EA028622B1

EA028622B1 - Ингибиторы протеасом

Info

Publication number: EA028622B1
Application number: EA201070247A
Authority: EA
Inventors: Эдвард Дж. Олхава; Михаела Д. Данка
Original assignee: Милленниум Фармасьютикалз, Инк.
Priority date: 2007-08-06
Filing date: 2007-08-06
Publication date: 2017-12-29
Also published as: EP3210987A1; LUC00013I1; ECSP10010015A; UA97536C2; PH12014500053A1; CA2695082A1; IL242290A; GEP20125599B; PH12014500053B1; IL242290A0; LUC00013I2; IL242291A; KR101831674B1; EP2527347A1; PL2178888T3; TN2010000060A1; HRP20120745T1; JP5261488B2; SI2178888T1; CN101772507A

Abstract

В изобретении предложены новые соединения, подходящие для применения в качестве ингибиторов протеасом. В изобретении также предложены фармацевтические композиции, содержащие соединения согласно изобретению, и способы применения указанных композиций для лечения различных заболеваний.

Description

Настоящее изобретение относится к бороновым кислотам и бороновым эфирам, подходящим для применения в качестве ингибиторов протеасом. В настоящем изобретении также предложены фармацевтические композиции, содержащие соединения согласно настоящему изобретению, и способы применения указанных композиций для лечения различных заболеваний.

Уровень техники

Бороновые кислоты и эфиры проявляют целый ряд фармацевтически полезных видов биологической активности. В патенте США 4499082 (1985), Шенви (δίκηνί) с соавт., показано, что пептидные бороновые кислоты являются ингибиторами некоторых протеолитических ферментов. Кеттнером (Кейпег) и Шенви (δίκηνί) в патентах США №№ 5187157 (1993), 5242904 (1993) и 5250720 (1993) предложен класс пептидных бороновых кислот, которые ингибируют трипсин-подобные протеазы. Климаном (К1еетап) с соавт. в патенте США № 5169841 (1992) предложены модифицированные по Ν-концу пептидные бороновые кислоты, ингибирующие действие ренина. Киндером (Кшбег) с соавт. в патенте США № 5106948 (1992) указано, что некоторые соединения бороновых кислот ингибируют рост раковых клеток. Баховчиным (ВасйоусЫп) с соавт. в публикации международной заявки АО 07/0005991 описаны соединения пептидных бороновых кислот, ингибирующие активирующий фибробласты белок.

Бороновые кислоты и эфиры являются многообещающими ингибиторами протеасомы, которая представляет собой мультикаталитическую протеазу, ответственную за большую часть процессов внутриклеточного обновления белков. Адамсом (Абатк) с соавт. в патенте США № 5780454 (1998) описаны пептидные бороновые эфиры и кислоты, подходящие для применения в качестве ингибиторов протеасом. В этой работе также описано применение бороновых эфиров и кислот для уменьшения скорости распада мышечных белков, уменьшения активности ΝΡ-κΒ в клетке, уменьшения скорости распада белка р53 в клетке, подавления распада циклинов в клетке, подавления роста раковых клеток и ингибирования ΝΡ-κΒ-зависимой клеточной адгезии. Фуретом (Риге!) с соавт. в публикации АО 02/096933, Четэржи (СЬайецее) с соавт. в публикации АО 05/016859 и Бернадини (Вегпайий) с соавт. в публикациях АО 05/021558 и АО 06/08660 предложены дополнительные бороновые эфиры и кислоты, которые, как сообщалось, обладают ингибиторной активностью по отношению к протеасомам.

В работе Кишановера (Саесйапоуег). Се11, 79: 13-21 (1994), указано, что протеасома представляет собой протеолитический компонент убиквитин-протеасомного пути, в котором белки соединяются с множеством молекул убиквитина, что приводит к последующему разложению указанных белков. Кишановером также указано, что убиквитин-протеасомный путь играет ключевую роль в целом ряде важных физиологических процессов. В работе Риветта (КлуеИ) с соавт., ВюсЬеш. 1. 291:1 (1993), указано, что протеасома проявляет трипсиновую, химотрипсиновую и пептидил-глютамилпептидазную активность. Каталитическое ядро протеасомы 26δ составляет протеасома 20δ. МакКормаком (МсСогтаск) с соавт., ВюсЬет18йу 37:7792 (1998) описан целый ряд пептидных субстратов, включая δис-^еи-^еи-Vа1-Τу^АМС, Ζ-Ьеи-Ьеи-Агд-АМС и Ζ-ΡΌνι-ΡΌνι-ΟΙνι-ΣΝΑ, где δικ представляет собой Ν-сукцинил, АМС представляет собой 7-амино-4-метилкумарин, а 2ΝΑ представляет собой 2-нафтиламин, которые расщепляются протеасомой 20δ.

Ингибирование протеасом представляет собой важную новую стратегию лечения рака. Кингом (Кш§) с соавт., δ^ιη^ 274:1652-1659 (1996), показано, что убиквитин-протеасомный путь играет важную роль в регуляции клеточного кольца, росте новообразований и метастазировании. Авторами было показано, что ряд ключевых регуляторных белков, включая циклины и циклин-зависимые киназы р21 и р27^КЖ, непрерывно разлагается в ходе протекания клеточного кольца по убиквитин-протеасомному пути. Своевременное разложение этих белков требуется для продвижения клетки по клеточному кольцу и ее митотического деления.

Кроме того, убиквитин-протеасомный путь необходим для регуляции транскрипции. В работе Паломбеллы (Ра1ошЬе11а) с соавт., Се11, 78:773 (1994) показано, что активация транскрипционного фактора ΝΡ-κΒ регулируется опосредованным протеасомами разложением ингибиторного белка ΙκΒ. В свою очередь, ΝΡ-κΒ играет центральную роль в регуляции генов, участвующих в иммунных и воспалительных ответах. В работе Рида (Кеаб) с соавт., 1штипйу 2:493-506 (1995) показано, что убиквитин-протеасомный путь необходим для экспрессии молекул клеточной адгезии, таких как Е-селектин, 1САМ-1 и УСАМ-Ι. В работе Цеттера ^ейег), δет^ηа^8 ίη Сапсег Βίο1ο§\· 4:219-229 (1993) показано, что молекулы клеточной адгезии участвуют в метастазировании опухолей и ангиогенезе ίη νίνο, направляя адгезию и экстравазацию опухолевых клеток в сосудистую систему и из нее к удаленным тканям внутри организма. Кроме того, Бегом ^ед) и Балтимором (Βа1ί^тο^е), δ^ιη^ 274:782 (1996) показано, что ΝΡ-κΒ представляет собой противоапоптический контролирующий фактор, и ингибирование активации ΝΡ-κΒ делает клетки более чувствительными к воздействиям окружающей среды и действию цитотоксических агентов.

Ингибитор протеасом УЕЬСАЭЕ® (бортезомиб; Ν-2-пиразинкарбонил-Ь-фенилаланин-Ьлейцинбороновая кислота) представляет собой первый ингибитор протеасом, официально разрешенный к применению. В работе Митсиадез (МПмайек) с соавт., СиггеШ Эгид ТагдеК 7:1341 (2006) приведен обзор клинических исследований, в результате которых было получено разрешение на применение бортезоми- 1 028622 ба для лечения пациентов со множественной миеломой, которые получали по меньшей мере один известный ранее лекарственный препарат. Фишером (ПзНег) с соавт., Σ. СНп. Опсо1., 30:4867 описано международное многоцентровое клиническое исследование II фазы, подтверждающее активность бортезомиба у пациентов с рецидивирующей или рефракторной лимфомой из клеток мантийной зоны. В работах Ишии (ΙδΗίί) с соавт., ЛпН-Сапсег Адеп1д ΐη МеФста1 СНет181гу, 7:359 (2007) и Роккаро (Коссаго) с соавт., Сигг. РНагт. Вю1есН., 7:1341 (2006) обсуждается ряд молекулярных механизмов, которые могут вносить вклад в противоопухолевую активность бортезомиба.

Как видно из приведенных выше источников, протеасома представляет собой важную мишень для терапевтического вмешательства. Следовательно, в настоящее время по-прежнему существует необходимость в создании новых и/или улучшенных ингибиторов протеасом.

Описание изобретения

В настоящем изобретении предложены соединения, являющиеся эффективными ингибиторами протеасомы. Указанные соединения подходят для подавления активности протеасом т уйго и т νίνο и являются особенно подходящими для лечения различных заболеваний, связанных с пролиферацией клеток.

Соединения согласно настоящему изобретению отвечают общей формуле (I) сн₃ или представляют собой фармацевтически приемлемую соль или бороновый ангидрид соединения указанной формулы,

мент, представляющий собой производное комплексообразующего агента на основе бороновой кислоты; кольцо А представляет собой

С1

- 2 028622

Соединения бороновых кислот формулы (I), где каждый из Ζ¹ и Ζ² представляет собой гидроксил, имеют следующие химические названия:

Таблица 1

Ингибиторы протеасом

	Химическое название
1-1	[(1Н)-1-({[(2,3-дифторбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-2	[(1К)—1—({[(5-хлор-2-фторбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-3	[(1Н)-1-({[(3,5-дифторбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-4	[(1Н)-1-({[(2,5-дифторбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-5	[(1Н)-1-({[(2-бромбензоил)амино]ацетил]амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-6	[(1Н)-1-({[(2-фторбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-7	[(1К)-1-({[(2-хлор-5-фторбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-8	[(1К)—1—({[(4-фторбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-9	[(1Н)-1-({[(3,4-дифторбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-10	[(1Н)-1- ({ [(3-хлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-11	[(1Н)-1-({[(2,5-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-12	[ (1Н)-1-({ [ (3,4-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино) -3- метилбутил]бороновая кислота
1-13	[(1И)-1-({[(3-фторбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-14	[(1Н)-1-({[(2-хлор-4-фторбензоил)амино]ацетил]амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-15	[ (1Н)-1-({ [ (2,3-дихлорбензоил) амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-16	[ (1Н) -1- ({ [ (2-хлорбензоил) амино] ацетил} амино) -3- метилбутил]бороновая кислота
1-17	[ (1Н)-1-({ [ (2,4-дифторбензоил)амино]ацетил}амино) -3- метилбутил]бороновая кислота
1-18	[ (1Н) -1- ( { [ (4-хлор-2-фторбензоил) амино] ацетил] амино) -3- метилбутил]бороновая кислота
1-19	[(1И)—1—({[(4-хлорбензоил)амино]ацетил}амино) -3- метилбутил]бороновая кислота
1-20	[(1Н)-1-({[(2,4-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота
1-21	[(1Н)-1-({[(3,5-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3- метилбутил]бороновая кислота

Термин приблизительно в настоящем описании означает приблизительно, в пределах, ориентировочно или около. Когда термин приблизительно используется вместе с числовым диапазоном, использование указанного термина приводит к изменению этого диапазона путем расширения верхних и ниж- 3 028622 них границ указанного числового диапазона. Как правило, термин приблизительно в настоящем описании изменяет числовое значение в большую или меньшую сторону от указанного значения на величину отклонения, составляющую 10%.

В настоящем описании термин включает означает включает, но не ограничивается.

Если не указано иное, структуры, приведенные в настоящем описании, включают соединения, которые отличаются лишь присутствием одного или более изотопно обогащенных атомов. Например, соединения, отвечающие приведенной структуре за исключением того, что один из атомов водорода замещен на дейтерий или тритий или один из атомов углерода замещен на ¹³С- или ¹⁴С-обогащенный углерод, находятся в рамках настоящего изобретения.

В настоящем описании термин бороновая кислота относится к химическому соединению, содержащему фрагмент В(ОН)₂. В некоторых вариантах реализации, бороновые кислоты могут образовывать олигомерные ангидриды путем дегидратации фрагмента бороновой кислоты. Например, Снайдером (Зпубег) с соавт., Ί. Ат. Сйет. Зое. 80:3611 (1958) описаны олигомерные арилбороновые кислоты.

В настоящем описании термин ангидрид бороновой кислоты (бороновый ангидрид) относится к химическому соединению, образованному путем комбинирования двух или более молекул бороновой кислоты с отщеплением одной или более молекул воды. При смешивании с водой ангидрид бороновой кислоты гидратируется с высвобождением свободной бороновой кислоты. Согласно различным вариантам реализации, ангидрид бороновой кислоты может содержать две, три, четыре или более единиц бороновой кислоты и может иметь циклическую или линейную конфигурацию. Неограничивающие примеры олигомерных бороновых ангидридов пептидных бороновых кислот согласно настоящему изобретению представлены ниже

В формулах (1) и (2) переменная п представляет собой целое число от 0 до примерно 10, предпочтительно 0, 1, 2, 3 или 4. В некоторых вариантах реализации ангидрид бороновой кислоты содержит циклический тример (бороксин) формулы (2), где п равен 1. Переменная имеет формулу (3)

где кольцо А принимает значения, указанные выше для формулы (I).

В некоторых вариантах реализации по меньшей мере 80% бороновой кислоты, присутствующей в ангидриде бороновой кислоты, существует в форме отдельного олигомерного ангидрида. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере 85, 90, 95 или 99% бороновой кислоты, присутствующей в ангидриде бороновой кислоты, существует в форме отдельного олигомерного ангидрида. В некоторых предпочтительных вариантах реализации ангидрид бороновой кислоты состоит или по существу состоит из бороксина, имеющего формулу (3).

Ангидрид бороновой кислоты предпочтительно можно получить из соответствующей бороновой кислоты в условиях проведения дегидратации, включая, но не ограничиваясь перечисленными, перекристаллизацию, лиофилизацию, тепловое воздействие и/или воздействие осушителя. Неограничивающие примеры подходящих для перекристаллизации растворителей включают этилацетат, дихлорметан, гексаны, простой эфир, ацетонитрил, этанол и их смеси.

В некоторых вариантах реализации Ζ¹ и Ζ² вместе образуют фрагмент, представляющий собой производное комплексообразующего агента на основе бороновой кислоты. Для целей настоящего изобретения термин комплексообразующий агент на основе бороновой кислоты относится к любому соединению, содержащему по меньшей мере две функциональные группы, каждая из которых может образовывать ковалентную связь с бором. Неограничивающие примеры подходящих функциональных групп включают амино и гидроксил. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна из указанных функциональных групп представляет собой гидроксильную группу. Термин фрагмент, представляющий собой производное комплексообразующего агента на основе бороновой кислоты относится к фрагменту, образованному путем удаления атомов водорода из двух функциональных групп в составе комплексообразующего агента на основе бороновой кислоты.

В настоящем описании термины боронатный эфир и бороновый эфир используются взаимозаменяемо и относятся к химическому соединению, содержащему фрагмент -Β(Ζ¹) (Ζ²), где по меньшей мере один из Ζ¹ или Ζ² представляет собой алкокси, аралкокси или арилокси или Ζ¹ и Ζ² вместе образуют фрагмент, представляющий собой производное комплексообразующего агента на основе бороновой ки- 4 028622 слоты, содержащего по меньшей мере одну гидроксильную группу.

В некоторых вариантах реализации, Ζ¹ и Ζ² вместе образуют фрагмент, представляющий собой производное соединения, содержащего по меньшей мере две гидроксильные группы, разделенные по меньшей мере двумя промежуточными атомами в цепи или кольце, при этом указанная цепь или указанное кольцо содержит атомы углерода и, возможно, гетероатом или гетероатомы, которые могут представлять собой Ν, δ или О, причем атом, присоединенный к бору, в каждом случае представляет собой атом кислорода.

В настоящем описании термин соединение, содержащее по меньшей мере две гидроксильные группы относится к любому соединению, содержащему две или более гидроксильных групп. Для целей настоящего изобретения указанные две гидроксильные группы предпочтительно разделены по меньшей мере двумя промежуточными атомами, предпочтительно от примерно 2 до примерно 5 промежуточными атомами, более предпочтительно 2 или 3 промежуточными атомами. Для удобства, термин дигидроксильное соединение можно применять по отношению к соединению, содержащему по меньшей мере две гидроксильные группы, как указано выше. Таким образом, в настоящем описании термин дигидроксильное соединение не должен быть ограничен соединениями, содержащими лишь две гидроксильные группы. Фрагмент, представляющий собой производное соединения, содержащего по меньшей мере две гидроксильные группы, может быть присоединен к бору через атомы кислорода в составе любой из двух указанных гидроксильных групп. Предпочтительно атом бора, атомы кислорода, присоединенные к бору, и атомы, соединяющие два атома кислорода, вместе образуют 5- или 6-членное кольцо.

Для целей настоящего изобретения комплексообразующий агент на основе бороновой кислоты предпочтительно является фармацевтически приемлемым, т.е. подходящим для введения людям. В некоторых предпочтительных вариантах реализации комплексообразующий агент на основе бороновой кислоты представляет собой сахар. Термин сахар включает любой полигидроксильный углеводный фрагмент, включая моносахариды, дисахариды, полисахариды, сахарные спирты и аминосахара. В некоторых вариантах реализации сахар представляет собой моносахарид, дисахарид, сахарный спирт или аминосахар. Неограничивающие примеры подходящих Сахаров включают глюкозу, сахарозу, фруктозу, трегалозу, маннит, сорбит, глюкозамин и Ν-метилглюкоз амин. В некоторых вариантах реализации сахар представляет собой маннит или сорбит. Таким образом, в вариантах реализации, согласно которым сахар представляет собой маннит или сорбит, Ζ¹ и Ζ² вместе образуют фрагмент формулы С₆Н₁₂О₆, где атомы кислорода двух депротонированных гидроксильных групп образуют ковалентные связи с бором с образованием боронатного эфира. В некоторых конкретных вариантах реализации, Ζ¹ и Ζ² вместе образуют фрагмент, представляющий собой производное Ό-маннита.

В некоторых вариантах реализации соединение формулы (I) приготовлено в виде лиофилизированного порошка, как описано Пламондоном (Р1атопбоп) с соавт. в публикации заявки \УО 02/059131, содержание которой полностью включено в настоящее описание посредством ссылки. В некоторых вариантах реализации лиофилизированный порошок также содержит свободное дигидроксильное соединение. Предпочтительно указанное свободное дигидроксильное соединение и соединение формулы (I) присутствуют в смеси в молярном соотношении, находящемся в диапазоне от примерно 0,5:1 до примерно 100:1, более предпочтительно от примерно 5:1 до примерно 100:1. В различных вариантах реализации, в которых дигидроксильное соединение представляет собой маннит, указанный лиофилизированный порошок содержит свободный маннит и маннит-боронатный эфир в молярном соотношении, находящемся в диапазоне от примерно 10:1 до примерно 100:1, от примерно 20:1 до примерно 100:1 или от примерно 40:1 до примерно 100:1.

В некоторых вариантах реализации лиофилизированный порошок содержит маннит и соединение формулы (I) и, по существу, не содержит других компонентов. Тем не менее, указанная композиция может дополнительно содержать один или более других фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, носителей, разбавителей, наполнителей, солей, буферов, стабилизаторов, солюбилизаторов и других веществ, хорошо известных в данной области техники. Получение фармацевтически приемлемых составов, содержащих эти вещества, описано, например, в ВстищЮп: ТЬе δοίοηοο аиб Ргасйсе оГ РЬагтасу, 20-е изд., ред. А. Сеииато, Ырршсой ^ЬЬатз & ХУПкиъ. 2000, или в последнем издании.

Лиофилизированный порошок, содержащий соединение формулы (I), предпочтительно получали согласно методикам, описанным Пламондоном (Р1атопбоп) с соавт. в \УО 02/059131. Таким образом, в некоторых вариантах реализации, способ получения лиофилизированного порошка включает: (а) получение водной смеси, содержащей пептидную бороновую кислоту и дигидроксильное соединение; и (Ь) лиофилизирование этой смеси.

Общая методология синтеза.

Соединения формулы (I) можно получить с помощью способов, известных среднему специалисту в данной области техники; см., например, Адаме (Абатз) с соавт., патент США № 5780454; Пикерсджилл (РюкетздШ) с соавт., международная публикация \УО 2005/097809. Типичный способ синтеза представлен на схеме 1 ниже.

- 5 028622

Реакция сочетания соединения (ΐ) с Ν-защищенным глицином (ΐΐ) с последующим удалением Νконцевых защитных групп обеспечивает получение соединения (ΐΐΐ). Примеры подходящих защитных групп (РО) включают, без ограничения, ацильные защитные группы, например формил, ацетил (Ас), сукцинил (8ис) и метоксисукцинил; и уретановые защитные группы, например трет-бутоксикарбонил (Вос), бензилоксикарбонил (ΟΒζ) и флуоренилметоксикарбонил (Тшос). Реакцию сочетания пептида можно осуществить путем предварительного превращения фрагмента карбоновой кислоты в составе соединения (ΐΐ) в активированный сложный эфир, например □-(Ν-гидроксисукцинимидный) эфир с последующей обработкой соединением (ΐ). В качестве альтернативы активированный эфир можно получить ΐπ лШ путем приведения карбоновой кислоты в контакт с агентом, применяемым в реакции сочетания пептида. Примеры подходящих агентов, применяемых в реакции сочетания пептида, включают, без ограничения, карбодиимидные агенты, например дициклогексилкарбодиимид (ЭСС) или 1-(3диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид (ЕЭС); фосфониевые агенты, например гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси-трис-(диметиламино)фосфония (ВОР); и урониевые агенты, например тетрафторборат О-(1Н-бензотриазол-1-ил)-НН№,№-тетраметилурония (ТВТИ).

Затем проводили реакцию сочетания соединения (ΐΐΐ) с замещенной бензойной кислотой (АгСО₂И) с получением соединения (ΐν). Условия проведения реакции сочетания пептида, описанные выше для реакции сочетания соединений (ΐ) и (ΐΐ), также подходят для проведения реакции сочетания соединения (ΐΐΐ) с АгСО₂Н. Удаление защитных групп из фрагмента бороновой кислоты затем приводит к образованию соединения (ν). Этап удаления защитных групп предпочтительно осуществляют путем переэтерификации в двухфазной смеси, содержащей бороновый эфир (ΐν), органический акцептор бороновой кислоты, низший алканол, С_5-8 углеводородный растворитель и водную минеральную кислоту.

Схема 2

В качестве альтернативы очередность проведения реакций сочетания можно обратить, как показано на схеме 2. Таким образом, О-защищенный глицин (νΐ) сначала подвергают сочетанию с замещенной бензойной кислотой (АгСО₂Н), а затем эфир гидролизуют с получением соединения (νΐΐ). Затем проводят реакцию сочетания с соединением (ΐ) и удаление защитных групп из бороновой кислоты, как описано выше для схемы 1, с получением соединения (ν).

Применения, композиции и введение.

В настоящем изобретении предложены соединения, которые представляют собой эффективные ингибиторы протеасомы. Указанные соединения можно исследовать ΐπ νίΐΓΟ или ΐπ νίνο с целью оценки их способности ингибировать опосредуемые протеасомами гидролиз пептидов или разложение белков.

Таким образом, согласно другому аспекту в настоящем изобретении предложен способ ингибирования одного или более видов пептидазной активности протеасомы в клетке, включающий приведение клетки, в которой требуется ингибирование протеасом, в контакт с соединением согласно настоящему изобретению или фармацевтически приемлемой солью, бороновым эфиром или бороновым ангидридом указанного соединения.

В настоящем изобретении также предложен способ ингибирования пролиферации клеток, вклю- 6 028622 чающий приведение клетки, в которой требуется обеспечение такого ингибирования, в контакт с соединением, предложенным в настоящем изобретении. Выражение ингибирование пролиферации клеток применяется для обозначения способности соединения согласно настоящему изобретению уменьшать количество клеток или подавлять рост контактирующих с указанным соединением клеток по сравнению с клетками, не контактирующими с указанным ингибитором. Оценку пролиферации клеток можно осуществить путем подсчета количества клеток с применением устройства для подсчета клеток или в ходе исследования выживаемости клеток, например исследования МТТ или \У8Т. В случае, когда клетки находятся в стадии непрерывного роста (например, в солидной опухоли или органе), такую оценку пролиферации клеток можно осуществить с помощью измерения роста, например, штангенциркулем и сравнения масштаба роста контактирующих клеток с ростом неконтактирующих клеток.

Предпочтительно рост клеток, контактирующих с ингибитором, замедляется по меньшей мере на примерно 50% по сравнению с ростом неконтактирующих клеток. В различных вариантах реализации, пролиферация контактирующих клеток подавлялась по меньшей мере на примерно 75%, по меньшей мере примерно 90% или по меньшей мере примерно 95% по сравнению с неконтактирующими клетками. В некоторых вариантах реализации, выражение подавление пролиферации клеток включает уменьшение количества контактирующих клеток по сравнению с количеством неконтактирующих клеток. Таким образом, ингибитор протеасом, который ингибирует пролиферацию контактирующих клеток, может индуцировать замедление роста контактирующих клеток, остановку роста, запрограммированную гибель клеток (т.е. апоптоз), или некротическую гибель клеток.

В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (1) или фармацевтически приемлемую соль или бороновый ангидрид указанного соединения и фармацевтически приемлемый носитель.

Если в данных композициях применяют фармацевтически приемлемую соль соединения согласно настоящему изобретению, указанную соль предпочтительно получают из неорганической или органической кислоты или основания. Для обзора подходящих солей, см., например, Вегде с1 а1., Рйагш. δα. 66:119 (1977) и ВенйпдЮп: ТЬе 8аепсе аиб Ргасйсе οί РЬагтасу, 201Ь Ей.ей. А. Сеииаго, Ырршсой ХУППапъ & А'Пкшз. 2000.

Неограничивающие примеры подходящих солей присоединения кислоты включают следующие: ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензосульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоционат, тозилат и ундеканоат.

Подходящие соли присоединения основания включают, без ограничения, соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли лития, натрия и калия; соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и магния; другие соли многовалентных металлов, такие как соли цинка; соли с органическими основаниями, такими как дициклогексиламин, Ν-метил-Э-глюкамин, трет-бутиламин, этилендиамин, этаноламин и холин; и соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин и так далее. В некоторых вариантах реализации фармацевтически приемлемая соль представляет собой соль присоединения основания к бороновой кислоте формулы (I), где каждый из Ζ¹ и Ζ² представляет собой гидроксил.

Термин фармацевтически приемлемый носитель в настоящем описании относится к материалу, который совместим с субъектом-реципиентом, предпочтительно млекопитающим, более предпочтительно человеком, и является подходящим для доставки активного агента к заданному месту, при этом не ограничивая активность указанного агента. Токсичность или нежелательные эффекты, при наличии таковых, связанные с носителем, предпочтительно соразмерны с приемлемым соотношением риск/польза для предполагаемого применения указанного активного агента.

Термины носитель, адъювант или среда в настоящем описании используются взаимозаменяемо и включают все и каждый из растворителей, разбавителей и других жидких носителей, диспергирующих или суспендирующих средств, поверхностно-активных веществ, модификаторов рН, изотонических агентов, загустителей или эмульгаторов, консервантов, твердых связующих веществ, смазывающих веществ и др., подходящих для конкретной желаемой дозированной формы. В ВетшдЮп: ТЬе 8аепсе апй Ргасйсе οί РЬагтасу, 20'¹' Ей. ей. А. Сеппаго, Ырршсой ^ЬЬатк & ХУПкнъ. 2000 описаны различные носители, применяемые для приготовления фармацевтически приемлемых композиций, и известные методики их получения. За исключением случаев, когда какая-либо традиционно применяемая среданоситель не совместима с соединениями согласно настоящему изобретению, например вызывает какоелибо нежелательное биологическое действие или иным образом неблагоприятно взаимодействует с любым другим компонентом(ами) фармацевтически приемлемой композиции, применение среды-носителя также находится в рамках настоящего изобретения. Некоторые примеры материалов, которые могут выступать в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают, но не ограничены перечисленными, ионообменные вещества, окись алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как человеческий сывороточный альбумин, буферные вещества, такие как фосфаты, карбонаты, гид- 7 028622 роксид магния и гидроксид алюминия, глицин, сорбиновая кислота или сорбат калия, смеси неполных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, вода, апирогенная вода, соли или электролиты, такие как протаминсульфат, двузамещенный фосфат натрия, двузамещенный фосфат калия, хлорид натрия и соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, полиакрилаты, воски, блок-сополимеры полиэтилен-полиоксипропилен, ланолин, сахара, такие как лактоза, глюкоза, сахароза и маннит, крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал, целлюлоза и ее производные, такие как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы, порошкообразный трагакант; солод, желатин, тальк, наполнители, такие как масло какао и воски для суппозиториев, масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло, гликоли, такие как пропиленгликоль и полиэтиленгликоль, эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат, агар, альгиновая кислота, изотонический солевой раствор, раствор Рингера, спирты, такие как этанол, изопропиловый спирт, гексадециловый спирт и глицерин, циклодекстрины, такие как гидроксипропил-в-циклодекстрин и сульфобутиловый эфир βциклодекстрина, смазывающие вещества, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния, нефтяные углеводороды, такие как минеральное масло и петролатум. Красители, высвобождающие агенты, глазировочные агенты, подсластители, вкусовые добавки и ароматизаторы, консерванты и антиоксиданты также могут присутствовать в композиции, по усмотрению специалиста, ответственного за приготовление состава.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно получить с помощью способов, хорошо известных в данной области техники, таких как, среди прочих, традиционные процессы гранулирования, смешивания, растворения, инкапсулирования, лиофилизирования или эмульгирования.

Композиции можно получить в различных формах, включая гранулы, преципитаты или твердые частицы, порошки, включая порошки, полученные с помощью сублимации, сушки в барабанной сушилке или сушки распылением, аморфные порошки, таблетки, капсулы, сироп, суппозитории, инъекции, эмульсии, эликсиры, суспензии или растворы.

Согласно предпочтительному варианту реализации композиции согласно настоящему изобретению приготовлены для фармацевтического введения млекопитающему, предпочтительно человеку. Такие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно вводить перорально, парентерально, путем ингаляционного распыления, топически, ректально, назально, буккально, вагинально или с помощью имплантированной емкости.

Термин парентеральный в настоящем описании включает методы подкожной, внутривенной, внутримышечной, внутрисуставной, внутрисиновиальной, внутристернальной, интратекальной, внутрипеченочной, внутрь пораженных тканей и интракраниальной инъекции или инфузии. Предпочтительно композиции вводят перорально, внутривенно или подкожно. Составы согласно настоящему изобретению могут быть разработаны таким образом, чтобы указанные составы являлись быстродействующими, представляли собой составы с быстрым высвобождением или составы пролонгированного действия. Кроме того, соединения можно вводить местными, а не системными средствами, как, например, с помощью введения (например, путем инъекции) в место локализации опухоли.

Жидкие дозированные формы для перорального введения включают, но не ограничены перечисленными, фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Помимо активных соединений, указанные жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, широко используемые в данной области техники, такие как, например, вода или другие растворители, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3бутиленгликоль, циклодекстрины, диметилформамид, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, зародышевое, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и эфиры сорбитана и жирных кислот, и смеси указанных веществ. Кроме инертных разбавителей композиции для перорального приема также могут включать адъюванты, такие как смачивающие агенты, эмульгирующие и суспендирующие агенты, подсластители, вкусовые добавки и ароматизаторы.

Инъецируемые препараты, например стерильные инъецируемые водные или масляные суспензии, могут быть приготовлены по способам, известным в данной области техники, с применением подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов. Стерильный инъецируемый препарат также может представлять собой стерильный инъецируемый раствор, суспензию или эмульсию в нетоксичном подходящем для парентерального введения разбавителе или растворителе, например раствор в 1,3-бутандиоле. В число подходящих носителей и растворителей, которые можно применять, входят вода, раствор Рингера, носители и растворители согласно Фармакопее США и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные нелетучие масла обычно применяют в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели можно применять любое безвкусное нелетучее масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, применяют для получения инъецируемых составов. Инъецируемые составы можно стерили- 8 028622 зовать, например, путем фильтрования через удерживающий бактерии фильтр или путем включения стерилизующих агентов в виде стерильных твердых композиций, которые можно растворить или диспергировать в стерильной воде или другой стерильной инъецируемой среде перед применением. Композиции, приготовленные для парентерального введения, можно вводить путем болюсной инъекции или путем введения через определенные интервалы времени, или путем непрерывной инфузии.

Твердые дозированные формы для перорального введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых дозированных формах активное соединение смешано по меньшей мере с одним инертным фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом или носителем, таким как цитрат натрия или дикальцийфосфат, и/или а) наполнителями или разбавителями, такими как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота, Ь) связующими веществами, такими как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидинон, сахароза и камедь, с) увлажнителями, такими как глицерин, ά) дезинтегрирующими агентами, такими как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или маниоковый крахмал, альгиновая кислота, некоторые силикаты и карбонат натрия, е) агентами, замедляющими растворение, такими как парафин, ί) усилителями абсорбции, такими как соединения четвертичного аммония, д) смачивающими агентами, такими как, например, цетиловый спирт и глицеролмоностеарат, 1ι) абсорбентами, такими как каолин и бентонитовая глина, ί) смазывающими веществами, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия, и смесями указанных веществ. В случае капсул, таблеток и пилюль, дозированная форма также может содержать буферные вещества, такие как фосфаты или карбонаты.

Твердые композиции аналогичного типа также можно применять в качестве наполнителей в мягких и твердых желатиновых капсулах, используя такие вспомогательные вещества, как лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и тому подобные. Твердые дозированные формы в виде таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул можно получить с покрытиями и оболочками, такими как энтеросолюбильные покрытия и другие покрытия, хорошо известные в области фармацевтики. Такие дозированные формы могут содержать замутняющие агенты и также могут иметь состав, обеспечивающий высвобождение действующего ингредиента(ов) исключительно, или предпочтительно в определенных отделах кишечника, при этом указанное высвобождение может являться замедленным. Примеры инкапсулирующих композиций, которые можно применять, включают полимерные вещества и воски. Твердые композиции аналогичного типа также можно применять в качестве наполнителей в мягких и твердых желатиновых капсулах, используя такие вспомогательные вещества, как лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и тому подобное.

Активные соединения также могут находиться в микроинкапсулированной форме вместе с одним или более вспомогательными веществами, как отмечалось выше. Твердые дозированные формы в виде таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул можно получить с покрытиями и оболочками, такими как энтеросолюбильные покрытия, покрытия, обеспечивающие контролируемое высвобождение, и другие покрытия, хорошо известные в области фармацевтики. В таких твердых дозированных формах активное соединение может находиться в смеси по меньшей мере с одним инертным разбавителем, таким как сахароза, лактоза или крахмал. Такие дозированные формы также могут содержать, как и в обычной практике, дополнительные вещества, отличные от инертных разбавителей, например смазывающие вещества для таблетирования и другие вспомогательные средства для таблетирования, такие как стеарат магния и микрокристаллическая целлюлоза. В случае капсул, таблеток и пилюль, дозированные формы также могут включать буферные вещества. Такие дозированные формы могут содержать замутняющие агенты и также могут иметь состав, обеспечивающий высвобождение действующего ингредиента(ов) исключительно, или предпочтительно в определенных отделах кишечника, при этом указанное высвобождение может являться замедленным. Примеры инкапсулирующих композиций, которые можно применять, включают полимерные вещества и воски.

Дозированные формы для топического или трансдермального введения соединения согласно настоящему изобретению включают мази, пасты, крема, лосьоны, гели, порошки, растворы, спреи, средства для ингаляции или пластыри. Активный компонент смешивают в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и любыми необходимыми консервантами или буферами, применение которых может требоваться. Офтальмические составы, ушные капли и глазные капли также находятся в рамках настоящего изобретения. Дополнительно, настоящее изобретение включает применение трансдермальных пластырей, которые имеют дополнительное преимущество в виде обеспечения контролируемой доставки соединения в организм. Такие дозированные формы можно получить путем растворения или распределения указанного соединения в подходящей среде. Усилители всасывания также можно применять для повышения проникновения соединения через кожу. Скорость можно контролировать либо путем обеспечения контролирующей скорость мембраны, либо путем диспергирования соединения в полимерной матрице или геле.

В некоторых вариантах реализации соединение формулы (I) вводят внутривенно. В таких вариантах реализации соединение формулы (I), где Ζ¹ и Ζ² вместе образуют фрагмент, представляющий собой производное комплексообразующего агента на основе бороновой кислоты, можно получить в виде лиофилизированного порошка, как описано выше. Влагосодержание лиофилизированного порошка предпочти- 9 028622 тельно восстанавливают путем добавления водного растворителя, подходящего для фармацевтического введения. Примеры подходящих для восстановления влагосодержания растворителей включают, без ограничения, воду, солевой раствор и фосфатно-солевой буферный раствор (ФБР). Предпочтительно влагосодержание лиофилизированного порошка восстанавливают нормальным (0,9%) физиологическим раствором. После восстановления влагосодержания устанавливается равновесие между боронатным эфиром и соответствующей свободной бороновой кислотой. В некоторых вариантах реализации равновесие достигается быстро, например в течение 10-15 мин, после добавления водной среды. Относительные концентрации боронатного эфира и бороновой кислоты, находящихся в равновесии, зависят от таких параметров, как, например, рН раствора, температура, природа комплексообразующего агента на основе бороновой кислоты и отношение содержания комплексообразующего агента на основе бороновой кислоты к содержанию боронатного эфира, присутствующего в лиофилизированном порошке.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению предпочтительно готовят для введения пациенту, имеющему повышенный риск развития или рецидива опосредуемого протеасомами расстройства или страдающему указанным расстройством. Термин пациент в настоящем описании означает животное, предпочтительно млекопитающее, более предпочтительно человека. Предпочтительными фармацевтическими композициями согласно настоящему изобретению являются композиции, приготовленные для перорального, внутривенного или подкожного введения. Тем не менее, любая из указанных выше дозированных форм, содержащих терапевтически эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению, может быть получена с помощью проведения обычных экспериментов и, следовательно, находится в рамках настоящего изобретения. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать другой терапевтический агент. В некоторых вариантах реализации такой другой терапевтический агент представляет собой агент, который обычно вводят пациентам с заболеванием или патологическим состоянием, подвергаемым лечению.

Под терапевтически эффективным количеством подразумевают количество, достаточное для того, чтобы вызывать заметное снижение активности протеасом или тяжести опосредуемого протеасомами расстройства. Необходимое количество ингибитора протеасом будет зависеть от эффективности указанного ингибитора по отношению к данному типу клеток и периода времени, требующегося для лечения расстройства. Также представляется очевидным, что конкретная дозировка и схема лечения для любого конкретного пациента будет зависеть от целого ряда факторов, включая активность конкретного применяемого соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и режим питания пациента, продолжительность введения, скорость выведения, комбинации лекарственных препаратов, мнение лечащего врача и тяжесть конкретного заболевания, подвергаемого лечению. Количество дополнительного терапевтического агента, присутствующего в композиции согласно настоящему изобретению, обычно не превышает количество, которое обычно вводят в композиции, содержащей этот терапевтический агент в качестве единственного активного агента.

Предпочтительно количество дополнительного терапевтического агента находится в диапазоне от примерно 50 до примерно 100% от количества, обычно присутствующего в композиции, содержащей этот агент в качестве единственного терапевтически активного агента.

В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения пациента, имеющего повышенный риск развития или рецидива опосредуемого протеасомами расстройства или страдающего от указанного расстройства. В настоящем описании термин опосредуемое протеасомами расстройство включает любое расстройство, заболевание или патологическое состояние, вызываемое или характеризующееся повышенной экспрессией или активностью протеасом или требующее активности протеасом. Термин опосредуемое протеасомами расстройство также включает любое расстройство, заболевание или патологическое состояние, при котором ингибирование активности протеасом обеспечивает положительный эффект.

Например, соединения и фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению подходят для лечения расстройств, опосредуемых белками (например, ΝΤ-κΒ, р27^К1р, р21^^ЛН'^с|р|. р53), которые регулируются активностью протеасом. Такие расстройства включают воспалительные расстройства (например, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ΟΘΡΌ), остеоартрит, дерматоз (например, атопический дерматит, псориаз)), сосудистые пролиферативные расстройства (например, атеросклероз, рестеноз), офтальмологические пролиферативные расстройства (например, диабетическую ретинопатию), доброкачественные пролиферативные расстройства (например, гемангиому), аутоиммунные заболевания (например, множественный склероз, отторжение тканей и органов), а также воспаление, связанное с инфекцией (например, иммунные реакции), нейродегенеративные расстройства (например, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, заболевание двигательных нейронов, невропатическую боль, расстройства, связанные с триплетными повторами, астроцитому и нейродегенерацию в результате алкогольной болезни печени), ишемическое повреждение (например, инсульт) и кахексию (например, ускоренный распад белка мышц, который сопровождает различные физиологические и патологические состояния (например, повреждение нерва, голодание, лихорадку, ацидоз, ВИЧ-инфекцию, раковое заболевание и некоторые эндокринопатии)).

- 10 028622

Соединения и фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению особенно подходят для лечения рака. В настоящем описании термин рак относится к клеточному расстройству, характеризуемому неконтролируемой или разрегулированной пролиферацией клеток, пониженной клеточной дифференцировкой, патологической способностью проникать в окружающие ткани и/или способностью вызывать новый рост в эктопических участках. Термин рак включает, но не ограничен перечисленными, солидные опухоли и гемопоэтические опухоли. Термин рак также включает заболевания кожи, тканей, органов, кости, хряща, крови и сосудов. Кроме того, термин рак включает первичные и метастатические раковые заболевания.

Неограничивающие примеры солидных опухолей, которые можно лечить с помощью предложенных ингибиторов протеасом, включают рак поджелудочной железы; рак мочевого пузыря; колоректальный рак; рак молочной железы, включая метастатический рак молочной железы; рак предстательной железы, включая андроген-зависимый и андроген-независимый рак предстательной железы; рак почки, включая, например, метастатический светлоклеточный рак; гепатоцеллюлярный рак; рак легких, включая, например, немелкоклеточный рак легких (ЫЬСЬС), бронхиолоальвеолярную карциному (ВАС) и аденокарциному легкого; рак яичников, включая, например, прогрессирующий эпителиальный или первичный рак брюшины; рак шейки матки; рак ЖКТ; рак пищевода; рак головы и шеи, включая, например, плоскоклеточную карциному головы и шеи; меланому; нейроэндокринный рак, включая метастатические нейроэндокринные опухоли; опухоли мозга, включая, например, глиому, анапластическую олигодендроглиому, мультиформную глиобластому у взрослых и анапластическую астроцитому у взрослых; рак кости; и саркому мягких тканей.

Неограничивающие примеры гематологических злокачественных новообразований, которые можно лечить с помощью предложенных ингибиторов протеасом, включают острую миелоидную лейкемию (АМЬ); хроническую миелогенную лейкемию (СМЬ), включая СМЬ в фазе акселерации и СМЬ в фазе бластов (СМЬ-ВР); острую лимфобластную лейкемию (АЬЬ); хроническую лимфоцитарную лейкемию (СЬЬ); болезнь Ходжкина (НО); неходжкинскую лимфому (ΝΗΕ), включая фолликулярную лимфому и лимфому из клеток мантийной зоны; В-клеточную лимфому; Т-клеточную лимфому; множественную миелому (ММ); макроглобулинемию Вальденстрема; миелодиспластические синдромы (МО§), включая рефрактерную анемию (КА), рефрактерную анемию с кольцевыми сидеробластами (КАК§), (рефракторную анемию с повышенным содержанием бластов (КАЕВ) и КАЕВ с трансформацией (КАЕВ-Т); и миелопролиферативные синдромы.

В некоторых вариантах реализации соединение или композицию согласно настоящему изобретению применяют для лечения пациента, имеющего повышенный риск развития или рецидива или страдающего от ракового заболевания, выбранного из группы, состоящей из множественной миеломы и лимфомы из клеток мантийной зоны.

В некоторых вариантах реализации ингибитор протеасом согласно настоящему изобретению вводят в сочетании с другим терапевтическим агентом. Другой терапевтический агент также может ингибировать протеасомы или может действовать по другому механизму. В некоторых вариантах реализации указанный другой терапевтический агент представляет собой агент, который обычно вводят пациентам с данным заболеванием или патологическим состоянием, подвергаемым лечению. Ингибитор протеасом согласно настоящему изобретению можно вводить вместе с другим терапевтическим агентом в составе одной дозированной формы или в виде отдельной дозированной формы. При введении в виде отдельной дозированной формы указанный другой терапевтический агент можно вводить перед введением, одновременно или после введения ингибитора протеасом согласно настоящему изобретению.

В некоторых вариантах реализации ингибитор протеасом формулы (I) вводят в сочетании с противораковым агентом. В настоящем описании термин противораковый агент относится к любому агенту, который вводят субъекту с раковым заболеванием для лечения указанного ракового заболевания.

Неограничивающие примеры повреждающих ДНК химиотерапевтических агентов включают ингибиторы топоизомеразы I (например, иринотекан, топотекан, камптотецин и их аналоги или метаболиты и доксорубицин); ингибиторы топоизомеразы II (например, этопозид, тенипозид и даунорубицин); алкилирующие агенты (например, мелфалан, хлорамбуцил, бусульфан, тиотепа, ифосфамид, кармустин, ломустин, семустин, стрептозоцин, декарбазин, метотрексат, митомицин С и циклофосфамид); ДНКинтеркаляторы (например, цисплатин, оксалиплатин и карбоплатин); ДНК-интеркаляторы и источники свободных радикалов, такие как блеомицин; и миметики нуклеозидов (например, 5-фторурацил, капецитабин, гемцитабин, флударабин, цитарабин, меркаптопурин, тиогуанин, пентостатин и гидроксимочевина).

Химиотерапевтические агенты, которые нарушают репликацию клетки, включают паклитаксел, доцетаксел и родственные аналоги; винкристин, винбластин и родственные аналоги; талидомид, леналидомид и родственные аналоги (например, СС-5013 и СС-4047); ингибиторы протеин-тирозинкиназ (например, мезилат иматиниба и гефитиниб); ингибиторы протеасом (например, бортезомиб); ингибиторы ΝΡкВ, включая ингибиторы IκВ-киназы; антитела, которые связываются с белками, избыточная экспрессия которых имеет место при раковых заболеваниях, и тем самым снижают репликацию клеток (например, трастузумаб, ритуксимаб, цетуксимаб и бевацизумаб); и другие ингибиторы белков или ферментов, по- 11 028622 вышенная регуляция, избыточная экспрессия или активация которых имеет место при раковых заболеваниях, ингибирование которых снижает репликацию клеток.

Для более полного понимания настоящего изобретения далее приведены следующие примеры получения и проведения исследований. Эти примеры иллюстрируют получение или исследование конкретных соединений и никоим образом не ограничивают настоящее изобретение.

Примеры

Сокращения:

БСМ - метиленхлорид,

ΌΙΕΑ - диизопропилэтиламин,

ЕОС1 - гидрохлорид ^(3-диметиламинопропил)-№-этилкарбодиимида,

ЕЮАс - этилацетат, ч - часы,

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография,

ТВТи - тетрафторборат ортобензотриазол-1-ил-ННА,№тетраметилурония,

НОВ! - гидрат 1-гидроксибензтриазола,

ЖХ-МС - жидкостная хроматография-масс-спектрометрия, мин - минуты,

1г - время удерживания из спектров диодной матрицы.

Аналитические методы ЖХ-МС.

Спектры получали на колонке Зушшейу С18 - 3,5 мкм - 4,6x50 мм, используя следующий градиент: растворитель А: 2% изопропилового спирта, 98% воды, 10 мМ ΝΗ₄ ОАс; растворитель В: 75% ацетонитрила, 25% метанола, 10 мМ ΝΗ₄ ОАс._

Время [мин]	Расход [мл/мин]	% растворителя В
0, 0	1,0	5, 0
3, 5	1,0	100, 0
4,9	1,0	100, 0
5, 0	1,0	5, 0

Пример 1. Синтез [(1К)-1-({[(2,3-дифторбензоил)амино]ацетил}амино)-3-метилбутил)бороновой кислоты-20 Ό-маннита (Ι-1)

Этап 1. Метил[(2,3-дифторбензоил)амино]ацетат.

К раствору 2,3-дифторбензойной кислоты (0,190 г, 1,2 ммоль) в тетрагидрофуране (5 мл) добавляли гидрохлорид сложного глицинметилового эфира (0,150 г, 1,2 ммоль), НОВ! (0,162 г, 1,2 ммоль), ΌΙΕΑ (0,209 мл, 1,2 ммоль) и ЕБС1 (0,252 г, 1,3 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи. Реакционную смесь гасили насыщенным раствором бикарбоната натрия и продукт разделяли в БСМ. Отделение органического слоя, а затем удаление растворителя позволяло получить метил[(2,3дифторбензоил)амино]ацетат, который использовали на следующем этапе без очистки.

Этап 2. [(2,3-Дифторбензоил)амино]уксусная кислота.

К раствору метил[(2,3-дифторбензоил)амино]ацетата (0,250 г, 1,1 ммоль) в метаноле (7 мл) добавляли гидроксид лития (0,053 г, 2,2 ммоль) и воду (3 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи. Смесь разбавляли водой (20 мл) и подкисляли 1 N НС1 (5 мл). Продукт разделяли в БСМ/метаноле (4:1). Органический слой сушили над сульфатом натрия и растворитель удаляли с получением [(2,3-дифторбензоил)амино]уксусной кислоты, которую использовали на следующем этапе без очистки.

- 12 028622

Этап 3. 2,3-Дифтор-^[2-({(1К)-3-метил-1-[(3аК,4К,6К,7а8)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метан1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамид.

К раствору [(2,3-дифторбензоил)амино]уксусной кислоты (0,205 г, 0,95 ммоль) в диметилформамиде (10 мл) добавляли ΤΒΤϋ (0,337 г, 1,0 ммоль) и (1К)-3-метил-1-[(3а8,48,68,7аК)-3а,5,5триметилгексагидро-4,6-метан-1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутан-1-амин в виде трифторацетатной соли (0,362 г, 0,95 ммоль). Смесь оставляли охлаждаться до 0°С и добавляли по каплям ΌΙΕΑ (0,498 мл, 2,9 ммоль). Реакционную смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакцию гасили водой (100 мл) и продукт разделяли в ЭСМ. Органический слой сушили над сульфатом натрия и удаляли растворитель с получением 2,3-дифтор-Щ2-({(1К)-3-метил-1[(3аК,4К,6К,7а8)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метан-1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутил}амино)-2оксоэтил]бензамида.

Этап 4. [(1К)-1-({(2,3-Дифторбензоил)амино)ацетил}амино)-3-метилбутил]бороновая кислота.

К раствору 2,3-дифтор-^[2-({(1К)-3-метил-1-[(3аК,4К,6К,7а8)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6метан-1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида (0,536 г, 1,2 ммоль) в метаноле/1 N НС1 (1:1) (1,5 мл) добавляли гептанол (1 мл) и изобутилборат (0,207 г, 2,0 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи. Слой гептанола отделяли и слой метанол/НС1 концентрировали. Неочищенный продукт очищали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой с получением [(1К)1-({(2,3 -дифторбензоил)амино)ацетил } амино)-3 -метилбутил] бороновой кислоты.

Этап 5. [(1К)-1-({(2,3-Дифторбензоил)амино)ацетил}амино)-3-метилбутил]бороновая кислота-20 Όманнит (Ι-1).

К раствору [(1К)-1- ({(2,3-дифторбензоил)амино)ацетил}амино)-3-метилбутил]бороновой кислоты (0,085 г, 0,26 ммоль) в трет-бутиловом спирте (2 мл) и воде (5 мл) добавляли Ό-маннит (0,943 г, 5,2 ммоль). Раствор нагревали и оставляли перемешиваться до полного растворения твердых веществ. Раствор затем замораживали и растворитель удаляли путем лиофилизации с получением [(1К)-1-({(2,3дифторбензоил)амино)ацетил}амино)-3-метилбутил]бороновой кислоты-20 Ό-маннита (Ι-1) (0,98 г, 97%).

Пример 2. Синтез [(1К)-1-({(2-бромбензоил)амино)ацетил}амино)-3-метилбутил]бороновой кислоты -20 Ό-маннита (Ι-5).

Этап 1. трет-Бутил-[2-({(1К)-3-метил-1-[(3а8,48,68,7аК)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метан-1,3,2бензодиоксаборол-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]карбамат.

К смеси (1К)-3 -метил-1-[(3 а8,48,68,7аК)-3 а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метан-1,3,2бензодиоксаборол-2-ил]бутан-1-амина в виде трифторацетатной соли (4,9 г, 10,8 ммоль), Ν-^ретбутоксикарбонил)глицина (1,98 г, 11,3 ммоль) и ΤΒΤϋ (3,81 г, 11,9 ммоль) в ЭСМ (100 мл) добавляли по каплям в течение 15 мин раствор ΌΙΕΆ (5,64 мл, 32,4 ммоль) в ЭСМ (25 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи и концентрировали. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии с получением трет-бутил-[2-({(1К)-3-метил-1-[(3а8,48,68,7аК)-3а,5,5триметилгексагидро-4,6-метан-1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]карбамата (2,5 г, 55%).

Этап 2. 2-Амино-^[(1К)-3-метил-1-[(3а8,48,68,7аК)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метан-1,3,2бензодиоксаборол-2-ил]бутил}ацетамид.

К раствору трет-бутил-[2-({(1К)-3-метил-1-[(3а8,48,68,7аК)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метан1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]карбамата (2,5 г, 5,9 ммоль) в ЭСМ (15 мл) добавляли 4 М НС1 в диоксане (5,9 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 2 ч и концентрировали с получением 2-амино-^[(1К)-3-метил-1-[(3а8,48,68,7аК)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6метан-1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутил}ацетамида, который использовали на следующем этапе без очистки.

Этап 3. 2-Бром-^[2-({(1К)-3-метил-1-[(3а8,48,68,7аК)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метан-1,3,2бензодиоксаборол-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамид.

К раствору 2-бромбензойной кислоты (0,124 г, 0,62 ммоль) в ЭСМ (2,25 мл) добавляли ЕЭС1 (0,119 г, 0,62 ммоль), НОВ! (0,084 г, 0,62 ммоль), Ν-метилморфолин (0,185 мл, 1,68 ммоль) и 2-амино-^[(1К)-3-метил1-[(3а8,48,68,7аК)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метан-1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутил}ацетамид (0,2 г,

- 13 028622

0,56 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 2 ч и концентрировали. Осадок разбавляли водой и экстрагировали Е1ОАс. Органические растворы объединяли, промывали солевым раствором, сушили над М§8О₄, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии с получением 2-бром-Н-[2-({(1К)-3-метил-1-[(3а8,48,68,7аК)-3а,5,5триметилгексагидро-4,6-метан-1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида (0,22 г, 78%).

Этап 4. [(1К)-1-({[(2-Бромбензоил)амино]ацетил}амино)-3-метилбутил]бороновая кислота.

К раствору 2-бром-Н-[2-({(1К)-3-метил-1-[(3а8,48,68,7аК)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метан1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида (0,220 г, 0,44 ммоль) в метаноле/гексане (1:1) (2,2 мл) добавляли 1 N НС1 (1 мл, 1,0 ммоль) и изобутилборат (0,078 г, 0,76 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой с получением [(1К)-1-({[(2бромбензоил)амино]ацетил}амино)-3-метилбутил]бороновой кислоты (0,119 г, 73%).

Этап 5. [(1К)-1-({(2-Бромбензоил)амино)ацетил}амино)-3-метилбутил]бороновая кислота-20 Όманнит (Ι-5).

К раствору [(1К)-1-({[(2-бромбензоил)амино]ацетил}амино)-3-метилбутил] бороновой кислоты (0,103 г, 0,28 ммоль) в трет-бутиловом спирте (9 мл) и воде (15 мл) добавляли Ό-маннит (1,01 г, 5,5 ммоль). Раствор нагревали и оставляли перемешиваться до полного растворения твердых веществ. Раствор затем замораживали и растворитель удаляли путем лиофилизации с получением [(1К)-1-({(2бромбензоил)амино)ацетил}амино)-3-метилбутил]бороновой кислоты -20 Ό-маннита (Ι-5) (0,92 г, 84%).

Соединения в следующей таблице получали из подходящих начальных материалов способом, аналогичным способу, приведенному в примере 1 или 2:_

1-1	ЖХ-МС:	ЭР- 327,3,	Гг	= 3,36	мин.
1-2	ЖХ-МС:	ЭР- 343-2,	Гг	= 3, 62	мин.
1-3	ЖХ-МС:	ЭР- 327,3,	Гг	= 3,49	мин.
1-4	ЖХ-МС:	ЭР- 327,2,	Гг	= 327 мин.
1-5	ЖХ-МС:	ЭР- 369,2,	Гг	= 3,30	мин.
	Щ ЯМР	(300 МГц,	04’	-МеОЭ)	8:7,62 (дд, 1Н), 7,28-
	7,50 (	м, ЗН), 4	,19	(с, 2Н) , 2,70-2,78 (м, 1Н) ,
	1,57-1,	71 (м, 1Н),	1,26-1,40	(м, 2Н) и 0, 89 (д, 6Н) .
1-6	ЖХ-МС:	ЭР- 309,1,	Гг	= 3,14	мин.
1-7	ЖХ-МС:	ЭР- 343,2,	Гг	= 3,30	мин.
1-8	ЖХ-МС:	ЭР- 309,3,	Гг	= 3,23	мин.
1-9	ЖХ-МС:	ЭР- 327,3,	Гг	= 3,49	мин.
1-10	ЖХ-МС:	ЭР- 325,2,	Гг	= 3,58	мин.
1-11	ЖХ-МС:	ЭР- 359,2,	Гг	- 3, 66	мин.
	Ш ЯМР	(300 МГц,	ά₄ΜθΟϋ) 8:	7,62 (с, 1Н) , 7,49 (д,
	2Н) , 4	,23 (с, 2Н),	2,74-2	,82 (м, 1Н) , 1,62-1,78
	(м, 1Н)	, 1,30-1,45 (м, 2Н) и 0,95 (д, 6Н).
1-12	ЖХ-МС:	ЭР- 359,2,	Гг	= 3, 95	мин.
1-13	ЖХ-МС:	ЭР- 309,2,	Гг	= 3,34	мин.
1-14	ЖХ-МС:	ЭР- 343,2,	Гг	= 3,44	мин.
1-15	ЖХ-МС:	ЭР- 359,2,	Гг	= 3,26	мин.
1-16	ЖХ-МС:	ЭР- 325,2,	Гг	= 3,20	мин.
1-17	ЖХ-МС:	ЭР- 327,3,	Гг	= 3,39	мин.
1-18	ЖХ-МС:	ЭР- 343,2,	Гг	- 3,58	мин.
1-19	ЖХ-МС:	ЭР- 325,1,	Гг	- 3,51	мин.
1-20	ЖХ-МС:	ЭР- 359,2,	Гг	= 3,54	мин.
1-21	ЖХ-МС:	ЭР- 359,2,	Гг	= 3, 99	мин.

Пример 2. Исследование с применением протеасомы 208.

К 1 мкл исследуемого соединения, растворенного в ДМСО, в 384-луночном черном микротитрационном планшете добавляли 25 мкл используемого в данном исследовании буфера при 37°С, содержащего активатор РА28 человека (Во§1оп Вюсйет, конечная концентрация 12 нМ) с Ас-А'ЕА-АМС (β5селективный субстрат) (конечная концентрация 15 мкМ), а затем добавляли 25 мкл используемого в дан- 14 028622 ном исследовании буфера при 37°С, содержащего 20З протеасомы человека (Βοδΐοη ВюсНет. конечная концентрация 0,25 нМ). Используемый в исследовании буфер содержал 20 мМ НЕРЕЗ, 0,5 мМ ЕИТА и 0,01% ВЗА, рН 7,4. За ходом реакции следили с помощью планшет-ридера ВМС Са1аху (37°С, возбуждение на 380 нм, испускание на 460 нм, усиление 20). Процент ингибирования рассчитывали относительно контрольных образцов с 0% ингибирования (ДМСО) и 100% ингибирования (10 мкМ бортезомиб).

В ходе указанного исследования все соединения с 1-1 по 1-21 проявляли значения 1С₅₀ меньше чем 50 нМ.

Пример 3. Антипролиферативное исследование.

НСТ-116 (1000) или другие опухолевые клетки в 100 мкл подходящей культуральной среды (МсСоу 5А для НСТ-116, 1пуйгодеп), дополненной 10% эмбриональной бычьей сывороткой (1пуИгодеп), высевали в лунки 96-луночного планшета для выращивания культуры и инкубировали в течение ночи при 37°С. Тестируемые соединения добавляли в лунки, и планшеты инкубировали в течение 96 ч при 37°С. Реагент МТТ или \УЗТ (10 мкл, КосНе) добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 4 ч при 37°С, как описано у производителя. Для МТТ метаболизированный краситель солюбилизировали в течение ночи согласно инструкции производителя (Косйе). Оптическую плотность для каждой лунки считывали при 595 нм (исходный) и 690 нм (эталон) для МТТ и 450 нм для ^ЗТ, применяя спектрофотометр (Мо1еси1аг Иеуюек). Для МТТ значения оптической плотности эталона вычитали из значений исходной длины волны. Процент ингибирования рассчитывали, используя значения, полученные для контрольного образца с ДМСО, принятые равными 100%.

Пример 4. Модель опухолевой эффективности ίη νί\Ό.

Свежеполученные диссоциированные НСТ-116 (2-5х 10⁶) или другие опухолевые клетки в 100 мкл среды КРМ1-1640 (Зщта-АИпсН) асептически инъецировали в подкожное пространство в правой дорсальной стороне самок голых мышей СИ-1 (возраст 5-8 недель, СНаг1е8 ККег), применяя 1 мл иглу размером 26 3/8-§а (Вес1оп Июкшзоп КеГ#309625). В качестве альтернативы некоторые ксенотрансплантатные модели требуют серийного пассирования опухолевых фрагментов. В этих случаях, небольшие фрагменты опухолевой ткани (приблизительно 1 мм³) имплантируют подкожно в правую дорсальную сторону анестезированных (3-5% смесь изофлуран/кислород) мышей С.В-17/ЗСГО (возраст 5-8 недель, СНаг1е8 ККег) через трокар размером 13-да (Роррег & Зоп8 7927). Начиная с 7 дня после инокуляции, опухоли измеряли дважды в неделю, используя штангенциркуль. Объемы опухоли рассчитывали, используя стандартные процедуры (0,5х(длинахширина²)). Когда опухоли достигали объема, равного приблизительно 200 мм, мышей распределяли случайным образом по группам лечения и начинали давать лекарственный препарат. Дозировки и графики определяли для каждого эксперимента на основании более ранних результатов, полученных из фармакокинетических/фармакодинамических исследований и исследованиях максимально переносимой дозы. Контрольная группа получала среду без какого-либо препарата. Обычно тестируемое соединение (100-200 мкл) вводили внутривенным (игла 27-да), пероральным (игла для гаважа 20-да) или подкожным (игла 27-да) путями в различных дозах и по различным графикам. Размер опухоли и вес тела измеряли дважды в неделю и исследование завершали, когда контрольные опухоли достигали приблизительно 2000 мм³.

Хотя настоящее изобретение описано выше с указанием некоторых деталей, призванных обеспечить ясность и более полное понимание изобретения, приведенные конкретные варианты реализации являются иллюстративными и не ограничивают настоящее изобретение. Для специалиста в данной области техники после ознакомления с настоящим описанием представляется очевидным, что возможные различные изменения по форме и содержанию также находятся в рамках настоящего изобретения, объем которого определяется в большей степени прилагаемой формулой изобретения, чем конкретными вариантами реализации.

Патентная и научная литература, упоминаемая в настоящем описании, характеризуют сведения, доступные специалистам в данной области техники. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют значения, обычно подразумеваемые средним специалистом в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Содержание патентов, заявок на патент и источников, ссылки на которые приведены в настоящем описании, настоящим включены в настоящее описание посредством ссылки в той же степени, как если бы для каждого из таких документов конкретно и отдельно было указано, что данный документ включен посредством ссылки. В случае несоответствий настоящее описание, включая определения, будет определяющим.

Claims

1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль или бороновый ангидрид, где каждый из Ζ¹ и Ζ² представляет собой гидрокси или Ζ¹ и Ζ² вместе образуют фрагмент, представляющий собой производное комплексообразующего агента на основе бороновой кислоты, содержащее по меньшей мере одну гидроксильную группу;

кольцо А представляет собой

2. Соединение по п.1, где Ζ¹ и Ζ², каждый, представляют собой гидрокси.

3. Соединение по п.1, где Ζ¹ и Ζ² вместе образуют фрагмент, представляющий собой производное комплексообразующего агента на основе бороновой кислоты, содержащее по меньшей мере одну гидроксильную группу.

4. Соединение по п.1, представляющее собой маннитовый эфир [(1К)-1-({[(2,5-дихлорбензоил)амино] ацетил} амино)-3 -метилбутил] бороновой кислоты.

5. Соединение по п.1, где соединение представляет собой [(1К)-1-({[(2,5-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3-метилбутил]бороновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль или бороновый ангидрид.

6. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-5 и фармацевтически приемлемый носитель.

7. Способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, фармацевтической композиции по п.6.

8. Применение соединения по любому из пп.1-5 для лечения рака.

9. Применение соединения по любому из пп.1-5 для получения лекарственного средства для лечения рака.

10. Способ по п.7, где рак представляет собой множественную миелому, лимфому или рецидив множественной миеломы и лимфомы.

11. Способ по п.7, где фармацевтическую композицию вводят с другим терапевтическим агентом.

12. Способ по п.11, где другой терапевтический агент представляет собой мелфалан.

13. Способ по п.11, где другой терапевтический агент представляет собой леналидомид.

14. Способ по п.7, где фармацевтическую композицию вводят перорально, парентерально, путем ингаляционного распыления, топически, ректально, назально, буккально, вагинально или с помощью имплантированной емкости.

15. Способ по п.7, где фармацевтическую композицию вводят перорально.

16. Способ по п.7, где фармацевтическую композицию вводят внутривенно.

17. Способ по п.7, где фармацевтическую композицию вводят системно или местно.

18. Применение по п.8, где рак представляет собой множественную миелому, лимфому или рецидив множественной миеломы и лимфомы.

19. Применение по п.9, где рак представляет собой множественную миелому или рецидив множественной миеломы.

20. Применение по п.9, где лекарственное средство используют с другим терапевтическим агентом.