CN116964096A - 预防、减轻或治疗肿瘤的方法 - Google Patents

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Abstract

本申请提供了一种治疗肿瘤的方法：给予HER2抑制剂，所述患者包含HER2、CDK12蛋白的改变。本申请提供了一种医药产品，包含：HER2抑制剂和多重CDK抑制剂，显示出对肿瘤细胞生长的显著抑制作用。

Description

预防、减轻或治疗肿瘤的方法
背景技术
乳腺癌是全球女性最常见的癌症，其中大约15-20％的病例表现为HER2(ERBB2)过表达或扩增，并且可以通过HER2定向靶向药物进行治疗。
近几十年来，引入HER2定向疗法，尤其是曲妥珠单抗(Trastuzumab)、帕妥珠单抗(Pertuzumab)、抗体药物联合物(ADCs)如T-DM1和DS8201a，以及酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)如拉帕替尼(lapatinib)、来那替尼(neratinib)、吡咯替尼(pyrotinib)和图卡替尼(tucatinib)，显著改善了HER2阳性乳腺癌患者的预后。
然而，一些患者对这样的HER2定向疗法没有反应，甚至在治疗一段时间后显示出药物抵抗性。此外，HER2定向疗法可能导致患者基因组发生一些改变，使治疗策略更加复杂。
因此，仍然迫切需要开发下一代抗HER2药物，以增强治疗效果并逆转药物抵抗性。
发明内容
在本申请中发现，携带CDK12扩增肿瘤的受试者，和/或HER2蛋白和/或CDK12蛋白发生改变的受试者，和/或编码它们的基因发生改变的受试者，对本申请所述的抗HER2双特异性抗体更具响应性(例如，更可能出现肿瘤体积显著减少；和/或更可能有更长的无进展生存期(PFS))。
本公开提供一种预防、缓解或治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，包含：给予蛋白质和/或编码该蛋白质的基因发生改变的受试者本申请的HER2抑制剂，其中该蛋白质包含HER2和/或CDK12。本申请还提供一种用于检测受试者中该改变以确定本申请的HER2抑制剂是否适合该受试者的方法和系统。本申请还提供使用本申请的HER2抑制剂、本申请的多重CDK抑制剂和/或本申请的免疫检查点抑制剂治疗肿瘤的方法。此外，本申请还提供一种药物产品，其中包含本申请的HER2抑制剂、本申请的多重CDK抑制剂和/或本申请的免疫检查点抑制剂。
在一个方面，本申请提供了一种预防、缓解或治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，包含：给予受试者HER2抑制剂，其中该受试者的蛋白质和/或编码该蛋白质的基因发生改变，且该蛋白质包含HER2和/或CDK12。
在另一个方面，本申请提供了一种预防、缓解或治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，该方法适用于需要的受试者，包含：给予受试者HER2抑制剂，其中该肿瘤是CDK12扩增肿瘤。
在一些实施例中，HER2抑制剂能够抑制人类的HER2。
在一些实施例中，HER2抑制剂是HER2抗体或其抗原结合部分和/或其结合物。
在一些实施例中，HER2抑制剂从以下组合中选择：帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和玛格妥昔单抗(Margetuximab)。
在一些实施例中，HER2抑制剂从以下组合中选择：DS8201a和T-DM1。
在一些实施例中，HER2抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合部分，且能够结合到人类HER2的不同表位。
在一些实施例中，HER2抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合部分，该双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一轻链和第二轻链，其中第一轻链和第二轻链具有相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，HER2抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合部分，该双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一重链和第二重链，其中第一重链和第二重链能够在生理条件下或体外蛋白表达过程中与轻链分别正确组装。
在一些实施例中，第一轻链和第二轻链能够分别与帕妥珠单抗的重链和曲妥珠单抗的重链正确组装。
在一些实施例中，第一轻链和/或第二轻链的可变区包含SEQ ID NO:91-96中的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，第一轻链和/或第二轻链的可变区包含SEQ ID NO:91中的氨基酸序列。
在一些实施例中，第一轻链和第二轻链分别选择自帕妥珠单抗的轻链或其突变体，曲妥珠单抗的轻链或其突变体。
在一些实施例中，第一轻链包含SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列，和/或，第二轻链包含SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，重链可变区域分别是帕妥珠单抗的重链可变区域和曲妥珠单抗的重链可变区域。
在一些实施例中，第一重链的可变区包含SEQ ID NO:87中的氨基酸序列；而第二重链的可变区包含SEQ ID NO:88中的氨基酸序列。
在一些实施例中，第一重链和第二重链包含恒定区域，并且该恒定区域来源于人类IgG的恒定区域。
在一些实施例中，重链的Fc片段序列包含SEQ ID NO:89-90和101-104中的任一个所示的序列。
在一些实施例中，其中两个重链包含SEQ ID NO:80-81、83-84、97-100中的任一个所示的序列。
在一些实施例中，HER2抑制剂以约15毫克/千克至约35毫克/千克的剂量给予受试者。
在一些实施例中，HER2抑制剂的剂量约为20毫克/千克至约30毫克/千克。
在一些实施例中，HER2抑制剂的剂量约为20毫克/千克。
在一些实施例中，HER2抑制剂的剂量约为30毫克/千克。
在一些实施例中，HER2抑制剂每两周左右给予一次，或者每三周左右给予一次。
在一些实施例中，HER2抑制剂的剂量约为20毫克/千克，并且HER2抑制剂每两周左右给予一次。
在一些实施例中，HER2抑制剂的剂量约为30毫克/千克，并且HER2抑制剂每三周左右给予一次。
在一些实施例中，HER2抑制剂通过静脉注射给药。
在一些实施例中，该改变包含基因的突变、扩增、融合和/或重排。
在一些实施例中，该改变包含蛋白质和/或编码该蛋白质的mRNA的突变和/或扩增。
在一些实施例中，该改变包含蛋白质的扩增、编码该蛋白质的mRNA的扩增和/或基因的扩增。
在一些实施例中，该改变包含HER2蛋白质的至少一个突变，其中该突变包含T862A、H878Y和/或R897W。
在一些实施例中，该改变包含HER2蛋白质的突变，其中该突变包含T862A、H878Y和R897W。
在一些实施例中，该改变包含CDK12基因的改变。
在一些实施例中，该改变包含CDK12基因的扩增。
在一些实施例中，该改变包含CDK12基因和HER2基因的共同扩增。
在一些实施例中，扩增包含CDK12基因和/或HER2基因的DNA复制数增加。
在一些实施例中，扩增包含CDK12蛋白质和/或HER2蛋白质的mRNA和/或蛋白质表达水平增强。
在一些实施例中，该受试者对于HER2相关肿瘤的传统治疗方法没有反应。
在一些实施例中，对于HER2相关肿瘤的传统治疗方法包含给予HER2-ADC、吡咯替尼、来那替尼、图卡替尼、曲妥珠单抗和/或帕妥珠单抗。
在一些实施例中，对于HER2相关肿瘤的传统治疗方法包含给予多西他赛(docetaxel)、卡培他滨(capecitabine)和/或拉帕替尼。
在一些实施例中，肿瘤是实体肿瘤。
在一些实施例中，肿瘤可以是转移性肿瘤、早期肿瘤和/或局部晚期肿瘤。
在一些实施例中，肿瘤可以是HER2阳性肿瘤和/或HER2低表达肿瘤。
在一些实施例中，肿瘤可以是乳腺癌和/或胃癌。
在一些实施例中，乳腺癌可以是HER2阳性乳腺癌和/或HER2低表达乳腺癌。
在一些实施例中，乳腺癌可以是早期乳腺癌、局部晚期乳腺癌和/或转移性乳腺癌；而胃癌可以是早期胃癌、局部晚期胃癌和/或转移性胃癌。
在一些实施例中，该方法包含以下步骤：检测受试者的改变，以确定是否适合给予HER2抑制剂。
在一些实施例中，检测包含对受试者的HER2蛋白质进行测序。
在一些实施例中，检测包含对受试者的CDK12基因进行测序。
在一些实施例中，检测包含对受试者的HER2基因进行测序。
在一些实施例中，测序包含新一代测序(NGS)和/或微滴式数字PCR(ddPCR)。
在一些实施例中，测序使用来自受试者的循环肿瘤DNA(ctDNA)。
在一些实施例中，测序使用来自受试者的外周血和/或肿瘤组织。
在一些实施例中，该方法进一步包含给予多重CDK抑制剂。
在一些实施例中，多重CDK抑制剂抑制CDK1、CDK2、CDK5、CDK9和/或CDK12。
在一些实施例中，多重CDK抑制剂抑制CDK12。
在一些实施例中，CDK12是人类CDK12。
在一些实施例中，多重CDK抑制剂不抑制CDK4、CDK6。
在一些实施例中，多重CDK抑制剂选自以下药物中的一组：THZ531、Dinaciclib和SR-3029。
在一些实施例中，多重CDK抑制剂是Dinaciclib。
在一些实施例中，该方法进一步包含给予免疫检查点抑制剂。
在一些实施例中，免疫检查点抑制剂能够特异性地结合PD-L1和CTLA4。
在一些实施例中，免疫检查点抑制剂是一种双特异性抗体或其抗原结合片段。
在一些实施例中，免疫检查点抑制剂是一种抗原结合片段，该抗原结合片段包含Fab、Fab'、F(ab)2、Fv片段、F(ab')2、scFv、di-scFv和/或dAb。
在一些实施例中，免疫检查点抑制剂是一种双特异性抗体，且该双特异性抗体是全人源抗体。
在一些实施例中，免疫检查点抑制剂是一种二聚体，该二聚体由两条多肽链组成，其中每条多肽链包含一个抗体Fc亚基。该二聚体包含两个或更多的免疫球蛋白单可变结构域(ISVDs)，其中至少一个ISVD能够特异结合PD-L1，至少一个ISVD能够特异结合CTLA4。
在一些实施例中，两条多肽链中的至少其中一条多肽链包含能够特异结合PD-L1的ISVD和能够特异结合CTLA4的ISVD。
在一些实施例中，两条多肽链中的每一条都包含能够特异结合PD-L1的ISVD和能够特异结合CTLA4的ISVD。
在一些实施例中，对于两条多肽链中的一条或两条，能够特异结合PD-L1的ISVD任选地通过连接体(linker)与能够特异结合CTLA4的ISVD融合。
在一些实施例中，对于两条多肽链中的一条或两条：能够特异结合PD-L1的ISVD任选地通过连接体与能够特异结合CTLA4的ISVD融合；以及，能够特异结合CTLA4的ISVD任选地通过连接体与与抗体Fc亚单位融合。
在一些实施例中，对于两条多肽链中的一条或两条：能够特异结合PD-L1的ISVD的C端任选地通过连接体与能够特异结合CTLA4的ISVD的N端融合；以及，能够特异结合CTLA4的ISVD的C端任选地通过连接体与抗体Fc亚基的N端融合。
在一些实施例中，对于两条多肽链中的一条或两条：能够特异结合PD-L1的ISVD任选地通过连接体与能够特异结合CTLA4的ISVD融合；而能够特异结合PD-L1的ISVD任选地通过连接体与抗体Fc亚基融合。
在一些实施例中，对于两条多肽链中的一条或两条：能够特异结合CTLA4的ISVD的C端任选地通过连接体与特异结合PD-L1的ISVD的N端融合；而能够特异结合PD-L1的ISVD的C端任选地通过连接体与抗体Fc亚基的N端。
在一些实施例中，抗体Fc亚基是源自IgG抗体的Fc亚基。
在一些实施例中，IgG是人类的IgG1。
在一些实施例中，抗体Fc亚基包含如SEQ ID NO:35、38和39中所列出的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD(或者特异于PD-L1的ISVD)能够与人类PD-L1的N端IgV结构域结合。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD能够与人类PD-L1N端IgV结构域的I54、Y56、E58、Q66和/或R113残基结合，其中人类PD-L1N端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD还与人类PD-L1N端IgV结构域的D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125残基结合，其中人类PD-L1N端IgV结构域包含如SEQ IDNO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD能够与人类PD-L1N端IgV结构域的构象表位结合，其中构象表位包括人类PD-L1N端IgV结构域的I54、Y56、E58、Q66和R113残基，并且其中人类PD-L1N端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD与人类PD-L1N端IgV结构域的构象表位结合，其中构象表位包括人类PD-L1N端IgV结构域的I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和R125残基，并且其中人类PD-L1N端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与PD1的结合。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与CD80的结合。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD能够与参考抗PD-L1抗体交叉竞争结合PD-L1，其中参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，重链包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:5和9中的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:3和7中的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考抗PD-L1抗体包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:4、8、11中的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考抗PD-L1抗体是特异结合PD-L1的ISVD。
在一些实施例中，参考抗PD-L1抗体包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考的抗PD-L1抗体包含重链可变结构域，其包含如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:5或9中的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:3或7中的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:4、8或11中的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链可变区域，其包含如SEQ IDNO:6、10、12、13、14或15中的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链可变区域，其包含如SEQ IDNO:6所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异结合CTLA4的ISVD(或者特异于CTLA4的ISVD)能够特异性地与人CTLA4结合。
在一些实施例中，能够特异结合CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD80的结合。
在一些实施例中，能够特异结合CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD86的结合。
在一些实施例中，能够特异结合CTLA4的ISVD与参考抗-CTLA4抗体发生交叉竞争，其中参考抗-CTLA4抗体包含重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考抗-CTLA4抗体包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考抗-CTLA4抗体包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考抗-CTLA4抗体包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:18、21或23中的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考抗-CTLA4抗体是一种能够特异性结合CTLA4的ISVD。
在一些实施例中，参考抗-CTLA4抗体包括重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中的任何一个中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考抗-CTLA4抗体包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异性结合CTLA4的ISVD包含重链CDR3，其包含如SEQ IDNO:19所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异性结合CTLA4的ISVD包含重链CDR1，其包含如SEQ IDNO:17所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异性结合CTLA4的ISVD包含重链CDR2，其包含如SEQ IDNO:16所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异性结合CTLA4的ISVD包含重链CDR2，其包含如SEQ IDNO:18、21和23中的任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，能够特异性结合CTLA4的ISVD包含重链可变区域，其包含如SEQID NO:20、22和24-32中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异性结合CTLA4的ISVD包含重链可变区域，其包含如SEQID NO:20所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，该二聚体是同源二聚体。
在某些实施例中，连接体包含如SEQ ID NO:33-34中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，两条多肽链中的一条或两条包含如SEQ ID NO:40-43、46、48和50中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，两条多肽链中的一条或两条包含如SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，该二聚体能够阻断PD-L1与PD-1的结合。
在某些实施例中，该二聚体能够阻断PD-L1与CD80的结合。
在某些实施例中，该二聚体能够阻断CTLA4与CD80的结合。
在某些实施例中，该二聚体能够阻断CTLA4与CD86的结合。
在另一方面，本申请提供了一种药物产品，包含HER2抑制剂和多重CDK抑制剂。
某些实施例中，该HER2抑制剂能够抑制人类HER2。
在某些实施例中，该HER2抑制剂是HER2抗体或其抗原结合部分和/或其缀合物。
在某些实施例中，该HER2抑制剂可从帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和玛格妥昔单抗中选择。
在某些实施例中，该HER2抑制剂可从DS8201a和T-DM1中选择。
在某些实施例中，该HER2抑制剂是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，能够与人类HER2的不同表位结合。
在某些实施例中，该HER2抑制剂是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，该双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一轻链和第二轻链，且第一轻链和第二轻链包含相同的氨基酸序列。
在某些实施例中，HER2抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合部分，其中该双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一重链和第二重链，并且在生理条件下或体外蛋白质表达期间，第一重链和第二重链能够正确地与轻链分别组装。
在某些实施例中，双特异性抗体或其抗原结合部分的第一轻链和第二轻链能够分别与帕妥珠单抗的重链和曲妥珠单抗的重链组装。
在某些实施例中，双特异性抗体或其抗原结合部分的第一轻链和/或第二轻链的可变区域包含如SEQ ID NO:91-96中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，双特异性抗体或其抗原结合部分的第一轻链和/或第二轻链的可变区域包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，第一轻链和第二轻链分别从帕妥珠单抗或其突变体的轻链中选择的，曲妥珠单抗或其突变体的轻链中选择。
在某些实施例中，第一轻链包含如SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列，和/或，第二轻链包含如SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，重链可变区域分别是帕妥珠单抗的重链可变区域和曲妥珠单抗的重链可变区域。
在某些实施例中，第一重链的可变区域包含如SEQ ID NO:87中的氨基酸序列；第二重链的可变区域包含如SEQ ID NO:88中的氨基酸序列。
在某些实施例中，第一重链和第二重链包含恒定区域，并且该恒定区域源自人体IgG的恒定区域。
在某些实施例中，重链的Fc片段序列包含如SEQ ID NO:89-90和101-104中的任一个所示的序列。
在某些实施例中，其中两条重链包含如SEQ ID NO:80-81、83-84和97-100中的任个中所示的序列。
在某些实施例中，多重CDK抑制剂抑制CDK1、CDK2、CDK5、CDK9和/或CDK12。
在某些实施例中，多重CDK抑制剂抑制CDK12。
在某些实施例中，CDK12是人类CDK12。
在某些实施例中，多重CDK抑制剂不抑制CDK4和CDK6。
在某些实施例中，多重CDK抑制剂是选自：THZ531、Dinaciclib和SR-3029。
在某些实施例中，多重CDK抑制剂是Dinaciclib。
在某些实施例中，HER2抑制剂和多重CDK抑制剂不包含在同一个容器中。
在某些实施例中，HER2抑制剂和多重CDK抑制剂分别包含在不同的容器中。
在某些实施例中，药物制剂还包含免疫检查点抑制剂。
在某些实施例中，免疫检查点抑制剂能够特异性地与PD-L1和CTLA4结合。
在某些实施例中，免疫检查点抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合片段。
在某些实施例中，免疫检查点抑制剂是抗原结合片段，且该抗原结合片段包含Fab、Fab'、F(ab)2、Fv片段、F(ab')2、scFv、二聚scFv和/或dAb。
在某些实施例中，免疫检查点抑制剂是双特异性抗体，且该双特异性抗体是全人源抗体。
在某些实施例中，免疫检查点抑制剂是二聚体，该二聚体由两条多肽链组成，每条多肽链包含抗体Fc亚基，其中该二聚体包括两个或更多的免疫球蛋白单可变结构域(ISVDs)，至少一个ISVD能够特异结合PD-L1，至少一个ISVD能够特异结合CTLA4。
在某些实施例中，两条多肽链中至少有一条包含能够特异结合PD-L1的ISVD和能够特异结合CTLA4的ISVD。
在某些实施例中，两条多肽链中的每一条都包含能够特异结合PD-L1的ISVD和能够特异结合CTLA4的ISVD。
在某些实施例中，对于两条多肽链中的一条或两条，能够特异结合PD-L1的ISVD与能够特异结合CTLA4的ISVD融合，可以通过连接子连接。
在某些实施例中，对于两条多肽链中的一条或两条，能够特异结合PD-L1的ISVD任选地通过连接子与能够特异结合CTLA4的ISVD融合；以及，能够特异结合CTLA4的ISVD任选地通过连接子与抗体Fc亚基融合。
在某些实施例中，对于两条多肽链中的一条或两条，能够特异结合PD-L1的ISVD的C端任选地通过连接子与能够特异结合CTLA4的ISVD的N端融合；以及，能够特异结合CTLA4的ISVD的C端任选地通过连接子与抗体Fc亚基的N端融合。
在某些实施例中，对于两条多肽链中的一条或两条，能够特异结合PD-L1的ISVD任选地通过连接子与能够特异结合CTLA4的ISVD融合；以及，能够特异结合PD-L1的ISVD任选地通过连接子与抗体Fc亚基融合。
在某些实施例中，对于两条多肽链中的一条或两条，能够特异结合CTLA4的ISVD的C端任选地通过连接子与能够特异结合PD-L1的ISVD的N端融合；以及，能够特异结合PD-L1的ISVD的C端任选地通过连接子与抗体Fc亚基的N端融合。
在某些实施例中，抗体Fc亚基源自IgG Fc亚基。
在某些实施例中，IgG是人类IgG1。
在某些实施例中，抗体Fc亚基的氨基酸序列包含如SEQ ID NO:35、38和39中的任一个所示的序列。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD能够与人类PD-L1的N端IgV结构域结合。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD能够与人类PD-L1的N端IgV结构域的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113结合，其中人类PD-L1的N端IgV结构域包含如SEQID NO:64所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD能够进一步与人类PD-L1的N端IgV结构域的氨基酸残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125结合，其中人类PD-L1的N端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD能够与人类PD-L1的N端IgV结构域的构象表位结合，该构象表位包含人类PD-L1的N端IgV结构域的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和R113，其中人类PD-L1的N端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD能够与人类PD-L1的N端IgV结构域的构象表位结合，该构象表位包含人类PD-L1的N端IgV结构域的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和R125，其中人类PD-L1的N端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与PD1的结合。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与CD80的结合。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD与参考抗PD-L1抗体交叉竞争结合PD-L1，其中参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，该重链CDR3的氨基酸序列包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，该重链CDR3的氨基酸序列包含如SEQ ID NO:5和9中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，该重链CDR1的氨基酸序列包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，该重链CDR1的氨基酸序列包含如SEQ ID NO:3和7中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，参考抗PD-L1抗体包含重链CDR2，该重链CDR2的氨基酸序列包含如SEQ ID NO:4、8和11中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，参考抗PD-L1抗体是对PD-L1特异的ISVD。
在某些实施例中，参考抗PD-L1抗体包含重链可变区域，该重链可变区域包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，参考抗PD-L1抗体包含重链可变区域，该重链可变区域包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:5和9中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:3和7中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:4、8和11中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链可变区域，该重链可变区域包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链可变区域，该重链可变区域包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，能够特异结合CTLA4的ISVD能够与人类CTLA4特异结合。
在某些实施例中，能够特异结合CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD80的结合。
在某些实施例中，能够特异结合CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD86的结合。
在某些实施例中，能够特异结合CTLA4的ISVD与参考抗CTLA4抗体竞争结合CTLA4，其中参考抗CTLA4抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，参考抗CTLA4抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:18、21和23中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，参考抗CTLA4抗体是能够特异结合CTLA4的ISVD。
在某些实施例中，参考抗CTLA4抗体包含重链可变区域，该重链可变区域包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，参考抗CTLA4抗体包含重链可变区域，该重链可变区域包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，特异结合CTLA4的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ IDNO:19所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，特异结合CTLA4的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ IDNO:17所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，特异结合CTLA4的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ IDNO:16所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，特异结合CTLA4的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ IDNO:18、21和23中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，特异结合CTLA4的ISVD包含重链可变区域，该重链可变区域包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，特异结合CTLA4的ISVD包含重链可变区域，该重链可变区域包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，二聚体是同源二聚体。
在某些实施例中，连接子包含如SEQ ID NO:33-34中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，两条多肽链中的一条或两条包含如SEQ ID NO:40-43、46、48和50中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，两条多肽链中的一条或两条包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，二聚体能够阻断PD-L1与PD-1的结合。
在某些实施例中，二聚体能够阻断PD-L1与CD80的结合。
在某些实施例中，二聚体能够阻断CTLA4与CD80的结合。
在某些实施例中，二聚体能够阻断CTLA4与CD86的结合。
在某些实施例中，药物产品是一种药物组合物。
在某些实施例中，HER2抑制剂、免疫检查点抑制剂和多重CDK抑制剂不包含在同一个容器中。
在某些实施例中，HER2抑制剂、免疫检查点抑制剂和多重CDK抑制剂分别包含在不同的容器中。
在另一方面，本申请还提供HER2抑制剂与多重CDK抑制剂和/或免疫检查点抑制剂联合在用于制备缓解、治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的药物中的用途，其中HER2抑制剂、多重CDK抑制剂和免疫检查点抑制剂的定义如本申请所述。
在另一方面，本申请提供了将本申请中定义的药物产品用于制备缓解或治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的药物用途。
在另一方面，本申请提供了一种确定受试者是否适合使用HER2抑制剂的方法，包括：检测受试者的一种改变，如果存在这种改变则该受试者适合使用HER2抑制剂，其中该改变位于蛋白质和/或编码该蛋白质的基因中，该蛋白质包含HER2和/或CDK12。
在某些实施例中，HER2抑制剂能够抑制人类HER2。
在某些实施例中，HER2抑制剂是HER2抗体或其抗原结合部分和/或其结合物。
在某些实施例中，HER2抑制剂选自帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和玛格妥昔单抗等药物。
在某些实施例中，HER2抑制剂选自DS8201a和T-DM1等药物。
在某些实施例中，HER2抑制剂是能够特异性结合人HER2不同表位的双特异性抗体或其抗原结合部分。
在某些实施例中，HER2抑制剂是能够特异结合人HER2的不同表位的双特异性抗体或其抗原结合部分，且该双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一轻链和第二轻链，其中第一轻链和第二轻链具有相同的氨基酸序列。
在某些实施例中，HER2抑制剂是能够特异结合人HER2不同表位的双特异性抗体或其抗原结合部分，且该双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一重链和第二重链，其中第一重链和第二重链能够在生理条件下或体外蛋白质表达过程中与相应的轻链正确组装。
在某些实施例中，第一轻链和第二轻链能够分别与与帕妥珠单抗的重链和曲妥珠单抗的重链组装。
在某些实施例中，第一轻链和/或第二轻链的可变区域包含如SEQ ID NO:91-96中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，第一轻链和/或第二轻链的可变区域包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，第一轻链和第二轻链分别选自帕妥珠单抗的轻链或其突变体、曲妥珠单抗的轻链或其突变体。
在某些实施例中，第一轻链包含如SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列，和/或第二轻链包含如SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，重链可变区域分别为帕妥珠单抗和曲妥珠单抗的重链可变区域。
在某些实施例中，第一重链的可变区域包含如SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列；第二重链的可变区域包含如SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，第一重链和第二重链包含恒定区，该恒定区源于人类IgG恒定区。
在某些实施例中，重链的Fc片段包含如SEQ ID NO:89-90、101-104中的任一个所示的序列。
在某些实施例中，两条重链中的一条或两条包含如SEQ ID NO:80-81、83-84、97-100中的任一个所示的序列。
在某些实施例中，改变包含基因的突变、扩增、融合和/或重排。
在某些实施例中，改变包含蛋白质和/或编码该蛋白质的mRNA的突变和/或扩增。
在某些实施例中，改变包含蛋白质的扩增、编码该蛋白质的mRNA的扩增和/或基因的扩增。
在某些实施例中，改变包含HER2蛋白质的至少一个位点的突变，其中该突变包含T862A、H878Y和/或R897W。
在某些实施例中，改变包含HER2蛋白质的突变，其中该突变包含T862A、H878Y和R897W。
在某些实施例中，改变包含CDK12基因的改变。
在某些实施例中，改变包含CDK12基因的扩增。
在某些实施例中，改变包含CDK12基因和HER2基因的共扩增。
在某些实施例中，扩增包含CDK12基因和/或HER2基因DNA拷贝的增强。
在某些实施例中，扩增包含CDK12蛋白质和/或HER2蛋白质mRNA和/或蛋白质表达水平的增强。
在某些实施例中，检测过程包含对受试者的HER2蛋白质进行测序。
在一些实施例中，检测包含对CDK12基因进行测序。
在一些实施例中，检测包含对HER2基因进行测序。
在一些实施例中，测序包含使用NGS和/或ddPCR技术。
在一些实施例中，测序使用来自受试者的ctDNA。
在一些实施例中，测序使用来自受试者的外周血液和/或肿瘤组织。
在另一方面，本申请提供了一个用于确定受试者是否适合接受HER2抑制剂治疗的系统，包含检测模块，其配置为检测受试者中蛋白质和/或编码该蛋白质的基因的改变，其中所述蛋白质包含HER2和/或CDK12。
在一些实施例中，所述改变包含基因中的突变、扩增、融合和/或重排。
在一些实施例中，所述改变包含蛋白质和/或编码该蛋白质的mRNA中的突变和/或扩增。
在一些实施例中，所述改变包含蛋白质的扩增、编码该蛋白质的mRNA的扩增和/或基因的扩增。
在一些实施例中，所述改变包含HER2蛋白质的至少一个突变，其中该突变包含T862A、H878Y和/或R897W。
在一些实施例中，改变包含HER2蛋白质的突变，其中该突变包含T862A、H878Y和R897W。
在一些实施例中，改变包含CDK12基因的改变。
在一些实施例中，改变包含CDK12基因的扩增。
在一些实施例中，改变包含CDK12基因和HER2基因的共扩增。
在一些实施例中，改变包含增加CDK12基因和/或HER2基因的DNA拷贝数。
在一些实施例中，扩增包含增加CDK12蛋白质和/或HER2蛋白质的mRNA和/或蛋白质表达水平。
在一些实施例中，检测模块被配置为对HER2蛋白质进行测序。
在一些实施例中，检测模块包含用于对HER2蛋白质进行测序的试剂。
在一些实施例中，检测模块被配置为对CDK12基因进行测序。
在一些实施例中，检测模块被配置为对HER2基因进行测序。
在一些实施例中，检测模块包含用于对CDK12基因进行测序的试剂和/或用于对HER2基因进行测序的试剂。
在一些实施例中，该系统包含样本收集模块。
在一些实施例中，样本收集模块被配置为从受试者收集ctDNA。
在一些实施例中，样本收集模块从受试者收集外周血液和/或肿瘤组织。
在一些实施例中，样本收集模块包含用于收集和/或分离ctDNA和/或肿瘤组织DNA的试剂。
在一些实施例中，HER2抑制剂能够抑制人类HER2。
在一些实施例中，HER2抑制剂是HER2抗体或其抗原结合部分和/或其缀合物。
在一些实施例中，HER2抑制剂从帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和玛格妥昔单抗等药物中选择。
在一些实施例中，HER2抑制剂从DS8201a和T-DM1等药物中选择。
在一些实施例中，HER2抑制剂是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，并且能够与人类HER2的不同表位结合。
在一些实施例中，HER2抑制剂是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，其中双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一轻链和第二轻链，且第一轻链和第二轻链具有相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，HER2抑制剂是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，其中双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一重链和第二重链，其中第一重链和第二重链能分别与轻链在生理条件下或体外蛋白质表达状态下正确组装。
在一些实施例中，第一轻链和第二轻链能够分别与帕妥珠单抗的重链和曲妥珠单抗的重链组装。
在一些实施例中，第一轻链和/或第二轻链的可变区域包含如SEQ ID NO:91-96中任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，第一轻链和/或第二轻链的可变区域包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，第一轻链和第二轻链分别选自帕妥珠单抗的轻链或其突变体，以及曲妥珠单抗的轻链或其突变体。
在一些实施例中，第一轻链包含如SEQ ID NO:65-70中任一个所示的氨基酸序列，和/或第二轻链包含如SEQ ID NO:65-70中任一个所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，重链的可变区域分别为帕妥珠单抗的重链可变区域和曲妥珠单抗的重链可变区域。
在一些实施例中，第一重链的可变区域包含如SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列，第二重链的可变区域包含SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，第一重链和第二重链具有一个恒定区域，并且该恒定区域源自人IgG的恒定区域。
在一些实施例中，重链的Fc片段序列包含如SEQ ID NO:89-90和101-104中任一个所示的序列。
在一些实施例中，两条重链的序列包含如SEQ ID NO:80-81、83-84和97-100中任一个所示的序列。
本申请的其他方面和优势将通过以下详细描述而变得显而易见，其中仅显示和描述了本申请的示例实施方式。正如将要认识到的，本申请能够具有其他和不同的实施方式，并且其多个细节能够在各种明显的方面进行修改，所有这些都不脱离本公开内容。因此，图纸和描述应被视为具有说明性质，而不是限制性质。
通过引用并入
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请，均按照引用并入，就像每个单独的出版物、专利或专利申请都明确且个别地被指明为引用纳入的范围内一样。
附图说明
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中描述的实施例和附图(亦称为“图(figure)”和“图(FIG)”)能够更好地理解本发明的特点和优势，对附图简要说明如下：
图1显示了22名患者组织ctDNA的下一代测序(NGS)信息。
图2显示了22名患者外周血ctDNA的NGS信息。
图3显示了本申请中的HER2抑制剂和多重CDK抑制剂抑制HER2阳性乳腺肿瘤细胞BT474的情况。
图4显示了本申请中的HER2抑制剂和多重CDK抑制剂抑制HER2阳性胃肿瘤细胞N87的情况。
图5-6显示了本申请中的HER2抑制剂和多重CDK抑制剂抑制CDK12扩增的实体肿瘤细胞的情况。
图7-8显示了本申请中的HER2抑制剂和多重CDK抑制剂抑制CDK12扩增实体肿瘤细胞的情况。
图9显示了本申请中的HER2抑制剂显著抑制HER2阳性胃肿瘤细胞N87的情况。
图10-11显示了本申请中的HER2抑制剂抑制CDK12扩增实体肿瘤细胞的情况。
具体实施方式
尽管在此展示并描述了本发明的各种实施方式，但对于熟练的技术人员来说，这些实施方式仅为例示而提供。对于不脱离本发明的各种改变、变化和替换可能会发生。应当理解，可以采用各种替代方案来实施本文所述的本发明实施方式。
如本文所使用，术语“HER2”，通常指的是I型跨膜蛋白，也称为c-erbB2、ErbB2或Neu，属于表皮生长因子受体家族。在本申请的背景下，“HER2”一词还包括HER2的同源体、变体和同型体，包括剪切同型体。术语“HER2”还涵盖具有一个或多个HER2同源体、变体和同型体序列的蛋白质，以及序列片段，只要这些变体蛋白质(包括同型体)、同源蛋白质和/或片段被一种或多种HER2特异性抗体识别，例如帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和玛格妥昔单抗提供的抗体。HER2可以是人类HER2。人类HER2基因位于染色体位置17q12，并且HER2基因的基因组序列可以在GenBank中找到(NG_007503.1)。在人类中，存在五种HER2同型体：A、B、C、D和E；本文中的术语“HER2”用于集体指代所有HER2同型体。
如本文所使用，术语“CDK”，通常指的是细胞周期蛋白依赖激酶。CDK可以与细胞周期蛋白(例如Cyclin H)结合，后者是一种调节蛋白。CDK可以在丝氨酸和苏氨酸上磷酸化它们的底物。CDK可包括CDK1、CDK2、CDK2、CDK4、CDK5、CDK7、CDK8、CDK9、CDK10、CDK11、CDK12、CDK13、CDK14、CDK16、CDK18和CDK20。术语“CDK抑制剂”可指选择性转录CDK抑制剂。例如，CDK抑制剂可用于抑制选择性转录CDK1、CDK2、CDK5、CDK9和/或CDK12，尤其是选择性转录CDK12。
如本文所使用，术语“CDK12”，通常指的是细胞周期蛋白依赖激酶12，它是细胞周期的关键调节因子。CDK12也称为CRK7、CRKR或CRKRS。CDK12位于染色体17上，位于17q21座位内，该座位含有多个乳腺癌易感候选基因(Kauraniemi等，癌症研究，2001，61(22)，8235-8240)。人类CDK12基因的基因序列可以在GenBank中找到(51755)。CDK12基因在黑猩猩、恒河猴、狗、牛、小鼠、大鼠、鸡和青蛙中保守。
如本文所使用，术语“CTLA4”，通常指的是细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4，以及其功能变体和/或功能片段。CTLA4是属于CD28家族的免疫抑制性受体。CTLA4在体内仅在T细胞(CD4+和CD8+细胞)上表达，并与两个配体CD80和CD86(也称为B7-1和B7-2)结合。例如，“CTLA4”一词可能包括多肽或其片段，其氨基酸序列与NCBI Accession No.AAL07473.1至少具有约85％的相似性，并且能够特异性地结合到CD80和/或CD86。术语“CTLA4”可包括整个CTLA4受体、其细胞外域，以及由功能性活性部分与第二个物质(例如蛋白质结构域)共价连接的融合蛋白。术语“CTLA4”可能包括与天然CTLA4的氨基酸序列不同但保留特异性结合到配体CD80和/或CD86的变体。本文中所指的“CTLA4”可能包括人类CTLA4(hCTLA4)、变体、同型体和hCTLA4的物种同源物，以及具有至少一个与hCTLA4共有的抗原表位的类似物。例如，“CTLA4”一词还可能包括其他物种(如其他哺乳动物，例如大鼠、小鼠、兔、非人灵长类动物、猪或牛)的CTLA4。完整的hCTLA4序列可以在GenBank Accession No.1493中找到。
如本文中所用，术语“PD-L1”通常指程序性死亡配体1蛋白、其功能性变体和/或其功能性片段。PD-L1也被称为分化簇274(CD274)或B7同源物1(B7-H1)，并且是由CD274基因(人)编码的蛋白质。PD-L1与其受体程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)结合，所述程序性细胞死亡蛋白1在活化的T细胞、B细胞和巨噬细胞中表达((Ishida等人，1992EMBO J,11:3887-3395；Okazaki等人，Autoimmune dilated cardiomyopathy in PD-1receptor-deficientmice.Science,2001；291:319-22)。PD-L1与PD-1的复合通过抑制T细胞增殖和细胞因子IL-2和IFN-γ的产生而发挥免疫抑制作用(Freeman等人，Engagement of PD-1immunoinhibitory receptor by a novel B7family member leads to negativeregulation of lymphocyte activation,J.Exp.Med.2000,192:1027-1034；Carter等人，PD-1:PD-L inhibitory pathway affects both CD4(+)and CD8(+)T cells and isovercome by IL-2.Eur.J.Immunol.2002,32:634–643)。例如，术语“PD-L1”可包括与NCBI登录号Q9NZQ7具有至少约85％氨基酸序列同一性并且特异性结合PD1的多肽或其片段。术语PD-L1包括完整的PD-L1配体、可溶性PD-L1配体和包含与第二元件(如,蛋白质结构域)共价连接的PD-L1配体的功能活性元件的融合蛋白。PD-L1的定义还包括变体，其氨基酸序列与天然存在的PD-L1不同，但保留了与受体PD1特异性结合的能力。在PD-L1定义中，还包括增强PD1生物活性的变体。PD-L1序列在本领域中是已知的，并且例如以GenBank登录号29126提供。如本文中所用，术语“PD-L1”包括人PD-L1(hPD-L1)、hPD-L1的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD-L1具有至少一个共同表位的类似物。例如，术语“PD-L1”还涵盖来自其它物种的PD-L1，诸如其它哺乳动物，例如大鼠、小鼠、兔、非人灵长类动物、猪或牛。完整hPD-L1序列可在GenBank登录号29126下找到。
如本文所使用，术语“抗体”，通常指的是免疫球蛋白或其片段或衍生物，并包括任何包含抗原结合位点的多肽，无论是在体外还是在体内产生。该术语包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体、非特异性抗体、人源化抗体、单链抗体、嵌合抗体、合成抗体、重组抗体、杂交抗体、突变抗体和移植抗体。术语“抗体”还可以包括抗体片段，例如Fab、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、dAb和其他保留抗原结合功能的抗体片段，即特异性地结合，例如特异性地与HER2结合。通常，这些片段将包含抗原结合域。
如本文所使用，术语“双特异性抗体”，通常指的是能够分别与两种不同的抗原或其抗原表位结合的抗体。例如，双特异性抗体可能包括至少一种轻链或其片段，以及至少一种重链或其片段。例如，双特异性抗体可能包括一种轻链或其片段，该片段可能特异性地结合到第一种抗原或其抗原表位和第二种抗原或其抗原表位。例如，双特异性抗体可能包括两种重链或其片段，分别与第一种抗原或其抗原表位以及第二种抗原或其抗原表位结合。例如，第一种抗原或其抗原表位和第二种抗原或其抗原表位可能是两种不同的HER2抗原。
如本文所使用，术语“HER2阳性”，通常指的是包含在其细胞表面具有HER2蛋白的实体肿瘤。HER2蛋白可能过度表达，例如由基因扩增引起。过度表达HER2的实体肿瘤可以通过免疫组织化学评分根据每个细胞表达的HER2分子的拷贝数来评估，并可以通过生化方法确定(参考Hudziak等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：7159-7163[1987])。例如，HER2阳性的实体肿瘤可能包括HER-2阳性乳腺癌。HER-2阳性乳腺癌可能对雌激素受体测试呈阳性，并且可能是HER2非扩增的浸润性乳腺癌。HER2阳性乳腺癌可能处于晚期。HER2阳性乳腺癌可能存在转移。
如本文所使用，术语“HER2低表达”，通常指的是包含在其细胞中表达非常低水平HER2的实体肿瘤。HER2低表达可能指的是HER2阴性肿瘤，其IHC检测为1+或2+且FISH阴性。HER2的表达水平可以通过免疫组织化学或FISH进行测量。例如，HER2水平低的群体可能更有可能是高级别的、EGFR阳性且ER/HER3/HER4阴性的。
如本文所使用，术语“改变”，通常指的是蛋白质及/或编码该蛋白质的基因的任何变化。这种变化可能包括蛋白质及/或编码该蛋白质的基因表达水平的增加(或减少)。这种改变可能包括蛋白质及/或编码该蛋白质的基因序列中的任何突变(如插入、替换和/或删除)。
如本文所使用，术语“扩增”，通常指的是基因组核酸序列的拷贝数高于正常水平。例如，相比于正常细胞，一个基因具有更高的DNA表达水平和/或拷贝数。例如，由该基因编码的mRNA和/或蛋白质可能具有相比于正常细胞更高的表达水平和/或拷贝数。例如，扩增可能发生在肿瘤细胞和/或患有肿瘤的个体中。
如本文所使用，术语“共扩增”，通常指的是细胞中不同基因的拷贝数在基本同时被扩增的过程。例如，共扩增可能发生在肿瘤细胞中的至少两个基因之间。例如，共扩增可能指的是一个基因(例如HER2基因)的更高DNA和/或RNA表达水平伴随着另一个基因(例如CDK12基因)的更高DNA和/或RNA表达水平。例如，共扩增可能指的是一个蛋白质(例如HER2)的更高表达水平伴随着另一个蛋白质(例如CDK12)的更高表达水平。共扩增可能在肿瘤细胞中自然发生。
如本文所使用，术语“突变”，通常指的是核酸序列或多肽序列中的改变。例如，突变可能是点突变，如转换或转位。例如，突变可能是缺失、插入或复制。例如，突变可能包括氨基酸序列中一个氨基酸被替换为另一个氨基酸。这样的替换可以以ANo.(X)B的格式表示，表示氨基酸A在氨基酸序列的N端第(X)个氨基酸处被氨基酸B所取代。例如，突变可能发生在肿瘤细胞和/或患有肿瘤的个体中。
如本文所使用，术语“融合”，通常指的是由至少两个先前独立的基因形成的混合基因。融合可能发生由于易位、间质性缺失或染色体倒位。融合可以通过下一代测序技术和/或转录组查看器(TViewer)来检测。例如，融合可能发生在肿瘤细胞和/或患有肿瘤的个体中。
如本文所使用，术语“重排”，通常指的是肿瘤细胞中频繁发生的遗传改变。例如，基因的重排可能经历基因融合。例如，重排可能是体细胞重组。例如，重排可能发生在肿瘤细胞和/或患有肿瘤的个体中。
如本文所使用，术语“实体肿瘤”，通常指的是通常不包含液体区域的异常组织块。实体肿瘤可能是恶性的，可能属于癌症。不同类型的实体肿瘤以形成它们的细胞类型来命名。例如，实体肿瘤可能包括乳腺癌。
如本文所使用，术语“转移性”，通常指的是肿瘤从其起源部位扩散到身体的其他部位。对于许多类型的肿瘤，也可以称为第IV(4)期肿瘤。转移性肿瘤可能在肿瘤细胞从主要肿瘤中脱落并进入血液或淋巴系统时发展。例如，蔓延到肺部的乳腺癌可能被称为转移性乳腺癌。
如本文所使用，术语“早期肿瘤”，通常指的是没有深入生长到附近组织的肿瘤。早期肿瘤可能被称为早期癌症，或者可能被称为第I(1)期肿瘤。早期肿瘤可能尚未蔓延到远处区域。
如本文所使用，术语“局部晚期肿瘤”，通常指的是肿瘤已经在起始部位之外生长，但尚未扩散到身体的其他部位。例如，局部晚期乳腺癌可能是乳腺癌的一种子集，其特征是在没有远处转移的情况下，具有最先进的乳腺肿瘤。
如本文所使用，术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”，通常指的是在临床上进行干预，试图改变正在接受治疗的个体的自然病程，并可在预防期或临床病理学过程中执行。治疗的期望效果还可能包括预防疾病的发生或复发，缓解症状，减轻疾病的直接或间接病理后果，预防转移，减缓疾病进展的速度，改善或减轻疾病状态，并实现缓解或改善预后。例如，抗HER2双特异性抗体可用于延缓疾病发展或减缓疾病进展。
如本文所使用，术语“预防”，通常指的是延迟疾病的发生，阻碍进展，阻碍出现，保护、抑制或消除疾病或障碍的发生或减少此类损害、影响或症状的发生率。
如本文所使用，术语“缓解”，通常指的是减轻疾病或障碍的体征或症状的严重程度。缓解可能包括减轻但不消除疾病或障碍的体征或症状。
如本文所使用，术语“受试者”，通常指的是动物，例如人类。例如，受试者可能包括“非人类动物”，其中可能包括鼠、小鼠、兔子、绵羊、猫、狗、牛、猪和非人类灵长类动物。
如本文所使用，术语“HER2相关肿瘤的常规疗法”，通常指的是给予任何可以阻断HER2相关肿瘤生长的物质或药物。HER2相关肿瘤的常规疗法可能干预与HER2相关(例如HER2阳性和/或HER2低表达)肿瘤细胞增殖和存活相关的特定分子的功能。HER2相关肿瘤的常规疗法可能包括任何获批用于治疗HER2相关肿瘤的特定药物(例如，HER2相关肿瘤可能是实体肿瘤，例如，HER2相关肿瘤可能处于任何阶段)。HER2相关肿瘤的常规疗法可能包括用于治疗HER2相关肿瘤的一线和/或二线获批药物(例如，已获批用于治疗HER2阳性乳腺癌的药物)。HER2相关肿瘤的常规疗法可能包括任何适用于治疗HER2相关肿瘤的获批药物，包括用于通用肿瘤治疗的药物，例如化疗药物。
如本文所使用，术语“失败”，通常指的是需要的受试者对治疗没有反应。失败可能包括肿瘤体积没有明显减少，无进展生存期(PFS)明显增加，和/或治疗后没有生物学反应。失败可能表明对于特定受试者，之前施用的治疗不适合。
术语“HER2-ADC”，如本文所使用，通常指的是具有针对HER2的靶向抗体药物偶联物，能够与肿瘤细胞表面的HER2结合。例如，HER2-ADC可能包括曲妥珠单抗-药物偶联物(T-DM1)，适用于治疗HER2阳性转移性乳腺癌。例如，HER2-ADC可能包括德卢替康-曲妥珠单抗(德曲妥珠单抗)(DS-8201a)，适用于治疗成人不可切除或转移性HER2阳性乳腺癌。例如，HER2-ADC可能包括SYD985，其中曲妥珠单抗通过可降解的连接体连接到多卡霉素(duocarmycin)前药seco-DUBA(seco-duocarmycin-hydroxybenzamide-azaindole)。
如本文所使用，术语“DS8201a”，通常指的是一种针对HER2的抗体药物偶联物，其包含人源化HER2抗体、可切割的肽链连接体和拓扑异构酶I抑制剂药物负荷。DS8201a也可以被称为德曲妥珠单抗或德卢替康-曲妥珠单抗。
如本文所使用，术语“T-DM1”或“赫赛莱(Kadcyla)”，通常指的是一种抗体药物偶联物，其包含恩美曲妥珠单抗(trastuzumab emtansine)。T-DM1已经获得FDA批准，用于治疗HER2阳性转移性乳腺癌，该乳腺癌之前曾接受过赫赛汀(化学名：曲妥珠单抗)和紫杉醇化疗。
如本文所使用，术语“吡咯替尼(pyrotinib)”，通常指的是一种不可逆的双重泛ErbB受体酪氨酸激酶抑制剂。吡咯替尼可能靶向EGFR、HER2和HER4。吡咯替尼可用于治疗HER2阳性的晚期实体瘤。吡咯替尼酒石酸盐(Pyrotinib Racemate)是吡咯替尼的外消旋酒石酸盐，是吡咯替尼酒石酸盐的化学结构如下：
如本文所使用，术语“来那替尼((neratinib)”，通常指的是一种酪氨酸激酶抑制剂。来那替尼可用于早期激素受体阳性HER2过表达/扩增乳腺癌的延长辅助治疗。来那替尼的化学结构如下：
如本文所使用，术语“图卡替尼(tucatinib)”，通常指的是一种HER2小分子抑制剂。图卡替尼可用于治疗晚期不可切除或转移性HER2阳性乳腺癌。图卡替尼的化学结构如下：
如本文所使用，术语“帕妥珠单抗”，通常指的是一种用于治疗HER2阳性乳腺癌的单克隆抗体。帕妥珠单抗的轻链可变区域和重链可变区域的氨基酸序列可以参考WO2006033700A2。
如本文所使用，术语“曲妥珠单抗”，通常指的是一种单克隆抗体，可干扰HER2/neu受体(商品名：赫赛汀，Herclon、Herceptin)(Hudis，2007，N.Engl.J.Med.3577(1)：39-51)。
如本文所使用，术语“多西他赛(docetaxel)”，通常指的是的活性成分，也可以指代/>本身。多西他赛是具有以下结构式的化合物：
如本文所使用，术语“卡培他滨(capecitabine)”，通常指的是一种化疗药物，它是一种前药，在组织中转化为5-FU。卡培他滨的化学名称是戊基[1-(3,4-二羟基-5-甲基四氢呋喃-2-基)-5-氟-2-氧代-lH-嘧啶-4-基]氨基甲酸酯。
如本文所使用，术语“拉帕替尼(lapatinib)”，通常指的是一种用于治疗乳腺癌和其他实体瘤的口服药物。它是一种双重酪氨酸激酶抑制剂，可中断HER2/neu和表皮生长因子受体(EGFR)信号通路。它作为这两种受体的双重可逆酪氨酸激酶抑制剂，从而阻断下游MAPK/Erk1/2和PI3K/AKT信号通路。拉帕替尼是具有以下结构式的化合物：
如本文所使用，术语“马格妥昔单抗(Margetuximab)”，通常指的是一种经过Fc工程改造的针对HER2的单克隆抗体。马吉妥珠单抗可与化疗联合使用，用于治疗曾接受过两个或更多HER2抑制剂治疗的成年患者的转移性HER2阳性乳腺癌。
如本文所使用，术语“检测模块”，通常指的是包含硬件和/或软件的单元，用于从样本中检测变化。例如，检测模块可以进行氨基酸序列和/或核酸的测序工作。
如本文所使用，术语“测序”，通常指的是在技术上已知的任何技术，该技术允许识别至少部分核酸中至少一些连续核苷酸的顺序，并/或识别至少部分氨基酸序列中至少一些连续氨基酸的顺序。示例测序技术可能包括目标测序、单分子实时测序、电子显微镜测序、晶体管介导测序、直接测序、随机散弹测序、Sanger二氧化二脱氧终止测序、外显子测序、全基因组测序、杂交测序、焦磷酸测序、毛细管电泳、凝胶电泳、双链测序、循环测序、单碱基延伸测序、固相测序、高通量测序、大规模并行特征测序、乳化PCR、低变性温度共扩增(COLD-PCR)、多重PCR、通过可逆染料终止子测序、成对末端测序、近期测序、外切酶测序、连接酶测序、短读取测序、单分子测序、合成法测序、实时测序、反向终止子测序、纳米孔测序、454测序、Solexa基因组分析仪测序、测序、MS-PET测序、质谱法以及以上技术的组合。在一些实施例中，测序包括使用仪器检测测序产物。例如，/>377DNA测序仪、310、3100、3100-Avant、3730或3730xI基因分析仪、ABI/>3700DNA分析仪、或Applied Biosystems SOLiDTM系统(以上均由Applied Biosystems提供)、基因测序仪20系统(Roche Applied Science)、或质谱仪。例如，测序可能包括高通量测序技术，例如大规模并行特征测序(MPSS)。
如本文所使用，术语“样本采集模块”，通常指的是包含硬件和/或软件的单元，用于从需要的受试者中收集样本。例如，样本采集模块可用于从患有HER2阳性实体肿瘤的受试者中收集ctDNA。
如本文所使用，术语“样本”，通常指的是从需要的受试者获得的任何材料，用于测序特定蛋白质的氨基酸序列和/或特定基因的核酸序列。例如，样本可以包括细胞、生物体、裂解细胞、细胞提取物、细胞核提取物或细胞或生物体的成分以及/或细胞外液。
如本文所使用，术语“ctDNA”，通常指的是循环肿瘤DNA，即来自肿瘤的游离DNA。ctDNA悬浮在受试者的血液中。众所周知，在血液中存在的DNA中，与正常细胞DNA相比，ctDNA的数量通常极少。
如本文所使用，术语“药品”，通常指的是治疗物质的任何成分，药品可能与术语“药物”、“药剂”、“治疗干预”或“制药产品”具有相同的含义。药品可以包括不考虑它们的物态状态(例如固体、液体或气体)的成分。药品可以包括多个成分，这些成分可以以混合状态、未混合状态和/或部分混合状态纳入治疗物质。药品可能包括治疗物质的活性成分(例如抗HER2的双特异性抗体)和惰性成分。因此，如本文所使用，药品可能包括非活性成分，如水、色素或类似物。
如本文所使用，术语“CDK12抑制剂”，通常指的是任何能够抑制CDK12蛋白质和/或CDK12/细胞周期素激酶复合物活性的药剂。该化合物或药剂可以通过与CDK12蛋白质的直接或间接相互作用来抑制CDK12活性，或者它可以通过阻止CDK12基因的表达来发挥作用。例如，CDK12抑制剂可以抑制CDK12蛋白质的活性和/或CDK12基因编码的mRNA的表达水平。
如本文所使用，术语“CDK12”，通常指的是与转录相关的CDK。CDK12是约164kDa的蛋白质，由1490个氨基酸组成，由CDK12基因编码。人类CDK12基因位于人类染色体17q12区域，由14个外显子组成。人类CDK12基因的基因ID为51755。CDK12与细胞周期蛋白K结合，通过对RNA聚合酶II进行磷酸化来调节基因转录延伸，并且还调节翻译。CDK12已成为肿瘤治疗的一个有吸引力的治疗靶点。
如本文所使用，术语“THZ531”，通常指的是一种选择性共价抑制剂，能够抑制CDK12和CDK13的活性。THZ531的化学名称为(R,E)-N-(4-(3-((5-氯-4-(1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)哌啶-1-羰基)苯基)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺；其CAS号为1702809-17-3。THZ531是具有以下结构式的化合物：
术语“Dinaciclib”或“SCH-727965”，在本文中通常指多重CDK抑制剂。Dinaciclib可以抑制CDK1、CDK2、CDK5、CDK9和CDK12。其CAS号为779353-01-4。Dinaciclib是具有以下分子式的化合物：
术语“SR-3029”，在本文中通常指强效的CK1δ/CK1ε抑制剂。它可以减少Wnt/β-catenin通路目标基因CCND1的表达，并降低核心β-catenin和cyclin D1的蛋白水平。SR-3029可能抑制Cdk4/cyclin D1、Cdk4/cyclin D3、Cdk6/cyclin D1、Cdk6/cyclin D3和CDK12。其CAS号为1454585-06-8。SR-3029是具有以下分子式的化合物：
术语“免疫检查点抑制剂”，在本文中通常指任何能够完全或部分减少、抑制、干预或调节一个或多个免疫检查点蛋白，从而调控T细胞的激活或功能的药物。例如，免疫检查点抑制剂可能干预和阻止PD-1与其配体PD-L1的相互作用；免疫检查点抑制剂可能干预和阻止CTLA4与其配体的相互作用。
术语“ISVD”，在本文中通常指抗原结合域或其片段，例如VHH域或VH或VL域。术语“抗原结合分子”或“抗原结合蛋白”可以互换使用，还可以包括纳米抗体(Nanobodies)。免疫球蛋白单可变结构域进一步是轻链可变域序列(例如VL序列)或重链可变域序列(例如VH序列)；更具体地说，它们可以是来源于传统四链抗体的重链可变区域序列，或来源于重链抗体的重链可变区域序列。因此，免疫球蛋白单可变结构域可以是域抗体，或适用于用作域抗体的免疫球蛋白序列；单域抗体，或适用于用作单域抗体的免疫球蛋白序列；“dAbs”，或适用于用作dAbs的免疫球蛋白序列；或者纳米抗体，其中可能包括VHH序列。该ISVD可能包含来自完全人源、人源化、经过序列优化和/或嵌合的免疫球蛋白的序列。该ISVD可能包含四个框架区域或“FRs”，在本技术领域和本文中分别称为“框架区域1”或“FR1”；“框架区域2”或“FR2”；“框架区域3”或“FR3”；以及“框架区域4”或“FR4”，这些框架区域由三个互补决定区域或“CDRs”间隔，这些互补决定区域在技术领域中分别称为“互补决定区域1”或“CDR1”；“互补决定区域2”或“CDR2”；以及“互补决定区域3”或“CDR3”。
术语“抗原结合部分”，在本文中通常指完整抗体的一个或多个部分，该抗原结合部分保持与抗体结合的抗原(如HER2)相同的结合能力，并且与完整抗体竞争特异性地结合抗原。一般参考《Fundamental Immunology,Ch.7》(Paul,W.,编辑，第二版，Raven Press，纽约(1989))，此书全文为本文的参考内容，供所有目的使用。抗原结合部分可以通过重组DNA技术生产，或通过对完整抗体进行酶解或化学断裂获得。例如，抗原结合部分可以包括多肽，如Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如scFv)、嵌合抗体和双特异抗体，并且它可以至少包括赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的一部分。在本申请中，可以使用已知技术(例如重组DNA技术或酶解或化学断裂过程)从给定抗体中获得抗原结合部分，然后通过与筛选完整抗体相同的过程对其进行特异性筛选。
术语“二聚体”，在本文中通常指由两个通常非共价结合的单体单位形成的大分子复合物。每个单体单位可以是一种大分子，例如多肽链或多核苷酸。术语“同源二聚体”，在本文中通常指由两个基本相同的单体组成或形成的二聚体，例如两个基本相同的多肽链。例如，同源二聚体的两个单体在一个或多个区域或位置上可能不同，但是这种差异不会显著改变单体的功能或结构。例如，在本申请的生物特性的上下文中，技术人员可能认为两个单体之间的差异在生物学和/或统计学意义上很小或没有意义。两个单体之间的结构/组成差异可以小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％、小于约10％、小于约5％或更小。
术语“CD80”，在本文中通常指CD28/CTLA4的配体，也称为B7.1，以及其功能变体和/或功能片段。术语“CD80”可能包括具有与NCBI登录号P33681至少约85％氨基酸序列同源性的多肽或其片段，并且可以特异性地结合CTLA4。在CD80的定义中还包括氨基酸序列与天然CD80不同但仍具有特异性结合CTLA4的变异体。CD80的序列在技术领域中是已知的，并且例如可以在GenBank登录号P33681提供。在本文中，“CD80”一词包括人类CD80(hCD80)、其变体、亚型和与hCD80具有至少一个共同表位的物种同源体。例如，术语“CD80”还包括其他物种的CD80，如其他哺乳动物，例如鼠、兔、非人灵长类动物、猪或牛。完整的hCD80序列的GenBank登录号为P33681。
术语“CD86”，在本文中通常指CD28/CTLA4的配体，也称为B7.2，以及其功能变体和/或功能片段。术语“CD86”可能包括具有与NCBI登录号P42081至少约85％氨基酸序列同源性的多肽或其片段，并且可以特异性地结合CTLA4。在CD86的定义中还包括氨基酸序列与天然CD86不同但仍具有特异性结合CTLA4的变异体。CD86的序列在技术领域中是已知的，并且例如可以在GenBank登录号U04343提供。在本文中，“CD86”一词可能包括人类CD86(hCD86)、其变体、亚型和与hCD86具有至少一个共同表位的物种同源体。例如，术语“CD86”还可以包括其他物种的CD86，如其他哺乳动物，例如鼠、兔、非人灵长类动物、猪或牛。完整的hCD86序列的GenBank登录号为U04343。
术语“PD1”，在本文中通常指程序性死亡-1受体，也称为CD279，以及其功能变体和/或功能片段。在PD1的定义中还包括氨基酸序列与天然PD1不同但仍具有特异性结合PD-L1的变异体。PD1的序列在技术领域中是已知的，并且例如可以在GenBank登录号Q15116.3提供。在本文中，“PD1”一词可能包括人类PD1(hPD1)、其变体、亚型和与hPD1具有至少一个共同表位的物种同源体。例如，术语“PD1”还可以包括其他物种的PD1，如其他哺乳动物，例如鼠、兔、非人灵长类动物、猪或牛。完整的hPD1序列的GenBank登录号为Q15116.3。
术语“一(a)”，在本文中通常不仅限于表示单数形式。在某些实施例中，“a”一词可能指复数形式。在本文披露的整个内容中，单数形式“a”，“an”和“the”包括复数引用，除非上下文明确说明。
术语“约(about)”，在本文中通常指在技术领域内正常容忍范围内的变化，通常指在所述值的±10％范围内，例如在9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％范围内。除非上下文明确说明，本文提供的所有数值值都受“约”一词的调整。
HER2抑制剂
在本申请中，HER2抑制剂可以能够抑制人类HER2。例如，该HER2抑制剂可以是HER2抗体或其抗原结合部分和/或其缀合物。
在一些情况下，HER2抑制剂可以从以下一组中选择：帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和玛格妥昔单抗。
在一些情况下，HER2抑制剂可以从以下一组中选择：DS8201a和T-DM1。
在本申请中，HER2抑制剂可以是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，并且可以结合到人类HER2的不同表位。人类HER2的表位可以参考“应用重组细胞外亚结构域进行人HER2特异性小鼠单克隆抗体的表位定位”(“Epitope Mapping of Human HER2SpecificMouse Monoclonal Antibodies Using Recombinant Extracellular Subdomains”，AsianPac J Cancer Prev.2017；18(11):3103–3110)。
在一些情况下，HER2抑制剂可以是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，该双特异性抗体或其抗原结合部分可能具有第一轻链和第二轻链，并且第一轻链和第二轻链可能具有相同的氨基酸序列。例如，当第一轻链和第二轻链具有相同的氨基酸序列时，双特异性抗体或其抗原结合部分可能具有共同的轻链。
在一些情况下，共同轻链可以通过工程手段从两种不同的原始单克隆抗体中获得，这两种抗体分别能够结合到人类HER2的不同表位。在某些情况下，共同轻链可能源自两种原始单克隆抗体中的任意一种的轻链。在其他情况下，共同轻链可能基于两种原始单克隆抗体的轻链进行改造。
在一些情况下，对共同轻链的改造可以涉及在两种原始单克隆抗体的轻链氨基酸序列的至少一个位置插入、删除和/或替换氨基酸。这些改造的目的在某些情况下是为了保持双特异性抗体或其抗原结合部分与相应表位之间的亲和力。
在本申请中，双特异性抗体或其抗原结合部分的轻链恒定区可能属于κ型或λ型；κ型轻链恒定区可能包括各种同种异型，例如Km1、Km2和Km3；λ型轻链恒定区可能包括各种同种异型，例如CL1、CL2、CL3、CL6和CL7。
在本申请中，HER2抑制剂可以是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，该双特异性抗体或其抗原结合部分可能包含第一重链和第二重链。
在本申请中，第一重链和第二重链能够在生理条件下或体外蛋白质表达过程中与轻链正确组装。
在一些情况下，第一轻链和第二轻链分别可以与帕妥珠单抗的重链和曲妥珠单抗的重链正确组装。
在一些情况下，第一轻链和/或第二轻链的可变区域可能包含在SEQ ID NO:91-96中所述的氨基酸序列。在一些情况下，第一轻链和/或第二轻链的可变区域可能包含在SEQID NO:91中所述的氨基酸序列。
在一些情况下，第一轻链和第二轻链可以分别选自帕妥珠单抗或其突变体的轻链，以及选自曲妥珠单抗或其突变体的轻链。
在一些情况下，第一轻链的可变区域和第二轻链的可变区域可以是曲妥珠单抗的轻链可变区域。在一些情况下，第一轻链和第二轻链可以是曲妥珠单抗的轻链。
在一些情况下，第一轻链和第二轻链可以包含如SEQ ID NO:65-70中的任意一条中所示的氨基酸序列。在一些情况下，第一轻链和第二轻链的氨基酸序列可以包含如SEQID NO:65中所述的氨基酸序列。
在一些情况下，第一重链的可变区域可以是帕妥珠单抗的重链可变区域，第二重链的可变区域可以是曲妥珠单抗的重链可变区域。在一些情况下，第一重链的可变区域可以包含如SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列；第二重链的可变区域可以包含如SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列。
在本申请中，第一重链和/或第二重链可以包含恒定区域。在一些情况下，该恒定区域可能来自人类IgG的恒定区域。在一些情况下，第一重链的重链恒定区域和第二重链的重链恒定区域可以相同或不同。在某些情况下，第一重链和第二重链的可变区域和CH1区域的氨基酸序列与原始单克隆抗体的氨基酸序列相同。
在本申请中，双特异性抗体或其抗原结合部分可以阻断HER2的配体依赖和非依赖信号传导途径。在一些情况下，双特异性抗体或其抗原结合部分的IgG1Fc片段可以结合到FcRγIIIa并介导强效的ADCC效应。在一些情况下，双特异性抗体或其抗原结合部分可以增强HER2的内吞作用，并在临床前模型中显示比单独使用原始单克隆抗体(如曲妥珠单抗和帕妥珠单抗)更好的抗肿瘤活性。
在某些情况下，双特异性抗体或其抗原结合部分的轻链恒定区和/或重链恒定区可能进行改造，以获得更好的ADCC、CDC、内吞作用、稳定性、免疫原性和/或半衰期；此外，该改造还可以促进抗体表达过程中异源二聚体蛋白的形成。在本申请中，对于改造重链的Fc片段的技术在技术领域中是众所周知的。
在一些情况下，第一重链的Fc片段可能包含如SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列；第二重链的Fc片段可能包含如SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，第一重链的Fc片段可能包含如SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列；第二重链的Fc片段可能包含如SEQ ID NO:102中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，第一重链的Fc片段可能包含如SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列；第二重链的Fc片段可能包含如SEQ ID NO:104中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，第一重链可能包含如SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列；第二重链可能包含如SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，第一重链可能包含如SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列；第二重链可能包含如SEQ ID NO:84中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，第一重链可能包含如SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列；第二重链可能包含如SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，第一重链可能包含如SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列；第二重链可能包含如SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列。
在本申请中，HER2抑制剂可以是一种抗HER2的双特异性抗体。该抗HER2双特异性抗体可能包含第一轻链、第二轻链、第一重链和第二重链，第一轻链和/或第二轻链的可变区域可能包含如SEQ ID NO:65中所示的序列；第一重链的可变区域可能包含如SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列；第二重链的可变区域可能包含如SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列。第一重链可能包含如SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列；第二重链可能包含如SEQ IDNO:98中所示的氨基酸序列。
在本申请中，氨基酸序列还可能包含与如SEQ ID NO:1-104中的任一个所示的氨基酸序列具有至少80％(例如至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或至少100％)相一致的氨基酸序列。例如，在本申请中，氨基酸序列可能包含如SEQ ID NO:1-104中任一个所示的氨基酸序列，在其中进行1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个氨基酸缺失、插入和/或替换。
免疫检查点抑制剂
在本申请中，免疫检查点抑制剂可以抑制至少一个免疫检查点。免疫检查点可以包括刺激性检查点分子和抑制性检查点分子。免疫检查点可以包括A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、IDO、KIR、LAG3、NOX2、PD-1和/或TIM3。
免疫检查点可以特异性地结合PD-L1和CTLA4。
在某些实施例中，免疫检查点抑制剂可以是双特异性抗体或其抗原结合片段。在一些情况下，免疫检查点抑制剂可以是抗原结合片段，可以包括Fab、Fab'、F(ab)2、Fv片段、F(ab')2、scFv、di-scFv和/或dAb。在一些情况下，免疫检查点抑制剂可以是双特异性抗体，可以是完全人源抗体。
在某些实施例中，免疫检查点抑制剂可以是一种二聚体。该二聚体可以由两条多肽链组成，其中每条多肽链包含一个抗体Fc亚基。
一些情况下，该二聚体可以由两条多肽链组成，其中每条多肽链包含一个抗体Fc亚基，并且一条多肽链的抗体Fc亚基可以与另一条多肽链的抗体Fc亚基结合形成该二聚体。在一些情况下，该二聚体的两条多肽链不会通过肽链连接物或肽键融合在一起成为单个多肽链。
该二聚体可以包括两个或更多免疫球蛋白单可变结构域(ISVD)。在一些情况下，该二聚体的一条多肽链可以包含两个或更多ISVD，而另一条多肽链可不包含任何ISVD。另一个例子是，两条多肽链都包含一个或多个ISVD。再一个例子是，两条多肽链都包含两个或更多ISVD。
至少一个ISVD可特异性地结合PD-L1，至少一个ISVD可特异性地结合CTLA4。在一些情况下，该二聚体的一条多肽链可以包含一个或多个特异性结合PD-L1的ISVD，和一个或多个特异性结合CTLA4的ISVD，而另一条多肽链不包含任何ISVD。另一个例子是，该二聚体的一条多肽链可以包含一个或多个特异性结合PD-L1的ISVD，而另一条多肽链可包含一个或多个特异性结合CTLA4的ISVD。另一个例子中，二聚体的一条多肽链可以包含一个或多个特异性结合PD-L1的ISVD，和一个或多个特异性结合CTLA4的ISVD，二聚体的另一条多肽链可包含一个或多个特异性结合PD-L1的ISVD和/或一个或多个特异性结合CTLA4的ISVD。
特异性结合PD-L1的一个或多个ISVD可相同或不同。特异性结合CTLA4的一个或多个ISVD可相同或不同。
在一些情况下，特异性结合PD-L1的ISVD不包含任何抗体轻链CDR。在一些情况下，特异性结合PD-L1的ISVD不包含任何抗体轻链可变区域。在一些情况下，特异性结合PD-L1的ISVD不包含任何抗体轻链或其片段。在一些情况下，特异性结合PD-L1的ISVD至少包含重链CDR3。在一些情况下，特异性结合PD-L1的ISVD包含重链CDR1。在一些情况下，特异性结合PD-L1的ISVD包含重链CDR2。在一些情况下，特异性结合PD-L1的ISVD包含重链可变区域。在一些情况下，特异性结合PD-L1的ISVD是一种抗-PD-L1的VHH。可对特异性结合PD-L1的ISVD进行人源化。
在一些情况下，特异性结合CTLA4的ISVD不包含任何抗体轻链CDR。在一些情况下，特异性结合CTLA4的ISVD不包含任何抗体轻链可变区域。在一些情况下，特异性结合CTLA4的ISVD不包含任何抗体轻链或其片段。在一些情况下，特异性结合CTLA4的ISVD至少包含重链CDR3。在一些情况下，特异性结合CTLA4的ISVD包含重链CDR1。在一些情况下，特异性结合CTLA4的ISVD包含重链CDR2。在一些情况下，特异性结合CTLA4的ISVD包含重链可变区域。在一些情况下，特异性结合CTLA4的ISVD是一种抗-CTLA4的VHH。特异性结合CTLA4的ISVD可以是人源化的。
在一些情况下，两条多肽链中的至少一条可同时包含特异性结合PD-L1的ISVD和特异性结合CTLA4的ISVD。在一些情况下，其中一条多肽链可包含一个或多个特异性结合PD-L1的ISVD和一个或多个特异性结合CTLA4的ISVD。另一个例子是，两条多肽链的每一条可都包含一个或多个特异性结合PD-L1的ISVD和一个或多个特异性结合CTLA4的ISVD。
对于两条多肽链中的一条或两条，特异性结合PD-L1的ISVD可与特异性结合CTLA4的ISVD融合在一起，可选地通过连接子连接。在一些情况下，在两条多肽链中的一条或两条中，可存在一个或多个特异性结合PD-L1的ISVD和一个或多个特异性结合CTLA4的ISVD。当单个多肽链中存在两个或更多个特异结合PD-L1的ISVD时，它们可以彼此融合(例如，直接地或通过肽连接子)，并且它们中的一个或多个可以进一步与一个或多个对CTLA4特异的ISVD融合。当在单个多肽链中存在两个或更多个对CTLA4特异的ISVD时，它们可以彼此融合(例如，直接地或通过肽接头)，并且它们中的一个或多个可进一步与一个或多个对PD-L1特异的ISVD融合。一个或多个接头(例如，肽连接子)可以存在于任意两个ISVD之间，例如，两个特异性结合PD-L1的ISVD之间，两个特异性结合CTLA4的ISVD之间，或一个特异性结合PD-L1的ISVD和一个特异性结合CTLA4的ISVD之间。
在两条多肽链中的一条或两条中，特异性结合PD-L1的ISVD可与特异性结合CTLA4的ISVD融合在一起，可选地通过连接子连接；并且，特异性结合CTLA4的ISVD可与抗体Fc亚基融合在一起，可选地通过连接子连接。例如，在一条多肽链中，特异性结合PD-L1的ISVD可直接(例如，框内)或通过连接子与特异性结合CTLA4的ISVD融合，以及特异性结合CTLA4的ISVD可直接(例如，框内)或通过连接子与抗体Fc亚基融合在一起。当在单个多肽链中存在不止一个对PD-L1特异的ISVD和/或不止一个对CTLA4特异的ISVD时，对PD-L1特异的ISVD和对CTLA4特异的ISVD可按照任何顺序直接或通过接头彼此融合，并且至少一个对CTLA4特异的ISVD可直接(例如，框内)或通过接头与抗体Fc亚基融合。例如，在两条多肽链中的一条或两条中，特异性结合PD-L1的ISVD的C端可能与特异性结合CTLA4的ISVD的N端融合在一起，可选地通过连接子连接；并且，特异性结合CTLA4的ISVD的C端可能与抗体Fc亚基的N端融合在一起，可选地通过连接子连接。例如，在单个多肽链中，特异性结合PD-L1的一个ISVD的C端可能直接(例如，框内)或通过连接子融合在特异性结合CTLA4的一个ISVD的N端，并且，特异性结合CTLA4的一个ISVD的C端可能直接(例如，框内)或通过连接子融合在抗体Fc亚基的N端。当一条多肽链中存在两个或更多个特异性结合PD-L1的ISVD和/或两个或更多个特异性结合CTLA4的ISVD时，特异性结合PD-L1的ISVD和特异性结合CTLA4的ISVD可能根据任何顺序直接或通过连接子彼此融合在一起，但至少一个特异性结合PD-L1的ISVD的C端可能直接(例如，框内)或通过连接子与至少一个特异性结合CTLA4的ISVD的N端融合，并且至少一个特异性结合CTLA4的ISVD的C端可能直接(例如，框内)或通过连接子与抗体Fc亚基的N端融合。
在两条多肽链中的一条或两条中，特异性结合CTLA4的ISVD可与特异性结合PD-L1的ISVD融合在一起，可选地通过连接子连接；并且，特异性结合PD-L1的ISVD可与抗体Fc亚基融合在一起，可选地通过连接子连接。例如，在单个多肽链中，特异性结合CTLA4的ISVD可直接(例如，框内)或通过连接子与对PD-L1特异的ISVD融合，并且，特异性结合PD-L1的ISVD可能直接(例如，框内)或通过连接子抗体Fc亚基融合。当单个多肽链中存在多个特异性结合PD-L1的ISVD和/或多个特异性结合CTLA4的ISVD时，特异性结合PD-L1的ISVD和特异性结合CTLA4的ISVD可能根据任何顺序直接或通过连接子融合在一起，并且至少一个特异性结合PD-L1的ISVD可直接(例如，框内)或通过连接子与抗体Fc亚基融合。例如，在两条多肽链中的一条或两条中，特异性结合CTLA4的ISVD的C端可与特异性结合PD-L1的ISVD的N端融合在一起，可选地通过连接子连接；并且，特异性结合PD-L1的ISVD的C端可能与抗体Fc亚基的N端融合在一起，可选地通过连接子连接。例如，在一条多肽链中，特异性结合CTLA4的一个ISVD的C端可能直接(例如，框内)或通过连接子融合在特异性结合PD-L1的一个ISVD的N端，并且，特异性结合PD-L1的一个ISVD的C端可能直接(例如，框内)或通过连接子融合在抗体Fc亚基的N端。在实施例中，当单个多肽链中存在两个或更多个特异性结合PD-L1的ISVD和/或两个或更多个特异性结合CTLA4的ISVD时，特异性结合PD-L1的ISVD和特异性结合CTLA4的ISVD可按照任何顺序直接或通过连接子彼此融合在一起，但至少一个特异性结合CTLA4的ISVD的C端可直接(例如，框内)或通过连接子融合在至少一个特异性结合PD-L1的ISVD的N端，然后至少一个特异性结合PD-L1的ISVD的C端可能直接(例如，框内)或通过连接子与抗体Fc亚基的N端融合。
在当前申请中使用的连接体(例如，肽链连接体)(例如，由本申请的二聚体包含的)可以是合成氨基酸序列，例如通过肽键连接或联接两条多肽序列。例如，肽链连接体可能包含1-10个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多氨基酸)，1-15个氨基酸(例如，1-10、11、12、13、14或15个氨基酸)，1-20个氨基酸(例如，1-15、16、17、18、19或20个氨基酸)，1-30个氨基酸或更多氨基酸(例如，1-20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个或更多氨基酸)。例如，肽链连接体可能包含如SEQ ID NO:33-34中的任一个所示的氨基酸序列。
抗体Fc亚基可源自IgG Fc亚基。例如，IgG可以从IgG1、IgG2、IgG3和IgG4中选择。在某些实施方式中，IgG是人源的IgG1，而IgG Fc亚基是人源的IgG1Fc亚基。Fc亚基可能包含与序列表中的SEQ ID NO:35、38和39中任一个所示的氨基酸序列具有至少80％(例如至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)的相似性。例如，Fc亚基可包含在如SEQ ID NO:35、38和39中的任一个所示的氨基酸序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、插入和/或替换。
在某些实施方式中，Fc亚基可以是IgG Fc亚基的变异体(例如，人源的IgG1Fc亚基的变异体)。例如，这些变异体可包含一个或多个氨基酸突变，以增强或降低ADCC或CDC活性。在另一些实施方式中，变异体可包含一个或多个氨基酸突变，影响包含变异体的分子的FcRn结合活性和/或半衰期。还有一些实施方案中，，变异体包含一个或多个氨基酸突变，其影响两个或多个Fc亚基(或Fc单体)之间的相互作用(例如，缔合，和/或增加或降低Fc异二聚体形成的效率。例如，这些变异体包含在专利CN102558355A、CN103388013A、CN105820251A或CN106883297A(其每一个通过引用并入本文)中描述的一个或多个氨基酸替换。
特异于PD-L1的单可变结构域域抗体(ISVD)可特异性结合到人源PD-L1。例如，特异于PD-L1的ISVD可特异性结合到人源PD-L1的细胞外结构域中的一个表位。这样的表位在文献中已有报道，例如由Gang Hao等人的研究(J.Mol.Recognit.2015；28:269–276)、Zhang等人的研究(Oncotarget.2017Oct；08(52):90215-90224)和Zhang等人的研究(CellDiscov.2017Mar 7；3:17004)所示。
例如，特异于PD-L1的单可变结构域抗体(ISVD)可与人PD-L1的N-端IgV结构域结合。人PD-L1的N-端IgV结构域(包括信号肽)可以包含如序列表中的SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。在本申请中，特异于PD-L1的ISVD能够结合到人PD-L1 N-端IgV结构域的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113。在具体的实施方式中，特异于PD-L1的ISVD能够与人PD-L1N-端IgV结构域的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和R113(例如，序列表中的SEQ ID NO:64中的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113)结合。特异于PD-L1的ISVD能够进一步与人PD-L1N-端IgV结构域的氨基酸残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125(例如，序列表中的SEQ ID NO:64中的氨基酸残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125)结合。在一些情况下，特异于PD-L1的ISVD能够与人PD-L1N-端IgV结构域的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125(例如，序列表中的SEQ ID NO:64中的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125)结合。在一些情况下，特异于PD-L1的ISVD能够结合到人PD-L1N-端IgV结构域的构象表位，该构象表位可包括人PD-L1N-端IgV结构域的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113(例如，序列表中的SEQ ID NO:64中的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113)。在一些情况下，特异于PD-L1的ISVD能够结合到人PD-L1N-端IgV结构域的构象表位，该构象表位可包括人源PD-L1N-端IgV结构域的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125(例如，序列表中的SEQ ID NO:64中的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125)。
本申请中特异于PD-L1的单可变结构域抗体(例如PD-L1ISVD-9及其人源化变种)可与人源PD-L1的N-端IgV结构域结合。以PD-L1ISVD-9为例，PD-L1ISVD-9(SEQ ID NO:6)的残基Phe101与人PD-L1N-端IgV结构域的Tyr56相互作用，当人PD-L1N-端IgV结构域的Tyr56被Ala取代时，PD-L1ISVD-9与PD-L1之间的结合亲和力降低了200多倍。当人源PD-L1N-端IgV结构域的Ile54被Ala取代时，PD-L1ISVD-9与PD-L1之间的结合亲和力降低了约40倍。PD-L1ISVD-9(SEQ ID NO:6)的残基Asp99与人PD-L1N-端IgV结构域的Arg113相互作用，当人PD-L1N-端IgV结构域的Arg113被Ala取代时，PD-L1ISVD-9与PD-L1之间的结合亲和力降低了约90倍。PD-L1ISVD-9(SEQ ID NO:6)的残基Ser100与人源PD-L1N-端IgV结构域的Glu58相互作用，当人PD-L1N-端IgV结构域的Glu58被Ala取代时，PD-L1ISVD-9与PD-L1之间的结合亲和力降低了约25倍。PD-L1ISVD-9(SEQ ID NO:6)的残基Thr105与人PD-L1N-端IgV结构域的Gln66相互作用，当人源PD-L1N-端IgV结构域的Gln66被Ala取代时，PD-L1ISVD-9与PD-L1之间的结合亲和力降低了约82倍。此外，人源PD-L1N-端IgV结构域的残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和R125可参与PD-L1ISVD-9与人PD-L1的相互作用，将这些残基替换为Ala会导致结合亲和力降低约2-10倍。以下是这些结果的总结表格(表1)：
表1：人PD-L1中的取代对结合PD-L1ISVD-9的替代效应
人PD-L1突变 KD(M) KD,突变/KD,WT
WT 5.92E-09 1
I54A 2.42E-07 40.9
Y56A 1.24E-06 209.5
E58A 1.49E-07 25.2
D61A 1.99E-08 3.4
N63A 2.30E-08 3.9
Q66A 4.88E-07 82.4
V68A 2.76E-08 4.7
R113A 5.34E-07 90.2
M115A 5.51E-08 9.3
S117A 1.26E-08 2.1
Y123A 4.24E-08 7.2
R125A 2.97E-08 5.0
特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与PD1的结合。在一些情况下，特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与CD80的结合。
特异于PD-L1的ISVD可与参考抗-PD-L1抗体进行交叉竞争与PD-L1的结合。
参考抗-PD-L1抗体可包括重链CDR3。重链CDR3的氨基酸序列可包含如DSFX1X2PTCX3X4X5X6SSGAFQY(SEQ ID NO:1)所示的氨基酸序列，其中X1可以是E或G；X2可以是D或Y；X3可以是T或P；X4可以是L或G；X5可以是V或P；X6可以是T或A。在一些情况下，参考抗-PD-L1抗体可包括重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:5和9中的任意一个中所示的氨基酸序列。参考抗-PD-L1抗体还可包括一个重链CDR1。重链CDR1的氨基酸序列包含如GX1X2X3X4X5RCMA(SEQ ID NO:2)所示的氨基酸序列，其中X1可以是K或N；X2可以是M或I；X3可以是S或I；X4可以是S或R；X5可以是R或V。例如，参考抗-PD-L1抗体可包括重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:3和7中的任意一个中所示的氨基酸序列。在一些情况下，参考抗-PD-L1抗体可包括重链CDR2。重链CDR2的氨基酸序列可包含如SEQ ID NO:4、8和11中的任意一个中所示的氨基酸序列。在一些情况下，参考抗-PD-L1抗体是对PD-L1特异的ISVD，例如抗-PD-L1VHH。参考抗-PD-L1抗体可包含重链可变区域。重链可变区域的氨基酸序列可包含如SEQID NO:6、10、12、13、14和15中的任意一个中所示的氨基酸序列。例如，重链可变区域可包含如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列。
在本申请中，特异于PD-L1的ISVD(例如，在本申请的二聚体中包含的ISVD)可以包含重链CDR3。重链CDR3的氨基酸序列可包含如：DSFX1X2PTCX3X4X5X6SSGAFQY(SEQ ID NO:1)所示的氨基酸序列，其中X1可以是E或G；X2可以是D或Y；X3可以是T或P；X4可以是L或G；X5可以是V或P；X6可以是T或A。例如，特异于PD-L1的ISVD可以包含如SEQ ID NO:5和9中的任意一个中所示的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可以包括与SEQ ID NO:5和9中的任何一个所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)相似性的氨基酸序列。一些情况下，重链CDR3可包含在SEQ ID NO:5和9中任意一个中所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、插入和/或替换的氨基酸序列
在本申请中，特异于PD-L1的ISVD(例如，在本申请的二聚体中包含的ISVD)还可以包括重链CDR1。重链CDR1可包含如GX1X2X3X4X5RCMA(SEQ ID NO:2)中所示的氨基酸序列，其中X1可以是K或N；X2可以是M或I；X3可以是S或I；X4可以是S或R；X5可以是R或V。例如，特异于PD-L1的ISVD可以包含如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:7中任意一个中所示的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可以包含与SEQ ID NO:3和7中的任意一个中所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)相似性的氨基酸序列。例如，重链CDR1可包含在SEQ ID NO:3和7中任意一个中所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、插入和/或替换的氨基酸序列。
在本申请中，特异于PD-L1的ISVD(例如，在本申请的二聚体中包含的ISVD)还可以进一步包括重链CDR2。重链CDR2可以包括任何合适的氨基酸序列。在某些情况下，特异于PD-L1的ISVD可以包括重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:4、8和11中任意一个中所示的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可以包含与SEQ ID NO:4、8和11中的任意一个中所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)相似性的氨基酸序列。例如，重链CDR2可包含在SEQ ID NO:4、8和11中的任意一个中所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多)氨基酸缺失、插入和/或替换的氨基酸序列。
在本申请中，特异于PD-L1的ISVD(例如，在本申请的二聚体中包含的ISVD)可以进一步包括重链可变区域。特异于PD-L1的ISVD可以包含具有任一SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中所示的氨基酸序列的重链可变区域。例如，重链可变区域可以包含如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可以包含与SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中的任意一个中所示的序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)相似性的氨基酸序列。例如，特异于PD-L1的ISVD可包含在如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中的任意一个中所示的氨基酸序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、插入和/或替换的氨基酸序列。
在本申请中，特异于PD-L1的ISVD(例如，在本申请的二聚体中包含的ISVD)可以包含具有如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任意一个中所示的氨基酸序列。例如，特异于PD-L1的ISVD可以包含如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列。例如，特异于PD-L1的ISVD可以包含与SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中的任意一个中所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)相似性的氨基酸序列。在一些情况下，特异于PD-L1的ISVD可包含在如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中的任意一个中所示的氨基酸序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、插入和/或替换的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD包括或由重链可变结构域(VH或VHH)组成。
例如，特异于PD-L1的ISVD可以从PD-L1ISVD-9、PD-L1ISVD-6、PD-L1ISVD-m3、PD-L1ISVD-4、PD-L1ISVD-11和PD-L1ISVD-13中进行选择。
特异于CTLA4的ISVD可以能够特异性地结合到人类CTLA4。例如，特异于CTLA4的ISVD可以能够特异性地结合到人类CTLA4的细胞外区域的一个表位，该表位可以包括在CN107400166A中描述的那些表位，以及在Udupi A.Ramagopal等人的PNAS2017年5月，114(21)中描述的那些表位。
特异于CTLA4的ISVD可以能够阻断CTLA4与CD80的结合。例如，特异于CTLA4的ISVD可以能够阻断CTLA4与CD86的结合。例如，特异于CTLA4的ISVD可以是人源化的。
特异于CTLA4的ISVD可以与参考的抗CTLA4抗体交叉竞争与CTLA4的结合。
参考的抗CTLA4抗体可以包括重链CDR3。重链CDR3可以包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。参考的抗CTLA4抗体还可以包括重链CDR1。重链CDR1可以包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。例如，参考的抗CTLA4抗体可以包括重链CDR2。重链CDR2可以包含如AIX1X2GGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:16)所示的氨基酸序列，其中X1可以是Y或S；X2可以是I或L。例如，重链CDR2可以包含如SEQ ID NO:18、21和23中的任意一个中所示的氨基酸序列。在一些情况下，参考的抗CTLA4抗体是特异于CTLA4的ISVD，例如抗CTLA4VHH。参考的抗CTLA4抗体可以包括重链可变区域。参考的抗CTLA4抗体可以包括重链可变区域，该重链可变区域包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中的任意一个所示的氨基酸序列。例如，重链可变区域可以包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
在本申请中，特异于CTLA4的ISVD(例如，作为本申请的二聚体的组成部分)可包括重链CDR3。重链CDR3可以包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
在一些情况下，特异于CTLA4的ISVD可以包含重链CDR3，其氨基酸序列与SEQ IDNO:19所示的序列具有至少80％(例如，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或至少100％)的相似性。例如，重链CDR3可包含在SEQ ID NO:19所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个，1-3个，1-4个，1-5个，1-6个，1-7个，1-8个，1-9个，1-10个或更多个)氨基酸缺失、插入和/或替换的氨基酸序列。
在本申请中，特异于CTLA4的ISVD(例如，作为本申请的二聚体的组成部分)还可包括重链CDR1。重链CDR1可以包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
例如，特异于CTLA4的ISVD可以包括重链CDR1，其氨基酸序列与SEQ ID NO:17所示的序列具有至少80％(例如，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或至少100％)的相同性。例如，重链CDR1可包含在如SEQ ID NO:17所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个，1-3个，1-4个，1-5个，1-6个，1-7个，1-8个，1-9个，1-10个或更多个)氨基酸缺失、插入和/或替换的氨基酸序列。
在本申请中，特异于CTLA4的ISVD(例如，作为本申请的二聚体的组成部分)还可包括重链CDR2。重链CDR2可以包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，其中X1可以是Y或S；X2可以是I或L。在某些情况下，特异于CTLA4的ISVD可包含重链CDR2，其其包含SEQ ID NO:18、21和23中的任一个所示的氨基酸系列。
例如，特异于CTLA4的ISVD可以包括重链CDR2，其氨基酸序列与SEQ ID NO:18、21和23中的任一个所示的序列具有至少80％(例如，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或至少100％)的相同性。例如，重链CDR2可包含在如SEQ ID NO:18、21和23中的任一个所示序列中具有一个或多个(例如，1-2个，1-3个，1-4个，1-5个，1-6个，1-7个，1-8个，1-9个，1-10个或更多)氨基酸缺失、插入和/或替换的氨基酸序列。
在本申请中，特异于CTLA4的ISVD(如包含在本申请的二聚体中)可包括重链可变区域。特异于CTLA4的ISVD可包括重链可变区域，其包含在如SEQ ID NO:20、22和24-32中的任意一个中所示的氨基酸序列。例如，重链可变区域可包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
例如，特异于CTLA4的ISVD可包括重链可变区域，其包含与SEQ ID NO:20、22和24-32中的任一个所示的序列具有至少80％(例如至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或至少100％)相似性的氨基酸序列。在某些情况下，特异于CTLA4的ISVD可包含在如SEQ ID NO:20、22和24-32中的任意一个中所示的序列中具有一个或多个(例如1-2、1-3、1-4、1-5、1-6、1-7、1-8、1-9、1-10或更多个)氨基酸缺失、插入和/或替换氨基酸序列。
在本申请中，特异于CTLA4的ISVD可包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中的任意一个中所示的氨基酸序列。例如，特异于CTLA4的ISVD(作为本申请的二聚体的一部分)可包含如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列。
例如，特异于CTLA4的ISVD可包含与如SEQ ID NO:20、22和24-32中的任一个所示的氨基酸序列具有至少80％(例如至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或至少100％)的相似性的氨基酸。例如，特异于CTLA4的ISVD可包含在与SEQ ID NO:20、22和24-32中的任一个所示的序列中具有一个或多个(例如1-2、1-3、1-4、1-5、1-6、1-7、1-8、1-9、1-10或更多个)氨基酸缺失、插入和/或替换的氨基酸序列。
例如，特异于CTLA4的ISVD包括重链可变结构域(VH或VHH)或完全由重链可变结构域(VH或VHH)组成。
在本申请中，本申请的二聚体可以由两条多肽链组成。这两条多肽链的氨基酸序列可以相同或不同。例如，本申请的二聚体可以是同源二聚体。
在本申请中，二聚体的两条多肽链中的一条或两条多肽链可包含如权利要求40-43、46、48和50中所述的氨基酸序列。例如，二聚体的两条多肽链中的一条或两条多肽链可包含如SEQ ID NO:40中所述的氨基酸序列。
在具体示例中，二聚体的两条多肽链中的一条或两条可包含与SEQ ID NO:40-43、46、48和50中的任一个所示的序列具有至少80％(例如至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)的相同性的氨基酸序列。此外在某些情况下，二聚体的两条多肽链中的一条或两条可包含在如SEQ ID NO:40-43、46、48和50中的任意一个中所示的序列具有一个或或多个氨基酸缺失、插入和/或替换的氨基酸序列。
在实施例中，特异于PD-L1的ISVD可与特异于CTLA4的ISVD的N-末端氨基酸融合(直接或间接，例如通过连接肽链，如肽链连接子)以形成双特异性结合部位。然后，将这样一个双特异性结合部位与本申请中一个Fc亚基的N-末端氨基酸融合(直接或间接，例如通过连接肽链，如肽链连接子)，以形成二聚体的一个多肽链。接着，另一个这样的双特异性结合部位与本申请中另一个Fc亚基的N-末端氨基酸融合(直接或间接，例如通过连接肽链，如肽链连接子)，以形成二聚体的另一条多肽链。两条多肽链中的两个Fc亚基可彼此结合(例如通过非共价作用和/或二硫键或其他共价键，在一些情况下，这种共价键不是肽键)形成二聚体。这两个双特异性结合部位可以相同或不同，而两个Fc亚基也可以相同或不同。
在一些实施例中，该二聚体是一种包含两条相同的多肽链的蛋白质性质的同源二聚体，其中每条多肽链包含一个双特异性结合部位与一个Fc亚基融合，而这两个Fc亚基彼此结合形成蛋白质同源二聚体。这两个Fc亚基可通过非共价相互作用和/或二硫键或其他共价键结合，在一些情况下，这种共价键不是肽键。
本申请的二聚体能够与CD80和/或CD86竞争与CTLA4的结合。例如，可以通过使用表达CTLA4的细胞系(例如表达CTLA4的HEK293细胞系)在体外实验中检查这种竞争。另一个例子是，在ELISA试验中检查这种竞争，例如竞争ELISA试验。
本申请的二聚体能够与PD1和/或CD80竞争与PD-L1的结合。例如，可以通过使用表达PD-L1的细胞系(例如表达PD-L1的A375细胞系)在体外实验中检查这种竞争。另一个例子是，在ELISA试验中检查这种竞争，例如竞争ELISA试验。
本申请的二聚体能够阻断PD-L1与PD-1的结合。例如，该二聚体能够阻断PD-L1与CD80的结合。又例如，该二聚体能够阻断CTLA4与CD80的结合。在一些情况下，该二聚体能够阻断CTLA4与CD86的结合。
本申请的二聚体可与CTLA4结合，其中KD值不超过约1x10-6M，例如，不超过约1x10-7M，不超过约1x10-8M，不超过约0.5x10-8M，不超过约1x10-9M，不超过约1x10-10M或更低。
本申请的二聚体可与PD-L1结合，其中KD值不超过约1x10-6M，例如，不超过约1x10-7M，不超过约1x10-8M，不超过约0.5x10-8M，不超过约1x10-9M，不超过约1x10-10M或更低。
本申请的二聚体可能能够刺激免疫细胞(例如PBMC细胞)分泌免疫调节因子(例如IL-2)。
例如，本申请的免疫检查点抑制剂可能包括特异于CTLA4的ISVD和特异于PDL1的ISVD。特异于PD-L1的ISVD可以包括CDR3其包含如SEQ ID NO.5中所示的氨基酸序列，包括CDR2其包含如SEQ ID NO.4中所示的氨基酸序列，包括CDR1其包含如SEQ ID NO.3中所示的氨基酸序列。而特异于CTLA4的ISVD可以包括CDR3其包含如SEQ ID NO.19中所示的氨基酸序列，包括CDR2其包含如SEQ ID NO.18中所示的氨基酸序列，包括CDR1其包含如SEQ IDNO.17中所示的氨基酸序列。本申请的二聚体可以包括特异于PD-L1的ISVD其包含如SEQ IDNO.6中所示的氨基酸序列，和特异于CTLA4的ISVD其包含如SEQ ID NO.20中所示的氨基酸序列。例如，本申请的二聚体可包含SEQ ID NO.40所示的氨基酸序列。
多重CDK抑制剂
在本申请中，多重CDK抑制剂可以能够抑制至少一种CDK。例如，多重CDK抑制剂可以能够抑制CDK1、CDK2、CDK5、CDK9和/或CDK12。在一些情况下，多重CDK抑制剂可以能够抑制CDK12。在一些情况下，多重CDK抑制剂不抑制CDK4。在一些情况下，多重CDK抑制剂可能不能抑制CDK6。
在本申请中，CDK12可以是人类CDK12。例如，所述多重CDK抑制剂可以包括CDK12抑制剂。例如，所述多重CDK抑制剂可以直接或间接减少和/或抑制相应的一个或多个CDK的活性。在某些情况下，所述多重CDK抑制剂可以直接或间接减少和/或抑制CDK12的活性。
在本申请中，多重CDK抑制剂可以从以下组中选择：THZ531，Dinaciclib和SR-3029。
治疗方法和药品
在本申请的一个方面，提供了一种预防、缓解或治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，包括：将本申请中的HER2抑制剂给予受试者，其中受试者的蛋白质和/或编码该蛋白质的基因发生改变，该蛋白质包括HER2和/或CDK12。
在另一个方面，本申请提供了一种预防、缓解或治疗肿瘤或抑制有需要的受试者实体瘤生长的方法，包括：将本申请中的HER2抑制剂给予受试者，其中该肿瘤是CDK12扩增的肿瘤。
在本申请中，所述改变可包含HER2基因和/或CDK12基因的突变、扩增、融合和/或重排。
例如，该改变可包括蛋白质中的突变和/或基因中的突变。例如，蛋白质的突变可以被表示为蛋白质氨基酸序列的任何变化。例如，基因的突变可以被表示为基因核苷酸序列的任何变化。
在一些情况下，该改变可包括蛋白质氨基酸序列中至少一个氨基酸的突变。例如，该改变可包括HER2蛋白质中至少一个突变。在一些情况下，该突变可包括T862A、H878Y和/或R897W。在一些情况下，该突变可包括T862A、H878Y和R897W。
在本申请中，T862A表示位于第862个位置的原始氨基酸T被氨基酸A所替代。在本申请中，人类HER2蛋白的氨基酸的位置是从N端编号的。人类HER2蛋白质的氨基酸序列可以参考UniProtKB/Swiss-Prot:P04626.1。例如，人类HER2蛋白质从N端开始的第一个氨基酸是M，从N端开始的第862个氨基酸是T。
在本申请中，该改变包括基因中的扩增，例如HER2基因和/或CDK12基因。在某些情况下，扩增可包括该基因DNA拷贝数的增强。
在本申请中，该改变包括蛋白质和/或编码蛋白质的mRNA中的扩增，例如HER2和/或CDK12。在某些情况下，扩增可包括mRNA拷贝数的增强和/或mRNA表达水平的增强。另外，扩增可包括蛋白质表达水平的增强。
在一些实施方式中，该改变可涉及CDK12基因的改变。例如，该改变可包括CDK12基因的扩增。例如，该改变可包括CDK12基因DNA拷贝数的增强。例如，该改变可包括由CDK12基因编码的mRNA拷贝数的增强。例如，该改变可包括CDK12蛋白质的增强表达水平。
在一些实施方式中，该改变可涉及HER2基因的改变。例如，该改变可包括HER2基因的扩增。例如，该改变可包括HER2基因DNA拷贝数的增强。例如，该改变可包括由HER2基因编码的mRNA拷贝数的增强。例如，该改变可包括HER2蛋白质表达水平的增强。
在某些实施方式中，该改变可包括CDK12基因和HER2基因的共同扩增。例如，扩增可包括CDK12基因和HER2基因的DNA拷贝数增强。例如，扩增可包括由CDK12基因和HER2基因编码的mRNA拷贝数的增强。例如，扩增可包括CDK12蛋白质和HER2蛋白质表达水平的增强。
在本申请中，增强可表示相对于正常细胞增强了至少约5％，至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％，至少约55％，至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约100％，至少约200％，至少约500％或更多。例如，正常细胞可来自健康个体和/或未受任何肿瘤影响的组织。
在某些实施方式中，受试者可能对针对HER2相关肿瘤的常规治疗没有反应。例如，HER2相关肿瘤的常规治疗包括使用针对HER2的药物。例如，包括HER2抗原结合蛋白(例如，抗HER2抗体)、其缀合物和/或HER2特异性抑制剂。在一些实施方式中，HER2相关肿瘤的常规治疗可能包括使用HER2-ADC、吡咯替尼(pyrotinib)、来那替尼(neratinib)、图卡替尼(tucatinib)、曲妥珠单抗和/或帕妥珠单抗。在一些实施方式中，HER2相关肿瘤的常规治疗可包括使用通用的治疗肿瘤的药物。例如，可包括任何可用的化疗药物。例如，HER2相关肿瘤的常规治疗，包括使用多西他赛(docetaxel)、卡培他滨(capecitabine)和/或拉帕替尼(lapatinib)。
在本申请中，不响应指的是受试者在接受HER2相关肿瘤的常规治疗后，肿瘤症状没有显著的缓解。例如，症状可能包括肿瘤体积的减少。例如，症状可能包括OS(总生存期)、ORR(总缓解率)和/或PFS(无进展生存期)的延长。
在本申请中，肿瘤可能是实体瘤。例如，肿瘤可能是转移性肿瘤、早期肿瘤和/或局部晚期肿瘤。例如，肿瘤可能是HER2阳性肿瘤和/或HER2低表达肿瘤。
在本申请中，肿瘤可能是CDK12扩增的肿瘤。例如，该肿瘤具有相对增强的CDK12基因拷贝数。在某些实施方式中，该肿瘤同时具有相对增强的CDK12基因和HER2基因拷贝数。在某些实施方式中，CDK12扩增的肿瘤可能包括实体瘤(例如，乳腺癌和/或胃癌)。
在某些实施方式中，肿瘤可能是乳腺癌和/或胃癌。例如，乳腺癌可能包含HER2阳性乳腺癌和/或HER2低表达乳腺癌。例如，乳腺癌可能包括早期乳腺癌、局部晚期乳腺癌和/或转移性乳腺癌。例如，胃癌可能包括早期胃癌、局部晚期胃癌和/或转移性胃癌。例如，在需要该治疗的受试者中，可能在诊断为局部晚期不能切除或转移性疾病时，已经进行了组织学或细胞学鉴定，确认其为HER2阳性乳腺癌。
在某些实施方式中，，本申请的HER2抑制剂可在每公斤体重约15毫克至约35毫克的剂量下给受试者使用。在一些实施方式中，，HER2抑制剂的剂量可在每公斤体重约20毫克至约30毫克之间。例如，HER2抑制剂的剂量可为每公斤体重约20毫克。例如，HER2抑制剂的剂量可为每公斤体重约30毫克。
例如，本申请的HER2抑制剂可每两周一次或每三周一次给予受试者。例如，本申请的HER2抑制剂剂量可为每公斤体重约20毫克，并且每两周一次给予。在一些实施方式中，本申请的HER2抑制剂给予受试者的使用剂量可为每公斤体重约30毫克，并且每三周一次给予。
本申请中的HER2抑制剂可通过相同的或不同的给药途径进行给予。例如，本申请中的HER2抑制剂可通过静脉注射给予。
在本申请中，该方法可包括使用本申请中的多重CDK抑制剂。在一些实施方式中，该方法可包括使用本申请中的HER2抑制剂和多重CDK抑制剂。
在本申请中，药物制剂可包括本申请中的多重CDK抑制剂。例如，药物制剂可包括本申请中的HER2抑制剂和多重CDK抑制剂。
例如，药物制剂可以分别包含本申请中的HER2抑制剂和多重CDK抑制剂的两个独立包装产品。
在本申请中，要给予的药物制剂可以一次性购买，也可以分开购买多次。一些情况下，一次购买本申请中的HER2抑制剂，另一次购买多重CDK抑制剂。另一些情况是，一次性购买本申请中的HER2抑制剂和多重CDK抑制剂。
例如，药物制剂可以包括药物组成的制剂。一些情况下，药物组成的制剂可以包括用于装载本申请中的HER2抑制剂和多重CDK抑制剂的容器。
例如，HER2抑制剂和多重CDK抑制剂不包含在同一个容器中。例如，HER2抑制剂和多重CDK抑制剂分别包含在各自的容器中。
在本申请中，药物制剂可以是固体或液体状态。
在本申请中，多重CDK抑制剂可以通过静脉注射给予。
在本申请中，HER2抑制剂可以在多重CDK抑制剂之前、之后或与其同时给予。
在本申请中，该方法可包括使用本申请中的免疫检查点抑制剂。
例如，该方法可包含使用本申请中的HER2抑制剂和免疫检查点抑制剂。例如，该方法可包含使用本申请中的HER2抑制剂、多重CDK抑制剂和免疫检查点抑制剂。
在本申请中，药物制剂可以包含本申请中的免疫检查点抑制剂。
例如，药物制剂可以包含本申请中的HER2抑制剂和免疫检查点抑制剂。例如，药物制剂可以包含本申请中的HER2抑制剂、多重CDK抑制剂和免疫检查点抑制剂。
例如，药物制剂可以分别包含本申请中的HER2抑制剂和免疫检查点抑制剂的两个独立包装产品。
例如，药物制剂可以分别包含本申请中的HER2抑制剂、多重CDK抑制剂和免疫检查点抑制剂的三个独立包装产品。
在本申请中，要给予的药物制剂可以一次性购买，也可以分开购买多次。例如，一次购买本申请中的HER2抑制剂，另一次购买免疫检查点抑制剂，还可以另一次购买多重CDK抑制剂。另一个例子是一次性购买本申请中的HER2抑制剂、多重CDK抑制剂和免疫检查点抑制剂。
例如，药物制剂可以包含药物组成的制剂。例如，药物组成的制剂可以包含用于装载本申请中的HER2抑制剂的容器，以及用于装载免疫检查点抑制剂的容器。例如，药物组成的制剂可以包含用于装载本申请中的HER2抑制剂的容器，用于装载免疫检查点抑制剂的容器，以及用于装载多重CDK抑制剂的容器。
例如，药物组成的制剂可以包含用于装载本申请中的HER2抑制剂和免疫检查点抑制剂的容器。例如，药物组成的制剂可以包含用于装载本申请中的HER2抑制剂、免疫检查点抑制剂和多重CDK抑制剂的容器。
在本申请中，药物制剂可以是固体或液体状态。
在本申请中，免疫检查点抑制剂可以通过静脉注射的方式给予。
在本申请中，HER2抑制剂可以在免疫检查点抑制剂之前、之后或同时给予。在本申请中，多重CDK抑制剂可以在免疫检查点抑制剂之前、之后或同时给予。在本申请中，HER2抑制剂可以与免疫检查点抑制剂和多重CDK抑制剂同时给予。
在一些实施方式中，HER2抑制剂可以以每公斤体重20毫克到30毫克的剂量给予。例如，HER2抑制剂可以每两周一次或每三周一次给予。例如，HER2抑制剂可以通过静脉注射的方式给予。
在一些实施方式中，免疫检查点抑制剂可以以每公斤体重0.01毫克到100毫克的剂量给予。例如，免疫检查点抑制剂可以每两周一次或每三周一次给予。例如，免疫检查点抑制剂可以通过静脉注射的方式给予。
在一些实施方式中，HER2抑制剂可以在免疫检查点抑制剂之前、之后或同时给予。例如，HER2抑制剂可以与免疫检查点抑制剂和多重CDK抑制剂同时给予。
在本申请中，该方法可包含以下步骤：检测受试者的基因改变以确定是否适合给予本申请中的HER2抑制剂。
在一些实施方式中，检测可以通过对受试者HER2蛋白进行测序来进行。例如，检测可以通过对受试者CDK12基因进行测序来进行。例如，检测可以通过对受试者HER2基因进行测序来进行。
在本申请中，测序可能包含新一代测序(NGS)和/或微滴式数字PCR(ddPCR)。新一代测序是用于确定DNA或RNA序列以了解与疾病(例如，涉及肿瘤)相关的基因改变的方法。新一代测序可能使用DNA(例如，cDNA)作为样本。在本申请中，ddPCR是基于水油乳液滴技术进行数字PCR的方法。水滴数字PCR可用于直接定量和克隆扩增核酸链，包含DNA、cDNA或RNA、。
在本申请中，检测也可以通过荧光原位杂交(FISH)和/或免疫组织化学(IHC)来进行。荧光原位杂交是一种使用与核酸序列高度互补的荧光探针来检测基因组(包括DNA和/或RNA)中特定特征(例如，本申请中的扩增、突变)的方法。免疫组织化学是一种用于在组织样本中标记蛋白质(例如，HER2和/或CDK12)的方法。如果使用相应的抗体来检测蛋白质，免疫组织化学可能非常敏感。
在本申请中，测序可使用受试者需要的外周血和/或肿瘤组织作为样本。一些情况下，受试者可能需要进行本申请中的预防、缓解或治疗肿瘤。一些情况下，受试者需要确定是否适合给予本申请中的HER2抑制剂。
本申请还提供了HER2抑制剂与本申请中的多重CDK抑制剂和/或免疫检查点抑制剂在制备用于缓解或治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的药物的用途。
本申请还提供了本申请中的药品在制备用于缓解或治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的药物的用途。
其检测方法及系统
在另一个方面，本申请提供了一种用于预防、缓解或治疗癌症或抑制患者肿瘤生长的方法，该方法包含：检测患者是否存在本申请中描述的基因改变，若存在改变，则患者适合接受本申请中提供的HER2抑制剂。
在另一个方面，本申请提供了一种系统，用于确定患者是否适合接受本申请中提供的HER2抑制剂，该系统包含检测模块，用于检测患者是否存在本申请中描述的基因改变。
例如，该检测模块可以配置为对目标蛋白质和/或其编码基因进行测序。
例如，该检测模块可以配置为对HER2基因进行测序。例如，该检测模块可以配置为对CDK12基因进行测序。
例如，该检测模块可以配置为对HER2进行测序。
在本申请中，检测模块可以包含用于对CDK12基因和/或HER2基因进行测序的试剂。例如，该试剂可以包含HER2基因的引物，和/或CDK12基因的引物。检测模块还可以包含用于对HER2基因和/或CDK12基因进行NGS和/或ddPCR的试剂。
在本申请中，检测模块可以包含用于对HER2进行测序的试剂。例如，该试剂可以包含HER2的探针和/或抗体。检测模块还可以包含用于对HER2和/或CDK12进行FISH和/或IHC的试剂。
在本申请中，该系统还可以包含样品收集模块。
在一些实施方式中，测序可以使用来自患者的ctDNA作为样本。在一些实施方式中，测序可以使用来自患者的外周血作为样本。在一些实施方式中，测序可以使用来自患者的肿瘤组织作为样本。
在一些实施方式中，样品收集模块可以配置为从患者收集ctDNA样本。例如，样品收集模块可以配置为从患者收集外周血样本。
在一些实施方式中，样品收集模块可以包含用于采集和/或分离ctDNA的试剂。例如，样品收集模块可以包含无菌针、止血带和/或穿刺部位。例如，样品收集模块可以包含玻璃载玻片。
实施例
阐述以下实施例是为了向本领域普通技术人员提供如何制造和使用本公开的完整公开和描述，并不旨在限制发明人认为是其发明的范围，也不旨在表示下面的实验是所有或唯一进行的实验。已努力确保所用数字的准确性(例如，数量、温度等)，但是应该考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，否则份数是重量份，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，压力等于或接近大气压。可以使用标准缩写，例如bp表示一个碱基对或多个碱基对；kb表示一千碱基或数千碱基；s或sec表示一秒或数秒；min表示一分钟或数分钟；h或hr表示一小时或数多个小时；aa表示一个或多个氨基酸；nt表示一个或多个核苷酸；i.m.表示肌内(地)；i.p.表示腹膜内(地)；s.c.表示皮下(地)；等等。
发光法细胞活力检测(CTG)
细胞培养
SK-BR-3(人乳腺癌，ATCC)在McCoy's 5a培养基(目录号：12330-031，Gibco)中加入10％ FBS(目录号：FND500，批号：11G271，ExCell)进行培养，AU565(人乳腺癌，ATCC)、HCC2218(人乳腺癌，ATCC)、HCC1954(人乳腺癌，ATCC)、KYSE-410(人食管癌，DSMZ)、NCI-H1781(人支气管肺泡癌，ATCC)、NCI-H2170(人鳞状非小细胞肺癌，PUMC)、NCI-N87(人胃癌，ATCC)在RPMI-1640培养基(目录号：C22400500BT，批号：8118117，Gibco)中加入10％ FBS进行培养。OE19(人食管癌，DSMZ)在RPMI-1640培养基中加入10％ FBS和2mM L-谷氨酰胺培养。EFM-192A(人乳腺癌，CoBioer)和ZR-75-30(人乳腺癌，ATCC)在RPMI-1640培养基中加入20％ FBS培养。所有细胞在37℃，5％ CO2条件下孵育。
药物处理
HER2抑制剂曲妥珠单抗(Alphamab)和帕妥珠单抗(Alphamab)均用培养基稀释。HER2抑制剂的最终浓度为676.52、169.13、42.28、10.57、2.64、0.88、0.22、0.055、0.014nM，曲妥珠单抗的最终浓度为687.13、171.78、42.95、10.74、2.68、0.67、0.17、0.042、0.01nM，帕妥珠单抗的最终浓度为675.67、168.92、42.23、10.56、2.64、0.66、0.17、0.041、0.01nM。Dinaciclib(Beyotime，SC6628)的最终浓度为100、33.33、11.11、3.70、1.23、0.41、0.14、0.046、0.015nM。
步骤
调整细胞密度至适当值，向96孔板(目录编号3610，Corning)的每个孔中加入90μL的细胞悬液(1500～8000个细胞)。对于联用处理组，使用80μL的细胞悬液进行孵育。然后，将96孔板在37℃、5％ CO2的湿润孵育箱中过夜孵育。向每个孔中加入10μL的复合液(10X)(一式三份)。将96孔板继续在37℃、5％ CO2的孵育箱中孵育三天。之后，向每个孔中加入50μL 试剂(目录号：G7572，批号：0000309060，Promega)。在摇床上震荡2分钟以促进细胞裂解。96孔板在室温下孵育20分钟以稳定荧光信号。使用EnVision2104多功能读取器记录荧光信号。存活率(％)计算公式＝(样品荧光-培养基对照荧光)/(阴性对照荧光-培养基对照荧光)x100％。使用GraphPad Prism 5.0软件，通过非线性回归模型和计算IC50展示S型剂量反应-存活率曲线。数据还包括最大抑制率。
本申请的HER2抑制剂具有共同的轻链以及第一重链和第二重链，其中共同的轻链包括序列编号为SEQ ID NO.65的氨基酸序列；第一重链的可变区包括序列编号为SEQ IDNO.87的氨基酸序列，第二重链的可变区包括序列编号为SEQ ID NO.88的氨基酸序列。
本申请的二聚体是同源二聚体，每个肽链的二聚体包含序列编号为SEQ ID NO.40的氨基酸序列。本申请的二聚体包含特异于PD-L1的ISVD，该ISVD包含如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，以及特异于CLTA4的ISVD，该ISVD包含如SEQ ID NO.20所示的氨基酸序列。
实施例1临床活性
研究设计和患者选择
本阶段I期多中心、开放标签、3+3剂量递增研究旨在评估HER2抑制剂在HER2阳性转移性乳腺癌(MBC)患者中的安全性、耐受性、药代动力学(PK)和初步抗肿瘤活性，并确定推荐的II期剂量(RP2D)。该研究方案在招募患者之前获得了机构审查委员会的批准，并按照《ICH-GCP》临床试验管理规范E6进行管理。每位患者在研究入组前均签署了知情同意书。
符合条件的患者为年龄在18至75岁之间，且已经经过组织学确诊为HER2阳性转移性乳腺癌。HER2阳性状态根据ASCO/CAP 2018指南进行确认。患者既往至少接受过一线抗her2治疗，至少有个符合RECIST 1.1标准的可测量病灶，基线左室射血分数(LVEF)≥55％。患者若有不稳定的脑转移、恶性脑膜炎、有症状的间质性肺病史、累积阿霉素剂量超过300mg/m2或等效剂量，或医学上有意义的心脏疾病史，将被排除。如果患者在签署知情同意书之前已经有血液或存档肿瘤样本的下一代基因测序结果，这些信息将被收集。
在3+3剂量递增阶段，患者按照5mg/kg每周1次(QW)、10mg/kg QW、20mg/kg每两周1次(Q2W)和30mg/kg每三周1次(Q3W)的剂量方案接受HER2抑制剂治疗。符合条件的患者在21天或28天周期内静脉注射HER2抑制剂，直到疾病进展、无法忍受的毒副作用或撤回知情同意。最初有3名患者分配到5mg/kg的初始剂量水平。剂量限制性毒性(DLT)定义为在给药后与研究治疗相关的毒性反应，由于严重程度和/或不可逆性而无法接受，并限制了剂量的进一步递增。对于QW和Q2W的给药频率，DLT评估期为28天；对于Q3W的给药频率，DLT评估期为21天。一旦观察到某一剂量水平出现客观缓解(部分缓解或完全缓解)，该剂量水平将扩展以招募额外的23到25名患者，以探索HER2抑制剂的疗效、安全性和耐受性。最大耐受剂量(MTD)被定义为在当有不超过六分之一的患者出现DLT时的最高剂量水平。如果无法确定MTD，则使用种群药代动力学和药效学方法来确定推荐的II期剂量(RP2D)。
样本规模的确定和统计分析
剂量递增队列的规模基于3+3I期试验设计。剂量扩展阶段的样本量采用单侧精确检验方法计算，假设每个剂量扩展阶段的队列将招募大约60名受试者。假设既往抗her2治疗失败的her2阳性转移性乳腺癌(MBC)患者的客观缓解率(ORR)为8-10％，则招募60名患者可以提供80％的统计功效检测到30％的ORR增加(α＝0.05)。安全性分析基于安全性分析集，疗效分析基于完整疗效分析集(FAS)。
人口统计学资料、基线特征、不良事件(AEs)、实验室毒性以及剂量限制性毒性(DLT)使用描述性统计进行总结。采用Clopper Pearson法进行点估计值和95％精确的二项式置信区间(CI)计算客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)和临床获益率(CBR)。采用Kaplan-Meier方法估算生存结果，包括无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。对于所有PK终点，采用描述性统计和图形显示。最大血药浓度(Tmax)用中位数、25％和75％分位数、最小值和最大值进行描述。使用SAS 9.4软件进行统计计算。
根据来自22名患者组织和外周血ctDNA的基线NGS信息(图1和图2)，在3名患者组织中(p.T862A、p.H878Y、p.R897W)和2名患者ctDNA中(p.T862A和p.H878Y，与相应的组织NGS信息一致)发现功能获得性HER2突变。这3名患者的最佳反应是2名PD和1名体积增大的SD。TP53、CDK12、MYC和PIK3CA是22名患者组织中最常见的4种基因改变。然而，在ctDNA分析中，MYC的改变并不常见。仅有2名患者在组织中未检测到HER2扩增，这两名患者的最佳反应是PD。对HER2抑制剂有反应的所有患者均有CDK12扩增。那些在组织或ctDNA中检测到PIK3CA突变的患者对HER2抑制剂相对不敏感。
探索性研究表明，具有增强功能HER2突变的3名患者的最佳反应是2名PD和1名体积增大的SD。实际上，HER2p.T862A、p.H878Y和p.R897W突变均位于HER2蛋白激酶结构域。在一些临床前研究中，表达具有HER2增强功能突变的转化细胞显示出对曲妥珠单抗的耐药性。TP53、CDK12和PIK3CA是组织和ctDNA中最常见的基因改变，这与陈已报道的研究结果相似。有趣的是，所有PR患者均具有CDK12扩增。进一步研究CDK12在HER2阳性转移性乳腺癌中的作用将有助于更好地了解这类患者的生物学特征，并发现具有CDK12共扩增的患者潜在的治疗方法。具有PIK3CA突变的患者对HER2抑制剂的反应相对较差，这与先前的研究结果一致，表明PIK3CA突变在曲妥珠单抗/帕妥珠单抗的耐药性和转移性乳腺癌的进展中可能起着非常重要的作用。
实施例2肿瘤抑制
]单独使用HER2抑制剂或与Dinaciclib联合用于抑制对赫赛汀(Herceptin)耐药的BT474细胞的扩增(HER2阳性乳腺癌细胞)。赫赛汀耐药的BT474细胞来源于一个接受了至少一年赫赛汀治疗并对赫赛汀显示出耐药性的受试者。
然后将赫赛汀耐药的BT474细胞分别用HER2抑制剂和Dinaciclib单独或联合处理，并在不同浓度下培养细胞3天。使用CCK-8法测量OD450值。
结果如图3所示。在图3中，组1-3分别表示仅用HER2抑制剂处理、仅用Dinaciclib处理和HER2抑制剂与Dinaciclib联合处理的结果。从图3的结果可以看出，HER2抑制剂与Dinaciclib联合治疗的最大抑制率约为90％，而单独使用HER2抑制剂的最大抑制率不到60％。因此，HER2抑制剂与Dinaciclib联合使用对赫赛汀耐药的BT474细胞的增殖抑制效果显著优于单独使用HER2抑制剂或单独使用Dinaciclib。
HER2抑制剂单独使用或与Dinaciclib联合用于抑制赫赛汀耐药的N87细胞(HER2阳性胃癌细胞)。赫赛汀耐药的N87细胞来源于一个接受了至少一年赫赛汀治疗并对赫赛汀显示出耐药性的受试者。
然后将赫赛汀耐药的N87细胞分别用HER2抑制剂和Dinaciclib单独或联合处理，并在不同浓度下培养细胞3天。使用CCK-8法测量OD450值。
结果如图4所示。在图4中，组1-3分别对应于仅用HER2抑制剂处理、仅用Dinaciclib处理和HER2抑制剂与Dinaciclib联合处理的结果。从图4的结果可以看出，HER2抑制剂与Dinaciclib联合治疗的最大抑制率约为90％，而单独使用HER2抑制剂的最大抑制率不到40％。因此，HER2抑制剂与Dinaciclib联合对赫赛汀耐药的N87细胞的增殖抑制效果显著优于单独使用HER2抑制剂或单独使用Dinaciclib。
实施例3HER2抑制剂与Dinaciclib联合的肿瘤抑制作用
实施例3根据发光法细胞活力检测(CTG)的步骤进行实验。
结果如图5-6所示。在图5-6中，组1-3分别对应于仅用HER2抑制剂处理、仅用Dinaciclib处理和HER2抑制剂与Dinaciclib联合处理的结果。
从图5-6的结果可以看出，HER2抑制剂与Dinaciclib联合治疗(尤其在相对较高浓度下)对CDK12扩增的实体肿瘤细胞具有显著优于单独使用HER2抑制剂的增殖抑制效果；并且稍微优于单独使用Dinaciclib的增殖抑制效果。
实施例4HER2抑制剂和Dinaciclib联合治疗的肿瘤抑制效果
实施例4按照发光法细胞活力检测(CTG)的步骤进行了实验。
结果见图7-8。在图7-8中，组1-3分别代表接受曲妥珠单抗和Dinaciclib联合治疗，接受曲妥珠单抗、帕妥珠单抗和Dinaciclib联合治疗，以及接受HER2抑制剂和Dinaciclib联合治疗的结果。
从图7-8的结果可见，HER2抑制剂和Dinaciclib联合治疗对CDK12扩增的实体肿瘤细胞具有显著的增殖抑制效果，优于曲妥珠单抗、帕妥珠单抗和Dinaciclib的联合治疗效果；而对于部分CDK12未扩增的实体肿瘤细胞(如OE19细胞、NCI-H1781细胞、ZR-75-30细胞和NCI-H2170细胞)，HER2抑制剂和Dinaciclib联合治疗的增殖抑制效果与曲妥珠单抗、帕妥珠单抗和Dinaciclib三者联合治疗的效果相对类似。
实施例5胃肿瘤细胞的抑制作用
实施例5按照发光法细胞活力检测(CTG)的步骤进行了实验。
结果见图9。在图9中，组1-2分别代表接受曲妥珠单抗单独治疗和接受HER2抑制剂单独治疗的结果。
从图9的结果可见，HER2抑制剂对胃肿瘤细胞(NCI-N87)的增殖抑制效果显著优于曲妥珠单抗。而NCI-N87细胞同时表达HER2和CDK12。
实施例6肿瘤细胞的抑制作用
实施例6按照发光法细胞活力检测(CTG)的步骤进行了实验。
结果见图10-11。在图10-11中，组1-2分别代表图中对应肿瘤细胞分别接受曲妥珠单抗单独治疗和接受HER2抑制剂单独治疗的结果。
从图10-11的结果可见，HER2抑制剂对CDK12扩增的实体肿瘤细胞(如NCI-N87)的增殖抑制效果显著优于曲妥珠单抗。
实施例7CDK12是HER2抑制剂疗效更好的生物标志物
为了探索患者对HER2抑制剂的不同反应的分子机制，并鉴定有希望的生物标志物，共招募了22例HER2阳性患者，基于免疫组织化学(IHC)测试进行筛选(表2)。对患者组织样本进行了基于NGSpanel的基因检测，并确认其中20例患者具有HER2扩增，其中14例患者同时具有CDK12共扩增。值得注意的是，对于具有HER2/CDK12共扩增的患者治疗效果更加显著(ORR为50％对比0％，Fisher's精确检验，P＝0.05)，并具有更长的PFS(无进展生存期)(8.2对比2.7个月，Log-rank检验，P＝0.04)，表明HER2/CDK12共扩增有助于患者获得更有效的临床疗效，并且这一特征可以作为HER2抑制剂治疗的潜在生物标志物。利用TheCancer Genome Atlas(TCGA)获得的多组学数据(multi-omics data)，发现多种癌症中广泛存在HER2/CDK12共扩增，尤其在肾脏乳头状细胞癌(KIRP)和肺鳞状细胞癌(LUAD)中。约有30％的乳腺癌患者(在33种常见癌症类型中排名第9)表现出HER2/CDK12共扩增，而在基于PAM50定义的HER2富集亚型的乳腺癌中，这一比例增加到约70％。由于80％的HER2阳性亚型乳腺癌患者表现出HER2扩增，因此这种亚型成为了研究重点。研究发现，在不具有HER2/CDK12共扩增的情况下，乳腺癌中众所周知的驱动基因PTEN的失活突变在这种癌症亚型中显著富集(Fisher's精确检验，P＝1.3×10-3)。预期，HER2/CDK12共扩增使得这两个基因在mRNA水平上表达显著增加。此外，与无共扩增组相比，HER2/CDK12共扩增组在细胞周期、mTOR和DNA修复通路的mRNA和蛋白表达水平上显示出显著较低的活性。此外，共扩增组表现出较低的免疫活性和较少的免疫细胞，包括CD8+T细胞(P＝1.7×10-2)、中性粒细胞(P＝1.9×10-2)和B细胞(P＝2.9×10-2)。综上所述，具有HER2/CDK12共扩增的乳腺癌患者具有不同的分子特征、紊乱的信号通路和肿瘤微环境，这可能是导致本申请中HER2抑制剂治疗反应差异的原因。这些结果表明，HER2/CDK12共扩增可能是本申请中HER2抑制剂治疗反应的潜在预测生物标志物。
使用发光法细胞活力检测(CTG)，本申请中的HER2抑制剂相较于曲妥珠单抗+帕珠单抗联用在曲妥珠单抗耐药细胞系中表现出更高的效力和效能参数，如绝对EC50、相对EC95和最大抑制率。与这些结果一致，本申请中的HER2抑制剂在HER2/CDK12共扩增的细胞系中相较于HER2扩增/CDK12非扩增的细胞系表现出更高的效力和效能。包含Dinaciclib的3种组合(曲妥珠单抗+Dinaciclib，曲妥珠单抗+帕珠单抗+Dinaciclib，HER2抑制剂+Dinaciclib)的最大抑制率均非常高，且对CDK12共扩增和非共扩增细胞系之间的抑制效果没有显著差异。
表2：本研究中用于基因检测患者的临床信息
缩写解释：NA：不适用；PD：疾病进展；PFS：无进展生存时间；PR：部分缓解；SD：疾病稳定。
实施例8本申请中披露的HER2抑制剂与二聚体联合用药对CDK12阳性肿瘤受试者的应用研究
本研究旨在评估本申请中披露的HER2抑制剂与本申请中披露的二聚体在CDK12阳性肿瘤受试者中的安全性和疗效。
剂量组(HER2抑制剂15-35mg/kg Q2W+本文公开的二聚体1-5mg/kg Q2W)共涉及6名受试者。
结果显示，HER2抑制剂与本文公开的二聚体联合治疗对4名CDK12阳性肿瘤受试者有效。
虽然本发明的优选实施方式已在本文中展示和描述，但显然这些实施方式仅供示例。本发明不打算受限于本规范中提供的特定示例。虽然本发明已描述与上述规范的参考，但这里的实施方式的描述和插图并不意味着以限定意义理解。在不脱离本发明的前提下，专业人士会注意到将有许多变化、改动和替换。此外，应理解本发明的各个方面并不限于本规范中设置的特定描绘、配置或相对比例，这取决于多种条件和变量。应理解在实践本发明时可以采用本规范中所描述的各种替代方案。因此，预期本发明还将涵盖所有这些替代方案、改动、变体或等效物。本发明的范围由以下权利要求所定义，涵盖其中所述方法和结构以及其等效物。
序列表
<110> 江苏康宁杰瑞生物制药有限公司
<120> 预防、减轻或治疗肿瘤的方法
<130> 0096-PA-024CN
<160> 104
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的CDR3
<220>
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Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Met Ala
1 5 10
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-9 CDR1
<400> 3
Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg Cys Met Ala
1 5 10
<210> 4
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-9 CDR2
<400> 4
Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 5
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-9 CDR3
<400> 5
Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser Gly Ala
1 5 10 15
Phe Gln Tyr
<210> 6
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-9
<400> 6
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-6 CDR1
<400> 7
Gly Asn Ile Ile Arg Val Arg Cys Met Ala
1 5 10
<210> 8
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-6 CDR2
<400> 8
Asn Ile Leu Thr Thr Thr Ile Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 9
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-6 CDR3
<400> 9
Asp Ser Phe Gly Tyr Pro Thr Cys Pro Gly Pro Ala Ser Ser Gly Ala
1 5 10 15
Phe Gln Tyr
<210> 10
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-6
<400> 10
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Asn Ile Ile Arg Val Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Gly
35 40 45
Pro Asn Ile Leu Thr Thr Thr Ile Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asn Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Gly Tyr Pro Thr Cys Pro Gly Pro Ala Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 11
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-m3 CDR2
<400> 11
Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 12
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-m3
<400> 12
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asn Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 13
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-4
<400> 13
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asn Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 14
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-11
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 15
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-13
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 16
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CDR2 of CTLA4
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> X=Y/S
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X=I/L
<400> 16
Ala Ile Xaa Xaa Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-34 CDR1
<400> 17
Ala Tyr Cys Met Gly
1 5
<210> 18
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-34 CDR2
<400> 18
Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 19
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-34 CDR3
<400> 19
Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser Gly Pro
1 5 10 15
Phe Gly Tyr
<210> 20
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-34
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-C1 CDR2
<400> 21
Ala Ile Tyr Leu Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 22
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-C1
<400> 22
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Gly Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Leu Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Ile Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Ser Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-13 CDR2
<400> 23
Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 24
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-13
<400> 24
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 25
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-26
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 26
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-27
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 27
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-28
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 28
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-29
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 29
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-30
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 30
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-31
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 31
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-32
<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 32
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-33
<400> 32
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 33
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 短连接体
<400> 33
Gly Ala Pro
1
<210> 34
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 长连接体
<400> 34
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 35
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 具有铰链的IgGl-Fc区
<400> 35
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 36
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IgGl恒定区
<400> 36
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 37
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 对照dAb
<400> 37
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Tyr Cys Met Gly
20 25 30
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ala Leu Ala
35 40 45
Val Thr Gly Ile Ser Ile Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
50 55 60
Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
65 70 75 80
Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ala Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser
85 90 95
Thr Ile Arg Tyr Val Cys Pro Gly Leu Asn Arg Gly Asp Gln Phe Lys
100 105 110
Asn Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 38
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 具有铰链区(C-S)的IgGl-Fc区
<400> 38
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 39
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 无铰链的人IgG1-Fc区
<400> 39
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 40
<211> 493
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aPDL1.9-aCTLA4.34-Fc
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Ala Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr
145 150 155 160
Ser Ala Tyr Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
165 170 175
Glu Gly Val Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala
180 185 190
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
195 200 205
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly
225 230 235 240
Ser Trp Ser Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
245 250 255
Val Ser Ser Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
260 265 270
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
275 280 285
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
290 295 300
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
305 310 315 320
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
325 330 335
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
340 345 350
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
355 360 365
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
370 375 380
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
385 390 395 400
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
405 410 415
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
420 425 430
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
435 440 445
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
450 455 460
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
465 470 475 480
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
485 490
<210> 41
<211> 505
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aPDL1.9-L-aCTLA4.34-Fc
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
130 135 140
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr Cys
165 170 175
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val Ala
180 185 190
Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser Gly
245 250 255
Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
260 265 270
Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
275 280 285
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
290 295 300
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
305 310 315 320
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
325 330 335
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
340 345 350
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
355 360 365
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
370 375 380
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
385 390 395 400
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
405 410 415
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
420 425 430
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
435 440 445
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
450 455 460
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
465 470 475 480
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
485 490 495
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500 505
<210> 42
<211> 493
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aCTLA4.34-aPDL1.9-Fc
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Ala Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser
145 150 155 160
Ser Arg Arg Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg
165 170 175
Glu Arg Val Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala
180 185 190
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
195 200 205
Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Ser Ser Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
245 250 255
Val Ser Ser Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
260 265 270
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
275 280 285
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
290 295 300
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
305 310 315 320
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
325 330 335
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
340 345 350
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
355 360 365
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
370 375 380
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
385 390 395 400
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
405 410 415
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
420 425 430
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
435 440 445
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
450 455 460
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
465 470 475 480
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
485 490
<210> 43
<211> 505
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aCTLA4.34-L-aPDL1.9-FC
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
130 135 140
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg Cys
165 170 175
Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val Ala
180 185 190
Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser Gly
245 250 255
Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
260 265 270
Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
275 280 285
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
290 295 300
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
305 310 315 320
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
325 330 335
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
340 345 350
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
355 360 365
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
370 375 380
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
385 390 395 400
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
405 410 415
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
420 425 430
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
435 440 445
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
450 455 460
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
465 470 475 480
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
485 490 495
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500 505
<210> 44
<211> 487
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aPDL1.9-dAb-Fc
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Ala Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln
130 135 140
Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Tyr
145 150 155 160
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
165 170 175
Ala Leu Ala Val Thr Gly Ile Ser Ile Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
180 185 190
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr
195 200 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ala Ala Met Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Ala Ser Thr Ile Arg Tyr Val Cys Pro Gly Leu Asn Arg Gly Asp
225 230 235 240
Gln Phe Lys Asn Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu
245 250 255
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
260 265 270
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
275 280 285
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
290 295 300
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
305 310 315 320
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
325 330 335
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
340 345 350
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
355 360 365
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
370 375 380
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
385 390 395 400
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
405 410 415
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
420 425 430
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
435 440 445
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
450 455 460
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
465 470 475 480
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
485
<210> 45
<211> 487
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> dAb-aCTLA4.34-Fc
<400> 45
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Tyr Cys Met Gly
20 25 30
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ala Leu Ala
35 40 45
Val Thr Gly Ile Ser Ile Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
50 55 60
Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
65 70 75 80
Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ala Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser
85 90 95
Thr Ile Arg Tyr Val Cys Pro Gly Leu Asn Arg Gly Asp Gln Phe Lys
100 105 110
Asn Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Ala Pro Gln
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val Ala
165 170 175
Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser Gly
225 230 235 240
Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu
245 250 255
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
260 265 270
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
275 280 285
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
290 295 300
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
305 310 315 320
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
325 330 335
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
340 345 350
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
355 360 365
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
370 375 380
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
385 390 395 400
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
405 410 415
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
420 425 430
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
435 440 445
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
450 455 460
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
465 470 475 480
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
485
<210> 46
<211> 491
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aPDL1.6-aCTLA4.34-Fc
<400> 46
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Asn Ile Ile Arg Val Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Gly
35 40 45
Pro Asn Ile Leu Thr Thr Thr Ile Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asn Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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Ala Ala Asp Ser Phe Gly Tyr Pro Thr Cys Pro Gly Pro Ala Ser Ser
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Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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Gly Ala Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
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Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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195 200 205
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325 330 335
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Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr
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Ser Ala Tyr Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg
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260 265 270
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325 330 335
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340 345 350
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435 440 445
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450 455 460
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Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
450 455 460
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465 470 475 480
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu
65 70 75 80
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85 90 95
Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn
100 105 110
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115 120 125
Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala
130 135 140
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145 150 155 160
Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Asn Leu Phe Asn Val Thr Ser
165 170 175
Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr Phe
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
370 375 380
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
385 390 395 400
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405 410 415
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
420 425 430
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
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Ser Pro Gly Lys
450
<210> 54
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1-huFc
<400> 54
Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser Asn
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35 40 45
Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg Gln
50 55 60
Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met
85 90 95
Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn
100 105 110
Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro Val
115 120 125
Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala
130 135 140
Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys Thr
145 150 155 160
Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Asn Leu Phe Asn Val Thr Ser
165 170 175
Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr Phe
180 185 190
Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile Pro
195 200 205
Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr Asp Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 55
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD80-muFc
<400> 55
Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys
1 5 10 15
Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp
20 25 30
Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn
35 40 45
Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn
50 55 60
Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr
65 70 75 80
Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His
85 90 95
Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser
100 105 110
Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn
130 135 140
Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu
145 150 155 160
Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr
165 170 175
Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn
180 185 190
Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn
195 200 205
Ile Glu Gly Arg Met Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
225 230 235 240
Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys
245 250 255
Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp
260 265 270
Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu
275 280 285
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met
290 295 300
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser
305 310 315 320
Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly
325 330 335
Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln
340 345 350
Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe
355 360 365
Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu
370 375 380
Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly Ser Tyr Phe
385 390 395 400
Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn
405 410 415
Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
420 425 430
Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 56
<211> 357
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4-huFc
<400> 56
Met His Val Ala Gln Pro Ala Val Val Leu Ala Ser Ser Arg Gly Ile
1 5 10 15
Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Ala Ser Pro Gly Lys Ala Thr Glu Val
20 25 30
Arg Val Thr Val Leu Arg Gln Ala Asp Ser Gln Val Thr Glu Val Cys
35 40 45
Ala Ala Thr Tyr Met Met Gly Asn Glu Leu Thr Phe Leu Asp Asp Ser
50 55 60
Ile Cys Thr Gly Thr Ser Ser Gly Asn Gln Val Asn Leu Thr Ile Gln
65 70 75 80
Gly Leu Arg Ala Met Asp Thr Gly Leu Tyr Ile Cys Lys Val Glu Leu
85 90 95
Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly Asn Gly Thr Gln Ile
100 105 110
Tyr Val Ile Asp Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser Asp Gln Glu Pro Lys
115 120 125
Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
130 135 140
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
145 150 155 160
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
165 170 175
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
180 185 190
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
195 200 205
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
210 215 220
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
225 230 235 240
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
245 250 255
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
260 265 270
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
275 280 285
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
290 295 300
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
305 310 315 320
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
325 330 335
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
340 345 350
Leu Ser Pro Gly Lys
355
<210> 57
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD86-muFc
<400> 57
Tyr Phe Asn Glu Thr Ala Asp Leu Pro Cys Gln Phe Ala Asn Ser Gln
1 5 10 15
Asn Gln Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp Gln Asp Gln Glu Asn
20 25 30
Leu Val Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu Lys Phe Asp Ser Val
35 40 45
His Ser Lys Tyr Met Gly Arg Thr Ser Phe Asp Ser Asp Ser Trp Thr
50 55 60
Leu Arg Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys Gly Leu Tyr Gln Cys
65 70 75 80
Ile Ile His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile Arg Ile His Gln Met
85 90 95
Asn Ser Glu Leu Ser Val Leu Ala Asn Phe Ser Gln Pro Glu Ile Val
100 105 110
Pro Ile Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile Asn Leu Thr Cys Ser
115 120 125
Ser Ile His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys Lys Met Ser Val Leu Leu Arg
130 135 140
Thr Lys Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Ile Met Gln Lys Ser Gln
145 150 155 160
Asp Asn Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile Ser Leu Ser Val Ser
165 170 175
Phe Pro Asp Val Thr Ser Asn Met Thr Ile Phe Cys Ile Leu Glu Thr
180 185 190
Asp Lys Thr Arg Leu Leu Ser Ser Pro Phe Ser Ile Glu Leu Glu Asp
195 200 205
Pro Gln Pro Pro Pro Asp His Ile Pro Gly Ser Met Asp Pro Lys Ser
210 215 220
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Val Ser
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr
245 250 255
Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr
275 280 285
Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser
290 295 300
Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln
370 375 380
Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met
385 390 395 400
Asn Thr Asn Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys
405 410 415
Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu
420 425 430
Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 58
<211> 381
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD1-muFc
<400> 58
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Ile Glu Gly Arg Met Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr
145 150 155 160
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile
165 170 175
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys
180 185 190
Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln
195 200 205
Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu
225 230 235 240
Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg
245 250 255
Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
260 265 270
Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro
275 280 285
Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr
290 295 300
Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln
305 310 315 320
Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly
325 330 335
Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu
340 345 350
Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn
355 360 365
His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
370 375 380
<210> 59
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 伊匹单抗HC（Ipilimumab）
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 60
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 伊匹单抗LC
<400> 60
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 61
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 度伐单抗(Durvalumab) HC
<400> 61
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 62
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 度伐单抗LC
<400> 62
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 63
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人PD-L1
<400> 63
Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser Asn
1 5 10 15
Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala
20 25 30
Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln Phe
35 40 45
Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg Gln
50 55 60
Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met
85 90 95
Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn
100 105 110
Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro Val
115 120 125
Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala
130 135 140
Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys Thr
145 150 155 160
Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Asn Leu Phe Asn Val Thr Ser
165 170 175
Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr Phe
180 185 190
Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile Pro
195 200 205
Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr
210 215 220
<210> 64
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人PD-L1 N末端IgV结构域
<400> 64
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr
115 120 125
<210> 65
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLCL1
<400> 65
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
　　 20 25 30
　　Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
　　 35 40 45
　　Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
　　 50 55 60
　　Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
　　65 70 75 80
　　Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
　　 85 90 95
　　Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
　　 100 105 110
　　Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
　　 115 120 125
　　Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
　　 130 135 140
　　Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
　　145 150 155 160
　　Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
　　 165 170 175
　　Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
　　 180 185 190
　　Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
　　 195 200 205
　　Phe Asn Arg Gly Glu Cys
　　 210
　　<210> 66
　　<211> 214
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLCL2
　　<400> 66
　　Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
　　1 5 10 15
　　Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Ile Ala
　　 20 25 30
　　Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
　　 35 40 45
　　Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
　　 50 55 60
　　Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
　　65 70 75 80
　　Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
　　 85 90 95
　　Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
　　 100 105 110
　　Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
　　 115 120 125
　　Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
　　 130 135 140
　　Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
　　145 150 155 160
　　Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
　　 165 170 175
　　Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
　　 180 185 190
　　Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
　　 195 200 205
　　Phe Asn Arg Gly Glu Cys
　　 210
　　<210> 67
　　<211> 214
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLCL3
　　<400> 67
　　Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
　　1 5 10 15
　　Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
　　 20 25 30
　　Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
　　 35 40 45
　　Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
　　 50 55 60
　　Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
　　65 70 75 80
　　Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Tyr Pro Pro
　　 85 90 95
　　Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
　　 100 105 110
　　Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
　　 115 120 125
　　Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
　　 130 135 140
　　Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
　　145 150 155 160
　　Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
　　 165 170 175
　　Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
　　 180 185 190
　　Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
　　 195 200 205
　　Phe Asn Arg Gly Glu Cys
　　 210
　　<210> 68
　　<211> 214
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLCL4
　　<400> 68
　　Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
　　1 5 10 15
　　Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Ile Ala
　　 20 25 30
　　Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
　　 35 40 45
　　Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
　　 50 55 60
　　Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
　　65 70 75 80
　　Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Tyr Pro Pro
　　 85 90 95
　　Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
　　 100 105 110
　　Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
　　 115 120 125
　　Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
　　 130 135 140
　　Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
　　145 150 155 160
　　Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
　　 165 170 175
　　Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
　　 180 185 190
　　Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
　　 195 200 205
　　Phe Asn Arg Gly Glu Cys
　　 210
　　<210> 69
　　<211> 214
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLCL5
　　<400> 69
　　Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
　　1 5 10 15
　　Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
　　 20 25 30
　　Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
　　 35 40 45
　　Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
　　 50 55 60
　　Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
　　65 70 75 80
　　Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr
　　 85 90 95
　　Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
　　 100 105 110
　　Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
　　 115 120 125
　　Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
　　 130 135 140
　　Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
　　145 150 155 160
　　Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
　　 165 170 175
　　Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
　　 180 185 190
　　Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
　　 195 200 205
　　Phe Asn Arg Gly Glu Cys
　　 210
　　<210> 70
　　<211> 214
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLCL6
　　<400> 70
　　Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
　　1 5 10 15
　　Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
　　 20 25 30
　　Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
　　 35 40 45
　　Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
　　 50 55 60
　　Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
　　65 70 75 80
　　Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Thr Pro Tyr
　　 85 90 95
　　Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
　　 100 105 110
　　Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
　　 115 120 125
　　Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
　　 130 135 140
　　Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
　　145 150 155 160
　　Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
　　 165 170 175
　　Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
　　 180 185 190
　　Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
　　 195 200 205
　　Phe Asn Arg Gly Glu Cys
　　 210
　　<210> 71
　　<211> 642
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLCL1 基因
　　<400> 71
　　gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
　　atcacctgcc gcgccagcca ggacgtgaac actgccgttg catggtacca gcagaagccc 120
　　ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagcttcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180
　　cgcttcagcg gcagccgcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
　　gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactatacta ctcctccaac attcggccag 300
　　ggcaccaagg tggagatcaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
　　agcgacgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
　　ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
　　gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
　　ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
　　ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
　　<210> 72
　　<211> 642
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLCL2 基因
　　<400> 72
　　gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
　　atcacctgcc gcgccagcca ggacgtgaac attgccgttg catggtacca gcagaagccc 120
　　ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagcttcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180
　　cgcttcagcg gcagccgcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
　　gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactatacta ctcctccaac attcggccag 300
　　ggcaccaagg tggagatcaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
　　agcgacgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
　　ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
　　gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
　　ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
　　ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
　　<210> 73
　　<211> 642
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLCL3 基因
　　<400> 73
　　gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
　　atcacctgcc gcgccagcca ggacgtgaac actgccgttg catggtacca gcagaagccc 120
　　ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagcttcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180
　　cgcttcagcg gcagccgcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
　　gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactatactt atcctccaac attcggccag 300
　　ggcaccaagg tggagatcaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
　　agcgacgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
　　ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
　　gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
　　ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
　　ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
　　<210> 74
　　<211> 642
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLCL4 基因
　　<400> 74
　　gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
　　atcacctgcc gcgccagcca ggacgtgaac attgccgttg catggtacca gcagaagccc 120
　　ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagcttcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180
　　cgcttcagcg gcagccgcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
　　gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactatactt atcctccaac attcggccag 300
　　ggcaccaagg tggagatcaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
　　agcgacgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
　　ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
　　gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
　　ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
　　ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
　　<210> 75
　　<211> 642
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLCL5 基因
　　<400> 75
　　gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
　　atcacctgca aggccagcca ggacgtgagc atcggcgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
　　ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagctacc gctacaccgg cgtgcccagc 180
　　cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
　　gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tactacatct acccctacac cttcggccag 300
　　ggcaccaagg tggagatcaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
　　agcgacgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
　　ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
　　gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
　　ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
　　ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
　　<210> 76
　　<211> 642
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLCL6 基因
　　<400> 76
　　gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
　　atcacctgca aggccagcca ggacgtgagc atcggcgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
　　ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagctacc gctacaccgg cgtgcccagc 180
　　cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
　　gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tactacatca ccccctacac cttcggccag 300
　　ggcaccaagg tggagatcaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
　　agcgacgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
　　ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
　　gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
　　ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
　　ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
　　<210> 77
　　<211> 630
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Her2 m1
　　<400> 77
　　Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser
　　1 5 10 15
　　Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln
　　 20 25 30
　　Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser
　　 35 40 45
　　Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile
　　 50 55 60
　　Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val
　　65 70 75 80
　　Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp
　　 85 90 95
　　Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro
　　 100 105 110
　　Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys
　　 115 120 125
　　Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr
　　 130 135 140
　　Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr
　　145 150 155 160
　　Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met
　　 165 170 175
　　Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser
　　 180 185 190
　　Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro
　　 195 200 205
　　Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly
　　 210 215 220
　　Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly
　　225 230 235 240
　　Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr
　　 245 250 255
　　Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser
　　 260 265 270
　　Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ala
　　 275 280 285
　　Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu Ala Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp
　　 290 295 300
　　Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys
　　305 310 315 320
　　Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser
　　 325 330 335
　　Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu
　　 340 345 350
　　Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala
　　 355 360 365
　　Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile
　　 370 375 380
　　Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu
　　385 390 395 400
　　Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn
　　 405 410 415
　　Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly
　　 420 425 430
　　Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His
　　 435 440 445
　　Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe
　　 450 455 460
　　Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp
　　465 470 475 480
　　Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly
　　 485 490 495
　　His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe
　　 500 505 510
　　Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu
　　 515 520 525
　　Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu
　　 530 535 540
　　Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp
　　545 550 555 560
　　Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala
　　 565 570 575
　　Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp
　　 580 585 590
　　Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys
　　 595 600 605
　　Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln
　　 610 615 620
　　Arg Ala Ser Pro Leu Thr
　　625 630
　　<210> 78
　　<211> 630
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Her2 m2
　　<400> 78
　　Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser
　　1 5 10 15
　　Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln
　　 20 25 30
　　Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser
　　 35 40 45
　　Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile
　　 50 55 60
　　Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val
　　65 70 75 80
　　Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp
　　 85 90 95
　　Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro
　　 100 105 110
　　Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys
　　 115 120 125
　　Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr
　　 130 135 140
　　Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr
　　145 150 155 160
　　Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met
　　 165 170 175
　　Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser
　　 180 185 190
　　Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro
　　 195 200 205
　　Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly
　　 210 215 220
　　Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly
　　225 230 235 240
　　Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr
　　 245 250 255
　　Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser
　　 260 265 270
　　Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser
　　 275 280 285
　　Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp
　　 290 295 300
　　Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys
　　305 310 315 320
　　Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser
　　 325 330 335
　　Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu
　　 340 345 350
　　Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala
　　 355 360 365
　　Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile
　　 370 375 380
　　Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu
　　385 390 395 400
　　Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn
　　 405 410 415
　　Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly
　　 420 425 430
　　Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His
　　 435 440 445
　　Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe
　　 450 455 460
　　Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp
　　465 470 475 480
　　Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly
　　 485 490 495
　　His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe
　　 500 505 510
　　Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu
　　 515 520 525
　　Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu
　　 530 535 540
　　Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Ala Ala Asp
　　545 550 555 560
　　Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro Ala Phe Cys Val Ala
　　 565 570 575
　　Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp
　　 580 585 590
　　Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys
　　 595 600 605
　　Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln
　　 610 615 620
　　Arg Ala Ser Pro Leu Thr
　　625 630
　　<210> 79
　　<211> 630
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Her2 m3
　　<400> 79
　　Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser
　　1 5 10 15
　　Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln
　　 20 25 30
　　Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser
　　 35 40 45
　　Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile
　　 50 55 60
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　　65 70 75 80
　　Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp
　　 85 90 95
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　　 100 105 110
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　　 115 120 125
　　Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr
　　 130 135 140
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　　145 150 155 160
　　Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met
　　 165 170 175
　　Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser
　　 180 185 190
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　　 195 200 205
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　　 210 215 220
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　　225 230 235 240
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　　 245 250 255
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　　 260 265 270
　　Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser
　　 275 280 285
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　　 290 295 300
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　　305 310 315 320
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　　 325 330 335
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　　 340 345 350
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　　 355 360 365
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　　 370 375 380
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　　385 390 395 400
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　　 405 410 415
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　　 420 425 430
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　　 435 440 445
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　　 450 455 460
　　Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp
　　465 470 475 480
　　Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly
　　 485 490 495
　　His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe
　　 500 505 510
　　Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu
　　 515 520 525
　　Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu
　　 530 535 540
　　Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp
　　545 550 555 560
　　Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Ala Ala Phe Cys Val Ala
　　 565 570 575
　　Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp
　　 580 585 590
　　Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys
　　 595 600 605
　　Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln
　　 610 615 620
　　Arg Ala Ser Pro Leu Thr
　　625 630
　　<210> 80
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　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 曲妥珠单抗（Tmab）重链
　　<400> 80
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　　agctgcgccg ccagcggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcgccaggcc 120
　　cccggcaagg gcctggagtg ggtggcccgc atctacccca ccaacggcta cacccgctac 180
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　　ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgccgtgt actactgcag ccgctggggc 300
　　ggcgacggct tctacgccat ggactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360
　　gccagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
　　ggcaccgccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
　　tggaacagcg gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
　　ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600
　　tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagccc 660
　　aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccccg cccccgagct gctgggcggc 720
　　cccagcgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tgatgatcag ccgcaccccc 780
　　gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840
　　tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgcgagga gcagtacaac 900
　　agcacctacc gcgtggtgag cgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
　　gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcccgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020
　　aaggccaagg gccagccccg cgagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgcgaggag 1080
　　atgaccaaga accaggtgag cctgacctgc ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140
　　gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccccgtg 1200
　　ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctga ccgtggacaa gagccgctgg 1260
　　cagcagggca acgtgttctc gtgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320
　　cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350
　　<210> 81
　　<211> 1347
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕妥珠单抗（Pmab）重链
　　<400> 81
　　gaggtgcagc tcgtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgcgcctg 60
　　agctgcgccg ccagcggctt caccttcacc gactacacca tggactgggt gcgccaggcc 120
　　cccggcaagg gcctggagtg ggtggccgac gtgaacccca acagcggcgg cagcatctac 180
　　aaccagcgct tcaagggccg cttcaccctg agcgtggacc gcagcaagaa caccctgtac 240
　　ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgccgtgt actactgcgc ccgcaacctg 300
　　ggccccagct tctacttcga ctactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gagcagcgcc 360
　　agcaccaagg gccccagcgt gttccccctg gcccccagca gcaagagcac cagcggcggc 420
　　accgccgccc tgggctgcct ggtgaaggac tacttccccg agcccgtgac cgtgagctgg 480
　　aacagcggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttccccg ccgtgctgca gagcagcggc 540
　　ctgtacagcc tgagcagcgt ggtgaccgtg cccagcagca gcctgggcac ccagacctac 600
　　atctgcaacg tgaaccacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaggt ggagcccaag 660
　　agctgcgaca agacccacac ctgccccccc tgccccgccc ccgagctgct gggcggcccc 720
　　agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagccg cacccccgag 780
　　gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccac gaggaccccg aggtgaagtt caactggtac 840
　　gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagcccc gcgaggagca gtacaacagc 900
　　acctaccgcg tggtgagcgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960
　　tacaagtgca aggtgagcaa caaggccctg cccgccccca tcgagaagac catcagcaag 1020
　　gccaagggcc agccccgcga gccccaggtg tacaccctgc cccccagccg cgaggagatg 1080
　　accaagaacc aggtgagcct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 1140
　　gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccccgtgctg 1200
　　gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagag ccgctggcag 1260
　　cagggcaacg tgttctcgtg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
　　aagagcctga gcctgagccc cggcaag 1347
　　<210> 82
　　<211> 630
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HER2 ECD
　　<400> 82
　　Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser
　　1 5 10 15
　　Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln
　　 20 25 30
　　Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser
　　 35 40 45
　　Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile
　　 50 55 60
　　Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val
　　65 70 75 80
　　Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp
　　 85 90 95
　　Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro
　　 100 105 110
　　Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys
　　 115 120 125
　　Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr
　　 130 135 140
　　Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr
　　145 150 155 160
　　Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met
　　 165 170 175
　　Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser
　　 180 185 190
　　Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro
　　 195 200 205
　　Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly
　　 210 215 220
　　Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly
　　225 230 235 240
　　Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr
　　 245 250 255
　　Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser
　　 260 265 270
　　Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser
　　 275 280 285
　　Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp
　　 290 295 300
　　Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys
　　305 310 315 320
　　Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser
　　 325 330 335
　　Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu
　　 340 345 350
　　Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala
　　 355 360 365
　　Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile
　　 370 375 380
　　Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu
　　385 390 395 400
　　Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn
　　 405 410 415
　　Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly
　　 420 425 430
　　Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His
　　 435 440 445
　　Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe
　　 450 455 460
　　Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp
　　465 470 475 480
　　Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly
　　 485 490 495
　　His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe
　　 500 505 510
　　Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu
　　 515 520 525
　　Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu
　　 530 535 540
　　Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp
　　545 550 555 560
　　Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala
　　 565 570 575
　　Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp
　　 580 585 590
　　Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys
　　 595 600 605
　　Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln
　　 610 615 620
　　Arg Ala Ser Pro Leu Thr
　　625 630
　　<210> 83
　　<211> 450
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 曲妥珠单抗 HC-孔
　　<400> 83
　　Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
　　1 5 10 15
　　Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
　　 20 25 30
　　Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
　　 35 40 45
　　Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
　　 50 55 60
　　Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
　　65 70 75 80
　　Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
　　 85 90 95
　　Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
　　 100 105 110
　　Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
　　 115 120 125
　　Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
　　 130 135 140
　　Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
　　145 150 155 160
　　Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
　　 165 170 175
　　Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
　　 180 185 190
　　Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
　　 195 200 205
　　Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
　　 210 215 220
　　Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
　　225 230 235 240
　　Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
　　 245 250 255
　　Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
　　 260 265 270
　　Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
　　 275 280 285
　　Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
　　 290 295 300
　　Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
　　305 310 315 320
　　Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
　　 325 330 335
　　Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
　　 340 345 350
　　Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
　　 355 360 365
　　Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
　　 370 375 380
　　Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
　　385 390 395 400
　　Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
　　 405 410 415
　　Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
　　 420 425 430
　　Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
　　 435 440 445
　　Gly Lys
　　 450
　　<210> 84
　　<211> 449
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕妥珠单抗 HC-孔
　　<400> 84
　　Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
　　1 5 10 15
　　Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
　　 20 25 30
　　Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
　　 35 40 45
　　Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
　　 50 55 60
　　Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
　　65 70 75 80
　　Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
　　 85 90 95
　　Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
　　 100 105 110
　　Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
　　 115 120 125
　　Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
　　 130 135 140
　　Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
　　145 150 155 160
　　Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
　　 165 170 175
　　Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
　　 180 185 190
　　Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
　　 195 200 205
　　Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
　　 210 215 220
　　Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
　　225 230 235 240
　　Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
　　 245 250 255
　　Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
　　 260 265 270
　　Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
　　 275 280 285
　　Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
　　 290 295 300
　　Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
　　305 310 315 320
　　Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
　　 325 330 335
　　Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
　　 340 345 350
　　Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
　　 355 360 365
　　Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
　　 370 375 380
　　Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
　　385 390 395 400
　　Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
　　 405 410 415
　　Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
　　 420 425 430
　　Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
　　 435 440 445
　　Lys
　　<210> 85
　　<211> 450
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Tmab HC-mix1
　　<400> 85
　　Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
　　1 5 10 15
　　Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
　　 20 25 30
　　Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
　　 35 40 45
　　Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
　　 50 55 60
　　Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
　　65 70 75 80
　　Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
　　 85 90 95
　　Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
　　 100 105 110
　　Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
　　 115 120 125
　　Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
　　 130 135 140
　　Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
　　145 150 155 160
　　Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
　　 165 170 175
　　Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
　　 180 185 190
　　Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
　　 195 200 205
　　Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
　　 210 215 220
　　Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
　　225 230 235 240
　　Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
　　 245 250 255
　　Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
　　 260 265 270
　　Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
　　 275 280 285
　　Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
　　 290 295 300
　　Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
　　305 310 315 320
　　Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
　　 325 330 335
　　Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
　　 340 345 350
　　Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
　　 355 360 365
　　Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
　　 370 375 380
　　Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
　　385 390 395 400
　　Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
　　 405 410 415
　　Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
　　 420 425 430
　　Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
　　 435 440 445
　　Gly Lys
　　 450
　　<210> 86
　　<211> 449
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕妥珠单抗-CLC1
　　<400> 86
　　Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
　　1 5 10 15
　　Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
　　 20 25 30
　　Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
　　 35 40 45
　　Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
　　 50 55 60
　　Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
　　65 70 75 80
　　Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
　　 85 90 95
　　Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
　　 100 105 110
　　Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
　　 115 120 125
　　Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
　　 130 135 140
　　Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
　　145 150 155 160
　　Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
　　 165 170 175
　　Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
　　 180 185 190
　　Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
　　 195 200 205
　　Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
　　 210 215 220
　　Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
　　225 230 235 240
　　Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
　　 245 250 255
　　Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
　　 260 265 270
　　Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
　　 275 280 285
　　Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
　　 290 295 300
　　Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
　　305 310 315 320
　　Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
　　 325 330 335
　　Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
　　 340 345 350
　　Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
　　 355 360 365
　　Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
　　 370 375 380
　　Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu
　　385 390 395 400
　　Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys
　　 405 410 415
　　Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
　　 420 425 430
　　Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
　　 435 440 445
　　Lys
　　<210> 87
　　<211> 120
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕妥珠单抗 VH
　　<400> 87
　　Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
　　1 5 10 15
　　Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
　　 20 25 30
　　Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
　　 35 40 45
　　Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
　　 50 55 60
　　Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
　　65 70 75 80
　　Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
　　 85 90 95
　　Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
　　 100 105 110
　　Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
　　 115 120
　　<210> 88
　　<211> 119
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 曲妥珠单抗 VH
<400> 88
　　Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
　　1 5 10 15
　　Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
　　 20 25 30
　　Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
　　 35 40 45
　　Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
　　 50 55 60
　　Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
　　65 70 75 80
　　Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
　　 85 90 95
　　Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
　　 100 105 110
　　Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
　　 115
　　<210> 89
　　<211> 227
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Fc1
　　<400> 89
　　Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
　　1 5 10 15
　　Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
　　 20 25 30
　　Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
　　 35 40 45
　　Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
　　 50 55 60
　　His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
　　65 70 75 80
　　Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
　　 85 90 95
　　Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
　　 100 105 110
　　Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
　　 115 120 125
　　Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
　　 130 135 140
　　Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
　　145 150 155 160
　　Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
　　 165 170 175
　　Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
　　 180 185 190
　　Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
　　 195 200 205
　　His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
　　 210 215 220
　　Pro Gly Lys
　　225
<210> 90
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Fc2
<400> 90
　　Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
　　1 5 10 15
　　Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
　　 20 25 30
　　Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
　　 35 40 45
　　Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
　　 50 55 60
　　His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
　　65 70 75 80
　　Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
　　 85 90 95
　　Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
　　 100 105 110
　　Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
　　 115 120 125
　　Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
　　 130 135 140
　　Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
　　145 150 155 160
　　Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
　　 165 170 175
　　Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
　　 180 185 190
　　Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
　　 195 200 205
　　His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
　　 210 215 220
　　Pro Gly Lys
　　225
<210> 91
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLC1 VL
<400> 91
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 92
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLC2 VL
<400> 92
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 93
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLC3 VL
<400> 93
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 94
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLC4 VL
<400> 94
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 95
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLC5 VL
<400> 95
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 96
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CLC6 VL
<400> 96
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 97
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链 1-1
<400> 97
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 98
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链 2-1
<400> 98
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 99
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链 1-2
<400> 99
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 100
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链 2-2
<400> 100
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 101
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Fc 1-1
<400> 101
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 102
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Fc 2-1
<400> 102
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 103
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Fc 1-2
<400> 103
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 104
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Fc 2-2
<400> 104
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225

Claims (286)

1.一种预防、缓解或治疗受试者中的肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，包括：向受试者施用HER2抑制剂，其中该受试者包括蛋白质的改变和/或编码该蛋白质的基因改变，该蛋白质包括HER2和/或CDK12。
2.一种预防、缓解或治疗肿瘤或抑制受试者中的肿瘤生长的方法，包括：向受试者施用HER2抑制剂，其中所述肿瘤为CDK12扩增肿瘤。
3.根据权利要求1-2中的任一方法，其中所述HER2抑制剂能够抑制人类HER2。
4.根据权利要求1-3中的任一方法，其中所述HER2抑制剂是HER2抗体或其抗原结合部分和/或其缀合物。
5.根据权利要求1-4中的任一方法，其中所述HER2抑制剂选自帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和玛格妥昔单抗。
6.根据权利要求1-5中的任一方法，其中所述HER2抑制剂选自DS8201a和T-DM1。
7.根据权利要求1-6中的任一方法，其中所述HER2抑制剂是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，并且能够与人类HER2的不同表位结合。
8.根据权利要求1-7中的任一方法，其中所述HER2抑制剂是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，该双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一轻链和第二轻链，其中所述第一轻链和第二轻链具有相同的氨基酸序列。
9.根据权利要求1-8中的任一方法，其中所述HER2抑制剂是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，该双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一重链和第二重链，其中所述第一重链和第二重链在生理条件下或在体外蛋白质表达过程中能够分别与其轻链正确组装。
10.根据权利要求8-9中的任一方法，其中所述第一轻链和第二轻链能够与帕妥珠单抗的重链和曲妥珠单抗的重链分别组装。
11.根据权利要求8-10中的任一方法，其中所述第一轻链和/或所述第二轻链的可变区域包含SEQ ID NO:91-96中的任一个所示的氨基酸序列。
12.根据权利要求8-10中的任一方法，其中所述第一轻链和/或所述第二轻链的可变区域包含SEQ ID NO:91中的氨基酸序列。
13.根据权利要求8-12中的任一方法，其中所述第一轻链和/或所述第二轻链分别选自帕妥珠单抗的轻链或其突变体、曲妥珠单抗的轻链或其突变体。
14.根据权利要求8-13中的任一方法，其中所述第一轻链包含SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列，且/或所述第二轻链包含SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列。
15.根据权利要求9-14中的任一方法，其中重链可变区域分别为帕妥珠单抗的重链可变区域和曲妥珠单抗的重链可变区域。
16.根据权利要求9-15中的任一方法，其中所述第一重链的可变区域包含SEQID NO:87中所示的氨基酸序列；所述第二重链的可变区域包含SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列。
17.根据权利要求9-16中的任一方法，其中所述第一重链和所述第二重链包含恒定区，该恒定区来源于人类IgG恒定区。
18.根据权利要求9-17中的任一方法，其中重链的Fc片段序列包含SEQ ID NO:89-90和SEQ ID NO:101-104中的任一个所示的序列。
19.根据权利要求9-18中的任一方法，其中两条重链包含SEQ ID NO:80-81、
83-84和SEQ ID NO:97-100中的任一个所示的序列。
20.根据权利要求1-19中的任一方法，其中所述HER2抑制剂以约15mg/kg至约35mg/kg的剂量施用于受试者。
21.根据权利要求20的方法，其中所述HER2抑制剂的剂量约为20mg/kg至约30mg/kg。
22.根据权利要求20-21的任一方法，其中所述HER2抑制剂的剂量约为20mg/kg。
23.根据权利要求20-22的任一方法，其中所述HER2抑制剂的剂量约为30mg/kg。
24.根据权利要求1-23的任一方法，其中所述HER2抑制剂约每两周施用一次或约每三周施用一次。
25.根据权利要求1-24的任一方法，其中所述HER2抑制剂的剂量约为20mg/kg，且每两周施用一次。
26.根据权利要求1-25的任一方法，其中所述HER2抑制剂的剂量约为30mg/kg，且每三周施用一次。
27.根据权利要求1-26的任一方法，其中所述HER2抑制剂通过静脉注射给药。
28.根据权利要求1-27的任一方法，其中所述改变包含所述基因的突变、扩增、融合和/或重排。
29.根据权利要求1-28的任一方法，其中所述改变包含所述蛋白质和/或编码该蛋白质的mRNA的突变和/或扩增。
30.根据权利要求1-29的任一方法，其中所述改变包含所述蛋白质、编码该蛋白质的mRNA和/或所述基因的扩增。
31.根据权利要求1-30的任一方法，其中所述改变包含所述HER2蛋白质的至少一个突变，其中所述突变包含T862A、H878Y和/或R897W。
32.根据权利要求1-31的任一方法，其中所述改变包含所述HER2蛋白质的突变，其中所述突变包含T862A、H878Y和R897W。
33.根据权利要求1-32的任一方法，其中所述改变包含CDK12基因的改变。
34.根据权利要求1-33的任一方法，其中所述改变包含CDK12基因的扩增。
35.根据权利要求1-34的任一方法，其中所述改变包含CDK12基因和HER2基因的共扩增。
36.根据权利要求1-35的任一方法，其中所述扩增包含所述CDK12基因和/或所述HER2基因DNA拷贝的增强。
37.根据权利要求1-36的任一方法，其中所述扩增包含所述CDK12蛋白和/或所述HER2蛋白在mRNA和/或蛋白质表达水平的增强。
38.根据权利要求1-37的任一方法，其中所述受试者对HER2相关肿瘤的传统治疗无反应。
39.根据权利要求38的方法，其中所述HER2相关肿瘤的传统治疗包含给予HER2-ADC、吡咯替尼、来那替尼、图卡替尼、曲妥珠单抗和/或帕珠妥珠单抗。
40.根据权利要求38-39的任一方法，其中所述HER2相关肿瘤的传统治疗包含给予多西他赛、卡培他滨和/或拉帕替尼。
41.根据权利要求1-40的任一方法，其中所述肿瘤包含实体肿瘤。
42.根据权利要求1-41的任一方法，其中所述肿瘤包含转移性肿瘤、早期肿瘤和/或局部晚期肿瘤。
43.根据权利要求1-42的任一方法，其中所述肿瘤包含HER2阳性肿瘤和/或HER2低表达肿瘤。
44.根据权利要求1-43的任一方法，其中所述肿瘤包含乳腺癌和/或胃癌。
45.根据权利要求44的方法，其中所述乳腺癌包含HER2阳性乳腺癌和/或HER2低表达乳腺癌。
46.根据权利要求44-45的任一方法，其中所述乳腺癌包含早期乳腺癌、局部晚期乳腺癌和/或转移性乳腺癌；和/或所述胃癌包含早期胃癌、局部晚期胃癌和/或转移性胃癌。
47.根据权利要求1-46的任一方法，其中所述方法包含以下步骤：检测所述受试者的所述改变，以确定是否适合给予所述HER2抑制剂。
48.根据权利要求47的方法，其中所述检测包含对所述受试者的所述HER2蛋白质进行测序。
49.根据权利要求47-48的任一方法，其中所述检测包含对所述CDK12基因进行测序。
50.根据权利要求47-49的任一方法，其中所述检测包含对所述HER2基因进行测序。
51.根据权利要求47-50的任一方法，其中所述测序包含NGS和/或ddPCR。
52.根据权利要求47-51的任一方法，其中所述测序使用所述受试者的ctDNA。
53.根据权利要求47-52的任一方法，其中所述测序使用所述受试者的外周血和/或肿瘤组织。
54.根据权利要求1-53的任一方法，其中所述方法进一步包含给予多重CDK抑制剂。
55.根据权利要求54的方法，其中所述多重CDK抑制剂抑制CDK1、CDK2、CDK5、CDK9和/或CDK12。
56.根据权利要求54-55的任一方法，其中所述多重CDK抑制剂抑制CDK12。
57.根据权利要求56的方法，其中所述CDK12是人CDK12。
58.根据权利要求54-57的任一方法，其中所述多重CDK抑制剂不抑制CDK4和CDK6。
59.根据权利要求54-58的任一方法，其中所述多重CDK抑制剂选自：THZ531、Dinaciclib和SR-3029。
60.根据权利要求54-59的任一方法，其中所述多重CDK抑制剂是Dinaciclib。
61.根据权利要求1-60的任一方法，其中所述方法进一步包含给予免疫检查点抑制剂。
62.根据权利要求61的方法，其中所述免疫检查点抑制剂能够特异性地结合到PD-L1和CTLA4。
63.根据权利要求61-62的任一方法，其中所述免疫检查点抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合片段。
64.根据权利要求61-63的任一方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗原结合片段，所述抗原结合片段包含Fab、Fab'、F(ab)2、Fv片段、F(ab')2、scFv、di-scFv和/或dAb。
65.根据权利要求61-64的任一方法，其中所述免疫检查点抑制剂是双特异性抗体，所述双特异性抗体是完全人源抗体。
66.根据权利要求61-65的任一方法，其中所述免疫检查点抑制剂是二聚体，所述二聚体由两条多肽链组成，其中每条多肽链包含抗体Fc亚基，其中所述二聚体包含两个或更多的免疫球蛋白单可变结构域(ISVDs)，所述ISVD中的至少一个能够特异地结合PD-L1，并且所述ISVD中的至少一个能够特异地结合CTLA4。
67.根据权利要求66的方法，其中所述两条多肽链中至少有一条包含能够特异结合PD-L1的ISVD和能够特异结合CTLA4的ISVD。
68.根据权利要求66-67的任一方法，其中所述两条多肽链的每一条都包含能够特异结合PD-L1的ISVD和能够特异结合CTLA4的ISVD。
69.根据权利要求66-68的任一方法，其中所述两条多肽链中的一条或两条，能够特异结合PD-L1的所述ISVD任选地通过连接体与能够特异结合CTLA4的所述ISVD连接。
70.根据权利要求66-69的任一方法，其中所述两条多肽链中的一条或两条：能够特异结合PD-L1的所述ISVD任选地通过连接体与能够特异结合CTLA4的所述ISVD通过连接体连接；以及，能够特异结合CTLA4的所述ISVD任选地通过连接体与抗体Fc亚基连接。
71.根据权利要求66-70的任一方法，其中所述两条多肽链中的一条或两条：能够特异结合PD-L1的所述ISVD的C端任选地通过连接体与能够特异结合CTLA4的所述ISVD的N端连接；以及，能够特异结合CTLA4的所述ISVD的C端任选地通过连接体与抗体Fc亚基的N端连接。
72.根据权利要求66-71的任一方法，其中所述两条多肽链中的一条或两条：能够特异结合PD-L1的所述ISVD任选地通过连接体与能够特异结合CTLA4的所述ISVD连接；以及，能够特异结合PD-L1的所述ISVD任选地通过连接体与抗体Fc亚基连接。
73.根据权利要求72的方法，其中所述两条多肽链中的一条或两条：能够特异结合CTLA4的所述ISVD的C端任选地通过连接体与能够特异结合PD-L1的所述ISVD的N端连接；以及，能够特异结合PD-L1的所述ISVD的C端任选地通过连接体与抗体Fc亚基的N端连接。
74.根据权利要求66-73的任一方法，其中所述抗体Fc亚基来源于IgG Fc亚基。
75.根据权利要求74的方法，其中所述IgG是人IgG1。
76.根据权利要求66-75的任一方法，其中所述抗体Fc亚基包含如SEQ ID NO:35、38和39中的任一个所示的氨基酸序列。
77.根据权利要求66-76的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够与人PD-L1的N端IgV结构域结合。
78.根据权利要求66-77的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够与人PD-L1 N端IgV结构域的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113结合，其中所述人PD-L1 N端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64中所述的氨基酸序列。
79.根据权利要求78的方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD还能够与人PD-L1 N端IgV结构域的氨基酸残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125结合，其中所述人PD-L1 N端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列。
80.根据权利要求66-79的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够与人PD-L1 N端IgV结构域的构象表位结合，其中所述构象表位包含所述人PD-L1 N端IgV结构域的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和R113，并且其中所述人PD-L1 N端IgV结构域包含如SEQ IDNO:64中所示的氨基酸序列。
81.根据权利要求66-80的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够与人PD-L1 N端IgV结构域的构象表位结合，所述构象表位包含人PD-L1N端IgV结构域的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和R125，并且其中所述人PD-L1 N端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列。
82.根据权利要求66-81的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与PD1的结合。
83.根据权利要求66-82的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与CD80的结合。
84.根据权利要求66-83的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD与参考抗PD-L1抗体交叉竞争结合PD-L1，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，其包含如SEQ IDNO:1所示的氨基酸序列。
85.根据权利要求84的方法，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，其包含如SEQID NO:5和9中的任一个所示的氨基酸序列。
86.根据权利要求84-85的任一方法，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
87.根据权利要求84-86的任一方法，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:3和7中的任一个所示的氨基酸序列。
88.根据权利要求84-87的任一方法，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:4、8和11中的任一个所示的氨基酸序列。
89.根据权利要求84-88的任一方法，其中所述参考抗PD-L1抗体是能够特异结合PD-L1的ISVD。
90.根据权利要求84-89的任一方法，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中的任一个所示的氨基酸序列。
91.根据权利要求84-90的任一方法，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
92.根据权利要求66-91的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
93.根据权利要求66-92的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:5和9中的任一个所示的氨基酸序列。
94.根据权利要求66-93的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
95.根据权利要求66-94的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:3和7中的任一个所示的氨基酸序列。
96.根据权利要求66-95的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:4、8和11中的任一个所示的氨基酸序列。
97.根据权利要求66-96的任一方法，其中能够特异结合PD-L1的所述ISVD包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中的任一个所示的氨基酸序列。
98.根据权利要求66-97的任一方法，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
99.根据权利要求66-98的任一方法，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD能够特异结合人CTLA4。
100.根据权利要求66-99的任一方法，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD80的结合。
101.根据权利要求66-100的任一方法，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD86的结合。
102.根据权利要求66-101的任一方法，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD与参考抗CTLA4抗体交叉竞争结合，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
103.根据权利要求102的方法，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR1，其包含如SEQID NO:17所示的氨基酸序列。
104.根据权利要求102-103的任一方法，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
105.根据权利要求102-104的任一方法，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:18、21和23中的任一个所示的氨基酸序列。
106.根据权利要求102-105的任一方法，其中所述参考抗CTLA4抗体是能够与CTLA4特异结合的ISVD。
107.根据权利要求102-106的任一方法，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中的任一个所示的氨基酸序列。
108.根据权利要求102-107的任一方法，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
109.根据权利要求66-108的任一方法，其中所述CTLA4特异结合的ISVD包含重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
110.根据权利要求66-109的任一方法，其中所述CTLA4特异结合的ISVD包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
111.根据权利要求66-110的任一方法，其中所述CTLA4特异结合的ISVD包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
112.根据权利要求66-111的任一方法，其中所述CTLA4特异结合的ISVD包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:18、21和23中的任一个所示的氨基酸序列。
113.根据权利要求66-112的任一方法，其中所述CTLA4特异结合的ISVD包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中的任一个所示的氨基酸序列。
114.根据权利要求66-113的任一方法，其中所述CTLA4特异结合的ISVD包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
115.根据权利要求66-114的任一方法，其中所述二聚体是同二聚体。
116.根据权利要求69-115的任一方法，其中所述连接体包含如SEQ ID NO:33-34中任一个所示的氨基酸序列。
117.根据权利要求66-116的任一方法，其中所述两条多肽链中的一条或两条包含如SEQ ID NO:40-43、46、48和50中的任一个所示的氨基酸序列。
118.根据权利要求66-117的任一方法，其中所述两条多肽链中的一条或两条包含如SEQ ID NO 40所示的氨基酸序列。
119.根据权利要求66-118的任一方法，其中所述二聚体能够阻断PD-L1与PD-1的结合。
120.根据权利要求66-119的任一方法，其中所述二聚体能够阻断PD-L1与CD80的结合。
121.根据权利要求66-120的任一方法，其中所述二聚体能够阻断CTLA4与CD80的结合。
122.根据权利要求66-121的任一方法，其中所述二聚体能够阻断CTLA4与CD86的结合。
123.一种药品，包含：HER2抑制剂和多重CDK抑制剂。
124.根据权利要求123的药品，其中所述HER2抑制剂能够抑制人HER2。
125.根据权利要求123-124的任一药品，其中所述HER2抑制剂是HER2抗体或其抗原结合部分和/或其缀合物。
126.根据权利要求123-125的任一药品，其中所述HER2抑制剂选自帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和玛格妥昔单抗。
127.根据权利要求123-126的任一药品，其中所述HER2抑制剂选自DS8201a和T-DM1。
128.根据权利要求123-127的任一药品，其中所述HER2抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合部分，并且其能够结合人HER2的不同表位。
129.根据权利要求123-128的任一药品，其中所述HER2抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合部分，且所述双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一轻链和第二轻链，其中所述第一轻链和第二轻链具有相同的氨基酸序列。
130.根据权利要求123-129的任一药品，其中所述HER2抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合部分，且所述双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一重链和第二重链，其中所述第一重链和第二重链能够在生理条件或体外蛋白质表达期间正确组装。
131.根据权利要求129-130的任一药品，其中所述第一轻链和第二轻链能够分别与帕妥珠单抗的重链和曲妥珠单抗的重链组装。
132.根据权利要求129-131的任一药品，其中所述第一轻链和/或第二轻链的可变区包含如SEQ ID NO:91-96中的任一个所示的氨基酸序列。
133.根据权利要求129-132的任一药品，其中所述第一轻链和/或第二轻链的可变区包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列。
134.根据权利要求129-133的任一药品，其中所述第一轻链和第二轻链分别选自帕妥珠单抗或其突变体的轻链，曲妥珠单抗或其突变体的轻链。
135.根据权利要求129-134的任一药品，其中所述第一轻链包含如SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列，和/或所述第二轻链包含如SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列。
136.根据权利要求130-135的任一药品，其中所述重链可变区域分别是帕妥珠单抗的重链可变区域和曲妥珠单抗的重链可变区域。
137.根据权利要求130-136的任一药品，其中所述第一重链的可变区域包含如SEQ IDNO:87中所示的氨基酸序列；所述第二重链的可变区域包含如SEQID NO:88中所示的氨基酸序列。
138.根据权利要求130-137的任一药品，其中所述第一重链和第二重链包含恒定区域，所述恒定区域源自人IgG恒定区域。
139.根据权利要求130-138的任一药品，其中所述重链的Fc片段序列包含如SEQID NO:89-90和101-104中的任一个所示的序列。
140.根据权利要求130-139的任一药品，其中两条重链包含如SEQ ID NO:80-81、83-84或97-100中的任一个所示的序列。
141.根据权利要求123-140的任一药品，其中所述多重CDK抑制剂抑制CDK1、CDK2、CDK5、CDK9和/或CDK12。
142.根据权利要求123-141的任一药品，其中所述多重CDK抑制剂抑制CDK12。
143.根据权利要求142的药品，其中所述CDK12是人CDK12。
144.根据权利要求123-143的任一药品，其中所述多重CDK抑制剂不抑制CDK4和CDK6。
145.根据权利要求123-144的任一药品，其中所述多重CDK抑制剂选自THZ531、Dinaciclib和SR-3029。
146.根据权利要求123-145的任一药品，其中所述多重CDK抑制剂是Dinaciclib。
147.根据权利要求123-146的任一药品，其中所述HER2抑制剂和多重CDK抑制剂不包含在同一个容器中。
148.根据权利要求123-147的任一药品，其中所述HER2抑制剂和多重CDK抑制剂分别包含在单独的容器中。
149.根据权利要求123-148的任一药品，其中所述药品还进一步包含免疫检查点抑制剂。
150.根据权利要求149的药品，其中所述免疫检查点抑制剂能够特异性地结合PD-L1和CTLA4。
151.根据权利要求149-150的任一药品，其中所述免疫检查点抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合片段。
152.根据权利要求149-151的任一药品，其中所述免疫检查点抑制剂是抗原结合片段，所述抗原结合片段包含Fab、Fab'、F(ab)2、Fv片段、F(ab')2、scFv、di-scFv和/或dAb。
153.根据权利要求149-152的任一药品，其中所述免疫检查点抑制剂是双特异性抗体，且该双特异性抗体是全人源抗体。
154.根据权利要求149-153的任一药品，其中所述免疫检查点抑制剂是二聚体，所述二聚体由两条多肽链组成，其中每条多肽链都包含一个抗体Fc亚基，该二聚体包含两个或更多的免疫球蛋白单可变结构域(ISVDs)，至少一个ISVD能够特异结合PD-L1，至少一个ISVD能够特异结合CTLA4。
155.根据权利要求154的药品，其中所述两条多肽链中至少有一条多肽链既包含能够特异结合PD-L1的ISVD，又包含能够特异结合CTLA4的ISVD。
156.根据权利要求154-155的任一药品，其中所述两条多肽链中的每条既包含能够特异结合PD-L1的ISVD，又包含能够特异结合CTLA4的ISVD。
157.根据权利要求154-156的任一药品，其中所述两条多肽链中的一条或两条，所述能够特异结合PD-L1的ISVD与能够特异结合CTLA4的ISVD连接，任选地通过连接体；。
158.根据权利要求154-157的任一药品，其中所述两条多肽链中的一条或两条：能够特异结合PD-L1的ISVD任选地通过连接体与能够特异结合CTLA4的ISVD连接；能够特异结合CTLA4的ISVD任选地通过连接体与抗体Fc亚基连接。
159.根据权利要求154-158的任一药品，其中所述两条多肽链中的一条或两条：能够特异结合PD-L1的ISVD的C端任选地通过连接体与能够特异结合CTLA4的ISVD的N端连接；以及，能够特异结合CTLA4的ISVD的C端任选地通过连接体与抗体Fc亚基的N端连接。
160.根据权利要求154-159的任一药品，其中所述两条多肽链中的一条或两条：能够特异结合PD-L1的ISVD任选地通过连接体与能够特异结合PD-L1的ISVD连接；能够特异结合PD-L1的ISVD任选地通过连接体与抗体Fc亚基连接。
161.根据权利要求160的药品，其中所述两条多肽链中的一条或两条：能够特异结合CTLA4的ISVD的C端通过连接体任选地与能够特异结合PD-L1的ISVD的N端连接；能够特异结合PD-L1的ISVD的C端任选地通过连接体与抗体Fc亚基的N端连接。
162.根据权利要求154-161的任一药品，其中所述抗体Fc亚基来源于IgG Fc亚基。
163.根据权利要求162的药品，其中所述的IgG为人IgG1。
164.根据权利要求154-163的任一药品，其中所述抗体Fc亚基包含如SEQ ID NO:35,38和39中的任一个所示的氨基酸序列。
165.根据权利要求154-164的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够结合到人PD-L1的N端IgV结构域。
166.根据权利要求154-165的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够结合到人PD-L1 N端IgV结构域的I54、Y56、E58、Q66和/或R113残基，其中所述人PD-L1 N端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列。
167.根据权利要求166的药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD还能够进一步结合到人PD-L1 N端IgV结构域的D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125残基，其中所述人PD-L1 N端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列。
168.根据权利要求154-167的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够结合到人PD-L1 N端IgV结构域的构象表位，其中所述人PD-L1 N端IgV结构域的构象表位包含I54、Y56、E58、Q66和R113残基，所述人PD-L1 N端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列。
169.根据权利要求154-168的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够结合到人PD-L1 N端IgV结构域的构象表位，其中所述人PD-L1 N端IgV结构域的构象表位包含I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和R125残基，所述人PD-L1 N端IgV结构域包含如SEQID NO:64中所示的氨基酸序列。
170.根据权利要求154-169的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与PD1的结合。
171.根据权利要求154-170的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与CD80的结合。
172.根据权利要求154-171的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD能够与参考抗PD-L1抗体交叉竞争与PD-L1的结合，所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列。
173.根据权利要求172的药品，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，其包含如SEQID NO:5和9中的任一个所示的氨基酸序列。
174.根据权利要求172-173的任一药品，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列。
175.根据权利要求172-174的任一药品，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:3和7中的任一个所示的氨基酸序列。
176.根据权利要求172-175的任一药品，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:4、8和11中的任一个所示的氨基酸序列。
177.根据权利要求172-176的任一药品，其中所述参考抗PD-L1抗体是特异性结合PD-L1的ISVD。
178.根据权利要求172-177的任一药品，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中的任一个所示的氨基酸序列。
179.根据权利要求172-178的任一药品，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列。
180.根据权利要求154-179的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列。
181.根据权利要求154-180的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:5和9中的任一个所示的氨基酸序列。
182.根据权利要求154-181的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:2中所示的重链CDR1氨基酸序列。
183.根据权利要求154-182的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:3和7中的任一个所示的氨基酸序列。
184.根据权利要求154-183的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:4、8和11中的任一个所示的氨基酸序列。
185.根据权利要求154-184的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中的任一个所示的氨基酸序列。
186.根据权利要求154-185的任一药品，其中所述能够特异结合PD-L1的ISVD包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:6中的任一个所示的氨基酸序列。
187.根据权利要求154-186的任一药品，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD能够特异性地结合到人源CTLA4。
188.根据权利要求154-187的任一药品，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD80的结合。
189.根据权利要求154-188的任一药品，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD86的结合。
190.根据权利要求154-189的任一药品，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD能够与参考抗CTLA4抗体交叉竞争与CTLA4的结合，所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR3，其包含如SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列。
191.根据权利要求190的药品，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR1，其包含如SEQID NO:17中所示的氨基酸序列。
192.根据权利要求190-191的任一药品，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列。
193.根据权利要求190-192的任一药品，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:18、21和23中的任一个所示的氨基酸序列中的任一序列。
194.根据权利要求190-193的任一药品，其中所述参考抗CTLA4抗体是特异结合CTLA4的ISVD。
195.根据权利要求190-194的任一药品，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中的任一个所示的氨基酸序列。
196.根据权利要求190-195的任一药品，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列。
197.根据权利要求154-196的任一药品，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD包含如SEQ ID NO:19中所示的重链CDR3氨基酸序列。
198.根据权利要求154-197的任一药品，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD包含重链CDR1，其包含如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列。
199.根据权利要求154-198的任一药品，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列。
200.根据权利要求154-199的任一药品，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD包含重链CDR2，其包含如SEQ ID NO:18、21和23中的任一个所示的氨基酸序列。
201.根据权利要求154-200的任一药品，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中的任一个所示的氨基酸序列。
202.根据权利要求154-201的任一药品，其中所述能够特异结合CTLA4的ISVD包含重链可变区域，其包含如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列。
203.根据权利要求154-202的任一药品，其中所述二聚体是同二聚体。
204.根据权利要求157-203的任一药品，其中所述连接体包含如SEQ ID NO:33-34中的任一个所示的氨基酸序列。
205.根据权利要求154-204的任一药品，其中所述两条多肽链中的一条或两条包含如SEQ ID NO:40-43、46、48和50中的任一个所示的氨基酸序列。
206.根据权利要求154-205的任一药品，其中所述两条多肽链中的一条或两条包含如SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列
207.根据权利要求154-206的任一药品，其中所述二聚体能够阻断PD-L1与PD-1的结合。
208.根据权利要求154-207的任一药品，其中所述二聚体能够阻断PD-L1与CD80的结合。
209.根据权利要求154-208的任一药品，其中所述二聚体能够阻断CTLA4与CD80的结合。
210.根据权利要求154-209的任一药品，其中所述二聚体能够阻断CTLA4与CD86的结合。
211.根据权利要求123-210的任一药品，其中所述药品是一种药物组合物。
212.根据权利要求149-211的任一药品，其中所述HER2抑制剂、免疫检查点抑制剂和多重CDK抑制剂不包含在同一个容器中。
213.根据权利要求149-212的任一药品，其中所述HER2抑制剂、免疫检查点抑制剂和多重CDK抑制剂分别包含在不同的容器中。
214.HER2抑制剂与多重CDK抑制剂和/或免疫检查点抑制剂联合在制备缓解或治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的药物中的应用，其中所述HER2抑制剂如权利要求123-140中任一项所定义，所述多重CDK抑制剂如权利要求141-148中任一项所定义，所述免疫检查点抑制剂如权利要求149-210中任一项所定义。
215.权利要求123-213中的任一药品在制备缓解或治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的药物中的应用。
216.一种用于确定受试者是否适合使用HER2抑制剂的方法，包括：检测所述受试者中的改变，如果存在所述改变，则该受试者适合使用所述HER2抑制剂，其中所述改变位于蛋白质和/或编码所述蛋白质的基因中，所述蛋白质包含HER2和/或CDK12。
217.根据权利要求216的方法，其中所述HER2抑制剂能够抑制人HER2。
218.根据权利要求216-217的任一方法，其中所述HER2抑制剂是HER2抗体或其抗原结合部分和/或缀合物。
219.根据权利要求216-218的任一方法，其中所述HER2抑制剂选自帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和玛格妥昔单抗。
220.根据权利要求216-219的任一方法，其中所述HER2抑制剂选自DS8201a和T-DM1。
221.根据权利要求216-220的任一方法，其中所述HER2抑制剂是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，并且能够与人类HER2的不同表位结合。
222.根据权利要求216-221的任一方法，其中所述HER2抑制剂是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，该双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一轻链和第二轻链，并且其中所述第一轻链和第二轻链具有相同的氨基酸序列。
223.根据权利要求216-222的任一方法，其中所述HER2抑制剂是一种双特异性抗体或其抗原结合部分，该双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一重链和第二重链，并且其中所述第一重链和第二重链在生理条件下或体外蛋白表达过程中能够分别与相应的轻链正确组装。
224.根据权利要求222-223的任一方法，其中所述第一轻链和第二轻链能够分别与帕妥珠单抗的重链和曲妥珠单抗的重链组装在一起。
225.根据权利要求222-224的任一方法，其中所述第一轻链和/或第二轻链的可变区包含如SEQ ID NO:91-96中的任一个所示的氨基酸序列。
226.根据权利要求222-225的任一方法，其中所述第一轻链和/或第二轻链的可变区包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列。
227.根据权利要求222-226的任一方法，其中所述第一轻链和第二轻链分别选自帕妥珠单抗的轻链或其突变体，曲妥珠单抗的轻链或其突变体。
228.根据权利要求222-227的任一方法，其中所述第一轻链包含如SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列，和/或，所述第二轻链包含如SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列。
229.根据权利要求223-228的任一方法，其中重链的可变区分别是帕妥珠单抗的重链可变区和曲妥珠单抗的重链可变区。
230.根据权利要求223-229的任一方法，其中所述第一重链的可变区包含如SEQID NO:87中所示的氨基酸序列，所述第二重链的可变区包含如SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列。
231.根据权利要求223-230的任一方法，其中所述第一重链和第二重链包含恒定区，该恒定区源于人类IgG恒定区。
232.根据权利要求223-231的任一方法，其中所述重链的Fc片段序列包含如SEQID NO:89-90、101-104中的任一个所示的序列。
233.根据权利要求223-232的任一方法，其中两条重链包含如SEQ ID NO:80-81、83-84、97-100中的任一个所示的序列。
234.根据权利要求216-233的任一方法，其中所述改变包含所述基因中的突变、扩增、融合和/或重排。
235.根据权利要求216-234的任一方法，其中所述改变包含所述蛋白质和/或编码该蛋白质的mRNA中的突变和/或扩增。
236.根据权利要求216-235的任一方法，其中所述改变包含所述蛋白质的扩增、编码该蛋白质的mRNA的扩增，和/或所述基因的扩增。
237.根据权利要求216-236的任一方法，其中所述改变包含HER2蛋白的至少一处突变，其中所述的突变包含T862A、H878Y和/或R897W。
238.根据权利要求216-237的任一方法，其中所述改变包含HER2蛋白的突变，其中所述的突变包含T862A、H878Y和R897W。
239.根据权利要求216-238的任一方法，其中所述改变包含CDK12基因的改变。
240.根据权利要求216-239的任一方法，其中所述改变包含CDK12基因的扩增。
241.根据权利要求216-240的任一方法，其中所述改变包含CDK12基因和HER2基因的共扩增。
242.根据权利要求235-241的任一方法，其中所述扩增包含CDK12基因和/或HER2基因DNA拷贝数的增强。
243.根据权利要求235-242的任一方法，其中所述扩增包含CDK12蛋白和/或HER2蛋白的mRNA和/或蛋白表达水平的增强。
244.根据权利要求216-243的任一方法，其中所述检测包含对受试者的HER2蛋白进行测序。
245.根据权利要求244的方法，其中所述检测包含对受试者的CDK12基因进行测序。
246.根据权利要求244-245的任一方法，其中所述检测包含对受试者的HER2基因进行测序。
247.根据权利要求244-246的任一方法，其中所述测序包含NGS和/或ddPCR。
248.根据权利要求244-247的任一方法，其中所述测序使用来自受试者的ctDNA。
249.根据权利要求244-248的任一方法，其中所述测序使用来自受试者的外周血液和/或肿瘤组织。
250.一种确定受试者是否适合接受HER2抑制剂的系统，包含：检测模块，配置用于检测受试者中蛋白质和/或编码该蛋白质的基因的改变，其中所述的蛋白质包含HER2和/或CDK12。
251.根据权利要求250的系统，其中所述改变包括所述基因中的突变、扩增、融合和/或重排。
252.根据权利要求250-251的任一系统，其中所述改变包括蛋白质和/或编码该蛋白质的mRNA中的突变和/或扩增。
253.根据权利要求250-252的任一系统，其中所述改变包含所述蛋白质的扩增、编码该蛋白质的mRNA的扩增和/或所述基因的扩增。
254.根据权利要求250-253的任一系统，其中所述改变包含HER2蛋白的至少一处突变，其中所述的突变包括T862A、H878Y和/或R897W。
255.根据权利要求250-254的任一系统，其中所述改变包含HER2蛋白的突变，其中所述的突变包含T862A、H878Y和R897W。
256.根据权利要求250-255的任一系统，其中所述改变包含CDK12基因的改变。
257.根据权利要求250-256的任一系统，其中所述改变包含CDK12基因的扩增。
258.根据权利要求250-257的任一系统，其中所述改变包含CDK12基因和HER2基因的共扩增。
259.根据权利要求250-258的任一系统，其中所述扩增包含CDK12基因和/或HER2基因DNA拷贝数的增强。
260.根据权利要求250-259的任一系统，其中所述的扩增包含CDK12蛋白和/或HER2蛋白的mRNA和/或蛋白表达水平的增强。
261.根据权利要求250-260的任一系统，其中所述检测模块配置用于对受试者的HER2蛋白进行测序。
262.根据权利要求250-261的任一系统，其中所述检测模块包含用于对受试者的HER2蛋白进行测序的试剂。
263.根据权利要求250-262的任一系统，其中所述检测模块配置用于对受试者的CDK12基因进行测序。
264.根据权利要求250-263的任一系统，其中所述检测模块配置用于对受试者的HER2基因进行测序。
265.根据权利要求250-264的任一系统，其中所述检测模块包含用于对受试者的CDK12基因进行测序的试剂和/或用于对受试者的HER2基因进行测序的试剂。
266.根据权利要求250-265的任一系统，其中所述系统包含样品收集模块。
267.根据权利要求266的系统，其中所述的样品收集模块配置用于收集来自受试者的ctDNA。
268.根据权利要求266-267的任一系统，其中所述样品收集模块收集来自受试者的外周血液和/或肿瘤组织。
269.根据权利要求266-268的任一系统，其中所述样品收集模块包含用于收集和/或分离ctDNA和/或肿瘤组织DNA的试剂。
270.根据权利要求250-269的任一系统，其中所述HER2抑制剂能够抑制人类HER2。
271.根据权利要求250-270的任一系统，其中所述HER2抑制剂是HER2抗体或其抗原结合部分和/或其缀合物。
272.根据权利要求250-271的任一系统，其中所述HER2抑制剂选自帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和玛格妥昔单抗。
273.根据权利要求250-272的任一系统，其中所述的HER2抑制剂选自DS8201a和T-DM1。
274.根据权利要求250-273的任一系统，其中所述HER2抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合部分，并能够与人类HER2的不同表位结合。
275.根据权利要求250-274的任一系统，其中所述HER2抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合部分，所述双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一轻链和第二轻链，其中第一轻链和第二轻链具有相同的氨基酸序列。
276.根据权利要求250-275的任一系统，其中所述HER2抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合部分，该双特异性抗体或其抗原结合部分具有第一重链和第二重链，其中第一重链和第二重链在生理条件下或体外蛋白表达过程中能够分别与其相应的轻链正确组装。
277.根据权利要求275-276的任一系统，其中所述第一轻链和第二轻链能够分别与帕妥珠单抗的重链和曲妥珠单抗的重链组装。
278.根据权利要求275-277的任一系统，其中所述第一轻链和/或第二轻链的可变区包含如SEQ ID NO:91-96中的任一个所示的氨基酸序列。
279.根据权利要求275-278的任一系统，其中所述第一轻链和/或第二轻链的可变区包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列。
280.根据权利要求275-279的任一系统，其中所述第一轻链和第二轻链分别选自帕妥珠单抗或其突变体的轻链、曲妥珠单抗或其突变体的轻链等。
281.根据权利要求275-280的任一系统，其中所述第一轻链包含如SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列，和/或所述的第二轻链包含如SEQ ID NO:65-70中的任一个所示的氨基酸序列。
282.根据权利要求276-281的任一系统，其中所述重链可变区域分别是帕妥珠单抗的重链可变区域和曲妥珠单抗的重链可变区域。
283.根据权利要求276-282的任一系统，其中所述第一重链的可变区域包含如SEQ IDNO:87中所示的氨基酸序列，和所述的第二重链的可变区域包含如SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列。
284.根据权利要求276-283的任一系统，其中所述第一重链和第二重链包含恒定区，所述的恒定区源自人类IgG恒定区。
285.根据权利要求276-284的任一系统，其中所述重链的Fc区序列包含如SEQID NO:89-90、101-104中的任一个所示的序列。
286.根据权利要求276-285的任一系统，其中所述两条重链包含如SEQ ID NO:80-81、83-84、97-100中的任一个所示的序列。
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