MX2012005086A - Antagonistas de il-17a. - Google Patents

Abstract

Se describen antagonistas del anticuerpo de interleucina-17A (IL-17A), polinucleótidos que codifican los antagonistas del anticuerpo IL-17A o fragmentos de los mismos, y métodos para hacer y utilizar los anteriores.

Description

ANTAGONISTAS DE IL-17A CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a antagonistas de anticuerpos de interleuquina 17A (IL-17A), a polinucleótidos que codifican antagonistas de anticuerpos de IL-17A o fragmentos de estos, y a métodos de elaboración y uso de estos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La interleuquina 17A (IL-17A, CTLA-8, IL-17) es una citocina secretada por medio de células Th17 activadas, células CD8+ T, células ?d T y células NK en respuesta a citocinas tales como IL-23 y TGF-ß, y regula la producción de mediadores, tales como péptidos antimicróbiános (defensinas), citocinas y quemocinas proinflamatorias a partir de múltiples tipos de células, tales como fibroblastos y sinoviocitos que están involucrados en la biología neutrófila, inflamación, destrucción de órganos y defensa del huésped (revisado en Weaver y otros, Annu. Rev. Irrimunol. 25:821 -52, 2007; Aggarwal y otros, J. Bol. Chem. 278: 1910-4, 2003; Mangan y otros, Nature 441 :231 -4, 2006). IL-17A se sinergiza con otras citocinas, tales como TNF-a e IL-? ß para potenciar el ambiente pro-inflamatorio.

La familia de la citocina IL-17A consiste de seis homólogos designados como IL-17A, B, C, D, E y F, cada uno con roles biológicos distintos y divergente (Kawaguchi y otros, J. Allergy Clin. Immunol. 1 14:1265-73, 2004; Kolls y Linden, Immunity 21 :467-76, 2004; Moseley y otros, Cytokine Growth Factor Rev. 14:155-74, 2003). De los miembros de la familia, IL-17F es la que tiene mayor homología con IL-17A y comparte muchas propiedades funcionales similares tales como inducción de neutrofilia en el pulmón e inducción de citocinas pro-inflamatorias; sin embargo, en el hombre, la IL-17F es aproximadamente 10 veces menos potente que la IL-17A (Moseley y otros, Cytokine Growth Factor Rev. 14:155-74, 2003; Kolls y otros, Immunity, 21 : 467-76, 2004; McAllister y otros, J. Immunol. 175:404-12, 2005). La IL-17A y la IL-17F pueden formar, además, heterodímeros, los cuales tienen bioactividad del intermedio in vitro (Wright y otros, J. Biol. Chem. 282:13447-55, 2007).

El efecto mediado por IL-17A se produce por la interacción con los receptores de lnterleuquina-17 A (IL-17RA) y receptor C (IL-17RC) (Moseley y otros, Cytokine Growth Factor Rev. 14:155-74, 2003; Toy y otros, J. Immunol. 177:36-9, 2006). La IL-17F produce señales a través de los mismos receptores, aunque la afinidad de IL-17F con los receptores es significativamente menor (Kuestner y otros, J. Immunol. 179:5462-73, 2007). Las estructuras de cristal de la IL-17F humana y del complejo IL-17F/IL-17RA humano identificaron una cavidad putativa de unión a receptores en el homodímero del IL-17F (Hymowitz y otros, EMBO J. 20:5332-41 , 2001 ; Ely y otros, Nat. Inmunología 10:1245-51 , 2009). Una cavidad similar fue identificada en la estructura de cristal de IL-17A humana en el complejo con un Fab neutralizante, aunque la cavidad fue ocupada parcialmente (Gerhardt y otros, J. Mol. Biol. 394:905-21 , 2009).

La producción inapropiada o excesiva de IL-17A está asociada con la patología de varias enfermedades y trastornos que incluyen artritis reumatoide (Lubberts, Cytokine 41 :84-91 , 2008), hipersensibilidad en las vías aéreas que incluye enfermedad alérgica en las vías aéreas tales como asma (revisado en Linden, Curr. Opin. Investig. Drugs. 4:1304-12, 2003; Ivanov, Trends Pharmacol. Sci. 30:95-103, 2009), soriasis (Johansen y otros, Br. J. Dermatol. 160:319-24, 2009), hipersensibilidad dérmica que incluye dermatitis atópica (Toda y otros, J. Allergy Clin. Immunol. 111 :875-81 , 2003), esclerosis sistémica (Fujimoto y otros, J. Dermatolog. Sci. 50:240-42, 2008), enfermedades inflamatorias intestinales que incluyen colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn (Holtta y otros, Inflamm. Bowel Dis. 14:1175-84, 2008; Zhang y otros, Inflamm. Bowel Dis. 12:382-88, 2006), y enfermedades pulmonares que incluyen enfermedad pulmonar obstructiva crónica (Curtís y otros, Proc. Am. Thorac. Soc. 4:512-21 , 2007).

Se ha propuesto el uso de anticuerpos a IL-17A para el tratamiento de enfermedades y trastornos mediados por IL-17A (publicaciones del PCT núms. WO08/02 156, WO07/070750, WO07/149032, WO06/054059, WO06/013107, WO08/001063, W010/034443; solicitudes de patente de los Estados Unidos núms. US2008/095775, US2009/0175881 ;). Dado que la farmacocinética, los perfiles de eficacia y la seguridad de la terapéutica de anticuerpos dependerán de las composiciones específicas, existe la necesidad de anticuerpos a IL-17A humana mejorados que sean adecuados para el uso en el tratamiento de enfermedades y trastornos mediados por IL-17A.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Las figuras 1A y 1 B muestran: Figura 1A) IGLV3 e IGLJ; y figura 1 B) genes de la línea germinal IGHV3 e IGHJ como andamios para injertar residuos de parátopos. La secuencia de mAb6785 se muestra anteriormente. Las regiones de CDR están subrayadas y los sitios de contacto del núcleo n la cadena liviana de mAb6785 (Y31 , D49, Y90, F92, F93) y cadena pesada (S52, T54, F57, Y59, Q99, L100 y T101 ) están indicados por medio de un asterisco "*". Las regiones del marco 4 en la figura 1 B) están subrayadas con una doble línea. La secuencia que se muestra corresponde a alelos *01 alelos a menos que se especifique lo contrario.

Figuras 2A-2F. Ensayos de unión competitiva de la figura 2A) y figura 2B) mAb1926¡ figura 2C) mAb317; figura 2D) mAb3171 ; figura 2E) y figura 2F) mAb7357 marcados con IL-17A en un formato ELISA.

Figura 3. A) Mapas de intercambio de H/D de la 1L-17A complejada con distintos mAbs de anti-IL-17A. La numeración por encima de los bloques protectores corresponde a la numeración de secuencias de la IL-17A madura (SEQ ID NO: 105).

Figuras 4A-4D. Figura 4A) la estructura molecular general del complejo IL-17A/ Fab6468. El dímero de IL-17A se muestra en gris oscuro y gris claro. Las dos moléculas de Fab se muestran en gris oscuro y gris claro, respectivamente; Figura 4B) comparación del monómero de IL-17A (gris claro) e IL-17F (gris oscuro); Figura 4C) dímero de IL-17A (gris claro y oscuro); Figura 4D) dímero de IL-17F (gris claro y oscuro).

Figura 5. Los dos sitios de unión y el epítopo del núcleo en IL- 17A para Fab6468. Los protómeros 1 y 2 están en color gris claro y oscuro, respectivamente. El epítopo del núcleo se indica por medio del óvalo negro. La línea discontinua representa los residuos desordenados. i Figuras 6A-6C. Comparación de las bolsas de unión a receptores putativos de IL-17A y IL-17F. Figura 6A) Vistas posterior y frontal de las bolsas P1 y P2 de IL-17A. El motivo FF del CDR3 de cadena liviana de CDR3 se muestra en la bolsa P2. Figura 6B) IL-17F con motivo FF N-terminal en la bolsa P2. Figura 6C) Alineamiento de secuencias -17F y IL-17F y conservacióri de las bolsas P1 y P2.

Figura 7. Especificidad de unión de mAb1926 a especies diferentes de proteínas de IL-17A en un formato ELISA.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Un aspecto de la invención es un anticuerpo aislado^ o un fragmento de este, en donde el anticuerpo se une específicamente a 1L-17A humana que tiene la secuencia ilustrada en la SEQ ID NO: 105 n los residuos de aminoácidos 56-68 (SEQ ID NO: 157) y 100-1 16 (SEQ ID NO: 158); o en los residuos L26, R55, E57, P59, E60, R61 , Y62, S64, V65, W67, R101 , E102, P103 y F1 10.

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo aislado o un fragmento de este, en donde el anticuerpo se une específicamente a la cavidad de la bolsa P2 en la IL-17A humana, la cavidad de la bolsa P2 comprende residuos de aminoácidos V22, V24, L26, I28, Y62, L99,| R101 , F1 10, y L1 12 de SEQ ID NO: 105.

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a IL-17A humana que compite con la unión de IL-17A humana con un anticuerpo monoclonal que comprende las secuencias de aminoácidos de ciertas regiones de determinación de complementariedad de la cadena pesada (CDR, por sus siglas en inglés) 1 , 2 y 3 (HCDR1 , HCDR2, HCDR3), las secuencias de aminoácidos de ciertas regiones de determinación de complementariedad de la cadena liviana (CDR, por sus siglas en inglés) 1 , 2 y 3 (LCDR1 , LCDR2, LCDR3J, la secuencias de aminoácidos de ciertas regiones variables de cadena pesiada (VH, por sus siglas en inglés) o secuencias de aminoácidos de regiones variables de cadena liviana (VL por sus siglas en inglés).

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo aislado o un fragmento de este que se une específicamente a la IL-17A humaná, que i comprende ciertos residuos de aminoácidos parátopos de la región vjariable de cadena liviana que interactúan con ciertos residuos de IL-17A que tienen la secuencia de aminoácidos ilustrada en la SEQ ID NO: 105.

Otro aspecto de la invención es una anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humana que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena liviana, en donde el anticuerpo comprende un parátopo de la región variable de cadena pesada seleccionado de los residuos F56 y Y58 según Chothia; y un parátopo de la región variable de cadena liviana seleccionado de los residuos Y9t, F93 y F94 según Chothia.

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humana que comprende una¡ región variable de cadena pesada (VH) y una región variable de cadena liviana (VL), en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos de ciertas regiones de determinación de complementariedad de la cadena pesada (CDR, por sus siglas en inglés) 1 , 2 y 3 (HCDR1 , HCDR2, HCDR3), las secuencias de aminoácidos de ciertas regiones de determinación de complementariedad de la cadena liviana (CDR, por sus siglas en inglés) 1 , 2 y 3 (LCDR1 , LÍCDR2, LCDR3), la secuencias de aminoácido de ciertas regiones variables de cadena pesada (VH, por sus siglas en inglés) o las secuencias de aminoácidos de ciertas regiones variables de cadena liviana (VL, por sus siglas en inglés).

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a IL-17A humana, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos de ciertas cadenas pesadas y las secuencias de aminoácido de ciertas cadenas livianas.

Otro aspecto de la invención es una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo aislado o fragmento de la invención y un portador farmacéuticamente aceptable.

Otro aspecto de la invención es una cadena pesada del anticuerpo aislado que comprende las secuencias de aminoácidos ilustradas en las SEQ ID NO: 67, 68, 69, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 0 100.

Otro aspecto de la invención es una cadena liviana del anticuerpo aislado que comprende las secuencias de aminoácidos ilustradas en las SEQ ID NO: 76, 77, 78, 79, 80, 87, 88, 89, 90, o 91.

Otro aspecto de la invención es un polinucleótido que codifica una cadena pesada del anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos ilustradas en las SEQ ID NO: 67, 68, 69, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 0 100.

Otro aspecto de la invención es un polinucleótido que codifica una cadena liviana del anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos ilustradas en las SEQ ID NO: 76, 77, 78, 79, 80, 87, 88, 89, 90, o 91.

Otro aspecto de la invención es un vector que comprende al menos un polinucleótido de la invención.

Otro aspecto de la invención es una célula huésped que comprende el vector de la invención.

Otro aspecto de la invención es un método para inhibir la interacción de IL-17A con IL-17RA humana que comprende: proporcionar una IL-17A humana y una IL-17RA; y contactar la IL-17A humana con un antagonista que une la IL-17A humana en al menos un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de V22, V24, L26, I28, Y62, L99, R101 , F1 10, y L1 12.

Otra aspecto de la invención es un método para inhibir la actividad biológica de IL-17A que comprende: proporcionar una IL17-A humana y una IL-17RA; y contactar la IL-17A humana con un antagonista que une la : IL-17A humana en al menos un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de V22, V24, L26, I28, Y62, L99, R101 , F1 10, y L1 12.

Otro aspecto de la invención es un método para tratar una condición inflamatoria que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo aislado de la reivindicación 3 o 7 á un paciente que lo necesita durante un tiempo suficiente para tratar la condición inflamatoria.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Todas las publicaciones que incluyen, pero no se limitan a, las patentes y solicitudes de patente citadas en la presente especificación se incorporan en la presente invención como referencia tal como si se incluyesen en su totalidad.

Se debe entender que la terminología usada en la presente descripción tiene únicamente el propósito de describir modalidades particulares y no pretende ser limitante. A menos que se definan de otra forma, todos los términos técnicos y científicos usados aquí tienen el mismo significado como lo entiende comúnmente un experto en la técnica a la que se dirige la invención.

Si bien en la práctica o prueba de la invención puede usarse cualquier método o cualquier material similar a los descritos en la presente descripción, a continuación se describen en la presente descripción métodos y materiales ilustrativos. La siguiente terminología se usará para la descripción y reivindicaciones de la presente invención.

El término "antagonista", como se usa en la presente invención, significa una molécula que inhibe la actividad IL-17A parcial o completamente por medio de cualquier mecanismo. Los antagonistas ilustrativos son anticuerpos, proteínas de fusión, péptidos, miméticos de j péptidos, ácidos nucleicos, oligonucleótidos y moléculas pequeñas. El agente se puede identificar por medio de ensayos conocidos para determinar la actividad de IL-17A descritos más abajo.

El término "anticuerpo antagonista de IL-17A" o un "reactivo de anticuerpo con IL-17A", como se usa en la presente invención, se refiere a un anticuerpo que es capaz de reducir o inhibir, directa o indirectamente, la actividad biológica de IL-17A, bloquear la unión de la IL-17A a su receptor o inhibir la activación del receptor de IL-17A. Por ejemplo, un reactivo de anticuerpo con IL-17A puede unirse directamente a IL-17A y neutralizar la actividad de IL-17A, es decir, bloquear la señalización de IL-17A para reducir la liberación de la citocina y quimocina.

El término "IL-17A" (CTLA-8, IL-17, interleuquina 17A) se refiere a un polipéptido de IL-17A humana que tiene una secuencia de aminoácidos ilustrada en el núm. de registro en el GenBank NP_002181. La SEQ ID NO: 105 ilustra la secuencia de aminoácido de la IL-17A húmana madura. La IL-17A in vivo forma homodímeros de dos monómeros designados como monómero A y monómero B, o protómero A y protómero B, o protómero 1 y protómero 2, o cadena A y cadena B. La IL-17A ¡puede formar, además, un heterodímero con IL-17F. El término "IL-17A" comprende las formas monoméricas, homodiméricas y heterodiméricas. El término "IL-17Amut6" se refiere a una variante de IL-17A quej tiene sustituciones A70Q y A132Q. La secuencia de aminoácido de la IL-17Amut6 madura se ilustra en la SEQ ID NO: 106 y la secuencia de ADNc en lá SEQ ID NO: 1 12. IL-17A y IL-17Amut6 tienen actividades comparables (solicitud de patente del PCT núm. WO09/003096).

El término "receptor de IL-17A", como se usa en la presente descripción, comprende ambos polipéptidos de los receptores, IL-17RA (núm. de acceso en el GenBank: NP_055154, SEQ ID NO: 107) e IL-17RC (núm. de acceso en el GenBank NP_703191 , SEQ ID NO: 113), y homodímeros o heterodímeros de los dos polipéptidos.

El término "anticuerpos", como se usa en la presente descripción, tiene un sentido amplio e incluye moléculas de inmunoglobulina que incluyen anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales que incluyen anticuerpos monoclonales murino, humano, adaptado a humanos, humanizado y quiméricos, fragmentos de los anticuerpos, anticuerpos multiespecíficos formados a partir de al menos dos anticuerpos intactos, diméricos, tetraméricos o multiméricos.

El término "anticuerpo monoclonal" (mAb), como se usa en la presente descripción, significa un anticuerpo (o fragmento de anticuerpo) obtenido a partir de una población de anticuerpos sustancialménte homogénea. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, típicamente, están dirigidos contra un solo epítopo. El modificador "monoclonal" indica el carácter sustancialménte homogéneo del anticuerpo y no requiere producción del anticuerpo por cualquier método particular.

Las immunoglobulinas se pueden asignar a cinco clases principales, especialmente IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, dependiendo; de la secuencia de aminoácido del dominio constante de la cadena pesada. Las IgA e IgG están subclasificadas, además, como los isotipos IgAi, lgA¿ , IgGi, lgG2, lgG3 e lgG4. Las cadenas livianas de los anticuerpos de cualquiera de las especies de vertebrados se pueden asignar a uno o dos tipos claramente distintos, especialmente kappa (?) y lambda (?), basado en las secuencias de aminoácido de sus dominios constantes.

El término "fragmentos de anticuerpos" comprende al menos una parte de una molécula de inmunoglobulina, tal como, una región de determinación de complementariedad de la cadena pesada (HCDR, por sus siglas en inglés), una región de determinación de complementariedad de la cadena liviana (LCDR, por sus siglas en inglés), una región variable de la cadena pesada (VH, por sus siglas en inglés), una región variable de la cadena liviana (VL, por sus siglas en inglés), una región constante de la cadena pesada (CH, por sus siglas en inglés), una región constante de la cadena liviana (CL, por sus siglas en inglés) o una región de marco (FR, por sus siglas en inglés) a partir de la cadena liviana o pesada del anticuerpo. Un anticuerpo puede ser un Fab, F(ab'), F(ab')2, scFv, dsFv, o un diacuerpo. Las estructuras de los fragmentos de anticuerpos mencionadas anteriormente, y las técnicas para la preparación y uso de los anticuerpos y fragmentos d estos son conocidos en la materia.

Una región variable de anticuerpo consiste de una región "marco" interrumpida por tres sitios de "unión al antígeno". Los sitios de unión al antígeno se definen por diversos términos: (i) Las regiones de determinación de complementariedad (CDR), tres en la VH (HCDR1 , HCDR2, HCDR3) y tres en la VL (LCDR1 , LCDR2, LCDR3), están basadas en la variabilidad de la secuencia (Wu y Kabat, J. Exp. Med. 132:21 1-250, 1970; Kabat y otros., Sequerices of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991). (ii) "Las regiones hipervarjabies", "HVR" o "HV", tres en la VH (H1 , H2, H3) y tres en la VL (L1 , L2, L3), se refieren a las regiones de dominio variable del anticuerpo cuya estructura es hipervariable tal como se define en Chothia y Lesk (Chothia y Lesk, Mol. Biol. 196:901-917, 1987). Otros términos incluyen "IMGT-CDRs" (Lefranc y otros, Dev. Comparat. Immunol. 27:55-77, 2003) y "Specificity Determining Residue Usage" (SDRU) (Almagro, Mol. Recognit. 17:132-143, 2004). La base de datos de International ImMunoGeneTics (IMGT) (http://www_imgt_org) proporciona una numeración estandarizada y la definición de los sitios de unión al antígeho. La correspondencia entre delineaciones CDRs, HVs e IMGT se describe en Lefranc y otros, Dev. Comparat. Immunol. 27:55-77, 2003.

Los "residuos de Chothia", tal como se usa en la presente invención, se refiere a los residuos VL y VH de los anticuerpos numerados de conformidad con Al-Lazikani (Al-Lazikani y otros, J. Mol. Biol. 273:927-48, 1997). La correspondencia entre los dos sistemas de numeración más usados, Kabat (Kabat y otros, Sequences of Immunological Interest, 5° Ed. Public Health Service, NIH, Bethesda, MD, 1991) y Chothia (Chothia y Lesk, Mol. Biol. i 196:901-17, 1987) en relación con la numeración de polipéptidos secuepciales se muestra en el cuadro B para anticuerpos ilustrativos de la invención.

CUADRO B "Marco" o "secuencias de marco" son las secuencias remanentes de una región variable diferentes a las definidas como sitio de unión al aritígeno. Dado que el sitio de unión al antígeno se puede definir por varios términos como se describe anteriormente, la secuencia de aminoácidos exacta de una variable depende de la forma usada para definir el sitio de unión al antígeno.

El término "prácticamente idéntico", como se usa en la presente descripción, significa que las dos secuencias de aminoácidos del anticuerpo o del fragmento del anticuerpo comparadas son idénticas o tienen "diferencias poco significativas". Las diferencias poco significativas son sustituciones de 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14 o 15 aminoácidos en una secuencia de aminoácidos del anticuerpo o fragmentos del anticuerpo que no afectan negativamente las propiedades del anticuerpo. Las secuencias de aminoácidos prácticamente idénticas a las secuencias descritas en la presente descripción son, además, parte de esta solicitud. En algunas modalidades, la identidad de secuencia puede ser de aproximadamente 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o mayor. El porcentaje de identidad se puede determinar, por ejemplo, por medio del alineamiento en pares con los parámetros de alineamiento predeterminados en el módulo de AlignX del programa Vector NTI v.9.0.0 (Invitrogen, Carslbad, CA). Las secuencias de proteínas de la presente descripción se pueden usar como una secuencia de consulta para realizar una búsqueda con respecto a las bases de datos de patentes o públicas, por ejemplo, para identificar las secuencias relacionadas. Los programas ilustrativos usados para las búsquedas son los programas XBLAST o BLASTP (http_//www_ncbi_nlm/nih_gov), o el conjunto de programas GenomeQuest™ (GenomeQuest, Westborough, MA) con los parámetros predeterminados.

El término "en conjunto con", como se usa en la presente descripción, significa que los agentes descritos se pueden administrar a un animal juntos en una mezcla, simultáneamente como agentes simples o en secuencia como agentes simples en cualquier orden.

El término "condición inflamatoria", como se usa en la presente descripción, se refiere a respuestas sistémicas o localizadas crónicas o agudas a estímulos perjudiciales, tales como patógenos, células dañadas, lesiones físicas o irritantes mediadas, en parte, por la actividad de citbcinas, quimocinas o células inflamatorias (por ejemplo, neutrófilos, monocitos, linfocitos, macrofagos) y, en la mayoría de los casos, se caracteriza por dolor, enrojecimiento, hinchazón y obstrucción de la función tisular.

El término "condición inflamatoria mediada por IL-17A", como se usa en la presente descripción, se refiere a una condición inflamatoria producida al menos parcialmente por la actividad biológica de IL-17A ó por la actividad de IL-17A. Las condiciones inflamatorias mediadas por IL-17A ilustrativas son la soriasis y la artritis reumatoide.

El término "condición mediada por IL-17A", como se usa en la presente descripción, abarca todas las enfermedades y condiciones médicas en las cuales la IL-17A actúa, directa o indirectamente, en la enfermedad o condición médica que incluye la causalidad, desarrollo, progreso, persistencia o patología de la enfermedad o condición.

El término "epítopo", como se usa en la presente descripción, significa una parte de un antígeno al cual se une específicamente un anticuerpo. Los epítopos consisten, usualmente, de grupos de superficie químicamente activa (tales como polares, no polares o hidrófobos) de entidades, tales como cadenas laterales de polisacáridos o aminoácidos y pueden tener características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Un epítopo puede estar compuesto por aminoácidos continuos o discontinuos o ambos que forman una unidad espacial conformacional. Para un epítopo discontinuo, los aminoácidos de porciones diversas de la secuencia lineal del antígeno se acercan en el espacio tridimensional a través del plegamiento de la molécula de la proteína.

El término "parátopo", como se usa en la presente descripción, significa una parte de un anticuerpo a la cual se une específicamente un antígeno. Un parátopo puede ser lineal o discontinuo, formado por una relación espacial entre los aminoácidos no contiguos de un anticuerpo en lugar de una serie lineal de aminoácidos. Un "parátopo de cadena liviana" y un "parátopo de cadena pesada" o "residuos de aminoácidos de parátopos de cadena liviana" y "residuos de aminoácidos de parátopos de la cadena pesada" se refieren a los residuos de la cadena pesada y la cadena liviana del anticuerpo en contacto con el antígeno, respectivamente.

El término "unión específica", como se usa en la présente descripción, se refiere a la unión del anticuerpo a un antígeno predeterminado con mayor afinidad que para otros antígenos o proteínas.

Típicamente, el anticuerpo se une con una constante de disociación (KD) de 10"7 M o menor, y se une al antígeno predeterminado con una KD que es al menos diez veces menor que su KD para unirse a un antígeno no específico (por ejemplo, BSA, caseína o cualquier otro polipéptido especificado) distinto al antígeno predeterminado. Las frases "un anticuerpo que reconoce un antígeno" y "un anticuerpo específico para un antígeno" se usan en forma indistinta en la presente descripción con el término "un anticuerpo ué se une específicamente a un antígeno" o "un anticuerpo específipo del antígeno" por ejemplo, un anticuerpo específico de IL-17A. La constante de disociación se puede medir mediante el uso de procedimientos estándar.

El término "actividad biológica de IL-17A" o "activación de IL-17A", como se usa en la presente descripción, se refiere a cualquier actividad que se produce como resultado de la unión de IL-17A al receptor de IL-17A. Las actividades biológicas de IL-17A ilustrativas producen una mayor secreción de IL-6 o IL-8, activación de NF-?? o regulación de las quinasas corriente abajo tales como ERK1 , ERK2 y p38 cuando se unen al receptor de IL-17A. La liberación de citocinas y quimocinas a partir de células, tejidos o en circulación, la activación de NF-??, o los casos fosforilación de quinasa se pueden medir por medio del uso de métodos conocidos, por ejemplo, ¡nmunoensayos, inmunoelectrotransferencia, o sistemas de genes indicadores (Yao y otros, Immunity 3:81 1-21 , 1995; Awane y otros, J. Immunol. 162:5337-44, 1999).

El término "vector" significa un polinucleótído capaz de duplicarse dentro de un sistema biológico o que puede trasladarse entre dichos sistemas. Los polinucleótidos del vector contienen, típicamente, elementos, tales como orígenes de replicación, señal de poliadeniláción o marcadores de selección que actúan para facilitar la duplicación o mantenimiento de estos polinucleótidos es un sistema biológico. Los ejemplos de dichos sistemas biológicos pueden incluir una célula,! virus, animal, planta, y sistemas biológicos reconstituidos que usan componentes biológicos capaces de duplicar un vector. El polinucleótido que comprende un vector pueden ser moléculas de ADN o ARN o un híbrido de estos.

El término "vector de expresión" significa un vector que se puede usar en un sistema biológico o en un sistema biológico reconstituido para dirigir la traducción de un polipéptido codificado por una secuencia de polinucleótidos presente en el vector de expresión.

El término "polinucleótido" significa una molécula que comprende una cadena de nucleótidos unida covalentemente por una cadena principal de azúcar-fosfato u otra química covalente equivalente. Los ADN y ARN de cadena simple o doble son ejemplos típicos de polinucleótidos.

El término "polipéptido" o "proteína" significa una molécula que comprende al menos dos residuos de aminoácido unidos por una enlace peptídico para formar un polipéptido. Los polipéptidos pequeños con menos de 50 aminoácidos se pueden mencionar como "péptidos".

Los códigos convencionales de aminoácidos de una y tres letras se usan en la presente invención como sigue a continuación: Aminoácido Código de tres letras Cód Alanina ala A Arginina arg Asparagina asn N Aspartato asp D Cisteína cys C Glutamato glu E Glutamina gln Q Glicina giy G Histidina his H Isoleucina ile I Leucina leu L Usina lys K etionina met M Fenilalanina phe F Prolina pro P Serina ser S Treonina thr T Triptófano trp W Tirosina tyr Y Valina val V Composiciones de materia La presente invención proporciona antagonistas de IL-17A capaces de inhibir la actividad biológica de IL-17A y usos de dichos anticuerpos. Los mecanismos ilustrativos por los cuales dichos anticuerpos pueden inhibir la activación de IL-17A incluyen inhibición in vitro, in vivo o in situ de la homo o heterodimerización de IL-17A y el bloqueo de la unión de IL-17A al receptor de IL-17A, inhibición de dimerización del receptor, inhibición de la actividad de quinasa de las vías de señalización corriente abajo o inhibición de la transcripción de ARNm de IL-17A. Otros anticuerpos antagonistas capaces de inhibir la activación de IL-17A por otros mecanismos están, además, dentro del alcance de los varios aspectos y modalidades de la invención. Estos antagonistas son útiles como reactivos de investigación, reactivos de diagnóstico y agentes terapéuticos.

La invención proporciona sitios nuevos de unión al antigeno derivados de genotecas de genes de inmunoglobulina humana. La estructura para portar un sitio de unión al antigeno es, generalmente, una cadena liviana o pesada del anticuerpo o parte de esta.

La invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento de este que se une específicamente a IL-17A humana, que comprende una región variable de cadena pesada (VH) y una región variable de cadena liviana (VL), en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos de la región de determinación de complementariedad de la cadena pesada (CDR) 1 , 2 y 3 (HCDR1 , HCDR2 y HCDR3) y las secuencias de aminoácidos de la región de determinación de complementariedad de la cadena liviana (CDR) 1 , 2 y 3 (LCDR , LCDR2 y LCDR3) como se muestra en el cuadro 1A.

CUADRO 1A En ciertas modalidades, la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humana, que comprende un VH y un VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos de HCDR1 , HCDR2 y HCDR3 como se muestra en las sec. con núms. de ident: 23, 35 y 52, en donde la HCDR2 de la SEQ ID NO: 35 se define, además, como se muestra en la Fórmula (I): Xaai-I-I-P-W-F-G-Xaa2-T-Xaa3-Y-A-Q-K-F-Q-G, (I) en donde Xaai puede ser His, Met, Arg, Ser o Tyr; Xaa2 puede ser Trp, Thr o Tyr; y Xaa3 puede ser Tyr, Phe, Ser o Asp.

En otras modalidades, la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humana, que comprende un VH y un VL, en donde el anticuerpo comprende la LCDR1 , LCDR2 y LCDR3 de las secuencias de aminoácidos como se muestra en las sec. con núms. de ident: 2, 5 y 1 1 , en donde la LCDR3 en la SEQ ID NO: 1 1 se define, además, como se muestra en la Fórmula (II): Xaa4-Q-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaaio, (II) en donde Xaa4 puede ser His o Gln; Xaa5 puede ser Phe o Gly; Xaa6 puede ser Thr, Val o Asn; Xaa7 puede ser lie, Thr o Tyr; Xaae puede ser Pro o Arg; Xaag puede ser Ser o Pro; y Xaa-?? puede ser His, Phe o Leu.

En otras modalidades, la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humana de unión, que comprende un VH y un VL, en donde el anticuerpo comprendé las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3 como se muestra en las sec. con núms. de ident: 2, 5 y 17, en donde la LCDR3 de la SEQ ÍD NO: 17 se define, además, como se muestra en la Fórmula (III): Xaan-Q-Xaai2-Xaai3-Xaa-i4-Xaai5-Xaai6-Xaai7-Xaai8-T, (III) en donde Xaan puede ser Gln o Thr; Xaai2 puede ser Ser o Tyr; Xaa-13 puede ser Asn, Arg, Val o Tyr; Xaai4 puede ser His o Ser; Xaa-15 puede ser lie, Thr, Leu, Ala o Ser; Xaa-i6 puede ser Pro, Leu o Ser; Xaa-i7 puede ser Pro, Ser, Phe o Leu; y Xaa-is puede ser Ala, Leu o Asp.

En otras modalidades, la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humaha, que comprende un VH y un VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos de HCDR1 , HCDR2 y HCDR3 como se muestra en las SEQ ID NO: 24, 36 y 57, en donde la HCDR3 de la SEQ ID NO: 57 se define, además, como se muestra en la Fórmula (IV): E-V-D-S-Xaa19-Y-Y-S-Y-F-D-I, (IV) en donde Xaa-ig es Met, He, Leu o Thr.

En otras modalidades, la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humana, que comprende un VH y un VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos de LCDR1 , LCDR2 y LCDR3 como muestra en las SEQ ID NO: 3, 6 y 22, en donde la LCDR3 de SEQ ID NO: 22 se define, además, como se muestra en la Fórmula (V): G-S-Y-D-F-F-L-G-Xaa20-I-V, (V) en donde Xaa2o es Met, Leu, Thr o Tyr.

En otras modalidades, la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humana, que comprende un VH y un VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácido de HCDR1 , HCDR2 y HCDR3. tal como se muestra en sec. con núm. de ident: 25, 46 y 61 , en donde la HCDR2 de la SEQ ID NO: 46 se define, además, como se muestra en la Formula (VI): Xaa2i-I-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Y-A-D-S-V-K-G, (VI) en donde Xaa2i puede ser Ala, Gly, Thr o Val; Xaa22 puede ser Asn o Ser; Xaa23 puede ser Gly, Met, Lys, lie, Leu o His; Xaa24 puede ser Leu, Asp, Ala, His, Thr, Gly o Ser; Xaa25 puede ser Gly o Ser; Xaa26 puede ser Thr, Gly, Tyr o Asp; Xaa27 puede ser His, Trp, Tyr o Phe; Xaa28 puede ser Lys, Thr o lie; y Xaa2g puede ser Tyr, Phe o Asn, y la HCDR3 de SEQ ID NO: 61 se define como se muestra en la Fórmula (VII): Q-L-Xaa30-L-D-V, (VII) en donde Xaa3o puede ser Met, Leu o Thr.

En otras modalidades, la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que une específicamente a la IL-17A humana, que comprende un VH y un VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácido de HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, como se muestra en sec. con núm. de ident: 25, 51 y 58, en donde la HCDR2 de la SEO ID NO: 51 se define, además, como se muestra en la Formula (VIII): V-T-S-Xaa3i-Xaa32-Xaa33-Xaa34-T-Y-Y-A-Xaa35-S-V-K-G, (VIII) en donde Xaa3i puede ser Ala, Lys, Met o His; Xaa32 puede ser Asn, Met, Thr o Arg; Xaa33 puede ser Gly o Asp; Xaa34 puede ser Arg, His o Asn; y Xaa35 puede ser Asp o Gly.

Los anticuerpos, cuyas secuencias de aminoácidos del sitio de unión al antígeno son sustancialmente idénticos a aquellos mostrados en el cuadro 1A (SEQ ID NO: 1-61 ), están incluidos dentro del alcance de la invención. Típicamente, esto involucra una o más sustituciones de aminoácidos con aminoácidos que tienen carga similar o hidrófobo o características estereoquímicas, y están elaboradas para mejorar las propiedades del anticuerpo, por ejemplo la estabilidad o afinidad. Por ejemplo, una sustitución conservante puede incluir una sustitución^ de un residuo de aminoácido nativo con un residuo no nativo, de manera tal que existe poco o ningún efecto sobre la polaridad o carga del residuo del aminoácido en esa posición. Además, cualquier residuo nativo ! en el polipéptido puede ser, además, sustituido por alanina, como se ha descrito previamente para la mutagénesis por escaneo de alanina (MacLennan y otros, Acta Physiol. Scand. Suppl. 643:55-67, 1998; Sasaki y otros, Adv. Biophys. 35: 1-24, 1998). Las sustituciones conservantes producirán moléculas que tienen características químicas y funcionales similares a aquellas de la molécula a partir de las cuales se realizan dichas modificaciones. Las sustituciones no conservantes en las características químicas y/o funcionales de las moléculas pueden ser realizadas al seleccionar las sustituciones en la secuencia de aminoácidos que difieren, significativamente, en su efecto al mantener (1 ) la estructura de la cadena principal de la molécula en el área de la sustitución, por ejemplo, como una hoja o como conformaciones helicoidales, (2) la carga o hidrófobicida de la molécula en el sitio objetivo, o (3) el tamaño de la molécula. Las sustituciones preferidas de aminoácidos (tanto conservantes como no conservantes) se pueden determinar por aquellos con experiencia en la materia, en el momento en que se prefieren dichas sustituciones. Por ejemplo, las sustituciones de aminoácidos se pueden usar para identificar residuos importantes para la función de los anticuerpos, tales como residuos que afectan la afinidad, o residuos que imparten propiedades no deseadas tal como, agregación. Las sustituciones de aminoácidos ilustrativas muestran en el cuadro 1 B, y en los cuadros A1 -A8.

CUADRO A1 Familia 2 HCDR2 Xaat puede ser His, Met, Arg, Ser o Tyr; Xaa2 puede ser Trp, Thr o Tyr; y Xaa3 puede ser Tyr, Phe, Ser o Asp.

CUADRO A2 Familia 6a LCDR3 Xaa4 puede ser His o Gln; Xaa5 puede ser Phe o Gly; Xaa6 puede ser Thr, Val o Asn; Xaa7 puede ser He, Thr o Tyr; Xaa8 puede ser Pro o Arg; Xaa9 puede ser Ser o Pro; and Xaa10 puede ser His, Phe o Leu CUADRO A3 Familia 6b LCDR3 Xaa11 puede ser Gln o Thr; Xaa12 puede ser Ser or Tyr: Xaa13 puede ser Asn, Arg, Val o Tyr; Xaa14 puede ser His o Ser; Xaa15 puede ser lie, Thr, Leu, Ala o Ser; Xaa16 puede ser Pro, Leu o Ser; Xaa17 puede ser Pro, Ser, Phe o Leu; y Xaa18 puede ser Ala, Leu o Asp.

CUADRO A4 Familia 6b HCDR3 Xaa19 es Met, I e, Leu o Thr.

CUADRO A5 Familia 19a LCDR3 Xaa20 es Met, Leu, Thr o Tyr.

CUADRO ?ß Familia 19a HCDR2 Xaa21 puede ser Ala, Gly, Thr o Val; Xaa22 puede ser Asn o Ser; Xaa23 puede ser Gly, Met, Lys, lie, Leu o His; Xaa24 puede ser Leu, Asp, Ala, His, Thr, Gly o Ser; Xaa25 puede ser Gly o Ser; Xaa26 puede ser Thr, Gly, Tyr o Asp; ^-Xaa27 puede ser His, Tro, Tyr o Phe; Xaa28 puede ser Lys, Thr o lie; y Xaa29 puede ser Try, Phe o Asn.

CUADRO A7 Familia 19a HCDR3 Xaa30 puede ser Met, Leu o Thr.

CUADRO A8 Familia 19b HCDR2 Xaa31 puede ser Ala, Lys, Met o His; Xaa32 puede ser Asn, Met, Thr o Arg; Xaa33 puede ser Gly o Asp; Xaa34 puede ser Arg, His o Asn; y Xaa35 puede ser Asp o Gly.

Las sustituciones en las regiones marco, en contraste con los sitios de unión al antígeno pueden ser efectuadas, además, en la medida que no afecten en forma adversa a las propiedades del anticuerpo. Las sustituciones marco pueden ser efectuadas, por ejemplo en los residuos Vernier Zone (patente de los Estados Unidos núm. 6,649,055) para mejorar la afinidad del anticuerpo o estabilidad. Las sustituciones pueden ser efectuadas, además, a aquellas posiciones marco en el anticuerpo que difieren en secuencia, cuando se compara con las secuencias genéticas de células germinales humanas homologas para reducir la inmunogenicidad posible. Estas modificaciones se pueden realizar por ejemplo a los anticuerpos derivados de las genotécas de anticuerpos de novo, tales como genotécas pIX.

CUADRO 1 B Las sustituciones conservantes de aminoácidos abarcan, además, i residuos de aminoácidos que no suceden naturalmente que son incorporados, típicamente, por la síntesis química de péptidos, en lugar de síntesis en sistemas biológicos. Las sustituciones de aminoácidos se pueden realizar por ejemplo por mutagénesis PCR (patente de los Estados Unidos núm. 4,693,195).

Las genotecas de las variantes se pueden generar por medio del uso de los métodos conocidos, por ejemplo por el uso de codones aleatorios (NNK) o no aleatorios, por ejemplo codones DVK, que codifican 11 aminoácidos (ACDEGKNRSYW), y por medio del análisis de las genotecas o variantes con las propiedades deseadas, tal como lo muestra en el Ejemplo 1. Los cuadros A1-A8 muestran sustituciones realizadas a cinco antagonistas de anticuerpos de IL-17A parenterales dentro de las regiones LCDR3, HCDR2 y HCDR3 para mejorar las propiedades del anticuerpo. Se pueden medir las propiedades mejoradas, tales como afinidad o estabilidad por medio de métodos conocidos.

En otras modalidades, la invención proporciona un anticuerpo o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humana, que comprende un VH y un VL, en donde el anticuerpo comprende ciertas secuencias de VH y VL, y, además, proporciona para cada VH y VL aislado, tal como se muestra en el cuadro 2.

CUADRO 2 Aunque las modalidades ilustradas en los Ejemplos comprenden pares de regiones variables, pares de cadenas de anticuerpos de longitud completa o pares de regiones CDR1 , CDR2 y CDR3, una a partir de una cadena pesada y otra a partir de una cadena liviana, un experto en la materia reconocerá que las modalidades alternativas pueden comprender una región variable de cadena pesada simple o regiones variables de cadena liviana, cadenas de anticuerpo de longitud completa o regiones CDR1 , CDR2 y CDR3 a partir de una cadena de anticuerpos, tanto pesada como liviana. La región variable simple, la cadena de anticuerpo de longitud completa o las regiones CDR1 , CDR2 y CDR3 de una cadena se pueden usar para analizar dominios correspondientes en otra cadena, las dos cadenas son capaces de formar un anticuerpo que se une específicamente a IL-17A. El análisis se puede realizar por medio de los métodos de análisis de muestra de fago, mediante el uso, por ejemplo, de un enfoque combinatorio doble jerárquico descrito en la publicación del PCT núm. WO92/01047. En este enfoque se usa una colonia individual que contiene un clon de cadena pesada o liviana para infectar una génoteca completa de clones que codifica la otra cadena (L o H), y se selecciona el dominio resultante de unión al antígeno específico de dos cadehas de conformidad con las técnicas de muestra de fago como se describe.

En otras modalidades la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humana, que comprende un VH y un VL que tienen secuencias de aminoácidos al menos 90 % idénticas a las secuencias de aminoácidos de VH y VL tal como se muestra en el cuadro 2.

En otras modalidades la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humana, que comprende un VH y un VL que tienen secuencias de aminoácidos al menos 95 % idénticas a las secuencias de aminoácidos de VH y VL tal como se muestra en el cuadro 2.

En otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo aiblado o fragmento que tiene ciertas secuencias de aminoácidos de cadena pesada y liviana tal como se muestra en el cuadro 2. Adicionalmente a la numeración secuencial de los residuos del anticuerpo, los polipéptidos que codifican las cadenas del anticuerpo se pueden numerar en función de la numeración de Kabat o Chothia (Kabat y otros, sequences of Proteins of Immunblogical Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethésda, Md.. 1991 ; Chothia y Lesk, Mol. Biol. 196:901-917, 1987). Ejemplos de correspondencia entre numeración secuencial de Kabat y Chotia para cadenas selectas de anticuerpo se muestran en el cuadro B. Las posiciones resaltadas en gris indican las regiones CDR del anticuerpo.

En otras modalidades, la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a IL-17A humana, que comprende un VH y un VL, en donde el anticuerpo comprende un parátopo de Í región variable de cadena pesada a partir de los residuos de Chothia S51 , T53, F56, Y58, Q95, L96 Y T97 y un parátopo de región variable de cadena liviana seleccionado a partir de los residuos de Chothia Y32, D50, Y91 , F93 y F94. Los residuos de Chothia del parátopo de la cadena pesada y el parátopo de la cadena liviana corresponden a los residuos de la cadena pesada S52, T54, F57, Y59, Q99, L100 y T101 de SEQ ID NO: 86 y los residuos de la cadena liviana Y31 , D49, Y90, F92 y F93 de SEQ ID NO: 79. : En otras modalidades, la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humana, que comprende residuos de aminoácidos de parátopo de la región de la cadena pesada que interactúan con residuos de IL-17A humana que tienen la secuencia de aminoácidos tal como se muestra en la SEQ ID NO: 105, que comprende: un primer residuo de treonina que interactúa con R55 o ¡E57 de la IL-17A humana; un residuo de glutamina que interactúa con R55 o E57 de la IL- 17A humana; un residuo de lisina que interactúa con E57 de la IL-17A humana; un residuo de tirosina que interactúac con P59, E60 o 101 de la IL-17A humana; un residuo de fenilalanina que interactúa con E60 o P103 R101 , E102 de la IL-17A humana; ' un residuo de serina que interactúa con E60 de la IL-17A hürnana; i un segundo residuo de treonina que interactúa con E60 de la IL-17A humana En otras modalidades, la invención proporciona un anticuerpo I aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humana, que comprende residuos de aminoácidos de parátopo de la región variable de la cadena liviana que interactúan con residuos de IL-17A humana que tienen la secuencia de aminoácidos tal como se muestra en la SEQ ID NO: 105, que comprende: j un primer residuo de fenilalanina que interactúa con L26 de la IL-17A humana un residuo de ácido aspártico que interactúa con R55 o W67 de la IL-17A humana; un primer residuo de tirosina que interactúa con P59, ! S64 o i R101 de la IL-17A humana; un segundo residuo de fenilalanina que interactúa con P59, ?60 R61 , Y62, o R101 , F1 10 de la IL-17A humana; un segundo residuo de tirosina que interactúa con V65 d(e la IL- 17A humana En otra modalidad, la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A humarla, que comprende residuos de aminoácidos de parátopo de la región variablje de la cadena pesada y un residuos de aminoácidos de parátopo de la ¡ región I variable de la cadena liviana que interactúan con residuos de IL-17A humana í que tienen la secuencia de aminoácidos tal como se muestra en la SEQ ID NO: 105 que comprende: ; un residuo de tirosina en la región variable de la cadena pesada i que interactúa con R101 de la IL-17A humana; un residuo de fenilalanina en la región variable de la cadena pesada que interactúa con R101 de la IL-17A humana; j un primer residuo de fenilalanina en la región variable de la ;cadena liviana que interactúa con Y62 y R101 de la IL-17A humana; | un segundo residuo de fenilalanina en la región variablé de la cadena liviana que interactúa con L26 y F 10 de la IL-17A hümána; un residuo de tirosina en la región variable de la cadena liviana que interactúa con R101 de la IL-17A humana En otra modalidad, la invención proporciona un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a IL-17A humana, que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena liviana, en donde el anticuerpo comprende: un parátopo de la región variable de la cadena pesada seleccionado a partir de los residuos F56 e Y58, un parátopo de la región variable de la cadena liviana seleccionado de los residuos de Chothia Y91 , F93 y F94.

Los residuos F56 e Y58 de Chothia del parátopo de la cadena pesada y los residuos Y91 , F92 y F94 de Chothia del parátopo de la cadena liviana son residuos en contacto directo con los residuos de IL-17A, L26, Y62, R101 y F1 10. Estos residuos de IL-17A son parte de ambos; el epítopo Fab6468 y la cavidad con forma de bolsa P2 (ver a continuación). Sin limitaciones teóricas de ninguna especie, se considera que la interacción entre Fab6468 y IL-17A en estos residuos selectos puede ser suficiente para que el anticuerpo bloquee la actividad de IL-17A.

Los mAbs totalmente humanos que carecen de secuencias no humanas se pueden preparar y optimizar a partir de genotecas de muestra de fago por medio de técnicas mencionadas, por ejemplo, en Knappik y otros, J.

Mol. Biol. 296:57-86, 2000; y Krebs y otros, J. Immunol. Meth. 254:67-84 2001. En un método ilustrativo, los anticuerpos de la invención estás aislados de las genotecas que expresan regiones variables de cadena liviana y pesada del anticuerpo como proteínas de fusión con proteína de revestimiento; de pIX del bacteriófago. Las genotecas de los anticuerpos se analizan para determinar la unión a IL-17mut6 humano (SEQ ID NO: 105), y los clones positivos obtenidos se caracterizan, aún más, los Fabs se aislan de los lisados de clones y se expresan como IgG de longitud completa. Las genotecas dé los anticuerpos ilustrativos y los métodos de análisis están descritos ep Shi y otros, J. Mol. Biol. 397:385-96, 2010; publicación de patente del PCT. núm. WO09/085462, y patentes de los Estados Unidos con núm. dé serie 12/546850; 5,223,409, 5,9 69, 1 08, y 5,885,793).

Los mAbs resultantes se pueden modificar, además, én sus regiones marco para cambiar ciertos residuos marco a aquellos presentes en una línea germinal humana coincidente, como se ejemplifica en el presente.

Los anticuerpos de la invención que unen los epítopos específicos a la IL-17A se pueden preparar al inmunizar los ratones humanizados que expresan loci de inmunoglobulina humana. (Lonberg y otros, Nature 368:856-9, 1994; Fishwild y otros, Nature Biotechnology 14:845-51 , 1996; Méndez y otros, Nature Genetics 15:146-56, 1997; patentes de los Estados Unidos núm. 5,770,429, 7,041 ,870, y 5,939,598) o ratones Balb/c con los péptidos que codifican los epítopos, por ejemplo, péptido. seNEDPERYPSVIWEee (SEQ ID NO: 157) o ioo EPPHCPNSFRLEKIL116 (SEQ ID NO: 158) y con el uso de método de hibridomas de Kohler y otros, Nature 256:495-97. Los anticuerpos resultantes son probados por su unión al epítopo por medio de métodos estándares. Los mAbs identificados se pueden modificar, aderrjás, al incorporar residuos de soporte de marco alterados para preservar la afinidad de unión mediante técnicas, tales como aquellas descritas en Queen y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. (USA), 86:10029-32, 1989 y Hodgson y otros, Bio/Technology, 9:421 , 1991.

Los anticuerpos aislados que tienen ciertos residuós del parátopo (por ejemplo, los residuos del núcleo del parátopo definidos en el cuadro 10) que se unen específicamente a la IL-17A humana se pueden preparar, por ejemplo, al injertar los residuos del parátopo dentro de un supercóntigo adecuado, al ensamblar el supercóntigo industrializado en anticuerpos completos, al expresar los anticuerpos para unir a la IL-17A o para un efecto sobre la actividad biológica de la IL-17A. Los supercóntigos ilustrativos son secuencias de aminoácidos de las regiones variables del anticuerpo codificado por genes de la línea germinal humana. Los supercóntigos se pueden seleccionar en función de, por ejemplo, la homología de la secuencia completa, el % de identidad entre los residuos del parátopo, o la identidad de clase de estructura normal entre el supercóntigo y un anticuerpo ilustrativo, tal como mAb6785. Los genes de la línea germinal del anticuerpo humano se describen, por ejemplo, por Tomlinson y otros, J. Mol. Biol 227:776-798, y en la base de datos de International ImMunoGeneTics (IMGT) (http_://_www_imgt_org). Además pueden usarse regiones de marco humanas de consenso, por ejemplo, como se describen en la patente de los Estados Unidos núm.: 6,054,297. La selección del supercóntigo adecuado se puede realizar, por ejemplo, de acuerdo cori los métodos descritos en la publicación del PCT. núm. W010/045340.

Los genes de la línea germinal humana ilustrativos que se pueden usar como supercóntigos sobre los cuales se injertan los residuos de par topos, son los genes codificados por los marcos VA3, Vh3, JA, y el Jh. Los genes VK3 ilustrativos son IGLV3-1 , IGLV3-9, IGLV3-10, IGLV3-12, IGLV3-16, IGLV3-19, IGLV3-21 , IGLV3-22, IGLV3-25, IGLV3-27, y IGLV3-32 (nomenclatura IMGT, alelos *01), (SEQ ID NO: 1 17-127, respectivamente). Los genes JA ilustrativos son IGLJ1 , IGLJ2, IGLJ3, IGLJ4, IGLJ5, IGLJ6, y IGLJ7 (SEQ ID NO: 128-134, respectivamente). Los genes Vh3 ilustrativos son IGHV3-7, IGHV3-9, IGHV3-11 , IGHV3- 6, IGHV3-19, IGHV3-20, IGHV3-21 , IGHV3-23, IGHV3-30, IGHV3-30*03, IGHV3-33, IGHV3-45, IGHV3-48, IGHV3-64, y IGHV3-74 (nomenclatura IMGT, alelos *01 excepto cuando el alelo diferente se especifica) (SEQ ID NO: 135-150, respectivamente). Los genes Jh ilustrativos son IGHJ1 , IGHJ2, IGHJ3, IGHJ4, IGHJ5 y IGHJ6 (SEQ ID NO: 151 -156, respectivamente). Las regiones J de la línea germinal se usan en su totalidad o en parte para seleccionar las secuencias FR4. Por ejemplo, los residuos del parátopo de la cadena liviana de mAb6785 se pueden injertar dentro del marco de la proteína VA3 codificada por IGLV3-1 (SEQ ID NO: 117) que se une a la secuencia de la región J codificada por IGLJ2 (SEQ ID NO: 129) con inserción de un residuo de aminoácido entre las secuencias IGLV3-1 y IGLJ2, por ejemplo, metionina. El marco! de la proteína VA3 codificada por IGLV3-1 puede contener sustituciones adicionales, por ejemplo, una sustitución de residuo de cisteína en la posición 33 de SEQ ID NO: 117 ("ACW") por ejemplo con asparagina; y sustitución de residuos 1-3 de la SEQ ID NO: 117 ("SYE") con la secuencia amino-terminal común a otra familias de cadena lambda, tal como, "QSV" de la familia IGLA L ' Las secuencias de genes funcionales ilustrativos de VA3 y JA se pueden usar para injertar residuos del parátopo de la cadena liviana de mAb6785 con la Inserción de cero, uno, o dos residuos de aminoácido entre los terminales earboxi codificados por los genes VA3 y los terminales amino codificados por los genes JA, de manera tal que la longitud de la región CDR3 sea de 11 aminoácidos. Por ejemplo, la metionina y la isoleucina se pueden insertar entre la IGLV3-22 (SEQ ID NO: 124) y la IGLJ2 (SEQ ID NO: 129). La Figura 1A muestra el alineamiento de los supercóntigos de la cadena liviana que se pueden usar para el injerto. Los residuos del parátopo de la cadena pesada de mAb6785 se pueden injertar, por ejemplo, sobre el marco de Vh3 codificado por IGWV3-23 (SEQ ID NO: 142), que se une a la secuencia FR4 de la región J (11 aminoácidos C-terminal, por ejemplo, "WGQGTLVTVSS") de IGHJ1 (SEQ ID NO: 151), con la inserción de aproximadamente 5-7 residuos, por ejernplo, 6 residuos, que constituyen HCDR3, entre las regiones V y j. Los aproximadamente 5-7 residuos de HCDR3 insertados incluyen la inserción de glutamina, leucina y treonina, por ejemplo, 3 de los residuos del parátopo a partir de Vh de mAb6785 (cuadro 10). Las secuencias de otros genes funcionales ilustrativos Vh3 y Jh se pueden usar para injertar los residuos del parátopo de la cadena pesada del mAb6785. En algunos casos, un aminoácido C-terminal del gen Vh3 se puede eliminar antes de la inserción de aproximadamente 5-7 residuos que constituyen la HCDR3 de manera tal que solo las secuencias de FR3 estén incluidas en el supercóntigo. Las secuencias de otros genes de Vh3 que codifican un CDR2 de 17 residuos (residuos 50-66 de IGHV3-23 (SEO. ID NO: 142) se pueden usar, además, y las secuencias de FR4 de otros genes Jh se pueden sustituir en lugar de IGJH1.

La unión específica a la IL-17A humana y la actividad biológica del anticuerpo resultante se pueden evaluar por medio del uso de métodos estándares. Los alineamientos de las regiones variables de la cadena liviana del mAb6785 y las regiones variables de la cadena pesada con los genes ilustrativos Vh3, VA3, JA o Jh se muestran en las Figuras 1A y 1 B. Alternativamente, los residuos del parátopo extendido del mAb6785, como se define en el cuadro 10, se pueden usar en lugar de residuos del núcleo del parátopo. Los anticuerpos industrializados con parátopo injertado se pueden modificar, además, por las sustituciones de los residuos de la Zona de Vernier (patente de los Estados Unidos núm. 6,639,055) o los residuos de determinación de afinidad (solicitud de patente de los Estados Unidos núm. 2010/0261620; Cobaugh y otros, J Mol Biol. 378:622-33, 2008) para mejorar las propiedades del anticuerpo, por ejemplo, la afinidad. En la medida que el anticuerpo con parátopo injertado retenga la unión a la IL-17A, la secuencia marco del aminoácido en el anticuerpo con parátópo-injertado puede ser 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, o 99 % idéntica a las secuencias marco del mAb6785. Las variantes alélicas para los marcos de genes de la línea germinal ilustrativa se pueden usar en lugar de las secuencias de proteínas de las regiones V y J. Las secuencias de las variantes alélicas son conocidas y se pueden obtener de la base de datos International ImMunoGeneTics (IMGT) (http_://_www_imgt_org).

Las secuencias de los sitios de unión al antígeno se pueden injertar, adicionalmente, a los residuos del parátopo por medio del usoi de los métodos estándares. Por ejemplo, se puede injertar un HCDR3 o LCDR3 completo.

Otra modalidad de la invención es un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a la IL-17A que compite para la unión de IL-17A humana que une con un anticuerpo monoclonal que comprende ciertos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, y las secuencias de aminoácidos de LCDR1 , LCDR2 y LCDR3. Los anticuerpos monoclonales ilustrativos de la invención son un anticuerpo aislado que comprende secuencias de aminoácidos de HCDR1 , HCDR2 y HCDR3 como se muestra en las SEQ ID NO: 25, 43 y 60 y las secuencias de aminoácidos de LCDR1 , LSCDR2 y LCDR3 como se muestra en las SEQ ID NO: 3, 6 y 18.

La competencia entre la unión específica a la IL-17A se ¡puede ensayar in vitro por medio de métodos conocidos. Por ejemplo, la unión del anticuerpo marcado con éster de NHS MSD Sulfo Tag™ a la IL-17A en presencia de un anticuerpo no marcado se puede evaluar por ELISA.

Otra modalidad de la invención de un anticuerpo aislado o anticuerpo o fragmento de este, en donde el anticuerpo se une específicamente a la IL-17A humana que tiene la secuencia mostrada en la SEQ ID NO: 105 en los residuos de aminoácidos 56-68 (SEQ ID NO: 157) y 100-1 16 (SEQ |D NO: 158); o en los residuos L26, R55, E57, P59, E60, R61 , Y62, S64, V65, W67, R101 , E102, P103 y F110.

Varias metodologías conocidas se pueden emplear para determinar el epítopo de unión de los anticuerpos de la invención. Por ejemplo, cuando se conocen las estructuras de ambos componentes individuales, una conexión entre proteína-proteína in silicio se puede llevar a cabo para identificar los sitios de interacción compatibles. El intercambio i hidrógeno-deuterio (D/HD) se puede llevar a cabo con el complejo de antígeno y anticuerpo para mapear regiones en el antígeno que se pueden unir por el anticuerpo. La mutagénesis de segmentos y puntos del antígeno se puede usar para localizar los aminoácidos importantes para la unión al anticuerpo. La estructura co-cristalina del complejo anticuerpo-antígeno se usa para identificar residuos que contribuyen al epítopo y el parátopo.

Previamente descritos, los anticuerpos anti-IL-17A se unen a epítopos en la IL-17A distintos del epítopo para Fab6468 descrito en la presente descripción. Se han descrito residuos de la IL-17A humana (SEQ ID NO: 105) unidos a los anticuerpos 74-85, 46-53, 71-87, 80-86, 1 1 -18, 29- 41 o 54-62 (publicaciones del PCT. núms. WO08/021 156, WO07/106769, WO07/149032, WO07/070750; solicitud de los Estados Unidos núm.

US2008/095775, respectivamente). Los epítopos conformacionales se han descrito en la publicación del PCTI. núm. WO09/130459 y Gerhardt y otros, J . Mol. Biol: 394:901-21 , 2009.

Otra modalidad de la invención es un anticuerpo aislado o fragmento de este, en donde el anticuerpo se une específicamente a una cavidad con forma de bolsa P2 en la IL-17A, la cavidad con forma dé bolsa P2 comprende los residuos de aminoácido V22, V24, L26, I28, Y62, L99, R101 , F1 10, y L1 12 de la SEQ ID NO: 105.

La estructura co-cristalina del homodímero de IL-17A con la anti-IL-17A Fab6468 identificó una cavidad con forma de bolsa P2 hidrófoba en la superficie del homodímero de IL-17A, que probablemente esté implicado en la unión de IL-17RA (ver Ejemplos). La "cavidad con forma de bolsa P2" como se usa en la presente descripción, se refiere a una cavidad estructural hidrófoba terciaria en el homodímero de IL-17A, en donde los residuos expuestos en la superficie en la bolsa P2 son V24, L26, I28, Y62, L99, R101 , F110 y L112 en el monómero A y V22, V24 y L112 en el monómero B, y viceversa. Los anticuerpos selectos de la invención que reaccionan con IL-17A, por ejemplo, Fab6468, tienen contactos directos con los residuos de la cavidad con forma de bolsa P2 L26, Y62, R101 y F110, cuyos residuos son parte, además, del epítopo Fab6468. Sin limitaciones teóricas de ninguna especie, se asume que los anticuerpós de la invención que se unen a los residuos de la cavidad con forma de bolsa P2 de la IL-17A selecta bloquean la interacción entre IL-17A y IL-17RA. Basado en la estructura co-cristalina, el mosaico de fenillalanina (FF) en los residuos 93 y 94 en una cadena liviana (SEQ ID NO: 79) de Fab6468 bloquea la interacción IL-17A IL-17RA, y así es un bloqueador de la cavidad con forma de bolsa P2. Otros antagonistas del bloqueador de la cavidad con forma de bolsa P2 están, además, dentro del alcance de la presente descripción, tal como péptidos nuevos o moléculas pequeñas. Estos se pueden modelar en función de la co-estrutítura IL-17A/Fab6468, y analizar por su habilidad de reemplazar Fab6468 unido a la IL-17A. Por ejemplo, los inhibidores de péptido se pueden analizar a partir de las genotecas de péptido aleatorias que han incorporado el mosaico FF (por ejemplo genotecas de XXXXFFXX; X indicaba cualquier aminoácido; F = fenilalanina) y mostrado en bacteriófago, como una fusión, por ejemplo, con proteína de revestimiento plll, pVII o pIX (US5,223,409; Gao y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 96:6025-30, 1999, Tornetta y otros, J. Immunol. Métodos. 360:39-46, 2010; Shi y otros, J. Mol. Biol. 397:385-96, 2010) y posteriormente probadas para determinar su inhibición de unión de Fab6468 a IL-17A, y la inhibición de la actividad de IL-17A.

Las pequeñas moléculas pueden ser analizadas por medio del uso de las genotecas de los compuestos naturales o sintéticos, o cualquier combinación de estos, y los aciertos positivos primarios resultantes pueden ser rápidamente modificados para producir los análogos estructurales! de los agentes. Son conocidos los métodos de elaboración de las genotecas de péptidos y fusiones de pIX, y el análisis de las genotecas resultantes.

Otra modalidad de la invención de un método para inhibir la interacción de la IL-17A humana con IL-17RA comprende: proporcionar la IL-17A humana y la IL-17RA; y contactar la IL-17A humana con un antagonista que se une específicamente a la IL-17A humana en al menos un residuo de aminoácido seleccionado a partir del grupo que consiste en V22, V24, L26, 128, Y62, L99, R101 , F1 10, y L1 12.

Otra modalidad de la invención es un método para inhibir la actividad biológica de la IL-17A humana, que comprende: proporcionar la IL17 -A humana y la IL-17RA; y contactar la IL-17A humana con un antagonista que se une específicamente a la IL-17A humana en al menos un residuo de aminoácido seleccionado a partir del grupo que consiste en V22, V24, L26, I28, Y62, L99, R101 , F1 10, y L1 12.

Se puede proporcionar la IL-17A humana y la IL-17RA como proteínas aisladas o proteínas de fusión. El homodímero de IL-17A humana se puede modificar a partir de medios de células activadas Th17 preparadas por estimulación in vitro de células CD4 T precursoras por dos estimulaciones anti-CD3/anti-CD28 en presencia de la IL-2, IL-23 y IL-? ß. La IL-17RA se puede asociar con células o membranas de células, pueden ser nativas o sobreexpresadas, o pueden ser un fragmento de IL-17RA, por ejemplo, dominio extracelular del receptor. La IL-17RA puede ser una IL-17RA humana o IL-17RA de otras especies tales como ratón, rata o mono. Los antagonistas que se unen a residuos de la IL-17A humana V22, V24, L26, I28, Y62, L99, R101 , F110, y L112 se pueden identificar por la habilidad del antagonista para reemplazar Fab6468 que se une a la IL-17A, por estudios de mutagénesis o por medio de estructuras co-cristalinas. Las proteínas de fusión de la IL-17A humana y la IL-17RA se pueden preparar por medio de métodos conocidos. La proteína de fusión ilustrativa es una IL-17RA soluble fusionada a un dominio Fe de inmunoglóbulina.

Otro aspecto de la invención es un polinucleótido aislado que codifica cualquiera de las cadenas pesadas del anticuerpo o las cadena livianas del anticuerpo o fragmentos de este de la invención o de su complemento. Ciertos polinucleótidos ilustrativos se describen en la presente descripción, sin embargo, otros polinucleótidos, los cuales, dado la degeneración de las preferencias del código genético o codón en un sistema de expresión dado, codifican los antagonistas del anticuerpo de la invención están, además,! dentro del alcance de la invención. Los polinucleótidos ilustrativos se muestran en las SEQ ID NO: 101 , 102, 103 y 104.

Los antagonistas del anticuerpo ilustrativos pueden ser anticuerpos de los isotipos IgG, IgD, IgE, IgA o IgM. Además, dichos antagonistas del anticuerpo pueden modificarse posteriormente a la traducción por medio de procesos tales como glicosilación, isomerización, desglicosilación o modificación covalente no natural, tal como la adición de entidades de polietilenglicol (PEG) (pegilación) y lipidación. Dichas modificaciones pueden ocurrir in vivo or in vitro. Por ejemplo, los anticuerpos de la invención se pueden conjugar a polietilenglicol (PEGilatado) para mejorar sus perfiles farmacocinéticos. La conjugación se puede llevar a cabo por medio de técnicas conocidas para aquellos con experiencia en la materia. Se ha demostrado que la conjugación de los anticuerpos terapéuticos con PEG mejora la farmacodinámica y no interfiere con la función. Ver Deckert y otros, nt. J.

Cáncer 87:382-90, 2000; Knight y otros, Platelets 15:409-18, 2004; Lieong y otros, Cytokine 16:106-19, 2001 ; y Yang y otros, Protein Eng. 16:761-70, 2003.

Las propiedades farmacocinéticas de los anticuerpos ' de la invención se pueden mejorar a través de las modificaciones de Fe por medio de las técnicas conocidas para aquellos con experiencia en la materia. La 'i' Fe" de un anticuerpo no está implicada directamente en la unión de un anticuerpo a un antígeno, pero exhibe varias funciones que la afectan. "Fe" de un anticuerpo es un término conocido y se define en función del clivaje de papaína de anticuerpos. La Fe de un anticuerpo está implicada directamente en ; ADCC (citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos) y CDC (citotoxicidad dependiente del complemento) basado en la activación del complemento, unión de C1q y unión al receptor Fe. Dicho complemento y sitios de unión al receptor de Fe son conocidos e incluyen por ejemplo L234 L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331 , y P329 (numeración de acuerdo con el índice EU de Kabat) (Brekke y otros, Eur. J. Immunol. 24:2542-7,! 1995; patentes de los Estados Unidos núms. 5,624,821 , 7,597,889, Canfield y Morrison, J. Exp. Med. 173:1483-91 , 1991). Por ejemplo, la mutación de Leu234/Leu235 en la región bisagra de lgG1 a L234A/L235A o Phe235/Leu236 en la región bisagra de lgG4 a P235A/L236A minimiza la unión a FcR y reduce la capacidad de la inmunoglobulina para mediar la citotoxicidad dependiente del complemento y la ADCC. Una sustitución de Ser a Pro en el mosaico Cys-Pro-Ser-Cys (CPSC) en la región bisagra de las cadenas pesadas de lgG4 capaces de formar enlaces disulfuro entre o dentro de la cadena pesada in viyo por medio de acción de isomerasas (Aalberse y Schuurman, Immunology 105:9-19, 2002) produce un "comportamiento de tipo lgG1", es decir, las moléculas sustituidas con Pro no pueden formar los enlaces disulfuro entre cadenas pesadas. El mosaico de CPSC se localiza, típicamente, en el residuo ¡228 de una cadena pesada madura pero puede cambiar dependiendo de las longitudes de CDR. Una región de Fe de lgG1 ilustrativa que tiene los residuos Leu234/Leu235 tiene una secuencia de aminoácido que se muestra en la SEQ ID NO: 1 14, en donde los residuos L117 y L118 corresponden a los residuos Leu234/Leu235 en la cadena pesada madura. Una región de Fe dé 1gG4 ilustrativa que tiene el mosaico Pro-Ser-Cys (CPSC) y los residuos Leu234/Leu235 tiene una secuencia de aminoácido que se muestra enj la sec con núm. de ident.: 115 en donde el mosaico de CPSC se localiza en los residuos 106-109 y los residuos Leu234/Leu235 en las posiciones 122 y 123.

Los anticuerpos o fragmentos de estos de la invención modificados para mejorar la estabilidad, selectividad, reactividad cruzada, afinidad, immunogenicidad u otra propiedad biofísica o biológica de|seáble están dentro del alcance de la invención. La estabilidad de un anticuerpo está influenciada por un número de factores, que incluyen (1) empaquetado central de los dominios individuales que afectan su estabilidad intrínseca, (2) interacciones de interfase de proteína/proteína que tienen impacto sobre en el apareamiento de HC y LC, (3) entierro de residuos cargados y polares, (4) red de enlance-H para residuos cargados y polares; y (5) distribución de residuos polares y cargados de la superficie entre fuerzas intra e ínter moleculares (Worn y otros, J. Mol. Biol. 305:989-1010, 2001 ). La estructura potencial que desestabiliza los residuos puede ser identificada en base a la estructura de cristalina del anticuerpo o por medio del modelado molecular en ciertos casos, y el efecto de los residuos sobre la estabilidad del anticuerpo se puede probar al generar y evaluar las variantes que albergan mutaciones en los residuos identificados. Uno de los modos para incrementar la estabilidad del anticuerpo es elevar el punto medio de transición térmico (Tm) tal como se mide por medio de calorimetría diferencial de barrido (DSC por sus siglas en inglés). Generalmente, la proteína Tm está correlacionada con su estabilidad y correlacionada en forma inversa con su susceptibilidad para el despliegue y desnaturalización en solución y los procesos de degradación que dependen de la tendencia de la proteína para desplegarse (Remmele y otros, Biopharm. 13:36-46, 2000).

Varios estudios han determinado la correlación entre la clasificación de la estabilidad física de las formulaciones medidas como estabilidad térmica por DSC y la estabilidad física medida por otros métodos (Gupta y otros, | AAPS PharmSci. 5E8, 2003; Zhang y otros, J. Pharm. Sci. 93:3076-89, 2004; Maa y otros, Int. J. Pharm., 140:155-68, 1996; Bedu-Addo y otros, Pharm.i Res., 21 :1353-61 , 2004; Remmele y otros, Pharm Res., 15:200-8, 1997). Los estudios de formulación sugieren que una Tm de Fab tiene efecto en la estabilidad física a largo plazo de un mAb correspondiente. Las diferencias de aminoácidos en cualquier marco o dentro de los CDR podrían tener efectos significativos sobre la estabilidad térmica del dominio de Fab (Yasui, y otros, FEBS Lett. 353:143-6, 1994).

Los antagonistas de anticuerpos de la invención pueden! unir la IL-17A con una Kd menor o igual a aproximadamente 10"7, 10'8, 10"9, 10"10, 10"11 o 10"12 M. La afinidad de una molécula determinada para la IL-17A, tal como un anticuerpo, puede determinarse experimentalmente con cualquier método adecuado. Dichos métodos pueden usar instrumentación Biacore o KinExA, ELISA o ensayos de unión competitiva conocidos para las personas con experiencia en la materia.

Los antagonistas de anticuerpos que unen la IL-17A humana con una afinidad deseada pueden seleccionarse a partir de genotecas de variantes o fragmentos por medio de técnicas que incluyen la maduración de la afinidad de los anticuerpos. Los antagonistas de anticuerpos pueden identificarse en base a su inhibición de la actividad biológica de IL-17A con cualquier método adecuado. Tales métodos pueden usar ensayos de: genes reporteros o ensayos de medición de la producción de citocinas por medio de métodos muy conocidos y tal como se describe en la solicitud.

Otra modalidad de la invención es un vector que comprende al menos un polinucleótido de la invención. Tales vectores pueden ser vectores plasmídicos, vectores virales, vectores para la expresión de baculqvirus, vectores basados en transposones o cualquier otro vector adecuado para introducir los polinucleótidos de la invención en un organismo determinado o antecedente genético por cualquier medio.

Otra modalidad de la invención es una célula huésped que comprende cualquiera de los polinucleótidos de la invención, tal como un polinucleótido que codifica un polipéptido que comprende una región variable de cadena pesada de inmunoglobuiina que tiene la secuencia de aminoácidos ilustrada en las SEQ ID NO: 67-75 y 81-86 o una ¡ región variable de cadena liviana de inmunoglobuiina que tiene la secuencia de aminoácidos que se muestra en las SEQ ID NO: 62-66 y 76-80 o una cadena pesada de inmunoglobuiina que tiene la secuencia de aminoácidos ilustrada en las SEQ ID NO: 92-100 o una cadena liviana de inmunoglobuiina que tiene la secuencia de aminoácidos que se muestra en las SEQ ID NO: 87-91. Dichas células huésped pueden ser Células eucariotas, células bacterianas, células vegetales o células arqueas. Las células eucariotas ilustrativas pueden ser de mamíferos, de insectos, de aves o de otros animales. Las células eucariotas de mamíferos incluyen líneas celulares inmortalizadas, tales como hibridomas, o líneas celulares de mielomas, tales como líneas celulares murinas SP2/0 (Colección americana de cultivos tipo (ATCC, por sus siglas en inglés), Manassas, VA, CRL-1581), NSO (Colección europea de cultivos celulares (ECACC, por sus siglas en inglés), Salisbury, Wiltshire, Reino Unido, núm. de registro en ECACC 85110503), FO (ATCC CRL-1646) y Ag653 (ATCC CRL-1580). Una línea celular de mieloma humano ilustrativa es U266 (ATTC CRL-TIB-196). Otras líneas celulares útiles incluyen las derivadas de las células de ovarios de hámster chino (CHO, por sus siglas en inglés) tales como CHO-K1 SV (Lonza Biologics, Walkersville, MD), CHO-K1 (ATCC CRL-61 ) o DG44.

Otra modalidad de la invención es un método para fabricar un reactivo de anticuerpos con IL-17A que comprende el cultivo de una célula huésped de la invención y la recuperación del anticuerpo producido por la célula huésped. Los métodos para fabricar anticuerpos y purificarlos son muy conocidos en la materia. Para la expresión, las secuencias de cadena pesada de las familias diseñadas por ingeniería 2, 6a, 6b, 19a y 19b pueden incluir una secuencia líder N-terminal, tal como MAWVWTLLFLMAAAQSIQA (SEQ ID NO: 109). Las secuencias de nucleótidos ilustrativas que codifican la cadena pesada del candidato mAb6785 (familia 19) con una secuencia líder y la forma madura (sin una secuencia líder) se muestran en las SEQ ID NO: 101 y 102, respectivamente. De manera similar, para la expresión, las secuencias de cadena liviana de los anticuerpos de las familias 2, 6a, 6b de la invención pueden incluir una secuencia líder N-terminal tal como MGVPTQVLGLLLLWLTDARC (SEQ ID NO: 110)y las secuencias de cadena liviana de los anticuerpos dé las familias 19a y 19b de la invención pueden incluir una secuencia líder N-terminal tal como MAWSPLLLTLLAHCTGSWA (SEQ ID NO: 116). Las secuencias de nucleótidos ilustrativas que codifican la cadena liviana de mAb6785 optimizado por codones con una secuencia líder y la forma madura (sin una secuencia líder) se muestran en las SEQ ID NO: 103 y 104, respectivamente.

Otra modalidad de la invención es una línea celular de hibridoma que produce un anticuerpo de la invención.

Métodos de tratamiento Los antagonistas de IL-17A de la invención, por ejemplo, antagonistas de anticuerpos de IL-17A, pueden usarse en cualquier terapia en la que se desea reducir los efectos de IL-17A en el animal tratado. La |L- 17A puede circular en el cuerpo o puede estar presente en un nivel indeseablemente alto localizado en un sitio específico en el cuerpo, por ejemplo, un sitio de inflamación. Sin limitaciones teóricas de ninguna especie, los antagonistas de la invención proporcionan una terapia benéfica mediante la prevención o reducción de la unión de IL-17A a su receptor, o la homo o heterodimerización de IL-17A. Los métodos de la invención pueden usarse para tratar un animal que pertenece a cualquier clasificación. Los ejemplos de dichos animales incluyen mamíferos, tales como humanos, roedores, perros, gatos y animales de granja.

Los anticuerpos de la invención pueden ser útiles para la profilaxis y el tratamiento de condiciones mediadas por IL-17A, tales como condiciones inflamatorias, alergias y condiciones alérgicas, reacciones de hipersensibilidad, enfermedades autoinmunes, infecciones severas y rechazo al transplante de órganos o tejidos. Los anticuerpos de la invención son útiles, además, para preparar un medicamento para dicho tratamiento, en donde el medicamento se prepara para administrar en las dosificaciones definidas en la presente descripción. Las condiciones mediadas por IL-17A ilustrativas son condiciones inflamatorias, trastornos inmunes y proliferativos que incluyen artritis reumatoide (RA), espondilitis anquilosante, artritis soriásica, osteoartritis, osteoporosis, uveítis, fibrosis inflamatoria (por ejemplo, escleroderma, fibrosis pulmonar y cirrosis), trastornos intestinales inflamatorios (por ejemplo, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa y enfermedad intestinal inflamatoria), asma (que incluye asma alérgica), alergias, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, esclerosis múltiple, soriasis, lupus eritematoso sistémico, diabetes y cáncer. Los resultados positivos en pacientes tratados con terapias con IL-17A antihumana se han descrito en artritis reumatoide, soriasis y uveítis no infeccionsa (Genovese y otros, Arthritis Rheum. 62:929-39, 2010; Hueber y otros, Sci. Transí. Med. 2: 52ra72., 2???).

La condición pulmonar inflamatoria es un ejemplo de una condición inflamatoria. Las condiciones pulmonares inflamatorias ilustrativas incluyen las condiciones pulmonares inducidas por infección que incluyen las asociadas con infecciones virales, bacterianas, fúngicas, parasitarias o por priones; condiciones pulmonares inducidas por alérgenos; condiciones pulmonares inducidas por contaminantes tales como asbestosis, silicosis o beriliosis; condiciones pulmonares inducidas por aspiración gástrica, desregulación inmune, condiciones inflamatorias con predisposición genética, tales como fibrosis quística y condiciones pulmonares inducidas por trauma físico, tales como lesión en el aparato respiratorio. Estas condiciones inflamatorias incluyen, además, asma, efisema, bronquitis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), sarcoidosis, hístiocitosis, linfangiomiomatosis, lesión pulmonar aguda, síndrome de enfermedad respiratoria aguda, enfermedad pulmonar crónica, displasia broncopulfnonar, neumonía comunitaria, neumonía nosocomial, neumonía asociada con el aparato respiratorio, sepsis, neumonía viral, infección por influenza, infección por parainfluenza, infección por rotavirus, infección por el metaneumovirus humano, infección por el virus sincitial respiratorio e infección por aspergillus u otras infecciones fúngicas. Las enfermedades inflamatorias asociadas con infecciones ilustrativas pueden incluir neumonía viral o bacteriana que incluye neumonía severa, fibrosis quística, bronquitis, exacerbaciones de las vías respiratorias y síndrome de enfermedad respiratoria aguda (ARDS, por sus siglas en inglés). Dichas condiciones asociadas con la infección pueden implicar infecciones múltiples, tales como infección viral primaria e infección bacteriana secundaria. La producción desregulada de IL-17A puede actuar en la patología de enfermedades pulmonares, tales como asma y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) (analizada en Alcorn y otros, Anxnu. Rev. Physiol. 72:495-516, 2010). Se ha demostrado que la IL-17A recula la inflamación neutrofílica en los pulmones (una característica distintiva del asma severo además de COPD) debido a la capacidad de IL-17A para inducir factores importantes en la reclutacion, supervivencia y activación de neutrófilos a partir de células epiteliales residentes en los pulmones (por ejemplo, IL-6, IL-8, G -CSF, G-CSF). Los anticuerpos de la presente invención suprimen la secreción de IL-6, IL-8 y GM-CSF a partir de células epiteliales pulmonares y, asi, pueden ser beneficiosos para el tratamiento terapéutico o profiláctico de sujetos con condiciones inflamatorias pulmonares, tales como asma y COPD. Los modelos animales usados comúnmente para el asma y la inflamación de las vías respiratorias incluyen el modelo de prueba de ovalbúmina y los modelos de sensibilización de metacolina (Hessel y otros, Eur. J. Phafmácol. 293:401-12, 1995). La inhibición de la producción de citocina y quimocina a partir de células epiteliales bronquiales humanas cultivas, fibroblastos bronquiales o células musculares suaves de las vías respiratorias puede usarse, además, como modelos in vitro. La administración de antagonistas de la presente invención a cualquiera de estos modelos puede usarse para evaluar el uso de dichos antagonistas para reducir los síntomas y alterar el curso del asma, inflamación de las vías respiratorias, COPD y similares. , La soriasis es otro ejemplo de una condición inflamatoria. La soriasis se caracteriza por la hiperproliferación mediada por células T de queratinocitos acoplados con un infiltrado inflamatorio. La inflamación e hiperproliferación del tejido soriatico se asocia con un perfil histológico, antigénico y de citocina diferente al de la piel normal. Entre las citocinas asociadas con la soriasis se encuentran: TNFa, IL-19, IL-18, IL-15, IL-12, IL-7, IFNy, IL-17A y IL-23 (Gudjonsson y otros, Clin. Exp. Immunol. 135:1 -8, 2004). La sobreexpresión de IL-17A se ha encontrado en lesiones sonásicas (patente de los Estados Unidos núm. 7,776,540) y se han descrito resultados positivos en pacientes tratados con terapias de IL-17A anti-humana (Hueber y otros, Sci. Transí. Med. 2: 52ra72., 2010).

La artritis, que incluye la osteoartritis, la artritis reumatoide, las articulaciones artríticas como resultado de lesión y similares, es una condición inflamatoria común que podría beneficiarse del uso terapéutico de proteínas anti-inflamatorias, tales como los antagonistas de la presente invención. La activación de la señalización de IL-17A puede perpetuar la inflamación e incluso dañar el tejido en la articulación inflamada. Se conocen varios modelos animales para la artritis reumatoide. Por ejemplo, en el modelo de artritis inducida por colágeno (CIA, por sus siglas en inglés), los ratones desarrollan artritis inflamatoria crónica muy parecida a la artritis reumatoide en humanos. La administración de los anticuerpos de la IL-17A de la presente invención a los ratones modelo de CIA puede usarse para evaluar el uso de estos antagonistas para reducir los síntomas y alterar el curso de las enfermedades.

Las condiciones gastrointestinales inflamatorias són la enfermedad intestinal inflamatoria (IBD, por sus siglas en inglés), la colitis ulcerativa (UC, por sus siglas en inglés) y la enfermedad de Crohn (CD, por sus siglas en inglés), la colitis inducida por factores ambientales (por ejemplo, inflamación gastrointestinal (por ejemplo, colitis) causada ! por o asociada con (por ejemplo, como un efecto secundario) un régimen terapéutico, tal como la administración de quimioterapia, terapia por radiación y similares), colitis infecciosa, colitis isquémica, colitis colagenosa o linfocítica, enterocolitis necrotizante, colitis en condiciones, tales' como enfermedad granulomatosa crónica o celiaquía, alergias a los alimentos, gastritis infecciosa o enterocolitis (por ejemplo, gastritis crónica activa por infección con Helicobacter pylori) y otras formas de inflamación gastrointestinal causada por un agente infeccioso. Existen varios modelos animales para las condiciones gastrointestinales inflamatorias. Algunos de los modelos más ampliamente usados son el modelo de colitis inducida por etanol/ácido 2,4,6-trinitrobencenosulfónico (TNBS) o el modelo de oxazolona, que induce la inflamación crónica y la ulceración en el colon (Neurath y otros, Intern. Rev. Immunol 19:51-62, 2000). Otro modelo! usa el dextrano sulfato sódico (DSS, por sus siglas en inglés) que induce una colitis aguda manifestada por diarrea sangrante, pérdida de peso, acortamiento del colon y ulceración mucosal con infiltración de neutrófilos. Otro modelo implica la transferencia adoptiva de células precursoras T con alta expresión de CD4 de CD45RB a ratones RAG o SCID. En este modelo, las células precursoras T donantes atacan el intestino receptor y causan inflamación intestinal crónica y síntomas similares a las enfermedades intestinales inflamatorias en humanos (Read y Powrie, Curr. Protoc. Immunol. capítulo 15 unidad 15.13, 2001 ). La administración de antagonistas de la présente invención en cualquiera de estos modelos puede usarse para evaluar la eficacia del potencial de esos antagonistas para reducir los síntomas y alterar el curso de las enfermedades asociadas con inflamación en el intestino, tal como enfermedad intestinal inflamatoria.

La fibrosis renal puede desarrollarse a partir de un i factor negativo agudo (por ejemplo, isquemia/reperfusión de injerto) (Freese y otros, Nephrol. Dial. Transplant. 16:2401-6, 2001 ) o condición crónica (por ejemplo, diabetes) (Ritz y otros, Nephrol. Dial. Transplant. 1 1 Suppl 9:38-44, 1996). La patogénesis se caracteriza, típicamente, por una respuesta inflamatoria inicial seguida de fibrogénesis sostenida del aparato de filtración glomerular e intersticio tubular (Liu, Kidney Int. 69:213-7, 2006). Se ha demostrado que la fibrosis tubulointersticial actúa esencialmente en la patogénesis de la lesión renal en la falla renal en etapa terminal y! se ha determinado que la célula del tubo proximal es un mediador central (Phillips y Steadman, Histol. Histopathol. 17:247-52, 2002; Phillips, Chang Gung Med. J. 30:2-6, 2007). La fibrogénesis en el compartimento tubulointersticial está mediada en parte por la activación de fibroblastos residentes que secretan citocinas proinflamatorias que estimulan el epitelio del tubulo proximal para secretar los mediadores inflamatorios y fibrogénicos locales. Ademas, las células epiteliales y los fibroblastos secretan citocinas quemotácticas y proporcionan un gradiente direccional que guía la infiltración de monocitos/macrófagos y células T en el espacio tubulointersticial. El infiltrado inflamatorio produce citocinas inflamatorias y fibrogénicas adicionales que también activan la liberación de citocinas epiteliales y fibroblastos al mismo tiempo que, ademas, estimulan el epitelio para exponerlo a una transición fenotípica en la cual las células depositan un exceso de componentes dé la matriz extracelular (Simonson, Kidney Int. 71 :846-54, 2007). Se ha demostrado que la IL-17A se regula en alza durante el rechazo al alqinjerto renal humano (Van Kooten y otros, J. Am. Soc. Nephrol. 9: 1526-34,: 1998; Loong y otros, J. Path. 197:322-32, 2002). La IL-17A estimula la producción de los mediadores proinflamatorios IL-6, IL-8, el componente C3 del complemento y RANTES por el epitelio tubular (Van Kooten y otros, J. Am. Soc. Nephrol. 9:1526-34, 1998; Woltman y otros, J. Am. Nephrol. 1 1 :2044-55, 2000). A su vez, estos factores median el reclutamiento de otros tipos celulares inflamatorios en el intersticio que contnbuyen al mantenimiento de la respuesta inflamatoria/inmune y, si no se suprimen, contribuyen a la aparición de fibrosis y nefropatía de aloinjerto crónica (Racusen y otros, Kidney Int. 55:713-23, 1999; Mannon, Am. J. Transpl. 6:867-75, 2006) j Otras condiciones fibróticas ilustrativas pueden incluir fibrosis del hígado (que incluye, pero no se limita a, cirrosis inducida por alcohol, ¡cirrosis inducida por virus, hepatitis autoinmune inducida); fibrosis pulmonar (que incluye, pero no se limita a, escleroderma, fibrosis pulmonar idiopática); fibrosis del riñon (que incluye, pero no se limita a, escleroderma, nefritis diabética, nefritis glomerular, nefritis por lupus); fibrosis dérmica (que incluye, pero no se limita a, escleroderma, cicatrices queloides e hipertróficas, quemaduras); mielofibrósis; neurofibromatosis; fibroma; fibrosis intestinal; y adhesiones fibróticas resultantes de procedimientos quirúrgicos. La fibrosis puede ser fibrosis específica de un órgano o fibrosis sistémica. La fibrosis específica del órgano puede asociarse con la fibrosis pulmonar, fibrosis del hígado, fibrosis del riñon, fibrosis del corazón, fibrosis vascular, fibrosis de la piel, fibrosis de los ojos o fibrosis de la médula espinal. La fibrosis pulmonar puede asociarse con fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis pulmonar inducida por fármacos, asma, sarcoidosis o enfermedad pulmonar obstructiva crónica. La fibrosis del hígado puede asociarse con cirrosis, esquistomasomiasis o colangitis. La cirrosis puede seleccionarse de cirrosis alcohólica, cirrosis posterior a la hepatitis C, cirrosis biliar primaria. La colangitis j puede ser colangitis esclerosante. La fibrosis del riñon puede asociarse con nefropatía diabética o lupus glomeruloesclerosis. La fibrosis del corazón puede asociarse con infarto del miocardio. La fibrosis vascular puede asociarse con restenosis arterial posterior a la angioplastía o aterosclerosis. La fibrosis dé la piel puede asociarse con cicatrices por quemaduras, cicatrices hipertróficas, queloides o dermopatía fibrosante nefrogénica. La fibrosis del ojo puede asociarse con fibrosis retro-orbital, cirugía posterior a cataratas o vitroretifiopatía proliferativa. La fibrosis en la médula espinal puede asociarse con mielofibrosis idiopática o mielofibrosis inducida por fármacos. La fibrosis sistémica puede ser esclerosis sistémica o enfermedad en el injerto versus en el huésped.

Otras condiciones inflamatorias o neuropatías que pueden evitarse o tratarse por los métodos de la invención son aquellas causados por enfermedades autoinmunes. Estas condiciones y las neuropatías incluyen esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico y trastornos degenerativos y del sistema nervioso central (CNS, por sus siglas en inglés) que incluyen enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, trastorno bipolar y esclerosis lateral amiotrófica (ALS, por sus siglas en inglés), enfermedades del hígado que incluyen cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria, esteatohepatitis/enfermedad del hígado graso no causada por alcohol, fibrosis, virus de la hepatitis C (HCV) y virus de la hepatitis B (HBV), diabetes y resistencia a la insulina, trastornos cardiovasculares que incluyen aterosclerosis, hemorragia cerebral, derrame cerebral e infarto del miocardio, artritis, artritis reumatoide, artritis soriásica, y artritis reumatoide juvenil (JRA), osteoporosis, osteoartritis, pancreatitis, fibrosis, encefalitis, soriasis, arteritis de células gigantes, espondilitis anquilosante, hepatitis autoinmune, virus de la inmunodeficiencia humana (HIV), condiciones inflamatorias de la piel, transplante, cáncer, alergias, enfermedades endocrinas, reparación de heridas, otros trastornos autoinmunes, hiperresponsividad de las vías aéreas e infecciones o trastornos mediados por células, virus o priones.

Composiciones farmacéuticas/administración La "cantidad terapéuticamente eficaz" del agente eficaz en el tratamiento de condiciones, en donde la supresión de la actividad de IL-17A es deseable, puede determinarse por medio de técnicas de investigación i estándar. Por ejemplo, la dosificación del agente que será efectivo para el tratamiento de una condición inflamatoria tal como enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa o artritis reumatoide puede determinarse por medio de la administración del agente a modelos animales relevantes, tales como los modelos descritos en la presente descripción.

Además, los ensayos in vitro pueden usarse, opcionalmente, para facilitar la identificación de intervalos de dosificación óptimos. Las personas con experiencia en la materia pueden determinar {por ejemplo, por medio de pruebas clínicas) la selección de una dosis eficaz específica en base a la consideración de varios factores. Tales factores incluyen la enfermedad que se tratará o evitará, los síntomas implicados, la masa corporal del paciente, el estado inmune del paciente y otros factores conocidos por el experto en la materia. La dosis precisa que se usará para la formulación dependerá, además, de la ruta de administración y la severidad de la enfermedad y debería determinarse de conformidad con el criterio del practicante y las circunstancias del paciente. Las dosis eficaces pueden extrapolarse a partir de curvas de dosis-respuesta derivadas de sistemas de prueba de modelos in vitro o de modelos animales.

El modo de administración para el uso terapéutico del agente de la invención puede ser cualquier ruta adecuada que suministra el agente al huésped. Las composiciones farmacéuticas de estos agentes son particularmente útiles para administración parenteral, por ejemplo, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea o intranasal.

El agente de la invención puede prepararse como composiciones farmacéuticas que contienen una cantidad eficaz del agente como un ingrediente activo en un portador farmacéuticamente aceptable. El término "portador" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo con el cual se administra el compuesto activo. Dichos vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos, tales como agua y aceites que incluyen los provenientes del petróleo o de origen animal, vegetal o sintético, tales como aceite de cacahuate, aceite de frijol de soya, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. Por ejemplo, se puede usar solución salina al 0.4 % y glicina al 0.3 %. Estas soluciones son estériles y, generalmente, libres de materia particulada, pueden esterilizarse por medio de técnicas de esterilización convencionales muy conocidas (por ejemplo, filtración). Las composiciones pueden contener sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables según se requiera para aproximarse a las condiciones fisiológicas tales como agentes amortiguadores y de ajuste del pH, agentes estabilizantes, espesantes, lubricantes y colorantes, etc. La concentración del agente de la invención en dicha formulación farmacéutica puede variar ampliamente, es decir, de menos de aproximadamente 0.5 %, usualmente de o de al menos aproximadamente 1 % hasta tanto como 15 o 20 % en peso y se seleccionará mayormente en ¡base a la dosis requerida, volúmenes de fluidos, viscosidades, etc., de conformidad con el modo de administración especifico seleccionado.

Así, una composición farmacéutica de la invención para inyección intramuscular podría prepararse de modo que contenga 1 mi de agua tamponada estéril, y de aproximadamente 1 ng a aproximadamente 100 mg, por ejemplo, de aproximadamente 50 ng a aproximadamente! 30 mg o, con mayor preferencia, de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 25 mg, de un antagonista de anticuerpos de IL-17A de la invención. De manera similar, una composición farmacéutica de la invención para infusión intravenosa podría prepararse de modo que contenga aproximadamente 250 mi de solución de Ringer estéril y de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 30 mg y, preferentemente, de 5 mg a aproximadamente 25 mg de un antagonista de la invención. Los métodos actuales para preparar composiciones administrables por vía parental son muy conocidos y se describen con más detalle, por ejemplo, en "Remington's Pharmaceutical Science", 15.° ed., Mack Publishing Company, Easton, PA.

Los antagonistas de anticuerpos de la invención liofilizarse para el almacenamiento y reconstruirse en un portador adecuado antes del uso. Se ha demostrado que esta técnica es eficaz para las preparaciones convencionales de inmunoglobulinas y proteínas y se pueden i ? usar técnicas de liofilización y reconstitución conocidas en la materia, j La presente invención se describirá ahora con referenciá á los siguientes ejemplos específicos no limitantes.

EJEMPLO 1 Identificación de mAbs antagonísticos de IL-17A antihumana La genoteca de exhibición de fagos Gold de la Genotéca de anticuerpos combinatorios humanos de MorphoSys (HuCAL®) AG, Martinsried, Alemania) se usó como fuente de fragmentos de anticuerpos humanos y se separó por criba en subconjuntos en solución. En la primera ronda de separación por criba se seleccionaron las subgenotecas cor á las variantes A132Q y A70Q de IL-17A etiquetadas con H¡s6 maduro bioiinilado (IL-17Amut6) (SEQ ID NO: 106). En la segunda ronda, el resultado i amplificado de la ronda 1 se seleccionó contra IL-17Amut6 etiquetado con H¡s6 biotinilada en presencia o ausencia de otros miembros de la familia de IL- 17A como competidor contrario a los anticuerpos que fueron específicos para la IL-17A. El resultado amplificado de la ronda 2 se dividió en dos conjuntos. El primer conjunto se separó por criba como en la ronda 1. Los clones en el segundo grupo se diversificaron aun mas en HCDR2 o LCDR3, dependiendo de la subgenoteca usada en las selecciones iniciales, y después, se realizaron a través de 2 rondas adicionales de separación por criba contra IL-17Amut6 para dar una segunda fuente de clones para el análisis. Los Fabs de jlisados de clones se captaron en pocilios de placas de ELISA revestidas con anticuerpos de Fd antihumano de oveja y se analizaron para determinar la unión a IL-17Amut6 biotinilado. Los lisados crudos de clones positivos se analizaron para determinar la inhibición de la unión de IL-17Amut6 al receptor de IL- 7RA humana recombinante (SEQ ID NO: 107).

Los clones seleccionados se eligieron para caracterización posterior como Fabs purificados basados en la puntuación de la secuencia, afinidad y representación de todas las familias de secuencias y se designaron con números de MOR Se generaron variantes adicionales para MOR7708, MOR7785, MOR7706, MOR7775 y MOR7700 para reemplazar Trp o Met residente en HCDR2, HCDR3 o LCDR3. El cuadro 3 muestra las variantes generadas.

CUADRO 3 Se probaron los Fabs para determinar su inhibición de la unión i de IL-17Amut6 y cynolL-17A al receptor de IL-17RA humana y su unión a IL-17Amut6. Todos los Fabs probados inhibieron la unión de IL-17Amut6 y cynolL- 7A al IL-17RA. La afinidad de los Fabs a IL-17Amut6 se midió con el ensayo SET (cuadro 4). A partir de los Fabs identificados, se seleccionaron candidatos de las familias 2, 6a, 6b, 19a y 19b para mayor caracterización.

CUADRO 4 EJEMPLO 2 Derivación, diseño mediante ingeniería genética y caracterización de mAbs antagonísticos anti-IL-17A Los MOR# Fabs seleccionados se convirtieron y expresaron como mAbs en formato de lgG1 humana y se asignó a ellos la designación MORmAb correspondiente. Los MORmAbs generados se probaron para determinar la expresión y agregación, su capacidad para inhibir la unión humana y cyno IL-17A a IL-17RA humana y la secreción de IL-8 a partir de células NHDF. El cuadro 5 muestra los valores de IC50 para los ensayos seleccionados para el MORmAbs. Ninguno de los MORmAbs probados (MORmAb#s 7702, 7708, 7785, 7786, 7706, 7775, 7700, 8095, 8096, 8097, 8098, 7768) reaccionó en forma cruzada con otros miembros de la familia de IL-17.

CUADRO 5 Diseño genético marco de mAbs antagonístico de anti-IL-17A ? En base a la actividad y propiedades biofísicas y bioquímicas, los MORmAbs seleccionados se diseñaron genéticamente aun mas én sus regiones variables para cambiar ciertos residuos de marco a aquellos presentes en una línea germinal humana concordante y para cambiar codones a aquellos que se producen más frecuentemente en proteínas mamíferas altamente expresadas. En la familia 2 se realizaron sustituciones de VL, L11V y V85T (secuencia lineal) para convertir el marco a una coincidencia exacta con la línea germinal de VK-1 Vb-L5 (IGKV1 -12*01). Una región variable ilustrativa con las sustituciones V11V y V85T es la región variable que tiene la secuencia de i aminoácidos que se ilustra en la SEQ ID NO: 76. En las familias 6a y 6b se realizaron sustituciones de VL, D1 E, V59I y T86V (secuencia lineal) para convertir el marco a una coincidencia exacta con la línea germinal de Vk-3 Vb- L6 (IGKV3-11*01). Una región variable ilustrativa con las sustituciones D1 E, t V59I y T86V es la región variable que tiene la secuencia de aminoácidos ilustrada en la SEQ ID NO: 77. En VH de las familias 6a y 6b se realizó una sustitución de G44S (secuencia lineal) para coincidir con la línea germinal de Vh-6 Vb 6-01 (IGHV6-1*01). Una región variable ilustrativa con las sustitución G44S es la región variable que tiene la secuencia de aminoácidos que se ilustra en la SEQ ID NO: 81. En el VL de las familias 19a y 19b, los aminoácidos 1-3 (DIE) se sustituyeron con QSV para reemplazar el N-terminal kappa artificial con el de una cadena lambda. La región variable ilustrativa con la sustitución QSV es una región variable que tiene la secuencia de aminoácidos ilustrada en la SEQ ID NO: 79. En VH de las familias 19a y 19b VH, se una sustitución V5L para proporcionar una coincidencia cercana con lá línea t germinal de Vh-3 Vb 3-23 (IGHV3-23*01. Además, en este proceso los residuos de secuencias de aminoácidos de región constante de cadena pesada 353-357 (REEMT) se sustituyeron con RDELT. Una región variable ilustrativa con la sustitución V5L es una región variable que tiene la secuencia de aminoácidos ! que se ilustra en la SEQ ID NO: 86. Una cadena pesada ilustrativa con las i sustituciones de la región constante 353-357 REEMT -> RDELT es una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos ilustrada en la SEQ ID NQ: 100.

Se asignaron números de mAb a los anticuerpos diseñados por ingeniería.

Las designaciones correspondientes y los listados de I secuencias de las regiones variables diseñadas por ingeniería y originales y los anticuerpos de longitud completa se listan en el cuadro 2. La de los CDR dentro de cada familia se ilustra en los cuadros A1-A8.

Los mAbs diseñados por ingeniería se caracterizaron tal cómo se describió anteriormente para los MORmAbs. Los valores de IC50 (pM) se midieron con los ensayos indicados tal como se ilustra en el cuadro 6. i CUADRO 6 La afinidad de los mAbs seleccionados se evaluó por medio de I Biacore. Los resultados de las mediciones se indican en el cuadro 7. ¡ CUADRO 7 I Unión a IL-17 humano Amut6 Unión a ciño IL- 7A * Dímeros por anti-IL-17 El anticuerpo anti-IL-17 inhibe la secreción de citocina en células NHBE Se ha demostrado que la IL-17A regula la inflamación neutrofílica en los pulmones, una característica distintiva de asma severa además de COPD debido a la capacidad de IL-17A para inducir factores importantes en la reclutacion, supervivencia y activación de neutrófilos (por ejemplo, IL-6, IL-8, GM-CSF). Para determinar si los anticuerpos de anti-IL-17A de la invención pueden inhibir los cambios de IL-17A en las células residentes en los pulmones, las células epiteliales bronquiales humanas normales (NHBE, por sus siglas en inglés) se estimularon con IL-17A humana por 48 horas en presencia de mAb6785. El mAb6785 inhibió la IL-6 inducida por IL-17A y la producción de GM-CSF por células NHBE con IC50=619.0 ± 64.0 pM y 564 ± 86 pM, respectivamente.

El anticuerpo anti-IL-17 inhibe la actividad biológica del heterodímero de IL-17A/F Se sembraron células de fibroblastos dérmicos humanos nórmales (NHDF; Lonza) en una placa de cultivos tisular de fondo plano de 48 pocilios a 10.000 células por pocilio en un medio FGM-2 (Lonza) y se incubaron de la noche a la mañana (37°, 5 % CO2). Después de la incubación, 50 ng/mL de concentración final (1.47 nM) de heterodímero de rhlL-17A/F (R&D Systems) se preincubaron con una serie de dilución (30 pg/mL - 0.5 ng/mL) de mAb¡6785 o anticuerpos de control por 10 minutos a temperatura ambiente, y se añadieron a las células. Las células se incubaron por 48 h (37°, 5 % C02) y los sobrenadantes de cultivos se recolectaron y ensayaron por medio de ELISA para determinar el contenido de IL-6 con conjuntos Human IL-6 Dúo Sets (R&D Systems, Inc.) de conformidad con las instrucciones del fabricante. Se determinaron los valores de IC50 por regresión no lineal con el programa GraphPad Pñsm software (GraphPad Software, Inc). El mAb6785 inhibió la producción de IL-6 inducida por el heterodímero de IL-17A/F por NHDF con EC50 2 ± 2.5 nM.

Métodos Determinación de afinidades picomolares con valoración de equilibrio en solución (SET, por sus siglas en inglés) Para la determinación de KD por valoración de equilibrio de solución (SET), se usaron fracciones monoméricas (contenido monomérico de al menos 90 %, analizadas por medio de columna analítica Superdex75, SEC; GE) de proteínas Fab.

La determinación de afinidad basada en electroquimiluminiscencia (ECL, por sus siglas en inglés) en solución y evaluación de datos se realizaron esencialmente tal como se describió anteriormente(Haenel y otros, Anal Biochem 339:182-4, 2005). Una concentración fija definida de Fab purificado (-10-100 pM) se incubó con concentraciones crecientes de IL-17Amut6 (concentración máxima de 5 nM) en solución hasta alcanzar el equilibrio químico. Para cuantificar el Fab no unido en solución se transfirieron las muestras a una placa de microtitulación de 384 pocilios MSD Streptavidin (Meso Scale Discovery, Gaithersburg, MD) con IL-17Amut6 biptinílado recubierto. Para la detección se aplicó un anticuerpo de Fab/lgG antihumana marcado con complejo de rutenio y las placas se leyeron con el programa Sector™ Imager 6000 (MSD). Las curvas de valoración (concentración ¡de Fab libre como una función de la concentración de antígenos) se graficaron y ajustaron con el programa Excel / XLfit con el modelo descrito más abajo.

Para la evaluación de datos para la determinación de KD de moléculas de Fab se usó el siguiente modelo de ajuste (modificado de conformidad con Abraham y otros, J Mol Recognit. 9:456-461 , 1996): y=Bmax-(Bmax/(2*cFab)*(x +cFab+KD-sqrt((x+cFab+ KD)*(x+cFab+ KD)- 4*x*cFab))) mientras que: Bmax: señal de unión máxima (a la concentración de antígenos=0) cFab: concentración de Fab aplicada x: concentración de antígenos solubles totales aplicada sqrt: raíz cuadrada KD: Constante de disociación de equilibrio Inhibición de la unión de IL-17A a IL-17RA (por ejemplo ensayo de "inhibición de IL-17RA" Se recubrieron placas maxisorp transparentes con 100 µ?/pocillo de 2.5 pg/ml de IL-17RA-Fc humana (R&D Systems, Minneapolis, MN) en tampón de carbonato-bicarbonato de sodio 0.1 M, pH 9.4 y se incubaron de la noche a la mañana a 4 °C. Después del bloqueo y los lavados se preincubaron 25 ng/ml de IL-17mut6 humana biotinilada (SEQ ID NO: 106) o IL-Í7A de cinomolgos (SEQ ID NO: 108) con mAbs probado o mAbs de control (de 30 a 0 g/ml de concentración final) en un volumen combinado de 100 µ? por 5-10 minutos y, después, se añadieron a las placas. La señal se detectó con 100 µ? de una dilución 1 :10.000 de 1 mg/ml de SA-HRP (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) por 20 minutos a temperatura ambiente (RT) seguido de 100 µ?/pocillo de sustrato de OPD (Sigma-Aldrich Corp., St. Louis, ?T). Las placas se leyeron a 492 nm (Envision, PerkinElmer, Waltham, MA). La unión de Fab a IL-17RA se probó tal como se describió para mAbs.

Inhibición de la producción de IL-8 v IL-6 a partir de células NHDF (por ejemplo, ensayos de "producción de IL-8" y "producción de IL-6") El efecto de inhibición de anticuerpos mAb anti-IL-17A sobre la producción de IL-8 y IL-6 fue evaluado en fibroblastos dérmicos humanos normales (NHDF, por sus siglas en inglés). Las células se cultivaron en una placa de cultivo de tejido de 48 pocilios de fondo plano a 0.1x105 células por pocilio, 250 µ? por pocilio en un medio de cultivo FGM-2 y se incubaron toda la noche (37 °C, 5 % de C02). Luego de la incubación, se añadió 0.1 ng/ml de TNF-a humano a todos los pocilios. Se preincubaron 10 ng/ml de IL-17mut6 o 25 ng/ml de IL-17A de cynomolgus con anticuerpos mAb o anticuerpos mAb de; control probados (concentración final de 30-0 Mg/ml) en un volumen combinado de 250 µ? durante 10 minutos a RT, y después se añadió 250 µ? de células.' En los ensayos, las muestras de IL-17mut6 sin anticuerpo añadido fueron incluidas como muestras de control, mientras que las muestras que consisten en TNF-a o medio de cultivo solo fueron incluidas como controles negativos. Las células se incubaron durante 24 horas (37 °C, 5 % de C02) y se recolectó medio acondicionado y se evaluó por ELISA para determinar IL-6 y IL-8 con el uso de equipos dobles de ELISA de IL-6 & IL-8 humanas de acuerdo con las instrucciones del fabricante (R&D Systems, Minneapolis, MN). Se evaluaron los fragmentos Fab como se describió a partir de los anticuerpos mAb.

Inhibición de la producción de IL-6 y G-CSF a partir de células NHBE Se sembraron células epiteliales bronquiales normales de humano (NHBE; Lonza) a 20,000 células por pocilio en un medio de cultivo BEGM (Lonza) y se incubaron toda la noche (37 °C, 5 % de C02). Luego de la incubación, las células se estimularon con IL-17Amut6 durante 48 horas en la presencia de los anticuerpos probados en un intervalo de concentraciones de (30 pg/ml - 0.5 ng.ml). Se recolectaron los sobrenadantes después! de la incubación y se evaluaron para determinar el contenido de IL-6 o G-CSF con el uso de un ELISA específico de IL-6- o G-CSF humano (R&D Systems, Inc.). Se determinaron los valores IC50 mediante una regresión no lineal con el uso del software GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc).

Reactividad cruzada con miembros de la familia de IL- 7A Se recubrieron placas limpias maxisorp con 100 µ?/pocillo de 5 pg/ml de anticuerpo mAb o anticuerpo de control isotipo mAb en PBS y se incubaron toda la noche a 4 °C. Las placas fueron bloqueadas con 200 ul/ppcillo durante 1 hora con amortiguador de bloqueo ELISA (1 % de BSA, 5 % de sacarosa en PBS con 0.05 % de NaN3) y se lavaron tres veces con amortiguador de lavado (PBS, con 0.01 % de Tween-20). Se titularon las citocinas antagónicas en un amortiguador diluyente de ensayo (1 % de BSA en PBS) ; a una concentración final de 2x y se preparó citocina biotinilada a una concentración final de 2x. Se mezclaron 100 µ? de citocinas a una concentración final de 2x (concentración final de 30-0 g/ml) con 100 µ? de IL-17mut6 biotilinada a una concentración final de 2x (concentración final de 25 ng/ml) en un amortiguador de ensayo. Se usó IL-23 recombinante humana (R&D Systems, inneapolis, MN) como control negativo, una muestra de amortiguador como control de soporte y IL-17mut6 como control positivo. Se añadió 100 µ? por pocilio por duplicado de mezcla de citocina/ IL-17mut6 biotilinada a la placa y se incubaron durante 1-2 horas. Se lavaron las placas tres veces con amortiguador de lavado y se incubaron con 100 µ? de una dilución 1 :10,000 de 1 mg/ml de SA-HRP (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) durante 20 minutos a RT. Se lavaron las placas tres veces con amortiguador de lavado ELISA. Luego del lavado, se añadió 100 µ?/pocillo de sustrato OPD (Sigma-Aldrich Corp., St. Louis, j MO) a cada pocilio y se incubaron hasta que se detectó el cambio de color apropiado.

Se detuvo la reacción con la adición de 50 µ? de ácido sulfúrico 2N y se leyeron las placas a 492 nm con el uso de un instrumento Envision.

Mediciones de afinidad - ensayo Biacore Las mediciones de afinidad con resonancia de plasmón de superficie (SPR) se realizaron por medio del uso de un biosensor óptico Biacore 3000 (Biacore). Los fragmentos Fab seleccionados (~30 RU) o anticuerpos mAb (~50 RU) fueron capturados sobre la superficie del chip sensor con el uso de un anticuerpo de oveja anti-Fd o un anticuerpo anti-Fc humano para la captura de fragmentos Fab o anticuerpos mAb, respectivamente. La captura de fragmentos Fab o anticuerpos mAb fue seguida de la inyección de hulL-17mut6 o cyno IL-17A en solución (0.2 a 49 nM).

EJEMPLO 3 Mapeo de epítopos Los epítopos del anticuerpo fueron determinados mediante una combinación de unión de competencia, análisis de intercambio H/D y coestructura del anticuerpo-IL-17A (véase el Ejemplo 4). Se usaron los siguientes anticuerpos: mAb1926, MORmAb7700, MORmAb7706, MORmAb7708, mAb7357 (un anticuerpo de neutralización ratón anti-humano IL-17A derivado de hibridoma C1863), mAb2832 (un anticuerbo de neutralización ratón/humano quimérico anti-humano IL-17A derivado de hibridoma C1861 ), mAb317 (anticuerpo ratón anti- humano IL-17A, R&D Systems, Minneapolis, MN) y mAb3171 (anticuerpo ratón anti-humano IL-17A, R&D Systems, Minneapolis, MN), y mAbeBI016-7178 (un anticuerpo ratón antihumano IL-17A, e-Bioscience, San Diego, CA). Los tres anticuerpos comerciales mostraron grados variables de actividad de neutralización.

Unión de epítopos competitivos Para la ELISA competitiva, se recubrió 5 µ? (20 pg/ml) de proteína IL-17Amut6 en una placa HighBind MSD (Meso Scale Discovery, Gaithérsburg, MD) por pocilio durante 2 h a temperatura ambiente. Se añadió 150 µ? de 5 % de amortiguador Blocker A MSD (Meso Scale Discovery, Gaithérsburg, MD) a cada pocilio y se incubaron durante 2 h a temperatura ambiente. Se lavaron las placas con amortiguador HEPES 0.1 M (pH 7.4). Se incubó 10 nM del anticuerpo etiquetado (tinte de fluorescencia MDS) con concentraciones crecientes de anticuerpos competidores (1 nM - 2 µ?), y se añadió 25 µ? de la mezcla a los pocilios designados. Luego de una incubación de 2 horas con agitación ligera a RT, se lavaron las placas como se indicó más arriba, se añadió 150 µ? de amortiguador de lectura T MSD diluido y se leyeron las placas con un Sector Imager 6000 MDS.

Los ensayos se realizaron con anticuerpos etiquetados mAb1926, mAb317, mAb3171 , o mAb7357 (Figuras 2A-2F). Basados en ensayos de competencia, se asignaron anticuerpos anti-IL-17A a cuatro cabinas diferentes. Cabina A: mAb1926, MORmAb7706 y MORmAb7708; Cabina B: eBio16-7178 y mAb7357; Cabina C: mAb317; Bin D: mAb3171.

Análisis de intercambio H/D: Para el intercambio H/D, el procedimiento usado para analizar la perturbación del anticuerpo fue similar a aquel descrito previamente (Hamuro y otros, J. Biomol. Techniques, 14:171-82, 2003; Horn y otros, Biochemistry> 45: 8488-98, 2006) con alguna modificación. Se incubó IL-17Amut6 recombinante (expresada en células HEK293E con anticuerpo His-tag C-terminal) en una solución acuosa deuterizada para tiempos predeterminados que resultán en la incorporación de deuterio en átomos de hidrógeno intercambiables.! El IL- 17Amut6 deuterizado fue capturado en una columna que contiene anticuerpos mAb anti-IL-17A individuales inmovilizados y luego se lavaron con un i amortiguador acuoso. La proteína IL-17Amut6 intercambiada nuevamente fue eluida de la columna y la localización de los fragmentos que contienen deuterio se determinó mediante digestión de proteasa y análisis de espectrometría de masas. Las regiones unidas al anticuerpo fueron inferidas a aquellos sitios protegidos relativamente del intercambio y contienen, de ese modo, una fracción más alta de deuterio, comparada con IL-17Amut6 que no forma un complejo con el anticuerpo. Los mapas de perturbación del intercambio (H/D de IL-17Amut6 se muestran en la Figura 3. Los números en la parte superior de las barras se refieren a residuos de IL-17Amut6.

MORmAb7700, MORmAb7706 y MORmAb7708 mostraron ¡grados variables de intercambio diferencial para tres segmentos de IL-17A (SEQ ID NO: 105) 45NRSTSPWNLH54 (SEQ ID NO: 159), 56NEDPERYPSVIWE68 (SEQ ID NO: 157) y 10oRREPPHCPNSFRLEKIL116 (SEQ ID NO: 158), que ¡indican i I protección mediante los anticuerpos. El fragmento 56NEDPERYPSVIWE68 (SEQ ID NO: 157) fue protegido fuertemente por MORmAb7708, protegido débilmente por MORmAb7700 y no protegido por MORmAb7706. El traslape en los pátrones de protección de fragmentos de estos anticuerpos es consistente con su inhibición cruzada en los ensayos de competencia descritos más arriba.

Para los anticuerpos mAb7357 y mAbeBio16-7178, se observó una fuerte protección para 7iCRHLGCINADGNVDYHM87 (SEQ ID NO: 160) consistente con su inhibición cruzada en los ensayos de competencia descritos más arriba. Se observó un intercambio diferencial débil y, por lo tanto, no concluyente para otros fragmentos con los anticuerpos mAb7357, mAb2832, mAb317 y mAb3171.

Los estudios del intercambio H/D localizaron los sitios de unión para dos de los cuatro grupos de competencia definidos más arriba. Los anticuerpos de la cabina A (MORmAb7700, MORmAb7706 y MORmAb7708) unidos en la región de segmentos de péptido 45NRSTSPWNLH54, (SEQ ID NO: 159), seNEDPERYPSVIWEee (SEQ ID NO: 157) y 100RREPPHCPNSFRLEKIL116 (SEQ ID NO: 158), de SEQ ID NO: 105, y los anticuerpos de la cabina B (mAb7357 y mAbeBio16-7178) unidos en la región del segmento de péptido 71CRHLGCINADGNVDYHM87 (SEQ ID NO: 160). Los anticuerpos mAb317 y mAb3171 unidos a sitios distintos entre sí y de los anticuerpos de la cabina A y cabina B. Sin embargo, las señales débiles en los estudios del intercambio H/D con ambos anticuerpos no proporcionaron suficiente evidencia para localizar sus epítopos en IL-17A.

EJEMPLO 4 Estructura cocristalina de IL-17A y anticuerpo anti-IL-17A La coestructura de IL-17Amut6 con el fragmento Fab6468, un fragmento Fab recombinante etiquetado His6 del anticuerpo mAb6785 se determinó mediante cristalografía por rayos X. La secuencia de aminoácidos de la cadena ligera del fragmento Fab6468 se muestra en la SEQ ID NO: 90, y la secuencia de aminoácidos de cadena pesada se muestra en la SEQ ID NO: 111. En el Ejemplo 4, los residuos de aminoácido de IL-17A referidos para indicar residuos de acuerdo con la SEQ ID NO: 105, y los residuos del fragmento Fab6468 referidos para indicar los residuos de la región variables de cadena ligera de acuerdo con la SEQ ID NO: 79 y los residuos de la región variable de cadena pesada de acuerdo con la SEQ ID NO: 86. Se ha descrito la expresión, renaturalización y purificación del anticuerpo IL-17Amut6 humano recombinante (Wu y otros, Cytokine, ePub antes de publicarse, 29 de jul). El fragmento i Fab6468 fue expresado en células HEK-293F y purificado con el uso; de un método similar como se describió (Zhao y otros., Protein Expr Purif, 67:182-9, 2009).

Cristalización del complejo IL-17A/Fab6468 El complejo IL-17A/Fab6468 fue preparado al mezclar el anticuerpo IL-17Amut6 y el fragmento Fab6468 en una relación molar de 1 :1.1 en 20 mM MES pH 6.5, NaCI 0.2 M y 10 % glicerina y se incubó toda la noche a 4 °C. El complejo fue purificado de fragmentos Fab en exceso que no forman complejos con el uso de cromatografía de exclusión por tamaño (SEC, por sus siglas en inglés) en una columna Superdex 200 10/300 GL (GE Healthcare, Piscataway, NJ) en 20 mM MES, pH 6.5, NaCI 0.2 M y 10 % de glicerina. Las fracciones correspondientes al complejo fueron agrupadas y concentradas con un dispositivo Amicon Ultra 10000 MWCO a 4.6 mg/ml.

Se realizó una evaluación automática de cristalización con el uso del robot automático de cristalización de proteínas Oryx4 (Douglas Instruments, East Garston, UK) que suministra volúmenes ¡guales de proteína y solución de depósito en un formato de gota con el uso de una placa Corning 3550 (Corning Inc., Corning, NY). La evaluación inicial se realizó con la pantalla de cristal HT Hampton (HR2-130, Hampton Research) y se produjo cristales similares a agujas de condiciones diversas que contienen sulfato de amonio, PEG a pH 4.5-4.6. Estos cristales pequeños fueron usados para producir materia prima de semillas para la matriz de evaluación microseed (MMS, por su siglas en inglés) (D'Arcy y otros, Acta Crystallographica Section D, 63:550-4, 2007). Se obtuvieron cristales de difracción de calidad de la evaluación MMS en acetato de sodio 0.1 M, pH 5.5, 12 % de PEG MME 5000 y sulfato de litio 0.2 M.

Recolección de datos por rayos X del complejo IL-17A/Fab6468 Para la recolección de datos por rayos X, se remojó el cristal por algunos segundos en el licor madre suplementado con 24 % de glicerina y se realizó la congelación Flash en la corriente de nitrógeno a 95 °K. Los datos de difracción por rayos X fueron recolectados y procesados con el uso de un microfoco generador de rayos X 007HF Rigaku MicroMax™ equipado con una detector CCD Saturn 944 Osmic confocal optics™ VariMax™ y un sistema de enfriamiento criogénico X-stream 2000™ (Rigaku, Woodlands, TX). Las intensidades de difracción fueron detectadas sobre una rotación de cristal de 254° con un tiempo de exposición de 3 min por imagen de medio grado a la máxima resolución de 2.2 A. Los datos de rayos X fueron procesado con el programa D*TREK (Pflugrath, J., Acta Crystallographica Section D, 55:1718-25, 1999). El cristal pertenece al grupo de espacio monoclínico P2i con un a=73.40 A, b=64.04 A, c=145.61 A y ß=95.39°. Las estadísticas de los datos de rayos X se describen en el cuadro 8.

CUADRO 8 Longitud de onda (A) 1.5418 Temperatura (K) 95 Intervalo de rotación (°) 254 Grupo de espacio P2i Ejes de células unitarias (A) 73.40, 64.04, 145.61 Angulos de células unitarias (°) 90, 95.39, 90 ; Moléculas/unidad asimétrica IL-17 dimero + 2 fragmentos Fab Vm (A3/Da) 2.76 Contenido de solvente (%) 55 Resolución (A) 73-2.2 (2.28-2.20)* Núm. de reflexiones medidas 251.653 (16.276) Núm. de refexiones únicas 61.776 (5.947) Producto completo (%) 89.8 (86.9) i Redundancia 4.1 (2.7) Mezcla R 0.151 (0.353) <?/s> 5.6 (1.9) Factor B (Wilson) (A2) 33.3 ! * Los valores para la capa de resolución más alta están en (). i Determinación de la estructura ! La estructura de cristal del complejo IL-17A/Fab6468 fue determinada mediante reemplazo molecular con el uso de un Phaser ¡(Read, Acta Crystallorg D Biol Crystallorg, 57:1373-82, 2001). Los modelos de búsqueda fueron IL-17F (PDB ID 1JPY) (Hymowitz y otros, EMBO J., 20:5332- 41 , 2001) y un modelo de homología para la Fv (VHA/L), que fue construido en base al anticuerpo anti-IL-13 CNTO607 (PDB ID 3G6A) (Teplyakov y otros, J. Mol. Biol. 389: 15-23. 2009) para el VH y VL, que usan Modeller (Accelrys, i CA). Los dos dominios constantes CL/CH1 fueron tomados de PDB ID 8FAB (Strong y otros, Biochemistry, 30:3739-48, 1991 ). El perfeccionamiento de la estructura fue realizado con PHENIX (Adams y otros, J. Synchrotron. ¡Radiat. i 1 1 :53-5, 2004). La simetría de dos pliegues, no cristalográfica fue impuesta, inicialmente, en las etapas iniciales de perfeccionamiento, pero fue dejada en las etapas finales en base a Rübres- El ajuste de modelo y la reconstrucción I : manual se realizaron con el uso de COOT (Emsley y otros, Acta Crystallogr.

D. Biol. Crystallogr. 60:2126-32, 2004). El Rcr¡st final y el R|i re fueron 2^.4 % y 29.7 %, respectivamente para todas las 61.706 reflexiones independientes a 2.2 A. Las estadísticas de perfeccionamiento se describen en el cuadro ¡9.

CUADRO 9 Perfeccionamiento de la estructura Resolución (A) 73-2.2 (2.234-2.2) F Ri¡bre(%)b 23.4/29.7 (27 Í2/37.7) Núm. de reflexiones Grupo de trabajo 58,570 Grupo de prueba (5 % de los datos) 3,136 Rmsd de los valores ideales Longitud de unión (A) 0.007 Ángulos de unión (°) 1.1 Factor B promedio (A2) 28.0 Número de átomos de proteína 7,994 Número de solventes (agua + iones) ! 864 Gráfico de Ramachandranc Regiones más favorecidas (%) 90.5 Permitidas adicionales (%) 8.6 Permitidas generosamente 0.2 No permitidas (%) 0.7 La estructura del complejo IL-17A/Fab6468 La estructura del complejo fue determinada a alta resolución (~ í 2.2 A). IL-17A fue un homodímero casi simétrico en el cristal y unido a dos moléculas de fragmento Fab. Las interacciones anticuerpo-antígeno ! fueron hidrófobas en gran parte y a diferencia de la mayoría de anticuerpos, la Cadena ligera CDR realizó una cantidad de los contactos importantes. La estructura molecular total del complejo IL-17A/Fab6468 se muestra en la Figura! 4A. El monómero del dímero IL-17A adoptó la topología total de un nudo de| cistina (Figura 4B). Los dos monómeros fueron muy similares con un RMSD| Cá de 0.54 A para 77 átomos Ca de cadena principal. La arquitectura total del nudo de cistina del monómero IL-17A fue muy similar a aquel de IL-17F con un rmsd de 0.71 A para 76 átomos Ca (Figura 4B). Cada monómero IL-17A fue estabilizado por tres uniones disulfuro. Para la cadena B, se observaron tres uniones disulfuro intercatenarias (C10-C106, C71-C121, C76-C123), mientras que para la cadena A la unión disulfuro de C10-C106 no se observó debido al desorden en estos segmentos del monómero. Las dos últimas uniones disulfuro (C71-C121, C76-C123) estabilizaron la arquitectura del nudo de cistina, análoga a IL-17F y NGF. El modelo estructural para la cadena B de IL-17A incluyó todos los residuos 10-128 (residuos 1-9 estuvieron desordenados), mientras que para los residuos de la cadena A, solo los residuos 21-29, 41-104 y 109-127 fueron observados y los otros residuos 1-20, 30-40, 105-108 y 128 faltaron debido al desorden en la estructura. Para los dos fragmentos Fab, los residuos 1-2 de las dos cadenas ligeras estuvieron desordenados o tuvieron una densidad de electrones deficiente. Los 3 residuos C-terminales de las cadenas pesadas y ligeras, que incluyen las uniones disulfuro intracatenarias, así como el anticuerpo His-tag en la cadena pesada, estuvieron desordenados.

El segmento N-ordenado de IL-17A (cadena B) contenía un elemento helicoidal corto (residuos 8-12). Se dobló nuevamente hacia el ciclo 3- 4 del mismo monómero y formó una unión disulfuro intracatenaria (C10-C106).

Por el contrario, el segmento equivalente de IL-17F llegó hacia el otro monómero del dímero y formó una unión disulfuro intracatenaria y unió los dos I monómero covalentemente. Las partes ordenadas de los segmentos 17-39 de los dos monómeros IL-17A fueron cambiadas como en IL-17F. Este intercambio resultó en un cruce para estas partes del dímero IL-17A. Combinados con la unión disulfuro intramolecular (C10-C106), los dos segmentos N-terminales de IL-17A formaron dos monómeros entrelazados que originaron, además, un ¡dímero aparente de 26 kD en SDS-PAGE no reductores.

El dímero de IL-17A fue casi simétrico para las cuatro i hebras principales ß (hebras 1-4) (Figura 4C). El rmsd Ca para 76 residuos es 0.71 Á. La asimetría ligera proviene de dos fuentes. Primero, la cadena A conteñía una cantidad de segmentos desordenados, principalmente en N-terminal. Solo una hebra ß-corta (hebra 0, residuos 22-26) fue ordenada aparentemente, mientras que los residuos 10-40 de la cadena B fueron ordenados con un segmento helicoidal (residuos 12-16) y una hebra ß (hebra 0, residuos 21-25). Segundo, mientras la cistina anudó cuatro hebras principales ß de los dos monómeros, (40-128) de IL-17A se relacionaron mediante una simetría de rotación de dos pliegues, las partes ordenadas de la hebra 0 no se superponen bien cuando el cuerpo principal está sobrepuesto (no se muestra). Ya sea que esto fue un artefacto de renaturalización de proteína o que dicha configuración exista en la naturaleza, no estará clara sin una investigación adicional. La bioactiviclad de estas especies fue similar a aquella de la referencia IL-17A de una ; fuente comercial (producida, además, en E. coli) (R&D Systems, Minneapolis, MÑ), que sugiere que el enlace disulfuro intercatenario o íntracatenario para C10-C10? no es importante para la unión de su receptor. Sin embargo, la estructura actual sugiere que los segmentos N-terminales (1-20) y (30-39) son muy flexibles y sus estructuras no impactan la actividad del dímero renaturalizado IL-17A.

El epítopo v el parátopo Los residuos involucrados en la unión entre IL-17A y el fragmento Fab6468 se enumeran en el cuadro 10. Debido a los residuos faltantes en el promotor A en el dímero IL-17A y la naturaleza asimétrica ligera del dímero IL-17A, todos los residuos del epítopo de los dos sitios de contacto no fueron idénticos (cuadro 10 y Figura 5). Sin embargo, existió un conjunto de núcleos de residuos, así como sus interacciones que fueron idénticas. Estos residuos fueron L26, R55, E57, P59, E60, R61 , Y62, S64, V65, W67, R101 , E10¿, P103 y F1 10 de IL-17A, SEQ ID NO: 105 (resaltados en color negro en el cuadro 10), y constituyen el epítopo de núcleo para el fragmento Fab6468.

Los residuos del epítopo de núcleo se resaltan en color negro. Los residuos del parátopo de núcleo están en negrita. Los residuos de parátopo extendidos se muestran en paréntesis.

CUADRO 10 De manera similar, los residuos de contacto de los anticuerpos en i los dos sitios no fueron todos idénticos. Los residuos involucrados en contactos idénticos con los residuos de epítopo de núcleo se conocen como el "parátopo de núcleo", que estuvo compuesto de los siguientes residuos: cadena ligefa (LC): Y31 , D49, Y90, F92, F93 (SEQ ID NO: 79), y cadena pesada (HC): S5;2, T54, F57, Y59, Q99, L100 y T101 (SEQ ID NO: 86) (cuadro 10). Los residuos de parátopo de núcleo se muestran en negrita en el cuadro 10. Los residuos de "parátopo extendido" adicionales identificados en un monómero que se une a un residuo IL-17A específico se muestran en paréntesis.

Los datos de protección H/D para el anticuerpo MORmAb7700 ? estuvieron de acuerdo con los estudios de cocristalinos, debido a que to os los residuos de epítopos de núcleo identificados en la estructura cocristalina éxcepto L26 estuvieron dentro o en los límites de dos de los segmentos protegidos I identificados por el intercambio H/D, 56NEDPERYPSVIWE68 (SEQ ID NOj 157) y 100RREPPHCPNSFRLEKIL116 (SEQ ID NO: 158) para el anticuerpo MORmAb7700. Todos los derivados del anticuerpo MORmAb7700, ¡incluso MORmAb8302 y mAb1926 se asume que tienen la misma especificidad de unión que el fragmento Fab6468, debido a que difieren en su mayoría por un residuo en la región N-terminal de VH (véase el Ejemplo 1), 3 residuos en el N-términal de VL (véase el Ejemplo 1) y 3 residuos CDR (cada uno en H2, H3 y L3, ¡cuadro 1A), ninguno de ellos es parte del parátopo del anticuerpo. j La estructura de IL-17A caracterizada en esta invención es muy similar a la estructura publicada previamente, excepto por los segmentos faltantes, la cavidad bolsillo P2 (véase más abajo) no fue identificada en el trabajo anterior (estructura 2VXS, disponible en Protein DataBank http_//www_rcsb_org/pdb/home/home_do; Gerhardt y otros, J. Mol. Biol. 394:905-21 , 2009).

La estructura cristalina del IL-17F humano en el complejo con IL-17RA ha sido reportada (Ely y otros, Nat. Immunology, 10:1245-51 , 2009).

Debido a las similitudes estructurales y de secuencia entre IL-17A e IL-17F, es probable que IL-17A interactúe con el IL-17RA de una manera similar a IL-17F. El modelamiento molecular al superponer la estructura de IL- l 7A en el complejo con el fragmento Fab6468 obtenido en este estudio sobré el IL-17F en el complejo IL-17F/IL-17RA reportado mostró que los segmentos del fragmento Fab6468 tendrían choques estéricos con IL-17RA. Uno de estos segmentos se localizan alrededor del motivo FF (residuos 92 y 93 de la SEQ ID NO: 79) en la cadena ligera CDR3 del fragmento Fab6468. Por consiguiente, sin desear estar limitados por cualquier teoría particular, se sugiere que el fragmento Fab6468 inhibiría la función de IL-17A al bloquear sus interacciones con IL-17RA y por analogía, IL-17RC a través del modo de interacción entre IL-17RC y IL-17A no se conoce en el nivel molecular.

Las diferencias significativas en las afinidades de IL-17A e IL- 17F para IL-17RA sugieren que pueden haber diferencias significativas en ! los detalles de las interacciones de IL-17A y IL-17RA, cuya medida solo i estará disponible cuando se determine la estructura cocristalina de IL-17A/IL-17RA. Esto está implicado por la identificación de la cavidad bolsillo P2 en este estudio, que solo se identifica parcialmente en la región análoga de IL- 17F en la estructura cristalina de IL-17F/IL-17RA reportada (Ely y otros, Nat.

Immunology, 10:1245-51 , 2009). i Se identificaron dos bolsillos profundos, en gran parte hidrófobos sobre la superficie de IL-17A a lo largo con la interfase del dímero (Fig|ura 6A, 6B). El bolsillo P1 , que es análogo a un bolsillo descubierto primero en¡ IL-17F I (Hymowitz y otros, EMBO J, 20: 5332-41 , 2001) está compuesto de residuos Q94, E95, L97 y K114 del monómero A; y L53, Y62, P63, V65, I66, I96, V117 y V1 19 del monómero B y viceversa. En un lado del dímero, el bolsillo P1 está parcialmente cubierto por el segmento 30-40, mientras que en el otro lado fue, completamente, abierto debido a que se desordenó el segmento. Debido a que este segmento parece ser flexible, el bolsillo P1 sería accesible pór otras moléculas. El bolsillo P2 está compuesto, además, de residuos de jambas cadenas: V24, L26, I28, Y62, L99, R101 , F110 y L1 12 del monómero A;! y V22, V24 y L1 2 del monómero B y viceversa.

Aunque los detalles de los bolsillos P2 son ligeramente diferentes debido a la asimetría del dímero IL-17A, como se describió más arriba, la geometría total de los dos bolsillos es muy similar. Los dos conjuntos de residuos que revisten los bolsillos P1 y P2 están muy bien conservados entre IL-17A y IL- I 17F (Figura 6C). Sin embargo, en la estructura IL-17F, el bolsillo P2 está Í ocupado por los residuos F10 y F11 (F 0Fn motivo) (Figura 6B) (Hymowitz y I otros, EMBO J, 20: 5332-41 , 2001). El motivo FF está ausente en ; IL-17A humana, en su lugar los residuos de aminoácidos correspondientes son ¡4 y P5 (residuos 4 y 5 en la SEQ ID NO: 105) (Figura 6C). Es probable que estos residuos no se unan en el bolsillo P2, así como, el motivo FF debido a que son mucho más pequeños que los residuos de fenilalanina y lo más probable! es que no tendrán suficiente afinidad por el bolsillo P2. Por consiguiente, el motivo FF de IL-17F es probablemente un discriminante estructural para interacciones de IL-17A y IL-17F humanas con receptores IL-17RA y IL-17RC. Es probable que ambos de estos bolsillos en gran parte hidrófobos (P1 y P2) sean requeridas para la unión de IL-17A a IL-17RA. La estructura cristalina reciente del complejo IL-17F/IL-17RA muestra que el motivo FF está desplazado por IL-17RA (Ely jy otros, Nat. Immunology 10:1245-51 , 2009). La penalidad energética de la expulsión del motivo FF de P2 resulta, probablemente, en una afinidad de unión más baja. Esto es consistente con las observaciones que IL-17RA se une a IL-17A con alta afinidad, pero IL-17F con baja afinidad en humanos (Kuestner y otros, J Immunol, 179:5462-73, 2007) y puede explicar potencialmente las diferencias ! en las potencias de IL-17A y IL-17F. En ratones, el motivo FF está ausente en IL-17A y IL-17F, y se reemplaza por los residuos IP y AL, respectivamente. Los pares de residuos AL e IP son pequeños y probablemente tengan una afinidad baja! para el bolsillo P2. Por consiguiente, P2 estaría disponible en un IL-17A y IL-¡17F de ratón para la unión con IL-17RA. Ambos IL-17A y IL-17F de ratón se unen a IL-17RA de ratón con afinidad similar (Kuestner y otros, J Immunol, 179:5j 62-73, 2007), consistentes con la sugerencia presente que la disponibilidad del! bolsillo P2 para la unión aumenta la afinidad de los ligandos. ¡ Generalmente, las diferencias estructurales observadas entre IL-17A y IL-17F proporcionan una base para diseccionar sus interacciones con los receptores respectivos. Adicionalmente, es concebible que los péptidos, peptidomiméticos y moléculas pequeñas puedan ser diseñadas para unirse en uno o los dos bolsillos para bloquear IL-17A y/o IL-17F y evitar que intefactúen j con sus receptores. Debido a que el motivo FF presente en el fragmento Fab6468 (residuos F92 y F93 en la SEQ ID NO: 79) se une con los residuos del bolsillo P2: L26, R61 , L99, R101 y R102, la estructura del fragmento Fab 6468 puede usarse para seleccionar y optimizar los antagonistas adicionales IL-17A, tales como péptidos de bibliotecas de péptidos diseñadas o aleatorias con el uso de expresión en fago.

Los residuos que recubren los bolsillos P1 y P2 están bien conservados entre IL-17A y IL-17F y el modelamiento molecular sugiere que un heterodímero IL-17A/F adoptarja una estructura total casi icJéntica comparada con el homodímero IL-17A solo. Por lo tanto, es probable que los bolsillos P1 y P2 estén presentes en el heterodímero IL-17A/F con topología total similar y constituyan sus sitios de unión. Por lo tanto, los antagonistas de IL-17A que se unen a los residuos de bolsillo P2 pueden unir y antagonizar el heterodímero IL-17A/F.

EJEMPLO 5 Especificidad de unión de especies cruzadas Para evaluar la especifidad de unión de especies del fragmento mAbtr1926, se realiza una ELISA de unión con proteínas de IL-17A diferentes recubiertas en placas de microtitulación. Las proteínas IL-17A de humanó, ratón y rata se recubrieron en las placas de microtitulación. Se incubaron diluciones en serie de anticuerpos mAb1926 etiquetados a 37 °C durante 2 horas. Luego de la incubación, se lavaron cuidadosamente las placas de microtitulación y se detectó el anticuerpo mAb1926 etiquetado unido. El anticuerpo mAb 1926 se unió al IL-17A humano más fuertemente que a las proteínas IL-17A dé rata o ratón (Figura 7). Esta unión reducida a IL-17A de rata o ratón es consistente con esas proteínas y ambas difieren de IL-17A humana en 7 posiciones del epítopo extendido de fragmento Fab6468 (cuadro 10). Además, existe una inserción de aminoácido en IL-17A de rata y ratón entre los residuos 40 y 41 de IL-17A humana, una posición cerca a parte del epítopo de fragmento Fab 6468.

Claims (48)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un anticuerpo aislado o fragmento de este, en dónde el anticuerpo se une específicamente a IL-17A humana que tiene la secuencia mostrada en la SEQ ID NO: 105 en los residuos de aminoácido 56-68 (SEQ ID NO: 157) y 100-1 16 (SEQ ID NO: 158); o en los residuos L26, R55, E57, P59, E60, R61 , Y62, S64, V65, W67, R101 , E102, P103 y F1 10.

2.- Un anticuerpo aislado o fragmento de este, en dónde el anticuerpo se une específicamente a la cavidad bolsillo P2 en IL-17A humana, i la cavidad bolsillo P2 comprenden residuos de aminoácido V22, V24, L26, I28, Y62, L99, R101 , F110 y L1 12 de la SEQ ID NO: 105.

3. - Un anticuerpo aislado o fragmento que se une específicamente a IL-17A humana que compite por la unión de IL-17A humana con un anticuerpo monoclonal que comprende las secuencias de aminoácidos de cadena pesada CDR 1 , 2 y 3 (HCDR1 , HCDR2 y HCDR3) mostradas eh las SEQ ID NO: 25, 43 y 60, respectivamente; y las secuencias de aminoácidos de cadena ligera CDR 1 , 2 y 3 (LCDR1 , LCDR2 y LCDR3) mostradas en las SEQ ID NO: 3, 6 y 18, respectivamente.

4. - Un anticuerpo aislado o fragmento que sé une específicamente a IL-17A humana; el anticuerpo o fragmento comprende residuos de aminoácidos de cadena pesada de parátopo de región variable que interactúan con residuos de IL-17A humana que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 105, que comprende: a. un primer residuo de treonina que interactúa con R55 o E57 de IL-17A humana; b. un residuo de glutamina que interactúa con R55 o E57 de IL-17A humana; c. un residuo de lisina que interactúa con E57 de IL-17A humana; d. un residuo de tirosina que interactúa con P59, E60 o R101 de IL-17A humana; e. un residuo de fenilalanina que interactúa con E60, R101 , E102 o P103 de IL-17A humana; f. un residuo de serina que interactúa con E60 de IL-17A humana; y ! g. un segundo residuo de treonina que interactúa con E60 de : IH 7A humana.

5.- Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento comprende residuos de aminoácido parátopo de región variable de cadena ligera que interactúan con los residuos de la IL-17A humana que tienen la secuehciá de aminoácidos que se muestra en la SEQ ID NO: 105, el anticuerpo o i fragmento comprende: a. un primer residuo de fenilalanina que interactúa con la L26 de la IL-17A humana; b. un residuo de ácido aspártico que interactúa con la R55 o W67 de la IL-17A humana; c. un primer residuo de tirosina que interactúa con la P59, S64 o R101 de la IL-17A humana; d. un segundo residuo de fenilalanina que interactúa con la P59, E60, R61 , Y62, R101 t> F110 i de la IL-17A humana; y e. un segundo residuo de tirosina que interactúa con la V65 de la IL-17A humana.

6. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende el parátopo de región variable de cadena pesada de conformidad con la reivindicación 4 y el parátopo de región variable de cadena ligera de conformidad con la reivindicación 5.

7. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera, en donde el anticuerpo comprende: a. un parátopo de| región variable de cadena pesada seleccionado de los residuos Chothia S5l , T53, F56, Y58, Q95, L96 y T97; o b. un parátopo de región variable de cadena ligera seleccionado de los residuos Chothia Y32, D50, Y91 , F93 y F94; o c. un parátopo de región variable de cadena pesada seleccionado de los residuos Chothia S51 , T53, F56, Y58, Q95, L96 y T97 y d. un parátopo de j región variable de cadena ligera seleccionado de los residuos Chothia Y32, D50, Y91 , F93 y F94.

8. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana; el anticuerpo o fragmento aislado comprende residuos de aminoácido parátopo de región variable de cadena pesada y residuos de aminoácido parátopo de región variable de cadena ligera que interactúan con los residuos de la IL-17A humana que tiene la secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEQ ID NO: 1 Q5, que comprende: a. un residuo de tirosina en la región variable de cadena pesada que interactúa con la R101 de la IL-17A humana; b. un residuo de fenilalanina en la región variable de cadena pesada que interactúa con la R 01 de la: IL-17A humana; c. un primer residuo de fenilalanina en la región variable de óadena ligera que interactúa con la Y62 y R101 de la IL-17A humana; d. un segundo residuo de fenilalanina en la región variable de cadena ligera que interactúa con la L26 y F1 10 de la IL-17A humana; y e. un residuo de tirosina en la región variable de cadena ligera que interactúa con la R101 de la IL-17A humana.

9. - Un anticuerpo o fragmento aislado que sé une, específicamente, a la IL-17A, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera, en donde el anticuerpo comprende: a. un parátopo de región variable de cadena pesada seleccionado de los residuos Chothia F56 y Y58; y b. un parátopo de región variable de cadena ligera seleccionado de los residuos Chothia Y91 , F93 y F94. i

10. - Un anticuerpo aislado o fragmento de este que se üne, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo aislado o fragmento de este comprende una región variable de cadena pesada (VH, por sus siglas en inglés) y una región variable de cadena ligera (VL, por sus siglas en inglés), en donde el anticuerpo comprende: a. las secuencias de aminoácidos de la región determinante de la complementariedad de cadena pesada (CDR, por sus siglas en inglés) 1 , 2 y 3 (HCDR1 , HCDR2, HCDR3), tal como se muestran en las SEQ ID NO: 23, 35 y 52, respectivamente, en donde la HCDR2 de la SEQ ID NO: 35 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (I): Xaa1-I-I-P-W-F-G-Xaa2-T-Xaa3-Y-A-Q-K-F-Q-G, (I) en donde Xaai puede ser His, Met, Arg, Ser o Tyr; Xaa2 puede ser Trp, Thr o Tyr; y Xaa3 puede ser Tyr, Phe, Ser o Asp; o b. las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2, y HCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 23, 35 y 52, respectivamente, en donde el HCDR2 de la SEQ ID NO: 35 se define además tal como se muestra en la Fórmula (I): Xaai-I-I-P-W-F-G-Xaa2-T-Xaa3-Y-A-Q-K-F-Q-G, en donde Xaai puede ser His, Met, Thr o Tyr; y Xaa3 puede ser Tyr, Phe, Ser o Asp; y las secuencias de aminoácidos de la región determinante de la complementariedad de cadena ligera (CDR) 1 , 2 y 3 (LCDR1 , LCDR2, LCDR3) tal como se muestra en las SEQ ID NO: 1 , 4 y 7, respectivamente; o c. las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 2, 5 y 11 , respectivamente, en donde la LCDR3 de la SEQ ID NO: 11 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (II): Xaa4-Q-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaaio, (ll) en donde Xaa4 puede ser His o GIn; Xaas puede ser Phe o Gly; Xaaepuede ser Thr, Val o Asn; Xaa7 puede ser lie, Thr o Tyr; Xaae puede ser Pro o Arg; Xaag puede ser Ser o Pro; y Xaaio puede ser His, Phe o Leu; o d. las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2, y LCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 2, 5 y 1 1 , respectivamente, en donde la LCDR3 de la SEQ ID NO: 1 1 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (II): en donde Xaa4 puede ser Thr, Val o Asn; Xaa puede ser lie, Thr o Tyr; Xaa8 puede ser Pro o Arg; Xaa9 puede ser Ser o Pro; y Xaaio puede ser His, Phe o Leu; y las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestra en las SEQ ID NO: 24, 36 y 53, respectivamente; o e. las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 24, 36 y 57, respectivamente, en donde la HCDR3 de la SEQ ID NO: 57 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (IV): E-V-D-S-Xaa19-Y-Y-S-Y-F-D-I, (IV) i en donde Xaaig es Met, lie, Leu o Thr; o f. las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 2, :5 y 17, respectivamente, en donde la LCDR3 de la SEQ ID NO: 17 se jdefine, además, tal como se muestra en la Fórmula (III): Xaaii-Q-Xaai2- aa-i3-Xaai4-Xaa-i 5-Xaai6-Xaai7-Xaai8-T, (III) en donde Xaan puede ser Gln o Thr; Xaa-|2 puede ser Ser o Tyr; Xaa-i3 puede ser Asn, Arg, Val o Tyr; Xaa™ puede ser His o Ser; Xaa-i5 puede ser lie, Thr, Leu, Ala o Ser; Xaai6 puede ser Pro, Leu o Ser; Xaai7 puede ser Pro, Ser, Phe o Leu; y Xaa-ie puede ser Ala, Leu o Asp; o g. las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 24, 36 y 57, respectivamente, en donde la HCDR3 de la SEQ ID NO: 57 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (IV): E-V-D-S-Xaai9-Y-Y-S-Y-F-D-I, (IV) en donde Xaaig es Met, lie, Leu o Thr; y las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 2, 5 y 17, respectivamente, en donde la LCDR3 de la SEQ ID NO: 17 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (III): Xaaii-Q-Xaai2-Xaai3-Xaai4-Xaa-|5-Xaai6- aai7-Xaai8-T, (III) en donde Xaan puede ser Gln o Thr; Xaai2 puede ser Ser o Tyr; Xaai3 puede ser Asn, Arg, Val o Tyr; Xaau puede ser His o Ser; Xaa15 puede ser lie, Thr, Leu, Ala o Ser; Xaai6 puede ser Pro, Leu o Ser; Xaa-|7 puede ser Pr , Ser, Phe o Leu; y Xaai8 puede ser Ala, Leu o Asp; o h. las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID ? NO: 25, 46 y 61 , respectivamente, en donde la HCDR2 de la SEQ ID ÑO: 46 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (VI): Xaa2i-l-Xaa22-Xaa23- aa24-Xaa25- aa26- aa27-Xaa28- aa29-Y-A-D-S- K-G, (VI) en donde Xaa2i puede ser Ala, Gly, Thr o Val; Xaa22 puede ser Asn o Ser; Xaa23 puede ser Gly, Met, Lys, lie, Leu o His; Xaa24 puede ser Leu, Asp, Ala, His, Thr, Gly o Ser; Xaa25 puede ser Gly o Ser; Xaa26 puede ser Thr, Gly, Tyr o Asp; Xaa27 puede ser His, Trp, Tyr o Phe; Xaa28 puede ser Lys, Thr o lie; y Xaa29 puede ser Tyr, Phe o Asn; y la HCDR3 de la SEQ ID NO: 61 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (VII): Q-L-Xaa30-L-D-V, (VII) en donde Xaa3o puede ser Met, Leu o Thr; o i. las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 3, 6 y 22, respectivamente, en donde la LCDR3 de la SEQ ID NO: 22 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (V): G-S-Y-D-F-F-L-G-Xaa20-I-V, (V) en donde Xaa2o es Met, Leu, Thr o Tyr; o j. las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 25, 46 y 61 , respectivamente, en donde la HCDR2 de la SEQ ID NO: 46 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (VI): Xaa2i-I-Xaa22-Xaa23- aa2 - aa25-Xaa26- aa27- aa28- aa29-Y-A-D-S-V-K-G, (VI) en donde Xaa2i puede ser Ala, Gly, Thr o Val; Xaa22 puede ser Asn ¡ o Ser; Xaa23 puede ser Gly, Met, Lys, lie, Leu o His; Xaa24 puede ser Leu, Asp, Ala, His, Thr, Gly o Ser; Xaa25 puede ser Gly o Ser; Xaa26 puede ser Thr, Gly, Tyr o Asp; Xaa27 puede ser His, Trp, Tyr o Phe; Xaa2s puede ser Lys, Thr o He; y Xaa29 puede ser Tyr, Phe o Asn; y la HCDR3 de la SEQ ID NO: 61 se define además tal como se muestra en la Fórmula (VII): Q-L-Xaa30-L-D-V, (VII) en donde Xaa3o puede ser Met, Leu o Thr; y las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 3, 6 y 22, respectivamente, en donde la LCDR3 de la SEQ ID NO: 22 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (V): G-S-Y-D-F-F-L-G-Xaa20-I-V, (V) en donde Xaa20 es Met, Leu, Thr o Tyr; o k. las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 25, 51 y 58, respectivamente, en donde la HCDR2 de la SEQ ID NO: 51 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (VIII): V-T-S-Xaa3i-Xaa32-Xaa33-Xaa34-T-Y-Y-A-Xaa35-S-V-K-G, (VIII) en donde Xaa3i puede ser Ala, Lys, Met o His; Xaa32 puede ser Asn, Met, Thr o Arg; Xaa33 puede ser Gly o Asp; Xaa34 puede ser Arg, His o Asn; y Xaa35 puede ser Asp o Gly; o I. las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HQDR2 y HCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 25, 51 j y 58, respectivamente, en donde la HCDR2 de la SEQ ID NO: 51 se define, además, tal como se muestra en la Fórmula (VIII): V-T-S-Xaa3i-Xaa32-Xaa33-Xaa34-T-Y-Y-A-Xaa35-S-V-K-G, (VIII) en donde Xaa3i puede ser Ala, Lys, Met o His; Xaa32 puede ser Asn, Met, Thr o Arg; Xaa33 puede ser Gly o Asp; Xaa34 puede ser Arg, His o Asn; y Xaa35 puede ser Asp o Gly; y las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 3, 6 y 18, respectivamente.

1 1.- Un anticuerpo aislado o fragmento de este se une, específicamente, a la IL-17A humana que comprende una región VH y una región VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestra en las a. SEQ ID NO:! 23, 26 y 52, respectivamente; b. SEQ ID NO: 23, 27 y 52, respectivamente; c. SEQ ID NO: 23, 28 y 52, respectivamente; d. SEQ ID NO: 23, 29 y 52, i respectivamente; e. SEQ ID NO: 23, 30 y 52, respectivamente; f. SEQ ID NO: 23, 31 y 52, respectivamente; g. SEQ ID NO: 23, 32 y 52, respectivamente; h. SEQ ID NO: 23, 33 y 52, respectivamente; o i. SEQ ID NO: 23, 34 y 52, respectivamente.

12. - El anticuerpo o fragmento aislado de conformidad j con la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque el anticuerpo comprende además las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 1 , 4 y 7, respectivamente.

13. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado i comprende una VH y una VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 1 , 4 y 7, respectivamente.

14. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una VH y una VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestra en: a. SEQ ID NO: 2, 5 y 8, respectivamente; b. SEQ ID NO: 2, 5 y 9, respectivamente; o c. SEQ ID NO: 2, 5 y 10, respectivamente.

15. - El anticuerpo o fragmento aislado de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado además porque el anticuerpo comprende, además, las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestra en las SEQ ID NO: 24, 36 y 53, respectivamente. ;

16. - Un anticuerpo o fragmento aislado que sé une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una VH y una VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestra en: a. SEQ ID NO: 24, 36 y 53, respectivamente; b. SEQ ID NO: 24, 36 y 54, respectivamente; c. SEQ ID NO: 24, 36 y 55, respectivamente; o d. SEQ ID NO: 24, 36 y 56, respectivamente.

17. - El anticuerpo o fragmento aislado de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque el anticuerpo comprende, además, secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal cómo se ! i muestra en: a. SEQ ID NO: 2, 5 y 12, respectivamente; b. SEQ ID NO: 2, 5 y 13, respectivamente; c. SEQ ID NO: 2, 5 y 14, respectivamente; d. SEQ ID NO: 2, 5 y 15, respectivamente; o e. SEQ ID NO: 2, 5 y 16, respectivamente.

18. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una VH y una VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestra en: a. SEQ ID NO: 2, 5 y 12, respectivamente; b. SEQ ID NO: 2, 5 y 13, respectivamente; c. SEQ ID NO: 2, 5 y 14, respectivamente; d. SEQ ID NO: 2, 5 y 15, respectivamente; e. SEQ ID NO: 2, 5 y 16, respectivamente.

19. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una VH y una VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestra en: a. SEQ ID NO: 25, 37 y 58, respectivamente; b. SEQ ID NO: 25, 38 y 58, respectivamente; c. SEQ ID NO: 25, 39 y 58, respectivamente; d. SEQ ID NO: 25, 40 y 58, respectivamente; e. SEQ ID NO: 25, 41 y 58, respectivamente; f. SEQ ID NO: 25, 42 y 58, respectivamente; g. SEQ ID NO: 25, 43 y 58, respectivamente; h. SEQ ID NO: 25, 41 y 59, respectivamente; i. SEQ ID NO: 25, 41 y 60, respectivamente; j. SEQ ID NO: 25, 43 y 60, respectivamente; k. SEQ ID NO: 25, 44 y 58, respectivamente; o I. SEQ ID NO: 25, 45 y 58, respectivamente.

20. - El anticuerpo o fragmento aislado de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado además porque el anticuerpo comprende, además, secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestra en: a. SEQ ID NO: 3, 6 y 18, respectivamente; b. SEQ ID NO: 3, 6 y 19, respectivamente; c. SEQ ID NO: 3, 6 y 20, respectivamente; y d. $EQ ID NO: 3, 6 y 21 , respectivamente.

21. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una VH y una VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestra en: a. SEQ ID NO: 3, 6 y 18, respectivamente; b. SEQ ID NO: 3, 6 y 19, respectivamente; c. SEQ ID NO: 3, 6 y 20, respectivamente; o d. SEQ ID NO: 3, 6 y 21 , respectivamente.

22. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una VH y una VL, en donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestra en: a. SEQ ID NO: 25, 47 y 58, respectivamente; b. SEQ ID NO: 25, 48 y 58, respectivamente; c. SEQ ID NO: 25, 49 y 58, respectivamente; o d. SEQ ID NO: 25, 50 y 58, respectivamente.

23.- El anticuerpo o fragmento aislado de conformidad ¡con la reivindicación 22, caracterizado además porque el anticuerpo comprende, además, las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2 y LCDR3, tal como se muestran en las SEQ ID NO: 3, 6 y 18, respectivamente.

24. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se! une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una VH y una VL, en donde el anticuerpo comprende:! a. las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestra en las SEQ ID NO: 25, 43 y 60, respectivamente; o b. las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2, y LCDR3, tal como se muestra en las SEQ ID NO: 3, 6 y 18, respectivamente; o c. las secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3, tal como se muestra en las SEQ ID NO: 25, 43 y 60, respectivamente y las secuencias de aminoácidos LCDR1 , LCDR2, y LCEDRS, tal como se muestra en las SEQ ID NO: 3, 6 y 18, respectivamente; o d. la VH de la SEQ ID NO: 86; o e. la VL de la SEQ ID NO: 79; o f. la VH de la SEQ ÍD NO: 86 y la VL de la SEQ ID NO: 79.

25. - Un anticuerpo o fragmento aislado que sé Une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una VH y una VL, en donde el anticuerpo comprende el VH con una secuencia de aminoácidos que se muestra en las SEQ ID NO: 67, 68, 69, 81 , 82, 83, 84, 85 u 86.

26. - El anticuerpo o fragmento aislado de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado además porque el anticuerpo comprende, además, el VL con una secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEQ ID NO: 76, 77, 78, 79 u 80.

27. - Un anticuerpo o fragmento aislado que sé une específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una VH y una VL, en donde el anticuerpo comprende el VH con una secuencia de aminoácidos que se muestra en las SEQ ID NO: 76, 77, 78, 79 u 80.

28. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una VH y una VL, en donde el anticuerpo comprende el VH que es al menos 90 % idéntico al VH con una secuencia de aminoácidos qué se muestra en las SEQ ID NO: 67, 68, 69, 81 , 82, 83, 84, 85 u 86.

29. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una VH y una VL, en donde el anticuerpo comprende el VL que es al menos 90 % idéntico a la región variable que tiene una secuencia de aminoácidos que se muestra en las SEQ ID NO: 76, 77, 78, 79 u 80.

30. - Un anticuerpo o fragmento aislado que se une, específicamente, a la IL-17A humana, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una cadena pesada de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos que se muestra en las SEQ ID NO: 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 o 100.

31 . - Un anticuerpo o fragmento aislado que sé une, específicamente, a la IL-17A, el anticuerpo o fragmento aislado comprende una cadena ligera de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEQ ID NO: 87, 88, 89, 90 o 91.

32. - El anticuerpo o fragmento aislado de conformidad 'con la reivindicación 3 o 7, caracterizado además porque el anticuerpo es completamente humano.

33. - El anticuerpo o fragmento aislado de conformidad con la t reivindicación 3 o 7, caracterizado además porque el anticuerpo está conjugado con polietilenglicol.

34. - El anticuerpo o fragmento aislado de conformidad con la reivindicación 3 o 7, caracterizado además porque el anticuerpo o fragmento aislado tiene un isotipo lgG1 o lgG4.

35. - El anticuerpo o fragmento aislado de conformidad con la reivindicación 3 o 7, caractenzado además porque el dominio Fe comprende las mutaciones S229P, P235A o L236A en el dominio Fe.

36.- Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo o fragmento aislado de conformidad con la reivindicación 3 o 7 y un portador farmacéuticamente aceptable. i

37. - Una cadena pesada de anticuerpo aislado que comprende la secuencia de aminoácidos que se muestra en las SEQ ID NO: 67, 68, 69, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 o 100.

38. - Una cadena ligera de anticuerpo aislado que comprende la secuencia de aminoácidos que se muestra en las SEQ ID NO: 76, 77, 78, 79, 80, 87, 88, 89, 90 o 91.

39. - Un polinucleótido aislado que codifica una cadena pesada de anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEQ ID NO: 67, 68, 69, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 92, 93, 94, 95, 96, 97 ¡ 98, 99 o 100.

40. - Un polinucleótido aislado que codifica una cadena ligera de anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEQ ID NO: 76, 77, 78, 79, 80, 87, 88, 89, 90 o 91 .

41. - Un vector que comprende al menos un polinucleótido, de conformidad con la reivindicación 39 o 40.

42. - Una célula huésped que comprende el vector dé la reivindicación 41 .

43. - Un método para inhibir la interacción de la IL-17A humana ? con la IL-17RA, el método comprende: a. suministrar IL-17A humana e IL- 17RA; y b. poner en contacto la IL-17A humana con un antagonista que una la IL-17A humana en al menos un residuo de aminoácido, el residuo de aminoácido se selecciona del grupo que consiste en V22, V24, L26, I28, Y62, L99, R101 , F1 10 y L1 12.

44. - Un método para inhibir la actividad biológica de la IL-17A, el método comprende: a. suministrar IL17-A humana e IL-17RA humana; y b. poner en contacto la IL-17A humana con un antagonista que una la IL-17A i humana en al menos un residuo de aminoácido, el residuo de aminoácido se selecciona del grupo que consiste en V22, V24, L26, I28, Y62, L99, R101 , F110 y L112.

45. - El método de conformidad con la reivindicación 43 o 44, caracterizado además porque el antagonista es un anticuerpo, un péptido, o t una molécula pequeña.

46.- El uso del anticuerpo aislado, de conformidad con la reivindicación 3 o 7, en la fabricación de un medicamento para tratar un estado inflamatorio en un paciente.

47. - El uso como se reclama en la reivindicación 46, en, donde el estado inflamatorio afecta el tracto respiratorio, los pulmones, el tracto gastrointestinal, el intestino delgado, el intestino grueso, el colon, el las articulaciones, los huesos y los tejidos sinoviales, el cartílago, el epitelio, el endotelio, el tejido hepático o la piel.

48. - El uso como se reclama en la reivindicación 46, en: donde el estado inflamatorio es un estado inflamatorio pulmonar, asma, enfermedad crónica obstructiva pulmonar (COPD, por sus siglas en inglés), una enfermedad inflamatoria del intestino, una enfermedad autoinmunitaria, i artritis reumatoide, soriasis o la esclerosis sistémica.