EA029283B1 - Антагонисты il-17a - Google Patents

Антагонисты il-17a Download PDF

Info

Publication number
EA029283B1
EA029283B1 EA201290254A EA201290254A EA029283B1 EA 029283 B1 EA029283 B1 EA 029283B1 EA 201290254 A EA201290254 A EA 201290254A EA 201290254 A EA201290254 A EA 201290254A EA 029283 B1 EA029283 B1 EA 029283B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
zeg
tug
antibody
azr
amino acid
Prior art date
Application number
EA201290254A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201290254A1 (ru
Inventor
Майкл Насо
Рэймонд Свит
Цзиньцюань Ло
Шэн-Дзюн Ву
Мерле Эллосо
Даниэла Делла Дуката
Роберт Раухенбергер
Марк Рутц
Хуан Карлос Альмагро
Сузанн Таудте
Бинюань Ву
Галина Обмолова
Томас Малиа
Original Assignee
Янссен Байотек, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=43922991&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA029283(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Янссен Байотек, Инк. filed Critical Янссен Байотек, Инк.
Publication of EA201290254A1 publication Critical patent/EA201290254A1/ru
Publication of EA029283B1 publication Critical patent/EA029283B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/04—Drugs for disorders of the respiratory system for throat disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

В изобретении описаны антитела-антагонисты интерлейкина-17А (IL-17A), полинуклеотиды, кодирующие антитела-антагонисты IL-17A или их фрагменты, а также способы получения и использования названных продуктов.

Description

Настоящее изобретение относится к антителам-антагонистам интерлейкина-17А (ГЬ-17А), полинуклеотидам, кодирующим антитела-антагонисты Ш-17А или их фрагменты, а также к способам получения и использования названных продуктов.
Предпосылки создания изобретения
Интерлейкин-17А (ГЬ-17А, СТЬА-8, ГЬ-17) представляет собой цитокин, выделяющийся при активации клеток ТЙ17, СЭ8' Т, клеток γδ Т и ΝΚ-клеток в ответ на такие цитокины как ГЬ-23 и ТОР-β и регулирующий выработку таких медиаторов, как антимикробные пептиды (дефенсины), провоспалительные цитокины и хемокины в клетках различного типа, таких как фибробласты и синовиоциты, которые вовлечены в биологию нейтрофилов, воспаления, повреждения органов и иммунной защиты (см. обзор ХУеауег е! а1., Аппи. Кеу. 1ттипо1. 25:821-52, 2007; Аддаг\\а1 е! а1., 1. ΒίοΙ. Сйет. 278:1910-4, 2003; Мапдап е! а1., №!иге 441:231-4, 2006). ГЬ-17А проявляет синергию с другими цитокинами, такими как ΪΝί-α и Ю-1 β. усиливая провоспалительные условия.
Семейство цитокинов ГЬ-17А состоит из шести гомологов, обозначенных как ГЬ-17А, В, С, Ό, Е и Р, каждый из которых выполняет отдельную специфическую для него биологическую функцию (Ка\уадис1й е! а1., ί. А11егду Сйп. 1ттипо1. 114:1265-73, 2004; КоЙ8 апй Ыпйеп. 1ттипйу 21:467-76, 2004; Мозе1еу е! а1., Су!окте Ого^!й Рас!ог Кеу. 14:155-74, 2003). Из всех членов семейства 1Ь-17Р является наиболее гомологичным к 1Ь-17А и имеет с ним много сходных функциональных свойств, таких как индукция нейтрофилии в легких и возбуждение провоспалительных цитокинов, однако в организме человека 1Ь-17Р приблизительно в 10 раз менее активен, чем 1Ь-17А (Мозе1еу е! а1., Су!окше Ого^!й Рас!ог Кеу. 14:15574, 2003; Ко1к е! а1., 1ттиийу, 21: 467-76, 2004; МсА1Й5!ег е! а1., ί. Гттипо1. 175:404-12, 2005). ГЬ-17А и 1Ь-17Р могут образовывать гетеродимеры, которые ш уйго обладают промежуточной биоактивностью ^пдй! е! а1., ί. Вю1. Сйет. 282:13447-55, 2007).
1Ь-17А передает свои эффекты, взаимодействуя с интерлейкин-17-рецепторами А (ГЬ-17КА) и С (ГЬ-17КС) (Мозе1еу е! а1., Су!окше Ого\\1й Рас!ог Кеу. 14:155-74, 2003; Тоу е! а1., ί. 1ттипо1. 177:36-9,
2006) . 1Ь-17Р передает сигналы через те же рецепторы, однако аффинность 1Ь-17Р к этим рецепторам значительно ниже (Кие§!пег е! а1., ί. 1ттипо1. 179:5462-73, 2007). В кристаллических структурах человеческого 1Ь-17Р и человеческого комплекса 1Ь-17Р/1Ь-17КА определена предполагаемая рецепторсвязывающая полость в 1Ь-17Р гомодимере (Нуто\\й/ е! а1., ЕМВО ί. 20:5332-41, 2001; Е1у е! а1., Ν;·ιΙ. 1ттипо1оду 10:1245-51, 2009). Аналогичная полость была обнаружена в кристаллической структуре человеческого 1Ь-17А в комплексе с нейтрализующим РаЬ, однако данная полость была частично занята (Оегйагй! е! а1., ί. Мо1. Вю1. 394: 905-21, 2009).
Неправильное либо избыточное продуцирование 1Ь-17А связано с патологией при различных заболеваниях и расстройствах, в том числе при ревматоидном артрите (ЬиЬЬепз, Су!окше 41:84-91, 2008), гиперчувствительности дыхательных путей, включая аллергические заболевания дыхательных путей, такие как астма (см. обзор Ыпйеп, Сигг. Орш. ГпуехОд. Эгидк 4:1304-12, 2003; Гуапоу, Тгепйз РйагшасоГ 8сг 30:95-103, 2009), псориазе Дойащеп е! а1., Вг. I Оегша!о1. 160:319-24, 2009), кожной гиперчувствительности, в том числе атопическом дерматите (Тойа е! а1., I А11егду Сйп. Гттипо1. 111:875-81, 2003), системном склерозе (Рирто!о е! а1., Е Оегта!о1од. 8сг 50:240-42, 2008), при воспалительных заболеваниях кишечника, включая неспецифический язвенный колит и болезнь Крона (Но1!!а е! а1., ГпПатт. Во\\е1 Όίδ. 14:1175-84, 2008; 2йапд е! а1., ГпПатт. Во\\е1 Όίδ. 12:382-88, 2006), а также при заболеваниях легких, включая хронические обструктивные заболевания легких (СигЙ8 е! а1., Ргос. Ат. Тйогас. 8ос. 4:512-21,
2007) .
Для лечения ГЬ-17А-опосредованных заболеваний и расстройств были предложены антитела к ГЬ17А (публикации РСТ № νθ 08/021156, νθ 07/070750, νθ 07/149032, νθ 06/054059, νθ 06/013107, νθ 08/001063, νθ 10/034443; заявки на патент США № И8 2008/095775, И8 2009/0175881). Так как фармакокинетический профиль, эффективность и безопасность лекарственных средств на основе антител зависят от особенностей композиций, необходимо усовершенствовать антитела к человеческому Ш-17А, пригодные для использования в лечении ГЬ-17А-опосредованных заболеваний и расстройств.
Краткое описание фигур
Фиг. 1. А-Н. Последовательности СОК семейства 2, 6а, 6Ь, 19а и 19Ь антител-антагонистов Ш-17А.
Фиг. 2. Иллюстративно: А) ГОЬУ3 и ГОЬГ; В) ГОНУ3 и ΙΟΗί гены зародышевой линии в качестве скелета для пересадки остатков паратопа. тАЬ6785-последовательность показана выше. СОК-области подчеркнуты, центральные контактные участки в легкой цепи (Υ31, Ό49, Υ90, Р92, Р93) и тяжелой цепи (852, Т54, Р57, Υ59, Р99, Ь100 и Т101) тАЬ6785 обозначены звездочкой *. Области каркаса 4 в В) подчеркнуты двойной чертой. Последовательность показана *01 аллелями, если специально не указано иное.
Фиг. 3. Номенклатура Кабата и Чотиа для отобранных А) легких и В) тяжелых цепей антител. Расположение СОК Кабата и НУ Чотиа выделено серым цветом.
Фиг. 4. Конкурентно-связывающий анализ маркированных А) и В) тАЬ1926; С) тАЬ317; Ό) тАЬ3171; Е) и Р) тАЬ7357 с Ш-17А в формате ИФА.
Фиг. 5. А) Н/О карты обмена Ш-17А в комплексе с различными анти-ГЬ-17А тАЬ. Нумерация выше
- 1 029283 защитных блоков соответствует нумерации последовательности зрелого 1Й-17А (8ЕЦ ГО N0: 105).
Фиг. 6. А) общая молекулярная структура комплекса 1Е-17А/РаЬ6468. Димер ГО-17А показан темносерым и светло-серым. Две молекулы РаЬ показаны темно-серым и светло-серым соответственно; В) сравнение мономеров ГО-17А (светло-серый) и ГО-17Р (темно-серый); С) димер ГО-17А (светло- и темносерый); Ό) димер ГО-17Р (светло- и темно-серый).
Фиг. 7. Два участка связывания и ядерный эпитоп на ГО-17А к РаЬ6468. Протомеры 1 и 2 темно- и светло-серый соответственно. Ядерный эпитоп обозначен черным овалом. Пунктирная линия представляет неупорядоченные остатки.
Фиг. 8. Сравнение предполагаемых рецептор-связывающих карманов ГО-17А и ГО-17Р. А) вид спереди и сзади Р1 и Р2 карманов ГО-17А. РР-мотив тАЬ6468 легкой цепи СГОР3 показан в Р2-кармане. В) ГО-17Р с Ν-терминальным РР-мотивом в Р2-кармане. С) выравнивание последовательности ГО-17А и 1Ь17Р и консервативность карманов Р1 и Р2.
Фиг. 9. Связывающая специфичность тАЬ1926 к различным видам белков ГО-17А в формате ИФА. Краткое описание изобретения
Один аспект настоящего изобретения представляет собой выделенное антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с человеческим ГО-17А, где антитело или его фрагмент содержат аминокислотные последовательности НСЭР1, НСГОР2 и НСЭР3, как показано в:
a) 8ЕЦ ГО N0: 25, 37 и 58 соответственно;
b) 8ЕЦ ГО N0: 25, 38 и 58 соответственно;
c) 8ЕЦ ГО N0: 25, 39 и 58 соответственно; ά) 8ЕЦ ГО N0: 25, 40 и 58 соответственно; е) 8ЕЦ ГО N0: 25, 41 и 58 соответственно; ί) 8ЕЦ ГО N0: 25, 42 и 58 соответственно; д) 8ЕЦ ГО N0: 25, 43 и 58 соответственно; й) 8ЕЦ ГО N0: 25, 41 и 59 соответственно; ί) 8ЕЦ ГО N0: 25, 41 и 60 соответственно;
I) §ЕЦ ГО N0: 25, 43 и 60 соответственно;
k) §ЕЦ ГО N0: 25, 44 и 58 соответственно или
l) 8ЕЦ ГО N0: 25, 45 и 58 соответственно, и аминокислотные последовательности ЬСОР1, ЙСОР2. и ЬСПР3, как показано в: т) §ЕЦ ГО N0: 3, 6 и 18 соответственно;
п) §ЕЦ ГО N0: 3, 6 и 19 соответственно; о) 8ЕЦ ГО N0: 3, 6 и 20 соответственно и
р) 8ЕЦ ГО N0: 3, 6 и 21 соответственно.
Следующий аспект настоящего изобретения представляет собой выделенное антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с человеческим ГО-17А, включающие УН и УЪ, где антитело содержит:
a) аминокислотные последовательности НСГОР1, НСЭР2 и НСЭР3, как показано в §ЕЦ ГО N0: 25, 43 и 60 соответственно, и аминокислотные последовательности ЬСОР1, ЙСЭР2 и ЙС0Р3, как показано в §ЕЦ ГО N0: 3, 6 и 18 соответственно; или
b) УН согласно 8ЕЦ ГО N0: 86 и УЪ согласно 8ЕЦ ГО N0: 79.
Следующий аспект настоящего изобретения представляет собой выделенное антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с человеческим ГО-17А, включающие УН и УЪ, где антитело содержит УН с аминокислотной последовательностью, показанной в §ЕЦ ГО N0: 86, и УЪ с аминокислотной последовательностью, показанной в §ЕЦ ГО N0: 79.
Следующий аспект настоящего изобретения представляет собой выделенное антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с человеческим ГО-17А, включающие УН и УЪ, где антитело содержит УН, который по меньшей мере на 95% совпадает с УН, имеющим аминокислотную последовательность, показанную в §ЕЦ ГО N0: 86, и УЪ, который по меньшей мере на 95% совпадает с вариабельным участком, имеющим аминокислотную последовательность, показанную в §ЕЦ ГО N0: 79.
Следующий аспект настоящего изобретения представляет собой выделенное антитело или его фрагмент, которое специфически связывается с человеческим ГО-17А, включающее тяжелую цепь антитела с аминокислотной последовательностью, показанной в §ЕЦ ГО N0: 100, и легкую цепь антитела с аминокислотной последовательностью, показанной в §ЕЦ ГО N0: 90.
Следующий аспект настоящего изобретения представляет собой фармацевтическую композицию для лечения 1Ь-17А-опосредованных заболеваний или расстройств, содержащую выделенное антитело или фрагмент по любому из пп.1-9 и фармацевтически приемлемый носитель.
Следующий аспект настоящего изобретения представляет собой способ лечения воспалительного состояния, включающий введение терапевтически эффективного количества выделенного антитела по изобретению нуждающемуся в лечении пациенту в течение периода, достаточного для лечения воспалительного состояния.
- 2 029283
Подробное описание изобретения
Все публикации, упоминаемые в данном описании, в том числе, помимо прочего, патенты и патентные заявки, включенные в настоящее описание путем ссылки, являются частью настоящего документа, как если бы они были изложены непосредственно в настоящем документе.
Следует понимать, что применяемые в настоящем документе термины используются только в целях описания конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения и не являются ограничивающими. Все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, если не указано иное, имеют общепринятое значение, понятное любому специалисту в данной области, к которой имеет отношение настоящее изобретение.
В настоящем документе описаны примеры способов и материалов, хотя для проверки или анализа настоящего изобретения могут быть использованы любые способы и материалы, подобные или эквивалентные тем, которые описаны в настоящем документе. В описании и формулах настоящего изобретения будут использоваться следующие термины.
Используемый в настоящем документе термин антагонист обозначает молекулу, которая частично или полностью ингибирует активность 1Ь-17Л любым из способов. Примерами антагонистов являются антитела, слитые белки, пептиды, пептидомиметики, нуклеиновые кислоты, олигонуклеотиды и низкомолекулярные вещества. Агент может быть определен известными способами определения активности 1Ь-17А, описанными ниже.
Термин антитело-антагонист ГО-17А или антитело, реагирующее с ГО-17А, используемый в настоящем документе, относится к антителу, способному напрямую или косвенно снижать биологическую активность или ингибировать 1Ь-17А, блокируя связывание 1Ь-17А с рецепторами к нему или ингибируя активацию рецепторов к 1Ь-17А. Например, антитело, способное реагировать с 1Ь-17А, может связываться непосредственно с 1Ь-17А и нейтрализовать активность 1Ь-17А, т.е. блокировать сигнальный путь 1Ь17А для уменьшения секреции цитокинов и хемокинов.
Термин ГО-17А (СТЬА-8, 1Ь-17, интерлейкин-17А) относится к человеческому 1Ь-17Аполипептиду с аминокислотной последовательностью, содержащейся в СепВапк Асе. № ΝΡ_002181. δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 105 показывает последовательность аминокислот зрелого человеческого ГЬ-17А. ГЬ-17А ίη νίνο образует гомодимеры из двух мономеров, которые обозначают как мономер А и мономер В, или как протомер А и протомер В, или как протомер 1 и протомер 2, или как цепь А и цепь В. ГЬ-17А может также образовывать гетеродимер с 1Ь-17Р. Термин ГО-17А включает формы мономера, гомодимера и гетеродимера. Термин 1Ь-17АтЩб относится к варианту 1Ь-17А, имеющему заместители А70О и А132О. Аминокислотная последовательность зрелого ГЬ-17Ати1б показана в δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 106, последовательность сЬНА - в δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 112. ГО-17А и 1Ь-17Ати1б обладают сопоставимой активностью (заявка на патент США РСТ № АО 09/003096).
Используемый в настоящем документе термин рецептор к ГО-17А включает как рецепторы к полипептидам ГО-17КА (СепВапк Асе № ΝΡ_055154, δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 107) и ГО-17КС (ОепВапк Асе № ΝΡ_703191, δΕΟ ГО ΝΟ: 113), так и к гомодимерам или гетеродимерам из двух полипептидов.
Используемый в настоящем документе термин антитела в широком смысле означает и включает молекулы иммуноглобулина, в том числе поликлональные антитела, моноклональные антитела, включая антитела мышей, человека, адаптированные человеку, гуманизированные и химерные моноклональные антитела, фрагменты антител, мультиспецифичные антитела, образованные по меньшей мере из двух интактных антител, димерных, тетрамерных или мультимерных антител.
Используемый в настоящем документе термин моноклональное антитело (тАЬ) означает антитело (или фрагмент антитела), полученное из популяции по существу гомогенных антител. Моноклональные антитела высокоспецифичны и, как правило, направлены против единственного эпитопа. Определение моноклональные означает, по существу, гомогенный характер антител и не требует использования какого-либо определенного способа производства антител.
Иммуноглобулины могут быть разделены на пять больших классов, а именно, 1дА, Ι§ϋ, Ι§Ε, 1дС и 1дМ, в зависимости от аминокислотного состава константного домена тяжелой цепи. !дА и Ι§Ο, в свою очередь, подразделяются на изотипы ^А^ !дА2. [дС,, Ι§Ο2, Ι§Ο3 и !дС.4. Исходя из аминокислотной последовательности константных доменов легкая цепь антитела любого вида позвоночных может быть отнесена к одному из двух четко различающихся типов, а именно каппа (к) и лямбда (λ).
Термин фрагменты антител включает по меньшей мере часть молекулы иммуноглобулина, такую как участок, определяющий комплементарность тяжелой цепи (НСИК), участок, определяющий комплементарность легкой цепи (ЬСИК), вариабельную область тяжелой цепи (УН), вариабельную область легкой цепи (УЬ), константную область тяжелой цепи (СН), константную область легкой цепи (СЬ) или каркасную область (РК) тяжелой или легкой цепи антитела. Антитело может быть РаЬ, Р(аЬ'), Р(аЬ')2, δсΡν, άδΡν или диателом. Структуры вышеуказанных фрагментов антител, а также способы получения и использования антител и их фрагментов хорошо известны специалистам в данной области.
Вариабельный участок антитела состоит из каркасной области и трех антигенсвязывающих участков. Антигенсвязывающие участки определяются с помощью различных терминов: (ί) участки, определяющие комплементарность (СИК) - три в УН (НСИК1, НСИК2, НСИК3) и три в УЪ (ЬСГОК1, ЬСОК2,
- 3 029283
БСЭРЗ) - основаны на изменчивости последовательности (Аи апй КаЬа!, 1. Ехр. Мей. 132:211-250, 1970; КаЬа! е! а1., 8ецнепсез оГ РгоЮтз оГ 1ттипо1одюа1 1п!егез!, 51Н Ей. РиЬЬс НеаНЬ §ету1се, Ναΐίοηαΐ 1пз!Ни!ез оГ НеаНЬ, Ве!Ьезйа, Мй., 1991); (ίί) гипервариабельные области, НУК или НУ - три в УН (Н1, Н2, Н3) и три в УЬ (Ь1, Ь2, Ь3) - относятся к участкам вариабельных доменов антитела, являющихся по своей структуре гипервариабельными согласно определению Чотиа и Леска (СЬо1Ыа апй Ьезк, Мо1. Вю1. 196:901-917, 1987). Другие термины включают ЛМОТ-СЭРз (ЬеГтапс е! а1., Эеу. Сотрага!. 1ттипо1. 27:55-77, 2003) и БресШсИу ОеЮгтЬнпд Кебайие изаде (δΌΚυ) (А1тадго, Мо1. КесодпН. 17:132-143, 2004). В международной базе данных 1тМипоОепеТ1сз (1МОТ; Ьир://\у\у\ултд1.огд) приводится стандартизованное обозначение и определение антигенсвязывающих участков. Соответствие между СОК, НУ и 1МОТ подробно описано в работе ЬеГтапс е! а1., Эеу. Сотрага!. 1ттипо1. 27:55-77, 2003.
Остатки Чотиа в настоящем документе относятся к УЬ и УН областям антитела и нумеруются согласно А1-Ьа/1каш (А1-Ьа/|кап1 е! а1., 1. Мо1. Вю1. 273:927-48, 1997). Соответствие между двумя самыми употребительными системами нумерации, Кабата (КаЬа! е! а1., 8едиепсез оГ 1ттипо1одюа1 1п!егез!, 5|Ь Ей. РиЬЬс НеаЪЬ §етуюе, ΝΙΚ Ве!Ьезйа, МО, 1991) и Чотиа (СЬо!Ыа апй Ьезк, Мо1. Вю1. 196:901-17, 1987), по отношению к последовательной нумерации полипептидов показано на фиг. 3 на примере антител, относящихся к настоящему изобретению.
Название каркасный участок или каркасные последовательности относится к последовательностям вариабельных участков, которые не были определены как антигенсвязывающие. Поскольку для определения антигенсвязывающего участка могут использоваться разные термины, как указано выше, определение точной последовательности аминокислот каркасного участка зависит от определения антигенсвязывающего участка.
Используемый в настоящем документе термин по существу идентичный означает, что аминокислотные последовательности двух антител или фрагментов антител при сравнении являются идентичными или имеют незначительные отличия. Незначительными отличиями являются замещения 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот в аминокислотной последовательности антитела или фрагмента антитела, которые не влияют на характеристики антитела. Аминокислотные последовательности, по существу идентичные последовательностям, представленным в настоящем документе, также рассматриваются как часть данного изобретения. В некоторых случаях идентичность последовательностей может достигать 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более. Идентичность, определенная в процентном соотношении, может быть вычислена, например, при попарном выравнивании с помощью настройки, заданной по умолчанию, в модуле АЬдпХ программного обеспечения Уес!ог ΝΤΙ в. 9.0.0 (1пуНтодеп, г. Карлсбад, штат Калифорния). Белковые последовательности настоящего изобретения могут быть использованы в качестве запроса для выполнения поиска в публичных или патентных базах данных, например, для идентификации таких последовательностей. Примерами программ, используемых для осуществления такого поиска, являются ХВБА8Т или ВБА8ТР (ЬНр://№№№.псЬГп1т/шЬ.доу), либо Оепотефиез!™ (Оепотефиез!, г. Уэстборо, штат Массачусетс) - пакет с настройками по умолчанию.
Используемый в настоящем документе термин в сочетании с означает, что описанные активные вещества могут использоваться совместно, образуя смесь, по отдельности или последовательно в любом порядке.
Термин воспалительное состояние, используемый в настоящем документе, относится к острому или хроническому локализованному или системному ответу на повреждающие стимулы, такие как патогенные микроорганизмы, повреждение клеток, физические повреждения или повреждения раздражающими веществами, которые частично опосредуются активностью цитокинов, хемокинов, или такими участниками воспаления, как нейтрофилы, моноциты, лимфоциты и макрофаги; характеризующемуся в большинстве случаев болью, покраснением:, отеком и нарушением функций тканей.
Термин ЕЬ-17А-опосредованное воспалительное состояние, используемый в настоящем документе, относится к воспалительному состоянию, вызванному по меньшей мере отчасти биологической активностью ЕБ-17А или обусловленного активностью ЕЬ-17А. Примерами 1Ь-17А-опосредованных воспалительных состояний являются псориаз и ревматоидный артрит.
Термин 1Ь-17А-опосредованное состояние, используемый в настоящем документе, включает все заболевания и состояния, в которых ЕБ-17А играет какую-либо прямую или косвенную роль, включая этиологическую или патогенетическую, роль в развитии, прогрессировании или устойчивости заболевания или состояния.
Используемый в настоящем документе термин эпитоп означает часть антигена, с которой специфически связываются антитела. Эпитопы обычно состоят из химически активных (неполярных, полярных или гидрофобных), поверхностно расположенных функциональных групп, таких как боковые группы аминокислот или полисахаридов, и могут иметь специфическую трехмерную структуру, а также специфический заряд. Эпитоп может состоять как из расположенных последовательно, так и не находящихся в непрерывной последовательности аминокислот, которые образуют конформационную пространственную единицу. В пространственно-разобщенном эпитопе аминокислоты из различных частей линейной последовательности антигена оказываются в непосредственной близости друг от друга в трехмерном пространстве при сворачивании белковой молекулы.
- 4 029283
Используемый в настоящем документе термин паратоп означает часть антитела, с которой специфически связывается антиген. Паратоп может быть линейным или дискретным, образованным за счет пространственных взаимоотношений между аминокислотами, не находящимися в непрерывной последовательности, в отличие от взаимодействия линейно связанных аминокислот. Термины паратоп легкой цепи и паратоп тяжелой цепи или аминокислотные остатки паратопа легкой цепи и аминокислотные остатки паратопа тяжелой цепи означают аминокислотные остатки легкой и тяжелой цепей, контактирующие с антигеном.
Используемый в настоящем документе термин специфическое связывание относится к антителам, проявляющим большую аффинность при связывании с определенными антигенами, по сравнению с другими антигенами или белками. Как правило, связывание антитела характеризуется константой диссоциации (Кс) 10-7 М или менее. Связывание с предопределенным антигеном происходит при Кс, в десять раз меньшей, чем Кс связывания с неспецифичным антигеном (например, В8Л, казеин или любой другой полипептид), отличным от предопределенного антигена. Фразы антитело, распознающее антиген и антитело, специфичное к антигену используются как взаимозаменяемые вместе с выражениями антитело, которое специфически связывается с антигеном или специфичное к антигену антитело, например антитело, специфичное к 1Ь-17Л. Константа диссоциации может быть измерена стандартными способами.
Термин биологическая активность 1Ь-17Л или активация 1Ь-17Л, используемый в настоящем документе, относится к любой активности, являющейся результатом соединения 1Ь-17Л с рецептором к 1Ь-17Л. Примерами результатов биологической активности 1Ь-17Л являются увеличение секреции 1Ь-б или 1Ь-8, активация ΝΤ-κΒ или регуляция внеклеточных киназ, таких как ЕКК1, ЕКК2 и р38 при связывании с рецептором к 1Ь-17Л. Высвобождение цитокинов и хемокинов из клеток и тканей или циркулирующих цитокинов и хемокинов, активация ΝΤ-κΒ, либо киназное фосфорилирование может быть измерено известными специалистам способами, например, с помощью иммуноанализа, иммуноблоттинга или систем ген-репортеров (Уао с! а1., 1ттипйу 3:811-21, 1995; А\\апе с! а1., 1. 1ттипо1. 162:5337-44, 1999).
Понятие вектор обозначает полинуклеотид, способный к удвоению в биологической системе или к перемещению между такими системами. Полинуклеотиды-векторы, как правило, содержат элементы, такие как точки начала репликации, сигнал полиаденилирования или маркеры выбора, обеспечивающие дупликацию или сохранение таких полинуклеотидов в биологической системе. Примерами упомянутых биологических систем могут служить клетки, вирусы, животные, растения и реконструированные биологические системы, использующие биологические компоненты, способные к удвоению вектора. Полинуклеотидом, включающим вектор, могут быть молекулы ДНК или РНК, либо их гибрид.
Понятие вектор экспрессии обозначает вектор, который может использоваться в биологической системе или реконструированной биологической системе для прямой трансляции полипептида, закодированного полинуклеотидной последовательностью, имеющейся в векторе экспрессии.
Понятие полинуклеотид обозначает молекулу, включающую цепочку нуклеотидов, ковалентно связанных через сахарофосфатную главную цепь или через другую эквивалентную ковалентную химическую структуру. Двухцепочечные и одноцепочечные молекулы ДНК и РНК представляют собой типичные примеры полинуклеотидов.
Понятие полипептид или протеин обозначает молекулу, включающую по меньшей мере два аминокислотных остатка, связанных пептидной связью. Малые полипептиды, содержащие менее 50 аминокислотных остатков, могут называться пептидами.
В данном изобретении использованы общепринятые одно- и трехбуквенные коды обозначения аминокислот:
- 5 029283
Аминокислота Трехбуквенный код Однобуквенный код
Аланин а1а А
Аргинин агд К
Аспарагин азп N
Аспарагиновая азр Ό
кислота
Цистеин суз С
Глутаминовая кислота д1и Е
Глутамин д1п 0
Глицин д1у О
Гистидин Ыз Н
Изолейцин Не I
Лейцин 1еи ь
Лизин 1уз к
Метионин теЬ м
Фенилаланин рНе Р
Пролин рго Р
Серин зег 3
Треонин РЬг т
Триптофан Сгр м
Тирозин Суг Υ
Валин уа! V
Композиции данного изобретения
Настоящее изобретение относится к антителам-антагонистам 1Ь-17Л, способным ингибировать биологическую активность 1Ь-17Л, и к использованию этих антител. Примеры механизмов, по которым указанные антитела могут ингибировать активацию 1Ь-17Л, включают ингибирование гомо- или гетеродимеризации 1Ь-17Л и блокирование связывания 1Ь-17Л с рецептором 1Ь-17Л, ингибирование димеризации рецептора, ингибирование киназной активности дальнейшего сигнального пути или ингибирование транскрипции матричных РНК 1Ь-17Л. Другие антитела-антагонисты, способные ингибировать активацию 1Ь-17Л за счет других механизмов, также являются частью настоящего изобретения. Данные антагонисты находят применение в качестве исследовательских и диагностических реагентов, а также терапевтических агентов.
В настоящем изобретении предлагаются антигенсвязывающие участки, полученные из генных библиотек гена иммуноглобулина человека. Структурой, несущей антигенсвязывающие участки, является, как правило, тяжелая или легкая цепь антитела либо ее часть.
В настоящем изобретении предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим 1Ь-17Л, содержащим вариабельный участок тяжелой цепи (УН) и вариабельный участок легкой цепи (УЬ), где антитело содержит аминокислотные последовательности 1, 2 и 3 (НСЭКТ, НСЭК2 и НСЭКЗ) определяющего комплементарность участка тяжелой цепи (СОК) и аминокислотные последовательности 1, 2 и 3 (ЬСПК1, ТСОК2 и ЬСОКЗ) определяющего комплементарность участка тяжелой цепи (СОК), показанные в табл. 1а.
Таблица 1а
МОКтпАЬ № тАЬ № ЗЕО Ιϋ N0
ЬСПК1 ΗΟΏΚ1 НСЦК2 НСРКЗ
7702 1 4 7 23 26 52
7701 1 4 7 23 27 52
7708 624 1 4 7 23 28 52
8297 1 4 7 23 29 52
8298 1 4 7 23 30 52
- 6 029283
7785 3077 1 4 7 23 31 52
8104 7024 1 4 7 23 32 52
8105 1 4 7 23 33 52
7786 1 4 7 23 34 52
Типичная последовательность 1 4 7 23 35 52
ба Клон 10 2 5 8 24 36 53
Клон 11 2 5 9 24 36 53
Клон 12 2 5 10 24 36 53
Типичная последовательность 2 5 1.1 24 36 53
6Ь Клон 13 2 5 12 24 36 53
7706 4538 2 5 13 24 36 53
8299 3584 2 5 13 24 36 54
8300 2 5 13 24 36 55
8301 2 5 13 24 36 56
Клон 15 2 5 14 24 36 53
Клон 16 2 5 15 24 36 53
7775 732 2 5 16 24 36 53
8101 2 5 16 24 36 54
8102 2 5 16 24 36 55
8103 4168 2 5 16 24 36 56
Типичная последовательность 2 5 17 24 36 57
19а Клон 179 3 6 18 25 37 58
Клон 180 3 6 18 25 38 58
7709 3 6 18 25 39 58
Клон 182 3 6 18 25 40 58
7700 1926 3 6 18 25 41 58
8095 3 6 18 25 42 58
8096 3 6 18 25 43 58
8097 3 6 18 25 41 59
8098 3 6 18 25 41 60
8141 3 6 19 25 41 58
8142 3 6 2 0 25 41 58
8143 3 6 21 25 41 58
8160 7146 3 6 19 25 41 60
8161 3 6 20 25 41 60
8162 3 6 21 25 41 60
8302 6785 3 6 18 25 43 60
8303 3 6 20 25 43 60
5548 3 6 19 25 43 60
7768 3 6 18 25 44 58
Клон 185 3 6 18 25 45 58
Типичная последовательность 3 6 22 25 46 61
Клон 186 3 6 18 25 47 58
Клон 187 3 6 18 25 48 58
Клон 188 3 6 18 25 49 58
Клон 189 3 6 18 25 50 58
Типичная последовательность 3 6 18 25 51 58
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим ГО-17Л, содержащим УИ и УЬ, где антитело содержит ΗΟΌΚΙ, 11С1Ж2 и 11С1Ж3 аминокислотные последовательности, показанные в 8Ε^ ΙΌ ΝΟ: 23, 35 и 52, где 11С1Ж2 в 8Ε^ ГО ΝΟ: 35 дополнительно определяется, как показано в формуле (I)
где
Хаа1 может представлять собой Ηΐδ, Ме!, Агд, Зег или Туг;
Хаа2 может представлять собой Тгр, ТЬг или Туг; и
Хаа3 может представлять собой Туг, РЬе, Зег или Αδρ.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим ГО-17А, содержащим УН и УЬ, где антитело содержит СС1Ж1, СС1Ж2 и СС1Ж.3 аминокислотные последовательности, показанные в ЗЕС) ГО N0: 2, 5 и 11, где СС1Ж.3 в ЗЕР ГО N0: 11 дополнительно определяется, как показано в формуле (II)
где
Хаа4 может представлять собой Ηΐδ или О1п;
Хаа5 может представлять собой РЬе или О1у;
Хаа6 может представлять собой ТЬг, Уа1 или Αδη;
Хаа7 может представлять собой Не, ТЬг или Туг;
Хаа8 может представлять собой Рго или Агд;
Хаа9 может представлять собой Зег или Рго; и
Хаа10 может представлять собой Ηΐδ, РЬе или Ьеи.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим ГО-17А, содержащим УН и УЬ, где антитело содержит 1.С1Ж1, СС1Ж2 и СС1Ж.3 аминокислотные последовательности, показанные в ЗЕС) ГО N0: 2, 5 и 17, где СС1Ж.3 в ЗЕР ГО N0: 17 дополнительно определяется, как показано в формуле (III)
где
Хаа11 может представлять собой О1п или ТЬг;
Хаа12 может представлять собой Зег или Туг;
Хаа13 может представлять собой Αδη, Агд, Уа1 или Туг;
Хаа14 может представлять собой Ηΐδ или Зег;
Хаа15 может представлять собой Не, ТЬг, Ьеи, А1а или Зег;
Хаа16 может представлять собой Рго, Ьеи или Зег;
Хаа17 может представлять собой Рго, Зег, РЬе или Ьеи; и
Хаа18 может представлять собой А1а, Ьеи или Αδρ.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим ГО-17А, содержащим VII и УЬ, где антитело содержит 11С1Ж1, 11С1Ж2 и 11С1Ж.3 аминокислотные последовательности, показанные в ЗЕС) ГО N0: 24, 36 и 57, где 11С1Ж.3 в ЗЕР ГО N0: 57 дополнительно определяется, как показано в формуле ЦУ)
где
Хаа19 представляет собой Ме!, Не, Ьеи или ТЬг. В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим П.-17Л, содержащим УΗ и УЬ, где антитело содержит СС1Ж1, СС1Ж2 и СС1Ж.3 аминокислотные последовательности, показанные в ЗЕР ГО N0: 3, 6 и 22, где СС1Ж.3 в ЗЕР ГО N0: 22 дополнительно определяется, как показано в формуле (У)
где
Хаа20 представляет собой Ме!, Ьеи, ТЬг или Туг.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим ГО-17А, содержащим УΗ и УЬ, где антитело содержит 11С1Ж1, 11С1Ж2 и 11С1Ж.3 аминокислотные последовательности, показанные в ЗЕС) ГО N0: 25, 46 и 61, где ΗϋΏΚ2 в ЗЕР ГО N0: 46 дополнительно определяется, как показано в формуле (У[)
Хаа21-1-Хаа22-Хаа2з-Хаа24-Хаа25-Хаа2б-Хаа27-Хаа28-Хаа29-¥-А-О-3ν-Κ-Θ, (VI) где
Хаа21 может представлять собой А1а, О1у, ТЬг или Уа1;
Хаа22 может представлять собой Αδη или Зег;
Хаа23 может представлять собой О1у, Ме!, Κνδ, Не, Ьеи или Ηΐδ;
Хаа24 может представлять собой Ьеи, Αδρ, А1а, Ηΐδ, ТЬг, О1у или Зег;
Хаа25 может представлять собой О1у или Зег;
Хаа26 может представлять собой ТЬг, О1у, Туг или Αδρ;
Хаа27 может представлять собой Ηΐδ, Тгр, Туг или РЬе;
- 8 029283
Хаа28 может представлять собой Ьуз, ТЬг или Не; и
Хаа29 может представлять собой Туг, РЬе или Азп, и
НСЭКЗ в 8Е() Ιϋ N0: 61 определяется, как показано в формуле (VII)
О-Ь-Хаазо-Ь-Ρ-ν, (VII) где
Хаа30 может представлять собой Ме1, Ьеи или ТЬг.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим ΙΣ-17Α, содержащим νΗ и νΣ, где антитело содержит НСЭК1, НСОК2 и НСЭК3 аминокислотные последовательности, показанные в 8Ьр ГО N0: 25, 51 и 58, где НСГОК.2 в 8Е0 ГО N0: 51 дополнительно определяется, как показано в формуле (VIII)
где
Хаа31 может представлять собой А1а, Ьуз, Ме! или Шз;
Хаа32 может представлять собой Азп, Ме!, ТЬг или Агд;
Хаа33 может представлять собой О1у или Азр;
Хаа34 может представлять собой Агд, Шз или Азп; и
Хаа35 может представлять собой Азр или О1у.
Антитела, чьи аминокислотные последовательности антигенсвязывающих участков по существу идентичны последовательностям, представленным в табл. 1а (8Ьр ГО N0: 1-61), рассматриваются как часть настоящего изобретения. Как правило, они включают одну или несколько аминокислот, замещенных аминокислотой, имеющей аналогичный заряд либо гидрофобные или стереохимические характеристики, что позволяет улучшить такие свойства антитела, как, например, стабильность или аффинность. Например, консервативные аминокислотные замещения могут означать замещения природных аминокислотных остатков на неприродные, которые не сопровождаются изменением полярности или с незначительными изменениями полярности в районе замещения. Более того, любой природный аминокислотный остаток в полипептиде может быть замещен аланином, согласно способу, описанному как аланинсканирующий мутагенез (МаеЬеппап е! а1., Ас!а РЬузю1. 8сапй. 8ирр1. 643:55-67, 1998; 8азакт е! а1., Айу. БюрЬуз. 35:1-24, 1998). Консервативные замены приведут к созданию молекул, имеющих функциональные и химические характеристики, близкие к исходной молекуле. Неконсервативные замены функциональных и (или) химических характеристик молекул могут быть достигнуты путем тех замещений в аминокислотной последовательности, которые приводят к изменениям (1) в структуре каркаса молекулы в районе замещения, например, к плоской или спиральной конформации, (2) в заряде или гидрофобности молекулы в районе замещения или (3) в размере молекулы. Любое желательное аминокислотное замещение (консервативное или нет) может быть запланировано специалистом в случае необходимости. Например, замещение аминокислот может использоваться для идентификации остатков, влияющих на функционирование антител, таких как остатки, влияющие на аффинность, либо остатки, придающие такие нежелательные свойства как способность к агрегации. Примеры аминокислотных замен показаны в табл. 1Ь и на фиг. 1.
Также могут быть сделаны замены в каркасных участках, в отличие от антигенсвязывающих участков, в случае, если они не изменяют свойств антитела. Замены в каркасных участках могут быть выполнены, например, в остатках верньерной зоны (патент США № 6649055) для улучшения аффинности или стабильности антитела. Замены могут также быть выполнены в тех каркасных участках антитела, которые отличаются последовательностью при сравнении с гомологичной человеческой генной последовательностью зародышевой линии, чтобы уменьшить возможную иммуногенность. Такие модификации могут быть выполнены, например, для антител, полученных из новых библиотек антител, таких как рК библиотеки.
- 9 029283
Таблица 1Ь
Исходный остаток Примеры замещений Больше консервативных замещений
АЬа УаЬ, Ьеи, Ые УаЬ
Агд Ьуз, ОЬп, Азп Ьуз
Азп ОЬп ОЬп
Азр ОЬи СЬи
Суз Зег, АЬа Зег
ОЬп Азп Азп
СЬу Рго, АЬа АЬа
ΗΪ3 Азп, ОЬп, Ьуз, Агд Агд
Не Ьеи, УаЬ, МеР, АЬа, РЬе, Норлейцин Ьеи
Ьеи ЫогЬеизЬп, ЬЬе, УаЬ, МеР, АЬа, РЬе ЬЬе
Ьуз Агд, Азат 1,4-диаминомасляная кислота, ОЬп, Азп Агд
МеР Ьеи, РЬе, ЬЬе Ьеи
РЬе Ьеи, УаЬ, ЬЬе, АЬа, Туг Ьеи
Рго АЬа СЬу
Зег ТЬг, АЬа, Суз ТЬг
ТЬг Зег, АЬа Зег
Тгр Туг, РЬе Туг
Туг Тгр, РЬе, ТЬг, Зег РЬе
УаЬ ЬЬе, Мер, Ьеи, РЬе, АЬа, Норлейцин Ьеи
Консервативные аминокислотные замещения могут осуществляться путем введения в молекулу неприродных аминокислотных остатков, которое обычно происходит при химическом синтезе белков. Аминокислотные замещения могут быть осуществлены, например, с помощью ПЦР мутагенеза (патент США № 4683195). Могут быть созданы библиотеки новых вариантов с помощью хорошо известных способов, например применения случайных (ΝΝΚ) или неслучайных кодонов, таких как кодоны ЭУК, кодирующие 11 аминокислот (Αί'Τ)ΕΟΚΝΗδΥ^), а также поиска вариантов с необходимыми свойствами в уже существующих библиотеках, как показано в примере 1. На фиг. 1 показаны замещения, сделанные с целью улучшения характеристик антител в пяти родственных антителах-антагонистах Ш-17Л в пределах участков ЬСОКЗ, ΗΟΌΚ2 и НСОКЗ. Улучшение свойств, таких как аффинность или стабильность, можно измерить известными способами.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим Ш-17Л, содержащим УН и УЬ, где антитело содержит определенные последовательности УН и УЬ, а также предусматривает выделенные УН и УЬ, как показано в табл. 2.
УЬ УН
Семейство 2
7708 62 67
7785 62 68
8104 62 69
Семейство
бЬ
7706 63 70
8299 63 71
7775 64 70
8103 64 72
Семейство
19а
7700 65 73
8160 66 74
8302 65 75
Таблица 2
МОЕ № I 5Ε<2 ΙΌ ΝΟ: I I тАЬ № I ЗЕО ΙΏ ΝΟ: I
УЬ УН Легкая цепь Тяжелая цепь
624 76 67 87 92
3077 76 68 87 93
7024 76 69 87 94
4538 77 81 88 95
3584 77 82 88 96
732 78 81 89 95
4168 78 83 89 97
1926 79 84 90 98
7146 80 85 91 99
6785 79 86 90 100
5548 80 86 91 100
- 10 029283
Несмотря на то, что варианты осуществления показаны в примерах, содержащих пары вариабельных областей, пары полноразмерных антител или пары участков СЭК1. СЭК2 и СЭК3 - один из тяжелой цепи и один из легкой цепи, специалистам будет понятно, что альтернативные варианты осуществления могут включать одиночные вариабельные участки тяжелой цепи либо одиночные вариабельные участки легкой цепи, одиночные полноразмерные антитела или участки СГОКЕ СЭК2 и СЭК3 из одной либо тяжелой, либо легкой цепи антитела. Одиночный вариабельный участок, полноразмерное антитело, или участки СГОКЕ СЭК2 и СЭК3 одной цепи могут быть использованы для выявления соответствующих доменов в другой цепи; эти две цепи способны к формированию антитела, специфически связывающего 1Ь-17Л. Такой поиск может осуществляться с помощью методов фагового отображения, например, с использованием иерархического двойного комбинаторного подхода, описанного в публикации РСТ № νΟ 92/01047. Согласно указанному способу индивидуальная колония, содержащая клон Н или Ь цепей, используется для инфицирования всей библиотеки клонов, кодирующих другую цепь (Ь или Н), а появляющийся в результате двухцепочечный специфический антигенсвязывающий домен селективно отбирается в соответствии с методами фагового отображения.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим 1Ь-17Л, содержащим УН и УЬ, имеющие аминокислотную последовательность по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотным последовательностям УН и УЬ, показанным в табл. 2.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим 1Ь-17Л, содержащим УН и УЬ, имеющие аминокислотную последовательность по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотным последовательностям УН и УЬ, показанным в табл. 2.
Следующий аспект настоящего изобретения представляет собой выделенное антитело или фрагмент, имеющий определенную аминокислотную последовательность тяжелой и легкой цепей, как показано в табл. 2. Помимо последовательной нумерации остатков в антителах, полипептиды, кодирующие цепи антитела, могут быть пронумерованы на основе системы нумерации Кабата или Чотиа (КаЬа1 с1 а1., 8ециепсе5 οί Рго1си15 οί 1ттиио1одюа1 1п1еге81, 51П ЕД. РиЬНс НеаИЬ 8егуюе, Ναΐίοηαΐ 1пзН1и1сз οί НеаИЬ, ВеШекДа, МД., 1991; СНоДиа апД Ьекк, Мо1. Βίο1. 196:901-917, 1987). Примеры соответствия между последовательной нумерацией и нумерациями Кабата и Чотиа для выбранных цепей антител показаны на фиг. 3. Позиции, выделенные серым цветом, показывают СЭК-области антитела.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим 1Ь-17Л, содержащим УН и УЬ, где антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи паратопа, выбранный из остатков Чотиа 851, Т53, Р56, Υ58, 095, Ь96 и Т97, и вариабельный участок легкой цепи паратопа, выбранный из остатков Чотиа Υ32, Ό50, Υ91, Р93 и Р94. Остатки Чотиа паратопа тяжелой цепи и паратопа легкой цепи соответствуют остаткам тяжелой цепи 852, Т54, Р57, Υ59, Р99, Ь100 и Т101 8ЕО ГО ΝΟ: 86 и остаткам легкой цепи Υ31, Ό49, Υ90, Р92 и Р93 8ЕС) ГО ΝΟ: 79.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим 1Ь-17Л, содержащим аминокислотные остатки вариабельного участка тяжелой цепи паратопа, взаимодействующие с остатками человеческого 1Ь-17Л, имеющего аминокислотную последовательность, показанную в 8Е0 ГО ΝΟ: 105, содержащее первый треониновый остаток, взаимодействующий с К55 или Е57 человеческого ГО-17Л; глутаминовый остаток, взаимодействующий с К55 или Е57 человеческого ГО-17Л; лизиновый остаток, взаимодействующий с Е57 человеческого ГО-17Л; тирозиновый остаток, взаимодействующий с Р59, Е60 или К101 человеческого ГО-17Л; остаток фенилаланина, взаимодействующий с Е60, К101, Е102 или Р103 человеческого ГО-17Л; остаток серина, взаимодействующий с Е60 человеческого ГО-17А и второй треониновый остаток, взаимодействующий с Е60 человеческого ГО-17А.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим ГО-17А, включающим аминокислотные остатки вариабельного участка легкой цепи паратопа, взаимодействующие с остатками человеческого ГО-17А, имеющего аминокислотную последовательность, показанную в 8Е0 ГО ΝΟ: 105, содержащее первый фенилаланиновый остаток, взаимодействующий с Ь26 человеческого ГО-17А; остаток аспарагиновой кислоты, взаимодействующий с К55 или ν67 человеческого ГО-17А; первый тирозиновый остаток, взаимодействующий с Р59, 864 или К101 человеческого ГО-17А; второй фенилаланиновый остаток, взаимодействующий с Р59, Е60, К61, Υ62, К101 или Р110 человеческого ГО-17А и второй тирозиновый остаток, взаимодействующий с У65 человеческого ГО-17А.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим ГО-17А, включающим аминокислотные остатки вариабельного участка тяжелой цепи паратопа и аминокислотные остатки вариабельного участка легкой цепи паратопа, взаимодействующие с остатками человеческого ГО-17А, имеющего ами- 11 029283 нокислотную последовательность, показанную в δΕΟ ΙΌ N0: 105, содержащее тирозиновый остаток в вариабельном участке тяжелой цепи, взаимодействующий с К101 человеческого 1Ь-17А;
фенилаланиновый остаток в вариабельном участке тяжелой цепи, взаимодействующий с К101 человеческого 1Ь-17А;
первый фенилаланиновый остаток в вариабельном участке легкой цепи, взаимодействующий с Υ62 и К101 человеческого 1Ь-17А;
второй фенилаланиновый остаток в вариабельном участке легкой цепи, взаимодействующий с Ь26 и Е110 человеческого 1Ь-17А и тирозиновый остаток в вариабельном участке легкой цепи, взаимодействующий с К101 человеческого 1Ь-17А.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим 1Ь-17А, включающим вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, где антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи паратопа, выбранный из остатков Чотиа Р56 и Υ58; и вариабельный участок легкой цепи паратопа, выбранный из остатков Чотиа Υ91, Р93 и Р94.
Остатки тяжелой цепи паратопа по Чотиа Р56 и Υ58 и остатки легкой цепи паратопа по Чотиа Υ91,
Р92 и Р94 представляют собой остатки, находящиеся в прямом контакте с остатками 1Ь-17А Ь26, Υ62, К101 и Е110. Эти остатки 1Ь-17А являются как частью РаЬ6468 эпитопа, так и полости Р2-кармана (см. далее). Без опоры на какую-либо конкретную теорию, считается, что взаимодействие между определенными остатками РаЬ6468 и 1Ь-17А может быть достаточным для блокирования антителом активности 1Ь17А.
Полностью человеческие тАЬ, в которых отсутствуют последовательности, не свойственные человеку, можно получить и оптимизировать из библиотек фагового отображения с помощью способов, описанных, например, в работах Кпарр1к е! а1., 1. Μοί. ΒίοΙ. 296:57-86, 2000; и КгеЬк е! а1., 1. 1ттипо1. Мс11г 254:67-84 2001. В способе, приведенном в качестве примера, антитела настоящего изобретения были выделены из библиотек экспрессией вариабельных участков тяжелой и легкой цепи в виде слитого белка с белком оболочки р1Х бактериофага. В библиотеках антител был проведен поиск на связывание с человеческим 1Ь-17ти!6 (5>ЕО ГО N0: 105), затем полученные позитивные клоны были дополнительно определены, из лизатов клонов были выделены РаЬ и затем выполнена экспрессия полноразмерных Ι§0. Примеры библиотек антител и способов поиска описаны в работе 8Ы е! а1., 1. Μοί. Βίοί. 397:385-96, 2010; заявках на патент РСТ № АО 09/085462 и США № 12/546850; патентах США № 5223409, 5969108 и 5885793).
Полученные тАЬ могут быть дополнительно модифицированы в их каркасных областях с изменением определенных каркасных остатков до остатков, присутствующих в соответствующей человеческой зародышевой линии, которые показаны в рамках настоящего изобретения.
Антитела настоящего изобретения, специфически связывающиеся с эпитопами ГО-17А, могут быть получены иммунизацией гуманизированных мышей экспрессией локусов человеческого иммуноглобулина (^пЬег^ е! а1., №!иге 368:856-9, 1994; ЕЫиуйй е! а1., №!иге Βίο^ε1ηιο1ο§ν 14:845-51, 1996; Мепйе/ е! а1., №Диге Оепейск 15:146-56, 1997, патенты США №№ 5770429, 7041870 и 5939598) или Ва1Ь/с-мышей белками, кодирующими эпитопы, например пептид 56ΝΕΌΡΕΚΥΡδνΐΑΕ68 (5>ЕО ГО N0: 157) или |00ВРЕРРНСРЖЕРЕЕ1<1Е||6 (5>Е0 ГО N0: 158), а также с помощью метода гибридом КюНег е! а1., №йиге 256:495-97. Полученные антитела тестируются на связывание с зпитопом с помощью стандартных способов. Для сохранения аффинности связывания адаптированные к человеку тАЬ могут быть дополнительно модифицированы включением измененных оснований каркасного участка с помощью способов, предложенных Онееп е! а1., Ргос. №ιΐ1. Асай. 8сЕ (США), 86:10029-32, 1989 и Мот е! а1., Β^ο/ΤесΗпο1οду. 9:421, 1991.
Выделенные антитела, имеющие определенные остатки паратопа (например, остатки ядерного паратопа, показанные в табл. 10), специфически связывающиеся с человеческим ГО-17А, могут быть получены, например, пересадкой остатков паратопа на подходящий каркас, с последующей сборкой сконструированных каркасов в целое антитело, экспрессией полученных антител и тестированием антител на связывание с ГО-17А или влияние на биологическую активность ГО-17А. В качестве примера каркасных белков можно привести аминокислотные последовательности вариабельных областей человеческих антител, кодируемые человеческими генами зародышевой линии. Выбор каркасного белка может основываться, например, на общей гомологии последовательности, % идентичности между остатками паратопа или идентичности канонической структуры каркасного белка и примерного антитела, например тАЬ6785. Человеческие гены зародышевой линии описаны, например, в работе, ΤοιΕπ^οπ е! а1., 1. Μο1. Βίο1 227:776-798, и в международных базах данных IтΜиηοΟеηеΤ^с8 (ΙΜΟΤ) (1ιΙΙρ://\ν\γ\γ.ίιη§1.οΓ§). Также можно использовать консенсусные последовательности человеческих каркасных областей, как описано в патенте США № 6054297. Выбор подходящего каркасного белка может производиться, например, в соответствии со способами, описанными в патенте РСТ № А0 10/045340.
Примерами человеческих генов зародышевой линии, которые можно использовать для получения
- 12 029283 каркасных белков, в которые встраиваются остатки паратопа, являются гены, кодируемые νλ3, УН3, 1λ и Л. Примерами νκ3 генов являются ЮЬУ3-1, Ι0Τν3-9, Ι0Εν3-10, ΙΟΕνβ-η, Ι0Εν3-16, Ι0Εν3-19, ЮЬУ3-21, Ι0Τν3-22, Ι0Τν3-25, Ι0Τν3-27, и Ι0Τν3-32 (ΙΜ0Τ номенклатура, *01 аллели), (δΙΤ) ΙΌ N0: 117-127 соответственно). Примерами генов ΙΑ являются ЮЬЛ, ЮЫ2, ЮЫ3, ЮЫ4, ЮЫ5, ЮЫ6 и ЮЫ7 (δΕΟ ΙΌ N0: 128-134 соответственно). Примерами У1г3 генов являются Ι0Ην3-7, Ι0Ην3-9, Ι0Ην3-11, Ι0ΗΥ3-16,10ΗΥ3-19, Ι0Ην3-20, Ι0ΗΥ3-21, Ι0Ην3-23, Ι0Ην3-30, Ι0Ην3-30*03, Ι0Ην3-33, Ι0Ην3-45, Ι0Ην3-48, Ι0Ην3-64 и Ι0Ην3-74 (ΙΜ0Τ номенклатура, *01 аллели, за исключением случаев, когда определены различные аллели) (δΕΟ ΙΌ N0: 135-150 соответственно). Примерами генов 1Н являются Ι0Η11, Ι0Η12, Ι0Η13, Ι0Η14, Ι0Η15 и Ι0Η.Ι6 (δΕΟ ΙΌ N0: 151-156 соответственно). 1-области зародышевой линии используются полностью или частично для выбора последовательностей ΡΡ4. Например, шАЬ6785 остатки легкой цепи паратопа могут быть привиты на νλ3 протеиновый каркас, кодируемый ΙΟΕν3-1 (δΕΟ ΙΌ N0: 117), который присоединяется к 1-области последовательности, кодируемой ЮЫ2 (δΕΟ ΙΌ N0: 12 9) с включением одиночного аминокислотного остатка между Ι0Τν3-1 и ЮЫ2 последовательностями, например, метионина. νλ3 протеиновый каркас, кодируемый ЮЬУ3-1, может содержать дополнительные заместители, например остаток цистеина в позиции 33 в δΕΟ ΙΌ N0: 117 ('ΆΟν) может быть замещен, например, аспарагином; остатки 1-3 в δΕΟ ΙΌ N0: 117 (δΥΕ) могут быть замещены аминоконцевой последовательностью общей для других семейств лямбда-цепей, например Οδν в семействе ЮЬУ1. Могут быть использованы другие примеры последовательностей функциональных νλ3 и 1λ генов для пересадки тАЬ6785 остатков легкой цепи паратопа без включения либо с включением одного или двух аминокислотных остатков между карбоксиконцом, кодируемым ^3-генами, и аминоконцом, кодируемым Ιλ-генами, так, чтобы длина СПК3-области составляла 11 аминокислот. Например, метионин и изолейцин могут быть вставлены между Ι0Τν3-22 (δΕΟ ΙΌ N0: 124) и ЮЫ2 (δΕΟ ΙΌ N0: 129). На фиг. 2А показан пример выравнивания каркаса легкой цепи, который может быть использован для пересадки. тАЬ6785 остаток тяжелой цепи паратопа может быть пересажен, например, на УН3 каркас, кодируемый Ι0Ην3-23 (δΕΟ ΙΌ N0: 142), который присоединяется к 1-области ΡΡ4 последовательности (11 С-терминальных аминокислот, например, \νθΟ0ΤΕντνδδ) в Ι0Η11 (δΕΟ ΙΌ N0: 151), с включением приблизительно 5-7 остатков, например 6 остатков, составляющих Ηί-ΌΡ.!, между ν и 1 областями. Включение ΗίΌΡ3 приблизительно 5-7 остатков включает введение глутамина, лейцина и треонина, например 3 остатка паратопа из тАЬ6785 УН (табл. 10). Могут быть использованы другие примеры последовательностей функциональных νΗ3 и 1Н генов для пересадки тАЬ6785 остатков тяжелой цепи паратопа. В некоторых случаях одна С-концевая аминокислота из νΗ3 гена может быть удалена перед включением приблизительно 5-7 остатков, составляющих ΗίΌΡ3, так чтобы в каркас были включены только ΡΡ3 последовательности. Также могут быть использованы последовательности из других νΗ3 генов, которые кодируют ί.ΌΡ2 из 17 остатков (остатки 50-66 в Ι0Ην3-23 (δΕΟ ΙΌ N0: 142), также Ι01Η1 может быть замещен РР4-последовательностями других 1Н генов.
Специфичность связывания с человеческим Ш-17А и биологическая активность полученных антител можно оценить с помощью стандартных способов. Выравнивание тАЬ6785 вариабельных участков легкой цепи и вариабельных участков тяжелой цепи примерами νΗ3, νλ3, 1λ или 1Н генов показаны на фиг. 2А и 2В. Кроме того, вместо ядерных остатков паратопа могут быть использованы вытянутые остатки паратопа тАЬ6785, как показано в табл. 10. Сконструированные антитела со встроенным паратопом для улучшения их свойств, например аффинности, могут быть дополнительно модифицированы заменой остатков верньерной зоны (патент США № 6639055) либо остатков, определяющих аффинность (заявка на патент США № 2010/0261620; СоЬаидН е! а1., 1. Μοί ΒίοΙ. 378:622-33, 2008). До тех пор, пока антитело со встроенным паратопом сохраняет способность к связыванию Ш-17А, аминокислотная последовательность каркасного участка антитела со встроенным паратопом может быть на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичной последовательностям каркасной области тАЬ6785. Вместо ν и 1 областей протеиновых последовательностей могут быть использованы аллельные варианты примеров каркасов генов зародышевой линии. Последовательности аллельных вариантов общеизвестны и могут быть получены из базы данных Ιη^πιαίίοηαί IтΜиηοΟеηеΤ^С8 (ΙΜ0Τ) (НПрбЛхлхлултдТогд).
Последовательности антигенсвязывающих участков могут встраиваться в дополнение к остаткам паратопов с помощью стандартных способов. Например, возможна встройка полной последовательности ΗίΌΚ3 или ЕС1ЖЕ
Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является выделенное антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим Ш-17А, конкурирующим за связывание человеческого Ш-17А с моноклональным антителом, содержащим определенные ΗίΌΚΤ, ΗίΌΚ2 и ΗίΌΚ3, а также ЬСОКТ, ЕСЭР2 и ЕСЭР3 аминокислотные последовательности. Примерами моноклональных антител настоящего изобретения являются выделенные антитела, включающие ЫСОК1, ΗΕ.ΌΒ2 и ΗΕ.ΌΒ3 аминокислотные последовательности, показанные в δΕΟ ΙΌ N0: 25, 43 и 60, а также ЬСОКТ, ЕСЭР2 и ЕСЭР3 аминокислотные последовательности, показанные в δΕΟ ΙΌ N0: 3, 6 и 18.
Конкуренция за специфическое связывание с Ш-17А может быть определена ίη νίίτο с помощью известных способов. Например, оценка связывания ΜδΌ διιΙΓο-Ταβ™ ПЖ-эфир-меченого антитела с Ш- 13 029283
17А в присутствии немеченого антитела может быть проведена с помощью ИФА.
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой выделенное антитело или его фрагмент, при этом антитело связывается особым образом с человеческим 1Ь-17А, имеющим последовательность, показанную в §ЕО ГО N0: 105 на аминокислотных остатках 56-68 (§Е0 ГО N0: 157) и 100-116 (§Е0 ГО N0: 158); или на остатках Ь26, К55, Е57, Р59, Е60, К61, Υ62, §64, У65, Υ67, К101, Е102, Р103 и Е110.
Несколько хорошо известных способов могут быть использованы для определения эпитопа антител, предложенных в настоящем изобретении. Например, в случае, когда известна структура каждого из компонентов, может быть использован анализ ίη δίΐίοο белок-белковой стыковки с целью идентификации способных к взаимодействию участков. Может быть проведено избирательное замещение водорода дейтерием в антигене и антителе с целью определения участков антигена, способных связываться с антителом. Сегментный и точечный мутагенез антигена могут быть использованы для определения местоположения необходимых для связывания антитела аминокислот. Со-кристаллическая структура комплекса антиген-антитело используется для идентификации остатков, участвующих в образовании эпитопа и паратопа.
Описанные ранее антитела к анти-1Ь-17А связываются с эпитопами на ГО-17А, в отличие от эпитопа для РаЬ6468, описанного в настоящем изобретении. Ранее были описаны остатки антител, связывающие человеческий ГО-17А (§ЕО ГО N0: 105) 74-85, 46-53, 71-87, 80-86, 11-18, 29-41 или 54-62 (публикации РСТ № Υ0 08/021156, Υ0 07/106769, Υ0 07/149032, Υ0 07/070750; заявка на патент США № и§ 2008/095775 соответственно). Конформационные эпитопы были описаны в публикации РСТ № Υ0 09/130459 и Оегйагд! е! а1., I. Мо1. ΒίοΙ: 394:901-21, 2009.
Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является выделенное антитело или его фрагмент, где антитело специфически связывается с полостью Р2-кармана на ГО-17А, при этом полость Р2-кармана включает аминокислотные остатки У22, У24, Ь26, 128, Υ62, Ь99, К.101, Е110 и Ь112 в §ЕО ГО N0: 105.
Сокристаллическая структура ГО-17А гомодимера с анти-1Ь-17А РаЬ6468 определяет гидрофобную полость Р2-кармана на поверхности ГО-17А гомодимера, которая может быть связана с ГО-17КА (см. примеры). Используемый в настоящем документе термин полость Р2-кармана относится к третичным гидрофобным структурным полостям на ГО-17А гомодимере, где открытыми на поверхности остатками в Р2-кармане являются У24, Ь26, 128, Υ62, Ь99, К101, Е110 и Ь112 на мономере А и У22, У24 и Ь112 на мономере В, и наоборот. Выбранные антитела настоящего изобретения, взаимодействующие с ГО-17А, например, РаЬ6468, имеют прямые контакты с остатками полости Р2-кармана Ь26, Υ62, К101 и Е110, остатки которого являются также частью эпитопа РаЬ6468. Без опоры на какую-либо конкретную теорию, считается, что антитела настоящего изобретения, связывающиеся с выбранными остатками полости Р2-кармана ГО-17А, блокируют взаимодействие между ГО-17А и ГО-17КА. Исходя из со-кристаллической структуры, фенилаланиновый мотив (ЕЕ) в остатках 93 и 94 в легкой цепи (§Е0 ГО N0: 79) РаЬ6468 блокирует ГО-17А/ 1Ь-17КА-взаимодействие, блокируя полость Р2-кармана. В рамках настоящего изобретения также рассматриваются другие антагонисты блокаторов полости Р2-кармана, такие как новые пептиды и низкомолекулярные вещества. Они могут быть смоделированы на основе соструктуры 1Ь17А/ЕаЬ6468 и проверены на способность замещать ЕаЬ6468 при связывании с ГО-17А. Например, пептидные ингибиторы могут быть отобраны из случайно выбранных пептидных библиотек, которые включают ЕЕ-мотив (например, библиотеки ХХХХЕЕХХ; где X - любая аминокислота, Е - фенилаланин), отображены на бактериофаге в виде слитых, например, с ρΙΙΙ, рУ11 или р1Х, белков оболочки (патент США № 5223409; Оао е! а1., Ргос. ШО. Асад. §С1. и§А, 96:6025-30, 1999, Тотейа е! а1., 1. 1ттипо1. Медюдк 360:39-46, 2010; §Ы е! а1., 1. Мо1. Вю1. 397:385-96, 2010) и затем проверены на способность ингибировать связывание ЕаЬ6468 с ГО-17А и снижать активность ГО-17А.
Низкомолекулярные вещества могут быть отобраны из библиотек синтетических или природных соединений либо их комбинаций; полученные первичные положительные наиболее пригодные соединения могут быть легко модифицированы с получением структурных аналогов искомого вещества. Способы создания пептидных библиотек и р1Х-слияний, а также скрининга полученных библиотек хорошо известны.
Следующим вариантом осуществления настоящего изобретения является способ ингибирования взаимодействия человеческого ГО-17А с ГО-17КА, включающий обеспечение человеческого ГО-17А и ГО-17КА и приведение в контакт человеческого ГО-17А с антагонистом, который специфически связывается с человеческим ГО-17А по меньшей мере на одном аминокислотном остатке, выбранном из группы, состоящей из У22, У24, Ь26, Ι28, Υ62, Ь99, К101, Е110 и Ь112.
Следующим вариантом осуществления настоящего изобретения является способ снижения биологической активности человеческого ГО-17А, включающий обеспечение человеческого ГО17-А и ГО-17КА и приведение в контакт человеческого ГО-17А с антагонистом, который специфически связывается с человеческим ГО-17А по меньшей мере на одном аминокислотном остатке, выбранном из группы, состоящей из У22, У24, Ь26, Ι28, Υ62, Ь99, К101, Е110, и Ь112.
- 14 029283
Человеческие 1Ь-17Л и 1Ь-17КЛ могут быть представлены изолированными белками либо слитыми белками. Гомодимер человеческого 1Ь-17Л может быть очищен от субстрата активированных ТН17клеток, полученных стимуляцией ίη νΐίτο ί'.Ό4 Т-клеток, ранее не подвергавшихся подобной обработке, двумя анти-СО3/анти-СО28 стимуляциями в присутствии 1Ь-2, 1Ь-23 и 16-1 β. 1Ь-17КЛ может быть связан с клетками или клеточными мембранами, может быть нативным или сверхэкспрессированным либо может быть представлен фрагментом 1Ь-17КЛ, например внеклеточным доменом рецептора. 1Ь-17КЛ может быть человеческим 1Ь-17КЛ или 1Ь-17КЛ других видов, например мышей, крыс или обезьян. Антагонисты, связывающиеся с остатками человеческого 1Ь-17Л-У22, У24, Ь26, 128, Υ62, Ь99, К101, Р110 и Ь112, - могут быть определены по их способности замещать РаЬ6468 при связывании с 1Ь-17Л, исследованием мутагенеза или по со-кристаллическим структурам. Слитые белки человеческого 1Ь-17Л и 1Ь17КА могут быть получены известными способами. Примером слитого протеина является растворимый 1Ь-17КЛ, слитый с доменом Рс иммуноглобулина.
Следующим аспектом настоящего изобретения является изолированный полинуклеотид, кодирующий любую из тяжелых или легких цепей антитела или их фрагменты в настоящем изобретении, либо их комплемент. Некоторые полинуклеотиды описываются в настоящем изобретении, однако другие полинуклеотиды, которые, принимая во внимание вырожденность генетического кода или предпочтительность использования кодонов в данной экспрессионной системе, кодируют предложенные в настоящем изобретении антитела-антагонисты, также рассматриваются как часть настоящего изобретения. Примеры полинуклеотидов показаны в §ЕЦ ГО N0: 101, 102, 103 и 104.
Некоторыми антителами-антагонистами могут быть антитела изотипов 1§С, 1§О, 1дЕ, 1§Л или 1дМ. Кроме того, эти антитела-антагонисты могут модифицироваться на постранскрипционном уровне за счет таких процессов, как гликозилирование, изомеризация, дегликозилирование или ненатуральная ковалентная модификация, такая как добавление активной группы полиэтиленгликоля (ПЭГ) или липидизация. Такие модификации могут происходить ίη νΐνο или ίη νΐίτο. Например, предлагаемые в настоящем изобретении антитела могут быть конъюгированы с полиэтиленгликолем с целью усовершенствования их фармакокинетических характеристик. Конъюгация может быть выполнена с помощью известных специалистам способов. Было показано, что конъюгация терапевтических антител с ПЭГ усиливает их фармакодинамику и при этом не изменяет функцию. См. ЭескеП еί а1., ηί. ί. Сапсег 87:382-90, 2000; ΚηίβΙιΙ еί а1., Р1а1е1е15 15:409-18, 2004; Ьео^ еί а1., СуФкше 16:106-19, 2001; и Υηηβ еί а1., Р^οίе^η Εη§. 16:761-70, 2003.
Фармакокинетические свойства антител, описанных в настоящем изобретении, могут быть усилены за счет модификаций Рс с применением способов, хорошо известных специалистам. Рс антитела не участвуют непосредственно в связывании антитела с антигеном, однако проявляют различные эффекторные функции. Рс антитела является хорошо известным термином; определяется при папаиновом расщеплении антител. Рс антитела непосредственно участвует в антителозависимой клеточнообусловленной цитотоксичности (ЛЭСС) и комплементзависимой цитотоксичности (СЭС), в основе чего лежит активация комплемента, С1д-связывание и связывание с Рс-рецептором. Такой комплемент и места связывания с Рс-рецептором хорошо изучены и включают, например, Ь234, Ь235, Ό270, N297, Е318, К320, К322, Р331 и Р329 (нумерация в соответствии с ЕЙ тбех Кабата) (Вгекке еί а1., Еиг. ί. 1шщнпо1. 24:25427, 1995; патенты США № 5624821, 7597889, С^еМ и Μοιτίδοη. ί. Ехр. Меб. 173:1483-91, 1991). Например, мутация Реи234/Реи235 в шарнирном участке 1§С1 в Р234Л/Р235Л или мутация РЬе235/Ьеи236 в шарнирном участке 1§С4 в Р235Л/Ь236Л минимизирует связывание РсК и уменьшает способность иммуноглобулина опосредовать комплементарно зависимую цитотоксичность и ЛЭСС. §ег до Ргозаместителя в Су8-Рго-8ег-Су8 (СР8С) мотиве в шарнирном участке тяжелых цепей 1§С4 под действием изомераз способны образовывать либо внутренние либо межцепочечные дисульфидные связи ίη νΐνο (Ла1Ьег8е апб ЗсНиигтап Iттиηο1ο§у 105:9-19, 2002), что приводит к 1§О1-подобному поведению, когда Рго-замещенные молекулы не способны формировать дисульфидные связи между тяжелыми цепями. Мотив СР8С, как правило, расположен в позиции остатка 228 зрелой тяжелой цепи, но расположение этого мотива может изменяться в зависимости от длины СОК. Пример Рс-области 1§С1 с Реи234/Реи235 остатками имеет аминокислотную последовательность, показанную в §ЕЦ ГО N0: 114, где остатки Ь117 и Ь118 соответствуют Реи234/Реи235 остаткам зрелой тяжелой цепи. Пример Рс-области 1§О4 с Су8-Рго8ег-Су8 (СР8С) мотивом и Реи234/Реи235 остатками имеет аминокислотную последовательность, показанную в §ЕЦ ГО N0: 115, при этом СР8С мотив расположен в остатках 106-109, а Реи234/Реи235 остатки в позиции 122 и 123.
Антитела или их фрагменты, составляющие предмет настоящего изобретения, модифицированные с целью улучшения стабильности, селективности, перекрестной реактивности, аффинности, иммуногенности или достижения других желательных биологических или биосептических характеристик, также являются частью настоящего изобретения. Стабильность антитела определяется целым рядом факторов, включая (1) пространственную укладку индивидуальных доменов, влияющую на естественную стабильность, (2) поверхностное взаимодействие белков, определяющее спаривание НС и ЬС, (3) глубину расположения полярных и заряженных аминокислотных остатков, (4) сеть водородных мостиков между полярными и заряженными аминокислотными остатками; а также (5) поверхностный заряд и распределе- 15 029283 ние полярных аминокислотных остатков наряду с другими внутри- и межмолекулярными взаимодействиями (ЛУогп с1 а1., 1. Μοί. ΒίοΙ. 305:989-1010, 2001). Аминокислотные остатки, способные дестабилизировать структуру, могут быть идентифицированы на основании кристаллической структуры антитела или путем молекулярного моделирования, а эффект определенных аминокислотных остатков на стабильность антитела может быть проверен путем создания мутаций и оценки их влияния. Один из способов увеличить стабильность антитела заключается в увеличении срединной точки термоперехода (Тт), измеряемой путем дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). Как правило, Тт белка имеет положительную корреляцию с его стабильностью и отрицательную корреляцию с подверженностью нарушениям третичной структуры и денатурации в растворах, а также деградации, которая также зависит от склонности белка к нарушению третичной структуры (Кетте1е с1 а1., ВюрЬагт. 13:36-46, 2000). Многие исследования свидетельствуют о корреляции между степенью физической стабильности, измеренной как термостабильность путем Э8С. и измерениями, проведенными с помощью других способов (Сир1а е1 а1., ААР8 РЬагт8с1. 5Е8, 2003; ИЬапд е! а1., 1. Ркагт. 8сг 93:3076-89, 2004; Маа е! а1., Ιηΐ. 1. Ркагт., 140:155-68, 1996; Веби-Аббо е! а1., Ркагт. Кек., 21:1353-61, 2004; Кетте1е е! а1., Ркагт Кек., 15:200-8, 1997). Результаты исследований состава позволяют предположить, что Тт РаЬ-фрагмента влияет на долговременную физическую стабильность соответствующего тАЬ. Различия аминокислот каркасного фрагмента или участков СОК может значительно влиять на термическую стабильность домена РаЬ (Уакш, е! а1., РЕВ8 Ье!!. 353:143-6, 1994).
Предложенные в настоящем изобретении антитела-антагонисты могут связывать 1Ь-17А с К4, меньшей либо равной 10-, 10- , 10-, 10- , 10- или 10- М. Аффинность данной молекулы к 1Ь-17А, например, такой как антитело, может быть определена экспериментально с помощью любого подходящего способа. Такие способы могут включать использование аппаратуры В1асоге или К1пЕхА, набора реагентов ИФА или способов конкурентно-связывающего анализа, хорошо известных специалистам.
Антитела-антагонисты, с необходимой аффинностью связывающиеся с человеческим 1Ь-17А, могут быть выбраны в библиотеках вариантов или фрагментов с помощью способов, основанных на созревании аффинности антитела. Антитела-антагонисты могут быть идентифицированы с помощью соответствующих способов на основе их способности ингибировать биологическую активность 1Ь-17А. Такие способы могут включать тестовую систему с геном-репортером или измерение с помощью уже известных способов производства цитокинов, как показано в приложении.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения заключается в векторе, содержащем по меньшей мере один предложенный в данном изобретении полинуклеотид. Такие векторы могут быть плазмидными, вирусными, бакуловирусными экспрессионными векторами, векторами на основе транспозонов или любыми другими векторами, пригодными для интродукции предложенных в настоящем изобретении полинуклеотидов в данный организм или в данное генетическое окружение.
Следующий вариант осуществления настоящего изобретения заключается в клетках-хозяевах, включающих какой-либо из полинуклеотидов настоящего изобретения, таких как полинуклеотид, кодирующий полипептид, включающий вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в 8ЕО ГО N0: 67-75 и 81-86, или вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в 8ЕО ГО N0: 62-66 и 76-80, или тяжелую цепь иммуноглобулина, имеющую аминокислотную последовательность, показанную в 8Е0 ГО N0: 92-100, или легкую цепь иммуноглобулина, имеющую аминокислотную последовательность, показанную в 8Е0 ГО N0: 87-91. Такими клетками-хозяевами могут быть эукариотические, бактериальные, растительные клетки или клетки архей. Как правило, используются эукариотические клетки млекопитающих, насекомых, птиц или другие клетки животного происхождения. Эукариотические клетки млекопитающих включают бессмертные клеточные линии, такие как гибридомы или клеточные линии миеломы, например 8Р2/0 (Американская коллекция типовых культур (АТСС), Манассас, УА, СКЬ-1581), N80 (Европейская коллекция клеточных культур (ЕСАСС), г. Солсбери, Уилтшир, Великобритания, ЕСАСС № 85110503), Р0 (АТСС СКЬ-1646) и А§653 (АТСС СКЬ-1580) мышиные клеточные линии. Обычно используется линия клеток миеломы человека И266 (АТТС СКЕ-Т1В-196). Другие полезные клеточные линии включают линии, полученные из яичников китайского хомячка (СНО), например, линии СН0-К18У (Ьоп/а Βίο1ο§ίεκ, г. Уокерсвилл, штат Мэриленд), СН0-К1 (АТСС СКЬ-61) или ΏΟ44.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения заключается в способе получения антител, способных реагировать с ГО-17А, включающем культивирование предложенных в настоящем изобретении клеток-хозяев и отбор антител, производимых клетками-хозяевами. Способы создания и очистки антител хорошо известны специалистам в данной области. Сконструированные для экспрессии семейства последовательностей тяжелых цепей 2, 6а, 6Ь, 19а и 19Ь могут включать Ь-концевую лидерную последовательность, например МЛ\УУ\УТЬТЕЬМАЛЛО81ОА (8Е0 ГО N0: 109). Примеры нуклеотидных последовательностей, кодирующих тяжелую цепь кандидата тАЬ6785 (семейство 19) с лидерной последовательностью, а также зрелую форму (без лидерной последовательности), показаны в 8Е0 ГО N0: 101 и 102 соответственно. Аналогичным образом, последовательности легких цепей предложенных в настоящем изобретении антител семейства 2, 6а, 6Ь могут включать на Шконце лидерную последователь- 16 029283 ность, такую как МдурШУЪдШГОШагс (8ЕО ГО N0: 110), и последовательности легких цепей предложенных в настоящем изобретении антител семейства 19а и 19Ь могут включать на Ν-конце лидерную последовательность, такую как МЛ^8РЬЬЬТЬЬЛНСТС8^Л (8Е0 ГО N0: 116). Примеры нуклеотидных последовательностей, кодирующих тяжелую цепь после оптимизации кодонов тАЬ6785 с лидерной последовательностью, а также зрелую форму (без лидерной последовательности), показаны в 8Е0 ГО N0: 103 и 104 соответственно.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения заключается в клеточной линии гибридомы, производящей предложенные в настоящем изобретении антитела.
Способы лечения
1Ь-17А-антагонисты настоящего изобретения, например антитела-антагонисты ГО-17А, могут быть использованы для лечения состояний в животном организме, при которых желательно уменьшить влияние ГО-17А. ГО-17А может циркулировать в организме, либо может быть локализован в завышенном количестве в определенных частях тела, например, в месте воспаления. Без опоры на какую-либо конкретную теорию, известно, что антагонисты, представляющие настоящее изобретение, проявляют положительные терапевтические свойства, предотвращая либо уменьшая связывание ГО-17А с рецепторами к нему, либо гомо- или гетеродимеризацию ГО-17А. Предложенные в настоящем изобретении способы могут быть использованы для лечения любого животного. Например, это могут быть млекопитающие, в том числе человек, грызуны, собаки, кошки и сельскохозяйственные животные.
Антитела настоящего изобретения могут быть использованы для профилактики и лечения ГО-17Аопосредованных состояний, таких как воспалительные состояния, аллергии и аллергические состояния, реакции, обусловленные гиперчувствительностью, аутоиммунные заболевания, тяжелые инфекционные состояния, а также при отторжении трансплантированного органа или ткани. Антитела настоящего изобретения также пригодны для получения препаратов для лечения таких состояний, при этом препараты для лечения приготовлены для введения в дозировках, определенных в настоящем документе. Примерами 1Ь-17А-опосредованных состояний являются воспалительные состояния, иммунные и пролиферативные заболевания, включая ревматоидный артрит (КА), анкилозирующий спондилит, псориатический артрит, остеоартрит, остеопороз, увеит, воспалительный фиброз (например, склеродермию, фиброз легких, цирроз печени), воспалительные заболевания кишечника (например, болезнь Крона, язвенный колит и воспаление кишечника), астму (в том числе аллергическую астму), аллергии, хроническое обструктивное заболевание легких, рассеянный склероз, псориаз, системную красную волчанку, диабет и рак. Описаны положительные результаты у пациентов, получающих лечение, направленное против человеческого ГО-17А, при ревматоидном артрите, псориазе и неинфекционном увеите (Сепоуехе е! а1., ЛпНгПй Кйеит. 62:929-39, 2010; НиеЬег е! а1., 8с1. Тгаи§1. Мей. 2: 52га72., 2010).
Примером воспалительного состояния является воспаление легких. Примеры воспалительных состояний легких включают вызванные инфекцией состояния легких, в том числе связанные с вирусными, бактериальными, грибковыми, паразитарными и прионовыми инфекциями; состояния легких, индуцированные аллергеном; состояния легких, индуцированные загрязнением окружающей среды, такие как асбестоз, силикоз и бериллиоз; состояния легких, вызванные аспирацией желудка, а также воспалительные состояния, вызванные иммунной дисрегуляцией и зависящие от генетической предрасположенности, такие как кистозный фиброз, состояния легких, индуцированные физической травмой, например нарушение вентиляции легких. Указанные воспалительные состояния также включают астму, эмфизему, бронхиты, хроническое обструктивное заболевание легких (СОРЭ), саркоидоз, гистиоцистоз, лимфангиомиоматоз, острое повреждение легких, синдром острого нарушения дыхания, хроническое заболевание легких, бронхопульмональную дисплазию, внебольничную пневмонию, госпитальную пневмонию, пневмонию, вызванную искусственной вентиляцией легких, сепсис, вирусную пневмонию, инфекцию вирусом гриппа, парагриппозную инфекцию, инфекцию ротавирусом, инфекцию человеческим метапневмовирусом, респираторно-синциальную инфекцию, аспергиллез легких и другие грибковые инфекции. Как правило, связанные с инфекцией воспалительные заболевания могут включать вирусную или бактериальную пневмонию, в том числе тяжелую пневмонию, муковисцидоз, бронхит, обострения заболеваний дыхательных путей и синдром острой дыхательной недостаточности (АКО8). Такие связанные с инфекцией состояния могут вовлекать множественные инфекции, такие как первичную вирусную и вторичную бактериальную инфекции. Нарушение регуляции выработки ГО-17А может играть роль в патогенезе заболеваний легких, таких как астма и хроническое обструктивное заболевание легких (СОРЭ) (обзор в А1согп е! а1., Аппи. Кеу. РЬу8ю1. 72:495-516, 2010). Было доказано участие ГО-17А в регуляции нейтрофильного воспаления в легких - показателя тяжелой степени бронхиальной астмы, а также СОРЭ вследствие способности ГО-17А запускать факторы, влияющие на мобилизацию нейтрофилов, их продолжительность жизни и активацию в эпителиальных клетках легких (например, ГО-6, ГО-8, СМ-С8Р, СС8Р). Антитела настоящего изобретения подавляют секрецию ГО-6, ГО-8 и СМ-С8Р из эпителиальных клеток легких, благодаря чему могут оказывать положительное влияние при лечении или профилактике у пациентов с воспалительными состояниями легких, такими как астма и СОРЭ. В качестве животных моделей для изучения астмы и воспаления дыхательных путей обычно используют модель провокационного введения овальбумина, а также модели, в которых сенсибилизация животного достигается введени- 17 029283 ем метахолина (Не88е1 с1 а1., Еиг. ί. РЬагтасо1. 293:401-12, 1995). Ингибирование продукции цитокинов и хемокинов в культурах человеческих эпителиальных бронхиальных клеток, бронхиальных фибробластов или клеток гладкой мускулатуры дыхательных путей может быть использовано в качестве моделей ίη νίίτο. Введение предложенных в настоящем изобретении антагонистов в любую из указанных моделей может быть использовано для оценки эффективности данных антагонистов в облегчении симптомов и изменении течения астмы, воспалений дыхательных путей, СОРИ и других подобных заболеваний.
Другим примером воспалительного состояния является псориаз. Для псориаза характерна опосредованная Т-клетками гиперпролиферация кератиноцитов в сочетании с воспалительным инфильтратом. Воспаление и гиперпролиферация псориатической ткани связаны с гистологическими и антигенными характеристиками и цитокиновым профилем, отличными от характеристик здоровой кожи. Цитокинами, ассоциированными с псориазом, являются ΤΝΡα, 1Ь-19, 1Ь-18, 1Ь-15, 1Ь-12, 1Ь-7, ΙΡΝγ, 1Ь-17Л и 1Ь-23 (Оий)оп88оп еί а1., СПп. Ехр. 1ттипо1. 135:1-8, 2004). Была обнаружена гиперэкспрессия 1Ь-17Л в участках с псориатическими поражениями (патент США № 7776540), также были описаны положительные результаты у пациентов, получающих лечение, направленное против человеческого 1Ь-17Л (НиеЬег еί а1., 8с1. Тгап§1. Мей. 2: 52га72., 2010).
Артриты, включая остеоартрит, ревматоидный артрит, артрит суставов, возникший в результате повреждения, и другие подобные заболевания, являются обычными воспалительными состояниями, лечение которых может быть улучшено за счет терапевтического использования таких противовоспалительных белков, как представленные в настоящем изобретении а.нтагонисты. Активация сигнального пути 1Ь-17Л может приводить к непрекращающемуся воспалению и повреждению других тканей в воспаленном суставе. Существуют животные модели для изучения ревматоидного артрита. Например, при моделировании коллагениндуцированного артрита (КИА) у мыши развивается хронический воспалительный артрит, который сильно напоминает человеческий ревматоидный артрит. Введение представленных в настоящем изобретении антител 1Ь-17Л экспериментальным мышам с КИА может быть использовано для оценки применения указанных антагонистов для облегчения симптомов и изменения течения болезни.
Примеры воспалительных состояний желудочно-кишечного тракта включают воспалительное заболевание пищеварительного тракта, ульцеративный колит и болезнь Крона, колит, индуцированный внешними воздействиями (например, воспаление ЖКТ (например, колит), вызванное или сопутствующее (например, в качестве побочного эффекта) терапевтическим режимам, таким как химиотерапия, радиотерапия и тому подобные), инфекционный колит, ишемический, коллагеновый или лимфоцитный колит, некротический энтероколит, колиты, вызванные другими состояниями, такими как хроническая грануломатозная болезнь или целиакия, пищевые аллергии, гастриты, инфекционные гастриты или энтероколиты (например, хронический гастрит, вызванный инфекцией НеПсоЬасЮг ру1оп), а также другие формы желудочно-кишечного воспаления, вызванные возбудителем инфекции. Существует несколько моделей воспалительных состояний желудочно-кишечного тракта на животных. Наиболее распространена модель колита, индуцированного введением 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислоты/этанола (ΤΝΒδ), и модель с применением оксазалона, который индуцирует хроническое воспаление и изъязвление прямой кишки (№игаШ еί а1., Шегп. Еее. 1ттипо1 19:51-62, 2000). Другая модель использует декстран сульфата натрия (Όδδ), который индуцирует острый колит, сопровождающийся такими симптомами, как кровавая диарея, потеря веса, сокращение прямой кишки и вызываемое инфильтрацией нейтрофилов изъязвление слизистой оболочки. Другая модель основана на адоптивном переносе наивных ί'.Ό45ΕΒΙιι?Ι' СИ4 Тклеток мышам линий ЕЛО или 8СГО. В данной модели наивные Т-клетки донора атакуют кишечник реципиента, вызывая хроническое воспаление пищеварительного тракта и симптомы, сходные с воспалительным заболеванием пищеварительного тракта человека (Ееай апй Ро\упе. Сигг. РгоЮс. 1ттипо1. Гл. 15, раздел 15.13, 2001). Введение предложенных в настоящем изобретении антагонистов в любую из названных моделей может быть использовано для оценки потенциальной эффективности указанных антагонистов в облегчении симптомов и изменении течения болезней, связанных с воспалительным процессом в пищеварительном тракте, например воспалительного заболевания пищеварительного тракта.
Фиброз почек может развиться вследствие острого инсульта (например, ишемии, спровоцированной трансплантатом/реперфузии) (Ргееке еί а1., №рЬго1. Όίη1. ТгапкрЦпР 16:2401-6, 2001) либо хронического состояния (например, диабета) (Είίζ еί а1., №рЬго1. И1а1. Тгап8р1ап£ 11 8ирр1 9:38-44, 1996). Патогенез обычно характеризуется сначала воспалительной реакцией, затем устойчивым фиброгенезом аппарата клубочковой фильтрации и канальцевого интерстиция (Ьш, Кайпеу 1пР 69:213-7, 2006).
Было показано, что тубулоинтерстициальный фиброз играет критическую роль в патогенезе поражения почек до развития терминальной почечной недостаточности, было также выявлено, что клетки проксимальных канальцев являются основным медиатором (РЫШрк апй δίеайтаη, НЕ1о1. НЕ1ора11ю1. 17:247-52, 2002; РЫШрк, Сйапд Сипд Мей. 1. 30:2-6, 2007). Фиброгенез в тубулоинтерстициальном отделе частично опосредуется активацией находящихся там фибробластов, которые выделяют провоспалительные цитокины, стимулирующие эпителий проксимальных канальцев к выделению местных медиаторов воспаления и фиброгенеза. Кроме того, фибробласты и эпителиальные клетки выделяют хемотаксические цитокины, которые обеспечивают направленный градиент, направляющий проникновение моноци- 18 029283 тов/макрофагов и Т-клеток в тубулоинтерстиций. Воспалительный инфильтрат продуцирует дополнительные фиброгенные и провоспалительные цитокины, что ведет к дальнейшей активации высвобождения цитокинов из фибробластов и эпителия, при этом в эпителии происходит изменение фенотипа, при котором клетки накапливают избыточное количество компонентов внеклеточного матрикса (Зипопюп. КМпеу 1п!. 71:846-54, 2007). Описано повышение содержания 1Ь-17А при отторжении почечного аллогенного трансплантата у человека (Уаи Коо!еп е! а1., 1. Ат. Зое. №рЬго1. 9:1526-34, 1998; Ьоопд е! а1., 1. Ра!Ь. 197:322-32, 2002). 1Ь-17А стимулирует выработку провоспалительных медиаторов 1Ь-6, 1Ь-8, 03компонента комплемента, а также хемокина, выделяемого Т-клетками при активации (ΚΑΝΤΕ3), эпителием проксимальных канальцев (Уап Коо!еп е! а1., 1. Ат. Зое. №рЬго1. 9:1526-34, 1998; \Уо11тап е! а1., 1. Ат. №рЬго1. 11:2044-55, 2000). Эти факторы, в свою очередь, опосредуют мобилизацию в интерстиции других типов клеток, участвующих в воспалении, что способствует поддержанию воспалительного/иммунного ответа, и в случае, если процесс не подавляется, возникновению фиброза и хронической нефропатии аллогенного трансплантата (Касикеп е! а1., КЦпеу 1п!. 55:713-23, 1999; Маппоп, Ат. 1. Тгап$р1. 6:867-75, 2006).
Другие типичные фиброзные состояния включают фиброз печени (включая, помимо прочего, такие заболевания, как цирроз, вызванный алкоголем, цирроз, индуцированный вирусной инфекцией, аутоиммунный гепатит); фиброз легких (включая, помимо прочего, такие заболевания, как склеродермия, идиопатический фиброз легких); фиброз почек (включая, помимо прочего, такие заболевания, как склеродермия, нефрит, вызванный диабетом, гломерулонефрит, нефрит, вызванный системной красной волчанкой); фиброзы кожи (включая, помимо прочего, такие заболевания, как склеродермия, гипертрофические и келоидные рубцы); миелофиброз; нейрофиброматоз; фиброму; фиброзные изменения кишечника; и фиброзные спайки, возникающие в результате хирургического вмешательства. Фиброз может быть органоспецифическим или системным. Органоспецифический фиброз может быть связан с одним из следующих заболеваний: фиброз легких, фиброз печени, фиброз почек, фиброз сердца, фиброз сосудов, фиброз кожи, фиброз глаза или фиброз костного мозга. Фиброз легких может быть связан с одним из следующих заболеваний: идиопатический фиброз легких, медикаментозный фиброз легких, астма, саркоидоз или хроническое обструктивное заболевание легких. Фиброз печени может быть связан с одним из следующих заболеваний: цирроз, шистосомоз или холангит. Цирроз может быть алкогольным, возникшим вследствие гепатита С или первичным билиарным циррозом. Холангит может быть склерозирующим холангитом. Фиброз почек может быть связан с диабетической нефропатией или с вызванным системной красной волчанкой гломерулосклерозом. Фиброз сердца может быть связан с инфарктом миокарда. Фиброз сосудов может быть связан с повторным сужением артерий после ангиопластии или атеросклерозом. Фиброз кожи может быть связан с возникшими в результате ожога рубцами, гипертрофическими рубцами, келоидными рубцами или нефрогенной фиброзирующей дермопатией. Фиброз глаза может быть связан с ретро-орбитальным фиброзом, с хирургическим вмешательством при лечении катаракты или пролиферативной витреоретинопатией. Фиброз костного мозга может быть связан с идиопатическим миелофиброзом или медикаментозным миелофиброзом. Системные фиброзы могут быть системными склерозами или реакцией трансплантат против хозяина.
Другие воспалительные состояния и нейропатии, которые могут быть предупреждены или вылечены представленными в настоящем изобретении способами, являются болезнями, вызванными аутоиммунными заболеваниями. Эти состояния и нейропатии включают рассеянный склероз, системную красную волчанку и нейродегенеративные заболевания и расстройства центральной нервной системы (ΟΝ3), например, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, биполярное аффективное расстройство и амиотрофический боковой склероз (АЬЗ), болезни печени, например первичный билиарный цирроз, первичный склерозирующий холангит, неалкогольная жировая инфильтрация (жировой метаморфоз) печени/стеатогепатит, фиброз, гепатит С (НСУ) и гепатит В (НВУ), диабет и резистентность к инсулину, сердечно-сосудистые расстройства, например атеросклероз, церебральные кровотечения, инсульт и инфаркт миокарда, артрит, ревматоидный артрит, псориатический артрит и ювенильный ревамтоидный артрит (ДКА), остеопороз, остеоартрит, панкреатит, фиброз, энцефалит, псориаз, гигантоклеточный артериит, анкилозный спондилит, аутоиммунный гепатит, вирус иммунодефицита человека (Н1У), воспалительные состояния кожи, трансплантаты, рак, аллергии, эндокринные заболевания, заживление ран, другие аутоиммунные заболевания, гиперчувствительность дыхательных путей, а также клеточные, вирусные или опосредованные прионами инфекции и заболевания.
Введение/Составление фармацевтических композиций
Терапевтически эффективное количество вещества, эффективного при лечении состояния, при котором желательна активность 1Ь-17А, может быть определено путем стандартных исследовательских способов. Например, доза вещества, эффективная при лечении воспалительного состояния, такого как астма, болезнь Крона, язвенный колит или ревматоидный артрит, может быть определена введением вещества в соответствующую модель, такую как представленные здесь модели.
Кроме того, в случае необходимости, для оптимизации дозы могут быть использованы тестсистемы ш уйго. Точное определение эффективной дозы (например, с помощью клинических испытаний) может быть осуществлено специалистами на основании нескольких факторов. Такими факторами явля- 19 029283 ются: подлежащее лечению или профилактике заболевание, симптомы заболевания, масса тела пациента, иммунологический статус пациента и другие известные специалистам факторы. Точная доза, предназначенная для применения в формуле композиции, зависит от способа введения препарата, а также от тяжести болезни, и должна определяться на основании врачебного решения и состояния каждого пациента. Эффективная доза может быть экстраполирована исходя из кривой динамики доза-ответ, полученной в экспериментах на животных или ш νίΙΐΌ.
Для введения предназначенного для терапевтического использования вещества может быть использован любой приемлемый путь введения, который обеспечивает попадание вещества к пациенту. Фармацевтические композиции данных веществ являются особенно полезными при парэнтеральном введении, например, внутрикожном, внутримышечном, внутрибрюшном, внутривенном, подкожном или интраназальном.
Предложенное в данном изобретении вещество может быть изготовлено в виде фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество вещества в качестве активного компонента вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Термин «носитель» относится к растворителям, адъювантам, связывающим веществам или среде, вместе с которыми активное соединение будет вводиться. Фармацевтическая среда может быть жидкой, как, например вода или масла, включая масла, получаемые из нефти, масла растительного, животного или синтетического происхождения, например, арахисовое, соевое, минеральное, кунжутное и другие подобные масла. Например, могут быть использованы 0,4% раствор поваренной соли и 0,3% раствор глицина. Указанные растворы стерильны и обычно не содержат твердых примесей. Стерилизация проводится с использованием общепринятых, хорошо известных способов стерилизации (например, фильтрации). Композиции могут содержать принятые в фармацевтике вспомогательные вещества, необходимые для приближения к физиологическим условиям, например, вещества, необходимые для контроля и изменения рН, стабилизаторы, увеличивающие плотность, увлажняющие и придающие окраску вещества и т.д. Концентрация предложенного в данном изобретении вещества в таких фармацевтических формулировках может значительно варьировать, т.е. от менее 0,5% (обычно не менее 1%) до 15-20% от веса и определяется, в первую очередь, на основании необходимой дозы, объема, вязкости и т.д., в соответствии с выбранным способом введения.
Таким образом, предложенные в настоящем изобретении фармацевтические композиции, предназначенные для внутримышечного введения, могут содержать 1 мл стерильного буферного раствора, а также от приблизительно 1 нг до приблизительно 100 мг, например, от приблизительно 50 нг до приблизительно 30 мг или предпочтительнее от приблизительно 5 мг до приблизительно 25 мг предложенного в настоящем изобретении антитела-антагониста ГО-17А. Сходным образом, предложенная в настоящем изобретении фармацевтическая композиция для внутривенного введения может содержать приблизительно 250 мл стерильного раствора Рингера и от приблизительно 1 мг до приблизительно 30 мг или, предпочтительнее, от приблизительно 5 мг до приблизительно 25 мг предложенного в настоящем изобретении антагониста. Способы изготовления парэнтерально вводимых композиций хорошо известны и их детальное описание может быть найдено, например, в Рет1п§1оп'з РЬаттасеиНса1 8с1епсе, 15!Ь еб., Маск РиЬкзЬтд Сотрапу, г. Истон, штат Пенсильвания.
Предложенные в настоящем изобретении антитела-антагонисты могут быть лиофилизированы для хранения и впоследствии перед использованием восстановлены (растворены) в подходящем носителе. Было показано, что этот способ эффективен для обычно используемых иммуноглобулинов и белковых препаратов, при этом могут быть использованы известные специалистам способы лиофилизации и восстановления.
Ниже приведены примеры, описывающие настоящее изобретение, но не ограничивающие его.
Пример 1
Определение анти-1Ь-17А человека тАЬ-антагонистов
В качестве источника фрагментов человеческих антител была использована фаговая библиотека МогрЬо8уз Нитап СотЬша1опа1 АпНЬобу ЫЬгагу (НиСАЬ®) Оо1б (МогрЬозуз АО, г. Мартиншрид, Германия), которую разделили в растворе на подпулы. В первом раунде разделения были отобраны подбиблиотеки по отношению к биотинилированному зрелому Н1з6-меченому ГО-17А А132О и А70Ц варианту (!Е-17Атп16) (8ЕЦ ГО N0: 106). Во втором раунде амплифицированный продукт первого раунда был отобран по отношению к биотинилированному Н1з6-меченому ГО-17Ати16 в присутствии или в отсутствие других членов семейства ГО-17А в качестве конкурентов, влияющих на взаимодействие с антителами, специфичными к ГО-17А. Амплифицированный продукт второго раунда разделяли на два пула. Первый пул был разделен аналогично первому раунду. Клоны второго пула были дополнительно диверсифицированы в НСИР2 или в ЬСИР3, в зависимости от подбиблиотеки, использованной для начального отбора, затем были проведены два дополнительных раунда разделения по отношению к ГО-17Ати16 с получением второго источника клонов для скрининга. РаЬ из лизата клонов были захвачены в лунки планшета для ИФА, покрытые овечьими античеловеческими Рб-антителами, и отобраны для связывания с биотинилированным !Е-17Атп16. Сырые лизаты положительных клонов были проверены на ингибирование связывания ГО-17Ати16 с рецепторами к рекомбинантному человеческому Ю-17РА (8ЕЦ ГО N0: 107).
- 20 029283
Отобранные клоны были выбраны для дальнейшего определения очищенных РаЬ на основе подсчета последовательностей, аффинности, представленности всех семейств последовательности, после чего были присвоены МОК-номера. Были созданы дополнительные варианты МОК7708, МОК7785, МОК7706, МОК7775 и МОК7700 для замещения Тгр или Мер расположенных в НСБК2, НСБК3 или ЬСОКЗ. Созданные варианты показаны в табл. 3.
Таблица 3
Семейство Родительский МОР. № Вариант МОР № Замещения
Η0ΌΡ2 ΗΟΌΡ3 ЬСОРЗ
2 МОР7708 МОР8297 М57Т
МОР8298 Ν57Υ
МОР7785 МОР8Ю4 Ν57Τ
МОР8Ю5 Ν57Υ
6Ь МОР7706 МОР8299 Μ106Ι
МОР8300 М106Ь
МОР8301 М106Т
МОР7775 М0Р8Ю1 Μ106Ι
МОР8Ю2 МЮбЬ
МОР8ЮЗ М106Т
19а МОР7700 МОР8095 Μ53Ι
МОР8096 М53Ь
МОР8097 М101Ь
МОР8098 М101Т
МОР8141 М96Ь
МОР8142 М96Т
МОР8143 Μ96Υ
МОР8160 М101Т М96Ь
МОР8161 М101Т М96Т
МОР8162 М101Т Μ96Υ
МОР8302 М53Ь М101Т
МОР8303 М53Ь М101Т М96Т
Полученные РаЬ были проверены на ингибирование связывания 1Т-17Ати16 и циномолгусного 1Ь17А с рецепторами к рекомбинантному человеческому 1Ь-17КА, а также на связывание с 1Ь-17Ати16. Все протестированные РаЬ ингибировали связывание как 1Ь-17Ати16, так и циномолгусного ΙΡ-17Λ с 1Ь17КА. Аффинность РаЬ к 1Т-17Ати1б определяли с помощью БЕТ-анализа (табл. 4). Из идентифицированных РаЬ были отобраны кандидаты из семейств 2, 6а, 6Ь, 19а и 19Ь для дополнительного определения.
Таблица 4
Пример 2
Выведение, конструирование и определение тАЬ-антагонистов анти-1Ь-17А
- 21 029283
Отобранные М0Р № РаЬ конвертировали и экспрессировали в виде тАЬ в формате человеческого 1дО1, затем присвоили соответствующие М0РтАЬ обозначения. Полученные М0РтАЬ проверили на экспрессию и агрегирование, способность ингибировать связывание человеческого и циномолгусного 1Ь17А с человеческим 1Ь-17КА, и 1Ь-8-секрецию из КНЭР-клеток. В табл. 5 приведены значения 1С50 для некоторых исследований на М0РтАЬ. Ни один из проверенных М0РтАЬ (М0РтАЬ#8 7702, 7708, 7785, 7786, 7706, 7775, 7700, 8095, 8096, 8097, 8098, 7768) не дает перекрестной реакции с другими членами семейства 1Ь-17.
Таблица 5
Семейство МОКтАЬ# Человеческий 1Ъ-17, 1С50 (рМ) Циномолгусный 1Ь-17, 1С50 (рМ)
1Б-17КА Ингибирование 1Ь-8 Секреция ΙΣ-17ΕΑ Ингибирование
2 7702 297 6214 209
7708 284 398 289
7785 172 196 270
8104 204 512 306
8105 538 1168 498
7786 14 0 368 59
6Ь 7706 378 4 02 961
7775 138 2244 541
8101 108 1907 845
8102 186 2452 0 838
8103 167 929 491
19а 7700 99 70 236
8095 130 121 198
8096 189 75 58
8097 178 84 300
8098 225 14 6 289
8141 117 6 7 1435
8142 129 79 139
8143 191 61 252
7768 456 22 9 388
Конструирование каркаса тАЬ-антагонистов анти-1Р-17А
На основе активности и биофизических и биохимических свойств, отобранные М0РтАЬ были дополнительно изменены в их вариабельных участках в определенных каркасных остатках с получением остатков, присутствующих в соответствующей человеческой зародышевой линии, а также с изменением кодонов до наиболее часто встречающихся кодонов в протеинах млекопитающих с высоким уровнем экспрессии. В семействе 2 УЬ были выполнены Ы1У и У85Т (линейная последовательность) замены, преобразующие каркас до точного соответствия с зародышевой линией УК-1 УЬ-Ь5 (10КУ1-12*01). Примером вариабельного участка с У11У и У85Т заменами является вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в 8ЕР ГО N0: 76. В семействе 6а и 6Ь УЕ были выполнены ПГЕ, У591 и Т86У замены (линейная последовательность), преобразующие каркас до точного соответствия с зародышевой линией Ук-3 УЬ-Е6 (10КУ3-11*01). Примером вариабельного участка с О1Е, У591 и Т86У заменами является вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в 8ЕР ГО N0: 77. В семействе 6а и 6Ь УН была выполнена 0448 замена (линейная последовательность) до соответствия с зародышевой линией Уй-6 УЬ 6-01 (10НУ6-1*01). Примером вариабельного участка с 0448 заменой является вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в 8ЕР ГО N0: 81. В семействе 19а и 19Ь УЕ аминокислоты 1-3 (Э1Е) были замещены Р8У, с заменой искусственного каппа-оконца Окопном лямбда-цепи. Примером вариабельного участка с Р8У заменой является вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в 8ЕР ГО N0: 79. В семействе 19а и 19Ь УН была выполнена У5Е замена с получением близкого соответствия Уй-3 зародышевой линии УЬ 3-23 (10НУ3-23*01). Также при этом константная область тяжелой цепи остатков аминокислотной последовательности 353-357 (РЕЕМТ) была замещена РЭЕЕТ. Примером вариабельного участка с У5Е заменой является вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в 8ЕР ГО N0: 86. Примером тяжелой цепи с константной областью 353-357 РЕЕМТ -> РЭЕЕТ заменой является тяжелая цепь, имеющая аминокислотную последовательность, показанную в 8ЕР ГО N0: 100.
Сконструированным антителам были присвоены номера тАЬ.
Соответствующие обозначения и списки последовательностей сконструированных и оригинальных вариабельных участков антител и антител полной длины приведены в табл. 2. Последовательности СОР
- 22 029283 в каждом семействе показаны на фиг. 1.
Сконструированные тАЬ были проверены, как описано выше, на МΟКтАЬ. Значения Ю0 (рМ), полученные с помощью обозначенных тестов, показаны в табл. 6.
Таблица 6
Семейство тАЬ № 1С50(рМ), человеческий 1Ь- 17А 1С50 (рМ), супо1Ь-17А
1Б-17ЕА ингиби- рование 1Ь-8 произ- водство 1Ь-6 произ- водство ΙΒ-17ΚΑ ингиби- рование 1Ь-8 произ- водство ΙΙι-б произ- водство
2 шАЬ624 78 687 234 51 192 687
тАЬ3077 118 292 37 54 374 113
тАЬ7024 185 693 412 117 2979 999
бЪ тАЬ4538 229 1483 264 636 1754 847
тАЬ3584 195 2388 370 489 1253 823
тАЬ732 327 2607 560 463 12527 2017
тАЬ4168 266 4878 732 764 3301 2172
19а тАЫ926 108 62 35 53 105 67
тАЬ7146 143 71 40 67 140 139
тАЬ6785 172 95 45 76 563 193
Таблица 7. Связывание с человеческим ΙΕ-17 Ати16
Аффинность отобранных тАЬ оценивали с помощью В1асоге. Результаты измерений приведены в табл. 7.
Антитело ка (М’Щ’1) ка (з-1) Ко (рМ) Стехиометрия*
тАЬ7146 4,67х106 5,57х10-5 12 2,1
тАЬ6785 3,80х106 6, 98х10‘5 18 2,1
РаЬ648б 3,14х106 1,23х10‘4 39 1,1
ШАЦ5548 3, бЗхЮ6 1,45х10-4 40 2,1
тАЫ92б 4,43х106 3,41х10'5 8 2,1
Связывание с циномолгусным ΙΕ-ИА
Антитело ка (М-Щ-1) ка (з-Ч Ко (РМ) Стехиометрия*
шАЬ714б 2,23х106 1,12х10-4 50 2
птАЬ6785 1,80х106 2,67x10-4 14 8 2,2
РаЬ6486 1,б0х106 3,28x10-4 2 05 1,1
тАЬ5548 1,61x10е 3,62x10-4 225 1,9
ГПАЫ926 2,77x10е 5,11х10-5 18 2,3
*димеров на анти-ЕЬ-П
АнтиЧЬ-П-антитело ингибирует секрецию цитокинов в NНВΕ-клетках
Было показано, что ΙΕ-17Ά регулирует нейтрофильное воспаление в легких, которое является показателем тяжелой степени бронхиальной астмы, а также СΟΡ^, вследствие способности ^-ПА запускать факторы, влияющие на мобилизацию нейтрофилов, их продолжительность жизни и активацию (например, ΙΕ-6, ΙΕ-8, СМ-С+Р). Для определения способности анти-I^-17А антител настоящего изобретения ингибировать I^-17А-индуцированные изменения в клетках легких, нормальные клетки человеческого бронхиального эпителия (NНВΕ) подвергли стимуляции человеческим ^-ИА в течение 48 ч в присутствии тАЬ6785. тАЬ6785 ингибировало I^-17А-индуцированную выработку ΙΕ-6 и ОМ-С+Р' клетками ΝΙΙΒΕ при Κ50=619,0±64,0 рМ и 564±86 рМ соответственно.
Анти-I^-17 антитело подавляет биологическую активность гетеродимера ^-ПА/Р
Нормальные фибробласты кожи человека ^НЭР, Ьоп/а) высевали в 48-луночный плоскодонный планшет для тканевых культур по 10000 клеток в каждую лунку в РОМ-2 среду (Ьоп/а) и инкубировали в течение ночи (37°, 5% СΟ2)· После инкубации гЫЬ-17А/Р гетеродимер в конечной концентрации 50 нг/мл (1,47 нМ) (К&Г) δуδίетδ) был преинкубирован с серией разведений (от 30 мкг/мл до 0,5 нг/мл) тАЬ6785 или контрольными антителами в течение 10 мин при комнатной температуре, затем добавлен к клеткам. Клетки инкубировали в течение 48 ч (37°, 5% СΟ2); затем культуральные жидкости собрали и проанализировали с помощью ИФА на содержание ΙΕ-6 с помощью набора Нитап ΙΕ-6 Эио δеί (К&Г) δуδίетδ, Шс.) согласно инструкции производителя. Значения для ГС50 были определены нелинейной регрессией с помощью программного обеспечения ОгарЬРаб Рпзт (ОгарЬРаб δοΙίΜΉΓΓ'- Фс). тАЬ6785 ингибировали I^-17А/Ρ-геτеродимериндуцированную выработку ΙΕ-6 NН^Ρ-клетками при ЕС50 2±2,5 нМ.
- 23 029283
Способы
Определение пикомолярных аффинностей с помощью равновесного титрования (8ЕТ)
Для определения Ко равновесным титрованием (8ЕТ) использовали мономерные фракции РаЬ белка (содержание мономера по меньшей мере 90%, установлено аналитической эксклюзионной хроматографией, колонка 8ирегйех75, ОЕ).
Определение аффинности электрохемилюминисценцией (ЕСЬ) в растворе и оценка данных были по существу выполнены согласно описанию, приведенному ранее (Наепе1 е! а1., Апа1 ВюсЬет 339:182-4, 2005). Определенные фиксированные концентрации очищенного РаЬ (~10-100 пМ) инкубировали с возрастающими концентрациями 1Р-17Ати16 (максимальная концентрация 5 нМ) в растворе до достижения химического равновесия. Для количественной оценки несвязанного РаЬ в растворе образцы поместили в 384-луночный микропланшет 81гер1ау1йш М8Э (Мезо 8са1е О1зсоуегу, г. Гейтерсберг, штат Мэриленд) с иммобилизованным биотинилированным 1Р-17Ати16. Для определения применяли анти-человеческие РаЬ/1дО-антитела, меченые рутений-комплексом; планшеты считывали с помощью 8ес1ог™ 1тадег 6000 (М8Э). Кривые титрования (концентрация свободного РаЬ в зависимости от концентрации антигена) были построены с помощью программного обеспечения Ехсе1/ХРй1 с помощью модели, описанной ниже.
Для оценки данных и определения Ко молекул РаЬ была использована следующая пригодная модель (изменена в соответствии с АЬгаЬат е! а1. I. Мо1 Кесодп.Ь. 9:456-461, 1996):
у=Втах-(Втах/(2*сРаЬ)*(х+сРаЬ+КО-здгР((х+сРаЬ+КО)*(х+сРаЬ+
КО)-4*х*сРаЬ))), где
Втах - сигнал максимального связывания (при концентрации антигена = 0); сРаЬ - взятая концентрация РаЬ;
х - взятая общая концентрация растворяемого антигена (места связывания); зс]П - квадратный корень;
Ко - равновесная константа диссоциации.
Ингибирование связывания Ι1.-17Ά с 1Ь-17КА (например, тест на ингибирование П.-17КЛ)
Чистые планшеты тах1зогр покрыли 100 мкл/лунка 2,5 мкг/мл человеческого 1Ь-17КА-Рс (Κ&Ώ 8уз!етз, г. Миннеаполис, штат Миннесота) в 0,1 М натрия карбонатно-бикарбонатном буфере с рН 9,4 и инкубировали в течение ночи при 4°С. После блокировки и промывания 25 нг/мл биотинилрованного человеческого 1Р-17ти16 (8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 106) или циномолгусного 1Ь-17А (8ЕЦ ГО ΝΟ: 108) преинкубировали с тестовыми тАЬ либо контрольными тАЬ (от 30 до 0 мкг/мл конечной концентрации) в общем объеме 100 мкл в течение 5-10 мин и затем поместили в планшет. Сигнал был определен со 100 мкл 1:10000 разведения 1 мг/мл 8А-НКР Цаскзоп 1ттипогезеагсЬ, г. Уэст Гроув, штат Пенсильвания) в течение 20 мин при комнатной температуре с последующими 100 мкл на 1 лунку ОРО-субстрата (81дтаА1йпсЬ Согр., г. Сент-Луис, штат Миссури). Планшеты считывали при 492 нм (Епу1зюп, Регк1пЕ1тег, г. Уолтем, штат Массачусетс). Связывание РаЬ с 1Ь-17КА было проверено, как описано для тАЬ.
Ингибирование выработки ГО-8 и ГО-6 в ИНОР-клетках (например, исследования на выработку ГО8 и выработку ГО-6) Ингибирующее влияние анти-ГО-17А тАЬ на выработку ГО-8 и ГО-6 было исследовано в нормальных фибробластах кожи человека (ИНОР). Клетки помещали в 48-луночный плоскодонный планшет для тканевых культур в количестве 0,1 х105 клеток на лунку, 250 мкл на лунку в РОМ-2 среду и инкубировали в течение ночи (37°, 5% СО2). После инкубации в каждую лунку добавили по 0,1 нг/мл человеческого ТИР-а. 10 нг/мл ГО-17ти16 или 25 нг/мл циномолгусного ГО-17А были преинкубированы с тестовыми тАЬ или контрольными тАЬ (конечная концентрация 30-0 мкг/мл) в общем объеме 250 мкл в течение 10 мин при комнатной температуре и затем добавлены к 250 мкл клеток. Образцы ГО17ти!6 без добавления антител были взяты в качестве контроля, при этом образцы, состоящие только из ТИР-α либо культуральной среды, были взяты в качестве отрицательного контроля. Клетки инкубировали в течение 24 ч (37°, 5% СО2), затем охлажденные субстраты собрали и исследовали на ГО-6 и ГО-8 способом ИФА с помощью двойного набора Нитап ГО-6 & ГО-8 ЕЫ8А согласно инструкции производителя (Κ&Ώ 8уз!етз, г. Миннеаполис, штат Миннесота). РаЬ анализировали как было описано для тАЬ. Ингибирование выработки ГО-6 и О-С8Р в ИНВЕ-клетках Нормальные клетки человеческого бронхиального эпителия (ИНВЕ, Ьо^а) поместили по 20000 клеток в каждую лунку в ВЕОМ-субстрат (Ьо^а) и инкубировали в течение ночи (37°, 5% СО2). После инкубации клетки стимулировали ГО-17Ати16 в течение 48 ч в присутствии протестированных антител в диапазоне концентраций от 30 мкг/мл до 0,5 нг/мл. Супернатанты после инкубации собрали и исследовали на содержание ГО-6 или О-С8Р с помощью Нитап ГО-6- или О-С8Р-специфического ИФА (К&О 8уз!етз, 1пс.). Значения 1С50 определяли способом нелинейной регрессии с помощью программного обеспечения ОгарЬРай Рпзт (ОгарЬРай 8ой^аге, 1пс).
Взаимодействие между членами семейства ГО-17А
Чистые планшеты тах1зогр покрыли 100 мкл/лунка 5 мкг/мл тАЬ или изотипными контрольными тАЬ в ФБР и инкубировали в течение ночи при 4°С. Планшеты блокировали с 200 мкл/лунка в течение 1 ч с блокирующим буфером ИФА (1% В8А, 5% сахароза в ФБР с 0,05% ИаИ3), затем трижды промыли промывочным буфером (физиологический раствор с фосфатным буфером, 0,01% твин-20). Конкури- 24 029283 рующие цитокины оттитровали в буферном разбавителе для анализа (1% ВЗА в ФБР) в двойной конечной концентрации, были получены биотинилированные цитокины в двойной конечной концентрации. 100 мкл цитокинов в двойной конечной концентрации смешали (конечная концентрация 30-0 мкг/мл) с 100 мкл биотинилированного 1Е-17тШ6 в двойной конечной концентрации (конечная концентрация 25 нг/мл) в буфере для анализа. Рекомбинантный человеческий 1И-23 (К&И Зуδ!сшδ, г. Миннеаполис, штат Миннесота) использовали в качестве отрицательного контроля, только буфер - в качестве фонового контроля, и 1Е-17тШ6 - в качестве положительного контроля. 100 мкл на лунку раствора из равных частей цитокинов/биотинилированного 1Е-17тШ6 поместили в планшет и инкубировали в течение 1-2 ч. Планшеты трижды промыли промывочным буфером и инкубировали со 100 мкл 1:10000 разведения 1 мг/мл ЗА-ΗΚΓ (.Таскьоп Бпишпоп^сагсН. г. Уэст Гров, штат Пенсильвания) в течение 20 мин при комнатной температуре. Планшеты трижды промыли промывочным буфером ИФА. После промывания в каждую лунку внесли по 100 мкл 0РИ-субстрата (З1дта-А1йгюЬ Согр., г. Сент-Луис, штат Миссури) и инкубировали до появления соответствующего изменения цвета. Реакция была остановлена добавлением 50 мкл 2 Н серной кислоты, затем планшеты считывали при 492 нм с помощью оборудования Еην^δ^оη.
Измерение аффинности. В1асоге-анализ
Измерение аффинности методом поверхностного плазмонного резонанса (ЗРК) проводили с помощью оптического биосенсора В1асоге 3000 (В1асоге). Отобранные РаЬ (~30 КИ) или тАЬ (~50 КИ) были зафиксированы на поверхности сенсорного чипа с применением овечьих анти-Рй антител или античеловеческих Рс-антител для фиксации РаЬ или тАЬ соответственно. После фиксации РаЬ или тАЬ внесли раствор человеческого 1Ь-17шиЙ или циномолгусного !И-17А (от 0,2 до 49 нМ).
Пример 4
Картирование эпитопов
Было установлено происхождение эпитопов антитела комбинацией конкурентного связывания, Η/Ό-обменного анализа и соструктуры антитело-Ш-ПА (см. пример 5). Были использованы следующие антитела: тАЬ926, М0КтАЬ7700, М0КтАЬ7706, М0КтАЬ7708, тАЬ7357 (мышиные античеловеческий-Ш-ПА нейтрализующие антитела, полученные от гибридомы С1863), тАЬ2832 (мышиные/человеческие химерные анти-человеческий-1Ь-17А нейтрализующие антитела, полученные от гибридомы С1861), тАЬ317 (мышиные анти-человеческий-1Ь-17А антитела, К&И Зуδ!сшδ, г. Миннеаполис, штат Миннесота), тАЬ3171 (мышиные анти-человеческий-Ш-ПА антитела, К&И Зуδ!сшδ, г. Миннеаполис, штат Миннесота) и тАЬеВЮ16-7178 (мышиные анти-человеческий-Ш-ПА антитела, е-В^сюпсе, г. Сан-Диего, штат Калифорния). Три коммерческих антитела показали различную степень нейтрализующей активности.
Конкурентное связывание с эпитопами
При конкурентном ИФА 5 мкл (20 мкг/мл) белка 1Ь-17Аши!6 наносили в лунки планшета МЗИ ШдЬВшй (Мсδо Зса1е Όίδ^ν^, г. Гейтерсберг, штат Мэриленд) и выдерживали 2 ч при комнатной температуре. В каждую лунку добавляли 150 мкл 5% блокирующего буфера А МЗИ (Мсδо Зса1е Όίδ^ν^, г. Гейтерсберг, штат Мэриленд) и инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре. Планшеты промывали 0,1 М буфером ЖРЕЗ (рН 7,4). Меченые антитела (МИЗ флуоресцентный краситель), 10 нМ, инкубировали с возрастающими концентрациями конкурирующих антител (от 1 нМ до 2 мкМ), затем 25 мкл раствора внесли в обозначенные лунки. После инкубации в течение 2 ч при легком встряхивании при комнатной температуре планшеты промыли как описано выше, добавили 150 мкл разведенного буфера считывания Т производства МЗИ, затем планшеты считывали с помощью МИЗ Зес!ог 1тадег 6000.
Анализ проводили с мечеными тАЬ1926, тАЬ317, тАЬ3171 или тАЬ7357 (фиг. 4). На основании конкурентного анализа анти-Ш-ПА антитела были распределены на четыре группы. Группа А: тАЬ1926, М0КтАЬ7706 и М0КтАЬ7708; группа В: еВю16-7178 и тАЬ7357; группа С: тАЬ317; группа И: тАЬ3171.
Η/И обменный анализ
При замене Η/И процедура, используемая для анализа возмущения антителами, была аналогична описанным ранее (Ηаши^о е! а1., 1. Вюто1. ТссЬη^^исδ, 14:171-82, 2003; Жгп е! а1., В^осЬст^δί^у, 45: 848898, 2006) с некоторыми модификациями. Рекомбинантный 1Ь-17АшиЙ (экспрессированный в клетках ИЕК293Е с гистидиновым хвостом на С-конце) инкубировали в растворе на основе дейтерированной воды в течение указанного периода времени, при этом в него внедрялся дейтерий, заменяющий атомы водорода. Дейтерированный 1Ь-17АшиЙ зафиксировали в колонке, содержащей иммобилизованные обособленные анти-1Ь-17А тАЬ, затем промыли водным буфером. Затем белок 1Ь-17АшиЙ элюировали с колонки и - после обработки протеазами - определяли местоположение дейтерийсодержащих фрагментов с помощью масс-спектрометрического анализа. Подразумевается, что участки связываются с антителом в местах, относительно защищенных от обмена, и, следовательно, содержащих большее количество дейтерия, по сравнению с 1Ь-17АшиЙ, не состоящим в комплексе с антителом. Карты возмущения Η/И обмена 1Ь-17АшиЙ показаны на фиг. 5. Цифры в верхней части решетки относятся к остаткам 1Ь-17АшиЙ.
М0КшАЬ7700, М0КшАЬ7706 и М0КтАЬ7708 показали различную степень дифференциального обмена для трех сегментов 1Ь-17А (ЗЕО ГО N0: 105) .|5NΒЗТЗР\VN^Η5.| (ЗЕО ГО N0: 159), ,6\Р1)РРКУРЗУ1\\'Р68 (ЗРТ) ГО N0: 157) и 1С ККЕРР11СРХЗРКРРК1Р· 16 (ЗРО ГО N0: 158), указывая на
- 25 029283 защиту антителами. Фрагмент 56№ГОРЕКУР8У^Е68 (8Е0 ГО ΝΟ: 157) был сильно защищен МΟКтАЬ7708, слабо защищен МΟКтАЬ7700 и не защищен МΟКтАЬ7706. Наложения в моделях защиты фрагментов для данных антител в соответствии с их взаимным ингибированием в конкурентных исследованиях описаны выше.
Как для тАЬ7357, так и для тАЬеВю16-7178 наблюдалась высокая степень защиты для -УКНЕОСШАООХУОТНМ^ (8Е0 ГО ΝΟ: 160) в соответствии с их взаимным ингибированием в конкурентных исследованиях, описанным выше. Слабый и, следовательно, недостаточный дифференциальный обмен наблюдался для других фрагментов с тАЬ7357, тАЬ2832, тАЬ317 и тАЬ3171.
Анализ НГО обмена, определяющего места связывания для двух из четырех конкурирующих групп приведен выше. Группа А антител (МΟКтАЬ7700, МΟКтАЬ7706 и МΟКтАЬ7708) связывается в области пептидных сегментов ζβΝΚ^Ί^ΡνΝ^ζ,, (8ЕО ΙΌ ΝΟ: 159), ,..МГОРЕК¥Р8\ГЪЕ68 (81 ГО) ΙΌ ΝΟ: 157) и 1 ККЕРР11СРХ8РКЕЕКП... (8РТ) ΙΌ ΝΟ: 158), в 8РГО ΙΌ ΝΟ: 105; группа В антител (тАЬ7357 и тАЬеВю16-7178) связывается в области пептидного сегмента пСКНЕОСГОАООХУОУНМ^ (8ЕО ГО ΝΟ: 160). тАЬ317 и тАЬ3171 связываются в местах, отличных друг от друга и от группы А и группы В антител. Однако слабые сигналы в анализе НГО обмена с обоими антителами не были достаточно очевидными, чтобы определить их эпитопы на ГО-17А.
Пример 5
Сокристаллическая структура ГО-17А и анти-1Ь-17А антитела
Соструктуру 1Ь-17Ати16 с РаЬ6468 и рекомбинантного Н1з6-меченного РаЬ в тАЬ6785 определяли рентгеноструктурной кристаллографией. Аминокислотная последовательность легкой цепи РаЬ6468 показана в 8ЕО ГО ΝΟ: 90, аминокислотная последовательность тяжелой цепи показана в 8ЕО ГО ΝΟ: 111. В примере 5 аминокислотные остатки ГО-17А показывают остатки в соответствии с 8ЕО ГО ΝΟ: 105, а остатки РаЬ6468 показывают остатки вариабельного участка легкой цепи в соответствии с 8ЕО ГО ΝΟ: 79 и остатки вариабельного участка тяжелой цепи в соответствии с 8ЕО ГО ΝΟ: 86. Экспрессия, рефолдинг и очистка рекомбинантного человеческого 1Е-17АтШ6 была описана ранее (VII е1 а1., СуФкше, еРиЬ аНеаД οί ρτίιτί Ди129). РаЬ6468 зкспрессировали в НЕК-293Р-клетках и очистили с помощью способа, аналогичного описанному (Ζΐιπο е1 а1., Рго1ет Ехрг РипЕ 67:182-9, 2009).
Кристаллизация 1Ь-17А/РаЬ6468 комплекса
1Ь-17А/РаЬ6468 комплекс получили смешиванием 1Ь-17Ати16 с РаЬ6468 в молярном соотношении 1:1,1 в 20 мМ МЕ8 рН 6,5, 0,2 М №С1 и 10% глицерине и инкубировали в течение ночи при 4°С. Комплекс очистили от избытка не связанного в комплекс РаЬ с помощью эксклюзионной хроматографии (8ЕС) на колонке 8ирегДех 200 10/300 ОЬ (ОЕ НеаИИсаге, г. Пискатавэй, штат Нью-Джерси) в 20 мМ МЕ8 рН 6,5, 0,2 М №С1 и 10% глицерине. Фракции, соответствующие комплексу, объединили и сконцентрировали с помощью устройства Ат^п ИИга 10000 МVСΟ до 4,6 мг/мл.
Автоматический скрининг кристаллов проводили с помощью автомата для кристаллизации белков Οπ\4 (ΌοιίβΕίδ ЕМгитепК г. Ист-Гарстон, Великобритания) дозируя равные объемы белка и резервуарного раствора в формате сидячей капли с использованием планшета Соттд 3550 (Соттд 1пс., г. Корнинг, штат Нью-Йорк). С помощью НатрЮп Сгуз1а1 8сгееп НТ (НК2-130, НатрЮп КезеагсИ) провели первоначальный отбор и затем получили игольчатые кристаллы в зависимости от нескольких условий в присутствии аммония сульфата, ПЭГ при рН 4,5-4,6. Такие небольшие кристаллы использовали для получения посевного материала для микроматричного скрининга (ММ8) ГО'Агсу е1 а1., Ас1а Сгуз1а1ЕдгарЫса 8ес1юп Ό, 63:550-4, 2007). Кристаллы с дифракционными свойствами были получены с помощью ММ8-скрининга в 0,1 М ацетате натрия рН 5,5, 12% ПЭГ ММЕ 5000 и 0,2 М сульфате лития.
Сбор данных рентгена комплекса 1Ь-17А/РаЬ6468
Для сбора данных рентгена кристалл замачивали на несколько секунд в маточном растворе с добавлением 24% глицерина и замораживали в потоке азота при 95 К. Данные о дифракции рентгеновских лучей собирали и обрабатывали с помощью микрофокусного генератора рентгеновских лучей Ктдаки МюгоМах™-007НР, снабженного конфокальной оптикой ΟδΐηΚ™ УапМах™, детектором 8аШгп 944 ССО и системой криоохлаждения Х-8йеат™ 2000 (Ктдаки, г. Вудлендс, штат Техас). Интенсивность дифракции измеряли при вращении кристалла на 254° со временем экспозиции 3 мин. на каждый поворот на половину градуса с максимальным разрешением 2,2 А. Данные о дифракции рентгеновских лучей обрабатывали с помощью программы Э*ТКЕК (РйидгаШ, Ас1а С^у8ΐа11οд^аρЫса Т, раздел Ό., 55:1718-25, 1999)., Кристалл относится к моноклинной пространственной группе Р2Ь где а=73,40 А, Ь=64,04 А, с=145,61 А и β=95,39°. Статистика данных рентгенодифракционного анализа представлена в табл. 8.
- 26 029283
Таблица 8
Длина волны (А) 1,5418
Температура (К) 95
Диапазон вращения (°) 254
Пространственная группа Ρ2ι
Оси элементарной ячейки (А) 73,40; 64,04; 145,61
Углы элементарной ячейки (°) 90; 95,39; 90
Молекулы/асимметричная единица 1Ь-17 димер + 2 ГаЬ
ν™ (А3/Оа) 2,76
Содержание растворителя (%) 55
Разрешение (А) 73-2,2 (2,28-2,20)*
Число измеряемых отражений 251,653 (16,276)
Число уникальных отражений 61,776 (5,947)
Полнота (%) 89,8 (86,9)
Избыточность 4,1 (2,7)
Е-слияние 0,151 (0,353)
<1/о> 5,6 (1,9)
В-фактор (Уилсон) (А2) 33,3 *Значения для наибольшего разрешения показаны в ()
Определение структуры
Кристаллическую структуру 1Ь-17А/РаЬ6468 определяли молекулярным замещением с помощью Рйазег (Кеаб, Ас!а Сгуз!а11ог§ Ό. Βΐοί Сгуз!а11ог§, 57:1373-82, 2001). Искомыми моделями были 1Ь-17Р (ΡΌΒ ΙΌ 1ΙΡΥ) (Нутоуй/ е! а1., ΕΜΒΟ I., 20:5332-41, 2001) и гомологичная модель для Ρν (УН/УЬ), сконструированного на основе анти-1Ь-13 антитела СNΤΟ607 (ΡΌΒ ΙΌ 3О6Л) (Тер1уа1<ою е! а1., I. Μο1. Βΐο1. 389:115-23,. 2009) как для УН, так и УЬ, с помощью Мобе11ег (Ассе1гу§, штат Калифорния). Два константных домена СЬ/СН1 были получены из ΡΌΒ ΙΌ 8ΡΑΒ (3!гоп§ е! а1., Β^οсΡет^δ!^у, 30:3739-48, 1991). Уточнение структуры проводили с помощью программы ΡΙ ΙΕΝΙΧ (Абатз е! а1., I. ЗупсРго!гоп. КаШа!. 11:53-5, 2004). Изначально на ранних стадиях уточнения была задана двусторонняя некристаллографическая симметрия, но она была ослаблена на финальных стадиях на основе Ксвободных. Корректировка модели и мануальная реконструкция были выполнены с помощью СООТ (Етз1еу е! а1., Ас!а Сгуз!а11о§г. Ό. Β^Ρ Сгуз!а11о§г. 60:2126-32, 2004). Окончательные значения Ккристаллических и Ксвободных составили 23,4% и 29,7% соответственно, для всех 61 706 независимых отражений до 2,2А. Данные по уточнению приведены в табл. 9.
Таблица 9
Уточнение структуры
Разрешение (А) 73-2,2 (2,234-2,2)
Екристаллические/Есвободные ( 5 ) & 23,4/29,7 (27,2/37,7
Число отражений 58,570
Рабочий набор
Исследуемый набор (5% данных) 3,136
Ешзб идеальных значений
Длина связи (А) 0,007
Углы связи (°) 1,1
Среднее значение В-ф>актора (А2) 28,0
Число атомов белка 7,994
Количество растворителя (вода+ионы) 864
График Рамачандрана0
Наиболее благоприятствующие области (%) 90,5
Дополнительно возможные (%) 8,6
Максимально возможные 0,2
Недопустимые (%) 0,7
Структура комплекса 1Ь-17А/РаЬ6468
Структуру комплекса определили до высокого разрешения (~2,2 А). 1Ь-17А был почти симметричным гомодимером в кристаллической форме, связанным с двумя РаЬ молекулами. Взаимодействия антитело-антиген были в основном гидрофобными и, в отличие от большинства антител, СИК легких цепей имели несколько значительных контактов. Общая молекулярная структура комплекса 1Ь-17А/РаЬ6468 показана на фиг. 6А. Мономер из димера 1Ь-17А принял общую топологию цистинового узла (фиг. 6В). Два мономера имели большое сходство с Са ΡΜ3Ό 0,54 А для 77 атомов Са главной цепи. Общее стро- 27 029283 ение цистинового узла мономера 1Ь-17А имело большое сходство с аналогичным узлом 1Ь-17Р с гпъй 0,71 А для 76 атомов Са (фиг. 6В). Каждый мономер 1Ь-17А был стабилизирован тремя дисульфидными связями. В цепи В имелись три дисульфидные связи внутри цепи (С10-С106, С71-С121,, С76-С123), тогда как в цепи А С10-С106 дисульфидные связи не наблюдались вследствии нарушений в таких участках мономера. Последние две дисульфидные связи (С71-С121, С76-С123) стабилизировали структуру цистинового узла аналогично 1Ь-17Р и NΟΕ. Структурная модель цепи В 1Ь-17А включала все остатки 10-128 (остатки 1-9 были неупорядоченными), в то время как в остатках цепи А отмечены только остатки 21-29, 41-104 и 109-127, другие же остатки - 1-20, 30-40, 105-108 и 128 - были пропущены вследствие нарушений структуры. Для двух РаЬ остатки 1-2 обеих легких цепей были разупорядочены либо имели низкую электронную плотность. С-концевые 3 остатка как тяжелых, так и легких цепей, включающие дисульфидные связи внутри цепи также как и Ηίδ-метку на тяжелой цепи, были разупорядочены.
Упорядоченный ^концевой сегмент 1Ь-17А (цепь В) содержал короткий спиральный элемент (остатки 8-12). В обратную сторону сложена петля 3-4 того же мономера, а также сформирована дисульфидная связь внутри цепи (С10-С106). Эквивалентный сегмент 1Ь-17Р, напротив, доходил до другого мономера, относящегося к димеру, с образованием дисульфидной связи внутри цепи и ковалентным соединением двух мономеров. Упорядоченные части сегментов 17-39 двух мономеров 1Ь-17А обменялись местами как в 1Ь-17Р. Такая перестановка привела к перекрещиванию данных частей димера 1Ь-17А. Связанные внутримолекулярной дисульфидной связью (С10-С106) два ^концевых сегмента 1Ь-17А сформировали два сцепленных мономера, что дало увеличение до видимого с помощью невосстанавливающего ДСН ПААГ-электрофореза димера 26 кДа.
Димер 1Ь-17А был почти симметричным по четырем основным β-нитям (нити 1-4) (фиг. 6С). Са πηδά для 76 остатков равен 0,71 А. Легкая асимметрия вызвана двумя причинами. Во-первых, цепь А содержала ряд неупорядоченных сегментов, главным образом, в Оконце. Только короткая β-нить (нить 0, остатки 22-26) была видимо упорядоченной, в то время как остатки 10-40 цепи В были упорядоченными, но имели спиральный сегмент (остатки 12-16) и β-нить (нить 0, остатки 21-25). Во-вторых, в то время как переплетенные с цистином четыре основные β-нити двух мономеров (40-128) 1Ь-17А были связаны двусторонней симметрией вращения, упорядоченные части нити 0 не перекрывали друг друга в достаточной мере при наложении основной части (не показано). Является ли это артефактом при рефолдинге протеина или такой порядок существует в природе, без дополнительных исследований не ясно. Биологическая активность данного вида была сходна с активностью контрольного 1Ь-17А, полученного из коммерческого источника (также полученного от Е. Μί) (Κ&Ό §у8!ет8, г. Миннеаполис, штат Миннесота), с допущением, что дисульфидные связи внутри и между цепями для С10-С106 не влияют на связывание с рецептором. Тем не менее, данная структура предполагает, что ^концевые сегменты (1-20) и (30-39) являются очень гибкими, и их структуры не влияют на активность сложенного димера 1Ь-17А.
Эпитоп и паратоп
Остатки, участвующие в связывании 1Ь-17А с РаЬ6468, показаны в табл. 10. В связи с имеющимися пропусками остатков в протомере А в 1Ь-17А и слегка асимметричном характере димера 1Ь-17А, все остатки эпитопа из двух мест контакта не были идентичными (табл. 10 и фиг. 7). Однако некоторая совокупность ядерных остатков, также как и их взаимодействия, были идентичными. Данными остатками были Ь26, К55, Е57, Р59, Е60, К61, Υ62, §64, ν65, А67, К101, Е102, Р103 и Р110 в 1Ь-17А §ЕО ГО N0: 105 (выделено черным в табл. 10); они составляли ядерный эпитоп для РаЬ6468.
- 28 029283
Таблица 10
Остатки ядерного эпитопа выделены черным цветом. Остатки ядерного паратопа выделены жирным шрифтом. Вытянутые остатки паратопа приведены в скобках
УЬ ΙΙ-17Α эпитоп на мономере В УН УЬ ΙΙ-17Α эпитоп на мономере А УН
(Ц25) Р18
(Р93) Р19
(Р93) V 22
Е93 Ь26 Е93 Ь26
(N26) N2 7
(Ц29) , (Р93) 128
(Ό29) Н2 9 (028) N3 0
(Ц50), (151), (Υ31) N3 6
(151), (Ώ52), (Ώ49), (Υ31) КЗ 9
Ό49 К55 Т101, <299 (Υ48), ϋ49 К55 ' .. : Т101, 099
Е57 ЫОО, 099, Т101 Е57 ЫОО, 099, Т101
Υ90, Е92 Р59 Υ59, (ЫОО) Υ90, Е92 Р59 з . (552), Υ59
Е92 ЕбО Υ59, Е57, 352, Т54 Е92 ЕбО Υ59, Е57, 352, Т54
Е92 К61 Е92 К61
Е92 Υ62 Е92, (Р93) , (Ц29) Υ62
Υ90 564 Υ90 564 (ЫОО)
Υ31 У65 Υ31, (Ώ49) У65
ϋ49, (Υ31) N67 ϋ49, Ф52) , (Υ48) N67
Ь99 (Р93) Ь99
Е92, Υ90 К101 Е57, Υ59 Υ90, Е92 К101 Е57, Υ59
Е102 Е57 Е102 ' Е57
Р103 Е57 Р103 ' Е57
Р104 Р104 (056)
Е92 Р110 Е92, (Р93) Р110
Сходным образом, контактные остатки антител в двух местах не были одинаковыми. Остатки, участвующие в идентичных контактах с остатками ядерного эпитопа, называются ядерным паратопом, в состав которого входят следующие остатки: легкая цепь (ЬС): Υ31, Ό49, Υ90, Е92, Е93 (8Е^ ΙΌ ΝΟ: 79) и тяжелая цепь (НС): 852, Т54, Е57, Υ59, ^99, Ь100 и Т101 (8Е^ ΙΌ ΝΟ: 86) (табл. 10). Остатки ядерного паратопа выделены жирным шрифтом в табл. 10. Дополнительные остатки вытянутого паратопа, опре- 29 029283 деленные в одной мономерной связи специфичного 1Ь-17А остатка, показаны в скобках.
Данные Н/Ό защиты для М0КтАЬ7700 согласовывались с со-кристаллическими исследованиями, поскольку все остатки ядерного эпитопа, определенные в со-кристаллической структуре, за исключением Ь26, были в пределах или на границах двух защищенных сегментов, определенных с помощью Н/Ό обмена, ,6\Е1)РЕР¥РЗ\7\\'Е68 (ЗЕО ГО N0: 157) и ККЕРР11СРХ3ЕКЕЕК1Е··.. (ЗЕО ГО N0: 158) для М0КтАЬ7700. Все производные антитела М0КтАЬ7700, включая М0КтАЬ8302 и тАЬ1926, как предполагается, имеют сходную с РаЬ6468 специфичность связывания, так как они отличаются не более чем одним остатком в Ν-концевой области УН (см. пример 1), 3 остатками в Ν-конце УЪ (см. пример 1) и 3 СОК остатками (по одному в Н2, Н3 и Ь3, табл. 1а), ни один из которых не является частью паратопа антитела.
Структура ГО-17А, описанная в настоящем изобретении, имеет близкое сходство с ранее опубликованной структурой, за исключением того, что вследствие отсутствия ряда сегментов, полость Р2-кармана (см. ниже) не была идентифицирована в предыдущей работе (структура 2УХЗ, имеющаяся в Рго!еш Эа!аВапк 1Шр://\\у\уу.гскЬ.ог8/р0Ь/11оте/1юте.0о; ОегЬагб! е! а1., 1. Мо1. Вю1. 394:905-21, 2009).
Кристаллическая структура человеческого ΙΌ-17Ρ в комплексе с ГО-17КА была ранее описана (Е1у е! а1., Ν!. 1ттипо1оду, 10:1245-51, 2009). Благодаря сходству последовательностей и структур в ГО-17А и ГО-17Р, весьма вероятно, что ГО-17А будет взаимодействовать с ГО-17КА сходным с ГО-17Р образом. Молекулярное моделирование путем наложения структуры ГО-17А в комплексе с РаЬ6468, полученном в данном исследовании, на ГО-17Р в описанном комплексе 1Р-17Р/1Ь-17КА показало, что сегменты РаЬ6468 могут иметь пространственные расхождения с ГО-17КА. Один из этих сегментов локализован вокруг РРмотива (остатки 92 и 93 в ЗЕО ΙΌ Ν0: 79) в легкой цепи СГОР3 РаЬ6468. Таким образом, без опоры на какую-либо конкретную теорию, предполагается, что РаЬ6468 будет ингибировать ГО-17А, блокируя его взаимодействие с ГО-17КА и аналогичным образом с ГО-17КС, однако механизм взаимодействия на молекулярном уровне между ГО-17КС и ГО-17А неизвестен.
Существенные различия в аффинности ГО-17А и ГО-17Р к ГО-17КА предполагают возможные существенные различия в особенностях взаимодействия ГО-17А и 1Ь-17КА, степень которых может быть понятна, только когда определяется со-кристаллическая структура 1Р-17А/1Ь-17КА. Это подразумевает идентификацию полости Р2-кармана в данном исследовании, который был лишь частично идентифицирован в аналогичной области ГО-17Р в описанной кристаллической структуре 1Р-17Р/1Ь-17КА (Е1у е! а1., №11. 1ттипо1оду, 10:1245-51, 2009).
Два глубоких, в основном гидрофобных кармана были определены на поверхности ГО-17А вдоль контактной поверхности димера (фиг. 8А, 5В). Р1-карман, аналогичный карману, впервые обнаруженному в ГО-17Р (Нуто\уП/ е! а1., ЕМВ0 1, 20: 5332-41, 2001), состоит из остатков 094, Е95, Ь97 и К114 мономера А и Ь53, Υ62, Р63, У65, 166, \У67, 196, У117 и У119 мономера В, и наоборот. На одной стороне димера Р1-карман частично закрыт сегментом 30-40, в то время как на другой стороне он полностью открыт вследствие разупорядоченности сегмента. Поскольку данный сегмент оказывается гибким, Р1карман может быть доступным для других молекул. Р2-карман также состоит из остатков обеих цепей: У24, Ь26, Ι28, Υ62, Ь99, К101, Р110 и Ь112 мономера А и У22, У24 и Ь112 мономера В, и наоборот.
Несмотря на то, что детали Р2-кармана имеют небольшие различия вследствие асимметрии димера ГО-17А, как было описано выше, общая геометрия двух Р2-карманов очень похожа. Два набора остатков, выстилающих Р1- и Р2-карманы, очень хорошо сохраняются между ГО-17А и ГО-17Р (фиг. 8С). Однако в структуре ГО-17Р Р2-карман занят остатками Р10 и Р11 (Р10Р11 мотив) (фиг. 8В) (Нуто\уП/ е! а1., ЕМВ0 1., 20: 5332-41, 2001). Мотив РР в человеческом ГО-17А отсутствует, вместо него представлены соответствующие аминокислотные остатки Ι4 и Р5 (остатки 4 и 5 в ЗЕО ΙΌ Ν0: 105) (фиг. 8С). Данные остатки не склонны к связыванию с Р2-карманом, также как и РР-мотив, поскольку они намного меньше фенилаланиновых остатков и наиболее вероятно не имеют достаточной аффинности к Р2-карману. Таким образом, РР-мотив ГО-17Р является наиболее вероятным структурным дискриминантом для взаимодействия человеческого ГО-17А и ΙΕ-17Ε с рецепторами ΙΕ-17ΡΛ и !№-17КС. Вероятно, что оба из этих в основном гидрофобных карманов (Р1 и Р2) являются необходимыми для связывания ГО-17А с ГО-17КА. Последняя кристаллическая структура комплекса ГО-ПР/ГО-ПКА показывает, что РР-мотив смещается по воздействием ГО-17КА (Е1у е! а1., ΝηΙ. Iттиио1о§у 10:1245-51, 2009). Энергетические потери при вытеснении РРмотива из Р2 с большой вероятностью приводят к снижению аффинности связывания. Это согласуется с наблюдениями высокой аффинности при связывании ГО-17КА с ГО-17А, но низкой аффинности ГО-17Р у человека (Киек!пег е! а1., 1. Iттиио1, 179:5462-73, 2007), чем можно объяснить различия в эффективности ГО-17А и ГО-17Р. У мышей РР-мотив отсутствует как в ГО-17А, так и в ГО-17Р, вместо него присутствуют остатки ГР и АЬ соответственно. Пары остатков АЬ и ГР малы и вероятно имеют низкую аффинность к Р2-карману. Таким образом, Р2 будет доступен в мышином ГО-17А и ГО-17Р для связывания с ГО-17КА. Как мышиный ГО-17А, так и ГО-17Р, связывают мышиный ГО-17КА со сходной аффинностью (Киек!пег е! а1., Ρ Ιμ^μ! 179:5462-73, 2007) в соответствии с настоящим предположением, что доступность Р2кармана для связывания увеличивает аффинность лигандов.
В целом, структурные различия, отмеченные между ГО-17А и ГО-17Р, дают основу для анализа их взаимодействия с соответствующими рецепторами. Кроме того, возможно, пептиды, пептидомиметики и
- 30 029283 низкомолекулярные вещества могут быть выполнены таким образом, чтобы связываться с одним или обоими карманами и блокировать взаимодействие ГО-17А и (или) ГО-17Р с рецепторами к ним. Так как РР-мотив присутствует в РаЬ6468 (остатки Р92 и Р93 в 8Е^ ГО N0: 79) и связывает остатки Р2-кармана Р26, Р61, Р99, Р101 и Р102, структуру РаЬ 6468 можно использовать для отбора и оптимизации дополнительных ГО-17А антагонистов, таких как пептиды из рандомизированных или созданных пептидных библиотек с помощью фагового отображения.
Остатки, выстилающие Р1- и Р2-карманы, хорошо сохраняются между ГО-17А и ГО-17Р, а молекулярное моделирование показывает, что гетеродимер ГО-17А/Р может принимать почти идентичную в сравнении с одним гомодимером ГО-17А общую структуру. Таким образом, весьма вероятно, что Р1- и Р2-карманы, присутствующие в гетеродимере ГО-17А/Р, имеют сходную общую топологию и состав их мест связывания с рецептором. Таким образом, антагонисты ГО-17А, связываясь с остатками Р2-кармана, могут связываться и проявлять антагонизм к гетеродимеру ГО-17А/Р.
Пример 6
Межвидовая специфичность связывания
Для оценки межвидовой специфичности связывания тАЫг1926, было выполнено ИФА-связывание с различными белками ГО-17А, нанесенными на планшет для микротитрования. На планшет для микротитрования наносили белки человеческого, мышиного и крысиного ГО-17А. Серийные разведения меченого тАЬ1926 инкубировали при 37°С в течение 2 ч. После инкубации планшет для микротитрования тщательно промыли и провели определение связанного меченого тАЬ1926. тАЬ1926 связывался с белками человеческого ГО-17А гораздо сильнее, чем с белками крысиного или мышиного ГО-17А (фиг. 9). Такое уменьшение связывания с крысиным или мышиным ГО-17А согласуется с тем, что оба этих белка отличаются от человеческого ГО-17А на 7 позиции вытянутого эпитопа РаЬ6468 (табл. 10). Кроме того, в крысином и мышином ГО-17А имеется одна аминокислотная вставка между остатками 40 и 41 человеческого ГО-17А в положении, близком к части РаЬ6468 эпитопа.
Перечень последовательностей <110> ΟΕΝΤΟΟΟΡ ОРТНО ВЮТЕСН ΙΝΟ.
<120> АНТАГОНИСТЫ РЕЦЕПТОРА 1Ь-17А <130> ΟΕΝ5276ΡΟΤ <140> РСТ/и52010/054662 <141> 29.10.2010 г.
<150> 61256862 <151> 30.10.2009 г.
<150> 61310919 <151> 05.03.2010 г.
<160> 160 <170> ЕазЬЗЕ<2 для ТлИпсЬомз версии 4.0 <210> 1 <211> 11 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСЬРЬ антител семейства 2 <400> 1
Агд А1а Зег С1п С1у Не Зег Азп Тгр Ьеи Азп 15 10 <210> 2 <211> 12 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСЬР! антител семейств 6а и 6Ь
<400> 2 Агд А1а Зег С1п Азп Уа1 Тгр А1а РНе Туг
1 5 10
<210> 3 <211> 11 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСЬРЬ антител семейств 19а и 19Ь <400> 3
Зег О1у Азр Азп Ьеи О1у Азр Ьуз Туг АЬа Азп 15 10 <210> 4 <211> 7
- 31 029283 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСОК2 антител семейства 2 <210> 5 <211> 7 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <400> 5
С1у А1а Зег Азп Агд А1а ТЪг <210> 6 <211> 7 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <400> 6
Азр Азр Т1е Азр Агд Рго Зег <210> 7 <211> 8 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСОКЗ антител семейства 2 <400> 7
С1п С1п Туг Зег Азр Азр Рго ТЪг <210> 8 <211> 9 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСОКЗ антитела клона 10 семейства ба <211> 9 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСОКЗ антитела клона 11 семейства ба <210> 10 <211> 9 <212> РКТ <213> Искусственная последовательност:
<220>
<223> ЬСОКЗ антитела клона 12 семейст:
<400> 10
С1п С1п С1у Азп Туг Агд Рго Ьеи ТЪг <210>
<211>
<212>
<213>
РКТ
Искусственная последовательность <220>
<223>
Консенсусный ЬСОКЗ антител семейства ба, формула <220>
<221>
<222>
<223>
ВАРИАНТ
Хаа может представлять собой Нтз или С1п <220>
<221>
<222>
<223>
ВАРИАНТ
Хаа может представлять собой РЪе или С1у <220>
<221>
<222>
<223>
ВАРИАНТ
Хаа может представлять собой ТЪг, Уа1 или Азп <220>
<221>
<222>
<223>
ВАРИАНТ
Хаа может представлять собой 11е, ТЪг или Туг <220>
<221> ВАРИАНТ <222> б <223> Хаа может представлят:
<220>
<221> ВАРИАНТ <222> 7
- 32 029283 <223> Хаа может представлять собой Зег или Рго <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 8 <223> Хаа может представлять собой Нтз, РНе или Ьеи <400> 11
Хаа С1п Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа <210> 12 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСОКЗ клона 13 семейства 6Ь <400> 12
С1п С1п Зег Азп НЬз Не Рго Рго А1а ТЬг <210> 13 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСОКЗ семейст:
6Ь МОК7706, 8299, 8300, 8301 <400> 13
61η 61п Туг Агд Зег ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг <210> 14 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная ] ледовательность <400> 14
С1п С1п Туг Уа1 Зег Ьеи Зег РЬе Азр ТЬг <210> 15 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСОКЗ клона 16 семейства 6Ь <400> 15
С1п С1п Туг Туг Зег А1а Рго Ьеи Ьеи ТЬг 15 10 <210> 16 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСОКЗ семейства 6Ь МОК7775, 8101, 8102, 8103 <400> 16
ТЬг С1п Туг Туг Зег Зег Рго Зег Ьеи ТЬг <210> 17 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусный ЬСОКЗ антител семейства 6Ь, формула III <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 1 <223> Хаа может представлять собой 61п или ТЬг <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 3 <223> Хаа может представлять собой Зег или Туг <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 4 <223> Хаа может представлять собой Азп, Агд, Уа1 или Туг <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 5 <223> Хаа может представлять собой Низ или Зег <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 6 <223> Хаа может представлять собой Т1е, ТЬг, Ьеи, АТа или Зег <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 7 <223> Хаа может представлять собой Рго, Ьеи или Зег <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 8 <223> Хаа может представлять собой Рго, Зег, РЬе ]
- 33 029283 <221> ВАРИАНТ <222> 9 <223> Хаа может представлять собой А1а, Ьеи или Азр <400> 17
Хаа С1п Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа ТНг <210> 18 <211> 11 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСОКЗ семейства 19а, клон 178, 179, 181, 184, МОК 7709, 7700, 8095, 8097, 8098, 8302, 8096, 7768, и семейства 19Ь <400> 18
С1у Зег Туг Азр РНе РНе Ьеи С1у МеН Ые Уа1 <210> 19 <211> 11 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность клон МОК 8141, 8160, тАЬ 5548 <400> 19 у Зег Туг Азр РНе РНе Ьеи С1у Ьеи Ые Уа1 <210> 20 <211> 11 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСОКЗ семейства 19а, клон МОК 8142, 8161, 8303 <400> 20 у Зег Туг Азр РНе РНе Ьеи С1у ТНг Ые Уа1 <210> 21 <211> 11 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ЬСОКЗ семейства 19а, клон МОК 8143, 8162 <400> 21 у Зег Туг Азр РНе РНе Ьеи С1у Туг Ые Уа1 <210> 22 <211> 11 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусный ЬСОКЗ антител семейства 19а, формула <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 9 <223> Хаа может представлять собой Меб, Ьеи, ТНг или Туг <400> 22
С1у Зег Туг Азр РНе РНе Ьеи С1у Хаа Ые Уа1 <210> 23 <211> 5 <212> РКТ <213> Искусственная последовательное!] <220>
<223> ΗΟϋΚΙ семейства 2 <400> 23
Зег Туг А1а Ые Зег <210> 24 <211> 7 <212> РКТ <213> Искусственная последовательное!]] <220>
<223> ΗΟϋΚΙ семейства 6а и 6Ь <400> 24
Зег Зег Зег А1а А1а Тгр С1у <210> 25 <211> 5 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ΗΟϋΚΙ семейства 19а и 19Ь <400> 25
Зег Туг А1а Меб Зег <210> 26 <211> 17 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
- 34 029283
Нтз Не Не Рго Тгр РЬе С1у Тгр ТНг Туг Туг А1а С1п Туз РНе С1п <210> 27 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСОР2 семейства 2 7701 <400> 27
МеН 11е 11е Рго Тгр РНе С1у ТНг ТНг РНе Туг А1а С1п Туз РНе С1п <210> 28 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСОК2 семейства 2 7708 <400> 28
Агд 11е 11е Рго Тгр РНе С1у Тгр ТНг
Туг А1а С1п Туз РНе С1п <210> 29 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <400> 29
Агд 11е 11е Рго Тгр РНе 61у ТНг ТНг Зег Туг А1а 61п Туз РНе 61п <210> 30 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательное^ <220>
<223> НСОЕ2 семейства 2 8298 <400> 3 Агд Не
11е Рго Тгр РНе С1у Туг ТНг Зег Туг А1а С1п Туз РНе С1п <210> 31 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательност:
11е 11е Рго Тгр РНе С1у Тгр ТНг Азп Туг А1а С1п Туз РНе С1п <210> 32 <211> 17 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСОР2 семейства 2 8104
11е 11е Рго Тгр РНе С1у ТНг ТНг Азп Туг А1а С1п Туз РНе С1п <210> 33 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <400> 33
Зег 11е 11е Рго Тгр РНе 61у Туг ТНг Азп Туг А1а 61п Туз РНе 61п <210> 34 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСОР2 семейства 2 7786 <400> 34
Туг 11е 11е Рго Тгр РНе С1у Тгр ТНг
Азп Туг А1а С1п Туз РНе С1п
- 35 029283 <210> 35 <211> 17 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусный НСРК2 семейства 2, формула I <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 1 <223> Хаа может представлят:
<220>
<221> ВАРИАНТ <222> 8 <223> Хаа может представлят:
<220>
<221> ВАРИАНТ <222> 10 <223> Хаа может представлят:
обой Нтз, Меб, Агд, Зе обой Туг, РНе, Зе <400> 35
Хаа Не Т1е Рго Тгр РНе С1у Хаа ТНг Хаа Туг А1а С1п Ьуз РНе С1п <210> 36 <211> 18 <212> РКТ <213> Искусственная последовательно™ <400> 36
Агд 11е Зег Туг Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг А1а Уа1 Зег Уа1 <210> 37 <211> 17 <212> РКТ <213> Искусственная последовательно™ <400> 37
А1а 11е Азп С1у Ьеи С1у ТНг Нтз Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз <210> 38 <211> 17 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ΗΟΌΚ2 клона 180 семейства 19а
А1а 11е Зег Меб Азр С1у С1у Тгр ТНг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз <210> 39 <211> 17 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <400> 39
С1у 11е Азп Ьуз А1а С1у Туг Туг ТНг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз <210> 40 <211> 17 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ΗΟΏΚ2 клона 182 семейства 19а <400> 40
61у 11е Зег 61у Нтз 61у 61у Туг Ьуз РНе Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз <210> 41 <211> 17 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСБК2 семейства 19а МОК 7700, 8097, 8098, 8141,
8142, 8143, 8160, 8161, 8162 <400> 41
ТНг Не Зег Меб ТНг Зег 61у РНе ТНг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз <210> 42 <211> 17 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> ΗΟΌΚ2 семейства 19а МОК 8095
- 36 029283 <400> 42
ТЬг Не Зег Т1е ТЬг Зег С1у РЬе ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз <210> 43 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность . МОЕ 8096, 8302, 8303, тАЬ 5548 <400> 43
ТЬг Т1е Зег Ьеи ТЬг Зег С1у РЬе ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз <210> 44 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСЬЕ2 семейства 19а МОЕ 7768 <400> 44
Уа1 Т1е Азп Ьуз С1у С1у Азр РЬе Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз <210> 45 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСЬЕ2 клона 185 семейства 19а <400> 45 Уа1 11е 3
С1у : С1у С1у Тгр Т1е Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз <210> 46 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусный НСЬЕ2 семейства 19а, формула VI <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 1 <223> Хаа может представлять собой А1а, С1у, ТЬг или Уа1 <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 3 <223> Хаа может представлять собой Азп или Зег <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 4 <223> Хаа может представлять собой С1у, МеЬ, Ьуз, Не, Ьеи или Нтз <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 5 <223> Хаа может представлять собой Ьеи, Азр, А1а, Нтз, ТЬг, С1у или <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 6 <223> Хаа может представлять собой С1у или Зег <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 7 <223> Хаа может представлять собой ТЬг, С1у, Туг или Азр <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 8 <223> Хаа может представлять собой Нтз, Тгр, Туг или РЬе <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 9 <223> Хаа может представлять собой Ьуз, ТЬг <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 10 <223> Хаа может представлять собой Туг, РЬе или Азп <400> 46
Хаа Не Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз <210> 47 <211> 16 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСОЕ2 клона 186 семейства 19Ь <400> 47
Уа1 ТЬг Зег А1а Азп С1у Агд ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у
- 37 029283 <210> 48 <211> 16 <212> ΡΡΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСРЕ2 клона 187 семейства 19Ь <400> 48
Уа1 ТНг Зег Ьуз МеЬ С1у Нтз ТНг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у <210> 49 <211> 16 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСРЕ2 клона 188 семейства 19Ь <400> 49
Уа1 ТНг Зег МеН ТНг С1у Азп ТНг Туг Туг А1а Азр Зе
Уа1 Ьуз С1у <210> 50 <211> 16 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <400> 50
Уа1 ТНг Зег Нтз Агд Азр Азп ТНг Туг Туг А1а С1у Зег Уа1 Ьуз С1у <210>
<211>
<212>
<213>
РЕТ
Искусственная последовательность <220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
' Консенсусный НСЬЕ2 семейства 19Ь, формула VIII
ВАРИАНТ
Хаа может представлять собой А1а, Ьуз, МеН или
ВАРИАНТ
Хаа может представлять собой Азп, МеН, ТНг или .
ВАРИАНТ
Хаа может представлять собой С1у или Азр
ВАРИАНТ
Хаа может представлять собой Агд, Нтз или Азп <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 12 <223> Хаа может представлять собой Азр или С1у <400> 51
Уа1 ТНг Зег Хаа Хаа Хаа Хаа ТНг Туг Туг А1а Хаа Зег Уа1 Ьуз СЬу <210> 52 <211> 8 <212> РРТ <213> Искусственная последовательное^ <220>
<223> НСОРЗ семейства 2 <400> 52
Азр Зег С1и Туг Туг РНе Азр Нтз <210> 53 <211> 12 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСОРЗ семейства ба, бЬ клоны 13, 15, 16, Мог 7706, 7775 <400> 53
С1и Уа1 Азр Зег МеН Туг Туг Зег Туг РНе Азр Ые <210> 54 <211> 12 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСОРЗ семейства бЬ МОЕ 8299, 8101 <400> 54
С1и Уа1 Азр Зег Ые Туг Туг Зег Туг РНе Азр Ые <210> 55 <211> 12 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСОРЗ семейства бЬ МОЕ 8300, 8102
- 38 029283 <400> 55
С1и Уа1 Азр Зег Ьеи Туг Туг Зег Туг РЬе Азр Не <210> 56 <211> 12 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСРКЗ семейства 6Ь МОК 8301, 8103 <400> 56
С1и Уа1 Азр Зег ТЬг Туг Туг Зег Туг РЬе Азр 11е <210> 57 <211> 12 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусный НСРКЗ семейства 6Ь, формула IV <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 5 <223> Хаа может представлять собой Меб, 11е, Ьеи и.
<400> 57
С1и Уа1 Азр Зег Хаа Туг Туг Зег Туг РЬе Азр 11е <210> 58 <211> 6 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСРКЗ семейства 19а, клон 179, 180, 182, МОК
7709, 7700, 8095, 8096, 8141, 8142, 8143, 7768, семейства 19Ь <400> 58
С1п Ьеи Меб Ьеи Азр Уа1 <210> 59 <211> 6 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСРКЗ семейства 19а МОК 8097 <400> 59
С1п Ьеи Ьеи Ьеи Азр Уа1 1 5 <210> 60 <211> 6 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> НСРКЗ семейства 19а МОК 8098, 8160, 8161, 8162, 8302, 8303, тАЬ5548 <400> 60
С1п Ьеи ТЬг Ьеи Азр Уа1 <210> 61 <211> 6 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусный НСРКЗ семейства 19а, формула VII <220>
<221> ВАРИАНТ <222> 3 <223> Хаа может представлять собой Меб, Ьеи или ТЬг <400> 61
С1п Ьеи Хаа Ьеи Азр Уа1 <210> 62 <211> 106 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <400> 62
Азр Не С1п Меб ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п С1у 11е Зег Азп Тгр 20 25 30
Ьеи Азп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е 35 40 45
Туг А1а А1а Зег Зег Ьеи С1п Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Рго
70 75 80
С1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз С1п С1п Туг Зег Азр Азр Рго ТЬг
РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз 100 105 <210> 63 <211> 109 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
- 39 029283 <223> УЬ семейства 6Ь МОК 7706, 8299, 8300, 8301 <400> 63
Азр Не Уа1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у
С1и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Азп Уа1 Тгр А1а РЬе 20 25 30
Туг Ьеи А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи 35 40 45
Ые Туг С1у А1а Зег Азп Агд А1а ТЬг С1у Уа1 Рго А1а Агд РЬе Зег 50 55 60
С1у Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Зег Ьеи С1и
70 75 80
Рго О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п Туг Агд Зег ТЬг Ьеи <210> 64 <211> 109 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УЬ семейства 6Ь МОК 7775, 8010, 8102, 8103 <400> 64
Азр Ые Уа1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у 15 10 15
С1и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Азп Уа1 Тгр А1а РЬе 20 25 30
Туг Ьеи А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи 35 40 45
Ые Туг С1у А1а Зег Азп Агд А1а ТЬг С1у Уа1 Рго А1а Агд РЬе Зег 50 55 60
С1у Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Зег Ьеи С1и
70 75 80
Рго С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз ТЬг С1п Туг Туг Зег Зег Рго
Ьеи ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Ые Ьуз 100 105 <210> 65 <211> 108 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УЬ семейства 19а, клон 179, 180, 182, МОК 7709,
7700, 8095, 8096, 8097, 8098, 8302, 7768, семейства 19Ь <400> 65
Азр Ые С1и Ьеи ТЬг С1п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 А1а Рго С1у С1п
ТЬг А1а Агд Ые Зег Суз Зег С1у Азр Азп Ьеи С1у Азр Ьуз Туг А1а 20 25 30
Азп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Ые Туг 35 40 45
Азр Азр Ые Азр Агд Рго Зег С1у Ые Рго С1и Агд РЬе Зег С1у Зег 50 55 60
Азп Зег С1у Азп ТЬг А1а ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег С1у ТЬг С1п А1а С1и
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз С1у Зег Туг Азр РЬе РЬе Ьеи С1у МеЬ <210> 66 <211> 108 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УЬ семейства 19а МОК 8016, тАЬ 5548 <400> 66
Азр Ые С1и Ьеи ТЬг С1п Рго Рго Зег Уа1 Зег 15 10
ТЬг А1а Агд Ые Зег Суз Зег С1у Азр Азп Ьеи 20 25
Азп Тгр Туг 61п 61п Ьуз Рго 61у 61п А1а Рго 35 40
Азр Азр Ые Азр Агд Рго Зег 61у Ые Рго С1и 50 55
Азп Зег С1у Азп ТЬг А1а ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег 65 70 75
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз С1у Зег Туг Азр
Ые Уа1 РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 100 105
Уа1 А1а Рго
С1у Азр Ьуз 30
Уа1 Ьеи Уа1 45
Агд РЬе Зег 60
С1у ТЬг С1п
РЬе РЬе Ьеи
Ьеи
С1у С1п 15
Туг А1а
Ые Туг
61у Зег
А1а С1и 80
С1у Ьеи 95 <210> 67 <211> 117 <212> РКТ <213> Искусственная последовательност:
<220>
<223> УН семейства 2 МОК 7708 <400> 67
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и 15 10
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у
25
А1а Ые Зег Тгр Уа1 Агд 61п А1а Рго 61у
40
61у Агд Ые Ые Рго Тгр РЬе 61у Тгр ТЬг
55
С1п С1у Агд Уа1 ТЬг Ые ТЬг А1а Азр С1и 65 70
МеЬ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр
А1а Агд Азр Зег С1и Туг Туг РЬе Азр Нтз 100 105
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115
Уа1 Ьуз
С1у ТЬг
61п С1у
Зег Туг 60
Зег ТЬг 75
ТЬг А1а
Тгр С1у
Рго С1у Зег 15
Зег Зег Туг 30
61и Тгр МеЬ
61п Ьуз РЬе
ТЬг А1а Туг 80
Туг Туг Суз 95 <210> 68 <211> 117 <212> РКТ <213> Искусственная последовательност:
- 40 029283 <220>
<223> УН семейства 2 МОК 7785 <400> 68
61η Уа1 61η Ьеи Уа1 61η Зег б1у А1а б1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго б1у Зег
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег 61у 61у ТЬг РЬе Зег Зег Туг
20 25 30
А1а 11е Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго 61у 61п 61 у Ьеи 61и Тгр МеЬ
35 40 45
С1у Зег 11е 11е Рго Тгр РЬе 61у Тгр ТЬг Азп Туг А1а 61п Ьуз РЬе
50 55 60
61п 61у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр 61и Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ 61и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег 61и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Зег 61и Туг Туг РЬе Азр Нтз Тгр 61 у 61п 61у ТЬг Ьеи
100 105 но
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 69 <211> 117 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
<220> <223> VI I семейства 2 МОК 8104
<400> 69 61п Уа1 61п Ьеи Уа1 61п Зег 61у А1а 61и Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у Зег
1 Зег Уа1 5 10 15 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег 61у 61у ТЬг РЬе Зег Зег Туг
А1а 11е 20 25 30 Зег Тгр Уа1 Агд 61п А1а Рго 61у 61п С1у Ьеи 61и Тгр МеЬ
61у Зег 35 40 45 11е 11е Рго Тгр РЬе 61у ТЬг ТЬг Азп Туг А1а 61п Ьуз РЬе
50 61п 61у 55 60 Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр 61и Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 МеЬ 61и 70 75 80 Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег 61и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
А1а Агд 85 90 95 Азр Зег 61и Туг Туг РЬе Азр Нтз Тгр С1у 61п 61у ТЬг Ьеи
Уа1 ТЬг 100 105 110 Уа1 Зег Зег 115
<210> 70 <211> 124 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
<220> <223> ΥΗ семейства 6Ь МОК 7706, 7775
<400> 70
61п Уа1 61п Ьеи 61п 1 5 61п Зег 61у Рго 61у 10 Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег 15 61п
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг 20 Суз А1а 11е Зег 25 61у Азр Зег Уа1 Зег 30 Зег Зег
Зег А1а А1а Тгр 61у 35 Тгр 11е Агд 40 61п Зег Рго 61 у Агд 45 61у Ьеи 61и
Тгр Ьеи С1у Агд Не 50 Зег Туг 55 Агд Зег Ьуз Тгр Туг 60 Азп Азр Туг А1а
Уа1 Зег Уа1 Ьуз Зег 65 Агд 70 11е ТЬг 11е Азп Рго 75 Азр ТЬг Зег Ьуз Азп 80
61п РЬе Зег Ьеи С1п 85 Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг 90 Рго 61и Азр ТЬг А1а 95 Уа1
Туг Туг Суз А1а Агд 100 11е Тгр 61у 61п С1у 115 61и ТЬг Уа1 Ьеи Азр Уа1 120 Зег 105 ТЬг МеЬ Уа1 Туг Зег Туг Зег Зег Туг 110 РЬе Азр
<210> 71 <211> 124 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УН семейства 6Ь МОК 8299, 8101 <400> 71
61п Уа1 61п Ьеи 61п 61п Зег 61у Рго 61у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег 61п 15 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Не Зег С1у Азр Зег Уа1 Зег Зег Зег 20 25 30
Зег А1а А1а Тгр С1у Тгр 11е Агд С1п Зег Рго С1у Агд С1у Ьеи С1и 35 40 45
Тгр Ьеи С1у Агд Не Зег Туг Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг А1а 50 55 60
Уа1 Зег Уа1 Ьуз Зег Агд Не ТЬг 11е Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
70 75 80
61п РЬе Зег Ьеи С1п Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1
90 95
Туг Туг Суз А1а Агд С1и Уа1 Азр Зег 11е Туг Туг Зег Туг РЬе Азр
100 105 110
Не Тгр 61у 61п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120 <210> 72 <211> 124 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УН семейства 6Ь МОК 8103, 8301 <400> 72
61п Уа1 61п Ьеи 61п 61п Зег 61у Рго 61у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег 61п
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Не Зег 61у Азр Зег Уа1 Зег Зег Зег
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр 61у Тгр 11е Агд 61п Зег Рго 61у Агд 61у Ьеи 61и
35 40 45
Тгр Ьеи 61у Агд 11е Зег Туг Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг А1а
50 55 60
Уа1 Зег Уа1 Ьуз Зег Агд 11е ТЬг 11е Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
61п РЬе Зег Ьеи 61п Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг Рго 61и Азр ТЬг А1а Уа1
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд 61и Уа1 Азр Зег ТЬг Туг Туг Зег Туг РЬе Азр
100 105 110
11е Тгр 61 у 61п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 73 <211> 115 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УН семейства 19а МОК 7700, 8141, 8142, 8143 <400> 73
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЪе 20 25
А1а МеЪ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз 35 40
Зег ТЪг Ые Зег МеЪ ТЪг Зег С1у РЪе ТЪг Туг 50 55
Ьуз С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп Зег 65 70 75
Ьеи С1п МеЪ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЪг
А1а Агд С1п Ьеи МеЪ Ьеи Азр Уа1 Тгр С1у С1п ' 100 105
Уа1 Зег Зег 115
Уа1 С1п Рго С1у С1у 15
ТЪг РЪе Зег Зег Туг 30
С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 45
Туг А1а Азр Зег Уа1 60
Ьуз Азп ТЪг Ьеи Туг 80
А1а Уа1 Туг Туг Суз 95 <210> 74 <211> 115 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УН семейства 19а МОК 8096, 8160, 8161, 8162 <400> 74
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЪе 20 25
А1а МеЪ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз 35 40
Зег ТЪг Ые Зег МеЪ ТЪг Зег С1у РЪе ТЪг Туг 50 55
Ьуз С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп Зег 65 70 75
Ьеи С1п МеЪ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЪг
А1а Агд 61п Ьеи ТЪг Ьеи Азр Уа1 Тгр 61у 61п 100 105
Уа1 Зег Зег 115
Уа1 С1п Рго С1у С1у 15
ТЪг РЪе Зег Зег Туг 30
С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 45
Туг А1а Азр Зег Уа1 60
Ьуз Азп ТЪг Ьеи Туг 80
А1а Уа1 Туг Туг Суз 95
61у ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг 110 <210> 75 <211> 115 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УН семейства 19а МОК 8302, 8303, тАЬ 5548 <400> 75
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п 15 10
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЪе ТЪг РЪе 20 25
А1а МеЪ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи 35 40 45
Зег ТЪг Ые Зег Ьеи ТЪг Зег С1у РЪе ТЪг Туг Туг А1а 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп
70 75
Ьеи С1п МеЪ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЪг А1а Уа1
А1а Агд С1п Ьеи ТЪг Ьеи Азр Уа1 Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105
Уа1 Зег Зег 115
Рго С1у С1у 15
Зег Зег Туг 30
С1и Тгр Уа1
Азр Зег Уа1
ТЪг Ьеи Туг 80
Туг Туг Суз 95
Ьеи Уа1 ТЪг 110 <210> 76 <211> 106 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <400> 76
Азр Ые С1п МеЪ ТЪг С1п Зег Рго Зег Зег Уа1 Зег А1а Зег Уа1
Азр Агд Уа1 ТЪг 11е ТЪг Суз Агд А1а Зег С1п С1у 11е Зег Азп 20 25 30
Ьеи Азп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 35 40 45
Туг А1а А1а Зег Зег Ьеи С1п Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЪе Зег 50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЪг Азр РЪе ТЪг Ьеи ТЪг 11е Зег Зег Ьеи С1п 65 70 75
С1и Азр РЪе А1а ТЪг Туг Туг Суз С1п С1п Туг Зег Азр Азр Рго
С1у
Тгр
Ые
С1у
Рго
ТЪг <210> 77 <211> 109 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УЬ семейства бЪ тАЪз 4538, 3584 <400> 77
С1и Ые Уа1 Ьеи ТЪг С1п Зег Рго А1а ТЪг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у
С1и Агд А1а ТЪг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Азп Уа1 Тгр А1а РЪе 20 25 30
Туг Ьеи А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи 35 40 45
Ые Туг С1у А1а Зег Азп Агд А1а ТЪг С1у Ые Рго А1а Агд РЪе Зег 50 55 60
С1у Зег С1у Зег С1у ТЪг Азр РЪе ТЪг Ьеи ТЪг Ые Зег Зег Ьеи С1и
70 75 80
Рго С1и Азр РЪе А1а Уа1 Туг Туг Суз С1п С1п Туг Агд Зег ТЪг Ьеи
- 42 029283 ' Ьеи ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Не Ьуз 100 105 <210> 78 <211> 109 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УЬ семейства бЬ тАЬз 732, 4168 <400> 78
С1и Ые Уа1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у 15 10 15
С1и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Азп Уа1 Тгр А1а РЬе 20 25 30
Туг Ьеи А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи 35 40 45
Ые Туг С1у А1а Зег Азп Агд А1а ТЬг С1у 11е Рго А1а Агд РЬе Зег 50 55 60
С1у Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Зег Ьеи С1и
70 75 80
Рго С1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг С1п Туг Туг Зег Зег Рго ' Ьеи ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Ые Ьуз 100 105 <210> 79 <211> 108 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УЬ семейства 19а тАЪз 1926, 6785, семейства 19Ь <400> 79
СТп Зег Уа1 Ьеи ТЬг СТп Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 АТа Рго С1у СТп
ТЬг А1а Агд Ые Зег Суз Зег С1у Азр Азп Ьеи С1у Азр Ьуз Туг А1а
20 25 30
Азп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Ые Туг
35 40 45
Азр Азр Ые Азр Агд Рго Зег С1у Ые Рго С1и Агд РЬе Зег С1у Зег
Азп Зег С1у Азп ТЬг А1а ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег С1у ТЬг С1п А1а С1и
70 75 80
Азр С1и АТа Азр Туг Туг Суз С1у Зег Туг Азр РЬе РЬе Ьеи С1у МеЬ
Ые Уа1 РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи 100 105 <210> 80 <211> 108 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <400> 80
С1п Зег Уа1 Ьеи ТЬг С1п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 А1а Рго С1у С1п 15 10 15
ТЬг А1а Агд Ые Зег Суз Зег С1у Азр Азп Ьеи С1у Азр Ьуз Туг А1а 20 25 30
Азп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Ые Туг 35 40 45
Азр Азр Ые Азр Агд Рго Зег С1у Ые Рго С1и Агд РЬе Зег С1у Зег 50 55 60
Азп Зег С1у Азп ТЬг А1а ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег С1у ТЬг С1п А1а С1и
70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз С1у Зег Туг Азр РЬе РЬе Ьеи С1у Ьеи <210> 81 <211> 124 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УН семейства 6Ь тАЬ 4583, 732 <400> 81
С1п Уа1 С1п Ьеи С1п С1п Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Ые Зег С1у 20 25
Зег А1а А1а Тгр С1у Тгр Ые Агд С1п Зег 35 40
Тгр Ьеи С1у Агд Ые Зег Туг Агд Зег Ьуз 50 55
Уа1 Зег Уа1 Ьуз Зег Агд Ые ТЬг Ые Азп 65 70
С1п РЬе Зег Ьеи С1п Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг
Туг Туг Суз А1а Агд С1и Уа1 Азр Зег МеЬ 100 105
Ые Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 115 120
Азр Зег Уа1 Зег Зег Зег 30
Рго Зег Агд С1у Ьеи С1и 45
Тгр Туг Азп Азр Туг А1а 60
Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп 75 80
Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1
Туг Туг Зег Туг РЬе Азр 110 <210> 82 <211> 123 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <400> 82
С1п Уа1 С1п Ьеи С1п С1п Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п 15 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Ые Зег С1у Азр Зег Уа1 Зег Зег Зег 20 25 30
Зег А1а А1а Тгр С1у Тгр Ые Агд С1п Зег Рго Агд С1у Ьеи С1и Тгр 35 40 45
Ьеи С1у Агд Ые Зег Туг Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг А1а Уа1 50 55 60
Зег Уа1 Ьуз Зег Агд Ые ТЬг Ые Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п
70 75 80
РЬе Зег Ьеи С1п Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг
- 43 029283
Туг Суз А1а Агд С1и Уа1 Азр Зег 11е Туг Туг Зег Туг РНе Азр 11е 100 105 110
Тгр С1у С1п С1у ТНг Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 120 <210> 83 <211> 123 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УН семейства <400> 83
С1п Уа1 С1п Ьеи С1п 1 5
ТНг Ьеи Зег Ьеи ТНг
Зег А1а А1а Тгр С1у 35
Ьеи С1у Агд 11е Зег 50
Зег Уа1 Ьуз Зег Агд 65
РНе Зег Ьеи С1п Ьеи 85
Туг Суз А1а Агд С1и 100
Тгр С1у С1п С1у ТНг 115 бЬ тАЬ 4168
С1п Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п 10 15
Суз А1а 11е Зег С1у Азр Зег Уа1 Зег Зег Зег 25 30
Тгр 11е Агд С1п Зег Рго Агд С1у Ьеи С1и Тгр 40 45
Туг Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг А1а Уа1 55 60
11е ТНг 11е Азп Рго Азр ТНг Зег Ьуз Азп С1п 70 75 80
Азп Зег Уа1 ТНг Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг
Уа1 Азр Зег ТНг Туг Туг Зег Туг РНе Азр 11е 105 110
Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 120 <210> 84 <211> 115 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УН семейства 19а тАЬ 1926 <400> 84
С1п Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у С1у С1у 15 10
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у
25
А1а МеЬ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у
40
Зег ТНг 11е Зег МеЬ ТНг Зег С1у РНе ТНг
55
Ьуз С1у Агд РНе ТНг Не Зег Агд Азр Азп 65 70
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр
А1а Агд С1п Ьеи МеЬ Ьеи Азр Уа1 Тгр С1у ( 100 105
Уа1 Зег Зег 115
Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15
РНе ТНг РНе Зег Зег Туг 30
Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 45
Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 60
Зег Ьуз Азп ТНг Ьеи Туг 75 80
ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз <210> 85 <211> 115 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УН семейства 19а тАЬ 7146 <400> 85
С1п Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у С1у С1у 15 10
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у
25
А1а МеЬ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у
40
Зег ТНг 11е Зег МеЬ ТНг Зег С1у РНе ТНг
55
Ьуз С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп 65 70
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр
А1а Агд С1п Ьеи ТНг Ьеи Азр Уа1 Тгр С1у 100 105
Уа1 Зег Зег 115
Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15
РНе ТНг РНе Зег Зег Туг 30
Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 45
Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 60
Зег Ьуз Азп ТНг Ьеи Туг 75 80
ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз
С1п С1у ТНг Ьеи Уа1 ТНг 110 <210> 86 <211> 115 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> УН семейства 19а тАЬ 6785, 5548 <400> 86
С1п Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у С1у С1у 15 10
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у
25
А1а МеЬ Зег Тгр Уа1 Агд 61п А1а Рго 61у
40
Зег ТНг Не Зег Ьеи ТНг Зег С1у РНе ТНг
55
Ьуз С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп 65 70
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр
А1а Агд С1п Ьеи ТНг Ьеи Азр Уа1 Тгр С1у ( 100 105
Уа1 Зег Зег 115
Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15
РНе ТНг РНе Зег Зег Туг 30
Ьуз 61у Ьеи 61и Тгр Уа1 45
Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 60
Зег Ьуз Азп ТНг Ьеи Туг 75 80
ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз <210> 87 <211> 212 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Легкая цепь семейства 2 АЬ 624, 3077, 7024 <400> 87
Азр 11е С1п МеЬ ТНг С1п Зег Рго Зег Зег Уа1 Зег А1а Зег Уа1 61у
Азр Агд Уа1 ТНг 11е ТНг Суз Агд А1а Зег С1п С1у 11е Зег Азп Тгр
- 44 029283
Ьеи Азп Тгр 35 Туг СТп С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
40 45
Туг А1а А1а Зег Зег Ьеи С1п Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п Туг Зег Азр Азр Рго ТЬг
85 90 95
РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Ые Ьуз С1у С1п Рго Ьуз А1а А1а
100 105 110
Рго Зег Уа1 ТЬг Ьеи РЬе Рго Рго Зег Зег С1и С1и Ьеи С1п А1а Азп
115 120 125
Ьуз А1а ТЬг Ьеи Уа1 Суз Ьеи Ые Зег Азр РЬе Туг Рго 61у А1а Уа1
130 135 140
ТЬг Уа1 А1а Тгр Ьуз А1а Азр Зег Зег Рго Уа1 Ьуз А1а С1у Уа1 С1и
145 150 155 160
ТЬг ТЬг ТЬг Рго Зег Ьуз С1п Зег Азп Азп Ьуз Туг А1а А1а Зег Зег
165 170 175
Туг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Рго С1и С1п Тгр Ьуз Зег Низ Агд Зег Туг Зег
180 185 190
Суз С1п Уа1 ТЬг Шз С1и С1у Зег ТЬг Уа1 С1и Ьуз ТЬг Уа1 А1а Рго
195 200 205
Тйг С1и Суз Зег 210 <210> 88 <211> 215 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Легкая цепь тАЬ семейства 6Ь тАЬ 4538, 3584 <400> 88
С1и Ые Уа1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у 15 10 15
С1и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Азп Уа1 Тгр А1а РЬе 20 25 30
Туг Ьеи А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи 35 40 45
Ые Туг С1у 50 А1а Зег Азп Агд А1а ТЬг С1у Ые Рго АЬа Агд РЬе Зег
55 60
С1у Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Зег Ьеи С1и
65 70 75 80
Рго С1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз С1п С1п Туг Агд Зег ТЬг Ьеи
85 90 95
Зег Ьеи ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Ые Ьуз СТу С1п Рго
100 105 110
Ьуз А1а А1а Рго Зег Уа1 ТЬг Ьеи РЬе Рго Рго Зег Зег С1и С1и Ьеи
115 120 125
Рго
А1а
160
А1а
Агд
ТЬг
С1у
РЬе
Ьеи
Зег
С1и
Рго
Рго
Ьеи
Рго
А1а
160
А1а
Агд
ТЬг
С1п
А1а
Туг
Зег
С1и
МеЬ
- 45 029283
100 105 110
А1а А1а Рго Зег Уа1 ТЬг Ьеи РЬе Рго Рго Зег Зег С1и С1и Ьеи С1п
115 120 125
А1а Азп Ьуз А1а ТЬг Ьеи Уа1 Суз Ьеи Не Зег Азр РЬе Туг Рго С1у
130 135 140
А1а Уа1 ТЬг Уа1 А1а Тгр Ьуз А1а Азр Зег Зег Рго Уа1 Ьуз А1а С1у
145 150 155 160
Уа1 С1и ТЬг ТЬг ТЬг Рго Зег Ьуз С1п Зег Азп Азп Ьуз Туг А1а А1а
165 170 175
Зег Зег Туг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Рго С1и С1п Тгр Ьуз Зег Низ Агд Зег
180 185 190
Туг Зег Суз С1п Уа1 ТЬг Низ С1и С1у Зег ТЬг Уа1 С1и Ьуз ТЬг Уа1
195 200 205
А1а Рго ТЬг С1и Суз Зег
210 <210> 91 <211> 214 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Легкая цепь тАЬ семейства 19а тАЬ 7146, 5548 <400> 91
С1п Зег Уа1 Ьеи ТЬг С1п Рго Рго Зег Уа1
ТЬг А1а Агд 11е Зег Суз Зег С1у Азр Азп 20 25
Азп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а 35 40
Азр Азр 11е Азр Агд Рго Зег С1у 11е Рго 50 55
Азп Зег С1у Азп ТЬг А1а ТЬг Ьеи ТЬг 11е 65 70
Азр С1и АТа Азр Туг Туг Суз СТу Зег Туг
11е Уа1 РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг 100 105
А1а А1а Рго Зег Уа1 ТЬг Ьеи РЬе Рго Рго 115 120
А1а Азп Ьуз А1а ТЬг Ьеи Уа1 Суз Ьеи 11е
130 135
А1а Уа1 ТЬг Уа1 А1а Тгр Ьуз А1а Азр Зег 145 150
Уа1 С1и ТЬг ТЬг ТЬг Рго Зег Ьуз С1п Зег 165 170
Зег Зег Туг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Рго С1и С1п 180 185
Туг Зег Суз С1п Уа1 ТЬг Низ С1и С1у Зег 195 200
А1а Рго ТЬг С1и Суз Зег
210
Зег Уа1 А1а
Ьеи С1у Азр
Рго Уа1 Ьеи 45
С1и Агд РЬе 60
Зег С1у ТЬг 75
Азр РЬе РЬе
Уа1 Ьеи С1у
Зег Зег С1и 125
Зег Азр РЬе 140
Зег Рго Уа1 155
Азп Азп Ьуз
Тгр Ьуз Зег
Рго С1у С1п 15
Ьуз Туг А1а 30
Уа1 11е Туг
Зег С1у Зег
С1п А1а С1и 80
Ьеи С1у Ьеи 95
С1п Рго Ьуз 110
С1и Ьеи С1п
Туг Рго С1у
Ьуз А1а С1у 160
Туг А1а А1а 175
Низ Агд Зег 190
Ьуз ТЬг Уа1 <210> 92 <211> 447 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Тяжелая цепь семейства 2 тАЬ 624 <400> 92
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз 15 10
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у С1у ТЬг РЬе 20 25
А1а 11е Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи 35 40 45
С1у Агд 11е 11е Рго Тгр РЬе С1у Тгр ТЬг Зег Туг А1а 50 55 60
С1п С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр С1и Зег ТЬг Зег
70 75
МеЬ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг АТа Уа1
Рго С1у Зег 15
Зег Зег Туг 30
С1и Тгр МеЬ
С1п Ьуз РЬе
ТЬг А1а Туг 80
Туг Туг Суз 95
С1у ТЬг Ьеи 110
РЬе Рго Ьеи
Ьеи С1у Суз
Тгр Азп Зег 160
Ьеи С1п Зег 175
Зег Зег Зег 190
Низ Ьуз Рго Зег Азп 205
Суз Азр Ьуз ТЬг Низ 220
СТу СТу
А1а Агд Азр Зег С1и Туг Туг РЬе Азр Низ Тгр С1у С1п 100 105
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 115 120 125
А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а 130 135 140
Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег
145 150 155
С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 Низ ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 165 170
Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго 180 185
Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп 195 200
ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и Рго Ьуз Зег 210 215
ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи 225 230 235
РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е 245 250
Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Низ С1и 260 265
Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Низ 275 280 285
ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 290 295 300
Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Низ С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз
305 310 315
Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е С1и
325 330
Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг 340 345
Рго Зег Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи 355 360 365
Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр 370 375 380
С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1
385 390 395
Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр
405 410
Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Низ 420 425
Низ Азп Низ Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445
Рго Зег Уа1 240
Зег Агд ТЬг 255
Азр Рго С1и 270
Азп А1а Ьуз
Уа1 Уа1 Зег
С1и Туг Ьуз 320
Ьуз ТЬг 11е 335
ТЬг Ьеи Рго 350
ТЬг Суз Ьеи
С1и Зег Азп
Ьеи Азр Зег 400
Ьуз Зег Агд 415
С1и А1а Ьеи 430
СТу Ьуз <210> 93 <211> 447 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
- 46 029283 <220>
<223> Тяжелая цепь семейства 2 тАЬ 3077 <400> 93
С1п УаЬ С1п Ьеи Уа1 С1п 5 Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег Туг МеЬ
1 Зег А1а Уа1 Ьуз Ьуз А1а Зег 25 10 С1у С1у ТЬг РЬе Зег 30 С1и 15 Зег Тгр
Уа1 20 Тгр Зег Уа1 Суз Агд
С1у С1п С1у 45
Не Зег 35 С1п А1а 40 Рго
С1у Зег Не Не Рго Тгр РЬе С1у Тгр ТЬг Азп Туг А1а С1п Ьуз РЬе
50 55 60
С1п С1у Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг А1а Азр С1и Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Зег С1и Туг Туг РЬе Азр Нтз Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи
100 105 НО
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи
115 120 125
А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз
130 135 140
Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег
145 150 155 160
С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 Нтз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег
165 170 175
Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег
180 185 190
Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг Не Суз Азп Уа1 Азп Нтз Ьуз Рго Зег Азп
195 200 205
ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Нтз
210 215 220
ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у Рго Зег Уа1
225 230 235 240
РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ Не Зег Агд ТЬг
245 250 255
Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Нтз С1и Азр Рго С1и
260 265 270
Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Нтз Азп А1а Ьуз
275 280 285
ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег
290 295 300
Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нтз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз
305 310 315 320
Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Не С1и Ьуз ТЬг Не
325 330 335
Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго
340 345 350
Рго Зег Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи
355 360 365
Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр Не А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп
370 375 380
С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег
385 390 395 400
Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд
405 410 415
Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Нтз С1и А1а Ьеи
420 425 430
Нтз Азп Нтз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз
435 440 445
<210> 94 <211> 447 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Тяжелая цепь семейства 2 тАЬ 7024 <400> 94
С1п 1 УаЬ С1п Ьеи Уа1 5 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 10 Ьуз Ьуз Рго С1у 15 Зег
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у С1у ТЬг РЬе Зег Зег Туг
20 25 30
А1а Не Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
С1у Зег Не Не Рго Тгр РЬе С1у ТЬг ТЬг Азп Туг А1а С1п Ьуз РЬе
50 55 60
С1п С1у Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг А1а Азр С1и Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Зег СЬи Туг Туг РЬе Азр Нтз Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи
115 120 125
А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз
130 135 140
Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег
145 150 155 160
С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 Нтз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег
165 170 175
Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег
180 185 190
Ьеи 61у ТЬг С1п ТЬг Туг Не Суз Азп Уа1 Азп Нтз Ьуз Рго Зег Азп
195 200 205
ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Нтз
210 215 220
ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго СЬи Ьеи Ьеи С1у С1у Рго Зег Уа1
225 230 235 240
РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ Не Зег Агд ТЬг
245 250 255
Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Нтз СЬи Азр Рго СЬи
260 265 270
Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 СЬи Уа1 Нтз Азп А1а Ьуз
275 280 285
ТЬг Ьуз Рго Агд СЬи С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег
290 295 300
Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нтз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз СЬи Туг Ьуз
305 310 315 320
Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Не СЬи Ьуз ТЬг Не
325 330 335
Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд СЬи Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго
340 345 350
Рго Зег Агд Азр СЬи Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи
355 360 365
Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр Не А1а Уа1 СЬи Тгр СЬи Зег Азп
370 375 380
С1у С1п Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег
385 390 395 400
Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд
405 410 415
Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РНе Зег Суз Зег Уа1 Меб Нтз С1и А1а Ьеи 420 425 430
Нтз Азп Нтз Туг ТНг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз 435 440 445 <210> 95 <211> 454 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Тяжелая цепь семейства 6Ь тАЬ 4538, 732 <400> 95
С1п Уа1 С1п Ьеи С1п С1п Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 15 10
ТНг Ьеи Зег Ьеи ТНг Суз А1а 11е Зег С1у Азр Зег 20 25
Зег А1а А1а Тгр С1у Тгр 11е Агд С1п Зег Рго Зег 35 40
Тгр Ьеи С1у Агд Не Зег Туг Агд Зег Ьуз Тгр Туг 50 55 60
Уа1 Зег Уа1 Ьуз Зег Агд Не ТНг 11е Азп Рго Азр 65 70 75
С1п РНе Зег Ьеи С1п Ьеи Азп Зег Уа1 ТНг Рго С1и
Туг Туг Суз А1а Агд С1и Уа1 Азр Зег Меб Туг Туг 100 105
Не Тгр С1у С1п С1у ТНг Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 120
С1у Рго Зег Уа1 РНе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз 130 135 140
С1у ТНг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг 145 150 155
Уа1 ТНг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТНг Зег
165 170
РНе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег 180 185
Уа1 ТНг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТНг С1п ТНг 195 200
Уа1 Азп Низ Ьуз Рго Зег Азп ТНг Ьуз Уа1 Азр Ьуз 210 215 220
Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТНг Низ ТНг Суз Рго Рго Суз 225 230 235
Уа1 Зег 30
Агд С1у 45
Азп Азр
ТНг Зег
Азр ТНг
Зег Туг 110
А1а Зег 125
Зег ТНг
РНе Рго
С1у Уа1
Ьеи Зег 190
Туг Не 205
Ьуз Уа1
Рго А1а
Зег Зег
Ьеи С1и
Туг А1а
Ьуз Азп 80
А1а Уа1 95
РНе Азр
ТНг Ьуз
Зег С1у
С1и Рго 160
Низ ТНг 175
Зег Уа1
Суз Азп
С1и Рго
Рго С1и 240
Ьеи Ьеи С1у С1у Рго Зег Уа1 РНе Ьеи РНе Рго Рго 245 250
ТНг Ьеи Меб Не Зег Агд ТНг Рго С1и Уа1 ТНг Суз 260 265
Уа1 Зег Низ С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РНе Азп Тгр 275 280
Уа1 С1и Уа1 Низ Азп А1а Ьуз ТНг Ьуз Рго Агд С1и 290 295 300
Зег ТНг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТНг Уа1 Ьеи 305 310 315
Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп 325 330
А1а Рго Не С1и Ьуз ТНг Не Зег Ьуз А1а Ьуз С1у 340 345
Рго С1п Уа1 Туг ТНг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и 355 360
С1п Уа1 Зег Ьеи ТНг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РНе Туг 370 375 380
А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп ι
Ьуз Рго Ьуз Азр 255
Уа1 Азр
Уа1 Уа1 270
Туг Уа1 285
С1и С1п
Низ С1п
Ьуз А1а
С1п Рго 350
Ьеи ТНг 365
Рго Зег ί Азп Туг
385 390 395
ТНг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр 61у Зег РНе РНе Ьеи Туг
Азр С1у
Туг Азп
Азр Тгр 320
Ьеи Рго 335
Агд С1и
Ьуз Азп
Азр Не
Ьуз ТНг 400
Зег Ьуз 415
Зег Суз
Ьеи ТНг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РНе :
420 425 430
Зег Уа1 Меб Шз С1и А1а Ьеи Шз Азп Шз Туг ТНг С1п Ьуз Зег Ьеи 435 440 445
Зег Ьеи Зег Рго 61у Ьуз 450 <210> 96 <211> 454 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Тяжелая цепь семейства 6Ь тАЬ 3584 <400> 96
С1п Уа1 С1п Ьеи С1п С1п Зег С1у Рго С1у Ьеи 15 10
ТНг Ьеи Зег Ьеи ТНг Суз А1а Не Зег 61у Азр 20 25
Зег А1а А1а Тгр 61у Тгр Не Агд 61п Зег Рго 35 40
Тгр Ьеи С1у Агд Не Зег Туг Агд Зег Ьуз Тгр 50 55
Уа1 Зег Уа1 Ьуз Зег Агд Не ТНг Не Азп Рго 65 70 75
61п РНе Зег Ьеи 61п Ьеи Азп Зег Уа1 ТНг Рго
Туг Туг Суз А1а Агд 61и Уа1 Азр Зег Не Туг 100 105
Уа1 Ьуз
Зег Уа1
Зег Агд 45
Туг Азп 60
Азр ТНг
61и Азр
Туг Зег
Рго Зег С1п 15
Зег Зег Зег 30
61у Ьеи 61и
Азр Туг А1а
Зег Ьуз Азп 80
ТНг А1а Уа1 95
Туг РНе Азр НО
ТНг Туг 205
Ьуз Ьуз Уа1 61и Рго 220
Суз Рго
Не Тгр С1у С1п С1у ТНг Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТНг Ьуз 115 120 125
61у Рго Зег Уа1 РНе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТНг Зег 61у 130 135 140
61у ТНг А1а А1а Ьеи 61у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РНе Рго 61и Рго
145 150 155 160
Уа1 ТНг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТНг Зег С1у Уа1 Низ ТНг
165 170 175
РНе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 180 185 190
Уа1 ТНг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи 61у ТНг 61п ТНг Туг Не Суз Азп 195 200
Уа1 Азп Шз Ьуз Рго Зег Азп ТНг Ьуз Уа1 Азр 210 215
Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТНг Шз ТНг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и
225 230 235 240
Ьеи Ьеи С1у С1у Рго Зег Уа1 РНе Ьеи РНе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр
245 250 255
ТНг Ьеи Меб Не Зег Агд ТНг Рго 61и Уа1 ТНг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр 260 265 270
Уа1 Зег Шз 61и Азр Рго 61и Уа1 Ьуз РНе Азп Тгр Туг Уа1 Азр 61у 275 280 285
Уа1 61и Уа1 Шз Азп А1а Ьуз ТНг Ьуз Рго Агд 61и 61и 61п Туг Азп 290 295 300
Зег ТНг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТНг Уа1 Ьеи НЬз 61п Азр Тгр
305 310 315 320
Ьеи Азп 61у Ьуз 61и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго
325 330 335
- 48 029283
АЬа Рго Не СЬи Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи 340 345 350
Рго СЬп УаЬ Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр СЬи Ьеи ТЬг Ьуз Азп 355 360 365
СЬп УаЬ Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр 1Ье 370 375 380
АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг
385 390 395 400
ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз
405 4Ь0 4Ь5
Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п СЬу Азп УаЬ РЬе Зег Суз
420 425 430
Зег УаЬ МеЬ НЬз СЬи АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи
435 440 445
Зег Ьеи Зег Рго СЬу Ьуз
450 <2Ь0> 97 <2ЬЬ> 454 <2Ь2> РРТ <2ЬЗ> Искусственная последовательность <220>
<223> Тяжелая цепь семейства бЬ тАЬ 4Ь68 <400> 97
СЬп УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу Рго СЬу Ьеи Ь 5 ЬО
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз АЬа ЬЬе Зег СЬу Азр 20 25
Зег АЬа АЬа Тгр СЬу Тгр 1Ье Агд СЬп Зег Рго 35 40
Тгр Ьеи СЬу Агд 11е Зег Туг Агд Зег Ьуз Тгр 50 55
УаЬ Зег УаЬ Ьуз Зег Агд ЬЬе ТЬг 1Ье Азп Рго 65 70 75
СЬп РЬе Зег Ьеи СЬп Ьеи Азп Зег УаЬ ТЬг Рго
Туг Туг Суз АЬа Агд СЬи УаЬ Азр Зег ТЬг Туг ЬОО Ь05
ЬЬе Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег ЬЬ5 Ь20
СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Рго Ьеи АЬа Рго Зег Зег ЬЗО Ь35
СЬу ТЬг АЬа АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Ь45 Ь50 Ь55
УаЬ ТЬг УаЬ Зег Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТЬг
Ь65 Ь70
РЬе Рго АЬа УаЬ Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг
Ь80 Ь85
УаЬ ТЬг УаЬ Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг СЬп
Ь95 200
УаЬ Азп НЬз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЬ Азр
2Ь0 2Ь5
Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго 225 230 235
Ьеи Ьеи СЬу СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Ьеи РЬе Рго
245 250
ТЬг Ьеи МеЬ ЬЬе Зег Агд ТЬг Рго СЬи УаЬ ТЬг
260 265
УаЬ Зег НЬз СЬи Азр Рго СЬи УаЬ Ьуз РЬе Азп
275 280
УаЬ СЬи УаЬ НЬз Азп АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд
290 295
Зег ТЬг Туг Агд УаЬ УаЬ Зег УаЬ Ьеи ТЬг УаЬ 305 ЗЬО ЗЬ5
Ьеи Азп СЬу Ьуз СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег
325 330
АЬа Рго ЬЬе СЬи Ьуз ТЬг ЬЬе Зег Ьуз АЬа Ьуз
340 345
Рго СЬп УаЬ Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр
355 360
СЬп УаЬ Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе 370 375
АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи 385 390 395
ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе
405 4Ь0
Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп СЬу
420 425
Зег УаЬ МеЬ НЬз СЬи АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз Туг
435 440
Зег Ьеи Зег Рго СЬу Ьуз
450
УаЬ Ьуз Рго Зег СЬп Ь5
Зег УаЬ Зег Зег Зег 30
Зег Агд СЬу Ьеи СЬи 45
Туг Азп Азр Туг АЬа 60
Азр ТЬг Зег Ьуз Азп 80
СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ 95
Туг Зег Туг РЬе Азр ЬЬО
Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз Ь25
Ьуз Зег ТЬг Зег СЬу Ь40
Туг РЬе Рго СЬи Рго ЬбО
Зег СЬу УаЬ НЬз ТЬг Ь75
Зег Ьеи Зег Зег УаЬ Ь90
ТЬг Туг ЬЬе Суз Азп 205
Ьуз Ьуз УаЬ СЬи Рго 220
Суз Рго АЬа Рго СЬи 240
Рго Ьуз Рго Ьуз Азр 255
Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр 270
Тгр Туг УаЬ Азр СЬу 285
СЬи СЬи СЬп Туг Азп
300
Ьеи НЬз СЬп Азр Тгр 320
Азп Ьуз АЬа Ьеи Рго 335
СЬу СЬп Рго Агд СЬи 350
СЬи Ьеи ТЬг Ьуз Азп 365
Туг Рго Зег Азр ЬЬе 380
Азп Азп Туг Ьуз ТЬг 400
РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз 4Ь5
Азп УаЬ РЬе Зег Суз 430
ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи 445 <2Ь0> 98 <2ЬЬ> 445 <2Ь2> РРТ <2ЬЗ> Искусственная последовательность <220>
<223> Тяжелая цепь семейства Ь9а тАЬ Ь92б <400> 98
СЬп УаЬ СЬп Ьеи Ьеи СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ ОЬп Рго СЬу СЬу Ь 5 ЬО Ь5
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30
АЬа МеЬ Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ 35 40 45
Зег ТЬг ЬЬе Зег МеЬ ТЬг Зег СЬу РЬе ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ 50 55 60
Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг ЬЬе Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬп Ьеи МеЬ Ьеи Азр УаЬ Тгр СЬу ОЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг
ЬОО Ь05 ЬЬО
УаЬ Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Рго Ьеи АЬа Рго
ЬЬ5 Ь20 Ь25
Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег СЬу СЬу ТЬг АЬа АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ
ЬЗО Ь35 Ь40
Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг УаЬ Зег Тгр Азп Ь45 Ь50 Ь55
Ьеи ТЬг Зег СЬу УаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа УаЬ Ьеи СЬп Ь65 Ь70
Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ Рго Зег Зег Ь80 Ь85
ТЬг СЬп ТЬг Туг ЬЬе Суз Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз Рго Зег Ь95 200 205
УаЬ Азр Ьуз Ьуз УаЬ СЬи Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз
2Ь0 2Ь5 220
Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи Ьеи Ьеи СЬу СЬу Рго Зег 225 230 235
РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ ТЬе Зег Агд
Зег СЬу АЬа Ь60
Зег Зег СЬу Ь75
Зег Ьеи СЬу Ь90
Азп ТЬг Ьуз
УаЬ РЬе Ьеи 240
ТЬг Рго СЬи
- 49 029283
Уа1 РНе ТНг Азп Суз Тгр 275 Уа1 260 Туг 245 Уа1 Уа1 Уа1 Азр Азр С1у Уа1 Уа1 280 Зег 265 С1и 250 Нтз Уа1 С1и Нтз Азр Азп Рго А1а 285 С1и 270 Ьуз 255 Уа1 ТНг Ьуз Ьуз
Рго Агд С1и С1 и С1п Туг Азп Зег ТНг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи
290 295 300
ТНг Уа1 Ьеи Нтз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз
305 310 315 320
Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Ые С1и Ьуз ТНг Ые Зег Ьуз
325 330 335
А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТНг Ьеи Рго Рго Зег
340 345 350
Агд Азр С1и Ьеи ТНг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТНг Суз Ьеи Уа1 Ьуз
355 360 365
С1у РНе Туг Рго Зег Азр Ые А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п
370 375 380
Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТНг ТНг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у
385 390 395 400
Зег РНе РНе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТНг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п
405 410 415
С1п С1у Азп Уа1 РНе Зег Суз Зег Уа1 МеН Нтз С1и А1а Ьеи Нтз Азп
420 425 430
Нтз Туг ТНг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз
435 440 445
<210> 99 <211> 445 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь семейства 19а ι тАЬ 7146
<400> 99
С1п Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РНе ТНг РНе Зег Зег Туг
20 25 30
А1а МеН Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1
35 40 45
Зег ТНг Ые Зег Меб ТНг Зег С1у РНе ТНг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РНе ТНг Ые Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п Меб Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд С1п Ьеи ТНг Ьеи Азр Уа1 Тгр С1у С1п С1у ТНг Ьеи Уа1 ТНг
100 105 110
Уа1 Зег Зег А1а Зег ТНг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РНе Рго Ьеи А1а Рго
115 120 125
Зег Зег Ьуз Зег ТНг Зег С1у С1у ТНг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1
130 135 140
Ьуз Азр Туг РНе Рго С1и Рго Уа1 ТНг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а
145 150 155 160
Ьеи ТНг Зег С1у Уа1 Нтз ТНг РНе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у
165 170 175
Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТНг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у
180 185 190
ТНг С1п ТНг Туг Ые Суз Азп Уа1 Азп Нтз Ьуз Рго Зег Азп ТНг Ьуз
195 200 205
Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТНг Нтз ТНг Суз
210 215 220
Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у Рго Зег Уа1 РНе Ьеи
225 230 235 240
РНе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТНг Ьеи МеН Ые Зег Агд ТНг Рго С1и
245 250 255
Уа1 ТНг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Нтз С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз
260 265 270
РНе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Нтз Азп А1а Ьуз ТНг Ьуз
275 280 285
Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТНг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи
290 295 300
ТНг Уа1 Ьеи Нтз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз
305 310 315 320
Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Ые С1и Ьуз ТНг Ые Зег Ьуз
325 330 335
А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТНг Ьеи Рго Рго Зег
340 345 350
Агд Азр С1и Ьеи ТНг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТНг Суз Ьеи Уа1 Ьуз
355 360 365
С1у РНе Туг Рго Зег Азр Ые А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п
370 375 380
Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТНг ТНг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у
385 390 395 400
Зег РНе РНе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТНг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п
405 410 415
С1п С1у Азп Уа1 РНе Зег Суз Зег Уа1 МеН Нтз С1и А1а Ьеи Нтз Азп
420 425 430
Нтз Туг ТНг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз
435 440 445
<210> 100 <211> 445 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Тяжелая цепь семейства 19а тАЬ 6785, 5548 <400> 100
С1п Уа1 С1п 1 Зег Ьеи Агд А1а МеН Зег 35 Зег ТНг Ые Ьеи Ьеи С1и 5 Зег СТу СТу СТу Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у Туг Уа1 Уа1
10 15 Зег Тгр Зег
Ьеи 20 Тгр Зег Зег Суз Уа1 Агд А1а А1а СТп АТа Зег СТу РНе ТНг РНе Зег
25 Рго РНе СТу Ьуз С1у Ьеи 45 30 С1и Азр
Ьеи ТНг Зег 55 40 С1у ТНг Туг
Туг 60 А1а
50
Ьуз С1у Агд РНе ТНг Ые Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п МеН Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд С1п Ьеи ТНг Ьеи Азр Уа1 Тгр С1у С1п С1у ТНг Ьеи Уа1 ТНг
100 105 110
Уа1 Зег Зег А1а Зег ТНг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РНе Рго Ьеи А1а Рго
115 120 125
Зег Зег Ьуз Зег ТНг Зег С1у С1у ТНг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1
130 135 140
Ьуз Азр Туг РНе Рго С1и Рго Уа1 ТНг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а
145 150 155 160
Ьеи ТНг Зег СТу Уа1 Нтз ТНг РНе Рго А1а Уа1 Ьеи СТп Зег Зег СТу
165 170 175
Ьеи Туг
ТЬг С1п
Уа1 Азр 210
Рго Рго 225
РНе Рго
Уа1 ТНг
РНе Азп
Рго Агд 290
ТНг Уа1 305
Уа1 Зег
А1а Ьуз
Агд Азр
Зег Ьеи 180
ТНг Туг 195
Ьуз Ьуз
Суз Рго
Рго Ьуз
Зег Зег Уа1
Ые Суз Азп
Уа1 С1и Рго 215
А1а Рго С1и 230
Рго Ьуз Азр 245
Уа1 Уа1 Азр
Суз Уа1 260
Тгр Туг Уа1 Азр С1у 275
С1и С1и
385
Зег РНе
С1п С1у
Низ Туг
Ьеи Низ
Азп Ьуз
С1у С1п 340
С1и Ьеи 355
Туг Рго
Азп Азп
РНе Ьеи
Азп Уа1 420
ТНг С1п 435
С1п Туг Азп 295
С1п Азр Тгр 310
А1а Ьеи Рго 325
Рго Агд СЬи
Уа1 ТНг 185
Уа1 Азп 200
Ьуз Зег
Ьеи Ьеи
ТНг Ьеи
Уа1 Зег 265
Уа1 СЬи 280
Зег ТНг
Ьеи Азп
АЬа Рго
Рго СЬп 345
ТНг Ьуз Азп СЬп Уа1 360
АЬа УаЬ
Зег Азр Ые 375
Туг Ьуз ТНг 390
Туг Зег Ьуз 405
РНе Зег Суз
Ьуз Зег Ьеи
ТНг Рго
Ьеи ТНг
Зег УаЬ 425
Зег Ьеи 440
УаЬ Рго
Низ Ьуз
Суз Азр
С1у С1у 235
МеН Ые 250
Низ С1и
УаЬ НЬз
Туг Агд
СЬу Ьуз 315
Ые СЬи 330
УаЬ Туг
Зег Ьеи
СЬи Тгр
Рго УаЬ 395
УаЬ Азр 410
МеН НЬз
Рго Зег 205
Ьуз ТНг 220
Рго Зег
Зег Агд
Азр Рго
Азп АЬа 285
УаЬ УаЬ 300
СЬи Туг
Ьуз ТНг
ТНг Ьеи
Зег Ьеи СЬу 190
Азп ТНг Ьуз
НЬз ТНг Суз
УаЬ РНе Ьеи 240
ТНг Рго СЬи 255
СЬи УаЬ Ьуз 270
Ьуз ТНг Ьуз
Зег УаЬ Ьеи
Ьуз Суз Ьуз 320
Ые Зег Ьуз 335
Рго Рго Зег 350
Ьеи УаЬ Ьуз
ТНг Суз 365
СЬи Зег Азп СЬу СЬп 380
Ьеи Азр
Ьуз Зег
СЬи АЬа
Зег Рго СЬу Ьуз 445
Азр СЬу 400
Агд Тгр СЬп 415
Ьеи НЬз Азп 430 <210> 101 <211> 1392 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> кДНК кодон-оптимизированная тяжелая цепь тАЬ 6785 лидерной последовательностью <400> 101 аНддсННддд дНдсадсНдс
Ндсдссдсса ддсаадддсс дасадсдНда садаНдааса сНддасдНдН
НсддНсННсс
НдссНддНса ассадсддсд адсдНддНда сасаадссса сасасаНдсс сссссаааас дНддасдНда дНдсаНааНд адсдНссНса
Нссаасааад
НдНддассНН
Нддададсдд дсддсННсас
НддадНдддН адддссддНН дссНдсдддс ддддссаддд сссНддсасс аддасНасНН
НдсасассНН ссдНдсссНс дсаасассаа сассдНдссс ссааддасас дссасдаада ссаадасааа ссдНссНдса сссНсссадс дсНаННссНд сддсддссНд сННсадсадс дадсассаНс сассаНсадс сдаддасасс сасссНддНд сНссНссаад ссссдаассд сссддсНдНс садсадсННд ддНддасаад адсассНдаа ссНсаНдаНс сссНдаддНс дссдсдддад ссаддасНдд ссссаНсдад аНддсадсНд дНдсадсссд
НасдссаНда адссНдасса сдддасааса дссдНдНасН ассдНдадса адсассНсНд дНдасддНдН сНасадНссН ддсасссада ааадННдадс сНссНддддд
Нсссддассс аадННсаасН дадсадНаса сНдааНддса аааассаНсН сссааадНаН дсддсадссН дсНдддНдсд дсддсННсас дсаадаасас асНдсдсссд дсдссНссас ддддсасадс сдНддаасНс саддасНсНа ссНасаНсНд ссаааНсННд дассдНсадН сНдаддНсас ддНасдНдда асадсасдНа аддадНасаа ссааадссаа асаддсссаа дсддсНдадс дсаддссссс сНасНасдсс ссНдНассНд дсадсНдасс саадддссса ддсссНдддс аддсдсссНд сНсссНсадс саасдНдааН
НдасаааасН сННссНсННс аНдсдНддНд сддсдНддад ссдНдНддНс дНдсааддНс адддсадссс
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080 сдадаассас аддНдНасас ссНдссссса НсссдддаНд адсНдассаа даассаддНс адссНдассН дссНддНсаа аддсННсНаН сссадсдаса НсдссдНдда дНдддададс ааНдддсадс сддадаасаа сНасаадасс асдссНсссд НдсНддасНс сдасддсНсс ННсННссНсН асадсаадсН сассдНддас аададсаддН ддсадсаддд даасдНсННс НсаНдсНссд НдаНдсаНда ддсНсНдсас аассасНаса сдсадаадад ссНсНсссНд НсНссдддНа аа <210> 102 <211> 1335 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> кДНК кодон-оптимизированная тяжелая цепь тАЬ 6785 без лидерной последовательности
1140
1200
1260
1320
1380
1392 <400> 102 саадНдсадс адсНдсдссд сссддсаадд дссдасадсд сНдсадаНда асссНддасд ссаНсддНсН ддсНдссНдд сНдассадсд адсадсдНдд ааНсасаадс асНсасасаН
ННссссссаа дНддНддасд даддНдсаНа дНсадсдНсс дНсНссааса ссссдадаас дНсадссНда адсааНдддс
НссННсННсс
ННсНсаНдсН сНдНсНссдд
НдсНддадад ссадсддсНН дссНддадНд
Ндаадддссд асадссНдсд
НдНддддсса
НсссссНддс
НсааддасНа дсдНдсасас
НдассдНдсс ссадсаасас дсссассдНд аасссаадда
Ндадссасда аНдссаадас
НсассдНссН аадсссНссс сасаддНдНа ссНдссНддН адссддадаа
НсНасадсаа ссдНдаНдса дНааа сддсддсддс сассННсадс ддНдадсасс дННсассаНс ддссдаддас дддсасссНд асссНссНсс сННссссдаа сННсссддсН сНссадсадс сааддНддас сссадсассН сасссНсаНд адасссНдад ааадссдсдд дсассаддас адсссссаНс сасссНдссс саааддсННс саасНасаад дсНсассдНд
НдаддсНсНд сНддНдсадс адсНасдсса аНсадссНда адссдддаса ассдссдНдН дНдассдНда аададсассН ссддНдасдд дНссНасадН
ННдддсассс аадааадННд даасНссНдд аНсНсссдда дНсаадННса даддадсадН
НддсНдааНд дадаааасса ссаНсссддд
НаНсссадсд ассасдссНс дасаададса сасаассасН ссддсддсад
НдадсНдддН ссадсддсНН асадсаадаа асНасНдсдс дсадсдссНс сНдддддсас
НдНсдНддаа ссНсаддасН адассНасаН адсссаааНс ддддассдНс ссссНдаддН асНддНасдН асаасадсас дсааддадНа
НсНссааадс аНдадсНдас асаНсдссдН ссдНдсНдда ддНддсадса асасдсадаа ссНдсддсНд дсддсаддсс сассНасНас сасссНдНас ссддсадсНд сассаадддс адсддсссНд сНсаддсдсс сНасНсссНс сНдсаасдНд
ННдНдасааа адНсННссНс сасаНдсдНд ддасддсдНд дНассдНдНд саадНдсаад сааадддсад саадаассад ддадНдддад сНссдасддс ддддаасдНс дадссНсНсс
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1335 <210> 103 <211> 699 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> кДНК кодон-оптимизированная легкая цепь тАЬ 6785 лидерной последовательностью <400> 103 аНддссНддН адсдНдсНда
Ндсадсддсд дсссссдНдс адсддсадса даддссдасН ддсассаадс сссНссНсНд
Насссдддад дадассасса сНдасдссНд адсассдНдд сНссНсНссН сссадссссс асаассНддд
НддНдаНсНа асадсддсаа асНасНдсдд
НдассдНдсН аддадсННса ссдНдасадН сасссНссаа адсадНддаа адаадасадН ссНсасНсНс садсдНдадс сдасаадНас сдасдасаНс сассдссасс садсНасдас дддНсадссс адссаасаад ддссНддаад асааадсаас дНсссасада ддссссНаса сНсдсНсасН дНддсссссд дссаасНддН дассддссса сНдассаНса
ННсННссНдд ааддсНдсас дссасасНдд дссдаНадса аасаадНасд адсНасадсН дааНдННса дсасадддНс дссадассдс ассадсадаа дсддсаНссс дсддсассса дсаНдаНсдН ссадНдНсас
НдНдНсНсаН дссссдНсаа сддссадсад дссаддНсас сНдддсссад ссддаНсадс дсссддссад сдадсддННс ддссдаддас дННсддсддс
НсНдННсссд аадНдасННс ддсдддадНд сНаНсНдадс дсаНдааддд
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
699
- 51 029283 <210> 104 <211> 642 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> кДНК кодон-оптимизированная легкая цепь тАЬ 6785 без лидерной последовательности <400> 104 сададсдНдс адсНдсадсд саддсссссд
ННсадсддса дасдаддссд ддсддсасса ссдсссНссН
ННсНасссдд дНддадасса адссНдасдс дддадсассд <210> 105 <211> 132 <212> РКТ <213> Ното :
<400> 105 61у Не ТНг
Азп РНе Рго
ТНг Азп ТНг 35
Зег Рго Тгр 50
Уа1 Не Тгр 65
61у Азп Уа1
Ьеи Уа1 Ьеи
61и Ьуз Не 115
Низ Низ Уа1 130
Ндасссадсс дсдасаассН
НдсНддНдаН дсаасадсдд асНасНасНд адсНдассдН сНдаддадсН дадссдНдас ссасасссНс сНдадсадНд
Нддадаадас ссссадсдНд дддсдасаад сНасдасдас саасассдсс сддсадсНас дсНдддНсад
Нсаадссаас адНддссНдд сааасааадс даадНсссас адНддссссН адсдНддссс
НасдссаасН аНсдассддс асссНдасса дасННсННсс сссааддсНд ааддссасас ааддссдаНа аасаасаадН адаадсНаса асадааНдНН ссддссадас ддНассадса ссадсддсаН
Нсадсддсас
НдддсаНдаН сасссадНдН
НддНдНдНсН дсадссссдН асдсддссад дсНдссаддН сдсссддаНс 60 даадсссддс 120 ссссдадсдд 180 ссаддссдад 240 сдНдННсддс 300 сасНсНдННс 360 саНаадНдас 420 сааддсддда 480 садсНаНсНд 540 сасдсаНдаа 600
642 ;артепз
Не Рго 5
Агд ТНг 20
Азп Рго
Азп Ьеи
61и А1а
Азр Туг 85
Агд Агд 100
Ьеи Уа1
Агд Азп
Уа1 МеН
Ьуз Агд
Низ Агд 55
Ьуз Суз 70
Низ МеН
61и Рго
Зег Уа1
Рго 61у Суз 10
Уа1 Азп Ьеи 25
Зег Зег Азр 40
Азп 61и Азр
Агд Низ Ьеи
Азп Зег Уа1 90
Рго Низ Суз 105
61у Суз ТНг 120
Рго Азп
Азп 11е
Туг Туг
Рго 61и 60
61у Суз 75
Рго Не
Рго Азп
Суз Уа1
Зег 61и
Низ Азп 30
Азп Агд 45
Агд Туг
Не Азп
61п 61п
Зег РНе 110
ТНг Рго 125
Азр Ьуз 15
Агд Азп
Зег ТНг
Рго Зег
А1а Азр 80
61и Не 95
Агд Ьеи
Не Уа1 <210> 106 <211> 132 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Зрелый 1Ь-17АтиНб <400> 106
С1у Не ТНг Не Рго Агд Азп Рго С1у Суз Рго Азп Зег С1и Азр Ьуз 15 10 15
Азп РНе Рго Агд ТНг Уа1 МеН Уа1 Азп Ьеи Азп Не Низ Азп Агд Азп 20 25 30
ТНг Азп ТНг Азп Рго Ьуз Агд Зег Зег Азр Туг Туг Азп Агд Зег ТНг 35 40 45
Зег Рго Тгр Азп Ьеи Низ Агд Азп С1и Азр Рго С1и Агд Туг Рго Зег
Нтз Нтз Уа1 С1п 130 <210> 107 <211> 866 <212> РРТ <213> Ното зартепз <400> 107
МеН 1 61у А1а А1а Агд Зег Рго Рго Зег А1а Уа1 Рго 61у Рго Ьеи Ьеи 15
5 10
С1у Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи С1у Уа1 Ьеи А1а Рго С1у 61у А1а Зег
20 25 30
Ьеи Агд Ьеи Ьеи Азр Нтз Агд А1а Ьеи Уа1 Суз Зег 61п Рго 61у Ьеи
35 40 45
Азп Суз ТНг Уа1 Ьуз Азп Зег ТНг Суз Ьеи Азр Азр Зег Тгр Не Нтз
50 55 60
Рго Агд Азп Ьеи ТНг Рго Зег Зег Рго Ьуз Азр Ьеи 61п Не 61п Ьеи
65 70 75 80
Нтз РНе А1а Нтз ТНг 61п 61п 61у Азр Ьеи РНе Рго Уа1 А1а Нтз Не
85 90 95
С1и Тгр ТНг Ьеи 61п ТНг Азр А1а Зег Не Ьеи Туг Ьеи 61и 61у А1а
100 105 110
61и Ьеи Зег Уа1 Ьеи 61п Ьеи Азп ТНг Азп 61и Агд Ьеи Суз Уа1 Агд
115 120 125
РНе С1и РНе Ьеи Зег Ьуз Ьеи Агд Нтз Нтз Нтз Агд Агд Тгр Агд РНе
130 135 140
ТНг РНе Зег Нтз РНе Уа1 Уа1 Азр Рго Азр 61п 61и Туг 61и Уа1 ТНг
145 150 155 160
Уа1 Нтз Нтз Ьеи Рго Ьуз Рго Не Рго Азр 61у Азр Рго Азп Нтз 61п
165 170 175
Зег Ьуз Азп РНе Ьеи Уа1 Рго Азр Суз 61и Нтз А1а Агд МеН Ьуз Уа1
180 185 190
ТНг ТНг Рго Суз МеН Зег Зег 61у Зег Ьеи Тгр Азр Рго Азп Не ТНг
195 200 205
Уа1 61и ТНг Ьеи 61и А1а Нтз 61п Ьеи Агд Уа1 Зег РНе ТНг Ьеи Тгр
210 215 220
Азп 61и Зег ТНг Нтз Туг 61п Не Ьеи Ьеи ТНг Зег РНе Рго Нтз МеН
225 230 235 240
С1и Азп Нтз Зег Суз РНе 61и Нтз МеН Нтз Нтз Не Рго А1а Рго Агд
245 250 255
Рго 61и 61 и РНе Нтз 61п Агд Зег Азп Уа1 ТНг Ьеи ТНг Ьеи Агд Азп
260 265 270
Ьеи Ьуз 61у Суз Суз Агд Нтз 61п Уа1 61п Не 61п Рго РНе РНе Зег
275 280 285
Зег Суз Ьеи Азп Азр Суз Ьеи Агд Нтз Зег А1а ТНг Уа1 Зег Суз Рго
290 295 300
С1и МеН Рго Азр ТНг Рго 61и Рго Не Рго Азр Туг МеН Рго Ьеи Тгр
305 310 315 320
Уа1 Туг Тгр РНе Не ТНг 61у Не Зег Не Ьеи Ьеи Уа1 61у Зег Уа1
325 330 335
Не Ьеи Ьеи Не Уа1 Суз МеН ТНг Тгр Агд Ьеи А1а 61у Рго 61у Зег
340 345 350
- 52 029283
С1и Ьуз Туг Зег 355 Азр Азр ТЬг Ьуз Туг ТЬг Азр С1у Ьеи Рго А1а А1а
360 365
Азр Ьеи Не Рго Рго Рго Ьеи Ьуз Рго Агд Ьуз Уа1 Тгр Не Не Туг
370 375 380
Зег А1а Азр Низ Рго Ьеи Туг Уа1 Азр Уа1 Уа1 Ьеи Ьуз РЬе А1а С1п
385 390 395 400
РЬе Ьеи Ьеи ТЬг А1а Суз С1у ТЬг С1и Уа1 А1а Ьеи Азр Ьеи Ьеи С1и
405 410 415
С1и С1п А1а Не Зег С1и А1а С1у Уа1 МеЬ ТЬг Тгр Уа1 С1у Агд С1п
420 425 430
Ьуз С1п С1и МеЬ Уа1 С1и Зег Азп Зег Ьуз Не Не Уа1 Ьеи Суз Зег
435 440 445
Агд С1у ТЬг Агд А1а Ьуз Тгр С1п А1а Ьеи Ьеи С1у Агд С1у А1а Рго
450 455 460
Уа1 Агд Ьеи Агд Суз Азр Низ С1у Ьуз Рго Уа1 С1у Азр Ьеи РЬе ТЬг
465 470 475 480
А1а А1а МеЬ Азп МеЬ Не Ьеи Рго Азр РЬе Ьуз Агд Рго А1а Суз РЬе
485 490 495
С1у ТЬг Туг Уа1 Уа1 Суз Туг РЬе Зег С1и Уа1 Зег Суз Азр С1у Азр
500 505 510
Уа1 Рго Азр Ьеи РЬе С1у А1а А1а Рго Агд Туг Рго Ьеи МеЬ Азр Агд
515 520 525
РЬе С1и С1и Уа1 Туг РЬе Агд Не С1п Азр Ьеи С1и МеЬ РЬе С1п Рго
530 535 540
С1у Агд МеЬ Низ Агд Уа1 С1у С1и Ьеи Зег С1у Азр Азп Туг Ьеи Агд
545 550 555 560
Зег Рго С1у С1у Агд С1п Ьеи Агд А1а А1а Ьеи Азр Агд РЬе Агд Азр
565 570 575
Тгр С1п Уа1 Агд Суз Рго Азр Тгр РЬе С1и Суз С1и Азп Ьеи Туг Зег
580 585 590
А1а Азр Азр С1п Азр А1а Рго Зег Ьеи Азр С1и С1и Уа1 РЬе С1и С1и
595 600 605
Рго Ьеи Ьеи Рго Рго С1у ТЬг С1у Не Уа1 Ьуз Агд А1а Рго Ьеи Уа1
610 615 620
Агд С1и Рго С1у Зег С1п А1а Суз Ьеи А1а Не Азр Рго Ьеи Уа1 С1у
625 630 635 640
С1и С1и С1у С1у А1а А1а Уа1 А1а Ьуз Ьеи С1и Рго Низ Ьеи С1п Рго
645 650 655
Агд С1у С1п Рго А1а Рго С1п Рго Ьеи Низ ТЬг Ьеи Уа1 Ьеи А1а А1а
660 665 670
С1и С1и С1у А1а Ьеи Уа1 А1а А1а Уа1 С1и Рго С1у Рго Ьеи А1а Азр
675 680 685
С1у А1а А1а Уа1 Агд Ьеи А1а Ьеи А1а С1у С1и С1у С1и А1а Суз Рго
690 695 700
Ьеи Ьеи С1у Зег Рго С1у А1а С1у Агд Азп Зег Уа1 Ьеи РЬе Ьеи Рго
705 710 715 720
Уа1 Азр Рго С1и Азр Зег Рго Ьеи С1у Зег Зег ТЬг Рго МеЬ А1а Зег
725 730 735
Рго Азр Ьеи Ьеи Рго С1и Азр Уа1 Агд С1и Низ Ьеи С1и С1у Ьеи МеЬ
740 745 750
Ьеи Зег Ьеи РЬе С1и С1п Зег Ьеи Зег Суз С1п А1а С1п С1у С1у Суз
755 760 765
Зег Агд Рго А1а МеЬ Уа1 Ьеи ТЬг Азр Рго Низ ТЬг Рго Туг С1и С1и
770 775 780
С1и С1п Агд С1п Зег Уа1 С1п Зег Азр С1п С1у Туг Не Зег Агд Зег
785 790 795 800
Зег Рго С1п Рго Рго С1и С1у Ьеи ТЬг С1и МеЬ С1и С1и С1и С1и С1и
805 810 815
С1и С1и С1п Азр Рго С1у Ьуз Рго А1а Ьеи Рго Ьеи Зег Рго С1и Азр
820 825 830
Ьеи С1и Зег Ьеи Агд Зег Ьеи С1п Агд С1п Ьеи Ьеи РЬе Агд С1п Ьеи
835 840 845
С1п Ьуз Азп Зег СТу Тгр Азр ТЬг МеЬ СТу Зег С1и Зег С1и С1у Рго
850 855 860
Зег А1а
865
<210> 108 <211> 155 <212> РКТ <213> Павиан (СупосерЬа1из)
<400> 108 МеЬ ТЬг Рго С1у Ьуз ТЬг Зег Ьеи Уа1 Зег Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Зег
1 5 10 15
Ьеи С1и А1а Не Уа1 Ьуз А1а С1у Не А1а Не Рго Агд Азп Зег С1у
20 25 30
Суз Рго Азп Зег С1и Азр Ьуз Азп РЬе Рго Агд ТЬг Ή1 МеЬ Ή1 Азп
35 40 45
Ьеи Азп Не Низ Азп Агд Азп ТЬг Зег ТЬг Азп Рго Ьуз Агд Зег Зег
50 55 60
Азр Туг Туг Азп Агд Зег ТЬг Зег Рго Тгр Азп Ьеи Низ Агд Азп С1и
65 70 75 80
Азр Рго С1и Агд Туг Рго Зег Уа1 Не Тгр С1и А1а Ьуз Суз Агд Низ
85 90 95
Ьеи С1у Суз Уа1 Ьуз А1а Азр С1у Азп Уа1 Азр Туг Низ МеЬ Азп Зег
100 105 НО
Уа1 Рго Не С1п С1п С1и Не Ьеи Уа1 Ьеи Агд Агд С1и Рго Агд Низ
115 120 125
Суз Рго Азп Зег РЬе Агд Ьеи С1и Ьуз Не Ьеи Уа1 Зег Уа1 С1у Суз
130 135 140
ТЬг Суз Уа1 ТЬг Рго Не Уа1 Низ Низ Уа1 А1а
145 150 155
<210> 109 <211> 19 <212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Ν-концевая лидерная последовательность для экспрессии тяжелых цепей <400> 109
МеЕ А1а Тгр Уа1 Тгр ТЬг Ьеи Ьеи РЬе Ьеи МеЬ А1а А1а А1а С1п Зег 15 10 15
Не С1п А1а <210> 110 <211> 20 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Ν-концевая лидерная последовательность для экспрессии легких цепей <400> 110
МеЬ С1у Уа1 Рго ТЬг С1п Уа1 Ьеи С1у Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Тгр Ьеи ТЬг 15 10 15
Азр А1а Агд Суз 20 <210> 111 <211> 224 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Тяжелая цепь ГаЬ6468 с Нгз-меткой <400> 111
С1п Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа А1а Зег СЬу РНе ТНг РНе Зег Зег Туг
20 25 30
АЬа МеН Зег Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ
35 40 45
Зег ТНг Ые Зег Ьеи ТНг Зег СЬу РНе ТНг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ
50 55 60
Ьуз С1у Агд РНе ТНг Ые Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп МеН Азп Зег Ьеи Агд АЬа СЬи Азр ТНг АЬа Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд С1п Ьеи ТНг Ьеи Азр Уа1 Тгр С1у СЬп С1у ТНг Ьеи УаЬ ТНг
100 105 110
Уа1 Зег Зег АЬа Зег ТНг Ьуз СЬу Рго Зег УаЬ РНе Рго Ьеи АЬа Рго
115 120 125
Зег Зег Ьуз Зег ТНг Зег СЬу С1у ТНг АЬа АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ
130 135 140
Ьуз Азр Туг РНе Рго С1и Рго Уа1 ТНг УаЬ Зег Тгр Азп Зег С1у АЬа
145 150 155 160
Ьеи ТНг Зег С1у Уа1 Нгз ТНг РНе Рго АЬа УаЬ Ьеи СЬп Зег Зег С1у
165 170 175
Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ Уа1 ТНг УаЬ Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу
180 185 190
ТНг СЬп ТНг Туг Ые Суз Азп Уа1 Азп Нгз Ьуз Рго Зег Азп ТНг Ьуз
195 200 205
Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 СЬи Рго Ьуз Зег Суз Нгз Нгз Нгз Нгз Нгз Нгз
210 215 220
<210> 112 <211> 399 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223>кДНК последовательность зрелого 1Ь-17АтиН6 (2 аа мутации в сравнении с 1Ь-17А дикого типа) <400> 112 ддсаНаасса Нассссддаа ссссддсНдН сссаасадсд аадаНааааа ННННссасдН 60 ассдННаНдд НдааНсНсаа НаННсасааН сдааасасНа асасНаассс Наадсддадс 120 адсдасНаНН аНааНсддад сасНадсссс НддаассНдс аНсддаасда адаНсссдаа 180 сддНасссса дсдНааНННд ддаадсссаа НдНсддсаНс НдддННдНаН НааНдссдас 240 ддсааНдНсд аННаНсаНаН дааНадсдНд ссНаННсаас аддаааННсЕ адНдсНасдд 300 сдддаасссс сссаННдНсс НааНадсННН сдссНсдааа аааНссНсдН садсдНсддд 360
НдНасдНдсд НдасдсссаН сдНдсаНсас дНссааНда 399 <210> 113 <211> 791 <212> РКТ <213> Ното заргепз <400> 113
МеН Рго Уа1 Рго Тгр РНе Ьеи Ьеи Зег Ьеи А1а Ьеи С1у Агд Зег Рго
10 15
Уа1 Уа1 Ьеи Зег Ьеи С1и Агд Ьеи Уа1 С1у Рго С1п Азр А1а ТНг Нгз
25 30
Суз Зег Рго Уа1 Зег Ьеи С1и Рго Тгр С1у Азр С1и С1и Агд Ьеи Агд
40 45
Уа1 С1п РНе Ьеи А1а С1п С1п Зег Ьеи Зег Ьеи А1а Рго Уа1 ТНг А1а
55 60
АЬа ТНг АЬа Агд ТНг А1а Ьеи Зег С1у Ьеи Зег С1у А1а Азр С1у Агд
70 75 80
Агд СЬи С1и Агд С1у Агд С1у Ьуз Зег Тгр Уа1 Суз Ьеи Зег Ьеи С1у
90 95
СЬу Зег СЬу Азп ТНг С1и Рго С1п Ьуз Ьуз С1у Ьеи Зег Суз Агд Ьеи
100 105 110
Тгр Азр Зег Азр Ые Ьеи Суз Ьеи Рго С1у Азр Ые Уа1 Рго А1а Рго
115 120 125
С1у Рго Уа1 Ьеи А1а Рго ТНг Нгз Ьеи С1п ТНг С1и Ьеи Уа1 Ьеи Агд
130 135 140
Суз С1п Ьуз С1и ТНг Азр Суз Азр Ьеи Суз Ьеи Агд Уа1 А1а Уа1 Нгз
145 150 155 160
Ьеи АЬа Уа1 Нгз С1у Нгз Тгр С1и С1и Рго С1и Азр С1и С1и Ьуз РНе
165 170 175
СЬу С1у А1а А1а Азр Зег С1у Уа1 С1и С1и Рго Агд Азп А1а Зег Ьеи
180 185 190
С1п АЬа СЬп Уа1 Уа1 Ьеи Зег РНе С1п А1а Туг Рго ТНг А1а Агд Суз 195 200 205
Уа1 Ьеи Ьеи С1и Уа1 С1п Уа1 Рго А1а А1а Ьеи Уа1 С1п РНе С1у С1п
210 215 220
Зег Уа1 С1у Зег Уа1 Уа1 Туг Азр Суз РНе С1и А1а А1а Ьеи С1у Зег
225 230 235 240
С1и Уа1 Агд Ые Тгр Зег Туг ТНг С1п Рго Агд Туг С1и Ьуз С1и Ьеи
245 250 255
Азп Нгз ТНг С1п С1п Ьеи Рго Азр Суз Агд С1у Ьеи С1и Уа1 Тгр Азп
260 265 270
Зег Ые Рго Зег Суз Тгр А1а Ьеи Рго Тгр Ьеи Азп Уа1 Зег А1а Азр
275 280 285
С1у Азр Азп Уа1 Нгз Ьеи Уа1 Ьеи Азп Уа1 Зег С1и С1и С1п Нгз РНе
290 295 300
С1у Ьеи Зег Ьеи Туг Тгр Азп С1п Уа1 С1п С1у Рго Рго Ьуз Рго Агд
305 310 315 320
Тгр Нгз Ьуз Азп Ьеи ТНг С1у Рго С1п Ые Ые ТНг Ьеи Азп Нгз ТНг
325 330 335
Азр Ьеи Уа1 Рго Суз Ьеи Суз Ые С1п Уа1 Тгр Рго Ьеи С1и Рго Азр
340 345 350
Зег Уа1 Агд ТНг Азп Ые Суз Рго РНе Агд С1и Азр Рго Агд А1а Нгз
355 360 365
С1п Азп Ьеи Тгр С1п А1а А1а Агд Ьеи Агд Ьеи Ьеи ТНг Ьеи С1п Зег
370 375 380
Тгр Ьеи Ьеи Азр А1а Рго Суз Зег Ьеи Рго А1а С1и А1а А1а Ьеи Суз
385 390 395 400
Тгр Агд А1а Рго С1у С1у Азр Рго Суз С1п Рго Ьеи Уа1 Рго Рго Ьеи
405 410 415
Зег Тгр С1и Азп Уа1 ТНг Уа1 Азр Ьуз Уа1 Ьеи С1и РНе Рго Ьеи Ьеи
420 425 430
Ьуз С1у Нгз Рго Азп Ьеи Суз Уа1 С1п Уа1 Азп Зег Зег С1и Ьуз Ьеи
435 440 445
С1п Ьеи С1п С1и Суз Ьеи Тгр А1а Азр Зег Ьеи С1у Рго Ьеи Ьуз Азр
450 455 460
Азр Уа1 Ьеи Ьеи Ьеи С1и ТНг Агд С1у Рго С1п Азр Азп Агд Зег Ьеи
465 470 475 480
Суз А1а Ьеи С1и Рго Зег С1у Суз ТНг Зег Ьеи Рго Зег Ьуз А1а Зег
485 490 495
ТНг Агд А1а А1а Агд Ьеи С1у С1и Туг Ьеи Ьеи С1п Азр Ьеи С1п Зег
500 505 510
61у 61п Суз Ьеи 515
МеЬ Азр
Суз Рго 530
А1а Суз 545
Ьуз Азр
Зег 61у
Азр Азр
Суз 61п 610
Ьеи Зег 625
ТЬг Ьеи
Уа1 А1а
А1а Низ
Рго Азр 690
РЬе Азр 705
Уа1 Рго
Ьеи С1п
61и 61п
Рго Рго 770
Рго 61у 785
Ьеи Ьеи
Низ А1а
А1а А1а 580
Зег 61у 595
Ьеи Рго
А1а 61п
61п 61и
Ьеи Суз 660
61у Рго 675
РЬе Ьеи
Агд Ьеи
Уа1 РЬе
61п Рго 740
Уа1 Зег 755
61у ТЬг
61п Ьеи
Ьуз Туг
РЬе А1а 550
Ьуз С1у 565
А1а Агд
РЬе 61и
Ьеи Агд
Тгр Азр 520
Не Низ 535
А1а А1а
Тгр Ьеи
61у Агд
Агд Ьеи 600
Уа1 А1а 615
Уа1 А1а
61у Рго 630
61у 61у Уа1 Уа1 645
Низ Азр
61п 61у
Ьеи Низ 710
ТЬг Ьеи 725
Агд А1а ? Агд А1а ? Рго А1а г Азр 61у 790
Азр Азр Ьеи С1у
Ьуз Агд
Ьеи Зег
Агд Ьеи 570
А1а А1а 585
Уа1 61у
Уа1 Азр
Тгр РЬе
Уа1 Ьеи 650
61и Тгр Ьеи С1п Азр 665
Агд А1а
А1а РЬе 680
Агд А1а 695
Рго Азр
Рго Зег
Рго Агд
Рго 61у
А1а Уа1
61п Ьеи 730
Зег 61у 745
Рго А1а
Ьеи 61]
760
Рго 61у Агд С1у
775
ТЬг
Тгр А1а 540
Ьеи 11е 555
Ьеи Ьуз
Ьеи Ьеи
А1а Ьеи
Ьеи Тгр 620
Низ А1а 635
Ьеи РЬе
61у Уа1
Зег Ьеи
Зег Туг 700
Рго А1а 715
Рго Азр
Агд Ьеи
Ьеи Азр
А1а Ьеи 525
Ьеи Уа1
Ьеи Ьеи
61п Азр
Ьеи Туг 590
А1а Зег 605
Зег Агд
61п Агд
Зег Рго
Зег 61у 670
Зег Суз 685
Уа1 61у
Ьеи РЬе
РЬе Ьеи
61п 61и 750
Зег Туг 765
Рго 61у
Тгр А1а
Тгр Ьеи
Ьеи Ьуз 560
Уа1 Агд 575
Зег А1а
А1а Ьеи
Агд 61и
Агд 61п 640
61у А1а 655
Рго 61у
Уа1 Ьеи
А1а Суз
Агд ТЬг 720
61у А1а 735
Агд А1а
РЬе Низ
А1а 61у <210> 114 <211> 330 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 114
А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго 15 10
Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 20 25
РЬе Рго 61и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а 35 40 45
61у Уа1 Низ ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у 50 55 60
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у
70 75
Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Низ Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз
90
Ьуз Уа1 61и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Низ ТЬг Суз 100 105
Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи 115 120 125
Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго С1и 130 135 140
Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Низ С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз
145 150 155
Зег Зег Ьуз 15
Ьуз Азр Туг 30
Ьеи ТЬг Зег
Ьеи Туг Зег
ТЬг 61п ТЬг 80
Уа1 Азр Ьуз 95
Рго Рго Суз 110
РЬе Рго Рго
РЬе Азп Тгр 160
Туг Уа1 Азр 61у Уа1 61и Уа1 Низ Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд 61и
165 170 175
61и 61п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
180 185 190
Низ 61п Азр Тгр Ьеи Азп 61 у Ьуз 61и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп
195 200 205
Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Не 61и Ьуз ТЬг Не Зег Ьуз А1а Ьуз 61у
210 215 220
61η Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго 225 230 235
Ьеи ТЬг Ьуз Азп 61п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи
245 250
Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп
260 265
Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр Зег
275 280
Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд
290 295
Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Низ 61и А1а Ьеи 305 310 315
С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 61у Ьуз
325 330
Рго Зег
Уа1 Ьуз
61у 61п
Азр 61у 285
Тгр 61п 300
Низ Азп
Агд Азр б1и 240
61у РЬе Туг 255
Рго 61и Азп 270
Зег РЬе РЬе
61п 61 у Азп
Низ Туг ТЬг 320 <210> 115 <211> 327 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 115
А1а Зег ТЬг Ьуз 61у 1 5
Зег ТЬг Зег 61и Зег
РЬе Рго 61и Рго Уа1 35
61у Уа1 Низ ТЬг РЬе 50
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 65
Туг ТЬг Суз Азп Уа1 85
Агд Уа1 61и Зег Ьуз 100
61и РЬе Ьеи 61у 61у 115
Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е 130
Азр Уа1 Зег 61п 61и 145
61у Уа1 61и Уа1 Низ 165
Азп Зег ТЬг Туг Агд 180
Тгр Ьеи Азп 61 у Ьуз 195
Рго Зег Зег 11е 61и 210
61и Рго 61п Уа1 Туг 225
Азп 61п Уа1 Зег Ьеи 245
11е А1а Уа1 61и Тгр 260
Рго Зег
ТЬг А1а
ТЬг Уа1
Рго А1а 55
ТЬг Уа1 70
Азр Низ
Туг 61у
Рго Зег
Зег Агд 135
Азр Рго 150
Азп А1а
Уа1 Уа1
61и Туг
Ьуз ТЬг 215
ТЬг Ьеи 230
ТЬг Суз
Уа1 РЬе
А1а Ьеи 25
Зег Тгр 40
Уа1 Ьеи
Рго Зег
Ьуз Рго
Рго Рго 105
Уа1 РЬе 120
ТЬг Рго
61и Уа1
Ьуз ТЬг
Зег Уа1 185
Ьуз Суз 200
11е Зег
Рго Рго
Ьеи Уа1
61и Зег Азп 61у 265
Рго Ьеи 10
61у Суз
Азп Зег
61п Зег
Зег Зег 75
Зег Азп 90
Суз Рго
Ьеи РЬе
61и Уа1
61п РЬе 155
Ьуз Рго 170
Ьеи ТЬг
Ьуз Уа1
Ьуз А1а
Зег 61п 235
Ьуз 61у 250
61п Рго
А1а Рго
Ьеи Уа1 у А1а 45
Зег 61у 60
Ьеи 61у
ТЬг Ьуз
Зег Суз
Суз Зег Агд 15
Ьуз Азр Туг 30
Ьеи ТЬг Зег
Ьеи Туг Зег
ТЬг Ьуз ТЬг 80
Уа1 Азр Ьуз 95
Рго А1а Рго 110
Ьуз Рго Ьуз
Рго Рго 125
ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 140
Азп Тгр
Агд 61и
Уа1 Ьеи
Зег Азп 205
Ьуз 61у 220
61и 61и
РЬе Туг
61и Азп
Туг Уа1 Азр 160
61и 61п РЬе 175
Низ 61п Азр 190
Ьуз С1у Ьеи
61п Рго Агд
МеЬ ТЬг Ьуз 240
Рго Зег Азр 255
Азп Туг Ьуз 270
- 55 029283
ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег 275 280 285
Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1и 61 у Азп Уа1 РЬе Зег 290 295 300
Суз Зег Уа1 МеЬ Низ 61и А1а Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг 61п Ьуз Зег 305 310 315 320
Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи 61у Ьуз
325 <210> 116 <211> 19 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Лидерная последовательность для экспрессии легкой цепи <400> 116
МеЬ А1а Тгр Зег Рго Ьеи Ьеи Ьеи ТЬг Ьеи Ьеи А1а Нгз Суз ТЬг С1у
1 5 10 15
Зег Тгр А1а
<210> 117
<211> 98
<212> РКТ
<213> Ното : зараепз
<400> 117
61и Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 61у 61у Ьеи Уа1 61п Рго 61у 61у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг
20 25 30
Тгр МеЬ Зег Тгр Уа1 Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз 61 у Ьеи 61и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Азп Не Ьуз С1п Азр С1у Зег С1и Ьуз Туг Туг Уа1 Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Зег Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи 61п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд АТа С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд
<210> 118 <211> 99 <212> РКТ <213> Ното £ зараепз
<400> 118 61и Уа1 61п Ьеи Уа1 61и Зег 61у 61у 61у Ьеи Уа1 61п Рго 61у Агд
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у РЬе ТЬг РЬе Азр Азр Туг
20 25 30
А1а МеЬ Нгз Тгр Уа1 Агд 61п А1а Рго 61у Ьуз 61 у Ьеи 61и Тгр Уа1
35 40 45
Зег 61у Не Зег Тгр Азп Зег 61у Зег 11е 61у Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Зег Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи С1 .п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а 61и Азр ТЬг А1а Ьеи Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз Азр
<210> 119
<211> 98
<212> РКТ
<213> Ното : зартепз
<400> 119
61 п Уз П 61п Ьеи Уа1 61и Зег 61у 61у 61у Ьеи Уа1 Ьуз Рго 61у 61у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг МеЬ Зег Тгр 11е Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи 61и Тгр Уа1
40 45
Зег Туг 11е Зег Зег Зег 61у Зег ТЬг 11е Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Зег Ьеи Туг
70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
90 95
А1а Агд <210> 120 <211> 98 <212> РКТ <213> Ното заргепз <400> 120
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Азп Зег 20 25 30
Азр МеЬ Азп Тгр А1а Агд Ьуз А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45
Зег С1у Уа1 Зег Тгр Азп С1у Зег Агд ТЬг Нтз Туг Уа1 Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз Агд Агд РЬе 11е 11е Зег Агд Азр Азп Зег Агд Азп Зег Ьеи Туг 65 70 75 80
Ьеи С1п Ьуз Азп . Агд Агд Агд А1а 61и Азр МеЬ А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Уа1 Агд
<210> 121 <211> 98 <212> РКТ <213> Ното заргепз
<400> 121 ТЬг Уа1 61п Ьеи Уа1 61и Зег 61у 61у 61у Ьеи Уа1 61и Рго 61у 61у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Азп Зег
20 25 30
Азр МеЬ Азп Тгр Уа1 Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз 61у Ьеи 61и Тгр Уа1
35 40 45
Зег 61у Уа1 Зег Тгр Азп С1у Зег Агд ТЬг Нгз Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе Не 11е Зег Агд Азр Азп Зег Агд Азп РЬе Ьеи Туг
70 75 80
С1п С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр МеЬ А1а Уа1 Туг Туг Суз
90 95
Уа1 Агд <210> 122 <211> 98 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 122
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Уа1 Уа1 Агд Рго С1у С1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Азр Азр Туг 20 25 30
С1у МеЬ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45
Зег С1у 11е Азп Тгр Азп С1у С1у Зег ТЬг С1у Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Зег Ьеи Туг
70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Ьеи Туг Низ Суз
90 95
А1а Агд <210> 123 <211> 98 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 123
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго С1у С1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30
Зег МеЬ Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45
Зег Зег 11е Зег Зег Зег Зег Зег Туг 11е Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Зег Ьеи Туг
70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
90 95
А1а Агд <210> 124 <211> 98 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 124
С1и Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30
А1а МеЬ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1
Зег А1а 11е Зег С1у Зег С1у С1у Зег ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
90 95
А1а Ьуз <210> 125 <211> 98 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 125
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Уа1 Уа1 С1п Рго С1у Агд
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30
А1а МеЬ Низ Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45
А1а Уа1 11е Зег Туг Азр С1у Зег Азп Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
90 95
А1а Агд <210> 126 <211> 98 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 126
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Уа1 Уа1 С1п Рго С1у Агд
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30
А1а МеЬ Низ Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45
А1а Уа1 11е Зег Туг Азр С1у Зег Азп Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
90 95
А1а Агд <210> 127 <211> 98 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 127
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Уа1 Уа1 С1п Рго С1у Агд
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а
С1у РЬе ТЬг РЬе Зе.
- 57 029283
С1у Меб Низ Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз 35 40
А1а Уа1 Ые Тгр Туг Азр С1у Зег Азп Ьуз Туг 50 55
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп Зег 65 70 75
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг
90
А1а Агд <210> 128 <211> 98 <212> РРТ <213> Ното зариепз <400> 128
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи 15 10
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе 20 25
Азр МеЬ Азп Тгр Уа1 Низ С1п А1а Рго С1у Ьуз 35 40
Зег С1у Уа1 Зег Тгр Азп С1у Зег Агд ТЬг Низ 50 55
Ьуз С1у Агд РЬе Ые Ые Зег Агд Азр Азп Зег 65 70 75
Ьеи С1п ТЬг Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг
90
Уа1 Агд <210> 129 <211> 99 <212> РРТ <213> Ното зариепз <400> 129
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у Уа1 Уа1 15 10
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе 20 25
ТЬг МеЬ Низ Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз 35 40
Зег Ьеи Ые Зег Тгр Азр С1у С1у Зег ТЬг Туг 50 55
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп Зег 65 70 75
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд ТЬг С1и Азр ТЬг
90
А1а Ьуз Азр <210> 130 <211> 98 <212> РРТ <213> Ното зариепз <400> 130
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи 15 10
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе 20 25
Зег МеЬ Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз 35 40
Зег Туг Ые Зег Зег Зег Зег Зег ТЬг Ые Туг 50 55
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп А1а 65 70 75
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг
90
А1а Агд
С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 45
Туг А1а Азр Зег Уа1 60
Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг 80
А1а Уа1 Туг Туг Суз 95
Уа1 С1п Рго С1у С1у 15
ТЬг РЬе Зег Азп Зег 30
С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 45
Туг А1а Азр Зег Уа1 60
Агд Азп ТЬг Ьеи Туг 80
А1а Уа1 Туг Туг Суз 95
Уа1 С1п Рго С1у С1у 15
ТЬг РЬе Азр Азр Туг 30
С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 45
Туг А1а Азр Зег Уа1 60
Ьуз Азп Зег Ьеи Туг 80
А1а Ьеи Туг Туг Суз 95
Уа1 С1п Рго С1у С1у 15
ТЬг РЬе Зег Зег Туг 30
С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 45
Туг А1а Азр Зег Уа1 60
Ьуз Азп Зег Ьеи Туг 80
А1а Уа1 Туг Туг Суз 95 <210> 131 <211> 98 <212> РРТ <213> Ното зариепз <400> 131
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20
А1а МеЬ Низ Тгр Уа1 Агд С1п А1а 35 40
Зег А1а Ые Зег Зег Азп С1у С1у 50 55
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд
70
Ьеи С1п МеЬ С1у Зег Ьеи Агд А1а
А1а Агд
С1у С1у Ьеи 10
Зег 61у РЬе 25
Рго С1у Ьуз
Зег ТЬг Туг
Азр Азп Зег 75
61и Азр МеЬ 90
Уа1 С1п Рго С1у С1у 15
ТЬг РЬе Зег Зег Туг 30
С1у Ьеи С1и Туг Уа1 45
Туг А1а Азп Зег Уа1 60
Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг 80
А1а Уа1 Туг Туг Суз 95 <210> 132 <211> 98 <212> РРТ <213> Ното зариепз
С1у С1у С1у Ьеи 15 10
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе 20 25
Тгр МеЬ Низ Тгр Уа1 Агд 61п А1а Рго 61у Ьуз 35 40
Зег Агд Ые Азп Зег Азр 61у Зег Зег ТЬг Зег 50 55
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп А1а 65 70 75
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг
90
А1а Агд
Уа1 С1п Рго С1у С1у 15
ТЬг РЬе Зег Зег Туг 30
61у Ьеи Уа1 Тгр Уа1 45
Туг А1а Азр Зег Уа1 60
Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг 80
А1а Уа1 Туг Туг Суз 95 <210> 133 <211> 17 <212> РРТ <213> Ното зариепз <400> 133
- 58 029283
А1а С1и Туг РЬе С1п Нтз Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег 15 10 15
Зег <210> 134 <211> 17 <212> РРТ <213> Ното зариепз <400> 134
Туг Тгр Туг РЬе Азр Ьеи Тгр С1у Агд С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зе <210> 135 <211> 15 <212> РРТ <213> Ното зариепз <400> 135
А1а РЬе Азр Уа1 Тгр С1у С1п С1у ТЬг МеЬ Уа1 ТЬг Уа1 Зе.
<210> 136 <211> 15 <212> РРТ <213> Ното зариепз <400> 136
Туг РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зе.
<210> 137 <211> 16 <212> РРТ <213> Ното зариепз <400> 137
Азп Тгр РЬе Азр Зег Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег <210> 138 <211> 20 <212> РРТ <213> Ното зариепз <400> 138
Туг Туг Туг Туг Туг С1у МеЬ Азр Уа1 Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 <210> 139 <211> 95 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 139
Зег Туг С1и Ьеи ТЬг С1п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 Зег Рго С1у С1п
ТЬг А1а Зег 11е ТЬг Суз Зег С1у Азр Ьуз Ьеи С1у Азр Ьуз Туг А1а 20 25 30
Суз Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п Зег Рго Уа1 Ьеи Уа1 Ые Туг 35 40 45
С1п Азр Зег Ьуз Агд Рго Зег С1у Ые Рго С1и Агд РЬе Зег С1у Зег 50 55 60
Азп Зег С1у Азп ТЬг А1а ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег С1у ТЬг С1п А1а МеЬ 65 70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз С1п А1а Тгр Азр Зег Зег ТЬг А1а <210> 140 <211> 95 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 140
Зег Туг С1и Ьеи ТЬг С1п Рго Ьеи Зег Уа1 Зег Уа1 А1а Ьеи С1у С1п
ТЬг А1а Агд Ые ТЬг Суз С1у С1у Азп Азп Ые С1у Зег Ьуз Азп Уа1 20 25 30
Низ Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Ые Туг 35 40 45
Агд Азр Зег Азп Агд Рго Зег С1у Ые Рго С1и Агд РЬе Зег С1у Зег 50 55 60
Азп Зег С1у Азп ТЬг А1а ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Агд А1а С1п А1а С1у 65 70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз С1п Уа1 Тгр Азр Зег Зег ТЬг А1а <210> 141 <211> 96 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 141
Зег Туг С1и Ьеи ТЬг С1п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 Зег Рго С1у С1п
ТЬг А1а Агд Ые ТЬг Суз Зег С1у Азр А1а Ьеи Рго Ьуз Ьуз Туг А1а
20 25 30
Туг Тгр Туг С1п С1п Ьуз Зег С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Ые Туг
35 40 45
С1и Азр Зег Ьуз Агд Рго Зег С1у Ые Рго С1и Агд РЬе Зег С1у Зег
Зег Зег С1у ТЬг МеЬ А1а ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег С1у А1а С1п Уа1 С1и
70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз Туг Зег ТЬг Азр Зег Зег С1у Азп Низ <210> 142 <211> 96 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 142
Зег Туг С1и Ьеи ТЬг С1п Рго Низ Зег Уа1 Зег Уа1 А1а ТЬг А1а С1п
- 59 029283
МеЬ А1а Агд Не ТНг Суз С1у С1у Азп Азп Не С1у Зег Ьуз А1а Уа1 20 25 30
Низ Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п Азр Рго Уа1 Ьеи Уа1 Не Туг 35 40 45
Зег Азр Зег Азп Агд Рго Зег С1у Не Рго С1и Агд РНе Зег С1у Зег 50 55 60
Азп Рго С1у Азп ТНг ТНг ТНг Ьеи ТНг Не Зег Агд Не С1и А1а С1у
70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз С1п Уа1 Тгр Азр Зег Зег Зег Азр Низ <210> 143 <211> 96 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 143
Туг С1и Ьеи ТНг С1п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 Зег Ьеи С1у С1п
МеЬ А1а Агд 11е ТНг Суз Зег С1у С1и А1а Ьеи Рго Ьуз Ьуз Туг А1а 20 25 30
Туг Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п РНе Рго Уа1 Ьеи Уа1 11е Туг 35 40 45
Ьуз Азр Зег С1и Агд Рго Зег С1у 11е Рго С1и Агд РНе Зег С1у Зег 50 55 60
Зег Зег С1у ТНг 11е Уа1 ТНг Ьеи ТНг 11е Зег С1у Уа1 С1п А1а С1и
70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз Ьеи Зег А1а Азр Зег Зег С1у ТНг Туг <210> 144 <211> 96 <212> РЕТ <213> Ното зариепз <400> 144
Зег Зег С1и Ьеи ТНг С1п Азр Рго А1а Уа1 Зег Уа1 А1а Ьеи С1у С1п
ТНг Уа1 Агд Не ТНг Суз С1п С1у Азр Зег Ьеи Агд Зег Туг Туг А1а
20 25 30
Зег Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Не Туг
35 40 45
С1у Ьуз Азп Азп Агд Рго Зег С1у Не Рго Азр Агд РНе Зег С1у Зег
Зег Зег С1у Азп ТНг А1а Зег Ьеи ТНг 11е ТНг С1у А1а С1п А1а С1и
70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз Азп Зег Агд Азр Зег Зег С1у Азп Низ <210> 145 <211> 96 <212> РЕТ <213> Ното зариепз <400> 145
Зег Туг Уа1 Ьеи ТНг С1п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 А1а Рго С1у Ьуз 15 10 15
ТНг А1а Агд 11е ТНг Суз С1у С1у Азп Азп 11е С1у Зег Ьуз Зег Уа1 20 25 30
Низ Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Не Туг
Туг Азр Зег Азр Агд Рго Зег С1у 11е Рго С1и Агд РНе Зег С1у Зег 50 55 60
Азп Зег С1у Азп ТНг А1а ТНг Ьеи ТНг 11е Зег Агд Уа1 С1и А1а С1у
70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз С1п Уа1 Тгр Азр Зег Зег Зег Азр Низ <210> 146 <211> 94 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 146
Зег Туг С1и Ьеи ТНг 61п Ьеи Рго Зег Уа1 Зег Уа1 Зег Рго 61у 61п
ТНг А1а Агд Не ТНг Суз Зег С1у Азр Уа1 Ьеи С1у С1и Азп Туг А1а
20 25 30
Азр Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго С1и Ьеи Уа1 Не Туг
35 40 45
С1и Азр Зег С1и Агд Туг Рго С1у Не Рго С1и Агд РНе Зег С1у Зег
ТНг Зег С1у Азп ТНг ТНг ТНг Ьеи ТНг 11е Зег Агд Уа1 Ьеи ТНг С1и 65 70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз Ьеи Зег С1у Азр С1и Азр Азп <210> 147 <211> 96 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 147
Зег Туг 61и Ьеи МеЬ 61п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 Зег Рго 61у 61п 15 10 15
ТНг А1а Агд 11е ТНг Суз Зег 61у Азр А1а Ьеи Рго Ьуз 61п Туг А1а 20 25 30
Туг Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Не Туг 35 40 45
Ьуз Азр Зег С1и Агд Рго Зег С1у Не Рго С1и Агд РНе Зег С1у Зег 50 55 60
Зег Зег С1у ТНг ТНг Уа1 ТНг Ьеи ТНг Не Зег С1у Уа1 С1п А1а С1и
70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз С1п Зег А1а Азр Зег Зег С1у ТНг Туг <210> 148 <211> 94 <212> РКТ <213> Ното зариепз <400> 148
Зег Туг С1и Ьеи ТНг С1п Рго Зег Зег Уа1 Зег Уа1 Зег Рго С1у С1п
ТНг А1а Агд Не ТНг Суз Зег С1у Азр Уа1 Ьеи А1а Ьуз Ьуз Туг А1а 20 25 30
Агд Тгр РНе С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Не Туг 35 40 45
Ьуз Азр Зег С1и Агд Рго Зег С1у Не Рго С1и Агд РНе Зег С1у Зег 50 55 60
С1у ТНг ТНг Уа1 ТНг Ьеи ТНг Не Зег С1у А1а С1п Уа1 С1и
- 60 029283
Азр С 1и А1а Азр Туг Туг Суз Туг Зег А1а А1а Азр Азп Азп
85 90
<210> 149
<211> 94
<212> РРТ
<213> Ното заргепз
<400> 149
Зег 3 ег С1у Рго ТЪг С1п Уа1 Рго А1а Уа1 Зег Уа1 А1а Ьеи С1у С1п
1 5 10 15
МеЪ А 1а Агд 11е ТЪг Суз С1п С1у Азр Зег МеЪ С1и С1у Зег Туг С1и
20 25 30
Нгз Т гр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Ые Туг
35 40 45
Азр 3 ег Зег Азр Агд Рго Зег Агд Ые Рго С1и Агд РЪе Зег С1у Зег
5 0 55 60
Ьуз 3 ег С1у Азп ТЪг ТЪг ТЪг Ьеи ТЪг Ые ТЪг С1у А1а С1п А1а С1и
65 70 75 80
Азр С 1и А1а Азр Туг Туг Туг С1п Ьеи Ые Азр Азп Нгз А1а
85 90
<210> 150
<211> 12
<212> РРТ
<213> Ното заргепз
<400> 150
Туг V а1 РЪе С1у ТЪг С1у ТЪг Ьуз Уа1 ТЪг Уа1 Ьеи
1 5 10
<210> 151
<211> 12
<212> РРТ
<213> Ното заргепз
<400> 151
Уа1 V а1 РЪе С1у С1у С1у ТЪг Ьуз Ьеи ТЪг Уа1 Ьеи
1 5 10
<210> 152
<211> 12
<212> РРТ
<213> Ното заргепз
<400> 152
Уа1 V а1 РЪе С1у С1у С1у ТЪг Ьуз Ьеи ТЪг Уа1 Ьеи
1 5 10
<210> 153
<211> 12
<212> РРТ
<213> Ното заргепз
<400> 153
РЪе V а1 РЪе С1у С1у С1у ТЪг С1п Ьеи Ые Ые Ьеи
1 5 10
<210> 154
<211> 12
<212> РРТ
<213> Ното заргепз
<400> 154
Тгр Уа 1 РЪе С1у С1и С1у ТЪг С1и Ьеи ТЪг Уа1 Ьеи
1 5 10
<210> 155
<211> 12
<212> РРТ
<213> Ното заргепз
<400> 155
Азп Уа 1 РЪе С1у Зег С1у ТЪг Ьуз Уа1 ТЪг Уа1 Ьеи
1 5 10
<210> 156
<211> 12
<212> РРТ
<213> Ното заргепз
<400> 156
А1а Уа 1 РЪе С1у С1у С1у ТЪг С1п Ьеи ТЪг Уа1 Ьеи
1 5 10
<210> 157 <211> 13 <212> ΡΡΤ <213> Ното заргепз <220>
<223> Остатки 56-68 зрелого человеческого 1Ь-17А <400> 157
Азп С1и Азр Рго С1и Агд Туг Рго Зег Уа1 11е Тгр С1и 15 10 <210> 158 <211> 17 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Остатки 100-116 зрелого человеческого 1Ь-17А <400> 158
Агд Агд С1и Рго Рго Шз Суз Рго Азп Зег РЪе Агд Ьеи С1и Ьуз 11е 15 10 15
Ьеи <210> 159 <211> 10 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Остатки 45-54 зрелого человеческого 1Ь-17А
<400> 159
Азп Агд Зег ТЬг Зег Рго Тгр Азп Ьеи Нтз
1 5 10
<210> 160
<211> 17
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Остатки 71-87 зрелого человеческого 1Ь-17А
<400> 160
Суз Агд Нтз Ьеи С1у Суз 11е Азп А1а Азр С1у Азп Уа1 Азр Туг Нгз
1 5 10 15
МеЬ

Claims (10)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Выделенное антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с человеческим 1Ь17А, где антитело или его фрагмент содержат аминокислотные последовательности НСОК1, НСОК2 и НСОК3, как показано в
    a) 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 37 и 58 соответственно;
    b) 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 38 и 58 соответственно;
    c) 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 39 и 58 соответственно; й) 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 40 и 58 соответственно; е) 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 41 и 58 соответственно; ί) 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 42 и 58 соответственно; д) 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 43 и 58 соответственно;
    Ь) 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 41 и 59 соответственно; ι) 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 41 и 60 соответственно;
    Д 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 43 и 60 соответственно;
    k) 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 44 и 58 соответственно или
    l) 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 45 и 58 соответственно, и аминокислотные последовательности ЕСОК1, ЕСОК2, и ЕСОК3, как показано в т) 8Е^ ΙΌ ИО: 3, 6 и 18 соответственно;
    п) 8Е^ ΙΌ ИО: 3, 6 и 19 соответственно;
    о) 8Е^ ΙΌ ИО: 3, 6 и 20 соответственно или
    р) 8Е^ ΙΌ ИО: 3, 6 и 21 соответственно.
  2. 2. Выделенное антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с человеческим ΙΕ17А, включающие УН и УЬ, где антитело содержит:
    a) аминокислотные последовательности НСОК1, НСОК2 и НСОК3, как показано в 8Е^ ΙΌ ИО: 25, 43 и 60 соответственно, и аминокислотные последовательности ЕСОК1, ЕСОК2 и ЕСОК3, как показано в 8Е^ ΙΌ ИО: 3, 6 и 18 соответственно; или
    b) УН согласно 8Е^ ΙΌ ИО: 86 и УЕ согласно 8Е^ ΙΌ ИО: 79.
  3. 3. Выделенное антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с человеческим ΙΕ17А, включающие УН и УЕ, где антитело содержит УН с аминокислотной последовательностью, показанной в 8Е^ ΙΌ ИО: 86, и УЕ с аминокислотной последовательностью, показанной в 8Е^ ΙΌ ИО: 79.
  4. 4. Выделенное антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с человеческим ΙΕ17А, включающие УН и УЕ, где антитело содержит УН, который по меньшей мере на 95% совпадает с УН, имеющим аминокислотную последовательность, показанную в 8Е^ ΙΌ ИО: 86, и УЕ, который по меньшей мере на 95% совпадает с вариабельным участком, имеющим аминокислотную последовательность, показанную в 8Е^ ΙΌ ИО: 79.
  5. 5. Выделенное антитело, которое специфически связывается с человеческим ΙΕ-ПА, включающее тяжелую цепь антитела с аминокислотной последовательностью, показанной в 8Е^ ΙΌ ИО: 100, и легкую цепь антитела с аминокислотной последовательностью, показанной в 8Е^ ΙΌ ИО: 90.
  6. 6. Выделенное антитело или его фрагмент по любому из пп.1-5, где антитело или его фрагмент являются полностью человеческим.
  7. 7. Выделенное антитело или его фрагмент по любому из пп.1-5, где антитело или его фрагмент конъюгированы с полиэтиленгликолем.
  8. 8. Выделенное антитело или его фрагмент по любому из пп.1-5 с изотипом Ιβ('ι1 или IдС4.
  9. 9. Выделенное антитело по любому из пп.1-5, где Рс-домен содержит мутации 8229Р, Р235А или Е236А.
  10. 10. Фармацевтическая композиция для лечения I^-17А-опосредованных заболеваний или расстройств, содержащая выделенное антитело или фрагмент по любому из пп. 1-9 и фармацевтически приемлемый носитель.
    - 62 029283
    Семейство 6а ЬСОРЗ
    МОР# тАЬ# Консенсус семейства 6а ЬСОРЗ ЗЕО ГО1ЧО клон 10 Н О Р Т I Р 3 Н клон 11 О V т Р клон 12 О 6 N Υ Р Р ь Общий типичный элемент но РС ТУИ ΙΤΥ РР ЗР НРЬ ФОРМУЛА II Хаад О Хаа5 Хааб Хаа7 Хааб Хаа9 ХааЮ 11
    Хаа4 может представлять собой Ηϊδ или 61п;
    Хаа5 может представлять собой РНе или С1у;
    Хаа6 может представлять собой ТНг, \/а1 или Азп; Хаа7 может представлять собой Не, ТНг ил и Туг; Хаа8 может представлять собой Рго или Агд;
    Хаа9 может представлять собой Зег или Рго; и Хаа10 может представлять собой Ηϊδ, РНе или Ьеи.
EA201290254A 2009-10-30 2010-10-29 Антагонисты il-17a EA029283B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US25686209P 2009-10-30 2009-10-30
US31091910P 2010-03-05 2010-03-05
PCT/US2010/054662 WO2011053763A2 (en) 2009-10-30 2010-10-29 Il-17a antagonists

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201290254A1 EA201290254A1 (ru) 2012-12-28
EA029283B1 true EA029283B1 (ru) 2018-03-30

Family

ID=43922991

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201290254A EA029283B1 (ru) 2009-10-30 2010-10-29 Антагонисты il-17a

Country Status (21)

Country Link
US (1) US8519107B2 (ru)
EP (1) EP2493506B1 (ru)
JP (1) JP5922025B2 (ru)
KR (1) KR101836217B1 (ru)
CN (1) CN102905727B (ru)
AU (1) AU2010313304B2 (ru)
BR (1) BR112012010280B1 (ru)
CA (1) CA2779257C (ru)
CL (1) CL2012001141A1 (ru)
CO (1) CO6541541A2 (ru)
CR (1) CR20120298A (ru)
EA (1) EA029283B1 (ru)
EC (1) ECSP12011871A (ru)
ES (1) ES2728115T3 (ru)
GT (1) GT201200132A (ru)
IL (1) IL219390B (ru)
MX (1) MX2012005086A (ru)
NI (1) NI201200080A (ru)
NZ (1) NZ599737A (ru)
PE (1) PE20121363A1 (ru)
WO (1) WO2011053763A2 (ru)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2011011729A (es) 2009-05-05 2012-04-10 Novimmune Sa Anticuerpo anti il-17f y metodos de uso de los mismos.
SG185354A1 (en) 2010-05-20 2012-12-28 Ablynx Nv Biological materials related to her3
UA117218C2 (uk) 2011-05-05 2018-07-10 Мерк Патент Гмбх Поліпептид, спрямований проти il-17a, il-17f та/або il17-a/f
WO2013116682A1 (en) 2012-02-02 2013-08-08 Ensemble Therapeutics Corporation Macrocyclic compounds for modulating il-17
CN103509118B (zh) * 2012-06-15 2016-03-23 郭怀祖 胰岛素-Fc融合蛋白
US9676847B2 (en) 2012-06-25 2017-06-13 Orega Biotech IL-17 antagonist antibodies
CU24300B1 (es) * 2013-02-08 2017-12-08 Novartis Ag Anticuerpos anti-il-17a útiles en el tratamiento de trastornos autoinmunes e inflamatorios
CA2929662C (en) * 2013-11-18 2023-05-02 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd. Il-17a binding agent and uses thereof
KR20160124165A (ko) 2014-02-21 2016-10-26 제넨테크, 인크. 항-il-13/il-17 이중특이적 항체 및 그의 용도
CN103936854B (zh) * 2014-04-30 2016-08-17 北京精益泰翔技术发展有限公司 抗il-17a单克隆抗体及其制备与应用
WO2015191602A2 (en) * 2014-06-09 2015-12-17 Biomed Valley Discoveries, Inc. Combination therapies targeting tumor-associated stroma or tumor cells
US10758614B2 (en) 2014-06-09 2020-09-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services National Institutes Of Health Combination therapies targeting tumor-associated stroma or tumor cells and topoisomerase
WO2015191568A2 (en) * 2014-06-09 2015-12-17 Biomed Valley Discoveries, Inc. Combination therapies using agents that target tumor-associated stroma or tumor cells and tumor vasculature
US10758613B2 (en) 2014-06-09 2020-09-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services National Intstitutes Of Health Combination therapies using anti-metabolites and agents that target tumor-associated stroma or tumor cells
WO2015191590A2 (en) * 2014-06-09 2015-12-17 Biomed Valley Discoveries, Inc. Combination therapies targeting tumor-associated stroma or tumor cells and microtubules
WO2015191596A1 (en) * 2014-06-09 2015-12-17 Biomed Valley Discoveries, Inc. Combination therapies using platinum agents and agents that target tumor-associated stroma or tumor cells
US10758526B2 (en) 2014-06-09 2020-09-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services National Institutes Of Health Combination therapies using agents that target tumor-associated stroma or tumor cells and other pathways
WO2015191615A2 (en) * 2014-06-09 2015-12-17 Biomed Valley Discoveries, Inc. Combination therapies using agents that target tumor-associated stroma or tumor cells and alkylating agents
TWI713453B (zh) 2014-06-23 2020-12-21 美商健生生物科技公司 干擾素α及ω抗體拮抗劑
WO2016096896A1 (en) * 2014-12-15 2016-06-23 Morphosys Ag Antibodies for il-17c
CN107407677B (zh) 2015-01-28 2020-07-17 豪夫迈·罗氏有限公司 多发性硬化的基因表达标志和治疗
CN108251431B (zh) * 2015-03-05 2020-12-08 北京百特美博生物科技有限公司 双载体系统及其用途
CN106336459B (zh) * 2015-07-13 2020-12-08 三生国健药业（上海）股份有限公司 抗人白细胞介素-17a单克隆抗体、其制备方法和应用
WO2017132457A1 (en) * 2016-01-28 2017-08-03 Janssen Biotech, Inc. BISPECIFIC ANTI-TNF-α/IL-17A ANTIBODIES AND ANTI-TNF-α ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
KR102466763B1 (ko) * 2016-04-13 2022-11-11 오리맵스 리미티드 항- psma 항체 및 이의 용도
PE20191075A1 (es) * 2016-09-14 2019-08-20 Beijing hanmi pharm co ltd Anticuerpo que se une especificamente a il-17a y fragmento funcional del mismo
CN108359011B (zh) 2017-07-21 2019-06-25 华博生物医药技术（上海）有限公司 靶向于白介素17a的抗体、其制备方法和应用
JP2021519589A (ja) * 2018-03-29 2021-08-12 アールイーエムディー バイオセラピューティクス，インコーポレイテッドＲＥＭＤ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ インターロイキン１７ａ（ｉｌ−１７ａ）に結合する抗体を用いた自己免疫障害及び炎症障害の治療
WO2019218298A1 (zh) * 2018-05-17 2019-11-21 江苏荃信生物医药有限公司 抗人白介素17a单克隆抗体及其应用
CN111303283A (zh) * 2018-12-12 2020-06-19 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗il-17a抗体及其应用
EP3689907A1 (en) * 2019-01-31 2020-08-05 Numab Therapeutics AG Antibodies targeting il-17a and methods of use thereof
CN114127108A (zh) * 2019-07-30 2022-03-01 江苏恒瑞医药股份有限公司 Il-17拮抗剂治疗自身免疫疾病的方法
CA3156162A1 (en) 2019-09-30 2021-04-08 Jonathan M. BLEVITT IL-17 TARGET IMPLICATION ASSAY COMPOSITIONS AND METHODS WITH SMALL MOLECULE MODULATORS
JP2022549464A (ja) 2019-09-30 2022-11-25 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． 大分子モジュレータを用いたｉｌ－１７標的結合アッセイのための組成物及び方法
IT202200016722A1 (it) * 2022-08-04 2024-02-04 Paolo Grieco Nuovo peptide derivato da interleuchina-17A (IL-17A) e anticorpo neutralizzante (Ab17-IPL-1)

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000026667A1 (en) * 1998-10-30 2000-05-11 Miller Jonathan L Variable heavy chain and variable light chain regions of antibodies to human platelet glycoprotein ib alpha
US20020086014A1 (en) * 1999-08-24 2002-07-04 Korman Alan J. Human CTLA-4 antibodies and their uses
US20030099647A1 (en) * 2001-10-05 2003-05-29 Deshpande Rajendra V. Fully human antibody Fab fragments with human interferon-gamma neutralizing activity
US20030226155A1 (en) * 2001-08-30 2003-12-04 Biorexis Pharmaceutical Corporation Modified transferrin-antibody fusion proteins
US20050150002A1 (en) * 2004-01-02 2005-07-07 Dellapenna Dean Novel carotenoid hydroxylases for use in engineering carotenoid metabolism in plants
US20050208558A1 (en) * 1999-10-19 2005-09-22 Applera Corporation Detection kits, such as nucleic acid arrays, for detecting the expression or 10,000 or more Drosophila genes and uses thereof
WO2007076524A2 (en) * 2005-12-29 2007-07-05 Centocor, Inc. Human anti-il-23 antibodies, compositions, methods and uses
US20070271630A1 (en) * 2005-02-24 2007-11-22 Boukharov Andrey A Methods for genetic control of plant pest infestation and compositions thereof
US20080095775A1 (en) * 2006-06-13 2008-04-24 Lewis Katherine E Il-17 and il-23 antagonists and methods of using the same
US20080095770A1 (en) * 2006-08-09 2008-04-24 Glycart Biotechnology Ag Antigen binding molecules that bind EGFR, vectors encoding same, and uses thereof
US20090105461A1 (en) * 2004-03-15 2009-04-23 Wyeth Calicheamicin conjugates
US20090175881A1 (en) * 2006-08-11 2009-07-09 Presta Leonard G Antibodies to il-17a

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
JP3068180B2 (ja) 1990-01-12 2000-07-24 アブジェニックス インコーポレイテッド 異種抗体の生成
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
PT1024191E (pt) 1991-12-02 2008-12-22 Medical Res Council Produção de auto-anticorpos a partir de reportórios de segmentos de anticorpo e exibidos em fagos
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
PT1354034E (pt) 2000-11-30 2008-02-28 Medarex Inc Roedores transgénicos transcromossómicos para produção de anticorpos humanos
JP4406206B2 (ja) * 2001-04-24 2010-01-27 バイエル コーポレーション ヒトｔｉｍｐ−１抗体
EP1423428B2 (en) * 2001-06-20 2012-11-14 Fibron Ltd. Antibodies that block fgfr3 activation, methods of screening for and uses thereof
US6649055B1 (en) 2002-05-07 2003-11-18 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy Pump station for radioactive waste water
WO2005108616A1 (en) 2004-05-03 2005-11-17 Schering Corporation Use of il-17 expression to predict skin inflammation; methods of treatment
JP2008501035A (ja) 2004-05-28 2008-01-17 アプライド リサーチ システムズ エーアールエス ホールディング ナームロゼ フェンノートシャップ 妊孕性関連障害の治療におけるｉｌ−１７の使用
GB0417487D0 (en) 2004-08-05 2004-09-08 Novartis Ag Organic compound
GB0425569D0 (en) 2004-11-19 2004-12-22 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0525214D0 (en) * 2005-12-12 2006-01-18 Bioinvent Int Ab Biological materials and uses thereof
PT1963368E (pt) 2005-12-13 2012-09-14 Lilly Co Eli Anticorpos anti-il-17
EP2377887A1 (en) 2006-03-10 2011-10-19 Zymogenetics Inc Antibodies that bind both IL-17A and IL-17F and methods of using the same
TW200815469A (en) 2006-06-23 2008-04-01 Astrazeneca Ab Compounds
GB0612928D0 (en) 2006-06-29 2006-08-09 Ucb Sa Biological products
WO2009003096A2 (en) 2007-06-26 2008-12-31 Centocor, Inc. Il-17 mutein proteins, antibodies, compositions, methods and uses
TW200944231A (en) 2007-11-30 2009-11-01 Glaxo Group Ltd Antigen-binding constructs
WO2009082624A2 (en) 2007-12-10 2009-07-02 Zymogenetics, Inc. Antagonists of il-17a, il-17f, and il-23 and methods of using the same
AU2008343589A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Design and generation of human de novo pIX phage display libraries via fusion to pIX or pVII, vectors, antibodies and methods
GB0807413D0 (en) * 2008-04-23 2008-05-28 Ucb Pharma Sa Biological products
WO2010034443A1 (en) 2008-09-29 2010-04-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against human il 17 and uses thereof
JP2012505654A (ja) 2008-10-14 2012-03-08 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗体をヒト化及び親和性成熟する方法

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000026667A1 (en) * 1998-10-30 2000-05-11 Miller Jonathan L Variable heavy chain and variable light chain regions of antibodies to human platelet glycoprotein ib alpha
US20020086014A1 (en) * 1999-08-24 2002-07-04 Korman Alan J. Human CTLA-4 antibodies and their uses
US20050208558A1 (en) * 1999-10-19 2005-09-22 Applera Corporation Detection kits, such as nucleic acid arrays, for detecting the expression or 10,000 or more Drosophila genes and uses thereof
US20030226155A1 (en) * 2001-08-30 2003-12-04 Biorexis Pharmaceutical Corporation Modified transferrin-antibody fusion proteins
US20030099647A1 (en) * 2001-10-05 2003-05-29 Deshpande Rajendra V. Fully human antibody Fab fragments with human interferon-gamma neutralizing activity
US20050150002A1 (en) * 2004-01-02 2005-07-07 Dellapenna Dean Novel carotenoid hydroxylases for use in engineering carotenoid metabolism in plants
US20090105461A1 (en) * 2004-03-15 2009-04-23 Wyeth Calicheamicin conjugates
US20070271630A1 (en) * 2005-02-24 2007-11-22 Boukharov Andrey A Methods for genetic control of plant pest infestation and compositions thereof
WO2007076524A2 (en) * 2005-12-29 2007-07-05 Centocor, Inc. Human anti-il-23 antibodies, compositions, methods and uses
US20080095775A1 (en) * 2006-06-13 2008-04-24 Lewis Katherine E Il-17 and il-23 antagonists and methods of using the same
US20080095770A1 (en) * 2006-08-09 2008-04-24 Glycart Biotechnology Ag Antigen binding molecules that bind EGFR, vectors encoding same, and uses thereof
US20090175881A1 (en) * 2006-08-11 2009-07-09 Presta Leonard G Antibodies to il-17a

Non-Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
UMMC, Ulcerative colitis - Introduction, 2011 [online]. [Retrieved on 2011.06.03]. Retrieved from the Internet: <URL: http://www.umm.edu/patiented/articles/what_ulcerative_colitis_inflammatory_bowel_disease_00069_1.htm> *
UniProt_ B9CX49, Dipeptide transport protein DppA1, 24 March 2009 [online]. [Retrieved on 2011.05.25]. Retrieved from the Internet: <URL: http://www.uniprot.org/uniprot/B9CX49> amino acid residues 118-126, that is 79.3% identical to the claimed SEQ ID NO: 18 *
UniProt_A0D7C4, Chromosome undetermined scaffold_4, whole genome shotgun sequence, 28 November 2006 [online]. [Retrieved on 2011.05.25]. Retrieved from the Internet: <URL: http://www.uniprot.org/uniprot/A0D7C4> amino acid residues 62-71, that is 84.6% identical to the claimed SEQ ID NO: 15 *
UniProt_A5ICM5, Putative uncharacterized protein, 26 June 2007 [online]. [Retrieved on 2011.05.25]. Retrieved from the Internet: <URL: http://www.uniprot.org/uniprot/A5ICM5> amino acid residues 419-427 that is 80.8% identical to the claimed SEQ ID NO: 8 *
UniProt_A7XA61, DRF-like transcription factor DRFL2a, 23 October 2007 [online]. [Retrieved on 2011.05.25]. Retrieved from the Internet: <URL: http://www.uniprot.org/uniprot/A7XA61> amino acid residues 46-55, that is 86.5% identical to the claimed SEQ ID NO: 16 *
UniProt_B4HXQ5, GM14347, 23 September 2008 [online]. [Retrieved on 2011.05.25]. Retrieved from the Internet: <URL: http://www.uniprot.org/uniprot/B4HXQ5> amino acid residues 128-137, that is 80% identical to the claimed SEQ ID NO: 12 *
UniProt_C5A772, Permease, major facilitator superfamily, 28 July 2009 [online]. [Retrieved on 2011.05.25]. Retrieved from the Internet: <URL: http://www.uniprot.org/uniprot/C5A772> amino acid residues 89-100 that is 71.9% identical to the claimed SEQ ID NO: 2 *
UniProt_Q5DF07, SJCHGC06558 protein, 29 March 2005 [online]. [Retrieved on 2011.05.25]. Retrieved from the Internet: <URL: http://www.uniprot.org/uniprot/Q5DF07> amino acid residues 275-284, that is 81.2% identical to the claimed SEQ ID NO: 13 *
UniProt_Q8BCV6, Uncharacterized 55 kDa protein, 01 March 2003, [online]. [Retrieved on 2011.05.25]. Retrieved from the Internet: <URL: http://www.uniprot.org/uniprot/Q8BCV6> amino acid residues 260-266 that is 100% identical to the claimed SEQ ID NO: 6 *
UniProt_Q8PJC9, Putative uncharacterized protein, 01 October 2001, [online]. [Retrieved on 2011.05.25]. Retrieved from the Internet: <URL: http://www.uniprot.org/uniprot/Q8PJC9> amino acid residues 12-18 that 100% identical to the claimed SEQ ID NO: 24 *
UniProt_Q92TP0 (for C96025), Hypothetical exported protein, TonB-dependent receptor protein, 01 December 2001 [online]. [Retrieved on 2011.05.25]. Retrieved from the Internet: <URL: http://www.uniprot.org/uniprot/Q92TP0> amino acid residues 367-374 is 88.9% identical to the claimed SEQ ID NO: 7 *

Also Published As

Publication number Publication date
IL219390B (en) 2019-01-31
BR112012010280B1 (pt) 2020-09-24
PE20121363A1 (es) 2012-10-15
CA2779257C (en) 2019-03-12
EA201290254A1 (ru) 2012-12-28
WO2011053763A2 (en) 2011-05-05
CL2012001141A1 (es) 2012-11-30
CA2779257A1 (en) 2011-05-05
US8519107B2 (en) 2013-08-27
EP2493506B1 (en) 2019-04-10
BR112012010280A2 (pt) 2017-06-20
EP2493506A2 (en) 2012-09-05
EP2493506A4 (en) 2013-11-20
CN102905727B (zh) 2016-12-07
MX2012005086A (es) 2012-09-28
KR101836217B1 (ko) 2018-03-08
IL219390A0 (en) 2012-06-28
CN102905727A (zh) 2013-01-30
GT201200132A (es) 2014-01-17
CR20120298A (es) 2014-01-09
NI201200080A (es) 2013-04-22
NZ599737A (en) 2015-02-27
US20110236390A1 (en) 2011-09-29
ECSP12011871A (es) 2012-08-31
AU2010313304B2 (en) 2015-08-20
AU2010313304A1 (en) 2012-05-24
KR20120102662A (ko) 2012-09-18
ES2728115T3 (es) 2019-10-22
JP5922025B2 (ja) 2016-05-25
CO6541541A2 (es) 2012-10-16
JP2013509193A (ja) 2013-03-14
WO2011053763A3 (en) 2011-10-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029283B1 (ru) Антагонисты il-17a
RU2742691C2 (ru) Cd3-связывающий домен
DK1257648T4 (en) Antagonistic selective binding agents of osteoprotegerin binding protein
JP6258194B2 (ja) 抗神経成長因子抗体並びに前記の製造及び使用方法
ES2704036T3 (es) Anticuerpos anti-factor de crecimiento nervioso y procedimientos de preparación y uso de los mismos
JP6109571B2 (ja) 複数種のＣＣケモカインと結合するａｎｔｉｋｉｎｅ抗体
US20180179294A1 (en) Toll-like receptor 3 antagonists
JP2021533779A (ja) 操作された二重特異性タンパク質
EP1257648B2 (en) Antagonistic selective binding agents of osteoprotegerin binding protein
CN109311997A (zh) 抗axl拮抗抗体
CN103601806B (zh) Il-6结合分子
JP5727463B2 (ja) Ｔｏｌｌ様受容体３アンタゴニスト
JP2016500656A (ja) 代謝性疾患及び心臓血管疾患を治療するためのｔｏｌｌ様受容体３アンタゴニスト
CN109929035A (zh) 抗人ngf抗体及其制备方法和用途
CN111819201A (zh) Pd1结合剂
BR112021004686A2 (pt) proteínas de ligação de antígeno anti-flt3 melhoradas
CN109721656A (zh) 靶向rankl的治疗性抗体
TW202210513A (zh) 抗ｉｇｆ－１受體人源化抗體
WO2013039471A1 (en) Toll-like receptor 3 antagonists for the treatment of metabolic and cardiovascular diseases
WO2024153223A1 (zh) 一种治疗系统性红斑狼疮的方法
JP2023504974A (ja) 抗ｔｉｒｃ７抗原結合タンパク質
EP3145545A1 (en) Bak binding proteins