JP6258194B2 - 抗神経成長因子抗体並びに前記の製造及び使用方法 - Google Patents
抗神経成長因子抗体並びに前記の製造及び使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6258194B2 JP6258194B2 JP2014509818A JP2014509818A JP6258194B2 JP 6258194 B2 JP6258194 B2 JP 6258194B2 JP 2014509818 A JP2014509818 A JP 2014509818A JP 2014509818 A JP2014509818 A JP 2014509818A JP 6258194 B2 JP6258194 B2 JP 6258194B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- antibody
- sequence
- seq
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 title claims description 189
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 73
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 208
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 204
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 claims description 189
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 claims description 187
- 241000282324 Felis Species 0.000 claims description 151
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 114
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 104
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 90
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 claims description 67
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 57
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 55
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 55
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 55
- 230000036407 pain Effects 0.000 claims description 55
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 31
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 19
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 15
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 14
- 101150111783 NTRK1 gene Proteins 0.000 claims description 13
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 13
- 108091008604 NGF receptors Proteins 0.000 claims description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 12
- 102000007339 Nerve Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 10
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 10
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 9
- 206010036030 Polyarthritis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000030428 polyarticular arthritis Diseases 0.000 claims description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 2
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 claims 4
- 102100035361 Cerebellar degeneration-related protein 2 Human genes 0.000 claims 4
- 101000737796 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related protein 2 Proteins 0.000 claims 4
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 claims 3
- 101000737793 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related antigen 1 Proteins 0.000 claims 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 107
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 89
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 41
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 39
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 37
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 37
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 35
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 31
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 31
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 23
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 20
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 19
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 19
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 17
- 208000030175 lameness Diseases 0.000 description 16
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 16
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 16
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 14
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 13
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 13
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 12
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 12
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 12
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 12
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 11
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 11
- 208000000094 Chronic Pain Diseases 0.000 description 10
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 10
- 102100036220 PC4 and SFRS1-interacting protein Human genes 0.000 description 10
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 10
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 10
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 10
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 10
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 8
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 8
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 7
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 6
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 6
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 description 6
- -1 opioid Substances 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 208000004550 Postoperative Pain Diseases 0.000 description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 5
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 5
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 102000015533 trkA Receptor Human genes 0.000 description 4
- 108010064884 trkA Receptor Proteins 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 3
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 3
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 3
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 3
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010058019 Cancer Pain Diseases 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 108700022150 Designed Ankyrin Repeat Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 101100404651 Mus musculus Ngf gene Proteins 0.000 description 2
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 208000005298 acute pain Diseases 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 206010053552 allodynia Diseases 0.000 description 2
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 239000007819 coupling partner Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 2
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 230000007514 neuronal growth Effects 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 2
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000013077 scoring method Methods 0.000 description 2
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 2
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 2
- 210000001044 sensory neuron Anatomy 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 2
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 2
- 206010044652 trigeminal neuralgia Diseases 0.000 description 2
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- KYBXNPIASYUWLN-WUCPZUCCSA-N (2s)-5-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC1CC[C@@H](C(O)=O)N1 KYBXNPIASYUWLN-WUCPZUCCSA-N 0.000 description 1
- CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N (3s)-3-amino-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(1s)-1-carboxyethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-ox Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N 0.000 description 1
- 125000000979 2-amino-2-oxoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940117976 5-hydroxylysine Drugs 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical group OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-FOQJRBATSA-N 59096-14-9 Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1[14C](O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-FOQJRBATSA-N 0.000 description 1
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 1
- 229940127291 Calcium channel antagonist Drugs 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 102000014447 Complement C1q Human genes 0.000 description 1
- 108010078043 Complement C1q Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101100508941 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) ppa gene Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 208000035154 Hyperesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical group 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical group C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRVUJXDFFKFLMG-UHFFFAOYSA-N Meloxicam Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)N(C)C=1C(=O)NC1=NC=C(C)S1 ZRVUJXDFFKFLMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010087702 Penicillinase Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 229920002642 Polysorbate 65 Polymers 0.000 description 1
- 229920002651 Polysorbate 85 Polymers 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008866 Prostaglandin E receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010088540 Prostaglandin E receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010040021 Sensory abnormalities Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000674 adrenergic antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003452 antibody preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 229940030600 antihypertensive agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 1
- 102000012740 beta Adrenergic Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010079452 beta Adrenergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008275 binding mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000036782 biological activation Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000005460 biophysical method Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- RMRJXGBAOAMLHD-IHFGGWKQSA-N buprenorphine Chemical compound C([C@]12[C@H]3OC=4C(O)=CC=C(C2=4)C[C@@H]2[C@]11CC[C@]3([C@H](C1)[C@](C)(O)C(C)(C)C)OC)CN2CC1CC1 RMRJXGBAOAMLHD-IHFGGWKQSA-N 0.000 description 1
- 229960001736 buprenorphine Drugs 0.000 description 1
- IFKLAQQSCNILHL-QHAWAJNXSA-N butorphanol Chemical compound N1([C@@H]2CC3=CC=C(C=C3[C@@]3([C@]2(CCCC3)O)CC1)O)CC1CCC1 IFKLAQQSCNILHL-QHAWAJNXSA-N 0.000 description 1
- 229960001113 butorphanol Drugs 0.000 description 1
- 239000000480 calcium channel blocker Substances 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I calcium;potassium;disodium;hydrogen carbonate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].OC([O-])=O BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000004706 cardiovascular dysfunction Effects 0.000 description 1
- IVUMCTKHWDRRMH-UHFFFAOYSA-N carprofen Chemical compound C1=CC(Cl)=C[C]2C3=CC=C(C(C(O)=O)C)C=C3N=C21 IVUMCTKHWDRRMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003184 carprofen Drugs 0.000 description 1
- 238000013216 cat model Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005889 cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WAZQAZKAZLXFMK-UHFFFAOYSA-N deracoxib Chemical compound C1=C(F)C(OC)=CC=C1C1=CC(C(F)F)=NN1C1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 WAZQAZKAZLXFMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003314 deracoxib Drugs 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 229940030606 diuretics Drugs 0.000 description 1
- 238000011833 dog model Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N etodolac Chemical compound C1COC(CC)(CC(O)=O)C2=N[C]3C(CC)=CC=CC3=C21 XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005293 etodolac Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 229960002428 fentanyl Drugs 0.000 description 1
- PJMPHNIQZUBGLI-UHFFFAOYSA-N fentanyl Chemical compound C=1C=CC=CC=1N(C(=O)CC)C(CC1)CCN1CCC1=CC=CC=C1 PJMPHNIQZUBGLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- MGCCHNLNRBULBU-WZTVWXICSA-N flunixin meglumine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.C1=CC=C(C(F)(F)F)C(C)=C1NC1=NC=CC=C1C(O)=O MGCCHNLNRBULBU-WZTVWXICSA-N 0.000 description 1
- 229960000469 flunixin meglumine Drugs 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000003193 general anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 229940005494 general anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N hydrazine Substances NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002349 hydroxyamino group Chemical group [H]ON([H])[*] 0.000 description 1
- 239000002471 hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000009802 hysterectomy Methods 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000005550 inflammation mediator Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N ketoprofen Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000991 ketoprofen Drugs 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 229960005015 local anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229960001929 meloxicam Drugs 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229960005181 morphine Drugs 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 229960000805 nalbuphine Drugs 0.000 description 1
- NETZHAKZCGBWSS-CEDHKZHLSA-N nalbuphine Chemical compound C([C@]12[C@H]3OC=4C(O)=CC=C(C2=4)C[C@@H]2[C@]1(O)CC[C@@H]3O)CN2CC1CCC1 NETZHAKZCGBWSS-CEDHKZHLSA-N 0.000 description 1
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000001473 noxious effect Effects 0.000 description 1
- 239000000014 opioid analgesic Substances 0.000 description 1
- 229940005483 opioid analgesics Drugs 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000008058 pain sensation Effects 0.000 description 1
- 230000008533 pain sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229950009506 penicillinase Drugs 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940096701 plain lipid modifying drug hmg coa reductase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001816 polyoxyethylene sorbitan tristearate Substances 0.000 description 1
- 235000010988 polyoxyethylene sorbitan tristearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 1
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 1
- 229940099511 polysorbate 65 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 229940113171 polysorbate 85 Drugs 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- ZEXGDYFACFXQPF-UHFFFAOYSA-N robenacoxib Chemical compound OC(=O)CC1=CC(CC)=CC=C1NC1=C(F)C(F)=CC(F)=C1F ZEXGDYFACFXQPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000205 robenacoxib Drugs 0.000 description 1
- 238000013391 scatchard analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000020341 sensory perception of pain Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000003238 somatosensory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008362 succinate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000002889 sympathetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/04—Antipruritics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/461—Igs containing Ig-regions, -domains or -residues form different species
- C07K16/467—Igs with modifications in the FR-residues only
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Description
ヒトの痛み及び痛み感受性の治療でNGFアンタゴニストの使用が報告された(Cattaneo A., Curr. Op. Mol. Ther. 2010 12(1):94-106)。例えば、国際特許出願WO 2006/131951は、ラットアルファD11(αD11)モノクローナル抗体のヒト化型を記載している。αD11抗体はマウスNGFに対して結合特異性を有するが、NGFのヒト及びラット型と結合することもまた知られている。αD11ラット由来モノクローナル抗体のヒト化は、げっ歯類由来抗体に対して上昇するヒト抗マウス抗体(HAMA)応答から生じる中和抗体の産生を最小限にするために、ヒトに投与する前に要求される。さらにまた、マウス定常ドメインのヒト定常ドメインによる入れ替えは下流のエフェクター機能の選択を可能にする。
ネコにおける痛みの管理は、従来はいくつかのクラスの鎮痛薬(局所麻酔及び全身麻酔剤、オピオイド鎮痛薬、α2アゴニスト、非ステロイド系抗炎症剤(NSAID)及びステロイドを含む)の投与により提供される。これらの各々は頻繁な投与を必要とし、さらに有効性及び安全性に限界がある。したがって、慢性痛(例えば神経障害に関するもの又は癌性痛)を有するネコのために投与頻度が低く、長時間持続性で効果的な形態が希求される。
本発明の第一の特徴にしたがえば、ネコでの使用に適切な抗体を調製する方法が提供され、前記方法は以下の工程を含むか又は本質的に以下の工程から成る:
−ネコ以外の種に由来するドナー抗体を提供する工程(ここで前記ドナー抗体はネコに存在するある標的抗原に対して結合特異性を有する);
−前記ドナー抗体のフレームワーク領域のアミノ酸配列の各アミノ酸残基を、1つ以上のネコ抗体のフレームワーク領域のアミノ酸配列の対応する位置に存在する各アミノ酸残基と比較して、前記1つ以上のネコ抗体のフレームワーク領域のアミノ酸配列内の対応する位置の1つ以上のアミノ酸残基と異なる、前記ドナー抗体のフレームワーク領域のアミノ酸配列内の1つ以上のアミノ酸残基を同定する工程;及び
−前記ドナー抗体の同定された前記1つ以上のアミノ酸残基を、前記1つ以上のネコ抗体で対応する位置に存在する1つ以上のアミノ酸残基と置換する工程。
ある種の実施態様では、1つ以上の同定アミノ酸残基の置換工程は、前記置換される1つ以上のアミノ酸残基と最高の相同性を有する対応する位置に存在する1つ以上のアミノ酸残基で前記1つ以上の同定アミノ酸残基を置換する工程を含む。
ある種の実施態様では、本方法はさらに、ドナー抗体の重鎖及び/又は軽鎖の定常ドメインを、ネコ抗体由来の重鎖及び/又は軽鎖の定常ドメインで置換する工程を含む。典型的には、重鎖の定常ドメインはHC2型ネコ定常ドメインで入れ替えられる。
ある種の実施態様では、標的エピトープは神経成長因子(NGF)である。
本発明の第一の特徴の方法はCDR移植を含まない。本発明の第一の特徴の方法にしたがって調製される抗体は、ドナー抗体のCDR、本発明の第一の特徴の方法にしたがって調製されたネコ化フレームワーク領域及びネコ定常ドメインを含む。
本発明のある実施態様では、ネコNGFと結合しさらにp75又はTrkAネコNGFレセプターと結合するネコNGFの能力を中和する、抗ネコNGFキメラ抗体又はその結合フラグメントが提供され、前記キメラ抗体は、配列番号:1のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85、90、95又は99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖及び/又は配列番号:2のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85、90、95又は99%のアミノ酸同一性を有する配列を含む重鎖を含む。配列番号:2の重鎖定常ドメインはフェリス・カツス由来の抗体から誘導され、前記はGenbankアクセッション番号BAA32229.1の下に寄託されている。さらに別の実施態様では、重鎖は配列番号:16のアミノ酸配列を有し、前記は、フェリス・カツス由来の抗体から誘導される重鎖定常ドメインに連接される定常ドメインで、Genbankアクセッション番号BAA32230.1の下に寄託されている。
典型的には、本発明の抗ネコNGFキメラ抗体の定常ドメインは、当該抗体定常領域に付随する下流エフェクター機能、例えば補体の固定、ADCC、Fcレセプター結合などを媒介しない。ある種の実施態様では、重鎖の定常ドメインの残基は、グリコシル化できない残基に置換され得る。ある種の実施態様では、非グリコシル化重鎖は、配列番号:19のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85、90、95又は99%のアミノ酸同一性を有する配列を有する。
本発明のさらに別の又は関連する特徴にしたがえば、ネコニューロン成長因子(NGF)に特異的に結合するネコ化抗体又はその結合フラグメントが提供される。典型的には、ネコ化抗体又はその結合フラグメントは、ネコNGFと結合したときにネコNGFの生物学的機能を中和する。すなわち、ネコ化抗体又は結合フラグメントとネコNGFとの結合は、ネコNGFがTrkA NGFレセプター又はp75 NGFレセプターと結合する能力を封鎖する。ある種の実施態様では、ネコ化抗体又はその結合フラグメントは、1x10-8以下のKDの結合親和性でNGFと結合する。典型的には、ネコ化抗体はネコで免疫原性ではない。
本発明のさらに別の又は関連する特徴では、ネコ神経成長因子(NGF)と特異的に結合できる中和抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。前記抗体又は抗体の結合フラグメントは、配列番号:23のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85、90、95又は99%のアミノ酸同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含むか、前記配列から成るか、又は本質的に前記配列から成る。ある種の実施態様では、前記同一性は、少なくとも約15アミノ酸、好ましくは約20アミノ酸、より好ましくは約25アミノ酸の長さにわたる。
いくつかの実施態様では中和抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施態様では、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施態様では、抗体はネコ化抗体である。すなわちネコ対象動物に投与されたとき、当該ネコ化抗体に対して中和抗体が産生されないように脱免疫化されてあるアミノ酸配列を有する抗体である。ある種の実施態様では、ネコ化抗体は、本発明の第一の特徴の抗体を調製する方法にしたがって調製される。典型的には、当該抗体の重鎖定常ドメインは、定常ドメインが下流のエフェクター機能を媒介しないように、アミノ酸置換又は欠失の方法によって精選又は改変される。
さらに別の又は関連する特徴では、ネコ神経成長因子(NGF)と特異的に結合できる中和ネコ化抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。前記ネコ化抗体又は抗体の結合フラグメントは、配列番号:22のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85、90、95又は99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含むか、前記から成るか、又は本質的に前記から成る。ある種の実施態様では、前記同一性は、少なくとも約15アミノ酸、好ましくは約20アミノ酸、より好ましくは約25アミノ酸の長さにわたる。
典型的には、重鎖の可変領域(VH)は、少なくとも1つの免疫グロブリン定常ドメインを含む重鎖定常領域と連接される。典型的には、重鎖定常領域は3つの縦に並ぶ(すなわち一列に並んだ)定常ドメインで構成され、構造的可撓性を提供するためにヒンジ領域が当該ドメインの2つのドメインの間に提供される。種々のアイソタイプの定常領域は3つより多いか又は3つより少ない定常ドメインを含むことができる。ある種の実施態様では、当該重鎖定常領域はネコ由来定抗体から誘導される。2つの異なるネコ定常ドメインが公知であり(Genbankアクセッション番号BAA32229.1及びBAA32230.1で示される)、前記は、同じヒンジ領域及びそれらのCH3ドメイン間に8つのアミノ酸配列相違を有する。典型的には、前記定常ドメインは、CH1、CH2及びCH3を、前記CH1とCH2ドメインの間に位置する適切なリンカー(又は“ヒンジ”)と一緒に含む。典型的には、本発明の抗ネコNGF抗体は、定常ドメインに連接する重鎖可変ドメインを含み、ここで前記定常ドメインは、抗体のFc領域によって媒介される下流のエフェクター機能(例えば補体の固定、ADCC、Fcレセプター結合など)をもたらさない。
具体的な実施態様では、前記ネコ化抗体又は前記に由来する結合フラグメントは、定常ドメイン内の少なくとも1つの残基が、当該残基のグリコシル化を防止するために置換又は欠失されてある重鎖を含むことができる。ある種の実施態様では、前記重鎖サブタイプはサブタイプIgG2のネコ抗体に由来する。ある種のさらに別の実施態様では、前記定常ドメインは、フェリス・カツスに由来する抗体から誘導され、前記はGenbankアクセッション番号BAA3220.1の下に寄託されている。
さらにまた別の又は関連する特徴では、本発明は、ネコ神経成長因子(NGF)と特異的に結合し、さらにTrkA NGFレセプター及びp75 NGFレセプターとの結合に際してNGFの生物学的機能を中和するネコ化抗体又はその抗原結合フラグメントに及ぶ。前記ネコ化抗体又はその結合フラグメントは軽鎖及び重鎖を含み、ここで前記軽鎖の可変ドメイン(VL)は、配列番号:23のアミノ酸配列と同一若しくは実質的に相同なアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85、90、95又は99%のアミノ酸同一性を有する配列を含むか、前記配列から成るか、又は本質的に前記配列から成り、さらに前記重鎖の可変ドメイン(VH)は、配列番号:22のアミノ酸配列と同一若しくは実質的に相同なアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85、90、95又は99%のアミノ酸同一性を有する配列を含むか、前記配列から成るか、又は本質的に前記配列から成る。ある種の実施態様では、前記同一性は、少なくとも約15アミノ酸、好ましくは約20アミノ酸、より好ましくは約25アミノ酸の長さにわたる。
ある種の実施態様では、ネコ化抗体又は結合メンバーは、配列番号:24のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%、より好ましくは95%、もっとも好ましくは少なくとも98%同一性の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、前記配列から成るか、又は本質的に前記配列から成る重鎖を含む。ある種の実施態様では、前記同一性は、少なくとも約15アミノ酸、好ましくは約20アミノ酸、より好ましくは約25アミノ酸の長さにわたる。
ある種の実施態様では、前記抗体は少なくとも1つのレポーター分子と共役させることができる。ある種のさらに別の実施態様では、定常ドメインの少なくとも1つにおける少なくとも1つの残基は、当該残基のグリコシル化を防止するために置換又は欠失させることができる。
本発明のさらに別の又は関連する特徴では、ネコ神経成長因子(NGF)と特異的に結合できる中和抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。前記抗体又は抗体の結合フラグメントは、配列番号:3のアミノ酸配列又は前記と少なくとも85、90、95又は99%のアミノ酸同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含むか、前記から成るか、又は本質的に前記から成る。ある種の実施態様では、前記同一性は、少なくとも約15アミノ酸、好ましくは約20アミノ酸、より好ましくは約25アミノ酸の長さにわたる。
ある種の実施態様では、ネコ化抗体又は当該抗体の結合フラグメントは、配列番号:5のアミノ酸配列又は前記と少なくとも85、90、95又は99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含むか、前記から成るか、又は本質的に前記から成る。ある種の実施態様では、前記同一性は、少なくとも約15アミノ酸、好ましくは約20アミノ酸、より好ましくは約25アミノ酸の長さにわたる。
さらに別の又は関連する特徴では、ネコ神経成長因子(NGF)と特異的に結合できる中和ネコ化抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。前記ネコ化抗体又は抗体の結合フラグメントは、配列番号:4のアミノ酸配列又は前記と少なくとも85、90、95又は99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含むか、前記から成るか、又は本質的に前記から成る。ある種の実施態様では、前記同一性は、少なくとも約15アミノ酸、好ましくは約20アミノ酸、より好ましくは約25アミノ酸の長さにわたる。
ある種の実施態様では、抗体又は抗体の結合フラグメントは、配列番号:6のアミノ酸配列又は前記と少なくとも85、90、95又は99%のアミノ酸同一性を有する配列を含む重鎖を含むか、前記から成るか、又は本質的に前記から成る。前記実施態様では、定常ドメインは、フェリス・カツス由来の抗体(Genbankアクセッション番号BAA32229.1の下に寄託されている)から誘導される。
具体的な実施態様では、ネコ化抗体又は前記に由来する結合フラグメントは、定常ドメインの少なくとも1つの残基が、当該残基のグリコシル化を防止するために置換又は欠失されてある重鎖を含むことができる。したがって、ある種のさらに別の実施態様では、抗体又は抗体の結合フラグメントは、配列番号:7のアミノ酸又は前記配列と少なくとも85、90、95又は99%のアミノ酸同一性を有する配列を含む重鎖を含むか、前記から成るか、又は本質的に前記から成る。ある種の実施態様では、前記同一性は、少なくとも約15アミノ酸、好ましくは約20アミノ酸、より好ましくは約25アミノ酸の長さにわたる。ある種の実施態様では、前記重鎖のサブタイプは、サブタイプIgG2のネコ抗体に由来する。
さらにまた別の又は関連する特徴では、本発明は、ネコ神経成長因子(NGF)と特異的に結合し、さらにTrkA NGFレセプター及びp75NGFレセプターと結合したときにNGFの生物学的機能を中和するネコ化抗体又はその抗原結合フラグメントに及ぶ。前記ネコ化抗体又は当該抗体の結合フラグメントは軽鎖及び重鎖を含み、ここで前記軽鎖の可変ドメイン(VL)は、配列番号:3のアミノ酸配列と同一若しくは実質的に相同なアミノ酸配列又は前記と少なくとも85、90、95又は99%のアミノ酸同一性を有する配列を含むか、前記から成るか、又は本質的に前記から成り、さらに前記重鎖の可変ドメイン(VH)は、配列番号:4のアミノ酸配列と同一若しくは実質的に相同なアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85、90、95又は99%のアミノ酸同一性を有する配列を含むか、前記配列から成るか、又は本質的に前記配列から成る。ある種の実施態様では、前記同一性は、少なくとも約15アミノ酸、好ましくは約20アミノ酸、より好ましくは約25アミノ酸の長さにわたる。
ある種の実施態様では、ネコ化抗体又は結合メンバーは、配列番号:6若しくは配列番号:17のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%、より好ましくは95%、もっとも好ましくは少なくとも98%同一性の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、前記から成るか、又は本質的に前記から成る重鎖を含む。ある種の実施態様では、前記同一性は、少なくとも約15アミノ酸、好ましくは約20アミノ酸、より好ましくは約25アミノ酸の長さにわたる。
ある種の実施態様では、前記抗体は少なくとも1つのレポーター分子に連接できる。
ある種のさらに別の実施態様では、定常ドメインの少なくとも1つにおける少なくとも1つの残基を、当該残基のグリコシル化を防止するために置換又は欠失させることができる。したがって、ある種のさらに別の実施態様では、ネコ化抗体又は抗体の結合フラグメントは、配列番号:7若しくは配列番号:18のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも95%、より好ましくは少なくとも98%同一性の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含むか、前記から成るか、又は本質的に前記から成る。ある種の実施態様では、前記同一性は、少なくとも約15アミノ酸、好ましくは約20アミノ酸、より好ましくは約25アミノ酸の長さにわたる。
抗体分子はCDR1、CDR2及びCDR3領域並びに関連する介在フレームワーク領域を含む重鎖可変ドメインを含むことができる。重鎖可変ドメイン(VH)のCDRはHCDRとして知られ、これらのCDRはKabatの番号付与系にしたがえば以下の位置で見出される:HCDR1:Kabat残基31−35、HCDR2:Kabat残基50−65、HCDR3:Kabat残基95−102(Kabat EA et al. 1991 Sequences of proteins of immunological interest, 5th edition. Bethesda: US Department of Health and Human Services)。
さらにまた、抗体はさらにCDR1、CDR2及びCDR3領域並びに関連する介在フレームワーク領域を含む軽鎖可変ドメインを含む。軽鎖可変ドメイン(VL)のCDRはLCDRとして知られ、これらのCDRはKabatの番号付与系にしたがえば以下の位置で見出される:LCDR1:Kabat残基24−34、LCDR2:Kabat残基50−56、LCDR3:Kabat残基89−97。
軽鎖又は重鎖可変ドメインは4つのフレームワーク領域(FR1、FR2、FR3及びFR4)を含み、前記には以下の編成でCDRが介在する:FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
−配列番号:26のアミノ酸配列から成るか又は前記配列を含むFR1フレームワーク領域、
−配列番号:27のアミノ酸配列から成るか又は前記配列を含むFR2フレームワーク領域、
−配列番号:28のアミノ酸配列から成るか又は前記配列を含むFR3フレームワーク領域及び
−配列番号:29のアミノ酸配列から成るか又は前記配列を含むFR4フレームワーク領域の少なくとも1つを含む軽鎖可変領域、及び/又は
−配列番号:30のアミノ酸配列から成るか又は前記配列を含むFR1フレームワーク領域、
−配列番号:31のアミノ酸配列から成るか又は前記配列を含むFR2フレームワーク領域、
−配列番号:32のアミノ酸配列から成るか又は前記配列を含むFR3フレームワーク領域及び
−配列番号:33のアミノ酸配列から成るか又は前記配列を含むFR4フレームワーク領域の少なくとも1つを含む重鎖可変領域を含む。
典型的には、前記軽鎖及び重鎖CDRは、NGF(好ましくはネコNGF)と結合特異性を有する抗体に由来する。
ある種のさらに別の実施態様では、上記記載のフレームワーク領域の少なくとも1つを含む重鎖可変領域は、少なくとも1つのネコ由来重鎖定常ドメインと連接される。ある種の実施態様では、前記定常ドメインのアミノ酸配列は一切の翻訳後修飾を欠くか、又は定常ドメインがグリコシル化されないように、N-結合若しくはO-結合グリコシレーションに付され得るいずれかの又は全ての残基を除去するために改変できる。ある種の実施態様では、重鎖は、配列番号:30のアミノ酸配列を有するFR1領域、配列番号:31のアミノ酸配列を有するFR2領域、配列番号:32のアミノ酸配列を有するFR3領域、及び配列番号:33のアミノ酸配列を有するFR4領域、又は前述のものと少なくとも85、90、95又は98%の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む。ある種の実施態様では、前記同一性は少なくとも約5アミノ酸、好ましくは約10アミノ酸の長さにわたる。
したがって、ある種の実施態様では、本発明は、ポリペプチド(例えば抗体又はその抗原結合フラグメント)に及び、前記ポリペプチドは、以下から成る群から選択されるアミノ酸置換の1つ以上によって改変されてある、配列番号:26のアミノ酸配列を含むFR1領域を有する軽鎖可変ドメインを含む:D1はE又はNで、I2はV、P又はTで、E3はV又は Mで、M4はL又はIで、S7はTで、S10はFで、S12はP又はAで、T14はI又はAで、E17はDで、S18はP又はAで、V19はAで、I21はFで、さらにS22はFである。
ある種の実施態様では、配列番号:27のアミノ酸配列を有する軽鎖FR2領域は、以下から成る群から選択されるアミノ酸置換の1つ以上で改変され得る:Y2はFで、L3はF又はRで、K5はRで、R8はQで、L12はRで、I14はMで、さらにY15はH又はAである。
ある種の実施態様では、配列番号:29のアミノ酸配列を有する軽鎖FR4領域は、以下から成る群から選択されるアミノ酸置換の1つ以上で改変され得る:F1はSで、Q3はPで、K6はH、Q、E、S又はTで、E8はDで、L9はV、I又はMで、さらにK10はR、D又はTで置換される。
ある種の実施態様では、配列番号:30のアミノ酸配列を有する重鎖FR1領域は、以下から成る群から選択されるアミノ酸置換の1つ以上で改変され得る:Q1はD又はEで、V2はEで、Q3はL又はRで、L4はVで、V5はMで、E6はQ又はDで、A9はGで、E10はD又はNで、L11はV又はRで、V12はR又はKで、Q13はK、T、E、N又はRで、P14はTで、G15はEで、E16はG、A又はTで、S17はAで、L18はVで、R19はK又はEで、L20はI又はPで、T21はF又はSで、A23はK、V又はQで、A24はT又はDで、さらにG26はAで置換される。
ある種のさらに別の実施態様では、配列番号:31のアミノ酸配列を有する重鎖FR2領域は、以下から成る群から選択されるアミノ酸置換の1つ以上で改変され得る:V2はL、F又はIで、R3はC又はHで、A5はS、V又はTで、G7はA、E又はSで、K8はQ又はEで、L10はF又はPで、E11はQで、W12はC又はLで、M13はV又はIで、さらにG14はA又はSで置換される。
ある種のさらに別の実施態様では、配列番号:33のアミノ酸配列を有する重鎖FR4領域は、以下から成る群から選択されるアミノ酸置換の1つ以上で改変され得る:W1はR、C又はLで、G2はAで、Q3はH、R、P又はVで、G4はDで、T5はA又はVで、T6はL、I、Q、M又はSで、V7はIで、T8はA、I又はRで、V9はGで、S10はPで、さらにA11はS又はQで置換される。
ある種の実施態様では、抗体はモノクローナル抗体である。典型的には、抗体はネコ化抗体である。
−配列番号:8のアミノ酸配列から成るか又は前記を含むFR1フレームワーク領域、
−配列番号:9のアミノ酸配列から成るか又は前記を含むFR2フレームワーク領域、
−配列番号:10のアミノ酸配列から成るか又は前記を含むFR3フレームワーク領域及び
−配列番号:11のアミノ酸配列から成るか又は前記を含むFR4フレームワーク領域の少なくとも1つを含む軽鎖可変領域、及び/又は
−配列番号:12のアミノ酸配列から成るか又は前記を含むFR1フレームワーク領域、
−配列番号:13のアミノ酸配列から成るか又は前記を含むFR2フレームワーク領域、
−配列番号:14のアミノ酸配列から成るか又は前記を含むFR3フレームワーク領域及び
−配列番号:15のアミノ酸配列から成るか又は前記を含むFR4フレームワーク領域の少なくとも1つを含む重鎖可変領域を含む。
典型的には、前記軽鎖及び重鎖CDRは、NGF(好ましくはネコNGF)と結合特異性を有する抗体に由来する。
典型的には、本発明のネコ化抗ネコNGF抗体の作製は、軽鎖又は重鎖可変ドメインのフレームワーク領域内への復帰突然変異の導入を必要としない。
ある種のさらに別の実施態様では、上記記載のフレームワーク領域の少なくとも1つを含む重鎖可変領域は、少なくとも1つのネコ由来重鎖定常ドメインと連接される。ある種の実施態様では、前記定常ドメインのアミノ酸配列は一切の翻訳後修飾を欠くか、又は定常ドメインがグリコシル化されないように、N-結合若しくはO-結合グリコシレーションに付され得るいずれかの又は全ての残基を除去するために改変することができる。ある種の実施態様では、重鎖は、配列番号:12のアミノ酸配列を有するFR1領域、配列番号:13のアミノ酸配列を有するFR2領域、配列番号:14のアミノ酸配列を有するFR3領域、及び配列番号:15のアミノ酸配列を有するFR4領域、又は前述のものと少なくとも85、90、95又は98%の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む。ある種の実施態様では、前記同一性は少なくとも約5アミノ酸、好ましくは約10アミノ酸の長さにわたる。
したがって、ある種のさらに別の実施態様では、本発明は、ポリペプチド(例えば抗体又はその抗原結合フラグメント)に及び、前記は、21位のアミノ酸残基I(I21)をアミノ酸残基Aで置換することによって改変されてある、配列番号:8のアミノ酸配列を含むFR1領域を有する軽鎖可変ドメインを含む。
ある種のさらに別の実施態様では、配列番号:10のアミノ酸配列を有する軽鎖FR3領域は、31位のアミノ酸残基F(F31)をアミノ酸残基Yで置換することによって改変できる。
ある種のさらに別の実施態様では、配列番号:12のアミノ酸配列を有する重鎖FR1領域は、以下のアミノ酸置換の1つ以上によって改変できる(ここでアミノ酸は一文字コードによって示される):G9はAであり得、D10はEであり得、G15はEであり得、G16はAであり得、R19はKであり得、A23はV又はMであり得る。さらにまた、Q1はD 又はHであり得、V2はEであり得、Q3はLであり得、E6はQであり得、G9はRであり得、L11はVであり得、V12はR又はSであり得、Q13はKであり得、L18はVであり得、R19はSであり得、L20はIであり得、T21はF又はSであり得、A23はKであり得、A24はTであり得、F27はY又はLであり得、S28はT又はNであり得、L29はF又はVであり得、さらにT30はS、G又はRであり得る。
ある種のさらに別の実施態様では、配列番号:14のアミノ酸配列を有する重鎖FR3領域は、以下のアミノ酸置換の1つ以上によって改変できる:F2はLであり、S5はTであり、N8はTであり、A9はSであり、N11はDであり、L13はAであり、K21はRであり、T22はSである。さらにまた、T3はAであり、I4はL又はVであり、R6はA又はIであり、N8はSであり、A9はG又はTであり、K10はT、R、G又はQであり、T12はAであり、Y14はD又はSであり、L15はMであり、Q16はE、L又はRであり、M17はL又はTであり、N18はS、D又はTであり、S19はI、N、R又はTであり、K21はG又はTであり、T22はP又はAであり、E23はT、A又はDであり、T25はAであり、T27はV又はMであり、Y29はC又はFであり、C30はRであり、A31はG、I、T、S又はVであり、さらにR32はK、S、T、I、V、P、N又はである。
ある種のさらに別の実施態様では、配列番号:15のアミノ酸配列を有する重鎖FR4領域は、以下のアミノ酸置換の1つ以上によって改変できる:L6はIである。さらにまた、W1はRであり得、G2はRであり得、Q3はP、V、H又はRであり得、T5はA、V、I又はSであり得、L6はQであり得、S10はTであり得、さらにS11はQ、A又はPであり得る。
本発明の上記特徴のある種の実施態様では、抗体はモノクローナル抗体である。典型的には、抗体はネコ化抗体である。
ある種のさらに別の実施態様では、前記重鎖定常領域のアミノ酸配列に対する改変は本発明の抗体に対して実施できる。前記改変は、1つ以上のアミノ酸残基の付加、置換又は欠失を含むことができる。前記アミノ酸の変更は、典型的には抗体の機能的特徴を改変するために実施される。例えば、アミノ酸の改変は、例えばFcレセプターと結合し、補体を活性化し又はADCCを誘発する抗体の能力を防止することによって、抗体の定常ドメインによって媒介される下流のエフェクター機能を妨げるために実施できる。さらにまた、改変は重鎖定常ドメインのヒンジ領域に対して実施して、抗体をネコに投与したとき当該抗体の循環半減期を改変することができる。
ある種の実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは下流のエフェクター機能を媒介しない。典型的には、抗体又は結合フラグメントはネコ重鎖サブタイプHC2を有する。
ある種の実施態様では、ネコ化抗体は、本発明の第一の特徴の抗体の調製方法にしたがって調製される。
ある種の実施態様では、抗体の結合フラグメントは、可撓性リンカーによって連結された本発明の重鎖及び軽鎖配列を含み、単鎖抗体を形成することができる。
単鎖Fv(scFV)はVH及びVLドメインを含む。VH及びVLドメインは一緒になって標的結合部位を形成する。これら2つのドメインはペプチドリンカーによって共有結合により連結される。scFv分子は、軽鎖可変ドメインがN-末端で要求される事例ではVL-リンカー-VHの形態を有し、VHドメインがN-末端で要求される事例ではVH-リンカー-VLとしての形態有することができる。したがって、ある種のさらに別の実施態様では、抗原結合フラグメントは単鎖Fv(scFv)抗体フラグメントである。ある種のさらに別の実施態様では、抗体の結合フラグメントは、Fab抗体フラグメント、Fab’抗体フラグメント、F(ab’)2抗体フラグメント、Fv抗体フラグメント及びscFv抗体フラグメントなど(ただしこれらに限定されない)から成る群から選択される。
(i)配列番号:3若しくは配列番号:23のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%同一性を有する配列をもつ軽鎖可変ドメイン、及び/又は配列番号:4若しくは配列番号:22のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%同一性を有する配列をもつ重鎖可変ドメイン、又は
(ii)配列番号:1のアミノ酸配列を有する軽鎖及び/又は配列番号:2のアミノ酸配列を有する重鎖をもつキメラ抗体。
ある種の実施態様では、前記ネコ化抗体は、配列番号:5又は配列番号:25のアミノ酸配列を有する軽鎖及び/又は配列番号:6又は配列番号:24のアミノ酸配列を有する重鎖をもつ。ある種の実施態様では、ニュートロフィンはネコ神経成長因子(NGF)である。
本発明のさらにまた別の特徴は、以下の工程を含む、ネコで痛みを治療、阻止又は緩和する方法を提供する:
−治療的に有効な量の抗ネコNGF抗体(又はその抗原結合フラグメント)を提供する工程(ここで、前記抗体は、本発明のネコ化若しくはキメラ抗体又は前記の結合フラグメントである)、及び
−前記をその必要があるネコに投与する工程。
ある種の実施態様では、ネコ化抗体又はその抗原結合フラグメントは、本発明の前述の特徴によって提供されるもののうち任意のものである。
ある種の実施態様では、キメラ抗体は、配列番号:1のアミノ酸配列を有する軽鎖及び/又は配列番号:2のアミノ酸を有する重鎖を含む。
本発明のさらにまた別の特徴にしたがえば、ネコ対象動物における関節炎の治療方法が提供され、前記方法は以下の工程を含む:
−治療的に有効な量の本発明の抗ネコNGF抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する工程、及び
−前記をその必要があるネコに投与する工程。
ある実施態様では、抗ネコNGF抗体はキメラ抗体であり、ここで、前記軽鎖は配列番号:1のアミノ酸配列を有し、及び/又は前記重鎖は配列番号:2のアミノ酸を有する重鎖を有する。
ある種の実施態様では、関節炎には、免疫媒介多発性関節炎、慢性関節リウマチ、変形性関節症及び関連症状から成る群から選択される症状が含まれる。
典型的には、関節炎の治療は、当該関節炎症状に付随するか又は前記症状に起因せしめ得る痛みの緩和、阻止、軽減、抑制又は痛みの開始の遅延を含む。
本発明のさらに別の特徴は、ネコNGFの発現の増加又はネコ対象動物におけるNGF感受性の増加によって引き起こされるか、前記に付随するか、又は前記を生じる症状の治療方法を提供し、前記方法は以下の工程を含む:
−本発明の抗ネコNGF抗体又はその抗原結合フラグメントの治療的に有効な量を提供する工程、及び
−前記をその必要があるネコに投与する工程。
本発明のさらにまた別の特徴にしたがえば、NGFによってネコで増殖が誘発される腫瘍及び前記に付随する症状の治療方法が提供され、前記方法は以下の工程を含む:
−本発明の抗ネコNGF抗体又はその抗原結合フラグメントの治療的に有効な量を提供する工程、及び
−前記をその必要があるネコに投与する工程。
ある種の実施態様では、腫瘍は骨肉腫である。ある種の実施態様では、腫瘍はオートクライン又はパラクラインNGFによって増殖が誘発される。
適切な鎮痛剤の例には、ブトルファノール、ブプレノルフィン、フェンタニル、フルニキシンメグルミン、メルピジン、モルヒネ、ナルブフィン及びその誘導体が含まれるが、ただしこれらに限定されない。適切なNSAIDには、アセトアミノフェン、アセチルサリチル酸、カルプロフェン、エトドラク、ケトプロフェン、メロキシカム、フィロコキシブ、ロベナコキシブ、デラコキシブなどが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
ある種のさらに別の実施態様では、少なくとも1つのさらに別の薬剤は、抗生物質、抗真菌治療薬、抗原生動物治療薬、抗ウイルス治療薬又は類似の治療薬から選択される群の1つ以上であり得る治療的に活性な薬剤であり得る。さらにまた、前記少なくとも1つのさらに別の薬剤は、炎症媒介物質の阻害剤(例えばPGE-レセプターアンタゴニスト)、免疫抑制剤(例えばシクロスポリン)、又は抗炎症性グルココルチコイドであり得る。ある種のさらに別の実施態様では、前記少なくとも1つのさらに別の薬剤は、認知機能不全又は障害(老猫でだんだんと頻発し得る、例えば記憶低下又は関連症状)の治療に用いられる薬剤であり得る。さらにまた、前記少なくとも1つのさらに別の薬剤は、心脈管系機能不全の治療(例えば高血圧、心筋虚血、うっ血性心不全などの治療)に用いられる抗高血圧薬又は他の化合物であり得る。さらにまた、前記少なくとも1つのさらに別の薬剤は、利尿剤、血管拡張剤、ベータ-アドレナリン作動性レセプターアンタゴニスト、アンギオテンシン-II変換酵素阻害剤、カルシウムチャネルブロッカー又はHMG-CoAレダクターゼ阻害剤から成る群から選択できる。
多様なさらに別の特徴では、本発明は、本発明の前述の特徴のいずれかに示す抗体又はその結合フラグメントを含む組成物に及ぶ。ある種の実施態様では、前記組成物はさらに少なくとも1つの医薬的に許容できる担体を含む。
本発明のさらにまた別の特徴は、ネコの痛み、又は慢性痛によって引き起こされるか若しくは慢性痛を生じる症状を治療する医薬組成物を提供し、前記は、医薬的に有効な量の本発明の抗ネコNGFネコ化抗体を少なくとも1つの医薬的に許容できる担体、賦形剤又は希釈剤とともに含む。
ある種の実施態様では、前記組成物はさらに少なくとも1つの鎮痛剤、NSAID、オピオイド、コルチコステロイド又はステロイドを含む。
多様なさらに別の特徴では、本発明は、本発明の抗体又は抗体の結合フラグメントをコードする単離された核酸に及ぶ。
したがって、本発明のさらにまた別の特徴は、本発明の前述の特徴のいずれかに示す抗体又は抗原結合フラグメントをコードする単離された核酸を提供する。
ある種の実施態様では、前記単離された核酸はさらに、前記に作動できるように連結された1つ以上の調節配列をコードする。
さらに別の特徴では、本発明の重鎖及び/又は軽鎖可変ドメイン又は重鎖及び/又は軽鎖定常ドメインをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターが提供される。ある種の実施態様では、前記発現ベクターはさらに1つ以上の調節配列を含む。ある種の実施態様では、前記ベクターはプラスミド又はレトロウイルスベクターである。
さらにまた別の特徴は、本発明の前述の特徴の発現ベクターを取り込んでいる宿主細胞を提供する。本発明のさらに別の特徴は、本発明の前述の特徴のいずれかの抗体を生成する宿主細胞を提供する。
本発明のさらにまた別の特徴は抗ネコNGF中和抗体を生成する方法を提供し、前記方法は、本発明の前述の特徴の宿主細胞を培養して前記細胞に抗ネコNGF中和抗体を発現させる工程を含む。
本発明のさらにまた別の特徴は、ネコで痛みを治療、緩和又は阻止する方法を提供し、前記方法は、本発明の前述の特徴のいずれかに示すポリヌクレオチドの有効量をネコに投与する工程を含む。
本発明のさらにまた別の特徴は、ネコの痛みの治療、緩和又は予防に使用される、本発明の前述の特徴のいずれかに示す抗体若しくは抗体の結合フラグメント、又は本発明の前述の特徴に示す医薬組成物、又は本発明の前述の特徴のいずれかに示す核酸又は前記を含むベクターを提供する。
ある種の実施態様では、痛みは急性痛である。ある種の実施態様では、痛みは慢性痛である。さらにまた、痛みは術後痛、又は任意の術技から生じる痛みであり得る。前記術技にはネコの整形外科手術、軟組織外科手術、卵巣子宮摘出術、去勢術などが含まれ得る(ただし前記に限定されない)。ある種のさらに別の実施態様では、痛みは癌又は癌性症状に付随する慢性痛である。ある種のさらに別の実施態様では、痛みは、関節炎又は関節炎症状に付随するか又は前記から生じ、前記関節炎症状には、多発性関節炎、炎症、そう痒症、慢性関節リウマチ及び変形性関節症が含まれる。
本発明のさらにまた別の特徴は、ネコ対象動物のNGF誘発増殖腫瘍及び前記に付随する症状(特に骨肉腫)の治療に使用される、本発明の前述の特徴のいずれかに示す抗体若しくは抗体の結合フラグメント、又は本発明の前述の特徴に示す医薬組成物、又は本発明の前述の特徴のいずれかに示す核酸若しくは前記を含むベクターを提供する。ある種の実施態様では、腫瘍はオートクライン又はパラクラインNGFによって増殖が誘発される。
本発明のさらにまた別の特徴は、本発明の前述の特徴のいずれかに示す抗体若しくは抗体の結合フラグメント、又は本発明の前述の特徴に示す医薬組成物、又は本発明の前述の特徴のいずれかに示す核酸若しくは前記を含むベクターの、ネコの痛みの治療又は予防用医薬の調製における使用を提供する。
ある種の実施態様では、痛みは急性痛である。さらに別の実施態様では、痛みは慢性痛である。さらにまた、痛みは術後痛、又は任意の術技から生じる痛みであり得る。前記術技には、ネコの整形外科手術、軟組織外科手術、卵巣子宮摘出術、去勢術などが含まれ得る(ただし前記に限定されない)。ある種のさらに別の実施態様では、痛みは癌又は癌性症状に付随する慢性痛である。ある種のさらに別の実施態様では、痛みは、炎症、そう痒症、慢性関節リウマチ又は変形性関節症に付随するか又は前記から生じる。
本発明のさらにまた別の特徴は、本発明の前述の特徴のいずれかに示す抗体若しくは抗体の結合フラグメント、又は本発明の前述の特徴に示す医薬組成物、又は本発明の前述の特徴のいずれかに示す核酸若しくは前記を含むベクターの、ネコのNGF誘発増殖腫瘍及び前記に付随する症状(特に骨肉腫)の治療用医薬の調製における使用を提供する。ある種の実施態様では、腫瘍はオートクライン又はパラクラインNGFによって増殖が誘発される。
さらにまた別の特徴では、本発明の抗ネコNGF中和モノクローナル抗体又はそのフラグメントを生成する細胞株又はその誘導若しくは子孫細胞が提供される。前記抗体はネコ化抗体又はキメラ抗体であり得る。
本発明のさらにまた別の特徴は、ネコの痛みの治療用、又は痛みに付随する症状の治療用、又は変形性関節症、慢性関節リウマチ若しくは多発性関節炎に付随する痛みの治療、緩和若しくは阻止用キットを提供し、前記キットは、本発明の前述の特徴のいずれかに示す抗ネコNGF抗体又は結合フラグメント及び前記の使用のための指示を含む。
本発明のさらにまた別の特徴は、液体中の抗ネコNGFモノクローナル抗体のin vitro、ex vivo及びin vivo検出用診断キットを提供し、前記キットは前記抗体の濃度測定に使用される。前記キットは、本発明の任意の抗体又は前記の結合フラグメントを含むことができる。前記キットは前記を使用するための指示を含むことができる。
徹底的な実験の後に、本発明者らは、ラット抗マウスNGFモノクローナル抗体(MAb)αD11のアミノ酸配列を入手し、前記を用いて非免疫原性のキメラ及びネコ化抗NGF抗体を作製した。前記キメラ抗体は、ネコ抗体由来重鎖及び軽鎖定常ドメインに連接された、アルファD11ラット抗マウスNGF抗体由来の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。さらにいっそう驚くべきことには、前記ネコ化抗体(標準的なCDR移植技術を用いて作製されたものではない)は、高親和性ネコNGF結合を有することが示されている。驚くべきことに、キメラ抗体及びネコ化抗体はどちらもネコNGFの生物学的機能を中和し、もっとも驚くべきことには、ネコNGFと細胞上のNGFレセプターTrkA及びp75との結合を阻害することによって中和する。さらにまた、予想に反して、ネコに投与したとき当該抗体に対して中和抗体が産生されないこともまた見出された。したがって、本発明のネコ化抗体及びキメラ抗体はともにネコにおける長期間の慢性痛除去に適切である。
当該軽鎖及び重鎖定常領域はネコ(標的)由来抗体から誘導される。前記重鎖定常ドメインは、それらが下流のエフェクター機能を媒介しないように精選又は改変される。極めて驚くべきことには、本発明にしたがって生成された抗体に対して中和抗体は生成されないか又は最小限しか生成されないことが見出されたので、本発明の抗体は驚くべきことに、長期の循環半減期及び反復投与の選択肢に付随する利益を有することが判明した。さらにまた、フレームワーク残基の置換が、CDR領域の三次元構造に影響しないような態様で実施されるので、所望の標的に対する結合特異性に多様性は存在しないであろう。
本発明のキメラ抗体では、重鎖及び軽鎖可変ドメインは、αD11抗体に由来する完全な可変ドメインである。
本発明のネコ化抗体では、αD11抗体に由来するCDR領域は、特定のアミノ酸残基を置換するという方法(ただしαD11抗体に存在するフレームワーク領域を土台にしている)によって改変されてあるフレームワーク領域と結合される。このプロセスは、ネコに当該抗体を投与した後でT細胞によって標的とされ得るエピトープの除去をもたらす。さらにまた、このフレームワーク領域の改変は、当該CDR領域の三次元構造を保存するが、当該抗体をネコに投与したとき前記に対する中和抗体の生成を妨げるような態様で精選される。
表2:軽鎖可変ドメインFR2残基
表3:軽鎖可変ドメインFR3残基
表4:軽鎖可変ドメインFR4残基
表5:重鎖可変ドメインFR1残基
表6:重鎖可変ドメインFR2残基
表7:重鎖可変ドメインFR3残基
表8:重鎖可変ドメインFR4残基
好ましくは、ネコ化抗体は、そのCDRが由来した親(ドナー)抗体の結合特性を実質的に保持する。前記は、ネコ化抗体が、そのCDRが由来したドナー抗体(本事例ではラット由来アルファD11抗マウスNGF抗体)と同じ又は実質的に同じ結合親和性を示すことを意味する。理想的には、ネコ化抗体の親和性は、標的エピトープに対するドナー抗体の親和性の10%より低くはなく、より好ましくは約30%より低くはなく、もっとも好ましくは親抗体の50%より低くはないであろう。抗原結合親和性をアッセイする方法は当業界で周知であり、1/2最大結合アッセイ、競合アッセイ及びスキャチャード分析が含まれる。
図9及び10では、軽鎖可変ドメイン(図9)及び重鎖可変ドメイン(図10)の残基は、便利にはKabatらによって考案された番号付与システムにしたがって番号が付与されている(Kabat,E.A., Wu,T.T., Perry,H., Gottesman,K. and Foeller,C. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition. NIH Publication No. 91-3242)。Kabat番号付与システムは一般的に、可変ドメインの残基(軽鎖の約1−104残基及び重鎖の1−113残基)を指すときに用いられる。この番号付与システムは特段の場合に本明細書で用いられる。Kabatのアミノ酸残基指定は、該当配列の対応する配列番号で列挙された配列で提供される本発明の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸残基の直線的番号付与と常に直接的に一致するとは限らない。特に実際の直線的アミノ酸配列は、フレームワーク領域であれ又は相補性決定領域(CDR)であれ、重鎖又は軽鎖の基本的可変ドメインの構造成分の短縮又は構造成分への挿入に対応して、厳格なKabat番号付与の場合よりも減少又は増加したアミノ酸を含むことができる。任意のある抗体の残基に対する正確なKabatの番号付与は、Kabatの番号付与が適用されている標準配列に対して当該抗体の配列アラインメントを実施することによって決定できる。
これまでに記載したように、抗体の結合フラグメントは、Fabフラグメント、Fab’フラグメント及びscFv(単鎖可変フラグメント)を含む群(ただしこれらに限定されない)から、又はペプチド模倣体、ジアボディ若しくは関連する多価誘導体から選択できる。
ある種の実施態様では、抗体の結合フラグメントは、Fab又はF(ab')2フラグメント(抗体のVL、VH、CL及びCH1ドメインから成る)である。ある種の実施態様では、VLドメインは配列番号:3のアミノ酸配列を有し、VHドメインは配列番号:4のアミノ酸配列を有する。ある種の実施態様では、CL及びCH1ドメインは、ネコ免疫グロブリンのCL及びCH1ドメインのアミノ酸配列を土台にする。
ある種の実施態様では、抗体フラグメントは、モリモトの方法にしたがってタンパク質分解消化により完全長抗体から誘導することができる(Morimoto et al.,“Single-step purification of F(ab')2 fragments of mouse monoclonal antibodies (immunoglobulins G1) by hydrophobic interaction high performance liquid chromatography using TSKgel Phenyl-5PW”Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117, 1992)。抗体フラグメントはまた、宿主細胞によって直接生成することができる(Carter et al., “High level Escherichia coli expression and production of a bivalent humanized antibody fragment”Bio/Technology 10:163-167, 1992)。
したがって、本発明のある種のさらに別の実施態様では、本発明のネコ化抗体から誘導された単一結合ドメインを含むか、前記から成るか、又は本質的に前記から成る結合メンバーが提供される。ある種の実施態様では、前記単一結合ドメインは、配列番号:4に規定されるVH(重鎖可変ドメイン)のアミノ酸配列から誘導される。そのような結合ドメインはネコNGFの標的薬剤として用いることができる。
ある種のさらに別の実施態様では、本発明の抗ネコNGF抗体は、当該抗体をポリエチレングリコール(PEG)誘導体と反応させることによってPEG添加することができる。ある種の実施態様では、ネコ化又はキメラ抗体は脱フコシル化され、したがってフコース残基を欠く。
多様なさらに別の特徴では、本発明は、本発明のキメラ及びネコ化抗体、又は本発明の抗体のフラグメント及び結合メンバーをコードするポリヌクレオチド、及び特に単離ポリヌクレオチドに及ぶ。本明細書に規定するように、“ポリヌクレオチド”は、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを含み、前記は、未改変RNA若しくはDNAでも又は改変RNA若しくはDNAでもよく、一本鎖及び二本鎖RNA並びに一本鎖及び二本鎖領域の混合物であるRNAを含む(ただし前記に限定されない)。本発明のポリヌクレオチド(例えば本発明の1つのポリペプチド又は複数のポリペプチドをコードする)には、その対立遺伝子変種及び/又はそれらの相補物(そのようなヌクレオチド配列と中等度の又は高いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含む)が含まれる。
さらに別の結合分子には、アフィボディ分子(米国特許5,831,012号)、DARPin(設計されたアンキリンリピートタンパク質)(PCT国際特許出願公開公報WO 02/20565)及びアンチカリン(米国特許7,250,297号及びWO 99/16873)が含まれる。バーサボディ(Amunix、米国特許出願公開公報2007/0191272)は、ミクロプロテインと称される、15%を超えるシステイン残基を有する3−5kDaの小タンパク質であり、典型的にタンパク質が提示する疎水性コアと入れ替わった高密度ジスルフィド結合の足場を形成する。
本発明の抗体及び結合メンバーは化学的合成によって全体として又は部分として生成できる。例えば、本発明の抗体及び結合メンバーは、当業者に周知の技術(例えば標準的な液体ペプチド合成又は固相ペプチド合成の方法)によって調製できる。或いはまた、本抗体及び結合メンバーは、液相ペプチド合成技術を用いて、又はさらに固相、液相及び溶液化学の組合せによって調製できる。
本発明はさらに、本発明の抗体を含む少なくとも1つのアミノ酸をコードする核酸を、所望のペプチド又はポリペプチドがコードされ得る適切な発現系で発現させることによって本発明の抗体又は結合メンバーを生成することに及ぶ。例えば、軽鎖アミノ酸をコードする核酸及び重鎖アミノ酸をコードする第二の核酸を発現させ、本発明の抗体を提供することができる。
したがって、本発明のある種のさらに別の特徴では、本発明の抗体又は結合メンバーを形成するアミノ酸配列をコードする核酸が提供される。
典型的には、本発明の抗体又は結合メンバーを形成するアミノ酸配列をコードする核酸は、単離形若しくは精製形で提供されるか、又は天然では当該核酸に付随し得る物質を実質的に含まない(ただし例外として1つ以上の調節配列を有する)形態で提供され得る。本発明の抗体又は結合メンバーを発現する核酸は全体として又は部分として合成でき、前記にはDNA、cDNA及びRNAが含まれ得るが、ただしこれらに限定されない。
多様な種々の宿主細胞でポリペプチドをクローニング及び発現させる系は良く知られている。適切な宿主細胞には、細菌、哺乳動物細胞、酵母、昆虫及びバキュロウイルス系が含まれる。異種ポリペプチドの発現に当業界で利用可能な哺乳動物細胞株には、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、HeLa細胞、ベビーハムスター腎細胞及びNS0マウスミエローマ細胞が含まれる。一般的で好ましい細菌宿主は大腸菌(E. coli)である。抗体及び抗体フラグメントの原核細胞(例えばE. coli)での発現は当業界では良く確立されている。
培養真核細胞での発現もまた、結合メンバーの生成のための選択肢として当業者には利用可能である。
抗体を生成する一般的な技術は当分野の業者には周知であり、そのような方法は、例えば以下で考察されている:Kohler and Milstein (1975) Nature 256: 495-497;米国特許4,376,110号;Harlow and Lane, Antibodies: a Laboratory Manual, (1988) Cold Spring Harbor。組換え抗体分子の調製技術は、上記の参考文献に及び例えば欧州特許0,368,684号にも記載されている。
さらにまた、抗体の重鎖可変ドメイン及び/又は軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、天然に存在する重鎖可変ドメイン及び/又は軽鎖可変ドメイン又はその変異体をコードする真性の配列を有する、酵素的に又は化学的に合成された核酸であり得る。
本発明の抗体は、組換え手段によって、直接的に生成されるだけでなく異種ポリペプチドとの融合ポリペプチドとしても生成することができる(前記異種ポリペプチドは、好ましくはシグナル配列又は成熟タンパク質若しくはポリペプチドのN-末端に特異的な切断部位を有する他のポリペプチドである)。優先的に選択される異種シグナル配列は、宿主細胞によって認識されプロセッシングされる(すなわちシグナルペプチダーゼによって切断される)ものである。本来の抗体のシグナル配列を認識及びプロセッシングしない原核宿主細胞については、シグナル配列は、例えばアルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ipp又は熱安定性エンテロトキシンIIリーダーの群から選択される原核細胞シグナル配列によって代用される。
抗体、結合メンバー及び核酸は希釈剤又はアジュバントとともに処方することができ、さらに実用的な目的のために単離された形態で提供されると考えられる。例えば、抗体及び結合メンバーは、マイクロアッセイで使用されるマイクロタイタープレートの被覆に用いられる場合にはゼラチン又は他の担体と混合できる。また前記は、診断又は治療で用いられるときには医薬的に許容できる担体又は希釈剤と混合されるであろう。抗体又は結合メンバーは、自然の状態で又は異種真核細胞(例えばCHO又はNSO細胞)系によってグリコシル化されていてもよく、またそれらは(例えば原核細胞での発現によって生成される場合には)グリコシル化されてなくてもよい。
抗ネコNGFネコ化抗体分子を含む不均質調製物もまた本発明の部分を形成する。例えば、そのような調製物は、完全長の重鎖及びC-末端リジンを欠く重鎖を有する抗体、種々の程度のグリコシル化を示す抗体、及び/又は誘導アミノ酸(例えばピログルタミン酸残基の形成のために環化されたN-末端グルタミン酸)を有する抗体の混合物であり得る。
典型的には、本発明の医薬組成物は、液体処方物、凍結乾燥処方物、液体として再構成される凍結乾燥処方物、又はエーロゾル処方物として処方される。ある種の実施態様では、処方物中の抗体は、約5mg/mLから約250mg/mL、約0.5mg/mLから約45mg/mL、約0.5mg/mLから約100mg/mL、約100mg/mLから約200mg/mL、又は約50mg/mLから約250mg/mLの濃度で存在する。
ある種の実施態様では、処方物はさらに緩衝剤を含む。典型的には,処方物のpHは約pH5.5から約pH6.5である。ある種の実施態様では、緩衝剤は約4mMから約60mMのヒスチジン緩衝液、約5mMから約25mMのコハク酸緩衝液、又は約5mMから25mMの酢酸緩衝液を含むことができる。ある種の実施態様では、緩衝液は、約10mMから300mMの濃度、典型的には125mM周辺の濃度の塩化ナトリウム、及び約5mMから50mM、典型的には25mMの濃度のクエン酸ナトリウムを含む。ある種の実施態様では、処方物はさらに0%ちょうどから0.2%の濃度の界面活性剤を含むことができる。ある種の実施態様では、界面活性剤は、ポリソルベート-20、ポリソルベート-40、ポリソルベート-60、ポリソルベート-65、ポリソルベート-80、ポリソルベート-85及び前記の組合せから成る群から選択される(ただしこれらに限定されない)。好ましい実施態様では、界面活性剤はポリソルベート-20であり、さらに約125mMの濃度の塩化ナトリウム及び約25mMの濃度のクエン酸ナトリウムを含むことができる。
本発明の抗体又は結合メンバーは単独で投与できるが、好ましくは医薬組成物として投与されるであろう。前記医薬組成物は、一般的には意図する投与経路にしたがって選択される医薬的に許容できる適切な賦形剤、希釈剤又は担体を含むであろう。適切な医薬担体の例には、水、グリセロール、エタノールなどが含まれる。
本発明のモノクローナル抗体又は結合メンバーは、任意の適切な経路により治療の必要があるネコ患畜に投与できる。典型的には、組成物は注射又は輸液により非経口的に投与できる。非経口的投与の好ましい経路の例には以下が含まれる(ただしこれらに限定されない):静脈内、心臓内、動脈内、腹腔内、筋肉内、腔内、皮下、経粘膜、吸入又は経皮投与。投与経路はさらに、局所及び経腸、例えば粘膜(肺を含む)、口、鼻、直腸を含むことができる。
組成物が、注射用組成物として(例えば静脈内、皮内又は皮下適用で)デリバーされる実施態様では、活性成分は非経口的に許容できる水溶液(発熱因子を含まず適切なpH、張度及び安定性を有する)の形態として存在し得る。当業者は、例えば等張なビヒクル(例えば塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液又は乳酸リンゲル注射液)を用いて適切な溶液を容易に調製できる。保存料、安定化剤、緩衝剤、抗酸化剤及び/又は他の添加物も必要に応じて含むことができる。
組成物はまた微小球、リポソーム、他の微粒子デリバリー系、又は血液を含むある種の組織に配置される持続放出処方物により投与され得る。
本発明の抗体及び組成物は、典型的には“治療的に有効な量”で対象動物に投与される(この量は当該組成物が投与される対象動物に利益を示すために十分な量である)。投与される実際の用量並びに投与の頻度及びタイムコースは、治療される症状の性質及び重篤性とともに、治療される対象動物の年齢、性別及び体重の他に投与経路に左右され、当然それらを参考にして決定できる。さらにまた当然の斟酌が、組成物の特性、例えばその結合活性及びin vivo血中寿命、処方物中の抗体又は結合メンバーの濃度とともにデリバリーの経路、部位及び頻度に対して払われるべきである。
対象動物に実施できる投薬レジメンの例は以下を含む群から選択できる(ただしこれらに限定されない):1μg/kg/日から20mg/kg/日、1μg/kg/日から10mg/kg/日、10μg/kg/日から1mg/kg/日。ある種の実施態様では、投薬は、1μg/kgから100μg/kgの抗体血中濃度が得られるものであろう。しかしながら実際の組成物の投与用量並びに投与の頻度及びタイムコースは、治療される症状の性質及び重篤性に左右されるであろう。治療の処方(例えば投薬量の決定など)は、最終的には獣医学技術者及び他の獣医師の対応能力の範囲内及び自由裁量にあり、治療される疾患、個々の患畜の状態、デリバリー部位、投与方法、及び技術者に公知の他の要因が考慮されるであろう。
特段に規定されなければ、本明細書で用いられる全ての技術用語及び学術用語は、本発明の分野の業者が一般的に理解する意味と同じ意味を有する。
本明細書を通して、文脈が特段に要求しないかぎり、“含む”若しくは“含有する”又は変型、例えば“含み”若しくは“含有し”は、記述された整数又は整数群を含むが、任意の他の整数又は整数群も排除しないことを暗示する。
本明細書で用いられるように、例えば“a”、“an”及び“the”という用語は、文脈がそうでないことを明瞭に要求しないかぎり単数及び複数の該当語を含む。したがって、例えば、“活性薬剤”又は“薬理学的に活性な薬剤”と言えば、ただ1つの活性薬剤だけでなく2つ以上の組み合わされた異なる活性薬剤を含み、一方、“a carrier”と言えば、ただ1つの担体と同様に2つ以上の担体の混合物も含まれる。
手術痛又は術後痛に関して、米国動物福祉法(Animal Welfare Act 2002. AWA regulations, CFR, Title 9 (Animals and Animal Products), Chapter 1 (Animal and Plant Health Inspection Service, Department of Agriculture). Subchapter A (Animal Welfare), Parts 1-4)は、痛みを伴う処置とは、当該処置を適用される人間の軽度の又は瞬間的な痛み又は苦痛(すなわち、注射又はそれより軽度の他の処置によって引き起こされる痛みよりも強い痛み)を超えるものを引き起こすことが合理的に予想される任意の処置であると規定する。したがって、ネコが痛みを伴う外科手術を受ける場合、当該動物は術後鎮痛剤を投与されるべきである。
さらに別の例では、ネコは、付随する症状、例えば関節炎、例えば慢性関節リウマチ、炎症、変形性関節症又は癌性若しくは悪性症状の結果として強い又は慢性の痛みを体験し続ける可能性がある。
本明細書で用いられる“相補性決定領域(CDR)”という用語は、本来の免疫グロブリン結合部位の天然のFv領域の結合親和性及び特異性を共同して規定するアミノ酸配列を指し、前記はKabatら(Kabat,E.A., Wu,T.T., Perry,H., Gottesman,K. and Foeller,C. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition. NIH Publication No. 91-3242)によって正確に示された。本明細書で用いられる“フレームワーク領域(FR)”という用語は、CDRの間に介在するアミノ酸配列を指す。抗体のこれらの部分は、CDRを適切な向きで保持する(CDRが抗原と結合することを可能にする)ために機能する。
本明細書で用いられる“キメラ抗体”という用語は、2つの異なる抗体(典型的には異なる種に由来する)に由来する配列を含む抗体を指す。典型的には、キメラ抗体は、ドナー種に由来する可変ドメイン(標的エピトープに特異的に結合する)及び当該抗体が投与される標的種から得られた抗体に由来する定常ドメインを含む。本発明のキメラ抗体は、ラット抗体に由来する重鎖及び軽鎖可変ドメイン、並びにネコ抗体に由来する軽鎖及び重鎖定常ドメインを含む。
本明細書で用いられる“免疫原性”という用語は、受容動物に投与されたときに、標的タンパク質又は治療的部分の免疫応答(液性又は細胞性)を誘引する能力の強さを指す。本発明は対象のネコ化抗体の免疫原性に関する。好ましくは、本発明の抗体は免疫原性をもたず(すなわち、ネコに投与されたときそれらに対して中和抗体は生じないであろう)、さらに前記抗体のFc領域によってエフェクター機能は媒介されない。
本明細書で用いられる“同一性”又は“配列同一性”という用語は、アラインメントを実施した配列の個々の任意のアミノ酸残基位置で、アミノ酸残基が当該アラインメント実施配列間で同一であることを意味する。本明細書で用いられる“類似性”又は“配列類似性”という用語は、アラインメントを実施した配列の個々の任意の位置で、アミノ酸残基が当該配列間で類似のタイプであることを示す。例えば、イソロイシン又はバリンはロイシンに置換され得る。前記は保存的置換と称することができる。好ましくは、本発明のアミノ酸配列を当該配列に含まれるアミノ酸残基のいずれかの保存的置換によって改変するとき、これらの改変は、生じた抗体の結合特異性又は機能的活性に対して未改変抗体と比較して全く影響を及ぼさない。
本明細書で用いられるように、第二のアミノ酸残基に対して“最高の相同性”を有するアミノ酸残基と言えば、当該第二のアミノ酸残基と共通であるもっとも多くの特徴又は特性を有するアミノ酸残基を指す。あるアミノ酸残基が第二のアミノ酸残基と最高の相同性を有するか否かを決定するとき、典型的には、複数の因子、例えば電荷、極性、疎水性、サイドアームの質量及びサイドアームの大きさ(ただしこれらに限定されない)に関して評価を実施することができる。
第一の配列の個々のアミノ酸残基と一致する位置で第二の配列に存在するアミノ酸残基を指すために本明細書で用いられる“対応する位置”という用語は、2つの配列間で最大の配列同一性が可能となるように2つの配列でアラインメントを実施したとき、第一の配列の位置と同じ位置である第二の配列の位置を指すことが意図される。対応する位置のアミノ酸残基は同じKabat番号付与を有する。
“ポリペプチド”、“ペプチド”又は“タンパク質”という用語は、本明細書では互換的に用いられ、隣接残基のアルファ-アミノ基とカルボキシ基との間のペプチド結合によって互いに連結された線状の一列のアミノ酸残基を指す。アミノ酸残基は通常は天然の“L”異性体型である。しかしながら、当該ポリペプチドが所望の機能的特性を維持するかぎり、“D”異性体型の残基で任意のL-アミノ酸残基を置換することができる。
本明細書で規定されるように、“抗体”は、問題の標的抗原(この場合はネコ神経成長因子)と特異的に結合する抗原結合タンパク質(組換えにより調製される1つ以上のポリペプチドを有する)、又は免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによって遺伝的にコードされる抗原結合タンパク質を包含する。“抗体”という用語は、モノクローナル抗体及びキメラ抗体、特にウマ化抗体を包含し、さらにまたポリクローナル抗体又は任意のクラス若しくはサブタイプの抗体を包含する。“抗体”はさらにハイブリッド抗体、二重特異性抗体、ヘテロ抗体、及び抗原結合を維持する前記の機能的フラグメントに及ぶ。
本明細書で規定されるように、“feline(ネコ科の動物)”はまた“cat(ネコ)”を指すことができる。Felineは二名法のフェリス・カツス(Felis catus)をもつ亜種のカテゴリーに分類でき、前記にはフェリス・カツス・ドメスチカ(Felis catus domestica)及びフェリス・シルベストリス・カツス(Felis silvestris catus)が含まれる。ネコ科の動物には家畜化された任意のネコが含まれ、さらに飼育血統及び家ネコ品種が含まれ、後者はまた愛玩動物又はコンパニオンアニマルとも称される。
本発明を以下の実施例を参照しながらこれから説明するであろう。これらの実施例は例証のために提供され、本発明を限定するものと解されることを意図しない。
軽鎖(配列番号:1(feN-chi-LC1))及び重鎖(配列番号:2(feN-chi-HC2))をCHO細胞でpcDNA3.1ベクターから同時発現させ、ネコ及びネズミNGFとの結合について上清をELISAによって試験した(二次抗ネコIgGポリクローナル抗体-HRPコンジュゲートを使用)。モックpcDNA3.1ベクター単独トランスフェクトCHO細胞の上清をコントロール(Mock)として用いた。
結果を図1に示す(1A−ネコNGFとの結合、1B−ネズミNGFとの結合)。これらの結果は、キメラ抗NGFモノクローナル抗体(Mab)とネコ及びネズミ両NGF との結合について明瞭なシグナルの検出を示している。
プロテインAアフィニティカラムを用いて上清を精製し、溶出ピークをUV吸収により識別し、SDS-PAGEによって分析した。結果を図2に示す。図2Aは、キメラ抗体はプロテインAで精製できることを示す。図2Bは、キメラネコMAbは重鎖及び軽鎖の両方の存在によって染色ゲルで同定されたことを示す。
ネコ化可変ドメイン配列をC-末端ネコ定常重鎖又は定常軽鎖配列と結合させることによって、全抗体配列を作製した。
前記合体アミノ酸配列を、最適コドン精選及び完全に化学的な遺伝子合成によって哺乳動物細胞で発現可能な形態に変換し、哺乳動物細胞発現ベクターpcDNA3.1+でクローニングした。
得られたcDNAをCHO細胞にトランスフェクトし、以下の実施例で詳述するように上清を分析した。
ネコ化重鎖(配列番号:6)及び軽鎖(配列番号:5)cDNAの結合物をCHO細胞にトランスフェクトして上清を採集し、ELISAフォーマットでネコNGF又はネズミNGF と反応させた。インキュベーション及び洗浄工程の後で、結合したネコ化抗体を、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)結合ヤギ抗ネコIgG特異的ポリクローナル抗体との反応によって検知し、TMBを用いて現像した。得られた生成物の光学密度を450nmで測定し、偽空ベクターをトランスフェクトしたものの上清(図1で“Mock”と表示)の光学密度と比較した。
結果を図3に示す。図3Aは、ネコ化抗体はネコNGFと結合することを示す。図3Bは、ネコ化抗体はネコNGFとの結合と同じ親和性でネズミNGFと結合することを示す。
トランスフェクトCHO細胞上清のネコ化抗NGF MAb(実施例3)を、プロテインAアフィニティカラムを用いて精製し、溶出ピークをUV吸収により識別し、SDS-PAGEによって分析した。(LHS)feN-HC2及びfeN-kLC1発現構築物をコトランスフェクトしたCHO細胞由来MAbのプロテインAアフィニティクロマトグラフィーによる精製プロフィール。(RHS)ピーク分画のクマシーブルー染色SDS-PAGE。ある程度の微量の軽鎖分解が観察された。
結果を図4に示す。図4Aは、ネコ化抗体はプロテインAで精製できることを示す。図4Bは、ネコ化抗体の重鎖及び軽鎖(feN-chi-HC2(IgG2重鎖)及びfeN-chi-kLC1(軽鎖))を表すバンドをもつゲルを示す。
実施例4のCHO細胞トランスフェクタント上清の連続希釈(‘アンタゴニスト’)を、0.3ng/mLのNGFの存在下でTF-1細胞とともにインキュベートした。生じた増殖をチミジン取り込みによって測定した。
結果(図5)は、ネコ化抗NGF MAbをトランスフェクトしたCHO細胞の上清によるNGF誘発増殖の明瞭な阻害を示している。
実施例4のCHO細胞トランスフェクタント上清を0.1ng/mLのNGFで被覆した抗体捕捉プレートでインキュベートした。このプレートを洗浄し、続いてヒト血清とともにインキュベートし、結合した補体C1qを抗ヒトC1qポリクローナル抗体HRPの結合によって測定し、上記のように現像した。http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12376111
補体結合方法:
プレートを5μg/mLのマウスNGFを用い100μL/ウェルで被覆し、さらに5%のBSA/PBSで封鎖した。被覆ウェルをPBS/1%BSAで希釈した組換えネコ化抗NGF IgGを含む細胞培養上清とともに、1時間室温でインキュベートした(100μL/ウェル)。このプレートを洗浄し、さらにヒト血清(100μL/ウェル)とともに1時間室温でインキュベートした。前記ヒト血清は、ベロナール緩衝食塩水(0.5mM MgCl2、2mM CaCl2、0.05% Tween-20、0.1%ゼラチン及び0.5% BSAを含む)で1/100に希釈された。洗浄後、プレートを100μLのヒツジ抗C1q-HRP(Serotec)(PBS/1%BSAで1/800に稀釈)とともにインキュベートした。洗浄後、100μLのTMB基質(Thermo Scientific)を添加してプレートを現像した。現像反応を100μLのH2SO4(2N)の添加によって停止させ、吸収を450nmで測定した。
結果を図6に示す。これらの結果は、驚くべきことにfeN-chi-HC2(IgG2)重鎖を有するネコ化抗体は補体固定に活性を示さないことを示している。したがって、全く驚くべきことに、本発明の抗体がHC2サブタイプのネコ由来重鎖を有する場合、当該抗体とネコNGFとの結合は、補体の活性化又は他の下流エフェクター機能(例えばADCC)をもたらさないことがここで示された。したがって、前記抗体は、ネコNGF と膜結合TrkA又はp75レセプターとの結合を妨げることによってネコNGFの生物学的機能の活性と拮抗して、付随する下流の細胞内シグナリングカスケードを阻害する。さらにまた、NGF発現はしばしば神経の基部などで発生するので、本発明のNGF拮抗又は中和抗体(ネコ由来HC2(IgG2)重鎖を有し、より広範囲の免疫応答を誘導することなくネコNGFの生物学的活性を封鎖する)の能力は極めて所望されることであり、しかも予想に反することである。
表1から8は、抗NGF抗体の完全なネコ型が、ネコグロブリン配列(特にネコ軽鎖(この事例ではただ1つの軽鎖が比較のために用いられた))の限定的セットとの比較によるペチセーションによって創出できることを示している。直接的シークェンシング及びデータベースの掘り起こしによって、追加されるネコ免疫グロブリンカッパ軽鎖及び重鎖cDNAが誘導され、αD11抗体配列との比較に用いられた。表9−16は、これらコンパレーターの追加はラットαD11とネコIgGとの間の相同なマッチ数を増加させ、したがってαD11可変フレームワーク配列をネコ化変種に変換するために必要な変更数を減少させることを示す。表9−16は、“セット1”配列として表1−8の配列変種を、さらに“セット2”ネコ配列として新たなcDNAシークェンシング及びデータベース掘り起こしに由来する追加の配列を含む。表1−8の好ましいネコ化抗NGFフレームワーク配列には“feN”と注釈が付され、“セット2”ネコ配列との比較による好ましいネコ化抗NGFフレームワーク配列には“feN2”と注釈が付される。また別のネコ抗NGF免疫グロブリン重鎖(feN2-VH)及びカッパ軽鎖(feN2-Vk)タンパク質配列は、図13、14、15及び16(配列番号:22−25)に示される。
本発明の抗ネコモノクローナル抗体をCHO細胞で発現させ、プロテインAクロマトグラフィー及び/又はサイズ排除クロマトグラフィーとの組み合わせによって精製し、さらにリン酸緩衝食塩水で緩衝液交換を実施する。前記抗体を0.01−10mg/kg体重でネコの静脈内に注射し、獣医の目視精査による毒性徴候、体重変化、体温及び血液生化学について評価する。上記において又はいずれの血液生化学分析物においても観察される変化は期待されない。
本発明の抗ネコモノクローナル抗体をCHO細胞で発現させ、プロテインAクロマトグラフィー及び/又はサイズ排除クロマトグラフィーとの組み合わせによって精製し、さらにリン酸緩衝食塩水への緩衝液交換を実施する。前記抗体を0.01−10mg/kg体重でネコの静脈内に注射し、血漿サンプルを次の2週間にわたって種々の時間に採取する。稀釈血漿サンプルを抗ネコNGF抗体濃度について、標的としてNGFを抗ネコポリクローナル抗体-セイヨウワサビペルオキシダーゼ二次試薬とともに用いELISAにより評価する。測定血中濃度は二相カイネティクスに一致し、数日間の組織分布(アルファ)相及び排除(ベータ)相を示す。
100から300時間の間には、抗ネコNGF抗体濃度の血中濃度に急激な低下が存在しないことが予想される。このことは、ネコ血液中に組換え抗NGFモノクローナル抗体に対する既存の中和抗体も輸液後に生成される中和抗体も全く存在しないことを示していよう。
炎症のネコモデル:
ネコの一本の肢のフットパッドに前炎症薬剤(例えばカオリン)を注射し(=-1日目)、約24時間後に開始し当該ネコを一次的に跛行に至らしめる自家消散炎症を発生させる。このモデルではいったんカオリンに対する初期炎症応答が低下すると、約1−2週間の期間にわたって着実にネコの跛行が緩和され、続いて完全に回復する。
ネコのグループに本特許の抗ネコNGFモノクローナル抗体(0.01−10mg/kg体重)又はビヒクルコントロールとしてリン酸緩衝食塩水を静脈内注射する(=0日目)。前記のネコを以下の目視採点方法により4−14日にわたって跛行について評価する:例えばスコア0、跛行無し(完全な体重保持);スコア1、わずかな跛行(完全な体重保持ではないが良好に歩行する);スコア2、軽度の跛行(わずかに体重保持し歩行は良好ではない)、スコア3、重度の跛行(体重を保持できない)。観察者はどのネコがどの注射を受けているか知らされていない。
跛行スコアは、ビヒクルコントロールと比較して、注射後2−4日目までに抗ネコNGFモノクローナル抗体を投与されたネコで軽減されると予想され、抗ネコNGFモノクローナル抗体が、ビヒクル単独で観察される効果よりもネコで痛みを軽減する効果を有することを示唆する。
抗体療法:
本発明の抗体を調製する方法を適用して、イヌでの使用に適切なイヌ化抗体を生成した。イヌ化αD11 VLドメインをイヌカッパ軽鎖定常ドメインに結合させ、さらにイヌ化αD11 VHドメインをイヌ重鎖アイソタイプに結合させた。重鎖及び軽鎖を発現する発現ベクターに由来する抗イヌNGFモノクローナル抗体をCHO細胞で発現させ、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィーの組合せによって精製し、さらにリン酸緩衝食塩水に緩衝液交換した。
炎症のイヌモデル:
全ての実験は院内倫理委員会(CRL, Ireland)の事前の承認の下に実施された。ビーグル犬の一方の後肢のフットパッドにカオリンを注射し(=-1日目)、約24時間後に開始し当該イヌを一次的に跛行に至らしめる自家消散炎症を発生させた。このモデルではいったんカオリンに対する初期炎症応答が低下すると、約1−2週間の期間にわたって着実にイヌの跛行が緩和され、続いて完全に回復する。
3匹のイヌのグループに抗イヌNGFモノクローナル抗体(200μg/kg体重)又はビヒクルコントロールとしてリン酸緩衝食塩水を静脈内注射した(=0日目)。前記のイヌを以下の目視採点方法により7日間跛行について評価した:スコア0、跛行無し(完全な体重保持);スコア1、わずかな跛行(完全な体重保持ではないが良好に歩行する);スコア2、軽度の跛行(わずかに体重を保持し歩行は良好ではない)、スコア3、重度の跛行(体重を保持できない)。観察者はどのイヌがどの注射を受けているか知らされてなかった。
結果を図17に示す。跛行スコアは、ビヒクルコントロールと比較して、注射後3日目までに抗NGFモノクローナル抗体を投与されたイヌで軽減され、抗NGFモノクローナル抗体が、ビヒクル単独で観察される効果よりもイヌで痛みを軽減する効果を有することを示している。この長期に及ぶ活性は、抗イヌNGFモノクローナル抗体の血中薬理学動態と一致する(前記動態は、約30時間のゆっくりとした組織分布(アルファ)相及び相対的に貧弱なフットパッド領域の血管形成を示した)。図17に提示した結果は、本発明の方法によって調製した抗イヌNGF抗体はイヌで炎症痛を軽減し、その結果、跛行を緩和することを示している。
本明細書に引用した全ての文書類は参照により本明細書に含まれる。本発明に記載した実施態様の多様な改変及び変型が、本発明の範囲を逸脱することなく当業者には明白であろう。本発明を特定の好ましい実施態様との関連でこれまで説明してきたが、特許請求の範囲に記載した本発明はそのような個々の実施態様に限定されるべきではないことは理解されよう。実際のところ、本発明の実施に関して記載した態様の当業者に明白な多様な改変は本発明に包含される。
Claims (16)
- −ネコ以外の種に由来するドナー抗体を提供する工程であって、当該ドナー抗体がネコに存在するある標的抗原に対して結合特異性を有する、前記工程;
−当該ドナー抗体のフレームワーク領域のアミノ酸配列の各アミノ酸残基を、複数のネコ抗体のフレームワーク領域のアミノ酸配列の対応する位置に存在する各アミノ酸残基と比較して、当該複数のいずれのネコ抗体のフレームワーク領域のアミノ酸配列内の対応する位置の1つ以上のアミノ酸残基と異なる、当該ドナー抗体のフレームワーク領域のアミノ酸配列内の1つ以上のアミノ酸残基を同定する工程;及び
−当該ドナー抗体のフレームワーク領域において同定された当該1つ以上のアミノ酸残基のみを、当該複数のネコ抗体の対応する位置に存在する1つ以上のアミノ酸残基の一つと置換して改変抗体を作製する工程を含む、ネコで使用される適切な抗体を調製する方法であって、
前記改変抗体はフレームワーク領域内のいずれの位置においても、ネコでは当該位置で外来性であるようなアミノ酸を全く含まず、
前記改変抗体はネコ神経成長因子(NGF)と特異的に結合することができ、ネコNGFのp75ネコNGFレセプターおよび/またはTrkAネコNGFレセプターへの結合能を阻害することができる、
前記方法。 - ネコ神経成長因子(NGF)と特異的に結合でき、ネコNGFのp75ネコNGFレセプターおよび/またはTrkAネコNGFレセプターへの結合能を阻害できる抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
配列番号:3のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、を含む軽鎖可変領域であって、RASEDIYNALA(配列番号3の残基24〜34)からなるCDR1配列、NTDTLHT(配列番号3の残基50〜56)からなるCDR2配列およびHYFHYPRT(配列番号3の残基90〜97)からなるCDR3配列、を含む前記軽鎖可変領域、
及び、
配列番号:4のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、を含む重鎖可変領域であって、NNNVN(配列番号4の残基31〜35)からなるCDR1配列、GVWAGGATDYNSALK(配列番号4の残基50〜64)からなるCDR2配列およびDGGYSSSTLYAMDA(配列番号4の残基98〜111)からなるCDR3配列、含む前記重鎖可変領域、
を含み、
フレームワーク領域内のいずれの位置においても、ネコでは当該位置で外来性であるようなアミノ酸を全く含まない、前記抗体又はその抗原結合フラグメント。 - 軽鎖可変領域が配列番号:3のアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域が配列番号:4のアミノ酸配列を含む、請求項2記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
- 軽鎖が、配列番号:5のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の同一性を有する
アミノ酸配列、を含み、重鎖が、配列番号:6のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の配列同一性を有するアミノ酸配列、を含む、請求項2記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。 - 軽鎖が、配列番号:5のアミノ酸配列を含み、重鎖が、配列番号:6のアミノ酸配列を含む、請求項4記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
- 軽鎖が、配列番号:25のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の同一性を有する
アミノ酸配列、を含み、重鎖が、配列番号:24のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の配列同一性を有するアミノ酸配列、を含む、請求項2記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。 - 軽鎖可変領域が配列番号:23のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、を含み、重鎖可変領域が配列番号:22のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、を含む、請求項2記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
- 軽鎖可変領域が配列番号:23のアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域が配列番号:22のアミノ酸配列を含む、請求項2記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
- ネコ神経成長因子(NGF)と特異的に結合でき、ネコNGFのp75ネコNGFレセプターおよび/またはTrkAネコNGFレセプターへの結合能を阻害できる、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
RASEDIYNALA(配列番号3の残基24〜34)からなるCDR1配列、NTDTLHT(配列番号3の残基50〜56)からなるCDR2配列およびHYFHYPRT(配列番号3の残基90〜97)からなるCDR3配列、
配列番号:26のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の配列同一性を有する配列、からなるFR1フレームワーク領域、
配列番号:27のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の配列同一性を有する配列、からなるFR2フレームワーク領域、
配列番号:28のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の配列同一性を有する配列、からなるFR3フレームワーク領域、及び、
配列番号:29のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の配列同一性を有する配列、からなるFR4フレームワーク領域、
を含む軽鎖可変領域、及び、
NNNVN(配列番号4の残基31〜35)からなるCDR1配列、GVWAGGATDYNSALK(配列番号4の残基50〜64)からなるCDR2配列およびDGGYSSSTLYAMDA(配列番号4の残基98〜111)からなるCDR3配列、
配列番号:30のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の配列同一性を有する配列、からなるFR1フレームワーク領域、
配列番号:31のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の配列同一性を有する配列、からなるFR2フレームワーク領域、
配列番号:32のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の配列同一性を有する配列、からなるFR3フレームワーク領域、及び、
配列番号:33のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の配列同一性を有する配列、からなるFR4フレームワーク領域、
を含む重鎖可変領域、
を含み、
フレームワーク領域内のいずれの位置においても、ネコでは当該位置で外来性であるようなアミノ酸を全く含まない、
前記抗体又はその抗原結合フラグメント - 配列番号:26のアミノ酸配列からなるFR1フレームワーク領域、
配列番号:27のアミノ酸配列からなるFR2フレームワーク領域、
配列番号:28のアミノ酸配列からなるFR3フレームワーク領域、及び、
配列番号:29のアミノ酸配列からなるFR4フレームワーク領域、
を含む軽鎖可変領域、及び、
配列番号:30のアミノ酸配列からなるFR1フレームワーク領域、
配列番号:31のアミノ酸配列からなるFR2フレームワーク領域、
配列番号:32のアミノ酸配列からなるFR3フレームワーク領域、及び、
配列番号:33のアミノ酸配列からなるFR4フレームワーク領域、
を含む重鎖可変領域、
を含む、請求項9記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。 - 下流エフェクター機能を媒介しないように選ばれる、若しくはアミノ酸置換又は欠失の方法によって改変された重鎖定常ドメインを含む請求項2または9記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
- 抗体がHC2型ネコ定常ドメインを有する、請求項11記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
- 重鎖が、配列番号:6、配列番号:7、配列番号:17及び配列番号:18から成る群から選
択されるアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85%の配列同一性を有するアミノ酸配列、を含む、請求項12記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。 - 請求項2〜13いずれか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、医薬組成物。
- 請求項2〜13いずれか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントの、ネコにおいて、痛みの治療、または、変形性関節症、免疫媒介多発性関節炎若しくは関節リウマチに付随する痛みの治療、緩和、阻止、または、NGFによって増殖が誘発される腫瘍の治療のための医薬の製造における使用。
- 請求項2〜13のいずれか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント及びこれらの使用のための指示書を含む、ネコにおいて、痛みの治療、変形性関節症、免疫媒介多発性関節炎若しくは関節リウマチに付随する痛みの治療、緩和若しくは阻止、NGFによって増殖が誘発される腫瘍の治療のためのキット。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161483488P | 2011-05-06 | 2011-05-06 | |
US61/483,488 | 2011-05-06 | ||
US201161531439P | 2011-09-06 | 2011-09-06 | |
US61/531,439 | 2011-09-06 | ||
PCT/GB2012/051003 WO2012153122A1 (en) | 2011-05-06 | 2012-05-08 | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014519317A JP2014519317A (ja) | 2014-08-14 |
JP2014519317A5 JP2014519317A5 (ja) | 2016-07-21 |
JP6258194B2 true JP6258194B2 (ja) | 2018-01-10 |
Family
ID=46168540
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014509818A Active JP6258194B2 (ja) | 2011-05-06 | 2012-05-08 | 抗神経成長因子抗体並びに前記の製造及び使用方法 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9328164B2 (ja) |
EP (2) | EP3498732B1 (ja) |
JP (1) | JP6258194B2 (ja) |
KR (2) | KR20170070272A (ja) |
CN (1) | CN103732621B (ja) |
AU (1) | AU2012252152B2 (ja) |
BR (1) | BR112013028655B1 (ja) |
ES (1) | ES2704037T3 (ja) |
GB (1) | GB2504887B (ja) |
MY (1) | MY161394A (ja) |
RU (1) | RU2640254C2 (ja) |
SG (2) | SG10201500953YA (ja) |
WO (1) | WO2012153122A1 (ja) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11214610B2 (en) | 2010-12-01 | 2022-01-04 | H. Lundbeck A/S | High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as Pichia pastoris |
US9783601B2 (en) | 2010-12-01 | 2017-10-10 | Alderbio Holdings Llc | Methods of preventing inflammation and treating pain using anti-NGF compositions |
US9539324B2 (en) | 2010-12-01 | 2017-01-10 | Alderbio Holdings, Llc | Methods of preventing inflammation and treating pain using anti-NGF compositions |
US9884909B2 (en) | 2010-12-01 | 2018-02-06 | Alderbio Holdings Llc | Anti-NGF compositions and use thereof |
US9067988B2 (en) | 2010-12-01 | 2015-06-30 | Alderbio Holdings Llc | Methods of preventing or treating pain using anti-NGF antibodies |
US9078878B2 (en) | 2010-12-01 | 2015-07-14 | Alderbio Holdings Llc | Anti-NGF antibodies that selectively inhibit the association of NGF with TrkA, without affecting the association of NGF with p75 |
GB201114858D0 (en) | 2011-08-29 | 2011-10-12 | Nvip Pty Ltd | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of using the same |
US9580496B2 (en) | 2011-05-06 | 2017-02-28 | Nexvet Australia Pty Ltd | Therapeutic canine immunoglobulins and methods of using same |
US9499621B2 (en) | 2013-04-08 | 2016-11-22 | Cytodyn, Inc. | Felinized antibodies and methods of treating retroviral infections in felines |
PT3083694T (pt) | 2013-12-20 | 2024-02-01 | Intervet Int Bv | Anticorpos murinos caninizados anti-pd-1 canino |
BR112017006203A2 (pt) | 2014-09-30 | 2018-05-02 | Intervet International B.V. | anticorpos isolado, caninizado e monoclonal ou fragmento de ligação ao antígeno dos mesmos, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira, peptídeo antigênico isolado, proteína de fusão, composição farmacêutica, e, método de aumento da atividade de uma célula imune. |
BR112017025029A2 (ja) * | 2015-05-22 | 2018-08-07 | Astellas Pharma Inc. | New anti-human NGF antibody Fab fragmentation |
US11091556B2 (en) | 2015-12-18 | 2021-08-17 | Intervet Inc. | Caninized human antibodies to human IL-4R alpha |
US10093731B2 (en) | 2017-02-24 | 2018-10-09 | Kindred Biosciences, Inc. | Anti-IL31 antibodies for veterinary use |
BR112020017701A2 (pt) | 2018-03-12 | 2020-12-29 | Zoetis Services Llc | Anticorpos anti-ngf e métodos dos mesmos |
GB2578867A (en) * | 2018-10-09 | 2020-06-03 | Genome Res Ltd | Animal models and therapeutic molecules |
CN110283246A (zh) * | 2019-06-20 | 2019-09-27 | 长春西诺生物科技有限公司 | 一种抗猫细小病毒的猫源化基因工程抗体 |
EP4114856A4 (en) * | 2020-03-03 | 2023-11-22 | Scout Bio, Inc. | ANTIGEN BINDING MOLECULES AND USES THEREOF |
AU2022272427A1 (en) | 2021-05-12 | 2023-12-14 | Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. | Antigen binding molecule specifically binding to rankl and ngf, and medical use thereof |
Family Cites Families (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4376110A (en) | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
WO1990005144A1 (en) | 1988-11-11 | 1990-05-17 | Medical Research Council | Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors |
US6291158B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for tapping the immunological repertoire |
CA2022959C (en) * | 1989-08-10 | 2001-03-20 | Hiroaki Maeda | Cat-mouse heterohybridoma and gene fragment coding for constant region of feline immunoglobulin |
AU2238292A (en) | 1991-06-14 | 1993-01-12 | Xoma Corporation | Microbially-produced antibody fragments and their conjugates |
ATE408012T1 (de) | 1991-12-02 | 2008-09-15 | Medical Res Council | Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken |
GB9202796D0 (en) | 1992-02-11 | 1992-03-25 | Wellcome Found | Antiviral antibody |
SE9400088D0 (sv) | 1994-01-14 | 1994-01-14 | Kabi Pharmacia Ab | Bacterial receptor structures |
DE19742706B4 (de) | 1997-09-26 | 2013-07-25 | Pieris Proteolab Ag | Lipocalinmuteine |
EP1268794A2 (en) | 2000-04-07 | 2003-01-02 | Heska Corporation | Compositions and methods related to canine igg and canine il-13 receptors |
EP1332209B1 (en) | 2000-09-08 | 2009-11-11 | Universität Zürich | Collections of repeat proteins comprising repeat modules |
US20030157561A1 (en) | 2001-11-19 | 2003-08-21 | Kolkman Joost A. | Combinatorial libraries of monomer domains |
US7321026B2 (en) | 2001-06-27 | 2008-01-22 | Skytech Technology Limited | Framework-patched immunoglobulins |
US20030190705A1 (en) | 2001-10-29 | 2003-10-09 | Sunol Molecular Corporation | Method of humanizing immune system molecules |
CA2469833C (en) * | 2001-12-21 | 2008-05-20 | Idexx Laboratories, Inc. | Canine immunoglobulin variable domains, caninized antibodies, and methods for making and using them |
CA2516454A1 (en) * | 2003-02-19 | 2004-09-02 | Rinat Neuroscience Corp. | Methods for treating pain by administering a nerve growth factor antagonist and an nsaid and compositions containing the same |
ITRM20030601A1 (it) * | 2003-12-24 | 2005-06-25 | Lay Line Genomics Spa | Metodo per l'umanizzazione di anticorpi e anticorpi umanizzati con esso ottenuti. |
TWI367101B (en) * | 2004-04-07 | 2012-07-01 | Rinat Neuroscience Corp | Methods for treating bone cancer pain by administering a nerve growth factor antagonist |
US7462697B2 (en) | 2004-11-08 | 2008-12-09 | Epitomics, Inc. | Methods for antibody engineering |
ITRM20050290A1 (it) * | 2005-06-07 | 2006-12-08 | Lay Line Genomics Spa | Uso di molecole in grado di inibire il legame tra ngf e il suo recettore trka come analgesici ad effetto prolungato. |
WO2007038619A2 (en) | 2005-09-27 | 2007-04-05 | Amunix, Inc. | Proteinaceous pharmaceuticals and uses thereof |
CN101918549B (zh) * | 2008-01-11 | 2012-11-28 | 财团法人化学及血清疗法研究所 | 改良的人源化的抗-人α9-整联蛋白抗体 |
US8337842B2 (en) * | 2008-09-04 | 2012-12-25 | Vet Therapeutics, Inc. | Monoclonal antibodies |
JP2012515158A (ja) * | 2009-01-12 | 2012-07-05 | 武田薬品工業株式会社 | 癌の予防・治療剤 |
EP2411050A4 (en) | 2009-03-25 | 2013-07-17 | Vet Therapeutics Inc | ANTIBODY REGIONS WITH A CONSTANT DOMAIN AND THEIR USE |
WO2010117448A2 (en) | 2009-04-05 | 2010-10-14 | Provenance Biopharmaceuticals Corp. | Chimeric immunocytokines and methods of use thereof |
PL3333188T3 (pl) * | 2010-08-19 | 2022-05-09 | Zoetis Belgium S.A. | Przeciwciała anty-ngf i ich zastosowanie |
AU2014340035B2 (en) * | 2013-10-23 | 2018-07-26 | The Research Foundation Of The State University Of New York | Small molecule imaging of fungi by positron emission tomography scanning |
-
2012
- 2012-05-08 SG SG10201500953YA patent/SG10201500953YA/en unknown
- 2012-05-08 WO PCT/GB2012/051003 patent/WO2012153122A1/en active Application Filing
- 2012-05-08 EP EP18205428.8A patent/EP3498732B1/en active Active
- 2012-05-08 BR BR112013028655-5A patent/BR112013028655B1/pt active IP Right Grant
- 2012-05-08 SG SG2013081898A patent/SG194793A1/en unknown
- 2012-05-08 KR KR1020177016066A patent/KR20170070272A/ko not_active Application Discontinuation
- 2012-05-08 RU RU2013154301A patent/RU2640254C2/ru not_active Application Discontinuation
- 2012-05-08 ES ES12723731T patent/ES2704037T3/es active Active
- 2012-05-08 AU AU2012252152A patent/AU2012252152B2/en active Active
- 2012-05-08 US US14/115,787 patent/US9328164B2/en active Active
- 2012-05-08 KR KR1020137032544A patent/KR101783929B1/ko active IP Right Grant
- 2012-05-08 EP EP12723731.1A patent/EP2705055B1/en active Active
- 2012-05-08 JP JP2014509818A patent/JP6258194B2/ja active Active
- 2012-05-08 GB GB1320046.4A patent/GB2504887B/en active Active
- 2012-05-08 CN CN201280033596.4A patent/CN103732621B/zh active Active
- 2012-05-08 MY MYPI2013702080A patent/MY161394A/en unknown
-
2016
- 2016-03-28 US US15/082,541 patent/US20160272701A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3498732B1 (en) | 2021-11-17 |
GB2504887B (en) | 2016-02-03 |
EP2705055B1 (en) | 2018-11-14 |
AU2012252152B2 (en) | 2016-07-07 |
MY161394A (en) | 2017-04-14 |
SG194793A1 (en) | 2013-12-30 |
GB2504887A (en) | 2014-02-12 |
BR112013028655A8 (pt) | 2017-12-26 |
EP2705055A1 (en) | 2014-03-12 |
RU2640254C2 (ru) | 2017-12-27 |
KR20170070272A (ko) | 2017-06-21 |
BR112013028655A2 (pt) | 2016-11-29 |
EP3498732A1 (en) | 2019-06-19 |
US20140147439A1 (en) | 2014-05-29 |
US20160272701A1 (en) | 2016-09-22 |
CN103732621B (zh) | 2020-04-24 |
KR20140047048A (ko) | 2014-04-21 |
BR112013028655B1 (pt) | 2022-08-16 |
AU2012252152A1 (en) | 2013-11-14 |
WO2012153122A1 (en) | 2012-11-15 |
KR101783929B1 (ko) | 2017-10-11 |
US9328164B2 (en) | 2016-05-03 |
SG10201500953YA (en) | 2015-04-29 |
RU2013154301A (ru) | 2015-06-20 |
ES2704037T3 (es) | 2019-03-13 |
JP2014519317A (ja) | 2014-08-14 |
NZ617447A (en) | 2015-01-30 |
CN103732621A (zh) | 2014-04-16 |
GB201320046D0 (en) | 2013-12-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6732990B2 (ja) | 抗神経成長因子抗体並びに前記抗体の製造及び使用方法 | |
JP6258194B2 (ja) | 抗神経成長因子抗体並びに前記の製造及び使用方法 | |
KR101783398B1 (ko) | 항신경성 성장인자 항체 및 그의 제조방법과 이용방법 | |
JP6181043B2 (ja) | 抗神経成長因子抗体ならびにそれを調製および使用する方法 | |
CA2835094C (en) | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same | |
JP2014526902A (ja) | イヌ化腫瘍壊死因子抗体及びその使用方法 | |
EP4026845A1 (en) | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same | |
NZ617447B2 (en) | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150312 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150312 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160314 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20160602 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20160729 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20161205 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170306 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170517 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20171106 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20171206 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6258194 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |