EA027553B1 - Содержащая антитело к her2 композиция для подкожного введения - Google Patents

Содержащая антитело к her2 композиция для подкожного введения Download PDF

Info

Publication number
EA027553B1
EA027553B1 EA201200204A EA201200204A EA027553B1 EA 027553 B1 EA027553 B1 EA 027553B1 EA 201200204 A EA201200204 A EA 201200204A EA 201200204 A EA201200204 A EA 201200204A EA 027553 B1 EA027553 B1 EA 027553B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
hek2
antibody
composition
highly concentrated
pharmaceutical composition
Prior art date
Application number
EA201200204A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201200204A1 (ru
Inventor
Михаэль Адлер
Улла Граушопф
Ханнс-Кристиан Малер
Оливер Борис Штаух
Original Assignee
Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=43500473&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA027553(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг filed Critical Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг
Publication of EA201200204A1 publication Critical patent/EA201200204A1/ru
Publication of EA027553B1 publication Critical patent/EA027553B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01035—Hyaluronoglucosaminidase (3.2.1.35), i.e. hyaluronidase

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Описывается высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция обладающего фармацевтической активностью антитела к HER2, такого, например, как трастузумаб (HERCEPIN™), пертузумаб или T-DM1 или смесь указанных молекул антител, предназначенная для подкожной инъекции. В частности, описываются композиции, которые помимо взятого в соответствующем количестве антитела к HER2 содержат в эффективном количестве по меньшей мере один фермент гуалуронидазу, в виде объединенной композиции или в виде формы, которую используют для совместного введения. Композиции содержат также по меньшей мере один забуферивающий агент, такой, например, как гистидиновый буфер, стабилизатор или смесь двух или большего количества стабилизаторов (например, сахарид, такой, например, как дигидрат α,α-трегалозы или сахароза, и, необязательно, метионин в качестве второго стабилизатора), неионогенное поверхностно-активное вещество и в эффективном количестве по меньшей мере один фермент гуалуронидазу. Описываются также методы получения указанных композиций и пути их применения.

Description

Настоящее изобретение относится к высококонцентрированным стабильным фармацевтическим композициям обладающего фармацевтической активностью антитела к НЕК2 или смеси указанных молекул антител, предназначенным для подкожной инъекции. Указанные композиции содержат помимо антитела или смеси антител в высоких концентрациях, забуферивающий агент, стабилизатор или смесь двух или большего количества стабилизаторов, неионогенное поверхностно-активное вещество и применяемый в эффективном количестве по меньшей мере один фермент гиалуронидазы. Изобретение относится также к способу получения указанной композиции и к вариантам применения указанной композиции.
В последние годы возросло применение антител в фармацевтике. Во многих случаях эти антитела вводят путем внутривенной (IV) инъекции. При этом недостатком является то, что количество антитела, которое можно инъецировать внутривенным путем, ограничено физико-химическими свойствами антитела, прежде всего его растворимостью и стабильностью в приемлемой жидкой композиции и объемом применяемой для инфузии жидкости. Альтернативными путями введения являются подкожная или внутримышечная инъекция. Для таких путей введения требуется высокая концентрация белка в конечном инъекционном растворе (8Ыге δ.Ε, Зкактокк Ζ. е! а1., Ска11епде8 ίη !ке бсус1ортсШ οί Ыдк рто1еш сопсеп1такоп &ттц1айоп8, I. Ркагт. 8с1., 93(6), 2004, ρ. 1390-1402; Козкоз Ь.К., Όηνίδ С.С. е! а1., Тке скшса1 ркагтасо1оду οί 1кегареи1ю апИЪоЛез, Эгид Иеуе1ортеп1 Кезеагск, 61(3), 2004, ρ. 108-120). Для увеличения объема и, как следствие, терапевтической дозы, которая является безопасной и которую можно удобно вводить подкожно, предложено применение фермента(ов) гликозаминогликаназ с целью увеличения интерстициального пространства, в которое можно инъецировать композицию антитела (№О 2006/091871).
Примерами присутствующих в настоящее время на рынке стабильных композиций фармацевтически активных антител, предназначенных для терапевтического применения, являются следующие антитела:
НЕКСЕРТШ™ (трастузумаб), представляющий собой моноклональное антитело к рецептору НЕК2 (антитело к НЕК2), который в настоящее время поступает в продажу в Европе в виде препарата, содержащего 150 мг лиофилизированного порошка (содержащего антитело, дигидрат α,α-трегалозы, Ь-гистидин и гидрохлорид Ь-гистидина и полисорбат 20), который перед осуществлением инфузий подлежит восстановлению водой для инъекций с получением предназначенной для инъекции дозы, составляющей приблизительно 21 мг/мл. В США и многих других странах трастузумаб поступает в продажу в виде продукта, представляющего собой многодозовый пузырек, содержащий 440 мг действующего вещества.
ΑνΑδΤΙΝ™ (бевасизумаб), представляющий собой моноклональное антитело к сосудистому эндотелиальному фактору роста (νΈΟΡ), который в настоящее время поступает в продажу в Европе в виде жидкой композиции в пузырьках двух типов: а) 100 мг бевасизумаба в 4 мл и б) 400 мг бевасизумаба в 16 мл соответственно, что обеспечивает конечную концентрацию 25 мг/мл после разведения водой для инъекций, содержащей следующие эксципиенты: дигидрат трегалозы, фосфат натрия и полисорбат 20.
Хотя установлено, что указанные выше композиции антител пригодны для внутривенного введения, существует необходимость в создании высококонцентрированных стабильных фармацевтических композиций обладающих терапевтической активностью антител, предназначенных для подкожной инъекции. Преимущество подкожных инъекций состоит в том, что они дают возможность медицинскому персоналу осуществлять их посредством относительно непродолжительного вмешательства в организм пациента. Кроме того, пациента можно научить осуществлять подкожную инъекцию самостоятельно. Указанное самовведение является особенно важным во время поддерживающего периода лечения, поскольку отпадает необходимость в больничном уходе (что снижает использование выделенных на медицину ресурсов). Как правило, объемы инъецируемого подкожным путем раствора не превышают примерно 2 мл. Для пациентов, которым требуется вводить несколько доз, можно инъецировать композицию в виде нескольких стандартных доз в несколько областей на поверхности тела.
В продажу уже поступают два следующих содержащих антитела продукта, предназначенных для подкожного введения.
НИМ1КА™ (адалимумаб), представляющий собой моноклональное антитело к фактору некроза опухоли-альфа (ΤΝΡ-альфа), который в настоящее время поступает в продажу в Европе в форме 40-миллиграммовой дозы в инъецируемом объеме 0,8 мл для подкожного применения (концентрация: 50 мг антитела/мл инъецируемого объема).
ХОЬА1К™ (омализумаб), представляющий собой моноклональное антитело к иммуноглобулину Е (антитело к 1дЕ), который в настоящее время поступает в продажу в форме продукта, содержащего 150 мг лиофилизированного порошка (включающего антитело, сахарозу, гистидин и моногидрат гидрохлорида гистидина и полисорбат 20), который для осуществления подкожной инъекции подлежит восстановлению водой с получением предназначенной для инъекции дозы, составляющей приблизительно 125 мг/мл.
- 1 027553
В настоящее время на рынке отсутствует высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2, пригодная для подкожного введения. Таким образом, существует необходимость в разработке указанных высококонцентрированных стабильных фармацевтических композиций обладающих терапевтической активностью антител, предназначенных для подкожной инъекции.
Инъецируемый объем лекарственных средств, предназначенных для парентерального введения в гиподерму, как правило, не превышает 2 мл из-за вязкоэластичного сопротивления к гидравлической проводимости в подкожной (8С) ткани, являющегося результатом противодавления при инъекции (Аик1аий К. и Кеей К., ”1п1сг811Иа1-ИутрНаИс МесЬашктк ίη Не еои1го1 οί Ех1гасе11и1аг Р1шб Уо1ише, РЬукю1о§у Ксу1С№8, 73, 1993, р. 1-78), а также результатом болевых ощущений.
Приготовление высококонцентрированных белковых композиций является относительно сложной задачей и требует адаптации каждой композиции к конкретным применяемым белкам, поскольку каждый белок имеет различные особенности агрегации. Считается, что, по меньшей мере, в ряде случаев агрегаты обусловливают иммуногенность терапевтических белков. Иммуногенная реакция на агрегаты белка или антитела может приводить к нейтрализации антител, что может делать неэффективным терапевтический белок или антитело. Вероятно, иммуногенность белковых агрегатов представляет собой основную проблему при подкожных инъекциях, причем повторное введение повышает риск возникновения иммунного ответа.
Хотя антитела обладают очень схожей общей структурой, указанные антитела различаются составом аминокислот (в частности, в СИК-участках, ответственных за связывание с антигеном) и схемой гликозилирования. Кроме того, могут иметь место дополнительные пост-трансляционные модификации, такие как заряд и варианты гликозилирования. Конкретно, касательно антител к НЕК2 описаны такие пост-трансляционные модификации, например, для гуманизированного моноклонального антитела 1штМЛЬ4О5-8 (т.е. трастузумаба). В частности, разработаны методы очистки для удаления, например, кислотных вариантов и композиции, содержащие пониженное количество кислотных вариантов (главным образом деамидированные варианты, в которых один или несколько остатков аспарагина исходного полипептида превращены в аспартат, т.е. нейтральная амидная боковая цепь превращена в остаток, имеющий в целом кислотный характер), которые впервые описаны Ваксу СЮ. и В1аик С.8. в \УО 99/57134.
Стабильные лиофилизированные композиции антител, содержащие лиопротектант, буфер и поверхностно-активное вещество, описаны у Аийуа е1 а1. (^О 97/04801 и И8 6267958, 6685940, 6821151 и 7060268).
В \УО 2006/044908 предложены композиции антител, которые содержат моноклональные антитела в гистидин-ацетатном буфере, имеющем значение рН 5,5-6,5, предпочтительно 5,8-6,2.
Таким образом, задача, положенная в основу настоящего изобретения, состоит в создании новых высококонцентрированных стабильных фармацевтических композиций обладающего фармацевтической активностью антитела к НЕК2 или смеси молекул антител, предназначенных для подкожной инъекции. Указанные композиции содержат, помимо антитела или смеси антител, присутствующих в высоких концентрациях, забуферивающий агент, стабилизатор или смесь двух или большего количества стабилизаторов, неионогенное поверхностно-активное вещество и применяемый в эффективном количестве по меньшей мере один фермент гиалуронидазы. Получение высококонцентрированных композиций антител является сложной задачей из-за возможного повышения вязкости при более высокой концентрации белка и возможного усиления агрегации белка, явления, которое само по себе зависит от концентрации. Высокая вязкость оказывает отрицательное воздействие на возможность осуществления процесса приготовления (например, на стадиях перекачки насосом и фильтрации) и введения (например, на возможность введения с помощью шприца) композиций антител. В некоторых случаях высокую вязкость можно снижать посредством добавления эксципиентов. Необходимость в осуществлении контроля и анализа агрегации белков повышает сложность процесса получения. Агрегация может происходить на различных стадиях процесса приготовления, таких как ферментация, очистка, приготовление препарата, и в процессе хранения. На агрегационное поведение терапевтического белка могут влиять различные факторы, такие как температура, концентрация белка, стресс, связанный с перемешиванием, замораживание и оттаивание, влияние растворителя и поверхностно-активного вещества, а также химические модификации. В процессе создания высококонцентрированной композиции антитела необходимо осуществлять мониторинг и контроль тенденции к агрегации белка путем добавления различных эксципиентов и поверхностноактивных веществ (К1еке 8. с1 а1., 1. РЬагт. 8сг, 97(10), 2008, р. 4347-4366). Сложность приготовления приемлемой высококонцентрированной стабильной фармацевтической композиции обладающего фармацевтической активностью антитела к НЕК2, предлагаемой в настоящем изобретении, возрастает в связи с тем, что два различных белка, подлежащих включению в одну жидкую композицию, должны быть включены в композицию таким образом, чтобы композиция оставалась стабильной в течение нескольких недель и обладающие фармацевтической активностью ингредиенты сохраняли активность во время соответствующего периода хранения.
Первым объектом настоящего изобретения является готовая к применению высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция обладающего фармацевтической активностью антитела к НЕК2 или смеси молекул указанных антител, предназначенная для подкожной инъекции.
- 2 027553
Более конкретно, высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция обладающего фармацевтической активностью антитела к НЕК2, предлагаемая в изобретении, содержит антитело к НЕК2 в количестве примерно от 50 до 350 мг/мл;
забуферивающий агент, обеспечивающий значение рН 5,5±2,0, в количестве примерно от 1 до 100 мМ;
стабилизатор или смесь двух или большего количества стабилизаторов в количестве примерно от 1 до 500 мМ, при этом необязательно метионин присутствует в качестве вторичного стабилизатора, например, в концентрации от 5 до 25 мМ;
неионогенное поверхностно-активное вещество в количестве от 0,01 до 0,1%;
по меньшей мере один фермент гиалуронидазы в эффективном количестве. Следующим объектом настоящего изобретения является применение композиции для приготовления лекарственного средства, которое можно применять для лечения заболевания или нарушения, которое можно лечить с помощью антитела к НЕК2, такого, например, как рак или незлокачественное заболевание, у индивидуума, заключающееся в том, что вводят композицию, представленную в настоящем описании, индивидууму в количестве, эффективном для лечения указанного заболевания или нарушения. Антитело к НЕК2 можно вводить совместно, одновременно или последовательно с химиотерапевтическим средством.
Другим объектом настоящего изобретения являются способы лечения заболевания или нарушения, которое можно лечить с помощью антитела к НЕК2 (например, рака или незлокачественного заболевания), у индивидуума, заключающиеся в том, что вводят индивидууму композицию, представленную в настоящем описании, в количестве, эффективном для лечения указанного заболевания или нарушения. Рак или незлокачественное заболевание должен/должно, как правило, включать экспрессирующие НЕК2 клетки, для того, чтобы антитело к НЕК2 в терапевтической фармацевтической композиции для 8С-введения. предлагаемой в настоящем изобретении, могло связываться с пораженными клетками.
Настоящее изобретение относится также к фармацевтическим композициям, включающим высококонцентрированную стабильную фармацевтическую композицию обладающего фармацевтической активностью антитела к НЕК2 или смеси указанных антител и взятый в требуемом количестве по меньшей мере один фермент гиалуронидазы, в виде набора, который содержит как предназначенные для инъекции компоненты, так и инструкции по их подкожному введению.
Следующим объектом настоящего изобретения являются устройства для инъекции, содержащие высококонцентрированную стабильную фармацевтическую композицию, предлагаемую в настоящем изобретении. Указанная композиция может состоять из обладающего фармацевтической активностью антитела к НЕК2 или смеси молекул указанных антител и приемлемых эксципиентов, указанных ниже, и может дополнительно содержать растворимый гликопротеин гиалуронидазы либо в составе комбинированной композиции, либо в виде отдельной композиции, предназначенной для совместного введения.
Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция обладающего фармацевтической активностью антитела к НЕК2, предлагаемая в настоящем изобретении, может представлять собой жидкую форму или может представлять собой лиофилизированную форму. Согласно данным, представленным в \νϋ 97/04801, концентрацию антитела в восстановленной композиции можно повышать путем восстановления лиофилизированной композиции с получением концентрации белка в восстановленной композиции, превышающей примерно в 2-40 раз концентрацию белка в смеси до осуществления стадии лиофилизации.
Концентрация антитела к НЕК2 составляет от 100 до 150 мг/мл, например 120±18 мг/мл, примерно 110 мг/мл, примерно 120 мг/мл или примерно 130 мг/мл.
Концентрация забуферивающего агента, обеспечивающего значение рН 5,5±2,0, составляет от 1 до 50 мМ, например от 10 до 30 мМ или примерно 20 мМ. Ниже дополнительно представлены различные забуферивающие агенты, известные специалисту в данной области. Забуферивающий агент может представлять собой гистидиновый буфер, например Ь-гистидин/НСР В конкретном варианте осуществления изобретения значение рН Ь-гистидин/НС1-буфера составляет примерно 5,5 или примерно 6,0.
Стабилизатор (в контексте настоящего описании применяется в качестве синонима понятия стабилизирующий агент) представляет собой, например, углевод, или сахарид, или сахар, которые признаются специалистами в качестве приемлемой добавки или эксципиента в фармацевтических композициях, такие, например, как дигидрат α,α-трегалозы или сахароза. Концентрация стабилизатора составляет от 15 до 250 мМ, или от 150 до 250 мМ, или примерно 210 мМ. Композиция может содержать вторичный стабилизатор, при этом указанный вторичный стабилизатор может представлять собой метионин, например, в концентрации от 5 до 25 мМ или в концентрации от 5 до 15 мМ (например, метионин в концентрации примерно 5 мМ, примерно 10 мМ или примерно 15 мМ).
Репрезентативными примерами фармацевтически приемлемых поверхностно-активных веществ являются эфиры полиоксиэтиленсорбитана и жирных кислот (Твин), полиэтилен- и полипропиленгликоли, полиоксиэтиленстеараты, простые алкиловые эфиры полиоксиэтилена, например простой монолауриловый эфир полиоксиэтилена, простые алкилфенолполиоксиэтиленовые эфиры (Тритон-Х), сополимер полиоксиэтилена-полиоксипропилена (полоксамер, плюроник) и додецилсульфатнатрия (ДСН). Наиболее
- 3 027553 приемлемыми эфирами полиоксиэтиленсорбитана и жирных кислот являются полисорбат 20 (поступает в продажу под товарным знаком Т\\ееп 20™) и полисорбат 80 (поступает в продажу под товарным знаком Т\\ееп 80™). Наиболее приемлемыми сополимерами полиоксиэтилена-полиоксипропилена являются продукты, поступающие в продажу под названиями Р1игошс® Р68 или Ро1охатег 188™. Наиболее приемлемыми простыми алкиловыми эфирами полиоксиэтилена являются продукты, поступающие в продажу под товарным знаком Вту™. Наиболее приемлемыми простыми алкилфенолполиоксиэтиленовыми эфирами являются продукты, поступающие в продажу под товарным знаком ТгПоп-Х. Неионогенное поверхностно-активное вещество может представлять собой полисорбат, например, выбранный из группы, включающей полисорбат 20, полисорбат 80 и сополимер полиэтилена-полипропилена. Концентрация неионогенного поверхностно-активного вещества составляет от 0,01 до 0,1% (мас./об.), или от 0,01 до 0,08% (мас./об.), или от 0,025 до 0,075% (мас./об.), или более предпочтительно примерно 0,02, 0,04 или 0,06% (мас./об.).
Концентрация фермента гиалуронидазы зависит от конкретного фермента гиалуронидазы, применяемого для приготовления композиции, предлагаемой в изобретении. Специалист в данной области на основе представленного ниже описания легко может определять эффективное количество фермента гиалуронидазы. Указанный фермент должен присутствовать в количестве, необходимом и достаточном для повышения диспергирования и абсорбции вводимого совместно антитела к НЕК2. Минимальное количество фермента гиалуронидазы составляет >150 ед./мл. Более конкретно, эффективное количество фермента гиалуронидазы составляет примерно от 1000 до 16000 ед./мл, это количество соответствует примерно от 0,01 до 0,16 мг белка с учетом удельной активности, составляющей 100000 ед./мг. В альтернативном варианте концентрация фермента гиалуронидазы составляет примерно от 1500 до 12000 ед./мл или, более конкретно, примерно 2000 ед./мл или примерно 12000 ед./мл. Указанные выше количества соответствуют количеству фермента гиалуронидазы, первоначально добавляемому в композицию. Как видно из приведенных примеров композиций, концентрации фермента гиалуронидазы, измеренные в конечной композиции, могут варьироваться в определенных пределах. Так, например, фактическая измеренная концентрация фермента гиалуронидазы (НЕ) непосредственно после добавления фермента в количестве 12000 ед./мл варьировалась от 12355 до 15178 ед./мл (см. табл. 1, композиции А-Е и табл. 3, композиция 3). Фермент гиалуронидазы присутствует либо в виде комбинированной конечной композиции, либо в форме, предназначенной для совместного применения, например в виде вспомогательной композиции, как будет изложено ниже. Важной особенностью предлагаемой в настоящем изобретении композиции является то, что в момент, когда она является готовой к применению, и/или когда ее инъецируют, она имеет состав, представленный в прилагаемой формуле изобретения. Соотношение (мас./мас.) фермента гиалуронидазы и антитела к НЕК2 составляет от 1:1000 до 1:8000, или составляет от 1:4000 до 1:5000, или примерно 1:6000.
Фермент гиалуронидазы можно получать из образцов, выделенных из организма животных, человека или производить с использованием технологии рекомбинантной ДНК, что будет описано ниже.
В некоторых вариантах осуществления изобретения высококонцентрированные стабильные фармацевтические композиции антитела к НЕК2, предлагаемые в настоящем изобретении, имеют один из следующих составов:
а) антитело к НЕК2, например, выбранное из группы, включающей трастузумаб, пертузумаб и Т-ЭМ1, в концентрации от 100 до 150 мг/мл; гистидиновый буфер, например Ь-гистидин/НС1 с рН примерно 5,5, в концентрации от 1 до 50 мМ; стабилизатор, такой, например, как дигидрат α,α-трегалозы, в концентрации от 15 до 250 мМ; и необязательно метионин в качестве второго стабилизатора в концентрации от 5 до 25 мМ; неионогенное поверхностно-активное вещество в концентрации примерно от 0,01 до 0,08% и фермент гиалуронидазы, такой, например, как гНиРН20, в концентрации от >150 до 16000 ед./мл, более конкретно от 1000 до 16000л ед./м, например в концентрации примерно 2000 ед./мл или примерно 12000 ед./мл;
б) антитело к НЕК2, например, выбранное из группы, включающей трастузумаб, пертузумаб и Т-ЭМ1, в концентрации 120±18 мг/мл; гистидиновый буфер, например Ь-гистидин/НС1 с рН примерно 5,5, в концентрации от 10 до 30 мМ или примерно 20 мМ; стабилизатор, такой, например, как дигидрат α,α-трегалозы, в концентрации от 15 до 250 мМ или примерно 210 мМ; и необязательно метионин в качестве второго стабилизатора в концентрации от 5 до 25 мМ или примерно 10 мМ; неионогенное поверхностно-активное вещество в концентрации примерно от 0,01 до 0,08% и фермент гиалуронидазы, такой, например, как гНиРН20, в концентрации от 1000 до 16000 ед./мл, или от 1500 до 12000 ед./мл, примерно 2000 ед./мл, или примерно 12000 ед./мл;
в) антитело к НЕК2, например, выбранное из группы, включающей трастузумаб, пертузумаб и Т-ЭМ1, в концентрации примерно 120 мг/мл; гистидиновый буфер, например Ь-гистидин/НС1 с рН примерно 5,5, в концентрации от 10 до 30 мМ или примерно 20 мМ; стабилизатор, такой, например, как дигидрат α,α-трегалозы, в концентрации от 15 до 250 мМ или примерно 210 мМ; и необязательно метионин в качестве второго стабилизатора в концентрации от 5 до 25 мМ, или от 5 до 15 мМ, или примерно 10 мМ; неионогенное поверхностно-активное вещество в концентрации примерно от 0,01 до 0,08%; и
- 4 027553 фермент гиалуронидазы, такой, например, как гНиРН20, в концентрации от 1000 до 16000 ед./мл, или от 1500 до 12000 ед./мл, или, более конкретно, в концентрации примерно 2000 ед./мл, или примерно 12000 ед./мл;
г) антитело к НЕК2, например, выбранное из группы, включающей трастузумаб, пертузумаб и Τ-ΌΜ1, в концентрации примерно 120 мг/мл; гистидиновый буфер, например Ь-гистидин/НС1 с рН примерно 5,5, в концентрации примерно 20 мМ; дигидрат α,α-трегалозы в концентрации примерно 210 мМ и необязательно метионин в качестве второго стабилизатора в концентрации примерно 10 мМ; полисорбат 20 в концентрации 0,04 или 0,06%; и фермент гиалуронидазы, такой, например, как гНиРН20, в концентрации примерно 12000 ед./мл; и конкретно представляет собой указанную ниже композицию А;
д) антитело к НЕК2, например, выбранное из группы, включающей трастузумаб, пертузумаб и Τ-ΌΜ1, в концентрации примерно 120 мг/мл; гистидиновый буфер, например Ь-гистидин/НС1 с рН примерно 5,5, в концентрации примерно 20 мМ; дигидрат α,α-трегалозы в концентрации примерно 210 мМ и необязательно метионин в качестве второго стабилизатора в концентрации примерно 10 мМ; полисорбат 20 в концентрации 0,04 или 0,06%; и фермент гиалуронидазы, такой, например, как гНиРН20, в концентрации примерно 2000 ед./мл; и конкретно представляет собой указанную ниже композицию Ш;
е) лиофилизированная форма, содержащая антитело к НЕК2, например, выбранное из группы, включающей трастузумаб, пертузумаб и Τ-ΌΜ1, в концентрации 120 мг/мл; гистидиновый буфер, например Ь-гистидин/НС1 с рН примерно 5,5, в концентрации 20 мМ; дигидрат α,α-трегалозы в концентрации 210 мМ; и необязательно метионин в качестве второго стабилизатора в концентрации 10 мМ; неионогенное поверхностно-активное вещество в концентрации примерно от 0,04 до 0,06%; и которая конкретно представляет собой указанную ниже композицию Щ. Эти композиции можно восстанавливать с использованием фермента гиалуронидазы, такой, например, как гНиРН20, в концентрации от 1000 до 16000 ед./мл или от 1500 до 12000 ед./мл или, более конкретно, примерно 2000 ед./мл или примерно 12000 ед./мл.
В другом варианте осуществления изобретения высококонцентрированные стабильные фармацевтические композиции антитела к НЕК2, предлагаемые в настоящем изобретении, имеют один из составов, указанных в табл.1, 3 и 4, при этом композиции В, Г, Д и Е являются менее предпочтительными, поскольку они обладают менее желательными свойствами, что продемонстрировано в примерах и в табл. 1.
Для облегчения подкожной инъекции терапевтических белков предложено использовать в небольших количествах растворимые гликопротеины с гиалуронидазной активностью (8НА8ЕОР) (см. \νϋ 2006/091871). Установлено, что добавление указанных растворимых гликопротеинов с гиалуронидазной активностью (либо в составе комбинированной композиции, либо путем совместного введения) облегчает введение терапевтического лекарственного средства в гиподерму. Путем быстрой деполимеризации гиалуронана (НА) во внеклеточном пространстве фермент 8НА8ЕОР снижает вязкость интерстициальной ткани, повышая тем самым гидравлическую проводимость и делая возможным безопасное и удобное введение в подкожную ткань более значительных объемов. Повышенная гидравлическая проводимость, индуцируемая 8НА8ЕОР посредством снижения интерстициальной вязкости, обусловливает более высокое диспергирование, потенциально повышая системную биологическую доступность вводимого 8С-путем терапевтического лекарственного средства.
Таким образом, высококонцентрированные стабильные фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, которые содержат растворимый гликопротеин с гиалуронидазной активностью, являются наиболее пригодными для подкожной инъекции. Специалисту в данной области должно быть очевидно, что указанную композицию, содержащую антитело к НЕК2 и растворимый гликопротеин с гиалуронидазной активностью, можно приготавливать для введения в виде одной комбинированной композиции или в альтернативном варианте в виде двух различных композиций, которые можно смешивать непосредственно перед осуществлением подкожной инъекции. В альтернативном варианте антитело к НЕК2 и растворимый гликопротеин с гиалуронидазной активностью можно вводить путем раздельных инъекций в различные области тела, предпочтительно в области, непосредственно примыкающие друг к другу. Можно также инъецировать терапевтические средства, которые присутствуют в композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, в виде последовательных инъекций, осуществляя, например, сначала инъекцию растворимого гликопротеина с гиалуронидазной активностью, а затем инъекцию содержащей антитело к НЕК2 композиции. Указанные инъекции можно осуществлять также и в обратном порядке, т.е. сначала осуществлять инъекцию композиции, содержащей антитело к НЕК2, а затем инъекцию растворимого гликопротеина с гиалуронидазной активностью. В том случае, когда антитело к НЕК2 и растворимый гликопротеин с гиалуронидазной активностью вводят в виде различных инъекций, то один или оба белка следует приготавливать в сочетании с забуферивающим агентом, стабилизатором(ами) и неионогенным поверхностно-активным веществом, взятыми в концентрациях, которые представлены в прилагаемой формуле изобретения, но без фермента гиалуронидазы. Фермент гиалуронидазу можно приготавливать, например, в смеси, содержащей буфер Ь-гистидин/НС1, рН примерно 6,5, ЫаС1 в концентрации 100-150 мМ и полисорбат 20 или полисорбат 80 в концентрации от 0,01 до
- 5 027553
0,1% (мас./об.). В частности, фермент гиалуронидазы приготавливают в смеси, содержащей буфер Ь-гистидин/НС1, рН 6,5 (20 мМ), ЫаС1 (130 мМ), полисорбат 80 (0,05% (мас./об.)), как это в качестве примера указано для композиции Ж в табл. 1.
Как отмечалось выше, растворимый гликопротеин с гиалуронидазной активностью можно рассматривать в качестве дополнительного эксципиента в композиции антитела к НЕК2. Растворимый гликопротеин с гиалуронидазной активностью можно добавлять в композицию антитела к НЕК2 в момент изготовления композиции антитела к НЕК2 или его можно добавлять незадолго до инъекции. В альтернативном варианте растворимый гликопротеин с гиалуронидазной активностью можно вводить посредством другой инъекции. В последнем случае растворимый гликопротеин с гиалуронидазной активностью можно приготавливать в отдельном пузырьке либо в лиофилизированной форме, которую необходимо восстанавливать приемлемыми разбавителями перед осуществлением подкожной инъекции, либо производитель можно приготавливать его в виде жидкой композиции. Композицию антитела к НЕК2 и растворимый гликопротеин с гиалуронидазной активностью можно поставлять в виде отдельных продуктов или можно приготавливать в виде наборов, включающих оба предназначенных для инъекции компонента и соответствующие инструкции по их подкожному введению. Можно снабжать также одну или обе композиции соответствующими инструкциями по восстановлению и/или введению.
Таким образом, настоящее изобретение относится также к фармацевтическим композициям, включающим высококонцентрированную стабильную фармацевтическую композицию обладающего фармацевтической активностью антитела к НЕК2 или смеси указанных антител и взятый в соответствующем количестве по меньшей мере один фермент гиалуронидазы, в форме набора, который содержит оба предназначенных для инъекции компонента и соответствующие инструкции по их подкожному применению.
Следующим объектом настоящего изобретения являются устройства для инъекции, которые содержат высококонцентрированную стабильную фармацевтическую композицию, предлагаемую в настоящем изобретении. Указанная композиция может состоять из обладающего фармацевтической активностью антитела к НЕК2 или смеси указанных молекул антител и приемлемых эксципиентов, указанных ниже, и она может содержать также растворимый гликопротеин с гиалуронидазной активностью, который либо входит в состав комбинированной композиции, либо находится в виде отдельной композиции, предназначенной для совместного введения.
Из существующего уровня техники известны различные антитела к НЕК2. Предпочтительно такие антитела представляют собой моноклональные антитела. Они могут представлять собой так называемые химерные антитела, гуманизированные антитела, либо полностью человеческие антитела. Они могут представлять собой любые из следующих видов антител: полноразмерные антитела к НЕК2; фрагменты антител к НЕК2, обладающие такой же биологической активностью; включая варианты аминокислотных последовательностей и/или варианты гликозилирования указанных антител или фрагментов. Примерами гуманизированных антител к НЕК2 являются антитела, известные под Международными непатентованными названиями (ΙΝΝ) трастузумаб и пертузумаб. Другим приемлемым антителом к НЕК2 является Т-БМ1. которое представляет собой конъюгат антитело-токсин, содержащий ЬиМАЪ4Б5-8 (НЕКСЕРШ™) и майтанзиноид (т.е. ΌΜ1 =^'-деацетил-^'-(3-меркапто-1-оксопропил)майтанзин; агент, обладающий высокой эффективностью в отношении микротрубочек), указанный конъюгат (образующийся с помощью МСС-линкера) в настоящее время находится в стадии разработки с целью его применения для лечения метастатического рака молочной железы. Другие антитела к НЕК2, обладающие различными свойствами, описаны у ТадЬаЪие е! а1., Ιηΐ. 1. Сапсег, 47, 1991, р. 933-937; МсКсп/й е! а1., Опсодепе, 4, 1989, р. 543-548; Сапсег Кек., 51, 1991, р. 5361-5369; Васик е! а1., Мо1еси1аг СагсшодепеДк, 3, 1990, р. 350362; §!апсоукк1 е! а1., ΡΝΑδ (ИЗА), 88, 1991, р. 8691-8695; Васик е! а1., Сапсег КекеагсЬ, 52, 1992, р. 25802589; Хи е! а1., 1п!. 1. Сапсег, 53, 1993, р. 401-408; АО 94/00136; Какрг/ук е! а1., Сапсег КекеагсЬ, 52, 1992, р. 2771-2776; Напсоск е! а1., Сапсег Кек., 51, 1991, р. 4575-4580; ЗЬа\\уег е! а1., Сапсег Кек., 54, 1994, р. 1367-1373; Айеада е! а1., Сапсег Кек., 54, 1994, р. 3758-3765; НатеейЬ е! а1., 1. Вю1. СЬет., 267, 1992, р. 15160-15167; υδ 578386 и у К1аррег е! а1., Опсодепе, 14, 1997, р. 2099-2109. Наиболее эффективным терапевтическим антителом к НЕК2 является трастузумаб, поступающий в продажу от фирм Сепеп!есЬ 1пс. и Р. Ноййтапп-Ьа КосЬе Ь!б под товарным знаком НЕКСЕРШ™. Другие подробности, касающиеся антигена НЕК2 и антител к нему, описаны в многочисленных патентах и не относящихся к патентам публикациях (соответствующий обзор представлен в υδ 5821337 и АО 2006/044908).
Антитело к НЕК2 представляет собой, например, антитело, выбранное из группы, включающей трастузумаб, пертузумаб и Т-БМ1, и оно может представлять собой также смесь антител к НЕК2, такую, например, как трастузумаб и пертузумаб или Т-БМ1 и пертузумаб. Установлено, что комбинация пертузумаба и трастузумаба обладает активностью и хорошо переносится пациентами, страдающими метастатическим НЕК2-позитивным раком молочной железы, характеризовавшимся прогрессированием при осуществлении предыдущей терапии с использованием трастузумаба (см., например, Ваке1да 1. е! а1., 1оитпа1 ой С1ш. Опсо1., уо1. 28 (7), 2010, р. 1138-1144). Композиция, предлагаемая в настоящем изобретении, в качестве примера антитела к НЕК2 содержит трастузумаб. Понятия трастузумаб, пертузумаб и
- 6 027553
Τ-ΌΜ1 все относятся к соответствующим антителам к НЕК2, которые удовлетворяют требованиям, необходимым для получения разрешения на продажу в качестве идентичного или биологически сходного продукта в стране или на территории, выбранной из группы стран, включающей США, страны Европы и Японию. Трастузумаб имеет СЭК-участки, описанные в ЕР-В-590058. пертузумаб имеет СЭК-участки, описанные в νθ 01/00245. Установлено, что активность трастузумаба в анализе антипролиферативного действия в отношении клеток ВТ-474 (Ναΐιία К. с1 а1., ТНс НЕК-2-1ат§ейп§ апНЪоб1ек ТгаЧи/итаЬ апб РсгШ/итаЬ 5упегд15Йса11у шЫЪН 1Не 5игугуа1 οί Ъгеак! сапсег сеПк. Сапсег Ке8., 64, 2004, р. 2343-2346) составляла 0,7-1,3х104 ед./мг. Конъюгат Τ-ΌΜ1 описан в νθ 2005/117986.
ΗΕΚΟΕΡΙΝ™ (трастузумаб) разрешен для применения в странах Евросоюза (ЕЙ) для пациентов с метастатическим раком молочной железы (МВС), у которых в опухолях происходит сверхэкспрессия НЕК2, в следующих режимах:
в виде монотерапии для лечения пациентов, подвергавшихся по меньшей мере двум химиотерапевтическим режимам для лечения у них метастатической болезни. Предварительная химиотерапия должна была включать по меньшей мере применение антрациклина и таксана, если только пациентов можно подвергать такому лечению. У пациентов с зависимым от рецепторов гормонов раком не должна была также иметь успеха и гормональная терапия, если только указанных пациентов можно подвергать такому лечению;
в комбинации с паклитакселом для лечения тех пациентов, которых не подвергали химиотерапии для лечения у них метастатической болезни и которым не показано лечение антрациклином;
в комбинации с доцетакселом для лечения тех пациентов, которых не подвергали химиотерапии для лечения у них метастатической болезни;
в комбинации с ингибитором ароматазы для лечения пациентов в постменопаузальном периоде, страдающих зависимым от гормонов рецепторов МВС, которых ранее не подвергали лечению трастузумабом.
Трастузумаб разрешен также для применения в странах ЕЙ для пациентов с МВС, у которых в опухолях происходит сверхэкспрессия НЕК2, для лечения пациентов с ранней стадией НЕК2-позитивного рака молочной железы (ЕВС) после хирургического вмешательства, химиотерапии (неоадъювантной или адъювантной) и лучевой терапии (если это возможно).
Кроме того, в настоящее время проводится изучение применимости трастузумаба для лечения рака желудка.
В настоящее время разрешены две схемы применения трастузумаба (таблица 1) при лечении как метастатического рака молочной железы (МВС), так и ранней стадии рака молочной железы (ЕВС): один раз в неделю (с.]1\у) и каждые 3 недели (ц3У). При схеме применения с.]1\у используют ударную дозу 4 мг/кг с последующим использованием дозы 2 мг/кг. При схеме применения с|3\у используют ударную дозу 8 мг/кг с последующим использованием дозы 6 мг/кг.
Как отмечалось выше, предназначенный для внутривенного введения НЕКСЕРШ™ (трастузумаб) в настоящее время поступает в продажу в лиофилизированной форме в пузырьках. В каждом пузырьке, содержащем поступающую в продажу в Европе композицию, находится сухой остаток, полученный после лиофилизации стерильного водного раствора с объемом заполнения 6,25 мл, который содержит следующие компоненты: 150 мг трастузумаба (эффективное количество составляет 156,3 мг для гарантии того, что из конечного продукта после восстановления можно будет получить номинальное количество, составляющее 150 мг), 3,50 мг гидрохлорида Ь-гистидина, 2,25 мг Ь-гистидина, 141,9 мг дигидрата α,α-трегалозы, 0,63 мг полисорбата 20. Растворенный лиофилизат содержит примерно 24 мг/мл трастузумаба, 5 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 6,0, 60 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 0,01% полисорбата 20. Затем раствор вносят в раствор для инфузии и после этого вводят путем инфузии пациенту в течение 90 мин (продолжительность последующих инфузии в случае МВС может составлять 30 мин, если они хорошо переносятся).
В данной области известно несколько растворимых гликопротеинов с гиалуронидазной активностью. Для дополнительной оценки функции, механизма действия и свойств указанных растворимых гликопротеинов с гиалуронидазной активностью ниже представлена следующая основная информация.
Гиподермальный (§С) интерстициальный матрикс состоит из сети волокнистых белков, погруженной в вязкоэластичный гель гликозаминогликанов. Гиалуронан (НА), несульфированный состоящий из повторяющихся звеньев линейный дисахарид, является основным гликозаминогликаном в §С-ткани. НА секретируется в интерстициальную ткань фибробластами в виде высокомолекулярного вязкого полимера с молекулярной массой порядка нескольких мегадальтонов, который затем локально расщепляется в лимфе и в печени под действием лизосомальных гиалуронидаз и экзогликозидаз. Примерно 50% гиалуронана в организме продуцируется в §С-ткани, в которой он присутствует в количестве, составляющем примерно 0,8 мг/г веса ткани во влажном состоянии (Аик1апб К. и Кееб К., выше). Считается, что у взрослого человека весом 70 кг количество НА составляет 15 г, из которых 30% ежедневно подвергается круговороту (синтезируется и расщепляется) (Вашей Ь.В. е1 а1., СйаЬоПкт οί Нуа1игопап ш таЪЪИ ккш 1акек р1асе 1оса11у, ш 1утрН побек апб Нует, Ехр. РНукюк, 76, 1991, р. 695-703). НА, являющийся основ- 7 027553 ной составляющей гелеподобного компонента гиподермального матрикса, в значительной степени определяет его вязкость.
Гликозаминогликаны (ОАО) представляют собой сложные линейные полисахариды внеклеточного матрикса (ЕСМ). ОАО отличаются наличием повторяющихся структур дисахаридов Ν-замещенного гексозамина и уроновой кислоты (в случае гиалуронана (НА), хондроитинсульфата (С8), хондроитина (С), дерматансульфата (Όδ), гепарансульфата (Н8) и гепарина (Н)) или галактозы (в случае кератансульфата (Κδ)). За исключением НА все они ковалентно связаны с коровыми белками. С точки зрения структуры ОАО с их коровыми белками обозначают как протеогликаны (РО).
У млекопитающих гиалуронан (НА) обнаружен главным образом в соединительных тканях, коже, хряще и в синовиальной жидкости. Гиалуронан представляет собой также основной компонент стекловидного тела глаза. В соединительной ткани вода при гидратации, ассоциированной с гиалуронаном, создает гидратированные матриксы между тканями. Г иалуронан играет решающую роль в биологических явлениях, ассоциированных с подвижностью клеток, включая быстрое развитие, регенерацию, репарацию, эмбриогенез, эмбриологическое развитие, заживление ран, ангиогенез и онкогенез (Тоо1е, Се11 ΒίοΙ. Ех1тасе11. Майтх, под ред. Нау, изд-во Р1епит Ргекк, Νον Уогк, 1991, р. 1384-1386; Вейтапб е! а1., Ιηί. 1. Сапсег, 52, 1992, р. 1-6; Кпибкоп е! а1., РА8ЕВ 1., 7, 1993, р. 1233-1241). Кроме того, уровень гиалуронана коррелирует с агрессивностью опухолей (О/е11о е! а1., Сапсег Кек., 20, 1960, р. 600-604; ТакеисЫ е! а1., Сапсег Кек., 36, 1976, р. 2133-2139; К1та1а е! а1., Сапсег Кек., 43, 1983, р. 1347-1354).
НА обнаружен во внеклеточном матриксе многих типов клеток, прежде всего в мягких соединительных тканях. С НА связаны различные физиологические функции, такие как белковый гомеостаз в воде и плазме (Ьаигеп! Т.С. е! а1., РА8ЕВ 1., 6, 1992, р. 2397-2404). Производство НА повышается в пролиферирующих клетках, и это может играть роль при митозе. Он принимает также участие в локомоции и клеточной миграции. НА, вероятно, играет важные роли в регуляции, развитии и дифференцировке клеток (Ьаигеп! е! а1., см. выше).
НА нашел широкое применение в клинической медицине. Установлено, что его тканезащитные и реологические свойства можно использовать в глазной хирургии (например, для защиты эндотелия роговицы в процессе хирургии катаракты). Сывороточный НА является диагностическим маркером болезни печени и различных воспалительных состояний, таких как ревматоидный артрит. Интерстициальный отек, связанный с накоплением НА, может вызывать дисфункцию различных органов (Ьаигеп! е! а1., выше).
Белковые взаимодействия гиалуронана участвуют также в структуре внеклеточного матрикса или основного вещества.
Гиалуронидазы представляют собой группу, как правило, активных в нейтральных или кислых условиях ферментов, широко распространенных в царстве животных. Гиалуронидазы варьируются по субстратной специфичности и механизму действия (\УО 2004/078140). Известно три общих класса гиалуронидаз.
1. Гиалуронидазы млекопитающих (КФ 3.2.1.35), которые представляют собой эндо-бета-Νацетилгексозаминидазы, основными конечными продуктами которых являются тетрасахариды и гексасахариды. Они обладают гидролитической и трансгликозидазной активностью и могут расщеплять гиалуронан и хондроитинсульфаты (С8), как правило, хондроитин-4-сульфат (С4-8) и хондроитин-6-сульфат (С6-8).
2. Бактериальные гиалуронидазы (КФ 4.2.99.1), которые расщепляют гиалуронан и в различной степени С8 и Όδ. Они представляют собой эндо-бета-^ацетилгексозаминидазы, которые участвуют в реакции бета-элиминирования, основными конечными продуктами которой являются дисахариды.
3. Гиалуронидазы (КФ 3.2.1.36) из пиявок, других паразитов и ракообразных, которые представляют собой эндо-бета-глюкуронидазы, гидролизующие бета-1-3-связи, в результате чего образуются конечные продукты, представляющие собой тетрасахариды и гексасахариды.
Гиалуронидазы млекопитающих можно дополнительно подразделять на две группы: ферменты, активные в нейтральной среде, и ферменты, активные в кислой среде. В человеческом геноме выявлено шесть гиалуронидазоподобных генов, а именно НУАЫ, НУАЬ2, НУАЬ3, НУАЬ4, НУАЬР1 и РН20/8РАМ1.
НУАЕР1 представляет собой псевдоген, а у НУАЬ3 не обнаружена ферментативная активность в отношении известных субстратов.
НУАЬ4 представляет собой хондроитиназу и отличается невысоким уровнем активности в отношении гиалуронана.
НУАЬ1 является прототипом активного в кислой среде фермента, а РН20 является прототипом активного в нейтральной среде фермента. Активные в кислой среде гиалуронидазы, такие как НУАЬ1 и НУАЬ2, обычно не обладают каталитической активностью при нейтральном значении рН (т.е. при рН 7). Например, НУАЬ1 обладает слабой каталитической активностью ш νίΙΐΌ при значении рН, превышающем 4,5 (Рток! 1.О. и 8!етп К., А писгоШег-Ъакеб аккау Ют ЬуаЫтошбаке асйуйу по! гесццппд креОаП/еб геадеп!к, Апа1. Вюскет1к!ту, 251, 1997, р. 263-269).
- 8 027553
НУЛЬ2 представляет собой активный в кислой среде фермент с очень низкой удельной активностью ίη νίίτο.
Гиалуронидазоподобные ферменты можно охарактеризовать также как ферменты, которые, как правило, связаны с плазматической мембраной посредством гликозилфосфатидилинозитольного (ОР1) якоря, их примерами являются человеческая НУАЬ2 и человеческая РН20 (ΟαηίΙΚονίΙοΙι-ΜίαβΚονα с1 а1., Ргос. ЦаЙ. Асаб. δοί. И8А, 100(8), 2003, р. 4580-4585; РЬе1р8 е1 а1., Заепсе, 240(4860), 1988, р. 1780-1782), и ферменты, которые, как правило, являются растворимыми, их примером служит человеческая НУАБ1 (Ρτοδί Ι.Ο. еί а1., РипПсайоп. сЦшпд, апб ехрте88юп οί Ьитап р1а8та Ьуа1иготба8е, ВюсЬет. ВюрЬу8. Ве8. Сοттиη., 236(1), 1997, р. 10-15). Однако имеют место вариации от вида к виду: например, бычья РН20 очень слабо связана с плазматической мембраной и не заякорена через чувствительный к фософлипазе якорь (Ьа1апсейе еί а1., ΒίοΙ. Вергой., 65(2), 2001, р. 628- 636). Эта уникальная особенность бычьей гиалуронидазы обеспечила клиническое применение растворимой гиалуронидазы из яичек быка в виде экстракта (\Ууба8е™, Нуа1а8е™)· Другие виды РН20 представляют собой заякоренные с помощью липида ферменты, которые, как правило, являются нерастворимыми без использования детергентов или липаз. Например, человеческая РН20 заякорена на плазматической мембране через ΟΡΙ-якорь. Попытки создать ДНК-конструкции человеческой РН20, для которых не требуется интродукция липидного якоря в полипептид, приводили к получению либо каталитически неактивного фермента, либо нерастворимого фермента (Аттшд еί а1., Еиг. ί. ВюсЬет., 247(3), 1997, р. 810-814). Установлено, что встречающаяся в естественных условиях гиалуронидаза спермы макак присутствует как в растворимой, так и в связанной с мембраной форме. В то время как связанная с мембраной форма с молекулярной массой 64 кДа обладает ферментативной активностью при рН 7,0, форма с молекулярной массой 54 кДа обладает активностью только при рН 4,0 (СЬегг еί а1., ^еν· Вю1., 10, 175(1), 1996, р. 142-153). Таким образом, у растворимых форм РН20 часто отсутствует ферментативная активность в нейтральных условиях.
Как отмечалось выше и согласно данным, представленным в \УО 2006/091871, в композицию можно в небольших количествах добавлять растворимые гликопротеины, обладающие гиалуронидазной активностью (8НА8ЕОР), для облегчения введения терапевтического лекарственного средства в гиподерму. В результате быстрой деполимеризации НА во внеклеточном пространстве 8НА8ЕОР снижает вязкость интерстициальной ткани, повышая тем самым гидравлическую проводимость, и это обеспечивает возможность безопасного и удобного введения более значительных объемов в §С-ткань. Повышенная гидравлическая проводимость, индуцируемая 8НА8ЕОР посредством снижения вязкости интерстициальной ткани, обеспечивает повышенное диспергирование, потенциально повышает системную биологическую доступность вводимого 8С-путем терапевтического лекарственного средства.
При инъекции НА в гиподерму его деполимеризация с помощью 8НА8ЕОР происходит в ограниченной области §С-ткани, а именно в месте инъекции. Согласно экспериментальным данным для 8НА8ЕОР характерна локальная инактивация в интерстициальном пространстве, так, у мышей время полужизни составляет от 13 до 20 мин, при этом у мышей линии СЭ-1 не обнаружена заметная абсорбция в кровь после однократного внутривенного введения дозы. Для 8НА8ЕОР характерно время полужизни в сосудистом компартменте, составляющее 2,3 и 5 мин у мышей и обезьян циномолгус (яванский макак-крабоед) соответственно при использовании доз вплоть до 0,5 мг/кг. Быстрый клиренс 8НА8ЕОР в сочетании с постоянным синтезом НА-субстрата в §С-ткани приводит к кратковременному и локально активному повышению проницаемости для других совместно инъецируемых молекул, это явление является полностью обратимым через 24-48 ч после введения (Ву\уа1ег8 О.Ь. еί а1., Весοη8ί^ίиί^οη οί 1Ье бегта1 Ъатет ίο буе 8ргеаб айет Нуа1игошба8е, Вг. Меб. 1., 2(4741), 1951, р. 1178-1183).
Помимо воздействий на локальное диспергирование в жидкости 8НА8ЕОР действует также в качестве усилителя абсорбции. Макромолекулы с молекулярной массой, превышающей 16 кДа, как правило, не могут абсорбироваться через капилляры посредством диффузии и главным образом абсорбируются через дренирующие лимфатические узлы. Таким образом, введенные подкожно макромолекулы, такие, например, как терапевтическое антитело (молекулярная масса примерно 150 кДа), должны пересечь интерстициальный матрикс прежде, чем достигнут дренирующей лимфатической системы для последующей абсорбции в сосудистый компартмент. В результате повышения локального диспергирования 8НА8ЕОР повышает скорость (Ка) абсорбции многих макромолекул. Это приводит к повышенным пиковым уровням в крови (Стах) и потенциально к повышенной биологической доступности по сравнению с §С-введением без использования 8НА8ЕОР (ΒοοкЪ^ηбе^ Ь.Н. еί а1., А те^тЫт^ Ьитап еп/уте ίοτ епЬапсеб т1ег8Ййа1 ί^аη8рο^ί οί Шегареийс8, 1. Сοηί^ο1· Ве1еа8е, 114, 2006, р. 230-241).
Содержащие гиалуронидазу животного происхождения продукты уже применяли в клинических условиях в течение более чем 60 лет, прежде всего для повышения диспергирования и абсорбции других, вводимых совместно лекарственных средств и для гиподермоклиза (§С-инъекция/инфузия жидкости в большом объеме) (Ρτο8ί Ο.Ι., ВесοтЪ^ηаηί Ьитап Ьуа1иготба8е (гНиРН20): ап епаЪИпд р^Йит ίοτ 8иЪсиίаηеοи8 бгид апб Йшб абт^η^8ί^аί^οη, Ехрей Ортюп οη Эгид ЭеЩегу, 4, 2007, р. 427-440). Особенности механизма действия гиалуронидаз описаны подробно в следующих публикациях: ^и^аη-Веуηο1б8 Р., А 8ртеабшд ГасГОг щ сейаш 8паке νеηοт8 апб Й8 ге1а1юп ίο 1Ьей тοбе οί ас^п, СВ δο^ Вю1. Рап8, 1938, р. 69-81; СЬат Е., А ти^уРс еп/уте ш ίе8ίе8 ехйасз, Ыа1иге, 1939, р. 977-978; \Уе188тапп В., ТЬе
- 9 027553
1гапвд1усову1айуе асйоп о£ 1евйси1аг Нуа1игошйаве, 1. ΒίοΙ. СНет., 216, 1955, р. 783-794; Татт1 К., Заатапеп А.М., МшНасН Η.Ι., Татт1 М., Педгайайоп о£ пе\\'1у вуШНев1/ей ЫдЬ то1еси1аг тавв Нуа1игопап ίη (Не ер1йегта1 апй йегта1 сотраПтеШв о£ Нитап вк1п ш огдап сиНиге, 1. 1пуев1. Пегта1о1., 97, 1991, р. 126-130; Ьаигеп! и.В.О., ЭаН1 Ь.В., Кеей К.К., СайНоНвт о£ Нуа1игопап ш гаННН вк1п (акев р1асе 1оса11у, ш 1утрН пойев апй Нуег, Ехр. РНувю1., 76, 1991, р. 695-703; Ьаигей Т.С. и Ргавег ЕК.Е., Педгайайоп о£ ВюасОуе ЗиЬв1апсев: РНувю1оду апй Ра1НорНувю1оду, под ред. Неппквеп 1.Н., изд-во СКС Ргевв, Воса Ка1оп, РЬ; 1991, р. 249-265; Натв Ε.Ν. е! а1., Епйосуйс Еипсйоп, д1усоваттод1усап вресШсНу, апй апННойу вепвШуНу о£ (Не гесотЫпап! Нитап 190-кПа Нуа1игопап гесер!ог £ог епйосу1ов1в (НАКЕ), 1. Вю1. СНет., 279, 2004, р. 36201-36209; Ргов! Ο.Ι., КесотЫпап! Нитап Нуа1иготйаве (гНиРН20): ап епаЫшд рНШогт £ог внЬсШапеоив йгид апй йшй айт1тв1гайоп, Ехрей Ор1топ оп Эгид ОеНуегу, 4, 2007, р. 427440. Содержащие гиалуронидазу продукты, разрешенные для применения в странах ЕЙ, представляют собой Ну1аве® Эеввап и Нуа1аве®. Содержащие гиалуронидазу животного происхождения продукты, разрешенные для применения в США, включают УНтаве™, Нуйаве™ и АшрНайаве™.
Безопасность и эффективность содержащих гиалуронидазу продуктов интенсивно изучались. Было установлено, что наиболее важным риском, касающимся безопасности, является гиперчувствительность и/или аллергенность, которая, по-видимому, связана с недостаточной чистотой препаратов животного происхождения (Ргов! Ο.Ι., КесошЫпап! Нитап Нуа1иготйаве (гНиРН20): ап епаННпд р1аНогт £ог внЬсШапеоив йгид апй йшй айт1тв1гайоп, Ехрей Оршюп оп Эгид ОеНуегу, 4, 2007, р. 427-440). Следует отметить, что существуют различия касательно разрешенных доз гиалуронидаз животного происхождения в Великобритании, Германии и США. В Великобритании принятая доза при использовании в качестве адъюванта для подкожной или внутримышечной инъекции составляет 1500 ед., которую добавляют непосредственно в инъекционный раствор. В США обычная применяемая для этой цели доза составляет 150 ед. При осуществлении гиподермоклиза гиалуронидазу применяют с целью подкожного введения относительно больших объемов жидкости. В Великобритании, как правило, добавляют 1500 ед. гиалуронидазы к каждым 500-1000 мл жидкости для подкожного применения. В США 150 ед. рассматриваются как требуемые для каждого литра раствора для гиподермоклиза. В Германии считается, что для этой цели следует применять 150-300 ед. В Великобритании для повышения диффузии местных анестезирующих средств добавляют 1500 ед. В Германии и США считается, что для этой цели следует применять 150 ед. Несмотря на различия в дозах (доза в Великобритании в 10 раз выше, чем в США), отсутствуют данные о каких-либо заметных различиях в профилях безопасности продуктов, содержащих гиалуронидазу животного происхождения, в США и Великобритании соответственно.
декабря 2005 г. фирма На1о/уте ТНегареийсв 1пс. получила разрешение ΡΌΑ на применение инъекционной композиции рекомбинантной человеческой гиалуронидазы, гНиРН20 (НУЪЕ№Х™). От ΡΌΑ получено разрешение на применение ΗΥ^ЕNЕX™ в дозе 150 ед. для ЗС-введения при следующих показаниях:
в качестве адъюванта для повышения абсорбции и диспергирования других инъекционных лекарственных средств, для гиподермоклиза, в качестве вспомогательного средства для ЗС-урографии для улучшения резорбции рентгеноконтрастных агентов.
В качестве части обобщения, выполненного в процессе регистрации, установлено, что гНиРН20 обладает такой же способностью повышать диспергирование и абсорбцию других инъекционных лекарственных средств, что и ранее разрешенные препараты гиалуронидазы животного происхождения, но отличается улучшенным профилем безопасности. В частности, применение рекомбинантной человеческой гиалуронидазы (гНнРН20) минимизирует по сравнению с гиалуронидазами животного происхождения потенциальный риск загрязнения патогенами животных и трансмиссивными спонгиформными энцефалопатиями.
Растворимые гликопротеины с гиалуронидазной активностью (вНАЗЕОР), способ их получения и их применение в фармацевтических композициях описаны в АО 2004/078140. Применение растворимых гликопротеинов с гиалуронидазной активностью в комбинации с различными, взятыми в качестве примера антителами, такими, например, как трастузумаб, упомянуто в АО 2006/091871.
В детальном экспериментальном исследовании, изложенном дополнительно ниже, неожиданно установлено, что композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, отличаются предпочтительной стабильностью при хранении и удовлетворяют всем необходимым требованиям для одобрения службой здравоохранения.
Фермент гиалуронидазы в композициях, предлагаемых в настоящем изобретении, повышает степень введения антитела к НЕК2 в системный кровоток, например, повышая абсорбцию действующего вещества (т.е. действует в качестве усилителя проникновения). Фермент гиалуронидазы повышает также степень введения терапевтического антитела к НЕК2 в системный кровоток при подкожном пути применения в результате обратимого гидролиза гиалуронана, внеклеточного компонента интерстициальной ЗС-ткани. Г идролиз гиалуронана в гиподерме приводит к временному открытию каналов в интерстициальном пространстве ЗС-ткани и тем самым повышает степень введения терапевтического антитела к
- 10 027553
НЕК2 в системный кровоток. Кроме того, введение становится менее болезненным для человека и приводит к меньшему связанному с вводимым объемом опуханию 8С-ткани.
Гиалуронидаза при ее местном применении полностью проявляет свое действие локально. Другими словами, гиалуронидаза инактивируется и метаболизируется местно в течение нескольких минут и, как установлено, не обладает системным или пролонгированным действием. Быстрая инактивация гиалуронидазы в течение нескольких минут при ее проникновении в кровоток обусловливает реальную возможность осуществлять сравнительные эксперименты по оценке биологической доступности различных содержащих гиалуронидазу продуктов. Это свойство минимизирует также любые проблемы, связанные с потенциальной системной безопасностью, поскольку содержащий гиалуронидазу продукт не может оказывать воздействие на удаленные области.
Общей особенностью всех ферментов гиалуронидаз является их способность осуществлять деполимеризацию гиалуронана вне зависимости от различий в химической структуре, виде-источнике, в тканях-источниках или в партиях лекарственного продукта, полученного из одних и тех же видов и тканей. Их отличительной особенностью является то, что их активность является одинаковой (за исключением эффективности) несмотря на различие в структурах.
Фермент гиалуронидазы, применяемый в качестве эксципиента в композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, отличается тем, что не оказывает отрицательного воздействия на молекулярную целостность антитела к НЕК2 в стабильной фармацевтической композиции, представленной в настоящем описании. Кроме того, фермент гиалуронидазы модифицирует только введение антитела к НЕК2 в системный кровоток, но не обладает никакими свойствами, которые могут обусловливать или принимать участие в терапевтических воздействиях абсорбированного системно антитела к НЕК2. Фермент гиалуронидазы не обладает системной биологической доступностью и не оказывает отрицательного воздействия на молекулярную целостность антитела к НЕК2 при хранении в рекомендованных условиях стабильной фармацевтической композиции, предлагаемой в изобретении. Поэтому ее можно рассматривать в качестве эксципиента в композиции антитела к НЕК2, предлагаемой в настоящем изобретении. Поскольку она не обладает никаким терапевтическим действием, она представляет собой вспомогательную составную часть фармацевтической формы в отличие от обладающего терапевтической активностью антитела к НЕК2.
В данной области известно несколько приемлемых ферментов гиалуронидаз, которые можно применять согласно настоящему изобретению. Предпочтительным ферментом является человеческая гиалуронидаза, наиболее предпочтительно фермент, известный как гНиРН20. гНиРН20 является представителем семейства обладающих активностью в нейтральной и кислой среде в-1,4-гликозилгидролаз, которые катализируют деполимеризацию гиалуронана путем гидролиза в-1,4-связи между Соположением Ν-ацетилглюкозамина и С4-положением глюкуроновой кислоты. Гиалуронан представляет собой полисахарид, присутствующий во внутриклеточном основном веществе соединительной ткани, такой как подкожная интерстициальная ткань, и в определенных специализированных тканях, таких как пупочный канатик и жидкость стекловидного тела. Гидролиз гиалуронана приводит к временному снижению вязкости интерстициальной ткани и ускоряет диспергирование инъекционных жидкостей или локализованных транссудатов или экссудатов, облегчая тем самым их абсорбцию. Воздействия гиалуронидазы является местным и обратимым и сопровождается полным восстановлением тканевого гиалуронана в течение 24-48 ч (Ρτοδΐ Ο.Ι., КесотЫпай Ьитап Ьуа1игойба5е (гНиРН20): ап епаЫшд ркйГогт £ог 5иЪсйапеои5 бгид апб йшб абт1П151габои, Ехрей Ορίηίοη ои Огид ОеЬуегу. 4, 2007, р. 427-440). Повышение проницаемости соединительной ткани в результате гидролиза гиалуронана коррелирует с эффективностью гиалуронидазы в качестве вещества, обладающего способностью повышать диспергирование и абсорбцию вводимых совместно молекул.
В человеческом геноме присутствует несколько генов гиалуронидаз. Только генный продукт РН20 обладает выраженной гиалуронидазной активностью в физиологических внеклеточных условиях и действует в качестве агента, способствующего распространению, в то время как обладающие активностью в кислой среде гиалуронидазы не обладают указанным свойством.
гНиРН20 представляет собой первый и единственный рекомбинантный человеческий фермент гиалуронидазы, который в настоящее время доступен для терапевтического применения. Встречающийся в естественных условиях человеческий белок РН20 имеет липидный якорь, присоединенный к находящейся на карбоксильном конце аминокислоте, который заякоревает ее в плазматической мембране. Фермент гНиРН20, разработанный на фирме На1о/уте, представляет собой укороченный делеционный вариант, лишенный аминокислот на карбоксильном конце, ответственных за присоединение липида. Это позволяет получать растворимый обладающий активностью при нейтральном значении рН фермент, сходный с белком, который обнаружен в препаратах бычьих яичек. Белок гНиРН20 синтезируют с состоящим из 35 аминокислот сигнальным пептидом, который удаляется с Ν-конца в процессе секреции. Зрелый белок гНиРН20 содержит ортолог Ν-концевой аминокислотной последовательности, аутентичный с обнаруженным в некоторых препаратах бычьей гиалуронидазы.
- 11 027553
РН20-гиалуронидазы, включая РН20 животного происхождения и рекомбинантную человеческую гНиРН20, катализируют деполимеризацию гиалуронана путем гидролиза в-1,4-связи между Οι-положением Ν-ацетилглюкозамина и С4-положением глюкуроновой кислоты. Наименьшим продуктом расщепления является тетрасахарид (\Ус155тапп. В. ТЬе 1гап8д1усо8у1аЬуе аейоп о£ 1е8Йси1аг Ьуа1игошбаке, 1. Βίο1. СЬет., 216, 1955, р. 783-794). Эта структура Ν-ацетилглюкозамин/глюкуроновая кислота не обнаружена в Ν-сцепленных гликанах рекомбинатных биологических продуктов и поэтому гНиРН20 не влияет на гликозилирование антител, входящих вместе с ней в препарпативную форму, таких, например, как трастузумаб. Фермент гНиРН20 сам несет шесть Ν-сцепленных гликанов на молекулу, имеющую коровые структуры, сходные с обнаруженными в моноклональных антителах. Установлено, что эти Ν-сцепленные структуры не изменяются со временем, подтверждая тем самым отсутствие ферментативной активности гНиРН20 в отношении этих Ν-сцепленных гликановых структур. Короткое время полужизни гНиРН20 и постоянный синтез гиалуронана обусловливают кратковременное и локальное действие фермента на ткани.
Фермент гиалуронидазы, который является эксципиентом в подкожной композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, можно получать с помощью технологии рекомбинантной ДНК. Такой путь гарантирует, что в любые моменты времени получают один и тот же белок (идентичная аминокислотная последовательность) и что таким образом можно избегать аллергической реакции, например, вызываемой загрязняющими белками, которые образуются при совместной очистке в процессе экстракции из ткани. Фермент гиалуронидазы, применяемый в композиции, приведенный в качестве примера в контексте настоящего описания, представляет собой человеческий фермент, а именно гНиРН20.
Аминокислотная последовательность гНиРН20 (НУЪЕЫЕХ™) хорошо известна и представлена в СА8 под регистрационным номером 75971-58-7. Приблизительная молекулярная масса составляет 61 кДа.
Осуществляли множественные сравнения структуры и функции клонов кДНК гиалуронидазы млекопитающих, полученных из естественных источников, и РН-20 человека и других млекопитающих. Ген РН-20 представляет собой ген, применяемый для получения рекомбинантного продукта гНиРН20; однако рекомбинантный лекарственный продукт представляет собой состоящую из 447 аминокислот укороченную версию полноразмерного белка, кодируемого геном РН-20. При любом сравнении структурные сходства касательно аминокислотных последовательностей редко превышали 60%. Сравнения функциональных характеристик продемонстрировали, что активность гНиРН20 очень сходна с активностью ранее зарегистрированных содержащих гиалуронидазу продуктов. Эта информация согласуется с клиническими данными, полученными в течение последних 50 лет, о том, что вне зависимости от источника гиалуронидазы клиническая безопасность и эффективность единиц гиалуронидазы являются эквивалентными.
Применение гНиРН20 в содержащей антитело к НЕК2 композиции для 8С-введения, предлагаемой в настоящем изобретении, позволяет осуществлять введение более значительных объемов лекарственного продукта и потенциально приводит к повышению абсорбции вводимого подкожно трастузумаба в системный кровоток.
Осмотическое давление стабильной фармацевтической композиции, предлагаемой в изобретении, составляет 330±50 мОсм/кг.
В стабильной фармацевтической композиции, предлагаемой в изобретении, практически отсутствуют видимые (при оценке человеческим глазом) частицы. Частицы, невидимые невооруженным глазом (при оценке с затемнением света), должны удовлетворять следующим критериям:
максимальное количество на флакон частиц размером >10 мкм -> 6000; максимальное количество на флакон частиц размером >25 мкм -> 600.
Следующим объектом настоящего изобретения является применение композиции для приготовления лекарственного средства, пригодного для лечения у индивидуума заболевания или нарушения, которое можно лечить с помощью антитела к НЕК2, такого, например, как рак или незлокачественное заболевание, путем введения индивидууму композиции, представленной в настоящем описании, в количестве, эффективном для лечения указанного заболевания или нарушения. Антитело к НЕК2 можно вводить совместно, одновременно или последовательно, с химиотерапевтическим средством.
Следующим объектом настоящего изобретения является способ лечения заболевания или нарушения, которое можно лечить с помощью антитела к НЕК2, (например, рака или незлокачественного заболевания), у индивидуума, заключающийся в том, что вводят композицию, представленную в настоящем описании, индивидууму в количестве, эффективном для лечения указанного заболевания или нарушения. При раке или незлокачественном заболевании, как правило, должны присутствовать экспрессирующие НЕК2 клетки, в результате чего антитело к НЕК2 в терапевтической фармацевтической предназначенной для 8С-введения композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, должно обладать способностью связываться с пораженными клетками. Различные виды рака или незлокачественных заболеваний, которые можно лечить с помощью композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, перечислены в представленном ниже разделе Определения.
- 12 027553
Стабильную фармацевтическую композицию, которая содержит обладающее фармацевтической активностью антитело к НЕК2, предлагаемое в изобретении, можно вводить с помощью подкожной инъекции, при этом повторять введение несколько раз с интервалом 3 недели (с.]3\у). Полный объем инъецируемой жидкости в большинстве случаев вводят в течение периода времени, составляющего от 1 до 10 мин, предпочтительно от 2 до 6 мин, наиболее предпочтительно 3±1 мин. При применении в качестве вспомогательной терапии страдающих ЕВС пациентов и пациентов с МВС, подвергающихся монотерапии трастузумабом, которым не вводят другие внутривенные (IV) химиотерапевтические средства, указанное подкожное применение приводит к повышению удобства для пациентов, поскольку его можно осуществлять путем самовведения в домашних условиях. Это повышает строгость соблюдения больным режима и схемы лечения и снижает/устраняет затраты, связанные с ΐν-введением (т.е. затраты на осуществление ΐν-введения, арендную оплату койко-дней, перевоз пациента и т.д.). С подкожным введением, предлагаемым в настоящем изобретении, весьма вероятно должно быть связано снижение частоты и/или интенсивности связанных с инфузией реакций.
Добавление гиалуронидазы в композицию позволяет повышать инъецируемый объем, который можно безопасно и комфортно вводить подкожно. Общепринятый инъецируемый объем составляет от 1 до 15 мл. Установлено, что введение композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, повышает диспергирование, абсорбцию и биологическую доступность терапевтического антитела. Крупные молекулы (т.е. >6 кДа), которые вводят §С-путем, абсорбируются в сосудистый компартмент главным образом вместе с дренирующими лимфатическими жидкостями (Зирегкахо А. е! а1., Ейес! οί Мо1еси1аг АсщЫ оп 1Пе ЬутрЬабс АЬкогрбои οί Аа1ег-§о1иЬ1е Сотроиибк Ео11оу1пд §иЬси1апеои8 ЛбтийЩгаОоп. 2, 1990, р. 167-169; 5>\\аг1/ М.А., Абуаисеб Эгид ЭеЬуегу Веззезу, Тйе рйу8ю1оду οί 1Пе 1утрйабс 8у81ет, 50, 2001, р. 3-20). Таким образом, в этом случае скорость интродукции этих крупных молекул в системный кровоток замедляется по сравнению с внутривенной инфузией, что может приводить к снижению частоты/интенсивности связанных с инфузией реакций.
Для получения предназначенной для подкожного введения композиции трастузумаба, предлагаемой в изобретении, требуются высокие концентрации антитела (примерно 120 мг/мл) на конечной стадии очистки процесса изготовления. Поэтому к общепринятому процессу получения трастузумаба добавляют дополнительную стадию (стадию ультрафильтрации/диафильтрации).
Согласно данным, представленным в АО 97/04801, высококонцентрированную стабильную фармацевтическую препаративную форму антитела к НЕК2, предлагаемую в настоящем изобретении, можно получать также в виде стабилизированной композиции белка, которую можно восстанавливать приемлемым разбавителем с получением восстановленной композиции с высокой концентрацией антитела к НЕК2.
Предназначенная для §С-введения композиция антитела к НЕВ2, предлагаемая в настоящем изобретении, показана прежде всего для лечения рака. При этом понятия рак и раковый относятся или описывают физиологическое состояние у млекопитающих, которое, как правило, характеризуется нерегулируемым ростом клеток. Примерами рака являются (но не ограничиваясь только ими) карцинома, лимфома, бластома (включая медуллобластому и ретинобластому), саркома (включая липосаркому и синовиально-клеточную саркому), нейроэндокринные опухоли (включая карциноидные опухоли, гастриномы и островково-клеточный рак), мезотиелома, шваннома (включая невриному слухового нерва), менингиома, аденокарцинома, меланома и лейкоз или лимфоидные злокачественные заболевания. Более конкретными примерами указанных видов рака являются плоскоклеточный рак (например, эпителиальный плоскоклеточный рак), рак легкого, включая мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого и плоскоклеточную карциному легкого, рак брюшины, печеночноклеточный рак, гастральный рак или рак желудка, включая рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластома, рак шейки маки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатома, рак молочной железы, рак ободочной кишки, ректальный рак, колоректальный рак, карцинома эндометрия или матки, карцинома слюнных желез, рак почки или ренальный рак, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, печеночная карцинома, анальная карцинома, карцинома пениса, рак яичек, рак пищевода, опухоли желчных протоков, а также рак головы и шеи.
Понятие примерно в контексте настоящего описания означает, что конкретное представленное значение может варьироваться в определенных пределах, например, означает, что указанное значение включает вариации в диапазоне ±10%, предпочтительно ±5%, наиболее предпочтительно ±2%.
Рак, при котором происходит сверхэкспрессия рецептора НЕК, представляет собой рак, отличающийся существенно более высокими уровнями рецептора НЕК, такого как НЕК2, на клеточной поверхности по сравнению с нераковой клеткой ткани такого же типа. Указанная сверхэкспрессия может вызываться амплификацией гена или повышенной транскрипцией или трансляцией. Сверхэкспрессию рецептора НЕК можно определять диагностическими или прогностическими анализами, позволяющими определять повышенные уровни белка НЕК на поверхности клетки (например, иммуногистохимическим анализом; ИГХ). В альтернативном или дополнительном варианте можно измерять уровни кодирующей НЕК нуклеиновой кислоты в клетке, например, на основе методов флуоресцентной гибридизации ίη δίΐιι
- 13 027553 (ΡΙ8Η; см. АО 98/45479), Саузерн-блоттинга или полимеразной цепной реакции (ПЦР), например, количественной ПЦР в реальном времени (РВ-ПЦР). Можно изучать также сверхэкспрессию рецептора НЕК, оценивая слущивающийся антиген (например, внеклеточный домен НЕК) в биологической жидкости, такой как сыворотка (см., например, И8 4933294, выданный 12 июня 1990 г.; АО 91/05264, опубликованную 18 апреля 1991 г.; И8 540138, выданный 28 марта 1995 г. и §1а8 е! а1., 1. 1ттипо1. Мебюбк, 132, 1990, р. 73-80). Помимо указанных выше анализов практикующим специалистам в данной области известны различные анализы ίη νίνο. Например, можно экспонировать клетки в организме пациента антителом, которое необязательно может содержать выявляемую метку, например радиоактивный изотоп, и связывание антитела с клетками пациента можно оценивать, например, наружным сканированием с измерением радиоактивности или путем анализа биопсии, полученной у пациента до обработки антителом.
И, наоборот, рак, при котором не происходит сверхэкспрессия рецептора НЕК2, представляет собой рак, отличающийся отсутствием превышающий нормальный уровень экспрессии рецептора НЕК2 по сравнению с нераковой клеткой ткани такого же типа.
Рак, при котором происходит сверхэкспрессия лиганда НЕК2, представляет собой рак, отличающийся производством значительно более высоких уровней лиганда по сравнению с нераковой клеткой ткани такого же типа. Указанная сверхэкспрессия может вызываться амплификацией гена или повышенной транскрипцией или трансляцией. Сверхэкспрессию лиганда НЕК можно определять диагностически путем оценки уровней лиганда (или кодирующей его нуклеиновой кислоты) в организме пациента, например, в биопсии опухоли или с помощью различных диагностических анализов, таких как ИГХ, Р18Н, саузерн-блоттинг, ПЦР, или с помощью анализов ίη νίνο, хорошо известных в данной области.
Очевидно, что содержащую антитело к НЕК2 предназначенную для §С-введения композицию, предлагаемую в настоящем изобретении, можно применять также для лечения различных незлокачественных заболеваний или нарушений, таких как аутоиммунные заболевания (например, псориаз); эндометриоз; склеродерма; рестеноз; полипы, такие как полипы ободочной кишки, носовые полипы или полипы желудочно-кишечного тракта; фиброаденома; респираторное заболевание; холецистит; нейрофиброматоз; поликистоз почек; воспалительные заболевания; кожные нарушения, включая псориаз и дерматит; сосудистое заболевание; состояния, включающие аномальную пролиферацию сосудистых эпителиальных клеток; язвы желудочно-кишечного тракта; болезнь Менетрие, секретирующие аденомы или синдром потери белка; почечные нарушения; ангиогенные нарушения; глазное заболевание, такое как возрастная дегеренерация желтого пятна, синдром предполагаемого глазного гистоплазмоза, неоваскуляризация сетчатки в результате пролиферативной диабетической ретинопатии, васкуляризация сетчатки, диабетическая ретинопатия или возрастная дегенерация желтого пятна; связанные с костной тканью патологии, такие как остеоартрит, рахит и остеопороз; повреждение после церебрального ишемического инсульта; заболевания, связанные с фиброзом или отеком, такие как цирроз печени, фиброз легкого, саркоидоз, тиреоидит, синдром системной гипервязкости, болезнь Рандю-Ослера-Вебера, хроническое обтурирующее заболевание легких или отек, связанный с ожогами, травмой, облучением, ударом, гипоксией или ишемией; реакция гиперчувствительности кожи; диабетическая ретинопатия и диабетическая нефропатия; синдром Гийена-Барре; реакция трансплантат-против-хозяина или отторжение трансплантата; болезнь Педжетта; воспаление кости или сустава; фотостарение (например, вызванное УФ-облучением человеческой кожи); доброкачественная гипертрофия предстательной железы; определенные микробные инфекции, включая вызываемые микробными патогенами, выбранными из аденовирусов, хантавирусов, ВоггеБа ЬигдбогГеп. Уегкийа крр. и Вогбе!е11а репи8818; тромбоз, связанный с агрегацией тромбоцитов; связанные с репродуктивной системой состояния, такие как эндометриоз, синдром гиперстимуляции яичников, преэклампсия, дисфункциональное маточное кровотечение или менометрорагия; синовит; атерома; острые и хронические нефропатии (включая пролиферативный гломерулонефрит и индуцируемое диабетом заболевание почек); экзема; образование гипертрофированных рубцов; эндотоксический шок и грибная инфекция; семейный аденоматозный полипоз; нейродегенеративные болезни (например, болезнь Альцгеймера, связанная со СПИДом деменция, болезнь Паркинсона, амиотрофический боковой склероз, пигментный ретинит, атрофия спинномозговых мышц и дегенерация мозжечка); миелодиспластические синдромы; гипопластическая анемия; ишемическое повреждение; фиброз легкого, почки или печени; опосредуемая Т-клетками реакция гиперчувствительности; детский гипертрофический стеноз привратника; синдром задержки мочи; псориатический артрит и тиреоидит Хашимото. Примерами незлокачественных показаний для лечения являются псориаз, эндометриоз, склеродема, сосудистое заболевание (например, рестеноз, атеросклероз, ишемическая болезнь сердца или гипертензия), полипы ободочной кишки, фиброаденома или болезнь дыхательных путей (например, астма, хронический бронхит, бронхоэктаз или муковисцидоз).
Когда показанием для лечения является рак, для лечения пациента можно применять комбинацию содержащей антитело композиции и химиотерапевтического средства. Комбинированное применение включает совместное введение или одновременное введение с использованием различных композиций или одной фармацевтической композиции или последовательное введение в любом порядке, предпочтительно в течение периода времени, при котором оба (или все) действующие вещества одновременно проявляют свою биологическую активность. Так, химиотерапевтическое средство можно вводить до или
- 14 027553 после введения содержащей антитело композиции, предлагаемой в настоящем изобретении. Согласно этому варианту осуществления изобретения промежуток времени по меньшей мере между одним введением химиотерапевтического средства и по меньшей мере одним введением содержащей антитело композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, составляет предпочтительно примерно 1 месяц или менее и наиболее предпочтительно примерно 2 недели или менее. В альтернативном варианте химиотерапевтическое средство и содержащую антитело композицию, предлагаемую в настоящем изобретении, вводят пациенту одновременно в виде одной композиции или различных композиций.
Лечение с помощью указанной композиции, содержащей антитело, должно приводить к улучшению признаков или симптомов рака или заболевания. Например, когда подлежащее лечению заболевание представляет собой рак, такая терапия может приводить к увеличению продолжительности жизни (общей продолжительности жизни и/или продолжительности жизни без прогрессирования заболевания) и/или может приводить к конкретному клиническому ответу (частичному или полному). Кроме того, лечение с использованием комбинации химиотерапевтического средства и содержащей антитело композиции может приводить к синергетической или превышающей аддитивное действие терапевтической пользе для пациента.
Как правило, входящее в композицию антитело вводят в виде голого антитела. Однако вводимое антитело можно конъюгировать с цитотоксическим агентом. Иммуноконъюгат и/или антиген, с которым оно связано, затем интернализуется клеткой, что приводит к повышенной терапевтической эффективности иммуноконъюгата в отношении уничтожения раковой клетки, с которой он связан. В одном из вариантов осуществления изобретения цитотоксический агент оказывает направленное или интерферирующее воздействие на нуклеиновую кислоту в раковой клетке. Примерами таких цитотоксических агентов являются майтанзиноиды, калихеамицины, рибонуклеазы и ДНК-эндонуклеазы. Наиболее изученными в клинических условиях иммуоконъюгатами являются иммуноконъюгаты трастузумаб-майтанзиноид (Т-ИМ1), которые описаны в νθ 2003/037992, в частности, иммуноконъюгат Т-МСС-ЭМ1, химическое название которого Ы2-деацетил-М2-(3-меркапто-1-оксопропил)майтанзин-4-малеимидометилциклогексил-1-карбоксил-трастузумаб.
При подкожном введении композицию можно вводить с помощью приемлемого устройства, такого как (но не ограничиваясь только ими) шприц; устройство для инъекции (например, устройства Г№ТЕСТ-ЕЛ§Е™ и ОЕМЕСТ™); инфузионнный насос (такой, например, как Лсси-СЪек™); ручкаинжектор (например, ОЕИРЕЫ™); безыгольное устройство (например, МЕИИЕСТОК™ и В1О1ЕСТОК™); или с помощью системы введения на основе пластыря для подкожного применения. Приемлемая для композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, система введения описана в νθ 2010/029054. Указанное устройство содержит жидкую композицию, предлагаемую в настоящем изобретении, в количестве от примерно 5 до примерно 15 мл или более предпочтительно 5 мл.
Предназначенная для предупреждения или лечения заболевания соответствующая доза антитела должна зависеть от указанного выше типа заболевания, подлежащего лечению, от того, применяют антитело в превентивных или терапевтических целях, от предшествующей терапии, истории болезни пациента и его ответа на антитело и предписания лечащего врача. Антитело можно вводить пациенту однократно или в виде серий обработок. В зависимости от типа и серьезности заболевания начальная доза антитела к НЕК2, предназначенная для введения пациенту, может составлять от примерно 1 мкг/кг до 50 мг/кг веса тела или, более конкретно, от примерно 0,1 до 20 мг/кг веса тела, и ее применяют, например, путем одного или нескольких раздельных введений или с помощью длительной инфузии. Более конкретно, антитело к НЕК2 можно применять в дозах, составляющих от примерно 0,05 мг антитела к НЕК2/кг веса тела до примерно 10 мг антитела к НЕК2/кг веса тела. Если применяют химиотерапевтическое средство, то его, как правило, вводят в известных дозах или необязательно в более низкой дозе, что может быть связано с совместным действием лекарственных средств или с отрицательными побочными действиями, связанными с применением химиотерапевтического средства. Для подготовки и разработки схем применения указанных химиотерапевтических средств можно использовать инструкции производителя или их может определять эмпирически практикующий специалист в данной области. Подготовка и схемы применения указанной химиотерапии описаны также в СЪетоШегару 8егуюе, под ред. М.С. Реггу, изд-во \νί11ίαπΐ5 & \νί11<πΐ5, ВаШтоге, ΜΌ, 1992.
Другие терапевтические схемы, которые можно объединять с антителом, включают (но не ограничиваясь только ими) применение второго (третьего, четвертого и т.д.) химиотерапевтического(их) средства(в) (другими словами, коктейля различных химиотерапевтических средств); другого моноклонального антитела; ингибирующего рост агента; цитотоксического агента; химиотерапевтического средства; лекарственного средства, мишенью которого является ЕОРК; ингибитора тирозинкиназы; антиангиогенного средства; и/или цитокина и т.д.; или любой их приемлемой комбинации.
Помимо указанных выше терапевтических схем пациента можно подвергать хирургическому вмешательству для удаления раковых клеток и/или лучевой терапии.
Другим вариантом осуществления изобретения является изделие, которое содержит фармацевтическую композицию, предлагаемую в настоящем изобретении, и инструкции по ее применению. Это изде- 15 027553 лие содержит контейнер. Приемлемыми контейнерами являются, например, банки, пузырьки (например, пузырьки с несколькими или двумя камерами), шприцы (например, шприцы с несколькими или двумя камерами) и лабораторные пробирки. Контейнер можно изготавливать из различных материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер содержит композицию и этикетку на нем или присоединенную к нему, на контейнере можно размещать указания по применению. Содержащий композицию контейнер может представлять собой флакон для многоразового использования, который можно применять для повторных введений (например, от 2 до 6 введений) восстановленной композиции. Изделие может включать также дополнительные продукты, важные с коммерческой точки зрения или для потребителя, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы, шприцы и листовку-вкладыш в упаковке с инструкциями по применению.
Понятие фармацевтическая композиция относится к препарату в такой форме, которая обеспечивает эффективное проявление биологической активности действующего вещества и которая не содержит дополнительных компонентов, которые обладают неприемлемой токсичностью для индивидуума, которому требуется вводить композицию. Указанные композиции являются стерильными.
Стерильная композиция является асептической или свободной от всех живых микроорганизмов и их спор.
Стабильная композиция представляет собой форму, в которой все входящие белки практически сохраняют их физическую стабильность и/или химическую стабильность, и/или биологическую активность при хранении при соответствующей температуре хранения, например при 2-8°С. Желательно, чтобы при хранении композиция практически сохраняла свою физическую и химическую стабильность, а также биологическую активность. Период хранения выбирают, как правило, на основе соответствующего периода хранения композиции. Кроме того, композиция должна обладать стабильностью после замораживания (например, до -70°С) и оттаивания композиции, например, после 1, 2 или 3 циклов замораживания и оттаивания. В данной области известны различные аналитические методы измерения стабильности белков, и они обобщены, например, в Рерййе апй Ρτοΐβίη Эгид ИеНуету, под ред. УтссШ Ьее, изд-во Магсе1 Иеккег, 1пс., Иете Уогк, Иете Уогк, 1991, р. 247-301 и у 1опек А. Айу. Эгид ОеПуегу Кеу. 10, 1993, р. 2990. Стабильность можно оценивать при выбранной температуре в течение выбранного периода времени. Стабильность можно оценивать качественно и/или количественно разнообразными различными путями, включая оценку образования агрегатов (например, с помощью гель-фильтрации, путем измерения мутности и/или посредством визуальной оценки); путем оценки гетерогенности заряда с помощью катионообменной хроматографии или капиллярного зонального электрофореза; путем анализа аминоконцевой или карбоксиконцевой последовательности; масс-спектрометрическим анализом; анализом на основе ДСН-ПААГ для сравнения укороченного и интактного антитела; анализом на основе пептидного картирования (например, триптического или с помощью протеазы ЬУ§-С); путем оценки биологической активности антитела или его способности связываться с антигеном и т.д. Нестабильность может предусматривать наличие одного или нескольких следующих признаков: агрегация, деамидирование (например, деамидирование Акп), окисление (например, окисление Ме1). изомеризация (например, изомеризация Акр), отщепление/гидролиз/фрагментация (например, фрагментация шарнирной области), образование сукцинимида, наличие неспаренного(ых) остатка(ов) цистеина, Ν-концевое удлинение, С-концевой процессинг, изменения гликозилирования и т.д. В контексте настоящего описания деамидированное моноклональное антитело представляет собой антитело, в котором один или несколько остатков аспарагина модифицированы, например, с образованием аспарагиновой кислоты или изоаспарагиновой кислоты, в результате пост-трансляционной модификации.
В контексте настоящего описания понятие забуферивающий агент, обеспечивающий значение рН на уровне 5,5±2,0, относится к агенту, который препятствует изменению значения рН в содержащем его растворе благодаря действию водящих в конъюгат кислотных/основных компонентов. Применяемый в композициях, предлагаемых в настоящем изобретении, буфер имеет значение рН от примерно 5,0 до примерно 7,0, или от примерно 5,0 до примерно 6,5, или от примерно 5,3 до примерно 5,8. Установлено, что наиболее приемлемым является значение рН примерно 5,5. Примерами забуферивающих агентов, которые могут контролировать значение рН в указанном диапазоне, являются ацетатный, сукцинатный, глюконатный, гистидиновый, цитратный, глицилглициновый и другие буферы на основе органических кислот. Наиболее предпочтительным согласно настоящему изобретению является гистидиновый буфер, такой, например, как Ь-гистидин/ИС1.
Гистидиновый буфер содержит аминокислоту гистидин. Примерами гистидиновых буферов является хлорид гистидина, ацетат гистидина, фосфат гистидина, сульфат гистидина. Приведенный в примерах в качестве наиболее приемлемого гистидиновый буфер представляет собой буфер, содержащий хлорид гистидина. Такой включающий хлорид гистидина буфер получают титрованием Ь-гистидина (в виде твердого свободного основания) разбавленной соляной кислотой. В частности, гистидиновый буфер или буфер, содержащий хлорид гистидина, имеет значение рН 5,5±0,6, более предпочтительно значение рН от примерно 5,3 до примерно 5,8 и наиболее предпочтительно имеет значение рН 5,5.
- 16 027553
Понятие изотонический означает, что представляющая интерес композиция имеет практически такое же осмотическое давление, что и человеческая кровь. Изотонические композиции, как правило, имеют осмотическое давление примерно от 250 до 350 мОсм. Изотоничность можно измерять с помощью осмометра давления пара или криоскопического осмометра (принцип действия которого основан на оценке понижения температуры замерзания).
В контексте настоящего описания понятие сахарид относится к соединению, которое имеет общую формулу (СН2О)п, и его производным, включая моносахариды, дисахариды, трисахариды, полисахариды, сахараные спирты, редуцирующие сахара, нередуцирующие сахара и т.д. В контексте настоящего описания примерами сахаридов являются глюкоза, сахароза, трегалоза, лактоза, фруктоза, мальтоза, декстран, глицерин, эритрит, арабит, силит, сорбит, маннит, меллибиоза, мелезитоза, раффиноза, маннотриоза, стахиоза, мальтоза, лактулоза, мальтулоза, глюцит, мальтит, лактит, изомальтулоза и т.д. В частности, представленные в настоящем описании композиции содержат нередуцирующий дисахарид в качестве стабилизатора, например сахарид, выбранный из группы, включающей трегалозу (например, в форме дигидрата α,α-трегалозы) и сахарозу.
В контексте настоящего описания понятие поверхностно-активное вещество относится к поверхностно-активному агенту, например неионогенному поверхностно-активному веществу. В контексте настоящего описания примерами поверхностно-активных веществ являются полисорбат (например, полисорбат 20 и полисорбат 80); полоксамер (например, полоксамер 188); Тритон; додецилсульфат натрия (ДСН); лаурилсульфат натрия; октилгликозид натрия; лаурил-, миристил-, линолеил или стеарилсульфобетаин; лаурил-, миристил-, линолеил- или стеарилсаркозин; линолеил-, миристил или цетилбетаин лауроамидопропил-, кокамидопропил-, линолеамидопропил-, миристамидопропил-, пальмидопропил или изостеарамидопропилбетаин (например, лауроамидопропил); миристамидопропил-, пальмидопропилили изостеарамидопропилдиметиламин; натрийметилкокоил- или динатрийметилолеилтаурат и серин ΜΟΝΑρυ АТ™ (фирма Мопа ПЛиНпеь 1пс., Патерсон, шт. Нью-Джерси); полиэтилгликоль, полипропилгликоль и сополимеры этилен- и пропиленгликоля (например, Плюроники, РР68 и т.д.) и т.д., обнаружено, что полисорбат 20 (Р§20) и полисорбат 80 (Р§80) соответственно наиболее пригодны для включения в представленные в настоящем описании композиции.
В контексте настоящего описания понятие антитело используют в его наиболее широком смысле, и оно относится конкретно к полноразмерным моноклональным антителам, поликлональным антителам, мультиспецифическим антителам (например, биспецифическим антителам), образованным по меньшей мере из двух полноразмерных антител, и фрагментам антител, если они обладают требуемой биологической активностью.
В контексте настоящего описания понятие моноклональное антитело относится к антителу, полученному из популяции практически гомогенных антител, т.е. из популяции антител, которые являются идентичными и/или связываются с одним и тем же эпитопом, за исключением возможных вариантов, которые могут возникать при получении моноклонального антитела, такие варианты, как правило, присутствуют в небольших количествах. В отличие от препаратов поликлональных антител, которые включают различные антитела к различным детерминантам (эпитопам), мишенью каждого моноклонального антитела является одна детерминанта антигена. Помимо своей специфичности моноклональные антитела обладают тем преимуществом, что они не загрязнены другими иммуноглобулинами. Прилагательное моноклональный указывает на тот отличительный признак, что антитело получено из практически гомогенной популяции антител, и оно не подразумевает требования, что антитело должно быть получено каким-либо конкретным методом. Например, моноклональные антитела, предназначенные для применения согласно настоящему изобретению, можно создавать с помощью метода гибридом, впервые описанного у КбЫет е! а1., №1иге. 256, 1975, р. 495, или их можно создавать методами рекомбинантной ДНК (см., например, И8 4816567). Моноклональные антитела можно выделять также из фаговых библиотек антител с помощью методов, которые описаны у С1атк§оп е! а1., №Циге. 352, 1991, р. 624-628 и Магкз е! а1., 1. Мо1. Бю1., 222, 1991, р. 581-597.
Фрагмент антитела представляет собой часть полноразмерного антитела, в частности содержит антигенсвязывающий центр или вариабельную область антитела. Примерами фрагментов антитела являются РаЪ-, РаЪ'-, Р(аЪ')2- и Ρν-фрагменты; димерные антитела; линейные антитела; одноцепочечные молекулы антител и мультиспецифичекие антитела, образованные из фрагмента(ов) антител.
Полноразмерное антитело представляет собой антитело, которое содержит антигенсвязывающую вариабельную область и константную область (Съ) легкой цепи и домены СН1, СН2 и СН3 тяжелой цепи. Домены константной цепи могут представлять собой имеющие нативные последовательности домены константной цепи (например, константные домены, имеющие человеческую нативную последовательность) или варианты их аминокислотной последовательности. В частности, полноразмерное антитело обладает одной или несколькими эффекторными функциями.
Понятие вариант аминокислотной последовательности антитела в контексте настоящего описания относится к антителу, аминокислотная последовательность которого отличается от последовательности основных видов антител. Как правило, варианты аминокислотной последовательности должны быть го- 17 027553 мологичны по меньшей мере примерно на 70% последовательностям основных видов антител и предпочтительно должны быть гомологичны по меньшей мере примерно на 80%, более предпочтительно гомологичны по меньшей мере примерно на 90% последовательностям основных видов антител. Варианты аминокислотной последовательности несут замены, делеции и/или добавления в определенных положениях, находящихся внутри последовательностей, или в положениях, примыкающих к последовательностям основных видов антител. В контексте настоящего описания примерами вариантов аминокислотной последовательности являются кислый вариант (например, деамидированный вариант антитела), основный вариант, антитело, удлиненное лидерной последовательностью (например, ¥Н§-) на аминоконце одной или двух его легких цепей, антитело с С-концевым остатком лизина на одной или двух его тяжелых цепях и т.д., и они включают комбинации вариантов аминокислотных последовательностей тяжелых и/или легких цепей. Представляющий наибольший интерес согласно настоящему описанию вариант антитела представляет собой антитело, удлиненное лидерной последовательностью на аминоконце одной или двух его легких цепей, необязательно содержащее также другие отличия в аминокислотной последовательности и/или в гликозилировании относительно основных видов антител.
В контексте настоящего описания понятие вариант гликозилирования относится к антителу с присоединенными к нему одним или несколькими углеводными фрагментами, которые отличаются от углеводных фрагментов, присоединенных к антителам основных видов. В контексте настоящего описания примерами вариантов гликозилирования являются антитело, несущее олигосахаридную структуру 01 или 02 вместо олигосахаридной структуры С0, присоединенной к его Рс-области, антитело с одним или двумя углеводными фрагментами, присоединенными к одной или двум легким цепям, антитело, у которого отсутствует углевод, присоединенный к одной или двум тяжелым цепям антитела, и т.д. и комбинации вариаций гликозилирования. Кроме того, понятие вариант гликозилирования относится также к антителам со сконструированным гликозилированием, которые описаны, например, в ЕР 1331266 и И8Р 7517670.
Понятие эффекторные функции антитела относится к видам биологической активности, связанным с Рс-областью (с имеющей нативную последовательность Рс-областью или с Рс-областью, несущей вариант аминокислотной последовательности) антитела. Примерами эффекторных функций антитела являются связывание С1с.|; комплементзависимая цитотоксичность (СОС); связывание Рс-рецептора; антитело-обусловленная клеточнозависимая циотоксичность (АОСС); фагоцитоз; понижающая регуляция рецепторов клеточной поверхности (например, В-клеточного рецептора, ВСК) и т.д.
В зависимости от аминокислотной последовательности константной области их тяжелых цепей полноразмерные антитела можно разделять на различные классы. Известно пять основных классов полноразмерных антител: 1дА, 1дО, 1дЕ, 1д0 и 1дМ, и некоторые из них дополнительно подразделяют на подклассы (изотипы), например 1д01, 1д02, 1д03, 1д04, 1дА и 1дА2. Константные области тяжелых цепей, соответствующие различным классам антител, обозначают соответственно как α, δ, ε, γ и μ. Строение субъединиц и трехмерные конфигурации различных классов иммуноглобулинов хорошо известны.
В контексте настоящего описания понятие биологическая активность моноклонального антитела относится к способности антитела связываться с антигеном и обусловливать поддающийся измерению биологический ответ, который можно оценивать ίη νίίτο или ίη νίνο. Указанная активность может представлять собой антагонистическую (например, если антитело представляет собой антитело к НЕК2) или агонистическую активность. В случае пертузумаба согласно одному из вариантов осуществления изобретения понятие биологическая активность относится к способности включенного в композицию антитела ингибировать пролиферацию клеточной линии человеческого рака молочной железы МОА-МВ-175-УН.
Понятие моноклональные антитела в контексте настоящего описания относится, в частности, к так называемым химерным антителам, в которых часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующим последовательностям антител, выведенным из конкретных видов или принадлежащих к конкретному классу или подклассу антител, а остальная цепь(и) идентична(ы) или гологична(ы) соответствующим последовательностям антител, выведенным из других видов или принадлежащих к другому классу или подклассу антител, а также фрагментам указанных антител, если они обладают требуемой биологической активностью (υδ 4816567 и Моткоп еί а1., Ргос. Νηΐ1. Асаб. δα. И8А, 81, 1984, р. 6851-6855). Представляющие интерес согласно настоящему описанию химерные антитела включают приматизированные антитела, которые содержат антигенсвязывающие последовательности вариабельных областей, выведенные из примата, кроме человека (например, обезьян Старого Света, человекообразных обезьян), и последовательности человеческих константных областей.
Гуманизированные формы антител видов, кроме человека, (например, грызунов) представляют собой химерные антитела, которые содержат минимальные последовательности, выведенные из иммуноглобулина вида, кроме человека. Основная часть гуманизированных антител соответствует человеческим иммуноглобулинам (антитело-реципиент), в которых остатки из гипервариабельного участка реципиента заменены на остатки из гипервариабельного участка антитела видов, кроме человека (антителодонор), таких как мыши, крысы, кролики или приматы, кроме человека, обладающие требуемой специфичностью, аффинностью и активностью. В некоторых случаях остатки каркасного участка (РК) челове- 18 027553 ческого иммуноглобулина заменяют на соответствующие остатки иммуноглобулина видов, кроме человека. Кроме того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, которые не присутствуют в антителе-реципиенте или антителе-доноре. Эти модификации осуществляют для дальнейшего усовершенствования характеристик антитела. В целом, гуманизированное антитело должно содержать практически полностью по меньшей мере одну и, как правило, две вариабельные области, в которых все или практически все гипервариабельные петли соответствуют петлям иммуноглобулина видов, кроме человека, и все или практически все РК имеют последовательность человеческого иммуноглобулина. Гуманизированное антитело необязательно может содержать также по меньшей мере часть константной области (Рс) иммуноглобулина, как правило, человеческого иммуноглобулина. Более подробно см. у 1опе8 е! а1., №Циге 321, 1986, р. 522-525; ШесЬтапп е! а1., №Циге 332, 1988, р. 323-329 и Ргс81а, Сигг. Ор. §1тисБ Βίο1. 2, 1992, р. 593-596.
К гуманизированным антителам к НЕК2 относятся 1шМАЬ4И5-1. 1шМАЬ4И5-2. ЬиМАЬ4И5-3, 1шМАЬ4И5-4. 1шМАЬ4И5-5, 1шМАЬ4И5-6, 1шМАЬ4И5-7 и 1шМАЬ4И5-8 или трастузумаб (НЕКСЕРТГЫ™), которые представлены в табл.3 υδ 5821337; гуманизированное антитело 520С9 (νθ 93/21319) и гуманизированное антитело 2С4, например пертузумаб, дополнительное описание которых представлено ниже.
В контексте настоящего описания понятия трастузумаб, НЕКСЕРТГЫ™ и 1шМАЬ4И5-8 относятся к антителу к эпитопу 4Ό5 НЕК2. Указанное антитело предпочтительно содержит аминокислотные последовательности легких и тяжелых цепей, представленные, например, на фиг. 14 в νθ 2006/044908.
Эпитоп 4Ό5 представляет собой область внеклеточного домена НЕК2, с которой связываются антитело к 4Ό5 (АТСС СКЬ 10463) и трастузумаб. Этот эпитоп примыкает к трансмембранному домену НЕК2 и находится внутри домена IV НЕК2. Для скрининга антител, которые связываются с эпитопом 4Ό5, можно осуществлять стандартный анализ перекрестной блокады, описанный в АпБЬоШез А ЬаЬота1огу Мапиа1, изд-во СоМ Бртшд НагЬог ЬаЪога1огу, под ред. Нат1оте и Όπνίά Ьапе, 1988. В альтернативном варианте можно осуществлять эпитопное картирование для оценки того, связывается ли антитело с эпитопом 4Ό5 НЕК2 (например, любой один или несколько остатков в области, простирающейся примерно от остатка 529 до примерно остатка 625 включительно, НЕК2). Эпитоп 7С2/7Р3 представляет собой область на аминоконце внутри домена I внеклеточного домена НЕК2, с которой связываются антитела 7С2 и/или 7Р3. Для скрининга антител, которые связываются с эпитопом 7С2/7Р3, можно осуществлять стандартный анализ перекрестной блокады, описанный в АпРЬоФек, А БаЬогаЮгу Мапиа1, под ред. Наг1о\у и Όπνίά Ьапе, изд-во СоМ Брппд НагЬог ЬаЬога1огу, 1988. В альтернативном варианте можно осуществлять эпитопное картирование для оценки того, связывается ли антитело с эпитопом 7С2/7Р3 НЕК2 (например, любой один или несколько остатков в области, простирающейся примерно от остатка 22 до примерно остатка 53 НЕК2).
В контексте настоящего описания понятия пертузумаб и гНиМЛЬ 2С4 относятся к антителу, которое связывается с эпитопом 2С4, и предпочтительно содержит аминокислотные последовательности вариабельных областей легких и тяжелых цепей, описанные в νθ 2006/044908, более предпочтительно эти понятия относятся к гуманизированной версии 574 антитела 2С4, которая представлена на фиг. 2 в νθ 2006/044908.
Эпитоп 2С4 представляет собой область внеклеточного домена НЕК2, с которой связывается антитело 2С4. Для скрининга антител, которые связываются с эпитопом 2С4, можно осуществлять стандартный анализ перекрестной блокады, описанный в Лηΐ^Ъοά^е8, А БаЬогаЮгу Мапиа1, под ред. Наг1о\у и Ωηνίά Ьапе, изд-во Со1Ь 8ртш§ НагЬог БаЬога1огу, 1988. В альтернативном варианте можно осуществлять эпитопное картирование для оценки того, связывается ли антитело с эпитопом 2С4 НЕК2. Эпитоп 2С4 содержит остатки из домена II во внутриклеточном домене НЕК2. 2С4 и пертузумаб связываются с внеклеточным доменом НЕК2 в области стыка доменов I, II и III (РтапкПп е! а1., Сапсег Се11 5, 2004, р. 317328).
Ингибирующий рост агент в контексте настоящего описания относится к соединению или композиции, которое/которая ингибирует рост клетки, прежде всего экспрессирующей НЕК раковой клетки, либо ш νίΙΐΌ, либо ш угуо. Так, ингибирующий рост агент может представлять собой агент, который значительно снижает процент экспрессирующих НЕК клеток на δ-фазе. Примерами ингибирующих рост агентов являются агенты, которые блокируют этапы развития клеточного цикла (отличные от δ-фазы), например агенты, индуцирующие приостановку 01-фазы и приостановку М-фазы. Классическими блокаторами М-фазы являются алкалоиды винка (барвинка) (винкристин и винбластин), таксаны и ингибиторы !оро II, такие как док доксорубицин, эпирубицин, даунорубицин, этопозид и блеомицин. Те агенты, которые приостанавливают 01-фазу, распространяют своё действие также на приостановку δ-фазы, например, ДНК-алкилирующие агенты, такие как тамоксифен, преднизон, дакарбазин, мехлоретамин, цисплатин, метотрексат, 5-фторурацил и ага-С. Дополнительную информацию можно почерпнуть из следующей публикации: Т1е Мо1еси1аг Ва818 о£ Сапсег, под ред. МепПеПоИп и !8гае1, глава 1, озаглавленная Се11 сус1е теди1аПоп, опсодепе8, апП апПпеор1а8Пс Птид8, Митакат1 и др. (изд-во νΒ δί-πιπώ^: РЫ1аПе1рШа, 1995), см., прежде всего с. 13.
- 19 027553
Примерами рост-ингибирующих антител являются антитела, которые связываются с НЕК2 и ингибируют рост раковых клеток, для которых характерна сверхэкспрессия НЕК2. Предпочтительные ростингибирующие антитела к НЕК2 ингибируют рост опухолевых клеток молочной железы 8К-ВК-3 в клеточной культуре больше чем на 20% и предпочтительно больше чем на 50% (например, от примерно 50% до примерно 100%) при концентрации антитела примерно от 0,5 до 30 мкг/мл, когда ингибирование роста определяют через 6 дней после обработки клеток линии 8К-ВК-3 антителом (см. И8 5677171, выданный 14 октября 1997 г.). Предпочтительным рост-ингибирующим антителом является гуманизированный вариант мышиного моноклонального антитела 4Ό5, например трастузумаб.
Понятие лечение относится как к терапевтическим, так и профилактическим или превентивным мерам. К нуждающимся в лечении индивидуумам относятся как уже страдающие заболеванием индивидуумы, так и индивидуумы, у которых требуется предупреждать болезнь. Таким образом, пациент, подлежащий лечению, может представлять собой пациента, у которого заболевание уже диагностировано или который может быть предрасположен, или который обладает чувствительностью к заболеванию.
Понятие цитотоксический агент в контексте настоящего описания относится к субстанции, которая ингибирует или предотвращает функцию клеток и/или вызывает разрушение клеток. Под понятие подпадают радиоактивные изотопы (например, Αΐ211, I131, I125, Υ90, Ке186, Ке188, 8т153, В1212, Р32 и радиоактивные изотопы Ьи), химиотерапевтические средства и токсины, такие как низкомолекулярные токсины или обладающие ферментативной активностью токсины бактериального, грибного, растительного или животного происхождения, включая их фрагменты и/или варианты. Химиотерапевтическое средство представляет собой химическое соединение, которое можно применять для лечения рака. Примерами химиотерапевтических средств являются алкилирующие средства, такие как тиотепа и циклофосфамид ^ΥΤΟΧΑΝ™); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, такие как алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилоломеларнин; ацетогенины (прежде всего буллатацин и буллатацинон); дельта-9-тетрагидроканнабинол (дронабинол, ΜΑКЕNО^™); бета-лапахон; лапахол; колхицины; бетулиновая кислота; камптотецин (включая синтетические аналоги топотекан (НΥСΑΜΤIN™), СРТ-11 (иринотекан, САМРТО8АК™), ацетилкамптотецин, скополектин и 9-аминокамптотецин); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая его синтетические аналоги адозелезин, карзелезин и бизелезин); подофиллотоксин; подофиллиновая кислота; тенипозид; криптофицины (прежде всего криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги К\У-2189 и СВ1-ТМ1); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктиин; спонгистатин; азотные аналоги горчичного газа, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, гидрохлорид оксида мехлоретамина, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфанид, урациловый аналог горчичного газа; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимустин; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеамицин, прежде всего калихеамицин гамма 11 и калихеамицин омега 11, см., например, Адиете, СЬет. Ιηΐ1. Ей. Еид1., 33, 1994, р. 183-186)); динемицин, включая динемицин А; эсперамицин; а также неокарциностатина хромофор и родственные хромопротеиновые энедииновые антибактериальные хромофоры), аклациномицины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицины, карабицин, карминомицин, карцинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-Ь-норлейцин, доксорубинцин (ΑΌΡΙΑΜΥΟΝ™), морфолинодоксорубицин, цианморфолинодоксорубицин, 2-пирролинодоксорубицин, доксорубицин · НС1 для инъекций в виде липосом (ООХ1Ь™), липосомальный доксорубицин ТЬС Ό-99 (ΜΥОСЕΤ™), пэгилированный липосомальный доксорубицин (САЕЬ-ΥΧ™) и дезоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат, гемцитабин СЕМ2АК™), тегафур (ИРТОКАЬ™), капецитабин (ХЕЬООА™), эпотилон и 5-фторурацил (5-ФУ); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; антиадренальные средства, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; пополнитель фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамида гликозид; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бизантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элфорнитин; эллиптиния ацетат; этоглуцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидаинин; майтанзиноиды, такие как майтанзин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; 2-этилгидразид; прокарбазин; полисахаридный комплекс Р8КЬ™(фирма Ш8 №Цига1 Ргойис1к, Юджин, шт. Орегон); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2трихлортриэтиламин; трихотецены (прежде всего токсин Т-2, верракурин А, роридин А и ангвидин); уретан; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид
- 20 027553 (Ага-С); тиопета; таксоид, например, паклитаксел (ТАХОЬ™), композиция паклитаксела, сконструрованная на основе наночастиц альбумина (АΒКАXАNЕ™) и доцетаксел (ТАХОТЕКЕ™); хлорамбуцил; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин, оксалиптин и карбоплатин; алкалоиды винка, которые препятствуют полимеризации тубулина при образовании микротрубочек, включая винбластин (УЕЬВАК™), винкристин (ОNСОVIN™), виндезин (ЕЬПШГКЕ™, ΕΙΡΌΗδΙΝ™) и винорелбин ЩАУЕЬВГОЕ™); этопозид (УР-16); ифосфамид; митоксантрон; леуковорин; новантрон; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; ибандронат; ингибитор топоизомеразы КР8 2000; дифторметилорнитин (ОМРО); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота, включая бексаротен (ТАКОКЕТГО™); бисфосфонаты, такие как клодронат (например, ВО№РО8™ или О8ТАС™), этидронат (ОГОКОСАЬ™), ΝΞ- 58095, золедроновая кислота/золедронат ПОМЕТА™), алендронат (РО8АМА1Х™), памидронат (АКЕП1А™), тилудронат (8КЕЬГО™) или ризедронат (АСТОКЕЬ™); троксацитабин (1,3-диоксолановый аналог нуклеозида цитозина); антисмысловые олигонуклеотиды, прежде всего, ингибирующие экспрессию генов путей передачи сигналов аномальной пролиферации клеток, такие, например, как РКС-альфа, Ка£, Н-Как, и рецептора эпидермального фактора роста (ЕОР-К); вакцины, такие как вакцина ТНЕКАТОРЕ™ и вакцины для генной терапии, например, вакцина АЬЬОУЕСТЩ™, вакцина ЬЕИУЕСТГО™ и вакцина УАХГО™; ингибитор топоизомеразы 1 (например, ЬиКТОТЕСАК™); гтКН (например, АВАКЕЫХ™); ВАУ439006 (сорафениб; фирма Вауег); δυ-11248 (фирма РП/ег); перифозин, ингибитор СОХ-2 (например, целекоксиб или эторикоксиб), ингибитор протеосом (например, Ρδ341); бортезомиб (УЕЬСАОЕ™); СС1-779; типифарниб (К1 1577); орафениб, АВТ510; ингибитор
Вс1-2, такой как облимерсен натрия (ОЕNАδЕNδЕ™); пиксантрон; ингибиторы ЕОРК (см. определение ниже); ингибиторы тирозинкиназ (см. определения ниже); и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанных средств; а также комбинации двух или большего количества указанных средств, такие как СНОР (сокращенное обозначение комбинированной терапии на основе циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизолона) и РОЬРОХ (сокращенное обозначение схемы лечения на основе оксалиплатина (ЕЬОХАТГО™) в сочетании с 5-ФУ и леуковорином).
Под указанное определение подпадают также антигормональные средства, действие которых направлено на регулирование или ингибирование гормонального воздействия на опухоли, такие как антиэстрогены, отличающиеся смешанным агонистическим/антагонистическим профилем, такие как тамоксифен ЩОЬУАОЕХ™), 4-гидрокситамоксифен, торемифен (РАКЕТОК1™), идоксифен, дролоксифен, ралоксифен (ЕУТБТА™), триоксифен, кеоксифен, и селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов ^ЕКМ), такие как δЕКМ3; чистые антиэстрогены, не обладающие агонистическими свойствами, такие как фулвестрант (РАδ^О^ЕX™) и ЕМ800 (каждый из указанных агентов может блокировать димеризацию эстрогенного рецептора (ЕК), ингибировать ДНК-связывание, повышать круговорот ЕК и/или подавлять уровни ЕК); ингибиторы ароматазы, включая стероидные ингибиторы ароматазы, такие как форместан и эксеместан (АКОМАδIN™), и нестероидные ингибиторы ароматазы, такие как анастразол (АК1МГОЕХ™), летрозол (РЕМАКА™) и аминоглутетимид, и другие ингибиторы ароматазы, такие как ворозол (К1УЫОК™), мегестрола ацетат (МЕОАδЕ™), фадрозол, имидазол; агонисты релизинг-гормона лютеинизирующего гормона, такие как леупролид (ЬиРКОК™ и ЕЫОАКЭ™), гозерелин, бусерелин и триптерелин; половые стероиды, включая прогестины, такие как мегестрола ацетат и медроксипрогестерона ацетат, эстрогены, такие как диэтилстилбестрол и премарин, и андрогены/ретиноиды, такие как флуоксместрон, полностью транс-ретиноевая кислота и фенретидин; онапристон; антипрогестероны; понижающие регуляторы эстрогенового рецептора (ЕКЭ); антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид и бикалутамид; тестолактон; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанных средств; а также комбинации двух или большего количества указанных средств.
В контексте настоящего описания понятие лекарственное средство, мишенью которого является ЕОРК относится к терапевтическому средству, которое связывается с ЕОРК и необязательно ингибирует активацию ЕОРК. Примерами таких средств являются антитела и низкомолекулярные соединения, которые связываются с ЕОРК. Примерами связывающихся с ЕОРК антител являются МАЪ 579 (АТСС СКЬ НВ 8506), МАЪ 455 (АТСС СКЬ НВ8507), МАЪ 225 (АТСС СКЬ 8508), МАЪ 528 (АТСС СКЬ 8509) (см. υδ 4943533 на имя Мепбе1коЬп и др.) и их варианты, такие как химеризованное антитело 225 (С225 или цетуксимаб; ЕКВ1ТиХ™) и реконструированное человеческое антитело 225 (Н225) (см. \УО 96/40210 на имя фирмы 1тс1опе δук!ет5 1пс.); антитела, которые связываются смутантом типа ΙΙ ЕОРК (υδ 5212290); гуманизированные и химерные антитела, которые связываются с ЕОРК, описанные в υδ 5891996; и человеческие антитела, которые связываются с ЕОРК, такие как АВХ-ЕОР (см. \УО 98/50433 на имя фирмы АЪдетх). Антитело к ЕОРК можно конъюгировать с цитотоксическим агентом с получением иммуноконъюгата (см., например, ЕР-А-659439 на имя фирмы Мегск Ра!еп! ОтЪН). Примерами низкомолекулярных соединений, которые связываются с ЕОРК, являются ΖΌ 1839 или гефитиниб (IКЕδδА™; фирма Ак!га Ζеηеса), СР-358774 или эрлотинибхНС1 (ТАКСЕУА™ фирмы Оеηеη!есЬ/КοсЬе/ОδI) и АО1478, АО1571 (δυ 5271; фирма διι^π). Ингибитор тирозинкиназы представляет собой молекулу, которая ингибирует в определенной степени тирозинкиназную активность ти- 21 027553 розинкиназы, например, рецептора НЕК. Примерами указанных ингибиторов являются отмеченные в предыдущем разделе лекарственные средства, мишенью которых является ЕОРК, а также низкомолекулярный ингибитор тирозинкиназы НЕК2, такой как ТАК165, поступающий в продажу от фирмы Такеба, ингибиторы НЕК двойного действия, такие как ЕКВ-569 (поступает в продажу от фирмы ХУуеПЛ который главным образом связывается с ЕОРК, но ингибирует клетки, в которых происходит сверхэкспрессия как НЕК2, так и ЕОРК, ОХУ572016 (поступает в продажу от фирмы О1ахо), оральный ингибитор тирозинкиназ НЕК2 и ЕОРК и РК1-166 (поступает в продажу от фирмы Ыоуагйк); пан-ингибиторы НЕК, такие как канертиниб (С1-1033; фирма РЬагтааа); ингибиторы КаР-1, такие как антисмысловой агент 1818-5132, поступающий в продажу от фирмы 1818 РЬагтасеибса1к, который ингибирует передачу сигналов КаР-1; ингибиторы тирозинкиназ (ТК), мишенью которых не является НЕК, такие как имитиниба мезилат (О1ееуес™), поступающий в продажу от фирмы ЫоуагШ; ингибитор регулируемой внеклеточными сигналами киназы I из семейства МАРК, такой как С1-1040 (поступает в продажу от фирмы РЬагтааа); хиназолины, такие как РЭ 153035,4-(3-хлоранилино)хиназолин; пиридопиримидины; пиримидопиримидины; пирролопиримидины, такие как СОР 59326, СОР 60261 и СОР 62706; пиразолопиримидины, 4-(фениламино-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидины; куркумин (диферулоилметан, 4,5-бис-(4фторанилино)фталимид); тирфостины, содержащие нитротиофеновые фрагменты; РЭ-0183805 (фирма Уагпег-ЬагпЬег); антисмысловые молекулы (например, связывающиеся с кодирующей НЕК нуклеиновой кислотой); хиноксалины (И8 5804396); трифостины (И8 5804396); ΖΌ6474 (фирма АкКа 2епеса); РТК787 (фирма ЫоуаШ8/8сЬегш§ АО); пан-ингибиторы НЕК, такие как С1-1033 (фирма РП/ег); аффинитак (1818 3521; фирма Ык/ЪЫу); РК1 166 (фирма Ыоуагйк); ОХУ2016 (фирма О1ахо 8т11НКПпе); С1-1033 (фирма РП/ег); ЕКВ-569 (фирма ХУуе1Ь); семаксиниб (фирма 8идеп); ΖΌ6474 (фирма АкЬ^епеса); РТК-787 (фирма ЫоуаШк/8сЬегш§ АО); 1ЫС-1С11 (фирма 1тс1опе); или агенты, описанные в любом из следующих опубликованных патентов: И8 5804396; ХУО 99/09016 (на имя фирмы Атепсап Суапат1б); ХУО 98/43960 (на имя фирмы Атепсап Суапат1б); ХУО 97/38983 (на имя фирмы ХУагпег ЬатЬей); ХУО 99/06378 (на имя фирмы ХУагпег ЬатЬей); ХУО 99/06396 (на имя фирмы ХУагпег ЬатЬей); ХУО 96/30347 (на имя фирмы РП/ег 1пс); ХУО 96/33978 (на имя фирмы Ζепеса); ХУО 96/3397 (на имя фирмы Ζепеса) и ХУО 96/33980 (на имя фирмы Ζепеса).
Антиангиогенное средство представляет собой соединение, которое блокирует или оказывает определенное интерферирующее воздействие на развитие кровеносных сосудов. Антиангиогенный фактор может представлять собой, например, низкомолекулярное соединение или антитело, которое связывается с фактором роста или рецептором фактора роста, участвующим в ускорении ангиогенеза. В контексте настоящего описания предпочтительным антиангиогенным фактором является антитело, которое связывается с сосудистым эндотелиальным фактором роста (УЕОР), такое как бевасизумаб (АУА8Т1Ы™).
Понятие цитокин является родовым названием белков, которые высвобождаются одной клеточной популяцией и оказывают воздействие на другую клетку в качестве межклеточных медиаторов. Примерами указанных цитокинов являются лимфокины, монокины и традиционные полипептидные гормоны. К цитокинам относятся такие ростовые гормоны, как человеческий гормон роста, Ν-метионилированный человеческий гормон роста и бычий гормон роста, гормон паращитовидных желез, тироксин, инсулин, проинсулин, релаксин; прорелаксин, гликопротеиновые гормоны, такие как фолликулостимулирующий гормон (ФСГ), тиреотропный гормон (ТТГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ), гепатоцитарный фактор роста; фактор роста фибробластов, пролактин, плацентарный лактоген, фактор некроза опухолей α и β, ингибирующее вещество Мюллера, мышиный гонадотропинассоциированнй пептид, ингибин; активин, сосудистый эндотелиальный фактор роста, интегрин, тромбопоэтин (ТРО), факторы роста нервов, такие как NОР-β, тромбоцитарный фактор роста; трансформирующие факторы роста (ТОР), такие как ТОР-α и ТОР-β, инсулиноподобный фактор роста-1 и -II, эритропоэтин (ЕРО), остеоиндуктивные факторы; интерфероны, такие как интерферон-α, -β и -γ, Колониесимулирующие факторы (С8Р), такие как С8Р макофагов (М-С8Р), С8Р гранулоцитов-микрофагов (ОМ-С8Р) и С8Р гранулоцитов (О-С8Р), интерлейкины (1Ь), такие как 1Ь-1, 1Ь-1а, 1Ь-2, 1Ь-3, 1Ь-4, 1Ь-5, 1Ь-6, 1Ь-7, 1Ь-8, 1Ь-9, 1Ь-10, 1Ь-11, 1Ь-12, фактор некроза опухолей, такой как ТИР-а или ТИР-в, и другие полипептидные факторы, включая ЫР (фактор, ингибирующий миграцию лейкоцитов) и набор лигандов (КЬ). В контексте настоящего описания понятие цитокин относится к белкам, выведенным из встречающихся в естественных условиях источников или из рекомбинантной клеточной культуры, и к биологически активным эквивалентам нативных последовательностей цитокинов.
Понятие эффективное количество относится к количеству, обеспечивающему требуемое действие. В случае присутствия фермента гиалуронидазы в качестве ингредиента композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, эффективное количество представляет собой количество, необходимое для повышения диспергирования и абсорбции вводимого совместно антитела к НЕК2, так, чтобы антитело к НЕК2 могло оказывать указанное выше терапевтическое действие. В случае фармацевтической лекарственной субстанции оно представляет собой количество действующего вещества, эффективное в отношении лечения заболевания у пациента. Когда заболевание представляет собой рак, эффективное количество лекарственного средства может снижать количество раковых клеток; уменьшать размер опухоли; ин- 22 027553 гибировать (т.е. в определенной степени замедлять и предпочтительно прекращать) инфильтрацию раковых клеток в периферические органы; ингибировать (т.е. в определенной степени замедлять и предпочтительно прекращать) метастазирование опухоли; ингибировать в определенной степени рост опухоли; и/или облегчать в определенной степени один или несколько ассоциированных с раком симптомов. Для того чтобы лекарственное средство могло в определенной степени предупреждать рост и/или уничтожать существующие раковые клетки, оно должно обладать цитостатическим и/или цитотоксическим действием. Эффективное количество может удлинять период жизни без прогрессирующего развития заболевания, приводить к целевому ответу на лечение (включая частичный ответ, РК, или полный ответ, СК), повышает общую продолжительность жизни и/или облегчать один или несколько симптомов рака.
Антитело, которое включают в состав композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, предпочтительно является практически чистым и желательно практически гомогенным (т.е. не содержит белков-загрязнителей и т.д., при этом фермент гиалуронидазы в композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, не рассматривается как белок-загрязнитель моноклонального антитела к НЕК2, предлагаемого в настоящем изобретении). Понятие практически чистое антитело означает, что оно входит в композицию антитела в количестве, составляющем по меньшей мере примерно 90 мас.% в пересчете на общую массу композиции, предпочтительно по меньшей мере примерно 95 мас.%. Практически гомогенное антитело означает, что оно входит в композицию антитела в количестве, составляющем по меньшей мере примерно 99 мас.% в пересчете на общую массу композиции.
Для лучшего понимания изобретения оно проиллюстрировано с помощью представленных ниже примеров. Однако их не следует рассматривать в качестве ограничивающих объем изобретения. Все процитированные литературные и патентные публикации включены в настоящее описание в качестве ссылки.
Примеры дополнительно проиллюстрированы с помощью прилагаемых чертежей, на которых продемонстрированы следующие экспериментальные результаты:
на фиг. 1 - данные о стабильности композиций А-Е (см. табл. 1 ниже) после 8 недель хранения, касающиеся низкомолекулярных (ЬМУ) субстанций, которые получали с помощью гель-фильтрацииЖХВР. Как видно из чертежа, содержащие Р§20 композиции А, В и Д отличались несколько более высокой стабильностью по сравнению с содержащими Р§80 композициями Б, Г и Е при хранении при 30°С;
на фиг. 2 - данные о стабильности композиций А-Е (см. табл. 1, ниже) после 8 недель хранения, касающиеся высокомолекулярных (НМУ) субстанций, которые получали с помощью гель-фильтрацииЖХВР. Как видно из чертежа, в содержащих трегалозу без добавления хлорида натрия композициях А и Б обнаружены меньшие количества НМУ после хранения в течение 8 недель;
на фиг. 3 - данные о стабильности после 8 недель хранения, касающиеся мутности. Как видно из чертежа, для содержащих трегалозу композиций форм А и Б характерна невысокая мутность; в то время как содержащие Ν;·ιΟ композиции В-Е отличались существенно более высокой мутностью. Для композиций Д и Е, которые содержали и трегалозу, и №С1, характерна промежуточная степень мутности. Никакого значимого повышения мутности не обнаружено при хранении в течение 8 недель;
на фиг. 4 - данные о вязкости жидких композиций А-Е (см. табл. 1 ниже) при измерении с помощью конусно-пластинчатого вискозиметра при температуре окружающей среды. Все композиции имели низкую вязкость, позволяющую использовать их для подкожной инъекции.
Примеры
Предлагаемые в изобретении содержащие антитело к НЕК2 композиции, предназначенные для подкожного введения, создавали с учетом представленных ниже экспериментальных результатов с использованием общей методологии получения и аналитических методов и анализов, которые изложены далее.
А) Получение входящих в композицию компонентов.
Трастузумаб получали с помощью методов, хорошо известных для получения рекомбинантных белков. Генетически сконструированную линию клеток яичника китайского хомячка (СНО), для создания которой использовали метод, описанный в ЕР-В-590058, размножали в культуре клеток из мастербанка клеток. Из жидкой культуры клеток собирали моноклональное антитело трастузумаб и очищали с помощью основанной на применении иммобилизованного белка А аффинной хроматографии, катионообменной хроматографии (например, 8Р-Сефароза ЕЕ), фильтрации для удаления вирусных загрязнителей (например используя ПВДФ-мембрану, поступает в продажу от фирмы МШроте под названием Упекоке-фильтры) с последующей анионообменной хроматографией (например, О-сефароза ЕЕ) и ультрафильтрацией/диафильтрацией. Для приготовления композиций, представленных в этих примерах, трастузумаб применяли в концентрации примерно 100 мг/мл в 20 мМ гистидиновом буфере, значение рН примерно 6,0.
гНиРН20 получали с помощью методов, хорошо известных для получения рекомбинантных белков. Этот процесс начинали с оттаивания клеток из рабочего банка клеток (УСВ) или мастер-банка клеток (МСВ) и размножали в культуре клеток в сериях вращающихся колб с последующим размножением в биореакторе. После завершения стадии получения жидкую клеточную культуру осветляли фильтрацией и затем обрабатывали растворителем/детергентом для инактивации вирусов. Затем белок очищали путем осуществления серий процессов хроматографии на колонках для удаления примесей, связанных с осуще- 23 027553 ствлением процесса и связанных с продуктом. Осуществляли стадию фильтрации вирусов и затем полученную после фильтрации партию продукта концентрировали в конечном буфере: 10 мг/мл гНиРН20 в 20 мМ Ь-гистидин/НСРбуфере, рН 6,5, 130 мМ №С1, 0,05% (мас./об.) полисорбата 80. Партию гНиРН20 хранили при температуре ниже -70°С.
Другие эксципиенты, применяемые в композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, широко используют на практике и известны специалисту в данной области. Поэтому нет необходимости обсуждать их подробно.
Предлагаемые в изобретении жидкие композиции лекарственного средства, предназначенные для подкожного введения, создавали согласно описанному ниже методу.
Пример 1. Приготовление жидких композиций.
Для приготовления жидких композиций трастузумаба осуществляли обмен буфера на буфер для диафильтрации, содержащий требуемую буферную композицию, и при необходимости осуществляли концентрирование путем диафильтрации до получения концентрации антитела примерно 150 мг/мл. После завершения процедуры диафильтрации к раствору антитела добавляли эксципиенты (например, трегалозу, гНиРН20) в виде маточных растворов. Затем добавляли поверхностно-активное вещество в виде 50-200-кратного маточного раствора. И, наконец, концентрацию белка доводили буфером до достижения конечной концентрации трастузумаба, составляющей примерно 110, 120 или 130 мг/мл, указанной ниже для конкретных композиций.
Все композиции стерилизовали фильтрацией через 0,22 мкм фильтры с низкой способностью связывать белки и фильтровали в асептических условиях в стерильные 6-миллилитровые стеклянные пузырьки, снабженные покрытыми ЕТРЕ (сополимер этилена и тетрафторэтилена) резиновыми пробками и зажимными алюминиевыми крышками. Объем заполнения составлял примерно 3,0 мл. Эти композиции хранили в различных климатических условиях (5, 25 и 30°С) в течение различных интервалов времени и подвергали стрессу путем встряхивания (1 неделя с частотой встряхивания 200 мин, при 5 и 25°С) и стрессу методом замораживания-оттаивания. Образцы анализировали до и после воздействия указанных вариантов стресса с помощью следующих аналитических методов:
1) УФ-спектрофотометрия;
2) гель-фильтрация (8ЕС);
3) ионообменная хроматография (1ЕС);
4) определение мутности раствора;
5) определение видимых частиц; и
6) определение активности гНиРН20.
УФ-спектроскопию, применяемую для определения содержания белков, осуществляли с использованием УФ-спектрофотометра Регкт Е1тег А35 при диапазоне длин волн от 240 до 400 нм. Образцы чистого белка разводили до концентрации примерно 0,5 мг/мл с помощью соответствующего данной композиции буфера. Концентрацию белка рассчитывали согласно уравнению 1
Я(280)~ Л(320)*</>. разе.
Уравнение!: Содержание белка
Абсорбцию УФ-света при 280 нм корректировали с учетом рассеяния света при 320 нм и умножали на фактор разведения (ф. разв.), который определяли на основе взвешенных масс и плотностей чистого образца и буфера для разведения. Числитель делили на произведение длины пути кюветы (б) на коэффициент экстинкции (ε).
Для обнаружения растворимых высокомолекулярных субстанций (агрегаты) и низкомолекулярных продуктов гидролиза (ΡΜΥ) в композициях применяли гель-фильтрацию (8ЕС). Метод осуществляли с помощью устройства \ка1ег5 АШапсе 2695 НРЬС с детектором двойной абсорбции типа \ка1ег5 \Υ2487 и снабженного двумя расположенными в ряд колонками размера 4,6x300 То5оНаа5 Т8К Ое1 8ирег8\\’3000. Продукты, представляющие собой интактные мономеры, агрегаты и продукты гидролиза, разделяли с применением изократического профиля элюции, используя 50 мМ фосфат натрия, 420 мМ перхлорат натрия, рН 7,0 в качестве подвижной фазы, и осуществляли обнаружение при длине волны 280 нм.
Ионообменную хроматографию (1ЕС) осуществляли для обнаружения продуктов химического расщепления, изменяющих чистый заряд трастузумаба в композициях. Для этой цели трастузумаб расщепляли карбоксипептидазой В. Для осуществления метода использовали приемлемое устройство для ЖХВР, снабженное УФ-детектором (обнаружение при длине волны 214 нм), аналитическую катионообменную колонку Эюпех РгоРас™ АСХ-10 (4x250 мм). В качестве подвижных фаз А и Б использовали соответственно 10 мМ натрий-фосфатный буфер, рН 7,5 в Н2О и 10 мМ натрий-фосфатный буфер, рН 7,5 и 100 мМ ХаС! со скоростью потока 0,8 мл/мин.
Для оценки мутности опалесценцию определяли в РТИ (единица мутности по формазину), используя турбидиметр НАСН 2100ΑΝ при комнатной температуре.
- 24 027553
В образцах анализировали присутствие видимых частиц с помощью устройства для визуальной оценки ЗеМепаСег У90-Т.
Анализ т уИго фермента гиалуронидазы гНиРН20 использовали в качестве анализа активности. Этот анализ основан на образовании нерастворимого осадка при связывании гиалуронана (гиалуронат натрия) с катионным осадителем. Активность фермента определяли путем инкубации гНиРН20 с применяемым в качестве субстрата гиалуронаном и последующего осаждения нерасщепленного гиалуронана с помощью подкисленного сывороточного альбумина (лошадиная сыворотка). Мутность оценивали при длине волны 640 нм и снижение мутности в результате активности фермента в отношении субстрата гиалуронана использовали в качестве меры ферментативной активности. Процедуру осуществляли с использованием стандартной кривой, созданной на основе оценки разведений стандартного референсобразца гНиРН20, и активность образца определяли на основе этой кривой.
Другие эксперименты осуществляли с использованием следующих вариаций:
вариации значений рН от примерно 5,0 до примерно 6,0;
вариации содержания белка от примерно 110мг/мл до примерно 130 мг/мл;
вариации содержания поверхностно-активного вещества от примерно 0,02% до примерно 0,06%;
вариации концентрации стабилизатора (метионина) от примерно 5 до примерно 15 мМ.
Составы и результаты определения стабильности содержащих в качестве лекарственного продукта антитело к НЕК-2 жидких композиций (композиции А-Ш) представлены ниже в табл. 1, в которой использованы следующие сокращения:
йр = свободна от частиц; ейр = практически свободна от частиц; \уа1р = содержит небольшое количество частиц; Р/Т = замораживание/оттаивание; Зкд = встряхивание; пС = не определяли.
Указанные представленные ниже композиции свидетельствуют о том, что можно получать жидкие композиции с высокими концентрациями двух различных белков. Указанные композиции можно получать более легко и с меньшими затратами по сравнению с лифилизированными композициями. Кроме того, с указанными композициями проще обращаться, поскольку отсутствует необходимость в растворении лиофилизированного конечного продукта (восстановление) (являются готовыми к применению). Установлено, что композиции, указанные в табл. 1, 3 и 4, также пригодны для получения высококонцентрированной стабильной фармацевтической композиции обладающих фармацевтической активностью антител к НЕК2, в которой отсутствует фермента гиалуронидаза. Таким образом, одним из объектов настоящего изобретения являются также композиции, содержащие указанные ингредиенты, но в которых отсутствует фермент гиалуронидаза.
Таблица 1
Данные о составе и стабильности содержащих в качестве лекарственного продукта антитело к НЕК-2 жидких композиций, предлагаемых в изобретении
Композиция А.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 120 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,5, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 10 мМ метионин, 0,04% полисорбата 20, 12000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Гель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (рти) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜΑ (%) Мономер (%) ЬМА (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- Начало 111 0,4 98,9 0,7 60 15 10 5,0 йр 13613
8к§, 5°С 1 неделя ηά 0,4 98,7 0,9 ηά ηά ηά 5,2 Пр 13775
8к§,25°С 1 неделя ηά 0,4 98,7 0,9 60 11 12 5,7 йр 12053
Р/Т (5 циклов) ηά 0,4 98,7 0,9 ηά ηά ηά 6,0 ейр 12558
5°С 8 недель 105 0,4 98,5 ι,ι 60 15 11 4,8 йр 13204
21 неделя ηά 0,4 98,7 0,8 62 12 11 5,3 йр 14940
36 недель ηά 0,4 98,7 0,8 59 11 12 3,8 йр 12613
25°С 8 недель 106 0,5 98,3 1,2 53 8 19 4,7 йр 12176 .
21 неделя ηά 0,6 97,7 1,7 42 7 26 5,2 йр 13976
36 недель ηά 0,7 97,2 2,1 33 7 34 3,8 йр 12348
30°С 8 недель 105 0,6 97,8 1,6 45 6 26 4,4 йр 13294
21 неделя 107 0,8 96,3 2,9 33 6 25 5,5 йр ηά
- 25 027553
Композиция Б.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 120 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,5, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 10 мМ метионин, 0,06% полисорбата 80, 12000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (РТИ) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜΑ (%) Мономер (%) ЬМА (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- Начало 111 0,4 98,9 0,7 59 15 10 4,4 Пр 13293
5к§, 5°С 1 неделя ηά 0,4 98,7 0,9 ηά ηά ηά 5,2 Яр 13530
8к§, 25°С 1 неделя ηά 0,4 98,7 0,8 61 12 12 5,2 Γίρ 9390
Р/Т (5 циклов) ηά 0,4 98,7 0,9 ηά ηά ηά 5,5 Яр 12532
5°С 8 недель 109 0,4 98,7 0,9 60 15 11 5,1 Яр 13508
21 неделя ηά 0,5 98,8 0,8 ηά ηά ηά 5,3 Яр ηά
36 недель ηά 0,4 98,8 0,8 ηά ηά ηά 4,5 Яр ηά
25°С 8 недель 109 0,5 98,2 1,3 53 8 19 4,6 Яр ηά
21 неделя ηά 0,7 97,6 1,8 ηά ηά ηά 5,2 еЯр ηά
36 недель ηά 0,8 97,1 2,1 ηά ηά ηά 5,3 Яр ηά
30°С 8 недель 109 0,6 97,7 1,7 45 6 26 4,8 Яр 13394
21 неделя 107 0,9 96,2 2,9 ηά ηά ηά 5,3 Яр ηά
Композиция В.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 120 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,5, 130 мМ хлорид натрия, 10 мМ метионин, 0,04% полисорбата 20, 12000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Гель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (рти) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜΑ (%) Мономер (%) ЬМА (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- Начало 129 0,5 98,8 0,7 59 15 10 24,2 Яр 12355
8к§, 5°С 1 неделя ηά 0,5 98,6 0,9 Νά ηά ηά 26,0 Яр 13123
8к§,25°С 1 неделя ηά 0,5 98,5 0,9 60 12 11 25,3 Яр 12209
Р/Т (5 циклов) ηά 0,5 98,6 0.9 ηά ηά ηά 24,8 Яр 12576
5°С 8 недель 126 0,5 98,7 0,8 60 15 11 25,4 Яр 12463
21 неделя ηά 0,6 98,4 ι,ο 62 13 9 23,6 Яр 15409
36 недель ηά 0,6 98,6 0,8 59 12 12 26,3 Яр 13218
25°С 8 недель 125 0,7 98,0 1,3 54 9 18 25,0 Яр 13038
21 неделя ηά 0,9 97,5 1,6 42 9 22 24,3 Яр 14972
36 недель ηά 1,0 97,0 2,1 32 9 31 25,7 . ГГр 12028
зо°с 8 недель 125 0,8 97,6 1,6 46 8 25 23,0 Яр 12751
21 неделя 125 1,2 96,3 2,6 32 8 29 25.7 Яр ηά
Композиция Г.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 120 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,5, 130 мМ хлорид натрия, 10 мМ метионин, 0,06% полисорбата 80, 12000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Гель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (ΡΤϋ) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜΑ (%) Мономер (%) ЬМА (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 128 0,4 98,9 0,7 59 15 10 25,1 Яр 15178
5кд, 5°С 1 неделя ηά 0,5 98,6 0,9 ηά Νά ηά 24,1 еЯр 12201
5к§, 25°С 1 неделя ηά 0,6 98,5 0,9 60 12 11 25,4 еЯр 8311
Р/Т (5 циклов) ηά 0,5 98,6 0,9 ηά Νά ηά 24,8 еЯр 11906
5°С 8 недель 125 0,5 98,7 0,8 60 15 11 25,0 Яр 13238
21 неделя ηά 0,6 98,5 1,0 ηά Νά ηά 24,3 Яр ηά
36 недель ηά 0,6 98,6 0,8 ηά Νά ηά 26,1 Яр ηά
25°С 8 недель 125 0,7 98,1 1,2 54 9 18 23,4 Яр 12661
21 неделя ηά 0,9 97,3 1,8 ηά Νά ηά 24,5 Яр ηά
36 недель ηά 1,1 96,8 2,1 ηά Νά ηά 26,6 Яр ηά
зо°с 8 недель 124 0,9 97,5 1,7 45 8 25 23,7 Яр 12182
21 неделя 125 1,3 96,1 2,6 ηά Νά ηά 24,2 еЯр ηά
- 26 027553
Композиция Д.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 120 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,5, 105 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 65 мМ хлорид натрия, 10 мМ метионин, 0,04% полисорбата20, 12000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (ΡΤϋ) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
НМА (%) Мономер (%) ЬМА (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 128 0,4 98,9 0,7 59 15 10 16,6 Яр 13475
8к§, 5°С 1 неделя пб 0,5 98,6 0,9 пб пб пб 17.2 Яр 12363
8к§, 25°С 1 неделя пб 0,5 98,5 1,0 60 12 11 17,2 еЯр 12793
Р/Т (5 циклов) пб 0,5 98,6 0,9 пб пб пб 16,5 еЯр 12374
5°С 8 недель 125 0,5 98,7 0,8 60 15 11 16,9 Яр 13086
21 неделя пб 0,5 98,6 0,9 61 13 11 16,4 Яр 14896
36 недель пб 0,5 98,7 0,8 59 12 12 16,5 Яр 13321
25°С 8 недель 125 0,7 98,1 1,2 53 9 18 15,4 Яр пб
21 неделя пб 0,8 97,5 1,7 41 8 29 19.,2 йр 14730
36 недель пб 0,9 97,0 2,1 32 9 32 17,4 Яр 12028
30°С 8 недель 124 0,8 97,7 1,5 45 8 25 15,7 йр 11745
21 неделя 123 1,1 96,3 2,6 32 8 24 17,4 йр пб
Композиция Е.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 120 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,5, 105 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 65 мМ хлорид натрия, 10 мМ метионин, 0,06% полисорбата 80, 12000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (РТи) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
НМА (%) Мономер (%) ЬМА (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
начало 127 0,4 98,9 0,7 59 15 10 16,7 ейр 13069
5к§,5°С 1 неделя пб 0,5 98,6 0,9 пб пб пб 16,0 ' «Р 13188
5к§, 25°С 1 неделя пб 0,5 98,6 0,9 60 12 11 15,8 Яр 9764
Р/Т (5 циклов) пб 0,5 98,7 0,8 пб пб пб 18,5 Яр 11769
5°С 8 недель 125 0,5 98,7 0,8 60 15 11 16,5 Яр пб
21 неделя пб 0,6 98,6 0,9 пб пб пб 16,6 Яр пб
36 недель пб 0,6 98,7 0,8 пб пб пб 17,2 Яр пб
25°С 8 недель 125 0,7 98,1 1,2 53 9 18 17,4 Яр 13570
21 неделя пб 0,9 97,4 1,7 пб пб пб 16,4 Яр пб
36 недель пб 1,0 96,9 2,1 пб пб пб 18,3 Яр пб
зо°с 8 недель 124 0,8 97,5 1,7 45 8 25 16,2 Яр 11860
21 неделя 123 1,8 95,6 2,9 пб пб пб 16.1 Яр пб
Композиция Ж.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 120 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,5, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 10 мМ метионин, 0,04% полисорбата 20, и перед инъекций в нее добавляют гНИРН20 из партии, имеющий следующий состав: 10 мг/мл гНИРН20 в 20 мМ Н1з/гистидинНС1, рН 6,5, 130 мМ ЫаС1, 0,05% (мас./об.) полисорбата 80
Условия хранения Продолжи-тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (рти) Видимые частицы
НМА (%) Мономер (%) ЬМА (%) Основной ПИК (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- Начало 122 0,3 99,7 пб 71 11 7 4,2 Яр
5°С 4 недели пб 0,3 99,6 пб 60 11 11 пб пб
12 недель 118 0,4 99,6 <0,3 70 10 7 4,8 Яр
24 недели 121 0,4 99,5 пб 68 9 9 4,1 Яр
36 недель пб 0,5 99,5 0.1 67 8 10 пб пб
15°С 4 недели пб 0,4 99,6 пб 70 10 7 пб пб
12 недель 121 0,5 99,4 <0,3 66 8 11 4,3 Яр
24 недели 121 0,5 99,3 <0,3 59 7 17 4,4 Яр
36 недель пб 0,6 99,2 0,2 53 7 22 пб пб
25°С 4 недели пб 0,5 99,5 <0,3 66 7 11 пб пб
12 недель 121 0,6 97,2 2,1 53 6 22 4,2 Яр
24 недели 122 0,7 98,0 1.4 39 6 32 4,2 Яр
- 27 027553
Композиция З.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 110 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 5 мМ метионин, 0,02% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (ΡΤϋ) Видимые частицы ΗΕ- активность (ед./мл)
ΗΜν (%) Мономер (%) ЬМАУ (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 111 0,6 98,7 0,8 69 12 6 3,9 ίΤρ 2081
5к§, 5°С 1 неделя ηά 0,6 98,7 0,7 68 12 6 3,9 ίϊρ 2406
5к§, 25°С 1 неделя ηά 0,7 98,6 0,7 68 10 7 3,8 ίϊρ ηά
Р/Т (5 циклов) ηά 0,7 98,7 0,7 68 12 6 3,8 «ρ 2167
5°С 8 недель ηά 0,6 98,8 0,6 69 10 8 4,0 ίίρ 2235
12 недель ПО 0,6 98,7 0.7 66 10 9 3,9 ίϊρ 1970
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
25°С 8 недель ηά 0,7 98,3 ι,ο 57 5 15 4,1 ίίρ 1891
12 недель 111 0,7 97,8 1,5 50 4 20 3,8 ίίρ 2079
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
40°С 8 недель ηά 1,4 94,1 4,5 31 3 30 4,1 ίίρ πά
12 недель 111 1,6 92,5 5,9 28 5 35 4,7 ίίρ ηά
Композиция И.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 110 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 6,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 5 мМ метионин, 0,02% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (ρτυ) Видимые частицы ΗΕ- активность (ед./мл)
ΗΜ\ν (%) Мономер (%) ЬМШ (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 111 0,8 98,5 0,7 69 12 7 4,7 βίίρ 1948
8кё, 5°С 1 неделя ηά 0,8 98,6 0,7 68 12 7 5.1 ίίρ 2672
5кё, 25°С 1 неделя ηά 0,8 98,6 0,7 67 11 8 4,7 ίίρ 1724
Р/Т (5 циклов) ηά 0.8 98,6 0,7 68 12 7 4.5 ίίρ 2507
5°С 8 недель ηά 0,8 98.6 0,6 68 11 8 4,5 ίίρ 1911
12 недель 112 0.8 98.5 0,7 65 11 10 4.7 ίίρ 2034
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
25°С 8 недель ηά 0,9 98,1 1,0 53 12 18 4.8 είίρ 1910
12 недель 111 1.0 97,8 1,2 45 12 21 4.9 ίίρ 2157
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
40°С 8 недель ηά 1,6 95,3 3,1 26 9 26 5.0 ίίρ ηά
12 недель 112 1.9 93,9 4,3 20 9 22 5.7 ίίρ ηά
Композиция К.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 110 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 5 мМ метионин, 0,06% полисорбата 20, 2000ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (Ρτυ) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜΨ (%) Мономер (%) ЬМ\У (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 111 0,6 98,7 0,7 69 12 6 3,7 ίίρ 2198
8кё,5°С 1 неделя ηά 0,6 98,6 0,7 68 12 6 4,3 βίίρ 2528
5кё, 25°С 1 неделя ηά 0,6 98,6 0,8 68 10 7 4,0 είίρ 1993
Р/Т (5 циклов) ηά 0,7 98,7 0,7 68 12 6 3.7 ίίρ 2256
5°С 8 недель ηά 0,6 98,8 0,6 68 10 8 4,1 ίίρ 2263
12 недель 111 0,6 98,6 0,8 66 10 9 3,9 ίίρ 2337
36 недель ηά . ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
25°С 8 недель ηά 0,7 98,3 1,0 56 5 15 4,0 ίίρ 1931
12 недель 111 0,7 97,9 1,4 50 4 20 4,0 Γίρ 2291
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
40°С 8 недель ηά 1,3 94,5 4,2 30 3 35 4,2 ίίρ ηά
12 недель 111 1,6 92,4 6,0 27 5 35 4,2 ίίρ ηά
- 28 027553
Композиция Л.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 110 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 6,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 5 мМ метионин, 0,06% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (Ρτυ) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜΨ (%) Мономер (%) ίΜΨ (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
начало 111 0,8 98,6 0,7 69 12 7 4,7 Пр 2258
Зк§, 5°С 1 неделя ηά 0,8 98,6 0,7 68 12 7 5,0 Пр 2680
5кд,25°С 1 неделя ηά 0,8 98,5 0,7 67 11 8 4,6 еНр 2049
Р/Т (5 циклов) ηά 0,8 98,6 0,7 69 12 7 4,8 Нр 2316
5°С 8 недель ηά 0,8 98,5 0,7 68 12 8 4,5 Пр 2132
12 недель 112 0,8 98,5 0,7 65 12 9 5,2 Нр 2260
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
25°С 8 недель ηά 0,9 98,3 0,8 53 12 18 4,5 Пр 1863
12 недель 112 1,0 97,9 1,2 46 12 21 4,7 Пр 1917
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
40°С 8 недель ηά 1,5 95.4 3,1 26 10 26 5,2 Пр ηά
12 недель 112 1,9 93.9 4,3 28 8 22 6,2 Пр ηά
Композиция М.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 110 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 15 мМ метионин, 0,02% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (ρτυ) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜΨ (%) Мономер (%) Ι,ΜΨ (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
начало 111 0,6 98,7 0,7 69 12 6 3,5 еНр 2301
Зкё, 5°С 1 неделя ηά 0,6 98,7 0,7 69 12 6 4,1 Пр 2574
5к§, 25°С 1 неделя ηά 0,6 98,7 0,7 68 10 7 4,1 Пр ηά
Р/Т (5 циклов) ηά 0,7 98,5 0,8 68 12 7 3,6 Пр 2435
5°С 8 недель ηά 0,6 98,8 0,6 68 10 7 3,8 «Ρ 2263
12 недель 111 0,6 98,7 0,7 67 10 8 3,8 Пр 1857
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
25°С 8 недель ηά 0,7 98,4 ι,ο 56 5 15 3.8 Пр 1919
12 недель 111 0,7 97,9 1,4 50 4 19 3,8 Пр 2106
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
40°С 8 недель ηά 1,3 94,2 4,5 31 4 34 3,9 Пр ηά
12 недель 111 1,5 92,6 6,0 28 4 35 4,2 Пр ηά
Композиция Н.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 110 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 6,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 15 мМ метионин, 0,02% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Гель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (ΡΤυ) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜΨ (%) Мономер (%) ίΜΨ (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 110 0,7 98,6 0,7 69 12 Ί 4,4 еНр 2203
Зкд, 5°С 1 неделя ηά 0,7 98,6 0,6 69 12 Ί 5,2 Пр 2169
5к§, 25°С 1 неделя ηά 0,7 98,6 0,7 67 11 8 4,9 Пр 1661
Р/Т (5 циклов) ηά 0,7 98,6 0,6 68 12 7 4,6 Нр 2183
5°С 8 недель ηά 0,7 98,6 0,7 68 12 8 4,5 Пр 2188
12 недель 111 0,8 98,6 0,7 66 12 9 4,9 еНр 2028
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
25°С 8 недель πά 0,9 98,1 1,1 53 12 18 4.5 Пр 1900
12 недель 111 0.9 98,0 1,2 46 12 21 4,7 Пр 1936
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
40°С 8 недель ηά 1,5 95,0 3.5 26 10 26 5,4 Нр ηά
12 недель 111 1,7 94.1 4,2 27 8 22 5,5 Нр ηά
- 29 027553
Композиция О.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 110 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 15 мМ метионин, 0,06% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (рти) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
НМАУ (%) Мономер (%) ЬМ\У (%) Основной ПИК (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 111 0,6 98,7 0,7 69 12 7 3,8 еГГр 2410
5кд, 5°С 1 неделя пй 0,6 98,6 0,7 69 12 6 4,0 еГГр 2559
5к§, 25°С 1 неделя пй 0,6 98,6 0,8 68 10 7 3,7 Яр 2086
Р/Т (5 циклов) пй 0,7 98,7 0,7 68 12 6 4,0 Яр 2457
5°С 8 недель пй 0,6 98,8 0,7 69 10 7 3,9 Яр 2102
12 недель 111 0,6 98,8 0,7 67 10 8 3,6 еГГр 2037
36 недель пй пй пй пй пй пй пй пй пй пй
25°С 8 недель пй 0,7 98,2 1,1 57 5 15 3,8 Яр 2215
12 недель 111 0,7 97,9 1,4 50 4 19 3,7 Яр 2050
36 недель пй пй пй пй пй пй пй пй пй пй
40°С 8 недель пй 1,3 94,7 4,1 30 4 34 4,0 Яр пй
12 недель 111 1,5 92,5 6,0 28 4 35 4,5 «Р пй
Композиция П.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 110 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 6,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 15 мМ метионин, 0,06% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Гель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (Рти) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
НМ\У (%) Мономер (%) ЬМШ (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 111 0,8 98,6 0,7 69 12 7 4,5 Яр 2153
5ке, 5°С 1 неделя пй 0.7 98.6 0,7 69 12 7 4,7 Яр 1846
8кд, 25°С 1 неделя пй 0,7 98.5 0,7 67 11 8 4,9 ейр 2192
Р/Т (5 циклов) пй 0,7 98.6 0,7 69 12 7 4.3 еГГр 2323
5°С 8 недель пй 0,7 98.7 0.6 68 12 8 4,8 Яр 2049
12 недель 112 0,8 98,5 0,7 66 12 9 4.6 Яр 1903
36 недель пй пй пй пй пй ПЙ пй пй пй пй
25°С 8 недель пй 0,9 98,2 0,9 53 12 18 4.8 Яр 2002
12 недель 112 0.9 97.9 1,2 46 13 21 4.8 Яр 2216
36 недель пй пй пй пй пй пй пй пй пй пй
40°С 8 недель пй 1.5 95,6 2.9 26 10 25 5,2 Яр пй
12 недель 112 1,9 94,0 4,3 27 8 22 6.1 Яр пй
Композиция Р.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 130 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 5 мМ метионин, 0,02% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (РТП) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜ\ν (%) Мономер (%) ЬМАУ (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 128 0,7 98,7 0,7 69 12 6 3,8 Яр 2035
5к§, 5°С 1 неделя пй 0,7 98,7 0,7 69 12 6 3,4 Яр 2728
Зкд, 25°С 1 неделя пй 0,7 98,6 0,7 68 10 7 3,9 Яр пй
Р/Т (5 циклов) ПЙ 0,7 98,7 0,7 69 12 6 3,7 Яр 2559
5°С 8 недель пй 0,6 98,8 0,6 69 10 7 3,6 Яр 2217
12 недель 129 0,6 98,7 0,7 67 11 9 3,8 Яр 1878
36 недель пй пй пй пй пй пй пй пй пй пй
25°С 8 недель пй 0,8 98,2 1,0 57 5 15 3,5 Яр 2091
12 недель 128 0,8 97,8 1.4 51 4 19 4,3 Яр 1887
36 недель пй пй пй пй пй пй пй пй пй пй
40°С 8 недель пй 1,6 94,2 4,2 31 4 35 3,9 Яр пй
12 недель 129 1,9 92,1 5,9 28 5 35 4,5 Яр пй
- 30 027553
Композиция С.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 130 мг/мл трастузумаба, мМ Ь-гистидин/НС1, рН 6,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 5 мМ метионин, 0,02% полисорбата 20,
2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Гель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (РТО) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜλν (%) Мономер (%) ЬМ\У (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 131 0,8 98.5 0,7 69 12 Ί 4,4 ейр 2309
8кд, 5°С 1 неделя ηά 0,8 98.5 0.7 69 12 Ί 4,4 Пр 2522
Зкд, 25°С 1 неделя ηά 0.9 98.4 0.7 67 11 8 4,8 Пр 1787
Р/Т (5 циклов) ηά 0.8 98.5 0.6 69 12 6 4.8 Пр 2312
5°С 8 недель ηά 0,9 98.6 0,6 68 12 8 5,1 йр 2131
12 недель 132 0,9 98.4 0,7 66 11 9 4.9 ейр 1931
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
25°С 8 недель ηά 1.1 97.8 1.1 54 12 18 5,1 Пр 1888
12 недель 132 1,1 97.8 1.1 46 12 21 4.7 Пр 1912
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
40°С 8 недель ηά 1,8 95.2 3,0 27 10 27 5.6 ейр ηά
12 недель 132 2,2 93.4 4,4 28 8 22 6.1 Пр ηά
Композиция Т.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 130 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 5 мМ метионин, 0,06% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (РТО) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜΨ (%) Мономер (%) ίΜΨ (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 131 0,7 98,6 0,7 69 12 6 3,7 ейр 2096
Зкд, 5°С 1 неделя ηά 0,7 98,7 0,6 69 12 6 3,7 ейр 1856
8кд, 25°С 1 неделя ηά 0,7 98,5 0,8 68 10 Ί 4,3 ейр 1958
Р/Т (5 циклов) ηά 0,7 98,7 0,6 69 12 6 3.8 ейр 2371
5°С 8 недель ηά 0,7 98,7 0,6 69 10 7 3,5 ейр 2075
12 недель 131 0,6 98,6 0,7 67 10 8 3,6 ейр 2350
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
25°С 8 недель ηά 0,9 98,2 1,0 58 5 15 3,5 ейр 1989
12 недель 131 0,9 97,7 1.4 51 4 20 3,9 ейр 1999
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
40°С 8 недель ηά 1,6 94,3 4,1 32 4 35 4,2 йр ηά
12 недель 132 2,0 92,0 6,0 29 5 35 4,6 ейр ηά
Композиция У.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 130 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 6,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 5 мМ метионин, 0,06% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Гель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (ρτυ) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜΨ (%) Мономер (%) Ι.ΜΨ (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
начало 131 0,8 98,5 0,7 69 12 7 4,6 ейр 2406
8к§, 5°С 1 неделя ηά 0,8 98,5 0,7 69 12 7 4,8 \уаГр 2808
8к§, 25°С 1 неделя ηά 0,9 98,4 0,7 67 11 8 4,9 йр 2141
Р/Т (5 циклов) ηά 0,8 98,5 0,6 69 12 6 4,7 · йр 2487
5°С 8 недель ηά 0,8 98,5 0.7 69 12 8 4.8 ейр 2076
12 недель 132 0,9 98,4 0,7 66 12 9 4.8 ейр 1897
36 недель ηά ηά • ' ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
25°С 8 недель ηά 1,1 97,8 1,1 55 12 18 5,0 йр 1956
12 недель 131 1,1 97,7 1,2 47 12 21 4,9 йр 2094
36 недель ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά ηά
40°С 8 недель ηά 1,9 95,2 3,0 27 9 27 5,7 йр ηά
12 недель 133 2,2 93,5 4,3 21 9 22 6,1 Йр ηά
- 31 027553
Композиция Ф.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 130 мг/мл трастузумаба, мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 15 мМ метионин, 0,02% полисорбата 20,
2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (рти) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜΨ (%) Мономер (%) ЬМ\У (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 131 0,7 98,7 0,7 69 12 6 3,7 еЯр 2311
5к§, 5°С 1 неделя пб 0,7 98,7 0,7 69 12 6 3,7 Пр 2397
8к§,25°С 1 неделя иб 0,7 98,5 0,8 68 10 7 4,0 еЯр пб
Р/Т (5 циклов) пб 0,7 98,7 0,6 68 12 6 3,7 Пр 2277
5°С 8 недель пб 0,6 98,8 0,5 67 10 7 3,5 Пр 2167
12 недель 131 0,6 98,6 0,7 69 10 7 3,7 Пр 2070
36 недель пб пб пб пб пб пб пб пб пб пб
25°С 8 недель пб 0,8 98,2 1.0 56 5 15 3,6 Лр 2122
12 недель 131 0,8 97,8 1,4 52 4 19 3,7 Яр 2138
36 недель пб пб пб пб пб пб пб пб пб пб
40°С 8 недель пб 1,5 94,3 4,2 31 4 34 4,0 Яр пб
12 недель 132 1,8 92,2 6,0 29 4 35 4,1 Яр пб
Композиция X.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 130 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 6,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 15 мМ метионин, 0,02% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (рти) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
НМ\У (%) Мономер (%) ЬМАУ (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 131 0,8 98,5 0,7 69 12 7 4,5 еЯр 2768
8кё,5°С 1 неделя пб 0,8 98,6 0,7 68 12 7 4,7 еЯр 2884
5к§,25°С 1 неделя пб 0,8 98,5 0,7 68 11 8 6,0 еЯр 2044
Р/Т (5 циклов) пб 0,8 98,6 0,6 68 12 7 4,6 Яр 2617
5°С 8 недель пб 0,8 98.5 0,7 67 12 8 4,3 Яр 2571
12 недель 132 0,8 98,5 0,7 67 12 8 4,5 Яр 2164
36 недель пб пб пб пб пб пб пб пб пб N6
25°С 8 недель пб 1,0 98,0 1,0 52 12 18 4,9 Яр 2116
12 недель 131 1,0 97,7 1,3 47 13 21 5,0 еЯр 1990
36 недель пб пб пб пб пб пб пб пб пб N6
40°С 8 недель пб 1,7 95,4 2,9 24 10 24 5,4 Яр N6
12 недель 132 2,0 93.7 4,3 19 9 20 5,7 Яр пб
Композиция Ц.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 130 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 15 мМ метионин, 0,06% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (рти) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
НМ1У (%) Мономер (%) ЬМ1У (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
начало 131 0,7 98,7 0,7 68 12 6 3,7 еЯр 2323
5к§, 5°С 1 неделя пб 0,7 98,6 0,7 69 12 6 3,7 Яр 2646
5к§, 25°С 1 неделя пб 0,7 98,5 0,8 68 10 7 3,8 Яр 2056
Р/Т (5 циклов) пб 0,7 98,7 0,7 68 12 6 3,5 еЯр 2498
5°С 8 недель пб 0,6 98,9 0,5 67 10 7 3,5 еЯр 2179
12 недель 132 0,6 98,6 0,8 69 10 7 3,7 Яр 2119
36 недель пб пб пб пб пб пб пб пб пб пб
25°С 8 недель пб 0,8 98,1 1,1 56 5 15 3,6 Яр 2072
12 недель 132 0,8 97,8 1,4 52 4 19 3,9 еЯр 2348
36 недель пб пб пб пб пб пб пб пб пб пб
40°С 8 недель пб 1,5 94,2 4,3 31 4 34 3,9 Яр пб
12 недель 132 1,8 92,3 5,9 30 5 34 4,3 Яр пб
- 32 027553
Композиция Ч.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 130 мг/мл трастузумаба, мМ Ь-гистидин/НС1, рН 6,0, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 15 мМ метионин, 0,06% полисорбата 20,
2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (рти) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
НМ\У (%) Мономер (»/.) ЬМШ (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 131 0,8 98,5 0,7 69 12 7 4,7 Яр 2018
5к§, 5°С 1 неделя пй 0,8 98,5 0,7 69 12 7 4,6 Яр 1790
Зкё, 25°С 1 неделя пй 0,8 98,5 0,7 67 11 8 4,9 Яр 1918
Р/Т (5 циклов) пй 0,8 98,6 0,7 69 12 7 4,7 Яр 2379
5°С 8 недель . пй 0,8 98,7 0,5 67 11 8 4,4 Яр 2028
12 недель 131 0,8 98,4 0,8 67 12 8 4,7 еЯр 1964
36 недель пй пй пй пй пй пй пй пй пй пй
25°С 8 недель пй 1,0 98,0 1,0 53 12 18 4,3 Яр 2198
12 недель 131 1,0 97,8 1,2 47 13 20 5,0 Яр 1894
36 недель пй пй пй пй пй пй пй пй пй пй
40°С 8 недель пй 1,7 95,4 з,о 24 9 25 5,0 Яр пй
12 недель 132 2,0 93,7 4,4 27 9 20 5,8 еЯр пй
Композиция Ш.
Представляет собой жидкую композицию, имеющую следующий состав: 120 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,5, 210 мМ дигидрат α,α-трегалозы, 10 мМ метионин, 0,04% полисорбата 20, 2000 ед./мл гНиРН20.
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (РТИ) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
ΗΜΨ (%) Мономер (%) ЬМ\У (%) Основной пик (%) Пик 1 (%) Пик 4 (%)
- начало 121 0,8 98,5 0,7 69 12 7 4,2 еЯр 2277
8кё, 5°С 1 неделя пй 0,8 98,6 0,7 69 12 6 4,2 Яр 1855
5кд, 25°С 1 неделя пй 0,8 98,5 0,7 68 11 7 4,8 Яр 2070
Р/Т (5 циклов) пй 0,8 98,6 0,7 69 12 6 4,5 Яр 2477
5°С 8 недель пй 0,8 98,6 0,6 68 10 8 4,3 Яр 2447
12 недель 122 0,7 98,6 0,7 67 10 9 4,3 Яр 2189
36 недель пй пй пй пй пй пй пй пй пй пй
25°С 8 недель пй 0,9 98,2 1,0 57 7 18 4,5 Яр 2030
12 недель 122 0,9 97,8 1,3 50 7 23 4,5 Яр 2030
36 недель пй пй пй пй пй пй пй пй пй пй
40°С 8 недель пй 1,4 95,3 3,3 34 6 33 4,8 Яр пй
12 недель 122 1,7 93,6 4,6 32 7 31 5,1 Яр пй
Пример 2. Получение лиофилизированной композиции.
Получали раствор с содержанием трастузумаба примерно 60 мг/мл согласно методу, описанному выше для жидких композиций. Все эксципиенты добавляли в концентрации, составляющей половину от концентрации в указанной жидкой композиции. Композицию стерилизовали фильтрацией через фильтры с размером ячеек 0,22 мкм и в асептических условиях распределяли в равных количествах в стерильные 20-миллилитровые стеклянные флаконы. Флаконы неплотно закрывали покрытыми ЕТЕЕ (сополимер этилена и тетрафторэтилена) резиновыми пробками, пригодными для применения в процессах лиофилизации, и лиофилизировали с использованием цикла замораживания-оттаивания, представленного в табл. 2.
Таблица 2
Цикл замораживания-оттаивания
Стадия Температура на полке (°С) Скорость изменения температуры (°С/мин) Время выдерживания (мин) Уровень вакуума (мкбар)
Предварительное охлаждение 5°С 0,0 60 -
Замораживание -40°С 1,0 120 -
Первичная сушка -25°С 0,5 4560 80
Вторичная сушка +25°С 0,2 300 80
Температуру продукта сначала снижали с комнатной температуры до примерно 5°С (предварительное охлаждение), затем осуществляли стадию замораживания при -40°С со скоростью охлаждения полки примерно 1°С/мин, после чего выдерживали при -40°С в течение примерно 2 ч. Первую стадию сушки
- 33 027553 осуществляли при температуре на полке примерно -25°С, при этом давление в камере поддерживали на уровне примерно 80 мкбар в течение примерно 76 ч. Затем начинали вторую стадию сушку при температуре от -25 до 25°С, повышая температуру со скоростью 0,2°С/мин, с последующим выдерживанием при 25°С в течение по меньшей мере 5 ч при давлении в камере примерно 80 мкбар.
Лиофилизацию осуществляли в устройстве для сушки вымораживанием типа ивЛгоЫ ЗМН-90 ΕΝ2 (фирма ивЛгоЫ, Морепа, Франция) или типа 1уоЗ1аг II г (фирма РТЗ 8ув!ешв, Стоун Ридж, шт. НьюЙорк, США). Полученные после сушки вымораживанием образцы хранили в различных климатических условиях (5, 25 и 30°С) в течение различных промежутков времени. Содержимое флаконов для лиофилизации восстанавливали до конечного объема 2,65 мл водой для инъекций (АР1) с получением изотонической композиции с концентрацией антитела примерно 120 мг/мл. Время восстановления полученных в результате сушки вымораживанием осадков (кейков) составляло 10 мин. Анализ восстановленных образцов осуществляли после инкубации восстановленного жидкого образца в течение 24 ч при температуре окружающей среды.
Образцы снова анализировали с помощью описанных выше следующих аналитических методов:
1) УФ-спектрофотометрия;
2) гель-фильтрация (ЗЕС);
3) ионообменная хроматография (1ЕС);
4) определение мутности раствора и
5) определение видимых частиц.
Результаты определения стабильности композиции Щ представлены в табл. 3, в которой использованы следующие сокращения: ££р = свободна от частиц; е££р = практически свободна от частиц; пй = не определяли.
Композиция Щ представляет собой лиофилизированную композицию, имеющую после восстановления следующий состав: 120 мг/мл трастузумаба, 20 мМ Ь-гистидин/НС1, рН 5,5, 210 мМ дигидрат α,αтрегалозы, 10 мМ метионин, 0,04% полисорбата 20, 12000 ед./мл гНиРН20.
Таблица 3
Данные о составе и стабильности содержащей в качестве лекарственного продукта антитело к НЕК-2 лиофилизированной композиции, предлагаемой в изобретении
Условия хранения Продолжи- тельность хранения Концентрация белка (мг/мл) Г ель-фильтрация-ЖХВР Ионообменная-ЖХВР Мутность (рти) Видимые частицы НЕ- активность (ед./мл)
НМА (%) Мономер (%) ЬМА (%) Основной пик (%) Пик 1(%) Пик 4(%)
- начало 129 0,5 98,8 0,8 59 15 10 7,1 Пр 12451
5°С 8 недель 124 0,6 98,6 0,9 59 16 10 5,7 еГГр 13380
21 неделя пй 0,8 98,6 0,7 62 15 8 5,9 ЕГГр 14927
36 недель пй 0,8 98,5 0,7 59 16 10 6,0 РГр 13744
25°С 8 недель 120 1,3 97,8 0,8 59 16 11 6,1 ЕГГр 13162
21 недель пй 2,1 96,7 1,2 61 15 8 5,7 ЕГГр 15396
36 недель пй 2,7 96,6 0,7 58 15 И 6,0 РГр 13673
зо°с 8 недель 121 1,9 97,5 0,9 58 16 11 5,7 ЕГГр 13425
21 неделя 126 3,2 96,0 0,8 60 14 8 6,0 ЕГГр пй
36 недель пй 3,9 95,4 0,7 57 14 И 5,9 РГр 15034
- 34 027553
Свойства указанных выше композиций обобщены в табл.4.
Таблица 4
Р Тг (мг/мл) ΗΪ8 Тге (мМ) N301 (мМ) ΜείΗ (мМ) Р 20 8 80 гНи (ед./мл)
мМ рн % %
А 120 20 5,5 210 10 0,04 12000
Б 120 20 5,5 210 10 0,06 12000
В 120 20 5,5 130 10 0,04 12000
Г 120 20 5,5 130 10 0,06 12000
д 120 20 5,5 105 65 10 0,04 12000
Е 120 20 5,5 105 65 10 0,06 12000
Ж 120 20 5,5 210 10 0,04
3 ПО 20 5,0 210 5 0,02 2000
И НО 20 6,0 210 5 0,02 2000
к ПО 20 5,0 210 5 0,06 2000
л ПО 20 6,0 210 5 0,06 2000
м ПО 20 5,0 210 15 0,02 2000
н ПО 20 6,0 210 15 0,02 2000
о ПО 20 5,0 210 15 0,06 2000
п ПО 20 6,0 210 15 0,06 2000
Р 130 20 5,0 210 5 0,02 2000
с 130 20 6,0 210 5 0,02 2000
т 130 20 5,0 210 5 0,06 2000
У 130 20 6,0 210 5 0,06 2000
ф 130 20 5,0 210 15 0,02 2000
X 130 20 6,0 210 15 0,02 2000
ц 130 20 5,0 210 15 0,06 2000
ч 130 20 6,0 210 15 0,06 2000
ш 120 20 5,5 210 10 0,04 2000
щ 120 20 5,5 210 10 0,04 12000*)
Р = композиция,
Тг = трастузумаб,
Из = Ь-гистидин/НС1,
1ге = дигидрат α,α-трегалозы, №С1 = хлорид натрия, те! = метионин,
Р8 = полисорбат, % (мас./об.), гНи = гНиРН20 * = после восстановления.

Claims (26)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2, содержащая:
    а) антитело к НЕК2 в концентрации примерно от 50 до 350 мг/мл;
    б) забуферивающий агент, обеспечивающий значение рН 5,5±2,0, в концентрации примерно от 1 до 100 мМ;
    в) стабилизатор или смесь двух или большего количества стабилизаторов в концентрации примерно от 1 до 500 мМ;
    г) неионогенное поверхностно-активное вещество в концентрации примерно от 0,01 до 0,08% и
    д) фермент гуалуронидазы в количестве от более чем 150 до примерно 16000 ед./мл, примерно 2000 ед./мл или примерно 12000 ед./мл соответственно.
  2. 2. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по п.1, в которой фермент гуалуронидазы присутствует в количестве от примерно 1000 до примерно 16000 ед./мл.
  3. 3. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по п.1 или 2, в которой концентрация антитела к НЕК2 составляет 100-150 мг/мл, 120±18 мг/мл, примерно 110 мг/мл, примерно 120 мг/мл или примерно 130 мг/мл соответственно.
  4. 4. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-3, в которой забуферивающий агент присутствует в концентрация от 1 до 50 мМ.
  5. 5. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-4, в которой забуферивающий агент обеспечивает значение рН 5,5±0,6.
  6. 6. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-5, в которой забуферивающий агент представляет собой гистидиновый буфер, например 20 мМ гистидин/НС1.
  7. 7. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-6, в которой стабилизатор представляет собой сахарид.
    - 35 027553
  8. 8. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-7, в которой стабилизатор представляет собой дигидрат α,α-трегалозы или сахарозу.
  9. 9. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-8, в которой стабилизатор присутствует в концентрации от 15 до 250 мМ или примерно 210 мМ соответственно.
  10. 10. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по п.8 или 9, в которой в качестве второго стабилизатора применяют метионин.
  11. 11. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-10, в которой второй стабилизатор используется в концентрации от 5 до 25 мМ.
  12. 12. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-11, в которой неионогенное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат, выбранный из группы, включающей полисорбат 20, полисорбат 80 и сополимер полиэтиленаполипропилена.
  13. 13. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по п.12, в которой полисорбат присутствует в концентрации 0,02% (мас./об.), 0,04% (мас./об.) или 0,06% (мас./об.) соответственно.
  14. 14. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-13, в которой антитело к НЕК2 выбрано из группы, включающей трастузумаб, пертузумаб и Т-ЭМ1 или комбинацию указанных антител.
  15. 15. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-14, которая является стабильной при замораживании и оттаивании.
  16. 16. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-15, в которой фермент гуалуронидазы представляет собой гНиРН20.
  17. 17. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-16, включающая 120 мг/мл трастузмаба, 20 мМ Ь-гистидина/НС1, рН 5,5, 210 мМ гидрата α,α-трегалозы, 10 мМ метионина, 0,04% полисорбата 20 и 2000 ед./мл гНиРН20.
  18. 18. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-17 в форме для подкожного введения.
  19. 19. Высококонцентрированная стабильная фармацевтическая композиция антитела к НЕК2 по любому из пп.1-18, находящаяся в жидкой форме.
  20. 20. Применение высококонцентрированной стабильной фармацевтической композиции антитела к НЕК2 по любому из пп.1-19 для лечения заболевания или нарушения, которое можно лечить с помощью антитела к НЕК2.
  21. 21. Устройство для инъекции, содержащее высококонцентрированную стабильную фармацевтическую композицию антитела к НЕК2 по любому из пп.1-19.
  22. 22. Применение композиции по любому из пп.1-19 для приготовления лекарственного средства для лечения заболевания или нарушения у индивидуума, которое можно лечить с помощью антитела к НЕК2.
  23. 23. Способ лечения заболевания или нарушения, которое можно лечить с помощью антитела к НЕК2, включающий введение индивидууму композиции по любому из пп.1-19 в терапевтически эффективном количестве.
  24. 24. Способ по п.23, в котором композицию вводят совместно, одновременно или последовательно с химиотерапевтическим средством.
  25. 25. Набор для лечения заболевания или нарушения у индивидуума, которое можно лечить с помощью антитела к НЕК2, включающий один или несколько пузырьков, которые содержат композицию по любому из пп.1-19, и инструкции по подкожному введению композиции пациенту.
  26. 26. Набор по п.25, включающий также инъекционное устройство для подкожного введения композиции пациенту.
EA201200204A 2009-07-31 2010-07-28 Содержащая антитело к her2 композиция для подкожного введения EA027553B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP09167025 2009-07-31
PCT/EP2010/060930 WO2011012637A2 (en) 2009-07-31 2010-07-28 Subcutaneous anti-her2 antibody formulation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201200204A1 EA201200204A1 (ru) 2012-08-30
EA027553B1 true EA027553B1 (ru) 2017-08-31

Family

ID=43500473

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201400270A EA031013B1 (ru) 2009-07-31 2010-07-28 Высококонцентрированная стабильная жидкая фармацевтическая композиция обладающего фармацевтической активностью антитела к her2, ее применение, содержащие эту композицию устройство и набор, а также способ лечения заболевания или нарушения, которое можно лечить с помощью антитела к her2
EA201200204A EA027553B1 (ru) 2009-07-31 2010-07-28 Содержащая антитело к her2 композиция для подкожного введения

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201400270A EA031013B1 (ru) 2009-07-31 2010-07-28 Высококонцентрированная стабильная жидкая фармацевтическая композиция обладающего фармацевтической активностью антитела к her2, ее применение, содержащие эту композицию устройство и набор, а также способ лечения заболевания или нарушения, которое можно лечить с помощью антитела к her2

Country Status (41)

Country Link
US (6) US9345661B2 (ru)
EP (4) EP4339212A3 (ru)
JP (2) JP5462944B2 (ru)
KR (2) KR101769652B1 (ru)
CN (3) CN102573789B (ru)
AR (2) AR077605A1 (ru)
AU (1) AU2010277657B2 (ru)
BR (1) BR112012002080A2 (ru)
CA (1) CA2768458C (ru)
CL (2) CL2012000269A1 (ru)
CO (1) CO6430421A2 (ru)
CR (1) CR20110679A (ru)
CY (1) CY1114185T1 (ru)
DK (2) DK2459167T3 (ru)
DO (1) DOP2015000255A (ru)
EA (2) EA031013B1 (ru)
EC (2) ECSP12011643A (ru)
ES (2) ES2948033T3 (ru)
FI (1) FI2687202T3 (ru)
GT (1) GT201200024A (ru)
HK (2) HK1215157A1 (ru)
HR (2) HRP20230462T1 (ru)
HU (1) HUE062122T2 (ru)
IL (2) IL217382A (ru)
IN (1) IN2012CN00961A (ru)
LT (1) LT2687202T (ru)
MA (1) MA33471B1 (ru)
MX (2) MX355450B (ru)
MY (2) MY172245A (ru)
NZ (2) NZ597190A (ru)
PE (2) PE20131324A1 (ru)
PL (2) PL2459167T5 (ru)
PT (2) PT2687202T (ru)
RS (2) RS52913B2 (ru)
SG (2) SG193146A1 (ru)
SI (2) SI2687202T1 (ru)
TN (1) TN2012000023A1 (ru)
TW (2) TWI474834B (ru)
UA (2) UA104254C2 (ru)
WO (1) WO2011012637A2 (ru)
ZA (2) ZA201109459B (ru)

Families Citing this family (126)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
MY152164A (en) 2005-02-23 2014-08-15 Genentech Inc Extending time to disease progression or survival in cancer patients
BRPI0808418A2 (pt) 2007-03-02 2014-07-22 Genentech Inc Predição de resposta a um inibidor de her
TWI472339B (zh) 2008-01-30 2015-02-11 Genentech Inc 包含結合至ｈｅｒ２結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物
BRPI0812682A2 (pt) 2008-06-16 2010-06-22 Genentech Inc tratamento de cáncer de mama metastático
MX2012000841A (es) * 2009-07-24 2012-02-28 Hoffmann La Roche Optimizacion de la produccion de anticuerpos.
US9345661B2 (en) 2009-07-31 2016-05-24 Genentech, Inc. Subcutaneous anti-HER2 antibody formulations and uses thereof
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
WO2011080209A2 (en) * 2009-12-29 2011-07-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel antibody formulation
KR102289394B1 (ko) 2011-03-31 2021-08-13 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 인간 프로그램화된 사멸 수용체 pd-1에 대한 항체의 안정한 제제 및 관련된 치료
KR102679155B1 (ko) 2011-10-14 2024-06-28 제넨테크, 인크. Her2 이량체화 억제제인 페르투주맙의 용도 및 이를 포함하는 제조품
DK2773671T3 (da) 2011-11-04 2021-11-15 Zymeworks Inc Udformning af stabilt heterodimert antistof med mutationer i fc-domænet
AR090244A1 (es) * 2012-03-08 2014-10-29 Hoffmann La Roche Formulacion de anticuerpo anti-selectina p
WO2013173789A2 (en) * 2012-05-17 2013-11-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide compositions
US9574193B2 (en) 2012-05-17 2017-02-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating apolipoprotein (a) expression
KR102326359B1 (ko) 2012-05-18 2021-11-12 제넨테크, 인크. 고농도 모노클로날 항체 제제
DK2864346T3 (en) * 2012-06-21 2019-02-04 Synthon Biopharmaceuticals Bv Method of purifying an antibody.
WO2014052713A2 (en) 2012-09-27 2014-04-03 Massachusetts Institute Of Technology Her2-and vegf-a-binding proteins with enhanced stability
KR101454646B1 (ko) * 2012-11-05 2014-10-27 (주)한국비엠아이 히알루로니다아제의 안정화 제제 및 이를 포함하는 액상제제
DK2934582T3 (da) * 2012-12-21 2020-02-24 Ichnos Sciences SA Anti-her2-antistofformulering
CA2906057A1 (en) * 2013-03-13 2014-10-02 Genentech, Inc. Antibody formulations
KR20140119396A (ko) 2013-03-29 2014-10-10 삼성전자주식회사 단백질 약물의 액상 제형
KR20200085942A (ko) 2013-04-16 2020-07-15 제넨테크, 인크. 페르투주맙 변이체 및 그의 평가
CA2923859C (en) 2013-09-11 2021-11-23 Arsia Therapeutics, Inc. Liquid protein formulations containing viscosity-lowering agents
US9732154B2 (en) 2014-02-28 2017-08-15 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia
EP3110849B9 (en) * 2014-02-28 2021-04-07 Merus N.V. Antibody that binds erbb-2 and erbb-3
CN104906576B (zh) * 2014-03-13 2018-06-19 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 可供皮下注射的高浓度抗vegf抗体配制剂
SG10201809411PA (en) 2014-04-25 2018-11-29 Genentech Inc Methods of treating early breast cancer with trastuzumab-mcc-dm1 and pertuzumab
SG11201609706VA (en) 2014-06-23 2017-01-27 Novartis Ag Site specific protein modifications
US10588980B2 (en) 2014-06-23 2020-03-17 Novartis Ag Fatty acids and their use in conjugation to biomolecules
EP3157947A1 (en) 2014-06-23 2017-04-26 Novartis AG Hsa-gdf-15 fusion polypeptide and use thereof
WO2016044334A1 (en) 2014-09-15 2016-03-24 Genentech, Inc. Antibody formulations
KR20170103970A (ko) 2015-01-23 2017-09-13 노파르티스 아게 개선된 반감기를 갖는 합성 아펠린 지방산 접합체
US9824394B1 (en) 2015-02-06 2017-11-21 Square, Inc. Payment processor financing of customer purchases
US9779432B1 (en) 2015-03-31 2017-10-03 Square, Inc. Invoice financing and repayment
EP3302551B1 (en) 2015-05-30 2024-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating her2-positive previously untreated metastatic breast cancer
EP3310386B1 (en) * 2015-06-22 2021-07-21 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies for heme malignancies with anti-cd38 antibodies and survivin inhibitors
KR20170004814A (ko) 2015-07-02 2017-01-11 주식회사 녹십자 헌터증후군 치료제
WO2017003270A1 (ko) * 2015-07-02 2017-01-05 주식회사 녹십자 헌터증후군 치료제 및 치료방법
CA2999079A1 (en) * 2015-09-28 2017-04-06 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Stable anti-pd-1 antibody pharmaceutical preparation and application thereof in medicine
CN108602888B (zh) 2015-10-23 2022-10-04 美勒斯公司 抑制癌症生长的结合分子
LT3827845T (lt) 2015-11-03 2022-06-10 Janssen Biotech, Inc. Poodinės anti-cd38 antikūnų kompozicijos ir jų naudojimas
WO2017087280A1 (en) 2015-11-16 2017-05-26 Genentech, Inc. Methods of treating her2-positive cancer
CN106729743B (zh) 2015-11-23 2021-09-21 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗ErbB2抗体-药物偶联物及其组合物、制备方法和应用
CN108367053A (zh) 2015-12-22 2018-08-03 诺华股份有限公司 使用生长分化因子15(gdf-15)治疗或改善代谢性疾病的方法
MA45562B1 (fr) 2016-06-30 2024-05-31 Celltrion Inc Préparation pharmaceutique liquide stable
FI4050034T3 (fi) 2016-09-14 2024-06-10 Teneoone Inc Cd3:een sitoutuvia vasta-aineita
JP2019533708A (ja) * 2016-11-10 2019-11-21 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａの皮下送達
EP4215548A1 (en) 2016-12-21 2023-07-26 Teneobio, Inc. Anti-bcma heavy chain-only antibodies
JP6914336B2 (ja) 2016-12-28 2021-08-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド 進行したｈｅｒ２発現がんの治療
CR20190376A (es) * 2017-01-17 2019-11-20 Genentech Inc Formulaciones de anticuerpos de her2 subcutáneas
HRP20240069T1 (hr) 2017-03-02 2024-03-29 Genentech, Inc. Adjuvantno liječenje her2-pozitivnog raka dojke
AU2018246873B2 (en) 2017-03-31 2021-05-06 Merus N.V. ErbB-2 and ErbB3 binding bispecific antibodies for use in the treatment f cells that have an NRG1 fusion gene
AU2018258263A1 (en) 2017-04-24 2019-10-24 Genentech, Inc. ErbB2/Her2 mutations in the transmembrane or juxtamembrane domain
RU2019138507A (ru) 2017-05-02 2021-06-02 Мерк Шарп И Доум Корп. Составы антител против lag3 и совместные составы антител против lag3 и антител против pd-1
JOP20190260A1 (ar) 2017-05-02 2019-10-31 Merck Sharp & Dohme صيغ ثابتة لأجسام مضادة لمستقبل الموت المبرمج 1 (pd-1) وطرق استخدامها
EP3624846A1 (en) 2017-05-16 2020-03-25 Bhami's Research Laboratory, Pvt. Ltd. High concentration protein formulations with reduced viscosity
TW201902462A (zh) * 2017-06-02 2019-01-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於免疫促效劑之新穎投與途徑
EP3642237A2 (en) 2017-06-20 2020-04-29 Teneobio, Inc. Anti-bcma heavy chain-only antibodies
JP7240335B2 (ja) 2017-06-20 2023-03-15 テネオワン， インコーポレイテッド 抗ｂｃｍａ重鎖のみ抗体
EP3642628A1 (en) * 2017-06-23 2020-04-29 Anette Weyergang Diagnosis and treatment of cancer
WO2019020745A1 (en) * 2017-07-28 2019-01-31 F. Hoffmann-La Roche Ag BISPECIFIC ANTIBODY FORMULATION
BR112020002695A2 (pt) 2017-08-09 2020-08-25 Merus N.V. anticorpos que se ligam à egfr e cmet
SG11202002093TA (en) 2017-09-13 2020-04-29 Teneobio Inc Heavy chain antibodies binding to ectoenzymes
LT3681483T (lt) * 2017-09-15 2022-09-12 Amgen Inc. Terapinio baltymo farmacinės formos liofilizavimo būdas
WO2019089832A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating high risk multiple myeloma
CN107898756B (zh) * 2017-12-22 2020-11-20 东曜药业有限公司 一种用于皮下或肌肉注射的高浓度尼妥珠单抗制剂及其制备方法和应用
CN111601613A (zh) 2017-12-22 2020-08-28 诺华股份有限公司 用fgf21变体治疗代谢障碍的方法
JOP20200157A1 (ar) 2017-12-22 2022-10-30 Teneobio Inc أجسام مضادة ذات سلسلة ثقيلة ترتبط بـ cd22
EP3560945A1 (en) 2018-04-27 2019-10-30 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for purification of polypeptides using polysorbates
WO2019220369A2 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers and enhancing efficacy of t cell redirecting therapeutics
CN110732023B (zh) * 2018-07-18 2023-06-16 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种her2抗体药物组合物及其用途
KR20200010103A (ko) * 2018-07-19 2020-01-30 (주)셀트리온 안정한 액체 약제학적 제제
CN116769032A (zh) 2018-07-20 2023-09-19 坦尼奥第二公司 与cd19结合的重链抗体
US20200113912A1 (en) 2018-09-12 2020-04-16 Silverback Therapeutics, Inc. Methods and Compositions for the Treatment of Disease with Immune Stimulatory Conjugates
WO2020060183A1 (ko) * 2018-09-18 2020-03-26 삼성바이오에피스 주식회사 트라스투주맙 항체 안정화 액체 제제
US20210388106A1 (en) 2018-10-26 2021-12-16 Teneobio, Inc. Heavy chain antibodies binding to cd38
WO2020092546A1 (en) * 2018-10-30 2020-05-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Co-administration of a hyaluronidase and anti-c5 antibody for treatment of complement-associated conditions
WO2020097141A1 (en) * 2018-11-07 2020-05-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable formulations of programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of use thereof
CN111202845A (zh) * 2018-11-22 2020-05-29 上海医药集团股份有限公司 包含抗cd20抗体的药物配制剂及其制备方法和应用
CN113396158A (zh) 2018-11-26 2021-09-14 诺华股份有限公司 Lpl-gpihbp1融合多肽
WO2020142583A1 (en) * 2019-01-04 2020-07-09 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating cancer using combinations of parp inhibitors and antibody radioconjugates
WO2020152367A1 (en) 2019-01-25 2020-07-30 Ospedale San Raffaele S.R.L. Inhibitor of dux4 and uses thereof
MA55033A (fr) 2019-02-18 2021-12-29 Lilly Co Eli Formulation d'anticorps thérapeutique
US20210363270A1 (en) * 2019-03-25 2021-11-25 Alteogen Inc. Pharmaceutical composition for subcutaneous injection comprising human hyaluronidase ph20 variant and drug
BR112021019334A2 (pt) 2019-04-05 2021-12-07 Teneobio Inc Anticorpos de cadeia pesada que se ligam ao psma
CN110179746A (zh) * 2019-05-17 2019-08-30 通化东宝生物科技有限公司 一种稳定的苏金单抗注射剂及其制备方法
CA3140816A1 (en) 2019-06-14 2020-12-17 Nathan Trinklein Multispecific heavy chain antibodies binding to cd22 and cd3
CA3141085A1 (en) 2019-06-19 2020-12-24 Brenda Stevens Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates thereof
CN114341186A (zh) 2019-07-30 2022-04-12 魁尔斯弗生物治疗股份有限公司 双特异性抗LRRC15和CD3ε抗体
CN114206382B (zh) * 2019-08-07 2024-03-26 信达生物制药(苏州)有限公司 包含抗pd-1/her2双特异性抗体的制剂及其制备方法和用途
GB201913697D0 (en) 2019-09-23 2019-11-06 King S College London DAP10/DAP12 fusion polypeptides
WO2021079337A1 (en) * 2019-10-23 2021-04-29 Cadila Healthcare Limited Pharmaceutical formulation of anti-her2 antibody and preparation thereof
WO2021096278A1 (ko) * 2019-11-15 2021-05-20 삼성바이오에피스 주식회사 항체 의약품용 액상 조성물
JP2023502929A (ja) 2019-11-15 2023-01-26 シージェン インコーポレイテッド Ｈｅｒ２陽性乳がんを抗ｈｅｒ２抗体－薬物コンジュゲートと併用してツカチニブで治療する方法
WO2021118930A2 (en) * 2019-12-09 2021-06-17 Genentech, Inc. Anti-pd-l1 antibody formulations
CU20190104A7 (es) 2019-12-17 2021-08-06 Ct Inmunologia Molecular Formulación estable del anticuerpo nimotuzumab
CN115023441A (zh) 2019-12-18 2022-09-06 特诺福尔股份有限公司 与cd38结合的重链抗体
EP4106819A1 (en) 2020-02-21 2022-12-28 Silverback Therapeutics, Inc. Nectin-4 antibody conjugates and uses thereof
EP4115903A4 (en) * 2020-03-04 2023-12-20 Shanghai Henlius Biotech, Inc. PHARMACEUTICAL FORMULATION WITH BEVACIZUMAB
GB202003277D0 (en) 2020-03-06 2020-04-22 King S College London Therapeutic agents
CA3176792C (en) 2020-04-29 2024-06-18 Katherine HARRIS Anti-cd3 and anti-bcma bispecific antibodies wth modified heavy chain constant regions
CA3214992A1 (en) 2020-04-29 2021-11-04 Teneobio, Inc. Multispecific heavy chain antibodies with modified heavy chain constant regions
GB202007655D0 (en) 2020-05-22 2020-07-08 King S College London Chimeric nkg2d protein
CN113827717A (zh) * 2020-06-23 2021-12-24 三生国健药业（上海）股份有限公司 抗her2单克隆抗体冻干制剂及制备方法
EP4171750A1 (en) 2020-06-30 2023-05-03 Teneobio, Inc. Multi-specific antibodies binding to bcma
WO2022006327A1 (en) 2020-07-01 2022-01-06 Silverback Therapeutics, Inc. Anti-asgr1 antibody conjugates and uses thereof
US20240084014A1 (en) 2020-10-16 2024-03-14 Qlsf Biotherapeutics, Inc. Multispecific binding compounds that bind to pd-l1
TW202233684A (zh) 2020-11-18 2022-09-01 美商泰尼歐生物公司 結合於葉酸受體α之重鏈抗體
IL303350A (en) 2020-12-04 2023-08-01 Macrogenics Inc Preparations containing an antibody against HER2/NEU and their use
EP4272729A1 (en) * 2020-12-30 2023-11-08 Shanghai Bao Pharmaceuticals Co., Ltd. Recombinant human hyaluronidase formulation and application thereof
CN116964096A (zh) * 2021-02-23 2023-10-27 江苏康宁杰瑞生物制药有限公司 预防、减轻或治疗肿瘤的方法
KR20230148828A (ko) 2021-02-25 2023-10-25 테네오바이오, 인코포레이티드 항-psma 항체 및 car-t 구조
MX2023009882A (es) 2021-02-26 2023-08-30 Teneobio Inc Anticuerpos anti-muc1-c y estructuras car-t.
CA3212856A1 (en) 2021-03-23 2022-09-29 John Maher Compositions comprising nkg2d, cxcr2, and dap10/dap12 fusion polypeptides and methods of use thereof
TW202304994A (zh) 2021-04-02 2023-02-01 美商泰尼歐生物公司 促效性抗ｉｌ－２ｒ抗體及使用方法
PE20232050A1 (es) 2021-04-06 2023-12-27 Teneobio Inc Anticuerpos anti-cd19 y estructuras car-t
CR20230525A (es) 2021-04-16 2024-02-19 Teneobio Inc Anticuerpos anti-cd20 y estructuras car-t
WO2022271987A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 TeneoFour, Inc. Anti-cd38 antibodies and epitopes of same
WO2023004197A1 (en) 2021-07-23 2023-01-26 Teneoten, Inc. Heavy chain antibodies binding to hepatitis b surface antigen
WO2023019556A1 (zh) * 2021-08-20 2023-02-23 齐鲁制药有限公司 一种高浓度抗her2的抗体制剂及其用途
AU2022366971A1 (en) 2021-10-14 2024-05-02 Teneobio, Inc. Mesothelin binding proteins and uses thereof
WO2024026358A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Teneobio, Inc. Mesothelin binding proteins and uses thereof
GB202214120D0 (en) 2022-09-27 2022-11-09 King S College London Compositions comprising NKG2D, CXCR2, and DAP10/DAP12 fusion polypeptides and methods of use thereof
WO2024077044A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Amgen Inc. Combination therapies comprising t-cell redirecting therapies and agonistic anti-il-2r antibodies or fragments thereof
EP4389762A1 (en) 2022-12-23 2024-06-26 Ospedale San Raffaele S.r.l. Inhibitors of dux4 activity and their use in therapy.

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US20020035736A1 (en) * 2000-03-16 2002-03-21 Sharon Erickson HER2-transgenic non-human tumor model
WO2005023328A2 (en) * 2003-08-26 2005-03-17 Becton Dickinson And Company Methods for intradermal delivery of therapeutics agents
US20060104968A1 (en) * 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US20070071675A1 (en) * 2005-08-19 2007-03-29 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
WO2008150949A1 (en) * 2007-05-30 2008-12-11 Abbott Laboratories HUMANIZED ANTIBODIES TO Aß(20-42) GLOBULOMER AND USES THEREOF

Family Cites Families (75)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4943A (en) 1847-01-26 Harness-buckle
US533A (en) 1837-12-26 Truss for hermta
US2795529A (en) 1954-06-17 1957-06-11 American Home Prod Stabilized hyaluronidase solution containing calcium chloride
CU22545A1 (es) 1994-11-18 1999-03-31 Centro Inmunologia Molecular Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
AU3934085A (en) 1984-01-30 1985-08-09 Icrf Patents Ltd. Improvements relating to growth factors
US4943533A (en) 1984-03-01 1990-07-24 The Regents Of The University Of California Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5401638A (en) 1986-06-04 1995-03-28 Oncogene Science, Inc. Detection and quantification of neu related proteins in the biological fluids of humans
WO1989006692A1 (en) * 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
EP0491007B1 (en) 1989-09-08 1996-03-13 The Johns Hopkins University Structural alterations of the egf receptor gene in human gliomas
EP0494135B1 (en) 1989-09-29 1996-04-10 Oncogene Science, Inc. Human "neu" related protein p100 and use of the same for detecting preneoplastic or neoplastic cells in a human
US5945098A (en) 1990-02-01 1999-08-31 Baxter International Inc. Stable intravenously-administrable immune globulin preparation
US5721348A (en) 1990-12-14 1998-02-24 University Of Connecticut DNA encoding PH-20 proteins
DK0590058T3 (da) 1991-06-14 2004-03-29 Genentech Inc Humaniseret heregulin-antistof
AU4025193A (en) 1992-04-08 1993-11-18 Cetus Oncology Corporation Humanized C-erbB-2 specific antibodies
EP0655924A4 (en) 1992-06-30 1996-09-11 Oncologix Inc A COMBINATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST erbB-2 AND METHOD FOR THEIR USE.
ATE207366T1 (de) 1993-12-24 2001-11-15 Merck Patent Gmbh Immunokonjugate
CA2195537C (en) 1994-07-21 2006-09-12 Reinder Torenbeek Cyclic ketone peroxide formulations
US5804396A (en) 1994-10-12 1998-09-08 Sugen, Inc. Assay for agents active in proliferative disorders
US5573186A (en) 1995-03-20 1996-11-12 Moen Incorporated Stationary venturi diverter valve
EP0817775B1 (en) 1995-03-30 2001-09-12 Pfizer Inc. Quinazoline derivatives
GB9508538D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
GB9508565D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quiazoline derivative
WO1996040210A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Imclone Systems Incorporated Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth of tumors
CN102416176A (zh) 1995-07-27 2012-04-18 基因技术股份有限公司 稳定等渗的冻干蛋白质制剂
US6685940B2 (en) * 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
US5783186A (en) * 1995-12-05 1998-07-21 Amgen Inc. Antibody-induced apoptosis
DK0892789T4 (da) 1996-04-12 2010-04-06 Warner Lambert Co Irreversible inhibitorer af tyrosin kinaser
EP0852951A1 (de) 1996-11-19 1998-07-15 Roche Diagnostics GmbH Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von mono- oder polyklonalen Antikörpern
UA73073C2 (ru) 1997-04-03 2005-06-15 Уайт Холдінгз Корпорейшн Замещенные 3-циан хинолины
US5994071A (en) 1997-04-04 1999-11-30 Albany Medical College Assessment of prostate cancer
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US6991790B1 (en) 1997-06-13 2006-01-31 Genentech, Inc. Antibody formulation
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
ZA986729B (en) 1997-07-29 1999-02-02 Warner Lambert Co Irreversible inhibitors of tyrosine kinases
ZA986732B (en) 1997-07-29 1999-02-02 Warner Lambert Co Irreversible inhibitiors of tyrosine kinases
TW436485B (en) 1997-08-01 2001-05-28 American Cyanamid Co Substituted quinazoline derivatives
CN103641885A (zh) 1998-05-06 2014-03-19 基因技术股份有限公司 用离子交换层析纯化蛋白质
ATE437655T1 (de) 1999-06-25 2009-08-15 Genentech Inc Humanisierte anti-erbb2 antikörper und behandlung mit anti-erbb2 antikörper
AU2001277781A1 (en) 2000-08-11 2002-02-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Stabilized antibody-containing preparations
EP2314686B2 (en) 2000-10-06 2023-06-21 Kyowa Kirin Co., Ltd. Cells producing antibody compositions
ES2332402T5 (es) 2000-10-12 2018-05-14 Genentech, Inc. Formulaciones de proteína concentradas de viscosidad reducida
US8703126B2 (en) 2000-10-12 2014-04-22 Genentech, Inc. Reduced-viscosity concentrated protein formulations
DE10153197A1 (de) 2001-10-27 2003-05-08 Merck Patent Gmbh Pigment mit Metallglanz
EP2311489A3 (en) 2002-02-14 2013-08-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Formulation of antibody-containing solutions comprising a sugar as a stabilizer
TW555245U (en) 2003-01-29 2003-09-21 Hon Hai Prec Ind Co Ltd Cable connector assembly
DK2163643T3 (en) 2003-03-05 2015-03-23 Halozyme Inc Soluble hyaluronidaseglycoprotein (sHASEGP), process for preparing the same, pharmaceutical compositions and uses thereof covered
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20090123367A1 (en) * 2003-03-05 2009-05-14 Delfmems Soluble Glycosaminoglycanases and Methods of Preparing and Using Soluble Glycosaminoglycanases
US20050158303A1 (en) 2003-04-04 2005-07-21 Genentech, Inc. Methods of treating IgE-mediated disorders comprising the administration of high concentration anti-IgE antibody formulations
CN1798575A (zh) 2003-04-04 2006-07-05 健泰科生物技术公司 高浓度抗体和蛋白制剂
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
KR101441358B1 (ko) 2003-05-14 2014-09-24 이뮤노젠 아이엔씨 약물 콘쥬게이트 조성물
BRPI0510883B8 (pt) * 2004-06-01 2021-05-25 Genentech Inc composto conjugado de droga e anticorpo, composição farmacêutica, método de fabricação de composto conjugado de droga e anticorpo e usos de uma formulação, de um conjugado de droga e anticorpo e um agente quimioterapêutico e de uma combinação
MX2007000723A (es) 2004-07-22 2007-03-12 Genentch Inc Composicion de anticuerpos her2.
JO3000B1 (ar) * 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
TW200638943A (en) 2005-01-28 2006-11-16 Wyeth Corp Stabilized liquid polypeptide formulations
PE20070207A1 (es) 2005-07-22 2007-03-09 Genentech Inc Tratamiento combinado de los tumores que expresan el her
US7700299B2 (en) 2005-08-12 2010-04-20 Hoffmann-La Roche Inc. Method for predicting the response to a treatment
CA2618482C (en) * 2005-08-19 2014-10-07 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobin and uses thereof
EP1977763A4 (en) 2005-12-28 2010-06-02 Chugai Pharmaceutical Co Ltd STABILIZER PREPARATION CONTAINING ANTIBODIES
TW200806317A (en) 2006-03-20 2008-02-01 Wyeth Corp Methods for reducing protein aggregation
EP1998806A1 (en) 2006-03-28 2008-12-10 F. Hoffmann-Roche AG Anti-igf-1r human monoclonal antibody formulation
JP5070993B2 (ja) 2007-08-27 2012-11-14 富士通株式会社 音処理装置、位相差補正方法及びコンピュータプログラム
EP2212432A4 (en) * 2007-10-22 2011-10-19 Schering Corp COMPLETELY HUMAN ANTI-VEGF ANTIBODIES AND USE PROCEDURES
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
TWI489994B (zh) * 2008-03-17 2015-07-01 Baxter Healthcare Sa 供免疫球蛋白及玻尿酸酶之皮下投藥之用的組合及方法
CN102149416B (zh) 2008-09-10 2014-02-12 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 供治疗药物使用的传送装置
US7905299B2 (en) 2008-09-18 2011-03-15 Longyear Tm, Inc. Articulation assembly for moving a drill mast
ES2531385T3 (es) 2008-09-19 2015-03-13 Hoffmann La Roche Formulación que comprende un anticuerpo contra la selectina P
US20100305500A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Pacira Pharmaceuticals, Inc. Hyaluronidase as an adjuvant for increasing the injection volume and dispersion of large diameter synthetic membrane vesicles containing a therapeutic agent
US9345661B2 (en) 2009-07-31 2016-05-24 Genentech, Inc. Subcutaneous anti-HER2 antibody formulations and uses thereof
US20130236448A1 (en) 2009-08-04 2013-09-12 F. Hoffmann-La Roche Ag (Roche Glycart Ag) Concentrated polypeptide formulations with reduced viscosity
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
MX2013005024A (es) 2010-11-08 2013-11-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-il-6 receptor administrado subcutaneamente.

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US20020035736A1 (en) * 2000-03-16 2002-03-21 Sharon Erickson HER2-transgenic non-human tumor model
US20060104968A1 (en) * 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
WO2005023328A2 (en) * 2003-08-26 2005-03-17 Becton Dickinson And Company Methods for intradermal delivery of therapeutics agents
US20070071675A1 (en) * 2005-08-19 2007-03-29 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
WO2008150949A1 (en) * 2007-05-30 2008-12-11 Abbott Laboratories HUMANIZED ANTIBODIES TO Aß(20-42) GLOBULOMER AND USES THEREOF

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BOOKBINDER, L.H. HOFER, A. HALLER, M.F. ZEPEDA, M.L. KELLER, G.A. LIM, J.E. EDGINGTON, T.S. SHEPARD, H.M. PATTON, : "A recombinant human enzyme for enhanced interstitial transport of therapeutics", JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE., ELSEVIER, AMSTERDAM., NL, vol. 114, no. 2, 28 August 2006 (2006-08-28), NL, pages 230 - 241, XP005625403, ISSN: 0168-3659, DOI: 10.1016/j.jconrel.2006.05.027 *

Also Published As

Publication number Publication date
CL2013002550A1 (es) 2013-12-13
EP2459167B2 (en) 2022-03-02
CR20110679A (es) 2012-03-06
TW201328708A (zh) 2013-07-16
AR108936A2 (es) 2018-10-10
EA031013B1 (ru) 2018-11-30
SI2687202T1 (sl) 2023-07-31
JP2013224305A (ja) 2013-10-31
MY163001A (en) 2017-07-31
PL2687202T3 (pl) 2023-07-24
ES2948033T3 (es) 2023-08-30
IL253941A0 (en) 2017-10-31
CA2768458A1 (en) 2011-02-03
ZA201207815B (en) 2013-07-31
US20110044977A1 (en) 2011-02-24
DOP2015000255A (es) 2016-01-31
US9968676B2 (en) 2018-05-15
WO2011012637A2 (en) 2011-02-03
RS64314B1 (sr) 2023-08-31
JP5462944B2 (ja) 2014-04-02
JP2013500947A (ja) 2013-01-10
ECSP12011643A (es) 2012-02-29
EP2687202A1 (en) 2014-01-22
EA201400270A1 (ru) 2014-06-30
MA33471B1 (fr) 2012-07-03
KR101413947B1 (ko) 2014-06-30
CN102573789A (zh) 2012-07-11
LT2687202T (lt) 2023-07-10
ECSP23041058A (es) 2023-07-31
US20180228895A1 (en) 2018-08-16
TN2012000023A1 (en) 2013-09-19
US20210353753A1 (en) 2021-11-18
EP4257150A2 (en) 2023-10-11
CN105168125A (zh) 2015-12-23
WO2011012637A4 (en) 2011-11-03
SG178185A1 (en) 2012-03-29
IN2012CN00961A (ru) 2013-05-24
CO6430421A2 (es) 2012-04-30
IL217382A (en) 2017-09-28
EA201200204A1 (ru) 2012-08-30
DK2459167T3 (da) 2013-06-03
KR101769652B1 (ko) 2017-08-18
TWI474834B (zh) 2015-03-01
US20160166689A1 (en) 2016-06-16
EP2459167A2 (en) 2012-06-06
HRP20230462T1 (hr) 2023-07-21
IL217382A0 (en) 2012-02-29
MY172245A (en) 2019-11-19
US20130216532A1 (en) 2013-08-22
EP4257150A3 (en) 2023-11-01
ZA201109459B (en) 2013-05-29
HRP20130697T1 (en) 2013-09-30
CL2012000269A1 (es) 2012-10-12
IL253941B (en) 2021-10-31
HUE062122T2 (hu) 2023-09-28
CY1114185T1 (el) 2016-08-31
GT201200024A (es) 2013-10-28
HK1215157A1 (zh) 2016-08-19
PE20120665A1 (es) 2012-06-01
EP4339212A2 (en) 2024-03-20
ES2413090T5 (es) 2022-05-03
KR20130041374A (ko) 2013-04-24
AU2010277657B2 (en) 2013-05-02
MX2012001124A (es) 2012-03-29
SI2459167T2 (sl) 2022-05-31
HK1172236A1 (en) 2013-04-19
TW201106973A (en) 2011-03-01
ES2413090T3 (es) 2013-07-15
BR112012002080A2 (pt) 2016-04-12
NZ603900A (en) 2014-03-28
PE20131324A1 (es) 2013-11-04
AR077605A1 (es) 2011-09-07
PT2459167E (pt) 2013-06-24
SI2459167T1 (sl) 2013-07-31
US20240207400A1 (en) 2024-06-27
RS52913B2 (sr) 2022-05-31
PL2459167T5 (pl) 2023-12-11
JP5878144B2 (ja) 2016-03-08
MX355450B (es) 2018-04-18
DK2687202T3 (da) 2023-07-10
CN102573789B (zh) 2015-09-30
FI2687202T3 (fi) 2023-06-21
EP2459167B1 (en) 2013-05-15
NZ597190A (en) 2012-12-21
AU2010277657A1 (en) 2012-02-02
EP2687202B1 (en) 2023-05-10
RS52913B (en) 2014-02-28
HRP20130697T4 (hr) 2022-04-29
UA102166C2 (ru) 2013-06-10
PT2687202T (pt) 2023-06-15
WO2011012637A3 (en) 2011-08-25
CA2768458C (en) 2013-12-03
KR20120038540A (ko) 2012-04-23
TWI401089B (zh) 2013-07-11
PL2459167T3 (pl) 2013-10-31
EP4339212A3 (en) 2024-06-19
US9345661B2 (en) 2016-05-24
UA104254C2 (ru) 2014-01-10
SG193146A1 (en) 2013-09-30
CN113967194A (zh) 2022-01-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA027553B1 (ru) Содержащая антитело к her2 композиция для подкожного введения
ES2953478T3 (es) Formulaciones farmacéuticas altamente concentradas
AU2013202020B2 (en) Subcutaneous anti-HER2 antibody formulation
EA041673B1 (ru) Высококонцентрированные фармацевтические композиции, содержащие антитело к cd20, их применение и способ лечения с помощью таких композиций

Legal Events

Date Code Title Description
ND4A Extension of term of a eurasian patent
ND4A Extension of term of a eurasian patent
ND4A Extension of term of a eurasian patent