JP2014519317A5

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Publication number: JP2014519317A5
Application number: JP2014509818A
Authority: JP
Filing date: 2012-05-08
Publication date: 2016-07-21
Anticipated expiration: 2032-05-08

Description

NGFはネコの組織で発現されるが、その配列の部分的なクローンしか利用できない。この部分的mRNA配列は、Genbank アクセッション番号EF06510（URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov. フェリス・カツス（Felis catus）神経成長因子ベータ様mRNA）で規定されている。ネコNGFに対するアンタゴニストはこれまで記載されたことはなく、痛みを予防又は緩和するためにネコでNGF媒介シグナリングの遮断を利用することについて記載されたこともない。他の種で抗NGFアンタゴニストとして作用する公知の抗体をネコで使用することは現実的ではないであろう。なぜならば、別の種で発現された神経成長因子と結合特異性を有する抗体がネコの神経成長因子とも結合するという保証はないからである。さらにまた、そのような投与抗体のいずれかに対して中和抗体が生成され得る可能性がある（なぜならばそのような抗体はネコ免疫系によって外来性と認識されるからである）。いかなる中和抗体生成も当該抗体のネコへの長期投与を制限するであろう。前記は、慢性痛関連症状又は癌性症状を治療するときに特に重要な要件である。さらにまた、別の種に由来する抗NGF抗体のネコへの投与は、当該抗体が最初に得られた種には存在しないがネコに存在する可能性がある他の標的エピトープと交差反応性を示すかもしれない。したがって、それらに対する中和抗体の生成は回避するが、ネコNGFのアンタゴニストとして作用し高レベルの結合親和性及びアビジチーを保持する、ネコの痛みの管理で使用される結合メンバーが強く希求される。

本発明の方法はネコで使用するためにドナー抗体を改変し、前記改変抗体が、そのフレームワーク領域内のいずれの位置においても、ネコでは当該位置で外来性であるようなアミノ酸を全く含まない態様で改変する。前記改変抗体は、したがって前記標的抗原に対してドナー抗体の特異性及び親和性を保持するが、重要なこととして、潜在的に外来性であるエピトープが生成されないように改変される。前記改変抗体はしたがってネコで外来性であるとはみなされず、（特に長期投与に続いて）抗体の効能の中和を生じ得る免疫応答をネコで誘発しない。
ある種の実施態様では、1つ以上の同定アミノ酸残基の置換工程は、前記置換される1つ以上のアミノ酸残基と最高の相同性を有する対応する位置に存在する1つ以上のアミノ酸残基で前記1つ以上の同定アミノ酸残基を置換する工程を含む。
ある種の実施態様では、本方法はさらに、ドナー抗体の重鎖及び／又は軽鎖の定常ドメインを、ネコ抗体由来の重鎖及び／又は軽鎖の定常ドメインで置換する工程を含む。典型的には、重鎖の定常ドメインはHC2型ネコ定常ドメインで入れ替えられる。
ある種の実施態様では、標的エピトープは神経成長因子（NGF）である。
本発明の第一の特徴の方法はCDR移植を含まない。本発明の第一の特徴の方法にしたがって調製される抗体は、ドナー抗体のCDR、本発明の第一の特徴の方法にしたがって調製されたネコ化フレームワーク領域及びネコ定常ドメインを含む。

ドナーの免疫グロブリンフレームワーク領域に存在するアミノ酸残基の置換が必要な場合、典型的には、置換は保存的置換の原則を用いて実施される（保存的置換では、アミノ酸残基は、ネコの当該Kabatの位置で無理がなく、さらにドナー配列の置換されるアミノ酸とサイズ、荷電及び疎水性が可能な限り密接な関係を有するアミノ酸残基で入れ替えられる）。その意図は、ドナー抗体の三次元構造に混乱又は破壊を引き起こさないか又は前記を最小にする入れ替えを選択することである。ある種の状況では、明瞭な選択肢が存在せず、各選択が利益及び不利益を有するであろう。最終的な決定には三次元モデリング又は多様な選択配列の発現さえ要求され得る。しかしながら、一般的には明瞭な優先性が利用可能であろう。この方法の結果として、ドナー配列の変更は、当該残基が標的内で外来性であるときにのみ実施され、入れ代わったアミノ酸は、前記が入れ替えたアミノ酸と可能な限り密接な関係を有する。したがって、外来性のエピトープの発生は回避されるが、全体的な三次元構造は保存され、結果として親和性及び特異性もまた保存される。
当該軽鎖及び重鎖定常領域はネコ（標的）由来抗体から誘導される。前記重鎖定常ドメインは、それらが下流のエフェクター機能を媒介しないように精選又は改変される。極めて驚くべきことには、本発明にしたがって生成された抗体に対して中和抗体は生成されないか又は最小限しか生成されないことが見出されたので、本発明の抗体は驚くべきことに、長期の循環半減期及び反復投与の選択肢に付随する利益を有することが判明した。さらにまた、フレームワーク残基の置換が、CDR領域の三次元構造に影響しないような態様で実施されるので、所望の標的に対する結合特異性に多様性は存在しないであろう。

Claims

−ネコ以外の種に由来するドナー抗体を提供する工程であって、当該ドナー抗体がネコに存在するある標的抗原に対して結合特異性を有する、前記工程；
−当該ドナー抗体のフレームワーク領域のアミノ酸配列の各アミノ酸残基を、複数のネコ抗体のフレームワーク領域のアミノ酸配列の対応する位置に存在する各アミノ酸残基と比較して、当該複数のいずれのネコ抗体のフレームワーク領域のアミノ酸配列内の対応する位置の1つ以上のアミノ酸残基と異なる、当該ドナー抗体のフレームワーク領域のアミノ酸配列内の1つ以上のアミノ酸残基を同定する工程；及び
−当該ドナー抗体で同定された当該1つ以上のアミノ酸残基のみを、当該複数のネコ抗体の対応する位置に存在する1つ以上のアミノ酸残基の一つと置換して改変抗体を作製する工程を含む、ネコで使用される適切な抗体を調製する方法であって、
前記改変抗体はフレームワーク領域内のいずれの位置においても、ネコでは当該位置で外来性であるようなアミノ酸を全く含まず、
前記改変抗体はネコ神経成長因子（NGF）と特異的に結合することができ、ネコNGFのp75またはTrkAネコNGFレセプターへの結合能を阻害することができる、
前記方法。
ネコ神経成長因子（NGF）と特異的に結合でき、ネコNGFのp75またはTrkAネコNGFレセプターへの結合能を阻害できる抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
配列番号：3のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85％の同一性を有するアミノ酸配列、を含む軽鎖可変領域であって、RASEDIYNALA（配列番号３の残基２４〜３４）を含むCDR1配列、NTDTLHT（配列番号３の残基５０〜５６）を含むCDR2配列およびHYFHYPRT（配列番号３の残基９０〜９７）を含むCDR3配列、を含む前記軽鎖可変領域、
及び、
配列番号：4のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85％の同一性を有するアミノ酸配列、を含む重鎖可変領域であって、NNNVN（配列番号４の残基３１〜３５）を含むCDR1配列、GVWAGGATDYNSALK（配列番号４の残基５０〜６４）を含むCDR2配列およびDGGYSSSTLYAMDA（配列番号４の残基９８〜１１１）を含むCDR3配列、含む重鎖可変領域、
を含み、
フレームワーク領域内のいずれの位置においても、ネコでは当該位置で外来性であるようなアミノ酸を全く含まない、前記抗体又はその抗原結合フラグメント。
配列番号：3のアミノ酸配列含む軽鎖可変領域及び配列番号：4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、を含む、請求項２記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
軽鎖が、配列番号：5のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85％の同一性を有する
アミノ酸配列、を含み、重鎖が、配列番号：6のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85％の配列同一性を有するアミノ酸配列、を含む、請求項２記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
軽鎖が、配列番号：5のアミノ酸配列を含み、重鎖が、配列番号：6のアミノ酸配列を含む、請求項４記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
軽鎖が、配列番号：25のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85％の同一性を有する
アミノ酸配列、を含み、重鎖が、配列番号：24のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85％の配列同一性を有するアミノ酸配列、を含む、請求項２記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
軽鎖可変領域が配列番号：23のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85％の同一性を有するアミノ酸配列、を含み、重鎖可変領域が配列番号：22のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85％の同一性を有するアミノ酸配列、を含む、請求項２記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
軽鎖可変領域が配列番号：23のアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域が配列番号：22のアミノ酸配列を含む、請求項２記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
ネコ神経成長因子（NGF）と特異的に結合でき、ネコNGFのp75またはTrkAネコNGFレセプターへの結合能を阻害できる、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
配列番号：26のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列、からなる又は前記配列を含むFR1フレームワーク領域、
配列番号：27のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列、からなる又は前記配列を含むFR2フレームワーク領域、
配列番号：28のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列、からなる又は前記配列を含むFR3フレームワーク領域、及び、
配列番号：29のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列、からなる又は前記配列を含むFR4フレームワーク領域、
を含む軽鎖可変領域、及び、
配列番号：30のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列、からなる又は前記配列を含むFR1フレームワーク領域、
配列番号：31のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列、からなる又は前記配列を含むFR2フレームワーク領域、
配列番号：32のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列、からなる又は前記配列を含むFR3フレームワーク領域、及び、
配列番号：33のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列、からなる又は前記配列を含むFR4フレームワーク領域、
を含む重鎖可変領域、
を含み、
フレームワーク領域内のいずれの位置においても、ネコでは当該位置で外来性であるようなアミノ酸を全く含まない、
前記抗体又はその抗原結合フラグメント
配列番号：26のアミノ酸配列からなる又は前記配列を含むFR1フレームワーク領域、
配列番号：27のアミノ酸配列からなる又は前記配列を含むFR2フレームワーク領域、
配列番号：28のアミノ酸配列からなる又は前記配列を含むFR3フレームワーク領域、及び、
配列番号：29のアミノ酸配列からなる又は前記配列を含むFR4フレームワーク領域、
を含む軽鎖可変領域、及び、
配列番号：30のアミノ酸配列からなる又は前記配列を含むFR1フレームワーク領域、
配列番号：31のアミノ酸配列からなる又は前記配列を含むFR2フレームワーク領域、
配列番号：32のアミノ酸配列からなる又は前記配列を含むFR3フレームワーク領域、及び、
配列番号：33のアミノ酸配列からなる又は前記配列を含むFR4フレームワーク領域、
を含む重鎖可変領域、
を含む、請求項９記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
下流エフェクター機能を媒介しないように選ばれる、若しくはアミノ酸置換又は欠失の方法によって改変された重鎖定常ドメインを含む請求項２または９記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
抗体がＨＣ２型ネコ定常ドメインを有する、請求項１１記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
重鎖が、配列番号：6、配列番号：7、配列番号：17及び配列番号：18から成る群から選
択されるアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも85％の配列同一性を有するアミノ酸配列、を含む、請求項１２記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
請求項２〜１３いずれか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、医薬組成物。
請求項２〜１３いずれか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントの、ネコにおいて、痛みの治療、または、変形性関節症、免疫媒介多発性関節炎若しくは関節リウマチに付随する痛みの治療、緩和、阻止、または、NGFによって増殖が誘発される腫瘍の治療のための医薬の製造における使用。
請求項２〜１３のいずれか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント及びこれらの使用のための指示書を含む、ネコにおいて、痛みの治療、変形性関節症、免疫媒介多発性関節炎若しくは関節リウマチに付随する痛みの治療、緩和若しくは阻止、NGFによって増殖が誘発される腫瘍の治療のためのキット。