EA027315B1

EA027315B1 - Молекула нуклеиновой кислоты и белок для индукции иммунного ответа против антигена рака предстательной железы, плазмида, вектор экспрессии, способ лечения и фармацевтическая композиция

Info

Publication number: EA027315B1
Application number: EA201390689A
Authority: EA
Inventors: Дэвид Б Уэйнер; Цзянь Янь; Бернадетте Ферраро; Нирандзан И Сардесай; Матхура П Раманатхан
Original assignee: Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания; Иновио Фармасьютикалз, Инк.
Priority date: 2010-11-12
Filing date: 2011-11-14
Publication date: 2017-07-31
Also published as: US9399056B2; KR102364214B1; CN103314002A; US8927692B2; EP3909973A2; KR20170141811A; US9913885B2; EP3536703A1; MX358725B; SI3536703T1; KR20190096447A; JP2018030881A; KR102011026B1; JP6077450B2; KR102131276B1; JP2023171837A; AU2011325893B2; CN106434676B; JP6310952B2; EP2638055A4

Abstract

Изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты и белкам для индукции иммунного ответа против антигена рака предстательной железы, а также к плазмидам, векторам и фармацевтическим композициям, содержащим указанные нуклеиновые кислоты. Изобретение также относится к способам лечения пациентов, у которых диагностирован рак предстательной железы, включающим введение указанной нуклеиновой кислоты или указанного белка.

Description

Настоящее изобретение относится к последовательностям нуклеиновых кислот, кодирующим консенсусные белки простаты и их фрагменты; усовершенствованным вакцинам от рака простаты, усовершенствованным способам для стимуляции иммунных реакций против клеток рака простаты, усовершенствованным способам для профилактической и/или терапевтической иммунизации пациентов против рака простаты.

Уровень техники изобретения

Рак простаты является важной целью иммунной терапии. Совершенствование иммунного терапевтического подхода является комплексным, при этом иммуногены необходимо разрабатывать таким образом, чтобы они были способны индуцировать сильные иммунные реакции, включая предпочтительные СТЬ реакции.

Прямое введение последовательностей нуклеиновых кислот для вакцинации против болезней животных и человека изучалось, и много усилий было сосредоточено на эффективных и действенных средствах доставки нуклеиновой кислоты для того, чтобы вызвать необходимую экспрессию желаемых антигенов, приводящую к иммуногенной реакции и в конечном счете к успеху этого способа.

ДНК вакцины обладают многими концептуальными преимуществами по сравнению с более традиционными способами вакцинации, такими как живые ослабленные вирусы и вакцины, основанные на рекомбинантном белке. ДНК вакцины безопасны, стабильны, легко производятся и хорошо переносились людьми в доклинических исследованиях, показавших небольшое свидетельство интеграции плазмид [МагНп, Т., е! а1., Р1акт1б ΌΝΑ ша1апа уассше: !Не ροϊοηΐίαΐ Гог депотю ш!едга!юп айег ш!гашикси1аг Щ)ес!юп. Нит Сепе ТНег, 1999. 10(5): р. 759-68; №сНо1к, е! а1., Ро1епИа1 ΌΝΆ уассше ш!едга!юп ίηΐο

Нок! се11 депоте. Апп N Υ Лсаб δα, 1995. 772: р. 30-9]. Кроме того, ДНК вакцины хорошо подходят для повторного введения вследствие того факта, что на эффективность вакцины не влияют ранее существовавшие титры антител к вектору [СНа!!егдооп, М., 1. Воуег, апб Ό.Β. \Уешег. СепеНс штшш/аПоп: а пе\у ега ш уассшек апб 1ттипе !Негареи!1ск. ΡΑδΕΒ 1, 1997. 11(10): р. 753-63]. Однако основное препятствие для клинического внедрения ДНК вакцин заключается в уменьшении базовой иммуногенности при переходе к более крупным животным [Ыц, М.А. апб ΙΒ. и1тег, Нитап сйтса1 1па1к оГ р1акт1б ΌΝΑ уассшек. Αάν Сепе!, 2005. 55: р. 25-40]. Последние технологические достижения в разработке иммуногенной ДНКвакцины, такие как оптимизация кодонов, оптимизация РНК и добавление лидерных последовательностей иммуноглобулина улучшили экспрессию и иммуногенность ДНК-вакцин [Апбге, δ., е! а1., 1псгеакеб 1ттипе гекропке еНсйеб Ьу ΌΝΑ уасс1пабоп \\йН а куп!НеНс др120 кесщепсе χνίΐΐι орШт/еб собоп икаде. 1. У1го1, 1998. 72(2): р. 1497-503; Эетк Ь., е! а1., МиШр1е еГГес!к оГ собоп икаде орШш/аПоп оп ехргеккюп апб ттшподешсйу оГ ΌΝΑ сапб1ба!е уассшек епсобшд !Не Нитап ттшпобеПаепсу νίτυκ !уре 1 Сад рго!еш 1. У1го1, 2001. 75(22): р. 10991-1001; Ьаббу, Ό.Ι, е! а1., 1ттиподетсйу оГ ηονе1 сопкепкик-Ьакеб ΌΝΑ уассшек адатк! а\аап тПиеп/а. Уассше, 2007. 25(16): р. 2984-9; РгеНп, Ь., е! а1., Собоп орПни/аПоп апб тΚ.NΑ атрНЛсаНоп еПссПуе1у епНапсек !Не ттшподешсйу оГ !Не Нераббк С уник попк!гис!ига1 3/4Α депе. Сепе ТНег, 2004. 11(6): р. 522-33].

Последние технологические достижения в системах доставки плазмид улучшили экспрессию и иммуногенность ДНК-вакцин, включая такие технологии, как электропорация [Нйао, ΗΑ., е! а1., 1п!габегта1/киЬси!апеоик штшш/аПоп Ьу е1ес!горога!юп Птргоуек р1акт1б уассше беПуегу апб ро!епсу ш ртдк апб гНекик тасасщек. Уассше, 2008. 26(3): р. 440-8; Ьискау, Α., е! а1., ЕГГес! оГ р1акт1б ΌΝΑ уассше беыдп апб ш саго е1ес!горога!юп оп !Не гекиШпд уассше-креаЛс 1ттипе гекропкек ш гНекик тасасщек. 1. Уйо1, 2007. 81(10): р. 5257-69; ЛЫеи С., е! а1., 1п νί\Ό е1ес!горога!юп епНапсек !Не 1ттиподетсйу оГ НераННк С уник поп8!гис!ига1 3/4Α ΌΝΑ Ьу шсгеакеб 1оса1 ΌΝΑ ир!аке, рго!еш ехргеккюп 1пПатта!юп, апб тЛНгаПоп оГ СП3+ Т се11к. 1. 1ттипо1, 2007. 179(7): р. 4741-53].

Кроме того, исследования подтверждают, что использование консенсусных иммуногенов может повышать размах клеточной иммунной реакции по сравнению с одними природными антигенами ^ап, 1., е! а1., ЕпНапсеб се11и1аг 1ттипе гекропкек еНсйеб Ьу ап епдтеегеб Н1У-1 киЬ!уре В сопкепкик-Ьакеб епуе1оре ΌΝΑ уассше. Мо1 ТНег, 2007. 15(2): р. 411-21; Ко11апб, М., е! а1., Ресопк1гисПоп апб ГипсЛоп оГ апсек!га1 сеп!ег-оГ-!гее Нитап ттшпобеПаепсу у1гик !уре 1 рго!ешк. 1. УНо1, 2007. 81(16): р. 8507-14]. Однако общепризнано, что нарушение иммунной толерантности к раковым антигенам и выработка аутоиммунитета является основным препятствием для вакцин против рака.

Все еще остается потребность в конструктах нуклеиновых кислот, которые кодируют антигены рака простаты, и в составах, пригодных для стимуляции иммунных ответов на антигены рака простаты и нарушения таким образом иммунной толерантности. Остается потребность в эффективных профилактических и терапевтических вакцинах против рака простаты, которые являются экономичными и эффективными.

- 1 027315

Сущность изобретения

Аспекты настоящего изобретения включают молекулы нуклеиновых кислот, содержащие кодирующую последовательность, кодирующую один или более белков, выбранных из группы, содержащей а) 8ЕО ГО N0: 2; белок, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 2, при условии, что сохранились аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из 8Е0 ГО N0: 2; или иммуногенный фрагмент 8Е0 ГО N0: 2, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 256 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 2, при условии, что сохранились аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из 8ЕО ГО N0: 2; б) 8ЕО ГО N0: 4; белок, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 4, при условии, что сохранились аминокислоты 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 из 8Е0 ГО N0: 4; или иммуногенный фрагмент 8Е0 ГО N0: 4, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 274 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 4, при условии, что сохранились аминокислоты 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 из 8Е0 ГО N0: 4; в) 8Е0 ГО N0: 6; белок, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 6, при условии, что сохранились аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из 8Е0 ГО N0: 6; или иммуногенный фрагмент 8Е0 ГО N0: 6, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 735 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 6, при условии, что сохранились аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из 8ЕО ГО N0: 6; г) 8ЕО ГО N0: 8; белок, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 8, при условии, что сохранились аминокислоты 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 из 8ЕО ГО N0: 8; или иммуногенный фрагмент 8Е0 ГО N0: 8, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 751 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 8, при условии, что сохранились аминокислоты 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 из 8ЕО ГО N0: 8; д) 8ЕО ГО N0: 10; белок, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 10; или иммуногенный фрагмент 8Е0 ГО N0: 10, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 333 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 10; е) 8Е0 ГО N0: 12; белок, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 12; или иммуногенный фрагмент 8Е0 ГО N0: 12, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 349 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 12; ж) 8Е0 ГО N0: 14; белок, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 14 или иммуногенный фрагмент 8Е0 ГО N0: 14, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 129 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 14; или з) сигнальный пептид, связанный с аминокислотами 19-131 из 8Е0 ГО N0: 14; белок, который имеет сигнальный пептид, связанный с аминокислотной последовательностью, которая на 98% гомологична аминокислотам 19-131 из 8Е0 ГО N0: 14; или белок, который имеет сигнальный пептид, связанный с иммуногенным фрагментом аминокислот 19-131 из 8Е0 ГО N0: 14, фрагмент, содержащий по меньшей мере 110 аминокислотных остатков 8Е0 ГО N0: 14 и связанный с сигнальным пептидом. В некоторых вариантах воплощения молекулы нуклеиновой кислоты выбираются из молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих белки а), б), в), или г).

В другом аспекте изобретение включает способы лечения пациента, у которого диагностирован рак простаты, включающие введение пациенту молекулы нуклеиновой кислоты, описанной в настоящем изобретении.

В другом аспекте предоставляются белки, выбранные из группы, состоящей из а) 8Е0 ГО N0: 2; белка, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 2, при условии, что сохранились аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из 8Е0 ГО N0: 2; или иммуногенного фрагмента 8Е0 ГО N0: 2, содержащего аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 261 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 2, при условии, что сохранились аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из 8Е0 ГО N0: 2; б) 8Е0 ГО N0: 4; белка, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 4, при условии, что сохранились аминокислоты 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 из 8Е0 ГО N0: 4; или иммуногенного фрагмента 8Е0 ГО N0: 4, содержащего аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 274 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 4, при условии, что сохранились аминокислоты 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 из 8Е0 ГО N0: 4; в) 8Е0 ГО N0: 6; белка, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 6, при условии, что сохранились аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из 8Е0 ГО N0: 6; или иммуногенного фрагмента 8Е0 ГО N0: 6, содержащего аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 735 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 6, при условии, что сохранились аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из 8Е0 ГО N0: 6; г) 8Е0 ГО N0: 8; белка, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 8, при условии, что сохранились аминокислоты 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 из 8Е0 ГО N0: 8; или иммуногенного фрагмента 8Е0 ГО N0: 8, содержащего аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 751 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 8, при условии, что сохранились аминокислоты 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 из 8ЕО ГОЫ0:8; д) 8ЕО ГО N0: 10; белка, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 10; или иммуногенного фрагмента 8Е0 ГО N0: 10, содержащего аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 333 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 10;

- 2 027315

е) δΕΟ ΙΌ N0: 12; белка, который на 98% гомологичен δΕΟ ГО N0: 12; или иммуногенного фрагмента δΕΟ ГО N0: 12, содержащего аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 349 аминокислотным остаткам δΕΟ ГО N0: 12; ж) δΕΟ ГО N0: 14; белка, который на 98% гомологичен δΕΟ ГО N0: 14; или иммуногенного фрагмента δΕΟ ГО N0: 14, содержащего аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 129 аминокислотным остаткам δΕΟ ГО N0: 14; или з) сигнального пептида, связанного с аминокислотами 19-131 из δΕΟ ГО N0: 14; белка, который имеет сигнальный пептид, связанный с аминокислотной последовательностью, которая на 98% гомологична аминокислотам 19-131 из δΕΟ ГО N0: 14; или белка, который имеет сигнальный пептид, связанный с иммуногенным фрагментом аминокислот 19-131 из δΕΟ ГО N0: 14, фрагментом, содержащим по меньшей мере 110 аминокислотных остатков δΕΟ ГО N0: 14 и связанным с сигнальным пептидом. В некоторых вариантах воплощения белок выбирается из группы, содержащей белки а), б), в) или г).

Некоторые аспекты изобретения включают способы лечения пациента, у которого диагностировался рак простаты, включающие доставку упомянутому пациенту белка, описанного в настоящем изобретении.

Другими аспектами изобретения являются фармацевтические составы, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты, предоставляемые в настоящем изобретении, и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

Краткое описание фигур

Фиг. 1 показывает результаты трансляции ίη νίίτο, проведенной для подтверждения экспрессии ΡδΑ и ΡδΜΑ антигенов.

Фиг. 2А показывает данные по клеточной иммуногенности. Клеточная иммуногенность ΡδΆ антигенов определялась по интерферон-гамма ΕΕΙδροΐ.

Фиг. 2В показывает данные по клеточной иммуногенности. Клеточная иммуногенность ΡδΑ антигенов определялась по интерферон-гамма ΕΕΙδροΐ.

Фиг. 3А-С показывают реакции СГО4+ Т-клеток, как охарактеризовано по проточной цитометрии путем демонстрации графиков, показывающих ΡδΑ-специфичную (левая вставка), ΡδΜΑ-специфичную (средняя вставка) и совокупную вакциноспецифичную (правая вставка) продукцию цитокинов:% ГЕИу продуцирующие СГО4+ Т-клетки (фиг. 3А);% ГО-2 продуцирующие СГО4+ Т-клетки (фиг. 3В);% ФНОа продуцирующие СГО4+ Т-клетки (фиг. 3С).

Фиг. 4А-С показывают реакции СГО8+ Т-клеток, как охарактеризовано посредством проточной цитометрии при демонстрации графиков, показывающих ΡδΑ-специфичную (левая вставка), ΡδΜΑспецифичную (средняя вставка) и совокупную вакциноспецифичную (правая вставка) продукцию цитокинов:% ГЕИу продуцирующих СГО8+ Т-клеток (фиг. 4А);% ГО-2 продуцирующих СГО8+ Т-клеток (фиг. 4В);% ФНО-альфа-продуцирующих СГО8+ Т-клеток (фиг. 4С).

Фиг. 5А, В показывают данные ΕΌΙδΑ для ΡδΑ-специфичных антител через одну неделю после последней иммунизации. Фиг. 5А - ΡδΑ Ι§0 конечные титры. Фиг. 5В - репрезентативные кривые титрования 1§С.

Подробное описание

В настоящем изобретении предоставляются консенсусные последовательности белков простаты и выделенные молекулы нуклеиновых кислот, которые их кодируют, и, в частности, антигены простаты, простатоспецифический антиген (ΡδΑ), мембранный простатоспецифический антиген (ΡδΜΑ), эпителиальный антиген простаты, содержащий шесть трансмембранных доменов (δΤΕΑΡ) и простатоспецифический антиген стволовых клеток (Ρδί'Ά).

Антигены рака простаты, описанные здесь, представляют собой консенсусные последовательности, полученные из пула гомологичных антигенов множества видов, включая вид, являющийся целевым для вакцины. Выбранные виды, антигенные последовательности которых выравниваются для образования консенуса, следует выбирать на основе тесной близости видов на филогенетическом древе, например, Н.8ар1еп5 (люди), Μ.ιηιιΕιΙΙα (макаки-резусы), и Μ.ΠίδοίοιιΕιπδ (яванские макаки). Консенсусный антиген не идентичен природному антигену простаты, но будет иметь близкую идентичность, если последовательности идентичны по меньшей мере на 85% и предпочтительно на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, или 99%. Эти описанные консенсусные раковые антигены способны нарушать толерантность целевого вида (или быть причиной аутоиммунитета) и вырабатывать эффективную иммунную реакцию против антигена рака простаты. В настоящем изобретении предоставляются способы производства ДНК-вакцины, основанной на консенсусных раковых антигенах.

Аспекты настоящего изобретения включают молекулы нуклеиновых кислот, содержащие кодирующую последовательность, которая кодирует один или более белков, выбранных из группы, содержащей а) δΕΟ ΙΌ N0: 2; белок, который на 98% гомологичен δΕΟ ΙΌ N0: 2, при условии сохранения аминокислот 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из δΕΟ ΙΌ N0: 2; или иммуногенный фрагмент δΕΟ ГО N0: 2, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 256 аминокислотным остаткам δΕΟ ΙΌ N0: 2, при условии сохранения аминокислот 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из δΕΟ ΙΌ N0: 2; б) δΕΟ ΙΌ N0: 4; белок, который на 98% гомологичен

- 3 027315 δΕΟ ΙΌ N0: 4, при условии сохранения аминокислот 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 из δΕΟ ΙΌ N0: 4; или иммуногенный фрагмент δΕΟ ΙΌ N0: 4, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 274 аминокислотным остаткам δΕΟ ΙΌ N0: 4, при условии сохранения аминокислот 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 из δΕΟ ΙΌ N0: 4; в) δΕΟ ΙΌ N0: 6; белок, который на 98% гомологичен δΕΟ ΙΌ N0: 6, при условии сохранения аминокислот 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из δΕΟ ΙΌ N0: 6; или иммуногенный фрагмент δΕΟ ΙΌ N0: 6, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 735 аминокислотным остаткам δΕΟ ΙΌ N0: 6, при условии сохранения аминокислот 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из δΕΟ ΙΌ N0: 6; г) δΕΟ ΙΌ N0: 8; белок, который на 98% гомологичен δΕΟ ΙΌ N0: 8, при условии сохранения аминокислот 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 из δΕΟ ΙΌ N0: 8; или иммуногенный фрагмент δΕΟ ΙΌ N0: 8, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 751 аминокислотным остаткам δΕΟ ΙΌ N0: 8, при условии сохранения аминокислот 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 из δΕΟ ΙΌ N0: 8; д) δΕΟ ΙΌ N0: 10; белок, который на 98% гомологичен δΕΟ ΙΌ N0: 10; или иммуногенный фрагмент δΕΟ ΙΌ N0: 10, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 333 аминокислотным остаткам δΕΟ ΙΌ N0: 10; е) δΕΟ ΙΌ N0: 12; белок, который на 98% гомологичен δΕΟ ΙΌ N0: 12; или иммуногенный фрагмент δΕΟ ΙΌ N0: 12, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 349 аминокислотным остаткам δΕΟ ΙΌ N0: 12; ж) δΕΟ ΙΌ N0: 14; белок, который на 98% гомологичен δΕΟ ΙΌ N0: 14; или иммуногенный фрагмент δΕΟ ΙΌ N0: 14, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 129 аминокислотным остаткам δΕΟ ΙΌ N0: 14; или иммуногенный фрагмент δΕΟ ΙΌ N0: 14, содержащий по меньшей мере 129 аминокислотных остатков δΕΟ ΙΌ N0: 14; или з) сигнальный пептид, связанный с аминокислотами 19-131 из δΕΟ ΙΌ N0: 14; белок, который имеет сигнальный пептид, связанный с аминокислотной последовательностью, которая на 98% гомологична аминокислотам 19-131 из δΕΟ ΙΌ N0: 14; или белок, который имеет сигнальный пептид, связанный с иммуногенным фрагментом аминокислот 19-131 из δΕΟ ΙΌ N0: 14, фрагментом, содержащим по меньшей мере 110 аминокислотных остатков из δΕΟ ΙΌ N0: 14 и связанным с сигнальным пептидом. Раскрыты две консенсусных белковых последовательности для ΡδΑ: консенсусная антигенная последовательность 1 ΡδΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 2) и консенсусная антигенная последовательность 2 ΡδΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 4). Раскрыты две консенсусных белковых последовательности для ΡδΜΑ: консенсусная антигенная последовательность 1 ΡδΜΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 6) и консенсусная антигенная последовательность 2 ΡδΜΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 8). Раскрыты две консенсусных белковых последовательности для δΤΕΑΡ (также обозначаемого здесь как δΤΕΑΡ1): консенсусная антигенная последовательность 1 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 10) и консенсусная антигенная последовательность 2 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 12). Раскрыта одна консенсусная белковая последовательность Ρδί'Ά: консенсусная антигенная последовательность Ρδί'Ά (δΕΟ ΙΌ N0: 14). δΕΟ ΙΌ N0: 14 включает Ι§Ε сигнальный пептид. В некоторых вариантах воплощения консенсусный антиген Ρδί'Ά может включать аминокислоты 19-131 из δΕΟ ΙΌ N0: 14, связанные с сигнальной последовательностью, отличной от Ι§Ε сигнала в δΕΟ ΙΌ N0: 14. В некоторых вариантах воплощения молекулы нуклеиновой кислоты выбираются из тех, которые кодируют белки а), б), в) или г), перечисленные выше. В других вариантах воплощения молекулы нуклеиновой кислоты представляют собой те, которые кодируют один или более белков, выбранных из группы, содержащей по меньшей мере один, выбранный из тех, которые кодируют белки или а) или б), и по меньшей мере один, выбранный из тех, которые кодируют белки или в) или г).

Кроме того, молекулы нуклеиновой кислоты могут быть молекулами, кодирующими один или более белков, выбранных из группы, содержащей δΕΟ ΙΌ N0: 2; δΕΟ ΙΌ N0: 4; δΕΟ ΙΌ N0: 6; δΕΟ ΙΌ N0: 8; δΕΟ ΙΌ N0: 10; δΕί) ΙΌ N0: 12 или δΕί) ΙΌ N0: 14; и предпочтительно δΕί) ΙΌ N0: 2; δΕί) ΙΌ N0: 4; δΕΟ ΙΌ N0: 6; или δΕΟ ΙΌ N0: 8. В некоторых вариантах воплощения молекула нуклеиновой кислоты может быть одной из тех, которые кодируют один или более белков, выбранных из группы, содержащей по меньшей мере один, выбранный или из δΕΟ ΙΌ N0: 2, или из δΕΟ ΙΌ N0: 4, и по меньшей мере один, выбранный или из δΕΟ ΙΌ N0: 6, или из δΕΟ ΙΌ N0: 8.

В другом аспекте предоставляются белки, выбранные из группы, состоящей из а) δΕΟ ΙΌ N0: 2; белка, который на 98% гомологичен δΕΟ ΙΌ N0: 2, при условии, что сохранились аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из δΕΟ ΙΌ N0: 2; или иммуногенный фрагмент δΕΟ ΙΌ N0: 2, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 256 аминокислотным остаткам δΕΟ ΙΌ N0: 2, при условии, что сохранились аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из δΕΟ ΙΌ N0: 2; б) δΕΟ ΙΌ N0: 4; белка, который на 98% гомологичен δΕΟ ΙΌ N0: 4, при условии, что сохранились аминокислоты 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 из δΕΟ ΙΌ N0: 4; или иммуногенный фрагмент δΕΟ ΙΌ N0: 4, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 274 аминокислотным остаткам δΕΟ ΙΌ N0: 4, при условии, что сохранились аминокислоты 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 из δΕΟ ΙΌ N0: 4; в) δΕΟ ΙΌ N0: 6; белка, который на 98% гомологичен δΕΟ ΙΌ N0: 6, при условии, что сохранились аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613,

- 4 027315

624, 653, 660, 663, 733 и 734 из 8ЕО ГО N0: 6; или иммуногенный фрагмент 8Е0 ГО N0: 6, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 735 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 6, при условии, что сохранились аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из 8Е0 ГО N0: 6; г) 8Е0 ГО N0: 8; белка, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 8, при условии, что сохранились аминокислоты 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 из 8Е0 ГО N0: 8; или иммуногенный фрагмент 8Е0 ГО N0: 8, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 751 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 8, при условии, что сохранились аминокислоты 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 из 8ΙΤ) ГО N0: 8; д) 8ΙΤ) ГО N0: 10; белка, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 10; или иммуногенный фрагмент 8Е0 ГО N0: 10, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 333 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 10; е) 8Е0 ГО N0: 12; белка, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 12; или иммуногенный фрагмент 8Е0 ГО N0: 12, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 349 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 12; ж) 8Е0 ГО N0: 14; белка, который на 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 14; или иммуногенный фрагмент 8Е0 ГО N0: 14, содержащий аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 129 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 14; или з) сигнального пептида, связанного с аминокислотами 19131 из 8Е0 ГО N0: 14; белка, который имеет сигнальный пептид, связанный с аминокислотной последовательностью, которая на 98% гомологична аминокислотам 19-131 из 8Е0 ГО N0: 14; или белок, который имеет сигнальный пептид, связанный с иммуногенным фрагментом аминокислот 19-131 из 8Е0 ГО N0: 14, фрагментом, содержащим по меньшей мере 110 аминокислотных остатков 8Е0 ГО N0: 14 и связанным с сигнальным пептидом.

В некоторых вариантах воплощения белок выбирается из группы, содержащей белки а), б), в) или г). В других вариантах воплощения белки являются белками, кодирующими один или более белков, выбранных из группы, содержащей по меньшей мере один, выбранный из белков или а) или б), и по меньшей мере один, выбранный из белков или в) или г).

Кроме того, белки могут быть белками, выбранными из группы, содержащей 8Е0 ГО N0: 2; 8Е0 ГО N0: 4; 8ΙΤ) ГО N0: 6; 8ΙΤ) ГО N0: 8; 8ΙΤ) ГО N0: 10; 8ΙΤ) ГО N0: 12; или 8ΙΤ) ГО N0: 14; и предпочтительно, 8Е0 ГО N0: 2; 8Е0 ГО N0: 4; 8Е0 ГО N0: 6 или 8Е0 ГО N0: 8. В некоторых вариантах воплощения белки могут быть белками, которые выбраны из группы, содержащей по меньшей мере один, выбранный или из 8Е0 ГО N0: 2, или из 8Е0 ГО N0: 4, и по меньшей мере один, выбранный или из 8Е0 ГО N0: 6, или из 8Е0 ГО N0: 8.

Кодирующие последовательности нуклеиновой кислоты были созданы для усиления и оптимизации экспрессии. Кодоны, используемые в этих молекулах нуклеиновой кислоты, были отобраны для производства РНК, имеющей редуцированную вторичную структуру, образовавшуюся в результате внутримолекулярной гибридизации. Раскрыты последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие консенсусную антигенную последовательность 1 Р8А (8Е0 ГО N0: 1) и консенсусную антигенную последовательность 2 Р8А (8Е0 ГО N0: 3). Подобным образом, предоставляются кодирующая последовательность нуклеиновой кислоты для консенсусной антигенной последовательности 1 Р8МА (8Е0 ГО N0: 5 или нуклеотиды 1-2250 из 8Е0 ГО N0: 5) и консенсусной антигенной последовательности 2 Р8МА (8Е0 ГО N0: 7 или нуклеотиды 1-2301 из 8Е0 ГО N0: 7), а также консенсусной антигенной последовательности 1 8ТЕАР (8Е0 ГО N0: 9), консенсусной антигенной последовательности 2 8ТЕАР (8Е0 ГО N0: 11) и консенсусной антигенной последовательности Р8СА (8Е0 ГО N0: 13). Также предоставляются последовательности нуклеиновой кислоты, которые на 98% гомологичны 8Е0 ГО N0: 1 и кодируют или консенсусную антигенную последовательность 1 Р8А (8Е0 ГО N0: 2), или белок, на до 98% гомологичный 8Е0 ГО N0: 2, предпочтительно включающий аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из 8Е0 ГО N0: 2, и последовательности нуклеиновой кислоты, которые на 98% гомологичны 8Е0 ГО N0: 3 и кодируют или консенсусную антигенную последовательность 2 Р8А (8Е0 ГО N0: 4), или белок, на до 98% гомологичный 8Е0 ГО N0: 4, предпочтительно включающий аминокислоты 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 из 8ΙΤ) ГО N0: 4. Подобным образом, предоставляются последовательности нуклеиновой кислоты, которые на 98% гомологичны нуклеотидам 2250 из 8Е0 ГО N0: 5 и кодируют или консенсусную антигенную последовательность 1 Р8МА (8Е0 ГО N0: 6), или белок, на до 98% гомологичный 8Е0 ГО N0: 6, предпочтительно включающий аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из 8Е0 ГО N0: 6, или последовательности нуклеиновой кислоты, которые на 98% гомологичны нуклеотидам 2301 из 8Е0 ГО N0: 7 и кодируют или консенсусную антигенную последовательность 1 Р8МА (8Е0 ГО N0: 8), или белок, на до 98% гомологичный 8Е0 ГО N0: 8, предпочтительно включающий аминокислоты 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 из 8Е0 ГО N0: 8, а также нуклеотиды, которые на 98% гомологичны 8Е0 ГО N0 9 и кодируют или консенсусную антигенную последовательность 1 8ТЕАР (8Е0 ГО N0: 10), или белок, который на до 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 10, нуклеотиды, которые на 98% гомологичны 8Е0 ГО N0: 11 и кодируют или консенсусную антигенную последовательность 2 8ТЕАР (8Е0 ГО N0: 12), или белок, который на до 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 12, и нуклеотиды, которые на 98% гомологичны 8Е0 ГО N0: 13

- 5 027315 и кодируют или консенсусную антигенную последовательность Р8СА (8ЕО ГО N0: 14), или белок, который на до 98% гомологичен 8Е0 ГО N0: 14. В некоторых вариантах воплощения молекулы нуклеиновой кислоты кодируют белок, который содержит сигнальный пептид 1дЕ (например, 8Е0 ГО N0: 3, которая кодирует 8Е0 ГО N0: 4; нуклеотиды 1-2301 из 8Е0 ГО N0: 7 которые кодируют 8Е0 ГО N0: 8; 8Е0 ГО N0: 11, которая кодирует 8Е0 ГО N0: 12, и 8Е0 ГО N0: 13, которая кодирует 8Е0 ГО N0: 14).

Составы, содержащие молекулы нуклеиновых кислот, которые содержат кодирующие последовательности молекул выделенных нуклеиновых кислот, предоставленные в настоящем изобретении, могут быть пригодны для стимуляции иммунных реакций на белок простаты при введении в животное. Составы, содержащие одну или более из этих последовательностей нуклеиновых кислот, могут использоваться как вакцины или компоненты вакцины для профилактической или терапевтической иммунизации к раку простаты. Подобным образом, составы, содержащие консенсусные белки, могут быть пригодны для стимуляции иммунных реакций на белок простаты при введении в животное. Комбинации составов, содержащих молекулы нуклеиновых кислот, которые содержат кодирующие последовательности выделенных молекул нуклеиновых кислот, представленные здесь, могут быть пригодны для стимуляции иммунных реакций на белок простаты и могут вместе использоваться как вакцины или компоненты вакцины для профилактической или терапевтической иммунизации к раку простаты. Подобным образом, составы, содержащие консенсусные белки, могут быть пригодны для стимуляции иммунных реакций на белок простаты при введении в животное. Составы, содержащие один или более из этих консенсусных белков, могут использоваться как вакцины или компоненты вакцины для профилактической или терапевтической иммунизации к раку простаты.

Предоставляются вакцины, которые содержат последовательности нуклеиновых кислот, предоставляемые здесь. В некоторых вариантах воплощения предоставляются вакцины, которые содержат последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие один или более консенсусных антигенов простаты, выбранных из группы, состоящей из консенсусного Р8А-антигена 1, консенсусного Р8А-антигена 2, консенсусного Р8МА-антигена 1, консенсусного Р8МА антигена-2, консенсусного 8ТЕАР антигена-1, консенсусного 8ТЕАР антигена-2, и консенсусного Р8СА. Способы стимуляции иммунных реакций с использованием последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих один или более антигенов простаты, выбираются из группы, состоящей из консенсусного Р8А антигена-1, консенсусного Р8А антигена-2, консенсусного Р8МА антигена-1, консенсусного Р8МА антигена-2, консенсусного 8ТЕАР антигена-1, консенсусного 8ТЕАР антигена-2, и консенсусного Р8СА.

Предоставляются вакцины, которые содержат один или более консенсусный Р8А антиген-1, консенсусный Р8А антиген-2, консенсусный Р8МА антиген-1, консенсусный Р8МА антиген-2, консенсусный 8ТЕАР антиген-1, консенсусный 8ТЕАР антиген-2, и консенсусный Р8СА. Также предоставляются способы стимуляции иммунных реакций с использованием одного или более консенсусного Р8А антигена-1, консенсусного Р8А антигена-2, консенсусного Р8МА антигена-1, консенсусного Р8МА антигена-2, консенсусного 8ТЕАР антигена-1, консенсусного 8ТЕАР антигена-2 и консенсусного Р8СА.

Предоставляются способы защиты пациента от рака простаты или лечения пациента, который идентифицирован как имеющий рак простаты. Способы содержат этап введения упомянутому пациенту эффективного количества одной или более молекул нуклеиновой кислоты, содержащих одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, предоставляемые здесь. В некоторых способах доставке молекул нуклеиновых кислот способствует электропорация ткани-мишени или ткани, которая получает молекулы нуклеиновой кислоты. Последовательность нуклеиновой кислты экспрессируется в клетках пациента и стимулируется иммунная реакция против белка простаты, кодируемого последовательностью нуклеиновой кислоты.

1. Определения.

Терминология, используемая в настоящем изобретении, служит только для цели описания определенных вариантов воплощения, и предполагается, что она не имеет ограничительного характера. При использовании в спецификации и прилагаемой формуле изобретения единственные формы включают отсыл ко множественным, если контекст очевидно не диктует обратное.

При перечислении числовых диапазонов в настоящем изобретении, недвусмысленно предполагается каждое промежуточное число в пределах одной степени точности. Например, в диапазоне 6-9 в дополнение к 6 и 9 предполагаются числа 7 и 8, и в диапазоне 6,0-7,0 недвусмысленно предполагаются числа 6,0; 6,1; 6,2; 6,3; 6,4; 6,5; 6,6; 6,7; 6,8; 6,9 и 7,0.

а. Адьювант.

Адъювант при использовании в настоящем изобретении означает любую молекулу, добавленную к ДНК-плазмидным вакцинам, описанным в настоящем изобретении, для усиления иммуногенности антигенов, кодируемых плазмидами ДНК и кодирующими нуклеиновыми последовательностями, описанными далее.

б. Антитело.

Антитело при использовании в настоящем изобретении означает антитело классов 1дС. 1дМ, 1дА, 1§0 или 1дЕ, или его фрагменты, его фрагменты или производные, включая РаЬ, Р(аЬ')₂, Ρά, и одноцепочечные антитела, диатела, биспецифичные антитела, бифункциональные антитела и их производные.

- 6 027315

Антитело может быть антителом, выделенным из образца сыворотки млекопитающего, поликлональным антителом, аффинно-очищенным антителом, или их смесями, которое демонстрирует достаточную специфичность связывания с желаемым эпитопом или полученной из него последовательностью.

в. Кодирующая последовательность.

Кодирующая последовательность или кодирующая нуклеиновая кислота при использовании в настоящем изобретении означает нуклеиновые кислоты (молекулу РНК или ДНК), которые содержат нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок. Кодирующая последовательность может также включать сигналы инициации и терминации, функционально связанные с регуляторными элементами, включая промотор и сигнал полиаденилирования, способный направлять экспрессию в клетках человека или млекопитающего, которому введена нуклеиновая кислота.

г. Комплемент.

Комплемент или Комплементарный при использовании в настоящем изобретении означает спаривание оснований по Уотсону-Крику (например, А-Т/и и С-О) или Хустингу между нуклеотидами или аналогами нуклеотидов нуклеиновых молекул.

д. Консенсус или консенсусная последовательность.

Консенсус или консенсусная последовательность при использовании в настоящем изобретении означает полипептидную последовательность, основанную на анализе выравнивания множественных субтипов определенного антигена простаты. Могут быть подготовлены последовательности нуклеиновых кислот, которые кодируют консенсусную полипептидную последовательность. Вакцины, содержащие белки, которые содержат консенсусные последовательности и/или молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют такие белки, могут быть использованы для стимуляции широкого иммунитета к определенному антигену простаты.

е. Электропорация.

Электропорация, электропермеабилизация или электро-кинетическая стимуляция (ЭП) при использовании взаимозаменяемо в настоящем изобретении означает использование трансмембранного импульса электрического поля для получения микроскопических путей (пор) в био-мембране; их присутствие позволяет биомолекулам, таким как плазмиды, олигонуклеотиды, миРНК, лекарствам, ионам и воде проходить с одной стороны клеточной мембраны на другую.

ж. Фрагмент.

Фрамент при использовании здесь в отношении последовательностей нуклеиновых кислот означает последовательность нуклеиновой кислоты или ее часть, которая кодирует полипептид, способный вызывать иммунную реакцию у млекопитающего, которая дает перекрестную реакцию с антигеном простаты полной длины. Фрагменты могут быть ДНК-фрагментами, выбранными из по меньшей мере одной из различных нуклеотидных последовательностей, которые кодируют консенсусные аминокислотные последовательности и конструкты, содержащие такие последовательности. ДНК-фрагменты могут содержать кодирующие последовательности для иммуноглобулинового лидера, такие как 1дЕ или 1дО последовательности. ДНК-фрагменты могут кодировать белковые фрагменты, перечисленные ниже.

Фрагмент в отношении полипептидных последовательностей означает полипептид, способный вызывать иммунную реакцию у млекопитающего, которая дает перекрестную реакцию с антигеном простаты, включая, например, Р8А, Р8МА, 8ТЕАР и Р8СА.

Последовательность Р8А человека состоит из около 261 аминокислоты. Фрагменты консенсусного антигена 1 Р8А могут содержать по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% 8ЕО ГО N0: 2 и предпочтительно 98 или 99% при условии, что фрагменты включают одну или более из аминокислот 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248. Фрагменты консенсусного антигена 1 Р8А могут содержать 255, 256, 257, 258, 259 или 260 аминокислот 8ЕО ГО N0: 2, но предпочтительно 256 аминокислот или более. Фрагменты консенсусного антигена 2 Р8А могут содержать по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% 8Е0 ГО N0: 4 и предпочтительно 98 или 99% при условии, что фрагменты включают одну или более из аминокислот 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275. Все такие фрагменты консенсусного антигена 2 Р8А могут также необязательно исключать аминокислоты 1-17. В некоторых вариантах воплощения фрагменты консенсусного антигена 2 Р8А могут необязательно содержать одну или более из аминокислот 1-17 и из аминокислот от аминокислоты 18 до аминокислоты 278, фрагменты консенсусного антигена 2 Р8А могут также содержать 255, 256, 257, 258, 259 или 260 аминокислот 8Е0 ГО N0: 4, но предпочтительно 274 аминокислоты или более.

Последовательность Р8МА человека содержит около 749-750 аминокислот. Фрагменты консенсусного антигена 1 Р8МА могут содержать по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% из 8Е0 ГО N0: 6 и предпочтительно 98 или 99%, при условии, что фрагменты включают одну или более из аминокислот 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734. Фрагменты консенсунсного антигена 1 Р8МА могут содержать 745, 746, 747, 748 или 749 аминокислот 8Е0 ГО N0: 6, но предпочтительно 735 аминокислот или более. Фрагменты консенсунсного антигена 2 Р8МА могут содержать по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% из 8Е0 ГО N0: 8 и предпочтительно 98 или 99%, при условии, что фрагменты включают одну или более из аминокислот 20,

- 7 027315

30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750. Все такие фрагменты консенсусного антигена 2 ΡδΑ могут также необязательно исключать аминокислоты 1-16. В некоторых вариантах воплощения фрагменты консенсусного антигена 2 ΡδΆ могут необязательно содержать одну или более из аминокислот 1-16 и из аминокислот от аминокислоты 17 до аминокислоты 766, фрагменты консенсусного антигена 2 ΡδΜΑ могут также содержать 760, 761, 762, 763, 764 или 765 аминокислот δΕΟ ГО N0: 8, но предпочтительно 751 аминокислоту или более.

Последовательность δΤΕΑΡ человека состоит из около 339 аминокислот. Консенсусные δΤΕΑΡ последовательности могут содержать аминокислотные последовательности для иммуноглобулинового лидера, такие как ΙβΕ или 1§С. Консенсусный антиген 2 δΤΕΑΡ содержит 18 аминокислот лидерной последовательности взамен метионина в положении 1. Фрагменты консенсусного антигена 2 ΡδΜΑ могут содержать лидерную последовательность и по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% аминокислот 18-356 из δΕΟ ГО N0: 12 и предпочтительно 98 или 99%. Фрагменты консенсусного антигена 1 ΡδΜΑ могут содержать аминокислоты 1-350, 1-351, 1-352, 1-353, 1-354 или 1-355 из δΕΟ ΙΌ N0: 12.

Последовательность Ρδί'Ά человека состоит из около 114 аминокислот. Консенсусные δΤΕΑΡ последовательности могут содержать аминокислотные последовательности для иммуноглобулинового лидера, такие как Ι§Ε или 1§С. Консенсусный антиген Ρδί'Ά содержит 18 аминокислот лидерной последовательности взамен метионина в положении 1. Фрагменты консенсусного антигена Ρδί'Ά могут содержать лидерную последовательность и по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% аминокислот 18-131 из δΕΟ ГО N0: 14, и предпочтительно 98 или 99%. Фрагменты консенсусного антигена 1 ΡδΜΑ могут содержать аминокислоты 1-125, 1-126, 1-127, 1-128, 1-129 или 1-130 из δΕΟ ΙΌ N0: 14.

з. Генетический конструкт.

При использовании в настоящем изобретении термин генетический конструкт обозначает молекулы ДНК или РНК, которые содержат нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок. Кодирующая последовательность включает сигналы инициации и терминации, фукнционально связанные с регуляторными элементами, включая промотор и сигнал полиаденилирования, способные направлять экспрессию в клетках пациента, которому введена молекула нуклеиновой кислоты. При использовании здесь термин экспрессируемая форма относится к генным конструктам, которые содержат необходимые регуляторные элементы, функционально связанные с кодирующей последовательностью, которая кодирует белок, таким образом, что при присутствии в клетке пациента кодирующая последовательность будет экспрессироваться.

и. Гомология.

Гомология множественных выравниваний последовательностей и филограмма создавались с использованием С1и51а1\У. основной программы для целей выравнивания последовательностей ДНК или белков.

к. Идентичный.

Идентичный или идентичность при использовании здесь в контексте двух или более нуклеиновых кислот или полипептидных последовательностей означает, что эти последовательности имеют определенный процент остатков, которые являются одинаковыми на протяжении определенного участка. Процент может быть вычислен путем оптимального выравнивания двух последовательностей, сравнения двух последовательностей на протяжении определенного участка, определения количества положений, в которых в обеих последовательностях находятся идентичные остатки, для получения количества совпадающих положений, деления количества совпадающих положений на общее число положений в определенном участке, и умножение результата на 100 для получения процента идентичности последовательности. В случаях, когда две последовательности имеют различную длину или в результате выравнивания получается один или более несимметричных концов и определенный сравниваемый участок включает только единственную последовательность, остатки единственной последовательности включаются в знаменатель, но не в числитель расчета. При сравнении ДНК и РНК, тимин (Т) и урацил (И) могут считаться эквивалентами. Идентичность может быть определена вручную или с использованием компьютерного алгоритма, такого как ΒΕΑδΤ или ΒΕΑδΤ 2.0.

л. Иммунная реакция.

Иммунная реакция при использовании в настоящем изобретении означает активацию иммунной системы носителя, например, млекопитающего, в ответ на введение антигена, такого как консенсусный антиген простаты. Иммунная реакция может быть в форме клеточной или гуморальной реакции или обеих.

м. Нуклеиновая кислота.

Нуклеиновая кислота или олигонуклеотид или полинуклеотид при использовании в настоящем изобретении означает по меньшей мере два нуклеотида, ковалентно связанных вместе. Описание одной цепи также определяет последовательность комплементарной цепи. Таким образом, нуклеиновая кислота также охватывает комплементарную цепь обозначенной одиночной цепи. Множество вариантов нуклеиновой кислоты может быть использовано для той же цели, что и данная нуклеиновая кислота. Таким образом, нуклеиновая кислота также охватывает по существу идентичные нуклеиновые кислоты и их комплементарные цепи. Одиночная цепь предоставляет зонд, который может гибридизоваться с по- 8 027315 следовательностью-мишенью при жестких условиях гибридизации. Таким образом, нуклеиновая кислота также охзватывает зонд, который гибридизуется при жесткихусловиях гибридизации.

Нуклеиновые кислоты могут быть одноцепочечными или двуцепочечными или могут содержать части как двуцепочечной, так и одноцепочечной последовательности. Нуклеиновая кислота может быть ДНК как геномной, так и кДНК, РНК или гибридом, где нуклеиновая кислота может содержать комбинации дезоксирибо- и рибонуклеотидов, и комбинации оснований, включая урацил, аденин, тимин, цитозин, гуанин, инозин, ксантин, гипоксантин, изоцитозин и изогуанин. Нуклеиновые кислоты могут быть получены с помощью способов химического синтеза или рекомбинантных способов.

н. Функционально связанный.

Фукционально связанный при использовании в настоящем изобретении означает, что экспрессия гена находится под контролем промотора, с которым он пространственно соединен. Промотор может находиться в положении 5' (выше) или 3' (ниже) по отношению к гену, который он контролирует. Расстояние между промотором и геном может быть приблизительно таким же, как расстояние между промотором и геном, который он контролирует в том гене, из которого происходит промотор. Как известно специалистам, можно подобрать вариацию этого расстояния без потери фукнции промотора.

о. Промотор.

Промотор при использовании в настоящем изобретении означает синтетическую или природную молекулу, которая способна вызывать, активировать или усиливать экспрессию нуклеиновой кислоты в клетке. Промотор может содержать одну или более специфических регулирующих транскрипцию последовательностей для дополнительного усиления экспрессии и/или для изменения пространственной экспрессии и/или временной экспрессии того же участка. Промотор может также содержать дистальные энхансерные или репрессорные элементы, которые могут находиться на расстоянии до нескольких тысяч пар оснований от сайта начала транскрипции. Промотор может быть получен из источников, включающих вирусы, бактерии, грибы, растения, насекомых и животных. Промотор может регулировать экспрессию генного компонента конститутивно или различным образом в зависимости от клетки, ткани или органа, в которых происходит экспрессия, или в зависимости от стадии развития, на которой происходит экспрессия, или в зависимости от внешних стимулов, таких как физиологический стресс, патогены, ионы металлов или индукторы. Репрезентативные примеры промоторов включают промотор бактериофага Т7, промотор бактериофага Т3, 8Р6 промотор, промоторно-операторную область 1ас-оперона, 1ае-промотор, поздний промотор 8У40, ранний промотор 8У40, промотор К8У-ЬТК, СМУ ΙΕ промотор, ранний промотор 8У40 или поздний промотор 8У40 и СМУ ΙΕ промотор.

п. Жесткие условия гибридизации.

Жесткие условия гибридизации при использовании в настоящем изобретении означают условия, при которых первая последовательность нуклеиновой кислоты (например, зонд) будет гибридизоваться со второй последовательностью нуклеиновой кислоты (например, мишенью), такой как комплексная смесь нуклеиновых кислот. Жесткие условия зависят от последовательности и будут различными при различных обстоятельствах. Жесткие условия могут быть выбраны на около 5-10°С ниже, чем температура плавления (Т_т) для определенной последовательности при определенной ионной силе рН. Т_т может быть температурой (при определенной ионной силе, рН, и концентрации нуклеотидов), при которой 50% зондов, комплементарных мишени, гибридизуются с последовательностью-мишенью равновесно (поскольку последовательности-мишени присутствуют в избытке, при Т_т, 50% зондов в состоянии равновесия остаются связанными). Жесткие условия могут быть такими, при каких солевая концентрация составляет менее чем около 1,0 М ионов натрия, например, около 0,01-1,0 М концентрация ионов натрия (или других солей) при рН от 7,0 до 8.3 и при температуре по меньшей мере около 30°С для коротких зондов (например, около 10-50 нуклеотидов) и по меньшей мере около 60°С для длинных зондов (например, более чем около 50 нуклеотидов). Жесткие условия могут быть также достигнуты добавлением дестабилизирующих агентов, таких как формамид. Для селективной или специфичной гибридизации положительный сигнал может быть по меньшей мере от 2 до 10 раз выше фоновой гибридизации. Примеры жестких условий гибридизации включают следующие: 50% формамида, 5х 88С, и 1% ДСН, инкубация при 42°С или 5х 88С, 1% ДСН, инкубация при 65°С, с промывкой в 0,2х 88С, и 0,1% ДСН при 65°С.

р. По существу комплементарный.

По существу комплементарный при использовании в настоящем изобретении означает, что первая последовательность по меньшей мере на 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 или 99% идентична комплементарной цепи второй последовательности на протяжении участка из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 180, 270, 360, 450, 540, 630, 720, 810, 900, 990, 1080, 1170, 1260, 1350, 1440, 1530, 1620, 1710, 1800, 1890, 1980, 2070 или более нуклеотидов или аминокислот или что две последовательности гибридизуются при жестких условиях гибридизации.

с. По существу идентичный.

По существу идентичный при использовании в настоящем изобретении означает, что первая и вторая последовательность по меньшей мере на 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 или 99% идентичны на протяжении участка из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55,

- 9 027315

60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 180, 270, 360, 450, 540, 630, 720, 810, 900, 990, 1080, 1170, 1260, 1350, 1440, 1530, 1620, 1710, 1800, 1890, 1980, 2070 или более нуклеотидов или аминокислот, или, в отношении нуклеиновых кислот, если первая последовательность по существу комплементарна комплементарной цепи второй последовательности.

т. Субтип или серотип.

Субтип или серотип: при использовании в настоящем изобретении, взаимозаменяемо, и по отношению к антигенам рака простаты, означает генетические варианты антигена рака простаты, такие как один субтип (или вариант), распознаваемый иммунной системой отлично от другого субтипа.

у. Вариант.

Вариант при использовании в настоящем изобретении по отношению к нуклеиновой кислоте означает (ί) часть или фрагмент эталонной нуклеотидной последовательности; (ίί) комплементарную цепь эталонной нуклеотидной последовательности или ее часть; (ίίί) нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична эталонной нуклеиновой кислоте или ее комплементу; или (ίν) нуклеиновую кислоту, которая гибридизуется при жестких условиях с эталонной нуклеиновой кислотой, ее комплементарной цепью, или последовательностями, по существу идентичными им.

Вариант по отношению к пептиду или полипептиду означает, что он отличается по аминокислотной последовательности благодаря инсерции, делеции или консервативной замене аминокислот, но сохраняет по меньшей мере одну биологическую активность. Вариант также может означать белок с аминокислотной последовательностью, которая по существу идентична эталонному белку с аинокислотной последовательностью, которая сохраняет по меньшей мере одну биологическую активность. Консервативная замена аминокислоты, то есть замещение аминокислоты другой аминокислотой со сходными свойствами (например, гидрофильностью, степенью и распределением заряженных участков) признается специалистами как типично включающая незначительное изменение. Такие незначительные изменения могут идентифицироваться, частично, если учесть индекс гидрофобности аминокислот, как понятно специалистам. Ку1е е! а1., 1. Μοί. ΒίοΙ. 157:105-132 (1982). Индекс гидрофобности аминокислоты основывается на учете ее гидрофобности и заряда. Специалистам известно, что аминокислоты со сходными индексами гидрофобности могут замещать друг друга, и функция белка при этом остается прежней. В одном аспекте, замещаются аминокислоты, имеющие индексы гидрофобности ±2. Гидрофильность аминокислот может также быть использована для выявления замещений, в результате которых белки сохраняли бы биологическую функцию. Анализ гидрофильности аминокислот в контексте пептида дает возможность расчета наибольшей местной средней гидрофильности этого пептида, который представляет собой полезный показатель, про который сообщается, что он хорошо коррелирует с антигенностью и иммуногенностью. Патент США № 4554101 полностью включен в настоящее изобретение посредством ссылки. В результате замещения аминокислот, имеющих сходные значения гидрофильности, может сохраняться биологическая активность пептидов, например, иммуногенность, как понятно специалистам. Замены могут быть проведены с аминокислотами, имеющими значения гидрофильности в пределах ±2 по отношению друг к другу. Как на индекс гидрофобности, так и на значение гидрофильности аминокислот влияет определенная боковая цепь этой аминокислоты. Согласно этому наблюдению, представляется, что замены аминокислот, которые сравнимы по биологической функции, зависят от сравнительного сходства аминокислот, и в особенности боковых цепей этих аминокислот, как показывают гидрофобность, гидрофильность, заряд, размер и другие свойства.

ф. Вектор.

Вектор при использовании в настоящем изобретении означает последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую начало репликации. Вектор может быть вектором, бактериофагом, бактериальной искусственной хромосомой или дрожжевой искусственной хромосомой. Вектор может быть ДНК или РНК вектором. Вектор может быть самореплицирующимся внехромосомным вектором, и, предпочтительно, является ДНК-плазмидой.

2. Консенсусные антигены простаты.

В настоящем изобретении предоставляются консенсусные антигены, способные вызывать у млекопитающего иммунную реакцию на антиген простаты. Консенсусный антиген может содержать эпитопы, которые делают его особенно эффективным как возможный иммуноген против рака простаты. Консенсусный антиген простаты может содержать полной длины продукт трансляции, его вариант, его фрагмент или их комбинацию.

Разработано семь различных консенсусных антигенов простаты. Два из консенсусных антигенов простаты представляют собой консенсусный антиген 1 Ρ8Ά (8ЕО ГО N0: 2) и консенсусный антиген 2 Ρ8Ά (8ЕО ГО N0: 4). Два из консенсусных антигенов простаты представляют собой консенсусный антиген 1 Ρ8ΜΆ (8ЕС ГО N0: 6) и консенсусный антиген 2 Ρ8ΜΆ (8ЕО ГО N0: 8). Два из консенсусных антигенов простаты представляют собой консенсусный антиген 1 8ΤΕΆΡ (8ЕО ГО N0: 10) и консенсусный антиген 2 8ΤΕΆΡ (8ЕО ГО N0: 12). Один из консенсусных антигенов простаты представляет собой консенсусный антиген Ρδί'Ά (8ЕО ГО N0: 14). Белки могут содержать последовательности, гомологичные антигенам простаты, фрагментам антигенов простаты и белкам с последовательностями, гомологичными

- 10 027315 фрагментам антигенов простаты.

Консенсусный антиген 1 ΡδΑ (δΕΟ ГО N0: 2) на около 91% гомологичен последовательностям ΡδΑ человека, на около 95% гомологичен ΡδΆ М. Гахасиапх и на около 96% гомологичен ΡδΆ М. ти1айа. Консенсусный антиген 1 ΡδΑ отличается от последовательностей ΡδΑ человека по аминокислотам 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из δΕί) ΙΌ N0: 2.

Консенсусный антиген 2 ΡδΑ (δΕΟ ГО N0: 4) на около 90-91% гомологичен последовательностям ΡδΑ человека, на около 95% гомологичен ΡδΑ М. Гаксюиапк и на около 95% гомологичен ΡδΑ М. ти1айа. Консенсусный антиген 2 ΡδΑ содержит лидерную последовательность на своем Ν-конце. Консенсусный антиген 2 ΡδΑ также отличается от последовательностей ΡδΑ человека по аминокислотам 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 из δΕί) ΙΌ N0: 4.

Консенсусный антиген 1 ΡδМΑ (δΕΟ ГО N0: 6) на около 96% гомологичен последовательностям ΡδМΑ человека и на около 94% гомологичен ΡδМΑ М. ти1айа. Консенсусный антиген 1 ΡδМΑ отличается от последовательностей ΡδМΑ человека по аминокислотам 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из δΕί) ΙΌ N0: 6.

Консенсусный антиген 2 ΡδМΑ (δΕΟ ГО N0: 8) на около 96% гомологичен последовательностям ΡδΑ человека и на около 94% гомологичен ΡδΑ М. ти1айа. Консенсусный антиген 2 ΡδМΑ содержит лидерную последовательность на своем Оконце. Консенсусный антиген 2 ΡδМΑ также отличается от последовательностей ΡδΑ человека по аминокислотам 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 из δΕ(') ΙΌ N0: 8.

Консенсусный антиген 1 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 10) на около 94% гомологичен некоторым последовательностям δΤΕΑΡ человека и на около 99% гомологичен другим последовательностям δΤΕΑΡ человека. Консенсусный антиген 1 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 10) также на около 94% гомологичен ΡδМΑ М. ти1айа.

Консенсусный антиген 2 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 12) на около 88% гомологичен некоторым последовательностям δΤΕΑΡ человека и на около 94% гомологичен другим последовательностям δΤΕΑΡ человека. Консенсусный антиген 2 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 12) также на около 94% гомологичен ΡδМΑ М. ти1айа. Консенсусный антиген 2 δΤΕΑΡ содержит лидерную последовательность на своем Оконце.

Консенсусный антиген Ρδί'Ά (δΕΟ ΙΌ N0: 14) на около 87% гомологичен человеческому Ρδί'Ά Консенсусный антиген Ρδί'Ά (δΕΟ ΙΌ N0: 14) отличается от человеческого Ρδί'Ά путем включения лидерной последовательности на своем Оконце.

Белки могут иметь последовательности, на 98% гомологичные консенсусной антигенной последовательности 1 ΡδΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 2), консенсусной антигенной последовательности 2 ΡδΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 4), консенсусной антигенной последовательности 1 ΡδМΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 6), консенсусной антигенной последовательности 2 ΡδМΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 8), консенсусной антигенной последовательности 1 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 10), консенсусной антигенной последовательности 2 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 12) или консенсусной антигенной последовательности Ρδί'Ά (δΕΟ ΙΌ N0: 14).

Белки могут иметь последовательности, на 99% гомологичные консенсусной антигенной последовательности 1 ΡδΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 2), консенсусной антигенной последовательности 2 ΡδΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 4), консенсусной антигенной последовательности 1 ΡδМΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 6), консенсусной антигенной последовательности 2 ΡδМΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 8), консенсусной антигенной последовательности 1 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 10), консенсусной антигенной последовательности 2 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 12) или консенсусной антигенной последовательности Ρδί'Ά (δΕΟ ΙΌ N0: 14).

Как отмечено выше, некоторые варианты воплощения содержат лидерную последовательность на Оконце. В некоторых вариантах воплощения лидерная последовательность представляет собой лидерную последовательность Ι§Ε, которая представляет собой δΕΟ ΙΌ N0: 16. В некоторых вариантах воплощения белковых последовательностей, предоставляемых здесь, δΕΟ ΙΌ N0: 16 удаляется из них. Подобным образом, в некоторых вариантах воплощения последовательностей нуклеиновых кислот, предоставляемых здесь, δΕΟ ΙΌ N0: 15 (которая кодирует δΕΟ ΙΌ N0: 16) удаляется из них.

Соответственно, некоторые варианты воплощения относятся к белку, который содержит сигнальный пептид, связанный с δΕΟ ΙΌ N0: 2, δΕΟ ΙΌ N0: 6 или δΕΟ ΙΌ N0: 10 взамен метионина на Оконце, упомянутого в формуле изобретения (кодирующая последовательность сигнального пептида обычно включает стартовый кодон, кодирующий метионин на Оконце). Некоторые варианты воплощения относятся к белку, который содержит сигнальный пептид, связанный с аминокислотами 19-131 из δΕΟ ΙΌ N0: 14. Некоторые варианты воплощения относятся к белкам, которые содержат сигнальный пептид, связанный с белком, на 98% гомологичным δΕΟ ΙΌ N0: 2, при условии, что сохранились аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из δΕ(') ΙΌ N0: 2. Некоторые варианты воплощения относятся к белкам, которые содержат сигнальный пептид, связанный с белком, на 98% гомологичным δΕΟ ΙΌ N0: 6, при условии, что сохранились аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из δΕΟ ΙΌ N0: 6. Некоторые варианты воплощения относятся к белкам, которые содержат сигнальный пептид, связанный с белком, на 98% гомологичным δΕΟ ΙΌ N0: 10. В каждом случае, если сигнальный пептид связан с ^концом, он связан взамен метионина на Оконце, упомянутого в формуле изобретения (кодирующая последовательность сигнального пептида обычно включает стартовый кодон, кодирующий метионин на Оконце). Некоторые вари- 11 027315 анты воплощения относятся к белку, который содержит сигнальный пептид, связанный с белком, на 98% гомологичным аминокислотам 19-131 из 5>ЕО ГО N0: 14. Некоторые варианты воплощения относятся к белку, который содержит сигнальный пептид, связанный с иммуногенным фрагментом 5>Е0 ГО N0: 2, содержащим аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 256 аминокислотным остаткам 5>Е0 ГО N0: 2, при условии, что сохранились аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из 5>Е0 ГО N0: 2. Некоторые варианты воплощения относятся к белку, который содержит сигнальный пептид, связанный с иммуногенным фрагментом 5>Е0 ГО N0: 6, содержащим аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 735 аминокислотным остаткам 5>Е0 ГО N0: 6, при условии, что сохранились аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из 5>Е0 ГО N0: 6. Некоторые варианты воплощения относятся к белку, который содержит сигнальный пептид, связанный с иммуногенным фрагментом 5>Е0 ГО N0: 10, содержащим аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 333 аминокислотным остаткам 5>Е0 ГО N0: 10. Некоторые варианты воплощения относятся к белку, который содержит сигнальный пептид, связанный с белком, который имеет сигнальный пептид, связанный с иммуногенным фрагментом аминокислот 19-131 из 5>Е0 ГО N0: 14, причем этот фрагмент содержит по меньшей мере 110 аминокислотных остатков 5>Е0 ГО N0: 14.

3. Г енетические последовательности, конструкты и плазмиды.

Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие консенсусные аминокислотные последовательности, были произведены для оптимизации стабильности и экспрессии у людей. Селекция кодонов определялась на основе ш!ег айа, стремления минимизировать внутримолекулярные взаимодействия и образование вторичной структуры, а также использования кодонов, которые приводят к усилению экспрессии. Вакцины могут содержать одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, которые кодируют одну или более консенсусных версий иммуногенных белков, выбранных из этой группы последовательностей, произведенных для оптимизации стабильности и экспрессии у людей. Были произведены последовательности нуклеиновой кислоты, включающие кодирующую последовательность для 1дЕ-лидера на 5' конце оптимизированной, консенсусной кодирующей последовательности нуклеиновой кислоты, которые кодировали белки, имеющие лидерную последовательность 1дЕ на Оконце консенсусной аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах воплощения последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует 1дЕ-лидер, представляет собой 5>ЕС ГО N0: 15

Предоставляются последовательности нуклеиновой кислоты, которые кодируют Консенсусную Антигенную последовательность 1 ΡδΑ (белковая последовательность 5>ЕС ГО N0: 2; последовательность нуклеиновой кислоты 5>ЕС ГО N0: 1), консенсусную антигенную последовательность 2 ΡδΆ (белковая последовательность 5ЕС ГО N0: 4; последовательность нуклеиновой кислоты 5ЕС ГО N0: 3), консенсусную антигенную последовательность 1 ΡδΜΑ (белковая последовательность 5ЕС ГО N0: 6; последовательность нуклеиновой кислоты, имеющая нуклеотиды 1-2250 из 5ЕС ГО N0: 5), консенсусную антигенную последовательность 2 ΡδΜΑ (белковая последовательность δΞρ ГО N0: 8; последовательность нуклеиновой кислоты, имеющая нуклеотиды 1-2301 из δΞρ ГО N0: 7), консенсусную антигенную последовательность 1 δΤΒΑΡ (белковая последовательность δΞρ ГО N0: 10; последовательность нуклеиновой кислоты δЕ^ ГО N0: 9), консенсусную антигенную последовательность 2 δΤΒΑΡ (белковая последовательность δЕ^ ГО N0: 12; последовательность нуклеиновой кислоты δЕ^ ГО N0: 11) или консенсусную антигенную последовательность ΡδΟΑ (белковая последовательность δЕ^ ГО N0: 14; последовательность нуклеиновой кислоты δЕ^ ГО N0: 13). Последовательность нуклеиновой кислоты δЕ^ ГО N0: 5, которая кодирует консенсусную антигенную последовательность 1 ΡδΜΑ, содержит, в дополнение к кодирующим ΡδΜΑ нуклеотидам, дополнительные 9 кодонов (27 нуклеотидов) непосредственно перед стоп-кодонами, которые кодируют маркер НА (ЪЕС ГО N0: 32), не показанный в δЕ^ ГО N0: 6. Маркер НА представляет собой пептидную последовательность, которая соответствует эпитопу вируса гриппа, используемому в числе прочего для обнаружения белковой экспрессии с использованием имеющихся в продаже антител против маркера НА. δЕ^ ГО N0: 5 кодирует δЕ^ ГО N0: 6 плюс дополнительно 9 аминокислот последовательности δЕ^ ГО N0: 32, связанной на своем Оконце с С-концом δЕ^ ГО N0: 6. В некоторых вариантах воплощения ΡδΜΑ-1 консенсусный антиген кодируется δЕ^ ГО N0: 5 и содержит белки, имеющие аминокислотную последовательность δЕ^ ГО N0: 6, связанную на своем С-конце с N концом δЕ^ ГО N0: 32. В некоторых вариантах воплощения ΡδΜΑ-1 Консенсусный антиген кодируется нуклеотидами 1-2250 из δЕ^ ГО N0: 5 и содержит белки, имеющие аминокислотную последовательность δЕ^ ГО N0: 6. Кодирующая последовательность, имеющая нуклеотиды 1-2250 из δЕ^ ГО N0: 5, имеет один или более стоп-кодонов на своем 3'-конце. Последовательность нуклеиновой кислоты δЕ^ ГО N0: 7, которая кодирует консенсусную антигенную последовательность 2 ΡδΜΑ, содержит, в дополнение к нуклеотидам, кодирующим сигнальный пептид 1дЕ, связанный с ΡδΜΑ, белок плюс дополнительные 9 кодонов (27 нуклеотидов) непосредственно перед стоп-кодонами, которые кодируют маркер НА (ЪЕС ГО N0: 32), не показанный в δΞρ ΙΌ N0: 8. δΞρ ΙΌ N0: 7 кодирует δΞρ ΙΌ N0: 8 плюс дополнительную 9 аминокислотную последовательность δΞρ ГО N0: 32, связанную на своем Оконце с С-концом δΞρ ГО N0: 8. В некоторых вариантах воплощения ΡδΜΑ-2 консенсусный антиген кодируется δΞρ ГО N0: 7 и содержит белки, имеющие аминокислотную последовательность δΞρ ГО N0: 8, сязанную на своем Сконце с ^концом δΞρ ГО N0: 32. В некоторых вариантах воплощения ΡδΜΑ-2 консенсусный антиген

- 12 027315 кодируется нуклеотидами 1-2301 из δΕΟ ГО N0: 7 и содержит белки, имеющие аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0: 8. Кодирующая последовательность, имеющая нуклеотиды 1-2301 из δΕΟ ГО N0: 7, имеет один или более стоп-кодонов на своем З'-конце.

Выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые имеют последовательности, на 98% гомологичные консенсусной антигенной последовательности 1 ΡδΑ (δΕΟ ГО N0: 2), при условии, что сохранились аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из 5>Е0 ГО N0: 2, консенсусной антигенной последовательности 2 ΡδΆ (δΕΟ ΙΌ N0: 4), при условии, что сохранились аминокислоты 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 из δΕΟ ΙΌ N0: 4, консенсусной антигенной последовательности 1 ΡδΜΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 6), при условии, что сохранились аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из δΕΟ ΙΌ N0: 6, консенсусной антигенной последовательности 2 ΡδΜΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 8), при условии, что сохранились аминокислоты 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 из δΕΟ ΙΌ N0: 8, консенсусной антигенной последовательности 1 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 10), консенсусной антигенной последовательности 2 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 12) или консенсусной антигенной последовательности Ρδί'Ά (δΕΟ ΙΌ N0: 14).

Выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые имеют последовательности, на 99% гомологичные консенсусной антигенной последовательности 1 ΡδΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 2), при условии, что сохранились аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из δΕΟ ΙΌ N0: 2, консенсусной антигенной последовательности 2 ΡδΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 4), при условии, что сохранились аминокислоты 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 из δΕΟ ΙΌ N0: 4, консенсусной антигенной последовательности 1 ΡδΜΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 6), при условии, что сохранились аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из δΕΟ ΙΌ N0: 6, консенсусной антигенной последовательности 2 ΡδΜΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 8), при условии, что сохранились аминокислоты 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 из δΕΟ ΙΌ N0: 8, консенсусной антигенной последовательности 1 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 10), консенсусной антигенной последовательности 2 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 12) или консенсусной антигенной последовательности Ρδί'Ά (δΕΟ ΙΌ N0: 14).

Выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые имеют последовательности, на 98% гомологичные последовательности, кодирующей консенсусную антигенную последовательность 1 ΡδΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 1), консенсусную антигенную последовательность 2 ΡδΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 3), консенсусную антигенную последовательность 1 ΡδΜΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 5 или предпочтительно нуклеотиды 1-2250 из δΕΟ ΙΌ N0: 5), консенсусную антигенную последовательность 2 ΡδΜΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 7 или предпочтительно нуклеотиды 1-2301 из δΕΟ ΙΌ N0: 7), консенсусную антигенную последовательность 1 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 9), консенсусную антигенную последовательность 2 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 11) или консенсусную антигенную последовательность Ρδί'Ά (δΕΟ ΙΌ N0: 13).

Выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые имеют последовательности, на 99% гомологичные последовательности, кодирующей консенсусную антигенную последовательность 1 ΡδΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 1), консенсусную антигенную последовательность 2 ΡδΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 3), консенсусную антигенную последовательность 1 ΡδΜΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 5 или предпочтительно нуклеотиды 1-2250 из δΕΟ ΙΌ N0: 5), консенсусную антигенную последовательность 2 ΡδΜΑ (δΕΟ ΙΌ N0: 7 или предпочтительно нуклеотиды 1-2301 из δΕΟ ΙΌ N0: 7), консенсусную антигенную последовательность 1 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 9), консенсусную антигенную последовательность 2 δΤΕΑΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 11) или консенсусную антигенную последовательность Ρδί'Ά (δΕΟ ΙΌ N0: 13).

Выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые содержат лидерную последовательность на Оконце. В некоторых вариантах воплощения молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать Ι§Ε лидерную последовательность, которая представляет собой δΕΟ ΙΌ N0: 16. В некоторых вариантах воплощения выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые содержат сигнальный пептид, связанный с δΕΟ ΙΌ N0: 2, δΕΟ ΙΌ N0: 6, или δΕΟ ΙΌ N0: 10 взамен метионина на Оконце, упомянутого в формуле изобретения (кодирующая последовательность сигнального пептида обычно включает стартовый кодон, кодирующий метионин на Оконце). В некоторых вариантах воплощения выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые содержат сигнальный пептид, связанный с аминокислотой 19-131 из δΕΟ ΙΌ N0: 14. В некоторых вариантах воплощения выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые содержат сигнальный пептид, связанный с белком, на 98% гомологичным δΕΟ ΙΌ N0: 2, при условии, что сохранились аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из δΕΟ ΙΌ N0: 2. В некоторых вариантах воплощения выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые содержат сигнальный пептид, связанный с белком, на 98% гомологичным δΕΟ ΙΌ N0: 6, при условии, что сохранились аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из δΕΟ ΙΌ N0: 6. В некоторых вариантах воплощения выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые содержат сигнальный пептид, связанный с белком, на 98% гомологичным δΕΟ ΙΌ N0: 10. В случае, если предоставляется кодирующая последовательность для сигнального пептида, сегнальный пептид связывается с пептидной последователь- 13 027315 ностью в месте метионина на Ν-конце, как указано при показе последовательностей (кодирующая последовательность сигнального пептида обычно включает стартовый кодон, кодирующий метионин на N конце). В некоторых вариантах воплощения выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые содержат сигнальный пептид, связанный с белком, на 98% гомологичным аминокислоте 19-131 из 8ЕО ГО N0: 14. В некоторых вариантах воплощения выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые содержат сигнальный пептид, связанный с иммуногенным фрагментом 8Е0 ГО N0: 2, содержащим аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 256 аминокислотным остаткам из 8Е0 ГО N0: 2, при условии, что сохранились аминокислоты 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 из 8Е0 ГО N0: 2. В некоторых вариантах воплощения выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые содержат сигнальный пептид, связанный с иммуногенным фрагментом 8Е0 ГО N0: 6, содержащим аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 735 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 6, при условии, что сохранились аминокислоты 14, 15, 32, 47, 58, 79,111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 из 8ЕО ГО N0: 6. 8 В некоторых вариантах воплощения выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые содержат сигнальный пептид, связанный с иммуногенным фрагментом из 8Е0 ГО N0: 10, содержащим аминокислоты, соответствующие по меньшей мере 333 аминокислотным остаткам 8Е0 ГО N0: 10. В некоторых вариантах воплощения выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут кодировать белки, которые содержат сигнальный пептид, связанный с белком, который имеет сигнальный пептид, связанный с иммуногенным фрагментом аминокислот 19-131 из 8Е0 ГО N0: 14, фрагментом, содержащим по меньшей мере 110 аминокислотных остатков 8Е0 ГО N0: 14.

В настоящем изобретении предоставляются генетические конструкты, которые могут содержать последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует раскрытый в настоящем изобретении консенсусный антиген простаты, включающий последовательности консенсусного белка, последовательности, гомологичные последовательностям консенсусного белка, фрагменты последовательностей консенсусного белка и последовательности, гомологичные фрагментам последовательностей консенсусного белка. Генетический конструкт может быть представлен в клетке как функционирующая внехромосомная молекула. Генетический конструкт может быть линейной минихромосомой, включающей центромер, теломеры или плазмиды или космиды.

Генетический конструкт также может быть частью генома рекомбинантного вирусного вектора, включая рекомбинантный аденовирус, рекомбинантный аденоассоциированный вирус и рекомбинантную вакцину. Генетический конструкт может быть частью генетического материала ослабленных живых микроорганизмов или рекомбинантных микробных векторов, которые живут в клетках.

Генетические конструкты могут содержать регуляторные элементы для генной экспрессии кодирующих последовательностей нуклеиновой кислоты. Регуляторные элементы могут быть промотором, энхансером, инициирующим кодоном, стоп-кодоном или сигналом полиаденилирования.

Последовательности нуклеиновых кислот могут составлять генетический конструкт, который может быть вектором. Вектор может быть способен к экспрессии антигена в клетке млекопитающего в количестве, эффективном для стимуляции иммунной реакции у млекопитающего. Вектор может быть рекомбинантным. Вектор может содержать гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген. Вектор может быть плазмидой. Вектор может использоваться для трансфекции клеток нуклеиновой кислотой, кодирующей антиген, когда трансформируемая клетка-носитель культивируется и содержится в условиях, при которых имеет место экспрессия антигена.

В некоторых вариантах воплощения кодирующие последовательности для одного консенсусного антигена простаты предоставляются в одном векторе. В некоторых вариантах воплощения кодирующие последовательности для нескольких консенсусных антигенов простаты предоставляются в одном векторе. В некоторых вариантах воплощения предоставляются составы, содержащие кодирующие последовательности для нескольких консенсусных антигенов простаты в нескольких векторах, либо один антиген на вектор, либо же несколько антигенов на вектор.

В некоторых вариантах воплощения кодирующие последовательности для двух или более различных консенсусных антигенов простаты могут предоставляться в единственном векторе. В некоторых вариантах воплощения кодирующие последовательности могут иметь раздельные промоторы, контролирующие экспрессию. В некоторых вариантах воплощения кодирующие последовательности могут иметь единственные промоторы, контролирующие экспрессию с 1КЕ8-последовательности, разделяющей кодирующую последовательность. Присутствие 1КЕ8-последовательности приводит к раздельной трансляции транскрипционного продукта. В некоторых вариантах воплощения кодирующие последовательности могут иметь единственные промоторы, контролирующие экспрессию с кодирующей последовательности, кодирующей протеолитически расщепляемую пептидную последовательность, разделяющую кодирующие последовательности антигенов. Производится единственный продукт трансляции, который затем обрабатывается протеазой, которая распознает сайт расщепления протеазой, для получения отдельных белковых молекул. Используемые сайты расщепления протеазой обычно распознаются протеазой, эндогенно присутствующей в клетке, в которой происходит экспрессия. В некоторых вариантах воплощения отдельная кодирующая последовательность для протеазы может быть включена для того, чтобы

- 14 027315 обеспечить образование протеазы, необходимой для обработки полипротеинового продукта трансляции. В некоторых вариантах воплощения векторы содержат кодирующие последовательности для одного, двух, трех, четырех, пяти, шести или всех семи консенсусных антигенов простаты.

В каждом отдельном случае, упомянутом в настоящем изобретении, кодирующие последовательности могут быть оптимизированы для стабильности и высоких уровней экспрессии. В некоторых случаях кодоны выбираются для уменьшения формирования вторичной структуры РНК, такой как та, которая формируется из-за внутримолекулярного связывания.

Вектор может содержать гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген, и может также содержать инициирующий кодон, который может находиться выше антигенной кодирующей последовательности, и стоп-кодон, который может находиться ниже антигенной кодирующей последовательности. Кодон инициации и терминации может находиться в одной рамке считывания с антигенной кодирующей последовательностью. Вектор также может содежать промотор, который функционально связан с антигенной кодирующей последовательностью. Промотор, функционально связанный с антигенной кодирующей последовательностью, может быть промотором из вируса обезьяны 40 (§У40), промотором вируса опухоли молочной железы мыши (ММТУ), промотором вируса иммунодефицита человека (Ηΐν), таким как промотор длинного концевого повтора (ЬТК) вируса иммунодефицита крупного рогатого скота (Βΐν), промотором вируса Молони, промотором вируса лейкоза птиц (АйУ), промотором цитомегаловируса (СМУй таким как СМУ предранний промотор, промотором вируса Эпштейна-Барра (ΕΒν), или промотором вируса саркомы Рауса (КБУ). Промотор также может быть промотором из человеческого гена, таким как человеческий актин, человеческий миозин, человеческий гемоглобин, человеческий мышечный креатин, или человеческий металлотионеин. Промотор также может быть тканеспецифичным промотором, таким как мышечный или кожный специфичный промотор, природным или синтетическим. Примеры таких промоторов описаны в публикации заявки на патент США И8 № 20040175727, содержание которой включено в настоящее изобретение во всей полноте.

Вектор также может содержать сигнал полиаденилирования, который может находиться ниже кодирующей последовательности консенсусного антигена простаты. Сигнал полиаденилирования может являться сигналом полиаденилирования §ν40, ЬТК сигналом полиаденилирования, сигналом полиаденилирования бычьего гормона роста (БОН), сигналом полиаденилирования гормона роста человека (ЬСН), или сигналом полиаденилирования человеческого β-глобина. δν40 сигнал полиаденилирования может быть сигналом полиаденилирования из рСЕР4 вектора (1иуйгодеи, §аи Ωίοβο. СА).

Вектор также может содержать энхансер выше кодирующей последовательности консенсусного антигена простаты. Энхансер может быть необходим для экспрессии ДНК. Энхансер может быть человеческим актином, человеческим миозином, человеческим гемоглобином, человеческим мышечным креатином или вирусным энхансером, таким как энхансер из СМУ, НА, Κδν или ΕΒν. Полинуклеотиды с функцией энхансера описаны в патенте США № 5593972, 5962428 и ^094/016737, содержание каждого полностью включено в настоящее изобретение посредством ссылки.

Вектор также может содержать точку начала репликации млекопитающих для того, чтобы поддерживать вектор экстрахромосомно и продуцировать множественные копии вектора в клетке. Вектор может представлять собой ρνΑΧΙ, рСЕР4 или рКЕР4 от 1иуйгодеи (§аи О1едо, СА), который может содержать точку начала репликации вируса Эпштейна-Барр и кодирующий участок ядерного антигена ΕΒΝΑ1, который может производить многокопийную эписомальную репликацию без интеграции. Основой вектора может быть ρΑν0242. Вектор может быть вектором на основе аденовируса типа 5, дефектного по репликации (Ай5).

Вектор также может содержать регуляторную последовательность, которая может подходить для генной экспрессии в клетке млекопитающего или человека, в которую введен вектор. Кодирующая последовательность консенсусного антигена простаты может содержать кодон, который может делать возможной более эффективную транскрипцию кодирующей последовательности в клетке-носителе.

Вектор может представлять собой р§Е420 (1иуйгодеи, §аи О1едо, Сайр), который может использоваться для производства белка в ЕксйейсЫа сой (Е. сой). Вектор также может представлять собой рУЕ§2 (1пу11годеп, §аи О1едо, СайГ.), который может использоваться для производства белка в дрожжевых штаммах Бассйаготусек сегеу181ае. Вектор также может представлять собой МАХВАС™ полную бакуловирусную систему экспрессии (1иу11годеи, §ап О1едо, СайГ.), которая может использоваться для производства белка в клетках насекомых. Вектор также может представлять собой ρс^NА I или ρс^NА3 (Ιηνί1годеи, §ап О1едо, СайГ.), который может использоваться для производства белка в клетках млекопитающих, таких как клетки яичников китайского хомячка (СНО). Вектор может векторами экспрессии или системами для производства белка с помощью рутинных способов и легко доступных исходных материалов, включая §атЬгоок е! а1., Мо1еси1аг С1ошпд апй ЬаЬога1огу Мапиа1, 8есопй Ей., Со1й 8ргшд Нагйог (1989), которая полностью включена сюда посредством ссылки.

Вакцины могут содержать один или более антигенов простаты, перечисленных в настоящем изобретении, и/или вакцины могут содержать одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, которые кодируют один или более консенсусных антигенов простаты, выбранных из этой группы. Вак- 15 027315 цины могут содержать один или более консенсусных антигенов простаты, перечисленных в настоящем изобретении, в комбинации с другими иммуногенными белками простаты с последовательностями, отличными от консенсусных последовательностей, раскрытых в настоящем изобретении, включая природные последовательности, и/или вакцины могут содержать одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, которые кодируют один или более консенсусных антигенов простаты, выбранных из этой группы, в комбинации с с молекулами нуклеиновой кислоты, которые кодируют другие антигены простаты с последовательности, отличными от консенсусных последовательностей, раскрытых в настоящем изобретении.

Не ограничиваясь рамками научной теории, вакцина, которую можно использовать для стимуляции полиспецифичной иммунной реакции (гуморальной, клеточной или обеих) против клеток рака простаты, может содержать одну или более из следующих последовательностей нуклеиновых кислот, которая кодирует один или более белков, выбранных из группы, состоящей из консенсусного Р8А антигена 1, консенсусного Р8А антигена 2, консенсусного Р8МА антигена 1, консенсусного Р8МА антигена 2, консенсусного 8ТЕАР антигена 1, консенсусного 8ТЕАР антигена 2 и консенсусного Р8СА антигена 1. Кодирующие последовательности могут также включать те, которые предоставлены в настоящем изобретении, которые содержат гомологичные последовательности, фрагменты и гомологичные последовательности фрагментов.

Некоторые варианты воплощения изобретения предоставляют способы получения иммунных реакций на клетки рака простаты, содержащие введение пациенту одного или более составов, которые совместно содержат одну или более кодирующих последовательностей или комбинаций, описанных в настоящем изобретении. Некоторые варианты воплощения предоставляют способы профилактического вакцинирования пациента от рака простаты, содержащие введение одного или более составов, которые вместе содержат одну или более кодирующих последовательностей или комбинацй, описанных в настоящем изобретении. Некоторые варианты воплощения предоставляют способы терапевтического вакцинирования пациента, имеющего рак простаты, которые содержат введение одного или более составов, которые вместе содержат одну или более кодирующих последовательностей или комбинаций, описанных в настоящем изобретении.

4. Фармацевтические составы.

В настоящем изобретении предоставляются фармацевтические составы в соответствии с настоящим изобретением, которые содержат от около 1 нг до около 10 мг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы в соответствии с настоящим изобретением содержат от и между: 1) по меньшей мере 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 100 нг, или по меньшей мере 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95,100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245,

250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350, 355,

360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 400, 405, 410, 415, 420, 425, 430, 435, 440, 445, 450, 455, 460, 465,

470, 475, 480, 485, 490, 495, 500, 605, 610, 615, 620, 625, 630, 635, 640, 645, 650, 655, 660, 665, 670, 675,

680, 685, 690, 695, 700, 705, 710, 715, 720, 725, 730, 735, 740, 745, 750, 755, 760, 765, 770, 775, 780, 785,

790, 795, 800, 805, 810, 815, 820, 825, 830, 835, 840, 845, 850, 855, 860, 865, 870, 875, 880, 885, 890, 895,

900, 905, 910, 915, 920, 925, 930, 935, 940, 945, 950, 955, 960, 965, 970, 975, 980, 985, 990, 995 или 1000 мкг, или по меньшей мере 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5; 4; 4,5; 5; 5,5; 6; 6,5; 7; 7,5; 8; 8,5; 9; 9,5 или 10 мг или более; и 2) выше и включая 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 100 нг, или выше и включая 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95,100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235,

240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345,

350, 355, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 400, 405, 410, 415, 420, 425, 430, 435, 440, 445, 450, 455,

460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495, 500, 605, 610, 615, 620, 625, 630, 635, 640, 645, 650, 655, 660, 665,

670, 675, 680, 685, 690, 695, 700, 705, 710, 715, 720, 725, 730, 735, 740, 745, 750, 755, 760, 765, 770, 775,

780, 785, 790, 795, 800, 805, 810, 815, 820, 825, 830, 835, 840, 845, 850, 855, 860, 865, 870, 875, 880, 885,

890, 895, 900, 905, 910, 915, 920, 925, 930, 935, 940, 945, 950, 955, 960, 965, 970, 975, 980, 985, 990, 995, или 1000 мкг, или выше и включая 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5; 4; 4,5; 5; 5,5; 6; 6,5; 7; 7,5; 8; 8,5; 9; 9,5 или 10 мг. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы в соответствии с настоящим изобретением содержат от около 5 нг до около 10 мг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы в соответствии с настоящим изобретением содержат от около 25 нг до около 5 мг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 50 нг до около 1 мг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 0,1 до около 500 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 1 до около 350 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 5 до около 250 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 10 до около 200 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 15 до около 150 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 20 до около 100 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содер- 16 027315 жат от около 25 до около 75 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 30 до около 50 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 35 до около 40 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 100 до около 200 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 10 мкг до около 100 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 20 мкг до около 80 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 25 мкг до около 60 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 30 нг до около 50 мкг ДНК. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 35 нг до около 45 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 0,1 до около 500 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 1 до около 350 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 25 до около 250 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения фармацевтические составы содержат от около 100 до около 200 мкг ДНК.

Фармацевтические составы в соответствии с настоящим изобретением разрабатываются в сответствии с используемым способом введения. В случаях, если фармацевтические составы являются инъецируемыми фармацевтическими составами, они являются стерильными, непирогенными и не сыпучими. Предпочтительно использовать изотонический состав. Обычно добавки для изотоничности могут включать хлорид натрия, декстрозу, маннит, сорбит и лактозу. В некоторых случаях предпочтительны изотонические растворы, такие как фосфатный буферный солевой раствор. Стабилизаторы включают желатин и альбумин. В некоторых вариантах воплощения к составу добавляется сосудосуживающее средство.

Предпочтительно фармацевтический состав представляет собой вакцину и более предпочтительно ДНК-вакцину.

Вакцина может быть ДНК-вакциной. ДНК-вакцина может содержать множество одинаковых или различных плазмид, содержащих нуклеиновую кислоту, кодирующую последовательности для одного или более консенсусных антигенов простаты. ДНК-вакцина может содержать одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, которые кодируют один или более консенсусных антигенов простаты. Если ДНК-вакцина содержит кодирующие последовательности более чем одного консенсусного антигена простаты, все такие последовательности могут быть представлены в единственной плазмиде, или каждая из таких последовательностей может быть представлена в различных плазмидах.

В некоторых вариантах воплощения вакцины могут содержать последовательности нуклеиновой кислоты, которые кодируют один или более консенсусных антигенов простаты в комбинации с одним или более консенсусными антигенами простаты.

ДНК-вакцины раскрыты в патентах США № 5593972, 5739118, 5817637, 5830876, 5962428, 5981505, 5580859, 5703055 и 5676594, которые включены в настоящее изобретение полностью посредством ссылки. ДНК-вакцина может дополнительно содержать элементы или реагенты, которые подавляют ее интеграцию в хромосому. Вакцина может быть РНК антигена простаты. РНК-вакцина может быть интродуцирована в клетку.

Вакцина может быть рекомбинантной вакциной, содержащей генетический конструкт или антиген, описанный выше. Вакцина также может содержать один или более консенсусных белков простаты в форме одной или более субъединиц белка, или одну или более ослабленных вирусных частиц, содержащих один или более консенсусных антигенов простаты. Ослабленная вакцина может быть ослабленными живыми вакцинами, убитыми вакцинами и вакцинами, которые используют рекомбинантные векторы для доставки чужеродных генов, которые кодируют один или более консенсусных антигенов простаты, а также субъединичной и гликопротеиновой вакциной. Примеры ослабленных живых вакцин, которые используют рекомбинантные векторы для доставки антигенов простаты, субъединичных и гликопротеиновых вакцин описаны в патентах США № 4510245; 4797368; 4722848; 4790987; 4920209; 5017487; 5077044; 5110587; 5112749; 5174993; 5223424; 5225336; 5240703; 5242829; 5294441; 5294548; 5310668; 5387744; 5389368; 5424065; 5451499; 5453364; 5462734; 5470734; 5474935; 5482713; 5591439; 5643579; 5650309; 5698202; 5955088; 6034298; 6042836; 6156319 и 6589529, каждый из которых включен в настоящее изобретение посредством ссылки.

Предоставляемая вакцина может быть использована для стимуляции иммунных реакций, включая терапевтические или профилактические иммунные реакции. Могут быть произведены антитела и/или киллерные Т-клетки, которые направлены на консенсусный антиген простаты. Такие антитела могут быть выделены.

Вакцина может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый наполнитель. Фармацевтически приемлемый наполнитель может быть функциональными молекулами, таким как связующие вещества, адъюванты, носители или растворители. Фармацевтически приемлемый наполнитель может быть способствующим трансфекции средством, которые могут включать поверхностно-активные средства, такие как иммуностимулирующие комплексы (IδС0Μδ), неполный адъювант Фрейнда, аналог ΕΡδ, включая монофосфорил-липид А, мурамилпептиды, аналоги хинона, везикулы, такие как сквален и сква- 17 027315 лен, гиалуроновая кислота, липиды, липосомы, ионы кальция, вирусные белки, полианионы, поликатионы или наночастицы, или другие известные способствующие трансфекции средства.

Способствующее трансфекции средство представляет собой полианион, поликатион, включая полиЬ-глутамат (ЬС8), или липид. Способствующее трансфекции средство представляет собой поли-Ьглутамат и более предпочтительно поли-Ь-глутамат присутствует в вакцине в концентрации менее чем 6 мг/мл. Способствующее трансфекции средство также может включать поверхностно-активные средства, такие как иммуностимулирующие комплексы (18СОМ8), неполный адъювант Фрейнда, аналог ЬР8, включая монофосфорил-липид А, мурамилпептиды, аналоги хинона и везикулы, такие как сквален и сквален, и гиалуроновая кислота также может использоваться, вводясь вместе с генетическим конструктом. В некоторых вариантах воплощения ДНК-векторные вакцины также могут включать способствующее трансфекции средство, такое как липиды, липосомы, включая лецитиновые липосомы, или другие липосомы, известные специалистам, такие как смесь ДНК-липосом (см., например, \У09324640), ионы кальция, вирусные белки, полианионы, поликатионы или наночастицы, или другие известные способствующие трансфекции средства. Предпочтительно способствующее трансфекции средство представляет собой полианион, поликатион, включая поли-Ь-глутамат (ЬС8) или липид. Концентрация трансфекционного средства в вакцине менее чем 4 мг/мл, менее чем 2 мг/мл, менее чем 1 мг/мл, менее чем 0,750 мг/мл, менее чем 0,500 мг/мл, менее чем 0,250 мг/мл, менее чем 0,100 мг/мл, менее чем 0,050 мг/мл, или менее чем 0,010 мг/мл.

Фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество может быть адъювантом. Адъювант может быть другими генами, которые экспрессируются в альтернативной плазмиде или доставляются как белки в комбинации с вышеупомянутой плазмидой в вакцине. Адъювант может быть выбран из группы, состоящей из α-интерферона (ΙΡΝ-α), β-интерферона (ΙΡΝ-β), γ-интерферона, тромбоцитарным фактором роста (ΡΌΟΡ), ФНОа, ФНОв, ГМКСФ, эпидермального фактора роста (ЭФР), кожного привлекающего Т-клетки хемокина(СТАСК), эпителиального экспрессируемого тимусом хемокина (ТЕСК), связанного со слизистыми оболочками эпителиального хемокина (МЕС), 1Ь-12, 1Ь-15, МНС, СЭ80, СЭ86, включая 1Ь-15, имеющий делецию сигнальной последовательности, и необязательно включая сигнальный пептид из 1дЕ. Адъювант может быть 1Ь-12, 1Ь-15, 1Ь-28, СТАСК, ТЕСК, тромбоцитарным фактором роста (ΡΌΟΡ), ФНОа, ФНОв, ГМКСФ, эпидермального фактора роста (ЭФР), 1Ь-1, 1Ь-2, 1Ь-4, 1Ь-5, 1Ь-6, 1Ь-10, 1Ь-12, 1Ь-18, или их комбинации.

Другие гены, которые могу быть пригодными адъювантами, включают те, которые кодируют МСР1, М1Р-1а, М1Р-1р, 1Ь-8, ΚΑΝΓΕ8, Ь-селектин, Р-селектин, Е-селектин, СЭ34, С1уСАМ-1, МабСАМ-1, ЬРА-1, УЬА-1, Мас-1, р150.95, РЕСАМ, 1САМ-1, 1САМ-2, 1САМ-3, СЬ2, ЬРА-3, М-С8Р, С-С8Р, 1Ь-4, мутантные формы Ш-18, СЭ40, СЬ40Ь, фактор роста сосудов, фактор роста фибробластов, 1Ь-7, фактор роста нервов, фактор роста эндотелия сосудов, Рак, рецептор ФНО, Ρΐΐ, Аро-1, р55, \У8Ь-1, ΌΚ3, ТКАМР, Аро-3, А1К, ЬАКО, ΝΟΒΕ, ΌΚ4, ΌΚ5, К1ЬЬЕК, ТКА1Ь-К2, ТК1СК2, ΌΚ6, Каспаза 1СЕ, Рок, с-.щп, 8р-1, Ар-1, Ар-2, р38, р65Ке1, М\О88, 1КАК, ТКАР6, 1кВ, неактивный ΝΙΙ<, 8АР К, 8АР-1, ЖК, гены интерферонной реакции, №кВ, Вах, ТКАШ, ТКАШтес, ТКАШтесОКС5, ТКА1Ь-К3, ТКА1Ь-К4, КАЯК, КАИК ЬЮАЫЭ, Ох40, Ох40 Ι.ΙΟΆΜλ МчСЫХ М1СА, М1СВ, ИКО2А, ИКО2В, ИКО2С, ИКО2Е, ИКО2Р, ТАР1, ТАР2 и их функциональные фрагменты.

Вакцина может дополнительно включать средство, улучшающее работу генетической вакцины, как описано в США Серийный Νο. 021579, поданном 1 апреля 1994, который полностью включен сюда посредством ссылки.

5. Способы доставки.

В настоящем изобретении предоставляется способ доставки фармацевтических лекарственных средств, предпочтительно вакцин, для предоставления генетических конструктов и консенсусного антигена простаты, который содержит эпитопы, делающие их особенно эффективными иммуногенами, к которым может быть вызвана иммунная реакция на раковые клетки простаты. Может предоставляться способ доставки вакцины, или вакцинации для стимуляции терапевтической и/или профилактической иммунной реакции. Вакцина может быть доставлена пациенту для модуляции активности иммунной системы млекопитающего и усиления иммунного ответа.

После доставки вакцины млекопитающему, и доставки вследствие этого вектора в клетки млекопитающего, трансфицированные клетки будут экспрессировать и секретировать соответствующий консенсусный белок простаты. Такие секретируемые белки, или синтетические антигены, будут распознаваться иммунной системой, которая разовьет иммунную реакцию, что может включать антитела к антигенам и Т-клеточную реакцию, специфичную к антигену. В некоторых примерах млекопитающее, вакцинированное вакцинами, обсуждаемыми здесь, будет иметь примированную иммунную систему. Вакцина может быть доставлена пациенту для модуляции активности иммунной системы пациента, тем самым усиливая иммунную реакцию.

Вакцина может быть доставлена в форме ДНК-вакцины, и способы доставки ДНК-вакцин описаны в патентах США № 4945050 и 5036006, которые полностью включены сюда посредством ссылки.

Вакцина может вводиться млекопитающему для получения иммунной реакции у млекопитающего.

- 18 027315

Млекопитающее может быть человеком, не являющимся человеком приматом, коровой, свиньей, овцой, козой, антилопой, бизоном, водяным буйволом, полорогим жвачным животным, оленем, ежом, слоном, ламой, альпакой, мышью, крысой или курицей, и предпочтительно человеком, коровой, свиньей или курицей.

а. Комбинированное лечение.

Фармацевтические составы, предпочтительно вакцины, могут вводиться в комбинации с одним или более других белков простаты или генов. Вакцина может вводиться в комбинации с белками или генами, кодирующими адъюванты, которые могут включать α-интерферон (ГОП-а), β-интерферон (^N-3), γинтерферон, ГО-12, ГО-15, ГО-28, СТАСК, ТЕСК, тромбоцитарный фактор роста (ΡΌ0Ρ), ФНОа, ФНО3, ГМКСФ, эпидермальный фактор роста (ЭФР), ГО-1, ГО-2, ГО-4, ГО-5, ГО-6, ГО-10, ГО-12, ГО-18, МСР-1, ΜΙΡ-1α. ΜΙΡ-1ρ, ГО-8, ΚΑ^Εδ, Ь-селектин, Р-селектин, Е-селектин, СЭ34. Ο1νί’ΛΜ-1. Μ;·ιύί'ΆΜ-1. ΌΡΑ1, νΣΑ-1, Μο-1, ρ150.95, ΡΕСΛΜ, ΚΑΜ-1, ΚΑΜ-2, ΚΑΜ-3, СЭ2, ΕΡΑ-3, Μ-СЗР, С-С8Р, ГО-4, мутантные формы ГО-18, СЭ40, СО40Ь, фактор роста сосудов, фактор роста фибробластов, ГО-7, фактор роста нервов, фактор роста эндотелия сосудов, Рак, ГОР рецептор, Ρ1ΐ, Αρο-1, р55, ^δΌ-1, ΌΚ3, ΤΚΑΜΡ, Αρο3, ΑΙΚ, ΕΑΚΌ, Κ0ΚΡ, ΌΚ4, ΌΚ5, ΚΙΙ,Ι,ΕΙΕ ΤΚΑΙΒ-Κ2, ΤΚΚΚ2, ΌΚ6, Каспазу ΙϋΕ, Ροκ, с-.)ип, δρ-1, Αρ-1, Αρ-2, ρ38, ρ65^1, ΜγΌ88, ΙΚΑΚ, ΤΚΑΡ6, ΙΚΒ, неактивный №Κ, δΑΡ Κ, δΑΡ-1, ГОК, гены реакции на интерферон, ПРкВ, Вах, ΤΚΑΙΕ, ΤΚΑΙΕκ^ ΤΚΛI^^ес^ΚС5, ΤΚΑΙΕ-Κ3, ΤΚΑΙΕ-Κ4, ΚΑλΚ, ΚΑΠΚ ЬЮΛN^. 0x40, 0x40 ΕΙΟ/ΑΜΕ \Κ0,2Ιλ ΜIСΑ, ΜIСВ, ΠΚ02Α, ΜΚ02Β, Ж02С, ΠΚ02Ε, ΠΚ02Ρ, ΤΑΡ1, или ТАР2, или их функциональные фрагменты.

б. Пути введения.

Вакцина может вводиться различными путями, включая пероральный, парентеральный, подъязычный, трансдермальный, ректальный, трансмукозальный, местно, посредством ингаляции, посредством буккального введения, внутриплеврально, внутривенно, внутриартериально, внутрибрюшинно, подкожно, внутримышечно, интраназально, интратекально, внутрисуставно или их комбинациями. Для ветеринарного использования состав может вводиться по ситуации как приемлемое лекарственное средство в соответствии с нормальной ветеринарной практикой. Ветеринар может легко определить режим дозирования и путь введения, который наиболее подходит для определенного животного. Вакцина может вводиться путем традиционной хирургии, приспособлений для безыгольной инъекции, пистолетов для баллистической трансфекции , или другими физическими способами, такими как электропорация (ЕР), гидродинамический способ, или ультразвук.

Вектор вакцины может доставляться млекопитающему с помощью нескольких хорошо известных технологий, включая ДНК-инъекцию (также называемую ДНК-вакцинацией) с электропорацией ίη νίνο и без нее, опосредованную липосомами, облегченную наночастицами, рекомбинантные векторы, такие как рекомбинантный аденовирус, рекомбинантный аденоассоциированный вирус и рекомбинантную вакцину. Антиген простаты может доставляться посредоством инъекции ДНК и вместе с электропорацией ίη νίνο.

в. Электропорация.

Введение вакцины посредством электропорации плазмид вакцины может осуществляться с использованием устройств для электропорации, которые могут быть настроены для доставки в желаемую ткань млекопитающего импульса энергии, эффективного для создания обратимых пор в клеточных мембранах, и в некоторых вариантах воплощения импульс энергии представляет собой постоянный ток, подобный заданному постоянному току, введенному пользователем.

В некоторых вариантах воплощения, где используется электропорация, устройство для электропорации может содержать электропорационный компонент и набор электродов или набор рукояток. Электропорационный компонент может включать в себя и содержать один или более различных элементов электропорационных устройств, включая контроллер, генератор кривой тока, прибор для измерения импеданса, регистратор формы волн, входной элемент, элемент отчета о состоянии, коммуникационный порт, компонент памяти, источник питания и сетевой выключатель. Элекропорация может проводиться с использованием ίη νίνο электропорационного устройства, например, системы СΕ^^ΕСΤΚΑ® ЕР (Ιηονίο ΡЬа^тасеиΐ^са15, ГОс., В1ие Ве11, ΡΑ) или электропоратора Ε1^η (Ιηονίο ΡЬа^тасеиΐ^са15, ГОс., В1ие Ве11, ΡΑ) для облегчения трансфекции клеток плазмидой.

Электропорационный компонент может функционировать как один элемент электропорационных устройств, а другие элементы являются отдельными элементами (или компонентами), связанными с электропорационным компонентом. Электропорационный компонент может функционировать как более чем один элемент электропорационных устройств, которые могут быть связаны с другими элементами электропорационных устройств, отдельными от электропорационного компонента. Элементы электропорационных устройств, существующие как части одного электромеханического или механического устройства, могут быть не ограничены как элементы, которые могут функционировать как одно устройство или как раздельные элементы, передающие друг другу информацию. Электропорационный компонент может быть способен доставлять импульс энергии, который производит постоянный ток в желаемой ткани, и включает механизм обратной связи. Набор электродов может включать комплект электродов,

- 19 027315 имеющий множество электродов, определенным образом расположенных в пространстве, где набор электродов получает импульс энергии от электропорационного компонента и доставляет его желаемой ткани через электроды. По меньшей мере один из множества электродов нейтрален во время доставки импульса энергии и измеряет импеданс в желаемой ткани и осуществляет связь импеданса с электропорационным компонентом. Механизм обратной связи может получить измеренный импеданс и может отрегулировать импульс энергии, доставленный электропорационным компонентом для поддержания постоянного тока.

Множество электродов может доставлять импульс энергии децентрализованным образом через контроль электродов программируемой последовательностью, и программируемая последовательность вводится ползователем в электропорационный компонент. Программируемая последовательность может содержать множество импульсов, доставляемых в последовательности, где каждый импульс из множества импульсов доставляется по меньшей мере двумя активными электродами с одним нейтральным электродом, который измеряет импеданс, и где последующий импульс множества импульсов доставлется одним другим из по меньшей мере двух активных электродов с одним нейтральным электродом, который измеряет импеданс.

Механизм обратной связи может осуществляться или с помощью аппаратуры, или с помощью программного обеспечения. Механизм обратной связи может осуществляться аналоговой системой управления с обратной связью. Обратная связь происходит каждые 50, 20, 10 или 1 мкс, но предпочтительна обратная связь в режиме реального времени или мгновенно (то есть по существу мгновенно, как определяется доступными способами для определения времени реакции). Нейтральный электрод может измерять импеданс желаемой ткани и передает импеданс механизму обратной связи, и механизм обратной связи реагирует на импеданс и регулирует импульс энергии для поддержания значения постоянного тока, подобного заданному. Механизм обратной связи может поддерживать постоянный ток безостановочно и незамедлительно во время доставки импульса энергии.

Примеры электропорационных устройств и электропорационных способов, которые могут способствовать доставке ДНК-вакцин настоящего изобретения, включают те, которые описаны в патенте США № 7245963, принадлежащем ИгадЫа-Лкй, с1 а1., патента США 2005/0052630, представленной 8шКЬ, с1 а1., содержание которых включено сюда во всей полноте посредством ссылки. Другие электропорационные устройства и электропорационные способы, которые могут быть использованы для улучшения доставки ДНК-вакцин, включают те, которые предоставлены в совместно поданной и находящейся в совместной собственности Заявке на Патент США, Серийный № 11/874072, поданной 17 октября 2007 г., которая утверждает приоритет по 35 И8С 119(е) согласно предварительным заявкам США Сер. № 60/852149, поданной 17 октября 2006 г., и 60/978982, поданной 10 октября 2007 г., все из которых сюда включены во всей полноте.

Патент США № 7245963, принадлежащий ИгадПа-АкБ, с1 а1., описывает модульные системы электродов и их использование для улучшения внедрения биомолекулы в клетки выбранной ткани в организме животного или растения. Модульные системы электродов могут содержать множество игольных электродов; подкожную иглу; электрический разъем, который предоставляет электропроводящее соединение от программируемого контроллера импульса постоянного тока ко множеству игольных электродов; и источник питания. Оператор может управлять множеством игольных электродов, которые смонтированы на опорной структуре, прочно вставляя их в выбранную ткань в организме животного или растения. Биомолекулы затем доставляются посредством подкожной иглы в выбранную ткань. Программируемый импульсный контроллер постоянного тока активируется и электрический импульс постоянного тока используется во множестве игольных электродов. Используемый электрический импульс постоянного тока способствует интродукции биомолекулы в клетку между множеством электродов. Полное содержание патента США № 7245963 включено сюда посредством ссылки.

Патент США 2005/0052630, представленный 8ιηί11ι. с1 а1., описывает электропорационное устройство, которое может быть использовано для эффективного улучшения интродукции биомолекулы в клетки выбранной ткани в организме животного или растения. Электропорационное устройство содержит электрокинетическое устройство (ΕΚΌ устройство), работа которого определяется программным обеспечением или аппаратурой. ΕΚΌ устройство производит серии программируемых паттернов импульса постоянного тока между электродами в порядке, основанном на контроле пользователя и вводе параметров импульса, и делает возможным хранение и получение данных о форме волн тока. Электропорационное устройство также содержит заменяемый электродный диск, имеющий комплект игольных электродов, центральный инъекционный канал для инъекционной иглы, и съемную установочную шайбу. Полное содержание патента США 2005/0052630 включено сюда посредством ссылки.

Электродные комплекты и способы, описанные в патенте США № 7245963 и патента США 2005/0052630, могут быть адаптированы для глубокого проникновения не только в мышечные ткани, но также в другие ткани или органы. В зависимости от конфигурации электродного комплекта, инъекционная игла (для доставки биомолекулы по выбору) также вводится полностью в целевой орган, и инъекция делается перпендикулярно целевой ткани, в область, которая предварительно намечена электродами. Электроды, описанные в патенте США № 7245963 и патента США 2005/005263, предпочтительны 20 мм

- 20 027315 в длину и 21 размера.

Кроме того, рассмотренные в некоторых вариантах воплощения, включающие в себя электропорационные устройства и их использование, существуют электропорационные устройства, которые описаны в следующих патентах: патент США 5273525, опубликованный 28 декабря 1993 г., патент США 6110161, опубликованный 29 августа 2000 г., 6261281, опубликованный 17 июля 2001 г., и 6958060, опубликованный 25 октября 2005 г., и патент США 6939862, опубликованный 6 сентября 2005 г. Кроме того, в настоящем изобретении рассмотрены патенты, распространяющиеся на объект изобретения, предоставляемый в патенте США 6697669, опубликованном 24 февраля 2004 г., который относится к доставке ДНК с использованием любого из множества устройств, и патенте США 7328064, опубликованном 5 февраля 2008 г., который относится к способу инъекции ДНК. Вышеперечисленные патенты включены сюда во всей полноте посредством ссылки. Другой вариант воплощения электропорационного устройства для использования с раковыми антигенами, описанными в настоящем изобретении, представляет собой Е1деп ЕР устройство (Ιηονίο РЬагтасеийса1к, 1пс., В1ие Ве11, РА).

г. Способ приготовления вакцины.

В настоящем изобретении предоставляются способы приготовления ДНК-плазмид, которые содежат ДНК-вакцины, описанные в настоящем изобретении. ДНК-плазмиды, после конечного этапа субклонирования в плазмиду экспрессии млекопитающего, могут быть использованы для инокулирования клеточной культуры в резервуаре для крупномасштабной ферментации, с использованием способов, известных специалистам.

ДНК-плазмиды для использования с ЕР устройствами настоящего изобретения могут быть поставлены или произведены с использованием комбинации известных устройств и способов, но предпочтительно они производятся с использованием оптимизированного способа производства плазмид, который описан в составляющей предмет лицензии, совместно поданной предварительной заявке США Серийный № 60/939792, которая была подана 23 мая 2007 года. В некоторых примерах плазмиды ДНК, используемые в этих исследованиях, могут быть поставлены в концентрациях, более чем или эквавалентных 10 мг/мл. Технология производства также включает или содержит в себе различные устройства и протоколы, которые хорошо известны средним специалистам в данной области техники, в дополнение к тем, которые описаны в США серийный № 60/939792, включая описанные в составляющем предмет лицензии патенте,

Патент США № 7238522, который был опубликован 3 июля 2007 г. Заявка и патент, на которые ссылаются выше, США серийный № 60/939792 и патент США № 7238522, соответственно, включены сюда во всей полноте.

Примеры

Настоящее изобретение дополнительно иллюстрируется в следующих примерах. Следует понимать, что эти примеры, хотя и указывают на предпочтительные варианты воплощения изобретения, даются только для иллюстрации. Из вышеследующего обсуждения и этих примеров специалист в данной области техники может установить необходимые характеристики этого изобретения, и без отхода от сущности и объема изобретения может внести различные изменения и модификации в изобретение для адаптации его к различным вариантам использования и условиям. Таким образом, различные модификации изобретения в дополнение к тем, которые показаны и описаны в настоящем изобретении, будут очевидны специалистам в данной области техники из нижеследующего описания. Предполагается также, что такие модификации попадают в объем прилагаемой формулы изобретения.

Пример 1.

Консенсусные иммуногены для Р8А и Р8МА были сконструированы из доступных полной длины последовательностей человека и макак в базе данных ОепВапк, как описано ранее Ьаййу, И.Е, Уап, 1., СогЬй!, Ν, КоЬака, И., КоЬшдег, О.Р., ХУетег, И.В. (2007). ПнншподешсПу оГ ηονе1 сопзепкик-Ьакей ИУА \'асстек адатк! аν^аη тПиеп/а. Уассше. 25, 2984-2989, и Ьаййу, И.Е, Уап, 1., Кн1/1ег, М., КоЬака, И., КоЬшдег, О.Р., КЬап, А.8., ОгеепЬоике, 1., 8агйекаг КУ., ИгадЫа-АкП, К., ХУешег, И.В. (2008). НеЮгокиЬ1урю Рго!есйоп адашк! РаШодетс Нитап апй А\аап 1пГ1неп/а Уникек \аа 1п Ушо Е1ес!горогайоп оГ 8уп1ЬеИс Сопкепкик ИУА Апйдепк. РЬо8 0ИЕ. 3,е2517.

Консенсусные антигенные последовательности были синтезированы при помощи Сепе8спр1 (Р1кса1а\уау, N1). Маркер НА был включен в С-конец антигенной последовательности. Антигенные последовательности были оптимизированы по стабильности мРНК и использованию кодонов у людей. Итоговые последовательности клонировались в ВатН1 и ХЬо1 сайтах рУАХ1 вектора Оптагодеп, Сат1кЬай, СА).

Был произведен консенсусный Р8А антиген 1 (8ЕО ГО N0: 2). Эта последовательность, которая содержит 261 аминокислоту, сравнивалась с каждой из Р8А последовательностей, перечисленных в табл. 1. Использованные Р8А последовательности включают две последовательности человека, последовательность из М. ГаксюЫапк, и последовательность из М. ти1айа. Табл. 1 включает 8ЕО ГО N0 и номер доступа для каждой последовательности, использованной при сравнении с консенсусным Р8А антигеном 1 (8ЕС ГО N0: 2).

- 21 027315

ЗЕО	Виды и белок	Номер доступа	Количество	Таблица 1 %
ΙΡΝΟ			аминокислот	гомологии с
				8Ε0ΙΡ
				N0:2
17	Н. 8ар1еп8 ΡδΑ Ϊ8θ1	ΝΡ001639.1	261	91
18	Н. 8ар1еп8 РЗА	§ЬААА60193.1	262	91
19	М. 1а8с1си1ап8 КЕКЗ	ζ)6ΡΤ45.1	261	95
20	М. ши1а11а РЗА	ΝΡΟΟ1036241.1 р	261	96

Было осуществлено множественное выравнивание Ρ8Ά последовательностей Н. Вар1епз (ВЕР ГО N0: 17 и ВЕР ГО N0: 18), Μ. ши1айа (ВЕР ГО N0: 20) и М. £ас1си1апз (ВЕР ГО N0: 19) с консенсусным ΡΒΑ антигеном 1 (ВЕР ГО N0: 2). КЬК3 (калликреин 3) представляет собой ген, кодирующий ΡΒΑ и являющийся псевдонимом ΡΒΑ. ΡΒΑ антиген 1 на 91% гомологичен Н. зар1епз, на 96% гомологичен М. ши1айа и на 95% гомологичен М. £ас1си1апз ΡΒΑ белковым последовательностям полной длины.

Пример 2.

Был произведен консенсусный ΡΒΑ антиген 2 (ВЕР ГО N0: 4). Эта последовательность, которая содержит 279 аминокислот, включая лидерную последовательность 1дЕ, сравнивалась с каждой из ΡΒΑ последовательностей, перечисленных в табл. 2. Использованные ΡΒΑ последовательности включают две последовательности человека, последовательность из М. £азс1си1апз и последовательность из М. тн1а11а. Табл. 2 включает ВЕР ГО N0 и номер доступа для каждой последовательности, использованной при сравнении с консенсусным ΡΒΑ антигеном 2 (ВЕР ГО N0: 4).

8Е0 Виды и белок Номер доступа

ΙΡΝΟ

17	Н. 8ар1еп8 Р8А Ϊ8θ1	ΝΡ001639.1
18	Н. 8ар1еп8 РЗА	§ЬААА60193.1
19	М. 1а8С1си1аг18 КЕКЗ	Р6РТ45.1
21	М. ши1а11а РЗА	ΑΑΖ82258.1

Таблица 2

Количество	%
аминокислот	гомологии с 8Ε0ΙΡ N0:4
261	91
262	90
261	95
244	95

Было осуществлено множественное выравнивание ΡΒΑ последовательностей Н. Вар1епз (ВЕР ГО N0: 17 и ВЕР ГО N0: 18), М. ти1а11о (ВЕР ГО N0: 21) и М. £ас1си1апз (ВЕР ГО N0: 19) с консенсусным ΡΒΑ антигеном 1 (ВЕР ГО N0: 4). КЬК3 (калликреин 3) представляет собой ген, кодирующий ΡΒΑ и являющийся псевдонимом ΡΒΑ. ΡΒΑ антиген 1 на 90-91% гомологичен Н. зар1епз и на 95% гомологичен М. £ас1си1аг18, и на 95% гомологичен М. ти1а!1а ΡΒΑ частичной белковой последовательности.

Пример 3.

Был произведен консенсусный ΡΒΜΑ антиген 1 (ВЕР ГО N0: 6). Эта последовательность, которая содержит 750 аминокислот, сравнивалась с каждой из ΡΒΜΑ последовательностей, перечисленных в табл. 3. Использованные ΡΒΜΑ последовательности включают две последовательности человека и последовательность из М. ти1аНа. Табл. 3 включает ВЕР ГО N0 и номер доступа для каждой последовательности, использованной при сравнении с консенсусным ΡΒΜΑ антигеном 1 (ВЕР ГО N0: 6).

Таблица 3

Номер доступа

8Е0 Виды и белок ΙΡΝΟ

Количество % аминокислот гомологии с

8Ε0ΙΡ

22	Н. 8ар1еп8 Р8МА ОСРП_18о1	ΝΡ_004467.1	750	N0:6 96
23	Н. 8ар1еп8 Р8МА	ААС83972.1	749	96
24	М. ши1а11а ОСРП Ϊ8θ1	ХР-001096141.2	735	94

Было осуществлено множественное выравнивание ΡΒΜΑ последовательностей Н. Вар1епз и М. ти1а11а с ΡΒΜΑ антигеном 1. ΡΒΜΑ антиген 1 консенсусная последовательность (ВЕР ГО N0: 6) на 96% гомологична Н. зар1епз ΡΒΜΑ (ВЕР ГО N0: 22 и ВЕР ГО N0: 23) и на 94% гомологична М. ти1а1£а ΡΒΜΑ белковой последовательности полной длины (ВЕР ГО N0: 24).

- 22 027315

Пример 4.

Был произведен консенсусный ΡδΜΑ антиген 2 (δΕρ ΙΌ N0: 8). Эта последовательность, которая содержит 766 аминокислот, включая лидерную последовательность Ι§Ε, сравнивалась с каждой из ΡδΜΑ последовательностей, перечисленных в табл. 4. Использованные ΡδΜΑ последовательности включают две последовательности человека и последовательность из М. ши1а11а. Табл. 4 включает δΕρ ΙΌ N0 и номер доступа для каждой последовательности, использованной при сравнении с консенсусным ΡδΜΑ антигеном 2 (δΕρ ΙΌ N0: 8).

5Е0	Виды и белок	Номер доступа	Количество	Таблица 4 %
ΌΝΟ			аминокислот	гомологии с
				ЗЕО ГО
				N0:8
22	Н. §ар1еп§ ΡδΜΑ ОСРП_1§о1	ΝΡ_004467.1	750	96
23	Н. §ар1еп§ ΡδΜΑ	ААС83972.1	749	96
24	М. ши1а11а ОСРП ϊδοί	ХР_001096141.2	735	94
25	М. ши!а11а ОСРП ί§ο2	ХР_002799784.1	704	94

Было осуществлено множественное выравнивание Н. 8ар1еп§ (δΕρ ΙΌ N0: 22 и δΕρ ΙΌ N0: 23) и М. ши1аИа ΡδΜΑ последовательностей (δΕρ ΙΌ N0: 24 и δΕρ ΙΌ N0: 25) с ΡδΜΑ антигеном 2. ΡδΜΑ антиген 2 консенсусная последовательность (δΕρ ΙΌ N0: 8) на 96% гомологична Н. §ар1еп§ ΡδΜΑ белковым последовательностям и на 94% гомологична М. ши1а11а ΡδΜΑ белковым последовательностям.

Пример 5.

Был произведен консенсусный δΤΕΑΡ антиген 1 (δΕ(1 ΙΌ N0: 10). Эта последовательность, которая содержит 339 аминокислот, сравнивалась с каждой из δΤΕΑΡ последовательностей, перечисленных в табл. 5. Использованные δΤΕΑΡ последовательности включают две полной длины последовательности человека, полной длины последовательность из М. ши1аИа и две более коротких последовательности человека. Табл. 5 включает δΕρ ΙΌ N0 и номер доступа для каждой последовательности, использованной при сравнении с консенсусным δΤΕΑΡ антигеном 1 (δΕρ ΙΌ N0: 10).

				Таблица 5
ЗЕО ГО N0	Виды и белок	Номер доступа	Количество аминокислот	% гомологии с 3ΕΟΙΟ N0:10
26	Н. 8ар1еи8 δΤΕΑΡ 1	ΝΡ_036581.1	339	99
27	Н. 8ар1еиз δΤΕΑΡ 1	Ο6_ΕΑΌ24167.1	339	99
28	М. ши1аИа δ ТЕ АР 1	ХР_001103605.1	339	98
29	Н. §ар1еп8 δΤΕΑΡ 1 СКА Ь	ЕА\У93751.1	259	94
30	Н. зар1епз δΤΕΑΡ 1 изоформа	ΕΑλΥ93749.1	258	94

Было осуществлено множественное выравнивание Н. δ;η^'η8 и М. ши1аИа δΤΕΑΡ последовательнсотей с консенсусным δΤΕΑΡ антигеном 1. δΤΕΑΡ антиген 1 консенсусная последовательность (δΕ(1 ΙΌ N0: 10) на 99% гомологична человеческим полной длины изоформам (δΕρ ΙΌ N0: 26 и δΕρ ΙΌ N0: 27), на 94% гомологична укороченным Н. 8ар1еп§ изоформам (δΕρ ΙΌ N0: 29 и δΕρ ΙΌ N0: 30), и на 94% гомологична М. ши1а11а полной длины δΤΕΑΡ1 белковой последовательности (δΕρ ΙΌ N0: 28).

Пример 6.

Был произведен консенсусный δΤΕΑΡ антиген 2 (δΕ(1 ΙΌ N0: 12). Эта последовательность, которая содержит 356 аминокислот, сравнивалась с каждой из δΤΕΑΡ последовательностей, перечисленных в табл. 6. Используемые δΤΕΑΡ последовательности включают две полной длины последовательности человека, полной длины последовательность из М. ши1айа и две более коротких последовательности человека. Табл. 6 включает δΕρ ΙΌ N0 и номер доступа для каждой последовательности, использованной при сравнении с консенсусным δΤΕΑΡ антигеном 2 (δΕρ ΙΌ N0: 12).

- 23 027315

ЗЕО	Виды и белок	Номер доступа	Количество	Таблица 6 %
ГО N0			аминокислот	гомологии с 5Е0ГО N0:12
26	Н. 8ар1еп§ ЗТЕАР1	ΝΡ_036581.1	339	94
27	Н. §ар1еп8 8ТЕАР1	ОЬ_ЕАЕ24167.1	339	94
28	М. ти1аНа 5ТЕАР1	ХР_001103605.1	339	94
29	Н. 8ар1епк ЗТЕАР1 СКА Ь	ЕААУ93751.1	259	88
30	Н. 8ар1епк 8ТЕАР1 изоформа	ΕΑλ¥93749.1	258	88

Было осуществлено множественное выравнивание Н. δαρίοπδ и М. ти1аИа δΤΕΑΡ1 последовательностей с консенсусным δΤΕΑΡ1 антигеном 2. δΤΕΑΡ1 антиген 2 консенсусная последовательность (δΕ^ ГО N0: 12) на 94% гомологична полной длины человеческим изоформам (δΕ^ ГО N0: 26 и δΗΟ ГО N0: 27), на 88% гомологична укороченным Н. δαρίοπδ изоформам (δΕ^ ГО N0: 29 и δΗ) ГО N0: 30), и на 94% гомологична М. ши1айа полной длины δΤΕΑΡ 1 белковым последовательностям (δΕ^ ГО N0: 28).

Пример 7.

Был произведен консенсусный ΡδΟΑ антиген (δΕ^ ГО N0: 14). Эта последовательность, которая содержит 131 аминокислоту, включая лидерную последовательность ΙβΕ, сравнивалась с ΡδΟΑ последовательностью, указанной в табл. 7. Используемая ΡδΟΑ последовательность была человеческой последовательностью полной длины. Табл. 7 включает δΗ) ГО N0 и номер доступа для последовательности, использованной при сравнении с консенсусным ΡδΟΑ антигеном (δΕ^ ГО N0: 14).

Таблица 7

ЗЕО ГО N0	Виды и белок	Номер доступа	Количество аминокислот	% гомологии с 8Е0ГО N0:14
31	Н. §ар1еп§ Р8СА	ΝΡ_005663.2	114	87

Было произведено множественное выравнивание Н. δаρ^еηδ ΡδΟΑ последовательности (δΕ^ ГО N0: 31) с консенсусным ΡδΟΑ антигеном (δΕ^ ГО N0: 14). ΡδΟΑ антигенная консенсусная последовательность на 87% гомологична полной длины Н. δаρ^еηδ ΡδΟΑ.

Пример 8.

Ιη νΐΐΐΌ трансляция проводилась для подтверждения экспрессии ΡδΑ и ΡδΜΑ антигенов. Использовались ΤΠΤ® сопряженная система транскрипции /трансляции и 35δ-метионин (Егошеда). ρνΑΧ вектор сам по себе (отрицательный контроль) или каркас ρνΑΧ с ΡδΑ или ΡδΜΑ антигенными вставками и 35δ-метионин был добавлен к реакционной смеси в соответствии с инструкциями производителя. Реакция проводилась при 30°С в течение 2 ч. Меченые белки иммунопреципитировались с аффинным гелем против НА (апй-ΗΑ ΑΕΕϊηϊΐγ Ое1) ^1§ша, δΐ. Εουίδ, МО) при перемешивании в течение ночи в в буфере для радиоиммунопреципитационного анализа (ΚΙΡΑ) при 4°С. Иммунопреципитированные белки подвергались электрофорезу в ДСН-ПААГ, который затем фиксировался и высушивался. Экспрессия 35δмеченых белков определялась путем авторадиографии. Результаты показаны на фиг. 1.

Пример 9.

Клеточная иммуногенность ΡδΑ и ΡδΜΑ антигенов определялась с помощью интерферон-гамма ΕΕΙδροΐ.

Самки мышей в возрасте от 4 до 6 недель ΒΑΕΒ/с были приобретены у Лабораторий 1аекзоп (Ваг НагЬог, ΜΕ). Все животные содержались в Университете Пенсильвании в условиях с контролируемой температурой и световым циклом. Уход за животными проводился в соответствии с руководствами Национального института здоровья и Комитета университета Пенсильвании по институционному уходу и использованию.

Для исследований по клеточной иммуногенности 10 или 20 мкг каждого антигена доставлялось в переднюю болыпеберцовую мышцу мышей Ва1Ь/с посредством внутримышечной инъекции, после чего следовала электропорация с использованием ΟΕΕΕΕΟΤΚΑ® адаптивного устройства постоянного тока (Ιηονΐο Ρйа^тасеиΐ^са1δ, Нс., В1ие Ве11, ΡΑ). Мыши (п=5 на группу) получали 2 иммунизации в недели 0 и 2. Два 0,1 ампер постоянного тока прямоугольных импульсов доставлялись посредством треугольного 3электродного комплекта, состоящего из твердых электродов из нержавеющей стали 26 размера. Каждый импульс продолжался 52 мс с промежутком в 1 с между импульсами. Мыши получили всего 2 иммунизации, которые вводились с промежутком 2 недели. Мыши были гуманно забиты через 1 неделю после второй иммунизации для анализа клеточных и гуморальных иммунных реакций.

- 24 027315

Клеточные и реакции оценивались через 1 неделю после последней иммунизации (неделя 5). ЕЫ8ро1 анализ использовался для определения антиген-специфичной секреции ГРИу. Иммобилизованное антитело против ГРИу мыши (Κ&Ό 8у51ст5. М1ппеароЙ8, МИ) использовалось для покрытия плоскодонных планшетов 1ттоЫ1оп-Р (МЛНроге, ВШепса, МА) на ночь при 4°С. Спленоциты были стерильно выделены и ресуспендированы при в К10 среде (Ко5е\уе11 Рагк Мешопа1 1п8Йи1е теЛшт 1640 с добавкой 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 1% антибиотика-антимикотика и 0,1% 2-меркаптоэтанола). 2х10⁵спленоцитов из иммунизированных мышей были добавлены к каждой лунке 96-луночного планшета и стимулировались в течение ночи при 37°С, 5% СО₂, в присутствии К10 (отрицательный контроль), конканавалина А (положительный контроль) (81дта, 8ΐ. Ьошк, МО) или антиген-специфичных пептидных пулов. На следующий день идентифицирующее антитело против ШЫу мыши (Κ&Ό 8у51ет5, МитеароПк, МИ) было добавлено в планшеты, которые затем инкубировались в течение ночи при 4°С. На следующий день стрептавидин-АЬР (МаЬТесЬ, 8\уеЛеп) был добавлен к планшетам на 2 ч и антигенспецифичные метки визуализировались с ВСЛР/ИРТ субстратом (МаЬТесЬ, 8\уеЛеп). Р8А и Р8МА пептиды были 15-членными пептидами, распределенными о всей длине консенсусного иммуногена, не включая маркер НА или лидерную последовательность, перекрывающимися на 11 аминокислот, и синтезировались при помощи Сеп8спр1 (Р15са1а\уау, N1). Р8А и Р8МА пептиды были использованы в конечной концентрации 1,0 мкг/мл для каждого пептида. ШЫу ЕЬ18ро! использовался для оценки антигенспецифичных клеточных реакций через 1 неделю после последней иммунизации. Для Р8А, ШЫу реакции были подобны дозам вакцины 10 мкг (772,2±138,2 СОЕ) и 20 мкг (771,1±155,2 СОЕ) (фиг. 2А). Напротив, было дозозависимое возрастание Р8МА-специфичных РИу реакций с 20 мкг вакцины (1585,0±194,0 8РИ) в сравнении с 10 мкг вакцины (1047,2±160,7 8РИ) (фиг. 2В). Минимальный фон наблюдался для Р8А или Р8МА реакций наивных мышей.

Пример 10.

Вакцино-индуцированная продукция ГРИу, 1Ь-2 и ФНО а СЭ4+ и СЭ8+ Т клетками.

Клеточная иммуногенность также была охарактеризована посредством проточной цитометрии для совместно доставленных Р8А и Р8МА вакцин. Антиген-специфичная продукция СЭ4+ и СЭ8+ Т клетками ГРИу, 1Ь-2 и ФНОа определялась для совокупной вакцин-специфичной реакции и Р8А и Р8МА компонентов совокупной вакцин-специфичной реакции (п=5).

Клеточные иммунные реакции также определялись с помощью внутриклеточного окрашивания цитокинов и проточной цитометрии с использованием Су1оР|х/Су1оРегт набора по инструкциям производителя (ΒΌ Вюкшепсек, 8ап П1едо, СА). Спленоциты, собранные от иммунизированных мышей, промывались РВ8 и затем ресуспендировались в К10 среде до конечной концентрации 107 клеток/мл. Клетки высевали в круглодонных 96-луночных планшетах в объеме 100 мкл и в дополнительных 100 мкл К10 среды (отрицательный контроль), добавляли среду, содержащую пулы антиген-специфичных пептидов, или среду, содержащую форболмиристацетат (РМА, 10 нг/мл) и иономицин (250 нг/мл; положительный контроль) (81дта, 8ΐ. Ьошк, МО), и планшеты инкубировались при 37°С, 5% СО₂, в течение 6 ч. Все стимулирующие среды содержали по 1 мкг/мкл Со1д1Р1ид и Со1д|81ор (ΒΌ Вюкшепсек, 8ап О|едо, СА). В конце инкубационного периода планшеты переворачивались и промывались дважды РВ8. Клетки затем окрашивались фиолетовым красителем для визуализации (иУЕ/ОЕАО Ую1е1 У1аЬЛЬу Оуе, 1пуПгодеп; СагкЬаЛ, СА) в течение 30 мин при 4°С. После промывания РВ8, как указано выше, клетки окрашивались извне в течение 30 мин анти-СО4 РегСРСу5.5 и анти-СЭ8 АРС при 4°С, после чего следовала фиксация и пермеабилизация. Добавлялись анти-СЭ3 РЕ-Су5, анти-1Ь-2 РЕ, ати-ШКу А1ехаР1иог-700 и анти-ФНОа Р1ТС (ВО Вюкаепсек, 8ап О|едо, СА), и клетки снова инкубировались при 4°С в течение 30 мин. Клетки затем последний раз промывались РВ8 и фиксировались в 1% ПФА.

Совместная доставка Р8А и Р8МА вакцины индуцировала устойчивую ί'Ό4+ секрецию ГРИу, 1Ь-2 и ФНОа. Процент ί'Ό4+ Т клеток, продуцирующих Р8А-специфичный (0,21%) и Р8МА-специфичный (0,24%) ГРИу давал равный вклад в совокупную вакциноспецифичную ГРИу реакцию СЭ4+ Т клеток (0,44%) (фиг. 3А). Р8МА-специфичные СЭ4+ Т клетки, продуцирующие ΣΕ-2 (1,08%), содержали большинство совокупного процента ί'Ό4+ Т клеток, продуцирующих вакциноспецифичный ]Е-2 (1,40%) (фиг. 3В). Процент Р8А (0,31%) и Р8МА (0,29%) индуцированной продукции ФНОа ί'Ό4+ Т клетками давал равный вклад в совокупную вакциноспецифичную реакцию (0,60%) (фиг. 3С). В целом реакции ί'Ό4+ Т клеток были хорошо сбалансированы между Р8А и Р8МА, за исключением Р8МА, вызывающих основную часть продукции ί'Ό4+ Т клетками вакциноспецифичного ]Е-2.

Вакцина индуцировала сильную антиген-специфичную продукцию СЭ8+ Т клетками ГРИу и ]Е-2 и, в меньшей степени, ФНОа. Как Р8А (0,70%), так и Р8МА (0,67%) вызывали устойчивую выработку ί'Ό8+ Т клетками ГРИу. Фактически, вакциноспецифичные СЭ8+ Т клетки, секретирующие ГРИу, составляли 1,37% от общей популяции ί'Ό8+ Т клеток (фиг. 4А). Вакцина также вызывала сильную ]Е-2 реакцию ί'Ό8+ Т клеток (1,54%). Подобно ΣΕ-2 реакции СЭ4+ Т клеток, процент Р8МА-специфичных (1,06%) ί'Ό8+ Т клеток, секретирующих ΣΕ-2, был приблизительно в 2 раза выше, чем Р8А-специфичных (0,47%) (фиг. 4В). Совокупный процент вакциноспецифичной продукции ФНОа ί'Ό8+ Т клетками

- 25 027315 (0,11%) коррелировал с ΡδΑ компонентом вакцины (фиг. 4С). Подводя итог, имелся высокий процент вакциноспецифичной выработки СЭ8+ Т клетками ΙΕ^ и ΙΕ-2. Подобно реакциям С1)4- Т клеток, выработка №N7 была равно сбалансирована между ΡδΑ и ΡδМΑ, и величина ΙΕ-2 ΡδМΑ-специфичной реакции была выше, чем ΡδΑ-специфичной реакции.

Пример 11.

ΡδΑ-специфичная ΙΑ.ί сероконверсия.

Реакция антител может играть важную роль в терапии опухолей. Соответственно мы затем исследовали этот параметр иммунной реакции на ΡδΑ антиген на основе доступности белковой мишени.

Для определения ΡδΑ-специфичных титров сывороточных антител 96-луночные Nиηс-Iттиηο Мах^огр планшеты ^ипс, Косйез1ег, NΥ) покрывались на ночь при 4°С с 1 мкг/лунку рекомбинантного ΡδΑ белка (РП/дегак! !п4из1пез. ЛсЮп. МΑ), разбавленного в ΡΒδ. Планшеты промывались ΡΒδ, 0,05% 4\\ееп 20 (ΡΒδΤ), блокировались в течение 1 ч при комнатной температуре с 10% БСА/ΡΒδΤ, и инкубировались с серийными разведениями сыворотки от иммунизированых или наивных животных в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшеты затем промывались 3 раза ΡΒδΤ и антитело козы против ΙρΟ мыши (8ап!а Сш/, δаηίа Сш/, СΑ) добавляли в разведении 1:5000 в ΡΒδΤ. Связанный фермент определялся с помощью δ^дтаΕΑδΤ О-фенилендиамина дигидрохлорида, (0ΡΙ): δ^дта-Α1ά^^сй, δί. Еошз, МО), и оптическая плотность определялась при 450 нм на Ню1ек (Аапоозка νΤ) планшетных ридерах, показанных на Фигуре 5В. Конечные титры определялись, как описано выше (Ргеу, Α. еί а1. 1998). Вкратце, лимит прогнозирования рассчитывался с использованием ί-распределения Стьюдента. Математическая формула, которая определяет лимит прогнозирования, выражается как стандартное отклонение, умноженное на множитель, основанный на количестве отрицательных контролей и (п=5) и доверительном уровне (95%). Конечный титр сообщался как обратное от последнего разведения выше верхнего предела прогнозирования.

В дополнение к подтверждению устойчивого иммунитета, опосредованного клетками, ΡδΑ вакцина также вызывала сильные антиген-специфичные гуморальные реакции. Титры антител определялись с помощью ΕΟδΑ в выделенной из мышей сыворотке через одну неделю после последней иммунизации (п=5). Вакцина вызывала средний ΡδΑ-специфичный конечный титр антител 4427 (диапазон 1581-15811) (фиг. 5А). Также может быть важна продолжительность таких реакций.

Пример 12.

Аминокислотные последовательности специфичного антигена простаты, доступные в ΟеηΒаηк, включают следующие:

§Ь_Е А\У71923.1_Н.зар1епз_к1кЗ_СКАЬ;

_001639.1_Н.зар1епз_Р8А_1зо1_препробелок;

§Ь_ААА59995.1_Н.зар1епз_Р8А_предшественник; §Ъ_ААА60193.1_Н.зар1епз_Р8А;

§Ь_Е А\У71933.1_Н.зар1епз_к1кЗ_СКА_1;

14Р_001025218.1_Н.зар1епз_РЗА_1зоЗ_препробелок; §Ъ_САО54617.1_Н.зар1епз_РЗА; §Ъ_САО30844.1_Н.зар1епз_Р8А; §Ъ_ААА59996.1_Н.зар1епз_РЗА_предшественник;

§Ь_ААϋ 14185.1_Н.зар1епз_РЗА; ζ)6ϋΤ45.1_МТазс1си1апз_КЕКЗ;

ΝΡ 001036241.1_М.ти1айа_РЗА_предшественник; ΑΑΖ82258.1_М.ти1а11а_РЗА;

АА782255.1_О.§огШа_РЗА; §И 1638386661геТ1КР_001106216.11 сыворотки калликреин [Рарю апиЫз]; βίΙ73746696Ι§6ΙΑΑΖ82261.11 специфический антиген простаты [Рарю апиЫз]; ίΙ73746692Ι§6ΙΑΑΖ82259.1Ι специфический антиген простаты [ЕгуйносеЪиз ра1аз];

βίΙ73746694Ιβ6ΙΑΑΖ82260.11 специфический антиген простаты [Сегсорййесиз серйиз];

βίΙ73746682Ιβ6ΙΑΑΖ82254.11 специфический антиген простаты [Рап рашзсиз];

βίΙ73746680Ιβ6ΙΑΑΖ82253.11 специфический антиген простаты [Рап 1го§1ос1у1ез];

βίΙ73746686Ιβ6ΙΑΑΖ82256.11 специфический антиген простаты [Роп§о ру§таеиз]; и

3746688Ιβ6ΙΑΑΖ82257.1Ι специфический антиген простаты [ЕГотазсиз §аЬпе11ае].

ΡδМΑ аминокислотные последовательности, доступные в ОепЕапк. включают следующие: NΡ_004467.1_Ηитап_ССΡII_^зо1; Ηитап_ΡδМΑ_ΑΑС83972.1; М.ти1аίίа_ΟСΡII_13о1 ΧΡ_001096141.2; и \1.ти1аиа ССТИ 1зо2 ΧΡ 002799784.1.

δΤΕΑΡ аминокислотные последовательности, доступные в СтепНапк. включают следующие:

- 26 027315

ΝΡ036581.1_Нишап_8ТЕАР1; ЕАЫ24167.1_Нишап_8ТЕАР1;

ХР001103605.1_М.ши1а«а_8ТЕАР1_18оЗ; ΕΑλ¥93751.1_Нишап_8ТЕАР1_СКАЬ; ЕА\¥93749.1_Нитап_8ТЕАР1_СКАа; ХР001164838.1_Р.1го§1ос1у1е8_ЗТЕАР18о2;

ХР002818311.1_Р.аЬеШ_8ТЕАР1; ΝΡ001162459.1_Р.апиЫ8_ЗТЕАР1; ЫР_999470.1_5.§сгоГа_5ТЕАР1; и ЫР_081675.2_М.ти8си1из_8ТЕАР1.

NΡ_005663.2_Ηитаη_ΡδСΑ является номером доступа ΡδϋΑ аминокислотной последовательности, доступной в ОепБапк.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> ТНЕ ТВиЗТЕЕЗ ОЕ ТНЕ υΝίνΕΚδΙΤΥ ОЕ ΡΕΝΝδΥΠνΑΝΙΑ №ΕΙΝΕΚ, Ε^νίά ΥΑΝ, Лап

ЕЕККАКО, ВегпаДеЬЬе 5АКЮЕ5А1, Νίταπ^απ ΡΑΜΑΝΑ^ΑΝ, МаЬПига <12 0> КОНСЕНСУСНЫЕ АНТИГЕНЫ ПРОСТАТЫ, МОЛЕКУЛА НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ, КОДИРУЮЩАЯ ИХ, И ВАКЦИНА, И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ, ВКЛЮЧАЮЩЕЕ ИХ <130> υρνοοο36 <150> из 61/413,176 <151> 2010-11-12 <150> из 61/417,817 <151> 2010-11-29 <160> 31 <170> Патентная версия 3.5 <210> 1 <211> 789 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность нуклеиновых кислот антигена Ρ3Α 1 <400> 1

аЬдЬдддЬсс	ЬддЬддЬдЬЬ	ссЬдасЬсЬд	адсдЬсасаЬ	ддаЬсддсдс	сдсЬссасЬд	60
аЬЬсЬдадсс	дссЬддЬддд	сдддЬдддад	Ьдсдаааадс	асЬсссадсс	аЬддсаддЬд	120
сЬддЬсдсЬЬ	сЬаддддссд	адсадЬдЬдс	ддаддсдЬдс	ЬддЬссассс	ЬсадЬдддЬс	180
сЬдассдсад	сссаЬЬдЬаЬ	ссдасадаад	адсдЬдаЬЬс	ЬдсЬддддсд	асассадсса	240
ЬЬсЬассссд	аддасасадд	асаддЬдЬЬс	саддЬсЬсЬс	асадЬЬЬЬсс	ссаЬссЬсЬд	300
ЬасаасаЬда	дссЬдсЬдаа	ааасадаЬаЬ	сЬдддассЬд	дсдасдаЬад	сЬсссаЬдаЬ	360
сЬдаЬдсЬдс	ЬдаддсЬдЬс	сдадссадсс	даасЬдасЬд	асдсЬдЬдса	ддЬссЬддаЬ	420
сЬдсссассс	аддадссЬдс	ссЬдддаасс	асаЬдЬЬаЬд	сЬЬсаддсЬд	ддддадсаЬс	480
даассададд	аасаЬсЬдас	Ьсссаадааа	сЬдсадЬдсд	ЬддассЬдса	ссЬдаЬЬадЬ	540
аасдаЬдЬдЬ	дрдсасаддр	ссаЬЬсасад	ааддЬдасаа	адЬЬсаЬдсЬ	дрдсдссддс	600

- 27 027315

КсККддаКдд	дсддсаадКс аасККдсадс ддддасКссд дсдддссасК ддКдКдКдаК	660
ддадКссКдс	адддсаКсас сКсККддддс адКсадссКК дКдсссКдсс Ксддадасса	720
адКсКдКаса	сКааддКддК ссддКаКадд аааКддаККс аддасасКаК КдссдсКаас	780
сссКдаКаа		789

<210> 2 <211> 261 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность аминокислот антигена РЗА 1 <400> 2

МеК 1

Тгр

Уа1

Ьеи

Уа1 5

Уа1

РПе

Ьеи

ТПг

Ьеи 10

Зег

Уа1

ТПг

Тгр

11е 15

С1у

А1а

Рго

Ьеи

11е

Ьеи

Зег

Агд

Ьеи

Уа1

С1у

Тгр

С1и

Суз

С1и

20

25

30

Ьуз

Н1з

Зег

С1п

Рго

Тгр

С1п

Уа1

Ьеи

Уа1

А1а

Зег

Агд

С1у

Агд

А1а

35

40

45

Уа1

Суз

С1у

Уа1

Ьеи

Уа1

Н1з

Рго

С1п

Тгр

Уа1

Ьеи

ТПг

А1а

50

55

60

Н1з

Суз

11е

Агд

С1п

Ьуз

Зег

Уа1

11е

Ьеи

С1у

Агд

Н1з

С1п

Рго

65

70

75

80

РПе

Туг

Рго

С1и

Азр

ТПг

С1у

С1п

Уа1

РПе

С1п

Уа1

Зег

Н1з

Зег

РПе

85

90

95

Рго

Н1з

Рго

Ьеи

Туг

Азп

МеК

Зег

Ьеи

Ьуз

Азп

Агд

Туг

Ьеи

С1у

100

105

110

Рго

С1у

Азр

Зег

Н1з

Азр

Ьеи

МеК

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

С1и

115

120

125

Рго

А1а

С1и

Ьеи

ТПг

Азр

А1а

Уа1

С1п

Уа1

Ьеи

Азр

Ьеи

Рго

ТПг

С1п

130

135

140

С1и

Рго

А1а

Ьеи

С1у

ТПг

Суз

Туг

А1а

Зег

С1у

Тгр

С1у

Зег

11е

145

150

155

160

С1и

Рго

С1и

Н1з

Ьеи

ТПг

Рго

Ьуз

Ьеи

С1п

Суз

Уа1

Азр

Ьеи

165

170

175

- 28 027315

Н1з

Ьеи

11е

Зег 180

Азп

Азр

Уа1

Суз

А1а 185

С1п

Уа1

Н1з

Зег

С1п 190

Ьуз

Уа1

ТНг

Ьуз

РНе

МеЬ

Ьеи

Суз

А1а

С1у

Зег

Тгр

МеЬ

С1у

Ьуз

Зег

ТНг

195

200

205

Суз

Зег

С1у

Азр

Зег

С1у

Рго

Ьеи

Уа1

Суз

Азр

С1у

Уа1

Ьеи

С1п

210

215

220

С1у

11е

ТНг

Зег

Тгр

С1у

Зег

С1п

Рго

Суз

А1а

Ьеи

Рго

Агд

Рго

225

230

235

240

Зег

Ьеи

Туг

ТНг

Ьуз

Уа1

Агд

Туг

Агд

Ьуз

Тгр

11е

С1п

Азр

ТНг

245

250

255

11е

А1а

Азп

Рго

260 <210> 3 <211> 840 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность нуклеиновых кислот антигена РЗА 2 <400> 3

аЬддасЬдда	саЬддаЬЬсЬ	дЬЬссЬддЬс	дссдссдсаа	сЬсдсдЬдса	ЬЬссЬдддЬс	60
сЬддЬддЬдЬ	ЬссЬдасЬсЬ	дадсдЬсаса	ЬддаЬсддсд	ссдсЬссасЬ	даЬЬсЬдадс	120
сдссЬддЬдд	дсдддЬддда	дЬдсдаааад	сасЬсссадс	саЬддсаддЬ	дсЬддЬсдсЬ	180
ЬсЬаддддсс	дадсадЬдЬд	сддаддсдЬд	сЬддЬссасс	сЬсадЬдддЬ	ссЬдассдса	240
дсссаЬЬдЬа	Ьссдасадаа	дадсдЬдаЬЬ	сЬдсЬддддс	дасассадсс	аЬЬсЬасссс	300
даддасасад	дасаддЬдЬЬ	ссаддЬсЬсЬ	сасадЬЬЬЬс	сссаЬссЬсЬ	дЬасаасаЬд	360
адссЬдсЬда	аааасадаЬа	ЬсЬдддассЬ	ддсдасдаЬа	дсЬсссаЬда	ЬсЬдаЬдсЬд	420
сЬдаддсЬдЬ	ссдадссадс	сдаасЬдасЬ	дасдсЬдЬдс	аддЬссЬдда	ЬсЬдсссасс	480
саддадссЬд	сссЬдддаас	сасаЬдЬЬаЬ	дсЬЬсаддсЬ	дддддадсаь	сдаассадад	540
даасаЬсЬда	сЬсссаадаа	асЬдсадЬдс	дЬддассЬдс	ассЬдаЬЬад	ЬаасдаЬдЬд	600
ЬдЬдсасадд	ЬссаЬЬсаса	дааддЬдаса	аадЬЬсаЬдс	ЬдЬдсдссдд	сЬсЬЬддаЬд	660
ддсддсаадЬ	саасЬЬдсад	сддддасЬсс	ддсдддссас	ЬддЬдЬдЬда	ЬддадЬссЬд	720
садддсаЬса	ссЬсЬЬдддд	садЬсадссЬ	ЬдЬдсссЬдс	сЬсддадасс	аадЬсЬдЬас	780
асЬааддЬдд	ЬссддЬаЬад	даааЬддаЬЬ	саддасасЬа	ЬЬдссдсЬаа	ссссЬдаЬаа	840

- 29 027315 <210> 4 <211> 278 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность аминокислот антигена РЗА 2 <400> 4

МеК 1

Азр

Тгр

ТПг

Тгр 5

11е

Ьеи

РПе

Ьеи

Уа1 10

А1а

ТПг

Агд 15

Уа1

Н1з

Зег

Тгр

Уа1

Ьеи

Уа1

РПе

Ьеи

ТПг

Ьеи

Зег

Уа1

ТПг

Тгр

11е

20

25

30

С1у

А1а

Рго

Ьеи

11е

Ьеи

Зег

Агд

Ьеи

Уа1

С1у

Тгр

С1и

Суз

35

40

45

С1и

Ьуз

Н1з

Зег

С1п

Рго

Тгр

С1п

Уа1

Ьеи

Уа1

А1а

Зег

Агд

С1у

Агд

50

55

60

А1а

Уа1

Суз

С1у

Уа1

Ьеи

Уа1

Н1з

Рго

С1п

Тгр

Уа1

Ьеи

ТПг

А1а

65

70

75

80

А1а

Н1з

Суз

11е

Агд

С1п

Ьуз

Зег

Уа1

11е

Ьеи

С1у

Агд

Н1з

С1п

85

90

95

Рго

РПе

Туг

Рго

С1и

Азр

ТПг

С1у

С1п

Уа1

РПе

С1п

Уа1

Зег

Н1з

Зег

100

105

110

РПе

Рго

Н1з

Рго

Ьеи

Туг

Азп

МеК

Зег

Ьеи

Ьуз

Азп

Агд

Туг

Ьеи

115

120

125

С1у

Рго

С1у

Азр

Зег

Н1з

Азр

Ьеи

МеК

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

130

135

140

С1и

Рго

А1а

С1и

Ьеи

ТПг

Азр

А1а

Уа1

С1п

Уа1

Ьеи

Азр

Ьеи

Рго

ТПг

145

150

155

160

С1п

61и

Рго

А1а

Ьеи

С1у

ТПг

Суз

Туг

А1а

Зег

С1у

Тгр

С1у

Зег

165

170

175

11е

61и

Рго

С1и

Н1з

Ьеи

ТПг

Рго

Ьуз

Ьеи

С1п

Суз

Уа1

Азр

180

185

190

Ьеи

Н1з

Ьеи

11е

Зег

Азп

Азр

Уа1

Суз

А1а

С1п

Уа1

Н1з

Зег

С1п

Ьуз

195

200

205

Уа1

ТПг

Ьуз

РПе

МеК

Ьеи

Суз

А1а

С1у

Зег

Тгр

МеК

С1у

Ьуз

Зег

- 30 027315

210

215

220

ТНг

Суз

Зег

С1у

Азр

Зег

С1у

Рго

Ьеи

Уа1

Суз

Азр

С1у

Уа1

Ьеи

225

230

235

240

С1п

С1у

11е

ТНг

Зег

Тгр

С1у

Зег

С1п

Рго

Суз

А1а

Ьеи

Рго

Агд

245

250

255

Рго

Зег

Ьеи

Туг

ТНг

Ьуз

Уа1

Агд

Туг

Агд

Ьуз

Тгр

11е

С1п

Азр

260

265

270

ТНг

11е

А1а

Азп

Рго

275 <210> 5 <211> 2283 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность нуклеиновых кислот антигена РЗМА 1

<400> 5 аЬдЬддаасд	сасЬдсаЬда	дасЬдаЬЬсЬ	дсЬдЬсдсас	Ьдддасддад	ассссддЬдд	60
сЬдЬдсдсЬд	дадсасЬддЬ	дсЬддссддс	дддддаььсс	ЬдсЬдддаЬЬ	ссЬдЬЬЬддс	120
ЬддЬЬЬаЬса	ааадсЬссад	сдаддсЬасс	ааЬаЬЬассс	сЬаадсасаа	Ьаадааадса	180
ЬЬссЬддаЬд	аасЬдааадс	сдадаасаЬс	аадаааЬЬсс	ЬдЬасаасЬЬ	сасаадааЬЬ	240
ссасаЬсЬдд	сЬддсасЬда	дсадаасЬЬс	садсЬддсаа	аасадаЬсса	дадЬсадЬдд	300
ааддааЬЬЬд	ддсЬддасЬс	адЬддадсЬд	асссасЬасд	аЬдЬссЬдсЬ	дЬссЬаЬсса	360
ааЬаадасЬс	аЬсссаасЬа	саЬсЬсЬаЬс	аЬЬаасдаад	асддаааЬда	даЬЬЬЬсаас	420
ассЬсЬсЬдЬ	ЬЬдаассссс	Ьссасссддс	ЬаЬдадааЬд	ЬсадЬдасдЬ	ддЬсссЬсса	480
ЬЬсЬсадссЬ	Ьсадссссса	ддддаЬдссЬ	дадддадаЬс	ЬддЬдЬасдЬ	сааЬЬаЬдсЬ	540
адаасадаад	асЬЬсЬЬЬаа	дсЬддададд	даЬаЬдаааа	ЬсаасЬдЬЬс	сддсаадаЬс	600
дЬдаЬЬдссс	ддЬасдддаа	ддЬдЬЬсада	ддаааЬаадд	Ьсааааасдс	ЬсадсЬддсс	660
ддадсЬассд	дсдЬдаЬссЬ	дЬасадсдас	сссдсЬдаЬЬ	аЬЬЬЬдсасс	ЬддсдЬдаад	720
ЬссЬаЬссад	асддаЬддаа	ЬсЬдсссддс	дддддадьдс	ададдддааа	саЬссЬдаас	780
сЬдааЬддад	ссддсдаЬсс	ЬсЬдасЬсса	ддаЬассссд	ссаасдааЬа	сдсЬЬаЬсдс	840
сддддааЬЬд	сададдссдЬ	дддссЬдссЬ	адсаЬсссад	ЬссаЬсссаЬ	ЬддсЬаЬЬас	900
даЬдсссада	адсЬдсЬдда	дааааЬдддс	дддадсдсЬс	ссссЬдасЬс	ЬадЬЬддаад	960
ддсЬсссЬда	аадЬдссЬЬа	сааЬдЬсддд	ссаддаЬЬса	сЬдддаасЬЬ	ЬЬсЬасссад	1020
ааддЬдаааа	ЬдсасаЬсса	ЬадЬассадс	даддЬдасас	дааЬсЬасаа	сдЬсаЬЬддс	1080

- 31 027315

асссЕдадад	дсдссдЕдда	дссЕдаЕсдс	ЕаЕдЕсаЕЕс	Едддаддсса	сададасЕса	1140
ЕдддЕдЕЕсд	ддддааЕсда	Ессасададс	ддадсадсЕд	ЕддЕссаЕда	ааЕЕдЕдсдс	1200
адсЕЕЕддда	сссЕдаадаа	ададддаЕдд	сдасссаддс	дсасааЕссЕ	дЕЕсдсаЕсс	1260
Едддасдссд	аддааЕЕЕдд	дсЕдсЕдддс	адсасадааЕ	дддссдадда	аааЕЕсЕсдс	1320
сЕдсЕдсадд	адсдаддддЕ	ддсЕЕасаЕс	ааЕдсадасЕ	саадсаЕЕда	аддааасЕаЕ	1380
асссЕдсддд	ЕддаЕЕдсас	ассссЕдаЕд	ЕасадЕсЕдд	ЕсЕаЕаассЕ	дасаааддад	1440
сЕдаааЕсас	сЕдасдаддд	сЕЕсдааддд	аааадссЕдЕ	асдааЕссЕд	дасЕдадаад	1500
адсссаЕссс	ссдааЕЕсад	сддсаЕдссЕ	аддаЕсЕсЕа	адсЕдддсад	ЕдддаасдаЕ	1560
ЕЕЕдаддЕдЕ	ЕсЕЕЕсадсд	ссЕдддааЕЕ	дссЕсЕддсс	дадсЕсддЕа	сасааааааЕ	1620
ЕдддадасЕа	асаадЕЕсЕс	сЕсЕЕассса	сЕдЕаЕсаса	дсдЕдЕасда	дасЕЕаЕдаа	1680
сЕддЕсдада	ааЕЕсЕасда	ссссасЕЕЕЕ	аадЕаЕсаЕс	ЕдассдЕддс	асаддЕсадд	1740
ддсдддаЕдд	ЕдЕЕсдаасЕ	ддссааЕадс	аЕсдЕссЕдс	саЕЕЕдасЕд	ЕсдадаЕЕас	1800
дсЕдЕддЕсс	ЕдсддаадЕа	сдсадасаад	аЕсЕаЕааса	ЕсЕссаЕдаа	дсасссссад	1860
дадаЕдаадд	ссЕаЕЕсЕдЕ	дадЕЕЕсдаЕ	ЕсссЕдЕЕЕЕ	сЕдссдЕсаа	аааЕЕЕсасс	1920
даааЕсдсЕа	дЕаадЕЕЕЕс	ададсдссЕд	саддассЕдд	аЕаадЕссаа	ЕсссаЕссЕд	1980
сЕдсддаЕЕа	ЕдаасдаЕса	дсЕдаЕдЕЕс	сЕддааадад	ссЕЕЕаЕсда	сссЕсЕдддс	2040
сЕдссЕдаЕа	дассаЕЕсЕа	саддсасдЕд	аЕсЕасдсас	сЕадЕЕсаса	ЕаасаадЕас	2100
дссддсдадЕ	сЕЕЕсссадд	даЕсЕаЕдас	дсЕсЕдЕЕЕд	аЕаЕЕдааЕс	аааддЕддас	2160
сссадсааад	саЕддддсда	ддЕсаадада	садаЕсадса	ЕЕдсадссЕЕ	ЕасадЕдсад	2220
дссдссдссд	ааасссЕдЕс	сдаадЕсдсЕ	ЕасссаЕасд	аЕдЕссссда	ЕЕасдсаЕда	2280

Еаа 2283 <210> 6 <211> 750 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность аминокислот антигена РЗМА 1 <400> 6

МеЕ 1

Тгр

Азп

А1а

^еυ 5

Н1з

С1и

ТПг

Азр

Зег 10

А1а

Уа1

А1а

^еυ

С1у 15

Агд

Рго

Агд

Тгр

^еυ

Суз

А1а

С1у

А1а

^еυ

Уа1

^еυ

А1а

С1у

20

25

30

РПе

^еυ

С1у

РПе

^еυ

РПе

С1у

Тгр

РПе

11е

^уз

Зег

С1и

- 32 027315

35

40

45

А1а

ТЬг

Азп

11е

ТЬг

Рго

Ьуз

Н1з

Азп

Ьуз

А1а

РЬе

Ьеи

Азр

С1и

50

55

60

Ьеи

Ьуз

А1а

С1и

Азп

11е

Ьуз

РЬе

Ьеи

Туг

Азп

РЬе

ТЬг

Агд

11е

65

70

75

80

Рго

Н1з

Ьеи

А1а

С1у

ТЬг

С1и

С1п

Азп

РЬе

С1п

Ьеи

А1а

Ьуз

С1п

11е

85

90

95

С1п

Зег

С1п

Тгр

Ьуз

С1и

РЬе

С1у

Ьеи

Азр

Зег

Уа1

С1и

Ьеи

ТЬг

Н1з

100

105

110

Туг

Азр

Уа1

Ьеи

Зег

Туг

Рго

Азп

Ьуз

ТЬг

Н1з

Рго

Азп

Туг

11е

115

120

125

Зег

11е

Азп

С1и

Азр

С1у

Азп

С1и

11е

РЬе

Азп

ТЬг

Зег

Ьеи

РЬе

130

135

140

С1и

Рго

С1у

Туг

С1и

Азп

Уа1

Зег

Азр

Уа1

Рго

145

150

155

160

РЬе

Зег

А1а

РЬе

Зег

Рго

С1п

С1у

МеЬ

Рго

С1и

С1у

Азр

Ьеи

Уа1

Туг

165

170

175

ναι

Азп

Туг

А1а

Агд

ТЬг

С1и

Азр

РЬе

Ьуз

Ьеи

С1и

Агд

Азр

МеЬ

180

185

190

Ьуз

11е

Азп

Суз

Зег

С1у

Ьуз

11е

Уа1

11е

А1а

Агд

Туг

С1у

Ьуз

Уа1

195

200

205

РЬе

Агд

С1у

Азп

Ьуз

Уа1

Ьуз

Азп

А1а

С1п

Ьеи

А1а

С1у

А1а

ТЬг

С1у

210

215

220

ναι

11е

Ьеи

Туг

Зег

Азр

Рго

А1а

Азр

Туг

РЬе

А1а

Рго

С1у

Уа1

Ьуз

225

230

235

240

Зег

Туг

Рго

Азр

С1у

Тгр

Азп

Ьеи

Рго

С1у

Уа1

С1п

Агд

С1у

245

250

255

Азп

11е

Ьеи

Азп

Ьеи

Азп

С1у

А1а

С1у

Азр

Рго

Ьеи

ТЬг

Рго

С1у

Туг

260

265

270

Рго

А1а

Азп

С1и

Туг

А1а

Туг

Агд

С1у

11е

А1а

С1и

А1а

Уа1

С1у

275

280

285

- 33 027315

Ьеи

Рго 290

Зег

11е

Рго

Уа1

Н1з 295

Рго

11е

С1у

Туг

Туг 300

Азр

А1а

С1п

Ьуз

Ьеи

С1и

Ьуз

МеЬ

С1у

Зег

А1а

Рго

Азр

Зег

Тгр

Ьуз

305

310

315

320

С1у

Зег

Ьеи

Ьуз

Уа1

Рго

Туг

Азп

Уа1

С1у

Рго

С1у

РЕе

ТЕг

С1у

Азп

325

330

335

РЕе

Зег

ТЕг

С1п

Ьуз

Уа1

Ьуз

МеЬ

Н1з

11е

Н1з

Зег

ТЕг

Зег

С1и

Уа1

340

345

350

ТЕг

Агд

11е

Туг

Азп

Уа1

11е

С1у

ТЕг

Ьеи

Агд

С1у

А1а

Уа1

С1и

Рго

355

360

365

Азр

Агд

Туг

Уа1

11е

Ьеи

С1у

Н1з

Агд

Азр

Зег

Тгр

Уа1

РЕе

С1у

370

375

380

С1у

11е

Азр

Рго

С1п

Зег

С1у

А1а

Уа1

Н1з

С1и

11е

Уа1

Агд

385

390

395

400

Зег

РЕе

С1у

ТЕг

Ьеи

Ьуз

С1и

С1у

Тгр

Агд

Рго

Агд

ТЕг

11е

405

410

415

Ьеи

РЕе

А1а

Зег

Тгр

Азр

А1а

С1и

РЕе

С1у

Ьеи

С1у

Зег

ТЕг

420

425

430

С1и

Тгр

А1а

С1и

Азп

Зег

Агд

Ьеи

С1п

С1и

Агд

С1у

Уа1

А1а

435

440

445

Туг

11е

Азп

А1а

Азр

Зег

11е

С1и

С1у

Азп

Туг

ТЕг

Ьеи

Агд

Уа1

450

455

460

Лзр

Суз

ТЕг

Рго

Ьеи

МеЬ

Туг

Зег

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Ьеи

ТЕг

Ьуз

С1и

465

470

475

480

Ьеи

Ьуз

Зег

Рго

Азр

С1и

С1у

РЕе

С1и

С1у

Ьуз

Зег

Ьеи

Туг

С1и

Зег

485

490

495

Тгр

ТЕг

С1и

Ьуз

Зег

Рго

Зег

Рго

С1и

РЕе

Зег

С1у

МеЬ

Рго

Агд

11е

500

505

510

Зег

Ьуз

Ьеи

С1у

Зег

С1у

Азп

Азр

РЕе

С1и

Уа1

РЕе

С1п

Агд

Ьеи

515

520

525

С1у

11е

А1а

Зег

С1у

Агд

А1а

Агд

Туг

ТЕг

Ьуз

Азп

Тгр

С1и

ТЕг

Азп

530

535

540

Ьуз

РЕе

Зег

Туг

Рго

Ьеи

Туг

Н1з

Зег

Уа1

Туг

С1и

ТЕг

Туг

С1и

545

550

555

560

- 34 027315

Ьеи

ναι

С1и

Ьуз

РНе 565

Туг

Азр

Рго

ТНг

РНе 570

Ьуз

Туг

Н1з

Ьеи

ТНг 575

Уа1

А1а

С1п

ναι

Агд

С1у

МеК

Уа1

РНе

С1и

Ьеи

А1а

Азп

Зег

11е

Уа1

580

585

590

Ьеи

Рго

РНе

Азр

Суз

Агд

Азр

Туг

А1а

Уа1

Ьеи

Агд

Ьуз

Туг

А1а

595

600

605

Азр

Ьуз

11е

Туг

Азп

11е

Зег

МеК

Ьуз

Н1з

Рго

С1п

С1и

МеК

Ьуз

А1а

610

615

620

Туг

Зег

Уа1

Зег

РНе

Азр

Зег

Ьеи

РНе

Зег

А1а

Уа1

Ьуз

Азп

РНе

ТНг

625

630

635

640

С1и

11е

А1а

Зег

Ьуз

РНе

Зег

С1и

Агд

Ьеи

С1п

Азр

Ьеи

Азр

Ьуз

Зег

645

650

655

Азп

Рго

11е

Ьеи

Агд

11е

МеК

Азп

Азр

С1п

Ьеи

МеК

РНе

Ьеи

С1и

660

665

670

Агд

А1а

РНе

11е

Азр

Рго

Ьеи

С1у

Ьеи

Рго

Азр

Агд

Рго

РНе

Туг

Агд

675

680

685

Н1з

ναι

11е

Туг

А1а

Рго

Зег

Н1з

Азп

Ьуз

Туг

А1а

С1у

С1и

Зег

690

695

700

РНе

Рго

С1у

11е

Туг

Азр

А1а

Ьеи

РНе

Азр

11е

С1и

Зег

Ьуз

Уа1

Азр

705

710

715

720

Рго

Зег

Ьуз

А1а

Тгр

С1у

С1и

Уа1

Ьуз

Агд

С1п

11е

Зег

11е

А1а

725

730

735

РНе

ТНг

Уа1

С1п

А1а

С1и

ТНг

Ьеи

Зег

С1и

Уа1

А1а

740

745

750

<210> 7 <211> 2334 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность нуклеиновых кислот антигена РЗМА 2 <400> 7 аКддасКдда саКддаККсК дККссКддКс дссдссдсаа сКсдсдКдса ККссКддаас дсасКдсаКд адасКдаККс КдсКдКсдса сКдддасдда дассссддКд дсКдКдсдсК

120

- 35 027315

ддадсасЕдд	ЕдсЕддссдд	сдддддаЕЕс	сЕдсЕдддаЕ	ЕссЕдЕЕЕдд	сЕддЕЕЕаЕс	180
аааадсЕсса	дсдаддсЕас	сааЕаЕЕасс	ссЕаадсаса	аЕаадааадс	аЕЕссЕддаЕ	240
даасЕдааад	ссдадаасаЕ	саадаааЕЕс	сЕдЕасаасЕ	ЕсасаадааЕ	ЕссасаЕсЕд	300
дсЕддсасЕд	адсадаасЕЕ	ссадсЕддса	ааасадаЕсс	ададЕсадЕд	дааддааЕЕЕ	360
дддсЕддасЕ	садЕддадсЕ	дасссасЕас	даЕдЕссЕдс	ЕдЕссЕаЕсс	аааЕаадасЕ	420
саЕсссаасЕ	асаЕсЕсЕаЕ	саЕЕаасдаа	дасддаааЕд	адаЕЕЕЕсаа	сассЕсЕсЕд	480
ЕЕЕдаасссс	сЕссасссдд	сЕаЕдадааЕ	дЕсадЕдасд	ЕддЕсссЕсс	аЕЕсЕсадсс	540
ЕЕсадссссс	аддддаЕдсс	ЕдадддадаЕ	сЕддЕдЕасд	ЕсааЕЕаЕдс	Еадаасадаа	600
дасЕЕсЕЕЕа	адсЕддадад	ддаЕаЕдааа	аЕсаасЕдЕЕ	ссддсаадаЕ	сдЕдаЕЕдсс	660
сддЕасддда	аддЕдЕЕсад	аддаааЕаад	дЕсааааасд	сЕсадсЕддс	сддадсЕасс	720
ддсдЕдаЕсс	ЕдЕасадсда	ссссдсЕдаЕ	ЕаЕЕЕЕдсас	сЕддсдЕдаа	дЕссЕаЕсса	780
дасддаЕдда	аЕсЕдсссдд	сдддддадЕд	сададдддаа	асаЕссЕдаа	ссЕдааЕдда	840
дссддсдаЕс	сЕсЕдасЕсс	аддаЕасссс	дссаасдааЕ	асдсЕЕаЕсд	ссддддааЕЕ	900
дсададдссд	ЕдддссЕдсс	ЕадсаЕссса	дЕссаЕссса	ЕЕддсЕаЕЕа	сдаЕдсссад	960
аадсЕдсЕдд	адааааЕддд	сдддадсдсЕ	сссссЕдасЕ	сЕадЕЕддаа	дддсЕсссЕд	1020
ааадЕдссЕЕ	асааЕдЕсдд	дссаддаЕЕс	асЕдддаасЕ	ЕЕЕсЕассса	дааддЕдааа	1080
аЕдсасаЕсс	аЕадЕассад	сдаддЕдаса	сдааЕсЕаса	асдЕсаЕЕдд	сасссЕдада	1140
ддсдссдЕдд	адссЕдаЕсд	сЕаЕдЕсаЕЕ	сЕдддаддсс	асададасЕс	аЕдддЕдЕЕс	1200
дддддааЕсд	аЕссасадад	сддадсадсЕ	дЕддЕссаЕд	аааЕЕдЕдсд	садсЕЕЕддд	1260
асссЕдаада	аададддаЕд	дсдасссадд	сдсасааЕсс	ЕдЕЕсдсаЕс	сЕдддасдсс	1320
даддааЕЕЕд	ддсЕдсЕддд	садсасадаа	Едддссдадд	ааааЕЕсЕсд	ссЕдсЕдсад	1380
дадсдадддд	ЕддсЕЕасаЕ	сааЕдсадас	ЕсаадсаЕЕд	ааддааасЕа	ЕасссЕдсдд	1440
дЕддаЕЕдса	сассссЕдаЕ	дЕасадЕсЕд	дЕсЕаЕаасс	Едасааадда	дсЕдаааЕса	1500
ссЕдасдадд	дсЕЕсдаадд	даааадссЕд	ЕасдааЕссЕ	ддасЕдадаа	дадсссаЕсс	1560
сссдааЕЕса	дсддсаЕдсс	ЕаддаЕсЕсЕ	аадсЕдддса	дЕдддаасда	ЕЕЕЕдаддЕд	1620
ЕЕсЕЕЕсадс	дссЕдддааЕ	ЕдссЕсЕддс	сдадсЕсддЕ	асасаааааа	ЕЕдддадасЕ	1680
аасаадЕЕсЕ	ссЕсЕЕассс	асЕдЕаЕсас	адсдЕдЕасд	адасЕЕаЕда	асЕддЕсдад	1740
аааЕЕсЕасд	ассссасЕЕЕ	ЕаадЕаЕсаЕ	сЕдассдЕдд	сасаддЕсад	дддсдддаЕд	1800
дЕдЕЕсдаас	ЕддссааЕад	саЕсдЕссЕд	ссаЕЕЕдасЕ	дЕсдадаЕЕа	сдсЕдЕддЕс	1860
сЕдсддаадЕ	асдсадасаа	даЕсЕаЕаас	аЕсЕссаЕда	адсассссса	ддадаЕдаад	1920
дссЕаЕЕсЕд	ЕдадЕЕЕсда	ЕЕсссЕдЕЕЕ	ЕсЕдссдЕса	ааааЕЕЕсас	сдаааЕсдсЕ	1980
адЕаадЕЕЕЕ	сададсдссЕ	дсаддассЕд	даЕаадЕсса	аЕсссаЕссЕ	дсЕдсддаЕЕ	2040

- 36 027315

аКдаасдаКс	адсКдаКдКК	ссКддааада	дссКККаКсд	асссКсКддд	ссКдссКдаК	2100
адассаККсК	асаддсасдК	даКсКасдса	ссКадККсас	аКаасаадКа	сдссддсдад	2160
КсКККсссад	ддаКсКаКда	сдсКсКдККК	даКаККдааК	саааддКдда	ссссадсааа	2220
дсаКддддсд	аддКсаадад	асадаКсадс	аККдсадссК	ККасадКдса	ддссдссдсс	2280
дааасссКдК	ссдаадКсдс	ККасссаКас	даКдКссссд	аККасдсаКд	аКаа	2334

<210> 8 <211> 766 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность аминокислот антигена РЗМА 2 <400> 8

МеК 1

Азр

Тгр

ТПг

Тгр 5

11е

Ьеи

РПе

Ьеи

Уа1 10

А1а

ТПг

Агд 15

Уа1

Н1з

Зег

Тгр

Азп

А1а

Ьеи

Н1з

С1и

ТПг

Азр

Зег

А1а

Уа1

А1а

Ьеи

С1у

20

25

30

Агд

Рго

Агд

Тгр

Ьеи

Суз

А1а

С1у

А1а

Ьеи

Уа1

Ьеи

А1а

С1у

35

40

45

С1у

РПе

Ьеи

С1у

РПе

Ьеи

РПе

С1у

Тгр

РПе

11е

Ьуз

Зег

50

55

60

С1и

А1а

ТПг

Азп

11е

ТПг

Рго

Ьуз

Н1з

Азп

Ьуз

А1а

РПе

Ьеи

Азр

65

70

75

80

С1и

Ьеи

Ьуз

А1а

С1и

Азп

11е

Ьуз

РПе

Ьеи

Туг

Азп

РПе

ТПг

Агд

85

90

95

11е

Рго

Н1з

Ьеи

А1а

С1у

ТПг

С1и

С1п

Азп

РПе

С1п

Ьеи

А1а

Ьуз

С1п

100

105

110

11е

С1п

Зег

С1п

Тгр

Ьуз

С1и

РПе

С1у

Ьеи

Азр

Зег

Уа1

С1и

Ьеи

ТПг

115

120

125

Н1з

Туг

Азр

Уа1

Ьеи

Зег

Туг

Рго

Азп

Ьуз

ТПг

Н1з

Рго

Азп

Туг

130

135

140

11е

Зег

11е

Азп

С1и

Азр

С1у

Азп

С1и

11е

РПе

Азп

ТПг

Зег

Ьеи

145

150

155

160

РПе

С1и

Рго

С1у

Туг

С1и

Азп

Уа1

Зег

Азр

Уа1

Рго

- 37 027315

165 170 175

Рго

РЬе

Зег

А1а 180

РЬе

Зег

Рго

С1п

С1у 185

МеЬ

Рго

С1и

С1у

Азр 190

Ьеи

Уа1

Туг

Уа1

Азп

Туг

А1а

Агд

ТЬг

С1и

Азр

РЬе

Ьуз

Ьеи

С1и

Агд

Азр

195

200

205

МеЬ

Ьуз

11е

Азп

Суз

Зег

С1у

Ьуз

11е

Уа1

11е

А1а

Агд

Туг

С1у

Ьуз

210

215

220

ναι

РЬе

Агд

С1у

Азп

Ьуз

Уа1

Ьуз

Азп

А1а

С1п

Ьеи

А1а

С1у

А1а

ТЬг

225

230

235

240

С1у

Уа1

11е

Ьеи

Туг

Зег

Азр

Рго

А1а

Азр

Туг

РЬе

А1а

Рго

С1у

Уа1

245

250

255

Ьуз

Зег

Туг

Рго

Азр

С1у

Тгр

Азп

Ьеи

Рго

С1у

Уа1

С1п

Агд

260

265

270

С1у

Азп

11е

Ьеи

Азп

Ьеи

Азп

С1у

А1а

С1у

Азр

Рго

Ьеи

ТЬг

Рго

С1у

275

280

285

Туг

Рго

А1а

Азп

С1и

Туг

А1а

Туг

Агд

С1у

11е

А1а

С1и

А1а

Уа1

290

295

300

С1у

Ьеи

Рго

Зег

11е

Рго

Уа1

Н1з

Рго

11е

С1у

Туг

Азр

А1а

С1п

305

310

315

320

Ьуз

Ьеи

С1и

Ьуз

МеЬ

С1у

Зег

А1а

Рго

Азр

Зег

Тгр

325

330

335

Ьуз

С1у

Зег

Ьеи

Ьуз

Уа1

Рго

Туг

Азп

Уа1

С1у

Рго

С1у

РЬе

ТЬг

С1у

340

345

350

Азп

РЬе

Зег

ТЬг

С1п

Ьуз

Уа1

Ьуз

МеЬ

Н1з

11е

Н1з

Зег

ТЬг

Зег

С1и

355

360

365

ναι

ТЬг

Агд

11е

Туг

Азп

Уа1

11е

С1у

ТЬг

Ьеи

Агд

С1у

А1а

Уа1

С1и

370

375

380

Рго

Азр

Агд

Туг

Уа1

11е

Ьеи

С1у

Н1з

Агд

Азр

Зег

Тгр

Уа1

РЬе

385

390

395

400

С1у

11е

Азр

Рго

С1п

Зег

С1у

А1а

Уа1

Н1з

С1и

11е

Уа1

405

410

415

Агд

Зег

РЬе

С1у

ТЬг

Ьеи

Ьуз

С1и

С1у

Тгр

Агд

Рго

Агд

ТЬг

420

425

430

- 38 027315

11е

^еυ

РПе 435

А1а

Зег

Тгр

Азр

А1а 440

С1и

РПе

С1у

^еυ 445

^еυ

С1у

Зег

ТПг

С1и

Тгр

А1а

С1и

Азп

Зег

Агд

^еυ

С1п

С1и

Агд

С1у

Уа1

450

455

460

А1а

Туг

11е

Азп

А1а

Азр

Зег

11е

С1и

С1у

Азп

Туг

ТПг

^еυ

Агд

465

470

475

480

Уа1

Азр

Суз

ТПг

Рго

^еυ

МеЕ

Туг

Зег

^еυ

Уа1

Туг

Азп

^еυ

ТПг

^уз

485

490

495

С1и

^еυ

^уз

Зег

Рго

Азр

С1и

С1у

РПе

С1и

С1у

^уз

Зег

^еυ

Туг

С1и

500

505

510

Зег

Тгр

ТПг

С1и

^уз

Зег

Рго

Зег

Рго

С1и

РПе

Зег

С1у

МеЕ

Рго

Агд

515

520

525

11е

Зег

^уз

^еυ

С1у

Зег

С1у

Азп

Азр

РПе

С1и

Уа1

РПе

С1п

Агд

530

535

540

^еυ

С1у

11е

А1а

Зег

С1у

Агд

А1а

Агд

Туг

ТПг

^уз

Азп

Тгр

С1и

ТПг

545

550

555

560

Азп

^уз

РПе

Зег

Туг

Рго

^еυ

Туг

Н1з

Зег

Уа1

Туг

С1и

ТПг

Туг

565

570

575

С1и

^еυ

Уа1

С1и

^уз

РПе

Туг

Азр

Рго

ТПг

РПе

^уз

Туг

Н1з

^еυ

ТПг

580

585

590

Уа1

А1а

С1п

Уа1

Агд

С1у

МеЕ

Уа1

РПе

С1и

^еυ

А1а

Азп

Зег

11е

595

600

605

Уа1

^еυ

Рго

РПе

Азр

Суз

Агд

Азр

Туг

А1а

Уа1

^еυ

Агд

^уз

Туг

610

615

620

А1а

Азр

^уз

11е

Туг

Азп

11е

Зег

МеЕ

^уз

Н1з

Рго

С1п

С1и

МеЕ

^уз

625

630

635

640

А1а

Туг

Зег

Уа1

Зег

РПе

Азр

Зег

^еυ

РПе

Зег

А1а

Уа1

^уз

Азп

РПе

645

650

655

ТПг

С1и

11е

А1а

Зег

^уз

РПе

Зег

С1и

Агд

^еυ

С1п

Азр

^еυ

Азр

^уз

660

665

670

Зег

Азп

Рго

11е

^еυ

Агд

11е

МеЕ

Азп

Азр

С1п

^еυ

МеЕ

РПе

^еυ

- 39 027315

675

680

685

С1и

Агд

А1а

РНе

11е

Азр

Рго

Ьеи

С1у

Ьеи

Рго

Азр

Агд

Рго

РНе

Туг

690

695

700

Агд

Н1з

Уа1

11е

Туг

А1а

Рго

Зег

Н1з

Азп

Ьуз

Туг

А1а

С1у

С1и

705

710

715

720

Зег

РНе

Рго

С1у

11е

Туг

Азр

А1а

Ьеи

РНе

Азр

11е

С1и

Зег

Ьуз

Уа1

725

730

735

Азр

Рго

Зег

Ьуз

А1а

Тгр

С1у

С1и

Уа1

Ьуз

Агд

С1п

11е

Зег

11е

А1а

740

745

750

А1а

РНе

ТНг

Уа1

С1п

А1а

С1и

ТНг

Ьеи

Зег

С1и

Уа1

А1а

755

760

765

<210> 9 <211> 1023 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность нуклеиновых кислот антигена ЗТЕАР 1

<400> 9 аКддададсс	дсааддасаК	сасаааКсад	даададсКдК	ддаадаКдаа	ассасддада	60
аассКддадд	аадасдаККа	ссКдсасаад	дасассддсд	ааасаадКаК	дсКдаааада	120
ссадКдсКдс	КдсассКдса	КсадасКдсК	саКдсадасд	адКККдаККд	ссссКсКдаа	180
сКдсадсаса	сссаддадсК	дККсссасад	КддсаКсКдс	ссаКсаадаК	КдссдсКаКс	240
аККдсККсас	КдасаКККсК	дКаКасКсКд	сКдададаад	КдаКссассс	КсКддссасс	300
адссаКсадс	адКасККсКа	КаадаКсссК	аККсКддКса	КсаасааддК	ссКдссааКд	360
дКдадсаКса	сасКдсКддс	ссКддКсКас	сКдссКддсд	КдаКсдсадс	саККдКссад	420
сКдсасаасд	даасааадКа	саадаадККс	ссасаККддс	КддаКаадКд	даКдсКдасК	480
аддааасадК	КсдддсКдсК	дКссККсККК	ККсдссдКдс	КдсасдсКаК	сКасадссКд	540
КссКаКссса	КдаддсдсКс	ККассдаКаК	аадсКдсКда	асКдддсККа	ссадсаддКд	600
садсадааса	аддаддасдс	аКддаККдаа	сасдаКдКдК	ддсддаКдда	ааКсКаКдКд	660
КсКсКдддса	ККдКсдддсК	ддссаКссКд	дсКсКдсКдд	садКдассад	КаКсссККсК	720
дКсадКдасК	сасКдасаКд	дсдсдадККК	сасКасаККс	ададсаадсК	дддааКсдКд	780
КсссКдсКдс	КдддсассаК	ссаКдсасКд	аКККККдссК	ддааКаадКд	даКсдаКаКс	840
аадсадККсд	КдКддКаКас	КсссссКасс	КККаКдаККд	ссдКсККссК	дсссаКсдКд	900
дКссКдаККК	ККаадКссаК	ссКдККссКд	ссККдКсКдс	дааадааааК	ссКдааааКс	960

- 40 027315 сдасаЕдддЕ дддаадасдЕ дасаааааЕс ааЕаадассд аааЕсЕсаад ссадсЕдЕда

Еаа

1020

1023 <210> 10 <211> 339 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность аминокислот антигена ЗТЕАР 1 <400> 10

МеЕ 1

С1и

Зег

Агд

Ьуз 5

Азр

11е

ТПг

Азп

С1п 10

С1и

Ьеи

Тгр

Ьуз 15

МеЕ

Ьуз

Рго

Агд

Азп

Ьеи

С1и

Азр

Туг

Ьеи

Н1з

Ьуз

Азр

ТПг

20

25

30

С1у

С1и

ТПг

Зег

МеЕ

Ьеи

Ьуз

Агд

Рго

Уа1

Ьеи

Н1з

Ьеи

Н1з

С1п

35

40

45

ТПг

А1а

Н1з

А1а

Азр

С1и

РПе

Азр

Суз

Рго

Зег

С1и

Ьеи

С1п

Н1з

ТПг

50

55

60

С1п

С1и

Ьеи

РПе

Рго

С1п

Тгр

Н1з

Ьеи

Рго

11е

Ьуз

11е

А1а

11е

65

70

75

80

11е

А1а

Зег

Ьеи

ТПг

РПе

Ьеи

Туг

ТПг

Ьеи

Агд

С1и

Уа1

11е

Н1з

85

90

95

Рго

Ьеи

А1а

ТПг

Зег

Н1з

С1п

Туг

РПе

Туг

Ьуз

11е

Рго

11е

Ьеи

100

105

110

Уа1

11е

Азп

Ьуз

Уа1

Ьеи

Рго

МеЕ

Уа1

Зег

11е

ТПг

Ьеи

А1а

Ьеи

115

120

125

Уа1

Туг

Ьеи

Рго

С1у

Уа1

11е

А1а

11е

Уа1

С1п

Ьеи

Н1з

Азп

С1у

130

135

140

ТПг

Ьуз

Туг

Ьуз

РПе

Рго

Н1з

Тгр

Ьеи

Азр

Ьуз

Тгр

МеЕ

Ьеи

ТПг

145

150

155

160

Агд

Ьуз

С1п

РПе

С1у

Ьеи

Зег

РПе

А1а

Уа1

Ьеи

Н1з

А1а

165

170

175

11е

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Туг

Рго

МеЕ

Агд

Зег

Туг

Агд

Туг

Ьуз

Ьеи

180

185

190

- 41 027315

Ьеи

Азп

Тгр 195

А1а

Туг

С1п

Уа1 200

С1п

Азп

Ьуз

С1и 205

Азр

А1а

Тгр

11е

С1и

Н1з

Азр

Уа1

Тгр

Агд

МеК

С1и

11е

Туг

Уа1

Зег

Ьеи

С1у

11е

210

215

220

Уа1

С1у

Ьеи

А1а

11е

Ьеи

А1а

Ьеи

А1а

Уа1

ТНг

Зег

11е

Рго

Зег

225

230

235

240

Уа1

Зег

Азр

Зег

Ьеи

ТНг

Тгр

Агд

С1и

РНе

Н1з

Туг

11е

С1п

Зег

Ьуз

245

250

255

Ьеи

С1у

11е

Уа1

Зег

Ьеи

С1у

ТНг

11е

Н1з

А1а

Ьеи

11е

РНе

260

265

270

А1а

Тгр

Азп

Ьуз

Тгр

11е

Азр

11е

Ьуз

С1п

РНе

Уа1

Тгр

Туг

ТНг

Рго

275

280

285

Рго

ТНг

РНе

МеК

11е

А1а

Уа1

РНе

Ьеи

Рго

11е

Уа1

Ьеи

11е

РНе

290

295

300

Ьуз

Зег

11е

Ьеи

РНе

Ьеи

Рго

Суз

Ьеи

Агд

Ьуз

11е

Ьеи

Ьуз

11е

305

310

315

320

Агд

Н1з

С1у

Тгр

С1и

Азр

Уа1

ТНг

Ьуз

11е

Азп

Ьуз

ТНг

С1и

11е

Зег

325

330

335

Зег С1п Ьеи <210> 11 <211> 1074 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность нуклеиновых кислот антигена ЗТЕАР 2 <400> 11

аКддасКдда	саКддаККсК	дКККсКддКс	дсКдссдсаа	сссдсдКдса	ККсадададс	60
сдсааддаса	КсасаааКса	ддаададсКд	КддаадаКда	аассасддад	ааассКддад	120
даадасдаКК	ассКдсасаа	ддасассддс	дааасаадКа	КдсКдаааад	ассадКдсКд	180
сКдсассКдс	аКсадасКдс	КсаКдсадас	дадКККдаКК	дссссКсКда	асКдсадсас	240
асссаддадс	КдККсссаса	дКддсаКсКд	сссаКсаада	ККдссдсКаК	саККдсККса	300
сКдасаКККс	КдКаКасКсК	дсКдададаа	дКдаКссасс	сКсКддссас	садссаКсад	360
садКасККсК	аКаадаКссс	КаККсКддКс	аКсаасаадд	КссКдссааК	ддКдадсаКс	420

- 42 027315

асасЕрсЕрр	сссЕддЕсЕа	ссЕдссЕддс	дЕдаЕсдсад	ссаЕЕдЕсса	дсЕдсасаас	480
рраасааарЕ	асаадаадЕЕ	сссасаЕЕдд	сЕддаЕаадЕ	ддаЕдсЕдас	Еаддааасад	540
ЕЕсдддсЕдс	ЕдЕссЕЕсЕЕ	ЕЕЕсдссдЕд	сЕдсасдсЕа	ЕсЕасадссЕ	дЕссЕаЕссс	600
аЕдаддсдсЕ	сЕЕассдаЕа	ЕаадсЕдсЕд	аасЕдддсЕЕ	ассадсаддЕ	дсадсадаас	660
ааддаддасд	саЕддаЕЕда	асасдаЕдЕд	ЕддсддаЕдд	аааЕсЕаЕдЕ	дЕсЕсЕдддс	720
аЕЕдЕсдддс	ЕддссаЕссЕ	ддсЕсЕдсЕд	дсадЕдасса	дЕаЕсссЕЕс	ЕдЕсадЕдас	780
ЕсасЕдасаЕ	ддсдсдадЕЕ	ЕсасЕасаЕЕ	сададсаадс	ЕдддааЕсдЕ	дЕсссЕдсЕд	840
сЕдддсасса	ЕссаЕдсасЕ	даЕЕЕЕЕдсс	ЕддааЕаадЕ	ддаЕсдаЕаЕ	саадсадЕЕс	900
дЕдЕддЕаЕа	сЕсссссЕас	сЕЕЕаЕдаЕЕ	дссдЕсЕЕсс	ЕдсссаЕсдЕ	ддЕссЕдаЕЕ	960
ЕЕЕаадЕсса	ЕссЕдЕЕссЕ	дссЕЕдЕсЕд	сдааадаааа	ЕссЕдааааЕ	ссдасаЕддд	1020
Едддаадасд	ЕдасаааааЕ	сааЕаадасс	даааЕсЕсаа	дссадсЕдЕд	аЕаа	1074

<210> 12 <211> 356 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

<220>

<223>

Последовательность аминокислот антигена :

ЗΤΕΑΡ

2

<400>

12

МеЕ

Α3ρ

Тгр

ТЕг

Тгр

11е

Ьеи

РЕе

Ьеи

Vа1

Α^

ТЕг

Ατρ

Vа1

1

5

10

15

Н1з

Зег

С1и

Зег

Ατρ

Ьуз

Α3ρ

11е

ТЕг

Αзη

С1п

С1и

Ьеи

Тгр

Ьуз

20

25

30

МеЕ

Ьуз

Рго

Ατρ

Α3η

Ьеи

С1и

Αзρ

Туг

Ьеи

Н1з

Ьуз

Αзρ

35

40

45

ТЕг

С1у

С1и

ТЕг

Зег

МеЕ

Ьеи

Ьуз

Ατρ

Рго

Vа1

Ьеи

Н1з

Ьеи

Н1з

50

55

60

С1п

ТЕг

Α^

Н1з

Α^

Α3ρ

С1и

РЕе

Αзρ

Суз

Рго

Зег

С1и

Ьеи

С1п

Н1з

65

70

75

80

ТЕг

С1п

Θ1υ

Ьеи

РЕе

Рго

С1п

Тгр

Н1з

Ьеи

Рго

11е

Ьуз

11е

Α^

85

90

95

11е

Α^

Зег

Ьеи

ТЕг

РЕе

Ьеи

Туг

ТЕг

Ьеи

Ατρ

С1и

Vа1

11е

100

105

110

Н1з

Рго

Ьеи

Α^

ТЕг

Зег

Н1з

С1п

Туг

РЕе

Туг

Ьуз

11е

Рго

11е

- 43 027315

115

120

125

Ьеи

Уа1

11е

Азп

Ьуз

Уа1

Ьеи

Рго

МеЬ

Уа1

Зег

11е

ТЬг

Ьеи

А1а

130

135

140

Ьеи

Уа1

Туг

Ьеи

Рго

С1у

Уа1

11е

А1а

11е

Уа1

С1п

Ьеи

Н1з

Азп

145

150

155

160

С1у

ТЬг

Ьуз

Туг

Ьуз

РЬе

Рго

Н1з

Тгр

Ьеи

Азр

Ьуз

Тгр

МеЬ

Ьеи

165

170

175

ТЬг

Агд

Ьуз

С1п

РЬе

С1у

Ьеи

Зег

РЬе

А1а

Уа1

Ьеи

Н1з

180

185

190

А1а

11е

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Туг

Рго

МеЬ

Агд

Зег

Туг

Агд

Туг

Ьуз

195

200

205

Ьеи

Азп

Тгр

А1а

Туг

С1п

Уа1

С1п

Азп

Ьуз

С1и

Азр

А1а

210

215

220

Тгр

11е

С1и

Н1з

Азр

Уа1

Тгр

Агд

МеЬ

С1и

11е

Туг

Уа1

Зег

Ьеи

С1у

225

230

235

240

11е

Уа1

С1у

Ьеи

А1а

11е

Ьеи

А1а

Ьеи

А1а

Уа1

ТЬг

Зег

11е

Рго

245

250

255

Зег

Уа1

Зег

Азр

Зег

Ьеи

ТЬг

Тгр

Агд

С1и

РЬе

Н1з

Туг

11е

С1п

Зег

260

265

270

Ьуз

Ьеи

С1у

11е

Уа1

Зег

Ьеи

С1у

ТЬг

11е

Н1з

А1а

Ьеи

11е

275

280

285

РЬе

А1а

Тгр

Азп

Ьуз

Тгр

11е

Азр

11е

Ьуз

С1п

РЬе

Уа1

Тгр

Туг

ТЬг

290

295

300

Рго

ТЬг

РЬе

МеЬ

11е

А1а

Уа1

РЬе

Ьеи

Рго

11е

Уа1

Ьеи

11е

305

310

315

320

РЬе

Ьуз

Зег

11е

Ьеи

РЬе

Ьеи

Рго

Суз

Ьеи

Агд

Ьуз

11е

Ьеи

Ьуз

325

330

335

11е

Агд

Н1з

С1у

Тгр

С1и

Азр

Уа1

ТЬг

Ьуз

11е

Азп

Ьуз

ТЬг

С1и

11е

340

345

350

Зег Зег С1п Ьеи 355

- 44 027315 <210> 13 <211> 399 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность нуклеиновых кислот антигена РЗСА <400> 13

аЕддасЕдда	саЕддаЕЕсЕ	дЕЕЕсЕддЕс	дссдссдсаа	сссдсдЕдса	ЕЕсЕдсЕддс	60
сЕддсасЕдс	адссЕддаас	сдсссЕдсЕд	ЕдсЕасЕсЕЕ	дЕааддссса	ддЕдадЕаас	120
даддасЕдсс	ЕдсаддЕсда	аааЕЕдЕасЕ	садсЕдддад	адсадЕдсЕд	дассдсасдд	180
аЕсададсад	ЕдддасЕдсЕ	дасадЕсаЕЕ	адсааадддЕ	дсЕсссЕдаа	сЕдЕдЕддас	240
даЕадссадд	аЕЕасЕаЕдЕ	сддааадааа	аасаЕсассЕ	дсЕдЕдасас	адаЕсЕдЕдЕ	300
ааЕдсЕЕсЕд	дсдсссасдс	ЕсЕдсадссс	дсадссдсЕа	ЕЕсЕддсЕсЕ	дсЕдсссдсЕ	360
сЕдддасЕдс	ЕдсЕдЕдддд	асссддасад	сЕдЕдаЕаа			399

<210> 14 <211> 131 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Последовательность аминокислот антигена РЗСЛ <400> 14

МеЕ 1

Азр

Тгр

ТНг

Тгр 5

11е

Ьеи

РНе

Ьеи

Уа1 10

А1а

ТНг

Агд 15

Уа1

Н1з

Зег

А1а

С1у 20

Ьеи

А1а

Ьеи

С1п

Рго 25

С1у

ТНг

А1а

Ьеи

Ьеи 30

Суз

Туг

Зег

Суз

Ьуз 35

А1а

С1п

Уа1

Зег

Азп 40

С1и

Азр

Суз

Ьеи

С1п 45

Уа1

С1и

Азп

Суз

ТНг 50

С1п

Ьеи

С1у

С1и

С1п 55

Суз

Тгр

ТНг

А1а

Агд 60

11е

Агд

А1а

Уа1

С1у 65

Ьеи

ТНг

Уа1

11е 70

Зег

Ьуз

С1у

Суз

Зег 75

Ьеи

Азп

Суз

Уа1

Азр 80

Азр

Зег

С1п

Азр

Туг 85

Туг

Уа1

С1у

Ьуз

Ьуз 90

Азп

11е

ТНг

Суз

Суз 95

Азр

ТНг

Азр

Ьеи

Суз 100

Азп

А1а

Зег

С1у

А1а 105

Н1з

А1а

Ьеи

С1п

Рго 110

А1а

11е

Ьеи

А1а

Ьеи

Рго

А1а

Ьеи

С1у

Ьеи

Тгр

С1у

Рго

- 45 027315

115

120

125

С1у С1п Ьеи

130 <210> 15 <211> 54 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Лидерная последовательность нуклеиновых кислот 1дЕ <400> 15 аКддасКдда саКддаККсК дКККсКддКс дсКдссдсаа сссдсдКдса ККса <210> 16 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Лидерная последовательность аминокислот 1дЕ <400> 16

МеК Тгр ТЬг Тгр 11е Ьеи РЬе Ьеи Уа1 А1а А1а А1а ТЬг Агд Уа1 Н1з 1 5 10 15

Зег <210> 17 <211> 261 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> ИР_001639.1_Н.зар1епз_РЗА_1зо1_ргергоргоКе1п <400> 17

МеК 1

Тгр

Уа1

Рго

Уа1 5

Уа1

РЬе

Ьеи

ТЬг

Ьеи 10

Зег

Уа1

ТЬг

Тгр

11е 15

С1у

А1а

Рго

Ьеи 20

11е

Ьеи

Зег

Агд

11е 25

Уа1

С1у

Тгр

С1и 30

Суз

С1и

Ьуз

Н1з

Зег 35

С1п

Рго

Тгр

С1п

Уа1 40

Ьеи

Уа1

А1а

Зег

Агд 45

С1у

Агд

А1а

Уа1

Суз 50

С1у

Уа1

Ьеи

Уа1 55

Н1з

Рго

С1п

Тгр

Уа1 60

Ьеи

ТЬг

А1а

- 46 027315

Н1з 65

Суз

11е

Агд

Азп

Ьуз 70

Зег

Уа1

11е

Ьеи

Ьеи 75

С1у

Агд

Н1з

Зег

Ьеи 80

РЬе

Н1з

Рго

С1и

Азр

ТЬг

С1у

С1п

Уа1

РЬе

С1п

Уа1

Зег

Н1з

Зег

РЬе

85

90

95

Рго

Н1з

Рго

Ьеи

Туг

Азр

МеЕ

Зег

Ьеи

Ьуз

Азп

Агд

РЬе

Ьеи

Агд

100

105

110

Рго

С1у

Азр

Зег

Н1з

Азр

Ьеи

МеЕ

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

С1и

115

120

125

Рго

А1а

С1и

Ьеи

ТЬг

Азр

А1а

Уа1

Ьуз

Уа1

МеЕ

Азр

Ьеи

Рго

ТЬг

С1п

130

135

140

С1и

Рго

А1а

Ьеи

С1у

ТЬг

Суз

Туг

А1а

Зег

С1у

Тгр

С1у

Зег

11е

145

150

155

160

С1и

Рго

С1и

РЬе

Ьеи

ТЬг

Рго

Ьуз

Ьеи

С1п

Суз

Уа1

Азр

Ьеи

165

170

175

Н1з

Уа1

11е

Зег

Азп

Азр

Уа1

Суз

А1а

С1п

Уа1

Н1з

Рго

С1п

Ьуз

Уа1

180

185

190

ТЬг

Ьуз

РЬе

МеЕ

Ьеи

Суз

А1а

С1у

Агд

Тгр

ТЬг

С1у

Ьуз

Зег

ТЬг

195

200

205

Суз

Зег

С1у

Азр

Зег

С1у

Рго

Ьеи

Уа1

Суз

Азп

С1у

Уа1

Ьеи

С1п

210

215

220

С1у

11е

ТЬг

Зег

Тгр

С1у

Зег

С1и

Рго

Суз

А1а

Ьеи

Рго

С1и

Агд

Рго

225

230

235

240

Зег

Ьеи

Туг

ТЬг

Ьуз

Уа1

Н1з

Туг

Агд

Ьуз

Тгр

11е

Ьуз

Азр

ТЬг

245

250

255

11е

Уа1

А1а

Азп

Рго

260 <210> 18 <211> 262 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> дЬ_ААА60193.1_Н.зар1епз_РЗА <400> 18

МеЕ Тгр Уа1 Рго Уа1 Уа1 РЬе Ьеи ТЬг Ьеи Зег Уа1 ТЬг Тгр 11е С1у

- 47 027315

5 10 15

А1а

Рго

Ьеи 20

11е

Ьеи

Зег

Агд

11е 25

Уа1

С1у

Тгр

С1и 30

Суз

С1и

Ьуз

Н1з

Зег

С1п

Рго

Тгр

С1п

Уа1

Ьеи

Уа1

А1а

Зег

Агд

С1у

Агд

А1а

35

40

45

ναι

Суз

С1у

Уа1

Ьеи

Уа1

Н1з

Рго

С1п

Тгр

Уа1

Ьеи

ТЬг

А1а

50

55

60

Н1з

Суз

11е

Агд

Ьуз

Суз

Ьуз

Зег

Уа1

11е

Ьеи

С1у

Агд

Н1з

Зег

65

70

75

80

Ьеи

РЬе

Н1з

Рго

С1и

Азр

ТЬг

С1у

С1п

Уа1

РЬе

С1п

Уа1

Зег

Н1з

Зег

85

90

95

РЬе

Рго

Н1з

Рго

Ьеи

Туг

Азр

МеЬ

Зег

Ьеи

Ьуз

Азп

Агд

РЬе

Ьеи

100

105

110

Агд

Рго

С1у

Азр

Зег

Н1з

Азр

Ьеи

МеЬ

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

115

120

125

С1и

Рго

А1а

С1и

Ьеи

ТЬг

Азр

А1а

Уа1

Ьуз

Уа1

МеЬ

Азр

Ьеи

Рго

ТЬг

130

135

140

С1п

С1и

Рго

А1а

Ьеи

С1у

ТЬг

Суз

Туг

А1а

Зег

С1у

Тгр

С1у

Зег

145

150

155

160

11е

С1и

Рго

С1и

РЬе

Ьеи

ТЬг

Рго

Ьуз

Ьеи

С1п

Суз

Уа1

Азр

165

170

175

Ьеи

Н1з

Уа1

11е

Зег

Азп

Азр

Уа1

Суз

А1а

С1п

Уа1

Н1з

Рго

С1п

Ьуз

180

185

190

ναι

ТЬг

Ьуз

РЬе

МеЬ

Ьеи

Суз

А1а

С1у

Агд

Тгр

ТЬг

С1у

Ьуз

Зег

195

200

205

ТЬг

Суз

Зег

С1у

Азр

Зег

С1у

Рго

Ьеи

Уа1

Суз

Азп

С1у

Уа1

Ьеи

210

215

220

С1п

С1у

11е

ТЬг

Зег

Тгр

С1у

Зег

С1и

Рго

Суз

А1а

Ьеи

Рго

С1и

Агд

225

230

235

240

Рго

Зег

Ьеи

Туг

ТЬг

Ьуз

Уа1

Н1з

Туг

Агд

Ьуз

Тгр

11е

Ьуз

Азр

245 250 255

- 48 027315

ТЬг 11е Уа1 А1а Азп Рго 260 <210> 19 <211> 261 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> О6БТ45.1_М.£азс1си1аг±з_КЬК3 <400> 19

МеК 1

Тгр

Уа1

Ьеи

Уа1 5

Уа1

РЬе

Ьеи

ТЬг

Ьеи 10

Зег

Уа1

ТЬг

Тгр

11е 15

С1у

А1а

Рго

Ьеи

11е

Ьеи

Зег

Агд

11е

Уа1

С1у

Тгр

С1и

Суз

С1и

20

25

30

Ьуз

Н£з

Зег

С1п

Рго

Тгр

С1п

Уа1

Ьеи

Уа1

А1а

Зег

Н£з

С1у

Агд

А1а

35

40

45

Уа1

Суз

С1у

Уа1

Ьеи

Уа1

Н£з

Рго

С1п

Тгр

Уа1

Ьеи

ТЬг

А1а

50

55

60

Н£з

Суз

11е

Агд

Зег

Н1з

Зег

Уа1

11е

Ьеи

С1у

Агд

Н£з

Азп

Рго

65

70

75

80

Туг

Рго

С1и

Азр

ТЬг

С1у

С1п

Уа1

РЬе

С1п

Уа1

Зег

Н£з

Зег

РЬе

85

90

95

Рго

Н£з

Рго

Ьеи

Туг

Азп

МеК

Зег

Ьеи

Ьуз

Азп

Агд

Туг

Ьеи

С1у

100

105

110

Рго

С1у

Азр

Зег

Н£з

Азр

Ьеи

МеК

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

С1и

115

120

125

Рго

А1а

С1и

11е

ТЬг

Азр

А1а

Уа1

С1п

Уа1

Ьеи

Азр

Ьеи

Рго

ТЬг

Тгр

130

135

140

С1и

Рго

С1и

Ьеи

С1у

ТЬг

Суз

Туг

А1а

Зег

С1у

Тгр

С1у

Зег

11е

145

150

155

160

С1и

Рго

С1и

Н£з

Ьеи

ТЬг

Рго

Ьуз

Ьеи

С1п

Суз

Уа1

Азр

Ьеи

165

170

175

Н£з

11е

Зег

Азп

Азр

Уа1

Суз

А1а

С1п

Уа1

Н£з

Зег

С1п

Ьуз

Уа1

180

185

190

ТЬг

Ьуз

РЬе

МеК

Ьеи

Суз

А1а

С1у

Зег

Тгр

МеК

С1у

Ьуз

Зег

ТЬг

- 49 027315

195

200

205

Суз

Зег

С1у

Азр

Зег

С1у

Рго

Ьеи

Уа1

Суз

Азр

С1у

Уа1

Ьеи

С1п

210

215

220

С1у

11е

ТЬг

Зег

Тгр

С1у

Зег

С1п

Рго

Суз

А1а

Ьеи

Рго

Агд

Рго

225

230

235

240

Зег

Ьеи

Туг

ТЬг

Ьуз

Уа1

Агд

Туг

Агд

Ьуз

Тгр

11е

С1п

Азр

ТЬг

245

250

255

11е

МеК

А1а

Азп

Рго

260 <210> 20 <211> 261 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223>	ЫР_001036241.	. 1_М.	.ти1аККа_РЗА_ргесигзог
<400>	20
МеК Тгр	Уа1 Ьеи Уа1	Уа1	РЬе Ьеи ТЬг Ьеи Зег Уа1 ТЬг Тгр 11е С1у
1	5		10 15
А1а А1а	Рго Ьеи 11е	Ьеи	Зег Агд 11е Уа1 С1у С1у Тгр С1и Суз С1и
	20		25 30
Ьуз Н1з	Зег С1п Рго	Тгр	С1п Уа1 Ьеи Уа1 А1а Зег Агд С1у Агд А1а
	35		40 45
Уа1 Суз	С1у С1у Уа1	Ьеи	Уа1 Н1з Рго С1п Тгр Уа1 Ьеи ТЬг А1а А1а
50			55 60
Н1з Суз	11е Агд Зег	Азп	Зег Уа1 11е Ьеи Ьеи С1у Агд Н1з Азп Рго
65		70	75 80
Туг Туг	Рго С1и Азр	ТЬг	С1у С1п Уа1 РЬе С1п Уа1 Зег Н1з Зег РЬе
	85		90 95
Рго Н1з	Рго Ьеи Туг	Азп	МеК Зег Ьеи Ьеи Ьуз Азп Агд Туг Ьеи С1у
	100		105 110
Рго С1у	Азр Азр Зег	Зег	Н1з Азр Ьеи МеК Ьеи Ьеи Агд Ьеи Зег С1и
	115		120 125
Рго А1а	С1и 11е ТЬг	Азр	А1а Уа1 С1п Уа1 Ьеи Азр Ьеи Рго ТЬг Тгр
130			135 140

- 50 027315

С1и 145

Рго

С1и

Ьеи

С1у

ТЬг 150

ТЬг

Суз

Туг

А1а

Зег 155

С1у

Тгр

С1у

Зег

11е 160

С1и

Рго

С1и

Н1з

Ьеи

ТЬг

Рго

Ьуз

Ьеи

С1п

Суз

Уа1

Азр

Ьеи

165

170

175

Н1з

11е

Зег

Азп

Азр

Уа1

Суз

А1а

С1п

Уа1

Н1з

Зег

С1п

Ьуз

Уа1

180

185

190

ТЬг

Ьуз

РЬе

МеЕ

Ьеи

Суз

А1а

С1у

Зег

Тгр

МеЕ

С1у

Ьуз

Зег

ТЬг

195

200

205

Суз

Зег

С1у

Азр

Зег

С1у

Рго

Ьеи

Уа1

Суз

Азр

С1у

Уа1

Ьеи

С1п

210

215

220

С1у

11е

ТЬг

Зег

Тгр

С1у

Зег

С1п

Рго

Суз

А1а

Ьеи

Рго

Агд

Рго

225

230

235

240

Зег

Ьеи

Туг

ТЬг

Ьуз

Уа1

Агд

Туг

Агд

Ьуз

Тгр

11е

С1п

Азр

ТЬг

245

250

255

11е

МеЕ

А1а

Азп

Рго

260 <210> 21 <211> 244 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223>

ААЬ82258 .

. 1_М.

. ти1аЕЕа_

РЗА

<400>

21

А1а

Рго

Ьеи

11е

Ьеи

Зег

Агд

11е

Уа1

С1у

Тгр

С1и

Суз

С1и

Ьуз

1

5

10

15

Н1з

Зег

С1п

Рго

Тгр

С1п

Уа1

Ьеи

Уа1

А1а

Зег

Агд

С1у

Агд

А1а

Уа1

20

25

30

Суз

С1у

Уа1

Ьеи

Уа1

Н1з

Рго

С1п

Тгр

Уа1

Ьеи

ТЬг

А1а

Н1з

35

40

45

Суз

11е

Агд

Зег

Азп

Зег

Уа1

11е

Ьеи

С1у

Агд

Н1з

Азп

Рго

Туг

50

55

60

Туг

Рго

С1и

Азр

ТЬг

С1у

С1п

Уа1

РЬе

С1п

Уа1

Зег

Н1з

Зег

РЬе

Рго

65

70

75

80

- 51 027315

Н1з

Рго

Ьеи

Туг

Азп 85

МеЬ

Зег

Ьеи

Ьуз 90

Азп

Агд

Туг

Ьеи

С1у 95

Рго

С1у

Азр

Зег

Н1з

Азр

Ьеи

МеЬ

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

С1и

Рго

100

105

110

А1а

С1и

11е

ТЬг

Азр

А1а

Уа1

С1п

Уа1

Ьеи

Азр

Ьеи

Рго

ТЬг

Тгр

С1и

115

120

125

Рго

С1и

Ьеи

С1у

ТЬг

Суз

Туг

А1а

Зег

С1у

Тгр

С1у

Зег

11е

С1и

130

135

140

Рго

С1и

Н1з

Ьеи

ТЬг

Рго

Ьуз

Ьеи

С1п

Суз

Уа1

Азр

Ьеи

Н1з

145

150

155

160

11е

Зег

Азп

Азр

Уа1

Суз

А1а

С1п

Уа1

Н1з

Зег

С1п

Ьуз

Уа1

ТЬг

165

170

175

Ьуз

РЬе

МеЬ

Ьеи

Суз

А1а

С1у

Зег

Тгр

МеЬ

С1у

Ьуз

Зег

ТЬг

Суз

180

185

190

Зег

С1у

Азр

Зег

С1у

Рго

Ьеи

Уа1

Суз

Азр

С1у

Уа1

Ьеи

С1п

С1у

195

200

205

11е

ТЬг

Зег

Тгр

С1у

Зег

С1п

Рго

Суз

А1а

Ьеи

Рго

Агд

Рго

Зег

210

215

220

Ьеи

Туг

ТЬг

Ьуз

Уа1

Агд

Туг

Агд

Ьуз

Тгр

11е

С1п

Азр

ТЬг

11е

225

230

235

240

МеЬ

А1а

Азп

Рго

<210> 22 <211> 750 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> ИР_004467

. 1_

Нитап

._еСРЬЬ_

1зо1

<400> 22

МеЬ Тгр Азп 1

Ьеи

Ьеи 5

Н1з

С1и ТЬг

Азр

Зег 10

А1а

Уа1

А1а

ТЬг

А1а 15

Агд

Агд Рго Агд

Тгр 20

Ьеи

Суз

А1а С1у

А1а 25

Ьеи

Уа1

Ьеи

А1а

С1у 30

С1у

РЬе

- 52 027315

РЬе

Ьеи

Ьеи 35

С1у

РЬе

Ьеи

РЬе

С1у 40

Тгр

РЬе

11е

Ьуз

Зег 45

Зег

Азп

С1и

А1а

ТЬг

Азп

11е

ТЬг

Рго

Ьуз

Н1з

Азп

МеК

Ьуз

А1а

РЬе

Ьеи

Азр

С1и

50

55

60

Ьеи

Ьуз

А1а

С1и

Азп

11е

Ьуз

РЬе

Ьеи

Туг

Азп

РЬе

ТЬг

С1п

11е

65

70

75

80

Рго

Н1з

Ьеи

А1а

С1у

ТЬг

С1и

С1п

Азп

РЬе

С1п

Ьеи

А1а

Ьуз

С1п

11е

85

90

95

С1п

Зег

С1п

Тгр

Ьуз

С1и

РЬе

С1у

Ьеи

Азр

Зег

Уа1

С1и

Ьеи

А1а

Н1з

100

105

110

Туг

Азр

Уа1

Ьеи

Зег

Туг

Рго

Азп

Ьуз

ТЬг

Н1з

Рго

Азп

Туг

11е

115

120

125

Зег

11е

Азп

С1и

Азр

С1у

Азп

С1и

11е

РЬе

Азп

ТЬг

Зег

Ьеи

РЬе

130

135

140

С1и

Рго

С1у

Туг

С1и

Азп

Уа1

Зег

Азр

11е

Уа1

Рго

145

150

155

160

РЬе

Зег

А1а

РЬе

Зег

Рго

С1п

С1у

МеК

Рго

С1и

С1у

Азр

Ьеи

Уа1

Туг

165

170

175

Уа1

Азп

Туг

А1а

Агд

ТЬг

С1и

Азр

РЬе

Ьуз

Ьеи

С1и

Агд

Азр

МеК

180

185

190

Ьуз

11е

Азп

Суз

Зег

С1у

Ьуз

11е

Уа1

11е

А1а

Агд

Туг

С1у

Ьуз

Уа1

195

200

205

РЬе

Агд

С1у

Азп

Ьуз

Уа1

Ьуз

Азп

А1а

С1п

Ьеи

А1а

С1у

А1а

Ьуз

С1у

210

215

220

Уа1

11е

Ьеи

Туг

Зег

Азр

Рго

А1а

Азр

Туг

РЬе

А1а

Рго

С1у

Уа1

Ьуз

225

230

235

240

Зег

Туг

Рго

Азр

С1у

Тгр

Азп

Ьеи

Рго

С1у

Уа1

С1п

Агд

С1у

245

250

255

Азп

11е

Ьеи

Азп

Ьеи

Азп

С1у

А1а

С1у

Азр

Рго

Ьеи

ТЬг

Рго

С1у

Туг

260

265

270

Рго

А1а

Азп

С1и

Туг

А1а

Туг

Агд

С1у

11е

А1а

С1и

А1а

Уа1

С1у

275

280

285

- 53 027315

Ьеи

Рго 290

Зег

11е

Рго

Уа1

Н1з 295

Рго

11е

С1у

Туг

Туг 300

Азр

А1а

С1п

Ьуз

Ьеи

С1и

Ьуз

МеЬ

С1у

Зег

А1а

Рго

Азр

Зег

Тгр

Агд

305

310

315

320

С1у

Зег

Ьеи

Ьуз

Уа1

Рго

Туг

Азп

Уа1

С1у

Рго

С1у

РЕе

ТЕг

С1у

Азп

325

330

335

РЕе

Зег

ТЕг

С1п

Ьуз

Уа1

Ьуз

МеЬ

Н1з

11е

Н1з

Зег

ТЕг

Азп

С1и

Уа1

340

345

350

ТЕг

Агд

11е

Туг

Азп

Уа1

11е

С1у

ТЕг

Ьеи

Агд

С1у

А1а

Уа1

С1и

Рго

355

360

365

Азр

Агд

Туг

Уа1

11е

Ьеи

С1у

Н1з

Агд

Азр

Зег

Тгр

Уа1

РЕе

С1у

370

375

380

С1у

11е

Азр

Рго

С1п

Зег

С1у

А1а

Уа1

Н1з

С1и

11е

Уа1

Агд

385

390

395

400

Зег

РЕе

С1у

ТЕг

Ьеи

Ьуз

С1и

С1у

Тгр

Агд

Рго

Агд

ТЕг

11е

405

410

415

Ьеи

РЕе

А1а

Зег

Тгр

Азр

А1а

С1и

РЕе

С1у

Ьеи

С1у

Зег

ТЕг

420

425

430

С1и

Тгр

А1а

С1и

Азп

Зег

Агд

Ьеи

С1п

С1и

Агд

С1у

Уа1

А1а

435

440

445

Туг

11е

Азп

А1а

Азр

Зег

11е

С1и

С1у

Азп

Туг

ТЕг

Ьеи

Агд

Уа1

450

455

460

Азр

Суз

ТЕг

Рго

Ьеи

МеЬ

Туг

Зег

Ьеи

Уа1

Н1з

Азп

Ьеи

ТЕг

Ьуз

С1и

465

470

475

480

Ьеи

Ьуз

Зег

Рго

Азр

С1и

С1у

РЕе

С1и

С1у

Ьуз

Зег

Ьеи

Туг

С1и

Зег

485

490

495

Тгр

ТЕг

Ьуз

Зег

Рго

Зег

Рго

С1и

РЕе

Зег

С1у

МеЬ

Рго

Агд

11е

500

505

510

Зег

Ьуз

Ьеи

С1у

Зег

С1у

Азп

Азр

РЕе

С1и

Уа1

РЕе

С1п

Агд

Ьеи

515

520

525

С1у

11е

А1а

Зег

С1у

Агд

А1а

Агд

Туг

ТЕг

Ьуз

Азп

Тгр

С1и

ТЕг

Азп

530 535 540

- 54 027315

^уз 545

РПе

Зег

С1у

Туг

Рго 550

^еυ

Туг

Н1з

Зег

Уа1 555

Туг

С1и

ТПг

Туг

С1и 560

^еυ

Уа1

С1и

^уз

РПе

Туг

Азр

Рго

МеЕ

РПе

^уз

Туг

Н1з

^еυ

ТПг

Уа1

565

570

575

А1а

С1п

Уа1

Агд

С1у

МеЕ

Уа1

РПе

С1и

^еυ

А1а

Азп

Зег

11е

Уа1

580

585

590

^еυ

Рго

РПе

Азр

Суз

Агд

Азр

Туг

А1а

Уа1

^еυ

Агд

^уз

Туг

А1а

595

600

605

Азр

^уз

11е

Туг

Зег

11е

Зег

МеЕ

^уз

Н1з

Рго

С1п

С1и

МеЕ

^уз

ТПг

610

615

620

Туг

Зег

Уа1

Зег

РПе

Азр

Зег

^еυ

РПе

Зег

А1а

Уа1

^уз

Азп

РПе

ТПг

625

630

635

640

С1и

11е

А1а

Зег

^уз

РПе

Зег

С1и

Агд

^еυ

С1п

Азр

РПе

Азр

^уз

Зег

645

650

655

Азп

Рго

11е

Уа1

^еυ

Агд

МеЕ

Азп

Азр

С1п

^еυ

МеЕ

РПе

^еυ

С1и

660

665

670

Агд

А1а

РПе

11е

Азр

Рго

^еυ

С1у

^еυ

Рго

Азр

Агд

Рго

РПе

Туг

Агд

675

680

685

Н1з

Уа1

11е

Туг

А1а

Рго

Зег

Н1з

Азп

^уз

Туг

А1а

С1у

С1и

Зег

690

695

700

РПе

Рго

С1у

11е

Туг

Азр

А1а

^еυ

РПе

Азр

11е

С1и

Зег

^уз

Уа1

Азр

705

710

715

720

Рго

Зег

^уз

А1а

Тгр

С1у

С1и

Уа1

^уз

Агд

С1п

11е

Туг

Уа1

А1а

725

730

735

РПе

ТПг

Уа1

С1п

А1а

С1и

ТПг

^еυ

Зег

С1и

Уа1

А1а

740 745 750 <210> 23 <211> 749 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нитап_РЗМА_ААС83972.1 <400> 23

- 55 027315

МеЕ 1

Тгр

Αзη

Ьеи

Ьеи 5

Н1з

С1и

ТЕг

Αзρ

Зег 10

Α^

Vа1

Α^

ТЕг

Α^ 15

Ατρ

Рго

Ατρ

Тгр

Ьеи

Суз

Α^

С1у

Α^

Ьеи

Vа1

Ьеи

Α^

С1у

РЕе

20

25

30

РЕе

Ьеи

С1у

РЕе

Ьеи

РЕе

С1у

Тгр

РЕе

11е

Ьуз

Зег

Αзη

С1и

35

40

45

Α^

ТЕг

Αзη

11е

ТЕг

Рго

Ьуз

Н1з

Αзη

МеЕ

Ьуз

Α^

РЕе

Ьеи

Αзρ

С1и

50

55

60

Ьеи

Ьуз

Α^

С1и

Αзη

11е

Ьуз

РЕе

Ьеи

Н1з

Αзη

РЕе

ТЕг

С1п

11е

65

70

75

80

Рго

Н1з

Ьеи

Α^

С1у

ТЕг

С1и

С1п

Αзη

РЕе

С1п

Ьеи

Α^

Ьуз

С1п

11е

85

90

95

Θ1η

Зег

С1п

Тгр

Ьуз

С1и

РЕе

С1у

Ьеи

Αзρ

Зег

Vа1

С1и

Ьеи

Α^

Н1з

100

105

110

Туг

Αзρ

Vа1

Ьеи

Зег

Туг

Рго

Αзη

Ьуз

ТЕг

Н1з

Рго

Αзη

Туг

11е

115

120

125

Зег

11е

Αзη

С1и

Αзρ

С1у

Αзη

С1и

11е

РЕе

Αзη

ТЕг

Зег

Ьеи

РЕе

130

135

140

С1и

Рго

С1у

Туг

С1и

Αзη

Vа1

Зег

Αзρ

11е

Vа1

Рго

145

150

155

160

РЕе

Зег

Α^

РЕе

Зег

Рго

С1п

С1у

МеЕ

Рго

С1и

С1у

Αзρ

Ьеи

Vа1

Туг

165

170

175

Vа1

Αзη

Туг

Α^

Ατρ

ТЕг

С1и

Αзρ

РЕе

Ьуз

Ьеи

С1и

Ατρ

Αзρ

МеЕ

180

185

190

Ьуз

11е

Αзη

Суз

Зег

С1у

Ьуз

11е

Vа1

11е

Α^

Ατρ

Туг

С1у

Ьуз

Vа1

195

200

205

РЕе

Ατρ

С1у

Αзη

Ьуз

Vа1

Ьуз

Αзη

Α^

С1п

Ьеи

Α^

С1у

Α^

Ьуз

С1у

210

215

220

Vа1

11е

Ьеи

Туг

Зег

Αзρ

Рго

Α^

Αзρ

Туг

РЕе

Α^

Рго

С1у

Vа1

Ьуз

225

230

235

240

Зег

Туг

Рго

Αзρ

С1у

Тгр

Αзη

Ьеи

Рго

С1у

Vа1

С1п

Ατρ

С1у

245 250 255

- 56 027315

Азп

11е

Ьеи

Азп 260

Ьеи

Азп

С1у

А1а

С1у 265

Азр

Рго

Ьеи

ТЬг

Рго 270

С1у

Туг

Рго

А1а

Азп

С1и

Туг

А1а

Туг

Агд

С1у

11е

А1а

С1и

А1а

Уа1

С1у

275

280

285

Ьеи

Рго

Зег

11е

Рго

Уа1

Н1з

Рго

11е

С1у

Туг

Азр

А1а

С1п

Ьуз

290

295

300

Ьеи

С1и

Ьуз

МеЕ

С1у

Зег

А1а

Рго

Азр

Зег

Тгр

Агд

305

310

315

320

С1у

Зег

Ьеи

Ьуз

Уа1

Рго

Туг

Азп

Уа1

С1у

Рго

С1у

РЬе

ТЬг

С1у

Азп

325

330

335

РЬе

Зег

ТЬг

С1п

Ьуз

Уа1

Ьуз

МеЕ

Н1з

11е

Н1з

Зег

ТЬг

Азп

С1и

Уа1

340

345

350

ТЬг

Агд

11е

Туг

Азп

Уа1

11е

С1у

ТЬг

Ьеи

Агд

С1у

А1а

Уа1

С1и

Рго

355

360

365

Азр

Агд

Туг

Уа1

11е

Ьеи

С1у

Н1з

Агд

Азр

Зег

Тгр

Уа1

РЬе

С1у

370

375

380

С1у

11е

Азр

Рго

С1п

Зег

С1у

А1а

Уа1

Н1з

С1и

11е

Уа1

Агд

385

390

395

400

Зег

РЬе

С1у

ТЬг

Ьеи

Ьуз

С1и

С1у

Тгр

Агд

Рго

Агд

ТЬг

11е

405

410

415

Ьеи

РЬе

А1а

Зег

Тгр

Азр

А1а

С1и

РЬе

С1у

Ьеи

С1у

Зег

ТЬг

420

425

430

С1и

Тгр

А1а

С1и

Азп

Зег

Агд

Ьеи

С1п

С1и

Агд

С1у

Уа1

А1а

435

440

445

Туг

11е

Азп

А1а

Азр

Зег

11е

С1и

С1у

Азп

Туг

ТЬг

Ьеи

Агд

Уа1

450

455

460

Азр

Суз

ТЬг

Рго

Ьеи

МеЕ

Туг

Зег

Ьеи

Уа1

Н1з

Азп

Ьеи

ТЬг

Ьуз

С1и

465

470

475

480

Ьеи

Ьуз

Зег

Рго

Азр

С1и

С1у

РЬе

С1и

С1у

Ьуз

Зег

Ьеи

Туг

С1и

Зег

485

490

495

Тгр

ТЬг

Ьуз

Зег

Рго

Зег

Рго

С1и

РЬе

Зег

С1у

МеЕ

Рго

Агд

11е

- 57 027315

500

505

510

Зег

Ьуз

Ьеи

С1у

Зег

С1у

Азп

Азр

РЬе

С1и

Уа1

РЬе

С1п

Агд

Ьеи

515

520

525

С1у

11е

А1а

Зег

С1у

Агд

А1а

Агд

Туг

ТЬг

Ьуз

Азп

Тгр

С1и

ТЬг

Азп

530

535

540

РЬе

Зег

С1у

Туг

Рго

Ьеи

Туг

Н1з

Зег

Уа1

Туг

С1и

ТЬг

Туг

С1и

Ьеи

545

550

555

560

Уа1

С1и

Ьуз

РЬе

Туг

Азр

Рго

МеК

РЬе

Ьуз

Туг

Н1з

Ьеи

ТЬг

Уа1

А1а

565

570

575

С1п

Уа1

Агд

С1у

МеК

Уа1

РЬе

С1и

Ьеи

А1а

Азп

Зег

11е

Уа1

Ьеи

580

585

590

Рго

РЬе

Азр

Суз

Агд

Азр

Туг

А1а

Уа1

Ьеи

Агд

Ьуз

Туг

А1а

Азр

595

600

605

Ьуз

11е

Туг

Зег

11е

Зег

МеК

Ьуз

Н1з

Рго

С1п

С1и

МеК

Ьуз

ТЬг

Туг

610

615

620

Зег

Уа1

Зег

РЬе

Азр

Зег

Ьеи

РЬе

Зег

А1а

Уа1

Ьуз

Азп

РЬе

ТЬг

С1и

625

630

635

640

11е

А1а

Зег

Ьуз

РЬе

Зег

С1и

Агд

Ьеи

С1п

Азр

РЬе

Азр

Ьуз

Зег

Азп

645

650

655

Рго

11е

Уа1

Ьеи

Агд

МеК

Азп

Азр

С1п

Ьеи

МеК

РЬе

Ьеи

С1и

Агд

660

665

670

А1а

РЬе

11е

Азр

Рго

Ьеи

С1у

Ьеи

Рго

Азр

Агд

Рго

РЬе

Туг

Агд

Н1з

675

680

685

Уа1

11е

Туг

А1а

Рго

Зег

Н1з

Азп

Ьуз

Туг

А1а

С1у

С1и

Зег

РЬе

690

695

700

Рго

С1у

11е

Туг

Азр

А1а

Ьеи

РЬе

Азр

11е

С1и

Зег

Ьуз

Уа1

Азр

Рго

705

710

715

720

Зег

Ьуз

А1а

Тгр

С1у

С1и

Уа1

Ьуз

Агд

С1п

11е

Туг

Уа1

А1а

РЬе

725

730

735

ТЬг

Уа1

С1п

А1а

С1и

ТЬг

Ьеи

Зег

С1и

Уа1

А1а

740

745

- 58 027315 <210> 24 <211> 735 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> М. ти1аККа_еСРЬЬ_1зо1 ХР_001096141.2 <400> 24

МеК 1

11е

А1а

С1у

Зег 5

Зег

Туг

Рго

Ьеи

Ьеи 10

Ьеи

А1а

Туг

А1а 15

Суз

ТИг

С1у

Суз

Ьеи

А1а

С1и

Агд

Ьеи

С1у

Тгр

РИе

11е

Ьуз

Зег

20

25

30

С1и

А1а

ТИг

Азп

11е

ТИг

Рго

Ьуз

Н1з

Азп

МеК

Ьуз

А1а

РИе

Ьеи

Азр

35

40

45

С1и

Ьеи

Ьуз

А1а

С1и

Азп

11е

Ьуз

РИе

Ьеи

Н1з

Азп

РИе

ТИг

С1п

50

55

60

11е

Рго

Н1з

Ьеи

А1а

С1у

ТИг

С1и

С1п

Азп

РИе

С1п

Ьеи

А1а

Ьуз

С1п

65

70

75

80

11е

С1п

Зег

С1п

Тгр

Ьуз

С1и

РИе

С1у

Ьеи

Азр

Зег

Уа1

С1и

Ьеи

ТИг

85

90

95

Н1з

Туг

Азр

Уа1

Ьеи

Зег

Туг

Рго

Азп

Ьуз

ТИг

Н1з

Рго

Азп

Туг

100

105

110

11е

Зег

11е

Азп

С1и

Азр

С1у

Азп

С1и

11е

РИе

Азп

ТИг

Зег

Ьеи

115

120

125

РИе

С1и

Рго

А1а

С1у

Туг

С1и

Азп

Уа1

Зег

Азр

11е

Уа1

Рго

130

135

140

Рго

РИе

Зег

А1а

РИе

Зег

Рго

С1п

С1у

МеК

Рго

С1и

С1у

Азр

Ьеи

Уа1

145

150

155

160

Туг

Уа1

Азп

Туг

А1а

Агд

ТИг

С1и

Азр

РИе

Ьуз

Ьеи

С1и

Агд

Азр

165

170

175

МеК

Ьуз

11е

Азп

Суз

Зег

С1у

Ьуз

11е

Уа1

11е

А1а

Агд

Туг

С1у

Ьуз

180

185

190

Уа1

РИе

Агд

С1у

Азп

Ьуз

Уа1

Ьуз

Азп

А1а

С1п

Ьеи

А1а

С1у

А1а

ТИг

195

200

205

С1у

Уа1

11е

Ьеи

Туг

Зег

Азр

Рго

А1а

Азр

Туг

РИе

А1а

Рго

С1у

Уа1

- 59 027315

210 215 220

Ьуз 225

Зег

Туг

Рго

Азр

С1у 230

Тгр

Азп

Ьеи

Рго

С1у 235

С1у

Уа1

С1п

Агд 240

С1у

Азп

11е

Ьеи

Азп

Ьеи

Азп

С1у

А1а

С1у

Азр

Рго

Ьеи

ТЬг

Рго

С1у

245

250

255

Туг

Рго

А1а

Азп

С1и

Туг

А1а

Туг

Агд

С1у

МеЬ

А1а

С1и

А1а

Уа1

260

265

270

С1у

Ьеи

Рго

Зег

11е

Рго

Уа1

Н1з

Рго

11е

С1у

Туг

Азр

А1а

С1п

275

280

285

Ьуз

Ьеи

С1и

Ьуз

МеЬ

С1у

Зег

А1а

Зег

Рго

Азр

Зег

Тгр

290

295

300

Агд

С1у

Зег

Ьеи

Ьуз

Уа1

Рго

Туг

Азп

Уа1

С1у

Рго

С1у

РЬе

ТЬг

С1у

305

310

315

320

Азп

РЬе

Зег

ТЬг

С1п

Ьуз

Уа1

Ьуз

МеЬ

Н1з

11е

Н1з

Зег

ТЬг

Зег

С1и

325

330

335

Уа1

ТЬг

Агд

11е

Туг

Азп

Уа1

11е

С1у

ТЬг

Ьеи

Агд

С1у

А1а

Уа1

С1и

340

345

350

Рго

Азр

Агд

Туг

Уа1

11е

Ьеи

С1у

Н1з

Агд

Азр

Зег

Тгр

Уа1

РЬе

355

360

365

С1у

11е

Азр

Рго

С1п

Зег

С1у

А1а

Уа1

Н1з

С1и

11е

Уа1

370

375

380

Агд

Зег

РЬе

С1у

ТЬг

Ьеи

Ьуз

С1и

С1у

Тгр

Агд

Рго

Агд

ТЬг

385

390

395

400

11е

Ьеи

РЬе

А1а

Зег

Тгр

Азр

А1а

С1и

РЬе

С1у

Ьеи

С1у

Зег

405

410

415

ТЬг

С1и

Тгр

А1а

С1и

Азп

Зег

Агд

Ьеи

С1п

С1и

Агд

С1у

Уа1

420

425

430

А1а

Туг

11е

Азп

А1а

Азр

Зег

11е

С1и

С1у

Азп

Туг

ТЬг

Ьеи

Агд

435

440

445

Уа1

Азр

Суз

ТЬг

Рго

Ьеи

МеЬ

Туг

Зег

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Ьеи

ТЬг

Ьуз

450 455 460

- 60 027315

Θ1υ 465

Ьеи

С1и

Зег

Рго

Азр 470

С1и

С1у

РЬе

С1и

С1у 475

Ьуз

Зег

Ьеи

Туг

С1и 480

Зег

Тгр

ТЬг

Ьуз

Зег

Рго

Зег

Рго

С1и

РЬе

Зег

С1у

МеЕ

Рго

Агд

485

490

495

11е

Зег

Ьуз

Ьеи

С1у

Зег

С1у

Азп

Азр

РЬе

С1и

Уа1

РЬе

С1п

Агд

500

505

510

Ьеи

С1у

11е

А1а

Зег

С1у

Агд

А1а

Агд

Туг

ТЬг

Ьуз

Азп

Тгр

С1и

ТЬг

515

520

525

Азп

Ьуз

РЬе

Зег

Туг

Рго

Ьеи

Туг

Н1з

Зег

Уа1

Туг

С1и

ТЬг

Туг

530

535

540

С1и

Ьеи

Уа1

С1и

Ьуз

РЬе

Туг

Азр

Рго

МеЕ

РЬе

Ьуз

Туг

Н1з

Ьеи

ТЬг

545

550

555

560

Уа1

А1а

С1п

Уа1

Агд

С1у

МеЕ

Уа1

РЬе

С1и

Ьеи

А1а

Азп

Зег

Уа1

565

570

575

Уа1

Ьеи

Рго

РЬе

Азр

Суз

Агд

Азр

Туг

А1а

Уа1

Ьеи

Агд

Ьуз

Туг

580

585

590

А1а

Азр

Ьуз

11е

Туг

Азп

11е

Зег

МеЕ

Ьуз

Н1з

Рго

С1п

С1и

МеЕ

Ьуз

595

600

605

ТЬг

Туг

Зег

Уа1

Зег

РЬе

Азр

Зег

Ьеи

РЬе

Зег

А1а

Уа1

Ьуз

Азп

РЬе

610

615

620

ТЬг

С1и

11е

А1а

Зег

Ьуз

РЬе

Зег

С1и

Агд

Ьеи

Агд

Азр

РЬе

Азр

Ьуз

625

630

635

640

Зег

Азп

Рго

11е

Ьеи

Агд

МеЕ

Азп

Азр

С1п

Ьеи

МеЕ

РЬе

Ьеи

645

650

655

С1и

Агд

А1а

РЬе

11е

Азр

Рго

Ьеи

С1у

Ьеи

Рго

Азр

Агд

Рго

РЬе

Туг

660

665

670

Агд

Н1з

Уа1

11е

Туг

А1а

Рго

Зег

Н1з

Азп

Ьуз

Туг

А1а

С1у

С1и

675

680

685

Зег

РЬе

Рго

С1у

11е

Туг

Азр

А1а

Ьеи

РЬе

Азр

11е

С1и

Зег

Ьуз

Уа1

690

695

700

Азр

Рго

Зег

С1п

А1а

Тгр

С1у

С1и

Уа1

Ьуз

Агд

С1п

11е

Зег

11е

А1а

705

710

715

720

- 61 027315

ТЕг РЕе ТЕг ναΐ С1п А1а А1а А1а 01и ТЕг Ьеи Зег 01и Уа1 А1а 725 730 735 <210> 25 <211> 704 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> М. ти1аЬЬа_ОСРЬЬ_1зо2_ХР_002799784.1 <400> 25

МеЬ 1

11е

А1а

С1у

Зег 5

Зег

Туг

Рго

Ьеи

Ьеи 10

Ьеи

А1а

Туг

А1а 15

Суз

ТЕг

С1у

Суз

Ьеи

А1а

С1и

Агд

Ьеи

С1у

Тгр

РЕе

11е

Ьуз

Зег

20

25

30

С1и

А1а

ТЕг

Азп

11е

ТЕг

Рго

Ьуз

Н1з

Азп

МеЬ

Ьуз

А1а

РЕе

Ьеи

Азр

35

40

45

С1и

Ьеи

Ьуз

А1а

С1и

Азп

11е

Ьуз

РЕе

Ьеи

Н1з

Азп

РЕе

ТЕг

С1п

50

55

60

11е

Рго

Н1з

Ьеи

А1а

С1у

ТЕг

С1и

С1п

Азп

РЕе

С1п

Ьеи

А1а

Ьуз

С1п

65

70

75

80

11е

С1п

Зег

С1п

Тгр

Ьуз

С1и

РЕе

С1у

Ьеи

Азр

Зег

Уа1

С1и

Ьеи

ТЕг

85

90

95

Н1з

Туг

Азр

Уа1

Ьеи

Зег

Туг

Рго

Азп

Ьуз

ТЕг

Н1з

Рго

Азп

Туг

100

105

110

11е

Зег

11е

Азп

С1и

Азр

С1у

Азп

С1и

11е

РЕе

Азп

ТЕг

Зег

Ьеи

115

120

125

РЕе

С1и

Рго

А1а

С1у

Туг

С1и

Азп

Уа1

Зег

Азр

11е

Уа1

Рго

130

135

140

Рго

РЕе

Зег

А1а

РЕе

Зег

Рго

С1п

С1у

МеЬ

Рго

С1и

С1у

Азр

Ьеи

Уа1

145

150

155

160

Туг

Уа1

Азп

Туг

А1а

Агд

ТЕг

С1и

Азр

РЕе

Ьуз

Ьеи

С1и

Агд

Азр

165

170

175

МеЬ

Ьуз

11е

Азп

Суз

Зег

С1у

Ьуз

11е

Уа1

11е

А1а

Агд

Туг

С1у

Ьуз

180

185

190

- 62 027315

Уа1

РЬе

Агд 195

С1у

Азп

Ьуз

Уа1

Ьуз 200

Азп

А1а

С1п

Ьеи

А1а 205

С1у

А1а

ТЬг

С1у

Уа1

11е

Ьеи

Туг

Зег

Азр

Рго

А1а

Азр

Туг

РЬе

А1а

Рго

С1у

Уа1

210

215

220

Ьуз

Зег

Туг

Рго

Азр

С1у

Тгр

Азп

Ьеи

Рго

С1у

Уа1

С1п

Агд

225

230

235

240

С1у

Азп

11е

Ьеи

Азп

Ьеи

Азп

С1у

А1а

С1у

Азр

Рго

Ьеи

ТЬг

Рго

С1у

245

250

255

Туг

Рго

А1а

Азп

С1и

Туг

А1а

Туг

Агд

С1у

МеК

А1а

С1и

А1а

Уа1

260

265

270

С1у

Ьеи

Рго

Зег

11е

Рго

Уа1

Н1з

Рго

11е

С1у

Туг

Азр

А1а

С1п

275

280

285

Ьуз

Ьеи

С1и

Ьуз

МеК

С1у

Зег

А1а

Зег

Рго

Азр

Зег

Тгр

290

295

300

Агд

С1у

Зег

Ьеи

Ьуз

Уа1

Рго

Туг

Азп

Уа1

С1у

Рго

С1у

РЬе

ТЬг

С1у

305

310

315

320

Азп

РЬе

Зег

ТЬг

С1п

Ьуз

Уа1

Ьуз

МеК

Н1з

11е

Н1з

Зег

ТЬг

Зег

С1и

325

330

335

Уа1

ТЬг

Агд

11е

Туг

Азп

Уа1

11е

С1у

ТЬг

Ьеи

Агд

С1у

А1а

Уа1

С1и

340

345

350

Рго

Азр

Агд

Туг

Уа1

11е

Ьеи

С1у

Н1з

Агд

Азр

Зег

Тгр

Уа1

РЬе

355

360

365

С1у

11е

Азр

Рго

С1п

Зег

С1у

А1а

Уа1

Н1з

С1и

11е

Уа1

370

375

380

Агд

Зег

РЬе

С1у

ТЬг

Ьеи

Ьуз

С1и

С1у

Тгр

Агд

Рго

Агд

ТЬг

385

390

395

400

11е

Ьеи

РЬе

А1а

Зег

Тгр

Азр

А1а

С1и

РЬе

С1у

Ьеи

С1у

Зег

405

410

415

ТЬг

С1и

Тгр

А1а

С1и

Азп

Зег

Агд

Ьеи

С1п

С1и

Агд

С1у

Уа1

420

425

430

А1а

Туг

11е

Азп

А1а

Азр

Зег

11е

С1и

С1у

Азп

Туг

ТЬг

Ьеи

Агд

435

440

445

- 63 027315

να1

Азр 450

Суз

ТЬг

Рго

Ьеи

МеК 455

Туг

Зег

Ьеи

Уа1

Туг 460

Азп

Ьеи

ТЬг

Ьуз

Θ1υ

Ьеи

С1и

Зег

Рго

Азр

С1и

С1у

РЬе

С1и

С1у

Ьуз

Зег

Ьеи

Туг

С1и

465

470

475

480

Зег

Тгр

ТЬг

Ьуз

Зег

Рго

Зег

Рго

С1и

РЬе

Зег

С1у

МеК

Рго

Агд

485

490

495

11е

Зег

Ьуз

Ьеи

С1у

Зег

С1у

Азп

Азр

РЬе

С1и

Уа1

РЬе

С1п

Агд

500

505

510

Ьеи

С1у

11е

А1а

Зег

С1у

Агд

А1а

Агд

Туг

ТЬг

Ьуз

Азп

Тгр

С1и

ТЬг

515

520

525

Азп

Ьуз

РЬе

Зег

Туг

Рго

Ьеи

Туг

Н1з

Зег

Уа1

Туг

С1и

ТЬг

Туг

530

535

540

С1и

Ьеи

Уа1

С1и

Ьуз

РЬе

Туг

Азр

Рго

МеК

РЬе

Ьуз

Туг

Н1з

Ьеи

ТЬг

545

550

555

560

να1

А1а

С1п

Уа1

Агд

С1у

МеК

Уа1

РЬе

С1и

Ьеи

А1а

Азп

Зег

Уа1

565

570

575

να1

Ьеи

Рго

РЬе

Азр

Суз

Агд

Азр

Туг

А1а

Уа1

Ьеи

Агд

Ьуз

Туг

580

585

590

А1а

Азр

Ьуз

11е

Туг

Азп

11е

Зег

МеК

Ьуз

Н1з

Рго

С1п

С1и

МеК

Ьуз

595

600

605

ТЬг

Туг

Зег

Уа1

Зег

РЬе

Азр

Зег

Ьеи

РЬе

Зег

А1а

Уа1

Ьуз

Азп

РЬе

610

615

620

ТЬг

С1и

11е

А1а

Зег

Ьуз

РЬе

Зег

С1и

Агд

Ьеи

Агд

Азр

РЬе

Азр

Ьуз

625

630

635

640

Зег

Ьуз

Н1з

Уа1

11е

Туг

А1а

Рго

Зег

Н1з

Азп

Ьуз

Туг

А1а

С1у

645

650

655

С1и

Зег

РЬе

Рго

С1у

11е

Туг

Азр

А1а

Ьеи

РЬе

Азр

11е

С1и

Зег

Ьуз

660

665

670

Уа1

Азр

Рго

Зег

С1п

А1а

Тгр

С1у

С1и

Уа1

Ьуз

Агд

С1п

11е

Зег

11е

675

680

685

А1а

ТЬг

РЬе

ТЬг

Уа1

С1п

А1а

С1и

ТЬг

Ьеи

Зег

С1и

Уа1

А1а

690 695 700

- 64 027315 <210> 26 <211> 339 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> ИР036581.1_Нитап_ЗТЕАР1 <400> 26

МеЕ 1

С1и

Зег

Агд

Ьуз 5

Азр

11е

ТЬг

Азп

С1п 10

С1и

Ьеи

Тгр

Ьуз 15

МеЕ

Ьуз

Рго

Агд

Азп

Ьеи

С1и

Азр

Туг

Ьеи

Н1з

Ьуз

Азр

ТЬг

20

25

30

С1у

С1и

ТЬг

Зег

МеЕ

Ьеи

Ьуз

Агд

Рго

Уа1

Ьеи

Н1з

Ьеи

Н1з

С1п

35

40

45

ТЬг

А1а

Н1з

А1а

Азр

С1и

РЬе

Азр

Суз

Рго

Зег

С1и

Ьеи

С1п

Н1з

ТЬг

50

55

60

С1п

С1и

Ьеи

РЬе

Рго

С1п

Тгр

Н1з

Ьеи

Рго

11е

Ьуз

11е

А1а

11е

65

70

75

80

11е

А1а

Зег

Ьеи

ТЬг

РЬе

Ьеи

Туг

ТЬг

Ьеи

Агд

С1и

Уа1

11е

Н1з

85

90

95

Рго

Ьеи

А1а

ТЬг

Зег

Н1з

С1п

Туг

РЬе

Туг

Ьуз

11е

Рго

11е

Ьеи

100

105

110

Уа1

11е

Азп

Ьуз

Уа1

Ьеи

Рго

МеЕ

Уа1

Зег

11е

ТЬг

Ьеи

А1а

Ьеи

115

120

125

Уа1

Туг

Ьеи

Рго

С1у

Уа1

11е

А1а

11е

Уа1

С1п

Ьеи

Н1з

Азп

С1у

130

135

140

ТЬг

Ьуз

Туг

Ьуз

РЬе

Рго

Н1з

Тгр

Ьеи

Азр

Ьуз

Тгр

МеЕ

Ьеи

ТЬг

145

150

155

160

Агд

Ьуз

С1п

РЬе

С1у

Ьеи

Зег

РЬе

А1а

Уа1

Ьеи

Н1з

А1а

165

170

175

11е

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Туг

Рго

МеЕ

Агд

Зег

Туг

Агд

Туг

Ьуз

Ьеи

180

185

190

Ьеи

Азп

Тгр

А1а

Туг

С1п

Уа1

С1п

Азп

Ьуз

С1и

Азр

А1а

Тгр

195

200

205

- 65 027315

11е

С1и 210

Н1з

Азр

Уа1

Тгр

Агд 215

МеЕ

С1и

11е

Туг

Уа1 220

Зег

Ьеи

С1у

11е

Уа1

С1у

Ьеи

А1а

11е

Ьеи

А1а

Ьеи

А1а

Уа1

ТЬг

Зег

11е

Рго

Зег

225

230

235

240

Уа1

Зег

Азр

Зег

Ьеи

ТЬг

Тгр

Агд

С1и

РЬе

Н1з

Туг

11е

С1п

Зег

Ьуз

245

250

255

Ьеи

С1у

11е

Уа1

Зег

Ьеи

С1у

ТЬг

11е

Н1з

А1а

Ьеи

11е

РЬе

260

265

270

А1а

Тгр

Азп

Ьуз

Тгр

11е

Азр

11е

Ьуз

С1п

РЬе

Уа1

Тгр

Туг

ТЬг

Рго

275

280

285

Рго

ТЬг

РЬе

МеЕ

11е

А1а

Уа1

РЬе

Ьеи

Рго

11е

Уа1

Ьеи

11е

РЬе

290

295

300

Ьуз

Зег

11е

Ьеи

РЬе

Ьеи

Рго

Суз

Ьеи

Агд

Ьуз

11е

Ьеи

Ьуз

11е

305

310

315

320

Агд

Н1з

С1у

Тгр

С1и

Азр

Уа1

ТЬг

Ьуз

11е

Азп

Ьуз

ТЬг

С1и

11е

Суз

325

330

335

Зег

С1п

Ьеи

<210> 27 <211> 339 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223>	ЕАЬ24167.	.1_Нитап_ЗТЕАР1
<400>	27
МеЕ С1и	Зег Агд	Ьуз Азр 11е ТЬг	Азп	С1п	С1и	С1и	Ьеи	Тгр	Ьуз	МеЕ
1		5		10					15
Ьуз Рго	Агд Агд	Азп Ьеи С1и С1и	Азр	Азр	Туг	Ьеи	Н1з	Ьуз	Азр	ТЬг
	20		25					30
С1у С1и	ТЬг Зег	МеЕ Ьеи Ьуз Агд	Рго	Уа1	Ьеи	Ьеи	Н1з	Ьеи	С1п	С1п
	35	40					45
ТЬг А1а	Н1з А1а	Азр С1и РЬе Азр	Суз	Рго	Зег	С1и	Ьеи	С1п	Н1з	ТЬг

55 60

- 66 027315

С1п 65

С1и

Ьеи

РЬе

Рго

С1п 70

Тгр

Н1з

Ьеи

Рго

11е 75

Ьуз

11е

А1а

11е 80

11е

А1а

Зег

Ьеи

ТЬг

РЬе

Ьеи

Туг

ТЬг

Ьеи

Агд

С1и

Уа1

11е

Н1з

85

90

95

Рго

Ьеи

А1а

ТЬг

Зег

Н1з

С1п

Туг

РЬе

Туг

Ьуз

11е

Рго

11е

Ьеи

100

105

110

Уа1

11е

Азп

Ьуз

Уа1

Ьеи

Рго

МеЬ

Уа1

Зег

11е

ТЬг

Ьеи

А1а

Ьеи

115

120

125

Уа1

Туг

Ьеи

Рго

С1у

Уа1

11е

А1а

11е

Уа1

С1п

Ьеи

Н1з

Азп

С1у

130

135

140

ТЬг

Ьуз

Туг

Ьуз

РЬе

Рго

Н1з

Тгр

Ьеи

Азр

Ьуз

Тгр

МеЬ

Ьеи

ТЬг

145

150

155

160

Агд

Ьуз

С1п

РЬе

С1у

Ьеи

Зег

РЬе

А1а

Уа1

Ьеи

Н1з

А1а

165

170

175

11е

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Туг

Рго

МеЬ

Агд

Зег

Туг

Агд

Туг

Ьуз

Ьеи

180

185

190

Ьеи

Азп

Тгр

А1а

Туг

С1п

Уа1

С1п

Азп

Ьуз

С1и

Азр

А1а

Тгр

195

200

205

11е

С1и

Н1з

Азр

Уа1

Тгр

Агд

МеЬ

С1и

11е

Туг

Уа1

Зег

Ьеи

С1у

11е

210

215

220

Уа1

С1у

Ьеи

А1а

11е

Ьеи

А1а

Ьеи

А1а

Уа1

ТЬг

Зег

11е

Рго

Зег

225

230

235

240

Уа1

Зег

Азр

Зег

Ьеи

ТЬг

Тгр

Агд

С1и

РЬе

Н1з

Туг

11е

С1п

Зег

Ьуз

245

250

255

Ьеи

С1у

11е

Уа1

Зег

Ьеи

С1у

ТЬг

11е

Н1з

А1а

Ьеи

11е

РЬе

260

265

270

А1а

Тгр

Азп

Ьуз

Тгр

11е

Азр

11е

Ьуз

С1п

РЬе

Уа1

Тгр

Туг

ТЬг

Рго

275

280

285

Рго

ТЬг

РЬе

МеЬ

11е

А1а

Уа1

РЬе

Ьеи

Рго

11е

Уа1

Ьеи

11е

РЬе

290

295

300

Ьуз

Зег

11е

Ьеи

РЬе

Ьеи

Рго

Суз

Ьеи

Агд

Ьуз

11е

Ьеи

Ьуз

11е

305

310

315

320

- 67 027315

Агд	Н1з	С1у	Тгр С1и Азр Уа1	ТПг ^уз 11е Азп ^уз	ТПг С1и 11е Суз
Зег	С1п	^еυ	325	330	335

<210> 28 <211> 339 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> ХР001103605.1_М.ти1аЕЕа_ЗТЕАР1_1зо3 <400> 28

МеЕ 1

С1и

Зег

Агд

^уз 5

Азр

11е

ТПг

Азп

С1и 10

С1и

^еυ

Тгр

^уз 15

МеЕ

^уз

Рго

Агд

Азп

^еυ

С1и

Азр

Туг

^еυ

Н1з

^уз

Азр

ТПг

20

25

30

С1у

С1и

ТПг

Зег

МеЕ

^еυ

^уз

Агд

Рго

Уа1

^еυ

Н1з

^еυ

Н1з

С1п

35

40

45

ТПг

А1а

Н1з

А1а

Азр

С1и

РПе

Азр

Суз

Рго

Зег

С1и

^еυ

С1п

Н1з

ТПг

50

55

60

С1п

С1и

^еυ

РПе

Рго

С1п

Тгр

Н1з

^еυ

Рго

11е

^уз

11е

А1а

11е

65

70

75

80

11е

А1а

Зег

^еυ

ТПг

РПе

^еυ

Туг

ТПг

^еυ

Агд

С1и

Уа1

11е

Н1з

85

90

95

Рго

^еυ

А1а

ТПг

Зег

Н1з

С1п

Туг

РПе

Туг

^уз

11е

Рго

11е

^еυ

100

105

110

Уа1

11е

Азп

^уз

Уа1

^еυ

Рго

МеЕ

Уа1

Зег

11е

ТПг

^еυ

А1а

^еυ

115

120

125

Уа1

Туг

^еυ

Рго

С1у

Уа1

11е

А1а

11е

Уа1

С1п

^еυ

Н1з

Азп

С1у

130

135

140

ТПг

^уз

Туг

^уз

РПе

Рго

Н1з

Тгр

^еυ

Азр

^уз

Тгр

МеЕ

^еυ

ТПг

145

150

155

160

Агд

^уз

С1п

РПе

С1у

^еυ

Зег

РПе

А1а

Уа1

^еυ

Н1з

А1а

165

170

175

- 68 027315

11е

Туг

Зег

Ьеи 180

Зег

Туг

Рго

МеЕ

Ατρ 185

Ατρ

Зег

Туг

Ατρ

Туг 190

Ьуз

Ьеи

Αзη

Тгр

Α^

Туг

С1п

Vа1

С1п

Αзη

Ьуз

С1и

Αзρ

Α^

Тгр

195

200

205

11е

С1и

Н1з

Αзρ

Vа1

Тгр

Ατρ

МеЕ

С1и

11е

Туг

Vа1

Зег

Ьеи

С1у

11е

210

215

220

Vа1

С1у

Ьеи

Α^

11е

Ьеи

Α^

Ьеи

Α^

Vа1

ТЕг

Зег

11е

Рго

Зег

225

230

235

240

Vа1

Зег

Αзρ

Зег

Ьеи

ТЕг

Тгр

Ατρ

С1и

РЕе

Н1з

Туг

11е

С1п

Зег

Ьуз

245

250

255

Ьеи

С1у

11е

Vа1

Зег

Ьеи

Α^

ТЕг

11е

Н1з

Α^

Ьеи

11е

РЕе

260

265

270

Α^

Тгр

Αзη

Ьуз

Тгр

11е

Αзρ

11е

Ьуз

С1п

РЕе

Vа1

Тгр

Туг

ТЕг

Рго

275

280

285

Рго

ТЕг

РЕе

МеЕ

11е

Α^

Vа1

РЕе

Ьеи

Рго

Vа1

Ьеи

11е

РЕе

290

295

300

Ьуз

Зег

11е

Ьеи

РЕе

Ьеи

Рго

Суз

Ьеи

Ατρ

Ьуз

11е

Ьеи

Ьуз

11е

305

310

315

320

Ατρ

Н1з

С1у

Тгр

С1и

Αзρ

Vа1

ТЕг

Ьуз

11е

Αзη

Ьуз

МеЕ

С1и

11е

Зег

325

330

335

Зег

С1п

Ьеи

<210> 29 <211> 259 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223>	ΕΑИ93751.	.1_Нитаη_ЗΤΕΑΡ1_СΗΑЬ
<400>	29
МеЕ С1и	Зег Ατρ	Ьуз Αзρ 11е ТЕг Αзη	С1п	С1и	С1и	11е	Тгр	Ьуз	МеЕ
1		5	10					15
Ьуз Рго	Ατρ Ατρ	Αзη Ьеи С1и Αзρ Αзη	Αзρ	Туг	Ьеи	Н1з	Ьуз	Αзρ	ТЕг
	20	25					30
С1у С1и	ТЕг Зег	МеЕ Ьеи Ьуз Ατρ Рго	Vа1	Ьеи	Ьеи	Н1з	Ьеи	С1п	С1п

- 69 027315

40 45

ТЬг

А1а 50

Н1з

А1а

Азр

С1и

РЬе 55

Азр

Суз

Рго

Зег

С1и 60

Ьеи

С1п

Н1з

А1а

С1п

С1и

Ьеи

РЬе

Рго

С1п

Тгр

Н1з

Ьеи

Рго

11е

Ьуз

11е

А1а

Уа1

65

70

75

80

МеК

А1а

Зег

Ьеи

ТЬг

РЬе

Ьеи

Туг

ТЬг

Ьеи

Агд

С1и

Уа1

11е

Н1з

85

90

95

Рго

Ьеи

А1а

ТЬг

Зег

Н1з

С1п

Туг

РЬе

Туг

Ьуз

11е

Рго

11е

Ьеи

100

105

110

Уа1

11е

Азп

Ьуз

Уа1

Ьеи

Рго

МеК

Уа1

Зег

11е

ТЬг

Ьеи

А1а

Ьеи

115

120

125

Уа1

Туг

Ьеи

Рго

С1у

Уа1

11е

А1а

11е

Уа1

С1п

Уа1

Н1з

Азп

С1у

130

135

140

ТЬг

Ьуз

Туг

Ьуз

РЬе

Рго

Н1з

Тгр

Ьеи

Азр

Ьуз

Тгр

МеК

Ьеи

ТЬг

145

150

155

160

Агд

Ьуз

С1п

РЬе

С1у

Ьеи

Зег

Ьеи

РЬе

А1а

Уа1

Ьеи

Н1з

А1а

165

170

175

11е

Туг

ТЬг

Ьеи

Зег

Туг

А1а

МеК

Агд

Зег

Туг

Агд

Туг

Ьуз

Ьеи

180

185

190

Ьеи

Азп

Тгр

А1а

Туг

С1п

Уа1

С1п

Азп

Ьуз

С1и

Азр

А1а

Тгр

195

200

205

11е

С1и

Н1з

Азр

Уа1

Тгр

Агд

МеК

С1и

11е

Туг

Уа1

Зег

Ьеи

С1у

11е

210

215

220

Уа1

С1у

Ьеи

А1а

11е

Ьеи

А1а

Ьеи

А1а

Уа1

ТЬг

Зег

11е

Рго

Зег

225

230

235

240

Уа1

Зег

Азр

Зег

Ьеи

ТЬг

Тгр

Агд

С1и

РЬе

Н1з

Туг

11е

С1п

Агд

Ьеи

245

250

255

Ьеи С1п С1и <210> 30 <211> 258 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

- 70 027315 <220>

<223> ЕАИ93749.1_Нитап_ЗТЕАР1_СНАа <400> 30

МеК 1

С1и

Зег

Агд

Ьуз 5

Азр

11е

ТИг

Азп

С1п 10

С1и

11е

Тгр

Ьуз 15

МеК

Ьуз

Рго

Агд

Азп

Ьеи

С1и

Азр

Азп

Азр

Туг

Ьеи

Н1з

Ьуз

Азр

ТИг

20

25

30

С1у

С1и

ТИг

Зег

МеК

Ьеи

Ьуз

Агд

Рго

Уа1

Ьеи

Н1з

Ьеи

С1п

35

40

45

ТИг

А1а

Н1з

А1а

Азр

С1и

РИе

Азр

Суз

Рго

Зег

С1и

Ьеи

С1п

Н1з

А1а

50

55

60

С1п

С1и

Ьеи

РИе

Рго

С1п

Тгр

Н1з

Ьеи

Рго

11е

Ьуз

11е

А1а

Уа1

65

70

75

80

МеК

А1а

Зег

Ьеи

ТИг

РИе

Ьеи

Туг

ТИг

Ьеи

Агд

С1и

Уа1

11е

Н1з

85

90

95

Рго

Ьеи

А1а

ТИг

Зег

Н1з

С1п

Туг

РИе

Туг

Ьуз

11е

Рго

11е

Ьеи

100

105

110

Уа1

11е

Азп

Ьуз

Уа1

Ьеи

Рго

МеК

Уа1

Зег

11е

ТИг

Ьеи

А1а

Ьеи

115

120

125

Уа1

Туг

Ьеи

Рго

С1у

Уа1

11е

А1а

11е

Уа1

С1п

Уа1

Н1з

Азп

С1у

130

135

140

ТИг

Ьуз

Туг

Ьуз

РИе

Рго

Н1з

Тгр

Ьеи

Азр

Ьуз

Тгр

МеК

Ьеи

ТИг

145

150

155

160

Агд

Ьуз

С1п

РИе

С1у

Ьеи

Зег

Ьеи

РИе

А1а

Уа1

Ьеи

Н1з

А1а

165

170

175

11е

Туг

ТИг

Ьеи

Зег

Туг

А1а

МеК

Агд

Зег

Туг

Агд

Туг

Ьуз

Ьеи

180

185

190

Ьеи

Азп

Тгр

А1а

Туг

С1п

Уа1

С1п

Азп

Ьуз

С1и

Азр

А1а

Тгр

195

200

205

11е

С1и

Н1з

Азр

Уа1

Тгр

Агд

МеК

С1и

11е

Туг

Уа1

Зег

Ьеи

С1у

11е

210

215

220

Уа1

С1у

Ьеи

А1а

11е

Ьеи

А1а

Ьеи

А1а

Уа1

ТИг

Зег

11е

Рго

Зег

- 71 027315

225 230 235 240

Уа1 Зег Азр Зег Ьеи ТЬг Тгр Агд С1и РЬе Н1з Туг 11е С1п Уа1 Азп 245 250 255

Азп 11е <210> 31 <211> 114 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> ИР_005663.2_Нишап_РЗСА <400> 31

МеК 1

А1а

С1у

Ьеи

А1а 5

Ьеи

С1п

Рго

С1у

ТЬг 10

А1а

Ьеи

Суз

Туг 15

Зег

Суз

Ьуз

А1а

С1п

Уа1

Зег

Азп

С1и

Азр

Суз

Ьеи

С1п

Уа1

С1и

Азп

Суз

20

25

30

ТЬг

С1п

Ьеи

С1у

С1и

С1п

Суз

Тгр

ТЬг

А1а

Агд

11е

Агд

А1а

Уа1

С1у

35

40

45

Ьеи

ТЬг

Уа1

11е

Зег

Ьуз

С1у

Суз

Зег

Ьеи

Азп

Суз

Уа1

Азр

50

55

60

Зег

С1п

Азр

Туг

Уа1

С1у

Ьуз

Азп

11е

ТЬг

Суз

Азр

ТЬг

65

70

75

80

Азр

Ьеи

Суз

Азп

А1а

Зег

С1у

А1а

Н1з

А1а

Ьеи

С1п

Рго

А1а

85

90

95

11е

Ьеи

А1а

Ьеи

Рго

А1а

Ьеи

С1у

Ьеи

Тгр

С1у

Рго

С1у

100

105

110

С1п Ьеи <210> 31 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Марекр НА последовательности аминокислот <400> 31

Туг Рго Туг Азр Уа1 Рго Азр Туг А1а

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Молекула нуклеиновой кислоты для индукции иммунного ответа против антигена рака предстательной железы, содержащая одну или более нуклеотидных последовательностей, кодирующих один или более белков, выбранных из:

а) белка с аминокислотной последовательностью δΕΟ ΙΌ N0: 2 или гомологичной ей на 98% последовательностью, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 2, или иммуногенного фрагмента последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 2, содержащего по меньшей мере 256 аминокислотных остатков последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 2, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 2;

б) белка с аминокислотной последовательностью δΕΟ ΙΌ N0: 4 или гомологичной ей на 98% последовательностью, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 4, или иммуногенного фрагмента последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 4, содержащего по меньшей мере 274 аминокислотных остатка последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 4, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 4.
2. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, дополнительно содержащая одну или более нуклеотидных последовательностей, кодирующих один или более белков, выбранных из:

в) белка с аминокислотной последовательностью δΕΟ ΙΌ N0: 6 или гомологичной ей на 98% последовательностью, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 14, 15, 32, 47, 58, 79, 111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 6, или иммуногенного фрагмента последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 6, содержащего по меньшей мере 735 аминокислотных остатков последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 6, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 14, 15, 32, 47, 58, 79, 111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 6;

г) белка с аминокислотной последовательностью δΕΟ ΙΌ N0: 8 или гомологичной ей на 98% последовательностью, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 8, или иммуногенного фрагмента последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 8, содержащего по меньшей мере 751 аминокислотный остаток последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 8, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 8.
3. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.1 или 2, кодирующая один или более белков с последовательностями, выбранными из δΕΟ ΙΌ N0: 2 и δΕΟ ΙΌ N0: 4.
4. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая одну или более нуклеотидных последовательностей, выбранных из:

а) последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 1 или гомологичной ей на 98% последовательности;

б) последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 3 или гомологичной ей на 98% последовательности.
5. Молекула нуклеиновой кислоты по п.4, дополнительно содержащая одну или более нуклеотидных последовательностей, выбранных из:

в) последовательности, образованной нуклеотидами 1-2250 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 5, или гомологичной на 98% последовательности, образованной указанными нуклеотидами;

г) последовательности, образованной нуклеотидами 1-2301 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 7, или гомологичной на 98% последовательности, образованной указанными нуклеотидами.
6. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.4 или 5, содержащая одну или более нуклеотидных последовательностей, выбранных из δΕΟ ΙΌ N0: 1 и δΕΟ ΙΌ N0: 3.
7. Плазмида, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-6.
8. Вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-6, причем одна или более указанных молекул функционально связаны с регуляторными элементами.
9. Способ лечения пациента, у которого диагностирован рак предстательной железы, включающий введение пациенту молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-6.
10. Белок для индукции иммунного ответа против антигена рака предстательной железы, выбранный из:

а) белка с аминокислотной последовательностью δΕΟ ΙΌ N0: 2 или гомологичной ей на 98% последовательностью, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 2, или иммуногенного фрагмента последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 2, содержащего по меньшей мере 256 аминокислотных остатков последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 2, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 69, 78, 80, 82, 102, 110, 137, 139, 165, 189, 203, 220, 232 и 248 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 2;

б) белка с аминокислотной последовательностью δΕΟ ΙΌ N0: 4 или гомологичной ей на 98% по- 73 027315 следовательностью, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 последовательности δΕ^ ΙΌ N0: 4, или иммуногенного фрагмента последовательности δΕ^ ΙΌ N0: 4, содержащего по меньшей мере 274 аминокислотных остатка последовательности δΕ^ ΙΌ N0: 4, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 21, 86, 127, 129, 154, 156, 182, 195, 206, 218, 220, 237, 249, 255, 265, 271 и 275 последовательности δΕ^ ΙΌ N0: 4.
11. Белок для индукции иммунного ответа против антигена рака предстательной железы, выбранный из:

в) белка с аминокислотной последовательностью δΕ^ ΙΌ N0: 6 или гомологичной ей на 98% последовательностью, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 14, 15, 32, 47, 58, 79, 111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 последовательности δΕ^ ΙΌ N0: 6, или иммуногенного фрагмента последовательности δΕ^ ΙΌ N0: 6, содержащего по меньшей мере 735 аминокислотных остатков последовательности δΕ^ ΙΌ N0: 6, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 14, 15, 32, 47, 58, 79, 111, 157, 223, 320, 350, 475, 499, 569, 613, 624, 653, 660, 663, 733 и 734 последовательности δΕ^ ΙΌ N0: 6;

г) белка с аминокислотной последовательностью δΕ^ ΙΌ N0: 8 или гомологичной ей на 98% последовательностью, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 последовательности δΕ^ ΙΌ N0: 8, или иммуногенного фрагмента последовательности δΕ^ ΙΌ N0: 8, содержащего по меньшей мере 751 аминокислотный остаток последовательности δΕ^ ΙΌ N0: 8, при условии, что сохранились аминокислотные остатки 20, 30, 31, 48, 63, 74, 95, 127, 173, 239, 336, 366, 491, 515, 564, 585, 629, 640, 669, 676, 679, 749 и 750 последовательности δΕ^ ΙΌ N0: 8.
12. Белок по п.10, включающий аминокислотную последовательность, выбранную из δΕ^ ΙΌ N0: 2 и δΕΟ ΙΌ N0: 4.
13. Способ лечения пациента, у которого диагностирован рак предстательной железы, включающий введение пациенту белка по любому из пп.10-12.
14. Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения рака предстательной железы, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемлемый эксципиент.