EA029777B1 - Ячмень и напитки на основе солода с низкими концентрациями dms - Google Patents

Abstract

В изобретении представлены напитки на основе ячменя, характеризующиеся заметно сниженными концентрациями диметилсульфида (DMS) и/или его предшественника S-метил-L-метионина (SMM) или не содержащие указанных соединений. Кроме того, изобретение относится к способам производства указанных выше напитков и также к растениям ячменя, которые могут использоваться при получении таких напитков, а также к другим растительным продуктам, получаемым из указанных растений. Использование изобретения дает возможность применения улучшенных процедур производства напитков с улучшенным вкусовым профилем и также в перспективе предоставляет заметное снижение потребления тепловой энергии для производства пива.

Description

изобретение относится к способам производства указанных выше напитков и также к растениям ячменя, которые могут использоваться при получении таких напитков, а также к другим растительным продуктам, получаемым из указанных растений. Использование изобретения дает возможность применения улучшенных процедур производства напитков с улучшенным вкусовым профилем и также в перспективе предоставляет заметное снижение потребления тепловой энергии для производства пива.

029777

Все патентные и непатентные ссылки, цитируемые в заявке, включены, таким образом, в качестве ссылки в полном объеме.

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к напиткам на основе солода, характеризующимся значительно сниженными концентрациями диметилсульфида (ΌΜ8) и/или его предшественника 8-метил-Ьметионина (8ΜΜ) или не содержащим одно из указанных соединений или предпочтительно оба указанных соединения. Кроме того, изобретение относится к способам производства указанных выше напитков и также к растениям ячменя, которые могут использоваться при получении таких напитков, а также к другим растительным продуктам, получаемым из указанных растений. При том, что изобретение обеспечивает производство напитков, характеризующихся улучшенными вкусовыми качествами, оно также способствует созданию новой парадигмы для способов продукции со значительным снижением входящей тепловой энергии, в частности, в отношении кипячения сусла.

Предпосылки изобретения

Напитки, в особенности, пиво, могут производиться на основе ячменя Ногйеит уи1даге Ь., который является однодольной сельскохозяйственной культурой, выращиваемой во многих частях света. Ячмень является экономически значимой культурой, как в качестве сырья для промышленных продуктов, включая пиво, так и в качестве источника корма для животных.

В пиве, а также во многих растениях и пищевых продуктах, включая чай, какао, молоко, вина, спиртные напитки (например, ром), сладкую кукурузу и многие приготовленные овощи, наличие ΌΜ8 добавляет в продукт отчетливые, как правило, приятные ноты запаха и вкуса. Однако высокий уровень ΌΜ8 ухудшает вкус, который может быть нежелательным, обычно описываемым как вкус "вареной сладкой кукурузы" и иногда как "подобный черной смородине".

В зависимости от типа пива, концентрация ΌΜ8 обычно доходит до 144 мкг/л и иногда может достигать такого высокого уровня, как 150 частей на миллиард (150 мкг/л), при том, что указанное соединение часто вносит вклад в нежелательный запах "вареных овощей" или "подобный запаху капусты" запах. Однако, низкая концентрация данного соединения иногда желательна для светлого пива, поскольку она может вносить вклад в полноту вкуса и общий аромат пива; предел чувствительности данного вкуса составляет ~25-50 частей на миллиард, например, около 30-45 мкг/л (Μе^1даа^ά, 1982). Запах ΌΜ8, как правило, не замечается при уровне ΌΜ8 <10 частей на миллиард.

8ΜΜ, здесь также обозначенный как предшественник ΌΜ8 (ΌΜ8Ρ), синтезируется в прорастающих зернах ячменя под действием функциональных компонентов цикла 8ΜΜ (фиг. 1А). В нем фермент метионин(Μеΐ)-8-метилтрансфераза (ΜΜΤ) катализирует перенос метильной группы с 8-аденозилметионина (ΑάоΜеΐ) на Μеΐ, с образованием 8ΜΜ. Последнее соединение, в свою очередь, может служить донором метила для синтеза Μеΐ из гомоцистеина (Нсу), причем данная реакция катализируется ферментом Нсу-8-метилтрансферазой (ΗΜΤ). Несмотря на наличие дебатов в отношении определяющей роли ΜΜΤ, исходно предполагалось, что он предотвращает пулы Μеΐ для синтеза белка от истощения за счет его переброски на синтез ΑάоΜеΐ (Μιιάά и Эа1ко. 1990). Цикл 8ΜΜ, как полагают, также функционирует при переносе серы на большие расстояния в растениях, когда в листьях осуществляется основной переход Μеΐ в 8ΜΜ, транспорт 8ΜΜ по флоэме, и обратный переход 8ΜΜ в Μеΐ в развивающихся зернах или других запасающих тканях (Воит§15 е1 а1., 1999). Но позднее в экспериментах со слежением за радиоактивными соединениями было показано, что указанный цикл осуществляет контроль за уровнем ΑάоΜеΐ, а не предотвращает истощение запасов Μеΐ (Капоска е1 а1., 2001). Альтернативное объяснение физиологической роли 8ΜΜ в растениях относится к регуляции синтеза этилена (Ко е1 а1., 2004), главным образом, на основе идей, взятых из исследований с рекомбинантной 1-аминоциклопропан-1карбоксилатсинтазой из дрожжей рода РюЫа.

ΜсΕ1^оу и 1асоЬ5еп (1995) предположили, что можно регулировать синтез 8ΜΜ с использованием, например, технологии антисмысловых последовательностей. Однако, не было предоставлено указаний, на какие соответствующие гены-мишени следует направить антисмысловые последовательности, хотя ожидалось, что вероятность положительного исхода находится под вопросом, поскольку значительное снижение уровня 8ΜΜ может быть вредным для роста и развития ячменя. Альтернативные решения для получения более низких концентраций 8ΜΜ ΜсΕ1^оу и 1асоЬ5еп не обсуждались (выше). Кроме того, как подробно обсуждается ниже, технологии антисмысловых последовательностей не были успешно применены в ячмене для полного блокирования генной экспрессии.

К несчастью, нет доступных способов получения трансгенных растений ячменя, которые полностью лишены экспрессии данного белка. В основном, в случае ячменя применение способов антисмысловых последовательностей приводит к образованию трансгенных растений, все же экспрессирующих некоторые количества интересующего белка (см., например, КоЬЫп5 е1 а1., 1998; 81аЬ1 е1 а1., 2004; Нап5еп е1 а1., 2007).

Также не разработано эффективных способов получения специфических мутаций с использованием химерных РНК/ДНК или сайтспецифического мутагенеза для применения в растениях ячменя. В соответствии с этим и несмотря на интенсивные усилия в данном направлении авторам настоящей публикации не известно какого-либо опубликованного примера успешного, обусловленного олигонуклеотидом

- 1 029777

направленного действия на ген ячменя. Хотя и не в отношении ячменя, Пка и Тегака (2005) отмечают, что обусловленное олигонуклеотидом направленное действие на гены тестировали в кукурузе, табаке и рисе, но во всех случаях с геном устойчивости к гербицидам ацетолактатсинтазы (АЬ8) в качестве мишени. Согласно выводам Пка и Тегака (выше), остается установить, может ли применяться указанная выше стратегия с подходящими модификациями к генам, отличающимся от генов, которые непосредственно приводят к прямому отбору, таких как гены АЬ8. Направленный мутагенез с использованием нуклеаз с цинковыми пальцами предоставляет другой инструмент, который потенциально может обеспечить дальнейшие исследования в фундаментальной биологии растений или модификации сельскохозяйственных культур (ΌιΐΗΐί е! а1., 2005; Т/Пга и \У1Ше. 2005; Китаг е! а1., 2006). Также в данном случае мутагенез не был осуществлен или успешно применен на ячмене.

Тем не менее, мутанты ячменя можно получать путем случайного мутагенеза с использованием облучения или химической обработки, такой как обработка азидом натрия (Ν8Ν₃). Пример относится к зернам ячменя, подвергнутым мутагенезу путем использования №N3, и впоследствии скринингу на высокие концентрации свободного фосфата с целью скрининга на предмет мутантов низким уровнем фитата (Ка8ти88еп апк НаЧаск, 1998); идентифицировали всего 10 мутантов из 2000 подвергнутых скринингу зерен. Хотя это далеко не всегда возможно, нахождение конкретного мутанта после обработки №ιΝ₃ зависит от его жизнеспособности и эффективного способа скрининга, и, таким образом, это далеко не всегда увенчивается успехом.

Сложная часть работы, относящаяся к идентификации многообещающих молекулярных мишеней в традиционно используемом разведении растений, касается сложности с идентификацией компонента(ов) в данном биохимическом каскаде, которые должны быть нарушены для получения требуемого изменения в итоговой работе системы, и, таким образом, с возможностью предложить подходящий способ скрининга.

Связанные с производством пива инкубации при повышенных температурах, такие как печная сушка солода, или нагревание и варка сусла, могут индуцировать химические превращения 8ММ в ΌΜ8. Вследствие свойств, присущих ΌΜ8, в особенности его точки кипения, равной всего 37-38°С, большая часть ΌΜ8, образующегося во время печной сушки и варки сусла, может быть потеряна в атмосфере. При температурах выше ~70°С, летучесть ΌΜ8 снижается до очень низкого уровня (8сПеигеп апк 8оттег, 2008), в то время как появляются условия для дальнейшего окисления до диметилсульфоксида (ΌΜ8Θ). Когда время или сила варки сусла не соответствует преобразованию остаточного 8ММ, ΌΜ8 может продолжать образовываться, пока сусло остывает, с его последующим переносом в пиво.

Разработаны технологические способы снижения уровня ΌΜ8 в пиве. Таким образом, в ЛИ 38578/93 описан способ снижения ΌΜ8 в солоде, включающий в себя обработку указанного солода паром. В патентной заявке И8 2006/0057684, выданной В18§аагк-Ргай7еп, Н. е! а1., описаны способы пивоварения, включающие в себя тепловую обработку солода при температуре 70°С и выше. И в патенте США № 5242694, выданном на имя Н. Кеи1Пег, описаны способы получения пива с низким содержанием углевода, где способы включают в себя интенсивное кипячение сусла с последующим промыванием указанного сусла диоксидом углерода. Однако все указанные выше способы обработки потребляют энергию на высоком уровне, и далее они могут изменять характеристики солода или сусла.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к напиткам, полученным из ячменя или его частей, в частности к пиву с улучшенным вкусом. Напитки, описываемые в настоящем документе, характеризуются очень низкими концентрациями ΌΜ8 или даже вовсе не содержат ΌΜ8, в особенности, это напитки с концентрациями ΌΜ8 ниже предела вкусового восприятия, и, таким образом, они характеризуются отсутствием вкуса ΌΜ8.

Кроме того, напитки по изобретению имеют превосходные вкусовые качества. Таким образом, напитки по изобретению характеризуются как особенно сбалансированные и пригодные для питья, с высоким уровнем свежести, ароматным и растительным вкусом.

Таким образом, изобретение относится к напиткам с замечательными вкусовыми качествами, основанными на отсутствии ΌΜ8 или низком уровне ΌΜ8. В данном исследовании обнаружено, что ΌΜ8 существенным образом влияет на восприятие человеком сложноэфирных соединений в пиве (ср. фиг. 1В), в соответствии с моделью, предоставленной авторами изобретения, в которой ΌΜ8 маскирует вкус указанных соединений.

Считается очень важным, что настоящее изобретение относится к ячменным или солодовым зернам с дефектами, которые специфично блокируют образование предшественника ΌΜ8. Таким образом, может предотвращаться описанная выше маскировка фруктового вкуса за счет ΌΜ8, что обеспечивает новые возможности промышленного использования ячменя и солода. Кроме того, ячменные или солодовые зерна с дефектами, которые специфично блокируют образование предшественника ΌΜ8, также имеют вкусовые качества, вызванные отсутствием ΌΜ8 как такового. Примечательно, что указанный тип ячменя или солода может использоваться в качестве сырья для вариантов эффективного промышленного применения, которые помогут организовать нестандартные условия производства, далеко превосходящие современные возможности. В частности, улучшения касаются вопросов качества пива и экологиче- 2 029777

ской устойчивости в продукции пива, в особенности для получения:

(ί) пива, имеющего низкий уровень специфичного для ΌΜ8 вкуса;

(ίί) пива, имеющего улучшенный профиль фруктового вкуса;

(ίίί) сниженных затрат энергии для производства пива и

(ίν) сниженного энергопотребления при производстве сусла.

Растения и зерна ячменя, удовлетворяющие указанным улучшениям, предоставляются в рамках настоящего изобретения.

Так, без связи с теоретическими соображениями о том, как метаболизм 8ΜΜ может быть связан с другими биологическими процессами, настоящая заявка обеспечивает ранее не предоставленные возможности для эксплуатации и испытания кормового и промышленного применения растений ячменя, дефектным по синтезу 8ΜΜ.

Настоящее изобретение относится к тому, что напитки, характеризующиеся низким уровнем специфичного для ΌΜ8 вкуса и улучшенным профилем сложноэфирного вкуса, и/или напитки, которые являются особенно сбалансированными и пригодными для питья, т.е. обладают высоким уровнем свежести, аромата и растительного вкуса, можно получать из растений ячменя или их частей, несущих мутацию в гене, кодирующем ΜΜΤ, что вызывает полную утрату активности ΜΜΤ. Такие растения обозначены здесь как ячмень "без ΜΜΤ".

Таким образом, в одном из аспектов изобретение относится к напиткам, полученным из растения ячменя или его части, где указанный напиток содержит концентрацию ΌΜ8 ниже 30 частей на миллиард (например, менее чем 30 частей на миллиард ΌΜ8) и где указанное растение ячменя несет мутацию в гене, кодирующем ΜΜΤ, что вызывает общую потерю активности ΜΜΤ.

В другом аспекте изобретение относится к растениям ячменя, которые могут использоваться для получения указанных напитков. Таким образом, также целью изобретения является предоставление растения ячменя или его частей, где растение ячменя несет мутацию в гене, кодирующем ΜΜΤ, что вызывает полную потерю функционального фермента ΜΜΤ.

Кроме того, изобретение относится к растительным продуктам, производимым из указанного растения ячменя без ΜΜΤ, включая, например, композиции солода и сусла, или сиропы и экстракты на основе ячменя, или добавки. Добавки в настоящем контексте могут представлять собой несоложенный ячмень, который можно использовать отдельно или в сочетании с осоложенным ячменем для получения сусла. Также по изобретению предоставлены способы получения указанных растений ячменя, а также способы получения напитков и других растительных продуктов.

Кроме того, в мире с международной проблемой нарушения климата, общество и промышленность должны вносить вклад в снижение глобального выделения парниковых газов и в улучшение окружающей среды. Целью изобретения, таким образом, является предоставление растений ячменя, которые могут использоваться для продукции пива с использованием способов со сниженным энергопотреблением. Таким образом, растения ячменя по изобретению могут использоваться для производства пива с применением способов, в которых снижена длительность стадий нагревания, или снижена температура стадий нагревания по сравнению со стандартными способами пивоварения.

Фундаментальную значимость имеют преимущества, касающиеся стадий печной сушки и процедур варки сусла, которые могут существенно сокращаться и осуществляться при более низких температурах по сравнению со стандартными режимами пивоварения и производства пива, со снижением энергопотребления для обеспечения более экологически устойчивого способа производства пива.

Список последовательностей

Изобретение может быть понятно в более полной мере из следующего подробного описания и сопровождающего списка последовательностей (обобщено в табл. 10), который образует часть данной заявки. В указанной таблице перечислены нуклеиновые кислоты и полипептиды, описанные в настоящем документе, обозначение олигонуклеотидных праймеров, а также клоны кДНК и гДНК, которые содержат фрагменты нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептиды, представляющие всю или существенную часть данных полипептидов, и соответствующий идентификатор (8ЕО ГО N0:). Описания последовательностей и список последовательностей, присоединенный к документу, подчиняются правилам, управляющим описаниями нуклеотидных и/или аминокислотных последовательностям в патентных заявках.

Описание фигур

На фиг. 1 показаны выбранные компоненты цикла 8ΜΜ и средние значения балльной оценки вкуса и запаха. (А) Выбранные компоненты цикла 8ΜΜ, в котором 8ΜΜ синтезируется путем переноса метила с 8-аденозилметионина (8ΑΜ) на метионин (Μθΐ), катализируемого ферментом Μθΐ-8-метилтрансферазой (ΜΜΤ). 8ΜΜ может быть, в свою очередь, донором метила для синтеза Μθΐ из гомоцистеина (Нсу), в реакции, катализируемой ферментом Нсу-8-метилтрансферазой (ΗΜΤ). Иллюстрация показывает, как связаны, по существу, необратимые реакции. Каждый оборот цикла не является полезным, поскольку он потребляет и затем регенерирует два Μθΐ, при этом преобразуя АТФ в аденозин, ΡΡί и Ρί (не показано). (В) Проиллюстрированы средние значения балльной оценки вкуса и запаха ± стандартное отклонение, начисленные образцам пива панелью дегустаторов пива, по следующим свойствам: экстрактивность, фруктовый вкус и ΌΜ8. К контрольным образцам стандартного пива добавляли только

- 3 029777

пиво (столбцы, помеченные "0"), или добавляли смесь сложных эфиров, дающую следующие концентрации в пиве: 5 м.д. (частей на миллион) этилацетата, 1,5 м.д. изоамилацетата, 0,05 м.д. этилгексаноата, 0,13 м.д. этилоктаноата (столбцы, помеченные "1"), и указанную выше смесь сложных эфиров, включающую в себя 100 частей на миллиард ΌΜ8 (столбцы, помеченные "2").

На фиг. 2 показаны молекулы, вовлеченные в образование в щелочных условиях флуоресцентного соединения 8ΜΜ-ΟΡΑ.

На фиг. 3 показаны результаты экспериментов ВЭЖХ и вестерн-блоттинга для подтверждения фенотипа без ΜΜΤ мутанта 8063 и мутанта 14018. (А) Пример основанного на ВЭЖХ разделения экстракта проростков сорта Ргекйде, с показанной элюцией аспарагиновой кислоты (Акр), глутаминовой кислоты (О1и), аспарагина (Акп), серина (8ег) и 8ΜΜ. Флуоресценцию дериватизированных ОРА экстрактов проростков ячменя возбуждали при 340 нм и измеряли испускание при 450 нм. (В) Основанное на ВЭЖХ разделение экстрактов из указанных мутантов и дикого типа сорта 8еЪакйап. Разделение компонентов в мутантном экстракте предоставляло хроматограмму без специфичных для 8ΜΜ пиков. (С) Вестернблоттинг приводит к разделенным по размеру белкам из экстракта проростков дикого типа Ргекйде (полоса 2), мутанта 8063 (полоса 3), дикого типа 8еЪакйап (полоса 5), и мутанта 14018 (полоса 6). Белки сравнения с указанными массами в кДа, разделяли в полосах 1, 4 и 7, тогда как рекомбинантную ΜΜΤ из клеток Е. сой применяли в качестве контроля и разделяли в полосе 8. Как подробно описано в примере 12, окрашенные полосы массой 120 кДа представляют собой ΜΜΤ, тогда как полоса массой 80 кДа в экстракте Е. сой не происходит от ΜΜΤ, поскольку также появляется в экстрактах клеток отрицательного контроля, трансформированных вектором рЕТ19Ъ (ср. фиг. 14В, С).

На фиг. 4 показано отсутствие активности ΜΜΤ в проростках мутанта 8063 возрастом 4 суток, при выраженной активности в проростках дикого типа сходной длительности прорастания. Активность ΜΜΤ определяли с использованием [³Н] 8ΑΜ в качестве субстрата. Катализируемый ΜΜΤ перенос метильной группы с [³Η]8ΑΜ на Μеΐ, с образованием 8ΜΜ, отслеживали путем счета сцинтилляции после удаления остатков [³Η]8ΑΜ с помощью активированного угля. Он связывал субстрат, но не вновь синтезированный меченый продукт 8ΜΜ. Иллюстрация также показывает, что 8ΜΜ отсутствовал в мутантных побегах, но присутствовал в побегах дикого типа. Всего анализировали 30 проростков мутантов и растений дикого типа, по 15 проростков мутантов и растений дикого типа.

На фиг. 5 показано сравнение содержания свободного ΌΜ8Ρ и свободного ΌΜ8 в солоде, сусле и пиве дикого типа и без ΜΜΤ. (А) И в зеленом, и в сухом солоде из мутанта 8063 были заметно снижены концентрации ΌΜ8Ρ и свободного ΌΜ8. (В) Сладкое и прокипяченное сусло из мутанта 8063 почти не содержали ΌΜ8Ρ и свободного ΌΜ8, и также пиво, полученное с использованием солода из 8063, содержало исключительно мало свободного ΌΜ8.

На фиг. 6 показано сравнение профилей вкуса, осуществленное панелью из 10 дегустаторов пива; тесты включали в себя сорта пива, сваренные из солода дикого типа сорта Ρο\\όγ и мутанта 8063 (без ΜΜΤ). Данный тип анализа включает в себя использование нескольких заранее определенных признаков вкуса, как показано на графиках, исчисляемых по шкале 0-5. Вкус считается "исключительным", в соответствии с оценкой 5, только если его свойство считается максимальным для анализируемого типа пива. (А) Итоги оценки панелью дегустаторов пива с примесью сложных эфиров и спиртов приведены в табл. 1. (В) Итоги подробной оценки панелью дегустаторов пива без примесей.

На фиг. 7 показана иллюстрация способа размножения зерен ячменя, подвергнутых мутагенезу посредством ΝαΝ₃,. Зерна поколения Μ0 развивались в растения, которые давали зерна поколения Μ1. Их можно посеять и получить растения Μ1, которые продуцируют новые зерна поколения Μ2. Затем растения М2 растут и дают зерна поколения Μ3. Зернам поколения Μ3 можно дать прорасти, и образцы из них, например, колеоптили, можно использовать для анализа. Семена Μ3 можно также посеять, и цветки соответствующих растений можно использовать для скрещивания и получения растений поколения Μ4.

На фиг. 8 показан упрощенный, схематичный обзор предпочтительного способа производства пива, включающего в себя замачивание зерна ячменя (1), проращивание (2), печную сушку (3), помол сухого солода (4), заваривание горячей водой (5), фильтрацию (6), варку сусла в присутствии добавленного хмеля (7), ферментацию в присутствии дрожжей (8), созревание пива (9), фильтрацию пива (10), упаковку, например, в бутылки, банки и тому подобное (11) и этикетирование (12). Отдельные процессы могут группироваться в секции, включающие в себя производство солода (1-3), производство сусла (4-7), ферментацию (8-9) и получение финального пива (10-12). Хотя предпочтительный способ проиллюстрирован, рассматриваются альтернативные пути, в которых пропускаются некоторые из изображенных стадий (фильтрация, например, может пропускаться или может не добавляться хмель), или могут добавляться дополнительные стадии (например, введение добавок или карбоната). Пиво также может производиться с использованием смесей осоложенного и несоложенного ячменя или только несоложенного ячменя, и в этом случае ферменты часто добавляются извне в процессе заваривания горячей водой.

На фиг. 9 в схематичной форме показана организация гена ячменя, кодирующего ΜΜΤ. Проиллюстрирована геномная последовательность длиной 6368 п.н. (8ЕЦ ГО ΝΟ: 3), которая охватывает старт- и стоп-кодоны трансляции. Экзоны и интроны показаны в виде пронумерованных прямоугольников и непронумерованных линий соответственно. Экзон 12 проиллюстрирован в виде стрелки, чтобы показать

- 4 029777

общее направление транскрипции и трансляции. Номера нуклеотидов относятся к 5'- и З'-концу указанных экзонов относительно первого основания старт-кодона трансляции. Также проиллюстрированы примерные места локализации участков ПЦР, которые соответствуют амплификациям с использованием наборов праймеров, перечисленных в табл. 2.

На фиг. 10 показана последовательность кДНК ММТ ячменя сорта РгехОде. которая охватывает старт- и стоп-кодон трансляции. т.е. кодирующую область (8ЕО ГО N0: 4). выровненную с транслируемой последовательностью (8Е0 ГО N0: 6). с использованием однобуквенного кода для аминокислот.

На фиг. 11 показано выравнивание последовательностей почти идентичных ферментов ММТ сортов ячменя Нагипа Νρο (8Е0 ΙΌ N0: 2) и Ртевйде (8Е0 ГО N0: 6). Два отдельных отличия аминокислотных остатков выделены в виде черных прямоугольников с белыми буквами.

На фиг. 12 показано. как в мутанте ячменя 8063 активируются скрытые участки сплайсинга в гене ММТ. (А) Малые горизонтальные стрелки ниже иллюстрации геномной структуры гена ММТ показывают примерное положение отжига набора праймеров 15. ср. табл. 4. (В) Визуализация полос ДНК путем электрофореза в агарозном геле. представляющих собой продукты полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). проведенной с использованием матрицы РНК из дикого типа сорта Ртевйде или мутанта 8063. (С) Иллюстрация. на которой показана экзон-интронная структура ПЦР продуктов панели В. с использованием тех же графических элементов. что в А. Экзон 5 продукта 4 короче по сравнению с таковым дикого типа. Вертикальные стрелки указывают на примерные положения преждевременных стоп-кодонов трансляции. Вследствие выбора праймеров продукты не включают в себя экзоны 1 и 2. Однако предсказано. что мРНК также содержит экзоны 1 и 2. (Б) Подробная иллюстрация транскриптов. появившихся в результате мутантного 5'-участка сплайсинга в интроне 5 (Ми1.) и данного участка дикого типа (^Т). причем участок мутации указан подчеркнутым основанием. Стрелки. объединенные сплошными линиями. помеченные 3 и 4. маркируют донорный и акцепторный участки. использованные во время сплайсинга продукта 3 и продукта 4 соответственно (ср. панель С). Пунктирная линия. помеченная 2*. указывает на сплайсинг транскрипта дикого типа (продукт 1 на панели С) и на не подвергнутый сплайсингу продукт 2 (ср. панель С). Основания экзонов и интрона 5 показаны буквами в нижнем и верхнем регистре соответственно. п1: нуклеотид. (Е) Обзор композиции 5' и 3' участков сплайсинга в однодольных (81шЪа1Й1 апй Мей1ет. 1992). по сравнению с последовательностью интрона 5 гена ММТ мутанта 8063.

На фиг. 13 показаны экспрессирующие плазмиды для гетерологичной экспрессии аберрантных ММТ мутанта 8063 и выравнивание кодируемых белков. (А) Иллюстрация фрагмента №о1-ВашН1 рЕТ19Ъ-ММТ. включающего в себя выбранные участки рестрикции: кодирует ММТ дикого типа. слитую с последовательностью. определяющей Ηίδ-тэг (*; последовательность МОНННННННННН; 8Е0 ГО N0: 69) в одной рамке с участком энтерокиназы (**; последовательность 88СНГОБББКН; 8Е0 ГО N0: 70). Конструкции с делециями проиллюстрированы на (В). (С) и (Б). (Е) Выравнивание кодируемых последовательностей ММТ (8Е0 ГО N0: 6. 11. 13. 15 из конструкций. показанных в А. В. С и Б соответственно). Синтетический пептид. соответствующий участку последовательности. помеченному звездочками. применяли для получения поликлональных антител против ММТ ячменя. Последовательность. находящаяся между остатками 333 и 1084. не показана для фермента дикого типа (8Е0 ГО N0: 6).

На фиг. 14 показаны результаты гетерологичной экспрессии в Е. сой ММТ дикого типа и мутантных форм ММТ из сорта Ртевйде и мутанта 8063 соответственно. при том. что подробности эксперимента описаны в примере 12. Экстракт клеток Е. сой. трансформированных вектором рЕТ19Ъ. а также аликвота чистого 8ММ служили в качестве образцов контроля эксперимента. Области геля между полосами 4 и 5 обоих блотов. содержащие данные. не имеющие отношения к настоящей заявке. удаляли в электронном виде после сканирования. (А) Профили ВЭЖХ чистого 8ММ. а также экстрактов из клеток Е. сой. трансформированных указанной плазмидой. С целью сравнения профили. также показаны в общей части фиг. 18. (В) Результаты вестерн-блоттинга разделенных по размеру белков из растворимых клеточных экстрактов клеток Е. сой. трансформированных плазмидами рЕТ-ММТ (полоса 2). рЕТ19Ъ-Ьше8063Ргой3 (полоса 3). рЕТ19Ъ-Еше8063-Ртой4 (полоса 4). и рЕТ19Ъ (полоса 5). Белки сравнения с массами. указанными в кДа. разделяли в полосе 1. (С) Результаты вестерн-блоттинга разделенных по размеру белков из экстрактов телец включения клеток Е. сой. трансформированных плазмидами. обозначенными в легенде к части фигуры В здесь и выше. Первичные поликлональные антитела. использованные в вестерн-анализах. индуцировали против синтетического пептида длиной 15 остатков из ММТ ячменя. соответствующего аминокислотной последовательности. отмеченной звездочками на фиг. 13.

На фиг. 15 показана иллюстрация подходов к идентификации зерен. которые характеризуются мутацией С3076^Л в гене ММТ мутантного 8063. (А) В предположительной реакции 1 и реакции 2 набор праймеров 20 (ср. с табл. 7) дает ПЦР-фрагмент длиной 271 п. н. и не дает фрагмента соответственно. как схематично показывает окрашенная бромистым этидием полоса после электрофореза в агарозном геле соответствующих реакционных смесей (С). В предположительных реакциях 3 и 4 (В) только последняя генерирует ПЦР-фрагмент. Горизонтальные стрелки показывают полную последовательность. соответствующую ДНК-матрице. тогда как стрелки с острым изломом указывают на несовпадение. (Б) Анализ вестерн-блоттинга с антителом против ММТ распознает фермент ММТ массой 120 кДа в зерне дикого

- 5 029777

типа сорта Ргекйде (полоса 2), но не в мутанте 8063. Стандартные белки разделяли в полосе 1 с указанием соответствующих масс в кДа.

На фиг. 16 показано, как в мутантном ячмене 14018 активируются скрытые участки сплайсинга в гене ММТ. (А) Малые горизонтальные стрелки под иллюстрацией геномной структуры гена ММТ указывают на примерное положение отжига праймеров набора 16, ср. с табл. 4. (В) Визуализация полос ДНК после электрофореза в агарозном геле продуктов ОТ-ПЦР с использованием матрицы РНК из дикого типа (сорт 8еЪа5Йап) или мутанта 14018. (С) Изображение для иллюстрации интронно-экзонной структуры продуктов ПЦР с панели В, с использованием тех же графических элементов, что в А. Экзон 2 продукта 8 укорочен по сравнению с таковым дикого типа. Вертикальные стрелки указывают на примерные положения преждевременных стоп-кодонов трансляции. Вследствие выбора праймеров продукты не содержат экзон 1. Однако можно предсказать, что мРНК также содержит экзон 1. (Ό) Подробная иллюстрация транскриптов, полученных с 5'-участка сплайсинга в интроне 2 мутантного гена (Ми!.) и гена дикого типа (АТ), причем участок мутации указан подчеркнутым основанием. Стрелки, объединенные сплошными линиями, отмеченными 7 и 8, указывают на донорные и акцепторные участки, использованные во время сплайсинга продукта 7 и продукта 8 соответственно (ср. с панелью С). Пунктирная линия, отмеченная 6*, указывает на сплайсинг транскрипта дикого типа (продукт 5 на панели С) и на не подвергнутый сплайсингу продукт 6 (ср. с панелью С). Основания экзонов и интрона 2 показаны буквами в нижнем и верхнем регистре соответственно; п!: нуклеотид. (Е) Обзор композиции 5' и 3' участков сплайсинга в однодольных (§1тЪа1Л и Мей1ег, выше) в сравнении с последовательностью интрона 2 для гена ММТ, мутант 14018.

На фиг. 17 показаны экспрессирующие плазмиды для гетерологичной экспрессии аберрантных ММТ мутанта 14018 и выравнивание кодируемых белков. (А) Иллюстрация фрагмента ЫсоКВатШ рЕТ19Ъ-ММТ включающего в себя выбранные участки рестрикции: кодирует ММТ дикого типа, слитую с последовательностью, определяющей Ηίδ-тэг (*; последовательность МСНННННННННН; 8ЕЦ ГО N0: 69) в одной рамке с участком энтерокиназы (**; последовательность 88СНГОЭЭЭКН; 8ЕЦ ГО N0: 70). Конструкции с делециями показаны на (В), (С) и (Ό). (Е) Выравнивание кодируемых последовательностей ММТ (8ЕЦ ГО N0: 18, 22, 24, 26 для конструкций, показанных в А, В, С и Ό соответственно). Последовательность, простирающаяся от остатка 213 до 1084, не показана для фермента дикого типа (8ЕЦ ГО N0: 18).

На фиг. 18 показаны основанные на ВЭЖХ результаты экспериментов по гетерологичной экспрессии в Е. сой форм дикого типа и мутантных форм ММТ из сорта Рге<11де и мутанта 14018 соответственно, причем подробности эксперимента описаны в примере 15. Чистый 8ММ и экстракт клеток Е. сой, трансформированных вектором рЕТ19Ъ служили в качестве образцов контроля эксперимента. Для целей сравнения хроматограммы, помеченные звездочками, представляют также интегральные части фиг. 14А.

На фиг. 19 показана иллюстрация генетического подхода к идентификации зерен, характеризующихся мутацией С1462^Л в гене ММТ мутанта 14018. (А) В гипотетической реакции 1 и реакции 2 набор праймеров 29 (ср. с табл. 9) дает ПЦР-фрагмент длиной 121 п.н. не дает фрагмента соответственно, как схематично показано посредством окрашенной бромистым этидием полосы после электрофореза в агарозном геле соответствующих реакционных смесей (С). В гипотетических реакционных смесях 3 и 4 (В) только последняя генерирует ПЦР-фрагмент (123 п.н.). Горизонтальные стрелки показывают полную последовательность, соответствующую ДНК-матрице, тогда как стрелки с острым изломом указывают на несовпадение. (Ό) Анализ вестерн-блоттинга с антителом против ММТ распознает фермент ММТ массой 120 кДа в зерне дикого типа сорта 8еЪа§йап (полоса 2), но не в таковом мутанта 14018. Стандартные белки разделяли в полосе 1, с указанием соответствующих масс в кДа.

Подробное описание изобретения

Определения.

В описании, фигурах и таблицах, которые последуют, используется некоторое количество терминов. Для предоставления спецификаций и формулы изобретения, включая объем, в котором даны такие термины, предоставлены следующие определения.

Как применяют в настоящем документе, единственное число может означать один или несколько, в зависимости от контекста, в котором оно используется.

Термин "агрономический признак" описывает фенотипический или генетический признак растения, который вносит вклад в функциональность или экономическую ценность указанного растения. Такие признаки включают в себя устойчивость к заболеванию, устойчивость к насекомым, устойчивость к вирусам, устойчивость к нематодам, засухоустойчивость, устойчивость к высокой степени засоленности, урожайность, высоту растения, число дней до зрелости, профиль зерен (т.е. фракционирование зерен по размеру), содержание азота в зернах и т.п.

Термин "ячмень" по отношению к способу получения пива, в частности, при использовании для описания способа получения солода, означает ячменные зерна. Во всех других случаях, если не указано иначе, "ячмень" означает растение ячменя (Ногбеиш уи1даге, Ь.), включая любую разновидность, в то время как часть растения ячменя может быть любой частью растения ячменя, например, любой тканью или клетками.

- 6 029777

"Зерновое" растение, как определено в настоящем документе, является представителем семейства растений Огатшае, культивируемым исходно из-за его содержащих крахмал семян. Зерновые растения включают в качестве неограничивающих примеров ячмень (Ногйеит), пшеницу (ТпИсит). рис (Огу/а). кукурузу (2еа), рожь (8еса1е), овес (Ауепа), сорго (Зогдйнт), и ТгШса1е, гибрид ржи и пшеницы.

"ΌΜ8Ρ", как это применяют в настоящем документе, представляет собой аббревиатуру для предшественника ΌΜ8 или возможного предшественника ΌΜ8, т.е. для молекул, которые могут преобразовываться в ΌΜ8 во время продукции напитков. 8ΜΜ представляет собой большую часть ΌΜ8Ρ, если не всего его. Уровень ΌΜ8Ρ определяется здесь, как количество ΌΜ8, который может образовываться из ΌΜ8Ρ в конкретном растительном материале или его продукте, путем кипячения в щелочных условиях в течение 1 ч. Как определено в настоящем документе, 1 часть на миллиард ΌΜ8Ρ может преобразовываться в 1 часть на миллиард ΌΜ8.

Под "кодированием" или "кодированным" в отношении конкретной нуклеиновой кислоты подразумевается содержание информации для трансляции в конкретный белок. Нуклеиновая кислота, которая кодирует белок, может включать в себя нетранслируемые последовательности (например, интроны) внутри транслируемых областей нуклеиновой кислоты, или может быть лишена таких промежуточных нетранслируемых последовательностей (например, в кДНК). Информация, посредством которой белок кодируется, определяется применением кодонов.

Как применяют в настоящем документе, "экспрессию" в отношении нуклеиновых кислот следует понимать как транскрипцию и накопление смысловой мРНК или антисмысловой РНК, происходящей из фрагмента нуклеиновой кислоты. "Экспрессия", как это применяют к белкам, относится к трансляции мРНК в полипептид.

Термин "ген" означает сегмент ДНК, вовлеченный в продукцию полипептидной цепи; он включает в себя области, предшествующую и следующую после кодирующей области (промотор и терминатор). Кроме того, гены растений являются прерывистыми по сравнению с кодируемыми ими белками, состоя из экзонов, прерывающихся интронами. После транскрипции в РНК интроны удаляются путем сплайсинга с образованием зрелой матричной РНК (мРНК). "Участки сплайсинга" между экзонами обычно определяются консенсусными последовательностями, действующими в качестве сигналов сплайсинга для процесса сплайсинга, состоящего из делеции интрона из первичного РНК-транскрипта и соединения или слияния концов оставшейся РНК на каждой стороне вырезанного интрона.

Термин "проращивание", как его применяют в настоящем документе, означает начало и продолжение роста ячменного зерна в различных композициях, таких как нормальная почва, находящаяся в природе. Проращивание также может иметь место в почве горшков, помещенных в вегетационные камеры и тому подобное, или, например, иметь место на влажной фильтровальной бумаге, помещенной в стандартные лабораторные чашки Петри, или во время соложения (например, в замочных танках или ящиках для проращивания на солодовом заводе). Проращивание, как обычно подразумевается, включает в себя гидратацию зерен, набухание зерен и рост зародыша. Факторы внешней среды, влияющие на проращивание, включают в себя влажность, температуру и концентрацию кислорода. Наблюдается развитие корня и побега.

Как применяют в настоящем документе, термин "выделенный" означает, что материал изъят из его исходного окружения. Например, встречающийся в природе полинуклеотид или полипептид, присутствующие в живом организме, не выделен, но тот же полинуклеотид или полипептид, отделенный от некоторых или всех сосуществующих материалов природной системы, выделен. Такие полинуклеотиды могут быть частью вектора и/или такие полинуклеотиды или полипептиды могут быть частью композиции и также могут быть выделенными, поскольку такой вектор или композиция не представляет собой часть своего природного окружения.

Термин "зерно", как он определяется, включает в себя злаковую зерновку, также он обозначает, внутреннее семя, нижнюю и верхнюю цветковую чешую. В большинстве разновидностей ячменя верхняя и нижняя цветковые пленки прилегают к зерновке и являются частью зерна во время молотьбы. Однако, также существуют разновидности голого ячменя. В них зерновка свободна от цветковых чешуи и отмолачивается свободной, как пшеничная. Термины "зерно" и "семя" используют в настоящем документе взаимозаменяемо.

"Развитие зерна" относится к периоду жизненного цикла ячменя, который начинает при оплодотворении, когда метаболические запасы, например, сахара, олигосахариды, крахмал, фенольные полимеры, аминокислоты и белки откладываются в вакуолях и вне их, в различных тканях зерна, например, в эндосперме, семенной оболочке, алейроне и щитке, приводя к увеличению зерна, наполнению зерна и заканчивая созреванием и высушиванием зерна.

Термины "общая потеря функциональной ΜΜΤ" и "общая потеря активности ΜΜΤ" относятся к отсутствию ферментативной активности ΜΜΤ, т.е. к растению ячменя с не поддающейся обнаружению активностью ΜΜΤ при использовании анализа, описанного в примере 2 настоящей заявки ниже. Альтернативно, активность ΜΜΤ растения ячменя определяется путем выделения кДНК ΜΜΤ указанного ячменя и определения того, способен ли белок, кодируемый указанной кДНК, катализировать перенос метильной группы с 8ΑΜ на Μеΐ, с образованием за счет этого 8ΜΜ.

- 7 029777

Термин "солодовый напиток" относится к напиткам, полученным с использованием солода, необязательно в смеси с другими ингредиентами, например, с использованием смесей осоложенного и несоложенного ячменя, предпочтительно к напиткам, полученным способом, включающим в себя инкубацию солода с горячей водой. Солодовый напиток может, например, представлять собой виды пива или виды безалкогольных напитков на основе солода, типа мальтина.

Термин "ферментированный солодовый напиток" относится к солодовому напитку, который был ферментирован, например, инкубирован с дрожжами.

Термин "активность ММТ" относится к ферментативной активности фермента метионин-8метилтрансферазы ячменя. В контексте настоящего изобретения "активность ММТ" представляет собой катализируемое ММТ метилирование атома серы Ме! с получением 8ММ. Даже хотя фермент ММТ может катализировать другие реакции, для целей определения активности ММТ в рамках настоящего изобретения рассматривается только активность по образованию 8ММ. На фиг. 1В показаны биохимические реакции, в которых Ме! преобразуется в 8ММ путем метилирования.

"Соложение" представляет собой особую форму проращивания зерен ячменя, имеющую место в контролируемых условиях окружающей среды, в замочных танках и ящиках для проращивания солодового завода, но этими устройствами примеры не ограничиваются. В соответствии со способом по настоящему изобретению, соложение начинает происходить во время и/или после того, как зерна ячменя замачиваются. Процесс соложения может останавливаться путем сушки зерен ячменя, например, в процессе печной сушки. В случае, когда солод не высушен в печах, он обозначается как "зеленый солод". Композиция солода, полученная из ячменя без ММТ, как подразумевается, содержит солод без ММТ, например, чистый солод без ММТ или любую смесь солодов, содержащую солод без ММТ. Солод может обрабатываться, например, путем помола, и в данном случае он может обозначаться как "молотый солод" или "мука".

"Заваривание горячей водой" представляет собой инкубацию молотого солода в воде. Заваривание горячей водой предпочтительно проводят при конкретной температуре и в конкретном объеме воды, так чтобы обеспечить требуемую ферментативную деполимеризацию субстратов. Температура и объем воды являются важными параметрами, поскольку они влияют на скорость снижения ферментативной активности, происходящей из солода, и, таким образом, в особенности, на интенсивность гидролиза крахмала, который может происходить. Также важным является действие протеаз. Заваривание горячей водой может происходить в присутствии добавок, которые, как подразумевается, содержат любой источник углеводов, отличный от солода, таких как, приведенные в качестве неограничивающих примеров ячмень (включая ячмень без ММТ), или маис, или рис, а также цельнозерновые или обработанные продукты, такие как крошки или крахмал, причем все они используются, главным образом, в качестве дополнительного источника экстракта (сиропы обычно дозируются во время варки сусла). Требования к обработке добавки в пивоварении зависят от состояния и типа применяемой добавки и, в частности, от температуры желатинирования или разжижения крахмала. Если температура желатинирования выше нормальной температуры сахарообразования солода, тогда крахмал желатинируют и разжижают до добавления в сусло.

Когда данная мутация фиксируется в виде гомозиготного генетического признака, например, в поколении >М3, соответствующее растение ячменя в настоящем документе взаимозаменяемо обозначается как "мутант", или как "мутантная линия" или как "линия".

"Мутации" включают в себя делеции, вставки, замены, трансверсии и точечные мутации в кодирующих и некодирующих областях гена, где некодирующая область предпочтительно представляет собой промоторную область или интроны. Делеции могут относиться к целому гену или только к части гена. Точечные мутации затрагивают изменения одного основания или одной пары оснований и могут приводить к образованию стоп-кодонов, мутаций со сдвигом рамки считывания или к заменам аминокислот. Соматические мутации являются теми мутациями, которые происходят только в определенных клетках или тканях растения и не наследуются в следующем поколении. Генеративные мутации можно найти в любой клетке растения, и они наследуются. Со ссылкой на фиг. 7 настоящей заявки, которая представляет обзор того, как зерна мутантного ячменя могут размножаться по программе селекции, зерна поколения М3 и непосредственно размноженные из них зерна, или зерна любого из последующих поколений, включая полученные из них растения, могут обозначаться как "исходные мутанты". Далее, также со ссылкой на фиг. 7 настоящей заявки, термин "селекционная линия" относится к зернам поколения М4 и любого последующего поколения, включая полученные из них растения, которые могут быть результатом скрещивания с сортовым растением или результатом скрещивания с другой селекционной линией с отдельным специфичным признаком.

Как применяют в настоящем документе, термин "без ММТ" относится к полной потере функционального фермента метионин-8-метилтрансферазы. Таким образом, "растение ячменя без ММТ" представляет собой растение ячменя, содержащее мутацию в гене, кодирующем ММТ, которая приводит к полной потере функциональной ММТ. Сходным образом, "зерна без ММТ" являются зернами, содержащими мутацию в гене, кодирующем ММТ, что приводит к полной потере функциональной ММТ, и так далее.

- 8 029777

Термин "части растения ячменя", например, содержащийся в составе значения выражения "растение ячменя или его часть", включает в себя клетки растения ячменя, протопласты растения ячменя, культуры ткани растительных клеток, из которой могут регенерироваться растения ячменя, каллусы растения ячменя и клетки растения ячменя, которые являются интактными в растениях, или большие части растения ячменя, такие как эмбрионы, пыльца, семязачатки, цветки, зерна, листья, корни, корневые кончики, пыльники или любые части растения.

"ПЦР" или "полимеразная цепная реакция" хорошо известна специалистам в данной области как способ, используемый для амплификации конкретных сегментов ДНК (патенты США № 4683195 и 4800159, выданные МиШк, К.В. с1 а1. ). Также обратная транскрипция(ОТ)-ПЦР хорошо известна специалистам в данной области. Проведение ОТ-ПЦР в биологическом образце способствует детекции экспрессируемой мРНК конкретного гена. В отношении ММТ ОТ-ПЦР, в основном, включает в себя получение образца, в котором предполагается нахождение мРНК ММТ, проведение ОТ-ПЦР в данном образце с использованием обратной транскриптазы, полимеразы и пары специфичных праймеров для амплификации РНК, если она присутствует, и детекцию продукта амплификации как признака присутствия кодирующей ММТ РНК в образце. Праймеры работают в парах - "прямой праймер" (или "вышестоящий праймер") и "обратный праймер" (или "нижестоящий праймер").

Последовательности праймеров приведены в настоящем документе в направлении от 5' до 3'.

Под термином "растительный продукт" подразумевается продукт, полученный в результате обработки растения или части растения. Например, указанный растительный продукт может представлять собой солод, сусло, ферментированный или неферментированный напиток, пищу или пищевой продукт.

"Панель дегустаторов пива" в рамках значения настоящей заявки представляет собой панель специалистов, интенсивно тренированных в определении вкуса и описании вкусов пива, с особым вниманием к сложным эфирам, высшим спиртам, жирным кислотам, компонентам, содержащим серу, и к экстрактивности. Хотя для оценки вкусовых компонентов имеется набор аналитических инструментов, относительную значимость активных в плане вкуса компонентов трудно оценить аналитически. Однако, такие сложные свойства могут оцениваться дегустаторами. Их длительные тренировки включают в себя оценку вкуса и оценку стандартных образцов пива, в которые вносили определенные концентрации компонентов пива, например, изоамилацетата, этилацетата, этилгексаноата и изоамилового спирта.

Под термином "участок сплайсинга" подразумеваются границы между экзонами и интронами в гене. Таким образом, участок сплайсинга может представлять собой границу перехода экзона в интрон, также называемую "донорный участок", или границу отделения интрона от экзона, также называемую "акцепторный" участок. Участок сплайсинга в растениях обычно содержит консенсусные последовательности. 5'-Конец интрона, в основном, состоит из консервативного динуклеотида ОТ (СИ в мРНК), а 3'конец интрона обычно состоит из консервативного динуклеотида АС. 5'-Участок сплайсинга интрона, таким образом, содержит 5'-конец интрона, а З'-участок сплайсинга содержит З'-конец интрона. Предпочтительно в контексте настоящего изобретения участок сплайсинга интрона:

(ί) 5'-участок сплайсинга, состоящий из наиболее 5'-концевого динуклеотида интрона, который, в основном, представляет собой СТ; или

(и) З'-участок сплайсинга, состоящий из наиболее З'-концевого динуклеотида интрона, который, в основном, представляет собой АС.

"Скрытые участки сплайсинга" не распознаются в нормальных условиях и, таким образом, в норме не вызывают сплайсинг. Однако в транскриптах, несущих точечные мутации в природных элементах, такие участки могут активироваться на предмет событий сплайсинга.

"Культура ткани" означает композицию, содержащую выделенные клетки одного или различных типов или коллекцию таких клеток, организованных в части растения, например, протопласты, каллуса, эмбрионы, пыльцу, пыльники и т.п.

"Дикий ячмень", Ногбеит уи1даге 88р. зроШапсит. считается предшественником культивируемых в настоящее время форм ячменя. Переход ячменя из дикого к культивируемому состоянию, как полагают, совпадал с одомашниванием растения при образовании "местных сортов ячменя". Они генетически более близкородственны современным сортам, чем дикий ячмень.

Термин ячмень "дикого типа" Ьаг1еу относится к выращиваемому общепринятым способом растению ячменя; предпочтительно термин относится к растению ячменя, от которого происходят растения ячменя по настоящему изобретению, т.е. к исходным растениям. Зерна ячменя дикого типа, как правило, доступны, например, от семенных компаний в виде сортов (часто сокращается "с"), т.е. тех генетически сходных зерен, которые перечислены в национальных организациях по растениеводству. Термины "сорт" и "разновидность" используют в настоящей заявке взаимозаменяемо.

Под термином "сусло" подразумевается жидкий экстракт солода, например, молотого солода, или зеленого солода, или молотого зеленого солода. В дополнение к указанному солоду жидкий экстракт можно получать из солода и дополнительных компонентов, таких как дополнительный содержащий крахмал материл, частично преобразованный в ферментируемые сахара. Сусло, в основном, получают завариванием в кипятке, необязательно, с последующей "промывкой пивной дробины", т.е. в процессе экстракции горячей водой остаточных сахаров и других соединений из оставшегося после заваривания

- 9 029777

горячей водой зерна. Промывка пивной дробины обычно осуществляется в фильтрационном чане, заторном фильтре, или другом аппарате, обеспечивающем отделение экстрагированной жидкости от остаточного зерна. Сусло, полученное после заваривания горячей водой, как правило, обозначается как "первое сусло", тогда как сусло, полученное после промывки пивной дробины, как правило, обозначается как "второе сусло". Если не определено конкретно, термин "сусло" может означать первое сусло, второе сусло или их комбинацию. Во время продукции пива сусло, как правило, варят вместе с хмелем. Сусло, полученное без варки с хмелем, может также обозначаться как "сладкое сусло", в то время как сусло, которое варили с хмелем и без него, может обозначаться как "прокипяченое сусло".

Растение ячменя

Ячмень представляет собой семейство растений. Ногйеиш уи1§аге ззр. зропГапеиш, считается предшественником культивируемых в настоящее время форм ячменя. Переход ячменя из дикого к культивируемому состоянию, как полагают, совпадал с радикальным изменением частот аллелей во множественных локусах. Редкие аллели и новые мутационные события были подвергнуты положительной селекции фермерами, которые быстро устанавливали новые признаки в популяциях одомашненных растений, обозначенных "местные сорта ячменя". Они генетически более близкородственны современным сортам, чем дикий ячмень. До конца девятнадцатого столетия местные сорта ячменя существовали в виде высоко гетерогенных смесей инбредных линий и гибридных сегрегатов, включая немногочисленные растения, происходящие из случайных скрещиваний с более ранними поколениями. Большая часть местных сортов замещены в прогрессивных сельских хозяйствах сортами -чистыми линиями. Оставшиеся местные сорта характеризуются промежуточным или высоким уровнем генетического разнообразия. Исходно сорта "современного ячменя" представляли собой результат селекции местных сортов. Затем они происходили из следующих друг за другом циклов скрещивания между установленными чистыми линиями, такими как линия различного географического происхождения. В итоге, результатом было сужение генетической базы во многих, возможно, во всех прогрессивных сельских хозяйствах. По сравнению с местными сортами, современные сорта ячменя имеют много улучшенных качеств (№νο, 1992; νοη ВоГЬтег, 1992), неограничивающими примерами которых, являются, например:

(ί) покрытые и голые зерна;

(ίί) покой семян;

(ίίί) устойчивость к заболеваниям;

(ίν) устойчивость к факторам окружающей среды (например, к засухе или рН почвы);

(ν) доля лизина и других аминокислот;

(νί) содержание белка;

(νίί) содержание азота;

(νίίί) композиция углеводов;

(ίχ) композиция хордеинов.

В настоящем изобретении термин "ячмень" включает в себя любое растение ячменя. Таким образом, изобретение относится к любому растению ячменя, несущему мутацию в гене, кодирующем ММТ, что приводит к общей потере функциональной ММТ.

Однако предпочтительные растения ячменя для применения по настоящему изобретению представляют собой современные сорта и чистые линии ячменя. Сорта ячменя, применяемые по настоящему изобретению, могут, например, быть выбранными из группы, состоящей из

ЗеЬазЫап, Се1ез£е,Тапдепк, Ьих, РгезЫде, За1ооп, ИегиЬа, Нагг1пдкоп, К1адез, Мап1еу, ЗсЬоопег, ЗЫгИпд, СИррег, ЕгапкИп, А1ех1з, ΒΙθπΗθϊιϊι, ΑγϊθΙ, Ьепка, Магезь, 3£θ££ί, С1тре1, СЬегь, Кгопа, Сатагдие, СЬагьоЕ, ОегкаЬо, Ргьзта, υηίοη, Века, Кут, АзаЫ 5, КОи А, Звдап На1з, Кап£о Иакаке 6ο1ά, Накака Νο.2, Κϊγϊπ - скоки Νο. 1, Кап£о 1а£е Уагьеку 6ο1ά, Вид! Νί₃ο, Νθντ Οοΐάθπ, Закикьо Νί₃ο, Зеьдо Νο.

17, Акадь Νί₃ο, Агита СоЫеп, Атадь Νί^ρο, ШзМпо 6ο1ά, Мьзако доЫеп, Нагипа Νί₃ο, Зсаг1е££, <2иепск, ΝΕΟ Τίρρίθ и йегзеу, предпочтительно, из группы, состоящей из Нагипа Νί₃ο, ЗеЬазЕьап, Тапдепк, Ьих, Ргезкьде, За1ооп, ИегиЬа, Ровдег, <2иепск и ΝΕΟ Τίρρίθ.

Таким образом, в одном из вариантов осуществления изобретения указанное растение представляет собой современный сорт ячменя, который несет мутацию в гене, кодирующем ММТ, приводящую к пол- 10 029777

ной потере функциональной ММТ, предпочтительно один из сортов, выбранных из группы сортов ячменя, описанных выше в настоящем документе. В данном варианте осуществления, таким образом, предпочтительно, чтобы растение ячменя не относилось к местному сорту ячменя.

Растение ячменя может находиться в любой предпочтительной форме. Например, растение ячменя по изобретению может быть жизнеспособным растением ячменя, высушенным растением, гомогенизированным растением или смолотым зерном ячменя. Растение может быть зрелым растением, зародышем, пророщенным зерном, осоложенным зерном, молотым осоложенным зерном или тому подобным.

Части растения ячменя могут быть любой подходящей частью растения, такой как зерна, зародыши, листья, стебли, корни, цветки или их части. Часть может, например, представлять собой срез зерна, зародыша, листа, стебля, корня или цветка. Часть растений ячменя также может быть фракцией гомогената, фракцией экстракта или фракцией молотого растения или зерна ячменя.

В одном из вариантов осуществления изобретения части растений ячменя могут представлять собой клетки указанного растения ячменя, предпочтительно жизнеспособные клетки, которые могут выращиваться ίη νίΐτο, например, в культурах клетки или ткани. В частности, в одном из вариантов осуществления указанные клетки могут представлять собой клетки, которые не способны созреть в целое растения ячменя, т.е. клетки, которые не являются репродуктивным материалом. Потеря функционального фермента ММТ.

Настоящее изобретение относится к растительным продуктам, таким как напитки, полученные из растений ячменя или их частей, причем указанные растения ячменя несут мутацию в гене ММТ, приводящую к потере функционального фермента ММТ, например, к потере по меньшей мере 90% активности ММТ, предпочтительно по меньшей мере 97%, более предпочтительно по меньшей мере 99%, еще более предпочтительно по меньшей мере 99,5% активности ММТ по сравнению с соответствующим уровнем в ячмене дикого типа, предпочтительно по сравнению с любым из сортов ячменя дикого типа, описываемых выше в настоящем документе, более предпочтительно по сравнению с ячменем дикого типа сорта РгсПщс. Наиболее предпочтительно указанное растение ячменя несет мутацию в гене, кодирующем ММТ, что приводит к полной потере функции ММТ.

Полная потеря функционального фермента ММТ может основываться на различных механизмах. Например, полная потеря функционального фермента ММТ может быть результатом нарушенного функционирования белка в указанном растении, т. е. нарушенного функционирования фермента ММТ, например, мутантного белка ММТ без выявляемой активности. Например, белок ММТ мутанта может быть укороченным белком. Потеря активности ММТ может, сходным образом, основываться на различных механизмах, например, на нарушенном функционировании белка ММТ.

Предпочтительно активность мутантного белка ММТ определяют по его способности катализировать перенос метильной группы с §АМ на Мс1. с образованием таким путем §ММ. Это, например, может осуществляться, как описано в примере 4 в данном документе ниже. Предпочтительно аминокислотную последовательность мутантного ММТ получают путем определения транслированной последовательности соответствующей выделенной кДНК ячменя. Это можно осуществлять, по существу, как описано в примере 8 в данном документе ниже. Альтернативно, мутантную ММТ растения ячменя по изобретению получают путем гетерологичной экспрессии в культуре бактериальных клеток, как описано в примере 11 и примере 12 в данном документе ниже, с последующим доказательством того, что рекомбинантный белок неактивен как фермент ММТ.

Полная потеря функциональной ММТ может пониматься как отсутствие белка ММТ. Отсутствие белка ММТ ведет к потере функции ММТ. Таким образом, растение ячменя может не содержать или содержать лишь очень мало выявляемого белка ММТ, предпочтительно белок ММТ не выявляется. Присутствие или отсутствие белка ММТ может выявляться любыми подходящими средствами, известными специалисту в данной области. Однако белок(и) предпочтительно анализируют способами, в которых белок ММТ выявляют специфичными антителами, которые распознают ММТ. Указанные способы могут, например, представлять собой вестерн-блоттинг или твердофазный иммуноферментный анализ, и указанные специфичные антитела могут быть моноклональными или поликлональными. Предпочтительно, однако, указанные антитела являются поликлональными антителами, которые распознают несколько различных эпитопов в белке ММТ. Данный параметр также может выявляться непрямым путем, например, способами определения активности ММТ. Таким образом, в одном из предпочтительных вариантов осуществления изобретения растение ячменя, как указано, несет мутацию гена, кодирующего ММТ, таким образом, вызывающую полную потерю активности ММТ, притом что в указанном растении не выявляется белка ММТ. В частности, это тот случай, когда в указанном растении ячменя, предпочтительно в зернах указанного растения ячменя, не выявляется белка ММТ с примерной массой 120 кДа, ±10%, при анализе путем вестерн-блоттинга.

Полная потеря функциональной ММТ также может являться результатом отсутствия транскрипции мРНК ММТ или наличия очень низкого уровня такой транскрипции. Специалисту в данной области понятно, что отсутствие транскрипта ММТ также приводит к отсутствию белка ММТ.

Предпочтительно, однако, полная потеря функциональной ММТ является результатом экспрессии аберрантного транскрипта ММТ. Указанный транскрипт может предпочтительно быть причиной абер- 11 029777

рантного события сплайсинга первичного транскрипта, например, вследствие мутации в участке сплайсинга. Экспрессия транскрипта, кодирующего ММТ, может, например, определяться посредством "нозерн"-блоттинга, или способами ОТ-ПЦР.

Полная потеря функциональной ММТ в растении ячменя по настоящему изобретению вызвана одной или несколькими мутациями. Таким образом, растения ячменя по настоящему изобретению, в основном, несут по меньшей мере одну мутацию в гене ММТ.

Указанная(ые) мутация(и) может(гут) быть в регуляторных областях, например, в промоторе, или в интронах, или указанная(ые) мутация(и) может(гут) быть в кодирующей белок области. Таким образом, потеря функциональной ММТ может также выявляться путем анализа мутаций в гене, кодирующем ММТ. Мутации в ММТ-кодирующем гене, могут, например, выявляться путем секвенирования указанного гена, с последующим сравнением его с последовательностью дикого типа, предпочтительно последовательностью дикого типа сорта Ргс<11дс. приведенной в данном документе как 8ЕС ГО N0: 3, или с таковой сорта ЗеЪакйаи (8ЕС ГО N0: 16). Предпочтительно после идентификации мутации потерю функции подтверждают тестированием активности ММТ, например, как описано в примере 2 или в примере 4.

Термин белок ММТ в своем значении покрывает полноразмерный белок ММТ ячменя, приведенный в 8ЕЭ ГО N0: 6, или его функциональный гомолог. В данном контексте функциональный гомолог представляет собой белок ММТ с тем же уровнем активности ММТ, ±25%, как в белке ММТ ячменя, приведенном в 8ЕС ГО N0: 6, где активность ММТ определяют, как описано в примере 2 или примере 4 в данном документе ниже.

Растение ячменя с потерей по меньшей мере 90%, например, 95%, например 99%, например, 99,5% активности ММТ или с полной потерей активности ММТ, может содержать частично функциональную или предпочтительно нефункциональную, укороченную форму ММТ, такую как форма, укороченная с Оконца или с С-конца. Растение ячменя может содержать более одной укороченной формы ММТ, например, 2, или, например, 3, или, например, более 4 различных укороченных форм ММТ, которые могут происходить от транскриптов с аберрантным сплайсингом. Указанные укороченные формы содержат только ^концевой фрагмент ММТ. В дополнение к ^концевому фрагменту ММТ дикого типа, указанные укороченные формы ММТ могут содержать дополнительные С-концевые последовательности, не находящиеся в ММТ дикого типа. Указанные дополнительные С-концевые последовательности могут, например, быть транслированными последовательностями интронов, такими как последовательности, содержащиеся в мутантной мРНК вследствие аберрантного сплайсинга. Предпочтительно указанные укороченные формы ММТ содержат максимум 500, более предпочтительно максимум 450, даже более предпочтительно максимум 400, еще более предпочтительно максимум 350, даже более предпочтительно максимум 320, еще более предпочтительно максимум 311 или максимум 288 ^концевых аминокислотных остатков 8ЕС ГО N0: 6. Это, в частности, имеет место в случае, когда указанное растение ячменя имеет полную потерю активности ММТ. Однако ММТ может также содержать меньше остатков, например, не более чем 300, например, не более чем 250, например, не более чем 200, например, максимум 150, например не более чем 147 или не более чем 133 ^концевых аминокислот 8ЕС ГО N0: 6.

В одном из самых предпочтительных вариантов осуществления укороченная форма ММТ может состоять из аминокислот 1-311 или аминокислот 1-288 8ЕС ГО N0: 6 и, необязательно, дополнительных С-концевых последовательностей, не присутствующих в ММТ дикого типа. Предпочтительно указанные дополнительные С-концевые последовательности состоят по меньшей мере из 50, более предпочтительно максимум из 30, даже более предпочтительно максимум из 10, еще более предпочтительно максимум из 4 или максимум из 1 аминокислот. В одном из самых предпочтительных вариантов осуществления укороченная форма ММТ может представлять собой белок в соответствии с 8ЕС ГО N0: 11, или 8ЕС ГО N0: 13, или 5ЕС ГО N0: 15. Ни один из белков 5ЕС ГО N0: 11, или 5ЕС ГО N0: 13, или 5ЕС ГО N0: 15 не является функциональным ферментом ММТ.

В другом, одном из самых предпочтительных вариантов осуществления укороченная форма ММТ может состоять из аминокислот 1-147, или из аминокислот 1-133 8ЕС ГО N0: 18, и необязательно из дополнительных С-концевых последовательностей, не присутствующих в ММТ дикого типа. Предпочтительно указанные дополнительные С-концевые последовательности состоят максимум из 50, более предпочтительно максимум из 40, даже более предпочтительно максимум из 39, или максимум из 33, или максимум из 30 аминокислот. В одном из самых предпочтительных вариантов осуществления укороченная форма ММТ может представлять собой белок в соответствии с 8ЕС ГО N0: 22, или 8ЕС ГО N0: 24, или 8ЕС ГО N0: 26. Ни один из белков по 8ЕС ГО N0: 22, или 8ЕС ГО N0: 24, или 8ЕС ГО N0: 26 не является функциональным ферментом ММТ.

Указанные выше укороченные формы ММТ могут, например, присутствовать в растении ячменя, несущем мутацию гена, кодирующего ММТ, где указанная мутация вводит предварительный стоп-кодон, в результате чего образуется ген, кодирующий указанные выше укороченные формы ММТ.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения растение ячменя содержит ген, который транскрибируется в мРНК, содержащую некоторую часть, но не весь ген ММТ дикого типа, соединенную без прерывания (интрон-экзонная структура гена ММТ ячменя дикого типа показана на фиг. 9). В

- 12 029777

одном из вариантов осуществления, таким образом, предпочтительно, что мРНК ММТ растения ячменя по изобретению содержит, как максимум, экзоны 1, 2, 3, 4 и 5, соединенные вместе без прерывания, или, например, максимум, экзоны 1 и 2, соединенные вместе без прерывания. В дополнение к указанным соединенным вместе экзонам мРНК ММТ растения ячменя по изобретению может содержать дополнительные З'-концевые последовательности, происходящие из интронов и/или экзонов дикого типа, где интроны разделяют экзонные последовательности. Предпочтительные примеры аберрантной мРНК ММТ растения ячменя по изобретению, определенной путем ОТ-ПЦР и, таким образом, с указанными в п.н. длинами фрагментов, проиллюстрированы на фиг. 12 и фиг. 16. Более предпочтительно аберрантные мРНК растений ячменя по изобретению соответствуют тем, что показаны на фиг. 12, и они, кроме того, содержат экзоны 1 и 2 на 5'-конце, или это мРНК, показанные на фиг. 16, которые, кроме того, содержат экзон 1 на 5'-конце.

В одном из самых предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения растение ячменя, несущее мутацию в гене ММТ, содержит мутацию в участке сплайсинга в гене ММТ, что приводит к образованию мРНК с аберрантным сплайсингом. Более предпочтительно указанную мутацию позиционируют в интроне гена ММТ, даже более предпочтительно в 5'-участке сплайсинга интрона, таком как 5'-участок сплайсинга интрона 1 (интрона, разделяющего экзоны 1 и 2), таком как 5'-участок сплайсинга интрона 2 (интрона, разделяющего экзоны 2 и 3), 5'-участок сплайсинга интрона 3 (интрона, разделяющего экзоны 3 и 4), 5'-участок сплайсинга интрона 4 (интрона, разделяющего экзоны 4 и 5), 5'участок сплайсинга интрона 5 (интрона, разделяющего экзоны 5 и 6), 5'-участок сплайсинга интрона 6 (интрона, разделяющего экзоны 6 и 7), наиболее предпочтительно в 5'-участке сплайсинга интрона 2 или интрона 5.

Предпочтительно, чтобы указанная мутация представляла собой мутацию С^А 5'-концевого основания указанных выше интронов. Таким образом, самая предпочтительная мутация представляет собой мутацию С^А 5'-концевого основания интрона 2, или мутацию С^А 5'-концевого основания интрона 5.

Растение ячменя по изобретению можно получать любым подходящим способом, известным специалисту в данной области, предпочтительно способом, описанным ниже в данном документе в разделе "Получение растений ячменя с полной потерей функциональной ММТ".

В одном из вариантов осуществления изобретения предпочтительно, чтобы растения ячменя с полной потерей активности ММТ по настоящему изобретению имели физиологические характеристики и характеристики развития, сравнимые с ячменем дикого типа. В данном документе, таким образом, предпочтительно, чтобы растение ячменя без ММТ было сходным с ячменем дикого типа в отношении значимых в сельском хозяйстве характеристик, таких как высота растения, число побегов на растение, начало цветения и/или число зерен на колос.

В одном из самых предпочтительных вариантов осуществления ген, кодирующий ММТ растения ячменя по изобретению, характеризуется последовательностью, приведенной в 8ЕО ГО N0: 8. Таким образом, предпочтительно, чтобы растение ячменя по изобретению несло мутацию С^А в основании № 3076 8Е0 ГО N0: 3 (где 8Е0 ГО N0: 3 представляет собой геномную последовательность дикого типа ММТ ячменя сорта Ргекйде).

Одним из предпочтительных примеров растения ячменя, характеризующегося полной потерей активности ММТ, является растение ячменя, депонированное 13 октября 2008 г. в Лтепсап Туре СиНиге СоИесйои (АТСС), Ра1еи1 ОерокПогу. 10801 Итуегейу Βίνά., Маиаккак, УА20110, Ипйеб 81а1ек и обозначенное как "Ячмень, Ногбеит мйдаге: линия 8063". Таким образом, растение ячменя по изобретению может представлять собой ячмень линии 8063, депонированный в АТСС 13 октября 2008 г. (АТСС Ра1еШ ЭерокП Оекфиайоп: РТА-9543), или любое растение-потомок указанного растения ячменя, где ген, кодирующий ММТ растения ячменя по изобретению, имеет последовательность, приведенную в 8Е0 ГО N0: 8.

В одном из самых предпочтительных вариантов осуществления ген, кодирующий ММТ растения ячменя по изобретению, содержит последовательность, приведенную в 8Е0 ГО N0: 19. Таким образом, предпочтительно, чтобы растение ячменя по изобретению несло мутацию С^А в основании № 14 62 8Е0 ГО N0: 16 (где 8Е0 ГО N0: 16 представляет собой геномную последовательность дикого типа ММТ ячменя сорта 8еЬакОап). Получение растений ячменя с полной потерей функциональной ММТ.

По изобретению растение ячменя с полной потерей функциональной ММТ можно получать любым подходящим способом, известным специалисту в данной области. Предпочтительно растение ячменя по изобретению получают способом, включающим стадии мутагенеза растений ячменя или их частей, например, зерен ячменя, с последующим скринингом и селекцией растений ячменя на предмет особей с полной потерей активности ММТ. Интересно, что настоящее изобретение относится, в одном из аспектов, к новому и очень эффективному способу обеспечения идентификации указанных растений ячменя.

Таким образом, целью настоящего изобретения является предоставление способов получения растения ячменя, которое несет мутацию в гене ММТ, вызывающую полную потерю активности ММТ. Указанные способы включают стадии:

(ί) мутагенез растений ячменя, и/или клеток ячменя, и/или ткани ячменя, и/или зерен ячменя, и/или

- 13 029777

зародышей ячменя, с получением таким образом ячменя поколения М0; и

(ίί) размножение указанных, подвергнутых мутагенезу растений, зерен и/или зародышей ячменя, по меньшей мере в течение 2 поколений, с получением таким образом растений ячменя поколения Мх, где х представляет собой целое число >2; и

(ίίί) получение образца из указанных растений ячменя Мх; и

(ΐν) определение уровня 8ММ в указанных образцах; и

(ν) селекция растений, где образец содержит менее чем 10 частей на миллиард 8ММ, предпочтительно менее чем 5 частей на миллиард 8ММ, более предпочтительно не содержит выявляемого 8ММ; и

(νΐ) секвенирование по меньшей мере части гена ММТ и

(νΐΐ) селекция растений, несущих мутацию в гене, кодирующим ММТ;

с получением таким путем растения ячменя, которое несет мутацию в гене ММТ, вызывающую полную потерю функциональной ММТ.

Стадия (ί) в указанном выше списке может включать в себя мутагенез живого материала ячменя, выбранного из группы, состоящей из растений ячменя, клеток ячменя, ткани ячменя, зерен ячменя и зародышей ячменя, предпочтительно выбранного из группы, состоящей из растений ячменя, зерен ячменя и зародышей ячменя, более предпочтительно зародышей ячменя. Мутагенез может проводиться любым подходящим способом. В одном из вариантов осуществления мутагенез проводят инкубацией растения ячменя или его части, например, зерен или отдельных клеток ячменя со средством мутагенеза. Такие средства известны специалистам в данной области и могут, например, быть выбраны из группы, состоящей из азида натрия (ΝαΝ₃), этилметансульфоната (ЕМ8), азидоглицерина (АС), метилнитрозомочевины (МЫИ) и малеинового гидразида (МН).

В другом варианте осуществления мутагенез проводят путем облучения, например, ультрафиолетовым светом растения ячменя или его части, такой как зерно. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения мутагенез проводят любым способом, описанным ниже в данном документе в разделе "Химический мутагенез". Неограничивающий пример подходящего протокола мутагенеза приведен в примере 1 патента США № 7420105, выданного Вгеббат, К. е! а1., а также в примере 2 ниже в настоящем документе.

Предпочтительно, чтобы мутагенез проводили таким путем, что частота требуемых мутантов составляла по меньшей мере 0,5, например, в интервале от 0,5 до 5, например, в интервале от 0,9 до 2,3 на 10000 зерен, при скрининге ячменя поколения М3.

В предпочтительном варианте осуществления растения ячменя подвергают мутагенезу. Они обозначены как поколение М0 (см. также фиг. 7).

После мутагенеза отбирают растения ячменя или их части без выявляемой активности ММТ. Предпочтительно селекция включает в себя получение образца из растения ячменя, предпочтительно из прорастающего растения ячменя, даже более предпочтительно из растения ячменя, которое проращивали в течение 4 суток. Предпочтительно, чтобы образец происходил из колеоптиля и/или первичного листа, предпочтительно из листа. Таким образом, образец может, например, составлять от 1 до 3 см ткани листа.

Образец можно подвергать экстракции и анализировать согласно впервые разработанному многостадийному протоколу, описанному в настоящем документе, включающему последовательное применение различных растворителей и связующих материалов. В основном, образец может подлежать экстракции, например, растворителем или смесью растворителей, предпочтительно вода и/или органическими растворителями. Органический растворитель может, например, представлять собой спирт, предпочтительно метанол, или органический растворитель может представлять собой алкилгалогенид, предпочтительно хлороформ. В одном из предпочтительных вариантов осуществления растворитель представляет собой смесь воды, метанола и хлороформа. Указанную экстракцию можно предпочтительно осуществлять во время смешивания, например, с использованием шейкера или миксера. В смесь растворитель/образец можно добавлять твердую основу, например гранулу, такую как стеклянную гранулу.

В предпочтительном варианте осуществления указанный выше образец листа берут из зерен поколения Мх, где х представляет собой целое число >2, предпочтительно в интервале от 2 до 10, более предпочтительно в интервале от 3 до 8. В одном из самых предпочтительных вариантов осуществления уровень 8ММ определяют в пророщенных растениях М3, или в образцах из них (таких как листья). В указанном варианте осуществления, предпочтительно, чтобы мутагенизированные зерна ячменя поколения М0 росли с получением растений ячменя, которые впоследствии скрещивали бы с получением зерен поколения М1. Процедуру повторяют до появления доступных зерен поколения М3 (ср. фиг. 7).

Определение уровня 8ММ предпочтительно основано на описанной ниже новой процедуре. Интересно, что данный способ обеспечивает высокопроизводительные скрининги, предоставляя возможность идентифицировать растения ячменя, характеризующиеся полной потерей функциональной ММТ.

В общих терминах, способ предпочтительно включает в себя взаимодействие образца или предпочтительно экстракта указанного образца, полученного как описано выше, с соединением, способным связывать 8ММ. Обнаружено, что реагент ОРА (81дта, кат. № Р7914; ср. фиг. 2), здесь и далее обозначае- 14 029777

мый как ОРА, является особенно подходящим для определения уровня 8ММ. ОРА, среди прочего, взаимодействует с 8ММ с образованием молекулы, обозначаемой как 8ММ-ОРА (ср. фиг. 2). Взаимодействие предпочтительно включает в себя инкубацию ОРА с экстрактом образца, полученным как описано выше. Кроме того, предпочтительно, чтобы в реакционную смесь добавляли 3-меркаптопропионовую кислоту. Смесь предпочтительно инкубируют при щелочном рН, предпочтительно в интервале от рН 8 до рН 11, более предпочтительно в интервале от рН 9 до рН 11, даже более предпочтительно в интервале от рН 9,5 до рН 10,5, например, при рН 10. Инкубацию предпочтительно проводят при температуре в интервале от 0 до 10°С, предпочтительно в интервале от 1 до 8°С, даже более предпочтительно в интервале от 2 до 6°С, еще более предпочтительно в интервале от 3 до 5°С, например, при 4°С. Время инкубации предпочтительно составляет >10 мин.

На основе наблюдений того, что 8ММ-ОРА поглощает и излучает свет на 340 и 450 нм соответственно, его детекция возможна с использованием флуоресцентной спектроскопии. В исходном способе детекции предпочтительно применяется разделение экстракта на колонке, предпочтительно на колонке 30x2 мм Оеш1ш 3μ С18 (Ркеиотеиех, кат. № 00А-4439-80; Ркеиотеиех, 2006), с последующей детекцией флуоресценции с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, предпочтительно с использованием ультраэффективной жидкостной хроматографии (система ИРЬС, Ща1егк). настроенной на идентификацию и измерение уровня флуоресценции молекул, характеризующихся возбуждением при 340 нм и испусканием при 450 нм. При использовании данного способа "отсутствие выявляемого 8ММ" означает отсутствие выявляемых соединений, которые элюируются совместно с 8ММ. В данном контексте малое "плечо" хроматографического пика считается артефактным пиком. Малое плечо с правой стороны пика Аки/Зег, ср. фиг. 3, таким образом, не считается представляющим собой пик 8ММ. Таким образом, в качестве примера, две верхние хроматограммы, показанные на фиг. 3В, как считается, обозначают "отсутствие выявляемого 8ММ", в то время как нижняя хроматограмма на указанной фигуре представляет собой разделение образца, содержащего 8ММ.

Детекция 8ММ может предпочтительно осуществляться, как описано в примере 2. Предпочтительный способ выбора растения ячменя по изобретению описан далее в настоящем документе в примере 2. Замечательно, что указанный выше способ скрининга является особенно подходящим. Во-первых, данный аналитический способ является новым. Кроме того, имеется значительное преимущество в указанном способе, который разработан для определения уровня 8ММ в прорастающих растениях ячменя, таких как листья прорастающих растений ячменя. Временные характеристики забора проб из прорастающих растений ячменя приводят к получению неожиданно чистых препаратов для выявления 8ММ на основе ИРЬС. Другие образцы, например, образцы сусла из сходных зерен, как описано выше, являются слишком сложными по составу и, как правило, не могут использоваться в указанном способе хроматографии для определения уровня 8ММ.

После идентификации растения ячменя, содержащего менее чем 10 частей на миллиард 8ММ, предпочтительно не содержащего выявляемого 8ММ, соответствующий ген ММТ или его часть обычно секвенируют для определения того, может ли интересующее растение ячменя классифицироваться как содержащее мутацию в гене ММТ. Затем отбирают растения ячменя, характеризующиеся тем, что они не содержат выявляемого 8ММ, и в них одно или несколько оснований кодирующего ММТ гена отличаются по сравнению с последовательностью дикого типа. В данном контексте последовательность дикого типа предпочтительно представляет собой последовательность, находящуюся в соответствующем сорте ячменя дикого типа, предпочтительно последовательность, приведенную в настоящем документе как 8ЕЦ ГО N0: 3. Предпочтительные мутации описаны выше в настоящем документе.

Выбранные мутанты ячменя могут выращиваться далее, и растения последующих поколений могут подвергаться повторному скринингу на предмет содержания 8ММ. После селекции подходящих растений ячменя они могут включаться в программы разведения с использованием общепринятых способов, описанных в настоящем документе ниже в разделе "Разведение растений".

Растительные продукты.

Настоящее изобретение в одном из аспектов относится к напиткам или другим растительным продуктам с низким уровнем ОМ8, полученным из растений ячменя или их частей, несущих мутацию в гене ММТ, вызывающую полную потерю функции ММТ. Интересно, что такие растительные продукты, в основном, содержат очень низкие концентрации ЭМ8. Кроме того, такие растительные продукты, в основном, также содержат очень низкие концентрации 8ММ и предпочтительно также очень низкие концентрации ЭМ8О. Без связи с какой-либо теорией авторами изобретения обнаружено, что отсутствие происходящего из ячменя и солода 8ММ приводит к наличию очень низких концентраций ЭМ8 в напитках и в других растительных продуктах, полученных из указанного ячменя, характеризующегося потерей функционального фермента ММТ. Примеры подходящих растительных продуктов, таких как напитки, полученные из растений ячменя, характеризующихся полной потерей активности ММТ, описаны далее в настоящем документе.

Предпочтительно, чтобы указанные напитки или указанные растительные продукты содержали:

(ί) менее чем 30%, предпочтительно менее чем 20%, более предпочтительно менее чем 15%, даже

- 15 029777

более предпочтительно менее чем 10% ΌΜ8; и/или

(ίί) менее чем 30%, предпочтительно менее чем 20%, более предпочтительно менее чем 15%, даже более предпочтительно менее чем 10%, например, менее чем 5%, например, менее чем 2% 8ΜΜ;

от содержания ΌΜ8 и 8ΜΜ соответственно, в сходном напитке или растительном продукте, полученном из растений ячменя дикого типа.

Даже более предпочтительно, чтобы указанные напитки или указанные растительные продукты содержали:

(ί) менее чем 30 частей на миллиард, предпочтительно менее чем 25 частей на миллиард, более предпочтительно менее чем 20 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 15 частей на миллиард, еще более предпочтительно менее чем 10 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 5 частей на миллиард, даже более предпочтительно не содержали выявляемого ΌΜ8; и/или

(ίί) менее чем 50 частей на миллиард, предпочтительно менее чем 40 частей на миллиард, более предпочтительно менее чем 30 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 20 частей на миллиард, еще более предпочтительно менее чем 10 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 5 частей на миллиард, даже более предпочтительно не содержали выявляемого 8ΜΜ.

Кроме того, предпочтительно, чтобы растительный продукт включал в себя менее чем 30%, предпочтительно менее чем 20%, более предпочтительно менее чем 15%, даже более предпочтительно менее чем 10% от содержания ΌΜ8Θ в сходном напитке или растительном продукте, полученном из растений ячменя дикого типа.

Растительный продукт по настоящему изобретению может в одном из аспектов представлять собой зерна ячменя, несущие мутацию, приводящую к полной потере функциональной ΜΜΤ. Растительный продукт также может представлять собой композиции, содержащие указанные зерна, и композиции, полученные из указанных зерен, а также другие растительные продукты, полученные из указанных зерен.

В одном из аспектов растительный продукт по изобретению представляет собой композицию солода, полученную путем соложения зерен растений ячменя, которые несут мутацию в гене, кодирующем ΜΜΤ, вызывающую полную потерю активности ΜΜΤ. Под термином "соложение" подразумевается проращивание замоченных зерен ячменя, происходящее в контролируемых условиях окружающей среды (например, как проиллюстрировано на фиг. 8).

Соложение представляет собой процесс контролируемого замачивания и проращивания с последующей сушкой (предпочтительно печной сушкой) ячменного зерна. Перед сушкой вымоченные и пророщенные зерна ячменя обозначают как "зеленый солод", который также может представлять собой растительный продукт по настоящему изобретению. Данная последовательность событий имеет значение для синтеза многочисленных ферментов, вызывающих модификацию зерна в ходе процессов, которые в основном служат для деполимеризации клеточных стенок мертвых клеток эндосперма и мобилизуют питательные вещества зерна. В процессе сушки вкус и цвет (например, коричневый цвет) продуцируются как следствие химических реакций. Хотя исходно солод используется для производства напитков, он также может применяться в других промышленных процессах, например, как источник ферментов в хлебопекарной промышленности, или как ароматизатор и краситель в пищевой промышленности, например, в виде солода или солодовой муки или непрямым путем в виде солодового сиропа, и т.д.

В одном из аспектов, настоящее изобретение относится к способам продукции указанных композиций солода. Способы предпочтительно включают в себя стадии:

(ί) предоставления зерен ячменя из растения ячменя, несущего мутацию в гене, кодирующем ΜΜΤ, вызывающую полную потерю активности ΜΜΤ;

(ίί) замачивания указанных зерен;

(ίίί) проращивания замоченных зерен в заранее определенных условиях;

(ίν) сушки указанных пророщенных зерен;

с производством таким путем солодовой композиции с низким уровнем 8ΜΜ и/или ΌΜ8. Например, солод может продуцироваться любым способом, описанным Впддз с1 а1. (1981) и НоидЬ с1 а1. (1982).

Однако любой другой подходящий способ производства солода также можно использовать по настоящему изобретению, например, способы производства специальных солодов, включая в качестве неограничивающих примеров, способы жарки солода.

Интересно, что ΌΜ8 является довольно летучим соединением с точной кипения 37-38°С ДтазЬики, выше), и во время производства солода, например, во время печной сушки, композиция, как правило, подвергается нагреву, так что существенное количество ΌΜ8 испаряется. Однако во время охлаждения обычной солодовой композиции больше ΌΜ8 может образовываться из предшественников ΌΜ8 (ΌΜ8Ρ). Одним из главных преимуществ настоящего изобретения является то, что ΌΜ8 в солодовой композиции не образуется, или его образуется очень мало (ср. пример 6; фиг. 5А).

Описаны способы снижения концентрации ΌΜ8 в солоде. Многие из данных способов основываются на тепловой обработке солода. Указанная тепловая обработка может просто представлять собой нагрев солода, например, во время печной сушки, для испарения свободного ΌΜ8 посредством применения пара. Таким образом, обработка паром солода может снижать уровень свободного ΌΜ8 в солоде. Однако данные способы в основном снижают в солоде уровень свободного ΌΜ8, но влияют на уровень

- 16 029777

8ΜΜ лишь в меньшей степени. Как указано выше, предпочтительно, чтобы растительные продукты по изобретению, такие как солодовые композиции, включали в себя низкие концентрации как ΌΜ8, так и 8ΜΜ. В одном из вариантов осуществления изобретения солодовые композиции по изобретению подвергаются только ограниченной обработке, включающей в себя испарение и удаление свободного ΌΜ8 паром, или, альтернативно, не подвергаются обработке, включающей в себя испарение и удаление свободного ΌΜ8 с использованием пара во время печной сушки.

В одном из вариантов осуществления изобретения предпочтительно, чтобы солод по изобретению не был обработан броматной солью, такой как бромат калия или бромат кальция.

Солод может далее обрабатываться, например, путем помола с получением таким путем молотого солода. Таким образом, растительный продукт по изобретению может представлять собой любой вид солода, такой как необработанный солод, или молотый солод или мука из него. Молотый солод и мука из него включают в себя химические компоненты солода, включая мертвые клетки, лишенные способности опять прорастать.

Солодовые композиции по изобретению предпочтительно включают в себя максимум 3, предпочтительно максимум 2, более предпочтительно максимум 1, даже более предпочтительно максимум 0,5, например, максимум 0,2 мкг/г свободного ΌΜ8. Кроме того, предпочтительно, чтобы солодовые композиции по изобретению предпочтительно содержали максимум 2, предпочтительно максимум 1, более предпочтительно максимум 0,5 мкг/г 8ΜΜ.

В предпочтительном аспекте изобретение относится к солодовым композициям, которые содержат максимум 200, предпочтительно максимум 150, более предпочтительно максимум 100, даже более предпочтительно максимум 50, например максимум 25 частей на миллиард свободного ΌΜ8. Кроме того, предпочтительно, чтобы солодовые композиции по изобретению предпочтительно содержали максимум 1000, предпочтительно максимум 500, более предпочтительно максимум 250, даже более предпочтительно максимум 100 частей на миллиард, еще более предпочтительно максимум 50 частей на миллиард 8ΜΜ. Также предпочтительно, чтобы солодовые композиции по изобретению содержали максимум 1000, предпочтительно максимум 500, более предпочтительно максимум 100 частей на миллиард, еще более предпочтительно максимум 50 частей на миллиард ΌΜ8Ρ.

В другом аспекте изобретение относится к композициям зеленого солода, содержащим максимум 5000, более предпочтительно максимум 2500, еще более предпочтительно максимум 1000, даже более предпочтительно максимум 500, еще более предпочтительно максимум 250, например, максимум 150 частей на миллиард ΌΜ8Ρ. Также предпочтительно, чтобы указанные композиции зеленого солода содержали максимум 200, предпочтительно максимум 150, более предпочтительно максимум 100, даже более предпочтительно максимум 50, например, максимум 25 частей на миллиард свободного ΌΜ8.

В другом аспекте растительные продукты по изобретению представляют собой сиропы, такие как ячменный сироп или сироп ячменного солода. Растительный продукт может также представлять собой экстракт ячменя или солода.

В другом аспекте растительные продукты по изобретению представляют собой композиции сусла, полученные из солодовых композиций, происходящих из зерен ячменя, который несет мутацию в гене ΜΜΤ, вызывающую полную потерю активности ΜΜΤ (ср. пример 6; фиг. 5В). Указанные виды сусла можно получать только из зерен без ΜΜΤ, или из смесей, также содержащих другие зерна. Изобретение также относится к композициям сусла, полученным с использованием ячменя без ΜΜΤ или его частей, отдельно или в смеси с другими компонентами. Указанные композиции сусла могут представлять собой первое, и/или второе и/или последующее сусло. Композиции сусла могут представлять собой сладкое сусло, прокипяченное сусло или их смесь. В основном, композиция сусла содержит высокий уровень азота аминогруппы и ферментируемые углеводы, причем последние, в основном, представляют собой мальтозу. На фиг. 8 проиллюстрирован обычный способ получения сусла из солода. В основном, сусло получают путем инкубации солода с водой в процессе заваривания горячей водой. Во время заваривания горячей водой композиция солод/вода может дополняться добавочными богатыми углеводом композициями, например, ячменными, кукурузными или рисовыми добавками. Несолодовые зерновые добавки, как известно, обычно содержат очень низкие концентрации ферментов, что делает добавление солода или ферментов извне необходимым для преобразования сахара и/или получения экстракта, включая образование свободного азота аминогруппы.

В одном из вариантов осуществления изобретения растительный продукт может представлять собой несоложенный ячмень, который, например, может использоваться в качестве добавки во время заваривания горячей водой.

В основном, первая стадия способа производства сусла представляет собой помол солода, так что вода может получить доступ к частицам зерна на стадии заваривания горячей водой, что может расцениваться как продление процесса соложения за счет ферментативной деполимеризации субстратов. Во время заваривания горячей водой молотый солод инкубируют с жидкостью, такой как вода. Температуру инкубации поддерживают постоянной (изотермическое заваривание) или постепенно повышают. В предпочтительном варианте осуществления исходная температура заваривания горячей водой не превышает 70°С, предпочтительно не превышает 69°С, таким образом, например, исходная температура заваривания

- 17 029777

горячей водой может быть в интервале от 50 до 69°С, например, в интервале от 55 до 69°С, например, в интервале от 55 до 65°С. Если исходная температура заваривания горячей водой слишком высока, она влияет на ферментативную активность в сусле и может снижать или отменять требуемые виды ферментативной активности, что может приводить к изменению качества сусла. В любом случае, растворимые вещества, продуцируемые путем соложения и заваривания горячей водой, высвобождаются в указанную жидкую фракцию. Последующая фильтрация обеспечивает отделение жидкости сусла от остаточных твердых частиц, причем последние обозначают как пивная дробина. Указанное сусло может также обозначаться как "первое сусло". После фильтрации может быть получено "второе сусло" путем промывки пивной дробины горячей водой. Неограничивающие примеры подходящих процедур получения сусла описаны Вйддк е! а1. (1981) и Ноидй е! а1. (1982).

Первое, второе и дальнейшие сусла могут объединяться, и впоследствии подвергаются кипячению. Некипяченое сусло, чистое первое сусло или комбинированное сусло, также обозначают как "сладкое сусло", тогда как после кипячения его можно обозначать как "прокипяченное сусло". Если сусло подлежит использованию для производства пива, перед кипячением часто добавляют хмель.

Композиция сусла также может быть получена путем инкубации растений ячменя без ММТ или их частей, например, несоложенных растений без ММТ или их частей с одним или несколькими подходящими ферментами, такими как композиции ферментов или композиции смесей ферментов, например, иИгайо или Сегейо (Νονοζνιικδ). Композиция сусла также может быть получена с использованием смеси солода и несоложенных растений ячменя или их частей, или только с использованием несоложенного ячменя, с необязательным добавлением одного или нескольких подходящих ферментов во время указанного получения, в частности, амилаз, глюканаз (предпочтительно (1-4)- и/или (1-3,1 -4)-Р-глюканазы) и/или ксиланазы (такой как арабиноксиланазы), и/или протеазы, или смесей ферментов, содержащих один или несколько из указанных выше ферментов, например, с добавлением смеси ферментов Оибеа Рго (Nονοζутеδ).

Ячмень по настоящему изобретению можно добавлять в соложеное сусло и использовать в качестве добавки. Более конкретно, ячмень по изобретению можно использовать вместе с солодом в любом сочетании для заваривания горячей водой, с добавленными извне пивоваренными ферментами или без них, в качестве неограничивающих примеров, например, в отношении ячмень:солод = 100:0, или 75:25, или 50:50, или 25:75.

В традиционных способах пивоварения сусло варят в течение длительного времени, в основном, в интервале от 60 до 120 мин, причем одна из причин этого состоит в том, что длительное кипячение снижает количество ОМ§, который летуч. Однако длительное кипячение является нежелательным по некоторым другим причинам, например, поскольку длительное кипячения требует значительной затраты энергии. Кроме того, указанное кипячение может вести к образованию нежелательных побочных привкусов за счет альдегидов Стрекера. По настоящему изобретению сусло с низкими концентрациями ЭМ8 может производиться из ячменя без ММТ даже без длительного кипячения. Таким образом, сусло по предпочтительному варианту осуществления изобретения кипятят максимум в течение 45 мин, даже более предпочтительно максимум в течение 30 мин, например, максимум в течение 15 мин. Примечательно, что даже если сусло интенсивно кипятят, ЭМ8 может все же с течением времени образовываться из ЭМ8Р. Интересно, что сусло по настоящему изобретению сохраняет низкую концентрацию ЭМЗ. которая существенно ниже, чем та, которая получается после кипячения обычного сусла.

В дополнительном варианте осуществления изобретения предпочтительно, чтобы сусло не подвергалось промывке диоксидом углерода после кипячения сусла и после ферментации.

Предпочтительно композиции сусла по изобретению содержат менее чем 30 частей на миллиард, предпочтительно менее чем 25 частей на миллиард, более предпочтительно менее чем 20 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 15 частей на миллиард, еще более предпочтительно менее чем 10 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 5 частей на миллиард ОМ§, еще более предпочтительно не содержат выявляемого ОМ§, и/или менее чем 5 частей на миллиард, предпочтительно менее чем 40 частей на миллиард, более предпочтительно менее чем 30 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 20 частей на миллиард, еще более предпочтительно менее чем 10 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 5 частей на миллиард 8ММ, даже более предпочтительно не содержат выявляемого 8ММ.

Растительные продукты или их части по настоящему изобретению могут также представлять собой пищевые композиции, кормовые композиции и композиции сырья для ароматических веществ, которые содержат растения ячменя, несущие мутацию в гене, кодирующем ММТ, вызывающую полную потерю активности ММТ. Пищевые композиции, например, могут, в качестве неограничивающих примеров, представлять собой несоложенные и осоложенные зерна ячменя, виды ячменной муки, хлеб, кашу, зерновые смеси, содержащие ячмень, оздоровительные продукты, такие как напитки, содержащие ячмень, ячменные сиропы, и композиции ячменя в виде хлопьев, молотые или экструдированные композиции ячменя. Пищевые композиции, например, включают в себя композиции, содержащие зерна ячменя и/или виды муки. Композиции сырья для ароматических веществ описаны ниже в настоящем документе.

Изобретение также относится к смесям растительных продуктов, описываемых в настоящем доку- 18 029777

менте. Например, изобретение в одном из аспектов относится к композиции, полученной путем смешивания:

(ί) композиции, содержащей растение ячменя или его часть, несущую мутацию в гене, кодирующем ММТ, вызывающую полную потерю активности ММТ; и

(ίί) композиции солода, полученной из зерен без ММТ.

В предпочтительном аспекте, настоящее изобретение относится к напиткам, более предпочтительно к напиткам на основе солода, даже более предпочтительно к алкогольным напиткам, таким как пиво, содержащее низкие концентрации ОМ§, где указанные напитки получены с использованием ячменя без ММТ или его частей.

Таким образом, в предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к напиткам, более предпочтительно к напиткам на основе солода, даже более предпочтительно к алкогольным напиткам, таким как пиво, причем указанные напитки или пиво содержат:

(ί) менее чем 30 частей на миллиард, предпочтительно менее чем 25 частей на миллиард, более предпочтительно менее чем 20 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 15 частей на миллиард, еще более предпочтительно менее чем 10 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 5 частей на миллиард ОМ§, еще более предпочтительно не содержат выявляемого Э5>М; и/или

(ίί) менее чем 50 частей на миллиард, предпочтительно менее чем 40 частей на миллиард, более предпочтительно менее чем 30 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 20 частей на миллиард, еще более предпочтительно менее чем 10 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 5 частей на миллиард §ММ, даже более предпочтительно не содержат выявляемого §ММ.

Предпочтительно, чтобы напиток получали путем ферментации ячменя без ММТ, или его частей, или его экстрактов, например, ферментацией сусла, полученного с использованием солода, произведенного из ячменя без ММТ, отдельно или в сочетании с другими ингредиентами.

Однако, в других вариантах осуществления изобретения напиток представляет собой неферментированный напиток, например, сусло, предпочтительно сусло, полученное из солода ячменя без ММТ. Также к настоящему изобретению относится, что указанный напиток можно получать из несоложенных растений ячменя или их частей, предпочтительно из несоложенных растений ячменя без ММТ или их частей.

Напиток может представлять собой безалкогольный напиток, такой как безалкогольное пиво или другие виды безалкогольных напитков, такие как безалкогольные солодовые напитки, например, мальтика.

Предпочтительно, однако, чтобы указанный напиток получали из композиции солода, содержащей зерна ячменя без ММТ. Более предпочтительно указанный напиток является пивом. Он может представлять собой любой вид пива, известный специалисту в данной области. В одном из вариантов осуществления пиво, например, представляет собой лагер. Пиво предпочтительно варят с использованием солодовой композиции, содержащей пророщенный ячмень без ММТ. Данная солодовая композиция может, однако, также содержать другие компоненты, например, другие пророщенные или непророщенные зерновые, например, такие как ячмень, пшеница и/или рис дикого типа, или непророщенные сырьевые материалы, которые содержат сахара, или композиции, происходящие из осоложенных или несоложенных сырьевых материалов, включая композиции сиропов.

Как правило, полагают, что с течением времени ОМ§ может образовываться из ЭМЗР. включающих в себя §ММ. Таким образом, даже если исходно в напитке находится очень мало ОМ§, то ЭМ5> может накапливаться в течение времени. Однако целью настоящего изобретения является предоставление напитков, которые содержат мало ЭМ5> или не содержат его даже после хранения.

Таким образом, целью настоящего изобретения является предоставление напитков на основе растения ячменя, таких как пиво, содержащих менее чем 30 частей на миллиард, предпочтительно менее чем 25 частей на миллиард, более предпочтительно менее чем 20 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 15 частей на миллиард, еще более предпочтительно менее чем 10 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 5 частей на миллиард ОМ§, еще более предпочтительно не содержащих выявляемого ЭМ5> после хранения по меньшей мере в течение 1 недели, предпочтительно по меньшей мере в течение 2 недель, более предпочтительно по меньшей мере в течение 3 недель, даже более предпочтительно по меньшей мере в течение 4 недель, например, в интервале от 1 месяца до 3 месяцев, например, в интервале от 3 месяцев до 6 месяцев, например, в интервале от 6 месяцев до 12 месяцев, например в течение времени дольше одного года. Хранение осуществляют при температуре в интервале от 5 до 40°С, например, в интервале от 15 до 40°С.

Кроме того, предпочтительно, чтобы напитки по изобретению характеризовались превосходными вкусовыми качествами. В частности, предпочтительно, чтобы напитки по изобретению характеризовались как более ароматные и душистые, чем соответствующее "обычное" пиво (ср. пример 7; фиг. 6). Без связи с теорией настоящее изобретение относится к теории того, что низкие концентрации или даже отсутствие ЭМ5> и §ММ вызывают усиленное восприятие ароматических и душистых вкусов.

Предпочтительно ароматические и душистые вкусы определяются панелью профессиональных дегустаторов. В вариантах осуществления, в которых напиток является пивом, панель дегустаторов, пред- 19 029777

почтительно состоит из профессиональных дегустаторов пива. В настоящем документ "панель профессиональных дегустаторов пива" также обозначают как "панель тренированных дегустаторов" или "панель дегустаторов-специалистов по пиву". Хотя имеются надежные знания о том, что 1)М8 сам по себе оказывает выраженное действие на вкусовые качества пива, некоторые панели дегустаторов могут проявлять тенденцию давать неточные оценки многоплановым сернистым привкусам. Причина этого состоит в том, что дегустаторы сохраняют несоответствующую "калибровку", как следствие различий в восприятии вкуса. Данную комплексную проблему разрешали, как описано в настоящем документе, путем организации панели интенсивно тренированных дегустаторов по меньшей мере из 9 дегустаторов пива, которые способны критически оценивать вкусовые качества сложных эфиров, высших спиртов, сернистых компонентов и экстрактивность пива.

Панель дегустаторов, таким образом, должна состоять по меньшей мере из 9 лиц, предпочтительно должна состоять из числа лиц от 9 до 20, например, от 9 до 12 лиц, например, из 10 лиц. Каждый участник панели дегустаторов предпочтительно должен пройти интенсивные тренировки, в частности, каждый участник должен быть специалистом в оценке вкусовых качеств сложных эфиров, высших спиртов, серных компонентов и экстрактивности пива. Каждый участник панели дегустаторов может затем оценивать различные вкусовые ноты по шкале от 0 до 5. Вкусовые признаки предпочтительно выбраны из группы, состоящей из интенсивности горечи, качества горечи, экстрактивности, сбалансированности, свежести, пригодности для питья, аромата, фруктового вкуса, спиртового вкуса/вкуса растворителя, цветочного вкуса, хмелевого вкуса, смолистого вкуса, солодового вкуса, вкуса зерна, карамельного вкуса, пригорелого вкуса, фенольного вкуса, сернистого вкуса, кислотности и сладости.

При использовании указанного выше подхода предпочтительно, чтобы напитки по изобретению давали более высокий балл по меньшей мере по одному, предпочтительно по меньшей мере по двум, даже более предпочтительно по меньшей мере по 3, еще более предпочтительно по меньшей мере по 4, даже более предпочтительно по всем ароматическим/душистым свойствам, выбранным из группы, состоящей из ароматического вкуса, фруктового вкуса, спиртового вкуса/вкуса растворителя, цветочного вкуса и хмелевого вкуса, по сравнению с напитком со сходным содержанием этанола, полученным из ячменя дикого типа, предпочтительно из сорта Ро^ег, при том, что сложноэфирные/спиртовые профили обоих напитков доведены до сходных показателей, и напитки получают одним и тем же путем.

Кроме того, с использованием указанного выше подхода предпочтительно, чтобы напитки по изобретению имели более высокий балл по меньшей мере по одному, предпочтительно по меньшей мере двум, даже более предпочтительно по всем из трех общих характеристик, выбранных из группы, состоящей из сбалансированности, свежести и пригодности для питья, по сравнению с напитком со сходным содержанием этанола, полученным из ячменя дикого типа, предпочтительно из сорта Ро^ег, при том, что сложноэфирные/спиртовые профили обоих напитков доведены до сходных показателей.

С использованием указанного выше подхода предпочтительно, чтобы напитки по изобретению имели значения балла свежести и/или фруктового вкуса по меньшей мере на 0,1, более предпочтительно по меньшей мере на 0,2 выше по сравнению с напитком со сходным содержанием этанола, полученным из ячменя дикого типа, предпочтительно из сорта Ро^ег, при том, что сложноэфирные/спиртовые профили обоих напитков доведены до сходных показателей.

В отношении настоящей заявки сложноэфирный/спиртовой профиль считается сходным, когда 12 соединений, указанных в табл. 1, доведены до сходных уровней (см. также пример 7), т.е. напитки содержат одинаковое количество ±20% 12 соединений, указанных в табл. 1. Содержание этанола считается сходным, если оно совпадает ±20%, предпочтительно совпадает ±10%.

Таким образом, предпочтительно, чтобы напитки по изобретению, если они доведены по содержанию следующих 12 соединений до следующих значений (ср. список в табл. 1 и примере 7):

ί)	Ацетальдегид	1,20 м.д.	±20%;
ϋ)	Этилформиат	0,24 м.д.	±2 0%;
ίϋ)	Этилацетат	23,40 м.д.	. ±20%
ίν)	Изобутилацетат	0,05 м.д.	±2 0%;
ν)	1-Пропанол	13,80 м.д.	. ±20%
νί)	Изобутанол	9,60 м.д.	±2 0%;
νίί)	Изоамилацетат	3,43 м.д.	±20%;
νίίί)	1-Бутанол	0,23 м.д.	±2 0%;
ίχ)	Изоамиловый спирт	52,00 м.д.	. ±20%
χ)	Этилгексаноат	0,13 м.д.	±2 0%;
χί)	н-Гексилацетат	0,01 м.д.	±20%;
χίί)	Этилоктаноат	0,33 м.д.	±20%,

характеризовались наличием значения балла, равного по меньшей мере 1, предпочтительно по

- 20 029777

меньшей мере 2, более предпочтительно по меньшей мере 3, даже более предпочтительно по меньшей мере 4, еще более предпочтительно по меньшей мере 5, даже более предпочтительно для всех следующих характеристик (определенных, как описано в примере 7):

(ί) "сбалансированность" (балл по меньшей мере 2,5, предпочтительно по меньшей мере 2,7);

(ίί) "свежесть" (балл по меньшей мере 2,5, предпочтительно по меньшей мере 2,7, более предпочтительно по меньшей мере 2,9, еще более предпочтительно по меньшей мере 3,1);

(ίίί) "пригодность для питья" (балл по меньшей мере 2,5, предпочтительно по меньшей мере 2,7, более предпочтительно по меньшей мере 2,9, еще более предпочтительно по меньшей мере 3,0);

(ίν) "аромат" (балл по меньшей мере 2,5, предпочтительно по меньшей мере 2,7, более предпочтительно по меньшей мере 2,9);

(ν) "фруктовый вкус" (балл по меньшей мере 2,5, предпочтительно по меньшей мере 2,7, более предпочтительно по меньшей мере 2,9, еще более предпочтительно по меньшей мере 3,0);

(νί) "спирт/растворитель" (балл по меньшей мере 1,5);

(νίί) "цветочный вкус" (балл по меньшей мере 1,7, предпочтительно по меньшей мере 1,9);

(νίίί) "хмелевой вкус" (балл по меньшей мере 1,8);

более предпочтительно для следующих характеристик (определенных, как описано в примере 7):

(ί) "свежесть" (балл по меньшей мере 2,5, предпочтительно по меньшей мере 2,7, более предпочтительно по меньшей мере 2,9, еще более предпочтительно по меньшей мере 3,1);

(ίί) "пригодность для питья" (балл по меньшей мере 2,5, предпочтительно по меньшей мере 2,7, более предпочтительно по меньшей мере 2,9, еще более предпочтительно по меньшей мере 3,0);

(ш) "аромат" (балл по меньшей мере 2,5, предпочтительно по меньшей мере 2,7, более предпочтительно по меньшей мере 2,9);

(ίν) "фруктовый вкус" (балл по меньшей мере 2,5, предпочтительно по меньшей мере 2,7, более предпочтительно по меньшей мере 2,9, еще более предпочтительно по меньшей мере 3,0).

Таким образом, предпочтительно, чтобы напиток по изобретению характеризовался:

(ί) баллом "свежести", равным по меньшей мере 2,5 по шкале от 0 до 5 при оценке панелью профессиональных дегустаторов; и/или

(ίί) баллом "пригодности для питья", равным по меньшей мере 2,5 по шкале от 0 до 5 при оценке панелью профессиональных дегустаторов; и/или

(ίίί) баллом "ароматного вкуса", равным по меньшей мере 2,5 по шкале от 0 до 5 при оценке панелью профессиональных дегустаторов; и/или

(ίν) баллом "фруктового вкуса", равным по меньшей мере 2,5 по шкале от 0 до 5 при оценке панелью профессиональных дегустаторов;

при условии, что сложноэфирный/спиртовой профиль напитка соответствует указанному в примере 7, табл. 1, в столбце "без ΜΜΤ", в которую добавлены смесь 1 и смесь 2.

В частности, настоящее изобретение относится к тому, что присутствие ΌΜ8 в напитке может скрывать фруктовый вкус. Таким образом, целью настоящего изобретения является предоставление напитков, которые имеют более высокий балл фруктового вкуса, где указанный вкус оценивает панель тренированных дегустаторов, предпочтительно панель тренированных дегустаторов, по меньшей мере из 9 участников, по сравнению с напитком, полученным тем же путем, но содержащим по меньшей мере 100 частей на миллиард ΌΜ8, например, в интервале от 100 до 200 частей на миллиард ΌΜ8, или по сравнению с напитком, полученным тем же путем, но содержащим по меньшей мере 50 частей на миллиард ΌΜ8, например, в интервале от 50 до 100 частей на миллиард. Указанный более высокий балл фруктового вкуса предпочтительно по меньшей мере на 0,5 баллов, предпочтительно по меньшей мере на 0,7 баллов, например, по меньшей мере на 0,9 баллов выше, при том, что фруктовый вкус определяют по шкале от 0 до 5, как описано выше.

Изобретение также относится к способам производства указанных выше напитков, предпочтительно включающим в себя стадии:

(ί) предоставления солодовой композиции, содержащей пророщенные зерна без ΜΜΤ;

(ίί) переработку указанной солодовой композиции в напиток;

с получением таким образом напитка, содержащего менее чем 30 частей на миллиард, предпочтительно менее чем 25 частей на миллиард, более предпочтительно менее чем 20 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 15 частей на миллиард, еще более предпочтительно менее чем 10 частей на миллиард, даже более предпочтительно менее чем 5 частей на миллиард ΌΜ8, еще более предпочтительно не содержащего выявляемого ΌΜ8.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления напиток представляет собой пиво. В данном случае стадия переработки предпочтительно включает в себя получение сусла из указанной солодовой композиции, например, любым из способов, описываемых в настоящем документе выше, и ферментирование указанного сусла.

В общих терминах, алкогольные напитки, такие как пиво, могут производиться из осоложенных и/или несоложенных растений ячменя. Солод, в дополнение к хмелю и дрожжам, вносит вклад во вкус и цвет пива. Кроме того, солод функционирует как источник сбраживаемого сахара и также как источник

- 21 029777

ферментов. Схематичное представление общего процесса производства пива показано на фиг. 8, в то время как подробные описания способов соложения и пивоварения можно найти, например, в публикациях Вг1§§8 е! а1. (1981) и НоидП е! а1. (1982). Доступны многочисленные, регулярно обновляемые способы анализа ячменя, солода и пивных продуктов. Они включают в себя в качестве неограничивающих примеров Лтепсап ЛккоДаПоп о£ Сегеа1 С’кетЩх (1995), Лтепсап 8ос1е1у о£ Вгедапд С’кетЩх (1992), Еигореап Вге^егу СопуепПоп (1998), и ПъШШе о£ Вге\утд (1997). Установлено, что много особых процедур используются на каждой конкретной пивоварне с наиболее значимыми вариациями, относящимися к предпочтениям местных потребителей. Любой такой способ производства пива можно использовать по настоящему изобретению.

Солодовые композиции указанных выше напитков, включающие, например, пиво, солодовые напитки или неферментированное сусло, могут быть получены любым из способов, описываемых в настоящем документе выше. Сусло можно получать из указанной солодовой композиции.

Первая стадии продукции пива из сусла предпочтительно включает кипячение указанного сусла. Во время кипячения могут добавляться другие ингредиенты, такие как зерновые сиропы или хмель, где последний компонент может предоставлять типичную горечь и ароматические характеристики пива. Кипячение сусла также вызывает агрегацию полифенолов и денатурированных белков, которые могут осаждаться во время последующих фаз производства пива. Также кипячение сусла может вызвать испарение летучих соединений, включая ΌΜ8. Однако, как указано выше, сусло, полученное из ячменя без ММТ, содержит мало ΌΜ8 или не содержит его, что, таким образом, делает возможным существенное снижение время кипячения таких сусел. После охлаждения сусло переносят в ферментационные чаны, содержащие дрожжи, предпочтительно пивоваренные дрожжи вида 8асскаготусе8 саг18Ьег§еп818. Сусло ферментируют в течение любого подходящего периода времени, как правило, в интервале от 1 до 100 сут. Во время процесса ферментации длительностью в течение нескольких суток, сахар преобразуется в спирт и СО₂, одновременно с появлением некоторых придающих вкус соединений.

Затем пиво может далее обрабатываться, например, охлаждаться. Оно также может фильтроваться и/или выдерживаться в лагерном подвале, причем в этом процессе развивается приятный аромат и менее дрожжевой вкус. Также можно вносить добавки. Кроме того, может добавляться СО₂. Наконец, пиво может пастеризоваться и фильтроваться, до того, как оно будет разлито в бутылки или алюминиевые банки.

Доступны различные способы определения того, получают ли растение ячменя или растительный продукт из растения ячменя, несущего мутацию в гене ММТ, вызывающую полную потерю функции ММТ. Растительные продукты, в основном, содержат, по меньшей мере, некоторое количество геномной ДНК из растения, использованного для их производства. Так, солод содержит большие количества геномной ДНК, но даже экстракты ячменя или солода, такие как сусло, могут содержать геномную ДНК из указанного ячменя или солода. Также напитки на основе ячменя, такие как пиво, могут содержать геномную ДНК из указанного растения. Путем анализа ДНК в растительном продукте может быть установлено, несет ли растение, из которого получен растительный продукт, мутацию в гене ММТ, вызывающую полную потерю функции ММТ. Указанная мутация может, например, представлять собой любую из мутаций в гене ММТ, описываемых в настоящем документе выше, в разделе "Потеря функционального фермента ММТ". Геномную ДНК можно анализировать любым подходящим способом, таким как секвенирование или основанными на амплификации способами, включая основанные на ПЦР способы. Если предполагается наличие конкретной мутации в гене ММТ, то может использоваться анализ полиморфизмов, например, анализ 8ΝΡ. Такой анализ может проводиться, как описано в настоящем документе далее в примерах 13 и 17. Специалист в данной области может адаптировать специфичный анализ 8ΝΡ, описанный в данных примерах для применения с другими мутациями или другим исходным материалом.

Если указанные выше растительные продукты получают только из растений ячменя, несущих мутацию в гене ММТ, вызывающую полную потерю функции ММТ, то присутствие или отсутствие мРНК ММТ ячменя и/или белка ММТ может также указывать на то, получают ли указанный продукт из ячменя без ММТ. Таким образом, может проводиться оценка растительного продукта путем анализа вестернблоттинга или другого белкового анализа, или путем ОТ-ПЦР, или путем анализа нозерн-блоттинга или путем других анализов мРНК. Такие анализы, в частности, могут использоваться, когда растительный продукт представляет собой солод.

8ММ и ΌΜ8

Количество 8ММ и ΌΜ8 в растительном продукте может определяться любым подходящим способом. 8ММ может определяться, по существу, как описано в настоящем документе выше в разделе "Получение растений ячменя с полной потерей функционального ММТ", где описано определение концентраций 8ММ в образце ячменя. Таким образом, 8ММ может определяться путем его присоединения к такому соединению, как ОРА, и определения флуоресценции, например, с использованием системы ИРЬС. Для количественного анализа может определяться площадь хроматограммы, соответствующая пику 8ММ.

Для более точного измерения количества ΌΜ8 и ΌΜ8Ρ (такого как 8ММ), последнее соединение, измеряемое как ΌΜ8 после активации, предпочтительно определяют с использованием капиллярной га- 22 029777

зовой хроматографии высокого разрешения. Общий БМ8 в образцах сусла или пива определяют в настоящем документе. как количественная сумма свободного БМ8 и его форм-предшественников. обозначаемых БМ8Р. С использованием данного определения количество БМ8Р в образце сусла или пива может определяться как разница между общим БМ8 (измеряемым в кипяченом образце. предпочтительно в образце. который кипятили в щелочных условиях в течение 1 ч). и свободным БМ8 (измеряемым в некипяченом образце). В примере 6 подробно описаны предпочтительные пути измерения концентраций общего и свободного БМ8.

Химический мутагенез

Для образования растений. несущих мутацию в гене. кодирующем ММТ. вызывающую полную потерю активности ММТ. по настоящему изобретению очень большое число мутантов ячменя может быть получено любым подходящим способом мутагенеза. например. с использованием химического мутагенеза зерен ячменя. способа. о котором известно. что он индуцирует мутации случайным образом. Мутагенез ячменя можно проводиться с использованием любого мутагенизирующего химического вещества. Предпочтительно. однако. он проводится путем обработки зерен NаN₃ (ср. фиг. 7). предоставления возможности выжившим зернам прорасти с последующим анализом растений-потомков. Поколение растений. выросших из подвергнутых мутагенезу зерен. обозначаемое как М0. содержит гетерозиготные химеры любой данной мутации. Растения-потомки. собранные после самоопыления. обозначают как поколение М1. в котором данная мутация сегрегирует на соответствующие гетерозиготы и гомозиготы.

Обработка зерен ячменя не эквивалентна обработке единичной клетки ячменя. поскольку зерна после обработки содержат некоторые немутировавшие клетки и разнообразные клетки. содержащие мутации ДНК. Мутации будут потеряны в последовательностях клеточных поколений. которые не приведут к образованию половых клеток. и это означает. что целью является направленное действие мутагена на те немногие клеток. что разовьются в репродуктивные ткани. которые внесут вклад в развитие поколения М1.

Для оценки общей эффективности мутаций можно подсчитать химеры-альбиносы и растенияальбиносы в поколениях М0 и М1 соответственно. Оценка числа мутантов как функции числа выживших растений дает оценку эффективности мутации. тогда как оценка числа мутантов как функции числа обработанных семян предоставляет комбинированную меру эффективности мутаций и уничтожения семян.

Примечательно. что клетки имеют механизмы гарантии качества практически на каждой стадии генной экспрессии. возможно. для управления эффектами повреждающих мутаций. Один из хорошо изученных примеров у эукариот представляет собой опосредованный нонсенс-кодоном распад мРНК. обозначенный NМ^. который предотвращает синтез потенциально вредных. преждевременно укороченных белков (Мациак апй СагписНаек 2001; \Уи е1 а1.. 2007). При NМ^. кодон терминации идентифицируется как незрелый по его положению относительно нижележащих дестабилизирующих элементов. Мутации. которые образуют преждевременные кодоны терминации (нонсенс-кодоны). обозначаемые РТС. иногда повышают уровень транскриптов с альтернативным сплайсингом. которые пропускают повреждающие мутации. за счет этого потенциально сохраняя функцию белка (Мепйе11 апй Б|е1/. 2001).

Разведение растений

Разработка сельскохозяйственных культур может рассматриваться как длительный процесс. который начинается с введения нового признака. С точки зрения селекционера данная стадия часто может приводить к образованию растения. которое имеет менее подходящий общий профиль агрономических признаков по сравнению с существующими коммерческими разновидностями. В одном из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения цель. таким образом. состоит в предоставлении подходящих с агрономической точки зрения растений ячменя. которые несут мутацию в гене ММТ. вызывающую общую потерю функциональной ММТ.

В дополнение к признаку отсутствия ММТ. имеются иные факторы. которые также могут рассматриваться в области получения коммерческой разновидности солодового ячменя. включающие в качестве неограничивающих примеров урожайность зерна. размер зерна и параметры. которые относятся к качеству солода или качеству пива. Поскольку многие. если не все данные признаки находятся под генетическим контролем. настоящее изобретение также относится к современным гомозиготным высокоурожайным сортам ячменя. которые можно получать путем скрещивания с растениями ячменя без ММТ. Зерна таких растений ячменя предоставляют новый сырьевой материал без функционального фермента ММТ. Селекционер-специалист по ячменю может скрещивать растение ячменя ММТ по изобретению с другими растениями ячменя и затем может отобрать и вырастить потомство. имеющее признаки. которые характеризуют превосходящие сорта. Такие потомки также считаются частью настоящего изобретения. Альтернативно. селекционер ячменя может использовать растения по настоящему изобретению для дальнейшего мутагенеза с целью образования новых сортов. происходящих от ячменя без ММТ.

Растения ячменя по настоящему изобретению могут использоваться в растениеводческой деятельности по любой подходящей схеме.

Другой целью настоящего изобретения является предоставление элитных с агрономической точки зрения растений ячменя. которые содержат признак отсутствия ММТ. Таким образом. настоящее изобретение также направлено на способы продукции нового растения ячменя без ММТ путем скрещивания

- 23 029777

первого родительского растения ячменя со вторым родительским растением ячменя, где первое или второе растение представляет собой ячмень без ММТ. Дополнительно, и первое, и второе родительское растение ячменя представляют собой разновидность ячменя без ММТ. Таким образом, любой такой способ из следующих способов, в которых применяется разновидность ячменя без ММТ, является частью данного изобретение: самоопыление, возвратное скрещивание, скрещивание по популяциям, и т.п. Все растения, полученные с использованием разновидности ячменя без ММТ в качестве родительского поколения, относятся к объему данного изобретения, включая те растения, которые развиваются из разновидностей, происходящих от разновидности ячменя без ММТ. Ячмень без ММТ также можно использовать для генетической трансформации в таких случаях, когда в растение или растительную ткань без ММТ вводится и экспрессируется чужеродная ДНК.

Способы возвратного скрещивания можно использовать по настоящему изобретению для введения признака отсутствия ММТ мутантного растения ячменя в другую разновидность, например, в другой сорт, такой как сорт 8саг1е!! или сорт 1ег8еу, причем оба они являются современными высокоурожайными сортами солодового ячменя. По стандартному протоколу возвратного скрещивания интересующая исходная разновидность, т. е. интересующее рекуррентное родительское растение скрещивают со второй разновидностью (т.е. нерекуррентным растением), несущим один интересующий ген, который следует передать. Полученные в результате данного скрещивания растения-потомки без ММТ впоследствии скрещивают с рекуррентным родителем, причем процесс повторяют, пока не будет получено растение ячменя, в котором, по существу, все характеристики, присущие рекуррентному родительскому растению, будут восстановлены в полученном растении, в дополнение к переданной генетической организации признака отсутствия ММТ от нерекуррентного родительского растения. В конечном счете, последнее образованное путем возвратного скрещивания растение оплодотворяют самоопылением с получением чистой линии селекционных растений-потомков без ММТ.

Наличие подходящего рекуррентного родителя является предпочтительным для успешной процедуры возвратного скрещивания, цель которого включает в себя введения признака отсутствия ММТ в исходную разновидность. Для выполнения данной цели генетическая организация рекуррентной разновидности модифицируется таковой признака отсутствия ММТ из нерекуррентного родительского растения при сохранении, по существу, всех генетических характеристик исходной разновидности. Хотя способы возвратного скрещивания упрощены в том случае, когда переносимое генетическое свойство определяется доминантным аллелем, возможно осуществлять возвратное скрещивание рецессивного признака отсутствия ММТ.

Путь ускорения процесса разведения растений включает исходное умножение полученных мутантов путем применения способов культуры ткани и регенерации. Таким образом, другой аспект настоящего изобретения состоит в предоставлении клеток, которые после роста и дифференцировки образуют растения ячменя, имеющие признак отсутствия ММТ. Например, разведение может включать традиционные скрещивания, получение растений, происходящих из фертильных пыльников или использование способов культивирования микроспор.

Также вариантом осуществления настоящего изобретения является предоставление растений ячменя, которые несут не только мутацию в гене, кодирующем ММТ, вызывающую полную потерю активности ММТ, но также одну или несколько дополнительных полезных мутаций. Такие дополнительные мутации могут, например, включать в себя мутации в гене ячменя, кодирующем липоксигеназу-1 (Ь0Х-1), такие как мутация, вызывающая более низкий уровень активности Ь0Х-1 (например, мутант, описанный в патенте США № 6660915, выданный Эоита. А.С. е! а1.), или мутация, вызывающая полную потерю функции Ь0Х-1; примерами служит любой из мутантов, раскрытых в патенте США № 7420105 или патентной заявке РСТ А0 2005/087934 Вгеббат, К. е! а1., в частности, мутанты, содержащие геномную последовательность гена, кодирующего Ь0Х-1 в соответствии с 8ЕЦ ГО N0: 2 или 8ЕЦ ГО N0: 6 патента США № 7420105, выданного Вгеббат. К. е! а1.

Солод без Ь0Х-1, как описано в указанных выше патентах и патентных заявках, может предоставлять сам по себе сырьевой материал для печной сушки при низкой температуре в процессе соложения ячменя. Сочетанный двойной мутант без Ь0Х-1 и без ММТ, однако, будет превосходным и может очень успешно использоваться в пивоваренной промышленности, поскольку активности и Ь0Х-1, и ММТ будут инактивированы. Такие растения ячменя могут быть получены путем скрещивания растения ячменя по настоящему изобретению с теми, что описаны в патенте США № 7420105 или патентной заявке РСТ А0 2005/087934 Вгеббат, К. е! а1.

Примеры

Приведенные в настоящем документе примеры иллюстрируют предпочтительные варианты осуществления изобретения, и их не следует рассматривать как ограничивающие изобретение.

Если не указано иначе, основные молекулярно-биологические способы осуществляли для манипуляций нуклеиновыми кислотами, белками и бактериями, как описано в 8атЪгоок апб Ки88е1 (2001).

Пример 1.

ЭМ8 маскирует фруктовый вкус пива.

Характеристика нот сернистого привкуса, как правило, считается сложной, даже среди общеприня- 24 029777

тых дегустаторов пива. Часто дегустатор пива использует для характеристики сернистых нот общий термин "сернистый" вместо более специализированных сернистых нот, например, "меркаптана", "сероводорода" и "ΌΜ8".

После организации панели из 9 дегустаторов ее участники интенсивно тренировались в отслеживании аромата серосодержащих компонентов, неожиданно обнаружив, что добавление сернистых компонентов сильно влияло на восприятие других ароматических компонентов, причем данное свойство приводило к снижению коэффициентов, например, фруктового вкуса и экстрактивности пива.

В другом наборе экспериментов для тренировки панели выбирали ΌΜ8. Образцы пива, в которые добавляли высокие концентрации указанных серосодержащих компонентов, представляли панели, участников которой просили тестировать и ранжировать характеристики "экстрактивность", "фруктовый вкус" и "ΌΜ8" по шкале от 0 (отсутствует) до 5 (экстремальный). В каждую серию тестов включали стандартное, коммерчески доступное пиво и два неизвестных дегустаторам образца.

На фиг. 1В в виде средних баллов проиллюстрированы результаты серии тестов, включающих образцы пива, в которые добавляли сложный эфир и сложный эфир/^Μ8 соответственно. Неожиданным результатом было то, что добавление ΌΜ8, при комбинации со сложным эфиром, негативно воздействовало на воспринимаемый балл фруктового вкуса по сравнению с тем, который наблюдался при добавлении только сложного эфира. Сходным образом, снижалась нота экстрактивности пива. Добавление ΌΜ8 ожидаемо повышало балл данной характеристики.

Указанные результаты демонстрируют, что способность панели специалистов-дегустаторов тестировать отдельный вкусовой компонент, как оказывается, сильно зависит от "вкусового фона", определенного другими ароматическими компонентами.

Неожиданная находка в результате вкусовых тестов, итоги которой подведены на фиг. 1В, также обеспечила основу для настоящего изобретения путем предоставления напитков с низкими концентрациями ΌΜ8 и мутантов ячменя, которые могут использоваться для получения таких напитков, т.е. мутантов ячменя, не способных синтезировать 8ΜΜ, так что использование соответствующего сырьевого материала в производстве напитков не только может гарантировать получение продуктов с меньшим количеством ΌΜ8 или без него, но также с перспективой улучшения фруктовой ноты.

Пример 2.

Организация скрининга, подход 1.

Зерна, собранные из растений ячменя сорта Ρΐΐκίί^ и сорта 8еЪакйап, инкубировали раздельно с мутагеном NаNз, с последующими экспериментальными подробностями, предоставленными К1е1пНоГк е1 а1. (1978). Данную процедуру выбирали, потому что известен ее потенциал в плане индукции точечных мутаций в геномной ДНК ячменя.

В экспериментах мутантные зерна поколения Μ1 выращивали на полевых участках в течение двух последующих поколений, с получением в итоге высокой доли гомозиготных растений поколения Μ3 для целей скрининга. Мутантные зерна поколения Μ3, как ожидалось, содержали генные мутации с частотой 0,9-2,3 на 10000 зерен (К1е1пПоГк е1 а1., выше). Примечательно, что зерна М2 не подвергали скринингу.

Интересно, что по настоящему изобретению описана процедура быстрого высокопроизводительного скрининга для детекции мутантных зерен ячменя Μ3, не имеющих активности ΜΜΤ, что предоставляет отсутствие выявляемого синтеза 8ΜΜ во время соложения. Так, авторами заявки обнаружено, что 8ΜΜ в основном накапливается в колеоптиле и первичном листе прорастающего ячменя, и что детекцию 8ΜΜ можно проводить путем экстракции аминокислот из раздавленной ткани листа пророщенных зерен возрастом 4 суток, с последующим взаимодействием экстрагированных аминокислот с ОРА для образования продуктов с сильной флуоресценцией (ср. фиг. 2).

В практических терминах, каждый анализ проводили путем проращивания в закрытом пластиковом контейнере с одним куском фильтровальной бумаги ХУПаЦнап № 1 (296x20,9 мм), с использованием двух зерен от каждого из 94 потенциальных мутантов и двух растений дикого типа. Анализ проводили для многих потенциально мутантных зерен (см. ниже). В начале прорастания 25 мл водопроводной воды добавляли в указанный пластиковый контейнер, с последующим добавлением дополнительных 15 мл водопроводной воды на 2 сутки прорастания. Через 4 суток прорастания 1-3 см тканей листа переносили в планшеты для хранения (АВдепе), в которых каждая из 96 лунок объемом 1,2 мл содержала стеклянную бусину диаметром 5 мм и 500 мкл 12:5:6 (об./об./об.) смеси вода:метанол:хлороформ. Планшет встряхивали в течение 45 с с частотой 30 Гц в лабораторной мельнице ΜΜ 300 (Ке1ксй). Затем планшет переносили в центрифугу (Во1ап1а 460К, НеШсй), и центрифугировали при 4000 об./мин. в течение 15 мин при комнатной температуре для осаждения нерастворимого материала. 10 мкл надосадочной жидкости переносили в 96-луночный планшет для хранения (ХУаЮгк, кат. № 186002481), и смешивали с 200 мкл Н₂О и 60 мкл реакционного раствора, содержащего смесь 15000:45 (об./об.) реагента ОРА (81дта, кат. № Р7914) с 3-меркаптопропионовой кислотой (АИпсй, кат. № Μ5801). Смесь инкубировали при 4°С в течение по меньшей мере 10 мин с получением количественной дериватизации аминокислот образца посредством ОРА. С использованием основанной на ХУа1егк системы υΡΕ-С. укомплектованной флуоресцентным детектором 2 мкл дериватизированной смеси разделяли на колонке 2,1x30 мм С18 Сетип с части- 25 029777

цами 3 мкм (РЬепотепех, кат. № 00А-4439-80), с использованием градиентной элюции путем смешивания подвижной фазы А (40 мМ буфер Ν;·ιΗ₂ΡΟ₄ с доведенным рН 7,8) и подвижной фазы В [45:45:10 (об.:об.:об.) раствор ацетонитрил: метанол: вода, как описано (РЬепотепех, 2006)]. Возбуждение элюируемых производных ОРА осуществляли при 340 нм, тогда как испускание света измеряли при 450 нм. Пример хроматограммы показан на фиг. 3А для иллюстрации профиля элюции аспарагиновой кислоты (Акр), глутаминовой кислоты (С1и), аспарагина (Акп), серина (8ег) и 8ММ. Последнее соединение включали, поскольку общая цель проекта состояла в идентификации растения ячменя, лишенного способности синтезировать 8ММ, т.е. растения, в котором соответствующих пик хроматограммы был очень малым или, предпочтительно отсутствовал.

Организация скрининга, подход 2.

Параллельно с описанными выше экспериментами в настоящем примере осуществляли попытки организации очень быстрого способа скрининга для идентификации проростков ячменя, лишенных активного фермента ММТ. Основываясь на том факте, что указанные проростки могут расти в присутствие 250 мкМ селенита Να, при обеспечении того, что растения содержат активный ММТ для преобразования селенита Να, конструировали способ скрининга для визуальной оценки проростков со сниженным ростом в присутствии указанной концентрации селенита Να. В практических терминах, 22704 колосков мутагенезированного ΝαΝ₃ ячменя сорта Ргек11де, поколения М3, каждый из которых состоял из 20-30 зерен, помещали в пластиковые лотки со стандартной средой для выращивания УегтесиШе, дополненной 250 мкМ селенита Να. Зернам из колосков позволяли прорасти и развиться в проростки примерно ~15 см длиной. Всего 812 растений, характеризовавшихся сниженным ростом, т.е. проростки которых были <15 см длиной, переносили на свежую почву и позволяли далее развиваться.

Однако ни в одном из указанных растений не обнаруживали сниженной активности ММТ, что определяли сравнением с уровнем 8ММ в диком типе. Таким образом, описанный выше подход к скринингу не давал мутантов, и таким образом, был прерван.

Пример 3.

Потенциальные мутанты.

Всего 10248 и 3858 NаN₃-мутантных зерен сорта Ргекбде и сорта 8еЬа5ΐ^аη, соответственно, подвергали скринингу на содержание 8ММ (ср. подход 1 в примере 2) с целью идентифицировать зерна с сильно сниженным содержанием по сравнению с зернами дикого типа. Идентифицировали только 2 потенциальных мутанта поколения М3, а именно зерна образца № 8063 (происходящего из сорта Ргек11де и обозначенного здесь и далее мутанта 8063, причем это обозначение также использовали для зерен последующих поколений; фиг. 3В) и зерна образца № 14018 (происходящий из сорта 8еЬа5ΐ^аη и обозначенный здесь и далее как мутант 14018, обозначение, также используемое для зерен последующих поколений; проиллюстрировано на фиг. 3В). Зерна каждого мутанта выращивали до поколения М4, затем собирали и, наконец, повторно анализировали. В результате подтверждали, что зерна мутанта 8063 и мутанта 14018 имели исключительно низкое содержание 8ММ, потенциально, вообще не содержали 8ММ.

В отдельном эксперименте использовали анализ вестерн-блоттинга для подтверждения того, что мутант 8063 и мутант 14018 не содержали фермент ММТ. Зерна мутантов и соответствующих растений дикого типа проращивали в темноте в течение 4 суток на фильтровальной бумаге, намоченной водой. Одно из зерен каждого образца переносили в пробирку типа "эппендорф", содержащую 250 мкл Н₂О, и гомогенизировали с использованием пестика. После центрифугирования длительностью 10 мин при 13000 об/мин, 15 мкл жидкого экстракта смешивали с 5 мкл стандартного 4-кратного концентрированного буфера для образца на основе 8Ό8. С использованием той же иммунологической методологии, что описана в примере 12, и аликвоты того же антитела против ММТ, который подробно описан в указанном примере, белки экстрактов образцов указанных выше пророщенных зерен разделяли путем электрофореза по размеру и подвергли анализу вестерн-блоттинга. Отсутствие окрашенной белковой полосы размером 120 кДа, соответствующей ММТ, отмечали на разделенных по размеру экстрактах мутанта 8063 и мутанта 14018. Однако, полоса белка массой 120 кДа была ясно видна в экстрактах пророщенных зерен дикого типа (фиг. 3С). Сочетание результатов вестерн-анализа с отсутствием 8ММ в экстрактах мутанта 8063 и мутанта 14018, но присутствие 8ММ в экстрактах зерен дикого типа (ср. фиг. 3В), подтверждают, что мутант 8063 и мутант 14018 представляют мутанты с отсутствием признака ММТ.

Пример 4.

Измерения активности ММТ мутанта 8063.

Фермент ММТ катализирует перенос метильной группы от 8АМ на Ме!, с образованием 8ММ (ср. фиг. 1В). С использованием [³Н]8АМ в качестве субстрата, в котором метильная группа помечена тритием, перенос указанной метильной группы может отслеживаться с использованием сцинтилляционного счетчика после удаления оставшегося [³Н]8АМ с помощью активированного угля. Последнее соединение связывается с субстратом, но не с вновь синтезированным меченым продуктом 8ММ (Ршейн е! α1., 1995). Это позволяет определить активность ММТ и содержание 8ММ, причем последнее осуществляли, как описано в примере 2, в экстрактах 15 побегов мутанта 8063 и сорта Ргекбде (фиг. 4). Оценка данных подтверждала, что ММТ катализировала образование 8ММ в зернах дикого типа, причем это свойство отсутствовало в зернах мутанта 8063.

- 26 029777

Пример 5.

Соложение и пивоварение зерен мутанта 8063 без ММТ.

Анализы соложения и пивоварения с солодом мутанта 8063 и солодом сравнения сорта Роуег задействовали следующие стадии:

(ί) проращивание, включающее в себя замачивание, для получения зеленого солода, иногда с последующей печной сушкой для получения сухого солода;

(ίί) получение сусла;

(ίίί) разделение сусла;

(ίν) кипячение сусла;

(ν) ферментация сусла с использованием дрожжей Зассйаготусек саг18Ьегдеп818;

(νί) выдержка пива в лагерном подвале;

(νίί) фильтрация светлого пива; и

(νίίί) розлив пива в бутылки.

Для мутанта 8063 и сорта Роуег (образец сравнения) 30 кг солода использовали для пивоварения. Образцы солода мололи, и затем добавляли водопроводную воду по 150 л на каждый образец. Заваривание горячей водой проводили при 60°С в течение 20 мин, после чего в течение 5 мин нагревали до 65°С, и при данной температуре продолжали инкубацию в течение 55 мин. Сусло затем в течение 15 мин нагревали до 78°С, после чего 5-минутной инкубацией завершали заваривание горячей водой.

Последующие операции пивоварения включали в себя фильтрацию сусла, стадию кипячения в течение 1 ч, и разделение в турбулентном чане. Ферментация в течение 7 суток, выдержка в лагерном подвале и наполнение готовым пивом бутылок зеленого стекла соответствовали спецификациям стандартной практики пивоварения, например, описанным Вйддк е1 а1. (1981) и Ноидй е1 а1. (1982). Всего производили 100 бутылок пива объемом 33 сл. из солода дикого типа и мутантного солода.

Пример 6.

Концентрации ИМ8 и ИМ8Р в пиве, сделанном из солода без ММТ.

Пиво варили из солода без ММТ и солода сорта Роуег, как описано в примере 5. В процессе соложения и пивоварения концентрации свободного ИМ8 и ИМ8Р определяли в зеленом и сухом солоде (фиг. 5А), а также в соответствующем сладком и прокипяченном сусле и также в готовом пиве (фиг. 5В).

Концентрации ИМ8 и ИМ8Р определяли, по существу, как описано Нукей е1 а1. (1980), с использованием специфичной в отношении серы детекции посредством газовой хроматографии со статичным устройством ввода паровой фазы на детекторе хемилюминесценции серы 350В (3|еуег5). Нанесение образца проводили с использованием автоматического аппарата (Н8-40 АнЮтаЮб Неабкрасе 8атр1ег, Регкт Е1тег). Общие концентрации ИМ8, т.е. сумму свободного ИМ8 и ИМ8Р в сусле и экстрактах зеленого и сухого солода, получали путем кипячения соответствующих образцов с использованием щелочных условий в течение 1 ч. Образцы затем подвергали анализу паровой фазы над жидкостью для определения уровня ИМ8. Как описано ранее, разницу между общей концентрацией ИМ8 в прокипяченных образцах и концентрацией свободного ИМ8 в соответствующих некипяченых образцах определяли равной количеству ИМ8Р в образце. Количество свободного ИМ8 в пиве определяли, по существу, так же, как в сусле (Нукей е! а1., выше).

Пример 7.

Дегустация пива, сваренного из солода без ММТ.

С целью установить, как панель профессиональных дегустаторов пива оценивает произведенное в пилотном масштабе пиво, сваренное из солода без ММТ, проводили профильную дегустацию образцов пива, в которых уровень измеренного ИМ8 составлял 4 части на миллиард. В качестве контроля использовали обычное пиво с 76 частями на миллиард ИМ8, причем указанное пиво производили с использованием солода сорта Роуег.

Перед дегустацией профили сложных эфиров и высших спиртов в пиве определяли посредством анализа газовой хроматографией. Пиво из солода без ММТ содержало более низкие концентрации 3 из 12 анализируемых соединений (табл. 1). В первом тесте вкуса в пиво, сваренное из солода без ММТ, добавляли смесь 1, состоящую из этилацетата, изоамилацетата и этилоктаноата, для обеспечения того, что два пива типа лагер имеют сходные концентрации тех активных в плане вкуса соединений, которые вносят вклад в стандартный профиль сложных эфиров (ср. табл. 1). Цель второго теста состояла в получении пива с высоким содержанием сложных эфиров с усиленными вкусовыми нотами. Таким образом, в пиво из солода сорта Роуег добавляли смесь 2, состоящую из изоамилацетата, этилгексаноата и этилоктаноата (табл. 1), тогда как в пиво из солода без ММТ добавляли и смесь 1, и смесь 2.

Описанные выше образцы пива затем тестировала панель тренированных дегустаторов пива из 10 участников, которая оценивала 20 специфичных атрибутов вкуса, каждый по шкале или по баллам от 0 до 5 (фиг. 6).

Как подробно описано на фиг. 6А для образцов пива с высоким содержанием сложных эфиров имел место заметный эффект восприятия ароматических душистых вкусов в пиве "с очень низким уровнем ИМЗ", сваренном из солода без ММТ, по сравнению со стандартным пивом с примесями на том же уровне. Более высокие баллы были отмечены для всех оцениваемых ароматических душистых вкусов.

- 27 029777

Даже в пиве из солода без ΜΜΤ, к которому добавляли сложные эфиры до нормального уровня (фиг. 6В), отмечали повышенное восприятие ароматических душистых вкусов, и это опять показывало, что низкий уровень ΌΜ8 оказывает положительное действие в отношении восприятия ароматических соединений пива. Объяснение данного феномена заключается просто в том, что ΌΜ8 в пиве маскирует вкус приятных ароматических душистых привкусов, что представляет значимые факторы при оценке свежести напитка.

Сумма концентраций 2-метилбутилацетата и изоамилацетата.

Сумма концентраций 2-метил-1-бутанола и изоамилового спирта.

Пример 8.

Определение последовательности гена, кодирующего ΜΜΤ в ячмене сорта ΡϊΌδΐίμυ.

С целью установления генетического разнообразия, которое лежит в основе различия в активности ΜΜΤ между растениями ячменя дикого типа и мутантными растениями исходные усилия были направлены на определение последовательности ДНК, которая продолжается от старт- до стоп-кодона соответствующего гена ячменя. Чтобы установить ранее неизвестную последовательность гена ΜΜΤ ячменя, первая стадия представляла собой очистку геномной ДНК (гДНК) из листьев проростков ячменя возрастом 6 суток сорта ΡϊΌδΐίμυ, в соответствии с инструкциями, предоставленными производителями набора для выделения растительной ДНК (КосЬе, кат. № 1667319).

Далее конструировали олигонуклеотидные праймеры для связывания с последовательностью кДНК, кодирующей ΜΜΤ (инвентарный номер ОепВапк ΑΒ028870; 8ЕР ГО N0: 1). С использованием гДНК ячменя в качестве матрицы проводили стандартные амплификации ПЦР с 6 различными наборами праймеров, последовательности ДНК которых перечислены в табл. 2. Находили праймеры, которые отжигались попарно в экзонах 1 (включая старт-кодон трансляции и ниже него) и 2, экзоны 2 и 4, экзоны 4 и 5, экзоны 5 и 9, экзоны 9 и 11, и экзоны 11 и 12 (включая стоп-кодон трансляции и выше него). В пяти из указанных выше шести реакций образовывались фрагменты ДНК, охватывающие экзоны 2-4, экзоны 4-5, экзоны 5-9, экзоны 9-11 и экзоны 11-12 (ср. фиг. 9). В одной из реакций так же, как предполагалось, образовывался фрагмент ДНК, охватывающий старт-кодон трансляции и экзон 2 (т.е. реакцию с набором праймеров № 1, перечисленных в табл. 2 и на фиг. 9), но наблюдали лишь один артефакт реакции. Хотя причина этого затруднения остается неясной, причиной неудачи правильной амплификации последовательности может служить примечательно высокое содержание оснований О и С в интересующем генном сегменте. Таким образом, многочисленные коммерчески доступные добавки к реакции ПЦР, заявленные в качестве облегчающих амплификацию богатых О-С участков генов, использовали в попытках амплифицировать фрагмент ДНК ниже старт-кодона кодирующего ΜΜΤ гена ячменя, но все же включающего данный кодон. Несмотря на многочисленные попытки, все усилия с использованием матрицы гДНК потерпели неудачу в отношении амплификации фрагмента, определенного праймерами реакции № 1, перечисленными в табл. 2.

Одновременно с экспериментами по амплификации гДНК, также исследовали, может ли происхо- 28 029777

дящая из РНК кДНК из листьев проростков ячменя составлять функциональную матрицу для амплификации ошибочной последовательности экзона гена ММТ. Так, экстрагировали общую РНК, и очищали ее из листьев проростков ячменя возрастом 4 суток сорта РгезЕде, с использованием компонентов и инструкций набора РазЕКЫЛ РгоОгееп Κΐΐ (Р-ВЮдепе, кат. № 6045-050). Аликвоты выделенной РНК использовали в 8x2 стандартных реакциях ОТ-ПЦР [т.е. с 8 комбинациями пар праймеров (табл. 3), каждая с 2 реакционными буферами], как подробно описано в инструкциях к набору 0пеЗ1ер ЕТ-РСЕ (Отцеп, кат. № 210212). Фрагменты разделяли в 1% агарозных гелях с последующим анализом, который выявил, что продукты реакции могут быть получены только с использованием буфера 1 указанного набора. Интересующие полосы ДНК затем очищали с использованием набора для экстракции из геля ΟίηοιχΙΙ (Р1адеп, кат. № 20051). Выполнены отдельные амплификации ОТ-ПЦР с наборами праймеров № 7, 10 и 11 (ср. табл. 3) в присутствии О-раствора указанного выше набора для ОТ-ПЦР. Интересующие фрагменты ДНК также в данном случае очищали. После вставки индивидуальных фрагментов ДНК в вектор рСЕ2.1ТОРО (1п\л1гоуеп, кат. № Κ4500-01) и трансфекции клеток Е. еоИ конструкцией определяли соответствующие последовательности ДНК вставок в плазмиду.

Рассмотренные вместе объединенные описанные выше усилия привели к сборке геномной последовательности, продлевающейся от старт- до стоп-кодона гена ММТ ячменя сорта РгезЕде (ЗЕР ГО N0: 3). Путем выравнивания последовательности кДНК и геномной последовательности, т.е. выравнивания ЗЕР ГО N0: 3 с ЗЕР ГО N0: 1, определяли, что ген ячменя ММТ, проиллюстрированный на фиг. 9, включает в себя 12 экзонов (всего 3267 п.н.), разделенных 11 интронами (всего 3192 п.н.). Полученная аминокислотная последовательность ММТ сорта РгезЕде показана на фиг. 10 и указана в списке как ЗЕР ГО N0: 6. Кроме Рго157^Л1а и Ме1985^Туг в указанной выше полученной аминокислотной последовательности ММТ сорта РгезЕде, ее сравнение с таковой сорта Нагапа №)о (инвентарный номер ОепВапк АВ028870; ЗЕР ГО N0: 2) выявило полную идентичность (фиг. 11).

Таблица 2. Праймеры для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя

Набор праймеров №	Концы ПЦРпродукта*	Прямой праймер (5'—>3' последовательность ДНК)**	Обратный праймер (5'->3' последовательность ДНК)***
1	1-1462	АТСССТСССССССССССССАССТ СС (5Е<2 Ю ΝΟ: 37)	ССТТССААССССАССАСТТТТСТ СС (5Е0 Ю N0:43)
2	1268-2214	АССАТТССАССАААСАААСААСС (5Е<2 Ю N0:38)	СТССАСАССАСАСТАСТТССТСА АС (5Е0 Ю N0: 44)
3	2118-3075	САТТСТТААССССААТССАСАСС С (5Е0 Ю ΝΟ: 39)	СТССАТААТТТТТСТТТСССАСА СС (5Е0 Ю N0:45)
4	2886-4409	СССТТТТСТТСАССАССААТТТС СС (5Е0 Ю N0: 40)	ТАСАССАТТТСАССТТСССАСАС Τ (5Е0 Ю N0: 46)
5	4301-5188	ТССТССТТТССТСААСТТАТТ (5Е0 Ю N0: 41)	ААААТССАССССТТТАСТССАСА А (5Е0 Ю N0: 47)
6	5130-6459	САТАТССАТСТССАССССАССТТ СТТ (5Е0 Ю N0: 42)	СТАСТТССТАССАТТСАССТТАС САСС (5Е0 Ю N0: 48)

*) Нумерация пар основания, как в геномной последовательности ММТ (ЗЕО ГО N0: 3; смотри также фиг. 9).

**) Последовательность с 5'-конца фрагмента, приведенного в столбце, помеченном "Концы ПЦРпродукта".

***) Комплементарная последовательность с 3'-конца фрагмента, приведенного в столбце, помеченном "Концы ПЦР-продукта".

- 29 029777

Таблица 3. Праймеры для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя

№ набора праймер ОВ	Концы продуктов ОТПЦР*	Прямой праймер (5'—>3' последовательность ДНК) **	Обратный праймер (5'—>3' последовательность ДНК)***
7	1-69	АТСССТСССССССССССССАСС ТСС (ЗЕО Ю N0:49)	СТАСССССССТССССССАСС (ЗЕО Ю N0: 57)
8	1-170	АТСССТСССССССССССССАСС ТСС (ЗЕО Ю ΝΟ: 50)	ССССССССССССААСССССС (ЗЕО Ю ΝΟ: 58)
9	1-200	АТСССТСССССССССССССАСС ТСС (ЗЕО Ю ΝΟ: 51)	СТССССААССАСТССАСССС (ЗЕО Ю N0:59)
10	1-221	АТСССТСССССССССССССАСС ТСС (ЗЕО Ю ΝΟ: 52)	ОСТ ССАТ СО ССААСТ ССААС (ЗЕО Ю ΝΟ: 60)
11	1-247	АТСССТСССССССССССССАСС ТСС (ЗЕО Ю ΝΟ. 53)	СТТССАССТСССССТССАССАССА СС (ЗЕО Ю ΝΟ: 61)
12	131-200	СССТССТССССССССТСССАСС ССС (ЗЕО Ю ΝΟ: 54)	СТССССААССАСТССАСССС (ЗЕО Ю ΝΟ: 62)
13	131-221	СССТССТССССССССТСССАСС ССС (ЗЕО Ю ΝΟ. 55)	ОСТ ССАТ СС ССААСТ ССААС (ЗЕО Ю ΝΟ: 63)
14	131-247	СССТССТССССССССТСССАСС ССС (ЗЕО Ю ΝΟ: 56)	СТТССАССТСССССТССАССАССА СС (ЗЕО Ю ΝΟ: 64)

*) Нумерация пар основания, как в геномной последовательности ММТ (δΕρ ΙΌ ΝΟ: 3).

**) Последовательность с 5'-конца фрагмента, приведенного в столбце, помеченном "Концы ПЦР-продукта".

***) Комплементарная последовательность с З'-конца фрагмента, приведенного в столбце, помеченном "Концы ПЦР-продукта".

Пример 9.

Ген, кодирующий ММТ мутанта 8063, мутирован в 5'-участке сплайсинга интрона 5.

Содержание 8ММ в заростках ячменя мутанта 8063 является исключительно низким или отсутствующим (пример 3), в соответствии с отсутствием активности ММТ (пример 4). На основе данного открытия, исследовано, вызваны ли замены оснований в кодирующем ММТ гене исходной обработкой мутагеном ΝΝ₃ зерен ячменя. Таким образом, сделаны попытки амплифицировать, клонировать и секвенировать указанный ген мутанта 8063 для того, чтобы установить молекулярную основу для его фенотипа без ММТ.

При наличии амплифицированной с 6 наборами праймеров нуклеотидной последовательности гена дикого типа ММТ сорта Ргезйде (табл. 2; подробно описано в примере 8), сходны подход осуществляли в отношении мутанта ячменя 8063. В кратком изложении, геномную ДНК экстрагировали из мутанта, и ее специфичные в отношении гена ММТ амплифицированные фрагменты встраивали в вектор рСК2,1ТОРО (1пуйгодеп, кат. № К4500-01), клонировали, секвенировали, объединяли (δΕ^ ΙΌ ΝΟ: 8), и, наконец, сравнивали с таковыми из ячменя дикого типа. В кодирующей белок части гена ММТ не идентифицировали мутаций. Однако сравнение последовательностей интрона мутантного гена и гена дикого типа выявляло замену оснований О^Л в первом основании интрона 5 (нуклеотид № 3076 δΕ^ ΙΌ ΝΟ: 8). Указанное основание является частью 5'-участка сплайсинга интрона 5, и оно воздействует на процессинг первичной РНК гена, т.е. на сплайсинг РНК (δίηίδαίάί и МеШег, 1992; см. также фиг. 12).

Для оценки возможной роли мутации основания в отношении изменения нормального генного сплайсинга в кодирующем ММТ гене мутанта 8063 проводили подробный анализ происходящей из мутанта РНК для детекции промежуточных продуктов сплайсинга. Данный подход применяли, поскольку изменения в 5'-динуклеотиде ОТ интронов может приводить к накоплению интермедиатов сплайсинга (Еа1 е1 а1., 1999).

Для амплификации интересующих фрагментов анализ проводили по рекомендациям, предоставленным для применения набора для ОТ-ПЦР (Ο^δΐΌρ КТ-РСК от ^^адеη, кат. № 210212). В качестве матрицы использовали 1 мкг общей РНК из листьев проростков сорта Ргезйде и мутанта 8063 в возрасте 4 суток, очищенных как описано в примере 8. С использованием набора праймеров 15 (табл. 4) реакцию ОТ-ПЦР конструировали для амплификации области гена, продлевающейся от экзона 3 до экзона 7 транскриптов ММТ дикого типа РгезЕде и мутанта 8063 (фиг. 12 А). После амплификации продукты реакции разрешали путем электрофореза на 1% агарозном геле (фиг. 12В).

Оценка амплифицированных продуктов выявила только одну полосу от реакции с РНК дикого типа (фиг. 12В). Ее вырезали из геля, очищали с использованием компонентов набора ^^аеx11 ^1адеп, кат. № 20051), встраивали в вектор ρСК2,1-ТΟРΟ (1пуйгодеп, кат. № К4500-01), клонировали и секвенировали. Анализы демонстрировали присутствие фрагмента длиной 882 п.н. (продукт 1 на фиг. 12В, С; δΕ^ ΙΌ ΝΟ: 9), характеризующегося последовательностью, идентичной той, которая длится в пределах основа- 30 029777

ний 442-1323 полноразмерной кДНК ячменя дикого типа ΜΜΤ (8Е^ ГО N0: 4). Обнаруженный таким путем альтернативный сплайсинг считается не имеющим отношения к экспрессии гена дикого типа.

В реакции ОТ-ПЦР, подобной описанной в предыдущем абзаце, кроме применения очищенной мишени РНК из мутанта 8063, образовывались три специфичных фрагмента ДНК, обозначенные на фиг. 12 В как продукт 2, продукт 3, продукт 4, причем каждый из них отличался по длине от продукта 1, амплифицированного с использованием дикого типа РНК (фиг. 12 В). Таким образом, процессинг пре-мРНК нарушался за счет единичной нуклеотидной мутации в 5'-участке сплайсинга интрона 5 гена ΜΜΤ мутанта 8063. Данный сценарий полностью отменял использование указанного 5'-участка сплайсинга, но активировал применение скрытых дополнительных участков сплайсинга.

С целью установления лежащей в основе получения указанных выше трех фрагментов ПЦР в мутанте 8063 молекулярной причины, каждый из фрагментов подготавливали к секвенированию ДНК с использованием процедуры, как описано выше в примере 8 для происходящих из ПЦР полос ДНК сорта ΡΓβδΐίββ. Наибольший фрагмент составлял 1089 п.н. в длину (продукт 2 на фиг. 12С; 8ЕС) ГО N0: 10) и, как было обнаружено, включал в себя весь интрон 5, в то время как продукт 3 (фиг. 12С; 8ЕС) ГО N0: 12) и продукт 4 (фиг. 12С; 8ЕС) ГО N0: 14) составляли 955 п.н. и 810 п.н. в длину соответственно, и, таким образом, были короче фрагмента длиной 882 п.н. из РНК дикого типа (ср. описание выше). Анализ последовательности ДНК продукта 3 выявил скрытый участок сплайсинга в середине интрона 5, в то время как продукт 4 находился в экзоне 5 (фиг. 12 Ό).

Также значимой находкой анализов последовательности ДНК является открытие преждевременных стоп-кодонов трансляции в продукте 2 [ΤΟΑ в положении 3088-3090 согласно нумерации оснований геномной ДНК из ячменя сорта ΡϊΌδίΐ^ (8Е^ ΙΌ N0: 3)], в продукте 3 [ΤΟΑ в положении 3088-3090 согласно нумерации оснований геномной ДНК из ячменя сорта ΡΓβδΐίββ (8Е^ ΙΌ N0: 3)], и в продукте 4 [ΤΟΑ в положении 3289-3291 согласно нумерации оснований геномной ДНК из ячменя сорта ΡΓβδΐίββ (8Е^ ΙΌ N0: 3)], что дает транслируемые белки длиной 315, 315, и 289 аминокислот соответственно. На фиг. 12С предоставлено графическое сравнение и итог результатов секвенирования продукта 1, продукта 2, продукта 3 и продукта 4, тогда как иллюстрации на фиг. 12Ό и 12Е предоставляют конкретные данные по конкретным основаниям, вовлеченным в события альтернативного сплайсинга.

Таблица 4. Праймеры для детекции альтернативного сплайсинга гена, кодирующего ΜΜΤ ячменя

Набор праймеров №	Концы продуктов ОТ-ПЦР *	Прямой праймер (5'—>3' последовательности ДНК)**	Обратный праймер (5'—>3' последовательность ДНК)***
15 +	442-1323	СТТТАТССТСТССАТАТАААССС ААС (ЗЕО Ю N0:65)	АААТССАССААСААСАТТССССА АА (ЗЕО Ю N0:67)
16 +	246-933	АССАТТССАССАААСАААСААСС (ЗЕО Ю N0:66)	СТССАТААТТТТТСТТТСССАСА ОС (ЗЕО Ю N0:68)

Ф) Для ОТ-ПЦР с использованием матрицы РНК мутанта 8063.

Ф) Для ОТ-ПЦР с использованием матрицы РНК мутанта 14018.

*) Нумерация пар основания как для кДНК ММТ (8ЕЦ ΙΏ N0: 4).

**) Последовательность с 5'-конца фрагмента, обозначенного в столбце, отмеченном "Концы продуктов ПЦР".

***) Комплементарная последовательность с 3'-конца фрагмента, обозначенного в столбце, отмеченном "Концы продуктов ПЦР".

Пример 10.

Экспрессирующая плазмида, кодирующая ММТ дикого типа.

По причине следующих двух наблюдений:

(ΐ) клетки Е. соН не имеют ММТ и лишены способности синтезировать 8ΜΜ (Τ^ηΜ^ί е! а1., 1998);

(ίί) растительная ММТ может синтезироваться в Е. соН (Τадатоиηί е! а1., 2002);

гетерологичная экспрессия мутантных или укороченных ММТ ячменя в указанной выше бактерии обеспечивает новый путь симулировать ферментативную активность или подтвердить ее отсутствие. Поскольку рекомбинантная ММТ ячменя дикого типа из Е. соН служит в таких экспериментах в качестве положительного контроля, задача состояла в конструировании и разработке экспрессионной плазмиды Е. соН для гетерологичной экспрессии ММТ ячменя.

Для амплификации релевантных последовательностей общую РНК вначале экстрагировали из листьев проростков сорта ΡΓβδϋββ возрастом 4 суток (как описано в примере 9), и 1 мкг данной РНК использовали в качестве матрицы для стандартной реакции ОТ-ПЦР, за исключением того, что реакционную смесь добавляли набор праймеров 17 (табл. 5). Амплифицированный продукт встраивали в вектор ρϋΚ2.1-Τ0Ρ0 (1пуЁго§еп), с получением плазмиды ρϋΚ2.1-Τ0Ρ0-ΜΜΤ. После клонирования плазмиды целую вставку секвенировали (8Е^ ГО N0: 5) и сравнивали с таковой сорта ΡΓβδΐίββ (8Е^ ΙΌ N0: 4). Три индуцированных ПЦР нуклеотидных различия идентифицировали в клонированном продукте

- 31 029777

(Т1310—А, Т2954—С и 03031—А), причем они давали замены аминокислот ММТ Ьеи437—Н1§, Туг985—Ме! и О1у1011 ——Зег (что определяется сравнением ЗЕ^ ГО N0: 6 и ЗЕ^ ГО N0: 7). Не ожидалось, что какая-либо из аминокислотных замен помешает действию рекомбинантной ММТ тем путем, который может иметь отношение к настоящей заявке. Данный вывод основан на обнаружении того, что экспрессированный белок был активен и мог распознаваться антителами против ММТ (ср. пример 12).

Затем рСК2.1-ТОРО-ММТ вырезали посредством Ше1-ЕсоН1 с получением Ше1-ЕсоН1 5'фрагмента длиной 569 п.н. и 3'-фрагмента ЕсоМ длиной 2 699 п.н. 5'-Фрагмент встраивали в линеаризованный Ше1-ЕсоН1 экспрессирующий вектор рЕТ19Ъ ^оуадеп, кат. № 69677-3), и в участок ЕсоМ полученной в результате плазмиды встраивали указанный выше 3'-фрагмент длиной 2699 п.н., с получением таким путем экспрессирующей плазмиды рЕТ19Ъ-ММТ (фиг. 13А). Данная экспрессирующая плазмида кодирует ММТ, связанную с ^концевой Ηΐδ-меткой (МОНННННННННН; ЗЕ^ ГО N0: 69) и участком расщепления энтерокиназой (ЗЗОНГОИПИКН; ЗЕ^ ГО N0: 70).

Таблица 5. Праймеры для амплификации кодирующей белок последовательности гена ММТ ячменя

№ набора праймеров	Концы продуктов ОТПЦР *	Прямой праймер (5'—>3' последовательности ДНК) **	Обратный праймер (5 ' —>; 3 ' последовательность ДНК)
17	1-3267	САТАТСАТСССТСССССССССССС	СААТТСТЛСТТССТАССАТТСАСС
САССТСС (ЗЕО Ю N0:71)	ТТАССАСС (ЗЕО Ю N0:72)

*) Нумерация пар оснований, как для кДНК ММТ (ЗЕО ΙΌ N0: 5), т.е. включающая в себя продления последовательности САТ и ААТТС выше и ниже старт- и стоп-кодонов соответственно. **) Последовательность с 5'-конца фрагмента, обозначенного в столбце, отмеченном "Концы продуктов ОТ-ПЦР", как определено набором праймеров. Участок Ж1е1 подчеркнут, старт-кодон трансляции подчеркнут дважды.

***) Комплементарная последовательность с 3'-конца фрагмента, обозначенного в столбце, отмеченном "Концы продуктов ОТ-ПЦР". Участок ЕсоЫ подчеркнут; стоп-кодон трансляции, включая часть участка ЕсоЫ, показан курсивом.

Пример 11.

Экспрессирующие плазмиды, кодирующие укороченные ММТ мутанта 8063.

Ген, кодирующий ММТ мутанта 8063, как было показано в примере 9, содержит переход О—А в 5'участке сплайсинга интрона 5, с активацией за счет этого двух скрытых участков сплайсинга, что приводит к экспрессии трех аномальных транскриптов (ср. фиг. 12В, С), каждый из которых содержит незрелый стоп-кодон.

Для подтверждения того, что мутантные транскрипты кодируют нефункциональные ММТ, каждую соответствующую открытую рамку считывания амплифицировали и встраивали в экспрессирующий вектор Е. сой, как описано ниже. Заметно, что два из транскриптов, полученных в результате альтернативного сплайсинга, конкретно, те, которые дают продукт 2 и продукт 3 (фиг. 12В), кодируют идентичные белки. Таким образом, только двух экспрессирующих плазмид было достаточно для определения, кодируют ли гены мутанта ячменя 8063 с аномальным сплайсингом функциональные ферменты ММТ.

Знание последовательности скрытых продуктов сплайсинга мутанта 8063, ср. фиг. 12Ώ, дало возможность для амплификации релевантных участков гена из экспрессирующей плазмиды рЕТ19Ъ-ММТ, конструирование которой подробно описано в примере 10. Набор праймеров 18, перечисленный в табл. 6, использовали для амплификации 3'-концевых частей генов в виде фрагментов Зас11-ВатН1 продукта 2 (ЗЕО ГО N0: 27) и продукта 3 (ЗЕО ГО N0: 28). Их впоследствии обменивали на соответствующий фрагмент рЕТ19Ъ-ММТ (ср. фиг. 13А), с получением в результате экспрессирующих плазмид рЕТ19ЪПпе8063-Рго02 (фиг. 13В) и рЕТ19Ъ-Ппе8063-Рго03 (фиг. 13С). В параллельно осуществляемых реакциях использовали набор праймеров 19 (табл. 6) для образования экспрессирующей плазмиды рЕТ19ЪПпе8063-Рго04 (фиг. 13Ώ; с ЗЕО ГО N0: 29, в которой приводится последовательность продукта 4 для клонирования), сконструированной для синтеза укороченной ММТ, соответствующей той, которая относится к продукту 4 (ср. фиг. 12В).

На фиг. 13Е предоставлено подробное сравнение аминокислотных последовательностей ММТ дикого типа и укороченных продуктов, кодируемых мутантом 8063.

- 32 02977

Таблица 6. Праймеры для амплификации фрагментов ДНК мутанта 8063 (для плазмидной конструкции)

№ набора праймеров	Концы продуктов ПЦР *	Конечный продукт (5Е<2 Ю ΝΟ: )	Последовательность праймера** (5'—>3' последовательность ДНК)
18	1-27 736-781	27 и 28	Прямой: СССССССССССТССАСТССТТССССАС (5Е0 Ю ΝΟ: 73) Обратный: ССАТССТСАААСААТТССТАТСТССАТАА-
ТТТТТСТТТСССАСАСС (5Е0 Ю ΝΟ: 74)
19	1-27 667-703	29	Прямой: СССССССССССТССАСТССТТССССАС (5Е0 Ю N0:75) Обратный: ССАТССТТАССАСССТТСТССТССССССССТССС
АТС (5Е0 Ю N0:76)

*) Числа относятся к номерам нуклеотидов в соответствующих 8ЕР ГО N0, перечисленных в соседних колонках.

**) Одинарное подчеркивание использовано для того, чтобы отметить участки Зас11 и ВатН1 на прямом и обратном праймере соответственно. Двойное подчеркивание указывает стоп-кодоны.

Пример 12.

Рекомбинантные формы ММТ мутанта 8063 неактивны.

Для подтверждения того, что формы ММТ с делециями из мутанта 8063 не имеют ферментативной активности, клетки Е. соН штамма ВЬ21 раздельно трансформировали плазмидами рЕТ19Ь, рЕТ19ЬММТ, рЕТ19Ь-Ьте8063-Ргоб3 и рЕТ19Ь-Ьте8063-Ргоб4 (ср. фиг. 13), и затем выращивали в течение ночи в стандартной среде Ьипа Вго1й (ЕВ), содержащей ампициллин, в объеме 5 мл.

Аликвоту объемом 1,25 мл каждой культуры добавляли в 100 мл свежей ЬВ и инкубировали при 37°С до достижения плотности клеток 0Ό₆₀₀=0,6. В этот момент добавляли 40 мкл 1М 1РТС для индукции экспрессии гетерологичного белка. После инкубации в течение ночи при 20°С клетки отдельных культур осаждали посредством центрифугирования в течение 20 мин при 4000 об/мин, 4°С. Каждый клеточный осадок ресуспендировали в 5 мл Н₂О, затем подвергали нескольким циклам замораживанияоттаивания, и в итоге инкубировали в течение 30 мин при 37°С в присутствии ~750 ед./л нуклеазы (З1§та, кат. № Е8263-25КИ) для снижения вязкости образца. После 30 мин центрифугирования при 4000 об/мин и 4°С для отделения растворимых клеточных белков (определенных как белки жидкой фазы) от нерастворимых белков (определенных как осадок), осадок далее промывали ресуспендированием в 2 мл Н20, содержащих 1 мг лизоцим. После 5 мин инкубации при температуре окружающей среды образец разбавляли добавлением 15 мл Н₂0. Три сходных цикла промывки-осаждения проводили до того, как экстрагировали белки телец включения в осадке посредством 1 мл 50 мМ буфера ТП8-С1, рН 8,0, содержащего 7 М мочевину, 2 мМ β-меркаптоэтанол.

Для анализа активности ММТ 50 мкл образцов, содержащих растворимые клеточные белки (как определено в настоящем документе выше), переносили в 250 мкл 25 мМ К-фосфатного буфера, рН 6,0, содержащего 0,4 мМ АбоМе!, 10 мМ Ме!, 1 мМ ЭТТ, 0,1 мг/мл ВЗА. После инкубации в течение 1 ч при 50°С образцы фильтровали, и аликвотам объемом 10 мкл давали возможность взаимодействовать с ОРА, как подробно описано в примере 2. Затем проводили анализ концентраций ЗММ, как описано в указанном примере, причем результаты суммировали на фиг. 14А. Только экстракт клеток, трансформированных рЕТ19Ь-ММТ, давал пик на хроматограмме с тем же временем удержания, что и стандарт ЗММ. Таким образом, отсутствие сходных пиков в хроматограммах из клеток, трансформированных рЕТ19ЬЕте8063-Ргоб3 и рЕТ19Ь-Ете8063-Ргоб4, указывают на то, что мутант 8063 не способен образовывать активную ММТ.

Отдельный эксперимент был направлен на подтверждение того, что мутант 8063 не способен образовывать полноразмерную активную ММТ. Образцы объемом 5 мкл растворимых клеточных белков и образцы объемом 10 мкл происходящих из осадка белков указанных выше экстрактов Е. соН разделяли стандартным электрофорезом и тестировали кроличьим поликлональным антителом против ММТ, направленным против пептидный антиген ММТ ячменя длиной 15 остатков [ср. фиг. 13Е (полоса последовательности, помеченная звездочками); аффинное очищенный препарат объемом 12 мл поликлонального антитела против ММТ приобретали от 1иуИго§еи (проект № Е0402801К; животное № С7511) и использовали в стандартных анализах вестерн-блоттинга в разведении 1:1000 (фиг. 14В, С)].

- 33 029777

В подробном изложении, указанные выше белки нагружали на 10% δΌδ-полиакриламидный гель и разделяли путем электрофореза при 150 В течение 75 мин, после чего белки переносили на поливинилиденфторидную мембрану (1ттоЫ1ои-Р, ΜίΙΙίροΓο) посредством аппарата для электроблоттинга (ΤππίδΒ1οΐ 8Ό 8ет1-Эгу Τγ;πι5+γ Се11, ΒίοΡαά). который запускали при 2,5 мА на см² (макс. 25 В). Трансблоты помещали на 1 ч при 25°С в блокирующий буфер [1хфосфатно-солевой буфер (ΡΒ8), 1% Β8Α]. Блокирующий раствор удаляли, и мембрану помещали в раствор антитела против ΜΜΤ на 1 ч. После этого мембрану ополаскивали 1χΡΒ8 и инкубировали в течение 1 ч в растворе козьего 1дО с щелочной фосфатазой против кроличьих антител (81дта). После указанной выше инкубации мембрану ополаскивали в 1χΤΒ8, с последующей визуализацией белковых полос после инкубации с использованием нитросинего тетразолия и 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфата (81дта). В конце гель ополаскивали водой для остановки реакции фосфатазы.

Препарат антитела против ΜΜΤ, как описано в настоящем документе выше, использовали для тестирования блотов растворимых клеточных и происходящих из осадка белков клеток Е. соН, трансформированных рЕТ19Ь-ΜΜΤ (фиг. 14В, С; дорожки помечены "2"), ρΕΤ19ό-Ρίικ8063-ΡΐΌύ3 (фиг. 14В, С; дорожки помечены "3"), ρΕΤ19ό-Ρίικ8063-ΡΐΌύ4 (фиг. 14В, С; дорожки помечены "4") и ρΕΤ19ό (фиг. 14 В, С; дорожки помечены "5"). Несмотря на различия в общих профилях полос растворимых клеточных и происходящих из осадка белков клеток (причем последние, как правило, появляются с размазыванием белковых полос, которое начинается на верхней части и продолжается до его нижней части), полноразмерную ΜΜΤ распознавали как белковую полосу, мигрирующую вместе с маркерным белком массой 120 кДа (дорожки, обозначенные "1") в экстрактах клеток, трансформированных рЕТ19Ь-ΜΜΤ. Неактивные формы белка ΜΜΤ клеток, трансформированных ρΕΤ19ό-Ρίικ8063-ΡΐΌύ3 и рЕТ19Ъ-Ьше8063Рго64, как ожидается, соответствуют сильно окрашенным полосам в области блота между 30 кДа и 40 кДа. Примечательно, что окрашенная полоса белка массой 80 кДа не происходит от ΜΜΤ, поскольку она часто появляется в клетках отрицательного контроля, трансформированных вектором рЕТ19Ъ.

На основе экспериментальных результатов по гетерологичной экспрессии форм ΜΜΤ, как описано в настоящем документе выше, и экспериментов, спланированных для получения рекомбинантных форм ΜΜΤ ячменя дикого типа и мутанта 8063, сделан вывод, что только ΜΜΤ дикого типа является активной, в отличие от форм ΜΜΤ указанного мутанта. Таким образом, способность катализировать преобразование Μеΐ в предшественник ΌΜ8 8ΜΜ ограничена ячменем дикого типа, в отличие от мутанта 8063.

Пример 13.

Системы мониторинга мутанта ячменя 8063.

В дополнение к биохимическому анализу детекции зерен ячменя мутанта 8063 (ср. пример 2), в настоящем примере описан генетический способ, сконструированный для идентификации мутантных зерен или их продуктов. С подходящими модификациями, известными специалисту в данной области, способ также может применяться для выявления того, получен ли данный растительный продукт с использованием мутанта ячменя 8063. Анализ основан на анализе по детекции единичного нуклеотидного полиморфизма (8ΝΡ), конкретно, мутации О^А в положении 3076 гена МТТ в мутанте 8063, как иллюстрировано на фиг. 15 и с характеристиками наборов олигонуклеотидных праймеров, перечисленных в табл. 7.

Продукт ПЦР размером 271 п.н. с последовательностью, приведенной как 8ЕЦ ГО ΝΟ: 33, получают при использовании набора праймеров № 20 в реакции с геномной ДНК ячменя сорта РгекЬде в качестве матрицы, тогда как никакого продукта не амплифицируется, когда в качестве матрицы служит геномная ДНК мутанта 8063: в последнем случае просто потому, что не происходит спаривания оснований между 3'-концом обратного праймера и матрицей (фиг. 19А). Однако продукт ПЦР размером 271 п.н. получают с набором праймеров № 21 в амплификации ПЦР с геномной ДНК мутанта 8063 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 34; фиг. 19 А), поскольку обратный праймер имеет полное совпадение последовательности с матрицей. Набор праймеров № 22, который состоит из четырех указанных выше праймеров, перечисленных в наборах праймеров № 20 и 21, два для амплификации фрагмента, содержащего мутацию О3076^А гена ΜΜΤ мутанта 8063 и два для мутации 01462^А гена ΜΜΤ мутанта 14018 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 36, ср. пример 17), конструируют для мониторинга присутствия мутантного гена ΜΜΤ, который содержит обе указанные выше нуклеотидные мутации.

Каждую из указанных выше амплификации ПЦР экспериментально осуществляют в реакционной смеси полимеразы КеШац (81дта, кат. № Ό6063) объемом 50 мкл, состоящей из 200 нг геномной ДНК и 50-100 пмоль каждого праймера из специфичного набора праймеров (табл. 7). После амплификации в стандартном термоциклере для ПЦР (1 мин при 95°С; затем 30 циклов: 94°С, 60 с - 64°С, 30 с -72°С, 30 с; заключительные 10 мин при 72°С), аликвоту образца объемом 25 мкл наносят на стандартный электрофорез в 2% агарозном геле. Как проиллюстрировано на фиг. 15 С, ПЦР с геномной ДНК сорта РгекЬде в присутствии набора праймеров № 20 и набора праймеров № 21 приводит к образованию фрагмента ДНК размером 271 п. н. и не приводит к образованию фрагмента соответственно. И ПЦР с геномной ДНК мутанта 8063 в присутствии набора праймеров № 20 и набора праймеров № 21 не дает фрагмента и приводит к образованию фрагмента ДНК размером 271 п.н. соответственно. В тех случаях, когда последний

- 34 029777

результат является исходом ПЦР с геномной ДНК зерна ячменя неизвестной идентичности, имеется высокая вероятность, что ДНК-матрица идентична таковой мутанта 8063. Дальнейшие усилия для поддержки данного вывода включают в себя анализы по тестированию уровня 8ММ (ср. пример 2), и активности ММТ (ср. пример 4).

Отдельный способ подтверждения того, что мутант 8063 не содержит ММТ, включает в себя анализ вестерн-блоттинга, с использованием технической процедуры и антитела против ММТ, как подробно описано в примере 3. В практических терминах зерна сорта Ргезйде и мутанта 8063 проращивали при 20°С в течение 4 суток, с последующей отдельной гомогенизацией одного зерна дикого типа и одного мутантного зерна, в 250 мкл Н₂О каждое. После центрифугирования при 13000 об./мин в течение 10 мин, 15 мкл каждой надосадочной жидкости смешивали с 5 мкл загрузочного буфера с δϋδ, кипятили в течение 5 мин, нагружали на 12% δΏδ-полиакриламидный гель, разделяли путем электрофореза, подвергали электроблоттингу и, наконец, тестировали поликлональным антителом против ММТ (фиг. 15 В). Отдельную полосу белка ММТ массой 120 кДа легко распознавали в экстракте сорта Ргезйде, однако, никакого иммунореактивного белка мутанта 8063 не мигрировало совместно с маркерным белком массой 120 кДа. Таким образом, указанный выше способ анализа путем вестерн-блоттинга можно использовать для проверки того, продуцируют ли прорастающие зерна ячменя ММТ, или они лишены данной способности. Дальнейшие молекулярные и биохимические тесты могут использоваться для подтверждения того, происходит ли данное зерно из мутанта 8063.

Таблица 7.. Праймеры для выявления δΝΓ мутанта 8063

№ набора праймеров	Концы продукт ПЦР	Конечный продукт (ЗЕО Ю ΝΟ: )	Прямой праймер (5'—>3' данная последовательность ДНК) ****	Обратный праймер (5'->3' последовательность ДНК) *****
20	28313101*	33	ССАТТССАССТТССССТТС (ЗЕО Ю N0:77)	САТСТАСТСАСТСАААСАА ТТССТАС (ЗЕО Ю N0:81)

21	28313101**	34	ССАТТССАССТТССССТТС (ЗЕО Ю N0:78)	САТСТАСТСАСТСАААСАА ТТССТАТ (ЗЕО Ю N0:82)
22	28313101** 13611483***	34 36	ССАТТССАССТТССССТТС (ЗЕО Ю N0:79) СССАТССАСАТТССАТСТТ САС (ЗЕО Ю N0:80)	САТСТАСТСАСТСАААСАА ТТССТАТ (ЗЕО Ю N0:83) СТАСССААСААСАССТССС ААТ (ЗЕО Ю N0: 84)

*) Нумерация пар оснований как в геномной последовательности ММТ дикого типа (δΕρ ΙΌ N0: 3).

**) Нумерация пар оснований как в геномной последовательности ММТ мутанта 8063 (δΕρ ΙΌ N0: 8).

***) Нумерация пар оснований как в геномной последовательности ММТ мутанта 14018 (δΕρ ΙΌ N0: 19).

****) Последовательность с 5'-конца фрагмента, приведенного в столбце, обозначенном "Концы продукта ПЦР".

*****) Комплементарная последовательность с 3'-конца фрагмента, приведенного в столбце, обозначенном "Концы продукта ПЦР".

Пример 14.

Ген, кодирующий ММТ мутанта ячменя 14018, мутирован в 5'-участке сплайсинга интрона 2.

После обнаружения в экстрактах прорастающих зерен мутанта ячменя 14048 исключительно низких концентраций δММ или его отсутствия, растение подвергали анализам в тех же экспериментальных условиях, как те, что подробно описаны выше для мутанта 8063 в примере 9. Однако растительный материал дикого типа в данном случае был взят из сорта δеЬаδί^аη, поскольку его использовали для мутагенеза N8^ в группе зерен, содержащих мутант 14018. Эксперименты по идентификации мутации, которая вызывала фенотип без ММТ, планировали и выполняли как описано ниже в настоящем документе.

Вначале проводили сравнение различных геномных последовательностей ДНК с кодирующим ММТ геном сорта δеЬаδί^аη (δΕρ ΙΌ N0: 16 для геномной последовательности ДНК; δΕρ ΙΌ N0: 17 для последовательности кДНК; δΕρ ΙΌ N0: 18 для транслированной последовательности кДНК; во всех случаях с последовательностями, идентичными таковым сорта РгезПде, как описано в настоящем документе в примере 8) и мутанта 14018 (δΕρ ΙΌ N0: 19 для геномной последовательности, и δΕρ ΙΌ N0: 20, 21, 23, 25 для последовательностей кДНК) с фокусом на областях, продлевающихся от старт- до стопкодонов трансляции. Замену оснований О^А идентифицировали в секвенированной части гена мутанта 14018, конкретно, в донорном участке сплайсинга непосредственно ниже экзона 2 в первом основании интрона 2, более конкретно, в нуклеотиде № 1462, и, таким образом, она препятствовала процессингу

- 35 029777

первичной РНК генного транскрипта (фиг. 16).

Во-вторых, с использованием набора праймеров 16 (табл. 4), конструировали и реализовали реакцию ОТ-ПЦР для амплификации области гена, продлевающейся от экзона 2 до экзона 5 кодирующего ММТ гена сорта 8еЬазйап и мутанта 14018 (фиг. 16 А). После амплификации ДНК продукты реакции наносили на электрофорез в агарозном геле, причем результаты отображены на фиг. 16В. Сходным образом с тем, что описано для мутанта 8063 в примере 9, РНК дикого типа из сорта 8еЬазйап давала один фрагмент ПЦР, продукт 5 на фиг. 16В, который по длине и последовательности ДНК, ср. 8ЕЭ ГО N0: 20, был идентичен тому, который длился от основания 246 до 933 полноразмерной кДНК ММТ ячменя дикого типа (8Е0 ГО N0: 17). Данный результат опять подчеркивает, что альтернативный сплайсинг не является свойством экспрессии гена дикого типа.

В-третьих, РНК-матрицу, очищенную из мутанта 14018 использовали в реакции ПЦР, в которой образовывалось три специфичных фрагмента, обозначенных продукт 6 (8ЕЭ ГО N0: 21), продукт 7 (8ЕЭ ГО N0: 23) и продукт 8 (8ЕЭ ГО N0: 25) на фиг. 16 В,С, которые отличались по длине и последовательности амплифицированного продукта матрицы дикого типа. Это наблюдение указывает на то, что единичная мутация 5'-участке сплайсинга интрона 2 в гене ММТ мутанта 14018 препятствует процессингу премРНК путем удаления нормального участка сплайсинга, но вместо этого активирует применение скрытых дополнительных участков сплайсинга. В этом отношении для продукта 6 и продукта 7 идентифицировали скрытый участок сплайсинга в интроне 2, тогда как для продукта 8 он находился в экзоне 2. Графическое сравнение указанных выше результатов секвенирования предоставлено на фиг. 16С.

Кроме того, в анализах последовательности ДНК выявляли предварительные стоп-кодоны трансляции в продукте 6 [ТАС в основаниях 1579-1581 по нумерации оснований геномной ДНК из ячменя сорта 8еЬазйап (8ЕЭ ГО N0: 16)], в продукте 7 [ТАА в основаниях 1840-1842 по нумерации оснований геномной ДНК из ячменя сорта 8еЬазйап (8ЕЭ ГО N0: 16)], и в продукте 8 [ТСА в основаниях 1916-1918 оснований геномной ДНК из ячменя сорта 8еЬазйап (8ЕЭ ГО N0: 16)], что давало транслированные белки длиной 186, 180, и 163 аминокислот, приведенные как 8ЕЭ ГО N0: 22, 8ЕЭ ГО N0: 24 и 8ЕЭ ГО N0: 26 соответственно. Параллельно с результатами, описанными выше для мутанта 8063 (фиг. 12Ό, Е), иллюстрации на фиг. 16 Э.Е предоставляют конкретные данные о природе конкретных оснований, вовлеченных в события альтернативного сплайсинга.

Пример 15.

Экспрессирующие плазмиды для синтеза укороченных ММТ мутанта 14018.

Обоснование и стратегия конструирования экспрессирующих плазмид, которые направляют синтез трех укороченных рекомбинантных версий ММТ, происходящих из мутанта 14018, соответствовали описанным в примере 11 для мутанта 8063. В кратком изложении, целью эксперимента было подтверждение того, что аберрантные события сплайсинга мутанта 14086 приводят к образованию транскриптов, кодирующих неактивные ММТ.

Рекомбинантные части генов, таким образом, должны кодировать белки, последовательности которых, приведенные в 8ЕЭ ГО N0: 22, 8ЕЭ ГО N0: 24 и 8ЕЭ ГО N0: 26, отражают аберрантные события сплайсинга, приводящие к образованию продукта 6, продукта 7 и продукта 8 (ср. фиг. 16 В, С).

С использованием плазмиды рЕТ19Ь-ММТ, ср. пример 10, в качестве матрицы три стандартных последовательных ПЦР с наборами праймеров № 23, 24 и 25 (табл. 8), приводили к образованию амплифицированного фрагмента размером 394 п.н. (8ЕЭ ГО N0: 30). Его расщепляли 8ас11-ВатН1 и лигировали с фрагментом 8ас11-ВатН1 рЕТ19Ь-ММТ (фиг. 17А), с получением экспрессирующей плазмиды рЕТ19ЬЫпе14086-Ргоб6 (фиг. 17В), сконструированной для синтеза укороченной ММТ, соответствующей продукту 6, как обозначено на фиг. 16В.

С использованием той же процедуры, что описана в настоящем документе выше для фрагмента длиной 394 п.н., но сейчас с наборами праймеров № 23, 24 и 26 в трех последовательных амплификациях ПЦР (табл. 8), генерировали фрагмент размером 376 п.н. (8ЕЭ ГО N0: 31), который после расщепления 8ас11-ВатН1 лигировали с большим фрагментом 8ас11-ВатН1 рЕТ19Ь-ММТ (фиг. 17А), с получением экспрессирующей плазмиды рЕТ19Ь-Ыпе14086-Ргоб7 (фиг. 17С). Данную экспрессирующую плазмиду конструировали для синтеза укороченной ММТ, соответствующей той, которая давала продукт 7, обозначенный на фиг. 16В.

В параллельно запущенном эксперименте, проведенном сходным путем с тем, что описан выше для рЕТ19Ь-ММТ, но с наборами праймеров № 27 и 28 (табл. 8), амплифицировали фрагмент размером 325 п.н. (8ЕЭ ГО N0: 32), который после расщепления 8ас11-ВатН1 лигировали с большим фрагментом 8ас11ВатН1 рЕТ19Ь-ММТ (фиг. 17А), с получением экспрессирующей плазмиды рЕТ19Ь-Ыпе14086-Ргоб8 (фиг. 17Ό) для синтеза укороченной ММТ, соответствующей продукту 8 (ср. фиг. 16В).

- 36 029777

Таблица 8. Праймеры для амплификации фрагментов ДНК мутанта 14018 (для конструирования плазмид)

№ набора праймеров	Последовательность праймера (5'—>3' последовательность ДНК)*	Концы ПЦРпродукта**	Конечный продукт (ЗЕО Ю N0: )
23	Прямой: СССССССССССТССАСТССТТССССАС (ЗЕО Ю N0:85) Обратный: ССАСАТААСАТАААТАТСТАСССААСААСАССТСССААТСТТССААССССАССАСТТТТСТСС (ЗЕО Ю N0:86)	1-27 245-307	30
24	Прямой: СССССССССССТССАСТССТТССССАС (ЗЕО Ю N0:87)	1-27	30
Обратный: ААССТСАСТАААТСТСТААСТТСТССАССТСССАТС-	285-354
ТТТССААСАААССАСАТААСАТАААТАТСТАССС (ЗЕО Ю N0:88)
25	Прямой: СССССССССССТССАСТССТТССССАС (ЗЕО Ю N0:89) Обратный: ОСАТСССТАСТ СССАСМАССТААААСТ ТТ САТАТАААСТ-	1-27 329-394	30
ААССТСАСТАААТСТСТААСТТСТСС (ЗЕО Ю N0:90)
26	Прямой: СССССССССССТССАСТССТТССССАС (ЗЕО Ю N0: 91)	1-27	31
Обратный: ССЛТССТТАТАТССАСАССАТАААССТСАС-ТАААТСТСТААСТТСТСС (ЗЕО Ю N0: 92)	329-376
27	Прямой: СССССССССССТССАСТССТТССССАС (ЗЕО Ю N0:93) Обратный: АССТТТАТССАТССААТСТТСАТАССТСТТСССТТТАТАТССАСАССАТАААССАТТСССАСАТСССАССТСТССТАСТС (ЗЕО Ю N0:94)	1-27 198-277	32
28	Прямой: СССССССССССТССАСТССТТССССАС (ЗЕО Ю N0: 95)	1-27	32

Обратный: ССАГССТТАТТАСАТТСССАСАССАТССТССТСТАСТССАТТСААСТАААССТТТАТССАТССААТСТТСАТАССТСТТСС

(5Е0 Ю N0: 96)

246-325

*) Замечено, что один тот же прямой праймер с подчеркнутым участком 8ас11 используют во всех реакциях. Для обратных праймеров 5'-концевые продления без отжига ДНК-матрицы показаны волнистым подчеркиванием; участки ВатН1 показаны курсивом, и комплементарные стопкодоны трансляции буквами жирного шрифта.

**) Числа относятся к номерам нуклеотидов в соответствующей 8ЕС) ГО N0, приведенной в соседнем столбце.

Пример 16.

Рекомбинантные формы ΜΜΤ мутанта 14018 неактивны. Следовали процедуре по примеру 12, причем происходящие из мутанта 8063 конструкции заменяли на таковые из мутанта 14018. Бактерии Е. соН трансформировали рН’Г19Ь-1 зпе1401 8-Ργο06. ρΕΤ19Ε-Ι л пе 14018-Ργο07 и ρΕΤ19Ь-1 л пе 14018-Ρτοά8 (фиг. 17А-В, с соответствующим выравниванием аминокислот, показанным на фиг. 17Е), но эксперименты исключали анализы путем вестерн-блоттинга, поскольку антитело против ΜΜΤ, описанное в примере 12, было индуцировано против участка последовательности, отсутствующего в специфичной для мутанта 14018 части ΜΜΤ.

Ни один из экстрактов трансформированных бактерий не проявлял способности образовывать 8ΜΜ (фиг. 18), так что та же аргументация, что была предоставлена выше в примере 12, является основой для вывода о том, что мутант ячменя 14018 образует нефункциональные ферменты ΜΜΤ, которые лишены каталитической способности образовывать 8ΜΜ, предшественник ΏΜ8.

- 37 029777

Пример 17.

Системы мониторинга мутанта ячменя 14018.

В дополнение к биохимическому анализу по выявлению зерен ячменя мутанта 14018 (ср. пример 2), в настоящем примере описан генетический способ, который конструировали для идентификации мутантных зерен или растительных продуктов, полученных из мутанта ячменя 14018. Он основан на анализе по детекции единичного нуклеотидного полиморфизма (8ΝΡ), конкретно, мутации С^А в положении 1462 гена МТТ в мутанте 14018, что проиллюстрировано на фиг. 19, и характеристики наборов олигонуклеотидных праймеров приведены в табл. 9.

Продукт ПЦР размером 121 п.н. с последовательностью, приведенной как δΕΟ ГО N0: 35, образуется при использовании набора праймеров № 29 в реакции с геномной ДНК ячменя сорта 8еЪакйап в качестве матрицы, тогда как никакого продукта не амплифицируется, когда матрицей служит геномная ДНК мутанта 14018: в последнем случае просто потому что нет спаривания оснований между 3'-концом обратного праймера и матрицы (фиг. 19В). Однако, продукт ПЦР длиной 121 п.н. получают с набором праймеров № 30 в амплификации ПЦР с геномной ДНК мутанта 14018 (δΕΟ ГО N0: 36), поскольку обратный праймер имеет полное совпадение последовательности с матрицей (фиг. 19В). Набор праймеров №31, который состоит из четырех указанных выше праймеров, перечисленных для наборов праймеров №29 и 30, два из которых служат для амплификации фрагмента, содержащего мутацию С1462^Л в гене ММТ мутанта 14018 (т.е. δΕΟ ГО N0: 36), а два для мутации С3076^А в гене ММТ мутанта 8063 (т.е. 5>ЕС ГО N0: 34; ср. пример 9), сконструирован для мониторинга присутствия мутантного гена ММТ, который содержит обе указанные выше нуклеотидные мутации.

Каждую из указанных выше амплификации ПЦР экспериментально осуществляют в реакционной смеси полимеразы РейТац (§1§та, кат. № Ό6063) объемом 50 мкл, состоящей из 200 нг геномной ДНК и 50-100 пмоль каждого праймера из специфичного набора праймеров (табл. 7). После амплификации в стандартном термоциклере для ПЦР (1 мин при 95°С; затем 30 циклов: 94°С, 60 с - 64°С, 30 с -72°С, 30 с; заключительные 10 мин при 72°С), аликвоту образца объемом 25 мкл наносят на стандартный электрофорез в 2% агарозном геле. Как проиллюстрировано на фиг. 19С, ПЦР с геномной ДНК сорта 8еЪакйап в присутствии набора праймеров № 29 и набора праймеров № 30 приводит к образованию фрагмента ДНК размером 121 п.н. и не приводит к образованию фрагмента соответственно. И ПЦР с геномной ДНК мутанта 14018 в присутствии набора праймеров № 29 и набора праймеров № 30 не дает фрагмента и приводит к образованию фрагмента ДНК размером 123 п.н. соответственно. В тех случаях, когда последний результат является исходом ПЦР с геномной ДНК зерна ячменя неизвестной идентичности, имеется высокая вероятность, что ДНК-матрица идентична таковой мутанта 14018. Дальнейшие усилия для поддержки данного вывода включают в себя анализы по тестированию уровня §ММ (ср. пример 2), и активности ММТ (ср. пример 4).

Отдельный способ подтверждения того, что мутант 14018 не содержит ММТ, включает в себя анализ вестерн-блоттинга, с использованием технической процедуры и антитела против ММТ, как подробно описано в примере 3. В практических терминах зерна сорта 8еЪакйап и мутанта 14018 проращивали при 20°С в течение 4 суток, с последующей отдельной гомогенизацией одного зерна дикого типа и одного мутантного зерна, в 100 мкл Н₂0 каждое. После центрифугирования при 13000 об./мин в течение 10 мин, 15 мкл каждой надосадочной жидкости смешивали с 5 мкл загрузочного буфера с δΌδ, кипятили в течение 5 мин, нагружали на 12% δΌδ-полиакриламидный гель, разделяли путем электрофореза, подвергали электроблоттингу и, наконец, тестировали поликлональным антителом против ММТ (фиг. 15В). Отдельную полосу белка ММТ массой 120 кДа легко распознавали в экстракте сорта 8еЪакйап, однако, никакого иммунореактивного белка мутанта 14018 не мигрировало совместно с маркерным белком массой 120 кДа. Соответственно, указанный выше способ анализа путем вестерн-блоттинга можно использовать для проверки того, продуцируют ли прорастающие зерна ячменя ММТ, или они лишены данной способности. Дальнейшие молекулярные и биохимические тесты могут использоваться для подтверждения того, происходит ли данное зерно из мутанта 14018.

- 38 029777

Таблица 9. Праймеры для выявления 8ΝΡ мутанта 14018

№ набора праймеров	Концы продукт ПЦР	Конечный продукт (ЗЕО Ю N0: )	Прямой праймер (5'->3' данная последовательность ДНК)****	Обратный праймер (5’->3' последовательность ДНК)*****
29	13611481*	35	СССАТССАСАТТССАТСТТСАС (ЗЕО Ю N0: 97)	СТАСССААСААСАССТСССААС (ЗЕО Ю N0: 101)
30	13611483**	36	СССАТССАСАТТССАТСТТСАС (ЗЕО Ю N0:98)	СТАСССААСААСАССТСССААТ (ЗЕО Ю N0: 102)
31	13611483** 28313101***	36 34	СССАТССАСАТТССАТСТТСАС (ЗЕО Ю N0:99) ССАТТССАССТТССССТТС (ЗЕО Ю N0: 100)	СТАСССААСААСАССТСССААТ (ЗЕО Ю N0:103) САТСТАСТСАСТСАААСААТТС СТАТ (ЗЕО Ю N0: 104)

*) Нумерация пар оснований как в геномной последовательности ΜΜΤ дикого типа (8ЕР ГО N0: 16).

**) Нумерация пар оснований как в геномной последовательности ΜΜΤ мутанта 14018 (8ЕР ГО N0: 19).

***) Нумерация пар оснований как в геномной последовательности ΜΜΤ мутанта 8063 (8ЕР ГО N0: 8).

****) Последовательность с 5'-конца фрагмента, приведенного в столбце, обозначенном "Концы продукта ПЦР".

*****) Комплементарная последовательность с 3'-конца фрагмента, приведенного в столбце, обозначенном "Концы продукта ПЦР".

Цитируемые ссылки

Патентные документы.

Патент США № 4683195, выданный Μυ11ΐ5, К.В. е! а1.

Патент США № 4800159, выданный Μυ11ΐ5, К.В. е! а1.

Патент США № 5242694, выданный Кеи!кег, Н.

Патент США № 6660915, выданный Эоита, А.С. е! а1.

Патент США № 7420105, выданный Вгеййат, К. е! а1.

Публикация заявки на выдачу патента США № 2006/0057684, поданная В15§аагй-Ргап!7еп, Н. е! а1. Патент Австралии № 38578/93

Патентная заявка РСТ ΑΌ 2005/087934, поданная Вгеййат, К. е! а1.

Другие публикации

Атег1сап АззосчаШоп о£ Сегеа1 СЬепАзЕз, "Αρρτονθά теЕЬобз о£ ЕЬе Атег1сап АззосАаЫоп о£ Сегеа1 СЬепАзЕз." Ι3ΒΝ 0-91325086-4 (1995).

Атег1сап ЗосАеЕу о£ Вгевд1пд СЬепАзЕз, "МеЕЬосА о£ апа1уз1з о£ ЕЬе Атег1сап ЗосЛеЕу о£ Вгевд1пд СЬепАзЕз." Ι3ΒΝ 1—881696—01—

4 (1992) .

Воигд1з, В. е£ а1. , "3-МеЕЬу1теЕЫоп1пе р1ауз а тадог го1е ίη рЫоет зи1£иг ЕгапзрогЕ апб 13 зупЕЬезтгеЬ Ьу а ηονβΐ Еуре о£ те£Ьу1Егапз£егазе." Р1апЕ Се11 11:1485-1497, 1999.

Вгтддз, ϋ.Ε. е£ а1. , "МаШпд апй Ьгевдтпд зстепсе. \/о1ите I Ма1Е апб звдееЕ вдогЕ." СЬартап апб На11, Νθμ Уогк, ЮЗА. Ι3ΒΝ 0412165805, 1981.

ОиЕоиг, 6Г. Р. , "О1гесЕ аззау о£ 3-теЕЬу1теЕЫогАпе из1пд ЫдЬ-рег£огтапсе Ιίςιπά сЬготаЕодгарЬу апб £1иогезсепсе ЕесЬгАдиез." ОТ. Ат. Зое. Вгевд. СЬет. 44:1-6, 1986.

0ига1, 3. еЕ а1. , "Ζίηο £1пдег пис1еазез: сиз£от-Ьез1дпе0 то1еси1аг зс1ззогз Еог депоте епд1пеег1пд о£ р1ап£ апб таттаПап се11з." Е[ис1е1с АсАз Вез. 33:5978-5990, 2005.

Еигореап Вгевдегу ΟοηνεπΕίοη, "Апа1уЕ1са - ЕВС." Ι3ΒΝ 3418-00759-7 (1998) .

Напзеп, М. еЕ а1. , "АпЕЕзепзе-тесАаЕеб зирргезз1оп о£ СЬогЬе1п ЫозупЕЬез1з ίη ЕЬе Ьаг1еу дга1п гези1Ез ίη согге1а£ес1 сЬапдез ίη ЕЬе ЕгапзсзАрЕоте, рго£е1п ргоЕНе, апб апАпо асА сотроз1Е1оп. " ОТ. Ехр. ВоЕ. 58:3987-3995, 2007.

НоидЬ, ОГ.З. еЕ а1. "Ма1Е1пд апб Ьгевд1пд зс1епсе. Уо1ите II Норреб вдогЕ апб Ьеег." СЬартап апб На11, Иевд Уогк, ЮЗА. Ι3ΒΝ 0412165902, 1982.

НузегЕ, ϋ.Ι/ί. еЕ а1. , "ТЬе ог1д1п апб соп£го1 о£ сАте£Ьу1 зи1£Ше апб ί£3 ргесигзог ίη та1Е." ТесЬ. 0. МВАА 17:34-43,

1980.

ИсГа, 3. апб ТегасГа, К., "МосА£1саЕ1оп о£ епбодепоиз па£ига1 депез Ьу депе ЕагдеЫпд ίη Асе апЬ оЕЬег ЫдЬег р1ап£з." Р1апЕ Μοί. ΒίοΙ. 59:205-219, 2005.

- 39 029777

1тазЬики, Н., "Тио пей кесЬпо1од1ез £ог е££1с1епк апЬ £1ех1Ые иогк ЬоШпд: 1. Везк Ьекоге иогк ЬоШпд ко οοηνθΓί ЗММ ко ϋΜ3; 2. Нор ЬоШпд зерагаке1у £гот иогк." ЗгЬ Иог1Ь Вгеи1пд Сопдгезз, РгезепкаЫоп 0-52, Ргодгат Воок, р. 91 апЬ аккасЬеЬ ргезепкаЫоп зНЬез, 2008.

1пзк1кике о£ Вгеи1пд, "1пзк1кике о£ Вгеи1пд. МекЬоЬз о£ апа1уз1з." Ι3ΒΝ 0-900489-10-3, 1997.

К1е1пЬо£з, А. ек а1. , "1пЬисЫоп апЬ зе1есЫоп о£ зрес1£1с депе тикак1опз ίη НогЬеит апЬ Р1зит." Микак. Вез. 51:29-35, 1978.

Ко, 3. ек а1., "3-МекЬу1текЫоп1пе 13 ЬокЬ а зиЬзкгаке апЬ ап 1пасЫцаког о£ 1-ат1посус1оргорапе-1-сагЬоху1аке зупкЬазе." АгсЬ. В1осЬет. В1орЬуз. 421:85-90, 2004.

Косз1с, М.6, ек а1., "1пзегЫопа1 1паскЫаЫоп о£ кЬе теЬЫоп1пе 3-текЬу1кгапз£егазе депе еЫгЫпакез кЬе 3текЬу1текЫоп1пе сус1е апЬ 1псгеазез кЬе текЬу1ак1оп гак1о." Р1апк РЬузШ. 131:1808-1815,2003.

Китаг, 3. ек а1. , "бепе кагдек1пд ίη р1апкз: к1пдегз оп кЬе πιονε. " ТгепЬз Р1апк 3οί. 11:159-161,2006.

Ьа1, 3. ек а1., "А зрИсе з1ке тикапк ок та1ге аскЫакез з1кез, еИсМкз 1пкгоп 1пс1из1оп апЬ ехоп регт1кз ЬгапсЬ ροίηί

РЬузШ. 121:411-418, 1999.

Мадиак, Ь.Е. апЬ Сагт1сЬае1, 6.6., тВЬА кипск1оп." 6е11 104:173-17 6, 2001.

МсЕ1гоу, ϋ. апЬ ЬасоЬзеп, ОТ., "ИЬак' з Ьгеи1пд ίη Ьаг1еу ЫокесЬпо1оду? " В1о/ТесЬпо1оду 13:245-249, 1995.

МеЫдаагЬ, М.6., "РгесМсЫоп ок ίΐηνοητ Ыккегепсез Ьекиееп Ьеегз кгот кЬе1г сЬет1са1 сотроз1к1оп. " ОТ. Адг1с. Εοοά СЬет. 30:1009-1017, 1982.

МепЬеН, ОГ.Т. апЬ О1екг, Н.6., "ИЬеп кЬе теззаде доез аигу: 01зеазе-ргоЬис1пд тикак1опз ккак 1п£1иепсе тВЬА сопкепк апЬ регкогтапсе." 6е11 107:411-414, 2002.

МиЬЬ, З.Н. апЬ Оакко, А.Н., "ТЬе 3-текЬу1текЫоп1пе сус1е ίη Ьетпа раиЫсозкака. " Р1апк РЬуз1о1. 93:623-630, 1990.

Νενο, Е. "Ог1д1п, ενοΙοιΕίοη, рори1ак1оп депек1сз апЬ гезоигсез ког ЬгееЫпд ок мИс1 Ьаг1еу, НогЬеит зропкапеит, ίη кЬе ЕегкЫе Сгезсепк." 1п ЗЬеигу, Р.В. (еЬ.) : "Ваг1еу:

6епек1сз, В1осЬет1зкгу, Мо1еси1аг В1о1оду апЬ. В1окесЬпо1оду," рр. 19-43. 6АВ 1пкегпаЫопа1, МаШпдкогЬ, ЮК. Ι3ΒΝ 0-85198725-7, 1992. 1992.

Рлтепка, М.ОГ. ек а1., "Оекегт1пак1оп ок текЫопппе: Ь-текЫоп1пе 3-текЬу1кгапз£егазе

зе1ескЫе аЬзогрк1оп ок [текЬу1-³Н] 3-аЬепозу1текЫоп1пе опко аскЫакеЬ сЬагсоа1." Апа1. ВаосЬет. 225:167-169,

1995.РЬепотепех, "НРЬб аррИсак1оп. " Ю Νο.: 15992, 2006.

ВапосЬа, Р. ек а1., "ТЬе 3-текЬу1текЫоп1пе сус1е ίη апд1озрегтз: иЫди1ку, апЫди1ку апЬ аскЫ1ку." Р1апк ОТ.

25:575-584, 2001.

Вазтиззеп, З.К. апЬ Накгаск, Е., " ЫепЫЫсаЫоп ок кио

1ои-рЬукаке Ьаг1еу (НогЬеит Е.) дга1п тикапкз Ьу ТЬС

апс! депеЫс апа1уз1з." НегеЫказ 129:107-112, 1998.

ВоЬЫпз М.Р. ек а1., "бепе тап±ри1аЫоп ок сопЬепзеЬ капптпз ίη ЫдЬег р1апкз." Р1апк РЬузпо1. 116:1133-1144, 1998.

ЗатЬгоок, ОТ. апЬ Киззе11, ϋ.1/1., "Мо1еси1аг с1оп1пд. А 1аЬогакогу тапиа1, ЗгЬ ЕсЬ", Со1Ь Зргтпд НагЬог ЬаЬогакогу Ргезз, 6ο1ά ЗрЫпд НагЬог, Иен Уогк, и.З.А. Ι3ΒΝ 0-87969-577-3, 2001 .

сгурПс зрИсе ехс1из1оп, апЬ

θΙυοίάβΓίοη." Р1апк

"ОиаИку сопкго! о£

3-аЬепозу1-ЬаскЫпку Ьу

ЗсЬеигеп, Н. апЬ Зоттег, К., 'Ыарогезсепсе л/егэиз ЬоШпд - Ехри1з1оп ок аготак1с сотроипЬз Ьиг1пд кЬе иЬо1е иогк ргоЬисЫоп." ЗгЬ Иог1Ь Вгеиппд Сопдгезз, РгезепкаЫоп 0-55, Ргодгат Воок, р. 92 апЬ аккасЬеЬ ргезепкак1оп зПбез, 2008.

31п1Ьа1Ы, В.М. апЬ МекЫег 1.6Г., "1пкгоп зрЫЫпд апЬ 1пкгоп-теЫакеЬ епЬапсеЬ ехргезз1оп ίη топосокз." Ргод. Ыис1е1с Αοίά Вез. Μοί. ΒίοΙ. 42:229-257, 1992.

ЗкаЫ, У. ек а1., "Апкпзепзе Ьоипгеди1ак1оп ок кЬе Ьаг1еу Ит1к Ьехкг1пазе тЫЫког тоЬи1акез зкагсЬ дгапи1е з1гез Ызкг1Ьик1оп, зкагсЬ сотрозкк1оп апЬ. ату1ореск1п зкгискиге". Р1апк ά. 39:599-611, 2004.

Тадтоипк, А. ек а1., "Ап еззепк1а1 го1е ок 3-аЬепозу1-ЬтекЫоп1пе: Ь-текЫоп1пе 3-текЬу1кгапзкегазе ίη зе1еп1ит νοίηίίΐίζηίίοη Ьу р1апкз. МекЬу1аЫоп ок зе1епотекЫоп1пе ко

- 40 029777

зе1еп1ит-те£Цу1-Ь-зе1еп1ит-те£Шоп1пе, ЕЬе ргесигзог о£ чо1а£Ие зе1еп1ит." Р1ап£ РНуз . 130:847-856, 2002.

ТНапЫсЫег, М. е£ а1. , "3-Ме£Цу1те£Ыоп1пе теЕаЬоНзт ίη ЕзсЬег1сЫа соП." Д. Вас£ег1о1. 181:662-665, 1998.

Тг£1га, Т. апЦ ИЫке, С, "ТовдагДз ЕагдеЕес! ти£адепез1з апс! депе гер1асетеп£ ίη р1ап£з." ТгепДз В1о£есНпо1. 23:567-569,

2005 .

νοη ВоЕНтег, К. "ТНе νόΐά зрес1ез о£ НогДеит: Ке1а£1опзЫрз апс! ро£епН1а1 изе £ог 1тргочетепЕ о£ си1Е1чаЕес1 Ьаг1еу." 1п ЗНевдгу, Р. К. (ес!.) : "Ваг1еу: СепеНтсз,

В1осНет1зНгу, Мо1еси1аг В1о1оду апс! В1оНесНпо1оду," рр. 3-18.

САВ 1пНегпаН1опа1, Иа1Ппд£огс1, ик. Ι3ΒΝ 0-85198-725-7, 1992.

Ии, Д. еН а1., "Цопзепзе-теШаНеД ιηΚΝΑ Десау (ΝΜΌ) зИепсез ННе ассити1аН1оп о£ аЬеггапН Нгурзтп ргоНе1пазе 1пЫЫ£ог ιηΒΝΑ ίη МсоИапа аННепиаНа." Р1апН Д. 51:693-706, 2007 .

Таблица 10. Список последовательностей

ЗЕО Ю	Тип	Описание
N0:1	Нуклеиновая кислота	кДНК ячменя сорта Нагипа N13 о, продлевающаяся от старт- до стоп-кодона гена ММТ. кДНК, открытая рамка считывания ММТ. Последовательность получена из бепВапк, инвентарный номер АВ028870
N0:2	Белок	Последовательность ММТ ячменя сорта Нагипа N130, транслированная из ЗЕО Ю N0:1.
N0:3	Нуклеиновая кислота	гДНК ячменя сорта РгезН1де, геномная последовательность, продлевающаяся от старт- до стоп-кодона гена ММТ.
N0:4	Нуклеиновая кислота	кДНК ячменя сорта РгезН1де, продлевающаяся от старт- до стоп-кодона гена ММТ, последовательность кДНК открытой рамки считывания ММТ.
N0:5	Нуклеиновая кислота	Повторно клонированная кДНК ячменя сорта РгезН1де; повторно клонированная кДНК открытой рамки считывания ММТ, продлевающаяся от старт- до стоп-кодона гена ММТ, но содержащая три мутации (ср. пример 10) . Использована для гетерологичной экспрессии ММТ ячменя в Е. соП .
N0:6	Белок	Последовательность ММТ ячменя сорта Ргез-Ыде, транслированная из ЗЕО Ю N0:4.
N0:7	Белок	Последовательность ММТ ячменя, сорта РгезН1де, транслированная из ЗЕО Ю N0:5, использована для синтеза ММТ в Е. соП.
N0:8	Нуклеиновая кислота	гДНК мутанта ячменя 8063, геномная последовательность ММТ, продлевающаяся от старт- до стоп-кодона гена ММТ.
N0:9	Нуклеиновая кислота	Последовательность амплифицированного ОТПЦР фрагмента ячменя сорта РгезН1де, соответствующая продукту 1 на фиг.12В,С.
N0:10	Нуклеиновая кислота	Последовательность амплифицированного ОТПЦР фрагмента мутанта ячменя 8063, соответствующая продукту 2 на фиг.12В,С.
N0:11	Белок	Целая транслированная последовательность, происходящая из РНК мутанта 8063 с нарушенным сплайсингом, причем указанная РНК функционирует как матрица в амплификации ОТ-ПЦР, которая дает продукт 2 на фиг.12В,С.
N0:12	Нуклеиновая кислота	Последовательность амплифицированного ОТПЦР фрагмента мутанта ячменя 8063, соответствующая продукту 3 на фиг.12В,С.

- 41 029777

N0:13	Белок	Целая транслированная последовательность, происходящая из РНК мутанта 8063 с нарушенным сплайсингом, причем указанная РНК функционирует как матрица в амплификации ОТ-ПЦР, которая дает продукт 3 на фиг.12В,С.
N0:14	Нуклеиновая кислота	Последовательность амплифицированного ОТПЦР фрагмента мутанта ячменя 8063, соответствующая продукту 4 на фиг.12В,С.
N0:15	Белок	Целая транслированная последовательность, происходящая из РНК мутанта 8063 с нарушенным сплайсингом, причем указанная РНК функционирует как матрица в амплификации ОТ-ПЦР, которая дает продукт 4 на фиг.12В,С.
N0:16	Нуклеиновая кислота	гДНК ячменя сорта ЗеЬазВ1ап, геномная последовательность ММТ, продлевающаяся от старт- до стоп-кодона гена ММТ.
N0:17	Нуклеиновая кислота	кДНК ячменя сорта ЗеЬазВ1ап, кДНК последовательность открытой рамки считывания ММТ, продлевающаяся от стартдо стоп-кодона гена ММТ.
N0:18	Белок	Последовательность ММТ ячменя сорта ЗеЬазЫап, транслированная из ЗЕф Ю N0:17.
N0:19	Нуклеиновая кислота	гДНК ячменя МиБапБ 14018, геномная последовательность ММТ, продлевающаяся от старт- до стоп-кодона гена ММТ.
N0:20	Нуклеиновая кислота	Последовательность амплифицированного ОТПЦР фрагмента ячменя сорта ЗеЬазВ1ап, соответствующая продукту 5 на фиг.16В,С.
N0:21	Нуклеиновая кислота	Последовательность амплифицированного ОТПЦР фрагмента мутанта ячменя 14018, соответствующая продукту 6 на фиг.16В,С.
N0:22	Белок	Целая транслированная последовательность, происходящая из РНК мутанта 14018 с нарушенным сплайсингом, причем указанная РНК функционирует как матрица в амплификации ОТ-ПЦР, которая дает продукт 6 на фиг.16В,С.
N0:23	Нуклеиновая кислота	Последовательность амплифицированного ОТПЦР фрагмента мутанта ячменя 14018, соответствующая продукту 7 на фиг.16В,С.
N0:24	Белок	Целая транслированная последовательность, происходящая из РНК мутанта 14018 с нарушенным сплайсингом, причем указанная РНК функционирует как матрица в амплификации ОТ-ПЦР, которая дает продукт 7 на фиг.16В,С.
N0:25	Нуклеиновая кислота	Последовательность амплифицированного ОТПЦР фрагмента мутанта ячменя 14018, соответствующая продукту 8 на фиг.16В,С.
N0:26	Белок	Целая транслированная последовательность, происходящая из РНК мутанта 14018 с нарушенным сплайсингом, причем указанная РНК функционирует как матрица в амплификации ОТ-ПЦР, которая дает продукт 8 на фиг.16В,С.
N0:27	Нуклеиновая кислота	Фрагмент Зас11-ВатН1 продукта 2 (фиг.12В,С) с участком ВатН1, введенным непосредственно ниже стоп-кодона трансляции, для конструирования экспрессирующей плазмиды рЕТ19Ь-Ыпе8063Ρτοά2 (ср. фиг.13В).

- 42 029777

N0:28	Нуклеиновая кислота	Фрагмент 5ас11-ВатН1 продукта 3 (фиг.12В,С) с участком ВатН1, введенным непосредственно ниже стоп-кодона трансляции, для конструирования экспрессирующей плазмиды рЕТ19Ь-Ыпе8063РгобЗ (ср. фиг.13С) (идентичен 5Еф Ю N0:27).
N0:29	Нуклеиновая кислота	Фрагмент 5ас11-ВатН1 продукта 4 (фиг.12В, С) с участком ВатН1, введенным непосредственно ниже стоп-кодона трансляции, для конструирования экспрессирующей плазмиды рЕТ19Ь-Ыпе8063Ргос14 (ср. фиг.130).
N0:30	Нуклеиновая кислота	Фрагмент 5ас11-ВатН1 продукта 6 (фиг.16В, С) с участком ВатН1, введенным непосредственно ниже стоп-кодона трансляции, для конструирования экспрессирующей плазмиды рЕТ19ЬЫпе14018-Ргос16 (ср. фиг.17В).
N0:31	Нуклеиновая кислота	Фрагмент 5ас11-ВатН1 продукта 7 (фиг.16В, С) с участком ВатН1, введенным непосредственно ниже стоп-кодона трансляции, для конструирования экспрессирующей плазмиды рЕТ19ЬЫпе14018-Ргос17 (ср. фиг.17С).
N0:32	Нуклеиновая кислота	Фрагмент 5ас11-ВатН1 продукта 8 (фиг.16В,С) с участком ВатН1, введенным непосредственно ниже стоп-кодона трансляции, для конструирования экспрессирующей плазмиды рЕТ19ЬЫпе14018-Ргос18 (ср. фиг.170).
N0:33 N0:34 N0:35 N0:36 N0:37 N0:38 N0:39 N0:40 N0:41 N0:42	Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота	Фрагмент ПЦР, образованный из геномной ДНК сорта РгезЕФде, амплифицированный с использованием набора праймеров № 20 (ср. Таблица 7). Фрагмент ПЦР, образованный из геномной ДНК мутанта 8063, амплифицированный с использованием набора праймеров № 21 (ср. Таблица 7). Фрагмент ПЦР, образованный из геномной ДНК сорта 5еЬазб1ап, амплифицированный с использованием набора праймеров № 29 (ср. Таблица 9). Фрагмент ПЦР, образованный из геномной ДНК мутанта 14018, амплифицированный с использованием набора праймеров № 30 (ср. Таблица 9). Прямой праймер для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя. Прямой праймер для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя. Прямой праймер для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя. Прямой праймер для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя. Прямой праймер для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя. Прямой праймер для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя.
N0:43	Нуклеиновая кислота	Обратный праймер для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя.

- 43 029777

N0:44	Нуклеиновая кислота	Обратный праймер для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя.
N0:45	Нуклеиновая кислота	Обратный праймер для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя.
N0:46	Нуклеиновая кислота	Обратный праймер для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя.
N0:47	Нуклеиновая кислота	Обратный праймер для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя.
N0:48	Нуклеиновая кислота	Обратный праймер для амплификации геномной последовательности, кодирующей ММТ ячменя.
N0:49	Нуклеиновая кислота	Прямой праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя.
N0:50	Нуклеиновая кислота	Прямой праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя.
N0:51	Нуклеиновая кислота	Прямой праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя.
N0:52	Нуклеиновая кислота	Прямой праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя.
N0:53	Нуклеиновая кислота	Прямой праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя.
N0:54 N0:55 N0:56 N0:57 N0:58 N0:59 N0:60 N0:61 N0:62 N0:63 N0:64	Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота Нуклеиновая кислота	Прямой праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя. Прямой праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя. Прямой праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя, Обратный праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя. Обратный праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя. Обратный праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя. Обратный праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя. Обратный праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя. Обратный праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя. Обратный праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя. Обратный праймер для амплификации последовательности кДНК, кодирующей ММТ ячменя.
N0:65	Нуклеиновая кислота	Прямой праймер для выявления альтернативного сплайсинга гена, кодирующего ММТ ячменя.

- 44 029777

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для выявления альтернативного сплайсинга гена, кодирующего ММТ ячменя.

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для выявления альтернативного сплайсинга гена, кодирующего ММТ ячменя.

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для выявления альтернативного сплайсинга гена, кодирующего ММТ ячменя.

Нгз-метка

Участок расщепления энтерокиназой

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для амплификации кодирующей белок последовательности гена ММТ ячменя.

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для амплификации кодирующей белок последовательности гена ММТ ячменя.

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для

фрагментов ДНК мутанта 8063

амплификации

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для амплификации фрагментов ДНК мутанта 8063

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для

фрагментов ДНК мутанта 8063

амплификации

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для амплификации фрагментов ДНК мутанта 8063

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для выявления 3ΝΡ мутанта 8063

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для выявления 3ΝΡ мутанта 8063

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для выявления 3ΝΡ мутанта 8063

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для выявления 3ΝΡ мутанта 8063

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для выявления 3ΝΡ мутанта 8063

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для выявления 3ΝΡ мутанта 8063

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для выявления 3ΝΡ мутанта 8063

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для выявления 3ΝΡ мутанта 8063

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для

фрагментов ДНК мутанта 14018

амплификации

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для фрагментов ДНК мутанта 14018

амплификации

Нуклеиновая

Прямой праймер для

фрагментов ДНК мутанта 140

амплификации

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для фрагментов ДНК мутанта 14018

амплификации

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для

фрагментов ДНК мутанта 14018

амплификации

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для фрагментов ДНК мутанта 14018

амплификации

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для

фрагментов ДНК мутанта 14018

амплификации

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для фрагментов ДНК мутанта 14018

амплификации

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для

фрагментов ДНК мутанта 14018

амплификации

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для фрагментов ДНК мутанта 14018

амплификации

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для фрагментов ДНК мутанта 14018

амплификации

Нуклеиновая

кислота

Обратный праймер для амплификации фрагментов ДНК мутанта 14018

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для выявления 3ΝΡ мутанта 14018

Нуклеиновая

кислота

Прямой праймер для выявления 3ΝΡ мутанта 14018

- 45 029777

N0:99	Нуклеиновая кислота	Прямой праймер для 14018	выявления 5ΝΡ мутанта
N0:100	Нуклеиновая кислота	Прямой праймер для 14018	выявления 5ΝΡ мутанта
N0:101	Нуклеиновая кислота	Обратный праймер мутанта 14018	для выявления 5ΝΡ
N0:102	Нуклеиновая кислота	Обратный праймер мутанта 14018	для выявления 5ΝΡ
N0:103	Нуклеиновая кислота	Обратный праймер мутанта 14018	для выявления 5ΝΡ
N0:104	Нуклеиновая кислота	Обратный праймер мутанта 14018	для выявления 5ΝΡ

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Саг1зЬегд Вге^епез А/8

Нетпекеп 8ирр1у Скатп Β.ν.

<120> Ячмень и напитки на основе солода с низкой концентрацией ΌΜ8

<130> Р1600РС00

<160> 104

<170> Райепй1п νе^з^οη 3.4

<210> 1

<211> 3267

<212> ДНК

<213> Ячмень, сорт Нагипа Νί^ο

<400> 1 айддсйдсдд	сддсддддда	сдйддаддсд	ййссйддсдд	сдйдссаддс	дйсдддсдас	60
дсддсдйасд	дсдссдссаа	ддссдйдсйд	дадсддсйсд	аддсдссддс	сасдсдсдсс	120
даддссаддс	ддсйссйсдд	сдссдйдсда	сддсдсййсд	ссдссддсдд	сссддссдсд	180
дддсйсдадй	дсййссдсас	сййссасййс	сдсайссасд	асдйсдйссй	сдасссссас	240
сйссааддай	йссадсааад	ааадаадсйа	асаайдайдд	адайасссад	саййййсайй	300
ссадаадасй	ддйсаййсас	йййсйасдад	ддйсйсаасс	ддсайссада	ййссайсййс	360
адддайаада	садйадсада	дсйдддайдй	ддсаайддйй	ддайайссай	йдсасййдса	420
даааадйддй	дсссййсдаа	ддйййайддй	сйддайайаа	асссаадасс	йайсаадайй	480
дсайддайаа	ассйййасйй	даайдсасйа	дасдасдайд	дйсйсссаай	сйайдайдсд	540
даддддаааа	саййдсййда	сададйсдаа	ййсйайдаай	сйдайсййсй	ййсййасйдй	600
ададайааса	адайадаасй	йдайсдсайй	дййддайдса	йассасадай	йсййаасссс	660
аайссададд	саайдйсааа	даййдйаасй	дааааййсаа	дйдаддадйй	сййдйасйсс	720
ййдадсаасй	асйдйдсйсй	ссадддйййй	дййдаддасс	аайййддссй	сдддййдайй	780
дсйсдддсйд	ййдаадаадд	дайайсйдйд	айааадссйа	дйддйсййай	ддйаййсаас	840
айдддаддсс	ддссаддаса	аддйдйсйдй	дадсдссйай	ййсййсдссд	йддайййсдс	900

- 46 029777

абсаабаадс	бсбддсааас	аааааббабд	саддсбдссд	асасадасаб	сбссдсббба	960
дббдаааббд	адааааабад	ссддсабсдс	ббсдадббсб	ббабддабсб	бдббддддаб	1020
садссбдбдб	дбдсдсдсас	адсабдддса	басабдаааб	сбддбддссд	сабббсасаб	1080
дсбббдбсбд	бдбабадсбд	бсаасббсдс	садсссаасс	аддбдаадаа	аабабббдад	1140
ббссббааад	асддаббсса	бдаадбсадс	адсбсссбсд	абббдбссбб	бдабдабдаб	1200
бсбдббдсбд	абдааааааб	бссбббссба	дсабассбад	сбадбббсбб	дсаададааб	1260
аадбсбаабс	сббдбдадсс	бссадсбдда	бдбббааабб	бссддаабсб	бдббдсбдда	1320
бббабдаада	дббассасса	сабсссабба	асбссбдаба	абдббдббдб	дббсссабсс	1380
сдбдсбдббд	саабсдаааа	бдсбсббсдд	ббдббсбсас	сбддасббдс	ааббдббдас	1440
даасассбаа	ссадасасбб	дсссаадсаа	бддббаасаб	сбббадсааб	бдаддааадб	1500
аассабдсба	аадабасадб	аасбдбаабс	даадсассас	дссаабсада	бббдсбдабб	1560
дадббдабса	ддааасбдаа	дссссаддбб	дббдббасбд	дсабддсбса	дбббдаддсб	1620
абсассадбд	сбдсбббсдб	даасббабба	адбдбаасда	аадабдббдд	ббсссдабба	1680
ббасбадаба	бббсадааса	бсбддааббд	бсбадбсбдс	саадсбсааа	бддбдбаббд	1740
ааабабсббд	сбдддаадас	ссбдссббса	сабдсддсба	баббдбдбдд	сббадббаад	1800
аабсаддббб	аббсбдабсб	ддаадббдсб	бббдсбабсб	сбдаадабсс	аасбдбббаб	1860
ааддсаббдб	сасааасбаб	бдадсбаббд	дааддасаба	сббсбдбдаб	садссадсас	1920
баббабддбб	дбсббббсса	бдадсбдсбд	дсабббсааа	ббддбдассд	дсабссасаа	1980
саадададад	аассбдсада	адбдабабсб	ааддадабда	бадддббббс	аадббсадсб	2040
абдбссассс	бадааддадс	бдадбббббс	дббссбддбб	ссабддаабс	сддбдбсаба	2100
сабабддабс	бддассдсад	сббсббдсса	дбассббсбд	садбааасдс	сбссаббббс	2160
дааадббббд	ббсдбсадаа	сабсасбдаб	бсбдааасбд	абдбссдббс	садсаббсад	2220
садсбддбда	аадабадсба	бддбббсбса	дсаддсддбд	сббсбдаааб	бабабасддд	2280
аасассбдбс	бсдсдсбсбб	саасаадсбб	дббсбббдсб	дсабдсаада	асадддсасс	2340
ббдсббббсс	ссббдддаас	саасдддсаб	бабдбсаасд	садсааадбб	бдбдаабдса	2400
ассассббда	сбаббссаас	дааддсадаб	бсаддсббса	адабсдаасс	аадбдсбсба	2460
дссдасасас	бададааддб	дбсбсадссд	бдддбсбаба	бббсбддссс	сасаабсаас	2520
ссбасбддсб	бссбдбасад	бдасдасдаб	абадсададс	бдсбббсбдб	сбдбдсдаса	2580
басддадсса	дддбддбдаб	адабассбсс	бссбсбддбс	бддадббсса	адссассддс	2640
бдсадссадб	ддаабббдда	аадабдбсбб	бсбаабдбса	адбсббсааа	дсссбсдббс	2700
бссдббдбсс	бдсбсддада	дсбдбссббб	дадсбдасса	сддсбдддсб	бдабббсддд	2760

- 47 029777

ЕЕЕсЕдаЕЕа	ЕдадсдасЕс	дЕссЕЕддЕЕ	дасасаЕЕЕЕ	асадЕЕЕссс	аадсЕЕдадЕ	2820
сддссасаса	дсасдЕЕдаа	дЕасасЕЕЕс	аддаадсЕдЕ	ЕдддЕсЕЕаа	даассадаад	2880
даЕсадсаЕЕ	ЕсЕсЕдаЕсЕ	саЕссЕЕдад	садааддада	сдЕЕдаадаа	ЕсдЕдссдас	2940
садЕЕдаЕса	адаЕдсЕЕда	дадсЕдсддс	ЕдддасдсЕд	ЕдддсЕдсса	ЕддсддсаЕс	3000
ЕсдаЕдсЕЕд	саааассдас	сдссЕасаЕЕ	ддсаааЕсдс	ЕсааддЕдда	сддсЕЕЕдад	3060
ддсаадсЕдд	асадссасаа	саЕдадддаа	дсссЕссЕда	ддЕссассдд	дсЕдЕдсаЕЕ	3120
адсадсадсд	ддЕддасадд	ддЕдссддас	ЕасЕдссдсЕ	ЕсадсЕЕЕдс	ЕсЕддададс	3180
ддсдасЕЕсд	ассдддссаЕ	ддадЕдсаЕс	дсссддЕЕса	дддадсЕддЕ	ссЕЕддЕддс	3240
ддЕдсЕаадд	ЕдааЕддЕад	саасЕад				3267

<210> 2

<211> 1088

<212> Белок

<213> Ячмень, сорт Нагипа N130

<400> 2

МеЕ 1

А1а

А1а

А1а

А1а О1у 5

Азр

Уа1

О1и

А1а 10

РЬе

Ьеи

А1а

А1а

Суз 15

О1п

А1а

Бег

О1у

Азр

А1а

А1а

Туг

О1у

А1а

А1а

Ьуз

А1а

Уа1

Ьеи

О1и

Агд

20

25

30

Ьеи

О1и

А1а

Рго

А1а

ТЬг

Агд

А1а

О1и

А1а

Агд

Агд

Ьеи

Ьеи

О1у

А1а

35

40

45

Уа1

Агд

Агд

Агд

РЬе

А1а

А1а

О1у

О1у

Рго

А1а

А1а

О1у

Ьеи

О1и

Суз

50

55

60

РЬе

Агд

ТЬг

РЬе

Н13

РЬе

Агд

11е

Нчз

Азр

Уа1

Уа1

Ьеи

Азр

Рго

Нчз

65

70

75

80

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

С1п

С1п

Агд

Ьуз

Ьуз

Ьеи

ТЬг

МеЕ

МеЕ

О1и

11е

Рго

85

90

95

Бег

11е

РЬе

11е

Рго

О1и

Азр

Тгр

Бег

РЬе

ТЬг

РЬе

Туг

О1и

О1у

Ьеи

100

105

110

Азп

Агд

Н13

Рго

Азр

Бег

11е

РЬе

Агд

Азр

Ьуз

ТЬг

Уа1

А1а

О1и

Ьеи

115

120

125

О1у

Суз

О1у

Азп

С1у

Тгр

11е

Бег

11е

А1а

Ьеи

А1а

О1и

Ьуз

Тгр

Суз

130

135

140

Рго

Бег

Ьуз

Уа1

Туг

О1у

Ьеи

Азр

11е

Азп

Рго

Агд

Рго

11е

Ьуз

11е

- 48 029777

145 150 155 160

А1а

Тгр

11е

Азп Ьеи 165

Туг

Ьеи Азп А1а

Ьеи Азр Азр Азр 170

О1у

Ьеи 175

Рго

11е

Туг

Азр

А1а

О1и

О1у

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азр

Агд

Уа1

О1и

РЬе

Туг

180

185

190

О1и

Зег

Азр

Ьеи

Ьеи

Зег

Туг

Суз

Агд

Азр

Азп

Ьуз

11е

О1и

Ьеи

Азр

195

200

205

Агд

11е

Уа1

О1у

Суз

11е

Рго

О1п

11е

Ьеи

Азп

Рго

Азп

Рго

О1и

А1а

210

215

220

Мер

Зег

Ьуз

11е

Уа1

ТЬг

О1и

Азп

Зег

Зег

О1и

О1и

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

225

230

235

240

Ьеи

Зег

Азп

Туг

Суз

А1а

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

Уа1

О1и

Азр

О1п

РЬе

О1у

245

250

255

Ьеи

О1у

Ьеи

11е

А1а

Агд

А1а

Уа1

О1и

О1и

О1у

11е

Зег

Уа1

11е

Ьуз

260

265

270

Рго

Зег

О1у

Ьеи

Мер

Уа1

РЬе

Азп

Мер

О1у

О1у

Агд

Рго

О1у

О1п

О1у

275

280

285

Уа1

Суз

О1и

Агд

Ьеи

РЬе

Ьеи

Агд

Агд

О1у

РЬе

Агд

11е

Азп

Ьуз

Ьеи

290

295

300

Тгр

О1п

ТЬг

Ьуз

11е

Мер

О1п

А1а

А1а

Азр

ТЬг

Азр

11е

Зег

А1а

Ьеи

305

310

315

320

Уа1

О1и

11е

О1и

Ьуз

Азп

Зег

Агд

ΗΪ8

Агд

РЬе

О1и

РЬе

РЬе

Мер

Азр

325

330

335

Ьеи

Уа1

О1у

Азр

О1п

Рго

Уа1

Суз

А1а

Агд

ТЬг

А1а

Тгр

А1а

Туг

Мер

340

345

350

Ьуз

Зег

О1у

О1у

Агд

11е

Зег

ΗΪ8

А1а

Ьеи

Зег

Уа1

Туг

Зег

Суз

О1п

355

360

365

Ьеи

Агд

О1п

Рго

Азп

О1п

Уа1

Ьуз

Ьуз

11е

РЬе

О1и

РЬе

Ьеи

Ьуз

Азр

370

375

380

О1у

РЬе

Ηΐ3

О1и

Уа1

Зег

Зег

Зег

Ьеи

Азр

Ьеи

Зег

РЬе

Азр

Азр

Азр

385 390 395 400

- 49 029777

Зег

Уа1

А1а

Азр

О1и 405

Ьуз

11е

Рго

РЬе

Ьеи 410

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Зег 415

РЬе

Ьеи

О1п

О1и

Азп

Ьуз

Зег

Азп

Рго

Суз

О1и

Рго

Рго

А1а

О1у

Суз

Ьеи

420

425

430

Азп

РЬе

Агд

Азп

Ьеи

Уа1

А1а

О1у

РЬе

МеЬ

Ьуз

Зег

Туг

Н1з

Н1з

11е

435

440

445

Рго

Ьеи

ТЬг

Рго

Азр

Азп

Уа1

Уа1

Уа1

РЬе

Рго

Зег

Агд

А1а

Уа1

А1а

450

455

460

11е

О1и

Азп

А1а

Ьеи

Агд

Ьеи

РЬе

Зег

Рго

О1у

Ьеи

А1а

11е

Уа1

Азр

465

470

475

480

О1и

Ηΐ3

Ьеи

ТЬг

Агд

Н1з

Ьеи

Рго

Ьуз

О1п

Тгр

Ьеи

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

485

490

495

11е

О1и

О1и

Зег

Азп

Н1з

А1а

Ьуз

Азр

ТЬг

Уа1

ТЬг

Уа1

11е

О1и

А1а

500

505

510

Рго

Агд

О1п

Зег

Азр

Ьеи

Ьеи

11е

О1и

Ьеи

11е

Агд

Ьуз

Ьеи

Ьуз

Рго

515

520

525

О1п

Уа1

Уа1

Уа1

ТЬг

О1у

МеЬ

А1а

О1п

РЬе

О1и

А1а

11е

ТЬг

Зег

А1а

530

535

540

А1а

РЬе

Уа1

Азп

Ьеи

Ьеи

Зег

Уа1

ТЬг

Ьуз

Азр

Уа1

О1у

Зег

Агд

Ьеи

545

550

555

560

Ьеи

Ьеи

Азр

11е

Зег

О1и

Н1з

Ьеи

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Рго

Зег

Зег

565

570

575

Азп

О1у

Уа1

Ьеи

Ьуз

Туг

Ьеи

А1а

О1у

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Рго

Зег

Н1з

А1а

580

585

590

А1а

11е

Ьеи

Суз

О1у

Ьеи

Уа1

Ьуз

Азп

О1п

Уа1

Туг

Зег

Азр

Ьеи

О1и

595

600

605

Уа1

А1а

РЬе

А1а

11е

Зег

О1и

Азр

Рго

ТЬг

Уа1

Туг

Ьуз

А1а

Ьеи

Зег

610

615

620

О1п

ТЬг

11е

О1и

Ьеи

Ьеи

О1и

О1у

Н1з

ТЬг

Зег

Уа1

11е

Зег

О1п

Н1з

625

630

635

640

Туг

Туг

О1у

Суз

Ьеи

РЬе

Нтз

О1и

Ьеи

Ьеи

А1а

РЬе

О1п

11е

О1у

Азр

645

650

655

- 50 029777

Агд

Н1з

Рго

О1п 660

О1п

О1и

Агд

О1и

Рго 665

А1а

О1и

Уа1

11е

Зег 670

Ьуз

О1и

МеЕ

11е

О1у

РЬе

Зег

Зег

Зег

А1а

МеЕ

Зег

ТЬг

Ьеи

О1и

О1у

А1а

О1и

675

680

685

РПе

РЬе

Уа1

Рго

О1у

Зег

МеЕ

О1и

Зег

О1у

Уа1

11е

Н1з

МеЕ

Азр

Ьеи

690

695

700

Азр

Агд

Зег

РЬе

Ьеи

Рго

Уа1

Рго

Зег

А1а

Уа1

Азп

А1а

Зег

11е

РЬе

705

710

715

720

О1и

Зег

РЬе

Уа1

Агд

О1п

Азп

11е

ТЬг

Азр

Зег

О1и

ТЬг

Азр

Уа1

Агд

725

730

735

Зег

Зег

11е

О1п

О1п

Ьеи

Уа1

Ьуз

Азр

Зег

Туг

О1у

РЬе

Зег

А1а

О1у

740

745

750

О1у

А1а

Зег

О1и

11е

11е

Туг

О1у

Азп

ТЬг

Суз

Ьеи

А1а

Ьеи

РЬе

Азп

755

760

765

Ьуз

Ьеи

Уа1

Ьеи

Суз

Суз

МеЕ

О1п

О1и

О1п

О1у

ТЬг

Ьеи

Ьеи

РЬе

Рго

770

775

780

Ьеи

О1у

ТЬг

Азп

О1у

Н1з

Туг

Уа1

Азп

А1а

А1а

Ьуз

РЬе

Уа1

Азп

А1а

785

790

795

800

ТЬг

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е

Рго

ТЬг

Ьуз

А1а

Азр

Зег

О1у

РЬе

Ьуз

11е

О1и

805

810

815

Рго

Зег

А1а

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Ьеи

О1и

Ьуз

Уа1

Зег

О1п

Рго

Тгр

Уа1

820

825

830

Туг

11е

Зег

О1у

Рго

ТЬг

11е

Азп

Рго

ТЬг

О1у

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

Азр

835

840

845

Азр

Азр

11е

А1а

О1и

Ьеи

Ьеи

Зег

Уа1

Суз

А1а

ТЬг

Туг

О1у

А1а

Агд

850

855

860

ναι

Уа1

11е

Азр

ТЬг

Зег

Зег

Зег

О1у

Ьеи

О1и

РЬе

О1п

А1а

ТЬг

О1у

865

870

875

880

Суз

Зег

О1п

Тгр

Азп

Ьеи

О1и

Агд

Суз

Ьеи

Зег

Азп

Уа1

Ьуз

Зег

Зег

885

890

895

Ьуз

Рго

Зег

РЬе

Зег

Уа1

Уа1

Ьеи

Ьеи

О1у

О1и

Ьеи

Зег

РЬе

О1и

Ьеи

900

905

910

- 51 029777

ТЬг	ТЬг	А1а О1у Ьеи Азр 915	РЪе О1у 920	РЪе	Ьеи	11е	Меб	Зег Азр 925	Зег	Зег
Ьеи	Уа1	Азр ТЪг РЪе Туг	Зег РЪе	Рго	Зег	Ьеи	Зег	Агд Рго	Нгз	Зег
	930		935				940
ТЬг	Ьеи	Ьуз Туг ТЪг РЪе	Агд Ьуз	Ьеи	Ьеи	О1у	Ьеи	Ьуз Азп	О1п	Ьуз
945		950				955				960
Азр	О1п	Нгз РЪе Зег Азр	Ьеи 11е	Ьеи	О1и	О1п	Ьуз	О1и ТЪг	Ьеи	Ьуз
		965			970				975
Азп	Агд	А1а Азр О1п Ьеи	11е Ьуз	Меб	Ьеи	О1и	Зег	Суз О1у	Тгр	Азр
		980		985				990
А1а	Уа1	О1у Суз Нгз О1у	О1у 11е	Зег Меб Ьеи А1а Ьуз Рго ТЪг А1а
		995	1000				1005
Туг	11е	О1у Ьуз Зег Ьеи	Ьуз Уа1 Азр О1у РЪе О1и О1у	Ьуз	Ьеи
	1010		1015				1020
Азр	Зег	Нгз Азп Меб Агд	О1и А1а Ьеи Ьеи Агд Зег ТЪг	О1у	Ьеи
	1025		1030				1035
Суз	11е	Зег Зег Зег О1у	Тгр ТЪг О1у Уа1 Рго Азр Туг	Суз	Агд
	1040		1045				1050
РЬе	Зег	РЪе А1а Ьеи О1и	Зег О1у Азр РЪе Азр Агд А1а	Меб	О1и
	1055		1060				1065
Суз	11е	А1а Агд РЪе Агд	О1и Ьеи Уа1 Ьеи О1у О1у О1у	А1а	Ьуз
	1070		1075				1080
Уа1	Азп	О1у Зег Азп
	1085

<210> 3

<211> 6459

<212> ДНК

<213> Ячмень, сорт Ргезбгде

<400> 3

абддсбдсдд	сддсддддда	сдбддаддсд	ббссбддсдд	сдбдссаддс	дбсдддсдас	60
дсддсдбасд	дсдссдссаа	ддссдбдсбд	дадсддсбсд	аддсдссддс	сасдсдсдсс	120
даддссаддс	ддсбссбсдд	сдссдбдсда	сддсдсббсд	ссдссддсдд	сссддссдсд	180
дддсбсдадб	дсббссдсас	сббссасббс	сдсабссасд	асдбсдбссб	сдасссссас	240

- 52 029777

сбссааддбб	дсссддсссс	ббсссбасас	асссдббдбс	дасссдсабс	бсбббсдссд	300
абсбддссдб	саааадсасд	сддсббддба	дааабсаадс	сбдсаабссб	дабссдббба	360
бддсбддсса	дбсдабсадб	аабббддсса	баасбддадб	абаассббдд	бсбсбаабсб	420
сбассбдасс	абабассдад	ббддббббсб	ббсббсббдб	ббссдбаббб	дбдбадбббб	480
ббсббббсбб	бсдадсабда	бдббсбббда	аббаабдсдб	ассадасбсс	адбааббсда	540
саббббдааб	бббддсдадб	дббсббддаа	бббабаасас	аасдаддсбб	бдабсаадбд	600
дбббабдбад	аддадбдббб	ббдббсббдб	дсассдбаба	сааббсбсба	бббсссааса	660
аббббдабдд	ссбсбаадса	бссбдбадбс	абдбсбасбд	бдбаадсбас	адабббаббс	720
абдбсбабдб	дбаадсбдса	аабддадада	ааадсбабсб	абббддббдб	бссадсббдб	780
бсбббддсад	аасаабссбд	сссабссбаб	сассабаадб	абаааадсас	дасааабдад	840
бддддсаадс	абдсбдссаа	дсбаабасас	дасабаадсб	асабаббббд	аддддсабдб	900
бабсбббббб	бббсссббсб	асбсадбббс	ббсбббддда	даасаабссб	асбсаассба	960
баабсабаад	аабаааадса	адасадабда	дбдсбдсада	сбаббддсаб	абабаасаас	1020
бааабаддас	абсбдбссдс	бабабсббба	дббаабаабб	дбабабадас	дсадбсбббд	1080
бдсбддаааа	асбдсаасба	аабаббббсб	басаббабаб	ддаабсбддд	бдбдабабда	1140
сббсбббдбб	асдббббдбд	бдсабааадс	аббаасббсб	дбсбббадбб	ддсдсадсдд	1200
бааааасасс	саббдсббаа	баббббаббб	дсбббссдба	дсббдабааа	абббсаасбд	1260
сббсбаддаб	бссадсааад	ааадаадсба	асаабдабдд	адабасссад	саббббсабб	1320
ссадаадасб	ддбсаббсас	бббсбасдад	ддбсбсаасс	ддсабссада	ббссабсббс	1380
адддабаада	садбадсада	дсбдддабдб	ддсаабддбб	ддабабссаб	бдсасббдса	1440
даааадбддб	дсссббсдаа	ддббддсасс	бсббдббссд	бадабаббба	бсббабсбсд	1500
бббдббдсаа	асабдддасс	бдсадаадбб	адасабббас	бсаддббасб	ббабабдааа	1560
сббббаддбд	бсбдссадба	дбсбдсбддб	ддбсбааббб	бсббддбаба	ссбдабдссд	1620
бсдадсабаб	бдсбббсааа	ббббдддсаа	ддсаббасса	ссасабаббд	бббсбасааб	1680
дсбдаасааб	бдсбсбссбб	бдаааддаад	ааааасаада	абдасабдса	ссббадбадб	1740
ббаадссаса	аабассадсд	аабсааабба	дбббдсадбс	адсббддсаб	бассббасбб	1800
дадссббддб	бдббсббббд	ааддбббабд	дбсбддабаб	ааасссаада	дсбабсаада	1860
ббдсабддаб	ааассбббас	ббдаабдсас	бадасдасда	бддбсбссса	абсбабдабд	1920
сддаддддаа	аасаббдсбб	дасададбсд	ааббсбабда	абсбдабсбб	сбббсббасб	1980
дбададабаа	саадабадаа	сббдабсдса	ббдббддабд	сабассасад	дбасддбсад	2040
дбббббасса	абббссбдбд	аабддддабб	абадбсдабс	адаасббдаб	саааабдссс	2100

- 53 029777

ЕЕааЕаЕсЕд	ссЕЕЕсадаЕ	ЕсЕЕаасссс	ааЕссададд	сааЕдЕсааа	даЕЕдЕаасЕ	2160
дааааЕЕсаа	дЕдаддадЕЕ	сЕЕдЕасЕсс	ЕЕдадсаасЕ	асЕдЕдсЕсЕ	ссаддЕдадЕ	2220
ЕдадаЕсЕаЕ	ЕЕааасЕсаа	дссаЕЕсадЕ	ЕЕассЕдЕЕа	сЕаааЕддЕЕ	асссаЕдЕса	2280
дадЕсЕссаа	аЕсЕЕЕЕЕсЕ	ЕЕЕсЕсааас	адсааадада	даадаааасЕ	ЕЕЕаадЕЕсЕ	2340
аЕссЕдаааЕ	ЕдасЕЕЕаса	аЕдсЕЕдЕЕс	аЕааЕсЕдсЕ	ЕасдаааЕаЕ	дсдЕЕЕдаас	2400
аЕЕЕсЕсЕЕЕ	ЕссЕЕдЕадд	саЕдЕддЕса	дассЕЕЕаЕа	ЕаадааааЕд	аадЕЕЕЕЕдЕ	2460
адаааЕааЕд	ЕаЕдсЕЕЕдЕ	асЕЕаЕдаса	ЕддЕЕссасс	адЕаЕааЕса	аЕЕЕаадЕсЕ	2520
аддЕадЕЕад	даассЕадда	Еддададсас	сдасадЕдЕа	ЕааЕаЕаЕаЕ	аЕдЕсдаЕад	2580
ддддЕЕадса	дЕссаааЕсс	ассЕсаадЕЕ	саассЕаЕЕд	саЕаасЕЕЕЕ	ддЕсЕЕасаа	2640
ссЕдЕаЕдда	саааЕдЕдаЕ	садсасссса	дЕсЕЕЕссЕа	ЕаааааЕдЕс	ЕдсЕддааЕа	2700
ЕддааЕЕаЕЕ	аасадсддЕа	ЕЕЕаЕЕЕЕЕа	сссЕдЕЕЕаа	ЕЕЕЕЕЕссЕЕ	ЕдсЕаааада	2760
аЕдаЕааЕсс	ЕЕаЕдссасд	аддЕЕасаЕЕ	дЕаЕЕасЕса	адЕсааЕаЕЕ	ЕдЕЕасЕаЕд	2820
дсЕдаЕЕдЕа	сдаЕЕссадс	ЕЕссддЕЕдЕ	ЕааЕЕЕЕдЕЕ	аЕдЕЕЕдЕда	асЕЕЕдсЕдс	2880
аЕЕсадддЕЕ	ЕЕдЕЕдадда	ссааЕЕЕддс	сЕсдддЕЕда	ЕЕдсЕсдддс	ЕдЕЕдаадаа	2940
дддаЕаЕсЕд	ЕдаЕааадсс	ЕадЕддЕсЕЕ	аЕддЕаЕЕса	асаЕдддадд	ссддссадда	3000
сааддЕдЕсЕ	дЕдадсдссЕ	аЕЕЕсЕасдс	сдЕддаЕЕЕс	дсаЕсааЕаа	дсЕсЕддсаа	3060
асаааааЕЕа	ЕдсаддЕадс	ааЕЕсЕЕЕда	дЕдасЕадаЕ	дЕЕаасЕааЕ	сссадЕдЕЕЕ	3120
ЕЕссаЕдсса	дсаасадсаЕ	ЕаЕаЕссЕдд	ЕЕададдааЕ	аЕдсЕсЕЕса	ЕдЕЕдсасас	3180
сааЕсЕЕсад	сЕдддссЕад	ааЕЕЕЕсаЕс	ЕассддсЕЕа	саЕЕЕЕЕаса	ЕЕасадаасс	3240
ааЕЕЕЕЕдЕЕ	даддаЕсаЕЕ	ассаасЕадЕ	ЕдддЕсЕЕЕд	саддсЕдсЕд	асасадасаЕ	3300
сЕссдсЕЕЕа	дЕЕдаааЕЕд	адаааааЕад	ссдасаЕсдс	ЕЕсдадЕЕсЕ	ЕЕаЕддаЕсЕ	3360
ЕдЕЕддддаЕ	садссЕдЕдЕ	дЕдсдсдсас	адсаЕдддса	ЕасаЕдаааЕ	сЕддЕддссд	3420
саЕЕЕсасаЕ	дсЕЕЕдЕсЕд	ЕдЕаЕадсЕд	ЕсаасЕЕсдс	садсссаасс	аддЕассЕаЕ	3480
асЕсЕсЕдаЕ	ЕадаЕсЕЕЕа	саасааЕааЕ	аЕадЕааЕдЕ	саддааЕааЕ	ааЕааЕЕЕдд	3540
адааЕЕЕсад	дЕдаадаааа	ЕаЕЕЕдадЕЕ	ссЕЕааадас	ддаЕЕссаЕд	аадЕсадсад	3600
сЕсссЕсдаЕ	ЕЕдЕссЕЕЕд	аЕдаЕдаЕЕс	ЕдЕЕдсЕдаЕ	дааааааЕЕс	сЕЕЕссЕадс	3660
аЕассЕадсЕ	адЕЕЕсЕЕдс	аададааЕаа	дЕсЕааЕссЕ	ЕдЕдадссЕс	садсЕддаЕд	3720
ЕЕЕаааЕЕЕс	сддааЕсЕЕд	ЕЕдсЕддаЕЕ	ЕаЕдаададЕ	Еассассаса	ЕсссаЕЕаас	3780
ЕссЕдаЕдЕа	адасЕЕддЕд	ЕсЕаЕЕдссЕ	асааЕЕаЕдЕ	ЕЕдсЕЕаЕЕа	даааЕЕсаЕа	3840
адаЕсаассЕ	аЕЕЕдаЕдсЕ	ЕсЕсасдЕаЕ	дсЕЕсаЕдЕд	асасЕЕссЕЕ	ЕЕссЕсЕддЕ	3900
дсассадааЕ	дЕЕдЕЕдЕдЕ	ЕсссаЕсссд	ЕдсЕдЕЕдса	аЕсдааааЕд	сЕсЕЕсддЕЕ	3960
дЕЕсЕсассЕ	ддасЕЕдсаа	ЕЕдЕЕдасда	асассЕаасс	адасасЕЕдс	ссаадсааЕд	4020

- 54 029777

дббаасабсб	ббадсааббд	аддбасбббд	ассдабасбс	сссбсбббсб	ббсбдбдббб	4080
ддаасбдбдд	аааабасабд	бдббсбдбда	адааааадбб	абдсбдасаа	даабббсдаб	4140
дббаббдсса	ббсббсбааа	бббсаддааа	дбаассабдс	бааадабаса	дбаасбдбаа	4200
бсдаадсасс	асдссаабса	дабббдсбда	ббдадббдаб	саддааасбд	аадссбсадд	4260
ббдббдббас	бддсабддсб	садбббдадд	сбабсассад	бдсбдсбббс	дбдаасббаб	4320
баадбдбаас	дааадабдбб	ддббсссдаб	баббасбада	бабббсадаа	сабсбддааб	4380
бдбсбадбсб	дссаадсбса	аабддбдбаб	бдааабабсб	бдсбдддаад	асссбдссбб	4440
сасабдсддс	бабаббдбдб	ддсббадбба	адаабсаддб	дбдбдбсааб	садссбдаас	4500
бсбадббдаа	сбдббдбдса	басбабабад	аабабсббда	сббббабабд	басбббадаа	4560
асасбдббба	аабдбасбса	бббсбббббд	сббсабббба	сббдсаддбб	баббсбдабс	4620
бддаадббдс	ббббдсбабс	бсбдаадабс	саасбдббба	бааддсаббд	бсасааасба	4680
ббдадсбабб	ддааддасаб	асббсбдбда	бсадссадса	сбаббабддб	бдбсббббсс	4740
абдадсбдсб	ддсабббсаа	аббддбдасс	ддсабссаса	асаададдба	аасабддсбб	4800
дссбсббсса	дббсбссабс	бсасбсадбб	сбдбссасаа	ддбдссдааб	дабсбдббса	4860
адбддасасб	ссссбсадса	сдддсаадсб	адбссабдаа	бббддаббад	ббсссбсбба	4920
дсбдддбасб	бсдаббасас	сасаабдадс	бссбсаасдб	ддбсбддббб	абдбббббса	4980
бдббббсссб	сбаабдбббд	дббдсбсббб	ббсададада	ассбдсадаа	дбдабабсба	5040
аддадабдаб	адддббббса	адббсадсба	бдбссасссб	адааддадсб	дадбббббсд	5100
ббссбддббс	сабддаабсс	ддбдбсабас	абабддабсб	ддассдсадс	ббсббдссад	5160
бассббсбдс	адбааасдсс	бссаббббсд	ааадббббдб	бсдбсадаас	абсасбдабб	5220
сбдааассда	бдбссдббсс	адсаббсадс	адсбддбдаа	адабадсбаб	ддбббсбсад	5280
саддсддбдс	ббсбдааабб	абабасддда	асассбдбсб	сдсдсбсббс	аасаадсббд	5340
ббсбббдсбд	сабдсаадаа	садддсассб	бдсббббссс	сббдддаасс	аасдддсабб	5400
асдбсаасдс	адсааадббб	дбдаабдсаа	ссассббдас	баббссаасд	ааддсадабб	5460
саддсббсаа	дабсдаасса	адбдсбсбад	ссдасасасб	ададааддбд	бсбсадссдб	5520
дддбсбабаб	ббсбддсссс	асаабсаасс	сбасбддсбб	ссбдбасадб	дасдасдаба	5580
бадсададсб	дсбббсбдбс	бдбдсдасаб	асддадссад	ддбддбдаба	дабассбссб	5640
ссбсбддбсб	ддадббссаа	дссассддсб	дсадссадбд	даабббддаа	адабдбсббб	5700
сбаабдбсаа	дбсббсааад	сссбсдббсб	ссдббдбссб	дсбсддадад	сбдбссбббд	5760
адсбдассас	ддсбдддсбб	дабббсдддб	ббсбдаббаб	дадсдасбсд	бссббддббд	5820
асасабббба	садбббссса	адсббдадбс	ддссасасад	сасдббдаад	басасдббса	5880

- 55 029777

ддаадсЁдЁЁ	дддЁсЁЁаад	аассадаадд	аЁсадсаЁЁЁ	сЁсЁдаЁсЁс	аЁссЁЁдадс	5940
адааддадас	дДДдаадааД	сдЁдссдасс	адЁЁдаЁсаа	ддЁаЁдссЁЁ	ЁЁдддаЁаЁс	6000
с5д5д555ад	дс5с5с5д55	55с55сссс5	даЁсадсЁсЁ	ссдаЁссссЁ	ЁасаЁссЁЁа	6060
ддсЁааЁЁЁс	адЁасЁЁсаа	дЁЁЁдссасд	саЁЁЁсЁдас	а5а55с555с	СЁСЁЁдЁЁЁЁ	6120
а5555сс5д5	даЁдЁдаЁда	асадасдсЁЁ	дададсЁдсд	дсЁдддасдс	ЁдЁдддсЁдс	6180
саЁддсддса	ЁсЁсдаЁдсЁ	Ёдсаааассд	ассдссЁаса	ЁЁддсаааЁс	дсЁсааддЁд	6240
дасддсЁЁЁд	адддсаадсЬ	ддасадссас	аасаЁдаддд	аадсссЁссЁ	даддЁссасс	6300
дддсЁдЁдса	ЁЁадсадсад	сдддЁддаса	ддддЁдссдд	асЁасЁдссд	с55садс555	6360
дсЁсЁддада	дсддсдасЁЁ	сдассдддсс	аЁддадЁдса	ЁсдсссддЁЁ	садддадсЁд	6420
дЁссЁЁддЁд	дсддЁдсЁаа	ддЁдааЁддЁ	адсаасЁад			6459

<210> 4

<211> 3267

<212> ДНК

<213> Ячмень, сорт РгезШде

<400> 4

аЁддсЁдсдд	сддсддддда	сдЁддаддсд	ЁЁссЁддсдд	сдЁдссаддс	дЁсдддсдас	60
дсддсдЁасд	дсдссдссаа	ддссдЁдсЁд	дадсддсЁсд	аддсдссддс	сасдсдсдсс	120
даддссаддс	ддсЁссЁсдд	сдссдЁдсда	сддсдсДДсд	ссдссддсдд	сссддссдсд	180
дддсЁсдадЁ	дсЁЁссдсас	сЁЁссасЁЁс	сдсаЁссасд	асдЁсдЁссЁ	сдасссссас	240
сЁссааддаЁ	Ёссадсааад	ааадаадсЁа	асааЁдаЁдд	адаЁасссад	са5555са55	300
ссадаадасЁ	ддЁсаЁЁсас	ЁЁЁсЁасдад	ддЁсЁсаасс	ддсаЁссада	55сса5с55с	360
адддаЁаада	садЁадсада	дсЁдддаЁдЁ	ддсааЁддЁЁ	ддаЁаЁссаЁ	ЁдсасЁЁдса	420
даааадЁддЁ	дсссЁЁсдаа	дд555а5дд5	сЁддаЁаЁаа	асссаададс	ЁаЁсаадаЁЁ	480
дсаЁддаЁаа	асс555ас55	дааЁдсасЁа	дасдасдаЁд	дЁсЁсссааЁ	сЁаЁдаЁдсд	540
даддддаааа	саЁЁдсЁЁда	сададЁсдаа	55с5а5даа5	с5да5с55с5	55с55ас5д5	600
ададаЁааса	адаЁадаасЁ	ЁдаЁсдсаЁЁ	дЁЁддаЁдса	ЁассасадаЁ	ЁсЁЁаасссс	660
ааЁссададд	сааЁдЁсааа	даЁЁдЁаасЁ	дааааЁЁсаа	дЁдаддадЁЁ	сЁЁдЁасЁсс	720
ЁЁдадсаасЁ	асЁдЁдсЁсЁ	ссадддЁЁЁЁ	дЁЁдаддасс	ааЁЁЁддссЁ	сддд55да55	780
дсЁсдддсЁд	ЁЁдаадаадд	даЁаЁсЁдЁд	аЁааадссЁа	д5дд5с55а5	ддЁаЁЁсаас	840
аЁдддаддсс	ддссаддаса	аддЁдЁсЁдЁ	дадсдссЁаЁ	ЁЁсЁасдссд	ЁддаЁЁЁсдс	900
аЁсааЁаадс	ЁсЁддсааас	аааааЁЁаЁд	саддсЁдсЁд	асасадасаЁ	сЁссдсЁЁЁа	960
дЁЁдаааЁЁд	адаааааЁад	ссдасаЁсдс	55сдад55с5	55а5дда5с5	ЁдЁЁддддаЁ	1020
садссЁдЁдЁ	дЁдсдсдсас	адсаЁдддса	ЁасаЁдаааЁ	сЁддЁддссд	саЁЁЁсасаЁ	1080

- 56 029777

дсЕЕЕдЕсЕд	ЕдЕаЕадсЕд	ЕсаасЕЕсдс	садсссаасс	аддЕдаадаа	ааЕаЕЕЕдад	1140
ЕЕссЕЕааад	асддаЕЕсса	ЕдаадЕсадс	адсЕсссЕсд	аЕЕЕдЕссЕЕ	ЕдаЕдаЕдаЕ	1200
ЕсЕдЕЕдсЕд	аЕдааааааЕ	ЕссЕЕЕссЕа	дсаЕассЕад	сЕадЕЕЕсЕЕ	дсаададааЕ	1260
аадЕсЕааЕс	сЕЕдЕдадсс	ЕссадсЕдда	ЕдЕЕЕаааЕЕ	ЕссддааЕсЕ	ЕдЕЕдсЕдда	1320
ЕЕЕаЕдаада	дЕЕассасса	саЕсссаЕЕа	асЕссЕдаЕа	аЕдЕЕдЕЕдЕ	дЕЕсссаЕсс	1380
сдЕдсЕдЕЕд	сааЕсдаааа	ЕдсЕсЕЕсдд	ЕЕдЕЕсЕсас	сЕддасЕЕдс	ааЕЕдЕЕдас	1440
даасассЕаа	ссадасасЕЕ	дсссаадсаа	ЕддЕЕаасаЕ	сЕЕЕадсааЕ	ЕдаддааадЕ	1500
аассаЕдсЕа	аадаЕасадЕ	аасЕдЕааЕс	даадсассас	дссааЕсада	ЕЕЕдсЕдаЕЕ	1560
дадЕЕдаЕса	ддааасЕдаа	дссЕсаддЕЕ	дЕЕдЕЕасЕд	дсаЕддсЕса	дЕЕЕдаддсЕ	1620
аЕсассадЕд	сЕдсЕЕЕсдЕ	даасЕЕаЕЕа	адЕдЕаасда	аадаЕдЕЕдд	ЕЕсссдаЕЕа	1680
ЕЕасЕадаЕа	ЕЕЕсадааса	ЕсЕддааЕЕд	ЕсЕадЕсЕдс	саадсЕсааа	ЕддЕдЕаЕЕд	1740
аааЕаЕсЕЕд	сЕдддаадас	ссЕдссЕЕса	саЕдсддсЕа	ЕаЕЕдЕдЕдд	сЕЕадЕЕаад	1800
ааЕсаддЕЕЕ	аЕЕсЕдаЕсЕ	ддаадЕЕдсЕ	ЕЕЕдсЕаЕсЕ	сЕдаадаЕсс	аасЕдЕЕЕаЕ	1860
ааддсаЕЕдЕ	сасааасЕаЕ	ЕдадсЕаЕЕд	дааддасаЕа	сЕЕсЕдЕдаЕ	садссадсас	1920
ЕаЕЕаЕддЕЕ	дЕсЕЕЕЕсса	ЕдадсЕдсЕд	дсаЕЕЕсааа	ЕЕддЕдассд	дсаЕссасаа	1980
саадададад	аассЕдсада	адЕдаЕаЕсЕ	ааддадаЕда	ЕадддЕЕЕЕс	аадЕЕсадсЕ	2040
аЕдЕссассс	Еадааддадс	ЕдадЕЕЕЕЕс	дЕЕссЕддЕЕ	ссаЕддааЕс	сддЕдЕсаЕа	2100
саЕаЕддаЕс	Еддассдсад	сЕЕсЕЕдсса	дЕассЕЕсЕд	садЕааасдс	сЕссаЕЕЕЕс	2160
дааадЕЕЕЕд	ЕЕсдЕсадаа	саЕсасЕдаЕ	ЕсЕдааассд	аЕдЕссдЕЕс	садсаЕЕсад	2220
садсЕддЕда	аадаЕадсЕа	ЕддЕЕЕсЕса	дсаддсддЕд	сЕЕсЕдаааЕ	ЕаЕаЕасддд	2280
аасассЕдЕс	ЕсдсдсЕсЕЕ	саасаадсЕЕ	дЕЕсЕЕЕдсЕ	дсаЕдсаада	асадддсасс	2340
ЕЕдсЕЕЕЕсс	ссЕЕдддаас	саасдддсаЕ	ЕасдЕсаасд	садсааадЕЕ	ЕдЕдааЕдса	2400
ассассЕЕда	сЕаЕЕссаас	дааддсадаЕ	ЕсаддсЕЕса	адаЕсдаасс	аадЕдсЕсЕа	2460
дссдасасас	ЕададааддЕ	дЕсЕсадссд	ЕдддЕсЕаЕа	ЕЕЕсЕддссс	сасааЕсаас	2520
ссЕасЕддсЕ	ЕссЕдЕасад	ЕдасдасдаЕ	аЕадсададс	ЕдсЕЕЕсЕдЕ	сЕдЕдсдаса	2580
Еасддадсса	дддЕддЕдаЕ	адаЕассЕсс	ЕссЕсЕддЕс	ЕддадЕЕсса	адссассддс	2640
ЕдсадссадЕ	ддааЕЕЕдда	аадаЕдЕсЕЕ	ЕсЕааЕдЕса	адЕсЕЕсааа	дсссЕсдЕЕс	2700
ЕссдЕЕдЕсс	ЕдсЕсддада	дсЕдЕссЕЕЕ	дадсЕдасса	сддсЕдддсЕ	ЕдаЕЕЕсддд	2760
ЕЕЕсЕдаЕЕа	ЕдадсдасЕс	дЕссЕЕддЕЕ	дасасаЕЕЕЕ	асадЕЕЕссс	аадсЕЕдадЕ	2820
сддссасаса	дсасдЕЕдаа	дЕасасдЕЕс	аддаадсЕдЕ	ЕдддЕсЕЕаа	даассадаад	2880
даЕсадсаЕЕ	ЕсЕсЕдаЕсЕ	саЕссЕЕдад	садааддада	сдЕЕдаадаа	ЕсдЕдссдас	2940
садЕЕдаЕса	адасдсЕЕда	дадсЕдсддс	ЕдддасдсЕд	ЕдддсЕдсса	ЕддсддсаЕс	3000

- 57 029777

РсдаРдсРРд	саааассдас	сдссРасаРР	ддсаааРсдс	РсааддРдда	сддсРРРдад	3060
ддсаадсРдд	асадссасаа	саРдадддаа	дсссРссРда	ддРссассдд	дсРдРдсаРР	3120
адсадсадсд	ддРддасадд	ддРдссддас	РасРдссдсР	РсадсРРРдс	РсРддададс	3180
ддсдасРРсд	ассдддссаР	ддадРдсаРс	дсссддРРса	дддадсРддР	ссРРддРддс	3240
ддРдсРаадд	РдааРддРад	саасРад				3267

<210> 5

<211> 3267

<212> ДНК

<213> Ячмень, сорт РгезРчде

<400> 5

аРддсРдсдд	сддсддддда	сдРддаддсд	РРссРддсдд	сдРдссаддс	дРсдддсдас	60
дсддсдРасд	дсдссдссаа	ддссдРдсРд	дадсддсРсд	аддсдссддс	сасдсдРдса	120
даддсссдРс	ддсРссРсдд	сдссдРдсда	сдРсдРРРРд	садсаддРдд	Рссадссдсд	180
дддсРсдадР	дсРРссдсас	сРРссасРРс	сдсаРссасд	асдРсдРссР	сдасссссас	240
сРссааддаР	Рссадсааад	ааадаадсРа	асааРдаРдд	адаРасссад	саРРРРсаРР	300
ссадаадасР	ддРсаРРсас	РРРсРасдад	ддРсРсаасс	ддсаРссада	РРссаРсРРс	360
адддаРаада	садРадсада	дсРдддаРдР	ддсааРддРР	ддаРаРссаР	РдсасРРдса	420
даааадРддР	дсссРРсдаа	ддРРРаРддР	сРддаРаРаа	асссаададс	РаРсаадаРР	480
дсаРддаРаа	ассРРРасРР	дааРдсасРа	дасдасдаРд	дРсРсссааР	сРаРдаРдсд	540
даддддаааа	саРРдсРРда	сададРсдаа	РРсРаРдааР	сРдаРсРРсР	РРсРРасРдР	600
адддаРааса	адаРадаасР	РдаРсдсаРР	дРРддаРдса	РассасадаР	РсРРаасссс	660
ааРссададд	сааРдРсааа	даРРдРаасР	дааааРРсаа	дРдаддадРР	сРРдРасРсс	720
РРдадсаасР	асРдРдсРсР	ссадддРРРР	дРРдаддасс	ааРРРддссР	сдддРРдаРР	780
дсРсдддсРд	РРдаадаадд	даРаРсРдРд	аРааадссРа	дРддРсРРаР	ддРаРРсаас	840
аРдддаддсс	ддсссдддса	аддРдРсРдР	дадсдссРаР	РРсРРсдссд	РддаРРРсдс	900
аРсааРаадс	РсРддсааас	аааааРРаРд	саддсРдссд	асасадасаР	сРссдсРРРа	960
дРРдаааРРд	адаааааРад	ссддсаРсдс	РРсдадРРсР	РРаРддаРсР	РдРРддддаР	1020
садссРдРдР	дРдсдсдсас	адсаРдддса	РасаРдаааР	сРддРддссд	саРРРсасаР	1080
дсРРРдРсРд	РдРаРадсРд	РсаасРРсдс	садсссаасс	аддРдаадаа	ааРаРРРдад	1140
РРссРРааад	асддаРРсса	РдаадРсадс	адсРсссРсд	аРРРдРссРР	РдаРдаРдаР	1200
РсРдРРдсРд	аРдааааааР	РссРРРссРа	дсаРассРад	сРадРРРсРР	дсаададааР	1260
аадРсРааРс	сРРдРдадсс	РссадсРдда	РдРРРаааРР	РссддааРса	РдРРдсРдда	1320
РРРаРдаада	дРРассасса	саРсссаРРа	асРссРдаРа	аРдРРдРРдР	дРРсссаРсс	1380

- 58 029777

сдЕдсЕдЕЕд	сааЕсдаааа	ЕдсЕсЕЕсдд	ЕЕдЕЕсЕсас	сЕддасЕЕдс	ааЕЕдЕЕдас	1440
даасассЕаа	ссадасасЕЕ	дсссаадсаа	ЕддЕЕаасаЕ	сЕЕЕадсааЕ	ЕдаддааадЕ	1500
аассаЕдсЕа	аадаЕасадЕ	аасЕдЕааЕс	даадсассас	дссааЕсада	ЕЕЕдсЕдаЕЕ	1560
дадЕЕдаЕса	ддааасЕдаа	дссссаддЕЕ	дЕЕдЕЕасЕд	дсаЕддсЕса	дЕЕЕдаддсЕ	1620
аЕсассадЕд	сЕдсЕЕЕсдЕ	даасЕЕаЕЕа	адЕдЕаасда	аадаЕдЕЕдд	ЕЕсссдаЕЕа	1680
ЕЕасЕадаЕа	ЕЕЕсадааса	ЕсЕддааЕЕд	ЕсЕадЕсЕдс	саадсЕсааа	ЕддЕдЕаЕЕд	1740
аааЕаЕсЕЕд	сЕдддаадас	ссЕдссЕЕса	саЕдсддсЕа	ЕаЕЕдЕдЕдд	сЕЕадЕЕаад	1800
ааЕсаддЕЕЕ	аЕЕсЕдаЕсЕ	ддаадЕЕдсЕ	ЕЕЕдсЕаЕсЕ	сЕдаадаЕсс	аасЕдЕЕЕаЕ	1860
ааддсаЕЕдЕ	сасааасЕаЕ	ЕдадсЕаЕЕд	дааддасаЕа	сЕЕсЕдЕдаЕ	садссадсас	1920
ЕаЕЕаЕддЕЕ	дЕсЕЕЕЕсса	ЕдадсЕдсЕд	дсаЕЕЕсааа	ЕЕддЕдассд	дсаЕссасаа	1980
саадададад	аассЕдсада	адЕдаЕаЕсЕ	ааддадаЕда	ЕадддЕЕЕЕс	аадЕЕсадсЕ	2040
аЕдЕссассс	Еадааддадс	ЕдадЕЕЕЕЕс	дЕЕссЕддЕЕ	ссаЕддааЕс	сддЕдЕсаЕа	2100
саЕаЕддаЕс	Еддассдсад	сЕЕсЕЕдсса	дЕассЕЕсЕд	садЕааасдс	сЕссаЕЕЕЕс	2160
дааадЕЕЕЕд	ЕЕсдЕсадаа	саЕсасЕдаЕ	ЕсЕдааасЕд	аЕдЕссдЕЕс	садсаЕЕсад	2220
садсЕддЕда	аадаЕадсЕа	ЕддЕЕЕсЕса	дсаддсддЕд	сЕЕсЕдаааЕ	ЕаЕаЕасддд	2280
аасассЕдЕс	ЕсдсдсЕсЕЕ	саасаадсЕЕ	дЕЕсЕЕЕдсЕ	дсаЕдсаада	асадддсасс	2340
ЕЕдсЕЕЕЕсс	ссЕЕдддаас	саасдддсаЕ	ЕаЕдЕсаасд	садсааадЕЕ	ЕдЕдааЕдса	2400
ассассЕЕда	сЕаЕЕссаас	дааддсадаЕ	ЕсаддсЕЕса	адаЕсдаасс	аадЕдсЕсЕа	2460
дссдасасас	ЕададааддЕ	дЕсЕсадссд	ЕдддЕсЕаЕа	ЕЕЕсЕддссс	сасааЕсаас	2520
ссЕасЕддсЕ	ЕссЕдЕасад	ЕдасдасдаЕ	аЕадсададс	ЕдсЕЕЕсЕдЕ	сЕдЕдсдаса	2580
Еасддадсса	дддЕддЕдаЕ	адаЕассЕсс	ЕссЕсЕддЕс	ЕддадЕЕсса	адссассддс	2640
ЕдсадссадЕ	ддааЕЕЕдда	аадаЕдЕсЕЕ	ЕсЕааЕдЕса	адЕсЕЕсааа	дсссЕсдЕЕс	2700
ЕссдЕЕдЕсс	ЕдсЕсддада	дсЕдЕссЕЕЕ	дадсЕдасса	сддсЕдддсЕ	ЕдаЕЕЕсддд	2760
ЕЕЕсЕдаЕЕа	ЕдадсдасЕс	дЕссЕЕддЕЕ	дасасаЕЕЕЕ	асадЕЕЕссс	аадсЕЕдадЕ	2820
сддссасаса	дсасдЕЕдаа	дЕасасЕЕЕс	аддаадсЕдЕ	ЕдддЕсЕЕаа	даассадаад	2880
даЕсадсаЕЕ	ЕсЕсЕдаЕсЕ	саЕссЕЕдад	садааддада	сдЕЕдаадаа	ЕсдЕдссдас	2940
садЕЕдаЕса	адаЕдсЕЕда	дадсЕдсддс	ЕдддасдсЕд	ЕдддсЕдсса	ЕддсддсаЕс	3000
ЕсдаЕдсЕЕд	саааассдас	сдссЕасаЕЕ	адсаааЕсдс	ЕсааддЕдда	сддсЕЕЕдад	3060
ддсаадсЕдд	асадссасаа	саЕдадддаа	дсссЕссЕда	ддЕссассдд	дсЕдЕдсаЕЕ	3120
адсадсадсд	ддЕддасадд	ддЕдссддас	ЕасЕдссдсЕ	ЕсадсЕЕЕдс	ЕсЕддададс	3180
ддсдасЕЕсд	ассдддссаЕ	ддадЕдсаЕс	дсссддЕЕса	дддадсЕддЕ	ссЕЕддЕдда	3240

- 59 029777

ддбдсбаадд бдаабддбад саасбад

3267

<210> 6

<211> 1088

<212> Белок

<213> Ячмень, сорт РгезМде

<400> 6

Меб 1

А1а А1а А1а А1а 5

О1у

Азр Уа1

О1и

А1а 10

РЬе

Ьеи

А1а

А1а

Суз 15

О1п

А1а

Бег

О1у

Азр

А1а

А1а

Туг

О1у

А1а

А1а

Ьуз

А1а

Уа1

Ьеи

О1и

Агд

20

25

30

Ьеи

О1и

А1а

Рго

А1а

ТЬг

Агд

А1а

О1и

А1а

Агд

Агд

Ьеи

Ьеи

О1у

А1а

35

40

45

Уа1

Агд

Агд

Агд

РЬе

А1а

А1а

О1у

О1у

Рго

А1а

А1а

О1у

Ьеи

О1и

Суз

50

55

60

РЬе

Агд

ТЬг

РЬе

Ηΐ3

РЬе

Агд

11е

Н1з

Азр

Уа1

Уа1

Ьеи

Азр

Рго

Н1з

65

70

75

80

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

О1п

О1п

Агд

Ьуз

Ьуз

Ьеи

ТЬг

Меб

Меб

О1и

11е

Рго

85

90

95

Бег

11е

РЬе

11е

Рго

О1и

Азр

Тгр

Бег

РЬе

ТЬг

РЬе

Туг

О1и

О1у

Ьеи

100

105

110

Азп

Агд

Ηΐ3

Рго

Азр

Бег

11е

РЬе

Агд

Азр

Ьуз

ТЬг

Уа1

А1а

О1и

Ьеи

115

120

125

О1у

Суз

О1у

Азп

О1у

Тгр

11е

Бег

11е

А1а

Ьеи

А1а

О1и

Ьуз

Тгр

Суз

130

135

140

Рго

Бег

Ьуз

Уа1

Туг

О1у

Ьеи

Азр

11е

Азп

Рго

Агд

А1а

11е

Ьуз

11е

145

150

155

160

А1а

Тгр

11е

Азп

Ьеи

Туг

Ьеи

Азп

А1а

Ьеи

Азр

Азр

Азр

О1у

Ьеи

Рго

165

170

175

11е

Туг

Азр

А1а

О1и

О1у

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азр

Агд

Уа1

О1и

РЬе

Туг

180

185

190

О1и

Бег

Азр

Ьеи

Ьеи

Бег

Туг

Суз

Агд

Азр

Азп

Ьуз

11е

О1и

Ьеи

Азр

195

200

205

Агд

11е

Уа1

О1у

Суз

11е

Рго

О1п

11е

Ьеи

Азп

Рго

Азп

Рго

О1и

А1а

- 60 029777

210 215 220

МеЬ 225

Зег

Ьуз

11е Уа1

ТЬг 230

О1и

Азп

Зег

Зег

О1и 235

О1и

РЬе

Ьеи

Туг

Зег 240

Ьеи

Зег

Азп

Туг

Суз

А1а

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

Уа1

О1и

Азр

О1п

РЬе

О1у

245

250

255

Ьеи

О1у

Ьеи

11е

А1а

Агд

А1а

Уа1

О1и

О1и

О1у

11е

Зег

Уа1

11е

Ьуз

260

265

270

Рго

Зег

О1у

Ьеи

МеЬ

Уа1

РЬе

Азп

МеЬ

О1у

О1у

Агд

Рго

О1у

О1п

О1у

275

280

285

ναι

Суз

О1и

Агд

Ьеи

РЬе

Ьеи

Агд

Агд

О1у

РЬе

Агд

11е

Азп

Ьуз

Ьеи

290

295

300

Тгр

О1п

ТЬг

Ьуз

11е

МеЬ

О1п

А1а

А1а

Азр

ТЬг

Азр

11е

Зег

А1а

Ьеи

305

310

315

320

ναι

О1и

11е

О1и

Ьуз

Азп

Зег

Агд

Нгз

Агд

РЬе

О1и

РЬе

РЬе

МеЬ

Азр

325

330

335

Ьеи

Уа1

О1у

Азр

О1п

Рго

Уа1

Суз

А1а

Агд

ТЬг

А1а

Тгр

А1а

Туг

МеЬ

340

345

350

Ьуз

Зег

О1у

О1у

Агд

11е

Зег

Нгз

А1а

Ьеи

Зег

Уа1

Туг

Зег

Суз

О1п

355

360

365

Ьеи

Агд

О1п

Рго

Азп

О1п

Уа1

Ьуз

Ьуз

11е

РЬе

О1и

РЬе

Ьеи

Ьуз

Азр

370

375

380

О1у

РЬе

Ηΐ3

О1и

Уа1

Зег

Зег

Зег

Ьеи

Азр

Ьеи

Зег

РЬе

Азр

Азр

Азр

385

390

395

400

Зег

Уа1

А1а

Азр

О1и

Ьуз

11е

Рго

РЬе

Ьеи

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Зег

РЬе

405

410

415

Ьеи

О1п

О1и

Азп

Ьуз

Зег

Азп

Рго

Суз

О1и

Рго

Рго

А1а

О1у

Суз

Ьеи

420

425

430

Азп

РЬе

Агд

Азп

Ьеи

Уа1

А1а

О1у

РЬе

МеЬ

Ьуз

Зег

Туг

Нгз

Нгз

11е

435

440

445

Рго

Ьеи

ТЬг

Рго

Азр

Азп

Уа1

Уа1

Уа1

РЬе

Рго

Зег

Агд

А1а

Уа1

А1а

450 455 460

- 61 029777

11е 465

О1и Азп

А1а

Ьеи

Агд 470

Ьеи

РЬе

Зег

Рго

О1у 475

Ьеи

А1а

11е

Уа1

Азр 480

О1и

Шз

Ьеи

ТЬг

Агд

Η18

Ьеи

Рго

Ьуз

О1п

Тгр

Ьеи

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

485

490

495

11е

О1и

О1и

Зег

Азп

Η18

А1а

Ьуз

Азр

ТЬг

Уа1

ТЬг

Уа1

11е

О1и

А1а

500

505

510

Рго

Агд

О1п

Зег

Азр

Ьеи

Ьеи

11е

О1и

Ьеи

11е

Агд

Ьуз

Ьеи

Ьуз

Рго

515

520

525

О1п

Уа1

Уа1

Уа1

ТЬг

О1у

Меб

А1а

О1п

РЬе

О1и

А1а

11е

ТЬг

Зег

А1а

530

535

540

А1а

РЬе

Уа1

Азп

Ьеи

Ьеи

Зег

Уа1

ТЬг

Ьуз

Азр

Уа1

О1у

Зег

Агд

Ьеи

545

550

555

560

Ьеи

Ьеи

Азр

11е

Зег

О1и

Ηί.8

Ьеи

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Рго

Зег

Зег

565

570

575

Азп

О1у

Уа1

Ьеи

Ьуз

Туг

Ьеи

А1а

О1у

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Рго

Зег

Шз

А1а

580

585

590

А1а

11е

Ьеи

Суз

О1у

Ьеи

Уа1

Ьуз

Азп

О1п

Уа1

Туг

Зег

Азр

Ьеи

О1и

595

600

605

Уа1

А1а

РЬе

А1а

11е

Зег

О1и

Азр

Рго

ТЬг

Уа1

Туг

Ьуз

А1а

Ьеи

Зег

610

615

620

О1п

ТЬг

11е

О1и

Ьеи

Ьеи

О1и

О1у

Ηί.8

ТЬг

Зег

Уа1

11е

Зег

О1п

Шз

625

630

635

640

Туг

Туг

О1у

Суз

Ьеи

РЬе

Ηί.8

О1и

Ьеи

Ьеи

А1а

РЬе

О1п

11е

О1у

Азр

645

650

655

Агд

Шз

Рго

О1п

О1п

О1и

Агд

О1и

Рго

А1а

О1и

Уа1

11е

Зег

Ьуз

О1и

660

665

670

Меб

11е

О1у

РЬе

Зег

Зег

Зег

А1а

Меб

Зег

ТЬг

Ьеи

О1и

О1у

А1а

О1и

675

680

685

РЬе

РЬе

Уа1

Рго

О1у

Зег

Меб

О1и

Зег

О1у

Уа1

11е

Шз

Меб

Азр

Ьеи

690

695

700

Азр

Агд

Зег

РЬе

Ьеи

Рго

Уа1

Рго

Зег

А1а

Уа1

Азп

А1а

Зег

11е

РЬе

705

710

715

720

- 62 029777

О1и

Зег

РЬе

Уа1

Агд 725

О1п

Азп

11е

ТЪг Азр 730

Зег

О1и

ТЪг

Азр

Уа1 735

Агд

Зег

Зег

11е

О1п

О1п

Ьеи

Уа1

Ьуз

Азр

Зег

Туг

О1у

РЪе

Зег

А1а

О1у

740

745

750

О1у

А1а

Зег

О1и

11е

11е

Туг

О1у

Азп

ТЪг

Суз

Ьеи

А1а

Ьеи

РЪе

Азп

755

760

765

Ьуз

Ьеи

Уа1

Ьеи

Суз

Суз

МеЬ

О1п

О1и

О1п

О1у

ТЪг

Ьеи

Ьеи

РЪе

Рго

770

775

780

Ьеи

О1у

ТЬг

Азп

О1у

Н1з

Туг

Уа1

Азп

А1а

А1а

Ьуз

РЪе

Уа1

Азп

А1а

785

790

795

800

ТЬг

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е

Рго

ТЬг

Ьуз

А1а

Азр

Зег

О1у

РЪе

Ьуз

11е

О1и

805

810

815

Рго

Зег

А1а

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Ьеи

О1и

Ьуз

Уа1

Зег

О1п

Рго

Тгр

Уа1

820

825

830

Туг

11е

Зег

О1у

Рго

ТЬг

11е

Азп

Рго

ТЪг

О1у

РЪе

Ьеи

Туг

Зег

Азр

835

840

845

Азр

Азр

11е

А1а

О1и

Ьеи

Ьеи

Зег

Уа1

Суз

А1а

ТЪг

Туг

О1у

А1а

Агд

850

855

860

ναι

Уа1

11е

Азр

ТЬг

Зег

Зег

Зег

О1у

Ьеи

О1и

РЪе

О1п

А1а

ТЪг

О1у

865

870

875

880

Суз

Зег

О1п

Тгр

Азп

Ьеи

О1и

Агд

Суз

Ьеи

Зег

Азп

Уа1

Ьуз

Зег

Зег

885

890

895

Ьуз

Рго

Зег

РЬе

Зег

Уа1

Уа1

Ьеи

Ьеи

О1у

О1и

Ьеи

Зег

РЪе

О1и

Ьеи

900

905

910

ТЬг

ТЬг

А1а

О1у

Ьеи

Азр

РЬе

О1у

РЪе

Ьеи

11е

МеЬ

Зег

Азр

Зег

Зег

915

920

925

Ьеи

Уа1

Азр

ТЬг

РЬе

Туг

Зег

РЬе

Рго

Зег

Ьеи

Зег

Агд

Рго

Н1з

Зег

930

935

940

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Туг

ТЬг

РЬе

Агд

Ьуз

Ьеи

Ьеи

О1у

Ьеи

Ьуз

Азп

О1п

Ьуз

945

950

955

960

Азр

О1п

Нтз

РЬе

Зег

Азр

Ьеи

11е

Ьеи

О1и

О1п

Ьуз

О1и

ТЪг

Ьеи

Ьуз

965 970 975

- 63 029777

Азп Агд А1а Азр О1п Ьеи 11е Ьуз ТЬг Ьеи О1и Зег Суз О1у Тгр Азр 980 985 990

А1а Уа1 О1у Суз Нчз О1у О1у 11е Зег МеЕ Ьеи А1а Ьуз Рго ТЬг А1а 995 1000 1005

Туг

11е 1010

О1у

Ьуз

Зег Ьеи

Ьуз 1015

Уа1

Азр

О1у

РЬе

О1и 1020

О1у

Ьуз

Ьеи

Азр

Зег

Нчз

Азп

МеЕ

Агд

О1и

А1а

Ьеи

Ьеи

Агд

Зег

ТЬг

О1у

Ьеи

1025

1030

1035

Суз

11е

Зег

Зег

Зег

О1у

Тгр

ТЬг

О1у

Уа1

Рго

Азр

Туг

Суз

Агд

1040

1045

1050

РЬе

Зег

РЬе

А1а

Ьеи

О1и

Зег

О1у

Азр

РЬе

Азр

Агд

А1а

МеЕ

О1и

1055

1060

1065

Суз

11е

А1а

Агд

РЬе

Агд

О1и

Ьеи

Уа1

Ьеи

О1у

О1у

О1у

А1а

Ьуз

1070

1075

1080

Уа1

Азп

О1у

Зег

Азп

1085

<210> 7

<211> 1088

<212> Белок

<213> Ячмень, сорт РгезЕчде

<400> 7

МеЕ А1а А1а А1а А1а

О1у Азр Уа1

О1и

А1а 10

РЬе

Ьеи А1а

А1а

Суз 15

О1п

1

5

А1а

Зег

О1у

Азр

А1а

А1а

Туг

О1у

А1а

А1а

Ьуз

А1а

Уа1

Ьеи

О1и

Агд

20

25

30

Ьеи

О1и

А1а

Рго

А1а

ТЬг

Агд

А1а

О1и

А1а

Агд

Агд

Ьеи

Ьеи

О1у

А1а

35

40

45

Уа1

Агд

Агд

Агд

РЬе

А1а

А1а

О1у

О1у

Рго

А1а

А1а

О1у

Ьеи

О1и

Суз

50

55

60

РЬе

Агд

ТЬг

РЬе

Нчз

РЬе

Агд

11е

Нчз

Азр

Уа1

Уа1

Ьеи

Азр

Рго

Нчз

65

70

75

80

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

О1п

О1п

Агд

Ьуз

Ьуз

Ьеи

ТЬг

МеЕ

МеЕ

О1и

11е

Рго

85 90 95

- 64 029777

Зег

11е

РЬе

11е 100

Рго

О1и

Азр

Тгр

Зег 105

РЬе

ТЬг

РЬе

Туг

О1и 110

О1у

Ьеи

Азп

Агд

Н1з

Рго

Азр

Зег

11е

РЬе

Агд

Азр

Ьуз

ТЬг

Уа1

А1а

О1и

Ьеи

115

120

125

О1у

Суз

О1у

Азп

О1у

Тгр

11е

Зег

11е

А1а

Ьеи

А1а

О1и

Ьуз

Тгр

Суз

130

135

140

Рго

Зег

Ьуз

Уа1

Туг

О1у

Ьеи

Азр

11е

Азп

Рго

Агд

А1а

11е

Ьуз

11е

145

150

155

160

А1а

Тгр

11е

Азп

Ьеи

Туг

Ьеи

Азп

А1а

Ьеи

Азр

Азр

Азр

О1у

Ьеи

Рго

165

170

175

11е

Туг

Азр

А1а

О1и

О1у

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азр

Агд

Уа1

О1и

РЬе

Туг

180

185

190

О1и

Зег

Азр

Ьеи

Ьеи

Зег

Туг

Суз

Агд

Азр

Азп

Ьуз

11е

О1и

Ьеи

Азр

195

200

205

Агд

11е

Уа1

О1у

Суз

11е

Рго

О1п

11е

Ьеи

Азп

Рго

Азп

Рго

О1и

А1а

210

215

220

МеЕ

Зег

Ьуз

11е

Уа1

ТЬг

О1и

Азп

Зег

Зег

О1и

О1и

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

225

230

235

240

Ьеи

Зег

Азп

Туг

Суз

А1а

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

Уа1

О1и

Азр

О1п

РЬе

О1у

245

250

255

Ьеи

О1у

Ьеи

11е

А1а

Агд

А1а

Уа1

О1и

О1и

О1у

11е

Зег

Уа1

11е

Ьуз

260

265

270

Рго

Зег

О1у

Ьеи

МеЕ

Уа1

РЬе

Азп

МеЕ

О1у

О1у

Агд

Рго

О1у

О1п

О1у

275

280

285

Уа1

Суз

О1и

Агд

Ьеи

РЬе

Ьеи

Агд

Агд

О1у

РЬе

Агд

11е

Азп

Ьуз

Ьеи

290

295

300

Тгр

О1п

ТЬг

Ьуз

11е

МеЕ

О1п

А1а

А1а

Азр

ТЬг

Азр

11е

Зег

А1а

Ьеи

305

310

315

320

Уа1

О1и

11е

О1и

Ьуз

Азп

Зег

Агд

Н1з

Агд

РЬе

О1и

РЬе

РЬе

МеЕ

Азр

325

330

335

Ьеи

Уа1

О1у

Азр

О1п

Рго

Уа1

Суз

А1а

Агд

ТЬг

А1а

Тгр

А1а

Туг

МеЕ

- 65 029777

340

345

350

Ьуз

Зег

О1у

О1у

Агд

11е

Зег

Нгз

А1а

Ьеи

Зег

ν&1

Туг

Зег

Суз

О1п

355

360

365

Ьеи

Агд

О1п

Рго

Азп

О1п

ν&1

Ьуз

Ьуз

11е

РЬе

О1и

РЬе

Ьеи

Ьуз

Азр

370

375

380

О1у

РЬе

Нгз

О1и

ν&1

Зег

Зег

Зег

Ьеи

Азр

Ьеи

Зег

РЬе

Азр

Азр

Азр

385

390

395

400

Зег

ν&1

А1а

Азр

О1и

Ьуз

11е

Рго

РЬе

Ьеи

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Зег

РЬе

405

410

415

Ьеи

О1п

О1и

Азп

Ьуз

Зег

Азп

Рго

Суз

О1и

Рго

Рго

А1а

О1у

Суз

Ьеи

420

425

430

Азп

РЬе

Агд

Азп

Нгз

ν&1

А1а

О1у

РЬе

Мей

Ьуз

Зег

Туг

Нгз

Нгз

11е

435

440

445

Рго

Ьеи

ТЬг

Рго

Азр

Азп

ν&1

ν&1

ν&1

РЬе

Рго

Зег

Агд

А1а

ν&1

А1а

450

455

460

11е

О1и

Азп

А1а

Ьеи

Агд

Ьеи

РЬе

Зег

Рго

О1у

Ьеи

А1а

11е

ν&1

Азр

465

470

475

480

О1и

Нгз

Ьеи

ТЬг

Агд

Нгз

Ьеи

Рго

Ьуз

О1п

Тгр

Ьеи

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

485

490

495

11е

О1и

О1и

Зег

Азп

Нгз

А1а

Ьуз

Азр

ТЬг

ν&1

ТЬг

ν&1

11е

О1и

А1а

500

505

510

Рго

Агд

О1п

Зег

Азр

Ьеи

Ьеи

11е

О1и

Ьеи

11е

Агд

Ьуз

Ьеи

Ьуз

Рго

515

520

525

О1п

ν&1

ν&1

ν&1

ТЬг

О1у

Мей

А1а

О1п

РЬе

О1и

А1а

11е

ТЬг

Зег

А1а

530

535

540

А1а

РЬе

ν&1

Азп

Ьеи

Ьеи

Зег

ν&1

ТЬг

Ьуз

Азр

ν&1

О1у

Зег

Агд

Ьеи

545

550

555

560

Ьеи

Ьеи

Азр

11е

Зег

О1и

Нгз

Ьеи

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Рго

Зег

Зег

565

570

575

Азп

О1у

ν&1

Ьеи

Ьуз

Туг

Ьеи

А1а

О1у

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Рго

Зег

Нгз

А1а

580

585

590

- 66 029ΊΊΊ

А1а

11е

Ьеи 595

Суз

О1у

Ьеи Уа1

Ьуз 600

Азп

О1п Уа1

Туг

Зег 605

Азр

Ьеи

О1и

Уа1

А1а

РЬе

А1а

11е

Зег

О1и

Азр

Рго

ТЬг

Уа1

Туг

Ьуз

А1а

Ьеи

Зег

610

615

620

О1п

ТЬг

11е

О1и

Ьеи

Ьеи

О1и

С1у

ΗΪ8

ТЬг

Зег

Уа1

11е

Зег

О1п

Н1з

625

630

635

640

Туг

Туг

О1у

Суз

Ьеи

РЬе

Ηΐ3

О1и

Ьеи

Ьеи

А1а

РЬе

О1п

11е

О1у

Азр

645

650

655

Агд

Ηΐ3

Рго

О1п

О1п

О1и

Агд

О1и

Рго

А1а

О1и

Уа1

11е

Зег

Ьуз

О1и

660

665

670

МеЕ

11е

О1у

РЬе

Зег

Зег

Зег

А1а

МеЕ

Зег

ТЬг

Ьеи

О1и

О1у

А1а

О1и

675

680

685

РЬе

РЬе

Уа1

Рго

О1у

Зег

МеЕ

О1и

Зег

О1у

Уа1

11е

Нтз

МеЕ

Азр

Ьеи

690

695

700

Азр

Агд

Зег

РЬе

Ьеи

Рго

Уа1

Рго

Зег

А1а

Уа1

Азп

А1а

Зег

11е

РЬе

705

710

715

720

О1и

Зег

РЬе

Уа1

Агд

О1п

Азп

11е

ТЬг

Азр

Зег

О1и

ТЬг

Азр

Уа1

Агд

725

730

735

Зег

Зег

11е

О1п

О1п

Ьеи

Уа1

Ьуз

Азр

Зег

Туг

О1у

РЬе

Зег

А1а

О1у

740

745

750

О1у

А1а

Зег

О1и

11е

11е

Туг

С1у

Азп

ТЬг

Суз

Ьеи

А1а

Ьеи

РЬе

Азп

755

760

765

Ьуз

Ьеи

Уа1

Ьеи

Суз

Суз

МеЕ

О1п

О1и

О1п

О1у

ТЬг

Ьеи

Ьеи

РЬе

Рго

770

775

780

Ьеи

О1у

ТЬг

Азп

О1у

Ηΐ3

Туг

Уа1

Азп

А1а

А1а

Ьуз

РЬе

Уа1

Азп

А1а

785

790

795

800

ТЬг

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е

Рго

ТЬг

Ьуз

А1а

Азр

Зег

О1у

РЬе

Ьуз

11е

О1и

805

810

815

Рго

Зег

А1а

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Ьеи

О1и

Ьуз

Уа1

Зег

О1п

Рго

Тгр

Уа1

820

825

830

Туг

11е

Зег

О1у

Рго

ТЬг

11е

Азп

Рго

ТЬг

О1у

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

Азр

835

840

845

- 67 029777

Азр Азр 850

11е А1а О1и

Ьеи

Ьеи 855

Бег

Уа1

Суз

А1а

ТЪг 860

Туг

О1у

А1а

Агд

Уа1

Уа1

11е

Азр

ТЪг

Бег

Бег

Бег

О1у

Ьеи

О1и

РЪе

О1п

А1а

ТЪг

О1у

865

870

875

880

Суз

Бег

О1п

Тгр

Азп

Ьеи

О1и

Агд

Суз

Ьеи

Бег

Азп

Уа1

Ьуз

Бег

Бег

885

890

895

Ьуз

Рго

Бег

РЪе

Бег

Уа1

Уа1

Ьеи

Ьеи

О1у

О1и

Ьеи

Бег

РЪе

О1и

Ьеи

900

905

910

ТЪг

ТЪг

А1а

О1у

Ьеи

Азр

РЪе

О1у

РЪе

Ьеи

11е

Меб

Бег

Азр

Бег

Бег

915

920

925

Ьеи

Уа1

Азр

ТЪг

РЪе

Туг

Бег

РЪе

Рго

Бег

Ьеи

Бег

Агд

Рго

Нтз

Бег

930

935

940

ТЪг

Ьеи

Ьуз

Туг

ТЪг

РЪе

Агд

Ьуз

Ьеи

Ьеи

О1у

Ьеи

Ьуз

Азп

О1п

Ьуз

945

950

955

960

Азр

О1п

Нтз

РЪе

Бег

Азр

Ьеи

11е

Ьеи

О1и

О1п

Ьуз

О1и

ТЪг

Ьеи

Ьуз

965

970

975

Азп

Агд

А1а

Азр

О1п

Ьеи

11е

Ьуз

Меб

Ьеи

О1и

Бег

Суз

О1у

Тгр

Азр

980

985

990

А1а Уа1 О1у Суз Н1з О1у О1у 11е Бег Меб Ьеи А1а Ьуз Рго ТЪг А1а 995 1000 1005

Туг

11е 1010

Бег

Ьуз

Бег Ьеи Ьуз 1015

Уа1

Азр О1у

РЪе

О1и 1020

О1у

Ьуз

Ьеи

Азр

Бег

Нтз

Азп

Меб

Агд

О1и

А1а

Ьеи

Ьеи

Агд

Бег

ТЪг

О1у

Ьеи

1025

1030

1035

Суз

11е

Бег

Бег

Бег

О1у

Тгр

ТЪг

О1у

Уа1

Рго

Азр

Туг

Суз

Агд

1040

1045

1050

РЪе

Бег

РЪе

А1а

Ьеи

О1и

Бег

О1у

Азр

РЪе

Азр

Агд

А1а

Меб

О1и

1055

1060

1065

Суз

11е

А1а

Агд

РЪе

Агд

О1и

Ьеи

Уа1

Ьеи

О1у

О1у

О1у

А1а

Ьуз

1070

1075

1080

Уа1 Азп О1у Бег Азп 1085

- 68 029777

<210> 8 <211> 6459 <212> ДНК <213> Ячмень, мутант	8063
<400> 8 аЕддсЕдсдд	сддсддддда	сдЕддаддсд	ЕЕссЕддсдд	сдЕдссаддс	дЕсдддсдас	60
дсддсдЕасд	дсдссдссаа	ддссдЕдсЕд	дадсддсЕсд	аддсдссддс	сасдсдсдсс	120
даддссаддс	ддсЕссЕсдд	сдссдЕдсда	сддсдсЕЕсд	ссдссддсдд	сссддссдсд	180
дддсЕсдадЕ	дсЕЕссдсас	сЕЕссасЕЕс	сдсаЕссасд	асдЕсдЕссЕ	сдасссссас	240
сЕссааддЕЕ	дсссддсссс	ЕЕсссЕасас	асссдЕЕдЕс	дасссдсаЕс	ЕсЕЕЕсдссд	300
аЕсЕддссдЕ	саааадсасд	сддсЕЕддЕа	даааЕсаадс	сЕдсааЕссЕ	даЕссдЕЕЕа	360
ЕддсЕддсса	дЕсдаЕсадЕ	ааЕЕЕддсса	ЕаасЕддадЕ	аЕаассЕЕдд	ЕсЕсЕааЕсЕ	420
сЕассЕдасс	аЕаЕассдад	ЕЕддЕЕЕЕсЕ	ЕЕсЕЕсЕЕдЕ	ЕЕссдЕаЕЕЕ	дЕдЕадЕЕЕЕ	480
ЕЕсЕЕЕЕсЕЕ	ЕсдадсаЕда	ЕдЕЕсЕЕЕда	аЕЕааЕдсдЕ	ассадасЕсс	адЕааЕЕсда	540
саЕЕЕЕдааЕ	ЕЕЕддсдадЕ	дЕЕсЕЕддаа	ЕЕЕаЕаасас	аасдаддсЕЕ	ЕдаЕсаадЕд	600
дЕЕЕаЕдЕад	аддадЕдЕЕЕ	ЕЕдЕЕсЕЕдЕ	дсассдЕаЕа	сааЕЕсЕсЕа	ЕЕЕсссааса	660
аЕЕЕЕдаЕдд	ссЕсЕаадса	ЕссЕдЕадЕс	аЕдЕсЕасЕд	ЕдЕаадсЕас	адаЕЕЕаЕЕс	720
аЕдЕсЕаЕдЕ	дЕаадсЕдса	ааЕддадада	ааадсЕаЕсЕ	аЕЕЕддЕЕдЕ	ЕссадсЕЕдЕ	780
ЕсЕЕЕддсад	аасааЕссЕд	сссаЕссЕаЕ	сассаЕаадЕ	аЕаааадсас	дасаааЕдад	840
Еддддсаадс	аЕдсЕдссаа	дсЕааЕасас	дасаЕаадсЕ	асаЕаЕЕЕЕд	аддддсаЕдЕ	900
ЕаЕсЕЕЕЕЕЕ	ЕЕЕсссЕЕсЕ	асЕсадЕЕЕс	ЕЕсЕЕЕддда	даасааЕссЕ	асЕсаассЕа	960
ЕааЕсаЕаад	ааЕаааадса	адасадаЕда	дЕдсЕдсада	сЕаЕЕддсаЕ	аЕаЕаасаас	1020
ЕаааЕаддас	аЕсЕдЕссдс	ЕаЕаЕсЕЕЕа	дЕЕааЕааЕЕ	дЕаЕаЕадас	дсадЕсЕЕЕд	1080
ЕдсЕддаааа	асЕдсаасЕа	ааЕаЕЕЕЕсЕ	ЕасаЕЕаЕаЕ	ддааЕсЕддд	ЕдЕдаЕаЕда	1140
сЕЕсЕЕЕдЕЕ	асдЕЕЕЕдЕд	ЕдсаЕааадс	аЕЕаасЕЕсЕ	дЕсЕЕЕадЕЕ	ддсдсадсдд	1200
Еааааасасс	саЕЕдсЕЕаа	ЕаЕЕЕЕаЕЕЕ	дсЕЕЕссдЕа	дсЕЕдаЕааа	аЕЕЕсаасЕд	1260
сЕЕсЕаддаЕ	Ессадсааад	ааадаадсЕа	асааЕдаЕдд	адаЕасссад	саЕЕЕЕсаЕЕ	1320
ссадаадасЕ	ддЕсаЕЕсас	ЕЕЕсЕасдад	ддЕсЕсаасс	ддсаЕссада	ЕЕссаЕсЕЕс	1380
адддаЕаада	садЕадсада	дсЕдддаЕдЕ	ддсааЕддЕЕ	ддаЕаЕссаЕ	ЕдсасЕЕдса	1440
даааадЕддЕ	дсссЕЕсдаа	ддЕЕддсасс	ЕсЕЕдЕЕссд	ЕадаЕаЕЕЕа	ЕсЕЕаЕсЕсд	1500
ЕЕЕдЕЕдсаа	асаЕдддасс	ЕдсадаадЕЕ	адасаЕЕЕас	ЕсаддЕЕасЕ	ЕЕаЕаЕдааа	1560
сЕЕЕЕаддЕд	ЕсЕдссадЕа	дЕсЕдсЕддЕ	ддЕсЕааЕЕЕ	ЕсЕЕддЕаЕа	ссЕдаЕдссд	1620
ЕсдадсаЕаЕ	ЕдсЕЕЕсааа	ЕЕЕЕдддсаа	ддсаЕЕасса	ссасаЕаЕЕд	ЕЕЕсЕасааЕ	1680

- 69 029777

дсбдаасааб	бдсбсбссбб	бдаааддаад	ааааасаада	абдасабдса	ссббадбадб	1740
ббаадссаса	аабассадсд	аабсааабба	дбббдсадбс	адсббддсаб	бассббасбб	1800
дадссббддб	бдббсббббд	ааддбббабд	дбсбддабаб	ааасссаада	дсбабсаада	1860
ббдсабддаб	ааассбббас	ббдаабдсас	бадасдасда	бддбсбссса	абсбабдабд	1920
сддаддддаа	аасаббдсбб	дасададбсд	ааббсбабда	абсбдабсбб	сбббсббасб	1980
дбададабаа	саадабадаа	сббдабсдса	ббдббддабд	сабассасад	дбасддбсад	2040
дбббббасса	абббссбдбд	аабддддабб	абадбсдабс	адаасббдаб	саааабдссс	2100
ббаабабсбд	ссбббсадаб	бсббаасссс	аабссададд	саабдбсааа	даббдбаасб	2160
дааааббсаа	дбдаддадбб	сббдбасбсс	ббдадсаасб	асбдбдсбсб	ссаддбдадб	2220
бдадабсбаб	ббааасбсаа	дссаббсадб	ббассбдбба	сбааабддбб	асссабдбса	2280
дадбсбссаа	абсбббббсб	бббсбсааас	адсааадада	даадаааасб	бббаадббсб	2340
абссбдаааб	бдасбббаса	абдсббдббс	абаабсбдсб	басдааабаб	дсдбббдаас	2400
абббсбсббб	бссббдбадд	сабдбддбса	дассбббаба	баадаааабд	аадбббббдб	2460
адааабаабд	бабдсбббдб	асббабдаса	бддббссасс	адбабаабса	абббаадбсб	2520
аддбадббад	даассбадда	бддададсас	сдасадбдба	баабабабаб	абдбсдабад	2580
ддддббадса	дбссааабсс	ассбсаадбб	саассбаббд	сабаасбббб	ддбсббасаа	2640
ссбдбабдда	сааабдбдаб	садсасссса	дбсбббссба	бааааабдбс	бдсбддааба	2700
бддааббабб	аасадсддба	бббаббббба	сссбдбббаа	ббббббссбб	бдсбаааада	2760
абдабаабсс	ббабдссасд	аддббасабб	дбаббасбса	адбсаабабб	бдббасбабд	2820
дсбдаббдба	сдаббссадс	ббссддббдб	бааббббдбб	абдбббдбда	асбббдсбдс	2880
аббсадддбб	ббдббдадда	ссаабббддс	сбсдддббда	ббдсбсдддс	бдббдаадаа	2940
дддабабсбд	бдабааадсс	бадбддбсбб	абддбаббса	асабдддадд	ссддссадда	3000
сааддбдбсб	дбдадсдссб	абббсбасдс	сдбддабббс	дсабсаабаа	дсбсбддсаа	3060
асааааабба	бдсадабадс	ааббсбббда	дбдасбадаб	дббаасбааб	сссадбдббб	3120
ббссабдсса	дсаасадсаб	бабабссбдд	ббададдааб	абдсбсббса	бдббдсасас	3180
саабсббсад	сбдддссбад	ааббббсабс	бассддсбба	сабббббаса	ббасадаасс	3240
аабббббдбб	даддабсабб	ассаасбадб	бдддбсбббд	саддсбдсбд	асасадасаб	3300
сбссдсббба	дббдаааббд	адааааабад	ссдасабсдс	ббсдадббсб	ббабддабсб	3360
бдббддддаб	садссбдбдб	дбдсдсдсас	адсабдддса	басабдаааб	сбддбддссд	3420
сабббсасаб	дсбббдбсбд	бдбабадсбд	бсаасббсдс	садсссаасс	аддбассбаб	3480
асбсбсбдаб	бадабсббба	саасаабааб	абадбаабдб	саддаабааб	аабаабббдд	3540

- 70 029777

адааРРРсад	дРдаадаааа	РаРРРдадРР	ссРРааадас	ддаРРссаРд	аадРсадсад	3600
сРсссРсдаР	РРдРссРРРд	аРдаРдаРРс	РдРРдсРдаР	дааааааРРс	сРРРссРадс	3660
аРассРадсР	адРРРсРРдс	аададааРаа	дРсРааРссР	РдРдадссРс	садсРддаРд	3720
РРРаааРРРс	сддааРсРРд	РРдсРддаРР	РаРдаададР	Рассассаса	РсссаРРаас	3780
РссРдаРдРа	адасРРддРд	РсРаРРдссР	асааРРаРдР	РРдсРРаРРа	даааРРсаРа	3840
адаРсаассР	аРРРдаРдсР	РсРсасдРаР	дсРРсаРдРд	асасРРссРР	РРссРсРддР	3900
дсассадааР	дРРдРРдРдР	РсссаРсссд	РдсРдРРдса	аРсдааааРд	сРсРРсддРР	3960
дРРсРсассР	ддасРРдсаа	РРдРРдасда	асассРаасс	адасасРРдс	ссаадсааРд	4020
дРРаасаРсР	РРадсааРРд	аддРасРРРд	ассдаРасРс	сссРсРРРсР	РРсРдРдРРР	4080
ддаасРдРдд	ааааРасаРд	РдРРсРдРда	адааааадРР	аРдсРдасаа	дааРРРсдаР	4140
дРРаРРдсса	РРсРРсРааа	РРРсаддааа	дРаассаРдс	РааадаРаса	дРаасРдРаа	4200
Рсдаадсасс	асдссааРса	даРРРдсРда	РРдадРРдаР	саддааасРд	аадссРсадд	4260
РРдРРдРРас	РддсаРддсР	садРРРдадд	сРаРсассад	РдсРдсРРРс	дРдаасРРаР	4320
РаадРдРаас	дааадаРдРР	ддРРсссдаР	РаРРасРада	РаРРРсадаа	саРсРддааР	4380
РдРсРадРсР	дссаадсРса	ааРддРдРаР	РдаааРаРсР	РдсРдддаад	асссРдссРР	4440
сасаРдсддс	РаРаРРдРдР	ддсРРадРРа	адааРсаддР	дРдРдРсааР	садссРдаас	4500
РсРадРРдаа	сРдРРдРдса	РасРаРаРад	ааРаРсРРда	сРРРРаРаРд	РасРРРадаа	4560
асасРдРРРа	ааРдРасРса	РРРсРРРРРд	сРРсаРРРРа	сРРдсаддРР	РаРРсРдаРс	4620
РддаадРРдс	РРРРдсРаРс	РсРдаадаРс	саасРдРРРа	РааддсаРРд	РсасааасРа	4680
РРдадсРаРР	ддааддасаР	асРРсРдРда	Рсадссадса	сРаРРаРддР	РдРсРРРРсс	4740
аРдадсРдсР	ддсаРРРсаа	аРРддРдасс	ддсаРссаса	асаададдРа	аасаРддсРР	4800
дссРсРРсса	дРРсРссаРс	РсасРсадРР	сРдРссасаа	ддРдссдааР	даРсРдРРса	4860
адРддасасР	ссссРсадса	сдддсаадсР	адРссаРдаа	РРРддаРРад	РРсссРсРРа	4920
дсРдддРасР	РсдаРРасас	сасааРдадс	РссРсаасдР	ддРсРддРРР	аРдРРРРРса	4980
РдРРРРсссР	сРааРдРРРд	дРРдсРсРРР	РРсададада	ассРдсадаа	дРдаРаРсРа	5040
аддадаРдаР	адддРРРРса	адРРсадсРа	РдРссасссР	адааддадсР	дадРРРРРсд	5100
РРссРддРРс	саРддааРсс	ддРдРсаРас	аРаРддаРсР	ддассдсадс	РРсРРдссад	5160
РассРРсРдс	адРааасдсс	РссаРРРРсд	ааадРРРРдР	РсдРсадаас	аРсасРдаРР	5220
сРдааассда	РдРссдРРсс	адсаРРсадс	адсРддРдаа	адаРадсРаР	ддРРРсРсад	5280
саддсддРдс	РРсРдаааРР	аРаРасддда	асассРдРсР	сдсдсРсРРс	аасаадсРРд	5340
РРсРРРдсРд	саРдсаадаа	садддсассР	РдсРРРРссс	сРРдддаасс	аасдддсаРР	5400
асдРсаасдс	адсааадРРР	дРдааРдсаа	ссассРРдас	РаРРссаасд	ааддсадаРР	5460

- 71 029777

саддсббсаа	дабсдаасса	адбдсбсбад	ссдасасасб	ададааддбд	бсбсадссдб	5520
дддбсбабаб	ббсбддсссс	асаабсаасс	сбасбддсбб	ссбдбасадб	дасдасдаба	5580
бадсададсб	дсбббсбдбс	бдбдсдасаб	асддадссад	ддбддбдаба	дабассбссб	5640
ссбсбддбсб	ддадббссаа	дссассддсб	дсадссадбд	даабббддаа	адабдбсббб	5700
сбаабдбсаа	дбсббсааад	сссбсдббсб	ссдббдбссб	дсбсддадад	сбдбссбббд	5760
адсбдассас	ддсбдддсбб	дабббсдддб	ббсбдаббаб	дадсдасбсд	бссббддббд	5820
асасабббба	садбббссса	адсббдадбс	ддссасасад	сасдббдаад	басасдббса	5880
ддаадсбдбб	дддбсббаад	аассадаадд	абсадсаббб	сбсбдабсбс	абссббдадс	5940
адааддадас	дббдаадааб	сдбдссдасс	адббдабсаа	ддбабдссбб	ббдддабабс	6000
сбдбдбббад	дсбсбсбдбб	ббсббссссб	дабсадсбсб	ссдабссссб	басабссбба	6060
ддсбаабббс	адбасббсаа	дбббдссасд	сабббсбдас	абаббсбббс	сбсббдбббб	6120
аббббссбдб	дабдбдабда	асадасдсбб	дададсбдсд	дсбдддасдс	бдбдддсбдс	6180
сабддсддса	бсбсдабдсб	бдсаааассд	ассдссбаса	ббддсааабс	дсбсааддбд	6240
дасддсбббд	адддсаадсб	ддасадссас	аасабдаддд	аадсссбссб	даддбссасс	6300
дддсбдбдса	ббадсадсад	сдддбддаса	ддддбдссдд	асбасбдссд	сббсадсббб	6360
дсбсбддада	дсддсдасбб	сдассдддсс	абддадбдса	бсдсссддбб	садддадсбд	6420
дбссббддбд	дсддбдсбаа	ддбдаабддб	адсаасбад			6459

<210> 9

<211> 882

<212> ДНК

<213> Ячмень, сорт Ргезбгде

<400> 9

дбббабддбс	бддабабааа	сссаададсб	абсаадаббд	сабддабааа	ссбббасббд	60
аабдсасбад	асдасдабдд	бсбсссаабс	бабдабдсдд	аддддаааас	аббдсббдас	120
ададбсдааб	бсбабдаабс	бдабсббсбб	бсббасбдба	дадабаасаа	дабадаасбб	180
дабсдсаббд	ббддабдсаб	ассасадабб	сббаасссса	абссададдс	аабдбсааад	240
аббдбаасбд	ааааббсаад	бдаддадббс	ббдбасбссб	бдадсаасба	сбдбдсбсбс	300
садддббббд	ббдаддасса	абббддссбс	дддббдаббд	сбсдддсбдб	бдаадааддд	360
абабсбдбда	бааадссбад	бддбсббабд	дбаббсааса	бдддаддссд	дссаддасаа	420
ддбдбсбдбд	адсдссбабб	бсббсдссдб	ддабббсдса	бсаабаадсб	сбддсаааса	480
ааааббабдс	аддсбдсбда	сасадасабс	бссдсбббад	ббдаааббда	дааааабадс	540
сдасабсдсб	бсдадббсбб	бабддабсбб	дббддддабс	адссбдбдбд	бдсдсдсаса	600
дсабдддсаб	асабдааабс	бддбддссдс	абббсасабд	сбббдбсбдб	дбабадсбдб	660

- 72 029777

саасЬЬсдсс адсссаасса ддЬдаадааа аЬаЬЬЬдадЬ ЬссЬЬааада сддаЬЬссаЬ 720

даадЬсадса дсЬсссЬсда ЬЬЬдЬссЬЬЬ даЬдаЬдаЬЬ сЬдЬЬдсЬда ЬдааааааЬЬ 780

ссЬЬЬссЬад саЬассЬадс ЬадЬЬЬсЬЬд саададааЬа адЬсЬааЬсс ЬЬдЬдадссЬ 840

ссадсЬддаЬ дЬЬЬаааЬЬЬ ссддааЬсЬЬ дЬЬдсЬддаЬ ЬЬ 882

<210> 10

<211> 1089

<212> ДНК

<213> Ячмень, мутант 8063

<400> 10

дЬЬЬаЬддЬс ЬддаЬаЬааа сссаададсЬ аЬсаадаЬЬд саЬддаЬааа ссЬЬЬасЬЬд 60

ааЬдсасЬад асдасдаЬдд ЬсЬсссааЬс ЬаЬдаЬдсдд аддддаааас аЬЬдсЬЬдас 120

ададЬсдааЬ ЬсЬаЬдааЬс ЬдаЬсЬЬсЬЬ ЬсЬЬасЬдЬа дадаЬаасаа даЬадаасЬЬ 180

даЬсдсаЬЬд ЬЬддаЬдсаЬ ассасадаЬЬ сЬЬаасссса аЬссададдс ааЬдЬсааад 240

аЬЬдЬаасЬд ааааЬЬсаад ЬдаддадЬЬс ЬЬдЬасЬссЬ ЬдадсаасЬа сЬдЬдсЬсЬс 300

саддЬЬЬЬдЬ Ьдаддассаа ЬЬЬддссЬсд ддЬЬдаЬЬдс ЬсдддсЬдЬЬ даадааддда 360

ЬаЬсЬдЬдаЬ ааадссЬадЬ ддЬсЬЬаЬдд ЬаЬЬсаасаЬ дддаддссдд ссаддасаад 420

дЬдЬсЬдЬда дсдссЬаЬЬЬ сЬасдссдЬд даЬЬЬсдсаЬ сааЬаадсЬс Ьддсааасаа 480

аааЬЬаЬдса даЬадсааЬЬ сЬЬсдадЬда сЬадаЬдЬЬа асЬааЬссса дЬдЬЬЬЬЬсс 540

аЬдссадсаа садсаЬЬдЬа ЬссЬддЬЬад аддааЬаЬдс ЬсЬЬсаЬдЬЬ дсасассааЬ 600

сЬЬсаЬсЬдд ассЬддааЬЬ ЬЬсаЬсЬасс ддсЬЬасаЬЬ ЬЬЬасаЬЬас адаассааЬЬ 660

ЬЬЬдЬЬдадд аЬсаЬЬасса асЬадЬЬддд ЬсЬЬЬдсадд сЬдсЬдасас адасаЬсЬсс 720

дсЬЬЬадЬЬд аааЬЬдадаа аааЬадссда саЬсдсЬЬсд адЬЬсЬЬЬаЬ ддаЬсЬЬдЬЬ 780

ддддаЬсадс сЬдЬдЬдЬдс дсдсасадса ЬдддсаЬаса ЬдаааЬсЬдд ЬддссдсаЬЬ 840

ЬсасаЬдсЬЬ ЬдЬсЬдЬдЬа ЬадсЬдЬсаа сЬЬсдссадс ссаассаддЬ даадааааЬа 900

ЬЬЬдадЬЬсс ЬЬааадасдд аЬЬссаЬдаа дЬсадсадсЬ сссЬсдаЬЬЬ дЬссЬЬЬдаЬ 960

даЬдаЬЬсЬд ЬЬдсЬдаЬда аааааЬЬссЬ ЬЬссЬадсаЬ ассЬадсЬад ЬЬЬсЬЬдсаа 1020

дадааЬаадЬ сЬааЬссЬЬд ЬдадссЬсса дсЬддаЬдЬЬ ЬаааЬЬЬссд дааЬсЬЬдЬЬ 1080

дсЬддаЬЬЬ 1089

<210> 11

<211> 315

<212> Белок

<213> Ячмень, мутант 8063

<400> 11

МеЬ А1а А1а А1а А1а О1у Азр Уа1 О1и А1а РНе Ьеи А1а А1а Суз О1п

- 73 029777

1 5 10 15

А1а

Бег

О1у

Азр 20

А1а

А1а

Туг

О1у А1а А1а 25

Ьуз

А1а

Уа1

Ьеи 30

О1и

Агд

Ьеи

О1и

А1а

Рго

А1а

ТЬг

Агд

А1а

О1и

А1а

Агд

Агд

Ьеи

Ьеи

О1у

А1а

35

40

45

Уа1

Агд

Агд

Агд

РЬе

А1а

А1а

О1у

О1у

Рго

А1а

А1а

О1у

Ьеи

О1и

Суз

50

55

60

РЬе

Агд

ТЬг

РЬе

Нчз

РЬе

Агд

11е

Нчз

Азр

Уа1

Уа1

Ьеи

Азр

Рго

Нчз

65

70

75

80

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

О1п

О1п

Агд

Ьуз

Ьуз

Ьеи

ТЬг

МеЕ

МеЕ

О1и

11е

Рго

85

90

95

Бег

11е

РЬе

11е

Рго

О1и

Азр

Тгр

Бег

РЬе

ТЬг

РЬе

Туг

О1и

О1у

Ьеи

100

105

110

Азп

Агд

Нчз

Рго

Азр

Бег

11е

РЬе

Агд

Азр

Ьуз

ТЬг

Уа1

А1а

О1и

Ьеи

115

120

125

О1у

Суз

О1у

Азп

О1у

Тгр

11е

Бег

11е

А1а

Ьеи

А1а

О1и

Ьуз

Тгр

Суз

130

135

140

Рго

Бег

Ьуз

Уа1

Туг

О1у

Ьеи

Азр

11е

Азп

Рго

Агд

А1а

11е

Ьуз

11е

145

150

155

160

А1а

Тгр

11е

Азп

Ьеи

Туг

Ьеи

Азп

А1а

Ьеи

Азр

Азр

Азр

О1у

Ьеи

Рго

165

170

175

11е

Туг

Азр

А1а

О1и

О1у

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азр

Агд

Уа1

О1и

РЬе

Туг

180

185

190

О1и

Бег

Азр

Ьеи

Ьеи

Бег

Туг

Суз

Агд

Азр

Азп

Ьуз

11е

О1и

Ьеи

Азр

195

200

205

Агд

11е

Уа1

О1у

Суз

11е

Рго

О1п

11е

Ьеи

Азп

Рго

Азп

Рго

О1и

А1а

210

215

220

МеЕ

Бег

Ьуз

11е

Уа1

ТЬг

О1и

Азп

Бег

Бег

О1и

О1и

РЬе

Ьеи

Туг

Бег

225

230

235

240

Ьеи

Бег

Азп

Туг

Суз

А1а

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

Уа1

О1и

Азр

О1п

РЬе

О1у

245 250 255

- 74 029777

Ьеи О1у

Ьеи

11е 260

А1а

Агд

А1а

Уа1

О1и О1и О1у 265

11е

Бег

Уа1 270

11е

Ьуз

Рго

Бег

О1у

Ьеи

МеЕ

Уа1

РЬе

Азп

МеЕ

О1у

О1у

Агд

Рго

О1у

О1п

О1у

275

280

285

Уа1

Суз

О1и

Агд

Ьеи

РЬе

Ьеи

Агд

Агд

О1у

РЬе

Агд

11е

Азп

Ьуз

Ьеи

290

295

300

Тгр

О1п

ТЬг

Ьуз

11е

МеЕ

О1п

11е

А1а

11е

Ьеи

305

310

315

<210> 12

<211> 955

<212> ДНК

<213> Ячмень, мутант 8063

<400> 12 дЕЕЕаЕддЕс	ЕддаЕаЕааа	сссаададсЕ	аЕсаадаЕЕд	саЕддаЕааа	ссЕЕЕасЕЕд	60
ааЕдсасЕад	асдасдаЕдд	ЕсЕсссааЕс	ЕаЕдаЕдсдд	аддддаааас	аЕЕдсЕЕдас	120
ададЕсдааЕ	ЕсЕаЕдааЕс	ЕдаЕсЕЕсЕЕ	ЕсЕЕасЕдЕа	дадаЕаасаа	даЕадаасЕЕ	180
даЕсдсаЕЕд	ЕЕддаЕдсаЕ	ассасадаЕЕ	сЕЕаасссса	аЕссададдс	ааЕдЕсааад	240
аЕЕдЕаасЕд	ааааЕЕсаад	ЕдаддадЕЕс	ЕЕдЕасЕссЕ	ЕдадсаасЕа	сЕдЕдсЕсЕс	300
саддЕЕЕЕдЕ	Едаддассаа	ЕЕЕддссЕсд	ддЕЕдаЕЕдс	ЕсдддсЕдЕЕ	даадааддда	360
ЕаЕсЕдЕдаЕ	ааадссЕадЕ	ддЕсЕЕаЕдд	ЕаЕЕсаасаЕ	дддаддссдд	ссаддасаад	420
дЕдЕсЕдЕда	дсдссЕаЕЕЕ	сЕасдссдЕд	даЕЕЕсдсаЕ	сааЕаадсЕс	Еддсааасаа	480
аааЕЕаЕдса	даЕадсааЕЕ	сЕЕсдадЕда	сЕадаЕдЕЕа	асЕааЕссса	дЕдЕЕЕЕЕсс	540
аЕдссадсаа	садсаЕЕдЕа	ЕссЕддсЕдс	Едасасадас	аЕсЕссдсЕЕ	ЕадЕЕдаааЕ	600
ЕдадаааааЕ	адссдасаЕс	дсЕЕсдадЕЕ	сЕЕЕаЕддаЕ	сЕЕдЕЕдддд	аЕсадссЕдЕ	660
дЕдЕдсдсдс	асадсаЕддд	саЕасаЕдаа	аЕсЕддЕддс	сдсаЕЕЕсас	аЕдсЕЕЕдЕс	720
ЕдЕдЕаЕадс	ЕдЕсаасЕЕс	дссадсссаа	ссаддЕдаад	ааааЕаЕЕЕд	адЕЕссЕЕаа	780
адасддаЕЕс	саЕдаадЕса	дсадсЕсссЕ	сдаЕЕЕдЕсс	ЕЕЕдаЕдаЕд	аЕЕсЕдЕЕдс	840
ЕдаЕдааааа	аЕЕссЕЕЕсс	ЕадсаЕассЕ	адсЕадЕЕЕс	ЕЕдсаадада	аЕаадЕсЕаа	900
ЕссЕЕдЕдад	ссЕссадсЕд	даЕдЕЕЕааа	ЕЕЕссддааЕ	сЕЕдЕЕдсЕд	даЕЕЕ	955

<210> 13

<211> 315

<212> Белок

<213> Ячмень, мутант 8063

<400> 13

МеЕ А1а А1а А1а А1а О1у Азр Уа1 О1и А1а РНе Ьеи А1а А1а Суз О1п

- 75 029777

1 5 10 15

А1а

Зег

О1у

Азр 20

А1а

А1а

Туг

О1у А1а А1а 25

Ьуз

А1а

Уа1

Ьеи 30

О1и

Агд

Ьеи

О1и

А1а

Рго

А1а

ТЬг

Агд

А1а

О1и

А1а

Агд

Агд

Ьеи

Ьеи

О1у

А1а

35

40

45

Уа1

Агд

Агд

Агд

РЬе

А1а

А1а

О1у

О1у

Рго

А1а

А1а

О1у

Ьеи

О1и

Суз

50

55

60

РЬе

Агд

ТЬг

РЬе

Нгз

РЬе

Агд

11е

Нгз

Азр

Уа1

Уа1

Ьеи

Азр

Рго

Нгз

65

70

75

80

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

О1п

О1п

Агд

Ьуз

Ьуз

Ьеи

ТЬг

МеЕ

МеЕ

О1и

11е

Рго

85

90

95

Зег

11е

РЬе

11е

Рго

О1и

Азр

Тгр

Зег

РЬе

ТЬг

РЬе

Туг

О1и

О1у

Ьеи

100

105

110

Азп

Агд

Нгз

Рго

Азр

Зег

11е

РЬе

Агд

Азр

Ьуз

ТЬг

Уа1

А1а

О1и

Ьеи

115

120

125

О1у

Суз

О1у

Азп

О1у

Тгр

11е

Зег

11е

А1а

Ьеи

А1а

О1и

Ьуз

Тгр

Суз

130

135

140

Рго

Зег

Ьуз

Уа1

Туг

О1у

Ьеи

Азр

11е

Азп

Рго

Агд

А1а

11е

Ьуз

11е

145

150

155

160

А1а

Тгр

11е

Азп

Ьеи

Туг

Ьеи

Азп

А1а

Ьеи

Азр

Азр

Азр

О1у

Ьеи

Рго

165

170

175

11е

Туг

Азр

А1а

О1и

О1у

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азр

Агд

Уа1

О1и

РЬе

Туг

180

185

190

О1и

Зег

Азр

Ьеи

Ьеи

Зег

Туг

Суз

Агд

Азр

Азп

Ьуз

11е

О1и

Ьеи

Азр

195

200

205

Агд

11е

Уа1

О1у

Суз

11е

Рго

О1п

11е

Ьеи

Азп

Рго

Азп

Рго

О1и

А1а

210

215

220

МеЕ

Зег

Ьуз

11е

Уа1

ТЬг

О1и

Азп

Зег

Зег

О1и

О1и

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

225

230

235

240

Ьеи

Зег

Азп

Туг

Суз

А1а

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

Уа1

О1и

Азр

О1п

РЬе

О1у

245 250 255

- 76 029777

Ьеи О1у

Ьеи

11е 260

А1а

Агд

А1а

Уа1

О1и О1и О1у 265

11е

Бег

Уа1 270

11е

Ьуз

Рго

Бег

О1у

Ьеи

Меб

Уа1

РКе

Азп

Меб

О1у

О1у

Агд

Рго

О1у

О1п

О1у

275

280

285

Уа1

Суз

О1и

Агд

Ьеи

РКе

Ьеи

Агд

Агд

О1у

РКе

Агд

11е

Азп

Ьуз

Ьеи

290

295

300

Тгр

О1п

ТКг

Ьуз

11е

Меб

О1п

11е

А1а

11е

Ьеи

305

310

315

<210> 14 <211> 810 <212> ДНК <213> Ячмень, мутант	8063
<400> 14 дбббабддбс	бддабабааа	сссаададсб	абсаадаббд	сабддабааа	ссбббасббд	60
аабдсасбад	асдасдабдд	бсбсссаабс	бабдабдсдд	аддддаааас	аббдсббдас	120
ададбсдааб	бсбабдаабс	бдабсббсбб	бсббасбдба	дадабаасаа	дабадаасбб	180
дабсдсаббд	ббддабдсаб	ассасадабб	сббаасссса	абссададдс	аабдбсааад	240
аббдбаасбд	ааааббсаад	бдаддадббс	ббдбасбссб	бдадсаасба	сбдбдсбсбс	300
саддббббдб	бдаддассаа	бббддссбсд	ддббдаббдс	бсдддсбдбб	даадааддда	360
бабсбдбдаб	ааадссбадб	ддбсббабдд	баббсаасаб	дддаддссдд	ссаддасаад	420
дсбдсбдаса	садасабсбс	сдсбббадбб	даааббдада	аааабадссд	асабсдсббс	480
дадббсббба	бддабсббдб	бддддабсад	ссбдбдбдбд	сдсдсасадс	абдддсабас	540
абдааабсбд	дбддссдсаб	ббсасабдсб	ббдбсбдбдб	абадсбдбса	асббсдссад	600
сссаассадд	бдаадааааб	абббдадббс	сббааадасд	даббссабда	адбсадсадс	660
бсссбсдабб	бдбссбббда	бдабдаббсб	дббдсбдабд	ааааааббсс	бббссбадса	720
бассбадсба	дбббсббдса	ададаабаад	бсбаабссбб	дбдадссбсс	адсбддабдб	780
ббааабббсс	ддаабсббдб	бдсбддаббб				810

<210> 15

<211> 289

<212> Белок

<213> Ячмень, мутант 8063
<400> 15
Меб А1а А1а А1а А1а О1у Азр Уа1	О1и А1а	РКе Ьеи А1а А1а Суз О1п
1 5	10	15

А1а Бег О1у Азр А1а А1а Туг О1у А1а А1а Ьуз А1а Уа1 Ьеи О1и Агд

- 77 029777

20 25 30

Ьеи О1и А1а 35

Рго

А1а

ТЬг

Агд А1а О1и А1а Агд Агд 40

Ьеи 45

Ьеи

О1у

А1а

Уа1

Агд

Агд

Агд

РЬе

А1а

А1а

О1у

О1у

Рго

А1а

А1а

О1у

Ьеи

О1и

Суз

50

55

60

РПе

Агд

ТЬг

РЬе

Η13

РЬе

Агд

11е

Н1з

Азр

Уа1

Уа1

Ьеи

Азр

Рго

Н1з

65

70

75

80

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

О1п

О1п

Агд

Ьуз

Ьуз

Ьеи

ТЬг

МеР

МеР

О1и

11е

Рго

85

90

95

Зег

11е

РЬе

11е

Рго

О1и

Азр

Тгр

Зег

РЬе

ТЬг

РЬе

Туг

О1и

О1у

Ьеи

100

105

110

Азп

Агд

Ηΐ3

Рго

Азр

Зег

11е

РЬе

Агд

Азр

Ьуз

ТЬг

Уа1

А1а

О1и

Ьеи

115

120

125

О1у

Суз

О1у

Азп

О1у

Тгр

11е

Зег

11е

А1а

Ьеи

А1а

О1и

Ьуз

Тгр

Суз

130

135

140

Рго

Зег

Ьуз

Уа1

Туг

О1у

Ьеи

Азр

11е

Азп

Рго

Агд

А1а

11е

Ьуз

11е

145

150

155

160

А1а

Тгр

11е

Азп

Ьеи

Туг

Ьеи

Азп

А1а

Ьеи

Азр

Азр

Азр

О1у

Ьеи

Рго

165

170

175

11е

Туг

Азр

А1а

О1и

О1у

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азр

Агд

Уа1

О1и

РЬе

Туг

180

185

190

О1и

Зег

Азр

Ьеи

Ьеи

Зег

Туг

Суз

Агд

Азр

Азп

Ьуз

11е

О1и

Ьеи

Азр

195

200

205

Агд

11е

Уа1

О1у

Суз

11е

Рго

О1п

11е

Ьеи

Азп

Рго

Азп

Рго

О1и

А1а

210

215

220

МеР

Зег

Ьуз

11е

Уа1

ТЬг

О1и

Азп

Зег

Зег

О1и

О1и

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

225

230

235

240

Ьеи

Зег

Азп

Туг

Суз

А1а

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

Уа1

О1и

Азр

О1п

РЬе

О1у

245

250

255

Ьеи

О1у

Ьеи

11е

А1а

Агд

А1а

Уа1

О1и

О1и

О1у

11е

Зег

Уа1

11е

Ьуз

260

265

270

- 78 029777

Рго Зег О1у Ьеи МеЁ Уа1 РНе Азп МеЁ О1у О1у Агд Рго О1у О1п О1у 275 280 285

Суз

<210> 16 <211> 6459 <212> ДНК <213> Ячмень, сорт ЗеЬазЁчап <400> 16 аЁддсЁдсдд сддсддддда сдЁддаддсд	ЁЁссЁддсдд	сдЁдссаддс	дЁсдддсдас	60
дсддсдЁасд	дсдссдссаа	ддссдЁдсЁд	дадсддсЁсд	аддсдссддс	сасдсдсдсс	120
даддссаддс	ддсЁссЁсдд	сдссдЁдсда	сддсдсЁЁсд	ссдссддсдд	сссддссдсд	180
дддсЁсдадЁ	дсЁЁссдсас	сЁЁссасЁЁс	сдсаЁссасд	асдЁсдЁссЁ	сдасссссас	240
сЁссааддЁЁ	дсссддсссс	ЁЁсссЁасас	асссдЁЁдЁс	дасссдсаЁс	ЁсЁЁЁсдссд	300
аЁсЁддссдЁ	саааадсасд	сддсЁЁддЁа	даааЁсаадс	сЁдсааЁссЁ	даЁссдЁЁЁа	360
ЁддсЁддсса	дЁсдаЁсадЁ	ааЁЁЁддсса	ЁаасЁддадЁ	аЁаассЁЁдд	ЁсЁсЁааЁсЁ	420
сЁассЁдасс	аЁаЁассдад	ЁЁддЁЁЁЁсЁ	ЁЁсЁЁсЁЁдЁ	ЁЁссдЁаЁЁЁ	дЁдЁадЁЁЁЁ	480
ёёсёёёёсёё	ЁсдадсаЁда	ЁдЁЁсЁЁЁда	аЁЁааЁдсдЁ	ассадасЁсс	адЁааЁЁсда	540
саЁЁЁЁдааЁ	ЁЁЁддсдадЁ	дЁЁсЁЁддаа	ЁЁЁаЁаасас	аасдаддсЁЁ	ЁдаЁсаадЁд	600
дЁЁЁаЁдЁад	аддадЁдЁЁЁ	ЁЁдЁЁсЁЁдЁ	дсассдЁаЁа	сааЁЁсЁсЁа	ЁЁЁсссааса	660
аЁЁЁЁдаЁдд	ссЁсЁаадса	ЁссЁдЁадЁс	аЁдЁсЁасЁд	ЁдЁаадсЁас	адаЁЁЁаЁЁс	720
аЁдЁсЁаЁдЁ	дЁаадсЁдса	ааЁддадада	ааадсЁаЁсЁ	аЁЁЁддЁЁдЁ	ЁссадсЁЁдЁ	780
ЁсЁЁЁддсад	аасааЁссЁд	сссаЁссЁаЁ	сассаЁаадЁ	аЁаааадсас	дасаааЁдад	840
Ёддддсаадс	аЁдсЁдссаа	дсЁааЁасас	дасаЁаадсЁ	асаЁаЁЁЁЁд	аддддсаЁдЁ	900
ЁаЁсЁЁЁЁЁЁ	ёёёсссёёсё	асЁсадЁЁЁс	ЁЁсЁЁЁддда	даасааЁссЁ	асЁсаассЁа	960
ЁааЁсаЁаад	ааЁаааадса	адасадаЁда	дЁдсЁдсада	сЁаЁЁддсаЁ	аЁаЁаасаас	1020
ЁаааЁаддас	аЁсЁдЁссдс	ЁаЁаЁсЁЁЁа	дЁЁааЁааЁЁ	дЁаЁаЁадас	дсадЁсЁЁЁд	1080
ЁдсЁддаааа	асЁдсаасЁа	ааЁаЁЁЁЁсЁ	ЁасаЁЁаЁаЁ	ддааЁсЁддд	ЁдЁдаЁаЁда	1140
сЁЁсЁЁЁдЁЁ	асдЁЁЁЁдЁд	ЁдсаЁааадс	аЁЁаасЁЁсЁ	дЁсЁЁЁадЁЁ	ддсдсадсдд	1200
Ёааааасасс	саЁЁдсЁЁаа	ЁаЁЁЁЁаЁЁЁ	дсЁЁЁссдЁа	дсЁЁдаЁааа	аЁЁЁсаасЁд	1260
сЁЁсЁаддаЁ	Ёссадсааад	ааадаадсЁа	асааЁдаЁдд	адаЁасссад	саЁЁЁЁсаЁЁ	1320
ссадаадасЁ	ддЁсаЁЁсас	ЁЁЁсЁасдад	ддЁсЁсаасс	ддсаЁссада	ЁЁссаЁсЁЁс	1380
адддаЁаада	садЁадсада	дсЁдддаЁдЁ	ддсааЁддЁЁ	ддаЁаЁссаЁ	ЁдсасЁЁдса	1440
даааадЁддЁ	дсссЁЁсдаа	ддЁЁддсасс	ЁсЁЁдЁЁссд	ЁадаЁаЁЁЁа	ЁсЁЁаЁсЁсд	1500

- 79 029777

бббдббдсаа	асабдддасс	бдсадаадбб	адасабббас	бсаддббасб	ббабабдааа	1560
сббббаддбд	бсбдссадба	дбсбдсбддб	ддбсбааббб	бсббддбаба	ссбдабдссд	1620
бсдадсабаб	бдсбббсааа	ббббдддсаа	ддсаббасса	ссасабаббд	бббсбасааб	1680
дсбдаасааб	бдсбсбссбб	бдаааддаад	ааааасаада	абдасабдса	ссббадбадб	1740
ббаадссаса	аабассадсд	аабсааабба	дбббдсадбс	адсббддсаб	бассббасбб	1800
дадссббддб	бдббсббббд	ааддбббабд	дбсбддабаб	ааасссаада	дсбабсаада	1860
ббдсабддаб	ааассбббас	ббдаабдсас	бадасдасда	бддбсбссса	абсбабдабд	1920
сддаддддаа	аасаббдсбб	дасададбсд	ааббсбабда	абсбдабсбб	сбббсббасб	1980
дбададабаа	саадабадаа	сббдабсдса	ббдббддабд	сабассасад	дбасддбсад	2040
дбббббасса	абббссбдбд	аабддддабб	абадбсдабс	адаасббдаб	саааабдссс	2100
ббаабабсбд	ссбббсадаб	бсббаасссс	аабссададд	саабдбсааа	даббдбаасб	2160
дааааббсаа	дбдаддадбб	сббдбасбсс	ббдадсаасб	асбдбдсбсб	ссаддбдадб	2220
бдадабсбаб	ббааасбсаа	дссаббсадб	ббассбдбба	сбааабддбб	асссабдбса	2280
дадбсбссаа	абсбббббсб	бббсбсааас	адсааадада	даадаааасб	бббаадббсб	2340
абссбдаааб	бдасбббаса	абдсббдббс	абаабсбдсб	басдааабаб	дсдбббдаас	2400
абббсбсббб	бссббдбадд	сабдбддбса	дассбббаба	баадаааабд	аадбббббдб	2460
адааабаабд	бабдсбббдб	асббабдаса	бддббссасс	адбабаабса	абббаадбсб	2520
аддбадббад	даассбадда	бддададсас	сдасадбдба	баабабабаб	абдбсдабад	2580
ддддббадса	дбссааабсс	ассбсаадбб	саассбаббд	сабаасбббб	ддбсббасаа	2640
ссбдбабдда	сааабдбдаб	садсасссса	дбсбббссба	бааааабдбс	бдсбддааба	2700
бддааббабб	аасадсддба	бббаббббба	сссбдбббаа	ббббббссбб	бдсбаааада	2760
абдабаабсс	ббабдссасд	аддббасабб	дбаббасбса	адбсаабабб	бдббасбабд	2820
дсбдаббдба	сдаббссадс	ббссддббдб	бааббббдбб	абдбббдбда	асбббдсбдс	2880
аббсадддбб	ббдббдадда	ссаабббддс	сбсдддббда	ббдсбсдддс	бдббдаадаа	2940
дддабабсбд	бдабааадсс	бадбддбсбб	абддбаббса	асабдддадд	ссддссадда	3000
сааддбдбсб	дбдадсдссб	абббсбасдс	сдбддабббс	дсабсаабаа	дсбсбддсаа	3060
асааааабба	бдсаддбадс	ааббсбббда	дбдасбадаб	дббаасбааб	сссадбдббб	3120
ббссабдсса	дсаасадсаб	бабабссбдд	ббададдааб	абдсбсббса	бдббдсасас	3180
саабсббсад	сбдддссбад	ааббббсабс	бассддсбба	сабббббаса	ббасадаасс	3240
аабббббдбб	даддабсабб	ассаасбадб	бдддбсбббд	саддсбдсбд	асасадасаб	3300
сбссдсббба	дббдаааббд	адааааабад	ссдасабсдс	ббсдадббсб	ббабддабсб	3360

- 80 029777

ЕдЕЕддддаЕ	садссЕдЕдЕ	дЕдсдсдсас	адсаЕдддса	ЕасаЕдаааЕ	сЕддЕддссд	3420
саЕЕЕсасаЕ	дсЕЕЕдЕсЕд	ЕдЕаЕадсЕд	ЕсаасЕЕсдс	садсссаасс	аддЕассЕаЕ	3480
асЕсЕсЕдаЕ	ЕадаЕсЕЕЕа	саасааЕааЕ	аЕадЕааЕдЕ	саддааЕааЕ	ааЕааЕЕЕдд	3540
адааЕЕЕсад	дЕдаадаааа	ЕаЕЕЕдадЕЕ	ссЕЕааадас	ддаЕЕссаЕд	аадЕсадсад	3600
сЕсссЕсдаЕ	ЕЕдЕссЕЕЕд	аЕдаЕдаЕЕс	ЕдЕЕдсЕдаЕ	дааааааЕЕс	сЕЕЕссЕадс	3660
аЕассЕадсЕ	адЕЕЕсЕЕдс	аададааЕаа	дЕсЕааЕссЕ	ЕдЕдадссЕс	садсЕддаЕд	3720
ЕЕЕаааЕЕЕс	сддааЕсЕЕд	ЕЕдсЕддаЕЕ	ЕаЕдаададЕ	Еассассаса	ЕсссаЕЕаас	3780
ЕссЕдаЕдЕа	адасЕЕддЕд	ЕсЕаЕЕдссЕ	асааЕЕаЕдЕ	ЕЕдсЕЕаЕЕа	даааЕЕсаЕа	3840
адаЕсаассЕ	аЕЕЕдаЕдсЕ	ЕсЕсасдЕаЕ	дсЕЕсаЕдЕд	асасЕЕссЕЕ	ЕЕссЕсЕддЕ	3900
дсассадааЕ	дЕЕдЕЕдЕдЕ	ЕсссаЕсссд	ЕдсЕдЕЕдса	аЕсдааааЕд	сЕсЕЕсддЕЕ	3960
дЕЕсЕсассЕ	ддасЕЕдсаа	ЕЕдЕЕдасда	асассЕаасс	адасасЕЕдс	ссаадсааЕд	4020
дЕЕаасаЕсЕ	ЕЕадсааЕЕд	аддЕасЕЕЕд	ассдаЕасЕс	сссЕсЕЕЕсЕ	ЕЕсЕдЕдЕЕЕ	4080
ддаасЕдЕдд	ааааЕасаЕд	ЕдЕЕсЕдЕда	адааааадЕЕ	аЕдсЕдасаа	дааЕЕЕсдаЕ	4140
дЕЕаЕЕдсса	ЕЕсЕЕсЕааа	ЕЕЕсаддааа	дЕаассаЕдс	ЕааадаЕаса	дЕаасЕдЕаа	4200
Есдаадсасс	асдссааЕса	даЕЕЕдсЕда	ЕЕдадЕЕдаЕ	саддааасЕд	аадссЕсадд	4260
ЕЕдЕЕдЕЕас	ЕддсаЕддсЕ	садЕЕЕдадд	сЕаЕсассад	ЕдсЕдсЕЕЕс	дЕдаасЕЕаЕ	4320
ЕаадЕдЕаас	дааадаЕдЕЕ	ддЕЕсссдаЕ	ЕаЕЕасЕада	ЕаЕЕЕсадаа	саЕсЕддааЕ	4380
ЕдЕсЕадЕсЕ	дссаадсЕса	ааЕддЕдЕаЕ	ЕдаааЕаЕсЕ	ЕдсЕдддаад	асссЕдссЕЕ	4440
сасаЕдсддс	ЕаЕаЕЕдЕдЕ	ддсЕЕадЕЕа	адааЕсаддЕ	дЕдЕдЕсааЕ	садссЕдаас	4500
ЕсЕадЕЕдаа	сЕдЕЕдЕдса	ЕасЕаЕаЕад	ааЕаЕсЕЕда	сЕЕЕЕаЕаЕд	ЕасЕЕЕадаа	4560
асасЕдЕЕЕа	ааЕдЕасЕса	ЕЕЕсЕЕЕЕЕд	сЕЕсаЕЕЕЕа	сЕЕдсаддЕЕ	ЕаЕЕсЕдаЕс	4620
ЕддаадЕЕдс	ЕЕЕЕдсЕаЕс	ЕсЕдаадаЕс	саасЕдЕЕЕа	ЕааддсаЕЕд	ЕсасааасЕа	4680
ЕЕдадсЕаЕЕ	ддааддасаЕ	асЕЕсЕдЕда	Есадссадса	сЕаЕЕаЕддЕ	ЕдЕсЕЕЕЕсс	4740
аЕдадсЕдсЕ	ддсаЕЕЕсаа	аЕЕддЕдасс	ддсаЕссаса	асаададдЕа	аасаЕддсЕЕ	4800
дссЕсЕЕсса	дЕЕсЕссаЕс	ЕсасЕсадЕЕ	сЕдЕссасаа	ддЕдссдааЕ	даЕсЕдЕЕса	4860
адЕддасасЕ	ссссЕсадса	сдддсаадсЕ	адЕссаЕдаа	ЕЕЕддаЕЕад	ЕЕсссЕсЕЕа	4920
дсЕдддЕасЕ	ЕсдаЕЕасас	сасааЕдадс	ЕссЕсаасдЕ	ддЕсЕддЕЕЕ	аЕдЕЕЕЕЕса	4980
ЕдЕЕЕЕсссЕ	сЕааЕдЕЕЕд	дЕЕдсЕсЕЕЕ	ЕЕсададада	ассЕдсадаа	дЕдаЕаЕсЕа	5040
аддадаЕдаЕ	адддЕЕЕЕса	адЕЕсадсЕа	ЕдЕссасссЕ	адааддадсЕ	дадЕЕЕЕЕсд	5100
ЕЕссЕддЕЕс	саЕддааЕсс	ддЕдЕсаЕас	аЕаЕддаЕсЕ	ддассдсадс	ЕЕсЕЕдссад	5160
ЕассЕЕсЕдс	адЕааасдсс	ЕссаЕЕЕЕсд	ааадЕЕЕЕдЕ	ЕсдЕсадаас	аЕсасЕдаЕЕ	5220
сЕдааассда	ЕдЕссдЕЕсс	адсаЕЕсадс	адсЕддЕдаа	адаЕадсЕаЕ	ддЕЕЕсЕсад	5280

- 81 029777

саддсддЕдс	ЕЕсЕдаааЕЕ	аЕаЕасддда	асассЕдЕсЕ	сдсдсЕсЕЕс	аасаадсЕЕд	5340
ЕЕсЕЕЕдсЕд	саЕдсаадаа	садддсассЕ	ЕдсЕЕЕЕссс	сЕЕдддаасс	аасдддсаЕЕ	5400
асдЕсаасдс	адсааадЕЕЕ	дЕдааЕдсаа	ссассЕЕдас	ЕаЕЕссаасд	ааддсадаЕЕ	5460
саддсЕЕсаа	даЕсдаасса	адЕдсЕсЕад	ссдасасасЕ	ададааддЕд	ЕсЕсадссдЕ	5520
дддЕсЕаЕаЕ	ЕЕсЕддсссс	асааЕсаасс	сЕасЕддсЕЕ	ссЕдЕасадЕ	дасдасдаЕа	5580
ЕадсададсЕ	дсЕЕЕсЕдЕс	ЕдЕдсдасаЕ	асддадссад	ддЕддЕдаЕа	даЕассЕссЕ	5640
ссЕсЕддЕсЕ	ддадЕЕссаа	дссассддсЕ	дсадссадЕд	дааЕЕЕддаа	адаЕдЕсЕЕЕ	5700
сЕааЕдЕсаа	дЕсЕЕсааад	сссЕсдЕЕсЕ	ссдЕЕдЕссЕ	дсЕсддадад	сЕдЕссЕЕЕд	5760
адсЕдассас	ддсЕдддсЕЕ	даЕЕЕсдддЕ	ЕЕсЕдаЕЕаЕ	дадсдасЕсд	ЕссЕЕддЕЕд	5820
асасаЕЕЕЕа	садЕЕЕссса	адсЕЕдадЕс	ддссасасад	сасдЕЕдаад	ЕасасдЕЕса	5880
ддаадсЕдЕЕ	дддЕсЕЕаад	аассадаадд	аЕсадсаЕЕЕ	сЕсЕдаЕсЕс	аЕссЕЕдадс	5940
адааддадас	дЕЕдаадааЕ	сдЕдссдасс	адЕЕдаЕсаа	ддЕаЕдссЕЕ	ЕЕдддаЕаЕс	6000
сЕдЕдЕЕЕад	дсЕсЕсЕдЕЕ	ЕЕсЕЕссссЕ	даЕсадсЕсЕ	ссдаЕссссЕ	ЕасаЕссЕЕа	6060
ддсЕааЕЕЕс	адЕасЕЕсаа	дЕЕЕдссасд	саЕЕЕсЕдас	аЕаЕЕсЕЕЕс	сЕсЕЕдЕЕЕЕ	6120
аЕЕЕЕссЕдЕ	даЕдЕдаЕда	асадасдсЕЕ	дададсЕдсд	дсЕдддасдс	ЕдЕдддсЕдс	6180
саЕддсддса	ЕсЕсдаЕдсЕ	Едсаааассд	ассдссЕаса	ЕЕддсаааЕс	дсЕсааддЕд	6240
дасддсЕЕЕд	адддсаадсЕ	ддасадссас	аасаЕдаддд	аадсссЕссЕ	даддЕссасс	6300
дддсЕдЕдса	ЕЕадсадсад	сдддЕддаса	ддддЕдссдд	асЕасЕдссд	сЕЕсадсЕЕЕ	6360
дсЕсЕддада	дсддсдасЕЕ	сдассдддсс	аЕддадЕдса	ЕсдсссддЕЕ	садддадсЕд	6420
дЕссЕЕддЕд	дсддЕдсЕаа	ддЕдааЕддЕ	адсаасЕад			6459

<210> 17

<211> 3267

<212> ДНК

<213> Ячмень, сорт БеЬазЕчап

<400> 17

аЕддсЕдсдд	сддсддддда	сдЕддаддсд	ЕЕссЕддсдд	сдЕдссаддс	дЕсдддсдас	60
дсддсдЕасд	дсдссдссаа	ддссдЕдсЕд	дадсддсЕсд	аддсдссддс	сасдсдсдсс	120
даддссаддс	ддсЕссЕсдд	сдссдЕдсда	сддсдсЕЕсд	ссдссддсдд	сссддссдсд	180
дддсЕсдадЕ	дсЕЕссдсас	сЕЕссасЕЕс	сдсаЕссасд	асдЕсдЕссЕ	сдасссссас	240
сЕссааддаЕ	Ессадсааад	ааадаадсЕа	асааЕдаЕдд	адаЕасссад	саЕЕЕЕсаЕЕ	300
ссадаадасЕ	ддЕсаЕЕсас	ЕЕЕсЕасдад	ддЕсЕсаасс	ддсаЕссада	ЕЕссаЕсЕЕс	360
адддаЕаада	садЕадсада	дсЕдддаЕдЕ	ддсааЕддЕЕ	ддаЕаЕссаЕ	ЕдсасЕЕдса	420
даааадЕддЕ	дсссЕЕсдаа	ддЕЕЕаЕддЕ	сЕддаЕаЕаа	асссаададс	ЕаЕсаадаЕЕ	480

- 82 029777

дсаРддаРаа	ассРРРасРР	дааРдсасРа	дасдасдаРд	дРсРсссааР	сРаРдаРдсд	540
даддддаааа	саРРдсРРда	сададРсдаа	РРсРаРдааР	сРдаРсРРсР	РРсРРасРдР	600
ададаРааса	адаРадаасР	РдаРсдсаРР	дРРддаРдса	РассасадаР	РсРРаасссс	660
ааРссададд	сааРдРсааа	даРРдРаасР	дааааРРсаа	дРдаддадРР	сРРдРасРсс	720
РРдадсаасР	асРдРдсРсР	ссадддРРРР	дРРдаддасс	ааРРРддссР	сдддРРдаРР	780
дсРсдддсРд	РРдаадаадд	даРаРсРдРд	аРааадссРа	дРддРсРРаР	ддРаРРсаас	840
аРдддаддсс	ддссаддаса	аддРдРсРдР	дадсдссРаР	РРсРасдссд	РддаРРРсдс	900
аРсааРаадс	РсРддсааас	аааааРРаРд	саддсРдсРд	асасадасаР	сРссдсРРРа	960
дРРдаааРРд	адаааааРад	ссдасаРсдс	РРсдадРРсР	РРаРддаРсР	РдРРддддаР	1020
садссРдРдР	дРдсдсдсас	адсаРдддса	РасаРдаааР	сРддРддссд	саРРРсасаР	1080
дсРРРдРсРд	РдРаРадсРд	РсаасРРсдс	садсссаасс	аддРдаадаа	ааРаРРРдад	1140
РРссРРааад	асддаРРсса	РдаадРсадс	адсРсссРсд	аРРРдРссРР	РдаРдаРдаР	1200
РсРдРРдсРд	аРдааааааР	РссРРРссРа	дсаРассРад	сРадРРРсРР	дсаададааР	1260
аадРсРааРс	сРРдРдадсс	РссадсРдда	РдРРРаааРР	РссддааРсР	РдРРдсРдда	1320
РРРаРдаада	дРРассасса	саРсссаРРа	асРссРдаРа	аРдРРдРРдР	дРРсссаРсс	1380
сдРдсРдРРд	сааРсдаааа	РдсРсРРсдд	РРдРРсРсас	сРддасРРдс	ааРРдРРдас	1440
даасассРаа	ссадасасРР	дсссаадсаа	РддРРаасаР	сРРРадсааР	РдаддааадР	1500
аассаРдсРа	аадаРасадР	аасРдРааРс	даадсассас	дссааРсада	РРРдсРдаРР	1560
дадРРдаРса	ддааасРдаа	дссРсаддРР	дРРдРРасРд	дсаРддсРса	дРРРдаддсР	1620
аРсассадРд	сРдсРРРсдР	даасРРаРРа	адРдРаасда	аадаРдРРдд	РРсссдаРРа	1680
РРасРадаРа	РРРсадааса	РсРддааРРд	РсРадРсРдс	саадсРсааа	РддРдРаРРд	1740
аааРаРсРРд	сРдддаадас	ссРдссРРса	саРдсддсРа	РаРРдРдРдд	сРРадРРаад	1800
ааРсаддРРР	аРРсРдаРсР	ддаадРРдсР	РРРдсРаРсР	сРдаадаРсс	аасРдРРРаР	1860
ааддсаРРдР	сасааасРаР	РдадсРаРРд	дааддасаРа	сРРсРдРдаР	садссадсас	1920
РаРРаРддРР	дРсРРРРсса	РдадсРдсРд	дсаРРРсааа	РРддРдассд	дсаРссасаа	1980
саадададад	аассРдсада	адРдаРаРсР	ааддадаРда	РадддРРРРс	аадРРсадсР	2040
аРдРссассс	Радааддадс	РдадРРРРРс	дРРссРддРР	ссаРддааРс	сддРдРсаРа	2100
саРаРддаРс	Рддассдсад	сРРсРРдсса	дРассРРсРд	садРааасдс	сРссаРРРРс	2160
дааадРРРРд	РРсдРсадаа	саРсасРдаР	РсРдааассд	аРдРссдРРс	садсаРРсад	2220
садсРддРда	аадаРадсРа	РддРРРсРса	дсаддсддРд	сРРсРдаааР	РаРаРасддд	2280
аасассРдРс	РсдсдсРсРР	саасаадсРР	дРРсРРРдсР	дсаРдсаада	асадддсасс	2340

- 83 029777

ЕЕдсЕЕЕЕсс	ссЕЕдддаас	саасдддсаЕ	ЕасдЕсаасд	садсааадЕЕ	ЕдЕдааЕдса	2400
ассассЕЕда	сЕаЕЕссаас	дааддсадаЕ	ЕсаддсЕЕса	адаЕсдаасс	аадЕдсЕсЕа	2460
дссдасасас	ЕададааддЕ	дЕсЕсадссд	ЕдддЕсЕаЕа	ЕЕЕсЕддссс	сасааЕсаас	2520
ссЕасЕддсЕ	ЕссЕдЕасад	ЕдасдасдаЕ	аЕадсададс	ЕдсЕЕЕсЕдЕ	сЕдЕдсдаса	2580
Еасддадсса	дддЕддЕдаЕ	адаЕассЕсс	ЕссЕсЕддЕс	ЕддадЕЕсса	адссассддс	2640
ЕдсадссадЕ	ддааЕЕЕдда	аадаЕдЕсЕЕ	ЕсЕааЕдЕса	адЕсЕЕсааа	дсссЕсдЕЕс	2700
ЕссдЕЕдЕсс	ЕдсЕсддада	дсЕдЕссЕЕЕ	дадсЕдасса	сддсЕдддсЕ	ЕдаЕЕЕсддд	2760
ЕЕЕсЕдаЕЕа	ЕдадсдасЕс	дЕссЕЕддЕЕ	дасасаЕЕЕЕ	асадЕЕЕссс	аадсЕЕдадЕ	2820
сддссасаса	дсасдЕЕдаа	дЕасасдЕЕс	аддаадсЕдЕ	ЕдддЕсЕЕаа	даассадаад	2880
даЕсадсаЕЕ	ЕсЕсЕдаЕсЕ	саЕссЕЕдад	садааддада	сдЕЕдаадаа	ЕсдЕдссдас	2940
садЕЕдаЕса	адасдсЕЕда	дадсЕдсддс	ЕдддасдсЕд	ЕдддсЕдсса	ЕддсддсаЕс	3000
ЕсдаЕдсЕЕд	саааассдас	сдссЕасаЕЕ	ддсаааЕсдс	ЕсааддЕдда	сддсЕЕЕдад	3060
ддсаадсЕдд	асадссасаа	саЕдадддаа	дсссЕссЕда	ддЕссассдд	дсЕдЕдсаЕЕ	3120
адсадсадсд	ддЕддасадд	ддЕдссддас	ЕасЕдссдсЕ	ЕсадсЕЕЕдс	ЕсЕддададс	3180
ддсдасЕЕсд	ассдддссаЕ	ддадЕдсаЕс	дсссддЕЕса	дддадсЕддЕ	ссЕЕддЕддс	3240
ддЕдсЕаадд	ЕдааЕддЕад	саасЕад				3267

<210> 18

<211> 1088

<212> Белок

<213> Ячмень, сорт ЗеЬазЕчап

<400> 18

МеЕ 1

А1а А1а

А1а

А1а О1у Азр 5

Уа1

О1и

А1а 10

РЬе

Ьеи А1а А1а

Суз 15

О1п

А1а

Зег

О1у

Азр

А1а

А1а

Туг

О1у

А1а

А1а

Ьуз

А1а

Уа1

Ьеи

О1и

Агд

20

25

30

Ьеи

О1и

А1а

Рго

А1а

ТЬг

Агд

А1а

О1и

А1а

Агд

Агд

Ьеи

Ьеи

О1у

А1а

35

40

45

Уа1

Агд

Агд

Агд

РЬе

А1а

А1а

О1у

О1у

Рго

А1а

А1а

О1у

Ьеи

О1и

Суз

50

55

60

РЬе

Агд

ТЬг

РЬе

Нчз

РЬе

Агд

11е

Нчз

Азр

Уа1

Уа1

Ьеи

Азр

Рго

Нчз

65

70

75

80

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

О1п

О1п

Агд

Ьуз

Ьуз

Ьеи

ТЬг

МеЕ

МеЕ

О1и

11е

Рго

85

90

95

- 84 029777

Зег

11е

РЬе

11е 100

Рго

О1и

Азр

Тгр

Зег 105

РЬе

ТЬг

РЬе

Туг

О1и 110

О1у

Ьеи

Азп

Агд

Нгз

Рго

Азр

Зег

11е

РЬе

Агд

Азр

Ьуз

ТЬг

Уа1

А1а

О1и

Ьеи

115

120

125

О1у

Суз

О1у

Азп

О1у

Тгр

11е

Зег

11е

А1а

Ьеи

А1а

О1и

Ьуз

Тгр

Суз

130

135

140

Рго

Зег

Ьуз

Уа1

Туг

О1у

Ьеи

Азр

11е

Азп

Рго

Агд

Рго

11е

Ьуз

11е

145

150

155

160

А1а

Тгр

11е

Азп

Ьеи

Туг

Ьеи

Азп

А1а

Ьеи

Азр

Азр

Азр

О1у

Ьеи

Рго

165

170

175

11е

Туг

Азр

А1а

О1и

О1у

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азр

Агд

Уа1

О1и

РЬе

Туг

180

185

190

О1и

Зег

Азр

Ьеи

Ьеи

Зег

Туг

Суз

Агд

Азр

Азп

Ьуз

11е

О1и

Ьеи

Азр

195

200

205

Агд

11е

Уа1

О1у

Суз

11е

Рго

О1п

11е

Ьеи

Азп

Рго

Азп

Рго

О1и

А1а

210

215

220

МеЬ

Зег

Ьуз

11е

Уа1

ТЬг

О1и

Азп

Зег

Зег

О1и

О1и

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

225

230

235

240

Ьеи

Зег

Азп

Туг

Суз

А1а

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

Уа1

О1и

Азр

О1п

РЬе

О1у

245

250

255

Ьеи

О1у

Ьеи

11е

А1а

Агд

А1а

Уа1

О1и

О1и

О1у

11е

Зег

Уа1

11е

Ьуз

260

265

270

Рго

Зег

О1у

Ьеи

МеЬ

Уа1

РЬе

Азп

МеЬ

О1у

О1у

Агд

Рго

О1у

О1п

О1у

275

280

285

Уа1

Суз

О1и

Агд

Ьеи

РЬе

Ьеи

Агд

Агд

О1у

РЬе

Агд

11е

Азп

Ьуз

Ьеи

290

295

300

Тгр

О1п

ТЬг

Ьуз

11е

МеЬ

О1п

А1а

А1а

Азр

ТЬг

Азр

11е

Зег

А1а

Ьеи

305

310

315

320

Уа1

О1и

11е

О1и

Ьуз

Азп

Зег

Агд

Нгз

Агд

РЬе

О1и

РЬе

РЬе

МеЬ

Азр

325

330

335

Ьеи

Уа1

О1у

Азр

О1п

Рго

Уа1

Суз

А1а

Агд

ТЬг

А1а

Тгр

А1а

Туг

МеЬ

340

345

350

- 85 029777

Ьуз

Зег

О1у 355

О1у

Агд

11е

Зег

Шз 360

А1а

Ьеи

Зег

Уа1

Туг 365

Зег

Суз

О1п

Ьеи

Агд

О1п

Рго

Азп

О1п

Уа1

Ьуз

Ьуз

11е

РЬе

О1и

РЬе

Ьеи

Ьуз

Азр

370

375

380

О1у

РЬе

Шз

О1и

Уа1

Зег

Зег

Зег

Ьеи

Азр

Ьеи

Зег

РЬе

Азр

Азр

Азр

385

390

395

400

Зег

Уа1

А1а

Азр

О1и

Ьуз

11е

Рго

РЬе

Ьеи

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Зег

РЬе

405

410

415

Ьеи

О1п

О1и

Азп

Ьуз

Зег

Азп

Рго

Суз

О1и

Рго

Рго

А1а

О1у

Суз

Ьеи

420

425

430

Азп

РЬе

Агд

Азп

Ьеи

Уа1

А1а

О1у

РЬе

Меб

Ьуз

Зег

Туг

Шз

Шз

11е

435

440

445

Рго

Ьеи

ТЬг

Рго

Азр

Азп

Уа1

Уа1

Уа1

РЬе

Рго

Зег

Агд

А1а

Уа1

А1а

450

455

460

11е

О1и

Азп

А1а

Ьеи

Агд

Ьеи

РЬе

Зег

Рго

О1у

Ьеи

А1а

11е

Уа1

Азр

465

470

475

480

О1и

Шз

Ьеи

ТЬг

Агд

Шз

Ьеи

Рго

Ьуз

О1п

Тгр

Ьеи

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

485

490

495

11е

О1и

О1и

Зег

Азп

Шз

А1а

Ьуз

Азр

ТЬг

Уа1

ТЬг

Уа1

11е

О1и

А1а

500

505

510

Рго

Агд

О1п

Зег

Азр

Ьеи

Ьеи

11е

О1и

Ьеи

11е

Агд

Ьуз

Ьеи

Ьуз

Рго

515

520

525

О1п

Уа1

Уа1

Уа1

ТЬг

О1у

Меб

А1а

О1п

РЬе

О1и

А1а

11е

ТЬг

Зег

А1а

530

535

540

А1а

РЬе

Уа1

Азп

Ьеи

Ьеи

Зег

Уа1

ТЬг

Ьуз

Азр

Уа1

О1у

Зег

Агд

Ьеи

545

550

555

560

Ьеи

Ьеи

Азр

11е

Зег

О1и

Шз

Ьеи

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Рго

Зег

Зег

565

570

575

Азп

О1у

Уа1

Ьеи

Ьуз

Туг

Ьеи

А1а

О1у

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Рго

Зег

Шз

А1а

580

585

590

А1а

11е

Ьеи

Суз

О1у

Ьеи

Уа1

Ьуз

Азп

О1п

Уа1

Туг

Зег

Азр

Ьеи

О1и

- 86 029777

595

600

605

Уа1

А1а

РЬе

А1а

11е

Бег

О1и

Азр

Рго

ТЬг

Уа1

Туг

Ьуз

А1а

Ьеи

Бег

610

615

620

О1п

ТЬг

11е

О1и

Ьеи

Ьеи

О1и

О1у

Н1з

ТЬг

Бег

Уа1

11е

Бег

О1п

Н1з

625

630

635

640

Туг

Туг

О1у

Суз

Ьеи

РЬе

Н1з

О1и

Ьеи

Ьеи

А1а

РЬе

О1п

11е

О1у

Азр

645

650

655

Агд

Нтз

Рго

О1п

О1п

О1и

Агд

О1и

Рго

А1а

О1и

Уа1

11е

Бег

Ьуз

О1и

660

665

670

МеЕ

11е

О1у

РЬе

Бег

Бег

Бег

А1а

МеЕ

Бег

ТЬг

Ьеи

О1и

О1у

А1а

О1и

675

680

685

РЬе

РЬе

Уа1

Рго

О1у

Бег

МеЕ

О1и

Бег

О1у

Уа1

11е

Н1з

МеЕ

Азр

Ьеи

690

695

700

Азр

Агд

Бег

РЬе

Ьеи

Рго

Уа1

Рго

Бег

А1а

Уа1

Азп

А1а

Бег

11е

РЬе

705

710

715

720

О1и

Бег

РЬе

Уа1

Агд

О1п

Азп

11е

ТЬг

Азр

Бег

О1и

ТЬг

Азр

Уа1

Агд

725

730

735

Бег

Бег

11е

О1п

О1п

Ьеи

Уа1

Ьуз

Азр

Бег

Туг

О1у

РЬе

Бег

А1а

О1у

740

745

750

О1у

А1а

Бег

О1и

11е

11е

Туг

О1у

Азп

ТЬг

Суз

Ьеи

А1а

Ьеи

РЬе

Азп

755

760

765

Ьуз

Ьеи

Уа1

Ьеи

Суз

Суз

МеЕ

О1п

О1и

О1п

О1у

ТЬг

Ьеи

Ьеи

РЬе

Рго

770

775

780

Ьеи

О1у

ТЬг

Азп

О1у

Н1з

Туг

Уа1

Азп

А1а

А1а

Ьуз

РЬе

Уа1

Азп

А1а

785

790

795

800

ТЬг

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е

Рго

ТЬг

Ьуз

А1а

Азр

Бег

О1у

РЬе

Ьуз

11е

О1и

805

810

815

Рго

Бег

А1а

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Ьеи

О1и

Ьуз

Уа1

Бег

О1п

Рго

Тгр

Уа1

820

825

830

Туг

11е

Бег

О1у

Рго

ТЬг

11е

Азп

Рго

ТЬг

О1у

РЬе

Ьеи

Туг

Бег

Азр

835

840

845

- 87 029777

Азр Азр 850

11е А1а О1и

Ьеи

Ьеи 855

Зег

Уа1

Суз

А1а

ТЪг 860

Туг

О1у

А1а

Агд

Уа1

Уа1

11е

Азр

ТЪг

Зег

Зег

Зег

О1у

Ьеи

О1и

РЪе

О1п

А1а

ТЪг

О1у

865

870

875

880

Суз

Зег

О1п

Тгр

Азп

Ьеи

О1и

Агд

Суз

Ьеи

Зег

Азп

Уа1

Ьуз

Зег

Зег

885

890

895

Ьуз

Рго

Зег

РЪе

Зег

Уа1

Уа1

Ьеи

Ьеи

О1у

О1и

Ьеи

Зег

РЪе

О1и

Ьеи

900

905

910

ТЪг

ТЪг

А1а

О1у

Ьеи

Азр

РЪе

О1у

РЪе

Ьеи

11е

Меб

Зег

Азр

Зег

Зег

915

920

925

Ьеи

Уа1

Азр

ТЪг

РЪе

Туг

Зег

РЪе

Рго

Зег

Ьеи

Зег

Агд

Рго

Нгз

Зег

930

935

940

ТЪг

Ьеи

Ьуз

Туг

ТЪг

РЪе

Агд

Ьуз

Ьеи

Ьеи

О1у

Ьеи

Ьуз

Азп

О1п

Ьуз

945

950

955

960

Азр

О1п

Нгз

РЪе

Зег

Азр

Ьеи

11е

Ьеи

О1и

О1п

Ьуз

О1и

ТЪг

Ьеи

Ьуз

965

970

975

Азп

Агд

А1а

Азр

О1п

Ьеи

11е

Ьуз

Меб

Ьеи

О1и

Зег

Суз

О1у

Тгр

Азр

980

985

990

А1а Уа1 О1у Суз Нгз О1у О1у 11е Зег Меб Ьеи А1а Ьуз Рго ТЪг А1а 995 1000 1005

Туг

11е 1010

О1у

Ьуз

Зег Ьеи Ьуз 1015

Уа1

Азр О1у

РЪе

О1и 1020

О1у

Ьуз

Ьеи

Азр

Зег

Нгз

Азп

Меб

Агд

О1и

А1а

Ьеи

Ьеи

Агд

Зег

ТЪг

О1у

Ьеи

1025

1030

1035

Суз

11е

Зег

Зег

Зег

О1у

Тгр

ТЪг

О1у

Уа1

Рго

Азр

Туг

Суз

Агд

1040

1045

1050

РЪе

Зег

РЪе

А1а

Ьеи

О1и

Зег

О1у

Азр

РЪе

Азр

Агд

А1а

Меб

О1и

1055

1060

1065

Суз

11е

А1а

Агд

РЪе

Агд

О1и

Ьеи

Уа1

Ьеи

О1у

О1у

О1у

А1а

Ьуз

1070

1075

1080

Уа1 Азп О1у Зег Азп 1085

- 88 029777

<210> 19 <211> 6459 <212> ДНК <213> Ячмень, мутант	14018
<400> 19 аЬддсЬдсдд	сддсддддда	сдЬддаддсд	ЬЬссЬддсдд	сдЬдссаддс	дЬсдддсдас	60
дсддсдЬасд	дсдссдссаа	ддссдЬдсЬд	дадсддсЬсд	аддсдссддс	сасдсдсдсс	120
даддссаддс	ддсЬссЬсдд	сдссдЬдсда	сддсдсЬЬсд	ссдссддсдд	сссддссдсд	180
дддсЬсдадЬ	дсЬЬссдсас	сЬЬссасЬЬс	сдсаЬссасд	асдЬсдЬссЬ	сдасссссас	240
сЬссааддЬЬ	дсссддсссс	ЬЬсссЬасас	асссдЬЬдЬс	дасссдсаЬс	ЬсЬЬЬсдссд	300
аЬсЬддссдЬ	саааадсасд	сддсЬЬддЬа	даааЬсаадс	сЬдсааЬссЬ	даЬссдЬЬЬа	360
ЬддсЬддсса	дЬсдаЬсадЬ	ааЬЬЬддсса	ЬаасЬддадЬ	аЬаассЬЬдд	ЬсЬсЬааЬсЬ	420
сЬассЬдасс	аЬаЬассдад	ЬЬддЬЬЬЬсЬ	ЬЬсЬЬсЬЬдЬ	ЬЬссдЬаЬЬЬ	дЬдЬадЬЬЬЬ	480
ЬЬсЬЬЬЬсЬЬ	ЬсдадсаЬда	ЬдЬЬсЬЬЬда	аЬЬааЬдсдЬ	ассадасЬсс	адЬааЬЬсда	540
саЬЬЬЬдааЬ	ЬЬЬддсдадЬ	дЬЬсЬЬддаа	ЬЬЬаЬаасас	аасдаддсЬЬ	ЬдаЬсаадЬд	600
дЬЬЬаЬдЬад	аддадЬдЬЬЬ	ЬЬдЬЬсЬЬдЬ	дсассдЬаЬа	сааЬЬсЬсЬа	ЬЬЬсссааса	660
аЬЬЬЬдаЬдд	ссЬсЬаадса	ЬссЬдЬадЬс	аЬдЬсЬасЬд	ЬдЬаадсЬас	адаЬЬЬаЬЬс	720
аЬдЬсЬаЬдЬ	дЬаадсЬдса	ааЬддадада	ааадсЬаЬсЬ	аЬЬЬддЬЬдЬ	ЬссадсЬЬдЬ	780
ЬсЬЬЬддсад	аасааЬссЬд	сссаЬссЬаЬ	сассаЬаадЬ	аЬаааадсас	дасаааЬдад	840
Ьддддсаадс	аЬдсЬдссаа	дсЬааЬасас	дасаЬаадсЬ	асаЬаЬЬЬЬд	аддддсаЬдЬ	900
ЬаЬсЬЬЬЬЬЬ	ЬЬЬсссЬЬсЬ	асЬсадЬЬЬс	ЬЬсЬЬЬддда	даасааЬссЬ	асЬсаассЬа	960
ЬааЬсаЬаад	ааЬаааадса	адасадаЬда	дЬдсЬдсада	сЬаЬЬддсаЬ	аЬаЬаасаас	1020
ЬаааЬаддас	аЬсЬдЬссдс	ЬаЬаЬсЬЬЬа	дЬЬааЬааЬЬ	дЬаЬаЬадас	дсадЬсЬЬЬд	1080
ЬдсЬддаааа	асЬдсаасЬа	ааЬаЬЬЬЬсЬ	ЬасаЬЬаЬаЬ	ддааЬсЬддд	ЬдЬдаЬаЬда	1140
сЬЬсЬЬЬдЬЬ	асдЬЬЬЬдЬд	ЬдсаЬааадс	аЬЬаасЬЬсЬ	дЬсЬЬЬадЬЬ	ддсдсадсдд	1200
Ьааааасасс	саЬЬдсЬЬаа	ЬаЬЬЬЬаЬЬЬ	дсЬЬЬссдЬа	дсЬЬдаЬааа	аЬЬЬсаасЬд	1260
сЬЬсЬаддаЬ	Ьссадсааад	ааадаадсЬа	асааЬдаЬдд	адаЬасссад	саЬЬЬЬсаЬЬ	1320
ссадаадасЬ	ддЬсаЬЬсас	ЬЬЬсЬасдад	ддЬсЬсаасс	ддсаЬссада	ЬЬссаЬсЬЬс	1380
адддаЬаада	садЬадсада	дсЬдддаЬдЬ	ддсааЬддЬЬ	ддаЬаЬссаЬ	ЬдсасЬЬдса	1440
даааадЬддЬ	дсссЬЬсдаа	даЬЬддсасс	ЬсЬЬдЬЬссд	ЬадаЬаЬЬЬа	ЬсЬЬаЬсЬсд	1500
ЬЬЬдЬЬдсаа	асаЬдддасс	ЬдсадаадЬЬ	адасаЬЬЬас	ЬсаддЬЬасЬ	ЬЬаЬаЬдааа	1560
сЬЬЬЬаддЬд	ЬсЬдссадЬа	дЬсЬдсЬддЬ	ддЬсЬааЬЬЬ	ЬсЬЬддЬаЬа	ссЬдаЬдссд	1620
ЬсдадсаЬаЬ	ЬдсЬЬЬсааа	ЬЬЬЬдддсаа	ддсаЬЬасса	ссасаЬаЬЬд	ЬЬЬсЬасааЬ	1680

- 89 029777

дсЬдаасааЬ	ЬдсЁсЬссЬЁ	Ьдаааддаад	ааааасаада	аЬдасаЬдса	ссЁЬадЬадЬ	1740
ЬЬаадссаса	ааЬассадсд	ааЬсаааЬЬа	дЁЬЬдсадЬс	адсЬЬддсаЬ	ЬассЁЁасЁЬ	1800
дадссЬЬддЬ	ЁдЬЁсЁЁЁЬд	ааддЁЬЬаЬд	дЁсЬддаЬаЬ	ааасссаада	дсЬаЬсаада	1860
ЁЬдсаЬддаЬ	ааассЬЬЬас	ЬЬдааЬдсас	Ьадасдасда	ЬддЬсЬссса	аЁсЬаЬдаЬд	1920
сддаддддаа	аасаЬЁдсЬЬ	дасададЬсд	ааЁЬсЬаЬда	аЬсЁдаЁсЁЬ	сЁЬЁсЁЁасЬ	1980
дЬададаЬаа	саадаЬадаа	сЬЬдаЬсдса	ЁЁдЬЁддаЬд	саЬассасад	дЬасддЬсад	2040
дЬЁЁЁЬасса	аЁЁЬссЁдЬд	ааЬддддаЬЬ	аЬадЬсдаЬс	адаасЬЬдаЬ	сааааЬдссс	2100
ЁЁааЬаЁсЬд	ссЁЬЬсадаЬ	ЬсЬЬаасссс	ааЬссададд	сааЬдЬсааа	даЁЬдЬаасЬ	2160
дааааЬЬсаа	дЬдаддадЬЬ	сЁЬдЬасЬсс	ЬЬдадсаасЬ	асЁдЬдсЬсЬ	ссаддЬдадЬ	2220
ЁдадаЬсЬаЬ	ЬЬааасЬсаа	дссаЬЬсадЬ	ЁЁассЬдЁЬа	сЁаааЬддЬЬ	асссаЬдЬса	2280
дадЬсЬссаа	аЬсЁЁЁЁЁсЬ	ЁЬЬсЬсааас	адсааадада	даадаааасЬ	ЬЁЁаадЁЁсЬ	2340
аЬссЬдаааЬ	ЁдасЬЬЬаса	аЬдсЁЁдЁЬс	аЁааЬсЬдсЬ	ЬасдаааЬаЬ	дсдЬЬЬдаас	2400
аЬЁЁсЁсЁЁЬ	ЁссЬЬдЬадд	саЬдЬддЬса	дассЁЬЬаЬа	ЬаадааааЬд	аадЁЬЁЁЁдЬ	2460
адаааЬааЬд	ЁаЬдсЁЁЁдЬ	асЬЬаЬдаса	ЬддЬЬссасс	адЬаЬааЬса	аЬЁЁаадЁсЬ	2520
аддЬадЬЬад	даассЬадда	Ьддададсас	сдасадЬдЬа	ЁааЁаЬаЁаЬ	аЬдЬсдаЬад	2580
ддддььадса	дЬссаааЬсс	ассЬсаадЬЬ	саассЬаЬЬд	саЬаасЁЁЁЬ	ддЬсЬЬасаа	2640
ссЬдЬаЬдда	саааЬдЬдаЬ	садсасссса	дЬсЁЁЁссЬа	ЬаааааЬдЬс	ЬдсЬддааЬа	2700
ЁддааЁЬаЬЁ	аасадсддЬа	ЬЁЁаЁЁЁЁЬа	сссЁдЬЬЬаа	ЬЁЁЁЁЁССЁЬ	ЬдсЬаааада	2760
аЬдаЬааЬсс	ЬЬаЬдссасд	аддЁЬасаЬЬ	дЁаЬЬасЬса	адЁсааЬаЬЬ	ЁдЁЬасЁаЬд	2820
дсЁдаЬЬдЬа	сдаЬЬссадс	ЁЁссддЬЁдЬ	ЁааЬЁЁЁдЁЬ	аЁдЁЬЁдЬда	асЁЬЬдсЬдс	2880
аЁЬсадддЬЬ	ЁЬдЬЬдадда	ссааЬЬЬддс	сЬсдддЬЬда	ЬЬдсЬсдддс	ЬдЬЬдаадаа	2940
дддаЬаЬсЬд	ЬдаЬааадсс	ЁадЁддЬсЁЬ	аЁддЬаЬЬса	асаЬдддадд	ссддссадда	3000
сааддЬдЬсЬ	дЬдадсдссЬ	аЬЁЬсЬасдс	сдЬддаЬЬЬс	дсаЬсааЬаа	дсЬсЬддсаа	3060
асаааааЬЬа	ЬдсаддЬадс	ааЬЁсЁЁЬда	дЬдасЬадаЬ	дЁЬаасЬааЬ	сссадЁдЬЬЬ	3120
ЬЬссаЬдсса	дсаасадсаЬ	ЁаЬаЬссЬдд	ЬЬададдааЬ	аЬдсЁсЬЬса	ЬдЬЬдсасас	3180
сааЬсЬЬсад	сЬдддссЬад	ааЁЁЬЁсаЬс	ЬассддсЬЬа	саЁЁЬЁЬаса	ЬЬасадаасс	3240
ааЬЁЁЁЁдЁЬ	даддаЬсаЬЬ	ассаасЬадЬ	ЬдддЬсЬЬЬд	саддсЬдсЬд	асасадасаЬ	3300
сЁссдсЬЬЬа	дЁЬдаааЬЬд	адаааааЬад	ссдасаЬсдс	ЬЁсдадЁЁсЬ	ЁЁаЬддаЁсЬ	3360
ЁдЬЬддддаЬ	садссЬдЬдЬ	дЬдсдсдсас	адсаЬдддса	ЬасаЬдаааЬ	сЬддЬддссд	3420
саЁЬЬсасаЬ	дсЁЁЬдЁсЬд	ЁдЬаЬадсЬд	ЬсаасЬЬсдс	садсссаасс	аддЬассЬаЬ	3480
асЁсЬсЬдаЬ	ЁадаЁсЬЁЬа	саасааЬааЬ	аЁадЬааЬдЬ	саддааЬааЬ	ааЁааЬЬЬдд	3540
адааЬЬЬсад	дЬдаадаааа	ЁаЬЁЁдадЁЬ	ссЬЬааадас	ддаЬЬссаЬд	аадЬсадсад	3600

- 90 029777

сбсссбсдаб	ббдбссбббд	абдабдаббс	бдббдсбдаб	дааааааббс	сбббссбадс	3660
абассбадсб	адбббсббдс	аададаабаа	дбсбаабссб	бдбдадссбс	садсбддабд	3720
бббааабббс	сддаабсббд	ббдсбддабб	бабдаададб	бассассаса	бсссаббаас	3780
бссбдабдба	адасббддбд	бсбаббдссб	асааббабдб	ббдсббабба	даааббсаба	3840
адабсаассб	абббдабдсб	бсбсасдбаб	дсббсабдбд	асасббссбб	ббссбсбддб	3900
дсассадааб	дббдббдбдб	бсссабсссд	бдсбдббдса	абсдаааабд	сбсббсддбб	3960
дббсбсассб	ддасббдсаа	ббдббдасда	асассбаасс	адасасббдс	ссаадсаабд	4020
дббаасабсб	ббадсааббд	аддбасбббд	ассдабасбс	сссбсбббсб	ббсбдбдббб	4080
ддаасбдбдд	аааабасабд	бдббсбдбда	адааааадбб	абдсбдасаа	даабббсдаб	4140
дббаббдсса	ббсббсбааа	бббсаддааа	дбаассабдс	бааадабаса	дбаасбдбаа	4200
бсдаадсасс	асдссаабса	дабббдсбда	ббдадббдаб	саддааасбд	аадссбсадд	4260
ббдббдббас	бддсабддсб	садбббдадд	сбабсассад	бдсбдсбббс	дбдаасббаб	4320
баадбдбаас	дааадабдбб	ддббсссдаб	баббасбада	бабббсадаа	сабсбддааб	4380
бдбсбадбсб	дссаадсбса	аабддбдбаб	бдааабабсб	бдсбдддаад	асссбдссбб	4440
сасабдсддс	бабаббдбдб	ддсббадбба	адаабсаддб	дбдбдбсааб	садссбдаас	4500
бсбадббдаа	сбдббдбдса	басбабабад	аабабсббда	сббббабабд	басбббадаа	4560
асасбдббба	аабдбасбса	бббсбббббд	сббсабббба	сббдсаддбб	баббсбдабс	4620
бддаадббдс	ббббдсбабс	бсбдаадабс	саасбдббба	бааддсаббд	бсасааасба	4680
ббдадсбабб	ддааддасаб	асббсбдбда	бсадссадса	сбаббабддб	бдбсббббсс	4740
абдадсбдсб	ддсабббсаа	аббддбдасс	ддсабссаса	асаададдба	аасабддсбб	4800
дссбсббсса	дббсбссабс	бсасбсадбб	сбдбссасаа	ддбдссдааб	дабсбдббса	4860
адбддасасб	ссссбсадса	сдддсаадсб	адбссабдаа	бббддаббад	ббсссбсбба	4920
дсбдддбасб	бсдаббасас	сасаабдадс	бссбсаасдб	ддбсбддббб	абдбббббса	4980
бдббббсссб	сбаабдбббд	дббдсбсббб	ббсададада	ассбдсадаа	дбдабабсба	5040
аддадабдаб	адддббббса	адббсадсба	бдбссасссб	адааддадсб	дадбббббсд	5100
ббссбддббс	сабддаабсс	ддбдбсабас	абабддабсб	ддассдсадс	ббсббдссад	5160
бассббсбдс	адбааасдсс	бссаббббсд	ааадббббдб	бсдбсадаас	абсасбдабб	5220
сбдааассда	бдбссдббсс	адсаббсадс	адсбддбдаа	адабадсбаб	ддбббсбсад	5280
саддсддбдс	ббсбдааабб	абабасддда	асассбдбсб	сдсдсбсббс	аасаадсббд	5340
ббсбббдсбд	сабдсаадаа	садддсассб	бдсббббссс	сббдддаасс	аасдддсабб	5400
асдбсаасдс	адсааадббб	дбдаабдсаа	ссассббдас	баббссаасд	ааддсадабб	5460

- 91 029777

саддсббсаа	дабсдаасса	адбдсбсбад	ссдасасасб	ададааддбд	бсбсадссдб	5520
дддбсбабаб	ббсбддсссс	асаабсаасс	сбасбддсбб	ссбдбасадб	дасдасдаба	5580
бадсададсб	дсбббсбдбс	бдбдсдасаб	асддадссад	ддбддбдаба	дабассбссб	5640
ссбсбддбсб	ддадббссаа	дссассддсб	дсадссадбд	даабббддаа	адабдбсббб	5700
сбаабдбсаа	дбсббсааад	сссбсдббсб	ссдббдбссб	дсбсддадад	сбдбссбббд	5760
адсбдассас	ддсбдддсбб	дабббсдддб	ббсбдаббаб	дадсдасбсд	бссббддббд	5820
асасабббба	садбббссса	адсббдадбс	ддссасасад	сасдббдаад	басасдббса	5880
ддаадсбдбб	дддбсббаад	аассадаадд	абсадсаббб	сбсбдабсбс	абссббдадс	5940
адааддадас	дббдаадааб	сдбдссдасс	адббдабсаа	ддбабдссбб	ббдддабабс	6000
сбдбдбббад	дсбсбсбдбб	ббсббссссб	дабсадсбсб	ссдабссссб	басабссбба	6060
ддсбаабббс	адбасббсаа	дбббдссасд	сабббсбдас	абаббсбббс	сбсббдбббб	6120
аббббссбдб	дабдбдабда	асадасдсбб	дададсбдсд	дсбдддасдс	бдбдддсбдс	6180
сабддсддса	бсбсдабдсб	бдсаааассд	ассдссбаса	ббддсааабс	дсбсааддбд	6240
дасддсбббд	адддсаадсб	ддасадссас	аасабдаддд	аадсссбссб	даддбссасс	6300
дддсбдбдса	ббадсадсад	сдддбддаса	ддддбдссдд	асбасбдссд	сббсадсббб	6360
дсбсбддада	дсддсдасбб	сдассдддсс	абддадбдса	бсдсссддбб	садддадсбд	6420
дбссббддбд	дсддбдсбаа	ддбдаабддб	адсаасбад			6459

<210> 20

<211> 688

<212> ДНК

<213> Ячмень, сорт БеЬазбгап

<400> 20

аддаббссад	сааадааада	адсбаасааб	дабддадаба	сссадсаббб	бсаббссада	60
адасбддбса	ббсасбббсб	асдадддбсб	саассддсаб	ссадаббсса	бсббсаддда	120
баадасадба	дсададсбдд	дабдбддсаа	бддббддаба	бссаббдсас	ббдсадаааа	180
дбддбдсссб	бсдааддббб	абддбсбдда	бабааассса	ададсбабса	адаббдсабд	240
дабааассбб	басббдаабд	сасбадасда	сдабддбсбс	ссаабсбабд	абдсддаддд	300
даааасаббд	сббдасадад	бсдааббсба	бдаабсбдаб	сббсбббсбб	асбдбадада	360
баасаадаба	даасббдабс	дсаббдббдд	абдсабасса	садаббсбба	ассссаабсс	420
ададдсаабд	бсааадаббд	баасбдаааа	ббсаадбдад	дадббсббдб	асбссббдад	480
саасбасбдб	дсбсбссадд	дббббдббда	ддассааббб	ддссбсдддб	бдаббдсбсд	540
ддсбдббдаа	даадддабаб	сбдбдабааа	дссбадбддб	сббабддбаб	бсаасабддд	600
аддссддсса	ддасааддбд	бсбдбдадсд	ссбабббсбб	сдссдбддаб	ббсдсабсаа	660

- 92 029777

баадсбсбдд	сааасааааа	ббабдсад				688
<210> 21 <211> 1050 <212> ДНК <213> Ячмень, мутант	14018
<400> 21 аддаббссад	сааадааада	адсбаасааб	дабддадаба	сссадсаббб	бсаббссада	60
адасбддбса	ббсасбббсб	асдадддбсб	саассддсаб	ссадаббсса	бсббсаддда	120
баадасадба	дсададсбдд	дабдбддсаа	бддббддаба	бссаббдсас	ббдсадаааа	180
дбддбдсссб	бсдаадаббд	дсассбсббд	ббссдбадаб	абббабсбба	бсбсдбббдб	240
бдсааасабд	ддассбдсад	аадббадаса	бббасбсадд	ббасбббаба	бдааасбббб	300
аддбдбсбдс	садбадбсбд	сбддбддбсб	ааббббсббд	дбабассбда	бдссдбсдад	360
сабаббдсбб	бсаааббббд	ддсааддсаб	бассассаса	баббдбббсб	асаабдсбда	420
асааббдсбс	бссбббдааа	ддаадааааа	саадаабдас	абдсассбба	дбадбббаад	480
ссасааабас	садсдаабса	ааббадбббд	садбсадсбб	ддсаббассб	басббдадсс	540
ббддббдббс	ббббдааддб	ббабддбсбд	дабабааасс	саададсбаб	саадаббдса	600
бддабааасс	бббасббдаа	бдсасбадас	дасдабддбс	бсссаабсба	бдабдсддад	660
дддаааасаб	бдсббдасад	адбсдааббс	бабдаабсбд	абсббсбббс	ббасбдбада	720
дабаасаада	бадаасббда	бсдсаббдбб	ддабдсабас	сасадаббсб	баассссааб	780
ссададдсаа	бдбсааадаб	бдбаасбдаа	ааббсаадбд	аддадббсбб	дбасбссббд	840
адсаасбасб	дбдсбсбсса	дддббббдбб	даддассааб	ббддссбсдд	дббдаббдсб	900
сдддсбдббд	аадаадддаб	абсбдбдаба	аадссбадбд	дбсббабддб	аббсаасабд	960
ддаддссддс	саддасаадд	бдбсбдбдад	сдссбабббс	ббсдссдбдд	абббсдсабс	1020
аабаадсбсб	ддсааасааа	ааббабдсад				1050

<210> 22

<211> 186

<212> Белок

<213> Ячмень, мутант 14018

<400> 22

Меб А1а 1

А1а А1а А1а О1у 5

Азр

Уа1

О1и

А1а 10

РЬе

Ьеи А1а

А1а

Суз 15

О1п

А1а

Бег

О1у

Азр

А1а

А1а

Туг

О1у

А1а

А1а

Ьуз

А1а

Уа1

Ьеи

О1и

Агд

20

25

30

Ьеи

О1и

А1а

Рго

А1а

ТЬг

Агд

А1а

О1и

А1а

Агд

Агд

Ьеи

Ьеи

О1у

А1а

35

40

45

- 93 029777

Уа1

Агд 50

Агд

Агд

РЬе

А1а

А1а О1у О1у Рго А1а А1а О1у

Ьеи О1и Суз

55

60

РЬе

Агд

ТЬг

РЬе

Нгз

РЬе

Агд

11е

Нгз

Азр

Уа1

Уа1

Ьеи

Азр

Рго

Нгз

65

70

75

80

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

О1п

О1п

Агд

Ьуз

Ьуз

Ьеи

ТЬг

МеЕ

МеЕ

О1и

11е

Рго

85

90

95

Зег

11е

РЬе

11е

Рго

О1и

Азр

Тгр

Зег

РЬе

ТЬг

РЬе

Туг

О1и

О1у

Ьеи

100

105

110

Азп

Агд

Нгз

Рго

Азр

Зег

11е

РЬе

Агд

Азр

Ьуз

ТЬг

Уа1

А1а

О1и

Ьеи

115

120

125

О1у

Суз

О1у

Азп

О1у

Тгр

11е

Зег

11е

А1а

Ьеи

А1а

О1и

Ьуз

Тгр

Суз

130

135

140

Рго

Зег

Ьуз

11е

О1у

ТЬг

Зег

Суз

Зег

Уа1

Азр

11е

Туг

Ьеи

11е

Зег

145

150

155

160

РЬе

Уа1

А1а

Азп

МеЕ

О1у

Рго

А1а

О1и

Уа1

Агд

Нгз

Ьеи

Ьеи

Агд

Ьеи

165

170

175

Ьеи

Туг

МеЕ

Ьуз

Ьеи

Ьеи

О1у

Уа1

Суз

О1п

180

185

<210> 23 <211> 771 <212> ДНК <213> Ячмень, мутант	14018
<400> 23 аддаЕЕссад	сааадааада	адсЕаасааЕ	даЕддадаЕа	сссадсаЕЕЕ	ЕсаЕЕссада	60
адасЕддЕса	ЕЕсасЕЕЕсЕ	асдадддЕсЕ	саассддсаЕ	ссадаЕЕсса	ЕсЕЕсаддда	120
ЕаадасадЕа	дсададсЕдд	даЕдЕддсаа	ЕддЕЕддаЕа	ЕссаЕЕдсас	ЕЕдсадаааа	180
дЕддЕдсссЕ	ЕсдаадаЕЕд	дсассЕсЕЕд	ЕЕссдЕадаЕ	аЕЕЕаЕсЕЕа	ЕсЕсдЕЕЕдЕ	240
ЕдсааасаЕд	ддассЕдсад	аадЕЕадаса	ЕЕЕасЕсадд	ЕЕЕаЕддЕсЕ	ддаЕаЕааас	300
ссаададсЕа	ЕсаадаЕЕдс	аЕддаЕааас	сЕЕЕасЕЕда	аЕдсасЕада	сдасдаЕддЕ	360
сЕсссааЕсЕ	аЕдаЕдсдда	ддддааааса	ЕЕдсЕЕдаса	дадЕсдааЕЕ	сЕаЕдааЕсЕ	420
даЕсЕЕсЕЕЕ	сЕЕасЕдЕад	адаЕаасаад	аЕадаасЕЕд	аЕсдсаЕЕдЕ	ЕддаЕдсаЕа	480
ссасадаЕЕс	ЕЕаассссаа	Ессададдса	аЕдЕсааада	ЕЕдЕаасЕда	аааЕЕсаадЕ	540
даддадЕЕсЕ	ЕдЕасЕссЕЕ	дадсаасЕас	ЕдЕдсЕсЕсс	адддЕЕЕЕдЕ	Едаддассаа	600

- 94 029ΊΊΊ

ЕЕЕддссЕсд	ддЕЕдаЕЕдс	ЕсдддсЕдЕЕ	даадааддда	ЕаЕсЕдЕдаЕ	ааадссЕадЕ	660
ддЕсЕЕаЕдд	ЕаЕЕсаасаЕ	дддаддссдд	ссаддасаад	дЕдЕсЕдЕда	дсдссЕаЕЕЕ	720
сЕЕсдссдЕд	даЕЕЕсдсаЕ	сааЕаадсЕс	Еддсааасаа	аааЕЕаЕдса	д	771

<210> 24

<211> 180

<212> Белок

<213> Ячмень, мутант 14018

<400> 24

МеЕ 1

А1а

А1а

А1а

А1а 5

О1у Азр Уа1

О1и А1а 10

РЬе

Ьеи

А1а

А1а

Суз 15

О1п

А1а

Зег

О1у

Азр

А1а

А1а

Туг

О1у

А1а

А1а

Ьуз

А1а

Уа1

Ьеи

О1и

Агд

20

25

30

Ьеи

О1и

А1а

Рго

А1а

ТЬг

Агд

А1а

О1и

А1а

Агд

Агд

Ьеи

Ьеи

О1у

А1а

35

40

45

Уа1

Агд

Агд

Агд

РЬе

А1а

А1а

О1у

О1у

Рго

А1а

А1а

О1у

Ьеи

О1и

Суз

50

55

60

РЬе

Агд

ТЬг

РЬе

Нчз

РЬе

Агд

11е

Нчз

Азр

Уа1

Уа1

Ьеи

Азр

Рго

Нчз

65

70

75

80

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

О1п

О1п

Агд

Ьуз

Ьуз

Ьеи

ТЬг

МеЕ

МеЕ

О1и

11е

Рго

85

90

95

Зег

11е

РЬе

11е

Рго

О1и

Азр

Тгр

Зег

РЬе

ТЬг

РЬе

Туг

О1и

О1у

Ьеи

100

105

110

Азп

Агд

Нчз

Рго

Азр

Зег

11е

РЬе

Агд

Азр

Ьуз

ТЬг

Уа1

А1а

О1и

Ьеи

115

120

125

О1у

Суз

О1у

Азп

О1у

Тгр

11е

Зег

11е

А1а

Ьеи

А1а

О1и

Ьуз

Тгр

Суз

130

135

140

Рго

Зег

Ьуз

11е

О1у

ТЬг

Зег

Суз

Зег

Уа1

Азр

11е

Туг

Ьеи

11е

Зег

145

150

155

160

РЬе

Уа1

А1а

Азп

МеЕ

О1у

Рго

А1а

О1и

Уа1

Агд

Нтз

Ьеи

Ьеи

Агд

РЬе

165

170

175

МеЕ Уа1 Тгр 11е 180

- 95 029777

<210> 25

<211> 644

<212> ДНК

<213> Ячмень, мутант 14018

<400> 25

аддаЁЁссад сааадааада адсЁаасааЁ даЁддадаЁа сссадсаЁЁЁ ЁсаЁЁссада 60

адасЁддЁса ЁЁсасЁЁЁсЁ асдадддЁсЁ саассддсаЁ ссадаЁЁсса ЁсЁЁсаддда 120

ЁаадасадЁа дсададсЁдд даЁдЁддсаа ЁддЁЁЁаЁдд ЁсЁддаЁаЁа аасссаадад 180

сЁаЁсаадаЁ ЁдсаЁддаЁа аассЁЁЁасЁ ЁдааЁдсасЁ адасдасдаЁ ддЁсЁсссаа 240

ЁсЁаЁдаЁдс ддаддддааа асаЁЁдсЁЁд асададЁсда аЁЁсЁаЁдаа ЁсЁдаЁсЁЁс 300

ЁЁЁсЁЁасЁд ЁададаЁаас аадаЁадаас ЁЁдаЁсдсаЁ ЁдЁЁддаЁдс аЁассасада 360

ЁЁсЁЁаассс сааЁссадад дсааЁдЁсаа адаЁЁдЁаас ЁдааааЁЁса адЁдаддадЁ 420

ЁсЁЁдЁасЁс сЁЁдадсаас ЁасЁдЁдсЁс ЁссадддЁЁЁ ЁдЁЁдаддас сааЁЁЁддсс 480

ЁсдддЁЁдаЁ ЁдсЁсдддсЁ дЁЁдаадаад ддаЁаЁсЁдЁ даЁааадссЁ адЁддЁсЁЁа 540

ЁддЁаЁЁсаа саЁдддаддс сддссаддас ааддЁдЁсЁд ЁдадсдссЁа ЁЁЁсЁЁсдсс 600

дЁддаЁЁЁсд саЁсааЁаад сЁсЁддсааа саааааЁЁаЁ дсад 644

<210> 26

<211> 163

<212> Белок

<213> Ячмень, мутант 14018

<400> 26

МеЁ 1

А1а А1а А1а

А1а О1у Азр Уа1 5

О1и

А1а 10

РЬе

Ьеи

А1а

А1а

Суз 15

О1п

А1а

Зег

О1у

Азр

А1а

А1а

Туг

О1у

А1а

А1а

Ьуз

А1а

Уа1

Ьеи

О1и

Агд

20

25

30

Ьеи

О1и

А1а

Рго

А1а

ТЬг

Агд

А1а

О1и

А1а

Агд

Агд

Ьеи

Ьеи

О1у

А1а

35

40

45

Уа1

Агд

Агд

Агд

РЬе

А1а

А1а

О1у

О1у

Рго

А1а

А1а

О1у

Ьеи

О1и

Суз

50

55

60

РЬе

Агд

ТЬг

РЬе

Н1з

РЬе

Агд

11е

Н1з

Азр

Уа1

Уа1

Ьеи

Азр

Рго

Н1з

65

70

75

80

Ьеи

О1п

О1у

РЬе

О1п

О1п

Агд

Ьуз

Ьуз

Ьеи

ТЬг

МеЁ

МеЁ

О1и

11е

Рго

85

90

95

Зег

11е

РЬе

11е

Рго

О1и

Азр

Тгр

Зег

РЬе

ТЬг

РЬе

Туг

О1и

О1у

Ьеи

100

105

110

- 96 029777

Азп Агд Нгз

Рго

Азр

Зег

11е

РНе Агд Азр 120

Ьуз

ТЬг

Уа1 125

А1а

О1и

Ьеи

115

О1у

Суз

О1у

Азп

О1у

Ьеи

Тгр

Зег

О1у

Туг

Ьуз

Рго

Ьуз

Зег

Туг

О1п

130

135

140

Азр

Суз

МеР

Азр

Ьуз

Рго

Ьеи

Ьеи

О1и

Суз

ТЬг

Агд

Агд

Агд

Тгр

Зег

145

150

155

160

Рго Азп Ьеи

<210> 27 <211> 781 <212> ДНК <213> Искусственная
<220> <223> Фрагмент Зас11	ВатН1 продукта 2
<400> 27 ддссдсдддд	сРсдадРдсР	РссдсассРР	ссасРРссдс	аРссасдасд	РсдРссРсда	60
сссссассРс	сааддаРРсс	адсааадааа	даадсРааса	аРдаРддада	РасссадсаР	120
РРРсаРРсса	даадасРддР	саРРсасРРР	сРасдадддР	сРсаассддс	аРссадаРРс	180
саРсРРсадд	даРаадасад	РадсададсР	дддаРдРддс	ааРддРРдда	РаРссаРРдс	240
асРРдсадаа	аадРддРдсс	сРРсдааддР	РРаРддРсРд	даРаРааасс	саададсРаР	300
саадаРРдса	РддаРааасс	РРРасРРдаа	РдсасРадас	дасдаРддРс	РсссааРсРа	360
РдаРдсддад	дддаааасаР	РдсРРдасад	адРсдааРРс	РаРдааРсРд	аРсРРсРРРс	420
РРасРдРада	даРаасаада	РадаасРРда	РсдсаРРдРР	ддаРдсаРас	сасадаРРсР	480
РаассссааР	ссададдсаа	РдРсааадаР	РдРаасРдаа	ааРРсаадРд	аддадРРсРР	540
дРасРссРРд	адсаасРасР	дРдсРсРсса	дддРРРРдРР	даддассааР	РРддссРсдд	600
дРРдаРРдсР	сдддсРдРРд	аадаадддаР	аРсРдРдаРа	аадссРадРд	дРсРРаРддР	660
аРРсаасаРд	ддаддссддс	саддасаадд	РдРсРдРдад	сдссРаРРРс	РасдссдРдд	720
аРРРсдсаРс	ааРаадсРсР	ддсааасааа	ааРРаРдсад	аРадсааРРс	РРРдаддаРс	780
с						781
<210> 28 <211> 781 <212> ДНК <213> Искусственная
<220> <223> Фрагмент Зас11	ВатН1 продукта 3

- 97 029777

<400> 28

ддссдсдддд	сбсдадбдсб	бссдсассбб	ссасббссдс	абссасдасд	бсдбссбсда	60
сссссассбс	сааддаббсс	адсааадааа	даадсбааса	абдабддада	басссадсаб	120
бббсаббсса	даадасбддб	саббсасббб	сбасдадддб	сбсаассддс	абссадаббс	180
сабсббсадд	дабаадасад	бадсададсб	дддабдбддс	аабддббдда	бабссаббдс	240
асббдсадаа	аадбддбдсс	сббсдааддб	ббабддбсбд	дабабааасс	саададсбаб	300
саадаббдса	бддабааасс	бббасббдаа	бдсасбадас	дасдабддбс	бсссаабсба	360
бдабдсддад	дддаааасаб	бдсббдасад	адбсдааббс	бабдаабсбд	абсббсбббс	420
ббасбдбада	дабаасаада	бадаасббда	бсдсаббдбб	ддабдсабас	сасадаббсб	480
баассссааб	ссададдсаа	бдбсааадаб	бдбаасбдаа	ааббсаадбд	аддадббсбб	540
дбасбссббд	адсаасбасб	дбдсбсбсса	дддббббдбб	даддассааб	ббддссбсдд	600
дббдаббдсб	сдддсбдббд	аадаадддаб	абсбдбдаба	аадссбадбд	дбсббабддб	660
аббсаасабд	ддаддссддс	саддасаадд	бдбсбдбдад	сдссбабббс	басдссдбдд	720
абббсдсабс	аабаадсбсб	ддсааасааа	ааббабдсад	абадсааббс	бббдаддабс	780

с 781

<210> 29

<211> 703

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Фрагмент Бас11 ВатН1 продукта 4

<400> 29

ддссдсдддд сбсдадбдсб бссдсассбб ссасббссдс абссасдасд бсдбссбсда 60

сссссассбс сааддаббсс адсааадааа даадсбааса абдабддада басссадсаб 120

бббсаббсса даадасбддб саббсасббб сбасдадддб сбсаассддс абссадаббс 180

сабсббсадд дабаадасад бадсададсб дддабдбддс аабддббдда бабссаббдс 240

асббдсадаа аадбддбдсс сббсдааддб ббабддбсбд дабабааасс саададсбаб 300

саадаббдса бддабааасс бббасббдаа бдсасбадас дасдабддбс бсссаабсба 360

бдабдсддад дддаааасаб бдсббдасад адбсдааббс бабдаабсбд абсббсбббс 420

ббасбдбада дабаасаада бадаасббда бсдсаббдбб ддабдсабас сасадаббсб 480

баассссааб ссададдсаа бдбсааадаб бдбаасбдаа ааббсаадбд аддадббсбб 540

дбасбссббд адсаасбасб дбдсбсбсса дддббббдбб даддассааб ббддссбсдд 600

дббдаббдсб сдддсбдббд аадаадддаб абсбдбдаба аадссбадбд дбсббабддб 660

аббсаасабд ддаддссддс саддасаадд сбдсбаадда бсс 703

- 98 029777

<210> 30

<211> 394

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Фрагмент Зас11 ВатН1 продукта 6

<400> 30

ддссдсдддд	сйсдадйдсй	йссдсассйй	ссасййссдс	айссасдасд	йсдйссйсда	60
сссссассйс	сааддаййсс	адсааадааа	даадсйааса	айдайддада	йасссадсай	120
йййсаййсса	даадасйддй	саййсасййй	сйасдадддй	сйсаассддс	айссадаййс	180
сайсййсадд	дайаадасад	йадсададсй	дддайдйддс	аайддййдда	йайссаййдс	240
асййдсадаа	аадйддйдсс	сййсдаадай	йддсассйсй	йдййссдйад	айайййайсй	300
йайсйсдййй	дййдсаааса	йдддассйдс	адаадййада	сайййасйса	ддййасйййа	360
йайдааасйй	ййаддйдйсй	дссадйаддд	айсс			394

<210> 31

<211> 376

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Фрагмент Зас11 ВатН1 продукта 7

<400> 31

ддссдсдддд сйсдадйдсй йссдсассйй ссасййссдс айссасдасд йсдйссйсда 60

сссссассйс сааддаййсс адсааадааа даадсйааса айдайддада йасссадсай 120

йййсаййсса даадасйддй саййсасййй сйасдадддй сйсаассддс айссадаййс 180

сайсййсадд дайаадасад йадсададсй дддайдйддс аайддййдда йайссаййдс 240

асййдсадаа аадйддйдсс сййсдаадай йддсассйсй йдййссдйад айайййайсй 300

йайсйсдййй дййдсаааса йдддассйдс адаадййада сайййасйса ддйййайддй 360

сйддайайаа ддайсс 376

<210> 32

<211> 325

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220> <223> Фрагмент Зас11	ВатН1 продукта 8
<400> 32
ддссдсдддд	сйсдадйдсй	йссдсассйй	ссасййссдс	айссасдасд	йсдйссйсда	60
сссссассйс	сааддаййсс	адсааадааа	даадсйааса	айдайддада	йасссадсай	120
йййсаййсса	даадасйддй	саййсасййй	сйасдадддй	сйсаассддс	айссадаййс	180

- 99 029777

саЕсЕЕсадд	даЕаадасад	ЕадсададсЕ	дддаЕдЕддс	ааЕддЕЕЕаЕ	ддЕсЕддаЕа	240
Еааасссаад	адсЕаЕсаад	аЕЕдсаЕдда	ЕааассЕЕЕа	сЕЕдааЕдса	сЕадасдасд	300
аЕддЕсЕссс	ааЕсЕаЕаад	даЕсс				325
<210> 33 <211> 271 <212> ДНК <213> Ячмень, сорт РгезЕтде
<400> 33 сдаЕЕссадс	ЕЕссддЕЕдЕ	ЕааЕЕЕЕдЕЕ	аЕдЕЕЕдЕда	асЕЕЕдсЕдс	аЕЕсадддЕЕ	60
ЕЕдЕЕдадда	ссааЕЕЕддс	сЕсдддЕЕда	ЕЕдсЕсдддс	ЕдЕЕдаадаа	дддаЕаЕсЕд	120
ЕдаЕааадсс	ЕадЕддЕсЕЕ	аЕддЕаЕЕса	асаЕдддадд	ссддссадда	сааддЕдЕсЕ	180
дЕдадсдссЕ	аЕЕЕсЕасдс	сдЕддаЕЕЕс	дсаЕсааЕаа	дсЕсЕддсаа	асаааааЕЕа	240
ЕдсаддЕадс	ааЕЕсЕЕЕда	дЕдасЕадаЕ	д			271
<210> 34 <211> 271 <212> ДНК <213> Ячмень, мутант	8063
<400> 34 сдаЕЕссадс	ЕЕссддЕЕдЕ	ЕааЕЕЕЕдЕЕ	аЕдЕЕЕдЕда	асЕЕЕдсЕдс	аЕЕсадддЕЕ	60
ЕЕдЕЕдадда	ссааЕЕЕддс	сЕсдддЕЕда	ЕЕдсЕсдддс	ЕдЕЕдаадаа	дддаЕаЕсЕд	120
ЕдаЕааадсс	ЕадЕддЕсЕЕ	аЕддЕаЕЕса	асаЕдддадд	ссддссадда	сааддЕдЕсЕ	180
дЕдадсдссЕ	аЕЕЕсЕасдс	сдЕддаЕЕЕс	дсаЕсааЕаа	дсЕсЕддсаа	асаааааЕЕа	240
ЕдсадаЕадс	ааЕЕсЕЕЕда	дЕдасЕадаЕ	д			271

<210> 35

<211> 121

<212> ДНК

<213> Ячмень, сорт ЗеЬазЕтап

<400> 35
ддсаЕссада	ЕЕссаЕсЕЕс	адддаЕаада	садЕадсада	дсЕдддаЕдЕ	ддсааЕддЕЕ	60
ддаЕаЕссаЕ	ЕдсасЕЕдса	даааадЕддЕ	дсссЕЕсдаа	ддЕЕддсасс	ЕсЕЕдЕЕссд	120
Е						121

<210> <211> <212> <213>	36 123 ДНК Ячмень, мутант	14018
<400>	36
ддсаЕссада ЕЕссаЕсЕЕс	адддаЕаада садЕадсада дсЕдддаЕдЕ ддсааЕддЕЕ	60

- 100 029777

ддаЕаЕссаЕ ЕдсасЕЕдса даааадЕддЕ дсссЕЕсдаа даЕЕддсасс ЕсЕЕдЕЕссд 120

Еад 123

<210> 37

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 37

аЕддсЕдсдд сддсддддда сдЕдд 25

<210> 38

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 38

аддаЕЕссад сааадааада адс 23

<210> 39

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 39

даЕЕсЕЕаас сссааЕссад аддс 24

<210> 40

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 40

дддЕЕЕЕдЕЕ даддассааЕ ЕЕддс 25

<210> 41

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 41

ЕдсЕдсЕЕЕс дЕдаасЕЕаЕ Е 21

- 101 029777

<210>	42
<211>	26
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	42
сабабддабс бддассдсад сббсбб	26
<210>	43
<211>	25
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	43
ссббсдаадд дсассасббб бсбдс	25
<210>	44
<211>	25
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	44
сбддададса садбадббдс бсаад	25
<210>	45
<211>	25
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	45
сбдсабаабб бббдбббдсс ададс	25
<210>	46
<211>	24
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	46
басассаббб дадсббддса дасб	24
<210>	47

- 102 029777

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 47

аааабддадд сдбббасбдс адаа 24

<210> 48

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 48

сбадббдсба ссаббсассб бадсасс 27

<210> 49

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 49

абддсбдсдд сддсддддда сдбдд 25

<210> 50

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 50

абддсбдсдд сддсддддда сдбдд 25

<210> 51

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 51

абддсбдсдд сддсддддда сдбдд 25

<210> 52

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная

- 103 029777

<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	52
аЕддсЕдсдд сддсддддда	сдЕдд
<210>	53
<211>	25
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	53
аЕддсЕдсдд сддсддддда	сдЕдд
<210>	54
<211>	25
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	54
ддсЕссЕсдд сдссдЕдсда	сддсд
<210>	55
<211>	25
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	55
ддсЕссЕсдд сдссдЕдсда	сддсд
<210>	56
<211>	25
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	56
ддсЕссЕсдд сдссдЕдсда	сддсд
<210>	57
<211>	20
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР

- 104 029777

<400> 57

дЕасдссдсд Есдсссдасд 20

<210> 58

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 58

ссдссддсдд сдаадсдссд 20

<210> 59

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 59

дЕдсддаадс асЕсдадссс 20

<210> 60

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 60

сдЕддаЕдсд даадЕддаад 20

<210> 61

<211> 26

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 61

сЕЕддаддЕд ддддЕсдадд асдасд 26

<210> 62

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 62

дЕдсддаадс асЕсдадссс 20

- 105 029777

<210>	63
<211>	20
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	63
сдЕддаЕдсд даадЕддаад	20
<210>	64
<211>	26
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	64
сЕЕддаддЕд ддддЕсдадд асдасд	26
<210>	65
<211>	26
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	65
дЕЕЕаЕддЕс ЕддаЕаЕааа сссаад	26
<210>	66
<211>	23
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	66
аддаЕЕссад сааадааада адс	23
<210>	67
<211>	25
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	67
аааЕссадса асаадаЕЕсс ддааа	25
<210>	68

- 106 029777

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 68

сЕдсаЕааЕЕ ЕЕЕдЕЕЕдсс ададс 25

<210> 69

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная

<220>

<223> Няз Тад

<400> 69

МеЕ О1у Нтз Нтз Нтз Нтз Нтз Нтз Нтз Нтз Нтз Нтз
1	5	10

<210>	70
<211>	11
<212>	Белок
<213>	Искусственная
<220>
<223>	ЕпЕегокяпазе зяЕе
<400>	70
Бег Бег О1у Нтз 11е Азр Азр Азр Азр	Ьуз Няз
1	5	10

<210> 71

<211> 31

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 71

саЕаЕдаЕдд сЕдсддсддс дддддасдЕд д 31

<210> 72

<211> 32

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 72

дааЕЕсЕадЕ ЕдсЕассаЕЕ сассЕЕадса сс 32

- 107 029777

<210> 73

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 73

ддссдсдддд сЕсдадЕдсЕ Ессдсас 27

<210> 74

<211> 46

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 74

ддаЕссЕсаа адааЕЕдсЕа ЕсЕдсаЕааЕ ЕЕЕЕдЕЕЕдс сададс 46

<210> 75

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 75

ддссдсдддд сЕсдадЕдсЕ Ессдсас 27

<210> 76

<211> 37

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 76

ддаЕссЕЕад садссЕЕдЕс сЕддссддсс ЕсссаЕд 37

<210> 77

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 77

сдаЕЕссадс ЕЕссддЕЕд 19

<210>	78
<211>	19
<212>	ДНК

- 108 029777

<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	78
сдаббссадс ббссддббд	19
<210>	79
<211>	19
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	79
сдаббссадс ббссддббд	19
<210>	80
<211>	22
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	80
ддсабссада ббссабсббс ад	22
<210>	81
<211>	26
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	81
сабсбадбса сбсааадааб бдсбас	26
<210>	82
<211>	26
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	82
сабсбадбса сбсааадааб бдсбаб	26
<210>	83
<211>	26
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>

- 109 029777

<223> Праймер для ПЦР

<400> 83

сабсбадбса сбсааадааб бдсбаб 26

<210> <211> <212> <213>

84 22 ДНК Искусственная

<220> <223>

Праймер для ПЦР

<400> 84

сбасддааса ададдбдсса аб 22

<210> <211> <212> <213>

85 27 ДНК Искусственная

<220> <223>	Праймер для ПЦР
<400>	85

ддссдсдддд сбсдадбдсб бссдсас 27

<210> <211> <212> <213>

86 63 ДНК Искусственная

<220> <223>

Праймер для ПЦР

<400> 86

сдадабаада бааабабсба сддаасаада ддбдссаабс ббсдаадддс ассасббббс 60

бдс 63

<210> <211> <212> <213>

87 27 ДНК Искусственная

<220> <223>	Праймер для ПЦР
<400>	87

ддссдсдддд сбсдадбдсб бссдсас 27

<210> <211> <212> <213>

88 70 ДНК Искусственная

<220> <223>

Праймер для ПЦР

- 110 029777

<400> 88 аассЕдадЕа ааЕдЕсЕаас ЕЕсЕдсаддЕ аЕаЕсЕасдд	сссаЕдЕЕЕд	саасааасда	даЕаадаЕаа	60 70
<210>	89
<211>	27
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	89
ддссдсдддд сЕсдадЕдсЕ Ессдсас				27
<210>	90
<211>	66
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	90
ддаЕсссЕас Еддсадасас сЕаааадЕЕЕ	саЕаЕааадЕ	аассЕдадЕа	ааЕдЕсЕаас	60
ЕЕсЕдс					66
<210>	91
<211>	27
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	91
ддссдсдддд сЕсдадЕдсЕ Ессдсас				27
<210>	92
<211>	48
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	92
ддаЕссЕЕаЕ аЕссадасса ЕааассЕдад	ЕаааЕдЕсЕа	асЕЕсЕдс		48

<210>	93
<211>	27
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>

- 111 029777

<223> Праймер для ПЦР

<400> 93

ддссдсдддд сйсдадйдсй йссдсас 27

<210> 94

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 94

аддйййайсс айдсаайсйй дайадсйсйй дддйййайай ссадассайа аассаййдсс 60

асайсссадс йсйдсйасйд 80

<210> 95

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 95

ддссдсдддд сйсдадйдсй йссдсас 27

<210> 96

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 96

ддайссййай адаййдддад ассайсдйсд йсйадйдсай йсаадйааад дйййайссай 60

дсаайсййда йадсйсййдд 80

<210> 97

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 97

ддсайссада ййссайсййс ад 22

<210> 98

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная

- 112 029777

<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	98
ддсабссада ббссабсббс
<210>	99
<211>	22
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	99
ддсабссада ббссабсббс
<210>	100
<211>	19
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	100
сдаббссадс ббссддббд
<210>	101
<211>	22
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	101
сбасддааса ададдбдсса
<210>	102
<211>	22
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР
<400>	102
сбасддааса ададдбдсса
<210>	103
<211>	22
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Праймер для ПЦР

ад

ад

ас

аб

22

22

19

22

22

- 113 029777

<400> 103

сбасддааса ададдбдсса аб 22

<210> 104

<211> 26

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Праймер для ПЦР

<400> 104

сабсбадбса сбсааадааб бдсбаб 26

Claims (17)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Растение ячменя или его часть для получения напитка, в котором уровень диметилсульфида (ΌΜ8) составляет ниже 20 частей на миллиард и уровень 8-метил-1-метионина (8ΜΜ) составляет менее чем 20 частей на миллиард, при этом растение ячменя имеет мутацию в гене, кодирующем метионин-8метилтрансферазу (ΜΜΤ), которая приводит к не поддающейся обнаружению активности ΜΜΤ с 8ЕЦ ГО N0: 6 или полной потере функции ΜΜΤ.
2. 2. Растение ячменя или его часть по п.1, где указанная мутация:

   (a) находится внутри участка сплайсинга гена, кодирующего ΜΜΤ, и приводит к аберрантному сплайсингу мРНК; или

   (b) приводит к образованию гена, кодирующего укороченную форму ΜΜΤ, содержащую N концевой фрагмент ΜΜΤ дикого типа и необязательно дополнительные С-концевые последовательности, не входящие в ΜΜΤ дикого типа, где указанный Ц-концевой фрагмент содержит максимум 500 N концевых аминокислотных остатков 8ЕЦ ГО N0: 6.
3. 3. Растение ячменя или его часть по п.1, где указанная мутация представляет собой мутацию С^Л основания в положении 3076 8ЕЦ ГО N0: 3 или мутацию С^Л основания в положении 1462 8ЕЦ ГО N0: 16.
4. 4. Растение ячменя или его часть по любому из пп.1 или 2, где указанная мутация находится внутри участка сплайсинга гена, кодирующего ΜΜΤ, и приводит к аберрантному сплайсингу мРНК.
5. 5. Растение ячменя или его часть по любому из пп.2-4, где мутация приводит к образованию гена, кодирующего укороченную форму ΜΜΤ, содержащую ^концевой фрагмент ΜΜΤ дикого типа и необязательно дополнительные С-концевые последовательности, не входящие в ΜΜΤ дикого типа, где указанный ^концевой фрагмент содержит максимум 500 ^концевых аминокислотных остатков 8ЕЦ ГО N0: 6.
6. 6. Растение ячменя или его часть по любому из пп.2-5, где мутация приводит к образованию гена, кодирующего укороченную форму ΜΜΤ, содержащую ^концевой фрагмент ΜΜΤ дикого типа и необязательно дополнительные С-концевые последовательности, не входящие в ΜΜΤ дикого типа, где указанный ^концевой фрагмент содержит максимум 311 ^концевых аминокислотных остатков 8ЕЦ ГО N0: 6.
7. 7. Напиток, полученный из растения ячменя или его части по любому из пп.1-6, в котором уровень диметилсульфида (ΌΜ8) составляет ниже 20 частей на миллиард и уровень 8-метил-1-метионина (8ΜΜ) составляет менее чем 20 частей на миллиард и где указанное растение ячменя или его часть несет мутацию гена, кодирующего метионин-8-метилтрансферазу (ΜΜΤ), вызывающую полную потерю функциональной ΜΜΤ, и где указанное растение не имеет поддающуюся обнаружению активность ΜΜΤ.
8. 8. Напиток по п.7, где указанный напиток является солодовым напитком.
9. 9. Напиток по любому из пп.7 или 8, где напиток представляет собой пиво.
10. 10. Напиток по п.1, содержащий менее 10 частей на миллиард ΌΜ8.
11. 11. Напиток по п.1, содержащий менее 10 частей на миллиард 8-метил-1-метионина (8ΜΜ).
12. 12. Композиция солода, полученная с использованием зерен растения ячменя или его части по любому из пп.1-6, содержащая менее чем 20 частей на миллиард 8ΜΜ.
13. 13. Композиция солода по п.12, представляющая собой молотый солод.
14. 14. Композиция сусла, полученная из растения ячменя или его части по любому из пп.1-6 или с использованием композиции солода, полученной из зерен указанного растения ячменя или его части, где композиция сусла содержит менее чем 20 частей на миллиард 8ΜΜ.
15. 15. Способ получения напитка, содержащего менее чем 20 частей на миллиард ΌΜ8 и менее чем 20

    - 114 029777

    частей на миллиард 8ММ, включающий следующие стадии:

    (ΐ) получение композиции солода или композиции сусла из растения ячменя или его частей по любому из пп.1-6;

    (и) переработку композиции по п.(1) в напиток;

    с получением таким путем напитка, содержащего менее чем 20 частей на миллиард ΌΜ8 и менее чем 20 частей на миллиард 8ММ.
16. 16. Способ получения композиции солода, содержащей максимум 200 частей на миллиард свободного ЭМ8, включающий следующие стадии:

    (ΐ) предоставление зерен растения ячменя по любому из пп.1-6;

    (и) замачивание указанных зерен;

    (ϊϊϊ) проращивание замоченных зерен и

    (ίν) обработка пророщенных зерен нагреванием;

    с получением таким путем солодовой композиции, содержащей максимум 200 частей на миллиард свободного ЭМ8.
17. 17. Способ получения растения ячменя по любому из пп.1-6, где упомянутое растение не имеет поддающуюся обнаружению активность ММТ с 8ΙΤ) II) ΝΟ: 6 или характеризуется полной потерей активности ММТ, включающий следующие стадии:

    (ΐ) осуществление мутагенеза растения ячменя, и/или зерен ячменя, и/или зародышей ячменя, и/или клеток ячменя, и/или ткани ячменя с получением таким путем поколения ячменя М0; и

    (и) размножение указанных подвергнутых мутагенезу растений, зерен, клеток, ткани и/или зародышей ячменя по меньшей мере в течение 2 поколений с получением таким путем растений ячменя поколения Мх, где х представляет собой целое число >2; и

    (ϊϊϊ) получение образца указанных растений ячменя Мх; и

    (ίν) определение в указанном образце уровня 8ММ; и

    (ν) селекцию растений с отсутствием выявляемой активности 8ММ; и

    (νΐ) секвенирование по меньшей мере части гена ММТ; и

    (νΐΐ) селекцию растений, несущих мутацию в гене ММТ;

    с получением таким путем растения ячменя, имеющего не поддающуюся обнаружению активность ММТ или характеризующегося полной потерей активности ММТ.

    - 115 029777