EA031049B1 - Антитела против pdgfr-бета и их применения - Google Patents

Антитела против pdgfr-бета и их применения Download PDF

Info

Publication number
EA031049B1
EA031049B1 EA201591072A EA201591072A EA031049B1 EA 031049 B1 EA031049 B1 EA 031049B1 EA 201591072 A EA201591072 A EA 201591072A EA 201591072 A EA201591072 A EA 201591072A EA 031049 B1 EA031049 B1 EA 031049B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
beta
pdgfr
antibody
antibodies
binding
Prior art date
Application number
EA201591072A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201591072A1 (ru
Inventor
Стэнли Дж. Уиганд
Иван Б. Лобов
Original Assignee
Ридженерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Ридженерон Фармасьютикалз, Инк.
Publication of EA201591072A1 publication Critical patent/EA201591072A1/ru
Publication of EA031049B1 publication Critical patent/EA031049B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/179—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/32—Fusion polypeptide fusions with soluble part of a cell surface receptor, "decoy receptors"
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/40—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/73—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing coiled-coiled motif (leucine zippers)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)

Abstract

Изобретение относится к антителам, которые связываются с рецептором бета, полученным из тромбоцитов фактора роста (PDGFR-бета), и к способам их применения. Согласно некоторым вариантам осуществления изобретения антитела представляют собой полностью человеческие антитела, которые связываются в PDGFR-бета человека с высокой аффинностью. Антитела по изобретению применимы для лечения заболеваний и расстройств, ассоциированных с передачей сигнала PDGFR-бета и/или клеточной экспрессией PDGFR-бета, таких как глазные болезни, фиброзные болезни, сосудистые заболевания и злокачественные опухоли.

Description

Изобретение относится к антителам, которые связываются с рецептором бета, полученным из тромбоцитов фактора роста (PDGFR-бета), и к способам их применения. Согласно некоторым вариантам осуществления изобретения антитела представляют собой полностью человеческие антитела, которые связываются в PDGFR-бета человека с высокой аффинностью. Антитела по изобретению применимы для лечения заболеваний и расстройств, ассоциированных с передачей сигнала PDGFR-бета и/или клеточной экспрессией PDGFR-бета, таких как глазные болезни, фиброзные болезни, сосудистые заболевания и злокачественные опухоли.
031049 Bl
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к антителам и их антигенсвязывающим фрагментам, которые специфичны в отношении PDGFR-бета человека, и к способам их применения.
Уровень техники
Полученные из тромбоцитов факторы роста (PDGF) являются мощными митогенами, которые существуют в пяти разных димерных конфигурациях, состоящих из субъединиц четырех разных изоформ: A, B, C и D. Пять димерных форм PDGF представляют собой формы AA, BB, AB, CC и DD, которые образуются в результате образования дисульфидных связей между соответствующими отдельными мономерами PDGF. PDGF-лиганды оказывают свое биологическое действие посредством взаимодействий с рецепторами PDGF (PDGFR). PDGFR представляют собой однократно пронизывающие мембрану трансмембранные тирозинкиназные рецепторы, состоят из гетеродимерных или гомодимерных ассоциаций альфа (а)-цепи рецептора (PDGFR-альфа) и/или бета (Р)-цепи рецептора (PDGFR-бета). Таким образом, активные PDGFR могут состоять из пар цепей рецептора αα, ββ или αβ. PDGFR имеют общую доменную структуру, включающую в себя пять внеклеточных петель иммуноглобулина (Ig), трансмембранный домен и разделенный внутриклеточный тирозинкиназный (ТК) домен. Взаимодействие между димерными PDGF-лигандами и PDGFR приводит к димеризации цепей рецептора, автофосфорилированию рецептора и внутриклеточной трансдукции сигнала. Было показано, что in vitro рецепторы ββ активируются под действием PDGF-BB и -DD, тогда как рецепторы αβ активируются под действием PDGF-BB, -CC, -DD и -AB, а рецепторы αα активируются под действием PDGF-AA, -BB, -CC и -AB (смотри Andrae et al. (2008) Genes Dev. 22(10): 1276-1312).
Передача PDGF вовлечена в различные заболевания человека, включая заболевания, ассоциированные с патологической неоваскуляризацией, заболеваниями сосудов и фиброзирующие болезни, рост опухолей и глазные болезни. Соответственно, ингибиторы передачи сигнала PDGF были предложены для применения в различных планах лечения. Например, ингибиторы PDGFR-бета были предложены для применения при лечении различных заболеваний и расстройств. (Andrae et al. (2008) Genes Dev. 22(10): 1276-1312). Ингибиторы PDGFR-бета включают неспецифичные низкомолекулярные ингибиторы тирозинкиназ, такие как мезилат иматиниба, малат сунитиниба и CP-673451, а также антитела против PDGFR-бета (смотри, например, патенты США № 7060271, 5882644, 7740850 и публикацию заявки на выдачу патента № 2011/0177074). Аптамеры против лиганда (например, анти-PDGF-B) также были предложены для терапевтических применений. Тем не менее, в данной области существует необходимость в новых высокоспецифичных и сильных ингибиторах передачи сигнала PDGF.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к антителу, которое связывают рецептор бета полученного из тромбоцитов фактора роста человека (PDGFR-бета). Антитело по изобретению можно использовать, кроме прочего, для ингибирования опосредованной PDGFR-бета передачи сигнала и для лечения заболеваний и расстройств, вызванных или связанных с активностью и/или передачей сигнала PDGFR-бета. Антитело по изобретению также можно использовать для индукции клеточной гибели в клетках, которые экспрессируют высокие уровни PDGFR-бета на своей поверхности.
Антитело по изобретению может быть полноразмерным (например, антитело IgG1 или IgG4) или может содержать только антигенсвязывающую часть (например, фрагмент Fab, F(ab')2 или scFv) и может быть модифицировано так, чтобы оказать влияние на функциональность, например, чтобы исключить остаточные эффекторные функции (Reddy et al., 2000, J. Immunol. 164: 1925-1933).
Настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 130.
Настоящее изобретение также относится к антителу или антигенсвязывающему фрагменту антитела, содержащему вариабельную область легкой цепи (LCVR), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138.
Настоящее изобретение также относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащем пару последовательностей HCVR и LCVR (HCVR/LCVR) SEQ ID NO: 130/138.
Некоторые не ограничивающие примеры антител и антигенсвязывающих фрагментов по изобретению содержат домены HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3, соответственно, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 132-134-136-140-142-144 (например, H2M3374N).
В родственном варианте изобретение относится к антителу или антигенсвязывающему фрагменту антитела, который специфично связывается с PDGFR-бета, при этом антитело или фрагмент содержит домены CDR тяжелой и легкой цепей, входящие в последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепей (HCVR/LCVR) SEQ ID NO: 130/138. Способы и методики идентификации CDR в аминокислотных последовательностях HCVR и LCVR хорошо известны в данной области и могут быть использованы для идентификации CDR в конкретных аминокислотных последовательностях HCVR и/или LCVR, раскрытых в настоящем описании. Примеры правил, которые можно использовать для идентификации границ CDR включают, например, определение Kabat, определение Chothia и определение AbM. В
- 1 031049 общих чертах, определение Kabat основано на вариабельности последовательностей, определение Chothia основано на положении областей структурных петель, и определение AbM является компромиссом между подходами Kabat и Chothia. Смотри, например, Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273: 927-948 (1997); и Martin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 9268-9272 (1989). Также доступны базы данных общего пользования для идентификации последовательностей CDR в антителе.
В другом аспекте изобретение относится к молекулам нуклеиновых кислот, кодирующим антитела против PDGFR-бета или их антигенсвязывающие фрагменты. Рекомбинантные векторы экспрессии, несущие нуклеиновые кислоты по изобретению, и клетки-хозяева, в которые были введены такие векторы, также входят в объем изобретения, как и способы получения антител путем культивирования клетокхозяев в условиях, обеспечивающих возможность продукции антител, и выделение полученных антител.
Настоящее изобретение относится к антителам против PDGFR-бетам, имеющим модифицированную картину гликозилирования. В некоторых вариантах применения может быть эффективна модификация для удаления нежелательных сайтов гликозилирования, или антитело, в котором отсутствует остаток фукозы, присутствующий в олигосахаридной цепи, например, для повышений функции зависимой от антител клеточной цитотоксичности (ADCC) (смотри Shield et al. (2002) JBC 277: 26733). В других применениях может быть осуществлена модификация галактозилирования, чтобы модифицировать зависимую от комплемента цитотоксичность (CDC).
В другом аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей рекомбинантное антитело человека или его фрагмент, который специфично связывается с PDGFR-бета, и фармацевтически приемлемый носитель. В родственном аспекте отличительным признаком изобретения является композиция, которая представляет собой сочетание антитела против PDGFR-бета и второго терапевтического средства. В одном из вариантов вторым терапевтическим средством является любое средство, которое успешно сочетается с анти-PDGFR-бета-антителом. Примеры средств, которые можно успешно сочетать с анти-PDGFR-бета-антителом, включают без ограничения другие средства, которые ингибируют активность PDGFR-бета (включая другие антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, пептидные ингибиторы, низкомолекулярные антагонисты и т.д.) и/или средства, которые прямо не связывают PDGFR-бета, но, тем не менее, мешают, блокируют или ослабляют опосредованную PDGFR-бета передачу сигнала. Дополнительные сочетаемые терапевтические средства и совместно вводимые препараты, содержащие антитела против PDGFR-бета согласно настоящему изобретению, раскрыты в настоящем описании.
В другом аспекте изобретение относится к терапевтическим способам ингибирования активности PDGFR-бета с использованием антитела против PDGFR-бета или антигенсвязывающей части антитела по изобретению, при этом терапевтические способы включают в себя введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела по изобретению. Расстройством, в отношении которого проводят лечение, является любое заболевание или состояние, которое улучшается, ослабевает, ингибируется или предотвращается при удалении, ингибировании или снижении активности или передачи сигнала PDGFR-бета. Антитела против PDGFR-бета или фрагменты антител по изобретению могут функционировать, блокируя взаимодействие между PDGFR-бета и партнером PDGFR-бета в связывании (например, лигандом PDGF) или иным образом ингибируя активность PDGFR-бета в передаче сигнала.
Настоящее изобретение также относится к применению антитела против PDGFR-бета или антигенсвязывающей части антитела по изобретению в производстве лекарственного средства для лечения заболевания или расстройства, связанного или вызванного активностью PDGFR-бета, у пациента.
Другие варианты станут очевидными после рассмотрения следующего далее подробного описания.
Краткое описание фигур
Фиг. 1 представляет собой гистограмму, показывающую результаты анализа блокирования лиганда PDGF, в котором PDGFR-бета улавливали на поверхности биосенсора, а лиганд PDGF (BB, DD или AB) наносили на поверхность после обработки различными антителами против PDGFR-бетами по изобретению или контрольным антителом. Результаты показаны в условных единицах.
Фиг. 2 представляет собой матрицу, показывающую результаты анализа перекрестной конкуренции антител, в котором первое анти-PDGFR-бета-антитело (мАт №1) наносили на покрытый PDGFR-бета кончик сенсора с последующей обработкой вторым анти-PDGFR-бета-антителом (мАт №2). Изображены ответы в виде связывания (числовые значения от -0,01 до 0,36) для каждого исследуемого сочетания антител. Светло серые прямоугольники с черным шрифтом представляют ответ в виде связывания в случае самоконкуренции. Антитела, конкурирующие в обоих направлениях, независимо от порядка связывания антигена, выделены черными прямоугольниками с использованием белого шрифта. Отсутствие конкуренции, свидетельствующее о разных областях связывания, показано в виде белых прямоугольников с использованием черного шрифта.
Подробное описание
Прежде чем знакомиться с описанием настоящего изобретения следует понять, что настоящее изобретение не ограничено конкретными описанными способами и экспериментальными условиями, так как
- 2 031049 такие способы и условия могут варьировать. Также следует понимать, что терминология, используемая в настоящем описании, использована только в целях описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения, так как объем настоящего изобретения будет ограничен только прилагаемой формулой изобретения.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют такое же значение, которое обычно подразумевает специалист в области, к которой настоящее изобретение относится. В используемом в настоящем описании смысле термин примерно в случае применения по отношению к конкретному указанному числовому значению означает, что значение может варьировать по сравнению с указанным значением не более чем на 1%. Например, в используемом в настоящем описании смысле выражение примерно 100 включает 99 и 101 и все значения между ними (например, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4 и т.д.).
Хотя при практическом осуществлении или тестировании настоящего изобретения могут быть использованы любые способы и материалы, сходные или эквивалентные способам или материалам, описанным в настоящей публикации, далее описаны предпочтительные способы и материалы.
Определения
Выражения рецептор-бета полученного из тромбоцитов фактора роста, PDGFR(J>. PDGFRбета, PDGFRb и тому подобные, в используемом в настоящем описании смысле относятся к белку PDGFR-бета человека, имеющему аминокислотную последовательность SEQ ID N0:341 (смотри также UniProt, номер доступа P09619). Все ссылки на белки, полипептиды и фрагменты белков в настоящем описании приведены в отношении человеческого варианта соответствующего белка, полипептида или фрагмента белка, если специально не указано, что он получен из вида, отличного от человека (например, мышиный PDGFR-бета, PDGFR-бета обезьян и т.д.).
В используемом в настоящем описании смысле выражение антитело, которое связывает PDGFRбета или анти-PDGFR-бета-антитело охватывает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связывают растворимый фрагмент белка PDGFR-бета (например, весь или часть внеклеточного домена PDGFR-бета) и/или экспрессированный на клеточной поверхности PDGFR-бета. Выражение экспрессированный на клеточной поверхности PDGFR-бета означает белок PDGFR-бета или его часть, которые экспрессируются на поверхности клетки in vitro или in vivo, так что, по меньшей мере часть белка PDGFR-бета (например, аминокислоты 33-532 последовательности SEQ ID NO:341) экспонируется на внеклеточной стороне клеточной мембраны и доступна для антигенсвязывающей части антитела.
Экспрессированный на клеточной поверхности PDGFR-бета включает молекулы PDGFR-бета в контексте гомодимеров рецепторов ββ, а также молекулы PDGFR-бета в контексте гетеродимеров оф. Растворимые молекулы PDGFR-бета включают, например, мономерные и димерные конструкции PDGFR-бета, которые описаны в примере 3 в настоящей публикации (например, PDGFRb. mmh, SEQ ID NO:337 [мономерная], PDGFRb. mFc, SEQ ID NO:338 [димерная] и PDGFRb. hFc, SEQ ID NO:339 [димерная]), или конструкции, в значительной степени сходные с указанными.
Термин антитело в используемом в настоящем описании смысле означает любую антигенсвязывающую молекулу или молекулярный комплекс, содержащие, по меньшей мере одну определяющую комплементарность область (CDR), которая специфично связывается или взаимодействует с конкретным антигеном (например, PDGFR-бета). Термин антитело включает молекулы иммуноглобулинов, содержащие четыре полипептидных цепи, две тяжелых (H) цепи и две легких (L) цепи, связанные между собой дисульфидными связями, а также их мультимеры (например, IgM). Каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (сокращенно называемую в настоящем описании HCVR или VH) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи содержит три домена, CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи (сокращенно называемую в настоящем описании LCVR или VL) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи содержит один домен (CL1). Области VH и VL можно дополнительно подразделить на области гипервариабельности, называемые определяющими комплементарность областями (CDR), между которыми расположены области, которые являются более консервативными, называемые каркасными областями (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, распределенных от амино-конца к карбоксильному концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. В разных вариантах осуществления изобретения FR антитела против PDGFR-бета (или его антигенсвязывающей части) могут быть идентичны последовательностям зародышевой линии человека или могут быть естественным образом или искусственно модифицированы. Консенсусная аминокислотная последовательность может быть определена на основе сравнительного анализа двух или более CDR.
Термин антитело в используемом в настоящем описании смысле также относится к антигенсвязывающим фрагментам полных молекул антител. Термины антигенсвязывающая часть антитела, антигенсвязывающий фрагмент антитела и тому подобные в используемом в настоящем описании смысле включают любой встречающийся в природе, получаемый ферментативно, синтетический или генетически сконструированный полипептид или гликопротеид, который специфично связывается с антигеном с образованием комплекса. Антигенсвязывающие фрагменты антитела могут быть получены, например, из
- 3 031049 полноразмерных молекул антител с использованием любой подходящей стандартной методики, такой как протеолитическое расщепление или методика генетической инженерии рекомбинантов, включающая в себя обработку и экспрессию ДНК, кодирующей вариабельные и необязательно константные домены антител. Такая ДНК известна и/или легко доступна, например, из коммерческих источников, библиотек ДНК (включая, например, фаговые библиотеки антител), или может быть синтезирована. ДНК может быть секвенирована и подвергнута химической обработке или обработке с использованием способов молекулярной биологии, например, чтобы расположить один или несколько вариабельных и/или константных доменов в подходящей конфигурации, или чтобы ввести кодоны, создать остатки цистеина, модифицировать, добавить или делетировать аминокислоты и т.д.
Не ограничивающие примеры антигенсвязывающих фрагментов включают: (i) Fab-фрагменты; (ii) Р(аЬ')2-фрагменты; (iii) Fd-фрагменты; (iv) Fv-фрагменты; (v) одноцепочечные молекулы Fv(scFv); (vi) dAb-фрагменты; и (vii) минимальные единицы распознавания аминокислотных остатков, которые имитируют гипервариабельную область антитела (например, Выделенная определяющая комплементарность область (CDR), такая как пептид CDR3), или ограниченный пептид FR3-CDR3-FR4. Другие сконструированные молекулы, такие как домен-специфичные антитела, однодоменные антитела, антитела с делетированными доменами, химерные антитела, CDR-привитые антитела, диантитела, триантитела, тетраантитела, миниантитела, наноантитела (например, моновалентные наноантитела, бивалентные наноантитела и т.д.), малые модульные иммунофармацевтические средства (SMIP), и вариабельные домены IgNAR акул, также охватываются выражением антигенсвязывающая фрагмент в используемом в настоящем описании смысле.
Антигенсвязывающий фрагмент антитела обычно будет содержать, по меньшей мере один вариабельный домен. Вариабельный домен может быть любого размера или аминокислотного состава и обычно будет содержать, по меньшей мере одну CDR, которая располагается вблизи или в рамке с одной или несколькими каркасными последовательностями. В антигенсвязывающих фрагментах, имеющих домен Vh, ассоциированный с доменом VL, домены VH и VL могут быть расположены относительно друг друга в любом подходящем порядке. Например, вариабельная область может быть димерной и может содержать димеры VH-VH, VH-VL или VL-VL. Альтернативно антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать мономерный домен VH или VL.
В некоторых вариантах антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать, по меньшей мере один вариабельный домен, ковалентно связанный, по меньшей мере с одним константным доменом. Не ограничивающие примеры конфигураций вариабельных и константных доменов, которые можно найти в антигенсвязывающем фрагменте антитела согласно настоящему изобретению, включают: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) Vl-Ch2; (x) Vl-Ch3; (xi) Vl-Ch1-Ch2; (xii) Vl-Ch1-Ch2-Ch3; (xiii) Vl-Ch2-Ch3; и (xiv) Vl-Cl. В любой конфигурации вариабельных и константных доменов, включая любой из примеров конфигураций, перечисленных выше, вариабельные и константные домены могут быть либо непосредственно связаны друг с другом, либо могут быть связаны полноразмерной или неполной шарнирной или линкерной областью. Шарнирная область может состоять, по меньшей мере из 2 (например, 5, 10, 15, 20, 40, 60 или больше) аминокислот, которые обеспечивают в результате гибкую или полугибкую связь между соседними вариабельными и/или константными доменами в одной полипептидной молекуле. Кроме того, антигенсвязывающий фрагмент антитела согласно настоящему изобретению может содержать гомодимер или гетеродимер (или другой мультимер) любой из конфигураций вариабельных и константных доменов, перечисленных выше, в нековалентной ассоциации с любым другим и/или одним или несколькими мономерными доменами VH или VL (например, посредством дисульфидной связи(ей)).
Как и в случае полноразмерных молекул антител, антигенсвязывающие фрагменты могут быть моноспецифичными или полиспецифичными (например, биспецифичными). Полиспецифичный антигенсвязывающий фрагмент антитела обычно может содержать, по меньшей мере два разных вариабельных домена, при этом каждый вариабельный домен способен специфично связываться с отдельным антигеном, или они связываются с разными эпитопами на одном и том же антигене. Любая полиспецифичная форма антитела, включая примеры форм биспецифичных антител, описанные в настоящей публикации, могут быть адаптированы для применения в контексте антигенсвязывающего фрагмента антитела согласно настоящему изобретению с использованием обычных способов, имеющихся в данной области.
Антитела согласно настоящему изобретению могут функционировать посредством зависимой от комплемента цитотоксичности (CDC) или зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксичности (ADCC). Зависимая от комплемента цитотоксичность (CDC) относится к лизису экспрессирующих антиген клеток антителом по изобретению в присутствии комплемента. Зависимая от антител опосредованная клетками цитотоксичность (ADCC) относится к опосредованной клетками реакции, в которой неспецифичные цитотоксические клетки, которые узнают рецепторы Fc (FcR) (например, клетки природные киллеры (NK), нейтрофилы и макрофаги), узнают связанное антитело на клетке-мишени и при этом лизируют клетку-мишень. CDC и ADCC могут быть измерены с использованием анализов, которые хорошо известны и доступны в данной области (смотри, например, патенты США № 5500362 и 5821337 и публикацию Clynes с соавторами (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656). Константная
- 4 031049 область антитела важна для способности антитела фиксировать комплемент и опосредовать зависимую от клеток цитотоксичность. Таким образом, изотип антитела может быть выбран на основе того, требуется ли опосредование антителом цитотоксичности.
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела против PDGFR-бета по изобретению являются антителами человека. Подразумевается, что термин антитело человека в используемом в настоящем описании смысле включает антитела, имеющие вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека. Антитела человека по изобретению могут содержать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулинов зародышевой линии человека (например, мутации, введенные в результате случайного или сайт-специфичного мутагенеза in vitro или в результате соматический мутации in vivo), например, в нескольких CDR и в конкретной CDR3. Однако подразумевается, что термин антитело человека в используемом в настоящем описании смысле не включает антитела, в которых последовательности CDR, полученные из зародышевой линии другого вида млекопитающего, такого как мышь, были привиты в каркасные последовательности человека.
Антитела по изобретению в некоторых вариантах могут представлять собой рекомбинантные человеческие антитела. Подразумевается, что термин рекомбинантное человеческое антитело в используемом в настоящем описании смысле включает все антитела человека, которые получены, экспрессированы, созданы или выделены рекомбинантными способами, такие как антитела, экспрессированные с использованием рекомбинантного экспрессирующего вектора, трансфицированного в клетку-хозяина (описанную ниже), антитела, выделенные из комбинаторной библиотеки рекомбинантных антител человека (описанной ниже), антитела, выделенные из организма животного (например, мыши), которое является трансгенным по генам иммуноглобулинов человека (смотри, например, Taylor с соавторами, (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295), или антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные любыми другими способами, которые включают в себя сплайсинг последовательностей генов иммуноглобулинов человека с другими последовательностями ДНК. Такие рекомбинантные антитела человека имеют вариабельные и константные области, полученные из последовательностей зародышевой линии человека. Однако в некоторых вариантах такие рекомбинантные антитела человека подвергают мутагенезу in vitro (или в том случае, когда используют животное, трансгенное по последовательностям Ig человека, соматическому мутагенезу in vivo), и таким образом, аминокислотные последовательности областей VH и VL рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, хотя и получены и являются родственными последовательностям VH и VL зародышевой линии человека, могут не существовать в природе в репертуаре антител зародышевой линии человека in vivo.
Антитела человека могут существовать в двух формах, которые ассоциированы с гетерогенностью шарнира. В одной форме молекула иммуноглобулина содержит стабильную конструкцию из четырех цепей с молекулярной массой приблизительно 150-160 кД, в которой димеры удерживаются вместе дисульфидной связью между тяжелыми цепями. Во второй форме димеры не связаны межцепочечными дисульфидными связями, и молекула массой примерно 75-80 кД образована ковалентно связанными легкой и тяжелой цепями (полуантитело). Такие формы чрезвычайно трудно разделить даже после аффинной очистки.
Частота появления второй формы в различных интактных изотипах IgG является следствием, но не ограничена структурными различиями, ассоциированными с изотипом шарнирной области антитела. Одна аминокислотная замена в шарнирной области шарнира IgG4 человека может значимо снижать появление второй формы (Angal с соавторами, (1993) Molecular Immunology 30: 105) до уровней, обычно наблюдаемых при использовании шарнира IgG1 человека. Настоящее изобретение охватывает антитела, имеющие одну или несколько мутаций в шарнире, области CH2 или CH3, которые могут быть желательны, например, при получении, чтобы повысить выход требуемой формы антитела.
Антитела по изобретению могут представлять собой Выделенные антитела. Выделенное антитело в используемом в настоящем описании смысле означает антитело, которое было идентифицировано и отделено и/или извлечено, по меньшей мере от одного компонента в его природной среде. Например, антитело, которое было извлечено или отделено, по меньшей мере от одного компонента организма или от ткани или клетки, в которой антитело существует в природе или продуцируется в естественных условиях, является Выделенным антителом в целях настоящего изобретения. Выделенное антитело также включает антитело in situ в рекомбинантной клетке. Выделенными антителами являются антитела, которые были подвергнуты, по меньшей мере одной очистки или выделения. Согласно некоторым вариантам Выделенное антитело по существу может не содержать другого клеточного материала и/или химических веществ.
Настоящее изобретение охватывает нейтрализующие и/или блокирующие антитела против PDGFRбета. Предполагается, что нейтрализующее или блокирующее антитело в используемом в настоящем описании смысле относится к антителу, связывание которого с PDGFR-бета: (i) мешает взаимодействию между PDGFR-бета или фрагментом PDGFR-бета и лигандом PDGF (например, PDGF-BB, PDGF-CC, PDGF-DD, PDGF-AB и т.д.); (ii) мешает образованию димеров рецепторов ββ и/или αβ; и/или (ii) приводит к ингибированию, по меньшей мере одной биологической функции PDGFR-бета. Ингибирование,
- 5 031049 вызываемое нейтрализующим или блокирующим PDGFR-бета антителом необязательно должно быть полным, при условии, что оно выявляется с использованием подходящего анализа. Примеры анализов для выявления ингибирования PDGFR-бета описаны в рабочих примерах в настоящей публикации.
Антитела против PDGFR-бета, раскрытые в настоящем описании, могут содержать одну или несколько аминокислотных замен, инсерций и/или делеций в каркасных и/или CDR-областях вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей по сравнению с соответствующими последовательностями зародышевой линии, из которых были получены антитела. Такие мутации легко могут быть выявлены в результате сравнения аминокислотных последовательностей, раскрытых в настоящем описании, с последовательностями зародышевой линии, доступными, например, из открытых баз данных о последовательностях антител. Настоящее изобретение относится к антителам и их антигенсвязывающим фрагментам, которые получены из любой из аминокислотных последовательностей, раскрытых в настоящем описании, при этом одна или несколько аминокислот в одной или нескольких каркасных и/или CDR-областях мутированы с получением соответствующего остатка(ов) последовательности зародышевой линии, из которой антитело было получено, или соответствующего остатка(ов) другой последовательности зародышевой линии человека или с получением консервативной аминокислотной замены соответствующего остатка(ов) зародышевой линии (такие изменения последовательностей называют в настоящем описании общим термином мутации зародышевой линии). Специалист в данной области, исходя из последовательностей вариабельных областей тяжелой и легкой цепи, описанных в настоящей публикации, легко может получить многочисленные антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или несколько отдельных мутаций зародышевой линии или их сочетаний. В некоторых вариантах все остатки каркаса и/или CDR в доменах VH и/или VL подвергнуты обратным мутациям с получением остатков, встречающихся в исходной последовательности зародышевой линии, из которой получено антитело. В других вариантах только некоторые остатки подвергнуты обратным мутациям до исходной последовательности зародышевой линии, например, только мутантные остатки, находящиеся среди первых 8 аминокислот FR1 или среди последних 8 аминокислот FR4, или только мутантные остатки, находящиеся в CDR1, CDR2 или CDR3. В других вариантах один или несколько остатков каркаса и/или CDR мутированы до соответствующего остатка(ов) другой последовательности зародышевой линии (т.е. последовательности зародышевой линии, которая отличается от последовательности зародышевой линии, из которой исходно получено антитело). Кроме того, антитела согласно настоящему изобретению могут содержать любое сочетание двух или больше мутаций зародышевой линии в каркасных и/или CDR-областях, например, некоторые отдельные остатки могут быть мутированы до соответствующего остатка конкретной последовательности зародышевой линии, тогда как некоторые другие остатки, которые отличаются от исходной последовательности зародышевой линии, сохраняются или мутированы до соответствующего остатка другой последовательности зародышевой линии. После получения антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или несколько мутаций зародышевой линии, легко могут быть тестированы в отношении одного или нескольких требуемых свойств, таких как, улучшенная специфичность связывания, повышенная аффинность связывания, улучшенные или усиленные антагонистические или агонистические биологические свойства (в зависимости от ситуации), пониженная иммуногенность и т.д. Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, полученные таким общим способом, входят в объем настоящего изобретения.
Настоящее изобретение также относится к антителам против PDGFR-бетам, содержащим варианты аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, раскрытых в настоящем описании, имеющим одну или несколько консервативных замен. Например, настоящее изобретение относится к антителам против PDGFR-бетам, имеющим аминокислотные последовательности HCVR, LCVR, и/или CDR, например, с 10 или меньше, 8 или меньше, 6 или меньше, 4 или меньше и т.д. консервативными аминокислотными заменами относительно любой из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, раскрытых в настоящем описании.
Термин эпитоп относится к антигенной детерминанте, которая взаимодействует с конкретным антигенсвязывающим участком в вариабельной области молекулы антитела, известным как паратоп. Один антиген может иметь более одного эпитопа. Таким образом, разные антитела могут связываться с разными областями на антигене и могут вызывать разные биологические эффекты. Эпитопы могут быть либо конформационными, либо линейными. Конформационный эпитоп образуется пространственно близкими аминокислотами из разных участков линейной полипептидной цепи. Линейный эпитоп представляет собой эпитоп, образованный соседними аминокислотными остатками в полипептидной цепи. В некоторых случаях эпитоп может содержать остатки сахаридов, группы фосфорила или сульфонильные группы антигена.
Термин значимая идентичность или по существу идентичный в том случае, когда он относится к нуклеиновой кислоте или ее фрагменту, указывает, что при оптимальном выравнивании с соответствующими инсерциями или делециями нуклеотидов с другой нуклеиновой кислотой (или комплементарной ей нитью), имеет место идентичность нуклеотидных последовательностей, составляющая, по меньшей мере около 95% и более предпочтительно, по меньшей мере римерно 96, 97, 98 или 99% нуклеотидных оснований, которую измеряют, используя любой хорошо известный алгоритм определения идентич
- 6 031049 ности последовательностей, такой как FASTA, BLAST или Gap, которые обсуждаются ниже. Молекула нуклеиновой кислоты, имеющая значимую идентичность по отношению к эталонной молекуле нуклеиновой кислоты, в некоторых случаях может кодировать полипептид, имеющий такую же или в значительной степени сходную аминокислотную последовательность, что и полипептид, кодируемый эталонной молекулой нуклеиновой кислоты.
По отношению к полипептидам термин значимое сходство или по существу сходный означает, что две пептидных последовательности при оптимальном выравнивании, например, с помощью программ GAP или BESTFIT и с использованием весовых оценок за пробел по умолчанию, имеют по меньшей мере 95% идентичность последовательностей, еще более предпочтительно, по меньшей мере 98% или 99% идентичность последовательностей. Предпочтительно положения остатков, которые не являются идентичными, отличаются в результате консервативных аминокислотных замен. Консервативная аминокислотная замена представляет собой замену, при которой остаток аминокислоты заменяют другим аминокислотным остатком, имеющим боковую цепь (R-группу) со сходными химическими свойствами (например, зарядом или гидрофобностью). В общем, консервативная аминокислотная замена не будет существенно изменять функциональные свойства белка. В тех случаях, когда две или более амино кислотных последовательностей отличаются друг от друга консервативными заменами, идентичность последовательностей в процентах или степень сходства можно повысить, корректируя консервативную природу замены. Способы осуществления такой корректировки хорошо известны специалистам в данной области. Смотри, например, Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331. Примеры групп аминокислот, которые имеют боковые цепи со сходными химическими свойствами, включают группы с (1) алифатическими боковыми цепями: глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; (2) алифатическимигидроксильными боковыми цепями серин и треонин; (3) содержащими амид боковыми цепями: аспарагин и глутамин; (4) ароматическими боковыми цепями: фенилаланин, тирозин и триптофан; (5) основными боковыми цепями: лизин, аргинин и гистидин; (6) кислыми боковыми цепями: аспартат и глутамат, и (7) содержащими серу боковыми цепями: цистеин и метионин. Предпочтительными группами для консервативных замен аминокислот являются: валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизинаргинин, аланин-валин, глутамат-аспартат и аспарагин-глутамин. Альтернативно консервативной заменой является любое изменение, имеющее положительное значение при оценке с использованием матрицы логарифмической функции правдоподобия PAM250, описанной Gonnet с соавторами (1992) Science 256: 1443-45. Умеренно консервативной заменой является любое изменение, имеющее не отрицательное значение при оценке с использованием матрицы логарифмической функции правдоподобия PAM250.
Сходство последовательностей в случае полипептидов, которое также называют идентичностью последовательностей, обычно измеряют, используя компьютерную программу анализа последовательностей. Компьютерная программа анализа белков сопоставляет сходные последовательности, используя параметры сходства с учетом различных замен, делеций и других модификаций, включая консервативные аминокислотные замены. Например, компьютерная программа GCG содержит такие программы, как Gap и Bestfit, которые могут быть использованы с параметрами по умолчанию, чтобы определить гомологию последовательностей или идентичность последовательностей между близко родственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды разных видов организмов, или между белком дикого типа и его мутеином. Смотри, например, GCG, версию 6.1. Полипептидные последовательности также можно сравнить, используя FASTA с параметрами по умолчанию или рекомендованными параметрами, программа в GCG версии 6.1. FASTA (например, FASTA2 и FASTA3) обеспечивает выравнивание и дает процент идентичности последовательностей в областях наилучшего наложения между запрашиваемой и исследуемой последовательностями (Pearson (2000) выше). Другим предпочтительным алгоритмом при сравнении последовательности по изобретению с базой данных, содержащей большое количество последовательностей из разных организмов, является компьютерная программа BLAST, особенно BLASTP или TBLASTN с использованием параметров по умолчанию. Смотри, например, Altschul с соавторами (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 и Altschul с соавторами (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-402.
Зависимое от pH связывание
Изобретение относится к антителе против PDGFR-бетам с зависимыми от pH характеристиками связывания. Например, анти-PDGFR-бета-антитело согласно настоящему изобретению может проявлять пониженное связывание с PDGFR-бета при кислом значении pH по сравнению с нейтральным pH. Альтернативно анти-PDGFR-бета-антитело по изобретению может проявлять повышенное связывание со своим антигеном при кислом pH по сравнению с нейтральным pH. Выражение кислый pH включает значения pH ниже, чем примерно 6,2, например, приблизительно 6,0, 5,95, 5,9, 5,85, 5,8, 5,75, 5,7, 5,65, 5,6, 5,55, 5,5, 5,45, 5,4, 5,35, 5,3, 5,25, 5,2, 5,15, 5,1, 5,05, 5,0 или меньше. В используемом в настоящем описании смысле выражение нейтральный pH означает pH примерно от 7,0 до примерно 7,4. Выражение нейтральный pH включает значения рН примерно 7,0, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,3, 7,35 и 7,4.
В некоторых случаях пониженное связывание с PDGFR-бета при кислом значении pH по сравнению с нейтральным значением pH выражают в виде отношения значения KD связывания антитела с PDGFR-бета при кислом значении pH к значению KD связывания антитела с PDGFR-бета при нейтральном значении pH (или наоборот). Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент можно
- 7 031049 считать проявляющим пониженное связывание с PDGFR-бета при кислом значении pH по сравнению с нейтральным значением pH в целях настоящего изобретения, если антитело или его антигенсвязывающий фрагмент имеет отношение KD в кислых/нейтральных условиях примерно 3,0 или выше. В некоторых иллюстративных вариантах отношение KD в кислых/нейтральных условиях для антитела или антигенсвязывающего фрагмента согласно настоящему изобретению может составлять примерно 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5, 10,0, 10,5, 11,0, 11,5, 12,0, 12,5, 13,0, 13,5, 14,0, 14,5, 15,0, 20,0, 25,0, 30,0, 40,0, 50,0, 60,0, 70,0, 100,0 или выше.
Антитела с pH-зависимыми характеристиками могут быть получены, например, путем скрининга популяции антител в отношении пониженного (или повышенного) связывания с конкретным антигеном при кислом значении pH по сравнению с нейтральным pH. Кроме того, модификации антигенсвязывающего домена на уровне аминокислот могут давать антитела с pH-зависимыми характеристиками. Например, путем замены одной или нескольких аминокислот антигенсвязывающего домена (например, в CDR) остатком гистидина может быть получено антитело с пониженным связыванием антигена при кислом значении pH по сравнению с нейтральным pH.
Антитела против PDGFR-бета, содержащие варианты Fc
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения предлагаются антитела против PDGFR-бета, содержащие Fc-домен, содержащий одну или несколько мутаций, которые усиливают или снижают связывание антитела с рецептором FcRn, например, при кислом значении pH, по сравнению с нейтральным pH. Например, настоящее изобретение относится к антителам против PDGFRбетам, содержащим мутацию в области CH2 или CH3 домена Fc, при этом мутация(ии) повышает аффинность домена Fc к FcRn в кислой среде (например, в эндосоме, где диапазоны pH составляют примерно от 5,5 до примерно 6,0). Такие мутации могут приводить к увеличению времени полужизни антитела в сыворотке при введении животному. Не ограничивающие примеры таких модификаций Fc включают, например, модификацию в положении 250 (например, E или Q); 250 и 428 (например, L или F); 252 (например, L/Y/F/W или T), 254 (например, S или T), и 256 (например, S/R/Q/E/D или T); или модификацию в положении 428 и/или 433 (например, H/L/R/S/P/Q или K) и/или 434 (например, H/F или Y); или модификацию в положении 250 и/или 428; или модификацию в положении 307 или 308 (например, 308F, V308F) и 434. В одном из вариантов модификация включает модификацию 428L (например, M428L) и 434S (например, N434S); модификацию 428L, 2591 (например, V259I) и 308F (например, V308F); модификацию 433K (например, H433K) и 434 (например, 434Y); модификацию 252, 254, и 256 (например, 252Y, 254T и 256E); модификацию 250Q и 428L (например, T250Q и M428L); и модификацию 307 и/или 308 (например, 308F или 308P).
Например, настоящее изобретение относится к антителам против PDGFR-бетам, содержащим Fcдомен, содержащий одну или несколько пар или групп мутаций, выбранных из группы, состоящей из: 250Q и 248L (например, T250Q и M248L); 252Y, 254T и 256E (например, M252Y, S254T и T256E); 428L и 434S (например, M428L и N434S); и 433K и 434F (например, H433K и N434F). Все возможные сочетания указанных выше мутаций Fc-домена и другие мутации в вариабельных доменах антител, описанные в настоящей публикации, входят в объем настоящего изобретения.
Биологические характеристики антител
Настоящее изобретение относится к антителам против PDGFR-бетам и их антигенсвязывающим фрагментам, которые связывают растворимые мономерные или димерные молекулы PDGFR-бета с высокой аффинностью. Например, настоящее изобретение относится к антителам и антигенсвязывающим фрагментам антител, которые связывают мономерный PDGFR-бета (например, при 25 или 37°C) с KD меньше чем примерно 30 нМ, которую измеряют на основании поверхностного плазмонного резонанса, например, используя форму анализа, которая определена в примере 3 в настоящем описании. В некоторых вариантах антитела или антигенсвязывающие фрагменты согласно настоящему изобретению связывают мономерный PDGFR-бета с KD меньше чем примерно 25 нМ, меньше чем примерно 20 нМ, меньше чем примерно 15 нМ, меньше чем примерно 10 нМ, меньше чем примерно 5 нМ, меньше чем примерно 2 нМ или меньше чем примерно 1 нМ, которую измеряют на основании поверхностного плазмонного резонанса, например, используя форму анализа, которая определена в примере 3 в настоящем описании, или по существу сходный анализ.
Настоящее изобретение также относится к антителам и их антигенсвязывающим фрагментам, которые связывают димерный PDGFR-бета (например, при 25°C или 37°C) с KD меньше чем примерно 250 пМ, которую измеряют на основании поверхностного плазмонного резонанса, например, используя форму анализа, которая определена в примере 3 в настоящем описании. В некоторых вариантах антитела или антигенсвязывающие фрагменты согласно настоящему изобретению связывают димерный PDGFR-бета с KD меньше чем примерно 240 пМ, меньше чем примерно 230 пМ, меньше чем примерно 220 пМ, меньше чем примерно 210 пМ, меньше чем примерно 200 пМ, меньше чем примерно 190 пМ, меньше чем примерно 180 пМ, меньше чем примерно 170 пМ, меньше чем примерно 160 пМ, меньше чем примерно 150 пМ, меньше чем примерно 140 пМ, меньше чем примерно 130 пМ, меньше чем примерно 120 пМ, меньше чем примерно 110 пМ или меньше чем примерно 100 пМ, которую измеряют на основании поверхностного плазмонного резонанса, например, используя форму анализа, которая определена в примере 3 в
- 8 031049 настоящем описании, или по существу сходный анализ.
Настоящее изобретение также относится к антителам против PDGFR-бетам и их антигенсвязывающим фрагментам, которые блокируют связывание одного или нескольких лигандов PDGF (например, PDGF-BB, -AB, -CC или -DD) с PDGFR-бета. Например, настоящее изобретение относится к антителам против PDGFR-бета, которые блокируют связывание PDGF-BB с мономерным PDGFR-бета in vitro со значением IC50 меньше чем примерно 300 пМ, судя по измерениям с использованием основанного на ELISA иммуноанализа, например, с использованием формы анализа, которая определена в примере 4 (A) в настоящем описании, или биоанализа в реальном времени, например, с использованием формы анализа, которая определена в примере 4 (B), или с использованием по существу сходного анализа. В некоторых вариантах антитела или антигенсвязывающие фрагменты согласно настоящему изобретению блокируют связывание PDGF-BB с мономерным PDGFR-бета in vitro со значением IC50 меньше чем примерно 280 пМ, меньше чем примерно 260 пМ, меньше чем примерно 240 пМ, меньше чем примерно 220 пМ, меньше чем примерно 200 пМ, меньше чем примерно 180 пМ, меньше чем примерно 160 пМ, меньше чем примерно 150 пМ, меньше чем примерно 140 пМ, меньше чем примерно 130 пМ, меньше чем примерно 120 пМ, меньше чем примерно 110 пМ, меньше чем примерно 100 пМ, меньше чем примерно 90 пМ, меньше чем примерно 80 пМ, или меньше чем примерно 75 пМ, судя по измерениям с использованием основанного на ELISA иммуноанализа, например, с использованием формы анализа, которая определена в примере 4(A) в настоящем описании, или биоанализа в реальном времени, например, с использованием формы анализа, которая определена в примере 4(B), или с использованием по существу сходного анализа.
Настоящее изобретение также относится к антителам против PDGFR-бетам и их антигенсвязывающим фрагментам, которые ингибируют опосредованную лигандом PDGF активацию экспрессируемого на клеточной поверхности PDGFR-бета. Например, настоящее изобретение относится к антителам против PDGFR-бета и их антигенсвязывающим фрагментам, которые ингибируют опосредованную PDGFBB или PDGF-DD активацию экспрессируемого на клеточной поверхности PDGFR-бета со значением IC50 меньше чем примерно 500 пМ, судя по измерения в основанном на клетках анализе блокирования, например, с использованием формы анализа, которая определена в примере 6 в настоящем описании, или с использованием по существу сходного анализа. В некоторых вариантах антитела или антигенсвязывающие фрагменты согласно настоящему изобретению блокируют опосредованную PDGF-BB или PDGF-DD активацию экспрессируемого на клеточной поверхности PDGFR-бета со значением IC50 меньше чем примерно 400 пМ, меньше чем примерно 350 пМ, меньше чем примерно 300 пМ, меньше чем примерно 250 пМ, меньше чем примерно 200 пМ, меньше чем примерно 150 пМ, меньше чем примерно 100 пМ, меньше чем примерно 90 пМ, меньше чем примерно 80 пМ, меньше чем примерно 70 пМ, меньше чем примерно 60 пМ, меньше чем примерно 50 пМ, меньше чем примерно 40 пМ или меньше чем примерно 30 пМ, судя по измерениям в основанном на клетках биоанализе блокирования, например, используя форму анализа, которая определена в примере 6 в настоящем описании, или с использованием по существу сходного анализа.
Настоящее изобретение также относится к антителам против PDGFR-бетам и их антигенсвязывающим фрагментам, которые интернализуются в клетки, экспрессирующие PDGFR-бета. Например, настоящее изобретение относится к антителам против PDGFR-бета и их антигенсвязывающим фрагментам, которые эффективно интернализуются в клетки, экспрессирующие PDGFR-бета, судя по измерениям с использованием основанного на клетках анализа интернализации, который определен в примере 7 в настоящем описании, или с использованием по существу сходного анализа.
Антитела согласно настоящему изобретению могут иметь одно или несколько из указанных выше биологических характеристик или любое из их сочетаний. Другие биологические характеристики антител согласно настоящему изобретению будут понятны специалисту в данной области при знакомстве с настоящим описанием, включая рабочие примеры, приведенные в настоящей публикации.
Картирование эпитопов и родственные методики
Настоящее изобретение относится к антителам против PDGFR-бетам, которые взаимодействуют с одной или несколькими аминокислотами, находящимися во внеклеточном домене PDGFR-бета человека (например, в Ig-доменах 1, 2, 3, 4 и/или 5 внеклеточного домена PDGFR-бета). Известно, что Ig-домены 1-3 (например, аминокислоты 1-277 последовательности SEQ ID NO:337) вовлечены в связывание лиганда. Настоящее изобретение относится к антителам против PDGFR-бета, которые взаимодействуют с одной или несколькими аминокислотами, находящимися в Ig-домене 1 (например, аминокислотами 1-88 последовательности SEQ ID NO:337), Ig-домене 2 (например, аминокислотами 97-178 последовательности SEQ ID NO:337) и/или Ig-домене 3 (например, аминокислотами 182-277 последовательности SEQ ID NO:337), и тем самым эффективно блокируют взаимодействие рецептор/лиганд. В некоторых иллюстративных вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются антитела, которые специфично взаимодействуют с Ig-доменом 2 (например, с аминокислотами 97-178 последовательности SEQ ID NO:337; смотри, например, пример 8). Эпитоп, с которым связываются антитела, может состоять из одной непрерывной последовательности из 3 или более (например, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более) аминокислот, локализованных во внеклеточном домене PDGFR-бета. Альтерна
- 9 031049 тивно эпитоп может состоять из множества не следующих друг за другом аминокислот (или аминокислотных последовательностей), локализованных во внеклеточном домене PDGFR-бета.
Можно применять различные методики, известные специалистам в данной области, для определения того, взаимодействует ли антитело с одной или несколькими аминокислотами в полипептиде или белке. Примеры методик включают, например, обычный анализ перекрестного блокирования, такой как анализ, описанный в публикации Antibodies, Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY), анализ мутаций с использованием сканирования аланином, бот-анализы пептидов (Reineke, 2004, Methods Mol. Biol. 248: 443-463), и анализ расщепления пептидов. Кроме того, можно использовать такие способы, как эксцизия эпитопов, экстракция эпитопов и химическая модификация антигенов (Tomer, 2000, Protein Science 9:487-496). Другим способом, который можно использовать для идентификации аминокислот в полипептиде, с которыми взаимодействует антитело, является способ на основе обмена водород/дейтерий, выявляемого с использованием масс-спектрометрии. В общем, способ, основанный на обмене водород/дейтерий, заключается в мечении дейтерием представляющего интерес белка с последующим связыванием антитела с меченым дейтерием белком. Затем комплекс белок/антитело переносят в воду, обеспечивая возможность протекания обмена водород-дейтерий во всех остатках, за исключением остатков, защищенных антителом (которые остаются мечеными дейтерием). После диссоциации антитела белок-мишень подвергают расщеплению протеазой и масс-спектрометрическому анализу, выявляя при этом меченые дейтерием остатки, которые соответствуют конкретным аминокислотам, с которыми взаимодействует антитело. Смотри, например, Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267 (2): 252259; Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73: 256A-265A.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к антителам против PDGFR-бетам, которые связываются с тем же самым эпитопом, что и антитело H2M3374N. Подобным образом, настоящее изобретение также относится к антителам против PDGFR-бетам, которые конкурируют за связывание с PDGFRбета с антителом H2M3374N. Легко можно определить, связывается ли антитело с тем же самым эпитопом, что и эталонное анти-PDGFR-бета-антитело или конкурирует с таким антителом за связывание, используя обычные способы, известные в данной области и приведенные в качестве примера в настоящем описании. Например, чтобы определить, связывается ли тестируемое антитело с тем же самым эпитопом, что и эталонное анти-PDGFR-бета-антитело по изобретению, эталонному антителу дают возможность связаться с белком PDGFR-бета (например, растворимой частью внеклеточного домена PDGFR-бета или экспрессированным на клеточной поверхности PDGFR-бета). Затем оценивают способность тестируемого антитела связываться с молекулой PDGFR-бета. Если тестируемое антитело способно связываться с PDGFR-бета после насыщения связывания с эталонным анти-PDGFR-бета-антителом, то можно сделать вывод, что тестируемое антитело связывается с другим эпитопом, отличным от эпитопа, с которым связывается эталонное анти-PDGFR-бета-антитело. С другой стороны, если тестируемое антитело не способно связываться с молекулой PDGFR-бета после насыщения связывания эталонным анти-PDGFR-бетаантителом, то тестируемое антитело может связываться с тем же самым эпитопом, что и эпитоп, связываемый эталонным анти-PDGFR-бета-антителом по изобретению. Затем могут быть осуществлены дополнительные рутинные эксперименты (например, анализы пептидных мутаций и связывания), чтобы подтвердить, является ли наблюдаемое отсутствие связывания тестируемого антитела действительно следствием связывания с тем же самым эпитопом, что и эталонное антитело, или стерическое блокирование (или другое явление) ответственно за отсутствие наблюдаемого связывания.
Эксперименты такого рода могут быть осуществлены с использованием ELISA, РИА, Biacore, проточной цитометрии или любого другого количественного или качественного анализа связывания антител, доступного в данной области. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения два антитела связываются с одним и тем же эпитопом (или перекрывающимися эпитопами), если, например, 1-, 5-, 10-, 20-или 100-кратный избыток одного антитела ингибирует связывание другого, по меньшей мере на 50%, но предпочтительно на 75, 90 или даже 99%, судя по измерениям в анализе конкурентного связывания (смотри, например, Junghans et al., Cancer Res. 1990: 50: 1495-1502). Альтернативно, полагают, что два антитела связываются с одним и тем же эпитопом, если по существу все мутации аминокислот в антигене, которые уменьшают или исключают связывание одного антитела, уменьшают или исключают связывание другого. Полагают, что два антитела имеют перекрывающиеся эпитопы, если только подгруппа мутаций аминокислот, которые уменьшают или исключают связывание одного антитела, уменьшают или исключают связывание другого.
Чтобы определить, конкурирует ли антитело за связывание (или перекрестно конкурирует за связывание) с эталонным анти-PDGFR-бета-антителом, осуществляют описанную выше методику связывания в двух направлениях: в первом направлении эталонному антителу дают возможность связаться с белком PDGFR-бета (например, растворимой частью внеклеточного домена PDGFR-бета или экспрессируемым на клеточной поверхности PDGFR-бета) в условия насыщения с последующей оценкой связывания тестируемого антитела с молекулой PDGFR-бета. Во втором направлении тестируемому антителу дают возможность связаться с молекулой PDGFR-бета в условиях насыщения с последующей оценкой связывания эталонного антитела с молекулой PDGFR-бета. Если в обоих направлениях только первое (насыщающее) антитело способно связываться с молекулой PDGFR-бета, то делают вывод, что тестируемое
- 10 031049 антитело и эталонное антитело конкурируют за связывание с PDGFR-бета (смотри, например, форму анализа, описанную в примере 5 в настоящем описании, в котором растворимый белок PDGFR-бета улавливают на кончиках сенсора и покрытые PDGFR-бета кончики сенсора последовательно обрабатывают эталонным антителом [мАт № 1] и тестируемым анти-PDGFR-бета-антителом [мАт № 2] и используя оба порядка связывания). Как будет понятно специалисту в данной области, антитело, которое конкурирует за связывание с эталонным антителом, необязательно может связываться с тем же самым эпитопом, что и эталонное антитело, а может стерически блокировать связывание эталонного антитела за счет связывания перекрывающего или соседнего эпитопа.
Получение антител человека
Способы создания моноклональных антител, включая полностью человеческие моноклональные антитела, известны в данной области. Любой из таких известных способов можно применять в контексте настоящего изобретения, чтобы получить антитела человека, которые специфично связываются с PDGFR-бета человека.
Используя, например, методику VELOCIMMUNE™, или любой другой известный способ создания полностью человеческих моноклональных антител, сначала выделяют высоко аффинные химерные антитела к PDGFR-бета, имеющие вариабельную область человека и константную область мыши. Как описано в экспериментальном разделе ниже, антитела характеризуют и отбирают на основании требуемых характеристик, включая аффинность, избирательность и т.д. При необходимости константные области мыши заменяют требуемой константной областью человека, например, IgG1 или IgG4 дикого типа или модифицированного IgG1 или IgG4, чтобы создать полностью человеческое анти-PDGFR-бета-антитело. В то время как выбираемая константная область может варьировать в соответствии с конкретным применением, характеристики высоко аффинного связывания антигена и специфичности по отношению к мишени присущи вариабельной области. В некоторых случаях полностью человеческие антитела против PDGFR-бета выделяют непосредственно из антиген-позитивных B-клеток.
Биологические эквиваленты
Антитела против PDGFR-бета и фрагменты антител согласно настоящему изобретению охватывают белки, имеющие аминокислотные последовательности, которые варьируют по сравнению с последовательностями описанных антител, которые сохраняют способность связывать PDGFR-бета человека. Такие варианты антител и фрагментов антител содержат одно или несколько добавлений, делеций или замен аминокислот по сравнению с исходной последовательность, но проявляют биологическую активность, которая, по существу, эквивалентна активности описанных антител. Подобным образом, последовательности ДНК, кодирующие анти-PDGFR-бета-антитело, согласно настоящему изобретению охватывают последовательности, которые содержат одно или несколько добавлений, делеций или замен нуклеотидов по сравнению с описанной последовательностью, но которые кодируют анти-PDGFR-бетаантитело или фрагмент антитела, который по существу является биологическим эквивалентом антитела против PDGFR-бета или фрагмента антитела по изобретению. Примеры таких вариантов аминокислотных последовательностей и последовательностей ДНК обсуждаются выше.
Два антигенсвязывающих белка или антитела считают биологически эквивалентными, если, например, они являются фармацевтическими эквивалентами или фармацевтическими альтернативными вариантами, в скорости и степени всасывания которых не наблюдают значимого различия при введении в такой же молярной дозе в сходных экспериментальных условиях, либо в однократной дозе, либо в виде множественных доз. Некоторые антитела можно считать эквивалентами или фармацевтическими альтернативными вариантами, если они эквивалентны по степени их всасывания, но не по скорости всасывания, и их все еще можно считать биоэквивалентами, если такие различия в скорости всасывания являются преднамеренными и их отражают при маркировке, и они не существенны для достижения эффективных концентраций лекарственного средства в организме, например, при хроническом применении, и они считаются незначимыми с медицинской точки зрения в случае конкретного исследуемого лекарственного продукта.
В одном из вариантов два антигенсвязывающих белка являются биологически эквивалентными, если не существует клинически важных различий в их безопасности, чистоте и активности.
В одном из вариантов два антигенсвязывающих белка являются биологически эквивалентными, если пациент может переходить один или несколько раз с эталонного продукта на биологический продукт без ожидаемого повышения риска неблагоприятных эффектов, включая клинически значимое изменение иммуногенности или пониженную эффективность по сравнению с продолжаемой терапией без такого перехода.
В одном из вариантов два антигенсвязывающих белка являются биологически эквивалентными, если они оба действуют посредством общего механизма или механизмов действия в случае условия или условий применений, если такие механизмы известны.
Биологическая эквивалентность может быть показана способами in vivo и in vitro. Измерения биологический эквивалентности включают, например, (a) тест in vivo на человеке или других млекопитающих, в котором измеряют концентрацию антитела или его метаболитов в крови, плазме, сыворотке или другой биологической жидкости как функцию времени; (b) тест in vitro, который коррелировал и являет
- 11 031049 ся обоснованно прогностическим в отношении данных о биодоступности in vivo для человека; (c) тест in vivo на человеке или других млекопитающих, в котором измеряют соответствующий острый фармакологический эффект антитела (или его мишени) как функцию времени; и (d) хорошо контролируемое клиническое испытание, в котором устанавливают безопасность, эффективность или биологическую доступность или биологическую эквивалентность антитела.
Биологически эквивалентные варианты анти-РОСБК-бета-антител по изобретению можно сконструировать, например, получая различные замены остатков или последовательностей или делетируя концевые или внутренние остатки или последовательности, не являющиеся необходимыми для биологической активности. Например, остатки цистеина, не существенные для биологической активности могут быть делетированы или заменены другими аминокислотами, чтобы предотвратить образование ненужных или некорректных внутримолекулярных дисульфидных мостиков в результате денатурации. В других контекстах биологически эквивалентные антитела могут включать варианты анти-РПОБК-бетаантител, содержащие аминокислотные изменения, которые модифицируют характеристики гликозилирования антител, например, мутации, которые исключают или удаляют гликозилирование.
Видовая избирательность и видовая перекрестная реактивность
В настоящем изобретении согласно некоторым вариантам осуществления предлагаются антитела против PDGFR-бета, которые связываются с PDGFR-бета человека, но не связываются с PDGFR-бета из других видов. Настоящее изобретение также относится к антителам против PDGFR-бетам, которые связываются с PDGFR-бета человека и с PDGFR-бета одного или нескольких видов, отличных от человека. Например, антитела против PDGFR-бета по изобретению могут связываться с PDGFR-бета человека и могут связываться или не связываться, в зависимости от ситуации, с одним или несколькими PDGFRбета мыши, крысы, морской свинки, хомячка, песчанки, свиньи, кошки, собаки, кролика, козы, овцы, коровы, лошади, верблюда, макака-крабоеда, мартышки, макака-резус или шимпанзе. Согласно некоторым иллюстративным вариантам осуществления настоящего изобретения предлагаются антитела против PDGFR-бета, которые специфично связывают PDGFR-бета человека (например, мономерные и/или димерные конструкции hPDGFR-бета) и PDGFR-бета макака-крабоеда (например, Macaca fascicularis) (например, мономерные и/или димерные конструкции mfPDGFR-бета) (смотри, например, пример 3 в настоящем описании).
Терапевтический препарат и введение
Изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим антитела против PDGFRбета или их антигенсвязывающие фрагменты согласно настоящему изобретению. Фармацевтические композиции по изобретению готовят с подходящими носителями, эксципиентами и другими средствами, которые обеспечивают улучшенный перенос, доставку, переносимость и тому подобное. Множество подходящих препаратов можно найти в справочнике, известном всем химикам-фармацевтам: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Такие препараты включают, например, порошки, пасты, мази, желе, воски, масла, липиды, везикулы, содержащие липиды (катионные или анионные) (такие как LIPOFECTIN'™. Life Technologies, Carlsbad, CA), DNA-конъюгаты, безводные пасты для всасывания, эмульсии типа масло в воде и вода в масле, карбовакс (полиэтиленгликоли с различными молекулярными массами), полутвердые гели и полутвердые смеси, содержащие карбовакс. Смотри также Powell с соавторами Compendium of excipients for parenteral formulations PDA (1998) J. Pharm. Sci. Technol. 52: 238-311.
Доза антитела, вводимого пациенту, может варьировать, в зависимости от возраста и размера тела пациента, заболевания мишени, состояния, пути введения и тому подобного. Предпочтительную дозу обычно вычисляют на основании массы тела или площади поверхности тела. Когда антитело согласно настоящему изобретению используют для лечения состояния или заболевания, ассоциированного с активностью PDGFR-бета, у взрослого пациента, предпочтительно внутривенное введение антитела согласно настоящему изобретению, обычно в одной дозе примерно от 0,01 до примерно 20 мг/кг массы тела, более предпочтительно примерно от 0,02 до примерно 7, примерно от 0,03 до примерно 5 или примерно от 0,05 до примерно 3 мг/кг массы тела. В зависимости от тяжести состояния частота и продолжительность лечения могут быть скорректированы. Эффективные дозы и схемы введения анти-PDGFRбета-антител могут быть определены эмпирически; например, прогресс у пациента можно контролировать посредством периодической оценки и соответственно корректировать дозу. Кроме того, может быть осуществлен межвидовой пересчет доз с использованием способов, хорошо известных в данной области (например, Mordenti et al., 1991, Pharmaceut. Res. 8: 1351).
Известны различные системы доставки, и их можно использовать для введения фармацевтической композиции по изобретению, например, инкапсулирование в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, рекомбинантные клетки, способные экспрессировать антитело или другой терапевтический белок по изобретению, опосредованный рецепторами эндоцитоз (смотри, например, Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262: 4429- 4432). Антитела и другие терапевтически активные компоненты согласно настоящему изобретению также можно доставлять с помощью методики генной терапии. Способы введения включают без ограничения интрадермальный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, подкожный, интраназальный, эпидуральный и пероральный пути. Композиция может быть введена любым обычным
- 12 031049 путем, например, посредством инфузии или болюсной инъекции, путем всасывания через эпителиальные или кожно-слизистые выстилки (например, слизистую ротовой полости, слизистую прямой и тонкой кишки и т.д.) и может быть введена вместе с другими биологически активными средствами. Введение может быть системным или локальным.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть доставлена подкожно или внутривенно с использованием стандартной иглы и шприца. Кроме того, что касается подкожной доставке устройство доставки в виде ручки-шприца легко применимо при доставке фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению. Такое устройство доставки в виде ручки-шприца может быть многократного пользования или одноразовым. В устройстве для доставки в виде ручки шприца многократного пользования обычно используют сменный картридж, который содержит фармацевтическую композицию. После того как вся фармацевтическая композиция из картриджа была введена и картридж был опустошен, пустой картридж легко можно снять и заменить новым картриджем, который содержит фармацевтическую композицию. Затем устройство для доставки в виде ручки-шприца можно снова использовать. В одноразовом устройстве для доставки в виде ручки-шприца нет сменного картриджа. Напротив одноразовое устройство для доставки в виде ручки-шприца поставляется уже с фармацевтической композицией, находящейся в емкости в самом устройстве. После того как емкость опустошают от фармацевтической композиции все устройство выбрасывают.
Многочисленные устройства многократного применения для доставки в виде ручки-шприца и автоинжекторы используют для подкожной доставки фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению. Примеры включают без ограничения AUTOPEN'™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), ручку-шприц DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland), ручку-шприц HUMALOG MIX 75/25™, ручку-шприц HUMALOG™, ручку-шприц HUMALIN 70/30™ (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II и III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), ручку-шприц BD™ (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™ и OPTICLIK™ (Sanofi-Aventis, Frankfurt, Germany), при этом названа только их небольшая часть. Примеры одноразовых устройств для доставки в виде ручки-шприца, применимые для подкожной доставки фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению, включают без ограничения ручку-шприц SOLOSTAR™ (Sanofi-Aventis), FLEXPEN'™ (Novo Nordisk) и KWIKPEN™ (Eli Lilly), автоинжектор SURECLICK™ (Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN (Dey, L.P.) и ручку-шприц HUMIRA™ (Abbott Labs, Abbott Park IL), при этом названа только их небольшая часть.
В некоторых случаях фармацевтическая композиция может быть доставлена в системе контролируемого высвобождения. В одном из вариантов можно использовать насос (смотри Langer, выше; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 201). В другом варианте можно использовать полимерные материалы; смотри, Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida. В следующем варианте система контролируемого высвобождения может быть помещена вблизи мишени данной композиции, при этом потребуется только часть системной дозы (смотри, например, Goodson, 1984, в Medical Applications of Controlled Release, выше, vol. 2, pp. 115-138). Другие системы контролируемого высвобождения обсуждаются в обзоре Langer, 1990, Science 249: 1527-1533.
Инъекционные препараты могут содержать дозированные формы для внутривенных, подкожных, внутрикожных и внутримышечных инъекций, капельных инфузий и т.д. Такие инъекционные препараты могут быть получены общеизвестными способами. Например, инъекционные препараты могут быть получены, например, растворением, суспендированием или эмульгированием антитела или его соли, описанной выше, в стерильной водной среде или в масляной среде, обычно используемой для инъекций. В качестве водной среды для инъекций применяют, например, физиологический раствор соли, изотоничный раствор, содержащий глюкозу и другие вспомогательные средства и т.д., которые можно использовать в сочетании с подходящим солюбилизатором, таким как спирт (например, этанол), многоатомный спирт (например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль), неионогенное поверхностно-активное вещество [например, полисорбат 80, HCO-50 (полиоксиэтиленовый (50 моль) аддукт гидрогенизированного касторового масла и т. д. В качестве масляной среды используют, например, кунжутное масло, соевое масло и т.д., которые можно применять в сочетании с солюбилизатором, таким как бензилбензоат, бензиловый спирт и т. д. Полученным таким образом инъекционным препаратом предпочтительно наполняют подходящую ампулу.
Преимущественно фармацевтические композиции для перорального и парентерального применения, описанные выше, готовят в дозированных формах в подходящей стандартной дозе, которая соответствует дозе активных ингредиентов. Такие дозированные формы в стандартной дозе включают, например, таблетки, пилюли, капсулы, инъекционные препараты (ампулы), суппозитории и т.д. Количество указанного выше антитела обычно составляет примерно от 5 до примерно 500 мг на дозированную форму в стандартной дозе; в частности, в случае инъекционной формы предпочтительно, чтобы содержание указанного выше антитела составляло примерно от 5 до примерно 100 мг и примерно от 10 до примерно 250 мг в случае других дозированных форм.
- 13 031049
Терапевтические применения антител
Антитела по изобретению применимы, наряду с прочим, для лечения, профилактики и/или облегчения состояния при любом заболевании или расстройстве, ассоциированном или опосредованном экспрессией, передачей сигнала или активностью PDGFR-бета, или поддающемся лечению благодаря блокированию взаимодействия между PDGFR-бета и лигандом PDGFR-бета (например, PDGF-BB, PDGFCC, PDGF-DD, PDGF-AB и т.д.) или ингибированию активности и/или передачи сигнала PDGFR-бета иным образом. Например, настоящее изобретение относится к способам лечения глазных болезней, фиброзных болезней (фиброза), заболеваний сосудов и/или злокачественной опухоли (ингибирование опухолевого роста) посредством введения антитела против PDGFR-бета (или фармацевтической композиции, содержащей анти-PDGFR-бета-антитело), которая описана в настоящей публикации, пациенту, нуждающемуся в таком лечении. В контексте способов лечения, описанных в настоящей публикации, антиPDGFR-бета-антитело можно вводить в виде монотерапии (т.е. в виде единственного терапевтического средства) или в сочетании с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами (примеры которых описаны в настоящей публикации).
Примеры глазных болезней, поддающихся лечению посредством введения анти-PDGFR-бетаантител по изобретению, включают возрастную макулярную дегенерацию (например, влажную ВМД), экссудативную ВМД, диабетическую ретинопатию (например, пролиферативную диабетическую ретинопатию), окклюзионное поражение вен сетчатки, такое как окклюзия центральной вены сетчатки (ОЦВС), неовасуляризацию радужки, неоваскулярную глаукому, послеоперационный фиброз при глаукоме, пролиферативную витреоретинопатию (ПВР), хориоидальную неоваскуляризацию, неоваскуляризацию диска зрительного нерва, неоваскуляризацию роговицы, неоваскуляризацию сетчатки, неоваскуляризацию стекловидного тела, паннус, птеригиум, макулярный отек, диабетический макулярный отек (ДМО), сосудистую ретинопатию, дегенерацию сетчатки, увеит и воспалительные заболевания глаз.
Примеры фиброзных болезней, которые поддаются лечению посредством введения анти-PDGFRбета-антител по изобретению, включают фиброз легких (например, идиопатический легочный фиброз, индуцированный блеомицином легочный фиброз, индуцированный асбестозом легочный фиброз и синдром облитерирующего бронхиолита), хроническую астму, фиброз, ассоциированный с острым поражением легких и острым респираторным дистрессом (например, индуцированный бактериальной пневмонией фиброз, индуцированный травмой фиброз, индуцированный вирусной пневмонией фиброз, индуцированный вентилятором фиброз, индуцированный нелегочным сепсисом фиброз и индуцированный аспирацией фиброз), силикоз, индуцированный излучением фиброз, хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), фиброз глаза (например, фиброзное рубцевание глаза), фиброз кожи (например, склеродермия), фиброз печени (например, цирроз, индуцированный алкоголем фиброз печени, неалкогольный стеатогепатит (NASH), поражение желчных протоков, первичный биллиарный цирроз, индуцированный инфекцией или вирусами фиброз печени [например, хронической ВИЧ-инфекцией], аутоиммунный гепатит), фиброз почек (почечный фиброз), фиброз сердца, атеросклероз, внутристентовый рестеноз и миелофиброз.
Примеры сосудистых болезней, которые можно лечить посредством введения анти-PDGFR-бетаантител по изобретению, включают вазопролиферативные заболевания, гипертензию легочных артерий, рестеноз, рубцевание сосудов и т.д.
Настоящее изобретение также относится к способам лечения злокачественной опухоли, ингибирования опухолевого роста, стимуляции регрессии опухоли, ингибирования метастазов и/или ингибирования патологического ангиогенеза (например, ангиогенеза, связанного с ростом опухоли) посредством введения антитела против PDGFR-бета, которое описано в настоящей публикации, пациенту, нуждающемуся в таком лечении. Например, антитела и антигенсвязывающие фрагменты согласно настоящему изобретению можно применять для лечения, например, первичный и/или метастатических опухолей, возникающих в головном мозгу и оболочках головного мозга, ротовой части глотки, легком и бронхиальном древе, желудочно-кишечном тракте, мужских и женских половых путях, мышцах, костях, коже и придатках, соединительной ткани, селезенке, иммунной системе, кровеобразующих клетках и костном мозге, печени и мочевых путях и специальных органах чувств, таких как глаз. В некоторых вариантах антитела и антигенсвязывающие фрагменты по изобретению применяют для лечения одной или нескольких из следующих злокачественных опухолей: почечноклеточной карциномы, карциномы поджелудочной железы, карциномы молочной железы, рака головы и шеи (например, рака головного мозга, ротовой полости, ротовой части глотки, носоглотки, гортанной части глотки, полости носа, придаточных пазух носа, гортани, губ и т.д.), рака простаты, рака мочевого пузыря, злокачественных глиом, остеосаркомы, остеобластомы, остеохондромы, рака прямой и ободочной кишки, рака желудка (например, рака желудка с амплификацией MET), злокачественной мезотелиомы, астроцитомы, глиобластомы, медуллобластомы, ретинобластомы, множественной миеломы, рака яичника, мелкоклеточного рака легких, немелкоклеточного рака легких, синовиальной саркомы, рака щитовидной железы, неоплазм соединительной ткани, саркомы Капоши, базальноклеточной карциномы, плоскоклеточной карциномы или меланомы.
Комбинированная терапия и препараты
Настоящее изобретение относится к композициям и терапевтическим препаратам, содержащим лю
- 14 031049 бое из анти-PDGFR-бета-антител, описанных в настоящей публикации, в сочетании с одним или несколькими дополнительными терапевтически активными компонентами, и способам лечения, включающим в себя введение таких сочетаний субъектам, нуждающимся в таком введении.
Антитела против PDGFR-бета согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены совместно и/или введены, например, в сочетании с антагонистом VEGF, например, ловушкой VEGF, такой как афлиберцепт или другой VEGF-ингибирующий слитый белок, такой как белок, описанный в US 7087411, анти-VEGF-антителом или его антигенсвязывающим фрагментом (например, бевацизумабом, ранибизумабом), низкомолекулярным киназным ингибитором рецептора VEGF (например, сунитинибом, сорафенибом или пазопанибом), или антителом против рецептора VEGF. Анти-PDGFR-бета-антитело также можно сочетать с антагонистом лиганда PDGF (например, анти-PDGF-BB-антителом, анти-PDGFDD-антителом, анти-PDGF-CC-антителом, анти-PDGF-AB-антителом или другим антагонистом лиганда PDGF, таким как аптамер [например, анти-PDGF-B-аптамер, такой как Fovista™, Ophthotech Corp., Princeton, NJ], антисмысловой молекулой, рибозимом, ми-РНК, пептидоантителом, наноантителом или фрагментом антитела, направленным против лиганда PDGF). В других вариантах антитела против PDGFR-бета согласно настоящему изобретению можно готовить совместно и/или вводить в сочетании с антагонистом EGFR (например, анти-EGFR-антителом [например, цетуксимабом или панитумумабом] или низкомолекулярным ингибитором EGFR [например, гефетинибом или эрлотинибом]), антагонистом другого представителя семейства EGFR, такого как Her2/ErbB2, ErbB3 или ErbB4 (например, антиErbB2-, анти-ErbB3- или анти-ErbB4-антителом или низкомолекулярным ингибитором активности ErbB2, ErbB3 или ErbB4), антагонистом, специфичным для EGFRvIII (например, антителом, которое специфично связывается с EGFRvIII), антагонистом cMET (например, анти-cMET-антителом), антагонистом IGF1R (например, анти-IGF1R-антителом) или ингибитором B-raf (например, вемурафенибом, сорафенибом, GDC-0879, PLX-4720). В некоторых случаях антитела против PDGFR-бета согласно настоящему изобретению сочетают, готовят совместно и/или вводят в сочетании с ингибитором PDGFR-альфа (например, анти-PDGFR-альфа-антителом), антагонистом DLL4 (например, анти-DLL4-антителом, раскрытым в US 2009/0142354, таким как REGN421), антагонистом Ang2 (например, анти-Ang2-антителом, описанным в US 2011/0027286, таким как H1H685P) и т.д. Другие средства, которые можно успешно вводить в сочетании с антителами против PDGFR-бетами по изобретению, включают ингибиторы цитокинов, включая низкомолекулярные ингибиторы цитокинов и антитела, которые связываются с цитокинами, такие как IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18, или с соответствующими им рецепторами.
Антитела против PDGFR-бета по изобретению также можно вводить и/или готовить совместно в сочетании с противовирусными средствами, антибиотиками, анальгетиками, кортикостероидами, стероидами, кислородом, антиоксидантами, хелаторами металлов, IFN-гамма, и/или НПВС. Антитела против PDGFR-бета по изобретению также можно вводить в виде части схемы лечения, которая также включает лучевую терапию и/или обычную химиотерапию (например, в контексте способов лечения злокачественной опухоли или ингибирования опухолевого роста).
Любой из вышеуказанных дополнительных терапевтически активных компонентов можно вводить в сочетании с любым из анти-PDGFR-бета-антител согласно настоящему изобретению для лечения любого заболевания или расстройства, при котором введение антитела против PDGFR-бета является полезным, включая, например, любые глазные болезни, фиброзные болезни, заболевания сосудов и/или злокачественные опухоли, указанные в настоящем описании. Например, в контексте лечения глазной болезни (например, влажной ВМД, диабетической ретинопатии, ОЦВС или любых других глазных болезней, описанных в настоящей публикации), анти-PDGFR-бета-антитело согласно настоящему изобретению может быть приготовлено совместно и/или введено в сочетании с антагонистом VEGF, например, VEGF-ловушкой, такой как афлиберцепт или другой VEGF-ингибирующий слитый белок, который описан в US 7087411, или анти-VEGF-антителом или его антигенсвязывающим фрагментом (например, бевацизумабом или ранибизумабом).
В иллюстративных вариантах, в которых анти-PDGFR-бета-антитело по изобретению вводят в сочетании с антагонистом VEGF (например, ловушкой VEGF, такой как афлиберцепт), включая введение совместных препаратов, содержащих анти-PDGFR-бета-антитело и антагонист VEGF, при этом индивиду могут быть введены отдельные компоненты и/или они могут быть приготовлены в виде одного препарата с использованием множества сочетаний доз. Например, анти-PDGFR-бета-антитело может быть введено индивиду и/или может входить в состав общего препарата в количестве, выбранном из группы, состоящей из 0,05 мг, 0,1 мг, 0,2 мг, 0,3 мг, 0,4 мг, 0,5 мг, 0,6 мг, 0,7 мг, 0,8 мг, 0,9 мг, 1, 0 мг, 1,5 мг, 2,0 мг, 2,5 мг, 3,0 мг, 3,5 мг, 4,0 мг, 4,5 мг, 5,0 мг и 5,5 мг; и антагонист VEGF (например, ловушку VEGF, такую как афлиберцепт) может быть введен индивиду и/или может входить в состав общего препарата в количестве, выбранном из группы, состоящей из 1,0 мг, 1,1 мг, 1,2 мг, 1,3 мг, 1,4 мг, 1, 5 мг, 1, 6 мг, 1,7 мг, 1,8 мг, 1,9 мг, 2,0 мг, 2,1 мг, 2,2 мг, 2,3 мг, 2,4 мг, 2,5 мг, 2,6 мг, 2,7 мг, 2,8 мг, 2,9 мг и 3,0 мг. Примеры сочетаний доз антитела против PDGFR-бета/афлиберцепта согласно настоящему изобретению включают, например,: (i) 0,2 мг антитела против PDGFR-бета + 2 мг афлиберцепта; (ii) 0,5 мг антитела против PDGFR-бета- + 2 мг афлиберцепта; (iii) 1 мг антитела против PDGFR-бета + 2 мг афлиберцепта; (iv) 3 мг
- 15 031049 антитела против PDGFR-бета + 2 мг афлиберцепта; и (v) 4 мг антитела против PDGFR-бета + 2 мг афлиберцепта. Сочетания/совместные препараты можно вводить индивиду в соответствии с любой из схем введения, описанных в настоящей публикации, включая, например, один раз каждую неделю, один раз каждые 2 недели, один раз каждые 3 недели, один раз в месяц, один раз каждые 2 месяца, один раз каждые 3 месяца, один раз каждые 4 месяца, один раз каждые 5 месяцев, один раз каждые 6 месяцев и т.д.
Дополнительный терапевтически активный компонент (компоненты) может быть введен индивиду до введения антитела против PDGFR-бета согласно настоящему изобретению. Например, можно считать, что первый компонент введен перед вторым компонентом, если первый компонент вводят за 1 неделю до, 72 часа до, 60 часов до, 48 часов до, 36 часов до, 24 часа до, 12 часов до, 6 часов до, 5 часов до, 4 часа до, 3 часа до, 2 часа до, 1 час до, 30 минут до, 15 минут до, 10 минут до, 5 минут до или меньше чем за 1 минуту до введения второго компонента. В других вариантах дополнительный терапевтически активный компонент (компоненты) можно вводить индивиду после введения антитела против PDGFR-бета согласно настоящему изобретению. Например, можно считать, что первый компонент введен после второго компонента, если первый компонент вводят через 1 минуту после, 5 минут после, 10 минут после, 15 минут после, 30 минут после, 1 час после, 2 часа после, 3 часа после, 4 часа после, 5 часов после, 6 часов после, 12 часов после, 24 часа после, 36 часов после, 48 часов после, 60 часов после, 72 часа после введение второго компонента. В следующих вариантах дополнительный терапевтически активный компонент (компоненты) можно вводить индивиду одновременно с введением антитела против PDGFR-бета согласно настоящему изобретению. Термин одновременное введение в целях настоящего изобретения включает, например, введение антитела против PDGFR-бета и дополнительного терапевтически активного компонента индивиду в одной дозированной форме (например, приготовленных в виде одного препарата), или в отдельных дозированных формах, вводимых индивиду с интервалами между ними в пределах примерно 30 минут или меньше. При введении в виде отдельных дозированных форм каждую дозированную форму можно вводить одним и тем же путем (например, и анти-PDGFR-бета-антитело и дополнительный терапевтически активный компонент можно вводить интравитреально, подкожно и т.д.); альтернативно, дозированные формы можно вводить разными путями (например, анти-PDGFR-бетаантитело можно вводить интравитреально, а дополнительный терапевтически активный компонент можно вводить системно). В любом случае введение компонентов в одной дозированной форме, в отдельных дозированных формах одним и тем же путем или в отдельных дозированных формах разными путями считают одновременным введением в целях настоящего изобретения. В целях настоящего изобретения введение антитела против PDGFR-бета перед, одновременно или после (как в случае терминов, определенных в настоящем описании выше) введения дополнительного терапевтически активного компонента считают введением антитела против PDGFR-бета в сочетании с дополнительным терапевтически активным компонентом).
Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, в которых анти-PDGFR-бетаантитело согласно настоящему изобретению готовят в виде общего препарата с одним или несколькими дополнительными терапевтически активными компонентами, которые описаны в настоящей публикации.
Настоящее изобретение также относится к дополнительными терапевтическим композициям, содержащим сочетание антагониста PDGF и антагониста VEGF. Антагонисты PDGF согласно настоящему аспекту изобретения включают антагонисты рецептора PDGF, a также антагонисты лиганда PDGF. Подобным образом, антагонисты VEGF согласно настоящему аспекту изобретения включают антагонист рецептора VEGF, а также антагонисты лиганда VEGF.
Схемы введения
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения многократные дозы антитела против PDGFR-бета (или фармацевтической композиции, содержащей сочетание антитела против PDGFR-бета и любого из дополнительных терапевтически активных средств, указанных в настоящем описании) можно вводить индивиду на протяжении определенного периода времени. Способы согласно настоящему аспекту изобретения включают в себя последовательное введение индивиду многократных доз антитела против PDGFR-бета по изобретению. В используемом в настоящем описании смысле последовательное введение означает, что дозы антитела против PDGFR-бета вводят индивиду в разных временных точках, например, в разные дни, разделенные предварительно определяемым интервалом (например, составляющим часы, дни, недели или месяцы). Настоящее изобретение относится к способам, которые включают в себя последовательное введение пациенту одной начальной дозы антитела против PDGFR-бета с последующей одной или несколькими вторичными дозами антитела против PDGFR-бета и необязательно с последующими одной или несколькими третичными дозами антитела против PDGFRбета.
Термины начальная доза, вторичные дозы и третичные дозы относятся к временной последовательности введения антитела против PDGFR-бета по изобретению. Таким образом, начальная доза представляет собой дозу, которую вводят в начале схемы лечения (также называемую исходной дозой); вторичные дозы представляют собой дозы, которые вводят после начальной дозы; и третичные дозы представляют собой дозы, которые вводят после вторичных доз. Все дозы: начальная, вторичные и третичные дозы, могут содержать одно и то же количество антитела против PDGFR-бета, но обычно он мо
- 16 031049 гут отличаться друг от друга по частоте введения. Однако в некоторых вариантах количество антитела против PDGFR-бета, которое содержится в начальной, вторичных и/или третичных дозах, изменяют (например, корректируют выше или ниже, в зависимости от ситуации) в ходе лечения. В некоторых вариантах две или больше (например, 2, 3, 4 или 5) доз вводят в начале схемы лечения в качестве насыщающей дозы с последующими дозами, которые вводят менее часто (например, поддерживающими дозами).
В некоторых иллюстративных вариантах осуществления настоящего изобретения каждую из вторичных и/или третичных доз вводят от 1 до 26 (например, 1, 1'/2. 2, 21 /2. 3, 31 /2. 4, 4% 5, 51 /2. 6, 61 /2. 7, 71 /2. 8, 8% 9, 9% 10, 10% 11, 11% 12, 12% 13, 13% 14, 14% 15, 15% 16, 16% 17, 17% 18, 18% 19, 19% 20, 20% 21, 21% 22, 22% 23, 23% 24, 24% 25, 25% 26, 261/2 или больше) недель после непосредственно предшествующей дозы. Фраза непосредственно предшествующая доза в используемом в настоящем описании смысле означает предшествующую в последовательности многократных введений дозу антитела против PDGFR-бета, которую вводят пациенту перед введением сразу следующей за ней дозы в последовательности без промежуточных доз.
Способы согласно настоящему аспекту изобретения могут включать в себя введение пациенту любого количества вторичных и/или третичных доз антитела против PDGFR-бета. Например, в некоторых вариантах пациенту вводят только одну вторичную дозу. В других вариантах пациенту вводят две или больше (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или больше) вторичных доз. Подобным образом, в некоторых вариантах пациенту вводят только одну третичную дозу. В других вариантах пациенту вводят две или больше (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или больше) третичных доз.
В вариантах, в которых используют несколько вторичных доз, каждая вторичная доза может быть введена с той же самой частотой, что и другие вторичные дозы. Например, каждую вторичную дозу можно вводить пациенту через 1-2 недели или через 1-2 месяца после непосредственно предшествующей дозы. Подобным образом в вариантах, в которых используют многократные третичные дозы, каждую третичную дозу можно вводить с такой же частотой, что и другие третичные дозы. Например, каждую третичную дозу можно вводить пациенту через 2-12 недель после непосредственно предшествующей дозы. В некоторых вариантах осуществления изобретения частота, с которой пациенту вводят вторичные и/или третичные дозы, может варьировать на протяжении схемы лечения. Лечащий врач также может корректировать частоту введения в ходе лечения, в зависимости от потребностей отдельного пациента после клинического обследования.
Настоящее изобретение относится к схемам введения, в которых 2-6 насыщающих доз вводят пациенту с первой частотой (например, один раз в неделю, один раз каждые две недели, один раз каждые три недели, один раз в месяц, один раз каждые два месяца и т.д.) с последующим введением пациенту двух или более поддерживающих доз с меньшей частотой. Например, согласно настоящему аспекту изобретения, если насыщающие дозы вводят с частотой, например, один раз в месяц (например, два, три, четыре или больше насыщающих доз, вводимых один раз в месяц), то поддерживающие дозы можно вводить пациенту один раз каждые пять недель, один раз каждые шесть недель, один раз каждые семь недель, один раз каждые восемь недель, один раз каждые десять недель, один раз каждые двенадцать недель и т.д.).
Примеры
Следующие примеры приведены для того, чтобы предоставить специалистам в данной области полное раскрытие и описание того, как получать и применять способы и композиции по изобретению, и не предназначены для ограничения объема того, что авторы изобретения считают своим изобретением. Были предприняты усилия для обеспечения точности в отношении используемых числовых значений (например, количеств, температуры и т.д.), но необходимо учитывать некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иное, то части являются частями по массе, молекулярная масса представляет собой среднюю молекулярную массу, температура приведена в градусах по Цельсию, и давление равно или близко атмосферному давлению.
Пример 1. Создание человеческих антител к PDGFR-бета.
Иммуноген, содержащий эктодомен PDGFR-бета вводили непосредственно с адъювантом, чтобы стимулировать иммунный ответ, мышам VELOCIMMUNE®, содержащим ДНК, кодирующую вариабельные области легкой цепи каппа и тяжелой цепи иммуноглобулина человека. Гуморальный иммунный ответ наблюдали, используя специфичный для PDGFR-бета иммуноанализ. Когда был достигнут требуемый иммунный ответ, собирали спленоциты и сливали с клетками миеломы мышей, чтобы сохранить их жизнеспособность и образовать линии клеток гибридом. Линии клеток гибридомы подвергали скринингу и селекции, чтобы идентифицировать клеточные линии, которые продуцируют PDGFR-бетаспецифичные антитела. Используя такую методику, получили несколько химерных анти-PDGFR-бетаантител (т.е. антител, имеющих вариабельные домены человека и константные домены мыши); примеры антител, созданных таким образом, были обозначены следующим образом: H1M3299N, H1M3305N, H1M3310N, H1M3361N, H2M3363N, H2M3365N, H2M3368N, H2M3373N и H2M3374N. Вариабельные домены человека из химерных антител затем клонировали в константных доменах человека, чтобы получить полностью человеческие антитела против PDGFR-бета, которые описаны в настоящей публикации.
Антитела против PDGFR-бета также выделяли непосредственно из антиген-позитивных B-клеток
- 17 031049 без слияния с клетками миеломы, как описано в US 2007/0280945A1. Используя такой способ, получили несколько полностью человеческих анти-PDGFR-бета-антител (т.е. антител, имеющих вариабельные домены человека и константные домены человека); примеры антител, созданных таким образом, были названы следующим образом: H4H3394P, H4H3095S, H4H3096S, H4H3097S, H4H3098S, H4H3099S, H4H3102S, H4H3103S, H4H3104S, H4H3105S, H4H3106S, H4H3107S.
Некоторые биологические свойства примеров анти-PDGFR-бета-антител, созданных согласно способам, описанным в данном примере, подробно описаны в примерах, приведенных ниже.
Пример 2. Аминокислотные последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепей.
В табл. 1 приведены пары аминокислотных последовательностей вариабельных областей тяжелой и легкой цепей отобранных анти-PDGFR-бета-антител и соответствующие идентификационные номера антител.
Таблица 1
SEQ ID NO :
Обозначение антитела HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3
3299N 2 4 6 8 10 12 14 16
3305N 18 20 22 24 26 28 30 32
3310N 34 36 38 40 42 44 46 48
3361N 50 52 54 56 58 60 62 64
3363N 66 68 70 72 74 76 78 80
3365N 82 84 86 88 90 92 94 96
3368N 98 100 102 104 106 108 110 112
3373N 114 116 118 120 122 124 126 128
3374N 130 132 134 136 138 140 142 144
3094Р 146 148 150 152 154 156 158 160
3095S 162 164 166 168 170 172 174 176
3096S 178 180 182 184 186 188 190 192
3097S 194 196 198 200 202 204 206 208
3098S 210 212 214 216 218 220 222 224
3099S 226 228 230 232 234 236 238 240
3102S 242 244 246 248 250 252 254 256
3103S 258 260 262 264 266 268 270 272
3104S 274 276 278 280 282 284 286 288
3105S 290 292 294 296 298 300 302 304
3106S 306 308 310 312 314 316 318 320
3107S 322 324 326 328 330 332 334 336
Антитела обычно называют в настоящем описании согласно следующей номенклатуре: префикс Fc (например, M1M, H2M, H4H) с последующим числовым идентификационным номером (например, 3299, 3363 или 3094, который указан в таблице 1), затем следует окончание P, N или S. Таким образом, согласно такой номенклатуре антитело может быть названо в настоящем описании, например, H1M3299N, H2M3363N, H4H3094 и т.д. Префиксы H1M, H2M и H4H в обозначении антител, используемые в настоящем описании, указывают конкретный изотип Fc-области антитела. Например, антитело H1M имеет Fc IgG1 мыши, тогда как антитело H4H имеет Fc IgG4 человека. Как будет понятно специалисту в данной области, антитело, имеющее конкретный изотип Fc, может быть превращено в антитело с другим изотипом Fc (например, антитело с Fc IgG1 мыши может быть превращено в антитело с IgG4 человека и т.д.), но в любом случае, вариабельные домены (включая CDR) - которые указаны числовыми идентификационными номерами, показанными в табл. 1, будут оставаться теми же самыми, и предполагается, что связывающие свойств будут идентичными или по существу сходными, независимо от природы домена Fc.
Контрольная конструкция, используемая в следующих примерах
Контрольное анти-PDGFR-бета-антитело включали в следующие примеры с целью сравнения. Контрольное антитело обозначено в настоящем описании как контроль I: человеческое анти-PDGFR-бетаантитело с последовательностями вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей 2C5, которые указаны в US 7740850.
Пример 3. Связывание антитела с PDGFR-бета человека, которое определяли на основании поверхностного плазмонного резонанса.
Аффинности связывания и кинетические константы для связывания антигена с отобранными очищенными моноклональными антителами против PDGFR-бета человека определяли, используя анализ поверхностного плазмонного резонанса в реальном времени на биосенсоре (Biacore T100, GE Healthcare Life Sciences, Piscataway, NJ) при 25°C и 37°C. Антитела, экспрессированные либо с мышиным Fc (префикс H1M; H2M) или человеческим Fc (префикс H4H), улавливали на соответствующих им поверхностях анти^-сенсора (форма улавливания мАт). Разные концентрации растворимых мономерных конструкций PDGFR-бета (hPDGFRb.mmh [SEQ ID NO:337], Macaca fascicularis PDGFRb.mmh [SEQ ID NO:340]) или димерных конструкций PDGFR-бета (PDGFRb.mFc человека [SEQ ID NO:338] или PDGFRb.hFc человека [SEQ ID NO:339]) инъецировали на поверхность, на которой улавливали моноклональное анти-PDFR-бета-антитело со скоростью потока 50 мкл/мин. Кинетические константы скорости ассо
- 18 031049 циации (ka) и диссоциации (kd) определяли, обрабатывая и подгоняя данные с модели связывания 1:1, используя компьютерную программу для подгонки кривых Scrubber 2.0. Равновесные константы диссоциации для связывания (KD) и время полужизни в связи с диссоциацией (t1/2) вычисляли на основании кинетических констант скорости в виде: KD(M)= kd/ka; и ^(мин^М/^*^). Параметры кинетики связывания для разных моноклональных анти-PDGFR-бета-антител показаны в табл. 2-5 (NB = не наблюдали связывания в используемых условиях; NT = не тестировали).
Таблица 2. Характеристики связывания анти-PDGFR-бета-антител (форма с мышиным Fc) с мономерными и димерными конструкциями PDGFR-бета при 25°C
Антитело Аналит ka (М сек'1) kd(ceK·1) Kd ( моль ) ti/2 (МИН )
H1M3305N hPDGFRb.mmh 3.12E+04 2.52E-05 8.08E-10 458
mfPDGFRb.mmh 5.10E+04 4.16E-05 8.16E-10 278
hPDGFRb.mFc 1.62E+05 1.00E-06 6.18E-12 11550
H1M3310N hPDGFRb.mmh 1.40E+04 1.00E-06 7.00E-11 11550
mfPDGFRb.mmh 1.00E+04 1.00E-06 2.00E-10 11550
hPDGFRb.mFc 1.27E+04 1.00E-06 7.89E-11 11550
H1M3299N hPDGFRb.mmh 2.11E+04 9.20E-04 4.35E-08 13
mfPDGFRb.mmh NB NB NB NB
hPDGFRb.mFc 2.59E+04 1.65E-04 6.35E-09 70
H1M3361N hPDGFRb.mmh 1.73E+05 1.26E-03 7.29E-09 9
mfPDGFRb.mmh 1.00E+04 3.89E-05 3.90E-09 297
hPDGFRb.mFc 1.31E+04 1.00E-06 7.65E-11 11550
H2M3363N hPDGFRb.mmh 7.11E+04 3.33E-03 4.68E-08 3
mfPDGFRb.mmh 5.00E+04 6.85E-05 1.40E-09 169
hPDGFRb.mFc 1.04E+05 4.03E-06 3.86E-11 2867
H2M3365N hPDGFRb.mmh 4.54E+04 1.27E-04 2.79E-09 91
mfPDGFRb.mmh 6.00E+04 2.06E-04 3.40E-09 56
hPDGFRb.mFc 2.36E+05 8.01E-05 3.40E-10 144
H2M3368N hPDGFRb.mmh 4.61E+04 3.41 E-04 7.41 E-09 34
mfPDGFRb.mmh 7.00E+03 1.85E-04 3.00E-08 63
hPDGFRb.mFc 1.18E+05 3.70E-05 3.13E-10 313
H2M3373N hPDGFRb.mmh 1.89E+05 2.35E-03 1.24E-08 5
mfPDGFRb.mmh 1.30E+05 2.38E-03 1.83E-08 5
hPDGFRb.mFc 4.73E+05 2.40E-04 5.07E-10 48
H1M3374N hPDGFRb.mmh 1.67E+05 3.31 E-04 1.99E-09 35
mfPDGFRb.mmh 1.37E+05 3.71 E-04 2.70E-09 31
hPDGFRb.mFc 9.96E+05 1.07E-04 1.08E-10 108
Таблица 3. Характеристики связывания анти-PDGFR-бета-антител (форма с человеческим Fc) с мономерными и димерными конструкциями PDGFR-бета при 25°C
Антитело Аналит ka (м-сек'1) kd (сек'1) Kd ( моль ) ti/2 (МИН )
H4H3305N hPDGFRb.mmh 5.99E+04 1.09 E-04 1.81 E-09 106
mfPDGFRb.mmh 6.12E+04 1.11 E-04 1.82E-09 104
hPDGFRb.hFc 1.38E+05 3.42E-05 2.48E-10 338
H4H3310N hPDGFRb.mmh 2.61E+04 8.92E-05 3.41 E-09 130
mfPDGFRb.mmh 2.88E+04 1.08 E-04 3.75E-09 107
hPDGFRb.hFc 4.45E+04 2.90E-05 6.52E-10 398
H4H3365N hPDGFRb.mmh 8.53E+04 1.42 E-04 1.66E-09 81
mfPDGFRb.mmh 8.83E+04 1.50 E-04 1.70E-09 77
hPDGFRb.hFc 1.84E+05 4.55E-05 2.44E-10 254
H4H3374N hPDGFRb.mmh 2.83E+05 3.58 E-04 1.26E-09 32
mfPDGFRb.mmh 2.84E+05 4.72 E-04 1.66E-09 24
hPDGFRb.hFc 6.00E+05 8.93E-05 1.48E-10 129
H4H3107S hPDGFRb.mmh 2.21E+05 1.91 E-04 8.63E-10 61
mfPDGFRb.mmh 2.36E+05 1.98 E-04 8.36E-10 58
hPDGFRb.hFc 5.29E+05 4.24E-05 8.01E-11 272
H4H3102S hPDGFRb.mmh 5.09E+05 4.55E-04 8.90E-10 25
mfPDGFRb.mmh 2.83E+05 4.89 E-04 1.73E-09 24
hPDGFRb.hFc 3.00E+05 1.18E-04 3.90E-10 98
H4H3099S hPDGFRb.mmh 1.45E+05 1.69 E-04 1.16E-09 68
mfPDGFRb.mmh 1.66E+05 1.64 E-04 9.87E-10 71
hPDGFRb.hFc 2.38E+05 5.48E-05 2.30E-10 211
H4H3098S hPDGFRb.mmh 3.86E+05 5.96E-04 1.54E-09 19
mfPDGFRb.mmh 1.36E+05 9.40E-03 6.89E-08 1.2
hPDGFRb.hFc 2.80E+05 6.22E-05 2.19E-10 186
H4H3104S hPDGFRb.mmh 4.28E+05 6.88E-04 1.61 E-09 17
mfPDGFRb.mmh 7.86E+05 7.14E-04 9.09E-10 16
hPDGFRb.hFc 4.80E+05 1.46E-04 3.04E-10 79
H4H3094P hPDGFRb.mmh 1.65E+05 2.57E-04 1.56E-09 45
mfPDGFRb.mmh 1.77E+05 2.89E-04 1.63E-09 40
hPDGFRb.hFc 2.42E+05 6.20E-05 2.56E-10 186
H4H3103S hPDGFRb.mmh 3.35E+05 1.05E-03 3.13E-09 11
mfPDGFRb.mmh 3.59E+05 1.16E-03 3.24E-09 10
hPDGFRb.hFc 6.21E+05 1.64E-04 2.64E-10 70
H4H3106S hPDGFRb.mmh 2.99E+05 7.44E-04 2.49E-09 16
mfPDGFRb.mmh 1.90E+05 8.82E-04 4.65E-09 13
hPDGFRb.hFc 3.14E+05 2.15E-04 6.86E-10 54
H4H3105S hPDGFRb.mmh 2.46E+05 7.84E-04 3.19E-09 15
mfPDGFRb.mmh 1.80E+05 9.32E-04 5.20E-09 12
hPDGFRb.hFc 2.47E+05 2.25E-04 9.10E-10 51
H4H3095S hPDGFRb.mmh 2.85E+05 1.36E-03 4.78E-09 8
mfPDGFRb.mmh 2.07E+05 1.75E-03 8.50E-09 7
hPDGFRb.hFc 3.21E+05 2.32 E-04 7.20E-10 50
H4H3096S hPDGFRb.mmh 2.81E+05 1.04E-03 3.68E-09 11
mfPDGFRb.mmh 1.82E+05 1.17E-03 6.39E-09 10
hPDGFRb.hFc 2.22E+05 2.60E-04 1.17E-09 44
H4H3097S hPDGFRb.mmh NB NB NB NB
mfPDGFRb.mmh NB NB NB NB
hPDGFRb.hFc NB NB NB NB
Контроль I hPDGFRb.mmh 2.77E+05 3.49E-03 1.26E-08 3
mfPDGFRb.mmh 3.02E+05 2.43E-03 8.06 E-09 5
hPDGFRb.hFc 5.39E+05 1.50 E-04 2.78E-10 77
Таблица 4. Характеристики связывания анти-PDGFR-бета-антител (форма с мышиным Fc)
- 19 031049 с мономерными и димерными конструкциями PDGFR-бета при 37°C
Антитело Аналит ka (М сек'1) kd (сек1) KD ( моль ) t1/2 (мин )
H1M3305N hPDGFRb.mmh 1.16E+05 1.02E-04 8.80E-10 113
mfPDGFRb.mmh NT NT NT NT
hPDGFRb.mFc NT NT NT NT
H1M3310N hPDGFRb.mmh 3.53E+04 6.46E-05 1.83E-09 179
mfPDGFRb.mmh NT NT NT NT
hPDGFRb.mFc NT NT NT NT
H1M3299N hPDGFRb.mmh 3.16E+04 2.17E-03 6.86E-08 5
mfPDGFRb.mmh NT NT NT NT
hPDGFRb.mFc NT NT NT NT
H1M3361N hPDGFRb.mmh 3.04E+05 8.33E-03 2.74E-08 1.4
mfPDGFRb.mmh NT NT NT NT
hPDGFRb.mFc NT NT NT NT
H2M3363N hPDGFRb.mmh 2.86E+05 5.03E-03 1.76E-08 2
mfPDGFRb.mmh NT NT NT NT
hPDGFRb.mFc NT NT NT NT
H2M3365N hPDGFRb.mmh 1.15E+05 5.51 E-04 4.79E-09 21
mfPDGFRb.mmh NT NT NT NT
hPDGFRb.mFc NT NT NT NT
H2M3368N hPDGFRb.mmh 1.37E+05 8.44E-04 6.17E-09 14
mfPDGFRb.mmh NT NT NT NT
hPDGFRb.mFc NT NT NT NT
H2M3373N hPDGFRb.mmh 4.10E+05 1.22E-02 2.98E-08 0.9
mfPDGFRb.mmh NT NT NT NT
hPDGFRb.mFc NT NT NT NT
H1M3374N hPDGFRb.mmh 4.63E+05 7.90E-04 1.71E-09 15
mfPDGFRb.mmh NT NT NT NT
hPDGFRb.mFc NT NT NT NT
Таблица 5. Характеристики связывания анти-PDGFR-бета-антител (форма с человеческим Fc) с мономерными и димерными конструкциями PDGFR-бета при 37°C
Антитело Аналит ka (М сек'1) kd (сек'1) KD ( моль ) tl/2 (МИН )
H4H3305N hPDGFRb.mmh 1.84E+05 3.55 E-04 1.93E-09 33
mfPDGFRb.mmh 1.91E+05 3.90 E-04 2.04E-09 30
hPDGFRb.hFc 2.47E+05 4.85E-05 1.97E-10 238
H4H3310N hPDGFRb.mmh 5.09E+04 3.39E-04 6.65E-09 34
mfPDGFRb.mmh 5.14E+04 3.92E-04 7.62E-09 29
hPDGFRb.hFc 7.13E+04 4.50E-05 6.32E-10 256
H4H3365N hPDGFRb.mmh 1.90E+05 1.02E-03 5.38E-09 11
mfPDGFRb.mmh 2.00E+05 1.01E-03 5.06E-09 11
hPDGFRb.hFc 2.50E+05 2.64E-04 1.05E-09 44
H4H3374N hPDGFRb.mmh 6.85E+05 1.26E-03 1.84E-09 9
mfPDGFRb.mmh 6.70E+05 1.77E-03 2.63E-09 7
hPDGFRb.hFc 1.63E+06 2.91 E-04 1.78E-10 40
H4H3107S hPDGFRb.mmh 6.05E+05 8.79E-04 1.45E-09 13
mfPDGFRb.mmh 6.83E+05 9.42E-04 1.38E-09 12
hPDGFRb.hFc 6.95E+05 1.15E-04 1.65E-10 101
H4H3102S hPDGFRb.mmh 1.04E+06 1.47E-03 1.42E-09 8
mfPDGFRb.mmh 5.74E+05 1.64E-03 2.86E-09 7
hPDGFRb.hFc 4.20E+05 3.19E-04 7.60E-10 36
H4H3099S hPDGFRb.mmh 2.67E+05 6.39E-04 2.39E-09 18
mfPDGFRb.mmh 3.00E+05 6.52 E-04 2.17E-09 18
hPDGFRb.hFc 5.40E+05 1.05E-04 1.93E-10 110
H4H3098S hPDGFRb.mmh 7.33E+05 1.71E-03 2.34E-09 7
mfPDGFRb.mmh 2.80E+05 2.67E-02 9.56E-08 0.4
hPDGFRb.hFc 3.74E+05 7.66E-05 2.06E-10 151
H4H3104S hPDGFRb.mmh 8.33E+05 2.80E-03 3.37E-09 4
mfPDGFRb.mmh 7.40E+05 2.99E-03 4.05E-09 4
hPDGFRb.hFc 9.36E+05 5.67E-04 6.06E-10 20
H4H3094P hPDGFRb.mmh 2.23E+05 1.47E-03 6.58E-09 8
mfPDGFRb.mmh 2.53E+05 1.70E-03 6.69E-09 7
hPDGFRb.hFc 2.83E+05 2.48E-04 8.77E-10 47
H4H3103S hPDGFRb.mmh 4.92E+05 4.97E-03 1.01 E-08 2
mfPDGFRb.mmh 5.44E+05 5.56E-03 1.02E-08 2
hPDGFRb.hFc 7.57E+05 3.06E-04 4.05E-10 38
H4H3106S hPDGFRb.mmh 3.94E+05 3.35E-03 8.49E-09 3
mfPDGFRb.mmh 3.72E+05 3.45E-03 9.26E-09 3
hPDGFRb.hFc 3.56E+05 7.41 E-04 2.08E-09 16
H4H3105S hPDGFRb.mmh 3.14E+05 3.54E-03 1.13E-08 3
mfPDGFRb.mmh 2.89E+05 4.16E-03 1.44 E-08 3
hPDGFRb.hFc 2.80E+05 8.24E-04 3.00E-09 14
H4H3095S hPDGFRb.mmh 4.52E+05 6.24E-03 1.38E-08 2
mfPDGFRb.mmh 2.39E+05 7.97E-03 3.33E-08 1.5
hPDGFRb.hFc 4.25E+05 7.10E-04 1.67E-09 16
H4H3096S hPDGFRb.mmh 4.52E+05 6.24E-03 1.38E-08 2
mfPDGFRb.mmh 1.62E+05 5.12E-03 3.16E-08 2
hPDGFRb.hFc 2.50E+05 7.93E-04 3.10E-09 15
H4H3097S hPDGFRb.mmh NB NB NB NB
mfPDGFRb.mmh NB NB NB NB
hPDGFRb.hFc NB NB NB NB
Контроль I hPDGFRb.mmh 4.50E+05 1.46E-02 3.25E-08 0.8
mfPDGFRb.mmh 4.89E+05 9.82E-03 2.01 E-08 1.2
hPDGFRb.hFc 8.04E+05 2.17E-04 2.70E-10 53
Как показано в табл. 2-5, несколько анти-PDGFR-бета-антител согласно настоящему изобретению
- 20 031049 имели субнаномолярную аффинность по отношению к конструкциям PDGFR-бета человека и M. fascicularis. Кроме того, несколько клонов проявили более тесное (более низкая KD) связывание с конструкциями PDGFR-бета, чем эталонное (контроль I) антитело.
Пример 4. Анти-PDGFR-бета антитела блокируют связывание лигандов PDGF с PDGFR-бета.
А. Блокирование рецептора/лиганда, оцениваемое с использованием основанного на ELISA иммуноанализа.
Способность некоторых антител против PDGFR-бета человека по изобретению блокировать связывание рецептора с его лигандом PDGF-BB сначала оценивали с использованием основанного на ELISA иммуноанализа. Кратко, планшеты покрывали PDGF-BB человека (2 мкг/мл). Отдельно 250 пМ биотинилированного растворимого hPDGFR-beta.mmh (biot-hPDGFR-beta-mmh, SEQ ID NO:337) предварительно смешивали с серийно разведенными антителами против PDGFR-бетами (0-100 нМ) в течение 1 ч при комнатной температуре (25°C). Уравновешенные растворы PDGFR-бета/антитело добавляли в покрытые лигандом планшеты, давали возможность инкубироваться в течение 1 ч и промывали. Уровни biot-hPDGFR-beta.mmh определяли, используя конъюгированный с HRP стрептавидин. Данные анализировали, используя компьютерную программу Prism, и значения IC50 вычисляли в виде количества, необходимого для достижения снижения на 50% hPDGFR-beta-mmh, связанного с лигандом. Также вычисляли значения максимального блокирования, которые отражают способность антитела к блокированию по сравнению с исходным уровнем. Оптическую плотность, измеренную при постоянном количестве 250 пМ biot-hPDGFR-beta-mmh на дозовой кривой определяют как 0% блокирования, а оптическую плотность без добавления PDGFR-бета определяют как 100%. Оптическую плотность в лунках, содержащих самую высокую концентрацию антитела, определяли как процент максимального блокирования. Результаты показаны в табл. 6. (E указывает, что антитело является усилителем, т.е. сигнал был выше в присутствии некоторых концентраций антитела, чем в отсутствие антитела).
Таблица 6. Анти-PDGFR-бета-антитело, блокирующее связывание PDGF-BB с PDGFR-бета
Антитело IC50 Для антитела, блокирующего взаимодействие лиганд/рецептор (моль) Максимальное блокирование, %
H1M3299N 7.6Е-09 67
H1M3305N 8.5Е-11 83
H1M3310N 1.2Е-10 88
H1M3361N 1.0Е-10 76
H1M3374N 7.7Е-11 88
H2M3363N 4.1Е-09 77
H2M3365N 9.0Е-11 82
H2M3368N 1.ЗЕ-10 79
H2M3373N 9.0Е-10 80
Н4Н3094Р 1.2Е-10 85
H4H3095S 1.4Е-09 82
H4H3096S 1.8Е-10 84
H4H3097S Е 5
H4H3098S Е -13
H4H3099S 9.7Е-11 91
H4H3102S Е 30
H4H3103S 2.4Е-10 90
H4H3104S 3.8Е-10 89
H4H3105S 1.6Е-10 86
H4H3106S 1.7Е-10 86
H4H3107S 6.6Е-11 83
H4H3305N 3.0Е-10 86
H4H3310N 4.5Е-10 86
H4H3365N 3.7Е-10 87
H4H3374N 1.2Е-10 86
Контроль I 3.4Е-10* 92
* означает среднюю IC50 из трех отдельных экспериментов
Как показано в табл. 6, несколько антител по изобретению потенциально блокируют взаимодействие PDGFR-бета с его природным лигандом PDGF-BB со значениями IC50 в диапазонах примерно от 7,6 нМ (H1M3299N) до примерно 66 пМ (H4H3107S), и некоторые антитела усиливали взаимодействия рецептор-лиганд (например, H4H3097S, H4H3098S и H4H3102S).
B. Блокирование рецептора/лиганда, оцениваемое с использованием анализа на биосенсорах в ре
- 21 031049 альном времени.
Способность отобранных антител против PDGFR-бета человека блокировать связывание лиганда (PDGF-BB, PDGF-DD и PDGF-AB) с PDGFR-бета человека также оценивали, используя анализ на биосенсорах SPR в реальном времени (Biacore 3000).
Кратко, 400 условных единиц растворимого PDGFR-beta.mFc человека (SEQ ID NO:338) улавливали на поверхности сенсора Biacore, дериватизованного (ковалентно связанного) поликлональным антителом кролика против Fc мыши (GE Healthcare Life Sciences, Piscataway, NJ). Поверхность после улавливания насыщали 300 нМ отобранных анти-PDGFR-бета-антител в течение 4 мин с последующей инъекцией 30 нМ лиганда (PDGF-BB, PDGF-DD или PDGF-AB) еще в течение 4 мин при 25°C. Ответ в виде связывания в реальном времени контролировали в ходе анализа и сравнивали с ответом в виде связывания, измеряемым в том случае, когда лиганд PDGF наносили на дериватизованную улавливающую контрольную поверхность в отсутствие улавливаемого антитела. Результаты показаны на фиг. 1.
Как показано на фиг. 1, все антитела проявляли способность блокировать лиганды PDGF-BB и PDGF-AB, при этом меньшее количество антител способны эффективно блокировать PDGF-DD по сравнению с контролем без антитела. Следует отметить, что были антитела H4H3094P, H4H3374N и контрольное I, в случае которых регистрировали меньший количественный ответ в условных единицах, когда лиганд наносили на сенсорную поверхность Biacore.
Пример 5. Анализ перекрестной конкуренции анти-PDGFR-бета-антител.
Анализ перекрестной конкуренции проводили для того, чтобы оценить способность отобранных антител конкурировать друг с другом за связывание PDGFR-бета человека. Кратко, растворимый PDGFR-beta.mmh человека (SEQ ID NO:337) улавливали на кончиках сенсора анти-Penta-his Octet (ForteBio Corp., Menlo Park, CA).
Каждый кончик сенсора, покрытый PDGFR-beta.mmh, насыщали в течение 5 мин первым антиPDGFR-бета-антителом (мАт №1; 50 мкг/мл). Затем каждый кончик сенсора насыщали раствором второго антитела против PDGFR-бета (мАт № 2). Затем наблюдали ответ в реальном времени в виде связывания мАт № 2 с PDGR-beta.mmh, входящего в состав предварительно образованного комплекса с мАт №1. Все анализы осуществляли при 25°C со скоростью потока 1000 об/мин на биосенсоре Octet RED384 в буфере Octet HBST согласно инструкциям производителя (ForteBio Corp., Menlo Park, CA). Результаты показаны на фиг. 2.
Ответы в виде связывания, составляющие менее 0,1 нМ, показаны на фиг. 2 черной или серой штриховкой, и они свидетельствуют, что соответствующие пары антител конкурируют друг с другом за связывание с PDGFR-бета. Ответы в виде связывания выше 0,2 нМ (показанные белыми прямоугольниками на фиг. 2) означают, что пары антител не конкурируют друг с другом за связывание с PDGFR-бета.
Результаты, описанные в данном примере, показывают, что антитела против PDGFR-бета по изобретению могут быть сгруппированы в две отдельных корзины на основании характеристик связывания с эпитопом: корзина 1 включает контроль I, H4H3365N, H4H3374N, H4H3103S и H4H3094P. Корзина 2 включает H4H3099S, H4H3107S, H4H3305N и H4H3310N. Результаты данного примера свидетельствуют, что антитела корзины 1 связываются с другими областями на PDGFR-бета, отличными от областей, с которыми связываются антитела корзины 2.
Пример 6. Ингибирование опосредованной лигандом активации рецептора и передачи сигнала MAPK антитела против PDGFR-бетами.
Для дополнительной характеристики анти-PDGFR-бета-антител согласно настоящему изобретению был разработан биологический анализ для выявления активации PDGFR-бета двумя его известными связывающимися лигандами, PDGF BB и DD. Взаимодействие между рецепторами PDGFR-бета и их лигандами необходимо для индукции разнообразных клеточных процессов, включая пролиферацию, жизнеспособность, миграцию и морфогенез (Hoch and Soriano, 2003, Development 130: 5769-4784). Рецепторы PDGF представляют собой рецепторные тирозинкиназы и образуются в результате гомо-или гетеродимеризации рецепторов альфа и бета при активации под действием PDGF BB и DD. После активации индуцируется автофосфорилирование и запускаются несколько каскадов путей сигнальной трансдукции, включая путь Ras-MAPK (активируемая митогенами протеинкиназа).
Чтобы выявить активацию пути сигнальной трансдукции MAPK в результате связывания лиганда с PDGFR-бета, создали подходящую линию клеток HEK293 для экспрессии полноразмерного PDGFR-бета человека вместе с люциферазным репортером (отвечающий на сыворотку элемент [SRE-люцифераза]). Клетки HEK293/hPDGFR-бета высевали в 96-луночный планшет и поддерживали в среде с низким содержанием сыворотки, содержащей 0,1% FBS, в течение ночи. После инкубации к клеткам добавляли PDGF BB или DD, серийно разведенные 1:3 в концентрациях в диапазоне от 100 нМ до 0,002 нМ, чтобы определить зависимый от дозы ответ. Чтобы исследовать ингибирование активируемого лигандом каскада передачи сигнала MAPK, антитела серийно разводили 1:3 и добавляли к клеткам в концентрации в диапазоне от 100 нМ до 0,002 нМ. Концентрации PDGF BB и DD оставались постоянными на уровне 250 пМ и 400 пМ, соответственно, и люциферазную активность определяли спустя 5,5 часов. PDGF BB и DD активировали PDGFRb человека с ЕС50 0,04-1,11 нМ и 0,34-1,82 нМ, соответственно. Концентрацию антитела, необходимую для ингибирования на 50% опосредованной PDGFR-бета передачи сигнала (IC50),
- 22 031049 определяли для каждого антитела. Результаты суммированы в табл. 7. (NB = нет блокирования; изотип 1 = нерелевантное негативное контрольное IgG-антитело мыши; изотип 2 = нерелевантное негативное контрольное IgG-антитело человека).
Таблица 7. Значения IC50 для анти-PDGFR-бета-антител, блокирующих активацию лигандом
PDGF-BB и PDGF-DD
PDGF-BB (250 пМ) PDGF-DD (400 пМ)
Антитело 1Сзо (М) 1С50 (М)
Н4Н3094Р 4.0Е-10 3.9Е-10
H4H3095S 6.1Е-10 8.2Е-10
H4H3096S 4.5Е-10 5.8Е-10
H4H3097S NB NB
H4H3098S 1.2Е-09 1.1Е-09
H4H3099S 2.1Е-10 1.9Е-10
H4H3102S 4.1Е-09 4.4Е-09
H4H3103S 2.0Е-10 2.6Е-10
H4H3104S 5.0Е-10 З.ЗЕ-10
H4H3105S 5.8Е-10 5.1Е-10
H4H3106S 7.4Е-10 5.2Е-10
H4H3107S 1.7Е-10 2.4Е-10
H1M3299N 5.6Е-10 4.2Е-10
H1M3305N 8.5Е-09 1.9Е-10
H1M3310N 2.3Е-08 2.8Е-10
H1M3361N 6.8Е-09 8.4Е-11
H2M3363N 7.5Е-09 1.9Е-10
H2M3365N 7.9Е-09 1.1Е-10
H2M3368N 1.8Е-10 1.7Е-10
H2M3373N 7.0Е-11 9.2Е-11
H1M3374N 3.1Е-10 2.1Е-10
H4H3305N 5.0Е-10 4.8Е-10
H4H3310N 6.8Е-10 6.6Е-10
H4H3365N 2.3Е-10 3.7Е-10
H4H3374N 1.ЗЕ-10 1.5Е-10
Контроль I 1.8Е-10 1.8Е-10
Изотип 1 NB NB
Изотип 2 NB NB
Как показано в табл. 7, несколько анти-PDGFR-бета-антител согласно настоящему изобретению сильно блокировали зависимую от лиганда активацию PDGFR-бета с IC50 в субнаномолярном диапазоне. Кроме того, оба негативных контроля мышиный IgG (изотип 1) и IgG человека (изотип 2) не блокировали активацию рецептора лигандом.
Пример 7. Интернализация анти-PDGFR-бета-антител в PDGFR-бета-экспрессирующих клетках.
Чтобы исследовать опосредованную антителом интернализацию рецепторов, проводили эксперименты с использованием клеток, сконструированных так, чтобы они экспрессировали PDGFR-бета человека (клетки HEK293/SRE-luc/PDGFRb). Кратко, 20000 клеток HEK293/SRE Luc/PDGFRb/лунку высевали и оставляли на ночь в полной среде (10%FBS, пенициллин/стрептомицин/глутамин, NEAA и G418 в DMEM) и красили антитела против PDGFR-бетами в концентрации 10 мкг/мл в течение 30 мин при 4°C. Клетки промывали два раза и красили конъюгированным с Dylight 488 вторым Fab-антителом козы против IgG человека (10 мкг/мл; Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) в течение 30 мин при 4°C. Затем клетки инкубировали при 37°C в течение 2 ч, обеспечивая возможность интернализации рецептора. Флуоресценцию Alexa-488 гасили, инкубируя промытые клетки с анти-Alexa fluor 488 (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA) в течение 45 мин при 4°C, чтобы отличить связанные с поверхностью антитела от интернализованных антител. Изображения получали с использованием ImageXpress Micro XL (Molecular Devices LLC, Sunnyvale, CA) и осуществляли точечный анализ, используя компьютерную программу Columbus (Perkin Elmer, Waltham, MA). Относительную интернализацию вычисляли, сравнивая погашенное окрашивание (т.е. интернализованное антитело) для каждого антитела с окрашиванием в случае контрольного антитела 1. Результаты суммированы в табл. 8.
Таблица 8. Интернализация отобранных анти-PDGFR-бета-антител
Антитело Интернализация в процентах (относительно контроля I)
Н4Н3094Р 77%
H4H3099S 88%
H4H3103S 87%
H4H3107S 92%
H4H3305N 79%
H4H3310N 66%
H4H3365N 65%
H4H3374N 81%
Изотип контроль 4%
Контроль I 100%
Как показано в табл. 8, в данной форме анализа наблюдали, что все исследованные антитела против
- 23 031049
PDGFR-бета подвергались активной интернализации, что отражает потенциальную способность антител эффективно действовать на PDGFR-бета-экспрессирующие клетки-мишени в различных терапевтических контекстах.
Пример 8. Антитела против PDGFR-бета связываются с разными доменами на PDGFR-бета.
Внеклеточная часть PDGFR-бета состоит из 5 Ig-подобных домена C2-типа, названных D1-D5. D1D3 необходимы для высоко аффинного связывания лиганда. В настоящем примере эксперименты проводили для того, чтобы определить, с каким внеклеточным доменом (доменами) взаимодействуют некоторые антитела против PDGFR-бета по изобретению.
Для данного эксперимента использовали четыре разных конструкции внеклеточных доменов PDGFR-бета: D1 (SEQ ID NO:342), D1-D2 (SEQ ID NO:343), D1-D3 (SEQ ID NO:344) и D1-D4 (SEQ ID NO:345), а также полноразмерный PDGFR-бета. Четыре разных антитела против PDGFR-бета тестировали в отношении связывания с разными конструкциями, используя поверхностный плазмоный резонанс (Biacore). Кратко, 150-200 условных единиц антитела против PDGFR-бета улавливали, используя чип CM5 против Fc человека. Затем отдельные конструкции доменов или полноразмерный PDGFR-бета наносили на поверхность со связанным антителом в концентрации 50 нМ. Измеряли способность разных антител связываться с разными конструкциями доменов. Результаты показаны в табл. 9. (-) = не наблюдали связывания; (+) = наблюдали связывание; ND = не определяли.
Таблица 9. Наблюдаемое связывание отобранных анти-PDGFR-бета-антител с PDGFR-бета
Домены PDGFR-бета
Антитело D1 D1-2 D1-3 D1-4 Полноразмерный PDGFR-бета Предполагаемый домен связывания
Н4Н3094Р - + + + + 2
H4H3099S - - - - + ND
H4H3305N - - - - + ND
H4H3374N - + + + + 2
Как суммарно представлено в табл. 9, все антитела связывались с полноразмерным PDGFR-бета. Было определено, что два антитела, H4H3094P и H4H3374N, связывались с доменом 2. Интересно, что два указанных антитела также были блокаторами лигандов, судя по основанным на иммуноанализе ELISA результатам, что подтверждает, что домен 2 важен для связывания лиганда (PDGF-BB). Два других тестированных приведенных в качестве примера антител, H4H3099S и H4H3305N, не связывались ни с одной из конструкцией доменов, что свидетельствует о том, что такие антитела могут нуждаться в аминокислотах между доменами 4 и 5 и/или в самом домене 5 для высоко аффинного связывания.
Пример 9. Антитела против PDGFR-бета истощают перициты в модели сетчатки in vivo.
Два приведенных в качестве примера антитела против PDGFR-бета, H4H3374N и H4H3094P, тестировали в модели истощения перицитов сетчатки in vivo. Перициты представляют собой клетки, подобные гладкомышечным клеткам, которые экспрессируют PDGFR-бета. PDGF-B, экспрессируемый на эндотелиальных клетках, играет роль в привлечении перицитов к вновь образующимся сосудам, таким образом стимулируя ангиогенез и образование структуры сосудов. Однако взаимодействие между перицитами и эндотелием и передача сигналов PDGF-B/PDGFR-бета нарушаются во время патогенного ангиогенеза, что вносит вклад в неконтролируемое образование сосудов. В случае глазных болезней такая неовасукуляризация может приводить к болезням, связанным со зрением и слепоте.
В первом эксперименте детенышам мышей с гуманизированным PDGFR-бета подкожно (п/к) инъецировали 3 мг/кг H4H3374N, H4H3094P, контроля I (2C5) или Fc человека (hFc), чтобы увидеть влияние блокирования передачи сигнала PDGF-B/PDGFR-бета на вновь образующуюся сосудистую систему. Кратко, детенышам на 2 день после рождения (P2) с гуманизированным PDGFR-бета инъецировали подкожно 3 мг/кг hFc-контроля или PDGFR-бета-антитела. На 5 день после рождения мышей умерщвляли. Брали оба глаза и фиксировали в 4% P.F.A в течение 1 ч. Глаза промывали 3 раза в PBS и вырезали сетчатки, извлекая сосуды стекловидного тела. Сетчатки красили в течение ночи при комнатной температуре первым антителом кролика против хондроитинсульфата NG2 приготовленным в сыворотке для разбавления антител (ADS; 1% БСА в 0,05% тритон-X-100 в PBS). После инкубации все сетчатки промывали 3 раза по 15 мин в PBS и затем красили в течение ночи при 4°C меченым флуоресцеином лектином Griffonia Simplicifolia и вторым антителом козы против Ig кролика, меченым alexa 594, приготовленным в ADS. После инкубации все сетчатки снова промывали 3 раза по 15 мин в PBS. Сетчатки распластывали на предметных стеклах и покрывали покровными стеклами с использованием Fluoromount-G™ без DAPI.
Сетчатки визуализировали, используя флуоресцентный микроскоп Nikon 80i. Изображения визуализировали, используя Adobe Photoshop и Fovea. Среднюю NG2-позитивную область, нормализованную по hFc, измеряли для каждой группы обработки. И визуализацию и анализ осуществляли слепым способом. Статистический анализ осуществляли, используя однофакторный ANOVA в компьютерной программе prism. Результаты суммированы в табл. 10-11.
Таблица 10. Уменьшение NG2-позитивной области сетчатки после обработки 3 мг/кг H4H3374N,
- 24 031049 контроля I или hFc
N Нормализованная область NG2 относительно hFc
hFc Контроль I (2С5) H4H3374N
1 1.0 1.00 0.13
2 1.0 0.48 0.25
3 1.0 0.76 0.14
4 1.0 0.68 0.15
5 1.0 0.64 -
Среднее 1.0 0.71 0.17
Таблица 11. Уменьшение NG2-позитивной области сетчатки после обработки 3 мг/кг H4H3094P, контроля I или hFc
N Нормализованная область NG2 относительно hFc
hFc Контроль I (2С5) Н4Н3094Р
1 1.0 0.88 0.79
2 1.0 0.85 0.61
3 1.0 0.85 0.37
4 1.0 0.87 0.66
5 1.0 0.88 0.83
Среднее 1.0 0.86 0.65
Как показано в табл. 10-11, средняя NG2-позитивная область сетчатки уменьшалась у мышей, обработанных антителами против PDGFR-бетами, по сравнению с hFc. NG2-позитивная область значимо уменьшалась (p<0,001) в случае антител H4H3374N и H4H3094P по сравнению с hFc. Кроме того, H4H3374N вызывало наибольшее уменьшение NG2-позитивной области по сравнению с H4H3094P и контрольным антителом I.
В отдельной группе экспериментов, детенышам мышей C57BI/6 инъецировали подкожно (п/к) в P2 антитело против PDGFR-бета мыши мАт39 (имеющее вариабельные области антитела, названного APB5, смотри Uemura et al., J. Clin. Invest. 2002; 1 10(11): 1619-1628) в дозах 50 мг/кг, 25 мг/кг, 12,5 мг/кг или 6,25 мг/кг, или Fc в дозе 50 мг/кг в качестве контроля (исследование 1). Влияние на покрытие перицитами оценивали в P5, используя первое антитело кролика против протеогликана 4 хондроитинсульфата NG2. В развивающихся сосудах сетчатки все дозы мАт39 >12,5 мг/кг ингибировали покрытие перицитами кровеносных сосудов.
В другом исследовании (исследование 2), детенышам в P2 инъецировали п/к 25 мг/кг мАт39 или контроля. Сетчатки собирали в P5 и красили лектинами Griffonia simplicifolia (лектин I GS, Vector Labs). В дозе 25 мг/кг мАт39 умеренно уменьшало васкуляризированные области сетчатки и плотность сосудов по сравнению с контролями.
В отдельной группе экспериментов (исследование 3), в левые глаза детенышей инъецировали интравитреально (IVT) 5 мкг (0,5 мкл) мАт39 или контроль в P4 и собирали в P6. Одно интравитреальное введение антитела против PDGFR-бета почти полностью истощало муральные клетки и заметно влияло на дифференцировку и морфологию сосудов сетчатки, например, нерегулярные размеры кровеносных сосудов. Проводили дополнительные эксперименты, чтобы исследовать влияние нейтрализации PDGFRбета на глаза взрослых мышей. В частности, в левые глаза взрослых мышей инъецировали IVT мАт39 (5 мкг или 10 кг) или контроль (5 мкг или 10 мкг). Глаза получали спустя 48 часов и красили, используя анти-NG2 и лектин I GS. У взрослых мышей мАт39 не вызывало какой-либо явной утраты перицитов или каких-либо изменений морфологии сосудов.
Описанные исследования вместе демонстрируют, что избирательная фармакологическая нейтрализация PDGFR-бета является эффективной в стимулировании истощения перицитов и вносит вклад в изменение морфологии сосудов и роста новых развивающихся сосудов сетчатки. Напротив, такое же ингибирование не оказывало какого-либо влияния на зрелые перициты и сосуды в развитой сосудистой системе в сетчатке взрослых мышей.
Пример 10. Клиническое испытание фазы 1 комбинированного препарата, содержащего антиPDGFR-бета-антитело и антагонист VEGF, у пациентов с возрастной макулярной дегенерацией.
Описание исследования
Клиническое испытание фазы 1 проводили для того, чтобы тестировать безопасность антитела против PDGFR-бета по изобретению, доставляемого путем интравитреальной инъекции пациентам с неоваскулярной возрастной макулярной дегенерацией (ВМД) вместе с интравитреальным (IVT) афлиберцептом. Аминокислотная последовательность афлиберцепта (также известного как VEGFR1R2-FcAC1 (a)), а также последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей афлиберцепт, приведены, например, в WO2012/097019.
Основной целью данного исследования является исследование безопасности интравитреального (IVT) антитела против PDGFR-бета у пациентов с неоваскулярной ВМД. Вторичными целями являются исследование анатомического воздействия IVT-вводимого анти-PDGFR-бета на неоваскуляризацию ро- 25 031049 говицы (ХНВ) у пациентов с неоваскулярной ВМД, и определение фармакокинетики анти-PDGFR-бета и афлиберцепта у человека. Другой целью данного исследования является определение присутствия антител против антитела против PDGFR-бета и/или афлиберцепта у субъектов, которых лечили такими средствами.
Целевая популяция
Целевой популяцией в данном исследовании являются мужчины и женщины в возрасте 50 лет и старше с неоваскулярной ВМД. Приблизительно по 3-6 пациентов будет набрано в четыре плановых когорты. Всего запланировано лечение 15-24 пациентов. Шесть пациентов будет набрано в группу, получающую максимально переносимую дозу (МПД), если она будет идентифицирована, или в группу, получающую наиболее высокий уровень дозы.
Ключевые критерии включения/исключения
Ключевыми критериями включения в данном исследовании являются следующие критерии: (1) мужчины и женщины в возрасте 50 лет или старше; и (2) активная ХНВ центральной ямки сетчатки, вторичная по отношению к ВМД, включая юкстафовеальные поражения, которые влияют на центральную ямку, как показано на основании FA в исследуемом глазу.
Ключевыми критериями исключения являются следующие критерии: (1) IVT анти-VEGF-терапия в исследуемом глазу в пределах 8 недель от начала исследования (день 1); (2) любое предшествующее лечение ингибиторами PDGF или PDGFR; (3) внутриглазное давление больше или равно 25 мм Hg в исследуемом глазу; (4) доказательство инфекционного блефарита, кератита, склерита или конъюнктивита в любом глазу; (5) любое внутриглазное воспаление/инфекция в любом глазу в пределах 3 месяцев от визита для скрининга; (6) текущая неоваскуляризация радужки, кровоизлияние в стекловидное тело или тракционная отслойка сетчатки, видимая при скрининговой оценке в исследуемом глазу; (7) доказательство ХНВ по любой причине, отличной от ВМД, в любом глазу; (8) доказательство диабетической ретинопатии или диабетического макулярного отека в любом глазу; (9) невозможность сделать фотографии, FA или ОКТ для документального подтверждения ХНВ, например, вследствие непрозрачности среды, аллергии на краситель флуоресцеин или отсутствия венозного доступа; и (10) системное (в/в) введение анти-VEGF в пределах 6 недель относительно 1 дня.
Дизайн исследования
Пациенты будут подвергнуты оценке в отношении соответствия критериям исследования при визите для проведения скрининга, за 2 недели до 1 дня/на исходном уровне (визит 2). В 1 день/на исходном уровне (визит 2), пациенты будут подвергнуты оценке безопасности перед получением первой дозы исследуемого лекарственного средства.
Соответствующие установленным критериям пациенты буду зачислены в имеющуюся когорту, открытую для набора. Исходная когорта будет получать анти-PDGFR-бета/афлиберцепт (приготовленные совместно в дозе 0,2 мг: 2 мг). В 1 день и 29 день (±3 дня) пациенты будут получать инъекцию антиPDGFR-бета/афлиберцепта.
Доза анти-PDGFR-бета/афлиберцепта будет повышаться на основе данных о безопасности и переносимости, полученных для предыдущей когорты (начиная с первого пациента, первой дозы до 2 недель после второй дозы для последнего пациента в такой когорте или приблизительно до 6 недели). Также, первый пациент, набранный в каждую когорту будет наблюдаться в течение, по меньшей мере 1 недели после первой дозы до введения дозы следующим пациентам. Распространение исследования на когорту приема следующей дозы будет происходить после того, как данные будут проанализированы. Повышение дозы для пациентов внутри когорты будет запрещено.
Пациенты будут подвергаться оценке при визите для обследования в отношении безопасности для глаз и системной безопасности (включая офтальмологическое обследование, лабораторные оценки и т.д.) и в отношении эффективности (ОКТ, FA/FP, площадь ХНВ, классический размер ХНВ, общий размер поражения, объем макулярной зоны, визуализация и максимальная острота зрения с коррекцией с использованием протокола ETDRS на расстоянии 4 метров), и наблюдение за ними будет продолжаться до 24 недель.
Лечение исследуемым лекарственным средством
Пациентам будет введено четыре разных совместных препарата анти-PDGFR-бета/афлиберцепт. Совместные препараты суммарно представлена в табл. 12.
Таблица 12
Совместный препарат Анти-PDGFRбета-антитело Афлиберцепт
1 0.2 мг 2 мг
2 0.5 мг 2 мг
3 1 мг 2 мг
4 3 мг 2 мг
Каждый препарат будет состоять из 10 мМ фосфата натрия, pH 6,2, 0,03% (мас./об.) полисорбата 20, 5% (мас./об.) сахарозы и 40 мМ хлорида натрия.
Различные совместные препараты анти-PDGFR-бета/афлиберцепт будут доставлены путем IVT
- 26 031049 инъекции, и объем инъекции будет составлять 50 мкл. Как указано выше, пациенты будут получать два отдельных введения совместного препарата. Первое введение будет осуществлено в 1 день, а второе введение будет осуществлено на 29 день.
Основные и вторичные конечные результаты
Основным конечным результатом исследования является безопасность исследуемого лекарственного средства. Вторичными конечными результатами являются: (1) изменение толщины центральной области сетчатки по сравнению с исходным уровнем (измеряемое по ОКТ) на 8 неделе и 12 неделе; (2) доля пациентов с полной регрессией ретинальной жидкости (измеряемой по ОКТ) на 8 неделе и 12 неделе; (3) изменение области ХНВ по сравнению с исходным уровнем (измеряемое по ОКТ) на 8 неделе и 12 неделе; (4) изменение размера ХНВ по сравнению с исходным уровнем (измеряемое по FA) на 8 неделе и 12 неделе; (5) изменение области просачивания по сравнению с исходным уровнем (измеряемое по FA) на 8 неделе и 12 неделе; (6) изменение BCVA по сравнению с исходным уровнем; и (7) фармакокинетика и разработка антител к лекарственным средствам.
Настоящее изобретение не ограничено объемом конкретных вариантов осуществления, описанных в настоящей публикации. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к модификациям, описанным в настоящей публикации, будут очевидны для специалистов в данной области, исходя из приведенного выше описания и сопровождающих фигур. Подразумевается, что такие модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения.
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> REGENERON PHARMACEUTICALS, INC.
<120> АНТИТЕЛА ПРОТИВ PDGFR-БЕТА И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
<130> 9850A-WO
<140> TBA
<141> Filed herewith
<150> 61/750,437
<151> 2013-01-09
<150> 61/863,452
<151> 2013-08-08
<150> 61/909,421
<151> 2013-11-27
<160> 345
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 360
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 1
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggct tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcactt atatcaaatg ttggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa ctcgctgttt 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaagggggcc 300
gactactact actacggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360
<210> 2
<211> 120
- 27 031049 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 2
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Ser Asn Val Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ala Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> <211> <212> <213> 3 24 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 3
ggattcacct tcagtagcta tggc 24
<210> 4
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 4
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 5 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 5 atatcaaatg ttggaagtaa taaa <210> 6 <211> 8 <212> Белок
- 28 031049 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 6
Ile Ser Asn Val Gly Ser Asn Lys
5 <210> 7 <211> 39 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 7 gcgaaggggg ccgactacta ctactacggt atggacgtc
<210> 8
<211> 13
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 8
Ala Lys Gly Ala Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210>
<211>
<212>
<213>
339
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400> gacatcgtga atcaactgca tggtaccagc gaatccgggg atcagcagcc ccattcactt tgacccagtc agtccagcca agaaaccagg tccctgaccg tgcaggctga tcggccctgg tccagactcc gagtgtttta acagcctcct attcagtggc agatgtggca gaccaaagtg ctggctgtgt tacagctcca aagctgatca agcgggtctg gtttattact gatatcaaa ctctgggcga acaataagaa tttactggac ggacagattt gtcagcaata gagggccacc ctacttagct atccacccgg cactctcacc ttatagtact
120
180
240
300
339 <210>
<211>
<212>
<213>
113
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
Asp 1 Ile Val Met Thr 5 Gln Ser Pro Asp Ser 10 Leu Ala Val Ser Leu Gly 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
- 29 031049
Ser Asn Asn 35 Lys Asn Tyr Leu Ala Trp 40 Tyr Gln Gln Lys 45 Pro Gly Gln
Pro Pro Lys Leu Ile Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile
100 105 110
Lys
<210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
cagagtgttt tatacagctc caacaataag aactac <210>
<211>
<212>
<213>
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
Gln Ser Val Leu Tyr
Ser Ser Asn Asn Lys
Asn
Tyr <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400> tggacatcc <210>
<211>
<212>
<213>
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
Trp Thr Ser <210> 15
- 30 031049 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 15 cagcaatatt atagtactcc attcact
<210> 16
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 16
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 17 <211> 363 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 17 cagctgcagc acctgcattg cagcccccag tacaacccgt tccctgacgc agggttatgg tca tgcaggagtc tctctggtgg ggaagggact ccctcaagag tgacctctgt cttcgagccc gggcccagga ctccatcagc ggagtggatt tcgagtcacc gaccgccgca ctttgaccac ctggtgaagc agtagtagtt gggagtctct atatccgtag gacacggctg tggggccagg cttcggagac actactgggg attatagtgg acacgtccaa tgttttactg gaaccctggt cctgtccctc ctggatccgc gatcaccttc gaaccagttc tgcgagacat caccgtctcc
120
180
240
300
360
363 <210> 18 <211> 121 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 18
Gln Leu Gln Leu 1 Gln Glu 5 Ser Gly Pro Gly 10 Leu Val Lys Pro Ser 15 Glu
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ile Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Leu Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr Phe Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Thr Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Phe Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Arg Val Met Ala Ser Ser Pro Phe Asp His Trp Gly
100 105 110
- 31 031049
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 <210> 19 <211> 30 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 19 ggtggctcca tcagcagtag tagttactac <210> 20 <211> 10 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 20
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr
5 10 <210> 21 <211> 21 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 21 ctctattata gtgggatcac c 21 <210> 22 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 22
Leu Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr
5 <210> 23 <211> 39 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <223> Синтетическая <400> 23 gcgagacata gggttatggc ttcgagcccc tttgaccac <220>
- 32 031049 <210> 24 <211> 13 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 24
Ala Arg His Arg Val Met Ala Ser Ser Pro Phe Asp His
5 10 <210>
<211>
<212>
<213>
339
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400> gacatcgtga atcaactgca tggtaccagc gaatccgggg atcggcagcc ccattcactt tgacccagtc agtccagcca tgaaaccagg tccctgaccg tgcaggctga tcggccctgg tccagagtcc gagtatttta acagcctcct attcagtggc agatgtggca gaccaaagtg ctggctgtgt tacagctcca aacctgctca agcgggtctg gtttattact gatatcaaa ctctgggcga acaataagaa tttattgggc ggacagattt gtcagcaata gagggccacc ctaccttgct atctacccgg cactctcacc ttatagtact
120
180
240
300
339 <210>
<211>
<212>
<213>
113
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
Asp 1 Ile Val Met Thr 5 Gln Ser Pro Glu Ser 10 Leu Ala Val Ser Leu 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Gly Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile
100 105 110
Lys
<220>
<223> Синтетическая <210> 27 <211> 36 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 33 031049 <400> 27 cagagtattt tatacagctc caacaataag aactac 36 <210> 28 <211> 12 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 28
Gln Ser Ile Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
5 10
<210> <211> <212> <213> 29 9 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 29
tgggcatct 9
<210> 30
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 30
Trp Ala Ser
1
<210> 31 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 31 cagcaatatt atagtactcc attcact 27 <210> 32 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 32
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
5
- 34 031049 <210> 33 <211> 369 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 33 gaggtgcaac tcctgtgcag ccagggaagg gcagactccg ctgcaaatga tgtactacta gtctcctca tgttggagtc cctctggaat ggctggagtg tgaagggccg acagcctgag acagctgccc tgggggagac cacctttagt ggtctcaact gttcaccatc agccgaggac cgcttacttt ttggtacagc agttttgcca gttagtgtta tccagagaca acggccatat gactactggg cgggggggtc tgagctgggt gtgctggtat attccaagaa attattgtgc gcctgggaac ccttagactc ccgccaggct cacatactac cacactttat gaaatctagt cctggtcacc
120
180
240
300
360
369 <210> 34 <211> 123 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 34
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Val Ser Val Ser Ala Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Ser Cys Thr Thr Asn Ser Cys Pro Ala Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Leu Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 35 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 35 ggaatcacct ttagtagttt tgcc <210> 36 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
- 35 031049 <223> Синтетическая <400> 36
Gly Ile Thr Phe Ser Ser Phe Ala
1 5
<210> <211> <212> <213> 37 24 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 37
gttagtgtta gtgctggtat caca 24
<210> <211> <212> <213> 38 8 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 38
Val Ser Val Ser Ala Gly Ile Thr
1 5
<210> <211> <212> <213> 39 48 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 39
gcgaaatcta gttgtactac taacagctgc cccgcttact ttgactac 48
<210> <211> <212> <213> 40 16 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 40
Ala Lys Ser Ser Cys Thr Thr Asn Ser Cys Pro Ala Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> <211> <212> <213> 41 339 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
- 36 031049 <400> 41 gacatcgtga tgacccagtc tccagagtcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc60 atcaactgca agtccagcca gaatatttta tacaggtcca ataataagaa ctacttagct120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatggcact300 ccgtacactt ttggccaggg gaccaacctg gagatcaaa339 <210> 42 <211> 113 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 42
Asp 1 Ile Val Met Thr 5 Gln Ser Pro Glu Ser 10 Leu Ala Val Ser Leu 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Asn Ile Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Gly Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Asn Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 43 <211> 36 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 43 cagaatattt tatacaggtc caataataag aactac <210> 44 <211> 12 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 44
Gln Asn Ile Leu Tyr Arg Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
5 10 <210> 45 <211> 9 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 37 031049 <220>
<223> Синтетическая
<400> 45
tgggcatct 9
<210> 46
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 46
Trp Ala Ser
1
<210> 47
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 47
cagcaatatt atggcactcc gtacact 27
<210> 48
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 48
Gln Gln Tyr Tyr Gly Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 49 <211> 378 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 49 gaggtgcagc tcatgtgcag ccagggaagg gtggactctg ctgcaaatga ggtgggacct acggtcaccg tggtggagtc cctctggatt ggctggagtg tgaagggccg acagcctgag acggttataa tctcctca tgggggaggc cacctttagt ggtggccaac attcaccatc agccgaagac ccactactac ttggtccagc agttattgga ataaggcaag tccagagaca acggctgtgt tacggtatgg ctggggggtc tgacctgggt atggaagtga acgccaagaa attactgtgc acgtctgggg cctgagactc ccgccaggct caaatactat ctcactgttt gaggactaac ccaagggacc
120
180
240
300
360
378 <210> 50 <211> 126
- 38 031049 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 50
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Arg Gln Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Asn Gly Gly Thr Tyr Gly Tyr Asn His Tyr Tyr Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 51
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 51
ggattcacct ttagtagtta ttgg 24
<210> 52
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 52
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp
1 5
<210> 53
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 53
ataaggcaag atggaagtga caaa 24
<210> 54 <211> 8 <212> Белок
- 39 031049 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 54
Ile Arg Gln Asp Gly Ser Asp Lys
5 <210> 55 <211> 57 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 55 gcgaggacta acggtgggac ctacggttat aaccactact actacggtat ggacgtc 57 <210> 56 <211> 19 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 56
Ala Arg Thr Asn Gly Gly Thr Tyr Gly Tyr Asn His Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 57 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 57 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gttgaaacca120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctttgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct240 gaagattttg caacttatta ctgtctacaa cataatagtt acccgtggac gttcggccaa300 gggaccaagg tggaaatcaa a321 <210> 58 <211> 107 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 58
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
5 10 15
- 40 031049
Asp Arg Val Thr 20 Ile Thr Cys Arg Ala 25 Ser Gln Gly Ile Arg 30 Asn Asp
Leu Gly Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Phe Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 59
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 59
cagggcatta gaaatgat 18
<210> 60
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 60
Gln Gly Ile Arg Asn Asp
1 5
<210> <211> <212> <213> 61 9 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 61
gctgcatcc 9
<210> 62
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 62
Ala Ala Ser <210> 63
- 41 031049 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая
<400> 63
ctacaacata atagttaccc gtggacg 27
<210> 64
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 64
Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 65 <211> 369 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 65 caggtgcagg acctgcactg cagcccccag tacaacccgt tccctgaggc cgagcagctc gtctcttca tgcaggagtc tctctggtga ggaaggggct ccctcaagag tggcctctgt gccgtttttc gggcccagga ctccatcagc tgagtggatt tcgagtcacc gaccgccgca tgaggctttt ctggtgaagc agtagtagct gggagtatct atatccgtag gacacggctc gatatctggg cttcggagac actactgggg attataatgg agtcgtccaa tatattactg gccaagggac cctgtccctc ctggatccgc gatctcctcc gaaccaattc tgcgagacat aatggtcacc
120
180
240
300
360
369 <210> 66 <211> 123 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 66
Gln 1 Val Gln Val Gln 5 Glu Ser Gly Pro Gly 10 Leu Val Lys Pro Ser 15 Glu
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Asn Gly Ile Ser Ser Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Glu Ser Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Arg Leu Ala Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Arg Ala Ala Arg Arg Phe Ser Glu Ala Phe Asp Ile
100 105 110
- 42 031049
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 <210> 67 <211> 30 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 67 ggtgactcca tcagcagtag tagctactac <210> 68 <211> 10 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 68
Gly Asp Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr
5 10 <210> 69 <211> 21 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 69 atctattata atgggatctc c 21 <210> 70 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 70
Ile Tyr Tyr Asn Gly Ile Ser
5 <210> 71 <211> 45 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 71 gcgagacatc gagcagctcg ccgtttttct gaggcttttg atatc 45
- 43 031049 <210> 72 <211> 15 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 72
Ala Arg His Arg Ala Ala Arg Arg Phe Ser Glu Ala Phe Asp Ile
5 10 15 <210> 73 <211> 339 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 73 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ccggctgtgt ctctgggcga gagggccacc60 atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca gcaataagaa ctacttagct120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aggttgctca tttactgggc atctacccgg180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtggt300 ccgtacactt ttggccaggg gaccaagctg gagatcaaa339 <210> 74 <211> 113 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 74
Asp 1 Ile Val Met Thr 5 Gln Ser Pro Asp Ser 10 Pro Ala Val Ser Leu 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Ser Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Gly Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys <220>
<223> Синтетическая <210> 75 <211> 36 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 44 031049 <400> 75 cagagtgttt tatacagctc cagcaataag aactac 36 <210> 76 <211> 12 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 76
Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Ser Asn Lys Asn Tyr
5 10
<210> <211> <212> <213> 77 9 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 77
tgggcatct 9
<210> 78
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 78
Trp Ala Ser
1
<210> 79 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 79 cagcaatatt atagtggtcc gtacact 27 <210> 80 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 80
Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Pro Tyr Thr
5
- 45 031049 <210> 81 <211> 360 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 81 gaagtgcagt tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattttgcca tgcactgggt ccggcaagtt120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggc attagttgga gtagtggaac cataggctat180 gtgggctctg tgaagggccg cttcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccatgt atttctgtac aaaggataaa300 gcagctttcc atgatgcctt tgatatctgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcttca360 <210> 82 <211> 120 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 82
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Phe
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Ser Ser Gly Thr Ile Gly Tyr Val Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Lys Asp Lys Ala Ala Phe His Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 83 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 83 ggattcacct ttgatgattt tgcc <210> 84 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
- 46 031049 <223> Синтетическая <400> 84
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Phe Ala
1 5
<210> <211> <212> <213> 85 24 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 85
attagttgga gtagtggaac cata 24
<210> <211> <212> <213> 86 8 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 86
Ile Ser Trp Ser Ser Gly Thr Ile
1 5
<210> <211> <212> <213> 87 39 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 87
acaaaggata aagcagcttt ccatgatgcc tttgatatc 39
<210> <211> <212> <213> 88 13 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 88
Thr Lys Asp Lys Ala Ala Phe His Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 89 339 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
- 47 031049 <400> 89 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc60 atcaactgca agtccagcca gagtgtgtta tacaggtccg acaataagaa ctacttagct120 tggtaccagc agagaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg180 gaatccgggg tccctggccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc240 atcagcagcc tgcagggtga agatgtggca gtttattact gtcatcaata ttataatatt300 ccattcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa339 <210> 90 <211> 113 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 90
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asp Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Gly Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Ile Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile
100 105 110
Lys
<210> 91 <211> 36 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 91 cagagtgtgt tatacaggtc cgacaataag aactac <210> 92 <211> 12 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 92
Gln Ser Val Leu Tyr Arg Ser Asp Asn Lys Asn Tyr
5 10 <210> 93 <211> 9 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 48 031049 <220>
<223> Синтетическая <400> 93 tgggcatct <210> 94 <211> 3 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 94
Trp Ala Ser <210> 95 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 95 catcaatatt ataatattcc attcact
<210> 96
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 96
His Gln Tyr Tyr Asn Ile Pro Phe Thr
1 5
<210> 97 <211> 369 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 97 caggtgcagc acctgcgctg ccagggaagg ccgtccctca aaattgagct ttggggatgg gtctcgtca tacagcagtg tctatggtgg ggctggagtg agagtcgact ctgtgaccgc gctacgacta gggcgcagga gtccttcagt gatgggggaa caccatttct cgcggacacg cttcggtttg ctgttgaagc ggttactact atcagtcatc cttgacacgt gctgtttatt gacgtctggg cttcggagac ggacctggat gtggaaccac ccaataacca attgcgcgag gccaagggac cctgtccctc ccgccagtcc caactacaac cttctccctg agaggaaagg cacggtcacc
120
180
240
300
360
369 <210> 98 <211> 123
- 49 031049 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 98
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Ser His Arg Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Asn Asn His Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Glu Arg Leu Gly Met Gly Tyr Asp Tyr Phe Gly Leu Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 99
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 99
ggtgggtcct tcagtggtta ctac 24
<210> 100
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 100
Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr
1 5
<210> 101 <211> 21 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 101 atcagtcatc gtggaaccac c <210> 102 <211> 7 <212> Белок
- 50 031049 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая
102 <400>
Ile Ser His Arg Gly
Thr Thr <210> 103 <211> 51 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 103 gcgagagagg aaaggttggg gatgggctac gactacttcg gtttggacgt c <210> 104 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 104
Ala Arg Glu Glu Arg Leu Gly Met Gly Tyr Asp Tyr Phe Gly Leu Asp
1 5 10 15
Val
<210> 105 <211> 318 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 105 gaaattgtgt ctctcctgca ggccaggctc aggttcagtg gaagattgtg acacgactgg tgacacagtc gggccagtca ccaggctcct gcagtggatc cagtttatta agattaaa tccagccacc gagtgtcagc catctatgat tgggacagac ctgtcagcag ctgtctttgt acttacttaa gcatccaaca ttcactctca cgtagcatct ctccagggga cctggtacca gggccactgg ccatcagtag ggatcacctt aagagccacc acagaaacct catcccagcc cctagagcct cggccagggg
120
180
240
300
318 <210> 106 <211> 106 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 106
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
5 10 15
- 51 031049
Glu Arg Ala Thr Leu 20 Ser Cys Arg Ala 25 Ser Gln Ser Val Ser 30 Thr Tyr
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Cys Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ile Trp Ile Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 107
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 107
cagagtgtca gcacttac 18
<210> 108
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 108
Gln Ser Val Ser Thr Tyr
1 5
<210> <211> <212> <213> 109 9 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 109
gatgcatcc 9
<210> 110
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 110
Asp Ala Ser <210> 111
- 52 031049 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 111 cagcagcgta gcatctggat cacc
<210> 112
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 112
Gln Gln Arg Ser Ile Trp Ile Thr
1 5
<210> 113 <211> 360 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 113 gaggtacaac tgagagactc tgggggaggc ttggtccagc cgggggggtc cctgagactc60 tcctgtgtag cctctggatt cacctttagt tcctattgga tgagttgggt ccgccaggct120 ccagggaagg ggctggagtg ggtggtcaat ataaaccgag atggaagtga gaaatactat180 gtggattctg tgaagggccg attcatcatc tccagagaca acaccaagaa ctcactatat240 ttacaaatgg agagcctgag agccgaagac acggctgtat attactgtgc gagagatccc300 ccctaccact tatacggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca360 <210> 114 <211> 120 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 114
Glu Val Gln Leu Arg Asp Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Val Asn Ile Asn Arg Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Glu Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Pro Tyr His Leu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
- 53 031049
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 <210> 115 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 115 ggattcacct ttagttccta ttgg 24 <210> 116 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 116
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp
5 <210> 117 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 117 ataaaccgag atggaagtga gaaa 24 <210> 118 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 118
Ile Asn Arg Asp Gly Ser Glu Lys
5 <223> Синтетическая gcgagagatc ccccctacca cttatacggt atggacgtc <210> 119 <211> 39 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<400> 119
- 54 031049 <210> 120 <211> 13 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 120
Ala Arg Asp Pro Pro Tyr His Leu Tyr Gly Met Asp Val
5 10 <210>
<211>
<212>
<213>
121
321
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая
121 <400> gacatccaga atcacttgcc gggaaagccc aggttcagcg gaagattttg gggaccaagc tgacccagtc ggacaagtca ctgagcgcct gcggtggatc caacttatta tggagatcaa tccatcctcc gggcattaga gatctatgct tgggacagag ttgtctacag a ctgtctgcat gttgatttag gcatccagtt ttcactctca catcataatt ctgtaggaga cctggtatca tgcaaagtgg cagtcagcag tcccgtacac cagagtcacc gcagaaacca ggtcccatca cctgcagcct ttttggccag
120
180
240
300
321 <210>
<211>
<212>
<213>
122
107
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
122
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Ser Ser 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Gly Ile Arg Val Asp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Glu Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Val Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His His Asn Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 123 <211> 18 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 123
- 55 031049 cagggcatta gagttgat
<210> 124
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 124
Gln Gly Ile Arg Val Asp
1 5
<210> 125 <211> 9 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 125 gctgcatcc <210> 126 <211> 3 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 126
Ala Ala Ser <210> 127 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 127 ctacagcatc ataatttccc gtacact <210> 128 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 128
Leu Gln His His Asn Phe Pro Tyr Thr
5
- 56 031049
<210> <211> <212> <213> 129 366 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая <400> 129 cagctgcagc acctgcactg cagcccccag tacaatccgt tacctgaagg aatggagcag tcctca tgcaggagtc tctctggtgg ggaaggggct ccctcaagag tgtcctctgt ctcgtccgag gggcccagga ttccatcacc ggagtggatt tcgagtcacc gaccgccgta ctggttcgac ctggtgaagc agtagcagtt gggagtatct atatccgtag gacacggctg ccctggggcc cttcggagac actactgggg attatagagg actcgtccaa tgtattactg agggaaccct cctgtccctc ctggatccgc gagcaccaac gaaccagttc tgcgagacag ggtcaccgtc
120
180
240
300
360
366 <210> 130 <211> 122 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 130
Gln 1 Leu Gln Leu Gln 5 Glu Ser Gly Pro Gly 10 Leu Val Lys Pro Ser 15 Glu
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Arg Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Ser Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Tyr Leu Lys Val Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gln Asn Gly Ala Ala Arg Pro Ser Trp Phe Asp Pro Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 131 <211> 30 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 131 ggtggttcca tcaccagtag cagttactac <210> 132 <211> 10 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая
- 57 031049
<400> 132
Gly Gly Ser Ile Thr Ser Ser Ser Tyr Tyr
1 5 10
<210> 133
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 133
atctattata gagggagcac c 21
<210> 134
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 134
Ile Tyr Tyr Arg Gly Ser Thr
1 5
<210> 135 <211> 42 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 135 gcgagacaga atggagcagc tcgtccgagc tggttcgacc cc
<210> 136
<211> 14
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 136
Ala Arg Gln Asn Gly Ala Ala Arg Pro Ser Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 137 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 137 gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacacc atatctttgt ctccagggga aagagccacc 60
- 58 031049 ctctcctgca gggccagtca gagtattagc agcatctact tagcctggta ccagcagaaa120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggtcac tggcatccca180 gacaggttca gtgtcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cattatggta tttcaccatt cactttcggc300 cctgggacca aagtggatat caga324 <210> 138 <211> 108 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 138
Glu 1 Ile Val Leu Thr 5 Gln Ser Pro Asp Thr 10 Ile Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Val Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Val Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ile Ser Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Arg
100 105
<210> 139 <211> 21 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая
<400> 139
cagagtatta gcagcatcta c 21
<210> 140
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 140
Gln Ser Ile Ser Ser Ile Tyr
1 5
<220>
<223> Синтетическая <210> 141 <211> 9 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 59 031049 <400> 141 ggtgcatcc <210> 142 <211> 3 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 142
Gly Ala Ser
<210> 143
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 143
cagcattatg gtatttcacc attcact 27
<210> 144
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 144
Gln His Tyr Gly Ile Ser Pro Phe Thr
1 5
<210> 145 <211> 381 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 145 gaggtgcagc tcctgtgcag ccaggcaagg gtggactctg ctgcacatga gttccacctc accacggtca tggtggagtc cctctggatt ggctagaatg tgaagggccg acagcctgag gtcaggatga ccgtctcctc tgggggaggc caccttcagt ggtggccaac actctccatt agccgaggac ttactactat a ttggtccagc agttattgga atgaaccaag tccagagaca acggctgttt tatttcggca cgggggggtc tgagttgggt atggaagtga atgccaagaa atttctgtgc tggacgtctg cctgagactc ccgccaggct gacacactat atcactgttt gagagatctt gggccatggg
120
180
240
300
360
381 <210> 146 <211> 127 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
- 60 031049 <223> Синтетическая <400> 146
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Met Asn Gln Asp Gly Ser Glu Thr His Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu His Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Val Pro Pro Arg Gln Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Phe
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly His Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 147
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 147
ggattcacct tcagtagtta ttgg 24
<210> 148
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 148
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp
1 5
<210> 149
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 149
atgaaccaag atggaagtga gaca 24
<210> 150
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
- 61 031049 <400> 150
Met Asn Gln Asp Gly Ser Glu Thr
5 <210> 151 <211> 60 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 151 gcgagagatc ttgttccacc tcgtcaggat gattactact attatttcgg catggacgtc 60 <210> 152 <211> 20 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 152
Ala Arg Asp Leu Val Pro Pro Arg Gln Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Phe 1 5 10 15
Gly Met Asp Val <210>
<211>
<212>
<213>
153
321
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая
153 <400> gacatccaga atcacttgcc gggaaagccc aggttcagcg gatgattttg gggaccaagg tgacccagtc gggccagtca ctaaactcct gcagtggatc caacttatta tggaaatcaa tccctccacc gagtattagt gatctttaag tgggacagag ctgccaacag a ctgtctgcat gactggttgg gcgtctactt ttcactctca tataatagtt ctgtaggaga cctggtatca tagaaagtgg ccatcagcag attctcggac cagagtcacc gcagaaacca ggtcccatca cctacagcct gttcggccaa
120
180
240
300
321 <210>
<211>
<212>
<213>
154
107
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
154
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
- 62 031049
35 40 45
Phe Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 155
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 155
cagagtatta gtgactgg 18
<210> 156
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 156
Gln Ser Ile Ser Asp Trp
1 5
<210> <211> <212> <213> 157 9 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 157
aaggcgtct 9
<210> 158
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 158
Lys Ala Ser <210> 159 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 63 031049 <220>
<223> Синтетическая <400> 159 caacagtata atagttattc tcggacg <210> 160 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 160
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg Thr
5 <210> 161 <211> 383 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 161 gaggtgcagc tcctgtggag ccagggaagg gtggactctg ctgcaaatga gttccacctc accacggtca tggtggagtc cctctggatt ggctggagtg tgaagggccg acagggtgag gtcaggggga ccgtctcctc tgggggaggc cacctttagt ggtgggcaac attcaccatc agccgaggac taactactac agc ttggtccagc agttattgga ataaaccaag tccagagaca acggctgtat tacttcggta ctggggggtc tgacctgggt atggcagtga acgccaagaa attattgttc tggacgtctg cctgagactc ccgccaggct gaaatactct ctcactgtat gagagatctt gggcctaggg
120
180
240
300
360
383 <210> 162 <211> 127 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 162
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Gly Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Ser Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Val Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Asp Leu Val Pro Pro Arg Gln Gly Asp Asn Tyr Tyr Tyr Phe
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Leu Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
- 64 031049
<210> <211> <212> <213> 163 24 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 163
ggattcacct ttagtagtta ttgg 24
<210> <211> <212> <213> 164 8 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 164
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp
1 5
<210> <211> <212> <213> 165 24 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 165
ataaaccaag atggcagtga gaaa 24
<210> <211> <212> <213> 166 8 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 166
Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys
1 5
<210> <211> <212> <213> 167 60 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 167
tcgagagatc ttgttccacc tcgtcagggg gataactact actacttcgg tatggacgtc 60 <210> 168 <211> 20
- 65 031049 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 168
Ser Arg Asp Leu Val Pro Pro Arg Gln Gly Asp Asn Tyr Tyr Tyr Phe 1 5 10 15
Gly Met Asp Val <210>
<211>
<212>
<213>
169
321
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая
169 <400> gacatccaga atcacttgcc gggaaagccc aggttcagcg gatgattttg gggaccaaag tgacccagtc gggccagtca ctaagctcct gcagtggatc caacttatta tggatatcaa tccttccacc gaatattaat gatctatgag tgggacagaa ctgccaacac a ctgtctgcat aattggttgg gcgtcttctt ttcactctca tataattctt ctgtaggaga cctggtatca tagaaagtgg ccatcggcag attctcggac cagagtcatt gcagcaacca ggtcccatca cctgcagcct gttcggccaa
120
180
240
300
321 <210>
<211>
<212>
<213>
170
107
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
170
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Ser Thr 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly
Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<400> 171 <210> 171 <211> 18 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая
- 66 031049 cagaatatta ataattgg
<210> 172
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 172
Gln Asn Ile Asn Asn Trp
1 5
<210> <211> <212> <213> 173 9 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 173
gaggcgtct 9
<210> 174
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 174
Glu Ala Ser
1
<210> 175 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 175 caacactata attcttattc tcggacg <210> 176 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 176
Gln His Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg Thr
5
- 67 031049
<210> <211> <212> <213> 177 383 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая <400> 177 gaggtgcagc tcctgtacag ccagggaagg gtggactctg ctgcaaatga gtaccacctc accctggtca tggtgcagtc cctctggatt ggctggagtg tgaagggccg acagcctgag gtcaggggga ccgtctcctc tgggggaagt cacctttagt ggtggccaac attctccatc agccgaagac ttactaccac agc ttggtccagc agctattgga atacaacaag tccagagaca acggctgttt tatttcggta cgggggggtc tgagctgggt atgaaagtga acgccaagaa atttctgtgc tggacgtctg cctgagactc ccgccaggct gaaatactat gtcactgtat gagagatctt gggccaaggg
120
180
240
300
360
383 <210> 178 <211> 127 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 178
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Ser Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Gln Gln Asp Glu Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Val Pro Pro Arg Gln Gly Asp Tyr Tyr His Tyr Phe
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 179 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 179 ggattcacct ttagtagcta ttgg <210> 180 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая
- 68 031049 <400> 180
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp
5 <210> 181 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 181 atacaacaag atgaaagtga gaaa 24 <210> 182 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 182
Ile Gln Gln Asp Glu Ser Glu Lys
5 <210> 183 <211> 60 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 183 gcgagagatc ttgtaccacc tcgtcagggg gattactacc actatttcgg tatggacgtc 60 <210> 184 <211> 20 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 184
Ala Arg Asp Leu Val Pro Pro Arg Gln Gly Asp Tyr Tyr His Tyr Phe 1 5 10 15
Gly Met Asp Val <220>
<223> Синтетическая <210> 185 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 69 031049 <400> 185 gccatccgga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60 atcacttgcc gggccagtca gagtattagt gactggttgg cctggtatca gcagaaacca120 gggaaagccc ctaatctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcgg cctgcagcct240 gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attctcggac gttcggccaa300 gggaccaagc tggagatcaa acga324 <210> 186 <211> 108 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 186
Ala 1 Ile Arg Met Thr 5 Gln Ser Pro Ser Thr 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 187
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 187
cagagtatta gtgactgg 18
<210> 188
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 188
Gln Ser Ile Ser Asp Trp
1 5
<210> 189 <211> 9 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 70 031049 <220>
<223> Синтетическая
<400> 189
aaggcgtct 9
<210> 190
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 190
Lys Ala Ser
1
<210> 191
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 191
caacagtata atagttattc tcggacg 27
<210> 192
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 192
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg Thr
1 5
<210> 193 <211> 371 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 193 caggtgcagt tggtggagtc tggagctgaa atgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc60 tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc gactatggta tcaactgggt gcgacaggcc120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg gtcagcggtt acaatggtaa cacagtcttt180 gcacagaaga tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacggcctac240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt atttctgtgc ccgtatctca300 gttcggggac actcctacta ccacggtatg ggcgtctggg gccaagggac cacggtcacc360 gtctcctcag c371 <210> 194 <211> 123 <212> Белок
- 71 031049 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 194
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Val Ser Gly Tyr Asn Gly Asn Thr Val Phe Ala Gln Lys Ile
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Ser Val Arg Gly His Ser Tyr Tyr His Gly Met Gly Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 195
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 195
ggttacacct ttaccgacta tggt 24
<210> 196
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 196
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Gly
1 5
<210> 197
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 197
gtcagcggtt acaatggtaa caca 24
<210> 198
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
- 72 031049 <220>
<223> Синтетическая <400> 198
Val Ser Gly Tyr Asn Gly Asn Thr
5 <210> 199 <211> 48 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 199 gcccgtatct cagttcgggg acactcctac taccacggta tgggcgtc
<210> 200
<211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 200
Ala Arg Ile Ser Val Arg Gly His Ser Tyr Tyr His Gly Met Gly Val
1 5 10 15
<210>
<211>
<212>
<213>
201
321
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая
201 <400> gccatccgga atcacttgtc gggaaagccc aagttcagcg gaagattttg gggaccaagg tgacccagtc gggcgagtca ctaagtccct gcagtggatc caacttatta tggagagcaa tccatcctca ggacattaac gatctatact tgggacagat ctgccaacag a ctgtctgcat agttatttag gcatccagtt ttcactctca tataatactt ctgtaggaga cctggtttca tgcaaagtgg ccatcagcag acccgtacac cagagtcacc gcagaaacca ggtcccatca cctgcagcct ttttggccag
120
180
240
300
321 <210>
<211>
<212>
<213>
202
107
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
202
Ala 1 Ile Arg Met Thr Gln 5 Ser Pro Ser Ser 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
- 73 031049
35 40 45
Tyr Thr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ser Lys
100 105
<210> 203
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 203
caggacatta acagttat 18
<210> 204
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 204
Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
1 5
<210> <211> <212> <213> 205 9 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 205
actgcatcc 9
<210> 206
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 206
Thr Ala Ser
1
<210> 207 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 74 031049 <220>
<223> Синтетическая <400> 207 caacagtata atacttaccc gtacact <210> 208 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 208
Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Tyr Thr
5 <210>
<211>
<212>
<213>
209
354
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая
209 <400>
gaagtgcagc tcctgtgcag ccaggcaagg gcagactccg ctgcaaatga ctcggggatg tggtggagtc cgtctggatt ggctggagtg tgaagggccg atagcctgag cttttgatat tgggggaggc caccttcagt ggtgacagtt attcaccatc agccgaggac ctggggccaa gtggtccagc aattatggca atatggtatg tccagagaca acggctgtgt gggacaatgg ctgggaggtc tgcactgggt atggaagtta attccaagaa attactgtgc tcaccgtctc cctgagactc ccgccaggct taaatattat tagattgtat gagaggagag ttca
120
180
240
300
354 <210>
<211>
<212>
<213>
210
118
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
210
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Leu Gly Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
- 75 031049 <210> 211 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 211 ggattcacct tcagtaatta tggc 24 <210> 212 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 212
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly
5 <210> 213 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 213 atatggtatg atggaagtta taaa 24 <210> 214 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 214
Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys
5 <210> 215 <211> 33 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 215 gcgagaggag agctcgggga tgcttttgat atc 33 <210> 216 <211> 11 <212> Белок <213> Искусственная последовательность
- 76 031049 <220>
<223> Синтетическая <400> 216
Ala Arg Gly Glu Leu Gly Asp Ala Phe Asp Ile
5 10 <210>
<211>
<212>
<213>
217
321
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая
217 <400> gacatccaga atcacttgcc gggaaagccc aggttcagcg gatgattttg accaagctgg tgacccagtc gggccagtca ctaccctcct gcagtggatc caacttatta agatcaaacg tccttccacc gagtattagt gatctataag tgggacagat ctgccaacag a ctgtctgcat acctggttgg gcgtctagtt ttcactctca tataagactt ctgtaggaga cctggtatca tagagagtgg ccatcagcag cttggacatt cagacttacc gcagaaacca ggtcccatca cctgcagcct cggccaaggg
120
180
240
300
321 <210>
<211>
<212>
<213>
218
107
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
218
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Ser Thr 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly
Asp Arg Leu Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Thr Ser Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 219
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 219
cagagtatta gtacctgg 18
<210> 220 <211> 6
- 77 031049 <212> Белок <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 220
Gln Ser Ile Ser Thr Trp
5 <210> 221 <211> 9 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 221 aaggcgtct <210> 222 <211> 3 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 222
Lys Ala Ser <210> 223 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 223 caacagtata agacttcttg gaca <210> 224 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 224
Gln Gln Tyr Lys Thr
5
Ser Trp Thr <210> 225 <211> 372 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 78 031049 <220>
<223> Синтетическая <400> 225 cagatcacct tgaaggagtc tggtcctacg ctggtgaaac ccacacagac cctcacgctg60 acctgcacct tctctggatt ctcactcact actactgggg tgggtgtggg ctggatccgt120 cagcccccag gaaaggccct ggaatggctt gcactcattt attggaatga tcttaagcgc180 tacagcccat ctctgaagaa caggctcacc atcaccaagg acacctccag acaccaggtg240 gtccttacaa tgaccaacat ggaccctatg gacacagcca catattactg tgcacacaga300 cccctttact atggttcggg gagtggctgg ttcgacccct ggggcccggg aaccacggtc360 accgtctcct ca372 <210> 226 <211> 124 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 226
Gln 1 Ile Thr Leu Lys 5 Glu Ser Gly Pro Thr 10 Leu Val Lys Pro Thr 15 Gln
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Thr
20 25 30
Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Leu Ile Tyr Trp Asn Asp Leu Lys Arg Tyr Ser Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Arg His Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Met Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala His Arg Pro Leu Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Trp Phe Asp
100 105 110
Pro Trp Gly Pro Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 227 <211> 30 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 227 ggattctcac tcactactac tggggtgggt <210> 228 <211> 10 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 228
Gly Phe Ser Leu Thr Thr Thr Gly Val Gly
5 10
- 79 031049
<210> 229
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 229
atttattgga atgatcttaa g 21
<210> 230
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 230
Ile Tyr Trp Asn Asp Leu Lys
1 5
<210> 231 <211> 48 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 231 gcacacagac ccctttacta tggttcgggg agtggctggt tcgacccc
<210> 232
<211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 232
Ala His Arg Pro Leu Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Trp Phe Asp Pro
1 5 10 15
<210> 233 <211> 339 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 233 gccatccagt tgacccagtc tccagactcc ctggctctgt ctctgggcga gagggccacc60 atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagttcca acaataagaa ctacttagct120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aaactactca tttactgggc atcttcccgg180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc240 atcagcagcc tgcaggctga ggatgtggca gtttattact gtcagcaatt ttatggtact300
- 80 031049 ccgtacactt ttggccaggg gaccaaagtg gatatcaaa
339 <210>
<211>
<212>
<213>
234
113
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
234
Ala 1 Ile Gln Leu Thr 5 Gln Ser Pro Asp Ser 10 Leu Ala Leu Ser Leu 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Phe Tyr Gly Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile
100 105 110
Lys
<210> <211> <212> <213> 235 36 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 235
cagagtgttt tatacagttc caacaataag aactac
<210> 236
<211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 236
Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys
1 5 10
<210> 237
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 237
tgggcatct
Asn
Tyr
- 81 031049 <210> 238 <211> 3 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 238
Trp Ala Ser <210> 239 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 239 cagcaatttt atggtactcc gtacact <210> 240 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 240
Gln Gln Phe Tyr Gly Thr Pro Tyr Thr
5 <210> 241 <211> 357 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 241 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttggtacatc ctggcaggtc cctgagactc60 tcctgtgtag cctctggatt cacctttgat gattatacca tgcactgggt ccggcaagct120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcagct attagttgga atggtgataa cataaactat180 gcgggctctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat240 ctggaaatga acagtctgcg agttgaggac acggccttct attattgtgc aaaagggcgt300 ggattcagtt ttggctttaa ctacttgggc cagggaacca tggtcaccgt ctcctca357 <210> 242 <211> 119 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 242
- 82 031049
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val His Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Trp Asn Gly Asp Asn Ile Asn Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Arg Gly Phe Ser Phe Gly Phe Asn Tyr Leu Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 243
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 243
ggattcacct ttgatgatta tacc 24
<210> 244
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 244
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Thr
1 5
<210> 245 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 245 attagttgga atggtgataa cata <210> 246 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 246
Ile Ser Trp Asn Gly Asp Asn Ile
- 83 031049 <210> 247 <211> 36 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 247 gcaaaagggc gtggattcag ttttggcttt aactac
<210> 248
<211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 248
Ala Lys Gly Arg Gly Phe Ser Phe Gly Phe Asn Tyr
1 5 10
<210>
<211>
<212>
<213>
249
321
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая
249 <400> gccatccgga atcacttgtc ggaaaagccc aagttcagcg gaagattttg gggaccaagg tgacccagtc gggcgagtca ctaagtccct gcagtggatc caacttatta tggaaatcaa tccatcctca ggacattagc gatctatgct tgggacagac ctgccaacaa a ctgtctgcat aattatttag acatccagtt ttcactctca tataagtcct ctgtgggaga cctggtttca tgaacagtgg ccatcagcag accctctcac cagagttacc gcagcaacca ggtcccatca cctgcagcct tttcggcgga
120
180
240
300
321 <210>
<211>
<212>
<213>
250
107
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
250
Ala 1 Ile Arg Met Thr 5 Gln Ser Pro Ser Ser 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Gln Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asn Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Pro Leu
- 84 031049
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 251
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 251
caggacatta gcaattat 18
<210> 252
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 252
Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 253
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 253
gctacatcc 9
<210> 254
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 254
Ala Thr Ser
1
<210> 255 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая caacaatata agtcctaccc tctcact <400> 255
- 85 031049 <210> 256 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 256
Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Pro Leu Thr
5 <210> 257 <211> 372 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 257 gaggtgcagc tcctgtgcag cctgggaagg gtggactctg ttgcaaatga gtgactccga accgtctcct tgttgcagtc cctctggatt ggctggagtg tgaggggccg acagcctgcg atgtgggtta ca cgggggaggc cacctttagt ggtggccact attcaccatt aaccgaggac ttacttcgga ttggtccagc cactattgga attaagaaag tccagagaca acggctgtgt atggacgtct ctggggggtc tgagctgggt atggaagtga acgccaagaa attactgtgc ggggccaagg cctgagactc ccgccagggt gagctactat ctcactgtat gagagatata gaccacggtc
120
180
240
300
360
372 <210> 258 <211> 124 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 258
Glu Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Gly Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Lys Lys Asp Gly Ser Glu Ser Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ile Val Thr Pro Asn Val Gly Tyr Tyr Phe Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <210> 259
- 86 031049
<220> <223> Синтетическая
<400> 259
ggattcacct ttagtcacta ttgg 24
<210> <211> <212> <213> 260 8 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 260
Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr Trp
1 5
<210> <211> <212> <213> 261 24 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 261
attaagaaag atggaagtga gagc 24
<210> <211> <212> <213> 262 8 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 262
Ile Lys Lys Asp Gly Ser Glu Ser
1 5
<210> <211> <212> <213> 263 51 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 263
gcgagagata tagtgactcc gaatgtgggt tattacttcg gaatggacgt c 51
<210> <211> <212> <213> 264 17 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 264
- 87 031049
Ala Arg Asp Ile Val Thr Pro Asn Val Gly Tyr Tyr Phe Gly Met Asp 1 5 10 15
Val <210>
<211>
<212>
<213>
265
321
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая
265 <400> gacatccaga atcacttgcc gggaaagccc aggttcagcg gatgattttg gggaccaagc tgacccagtc gggccagtca ctaagctcct gcagtggatc caacttatta tggagatcaa tccttccacc gagtattagt gatctatatg tgggacagat ctgccaacag a ctgtctgcat agttggttgt gcgtctactt ttcactctca tctaatagtt ctgtaggaga cctggtatca tagaaagtgg ccatcaccag attctcggac cagagtcacc gcagaaacct ggtcccatca cctgcagcct gttcggccac
120
180
240
300
321 <210>
<211>
<212>
<213>
266
107
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
266
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Ser Thr 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Met Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Tyr Ser Arg
85 90 95
Thr Phe Gly His Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 267
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 267
cagagtatta gtagttgg 18
<211> 6 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <210> 268
- 88 031049 <220>
<223> Синтетическая <400> 268
Gln Ser Ile Ser Ser Trp
5
<210> 269
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 269
atggcgtct 9
<210> 270
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 270
Met Ala Ser
1
<210> 271 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 271 caacagtcta atagttattc tcggacg <210> 272 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 272
Gln Gln Ser Asn Ser
5
Tyr Ser Arg Thr <210> 273 <211> 372 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <223> Синтетическая <220>
- 89 031049 <400> 273 caggtgcagc tcctgtgcag cctgggaagg gtggactctg ttggaaatga gtgactccga accgtctcct tggtggagtc ccgctggatt ggctggagtg tgaagggccg atagcctgcg atacggacta ca cgggggaggc cacttttagt ggtggccacc attcaccatt aaccgaggac ctacttcggt ctggtccagc cactattgga ataaagaaag tccagagaca acggctatat atggacgtct ctggggggtc tgagctgggt atggaagtga acgccaggaa attactgtgc ggggccaagg cctgagactc ccgccaggct gagatactat ctcaatgtat gagagatata gaccacggtc
120
180
240
300
360
372 <210> 274 <211> 124 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 274
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ala Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Lys Lys Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ser Met Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ile Val Thr Pro Asn Thr Asp Tyr Tyr Phe Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 275 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 275 ggattcactt ttagtcacta ttgg <210> 276 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 276
Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr Trp
5 <210> 277 <211> 24
- 90 031049 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 277 ataaagaaag atggaagtga gaga
<210> <211> <212> <213> 278 8 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 278 Ile Lys Lys Asp Gly Ser Glu Arg
1 5
<210> 279 <211> 51 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 279 gcgagagata tagtgactcc gaatacggac tactacttcg gtatggacgt c <210> 280 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 280
Ala Arg Asp Ile Val Thr Pro Asn Thr Asp Tyr Tyr Phe Gly Met Asp
5 10 15
Val <210> 281 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 281 gacatccagt tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60 atcacttgcc gggccagtca gagttttaat aactggttgt cctggtatca gcagaaacct120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatatg gcgtctactt tagaaagtgg ggtcccatca180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaacag cctgcagcct240 gatgattttg caacttatta ctgccaacag tctaatagtt attctcggac gttcggccac300 gggaccaagg tggaaatcaa a321
- 91 031049 <210> 282 <211> 107 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 282
Asp 1 Ile Gln Leu Thr 5 Gln Ser Pro Ser Thr 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Phe Asn Asn Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Met Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Tyr Ser Arg
85 90 95
Thr Phe Gly His Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 283
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 283
cagagtttta ataactgg 18
<210> 284
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 284
Gln Ser Phe Asn Asn Trp
1 5
<210> 285 <211> 9 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 285 atggcgtct <210> 286 <211> 3
- 92 031049 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 286
Met Ala Ser <210> 287 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 287 caacagtcta atagttattc tcggacg
<210> 288
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 288
Gln Gln Ser Asn Ser Tyr Ser Arg Thr
1 5
<210> 289 <211> 381 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 289 caggtgcagc gcctgtacag ccagggaagg gtggactctg ctgcaaatga gtgccacctc accacggtca tggtggagtc cctctggatt ggctggagtg tgaagggccg acagcctgag gtcaggggga ccgtctcctc tgggggaagt cacctttagt ggtggccaac attctccatc agtcgaagat ttattaccac a ttggtccagc agctattgga atacaacaag tccagagaca acggctgtgt tatttcggta cgggggggtc tgagctgggt atgaaaatga acgccaagaa atttctgtgc tggacgtctg cctgagactc ccgccaggct gaaatactat gtcactgtat gagagatctt gggccaaggg
120
180
240
300
360
381 <210> 290 <211> 127 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 290
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ser Leu Val Gln Pro Gly Gly
5 10 15
- 93 031049
Ser Leu Arg Leu Ala 20 Cys Thr Ala Ser 25 Gly Phe Thr Phe Ser 30 Ser Tyr
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Gln Gln Asp Glu Asn Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Val Pro Pro Arg Gln Gly Asp Tyr Tyr His Tyr Phe
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 291
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 291
ggattcacct ttagtagcta ttgg 24
<210> 292
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 292
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp
1 5
<210> 293
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 293
atacaacaag atgaaaatga gaaa 24
<210> 294
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 294
Ile Gln Gln Asp Glu Asn Glu Lys
1 5
- 94 031049 <210> 295 <211> 60 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 295 gcgagagatc ttgtgccacc tcgtcagggg gattattacc actatttcgg tatggacgtc 60 <210> 296 <211> 20 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 296
Ala Arg Asp Leu Val Pro Pro Arg Gln Gly Asp Tyr Tyr His Tyr Phe 1 5 10 15
Gly Met Asp Val <210> 297 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетическая последовательность <400> 297 gacatccagt tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60 atcacttgcc gggccagtca gagtattagt gactggttgg cctggtatca gcagaaacca120 gggaaagccc ctaatctcct gatctataag gcgtctactt tagaaagtgg ggtcccatca180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct240 gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attctcggac gttcggccaa300 gggaccaagg tggaaatcaa a321 <210> 298 <211> 107 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 298
Asp 1 Ile Gln Leu Thr 5 Gln Ser Pro Ser Thr 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
- 95 031049
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 299
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 299
cagagtatta gtgactgg 18
<210> 300
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 300
Gln Ser Ile Ser Asp Trp
1 5
<210> 301
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 301
aaggcgtct 9
<210> 302 <211> 3 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 302
Lys Ala Ser <210> 303 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <223> Синтетическая <400> 303 <220>
- 96 031049 caacagtata atagttattc tcggacg <210> 304 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 304
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg Thr
5 <210> 305 <211> 381 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 305 caggtgcagc tcctgtgcag ccagggaagg gtggactctg ctgcaaatga gttccacctc acaatggtca tggtggagtc cctctggatt ggctggagtg tgaagggccg acggcctgag gtcaggggga ccgtctcttc tgggggaggc caccttcagt ggtggccaac actcaccata agccgaagac ttactactac a ttggtccagc agttattgga atgaaccaag tccagagaaa acggctgtgt tacttcggta ctggggggtc tgagttgggt atggaactga atgtcaagaa attactgtgc tggacgtctg cctgagactc ccgccaggtt gaaatactat ttcattgtat gagagatctt gggccatggg
120
180
240
300
360
381 <210> 306 <211> 127 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 306
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Met Asn Gln Asp Gly Thr Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Glu Asn Val Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Val Pro Pro Arg Gln Gly Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Phe
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly His Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 307 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 97 031049
<220> <223> Синтетическая
<400> 307
ggattcacct tcagtagtta ttgg 24
<210> <211> <212> <213> 308 8 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 308
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp
1 5
<210> <211> <212> <213> 309 24 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 309
atgaaccaag atggaactga gaaa 24
<210> <211> <212> <213> 310 8 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 310
Met Asn Gln Asp Gly Thr Glu Lys
1 5
<210> <211> <212> <213> 311 60 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
<400> 311
gcgagagatc ttgttccacc tcgtcagggg gattactact actacttcgg tatggacgtc 60
<210> <211> <212> <213> 312 20 Белок Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетическая
- 98 031049 <400> 312
Ala Arg Asp Leu Val Pro Pro Arg Gln Gly Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Phe 1 5 10 15
Gly Met Asp Val <210>
<211>
<212>
<213>
313
321
ДНК
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая
313 <400> gccatccaga atcacttgcc gggaaagccc aggttcagcg gatgattttg gggaccaaag tgacccagtc gggccagtca ctaaactcct gcagtggatc caacttacta tggatatcaa tccttccacc gagtattagt gatttttaag tgggacagat ctgccaacag a ctgtctgcat gactggttgg gcgtctagtt ttcactctca tataatagct ctgtaggaga cctggtatca tagaaagtgg ccatcagcag attctcggac catcgtcacc gcagaaacca ggtcccatca cctgcagcct gttcggccaa
120
180
240
300
321 <210>
<211>
<212>
<213>
314
107
Белок
Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетическая <400>
314
Ala 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Ser Thr 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly
Asp Ile Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 315
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 315
cagagtatta gtgactgg 18
<210> 316 <211> 6 <212> Белок
- 99 031049 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 316
Gln Ser Ile Ser Asp Trp
5
<210> <211> <212> <213> 317 9 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 317
aaggcgtct 9
<210> 318
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 318
Lys Ala Ser
1
<210> 319 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 319 caacagtata atagctattc tcggacg <210> 320 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 320
Gln Gln Tyr Asn Ser
5
Tyr Ser Arg Thr <210>
<211>
<212>
<213>
321
354
ДНК
Искусственная последовательность
- 100 031049 <220>
<223> Синтетическая <400> 321 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttcgtccagc ctggggggtc cctgagactc60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttacc aactatgcca tgagctgggt ccgccaggct120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtg ttggtggtag cacatactac180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca cttccaagaa tatgctgtat240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagccccg300 cactggggcc cctttggctc ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca354 <210> 322 <211> 118 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 322
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Phe Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Val Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Met Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ala Pro His Trp Gly Pro Phe Gly Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 323
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 323
ggattcacct ttaccaacta tgcc 24
<210> 324 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 324
Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr Ala
5 <210> 325
- 101 031049 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 325 attagtggtg ttggtggtag caca <210> 326 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 326
Ile Ser Gly Val Gly Gly Ser Thr
5 <210> 327 <211> 33 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 327 gcgaaagccc cgcactgggg cccctttggc tcc <210> 328 <211> 11 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 328
Ala Lys Ala Pro His Trp Gly Pro Phe Gly Ser
5 10 <210> 329 <211> 339 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 329 gacatccagt atcaactgca tggtaccagc gaatccgggg atcaacagcc ccgtacactt tgacccagtc agtccagcca agaaaccagg tccctgaccg tgcaggctga ttggccaggg tccagactcc gagtgtttta acagcctcct attcagtggc agatgtggca gaccaaggtg ctggctgtgt tacaggtcca aagccgctca agcgggtctg gtttattact gagatcaaa ctctgggcga acaataagaa tttactgggc ggacagattt gtcaacaata gagggccacc gttcttagtt atctacccgg cactctcacc ttatagtact
120
180
240
300
339
- 102 031049 <210> 330 <211> 113 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 330
Asp 1 Ile Gln Leu Thr 5 Gln Ser Pro Asp Ser 10 Leu Ala Val Ser Leu 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Lys Phe Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asn Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 331
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 331
cagagtgttt tatacaggtc caacaataag aagttc
<210> 332
<211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 332
Gln Ser Val Leu Tyr Arg Ser Asn Asn Lys
1 5 10
<210> 333
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая
<400> 333
tgggcatct
<210> 334
Lys
Phe
- 103 031049 <211> 3 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 334
Trp Ala Ser <210> 335 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 335 caacaatatt atagtactcc gtacact <210> 336 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 336
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr
5 <210> 337 <211> 527 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 337
Leu 1 Val Val Thr Pro 5 Pro Gly Pro Glu Leu 10 Val Leu Asn Val Ser 15 Ser
Thr Phe Val Leu Thr Cys Ser Gly Ser Ala Pro Val Val Trp Glu Arg
20 25 30
Met Ser Gln Glu Pro Pro Gln Glu Met Ala Lys Ala Gln Asp Gly Thr
35 40 45
Phe Ser Ser Val Leu Thr Leu Thr Asn Leu Thr Gly Leu Asp Thr Gly
50 55 60
Glu Tyr Phe Cys Thr His Asn Asp Ser Arg Gly Leu Glu Thr Asp Glu
65 70 75 80
Arg Lys Arg Leu Tyr Ile Phe Val Pro Asp Pro Thr Val Gly Phe Leu
85 90 95
Pro Asn Asp Ala Glu Glu Leu Phe Ile Phe Leu Thr Glu Ile Thr Glu
100 105 110
Ile Thr Ile Pro Cys Arg Val Thr Asp Pro Gln Leu Val Val Thr Leu
115 120 125
His Glu Lys Lys Gly Asp Val Ala Leu Pro Val Pro Tyr Asp His Gln
130 135 140
- 104 031049
Arg Gly Phe Phe Gly Ile Phe Glu Asp Arg Ser Tyr Ile Cys Lys Thr
145 150 155 160
Thr Ile Gly Asp Arg Glu Val Asp Ser Asp Ala Tyr Tyr Val Tyr Arg
165 170 175
Leu Gln Val Ser Ser Ile Asn Val Ser Val Asn Ala Val Gln Thr Val
180 185 190
Val Arg Gln Gly Glu Asn Ile Thr Leu Met Cys Ile Val Ile Gly Asn
195 200 205
Glu Val Val Asn Phe Glu Trp Thr Tyr Pro Arg Lys Glu Ser Gly Arg
210 215 220
Leu Val Glu Pro Val Thr Asp Phe Leu Leu Asp Met Pro Tyr His Ile
225 230 235 240
Arg Ser Ile Leu His Ile Pro Ser Ala Glu Leu Glu Asp Ser Gly Thr
245 250 255
Tyr Thr Cys Asn Val Thr Glu Ser Val Asn Asp His Gln Asp Glu Lys
260 265 270
Ala Ile Asn Ile Thr Val Val Glu Ser Gly Tyr Val Arg Leu Leu Gly
275 280 285
Glu Val Gly Thr Leu Gln Phe Ala Glu Leu His Arg Ser Arg Thr Leu
290 295 300
Gln Val Val Phe Glu Ala Tyr Pro Pro Pro Thr Val Leu Trp Phe Lys
305 310 315 320
Asp Asn Arg Thr Leu Gly Asp Ser Ser Ala Gly Glu Ile Ala Leu Ser
325 330 335
Thr Arg Asn Val Ser Glu Thr Arg Tyr Val Ser Glu Leu Thr Leu Val
340 345 350
Arg Val Lys Val Ala Glu Ala Gly His Tyr Thr Met Arg Ala Phe His
355 360 365
Glu Asp Ala Glu Val Gln Leu Ser Phe Gln Leu Gln Ile Asn Val Pro
370 375 380
Val Arg Val Leu Glu Leu Ser Glu Ser His Pro Asp Ser Gly Glu Gln
385 390 395 400
Thr Val Arg Cys Arg Gly Arg Gly Met Pro Gln Pro Asn Ile Ile Trp
405 410 415
Ser Ala Cys Arg Asp Leu Lys Arg Cys Pro Arg Glu Leu Pro Pro Thr
420 425 430
Leu Leu Gly Asn Ser Ser Glu Glu Glu Ser Gln Leu Glu Thr Asn Val
435 440 445
Thr Tyr Trp Glu Glu Glu Gln Glu Phe Glu Val Val Ser Thr Leu Arg
450 455 460
Leu Gln His Val Asp Arg Pro Leu Ser Val Arg Cys Thr Leu Arg Asn
465 470 475 480
Ala Val Gly Gln Asp Thr Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu
485 490 495
Pro Phe Lys Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Gly Gly Glu
500 505 510
Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu His His His His His His
515 520 525
<210> 338 <211> 732 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 338
Leu Val Val Thr Pro Pro Gly Pro Glu Leu Val Leu Asn Val Ser Ser
1 5 10 15
Thr Phe Val Leu Thr Cys Ser Gly Ser Ala Pro Val Val Trp Glu Arg
20 25 30
- 105 031049
Met Ser Gln Glu 35 Pro Pro Gln Glu 40 Met Ala Lys Ala Gln 45 Asp Gly Thr
Phe Ser Ser Val Leu Thr Leu Thr Asn Leu Thr Gly Leu Asp Thr Gly
50 55 60
Glu Tyr Phe Cys Thr His Asn Asp Ser Arg Gly Leu Glu Thr Asp Glu
65 70 75 80
Arg Lys Arg Leu Tyr Ile Phe Val Pro Asp Pro Thr Val Gly Phe Leu
85 90 95
Pro Asn Asp Ala Glu Glu Leu Phe Ile Phe Leu Thr Glu Ile Thr Glu
100 105 110
Ile Thr Ile Pro Cys Arg Val Thr Asp Pro Gln Leu Val Val Thr Leu
115 120 125
His Glu Lys Lys Gly Asp Val Ala Leu Pro Val Pro Tyr Asp His Gln
130 135 140
Arg Gly Phe Phe Gly Ile Phe Glu Asp Arg Ser Tyr Ile Cys Lys Thr
145 150 155 160
Thr Ile Gly Asp Arg Glu Val Asp Ser Asp Ala Tyr Tyr Val Tyr Arg
165 170 175
Leu Gln Val Ser Ser Ile Asn Val Ser Val Asn Ala Val Gln Thr Val
180 185 190
Val Arg Gln Gly Glu Asn Ile Thr Leu Met Cys Ile Val Ile Gly Asn
195 200 205
Glu Val Val Asn Phe Glu Trp Thr Tyr Pro Arg Lys Glu Ser Gly Arg
210 215 220
Leu Val Glu Pro Val Thr Asp Phe Leu Leu Asp Met Pro Tyr His Ile
225 230 235 240
Arg Ser Ile Leu His Ile Pro Ser Ala Glu Leu Glu Asp Ser Gly Thr
245 250 255
Tyr Thr Cys Asn Val Thr Glu Ser Val Asn Asp His Gln Asp Glu Lys
260 265 270
Ala Ile Asn Ile Thr Val Val Glu Ser Gly Tyr Val Arg Leu Leu Gly
275 280 285
Glu Val Gly Thr Leu Gln Phe Ala Glu Leu His Arg Ser Arg Thr Leu
290 295 300
Gln Val Val Phe Glu Ala Tyr Pro Pro Pro Thr Val Leu Trp Phe Lys
305 310 315 320
Asp Asn Arg Thr Leu Gly Asp Ser Ser Ala Gly Glu Ile Ala Leu Ser
325 330 335
Thr Arg Asn Val Ser Glu Thr Arg Tyr Val Ser Glu Leu Thr Leu Val
340 345 350
Arg Val Lys Val Ala Glu Ala Gly His Tyr Thr Met Arg Ala Phe His
355 360 365
Glu Asp Ala Glu Val Gln Leu Ser Phe Gln Leu Gln Ile Asn Val Pro
370 375 380
Val Arg Val Leu Glu Leu Ser Glu Ser His Pro Asp Ser Gly Glu Gln
385 390 395 400
Thr Val Arg Cys Arg Gly Arg Gly Met Pro Gln Pro Asn Ile Ile Trp
405 410 415
Ser Ala Cys Arg Asp Leu Lys Arg Cys Pro Arg Glu Leu Pro Pro Thr
420 425 430
Leu Leu Gly Asn Ser Ser Glu Glu Glu Ser Gln Leu Glu Thr Asn Val
435 440 445
Thr Tyr Trp Glu Glu Glu Gln Glu Phe Glu Val Val Ser Thr Leu Arg
450 455 460
Leu Gln His Val Asp Arg Pro Leu Ser Val Arg Cys Thr Leu Arg Asn
465 470 475 480
Ala Val Gly Gln Asp Thr Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu
485 490 495
Pro Phe Lys Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys
500 505 510
Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe
515 520 525
Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val
- 106 031049
530 535 540
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile
545 550 555 560
Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr
565 570 575
His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro
580 585 590
Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val
595 600 605
Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro
610 615 620
Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu
625 630 635 640
Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp
645 650 655
Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr
660 665 670
Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
675 680 685
Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu
690 695 700
Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His
705 710 715 720
His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
725 730
<210> 339 <211> 726 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 339
Leu 1 Val Val Thr Pro 5 Pro Gly Pro Glu Leu 10 Val Leu Asn Val Ser 15 Ser
Thr Phe Val Leu Thr Cys Ser Gly Ser Ala Pro Val Val Trp Glu Arg
20 25 30
Met Ser Gln Glu Pro Pro Gln Glu Met Ala Lys Ala Gln Asp Gly Thr
35 40 45
Phe Ser Ser Val Leu Thr Leu Thr Asn Leu Thr Gly Leu Asp Thr Gly
50 55 60
Glu Tyr Phe Cys Thr His Asn Asp Ser Arg Gly Leu Glu Thr Asp Glu
65 70 75 80
Arg Lys Arg Leu Tyr Ile Phe Val Pro Asp Pro Thr Val Gly Phe Leu
85 90 95
Pro Asn Asp Ala Glu Glu Leu Phe Ile Phe Leu Thr Glu Ile Thr Glu
100 105 110
Ile Thr Ile Pro Cys Arg Val Thr Asp Pro Gln Leu Val Val Thr Leu
115 120 125
His Glu Lys Lys Gly Asp Val Ala Leu Pro Val Pro Tyr Asp His Gln
130 135 140
Arg Gly Phe Phe Gly Ile Phe Glu Asp Arg Ser Tyr Ile Cys Lys Thr
145 150 155 160
Thr Ile Gly Asp Arg Glu Val Asp Ser Asp Ala Tyr Tyr Val Tyr Arg
165 170 175
Leu Gln Val Ser Ser Ile Asn Val Ser Val Asn Ala Val Gln Thr Val
180 185 190
Val Arg Gln Gly Glu Asn Ile Thr Leu Met Cys Ile Val Ile Gly Asn
195 200 205
Glu Val Val Asn Phe Glu Trp Thr Tyr Pro Arg Lys Glu Ser Gly Arg
- 107 031049
210 215 220
Leu Val Glu Pro Val Thr Asp Phe Leu Leu Asp Met Pro Tyr His Ile
225 230 235 240
Arg Ser Ile Leu His Ile Pro Ser Ala Glu Leu Glu Asp Ser Gly Thr
245 250 255
Tyr Thr Cys Asn Val Thr Glu Ser Val Asn Asp His Gln Asp Glu Lys
260 265 270
Ala Ile Asn Ile Thr Val Val Glu Ser Gly Tyr Val Arg Leu Leu Gly
275 280 285
Glu Val Gly Thr Leu Gln Phe Ala Glu Leu His Arg Ser Arg Thr Leu
290 295 300
Gln Val Val Phe Glu Ala Tyr Pro Pro Pro Thr Val Leu Trp Phe Lys
305 310 315 320
Asp Asn Arg Thr Leu Gly Asp Ser Ser Ala Gly Glu Ile Ala Leu Ser
325 330 335
Thr Arg Asn Val Ser Glu Thr Arg Tyr Val Ser Glu Leu Thr Leu Val
340 345 350
Arg Val Lys Val Ala Glu Ala Gly His Tyr Thr Met Arg Ala Phe His
355 360 365
Glu Asp Ala Glu Val Gln Leu Ser Phe Gln Leu Gln Ile Asn Val Pro
370 375 380
Val Arg Val Leu Glu Leu Ser Glu Ser His Pro Asp Ser Gly Glu Gln
385 390 395 400
Thr Val Arg Cys Arg Gly Arg Gly Met Pro Gln Pro Asn Ile Ile Trp
405 410 415
Ser Ala Cys Arg Asp Leu Lys Arg Cys Pro Arg Glu Leu Pro Pro Thr
420 425 430
Leu Leu Gly Asn Ser Ser Glu Glu Glu Ser Gln Leu Glu Thr Asn Val
435 440 445
Thr Tyr Trp Glu Glu Glu Gln Glu Phe Glu Val Val Ser Thr Leu Arg
450 455 460
Leu Gln His Val Asp Arg Pro Leu Ser Val Arg Cys Thr Leu Arg Asn
465 470 475 480
Ala Val Gly Gln Asp Thr Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu
485 490 495
Pro Phe Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
500 505 510
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
515 520 525
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
530 535 540
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
545 550 555 560
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
565 570 575
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
580 585 590
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
595 600 605
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
610 615 620
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
625 630 635 640
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
645 650 655
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
660 665 670
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
675 680 685
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
690 695 700
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
705 710 715 720
- 108 031049
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
725 <210> 340 <211> 527 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 340
Leu 1 Val Ile Thr Pro 5 Pro Gly Pro Glu Leu 10 Ile Leu Asn Val Ser 15 Ser
Thr Phe Val Leu Thr Cys Ser Gly Ser Ala Pro Val Val Trp Glu Arg
20 25 30
Met Ser Gln Glu Leu Pro Gln Glu Met Ala Lys Ala Gln Asp Asn Thr
35 40 45
Phe Ser Ser Val Leu Thr Leu Thr Asn Leu Thr Gly Leu Asp Thr Gly
50 55 60
Glu Tyr Phe Cys Thr Tyr Asn Asp Ser Arg Gly Leu Glu Pro Asp Glu
65 70 75 80
Arg Lys Arg Leu Tyr Ile Phe Val Pro Asp Pro Thr Val Gly Phe Leu
85 90 95
Pro Asn Asp Ala Glu Glu Leu Phe Ile Phe Leu Thr Glu Ile Thr Glu
100 105 110
Ile Thr Ile Pro Cys Arg Val Thr Asp Pro Gln Leu Val Val Thr Leu
115 120 125
His Glu Lys Lys Gly Asp Ile Ala Leu Pro Val Pro Tyr Asp His Gln
130 135 140
Arg Gly Phe Ser Gly Ile Phe Glu Asp Arg Ser Tyr Ile Cys Lys Thr
145 150 155 160
Thr Ile Gly Asp Arg Glu Val Asp Ser Asp Ala Tyr Tyr Val Tyr Arg
165 170 175
Leu Gln Val Ser Ser Ile Asn Val Ser Val Asn Ala Val Gln Thr Val
180 185 190
Val Arg Gln Gly Glu Asn Ile Thr Leu Met Cys Ile Val Ile Gly Asn
195 200 205
Glu Val Val Asn Phe Glu Trp Met Tyr Pro Arg Lys Glu Ser Gly Arg
210 215 220
Leu Val Glu Pro Val Thr Asp Phe Leu Leu Asp Met Pro Tyr His Ile
225 230 235 240
Arg Ser Ile Leu His Ile Pro Ser Ala Glu Leu Glu Asp Ser Gly Thr
245 250 255
Tyr Thr Cys Asn Val Thr Glu Ser Val Asn Asp His Gln Asp Glu Lys
260 265 270
Ala Ile Asn Ile Thr Val Val Glu Ser Gly Tyr Val Arg Leu Leu Gly
275 280 285
Glu Val Gly Ala Leu Gln Phe Ala Glu Leu His Arg Ser Arg Thr Leu
290 295 300
Gln Val Val Phe Glu Ala Tyr Pro Pro Pro Thr Val Leu Trp Phe Lys
305 310 315 320
Asp Asn Arg Thr Leu Gly Asp Ser Ser Ala Gly Glu Ile Ala Leu Ser
325 330 335
Thr Arg Asn Val Ser Glu Thr Arg Tyr Val Ser Glu Leu Thr Leu Val
340 345 350
Arg Val Lys Val Ala Glu Ala Gly His Tyr Thr Met Arg Ala Phe His
355 360 365
Glu Asp Ala Glu Val Gln Leu Ser Phe Gln Leu Gln Ile Asn Val Pro
370 375 380
Val Arg Val Leu Glu Leu Ser Glu Ser His Pro Asp Ser Gly Glu Gln
385 390 395 400
- 109 031049
Thr Val Arg Cys Arg Gly 405 Arg Gly Met Pro 410 Gln Pro Asn Ile Ile 415 Trp
Ser Ala Cys Arg Asp Leu Lys Arg Cys Pro Arg Glu Leu Pro Pro Met
420 425 430
Leu Leu Gly Asn Ser Ser Glu Glu Glu Ser Gln Leu Glu Thr Asn Val
435 440 445
Thr Tyr Trp Glu Glu Glu Gln Glu Phe Glu Val Val Ser Thr Leu Arg
450 455 460
Leu Gln His Val Asp Arg Pro Leu Ser Val Arg Cys Thr Leu Arg Asn
465 470 475 480
Ala Val Gly Gln Asp Met Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu
485 490 495
Pro Phe Lys Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Gly Gly Glu
500 505 510
Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu His His His His His His
515 520 525
<210> 341 <211> 1106 <212> Белок <213> Homo sapiens <400> 341
Met Arg Leu Pro Gly Ala Met Pro Ala Leu Ala Leu Lys Gly Glu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ser Leu Leu Leu Leu Leu Glu Pro Gln Ile Ser Gln Gly
20 25 30
Leu Val Val Thr Pro Pro Gly Pro Glu Leu Val Leu Asn Val Ser Ser
35 40 45
Thr Phe Val Leu Thr Cys Ser Gly Ser Ala Pro Val Val Trp Glu Arg
50 55 60
Met Ser Gln Glu Pro Pro Gln Glu Met Ala Lys Ala Gln Asp Gly Thr
65 70 75 80
Phe Ser Ser Val Leu Thr Leu Thr Asn Leu Thr Gly Leu Asp Thr Gly
85 90 95
Glu Tyr Phe Cys Thr His Asn Asp Ser Arg Gly Leu Glu Thr Asp Glu
100 105 110
Arg Lys Arg Leu Tyr Ile Phe Val Pro Asp Pro Thr Val Gly Phe Leu
115 120 125
Pro Asn Asp Ala Glu Glu Leu Phe Ile Phe Leu Thr Glu Ile Thr Glu
130 135 140
Ile Thr Ile Pro Cys Arg Val Thr Asp Pro Gln Leu Val Val Thr Leu
145 150 155 160
His Glu Lys Lys Gly Asp Val Ala Leu Pro Val Pro Tyr Asp His Gln
165 170 175
Arg Gly Phe Ser Gly Ile Phe Glu Asp Arg Ser Tyr Ile Cys Lys Thr
180 185 190
Thr Ile Gly Asp Arg Glu Val Asp Ser Asp Ala Tyr Tyr Val Tyr Arg
195 200 205
Leu Gln Val Ser Ser Ile Asn Val Ser Val Asn Ala Val Gln Thr Val
210 215 220
Val Arg Gln Gly Glu Asn Ile Thr Leu Met Cys Ile Val Ile Gly Asn
225 230 235 240
Glu Val Val Asn Phe Glu Trp Thr Tyr Pro Arg Lys Glu Ser Gly Arg
245 250 255
Leu Val Glu Pro Val Thr Asp Phe Leu Leu Asp Met Pro Tyr His Ile
260 265 270
Arg Ser Ile Leu His Ile Pro Ser Ala Glu Leu Glu Asp Ser Gly Thr
275 280 285
Tyr Thr Cys Asn Val Thr Glu Ser Val Asn Asp His Gln Asp Glu Lys
290 295 300
Ala Ile Asn Ile Thr Val Val Glu Ser Gly Tyr Val Arg Leu Leu Gly
- 110 031049
305 310 315 320
Glu Val Gly Thr Leu Gln Phe Ala Glu Leu His Arg Ser Arg Thr Leu
325 330 335
Gln Val Val Phe Glu Ala Tyr Pro Pro Pro Thr Val Leu Trp Phe Lys
340 345 350
Asp Asn Arg Thr Leu Gly Asp Ser Ser Ala Gly Glu Ile Ala Leu Ser
355 360 365
Thr Arg Asn Val Ser Glu Thr Arg Tyr Val Ser Glu Leu Thr Leu Val
370 375 380
Arg Val Lys Val Ala Glu Ala Gly His Tyr Thr Met Arg Ala Phe His
385 390 395 400
Glu Asp Ala Glu Val Gln Leu Ser Phe Gln Leu Gln Ile Asn Val Pro
405 410 415
Val Arg Val Leu Glu Leu Ser Glu Ser His Pro Asp Ser Gly Glu Gln
420 425 430
Thr Val Arg Cys Arg Gly Arg Gly Met Pro Gln Pro Asn Ile Ile Trp
435 440 445
Ser Ala Cys Arg Asp Leu Lys Arg Cys Pro Arg Glu Leu Pro Pro Thr
450 455 460
Leu Leu Gly Asn Ser Ser Glu Glu Glu Ser Gln Leu Glu Thr Asn Val
465 470 475 480
Thr Tyr Trp Glu Glu Glu Gln Glu Phe Glu Val Val Ser Thr Leu Arg
485 490 495
Leu Gln His Val Asp Arg Pro Leu Ser Val Arg Cys Thr Leu Arg Asn
500 505 510
Ala Val Gly Gln Asp Thr Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu
515 520 525
Pro Phe Lys Val Val Val Ile Ser Ala Ile Leu Ala Leu Val Val Leu
530 535 540
Thr Ile Ile Ser Leu Ile Ile Leu Ile Met Leu Trp Gln Lys Lys Pro
545 550 555 560
Arg Tyr Glu Ile Arg Trp Lys Val Ile Glu Ser Val Ser Ser Asp Gly
565 570 575
His Glu Tyr Ile Tyr Val Asp Pro Met Gln Leu Pro Tyr Asp Ser Thr
580 585 590
Trp Glu Leu Pro Arg Asp Gln Leu Val Leu Gly Arg Thr Leu Gly Ser
595 600 605
Gly Ala Phe Gly Gln Val Val Glu Ala Thr Ala His Gly Leu Ser His
610 615 620
Ser Gln Ala Thr Met Lys Val Ala Val Lys Met Leu Lys Ser Thr Ala
625 630 635 640
Arg Ser Ser Glu Lys Gln Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Met Ser
645 650 655
His Leu Gly Pro His Leu Asn Val Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr
660 665 670
Lys Gly Gly Pro Ile Tyr Ile Ile Thr Glu Tyr Cys Arg Tyr Gly Asp
675 680 685
Leu Val Asp Tyr Leu His Arg Asn Lys His Thr Phe Leu Gln His His
690 695 700
Ser Asp Lys Arg Arg Pro Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ser Asn Ala Leu
705 710 715 720
Pro Val Gly Leu Pro Leu Pro Ser His Val Ser Leu Thr Gly Glu Ser
725 730 735
Asp Gly Gly Tyr Met Asp Met Ser Lys Asp Glu Ser Val Asp Tyr Val
740 745 750
Pro Met Leu Asp Met Lys Gly Asp Val Lys Tyr Ala Asp Ile Glu Ser
755 760 765
Ser Asn Tyr Met Ala Pro Tyr Asp Asn Tyr Val Pro Ser Ala Pro Glu
770 775 780
Arg Thr Cys Arg Ala Thr Leu Ile Asn Glu Ser Pro Val Leu Ser Tyr
785 790 795 800
Met Asp Leu Val Gly Phe Ser Tyr Gln Val Ala Asn Gly Met Glu Phe
805 810 815
- 111 031049
Leu Ala Ser Lys 820 Asn Cys Val His Arg Asp 825 Leu Ala Ala Arg 830 Asn Val
Leu Ile Cys Glu Gly Lys Leu Val Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu Ala
835 840 845
Arg Asp Ile Met Arg Asp Ser Asn Tyr Ile Ser Lys Gly Ser Thr Phe
850 855 860
Leu Pro Leu Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Ile Phe Asn Ser Leu Tyr
865 870 875 880
Thr Thr Leu Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile
885 890 895
Phe Thr Leu Gly Gly Thr Pro Tyr Pro Glu Leu Pro Met Asn Glu Gln
900 905 910
Phe Tyr Asn Ala Ile Lys Arg Gly Tyr Arg Met Ala Gln Pro Ala His
915 920 925
Ala Ser Asp Glu Ile Tyr Glu Ile Met Gln Lys Cys Trp Glu Glu Lys
930 935 940
Phe Glu Ile Arg Pro Pro Phe Ser Gln Leu Val Leu Leu Leu Glu Arg
945 950 955 960
Leu Leu Gly Glu Gly Tyr Lys Lys Lys Tyr Gln Gln Val Asp Glu Glu
965 970 975
Phe Leu Arg Ser Asp His Pro Ala Ile Leu Arg Ser Gln Ala Arg Leu
980 985 990
Pro Gly Phe His Gly Leu Arg Ser Pro Leu Asp Thr Ser Ser Val Leu
995 1000 1005
Tyr Thr Ala Val Gln Pro Asn Glu Gly Asp Asn Asp Tyr Ile Ile Pro
1010 1015 1020
Leu Pro Asp Pro Lys Pro Glu Val Ala Asp Glu Gly Pro Leu Glu Gly
1025 1030 1035 1040
Ser Pro Ser Leu Ala Ser Ser Thr Leu Asn Glu Val Asn Thr Ser Ser
1045 1050 1055
Thr Ile Ser Cys Asp Ser Pro Leu Glu Pro Gln Asp Glu Pro Glu Pro
1060 1065 1070
Glu Pro Gln Leu Glu Leu Gln Val Glu Pro Glu Pro Glu Leu Glu Gln
1075 1080 1085
Leu Pro Asp Ser Gly Cys Pro Ala Pro Arg Ala Glu Ala Glu Asp Ser
1090 1095 1100
Phe Leu
1105
<210> 342 <211> 145 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> hPDGFR-beta D1.mmH <400> 342
Met His Arg Pro Arg Arg Arg Gly Thr Arg Pro Pro Pro Leu Ala Leu
1 5 10 15
Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ala Ala Arg Gly Ala Asp Ala Leu Val Val
20 25 30
Thr Pro Pro Gly Pro Glu Leu Val Leu Asn Val Ser Ser Thr Phe Val
35 40 45
Leu Thr Cys Ser Gly Ser Ala Pro Val Val Trp Glu Arg Met Ser Gln
50 55 60
Glu Pro Pro Gln Glu Met Ala Lys Ala Gln Asp Gly Thr Phe Ser Ser
65 70 75 80
Val Leu Thr Leu Thr Asn Leu Thr Gly Leu Asp Thr Gly Glu Tyr Phe
85 90 95
Cys Thr His Asn Asp Ser Arg Gly Leu Glu Thr Asp Glu Arg Lys Arg
100 105 110
- 112 031049
Leu Tyr Ile 115 Phe Val Glu Gln Lys 120 Leu Ile Ser Glu Glu 125 Asp Leu Gly
Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu His His His His His
130 135 140
His
145 <210> 343 <211> 227 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> hPDGFR-beta D1-D2.mmH <400> 343
Met His Arg Pro Arg Arg Arg Gly Thr Arg Pro Pro Pro Leu Ala Leu
1 5 10 15
Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ala Ala Arg Gly Ala Asp Ala Leu Val Val
20 25 30
Thr Pro Pro Gly Pro Glu Leu Val Leu Asn Val Ser Ser Thr Phe Val
35 40 45
Leu Thr Cys Ser Gly Ser Ala Pro Val Val Trp Glu Arg Met Ser Gln
50 55 60
Glu Pro Pro Gln Glu Met Ala Lys Ala Gln Asp Gly Thr Phe Ser Ser
65 70 75 80
Val Leu Thr Leu Thr Asn Leu Thr Gly Leu Asp Thr Gly Glu Tyr Phe
85 90 95
Cys Thr His Asn Asp Ser Arg Gly Leu Glu Thr Asp Glu Arg Lys Arg
100 105 110
Leu Tyr Ile Phe Val Pro Asn Asp Ala Glu Glu Leu Phe Ile Phe Leu
115 120 125
Thr Glu Ile Thr Glu Ile Thr Ile Pro Cys Arg Val Thr Asp Pro Gln
130 135 140
Leu Val Val Thr Leu His Glu Lys Lys Gly Asp Val Ala Leu Pro Val
145 150 155 160
Pro Tyr Asp His Gln Arg Gly Phe Phe Gly Ile Phe Glu Asp Arg Ser
165 170 175
Tyr Ile Cys Lys Thr Thr Ile Gly Asp Arg Glu Val Asp Ser Asp Ala
180 185 190
Tyr Tyr Val Tyr Arg Leu Gln Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp
195 200 205
Leu Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu His His His
210 215 220
His His His
225
<210> 344 <211> 323 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> hPDGFR-beta D1-D3.mmH <400> 344
Met His Arg Pro Arg Arg Arg Gly Thr Arg Pro Pro Pro Leu Ala Leu
1 5 10 15
Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ala Ala Arg Gly Ala Asp Ala Leu Val Val
20 25 30
Thr Pro Pro Gly Pro Glu Leu Val Leu Asn Val Ser Ser Thr Phe Val
- 113 031049
35 40 45
Leu Thr Cys Ser Gly Ser Ala Pro Val Val Trp Glu Arg Met Ser Gln
50 55 60
Glu Pro Pro Gln Glu Met Ala Lys Ala Gln Asp Gly Thr Phe Ser Ser
65 70 75 80
Val Leu Thr Leu Thr Asn Leu Thr Gly Leu Asp Thr Gly Glu Tyr Phe
85 90 95
Cys Thr His Asn Asp Ser Arg Gly Leu Glu Thr Asp Glu Arg Lys Arg
100 105 110
Leu Tyr Ile Phe Val Pro Asn Asp Ala Glu Glu Leu Phe Ile Phe Leu
115 120 125
Thr Glu Ile Thr Glu Ile Thr Ile Pro Cys Arg Val Thr Asp Pro Gln
130 135 140
Leu Val Val Thr Leu His Glu Lys Lys Gly Asp Val Ala Leu Pro Val
145 150 155 160
Pro Tyr Asp His Gln Arg Gly Phe Phe Gly Ile Phe Glu Asp Arg Ser
165 170 175
Tyr Ile Cys Lys Thr Thr Ile Gly Asp Arg Glu Val Asp Ser Asp Ala
180 185 190
Tyr Tyr Val Tyr Arg Leu Gln Ile Asn Val Ser Val Asn Ala Val Gln
195 200 205
Thr Val Val Arg Gln Gly Glu Asn Ile Thr Leu Met Cys Ile Val Ile
210 215 220
Gly Asn Glu Val Val Asn Phe Glu Trp Thr Tyr Pro Arg Lys Glu Ser
225 230 235 240
Gly Arg Leu Val Glu Pro Val Thr Asp Phe Leu Leu Asp Met Pro Tyr
245 250 255
His Ile Arg Ser Ile Leu His Ile Pro Ser Ala Glu Leu Glu Asp Ser
260 265 270
Gly Thr Tyr Thr Cys Asn Val Thr Glu Ser Val Asn Asp His Gln Asp
275 280 285
Glu Lys Ala Ile Asn Ile Thr Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp
290 295 300
Leu Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu His His His
305 310 315 320
His His His
<210> 345 <211> 396 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
<223> hPDGFR-beta D1-D4.mmH <400> 345
Met His Arg Pro Arg Arg Arg Gly Thr Arg Pro Pro Pro Leu Ala Leu
1 5 10 15
Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ala Ala Arg Gly Ala Asp Ala Leu Val Val
20 25 30
Thr Pro Pro Gly Pro Glu Leu Val Leu Asn Val Ser Ser Thr Phe Val
35 40 45
Leu Thr Cys Ser Gly Ser Ala Pro Val Val Trp Glu Arg Met Ser Gln
50 55 60
Glu Pro Pro Gln Glu Met Ala Lys Ala Gln Asp Gly Thr Phe Ser Ser
65 70 75 80
Val Leu Thr Leu Thr Asn Leu Thr Gly Leu Asp Thr Gly Glu Tyr Phe
85 90 95
Cys Thr His Asn Asp Ser Arg Gly Leu Glu Thr Asp Glu Arg Lys Arg
100 105 110
Leu Tyr Ile Phe Val Pro Asn Asp Ala Glu Glu Leu Phe Ile Phe Leu
- 114 031049
115 120 125
Thr Glu Ile Thr Glu Ile Thr Ile Pro Cys Arg Val Thr Asp Pro Gln
130 135 140
Leu Val Val Thr Leu His Glu Lys Lys Gly Asp Val Ala Leu Pro Val
145 150 155 160
Pro Tyr Asp His Gln Arg Gly Phe Phe Gly Ile Phe Glu Asp Arg Ser
165 170 175
Tyr Ile Cys Lys Thr Thr Ile Gly Asp Arg Glu Val Asp Ser Asp Ala
180 185 190
Tyr Tyr Val Tyr Arg Leu Gln Ile Asn Val Ser Val Asn Ala Val Gln
195 200 205
Thr Val Val Arg Gln Gly Glu Asn Ile Thr Leu Met Cys Ile Val Ile
210 215 220
Gly Asn Glu Val Val Asn Phe Glu Trp Thr Tyr Pro Arg Lys Glu Ser
225 230 235 240
Gly Arg Leu Val Glu Pro Val Thr Asp Phe Leu Leu Asp Met Pro Tyr
245 250 255
His Ile Arg Ser Ile Leu His Ile Pro Ser Ala Glu Leu Glu Asp Ser
260 265 270
Gly Thr Tyr Thr Cys Asn Val Thr Glu Ser Val Asn Asp His Gln Asp
275 280 285
Glu Lys Ala Ile Asn Ile Thr His Arg Ser Arg Thr Leu Gln Val Val
290 295 300
Phe Glu Ala Tyr Pro Pro Pro Thr Val Leu Trp Phe Lys Asp Asn Arg
305 310 315 320
Thr Leu Gly Asp Ser Ser Ala Gly Glu Ile Ala Leu Ser Thr Arg Asn
325 330 335
Val Ser Glu Thr Arg Tyr Val Ser Glu Leu Thr Leu Val Arg Val Lys
340 345 350
Val Ala Glu Ala Gly His Tyr Thr Met Arg Ala Phe His Glu Asp Ala
355 360 365
Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Gly Gly Glu Gln Lys Leu
370 375 380
Ile Ser Glu Glu Asp Leu His His His His His His
385 390 395

Claims (7)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связываются с мономерным рецептором бета полученного из тромбоцитов фактора роста человека (PDGFR-бета), где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат три определяющие комплементарность области тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3), включающие SEQ ID NO: 132, 134 и 136 соответственно, и три определяющие комплементарность области легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), включающие SEQ ID NO: 140, 142 и 144 соответственно.
  2. 2. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), содержащую SEQ ID NO: 130, и вариабельную область легкой цепи (LCVR), содержащую SEQ ID NO: 138.
  3. 3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, которые связываются с PDGFR-бета с равновесной константой диссоциации для такого связывания (KD) меньше чем примерно 30 нМ, измеряемой в анализе поверхностного плазмонного резонанса при 37°C.
  4. 4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, которые связываются с PDGFR-бета с равновесной константой диссоциации для такого связывания (KD) меньше чем примерно 200 пМ, измеряемой в анализе поверхностного плазмонного резонанса при 37°C, при этом антитело или антигенсвязывающий фрагмент блокируют связывание по меньшей мере одного лиганда PDGF с PDGFR-бета;
    при этом антитело или его антигенсвязывающий фрагмент блокируют связывание лиганда PDGFBB с растворимым мономерным PDGFR-бета со значением IC50 меньше чем примерно 150 пМ, измеряемым в анализе связывания рецептор/лиганд in vitro при 25°C; и при этом антитело или его антигенсвязывающий фрагмент ингибируют опосредованную лигандом PDGF активацию передачи сигнала PDGFR-бета в клетках, которые экспрессируют PDGFR-бета.
  5. 5. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний или расстройств, вызванных или свя- 115 031049 занных с активностью и/или передачей сигнала PDGFR-бета, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-4, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
  6. 6. Применение фармацевтической композиции по п.5 для лечении индивида, страдающего глазной болезнью, выбранной из группы, состоящей из возрастной макулярной дегенерации (ВМД), экссудативной ВМД, диабетической ретинопатии, окклюзии центральной вены сетчатки (ОЦВС), неоваскуляризации радужки, неоваскулярной глаукомы, послеоперационного фиброза при глаукоме, пролиферативной витреоретинопатии (ПВР), хориоидальной неоваскуляризации, неоваскуляризации диска зрительного нерва, неоваскуляризации роговицы, неоваскуляризации сетчатки, неоваскуляризации стекловидного тела, паннуса, птеригиума, макулярного отека, диабетического макулярного отека (ДМО), сосудистой ретинопатии, дегенерации сетчатки, увеита и воспалительных заболеваний глаз.
  7. 7. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний или расстройств, вызванных или связанных с активностью и/или передачей сигнала PDGFR-бета, содержащая антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.3 или 4 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель и антагонист VEGF, выбранный из группы, состоящей из афлиберцепта, бевацизумаба или ранибизумаба.
EA201591072A 2013-01-09 2014-01-07 Антитела против pdgfr-бета и их применения EA031049B1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361750437P 2013-01-09 2013-01-09
US201361863452P 2013-08-08 2013-08-08
US201361909421P 2013-11-27 2013-11-27
PCT/US2014/010395 WO2014109999A1 (en) 2013-01-09 2014-01-07 ANTI-PDGFR-beta ANTIBODIES AND USES THEREOF

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201591072A1 EA201591072A1 (ru) 2015-12-30
EA031049B1 true EA031049B1 (ru) 2018-11-30

Family

ID=50002880

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201890143A EA201890143A3 (ru) 2013-01-09 2014-01-07 Антитела против pdgfr-бета и их применения
EA201591072A EA031049B1 (ru) 2013-01-09 2014-01-07 Антитела против pdgfr-бета и их применения

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201890143A EA201890143A3 (ru) 2013-01-09 2014-01-07 Антитела против pdgfr-бета и их применения

Country Status (22)

Country Link
US (3) US9265827B2 (ru)
EP (1) EP2943218B1 (ru)
JP (1) JP6367233B2 (ru)
KR (1) KR102146692B1 (ru)
CN (1) CN104936614B (ru)
AU (3) AU2014205641B2 (ru)
BR (1) BR112015016312B1 (ru)
CA (1) CA2897383C (ru)
CL (2) CL2015001924A1 (ru)
EA (2) EA201890143A3 (ru)
HK (1) HK1214969A1 (ru)
IL (2) IL239552B (ru)
JO (1) JO3405B1 (ru)
MX (1) MX363635B (ru)
MY (1) MY169165A (ru)
NZ (1) NZ709683A (ru)
PH (1) PH12015501493A1 (ru)
SG (2) SG10201701308VA (ru)
TW (1) TWI647239B (ru)
UY (1) UY35258A (ru)
WO (1) WO2014109999A1 (ru)
ZA (1) ZA201504537B (ru)

Families Citing this family (66)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7803931B2 (en) 2004-02-12 2010-09-28 Archemix Corp. Aptamer therapeutics useful in the treatment of complement-related disorders
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
EP3628373A1 (en) 2013-07-12 2020-04-01 IVERIC bio, Inc. Methods for treating or preventing opthalmological conditions
US9914769B2 (en) 2014-07-15 2018-03-13 Kymab Limited Precision medicine for cholesterol treatment
DE202014010499U1 (de) 2013-12-17 2015-10-20 Kymab Limited Targeting von humaner PCSK9 zur Cholesterinbehandlung
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
WO2015143271A1 (en) 2014-03-21 2015-09-24 X-Body, Inc. Bi-specific antigen-binding polypeptides
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
SG11201702550WA (en) 2014-11-10 2017-04-27 Hoffmann La Roche ANTI-IL-1beta ANTIBODIES AND METHODS OF USE
CA2963175A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies and methods of use in ophthalmology
RU2017120361A (ru) * 2014-11-10 2018-12-13 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела к pdgf-b и способы их применения
KR20170082594A (ko) 2014-11-10 2017-07-14 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-ang2 항체 및 사용 방법
US20160144025A1 (en) * 2014-11-25 2016-05-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and formulations for treating vascular eye diseases
CN107708732A (zh) * 2015-02-06 2018-02-16 卡德门企业有限公司 免疫调节剂
AU2016241499B2 (en) * 2015-03-31 2020-12-17 Ildong Pharm Co., Ltd. Pharmaceutical composition for preventing and treating eye diseases, containing, as active ingredient, fusion protein in which tissue-penetrating peptide and anti-vascular endothelial growth factor preparation are fused
PL3328886T3 (pl) 2015-07-29 2021-02-08 Allergan, Inc. Przeciwciała ang-2 o wyłącznie ciężkim łańcuchu
TW202340452A (zh) 2015-08-04 2023-10-16 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法
IL302211A (en) 2015-12-16 2023-06-01 Regeneron Pharma Preparations and methods for making protein microparticles
WO2017117464A1 (en) 2015-12-30 2017-07-06 Kodiak Sciences Inc. Antibodies and conjugates thereof
WO2018005904A2 (en) * 2016-07-01 2018-01-04 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd Methods and compositions for pdgf-cc inhibition
EP3500297A1 (en) 2016-08-16 2019-06-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for quantitating individual antibodies from a mixture
WO2018039499A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Host cell protein modification
US11779604B2 (en) 2016-11-03 2023-10-10 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods
CN109021104B (zh) * 2017-06-12 2022-08-12 上海睿智化学研究有限公司 一种抗人血小板衍生生长因子β受体的抗体及其应用
JP7265494B2 (ja) 2017-07-06 2023-04-26 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 糖タンパク質を作製するための細胞培養方法
CN115925882A (zh) 2017-12-22 2023-04-07 瑞泽恩制药公司 用于表征药物产品杂质的系统和方法
WO2019152303A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for characterizing drug product impurities
TWI786265B (zh) 2018-02-02 2022-12-11 美商再生元醫藥公司 用於表徵蛋白質二聚合之系統及方法
JP2021514609A (ja) 2018-02-28 2021-06-17 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ウイルス混入物質を同定するためのシステムおよび方法
US12071476B2 (en) 2018-03-02 2024-08-27 Kodiak Sciences Inc. IL-6 antibodies and fusion constructs and conjugates thereof
KR102503356B1 (ko) 2018-03-19 2023-02-24 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 마이크로칩 모세관 전기영동 분석 및 시약
GB201806918D0 (en) * 2018-04-27 2018-06-13 Enleofen Bio Pte Ltd Combination treatment for eye fibrosis
CN108586611B (zh) * 2018-04-28 2021-01-26 暨南大学 重组全人源抗破伤风毒素单克隆抗体
TW202016125A (zh) 2018-05-10 2020-05-01 美商再生元醫藥公司 用於定量及調節蛋白質黏度之系統與方法
BR112020024296A2 (pt) 2018-08-27 2021-03-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Métodos para produção de um intermediário de purificação de proteína concentrado, para monitoramento e controle dos atributos de qualidade críticos em um intermediário de purificação de proteína e para monitorar e controlar os níveis de excipientes no fluido de cultura de células colhido e/ou intermediário de purificação de proteína, e, intermediário de purificação de proteína
US11754569B2 (en) 2018-08-30 2023-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for characterizing protein complexes
BR112021006352A2 (pt) * 2018-10-05 2021-07-06 Univ Ewha Ind Collaboration anticorpo receptor de pdgf e uso do mesmo
AU2020208396A1 (en) 2019-01-16 2021-05-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for identifying free thiols in proteins
US20220143204A1 (en) * 2019-03-08 2022-05-12 Linxis B.V. Internalizing binding molecules targeting receptors involved in cell proliferation or in cell differentiation
JP2022531591A (ja) 2019-05-03 2022-07-07 シンガポール・ヘルス・サービシーズ・ピーティーイー・リミテッド 代謝性疾患の治療および予防
JP7541534B2 (ja) 2019-05-13 2024-08-28 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 改善された競合的リガンド結合アッセイ
CA3150234C (en) 2019-09-24 2023-12-12 Robert Stairs Systems and methods for chromatography use and regeneration
JP2022553640A (ja) 2019-10-10 2022-12-26 コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッド 眼障害を処置する方法
IL293112A (en) 2019-11-25 2022-07-01 Regeneron Pharma Sustained release formulations using non-aqueous emulsions
AU2021205893A1 (en) 2020-01-08 2022-06-23 Synthis Therapeutics, Inc. ALK5 inhibitor conjugates and uses thereof
US11835527B2 (en) 2020-01-21 2023-12-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Deglycosylation methods for electrophoresis of glycosylated proteins
MX2023002417A (es) 2020-08-31 2023-03-22 Regeneron Pharma Estrategias de suministro de asparagina para mejorar el rendimiento del cultivo celular y mitigar las variantes de secuencia de asparagina.
JP2023541934A (ja) * 2020-09-16 2023-10-04 リンクシス ベスローテン フェンノートシャップ 内在化結合分子
CN116940347A (zh) 2020-11-25 2023-10-24 里珍纳龙药品有限公司 使用非水性膜乳化的持续释放调配物
EP4262757A1 (en) 2020-12-17 2023-10-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fabrication of protein-encapsulating microgels
CN116761880A (zh) 2021-01-20 2023-09-15 瑞泽恩制药公司 改进细胞培养物中的蛋白质滴度的方法
TW202246325A (zh) 2021-03-03 2022-12-01 美商再生元醫藥公司 用於定量及修飾蛋白質黏度之系統及方法
WO2022204728A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for developing mixing protocols
MX2023014246A (es) 2021-06-01 2024-01-17 Regeneron Pharma Ensayos y reactivos de microchips de electroforesis capilar.
TW202326138A (zh) 2021-09-08 2023-07-01 美商再生元醫藥公司 用於定量抗體及其他含Ｆｃ蛋白之高通量及基於質譜之方法
TW202328179A (zh) 2021-09-20 2023-07-16 美商再生元醫藥公司 控制抗體異質性之方法
KR20240090312A (ko) 2021-10-07 2024-06-21 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Ph 미터 보정 및 교정
CA3230984A1 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Ross BROWNE Systems and methods of ph modeling and control
CN118176167A (zh) 2021-10-26 2024-06-11 瑞泽恩制药公司 用于产生实验室用水和分配处于不同温度的实验室用水的系统和方法
WO2023177836A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for analyzing polypeptide variants
US11723955B1 (en) 2022-05-13 2023-08-15 Allgenesis Biotherapeutics Inc. VEGFR fusion protein pharmaceutical composition
WO2024130048A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for assessing chromatographic column integrity
US20240248097A1 (en) 2023-01-25 2024-07-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mass spectrometry-based characterization of antibodies co-expressed in vivo
WO2024158880A1 (en) 2023-01-25 2024-08-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modeling liquid protein composition stability
US20240255519A1 (en) 2023-02-01 2024-08-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Asymmetrical flow field-flow fractionation with mass spectrometry for biomacromolecule analysis
US20240280551A1 (en) 2023-02-22 2024-08-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. System suitability parameters and column aging

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020009443A1 (en) * 1991-12-02 2002-01-24 Vanitha Ramakrishman Inhibitory immunoglobulin polypeptides to human pdgf beta receptor
WO2008130704A2 (en) * 2007-04-17 2008-10-30 Imclone Llc PDGFRβ-SPECIFIC INHIBITORS
WO2009120922A2 (en) * 2008-03-27 2009-10-01 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for inhibiting pdgfrbeta and vegf-a

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
ATE193553T1 (de) 1991-01-31 2000-06-15 Cor Therapeutics Inc Domänen von extrazellulären bereichen von menschlichen blutplättchen abstammenden wachstumsfaktor rezeptor-polypeptiden
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
US5817310A (en) 1991-12-02 1998-10-06 Cor Therapeutics, Inc. Inhibitory immunoglobulin polypeptides to human PDGF beta receptor
JP3455743B2 (ja) * 1991-12-02 2003-10-14 ミレニアム ファーマシューティカルズ インク． ヒトｐｄｇｆベータ・レセプタに対する阻害性免疫グロブリン・ポリペプチド
US5620687A (en) 1993-02-25 1997-04-15 Zymogenetics, Inc. Inhibition of intimal hyperplasia using antibodies to PDGF beta receptors
US5882644A (en) 1996-03-22 1999-03-16 Protein Design Labs, Inc. Monoclonal antibodies specific for the platelet derived growth factor β receptor and methods of use thereof
US7087411B2 (en) 1999-06-08 2006-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion protein capable of binding VEGF
CN102813923B (zh) 2003-08-27 2015-04-01 奥普索特克公司 用于治疗眼新血管疾病的组合治疗
US7850962B2 (en) 2004-04-20 2010-12-14 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against CD20
RS52176B (en) 2006-06-02 2012-08-31 Regeneron Pharmaceuticals Inc. HIGH AFINITY ANTIBODIES TO THE HUMAN IL-6 RECEPTOR
RU2448979C2 (ru) 2006-12-14 2012-04-27 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Антитела человека к дельта-подобному лиганду-4 человека
EP2155238B1 (en) 2007-06-05 2016-04-06 Yale University Antibody against d4 domain of the kit receptor and use thereor
US8288540B2 (en) 2007-08-22 2012-10-16 Irm Llc 2-heteroarylamino-pyrimidine derivatives as kinase inhibitors
US9187535B2 (en) 2007-12-19 2015-11-17 Affibody Ab Polypeptide derived from protein A and able to bind PDGF
WO2010127029A1 (en) 2009-05-01 2010-11-04 Ophthotech Corporation Methods for treating or preventing ophthalmological diseases
JO3182B1 (ar) 2009-07-29 2018-03-08 Regeneron Pharma مضادات حيوية بشرية عالية الالفة مع تولد الاوعية البشرية - 2
SG10202111177VA (en) 2011-01-13 2021-11-29 Regeneron Pharma Use of a vegf antagonist to treat angiogenic eye disorders
CN102250246A (zh) 2011-06-10 2011-11-23 常州亚当生物技术有限公司 抗VEGF/PDGFRβ双特异性抗体及其应用
CN102250249A (zh) 2011-06-18 2011-11-23 常州亚当生物技术有限公司 一种抗VEGF/PDGFRbeta双特异性抗体及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020009443A1 (en) * 1991-12-02 2002-01-24 Vanitha Ramakrishman Inhibitory immunoglobulin polypeptides to human pdgf beta receptor
WO2008130704A2 (en) * 2007-04-17 2008-10-30 Imclone Llc PDGFRβ-SPECIFIC INHIBITORS
WO2009120922A2 (en) * 2008-03-27 2009-10-01 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for inhibiting pdgfrbeta and vegf-a

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LOKKER NATHALIE A ET AL: "Functional importance of platelet-derived growth factor (PDGF) receptor extracellular immunoglobulin-like domains. Identification of PDGF binding site and neutralizing monoclonal antibodies", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, AMERICAN SOCIETY FOR BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, US, vol. 272, no. 52, 26 December 1997 (1997-12-26), US, pages 33037 - 33044, XP002500817, ISSN: 0021-9258, DOI: 10.1074/jbc.272.52.33037 *

Also Published As

Publication number Publication date
IL245040A0 (en) 2016-05-31
MY169165A (en) 2019-02-20
US10023642B2 (en) 2018-07-17
IL239552B (en) 2019-01-31
TW201441261A (zh) 2014-11-01
NZ709683A (en) 2019-01-25
EA201591072A1 (ru) 2015-12-30
AU2014205641B2 (en) 2017-08-24
PH12015501493B1 (en) 2015-09-28
AU2018202814B2 (en) 2019-04-18
UY35258A (es) 2014-08-29
WO2014109999A1 (en) 2014-07-17
EP2943218B1 (en) 2018-08-08
AU2014205641A1 (en) 2015-07-23
US9265827B2 (en) 2016-02-23
AU2017245479A1 (en) 2017-11-02
IL245040B (en) 2020-05-31
AU2017245479B2 (en) 2018-01-25
US9650444B2 (en) 2017-05-16
HK1214969A1 (zh) 2016-08-12
MX2015008689A (es) 2015-10-05
CL2018000703A1 (es) 2018-07-06
SG10201701308VA (en) 2017-03-30
EP2943218A1 (en) 2015-11-18
JO3405B1 (ar) 2019-10-20
AU2017245479C1 (en) 2018-08-16
KR20150103682A (ko) 2015-09-11
US20140193402A1 (en) 2014-07-10
ZA201504537B (en) 2016-07-27
US20170210813A1 (en) 2017-07-27
KR102146692B1 (ko) 2020-08-21
CA2897383C (en) 2021-07-06
AU2018202814A1 (en) 2018-05-10
CN104936614B (zh) 2018-09-18
EA201890143A2 (ru) 2018-05-31
EA201890143A3 (ru) 2018-09-28
PH12015501493A1 (en) 2015-09-28
CN104936614A (zh) 2015-09-23
CA2897383A1 (en) 2014-07-17
TWI647239B (zh) 2019-01-11
SG11201505035YA (en) 2015-07-30
BR112015016312B1 (pt) 2020-12-15
AU2018202814B9 (en) 2019-06-06
US20160122433A1 (en) 2016-05-05
JP2016504416A (ja) 2016-02-12
CL2015001924A1 (es) 2016-06-10
JP6367233B2 (ja) 2018-08-01
IL239552A0 (en) 2015-08-31
MX363635B (es) 2019-03-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2017245479C1 (en) Anti-PDGFR-beta antibodies and uses thereof
KR102534895B1 (ko) 항-c5 항체 및 이의 용도
KR101781786B1 (ko) 사람 안지오포이에틴-2에 대한 고 친화성 사람 항체
KR102440044B1 (ko) 항-액티빈 a 항체 및 그의 용도
KR102337042B1 (ko) Pd-1에 대한 사람 항체
AU2013305863B2 (en) Human antibodies to GFRalpha3 and methods of use thereof
AU2013280610B2 (en) Anti-EGFR antibodies and uses thereof
KR20120059611A (ko) 인간 프로테아제-활성화된 수용체-2에 대한 고친화도 인간 항체들
KR20150129718A (ko) Ｇｒｅｍ 1에 대한 인간 항체
PH12014501730B1 (en) Anti-big-endothelin-1 (big-et-1) antibodies and uses thereof