EA030611B1 - Способы и композиции для модуляции гамма-глутамилового цикла - Google Patents

Abstract

В изобретении представлены фармацевтические композиции, включающие ингибиторы гамма-глутамилового цикла (GGCI) и их некоторые фармацевтически приемлемые соли, и способы их применения.

Description

изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей любой GGCI, описанный в данном документе, и фармацевтически приемлемый наполнитель. В другом аспекте настоящее изобретение относится к композиции для селективного лечения опухолевых клеток, содержащей эффективное количество аналога 5-оксопролина, в результате чего аналог транспортируется в клетку и связывается с 5-оксопролиназой, но не метаболизируется ей. Соединения по настоящему изобретению являются эффективными в ингибировании синтеза глутаминовой кислоты в гаммаглутамиловом цикле. В одном воплощении композиция ингибирует выработку субстрата для глутатионS-трансферазы. В одном воплощении композиция, ингибирующая глутатионы-трансферазу, включает 2имино-3-метоксибензил р-4-сульфанил 5 диметил 1-карбоновую кислоту. В одном воплощении композиция содержит GGCI и его соль и полиморфы. В одном воплощении предлагается хлоридная соль выделенного GGCI, которая имеет широкий спектр чистоты, выбранной из группы, состоящей из 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% чистоты. В одном воплощении, по существу, предлагается чистый безводный GGCI, дигидрат, тригидрат, тетрагидрат. В одном воплощении предлагается композиция, содержащая, по существу, чистый кристалл GGCI с чередующихся слоями молекул GGCI и молекул мезилата (соль мезилата) и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к применению соединения любой из формул I-V для получения лекарственного средства для лечения состояния, выбранного из группы, состоящей из злокачественного новообразования, гиперплазии и неоплазии. В одном воплощении MDR, таким образом, ингибируется и/или снижается. В одном воплощении, таким образом, ингибируется или уменьшается прогресс опухопи. В одном воплощении иллюстративные соединения связывают сахарные группы и/или имеют высоко аффинную активность лектина.

В одном из аспектов настоящее изобретение обеспечивает способ лечения рака, включающий введение объекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей GGCI формул I-V, посредством чего ингибируется гамма-глутамиловый цикл. В одном воплощении GGCI является аналогом 5-оксопролина. В одном воплощении аналог 5оксопролина представляет собой 2-имино-3-р-метоксибензил-4-сульфанил 5,5 диметил 1-карбоновую кислоту. В одном воплощении ингибирование GGC является результатом ингибирования биосинтеза с помощью GGC, например ингибирование получения продукта, промежуточного продукта или метаболита пути GGC.

В одном воплощении уровень глутатиона снижается в злокачественных опухолевых клетках. В одном воплощении соединения по данному изобретению ингибируют глутатионЫ-трансферазу, например, путем ингибирования продуцирования его субстрата. Глутатион защищает клетки от окислительного стресса, включая детоксикацию реактивных алкилирующих агентов и окислителей, а также помогает блокировать вредное воздействие терапевтических алкилирующих агентов и/или окислителей на злокачественные опухолевые клетки. В некоторых воплощениях GGCI можно вводить синергически с алкили- 3 030611

рующим агентом и/или окислителем, которые могут повысить риск/повреждение злокачественных опухолевых клеток. В некоторых воплощениях GGCI по данному изобретению могут быть введены в комбинации с ингибитором глутатион-Б-трансферазы для синергического ингибирования GGC. Например, любое из соединений по данному изобретению можно преимущественно вводить одновременно и/или последовательно с экстрактом куркумы и/или tacrinic кислотой. В некоторых воплощениях GGCI могут быть использованы для предотвращения или ослабления устойчивости к одной или нескольким терапиям рака и/или для уменьшения метаболического распада алкилирующих и/или окисляющих противоопухолевых средств, что позволит снизить дозы и уменьшить побочные эффекты.

В одном из аспектов эффективная доза GGCI составляет от 2 до 5 г/кг, например 4 г/кг. В другом аспекте эффективная доза GGCI дается в одной или нескольких дозах 3,5 г/кг для каждой дозы. В некоторых воплощениях одну или несколько эффективных доз GGCI вводят подкожно. В. одном воплощении одну или несколько эффективньк доз GGCI вводят внутривенно. В одном воплощении одну или несколько эффективньк доз GGCI вводят внутримышечно. В одном воплощении одну или несколько эффективных доз GGCI вводят перорально. В одном воплощении злокачественное новообразование представляет собой солидную опухоль. В одном воплощении лечение включает лечение солидных опухолей. В одном воплощении опухоли включают саркомы, карциномы или лимфомы. В одном воплощении злокачественное новообразование выбрано из группы, состоящей из рака легких, молочной железы, предстательной железы, поджелудочной железы, яичников, мочевого пузыря, головы и шеи, щитовидной железы, мозга, кожи и почек. В одном воплощении доза вводится путем доставки, выбранным из числа внутрибрюшинного, внутрикожного, внутримышечного, внутрибрюшинного, внутривенного, местного, подкожного, интраназального, пероралыюго или эпидурального путей.

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к способу синтеза соединения формулы I и его соли, в котором соединение получают путем схемы синтеза, показанной на фиг. 1. В одном воплощении была синтезирована (Ь)-2-имино-3-р-метоксибензил-4 сульфанил 5 диметил 1- карбоновая кислота. В одном воплощении эквимолярные количества метокситолуола (р-метоксибензальдегида), диметилцистеина и диоксида марганца растворяли в двух литрах 70% этанола. В одном воплощении смесь получали в роторном испарителе, а температуру повышали до 70°С. В одном воплощении приблизительно через 1 ч все ингредиенты растворялись. В одном воплощении затем объем уменьшали до одного литра. В одном воплощении раствор оставляли в колбе остывать в течение ночи до комнатной температуры. В одном воплощении осажденные белые кристаллы GCI отфильтровывали, а затем сушили в вакуумном сушильном шкафу в течение одного дня. В одном воплощении изобретение обеспечивает промежуточные соединения для упомянутой схемы синтеза, показанной на фиг. 1.

В других вариантах осуществления соответствующим образом замещенные цистеин, цистамин и альдегид могут быть подвергнуты взаимодействию в схемах синтеза фиг. 1 для получения искомого соединения. Альдегид может представлять собой, например, любой замещенный арил-СНО или гетероарил-СНО, пировиноградный альдегид, цитраль, цитронеллаль, салициловый альдегид, бензальдегид, глутаровый альдегид или р-метоксилбензальдегид. В одном воплощении (Ь)-изомер цистеина или замещенного цистеина (или его теллуровый или кислородный аналог) используется в качестве исходного реагента для получения энантиомера соединения формулы (I), имеющего специфическую стереохимию на атоме углерода, к которому прикреплена группа R₂ или группа карбоновой кислоты. Примерные реактивы включают (Ь)-пеницилламин, (Ь)-цистеин и цистамин.

Согласно одному аспекту настоящего изобретения предлагаются новые соединения, представленные общей формулой (I), их рацематы, их фармацевтически приемлемые соли и содержащие их фармацевтические композиции или их смесь.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения новых органических соединений общей формулы (I), их рацематов, их фармацевтически приемлемых солей и содержащих их фармацевтических композиций.

Еще один аспект настоящего изобретения заключается в предоставлении новых промежуточных соединений, способа их получения и их применение в способах получения соединений общей формулы (I).

В одном воплощении настоящее изобретение относится к стереомерным соединениям общей формулы I, их сложным эфирам, рацематам, их фармацевтически приемлемым солям, где R независимо выбирается из необязательно замещенного арила, гетероарила, параметоксифенила, метилкарбонила, 2,6диметил-1,5-гептадиенила, 2,6-диметил-5-гептенила, 2-гидроксифенила, фенила и 3-альдегидпропила; R₂ независимо выбран из группы, состоящей из СООН; и этерифицированной глюкозы или глюкуроновой кислоты; R₃ и R₄ независимо выбраны из метила или низшего алкила; a S независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенной серы, селена теллура или кислорода. В некоторых случаях, когда салицилальдегид (SA) или бензальдегид (ВА) используется для получения примерных соединений формулы IV по данному изобретению, также может быть получен синергический обезболивающий эффект при лечении объектов при введении соединений в соответствии со способами, описанными в данном документе. В некоторых воплощениях примерные соединения формул I-V могут быть также синтезированы с использованием типовых исходных соединений, таких как, например, (Ь)-пеницилламин, (L)цистеин и цистамин.

- 4 030611

В одном аспекте в данном изобретении предлагается способ лечения, включающий введение объекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей GGCI.

В одном воплощении объект имеет злокачественную опухоль солидного типа. В другом аспекте солидная опухоль включает саркомы, карциномы или лимфомы. В другом воплощении злокачественное новообразование выбрано из группы, состоящей из рака: легких, молочной железы, предстательной железы, поджелудочной железы, яичников, мочевого пузыря, головы и шеи, щитовидной железы, головного мозга, печени, желчного пузыря, толстой кишки, кожи и почки. В одном воплощении солидная опухоль представляет собой слабо реоксигенированную опухоль.

В одном из аспектов каждая доза GGCI составляет от около 1 нг/кг и менее до около 10 г/кг, и указанная доза вводится доставкой, выбранной из группы, состоящей из внутрибрюшинного, внутрикожного, внутримышечного, внутримышечного, внутривенного, парентерального, интраназального, внутричерепного, местного, подкожного, перорального и эпидурального путей.

Изобретения, описанные и заявленные в данном документе, имеют много атрибутов и воплощений, включая те, которые, без ограничения перечисленным, изложены или описаны или на которые дана ссылка в данном кратком описании. Оно не предназначено для того, чтобы быть всеобъемлющим и изобретения, описанные и заявленные в данном документе, не ограничены данным кратким описанием, или признаками или воплощениями, идентифицированными в нем, которое включено только для иллюстрации и не является ограничением. Дополнительные воплощения могут быть представлены в подробном описании ниже.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 изображены репрезентативные схемы синтеза для изготовления типовых аналогов GGCI/5 -оксопролина.

Фиг. 2 представляет собой диаграмму, показывающую GGC-биохимический путь.

Фиг. ЗА и 3В являются сравнительными изображениями размеров опухолей между контрольной группой голых мышей с привитой злокачественной меланомой человека и группой, обработанной GGCI.

Фиг. 4А и 4В являются сравнительными изображениями размеров опухолей между контрольной группой голых мышей с привитым злокачественным раком легкого человека и группой, обработанной GGCI.

Осуществление изобретения

Таким образом, настоящее изобретение, в целом, относится к новым ингибиторам гаммаглутамилового цикла. Раскрытие основано на более высокой активности фермента гаммаглутамилтранспептидазы в злокачественных опухолевых клетках и значимо повышенной скорости деления злокачественных опухолевых клеток по сравнению с клетками незлокачественного происхождения. Ингибирование GGC, например, путем блокирования и/или интерференции с одним или несколькими ферментами GGC, может привести к подавлению роста злокачественных опухолевых клеток и уменьшению числа злокачественных опухолевых клеток. Ингибирование GGC может быть достигнуто путем представления "ложного метаболита", конкурентного ингибитора фермента в гамма-глутамиловом цикле, который предпочтительно оказывает воздействие на быстро делящиеся клетки, такие как злокачественные опухолевые клетки. Действуя таким образом, GGCI данного описания может оказывать более пагубное воздействие на злокачественные опухолевые клетки, чем на незлокачественные клетки.

В одном аспекте данное изобретение относится к синтезу новых ингибиторов данного описания, которые конкурируют с 5-оксопролином за связывания 5-оксопролиназой, тем самым снижая и/или ингибируя биосинтез других ферментов в гамма-глутамиловом цикле через истощение субстрата. Это блокирует GGC-опосредованный транспорт аминокислот в клетку и препятствует делению клеток. Кроме того, GGCI настоящего изобретения дополнительно мешают GGC-синтезу глутатиона. Поскольку злокачественные опухолевые клетки нуждаются в существенно большем количестве аминокислот для поддержки намного более быстрого деления, чем незлокачественные клетки, GGCI настоящего изобретения будут преимущественно повреждать злокачественные опухолевые клетки.

Определения.

Термин "алкил" включает насыщенные алифатические группы, в том числе алкильные группы с прямой цепью (например, метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, гептил, октил, нонил, децил и т.п.), разветвленные алкильные группы (изопропил, трет-бутил, изобутил и т.д.), циклоалкильные группы (алициклические) (циклопропил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил), алкилзамещенные циклоалкильные группы и циклоалкильные алкильные группы. Термин "алкил" дополнительно включает алкильные группы, которые содержат кислород, азот, серу, фосфор или атомы, замещающие один или несколько атомов углерода в углеводородной цепи. Термин "ароматический алкил" включает алкильные группы, замещенные одной или несколькими арильными группами. Термин "низший алкил", используемый в данном документе, относится к алкилам с 3 или менее атомами углерода.

Термин "арил" включает группы с ароматичностью, в том числе 5- и 6-членные однокольцевые ароматические группы, которые могут включать от нуля до четырех гетероатомов, а также полициклические системы по меньшей мере с одним ароматическим кольцом. Примеры арильных групп включают бензол, фенил, пиррол, фуран, тиофен, тиазол, изотиазол, имидазол, триазол, тетразол, пиразол, оксазол,

- 5 030611

пиридин изооксазол, пиразин, пиридазин, пиримидин и тому подобное. Кроме того, термин "арил" включает полициклические арильные группы, например трициклические, бициклические, например нафталин, бензоксазол, бензодиоксазол, бензотиазол, бензимицазол, бензотиофен, метилендиоксифенил, хинолин, изохинолин, наптридин, индол, бензофуран, пурин, бензофуран, деазапурин или индолизин. Эти арильные группы с гетероатомами в кольце структуры могут также называться "арильными гетероциклами", "гетероциклами", "гетероарилами" или "гетероароматикой". Ароматическое кольцо может быть замещено в одном или нескольких положениях кольца такими заместителями, описанными выше, как, например, галоген, гидроксил, алкокси, алкилкарбонил, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, алкиламинокарбонил, аралкиламинокарбонил, алкениламинокарбонил, алкилкарбонил, арилкарбонил, аралкилкарбонил, алкенилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкилтиокарбонил, фосфат, фосфонато, фосфинато, циано, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкипариламино), ациламино (в том числе алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматическая или гетероароматическая группа. Арильные группы также могут быть слиты или объединены мостиком с алициклическим или гетероциклическим кольцом, которое не является ароматическим, с тем, чтобы сформировать полициклическую систему (например, тетралин, метилендиоксифенил).

Термин "алкилен" относится к насыщенной алифатической двухвалентной группе и включает в себя группы как с прямой цепью, так и с разветвленной.

Термин "алкенилен" относится к двухвалентным алифатическим группам, имеющим двойную связь, и включает в себя группы как с прямой цепью, так и с разветвленной.

При использовании в данном описании "объект" относится к животному, которое является объектом лечения, наблюдения или эксперимента. "Животное" включает холоднокровных и теплокровных позвоночных и беспозвоночных, таких как рыбы, моллюски, рептилии и, в частности, млекопитающие. "Млекопитающее" включает, без ограничения перечисленным, мышей, крыс, кроликов, морских свинок, собак, кошек, овец, коз, коров, лошадей, приматов, таких как обезьяны, шимпанзе, человекообразные обезьяны, и людей пренатального, детского и взрослого периода жизни.

В настоящем описании "предотвращение" или "защита" означает предотвращение полное или частичное, или ослабление, или контроль.

При использовании в данном описании термин "лечение" относится как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или превентивным мерам или введению агента с предположительным терапевтическим потенциалом. Этот термин включает превентивное (например, профилактическое) и паллиативное лечение.

Термин "фармацевтически эффективное количество" при использовании в данном документе означает количество активного соединения или фармацевтического агента, которое вызывает биологический или лечебный ответ в искомых тканях, системе, животном или человеке, который включает облегчение или временное облегчение симптомов заболевания, подвергаемого лечению, и/или количество, достаточное для обеспечения полезности и желаемого терапевтического предельного значения. В случае рака терапевтически эффективное количество лекарственного средства может уменьшить количество злокачественных опухолевых клеток; уменьшать размер опухоли; ингибировать инфильтрацию злокачественных опухолевых клеток в периферические органы (т.е. замедлять до некоторой степени и предпочтительно останавливать), ингибировать (т.е. замедлять до некоторой степени и предпочтительно останавливать) метастазирование опухоли; ингибировать до некоторой степени рост опухоли и/или облегчать в некоторой степени один или несколько симптомов, связанных с раком. В той степени, в которой лекарственное средство может предотвращать рост и/или убивать существующие злокачественные опухолевые клетки, оно может являться цитостатическим и/или цитотоксическим. Для терапии злокачественных новообразований эффективность можно измерить, например, оценивая время до прогресса заболевания и/или определяя скорость ответа.

Термин "фармацевтически приемлемый" при использовании в данном документе означает, что вещество или композиция должны быть совместимы химически и/или токсикологически с другими ингредиентами состава, и/или млекопитающим, подлежащим лечению данным составом.

Термин "злокачественное новообразование" относится или описывает физиологическое состояние у млекопитающих, которое обычно характеризуется неконтролируемым ростом клеток и/или гиперпролиферативной деятельностью. А "опухоль" включает одну или несколько злокачествленных клеток. Примеры злокачественного новообразования включают, в частности, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз или лимфоидные злокачественные опухоли. Более конкретные примеры таких злокачественных опухолевых заболеваний включают плоскоклеточный рак (например, эпителиальный плоскоклеточный рак), рак легкого, включая мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого ("NSCLC"), аденокарциному легкого и плоскоклеточный рак легкого, рак брюшной полости, гепатоцеллюлярный рак, рак желудка, включая желудочно-кишечный рак, рак поджелудочной железы, глиобластомы, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатомы, рак молочной железы, рак тол- 6 030611

стой кишки, рак прямой кишки, эндометрия или матки, карциному слюнной железы, рак почек или ренальный рак, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному печени, анальную карциному, карциному полового члена, а также рак головы и шеи.

"Химиотерапевтическое средство" представляет собой химическое соединение, используемое для лечения злокачественного новообразования, независимо от механизма действия. Классы химиотерапевтических средств включают, без ограничения перечисленным: алкилирующие агенты, антиметаболиты, растительные алкалоиды-веретенные яды, цитотоксические/противоопухолевые антибиотики, ингибиторы топоизомеразы, антитела, фотосенсибилизаторы и ингибиторы киназ. Химиотерапевтические агенты включают соединения, используемые в "таргетной терапии" и в традиционной химиотерапии. Примеры химиотерапевтических агентов включают эрлотиниб (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), доцетаксел (Таксотер, Sanofi-Aventis), 5-FU (фторурацил, 5-фторурацил, CAS № 51-21-8), гемцитабин (GEMZAR®, Lilly), PD-0325901 (CAS № 391210-10-9, Pfizer), цисплатин (цис-диамин, дихлорплатин (II) CAS № 15663-27-1), карбоплатин (CAS № 41575-94-4), паклитаксел (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Принстон, Нью-Джерси), пеметрексед (ALIMTA®, Eli Lilly), трастузумаб (HERCEPTIN®, Genentech), темозоломид (4-метил-5-оксо-2,3,4,6,8-пентазабицикло[4.3.0]нона-2,7,9-триен-9-карбоксамид, КАС № 85622-93-1, TEMODAR®, TEMODAL®, Schering Plough), тамоксифен (^)-2-[4-(1,2-дифенилбут-1-енил) фенокси]-Ы^-диметилэтанамин, Nolvadex®, ISTUBAL®, VALODEX®) и доксорубицин (ADRIAMYCIN®), Akti-1/2, HPPD и рапамицин.

Дополнительные примеры химиотерапевтических агентов включают оксалиплатин (Eloxatin®, Sanofi), бортезомиб (VELCADE® Millennium Pharm.), сутент (SUNITINIB®, SU11248, Pfizer), летрозол (FEMARA®, Novartis), мезилат иматиниб (GLEEVEC®, Novartis), XL-518 (ингибитор Mek Exelixis, WO 2007/044515), Arry-886 (ингибитор Mek, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), Sf-1126 (ингибитор PI3K, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (ингибитор PI3K, Novartis), XL-147 (ингибитор PI3K, Exelixis), PTK787/3K 222584 (Novartis), фулвестрант (Faslodex®, AstraZeneca), лейковорин (фолиевая кислота), рапамицин (сиролимус, RAPAMUNE®, Wyeth), лапатиниб (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), лонафарниб (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), сорафениб (Nexavar®, BAY43-9006, Bayer Labs), гефитиниб (IRESSA®, AstraZeneca), иринотекан (CAMPTOSAR®, КПП-11, Pfizer), типифарниб (ZARNESTRA ™, Johnson & Johnson), ABRAXANE™ (без Кремофора), составы паклитаксела с наночастицами с альбумином (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, II)), вандетаниб (RINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), хлоранмбуцил, AG1478, AG1571 (СУ 5271; Sugen), темсиролимус (TORISEL®, Wyeth), пазопаниб (GlaxoSmithKline), канфостаниб (TELCYTA®, Telik), тиотепа и циклофосфамид (CYTOXAN®, NEOSAR®); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметиломеламин; ацетогенины (особенно буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; включающей каллистатин; СС-1065 (включая его адозелезин, карзелезин и бизелезин синтетические аналоги); криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (в том числе синтетических аналогов, KW-2189 и СВ1-ТМ1); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктиин; спонгистатин; азотистые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, гидрохлорид оксида мехлорэтамина, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимнустин; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеамицин, калихеамицин гамма II, калихеамицин омега I1 (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); динемицин, динемицин А; бисфосфонаты, таких как клодронат; эсперамицином; а также неокарциностатиновый хромофор и родственные антибиотики-хромофоры хромопротеина энедиина), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, каминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицином, даунорубицин, деторубицин, 6диазо-5-оксо-Ъ-норлейцин, морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролинодоксорубицин и дезоксидоксорубицин), опирубицин, эзорубицин, идарубицин, неморубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофенолокислоту, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидина, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидеоксирубицин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолона пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадренергические вещества, такие как аминоглютетимид, митоган, трилостан; компенсатор фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамид гликозид; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бизантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазикон; элформитин; эллиптиниум ацетат; эпотилон; этоглюцид; нитрат галлия; гидро- 7 030611

ксимочевину; лентинан; лонидайнин; майтансиноиды, такие как майтансин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраэрин; гентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновую кислоту; 2-этилгидразид; прокарбазин; полисахарид комплекс PSK® (JHS Natural Products, Юджин, Орегон), разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманиум; тенуазоновую кислоту; триазиквон; 2,2',2"-трихлортриэтиламин; трихотецены (в частности, Т-2 токсин, верракурин А, роридин А и ангуидин); URETHAN; виндезин; дакарбазин; манномустин; мигобронитол; митолактол; пипоброман, гацитозин; арабинозид ("Ara-С"); циклофосфамид; тиотепа; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; платины аналоги, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; винорелбин (NAVELBINE®); новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; капецитабин (XELODA®, Roche); ибандронат; СРТ-11; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; и их фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любого из указанных выше.

Кроме того, в определение "химиотерапевтический агент" включены: (i) антигормональные средства, которые регулируют или ингибируют действие гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы рецепторов эстрогена (SERMs), в том числе, например, тамоксифен (включая NOLVADEX®; тамоксифен цитрат), ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и FARESTON® (toremifine цитрат); (ii) ингибиторы аромагазы, которые ингибируют фермент ароматазы, который регулирует выработку эстрогена в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, MEGASE® (мегестролацетат), AROMASIN® (эксеместан; Pfizer), форместан, фадрозол, RIVISOR® (ворозол), FEMARA® (летрозол; Novartis), a ARIMIDEX® (анастрозол; AstraZeneca), (iii) антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и тозерелин; а также троксацитабин (1,3-диоксолан нуклеозид цитозин аналогового); (iv) ингибиторы протеинкиназы, такие как ингибиторы МЕК из WO 2007/044515; (v) ингибиторы липидкиназы; (vi) антисмысловые олигонуклеотиды, в частности, те, которые ингибируют экспрессию генов в сигнальных путях, вовлеченных в пролиферацию аберрантных клеток, например РКС-альфа, Raf и H-Ras, например облимерсен (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) рибозимы, такие как ингибиторы экспрессии VEGF (например, ANGIOZYME®) и ингибиторы экспрессии HER2; (viii) вакцины, такие как вакцины генной терапии, например ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® и VAXID®; Proleukin® RIL-2; ингибиторы топоизомеразы 1, такие как LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) антиангиогенные агенты, такие как бевацизумаб (Avastin®, Genentech); и фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любого из указанных выше.

Кроме того, в определение "химиотерапевтического агента" включены терапевтические антитела, такие как алемтузумабом (Campath), бевацизумаб (Avastin®, Genentech); цетуксимаб (ERBITUX®, Imclone); панитумумаб (VECTIBIX®, Amgen), ритуксимаб (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idee), пертузумаб (OMNITARG™, 2C4, Genentech), трастузумаб (HERCEPTIN®, Genentech), тозитумомаб (BEXXAR, Corixia), и конъюгат лекарственного соединения с антителом, гемтузумаб озогамицин (Mylotarg®, Wyeth).

Гуманизированные моноклональные антитела с терапевтическим потенциалом в качестве химиотерапевтических агентов в комбинации с ингибиторами гамма-глутамилового цикла по изобретению включают алемтузумаб, аполизумаб, аселизумаб, атлизумаб, бапинеузумаб, бевацизумаб, биватузумаб мертансин, кантузумаб мертансин, цеделизумаб, цертолизумаб пегол, цидфуситузумаб, цидтузумаб, даклизумаб, экулизумаб, эфализумаб, эпратузумаб, ерлизумаб, фелвизумаб, фонтолизумаб, гемтузумаб озогамицин, инотузумаб озогамицин, ипилимумаб, лабетузумаб, линтузумаб, матузумаб, меполизумаб, мотавизумаб, мотовизумаб, натализумаб, нимотузумаб, ноловизумаб, нумавизумаб, окрелизумаб, омализумаб, паливизумаб. пасколизумаб, пекфуситузумаб, пектузумаб, пертузумаб, пекселизумаб, раливизумаб, ранибизумаб, ресливизумаб, реслизумаб, ресивизумаб, ровелизумаб, руплизумаб, сибротузумаб, сиплизумаб, сонтузумаб, такатузумаб тетраксетан, тадоцизумаб, тализумаб, тефибазумаб, тоцилизумаб, торализумаб, трастузумаб, тукотузумаб целмолейкин, тукуситузумаб, умавизумаб, уртоксазумаб и висилизумаб.

"Метаболит" представляет собой продукт, полученный путем метаболизма в организме указанного соединения или его соли. Соединения-метаболиты могут быть идентифицированы с использованием рутинных способов, известных в данной области, и их деятельность определяется с помощью тестов, подобных тем, что описаны в данном документе. Такие продукты могут привести, к примеру, к окислению, восстановлению, гидролизу, амидированию, дезаминированию, этерификации, деэтерификацию, ферментативному расщеплению и т.п. вводимого соединения. Соответственно изобретение включает метаболиты соединений по изобретению, включая соединения, полученные по способу, включающему контакт соединения данного изобретения с млекопитающим в течение периода времени, достаточного для получения его метаболического продукта.

Термин "вкладыш в упаковку" используется для обозначения инструкций, обычно включаемых в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, использовании, дозировке, введении, противопоказаниях и/или предупреждениях, касающихся использо- 8 030611

вания таких терапевтических продуктов.

Термин "хиральный" относится к молекулам, которые обладают свойством неналожимости в отношении зеркального партнера, тогда как термин "ахиральный" относится к молекулам, которые совмещаются с их зеркальным партнером.

Термин "стереоизомеры" относится к соединениям, которые имеют одинаковый химический состав, но отличаются по расположению атомов или групп в пространстве.

"Диастереомер" относится к стереоизомеру с двумя или несколькими хиральными центрами, молекулы которых не являются зеркальным отображением друг друга. Диастереомеры обладают различными физическими свойствами, например температурами плавления, температурами кипения, спектральными свойствами и реакционными способностями. Смеси диастереомеров можно разделить с помощью аналитических процедур высокого разрешения, например электрофорезом и хроматографией.

"Энантиомеры" относятся к двум стереоизомерным соединениям, которые не являются неналожимыми зеркальными отражениями друг друга.

Стереохимические определения и соглашения, используемые в настоящем документе, как правило, следуют S.P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York and Eliel E. and Wilen S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Соединения по настоящему изобретению могут содержать асимметричные или хиральные центры и, следовательно, существуют в различных стереоизомерных формах. Предполагается, что соединения по данному изобретению имеют Щ-конформацию по углероду, примыкающему к группе R₂ в соединениях формулы I и II, и атому углерода, смежному с СООН в формуле III.

Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, т.е. они обладают способностью вращать плоскость плоскополяризованного света. При описании оптически активного соединения префиксы D и L или R и S используются для обозначения абсолютной конфигурации молекулы относительно ее хирального центра(ов). Для аминокислот и их производных D и L номенклатура традиционно используется для обозначения конформации в хиральном углероде, примыкающем к карбоксильной группе. Префиксы D и L или (+) и (-) могут быть использованы для обозначения знака вращения плоскости поляризованного света соединением, причем (-) или L означает, что соединение является левовращающим. Соединение с префиксом (+) или D является правовращающим. Для данной химической структуры эти стереоизомеры являются идентичными, за исключением того, что они являются зеркальными отражениями друг друга. Конкретный стереоизомер может также называться энантиомером, а смесь таких изомеров часто называют энантиомерной смесью. Смесь энантиомеров 50:50 называют рацемической смесью или рацематом, которая может иметь место, когда не проводилась какая-либо стереоселекция или стереоспецифичность в химической реакции или процессе. Термины "рацемическая смесь" и "рацемат" относятся к эквимолярной смеси двух энантиомерных видов, лишенной оптической активности.

Выражение "фармацевтически приемлемая соль", используемое в данном документе, относится к фармацевтически приемлемой органической, неорганической соли соединения по настоящему изобретению. Примеры соли включают, без ограничения перечисленным, сульфат, цитрат, ацетат, оксалат, хлорид, бромид, иодид, нитрат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, лактат, салицилат, кислый цитрат, тартрат, олеат, таннат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкуронат, сахарат, формиат, бензоат, глутамат, метансульфонат "мезилат", этансульфонат, бензолсульфонат, р-толуолсульфонат и памоат (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоат)). Фармацевтически приемлемая соль может подразумевать включение другой молекулы, такой как ацетат-ион, сукцинат-ион или другой противоион. Противоион может быть любой органической или неорганической группой, которая стабилизирует заряд на исходном соединении. Кроме того, фармацевтически приемлемая соль может иметь более одного заряженного атома в своей структуре. В случаях, когда частью фармацевтически приемлемой соли являются несколько заряженных атомов, могут присутствовать несколько противоионов. Следовательно, фармацевтически приемлемая соль может иметь один или несколько заряженных атомов и/или один или несколько противоионов.

Если соединение по изобретению представляет собой основание, искомая фармацевтически приемлемая соль может быть получена любым подходящим способом, доступным в данной области, например обработкой свободного основания неорганической кислотой, такой как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, метансульфоновая кислота, фосфорная кислота и т.п., или органической кислотой, такой как уксусная кислота, трифторуксусная кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, миндальная кислота, фумаровая кислота, малоновая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, гликолевая кислота, салициловая кислота, пиранозидиловая кислота, такой как глюкуроновая кислота или галактуроновая кислота, альфа-оксикислота, такая как лимонная кислота или винная кислота, аминокислота, такая как аспарагиновая кислота или глутаминовая кислота, ароматическая кислота, такая как бензойная кислота или коричная кислота, сульфоновая кислота, такая как ртолуолсульфоновая кислота или этансульфоновая кислота, или тому подобное.

Если соединение по изобретению представляет собой кислоту, искомая фармацевтически приемлемая соль может быть получена любым подходящим способом, например обработкой свободной кислоты

- 9 030611

неорганическим или органическим основанием, таким как амин (первичный, вторичный или третичный), гидроксид щелочного металла или гидроксид щелочно-земельного металла, или тому подобное. Иллюстративные примеры подходящих солей включают, без ограничения перечисленным, органические соли, полученные из аминокислот, таких как глицин и аргинин, аммиака, первичных, вторичных и третичных аминов, а также циклических аминов, таких как пиперидин, морфолин и пиперазин, и неорганические соли, полученные из натрия, кальция, калия, магния, марганца, железа, меди, цинка, алюминия и лития.

"Сольват" относится к ассоциации или комплексу одной или нескольких молекул растворителя и соединения по настоящему изобретению. Примеры растворителей, которые образуют сольваты, включают, без ограничения перечисленным, воду, изопропанол, этанол, метанол, ДМСО, этилацетат, уксусную кислоту и этаноламин.

Введение соединений формулы I.

Соединения формулы I по настоящему изобретению могут быть введены любым путем, соответствующим состоянию, подлежащему лечению. Подходящие способы включают внутрибрюшинный (ВБ), пероральный, парентеральный (в том числе подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутриартериальный, внутрикожный, интратекальный и эпидуральный), трансдермальный, ректальный, назальный, местный (в том числе трансбуккальный и подъязычный), вагинальный, интраназальный и внутрилегочный. Для местного иммуносупрессивного лечения соединения могут быть введены в очаг поражения, в том числе перфузией или в ином случае контактом трансплантата с ингибитором перед трансплантацией. Следует понимать, что предпочтительный путь может меняться в зависимости, например, от состояния реципиента. Когда соединение вводят перорально, оно может быть приготовлено в виде таблеток, капсул, таблеток и т.д., вместе с фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем. Когда соединение вводят парентерально, оно может быть приготовлено с фармацевтически приемлемым парентеральным носителем и в виде единичной дозированной инъецируемой формы, как подробно описано ниже.

Доза для лечения пациентов человека может варьировать от около 10 до около 1000 мг соединения формулы I. Доза может составлять от около 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000 мг соединения формулы I или любой дозы в диапазоне между любыми двумя из этих доз. В некоторых случаях, например, когда L-цистеин или цистамин или другие соединения, пригодные для использования в качестве пищевых добавок, используются для получения соединений формулы I настоящего изобретения, дозы могут также составлять от около 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 8500, 9000, 9500 или около 10000 мг, или любой дозы в диапазоне между любыми двумя из этих доз, например от около 100 до около 10000 мг. Типичная доза соединения может составлять от около 100 до около 600 мг три раза в день. Доза может вводиться один раз в день (QID), два раза в день (BID) или чаще в зависимости от фармакокинетических и фармакодинамических свойств, в том числе поглощения, распределения, метаболизма и экскреции конкретного соединения. Кроме того, на дозировку и режим введения могут повлиять факторы токсичности. Типичная доза при пероральном введении, пилюля, капсула или таблетка может быть проглочена раз в день или реже в течение определенного периода времени. Схема может быть повторена для некоторого числа циклов терапии.

Способы лечения соединением формулы I.

Соединения формулы I по настоящему изобретению являются полезными при лечении гиперпролиферативных заболеваний, состояний и/или расстройств, в том числе без ограничения перечисленным, злокачественных новообразований. Соответственно аспект данного изобретения включает в себя способы лечения или предупреждения заболеваний или состояний, которые можно лечить или предупреждать путем ингибирования GGC. В одном воплощении способ включает введение объекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I, или его стереоизомера, энантиомера, геометрического изомера, таутомера, или его фармацевтически приемлемой соли. В одном воплощении пациента-человека подвергают лечению соединением формулы I и фармацевтически приемлемого носителя, адъюванта или наполнителя, отличающихся тем, что соединение формулы I присутствует в количестве для детектируемого ингибирования активности GGC.

Злокачественные новообразования, которые можно лечить в соответствии со способами настоящего изобретения, включают, без ограничения перечисленным, рак молочной железы, яичника, шейки матки, простаты, семенников, мочеполового тракта, пищевода, гортани, глиобластому, нейробластому желудка, кожи, кератоакантому легких, плоскоклеточный рак, крупноклеточный рак, немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), мелкоклеточный рак, аденокарциному легкого, кости, толстой кишки, аденому поджелудочной железы, аденокарциному щитовидной железы, фолликулярную карциному, недифференцированную карциному, папиллярную карциному, семиному, меланому, саркому, рак мочевого пузыря, рак печени и желчных проток, карциному почек, миелоидные расстройства, лимфоидные расстройства волосатых клеток, ротовой полости и глотки (внутриротовой), губ, языка, рта, глотки, тонкого кишечника, ободочной кишки-прямой кишки, толстого кишечника, прямой кишки, головного мозга и центральной нервной системы, болезнь Ходжкина и лейкоз.

- 10 030611

Соединения формулы I могут быть полезны для in vitro, in situ, и in vivo диагностики или лечения клеток млекопитающих, организмов или связанных патологических состояний, таких как гиперпролиферативные заболевания и/или рак.

Соединения формулы I могут быть использованы для лечения состояний мозга и центральной нервной системы, которые требуют транспорта через гематоэнцефалический барьер. Отдельные соединения формулы I обладают благоприятными проникающими свойствами для доставки в мозг. Нарушения головного мозга, которые можно эффективно лечить соединениями формулы I, включают метастатические и первичные опухоли головного мозга, такие как глиобластома и меланома.

Соединения формулы I могут быть полезны для лечения рака глаза локализованной доставкой в глаз. Отдельные соединения формулы I имеют благоприятные свойства для доставки и поглощения глазом. Некоторые соединения формулы I могут повысить эффективность и расширить продолжительность ответа на лечение мокрого AMD в сочетании с ранибизумабом (LUCENTIS®, компания Genentech, Inc.) и бевацизумабом (Avastin®, Genentech, Inc.).

Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению по настоящему изобретению для использования при лечении заболеваний или состояний, описанных в данном документе, у объекта, например у человека, страдающего таким заболеванием или состоянием. Также предлагается применение соединения данного изобретения при приготовлении лекарственного средства для лечения заболеваний и состояний, описанных в данном документе для теплокровного животного, такого как млекопитающее, например человек, страдающего от такого расстройства.

Фармацевтический состав/композиции и применения.

Для того чтобы использовать соединение формулы I для терапевтического лечения (в том числе профилактического лечения) млекопитающих, включая человека, его, как правило, включали в состав в соответствии со стандартной фармацевтической практикой в виде фармацевтической композиции. В соответствии с этим аспектом настоящего изобретения предлагается фармацевтический состав, содержащий соединение по настоящему изобретению в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

Типичный состав готовят путем смешивания соединения формулы I и носителя, разбавителя или наполнителя. Подходящие носители, разбавители и наполнители хорошо известны специалистам в данной области техники и включают такие материалы, как углеводы, воски, растворимые в воде и/или набухающие в воде полимеры, гидрофильные или гидрофобные материалы, желатин, масла, растворители, воду и тому подобное. Конкретный используемый носитель, разбавитель или наполнитель будет зависеть от средств и цели, для которой применяется соединение по настоящему изобретению. Растворители обычно выбирают на основании растворителей, признанных специалистам в данной области как безопасные (GRAS) для введения млекопитающему. В общем, безопасные растворители нетоксичные водные растворители, такие как вода и другие нетоксичные растворители, которые растворимы или смешиваются с водой. Подходящие водные растворители включают воду, этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоли (например, ПЭГ 400, ПЭГ 300) и т.д. и их смеси. Композиции могут также включать в себя один или несколько буферов, стабилизирующих агентов, поверхностно-активные вещества, смачивающие агенты, смазывающие агенты, эмульгаторы, суспендирующие агенты, консерванты, антиоксиданты, кроющие агенты, скользящие вещества для улучшения технологических свойств, красители, подсластители, отдушки, ароматизаторы и другие известные добавки для обеспечения превосходной презентации лекарственного средства (т.е соединения по настоящему изобретению или его фармацевтической композиции) или помощи в производстве фармацевтического продукта (т.е. лекарственного средства).

Композиции могут быть получены с использованием традиционных процедур растворения и смешивания. Например, нефасованное вещество лекарственного средства (т.е. соединение по настоящему изобретению или стабилизированная форма соединения формулы I (например, комплекс с производным циклодекстрина или другим известным комплексообразующим агентом) растворяют в подходящем растворителе в присутствии одного или нескольких наполнителей, описанных выше. Соединение по настоящему изобретению, как правило, составляют в виде фармацевтических лекарственных форм для получения легко контролируемой дозы лекарственного средства и для того, чтобы добиться соблюдение пациентом предписанного режима.

Фармацевтическая композиция (или состав) для применения может быть упакована множеством различных способов в зависимости от способа, используемого для введения лекарственного средства. Как правило, препарат для распределения включает в себя контейнер, в котором хранится фармацевтический состав в соответствующей форме. Подходящие контейнеры хорошо известны специалистам в данной области техники и включают такие материалы, как бутыли (пластиковые и стеклянные), саше, ампулы, пластиковые мешки, металлические цилиндры и тому подобное. Контейнер может также включать в себя защищенную от неумелого обращения сборку для предотвращения неосторожного доступа к содержимому упаковки. Кроме того, на контейнер наносится этикетка, описывающая содержимое контейнера. Этикетка может также содержать соответствующие предупреждения.

Фармацевтические препараты соединений по настоящему изобретению могут быть получены для

- 11 030611

различных путей и типов введения. Например, соединение формулы I, имеющее требуемую степень чистоты, необязательно может быть смешано с фармацевтически приемлемыми разбавителями, носителями, наполнителями или стабилизаторами (Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) 16th edition, Osol, A. Ed.) в виде лиофилизированного препарата, измельченного порошка или водного раствора. Состав может быть получен путем смешивания при комнатной температуре и соответствующем рН и с искомой степенью чистоты с физиологически приемлемыми носителями, т.е. носителями, которые являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозах и концентрациях. Значение рН композиции зависит, главным образом, от конкретного применения и концентрации соединения, но может находиться в диапазоне от около 3 до около 8. Состав в ацетатном буфере при рН 5 представляет собой подходящее воплощение.

Соединение по настоящему изобретению для применения в настоящем изобретении предпочтительно является стерильным. В частности, составы, которые будут использоваться для in vivo введения, должны быть стерильными. Такая стерилизация легко осуществляется путем фильтрации через стерильные фильтрующие мембраны.

Соединение обычно можно хранить в виде твердой композиции, лиофилизованного состава или в виде водного раствора (например, в физиологическом растворе).

Фармацевтические композиции изобретения, содержащие соединение формулы I, будут составлены, дозированы и введены согласно добросовестной медицинской практике, которой соответствуют количества, концентрации, графики, курс, носители и способ введения. Факторы, подлежащие рассмотрению в данном контексте, включают конкретное заболевание, подвергаемое лечению, конкретное млекопитающее, подлежащее лечению, клиническое состояние отдельного пациента, причину расстройства, место доставки агента, способ введения, схему введения и другие факторы, известные практикующим врачам. В дополнение к соединениям и солевым формам, представленным в данном документе, изобретение включает фармацевтические композиции, в том числе таблетки, капсулы, растворы и суспензии для парентеральных и пероральных форм доставки и составов, содержащих фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективные количества одного или нескольких из GGCI-соединений, представленных в данном документе. GGCI-фармацевтические композиции могут включать соли и гидраты.

При терапии человека и животных для лечения злокачественного новообразования, например при лечении злокачественного новообразования и других связанных расстройств, заболеваний и состояний, отмеченных в данном описании, соединения и их кристаллические формы, описанные и представленные в данном описании, их фармацевтически приемлемые соли и фармацевтически приемлемые сольваты любого из них могут быть введены отдельно, но обычно их будут вводить в смеси с фармацевтическим носителем, выбранным с учетом предполагаемого пути введения и стандартной фармацевтической практикой. Предпочтительно их вводят перорально в форме таблеток, содержащих фармацевтически приемлемые наполнители, такие как крахмал или лактоза, или в капсулах, или шариках отдельно или в смеси с наполнителями, или в виде эликсиров, растворов или суспензий, содержащих ароматизаторы или красители. Они также могут быть введены парентерально, например внутривенно, внутримышечно или подкожно. Для парентерального введения их лучше всего использовать в форме стерильного водного раствора, который может содержать другие вещества, например достаточное количество солей или моносахаридов, для получения раствора, изотонического с кровью. Для трансбуккального или сублингвального введения они могут быть введены в форме таблеток или пастилок, которые могут быть приготовлены обычным образом.

В качестве общего предложения начальное фармацевтически эффективное количество соединения формулы I, введенного парентерально на дозу, будет находиться в диапазоне около 0,01-100 мг/кг, 0,011,0 мг/кг, от 1,0 до 10,0 мг/кг или от 10,0 до 100,0 мг/кг. Количество соединения формулы I парентерально на дозу может также составлять от около 0,1 до 20 мг/кг массы тела пациента в день с типичным исходным диапазоном используемого исходного соединения от 0,3 до 15 мг/кг/день.

Приемлемые разбавители, носители, наполнители и стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозах и концентрациях и включают физиологический раствор и/или буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, хлорид бензетония; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и m-крезол); низшие (менее чем приблизительно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин, лизин; или моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; образующие соль противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, Zn-белковые комплексы); и/или неионные ПАВ, такие как TWEEN, PLURONICS или полиэтиленгликоль (ПЭГ). Активные фармацевтические ингредиенты могут быть также заключены в микрокапсулы, полученные, например, способами коацервации или межфазной полимеризации, например гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и поли (метилметакри- 12 030611

латные) микрокапсулы соответственно, в коллоидных системах доставки лекарственных средств (например, липосом, альбуминовых микросфер, микроэмульсий, наночастиц и нанокапсул) или в макроэмульсиях. Такие способы описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).

Могут быть получены препараты соединения формулы I с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащих соединение формулы I, где матрицы находятся в виде формованных препаратов, например пленок или микрокапсул. Примеры матриц с замедленным высвобождением включают полиэфиры, гидрогели (например, поли (2-гидроксиэтилметакрилат), или поливиниловый спирт)), полилактиды (патент США № 3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и гамма-этил-Ь-глутамата, недеградируемый этиленвинилацетат, разлагаемые кислоты сополимеры молочной и гликолевой кислоты, такие как LUPRON DEPOT TM (инъецируемые микросферы, состоящие из сополимера молочной кислоты-гликолевой кислоты и ацетата лейпролида) и полиЮ-(-)-3оксимасляную кислоту.

Составы включают те, которые пригодны для путей введения, описанных в данном документе. Составы могут быть удобно представлены в единичной дозированной форме и могут быть получены любым из способов, хорошо известных в области фармации. Методы и составы обычно можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, Pa.). Такие способы включают стадию ассоциации активного ингредиента с носителем, который состоит из одного или нескольких вспомогательных ингредиентов. В общем, составы получают путем однородного и непосредственного приведения в контакт активного ингредиента с жидкими носителями или тонко измельченными твердыми носителями или и с теми и другими, а затем, если необходимо, формования продукта.

Составы соединения формулы I, пригодные для перорального введения, могут быть приготовлены в виде дискретных единиц, таких как пилюли, капсулы, облатки или таблетки, каждая из которых содержит определенное количество соединения формулы I.

Прессованные таблетки могут быть получены прессованием в соответствующей машине активного ингредиента в свободно-текучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанного со связующим, лубрикантом, инертным разбавителем, консервантом, поверхностно-активным или диспергирующим агентом. Формованные таблетки могут быть изготовлены формованием в соответствующем аппарате смеси порошкообразного активного ингредиента, увлажненного инертным жидким разбавителем. Таблетки могут быть покрыты оболочкой или формуются с риской и необязательно составлены таким образом, чтобы обеспечить медленное или контролируемое высвобождение активного ингредиента из них.

Для перорального применения могут быть получены таблетки, пастилки, лепешки, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы, например желатиновые капсулы, сиропы или эликсиры. Композиции соединений формулы I, предназначенные для перорального введения, могут быть получены в соответствии с любым способом, известным в данной области для производства фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать один или несколько агентов, включая подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты для обеспечения препарата с приятным вкусом. Таблетки, содержащие активный ингредиент в смеси с нетоксичным фармацевтически приемлемым наполнителем, которые пригодны для изготовления таблеток, являются приемлемыми. Эти наполнители могут быть, например, инертными разбавителями, такими как кальций или карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или натрия, гранулирующие и дезинтегрирующие агенты, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие агенты, такие как крахмал, желатин или гуммиарабик; и смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут быть непокрытыми или могут быть покрытыми известными способами, включая микроинкапсуляцию для того, чтобы задержать распад и адсорбцию в желудочно-кишечном тракте и тем самым обеспечить пролонгированное действие в течение более длительного периода. Например, может быть использован материал для пролонгированного действия, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, отдельно или с воском.

Для лечения глаз или других наружных тканей, например рта и кожи, могут быть применены составы в качестве мази или крема, содержащего активный ингредиент(ы) в количестве, например, от 0,075 до 20% мас./мас. При приготовлении в виде мази активные ингредиенты могут быть использованы либо с парафиновой, либо со смешиваемой с водой мазевой основой. В ином случае активные ингредиенты могут быть приготовлены в виде крема с кремовой основой масло-в-воде.

При желании водная фаза кремовой основы может включать многоатомный спирт, т.е. спирт, имеющий две или несколько гидроксильных групп, такой как пропиленгликоль, бутан 1,3-диол, маннит, сорбит, глицерин и полиэтиленгликоль (в том числе PEG 400) и их смеси. Составы для местного применения могут при необходимости включать соединение, которое усиливает абсорбцию или проникновение активного ингредиента через кожу или другие пораженные участки. Примеры таких усилителей проникновения через кожу включают диметилсульфоксид и родственные аналоги.

Масляная фаза эмульсий по данному изобретению может быть составлена из известных ингредиентов известным способом. Несмотря на то, что фаза может содержать только эмульгатор, все же жела- 13 030611

тельно, чтобы она содержала смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или с маслом или и с жиром, и с маслом. Предпочтительно, если гидрофильный эмульгатор включен вместе с липофильным эмульгатором, который действует как стабилизатор. Предпочтительно включать как масло, так и жир. Вместе эмульгатор (эмульгаторы) с или без стабилизатора(ов) образуют так называемый эмульгирующий воск, а воск вместе с маслом и жиром образует так называемую эмульгирующую основу мази, которая образует масляную дисперсную фазу кремовых составов. Эмульгаторы и стабилизаторы эмульсии, пригодные для использования в композиции по изобретению, включают Tween® 60, Span® 80, цетостеариловый спирт, бензиловый спирт, миристиловый спирт, глицерилмоностеарат и натрий лаурилсульфат.

Водные суспензии соединений формулы I содержат активные материалы в смеси с наполнителями, подходящими для изготовления водных суспензий. Такие наполнители включают суспендирующий агент, такой как натрий-карбоксиметилцеллюлоза, кроскармеллоза, повидон, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и аравийская камедь, и диспергирующие или смачивающие агенты, такие как природные фосфатиды (например, лецитин), продукт конденсации алкиленоксида с жирной кислотой (например, стеарат полиоксиэтилена), продукт конденсации этиленоксида с длинноцепочечными алифатическими спиртами (например, гептадекаэтиленоксицетанол), продукт конденсации этиленоксида с частичным сложным эфиром, полученным из жирной кислоты и ангидрид гексита (например, моноолеат полиоксиэтиленсорбитена). Водная суспензия может также содержать один или несколько консервантов, такие как этил- или n-пропил-ргидроксибензоат, один или несколько красителей, один или несколько ароматизирующих веществ и один или несколько подсластителей, таких как сахароза или сахарин.

Фармацевтические композиции соединений формулы I могут быть в форме стерильного инъекционного состава, например стерильной инъецируемой йодной или масляной суспензии. Эти суспензии могут быть получены в соответствии с известным уровнем техники с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов, которые были указаны выше. Стерильный инъекционный состав может также быть стерильным инъекционным раствором или суспензией в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например в виде раствора в 1,3-бутандиоле, полученного в виде лиофилизированного порошка. Среди приемлемых носителей и растворителей, которые можно использовать, можно указать воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, традиционно стерильные нелетучие масла могут быть использованы в качестве растворителя или суспендирующей среды, Для этой цели может быть использовано любое мягкое нелетучее масло, в том числе синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, аналогично могут быть использованы в приготовлении годного для инъекции состава.

Количество активного ингредиента, которое можно комбинировать с материалами носителя для получения единичной дозировочной формы, будет варьировать в зависимости от пациента и конкретного способа введения. Например, композиция с замедленным высвобождением, предназначенная для перорального введения человеку, может содержать приблизительно от 1 до 1000 мг активного вещества, смешанного с соответствующим и подходящим количеством материала-носителя, которое может варьировать от около 5 до около 95% от общих композиций (масса:масса). Фармацевтическая композиция может быть получена для обеспечения легко измеряемых количеств для введения. Например, водный раствор, предназначенный для внутривенной инфузии, может содержать от около 3 до 500 мкг активного ингредиента на миллилитр раствора для того, чтобы могла пройти инфузия подходящего объема в размере около 30 мл/ч.

Композиции, пригодные для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные инъекционные растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические факторы и растворенные вещества, которые придают композиции изотоничность с кровью предполагаемого реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загустители.

Композиции, пригодные для местного введения в глаз, включают также глазные капли, в которых активный ингредиент растворен или суспендирован в подходящем носителе, особенно в водном растворителе для активного ингредиента. Активный ингредиент предпочтительно присутствует в таких составах в концентрации от около 0,5 до 20% мас./мас., приблизительно от 0,5 до 10% мас./мас. или около 1,5% мас./мас.

Композиции, пригодные для местного введения в полость рта, включают пастилки, содержащие активный ингредиент в ароматизированной основе, обычно в сахарозе и акациевой камеди или трагакантовой камеди; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или сахарозу и гуммиарабик; и жидкости для полоскания рта, содержащие активный ингредиент в соответствующем жидком носителе.

Композиции для ректального введения могут быть представлены в виде суппозиториев с подходящим основанием, содержащим, например, масло какао или салицилат.

Композиции, пригодные для внутрилегочного или назального введения, имеют размер частиц, например, в диапазоне от 0,1 до 500 мкм (в том числе размером частиц в диапазоне от 0,1 до 500 мкм с ша- 14 030611

гом микрон, например, 0,5, 1, 30, 35 мкм и т.д.), которые вводят путем быстрого вдоха через носовой ход или путем ингаляции через рот для достижения атьвеолярных мешочков. Подходящие лекарственные формы включают водные или масляные растворы активного ингредиента. Составы, пригодные для аэрозольного введения или введения в виде сухого порошка, могут быть получены в соответствии с обычными способами и могут быть доставлены с другими терапевтическими агентами, такими как соединения, представленные до настоящего времени, используемые при лечении или профилактике расстройств, как описано ниже.

Композиции, пригодные для вагинального введения, могут быть представлены в виде вагинальных суппозиториев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или аэрозолей, содержащих в дополнение к активному ингредиенту такие носители, известные в данной области техники, которые являются подходящими.

Композиции могут быть упакованы в единичной дозе или в многодозовых контейнерах, например в запаянных ампулах и флаконах, и могут храниться в сублимированном (лиофилизированном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например воды, для инъекций непосредственно перед использованием. Растворы и суспензии для инъекций получают из стерильных порошков, гранул и таблеток ранее описанного типа. Предпочтительными единичными дозированными составами являются составы, содержащие суточную дозу или единичную ежедневную субдозу, как указано в данном документе выше, или ее соответствующую часть, активного ингредиента.

Настоящее изобретение также относится к ветеринарным композициям, содержащим по меньшей мере один активный ингредиент, определенный выше, вместе с ветеринарным носителем. Ветеринарные носители являются материалами, которые пригодны для целей введения композиции и может быть твердыми, жидкими или газообразными материалами, которые в ином случае являются инертными или приемлемыми в ветеринарии и совместимыми с активным ингредиентом. Эти ветеринарные композиции можно вводить парентерально, перорально или любым другим желаемым путем.

Комбинированная терапия.

Соединения формулы I могут быть использованы по отдельности или в комбинации с другими терапевтическими агентами для лечения заболевания или расстройства, описанного в данном документе, такого как гиперпролиферативное расстройство (например, злокачественное новообразование). В некоторых воплощениях соединение формулы I в сочетании с фармацевтической комбинированной лекарственной формой или режим дозирования в виде комбинированной терапии со вторым соединением, которое имеет антигиперпролиферативные свойства или которое пригодно для лечения гиперпролиферативных расстройств (например, злокачественного новообразования). Второе соединение фармацевтической комбинированного состава или режим дозирования предпочтительно имеет активности, дополняющие соединения формулы I, так что они не оказывают отрицательного воздействия друг на друга. Такие молекулы могут присутствовать в комбинации в количествах, которые эффективны в предполагаемой области применения. В одном воплощении композиция по настоящему изобретению включает соединения формулы I в сочетании с химиотерапевтическим средством, таким, как описано в данном документе.

Комбинированная терапия может быть введена в виде одновременного или последовательного режима. При последовательном введении комбинация может быть введена в двух или нескольких введениях. Комбинированное введениг включает совместное введение с использованием отдельных составов или одного фармацевтического состава и последовательное введение в любом порядке, где предпочтительно имеется период времени, когда оба (или все) активные средства одновременно проявляют свои биологические активности.

Подходящие дозировки для любого из вышеуказанных одновременно вводимых агентов, представляют собой те, которые используются в настоящее время, и могут быть снижены за счет комбинированного действия (синергии) недавно идентифицированного агента и других химиотерапевтических агентов или терапий.

Комбинированная терапия может обеспечивать "синергию" и оказывать "синергический" эффект, в случае которого эффект активных ингредиентов, используемых вместе, больше, чем сумма эффектов, которые являются результатом применения соединений по отдельности. Синергический эффект может быть достигнут, когда активные ингредиенты: (1) одновременно приготовлены и введены или доставлены одновременно в комбинированном единичном дозированном составе; (2) доставлены чередованием или параллельно в виде отдельных составов или (3) с помощью какой-либо другой схемы. При доставке в чередующейся терапии синергетический эффект может быть достигнут, когда соединения вводятся или доставляются последовательно, например различными инъекциями в отдельных шприцах, отдельных таблетках или капсулах или отдельных инфузиях. В общем, при чередующейся терапии эффективная доза каждого активного ингредиента вводится последовательно, то есть серийно, в то время как в комбинированной терапии эффективные дозировки двух или нескольких активных ингредиентов вводят вместе.

В одном конкретном варианте противораковой терапии соединение формулы I, или его стереоизомер, геометрический изомер, таутомер, сольват, метаболит, или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство могут быть объединены с другими химиотерапевтическими, гормональными или антительными агентами, описанными в данном документе, а также в сочетании с хирургической терапией и

- 15 030611

лучевой терапией. Комбинированная терапия в соответствии с настоящим изобретением, таким образом, включает введение по меньшей мере одного соединения формулы I, или его стереоизомера, геометрического изомера, таутомера, сольвата, метаболита, или его фармацевтически приемлемой соли или пролекарства, а также использование по меньшей мере одного другого способа лечения рака. Количества соединения(ий) формулы I и другого фармацевтически активного химиотерапевтического агента(ов) и относительные тайминги введения выбирают для достижения желаемого комбинированного терапевтического эффекта.

Метаболиты соединений формулы I.

Также в объем данного изобретения подпадают in vivo продукты метаболизма формулы I, описанные в данном документе. Такие продукты могут быть результатом, например, конденсации, окисления, восстановления, гидролиза, амидирования, дезаминирования, этерификации, деэтерификации, ферментативного расщепления и т.п., вводимого соединения. Соответственно изобретение включает метаболиты соединений формулы I, в том числе соединений, полученных по способу, включающему контакт соединения данного изобретения с млекопитающим в течение периода времени, достаточного для получения его метаболического продукта.

Продукты-метаболиты обычно выявляются путем приготовления меченного радиоактивным изотопом (например, 14С или 3Н) соединения по изобретению, введения его парентерально в детектируемой дозе (например, больше чем около 0,5 мг/кг) животному, такому как крыса, мышь, морская свинка, обезьяна или человек, в течение периода времени, достаточного для метаболизма (как правило, от около 30 с до 30 ч), и выделения продуктов его преобразования из мочи, крови или других биологических образцов. Эти продукты легко выделять, поскольку они помечены (другие выделяют с использованием антител, способных связывать эпитопы, сохранившиеся в метаболите). Структуры метаболитов определяются обычным образом, например с помощью МС, ЖХ/МС или ЯМР-анализа. В общем, анализ метаболитов проводится таким же образом, как и обычные исследования метаболизма лекарственных средств, хорошо известные специалистам в данной области. Продукты-метаболиты при условии, что они не найдены in vivo, могут быть полезны в диагностических анализах для терапевтического дозирования соединений по изобретению.

Изделия/наборы.

В другом воплощении настоящего изобретения предлагается изделие, или "набор", содержащее вещества, пригодные для лечения заболеваний и расстройств, описанных выше. Набор включает в себя контейнер, содержащий соединение формулы I. Набор может дополнительно содержать этикетку или вкладыш на контейнере или соединенные с контейнером. Термин "вкладыш в упаковку" используется для обозначения инструкций, обычно включаемых в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, дозировке, использовании, введении, противопоказаниях и/или предупреждениях, касающихся использования таких терапевтических продуктов. Подходящие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы, блистерную упаковку и т.д. Контейнер может быть выполнен из различных материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер может содержать соединение формулы I или его состав, который является эффективным при лечении состояния, и может иметь порт стерильного доступа (например, контейнер может быть пакетом для внутривенного раствора или флаконом, имеющим пробку, прокалываемую иглой для подкожных инъекций). По меньшей мере один активный агент в композиции представляет собой соединение формулы I. На этикетке или вкладыше в упаковке указано, что композиция используется для лечения выбранного состояния, такого как рак. Кроме того, на этикетке или вкладыше в упаковке может быть указано, что подвергаемый лечению пациент представляет собой пациента, имеющего такое расстройство, например гиперпролиферативное расстройство. В одном воплощении ярлык или вкладыш указывает на то, что композиция, содержащая соединение формулы I, может быть использована для лечения расстройства, являющегося результатом аномального роста клеток. На этикетке или вкладыше в упаковке также может быть указано, что композиция может быть использована для лечения других расстройств. В ином случае или дополнительно изделие может дополнительно включать второй контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (BWFI), забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Изделие может дополнительно включать другие материалы, необходимые с коммерческой и с пользовательской точки зрения, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.

Набор может дополнительно содержать инструкции по введению соединения формулы I и в случае наличия второй фармацевтической композиции. Например, если набор содержит первую композицию, содержащую соединение формулы I и вторую фармацевтическую композицию, то набор может дополнительно дать указания для одновременного, последовательного или раздельного введения первой и второй фармацевтических композиций пациенту, нуждающемуся в этом.

В другом воплощении наборы подходят для доставки твердых пероральных форм соединения формулы I, таких как таблетки или капсулы. Такой набор предпочтительно включает в себя ряд стандартных дозировок. Такие наборы могут включать в себя карту, имеющую дозировки, ориентированные в порядке их предполагаемого использования. Примером такого набора является "блистерная упаковка". Блистер- 16 030611

ные упаковки хорошо известны в упаковочной промышленности и широко используются для упаковки фармацевтических стандартных лекарственных форм. В случае необходимости может быть предоставлена памятка, например, в виде цифр, букв или других маркировок или с календарной вставкой, обозначающий дни в схеме лечения, в которые дозы можно вводить.

В соответствии с одним из вариантов осуществления набор может включать: (а) первый контейнер с соединением формулы I, содержащимся в нем; и необязательно (b) второй контейнер со второй фармацевтической композицией, содержащейся в нем, где второй фармацевтический препарат содержит второе соединение с антигиперпролиферативной активностью. В ином случае или дополнительно набор может дополнительно включать третий контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (BWFI), забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор декстрозы и раствор Рингера. Он может дополнительно включать другие материалы, необходимые с коммерческой точки зрения, и с точки зрения пользователя, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.

В некоторых других воплощениях, где набор включает композицию формулы I и второй терапевтический агент, набор может содержать контейнер для содержания отдельных композиций, такой как разделенный флакон или разделенный пакет из фольги, однако отдельные композиции могут также содержаться в одном неразделенном контейнере. Как правило, набор включает в себя инструкции по введению отдельных компонентов. Форма набора особенно выгодна, когда отдельные компоненты, предпочтительно вводимые в различных лекарственных формах (например, пероральной и парентеральной), вводят в различных интервалах дозирования, или когда желательно титрование отдельных компонентов комбинации лечащим врачом.

Изобретение включает изделие, содержащее упаковочный материал, одну или несколько лекарственных форм, содержащих соединение GGCI в описании, в котором упаковочный материал имеет этикетку, которая указывает, что лекарственная форма может быть использована для объекта, имеющего или предположительно имеющего или предрасположенного к любому из заболеваний, расстройств и/или состояний, описанных или упоминаемых в данном документе. Такие лекарственные формы включают, например, таблетки, капсулы, растворы и суспензии для парентеральных и пероральных форм доставки и составов.

В еще одном аспекте настоящего изобретения представляет собой набор, включающий: (а) по меньшей мере одно GGCI-соединение или его соль или кристалл и фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель и/или добавку в виде единичной дозированной формы, и (b) средства, содержащие единичную форму. Поскольку настоящее изобретение имеет аспект, который относится к лечению заболевания/состояний, описанных в данном документе, с помощью комбинации активных ингредиентов, то настоящее изобретение также относится к объединению отдельных фармацевтических композиций в виде набора. Набор может содержать фармацевтическую композицию, включающую GGCI-соединение или его соль, или кристаллы, как представлено в данном документе, либо по отдельности, либо вместе со вторым соединением, описанным в данном документе.

В другом конкретном воплощении настоящего изобретения предлагается дозатор, предназначенный для выдачи суточных доз по одной за раз в порядке их предполагаемого использования. Предпочтительно, если дозатор снабжен памяткой для облегчения соблюдения режима. Примером такой памятки является механический счетчик, который указывает количество суточных доз, которые были выданы. Другим примером такой памятки является чип памяти с батарейкой в сочетании с жидкокристаллическим устройством для считывания показаний или звуковым напоминающим сигналом, который, например, демонстрирует дату приема последней суточной дозы и/или напоминает, когда должна быть принята следующая доза.

GGCI-агенты.

Следующие процедуры и схемы синтеза, описанные в подробном описании изобретения, и примеры с использованием способов и синтетических процедур, известных специалистам в данной области, могут быть изготовлены соли и композиции по настоящему изобретению.

Способы по настоящему изобретению также обеспечивают определенные соединения, которые имеют применение, например, в качестве промежуточных продуктов синтеза GGCI. Промежуточные продукты могут быть независимо выделены и очищены и/или кристаллизованы в ходе, и как часть, способов синтеза, представленных в данном документе. Выделенные и очищенные и/или кристаллизованные промежуточные продукты также могут быть сохранены для последующего применения.

Стадии и способы синтеза являются эффективными при приготовлении различных GGCI-солей.

Органические кислоты включают как алифатические, так и ароматические карбоновые кислоты и включают, например, алифатические монокарбоновые кислоты, алифатические дикарбоновые кислоты, алифатические трикарбоновые кислоты, ароматические монокарбоновые кислоты, ароматические дикарбоновые кислоты, ароматические трикарбоновые кислоты и другие органические кислоты, известные специалистам в данной области.

Алифатические карбоновые кислоты могут быть насыщенными или ненасыщенными. Подходящие алифатические карбоновые кислоты включают те, которые имеют от 2 до примерно 10 атомов углерода.

- 17 030611

Алифатические монокарбоновые кислоты включают насыщенные алифатические монокарбоновые кислоты и ненасыщенные алифатические монокарбоновые кислоты. Примеры насыщенных монокарбоновых кислот включают уксусную кислоту, пропионовую кислоту, масляную кислоту, валериановую кислоту, капроновую кислоту, энантовую кислоту, пеларгоновую кислоту и каприловую кислоту. Примеры ненасыщенных алифатические монокарбоновых кислот включают акриловую кислоту, пропиоловую кислоту, метакриловую кислоту, кротоновую кислоту и изокротоновую кислоту.

Алифатические дикарбоновые кислоты включают насыщенные алифатические дикарбоновые кислоты и ненасыщенные алифатические дикарбоновые кислоты. Примеры насыщенных алифатических дикарбоновых кислот включают щавелевую кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, глутаровую кислоту, адипиновую кислоту, пимелиновую кислоту, субериновую кислоту, азелаиновую кислоту и себациновую кислоту. Примеры ненасыщенных алифатических дикарбоновых кислот включают малеиновую кислоту, фумаровую кислоту, цитраконовую кислоту, мезаконовую кислоту, итаконовую кислоту и тому подобное.

В некоторых аспектах описаны кристаллический GGCI и его соли. Они включают малеат, фумарат и сукцинат кристаллического GGCI. Различные кристаллы GGCI включают те, которые включают геометрические структуры, структуры базисной клетки и структурные координаты.

Также описаны GGCI-соли высокой чистоты, способы их получения и лекарственные формы, включая GGCI-соли.

Фармацевтические композиции могут включать, например, один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей, носителей и/или добавок, подходящих для перорального или парентерального введения.

Продукт, образованный описанными процессами, по существу, является чистым, то есть, по существу, свободным от любых других соединений. Предпочтительно он содержит менее 10% примесей, а более предпочтительно менее чем приблизительно 5% примесей, а еще более предпочтительно менее чем около 1% примесей. Полученный таким образом продукт также предпочтительно, по существу, является чистым, т.е. содержит менее чем 10% примеси, более предпочтительно менее 5% примесей и еще более предпочтительно менее чем 1% примеси. Настоящее изобретение также включает в себя, по существу, чистую безводную кристаллическую форму дисукцината GGCI. Термин "по существу, чистый" означает, что образец соответствующей безводной кристаллической формы дисукцината GGCI содержит более 90% одной полиморфной формы, предпочтительно более чем 95% одной полиморфной формы и еще более предпочтительно больше чем 99% одной полиморфной формы.

Способы синтеза, описанные в данном документе, также проиллюстрировавы со ссылкой на фигуры, в том числе сопровождающую фиг. 1. Фиг. 1 показывает сводку примерной схемы реакции для получения GGCI, которые могут включать соль GGCI.

Дозы.

Терапевтически эффективное количество соединений в данном описании и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов может составлять от около 1 мг/кг до около 10 г/кг. Другие терапевтически эффективные диапазоны доз включают, например, от около 1,5 до около 950 мг/кг, от около 2 до около 90 мг/кг, от около 3 до около 85 мг/кг, от около 4 до около 80 мг/кг, от около 5 до около 750 мг/кг, от около 5 до около 700 мг/кг, от около 5 до около 600 мг/кг, от около 5 до около 500 мг/кг, от около 10 до около 400 мг/кг, от около 10 до около 300 мг/кг, от около 10 до около 200 мг/кг, от около 10 до около 250 мг/кг, от около 10 до около 200 мг/кг, от около 10 до около 200 мг/кг, от около 10 до около 150 мг/кг, от около 10 до около 100 мг/кг, от около 10 до около 75 мг/кг, от около 10 до около 50 мг/кг, от около 15 до около 35 мг/кг, от около 15 до около 9500 мг/кг, от около 20 до около 900 мг/кг, от около 30 до около 850 мг/кг, от около 40 до около 800 мг/кг, от около 50 до около 7500 мг/кг, от около 50 до около 7000 мг/кг, от около 50 до около 600 мг/кг, от около 5 до около 500 мг/кг, от около 100 до около 4000 мг/кг, от около 100 до около 3000 мг/кг, от около 100 до около 2000 мг/кг, от около 100 до около 2500 мг/кг, от около 100 до около 2000 мг/кг, от около 100 до около 2000 мг/кг, от около 100 до около 1500 мг/кг, от около 100 до около 1000 мг/кг, от около 100 до около 750 мг/кг, от около 100 до около 500 мг/кг, от около 150 до около 350 мг/кг.

В некоторых воплощениях диапазоны доз включают, например, 1/10 LD50 на основании данных о токсичности, в том числе, например, от около 50 до около 600 мг/кг, от около 60 до около 500 мг/кг, от около 70 до около 400 мг/кг, от около 80 до около 300 мг/кг, от около 90 до около 150 мг/кг, от около 90 до около 120 мг/кг, от около 95 до около 105 мг/кг и около 100 мг/кг.

Уровень суточной дозы соединений данного документа и их фармацевтически приемлемых солей и и сольватов может составлять от около 10 мг до около 6 г в день или вплоть до около 60 г в день (в одной или нескольких дозах). Другие терапевтически эффективные диапазоны доз включают, например от около 20 мг до около 5,9 г, от около 30 мг до около 4,7 г, от около 40 мг до около 3,5 г, от около 50 мг до около 3 г, от около 60 мг до около 2,8 г, от около 70 мг до около 2,5 г, от около 80 мг до около 2,3 г, от около 100 мг до около 2 г, от около 100 мг до около 1,5 г, от около 200 до около 1400 мг, от около 200 до около 1300 мг, от около 200 до около 1200 мг, от около 200 до около 1100 мг, от около 200 до около 1000 мг, от около 300 до около 900 мг, от около 300 до около 800 мг, от около 300 до около 700 мг, от около

- 18 030611

300 до около 600 мг, от около 200 мг до около 59 г, от около 300 мг до около 47 г, от около 400 мг до около 35 г, от около 500 мг до около 30 г, от около 600 мг до около 28 г, от около 700 мг до около 25 г, от около 800 мг до около 23 г, от около 1000 мг до около 20 г, от около 1000 мг до около 15 г, от около 2000 до около 14000 мг, от около 2000 до около 13000 мг, от около 2000 до около 12000 мг, от около 2000 до около 11000 мг, от около 2000 до около 10000 мг, от около 3000 до около 9000 мг, от около 3000 до около 8000 мг, от около 3000 до около 7000 мг или от около 3000 до 6000 мг в день.

Соединения, описанные в данном документе, и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты также будут эффективны в дозах в порядке 1/10 1/50, 1/100, 1/200, 1/300, 1/400, 1,/500 и даже 1/1000 от доз, описанвых в данном документе.

В некоторых воплощениях настоящего изобретения терапевтически эффективное количество представляет собой количество, эффективное для индукции концентрации в плазме представленных в данном документе соединений и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов, от около 0,01 до около 20 мг/л, 0,01 до около 15 мг/л, 0,1 до около 10 мг/л, 0,5 до около 9 мг/л, 1 до около 8 мг/л, 2 до около 7 мг/л или 3 до около 6 мг/л.

Дозы, описанные в данном документе, могут быть введены в однократной дозе или несколькими дозами. Например, дозы можно вводить один, два, три, четыре или более раз в день или один, два, три, четыре, пять, шесть раз в неделю.

Врач определит фактическую дозу, которая будет наиболее подходящей для отдельного пациента и которая будет варьировать в зависимости от возраста, массы и ответа конкретного пациента. Вышеуказанные дозировки являются примером среднего случая, конечно могут быть отдельные случаи с более высокими или более низкими диапазонами доз, которые находятся в пределах объема настоящего изобретения.

Как правило, у людей в.б. введение соединений по данному изобретению является предпочтительным путем. Предпочтительный пероральный режим дозирования при лечении рака для типичного человека составляет от около 400 до около 6000 мг в день соединения при необходимости. Профилактические дозы ниже, обычно от около 1/10 до около 1/20 от вышеуказанных количеств, в том числе от около 20-40 мг до приблизительно 40-600 мг в сутки.

Для применения в ветеринарии соединение, представленное в данном документе, или его ветеринарно приемлемая соль, или ветеринарно приемлемый сольват любого из них вводят в виде соответствующего приемлемого состава.

Таким образом, изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение GGCI, представленное в данном документе, или его фармацевтически приемлемую соль, или фармацевтически приемлемый сольват любого из них, вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

Также предлагается ветеринарная композиция, содержащая соединение GGCI, представленное в данном документе, или его ветеринарно приемлемую соль, или ветеринарно приемлемый сольват любого из них, вместе с ветеринарно приемлемым разбавителем или носителем.

Изобретение также относится к соединению GGCI, представленному в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтически приемлемому сольвату любого из них или фармацевтической композиции, содержащей любое из вышеуказанных для применения в качестве лекарственного средства для человека.

Кроме того, предлагается соединение GGCI, представленное в данном документе, или его ветеринарно приемлемая соль, или ветеринарно приемлемый сольват любого из них, или ветеринарный состав, содержащий любое из вышеуказанного, для применения в качестве лекарственного средства для животных.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к применению соединения GGCI, представленного в описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтически приемлемого сольвата любого из них для изготовления лекарственного средства для человека для лечения или профилактики медицинского состояния, для которого показан GGCI.

Кроме того, предложено применение соединения GGCI, представленного в описании, или ветеринарно приемлемой соли, или ветеринарно приемлемого сольвата любого из них для изготовления лекарственного средства для животных для лечения или профилактики медицинского состояния, для которого показан GGCI.

Кроме того, настоящее изобретение включает применение соединений и композиций, представленных в данном документе, в способах лечения и/или профилактики, в целом или частично, различных заболеваний, расстройств и состояний, включая, без ограничения указанным, гииерпролиферативные заболевания, таких как рак.

Изобретение также включает фармацевтические композиции, в том числе таблетки и капсулы и другие формы и составы для пероральной доставки, содержащие фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективные количества соединения GGCI, представленного в данном документе.

Изобретение относится к способам применения терапевтически эффективных количеств соединения GGCI, представленного в данном документе, в производстве лекарственного средства. Такие лекар- 19 030611

ственные средства включают, например, таблетки, капсулы, растворы и суспензии форм и составов для парентерального и перорального введения. Такие лекарственные средства включают те, которые подходят для лечения объекта, описанного в данном документе.

Соединения настоящего изобретения, в частности соли и гидраты GGCI, например, в раскрытой кристаллической форме, также могут быть приготовлены с другим противораковым средством.

Дозы таких соединений GGCI, солей и/или сольватов, представленных в данном документе, предусмотрены для введения в терапевтически эффективном количестве, например, для ингибирования рака, задержки развития опухоли, и/или для уменьшения множественной лекарственной устойчивости у объекта.

Изобретение включает композицию, содержащую соединение GGCI, представленное в данном документе, в количествах, эффективных для уменьшения транспорта глутатиона в организме объекта. Такие композиции включают, например, таблетки, капсулы, растворы и суспензии для форм и составов парентеральной и пероральной доставки.

Общие аспекты гамма-глутамилового цикла.

Биохимический цикл GGC существует в большинстве живых клеток. Этот цикл позволяет переносить аминокислоты, трансферрин, железо и другие составляющие снаружи живой клетки через клеточную мембрану в цитоплазму. Некоторые такие аминокислоты необходимы для de novo биосинтеза глутатиона. Данный цикл представляет собой один из немногих механизмов, которые позволяют осуществить транспортировку аминокислот в живых клетках, а также является единственным механизмом, который необходим для биосинтеза глутатиона и который не использует инсулин в качестве кофактора для транспортного механизма.

Поскольку скорость размножения злокачественных опухолевых клеток значительно выше, чем у клеток не злокачественного происхождения, вмешательством в данном цикле можно подавить рост и поддержание жизнедеятельности злокачественных опухолевых клеток. Данный эффект может быть достигнут путем представления в гамма-глутамиловом цикле конкурентного ингибитора, такого как "ложный метаболит" или аналог субстрата фермента. Поступая таким образом в злокачественные клетки, может быть введено больше повреждений, чем в незлокачественные клетки. Кроме того, сообщалось, что злокачественные клетки имеют более высокую активность фермента гамма-глутамилтрансферазы. Для того чтобы подавить гамма-глутамиловый цикл, были разработаны новые ингибиторы GGCI, описанные в данном документе, которые могут конкурировать с 5-оксопролином за связывание с 5-оксопролиназой, в результате чего может блокироваться гамма-глутамиловый цикл. Блокирование GGC уменьшает или мешает притоку аминокислот в клетку, тем самым препятствуя клеточному делению и синтезу глутатиона. Поскольку злокачественные опухолевые клетки нуждаются в существенно большем количестве аминокислот из-за намного более быстрого деления, то это приводит к предпочтительному и/или оптимальному поражению злокачественных опухолевых клеток.

Гамма-глутамилтрансфераза (GGT) является ключевым ферментом, участвующим в метаболизме глутатиона, экспрессия которого часто значительно возрастает в злокачественных опухолях человека. В последние несколько лет несколько исследований было сосредоточено на возможной роли GGT в опухолевой прогрессии, инвазии и лекарственной устойчивости. Сообщалось об участии проокислительной активности GGT, помимо ее ранее признанного вклада в клеточную антиоксидантную защиту. Прооксиданты, являющиеся результатом активности GGT, могут модулировать важные редоксчувствительные процессы и функции с конкретной ссылкой на пролиферативный/апоптотический баланс, который имеет очевидные и важные последствия в опухолевой прогрессии и лекарственной устойчивости. Кроме того, специфичность ферментативной реакции, проводимой GGT, предполагает, что подходящие пролекарства могут избирательно метаболизироваться (активироваться) с GGT экспрессируемой в опухолевой ткани. Соответственно соединения по изобретению могут быть полезны при лечении гиперпролиферативных заболеваний, таких как рак. Соединения могут ингибировать рост опухоли у млекопитающих и могут быть полезны при лечении людей-онкологических пациентов.

Следовательно, GGT играет роль в качестве диагностического/прогностического маркера, а также в качестве мишени противоопухолевого лечения.

Гамма-глутамилтрансфераза (GGT) представляет собой фермент, участвующий в метаболизме глутатиона (гамма-глутамил-цистеинил-глицина; GSH), и экспрессируется в широком ряду типов клеток. GGT катализирует перенос глутамиловой группы, присоединенной через глутамат гамма-карбоновой кислоты с цистеином, на акцепторные молекулы, включая пептиды, аминокислоты и воду.

Высокие активности GGT присутствуют на люминальной поверхности секреторных и поглощающих клеток, в том числе желчных протоков, желчных канальцев и проксимальных канальцев почек и в эндотелиальных клетках капилляров нервной системы. Разрегулированная экспрессия GGT была обнаружена в различных типах опухолей и GGT может быть ассоциирована с GSH-зависимыми механизмами лекарственной устойчивости.

Находясь на внешнем аспекте клеточной мембраны, GGT катализирует деградацию внеклеточного GSH, таким образом, способствуя восстановлению входящих в состав аминокислот для последующего внутриклеточного ресинтеза GSH. Поскольку GSH является основным водорастворимым антиоксидан- 20 030611

том в клетке, GGT является важным компонентом системы защиты клеток от окислительного стресса. С другой стороны, другие связанные с патофизиологией соединения также являются субстратами GGT, в частности все конъюгаты GSH, в том числе лейкотриен С4, S-нитрозоглутатион (GSNO) и GSH-аддукты ксенобиотиков, образованных действием глутатион-3-трансфераз.

Несколько исследований показали, что GGT положительно регулирована в разных типах клеток после острого воздействия окислительного стресса. Связь между экспрессией GGT и активацией путей RasMAPK была продемонстрирована в клетках рака толстой кишки после гамма-облучения, а также под воздействием окислительного стресса. Активные формы кислорода (ROS) участвуют в процессе канцерогенеза, и в то же время редокс-регуляция многих генов в ответ на ROS/электрофилы по всей видимости модулирует GGT-экспрессию; в целом это может объяснить повышенную экспрессию GGT, описанную в опухолях.

Распределение и концентрация GGT в опухолях человека демонстрируют несколько отличий от того, что наблюдается в нормальных тканях. Повышенные уровни GGT наблюдаются при раке яичников, раке толстой кишки, печени, астроцитарной глиоме, саркоме мягких тканей, меланоме, лейкозе и раке легких. В исследованиях на клетках меланомы in vitro и in vivo было обнаружено, что повышенные активности GGT сопровождают повышенный инвазивный рост, а между экспрессией GGT и неблагоприятными прогностическими признаками рака молочной железы человека была описана положительная корреляция.

Функции GGT в злокачественных опухолевых клетках.

Несколько исследований рассматривали связь активности GGT со злокачественным фенотипом в частности рассматривали вопрос, играет ли сама по себе повышенная экспрессия GGT какую-либо активную роль в малигнизации. Участие GGT в клеточном пополнении запасов глутатиона и повышенная устойчивость к проокислительным лекарственным средствам, наблюдаемым в нескольких GGTэкспрессирующих клеточных линиях, указывает на включение GGT во все компоненты клеточных защитных систем. С другой стороны, многие недавние данные показывают, что при определенных условиях метаболизм GSH посредством GGT может оказывать прооксидантные эффекты с модулирующим воздействием на нескольких редокс-чувствительных процессов.

GSH синтезируется внутри клеток и транспортируется во внеклеточную среду через транспортеры плазматической мембраны по градиенту концентрации (миллимолярная против микромолярной). Внеклеточный метаболизм GSH с помощью GGT в тесном взаимодействии с дипептидазами клеточной поверхности способствует выделению и восстановлению клетками составных аминокислот, среди которых глутаминовая кислота и незаменимый цистеин. Действительно исследования, проведенные in vitro и in vivo, показали, что клетки, сверхэкспрессирующие GGT, способны более эффективно использовать внеклеточный GSH в качестве источника цистеина, что дает селективное преимущество роста при физиологической, так и ограничивающей концентрации цистеина. Фактически наблюдали, что короткое (2часовое) ингибирование GGT способно снизить внутриклеточный цистеин в клеточных линиях GGTположительной цервикальной карциномы. Таким образом, благоприятное действие GGT на рост опухоли является двухкратным, потому что GGT играет роль источника незаменимых аминокислот как для синтеза белков, так и для поддержания внутриклеточных уровней GSH (фиг. 2).

Адекватные уровни GSH являются основой клеточной устойчивости против нескольких электрофильных/алкилирующих соединений, при этом сообщалось, что GGT-сверхэкспрессирующие клетки были более устойчивыми к перекиси водорода и химиотерапевтическим средствам, таким как доксорубицин, цисплатин и 5-фторурацил. В клетках меланомы истощение GSH и ингибирование GGT значительно повышали цитотоксичность в условиях окислительного стресса.

Активность GGT при преобразовании слабореактивного GSH в высокореактивный цистеинилглицин способна переключить образование цисплатин/тиоловых комплексов во внеклеточном пространстве, что приводит к сниженному накоплению цисплатины в клетке, снижению платинирования ДНК и пониженной цитотоксичности.

Сообщалось, что GGT может оказывать прооксидантные эффекты на уровне поверхности мембраны и во внеклеточной микросреде. Это явление было объяснено высокой реакционной способностью цистеинил-глицина, продукта расщепления GSH с помощью GGT. Более низкое значение pKa цистеинил-глицин тиола позволяет ему более быстро диссоциировать при физиологическом рН и уменьшать внеклеточные катионы переходных металлов (в частности, Fc³' и Cu²+) более эффективно, чем сам GSH. Снижение железа посредством GSH фактически может быть ограничено хелатирующими свойствами альфа-карбоксильной группы остатка глутамата, влияющего на стерические и окислительновосстановительные взаимодействия тиола цистеина. GGT-катализируемое удаление глутаминовой кислоты приводит к снижению pKa тиола цистеина и позволяет ему свободно взаимодействовать с железом.

Кроме того, активность GGT может способствовать освобождению свободного железа из трансферрина, стимулируя тем самым поглощение железа злокачественными опухолевыми клетками. Этот эффект может играть дополнительную роль в поставках железа в озлокачествленные клетки, а роль железа в канцерогенезе хорошо известна.

- 21 030611

Также недавно было показано, что проокислительная активность GGT стимулирует железозависимое окислительное повреждение ДНК в клетках меланомы, трансфецированных GGT, что, таким образом, потенциально способствует повреждению ДНК и повышенному риску мутаций в злокачественных опухолевых клетках.

Основную роль в таком регулировании играют цистеин-тиолы, которые могут подвергаться различным редокс-модификациям, все из которых, возможно, отражают особое функциональное состояние белка. Ряд таких явлений был описан в белках, участвующих в важнейших клеточных функциях, таких как клеточная пролиферация, апоптоз, клеточная адгезия и экспрессия генов, изменения в которых имеют первостепенное значение в прогрессе рака и других заболеваний. Активность GGT может способствовать окислению тиоловых групп в белках клеточной поверхности посредством процесса, включающего пероксид водорода и образование смешанных дисульфидов (S -тиолирование белков). Модулирующие эффекты GGT-опосредованных прооксидантных реакций могут способствовать устойчивости фенотипа GGT-экспрессирующих опухолевых клеток, как регулируя пути передачи сигналов, участвующих в балансе пролиферации/апоптоза, так и индуцируя защитные адаптации в пуле внутриклеточных антиоксидантов.

Как обсуждалось выше, антиоксидантные адаптации, связанные с экспрессией GGT, являются основанием для повышенной клеточной устойчивости против окислительного стресса, который сам по себе является фактором устойчивости к эффектам проокислительных лекарственных средств. Объединение нескольких агентов в терапии, однако, может преодолеть такую устойчивость; в недавней работе, например, сочетание триоксида мышьяка с субтоксическими концентрациями аскорбиновой кислоты приводит к сенсибилизации к апоптотической смерти GGT трансфицированных/устойчивых к триоксиду мышьяка клеток меланомы.

Экспрессия GGT и активность в патофизиологии клеточных процессов с участием оксида азота (NO) и родственных соединений, в первую очередь GSNO.

Обработка злокачественных опухолевых клеток человека с помощью NO и имитаторов NO может эффективно восстановить чувствительность популяции устойчивых клеток к цитотоксическим эффектам химиотерапевтических лекарственных средств. NO, таким образом, действует как агент, повышающий чувствительность к химиотерапии. GGT выборочно метаболизирует GSNO, способствуя тем самым высвобождению включенного в него NO.

Способы введения GGCI.

Настоящее изобретение основано на удивительном и неожиданном открытии того, что GGCIагенты обладают способностью модулировать транспорт аминокислот, селективно действуя в качестве аналогов 5-оксопролина, и способностью модулировать гамма-глутамиловый цикл.

Кроме того, аспекты настоящего изобретения основаны на неожиданном открытии того, что GGCI обладает возможностью для лечения, профилактики и/или уменьшения количества глутатиона в злокачественных опухолевых клетках.

Для цели текущего раскрытия следующие определения во всей их полноте можно использовать для определения технических терминов и для определения рамок композиции веществ, связанных между собой, для которой испрашивается охрана в формуле изобретения.

В настоящем описании предлагаются способы лечения путем введения объекту одной или нескольких эффективных доз GGCI в течение времени, необходимого для достижения желаемого терапевтического эффекта. Объект предпочтительно представляет собой млекопитающее, включая, без ограничения перечисленным, животных, таких как коровы, свиньи, лошади, куры, кошки, собаки и т.п., а наиболее предпочтительно является человеком.

Различные системы доставки известны и могут быть использованы для введения GGCI в соответствии со способами по изобретению, например инкапсуляцией в липосомы, микрочастицы или микрокапсулы. Способы введения включают, без ограничения перечисленным, местный, подкожный, внутрикожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, подкожный, интраназальный, эпидуральный и пероральный пути введения. Для лечения некоторых видов рака местная, подкожная, внутрикожная и системная доставки могут быть особенно эффективными.

GGCI можно вводить любым удобным способом, например путем инфузии или болюсной инъекцией, путем абсорбции через эпителиальные или слизистые выстилки (например, слизистую оболочку полости рта, прямой кишки и слизистую оболочку кишечника и т.д.) и могут быть введены вместе с другими биологически активными агентами. Введение может быть системным или местным. Кроме того, может быть желательно вводить фармацевтические композиции, содержащие GGCI, в центральную нервную систему любым подходящим способом, в том числе внутрижелудочковым и интратекальным введением; внутрижелудочковая инъекция может быть облегчена путем внутрижелудочкового катетера, например, прикрепленного к резервуару, такому как резервуар Оммайя. Может быть использовано введение через легкие, например использованием ингалятора или распылителя и состава с распыляемым агентом. Желательным может быть введение фармацевтических композиций, содержащих GGCI, локально в области, нуждающейся в лечении, это может быть достигнуто, например, без ограничения указанным, местным нанесением, инъекцией, посредством катетера, посредством суппозитория или с помощью им- 22 030611

плантата, причем указанный имплантат является пористым, непористым или желатиновым материалом, в том числе мембранами, такими как silastic™ мембраны или волокна.

Другие способы введения включают доставку GGCI в системе с контрюлируемым высвобождением. В некоторых воплощениях может быть использован насос (см. Langer, выше; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald et al., Surgery 83:507 (1980); Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574 (1989)). Кроме того, могут быть использованы полимерные материалы (см. Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres, Boca Raton, Fla. (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley N.Y. (1984); Ranger and Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61 (1983; see also Levy et al., Science 228:190 (1985); During et al., Ann. Neurol. 25:351 (1989); Howard et al., J. Neurosurg. 71:105 (1989)), или система с контролируемым высвобождением может быть размещена в непосредственной близости от терапевтической мишени, т.е. мозга, таким образом, требуя только часть системной дозы (см, например, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)). Другие системы с контролируемым высвобождением описаны в обзоре Langer (Science 249:1527-1533 (1990)).

Формы и дозировки GCGI.

Согласно настоящему описанию для лечения злокачественных новообразований особенно эффективны лиофилизированный состав и жидкий состав, подходящий для инъекции. Подходящие дозированные формы GGCI для применения в воплощениях настоящего изобретения включают физиологически/фармацевтически приемлемые носители, которые по своей природе не токсичны и не являются лечебными средствами. Примеры таких носителей включают ионообменники, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как сывороточный альбумин человека, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновую кислоту, сорбат калия, смеси неполных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протамин сульфат, гидрофосфат динатрия, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, P6N (Neumedicines, Pasadena, Калифорния) и PEG. Носители для форм местного введения или форм на основе гелей для GGCIполипептидов включают полисахариды, такие как натрий-карбоксиметилцеллюлоза или метилцеллюлоза, поливинилпирролидон, полиакрилаты, полиоксиэтилен и полиоксипропилен-блок-сополимеры, ПЭГ и спирты из древесной смолы. Для всех видов введения удобно использовать традиционные формы депо. Такие формы включают, например, микрокапсулы, нанокапсулы, липосомы, пластыри, ингаляционные формы, нос. спреи, таблетки подъязычные и формы с замедленным высвобождением препаратов.

Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие полипептид, где матрицы находятся в виде формованных изделий, например пленок или микрокапсул. Примеры матриц с замедленным высвобождением включают сложные полиэфиры, гидрогели (например, поли (2-гидроксиэтил метакрилат), как описано Langer et al, выше и Langer, выше, или поли (виниловый спирт), полилактиды (патент США № 3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и гамма этил L-глутамата (Sidman et al, выше), недеградируемый этилен винилацетат (разлагаемые сополимеры (Langer et al., выше), деградируемые сополимеры молочной кислоты-гликолевой кислоты, такие как Lupron Depot™ (инъецируемые микросферы, состоящие из сополимера молочной кислоты-гликолевой кислоты и ацетата лейпролида) и поли-Э-(-)-3гидроксимасляную кислоту. В то время как полимеры, такие как этилен-винилацетат и молочная кислота-гликолевая кислота, способны высвобождать молекулы в течение более 100 дней, некоторые гидрогели высвобождают белки в течение более коротких периодов времени. Если инкапсулированные полипептиды GGCI остаются в организме в течение длительного времени, они могут денатурировать или агрегировать в результате воздействия влаги при 37°С, что приводит к потере биологической активности и возможным изменениям в иммуногенности. Для стабилизации в зависимости от используемого механизма могут быть разработаны рациональные стратегии. Например, если было обнаружено, что механизм агрегации является образованием межмолекулярной SS-связи посредством тиодисульфидного обмена, то стабилизация может быть достигнута путем модификации сульфгидрильных остатков, лиофилизации из кислых растворов, контролированием содержания влаги, использованием соответствующих добавок и разработкой композиций специфической полимерной матрицы.

В случае введений в течение нескольких дней или дольше в зависимости от состояния лечение продолжают до желаемого подавления симптомов заболевания. Тем не менее, могут быть полезны другие режимы дозировки. Прогресс этой терапии легко контролировать обычными методами и тестами.

Терапевтические композиции GGCI получают для хранения путем смешивания GGCI, имеющего желаемую степень чистоты, с необязательными физиологически приемлемыми носителями, наполнителями или стабилизаторами (Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. , Ed. , (1980)), в форме лиофилированного осадка или водных растворов. Приемлемые носители, наполнители или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозах и концентрациях и включают буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту; низшие (менее чем приблизительно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сыворо- 23 030611

точный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин, лизин; или моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахарные спирты, такие как маннит или сорбит; сольобразующие противоионы, такие как натрий; и/или неионные ПАВ, такие как Tween®, Pluronics™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ).

Термин "буфер" при использовании в данном документе обозначает фармацевтически приемлемый наполнитель, который стабилизирует рН фармацевтического состава. Подходящие буферы хорошо известны в данной области и могут быть найдены в литературе. Фармацевтически приемлемые буферы включают, без ограничения перечисленным, гистидиновые буферы, цитратные буферы, сукцинатные буферы, ацетатные буферы, фосфатные буферы, аргининовые буферы или их смеси. Указанные буферы обычно используют в количестве от около 1 до около 100 мм, от около 5 до около 50 мМ и около 10-20 мМ. рН буферного раствора может составлять по меньшей мере 4,0, по меньшей мере 4,5, по меньшей мере 5,0, по меньшей мере 5,5 или по меньшей мере 6,0. рН буферного раствора может составлять менее 7,5, менее 7,0 или менее 6,5. рН буферного раствора может составлять от около 4,0 до около 7,5, от около 5,5 до около 7,5, от около 5,0 до около 6,5 и от около 5,5 до около 6,5 с кислотой или основанием, известными в данной области, примерами которых являются соляная кислота, уксусная кислота, фосфорная кислота, серная кислота и лимонная кислота, гидроксид натрия и гидроксид калия. При использовании в данном документе при описании рН "около" означает плюс или минус 0,2 единицы рН.

В настоящем описании термин "поверхностно-активное вещество" может включать фармацевтически приемлемый наполнитель, который используется для защиты белковых составов от механических напряжений, таких как перемешивание и деформация при сдвиге. Примеры фармацевтически приемлемых поверхностно-активных веществ включают сложные эфиры жирных кислот и полиоксиэтиленсорбитана (Tween) полиоксиэтиленалкиловые эфиры (Brij), простые эфиры алкилфенилполиоксиэтилена (Triton-X), сополимер полиоксиэтилена и полиоксипропилена (полоксамер, Pluronic) и додецилсульфат натрия (SDS). Подходящие поверхностно-активные вещества включают сложные эфиры полиоксиэтиленсорбитана и жирных кислот, такие как полисорбат 20 (продаваемый под торговой маркой Tween 20®) и полисорбат 80 (продаваемый под торговой маркой Tween 80®). Подходящие сополимеры полиэтиленполипропилена представляют собой те, которые продаются под названиями Pluronic® F68 или Poloxamer 188®. Подходящие алкиловые эфиры полиоксиэтилена представляют собой те, которые продаются под торговой маркой Brij®. Подходящие сложные эфиры алкилфенолполиоксиэтилена продаются под торговым названием Triton-X. При использовании полисорбата 20 (Tween 20®) и полисорбата 80 (Tween 80®) их, как правило, используют в концентрации от около 0,001 до около 1%, от около 0,005 до около 0,2%, от около 0,01% до около 0,1% мас./об.

При использовании в данном документе термин "стабилизатор" может включать фармацевтически приемлемый наполнитель, который защищает активный фармацевтический ингредиент и/или композицию от химической и/или физической деградации при изготовлении, хранении и применении. Химические и физические пути деградации белковых фармацевтических средств рассматриваются Cleland et al., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst, 70(4):307-77 (1993); Wang, Int. J. Pharm., 7S5(2): 129-88 (1999); Wang, Int. J. Pharm., 203(1-2): 1-60 (2000) и Chi et al, Pharm. Res., 20(9): 1325-36 (2003). Стабилизаторы включают, без ограничения перечисленным, сахара, аминокислоты, полиолы, циклодекстрины, например гидроксипропил-бета-циклодекстрин, сульфобутилэтил-бета-циклодекстрин, бета-циклодекстрин, полиэтиленгликоли, например PEG 3000, PEG 3350, PEG 4000, PEG 6000, альбумин, сывороточный альбумин человека (HSA), бычий сывороточный альбумин (BSA), соли, например хлорид натрия, хлорид магния, хлорид кальция, энтеросорбенты, например ЭДТА, как определено ниже. Как упоминалось выше, стабилизаторы могут присутствовать в композиции в количестве от около 10 до около 500 мМ, в количестве от около 10 до около 300 мМ или в количестве от около 100 до около 300 мМ. В некоторых воплощениях примерные GGCI могут быть растворены в соответствующем фармацевтическом составе, в котором они стабильны.

GGCI могут быть также заключены в микрокапсулы, полученные, например, способами коацервации или межфазной полимеризации (например, гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и поли(метилметакрилатные) микрокапсулы соответственно), в коллоидные системы доставки лекарственных средств (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокалсулы) или в макроэмульсии. Такие способы описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences выше.

GGCI, используемые для in vivo введения, должны быть стерильными. Стерильность легко достигается фильтрацией через стерильные фильтрационные мембраны до или после лиофилизации и восстановления. GGCI обычно будет храниться в лиофилизированной форме или в растворе. Терапевтические композиции GGCI обычно помещают в контейнер, имеющий стерильное входное отверстие, например мешок для внутривенного раствора, или флакон, имеющий пробку, прокалываемую иглой для подкожных инъекций.

При местном применении GGCI удобно объединять с другими ингредиентами, такими как носители

- 24 030611

и/или адъюванты. Не существует ограничений на природу таких других ингредиентов, за исключением того, что они должны быть физиологически приемлемыми и эффективными для их предполагаемого введения и не должны разрушать активность активных ингредиентов композиции. Примеры подходящих носителей включают мази, кремы, гели или суспензии с очищенным коллагеном или без него. Композиции могут быть также импрегнированы в трансдермальные пластыри, пластыри и бинты предпочтительно в жидкой или полужидкой форме.

Для получения гелевого состава GGCI, включенные в жидкую композицию, могут быть смешаны с эффективным количеством водорастворимого полисахарида или синтетического полимера, такого как PEG, для образования геля с соответствующей вязкостью, применяемого местно. Полисахарид, который может быть использован, включает, например, производные целлюлозы, такие как этерифицированные производные целлюлозы, в том числе алкилцеллюлозы, гидроксиалкилцеллюлозы и алкилгидроксиалкилцеллюлозы, например метилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и гидроксипропилцеллюлозу; крахмал и фракционированный крахмал; агар; альгиновую кислоту и альгинаты; гуммиарабик; пуллуллан; агарозу; каррагинан; декстраны; декстрины; фруктаны; инулин; маннаны; ксиланы; арабинаны; хитозаны; гликогенов; глюканы и синтетические биополимеры; а также смолы, такие как ксантановая камедь; гуаровая камедь; камедь рожкового дерева; гуммиарабик; трагакантовая камедь и камедь карайи; и их производные и смеси. В данном документе предпочтительным желирующим агентом является агент, который инертен по отношению к биологическим системам, не токсичен, прост в приготовлении, не слишком жидкий или вязкий и не будет дестабилизировать молекулу GGCI, заключенную в нем.

Предпочтительно полисахарид представляет собой этерифицированное производное целлюлозы, более предпочтительно тот, который хорошо определен, очищен и перечислен в патентах США, например метилцеллюлоза и гидроксиалкильные производные целлюлозы, такие как гидроксипропилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза и гидроксипропилметилцеллюлоза. Наиболее предпочтительной в настоящем документе является метилцеллюлоза.

Полиэтиленгликоль, полезный при гелеобразовании, обычно представляет собой смесь низко- и высокомолекулярных ПЭГ для получения правильной вязкости. Например, для этой цели будет эффективной смесь ПЭГ с молекулярной массой 400-600 с ПЭГ с молекулярной массой 1500 при смешивании в соответствующем соотношении с получением пасты.

Термин "водорастворимый" применительно к полисахаридам и ПЭГ подразумевает включение коллоидных растворов и дисперсий. В общем, растворимость производных целлюлозы определяется степенью замещения эфирных групп, а стабилизирующие производные, пригодные для применения согласно данному документу, должны иметь достаточное количество таких эфирных групп на единицу ангидроглюкозы в цепи целлюлозы, чтобы сделать производные водорастворимыми. Обычно достаточно степени замещения эфира по меньшей мере 0,35 эфирных групп на единицу ангидроглюкозы. Кроме того, производные целлюлозы могут быть в форме солей щелочных металлов, например солей Li, Na, K или Cs.

Если метилцеллюлоза используется в геле, то предпочтительно чтобы ее содержание составляло около 2-5%, более предпочтительно около 3% геля, a GGCI присутствовал в количестве примерно 3001000 мг на мл геля.

Эффективное количество GGCI, используемое терапевтически, зависит, например, от терапевтических задач, способа введения и состояния пациента. Соответственно необходимо, чтобы терапевт оттитровал дозировку и модифицировал способ введения, как это требуется для получения оптимального терапевтического эффекта. Как правило, врач будет вводить GGCI до тех пор, пока достигнутая дозировка не даст искомого эффекта. В некоторых воплощениях соответствующая дозировка может быть определена на основе количества GGCI, вводимого в площадь поверхности пораженной области.

"Приближенный по времени к моменту введения терапии" относится к введению GGCI в любой разумный период времени, или до и/или после введения лечения, например как около месяца, трех недель, около двух недель, одной недели, нескольких дней, около 120 ч, около 96 ч, около 72 ч, около 48 ч, около 24 ч, около 20 ч, несколько часов, около одного часа или минут. Приближенный по времени к моменту введения лечения также может относиться либо к одновременному, либо почти одновременному введению лечения и GGCI, т.е. в пределах от нескольких минут до одного дня.

"Химиотерапия" относится к любой терапии, которая включает природные или синтетические агенты, известные в настоящее время, или которые будут разработаны в области медицины. Примеры химиотерапии включают многочисленные лекарства от рака, которые доступны в данный момент. Тем не менее, химиотерапия также включает любое лекарственное средство, природное или синтетическое, которое предназначено для лечения болезненного состояния. В некоторых воплощениях изобретения химиотерапия может включать введение нескольких современных препаратов, предназначенных для лечения болезненного состояния. Примеры включают химиотерапию в сочетании с доцетакселом, цисплатиной и 5-фторурацилом для пациентов с местно-распространенным плоскоклеточным раком головы (Tsukuda M. et al., Int J Clin Oncol. 2004 June; 9 (3): 161-6), и флударабином и бендамустином в случае рефрактерной и рецидивирующей лимфомы (Konigsmann M., et al., Leuk Lymphoma. 2004; 45 (9): 1821-1827).

При использовании в данном документе примерные источники терапевтического или случайного

- 25 030611

ионизирующего излучения могут включать, например, источники альфа, бета, гамма, рентгеновского излучения и источники нейтронов.

"Лучевая терапия" относится к любой терапии, в которой любая форма излучения используется для лечения болезненного состояния. Приборы, которые производят излучения для лучевой терапии, являются либо теми приборами, которые доступны в настоящее время, либо теми, которые будут доступны в будущем.

"Хемозащита или радиозащита" относятся к защите от, или к явному снижению, кроветворной токсичности, сопровождающей терапию, ориентированную на болезненное состояние.

"Солидные опухоли" обычно относятся к злокачественным новообразованиям тканей организма, отличных от крови, костного мозга или лимфатической системы.

Примеры

Далее изобретение описано со ссылкой на следующие примеры. Эти примеры приведены только в иллюстративных целях, и изобретение не ограничивается этими примерами, а скорее охватывает все варианты, которые очевидны как результат описания, представленного данным документом.

До проведения экспериментов, описанных в данном документе, не публиковался протокол, который позволяет осуществить композиции и способы, включающие приготовление конкретного аналога GGCI 5-оксопролин для лечения злокачественных новообразований и других пролиферативных заболеваний. Аспекты и воплощения основы текущего описания являются результатом неожиданного открытия того, что некоторые составы GGCI обладают удивительными и неожиданными пользой и эффективностью при введении объекту.

В качестве примера был разработан способ получения терапевтически эффективного радиопротекторного препарата GGCI. Соединения по изобретению получали, как описано ниже, в соответствии со способами, описанными в данном документе. Однако изобретение не ограничивается этими способами; соединения также могут быть получены, как описано для структурно-родственных соединений, описанных в литературе.

Пример 1. Синтез типовых ингибиторов гамма-глутамилового цикла (GGCI).

Примерные соединения GGCI были синтезированы в соответствии со следующими схемами синтеза

Соединения формул I-VII могут быть получены с помощью способов, описанных в данном документе и показанных на фиг. 1. Соединение формулы III, например 2-имино-3-р-метоксибензил-4 сульфанил-5 диметил 1-карбоновую кислоту, получали следующим образом: эквимолярные количества (рметоксибензальдегида), диметилцистеина и двуокиси марганца растворяли в 2 л 70% этанола. Смесь готовили в роторном испарителе, после чего поднимали температуру до 70°C. В течение около 1 ч все ингредиенты в смеси растворились. Объем уменьшали до одного литра. Затем раствор оставляли остывать в колбе в течение ночи при комнатной температуре. На следующий день осажденные белые кристаллы GCL фильтровали и сушили в вакуумном сушильном шкафу. Выход оценили на уровне около 80%.

В некоторых воплощениях настоящее изобретение также относится к промежуточным продуктам реакции схем синтеза или внутри любой из схем синтеза, раскрытых в данном документе. Соединения по настоящему изобретению также могут включать оптические изомеры и их фармацевтически приемлемые соли любого из описанных в данном документе соединений.

В некоторых воплощениях данное изобретение относится также к продуктам, генерируемым схемами синтеза, раскрытыми в данном документе, где L-пеницилламин, L-цистеин или цистамин используются в качестве реагирующего вещества.

Пример 2. Демонстрация эффективности GGCI при лечении голых мышей, инокулированных меланомой человека.

Для того чтобы исследовать выживаемость бестимусных голых мышей, инокулированных внутри- 26 030611

венно опухолями, одну группу привитых мышей обрабатывали BA-GGCI, а вторую группу привитых мышей обрабатывали плацебо, после чего сравнивали эффекты обработки BA-GGCI и плацебо.

Проверяли две подгруппы голых мышей: контрольную группу и экспериментальную группу. Группы включали в общей сложности 20 бестимусных голых мышей (десять контрольных и десять экспериментальных), каждую облучали 400 рад радиации и инокулировали клетками меланомы человека 624 в количестве 3,0x10000000 клеток на мышь. Лечение экспериментальной группы рацемическим BA-GGCI начинали через 24 ч после инокуляции. Терапию вводили внутрибрюшинно (в.б.) в дозе 100 мг/кг в 2 куб. см физраствора каждый день, шесть дней в неделю. Контрольная группа получала плацебо (физраствор 2 куб. см в.б.), каждый день, шесть дней в неделю.

За объектами велось наблюдение в течение 120 дней. Результаты показали, что в контрольной группе десять из десяти объектов умерли (без выживаемости), тогда как десять из десяти объектов в группе, получавшей обработку, остались живы. У двух объектов развились небольшие опухоли после прекращения лечения.

Также были протестированы рацемический SA-GGCI и рацемический PMB-GGCI, каждый из которых показал результаты, аналогичные тем, которые были получены с рацемическим BA-GGCI.

Пример 3. Демонстрация эффективности применения GGCI при лечении рака легкого человека с использованием модели голых мышей.

В данном исследовании была продемонстрирована эффективность примерного GGCI при лечении рака легкого человека с использованием модели голых мышей. Для того чтобы исследовать выживание бестимусных голых мышей, инокулированных внутривенно опухолями, одну группу привитых мышей обрабатывали рацемическим BA-GGCI, а вторую группу привитых мышей обрабатывали плацебо и сравнивали эффекты обработки BA-GGCI и плацебо.

Исследовали две подгруппы самцов голых мышей: контрольную группу и экспериментальную группу. Группы включали 20 бестимусных голых мышей (десять контрольных и десять экспериментальных), каждую облучали 400 рад радиации и инокулировали легочными СА CRL5891 в количестве 3x10000000 клеток на мышь. Интервенционное лечение было идентичным первому исследованию, описанному выше.

За объектами велось наблюдение в течение 120 дней. В контрольной группе восемь из десяти объектов умерло. У двух выживших мышей развились большие опухоли. В обработанной группе все мыши остались живы (без детектируемых опухолей).

Также были протестированы рацемический SA-GGCI и рацемический PMB-GGCI, каждый из которых показал результаты, аналогичные тем, которые были получены с рацемическим BA-GGCI.

Пример 4. Демонстрация эффективности на основе данных, полученных на людях.

Двух пациентов с раком простаты подвергли лечению типовым GGCI в соответствии с программой благотворительно-испытательного использования.

Рацемический BA-GGCI вводили двум пациентам-людям, получающим гормональную терапию для 12 и 14 месяцев соответственно. Когда пациенты-люди не отреагировали на гормональную терапию и/или любую другую обычную терапию, начали введение лечения GGCI.

В начале лечения GGCI пациенты были прикованы к постели с уровнем PSA (простатспецифический антиген) 340 и 180 нг/мл соответственно. Оба пациента демонстрировали множественные метастазы в кости и испытывали мучительные боли. Протокол терапии GGCI включал 600 мг капсулы с GGCI 3 раза/день (составлены для людей на основании менее 5% значения LD50 токсичности на мышах). Были отмечены следующие результаты:

Первый пациент-человек (объект # 1) демонстрировал следующее в ответ на терапию типовым GGCI: уровень боли испытуемых пошла на убыль в течение 10 дней после получения терапии. Пациент достаточно оправился, чтобы вернуться к своей обычной деятельности в течение месяца. Значение PSA объекта снизилось с 340 до 18 единиц. Уровень ПСА продолжал падать до 5 единиц. САТ-сканирование костей показало существенную ремиссию. Пациент чувствовал себя нормально в течение 28 месяцев, после чего он в конце концов умер.

Следующий пациент-человек (объект # 2) демонстрировал следующее: боли утихли через 7 дней. Пациент вернулся к своим обычным видам деятельности в течение 2-3 недель. PSA испытуемого упало до 16 единиц. Объект все еще оставался жив и чувствует себя хорошо через 36 месяцев после начала лечения. Объект в настоящее время по-прежнему получает лечение GGCI на ежедневной основе.

Обработка рацемическим SA-GGCI дало результаты, аналогичные тем, что были получены при обработке B-GGCI, хотя пациенты, которым вводили SA-GGCI, субъективно ощущали себя лучше, чем пациенты, которым вводили BA-GGCI.

Пример 5. Демонстрация удивительной и неожиданной эффективности с помощью типового GGCI, полученного синтезом по фиг. 1 с использованием I-пеницилламина.

Сравнивали относительные активности примерных энантиомерных GGCI-соединений данного изобретения. Получали конъюгаты бензальдегида, салицилового альдегида и параметоксибензальдегида с использованием либо энантиомерного L-, либо D-пеницилламина в качестве второго реагента. Эффек- 27 030611

тивность рацемического BA-GGCI, рацемического SA-GGCI и рацемического PMB-GGCI при лечении рака предстательной железы человека была проверена с помощью модели голых мышей, как в примере 2, за исключением того, что голым мышам инокулировали внутривенно линию клеток рака предстательной железы человека. Одну группу инокулированных мышей обрабатывали рацемическим BA-GGCI, а контрольную группу инокулированных мышей обрабатывали плацебо, и сравнивали эффекты лечения GGCI и плацебо. Ответ на лечение контролировали по изменениям [PSA]. Результаты были аналогичны тем, что были получены на других моделях голых мышей с опухолями человека, где группа мышей, обработанных рацемическим GGCI, имела значительно более высокий коэффициент выживаемости по сравнению с контрольной группой. Также были проведены испытания рацемического SA-GGCI или PMBGGCI, которые дали схожие результаты.

Примерный L- и D-энантиомеры ВА- GGCI были получены в соответствии со схемой синтеза фиг. 1 с использованием L-пеницилламина. Получение GGCI с использованием той же схемы синтеза с Dпеницилламином в качестве исходного материала дало GGCI, который не оказывал никакого заметного влияния на объект.

При тестировании активности (L)-BA-GGCI по сравнению с соответствующим рацематом, (L)соединение по меньшей мере в два раза активнее, чем соответствующая рацемическая смесь. Аналогичные результаты были получены для L-SA-GGCI и L-PMB-GGCI по сравнению с их соответствующим рацематом.

Пример 6. Исследование токсичности, демонстрация безопасности и эффективности.

Измеряли данные LD50 и проводили изучение токсичности примерных ингибиторов гаммаглутамилового цикла на мышах Balb С. Конъюгат L-пеницилламина и метилового глиоксаля (MGPA) вводили в количестве около 4500 мг/кг в.б., 5000 мг/кг в пероральной форме. Конъюгат Lпеницилламина и параметоксифенила (PMFA) вводили в количестве 5250 мг/кг в.б., 5500 мг/кг перорально; а конъюгат L-пеницилламина и цитронеллаля (CNPA) вводили в количестве 3250 мг/кг в.б., 4500 мг/кг в пероральной форме.

Пример 7. Данные о токсичности на мышах.

Сводка определения значения LD50 для конъюгата L-пеницилламина и

салицилальдегида (L-SAPA), конъюгата L-пеницилламина и бензальдегида (L-ВАРА), конъюгата L-пеницилламина и пировиноградного альдегида (L-PAPA) и конъюгата L-пеницилламина и глутарового диальдегида (L-GAPA) на мышах B6C3F1

Соединение GGCI	Схема	Путь	Рассчитанное LD50 мг/кг/инъек	1/10 LD50
L-SAPA	День 1	в.б.	> 5000	500
	День 1	пероральный	> 5000	500
	День 1-5	в.б.	3750	375
	День 1-5	пероральный	> 5000	500
L-BAPA	День 1	в.б.	884	88.4
	День 1	пероральный	3553	355
	День 1-5	в.б.	884	88.4
	День 1-5	пероральный	2158	216
L-PAPA	День 1	в.б,	> 5000	500
	День 1	пероральный	> 5000	500
	День 1-5	в.б.	2771	277
	День 1-5	пероральный	> 5000	500
L-GAPA	День 1	в.б.	3749	375
	День 1	пероральный	>5000	500
	День 1-5	в.б.	1690	169
	День 1-5	пероральный	>5000	500

Пример 8. Типовой анализ для определения токсичности и демонстрации безопасности в животной модели.

Образец: порошок L-тиазолидин-диметилкарбоновой кислоты "L-BAPA" был замешан в корм (пеллеты).

Объекты были исследованы на подострую (4 недели) пероральную (через корм) токсичность LBAPA у мышей.

Экспериментальная процедура.

Животные и зоотехника.

40 самок и 40 самцов мышей CD1 в возрасте 8-10 недель, размещенных по 5 на клетку (клетки с верхним фильтром Milipore), половину из которых использовали в качестве контроля, получали нормальную мышиную диету (приготовленную на кормовой фабрике селекционного центра). Другая половина была экспериментальной группой и получала тот же самый состав корма, в который смешиванием и грануляцией на грануляторе добавляли 0,6 г L-тиазолидин-диметилкарбоновой кислоты на кг корма. Этот корм имел 12% влажность по сравнению с 6% влажностью контрольной диеты. Животных кормили ad libitum. Всех животных взвешивали еженедельно, и записывали потребление корма. Возможные кли- 28 030611

нические или фармацевтические эффекты проверяли раз в день. Через 4 недели мышей помещали на 24 ч в метаболические клетки, их мочу собирали, а затем у животных брали кровь, после чего забивали. Кровь анализировали, и получали мазки костного мозга для дифференциального подсчета.

Причина для помещения 40 мышей в группу заключалась в обеспечении достаточного количества крови и мочи для анализа, так чтобы все клинические анализы крови и мочи представляли собой пул из 2 мышей. Все другие результаты представляют собой отдельные результаты, выполненные в случайном порядке на одной из каждой из 2 групп мышей.

Следующие органы были проверены гистологически: надпочечники, головной мозг, глаза, половые органы, сердце, кишечник (толстая кишка, слепая кишка, двенадцатиперстная кишка, подвздошная кишка, прямая кишка), почки, печень, легкие, лимфатические узлы (мезентериальные и паховые), молочные железы, средостения, пищевод, поджелудочная железа, гипофиз, слюнные железы, скелетные мышцы, кожа, спинной мозг, селезенка, желудок, щитовидная железа, мочевой пузырь и матка. Органы фиксировали в растворе Буэна и окрашивали светло-зеленым красителем с гематоксилинэозиномфосфорномолибденовой кислотой. Фиксировали массы надпочечников, половых желез, почек, печени и гипофиза и рассчитывали соотношение массы органа/к массе тела.

Следующие лабораторные исследования были проведены:

гематология: гемоглобин, гематокрит, количество эритроцитов, лейкоциты;

клиническая химия: щелочная фосфатаза, азот мочевины крови, сывороточная глутаминовая кислота, пировиноградная трансаминаза, сахар крови;

анализ мочи: появление скрытой крови, белок Ph, билирубин, кетоны, глюкоза, нитриты, уробилиноген.

Результаты.

В течение периода наблюдения и введения доз в течение 4 недель мышей ежедневно осматривали на предмет возможных клинических симптомов, но никаких клинических или других эффектов не наблюдали.

Результаты всех проведенных испытаний приведены ниже:

1. Масса тела: по окончании эксперимента животные набирали массу, и не наблюдалась значительная разница между экспериментальной группой и контрольной группой.

2. Потребление корма: из таблиц видно, что L-BAPA-содержащий экспериментальный корм потреблялся экспериментальной группой в большем количестве, чем нормальный корм контрольной, но это было связано с тем, что влажность экспериментальной пищи значительно выше.

3. Масса и соотношение органов масса органа/тела: отсутствует существенная разница между экспериментальной и контрольной группами. Все значения находятся в пределах нормальных значений и никаких существенных различий между экспериментальной и контрольной группами не отмечено.

4. Клиническая химия крови и анализ мочи: все значения находятся в пределах нормального диапазона и никакой существенной разницы между контрольными и экспериментальными группами не отмечено (белковые следы, которые были отмечены у всех мышей, скорее всего, являются следствием незначительной контаминации мочи кормом).

5. Анализ клеток крови и дифференциальный подсчет: все значения находятся в пределах нормального диапазона, и никакой существенной разницы между контрольными и экспериментальными группами не отмечено.

6. Дифференциальный подсчет костного мозга: все значения находятся в пределах нормального диапазона и никакой существенной разницы между контрольными и экспериментальными группами не отмечено.

Г истопатология.

Гистологические исследования проводились на 10 самцах и 10 самках в каждой группе. В каждом животном исследовали 31 орган. Мозжечковые и церебральные области мозга выглядели нормальными без каких-либо признаков периваскулярной реакции. Глаза были нормальными. В семенниках сперматогенез был представлен обычным образом. В яичниках наблюдались фолликулы всех этапов. Мышца сердца и кишечник были нормальными, а молочная железа была "ювенильной" и нормальной. Нормальные паттерны были отмечены также в лимфатических узлах (паховых, мезентериальных) средостения, пищевода, поджелудочной железы, предстательной железы, матки, гипофиза, слюнных желез, скелетных мышц, коже, спинном мозге, селезенке, желудке, тимусе и мочевом пузыре. В почках клубочки и капсулы Боумена были прекрасно представлены. Проксимальные, дистальные, конволютные и собирающие канальцы были интактны и не содержали какого-либо материала. Перибронхиальные и альвеолярные области легких были чистыми. В печени портальные пространство было чистым, эпителиальные и синусоидальные элементы выглядели нормально.

У двух мышей контроля и у одной мыши в опытной группе наблюдали несколько липоидных вакуолей в гиппокампе (артефакт). Никаких других патологических или других изменений обнаружено не было.

Выводы.

При демонстрации безопасности L-тиазолидин-диметилкарбоновая кислота ("L-ВАРА"), смешанная

- 29 030611

с кормом (0,6 г на кг корма) и скормленная ad libitum в течение 4 недель, не давала никаких клинических или патологических изменений у мышей.

Патенты, патентные заявки, публикации, научные статьи, книги, веб-сайты и другие документы и материалы, указанные или упомянутые в настоящем документе, свидетельствуют об уровнях мастерства специалистов в области техники, к которой относится изобретение. Каждый такой упоминаемый документ и материал включен ссылкой в той же степени, как если бы он был включен ссылкой во всей своей полноте в отдельности или изложен или перепечатан во всей своей полноте. Кроме того, все пункты в этой заявке и все приоритетные заявки, в том числе, но без ограничения первоначальными пунктами, тем самым включены во всей их полноте и образуют часть письменного описания изобретения. Заявители оставляют за собой право физически включить в это описание любые материалы и информацию из любых таких патентов, заявок, публикаций, научных статей, веб-сайтов, информации в электронном виде и других упомянутых материалов или документов. Заявители оставляют за собой право физически встраивать в любую часть этого документа, в том числе любую часть письменного описания и формулы изобретения, упоминаемых выше, в том числе, без ограничения указанным, любые первоначальные пункты.

Изобретение было описано в данном документе широко и в общих деталях. Каждый из более узких видов и подродовых групп, входящих в общее описание, также составляют часть этих изобретений. Это включает в себя общее описание каждого изобретения, которое включено в настоящий документ, в том числе любые прилагаемые пункты формулы изобретения, оговорки или удаления отрицательных ограничений, или необязательно позволяя удаление любой задачи изобретения из рода, независимо от того, были ли исключенные материалы или варианты специально указаны или идентифицированы in haec verba в данном документе, и все такие вариации являются частью первоначального письменного описания изобретений. Кроме того, если признаки или аспекты изобретения описаны в терминах группы Маркуша, то данное изобретение следует понимать вследствие этого как описанное относительно всех без исключения и любого отдельного представителя или подгруппы представителей группы Маркуша.

Несмотря на то, что изобретение было описано в отношении синтеза GGCI и солей GGCI, следует признать, что маршруты, ступени и промежуточные продукты, представленные в описании, применимы к синтезу CGL.

Заявленное и проиллюстрированное в данном документе изобретение может соответствующим образом быть осуществлено на практике в отсутствие какого-либо элемента или элементов, ограничения или ограничений, не указанных специально в данном документе или описанных в данном документе, в качестве существенного. Так, например, термины "содержащий", "включающий", "охватывающий", "например" и т.п. должны читаться расширительно и без ограничений. Термин "включающий" означает "включающий, без ограничения перечисленным". Фраза "например" не ограничена элементами, которые следуют за этой фразой. Все ссылки на элементы, "известные в данной области", включают все эти элементы, эквиваленты и заменители, либо известные в настоящее время, либо открытые в будущем.

Заявляя свое изобретение, изобретатели оставляют за собой право заменить любую переходную фразу на любую другую переходную фразу, и изобретение следует понимать как включающее такие замещенные переходы и как образующее часть оригинального письменного описания изобретения. Так, например, термин "содержащий" может быть заменен любой из переходных фраз "состоящий, по существу, из" или "состоящий из".

Способы и процессы, иллюстративно описанные в данном документе, могут быть соответствующим образом осуществлены на практике различными последовательностями стадий. Они не обязательно ограничиваются последовательностями стадий, указанных в данном документе или в формуле изобретения.

Ни в коем случае патент не должен интерпретироваться как ограниченный конкретными примерами, или воплощениями, или способами, специально описанными в данном документе. Ни при каких обстоятельствах патент не должен интерпретироваться как ограниченный любым утверждением, сделанным любым экспертом, или иным должностным лицом, или работником Бюро по регистрации патентов и товарных знаков, если такое заявление не было специально, и без ограничений и оговорок, прямо признано заявителями в ответном письме, в частности относящемуся к заявке, которая привела к данному патенту до его публикации.

Термины и выражения, используемые в настоящем документе, были использованы в качестве терминов описания, а не ограничения, и не существует какого-либо намерения в применении таких терминов и выражений,или каких-либо их частей, для исключения каких-либо эквивалентов, известных в настоящее время или разработанных в будущем, вне зависимости от того изложены, или показаны, или описаны в данном документе такие эквиваленты, вне зависимости от того, рассматриваются ли такие эквиваленты как предсказуемые, но следует признать, что различные модификации находятся в пределах объема заявленного изобретения вне зависимости от того, выпущены ли эти пункты с или без изменений или поправок по какой-либо причине. Таким образом, следует понимать, что, хотя настоящее изобретение было конкретно описано предпочтительными вариантами и дополнительными признаками, модификации и вариации изобретения, включенные в данных документ или описанные в данном документе, могут быть повторно упорядочены специалистами в данной области, и такие модификации и вариации рас- 30 030611

сматриваются в объеме изобретений, описанных и заявленных в данном документе.

Конкретные способы и композиции, описанные в данном документе, являются типичными представителями предпочтительных вариантов и являются примерами, не предназначенными для ограничения объема настоящего изобретения. Другие цели, аспекты и варианты будут очевидны специалистам в данной области после рассмотрения настоящего описания и охватываются сущностью изобретения, определенной объемом формулы изобретения. Там где приведены примеры, описание не должно толковаться как включающее только эти примеры. Для специалиста в данной области техники будет очевидно, что различные замены и модификации могут быть введены в изобретение, раскрытое в данном документе, без отхода от объема и сущности настоящего изобретения, и от описания изобретения, включая то, что иллюстративно изложено в данном документе, в том числе в качестве иллюстрации приведены в данном документе, это является заявлением того, что различные модификации и эквиваленты могут быть использованы для имплементации концепций настоящего изобретения, без отхода от его объема. Рядовой специалист в данной области поймет, что изменения могут быть осуществлены в форме и деталях без отхода от сущности и объема настоящего изобретения. Описанные воплощения следует рассматривать во всех отношениях как иллюстративные, а не как ограничительные. Так, например, дополнительные воплощения находятся в пределах объема настоящего изобретения и представленной ниже формулы изобретения.

В то время как настоящее изобретение было раскрыто со ссылкой на конкретные воплощения, очевидно, что другие воплощения и вариации этого изобретения могут быть разработаны специалистами в данной области без отхода от сущности и объема настоящего изобретения. Прилагаемая формула изобретения включает все такие воплощения и эквивалентные вариации.

Claims (19)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение, которое имеет формулу (III)

   или его фармацевтически приемлемые соли.
2. 2. Фармацевтическая композиция для ингибирования гамма-глутамилового цикла, содержащая соединение или его фармацевтически приемлемую соль по п.1, и фармацевтически приемлемый наполнитель.
3. 3. Композиция для селективной обработки опухолевых клеток, содержащая эффективное количество соединения по п.1, при этом соединение метаболизируется и является эффективным при ингибировании синтеза глутаминовой кислоты в гамма-глутамиловом цикле.
4. 4. Композиция по п.3, которая ингибирует глутатионы-трансферазу.
5. 5. Композиция по п.3, где композиция, которая ингибирует глутатионЫ-трансферазу, содержит 2имино-3-параметоксибензил-4 сульфанил-5 диметил 1-карбоновую кислоту.
6. 6. Применение соединения по п. 1 для изготовления лекарственного средства для лечения состояния, выбранного из группы, состоящей из злокачественного новообразования, гиперплазии, неоплазии.
7. 7. Применение по п.6, при котором ингибируется или уменьшается прогрессия опухоли или ингибируется или снижается MDR.
8. 8. Способ лечения злокачественного новообразования, включающий введение объекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей соединение по п.1, при котором ингибируется биосинтез гамма-глутамилового цикла.
9. 9. Способ по п.8, при котором в CGC-цикле ингибируется стадия реакции, катализируемая 5оксопролиназой.
10. 10. Способ по п.8, при котором в злокачественных опухолевых клетках снижается уровень глутатиона.
11. 11. Способ по п.8, при котором соединение ингибирует глутатионЫ-трансферазу.
12. 12. Способ по п.8, где эффективная доза соединения по п. 1 составляет от около 10 мг/кг до около 6

    г/кг.
13. 13. Способ по п.8, где эффективная доза соединения по п.1 дается в одной или нескольких дозах от около 3,5 до около 4,0 г/кг для каждой дозы.
14. 14. Способ по п.8, где одна или несколько эффективных доз соединения по п.1 вводится подкожно, внутривенно или внутримышечно.
15. 15. Способ по п.8, где одна или несколько эффективных доз соединения по п.1 вводится перорально.
16. 16. Способ по п.8, где злокачественное новообразование является солидной опухолью.
17. 17. Способ по п. 16, где солидная опухоль охватывает саркомы, карциномы или лимфомы.

    - 31 030611
18. 18. Способ по п.16, где злокачественное новообразование выбирают из группы, состоящей из легкого, молочной железы, простаты, поджелудочной железы, яичника, мочевого пузыря, головы и шеи, щитовидной железы, мозга, кожи и почки.
19. 19. Способ по п.8, где каждая доза соединения по п.1 составляет от около 1 нг/кг и меньше чем около 10 мг/кг, и указанная доза вводится путем доставки, выбранным из группы, состоящей из внутрикожного, внутримышечного, внутрибрюшинного, внутривенного, местного, подкожного, перорального и эпидурального путей.

    - 32 030611

    Сравнение между контрольной и обработанной GGCI мышами: человеческая злокачественная меланома