JP2022545655A - 多量体の二重特異性抗ｃｄ１２３結合分子及びその使用 - Google Patents

多量体の二重特異性抗ｃｄ１２３結合分子及びその使用 Download PDF

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Abstract

本開示は、免疫エフェクター細胞に特異的に結合する改変Ｊ鎖を含む、多価の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子を提供する。当該結合分子またはそのサブユニットをコードするポリヌクレオチド、ならびに当該ポリヌクレオチドを含むベクター及び宿主細胞も提供される。本開示は、免疫エフェクター細胞に特異的に結合する改変Ｊ鎖を含む多価の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子を製造及び／または使用する方法をさらに提供する。TIFF2022545655000025.tif55128

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年８月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／８８８，４７５号及び２０１９年８月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／８８８，７０２号の利益を主張し、それらの各々は、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含有し、当該配列表は、参照することによってその全体が本明細書に援用される。ＡＳＣＩＩコピーは２０２０年８月１３日に生成され、０２７ＷＯ１－Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－Ｌｉｓｔｉｎｇと命名され、２０４，７３８バイトのサイズである。
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は米国における白血病による死亡の主要原因であり、１年あたり２０，０００名超の新規患者が発生し、５年生存率は３０％未満であり、６０歳を上回る患者では生存率は１０％へ減少する（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ，Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｎｄ－Ｒｅｓｕｌｔ Ｐｒｏｇｒａｍ（ＳＥＥＲ）のデータ、Ｏｒａｎ ａｎｄ Ｗｅｉｓｄｏｒｆ ２０１２，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ９７（１２）１９１６（非特許文献1））。過去４０年間ＡＭＬ患者の治療の進歩はほとんどなく、現行の治療選択肢は、主として激しい化学療法及び幹細胞移植からなる（Ｌｕｐｐｉ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ｃａｎｃｅｒｓ １０，４２９（非特許文献2））。ＡＭＬ細胞上の細胞表面分子を標的として、ＡＭＬ細胞と結合及び殺傷するようにＴ細胞に指令するために、複数のアプローチがとられてきた。１つのかかる表面分子はＣＤ１２３（ＩＬ－３受容体アルファ鎖またはＩＬ－３Ｒαとしても公知である）であり、ＡＭＬ患者のうちの９０％超において、白血病細胞、そして白血病性幹細胞（多くの場合治療法後の疾患再発に関与する細胞タイプ）上で発現される（Ｋｏｖｔｕｎ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖａｎｃｅｓ ２（８）８４８（非特許文献3）；Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ ２０１７，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ７，ｅ５６７（非特許文献4））。加えて、ＣＤ１２３は、非常に不良な予後に関連する遺伝子変異（ＦＬＴ３等）を有する患者において高度に発現される（Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ ２０１７，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ７，ｅ５６７（非特許文献4））。ＣＤ１２３の２つのヒトアイソフォームのアミノ酸配列は、配列番号２８（アイソフォーム、成熟タンパク質１：配列番号２８のおよそアミノ酸２３～３７８）及び配列番号２９（アイソフォーム、成熟タンパク質２：配列番号２９のおよそアミノ酸２３～３００）として提示され、カニクイザルＣＤ１２３アミノ酸配列は、配列番号３０（ヒトアイソフォーム１に約８７％同一、成熟タンパク質：およそ配列番号３０のアミノ酸２３～３７８）として提示され、マウスＣＤ１２３アミノ酸配列は、配列番号３１（ヒトアイソフォーム１に約３０％同一、成熟タンパク質：配列番号３１のおよそアミノ酸１７～３９６）として提示される。
ＣＤ１２３は、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍の治療のためにジフテリア毒素とコンジュゲートしている組み換えＩＬ－３サイトカインのＦＤＡ承認によって証明されるように、いくつかの血液悪性腫瘍のための臨床的に検証された標的である（Ｐｅｍｍａｒａｊｕ ｅｔ ａｌ ２０１９，ＮＥＪＭ ３８０：１６２８（非特許文献5））。このＣＤ１２３ターゲティング剤及び他のＣＤ１２３ターゲティング剤は、前臨床試験及び臨床試験において試験されている。初期の第１相臨床試験が、Ｘｅｎｃｏｒ（ＸｍＡｂ１４０４５ － ＩｇＧベース）、Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ（フロテツズマブ － ＤＡＲＴ）、及びＪａｎｓｅｎ（ＪＮＪ－６３７０９１７８ － ｄｕｏｂｏｄｙ）による、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体により行われた。臨床的有効性の初期の徴候がこれらの患者のうちの若干名で報告されたが、重症のサイトカイン放出症候群及び何名かの患者死亡もこのクラスの二重特異性薬物で観察された（Ｒａｖａｎｄｉ ｅｔ ａｌ ２０１８ Ｂｌｏｏｄ １３２：７６３（非特許文献6）；Ｊａｃｏｂｓ ｅｔ ａｌ ２０１８，Ｂｌｏｏｄ １３２：２７３８（非特許文献7）；Ｕｙ ｅｔ ａｌ ２０１８，Ｂｌｏｏｄ １３２：７６４（非特許文献8））。サイトカイン放出症候群（またはＣＲＳ）は、生命を脅かし得る、発熱、低血圧、血液凝固異常、及び毛細管の漏出を特徴し、かかる知見は、ＣＡＲ－Ｔ及びＢｉＴＥを含む他のＴ細胞が関与するアプローチにも付随する（Ｔｅａｃｈｌｅｙ ｅｔ ａｌ ２０１６，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ６（６）６６４（非特許文献9）；Ｈａｙ ｅｔ ａｌ ２０１７，Ｂｌｏｏｄ １３０（２１）２２９５（非特許文献10））。サイトカイン放出に関連するこれらの有害な安全性事象は、ＣＤ３と結合するＩｇＧベースの二重特異性抗体の用量制限毒性の性質を有する傾向があり、かかる薬剤の安全で効率的な忍容される投与への課題、及び可能性として、もたらされる投薬の限定に起因するこれらの治療剤の有効性の最適化能力への課題として現われる。
多量体化することができる抗体及び抗体様分子（ＩｇＡ及びＩｇＭの抗体等）は、例えば免疫腫瘍学及び感染性疾患の分野において、特異性の改善、アビディティーの改善、及び多重結合標的への結合能力を可能にする有望な薬物候補として浮上した。例えば米国特許第９，９５１，１３４号（特許文献1）、同第９，９３８，３４７号（特許文献2）、及び同第１０，６１８，９７８号（特許文献3）、米国特許出願公開第２０１９－０１００５９７号（特許文献4）、同第２０１９－０１８５５７０号（特許文献5）、ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／１５４５９３（特許文献6）、ＷＯ２０１６／１６８７５８（特許文献7）、ＷＯ２０１８／０１７８８８（特許文献8）、ＷＯ２０１８／０１７７６３（特許文献9）、ＷＯ２０１８／０１７８８９（特許文献10）、ＷＯ２０１８／０１７７６１（特許文献11）、及びＷＯ２０１９／１６９３１４（特許文献12）（それらの内容は、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）を参照されたい。
ＣＲＳを最小限に抑えながら、ＣＤ１２３を発現するＡＭＬ細胞をターゲティングし、それらの細胞のＴ細胞媒介性殺傷を誘導する必要性が依然として存在する。本発明のＣＤ３二重特異性ＩｇＭ技術によるＣＤ１２３のターゲティングが、ＣＤ１２３発現ＡＭＬ腫瘍細胞を、Ｔ細胞媒介性細胞傷害性のために有効にターゲティングするだけでなく、ＩｇＧベースのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体により治療される患者において時には重症であるサイトカイン放出症候群に好適な安全性プロファイルを備えた奏効も生ずるかどうかを評価した。加えて、ＩｇＭ抗体の高いアビディティーの結合は、本発明のＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性ＩｇＭが、ＩｇＧベースの二重特異性抗体と比較して、ＣＤ１２３を比較的低レベルの細胞表面発現で発現する腫瘍細胞をターゲティングすることを可能にし得る。
米国特許第９，９５１，１３４号 米国特許第９，９３８，３４７号 米国特許第１０，６１８，９７８号 米国特許出願公開第２０１９－０１００５９７号 米国特許出願公開第２０１９－０１８５５７０号 ＷＯ２０１６／１５４５９３ ＷＯ２０１６／１６８７５８ ＷＯ２０１８／０１７８８８ ＷＯ２０１８／０１７７６３ ＷＯ２０１８／０１７８８９ ＷＯ２０１８／０１７７６１ ＷＯ２０１９／１６９３１４
Ｏｒａｎ ａｎｄ Ｗｅｉｓｄｏｒｆ ２０１２，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ９７（１２）１９１６ Ｌｕｐｐｉ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ｃａｎｃｅｒｓ １０，４２９ Ｋｏｖｔｕｎ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖａｎｃｅｓ ２（８）８４８ Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ ２０１７，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ７，ｅ５６７ Ｐｅｍｍａｒａｊｕ ｅｔ ａｌ ２０１９，ＮＥＪＭ ３８０：１６２８ Ｒａｖａｎｄｉ ｅｔ ａｌ ２０１８ Ｂｌｏｏｄ １３２：７６３ Ｊａｃｏｂｓ ｅｔ ａｌ ２０１８，Ｂｌｏｏｄ １３２：２７３８ Ｕｙ ｅｔ ａｌ ２０１８，Ｂｌｏｏｄ １３２：７６４ Ｔｅａｃｈｌｅｙ ｅｔ ａｌ ２０１６，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ６（６）６６４ Ｈａｙ ｅｔ ａｌ ２０１７，Ｂｌｏｏｄ １３０（２１）２２９５
本開示は、２つまたは５つの二価結合ユニットと改変Ｊ鎖とを含む、二重特異性または多重特異性の多量体結合分子を提供し、当該改変Ｊ鎖は、野生型Ｊ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントと、免疫エフェクター細胞に特異的に結合するＪ鎖関連抗原結合ドメインとを含む。各結合ユニットは２つの抗体重鎖を含み、当該重鎖の各々は、ＩｇＡ、ＩｇＡ様、ＩｇＭ、もしくはＩｇＭ様の重鎖定常領域またはそれらの多量体化断片と、結合ユニット関連抗原結合ドメインの少なくとも重鎖可変領域（ＶＨ）部分とを含み、結合ユニット関連抗原結合ドメインのうちの少なくとも３つは、ＣＤ１２３に特異的に結合し、結合分子は、ＣＤ１２３を発現する細胞の免疫エフェクター細胞依存性殺傷を誘導し得る。
ある特定の実施形態において、改変Ｊ鎖は、バリアントＪ鎖またはその断片を含み、当該バリアントＪ鎖またはその断片は、野生型Ｊ鎖に比べて、結合分子の血清半減期に影響し得る１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を含み、その結果、結合分子は、動物に投与された際に、Ｊ鎖における１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を除いて同一であり且つ同じ動物種に同じ手法で投与される参照結合分子に比べて、増加した血清半減期を示す。ある特定の実施形態において、改変Ｊ鎖は、成熟野生型ヒトＪ鎖（配列番号２）のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態において、配列番号２のＹ１０２に対応するアミノ酸は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、またはアルギニン（Ｒ）で置換されていてもよい。ある特定の実施形態において、配列番号２のＹ１０２に対応するアミノ酸は、アラニン（Ａ）で置換されていてもよい。ある特定の実施形態において、Ｊ鎖は、バリアントヒトＪ鎖であり、且つ配列番号３のアミノ酸配列（「Ｊ＊」）を含む。
ある特定の実施形態において、Ｊ鎖関連抗原結合ドメインは、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントに融合しているかまたは化学的にコンジュゲートしている、抗体の一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片を含む。例えば、ｓｃＦｖ断片は、ペプチドリンカーを介してＪ鎖に融合していてもよい。ある特定の実施形態において、ｓｃＦｖ断片は、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＮ末端、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＣ末端、あるいはＪ鎖またはその断片もしくはバリアントのＮ末端及びＣ末端の両方に融合していてもよい。
ある特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。免疫エフェクター細胞がＴ細胞である実施形態において、ｓｃＦｖ断片は、ある特定の実施形態において、ＣＤ３εに特異的に結合し得る。ある特定の実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞である。
ある特定の実施形態において、ｓｃＦｖ断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、ＶＨ相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＶＬ相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含み、（ａ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３は、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号５、配列番号６、及び配列番号７のアミノ酸配列をそれぞれ含み、且つＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３は、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号９、配列番号１０、及び配列番号１１のアミノ酸配列をそれぞれ含むか、（ｂ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３は、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３０、配列番号１３２、及び配列番号１３５のアミノ酸配列をそれぞれ含み、且つＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３は、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３８、配列番号１４０、及び配列番号１４２のアミノ酸配列をそれぞれ含むか、（ｃ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３は、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３０、配列番号１３２、及び配列番号１３５のアミノ酸配列をそれぞれ含み、且つＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３は、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３８、配列番号１４０、及び配列番号１４３のアミノ酸配列をそれぞれ含むか、（ｄ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３は、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３１、配列番号１３３、及び配列番号１３６のアミノ酸配列をそれぞれ含み、且つＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３は、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３９、配列番号１４１、及び配列番号１４４のアミノ酸配列をそれぞれ含むか、（ｅ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３は、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３１、配列番号１３４、及び配列番号１３６のアミノ酸配列をそれぞれ含み、且つＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３は、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３９、配列番号１４１、及び配列番号１４５のアミノ酸配列をそれぞれ含むか、または（ｆ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３は、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３１、配列番号１３４、及び配列番号１３７のアミノ酸配列をそれぞれ含み、且つＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３は、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３９、配列番号１４１、及び配列番号１４６のアミノ酸配列をそれぞれ含む。
ある特定の実施形態において、ｓｃＦｖ断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、それぞれ配列番号５、配列番号６、及び配列番号７のアミノ酸配列を有するか、またはＶＨＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１、２、もしくは３つのアミノ酸置換を有する配列番号５、配列番号６、もしくは配列番号７のアミノ酸配列を有する、ＶＨ相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、それぞれ配列番号９、配列番号１０、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するか、またはＶＬＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１、２、もしくは３つのアミノ酸置換を有する配列番号９、配列番号１０、及び配列番号１１を有する、ＶＬ相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態において、ｓｃＦｖ断片は、それぞれ配列番号４及び配列番号８、配列番号１１９及び配列番号１２０、配列番号１２１及び配列番号１２２、配列番号１２３及び配列番号１２４、配列番号１２５及び配列番号１２６、または配列番号１２７及び配列番号１２８のＶＨアミノ酸配列及びＶＬアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、ｓｃＦｖ断片は、配列番号４のＶＨアミノ酸配列及び配列番号８のＶＬアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、ｓｃＦｖ断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号１３及び配列番号１４のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、改変Ｊ鎖は、配列番号１２のアミノ酸２０～４２０、配列番号１５のアミノ酸２０～４１２、または配列番号１６のアミノ酸２３～４１５を含む。
ある特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞であり、ｓｃＦｖ断片はＣＤ１６に特異的に結合する。
ある特定の実施形態において、改変Ｊ鎖は、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントに融合しているかまたは化学的にコンジュゲートしている免疫刺激物質（「ＩＳＡ」）をさらに含み得る。ある特定の実施形態において、ＩＳＡは、サイトカインまたはその受容体結合断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、ＩＳＡは、（ａ）インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）タンパク質またはその受容体結合断片もしくはバリアント（「Ｉ」）、及び（ｂ）Ｉと結合することができる、スシドメインを含むインターロイキン－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）断片またはそのバリアント（「Ｒ」）を含み、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアント、ならびにＩ及びＲのうちの少なくとも１つは、融合タンパク質として連結されており、Ｉ及びＲは結合してＩＳＡとして機能し得る。ある特定の実施形態において、ＩＳＡは、ペプチドリンカーを介してＪ鎖に融合し得る。
ある特定の実施形態において、提供される結合分子の各結合ユニットは、２つの軽鎖をさらに含み、当該軽鎖の各々は、κまたはλ軽鎖定常領域と、結合ユニット関連抗原結合ドメインの少なくとも軽鎖可変領域（ＶＬ）部分とを含む。
ある特定の実施形態において、提供される結合分子は、ＣＤ１２３に特異的に結合する、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個の結合ユニット関連抗原結合ドメインを含む。ある特定の実施形態において、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個の結合ユニット関連抗原結合ドメインは、同じＣＤ１２３エピトープに結合する。ある特定の実施形態において、提供される結合分子の全ての結合ユニット関連抗原結合ドメインは、同一である。
ある特定の実施形態において、結合ユニット関連抗原結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＨ及びＶＬは、６つの免疫グロブリン相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３は、配列番号３２及び配列番号３３、配列番号３７及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５、配列番号４６及び配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１、配列番号５２及び配列番号５３、配列番号５４及び配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９、配列番号６０及び配列番号６１、配列番号６２及び配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５、配列番号６６及び配列番号６７、配列番号６８及び配列番号６９、配列番号７０及び配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５、配列番号７６及び配列番号７７、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１、配列番号８２及び配列番号８３、配列番号８４及び配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７、配列番号８８及び配列番号８９、配列番号９０及び配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３、配列番号９４及び配列番号９５、配列番号９６及び配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９、配列番号１００及び配列番号１０１、配列番号１０２及び配列番号１０３、配列番号１０７及び配列番号１０８、配列番号１０９及び配列番号１１０、配列番号１１１及び配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４、配列番号１１５及び配列番号１１６、もしくは配列番号１１７及び配列番号１１８をそれぞれ含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する抗体のＣＤＲを含むか、または、ＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１つもしくは２つのアミノ酸置換を除いて、配列番号３２及び配列番号３３、配列番号３７及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５、配列番号４６及び配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１、配列番号５２及び配列番号５３、配列番号５４及び配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９、配列番号６０及び配列番号６１、配列番号６２及び配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５、配列番号６６及び配列番号６７、配列番号６８及び配列番号６９、配列番号７０及び配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５、配列番号７６及び配列番号７７、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１、配列番号８２及び配列番号８３、配列番号８４及び配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７、配列番号８８及び配列番号８９、配列番号９０及び配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３、配列番号９４及び配列番号９５、配列番号９６及び配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９、配列番号１００及び配列番号１０１、配列番号１０２及び配列番号１０３、配列番号１０７及び配列番号１０８、配列番号１０９及び配列番号１１０、配列番号１１１及び配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４、配列番号１１５及び配列番号１１６、もしくは配列番号１１７及び配列番号１１８をそれぞれ含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む抗体のＣＤＲを含む。
ある特定の実施形態において、結合ユニット関連抗原結合ドメインは、抗体のＶＨ及びＶＬを含み、当該ＶＨ及びＶＬは、配列番号３２及び配列番号３３、配列番号３７及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５、配列番号４６及び配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１、配列番号５２及び配列番号５３、配列番号５４及び配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９、配列番号６０及び配列番号６１、配列番号６２及び配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５、配列番号６６及び配列番号６７、配列番号６８及び配列番号６９、配列番号７０及び配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５、配列番号７６及び配列番号７７、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１、配列番号８２及び配列番号８３、配列番号８４及び配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７、配列番号８８及び配列番号８９、配列番号９０及び配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３、配列番号９４及び配列番号９５、配列番号９６及び配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９、配列番号１００及び配列番号１０１、配列番号１０２及び配列番号１０３、配列番号１０７及び配列番号１０８、配列番号１０９及び配列番号１１０、配列番号１１１及び配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４、配列番号１１５及び配列番号１１６、または配列番号１１７及び配列番号１１８をそれぞれ含むかまたはそれらの内に含有される成熟ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、提供される結合分子は、２つの二価結合ユニットを含む二量体結合分子であり、各結合ユニットは２つの抗体重鎖を含み、当該重鎖の各々は、ＩｇＡもしくはＩｇＡ様の重鎖定常領域またはそれらの多量体化断片を含む。ある特定の実施形態において、提供される二量体結合分子は、分泌成分またはその断片もしくはバリアントをさらに含む。ある特定の実施形態において、ＩｇＡもしくはＩｇＡ様の重鎖定常領域またはそれらの多量体化断片の各々は、Ｃα３及びテールピース（ｔｐ）ドメインを含み、Ｃα１ドメイン、Ｃα２ドメイン、ＩｇＡヒンジ領域、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。ある特定の実施形態において、ＩｇＡまたはＩｇＡ様の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＡまたはＩｇＡ様の定常領域であり、配列番号２４もしくは配列番号２５のアミノ酸配列またはそれらの任意の多量体化バリアントもしくは断片を含み得る。ある特定の実施形態において、各結合ユニットは、２つのＩｇＡまたはＩｇＡ様の重鎖（各々は、ＩｇＡ定常領域またはその断片に対してアミノ末端側に位置するＶＨを含む）及び２つの免疫グロブリン軽鎖（各々は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に対してアミノ末端側に位置するＶＬを含む）を含む。
ある特定の実施形態において、提供される結合分子は５つの二価結合ユニットを含む五量体結合分子であり、各結合ユニットは、２つのＩｇＭもしくはＩｇＭ様の重鎖定常領域またはその多量体化断片を含む。ある特定の実施形態において、ＩｇＭもしくはＩｇＭ様の重鎖定常領域またはその多量体化断片の各々は、Ｃμ４ドメイン及びテールピース（ｔｐ）ドメインまたはそれらの断片もしくはバリアントを含み、Ｃμ１ドメイン、Ｃμ２ドメイン、Ｃμ３ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。ある特定の実施形態において、ＩｇＭまたはＩｇＭ様の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＭ定常領域であり、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２３のアミノ酸配列、またはそれらの任意の多量体化バリアントもしくは断片を含み得る。ある特定の実施形態において、各結合ユニットは、２つのＩｇＭ重鎖（各々は、ＩｇＭ定常領域またはその断片に対してアミノ末端側に位置するＶＨを含む）及び２つの免疫グロブリン軽鎖（各々は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に対してアミノ末端側に位置するＶＬを含む）を含む。
ある特定の実施形態において、結合ユニットはバリアントヒトＩｇＭ定常領域を含み、多量体結合分子は、配列番号２２もしくは配列番号２３のアミノ酸配列またはそれらの多量体化バリアントもしくは断片を含むＩｇＭ重鎖定常領域を含む多量体結合分子に比べて、低減したＣＤＣ活性を有する。ある特定の実施形態において、各ＩｇＭ重鎖定常領域は、配列番号２２または配列番号２３のアミノ酸配列のバリアントを含み、バリアントは、配列番号２２もしくは配列番号２３の位置Ｐ３１１におけるアミノ酸置換、配列番号２２もしくは配列番号２３の位置Ｐ３１３におけるアミノ酸置換、または配列番号２２もしくは配列番号２３の位置Ｐ３１１及びＰ３１３におけるアミノ酸置換を含む。
ある特定の実施形態において、結合ユニットは、１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を除いてバリアントＩｇＭ重鎖定常領域と同一の参照ＩｇＭ重鎖定常領域に比べて、１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を有するバリアントヒトＩｇＭ定常領域を含み、結合分子は、対象動物に投与された際に、参照ＩｇＭ重鎖定常領域を含み且つ同じ動物種に同じ手法で投与される多量体結合分子に比べて、増加した血清半減期を示す。ある特定の実施形態において、バリアントＩｇＭ重鎖定常領域は、配列番号２２または配列番号２３の野生型ヒトＩｇＭ定常領域のアミノ酸Ｅ３４５Ａ、Ｓ４０１Ａ、Ｅ４０２Ａ、またはＥ４０３Ａに相当する、１つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。
本開示は、提供される結合分子を含む組成物（例えば、医薬組成物）をさらに提供する。
本開示は、提供される結合分子のポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドも提供する。
ある特定の実施形態において、ポリペプチドサブユニットは、ＩｇＭまたはＩｇＭ様の重鎖定常領域と、結合分子の結合ユニット関連抗原結合ドメインの少なくとも抗体ＶＨ部分とを含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチドサブユニットは、ＶＨのＣ末端に融合しているヒトＩｇＭ定常領域またはその断片を含み、当該ＶＨは、（ａ）配列番号３２、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９６、配列番号９８、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０７、配列番号１０９、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５、もしくは配列番号１１７を含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＨアミノ酸配列中に含有されるＣＤＲを含むか、または、ＨＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１つもしくは２つの単一アミノ酸置換を除いて、配列番号３２、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９６、配列番号９８、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０７、配列番号１０９、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５、もしくは配列番号１１７を含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＨアミノ酸配列中に含有されるＣＤＲを含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３領域、あるいは、（ｂ）配列番号３２、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９６、配列番号９８、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０７、配列番号１０９、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５、または配列番号１１７を含むかまたはそれらの内に含有される成熟ＶＨアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、ポリペプチドサブユニットは、軽鎖定常領域と、多量体結合分子の抗原結合ドメインの抗体ＶＬ部分とを含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチドサブユニットは、ＶＬのＣ末端に融合しているヒトκもしくはλ軽鎖定常領域またはその断片を含み、当該ＶＬは、（ａ）配列番号３３、配列番号３８、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、もしくは配列番号１１８を含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＬアミノ酸配列中に含有されるＣＤＲを含むか、または、ＬＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１つもしくは２つの単一アミノ酸置換を除いて、配列番号３３、配列番号３８、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、もしくは配列番号１１８のＶＬアミノ酸配列中に含有されるＣＤＲを含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３領域；あるいは、（ｂ）配列番号３３、配列番号３８、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、または配列番号１１８を含むかまたはそれらの内に含有される成熟ＶＬアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、ポリペプチドサブユニットは改変Ｊ鎖を含み、改変Ｊ鎖は、野生型Ｊ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントと、免疫エフェクター細胞に特異的に結合するＪ鎖関連抗原結合ドメインとを含む。ある特定の実施形態において、改変Ｊ鎖は、配列番号１２のアミノ酸２０～４２０、配列番号１５のアミノ酸２０～４１２、または配列番号１６のアミノ酸２３～４１５に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。
本開示は、前述のポリヌクレオチドのうちの２つ以上を含む組成物をさらに提供する。ポリヌクレオチドは、２つ以上の分離したベクターまたは単一ベクター上に位置し得る。かかるベクターも提供される。
本開示は、１つまたは複数の提供されるポリヌクレオチドまたは提供されるベクターを含む宿主細胞を提供し、当該宿主細胞は、提供される結合分子またはそのサブユニットを発現することができる。本開示は、提供される結合分子を製造する方法を提供し、当該方法は、宿主細胞を培養する工程、及び次いで結合分子を回収する工程を含む。
本開示は、がんまたは他の悪性腫瘍を治療する方法を提供し、当該方法は、有効量の提供される結合分子を、がん治療を必要とする対象に投与することを含み、結合分子は、がん細胞の免疫エフェクター細胞媒介性殺傷を誘導することができる。ある特定の実施形態において、がんまたは悪性腫瘍は、血液がんまたは血液悪性腫瘍（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ細胞ＡＬＬ）、古典的ホジキンリンパ腫、有毛細胞性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、全身性肥満細胞症、または形質細胞様樹状細胞白血病）である。ある特定の実施形態において、Ｊ鎖関連抗原結合ドメインはＣＤ３εに結合し、結合分子は悪性細胞のＴ細胞媒介性殺傷を誘導する。ある特定の実施形態において、治療は、対応するＩｇＧベースの抗ＣＤ１２３抗ＣＤ３二重特異性抗体と比べて減少したサイトカイン放出をもたらす。ある特定の実施形態において、治療される対象は、ヒト対象である。
Ａ～Ｄは、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１（重鎖：配列番号３５のアミノ酸２０～５９２、軽鎖：配列番号３６のアミノ酸２１～２４０、改変Ｊ鎖、配列番号１２のアミノ酸２０～４２０）及び抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃２（重鎖：配列番号４０のアミノ酸２０～５８９、軽鎖、配列番号４１のアミノ酸２１～２３４、改変Ｊ鎖、配列番号１２のアミノ酸２０～４２０）の発現、適切なアセンブリ、及びサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による精製を示す。Ａ：非還元ゲル。Ｂ：還元ゲル。Ｃ：抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１の精製を示す、サイズ排除クロマトグラフのトレース。Ｄ：抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃２の精製を示す、サイズ排除クロマトグラフのトレース。 Ａ～Ｂは、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１（第１の重鎖：配列番号１０４、軽鎖、配列番号１０５、第２の重鎖：配列番号６）の発現、適切なアセンブリ、及びサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による精製を示す。 ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１（三角形）及び抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃２（逆三角形）がＣＤ１２３に結合することを示す。単一特異性ＩｇＧバージョンの抗ＣＤ１２３ ＩｇＧ ＃１（アスタリスク、重鎖：配列番号３４のアミノ酸２０～４６９、軽鎖、配列番号３６のアミノ酸２１～２４０）、及び抗ＣＤ１２３のＩｇＧ ＃２（星型、重鎖：配列番号３９のアミノ酸２０～４６４、軽鎖、配列番号４１のアミノ酸２１～２３４）のＣＤ１２３結合も示される。 Ａは、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１（三角形）及び抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃２（逆三角形）はＣＤ３εに結合するが、単一特異性ＩｇＧ抗ＣＤ１２３コンストラクトは結合しないことを示す。Ｂは、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１（三角形）及び抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１（白丸）のＣＤ３εへの結合を、ＥＬＩＳＡアッセイで比較する。 Ａ～Ｄは、ＥＬＩＳＡによって測定した、異なるタンパク質濃度でのＩｇＭ及びＩｇＧの二重特異性抗体のＣＤ１２３への結合を示す。Ａ：３μｇ／ｍｌのＣＤ１２３。Ｂ：１μｇ／ｍｌのＣＤ１２３。Ｃ：０．３３μｇ／ｍｌのＣＤ１２３。及びＤ：０．１１μｇ／ｍｌのＣＤ１２３。 様々なＡＭＬ細胞株の表面上で発現されるＣＤ１２３の定量化を示す。 フローサイトメトリーによる、３つの異なるＡＭＬ細胞株（ｋｇ－１ａ、ＭＯＬＭ－１３、及びＭＶ４－１１）及び１つのバーキットリンパ腫細胞株Ｎａｍａｌｗａ（ＣＤ１２３陰性）への抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１の結合を示す。上段：対照抗ＣＤ１２３抗体７Ｇ３。下段：抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃３、及び抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃４。 Ａ～Ｃは、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１の存在における、ＣＤ１２３を発現するＡＭＬ細胞株ＴＨＰ－１（Ａ）及びＭＶ４－１１（Ｂ）のＴ細胞依存性殺傷、そしてＮａｍａｌｗａ細胞（ＣＤ１２３を発現しない）が殺傷されなかったこと（Ｃ）を示す。 ＭＶ４－１１細胞のＴＤＣＣアッセイにおいて、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１は、ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ２５活性化マーカーを促進するが、ＣＤ４＋Ｔ細胞では促進しないことを示す。 Ａ及びＢは、９６時間後のＭＶ４－１１細胞（パネルＡ）及びＴＨＰ－１細胞（パネルＢ）の汎ＴＤＣＣアッセイにおいて、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１（三角形）及び抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１（白丸）を比較する。白丸：抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１。黒三角形：抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１。 Ａ～Ｄは、ＭＶ４－１１細胞のＴＤＣＣアッセイにおける、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１と抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１との間のサイトカイン放出の比較を示す。Ａ：インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）放出。Ｂ：インターロイキン－６（ＩＬ－６）放出。Ｃ：ＴＮＦα放出。Ｄ：インターロイキン－１０（ＩＬ１０）放出。 Ａ～Ｄは、ＴＨＰ－１細胞のＴＤＣＣアッセイにおける、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１と抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１との間のサイトカイン放出の比較を示す。Ａ：インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）放出。Ｂ：インターロイキン－６（ＩＬ－６）放出。Ｃ：ＴＮＦα放出。Ｄ：インターロイキン－１０（ＩＬ１０）放出。 ＥＬＩＳＡによって測定した異なるタンパク質濃度でのＩｇＭ二重特異性抗体のＣＤ１２３への結合を示す。 ＩｇＭ二重特異性抗体のＣＤ１２３を発現するＭＶ４－１１細胞への結合を示す。 Ａ～Ｂは、様々なＣＤ１２３結合ドメインを備えた抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体の存在下における、ＣＤ１２３を発現するＡＭＬ細胞株ＴＨＰ－１（Ａ）及びＰＬ２１（Ｂ）のＴ細胞依存性殺傷を示す。 Ａ～Ｂは、様々なＣＤ３結合ドメインを備えた抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体の存在下における、ＣＤ１２３を発現するＡＭＬ細胞株ＴＨＰ－１（Ａ）及びＰＬ２１（Ｂ）のＴ細胞依存性殺傷を示す。 様々なＣＤ３結合ドメイン及びＪ鎖を備えた抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体の存在下における、ＣＤ１２３を発現するＡＭＬ細胞株ＭＶ４－１１のＴ細胞依存性殺傷を示す。 Ａ～Ｆは、Ｔ細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞（Ａ～Ｃ）またはＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｄ～Ｆ）である場合の、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭまたはＩｇＧの抗体により処理した細胞について、もたらされる腫瘍生存率（Ａ、Ｄ）、Ｔ細胞増殖（Ｂ、Ｅ）、及びＴ細胞活性化（Ｃ、Ｆ）を示す。 Ａ～Ｅは、サイトカインのインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）（Ａ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）（Ｂ）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）（Ｃ）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）（Ｄ）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）（Ｅ）についてのＴＤＣＣアッセイでの、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ抗体と抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体との間のサイトカイン放出の比較を示す。 図１９－１の説明を参照。
詳細な説明
定義
「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体という用語は、１つまたは複数のその実体を指すことに留意されたい。例えば、「１つの結合分子（ａ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」は、１つまたは複数の結合分子を表わすように理解される。それゆえ、「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１つまたは複数の」、及び「少なくとも１つの」という用語は、本明細書において互換的に使用され得る。
さらに、「及び／または」は、本明細書において使用される場合に、他のものが有りまたは無しの２つの指定された特色または構成要素の各々の具体的な開示と見なされる。したがって、「及び／または」という用語は、本明細書において「Ａ及び／またはＢ」等の表現中で使用される場合、Ａ及びＢ、ＡまたはＢ、Ａ（単独）、ならびにＢ（単独）を包含することが意図される。同様に、「及び／または」という用語は、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」等の表現中で使用される場合、以下の実施形態の各々、すなわちＡ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）を網羅することが意図される。
別段定義されない限り、本明細書において使用される技術用語及び科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって共通して理解されるものと同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；ａｎｄ ｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示において使用される用語の多くについての全般的な辞書を当業者に提供する。
単位、接頭語、及び記号は、Ｓｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）で容認された形態で表わされる。数値範囲は、当該範囲を定義する数を含む。別段の指示のない限り、アミノ酸配列は、アミノからカルボキシの方向で左から右に記載される。本明細書において提供される見出しは、様々な実施形態または本開示の実施形態の限定ではなく、それらは、全体として本明細書への参照により含められ得る。したがって、直後で定義される用語は、本明細書を全体で参照することによってより完全に定義される。
本明細書において使用される場合、「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」という用語は、単数形の「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」及び複数形の「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ）」を包含することが意図されており、アミド結合（ペプチド結合としても知られる）によって直線的に連結されている単量体（アミノ酸）から構成される分子を指す。「ポリペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸の任意の鎖を指し、産物の特定の長さを指さない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、または２つ以上のアミノ酸の鎖を指すために使用される他の用語は、「ポリペプチド」の定義内に含まれ、「ポリペプチド」という用語は、これらの用語のうちの任意のものの代わりに、またはそれらと互換的に使用され得る。「ポリペプチド」という用語は、ポリペプチドの発現後修飾の産物も指すように意図され、当該発現後修飾としては、糖鎖付加、アセチル化、リン酸化、アミド化、及び公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質溶解性切断、または天然に存在しないアミノ酸による修飾が限定されずに挙げられる。ポリペプチドは、生物学的供給源に由来し得るか、または組み換え技術によって作製され得るが、指定された核酸配列から必ずしも翻訳されない。ポリペプチドは、化学合成によるものを包含する任意の様式で生成され得る。
ポリペプチドは、本明細書において開示される場合、約３個以上、５個以上、１０個以上、２０個以上、２５個以上、５０個以上、７５個以上、１００個以上、２００個以上、５００個以上、１，０００個以上、または２，０００個以上のアミノ酸のサイズであり得る。ポリペプチドは定義された三次元構造を有し得るが、必ずしもかかる構造を有していない。定義された三次元構造を備えたポリペプチドは、折りたたまれている、と称され、定義された三次元構造を保持しないが、むしろ多数の異なる立体配座を採用し得るポリペプチドは、折りたたまれていない、と称される。本明細書において使用される場合、糖タンパク質という用語は、アミノ酸（例えば、セリンまたはアスパラギン）の酸素含有側鎖または窒素含有側鎖を介してタンパク質に付加された少なくとも１つの炭水化物部分に結合しているタンパク質を指す。
「単離された」ポリペプチド、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体は、その天然環境中にないポリペプチドが意図される。特定の精製レベルは要求されない。例えば、単離されたポリペプチドは、その本来の環境または天然環境から取り出され得る。宿主細胞において発現した組み換え産生されたポリペプチド及びタンパク質は、本明細書において開示される場合、単離されており、任意の好適な技法によって分離、分画、または部分的もしくは実質的に精製された、天然のポリペプチドまたは組み換えポリペプチドであるとみなされる。
本明細書において使用される場合、「天然に存在しないポリペプチド」という用語またはその任意の文法的な変形は、「天然に存在する」ポリペプチドである形態、あるいは「天然に存在する」と裁判官または行政機関もしくは裁判機関によって決定または解釈され得るポリペプチドの形態を明示的に除外し、但しこのような形態のみを除外する、条件付き定義である。
本明細書において開示される他のポリペプチドは、前述のポリペプチドの断片、誘導体、類似体、またはバリアント、及びそれらの任意の組み合わせである。「断片」、「バリアント」、「誘導体」、及び「類似体」という用語は、本明細書において開示される場合、対応するネイティブの抗体またはポリペプチドの特性のうちの少なくともいくつか（例えば、抗原に特異的に結合すること）を保持する、任意のポリペプチドを包含する。ポリペプチドの断片としては、例えばタンパク質分解断片、そして欠失断片に加えて、本明細書の他の箇所で検討される特異的抗体断片が挙げられる。例えばポリペプチドのバリアントとしては、上で記載される断片、及びアミノ酸の置換、欠失、または挿入に起因して変更されたアミノ酸配列を備えたポリペプチドが挙げられる。ある特定の実施形態において、バリアントは、天然に存在しないものであり得る。天然に存在しないバリアントは、当技術分野で公知の変異誘発技法を使用して作製され得る。バリアントポリペプチドは、保存的または非保存的なアミノ酸の置換、欠失、または付加を含み得る。誘導体は、元のポリペプチド上で見出されない追加の特色を示すように変更されたポリペプチドである。例としては、融合タンパク質が挙げられる。バリアントポリペプチドは、本明細書において「ポリペプチド類似体」として言及され得る。本明細書において使用される場合、ポリペプチドの「誘導体」は、官能性側基の反応によって化学的に誘導体化された１つまたは複数のアミノ酸を有する対象ポリペプチドも指し得る。２０の標準アミノ酸の１つまたは複数の誘導体を含有するペプチドも、「誘導体」として包含される。例えば、４－ヒドロキシプロリンはプロリンを置換することができ、５－ヒドロキシリシンはリジンを置換することができ；３－メチルヒスチジンはヒスチジンを置換することができる。ホモセリンはセリンを置換することができる。オルニチンはリジンを置換することができる。
「保存的アミノ酸置換」とは、類似する側鎖を有する別のアミノ酸により１つのアミノ酸が置き換えられることである。類似する側鎖を有するアミノ酸のファミリーは、当技術分野において定義され、当該類似する側鎖としては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電性極性側鎖（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。例えば、チロシンをフェニルアラニンで置換することは、保存的置換である。ある特定の実施形態において、本開示のポリペプチド及び抗体の配列中の保存的置換は、アミノ酸配列を含有するポリペプチドまたは抗体が、抗原（抗体が結合する）へ、結合することを無効にしない。抗原結合を消失させないヌクレオチド及びアミノ酸の保存的置換を同定する方法は、当技術分野において周知である（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０－１１８７（１９９３）、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９－８８４（１９９９）、及びＢｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：．４１２－４１７（１９９７）を参照）。
「ポリヌクレオチド」という用語は、単一の核酸そして複数の核酸を網羅するように意図され、単離された核酸分子またはコンストラクト（例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ｃＤＮＡ、またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ））を指す。ポリヌクレオチドは、従来のホスホジエステル結合または従来のものではない結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）中で見出されるもの等のアミド結合）を含み得る。「核酸」または「核酸配列」という用語は、ポリヌクレオチド中に存在する任意の１つまたは複数の核酸セグメント（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ断片）を指す。
「単離された」核酸またはポリヌクレオチドは、その天然の環境から分離された核酸またはポリヌクレオチドの任意の形態が意図される。例えば、ゲル精製されたポリヌクレオチド、またはベクター中に含有されるポリペプチドをコードする組み換えポリヌクレオチドは、「単離された」とみなされるであろう。また、クローニングのための制限部位を有するように操作されたポリヌクレオチドセグメント（例えば、ＰＣＲ産物）は、「単離された」とみなされる。単離されたポリヌクレオチドのさらなる例としては、異種宿主細胞中で維持された組み換えポリヌクレオチド、または非天然溶液（バッファーまたは塩類溶液等）中の精製された（部分的または実質的に）ポリヌクレオチドが挙げられる。単離されたＲＮＡ分子としては、その転写物が天然で見出されるものではない、ポリヌクレオチドのインビボまたはインビトロのＲＮＡ転写物が挙げられる。単離されたポリヌクレオチドまたは核酸としては、合成により作製されたかかる分子がさらに挙げられる。加えて、ポリヌクレオチドまたは核酸は、調節エレメント（プロモーター、リボソーム結合部位、または転写ターミネーター等）であり得るか、またはこれらを含み得る。
本明細書において使用される場合、「天然に存在しないポリヌクレオチド」という用語またはその任意の文法的な変化形は、「天然に存在する」核酸またはポリヌクレオチドである形態、あるいは「天然に存在する」と裁判官または行政機関もしくは裁判機関によって決定または解釈され得る核酸またはポリヌクレオチドの形態を明示的に除外し、但しこのような形態のみを除外する、条件付き定義である。
本明細書において使用される場合、「コード領域」は、アミノ酸へと翻訳されるコドンからなる核酸の部分である。「終止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、またはＴＡＡ）は、アミノ酸へと翻訳されないが、コード領域の一部分とみなすことができる。しかし任意の隣接配列（例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロン、及び同種のもの）は、コード領域の一部分ではない。２つ以上のコード領域は、単一ポリヌクレオチドコンストラクト（例えば、単一ベクター上）、または分離したポリヌクレオチドコンストラクト（例えば、分離した（異なる）ベクター上）中に存在し得る。さらに、任意のベクターは、単一のコード領域を含有することができるか、または２つ以上のコード領域を含むことができ、例えば単一ベクターは、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を別々にコードし得る。加えて、ベクター、ポリヌクレオチド、または核酸は、別のコード領域へ融合されるか、または融合されずに、異種コード領域を含み得る。異種コード領域としては、特殊化されたエレメントまたはモチーフ（分泌シグナルペプチドまたは異種の機能的ドメイン等）をコードするものが、限定されずに挙げられる。
ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドまたは核酸は、ＤＮＡである。ＤＮＡの場合、ポリペプチドをコードする核酸を含むポリヌクレオチドは通常、１つまたは複数のコード領域と作動可能に連結された、プロモーター及び／または他の転写もしくは翻訳の制御エレメントを含み得る。作動可能な連結とは、遺伝子産物（例えば、ポリペプチド）についてのコード領域が、調節配列の影響または制御下で遺伝子産物を発現させるような様式で、１つまたは複数の調節配列と連結された場合である。２つのＤＮＡ断片（ポリペプチドコード領域、及びそれと連結されたプロモーター等）は、プロモーター機能の誘導が、所望される遺伝子産物をコードするｍＲＮＡの転写をもたらすならば、且つ、２つのＤＮＡ断片の間のリンケージの性質が、発現調節配列が遺伝子産物の発現を指令する能力を妨害しないか、またはＤＮＡ鋳型が転写される能力を妨害しないならば、「作動可能に連結されている」。したがって、プロモーターがその核酸の転写を成し遂げることが可能なならば、プロモーター領域はポリペプチドをコードする核酸と作動可能に連結されているだろう。プロモーターは、所定の細胞におけるＤＮＡの実質的な転写を指令する細胞特異的なプロモーターであり得る。プロモーター以外の他の転写制御エレメント（例えば、エンハンサー、オペレーター、リプレッサー、及び転写終結シグナル）が、細胞特異的転写を指令するようにポリヌクレオチドと作動可能に連結され得る。
様々な転写制御領域が当業者に公知である。これらの転写制御領域としては、サイトメガロウイルス（イントロン－Ａと併用した最初期プロモーター）、シミアンウイルス４０（初期プロモーター）、及びレトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス等）からのプロモーター及びエンハンサーのセグメント等であるがこれらに限定されない、脊椎動物細胞中で機能する転写制御領域が、限定されずに挙げられる。他の転写制御領域としては、脊椎動物遺伝子に由来するもの（アクチン、熱ショックタンパク質、ウシ成長ホルモン、及びウサギβ－グロビン等）、そして真核生物細胞中で遺伝子発現を制御することが可能な他の配列が挙げられる。追加の好適な転写制御領域としては、組織特異的プロモーター及びエンハンサー、そしてリンホカイン誘導可能プロモーター（例えば、インターフェロンまたはインターロイキンによって誘導可能プロモーター）が挙げられる。
同様に、様々な翻訳制御エレメントが当業者に公知である。これらの翻訳制御エレメントとしては、リボソーム結合部位、翻訳開始コドン及び翻訳終結コドン、ならびにピコルナウイルスに由来するエレメント（特に内部リボソーム進入部位またはＩＲＥＳ、ＣＩＴＥ配列とも称される）が挙げられるがこれらに限定されない。
他の実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡ、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、またはリボソームＲＮＡの形態であり得る。
ポリヌクレオチド及び核酸のコード領域は、本明細書において開示されるポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの分泌物を指令する、分泌ペプチドまたはシグナルペプチドをコードする追加のコード領域と連結され得る。シグナル仮説によれば、哺乳動物細胞によって分泌されるタンパク質は、シグナルペプチドまたは分泌リーダー配列を有し、それは、一旦粗面小胞体を横切って成長するタンパク鎖の搬出が開始されたならば、成熟タンパク質から切断される。当業者は、脊椎動物細胞によって分泌されるポリペプチドが、ポリペプチドのＮ末端に融合しているシグナルペプチドを有し得、当該シグナルペプチドが完成したペプチドまたは「全長」ポリペプチドから切断されて、ポリペプチドの分泌形態または「成熟」形態を生成することを承知している。ある特定の実施形態において、天然のシグナルペプチド（例えば、免疫グロブリンの重鎖または軽鎖のシグナルペプチド）または配列と作動可能に連結されているポリペプチドの分泌を指令する能力を保持するその配列の機能的誘導体が使用される。代替的に、異種の哺乳動物シグナルペプチドまたはその機能的誘導体が使用され得る。例えば、野生型リーダー配列が、ヒト組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）またはマウスβ－グルクロニダーゼのリーダー配列に置換され得る。
本明細書において使用される場合、「結合分子」という用語は、その最も幅広い意味で、結合標的（例えば、エピトープまたは抗原決定基）に特異的に結合する分子を指す。本明細書においてさらに記載されるように、結合分子は、本明細書に記載されている１つまたは複数の「抗原結合ドメイン」を含み得る。抗原特異的結合を保持する結合分子の非限定的例は、本明細書において詳細に記載されるような抗体または抗体様分子である。ある特定の実施形態において、「結合分子」は、本明細書において詳細に記載されるような抗体または抗体様分子を含む。
本明細書において使用される場合、「結合ドメイン」または「抗原結合ドメイン」（互換的に使用され得る）という用語は、結合分子（例えば、抗体または抗体様分子）の、結合標的（例えば、エピトープ）に特異的に結合するのに必要且つ十分な領域を指す。例えば、「Ｆｖ」（例えば、２つの別個のポリペプチドサブユニットまたは一本鎖のいずれかとしての、抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）は、「結合ドメイン」であるとみなされる。他の抗原結合ドメインとしては、ラクダ科の動物種に由来する抗体の重鎖可変領域（ＶＨＨ）、または足場（例えば、フィブロネクチン足場）中で発現する６つの免疫グロブリン相補性決定領域（ＣＤＲ）が、限定されずに挙げられる。本明細書に記載されている「結合分子」または「抗体」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２個、またはよりさらに多くの「抗原結合ドメイン」を含み得る。本明細書において使用される場合、「結合ユニット関連抗原結合ドメイン」は、抗体重鎖及び／または抗体軽鎖の一部分である抗原結合ドメインを指す。「Ｊ鎖関連抗原結合ドメイン」という用語は、本明細書に記載されている改変Ｊ鎖に連結されている抗原結合ドメイン（例えば、野生型ヒトＪ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントに融合しているｓｃＦｖ）を指す。
「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は、本明細書において互換的に使用され得る。抗体（または本明細書において開示される、その断片、バリアント、もしくは誘導体）は、少なくとも重鎖の可変ドメイン（ラクダ科の動物種の場合）または少なくとも重鎖及び軽鎖の可変ドメインを含む。脊椎動物系における基本的な免疫グロブリン構造は、比較的良好に理解されている。例えばＨａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）を参照されたい。別段明記されない限り、「抗体」という用語は、抗体の小さな抗原結合断片からフルサイズの抗体（例えば、２つの完全な重鎖及び２つの完全な軽鎖を含む、ＩｇＧ抗体；４つの完全な重鎖及び４つの完全な軽鎖を含み、且つ任意選択でＪ鎖及び／または分泌成分を含む、ＩｇＡ抗体；あるいは１０個または１２個の完全な重鎖及び１０個または１２個の完全な軽鎖を含み、且つ任意選択でＪ鎖またはその機能的断片を含む、ＩｇＭ抗体）の範囲のものを全て網羅する。
「免疫グロブリン」という用語は、生化学的に区別され得る様々な幅広いクラスのポリペプチドを含む。当業者は、重鎖がガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）として分類され、それらの中でいくつかのサブクラス（例えば、γ１～γ４またはα１～α２）が有ることを認識するだろう。この鎖の性質が、抗体の「アイソタイプ」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとして決定する。免疫グロブリンサブクラス（サブタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２などは、十分に特徴づけられており、機能的な特殊化を付与することが公知である。これらの免疫グロブリンの各々の改変バージョンは、本開示を考慮して当業者に容易に認識可能であり、したがって本開示の範囲内である。
軽鎖は、カッパまたはラムダ（κ、λ）のいずれかとして分類される。各々の重鎖クラスは、κ軽鎖またはλ軽鎖のいずれかと結合され得る。概して、軽鎖及び重鎖は互いに共有結合され、免疫グロブリンが、例えばハイブリドーマ、Ｂ細胞、または遺伝子操作宿主細胞によって発現される場合に、２つの重鎖の「テール」部分は、共有結合性のジスルフィド結合または非共有結合性の連結によって互いに結合される。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙの立体配置の分岐した端部のＮ末端から、各々の鎖の下部のＣ末端まで延びる。ある特定の抗体（例えば、ＩｇＧ抗体）の基本的な構造は、ジスルフィド結合を介して共有結合で接続されて「Ｙ」の構造を形成する、２つの重鎖サブユニット及び２つの軽鎖サブユニットを含み、本明細書において「Ｈ２Ｌ２」構造または「結合ユニット」とも称される。
「結合ユニット」という用語は、本明細書において、標準的な「Ｈ２Ｌ２」免疫グロブリン構造（例えば、２つの重鎖またはその断片及び２つの軽鎖またはその断片）に対応する結合分子の部分（例えば、抗体、抗体様分子、それらの抗原結合断片、またはそれらの多量体化断片）を指すように使用される。ある特定の実施形態において、結合ユニットは、例えばラクダ科動物の抗体において、２つの重鎖に対応し得る。ある特定の実施形態において、例えば結合分子が二価のＩｇＧ抗体またはその抗原結合断片である場合に、「結合分子」及び「結合ユニット」という用語は等価である。他の実施形態において、例えば結合分子が多量体（例えば、二量体のＩｇＡ抗体もしくはＩｇＡ様抗体、五量体のＩｇＭ抗体もしくはＩｇＭ様抗体、または六量体のＩｇＭ抗体もしくはＩｇＭ様抗体）である場合に、結合分子は２つ以上の「結合ユニット」を含む。ＩｇＡ二量体の場合には２つ、ＩｇＭの五量体または六量体の場合にはそれぞれ５つまたは６つである。結合ユニットは、全長抗体の重鎖及び軽鎖を含む必要はないが、典型的には二価であり、すなわち上で定義されているような２つの「抗原結合ドメイン」を含むだろう。本明細書において使用される場合、本開示において提供されるある特定の結合分子は「二量体」であり、ＩｇＡ定常領域またはその多量体化断片を含む、２つの二価結合ユニットを含む。本開示において提供されるある特定の結合分子は「五量体」または「六量体」であり、ＩｇＭ定常領域またはその多量体化断片を含む、５つまたは６つの二価結合ユニットを含む。２つ以上の（例えば、２つ、５つ、または６つの）結合ユニットを含む結合分子（例えば、抗体または抗体様分子）は、本明細書において、「多量体である」と称される。
「Ｊ鎖」という用語は、本明細書において使用される場合、任意の動物種の天然配列のＩｇＭまたはＩｇＡ抗体のＪ鎖、任意のそれらの機能的断片、それらの誘導体、及び／またはそれらのバリアントを指し、アミノ酸配列が配列番号２として提示される成熟ヒトＪ鎖が挙げられる。様々なＪ鎖バリアント及び改変Ｊ鎖誘導体が、本明細書において開示される。当業者は、「機能的断片」または「機能的バリアント」は、ＩｇＭ重鎖定常領域と結合して五量体ＩｇＭ抗体を形成し得る（または代替的にＩｇＡ重鎖定常領域と結合して二量体ＩｇＡ抗体を形成し得る）それらの断片及びバリアントを包含することを認識するだろう。
「改変Ｊ鎖」という用語は、本明細書において、異種部分（例えば、異種ポリペプチド、例えば天然配列に導入される外来性結合ドメイン）を含む、天然配列Ｊ鎖ポリペプチドの誘導体を指すように使用される。導入は、異種ポリペプチドもしくは他の部分の直接的もしくは間接的な融合またはペプチドもしくは化学的リンカーを介する付加を包む、任意の手段によって達成され得る。「改変ヒトＪ鎖」という用語は、異種部分（例えば、異種ポリペプチド、例えば外来性結合ドメイン）の導入によって改変された、配列番号２のアミノ酸配列を含む天然配列ヒトＪ鎖またはその機能的断片もしくはその機能的バリアントを、非限定的に包含する。ある特定の実施形態において、異種部分は、ＩｇＭの五量体への効率的な重合、及びかかるポリマーの標的への結合を妨害しない。例示的な改変Ｊ鎖は、例えば米国特許第９，９５１，１３４号及び同１０，６１８，９７８号、米国特許出願公開第ＵＳ－２０１９－０１８５５７０号（それらの各々は、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）中に見出され得る。
本明細書において使用される場合、「ＩｇＭ由来結合分子」、「ＩｇＭ様抗体」、「ＩｇＭ様結合ユニット」、または「ＩｇＭ様重鎖定常領域」という用語は、多量体（すなわち六量体）を形成する能力またはＪ鎖と結合して五量体を形成する能力を付与するのに必要なＩｇＭ重鎖の構造的部分を依然として保持する、バリアント抗体由来の、結合分子、抗体、結合ユニット、または重鎖定常領域を指す。ＩｇＭ様抗体またはＩｇＭ由来結合分子は、典型的には、ＩｇＭ定常領域の少なくともＣμ４及びテールピース（ｔｐ）ドメインを含むが、同じ種または異なる種からの他の抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ）からの重鎖定常領域ドメインを含み得る。ＩｇＭ様抗体またはＩｇＭ由来結合分子は同様に、ＩｇＭ様抗体が六量体及び／または五量体を形成することが可能である限り、１つまたは複数の定常領域を欠失している抗体断片であり得る。したがって、ＩｇＭ様抗体またはＩｇＭ由来結合分子は、例えばハイブリッドＩｇＭ／ＩｇＧ抗体であり得るか、またはＩｇＭ抗体の「多量体化断片」であり得る。
本明細書において使用される場合、「ＩｇＡ由来結合分子」、「ＩｇＡ様抗体」、「ＩｇＡ様結合ユニット」、または「ＩｇＡ様重鎖定常領域」という用語は、Ｊ鎖と結合して多量体（すなわち二量体）を形成する能力を付与するのに必要なＩｇＡ重鎖の構造的部分を依然として保持する、バリアント抗体由来の、結合分子、抗体、結合ユニット、または重鎖定常領域を指す。ＩｇＡ様抗体またはＩｇＡ由来結合分子は、典型的には、ＩｇＡ定常領域の少なくともＣμ３及びテールピース（ｔｐ）ドメインを含むが、同じ種または異なる種からの他の抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ）からの重鎖定常領域ドメインを含み得る。ＩｇＡ様抗体またはＩｇＡ由来結合分子は同様に、ＩｇＡ様抗体がＪ鎖と結合して二量体を形成することが可能である限り、１つまたは複数の定常領域を欠失している抗体断片であり得る。したがって、ＩｇＡ様抗体またはＩｇＡ由来結合分子は、例えばハイブリッドＩｇＡ／ＩｇＧ抗体であり得るか、またはＩｇＡ抗体の「多量体化断片」であり得る。
「価数」、「二価」、「多価」という用語、及び文法上の同等語は、所与の結合分子（例えば、抗体または抗体様分子）または所与の結合ユニット中の抗原結合ドメインの数を指す。それゆえ、所与の結合分子（例えば、ＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、それらの多量体化断片）を参照した「二価」、「四価」、及び「六価」という用語は、それぞれ２つの抗原結合ドメイン、４つの抗原結合ドメイン、及び６つの抗原結合ドメインの存在を表わす。各結合ユニットが二価である典型的なＩｇＭ抗体、またはＩｇＭ様抗体もしくはＩｇＭ由来結合分子は、１０または１２の価数を有し得る。二価または多価の結合分子（例えば、抗体または抗体様分子）は、単一特異性であり得る（すなわち抗原結合ドメインの全ては同じである）か、または二重特異性または多重特異性であり得る（例えば、２つ以上の抗原結合ドメインが異なる場合に、例えば同じ抗原上の異なるエピトープに結合するか、または完全に異なる抗原に結合する）。
「エピトープ」という用語は、抗体または抗体様分子の抗原結合ドメインへの特異的結合ができる任意の分子的決定基を含む。ある特定の実施形態において、エピトープは、分子の化学的活性表面基群（アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニル等）を含むことができ、ある特定の実施形態において、三次元構造の特徴及び／または特異的電荷の特徴を有し得る。エピトープは、抗体の抗原結合ドメインによって結合される標的の領域である。
「標的」という用語は、結合分子（例えば、抗体または抗体様分子）によって結合され得る物質を包含するように、最も幅広い意味で使用される。標的は、例えばポリペプチド、核酸、炭水化物、脂質、または他の分子であり得る。さらに、「標的」は、結合分子（例えば、抗体または抗体様分子）によって結合され得るエピトープを含む、例えば細胞、器官、または生物体であり得る。
軽鎖及び重鎖の両方は、構造的相同性及び機能的相同性の領域へと分類される。「定常」及び「可変」という用語は、機能的に使用される。軽鎖（ＶＬ）及び重鎖（ＶＨ）の両方の可変領域は、抗原認識及び特異性を決定する。これとは逆に、軽鎖（ＣＬ）及び重鎖の定常ドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはＣＨ４）は、生物学的特性（分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合等）を付与する。慣例により、定常領域ドメインのナンバリングは、定常領域ドメインが抗体の抗原結合部位またはアミノ末端からより遠位になるにつれて増加する。Ｎ末端部分は可変領域であり、Ｃ末端部分は定常領域であり、ＣＨ３（またはＩｇＭの場合はＣＨ４）及びＣＬドメインは、実際にそれぞれ重鎖及び軽鎖のカルボキシ末端を含む。
「全長ＩｇＭ抗体重鎖」は、Ｎ末端からＣ末端への方向で、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体重鎖定常ドメイン１（ＣＭ１またはＣμ１）、抗体重鎖定常ドメイン２（ＣＭ２またはＣμ２）、抗体重鎖定常ドメイン３（ＣＭ３またはＣμ３）、及びテールピースを含み得る抗体重鎖定常ドメイン４（ＣＭ４またはＣμ４）を含む、ポリペプチドである。
上記のように、可変領域は、結合分子（例えば、抗体または抗体様分子）が抗原上のエピトープを選択的に認識して、それと特異的に結合することを可能にする。すなわち、結合分子（例えば、抗体または抗体様分子）のＶＬドメイン及びＶＨドメイン、または相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットが組み合わされて抗原結合ドメインを形成する。より具体的には、抗原結合ドメインは、ＶＨ鎖及びＶＬ鎖の各々における３つのＣＤＲによって定義され得る。ある特定の抗体は、より大きな構造を形成する。例えば、ＩｇＡは、ジスルフィド結合により共有結合で接続された２つのＨ２Ｌ２結合ユニット及び１つのＪ鎖を含む分子を形成することができ、当該分子はさらに分泌成分と連結されることができ、ＩｇＭは、ジスルフィド結合により共有結合で接続された５つまたは６つのＨ２Ｌ２結合ユニット及び任意選択で１つのＪ鎖を含む、五量体または六量体の分子を形成することができる。
抗体抗原結合ドメイン中に存在する６つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、短い連続していないアミノ酸の配列であり、抗体が水性環境中でその三次元立体配置をとる時に抗原結合ドメインを形成するように特異的に配置される。抗原結合ドメイン中の残りのアミノ酸は「フレームワーク」領域と称され、より少ない分子間の変動を示す。フレームワーク領域は主としてβ－シート立体配座を採用し、ＣＤＲは、β－シート構造を接続するループを形成し、いくつかの事例において当該ループはβ－シート構造の一部分を形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合性相互作用によってＣＤＲを正しい方向で配置させることを提供する足場を形成するように作用する。配置されたＣＤＲによって形成された抗原結合ドメインは、標的抗原上のエピトープに相補的な表面を画成する。この相補的な表面は、抗体がその同族のエピトープの非共有結合的に結合することを促進させる。ＣＤＲ及びフレームワーク領域をそれぞれ構成するアミノ酸は、様々な異なる手法で定義されているので、任意の与えられた重鎖または軽鎖の可変領域について当業者によって容易に特定され得る（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｋａｂａｔ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，（１９８３）；及びＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照、それらは、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）。
当該技術分野内で使用される及び／または許容される用語の定義が２つ以上のある事例において、本明細書において使用される用語の定義は、相反することが明示的に述べられない限り、かかる意味を全て含むように意図される。具体的な例は、重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内で見出される連続していない抗原結合部位を記載する、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）という用語の使用である。これらの特定の領域は、例えばＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）（それらは参照することによって本明細書に援用される）によって記載された。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの定義は、互いに比較した場合に、アミノ酸のオーバーラップまたはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体またはそのバリアントのＣＤＲを指す、いずれかの定義（または当業者に公知の他の定義）の適用も、別段の指示のない限り、本明細書において定義及び使用される用語の範囲内であることが意図される。上で引用される参照の各々によって定義されるＣＤＲを網羅する適切なアミノ酸が、比較として、表１中で以下に示される。特定のＣＤＲを網羅する正確なアミノ酸番号は、ＣＤＲの配列及びサイズに依存して変動するだろう。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列を考慮して、どのアミノ酸が特定のＣＤＲを構成するかをルーチンに決定することができる。
（表１）ＣＤＲの定義*
Figure 2022545655000002
*表１中の全てのＣＤＲ定義のナンバリングは、Ｋａｂａｔらによって示されるナンバリング慣例に従う（以下参照）。
抗体可変ドメインは、ＣＤＲを含む可変領域セグメントを特定するために、例えばＩＭＧＴ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（ｉｍｇｔ＿ｄｏｔ＿ｃｉｎｅｓ＿ｄｏｔ＿ｆｒ／）（ＩＭＧＴ（登録商標）／Ｖ－Ｑｕｅｓｔ）を使用しても分析され得る（例えば、Ｂｒｏｃｈｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３６：Ｗ５０３－５０８，２００８を参照）。
Ｋａｂａｔらは、任意の抗体へ適用可能な可変領域及び定常領域の配列についてのナンバリングシステムも定義した。当業者は、配列それ自体を超えて任意の実験データに頼ること無しに、「Ｋａｂａｔのナンバリング」のこのシステムを、任意の可変領域配列に明確に割り当てることができる。本明細書において使用される場合、「Ｋａｂａｔのナンバリング」は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）によって示されるナンバリングシステムを指す。しかしながらＫａｂａｔのナンバリングシステムの使用が明示的に指示されない限り、本開示における全てのアミノ酸配列について、通しのナンバリングが使用される。
ヒトＩｇＭ定常ドメインについてのＫａｂａｔのナンバリングシステムは、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．“Ｔａｂｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ａｎｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ，Ｖ－Ｒｅｇｉｏｎｓ，Ｃ－Ｒｅｇｉｏｎｓ，Ｊ－Ｃｈａｉｎ，Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｇｅｎ，Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｆａｃｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ，β－２ Ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，Ｍａｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ａｎｔｉｇｅｎｓ，Ｔｈｙ－１，Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ，Ｃ－Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｔｈｙｍｏｐｏｉｅｔｉｎ，Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ，Ｐｏｓｔ－ｇａｍｍａ Ｇｌｏｂｕｌｉｎ，α－２ Ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，ａｎｄ Ｏｔｈｅｒ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，”Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）中で見出され得る。ＩｇＭ定常領域は、逐次的に（すなわちアミノ酸＃１は定常領域の第１のアミノ酸で開始する）、またはＫａｂａｔナンバリングスキームの使用によって、ナンバリングされ得る。ヒトＩｇＭ定常領域の２つの対立遺伝子の、逐次的ナンバリング（配列番号２２（対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０３）及び配列番号２３（対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０４）として本明細書において提示される）及びＫａｂａｔシステムによるナンバリングの比較は、以下に記載される。下線が引かれたアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔシステムにおいて考慮されない（以下で二重下線が引かれた「Ｘ」は、セリン（Ｓ）（配列番号２２）またはグリシン（Ｇ）（配列番号２３）であり得る）。
ＩｇＭ重鎖についての逐次的ナンバリング（配列番号２２または配列番号２３）／Ｋａｂａｔナンバリングキー
Figure 2022545655000003
結合分子（例えば、抗体、抗体様分子、抗原結合断片、それらのバリアントもしくは誘導体、及び／またはそれらの多量体化断片）としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体、一本鎖抗体、エピトープ結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖｓ、一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド連結されたＦｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＬまたはＶＨのドメインを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生された断片）が挙げられるがこれらに限定されない。ｓｃＦｖ分子は当技術分野において公知であり、例えば特許第５，８９２，０１９号中で記載される。
「特異的に結合する」は、概して、結合分子（例えば、抗体、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体）が、その抗原結合ドメインを介してエピトープに結合し、結合が、抗原結合ドメインとエピトープとの間の何らかの相補性を引き起こすことが意味される。この定義によれば、結合分子が、ランダムで無関係なエピトープに結合するよりも容易に、当該結合分子の抗原結合ドメインを介してエピトープに結合する場合に、結合分子（例えば、抗体または抗体様分子）は、そのエピトープへ「特異的に結合する」と表現される。「特異性」という用語は、本明細書において、ある特定の結合分子がある特定のエピトープに結合する相対的親和性を定性化するのに使用される。例えば、結合分子「Ａ」は、結合分子「Ｂ」よりも所与のエピトープについて高い特異性を有すると見なされ得るか、または、結合分子「Ａ」は、関連するエピトープ「Ｄ」よりも高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合すると表現され得る。
結合分子（例えば、本明細書において開示される抗体、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体）は、５×１０－２秒－１、１０－２秒－１、５×１０－３秒－１、１０－３秒－１、５×１０－４秒－１、１０－４秒－１、５×１０－５秒－１、または１０－５秒－１、５×１０－６秒－１、１０－６秒－１、５×１０－７秒－１、または１０－７秒－１以下のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で、標的抗原と結合すると表現され得る。
結合分子（例えば、本明細書において開示される抗体、または抗原結合断片、バリアント、もしくは誘導体）は、１０３Ｍ－１秒－１、５×１０３Ｍ－１秒－１、１０４Ｍ－１秒－１、５×１０４Ｍ－１秒－１、１０５Ｍ－１秒－１、５×１０５Ｍ－１秒－１、１０６Ｍ－１秒－１、または５×１０６Ｍ－１秒－１、または１０７Ｍ－１秒－１以上のオンレート（ｋ（ｏｎ））で、標的抗原と結合すると表現され得る。
結合分子（例えば、抗体、またはその断片、バリアント、または誘導体）が、参照抗体または抗原結合断片のエピトープへの結合をある程度まで遮断する程度に、そのエピトープへ優先的に結合するならば、参照抗体または抗原結合断片の所与のエピトープへの結合を競合的に阻害すると表現される。競合的阻害は、当技術分野において公知の任意の方法（例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイ）によっても決定され得る。結合分子は、参照抗体または抗原結合断片の所与のエピトープへの結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害すると表現され得る。
本明細書において使用される場合、「親和性」という用語は、１つまたは複数の抗原結合ドメイン（例えば、免疫グロブリン分子の）と個別のエピトープの結合の強度の尺度を指す。例えばＨａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）の２７～２８ページを参照されたい。本明細書において使用される場合、「アビディティー」という用語は、抗原結合ドメインの集団と抗原との間の複合体の全体的な安定性を指す。例えばＨａｒｌｏｗの２９～３４ページを参照されたい。アビディティーは、特異的エピトープと集団中の個別の抗原結合ドメインの親和性、ならびに免疫グロブリン及び抗原の価数の両方に関連する。例えば、二価モノクローナル抗体と高度に反復するエピトープ構造（ポリマー等）を備えた抗原との間の相互作用は、高いアビディティーの１つのであるだろう。二価モノクローナル抗体と細胞表面上に高密度で存在する受容体との間の相互作用も、高いアビディティーであるだろう。
結合分子（例えば、本明細書において開示される抗体、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体）は、それらの交差反応性に関しても記載または規定され得る。本明細書において使用される場合、「交差反応性」という用語は、１つの抗原について特異的な結合分子（例えば、抗体、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体）が第２の抗原と反応する能力を指し、２つの異なる抗原性物質間の相関性の尺度である。したがって、結合分子が、結合分子の形成を誘導したエピトープ以外のエピトープに結合するならば、交差反応性である。交差反応性エピトープは、概して誘導性エピトープと同じ相補的構造の特色の多くを含有し、いくつかの事例において、実際にオリジナルのものよりも良好に適合し得る。
結合分子（例えば、抗体、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体）は、それらの抗原への結合親和性に関しても記載または規定され得る。例えば、結合分子は、５×１０－２Ｍ、１０－２Ｍ、５×１０－３Ｍ、１０－３Ｍ、５×１０－４Ｍ、１０－４Ｍ、５×１０－５Ｍ、１０－５Ｍ、５×１０－６Ｍ、１０－６Ｍ、５×１０－７Ｍ、１０－７Ｍ、５×１０－８Ｍ、１０－８Ｍ、５×１０－９Ｍ、１０－９Ｍ、５×１０－１０Ｍ、１０－１０Ｍ、５×１０－１１Ｍ、１０－１１Ｍ、５×１０－１２Ｍ、１０－１２Ｍ、５×１０－１３Ｍ、１０－１３Ｍ、５×１０－１４Ｍ、１０－１４Ｍ、５×１０－１５Ｍ、または１０－１５Ｍ以下の解離定数またはＫＤで、抗原に結合し得る。
「抗原結合抗体断片」（一本鎖抗体または他の抗原結合ドメインを包含する）は、単独で、あるいは以下、すなわちヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、もしくはＣＨ４ドメイン、Ｊ鎖、または分泌成分うちの１つまたは複数と組み合わせて、存在し得る。また、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、もしくはＣＨ４ドメイン、Ｊ鎖、または分泌成分のうちの１つもしくは複数と、可変領域の任意の組み合わせを含み得る抗原結合断片が含まれる。結合分子（例えば、抗体またはその抗原結合断片）は、鳥類及び哺乳動物を包含する任意の動物起源からものであり得る。抗体は、例えばヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、またはニワトリの抗体であり得る。別の実施形態において、可変領域は、軟骨魚類（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）起源（例えば、サメから）であり得る。本明細書において使用される場合、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を包含し、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、または１つまたは複数のヒト免疫グロブリンについての遺伝子導入動物から単離された抗体を包含し、下で及び例えばＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第５，９３９，５９８号中で記載されるように、いくつかの実例において内在性免疫グロブリンを発現することができ、そして発現しないこともある。本開示の実施形態によれば、本明細書において提供されるＩｇＭ、またはＩｇＭ様抗体もしくはＩｇＭ由来結合分子は、ＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体が多量体（例えば、六量体または五量体）を形成することが可能な限り、抗体（例えば、ｓｃＦｖ断片）の抗原結合断片を包含し得る。
本明細書において使用される場合、「重鎖サブユニット」という用語は、免疫グロブリン重鎖に由来するアミノ酸配列を含み、重鎖サブユニットを含む結合分子（例えば、抗体または抗体様分子）は、ＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中央、及び／または下部のヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、テールピース（ｔｐ）、またはそれらのバリアントもしくは断片のうちの少なくとも１つを含み得る。例えば、結合分子（例えば、抗体、抗体様分子、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体）は、ＶＨドメインに加えて、１つまたは複数の抗体アイソタイプ及び／または種のＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、またはテールピース（ｔｐ）の任意の組み合わせを限定されずに含み得る。ある特定の実施形態において、結合分子（例えば、抗体、抗体様分子、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体）は、ＶＨドメインに加えて、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４－ｔｐドメイン；またはＣＨ３ドメイン、ＣＨ４－ｔｐドメイン、及びＪ鎖を含み得る。さらに、本開示で使用される結合分子（例えば、抗体または抗体様分子）は、ある特定の定常領域部分（例えば、ＣＨ２ドメインの全てまたは一部分）を欠如し得る。これらのドメイン（例えば、重鎖サブユニット）は、それらは元の免疫グロブリン分子からアミノ酸配列が変動するように改変され得る。本開示の実施形態によれば、本明細書において提供されるＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体は、ＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体が多量体（例えば、六量体または五量体）を形成することを可能にするように、ＩｇＭ重鎖定常領域の十分な部分を含む（例えば、ＩｇＭ重鎖定常領域は、ＩｇＭ重鎖定常領域の「多量体化断片」を含む）。
本明細書において使用される場合、「軽鎖サブユニット」という用語は、免疫グロブリン軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。軽鎖サブユニットは少なくともＶＬを含み、ＣＬ（例えば、ＣκまたはＣλ）ドメインをさらに含み得る。
結合分子（例えば、抗体、抗体様分子、抗原結合断片、それらのバリアントもしくは誘導体、またはそれらの多量体化断片）は、それらが認識または特異的に結合する、抗原のエピトープまたは部分に関して記載または規定され得る。抗体の抗原結合ドメインと特異的に相互作用する標的抗原の部分は、「エピトープ」または「抗原決定基」である。標的抗原は単一のエピトープまたは少なくとも２つエピトープを含み、抗原のサイズ、立体配座、及びタイプに依存して、任意の数のエピトープを含み得る。
本明細書において使用される場合、「ヒンジ領域」という用語は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＤ重鎖におけるＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインへ繋ぐ重鎖分子の部分を含む。このヒンジ領域は、およそ２５のアミノ酸を含み、柔軟であり、したがって２つのＮ末端抗原結合領域が独立して動くことを可能にする。
本明細書において使用される場合、「ジスルフィド結合」という用語は、２つの硫黄原子の間に形成された共有結合を包含する。アミノ酸システインはチオール基を含み、当該チオ―ル基は、第２のチオール基とのジスルフィド結合または架橋を形成し得る。
本明細書において使用される場合、「キメラ抗体」という用語は、免疫反応性の領域または部位が第１の種から得られるかまたはそれに由来し、定常領域（インタクト、部分的、改変されたものであり得る）が第２の種から得られる抗体を指す。いくつかの実施形態において、標的結合領域または標的結合部位は、非ヒト供給源（例えば、マウスまたは霊長動物）からであり、定常領域はヒトである。
「多重特異性抗体」または「二重特異性抗体」という用語は、単一の抗体分子内の２つ以上の異なるエピトープに対する抗原結合ドメインを有する抗体または抗体様分子を指す。カノニカルな抗体構造に加える他の結合分子が、２つの結合特異性により構築され得る。
本明細書において使用される場合、「操作された抗体」という用語は、重鎖及び軽鎖または両方のいずれかの可変ドメインが、少なくともＣＤＲまたはフレームワーク領域のいずれか中の１つまたは複数のアミノ酸の部分的な置き換えによって変更される抗体を指す。ある特定の実施形態において、既知の特異性の抗体からの全体のＣＤＲが、異種抗体のフレームワーク領域の中へグラフトされ得る。代替ＣＤＲは、フレームワーク領域が由来する抗体と同じクラスまたは場合によっては同じサブクラスの抗体に由来し得るが、ＣＤＲは、異なるクラスの抗体に（例えば、異なる種からの抗体に）も由来し得る。既知の特異性の非ヒト抗体からの１つまたは複数の「ドナー」ＣＤＲが、ヒト重鎖または軽鎖のフレームワーク領域の中へグラフトされる、操作された抗体は、本明細書において「ヒト化抗体」と称される。ある特定の実施形態において、全てのＣＤＲがドナー可変領域からの完全なＣＤＲにより置き換えられるとは限らないが、それでもなおドナーの抗原結合能力は、レシピエントの可変ドメインへ移行させられ得る。例えば米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、及び同第６，１８０，３７０号中で記載される説明を考慮すると、それは、当業者の能力内で適切であり、ルーチンの実験を実行することによって、機能的操作抗体またはヒト化抗体が得られる。
本明細書において使用される場合、「操作された」という用語は、合成手段による（例えば、組み換え技法、インビトロのペプチド合成、ペプチド、核酸、もしくはグリカンの酵素的または化学的なカップリング、またはこれらの技法のうちのいくつかの組み合わせによる）、核酸分子またはポリペプチド分子の処理を包含する。
本明細書において使用される場合、「連結される」、「融合される」、もしくは「融合」という用語、または他の文法上の同等語は、互換的に使用され得る。これらの用語は、化学的コンジュゲーションまたは組み換え手段を含む任意の手段によって、２つ以上のエレメントまたは構成要素を一緒に繋ぐことを指す。「インフレームの融合」は、元のＯＲＦの翻訳のリーディングフレームを維持する様式で、２つ以上のポリヌクレオチドのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を繋いで、連続的なより長いＯＲＦを形成することを指す。したがって、組み換え融合タンパク質は、元のＯＲＦによってコードされたポリペプチドに対応する２つ以上のセグメント（これらのセグメントは通常は天然でそのように繋がれない）を含有する単一のタンパク質である。リーディングフレームは、融合されたセグメントを通してこのように連続的にされるが、セグメントは、例えばインフレームのリンカー配列によって物理的または空間的に分離され得る。例えば、免疫グロブリン可変部領域のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドは、インフレームで融合され得るが、「融合」ＣＤＲが連続的なポリペプチドの一部分として共翻訳される限り、少なくとも１つの免疫グロブリンフレームワーク領域または追加のＣＤＲ領域をコードするポリヌクレオチドによって分離され得る。
ポリペプチドの文脈において、「線状配列」または「配列」は、アミノ末端側からカルボキシル末端側への方向でのポリペプチド中のアミノ酸の順序であり、配列中で互いに隣り合うアミノ酸はポリペプチドの一次構造において連続する。ポリペプチドの別の部分に対して「アミノ末端側」または「Ｎ末端側」であるポリペプチドの部分は、連続するポリペプチド鎖において先に現れる部分である。同様に、ポリペプチドの別の部分に対して「カルボキシ末端側」または「Ｃ末端側」であるポリペプチドの部分は、連続するポリペプチド鎖において後に現れる部分である。例えば典型的な抗体において、可変ドメインは定常領域に対して「Ｎ末端側」であり、定常領域は可変ドメインに対して「Ｃ末端側」である。
「発現」という用語は、本明細書において使用される場合、遺伝子が生化学物質（例えば、ポリペプチド）を産生するプロセスを指す。当該プロセスは、細胞内の遺伝子の機能的存在の任意の現れ（遺伝子ノックダウン、そして一過性発現及び安定的発現の両方が限定されずに挙げられる）を包含する。当該プロセスは、ＲＮＡ（例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））への遺伝子の転写、及びポリペプチドへのかかるｍＲＮＡの翻訳を限定されずに包含する。最終的な所望の産物が生化学物質であるならば、発現はその生化学物質及び任意の前駆体の生成を包含する。遺伝子の発現は「遺伝子産物」を産生する。本明細書において使用される場合、遺伝子産物は、遺伝子の転写によって産生される核酸（例えば、メッセンジャーＲＮＡ）、または転写物からの翻訳されるポリペプチドのいずれかであり得る。本明細書に記載されている遺伝子産物としては、転写後修飾（例えば、ポリアデニル化）を有する核酸、または翻訳後修飾（例えば、メチル化、糖鎖付加、脂質の添加）を有するポリペプチド、他のタンパク質サブユニットとの会合、タンパク質分解性切断等がさらに挙げられる。
「治療する」もしくは「治療」もしくは「治療すること」または「緩和する」もしくは「緩和すること」等の用語は、既存の診断された疾患、病理学的状態、または障害を、治癒する、減速する、それらの症状を軽減する、及び／またはそれらの進行もしくは減速を停止する、治療的処置を指す。「防止する」、「防止」、「回避する」、「制止」等の用語、及び同種のものは、診断されていない標的とされる疾患、病理学的状態、または障害の発症を防止する、予防的または防止的な措置を指す。したがって、「治療を必要とする対象」としては、既に障害の有る対象、障害を有する傾向のある対象、及び障害が防止される対象が挙げられ得る。
本明細書において使用される場合、「血清半減期」または「血漿内半減期」という用語は、投与後にタンパク質または薬物（例えば、本明細書に記載されている結合分子、抗体、抗体様分子、またはそれらの断片等）の血清または血漿中の濃度が５０％低減するのにかかる時間（例えば、分、時間または日で）を指す。以下の２つの半減期が記載され得る。アルファ半減期、α半減期、またはｔ１／２αは、中央コンパートメント（例えば、静脈内送達の場合は血液）から末梢コンパートメント（例えば、組織または器官）への薬物再分布のプロセスに起因する血漿濃度の低下の速度であり、ベータ半減期、β半減期、またはｔ１／２βは、排泄または代謝のプロセスに起因する低下の速度である。
本明細書において使用される場合、「血漿薬物濃度－時間曲線下面積」または「ＡＵＣ」という用語は、ある用量の薬物の投与後の薬物への実際の身体曝露を反映し、ｍｇ＊ｈ／Ｌで表現される。この曲線下面積は、時間０（ｔ０）から無限大（∞）まで測定され、身体からの薬物の排出の速度及び投与された用量に依存する。
本明細書において使用される場合、「平均滞留時間」または「ＭＲＴ」という用語は、薬物が身体中に残存する時間の平均長を指す。
「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」は、診断、予後、または治療が所望される任意の対象（特に哺乳動物の対象）を意味する。哺乳動物の対象としては、ヒト、飼育動物、家畜、及び動物園の動物、スポーツ用の動物、または愛玩動物（イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ブタ、ウシ、クマ等）が挙げられる。
本明細書において使用される場合、「治療法から利益を得る対象」及び「治療を必要とする動物」という表現は、全ての候補対象の中で、所与の治療剤（例えば、１つまたは複数の抗原結合ドメインを含む抗体または抗体様分子等の結合分子）の投与から利益を得るであろう対象のサブセットを指す。かかる結合分子（例えば、抗体または抗体様分子）は、例えば診断手順のために及び／または疾患の治療もしくは防止のために使用され得る。
ＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、及びＩｇＭ由来結合分子
ＩｇＭは、抗原による刺激に応答してＢ細胞によって産生される第１の免疫グロブリンであり、天然では血清中におよそ１．５ｍｇ／ｍｌで存在し、半減期は約５日である。ＩｇＭは、五量体または六量体の分子であり、したがって５つまたは６つの結合ユニットを含む。ＩｇＭ結合ユニットは、典型的には２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む。ＩｇＧ重鎖定常領域は３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を含有するが、ＩｇＭの重鎖（μ）定常領域は第４の定常ドメイン（ＣＨ４）を追加で含有し、Ｃ末端の「テールピース」（ｔｐ）を含む。複数のヒト対立遺伝子が存在するが、ヒトＩｇＭ定常領域は、典型的には配列番号２２（ＩＭＧＴ対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０３、例えばＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ｐｉｒ｜｜Ｓ３７７６８と同一）または配列番号２３（ＩＭＧＴ対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０４、例えばＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ｓｐ｜Ｐ０１８７１．４と同一）のアミノ酸配列を含む。ヒトＣμ１領域は、配列番号２２または配列番号２３のアミノ酸約５～約アミノ酸１０２の範囲であり、ヒトＣμ２領域は、配列番号２２または配列番号２３のアミノ酸約１１４～約アミノ酸２０５の範囲であり、ヒトＣμ３領域は、配列番号２２または配列番号２３のアミノ酸約２２４～約アミノ酸３１９の範囲であり、Ｃμ４領域は、配列番号２２または配列番号２３のアミノ酸約３２９～約アミノ酸４３０の範囲であり、テールピースは、配列番号２２または配列番号２３のアミノ酸約４３１～約アミノ酸４５３の範囲である。
多少の配列変動の有るヒトＩｇＭ定常領域の他の形態が存在し、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＢ３７８３８．１及びｐｉｒ｜｜ＭＨＨＵが限定されずに挙げられる。配列番号２２または配列番号２３に対応する位置でのアミノ酸の置換、挿入、及び／または欠失は、本開示中の他の箇所で記載及び請求される代替ヒトＩｇＭ配列の中へ、そして他の種のＩｇＭ定常領域アミノ酸配列の中へ同様に取り込まれ得る。
各ＩｇＭ重鎖定常領域は、抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖまたはＶＨＨ）または抗原結合ドメインのサブユニット（例えば、ＶＨ領域）と連結され得る。
５つのＩｇＭ結合ユニットは、追加の小さなポリペプチド鎖（Ｊ鎖）またはその機能的断片、バリアント、もしくは誘導体と複合体を形成して、五量体のＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体を形成し得る。ヒトＪ鎖の前駆体形態は、配列番号１として示される。シグナルペプチド（下線が引かれている）は、配列番号１のアミノ酸１から約アミノ酸２２へ伸長し、成熟ヒトＪ鎖は、配列番号１の約アミノ酸２３からアミノ酸１５９へ伸長する。成熟ヒトＪ鎖は配列番号２のアミノ酸配列を有する。
例示的なバリアント及び改変Ｊ鎖は、本明細書の他の箇所で提供される。Ｊ鎖が無いと、ＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体は、典型的には、６つの結合ユニット及び最大１２個の結合ユニット関連抗原結合ドメインを含む六量体へと組み立てられる。Ｊ鎖が有ると、Ｊ鎖が、例えば追加のＪ鎖関連抗原結合ドメインであり得る１つまたは複数の異種ポリペプチドを含む改変Ｊ鎖であるならば、ＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体は、典型的には、５つの結合ユニット及び最大１０個の結合ユニット関連抗原結合ドメインを含む五量体またはそれ以上へと組み立てられる。五量体または六量体のＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体への５つまたは６つのＩｇＭ結合ユニットの集合は、Ｃμ４及びテールピースドメイン間の相互作用が関与すると考えられる。例えばＢｒａａｔｈｅｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：４２７５５－４２７６２（２００２）を参照されたい。したがって、本開示において提供される五量体または六量体のＩｇＭ抗体の定常領域または抗体様分子は、典型的には、少なくともＣμ４及び／またはテールピースドメイン（本明細書において集合的にＣμ４－ｔｐとも称される）を含む。ＩｇＭ重鎖定常領域の「多量体化断片」は、したがって少なくともＣμ４－ｔｐドメインを含む。ＩｇＭ重鎖定常領域は、Ｃμ３ドメインまたはその断片、Ｃμ２ドメインまたはその断片、Ｃμ１ドメインまたはその断片を追加で含み得る。ある特定の実施形態において、結合分子（例えば、本明細書において提供されるＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体）は、完全なＩｇＭ重（μ）鎖定常ドメイン（例えば、配列番号２２、配列番号２３）、または例えば本明細書において提供されるそれらのバリアント、誘導体、もしくは類似体を含み得る。
ある特定の実施形態において、本開示は、５つの二価結合ユニットを含む五量体のＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体を提供し、各結合ユニットは、各々が抗原結合ドメインまたは抗原結合ドメインのサブユニットと連結されている、２つのＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、２つのＩｇＭ重鎖定常領域はヒト重鎖定常領域である。
本明細書において提供されるＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体が五量体である場合に、ＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体は、典型的にはＪ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントをさらに含む。本明細書において提供されるように、いくつかの実施形態において、Ｊ鎖は、免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞またはＮＫ細胞）に特異的に結合するＪ鎖関連抗原結合ドメインを含む、改変Ｊ鎖である。ある特定の実施形態において、改変Ｊ鎖は、それに付加された１つまたは複数の異種部分（例えば、免疫刺激物質）をさらに含み得る。ある特定の実施形態において、Ｊ鎖は、本明細書の他の箇所で論じられているように、本明細書において提供されるＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体の血清半減期に影響する（例えば、向上させる）ように変異され得る。ある特定の実施形態において、Ｊ鎖は、本開示中の他の箇所で論じられているように、糖鎖付加に影響するように変異され得る。
いくつかの実施形態において、多量体結合分子は六量体であり、６つの二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくは断片を含む。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は六量体であり、６つの二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくは断片を含み、各結合ユニットは、２つのＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む。
ＩｇＭ重鎖定常領域は、Ｃμ１ドメインまたはその断片もしくはバリアント、Ｃμ２ドメインまたはその断片もしくはバリアント、Ｃμ３ドメインまたはその断片もしくはバリアント、Ｃμ４ドメインまたはその断片もしくはバリアント、及び／あるいはテールピース（ｔｐ）またはその断片もしくはバリアントのうちの１つまたは複数を含み得るが、但し、定常領域は、例えば第２のＩｇＭ定常領域と会合して１、２、もしくはそれ以上の抗原結合ドメインを備えた結合ユニットを形成して、及び／または他の結合ユニットと会合して（及び五量体の事例において、Ｊ鎖）六量体もしくは五量体を形成して、ＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体において所望の機能を供することができる。ある特定の実施形態において、個別の結合ユニット内の２つのＩｇＭ重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントは各々、Ｃμ４ドメインまたはその断片もしくはバリアント、テールピース（ｔｐ）またはその断片もしくはバリアント、あるいはＣμ４ドメイン及びｔｐまたはそれらの断片もしくはバリアントの組み合わせを含む。ある特定の実施形態において、個別の結合ユニット内の２つのＩｇＭ重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントは各々、Ｃμ３ドメインまたはその断片もしくはバリアント、Ｃμ２ドメインまたはその断片もしくはバリアント、Ｃμ１ドメインまたはその断片もしくはバリアント、あるいはそれらの任意の組み合わせをさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体の結合ユニットは、２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体の結合ユニットは、２つの軽鎖の断片を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖はκ軽鎖である。いくつかの実施形態において、軽鎖はλ軽鎖である。いくつかの実施形態において、各結合ユニットは、免疫グロブリン軽鎖定常領域に対してアミノ末端側に位置するＶＬを各々含む、２つの免疫グロブリン軽鎖を含む。
血清半減期が向上した、ＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、及びＩｇＭ由来結合分子
本明細書において提供されるある特定のＩｇＭ由来の多量体の二重特異性結合分子は、向上した血清半減期を有するように改変され得る。ＩｇＭ由来結合分子の血清半減期を向上させ得る例示的なＩｇＭ重鎖定常領域の変異は、ＰＣＴ公開第ＷＯ ２０１９／１６９３１４Ａ１号中で開示され、それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される。例えば、本明細書において提供されるＩｇＭ由来結合分子のバリアントＩｇＭ重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＭ定常領域（例えば、配列番号２２または配列番号２３）のアミノ酸Ｓ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に対応するアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み得る。「野生型ヒトＩｇＭ定常領域のアミノ酸Ｓ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に対応するアミノ酸」は、ヒトＩｇＭ定常領域中のＳ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に相同である、任意の種のＩｇＭ定常領域の配列中のアミノ酸を意味する。ある特定の実施形態において、配列番号２２または配列番号２３のＳ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に対応するアミノ酸は、任意のアミノ酸（例えば、アラニン）で置換されていてもよい。
低減したＣＤＣ活性を有する、ＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、及びＩｇＭ由来結合分子
本明細書において提供されるある特定のＩｇＭ由来の多量体結合分子は、低減したＣＤＣ活性を付与する変異を除いて同一である対応する参照ヒトＩｇＭ定常領域の有る参照ＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体に比べて、補体の存在下において細胞への低減した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を示すように操作され得る。これらのＣＤＣの変異は、本明細書において提供される、Ｎ結合型糖鎖付加を遮断する、及び／または増加した血清半減期を付与する変異のうちの任意のものとも組み合わせられ得る。「対応する参照ヒトＩｇＭ定常領域」は、ＣＤＣ活性に影響する定常領域中の改変を除いてバリアントＩｇＭ定常領域と同一であるヒトＩｇＭ定常領域またはその部分（例えば、Ｃμ３ドメイン）を意味する。ある特定の実施形態において、バリアントヒトＩｇＭ定常領域は、例えばＰＣＴ公開第ＷＯ／２０１８／１８７７０２号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）中で記載されるような、野生型ヒトＩｇＭ定常領域に比べて、例えばＣμ３ドメイン中で１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。ＣＤＣの測定のためのアッセイは当業者に周知であり、例示的なアッセイは例えばＰＣＴ公開第ＷＯ／２０１８／１８７７０２号中で記載される。
ある特定の実施形態において、低減したＣＤＣ活性を付与するバリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号２２（ヒトＩｇＭ定常領域対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０３）または配列番号２３（ヒトＩｇＭ定常領域対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０４）の位置Ｌ３１０、Ｐ３１１、Ｐ３１３、及び／またはＫ３１５での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態において、低減したＣＤＣ活性を付与するバリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号２２または配列番号２３の位置Ｐ３１１での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アミノ酸置換を含む。他の実施形態において、本明細書において提供されるバリアントＩｇＭ定常領域は、配列番号２２または配列番号２３の位置Ｐ３１３での、野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アミノ酸置換を含有する。他の実施形態において、本明細書において提供されるバリアントＩｇＭ定常領域は、配列番号２２もしくは配列番号２３の位置Ｐ３１１及び／または配列番号２２もしくは配列番号２３のＰ３１３での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、置換の組み合わせを含有する。これらのプロリン残基は、独立して任意のアミノ酸により（例えば、アラニンまたはセリンまたはグリシンにより）置換され得る。ある特定の実施形態において、低減したＣＤＣ活性を付与するバリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号２２または配列番号２３の位置Ｋ３１５での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アミノ酸置換を含む。リジン残基は、独立して任意のアミノ酸により（例えば、アラニン、セリン、グリシン、またはアスパラギン酸により）置換され得る。ある特定の実施形態において、低減したＣＤＣ活性を付与するバリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号２２または配列番号２３の位置Ｋ３１５での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アスパラギン酸によるアミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態において、低減したＣＤＣ活性を付与するバリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号２２または配列番号２３の位置Ｌ３１０での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アミノ酸置換を含む。リジン残基は、独立して任意のアミノ酸により（例えば、アラニン、セリン、グリシン、またはアスパラギン酸により）置換され得る。ある特定の実施形態において、低減したＣＤＣ活性を付与するバリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号２２または配列番号２３の位置Ｌ３１０での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アスパラギン酸によるアミノ酸置換を含む。
ヒト及びある特定の非ヒト霊長動物ＩｇＭ定常領域は、典型的には５つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）－結合型糖鎖付加モチーフまたは部位を含む。本明細書において使用される場合、「Ｎ－結合型糖鎖付加モチーフ」はアミノ酸配列Ｎ－Ｘ１－Ｓ／Ｔを含むかまたはそれからなり、配列中、Ｎはアスパラギンであり、Ｘ１はプロリン（Ｐ）以外の任意のアミノ酸であり、Ｓ／Ｔはセリン（Ｓ）またはスレオニン（Ｔ）である。グリカンは、アスパラギン残基の窒素原子に付加される。例えばＤｒｉｃｋａｍｅｒ Ｋ，Ｔａｙｌｏｒ ＭＥ（２００６），Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ ｅｄ．）．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ＵＳＡを参照されたい。Ｎ－結合型糖鎖付加モチーフは、配列番号２２または配列番号２３のヒトＩｇＭ重鎖定常領域において生じ、位置４６（「Ｎ１」）、２０９（「Ｎ２」）、２７２（「Ｎ３」）、２７９（「Ｎ４」）、及び４４０（「Ｎ５」）で開始する。これらの５つのモチーフは非ヒト霊長動物ＩｇＭ重鎖定常領域において保存され、５つのうちの４つはマウスＩｇＭ重鎖定常領域において保存される。したがっていくつかの実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子のＩｇＭ重鎖定常領域は、５つのＮ－結合型糖鎖付加モチーフ：Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、Ｎ４、及びＮ５を含む。いくつかの実施形態において、各ＩｇＭ重鎖定常領域上のＮ結合型糖鎖付加モチーフのうちの少なくとも３（例えば、Ｎ１、Ｎ２、及びＮ３）は、複雑なグリカンによって占められる。
ある特定の実施形態において、Ｎ－Ｘ１－Ｓ／Ｔモチーフのうちの少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、または少なくとも４つは、そのモチーフで糖鎖付加を防止するアミノ酸の挿入、欠失、または置換を含み得る。ある特定の実施形態において、ＩｇＭ由来の多量体結合分子は、モチーフＮ１、モチーフＮ２、モチーフＮ３、モチーフＮ５、またはモチーフＮ１、Ｎ２、Ｎ３、もしくはＮ５のうちの２つ以上、３つ以上、もしくは４つ全ての任意の組み合わせで、アミノ酸の挿入、欠失、または置換（そこで、アミノ酸の挿入、欠失、または置換はそのモチーフでの糖鎖付加を防止する）を含み得る。いくつかの実施形態において、ＩｇＭ定常領域は、配列番号２２（ヒトＩｇＭ定常領域対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０３）または配列番号２３（ヒトＩｇＭ定常領域対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０４）の位置４６、２０９、２７２、または４４０での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に比べて、１つまたは複数の置換を含む。例えば米国仮出願第６２／８９１，２６３号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）を参照されたい。
ＩｇＡ抗体、ＩｇＡ様抗体、及びＩｇＡ由来結合分子
ＩｇＡは粘膜免疫において重要な役割を果たし、産生される総免疫グロブリンのうちの約１５％を構成する。ＩｇＡは単量体または多量体であり得、主として二量体分子を形成するが、三量体、四量体、及び／または五量体としても組み立てられ得る。例えばｄｅ Ｓｏｕｓａ－Ｐｅｒｅｉｒａ，Ｐ．，ａｎｄ Ｊ．Ｍ．Ｗｏｏｆ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ８：５７（２０１９）を参照されたい。
いくつかの実施形態において、多量体結合分子は二量体であり、２つの二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくは断片を含む。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は二量体であり、２つの二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくは断片を含み、本明細書に記載されているＪ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントをさらに含む。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は二量体であり、２つの二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくは断片を含み、本明細書に記載されているＪ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントをさらに含み、各結合ユニットは、２つのＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む。
いくつかの実施形態において、多量体結合分子は四量体であり、４つの二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくは断片を含む。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は四量体であり、４つの二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくは断片を含み、本明細書に記載されているＪ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントをさらに含む。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は四量体であり、４つの二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくは断片を含み、本明細書に記載されているＪ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントをさらに含み、各結合ユニットは、２つのＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む。
ある特定の実施形態において、本開示によって提供される多量体結合分子は、抗原結合ドメイン（合計で４つの抗原結合ドメイン）と各々連結されているＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片を含む、二量体結合分子である。本明細書において提供されるように、ＩｇＡ抗体、ＩｇＡ由来結合分子、またはＩｇＡ様抗体は、２つの結合ユニットと、１つのＪ鎖（例えば、本明細書の他の箇所で記載されている、ＣＤ３に結合するｓｃＦｖ抗体断片を含む改変Ｊ鎖、またはそれに融合しているＩＬ－１５及び／もしくはＩＬ－１５受容体αスシドメイン）とを含む。提供される各結合ユニットは、２つのＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、多量体結合分子の少なくとも３つまたは４つ全ての抗原結合ドメインが、同じ標的抗原に結合する。ある特定の実施形態において、多量体結合分子の少なくとも３つまたは４つ全ての結合ポリペプチドは同一である。
二価ＩｇＡ由来結合ユニットは、２つのＩｇＡ重鎖定常領域を含み、二量体ＩｇＡ由来結合分子は、２つの結合ユニットを含む。ＩｇＡは、以下の重鎖定常ドメイン、すなわちＣα１（または代替的にＣＡ１もしくはＣＨ１）、ヒンジ領域、Ｃα２（または代替的にＣＡ２もしくはＣＨ２）、及びＣα３（または代替的にＣＡ３もしくはＣＨ３）、ならびにＣ末端「テールピース」を含有する。ヒトＩｇＡは、２つのサブタイプ、すなわちＩｇＡ１及びＩｇＡ２を有する。ヒトＩｇＡ１定常領域は、典型的には配列番号２４のアミノ酸配列を含む。ヒトＣα１ドメインは、配列番号２４のアミノ酸約６からアミノ酸約９８へ伸長し、ヒトＩｇＡ１ヒンジ領域は、配列番号２４のアミノ酸約１０２からアミノ酸約１２４へ伸長し、ヒトＣα２ドメインは、配列番号２４のアミノ酸約１２５からアミノ酸約２１９へ伸長し、ヒトＣα３ドメインは、配列番号２４のアミノ酸約２２８からアミノ酸約３３０へ伸長し、テールピースは、配列番号２４のアミノ酸約３３１からアミノ酸約３５２へ伸長する。ヒトＩｇＡ２定常領域は、典型的には配列番号２５のアミノ酸配列を含む。ヒトＣα１ドメインは、配列番号２５のアミノ酸約６からアミノ酸約９８へ伸長し、ヒトＩｇＡ２ヒンジ領域は、配列番号２５のアミノ酸約１０２からアミノ酸約１１１へ伸長し、ヒトＣα２ドメインは、配列番号２５のアミノ酸約１１３からアミノ酸約２０６へ伸長し、ヒトＣα３ドメインは、配列番号２５のアミノ酸約２１５からアミノ酸約３１７へ伸長し、テールピースは、配列番号２５のアミノ酸約３１８からアミノ酸約３４０へ伸長する。
２つのＩｇＡ結合ユニットが、２つの追加のポリペプチド鎖（Ｊ鎖（例えば、配列番号２）及び分泌成分（前駆体は配列番号２６、成熟体は配列番号２７））と複合体を形成して、本明細書において提供される二価分泌型ＩｇＡ（ｓＩｇＡ）由来結合分子を形成し得る。２つのＩｇＡ結合ユニットの二量体ＩｇＡ由来結合分子への組み立ては、Ｃα３及びテールピースのドメインが関与していると考えられる。例えばＢｒａａｔｈｅｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：４２７５５－４２７６２（２００２）を参照されたい。したがって、本開示において提供される多量体化二量体ＩｇＡ由来結合分子は、典型的には少なくともＣα３及びテールピースのドメインを含むＩｇＡ定常領域を含む。４つのＩｇＡ結合ユニットは、同様にＪ鎖と四量体複合体を形成し得る。ｓＩｇＡ抗体も、高次多量体（例えば、四量体）は形成し得る。
ＩｇＡ重鎖定常領域は、Ｃα２ドメインもしくはその断片、ＩｇＡヒンジ領域もしくはその断片、Ｃα１ドメインもしくはその断片、及び／または例えばＩｇＧヒンジ領域を含む他のＩｇＡ（または他の免疫グロブリン、例えばＩｇＧ）重鎖ドメインを追加で含み得る。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される結合分子は、完全なＩｇＡ重（α）鎖定常ドメイン（例えば、配列番号２４または配列番号２５）、またはそのバリアント、誘導体、もしくは類似体を含み得る。いくつかの実施形態において、ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片は、ヒトＩｇＡ定常領域である。
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子の各結合ユニットは、２つのＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントを含み、各々は、少なくともＩｇＡ Ｃα３ドメイン及びＩｇＡテールピースドメインを含む。ある特定の実施形態において、ＩｇＡ重鎖定常領域は各々、ＩｇＡ Ｃα３及びＩｇＡテールピースドメインに対してＮ末端側に位置するＩｇＡ Ｃα２ドメインをさらに含み得る。例えば、ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号２４のアミノ酸１２５～３５３または配列番号２５のアミノ酸１１３～３４０を含み得る。ある特定の実施形態において、ＩｇＡ重鎖定常領域は各々、ＩｇＡ Ｃα２ドメインに対してＮ末端側に位置するＩｇＡまたはＩｇＧのヒンジ領域をさらに含み得る。例えば、ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号２４のアミノ酸１０２～３５３または配列番号２５のアミノ酸１０２～３４０を含み得る。ある特定の実施形態において、ＩｇＡ重鎖定常領域は各々、ＩｇＡヒンジ領域に対してＮ末端側に位置するＩｇＡ Ｃα１ドメインをさらに含み得る。
いくつかの実施形態において、ＩｇＡ抗体、ＩｇＡ様抗体、または他のＩｇＡ由来結合分子の各結合ユニットは、２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＡ抗体、ＩｇＡ様抗体、または他のＩｇＡ由来結合分子の各結合ユニットは、２つの軽鎖の断片を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖はκ軽鎖である。いくつかの実施形態において、軽鎖はλ軽鎖である。いくつかの実施形態において、軽鎖は、κ－λキメラ軽鎖である。いくつかの実施形態において、各結合ユニットは、免疫グロブリン軽鎖定常領域に対してアミノ末端側に位置するＶＬを各々含む、２つの免疫グロブリン軽鎖を含む。
改変Ｊ鎖及び／またはバリアントＪ鎖
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子は、Ｊ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子は、五量体であり、Ｊ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子は、二量体ＩｇＡ分子または五量体ＩｇＭ分子であり、Ｊ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は、成熟ヒトＪ鎖配列（例えば、配列番号２）等の天然に存在するＪ鎖配列を含み得る。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は、天然に存在するＪ鎖またはバリアントＪ鎖の機能的断片を含み得る。
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される五量体のＩｇＭもしくはＩｇＭ様抗体または二量体のＩｇＡもしくはＩｇＡ様抗体のＪ鎖は、ＩｇＭもしくはＩｇＭ様抗体またはＩｇＡもしくはＩｇＡ様抗体が組み立てられ、その結合標的に結合する能力を妨害せずに、例えば１つの異種部分または２つ以上の異種部分（例えば、ポリペプチド）の導入によって改変され得る。米国特許第９，９５１，１３４号及び同第１０，６１８，９７８号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ－２０１９－０１８５５７０号（それらの各々は、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）を参照されたい。したがって、本明細書において提供されるＩｇＭもしくはＩｇＭ様抗体またはＩｇＡもしくはＩｇＡ様抗体（本明細書の他の箇所で記載される二重特異性または多重特異性のＩｇＭもしくはＩｇＭ様抗体またはＩｇＡもしくはＩｇＡ様抗体を含む）は、改変Ｊ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントを含み、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントは、その中へ導入された異種部分（例えば、異種ポリペプチド）をさらに含み得る。ある特定の実施形態において、異種部分は、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントにインフレームで融合しているか、あるいは化学的にコンジュゲートしている、ペプチドまたはポリペプチドであり得る。例えば、異種ポリペプチドは、Ｊ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントに融合し得る。ある特定の実施形態において、異種ポリペプチドは、リンカー（例えば、最も少なくとも５アミノ酸からなるが、典型的には２５アミノ酸より多くなることはない、ペプチドリンカー）を介してＪ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントに融合している。ある特定の実施形態において、ペプチドリンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号１７）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１８）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２０）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１）からなる。ある特定の実施形態において、異種部分は、Ｊ鎖にコンジュゲートしている化学的部分であり得る。Ｊ鎖へ付加される異種部分としては、結合部分（例えば、抗体またはその抗原結合断片、例えば一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子）、ＩｇＭもしくはＩｇＭ様抗体の半減期を増加させ得る安定化ペプチド、または化学的部分（ポリマーまたはサイトトキシン等）が限定されずに挙げられ得る。いくつかの実施形態において、異種部分は、結合分子（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）またはＨＳＡ結合分子）の半減期を増加させ得る安定化ペプチドを含む。
いくつかの実施形態において、改変Ｊ鎖は、Ｊ鎖関連抗原結合ドメイン（例えば、標的抗原に特異的に結合することができるポリペプチド）を含み得る。ある特定の実施形態において、Ｊ鎖関連抗原結合ドメインは、本明細書の他の箇所で記載される抗体またはその抗原結合断片であり得る。ある特定の実施形態において、Ｊ鎖関連抗原結合ドメインは、例えばラクダ科の動物または軟骨魚類の抗体に由来する一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗原結合ドメインまたは一本鎖抗原結合ドメインであり得る。Ｊ鎖関連抗原結合ドメインは、Ｊ鎖の機能または結合したＩｇＭもしくはＩｇＡ抗体の機能を妨害することなく、Ｊ鎖関連抗原結合ドメインがその結合標的に結合することを可能にする任意の位置で、Ｊ鎖に導入され得る。挿入位置としては、Ｃ末端もしくはその付近、Ｎ末端もしくはその付近、またはＪ鎖の三次元構造に基づいて接近可能な内部の場所が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態において、Ｊ鎖関連抗原結合ドメインは、配列番号２のシステイン残基９２と１０１との間で、配列番号２の成熟ヒトＪ鎖の中へ導入され得る。さらなる実施形態において、Ｊ鎖に連結された抗原結合ドメインは、糖鎖付加部位で、またはその糖鎖付加部位の付近の配列番号２のヒトＪ鎖の中へ導入することができる。さらなる実施形態において、Ｊ鎖関連抗原結合ドメインは、Ｃ末端から約１０のアミノ酸残基内、またはＮ末端から約１０のアミノ酸内で、配列番号２のヒトＪ鎖の中へ導入され得る。本明細書の他の箇所で記載されるように、本開示は、改変Ｊ鎖を含む多量体の二重特異性結合分子を提供し、改変Ｊ鎖は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞等）またはＮＫ細胞）に特異的に結合するＪ鎖関連抗原結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態において、改変Ｊ鎖は、免疫刺激物質（ＩＳＡ）、例えばサイトカイン、例えばインターロイキン－２（ＩＬ－２）もしくはインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、またはその受容体結合断片もしくはバリアントをさらに含み、それらは、ある特定の実施形態において、結合または共有結合的な付加のいずれかにより、その受容体の一部分（例えば、ＩＬ－１５受容体αのスシドメイン）に結合し得る。かかるＩＳＡは、同時係属中の米国仮出願第６２／８８７，４５８号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）において詳細に記載されている。
ある特定の実施形態において、本明細書において提供されるＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＡ様抗体、ＩｇＭ由来結合分子、またはＩｇＡ由来結合分子のＪ鎖は、例えば本明細書において提供されるＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＡ様抗体、ＩｇＭ由来結合分子、またはＩｇＡ由来結合分子の血清半減期を変更し得る、１つまたは複数のアミノ酸置換を含むバリアントＪ鎖である。例えば、ある特定のアミノ酸の置換、欠失、または挿入は、バリアントＪ鎖における１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を除いて同一であり且つ同じ動物種へ同じ方法を使用して投与される参照ＩｇＭ由来結合分子に比べて、対象動物に投与された際に増加した血清半減期を示すＩｇＭ由来結合分子をもたらし得る。ある特定の実施形態において、バリアントＪ鎖は、参照Ｊ鎖に比べて、１、２、３、または４の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を含み得る。
いくつかの実施形態において、多量体結合分子は、バリアントＪ鎖配列（低減した糖鎖付加を備えるか、または１つもしくは複数のポリマーＩｇ受容体（例えば、ｐＩｇＲ、Ｆｃアルファ－ミュー受容体（ＦｃαμＲ）、またはＦｃミュー受容体（ＦｃμＲ））への低減した結合を備える、本明細書に記載されているバリアント配列等）を含み得る。例えばＰＣＴ公開第ＷＯ２０１９／１６９３１４号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）を参照されたい。ある特定の実施形態において、バリアントＪ鎖は、成熟野生型ヒトＪ鎖（配列番号２）のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸位置で、アミノ酸置換を含み得る。「成熟野生型ヒトＪ鎖のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸」は、ヒトＪ鎖におけるＹ１０２に相同な任意の種のＪ鎖の配列中のアミノ酸を意味する。ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１９／１６９３１４号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）を参照されたい。配列番号２中のＹ１０２に対応する位置は、少なくとも４３の他の種のＪ鎖アミノ酸配列中で保存される。米国特許第９，９５１，１３４号（それは、参照することによって本明細書に援用される）の図４を参照されたい。配列番号２のＹ１０２に対応する位置での特定の変異は、特定の免疫グロブリン受容体（例えば、ヒトもしくはマウスのＦｃαμ受容体、マウスＦｃμ受容体、及び／またはヒトもしくはマウスのポリマーＩｇ受容体（ｐＩｇ受容体））が、変異Ｊ鎖を含むＩｇＭ五量体に結合することを阻害し得る。配列番号２のＹ１０２に対応するアミノ酸で変異を含むＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、及びＩｇＭ由来結合分子は、置換を除いて同一であり且つ同じ種へ同じ様式で投与される対応する抗体、抗体様分子、または結合分子よりも、動物に投与された場合に改善された血清半減期を有する。ある特定の実施形態において、配列番号２のＹ１０２に対応するアミノ酸は、任意のアミノ酸で置換されていてもよい。ある特定の実施形態において、配列番号２のＹ１０２に対応するアミノ酸は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、またはアルギニン（Ｒ）で置換されていてもよい。特定の実施形態において、配列番号２のＹ１０２に対応するアミノ酸は、アラニンで置換されていてもよい。特定の実施形態において、Ｊ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントはバリアントヒトＪ鎖であり、且つ配列番号３のアミノ酸配列（本明細書において「Ｊ＊」と称されるＪ鎖）を含む。
野生型Ｊ鎖は、典型的には１つのＮ結合型糖鎖付加部位を含む。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子のバリアントＪ鎖またはその機能的断片は、アスパラギン（Ｎ）結合型糖鎖付加モチーフＮ－Ｘ１－Ｓ／Ｔ（例えば、成熟ヒトＪ鎖（配列番号２）またはＪ＊（配列番号３）のアミノ酸４９（モチーフＮ６）に対応するアミノ酸位置で開始する）内で変異を含み、配列中、Ｎはアスパラギンであり、Ｘ１はプロリン以外の任意のアミノ酸であり、Ｓ／Ｔはセリンまたはスレオニンであり、変異はそのモチーフでの糖鎖付加を防止する。ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１９／１６９３１４号中で実証されるように、この部位での糖鎖付加を防止する変異は、バリアントＪ鎖における糖鎖付加を防止する変異を除いて同一であり且つ同じ動物種へ同じ手法で投与される参照多量体結合分子に比べて、対象動物への投与に際して増加した血清半減期を示す本明細書において提供される多量体結合分子をもたらし得る。
例えば特定の実施形態において、本明細書において提供されるＪ鎖を含む結合分子のバリアントＪ鎖もしくはその機能的断片は、配列番号２もしくは配列番号３のアミノ酸Ｎ４９もしくはアミノ酸Ｓ５１に対応するアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み得るが、但し、Ｓ５１に対応するアミノ酸はスレオニン（Ｔ）で置換されていないか、またはバリアントＪ鎖は、配列番号２もしくは配列番号３のアミノ酸Ｎ４９及びＳ５１の両方に対応するアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態において、配列番号２または配列番号３のＮ４９に対応する位置は、任意のアミノ酸（例えば、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ））で置換されている。特定の実施形態において、配列番号２または配列番号３のＮ４９に対応する位置は、アラニン（Ａ）で置換されていてもよい。別の特定の実施形態において、配列番号２または配列番号３のＮ４９に対応する位置は、アスパラギン酸（Ｄ）で置換されていてもよい。いくつかの実施形態において、配列番号２または配列番号３のＳ５１に対応する位置は、アラニン（Ａ）またはグリシン（Ｇ）で置換されている。いくつかの実施形態において、配列番号２または配列番号３のＳ５１に対応する位置は、アラニン（Ａ）で置換されている。
免疫エフェクター細胞に結合する改変Ｊ鎖を備えた、多量体の二重特異性または多重特異性の抗ＣＤ１２３結合分子。
本開示は、がん（例えば、血液がん、例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ））の治療における使用のための二重特異性または多重特異性の多量体結合分子を提供し、結合分子は二重特異性であり、高いアビディティーによりがん細胞上のＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒα）をターゲティングしながら、一つの抗原結合ドメインを介して免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞またはＮＫ細胞）もターゲティングし、それによって、がん細胞のエフェクター細胞媒介性殺傷を容易にしながら、同時にサイトカインの過剰な放出を最小限にする。ある特定の態様において、多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子は、抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子である。
したがって、本開示は、２つのＩｇＡもしくはＩｇＡ様または５つのＩｇＭもしくはＩｇＭ様の二価結合ユニット及び１つの改変Ｊ鎖を含む、二重特異性または多重特異性の多量体結合分子を提供し、改変Ｊ鎖は、少なくとも野生型Ｊ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントと、免疫エフェクター細胞に特異的に結合するＪ鎖関連抗原結合ドメインとを含む。各結合ユニットは２つの抗体重鎖を含み、当該重鎖の各々は、（本明細書の他の箇所で記載されている）ＩｇＡ、ＩｇＡ様、ＩｇＭ、もしくはＩｇＭ様の重鎖定常領域またはその多量体化断片と、結合ユニット関連抗原結合ドメインの少なくとも重鎖可変領域（ＶＨ）部分とを含む。結合ユニット関連抗原結合ドメインのうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個全てが、ＣＤ１２３に特異的に結合する。本明細書において提供される結合分子は、ＣＤ１２３を発現する細胞（例えば、がん細胞）の免疫エフェクター細胞依存性殺傷を誘導し得る。
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される結合分子の改変Ｊ鎖は、野生型Ｊ鎖のバリアントまたはその断片を含み、当該バリアントは、野生型Ｊ鎖に比べて、結合分子の血清半減期に影響し得る１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を含み、当該結合分子は、動物に投与された際に、Ｊ鎖における１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を除いて同一であり且つ同じ動物種に同じ方法で投与される参照結合分子に比べて増加した血清半減期を示す。例えば特定の実施形態において、Ｊ鎖は、配列番号３のアミノ酸配列を含むバリアントヒトＪ鎖（「Ｊ＊」）である。
ある特定の実施形態において、提供される結合分子のＪ鎖関連抗原結合ドメインは、抗体またはその断片を含む。ある特定の実施形態において、抗体断片は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片である。ｓｃＦｖは、Ｊ鎖または断片もしくはバリアント（例えば、Ｊ＊）に融合していてもよいし、または化学的にコンジュゲートしていてもよい。ある特定の実施形態において、ｓｃＦｖ断片は、ペプチドリンカー（例えば、配列番号１７～２１）を介してＪ鎖に融合している。本開示中の他の箇所で指摘されるように、Ｊ鎖の機能（すなわちＩｇＭ、ＩｇＭ様、ＩｇＡ、またはＩｇＡ様の結合ユニットと共に集合して、二量体または五量体を形成すること）が影響されない限り、ｓｃＦｖ断片は、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ任意の手法で融合し得る。例えば、ｓｃＦｖ断片は、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＮ末端、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＣ末端、あるいはＪ鎖またはその断片もしくはバリアントのＮ末端及びＣ末端の両方に融合し得る。
改変Ｊ鎖の抗原結合ドメインが結合する免疫エフェクター細胞は、ＣＤ１２３によってターゲティングされたがん細胞と結合した場合に有益な効果（例えば、ＣＤ１２３＋がん細胞の細胞ベースの殺傷を媒介する）を付与する、任意の免疫エフェクター細胞であり得る。ある特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、限定されずに、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、またはγδＴ細胞）、Ｂ細胞、形質細胞、マクロファージ、樹状細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であり得る。ある特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋のＴ細胞）である。ある特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞である。ある特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ＮＫ細胞である。
免疫エフェクター細胞がＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）である場合に、Ｊ鎖関連ｓｃＦｖ断片は、Ｔ細胞表面抗原ＣＤ３（例えば、ＣＤ３ε）に結合し得る。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ３ε ｓｃＦｖ断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＨは、それぞれ配列番号５、配列番号６、及び配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３、またはＶＨＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１、２、もしくは３つのアミノ酸置換を有する配列番号５、配列番号６、もしくは配列番号７のＶＨ相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含み、当該ＶＬは、それぞれ配列番号９、配列番号１０、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３、またはＶＬＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１、２、もしくは３つのアミノ酸置換を含む配列番号９、配列番号１０、及び配列番号１１のＶＬ相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態において、ｓｃＦｖ断片は、配列番号４のＶＨアミノ酸配列及び配列番号８のＶＬアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、抗ＣＤ３ε ｓｃＦｖ断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号１３及び配列番号１４のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、改変Ｊ鎖は、配列番号１２のアミノ酸２０～４２０、配列番号１５のアミノ酸２０～４１２、または配列番号１６のアミノ酸２３～４１５を含む、アミノ酸配列を含む。
ある特定の他の実施形態において、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞であり、ｓｃＦｖ断片はＣＤ１６またはＣＤ５６に特異的に結合し得る。
多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）の改変Ｊ鎖は、Ｊ鎖へ付加された追加の異種部分を含むようにさらに改変され得る。例示的な部分は、例えば米国特許第９，９５１，１３４号及び米国特許出願公開第ＵＳ２０１９－０１８５５７０号及びＵＳ特許第１０，６１８，９７８号、ならびに米国仮出願第６２／８８７，４５８号（それらの全ては、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）中で記載される。ある特定の実施形態において、多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）の改変Ｊ鎖は、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントに融合しているかまたは化学的にコンジュゲートしている免疫刺激物質（「ＩＳＡ」）をさらに含み得る。例えば、ＩＳＡは、サイトカインまたはその受容体結合断片もしくはバリアントを含み得る。特定の実施形態において、Ｊ鎖関連ＩＳＡは、（ａ）インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）タンパク質またはその受容体結合断片もしくはバリアント（「Ｉ」）、及び（ｂ）Ｉと結合することができる、スシドメインを含むインターロイキン－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）断片またはそのバリアント（「Ｒ」）を含み、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアント、ならびにＩ及びＲのうちの少なくとも１つまたはＩ及びＲの両方は、融合タンパク質として連結されており、Ｉ及びＲは結合してＩＳＡとして機能し得る。ある特定の実施形態において、ＩＳＡは、ペプチドリンカーを介してＪ鎖に融合し得る。
抗ＣＤ１２３結合ユニット関連抗原結合ドメイン
多量体の抗ＣＤ１２３二重特異性結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）の各結合ユニットは、２つの重鎖に加えて、２つの軽鎖をさらに含むことができ、各軽鎖は、κ軽鎖定常領域またはλ軽鎖定常領域（例えば、ヒトκ軽鎖定常領域またはλ軽鎖定常領域）と、結合ユニット関連抗原結合ドメインの少なくとも軽鎖可変領域（ＶＬ）部分とを含む。
ある特定の実施形態において、提供される多量体結合分子は多重特異性（例えば、二重特異性、三重特異性、または四重特異性）であり、結合分子の重鎖定常領域と連結された２つ以上の結合ドメインは、異なる標的に特異的に結合する。ある特定の実施形態において、多量体結合分子の全ての結合ドメインは、ＣＤ１２３に特異的に結合する。ある特定の実施形態において、多量体結合分子の結合ドメインは同一である。かかる場合において、例えば異なる特異性を備えた結合ドメインが、本明細書の他の箇所に記載されている改変Ｊ鎖の一部分であるならば、多量体結合分子は依然として二重特異性であり得る。ある特定の実施形態において、結合ドメインは、抗体由来抗原結合ドメイン（例えば、重鎖定常領域と連結されたｓｃＦｖ、または重鎖定常領域と連結された抗体結合ドメインのＶＨサブユニット）である。
加えて、多量体の抗ＣＤ１２３二重特異性結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）は、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個の、ＣＤ１２３に特異的に結合する結合ユニット関連抗原結合ドメインを含み得る。ある特定の実施形態において、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個全ての結合ユニット関連抗原結合ドメインは、同じＣＤ１２３エピトープに結合する。ある特定の実施形態において、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個全ての結合ユニット関連抗原結合ドメインは同一である。ある特定の実施形態において、全ての結合ユニット関連抗原結合ドメインは同一である。
ある特定の実施形態において、提供される結合分子の少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個の結合ユニット関連抗原結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＨ及びＶＬは、６つの免疫グロブリン相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３は、配列番号３２及び配列番号３３、配列番号３７及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５、配列番号４６及び配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１、配列番号５２及び配列番号５３、配列番号５４及び配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９、配列番号６０及び配列番号６１、配列番号６２及び配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５、配列番号６６及び配列番号６７、配列番号６８及び配列番号６９、配列番号７０及び配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５、配列番号７６及び配列番号７７、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１、配列番号８２及び配列番号８３、配列番号８４及び配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７、配列番号８８及び配列番号８９、配列番号９０及び配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３、配列番号９４及び配列番号９５、配列番号９６及び配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９、配列番号１００及び配列番号１０１、もしくは配列番号１０２及び配列番号１０３をそれぞれ含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む抗体のＣＤＲアミノ酸配列を含むか、または、ＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１つもしくは２つのアミノ酸置換を除いて、配列番号３２及び配列番号３３、配列番号３７及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５、配列番号４６及び配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１、配列番号５２及び配列番号５３、配列番号５４及び配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９、配列番号６０及び配列番号６１、配列番号６２及び配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５、配列番号６６及び配列番号６７、配列番号６８及び配列番号６９、配列番号７０及び配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５、配列番号７６及び配列番号７７、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１、配列番号８２及び配列番号８３、配列番号８４及び配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７、配列番号８８及び配列番号８９、配列番号９０及び配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３、配列番号９４及び配列番号９５、配列番号９６及び配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９、配列番号１００及び配列番号１０１、配列番号１０２及び配列番号１０３、配列番号１０７及び配列番号１０８、配列番号１０９及び配列番号１１０、配列番号１１１及び配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４、配列番号１１５及び配列番号１１６、もしくは配列番号１１７及び配列番号１１８をそれぞれ含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む抗体のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３は、０、１、または２つのアミノ酸置換を有する配列番号１０２及び配列番号１０３、配列番号１１３及び配列番号１１４、または配列番号１１１及び配列番号１１２をそれぞれ含むＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む抗体のＣＤＲアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３は、０、１、または２つのアミノ酸置換（０のアミノ酸置換等）を有する配列番号１１３及び配列番号１１４をそれぞれ含むＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む抗体のＣＤＲアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、提供される結合分子の少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個の結合ユニット関連抗原結合ドメインは、抗体のＶＨ及びＶＬを含み、当該ＶＨ及びＶＬは、配列番号３２及び配列番号３３、配列番号３７及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５、配列番号４６及び配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１、配列番号５２及び配列番号５３、配列番号５４及び配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９、配列番号６０及び配列番号６１、配列番号６２及び配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５、配列番号６６及び配列番号６７、配列番号６８及び配列番号６９、配列番号７０及び配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５、配列番号７６及び配列番号７７、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１、配列番号８２及び配列番号８３、配列番号８４及び配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７、配列番号８８及び配列番号８９、配列番号９０及び配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３、配列番号９４及び配列番号９５、配列番号９６及び配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９、配列番号１００及び配列番号１０１、配列番号１０２及び配列番号１０３、配列番号１０７及び配列番号１０８、配列番号１０９及び配列番号１１０、配列番号１１１及び配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４、配列番号１１５及び配列番号１１６、または配列番号１１７及び配列番号１１８をそれぞれ含むかまたはそれらの内に含有される成熟ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、提供される結合分子の少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個の結合ユニット関連抗原結合ドメインは、抗体のＶＨ及びＶＬを含み、当該ＶＨ及びＶＬは、配列番号１０２及び配列番号１０３、配列番号１１３及び配列番号１１４、または配列番号１１１及び配列番号１１２をそれぞれ含む成熟ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、提供される結合分子の少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、提供される結合分子の少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個の結合ユニット関連抗原結合ドメインは、抗体のＶＨ及びＶＬを含み、当該ＶＨ及びＶＬは、配列番号１１３及び配列番号１１４をそれぞれ含む成熟ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一（１００％同一等）のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、提供される結合分子の少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個の結合ユニット関連抗原結合ドメインは、抗体のＶＨ及びＶＬを含み、当該ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号３２及び配列番号３３のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、提供される結合分子はＩｇＭ抗体であり、各結合ユニットは、配列番号３５のアミノ酸２０～５９２を含む２つのＩｇＭ重鎖及び配列番号３６のアミノ酸２１～２４０を含む２つのκ軽鎖を含む。
ある特定の実施形態において、提供される結合分子の少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個の結合ユニット関連抗原結合ドメインは、抗体のＶＨ及びＶＬを含み、当該ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、提供される結合分子はＩｇＭ抗体であり、各結合ユニットは、配列番号４０のアミノ酸２０～５８９を含む２つのＩｇＭ重鎖及び配列番号４１のアミノ酸２１～２３４を含む２つのκ軽鎖を含む。
ポリヌクレオチド、ベクター、及び宿主細胞
本開示は、抗ＣＤ１２３多量体の二重特異性結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）のポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド（例えば、単離ポリヌクレオチド、組み換えポリヌクレオチド、及び／または天然に存在しないポリヌクレオチド）をさらに提供する。「ポリペプチドサブユニット」は、独立して翻訳され得る、結合分子の部分、結合ユニット、ＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、ＩｇＡ抗体、もしくはＩｇＡ様抗体、Ｊ鎖、改変Ｊ鎖、または抗原結合ドメインを意味する。例としては、抗体可変ドメイン（例えば、ＶＨまたはＶＬ）、Ｊ鎖（本明細書において提供される改変Ｊ鎖を包含する）、分泌成分、一本鎖Ｆｖ、抗体重鎖、抗体軽鎖、抗体重鎖定常領域、抗体軽鎖定常領域、及び／または任意のそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体が、限定されずに挙げられる。
ある特定の実施形態において、ポリペプチドサブユニットは、いずれも本明細書において提供される、抗原結合ドメインまたはそのサブユニットに（例えば、抗原結合ドメインのＶＨ部分、または抗原結合ドメインのＶＬ部分に）融合していてもよい、ＩｇＭ重鎖定常領域もしくはＩｇＭ様重鎖定常領域またはそれらの多量体化断片、あるいはＩｇＡ重鎖定常領域もしくはＩｇＡ様重鎖定常領域またはそれらの多量体化断片を含み得る。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、ヒトＩｇＭ重鎖定常領域、ヒトＩｇＭ様重鎖定常領域、ヒトＩｇＡ重鎖定常領域、ヒトＩｇＡ様重鎖定常領域、またはそれらの多量体化断片（例えば、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号２５）を含むポリペプチドサブユニットをコードし、それらのうちの任意のものが、抗原結合ドメインまたはそのサブユニット（例えば、ＶＨのＣ末端）に融合していてもよい。
ある特定の実施形態において、ＶＨは、配列番号３２、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９６、配列番号９８、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０７、配列番号１０９、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５、もしくは配列番号１１７を含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＨアミノ酸配列中に含有されるＣＤＲアミノ酸配列を含むか、または、ＨＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１つもしくは２つの単一アミノ酸置換を除いて、配列番号３２、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９６、配列番号９８、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０７、配列番号１０９、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５、もしくは配列番号１１７を含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＨアミノ酸配列中に含有されるＣＤＲアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３領域を含み得る。ある特定の実施形態において、ＶＨは、配列番号３２、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９６、配列番号９８、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０７、配列番号１０９、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５、または配列番号１１７を含むかまたはそれらの内に含有される成熟ＶＨアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。
ある特定の実施形態において、ポリペプチドサブユニットは、本明細書の他の箇所に記載されている抗原結合ドメインの抗体ＶＬ部分を含み得る。ある特定の実施形態において、ポリペプチドサブユニットは、ＶＬのＣ末端に融合していてもよい、抗体軽鎖定常領域、例えばヒト抗体軽鎖定常領域、またはその断片を含み得る。
ある特定の実施形態において、ＶＬは、配列番号３３、配列番号３８、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、もしくは配列番号１１８を含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＬアミノ酸配列中に含有されるＣＤＲアミノ酸配列を含むか、または、ＬＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１つもしくは２つの単一アミノ酸置換を除いて、配列番号３８、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、もしくは配列番号１１８配列番号３３を含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＬアミノ酸配列中に含有されるＣＤＲアミノ酸配列を含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３領域を含み得る。ある特定の実施形態において、ＶＨは、配列番号３３、配列番号３８、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、または配列番号１１８を含むかまたはそれらの内に含有される成熟ＶＬアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。
ある特定の実施形態において、ポリペプチドサブユニットは、本明細書の他の箇所で記載される改変Ｊ鎖であり得る。例えば、ポリペプチドサブユニットは、配列番号１２のアミノ酸２０～４２０、配列番号１５のアミノ酸２０～４１２、または配列番号１６のアミノ酸２３～４１５に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。
ある特定の実施形態において、本開示は、本明細書において提供される２、３、またはそれ以上のポリヌクレオチドを含む組成物を提供し、ポリヌクレオチドは一緒に、多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）をコードし得る。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、別個のベクター上に位置し得る。ある特定の実施形態において、２つ以上のポリヌクレオチドは、同じベクター上に位置し得る。かかるベクターは、本開示によって同様に提供される。
ある特定の実施形態において、本明細書において提供されるポリヌクレオチドは、発現ベクター（プラスミド等）上に位置し、１つのポリペプチドサブユニット（例えば、ＩｇＭ重鎖もしくはＩｇＭ様重鎖、ＩｇＡ重鎖もしくはＩｇＡ様重鎖、軽鎖、またはＪ鎖、例えば改変Ｊ鎖）をコードする核酸配列を含み得るか、または本明細書において提供される結合分子の２つ以上もしくは３つ全てのポリペプチドサブユニットをコードする２つ以上の核酸配列を含み得る。代替的に、３つのポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列は、別個のポリヌクレオチド（例えば、分離した発現ベクター）上にあり得る。本開示は、かかる単一または複数の発現ベクターを提供する。本開示は、提供されたポリヌクレオチドまたは発現ベクターをコードする１つまたは複数の宿主細胞も提供する。
本開示は、多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子またはその任意のサブユニット）をコードする１つのポリヌクレオチドまたは２つ以上のポリヌクレオチド、本明細書において提供されるポリヌクレオチド組成物、あるいは本明細書において提供される結合分子またはその任意のサブユニットを集合的にコードするベクター、または２、３、もしくは以上のベクターを含む、宿主細胞（例えば、原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞）をさらに提供する。
関連する実施形態において、本開示は、本開示によって提供される多量体結合分子を製造する方法を提供し、当該方法は、本明細書において提供される宿主細胞を培養する工程、及び多量体結合分子を回収する工程を含む。
使用方法
本開示は、治療を必要とする対象における疾患または障害（例えば、がんまたは他の悪性腫瘍、例えば血液がんまたは血液悪性腫瘍）を治療する方法をさらに提供し、当該方法は、治療有効量の多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）を対象に投与することを含む。「治療有効用量または治療有効量」または「有効量」は、投与された場合に、正の応答（例えば、対象における腫瘍細胞の殺傷）をもたらす結合分子の量を意図する。
ある特定の実施形態において、治療されるがんは、悪性細胞がＣＤ１２３を発現または過剰発現する任意のがんであり得る。例えば、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ細胞ＡＬＬ）、古典的ホジキンリンパ腫、有毛細胞性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、全身性肥満細胞症、または形質細胞様樹状細胞白血病）であり得る。
がんの治療のための組成物の有効用量は、多くの異なる要因（投与の手段、標的部位、対象の生理的状態、対象がヒトまたは動物であるか、投与される他の医薬物、及び処置が予防的または治療的であるか、が挙げられる）に依存して、変動し得る。通常、対象はヒトであるが、遺伝子導入哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物も治療され得る。当業者に公知のルーチンの方法を使用して治療投薬量を設定して、安全性及び有効性を最適化することができる。
治療される対象は、治療を必要とする任意の動物（例えば、哺乳動物）であり得、ある特定の実施形態において、対象はヒト対象である。
その最も単純な形態において、対象に投与される調製物は、従来の投薬形態において投与された多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）またはその多量体抗原結合断片であり、それらは、本明細書の他の箇所で記載される医薬賦形剤、担体、または希釈物質と組み合わせられ得る。
本開示の組成物は、任意の好適な方法（例えば、非経口、脳室内、経口、吸入噴霧、局所、経直腸、経鼻、頬側、経腟で、または植え込み型リザーバーを介して）によって投与され得る。「非経口」という用語は、本明細書において使用される場合、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病巣内、及び頭蓋内の注射または点滴の技法を包含する。
医薬組成物及び投与方法
多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３の×抗ＣＤ３結合分子）を調製し、それを必要とする対象に投与する方法は、当業者に周知であるか、または本開示を考慮して当業者によって容易に決定される。投与経路は、例えば腫瘍内、経口、非経口、吸入による、または局所であり得る。非経口という用語は、本明細書において使用される場合、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸、または経腟の投与を包含する。これらの投与形態が好適な形態として企図されているが、別の投与形態の例は、注射のための、特に腫瘍内、静脈内、または動脈内の注射または点滴のための溶液であるだろう。好適な医薬組成物は、緩衝剤（例えば、酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、またはクエン酸緩衝剤）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、任意選択で安定化剤（例えば、ヒトアルブミン）などを含み得る。
本明細書において論じられるように、多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）は、それを必要とする対象の治療のための薬学的有効量で投与され得る。この点に関して、開示される多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）は、投与を容易にし、且つ活性剤の安定性を増進するように製剤化され得ることが理解されるだろう。医薬組成物は、したがって薬学的に許容される非毒性の滅菌担体（生理的塩類溶液、非毒性緩衝剤、防腐剤、及び同種のもの等）を含み得る。本明細書において提供されるＩＳＡを含む多量体結合分子の薬学的有効量は、標的への有効な結合を達成し、且つ治療利益を達成するのに十分な量を意味する。好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、例えば第２１版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ）（２００５）に記載されている。
本明細書において提供されるある特定の医薬組成物は、許容される投薬形態（例えば、カプセル、錠剤、水性懸濁、または溶液が挙げられる）で経口投与され得る。ある特定の医薬組成物は、鼻エアロゾルまたは吸入によっても投与され得る。かかる組成物は、ベンジルアルコールもしくは他の好適な防腐剤、生物学的利用能を向上させる吸収促進剤、及び／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を用いて、塩類溶液中の溶液として調製され得る。
単一投薬形態を作製するために担体材料により組み合わせられ得る、多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）の量は、例えば治療される対象及び特定の投与モードを依存して変動するだろう。組成物は、単回用量、複数回用量、または点滴において確立された期間にわたってとして投与され得る。投薬量レジメンも、最適な所望の応答（例えば、治療応答または予防応答）を提供するように調整され得る。
本開示の範囲に沿って、多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）は、治療効果をもたらすのに十分な量で、治療法を必要とする対象に投与され得る。多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）は、公知の技法に従って、本開示の抗体またはその多量体抗原結合断片、バリアント、もしくは誘導体を、従来の薬学的に許容される担体または希釈物質と組み合わせることによって調製された従来の投薬形態で、対象に投与され得る。薬学的に許容される担体または希釈物質の形態及び性質は、それが組み合わせられる活性成分の量、投与経路、及び他の周知の可変要素によって定められ得る。
本開示は、がんまたは他の悪性腫瘍を治療、予防、または管理するための医薬品の製造における、多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）の使用も提供する。本開示は、がんを治療、予防、または管理することにおける使用のための多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば、本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）も提供する。
本開示は、別段の指示のない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、遺伝子導入生物学、微生物学、組み換えＤＮＡ、及び免疫学の従来の技法を用い、それは当業者の技能の範囲内である。かかる技法は、文献において十分に説明されている。例えばＧｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｄ．（２０１２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（４ｔｈ ｅｄ．；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ）、Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ａｎｄ Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ，ｅｄｓ．，（１９９５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ ２ｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ），Ｖｏｌｕｍｅｓ １－４、Ｇａｉｔ，ｅｄ．（１９９０）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）、Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．米国特許第４，６８３，１９５号、Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）、Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（２０１６）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ，７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ－Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ）、Ｗｏｏｄｗａｒｄ，Ｊ．，Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）（１９８５）、Ｐｅｒｂａｌ（１９８８）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；２ｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、Ｓ．Ｃ．Ｍａｋｒｉｄｅｓ（２００３）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５１－１５５（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）、Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）、Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）を参照されたい。
抗体操作の一般的な原理は、例えばＳｔｒｏｈｌ，Ｗ．Ｒ．，ａｎｄ Ｌ．Ｍ．Ｓｔｒｏｈｌ（２０１２），Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）中で説明される。タンパク質操作の一般的な原理は、例えばＰａｒｋ ａｎｄ Ｃｏｃｈｒａｎ，ｅｄｓ．（２００９），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｓｉｇｎ（ＣＤＣ Ｐｒｅｓｓ）中で説明される。免疫学の一般的な原理は、例えばＡｂｂａｓ ａｎｄ Ｌｉｃｈｔｍａｎ（２０１７）Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）中で説明される。追加で、当技術分野において公知の免疫学における標準的方法は、例えばＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ Ｏｎｌｉｎｅ Ｌｉｂｒａｒｙ）、Ｗｉｌｄ，Ｄ．（２０１３），Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，ｅｄ．（２０１３），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）、及び Ｏｓｓｉｐｏｗ ａｎｄ Ｆｉｓｃｈｅｒ，ｅｄｓ．，（２０１４），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ）中のものに従い得る。
前掲の参照文献の全て、そして本明細書において引用される全ての参考文献は、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される。
以下の実施例は、限定としてではなく例証として提供される。
実施例１：抗体の生成及び精製
抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１及び＃２、ならびに抗ＣＤ１２３ ＩｇＧ ＃１及び＃２
例示的なコンストラクトとして、４つの抗ＣＤ１２３抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を、標準的なクローニングプロトコルに従って、ＩｇＭフォーマット（二重特異性ＩｇＭ抗体を形成するための配列番号１２のアミノ酸２０～４２０のＳＪ＊鎖と共に）及びＩｇＧフォーマットの中へ取り込んだ。抗ＣＤ１２３ ＃１コンストラクトは、それぞれ配列番号３２及び配列番号３３のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１２３ ＃２コンストラクトは、それぞれ配列番号３８及び配列番号３９のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１２３ ＃３コンストラクトは、それぞれ配列番号１０２及び配列番号１０３のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１２３ ＃４コンストラクトは、それぞれ配列番号１０７及び配列番号１０８のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む。これらの抗体コンストラクトを、以下に記載されるように発現させ、精製した。ＩｇＭ二重特異性抗体（に加えて改変Ｊ鎖（ＳＪ＊））を、還元ゲル及び非還元ゲル上で以下のように分離した。図１Ａは、高分子量ＩｇＭを分離する例示的な非還元ゲルを示し、図１Ｂは、ＩｇＭの重鎖及び軽鎖を示す例示的な還元ゲルを示す。非還元ゲルのために、サンプルをＮｕＰａｇｅ ＬＤＳ Ｓａｍｐｌｅ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃ＮＰ０００７）と混合し、ＮａｔｉｖｅＰａｇｅ Ｎｏｖｅｘ ３～１２％ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ Ｇｅｌ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃ＢＮ１００３）の上へロードした。Ｎｏｖｅｘ Ｔｒｉｓ－Ａｃｅｔａｔｅ ＳＤＳ Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃ＬＡ００４１）をゲル電気泳動法のために使用し、ゲルをＣｏｌｌｏｉｄａｌ Ｂｌｕｅ Ｓｔａｉｎ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃ＬＣ６０２５）により染色した。還元ゲルのために、サンプルを、サンプルバッファー及びＮｕＰａｇｅ還元剤（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃ＮＰ０００４）と混合し、８０℃へ１０分間加熱し、ＮｕＰａｇｅ Ｎｏｖｅｘ ４～１２％ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ Ｇｅｌ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃ＮＰ０３２２）上にロードした。ＮｕＰａｇｅ ＭＥＳ ＳＤＳ Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃ＮＰ０００２）をゲル電気泳動法のために使用し、ゲルをＣｏｌｌｏｉｄａｌ Ｂｌｕｅにより染色した。
追加の抗ＣＤ１２３×ＣＤ３及び抗ＣＤ１２３ ＩｇＧコンストラクト
抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３ ＢｉＴＥコンストラクトは、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１７／２１０４４３ Ａ１号に記載されている。当該コンストラクトは、抗ＣＤ１２３ ＶＨ配列を含む第１の重鎖（ＶＨ＝配列番号３２、重鎖＝配列番号１０４）、抗ＣＤ１２３ ＶＬ配列（ＶＬ＝配列番号３２、軽鎖＝配列番号１０５）を含む軽鎖、及びＩｇＧ重鎖定常領域に融合している抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを含む第２の重鎖（重鎖＝配列番号１０６）を含む。このコンストラクトを、商業的な販売会社（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ及びＡＴＵＭ）を介して、合成、発現、及び精製し、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１として本明細書において表記する。タンパク質を還元ゲル及び非還元ゲルによって分離し（図２Ａ）、サイズ排除クロマトグラフによる精製タンパク質の分離を図２Ｂに示す。
タンパク質の発現及び精製
トランスフェクション。重鎖、軽鎖、及び改変Ｊ鎖（ＳＪ＊）のＤＮＡ（ＩｇＭ五量体コンストラクトのための）を、例えばＣＨＯ細胞またはＥｘｐｉ ２９３細胞へトランスフェクションした。発現ベクターのためのＤＮＡを、ポリエチルアミン（ＰＥＩ）試薬（ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ）と混合し、次いで細胞へ添加した。ＣＨＯ－Ｓ細胞または２９３のｅｘｐｉ細胞によるＰＥＩトランスフェクションを、確立された技法に従って行った（「Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌ．８７，５５３－５４５」を参照）。
ＩｇＧ発現産物を、商業的な販売会社によって発現及び精製した。
製造者の推奨に従って、例えばＣａｐｔｏ Ｃｏｒｅ ４００（ＧＥ ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅ）及びＰＯＲＯＳ（商標）５０ ＨＱ Ｓｔｒｏｎｇ Ａｎｉｏｎ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｒｅｓｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して、ＩｇＭ発現産物を精製した。タンパク質のピークを、ＩｇＭ発現産物について図１Ｃ及び図１Ｄに示すようにサイズ排除クロマトグラフィーによって分離した。
実施例２：ＥＬＩＳＡによって測定された抗体特異性
抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１及び抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃２のヒトＣＤ１２３及びＣＤ３εに対する特異性、そして対照抗ＣＤ１２３ ＩｇＧ ＃１及び抗ＣＤ１２３ ＩｇＧ ＃２ＣＤ１２３の特異性、ならびに二重特異性抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１のＣＤ３ε対する特異性を、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて以下のように測定した。９６ウェルの白色ポリスチレンＥＬＩＳＡプレート（Ｐｉｅｒｃｅ １５０４２）を、１ウェルあたり１００μＬの０．５μｇ／ｍＬの組み換えヒトＣＤ１２３タンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ １０５１８－Ｈ０８Ｈ－５０）または組み換えヒトＣＤ３εタンパク質（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＣＤＥ－Ｈ５２５６－１００）により４℃で一晩コーティングした。次いでプレートを０．０５％のＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎにより５回洗浄し、２％のＢＳＡ－ＰＢＳによりブロックした。ブロッキング後に、１００μＬのＣＤ１２３ ＩｇＭまたはＩｇＧの連続希釈、標準、及び対照を、ウェルへ添加し、室温で２時間インキュベーションした。次いでプレートを１０回洗浄し、ＨＲＰコンジュゲートマウス抗ヒトκ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、９２３０－０５。２％のＢＳＡ－ＰＢＳ中で１：６０００に希釈した）により３０分間インキュベーションした。０．０５％のＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎを使用して１０回の最終的に洗浄した後に、プレートを、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ化学発光基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、３７０７０）を使用して読み取った。発光データをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で収集し、４－パラメーターロジスティックモデルを使用してＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより分析した。ＩｇＭ二重特異性抗体のＣＤ１２３への結合を図３に示し、ＩｇＭ及びＩｇＧ二重特異性抗体のＣＤ３εへの結合を図４Ａ～Ｂに示す。
異なるタンパク質濃度でのＩｇＭ二重特異性抗体及びＩｇＧ二重特異性抗体のＣＤ１２３への結合を比較するために、３８４ウェルの白色プレートを、２５μｌの異なるＣＤ１２３タンパク質濃度（３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、０．３３μｇ／ｍｌ、及び０．１１μｇ／ｍｌ）により３７℃で１時間コーティングした。プレートを洗浄し、Ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ Ｓｔａｒｔｉｎｇ Ｂｌｏｃｋ Ｔ２０（Ｔｈｅｒｍｏ、３７５３９）を使用して１５分間ブロックした。２５μｌのＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭまたはＩｇＧ ＃１の連続希釈をプレートへ添加し、３７℃で３０分間インキュベーションし、１０回洗浄し、ＨＲＰコンジュゲート二次抗体抗ヒトκＥＰＲ５３６７－８を使用して結合したＩｇＭまたはＩｇＧ（Ａｂｃａｍ、ａｂ２０２５４９）を検出した。結果を図５Ａ～Ｄに示す。ＩｇＭ抗体は、全ての濃度で優れた結合を示した。
実施例３：ＡＭＬ細胞株への結合
ＡＭＬ細胞株のＣＤ１２３表面定量
ＡＭＬ細胞株を、ＡＴＣＣまたはＤＳＭＺから購入した（ＭＶ４－１１、ＴＨＰ－１、Ｎａｍａｌｗａ、ＫＧ－１ａ、Ｍｏｌｍ－１３、ＪＭ－１、ＲＥＨ、Ｋ５６２、ＨＬ－６０、及びＯｃｉ－Ｌｙ９）。細胞を、販売者の推奨に従って適切な培地中で培養した。ＣＤ１２３表面発現を、市販のＰＥコンジュゲート抗ＣＤ１２３抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローン６Ｈ６、３０６００６）及びＱｕａｎｔｕｍ（商標）Ｒ－ＰＥ ＭＥＳＦ ｂｅａｄｓ（Ｂａｎｇｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、８２７）を使用して定量した。結果を図６に示す。ＭＶ４－１１細胞、Ｍｏｌｍ－３細胞、Ｔｈｐ－１細胞、ＫＧ－１ａ細胞、及びＪＭ－１細胞は、検出可能なレベルのＣＤ１２３を発現した。
ＡＭＬ細胞株とＩｇＭ及びＩｇＧとの結合アッセイ
ＩｇＧ抗体及びＩｇＭ抗体が、ＣＤ１２３タンパク質を発現するＡＭＬ細胞上のＣＤ１２３と結合する能力を査定するために、以下の方法によって結合アッセイを行った。細胞をＦＡＣＳ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｇｅｎカタログ＃５５４６５６）により洗浄し、Ｆｃブロック（ＢＤ、５６４２２０）により室温で１０分間プレインキュベーションした。１×１０５個の細胞を、１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ１２３の抗体、１μｇ／ｍＬのＩｇＧアイソタイプ対照（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ＃００９－０００－００３）、または１μｇ／ｍＬのＩｇＭアイソタイプ対照（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ＃００９－０００－０１２）により４℃で３０分間染色した。細胞を２回洗浄し、次いで、５μｇ／ｍＬの抗ヒトκ－ＡＦ４８８二次抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ＃３１６５１２）により４℃で３０分間染色した。細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ中で再度懸濁し、フローサイトメトリーによって捕捉した。結果を図７に示す。
実施例４：Ｔ細胞によるＡＭＬ細胞の殺傷
二重特異性ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ結合分子が、ヒトＴ細胞の存在下において標的細胞を殺傷し得ることを実証するために、共培養実験を行った。５×１０３個のＭＶ４－１１、ＴＨＰ－１、及びＮａｍａｌｗａの腫瘍細胞（全てホタルルシフェラーゼを発現する）を、９６丸底組織培養プレート上で、１ウェルあたり３％の非動化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補足した１００μＬの全体積のＡＩＭ－Ｖ培地中の抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１の連続希釈物の存在下において、異なるエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比でＴ細胞と共培養した。５％のＣＯ２インキュベーター中の３７℃での７２時間または９６時間のインキュベーション後に、５０μｌの上清を取り出し、後のサイトカイン放出分析のために－８０℃で冷凍した。５０μｌのルシフェラーゼ基質（例えば、ＯＮＥ－Ｇｌｏ ＥＸ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を、ウェルへ添加した。プレートを短時間振盪して試薬を混合し、ルシフェラーゼ発光シグナルをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。次いでデータをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより分析して、ＥＣ５０を決定した。代表的な用量－応答曲線を図８Ａ～Ｃに示す。検出可能なレベルのＣＤ１２３を発現するＴＨＶ－１細胞（ＥＣ５０：１１．１２ ｐＭ）及びＭＶ４－１１細胞（ＥＣ５０：１３．６３ ｐＭ）は、有効に殺傷され、ＣＤ１２３を発現しないＮａｍａｌｗａ細胞は、殺傷されなかった。
実施例５：抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１はＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化させるが、ＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化させない
抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１がＴ細胞活性化を増強する能力を、以下のように査定した。製造者の指示に従ってＭＡＣＳ汎Ｔ細胞単離キットを使用して、ＰＢＭＣからヒト汎Ｔ細胞を単離した。次いでＴ細胞を、細胞トレース紫色色素（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｃ３４５５７）により標識した。１ウェルあたり１０×１０３個のＭＶ４－１１細胞を、２．５μｇ／ｍｌの抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１または１μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３ ｍＡｂ（ＳＰ３４ ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｔｈｅｒｍｏ １６－００３７－８５）存在下において、４０×１０３個ヒト汎Ｔ細胞抗原細胞と７２時間共培養した。細胞を、以下の染色パネル、すなわちＢｉｏｌｅｇｅｎｄ製の抗ＣＤ８ ＢＶ５１０、抗ＣＤ２５ ＡＰＣ、及び抗ＣＤ４ ＢＶ７８５、ならびにＦｉｘａｂｌｅ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｄｙｅ ＬＩＶＥ－ＯＲ－ＤＹＥ ７５０／７８８（Ｂｉｏｔｉｕｍ、３２００８）によりＦＡＣＳ分析のために染色した。結果を図９に示す。抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１は、ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ２５活性化マーカーを増強させたが、ＣＤ４＋Ｔ細胞上では増強させなかった。
実施例６：サイトカイン放出
実施例４で行ったＴ細胞による細胞傷害性アッセイからの上清を、細胞のうちの０％、２０％、５０％、及び９５％が殺傷された時点で収集した。図１０Ａ及び図１０Ｂは、曲線上の示されたポイントのＭＶ４－１１細胞（パネルＡ）及びＴＨＰ－１細胞（パネルＢ）の汎ＴＤＣＣアッセイにおいて、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１（三角形）及び抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１（白丸）を比較する。白丸：抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１、黒三角形：抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ ＃１。サンプルを、示された殺傷レベルで収集した。
実施例４で行ったＴ細胞による細胞傷害性アッセイからの上清を、示されるように収集し、製造者のプロトコルに従ってＶ－ＰＬＥＸ Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｐａｎｅｌ ｈｕｍａｎ（ＭＳＤ、Ｋ１５０４９Ｄ－２）を使用して、ＩＦＮγ、ＩＬ－４、ＴＮＦ、ＩＬ－１０、及びＩＬ－６を含むサイトカインのパネルについてアッセイした。次いで結果をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより分析した。ＭＶ４－１１細胞についての結果を図１１Ａ～Ｄに示し、ＴＨＰ細胞についての結果を図１２Ａ～Ｄに示し、両方とも４日目である。細胞のうちの９５％が殺傷された場合でさえ、ＩｇＭコンストラクトは最小限のサイトカイン放出をもたらしたが、ＩｇＧコンストラクトは高レベルのサイトカイン放出をもたらした。
実施例７：追加の抗体の生成及び精製
表２に示される追加の例示的な抗体を、実施例１中で記載されように生成及び精製した。抗体はＪ鎖と共に五量体として組み立てられた（データ不掲載）。
（表２）生成された抗体
Figure 2022545655000004
実施例８：ＥＬＩＳＡによって測定された抗体特異性
異なるタンパク質濃度での追加の抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体のサブセットのＣＤ１２３への結合を、実施例２において記載されるようにＥＬＩＳＡアッセイで測定した。結果を図１３に示す。次いでデータをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより分析して、ＥＣ５０を決定し、結果を表３に示す。
（表３）抗体結合ＩＣ５０
Figure 2022545655000005
実施例９：ＭＶ４－１１とＩｇＭ及びＩｇＧとの結合アッセイ
追加の抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体のサブセットの、ＣＤ１２３タンパク質を発現するＭＶ４－１１細胞上のＣＤ１２３と結合する能力を査定するために、標題「ＡＭＬ細胞株とＩｇＭ及びＩｇＧとの結合アッセイ」の実施例３において記載される方法によって様々な抗体濃度で結合アッセイを行った。結果を図１４に示す。
実施例１０：Ｔ細胞によるＡＭＬ細胞の殺傷（異なるＣＤ１２３結合ドメイン）
異なるＣＤ１２３結合ドメインを含む二重特異性ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ結合分子が、ヒトＴ細胞の存在下において標的細胞を殺傷し得ることを実証するために、共培養実験を、各々が異なるＣＤ１２３結合ドメイン（ＩＧＭ ＃Ｆ－ｂ－Ｊ＊－Ｈ１、ＩＧＭ ＃Ｂ－ｂ－Ｊ＊－Ｈ１、ＩＧＭ ＃Ｃ－ｂ－Ｊ＊－Ｈ１、及びＩＧＭ ＃Ａ－ｂ－Ｊ＊－Ｈ１）を含む、４つの例示的な抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ結合分子により行った。５×１０３個のＭＶ４－１１、ＴＨＰ－１、及びＰＬ－２１の腫瘍細胞（全てホタルルシフェラーゼを発現する）を、９６丸底組織培養プレート上で、１ウェルあたり３％の非動化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補足した１００μＬの全体積のＡＩＭ－Ｖ培地中の抗体の連続希釈物の存在下において、７：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比でＴ細胞（強い（ｓｔｒｏｎｇ）ドナーＴ細胞または弱い（ｗｅａｋ）ドナーＴ細胞のいずれか）と共培養した。５％のＣＯ２インキュベーター中の３７℃での７２時間または９６時間のインキュベーション後に、５０μｌのルシフェラーゼ基質（例えば、ＯＮＥ－Ｇｌｏ ＥＸ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を、ウェルへ添加した。プレートを短時間振盪して試薬を混合し、ルシフェラーゼ発光シグナルをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。次いでデータをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより分析して、ＥＣ５０を決定した。強いドナーＴ細胞とＴＨＰ１またはＰＬ２１の共培養についての結果を、それぞれ図１５Ａ及び１５Ｂに示し、全ての共培養についてのＥＣ５０値を表４に示す。
（表４）Ｔ細胞による殺傷のＥＣ５０（ｐＭ）
Figure 2022545655000006
実施例１１：Ｔ細胞によるＡＭＬ細胞の殺傷（異なる改変Ｊ鎖）
異なるＣＤ３結合ドメインを含む二重特異性ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ結合分子が、ヒトＴ細胞の存在下において標的細胞を殺傷し得ることを実証するために、共培養実験を、各々が異なるＣＤ１２３結合ドメイン（ＩＧＭ ＃Ａ－ｃ－Ｊ＊－Ｈ１、ＩＧＭ ＃Ａ－ｄ－Ｊ＊－Ｈ１、ＩＧＭ ＃Ａ－ｅ－Ｊ＊－Ｈ１、及びＩＧＭ ＃Ａ－ｂ－Ｊ＊－Ｈ１）を含む、４つの例示的な抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ結合分子により行った。５×１０３個のＭＶ４－１１、ＴＨＰ－１、及びＰＬ－２１の腫瘍細胞（全てホタルルシフェラーゼを発現する）を、９６丸底組織培養プレート上で、１ウェルあたり３％の非動化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補足した１００μＬの全体積のＡＩＭ－Ｖ培地中の抗体の連続希釈物の存在下において、７：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比でＴ細胞（強いドナーＴ細胞または弱いドナーＴ細胞のいずれか）と共培養した。５％のＣＯ２インキュベーター中の３７℃での７２時間または９６時間のインキュベーション後に、５０μｌのルシフェラーゼ基質（例えば、ＯＮＥ－Ｇｌｏ ＥＸ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を、ウェルへ添加した。プレートを短時間振盪して試薬を混合し、ルシフェラーゼ発光シグナルをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。次いでデータをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより分析して、ＥＣ５０を決定した。強いドナーＴ細胞とＴＨＰ１またはＰＬ２１の共培養についての結果を、それぞれ図１６Ａ及び１６Ｂにおいて示し、全ての共培養についてのＥＣ５０値を表５に示す。
（表５）Ｔ細胞による殺傷のＥＣ５０（ｐＭ）
Figure 2022545655000007
他のＣＤ３結合ドメインを比較するために、及びＪ＊をＪ－ＨＳＡと比較するために、アッセイを概して上で記載されるように繰り返した。ＭＶ４－１１細胞を、ＩＧＭ ＃Ａ－ｂ－Ｊ＊－Ｈ１、ＩＧＭ ＃Ａｆ－ＪＨ－Ｈ１、ＩＧＭ ＃Ａｆ－Ｊ＊－Ｈ１、またはＩＧＭ ＃ＡａＪ＊－Ｈ１の存在下において、３：１のＥ：Ｔ比で、強いドナー細胞と共培養した。結果を図１７に示す。
実施例１２：ＣＤ４＋Ｔ細胞によるＡＭＬ細胞の殺傷とＣＤ８＋Ｔ細胞によるＡＭＬ細胞の殺傷
追加の抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体のサブセットがＴ細胞活性化を増強する能力を、実施例５に記載されているように査定した。結果を図１８Ａ～１８Ｆに示す。抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を用いた場合には、強力な腫瘍の細胞傷害性及びＴ細胞増殖を媒介したが、ＣＤ４＋Ｔ細胞を用いた場合には媒介しなかった。
実施例１３：サイトカイン放出
二重特異性ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ結合分子の曝露により放出される様々なサイトカインの量を決定するために、共培養実験を、３つの例示的な抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ結合分子（ＩＧＭ ＃Ｂ－ｂ－Ｊ＊－Ｈ１、ＩＧＭ ＃Ａ－ｃ－Ｊ＊－Ｈ１、またはＩＧＭ ＃Ａ－ｂ－Ｊ＊－Ｈ１）または抗ＣＤ１２３×ＣＤ３のＩｇＧ ＃１により行った。ホタルルシフェラーゼを発現する５×１０３個のＭＶ４－１１腫瘍細胞を、９６丸底組織培養プレート上で、１ウェルあたり３％の非動化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補足した１００μＬの全体積のＡＩＭ－Ｖ培地中の５０ｐＭまたは１ｎＭの抗体の存在下において、７：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比でＴ細胞と共培養した。５％のＣＯ２インキュベーター中の３７℃での７２時間または９６時間のインキュベーション後に、腫瘍細胞の１００％が殺傷された時に５０μｌの上清を共培養から取り出し、分析するまで－８０℃で冷凍した。
上清を、製造者のプロトコルに従ってＶ－ＰＬＥＸ Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｐａｎｅｌ ｈｕｍａｎ（ＭＳＤ、Ｋ１５０４９Ｄ－２）を使用して、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、及びＩＬ－２を含むサイトカインのパネルについてアッセイした。次いで結果をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより分析した。結果を図１９Ａ～Ｅ及び表６に示す。ＩｇＭ抗体は、アッセイした全てのサイトカインについて、両方の抗体濃度でより少ないサイトカイン放出をもたらした。
（表６）放出されたサイトカイン濃度（ｐｇ／ｍｌ）
Figure 2022545655000008
（表７）本開示で提示される配列
Figure 2022545655000009
Figure 2022545655000010
Figure 2022545655000011
Figure 2022545655000012
Figure 2022545655000013
Figure 2022545655000014
Figure 2022545655000015
Figure 2022545655000016
Figure 2022545655000017
（表８）追加の抗ＣＤ１２３ ＶＨ及びＶＬ配列
Figure 2022545655000018
Figure 2022545655000019
Figure 2022545655000020
Figure 2022545655000021
Figure 2022545655000022
Figure 2022545655000023
（表９）追加の抗ＣＤ３ ＶＨ及びＶＬ配列
Figure 2022545655000024

Claims (66)

  1. ２つまたは５つの二価結合ユニットと改変Ｊ鎖とを含む、二重特異性または多重特異性の多量体結合分子であって、
    前記改変Ｊ鎖が、野生型Ｊ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントと、免疫エフェクター細胞に特異的に結合するＪ鎖関連抗原結合ドメインとを含み、
    各結合ユニットが２つの抗体重鎖を含み、前記重鎖の各々が、ＩｇＡ、ＩｇＡ様、ＩｇＭ、もしくはＩｇＭ様の重鎖定常領域またはそれらの多量体化断片と、結合ユニット関連抗原結合ドメインの少なくとも重鎖可変領域（ＶＨ）部分とを含み、前記結合ユニット関連抗原結合ドメインのうちの少なくとも３つがＣＤ１２３に特異的に結合し、且つ
    前記結合分子が、ＣＤ１２３を発現する細胞の免疫エフェクター細胞依存性殺傷を誘導し得る、
    前記結合分子。
  2. 前記改変Ｊ鎖が、野生型Ｊ鎖に比べて前記結合分子の血清半減期に影響し得る１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を含むバリアントＪ鎖またはその断片を含み、前記結合分子が、動物に投与された際に、前記Ｊ鎖における前記１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を除いて同一であり且つ同じ動物種に同じ方法で投与される参照結合分子に比べて、増加した血清半減期を示す、請求項１に記載の結合分子。
  3. 前記改変Ｊ鎖が、成熟野生型ヒトＪ鎖（配列番号２）のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、請求項２に記載の結合分子。
  4. 配列番号２のＹ１０２に対応するアミノ酸が、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、またはアルギニン（Ｒ）で置換されている、請求項３に記載の結合分子。
  5. 配列番号２のＹ１０２に対応するアミノ酸が、アラニン（Ａ）で置換されている、請求項４に記載の結合分子。
  6. 前記Ｊ鎖が、バリアントヒトＪ鎖であり、且つ配列番号３のアミノ酸配列（「Ｊ＊」）を含む、請求項５に記載の結合分子。
  7. 前記Ｊ鎖関連抗原結合ドメインが、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントに融合しているかまたは化学的にコンジュゲートしている、抗体の一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の結合分子。
  8. 前記ｓｃＦｖ断片が、ペプチドリンカーを介して前記Ｊ鎖に融合している、請求項７に記載の結合分子。
  9. 前記ｓｃＦｖ断片が、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＮ末端、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＣ末端、あるいは前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＮ末端及びＣ末端の両方に融合している、請求項７または請求項８に記載の結合分子。
  10. 前記免疫エフェクター細胞が、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である、請求項７～９のいずれか一項に記載の結合分子。
  11. 前記免疫エフェクター細胞がＴ細胞であり、前記ｓｃＦｖ断片がＣＤ３に特異的に結合する、請求項１０に記載の結合分子。
  12. 前記Ｔ細胞が、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞である、請求項１０または請求項１１に記載の結合分子。
  13. 前記ｓｃＦｖ断片が、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、ＶＨ相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含み、且つ前記ＶＬが、ＶＬ相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含み、
    （ａ）前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３が、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号５、配列番号６、及び配列番号７のアミノ酸配列をそれぞれ含み、且つ前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３が、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号９、配列番号１０、及び配列番号１１のアミノ酸配列をそれぞれ含むか、
    （ｂ）前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３が、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３０、配列番号１３２、及び配列番号１３５のアミノ酸配列をそれぞれ含み、且つ前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３が、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３８、配列番号１４０、及び配列番号１４２のアミノ酸配列をそれぞれ含むか、
    （ｃ）前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３が、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３０、配列番号１３２、及び配列番号１３５のアミノ酸配列をそれぞれ含み、且つ前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３が、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３８、配列番号１４０、及び配列番号１４３のアミノ酸配列をそれぞれ含むか、
    （ｄ）前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３が、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３１、配列番号１３３、及び配列番号１３６のアミノ酸配列をそれぞれ含み、且つ前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３が、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３９、配列番号１４１、及び配列番号１４４のアミノ酸配列をそれぞれ含むか、
    （ｅ）前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３が、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３１、配列番号１３４、及び配列番号１３６のアミノ酸配列をそれぞれ含み、且つ前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３が、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３９、配列番号１４１、及び配列番号１４５のアミノ酸配列をそれぞれ含むか、または
    （ｆ）前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３が、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３１、配列番号１３４、及び配列番号１３７のアミノ酸配列をそれぞれ含み、且つ前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３が、０、１、もしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１３９、配列番号１４１、及び配列番号１４６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、
    請求項１１または請求項１２に記載の結合分子。
  14. 前記ｓｃＦｖ断片が、それぞれ、配列番号４及び配列番号８、配列番号１１９及び配列番号１２０、配列番号１２１及び配列番号１２２、配列番号１２３及び配列番号１２４、配列番号１２５及び配列番号１２６、または配列番号１２７及び配列番号１２８のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の結合分子。
  15. 前記ｓｃＦｖ断片が、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨ及びＶＬが、それぞれ配列番号１３及び配列番号１４のアミノ酸配列を含む、請求項１１または請求項１２に記載の結合分子。
  16. 前記改変Ｊ鎖が、配列番号１２のアミノ酸２０～４２０、配列番号１５のアミノ酸２０～４１２、または配列番号１６のアミノ酸２３～４１５を含むアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の結合分子。
  17. 前記免疫エフェクター細胞がＮＫ細胞であり、前記ｓｃＦｖ断片がＣＤ１６に特異的に結合する、請求項１０に記載の結合分子。
  18. 前記改変Ｊ鎖が、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントに融合しているかまたは化学的にコンジュゲートしている免疫刺激物質（「ＩＳＡ」）をさらに含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の結合分子。
  19. 前記ＩＳＡが、サイトカインまたはその受容体結合断片もしくはバリアントを含む、請求項１８に記載の結合分子。
  20. 前記ＩＳＡが、（ａ）インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）タンパク質またはその受容体結合断片もしくはバリアント（「Ｉ」）、及び（ｂ）Ｉと結合することができる、スシドメインを含むインターロイキン－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）断片またはそのバリアント（「Ｒ」）を含み、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアント、ならびにＩ及びＲのうちの少なくとも１つが、融合タンパク質として連結されており、Ｉ及びＲが結合して前記ＩＳＡとして機能することができる、請求項１９に記載の結合分子。
  21. 前記ＩＳＡが、ペプチドリンカーを介して前記Ｊ鎖に融合している、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の結合分子。
  22. 各結合ユニットが２つの軽鎖をさらに含み、前記軽鎖の各々が、κまたはλ軽鎖定常領域と、結合ユニット関連抗原結合ドメインの少なくとも軽鎖可変領域（ＶＬ）部分とを含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の結合分子。
  23. ＣＤ１２３に特異的に結合する、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個の結合ユニット関連抗原結合ドメインを含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の結合分子。
  24. 前記少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個の結合ユニット関連抗原結合ドメインが、同じＣＤ１２３エピトープに結合する、請求項２３に記載の結合分子。
  25. 全ての前記結合ユニット関連抗原結合ドメインが同一である、請求項２４に記載の結合分子。
  26. 前記結合ユニット関連抗原結合ドメインが、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨ及びＶＬが、６つの免疫グロブリン相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３が、配列番号３２及び配列番号３３、配列番号３７及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５、配列番号４６及び配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１、配列番号５２及び配列番号５３、配列番号５４及び配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９、配列番号６０及び配列番号６１、配列番号６２及び配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５、配列番号６６及び配列番号６７、配列番号６８及び配列番号６９、配列番号７０及び配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５、配列番号７６及び配列番号７７、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１、配列番号８２及び配列番号８３、配列番号８４及び配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７、配列番号８８及び配列番号８９、配列番号９０及び配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３、配列番号９４及び配列番号９５、配列番号９６及び配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９、配列番号１００及び配列番号１０１、配列番号１０２及び配列番号１０３、配列番号１０７及び配列番号１０８、配列番号１０９及び配列番号１１０、配列番号１１１及び配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４、配列番号１１５及び配列番号１１６、もしくは配列番号１１７及び配列番号１１８をそれぞれ含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む抗体のＣＤＲを含むか、または、ＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１つもしくは２つのアミノ酸置換を除いて、配列番号３２及び配列番号３３、配列番号３７及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５、配列番号４６及び配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１、配列番号５２及び配列番号５３、配列番号５４及び配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９、配列番号６０及び配列番号６１、配列番号６２及び配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５、配列番号６６及び配列番号６７、配列番号６８及び配列番号６９、配列番号７０及び配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５、配列番号７６及び配列番号７７、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１、配列番号８２及び配列番号８３、配列番号８４及び配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７、配列番号８８及び配列番号８９、配列番号９０及び配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３、配列番号９４及び配列番号９５、配列番号９６及び配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９、配列番号１００及び配列番号１０１、配列番号１０２及び配列番号１０３、配列番号１０７及び配列番号１０８、配列番号１０９及び配列番号１１０、配列番号１１１及び配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４、配列番号１１５及び配列番号１１６、もしくは配列番号１１７及び配列番号１１８をそれぞれ含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む抗体のＣＤＲを含む、請求項２３～２５のいずれか一項に記載の結合分子。
  27. 前記結合ユニット関連抗原結合ドメインが、抗体のＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨ及びＶＬが、配列番号３２及び配列番号３３、配列番号３７及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５、配列番号４６及び配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１、配列番号５２及び配列番号５３、配列番号５４及び配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９、配列番号６０及び配列番号６１、配列番号６２及び配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５、配列番号６６及び配列番号６７、配列番号６８及び配列番号６９、配列番号７０及び配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５、配列番号７６及び配列番号７７、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１、配列番号８２及び配列番号８３、配列番号８４及び配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７、配列番号８８及び配列番号８９、配列番号９０及び配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３、配列番号９４及び配列番号９５、配列番号９６及び配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９、配列番号１００及び配列番号１０１、配列番号１０２及び配列番号１０３、配列番号１０７及び配列番号１０８、配列番号１０９及び配列番号１１０、配列番号１１１及び配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４、配列番号１１５及び配列番号１１６、または配列番号１１７及び配列番号１１８をそれぞれ含むかまたはそれらの内に含有される成熟ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の結合分子。
  28. 前記結合分子が、２つの二価結合ユニットを含む二量体結合分子であり、各結合ユニットが２つの抗体重鎖を含み、前記重鎖の各々が、ＩｇＡもしくはＩｇＡ様の重鎖定常領域またはそれらの多量体化断片を含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の結合分子。
  29. 分泌成分またはその断片もしくはバリアントをさらに含む、請求項２８に記載の結合分子。
  30. 前記ＩｇＡもしくはＩｇＡ様の重鎖定常領域またはそれらの多量体化断片の各々が、Ｃα３及びテールピース（ｔｐ）ドメインを含む、請求項２８または請求項２９に記載の結合分子。
  31. 前記ＩｇＡもしくはＩｇＡ様の重鎖定常領域が、Ｃα１ドメイン、Ｃα２ドメイン、ＩｇＡヒンジ領域、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項３０に記載の結合分子。
  32. 前記ＩｇＡまたはＩｇＡ様の重鎖定常領域が、ヒトＩｇＡまたはＩｇＡ様の定常領域である、請求項２８～３１のいずれか一項に記載の結合分子。
  33. 前記ＩｇＡの重鎖定常領域が、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２５のアミノ酸配列、またはそれらの任意の多量体化バリアントもしくは断片を含む、請求項３２に記載の結合分子。
  34. 各結合ユニットが、前記ＩｇＡ定常領域またはその断片に対してアミノ末端側に位置するＶＨを各々含む２つのＩｇＡまたはＩｇＡ様の重鎖と、免疫グロブリン軽鎖定常領域に対してアミノ末端側に位置するＶＬを各々含む２つの免疫グロブリン軽鎖とを含む、請求項２８～３３のいずれか一項に記載の結合分子。
  35. 前記結合分子が、５つの二価結合ユニットを含む五量体結合分子であり、各結合ユニットが、２つのＩｇＭもしくはＩｇＭ様の重鎖定常領域またはそれらの多量体化断片を含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の結合分子。
  36. 前記ＩｇＭもしくはＩｇＭ様の重鎖定常領域またはそれらの多量体化断片の各々が、Ｃμ４ドメイン及びテールピース（ｔｐ）ドメイン、またはそれらの断片もしくはバリアントを含む、請求項３５に記載の結合分子。
  37. 前記ＩｇＭもしくはＩｇＭ様の重鎖定常領域またはそれらの多量体化断片が、Ｃμ１ドメイン、Ｃμ２ドメイン、Ｃμ３ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項３５または請求項３６に記載の結合分子。
  38. 前記ＩｇＭまたはＩｇＭ様の重鎖定常領域が、ヒトＩｇＭ定常領域である、請求項３５～３７のいずれか一項に記載の結合分子。
  39. 各ＩｇＭ重鎖定常領域が、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２３のアミノ酸配列、またはそれらの多量体化バリアントもしくは断片を含む、ヒトＩｇＭ定常領域またはその多量体化バリアントもしくは断片である、請求項３８に記載の結合分子。
  40. 前記結合分子がバリアントヒトＩｇＭ定常領域を含み、前記多量体結合分子が、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２３のアミノ酸配列、またはそれらの多量体化バリアントもしくは断片を含むＩｇＭ重鎖定常領域を含む多量体結合分子に比べて、低減したＣＤＣ活性を有する、請求項３８または請求項３９に記載の結合分子。
  41. 各ＩｇＭ重鎖定常領域が、配列番号２２または配列番号２３のアミノ酸配列のバリアントを含み、前記バリアントが、配列番号２２もしくは配列番号２３の位置Ｐ３１１におけるアミノ酸置換、配列番号２２もしくは配列番号２３の位置Ｐ３１３におけるアミノ酸置換、または配列番号２２もしくは配列番号２３の位置Ｐ３１１及びＰ３１３におけるアミノ酸置換を含む、請求項４０に記載の結合分子。
  42. 各ＩｇＭ重鎖定常領域が、参照ＩｇＭ重鎖定常領域に比べて１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を有するバリアントヒトＩｇＭ定常領域であり、前記参照ＩｇＭ重鎖定常領域が、前記１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を除いて前記バリアントＩｇＭ重鎖定常領域と同一であり、前記結合分子が、対象動物に投与された際に、同じ動物種に同じ方法で投与される前記参照ＩｇＭ重鎖定常領域を含む結合分子に比べて、増加した血清半減期を示す、請求項３８または請求項３９に記載の結合分子。
  43. 前記バリアントＩｇＭ重鎖定常領域が、配列番号２２または配列番号２３の野生型ヒトＩｇＭ定常領域のアミノ酸Ｅ３４５Ａ、Ｓ４０１Ａ、Ｅ４０２Ａ、またはＥ４０３Ａに相当する、１つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、請求項４２に記載の多量体結合分子。
  44. 各結合ユニットが、前記ＩｇＭ定常領域またはその断片に対してアミノ末端側に位置するＶＨを各々含む２つのＩｇＭ重鎖と、免疫グロブリン軽鎖定常領域に対してアミノ末端側に位置するＶＬを各々含む２つの免疫グロブリン軽鎖とを含む、請求項３５～４３のいずれか一項に記載の結合分子。
  45. 請求項１～４４のいずれか一項に記載の結合分子を含む、組成物。
  46. 請求項１～４４のいずれか一項に記載の結合分子のポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド。
  47. 前記ポリペプチドサブユニットが、ＩｇＭまたはＩｇＭ様の重鎖定常領域と、前記結合分子の前記結合ユニット関連抗原結合ドメインの少なくとも抗体ＶＨ部分とを含む、請求項４６に記載のポリヌクレオチド。
  48. 前記ポリペプチドサブユニットが、ＶＨのＣ末端に融合しているヒトＩｇＭ定常領域またはその断片を含み、前記ＶＨが、
    （ａ）配列番号３２、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９６、配列番号９８、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０７、配列番号１０９、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５、もしくは配列番号１１７を含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＨアミノ酸配列中に含有されるＣＤＲ；または、ＨＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１つもしくは２つの単一アミノ酸置換を除いて、配列番号３２、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９６、配列番号９８、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０７、配列番号１０９、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５、もしくは配列番号１１７を含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＨアミノ酸配列中に含有されるＣＤＲ
    を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３領域、あるいは、
    （ｂ）配列番号３２、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９６、配列番号９８、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０７、配列番号１０９、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５、または配列番号１１７を含むかまたはそれらの内に含有される成熟ＶＨアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一のアミノ酸配列、
    を含む、請求項４７に記載のポリヌクレオチド。
  49. 前記ポリペプチドサブユニットが、軽鎖定常領域と、前記多量体結合分子の前記抗原結合ドメインの抗体ＶＬ部分とを含む、請求項４６～４８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  50. 前記ポリペプチドサブユニットが、ＶＬのＣ末端に融合しているヒトκもしくはλ軽鎖定常領域またはその断片を含み、前記ＶＬが、
    （ａ）配列番号３３、配列番号３８、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、もしくは配列番号１１８を含むかもしくはそれらの内に含有されるＶＬアミノ酸配列中に含有されるＣＤＲ；または、ＬＣＤＲのうちの１つもしくは複数における１つもしくは２つの単一アミノ酸置換を除いて、配列番号３３、配列番号３８、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、もしくは配列番号１１８のＶＬアミノ酸配列中に含有されるＣＤＲ
    を含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３領域、あるいは、
    （ｂ）配列番号３３、配列番号３８、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、または配列番号１１８を含むかまたはそれらの内に含有される成熟ＶＬアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一のアミノ酸配列
    を含む、請求項４９に記載のポリヌクレオチド。
  51. 前記ポリペプチドサブユニットが改変Ｊ鎖を含み、前記改変Ｊ鎖が、野生型Ｊ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントと、免疫エフェクター細胞に特異的に結合するＪ鎖関連抗原結合ドメインとを含む、請求項４６～５０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  52. 前記改変Ｊ鎖が、配列番号１２のアミノ酸２０～４２０、配列番号１５のアミノ酸２０～４１２、または配列番号１６のアミノ酸２３～４１５に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項５１に記載のポリヌクレオチド。
  53. 請求項４６～４８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項４６、４９、または５０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、及び請求項５１または請求項５２のポリヌクレオチドを含む、組成物。
  54. 前記ポリヌクレオチドが、２つ以上の別個のベクター上にある、請求項５３に記載の組成物。
  55. 前記ポリヌクレオチドが、単一ベクター上にある、請求項５３に記載の組成物。
  56. Ｊ鎖またはその断片もしくはそのバリアントをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドをさらに含む、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の組成物。
  57. 請求項５５に記載のベクター。
  58. 請求項５４に記載の複数のベクター。
  59. 請求項４６～５２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項５３～５６のいずれか一項に記載の組成物、または請求項５７もしくは５８のいずれか一項に記載のベクターを含み、請求項１～４４のいずれか一項に記載の結合分子またはそのサブユニットを発現し得る、宿主細胞。
  60. 請求項１～４４のいずれか一項に記載の結合分子を製造する方法であって、請求項５９に記載の宿主細胞を培養する工程、及び前記結合分子を回収する工程を含む、前記方法。
  61. がんまたは他の悪性腫瘍を治療する方法であって、有効量の請求項１～４４のいずれか一項に記載の結合分子を、治療を必要とする対象に投与する工程を含み、前記結合分子が、がん細胞の免疫エフェクター細胞媒介性殺傷を誘導し得る、前記方法。
  62. 前記がんまたは悪性腫瘍が、血液がんまたは悪性腫瘍である、請求項６１に記載の方法。
  63. 前記がんが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ細胞ＡＬＬ）、古典的ホジキンリンパ腫、有毛細胞性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、全身性肥満細胞症、または形質細胞様樹状細胞白血病である、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記Ｊ鎖関連抗原結合ドメインがＣＤ３εに結合し、前記結合分子が、悪性細胞のＴ細胞媒介性殺傷を誘導する、請求項６１～６３のいずれか一項に記載の方法。
  65. 前記治療が、ＩｇＧベースの抗ＣＤ１２３抗ＣＤ３二重特異性抗体と比べて少ないサイトカイン放出をもたらす、請求項６４に記載の方法。
  66. 前記対象がヒトである、請求項６１～６５のいずれか一項に記載の方法。
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