CN114341179A - 多聚体双特异性抗cd123结合分子及其用途 - Google Patents

Abstract

本公开提供包含特异性结合免疫效应细胞的经修饰的J链的多价双特异性抗CD123结合分子。还提供编码所述结合分子或其亚基的多核苷酸以及包含所述多核苷酸的载体和宿主细胞。本公开还提供用于产生和/或使用包含特异性结合免疫效应细胞的经修饰的J链的多价双特异性抗CD123结合分子的方法。

Description

多聚体双特异性抗CD123结合分子及其用途

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年8月17日提交的美国临时专利申请序列号62/888,475和2019年8月19日提交的美国临时专利申请序列号62/888,702的权益，所述临时申请各自以引用的方式整体并入本文。

序列表

本申请含有已以电子方式以ASCI I格式提交并以引用方式整体并入本文的序列表。ASCI I拷贝创建于2020年8月13日，命名为027WO1-Sequence-Listing，并且大小为204,738字节。

背景技术

急性髓系白血病(AML)是美国白血病死亡的主要原因，每年有超过20,000名新患者，5年存活率低于30％，超过60岁的患者的存活率下降至10％(National CancerInstitute Surveillance,Epidemiology and End-Result Program(SEER)data；Oran andWeisdorf 2012,Haematologica 97(12)1916)。在过去的40年里，AML患者的治疗进展甚微，并且目前的治疗选择主要包括强化疗和干细胞移植(Luppi等人2018,Cancers 10,429)。已经采用若干方法来靶向AML细胞上的细胞表面分子，以引导T细胞接合并杀伤AML细胞。一种这样的表面分子是CD123(也称为IL-3受体α链或IL-3Rα)，其在超过90％的AML患者的白血病细胞以及白血病干细胞上表达，白血病干细胞是通常导致治疗后疾病复发的细胞类型(Kovtun等人2018,Blood Advances 2(8)848；Xie等人2017,Blood Cancer Journal 7,e567)。此外，CD123在具有与极差预后相关的基因突变诸如FLT3的患者中高度表达(Xie等人2017,Blood Cancer Journal 7,e567)。CD123的两种人同工型的氨基酸序列呈现为SEQID NO:28(同工型1，成熟蛋白质：SEQ ID NO:28的大约氨基酸23至378)和SEQ ID NO:29(同工型2，成熟蛋白质：SEQ ID NO:29的大约氨基酸23至300)，食蟹猕猴CD123氨基酸序列呈现为SEQ ID NO:30(与人同工型1约87％相同；成熟蛋白质：SEQ ID NO:30的大约氨基酸23至378)，并且小鼠CD123氨基酸序列呈现为SEQ ID NO:31(与人同工型1约30％相同；成熟蛋白：SEQ ID NO:31的大约氨基酸17至396)。

CD123是一些血液系统恶性肿瘤的临床验证靶点，作为FDA批准重组IL-3细胞因子与白喉毒素缀合用于治疗母细胞性浆细胞样树突状细胞赘瘤的证据(Pemmaraju等人2019,NEJM 380:1628)。这种和其他CD123靶向剂正在临床前和临床试验中进行测试。Xencor(XmAb14045–基于IgG)、Macrogenics(氟替珠单抗(flotetuzumab)-DART)和Jansen(JNJ-63709178-duobody)已使用CD123 x CD3双特异性抗体进行了早期1期临床研究。尽管已在这些患者的一些中报告了临床功效的早期迹象，但使用此类双特异性药物也已观察到了严重的细胞因子释放综合征和一些患者死亡(Ravandi等人2018 Blood 132:763；Jacobs等人2018,Blood 132:2738；Uy等人2018,Blood 132:764)。细胞因子释放综合征(或CRS)的特征是发热、低血压、凝血异常和毛细血管渗漏，这可能会危及生命，并且此类发现也与其他T细胞接合方法相关，包括CAR-T和BiTE(Teachley等人2016,Cancer Discovery 6(6)664；Hay等人2017,Blood 130(21)2295)。这些与细胞因子释放相关的不良安全事件往往构成基于IgG的CD3接合双特异性抗体的剂量限制性毒性，并且表现为对此类药剂的安全、高效和耐受施用的挑战，并由于因此产生的给药限制，可能表现为对优化这些治疗剂功效的能力的挑战。

可多聚化的抗体和抗体样分子，诸如IgA和IgM抗体，已成为例如免疫肿瘤学和传染病领域中有希望的候选药物，从而允许改善的特异性、改善的亲合力以及结合多个结合靶点的能力。参见，例如，美国专利号9,951,134、9,938,347和10,618,978、美国专利申请公开号US 2019-0100597、US 2019-0185570以及PCT公开号WO 2016/154593、WO 2016/168758、WO 2018/017888、WO 2018/017763、WO 2018/017889、WO 2018/017761和WO 2019/169314，所述文献的内容以引用的方式整体并入本文。

仍然需要靶向表达CD123的AML细胞并诱导T细胞介导的这些细胞的杀伤，同时最大限度地减少CRS。已经评估了使用CD3双特异性IgM技术靶向CD123是否将不仅有效地靶向表达CD123的AML肿瘤细胞以获得T细胞介导的细胞毒性，还产生针对使用基于IgG的CD123x CD3双特异性抗体治疗的患者有时很严重的细胞因子释放综合征具有良好安全性的反应。此外，与基于IgG的双特异性抗体相比，IgM抗体的高亲合力结合可以允许CD123 x CD3双特异性IgM靶向表达细胞表面表达水平相对较低的CD123的肿瘤细胞。

发明内容

本公开提供一种多聚体、双特异性或多特异性结合分子，其包括两个或五个二价结合单元和经修饰的J链，其中经修饰的J链包括野生型J链或其功能片段或变体和特异性结合免疫效应细胞的与J链缔合的抗原结合结构域。每个结合单元包括两条抗体重链，每条重链包括IgA、IgA样、IgM或IgM样重链恒定区或其多聚片段并至少包括与结合单元缔合的抗原结合结构域的重链可变区(VH)部分，其中与结合单元缔合的抗原结合结构域中的至少三个与CD123特异性结合，并且其中结合分子可以诱导免疫效应细胞依赖性的表达CD123的细胞的杀伤。

在某些实施方案中，经修饰的J链包括变体J链或其片段，变体J链或其片段相对于野生型J链包括一个或多个可影响结合分子的血清半衰期的单一氨基酸取代、缺失或插入，使得相对于除J链中的一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入之外都相同的并且以相同的方式对相同的动物物种施用的参考结合分子，所述结合分子在对动物施用时表现出增加的血清半衰期。在某些实施方案中，经修饰的J链包括与成熟野生型人J链(SEQ ID NO:2)的氨基酸Y102相对应的氨基酸位置处的氨基酸取代。在某些实施方案中，与SEQ ID NO:2的Y102相对应的氨基酸可被丙氨酸(A)、丝氨酸(S)或精氨酸(R)取代。在某些实施方案中，与SEQ ID NO:2的Y102相对应的氨基酸可以被丙氨酸(A)取代。在某些实施方案中，J链是变体人J链并且包括氨基酸序列SEQ ID NO:3(“J*”)。

在某些实施方案中，与J链缔合的抗原结合结构域包括与J链或其片段或变体融合或化学缀合的抗体单链Fv(scFv)片段。例如，scFv片段可以通过肽接头与J链融合。在某些实施方案中，scFv片段可以与J链或其片段或变体的N末端融合、与J链或其片段或变体的C末端融合，或scFv片段可以与J链或其片段或变体的N末端和C末端两者融合。

在某些实施方案中，免疫效应细胞是T细胞或NK细胞。在免疫效应细胞是T细胞的那些实施方案中，scFv片段在某些实施方案中可以与CD3ε特异性结合。在某些实施方案中，T细胞是CD8+细胞毒性T细胞。

在某些实施方案中，scFv片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH包含VH互补决定区VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3并且VL包含VL互补决定区VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3，其中(a)VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7，并且VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11；(b)VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ IDNO:130、SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:135，并且VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:142；(c)VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:135，并且VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:143；(d)VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:136，并且VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:141和SEQ ID NO:144；(e)VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:136，并且VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:141和SEQ ID NO:145；或(f)VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:137，并且VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:141和SEQ ID NO:146。

在某些实施方案中，scFv片段包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH包括分别具有以下的VH互补决定区VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3：氨基酸序列SEQ ID NO:5、SEQID NO:6或SEQ ID NO:7；或具有VHCDR中的1个或多个中的1个、2个或3个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7，并且其中VL包括分别具有以下的VL互补决定区VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3：氨基酸序列SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11；或具有VLCDR中的1个或多个中的1个、2个或3个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:9、SEQID NO:10或SEQ ID NO:11。在某些实施方案中，scFv片段分别包含VH和VL氨基酸序列SEQID NO:4和SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:119和SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:123和SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:125和SEQ ID NO:126或SEQ ID NO:127和SEQ ID NO:128。

在某些实施方案中，scFv片段包括VH氨基酸序列SEQ ID NO:4和VL氨基酸序列SEQID NO:8。在其他实施方案中，scFv片段包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和VL分别包括氨基酸序列SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14。在某些实施方案中，经修饰的J链包括SEQ ID NO:12的氨基酸20至420、SEQ ID NO:15的氨基酸20至412或SEQ ID NO:16的氨基酸23至415。

在某些实施方案中，免疫效应细胞是NK细胞，并且其中scFv片段与CD16特异性结合。

在某些实施方案中，经修饰的J链还可包括与J链或其片段或变体融合或化学缀合的免疫刺激剂(“ISA”)。在某些实施方案中，ISA包括细胞因子或其受体结合片段或变体。在某些实施方案中，ISA包括：(a)白介素-15(IL-15)蛋白或其受体结合片段或变体(“I”)；和(b)白介素-15受体-α(IL-15Rα)片段(“R”)，其能够与I缔合，包括sushi结构域或其变体；其中I和R中的至少一者与J链或其片段或变体缔合为融合蛋白，并且其中I和R可缔合以用作ISA。在某些实施方案中，ISA可以通过肽接头与J链融合。

在某些实施方案中，所提供的结合分子的每个结合单元还包括两条轻链，每条轻链包括κ或λ轻链恒定区并至少包括与结合单元缔合的抗原结合结构域的轻链可变区(VL)部分。

在某些实施方案中，所提供的结合分子包括至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或十个特异性结合CD123的与结合单元缔合的抗原结合结构域。在某些实施方案中，至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或至少十个与结合单元缔合的抗原结合结构域与相同的CD123表位结合。在某些实施方案中，所提供的结合分子的与结合单元缔合的抗原结合结构域全部是相同的。

在某些实施方案中，与结合单元缔合的抗原结合结构域包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和VL包括六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包括：具有分别包括以下或包含在以下中的VH和VL氨基酸序列的抗体的CDR：SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:37和SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45、SEQID NO:46和SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQ IDNO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQID NO:63、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79、SEQ IDNO:80和SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85、SEQID NO:86和SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96和SEQ IDNO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:110、SEQID NO:111和SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115和SEQ IDNO:116或SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:118；或具有分别包括以下或包含在以下中的VH和VL氨基酸序列的抗体的CDR，CDR中的一个或多个中的一个或两个氨基酸取代除外：SEQ IDNO:32和SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43、SEQID NO:44和SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54和SEQ IDNO:55、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60和SEQID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:77、SEQ IDNO:78和SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83、SEQID NO:84和SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:94和SEQ IDNO:95、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108、SEQID NO:109和SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113和SEQ IDNO:114、SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:118。

在某些实施方案中，缔合连接单元的抗原结合结构域包括抗体VH和VL，其中VH和VL包括与成熟VH和VL氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列，所述成熟VH和VL氨基酸序列分别包括以下或包含在以下中：SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49、SEQ IDNO:50和SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:55、SEQID NO:56和SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66和SEQ IDNO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72和SEQID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89、SEQ IDNO:90和SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:95、SEQID NO:96和SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:114、SEQID NO:115和SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:118。

在某些实施方案中，所提供的结合分子是包括两个二价结合单元的二聚体结合分子，其中每个结合单元包括两条抗体重链，每条抗体重链包括IgA或IgA样重链恒定区或其多聚片段。在某些实施方案中，所提供的二聚体结合分子还包括分泌组分或其片段或变体。在某些实施方案中，IgA或IgA样重链恒定区或其多聚片段各自包括Cα3和尾片(tp)结构域，并且还可以包括Cα1结构域、Cα2结构域、IgA铰链区或它们的任何组合。在某些实施方案中，IgA或IgA样重链恒定区是人IgA或IgA样恒定区并且可以包括氨基酸序列SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25或其任何多聚变体或片段。在某些实施方案中，每个结合单元包括两条IgA或IgA样重链和两条免疫球蛋白轻链，每条重链包括位于IgA恒定区或其片段的氨基末端的VH，每条轻链包括位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。

在某些实施方案中，所提供的结合分子是包括五个二价结合单元的五聚体结合分子，其中每个结合单元包括两个IgM或IgM样重链恒定区或其多聚片段。在某些实施方案中，IgM或IgM样重链恒定区或其多聚片段各自包括Cμ4结构域和尾片(tp)结构域或其片段或变体，并且还可以包括Cμ1结构域、Cμ2结构域、Cμ3结构域或它们的任何组合。在某些实施方案中，IgM或IgM样重链恒定区是人IgM恒定区并且可包括氨基酸序列SEQ ID NO:22、SEQ IDNO:23或其多聚变体或片段。在某些实施方案中，每个结合单元包括两条IgM重链和两条免疫球蛋白轻链，每条重链包括位于IgM恒定区或其片段的氨基末端的VH，每条轻链包括位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。

在某些实施方案中，结合单元包括变体人IgM恒定区，其中多聚体结合分子相对于包括IgM重链恒定区的多聚体结合分子具有降低的CDC活性，所述IgM重链恒定区包括氨基酸序列SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23或其多聚变体或片段。在某些实施方案中，每个IgM重链恒定区包括氨基酸序列SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的变体，其中所述变体包括在SEQID NO:22或SEQ ID NO:23的P311位置处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的P313位置处的氨基酸取代或在SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的P311和P313位置处的氨基酸取代。

在某些实施方案中，结合单元包括变体人IgM恒定区，其相对于与变体IgM重链恒定区除一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入之外都相同的参考IgM重链恒定区具有一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入，其中相对于包括参考IgM重链恒定区并且以相同方式对相同动物物种施用的多聚体结合分子，所述结合分子在对受试动物施用时表现出增加的血清半衰期。在某些实施方案中，变体IgM重链恒定区包括与野生型人IgM恒定区SEQ IDNO:22或SEQ ID NO:23的氨基酸E345A、S401A、E402A或E403A相对应的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸取代。

本公开还提供包括所提供的结合分子的组合物，例如药物组合物。

本公开还提供一种多核苷酸，其包括编码所提供的结合分子的多肽亚基的核酸序列。

在某些实施方案中，多肽亚基包括IgM或IgM样重链恒定区并至少包括结合分子的与结合单元缔合的抗原结合结构域的抗体VH部分。在某些实施方案中，多肽亚基包括与包括以下的VH的C末端融合的人IgM恒定区或其片段：(a)HCDR1、HCDR2和HCDR3区，其包括：包含在包括以下或包含在以下中的VH氨基酸序列中的CDR：SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:37、SEQID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ IDNO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64、SEQID NO:66、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:76、SEQID NO:78、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88、SEQID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ IDNO:115或SEQ ID NO:117；或包含在包括以下或包含在以下中的VH氨基酸序列中的CDR，HCDR中的一个或多个中的一个或两个单一氨基酸取代除外：SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74、SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86、SEQ IDNO:88、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:98、SEQ IDNO:100、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:115或SEQ ID NO:117；或(b)与包括以下或包含在以下中的成熟VH氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:32、SEQID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQID NO:52、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQID NO:64、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74、SEQID NO:76、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86、SEQID NO:88、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:98、SEQID NO:100、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:115或SEQ ID NO:117。

在某些实施方案中，多肽亚基包括轻链恒定区和多聚体结合分子的抗原结合结构域的抗体VL部分。在某些实施方案中，多肽亚基包括人κ或λ轻链恒定区或其片段，其与包括以下的VL的C末端融合：(a)LCDR1、LCDR2和LCDR3区，其包括：包含在包括以下或包含在以下中的VL氨基酸序列中的CDR：SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:69、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:79、SEQ IDNO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ IDNO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQID NO:108、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:118；或包含在以下VL氨基酸序列中的CDR，LCDR中的一个或多个中的一个或两个单一氨基酸取代除外：SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ IDNO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:81、SEQ IDNO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ IDNO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:108、SEQID NO:110、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:118；或(b)与包括以下或包含在以下中的成熟VL氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:81、SEQID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:118。

在某些实施方案中，多肽亚基包括经修饰的J链，其中经修饰的J链包括野生型J链或其功能片段或变体和特异性结合免疫效应细胞的与J链缔合的抗原结合结构域。在某些实施方案中，经修饰的J链包括与SEQ ID NO:12的氨基酸20至420、SEQ ID NO:15的氨基酸20至412或SEQ ID NO:16的氨基酸23至415至少80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。

本公开还提供一种组合物，其包括前述多核苷酸中的两种或更多种。多核苷酸可以位于两个或更多个单独的载体上，或位于单个载体上。还提供这样的一个载体或多个载体。

本公开还提供一种宿主细胞，其包括一种或多种所提供的多核苷酸或所提供的一个载体或多个载体，其中宿主细胞可以表达所提供的结合分子或其亚基。本公开还提供一种产生所提供的结合分子的方法，其中所述方法包括培养宿主细胞，然后回收结合分子。

本公开还提供一种治疗癌症或其他恶性肿瘤的方法，其中所述方法包括向需要癌症治疗的受试者施用有效量的所提供的结合分子，其中结合分子可以诱导免疫效应细胞介导的癌细胞杀伤。在某些实施方案中，癌症或恶性肿瘤是血液学癌症或恶性肿瘤，例如，急性髓系白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、慢性髓系白血病(CML)、B细胞急性淋巴细胞白血病(B细胞ALL)、经典型霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、系统性肥大细胞增多症或浆细胞样树突状细胞白血病。在某些实施方案中，与J链缔合的抗原结合结构域结合CD3ε，并且结合分子诱导T细胞介导的恶性细胞杀伤。在某些实施方案中，相对于对应的基于IgG的抗CD123抗CD3双特异性抗体，治疗导致细胞因子释放减少。在某些实施方案中，待治疗的受试者是人受试者。

附图说明

图1A-1D示出了抗CD123xCD3 IgM #1(重链：SEQ ID NO:35的氨基酸20至592，轻链：SEQ ID NO:36的氨基酸21至240，经修饰的J链：SEQ ID NO:12的氨基酸20至420)和抗CD123xCD3 IgM #2(重链：SEQ ID NO:40的氨基酸20至589，轻链：SEQ ID NO:41的氨基酸21至234，经修饰的J链：SEQ ID NO:12的氨基酸20至420)的表达、正确组装和通过尺寸排阻色谱法(SEC)的纯化。图1A：非还原凝胶；图1B：还原凝胶；图1C：显示抗CD123xCD3 IgM #1的纯化的尺寸排阻色谱图；图1D：显示抗CD123xCD3 IgM #2的纯化的尺寸排阻色谱图。

图2A-2B示出了抗CD123xCD3 IgG #1(第一重链：SEQ ID NO:104，轻链：SEQ IDNO:105，第二重链：SEQ ID NO:6)的表达、正确组装和通过尺寸排阻色谱法(SEC)的纯化。

图3示出了抗CD123xCD3 IgM #1(三角形)和抗CD123xCD3 IgM #2(倒三角性)在ELISA测定中与CD123结合。还示出了单特异性IgG型式抗CD123 IgG #1(星号，重链：SEQ IDNO:34的氨基酸20至469，轻链：SEQ ID NO:36的氨基酸21至240)和抗CD123 IgG #2(星形，重链：SEQ ID NO:39的氨基酸20至464，轻链：SEQ ID NO:41的氨基酸21至234)的CD123结合。

图4A示出了抗CD123xCD3 IgM #1(三角形)和抗CD123xCD3 IgM #2(倒三角形)在ELISA测定中与CD3ε结合，但是单特异性IgG抗CD123构建体不与CD3ε结合。图4B比较了抗CD123xCD3 IgM #1(三角形)和抗CD123xCD3 IgG #1(空心圆)在ELISA测定中与CD3ε的结合。

图5A-5D示出了由ELISA测量的IgM和IgG双特异性抗体在不同蛋白质浓度下与CD123的结合。图5A：3μg/ml CD123，图5B：1μg/ml CD123；图5C：0.33μg/ml CD123；和图5D：0.11μg/ml CD123。

图6示出了在各种AML细胞系的表面上表达的CD123的量化。

图7示出了通过流式细胞术，抗CD123xCD3 IgM #1与三种不同的AML细胞系Kg-1a、MOLM-13和MV4-11以及Burkitt’s淋巴瘤细胞系Namalwa(CD123阴性)的结合。顶行：对照抗CD123抗体7G3；底行：抗CD123xCD3 IgM #1、抗CD123xCD3 IgM #3和抗CD123xCD3 IgM #4。

图8A-8C示出了在抗CD123xCD3 IgM#1存在的情况下，表达CD123的AML细胞系THP-1(图8A)和MV4-11(图8B)的T细胞依赖性杀伤，其中不表达CD123的Namalwa细胞未被杀伤(图8C)。

图9示出了，在MV4-11细胞的TDCC测定中，抗CD123xCD3 IgM #1增强CD8+T细胞上的CD25活化标记，但不增强CD4+T细胞上的CD25活化标记。

图10A和10B比较了96小时后，MV4-11细胞(分图A)和THP-1细胞(分图B)的pan-TDCC测定中的抗CD123xCD3 IgM #1(三角形)和抗CD123xCD3 IgG #1(空心圆)。空心圆：抗CD123xCD3 IgG #1，实心三角形：抗CD123xCD3 IgM #1。

图11A-11D示出了在MV4-11细胞的TDCC测定中，抗CD123xCD3 IgG #1和抗CD123xCD3 IgM #1之间的细胞因子释放的比较。图A：干扰素γ(IFNγ)释放；图B：白介素-6(IL-6)释放；图C：TNFα释放；图D:白介素-10(IL10)释放。

图12A-12D示出了在THP-1细胞的TDCC测定中，抗CD123xCD3 IgG #1和抗CD123xCD3 IgM #1之间的细胞因子释放的比较。图A：干扰素γ(IFNγ)释放；图B：白介素-6(IL-6)释放；图C：TNFα释放；图D:白介素-10(IL10)释放。

图13示出了由ELISA测量的IgM双特异性抗体在不同蛋白质浓度下与CD123的结合。

图14示出了IgM双特异性抗体与表达CD123的MV4-11细胞的结合。

图15A-15B示出了在具有各种CD123结合结构域的抗CD123xCD3 IgM抗体存在的情况下，表达CD123的AML细胞系THP-1(图15A)和PL21(图15B)的T细胞依赖性杀伤。

图16A-16B示出了在具有各种CD3结合结构域的抗CD123xCD3 IgM抗体存在的情况下，表达CD123的AML细胞系THP-1(图16A)和PL21(图16B)的T细胞依赖性杀伤。

图17示出了在具有各种CD3结合结构域和J链的抗CD123xCD3 IgM抗体存在的情况下，表达CD123的AML细胞系MV4-11的T细胞依赖性杀伤。

图18A-18F示出了当T细胞是CD8+T(图18A-18C)细胞或CD4+T(图18D-18F)细胞时，对于用抗CD123 x CD3 IgM或IgG抗体处理的细胞所得到的肿瘤存活(图18A、18D)、T细胞增殖(图18B、18E)和T细胞活化(图18C、18F)。

图19A-19E示出了在针对以下细胞因子的TDCC测定中的抗CD123xCD3 IgG和抗CD123xCD3 IgM抗体之间的细胞因子释放的比较：干扰素γ(IFNγ)(图19A)；肿瘤坏死因子α(TNFα)(图19B)；白介素-6(IL-6)(图19C)；白介素-10(IL-10)(图19D)；白介素-2(IL-2)(图19E)。

具体实施方式

定义

应注意，术语“一种/个(a)”或“一种/个(an)”实体是指一个或多个该实体；例如，“结合分子”应理解为代表一个或多个结合分子。因此，术语“一种/个(a)”(或“一种/个(an)”)、“一个或多个”和“至少一个”在本文可互换使用。

此外，在本文中使用时将“和/或”视为对两个指定特征或组分中的每一个在存在或不存在另一者的情况下的具体公开。因此，如本文中诸如“A和/或B”的短语中所使用的术语“和/或”意图包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。同样，在诸如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”意图涵盖以下实施方案中的每一种：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

除非另有定义，否则本文使用的技术和科技术语具有与本发明相关领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。例如，Concise Dictionary of Biomedicine andMolecular Biology,Juo,Pei-Show,第2版,2002,CRC Press；The Dictionary of Celland Molecular Biology,第3版,1999,Academic Press；以及Oxford Dictionary ofBiochemistry and Molecular Biology,修订版,2000,Oxford University Press对技术人员提供本公开中使用的许多术语的一般词典。

单位、前缀和符号均以其国际单位制(Système International de Unites,(SI))可接受的形式表示。数值范围包括限定范围的数字。除非另外指明，否则氨基酸序列是以氨基至羧基取向自左至右书写。本文提供的标题不是对本公开的各个实施方案或实施方案的限制，这些实施方案可以通过参考整个说明书来获得。因此，即将在下文定义的术语通过参考说明书全文而得到更充分地定义。

如本文所用，术语“多肽”意图涵盖单一“多肽”以及多个“多肽”，并且是指由通过酰胺键(也被称为肽键)加以线性连接的单体(氨基酸)组成的分子。术语“多肽”是指具有两个或更多个氨基酸的任何一条或多条链，并且不涉及产物的特定长度。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸”和用于指代具有两个或更多个氨基酸的一条或多条链的任何其他术语包括在“多肽”的定义内，并且术语“多肽”可以代替任何这些术语使用或与任何这些术语互换使用。术语“多肽”还意图指代多肽的表达后修饰的产物，所述表达后修饰包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酰化、酰胺化和通过已知保护/阻断基团、蛋白水解性裂解或被非自然存在的氨基酸修饰而进行的衍生化。多肽可来源于生物来源或通过重组技术产生，但不必从指定的核酸序列翻译。多肽可以任何方式产生，包括通过化学合成。

如本文所公开的多肽的尺寸可以是约3个或更多个、5个或更多个、10个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、50个或更多个、75个或更多个、100个或更多个、200个或更多个、500个或更多个、1000个或更多个或2000个或更多个的氨基酸。多肽可具有定义的三维结构，尽管其不一定具有此种结构。具有定义的三维结构的多肽称为折叠的，并且不具有定义的三维结构但可采用许多不同构象的多肽称为未折叠的。如本文所用，术语糖蛋白是指与至少一个碳水化合物部分偶联的蛋白质，所述至少一个碳水化合物部分通过氨基酸(例如，丝氨酸或天冬酰胺)的含氧或含氮侧链附接到蛋白质。

“分离的”多肽或其片段、变体或衍生物意指不在它的自然环境中的多肽。不要求特定的纯化水平。例如，分离的多肽可以是从其天然或自然环境中移出的。如本文所公开，在宿主细胞中表达的重组产生的多肽和蛋白质被认为是分离的，通过任何合适的技术分离、分级分离或部分或基本上纯化的天然或重组多肽也被认为是分离的。

如本文所用，术语“非自然存在的多肽”或其任何语法变体是附带条件的定义，所述附带条件的定义明确排除但仅排除由或可能由法官或行政或司法机构确定或解释为“自然存在”的那些形式的多肽。

本文所公开的其他多肽为上述多肽的片段、衍生物、类似物或变体及其任何组合。本文所公开的术语“片段”、“变体”、“衍生物”和“类似物”包括保留对应的天然抗体或多肽的至少一些特性(例如，特异性结合抗原)的任何多肽。除了本文别处讨论的特异性抗体片段以外，多肽的片段包括例如蛋白水解片段以及缺失片段。例如，多肽的变体包括如上所述的片段，并且包括由于氨基酸取代、缺失或插入而具有改变的氨基酸序列的多肽。在某些实施方案中，变体可以是非自然存在的。可使用本领域已知的诱变技术来产生非自然存在的变体。变体多肽可包含保守或非保守的氨基酸取代、缺失或添加。衍生物是已被改变以表现出原始多肽上未发现的另外特征的多肽。实例包括融合蛋白。变体多肽在本文中也可称为“多肽类似物”。如本文所用，多肽的“衍生物”还可指具有一个或多个通过官能性侧基的反应来加以化学衍生的氨基酸的主题多肽。“衍生物”还包括含有20种标准氨基酸的一个或多个衍生物的那些肽。例如，4-羟基脯氨酸可取代脯氨酸；5-羟基赖氨酸可取代赖氨酸；3-甲基组氨酸可取代组氨酸；高丝氨酸可取代丝氨酸；并且鸟氨酸可取代赖氨酸。

“保守氨基酸取代”是其中一个氨基酸被具有类似侧链的另一个氨基酸替代的一种取代。在本领域中已定义具有类似侧链的氨基酸的家族，包括碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷极性侧链(例如天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。例如，苯丙氨酸取代酪氨酸是保守取代。在某些实施方案中，本公开的多肽和抗体的序列中的保守取代不消除含有氨基酸序列的多肽或抗体与抗体结合的抗原的结合。鉴定不消除抗原结合的核苷酸和氨基酸保守取代的方法在本领域中是众所周知的(参见，例如，Brummell等人，Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人，Protein Eng.12(10):879-884(1999)；和Burks等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:.412-417(1997))。

术语“多核苷酸”意图涵盖单个核酸以及多个核酸，并且是指分离的核酸分子或构建体，例如，信使RNA(mRNA)、cDNA或质粒DNA(pDNA)。多核苷酸可包含常规的磷酸二酯键或非常规的键(例如，酰胺键，诸如在肽核酸(PNA)中发现的)。术语“核酸”或“核酸序列”是指存在于多核苷酸中的任何一个或多个核酸区段，例如，DNA或RNA片段。

“分离的”核酸或多核苷酸意指从其天然环境分离的任何形式的核酸或多核苷酸。例如，凝胶纯化的多核苷酸或包含在载体中的编码多肽的重组多核苷酸将被认为是“分离的”。此外，已被工程化以具有用于克隆的酶切位点的多核苷酸区段(例如，PCR产物)被认为是“分离的”。分离的多核苷酸的其他实例包括维持在异源宿主细胞中的重组多核苷酸，或在非天然溶液诸如缓冲液或盐水中的纯化(部分或基本上)多核苷酸。分离的RNA分子包括多核苷酸的体内或体外RNA转录物，其中转录物不是在自然中发现的转录物。分离的多核苷酸或核酸还包括由合成方式产生的此类分子。此外，多核苷酸或核酸可为调控元件或可包括调控元件，诸如启动子、核糖体结合位点或转录终止子。

如本文所用，术语“非自然存在的多核苷酸”或其任何语法变体是附带条件的定义，所述附带条件的定义明确排除但仅排除由或可能由法官或行政或司法机构确定或解释为“自然存在”的那些形式的核酸或多核苷酸。

如本文所用，“编码区”是核酸中由翻译成氨基酸的密码子组成的一部分。尽管“终止密码子”(TAG、TGA或TAA)不被翻译成氨基酸，但它可被视为编码区的一部分，但任何侧接序列例如启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子等不是编码区的一部分。两个或更多个编码区可存在于单个多核苷酸构建体中，例如，在单个载体上，或存在于单独的多核苷酸构建体中，例如，在单独的(不同的)载体上。此外，任何载体可含有单个编码区，或可包含两个或更多个编码区，例如，单个载体可分别编码免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区。此外，载体、多核苷酸或核酸可包括与另一编码区融合或未融合的异源编码区。异源编码区包括但不限于编码特殊元件或基序(诸如分泌信号肽或异源功能结构域)的那些。

在某些实施方案中，多核苷酸或核酸为DNA。在DNA的情况下，包含通常编码多肽的核酸的多核苷酸可包括与一个或多个编码区可操作地缔合的启动子和/或其他转录或翻译控制元件。可操作的缔合是基因产物(例如，多肽)的编码区与一个或多个调控序列缔合，从而将基因产物的表达置于这一个或多个调控序列的影响或控制之下。如果诱导启动子功能会导致编码所期望基因产物的mRNA的转录，以及如果两个DNA片段之间的连接的性质不干扰表达调控序列引导基因产物的表达的能力或不干扰DNA模板被转录的能力，那么两个DNA片段(诸如多肽编码区和与其缔合的启动子)是“可操作地缔合”。因此，如果启动子能够实现编码多肽的核酸的转录，那么启动子区域将与那个核酸可操作地缔合。启动子可以是在预先确定的细胞中引导DNA实质性转录的细胞特异性启动子。除启动子外，其他转录控制元件例如增强子、操纵子、阻遏子和转录终止信号可以与多核苷酸可操作地缔合以引导细胞特异性转录。

本领域的技术人员已知多个转录控制区。它们包括但不限于：转录控制区，其在脊椎动物细胞中起作用，诸如但不限于来自巨细胞病毒(立即早期启动子，与内含子-A联合)、猿猴病毒40(早期启动子)以及逆转录病毒(诸如劳斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus))的启动子和增强子区段。其他转录控制区包括来源于脊椎动物基因的那些，诸如肌动蛋白、热休克蛋白、牛生长激素和兔β球蛋白，以及能够在真核细胞中控制基因表达的其他序列。另外的合适转录控制区包括组织特异性启动子和增强子以及淋巴因子诱导型启动子(例如可由干扰素或白介素诱导的启动子)。

类似地，多种翻译控制元件为本领域普通技术人员所知。这些翻译控制元件包括但不限于核糖体结合位点、翻译起始和终止密码子、以及来源于微小核糖核酸病毒的元件(特别是内部核糖体进入位点或IRES，也被称为CITE序列)。

在其他实施方案中，多核苷酸可为RNA，例如呈信使RNA(mRNA)、转运RNA或核糖体RNA形式。

多核苷酸和核酸编码区可以与编码分泌或信号肽的另外的编码区缔合，分泌或信号肽引导由如本文所公开的多核苷酸编码的多肽的分泌。根据信号假说，由哺乳动物细胞分泌的蛋白质具有信号肽或分泌前导序列，一旦生长中的蛋白质链跨粗面内质网的输出被起始，那么该序列就从成熟蛋白质裂解。本领域普通技术人员应了解由脊椎动物细胞分泌的多肽可具有融合于多肽的N末端的信号肽，其从完整或“全长”多肽裂解以产生多肽的分泌或“成熟”形式。在某些实施方案中，使用天然信号肽(例如，免疫球蛋白重链或轻链信号肽)或该序列的保留引导与其可操作地缔合的多肽的分泌的能力的功能衍生物。或者，可以使用异源哺乳动物信号肽或其功能衍生物。例如，野生型前导序列可被人组织纤溶酶原激活剂(TPA)或小鼠β-葡糖醛酸糖苷酶的前导序列取代。

如本文所用，术语“结合分子”在其最广泛的意义上是指与结合靶(例如，表位或抗原决定簇)特异性结合的分子。如本文还描述的，结合分子可包含一个或多个本文所述的“抗原结合结构域”。结合分子的非限制性实例是如本文详述的抗体或抗体样分子，其保留抗原特异性结合。在某些实施方案中，“结合分子”包含如本文详述的抗体或抗体样分子。

如本文所用，术语“结合结构域”或“抗原结合结构域”(可互换使用)是指结合分子(例如，抗体或抗体样分子)的区域，其对于特异性结合结合靶(例如，表位)是必要且充分的。例如，“Fv”，如抗体的重链可变区和轻链可变区，作为两个单独的多肽亚基或作为单个链，被认为是“结合结构域”。其他抗原结合结构域包括但不限于来源于骆驼科物种的抗体的重链可变区(VHH)或在支架(例如，纤连蛋白支架)中表达的6个免疫球蛋白互补决定区(CDR)。如本文所述的“结合分子”或“抗体”可包括1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个或甚至更多个“抗原结合结构域”。如本文所用，“与结合单元缔合的抗原结合结构域”是指为抗体重链和/或抗体轻链的一部分的抗原结合结构域。术语“与J链缔合的抗原结合结构域”是指与如本文所述的经修饰的J链缔合的抗原结合结构域，例如与野生型人J链或其功能片段或变体融合的scFv。

术语“抗体”和“免疫球蛋白”在本文中可互换使用。抗体(或如本文所公开的其片段、变体或衍生物)至少包括重链的可变结构域(对于骆驼科物种)或至少包括重链和轻链的可变结构域。脊椎动物系统中的基本免疫球蛋白结构被相对充分地理解。参见，例如，Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor LaboratoryPress,第2版1988)。除非另外指出，否则术语“抗体”涵盖从抗体的小抗原结合片段到全尺寸的抗体的任何事物，例如，包括2条完整重链和2条完整轻链的IgG抗体；包括4条完整重链和4条完整轻链并任选地包括J链和/或分泌组分的IgA抗体；或包括10条或12条完整重链和10条或12条完整轻链并任选地包括J链或其功能片段的IgM抗体。

术语“免疫球蛋白”包括可以被生物化学区别的各种广泛类别的多肽。本领域技术人员将理解，重链分类为伽马(gamma)、缪(mu)、阿尔法(alpha)、德尔塔(delta)或伊普西龙(epsilon)(γ、μ、α、δ、ε)，它们之中有一些亚类(例如，γ1至γ4或α1至α2)。此链的本质决定了抗体的“同种型”分别为IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。免疫球蛋白亚类(亚型)，例如，IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁、IgA₂等被充分地表征，并且已知其赋予功能特异化。鉴于本公开，这些免疫球蛋白中的每种的修饰型式对于本领域技术人员是容易辨别的并因此处于本公开的范围内。

轻链分类为卡帕(kappa)或兰布达(lambda)(κ、λ)。每个重链类别可与卡帕(kappa)或兰布达(lambda)轻链结合。通常，轻链和重链彼此共价键合，并且当例如，通过杂交瘤、B细胞或基因工程宿主细胞来表达免疫球蛋白时，两条重链的“尾”部分通过共价二硫键或非共价键彼此键合。在重链中，氨基酸序列从Y构型的叉端处的N末端到每条链底部的C末端。某些抗体(例如，IgG抗体)的基本结构包括两个重链亚基和两个轻链亚基，亚基通过二硫键共价连接以形成“Y”结构，在本文中也称为“H2L2”结构，或“结合单元”。

术语“结合单元”在本文中用于指代结合分子，例如，抗体、抗体样分子、其抗原结合片段或其多聚片段中与标准“H2L2”免疫球蛋白结构(例如，两条重链或其片段和两条轻链或其片段)相对应的部分。在某些实施方案中，结合单元可以与两条重链(例如，骆驼科抗体中)相对应。在某些实施方案中，例如在结合分子是二价IgG抗体或其抗原结合片段的情况下，术语“结合分子”和“结合单元”是等同的。在其他实施方案中，例如在结合分子是多聚体(例如，二聚体IgA抗体或IgA样抗体、五聚体IgM抗体或IgM样抗体或六聚体IgM抗体或IgM样抗体)的情况下，结合分子包含两个或更多个“结合单元”。在IgA二聚体的情况下为2个结合单元，或在IgM五聚体或六聚体的情况下分别为5个或6个结合单元。结合单元不需要包括全长抗体的重链和轻链，但通常将是二价的，即，将包括两个如上所定义的“抗原结合结构域”。如本文所用，本公开中提供的某些结合分子是“二聚体”，并且包括两个包括IgA恒定区或其多聚片段的二价结合单元。本公开中提供的某些结合分子是“五聚体”或“六聚体”，并且包括五个或六个包括IgM恒定区或其多聚片段的二价结合单元。包含两个或更多个(例如，两个、五个或六个)结合单元的结合分子(例如，抗体或抗体样分子)在本文中称为“多聚体”。

如本文所用，术语“J链”是指任何动物物种的IgM或IgA抗体的天然序列的J链、其任何功能片段、其衍生物和/或其变体，包括成熟人J链，成熟人J链的氨基酸序列呈现为SEQID NO:2。本文公开各种J链变体和经修饰的J链衍生物。如本领域的普通技术人员将认识到的，“功能片段”或“功能变体”包括能够与IgM重链恒定区缔合以形成五聚体IgM抗体(或另选地能够与IgA重链恒定区缔合以形成二聚体IgA抗体)的那些片段和变体。

术语“经修饰的J链”在本文中用于指代天然序列J链多肽的衍生物，其包含异源部分，例如异源多肽，例如，引入到天然序列中的外部结合结构域。可以通过任何方式实现引入，包括异源多肽或其他部分的直接或间接融合，或通过使用肽接头或化学接头进行附接。术语“经修饰的人J链”涵盖但不限于通过引入异源部分(例如，异源多肽，例如，外部结合结构域)进行修饰的、包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的天然序列人J链或其功能片段或其功能变体。在某些实施方案中，异源部分不干扰IgM高效地聚合为五聚体，并且不干扰此类聚合物与靶的结合。示例性经修饰的J链可见于例如美国专利号9,951,134和10,618,978、美国专利申请公开号US-2019-0185570，所述文献各自以引用的方式整体并入本文。

如本文所用，术语“IgM衍生的结合分子”、“IgM样抗体”、“IgM样结合单元”或“IgM样重链恒定区”是指仍保留IgM重链的结构部分的变体抗体衍生的结合分子、抗体、结合单元或重链恒定区，所述IgM重链的结构部分对于赋予形成多聚体(即，六聚体)或与J链缔合形成五聚体的能力是必要的。IgM样抗体或IgM衍生的结合分子通常至少包括IgM恒定区的Cμ4和尾片(tp)结构域，但可包括来自相同物种或不同物种的其他抗体同种型(例如，IgG)的重链恒定区结构域。IgM样抗体或IgM衍生的结合分子同样可以是其中一个或多个恒定区缺失的抗体片段，只要IgM样抗体能够形成六聚体和/或五聚体。因此，IgM样抗体或IgM衍生的结合分子可以是例如杂合IgM/IgG抗体，或可以是IgM抗体的“多聚片段”。

如本文所用，术语“IgA衍生的结合分子”、“IgA样抗体”、“IgA样结合单元”或“IgA样重链恒定区”是指仍保留IgA重链的结构部分的变体抗体衍生的结合分子、抗体、结合单元或重链恒定区，所述IgA重链的结构部分对于赋予与J链缔合形成多聚体(即，二聚体)的能力是必要的。IgA样抗体或IgA衍生的结合分子通常至少包括IgA恒定区的Cα3和尾片(tp)结构域，但可包括来自相同物种或不同物种的其他抗体同种型(例如，IgG)的重链恒定区结构域。IgA样抗体或IgA衍生的结合分子同样可以是其中一个或多个恒定区缺失的抗体片段，只要IgA样抗体能够与J链缔合形成二聚体。因此，IgA样抗体或IgA衍生的结合分子可以是例如杂合IgA/IgG抗体，或可以是IgA抗体的“多聚片段”。

术语“价”、“二价”、“多价”和语法等同物是指给定结合分子(例如，抗体或抗体样分子)中或给定结合单元中抗原结合结构域的数量。因此，参考给定结合分子(例如，IgM抗体、IgM样抗体或其多聚片段)，术语“二价”、“四价”和“六价”分别表示存在两个抗原结合结构域、四个抗原结合结构域和六个抗原结合结构域。在每个结合单元为二价的情况下，典型的IgM抗体或IgM样抗体或IgM衍生的结合分子可具有10或12价。二价或多价结合分子，例如，抗体或抗体样分子，可为单特异性的，即，所有抗原结合结构域是相同的，或可为双特异性或多特异性的，例如，其中两个或更多个抗原结合结构域是不同的，例如，结合相同抗原上的不同表位、或结合完全不同的抗原。

术语“表位”包括能够特异性结合抗体或抗体样分子的抗原结合结构域的任何分子决定簇。在某些实施方案中，表位可包括诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基的分子的化学活性表面集群，并且在某些实施方案中，可具有三维结构特征和或特定电荷特征。表位是靶中由抗体的抗原结合结构域结合的区域。

术语“靶”在最广泛的意义上使用，以包括可由结合分子(例如，抗体或抗体样分子)结合的物质。靶可为例如，多肽、核酸、碳水化合物、脂质或其他分子。此外，“靶”可为例如，细胞、器官或生物体，其包含可由结合分子(例如，抗体或抗体样分子)结合的表位。

轻链和重链均分成结构同源性和功能同源性的区域。术语“恒定的”和“可变的”是就功能上来使用的。轻链的可变区(VL)和重链的可变区(VH)两者决定抗原识别和特异性。相反，轻链的恒定结构域(CL)和重链的恒定结构域(例如，CH1、CH2、CH3或CH4)赋予生物学特性，诸如分泌、经胎盘移动性、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区结构域的编号随其离抗体的抗原结合位点或氨基末端更远而增加。N末端部分是可变区并且C末端部分是恒定区；CH3(或在IgM的情况下是CH4)结构域和CL结构域实际上分别包含重链和轻链的羧基末端。

“全长IgM抗体重链”是在N末端向C末端方向上包括抗体重链可变结构域(VH)、抗体重链恒定结构域1(CM1或Cμ1)、抗体重链恒定结构域2(CM2或Cμ2)、抗体重链恒定结构域3(CM3或Cμ3)和可包括尾片的抗体重链恒定结构域4(CM4或Cμ4)的多肽。

如上所指明，一个或多个可变区允许结合分子(例如，抗体或抗体样分子)选择性识别并特异性结合抗原上的表位。即，结合分子(例如，抗体或抗体样分子)的VL结构域和VH结构域或互补决定区(CDR)的子集组合以形成抗原结合结构域。更具体地，抗原结合结构域可由每条VH和VL链上的三个CDR限定。某些抗体形成较大的结构。例如，IgA可形成包括通过二硫键共价连接的两个H2L2结合单元和J链的分子，该分子还可与分泌组分缔合，并且IgM可形成包括通过二硫键共价连接的五个或六个H2L2结合单元和任选地J链的五聚体或六聚体分子。

抗体抗原结合结构域中存在的六个“互补决定区”或“CDR”是短的非连续氨基酸序列，当抗体在水性环境中呈现其三维构型时，所述氨基酸序列被特别定位以形成抗原结合结构域。抗原结合结构域中的其余氨基酸被称为“框架”区，其显示较小的分子间变异性。框架区主要采用β-片层构象，并且CDR形成环，所述环连接β-片层结构且在一些情形下形成β-片层结构的一部分。因此，框架区起形成支架的作用，所述支架提供用于通过链间非共价相互作用将CDR定位在正确的取向上。由经定位的CDR形成的抗原结合结构域限定与靶抗原上的表位互补的表面。此互补表面促进抗体与其同源表位的非共价结合。对于任何给定的重链或轻链可变区，本领域普通技术人员可容易地鉴定分别构成CDR和框架区的氨基酸，因为它们已经以各种不同的方式被定义(参见，"Sequences of Proteins ofImmunologicalInterest,"Kabat,E.,等人,U.S.Department of Health and HumanServices,(1983)；和Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.,196:901-917(1987)，其以引用的方式整体并入本文)。

在本领域内使用和/或公认的术语存在两个或更多个定义的情况下，除非明确地相反说明，否则本文所用的术语的定义意图包括所有此类含义。具体的实例是使用术语“互补决定区”(“CDR”)来描述在重链和轻链多肽两者的可变区内发现的非连续抗原结合位点。这些特定区域已例如由Kabat等人,U.S.Dept.of Health and Human Services,"Sequences of Proteins of Immunological Interest"(1983)以及由Chothia等人,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)描述，所述参考以引用的方式并入本文。Kabat和Chothia定义包括相互比较时氨基酸的重叠或子集。然而，除非另有指明，否则提及抗体或其变体的CDR的任一定义(或本领域普通技术人员已知的其他定义)的应用意图落入本文定义和使用的术语的范围内。涵盖由以上引用的每个参考文献中的所定义的CDR的适当氨基酸在下表1中列出，作为比较。涵盖特定CDR的确切氨基酸数将根据CDR的序列和尺寸而变化。给定抗体的可变区氨基酸序列，本领域技术人员可常规地确定哪些氨基酸构成特定的CDR。

表1 CDR定义^*

	Kabat	Chothia
			VH CDR1	31-35	26-32
VH CDR2	50-65	52-58
			VH CDR3	95-102	95-102
VL CDR1	24-34	26-32
			VL CDR2	50-56	50-52
VL CDR3	89-97	91-96

^*表1中所有CDR定义的编号是根据Kabat等人提出的编号惯例(见下文)。

例如，也可使用IMGT信息系统(imgt_dot_cines_dot_fr/)(

/V-Quest)对抗体可变结构域进行分析，以鉴定可变区区段，包括CDR。(参见，例如，Brochet等人，Nucl.Acids Res.,36:W503-508,2008)。

Kabat等人还定义了适用于任何抗体的可变区和恒定区序列的编号系统。本领域的普通技术人员可以明确地对任何可变区序列分配这种“Kabat编号”系统，而不依赖于序列本身以外的任何实验数据。如本文所用，“Kabat编号”是指由Kabat等人，U.S.Dept.ofHealth and Human Services,"Sequence of Proteins of Immunological Interest"(1983)提出的编号系统。然而，除非明确指出使用Kabat编号系统，否则本公开中所有氨基酸序列使用连续编号。

用于人IgM恒定结构域的Kabat编号系统可见于Kabat等人“Tabulation andAnalysis of Amino acid and nucleic acidSequences of Precursors,V-Regions,C-Regions,J-Chain,T-Cell Receptors for Antigen,T-Cell Surface Antigens,β-2Microglobulins,Major Histocompatibility Antigens,Thy-1,Complement,C-ReactiveProtein,Thymopoietin,Integrins,Post-gamma Globulin,α-2 Macroglobulins,andOther Related Proteins,”U.S.Dept.of Health and Human Services(1991)。IgM恒定区可顺序地编号(即，氨基酸#1从恒定区的第一个氨基酸开始)或通过使用Kabat编号方案编号。下文列出了人IgM恒定区的两个等位基因顺序地编号(在本文中呈现为SEQ ID NO:22(等位基因IGHM*03)和SEQ ID NO:23(等位基因IGHM*04))和通过Kabat系统编号的比较。带下划线的氨基酸残基不考虑在Kabat系统中(下文带双下划线的

可以是丝氨酸(S)(SEQID NO:22)或甘氨酸(G)(SEQ ID NO:23))：

IgM重链的顺序(SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23)/KABAT编号图例

结合分子(例如，抗体、抗体样分子)、其抗原结合片段、变体或衍生物，和/或其多聚片段包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体、单链抗体、表位结合片段，例如，Fab、Fab'和F(ab')₂、Fd、Fv、单链Fv(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)、包含VL或VH结构域的片段、由Fab表达文库产生的片段。scFv分子是本领域已知的，并且在例如美国专利5,892,019中有所描述。

“特异性结合”通常意指结合分子(例如，抗体或其片段、变体或衍生物)通过其抗原结合结构域与表位结合，并且所述结合需要抗原结合结构域和表位之间的一定互补性。根据此定义，当与结合分子(例如，抗体或抗体样分子)将与随机的、不相关的表位结合相比，结合分子更易于通过其抗原结合结构域与一表位结合时，称结合分子与该表位“特异性结合”。本文中使用术语“特异性”来形容某个结合分子与某个表位结合的相对亲和力。例如，可认为，结合分子“A”比结合分子“B”对于给定的表位具有更高的特异性，或可以称，结合分子“A”以比对于相关表位“D”更高的特异性与表位“C”结合。

可以称，本文所公开的结合分子(例如，抗体或其片段、变体或衍生物)以小于或等于5X10^-2sec^-1、10^-2sec^-1、5X10^-3sec^-1、10^-3sec^-1、5X10^-4sec^-1、10^-4sec^-1、5X10^-5sec^-1或10^{- 5}sec^-1、5X10^-6sec^-1、10^-6sec^-1、5X10^-7sec^-1或10^-7sec^-1的解离速率(k(off))与靶抗原结合。

可以称，本文所公开的结合分子(例如，抗体或抗原结合片段、变体或衍生物)以大于或等于10³M^-1sec^-1、5X10³M^-1sec^-1、10⁴M^-1sec^-1、5X10⁴M^-1sec^-1、10⁵M^-1sec^-1、5X10⁵M^-1sec^-1、10⁶M^-1sec^-1、或5X10⁶M^-1sec^-1或10⁷M^-1sec^-1的结合速率(k(on))与靶抗原结合。

如果结合分子(例如，抗体或其片段、变体或衍生物)优先结合给定表位的程度使得它在一定程度上阻断参考抗体或抗原结合片段与该表位的结合，则称结合分子竞争性抑制参考抗体或抗原结合片段与该表位的结合。竞争性抑制可通过本领域已知的任何方法，例如竞争ELISA测定来确定。可以称，结合分子竞争性抑制参考抗体或抗原结合片段与给定表位的结合至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％。

如本文所用，术语“亲和力”是指单个表位与例如免疫球蛋白分子的一个或多个抗原结合结构域结合强度的量度。参见，例如，Harlow等人,Antibodies:A LaboratoryManual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,第2版,1988)，第27至28页。如本文所用，术语“亲合力”是指抗原结合结构域群与抗原之间的复合物的整体稳定性。参见，例如，Harlow，第29至34页。亲合力与群中单个抗原结合结构域与特定表位的亲和力有关，并且与免疫球蛋白的价和抗原有关。例如，二价单克隆抗体与具有高度重复的表位结构的抗原(诸如聚合物)之间的相互作用将是高亲和力的一种相互作用。二价单克隆抗体与在细胞表面上以高密度存在的受体之间的相互作用也将具有高亲合力。

如本文所公开的结合分子(例如，抗体或其片段、变体或衍生物)也可根据其交叉反应性来描述或指定。如本文所用，术语“交叉反应性”是指对一种抗原具有特异性的结合分子(例如，抗体或其片段、变体或衍生物)与第二抗原反应的能力；两种不同抗原物质之间相关性的量度。因此，如果结合分子与诱导其形成的表位以外的表位结合，则其是交叉反应的。交叉反应表位通常含有许多与诱导表位相同的互补结构特征，并且在一些情况下，可实际上比原始表位更适合。

结合分子(例如，抗体或其片段、变体或衍生物)也可根据其与抗原的结合亲和力来描述或指定。例如，结合分子可以不大于5x10^-2M、10^-2M、5x10^-3M、10^-3M、5x10^-4M、10^-4M、5x10^-5M、10^-5M、5x10^-6M、10^-6M、5x10^-7M、10^-7M、5x10^-8M、10^-8M、5x10^-9M、10^-9M、5x10^-10M、10^-10M、5x10^-11M、10^-11M、5x10^-12M、10^-12M、5x10^-13M、10^-13M、5x10^-14M、10^-14M、5x10^-15M或10^-15M的解离常数或K_D与抗原结合。

包括单链抗体或其他抗原结合结构域的“抗原结合抗体片段”可单独存在或与以下中的一种或多种组合存在：铰链区、CH1、CH2、CH3或CH4结构域、J链或分泌组分。还包括抗原结合片段，其可包括铰链区、CH1、CH2、CH3或CH4结构域、J链或分泌组分中的一种或多种与一个或多个可变区的任何组合。结合分子(例如，抗体或其抗原结合片段)可来自任何动物来源，包括鸟类和哺乳动物。抗体可为例如人、鼠、驴、兔、山羊、豚鼠、骆驼、美洲驼、马或鸡的抗体。在另一个实施方案中，可变区可以是软骨鱼(condricthoid)来源(例如，来自鲨鱼)。如本文所用，“人”抗体包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，并且包括从人免疫球蛋白文库或从一种或多种人免疫球蛋白的转基因动物中分离出的抗体，所述转基因动物可以在一些情况下表达内源性免疫球蛋白而在一些情况下不表达，如在下文并且例如在Kucherlapati等人的美国专利号5,939,598中有所描述。根据本公开的实施方案，如本文所提供的IgM或IgM样抗体或IgM衍生的结合分子可包括抗体的抗原结合片段(例如，scFv片段)，只要IgM或IgM样抗体能够形成多聚体，例如六聚体或五聚体。

如本文所用，术语“重链亚基”包括衍生自免疫球蛋白重链的氨基酸序列，包含重链亚基的结合分子(例如，抗体或抗体样分子)可包括以下中的至少一种：VH结构域、CH1结构域、铰链(例如，上、中和/或下铰链区)结构域、CH2结构域、CH3结构域、CH4结构域、尾片(tp)或其变体或片段。例如，除VH结构域之外，结合分子(例如，抗体、抗体样分子或其片段、变体或衍生物)还可以包括但不限于一种或多种抗体同种型和/或物种的CH1结构域、铰链、CH2结构域、CH3结构域、CH4结构域或尾片(tp)的任何组合。在某些实施方案中，除了VH结构域之外，结合分子(例如抗体、抗体样分子)或其片段、变体或衍生物还可包括：CH3结构域和CH4-tp结构域；或CH3结构域、CH4-tp结构域和J链。此外，用于本公开的结合分子(例如，抗体或抗体样分子)可缺乏某些恒定区部分，例如CH2结构域的全部或部分。可修饰这些结构域(例如，重链亚基)，使得其在氨基酸序列上与原始免疫球蛋白分子不同。根据本公开的实施方案，如本文所提供的IgM或IgM样抗体包括IgM重链恒定区的足够部分，以允许IgM或IgM样抗体形成多聚体(例如六聚体或五聚体)，例如IgM重链恒定区包括IgM重链恒定区的“多聚片段”。

如本文所用，术语“轻链亚基”包括衍生自免疫球蛋白轻链的氨基酸序列。轻链亚基至少包括VL，并且还可包括CL(例如，Cκ或Cλ)结构域。

结合分子(例如，抗体、抗体样分子、其抗原结合片段、变体或衍生物或其多聚片段)可以根据其识别或特异性结合的抗原的一个或多个表位或部分来描述或指定。靶抗原中与抗体的抗原结合结构域特异性相互作用的部分是“表位”或“抗原决定簇”。靶抗原可包含单个表位或至少两个表位，并且可包括任何数量的表位，其取决于抗原的尺寸、构象和类型。

如本文所用，术语“铰链区”包括在IgG、IgA和IgD重链中连接CH1结构域与CH2结构域的重链分子的部分。此铰链区包含大约25个氨基酸并且是柔性的，从而允许两个N末端抗原结合区独立地移动。

如本文所用，术语“二硫键”包括在两个硫原子之间形成的共价键。氨基酸半胱氨酸包含可以与第二巯基形成二硫键或与第二巯基桥联的巯基。

如本文所用，术语“嵌合抗体”是指其中免疫反应性区域或位点获自或来源于第一物种而恒定区(其可为完整的、部分的或修饰的)获自第二物种的抗体。在一些实施方案中，靶结合区或位点将来自非人来源(例如，小鼠或灵长类)并且恒定区是人的。

术语“多特异性抗体”或“双特异性抗体”是指在单个抗体分子内具有针对两种或更多种不同表位的抗原结合结构域的抗体或抗体样分子。除典型抗体结构之外，其他结合分子可以以两种结合特异性构建。

如本文所用，术语“工程化抗体”是指其中重链或轻链或两者中的可变结构域通过CDR或框架区中的一个或多个氨基酸的至少部分替代而改变的抗体。在某些实施方案中，可将来自已知特异性的抗体的整个CDR移植到异源抗体的框架区中。尽管替代的CDR可来源于与框架区所来源的抗体相同类别或甚至亚类的抗体，但是CDR也可来源于不同类别的抗体，例如，来源于不同物种的抗体。其中将来自已知特异性的非人抗体的一个或多个“供体”CDR移植到人重链或轻链框架区中的工程化抗体在本文中称为“人源化抗体”。在某些实施方案中，并不是所有CDR都被来自供体可变区的完整CDR替代，但是供体的抗原结合能力仍然可转移到受体可变结构域。鉴于在例如美国专利号5,585,089、5,693,761、5,693,762和6,180,370中提出的解释，本领域的普通技术人员将完全有能力通过进行常规实验来获得功能工程化或人源化抗体。

如本文所用，术语“工程化”包括通过合成方式(例如，通过重组技术、体外肽合成、通过肽、核酸或聚糖的酶促或化学偶联或这些技术的一些组合)对核酸或多肽分子进行操纵。

如本文所用，术语“连接的”、“融合的”或“融合”或其他语法等同物可互换使用。这些术语是指通过无论什么方式(包括化学缀合或重组方式)将两种或更多种元素或组分连接在一起。“框内融合”是指以维持原始开放阅读框(ORF)的翻译阅读框的方式连接两个或更多个多核苷酸ORF以形成连续的更长ORF。因此，重组融合蛋白是含有两个或更多个区段的单一蛋白质，所述两个或更多个区段对应于由原始ORF编码的多肽(所述区段在自然界中通常不会如此连接)。尽管因此阅读框在整个融合区段中是连续的，但是这些区段可通过例如框内接头序列在物理上或空间上分离。例如，编码免疫球蛋白可变区的CDR的多核苷酸可在框内融合，但是可被编码至少一个免疫球蛋白框架区或另外的CDR区的多核苷酸分离，只要“融合的”CDR作为连续多肽的一部分被共翻译。

在多肽的情境下，“线性序列”或“序列”是多肽中从氨基末端至羧基末端方向上的顺序的氨基酸，其中序列中彼此相邻的氨基酸在多肽的一级结构中是连续的。处在多肽另一部分的“氨基末端”或“C末端”的多肽部分是在顺序多肽链中出现较早的那部分。类似地，处在多肽另一部分的“羧基末端”或“C末端”的多肽部分是在顺序多肽链中出现较迟的那部分。例如，在典型的抗体中，可变结构域处在恒定区的“N末端”，并且恒定区处在可变结构域的“C末端”。

如本文所用，术语“表达”是指基因产生生化物质例如多肽的过程。所述过程包括基因在细胞内的功能存在的任何表现，包括但不限于基因敲除以及瞬时表达与稳定表达。其包括但不限于将基因转录成RNA，例如，信使RNA(mRNA)，以及将此种mRNA翻译成一个或多个多肽。如果最终期望产物是生化物质，则表达包括产生该生化物质和任何前体。基因的表达产生“基因产物”。如本文所用，基因产物可以是核酸(例如，由基因转录产生的信使RNA)或从转录物翻译的多肽。本文所述的基因产物还包括具有转录后修饰(例如，聚腺苷酸化)的核酸，或具有翻译后修饰(例如，甲基化、糖基化、脂质的添加、与其他蛋白质亚基的缔合、蛋白水解裂解等)的多肽。

诸如“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“治疗(to treat)”或“缓和(alleviating)”或“缓和(to alleviate)”的术语是指治愈、减缓、减轻现有诊断出的疾病、病理状况或病症的症状，和/或停止或减慢现有诊断出的疾病、病理状况或病症的进展。诸如“预防(prevent)”、“预防(prevention)”、“避免(avoid)”、“阻止(deterrence)”等的术语是指预防未诊断的目标疾病、病理状况或病症的发展的预防性(prophylactic)措施或预防性(preventative)措施。因此，“需要治疗的受试者”可包括已经患有病症的受试者；易患病症的那些；和待预防病症的那些。

如本文所用，术语“血清半衰期”或“血浆半衰期”是指施用后蛋白质或药物(例如，如本文所述的结合分子，诸如抗体、抗体样分子或其片段)的血清或血浆浓度降低50％所用的时间(例如，以分钟、小时或天为单位)。可描述两个半衰期：阿尔法半衰期、α半衰期或t_1/2α，其是由于药物从中央室(例如，在静脉内递送情况下的血液)到外周室(例如，组织或器官)的重新分配过程引起的血浆浓度下降速率；和贝塔半衰期、β半衰期或t_1/2β，其是由于排泄或新陈代谢过程引起的下降速率。

如本文所用，术语“血浆药物浓度-时间曲线下的面积”或“AUC”反映在施用一定剂量的药物后人体对药物的实际暴露，并且以mg*h/L表示。此曲线下面积是从时间0(t₀)到无穷大(∞)测得的，并且取决于从体内清除药物的速率和施用的剂量。

如本文所用，术语“平均停留时间”或“MRT”是指药物保留在体内的平均时间长度。

“受试者”或“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”是指期望进行诊断、预后或治疗的任何受试者，特别是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括人、家畜、农场动物以及动物园、运动或宠物动物，诸如狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、猪、牛、熊等。

如本文所用，诸如“将从治疗中受益的受试者”和“需要治疗的动物”的短语是指来自所有预期受试者中的受试者子集，所述预期受试者将受益于施用给定的治疗剂(例如结合分子诸如抗体或抗体样分子，其包含一个或多个抗原结合结构域)。此类结合分子(例如抗体或抗体样分子)可例如用于诊断程序和/或用于疾病的治疗或预防。

IgM抗体、IgM样抗体和IgM衍生的结合分子

IgM是B细胞响应抗原刺激而产生的第一免疫球蛋白，并且以约1.5mg/ml自然存在于血清中，其中半衰期为约5天。IgM是五聚体或六聚体分子，并因此包括五个或六个结合单元。IgM结合单元通常包括两条轻链和两条重链。虽然IgG重链恒定区含有三个重链恒定结构域(CH1、CH2和CH3)，但是IgM的重链(μ)恒定区另外含有第四个恒定结构域(CH4)并包括C末端“尾片”(tp)。虽然存在若干人类等位基因，但人类IgM恒定区通常包含氨基酸序列SEQID NO:22(IMGT等位基因IGHM*03，与例如GenBank登录号pir||S37768相同)或SEQ ID NO:23(IMGT等位基因IGHM*04，与例如GenBank登录号sp|P01871.4相同)。人Cμ1区的范围是SEQID NO:22或SEQ ID NO:23的约氨基酸5至约氨基酸102；人Cμ2区的范围是SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的约氨基酸114至约氨基酸205；人Cμ3区的范围是SEQ ID NO:22或SEQ IDNO:23的约氨基酸224至约氨基酸319；Cμ4区的范围是SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的约氨基酸329至约氨基酸430；并且尾片的范围是SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的约氨基酸431至约氨基酸453。

存在具有微小序列变异的人IgM恒定区的其他形式，包括但不限于GenBank登录号CAB37838.1和pir||MHHU。与本公开别处描述和要求保护的SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23相对应的位置处的氨基酸取代、插入和/或缺失同样可并入替代的人IgM序列中，以及并入到其他物种的IgM恒定区氨基酸序列中。

每个IgM重链恒定区可以与抗原结合结构域(例如，scFv或VHH)或抗原结合结构域的亚基(例如，VH区)缔合。

五个IgM结合单元可与另一个小多肽链(J链)或其功能片段、变体或衍生物形成复合物，以形成五聚体IgM抗体或IgM样抗体。人J链的前体形式呈现为SEQ ID NO:1。信号肽(带下划线)从SEQ ID NO:1的氨基酸1延伸至约氨基酸22，并且成熟人J链从SEQ ID NO:1的约氨基酸23延伸至氨基酸159。成熟人J链具有氨基酸序列SEQ ID NO:2。

本文别处提供了示例性的变体和经修饰的J链。在没有J链的情况下，IgM抗体或IgM样抗体通常组装成六聚体，六聚体包含六个结合单元和至多十二个与结合单元缔合的抗原结合结构域。在有J链的情况下，IgM抗体或IgM样抗体通常组装成五聚体，五聚体包含五个结合单元和至多十个与结合单元缔合的抗原结合结构域，或者如果J链是包含一个或多个异源多肽(异源多肽可以是例如另外的、与J链缔合的抗原结合结构域)的经修饰的J链，则五聚体包含更多个抗原结合结构域。五个或六个IgM结合单元组装成五聚体或六聚体IgM抗体或IgM样抗体被认为涉及Cμ4和尾片结构域之间的相互作用。参见，例如，Braathen,R.,等人，J.Biol.Chem.277:42755-42762(2002)。因此，本公开中提供的五聚体或六聚体IgM抗体或抗体样分子的恒定区通常至少包括Cμ4和/或尾片结构域(本文中也统称为Cμ4-tp)。因此，IgM重链恒定区的“多聚片段”至少包括Cμ4-tp结构域。IgM重链恒定区可另外包括Cμ3结构域或其片段、Cμ2结构域或其片段、Cμ1结构域或其片段。在某些实施方案中，如本文所提供的结合分子(例如，IgM抗体或IgM样抗体)可包括完整的IgM重(μ)链恒定结构域(例如，SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23)或其变体、衍生物或类似物(例如，如本文所提供的)。

在某些实施方案中，本公开提供一种五聚体IgM或IgM样抗体，其包含五个二价结合单元，其中每个结合单元包括两个IgM重链恒定区或其多聚片段或变体，IgM重链恒定区或其多聚片段或变体各自与抗原结合结构域或抗原结合结构域的亚基缔合。在某些实施方案中，两个IgM重链恒定区为人重链恒定区。

在本文提供的IgM或IgM样抗体是五聚体的情况下，IgM或IgM样抗体通常还包括J链或其功能片段或变体。如本文所提供，在一些实施方案中，J链是经修饰的J链，其包含特异性结合免疫效应细胞(例如，CD8+细胞毒性T细胞或NK细胞)的、与J链缔合的抗原结合结构域。在某些实施方案中，经修饰的J链还可包含一个或多个与其附接的异源部分，例如免疫刺激剂。在某些实施方案中，可以使J链突变以影响(例如，增强)本文提供的IgM或IgM样抗体的血清半衰期，如本文别处所讨论的。在某些实施方案中，可以使J链突变以影响糖基化，如本公开中别处所讨论的。

在一些实施方案中，多聚体结合分子是六聚体并且包含六个二价结合单元或其变体或片段。在一些实施方案中，多聚体结合分子是六聚体并且包含六个二价结合单元或其变体或片段，并且其中每个结合单元包含两个IgM重链恒定区或其多聚片段或变体。

IgM重链恒定区可包括以下中的一种或多种：Cμ1结构域或其片段或变体、Cμ2结构域或其片段或变体、Cμ3结构域或其片段或变体、Cμ4结构域或其片段或变体和/或尾片(tp)或其片段或变体，前提条件是恒定区可在IgM或IgM样抗体中发挥期望的功能，例如，与第二IgM恒定区缔合以形成具有1个、2个或更多个抗原结合结构域的结合单元，和/或与其他结合单元(以及在五聚体的情况下的J链)缔合以形成六聚体或五聚体。在某些实施方案中，在单个结合单元中的两个IgM重链恒定区或其片段或变体各自包含：Cμ4结构域或其片段或变体；尾片(tp)或其片段或变体；或Cμ4结构域和tp或其片段或变体的组合。在某些实施方案中，在单个结合单元中的两个IgM重链恒定区或其片段或变体各自还包含：Cμ3结构域或其片段或变体；Cμ2结构域或其片段或变体；Cμ1结构域或其片段或变体；或它们的任何组合。

在一些实施方案中，IgM或IgM样抗体的结合单元包含两条轻链。在一些实施方案中，IgM或IgM样抗体的结合单元包含两条轻链片段。在一些实施方案中，轻链是κ轻链。在一些实施方案中，轻链是λ轻链。在一些实施方案中，每个结合单元包含两条免疫球蛋白轻链，每条轻链包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。

具有增强的血清半衰期的IgM抗体、IgM样抗体和IgM衍生的结合分子

本文提供的某些IgM衍生的多聚体双特异性结合分子可以被修饰以具有增强的血清半衰期。可增强IgM衍生的结合分子的血清半衰期的示例性IgM重链恒定区突变在PCT公开号WO 2019/169314A1中公开，所述文献以引用的方式整体并入本文。例如，如本文所提供的IgM衍生的结合分子的变体IgM重链恒定区可包括与野生型人IgM恒定区(例如，SEQ IDNO:22或SEQ ID NO:23)的氨基酸S401、E402、E403、R344和/或E345相对应的氨基酸位置处的氨基酸取代。“与野生型人IgM恒定区的氨基酸S401、E402、E403、R344和/或E345相对应的氨基酸”意指与人IgM恒定区中的S401、E402、E403、R344和/或E345同源的任何物种的IgM恒定区的序列中的氨基酸。在某些实施方案中，与SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的S401、E402、E403、R344和/或E345相对应的氨基酸可以被任何氨基酸(例如，丙氨酸)取代。

具有降低的CDC活性的IgM抗体、IgM样抗体和IgM衍生的结合分子

相对于具有对应参考人IgM恒定区的、除赋予降低的CDC活性的突变之外都相同的参考IgM抗体或IgM样抗体，如本文所提供的某些IgM衍生的多聚体结合分子可以被工程化以在补体存在的情况下表现出对细胞的降低的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。这些CDC突变可以与如本文所提供的阻断N-连接糖基化和/或赋予增加的血清半衰期的任何突变组合。“对应参考人IgM恒定区”意指人IgM恒定区或其部分(例如，Cμ3结构域)，其与变体IgM恒定区除了恒定区中的影响CDC活性的一个或多个修饰之外都相同。在某些实施方案中，变体人IgM恒定区相对于野生型人IgM恒定区(例如，在PCT公开号WO/2018/187702中有所描述，所述文献以引用的方式整体并入本文)包括一个或多个氨基酸取代(例如，Cμ3结构域中)。本领域的普通技术人员熟知用于测量CDC的测定，并且示例性测定在例如PCT公开号WO/2018/187702中有所描述。

在某些实施方案中，赋予降低的CDC活性的变体人IgM恒定区包括与SEQ ID NO:22(人IgM恒定区等位基因IGHM*03)或SEQ ID NO:23(人IgM恒定区等位基因IGHM*04)的L310、P311、P313和/或K315位置处的野生型人IgM恒定区相对应的氨基酸取代。在某些实施方案中，赋予降低的CDC活性的变体人IgM恒定区包括与SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的P311位置处的野生型人IgM恒定区相对应的氨基酸取代。在其他实施方案中，如本文所提供的变体IgM恒定区含有与SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的P313位置处的野生型人IgM恒定区相对应的氨基酸取代。在其他实施方案中，如本文所提供的变体IgM恒定区含有与SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的P311和/或SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的P313位置处的野生型人IgM恒定区相对应的取代的组合。这些脯氨酸残基可以被任何氨基酸(例如，丙氨酸、丝氨酸或甘氨酸)独立地取代。在某些实施方案中，赋予降低的CDC活性的变体人IgM恒定区包括与SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的K315位置处的野生型人IgM恒定区相对应的氨基酸取代。赖氨酸残基可以被任何氨基酸(例如，丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸或天冬氨酸)独立地取代。在某些实施方案中，赋予降低的CDC活性的变体人IgM恒定区包括与SEQ ID NO:22或SEQ IDNO:23的K315位置处的野生型人IgM恒定区相对应的用天冬氨酸进行的氨基酸取代。在某些实施方案中，赋予降低的CDC活性的变体人IgM恒定区包括与SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的L310位置处的野生型人IgM恒定区相对应的氨基酸取代。赖氨酸残基可以被任何氨基酸(例如，丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸或天冬氨酸)独立地取代。在某些实施方案中，赋予降低的CDC活性的变体人IgM恒定区包括与SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的L310位置处的野生型人IgM恒定区相对应的用天冬氨酸进行的氨基酸取代。

人和某些非人灵长类IgM恒定区通常包括五个(5个)自然存在的天冬酰胺(N)连接糖基化基序或位点。如本文所用，“N连接糖基化基序”包含或由氨基酸序列N-X₁-S/T组成，其中N是天冬酰胺，X₁是除脯氨酸(P)之外的任何氨基酸，并且S/T是丝氨酸(S)或苏氨酸(T)。聚糖附接到天冬酰胺残基的氮原子上。参见，例如，Drickamer K,Taylor ME(2006),Introduction to Glycobiology(第2版).Oxford University Press,USA。N连接糖基化基序出现在SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的人IgM重链恒定区中，始于位置46(“N1”)、209(“N2”)、272(“N3”)、279(“N4”)和440(“N5”)。这五个基序在非人灵长类IgM重链恒定区中是保守的，并且五个基序中的四个在小鼠IgM重链恒定区中是保守的。因此，在一些实施方案中，如本文所提供的多聚体结合分子的IgM重链恒定区包含5个N连接糖基化基序：N1、N2、N3、N4和N5。在一些实施方案中，每个IgM重链恒定区上的至少三个N连接糖基化基序(例如，N1、N2和N3)被复合聚糖占据。

在某些实施方案中，至少一个、至少两个、至少三个或至少四个N-X₁-S/T基序可包括阻止该基序处的糖基化的氨基酸插入、缺失或取代。在某些实施方案中，IgM衍生的多聚体结合分子可以包括N1基序、N2基序、N3基序、N5基序或N1、N2、N3或N5基序中的两个或更多个、三个或更多个或全部四个的任何组合处的氨基酸插入、缺失或取代，其中氨基酸插入、缺失或取代阻止该基序处的糖基化。在一些实施方案中，相对于野生型人IgM恒定区，IgM恒定区包含在SEQ ID NO:22(人IgM恒定区等位基因IGHM*03)或SEQ ID NO:23(人IgM恒定区等位基因IGHM*04)的46、209、272或440位置处的一个或多个取代。参见，例如，美国临时申请号62/891,263，所述文献以引用的方式整体并入本文。

IgA抗体、IgA样抗体和IgA衍生的结合分子

IgA在粘膜免疫中起关键作用，并且包含产生的总免疫球蛋白的约15％。IgA可以是单体或多聚体，主要形成二聚体分子，但也可以组装成三聚体、四聚体和/或五聚体。参见，例如，de Sousa-Pereira,P.和J.M.Woof,Antibodies 8:57(2019)。

在一些实施方案中，多聚体结合分子是二聚体并且包含两个二价结合单元或其变体或片段。在一些实施方案中，多聚体结合分子是二聚体，包含两个二价结合单元或其变体或片段，并且还包含如本文所述的J链或其功能片段或变体。在一些实施方案中，多聚体结合分子是二聚体，包含两个二价结合单元或其变体或片段，并且还包含如本文所述的J链或其功能片段或变体，其中每个结合单元包含两个IgA重链恒定区或其多聚片段或变体。

在一些实施方案中，多聚体结合分子是四聚体并且包含四个二价结合单元或其变体或片段。在一些实施方案中，多聚体结合分子是四聚体，包含四个二价结合单元或其变体或片段，并且还包含如本文所述的J链或其功能片段或变体。在一些实施方案中，多聚体结合分子是四聚体，包含四个二价结合单元或其变体或片段，并且还包含如本文所述的J链或其功能片段或变体，其中每个结合单元包含两个IgA重链恒定区或其多聚片段或变体。

在某些实施方案中，本公开提供的多聚体结合分子是二聚体结合分子，其包括IgA重链恒定区或其多聚片段，IgA重链恒定区或其多聚片段各自与抗原结合结构域缔合，总共四个抗原结合结构域。如本文所提供，IgA抗体、IgA衍生的结合分子或IgA样抗体包括两个结合单元、和J链，例如经修饰的J链，其包含与CD3结合的scFv抗体片段或与经修饰的J链融合的IL-15和/或IL-15受体-αsushi结构域，如本文别处所述的。所提供的每个结合单元包含两个IgA重链恒定区或其多聚片段或变体。在某些实施方案中，多聚体结合分子的至少三个或所有四个抗原结合结构域与相同的靶抗原结合。在某些实施方案中，多聚体结合分子的至少三个或所有四个结合多肽是相同的。

二价IgA衍生的结合单元包括两个IgA重链恒定区，并且二聚体IgA衍生的结合分子包括两个结合单元。IgA含有以下重链恒定结构域：Cα1(或另选地CA1或CH1)、铰链区、Cα2(或另选地CA2或CH2)和Cα3(或另选地CA3或CH3)以及C末端“尾片”。人IgA具有两种亚型：IgA1和IgA2。人IgA1恒定区通常包括氨基酸序列SEQ ID NO:24。人Cα1结构域从SEQ ID NO:24的约氨基酸6延伸至约氨基酸98；人IgA1铰链区从SEQ ID NO:24的约氨基酸102延伸至约氨基酸124，人Cα2结构域从SEQ ID NO:24的约氨基酸125延伸至约氨基酸219，人Cα3结构域从SEQ ID NO:24的约氨基酸228延伸至约氨基酸330，并且尾片从SEQ ID NO:24的约氨基酸331延伸至约氨基酸352。人IgA2恒定区通常包括氨基酸序列SEQ ID NO:25。人Cα1结构域从SEQ ID NO:25的约氨基酸6延伸至约氨基酸98；人IgA2铰链区从SEQ ID NO:25的约氨基酸102延伸至约氨基酸111，人Cα2结构域从SEQ ID NO:25的约氨基酸113延伸至约氨基酸206，人Cα3结构域从SEQ ID NO:25的约氨基酸215延伸至约氨基酸317，并且尾片从SEQ ID NO:25的约氨基酸318延伸至约氨基酸340。

两个IgA结合单元可与两条另外的多肽链：J链(例如，SEQ ID NO:2)和分泌组分(前体，SEQ ID NO:26，成熟，SEQ ID NO:27)形成复合物，以形成如本文所提供的二价分泌性IgA(sIgA)衍生的结合分子。两个IgA结合单元组装成二聚体IgA衍生的结合分子被认为涉及Cα3和尾片结构域。参见，例如，Braathen,R.,等人，J.Biol.Chem.277:42755-42762(2002)。因此，本公开中提供的多聚二聚体IgA衍生的结合分子通常包括至少包括Cα3和尾片结构域的IgA恒定区。四个IgA结合单元同样可以与J链形成四聚体复合物。sIgA抗体也可以形成为更高级别的多聚体，例如四聚体。

IgA重链恒定区可另外包括Cα2结构域或其片段、IgA铰链区或其片段、Cα1结构域或其片段和/或包括例如IgG铰链区的其他IgA(或其他免疫球蛋白，例如IgG)重链结构域。在某些实施方案中，如本文所提供的结合分子可包括完整的IgA重(α)链恒定结构域(例如，SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25)或其变体、衍生物或类似物。在一些实施方案中，IgA重链恒定区或其多聚片段是人IgA恒定区。

在某些实施方案中，如本文所提供的多聚体结合分子的每个结合单元包括两个IgA重链恒定区或其多聚片段或变体，每个IgA重链恒定区或其多聚片段或变体至少包括IgA Cα3结构域和IgA尾片结构域。在某些实施方案中，IgA重链恒定区还可以各自包括位于IgA Cα3结构域和IgA尾片结构域的N末端的IgA Cα2结构域。例如，IgA重链恒定区可以包括SEQ ID NO:24的氨基酸125至353或SEQ ID NO:25的氨基酸113至340。在某些实施方案中，IgA重链恒定区还可以各自包括位于IgA Cα2结构域的N末端的IgA或IgG铰链区。例如，IgA重链恒定区可以包括SEQ ID NO:24的氨基酸102至353或SEQ ID NO:25的氨基酸102至340。在某些实施方案中，IgA重链恒定区还可以各自包括位于IgA铰链区的N末端的IgA Cα1结构域。

在一些实施方案中，IgA抗体、IgA样抗体或其他IgA衍生的结合分子的每个结合单元包含两条轻链。在一些实施方案中，IgA抗体、IgA样抗体或其他IgA衍生的结合分子的每个结合单元包含两条轻链片段。在一些实施方案中，轻链是κ轻链。在一些实施方案中，轻链是λ轻链。在一些实施方案中，轻链是嵌合κ-λ轻链。在一些实施方案中，每个结合单元包含两条免疫球蛋白轻链，每条轻链包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。

经修饰的J链和/或变体J链

在某些实施方案中，本文提供的多聚体结合分子包含J链或其功能片段或变体。在某些实施方案中，本文提供的多聚体结合分子是五聚体，并且包含J链或其功能片段或变体。在某些实施方案中，本文提供的多聚体结合分子是二聚体IgA分子或五聚体IgM分子，并且包含J链或其功能片段或变体。在一些实施方案中，多聚体结合分子可包含自然存在的J链序列，诸如成熟人J链序列(例如，SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，多聚体结合分子可包含自然存在的J链或变体J链的功能片段。

在某些实施方案中，如本文所提供的五聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体的J链可以例如通过引入一个异源部分、或两个或更多个异源部分(例如，多肽)进行修饰，而不干扰IgM或IgM样抗体或IgA或IgA样抗体组装和结合其结合靶的能力。参见美国专利号9,951,134和10,618,978以及美国专利申请公开号US-2019-0185570，所述文献各自以引用的方式整体并入本文。因此，如本文所提供的IgM或IgM样抗体或IgA或IgA样抗体，包括如本文别处所述的双特异性或多特异性IgM或IgM样抗体或IgA或IgA样抗体，可以包括经修饰的J链或其功能片段或变体，经修饰的J链或其功能片段或变体还包括异源部分，例如异源多肽，其被引入到J链或其片段或变体中。在某些实施方案中，异源部分可以是与J链或其片段或变体框内融合或化学缀合的肽或多肽。例如，异源多肽可以与J链或其功能片段或变体融合。在某些实施方案中，异源多肽通过接头(例如，由至少5个氨基酸但通常不超过25个氨基酸组成的肽接头)与J链或其功能片段或变体融合。在某些实施方案中，肽接头由以下组成：GGGGS(SEQ ID NO:17)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:18)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:19)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:20)或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:21)。在某些实施方案中，异源部分可以是与J链缀合的化学部分。要附接到J链的异源部分可包括但不限于：结合部分，例如抗体或其抗原结合片段，例如单链Fv(scFv)分子；可增加IgM或IgM样抗体的半衰期的稳定肽；或诸如聚合物或细胞毒素的化学部分。在一些实施方案中，异源部分包含可增加结合分子(例如，人血清白蛋白(HSA)或HSA结合分子)的半衰期的稳定肽。

在一些实施方案中，经修饰的J链包括与J链缔合的抗原结合结构域，例如能够特异性结合靶抗原的多肽。在某些实施方案中，与J链缔合的抗原结合结构域可以是抗体或其抗原结合片段，如本文别处所述的。在某些实施方案中，与J链缔合的抗原结合结构域可以是来源于例如骆驼科或软骨鱼抗体的单链Fv(scFv)抗原结合结构域或单链抗原结合结构域。可以在任何允许与J链缔合的抗原结合结构域结合其结合靶而不干扰J链的功能或缔合的IgM或IgA抗体的功能的位置处将与J链缔合的抗原结合结构域引入到J链中。插入位置包括但不限于C末端处或其附近、N末端处或其附近或基于J-链的三维结构可接近的内部位置。在某些实施方案中，可以将与J链缔合的抗原结合结构域在SEQ ID NO:2的半胱氨酸残基92与101之间引入到SEQ ID NO:2的成熟人J链中。在另一个实施方案中，可以将与J链缔合的抗原结合结构域在糖基化位点处或其附近引入到SEQ ID NO:2的人J链中。在另一个实施方案中，可以将与J链缔合的抗原结合结构域在距C末端约10个氨基酸残基以内或距N末端约10个氨基酸残基以内引入到SEQ ID NO：2的人J链中。如本文别处所述，本公开提供一种包含经修饰的J链的多聚体双特异性结合分子，其中经修饰的J链包含特异性结合免疫效应细胞(例如，T细胞，诸如CD4+T细胞或CD8+细胞毒性T细胞或NK细胞)的、与J链缔合的抗原结合结构域。

在一些实施方案中，经修饰的J链还可以包括免疫刺激剂(ISA)，例如细胞因子(例如，白介素-2(IL-2)或白介素-15(IL-15)或其受体结合片段或变体)，在某些实施方案中细胞因子可以通过结合或共价附接来与其受体的一部分(例如，IL-15受体-α的sushi结构域)缔合。此类ISA在共同未决的美国临时申请号62/887,458中详述，所述文献以引用的方式整体并入本文。

在某些实施方案中，如本文所提供的IgM抗体、IgM样抗体、IgA抗体、IgA样抗体或IgM或IgA衍生的结合分子的J链是变体J链，其包含一个或多个可以改变例如本文提供的IgM抗体、IgM样抗体、IgA抗体、IgA样抗体或IgM或IgA衍生的结合分子的血清半衰期的氨基酸取代。例如，相对于除了变体J链中的一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入之外都相同的并且以相同方法对相同的动物物种施用的参考IgM衍生的结合分子，某些氨基酸取代、缺失或插入可以导致IgM衍生的结合分子在对受试动物施用时表现出增加的血清半衰期。在某些实施方案中，变体J链相对于参考J链可包括1个、2个、3个或4个单一氨基酸取代、缺失或插入。

在一些实施方案中，多聚体结合分子可以包含变体J链序列，诸如本文所述的具有降低的糖基化或与一种或多种聚合物Ig受体(例如，pIgR，Fcα-μ受体(FcαμR)或Fcμ受体(FcμR))的降低的结合的变体序列。参见，例如，PCT公开号WO 2019/169314，所述文献以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，变体J链可以包含与成熟野生型人J链(SEQ ID NO:2)的氨基酸Y102相对应的氨基酸位置处的氨基酸取代。“与成熟野生型人J链的氨基酸Y102相对应的氨基酸”意指与人J链中Y102同源的任何物种的J链序列中的氨基酸。参见PCT公开号WO 2019/169314，所述文献以引用的方式整体并入本文。与SEQ ID NO:2中的Y102相对应的位置在至少43种其他物种的J链氨基酸序列中是保守的。参见美国专利号9,951,134的图4，所述文献以引用的方式并入本文。与SEQ ID NO:2的Y102相对应的位置处的某些突变可以抑制某些免疫球蛋白受体(例如，人或鼠Fcαμ受体、鼠Fcμ受体和/或人或鼠聚合物Ig受体(pIg受体))与包含突变J链的IgM五聚体结合。相比于除取代之外都相同并且以相同的方式对相同的物种施用的对应抗体、抗体样分子或结合分子，包含与SEQ ID NO:2的Y102相对应的氨基酸处的突变的IgM抗体、IgM样分子和IgM衍生的结合分子在对动物施用时具有改善的血清半衰期。在某些实施方案中，与SEQ ID NO:2的Y102相对应的氨基酸可以被任何氨基酸取代。在某些实施方案中，与SEQ ID NO:2的Y102相对应的氨基酸可被丙氨酸(A)、丝氨酸(S)或精氨酸(R)取代。在特定的实施方案中，与SEQ ID NO:2的Y102相对应的氨基酸可以被丙氨酸取代。在特定的实施方案中，J链或其功能片段或变体是变体人J链并且包含氨基酸序列SEQ ID NO:3(在本文中称为“J*”的J链)。

野生型J链通常包括一个N连接糖基化位点。在某些实施方案中，如本文所提供的多聚体结合分子的变体J链或其功能片段包括天冬酰胺(N)连接糖基化基序N-X₁-S/T(例如，始于与成熟人J链(SEQ ID NO:2)或J*(SEQ ID NO:3)的氨基酸49(N6基序)相对应的氨基酸位置处)内的突变，其中N是天冬酰胺，X₁是除脯氨酸之外的任何氨基酸，并且S/T是丝氨酸或苏氨酸，并且其中突变阻止该基序处的糖基化。如PCT公开号WO 2019/169314中所展示的，阻止此位点处的糖基化的突变可以导致相对于除了阻止变体J链中的糖基化的一个或多个突变之外都相同的并且以相同方式对相同的动物物种施用的参考多聚体结合分子，如本文所提供的多聚体结合分子在对受试动物施用时表现出增加的血清半衰期。

例如，在某些实施方案中，如本文所提供的包含J链的结合分子的变体J链或其功能片段可包括与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸N49或氨基酸S51相对应的氨基酸位置处的氨基酸取代，前提条件是与S51相对应的氨基酸不被苏氨酸(T)取代，或其中变体J链包含与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸N49和S51两者相对应的氨基酸位置处的氨基酸取代。在某些实施方案中，与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的N49相对应的位置被任何氨基酸(例如，丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、苏氨酸(T)、丝氨酸(S)或天冬氨酸(D))取代。在特定的实施方案中，与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的N49相对应的位置可以被丙氨酸(A)取代。在另一个特定的实施方案中，与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的N49相对应的位置可以被天冬氨酸(D)取代。在一些实施方案中，与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的S51相对应的位置被丙氨酸(A)或甘氨酸(G)取代。在一些实施方案中，与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的S51相对应的位置被丙氨酸(A)取代。

具有结合免疫效应细胞的经修饰的J链的多聚体双特异性或多特异性抗CD123结合分子。

本公开提供一种用于治疗癌症(例如血液学癌症，例如急性髓系白血病(AML))的多聚体、双特异性或多特异性结合分子，其中结合分子是双特异性的并且以高亲合力靶向癌细胞上的CD123(IL-3Rα)，同时还通过单个抗原结合结构域靶向免疫效应细胞(例如，CD4+或CD8+T细胞或NK细胞)，从而有助于效应细胞介导的癌细胞杀伤，同时最大限度地减少细胞因子的过度释放。在某些方面，多聚体、双特异性抗CD123结合分子是抗CD123 x抗CD3结合分子。

因此，本公开提供一种多聚体、双特异性或多特异性结合分子，其包含两个IgA或IgA样二价结合单元或五个IgM或IgM样二价结合单元、和经修饰的J链，其中经修饰的J链至少包括野生型J链或其功能片段或变体和特异性结合免疫效应细胞的与J链缔合的抗原结合结构域。每个结合单元包含两条抗体重链，每条重链包含IgA、IgA样、IgM或IgM样重链恒定区或其多聚片段(如本文别处所述)并至少包含与结合单元缔合的抗原结合结构域的重链可变区(VH)部分。与结合单元缔合的抗原结合结构域中的至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或全部十个特异性结合CD123。如本文所提供的结合分子可以诱导免疫效应细胞依赖性细胞(例如，表达CD123的癌细胞)杀伤。

在某些实施方案中，本文提供的结合分子的经修饰的J链包括野生型J链或其片段的变体，其中相对于野生型J链，变体包括一个或多个可以影响结合分子的血清半衰期的单一氨基酸取代、缺失或插入；并且其中相对于除J链中的一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入之外都相同并且以相同的方式对相同的动物物种施用的参考结合分子，结合分子在对动物施用时表现出增加的血清半衰期。例如，在某些实施方案中，J链是包含氨基酸序列SEQ ID NO:3(“J*”)的变体人J链。

在某些实施方案中，所提供的结合分子的与J链缔合的抗原结合结构域包含抗体或其片段。在某些实施方案中，抗体片段是单链Fv(scFv)片段。scFv可以与J链或其片段或变体(例如，J*)融合或化学缀合。在某些实施方案中，scFv片段通过肽接头(例如，SEQ IDNO:17至21)与J链融合。如本公开中别处指出的，scFv片段可以以任何方式与J链或其片段或变体融合，只要J链的功能(即，与IgM、IgM样、IgA或IgA样结合单元组装以形成二聚体或五聚体)不被影响。例如，scFv片段可以与J链或其片段或变体的N末端融合、与J链或其片段或变体的C末端融合或与J链或其片段或变体的N末端和C末端两者融合。

由经修饰的J链的抗原结合结构域结合的免疫效应细胞可以是在与CD123靶向的癌细胞缔合时赋予有益效果(例如，介导基于细胞的CD123+癌细胞杀伤)的任何免疫效应细胞。在某些实施方案中，免疫效应细胞可以是但不限于：T细胞(例如，CD4+T细胞、CD8+T细胞、NKT细胞或γδT细胞)、B细胞、浆细胞、巨噬细胞、树突状细胞或自然杀伤(NK)细胞。在某些实施方案中，免疫效应细胞是T细胞，例如CD4+或CD8+T细胞。在某些实施方案中，免疫效应细胞是CD8+细胞毒性T细胞。在某些实施方案中，免疫效应细胞是NK细胞。

在免疫效应细胞是T细胞(例如CD8+T细胞)的情况下，与J链缔合的scFv片段可以与T细胞表面抗原CD3(例如，CD3ε)特异性结合。在某些实施方案中，抗CD3εscFv片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH包含VH互补决定区VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，它们分别包含氨基酸序列SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7或具有VHCDR中的一个或多个中的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ IDNO:7，并且其中VL包含VL互补决定区VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3，它们分别包含氨基酸序列SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11或具有VLCDR中的一个或多个中的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11。在某些实施方案中，scFv片段包含VH氨基酸序列SEQ ID NO:4和VL氨基酸序列SEQ ID NO:8。在其他实施方案中，抗CD3εscFv片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和VL分别包含氨基酸序列SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14。在特定的实施方案中，经修饰的J链包含有包含SEQ ID NO:12的氨基酸20至420、SEQ ID NO:15的氨基酸20至412或SEQ ID NO:16的氨基酸23至415的氨基酸序列。

在某些其他实施方案中，免疫效应细胞是NK细胞，并且scFv片段可以与CD16或CD56特异性结合。

如本文所提供的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)的经修饰的J链可以被进一步修饰以包括附接到J链的另外的异源部分。示例性部分在例如美国专利号9,951,134和美国专利申请公开号US 2019-0185570和美国专利号10,618,978以及美国临时申请号62/887,458中有所描述，所述文献全部以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，如本文所提供的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123x抗CD3结合分子)的经修饰的J链还可包括与J链或其片段或变体融合或化学缀合的免疫刺激剂(“ISA”)。例如，ISA可包括细胞因子或其受体结合片段或变体。在特定的实施方案中，与J链缔合的ISA可以包括：(a)白介素-15(IL-15)蛋白或其受体结合片段或变体(“I”)；和(b)白介素-15受体-α(IL-15Rα)片段(“R”)，其能够与I缔合，包含sushi结构域或其变体；其中I和R中的至少一者或I和R两者与J链或其片段或变体缔合为融合蛋白，并且其中I和R可以缔合以用作ISA。在某些实施方案中，ISA可以通过肽接头与J链融合。

与抗CD123结合单元缔合的抗原结合结构域

除了两条重链之外，如本文所提供的抗CD123双特异性多聚体结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)的每个结合单元还可以包括两条轻链，其中每条轻链包括κ或λ轻链恒定区(例如，人κ或λ轻链恒定区)并至少包括与结合单元缔合的抗原结合结构域的轻链可变区(VL)部分。

在某些实施方案中，所提供的多聚体结合分子是多特异性的(例如双特异性、三特异性或四特异性)，其中与结合分子的重链恒定区缔合的两个或更多个结合结构域与不同的靶特异性结合。在某些实施方案中，多聚体结合分子的结合结构域全部与CD123特异性结合。在某些实施方案中，多聚体结合分子的结合结构域是相同的。在此类情况下，例如，如果具有不同特异性的结合结构域是如本文别处所述的经修饰的J链的一部分，则多聚体结合分子仍可以是双特异性的。在某些实施方案中，结合结构域是抗体衍生的抗原结合结构域，例如，与重链恒定区缔合的scFv或与重链恒定区缔合的抗体结合结构域的VH亚基。

此外，如本文所提供的抗CD123双特异性多聚体结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)可包括至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或十个特异性结合CD123的与结合单元缔合的抗原结合结构域。在某些实施方案中，至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或全部十个与结合单元缔合的抗原结合结构域与相同的CD123表位结合。在某些实施方案中，至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或全部十个与结合单元缔合的抗原结合结构域是相同的。在某些实施方案中，与结合单元缔合的抗原结合结构域全部是相同的。

在某些实施方案中，所提供的结合分子的至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或十个与结合单元缔合的抗原结合结构域包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和VL包括六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包括：包括VH和VL氨基酸序列的抗体的CDR氨基酸序列，所述VH和VL氨基酸序列分别包含以下或包含在以下中：SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:54和SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59、SEQID NO:60和SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70和SEQ IDNO:71、SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76和SEQID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93、SEQ IDNO:94和SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99、SEQID NO:100和SEQ ID NO:101或SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:103；或包括VH和VL氨基酸序列的抗体的CDR，所述VH和VL氨基酸序列分别包含以下或包含在以下中，CDR中的一个或多个中的一个或两个氨基酸取代除外：SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37和SEQ IDNO:38、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46和SEQID NO:47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63、SEQ IDNO:64和SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69、SEQID NO:70和SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ IDNO:81、SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQID NO:87、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111和SEQID NO:112、SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:116或SEQ IDNO:117和SEQ ID NO:118。在一些实施方案中，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包括有包括VH和VL氨基酸序列的抗体的CDR氨基酸序列，所述VH和VL氨基酸序列分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113和SEQ IDNO:114或SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:112。在一些实施方案中，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包括有包括VH和VL氨基酸序列的抗体的CDR氨基酸序列，所述VH和VL氨基酸序列分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代(诸如0个氨基酸取代)的SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:114。

在某些实施方案中，所提供的结合分子的至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或十个与结合单元缔合的抗原结合结构域包括抗体VH和VL，其中VH和VL包括与分别包含以下或包含在以下中的成熟VH和VL氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ IDNO:45、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:68和SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73、SEQID NO:74和SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84和SEQ IDNO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90和SEQID NO:91、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:101、SEQ IDNO:102和SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:118。

在某些实施方案中，所提供的结合分子的至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或十个与结合单元缔合的抗原结合结构域包括抗体VH和VL，其中VH和VL包括与分别包含SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113和SEQ IDNO:114或SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:112的成熟VH和VL氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，所提供的结合分子的至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或十个与结合单元缔合的抗原结合结构域包括抗体VH和VL，其中VH和VL包括与分别包含SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:114的成熟VH和VL氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同(诸如100％相同)的氨基酸序列。

在某些实施方案中，所提供的结合分子的至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或十个与结合单元缔合的抗原结合结构域包括抗体VH和VL，其中VH和VL分别包括氨基酸序列SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33。在某些实施方案中，所提供的结合分子是IgM抗体并且每个结合单元包括两条IgM重链和两条κ轻链，重链包括SEQID NO:35的氨基酸20至592，轻链包括SEQ ID NO:36的氨基酸21至240。

在某些实施方案中，所提供的结合分子的至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或十个与结合单元缔合的抗原结合结构域包括抗体VH和VL，其中VH和VL分别包括氨基酸序列SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38。在某些实施方案中，所提供的结合分子是IgM抗体并且每个结合单元包括两条IgM重链和两条κ轻链，重链包括SEQID NO:40的氨基酸20至589，轻链包括SEQ ID NO:41的氨基酸21至234。

多核苷酸、载体和宿主细胞

本公开还提供一种多核苷酸(例如，分离的、重组的和/或非自然存在的多核苷酸)，其包括编码如本文所提供的抗CD123多聚体双特异性结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)的多肽亚基的核酸序列。“多肽亚基”意指结合分子、结合单元、IgM抗体、IgM样抗体、IgA抗体或IgA样抗体、J链、经修饰的J链或抗原结合结构域中可以被独立翻译的一部分。实例包括但不限于：抗体可变结构域，例如，VH或VL；J链，包括如本文所提供的经修饰的J链；分泌组分；单链Fv；抗体重链；抗体轻链；抗体重链恒定区；抗体轻链恒定区；和/或它们的任何片段、变体或衍生物。

在某些实施方案中，多肽亚基可包括IgM重链恒定区或IgM样重链恒定区或其多聚片段、或IgA重链恒定区或IgA样重链恒定区或其多聚片段，它们可以与抗原结合结构域或其亚基融合，例如与抗原结合结构域的VH部分或抗原结合结构域的VL部分融合，所述各物都如本文所提供。在某些实施方案中，多核苷酸可编码包括以下的多肽亚基：人IgM重链恒定区、人IgM样重链恒定区、人IgA重链恒定区、人IgA样重链恒定区或它们的多聚片段(例如，SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25)，这些中的任一者都可以与抗原结合结构域或其亚基(例如，VH的C末端)融合。

在某些实施方案中，VH可包括HCDR1、HCDR2和HCDR3区，HCDR1、HCDR2和HCDR3区包括：包含在VH氨基酸序列中的CDR氨基酸序列，所述VH氨基酸序列包含以下或包含在以下中：SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:58、SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:70、SEQ IDNO:72、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82、SEQ IDNO:84、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:94、SEQ IDNO:96、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:102；SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:115或SEQ ID NO:117；或包含在VH氨基酸序列中的CDR氨基酸序列，所述VH氨基酸序列包含以下或包含在以下中，HCDR中的一个或多个中的一个或两个单一氨基酸取代除外：SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ IDNO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:54、SEQ IDNO:56、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:78、SEQ IDNO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:90、SEQ IDNO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:102、SEQID NO:107、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:115或SEQ ID NO:117。在某些实施方案中，VH可包括与包含以下或包含在以下中的成熟VH氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:32、SEQ IDNO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ IDNO:52、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74、SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86、SEQ IDNO:88、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:98、SEQ IDNO:100、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:115或SEQ ID NO:117。

在某些实施方案中，多肽亚基可以包括如本文别处所述的抗原结合结构域的抗体VL部分。在某些实施方案中，多肽亚基可以包括抗体轻链恒定区(例如，人抗体轻链恒定区)或其片段，抗体轻链恒定区或其片段可以与VL的C末端融合。

在某些实施方案中，VL可包括LCDR1、LCDR2和LCDR3区，LCDR1、LCDR2和LCDR3区包括：包含在VL氨基酸序列中的CDR氨基酸序列，所述VL氨基酸序列包含以下或包含在以下中：SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ IDNO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:59、SEQ IDNO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:71、SEQ IDNO:73、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ IDNO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:95、SEQ IDNO:97、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:118；或包含在VL氨基酸序列中的CDR氨基酸序列，所述VL氨基酸序列包含以下或包含在以下中，LCDR中的一个或多个中的一个或两个单一氨基酸取代除外：SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:43、SEQ IDNO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ IDNO:57、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:69、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:79、SEQ IDNO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ IDNO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQID NO:108、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:118。在某些实施方案中，VH可包括与包含以下或包含在以下中的成熟VL氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:38、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ IDNO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ IDNO:65、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:75、SEQ IDNO:77、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ IDNO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:99、SEQ IDNO:101、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:118。

在某些实施方案中，多肽亚基可以是如本文别处所述的经修饰的J链。例如，多肽亚基可以包括与SEQ ID NO:12的氨基酸20至420、SEQ ID NO:15的氨基酸20至412或SEQ IDNO:16的氨基酸23至415至少80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。

在某些实施方案中，本公开提供一种组合物，其包含两个、三个或更多个如本文所提供的多核苷酸，其中多核苷酸可以一起编码如本文所提供的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)。在某些实施方案中，多核苷酸可以位于单独的载体上。在某些实施方案中，多核苷酸中的两个或更多个可以位于同一载体上。此类载体同样由本公开提供。

在某些实施方案中，如本文所提供的多核苷酸位于诸如质粒的表达载体上，并且可包括编码一个多肽亚基(例如，IgM重链或IgM样重链、IgA重链或IgA样重链、轻链或J链(例如，经修饰的J链))的一个核酸序列，或可包括编码如本文所提供的结合分子的两个或更多个或全部三个多肽亚基的两个或更多个核酸序列。或者，编码三个多肽亚基的核酸序列可以处在单独的多核苷酸(例如，单独的表达载体)上。本公开提供了这样的单个或多个表达载体。本公开还提供一种或多种宿主细胞，其编码所提供的多核苷酸或表达载体。

本公开还提供一种宿主细胞(例如，原核或真核宿主细胞)，其包括：编码如本文所提供的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)或其任何亚基的一个多核苷酸、或两个或更多个多核苷酸；如本文所提供的多核苷酸组合物；或共同编码如本文所提供的结合分子或其任何亚基的一个载体、或两个、三个或更多个载体。

在相关实施方案中，本公开提供一种产生如本公开所提供的多聚体结合分子的方法，其中方法包括培养如本文所提供的宿主细胞和回收多聚体结合分子。

使用方法

本公开还提供一种治疗需要治疗的受试者的疾病或病症(例如，癌症或其他恶性肿瘤，例如，血液学癌症或恶性肿瘤)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的如本文所提供的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)。“治疗有效剂量或量”或“有效量”意指结合分子在施用时于受试者中产生积极反应(例如，肿瘤细胞杀伤)的量。

在某些实施方案中，待治疗的癌症可以是其中恶性细胞表达或过表达CD123的任何癌症。例如，癌症可以是急性髓系白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、慢性髓系白血病(CML)、B细胞急性淋巴细胞白血病(B细胞ALL)、经典型霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、系统性肥大细胞增多症或浆细胞样树突状细胞白血病。

用于治疗癌症的组合物的有效剂量根据许多不同因素而变化，包括施用方式、靶位点、受试者的生理状态、受试者是人类还是动物、所施用的其他药物以及治疗是预防性还是治疗性。通常，受试者是人类，但是也可治疗非人类哺乳动物，包括转基因哺乳动物。可使用本领域的技术人员已知的常规方法来滴定治疗剂量，以优化安全性和功效。

待治疗的受试者可以是任何需要治疗的动物(例如，哺乳动物)，在某些实施方案中，受试者是人受试者。

以其最简单的形式，待向受试者施用的制剂是以常规剂型施用的如本文所提供的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)或其多聚体抗原结合片段，其可以与本文别处所述的药物赋形剂、载剂或稀释剂组合。

可以通过任何合适的方法来施用本公开的组合物，例如，胃肠外、心室内、口服、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或通过植入式贮存器施用。如本文中所用的术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内及颅内注射或输注技术。

药物组合物和施用方法

根据本公开，本领域的技术人员熟知或容易地确定制备如本文所提供的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)和将其施用于对其有需要的受试者的方法。施用途径可以是例如肿瘤内、口服、胃肠外、通过吸入或局部。如本文所用的术语“胃肠外”包括例如静脉内、动脉内、腹腔内、肌肉内、皮下、直肠或阴道施用。虽然这些施用形式被设想为合适的形式，但是施用形式的另一个实例将是用于注射的溶液，尤其是用于肿瘤内、静脉内或动脉内注射或滴注的溶液。合适的药物组合物可以包含缓冲剂(例如，乙酸盐、磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂)、表面活性剂(例如，聚山梨醇酯)、任选地稳定剂(例如，人白蛋白)等。

如本文所讨论的，可以以药学有效量施用如本文所提供的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)，以用于治疗对其有需要的受试者。在这方面，应当理解，可配制所公开的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)，以便有助于施用和促进活性剂的稳定性。因此，药物组合物可包含药学上可接受的无毒无菌载剂(诸如生理盐水)、无毒缓冲剂、防腐剂等。如本文所提供的包含ISA的多聚体结合分子的药学有效量意指足够实现与靶的有效结合并实现治疗益处的量。合适的制剂在Remington's Pharmaceutical Sciences,例如,第21版(Lippincott Williams &Wilkins)(2005)中有所描述。

本文提供的某些药物组合物可以可接受的剂型口服施用，所述剂型包括例如，胶囊、片剂、水性混悬液或溶液。某些药物组合物还可通过鼻气雾剂或吸入来施用。采用苄醇或其他合适的防腐剂、增强生物利用率的吸附促进剂、和/或其他常规稳定剂或分散剂，可将此类组合物制备成盐水中的溶液。

可以与载剂材料组合以产生单一剂型的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)的量将根据例如所治疗的受试者和特定施用模式而变化。组合物可作为单剂量、多剂量或以输注的形式在确立的时间段内施用。还可调整剂量方案以提供最佳的期望反应(例如，治疗反应或预防反应)。

与本公开的范围一致，可以以足够产生治疗效果的量向需要治疗的受试者施用如本文所提供的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)。可以以常规剂型向受试者施用如本文所提供的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123x抗CD3结合分子)，所述常规剂型通过根据已知技术将本公开的抗体或其多聚体抗原结合片段、变体或衍生物与常规的药学上可接受的载剂或稀释剂组合来制备。药学上可接受的载剂或稀释剂的形式和特性可由与其组合的活性成分的量、施用途径和其他熟知的变量决定。

本公开还提供如本文所提供的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123x抗CD3结合分子)在制造用于治疗、预防或控制癌症或其他恶性肿瘤的药物中的用途。本公开还提供在治疗、预防或控制癌症中使用的如本文所提供的多聚体双特异性抗CD123结合分子(例如，抗CD123 x抗CD3结合分子)。

除非另外指明，否则本公开采用本领域的技术范围内的细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术。此类技术在文献中得到了充分的解释。参见，例如，Green和Sambrook编(2012)Molecular Cloning A LaboratoryManual(第4版；Cold Spring Harbor Laboratory Press)；Sambrook等人编(1992)Molecular Cloning:A Laboratory Manual,(Cold Springs Harbor Laboratory,NY)；D.N.Glover和B.D.Hames编,(1995)DNA Cloning第2版(IRL Press),第1-4卷；Gait编(1990)Oligonucleotide Synthesis(IRL Press)；Mullis等人美国专利号4,683,195；Hames和Higgins编.(1985)Nucleic Acid Hybridization(IRL Press)；Hames和Higgins编(1984)Transcription And Translation(IRL Press)；Freshney(2016)Culture OfAnimal Cells,第7版(Wiley-Blackwell)；Woodward,J.,Immobilized Cells And Enzymes(IRL Press)(1985)；Perbal(1988)A Practical Guide To Molecular Cloning；第2版(Wiley-Interscience)；Miller和Calos编(1987)Gene Transfer Vectors For MammalianCells,(Cold Spring Harbor Laboratory)；S.C.Makrides(2003)Gene Transfer andExpression in Mammalian Cells(Elsevier Science)；Methods in Enzymology,第151-155卷(Academic Press,Inc.,N.Y.)；Mayer和Walker编(1987)Immunochemical Methodsin Cell and Molecular Biology(Academic Press,London)；Weir和Blackwell编；以及Ausubel等人(1995)Current Protocols in Molecular Biology(John Wiley and Sons)。

抗体工程的一般原理提出于例如，Strohl,W.R.和L.M.Strohl(2012),Therapeutic Antibody Engineering(Woodhead Publishing)中。蛋白质工程的一般原理提出于例如，Park和Cochran编(2009),Protein Engineering and Design(CDC Press)中。免疫学的一般原理提出于例如Abbas和Lichtman(2017)Cellular and MolecularImmunology第9版(Elsevier)中。此外，可遵循本领域中已知的免疫学标准方法，例如Current Protocols in Immunology(Wiley Online Library)；Wild,D.(2013),TheImmunoassay Handbook 4th Edition(Elsevier Science)；Greenfield编(2013),Antibodies,a Laboratory Manual,2d Edition(Cold Spring Harbor Press)；以及Ossipow和Fischer编,(2014),Monoclonal Antibodies:Methods and Protocols(HumanaPress)中的方法。

上文引用的所有参考文献以及本文引用的所有参考文献均以引用的方式整体并入本文。

以说明而非限制的方式提供以下实施例。

实施例

实施例1：抗体生成和纯化

抗CD123 X CD3 IgM #1和#2以及抗CD123 IgG #1和#2

作为示例性构建体，根据标准克隆规程将四种抗CD123抗体的VH和VL区掺入IgM(与SJ*链，SEQ ID NO:12的氨基酸20至420，形成双特异性IgM抗体)和IgG形式中。抗CD123#1构建体分别包括VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33，抗CD123 #2构建体分别包括VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39，抗CD123 #3构建体分别包括VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:103，并且抗CD123 #4构建体分别包括VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108。如下所述表达并纯化这些抗体构建体。如下在还原和非还原凝胶上分辨IgM双特异性抗体(加上经修饰的J链-SJ*)。图1A示出了分辨高分子量IgM的示例性非还原凝胶，并且图1B示出了显示IgM重链和轻链的示例性还原凝胶。对于非还原凝胶，将样品与NuPage LDS样品缓冲液(Life Technologies #NP0007)混合，并装载到NativePage Novex 3至12％Bis-Tris凝胶上(Life Technologies #BN1003)。使用Novex Tris-Acetate SDS电泳缓冲液(Life Technologies #LA0041)进行凝胶电泳，并且凝胶用胶体蓝染色剂(Colloidal Blue Stain)(Life Technologies #LC6025)染色。对于还原凝胶，将样品与样品缓冲液和NuPage还原剂(Life Technologies #NP0004)混合并加热至80℃保持10分钟，并装载到NuPage Novex 4至12％Bis-Tris凝胶(Life Technologies#NP0322)上。使用NuPage MES SDS电泳缓冲液(Life Technologies #NP0002)进行凝胶电泳，并且凝胶用胶体蓝染色。

另外的抗CD123 X CD3和抗CD123 IgG构建体

抗CD123 x抗CD3 BiTE构建体在PCT申请公开号WO 2017/210443 Al中有所描述。构建体包括：第一重链，其包含抗CD123 VH序列(VH＝SEQ ID NO:32；重链＝SEQ ID NO:104)；轻链，其包含抗CD123VL序列(VL＝SEQ ID NO:32，轻链＝SEQ ID NO:105)；和第二重链，其包含与IgG重链恒定区融合的抗CD3 scFv(重链＝SEQ ID NO:106)。此构建体通过商业供应商(Creative Biolabs和ATUM)合成、表达和纯化，并且在本文中命名为抗CD123xCD3IgG #1。通过对纯化的蛋白质的还原和非还原凝胶(图2A)分辨，通过图2B中所示的尺寸排阻色谱法，来分辨蛋白质。

蛋白质表达和纯化

转染。将重链、轻链和经修饰的J链(SJ*)的DNA(对于IgM五聚体构建体)转染到例如CHO细胞或Expi 293细胞中。将用于表达载体的DNA与聚乙胺(PEI)试剂(ExpiFectamine

293转染试剂盒)混合，然后添加到细胞中。根据确立的技术(参见“Biotechnology andBioengineering,第87卷,553-545”)来执行使用CHO-S或293expi细胞的PEI转染。

IgG表达产物由商业供应商表达和纯化。

根据制造商的建议，使用例如Capto Core 400(GE life science)和POROS

50HQ强阴离子交换树脂(Thermo Fisher)来纯化IgM表达产物。对于IgM表达产物，通过尺寸排阻色谱法分辨蛋白质峰，如图1C和图1D所示。

实施例2：由ELISA测量的抗体特异性

在ELISA测定中如下测量抗CD123xCD3 IgM #1和抗CD123xCD3 IgM #2对人CD123和CD3ε的特异性，以及对照抗CD123 IgG #1和抗CD123 IgG #2对CD123的特异性和双特异性抗CD123 x CD3 IgG #1对CD3ε的特异性。在4℃下，96孔白色聚苯乙烯ELISA板(Pierce15042)用每孔100μL 0.5μg/mL的重组人CD123蛋白(Sino Biological 10518-H08H-50)或重组人CD3ε蛋白(Acro Biosystems,CDE-H5256-100)涂覆过夜。然后，将板用0.05％PBS-Tween洗涤5次，并用2％BSA-PBS封闭。在封闭后，将100μL的CD123 IgM或IgG的连续稀释液、标准物和对照添加到孔中，并且在室温下孵育2小时。然后，洗涤板10次并且将板与HRP缀合的小鼠抗人κ(Southern Biotech，9230-05，1:6000稀释于2％BSA-PBS中)孵育30分钟。在使用0.05％PBS-Tween进行10次最终洗涤后，使用SuperSignal化学发光底物(ThermoFisher，37070)来读取板。在EnVision读板仪(Perkin-Elmer)上收集发光数据，并使用GraphPadPrism用4参数逻辑模型进行分析。图3中示出了IgM双特异性抗体与CD123的结合，并且图4A-4B中示出了IgM和IgG双特异性抗体与CD3ε的结合。

为了比较不同蛋白质浓度下IgM和IgG双特异性抗体与CD123的结合，将384孔白色板在37℃下用25μl的不同CD123蛋白浓度(3μg/ml、1μg/ml、0.33μg/ml和0.11μg/ml)涂覆一小时。洗涤板并使用封闭缓冲液Starting Block T20(Thermo,37539)封闭15分钟。向板添加25μl CD123 X CD3 IgM或IgG #1的连续稀释液并在37℃下孵育30分钟，洗涤10次，并且使用与HRP缀合的二抗抗人κEPR5367-8来检测结合的IgM或IgG(Abcam,ab202549)。结果在图5A-5D中示出。IgM抗体在所有浓度下都显示优异的结合。

实施例3：与AML细胞系的结合

AML细胞系-CD123表面量化

AML细胞系购自ATCC或DSMZ(MV4-11、THP-1、Namalwa、KG-1a、Molm-13、JM-1、REH、K562、HL-60和Oci-Ly9)根据卖家的建议，在合适的培养基中培养细胞。使用商业的、与PE缀合的抗CD123抗体(Biolegend,Clone 6H6,306006)和Quantum

R-PE MESF珠(BangsLaboratories,827)来量化CD123表面表达。结果在图6中示出。MV4-11、Molm-3、Thp-1、KG-1a和JM-1细胞表达可检测水平的CD123。

AML细胞系IgM和IgG结合测定

为了评估IgG和IgM抗体与表达CD123蛋白的AML细胞上的CD123结合的能力，通过以下方法进行结合测定。细胞用FACS染色缓冲液(BD Pharmigen目录号554656)洗涤，并在室温下与Fc Block(BD,564220)预孵育10分钟。在4℃下，1x10⁵个细胞用1μg抗CD123抗体、1μg/mL IgG同种型对照(Jackson ImmunoResearch #009-000-003)或1μg/mL IgM同种型对照(Jackson ImmunoResearch #009-000-012)染色30分钟。将细胞洗涤两次，然后在4℃下用5μg/mL抗人κ-AF488二抗(Biolegend #316512)染色30分钟。将细胞洗涤两次，重悬于FACS染色缓冲液中，并通过流式细胞术获得细胞。结果在图7中示出。

实施例4：T细胞引导的AML细胞杀伤

为了证明双特异性CD123 x CD3 IgM结合分子可以在人T细胞存在的情况下杀伤靶细胞，进行了共培养实验。在96孔圆底组织培养板上、每孔总体积100μL补充有3％热灭活胎牛血清(FBS)的AIM-V培养基中，在抗CD123xCD3 IgM #1的连续稀释液存在的情况下，将5x10³个肿瘤细胞MV4-11、THP-1和Namalwa(都表达萤火虫荧光素酶)与T细胞以不同的效靶比(E:T)共培养。在37℃下在5％CO₂培养箱中孵育72或96小时后，去除50μl上清液并在-80℃下冷冻，以用于以后的细胞因子释放分析。向孔中添加50μl荧光素酶底物(例如，ONE-GloEX荧光素酶测定系统,Promega)。将板短暂摇动以混合试剂，并在EnVision读板仪(Perkin-Elmer)上测量荧光素酶发光信号。然后用GraphPad Prism分析数据以确定EC₅₀。图8A-8C中示出了代表性的剂量反应曲线。表达可检测水平的CD123的THV-1细胞(EC50：11.12pM)和MV4-11细胞(EC50：13.63pM)被有效杀伤，其中不表达CD123的Namalwa细胞未被杀伤。

实施例5：抗CD123xCD3 IgM #1活化CD8+T细胞但不活化CD4+T细胞

抗CD123 XCD3 IgM #1的增强T细胞活化的能力如下评估。根据制造商的说明，使用MACS pan T细胞分离试剂盒将人pan T细胞从PBMC中分离。然后用细胞示踪紫色染料(Thermo,C34557)标记T细胞。在2.5μg/ml抗CD123 X CD3 IgM #1或1μg/ml抗CD3单抗(SP34ebioscience,Thermo 16-0037-85)存在的情况下，将每孔10x10³个MV4-11细胞与40x10³个人Pan T细胞共培养72小时。使用以下染色套组对细胞进行染色以用于FACS分析：来自Biolegend的抗CD8BV510、抗CD25 APC和抗CD4 BV785，以及死活细胞鉴定染料(Fixableviability dye)LIVE-OR-DYE 750/788(Biotium,32008)。结果在图9中示出。抗CD123xCD3IgM #1增强CD8+T细胞上的CD25活化标记，但不增强CD4+T细胞上的活化标记。

实施例6：细胞因子释放

在0％、20％、50％和95％的细胞被杀伤的时间点收集来自实施例4中进行的T细胞引导的细胞毒性测定的上清液。图10A和10B比较了在曲线上指明的点处，MV4-11细胞(分图A)和THP-1细胞(分图B)的pan-TDCC测定中的抗CD123xCD3 IgM #1(三角形)和抗CD123xCD3IgG #1(空心圆)。空心圆：抗CD123xCD3 IgG #1，实心三角形：抗CD123xCD3 IgM#1。在指明的杀伤水平下收集样品。

如所指明的那样收集来自实施例4中进行的T细胞引导的细胞毒性测定的上清液，并根据制造商规程，使用V-PLEX Proinflammatory Panel(人)(MSD,K15049D-2)来测定上清液中包括IFNγ、IL-4、TNF、IL-10和IL-6的细胞因子套组。然后用GraphPad Prism分析结果。图11A-11D示出了MV4-11细胞第4天的结果，并且图12A-12D示出了THP细胞第4天的结果。即使在95％的细胞被杀伤的情况下，IgM构建体也导致最少的细胞因子释放，而IgG构建体导致高水平的细胞因子释放。

实施例7：另外的抗体生成和纯化

如实施例1中所述生成并纯化如表2中所指明的另外的示例性抗体。抗体与J链组装成五聚体(数据未示出)。

表2：生成的抗体

实施例8：由ELISA测量的抗体特异性

在如实施例2中所述的ELISA测定中测量另外的抗CD123xCD3 IgM抗体的子集与CD123在不同蛋白质浓度下的结合。结果在图13中示出。然后用GraphPad Prism分析数据以确定EC₅₀，并且结果在表3中示出。

表3：抗体结合IC₅₀

抗体	EC<sub>50</sub>(pM)
		IGM #F-b-J*-H1	529.7
IGM #B-b-J*-H1	298.0
		IGM #C-b-J*-H1	354.4
IGM #A-b-J*-H1	198.0

实施例9：MV4-11-IgM和IgG结合测定

为了评估另外的抗CD123xCD3 IgM抗体的子集与表达CD123蛋白的MV4-11细胞上的CD123结合的能力，通过实施例3中在标题“AML细胞系IgM和IgG结合测定”下描述的方法对各种浓度的抗体进行结合测定。结果在图14中示出。

实施例10：T细胞引导的AML细胞杀伤-不同的CD123结合结构域

为了证明包含不同CD123结合结构域的双特异性CD123 x CD3 IgM结合分子可以在人T细胞存在的情况下杀伤靶细胞，使用各自包含不同CD123结合结构域的4种示例性抗CD123 x CD3 IgM结合分子(IGM #F-b-J*-H1、IGM #B-b-J*-H1、IGM #C-b-J*-H1和IGM #A-b-J*-H1)进行共培养实验。在96孔圆底组织培养板上、每孔总体积100μL补充有3％热灭活胎牛血清(FBS)的AIM-V培养基中，在抗体的连续稀释液存在的情况下，将5x10³个肿瘤细胞MV4-11、THP-1和PL-21(都表达萤火虫荧光素酶)与T细胞(强供体或弱供体T细胞)以7:1的效靶比(E:T)共培养。在37℃下在5％CO₂培养箱中孵育72或96小时后，向孔中添加50μl荧光素酶底物(例如，ONE-Glo EX荧光素酶测定系统,Promega)。将板短暂摇动以混合试剂，并在EnVision读板仪(Perkin-Elmer)上测量荧光素酶发光信号。然后用GraphPad Prism分析数据以确定EC₅₀。图15A和15B中分别示出了强供体T细胞和THP1或PL21的共培养物的结果，并且表4中示出了所有共培养物的EC₅₀值。

表4：T细胞引导的杀伤EC₅₀(pM)

实施例11：T细胞引导的AML细胞杀伤-不同的经修饰的J链

为了证明包含不同CD3结合结构域的双特异性CD123 x CD3 IgM结合分子可以在人T细胞存在的情况下杀伤靶细胞，使用各自包含不同CD123结合结构域的4种示例性抗CD123 x CD3 IgM结合分子(IGM #A-c-J*-H1、IGM #A-d-J*-H1、IGM #A-e-J*-H1和IGM #A-b-J*-H1)进行共培养实验。在96孔圆底组织培养板上、每孔总体积100μL补充有3％热灭活胎牛血清(FBS)的AIM-V培养基中，在抗体的连续稀释液存在的情况下，将5x10³个肿瘤细胞MV4-11、THP-1和PL-21(都表达萤火虫荧光素酶)与T细胞(强供体或弱供体T细胞)以7:1的效靶比(E:T)共培养。在37℃下在5％CO₂培养箱中孵育72或96小时后，向孔中添加50μl荧光素酶底物(例如，ONE-Glo EX荧光素酶测定系统,Promega)。将板短暂摇动以混合试剂，并在EnVision读板仪(Perkin-Elmer)上测量荧光素酶发光信号。然后用GraphPad Prism分析数据以确定EC₅₀。图16A和16B中分别示出了强供体T细胞和THP1或PL21的共培养物的结果，并且表5中示出了所有共培养物的EC₅₀值。

表5：T细胞引导的杀伤EC₅₀(pM)

为了比较与J-HSA相比的其他CD3结合结构域和J*，大体如上所述重复该测定。在IGM #A-b-J*-H1、IGM #A-f-JH-H1、IGM #A-f-J*-H1或IGM #A-a-J*-H1存在的情况下，将MV4-11细胞与强供体细胞以3:1的E:T比率共培养。结果在图17中示出。

实施例12：CD4+与CD8+T细胞引导的AML细胞杀伤

如实施例5中所述评估另外的抗CD123 X CD3 IgM抗体的子集增强T细胞活化的能力。结果在图18A-18F中示出。抗CD123 x CD3 IgM强效肿瘤(potent tumor)介导CD8+T细胞的细胞毒性和T细胞增殖，而不介导CD4+T细胞的细胞毒性和T细胞增殖。

实施例13：细胞因子释放

为了确定暴露于双特异性CD123 x CD3 IgM结合分子时释放的各种细胞因子的量，使用3种示例性抗CD123 x CD3 IgM结合分子(IGM #B-b-J*-H1、IGM #A-c-J*-H1或IGM#A-b-J*-H1)或抗CD123xCD3 IgG #1进行共培养实验。在96孔圆底组织培养板上、每孔总体积100μL补充有3％热灭活胎牛血清(FBS)的AIM-V培养基中，在50pM或1nM抗体存在的情况下，将5x10³个表达萤火虫荧光素酶的MV4-11肿瘤细胞与T细胞以7:1的效靶比(E:T)共培养。在37℃下在5％CO₂培养箱中孵育72或96小时后，在100％的肿瘤细胞已被杀伤时将50μl上清液从共培养物中去除，并在-80℃下冷冻，直到用于分析。

根据制造商规程，使用V-PLEX Proinflammatory Panel(人)(MSD,K15049D-2)来测定上清液中包括IFNγ、TNFα、IL-6、IL-10和IL-2的细胞因子套组。然后用GraphPadPrism分析结果。结果在图19A-19E和表6中示出。对于所测定的所有细胞因子，IgM抗体在两种抗体浓度下都导致较少的细胞因子释放。

表6：释放的细胞因子浓度(pg/mL)

表7：本公开中呈现的序列

序列表

<110> IGM生物科学股份有限公司(IGM BIOSCIENCES, INC.)

<120> 多聚体双特异性抗CD123结合分子及其用途

<130> 001-027WO1

<140>

<141>

<150> 62/888,702

<151> 2019-08-19

<150> 62/888,475

<151> 2019-08-17

<160> 146

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 159

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 1

Met Lys Asn His Leu Leu Phe Trp Gly Val Leu Ala Val Phe Ile Lys

1 5 10 15

Ala Val His Val Lys Ala Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp

20 25 30

Asn Lys Cys Lys Cys Ala Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser

35 40 45

Glu Asp Pro Asn Glu Asp Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val

50 55 60

Pro Leu Asn Asn Arg Glu Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg

65 70 75 80

Thr Arg Phe Val Tyr His Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro

85 90 95

Thr Glu Val Glu Leu Asp Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn

100 105 110

Ile Cys Asp Glu Asp Ser Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg

115 120 125

Asn Lys Cys Tyr Thr Ala Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr

130 135 140

Lys Met Val Glu Thr Ala Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp

145 150 155

<210> 2

<211> 137

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 2

Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala

1 5 10 15

Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp

20 25 30

Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu

35 40 45

Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His

50 55 60

Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp

65 70 75 80

Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser

85 90 95

Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala

100 105 110

Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala

115 120 125

Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp

130 135

<210> 3

<211> 137

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 人工序列的描述：合成多肽

<400> 3

Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala

1 5 10 15

Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp

20 25 30

Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu

35 40 45

Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His

50 55 60

Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp

65 70 75 80

Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser

85 90 95

Ala Thr Glu Thr Cys Ala Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala

100 105 110

Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala

115 120 125

Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp

130 135

<210> 4

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 4

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 5

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 5

Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 6

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 6

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 7

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 7

His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 8

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 8

Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 9

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 9

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 10

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 10

Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 11

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 12

<211> 420

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 12

Met Gly Trp Ser Tyr Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Lys Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser

85 90 95

Gln Ser Ile Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Met Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val

115 120 125

Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln

145 150 155 160

Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu Thr

165 170 175

Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn

180 185 190

Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly Leu

195 200 205

Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser

210 215 220

Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln

225 230 235 240

Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu

245 250 255

Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly

260 265 270

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Glu Asp Glu Arg

275 280 285

Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala Arg Ile Thr Ser Arg

290 295 300

Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp Ile Val Glu Arg Asn

305 310 315 320

Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu Asn Ile Ser Asp Pro

325 330 335

Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His Leu Ser Asp Leu Cys

340 345 350

Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp Asn Gln Ile Val Thr

355 360 365

Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser Ala Thr Glu Thr Cys

370 375 380

Ala Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala Val Val Pro Leu Val

385 390 395 400

Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala Leu Thr Pro Asp Ala

405 410 415

Cys Tyr Pro Asp

420

<210> 13

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 13

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gln Lys Leu

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Ala Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 14

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 14

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 15

<211> 412

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 15

Met Gly Trp Ser Tyr Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Ile Ser Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr His Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Leu Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ala Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln

145 150 155 160

Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr

165 170 175

Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys

180 185 190

Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala

195 200 205

Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

210 215 220

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr

225 230 235 240

Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

245 250 255

Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

260 265 270

Gly Gly Ser Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys

275 280 285

Lys Cys Ala Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro

290 295 300

Asn Glu Asp Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn

305 310 315 320

Asn Arg Glu Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe

325 330 335

Val Tyr His Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val

340 345 350

Glu Leu Asp Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp

355 360 365

Glu Asp Ser Ala Thr Glu Thr Cys Ala Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys

370 375 380

Tyr Thr Ala Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val

385 390 395 400

Glu Thr Ala Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp

405 410

<210> 16

<211> 415

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 16

Met Lys Asn His Leu Leu Phe Trp Gly Val Leu Ala Val Phe Ile Lys

1 5 10 15

Ala Val His Val Lys Ala Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp

20 25 30

Asn Lys Cys Lys Cys Ala Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser

35 40 45

Glu Asp Pro Asn Glu Asp Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val

50 55 60

Pro Leu Asn Asn Arg Glu Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg

65 70 75 80

Thr Arg Phe Val Tyr His Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro

85 90 95

Thr Glu Val Glu Leu Asp Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn

100 105 110

Ile Cys Asp Glu Asp Ser Ala Thr Glu Thr Cys Ala Thr Tyr Asp Arg

115 120 125

Asn Lys Cys Tyr Thr Ala Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr

130 135 140

Lys Met Val Glu Thr Ala Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp Gly

145 150 155 160

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val

165 170 175

Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val

180 185 190

Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr Thr Met

195 200 205

His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Tyr

210 215 220

Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gln Lys Leu Lys Asp

225 230 235 240

Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu

245 250 255

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

260 265 270

Ser Ala Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

275 280 285

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

290 295 300

Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu

305 310 315 320

Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser

325 330 335

Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

340 345 350

Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser

355 360 365

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

370 375 380

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser

385 390 395 400

Ser Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

405 410 415

<210> 17

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 17

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 18

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 18

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 19

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 19

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 20

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 20

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 21

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 21

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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

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<210> 23

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<212> PRT

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<400> 23

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 24

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Tyr

<210> 25

<211> 340

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 25

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 26

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 27

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<210> 28

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 28

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<210> 29

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 29

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Leu Gln Thr Lys Glu Gly Gly Lys Pro Trp Ala Gly Ala Glu Asn Leu

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195 200 205

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Asn Asp Lys Leu Val Val Trp Glu Ala Gly Lys Ala Gly Leu Glu Glu

275 280 285

Cys Leu Val Thr Glu Val Gln Val Val Gln Lys Thr

290 295 300

<210> 30

<211> 378

<212> PRT

<213> 食蟹猕猴(Macaca fascicularis)

<400> 30

Met Thr Leu Leu Trp Leu Thr Leu Leu Leu Val Ala Thr Pro Cys Leu

1 5 10 15

Leu Arg Thr Lys Glu Asp Pro Asn Ala Pro Ile Arg Asn Leu Arg Met

20 25 30

Lys Glu Lys Ala Gln Gln Leu Met Trp Asp Leu Asn Arg Asn Val Thr

35 40 45

Asp Val Glu Cys Ile Lys Gly Thr Asp Tyr Ser Met Pro Ala Met Asn

50 55 60

Asn Ser Tyr Cys Gln Phe Gly Ala Ile Ser Leu Cys Glu Val Thr Asn

65 70 75 80

Tyr Thr Val Arg Val Ala Ser Pro Pro Phe Ser Thr Trp Ile Leu Phe

85 90 95

Pro Glu Asn Ser Gly Thr Pro Arg Ala Gly Ala Glu Asn Leu Thr Cys

100 105 110

Trp Val His Asp Val Asp Phe Leu Ser Cys Ser Trp Val Val Gly Pro

115 120 125

Ala Ala Pro Ala Asp Val Gln Tyr Asp Leu Tyr Leu Asn Asn Pro Asn

130 135 140

Ser His Glu Gln Tyr Arg Cys Leu His Tyr Lys Thr Asp Ala Arg Gly

145 150 155 160

Thr Gln Ile Gly Cys Arg Phe Asp Asp Ile Ala Pro Leu Ser Arg Gly

165 170 175

Ser Gln Ser Ser His Ile Leu Val Arg Gly Arg Ser Ala Ala Val Ser

180 185 190

Ile Pro Cys Thr Asp Lys Phe Val Phe Phe Ser Gln Ile Glu Arg Leu

195 200 205

Thr Pro Pro Asn Met Thr Gly Glu Cys Asn Glu Thr His Ser Phe Met

210 215 220

His Trp Lys Met Lys Ser His Phe Asn Arg Lys Phe Arg Tyr Glu Leu

225 230 235 240

Arg Ile Gln Lys Arg Met Gln Pro Val Arg Thr Glu Gln Val Arg Asp

245 250 255

Thr Thr Ser Phe Gln Leu Pro Asn Pro Gly Thr Tyr Thr Val Gln Ile

260 265 270

Arg Ala Arg Glu Thr Val Tyr Glu Phe Leu Ser Ala Trp Ser Thr Pro

275 280 285

Gln Arg Phe Glu Cys Asp Gln Glu Glu Gly Ala Ser Ser Arg Ala Trp

290 295 300

Arg Thr Ser Leu Leu Ile Ala Leu Gly Thr Leu Leu Ala Leu Leu Cys

305 310 315 320

Val Phe Leu Ile Cys Arg Arg Tyr Leu Val Met Gln Arg Leu Phe Pro

325 330 335

Arg Ile Pro His Met Lys Asp Pro Ile Gly Asp Thr Phe Gln Gln Asp

340 345 350

Lys Leu Val Val Trp Glu Ala Gly Lys Ala Gly Leu Glu Glu Cys Leu

355 360 365

Val Ser Glu Val Gln Val Val Glu Lys Thr

370 375

<210> 31

<211> 396

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 31

Met Ala Ala Asn Leu Trp Leu Ile Leu Gly Leu Leu Ala Ser His Ser

1 5 10 15

Ser Asp Leu Ala Ala Val Arg Glu Ala Pro Pro Thr Ala Val Thr Thr

20 25 30

Pro Ile Gln Asn Leu His Ile Asp Pro Ala His Tyr Thr Leu Ser Trp

35 40 45

Asp Pro Ala Pro Gly Ala Asp Ile Thr Thr Gly Ala Phe Cys Arg Lys

50 55 60

Gly Arg Asp Ile Phe Val Trp Ala Asp Pro Gly Leu Ala Arg Cys Ser

65 70 75 80

Phe Gln Ser Leu Ser Leu Cys His Val Thr Asn Phe Thr Val Phe Leu

85 90 95

Gly Lys Asp Arg Ala Val Ala Gly Ser Ile Gln Phe Pro Pro Asp Asp

100 105 110

Asp Gly Asp His Glu Ala Ala Ala Gln Asp Leu Arg Cys Trp Val His

115 120 125

Glu Gly Gln Leu Ser Cys Gln Trp Glu Arg Gly Pro Lys Ala Thr Gly

130 135 140

Asp Val His Tyr Arg Met Phe Trp Arg Asp Val Arg Leu Gly Pro Ala

145 150 155 160

His Asn Arg Glu Cys Pro His Tyr His Ser Leu Asp Val Asn Thr Ala

165 170 175

Gly Pro Ala Pro His Gly Gly His Glu Gly Cys Thr Leu Asp Leu Asp

180 185 190

Thr Val Leu Gly Ser Thr Pro Asn Ser Pro Asp Leu Val Pro Gln Val

195 200 205

Thr Ile Thr Val Asn Gly Ser Gly Arg Ala Gly Pro Val Pro Cys Met

210 215 220

Asp Asn Thr Val Asp Leu Gln Arg Ala Glu Val Leu Ala Pro Pro Thr

225 230 235 240

Leu Thr Val Glu Cys Asn Gly Ser Glu Ala His Ala Arg Trp Val Ala

245 250 255

Arg Asn Arg Phe His His Gly Leu Leu Gly Tyr Thr Leu Gln Val Asn

260 265 270

Gln Ser Ser Arg Ser Glu Pro Gln Glu Tyr Asn Val Ser Ile Pro His

275 280 285

Phe Trp Val Pro Asn Ala Gly Ala Ile Ser Phe Arg Val Lys Ser Arg

290 295 300

Ser Glu Val Tyr Pro Arg Lys Leu Ser Ser Trp Ser Glu Ala Trp Gly

305 310 315 320

Leu Val Cys Pro Pro Glu Val Met Pro Val Lys Thr Ala Leu Val Thr

325 330 335

Ser Val Ala Thr Val Leu Gly Ala Gly Leu Val Ala Ala Gly Leu Leu

340 345 350

Leu Trp Trp Arg Lys Ser Leu Leu Tyr Arg Leu Cys Pro Pro Ile Pro

355 360 365

Arg Leu Arg Leu Pro Leu Ala Gly Glu Met Val Val Trp Glu Pro Ala

370 375 380

Leu Glu Asp Cys Glu Val Thr Pro Val Thr Asp Ala

385 390 395

<210> 32

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 32

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asp Ile Ile Pro Ser Asn Gly Ala Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser His Leu Leu Arg Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 33

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 33

Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Thr

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 34

<211> 469

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 34

Met Gly Trp Ser Tyr Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asp Tyr Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ile Pro Ser Asn Gly Ala Thr Phe Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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180 185 190

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210 215 220

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245 250 255

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

260 265 270

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

275 280 285

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

290 295 300

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

305 310 315 320

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

325 330 335

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

340 345 350

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Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

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Leu Ser Pro Gly Lys

465

<210> 35

<211> 592

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 35

Met Gly Trp Ser Tyr Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

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50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ile Pro Ser Asn Gly Ala Thr Phe Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser His Leu Leu Arg Ala Ser Trp Phe Ala Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Ala Ser Ala

130 135 140

Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn Ser Pro Ser Asp Thr

145 150 155 160

Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp Phe Leu Pro Asp Ser

165 170 175

Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser Asp Ile Ser Ser Thr

180 185 190

Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys Tyr Ala Ala Thr Ser

195 200 205

Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln Gly Thr Asp Glu His

210 215 220

Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn Lys Glu Lys Asn Val

225 230 235 240

Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys Val Ser Val Phe Val

245 250 255

Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg Lys Ser Lys Leu Ile

260 265 270

Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile Gln Val Ser Trp Leu

275 280 285

Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr Thr Asp Gln Val Gln

290 295 300

Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr Lys Val Thr Ser Thr

305 310 315 320

Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Ser Gln Ser Met Phe Thr Cys

325 330 335

Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln Asn Ala Ser Ser Met

340 345 350

Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val Phe Ala Ile Pro Pro

355 360 365

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370 375 380

Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr Ile Ser Trp Thr Arg

385 390 395 400

Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn Ile Ser Glu Ser His

405 410 415

Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala Ser Ile Cys Glu Asp

420 425 430

Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr Val Thr His Thr Asp

435 440 445

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450 455 460

Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu

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485 490 495

Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser

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Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr

565 570 575

Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Cys Tyr

580 585 590

<210> 36

<211> 240

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 36

Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Arg

1 5 10 15

Gly Ala Arg Cys Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala

20 25 30

Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser

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Leu Leu Asn Thr Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln

50 55 60

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65 70 75 80

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210 215 220

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225 230 235 240

<210> 37

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 37

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

Ala Arg Gly Asn Trp Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 38

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 38

Glu Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Asp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Lys Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 39

<211> 464

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 39

Met Gly Trp Ser Tyr Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Ser Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

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65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val

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145 150 155 160

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

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275 280 285

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Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

305 310 315 320

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

325 330 335

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

340 345 350

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

355 360 365

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370 375 380

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405 410 415

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420 425 430

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

435 440 445

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455 460

<210> 40

<211> 587

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 40

Met Gly Trp Ser Tyr Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

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Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Ser Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

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Glu Trp Met Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Asn Trp Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

115 120 125

Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro

130 135 140

Leu Val Ser Cys Glu Asn Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val

145 150 155 160

Gly Cys Leu Ala Gln Asp Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp

165 170 175

Lys Tyr Lys Asn Asn Ser Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser

180 185 190

Val Leu Arg Gly Gly Lys Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro

195 200 205

Ser Lys Asp Val Met Gln Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val

210 215 220

Gln His Pro Asn Gly Asn Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile

225 230 235 240

Ala Glu Leu Pro Pro Lys Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly

245 250 255

Phe Phe Gly Asn Pro Arg Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly

260 265 270

Phe Ser Pro Arg Gln Ile Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln

275 280 285

Val Gly Ser Gly Val Thr Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu

290 295 300

Ser Gly Pro Thr Thr Tyr Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu

305 310 315 320

Ser Asp Trp Leu Ser Gln Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg

325 330 335

Gly Leu Thr Phe Gln Gln Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln

340 345 350

Asp Thr Ala Ile Arg Val Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile

355 360 365

Phe Leu Thr Lys Ser Thr Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr

370 375 380

Thr Tyr Asp Ser Val Thr Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala

385 390 395 400

Val Lys Thr His Thr Asn Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe

405 410 415

Ser Ala Val Gly Glu Ala Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly

420 425 430

Glu Arg Phe Thr Cys Thr Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu

435 440 445

Lys Gln Thr Ile Ser Arg Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp

450 455 460

Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser

465 470 475 480

Ala Thr Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe

485 490 495

Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val

500 505 510

Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala

515 520 525

His Ser Ile Leu Thr Val Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr

530 535 540

Tyr Thr Cys Val Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu

545 550 555 560

Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser

565 570 575

Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Cys Tyr

580 585

<210> 41

<211> 234

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 41

Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Arg

1 5 10 15

Gly Ala Arg Cys Glu Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

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Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser

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<210> 42

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 42

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<223>人工序列的描述：合成多肽

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

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<223>人工序列的描述：合成多肽

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 46

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<223>人工序列的描述：合成多肽

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<223>人工序列的描述：合成多肽

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<223>人工序列的描述：合成多肽

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

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<223>人工序列的描述：合成多肽

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 52

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 53

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 54

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 55

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 58

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 60

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 61

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<210> 62

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 62

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<210> 63

<211> 113

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 63

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<210> 64

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 64

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<210> 65

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 65

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<210> 66

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 66

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<210> 67

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 67

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<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 68

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

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<223>人工序列的描述：合成多肽

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<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 70

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<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 71

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<223>人工序列的描述：合成多肽

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

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<223>人工序列的描述：合成多肽

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 78

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 80

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 82

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 83

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 84

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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 85

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 86

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<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 87

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 88

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 89

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 90

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala

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<210> 91

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 91

Leu Pro Val Leu Thr Gln Ser Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

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Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Arg Tyr

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<210> 92

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 92

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

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Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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<210> 93

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 93

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr

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<210> 94

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 94

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

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<210> 95

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 95

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Tyr

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<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 96

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Met Asn Ile Leu Ala Thr Val Pro Phe Asp Ile Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 97

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 97

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Val Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Ser Val Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 98

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 98

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Asp Asp Pro Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Met Asn Ile Leu Ala Thr Val Pro Phe Asp Ile Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 99

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 99

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Val Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Ser Val Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 100

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 100

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Ser Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Met Asn Ile Leu Ala Thr Val Pro Phe Asp Ile Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 101

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 101

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Ser Val Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 102

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 102

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Ala Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asp Ile Ile Pro Ser Asn Gly Ala Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Thr Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser His Leu Leu Arg Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 103

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 103

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Glu Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg

<210> 104

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 104

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asp Ile Ile Pro Ser Asn Gly Ala Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser His Leu Leu Arg Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

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Pro Ser Asp Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

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Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 105

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 105

Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Thr

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 106

<211> 485

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 106

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asp Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Lys Pro

115 120 125

Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly

130 135 140

Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly

145 150 155 160

Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr

165 170 175

Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Arg

180 185 190

Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg

195 200 205

Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly

210 215 220

Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser

225 230 235 240

Asn His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Glu Pro

245 250 255

Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro

260 265 270

Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

275 280 285

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

290 295 300

Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

305 310 315 320

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

325 330 335

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

340 345 350

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

355 360 365

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

370 375 380

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln

385 390 395 400

Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

405 410 415

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

420 425 430

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

435 440 445

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

450 455 460

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

465 470 475 480

Leu Ser Pro Gly Lys

485

<210> 107

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 107

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Ile Pro Ser Asn Gly Ala Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser His Leu Leu Arg Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 108

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 108

Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 109

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 109

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Ile Pro Ser Asn Gly Ala Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser His Leu Leu Arg Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 110

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 110

Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 111

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 111

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Asp Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asn Trp Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 112

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 112

Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Asp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Lys Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 113

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 113

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Ser Phe Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Thr Tyr Ser Ala Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu His Ile Asn Asp Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Gly Tyr Asp Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 114

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 114

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly Asn Thr Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

<210> 115

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 115

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Ile Pro Ser Asn Gly Ala Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser His Leu Leu Arg Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 116

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 116

Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg

<210> 117

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 117

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Ser

20 25 30

Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Lys Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ser Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Gly Asn Asp Tyr Tyr Asp Thr Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 118

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 118

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Val Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Asn Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Ala Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 119

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 119

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Glu Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Ala Asn Phe Gly Ala Gly Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 120

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 120

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 121

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 121

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Glu Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Ala Asn Phe Gly Ala Gly Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 122

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 122

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asp

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 123

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 123

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Ile Tyr Asp Ala Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 124

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 124

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala

20 25 30

Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln

85 90 95

Ser Tyr Ser Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 125

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 125

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 126

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 126

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala

20 25 30

Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln

85 90 95

Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 127

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 127

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Gln Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 128

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 128

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala

20 25 30

Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln

85 90 95

Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 129

<211> 737

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成多肽

<400> 129

Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala

1 5 10 15

Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp

20 25 30

Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu

35 40 45

Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His

50 55 60

Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp

65 70 75 80

Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser

85 90 95

Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala

100 105 110

Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala

115 120 125

Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala

145 150 155 160

His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu

165 170 175

Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val

180 185 190

Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp

195 200 205

Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp

210 215 220

Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala

225 230 235 240

Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln

245 250 255

His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val

260 265 270

Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys

275 280 285

Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro

290 295 300

Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys

305 310 315 320

Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu

325 330 335

Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys

340 345 350

Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val

355 360 365

Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser

370 375 380

Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu Cys Cys His Gly

385 390 395 400

Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile

405 410 415

Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu

420 425 430

Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp

435 440 445

Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser

450 455 460

Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly

465 470 475 480

Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val

485 490 495

Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys

500 505 510

Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu

515 520 525

Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys

530 535 540

Glu Leu Phe Lys Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu

545 550 555 560

Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val

565 570 575

Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His

580 585 590

Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val

595 600 605

Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg

610 615 620

Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe

625 630 635 640

Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala

645 650 655

Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu

660 665 670

Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys

675 680 685

Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala

690 695 700

Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe

705 710 715 720

Ala Glu Glu Gly Pro Lys Leu Val Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly

725 730 735

Leu

<210> 130

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 130

Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 131

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 131

Asp Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 132

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 132

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 133

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 133

Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Ile Tyr Asp Ala Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 134

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 134

Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 135

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 135

His Ala Asn Phe Gly Ala Gly Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10

<210> 136

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 136

Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val

1 5 10

<210> 137

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 137

Asp Ala Tyr Gly Gln Tyr Phe Tyr Asp Val

1 5 10

<210> 138

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 138

Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 139

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 139

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 140

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 140

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 141

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 141

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 142

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 142

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val

1 5

<210> 143

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 143

Ala Leu Trp Tyr Ser Asp Leu Trp Val

1 5

<210> 144

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 144

Lys Gln Ser Tyr Ser Arg Arg Thr

1 5

<210> 145

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 145

Lys Gln Ser Tyr Phe Arg Arg Thr

1 5

<210> 146

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>人工序列的描述：合成肽

<400> 146

Thr Gln Ser Tyr Phe Arg Arg Thr

1 5

Claims (66)

1.一种多聚体、双特异性或多特异性结合分子，其包含两个或五个二价结合单元、和经修饰的J链，

其中所述经修饰的J链包含野生型J链或其功能片段或变体和特异性结合免疫效应细胞的与J链缔合的抗原结合结构域，

其中每个结合单元包含两条抗体重链，每条重链包含IgA、IgA样、IgM或IgM样重链恒定区或其多聚片段并至少包含与结合单元与结合单元缔合的抗原结合结构域的重链可变区(VH)部分，其中所述与结合单元与结合单元缔合的抗原结合结构域中的至少三个与CD123特异性结合，并且

其中所述结合分子能够诱导免疫效应细胞依赖性的表达CD123的细胞的杀伤。

2.如权利要求1所述的结合分子，其中所述经修饰的J链包含变体J链或其片段，所述变体J链或其片段相对于野生型J链包含一个或多个能够影响所述结合分子的血清半衰期的单一氨基酸取代、缺失或插入；并且其中相对于除所述J链中的所述一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入之外都相同的并且以相同的方式对相同的动物物种施用的参考结合分子，所述结合分子在对动物施用时表现出增加的血清半衰期。

3.如权利要求2所述的结合分子，其中所述经修饰的J链包含与成熟野生型人J链(SEQID NO:2)的氨基酸Y102相对应的氨基酸位置处的氨基酸取代。

4.如权利要求3所述的结合分子，其中与SEQ ID NO:2的Y102相对应的所述氨基酸被丙氨酸(A)、丝氨酸(S)或精氨酸(R)取代。

5.如权利要求4所述的结合分子，其中与SEQ ID NO:2的Y102相对应的所述氨基酸被丙氨酸(A)取代。

6.如权利要求5所述的结合分子，其中所述J链是变体人J链，并且包含氨基酸序列SEQID NO:3(“J*”)。

7.如权利要求1至6中任一项所述的结合分子，其中所述与J链缔合的抗原结合结构域包含与所述J链或其片段或变体融合或化学缀合的抗体单链Fv(scFv)片段。

8.如权利要求7所述的结合分子，其中所述scFv片段通过肽接头与所述J链融合。

9.如权利要求7或权利要求8所述的结合分子，其中所述scFv片段与所述J链或其片段或变体的N末端融合、与所述J链或其片段或变体的C末端融合或与所述J链或其片段或变体的N末端和C末端两者融合。

10.如权利要求7至9中任一项所述的结合分子，其中所述免疫效应细胞是T细胞或NK细胞。

11.如权利要求10所述的结合分子，其中所述免疫效应细胞是T细胞，并且其中所述scFv片段特异性结合CD3。

12.如权利要求10或权利要求11所述的结合分子，其中所述T细胞是CD8+细胞毒性T细胞。

13.如权利要求11或权利要求12所述的结合分子，其中所述scFv片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH包含VH互补决定区VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3并且所述VL包含VL互补决定区VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3，其中

(a)所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7，并且所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11；

(b)所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:135，并且所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:140和SEQID NO:142；

(c)所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:135，并且所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:140和SEQID NO:143；

(d)所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:136，并且所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:141和SEQID NO:144；

(e)所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:136，并且所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:141和SEQID NO:145；

(f)所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:137，并且所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含具有0个、1个或2个氨基酸取代的氨基酸序列SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:141和SEQID NO:146。

14.如权利要求13所述的结合分子，其中所述scFv片段分别包含VH和VL氨基酸序列SEQID NO:4和SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:119和SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:123和SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:125和SEQ ID NO:126或SEQ ID NO:127和SEQ ID NO:128。

15.如权利要求11或权利要求12所述的结合分子，其中所述scFv片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH和VL分别包含氨基酸序列SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14。

16.如权利要求13所述的结合分子，其中所述经修饰的J链包含有包含SEQ ID NO:12的氨基酸20至420、SEQ ID NO:15的氨基酸20至412或SEQ ID NO:16的氨基酸23至415的氨基酸序列。

17.如权利要求10所述的结合分子，其中所述免疫效应细胞是NK细胞，并且其中所述scFv片段特异性结合CD16。

18.如权利要求1至17中任一项所述的结合分子，其中所述经修饰的J链还包含与所述J链或其片段或变体融合或化学缀合的免疫刺激剂(“ISA”)。

19.如权利要求18所述的结合分子，其中所述ISA包含细胞因子或其受体结合片段或变体。

20.如权利要求19所述的结合分子，其中所述ISA包含：(a)白介素-15(IL-15)蛋白或其受体结合片段或变体(“I”)；和(b)白介素-15受体-α(IL-15Rα)片段(“R”)，其能够与I缔合，包含sushi结构域或其变体；其中I和R中的至少一者与所述J链或其片段或变体缔合为融合蛋白，并且其中I和R能够缔合以用作所述ISA。

21.如权利要求18至20中任一项所述的结合分子，其中所述ISA通过肽接头与所述J链融合。

22.如权利要求1至21中任一项所述的结合分子，其中每个结合单元还包含两条轻链，每条轻链包含κ或λ轻链恒定区并至少包含与结合单元缔合的抗原结合结构域的轻链可变区(VL)部分。

23.如权利要求1至22中任一项所述的结合分子，其包含至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或十个特异性结合CD123的与结合单元缔合的抗原结合结构域。

24.如权利要求23所述的结合分子，其中所述至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或至少十个与结合单元缔合的抗原结合结构域与相同的CD123表位结合。

25.如权利要求24所述的结合分子，其中所述与结合单元缔合的抗原结合结构域全部是相同的。

26.如权利要求23至25中任一项所述的结合分子，其中所述与结合单元缔合的抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH和VL包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含：包含VH和VL氨基酸序列的抗体的CDR，所述VH和VL氨基酸序列分别包含以下或包含在以下中：SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38、SEQID NO:42和SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ IDNO:53、SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQID NO:59、SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75、SEQ IDNO:76和SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81、SEQID NO:82和SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92和SEQ IDNO:93、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98和SEQID NO:99、SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:117和SEQID NO:118；或包含VH和VL氨基酸序列的抗体的CDR，所述VH和VL氨基酸序列分别包含以下或包含在以下中，所述CDR中的一个或多个中的一个或两个氨基酸取代除外：SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43、SEQ IDNO:44和SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49、SEQID NO:50和SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60和SEQ IDNO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66和SEQID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83、SEQ IDNO:84和SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89、SEQID NO:90和SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100和SEQ IDNO:101、SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:118。

27.如权利要求25所述的结合分子，其中所述与结合单元缔合的抗原结合结构域包含抗体VH和VL，其中所述VH和VL包含与成熟VH和VL氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列，所述成熟VH和VL氨基酸序列分别包含以下或包含在以下中：SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47、SEQ IDNO:48和SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53、SEQID NO:54和SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64和SEQ IDNO:65、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70和SEQID NO:71、SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87、SEQ IDNO:88和SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93、SEQID NO:94和SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:107和SEQID NO:108、SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:112、SEQ IDNO:113和SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:118。

28.如权利要求1至27中任一项所述的结合分子，其是包含两个二价结合单元的二聚体结合分子，其中每个结合单元包含两条抗体重链，每条重链包含IgA或IgA样重链恒定区或其多聚片段。

29.如权利要求28所述的结合分子，其还包含分泌组分或其片段或变体。

30.如权利要求28或权利要求29所述的结合分子，其中所述IgA或IgA样重链恒定区或其多聚片段各自包含Cα3和尾片(tp)结构域。

31.如权利要求30所述的结合分子，其中所述IgA或IgA样重链恒定区还包含Cα1结构域、Cα2结构域、IgA铰链区或它们的任何组合。

32.如权利要求28至31中任一项所述的结合分子，其中所述IgA或IgA样重链恒定区是人IgA或IgA样恒定区。

33.如权利要求32所述的结合分子，其中所述IgA重链恒定区包含氨基酸序列SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25或其任何多聚变体或片段。

34.如权利要求28至33中任一项所述的结合分子，其中每个结合单元包含两条IgA或IgA样重链和两条免疫球蛋白轻链，每条所述IgA或IgA样重链包含位于所述IgA恒定区或其片段的氨基末端的VH，每条所述免疫球蛋白轻链包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。

35.如权利要求1至27中任一项所述的结合分子，其是包含五个二价结合单元的五聚体结合分子，其中每个结合单元包含两个IgM或IgM样重链恒定区或其多聚片段。

36.如权利要求35所述的结合分子，其中所述IgM或IgM样重链恒定区或其多聚片段各自包含Cμ4结构域和尾片(tp)结构域或其片段或变体。

37.如权利要求35或权利要求36所述的结合分子，其中所述IgM或IgM样重链恒定区或其多聚片段还包含Cμ1结构域、Cμ2结构域、Cμ3结构域或它们的任何组合。

38.如权利要求35至37中任一项所述的结合分子，其中所述IgM或IgM样重链恒定区是人IgM恒定区。

39.如权利要求38所述的结合分子，其中每个IgM重链恒定区是人IgM恒定区或其多聚变体或片段，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23或其多聚变体或片段。

40.如权利要求38或权利要求39所述的结合分子，其包含变体人IgM恒定区，其中相对于包含有包含氨基酸序列SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23或其多聚变体或片段的IgM重链恒定区的多聚体结合分子，所述多聚体结合分子具有降低的CDC活性。

41.如权利要求40所述的结合分子，其中每个IgM重链恒定区包含氨基酸序列SEQ IDNO:22或SEQ ID NO:23的变体，其中所述变体包含SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的P311位置处的氨基酸取代、SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的P313位置处的氨基酸取代或SEQ IDNO:22或SEQ ID NO:23的P311和P313位置处的氨基酸取代。

42.如权利要求38或权利要求39所述的结合分子，其中每个IgM重链恒定区是变体人IgM恒定区，所述变体人IgM恒定区相对于与所述变体IgM重链恒定区除一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入之外都相同的参考IgM重链恒定区具有所述一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入；其中相对于包含所述参考IgM重链恒定区、以相同方式对相同动物物种施用的结合分子，所述结合分子在对受试动物施用时表现出增加的血清半衰期。

43.如权利要求42所述的多聚体结合分子，其中所述变体IgM重链恒定区包含与野生型人IgM恒定区SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的氨基酸E345A、S401A、E402A或E403A相对应的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸取代。

44.如权利要求35至43中任一项所述的结合分子，其中每个结合单元包含两条IgM重链和两条免疫球蛋白轻链，每条所述IgM重链包含位于所述IgM恒定区或其片段的氨基末端的VH，每条所述免疫球蛋白轻链包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。

45.一种组合物，其包含如权利要求1至44中任一项所述的结合分子。

46.一种多核苷酸，其包含编码如权利要求1至44中任一项所述的结合分子的多肽亚基的核酸序列。

47.如权利要求46所述的多核苷酸，其中所述多肽亚基包含IgM或IgM样重链恒定区并至少包含所述结合分子的所述与结合单元缔合的抗原结合结构域的抗体VH部分。

48.如权利要求47所述的多核苷酸，其中所述多肽亚基包含有与包含以下的VH的C末端融合的人IgM恒定区或其片段：

(a)HCDR1、HCDR2和HCDR3区，其包含：包含在VH氨基酸序列中的CDR，所述VH氨基酸序列包含以下或包含在以下中：SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:78、SEQ IDNO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:90、SEQ IDNO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:102、SEQID NO:107、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:115或SEQ ID NO:117；或包含在VH氨基酸序列中的CDR，所述VH氨基酸序列包含以下或包含在以下中，所述HCDR中的一个或多个中的一个或两个单一氨基酸取代除外：SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74、SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86、SEQ IDNO:88、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:98、SEQ IDNO:100、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:115或SEQ ID NO:117；或

(b)与包含以下或包含在以下中的成熟VH氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ IDNO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:54、SEQ IDNO:56、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:78、SEQ IDNO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:90、SEQ IDNO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:102、SEQID NO:107、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:115或SEQ ID NO:117。

49.如权利要求46至48中任一项所述的多核苷酸，其中所述多肽亚基包含轻链恒定区和所述多聚体结合分子的所述抗原结合结构域的抗体VL部分。

50.如权利要求49所述的多核苷酸，其中所述多肽亚基包含有与包含以下的VL的C末端融合的人κ或λ轻链恒定区或其片段：

(a)LCDR1、LCDR2和LCDR3区，其包含：包含在VL氨基酸序列中的CDR，所述VL氨基酸序列包含以下或包含在以下中：SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:69、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:79、SEQ IDNO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ IDNO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQID NO:108、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:118；或包含在以下VL氨基酸序列中的CDR，所述LCDR中的一个或多个中的一个或两个单一氨基酸取代除外：SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ IDNO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ IDNO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:81、SEQ IDNO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ IDNO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:108、SEQID NO:110、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:118；或

(b)与包含以下或包含在以下中的成熟VL氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:43、SEQ IDNO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ IDNO:57、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:69、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:79、SEQ IDNO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ IDNO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQID NO:108、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:116或SEQ ID NO:118。

51.如权利要求46至50中任一项所述的多核苷酸，其中所述多肽亚基包含经修饰的J链，其中所述经修饰的J链包含野生型J链或其功能片段或变体和特异性结合免疫效应细胞的与J链缔合的抗原结合结构域。

52.如权利要求51所述的多核苷酸，其中所述经修饰的J链包含与SEQ ID NO:12的氨基酸20至420、SEQ ID NO:15的氨基酸20至412或SEQ ID NO:16的氨基酸23至415至少80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。

53.一种组合物，其包含如权利要求46至48中任一项所述的多核苷酸、如权利要求46、49或50中任一项所述的多核苷酸和如权利要求51或权利要求52所述的多核苷酸。

54.如权利要求53所述的组合物，其中所述多核苷酸处在两个或更多个单独的载体上。

55.如权利要求53所述的组合物，其中所述多核苷酸处在单个载体上。

56.如权利要求53至55中任一项所述的组合物，其还包含有包含编码J链或其片段或其变体的核酸序列的多核苷酸。

57.如权利要求55所述的一个载体。

58.如权利要求54所述的多个载体。

59.一种宿主细胞，其包含如权利要求46至52中任一项所述的多核苷酸、如权利要求53至56中任一项所述的组合物或如权利要求57或58中任一项所述的一个载体或多个载体，其中所述宿主细胞能够表达如权利要求1至44中任一项所述的结合分子或其亚基。

60.一种产生如权利要求1至44中任一项所述的结合分子的方法，其包括培养如权利要求59所述的宿主细胞并回收所述结合分子。

61.一种治疗癌症或其他恶性肿瘤的方法，其包括向需要治疗的受试者施用有效量的如权利要求1至44中任一项所述的结合分子，其中所述结合分子能够诱导免疫效应细胞介导的癌细胞杀伤。

62.如权利要求61所述的方法，其中所述癌症或恶性肿瘤是血液学癌症或恶性肿瘤。

63.如权利要求62所述的方法，其中所述癌症是急性髓系白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、慢性髓系白血病(CML)、B细胞急性淋巴细胞白血病(B细胞ALL)、经典型霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、系统性肥大细胞增多症或浆细胞样树突状细胞白血病。

64.如权利要求61至63中任一项所述的方法，其中所述与J链缔合的抗原结合结构域与CD3ε结合，并且其中所述结合分子诱导T细胞介导的恶性细胞杀伤。

65.如权利要求64所述的方法，其中相对于基于IgG的抗CD123抗CD3双特异性抗体，所述治疗导致细胞因子释放减少。

66.如权利要求61至65中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类。

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