EA031080B1 - МОДУЛОКИНЫ НА ОСНОВЕ ДОМЕНА SUSHI IL-15 И IL-15Rα - Google Patents

МОДУЛОКИНЫ НА ОСНОВЕ ДОМЕНА SUSHI IL-15 И IL-15Rα Download PDF

Info

Publication number
EA031080B1
EA031080B1 EA201690333A EA201690333A EA031080B1 EA 031080 B1 EA031080 B1 EA 031080B1 EA 201690333 A EA201690333 A EA 201690333A EA 201690333 A EA201690333 A EA 201690333A EA 031080 B1 EA031080 B1 EA 031080B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
amino acid
xaa
antibody
acid sequence
immunocytokine
Prior art date
Application number
EA201690333A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201690333A1 (ru
Inventor
Ален Жеи
Эрик Тартур
Давид Бешар
Original Assignee
Ситюн Фарма
Университе Пари Декарт
Ассистанс Пюблик - Опито Де Пари
Энститю Насьональ де ля Санте э де ля Решерш Медикаль (Энсерм)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=48953308&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA031080(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ситюн Фарма, Университе Пари Декарт, Ассистанс Пюблик - Опито Де Пари, Энститю Насьональ де ля Санте э де ля Решерш Медикаль (Энсерм) filed Critical Ситюн Фарма
Publication of EA201690333A1 publication Critical patent/EA201690333A1/ru
Publication of EA031080B1 publication Critical patent/EA031080B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2086—IL-13 to IL-16
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6813—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin the drug being a peptidic cytokine, e.g. an interleukin or interferon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5443—IL-15
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

Настоящее изобретение относится к иммуноцитокину, содержащему (a) конъюгат и (b) иммуномодулирующее антитело или его фрагмент, напрямую или опосредованно связанные ковалентной связью с указанным конъюгатом, где указанный конъюгат содержит (i) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность интерлейкина-15 или его производных, и (шш) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность домена sushi IL-15Rα или его производных; и вариантам их применения.

Description

Настоящее изобретение относится к иммуноцитокину, содержащему (а) конъюгат и (Ь) иммуномодулирующее антитело или его фрагмент, напрямую или опосредованно связанные ковалентной связью с указанным конъюгатом, где указанный конъюгат содержит (i) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность интерлейкина-15 или его производных, и (шш) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность домена sushi IL-15Ra или его производных; и вариантам их применения.
Настоящая международная заявка на патент испрашивает приоритет европейской заявки на патент EP 13003963.9, поданной 8 августа 2013 г., которая включена в данный документ с помощью ссылки.
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к новым иммуноцитокинам, называемым в данном документе модулокинами, и их применению в качестве лекарственного препарата, в частности, для лечения рака, путем активации проникающих в опухоль лимфицитов (TIL).
Предпосылки изобретения
Иммунная система позвоночных требует взаимодействий многих молекул и клеток для того, чтобы достичь оптимальных иммунных ответов против рака.
В настоящее время на противоопухолевый иммунитет хозяина влияют главным образом TIL (GALON et al., Science, vol. 313, p. 1960-1964, 2006). Действительно, многочисленные факты указали на то, что TIL подвержены ингибирующей регуляции посредством опухолевых клеток.
Для того чтобы реактивировать упомянутые TIL, были рассмотрены многие стратегии и мишени. Эти стратегии основаны либо на i) ингибировании иммуносупрессорных рецепторов TIL (например, CTL-A4, PD-1, BTLA, LAG3 HAVCR2, ADORA2A или ингибирующих KIR) для стимуляции иммунной активации путем предупреждения деактивирующих сигналов; либо на ii) стимуляции костимулирующих рецепторов TIL (например, CD40, 4-1ВВ, ОХ-40 или индуцированного глюкокортикоидами TNFRсвязанного белка (GITR)) для стимуляции активации Т- и/или NK-клеток.
Хотя упомянутые виды терапии уже дали некоторые обнадеживающие результаты, по-видимому, эффективность этих стратегий ограничена. Большей частью лишь небольшой процент когорт демонстрирует восстановленный ответ TIL.
Для того чтобы получить усиленную эффективность, в настоящее время рассмотрено комбинирование этих стратегий с другими лекарственными средствами или модулятором.
В связи с этим, авторы пытаются комбинировать эти стратегии с антителом к PD1 с модулятором, раскрытым в заявке на патент WO 2007/046006.
Результаты показали, что данное комбинирование не смогло восстановить значительную часть, т.е. приблизительно 20%, TIL, выделенных из пациентов с гипернефромой (RCC).
Краткое описание изобретения
Ниже авторы также испытывали другую комбинацию, в которой такой же модулятор сливали с таким же антителом, представляя новый тип иммуноцитокинов, который они назвали модулокины. Неожиданным образом и по сравнению с предыдущей комбинацией эта комбинация обеспечивала выраженные реактивации TIL, при этом реактивация наблюдалась для большинства TIL, т. е. приблизительно 80%.
Эта выраженная синергия позволяет рассмотреть новые виды терапии.
Соответственно, настоящее изобретение относится к иммуноцитокину, содержащему:
A) конъюгат и
B) иммуномодулирующее антитело или его фрагмент, напрямую или опосредовано связанный ковалентной связью с упомянутым конъюгатом, где упомянутый конъюгат содержит:
(i) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность интерлейкина 15 или его производных, и (ii) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность домена sushi IL-15Ra или его производных.
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей иммуноцитокин, как описано выше.
В третьем аспекте настоящее изобретение представляет вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, как описано выше.
В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, полученной способами генетической инженерии с использованием полинуклеотида или с использованием вектора, описанного ранее. Настоящее изобретение также относится к способу получения клетки-хозяина, полученной способами генетической инженерии, экспрессирующей иммуноцитокин в соответствии с настоящим изобретением, при этом упомянутый способ включает этапы: (i) введения in vitro или ex vivo нуклеиновой кислоты или вектора, как описано выше, в клетку-хозяин, (ii) культивирования in vitro или ex vivo рекомбинантной клетки-хозяин, полученной способами генетической инженерии, и (iii) необязательно отбора клеток, которые экспрессируют и/или секретируют упомянутый иммуноцитокин.
В предпочтительном варианте осуществления упомянутой клеткой-хозяином, полученной способами генетической инженерии, является животная клетка и предпочтительно клетка CHO.
В четвертом аспекте настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую иммуноцитокин, описанный выше, кодирующую его нуклеиновую кислоту или вектор нуклеиновой кислоты, содержащий упомянутую нуклеиновую кислоту, впоследствии связанные с фармацевтически приемлемым носителем.
В предпочтительном варианте осуществления упомянутая композиция содержит дополнительное
- 1 031080 терапевтическое средство, которым предпочтительно является противоопухолевое средство.
В шестом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, описанной ранее, для лечения рака у субъекта.
В седьмом аспекте настоящее изобретение относится к продуктам, содержащим:
(i) иммуноцитокин, как описано выше, последовательность кодирующей его нуклеиновой кислоты или вектор, содержащий такую последовательность нуклеиновой кислоты, и (ii) терапевтическое средство, предпочтительно противоопухолевое средство, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения для лечения рака у субъекта.
В восьмом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения рака у субъекта, включающему этап введения упомянутому субъекту фармацевтической композиции, как упомянуто ранее.
В последнем аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения рака, включающему этап одновременного, раздельного или последовательного введения субъекту, испытывающему потребность в этом, терапевтически эффективного количества (i) иммуноцитокина, как описано выше, последовательности кодирующей его нуклеиновой кислоты или вектора, содержащего такую последовательность нуклеиновой кислоты, и (ii) терапевтического средства, предпочтительно противоопухолевого средства.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 представлена экспрессия PD-1, Tim-3 и IL-15Ra в TIL от пациента А (А) и у пациента В (В).
На фиг. 2 представлена реактивация проникающих в опухоль лимфоцитов (TIL), индуцированных антителом к PD1 (НВАТ), RLI, комбинацией RLI и НВАТ (RLI + НВАТ) или модулокином согласно настоящему изобретению (НВАТ - RLI).
Подробное описание
Термин иммуноцитокин относится к молекуле, содержащей антитело или его фрагменты, напрямую или опосредованно связанные ковалентной связью с питокином или его производными. Упомянутое антитело и цитокин могут быть связаны линкерным пептидом.
Конъюгат иммуноцитокина согласно настоящему изобретению.
Термин интерлейкин 15 в его общем значении в данной области относится к цитокину со структурным сходством с IL-2 (GRABSTEIN et al., Science, vol. 264(5161), p. 965-968, 1994). Этот цитокин также известен как IL-15, IL15 или MGC9721. Этот цитокин и IL-2 обладают многими общими видами биологической активности и, как было обнаружено, связываются с одинаковыми субъединицами рецептора гематопоэтина. Таким образом, они могут конкурировать за один и тот же рецептор, отрицательно регулируя активность друг друга. Было установлено, что IL-15 регулирует активацию и пролиферацию Т-клеток и естественных клеток-киллеров и что число клеток памяти CD8+, как показано, контролируется балансом между этим цитокином и IL-2. Активность IL-15 можно измерить с помощью определения его индукции пролиферации на линии клеток kit225 (HORI et al., Blood, vol. 70(4), p. 1069-72, 1987), как раскрыто в примерах.
Упомянутый IL-15 или его производные имеют по меньшей мере 10% активности интерлейкина-15 человека в отношении индукции пролиферации линии клеток kit225, предпочтительно по меньшей мере 25% и более предпочтительно по меньшей мере 50%.
Упомянутый интерлейкин 15 представляет собой интерлейкин-15 млекопитающих, предпочтительно интерлейкин-15 приматов и более предпочтительно интерлейкин-15 человека.
Интерлейкин-15 млекопитающих может быть легко идентифицирован специалистом в данной области. В качестве примера можно привести интерлейкин-15 Sus scrofa (номер доступа ABF82250), Rattus norvegicus (номер доступа NP_037261), Mus musculus (номер доступа NP_032383), Bos Taurus (номер доступа NP_776515), Oryctolagus cuniculus (номер доступа NP_001075685), Ovies aries (номер доступа NP_001009734), Felis catus (номер доступа NP_001009207), Macaca fascicularis (номер доступа BAA19149), Homo sapiens (номер доступа NP_000576), Macaca Mulatta (номер доступа NP_001038196), Cavia porcellus (номер доступа NP_001166300) или Chlorocebus sabaeus (номер доступа ACI289).
Используемый в данном документе термин интерлейкин-15 млекопитающих относится к консенсусной последовательности SEQ ID NO: 1.
Интерлейкин-15 приматов может быть легко идентифицирован специалистом в данной области. В качестве примера можно привести интерлейкин-15 Sus scrofa (номер доступа ABF82250), Oryctolagus cuniculus (номер доступа NP_001075685), Macaca fascicularis (номер доступа ВАА19149), Homo sapiens (номер доступа NP_000576), Macaca Mulatto, (номер доступа NP_001038196) или Chlorocebus sabaeus (номер доступа ACI289).
Используемый в данном документе термин интерлейкин-15 приматов относится к консенсусной последовательности SEQ ID NO: 2.
Интерлейкин-15 человека может быть легко идентифицирован специалистом и относится к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3.
Используемый в данном документе термин производные интерлейкина-15 относится к аминокис
- 2 031080 лотной последовательности, имеющей процент идентичности по меньшей мере 92,5% (т.е. соответствующий приблизительно 10 аминокислотным заменам) по отношению к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, предпочтительно по меньшей мере 96% (т.е. соответствующий приблизительно 5 аминокислотным заменам) и более предпочтительно по меньшей мере 98,5% (т.е. соответствующий приблизительно 2 аминокислотным заменам) или по меньшей мере 99% (т.е. соответствующий приблизительно 1 аминокислотной замене). Такие производные могут быть легко идентифицированы специалистом в данной области исходя из его личных знаний и идеи настоящей заявки на патент. В качестве примера таких производных можно привести таковые, описанные в международной заявке на патент PCT WO 2009/135031. Также будет понятно, что встречающиеся в природе аминокислоты могут быть замещены химически модифицированными аминокислотами. Обычно такие химически модифицированные аминокислоты повышают время полужизни полипептида.
Используемый в данном документе процент идентичности между двумя аминокислотными последовательностями означает процент идентичных аминокислот между двумя последовательностями, подлежащими сравнению, полученный с наилучшим выравниванием упомянутых последовательностей, при этом этот процент является чисто статистическим и различия между этими двумя последовательностями случайно распределяются в аминокислотных последовательностях. Как используется в данном документе, наилучшее выравнивание или оптимальное выравнивание означает выравнивание, для которого определенный процент идентичности (см. ниже) является наивысшим. Сравнение последовательностей между двумя аминокислотными последовательностями обычно осуществляют с помощью сравнения этих последовательностей, которые ранее были выравнены в соответствии с наилучшим выравниванием; это сравнение осуществляют на сегментах сравнения для того, чтобы идентифицировать и сравнить локальные участки сходства. Наилучшее выравнивание последовательностей, подлежащих сравнению, можно осуществить, помимо ручного способа, с помощью алгоритма локальной гомологии, разработанного SMITH и WATERMAN (Ad. Арр. Math., vol. 2, p. 482, 1981), с помощью алгоритма глобальной гомологии, разработанного NEDDLEMAN и WUNSCH (J. Mol. Biol, vol. 48, p. 443, 1970), с помощью способа сходств, разработанного PEARSON и LIPMAN (Proc. Natl. Acd. Sci. USA, vol. 85, p. 2444, 1988), с помощью компьютерных программ, использующих такие алгоритмы (GAP, BESTFIT, BLAST P, BLAST N, FASTA, TFASTA в пакете программного обеспечения Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Мадисон, Висконсин, США), с помощью алгоритмов множественного выравнивания MUSCLE (Edgar, Robert С., Nucleic Acids Research, vol. 32, p. 1792, 2004) или с помощью CLUSTAL (GOUJON et al., Nucleic acids research, vol. 38, W695-9, 2010).
Чтобы получить наилучшее локальное выравнивание, предпочтительно можно использовать программное обеспечение BLAST с матрицей BLOSUM 62. Процент идентичности между двумя последовательностями аминокислот определяют путем сравнения этих двух оптимально выравненных последовательностей, при этом для того, чтобы получить оптимальное выравнивание между этими двумя последовательностями, аминокислотные последовательности могут охватывать добавления или делеции в отношении эталонной последовательности. Процент идентичности рассчитывают с помощью определения числа идентичных положений между этими двумя последовательностями и деления этого числа на общее число сравниваемых положений, а затем умножения полученного результата на 100 для того, чтобы получить процент идентичности между этими двумя последовательностями.
Предпочтительно производными интерлейкина 15 являются агонист или суперагонист IL-15. Специалист в данной области может легко идентифицировать агонист или суперагонист IL-15. В качестве примера агониста или суперагониста IL-15 можно привести таковые, раскрытые в международной заявке на патент WO 2005/085282 или в ZHU et al. (J. Immunol, vol. 183(6), р. 3598-607, 2009).
Еще более предпочтительно упомянутый агонист или суперагонист IL-15 выбирают в группе, включающей/состоящей из L45D, L45E, S51D, L52D, N72D, N72E, N72A, N72S, N72Y и N72P (в отношении последовательности IL-15 человека, SEQ ID NO: 3).
Используемый в данном документе термин домен sushi IL-15Ra имеет свое обычное значение в данной области и относится к домену, начинающемуся в первом остатке цистеина (С1) после сигнального пептида IL-15Ra и заканчивающемуся в четвертом остатке цистеина (С4) после упомянутого сигнального пептида. Упомянутый домен sushi, соответствующий части внеклеточной области IL-15Ra, необходим для его связывания с IL-15 (WEI et al., J. Immunol, vol. 167(1), p. 277-282, 2001).
Упомянутый домен sushi IL-15Ra или его производные характеризуется по меньшей мере 10% связывающей активностью домена sushi IL-15Ra человека с интерлейкином-15 человека, предпочтительно по меньшей мере 25% и более предпочтительно по меньшей мере 50%. Упомянутая связывающая активность может быть легко определена с помощью способа, раскрытого в WEI et al. (упомянутого выше, 2001).
Упомянутый домен sushi IL-15Ra представляет собой домен sushi IL-15Ra млекопитающих, предпочтительно домен sushi IL-15Ra приматов и более предпочтительно домен sushi IL-15Ra человека.
Домен sushi IL-15Ra млекопитающих может быть легко идентифицирован специалистом в данной
- 3 031080 области. В качестве примера можно привести домен sushi IL-15Ra Rattus norvegicus (номер доступа ХР_002728555), Mus musculus (номер доступа EDL08026), Bos Taurus (номер доступа ХР_002692113), Oryctolagus cuniculus (номер доступа ХР_002723298), Масаса fascicularis (номер доступа ACI42785), Масаса nemestrina (номер доступа ACI42783), Homo sapiens (номер доступа Q13261.1), Масаса Mulatta (номер доступа NP_001166315), Pongo abelii (номер доступа ХР_002820541), Cercocebus torquatus (номер доступа ACI42784), Callithrix jacchus (номер доступа ХР_002750073) или Cavia porcellus (номер доступа NP_001166314).
Используемый в данном документе термин домен sushi IL-15Ra млекопитающих относится к консенсусной последовательности SEQ ID NO: 4.
Предпочтительно полипептид, содержащий аминокислотную последовательность домена sushi IL15Ra млекопитающих, относится к консенсусной последовательности SEQ ID NO: 5.
Домен sushi IL-15Ra приматов может быть легко идентифицирован специалистом в данной области. В качестве примера можно привести домены sushi IL-15Ra Oryctolagus cuniculus, Macaca fascicularis, Macaca nemestrina, Homo sapiens, Macaca Mulatta, Pongo abelii, Cercocebus torquatus или Callithrix jacchus.
Используемый в данном документе термин домен sushi IL-15Ra приматов относится к консенсусной последовательности SEQ ID NO: 6.
Предпочтительно полипептид, содержащий аминокислотную последовательность домена sushi IL15Ra приматов, относится к консенсусной последовательности SEQ ID NO: 7.
Домен sushi IL-15Ra человека может быть легко идентифицирован специалистом и относится к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8.
Предпочтительно полипептид, содержащий аминокислотную последовательность домена sushi IL15Ra человека, относится к SEQ ID NO: 9.
Используемый в данном документе термин производные домена sushi IL-15Ra относится к аминокислотной последовательности, имеющей процент идентичности по меньшей мере 92% (т.е. соответствующий приблизительно 5 аминокислотным заменам) в отношении аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9, предпочтительно по меньшей мере 96% (т.е. соответствующий приблизительно 2 аминокислотным заменам) и более предпочтительно по меньшей мере 98% (т.е. соответствующий приблизительно 1 аминокислотной замене). Такие производные содержат четыре остатка цистеина домена sushi L-15Ra и могут быть легко идентифицированы специалистом в данной области исходя из его/ее общих знаний и идеи настоящей заявки на патент. Также будет понятно, что встречающиеся в природе аминокислоты могут быть замещены химически модифицированными аминокислотами. Обычно такие химически модифицированные аминокислоты способны повышать время полужизни полипептида.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления конъюгат содержит (ii) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность домена sushi и шарнирного домена IL-15Ra или его производных.
Шарнирный домен IL-15Ra определяют как аминокислотную последовательность, которая начинается в первом аминокислотном остатке после домена sushi и которая заканчивается в последнем аминокислотном остатке перед первым потенциальным сайтом гликозилирования. В IL-15Ra человека аминокислотная последовательность шарнирного участка состоит из четырнадцати аминокислот, которые расположены после домена sushi этого IL-15Ra, в С-концевом положении по отношению к упомянутому домену sushi, т.е. упомянутый шарнирный участок IL- 15Ra начинается в первой аминокислоте после упомянутого (С4) остатка цистеина и заканчивается в четырнадцатой аминокислоте (счет в стандартной N-концевой - С-концевой ориентации).
Упомянутый домен sushi и шарнирный домен IL-15Ra представляют собой домен sushi и шарнирный домен IL-15Ra млекопитающих, предпочтительно домен sushi и шарнирный домен IL-15Ra приматов и более предпочтительно домен sushi и шарнирный домен IL-15Ra человека.
Аминокислотная последовательность домена sushi и шарнирного домена IL-15Ra млекопитающих может быть легко идентифицирована специалистом в данной области. Используемый в данном документе термин домен sushi и шарнирный домен IL-15Ra млекопитающих относится к консенсусной последовательности SEQ ID NO: 10.
Аминокислотная последовательность домена sushi и шарнирного домена IL-15Ra приматов может быть легко идентифицирована специалистом в данной области. Используемый в данном документе термин домен sushi и шарнирный домен IL-15Ra приматов относится к консенсусной последовательности SEQ ID NO: 11.
Аминокислотная последовательность домена sushi и шарнирного домена IL-15Ra человека может быть легко идентифицирована специалистом в данной области. Используемый в данном документе термин домен sushi и шарнирный домен IL-15Ra человека относится к консенсусной последовательности SEQ ID NO: 12.
Используемый в данном документе термин производные домена sushi и шарнирного домена IL
- 4 031080
15Ra относится к аминокислотной последовательности, имеющей процент идентичности по меньшей мере 93% (т.е. соответствующий приблизительно 5 аминокислотным заменам) в отношении аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, предпочтительно по меньшей мере 97% (т.е. соответствующий приблизительно 2 аминокислотным заменам) и более предпочтительно по меньшей мере 98% (т.е. соответствующий приблизительно 1 аминокислотной замене). Такие производные содержат четыре остатка цистеина домена sushi L-15Ra и могут быть легко идентифицированы специалистом в данной области исходя из его общих знаний и идеи настоящей заявки на патент. Также будет понятно, что встречающиеся в природе аминокислоты могут быть замещены химически модифицированными аминокислотами. Обычно такие химически модифицированные аминокислоты способны повышать время полужизни полипептида.
Оба полипептида i) и ii) конъюгата могут быть связаны нековалентной связью, такой как в комплексе, раскрытом в патенте US 8124084 В2. Упомянутый конъюгат или комплекс может быть легко получен путем обеспечения подходящего количества полипептида i), обеспечения подходящего количества полипептида ii), смешивания обоих полипептидов при подходящем pH и ионных условиях в течение времени, достаточного для получения комплекса (т. е. конъюгата), и необязательно концентрирования и очистки упомянутого комплекса. Полипептиды комплекса (т.е. конъюгата) могут быть образованы, например, с помощью синтезатора пептидов в соответствии со стандартными способами; с помощью экспрессии каждого полипептида отдельно в клетке или клеточном экстракте, затем выделения и очистки полипептида. Необязательно терапевтический полипептидный комплекс в соответствии с настоящим изобретением может быть получен с помощью экспрессии обоих полипептидов i) и ii) в одной и той же клетке или клеточном экстракте, затем выделения и очистки комплексов, например, с помощью хроматографических методик, таких как аффинная хроматография с антителами к части лимфокина, части рецептора лимфокина или к комплексу.
Оба полипептида i) и ii) конъюгата могут быть также ковалентно связаны с помощью бифункциональных белок-связывающих агентов или в слитом белке.
Бифункциональные белок-связывающие агенты хорошо известны специалисту в данной области, в том числе способы их использования, и включают, в качестве примеров, №сукцинимидил(2пиридилдитио)пропионат (SPDP), сукцинимидил(№малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат, иминотиолан (IT), бифункциональные производные имидоэфиров (такие как диметиладипимидат HCL), активные сложные эфиры (такие как дисукцинимидил суберат), альдегиды (такие как глутаральдегид), бисазидосоединения (такие как бис(п-азидобензоил)гександиамин), производные бис-диазония (такие как бис-(п-диазонийбензоил)этилендиамин), диизоцианаты (такие как толуол 2,6-диизоцианат) и бисактивные соединения фтора (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол).
Термин слитый белок относится к белку, полученному путем объединения двух или более генов, которые изначально кодировали отдельные белки. Он также известен как химерный белок. Трансляция этого слитого гена приводит к образованию одного полипептида с функциональными свойствами, полученными от каждого из исходных белков. Рекомбинантные слитые белки получают искусственным путем с помощью технологии рекомбинантных ДНК для использования в биологических исследованиях или терапии. Рекомбинантный слитый белок представляет собой белок, полученный в процессе генетической инженерии из слитого гена. Это обычно включает удаление стоп-кодона из последовательности кДНК, кодирующей первый белок, затем прибавление последовательности кДНК второго белка в рамке путем опосредованной лигированием ПЦР или ПЦР с перекрывающимися праймерами. Эта последовательность ДНК будет затем экспрессироваться клеткой в виде одного белка. Белок может быть сконструирован генетически таким образом, чтобы включать полную последовательность обоих исходных белков или только часть каждого.
В предпочтительном варианте осуществления конъюгат является слитым белком.
Аминокислотная последовательность интерлейкина 15 или его производных может располагаться в С-концевом или в N-концевом положении по отношению к аминокислотной последовательности домена sushi IL-15Ra или его производных. Предпочтительно аминокислотная последовательность интерлейкина 15 или его производных расположена в С-концевом положении по отношению к аминокислотной последовательности домена sushi IL-15Ra или его производных.
Аминокислотная последовательность интерлейкина 15 или его производных и аминокислотная последовательность домена sushi IL-15Ra или его производных могут быть отделены первой линкерной аминокислотной последовательностью. Упомянутая первая линкерная аминокислотная последовательность может быть равной длине, достаточной для обеспечения того, чтобы слитый белок формировал надлежащие вторичные и третичные структуры.
Длина первой линкерной аминокислотной последовательности может варьировать без значительного влияния на биологическую активность слитого белка. Обычно первая линкерная аминокислотная последовательность содержит по меньшей мере одну, но менее 30 аминокислот, например линкер из 2-30 аминокислот, предпочтительно из 10-30 аминокислот, более предпочтительно из 15-30 аминокислот, еще более предпочтительно из 15-25 аминокислот, наиболее предпочтительно из 18-22 аминокислот.
- 5 031080
Предпочтительными линкерными аминокислотными последовательностями являются таковые, которые способствуют тому, что конюгат принимает надлежащую конформацию (т.е. конформацию, способствующую надлежащей активности проведения сигнала по сигнальному пути IL-15Rp/y).
Наиболее подходящие линкерные аминокислотные последовательности (1) будут принимать гибкую растянутую конформацию, (2) не будут склонны к образованию упорядоченной вторичной структуры, которая могла бы взаимодействовать с функциональными доменами слитых белков, и (3) будут иметь минимальную гидрофобную характеристику или характеристику заряда, которая способствовала бы взаимодействию с функциональными доменами белка.
Предпочтительно первая линкерная аминокислотная последовательность содержит близкие к нейтральным аминокислоты, выбранные из группы, включающей Gly (G), Asn (N), Ser (S), Thr (T), Ala (A), Leu (L) и Gln (Q), более предпочтительно из группы, включающей Gly (G), Asn (N) и Ser (S).
Примеры линкерных последовательностей описаны в патентных документах США № 5073627 и № 5108910.
Иллюстративные гибкие линкеры, которые являются, в частности, подходящими для настоящего изобретения, включают таковые, кодируемые последовательностями SEQ ID NO: 13 (SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ), §EQ ID NO: 14 (SGGSGGGGSGGGSGGGGSGG) или §EQ ID NO: 15 (SGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQ).
Предпочтительно конъюгат имеет последовательность SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 19.
Антитело иммуноцитокина согласно настоящему изобретению.
Термин антитело относится к молекуле иммуноглобулина, соответствующей тетрамеру, содержащему четыре полипептидые цепи, две идентичные тяжелые (H) цепи (приблизительно 50-70 кДа при полной длине) и две идентичные легкие (L) цепи (приблизительно 25 кДа при полной длине), соединенные между собой дисульфидными связями. Легкие цепи классифицируются как каппа и лямбда. Тяжелые цепи классифицируются как гамма, мю, альфа, дельта или эпсилон и определяют изотип антитела как IgG, IgM, IgA, IgD и IgE соответственно. Каждая тяжелая цепь состоит из N-концевого вариабельного участка тяжелой цепи (сокращен в данном документе как HCVR) и константного участка тяжелой цепи. Константный участок тяжелой цепи состоит из трех доменов (CH1, CH2 и СН3) для IgG, IgD и IgA и 4 доменов (CH1, CH2, СН3 и CH4) для IgM и IgE. Каждая легкая цепь состоит из N-концевого вариабельного участка легкой цепи (сокращен в данном документе как LCVR) и константного участка легкой цепи. Константный участок легкой цепи состоит из одного домена, CL. Участки HCVR и LCVR далее могут подразделяться на участки гипервариабельности, называемые участками, определяющими комплементарность (CDR), расположенными между участками, которые являются более консервативными, называемыми каркасными участками (FR). Каждый HCVR и LCVR состоит из трех CDR и четырех FR, упорядоченных от аминоконца до карбоксиконца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Распределение аминокислот по каждому домену соответствует хорошо известным условиям. Функциональная способность антитела связываться с определенным антигеном зависит от вариабельных участков каждой пары легкой/тяжелой цепи и, главным образом, определяется CDR.
Термин антитело, используемый в данном документе, относится к моноклональному антителу как таковому. Моноклональным антителом может быть антитело человека, химерное антитело и/или гуманизированное антитело.
Преимущественно выражение антитело относится к IgG, такому как IgG1, IgG2 (IgG2a или IgG2b), IgG3 и IgG4. Предпочтительно выражение антитело относится к IgG1 или IgG2 и более предпочтительно к IgG2a.
Химерное антитело означает антитело, которое состоит из вариабельных участков мышиного иммуноглобулина и константных участков иммуноглобулина человека. Это изменение состоит просто из замещения константного участка антитела человека константным участком мыши, приводя, таким образом, к химере человек/мышь, которая может иметь достаточно низкую иммуногенность для того, чтобы быть приемлемой для фармацевтического использования. Ряд способов получения таких химерных антител уже были описаны с формированием, таким образом, части общих знаний специалиста в данной области (см., например, патент США № 5225539).
Гуманизированное антитело означает антитело, которое состоит частично или полностью из аминокислотных последовательностей, полученных из зародышевой линии антител человека путем изменения последовательности антитела, имеющего участки, определяющие комплементарность, не принадлежащие человеку (CDR). Эту гуманизацию вариабельного участка антитела и в конечном итоге CDR выполняют с помощью методик, которые в настоящее время хорошо известны в данной области. В качестве примера британская заявка на патент GB 2188638A и патент США № 5585089 раскрывают способы, в которых получают рекомбинантные антитела, где единственной частью, которую замещают, является участок, определяющий комплементарность, или CDR. Методика пересадки CDR используется для получения антител, которые состоят из мышиных CDR, каркаса вариабельного участка и константных участков человека (см., например, RIECHMANN et al., Nature, vol. 332, p. 323-327, 1988). Эти антитела сохраняют константные участки человека, которые необходимы для Fc-зависимой эффекторной функ
- 6 031080 ции, однако с намного меньшей вероятностью вызовут иммунный ответ к антителу. В качестве примера каркасные участки вариабельных участков замещают соответствующими каркасными участками человека, оставляя CDR, не принадлежащий человеку, фактически интактным, или даже замещая CDR последовательностями, полученными из генома человека. Антитела, полностью принадлежащие человеку, получают в генетически модифицированных мышах, иммунные системы которых были изменены таким образом, чтобы соответствовать иммунным системам человека. Как упомянуто выше, для использования в способах согласно настоящему изобретению достаточно применять иммунологически специфический фрагмент антитела, включающий фрагменты, соответствующие одноцепочечным формам.
Гуманизированное антитело снова относится к антителу, содержащему каркас человека, по меньшей мере один CDR от антитела, не принадлежащего человеку, и в котором любой присутствующий константный участок фактически идентичен константному участку иммуноглобулина человека, т.е. идентичен по меньшей мере на приблизительно 85 или 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%. Таким образом, все части гуманизированного антитела, кроме, возможно, CDR, фактически идентичны соответствующим частям одного или нескольких нативных последовательностей иммуноглобулинов человека. Например, гуманизированный иммуноглобулин обычно не будет охватывать химерное антитело с вариабельным участком мыши/константным участком человека. В качестве примера разработку гуманизированных иммуноглобулинов можно осуществлять следующим образом: когда аминокислота попадает под следующую категорию, каркасную аминокислоту иммуноглобулина человека, подлежащую использованию (акцепторного иммуноглобулина), замещают каркасной аминокислотой из иммуноглобулина, представляющего CDR, не принадлежащего человеку (донорного иммуноглобулина): (а) аминокислота в каркасном участке человека акцепторного иммуноглобулина является необычной для иммуноглобулина человека в этом положении, где соответствующая аминокислота в донорном иммуноглобулине является типичной для иммуноглобулина человека в этом положении; (b) положение аминокислоты является непосредственно прилежащим к одному из CDR; или (c) любой атом боковой цепи каркасной аминокислоты расположен в пределах приблизительно 5-6 А (от центра к центру) от любого атома аминокислоты CDR в трехмерной модели иммуноглобулина (QUEEN et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 88, p. 2869, 1991). Если каждая из аминокислот в каркасном участке человека акцепторного иммуноглобулина и соответствующая аминокислота в донорном иммуноглобулине является необычной для иммуноглобулина человека в этом положении, такую аминокислоту замещают аминокислотой, типичной для иммуноглобулина человека в этом положении.
Термин фрагмент антитела, используемый в данном документе, относится к фрагменту антитела, способному к реакции с тем же самым антигеном, что и его аналог антитела. Такие фрагменты могут быть легко идентифицированы специалистом в данной области и содержат, в качестве примера, фрагмент Fab (например, в результате расщепления папаином), фрагмент Fab' (например, в результате расщепления пепсином и частичного восстановления), фрагмент F(ab')2 (например, в результате расщепления пепсином), Facb (например, в результате расщепления плазмином), Fd (например, в результате расщепления пепсином, частичного восстановления и реагрегации), а также фрагмент scFv (одноцепочечный Fv; например, в результате методик молекулярной биологии), охваченые настоящим изобретением.
Такие фрагменты можно получить с помощью ферментативного расщепления, синтетических или рекомбинантных методик, как известно в данной области и/или как описано в данном документе. Антитела также можно получить в ряде усеченных форм с использованием генов антител, в которых один или более стоп-кодонов были введены в обратном направлении от встречающегося в природе сайта стопкодона. Например, комбинированный ген, кодирующий часть тяжелой цепи F(ab')2, может быть разработан таким образом, чтобы включать последовательности ДНК, кодирующие домен CHj и/или шарнирный участок тяжелой цепи. Различные части антител можно соединить вместе химическим путем с помощью традиционных методик или можно получить в виде непрерывного белка с помощью методик генетической инженерии.
Предпочтительно упомянутым фрагментом антитела является фрагмент scFv.
Выражение иммуномодулирующее антитело, как используется в данном документе, относится к антителу, действующему либо путем
1) ингибирования иммуносупрессорного рецептора, такого как CTL-A4, PD-1, BTLA, LAG3 HAVCR2, ADORA2A или ингибирующих KIR с помощью связывания или этого рецептора, или его лиганда, способствуя, таким образом, иммунной активации путем предупреждения деактивирующих сигналов; либо
2) стимулирования костимулирующего рецептора, такого как CD40, CD137, CD134 или TNFRSF18 (GITR), способствуя, таким образом, активации Т- и/или NK-клеток.
В первом предпочтительном варианте осуществления иммуномодулирующее антитело ингибирует иммуносупрессорный рецептор. В качестве примера иммуномодулирующих антител, ингибирующих иммуносупрессорные рецепторы, можно привести антагонисты CTL-A4, ингибирующих KIR, BTLA, LAG3 HAVCR2, ADORA2A и PD-1 и более предпочтительно антагонисты PD-1, выбранные среди антител к PD1 и к PD-L1.
CTL-A4 (антиген, ассоциированный с цитотоксическими лимфоцитами, также обозначаемый CD
- 7 031080
152) был описан в 1987 г. (BRUNET et al., Nature, vol. 328, p. 267-270, 1987). Роль CTL-A4 заключается преимущественно в том, чтобы ингибировать активацию Т-клеток, и это было показано у мышей с недостаточностью CTL-A4, страдающих массивной лимфопролиферацией (CHAMBERS et al., Immunity, vol. 7, p. 8855-8959, 1997). В настоящее время было показано, что блокада CTL-A4, усиливает ответы Тклеток in vitro (WALUNAS et al., Immunity, vol. 1, p. 405-413, 1994) и in vivo (KEARNEY, J. Immunol, vol. 155, p. 1032-1036, 1995) и также усиливает противоопухолевый иммунитет (LEACH, Science, vol. 271, p. 1734-1736, 1996). В качестве примера антител, соответствующих антагонистам CTL-A4, можно привести ипилимумаб (также обозначаемый как MDX-010 и 10D1, доступный от MEDAREX и поставляемый на рынок компанией Bristol-Myers Squibb как YERVOY'™). раскрытый в WO 01/14424, тицилимумаб (также известный как 11.2.1 и СР-675206), раскрытый в WO 00/37504, а также антитела к CTL-A4, раскрытые в международных заявках на патент WO 98/42752, WO 01/14424, WO 2004/035607 и WO 2012/120125, в EP 1212422 и EP 1262193, в патентах США №№ 5811097, US 5855887, US 5977318, US 6051227, US 6207156, US 6682736, US 6984720, US 7109003 и US 7132281, которые включены в данный документ с помощью ссылки.
Белок запрограммированной клеточной смерти 1, также известный как PD-1 (также обозначаемый как PDCD1 или CD279), представляет собой мембранный гликопротеин типа I с массой ~55 кДа. PD-1 представляет собой рецептор семейства костимулирующего гена CD28, который умеренно экспрессируется на наивных Т-, В- и NK-клетках и активируется передачей сигнала на рецепторы Т/В-клеток на лимфоцитах, моноцитах и миелоидных клетках. PD-1 имеет два известных лиганда с различными профилями экспрессии, PD-L1 (В7-Н1), который широко экспрессируется, т.е. на наивных лимфоцитах, на активированных В- и Т-клетках, моноцитах и дендритных клетках, и PD-L2 (B7-DC), экспрессия которого ограничена, т.е. на активированных дендритных клетках, макрофагах и моноцитах, а также на клетках эндотелия сосудов. В нескольких мышиных сингенных опухолевых моделях блокада либо PD-1, либо PD-L1 значительно ингибировала опухолевый рост или индуцировала полную регрессию. Таким образом, PD-1 признают как важный фактор регуляции иммунной системы и поддержания периферической устойчивости. В качестве примера антител, соответствующих антагонистам PD-1, можно привести ниволумаб (также известный как BMS-936558 или MDX1106; антитело к PD-1, BRISTOL-MYERS SQUIBB), раскрытый в WO 2006/121168, Merck 3745 (также известный как MK-3475 или SCH-900475, представляет собой антитело к PD-1), раскрытый в WO 2009/114335, СТ-011 (также известный как hBAT или hBAT1, PD-1), раскрытый в WO 2009/101611, ламбролизумаб, раскрытый в WO 2008/156712, АМР514, который раскрыт в WO 2010/027423, WO 2010/027827, WO 2010/027828 и WO 2010/098788, а также антитела, раскрытые в международных заявках на патент WO 2004/056875, WO 2006/056875, WO 2008/083174, WO 2010/029434, WO 2010/029435, WO 2010/036959, WO 2010/089411, WO 2011/110604, WO 2012/135408 и WO 2012/145493. Упомянутый антагонист PD-1 может соответствовать антителу к PD-L1, такому как MDX-1105 (также известному как BMS-936559, антитело к PD-L1), раскрытому в WO 2007/005874, или YW243.55.S70 (также известному как MPDL3280A или RG7446; антителу к PD-L1), раскрытому в WO 2010/077634, которые включены в данный документ с помощью ссылки.
Иммуноглобулинподобные рецепторы клеток-киллеров (KIR) представляют собой семейство белков клеточной поверхности, обнаруженных на важных клетках иммунной системы, называемых естественными клетками-киллерами (NK). Они регулируют киллерную функцию данных клеток путем взаимодействия с молекулами МНС класса I, которые экспрессируются на всех типах клеток. Это взаимодействие позволяет им обнаруживать клетки, зараженные вирусом, или опухолевые клетки, которые имеют характерный низкий уровень МНС класса I на своей поверхности. Большинство KIR являются ингибирующими, означая, что распознавание МНС подавляет цитотоксическую активность их NK-клетки. Лишь ограниченное число KIR имеет способность активировать клетку.
Ингибирующие KIR имеют длинный цитоплазматический хвост, содержащий ингибирующий мотив иммунорецептора на основе тирозина (ITIM), который проводит ингибирующие сигналы к NKклетке при соединении с их лигандами МНС класса I. Известные ингибирующие KIR включают представителей подсемейств KIR2DL и KIR3DL, включающих KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DL4, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR3DL1, KIR3DL2 и KIR3DL3. В качестве примера антител, соответстующих антагонистам ингибирующих KIR, можно привести антитело 1-7F9, раскрытое в WO 2006/003179, который включен в данный документ с помощью ссылки.
BTLA (аттенюатор В- и Т-лимфоцитов), также известный как CD272, индуцируется во время активации Т-клеток и остается экспрессируемым на Th1-клетках, но не на Th2-клетках. BTLA проявляет ингибирование Т-клеток путем взаимодействия с фактором некроза опухоли (рецептором), представителем 14 (TNFRSF14), также известным как медиатор вхождения вируса герпеса (HVEM), TR2; ATAR; HVEA; CD270; LIGHTR. TNFRSF14 был идентифицирован как клеточный медиатор вхождения вируса простого герпеса (HSV). Было обнаружено, что цитоплазматический участок данного рецептора связывается с несколькими членами семейства TRAF, которые могут опосредовать пути проведения сигнала, которые активируют иммунный ответ. В конечном итоге комплексы BTLA/HVEM отрицательно регулируют иммунные ответы Т-клеток. В качестве примера антагониста BTLA/HVEM можно привести антитела, раскрытые в WO 2008/076560, WO 2010/106051 и WO 2011/014438.
- 8 031080
LAG3 (ген активации лимфоцитов 3, также известный как CD223) принадлежит к суперсемейству иммуноглобулинов (Ig) и содержит 4 внеклеточных Ig-подобных домена. В качестве примера антагонистов LAG3 можно привести антитела, раскрытые в WO 2010/019570.
HAVCR2 (клеточный рецептор 2 вируса гепатита А, также известный как Tim-3, KIM-3; TIMD3; Tim-3 и TIMD-3) является Th1-специфическим белком клеточной поверхности, принадлежащим к суперсемейству иммуноглобулинов. HAVCR2 регулирует активацию макрофагов и ингибирует Th1опосредованные ауто- и аллоиммунные ответы, способствуя таким образом иммунологической устойчивости. В качестве примера антагонистов HAVCR2 можно привести антитела, раскрытые в WO 2013/006490A.
ADORA2A (рецептор аденозина A2A, также известный как A2aR, RDC8 или ADORA2) принадлежит к суперсемейству рецепторов, сопряженных с белком (G-белком), связывающим гуаниновый нуклеотид (GPCR), которое разделяют на классы и подтипы. Этот белок играет важную роль во многих биологических функциях, таких как сердечный ритм и кровообращение, мозговой и почечный кровоток, иммунная функция, регуляция боли и сон. Он был связан с патофизиологическими состояниями, такими как воспалительные заболевания и нейродегенеративные нарушения.
Во втором предпочтительном варианте осуществления иммуномодулирующее антитело стимулирует костимулирующей рецептор.
В качестве примера иммуномодулирующих антител, стимулирующих костимулирующие рецепторы, можно привести агонисты CD40, CD137, CD134 и TNFRSF18.
CD40 является представителем суперсемейства TNF-рецептора, обнаруженного на АРС, который требуется для их активации. Было обнаружено, что этот рецептор является необходимым в опосредовании широкого спектра иммунных и воспалительных ответов, включающих переключение класса зависимых от Т-клеток иммуноглобулинов и развитие В-клеток памяти.
В качестве примера антител, соответствующих агонистам CD40, можно привести таковые, раскрытые в WO 03/040170, в WO 2005/063981, в WO 2005/063289 и в WO 2012/041635, которые включены в данный документ с помощью ссылки.
CD137 является представителем семейства рецепторов фактора некроза опухоли (TNF). Его альтернативными названиями являются представитель 9 суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли (TNFRSF9), 4-1ВВ и рецептор, индуцированный активацией лимфоцитов (ILA). CD137 может быть экспрессирован активированными Т-клетками, но в большей степени на Т-клетках CD8, чем на Т-клетках CD4. Кроме того, экспрессия CD137 встречается на дендритных клетках, фолликулярных дендритных клетках, естественных клетках-киллерах, гранулоцитах и клетках стенок кровеносных сосудов в местах воспаления. Наиболее описанной активностью CD137 является его костимулирующая активность в отношении активированных Т-клеток. Перекрестное сшивание CD137 усиливает пролиферацию Т-клеток, поддержание секреции и цитолитическую активность IL-2. Кроме того, оно может усиливать активность иммунной системы для того, чтобы уничтожить опухоли у мышей.
В качестве примера антител, соответствующих агонистам CD137, можно привести урелумаб (также известный как BMS-663513) и антитела, раскрыте в WO 03/040170, WO 2004/010947, в WO 2005/035584, WO 2006/126835 и в WO 2012/145183, которые включены в данный документ с помощью ссылки.
CD134, также известный как ОХ40, является представителем суперсемейства рецепторов TNFR. OX40 представляет собой костимулирующую молекулу, при этом экспрессия ОХ40 зависит от полной активации Т-клетки. ОХ40 связывается с рецепторами на Т-клетках, предотвращая их гибель и впоследствии повышая продукцию цитокинов. ОХ40 играет критическую роль в поддержании иммунного ответа после первых нескольких дней и далее до ответа памяти вследствие его способности повышать выживание.
В качестве примера антител, соответствующих агонистам CD134, можно привести антитела, раскрытые в WO 2009/079335, в WO 2012/027328, WO 2013/038191 и в WO 2013/028231, которые включены в данный документ с помощью ссылки.
Представитель 18 суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли (TNFRSF18), также известен как рецептор семейства TNFR, индуцируемый активацией (AITR), или TNFR-связанный белок, индуцируемый глюкокортикоидами (GITR), является представителем суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли (TNF-R). Этот белок представляет собой поверхностную рецепторную молекулу, которая, как было показано, участвует в ингибировании супрессорной активности Т-регуляторных клеток и увеличении выживаемости Т-эффекторных клеток.
В качестве примера антител, соответствующих агонистам TNFRSF18, можно привести антитела, раскрытые в WO 2006/105021 и в WO 2011/028683.
Как конъюгат, так и антитело или его фрагмент могут быть ковалентно связаны с помощью бифункциональных белоксвязывающих агентов или находиться в слитом белке.
Способы использования бифункциональных белоксвязывающих агентов хорошо известны специалисту в данной области и были раскрыты ранее. В качестве примера специалист в данной области может использовать способ, раскрытый в TILL et al. (Proc. Natl. Acad. U.S.A., vol. 86(6), p. 1987-91, 1989).
В предпочтительном варианте осуществления иммуноцитокин является слитым белком.
- 9 031080
В другом предпочтительном варианте осуществления иммуноцитокин является комплексом, предпочтительно комплексом, содержащим конъюгат между полипептидами i) и ii), где полипептид i) или ii) слит с антителом или его фрагментом.
Полипептид i), полипептид ii) или конъюгат может находиться в С-концевом или в N-концевом положении по отношению к аминокислотной последовательности антитела или его фрагмента.
Предпочтительно конъюгат является слитым белком, и аминокислотная последовательность конъюгата находится в С-концевом положении по отношению к аминокислотной последовательности антитела или его фрагмента, более предпочтительно в С-концевом положении по отношению к аминокислотной последовательности по меньшей мере одного константного участка тяжелой цепи антитела или его фрагмента.
Аминокислотная последовательность конъюгата и аминокислотная последовательность антитела или его фрагмента может быть отделена или не отделена второй линкерной аминокислотной последовательностью.
В конкретном варианте осуществления иммуноцитокин согласно настоящему изобретению является слитым белком, где конъюгат и антитело или его фрагмент не отделены каким-либо линкером.
Как и в случае первой линкерной аминокислотной последовательности упомянутая вторая линкерная аминокислотная последовательность может иметь длину, достаточную для обеспечения того, чтобы слитый белок образовывал надлежащие вторичные и третичные структуры.
Длина первой линкерной аминокислотной последовательности может варьировать без значительного влияния на биологическую активность слитого белка. Обычно первая линкерная аминокислотная последовательность содержит по меньшей мере одну, но менее 30 аминокислот, например линкер из 2-30 аминокислот, предпочтительно из 10-30 аминокислот, более предпочтительно из 15-30 аминокислот, наиболее предпочтительно из 15-25 аминокислот.
Как и в случае первой линкерной аминокислотной последовательности, наиболее подходящие вторые линкерные аминокислотные последовательности (1) будут принимать гибкую растянутую конформацию, (2) не будут предрасположены к образованию упорядоченной вторичной структуры, которая могла бы взаимодействовать с функциональными доменами слитых белков, и (3) будут иметь минимальную гидрофобную характеристику или характеристику заряда, которая способствовала бы взаимодействию с функциональными доменами белка.
Предпочтительно вторая линкерная аминокислотная последовательность содержит близкие к нейтральным аминокислоты, выбранные из группы, включающей Gly (G), Asn (N), Ser (S), Thr (T), Ala (A), Leu (L) и Gln (Q), более предпочтительно из группы, включающей Gly (G), Asn (N) и Ser (S).
В качестве примера второй линкерной аминокислотной последовательности, которая является подходящей для настоящего изобретения, можно привести последовательность SEQ ID NO: 16 (SGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG) или SEQ ID NO' 17 (AAGGGSGGGSGGGGSGGGGSAA).
Нуклеиновые кислоты, векторы и рекомбинантные клетки-хозяева.
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей иммуноцитокин, как описано выше, предпочтительно иммуноцитокин, соответствующий слитому белку.
Упомянутая нуклеиновая кислот соответствует РНК или ДНК, предпочтительно ДНК.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая иммуноцитокин согласно настоящему изобретению, функционально связана с последовательностью экспрессии гена, который направляет экспрессию нуклеиновой кислоты в прокариотической или эукариотической клетке, предпочтительно в эукариотической клетке. Последовательность экспрессии гена представляет собой любую регуляторную нуклеотидную последовательность, такую как промоторная последовательность или комбинация промотор-энхансер, которая облегчает эффективную транскрипцию и трансляцию нуклеиновой кислоты иммуноцитокина, с которым она функционально связана. Последовательность экспрессии гена может представлять собой, например, промотор млекопитающих или вирусов, такой как конститутивный или индуцибельный промотор.
Конститутивные промоторы млекопитающих включают, но без ограничений, промоторы для следующих генов: гипоксантинфосфорибозилтрансферазы (HPTR), аденозиндезаминазы, пируваткиназы, промотора бета-актина, промотора мышечной креатинкиназы, промотора фактора элонгации человека и другие конститутивные промоторы. Иллюстративные промоторы вирусов, которые функционируют конститутивно в эукариотических клетках, включают, например, промоторы вируса обезьян (например, SV40), вируса папилломы, аденовируса, вируса иммунодефицита человека (HIV), цитомегаловируса (CMV), вируса саркомы Рауса (RSV), вируса гепатита В (HBV), длинные концевые повторы (LTR) вируса лейкоза Молони и других ретровирусов и тимидинкиназный промотор вируса простого герпеса. Специалистам в данной области известны другие конститутивные промоторы.
Промоторы, подходящие в качестве последовательностей экспрессии гена согласно настоящему изобретению, также включают индуцибельные промоторы. Индуцибельные промоторы экспрессируются в присутствии индуцирующего средства. Например, металлотион в промоторе индуцируется для активации транскрипции и трансляции в присутствии некоторых ионов металлов. Специалистам в данном об
- 10 031080 ласти известны другие индуцибельные промоторы.
Как правило, последовательность экспрессии гена будет включать в качестве необходимости 5'нетраскрибируемые и 5'-нетранслируемые последовательности, участвующие в инициации транскрипции и трансляции соответственно, такие как TATA-бокс, кэппинг-последовательность, последовательность CAAT и т.п. В частности, такие 5'-нетраскрибируемые последовательности будут включать промоторный участок, который включает промоторную последовательность для контроля транскрипции функционально соединенной нуклеиновой кислоты. Последовательности экспрессии гена необязательно включают энхансерные последовательности или при необходимости расположенные против хода транскрипции активирующие последовательности. Как используется в данном документе, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая иммуноцитокин согласно настоящему изобретению, и последовательность экспрессии гена считаются функционально связанными, если они ковалентно связаны таким образом, чтобы экспрессия или транскрипция и/или трансляция кодирующей последовательности иммуноцитокина согласно настоящему изобретению находилась под влиянием или контролем последовательности экспрессии гена.
Две ДНК-последовательности считаются функционально связанными, если индукция промотора в 5' последовательности экспрессии гена приводит к транскрипции иммуноцитокина согласно настоящему изобретению и если природа связи между ДНК-последовательностями (1) не приводит к введению мутации по типу сдвига рамки, (2) не нарушает способность промоторного участка направлять транскрипцию иммуноцитокина согласно настоящему изобретению или (3) не нарушает способность соответствующего РНК-транскрипта транслироваться в белок. Таким образом, последовательность экспрессии гена была бы функционально связанной с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей иммуноцитокин согласно настоящему изобретению, если бы последовательность экспрессии гена могла влиять на транскрипцию этой последовательности нуклеиновой кислоты таким образом, чтобы полученный транскрипт транслировался в желаемый полипептид.
Преимущественно упомянутая последовательность нуклеиновой кислоты содержит интрон, поскольку, как часто было показано, молекулы пре-мРНК улучшают результаты продукции рекомбинантных молекул. Любые последовательности интрона могут быть сшиты, и в качестве примера можно привести таковые, раскрытые в ZAGO et al. (Biotechnol. Appl. Biochem., vol. 52 (Pt 3), p. 191-8, 2009) и в CAMPOS-DA-PAZ et al. (Mol. Biotechnol., vol. 39(2), p. 155-8, 2008).
Нуклеиновая кислота, кодирующая иммуноцитокин согласно настоящему изобретению, может быть доставлена in vivo отдельно или совместно с вектором.
В третьем аспекте настоящее изобретение относится к вектору, содержащему нуклеиновую кислоту, как описано выше.
В своем самом широком смысле вектор представляет собой любой переносчик, способный облегчить перенос нуклеиновой кислоты, кодирующей иммуноцитокин согласно настоящему изобретению, в клетки. Предпочтительно вектор транспортирует нуклеиновую кислоту в клетки со сниженным разрушением относительно степени разрушения, которая происходила бы при отсутствии вектора. Как правило, векторы, пригодные для настоящего изобретения, включают, но без ограничений, плазмиды, космиды, фагмиды, эписомы, искусственные хромосомы, вирусы, другие переносчики, полученные из вирусных или бактериальных источников, которые были обработаны путем вставки или включения последовательностей нуклеиновой кислоты иммуноцитокина.
Плазмидные векторы являются предпочтительным типом вектора и были подробно описаны в данной области и хорошо известны специалистам в данной области. См., например, SANBROOK et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. Неограничивающие примеры плазмид включают pBR322, pUC18, pUC19, pRC/CMV, SV40 и pBlueScript, а также другие плазмиды, хорошо известные специалистам в данной области. Кроме того, плазмиды могут быть разработаны в индивидуальном порядке с помощью ферментов рестрикции и реакций лигирования для того, чтобы удалить и добавить специфические фрагменты ДНК.
Предпочтительно вектор нуклеиновой кислоты может включать селектируемые маркеры, которые активны как в бактериях, так и в клетках млекопитающих.
В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, полученной способами генетической инженерии с использованием нуклеиновой кислоты или с использованием вектора, описанного ранее.
Используемый в данном документе термин клетка-хозяин, полученная способами генетической инженерии, относится к клеткам-хозяевам, которые были трансдуцированы, трансформированы или трансфицированы нуклеиновой кислотой или вектором, описанным ранее.
В качестве типичных примеров подходящих клеток-хозяев можно привести бактериальные клетки, такие как Е. coli, клетки грибов, такие как дрожжи, клетки насекомых, такие как Sf9, животные клетки, такие как CHO или COS, растительные клетки и т.д. Считается, что выбор подходящего хозяина, находится в пределах компетенции специалистов в данной области исходя из идей, изложенных в данном документе.
Предпочтительно клеткой-хозяином, полученной способами генетической инженерии, является жи
- 11 031080 вотная клетка и наиболее предпочтительно клетка CHO-S (INVITROGEN, № по каталогу 11619-012).
Клетки яичников китайского хомячка (CHO) часто используются в биофармацевтической промышленности для получения биологических препаратов, таких как рекомбинантные белки, антитела, пептидные антитела и лиганды рецепторов. Одной из причин того, что клетки CHO часто используются, является то, что эти клетки хорошо зарекомендовали себя с точки зрения безопасности для получения биологических препаратов. Они считаются хорошо описанной линией клеток и, как следствие, требуемое испытание безопасности может быть менее тщательным в некоторых отношениях (например, ретровирусная безопасность), чем таковое, которое требуется для других типов клеток. Несмотря на это, получение интерлейкина 15 является очень сложным, особенно в этой клетке.
Введение нуклеиновой кислоты или вектора, описанного ранее, в клетку-хозяин можно осуществлять с помощью способов, хорошо известных специалисту в данной области, таких как трансфекция с использованием фосфата кальция; трансфекция, опосредованная DEAE-декстраном, или электропорация.
Настоящее изобретение также относится к способу получения клетки-хозяина, полученной способами генетической инженерии, экспрессирующей иммуноцитокин в соответствии с настоящим изобретением, при этом упомянутый способ включает этапы: (i) введения in vitro или ex vivo нуклеиновой кислоты или вектора, как описано выше, в клетку-хозяин, (ii) культивирования in vitro или ex vivo рекомбинантной клетки-хозяин, полученной способами генетической инженерии, и (iii) необязательно отбора клеток, которые экспрессируют и/или секретируют упомянутый иммуноцитокин. Такие рекомбинантные клетки-хозяева могут быть использованы для получения иммунокина согласно настоящему изобретению.
Фармацевтическая композиция, содержащая иммуноцитокин согласно настоящему изобретению.
Дополнительная цель настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей иммуноцитокин, как описано выше, кодирующую его нуклеиновую кислоту или вектор, содержащий упомянутую нуклеиновую кислоту, впоследствии связанные с фармацевтически приемлемым носителем.
Выражение фармацевтически приемлемый относится к молекулярным частицам и композициям, которые являются физиологически переносимыми и обычно не вызывают аллергических или подобных нежелательных реакций, таких как расстройство желудка, головокружение и т.п.. при введении человеку. Предпочтительно используемое в данном документе выражение фармацевтически приемлемый означает разрешенный органом регулирования федерального правительства или правительства штата или указанный в Фармакопее США или другой общепризнанной фармакопее для применения у животных, и, в частности, у человека.
Термин носитель относится к растворителю, вспомагательному средству, вспомагательному веществу или переносчику, с которыми соединение вводят. Такими фармацевтическими носителями могут быть стерильные жидкости, такие как вода и масла, в том числе таковые нефтяного, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п.
Фармацевтическая композиция содержит эффективное количество иммуноцитокина согласно настоящему изобретению, эффективное количество которого достаточно, чтобы ингибировать рост раковых клеток, предпочтительно достаточно, чтобы индуцировать регрессию опухолевого роста. Дозы, используемые для введения, можно адаптировать в виде функции различных параметров, в частности, функции используемого режима введения, сопутствующей патологии или альтернативно желательной продолжительности лечения. Естественно, что форма фармацевтической композиции, путь введения, доза и режим, в норме зависят от состояния, подлежащего лечению, тяжести заболевания, возраста, веса и пола субъекта и т.д. Диапазоны эффективных доз, представленные ниже, не предполагают ограничивать настоящее изобретение и представляют предпочтительные диапазоны доз. Однако предпочтительная доза может быть адаптирована к отдельному субъекту, как понимается и определяется специалистом в данной области, без излишнего экспериментирования.
С точки зрения отмеченной эффективности иммуноцитокина согласно настоящему изобретению, специалист в данной области может планировать использовать очень малые дозы для лечения субъекта. В качестве неограничивающего примера иммуноцитокин согласно настоящему изобретению можно вводить с помощью инъекции в дозе, содержащей от 50 мг/кг до 5 мкг/кг субъекта, предпочтительно в дозе, содержащей от 10 мг/кг до 100 мкг/кг, и наиболее предпочтительно в дозе, содержащей от 2,5 мг/кг до 500 мкг/кг.
В качестве примера фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно разрабатывать в составах для местных, пероральных, интраназальных, внутриглазных, внутривенных, внутримышечных, внутриопухолевых или подкожных методов введения и т. п. Предпочтительно фармацевтическая композиция содержит переносчики, которые являются фармацевтически приемлемыми для состава, предназначенного для инъецирования. Они могут быть, в частности, изотоническими, стерильными, физиологическими растворами (мононатрийфосфат или динатрийфосфат, хлорид натрия, калия, кальция или магния и т.п. или смеси таких солей), или сухими, особенно лиофилизованными композициями, которые при добавлении, в зависимости от случая, стерильной воды или физиологического солевого раствора, обеспечивают состав инъецируемых растворов. Подходящие фармацевтические носители
- 12 031080 описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences автора E.W. Martin.
Иммуноцитокин согласно настоящему изобретению, нуклеиновые кислоты, кодирующие его, или векторы нуклеиновых кислот, можно растворить в буфере или воде или включать в эмульсии, микроэмульсии, гидрогели (например, гидрогели на основе триблочных сополимеров PLGA-PEG-PLGA), в микросферы, в наносферы, в микрочастицы, в наночастицы (например, сополимер молочной и гликолевой кислоты), микрочастицы (например, полимолочной кислоты (PLA); сополимер лактида и гликолевой кислоты (PLGA); полиглутаматные микросферы, наносферы, микрочастицы или наночастицы), в липосомы или другие галеновые составы. Во всех случаях составы должны быть стерильными и жидкими до степени приемлемой возможности введения с помощью шприца. Он должен быть стабильным в условиях производства и хранения и должен быть защищен от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы.
Растворы активных соединений в виде свободных оснований или фармацевтически приемлемых солей могут быть получены в воде, соответствующим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза.
Также могут быть получены дисперсии в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях и в маслах. При обычных условиях хранения и применения эти препараты содержат консервант для предупреждения роста микроорганизмов.
Иммуноцитокины в соответствии с настоящим изобретением могут быть составлены в композиции в нейтральной форме или форме соли. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислоты (полученные с помощью свободных аминогрупп белка), которые образуются с участием неорганических кислот, таких как, например, соляная или фосфорная кислоты, или таких органических кислот, как уксусная, щавелевая, винная, миндальная и т.п. Соли, образованы с помощью свободных карбоксильных групп, также могут быть получены из неорганических оснований, таких как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, гистидин, прокаин и т.п.
Носитель также может быть раствором или дисперсионной средой, содержащей, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.), их подходящие смеси и растительные масла. Иммуноцитокины согласно настоящему изобретению также могут быть модифицированы, например, пегилированием, таким образом, чтобы повысить их биодоступность. Если иммуноцитокин согласно настоящему изобретению имеет форму нуклеиновой кислоты, носителем также может быть вектор, такой как вирус (например, MVA, rAAV, лентивирус и т.п.).
Подходящая текучесть может поддерживаться, например, за счет использования покрытия, такого как лецитин, с помощью поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и с использованием поверхностно-активных веществ. Предупреждение действия микроорганизмов может осуществляться с помощью различных антибактериальных и противогрибковых средств, например парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросала и т.п. Во многих случаях предпочтительным будет включение изотонических средств, например сахара или хлорида натрия.
Длительное всасывание инъецируемых композиций может осуществляться с помощью использования в композициях средств, задерживающих всасывание, например моностеарата алюминия, желатина, полиолов и повышающих период полужизни ковалентных и нековалентных составов.
Существуют многочисленные причины нестабильности или разрушения пептидов, в том числе гидролиз и денатурация. Гидрофобное взаимодействие может вызывать скопление молекул вместе (т.е. агрегацию). Можно добавлять стабилизаторы, чтобы уменьшить или предупредить такие проблемы.
Стабилизаторы включают циклодекстрин и его производные (см. патентный документ США № 5730969). Также можно добавлять подходящие консерванты, такие как сахароза, маннит, сорбит, трегалоза, декстран и глицерин, чтобы стабилизировать конечный состав. К составу можно добавлять стабилизатор, выбранный из ионных и неоинных поверхностно-активных веществ, D-глюкозы, D-галактозы, D-ксилозы, D-галактуроновой кислоты, трегалозы, декстранов, гидроксиэтиловых крахмалов и их смесей. Добавление соли щелочных металлов, или хлорида магния может стабилизировать пептид. Пептид можно также стабилизировать путем его контактирования с сахаридом, выбранным из группы, включающей декстран, хондроитинсерную кислоту, крахмал, гликоген, декстрин и соли альгиновой кислоты. Другие сахара, которые могут быть добавлены, включают моносахариды, дисахариды, сахарные спирты и их смеси (например, глюкозу, маннозу, галактозу, фруктозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, маннит, ксилит). Полиолы могут стабилизировать пептид, а также являются смешивающимися с водой или водорастворимыми. Подходящими полиолами могут быть полигидроксиспирты, моносахариды и дисахариды, в том числе маннит, глицерин, этиленгликоль, пропиленгликоль, триметилгликоль, винилпирролидон, глюкоза, фруктоза, арабиноза, манноза, мальтоза, сахароза и их полимеры. Различные вспомагательные вещества также могут стабилизировать пептиды, в том числе, сывороточный альбумин, аминокислоты, гепарин, жирные кислоты и фосфолипиды, поверхностно-активные вещества, металлы, полиолы, восстанавливающие средства, металлохелатирующие средства, поливинилпирролидон, гидролизованный желатин и сульфат аммония.
Перспектива терапии цитокинами действительно исходит из выявления этих новых цитокинов, од
- 13 031080 нако, даже более фундаментально, эта область значительно выигрывает от непрерывно растущего количества доклинических данных, которые убедительно показывают синергические и/или новые биологические эффекты, которые могут быть достигнуты путем использования нескольких комбинаций цитокинов с дополняющими иммуностимулирующими свойствами. Потенциальные комбинации терапевтических активных средств с иммуноцитокинами на основе RLI включают, например, химиотерапевтические средства, антиангиогенные средства или иммуномодулирующие средства.
В предпочтительном варианте осуществления композиция согласно настоящему изобретению может содержать дополнительное терапевтическое активное средство, такое как химиотерапевтические средства, антиангиогенные средства или иммуномодулирующие средства.
Для химиотерапевтических средств было показано, что их терапевтические эффекты могут быть опосредованы частично непрямым влиянием на иммунные ответы, путем индукции иммуногенной клеточной гибели, уравновешивания иммуносупрессорного окружения, сокращения первичной крупной опухоли и затем облегчения иммунной атаки или путем индукции временной лимфопении с последующей гомеостатической лимфопролиферацией. Многие из них хорошо известны специалисту в данной области и в качестве примера химиотерапевтического средства, которое может быть объединено с иммуноцитокином согласно настоящему изобретению, можно привести флударабин, гемцитабин, капецитабин, метотрексат, таксол, таксотер, меркаптопурин, тиогуанин, гидроксимочевину, цитарабин, циклофосфамид, ифосфамид, нитрозомочевину, комплексы платины, такие как цисплатин, карбоплатин и оксалиплатин, митомицин, дакарбазин, прокарбизин, этопозид, тенипозид, кампатецины, блеомицин, доксорубицин, идарубицин, даунорубицин, дактиномицин, пликамицин, митоксантрон, L-аспарагиназу, доксорубицин, эпимбицин, 5-фторурацил, таксаны, такие как доцетаксел и паклитаксел, лейковорин, левамизол, иринотекан, эстрамустин, этопозид, азотистые иприты, BCNU, нитрозомочевины, такие как кармустин и ломустин, алкалоиды барвинка, такие как винбластин, винкристин и винорелбин, иматиниба мезилат, гексаметиленамин, топотекан, ингибиторы киназы, ингибиторы фосфатазы, ингибиторы АТФазы, тирфостины, ингибиторы протеазы, ингибиторы гербимицина А, генистеин, эрбстатин и лавендустин А.
Для антиангиогенных средств было показано, что они оказывали нецелевые эффекты на иммунную систему и затем могли облегчать опухолевые иммунные ответы. В качестве примера антиангиогенного средства, которое может быть объединено с иммуноцитокином согласно настоящему изобретению, можно привести лекарственные средства, направленные на рецептор фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR) с помощью его тирозинкиназы, такие как сорафениб, сунитиниб и пазопаниб, или мишень рапамицина млекоптимающих (mTOR), такую как темсиролимус и эверолимус.
В качестве иммуномодулирующих средств, которые могут быть объединены с иммуноцитокином настоящего изобретения, можно привести цитокины (IL-2, IL-7, IL-15, IL-12, IL18, IL-21, GM-CSF, GCSF, IFNa, ...), хемокины/антиангиогенные цитокины (IP10, Mig, SDF-1, RANTES, ...), агонисты TLR и иммунорегуляторные антитела (антитело к CTLA4, антитело к PD1, антитело к TGFb, агонист антитела к CD40, ...).
Терапевтические способы и варианты их использования.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, как описано ранее, для лечения рака у субъекта, предпочтительно фармацевтической композиции, содержащей иммуноцитокин, как описано ранее.
Используемый в данном документе термин субъект означает млекопитающего, такого как грызун, представитель кошачьих, представитель псовых или примат и наиболее предпочтительно человек.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к продуктам, содержащим:
(i) иммуноцитокин, как описано выше, последовательность кодирующей его нуклеиновой кислоты или вектор, содержащий такую последовательность нуклеиновой кислоты, и (ii) терапевтическое средство, предпочтительно противоопухолевое средство, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения для лечения рака у субъекта.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения рака у субъекта, включающему этап введения указанному субъекту фармацевтической композиции, описанной ранее.
В последнем аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения рака, включающему этап одновременного, раздельного или последовательного введения субъекту, испытывающему потребность в этом, терапевтически эффективного количества (i) иммуноцитокина, описанного выше, последовательности кодирующей его нуклеиновой кислоты или вектора, содержащего такую последовательность нуклеиновой кислоты, и (ii) терапевтического средства, предпочтительно противоопухолевого средства.
В контексте настоящего изобретения термин лечение, используемый в данном документе, означает обращение, ослабление, ингибирование прогрессирования или предупреждение нарушения или состояния, к которому такой термин применяется, или одного или нескольких симптомов такого нарушения или состояния. Выражение лечение рака, используемое в данном документе, означает ингибирование роста раковых клеток. Предпочтительно такое лечение также приводит к регрессии опухолевого рос- 14 031080 та, т.е. снижению размера измеряемой опухоли. Наиболее предпочтительно такое лечение приводит к полной регрессии опухоли.
Предпочтительно упомянутый рак представляет собой карциному или рак легких.
Более предпочтительно выражение лечение рака означает лечение рака путем активации проникающих в опухоль лимфоцитов.
Соответственно, рак соответствует предпочтительно васкуляризованному раку.
Более предпочтительно указанным раком является рак с анергической популяцией TIL, при этом упомянутый рак соответствует поздней стадии рака, такого как гипернефрома (RCC).
Далее настоящее изобретение описано более подробно со ссылкой на аминокислотные последовательности, последовательности нуклеиновых кислот и примеры. Однако подробности примеров не предназначены для ограничения настоящего изобретения. Наоборот, настоящее изобретение относится к любому варианту осуществления, который предусматривает подробности, которые не упоминаются явным образом в примерах в данном документе, однако которые специалист в данной области находит без излишних усилий.
Примеры
1) Модулокины на основе RLI.
Конструирование иммуноцитокинов антитело к PD-1 (hBAT) с RLI.
Экспрессионная плазмида, кодирующая легкую цепь антитела к PD-1 (соответствующая одному из СТ-011 (hBAT или hBAT-1)). Последовательности тяжелой цепи антитела химерного IgG разрабатывали таким образом, чтобы они сливались на З'-конце с линкером из 22 аминокислот (SEQ ID NO: 16) или без него с IL15 (SEQ ID NO: 3, где аминокислотой в положении 93 является K). Эти нуклеотидные последовательности синтезировали и клонировали в плазмидах pcDNA3.1 с помощью GENEART. Полные последовательности легкой и тяжелой цепей антитела к PD-1 раскрыты в международной заявке на патент WO 2009/101611.
Получение плазмидной ДНК и реагента для трансфекции.
Линейный PEI из 40 кДа получали от POLYSCIENCE. 1 мг/мл маточного раствора получали растворением PEI в воде с нагреванием, нейтрализацией NaOH и стерилизацией с помощью фильтрации через фильтр с размером пор 0,22 мкм. Маточный раствор разделяли на аликвоты и хранили при -20°C.
Плазмидную ДНК для трансфекции очищали с помощью наборов для очистки плазмид в соответствии с протоколом производителя (MACHEREY-NAGEL) и стерилизовали с помощью фильтрации через фильтр с размером пор 0,22 мкм.
Получение и очистка иммуноцитокинов.
1. Транзиентная трансфекция в суспензии.
Поддерживаемые в стандартных условиях клетки CHO-S (INVITROGEN) высевали с плотностью 1х106 клеток/мл в среду PowerCHO2 (LONZA) и культивировали в течение ночи при 37°C во встряхивателе-инкубаторе (100 об/мин) с 5% СО2. Для трансфекции клетки затем разводили до 2х106 клеток/мл в среде CD-CHO (INVITROGEN). Трансфекционные комплексы получали в 10% объема культуры с использованием 150 мМ NaCl. ДНК экспрессионных конструкций (2,5 мг/л объема культуры, с использованием соотношения 1:2 плазмид, кодирующих тяжелую цепь, к плазмидам, кодирующим легкую цепь) смешивали с PEI, разведенным в NaCl (10 мг/л конечного объема культуры), и инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре перед добавлением в культуру. Клетки культивировали во встряхивателе-инкубаторе (130 об/мин) при 37°C в течение 5 ч перед удвоением объема культуры с использованием среды PowerCHO2. Супернатант собирали через 5 дней после трансфекции.
2. Стабильная трансфекция на адгезивных клетках.
Клетки CHO-K1 (АТСС № CCL-61) выращивали в DMEM с добавлением 1-глутамина, 10% FCS и пенициллина (100 ед./мл)/стрептомицина (100 мкг/мл) и трансфицировали каждым вектором с помощью реагента липофектамина 2000 (INVITROGEN), как рекомендуется производителем. Клоны селектировали с помощью предельного разведения средой, содержащей генетицин и гигромицин (0,5 мг/мл), или бластицин и гигромицин (5 мкг/мл и 100 мкг/мл) для ацетилированного ICK к GD2O и ICK к CD20 соответственно. Супернатант культуры каждого клона количественно определяли в отношении продуцирования бифункциональных белков с помощью ELISA. Для продукции ICK выбранные клоны амплифицировали в 25% среде DMEM и 75% среде AIM (INVITROGEN). Клетки затем поддерживали в 100% AIM и супернатант собирали и замещали каждые 2 дня в течение 10 дней.
3. Очистка супернатанта.
Собранный супернатант центрифугировали при 3000 об/мин в течение 20 мин при 4°C, доводили до равновесия при pH 7,8 с помощью NaOH и фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм. Кондиционированные среды очищали с помощью афинной хроматографии с использованием колонки на основе белка A (GE) в соответствии с инструкциями производителя. Очищенные белки концентрировали с помощью 50 кДа единиц AMICON (MILLIPORE). Во время этого этапа элюирующий буфер замещали PBS. Очищенные белки окончательно количественно определяли с помощью ELISA и измерения поглощения при 280 нм. Чистоту оценивали с помощью электрофореза.
- 15 031080
4. Выявление компонента иммуноглобулина с помощью ELISA.
Плоскодонный микротитрационный планшет Maxisorp (NUNC) покрывали 100 мкл антитела козы к антителу человека (UP892370, INTERCHIM), разведенного в PBS до 1,5 мкг/мл в течение 1 ч при 4°C. Затем планшет блокировали 200 мкл блокирующего буфера (1% BSA+0,1% TWEEN 20 в PBS) в течение 1 ч при 37°C. Затем планшет промывали 3 раза отмывочным буфером (0,1% TWEEN 20 в PBS) и образец, разведенный в блокирующем буфере, добавляли и инкубировали в течение 30 мин при 37°C (100 мкл). После 3-го отмывания добавляли конъюгированное с пероксидазой антитело козы к IgG1 человека (109036-003, JACKSON), разведенное 1:10000, и инкубировали в течение 30 мин при 37°C. Субстрат ТМВ (INTERCHIM) использовали для определения уровней белка и планшеты считывали при 450 нм. Очищенный ритуксимаб (ROCHE) использовали для получения стандартной кривой на планшете.
5. Выявление компонента цитокина с помощью ELISA.
Плоскодонный микротитрационный планшет Maxisorp (NUNC) покрывали 100 мкл В-Е29 к IL15 (DIACLONE), разведенного в карбонатном буфере до 2 мкг/мл в течение 16 ч при 4°C. Затем планшет блокировали 200 мкл блокирующего буфера (1% BSA в PBS) в течение 1 ч пои 37°C. Затем планшет промывали 3 раза отмывочным буфером (0,05% Tween 20 в PBS). Образец, разведенный в TBS+0,05% BSA, добавляли и инкубировали 1 ч 30 мин при 37°C (100 мкл). После 3-го отмывания добавляли биотинилированное антитело ВАМ 247 к IL15 (R&D SYSTEM), разведенное до 200 нг/мл, и инкубировали в течение 1 ч 30 мин при 37°C. Планшет промывали 3 раза и добавляли конъюгированной пероксидазой стрептавидин при разведении 1:1000. Субстрат ТМВ (INTERCHIM) использовали для определения уровней белка и планшеты считывали при 450 нм. IL-15 (PEPROTECH) использовали для получения стандартной кривой на планшете.
Фенотипы TIL.
Проникающие в опухоль лимфоциты (TIL) получали из биоптатов или нефрэктомических тканей, полученных от 2 пациентов с гипернефромой после расщепления ДНКазой и коллагеназой. Эти TIL были большей частью анергическими, способствуя опухолевой прогрессии.
Фенотип этих TIL в отношении PD-1, Tim-3 и IL-15Ra определяли с помощью иммунофлуоресценции.
На фиг. 1 показан полученный фенотип для пациента А (фиг. 1А) и для пациента В (фиг. 1В).
Связывающая активность иммуноцитокинов.
Специфическое связывание модулокина RLI к PD-1 оценивали с помощью проточной цитометрии. Способность модулокина связываться с рецептором IL-15 на эффекторных клетках тестировали на наборе Kit 225. Модулокин, покрывающий целевые клетки, выявляли с помощью РЕ-конъюгированного mAb козы к IgG человека (PN IM0550, BECKMAN COULTER) или с помощью биотинилированного антитела мыши к IL15 (ВАМ247, R&D SYSTEM), сопряженного с РЕ-стрептавидином (SIGMA-ALDRICH). Целевые клетки (1х105) инкубировали с каждым ICK в течение 1 ч при 4°C, отмывали и затем инкубировали с РЕ-конъюгатом в течение 1 ч при 4°C. Отмытые клетки в конечном итоге анализировали на FACSCALIBUR (BECTON DICKINSON).
Результаты показали, что модулокин связывается с рецептором IL-15, a также с PD-1.
Пролиферационная активность иммуноцитокинов.
Опосредованную интерлейкином-15 пролиферационную активность полученного модулокина тестировали и сравнивали с RLI. Пролиферативные ответы клеток набора Kit 225 и 32D|3 на ICK измеряли по включению тимидина [3Н]. Клетки поддерживали в среде для культивирования в течение 3 дней, дважды промывали и истощали в среде без цитокина в течение 24 ч или 4 ч для набора 225 и 32D|3 соответственно. Затем их высевали в многолучночные планшеты при 10 клетках/лунку в 100 мкл и культивировали в течение 48 ч в среде с добавлением возрастающей концентрации образца. rIL-15 и RLI человека использовали в качестве калибровочного стандарта. Клетки сенсибилизировали в течение 16 ч с использованием 0,5 мкКи/лунку [3Н] тимидина, собирали на фильтры из стекловолокна и измеряли связанную с клетками радиоактивность. Результаты подтвердили, что пролиферационная активность модулокина была сопоставимой с одним из RLI.
Мощная реактивация TIL модулокином RLI.
Проникающие в опухоль лимфоциты (TIL) получали из биоптатов или нефрэктомических тканей, полученных от 25 пациентов с гипернефромой после расщепления ДНКазой и коллагеназой. Эти TIL были большей частью анергическими, способствуя опухолевой прогрессии.
Реактивацию TIL от 25 пациентов тестировали с помощью инкубации упомянутых TIL при отсутствие и при присутствии одинаковой молярности RLI, НВАТ (СТ011 = антитело к PD1), HBAT-RLI (модулокин) или комбинации НВАТ и RLI каждого пациента. RLI использовали при 1 г/мл для пациентов 1-8 и затем при 300 нг/мл для пациентов 9-25.
Супернатанты собирали через 48 ч после стимуляции и реактивацию определяли измерением с помощью ELISA концентрации IFNy в супернатанте.
Первичные данные из 25 TIL, полученных от пациентов с гипернефромой, представлены в таблице, за исключением нестимулированных TIL, которые всегда секретировали менее 20 пг/мл IFNy.
- 16 031080
Комбинирование
Пациен т пг/мл IFNy.
RLI HBAT HBAT- HBAT+RLI
1 44 0 107 н.о.
2 26 0 338 н.о.
3 36 28 200 377
4 15 92 228 1500
5 29 н.о 770 2900
6 57 80 970 700
7 0 0 0 0
8 15 15 32 25
9 32 17 157 360
10 24 0 635 245
11 26 32 200 1490
12 31 22 110 360
13 17 16 360 1800
14 0 9 50 0
15 84 27 250 1000
16 15 73 0 50
17 0 0 0 0
18 12 55 800 230
19 17 0 450 0
20 0 33 330 0
21 80 0 395 0
22 12 65 150 1000
23 0 0 0 0
24 30 65 250 540
25 39 н.о 360 н.о.
На фиг. 2 представлены среднее значение и медиана IFNy, продуцируемого из TIL, активированных RLI, HBAT, HBAT-RLI и HBAT+RLI (*p <0,05).
Результаты показывают, что практически никакой активации TIL не было получено только при отдельном использовании антитела к PD-1. Некоторая активация TIL была получена при отдельном использовании RLI или в комбинации с антителом к PD1. В данный момент и неожиданным образом выраженная и общая активация по сравнению с RLI и также RLI+HBAT была получена при использовании иммуноцитокина согласно настоящему изобретению (таблица и фиг. 2).
Эти результаты позволяют рассмотреть новые виды терапии.
Определение эффективности модулокина в экспериментальной опухолевой модели карциномы СТ26.
СТ26 представляет собой линию клеток индуцированной н-нитрозо-e-метилуретаном (NNMU) недифференцированной карциномы кишечника мыши.
Мышам BALB/C инъецировали подкожно на правом боку опухолевые клетки СТ26 (2,105/мышь).
На 9-й день, когда опухоль должна достигать 20-30 мм, различные группы мышей обрабатывали 16 или 32 мкг/мышь модулокина RLI к PD1 отдельно в сравнении с эквимолярными концентрациями антитела к PD1 отдельно, RLI отдельно (1004-14р), комбинации антитела к PD1 и RLI или PBS в контрольной группе.
- 17 031080
Модулокин или RLI отдельно инъецировали с 9-го дня дважды в неделю в течение 4 недель. Антитело к PD1 отдельно инъецировали с 9-го дня и затем один раз в неделю в течение 4 недель. В группе с комбинированием антитело к PD1 инъецировали с 9-го дня и затем один раз в неделю в течение 4 недель, a RLI с 15-го дня и затем дважды в неделю в течение 3 недель. Опухоли измеряли три раза в неделю с помощью штангенциркуля иплощадь опухоли рассчитывают следующим образом: длинахширина. Мышей выводили из эксперимента, когда размер опухоли достигал 300 мм2 или при изъязвлении. Определяли первичный опухолевый рост, выживание и в конечном итоге регрессию. Контрольные группы получали соответствующую дозу изотипа антитела или несвязанного конъюгата aRLI-антитело (RLI к HER2).
Мышам BALB/C инъецировали подкожно на правом боку опухолевые клетки СТ26 (2,105/мышь). На 9-й день, когда опухоли достигали 20-30 мм2, мышей обрабатывали i.p. 16 или 32 мкг/мышь модулокина RLI к PD-L1 отдельно в сравнении с эквимолярными концентрациями антитела к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL) отдельно, RLI отдельно (1004-14р), комбинации антитела к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL) и RLI или PBS в контрольной группе.
Модулокин или RLI отдельно инъецировали с 9-го дня дважды в неделю в течение 4 недель. Антитело к PD1 отдельно инъецировали с 9-го дня и затем один раз в неделю в течение 4 недель. В группе с комбинированием антитело к PD1 инъецировали с 9-го дня и затем один раз в неделю в течение 4 недель, a RLI с 15-го дня и затем дважды в неделю в течение 3 недель. Опухоли измеряли три раза в неделю с помощью штангенциркуля и площадь опухоли рассчитывали следующим образом: длинахширина. Мышей выводили из эксперимента, когда размер опухоли достигал 300 мм2 или при изъязвлении. Определяли первичный опухолевый рост, выживание и в конечном итоге регрессию. Контрольные группы получали соответствующую дозу изотипа антитела или несвязанного конъюгата aRLI-антитело (RLI к HER2).
Определение эффективности модулокина в экспериментальной опухолевой модели рака легких tc-1. Линию опухолевых клеток ТС-1 получали из первичных эпителиальных клеток легких мышей С57В1/6. Клетки иммортализовали амфотропным ретровирусным вектором lxsn16e6e7 и затем трансформировали плазмидой pvejb, экспрессирующей активированный онкоген человека c-ha-ras. Клетки являются положительными в отношении экспресси HPV-16 E7.
Мышам С57В1/6 инъецировали подкожно на правом боку опухолевые клетки ТС-1 (1,10 /мышь). На 9-й день, когда опухоль достигала 20-50 мм2, различные группы мышей обрабатывали 16 или 32 мкг/мышь модулокина RLI к PD1 отдельно в сравнению с эквимолярными концентрациями антитела к PD1 отдельно, RLI отдельно (1004-14р), комбинации антитела к PD1 и RLI или PBS в контрольной группе. Модулокин или RLI отдельно инъецировали с 9-го дня дважды в неделю в течение 4 недель. Антитело к PD1 отдельно инъецировали с 9-го дня и затем один раз в неделю в течение 4 недель. В группе с комбинированием антитело к PD1 инъецировали с 9-го дня и затем один раз в неделю в течение 4 недель, a RLI с 15-го дня и затем дважды в неделю в течение 3 недель. Опухоли измеряли три раза в неделю с помощью штангенциркуля и площадь опухоли рассчитывали следующим образом: длинахширина. Мышей выводили из эксперимента, когда размер опухоли достигал 300 мм2 или при изъязвлении. Определяли первичный опухолевый рост, выживание и в конечном итоге регрессию.
Определение эффективности модулокина в экспериментальной опухолевой модели метастатической меланомы B16F10.
Опухоли B16F10 имплантировали инъекцией 3х104 клеток B16F10 в бок мышей C57BL/6, i.d. на 0-й день. После внедрения опухолевых клеток лечение начинали на 4-й день. Модулокин RLI к PD-L1 инъецировали i.p. при дозе 16 или 32 мкг/мышь в сравнении с эквимолярными концентрациями антитела к PD-L1 отдельно (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL), RLI отдельно (1004-14р), комбинации антитела к PD-L1 ((клон 10 F.9G2, BIO-XCELL)) и RLI или PBS в контрольной группе.
Модулокин, mAb к PD-L1, RLI или комбинацию mAb к PD-L1 + RLI инъецировали с 4-го дня дважды в неделю в течение 4 недель. Опухоли измеряли три раза в неделю с помощью штангенциркуля и площадь опухоли рассчитывают следующим образом: длинахширина. Мышей выводили из эксперимента, когда размер опухоли достигал 300 мм2 или при изъязвлении. Определяли первичный опухолевый рост, выживание и в конечном итоге регрессию. Контрольные группы получали соответствующую дозу изотипа антитела или несвязанного конъюгата aRLI-антитело (RLI к HER2).
Определение эффективности модулокина в экспериментальной опухолевой модели рака мочевого пузыря МВ49 поздней стадии.
Линия опухолевых клеток МВ49 происходит из индуцированной канцерогенами опухоли мочевого пузыря эпителиального происхождения от самцов мышей C57BL/6. 10 клеток опухоли мочевого пузыря МВ49 инъецировали s.c. в верхнюю часть дермы на спине мышей C57BL/6. Лечение начинали на 6-й день после инокуляции опухоли, который соответствует моменту, когда опухоли становятся четко визуализируемыми и пальпируемыми с размером =15 мм2. Модулокины RLI к PD-1 и к PD-L1 инъецировали i.p. в дозе 16 или 32 мкг/мышь в сравнении с эквимолярными концентрациями антитела к PD1 отдельно, антитела к PD-L1 отдельно (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL), RLI отдельно (1004-14р), комбинации антитела к PD1 или антитела к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL) с RLI или PBS в контрольной группе.
Модулокины, mAb к PD-1, mAb к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL), RLI и комбинацию mAb к
- 18 031080
PD-1 или к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL) + RLI инъецировали с 6-го дня дважды в неделю в течение 4 недель. Опухоли измеряли три раза в неделю с помощью штангенциркуля и площадь опухоли рассчитывали следующим образом: длинахширина. Мышей выводили из эксперимента, когда размер опухоли достигал 300 мм2 или при изъязвлении. Определяли первичный опухолевый рост, выживание и в конечном итоге регрессию. Контрольные группы получали соответствующую дозу изотипа антитела или несвязанного конъюгата aRLI-антитело (RLI к HER2).
Определение эффективности модулокина в экспериментальной опухолевой модели рака молочной железы 4Т1.
Мышей BALB/c инокулировали 5х104 клетками рака молочной железы 4Т1 в молочную железу на 0-й день. Лечение начинали на 10-й день после инокуляции опухоли, который соответствует моменту, когда опухоли становятся четко визуализируемыми и пальпируемыми с размером =15-20 мм2. Модулокины RLI к PD-1 и к PD-L1 инъецировали i.p. в дозе 16 или 32 мкг/мышь в сравнении с эквимолярными концентрациями антитела к PD1 отдельно, антитела к PD-L1 отдельно (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL), RLI отдельно (1004-14р), комбинации антитела к PD1 или антитела к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL) с RLI или PBS в контрольной группе.
Модулокины, mAb к PD-1, mAb к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL), RLI и комбинацию mAb к PD-1 или к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL) + RLI инъецировали с 10-го дня дважды в неделю в течение 4 недель. Контрольные группы получали соответствующую дозу изотипа антитела или несвязанного конъюгата aRLI-антитело (RLI к HER2). Опухоли измеряли три раза в неделю с помощью штангенциркуля и площадь опухоли рассчитывали следующим образом: длинахширина. Мышей выводили из эксперимента на 27-й день. Метастатические узелки в легких подсчитывали под бинокулярным микроскопом.
Определение эффективности модулокина в экспериментальной опухолевой модели рака яичника ID8.
Линию клеток карциномы яичника ID8-VEGF предварительно получали из линии клеток эпителиальной папиллярной серозной аденокарциномы яичника мышей. Мышам C57BL/6 подкожно на правом боку имплантировали 5х106 опухолевых клеток ID8. Лечение начинали на 10-й день после инокуляции опухоли, который соответствует моменту, когда опухоли становятся четко визуализируемыми и пальпируемыми с размером =15-20 мм2. Модулокины RLI к PD-1 и к PD-L1 инъецировали i.p. в дозе 16 или 32 мкг/мышь в сравнении с эквимолярными концентрациями антитела к PD1 отдельно, антитела к PD-L1 отдельно (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL), RLI отдельно (1004-14р), комбинации антитела к PD1 или антитела к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL) с RLI или PBS в контрольной группе.
Модулокины, mAb к PD-1, mAb к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL), RLI и комбинацию mAb к PD-1 или к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL) + RLI инъецировали с 10-го дня дважды в неделю в течение 4 недель. Контрольные группы получали соответствующую дозу изотипа антитела или несвязанного конъюгата aRLI-антитело (RLI к HER2). Опухоли измеряли три раза в неделю с помощью штангенциркуля и площадь опухоли рассчитывали следующим образом: длинахширина. Мышей выводили из эксперимента, когда размер опухоли достигал 300 мм2 или при изъязвлении.
Определение эффективности модулокина в экспериментальной опухолевой модели рака предстательной железы RM-1.
Самок мышей C57BL/6 инокулировали s.c. 2х105 клетками рака предстательной железы мышей RM-1. Лечение начинали на 3-й день после инокуляции опухоли, который соответствует моменту, когда опухоли становятся четко визуализируемыми и пальпируемыми с размером =15-20 мм2. Модулокины RLI к PD-1 и к PD-L1 инъецировали i.p. в дозе 16 или 32 мкг/мышь в сравнении с эквимолярными концентрациями антитела к PD1 отдельно, антитела к PD-L1 отдельно (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL), RLI отдельно (1004-14р), комбинации антитела к PD1 или антитела к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL) с RLI или PBS в контрольной группе.
Модулокины, mAb к PD-1, mAb к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL), RLI и комбинацию mAb к PD-1 или к PD-L1 (клон 10 F.9G2, BIO-XCELL) + RLI инъецировали с 3-го дня дважды в неделю в течение 4 недель. Контрольные группы получали соответствующую дозу изотипа антитела или несвязанного конъюгата aRLI-антитело (RLI к HER2). Опухоли измеряли три раза в неделю с помощью штангенциркуля и площадь опухоли рассчитывали следующим образом: длинахширина. Мышей выводили из эксперимента, когда размер опухоли достигал 300 мм2 или при изъязвлении.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> СИТЮН
Университе Пари Декарт
Эй-Пи-Эйч-Пи
БЕШАР, Давид
ТАРТУР, Эрик
ЖЕИ, Ален
- 19 031080 <120> МОДУЛОКИНЫ НА ОСНОВЕ ДОМЕНА SUSHI IL-15 И IL-15Ra <130> CYT-B-0005-PCT1 <150> 13003963.9 <151> 2013-08-08 <160> 19 <170> PatentIn версии 3.5 <210> 1 <211> 114 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> консенсусная последовательность интерлейкина 15 млекопитающего <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (1)..(1) <223> X= N, S, T или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (3)..(3) <223> X= V, H, I, Q или E <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (4)..(4) <223> X= N, Y, F или D <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (6)..(6) <223> X= I или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (7)..(7) <223> X= S, N, L, Y, K или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (10)..(10) <223> X= K, E, R или Q <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (11)..(11) <223> X= K, T или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (13)..(13) <223> X= E, D или Q <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (14)..(14)
- 20 031080 <223> X= D, H, S или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (16)..(16) <223> X= I или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (17)..(17) <223> X=Q, R или K <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (18)..(18) <223> X= S или F <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (19)..(19) <223> X= M, I или L <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (21)..(21) <223> X= I, V или M <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (23)..(23) <223> X=A или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (28)..(28) <223> X=E или D <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (30)..(30) <223> X= D или G <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (31)..(31) <223> X= V, F, A или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (34)..(34) <223> X= S, N или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (37)..(37) <223> X= V или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (39)..(39) <223> X= A или T <220>
- 21 031080 <221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (41)..(41) <223> X= K, Q или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (48)..(48) <223> X= Q, G, R, H или E <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (51)..(51) <223> X= S или L <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (52)..(52) <223> X= L, Q или H <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (54)..(54) <223> X= S, F или Y <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (55)..(55) <223> X= G, K, S, N или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (56)..(56) <223> X= D, H, S или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (57)..(57) <223> X= A, H, M, E, G, S или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (58)..(58) <223> X= S, V, P, T, N или D <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (59)..(59) <223> X= I или L <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (60)..(60) <223> X= H, S, K, N, Y или E <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (61)..(61) <223> X= D или E <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (62)..(62) <223> X= T, I или A
- 22 031080 <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (63)..(63) <223> X= V или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (64)..(64) <223> X= E, T, Q, R или K <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (66)..(66) <223> X= L или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (67)..(67) <223> X= I, T или L <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (68)..(68) <223> X=I, M, F, Y или L <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (72)..(72) <223> X= N, T, R, D или S <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (73)..(73) <223> X= S, N, R, T или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (75)..(75) <223> X= S или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (76)..(76) <223> X= S или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (77)..(77) <223> X= N, I или K <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (78)..(78) <223> X= G, E или K <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (79)..(79) <223> X= N, Y, D или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
- 23 031080 <222> (80)..(80) <223> X= V, K или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (81)..(81) <223> X= T, A или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (83)..(83) <223> X= S, L или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (87)..(87) <223> X= E или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (93)..(93) <223> X= E или K <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (94)..(94) <223> X= K или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (95)..(95) <223> X= N, T или S <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (96)..(96) <223> X= I или F <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (97)..(97) <223> X= K, N, A, или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (101)..(101) <223> X= Q, K или E <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (104)..(104) <223> X= V, I или K <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (105)..(105) <223> X= H или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (112)..(112) <223> X= N или Y
- 24 031080 <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (113)..(113) <223> X= = T, S, P, L или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (114)..(114) <223> X= = S или P <400> 1
Xaa 1 Trp Xaa Xaa Val 5 Xaa Xaa Asp Leu Xaa 10 Xaa Ile Xaa Xaa Leu 15 Xaa
Xaa Xaa Xaa His Xaa Asp Xaa Thr Leu Tyr Thr Xaa Ser Xaa Xaa His
20 25 30
Pro Xaa Cys Lys Xaa Thr Xaa Met Xaa Cys Phe Leu Leu Glu Leu Xaa
35 40 45
Val Ile Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
50 55 60
Asn Xaa Xaa Xaa Leu Ala Asn Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
65 70 75 80
Xaa Glu Xaa Gly Cys Lys Xaa Cys Glu Glu Leu Glu Xaa Xaa Xaa Xaa
85 90 95
Xaa Glu Phe Leu Xaa Ser Phe Xaa Xaa Ile Val Gln Met Phe Ile Xaa
100 105 110
Xaa Xaa <210> 2 <211> 114 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> консенсусная последовательность интерлейкина 15 примата <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (1)..(1) <223> X = N или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (4)..(4) <223> X = N или D
- 25 031080 <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (10)..(10) <223> X = K или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (11)..(11) <223> X = K или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (13)..(13) <223> X = E или Q <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (16)..(16) <223> X = I или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (19)..(19) <223> X = M или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (30)..(30) <223> X = D или G <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (31)..(31) <223> X = V или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (34)..(34) <223> X = S или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (52)..(52) <223> X = L или H <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (55)..(55) <223> X = G или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (56)..(56) <223> X = D или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (57)..(57) <223> X = A или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (58)..(58)
- 26 031080 <223> X = S, N или D <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (60)..(60) <223> X = H или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (63)..(63) <223> X = V или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (67)..(67) <223> X = I или L <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (72)..(72) <223> X = N или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (73)..(73) <223> X =S или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (76)..(76) <223> X =S или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (79)..(79) <223> X =N или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (80)..(80) <223> X =V или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (93)..(93) <223> X =E или K <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (112)..(112) <223> X = N или Y <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (113)..(113) <223> X = T или A <400> 2
Xaa Trp Val Xaa Val Ile Ser Asp Leu Xaa Xaa Ile Xaa Asp Leu Xaa
5 10 15
- 27 031080
Gln Ser Xaa His 20 Ile Asp Ala Thr Leu 25 Tyr Thr Glu Ser Xaa 30 Xaa His
Pro Xaa Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Xaa Glu Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Ile Xaa Asp Thr Xaa Glu
50 55 60
Asn Leu Xaa Ile Leu Ala Asn Xaa Xaa Leu Ser Xaa Asn Gly Xaa Xaa
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Xaa Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Xaa
100 105 110
Xaa Ser <210> 3 <211> 114 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (93)..(93) <223> X= E или K <400> 3
Asn 1 Trp Val Asn Val 5 Ile Ser Asp Leu Lys 10 Lys Ile Glu Asp Leu 15 Ile
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Xaa Lys Asn Ile
90 95
- 28 031080
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser <210> 4 <211> 61 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> консенсусная последовательность домена sushi млекопитающего <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (3)..(3) <223> X= P или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (5)..(5) <223> X= M или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (7)..(7) <223> X= V или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (13)..(13) <223> X= W, R или Q <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (16)..(16) <223> X= S или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (19)..(19) <223> X= L или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (20)..(20) <223> X= Y, H или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (26)..(26) <223> X= I или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (39)..(39) <223> X= S или T
- 29 031080 <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (41)..(41) <223> X=T или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (45)..(45) <223> X=T или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (45)..(45) <223> X= L или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (48)..(48) <223> X= A или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (51)..(51) <223> X= V или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (53)..(53) <223> X= H или Y <400> 4
Cys 1 Pro Xaa Pro Xaa 5 Ser Xaa Glu His Ala 10 Asp Ile Xaa Val Lys 15 Xaa
Tyr Ser Xaa Xaa Ser Arg Glu Arg Tyr Xaa Cys Asn Ser Gly Phe Lys
20 25 30
Arg Lys Ala Gly Thr Ser Xaa Leu Xaa Glu Cys Val Xaa Asn Lys Xaa
35 40 45
Thr Asn Xaa Ala Xaa Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys
50 55 60
<210> 5 <211> 64 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> увеличенная консенсусная последовательность домена sushi щего млекопитаю<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (1)..(1) <223> X= T, V или I
- 30 031080 <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (5)..(5) <223> X= P или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (7)..(7) <223> X= M или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (9)..(9) <223> X= V или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (15)..(15) <223> X= W, R или Q <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (18)..(18) <223> X= S или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (21)..(21) <223> X=L или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (22)..(22) <223> X=Y, H или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (28)..(28) <223> X= I или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (41)..(41) <223> X= S или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (43)..(43) <223> X= T или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (47)..(47) <223> X= L или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (50)..(50) <223> X= A или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
- 31 031080 <222> (53)..(53) <223> X= V или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (55)..(55) <223> X= H или Y <400> 5
Xaa 1 Thr Cys Pro Xaa 5 Pro Xaa Ser Xaa Glu 10 His Ala Asp Ile Xaa 15 Val
Lys Xaa Tyr Ser Xaa Xaa Ser Arg Glu Arg Tyr Xaa Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Xaa Leu Xaa Glu Cys Val Xaa Asn
35 40 45
Lys Xaa Thr Asn Xaa Ala Xaa Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
<210> 6 <211> 61 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> консенсусная последовательность домена sushi примата <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (3)..(3) <223> X= P или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (5)..(5) <223> X= M или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (13)..(13) <223> X= W, R или Q <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (20)..(20) <223> X= Y или H <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (26)..(26) <223> X= I или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (51)..(51)
- 32 031080 <223> X= V или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (53)..(53) <223> X= V или A <400> 6
Cys 1 Pro Xaa Pro Xaa 5 Ser Val Glu His Ala 10 Asp Ile Xaa Val Lys 15 Ser
Tyr Ser Leu Xaa Ser Arg Glu Arg Tyr Xaa Cys Asn Ser Gly Phe Lys
20 25 30
Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala
35 40 45
Thr Asn Xaa Ala Xaa Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys
50 55 60
<210> 7 <211> 63 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> увеличенная консенсусная последовательность домена sushi примата <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (1)..(1) <223> X= V или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (5)..(5) <223> X= P или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (7)..(7) <223> X= M или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (15)..(15) <223> X= W, R или Q <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (22)..(22) <223> X= Y или H <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (28)..(28) <223> X= I или V
- 33 031080
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (53)..(53)
<223> X=V или A
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (55)..(55)
<223> X=H или Y
<400> 7
Xaa 1 Thr Cys Pro Xaa 5 Pro Xaa Ser Val Glu 10 His Ala Asp Ile Xaa 15 Val
Lys Ser Tyr Ser Leu Xaa Ser Arg Glu Arg Tyr Xaa Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Xaa Ala Xaa Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys
50 55 60
<210> 8
<211> 61
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 8
Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser
1 5 10 15
Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys
20 25 30
Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala
35 40 45
Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys
50 55 60
<210> 9
<211> 64
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 9
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
- 34 031080
Lys Ser Tyr Ser 20 Leu Tyr Ser Arg Glu 25 Arg Tyr Ile Cys Asn 30 Ser Gly
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
<210> 10 <211> 77 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> sushi млекопитающего и консенсусная последовательность домена <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (1)..(1) <223> X= T, V или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (5)..(5) <223> X= P или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (7)..(7) <223> X= M или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (9)..(9) <223> X= V или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (15)..(15) <223> X= W, R или Q <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (18)..(18) <223> X= S или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (21)..(21) <223> X= L или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (22)..(22) <223> X= Y, H или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
- 35 031080 <222> (28)..(28) <223> X= I или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (41)..(41) <223> X= S или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (43)..(43) <223> X= T или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (47)..(47) <223> X= L или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (50)..(50) <223> X=A или N <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (53)..(53) <223> X= V или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (55)..(55) <223> X= H или Y <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (55)..(55) <223> X= H или Y <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (68)..(68) <223> X=A, S или L <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (70)..(70) <223> X= V, A, S или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (71)..(71) <223> X= H или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (72)..(72) <223> X= Q или H <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (73)..(73) <223> X= R, S или K
- 36 031080 <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (75)..(75) <223> X= A, V или P <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (76)..(76) <223> X= P или S <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (77)..(77) <223> X= P или T <400> 10
Xaa 1 Thr Cys Pro Xaa 5 Pro Xaa Ser Xaa Glu 10 His Ala Asp Ile Xaa 15 Val
Lys Xaa Tyr Ser Xaa Xaa Ser Arg Glu Arg Tyr Xaa Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Xaa Leu Xaa Glu Cys Val Xaa Asn
35 40 45
Lys Xaa Thr Asn Xaa Ala Xaa Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Xaa
65 70 75
<210> 11 <211> 77 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> sushi примата и консенсусная последовательность домена <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (1)..(1) <223> X= V или I <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (5)..(5) <223> X= P или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (7)..(7) <223> X= M или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
- 37 031080 <222> (15)..(15) <223> X= W, R или Q <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (22)..(22) <223> X= Y или H <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (28)..(28) <223> X= I или V <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (53)..(53) <223> X= V или A <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (55)..(55) <223> X= H или Y <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (68)..(68) <223> X= A, S или L <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (70)..(70) <223> X= V, A или T <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (71)..(71) <223> X= H или R <220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК <222> (75)..(75) <223> X= A или V <400> 11
Xaa 1 Thr Cys Pro Xaa 5 Pro Xaa Ser Val Glu 10 His Ala Asp Ile Xaa 15 Val
Lys Ser Tyr Ser Leu Xaa Ser Arg Glu Arg Tyr Xaa Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Xaa Ala Xaa Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Xaa Leu Xaa Xaa Gln Arg Pro Xaa Pro Pro
70 75
- 38 031080
<210> <211> <212> <213> 12 77 БЕЛОК Homo sapiens
<400> 12
Ile 1 Thr Cys Pro Pro 5 Pro Met Ser Val Glu 10 His Ala Asp Ile Trp 15 Val
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro
65 70 75
<210> 13
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> пептидный линкер
<400> 13
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser Leu Gln
<210> 14
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> пептидный линкер
<400> 14
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gly
- 39 031080 <210> 15 <211> 21 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> пептидный линкер <400> 15
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
5 10
Ser Gly
Gly Gly Ser
Leu Gln
<210> 16
<211> 22
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> пептидный линкер
<400> 16
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Ser Gly
<210> 17
<211> 22
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> пептидный линкер
<400> 17
Ala Ala Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Ala Ala <210> 18 <211> 211 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> RLI1
- 40 031080 <400> 18
Ile 1 Thr Cys Pro Pro 5 Pro Met Ser Val Glu 10 His Ala Asp Ile Trp 15 Val
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Gly Gly
65 70 75 80
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu
85 90 95
Gln Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu
100 105 110
Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val
115 120 125
His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu
130 135 140
Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val
145 150 155 160
Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn
165 170 175
Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn
180 185 190
Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile
195 200 205
Asn Thr Ser
210 <210> 19 <211> 211 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность
- 41 031080 <220>
<223> RLI2 <400> 19
Ile 1 Thr Cys Pro Pro 5 Pro Met Ser Val Glu 10 His Ala Asp Ile Trp 15 Val
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Gly Gly
65 70 75 80
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
85 90 95
Gly Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu
100 105 110
Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val
115 120 125
His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu
130 135 140
Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val
145 150 155 160
Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn
165 170 175
Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn
180 185 190
Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile
195 200 205
Asn Thr Ser
210
- 42 031080

Claims (18)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Иммуноцитокин, содержащий:
    a) конъюгат и
    b) иммуномодулирующее антитело или его фрагмент, напрямую или опосредовано связанные ковалентной связью с указанным конъюгатом, где указанный конъюгат содержит:
    (i) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность интерлейкина-15 или его производных, и (ii) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность домена sushi IL-15Ra или его производных.
  2. 2. Иммуноцитокин по п.1, где указанное иммуномодулирующее антитело стимулирует костимулирующий рецептор и выбрано из группы, включающей агонисты CD40, агонисты CD137, агонисты CD134 и агонисты TNFRSF18.
  3. 3. Иммуноцитокин по п.1, где указанное иммуномодулирующее антитело ингибирует иммуносупрессорный рецептор и выбрано из группы, включающей антагонисты CTL-A4, антагонисты ингибирующих KIR, антагонисты BTLA, антагонисты LAG3, антагонисты HAVCR2, антагонисты ADORA2A и антагонисты PD-1.
  4. 4. Иммуноцитокин по п.3, где указананное иммуномодулирующее антитело, ингибирующее иммуносупрессорный рецептор, выбрано среди антагонистов СТЪ-А^ предпочтительно ипилимумаба или тицилимумаба.
  5. 5. Иммуноцитокин по п.3, где указанное иммуномодулирующее антитело, ингибирующее иммуносупрессорные рецепторы, выбрано среди антагонистов ингибирующих KIR, предпочтительно 1-7F9.
  6. 6. Иммуноцитокин по п.3, где указанное иммуномодулирующее антитело, ингибирующее иммуносупрессорные рецепторы, выбрано среди антагонистов PD-1, предпочтительно ниволумаба, Merck 3745 или СТ-011 (также известного как hBAT).
  7. 7. Иммуноцитокин по любому из пп.1-6, где
    a) полипептиды i) и ii) конъюгата ковалентно связаны в слитом белке и
    b) указанный конъюгат и антитело или его фрагмент ковалентно связаны в слитом белке.
  8. 8. Иммуноцитокин по любому из пп.1-7, где указанный интерлейкин-15 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.
  9. 9. Иммуноцитокин по любому из пп.1-8, где домен sushi IL-15Ra имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.
  10. 10. Иммуноцитокин по любому из пп.1-9, где полипептид (ii), содержащий аминокислотную последовательность домена sushi IL-15Ra или его производных, имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
  11. 11. Иммуноцитокин по п.7, где указанный конъюгат содержит аминокислотную последовательность интерлейкина-15 или его производных в С-концевом положении по отношению к аминокислотной последовательности домена sushi IL-15Ra или его производных и где аминокислотная последовательность конъюгата находится в С-концевом положении по отношению к аминокислотной последовательности антитела или его фрагмента.
  12. 12. Нуклеиновая кислота, кодирующая иммуноцитокин, по любому из пп.1-11.
  13. 13. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.12.
  14. 14. Клетка-хозяин, полученная способами генетической инженерии с использованием нуклеиновой кислоты по п.12 или с использованием вектора по п.13, при этом предпочтительно указанной клеткойхозяином является животная клетка и наиболее предпочтительно клетка CHO.
  15. 15. Фармацевтическая композиция, содержащая иммуноцитокин по любому из пп.1-11, связанный с фармацевтически приемлемым носителем.
  16. 16. Фармацевтическая композиция, содержащая нуклеиновую кислоту по п.12, связанную с фармацевтически приемлемым носителем.
  17. 17. Фармацевтическая композиция, содержащая вектор по п.13, связанный с фармацевтически приемлемым носителем.
  18. 18. Фармацевтическая композиция по любому из пп.15-17, где указанная фармацевтическая композиция предназначена для лечения рака у субъекта, предпочтительно поздней стадии рака, такого как гипернефрома (RCC).
    - 43 031080
    Фиг. 1В ♦ Среднее значение Медиана
    1800 1600
    1400
    1200
    1000
    800
    600
    400
    -р .,.-200 о
    *
    НВА
    RLI HBAT-RLI
    Фиг. 2 ———г——
    НВАТ+- RLI
EA201690333A 2013-08-08 2014-08-08 МОДУЛОКИНЫ НА ОСНОВЕ ДОМЕНА SUSHI IL-15 И IL-15Rα EA031080B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP13003963 2013-08-08
PCT/EP2014/002181 WO2015018528A1 (en) 2013-08-08 2014-08-08 Il-15 and il-15raplha sushi domain based modulokines

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201690333A1 EA201690333A1 (ru) 2016-06-30
EA031080B1 true EA031080B1 (ru) 2018-11-30

Family

ID=48953308

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201690333A EA031080B1 (ru) 2013-08-08 2014-08-08 МОДУЛОКИНЫ НА ОСНОВЕ ДОМЕНА SUSHI IL-15 И IL-15Rα

Country Status (18)

Country Link
US (2) US11273204B2 (ru)
EP (4) EP3444271B1 (ru)
JP (2) JP6649254B2 (ru)
KR (2) KR102364523B1 (ru)
CN (1) CN105612175B (ru)
AU (1) AU2014304931B2 (ru)
BR (1) BR112016002614B8 (ru)
CA (1) CA2919725C (ru)
DK (2) DK3030575T3 (ru)
EA (1) EA031080B1 (ru)
ES (3) ES2690046T3 (ru)
HR (3) HRP20231437T1 (ru)
HU (2) HUE064280T2 (ru)
MX (1) MX2016001555A (ru)
PL (3) PL3995507T3 (ru)
PT (2) PT3444271T (ru)
SI (2) SI3030575T1 (ru)
WO (1) WO2015018528A1 (ru)

Families Citing this family (76)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT2529747T (pt) 2005-12-02 2018-05-09 Icahn School Med Mount Sinai Vírus da doença de newcastle quiméricos que apresentam proteínas de superfície não nativas e suas utilizações
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
KR102211837B1 (ko) 2013-01-14 2021-02-03 젠코어 인코포레이티드 신규한 이형이량체 단백질
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US20160015760A1 (en) 2013-03-14 2016-01-21 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Newcastle disease viruses and uses thereof
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
CA3093606A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins for induction of t cells
JP6857498B2 (ja) 2014-02-27 2021-04-14 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． 癌を処置するための併用方法
EP2915569A1 (en) 2014-03-03 2015-09-09 Cytune Pharma IL-15/IL-15Ralpha based conjugates purification method
US9394365B1 (en) 2014-03-12 2016-07-19 Yeda Research And Development Co., Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of alzheimer's disease
US10519237B2 (en) 2014-03-12 2019-12-31 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US10618963B2 (en) 2014-03-12 2020-04-14 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US10144778B2 (en) 2014-03-12 2018-12-04 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
KR20230022270A (ko) 2014-03-28 2023-02-14 젠코어 인코포레이티드 Cd38 및 cd3에 결합하는 이중특이적 항체
EP3223845B1 (en) 2014-11-26 2021-05-19 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd20
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
JP2017536830A (ja) 2014-11-26 2017-12-14 ゼンコー・インコーポレイテッドＸｅｎｃｏｒ、 Ｉｎｃ． Ｃｄ３及びｃｄ３８に結合するヘテロ二量体抗体
WO2016105450A2 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
WO2016141387A1 (en) 2015-03-05 2016-09-09 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
US20180155439A1 (en) * 2015-06-10 2018-06-07 Emory University Compositions and Conjugates Comprising an Interleukin and Polypeptides That Specifically Bind TGF-beta
JP6800219B2 (ja) 2015-09-16 2020-12-16 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 特異的なインターロイキン−１５（ｉｌ−１５）アンタゴニストポリペプチド並びに炎症疾患及び自己免疫疾患の処置のためのその使用
MX2018003630A (es) 2015-10-02 2018-08-01 F Hoffmann ­La Roche Ag Anticuerpos biespecificos para pd1 y tim3.
CN108699136B (zh) 2015-12-07 2022-03-18 Xencor股份有限公司 结合cd3和psma的异二聚抗体
US11661455B2 (en) 2016-02-05 2023-05-30 Orionis Biosciences BV Chimeric protein comprising an interferon alpha 2mutant and a PD-L1 binding moiety
CN109071627B (zh) 2016-02-05 2023-04-04 奥里尼斯生物科学私人有限公司 Cd8结合剂
CA3017813C (en) * 2016-03-17 2021-12-07 Oslo Universitetssykehus Hf Fusion proteins targeting tumour associated macrophages for treating cancer
EP3443001A4 (en) 2016-04-11 2020-04-29 Obsidian Therapeutics, Inc. REGULATED BIOCIRCUIT SYSTEMS
AU2017268399B2 (en) 2016-05-18 2023-01-12 Modernatx, Inc. mRNA combination therapy for the treatment of cancer
JP7185530B2 (ja) 2016-06-13 2022-12-07 トルク セラピューティクス， インコーポレイテッド 免疫細胞機能を促進するための方法および組成物
WO2017218707A2 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
WO2018005706A1 (en) 2016-06-28 2018-01-04 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
US10501543B2 (en) * 2016-10-14 2019-12-10 Xencor, Inc. IL15/IL15Rα heterodimeric Fc-fusion proteins
AU2018247765B2 (en) 2017-04-03 2023-11-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Immunoconjugates of an Anti-PD-1 antibody with a mutant IL-2 or with IL-15
TWI690538B (zh) 2017-04-05 2020-04-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 特異性結合至pd1至lag3的雙特異性抗體
AU2018291497A1 (en) 2017-06-30 2020-01-16 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric Fc fusion proteins containing IL-15/IL-15Ra and antigen binding domains
JP7423511B2 (ja) 2017-08-09 2024-01-29 オリオンズ バイオサイエンス インコーポレイテッド Ｐｄ－１およびｐｄ－ｌ１結合物質
EP3665201A4 (en) 2017-08-09 2021-06-02 Orionis Biosciences, Inc. CD8 BINDERS
EP3678701A4 (en) 2017-09-05 2021-12-01 Torque Therapeutics, Inc. THERAPEUTIC PROTEIN COMPOSITIONS AND METHOD FOR MANUFACTURING AND USING THEREOF
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
US11312770B2 (en) 2017-11-08 2022-04-26 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-PD-1 sequences
KR20200100098A (ko) 2017-12-19 2020-08-25 젠코어 인코포레이티드 조작된 il-2 fc 융합 단백질
TW201938196A (zh) * 2018-01-18 2019-10-01 美商南特生物科學股份有限公司 融合蛋白擴展
PE20201342A1 (es) 2018-02-28 2020-11-25 Pfizer Variantes de il-15 y usos de las mismas
US10982006B2 (en) 2018-04-04 2021-04-20 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
AU2019256539A1 (en) * 2018-04-18 2020-11-26 Xencor, Inc. PD-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15Ra Fc-fusion proteins and PD-1 antigen binding domains and uses thereof
EP3781596A1 (en) * 2018-04-18 2021-02-24 Xencor, Inc. Il-15/il-15ra heterodimeric fc fusion proteins and uses thereof
WO2019204646A1 (en) * 2018-04-18 2019-10-24 Xencor, Inc. Lag-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and lag-3 antigen binding domains
EP3781598A1 (en) 2018-04-18 2021-02-24 Xencor, Inc. Tim-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and tim-3 antigen binding domains
EP3861016A2 (en) 2018-10-03 2021-08-11 Xencor, Inc. Il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
KR20210091710A (ko) 2018-10-12 2021-07-22 젠코어 인코포레이티드 PD-1 표적화 IL-15/IL-15Rα Fc 융합 단백질 및 병용요법에서의 이의 용도
EP3897853A1 (en) 2018-12-20 2021-10-27 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric fc fusion proteins containing il-15/il-15ra and nkg2d antigen binding domains
CA3132185A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind enpp3 and cd3
EP3725370A1 (en) 2019-04-19 2020-10-21 ImmunoBrain Checkpoint, Inc. Modified anti-pd-l1 antibodies and methods and uses for treating a neurodegenerative disease
MX2021014189A (es) * 2019-05-20 2022-01-06 Cytune Pharma Regimenes de dosificacion de agonistas de la il-2/il-15r?y para el tratamiento del cancer o enfermedades infecciosas.
CN114341179A (zh) * 2019-08-17 2022-04-12 Igm生物科学股份有限公司 多聚体双特异性抗cd123结合分子及其用途
CN110478474B (zh) * 2019-08-21 2020-06-02 启辰生生物科技(珠海)有限公司 免疫调节剂、疫苗、细胞及应用
CN116574183A (zh) * 2019-08-22 2023-08-11 盛禾(中国)生物制药有限公司 多功能抗体、其制备及其用途
EP4028413A1 (en) 2019-09-10 2022-07-20 Obsidian Therapeutics, Inc. Ca2-il15 fusion proteins for tunable regulation
RU2753282C2 (ru) 2019-09-19 2021-08-12 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" ИММУНОЦИТОКИН, ВКЛЮЧАЮЩИЙ ГЕТЕРОДИМЕРНЫЙ БЕЛКОВЫЙ КОМПЛЕКС НА ОСНОВЕ IL-15/IL-15Rα, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
TW202128757A (zh) 2019-10-11 2021-08-01 美商建南德克公司 具有改善之特性的 PD-1 標靶 IL-15/IL-15Rα FC 融合蛋白
JP2023502712A (ja) * 2019-11-21 2023-01-25 インサーム（インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル） 抗ｐｄ－１／ｉｌ－１５免疫サイトカインによる新しいｐｄ－１標的免疫療法
CN110804588B (zh) * 2019-11-22 2020-09-01 启辰生生物科技(珠海)有限公司 用于协同改善t淋巴细胞性质的组合物及其应用
EP3889183A1 (en) * 2020-04-01 2021-10-06 Pierre Fabre Medicament A protein complex comprising an immunocytokine
US11919956B2 (en) 2020-05-14 2024-03-05 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3
KR102607909B1 (ko) 2020-08-19 2023-12-01 젠코어 인코포레이티드 항-cd28 조성물
CN116134140A (zh) * 2020-09-01 2023-05-16 上海药明生物技术有限公司 长效作用的il-15及其用途
JP2023550880A (ja) 2020-10-26 2023-12-06 サイチューン ファーマ 非黒色腫皮膚癌を治療するためのＩＬ－２／ＩＬ－１５Ｒβγアゴニスト
CA3195627A1 (en) 2020-10-26 2022-05-05 Stefano FERRARA Il-2/il-15r.beta..gamma. agonist for treating squamous cell carcinoma
WO2022192403A1 (en) 2021-03-09 2022-09-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
JP2024509274A (ja) 2021-03-10 2024-02-29 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｇｐｃ３に結合するヘテロ二量体抗体
WO2023086772A1 (en) 2021-11-12 2023-05-19 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind to b7h3 and nkg2d

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012175222A1 (en) * 2011-06-24 2012-12-27 Cytune AN IL-15 AND IL-15Rα SUSHI DOMAIN BASED IMMUNOCYTOKINES

Family Cites Families (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5997856A (en) 1988-10-05 1999-12-07 Chiron Corporation Method and compositions for solubilization and stabilization of polypeptides, especially proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5073627A (en) 1989-08-22 1991-12-17 Immunex Corporation Fusion proteins comprising GM-CSF and IL-3
US5108910A (en) 1989-08-22 1992-04-28 Immunex Corporation DNA sequences encoding fusion proteins comprising GM-CSF and IL-3
US5851795A (en) 1991-06-27 1998-12-22 Bristol-Myers Squibb Company Soluble CTLA4 molecules and uses thereof
US5855887A (en) 1995-07-25 1999-01-05 The Regents Of The University Of California Blockade of lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US6051227A (en) 1995-07-25 2000-04-18 The Regents Of The University Of California, Office Of Technology Transfer Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
AU6703198A (en) 1997-03-21 1998-10-20 Brigham And Women's Hospital Immunotherapeutic ctla-4 binding peptides
EE05627B1 (et) 1998-12-23 2013-02-15 Pfizer Inc. CTLA-4 vastased inimese monoklonaalsed antikehad
US7109003B2 (en) 1998-12-23 2006-09-19 Abgenix, Inc. Methods for expressing and recovering human monoclonal antibodies to CTLA-4
JP3793693B2 (ja) 1998-12-23 2006-07-05 ファイザー インコーポレーテッド Ｃｔｌａ−４に対するヒトモノクローナル抗体
CN1371416B (zh) 1999-08-24 2012-10-10 梅达里克斯公司 人ctla-4抗体及其应用
IL149701A0 (en) 2001-05-23 2002-11-10 Pfizer Prod Inc Use of anti-ctla-4 antibodies
AR039067A1 (es) 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
US6887673B2 (en) 2002-07-30 2005-05-03 Bristol-Myers Squibb Company Humanized antibodies against human 4-1BB
NZ581541A (en) 2002-10-17 2011-07-29 Genmab As Human monoclonal antibodies against CD20
WO2004056875A1 (en) 2002-12-23 2004-07-08 Wyeth Antibodies against pd-1 and uses therefor
US7288638B2 (en) 2003-10-10 2007-10-30 Bristol-Myers Squibb Company Fully human antibodies against human 4-1BB
US20050136055A1 (en) 2003-12-22 2005-06-23 Pfizer Inc CD40 antibody formulation and methods
CA2551008C (en) 2003-12-25 2013-10-01 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Anti-cd40 antibody mutants
WO2005085282A1 (en) 2004-02-27 2005-09-15 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Il-15 binding site for il15-ralpha and specific il-15 mutants having agonists/antagonists activity
EP1791868B1 (en) * 2004-07-01 2011-02-23 Novo Nordisk A/S Antibodies binding to receptors kir2dl1, -2, 3 but not kir2ds4 and their therapeutic use
WO2006056875A1 (en) 2004-11-29 2006-06-01 Pharmacia & Upjohn Company Llc Thiazepine oxazolidinones as antibacterial agents
DK1866339T3 (da) 2005-03-25 2013-09-02 Gitr Inc GTR-bindende molekyler og anvendelser heraf
CA2607147C (en) 2005-05-09 2018-07-17 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
PT1899364T (pt) 2005-05-17 2020-05-20 Univ Connecticut Composições e métodos para imunomodulação num organismo
KR100694508B1 (ko) 2005-05-24 2007-03-13 울산대학교 산학협력단 Ｈｂｂｋ４항체를 포함하는 암 질환 치료용 약학조성물및 이를 이용한 암의 면역치료 방법
JP5252635B2 (ja) 2005-07-01 2013-07-31 メダレックス インコーポレーティッド プログラム死リガンド１（ｐｄ−ｌ１）に対するヒトモノクローナル抗体
EP1777294A1 (en) 2005-10-20 2007-04-25 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) IL-15Ralpha sushi domain as a selective and potent enhancer of IL-15 action through IL-15Rbeta/gamma, and hyperagonist (IL15Ralpha sushi -IL15) fusion proteins
WO2008076560A2 (en) 2006-11-15 2008-06-26 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to btla and methods of use
SI2079760T1 (sl) 2006-12-27 2016-11-30 Emory University Sestavki in metode za zdravljenje okužb
PT2160401E (pt) 2007-05-11 2014-10-30 Altor Bioscience Corp Moléculas de fusão e variantes de il-15
CN104945508B (zh) 2007-06-18 2019-02-22 默沙东有限责任公司 针对人程序性死亡受体pd-1的抗体
NZ703668A (en) 2007-06-27 2016-07-29 Us Sec Dep Of Health And Human Services Complexes of il-15 and il-15ralpha and uses thereof
BRPI0820875B1 (pt) 2007-12-14 2021-10-19 Bristol-Myers Squibb Company Molécula de ligação isolada, anticorpo monoclonal humano, composição, molécula de ácido nucleico, vetor e célula hospedeira
CN104548091A (zh) 2008-02-11 2015-04-29 治疗科技公司 用于肿瘤治疗的单克隆抗体
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
WO2009135031A1 (en) 2008-04-30 2009-11-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Servic Substituted il-15
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
BRPI0917891A2 (pt) 2008-08-25 2015-11-24 Amplimmune Inc antagonistas de pd-1 e métodos de utilização dos mesmos
EP2350129B1 (en) 2008-08-25 2015-06-10 Amplimmune, Inc. Compositions of pd-1 antagonists and methods of use
CA2736816C (en) 2008-09-12 2018-05-22 Isis Innovation Limited Pd-1 specific antibodies and uses thereof
JP2012501670A (ja) 2008-09-12 2012-01-26 アイシス・イノベーション・リミテッド Ｐｄ−１特異抗体およびその使用
EP3133086B1 (en) 2008-09-26 2018-08-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Human anti-pd-1, pd-l1, and pd-l2 antibodies and uses thereof
LT4209510T (lt) 2008-12-09 2024-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-pd-l1 antikūnai ir jų panaudojimas t ląstelių funkcijos pagerinimui
EP2393835B1 (en) 2009-02-09 2017-04-05 Université d'Aix-Marseille Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
WO2010106051A1 (en) 2009-03-17 2010-09-23 Universite De La Mediterranee Btla antibodies and uses thereof
MX2012001417A (es) 2009-07-31 2012-07-03 Organon Nv Anticuerpos completamente humanos para atenuante de linfocitos b y t (btla).
EP3135294B1 (en) 2009-08-14 2020-06-03 The Government of the United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services Use of il-15-il-15 receptor heterodimers to treat lymphopenia
CN102574924A (zh) 2009-09-03 2012-07-11 先灵公司 抗-gitr抗体
EP2545078A1 (en) 2010-03-11 2013-01-16 UCB Pharma, S.A. Pd-1 antibody
NZ629913A (en) 2010-08-23 2016-01-29 Univ Texas Anti-ox40 antibodies and methods of using the same
AU2011305476B2 (en) 2010-09-21 2016-12-01 Altor Bioscience Corporation Multimeric IL-15 soluble fusion molecules and methods of making and using same
CA2805361A1 (en) 2010-09-29 2012-04-05 Universite De Liege Combination of an agonistic anti-cd40 monoclonal antibody or a cd40 ligand and inactivated or attenuated bacteria for use in the treatment and/or prevention of mastitis
GB201103955D0 (en) 2011-03-09 2011-04-20 Antitope Ltd Antibodies
PT2691112T (pt) 2011-03-31 2018-07-10 Merck Sharp & Dohme Formulações estáveis de anticorpos para o recetor pd-1 humano de morte programada e tratamentos relacionados
DK2699598T3 (en) 2011-04-19 2019-04-23 Pfizer COMBINATIONS OF ANTI-4-1BB ANTIBODIES AND ADCC-INducing ANTIBODIES FOR TREATMENT OF CANCER
CA2833636A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Amplimmune, Inc. Antibodies and other molecules that bind b7-h1 and pd-1
WO2013006490A2 (en) 2011-07-01 2013-01-10 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to tim3
KR101685262B1 (ko) 2011-08-23 2016-12-21 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 항-ｏｘ４０ 항체 및 이의 사용 방법
GB201116092D0 (en) 2011-09-16 2011-11-02 Bioceros B V Antibodies and uses thereof
US20150359853A1 (en) * 2012-10-24 2015-12-17 Admune Therapeutics Llc Il-15r alpha forms, cells expressing il-15r alpha forms, and therapeutic uses of il-15r alpha and il-15/il-15r alpha complexes
CA2909576C (en) 2013-04-19 2023-07-18 Cytune Pharma Cytokine derived treatment with reduced vascular leak syndrome
US9580504B1 (en) 2013-11-07 2017-02-28 Curetech Ltd. Pidilizumab monoclonal antibody therapy following stem cell transplantation
RS62989B9 (sr) 2014-01-15 2022-07-29 Kadmon Corporation Llc Imunomodulatorni agensi

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012175222A1 (en) * 2011-06-24 2012-12-27 Cytune AN IL-15 AND IL-15Rα SUSHI DOMAIN BASED IMMUNOCYTOKINES

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JASON C. STEEL; THOMAS A. WALDMANN; JOHN C. MORRIS;: "Interleukin-15 biology and its therapeutic implications in cancer", TRENDS IN PHARMACOLOGICAL SCIENCES., ELSEVIER, HAYWARTH., GB, vol. 33, no. 1, GB, pages 35 - 41, XP028441944, ISSN: 0165-6147, DOI: 10.1016/j.tips.2011.09.004 *
W. E. CARSON: "Braking Bad: Blockade of Inhibitory Pathways Improves Interleukin-15 Therapy", CLINICAL CANCER RESEARCH, ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH, vol. 16, no. 24, 15 December 2010 (2010-12-15), pages 5917 - 5919, XP055150942, ISSN: 10780432, DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-10-2658 *

Also Published As

Publication number Publication date
DK3030575T3 (en) 2018-10-22
KR102564207B1 (ko) 2023-08-10
JP6951479B2 (ja) 2021-10-20
HRP20231437T1 (hr) 2024-02-16
EP3444271B1 (en) 2021-10-06
JP2016532693A (ja) 2016-10-20
CA2919725A1 (en) 2015-02-12
EA201690333A1 (ru) 2016-06-30
US11273204B2 (en) 2022-03-15
KR102364523B1 (ko) 2022-02-18
CN105612175B (zh) 2023-05-09
BR112016002614A8 (pt) 2022-11-08
EP3030575A1 (en) 2016-06-15
PL3030575T3 (pl) 2018-12-31
EP4269441A3 (en) 2024-01-24
EP3030575B1 (en) 2018-07-11
EP3995507C0 (en) 2023-10-04
PL3444271T3 (pl) 2022-03-07
WO2015018528A1 (en) 2015-02-12
PT3444271T (pt) 2022-01-05
HUE064280T2 (hu) 2024-03-28
CA2919725C (en) 2023-04-18
BR112016002614B8 (pt) 2023-11-07
KR20160042922A (ko) 2016-04-20
HRP20181472T1 (hr) 2018-11-02
HRP20212023T1 (hr) 2022-04-01
PT3030575T (pt) 2018-10-31
EP3995507A1 (en) 2022-05-11
EP3995507B1 (en) 2023-10-04
AU2014304931B2 (en) 2018-05-10
BR112016002614B1 (pt) 2023-10-03
HUE057598T2 (hu) 2022-05-28
JP2020072726A (ja) 2020-05-14
EP3444271A1 (en) 2019-02-20
WO2015018528A8 (en) 2016-04-07
ES2902589T3 (es) 2022-03-29
JP6649254B2 (ja) 2020-02-19
US20220193199A1 (en) 2022-06-23
US20160175459A1 (en) 2016-06-23
AU2014304931A1 (en) 2016-02-25
EP4269441A2 (en) 2023-11-01
AU2014304931A9 (en) 2016-06-16
BR112016002614A2 (pt) 2017-09-12
PL3995507T3 (pl) 2024-03-04
DK3444271T3 (da) 2022-01-10
SI3444271T1 (sl) 2022-03-31
ES2690046T3 (es) 2018-11-19
ES2963591T3 (es) 2024-04-01
KR20220025923A (ko) 2022-03-03
SI3030575T1 (sl) 2018-11-30
MX2016001555A (es) 2016-08-03
CN105612175A (zh) 2016-05-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220193199A1 (en) Il-15 and il-15ralpha sushi domain based modulokines
US20220168395A1 (en) Combined pharmaceutical composition
JP6151687B2 (ja) ＩＬ−１５およびＩＬ−１５ＲαＳＵＳＨＩドメインに基づいた免疫サイトカイン

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Registration of transfer of a eurasian patent in accordance with the succession in title