EA023892B1 - Иммуногенные белки вируса человеческой папилломы и способы их применения - Google Patents

Иммуногенные белки вируса человеческой папилломы и способы их применения Download PDF

Info

Publication number
EA023892B1
EA023892B1 EA201170965A EA201170965A EA023892B1 EA 023892 B1 EA023892 B1 EA 023892B1 EA 201170965 A EA201170965 A EA 201170965A EA 201170965 A EA201170965 A EA 201170965A EA 023892 B1 EA023892 B1 EA 023892B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
fragments
sequences
sequence
beo
nucleic acid
Prior art date
Application number
EA201170965A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201170965A1 (ru
Inventor
Дэвид Б. Вейнер
Цзянь Янь
Original Assignee
Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания filed Critical Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания
Publication of EA201170965A1 publication Critical patent/EA201170965A1/ru
Publication of EA023892B1 publication Critical patent/EA023892B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1131—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/00032—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/00032—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Раскрыты усовершенствованные иммуногены против ВПЧ и молекулы нуклеиновых кислот, которые их кодируют. Описанные иммуногены включают те, которые имеются у консенсусных ВПЧ 18 E6 и Е7. Раскрыты фармацевтическая композиция, рекомбинатные вакцины и живые ослабленные вакцины, а также способы вызова иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума.

Description

Настоящее исследование относится к усовершенствованным вакцинам вируса человеческой папилломы (ВПЧ), усовершенствованным способам вызова иммунного ответа и профилактической и/или терапевтической иммунизации индивидуумов против ВПЧ.
Уровень техники
Заявлен приоритет предварительной заявки США № 61/146942, поданной 23 января 2009 г., и заявки на патент США № 12/691588, поданной 21 января 2010 г., полное описание которых включено в данное описание посредством ссылки.
Папилломавирусы - это маленькие ДНК-вирусы, содержащие семь ранних генов и два поздних гена. Обычно ранние гены папилломавируса обозначаются как Е1-Е7, а поздние гены - как Ь1 и Ь2. Некоторые виды животных могут инфицироваться представителями семейства папилломавирусов.
Инфекция вирусом человеческой папилломы (ВПЧ) широко распространена и может передаваться половым путем. На основании гомологичных последовательностей ДНК различают 56 или более типов ВПЧ. ВПЧ 16 и 18 типов, вызывающие эпителиальную дисплазию и другие болезни, часто связаны с повышенным риском рака, особенно ίη кки и инвазивных карцином шейки матки, влагалища, вульвы и анального прохода.
ДНК-вакцины обладают многими концептуальными преимуществами перед более традиционными способами вакцинации, такими как живые ослабленные вирусы и рекомбинантные вакцины на основе белка. ДНК-вакцины безопасны, стабильны, легко производятся и хорошо переносились людьми при доклинических исследованиях, показавших мало доказательств плазмидной интеграции [Магкп, Т., с1 а1., Р1акт1к ΌΝΑ та1апа уассше: 1Ье ροίοηΐίαΙ Гог депот1с иНедгакоп айег шкатикси1аг кдескоп. Нит Оепе ТЬег, 1999. 10(5):ρ. 759-68; №сЬо1к, е1 а1., Ро1епка1 ΌΝΑ уассше Шедгакоп иЛо 1юк1 се11 депоте.
Апп Ν.Υ. Асак. δοΐ., 1995, 772:ρ. 30-9]. Кроме того, ДНК-вакцины хорошо подходят для повторных введений благодаря тому, что эффективность вакцины не зависит от титров предсуществующих антител к вектору [СЬакегдооп, М., 1. Воуег, апк Ό.Β. ХУетег, Оепекс иптиш/аОоп: а пе\у ега ш уассшек апк иптипе Шегареикск. ΡΑδΕΒ 1, 1997, 11(10):р. 753-63]. Однако одним из основных препятствий для клинического выбора ДНК-вакцин остается снижение платформы иммуногенности при переходе к более крупным животным [Ьш, М.А. апк ЕВ. И1тег, Нитап сктса1 1па1к о! р1акт1к ΌΝΑ уассшек. Аку Оепек 2005. 55:ρ. 2540]. Последние технологические достижения в разработке иммуногенных ДНК-вакцин, такие как оптимизация кодонов, РНК-оптимизация и добавление лидерных последовательностей иммуноглобулина усиливают экспрессию и иммуногенность ДНК-вакцин |Лпкге, 8., е1 а1., 1псгеакек 1тшипе гекропке еНскек Ьу ΌΝΑ уассшакоп \νί11ι а куйкекс др120 кедиепсе \νί11ι оркти/ек сокоп икаде. 1. Уко1., 1998. 72(2):р. 1497503; Нет1, Ь., е1 а1., Ми1кр1е еГГес1к о! сокоп икаде оркти/акоп оп ехргеккюп апк штиподетску о! ΌΝΑ сапШкаЮ уассшек епсокшд 1ке Ьитап 1ттипокеПс1епсу укик 1уре 1 Оад ргоЮш. 1. Уко1., 2001. 75(22): р. 10991-1001; Ьакку, Ό.Ι, е1 а1., 1ттиподетску оГ поуе1 сопкепкик-Ьакек ΌΝΑ уассшек адатк! ау1ап 1пЙиеп/а. Уассше, 2007. 25(16): р. 2984-9; РгеИп, Ь., е1 а1., Сокоп оркик/акоп апк тΚNΑ атркксакоп еГГескуе1у епкапсек 1ке 1ттиподетску оГ 1ке Ьераккк С У1гик попк1гис1ига1 3/4Α депе. Оепе ТЬег., 2004. 11(6):р. 522-33], а также недавно разработанная технология системы доставки плазмид, такая как электропорация [Ниао, БА., е1 а1., 1п1гакегта1/киЬси1апеоик кштии/акоп Ьу е1ескорогакоп кмргоуек р1акт1к уассше кекуегу апк роЮпсу ш р1дк апк гЬекик тасадиек. Уассше, 2008. 26(3): р. 440-8; Ьискау, Α., е1 а1., ЕГГес1 оГ р1акт1к ΌΝΑ уассше кеыдп апк ш у1уо е1ескорогакоп оп 1ке гекиШпд уассше-крескгс 1ттипе гекропкек ш гЬекик тасадиек. 1. Уко1., 2007. 81(10): р. 5257-69; ΑΜ^ О., е1 а1., 1п У1уо е1ескорогакоп епкапсек Пзе 1ттиподетску оГ Ьераккк С У1гик попк1гис1ига1 3/4Α ΌΝΑ Ьу шсгеакек 1оса1 ΌΝΑ ир1аке, рго1еш ехргеккюп, шйаттакоп, апк шйкгакоп оГ СЭ3+ Т се11к. 1. 1ттипо1., 2007. 179(7): р. 4741-53]. Кроме того, исследования подтверждают, что использование консенсусных иммуногенов может обладать способностью увеличивать распространенность клеточного иммунного ответа по сравнению с естественными антигенами. Щап., 1., е1 а1., Епкапсек се11и1аг 1ттипе гекропкек ейскек Ьу ап епдшеегек Н1У-1 киЫуре В сопкепкикЬакек епуе1оре ΌΝΑ уассше. Мо1. ТЬег., 2007. 15(2): р. 411-21; Ко11апк, М., е1 а1., Кесопккископ апк Гипскоп оГ апсекка1 сеп1ег-оГ-1гее Ьитап 1ттипокейс1епсу У1гик 1уре 1 ргоЮшк. 1. Уко1., 2007. 81(16): р. 850714].
Следовательно, остается потребность в усовершенствованных вакцинах и способах для предотвращения и лечения инфекции ВПЧ.
Сущность изобретения
Предоставляются белки, включающие консенсусные последовательности аминокислот ВПЧ типа 18 (ВПЧ 18) Е6 и Е7, и молекулы нуклеиновых кислот, включающие нуклеотидные последовательности, кодирующие такие белки. Эти конструкты нуклеиновых кислот и кодируемые ими белки, в свою очередь, представляют собой усовершенствованные иммуногенные мишени, на которые может быть выработан иммунный ответ анти-ВПЧ.
Также предоставляются конструкты, которые кодируют такие белки, вакцины, которые содержат такие белки, вакцины, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют такие белки, и способы вызова иммунных ответов анти-ВПЧ.
Аспекты изобретения включают молекулы нуклеиновых кислот, содержащие нуклеотидную после- 1 023892 довательность, выбранную из группы, состоящей из ЗЕО ГО N0: 1; фрагментов ЗЕО ГО N0: 1; последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией ЗЕО ГО N0: 1; фрагментов последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией ЗЕО ГО N0: 1; ЗЕО ГО N0: 5; фрагментов ЗЕО ГО N0: 5, включающих кодирующие последовательности ВПЧ; последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией ЗЕО ГО N0: 5; и фрагментов последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией ЗЕО ГО N0: 5, включающих кодирующие последовательности ВПЧ; ЗЕО ГО N0: 7; фрагментов ЗЕО ГО N0: 7, включая кодирующие последовательности ВПЧ; последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией ЗЕО ГО N0: 7; и фрагментов последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией ЗЕО ГО N0: 7, включая кодирующие последовательности ВПЧ.
Настоящее исследование связано с молекулами нуклеиновых кислот, содержащими нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, кодирующих ЗЕО ГО N0: 2; нуклеотидных последовательностей, кодирующих аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 90% гомологией ЗЕО ГО N0: 2; нуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты ЗЕО ГО N0: 2; нуклеотидных последовательностей, кодирующих аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 90% гомологией с фрагментами ЗЕО ГО N0: 2; нуклеотидных последовательностей, кодирующих ЗЕО ГО N0: 6; нуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты ЗЕО ГО N0: 6, включая последовательности ВПЧ; нуклеотидных последовательностей, кодирующих аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 90% гомологией ЗЕО ГО N0: 6, включая последовательности ВПЧ; и нуклеотидные последовательности, кодирующие аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 90% гомологией с фрагментами ЗЕО ГО N0: 6, включая последовательности ВПЧ.
Кроме того, настоящее изобретение предоставляет фармацевтические композиции, содержащие такие молекулы нуклеиновых кислот, и их использование в способах вызова у индивидуумов иммунного ответа на ВПЧ, которое включает введение индивидуумам композиции, содержащей такие молекулы нуклеиновых кислот.
Кроме того, настоящее изобретение предоставляет рекомбинантную вакцину, содержащую такие молекулы нуклеиновых кислот, и ее использование в способах вызова у индивидуумов иммунного ответа на ВПЧ, которое включает введение индивидуумам такой рекомбинантной вакцины.
Кроме того, настоящее изобретение предоставляет живые ослабленные патогены, содержащие такие молекулы нуклеиновых кислот, и их использование в способах вызова у индивидуумов иммунного ответа на ВПЧ, которое включает введение индивидуумам таких живых ослабленных патогенов.
Кроме того, настоящее изобретение предоставляет белки, содержащие аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из ЗЕО ГО N0: 2, последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией ЗЕО ГО N0: 2; фрагментов ЗЕО ГО N0: 2, фрагментов последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией ЗЕО ГО N0: 2; ЗЕО ГО N0: 6; последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией ЗЕО ГО N0: 6; фрагментов ЗЕО ГО N0: 6 и фрагментов последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией ЗЕО ГО N0: 6.
Кроме того, настоящее изобретение предоставляет фармацевтические композиции, содержащие такие белки, и их использование в способах вызова у индивидуумов иммунного ответа на ВПЧ, которое включает введение индивидуумам композиции, содержащей такие белки.
Кроме того, настоящее изобретение предоставляет рекомбинантные вакцины, содержащие такие белки, и их использование в способах вызова у индивидуумов иммунного ответа на ВПЧ, которое включает введение индивидуумам такой рекомбинантной вакцины.
Кроме того, настоящее изобретение предоставляет живые ослабленные патогены, содержащие такие белки, и их использование в способах вызова у индивидуумов иммунного ответа на ВПЧ, которое включает введение индивидуумам таких живых ослабленных патогенов.
Краткое описание фигуры
На фигуре представлено описание конструкта плазмиды.
Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления
Используемое здесь выражение точные условия гибридизации или точные условия относится к условиям, при которых молекула нуклеиновой кислоты гибридизуется с другой молекулой нуклеиновой кислоты, но не с другими последовательностями. Точные условия зависят от последовательности и будут различны при разных обстоятельствах. Более длинные последовательности специфично гибридизуются при более высоких температурах. Обычно точные условия выбираются примерно на 5°С ниже, чем температура точки плавления (Т.пл.) для специфической последовательности при определенной ионной силе и рН. Т.пл. - температура (при определенной ионной силе, рН и концентрации нуклеиновых кислот), при которой 50% проб, комплементарных последовательности-мишени, равновесно гибридизуются с последовательностью-мишенью.
Поскольку последовательности-мишени обычно присутствуют в избытке, при Т.пл. 50% проб находятся в равновесии. Обычно точными условиями будут те, при которых концентрация солей меньше чем 1,0 М ионов натрия, обычно от 0,01 до 1,0 М ионов натрия (или других солей) при рН от 7,0 до 8,3 и тем- 2 023892 пературе по меньшей мере примерно 30°С для коротких проб, праймеров или олигонуклеотидов (т.е. от 10 до 50 нуклеотидов) и по меньшей мере примерно 60°С для более длинных проб, праймеров или олигонуклеотидов. Точных условий также можно достигнуть добавлением дестабилизирующих агентов, таких как формамид.
Гомологичную последовательность для нуклеотидов и аминокислот можно определить, используя РА8ТА, ВЬА8Т и гэп-ВЬА8Т (Л118сйи1 е! а1., Нис. Λείάδ Ке8., 1997, 25, 3389, который включен сюда в виде ссылки на полное описание) и программу РАИР* 4.0Ы0 (ЭХ. δ^οίίοτά, 8шаиет А88оаа1е8, Ма88ас1ш8еО8). Процент сходства высчитывается с использованием программы РЛИР* 4.0Ы0 (ЭХ. δ^οίίοτά, §1паиег А88оаа1е8, Ма88асйи8ей8). Средний аналог консенсусной последовательности высчитывается при сравнении со всеми последовательностями в филогенетическом древе.
Вкратце, алгоритм ВЬА8Т, который означает базовый локальный регулирующий поисковый инструмент, подходит для определения гомологичности последовательности (Л118сйи1 е! а1., 1. Мо1. Вю1., 1990, 215, 403-410, включенный сюда в виде ссылки на полное описание). Программа для осуществления ВЬА8Т анализа общедоступна в Национальном Центре Биотехнологической Информации (Ьйр://№№№.псЫ.п1т.п1Й.§оу/). Этот алгоритм включает первичную идентификацию интенсивного подчета пар последовательностей (Н8Р) путем идентификации коротких слов длины в рассматриваемой последовательности, которые или соответствуют, или удовлетворяют некоторому положительному порогу оценки Т, когда выстраиваются со словом той же длины в последовательность базы данных. Т описывается как соседнее слово порога оценки (Л118сйи1 е! а1., выше). Эти первичные соседние слова действуют как затравки в начале поиска для обнаружения Н8Р, содержащих их. Слова-затравки удлиняются в обоих направлениях по длине каждой последовательности, насколько может увеличиться значение кумулятивного выравнивания. Удлинение слова-затравки в каждом направлении останавливается, когда: 1) кумулятивное выравненное значение падает на величину X от своего максимального достигнутого значения; 2) кумулятивное значение доходит до нуля или ниже вследствие накопления одного или более отрицательно оцениваемых остатков выравниваний, или 3) достигнут конец любой последовательности. Параметры Т и X алгоритма ВЬА8Т определяют чувствительность и скорость выравнивания. Программа ВЬА8Т использует как значения по умолчанию длину слова (^), равную 11, оценочную матрицу ВЬО8иМ62 (см. Нешко£Т е! а1., Ргос. Νηΐ1. Лсаб. δα. И8А, 1992, 89, 10915-10919, включенная сюда в виде ссылки на полное описание) выравнивания (В), равную 50, ожидаемое (Е), равное 10, М=5, N=4 и сравнение обеих цепей. Алгоритм ВЬА8Т (Катйп е! а1., Ргос. Νηΐ1. АсаХ δα. И8А, 1993, 90, 58735787, включенная сюда в виде ссылки на полное описание) и гэп-ВЬА8Т представляют статистический анализ схожести между двумя последовательностями. Одна мера схожести, предоставленная алгоритмом ВЬА8Т, - наименьшая суммарная вероятность (Р(Щ), которая дает индикатор вероятности, по которой парность нуклеотидных последовательностей появится случайно. Например, нуклеиновая кислота считается подобной другой, если наименьшая суммарная вероятность при сравнении тестируемой нуклеиновой кислоты с другой нуклеиновой кислотой меньше, чем 1, предпочтительно меньше, чем 0,1, более предпочтительно меньше, чем 0,01 и наиболее предпочтительно меньше, чем 0,001.
Используемый в настоящем описании термин генетический конструкт относится к молекулам ДНК или РНК, которые содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую белок. Кодирующая последовательность включает инициирующие и терминирующие сигналы, функционально связанные с регулирующими элементами, включая промотор и сигнал полиаденилирования, способные направить экспрессию в клетках индивидуума, которому вводится молекула нуклеиновой кислоты.
Используемый в настоящем описании термин экспрессирующаяся форма относится к генным конструктам, которые содержат необходимые регуляторные элементы, функционально связанные с кодирующей последовательностью, которая кодирует белок так, что когда она находится в клетках индивидуума, кодирующая последовательность экспрессируется.
Открытые усовершенствованные вакцины основаны на мультифазной стратегии для усиления клеточных иммунных ответов, вызванных иммуногенами. Были разработаны модифицирванные консенсусные последовательности. Также открыты генетические варианты осуществления, включающие кодонную оптимизацию, РНК-оптимизацию и добавление высокоэффективной лидерной последовательности иммуноглобина. Новый конструкт разработан для вызова более сильного и обширного клеточного иммунного ответа, чем соответствующие кодон-оптимизированные иммуногены.
Усовершенствованные вакцины ВПЧ основаны на белках и генетических конструктах, которые кодируют белки с эпитопами, делающими их особенно эффективными в качестве иммуногенов, против которых может быть вызван анти-ВПЧ. Соответственно, вакцины могут вызывать терапевтический или профилактический иммунный ответ. В некоторых вариантах осуществления средствами, доставляющими иммуногены, являются ДНК-вакцина, рекомбинантная вакцина, белковая субъединичная вакцина, соединение, содержащее иммуноген, ослабленная вакцина или инактивированная вакцина. В некоторых вариантах осуществления вакцина включает композицию, выделенную из групп, состоящих из одной или более ДНК-вакцин, одной или более рекомбинантных вакцин, одной или более белковых субъединичных вакцин, одного или более соединений, содержащих иммуноген, одной или более ослабленных вакцин и одной или более инактивированных вакцин.
- 3 023892
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения вакцина, предоставляемая индивидууму, модулирует активность иммунной системы индивидуума и тем самым усиливает иммунный ответ против ВПЧ. Когда молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует белок, попадает в клетку индивидуума, в клетке экспрессируется нуклеотидная последовательность, и таким образом к индивидууму попадает белок. Предоставляются способы доставки последовательности, кодирующей белок, в молекулу нуклеиновой кислоты, такую как плазмида, как часть рекомбинантной вакцины и как часть ослабленной вакцины, как изолированные белки или белки, входящие в вектор.
Предоставляются композиции и способы, которые профилактически и/или терапевтически иммунизируют индивидуумов против ВПЧ.
Составы для доставки молекул нуклеиновых кислот, которые включают нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуноген, функционально связаны с регуляторными элементами. Составы могут включать плазмиду, кодирующую иммуноген, рекомбинантную вакцину, содержащую нуклеотидную последовательность, которая кодирует иммуноген, живой ослабленный патоген, который кодирует белок по изобретению и/или включает белок по изобретению; инактивированный патоген, включающий белок по изобретению, или соединение, такое как липосома или субъединичная вакцина, которая содержит белок по изобретению. Кроме того, настоящее изобретение связано с инъецируемыми фармацевтическими композициями, которые включают композиции.
5>ЕО ГО N0: 1 содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую консенсусный иммуноген белков ВПЧ 18 Е6 и Е7. 5>Е0 ГО N0: 5 включает 5>Е0 ГО N0: 1 и, кроме того, составы лидерной последовательности 1дЕ, связанной с нуклеотидной последовательностью, кодирующей консенсусный иммуноген белков ВПЧ 18 Е6 и Е7. 5>Е0 ГО N0: 2 содержит аминокислотную последовательность для консенсусного иммуногена белков ВПЧ 18 Е6 и Е7. 5>Е0 ГО N0: 6 включает 5>Е0 ГО N0: 2 и, кроме того, содержит лидерную последовательность 1дЕ, связанную с консенсусной иммуногенной последовательностью. Лидерная последовательность 1дЕ представляет собой 5>Е0 ГО N0: 4, может кодироваться 5>Е0 ГО N0: 3. 5>Е0 ГО N0: 7 представляет собой нуклеотидную последовательность плазмиды рОХ302 с 5>Е0 ГО N0: 5, встроенной туда для экспрессии.
В некоторых вариантах осуществления вакцины включают 5>Е0 ГО N0: 2 или молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую 5>Е0 ГО N0: 2. В некоторых вариантах осуществления вакцины включают 5>Е0 ГО N0: 1 как молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую 5>Е0 ГО N0: 2. В некоторых вариантах осуществления вакцины преимущественно содержат 5>Е0 ГО N0: 6 или молекулу нуклеиновой кислоты, которая их кодирует. В некоторых вариантах осуществления вакцины преимущественно содержат 5>Е0 ГО N0: 5 как молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует 5>Е0 ГО N0: 6. В некоторых вариантах осуществления вакцины преимущественно содержат 5>Е0 ГО N0: 7.
Фрагменты 5>Е0 ГО N0: 1 могут содержать 90 или более нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления фрагменты 5>Е0 ГО N0: 1 могут содержать 180 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 270 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 360 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 450 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 540 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 630 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 720 или более нуклеотидов; и в некоторых вариантах осуществления 770 или более нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления фрагменты 5>Е0 ГО N0: 1, такие как те, что будут описаны здесь в дальнейшем, могут, кроме того, содержать кодирующие последовательности для лидерных последовательностей 1дЕ. В некоторых вариантах осуществления 5>Е0 ГО N0: 1 не содержат кодирующих последовательностей для лидерных последовательностей 1дЕ. Фрагменты 5>Е0 ГО N0: 1 могут содержать менее чем 180 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 270 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 360 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 450 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 540 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 630 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 690 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 760 нуклеотидов, и в некоторых вариантах осуществления менее чем 780 нуклеотидов.
Фрагменты 5>Е0 ГО N0: 2 могут содержать 30 или более аминокислот. В некоторых вариантах осуществления фрагменты 5>Е0 ГО N0: 2 могут содержать 60 или более аминокислот; в некоторых вариантах осуществления 90 или более аминокислот; в некоторых вариантах осуществления 120 или более аминокислот; в некоторых вариантах осуществления 150 или более аминокислот; в некоторых вариантах осуществления 180 или более аминокислот; в некоторых вариантах осуществления 210 или более аминокислот; и в некоторых вариантах осуществления 240 или более аминокислот. Фрагменты могут содержать менее чем 90 аминокислот, в некоторых вариантах осуществления менее чем 120 аминокислот, в некоторых вариантах осуществления менее чем 150 аминокислот, в некоторых вариантах осуществления менее чем 180 аминокислот, в некоторых вариантах осуществления менее чем 210 аминокислот и в некоторых вариантах осуществления менее чем 240 аминокислот.
Все фрагменты 5>Е0 ГО N0: 5 содержат кодирующие последовательности, которые кодируют последовательности ВПЧ, т.е. фрагменты 5>Е0 ГО N0: 5 должны содержать последовательности в добавление к тем, что кодируют лидерный пептид 1дЕ. В некоторых вариантах осуществления фрагменты 5>Е0
- 4 023892
ГО N0: 5 содержат 90 или более нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления фрагменты 8ЕС ГО N0: 5 могут содержать 180 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 270 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 360 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 450 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 540 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 630 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 720 или более нуклеотидов; в некоторых вариантах осуществления 810 или более нуклеотидов; и в некоторых вариантах осуществления 830 или более нуклеотидов. Фрагменты 8ЕС ГО N0: 5 могут содержать менее чем 180 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 270 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 360 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 450 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 540 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 630 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 690 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 720 нуклеотидов, в некоторых вариантах осуществления менее чем 780 нуклеотидов и в некоторых вариантах осуществления менее чем 840 нуклеотидов.
Фрагменты 8ЕС ГО N0: 6 могут содержать 30 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ. В некоторых вариантах осуществления фрагменты 8ЕС ГО N0: 6 могут содержать 60 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; в некоторых вариантах осуществления 90 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; в некоторых вариантах осуществления 120 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; в некоторых вариантах осуществления 150 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; в некоторых вариантах осуществления 180 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; в некоторых вариантах осуществления 210 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; в некоторых вариантах осуществления 240 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ; и в некоторых вариантах осуществления 270 или более аминокислот, включающих последовательности ВПЧ. Фрагменты могут содержать менее чем 90 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ, в некоторых вариантах осуществления менее чем 120 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ, в некоторых вариантах осуществления менее чем 150 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ, в некоторых вариантах осуществления менее чем 180 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ, в некоторых вариантах осуществления менее чем 210 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ, в некоторых вариантах осуществления менее чем 240 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ, и в некоторых вариантах осуществления менее чем 270 аминокислот, включающих последовательности ВПЧ.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения способы вызова иммунного ответа у индивидуумов против иммуногена включают введение индивидуумам аминокислотной последовательности для консенсусного иммуногена белков ВПЧ 18 Е6 и Е7, или их функциональных фрагментов, или их экспрессирующихся кодирующих последовательностей. Некоторые варианты осуществления включают изолированную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислотную последовательность для консенсусного иммуногена белков ВПЧ 18 Е6 и Е7 или их фрагмента. Некоторые варианты осуществления включают рекомбинантную вакцину, которая кодирует аминокислотную последовательность для консенсусного иммуногена белков ВПЧ 18 Е6 и Е7 или их фрагмента. Некоторые варианты осуществления включают субъединичную вакцину, которая содержит аминокислотную последовательность для консенсусного иммуногена белков ВПЧ 18 Е6 и Е7 или их фрагмента. Некоторые варианты осуществления содержат живую ослабленную вакцину и/или инактивированную вакцину, которая содержит аминокислотную последовательность для консенсусного иммуногена белков ВПЧ 18 Е6 и Е7.
Усовершенствованные вакцины содержат белки и генетические конструкты, которые кодируют белки с эпитопами, делающие их особенно эффективными как иммуногены, против которых можно вызвать иммунный ответ анти-ВПЧ. Соответственно, вакцины можно предоставить для выработки терапевтического или профилактического иммунного ответа. В некоторых вариантах осуществления изобретения средство доставки иммуногена представляет собой вакцину ДНК, рекомбинантную вакцину, белковую субъединичную вакцину, состав, содержащий иммуноген, ослабленную вакцину или инактивированную вакцину. В некоторых вариантах осуществления вакцина содержит комбинацию, отобранную из групп, состоящих из одной или более ДНК-вакцин, одной или более рекомбинантных вакцин, одной или более белковых субъединичных вакцин, одной или более композиций, содержащих иммуноген, одну или более ослабленных вакцин и одну или более инактивированных вакцин.
Аспекты изобретения предоставляют способы доставки последовательности, кодирующей белок, в молекулу нуклеиновой кислоты, такую как плазмида, как часть рекомбинантной вакцины и как часть ослабленной вакцины, как изолированные белки или белки, входящие в вектор.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящего изобретения предоставляются композиции и способы, которые профилактически и/или терапевтически иммунизируют индивидуума.
ДНК-вакцины описаны в патентах США № 5593972, 5739118, 5817637, 5830876, 5962428, 5981505, 5580859, 5703055, 5676594 и предварительных заявках, цитированных здесь, каждые из которых вклю- 5 023892 чены в данное описание в качестве ссылки. В дополнение к протоколам доставки, описанным в этих заявках, альтернативные способы доставки ДНК описаны в патентах США № 4945050 и 5036006, которые включены в данное описание в качестве ссылки.
Настоящее изобретение связано с усовершенствованными ослабленными живыми вакцинами, усовершенствованными инактивированными вакцинами и усовершенствованными вакцинами, которые используют рекомбинантные векторы для доставки чужеродных генов, которые кодируют антигены, а также с субъединичными и гликопротеидными вакцинами. Примеры ослабленных живых вакцин, которые используют рекомбинантные векторы для доставки чужеродных антигенов, субъединичных вакцин и гликопротеидных вакцин, описаны в патентах США № 4510245; 4797368; 4722848; 4790987; 4920209; 5017487; 5077044; 5110587; 5112749; 5174993; 5223424; 5225336; 5240703; 5242829; 5294441; 5294548; 5310668; 5387744; 5389368; 5424065; 5451499; 5453364; 5462734; 5470734; 5474935; 5482713; 5591439; 5643579; 5650309; 5698202; 5955088; 6034298; 6042836; 6156319 и 6589529, каждый из которых включен в данное описание в качестве ссылки.
Попадая в клетку, генетический конструкт(ы) может остаться в клетке как функционирующая экстрахромосомная молекула и/или интегрированная в хромосомную ДНК клетки. ДНК может быть введена в клетку, где она остается как отдельный генетический материал в форме плазмиды или плазмид. Альтернативно, линейная ДНК, которая может интегрироваться с хромосомой, может быть введена в клетку. Когда ДНК вводится в клетку, могут быть добавлены реагенты, которые стимулируют интеграцию ДНК в хромосомы.
Последовательности ДНК, которые полезны для стимуляции интеграции, также могут быть включены в молекулу ДНК.
Альтернативно, РНК может вводиться в клетку. Также предусматривается предоставлять генетические конструкты как линейные микрохромосомы, включающие центромеру, теломеры и точку начала репликации. Генные конструкты могут оставаться частью генетического материала в ослабленных живых микроорганизмах или рекомбинантных бактериальных векторах, которые живут в клетках. Генные конструкты могут быть частью геномов рекомбинантных вирусных вакцин, когда генетический материал или интегрируется в хромосому клетки, или остается экстрахромосомным. Генетические конструкты включают регуляторные элементы, необходимые для генной экспрессии молекулы нуклеиновой кислоты. Элементы включают промотор, инициирующий кодон, терминирующий кодон и сигнал полиаденилирования. Кроме того, для экспрессии генной последовательности, которая кодирует белок-мишень или иммуномодулирующий белок, часто требуются энхансеры. Необходимо, чтобы эти элементы были функционально встроены в последовательность, которая кодирует требуемые белки и чтобы регуляторные элементы работали у тех, кому они вводятся.
Инициирующие кодоны и терминирующий кодон обычно считаются частью нуклеотидной последовательности, которая кодирует требуемый белок. Однако необходимо, чтобы эти элементы функционировали у тех, кому вводится генный конструкт. Инициирующий и терминирующий кодоны должны быть внутри кодирующей последовательности.
Используемые промоторы и сигнал полиаденилирования должны работать в клетках тех, кому они вводятся.
Примеры промоторов полезны для осуществления настоящего изобретения, особенно в производстве генетической вакцины для человека, включая, но без ограничения, промоторы обезьяньего вируса 40 (БУ40), промотор мышиного вируса опухоли молочной железы (ММТУ), вирус иммунодефицита человека (МУ), такой как промотор В1У длинного концевого повтора (ЬТК), вирус Молони, АТУ, цитомегаловирус (СМУ), такой как предранний промотор СМУ, вирус Эпштейна-Барр (ЕВУ), вирус саркомы Рауса (КБУ), а также промоторы из генов человека, такие как человеческий актин, человеческий миозин, человеческий гемоглобин, человеческий мышечный креатин и человеческий металлотионеин.
Примеры сигналов полиаденилирования полезны для осуществления настоящего изобретения, особенно для производства генетических вакцин для людей, включая, но без ограничения, сигналы полиаденилирования БУ40 и сигналы полиаденилирования ЬТК. Преимущественно используется сигнал полиаденилирования БУ40, который находится в плазмиде рСЕР4 (1пуйтодеп, Баи Ωίοβο. СА), называемый сигналом полиаденилирования БУ40.
Кроме регуляторных элементов, требуемых для экспрессии ДНК, другие элементы также могут быть включены в молекулу ДНК. Такие дополнительные элементы включают энхансеры. Энхансер может быть взят из группы, включающей, но без ограничения, человеческий актин, человеческий миозин, человеческий гемоглобин, человеческий мышечный креатин и вирусные энхансеры, такие как СМУ, КБУ и ЕВУ.
Генетические конструкты могут быть предоставлены с точкой начала репликации у млекопитающих для создания экстрахромосомного конструкта и выработки множественных копий конструкта в клетке. Плазмиды рУАХ1, рСЕР4 и рРЕР4 от 1иуйтодеи (Сан-Диего, Калифорния) содержат точку начала репликации вируса Эпштейна-Барр и ядерный кодирующий регион антигена ΕΒΝΑ-1, который генерирует многокопийную эписомную репликацию без интеграции.
В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, связанных с применением иммунизации,
- 6 023892 используются молекула(ы) нуклеиновой кислоты, которые включают нуклеотидные последовательности, кодирующие белок по изобретению; и, необязательно, гены белков, которые добавочно усиливают иммунный ответ против таких белков-мишеней. Примерами таких генов являются гены, кодирующие другие цитокины и лимфокины, такие как альфа-интерферон, гамма-интерферон, фактор роста тромбоцитов (РИОР), ΤΝΕα, ΤΝΡβ, ОМ-С8Р, эпидермальный фактор роста (ЕОР), 1Б-1, 1Б-2, 1Б-4, 1Б-5, 1Б-6, 1Б-10, 1Ь12, 1Б-18, МНС, СЭ80. С.П86 и 1Б-15, включая 1Б-15, обладающий сигнальной последовательностью, удаляющей и опционально включающей сигнальный пептид из 1дЕ. Другие гены, которые могут быть полезны, включают гены, кодирующие МСР-1, ΜΙΡ-1α, М1Р-1р, 1Б-8, Κ.ΆΝΤΕ8, Ь-селектин, Р-селектин, Е-селектин, СП34, О1уСАМ-1, МайСАМ-1, ЬРА-1, УЪА-1, Мас-1, р150.95, РЕСАМ, 1САМ-1, 1САМ-2, 1САМ-3, СЭ2, ЬРА-3, М-С8Р, О-С8Р, 1Б-4, мутантные формы 1Б-18, СЭ40, СП40Б, фактор роста сосудов, 1Б-7, фактор роста нервов, фактор роста эндотелия сосудов, Рак, ΤΝΡ рецептор, Είΐ, Аро-1, р55, Ш-1, ΌΡ3, ΤΚАΜΡ, Аро-3, А1Р, РАКИ, ΝΟΡΕ, ΌΡ4, ΌΡ5, К1ЕБЕК, ΤΕΛΙΕ-^, ΤΚΚΚ2, ΌΡ6, Сакраке 1СЕ, Рок, с-дии, 8р-1, Ар-1, Ар-2, р38, р65Ре1, МуП88, ЖАК, таАРб, 1кВ, 1иасйуе ΝΙΚ, 8АР К, 8АР-1, 1ΝΚ, гены интерферонового ответа, ОТкВ, Вах, ΤΚΆΙΕ ΤΚΆΙΡιό^ ΤΚАI^^ес^ΡС’5. ΤΚАI^-Κ3. таАШΡ4, КАЫК, КАЫК НОАМТ 0x40, 0x40 НОАМТ ΝΚΟ2Ό, М1СА, М1СВ, ХКОЗА, ΝΚΟ2Β, ХКОЗС, ЫКО2Е, ΝΚΟ2Ε, ΤАΡ1, ΤАΡ2 и их функциональные фрагменты.
Может быть добавлен дополнительный элемент, который служит мишенью для клеточной деструкции, если по каким-либо причинам желательно элиминировать клетки, получившие генетический конструкт. Г ен тимидинкиназы (!к) герпеса в экспрессирующейся форме может быть включен в генетический конструкт. Лекарственное средство гангцикловир может быть введено индивидууму, и это лекарственное средство станет причиной избирательного цитолиза любой клетки, продуцирующей 1к, тем самым предоставляя средство для избирательной деструкции клеток с генетическим конструктом.
Для того чтобы максимизировать продукцию белка, могут быть выбраны регуляторные последовательности, которые хорошо подходят для генной экспрессии в клетках, куда введен конструкт. Более того, могут быть выбраны кодоны, которые наиболее эффективно транскрибируются в клетке. Средний специалист в данной области может получить конструкции ДНК, которые являются функциональными в клетках.
В некоторых вариантах осуществления могут быть предоставлены генные конструкты, в которых кодирующие последовательности для белков, описанных здесь, связаны с сигнальным белком 1дЕ. В некоторых вариантах осуществления белки, описанные здесь, связаны с сигнальным белком 1дЕ.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, для которых используется белок, средний специалист может, например, продуцировать и изолировать белки по изобретению, используя хорошо известные технологии. В некоторых вариантах осуществления изобретения, для которых используется белок, средний специалист может, например, используя хорошо известные технологии, вставлять молекулы ДНК, которые кодируют белок по изобретению, в коммерчески доступные векторы экспрессии для использования в хорошо известных системах экспрессии. Например, коммерчески доступная плазмида р8Е420 (1иуйтодеи, Сан-Диего, Калифорния) может быть использована для продукции белка в Е. сой. Коммерчески доступная плазмида рУЕ82 Диуйтодеи, Сан-Диего, Калифорния) может, например, быть использована для продукции в штаммах дрожжей 8. сетеушае. Коммерчески доступная МАХВАС™ полная бакуловирусная система экспрессии Диуйтодеи, Сан-Диего, Калифорния) может, например, быть использована для продукции в клетках насекомых. Коммерчески доступная плазмида рсЭЫА I или рсЭЫА3 Диуйтодеи, Сан-Диего, Калифорния) может, например, быть использована для продукции в клетках млекопитающих, таких как клетки яичника китайского хомячка. Обладая средними специальными знаниями, можно использовать эти коммерческие векторы и системы экспрессии или другое для продуцирования белка с помощью стандартных технологий и легко доступных исходных материалов (см., например, 8ашЬтоок е! а1., Мо1еси1аг С1ошид а БаЬогаЮгу Маииа1, 8есоий Ей. Со1й 8ртшд Натйот Ргекк (1989), включенный в данный документ в качестве ссылки). Таким образом, требуемые белки можно получить как в прокариотических, так и в эукариотических системах, результатом чего будет диапазон обработанных форм белка.
Обладая средними специальными знаниями, можно использовать другие коммерчески доступные векторы экспрессии и системы или создать векторы, используя хорошо известные способы и легко доступные исходные материалы. Системы экспрессии, содержащие необходимые контрольные последовательности, такие как промоторы и сигналы полиаденилирования, и предпочтительно энхансеры, легко доступны и известны в данной области в отношении множества хозяев. См., например, 8атЬгоок е! а1., Мо1еси1аг С1отид а ЬаЬогаФгу Маииа1, 8есоий Ей. Со1й 8ргшд НагЬог Ргекк (1989).
Генетические конструкты включают белки, кодирующие последовательность, функционально связанную с промотором, который работает в клеточной линии, в которую трансфицированы конструкты. Примеры конститутивных промоторов включают промоторы из цитомегаловируса или 8У40. Примеры индуцируемых промоторов включают мышиный вирус лейкемии молочной железы или промоторы металлотионеина. Имея средние специальные знания, можно легко создать генетические конструкты, полезные для трансфекции в клетки ДНК, которая кодирует белок по изобретению, из легко доступных
- 7 023892 исходных материалов. Вектор экспрессии, включающий ДНК, которая кодирует белок, используется для трансформации совместимых хозяев, которые затем культивируются и содержатся при условиях, в которых происходит экспрессия чужеродной ДНК.
Произведенный белок извлекается из культуры или путем лизиса клеток, или из среды культуры, как принято и известно специалистам. Имея средние специальные знания и используя хорошо известные технологии, можно выделить белок, произведенный с использованием таких систем экспрессии. Способы очистки белка из естественных источников с использованием антитела, которое специфично связывается с определенным белком, как описано выше, могут также применяться для очистки белка, произведенного по методологии рекомбинантной ДНК.
В дополнение к производству белков путем рекомбинантных техник автоматизированные белковые синтезаторы также могут быть использованы для производства выделенного исключительно чистого белка. Такие техники хорошо известны специалистам и полезны, если производные, у которых есть замена, не обеспечиваются в производстве белка, кодируемого ДНК.
Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть получены при использовании любой из нескольких хорошо известных технологий, включая введение ДНК (также известное как ДНК-вакцинация), рекомбинантные векторы, такие как рекомбинантный аденовирус, рекомбинантный аденовирус, ассоциированный с вирусом, и рекомбинантная вакцина.
Способы введения включают, но не ограничиваются, введение внутримышечно, внутриназально, внутрибрюшинно, внутрикожно, подкожно, внутривенно, внутриартериально, интраокулярно и орально, а также местно, трансдермально, путем ингаляции или суппозиторием или в ткань слизистой оболочки, в виде орошения вагинальной, ректальной, уретральной, ротовой и подъязычной тканей. Предпочтительные пути введения включают внутримышечную, внутрибрюшинную, внутрикожную и подкожную инъекцию. Генетические конструкты могут вводиться посредством, но без ограничения, способов и приборов электропорации, традиционных шприцов, приборов для безыгольной инъекции или генной пушки для баллистической трансфекции.
Примеры приборов для электропорации и способов электропорации, предпочтительных для легкой доставки ДНК-вакцин, включают те, что описаны в патенте США № 7245963 ИгадПа-АкИ, е( а1., патенте США изд. 2005/0052630 подписан διηίΐΐι. е( а1., содержание которого включено в данное описание в виде ссылки в полном объеме. Также предпочтительными являются приборы для электропорации и способы электропорации для легкой доставки ДНК-вакцин, предоставляемые в одновременно находящейся на рассмотрении заявке того же владельца на патент США № 11/874072, зарегистрированный 17 октября 2007 г., заявляющей приоритет по статье 35 И8С 119(е) предварительных заявок № 60/852149, поданной 17 октября 2006 г., и 60/978982, поданной 10 октября 2007 г., включенных в данное описание в полном объеме в качестве ссылки.
Нижеследующее представляет собой пример осуществления с использованием технологии электропорации, и обсуждается более детально в патентных ссылках, описанных выше: приборы электропорации могут быть сконфигурированы для доставки в требуемую ткань млекопитающего импульсом энергии, производимым постоянным током, таким же, как заданный ток, введенный пользователем. Прибор для электропорации включает электропорационную составляющую и набор электродов или набор рукояток. Электропорационная составляющая может включать один или более из различных элементов приспособлений для электропорации, включая контроллер, волновой генератор тока, тестер импеданса, регистратор волн, входной элемент, элемент сообщения о статусе, коммуникационный порт, компонент памяти, источник питания и выключатель питания. Электропорационная составляющая может функционировать как один элемент электропорационных приборов, и другие элементы являются отдельными элементами (или компонентами) в сообщении с электропорационной составляющей. В некоторых вариантах осуществления элетропорационная составляющая может функционировать как более чем один элемент электропорационного прибора, который может находиться в сообщении с другими элементами электропорационного прибора, отдельно от электропорационной составляющей. Использование электропорационной технологии для доставки усовершенствованной вакцины ВПЧ не ограничено элементами электропорационных приборов, существующих как части одного электромеханического или механического прибора, поскольку элементы могут функционировать как один прибор или как различные элементы, сообщающиеся друг с другом. Электропорационная составляющая способна доставить энергетический импульс, который производит постоянный ток в нужной ткани и включает в себя механизм обратной связи. Набор электродов включает комплект электродов, в который входит множество электродов различного размера, где набор электродов получает импульс энергии от электропорационной составляющей и доставляет ее в нужную ткань посредством электродов. По меньшей мере один из множества электродов является нейтральным во время доставки импульса энергии и измеряет импеданс в нужной ткани и передает значение импеданса к электропорационной составляющей. Механизм обратной связи может получить значение импеданса и может подогнать импульс энергии, доставляемый электропорационной составляющей, для поддержания постоянного тока.
В некоторых вариантах осуществления множество электродов может доставлять импульс энергии в децентрализованную структуру. В некоторых вариантах осуществления множество электродов может
- 8 023892 доставлять импульс энергии в децентрализованную структуру благодаря контролю электродов запрограммированной последовательностью, и запрограммированная последовательность вводится пользователем электропорационной составляющей. В некоторых вариантах осуществления запрограммированная последовательность включает множество импульсов, доставляемых последовательно, где каждый импульс из множества импульсов доставляется по меньшей мере двумя активными электродами с одним нейтральным электродом, который оценивает импеданс, и где последующий импульс из множества импульсов доставляется различно одним из по меньшей мере двух активных электродов с одним нейтральным электродом, который оценивает импеданс.
В некоторых вариантах осуществления механизм обратной связи выполняется или аппаратурой, или программным обеспечением. Предпочтительно механизм обратной связи выполняется аналоговой системой управления с обратной связью. Предпочтительно эта обратная связь происходит каждые 50, 20, 10 или 1 мкс, но предпочтительна обратная связь в режиме реального времени или мгновенная (т.е. практически мгновенная, как определяется в доступных техниках установленное время ответа). В некоторых вариантах осуществления нейтральный электрод оценивает импеданс в нужной ткани и передает импеданс механизму обратной связи, и механизм обратной связи реагирует на импеданс и корректирует импульс энергии, поддерживая значение постоянного тока, сходное заданному значению. В некоторых вариантах осуществления механизм обратной связи непрерывно и мгновенно поддерживает постоянный ток в течение доставки импульса энергии.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты доставляется в клетки вместе с введением полинуклеотида с функцией энхансера или организующего агента генетической вакцины. Полинуклеотиды с функцией энхансера описаны в патенте США № 5593972, 5962428 и интернациональной заявке № РСТ/иЗ94/00899, зарегистрированной 26 января 1994 г., каждый из которых включен в данное описание в качестве ссылки. Организующие агенты генетической вакцины описаны в патенте США № 021579 от 1 апреля 1994 г., который включен в данное описание в качестве ссылки. Коагенты, которые вводятся вместе с молекулами нуклеиновых кислот, могут вводиться как смесь с молекулами нуклеиновой кислоты, или вводиться одновременно с введением молекул нуклеиновой кислоты, или отдельно, до или после введения молекул нуклеиновой кислоты. Кроме того, другие агенты, которые могут выполнять функции трансфицирующих агентов и/или реплицирующих агентов и/или воспалительных агентов и которые могут вводиться совместно с СУР. включая факторы роста, цитокины и лимфокины, такие как α-интерферон, гамма-интерферон, СМ-СЗР, фактор роста тромбоцитов (РОСР), ТИР, эпидермальный фактор роста (РСР) , Ш-1, Ш-2, Ш-4, Ш-6, Ш-10, Ш-12 и Ш-15, а также фактор роста фибробластов, поверхностно-активные агенты, такие как иммуностимулирующие комплексы (1ЗС0МЗ), неполный адъювант Фрейнда, аналог ЬРЗ, включающий монофосфорилированный липид А (^Ъ), мурамилпептиды, аналоги хинона и везикулы, такие как сквален и гиалуроновая кислота, могут также быть использованы для совместного введения с генетическим конструктом. В некоторых вариантах осуществления может быть использован иммуномодулирующий белок, такой как СУР. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты предоставляется совместно с РЬС, чтобы обеспечить доставку/усвоение энхансера.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению содержат от около 1 нг до около 2000 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции, соответствующие настоящему изобретению, содержат от около 5 нг до около 1000 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат от около 10 нг до около 800 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат от около 0,1 до около 500 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат от около 1 до около 350 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат от около 25 до около 250 мкг ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат от около 100 до около 200 мкг ДНК.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению разработаны в соответствии с используемым способом введения. В случаях, когда фармацевтические композиции являются инъецируемыми фармацевтическими составами, они стерильны, не содержат пирогенных препаратов и не содержат твердых частиц. Предпочтительно используется изотоническая формула. Обычно добавки для изотоничности могут включать хлористый натрий, декстрозу, маннит, сорбит и лактозу. В некоторых случаях предпочитаются изотонические растворы, такие как фосфатный солевой буфер. Стабилизаторы включают желатин и альбумин. В некоторых вариантах осуществления в состав добавляется сосудосуживающий агент.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения предоставляются способы вызова иммунных ответов. Вакцина может быть основанной на белке, живой ослабленной вакциной, клеточной вакциной, рекомбинантной вакциной, или вакциной нуклеиновой кислоты, или ДНКвакциной. В некоторых вариантах осуществления способы вызова у индивидуума иммунного ответа против иммуногена включают способы вызова мышечных иммунных ответов, состоящих из введения индивидууму одного или более из белка СТАСК, белка ТЕСК, белка МЕС и их функциональных фрагментов,
- 9 023892 или их экспрессирующихся кодирующих последовательностей в комбинации с очищенными молекулами нуклеиновой кислоты, которые кодируют белок по изобретению, и/или рекомбинантной вакциной, которая кодирует белок по изобретению, и/или субъединичной вакциной, содержащей белок по изобретению, и/или живой ослабленной вакциной, и/или инактивированной вакциной. Один или более из белка СТАСК, белка ТЕСК, белка МЕС и их функциональные фрагменты могут быть введены прежде, одновременно или после введения очищенной молекулы нуклеиновой кислоты, которая кодирует иммуноген, и/или рекомбинантной вакцины, которая кодирует иммуноген, и/или субъединичной вакцины, которая содержит иммуноген, и/или живой ослабленной вакцины, и/или инактивированной вакцины. В некоторых вариантах осуществления индивидууму вводится изолированная молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует один или более белков, выбранных из группы, содержащей СТАСК, ТЕСК, МЕС и их функциональные фрагменты.
Кроме того, настоящее изобретение иллюстрируется следующим примером. Должно быть понятно, что этот пример, показывающий варианты осуществления изобретения, является лишь иллюстративным. Из вышеизложенного обсуждения и этого примера специалист может убедиться в важнейших характеристиках этого изобретения и без отступления от объема его притязаний и не выходя за его границы, может внести различные изменения и модифицировать изобретение, чтобы адаптировать его к различным использованиям и условиям. Таким образом, различные варианты осуществления изобретения в дополнение к тем, что показаны и описаны здесь, будут очевидны специалистам из вышеизложенного описания. Подразумевается, что такие варианты осуществления также попадают в границы прилагаемых утверждений.
Все патенты США, заявки США и ссылки на литературу, цитируемые в ходе настоящего описания, тем самым включены сюда в качестве ссылки в полном объеме.
Пример.
Были подготовлены оптимизированные консенсусные последовательности вируса папилломы человека (ВПЧ) вирусных белков 18 Е6 и 7. Последовательность предназначена для высоких уровней экспрессии. Эта последовательность пригодна для технологии авторов генетической иммунизации. Результаты экспериментов, поставленных с использованием консенсусной последовательности, были положительными. На фиг. 1 дано описание плазмидного конструкта, который включает последовательность нуклеиновой кислоты консенсусного ВПЧ 18-6 и 7 в плазмиде рСХ3002 (8Е0 ГО N0: 7). Нуклеотидная последовательность консенсусного ВПЧ 18-6 и 7, которая встроена в плазмиду рСХ3002, включает кодирующую последовательность лидерного белка 1дЕ, связанного с кодирующими последовательностями консенсусного ВПЧ 18-6 и 7.
Плазмида рСХ3002 экспрессирует оптимизированные антигены человеческого папилломавируса 18-6 и 7 (ВПЧ 18 Е6 и 7), приводимые в действие промотором СМУ (рСМУ) гормона роста крупного рогатого скота с 3' конца и сигналом полиаденилирования (ЬСНрЛ) с использованием рУАХ основы, которая включает ген устойчивости к канамицину (Кап) и точку начала репликации плазмиды (рИС огг).
Элементы
Пары оснований
Промотор СМУ
Кодирующая последовательность ВПЧ 18-6 и 7 Ро1уА ЬСН
Устойчивость к Кап рЦС 0г1
137-724
754-1606
1649-1879
2052-2846
3145-3818
- 10 023892
Перечень последовательностей <110> ТНе ТгизЕееа οί ЕНе ишдегзхЕу οί Реппзу1дата Йешег, ΰδνχό. В Уап, Этап <120> УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫЕ ВАКЦИНЫ ВИРУСА ЧЕЛОВЕЧЕСКОЙ ПАПИЛЛОМЫ И СПОСОБЫ ИХ
ИСПОЛЬЗОВАНИЯ <130> 133172.02700 <150> 03 61/146,942 <151> 2009-01-23 <150> ОЗ 12/691,588 <151> 2010-01-21 <160> 7 <170> Патентная версияЗ.5 <210> 1 <211> 783 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная последовательность ВПЧ, кодирующая Е6 и Е7 <400> 1
дссадаЕЕсд аддассссас саддадсддс ЕасаадсЕдс ссдаЕсЕдЕд ЕассдадсЕд 60
аасассадсс ЕдсаддасаЕ сдадаЕсасс ЕдЕдЕдЕасЕ дЕаадассдЕ дсЕддадсЕд 120
ассдаддЕдЕ Есдадаадда ссЕдЕЕсдЕд дЕдЕасаддд асадсаЕссс ссасдссдсс 180
ЕдссасаадЕ дЕаЕсдасЕЕ сЕасадссдд аЕссдддадс ЕдадасасЕа садсдасадс 240
дЕдЕасддсд аЕасссЕдда даадсЕдасс аасассддсс ЕдЕасаассЕ дсЕдаЕссдд 300
ЕдссЕдадаЕ дссадаадсс ссЕдсЕдада сассЕдаасд адаадсддсд дЕЕссасаас 360
аЕсдссддсс асЕасададд ссадЕдссас адсЕдсЕдЕа асадддссад дсаддадада 420
сЕдсадсдда даадададас ссаддЕдадд ддсаддаада даадаадсса сддссссаад 480
дссасссЕдс аддаЕаЕсдЕ дсЕдсассЕд дадссссада аЕдадаЕссс сдЕддаЕсЕд 540
сЕдддссасд дссадсЕдЕс сдасадсдад даддадаасд асдадаЕсда сддсдЕдааЕ 600
сассадсасс ЕдссЕдссад аададссдад ссЕсададдс асассаЕдсЕ дЕдЕаЕдЕдс 660
ЕдЕаадЕдЕд аддсссддаЕ сдаасЕддЕд дЕддададса дсдссдасда ссЕдададсс 720
ЕЕссадсадс ЕдЕЕссЕдаа сасссЕдадс ЕЕсдЕдЕдЕс сЕЕддЕдЕдс садссадсад 780
Еда 783 <210> 2 <211> 260 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
- 11 023892 <223> Консенсусная последовательность пептида ВПЧ с Е6 и Е7 <400> 2
А1а Агд РЬе С1и Азр Рго ТЬг Агд Зег СЬу Туг Ьуз Ьеи Рго Азр Ьеи 15 10 15
Суз ТЬг С1и Ьеи Азп ТЬг Зег Ьеи С1п Азр Не С1и 11е ТЬг Суз Уа1 20 25 30
Туг Суз Ьуз ТЬг Уа1 Ьеи 61и Ьеи ТЬг С1и Уа1 РЬе С1и Ьуз Азр Ьеи 35 40 45
РЬе Ча1 Уа1 Туг Агд Азр Зег 11е Рго Нхз А1а А1а Суз Яхз Ьуз Суз 50 55 60
11е Азр РЬе Туг Зег Агд 11е Агд С1и Ьеи Агд Шз Туг Зег Азр Зег 65 70 75 80
Уа1 Туг 61у Азр ТЬг Ьеи С1и Ьуз Ьеи ТЬг Азп ТЬг СЬу Ьеи Туг Азп 85 90 95
Ьеи Ьеи 11е Агд Суз Ьеи Агд Суз С1п Ьуз Рго Ьеи Ьеи Агд НЬз Ьеи 100 105 110
Азп Б1и Ьуз Агд Агд РЬе НЬз Азп 11е А1а С1у Шз Туг Агд С1у С1п 115 120 125
Суз Шз Зег Суз Суз Азп Агд А1а Агд С1п С1и Агд Ьеи С1п Агд Агд 130 135 140
Агд С1и ТЬг С1п Уа1 Агд С1у Агд Ьуз Агд Агд Зег НЬз О1у Рго Ьуз 145 150 155 160
А1а ТЬг Ьеи С1п Азр 11е Уа1 Ьеи НЬз Ьеи С1и Рго С1п Азп С1и 11е 165 170 175
Рго \7а1 Азр Ьеи Ьеи С1у Шз С1у С1п Ьеи Зег Азр Зег С1и С1и С1и 1В0 185 190
Азп Азр С1и 11е Азр СЬу Уа1 Азп НЬз С1п Шз Ьеи Рго А1а Агд Агд 195 200 205
А1а С1и Рго С1п Агд Н1з ТЬг МеЬ Ьеи Суз МеЬ Суз Суз Ьуз Суз С1и 210 215 220
А1а Агд 11е С1и Ьеи Уа1 Уа1 С1и Зег Зег А1а Азр Азр Ьеи Агд А1а 225 230 235 240
- 12 023892
РЬе С1п С1п Ьеи РЬе Ьеи Абп ТЬг Ьеи Зег РЬе Уа1 Суз Рго Тгр Суз 245 250 255
А1а Зег С1п С1п 260 <210> 3 <211> 54 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Лидерная последовательность ДНК 1дЕ <400> 3 аДддасДдда ссДддаДссД дДДссДддДд дссдсДдсса сасдддДдса саде 54 <210> 4 <211> 18 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220 <223> Лидерная последовательность пептидов 1дЕ <400> 4
Мед Азр Тгр ТЬг Тгр Не Ьеи РЬе Ьеи Т7а1 А1а А1а А1а ТЬг Агд Уа1 15 10 15
ΗΪ3 Зег <210> 5 <211> 837 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная трансгенная последовательность нуклеиновой кислоты ВПЧ, включающая 1дЕ <4 00> 5
аДддасДдда ссДддаДссД дДДссДддДд дссдсДдсса сасдддДдса садсдссада 60
ДДсдаддасс ссассаддад сддсДасаад сДдсссдаДс ДдДдДассда дсДдаасасс 120
адссДдсадд асаДсдадаД сассДдДдДд ДасДдДаада ссдДдсДдда дсДдассдад 180
дДдДДсдада аддассДдДД сдДддДдДас адддасадса Дсссссасдс сдссДдссас 240
аадДдДаДсд асДДсДасад ссддаДссдд дадсДдадас асДасадсда садсдДдДас 300
ддсдадассс ДддадаадсД дассаасасс ддссДдДаса ассДдсДдаД ссддДдссДд 360
адаДдссада адссссДдсД дадасассДд аасдадаадс ддсддДДсса саасаДсдсс 420
ддссасДаса даддссадДд ссасадсДдс ДдДаасаддд ссаддсадда дадасДдсад 480
еддадаадад адасссаддД даддддсадд аададаадаа дссасддссс сааддссасс 540
- 13 023892
сЬдсаддаЬа ЬсдбдсЪдса ссбддадссс садааЬдада ЬссссдГдда ЬсЬдсбдддс 600
сасддссадс Ьдбссдасад сдаддаддад аасдасдада ЬсдасддсдЬ даабсассад 660
сассЬдссГд ссадаададс сдадссСсад аддсасасса ЬдсЬдЬдСаЬ дСдсЬдСаад 720
бдГдаддссс ддабсдаасС. ддсддгддад адсадсдссд асдассЬдад адссЬСссад 780
садсСд1Ссс СдаасасссЬ дадсЫсдЬд £д£сс£Ёдд£ дЬдссадсса дсадсда 337
<210> 6 <211> 278 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная последовательность белка ВПЧ с лидерным пептидом 1дЕ <400> 6
МеС Азр Тгр ТЬг Тгр Не Ьеи РЬе Ьеи Уа1 А1а А1а А1а ТЬг Агд Ча1
10 15
Нгз Зег А1а Агд РЬе С1и Азр Рго ТЬг Агд Зег 51у Туг Ьуз Ьеи Рго 20 25 30
Азр Ьеи Суз ТЬг С1и Ьеи Азп ТЬг Зег Ьеи С1п Азр Не С1и Не ТЬг 35 40 45
Суз Уа1 Туг Суз Ьуз ТЬг Уа1 Ьеи С1и Ьеи ТЬг С1и Уа1 РЬе 51и Ьуз 50 55 60
Азр Ьеи РЬе Уа1 Уа1 Туг Агд Азр Зег Не Рго Нгз А1а А1а Суз Нгз 65 70 75 80
Ьуз Суз Не Азр РЬе Туг Зег Агд Не Агд С1и Ьеи Агд Нгз Туг Зег 85 90 95
Азр Зег Уа1 Туг С1у Азр ТЬг Ьеи <31и Ьуз Ьеи ТЬг Азп ТЬг С1у Ьеи 100 105 110
Туг Азп Ьеи Ьеи 11е Агд Суз Ьеи Агд Суз С1п Ьуз Рго Ьеи Ьеи Агд 115 120 125
Нгз Ьеи Азп С1и Ьуз Агд Агд РЬе Шз Азп 11е А1а С1у Нгз Туг Агд 130 135 140
С1у С1п Суз Нгз Зег Суз Суз Азп Агд А1а Агд С1п С1и Агд Ьеи С1п 145 150 155 160
Агд Агд Агд С1и ТЬг С1п Уа1 Агд С1у Агд Ьуз Агд Агд Зег Нгз С1у 165 170 175
- 14 023892
<210> Ί <211> 3824 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223 Плазмиды СХ3002 с консенсусной и 1дЕ-лидерной последовательностями <400> 7
дсВдсВВсдс даВдВасддд ссадаВаВас дсдВВдасаВ ВдаВВаВВда сВадВВаВВа ЙО
аВадВаавса авЕасддддВ саВВадВВса вадсссавав аВддадВСсс дсдСВасаВа 120
асВВасддВа ааВддсссдс сВддсВдасс дсссаасдас ссссдсссаЕ ВдасдВсааВ 180
ааВдасдВаВ дВВсссаВад ВаасдссааВ адддасВВВс саВВдасдВс ааВдддВдда 240
двавввасдд ВааасВдссс асВВддсадВ асаВсаадвд Вавсававдс саадвасдсс 300
сссВаВВдас дВсааВдасд дВаааВддсс сдссВддсаВ ВаВдсссадВ асаВдассВВ 360
аВдддасВВВ ссВасВВддс адВасаВсВа сдВаВВадВс аВсдсВаВВа ссаВддВдаВ 420
дсддВВВВдд садВасаВса аВдддсдВдд аВадсддВВВ дасВсасддд даВВВссаад 480
ВсВссасссс аВВдасдВса аВдддадВВВ дВВВВддсас сааааВсаас дддасВВВсс 540
ааааВдВсдВ аасаасВссд ссссаВВдас дсаааВдддс ддВаддсдвд васддвддда 600
ддВсВаВаВа адсададсВс ВсВддсВаас Вададаассс асВдсВВасВ ддсВВаВсда 660
ааВВааВасд асВсасВаВа дддадассса адсВддсВад сдВВВааасВ ВаадсВВддВ 720
ассдадсвсд даВссасВад ВссадВдвдд ЕддааВВсдс сассаВддас сддассВдда 730
ВссВдВВссВ ддВддссдсВ дссасасддд Вдсасадсдс садаВВсдад дассссасса 840
- 15 023892
ддадсддсЕа саадсЕдссс даЕсЕдЕдЕа ссдадсЕдаа сассадссЕд саддасаЕсд 900
адаЕсассЕд ЕдЕдЕасЕдЕ аадассдЕдс ЕддадсЕдас сдаддЕдЕЕс дадааддаос 960
ЕдЕЕсдЕддЕ дЕасадддас адсаЕссссс асдссдссЕд ссасаадЕдЕ аЕсдасЕЕсЕ 1020
асадссддаЕ ссдддадсЕд адасасЕаса дсдасадсдЕ дЕасддсдаЕ асссЕддада 1080
адсЕдассаа сассддссЕд ЕаеаасеЕдс ЕдаЕссддЕд ссЕдадаЕдс садаадсосс 1140
ЕдсЕдадаса ссЕдаасдад аадсддсддЕ ЕссасаасаЕ сдссддссас Еасададдсс 1200
адЕдссасад сЕдсЕдЕаас адддссаддс аддададасЕ дсадсддада адададассс 1260
аддЕдадддд саддаадада адаадссасд дссссааддс сасссЕдсад даЕаЕсдЕдс 1320
ЕдсассЕдда дссссадааЕ дадаЕссссд ЕддаЕсЕдсЕ дддссасддс садсЕдЕссд 1380
асадсдадда ддадаасдас дадаЕсдасд дсдЕдааЕса ссадсассЕд ссЕдссадаа 1440
дадссдадсс Есададдсас ассаЕдсЕдЕ дЕаЕдЕдсЕд ЕаадЕдЕдад дсссддаЕсд 1500
аасЕддЕддЕ ддададсадс дссдасдасс ЕдададссЕЕ ссадсадсЕд ЕЕссЕдааса 1560
сссЕдадсЕЕ сдЕдЕдЕссЕ ЕддЕдЕдсса дссадсадЕд аЕдадсддсс дсЕсдадЕсЕ 1620
ададддсссд ЕЕЕааасссд сЕдаЕсадсс ЕсдасЕдЕдс сЕЕсЕадЕЕд ссадссаЕсЕ 1680
дЕЕдЕЕЕдсс ссЕсссссдЕ дссЕЕссЕЕд асссЕддаад дЕдссасЕсс саеЕдЕссЕЕ 1740
ЕссЕааЕааа аЕдаддаааЕ ЕдсаЕсдсаЕ ЕдЕсЕдадЕа ддЕдЕсаЕЕс ЕаЕЕсЕдддд 1800
ддЕддддЕдд ддсаддасад саадддддад даЕЕдддаад асааЕадсад дсаЕдсЕддд 1860
даЕдсддЕдд дсЕсЕаЕддс ЕЕсЕасЕддд сддЕЕЕЕаЕд дасадсаадс даассддааЕ 1920
ЕдссадсЕдд ддсдсссЕсЕ ддЕааддЕЕд ддаадсссЕд сааадЕааас ЕддаЕддсЕЕ 1980
ЕсЕЕдссдсс ааддаЕсЕда Еддсдсаддд даЕсаадсЕс ЕдаЕсаадад асаддаЕдад 2040
даЕсдЕЕЕсд саЕдаЕЕдаа саадаЕддаЕ Едсасдсадд ЕЕсЕссддсс дсЕЕдддЕдд 2100
ададдсЕаЕЕ сддсЕаЕдас Едддсасаас адасааЕсдд СЕдоЕсЕдаЕ дссдссдЕдЕ 2160
ЕссддсЕдЕс адсдсадддд сдсссддЕЕс ЕЕЕЕЕдЕсаа дассдассЕд ЕссддЕдссс 2220
ЕдааЕдаасЕ дсаадасдад дсадсдсддс ЕаЕсдЕддсЕ ддссасдасд ддсдЕЕссЕЕ 2230
дсдсадсЕдЕ дсЕсдасдЕЕ дЕсасЕдаад сдддааддда сЕддсЕдсЕа ЕЕдддсдаад 2340
Едссддддса ддаЕсЕссЕд ЕсаЕсЕсасс ЕЕдсЕссЕдс сдадааадЕа ЕссаЕсаЕдд 2400
сЕдаЕдсааЕ дсддсддсЕд саЕасдсЕЕд аЕссддсЕас сЕдсссаЕЕс дассассаад 2460
сдааасаЕсд саЕсдадсда дсасдЕасЕс ддаЕддаадс сддЕсЕЕдЕс даЕсаддаЕд 2520
аЕсЕддасда ададсаЕсад дддсЕсдсдс садссдаасЕ дЕЕсдссадд сЕсааддсда 2530
дсаЕдсссда сддсдаддаЕ сЕсдЕсдЕда сссаЕддсда ЕдссЕдсЕЕд ссдааЕаЕса 2640
ЕддЕддаааа ЕддссдсЕЕЕ ЕсЕддаЕЕса ЕсдасЕдЕдд ссддсЕдддЕ дЕддсддасс 2700
дсЕаЕсадда саЕадсдЕЕд дсЕасссдЕд аЕаЕЕдсЕда ададсЕЕддс ддсдааЕддд 2760
- 16 023892
сЬдассдсЫ ссЬсдЪдсЪЬ ЬасддЬаЪсд ссдсЪсссда Ысдсадсдс аЬсдссЫс! 2820
аРсдссЫсИ ЬдасдадСЬс ьссьдааСЕа ььаасдсььа сааЬЬСссСд аСдсддСаЫ: 2880
ЫсЬссЫас дсаЬсЬдбдс ддЬаЪЫсас ассдсаЬсад дбддсасСН ЬсддддаааЬ 2940
дьдсдсддаа сасссассьд сьгаьсссгс ЬаааРасаСС сааасасдба ЬссдсбсаЬд 3000
адасаабаас ссЪдаЬааа! дсЫсаабаа ЬадсасдЬдс ЬаааасЫса ЬЬСЬЬааСЕЕ 3060
ааааддаЬсС аддЬдаадаЬ ссЁССбЬдаЬ ааЬсбсаСда ссаааабссс ГСаасдЬдад 3120
ЬЫЛсдбЬсс асЬдадсдЬс адассссдба даааадаЬса ааддабсЬЬс ЬЬдадаЬссЬ 3180
Ь-ЬЬЪЬ-есЬдс дсдЬаабсЬд сЬдсЬЬдсаа асааааааас сассдсЬасс адсддЬддЫ; 3240
ЬдЬЬЬдссдд абсаададсЬ ассаасЬсН ЫЬссдаадд СаасЬддсЬб садсададсд 3300
садаЪассаа абасЬдЫс! СсЬадРд'Ьад ссдЬадЬЪад дссассасЬЬ саадаасбсЬ 3360
дЬадсассдс сЬасаЬассЬ сдсЬсЬдсЬа аЬссбдЫас садЬддсСдс СдссадСддс 3420
даСаадЬсдЬ дСсЫассдд дСЬддасЬса адасдаЬадЬ Сассддабаа ддсдсадсдд 3480
ЬсдддсЪдаа сддддддЫс дСдсасасад сссадс!Сдд адсдаасдас сЬасассдаа 3540
сЬдадаЬасс ЬасадсдЬда дсЬаЬдадаа адсдссасдс ЬСсссдаадд дадаааддсд 3600
дасаддЬаЪс сддьаадсдд садддЬсдда асаддададс дсасдаддда дсббссаддд 3660
ддааасдссЬ ддбаЬсЬЬЬа ЬадСссЬдЬс дддЬЬЬсдсс ассйсЬдасЬ ЁдадсдЬсда 3720
ЬЫЬЬдЬдаЬ дсбсдЪсадд ддддсддадс сЬабддаааа асдссадсаа сдсддссЕбб 3780
ЬРасддЪЬсс ЬддссССЬ'Сд сСддссЫЩ: дсЬсасаСд! ЬсЬЬ 3824

Claims (45)

1. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую антиген ВПЧ Е6/Е7, который индуцирует иммунный ответ у субъекта, причем указанная последовательность выбрана из группы, состоящей из
8ЕО ГО N0: 1;
фрагментов 8Е0 ГО N0: 1, содержащих 90 или более нуклеотидов 8Е0 ГО N0: 1; последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией с 8Е0 ГО N0: 1;
8ЕО ГО N0: 5;
фрагментов 8Е0 ГО N0: 5, содержащих 90 или более нуклеотидов 8Е0 ГО N0: 1; и последовательностей, обладающих по меньшей мере 90% гомологией с 8Е0 ГО N0: 5.
2. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая 8Е0 ГО N0: 1.
3. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая последовательность, обладающую по меньшей мере 95% гомологией с 8Е0 ГО N0: 1.
4. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая последовательность, обладающую по меньшей мере 98% гомологией с 8Е0 ГО N0: 1.
5. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая последовательность, обладающую по меньшей мере 99% гомологией с 8Е0 ГО N0: 1.
6. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая 8Е0 ГО N0: 5.
7. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая последовательность, обладающую по меньшей мере 95% гомологией с 8Е0 ГО N0: 5.
8. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая последовательность, обладающую по меньшей мере 98% гомологией с 8Е0 ГО N0: 5.
9. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая последовательность, обладающую по меньшей мере 99% гомологией с 8Е0 ГО N0: 5.
10. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, выбранная из группы, состоящей из фрагментов 8Е0 ГО N0: 1, содержащих 270 или более нуклеотидов 8Е0 ГО N0: 1;
фрагментов 8Е0 ГО N0: 1, содержащих 450 или более нуклеотидов 8Е0 ГО N0: 1;
фрагментов 8Е0 ГО N0: 1, содержащих 630 или более нуклеотидов 8Е0 ГО N0: 1;
фрагментов 8Е0 ГО N0: 1, содержащих 720 или более нуклеотидов 8Е0 ГО N0: 1;
фрагментов 8Е0 ГО N0: 1, содержащих 770 или более нуклеотидов 8Е0 ГО N0: 1;
- 17 023892 фрагментов 5>ЕС ΙΌ N0: 5, содержащих 270 или более нуклеотидов 5>ЕС ГО N0: 5;
фрагментов 5>Е0 ГО N0: 5, содержащих 450 или более нуклеотидов 5>Е0 ГО N0: 5;
фрагментов 5>Е0 ГО N0: 5, содержащих 630 или более нуклеотидов 5>Е0 ГО N0: 5;
фрагментов 5>Е0 ГО N0: 5, содержащих 720 или более нуклеотидов 5>Е0 ГО N0: 5; и фрагментов 5>Е0 ГО N0: 5, содержащих 770 или более нуклеотидов 5>Е0 ГО N0: 5.
11. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где указанная молекула представляет собой плазмиду.
12. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую антиген ВПЧ Е6/Е7, который индуцирует иммунный ответ у субъекта, причем указанная последовательность выбрана из группы, состоящей из последовательности, которая кодирует 5>ЕС ГО N0: 2;
последовательностей, которые кодируют аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 95% гомологией с 5>Е0 ГО N0: 2;
фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты 5>ЕС ГО N0: 2, где указанные фрагменты 5>Е0 ГО N0: 2 содержат 120 или более аминокислот 5>Е0 ГО N0: 2;
последовательности, которая кодирует 5>ЕС ГО N0: 6;
последовательностей, которые кодируют аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 95% гомологией с 5>Е0 ГО N0: 6;
фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты 5>ЕС ГО N0: 6, где указанные фрагменты 5>Е0 ГО N0: 6 содержат 120 или более аминокислот 5>Е0 ГО N0: 6.
13. Молекула нуклеиновой кислоты по п.12, содержащая нуклеотидную последовательность, которая кодирует 5Е0 ГО N0: 2.
14. Молекула нуклеиновой кислоты по п.12, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательности, которая кодирует 5>ЕС ГО N0: 6;
последовательностей, которые кодируют аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 95% гомологией с 5>Е0 ГО N0: 6;
фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты 5>ЕС ГО N0: 6, где указанные фрагменты 5>Е0 ГО N0: 6 содержат 120 или более аминокислот 5>Е0 ГО N0: 6.
15. Молекула нуклеиновой кислоты по п.14, содержащая нуклеотидную последовательность, которая кодирует 5Е0 ГО N0: 6.
16. Молекула нуклеиновой кислоты по п.14, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты 5>ЕС ГО N0: 6, где указанные фрагменты 5>Е0 ГО N0: 6 содержат 150 или более аминокислот последовательности 5>Е0 ГО N0: 6;
фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты 5>ЕС ГО N0: 6, где указанные фрагменты 5>Е0 ГО N0: 6 содержат 180 или более аминокислот последовательности 5>Е0 ГО N0: 6;
фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты 5>ЕС ГО N0: 6, где указанные фрагменты 5>Е0 ГО N0: 6 содержат 210 или более аминокислот последовательности 5>Е0 ГО N0: 6; и фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты 5>ЕС ГО N0: 6, где указанные фрагменты 5>Е0 ГО N0: 6 содержат 240 или более аминокислот последовательности 5>Е0 ГО N0: 6.
17. Молекула нуклеиновой кислоты по п.12, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты 5>ЕС ГО N0: 2, где указанные фрагменты 5>Е0 ГО N0: 2 содержат 150 или более аминокислот 5>Е0 ГО N0: 2;
фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты 5>ЕС ГО N0: 2, где указанные фрагменты 5>Е0 ГО N0: 2 содержат 180 или более аминокислот 5>Е0 ГО N0: 2;
фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты 5>ЕС ГО N0: 2, где указанные фрагменты 5>Е0 ГО N0: 2 содержат 210 или более аминокислот 5>Е0 ГО N0: 2; и фрагментов последовательностей, которые кодируют фрагменты 5>ЕС ГО N0: 2, где указанные фрагменты 5>Е0 ГО N0: 2 содержат 240 или более аминокислот 5>Е0 ГО N0: 2.
18. Фармацевтическая композиция для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.
19. Инъецируемая фармацевтическая композиция для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.
20. Способ генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму композиции, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.
21. Способ по п.20, где указанная молекула нуклеиновой кислоты представляет собой молекулу
ДНК.
22. Способ по п.21, где указанная молекула нуклеиновой кислоты представляет собой плазмиду.
23. Способ по п.20, где указанную молекулу нуклеиновой кислоты вводят индивидууму путем электропорации.
24. Способ по п.20, где у индивидуума диагностировали наличие инфекции ВПЧ.
- 18 023892
25. Рекомбинантная вакцина для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.
26. Рекомбинантная вакцина по п.25, где указанная рекомбинантная вакцина представляет собой рекомбинантную осповакцину.
27. Живая ослабленная вакцина для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.
28. Белок, содержащий аминокислотную последовательность антигена ВПЧ Е6/Е7, который индуцирует иммунный ответ у субъекта, выбранную из группы, состоящей из
БЕО ГО N0: 2;
последовательностей, обладающих по меньшей мере 95% гомологией с БЕО ГО N0: 2; фрагментов БЕО ГО N0: 2, где указанные фрагменты БЕО ГО N0: 2 содержат 120 или более аминокислот БЕО ГО N0: 2;
БЕЕ) ГО N0: 6;
последовательностей, обладающих по меньшей мере 95% гомологией с БЕО ГО N0: 6; фрагментов БЕО ГО N0: 6, где указанные фрагменты БЕО ГО N0: 6 содержат 120 или более аминокислот БЕО ГО N0: 6.
29. Белок по п.28, содержащий БЕО ГО N0: 2.
30. Белок по п.28, содержащий последовательности, обладающие по меньшей мере 98% гомологией с БЕТ) ГО N0: 2.
31. Белок по п.28, содержащий последовательности, обладающие по меньшей мере 99% гомологией с БЕТ) ГО N0: 2.
32. Белок по п.28, содержащий последовательности, обладающие по меньшей мере 98% гомологией с БЕТ) ГО N0: 6.
33. Белок по п.28, содержащий последовательности, обладающие по меньшей мере 99% гомологией с БЕТ) ГО N0: 6.
34. Белок по п.28, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
БЕТ) ГО N0: 6;
последовательностей, обладающих по меньшей мере 95% гомологией с БЕО ГО N0: 6; фрагментов БЕО ГО N0: 6, где указанные фрагменты БЕО ГО N0: 6 содержат 120 или более аминокислот БЕО ГО N0: 6.
35. Белок по п.34, содержащий БЕО ГО N0: 6.
36. Белок по п.34, содержащий фрагменты последовательности БЕО ГО N0: 6, содержащие 150 или более аминокислот БЕО ГО N0: 6; фрагменты последовательности БЕО ГО N0: 6, содержащие 180 или более аминокислот БЕО ГО N0: 6; фрагменты последовательности БЕО ГО N0: 6, содержащие 210 или более аминокислот БЕО ГО N0:
6; и фрагменты последовательности БЕО ГО N0: 6, содержащие 240 или более аминокислот БЕО ГО N0:
6.
37. Белок по п.28, содержащий фрагменты последовательности БЕО ГО N0: 2, содержащие 150 или более аминокислот БЕО ГО N0: 2; фрагменты последовательности БЕО ГО N0: 2, содержащие 180 или более аминокислот БЕО ГО N0: 2; фрагменты последовательности БЕО ГО N0: 2, содержащие 210 или более аминокислот БЕО ГО N0:
2; и фрагменты последовательности БЕО ГО N0: 2, содержащие 240 или более аминокислот БЕО ГО N0:
2.
38. Фармацевтическая композиция для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая белок по п.28.
39. Инъецируемая фармацевтическая композиция для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая белок по п.28.
40. Рекомбинантная вакцина для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая белок по п.28.
41. Рекомбинантная вакцина по п.40, представляющая собой рекомбинантную осповакцину.
42. Живая ослабленная вакцина для генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, содержащая белок по п.28.
43. Способ генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму композиции, содержащей белок по п.28.
44. Способ генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму рекомбинантной вакцины по п.25.
45. Способ генерации иммунного ответа против ВПЧ у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму живой ослабленной вакцины по п.27.
- 19 023892
EA201170965A 2009-01-23 2010-01-22 Иммуногенные белки вируса человеческой папилломы и способы их применения EA023892B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14694209P 2009-01-23 2009-01-23
US12/691,588 US8389706B2 (en) 2009-01-23 2010-01-21 Vaccines for human papilloma virus and methods for using the same
PCT/US2010/021869 WO2010085697A1 (en) 2009-01-23 2010-01-22 Improved vaccines for human papilloma virus and methods for using the same

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201170965A1 EA201170965A1 (ru) 2012-01-30
EA023892B1 true EA023892B1 (ru) 2016-07-29

Family

ID=42352560

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201170965A EA023892B1 (ru) 2009-01-23 2010-01-22 Иммуногенные белки вируса человеческой папилломы и способы их применения

Country Status (14)

Country Link
US (1) US8389706B2 (ru)
EP (1) EP2393496B1 (ru)
JP (2) JP5996191B2 (ru)
KR (1) KR101652764B1 (ru)
CN (2) CN107267530A (ru)
AU (1) AU2010206611B2 (ru)
CA (2) CA2653478A1 (ru)
EA (1) EA023892B1 (ru)
ES (1) ES2592204T3 (ru)
HK (1) HK1245334A1 (ru)
MX (1) MX2011007692A (ru)
PL (1) PL2393496T3 (ru)
PT (1) PT2393496T (ru)
WO (1) WO2010085697A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018144545A1 (en) * 2017-01-31 2018-08-09 Stc.Unm Arginine-rich polypeptide compositions and methods of using same

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9050287B2 (en) 2009-01-23 2015-06-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Vaccines for human papilloma virus and methods for using the same
US8298820B2 (en) 2010-01-26 2012-10-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Influenza nucleic acid molecules and vaccines made therefrom
EP3443982A1 (en) * 2011-10-12 2019-02-20 The Trustees of the University of Pennsylvania Vaccines for human papilloma virus and methods for using the same
AU2013245950B2 (en) 2012-04-10 2016-04-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Human respiratory syncytial virus consensus antigens, nucleic acid constructs and vaccines made therefrom, and methods of using same
CN105307678A (zh) * 2013-03-12 2016-02-03 宾夕法尼亚大学理事会 用于人乳头状瘤病毒的改进疫苗及其使用方法
US11419925B2 (en) 2013-03-15 2022-08-23 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Cancer vaccines and methods of treatment using the same
CA2935375C (en) * 2014-01-06 2023-08-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Pd1 and pdl1 antibodies and vaccine combinations and use of same for immunotherapy
US20230277645A1 (en) * 2020-04-02 2023-09-07 Inovio Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating vulvar dysplasia
CN111482408A (zh) * 2020-05-28 2020-08-04 成都润林医疗器械有限公司 具有远程控制系统的清洗机
CN114106207B (zh) * 2022-01-24 2022-04-26 诺未科技（北京）有限公司 Ccl5的用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050031638A1 (en) * 1997-12-24 2005-02-10 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Vaccine
WO2007119896A1 (en) * 2006-04-19 2007-10-25 Postech Foundation Compositions comprising hpv polypeptides and immunoenhancement peptides for the treatment and prevention of cervical cancer

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5077044A (en) * 1980-05-19 1991-12-31 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University Novel non-reverting shigella live vaccines
US5174993A (en) * 1981-12-24 1992-12-29 Health Research Inc. Recombinant avipox virus and immunological use thereof
US5338683A (en) * 1981-12-24 1994-08-16 Health Research Incorporated Vaccinia virus containing DNA sequences encoding herpesvirus glycoproteins
US4722848A (en) * 1982-12-08 1988-02-02 Health Research, Incorporated Method for immunizing animals with synthetically modified vaccinia virus
US5110587A (en) * 1981-12-24 1992-05-05 Health Research, Incorporated Immunogenic composition comprising synthetically modified vaccinia virus
US4510245A (en) * 1982-11-18 1985-04-09 Chiron Corporation Adenovirus promoter system
US5643579A (en) * 1984-11-01 1997-07-01 American Home Products Corporation Oral vaccines
ZA858044B (en) * 1984-11-01 1987-05-27 American Home Prod Oral vaccines
US5036006A (en) * 1984-11-13 1991-07-30 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
US4945050A (en) * 1984-11-13 1990-07-31 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
US4797368A (en) * 1985-03-15 1989-01-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector
GB8508845D0 (en) * 1985-04-04 1985-05-09 Hoffmann La Roche Vaccinia dna
US5223424A (en) * 1985-09-06 1993-06-29 Prutech Research And Development Attenuated herpesviruses and herpesviruses which include foreign DNA encoding an amino acid sequence
US4790987A (en) * 1985-11-15 1988-12-13 Research Corporation Viral glycoprotein subunit vaccine
US5310668A (en) * 1986-06-20 1994-05-10 Merck & Co., Inc. Varicella-zoster virus as a live recombinant vaccine
US5242829A (en) * 1986-09-23 1993-09-07 Therion Biologics Corporation Recombinant pseudorabies virus
US5294441A (en) * 1987-06-04 1994-03-15 Washington University Avirulent microbes and uses therefor: salmonella typhi
US5387744A (en) * 1987-06-04 1995-02-07 Washington University Avirulent microbes and uses therefor: Salmonella typhi
IL86583A0 (en) * 1987-06-04 1988-11-15 Molecular Eng Ass Vaccine containing a derivative of a microbe and method for the production thereof
US5112749A (en) * 1987-10-02 1992-05-12 Praxis Biologics, Inc. Vaccines for the malaria circumsporozoite protein
US5225336A (en) * 1989-03-08 1993-07-06 Health Research Incorporated Recombinant poxvirus host range selection system
JP3044062B2 (ja) * 1989-03-08 2000-05-22 ヘルス・リサーチ・インク 組換えポックスウイルス宿主選択系
US5703055A (en) * 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
US5591439A (en) * 1989-03-24 1997-01-07 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Recombinant cytomegalovirus vaccine
AU645489B2 (en) * 1989-03-31 1994-01-20 Washington University Vaccines containing avirulent phoP-type microorganisms
EP0431668B1 (en) * 1989-12-04 1995-02-15 Akzo Nobel N.V. Recombinant herpesvirus of turkeys and live vector vaccines derived thereof
US5294548A (en) * 1990-04-02 1994-03-15 American Biogenetic Sciences, Inc Recombianant Hepatitis a virus
WO1991018088A1 (en) * 1990-05-23 1991-11-28 The United States Of America, Represented By The Secretary, United States Department Of Commerce Adeno-associated virus (aav)-based eucaryotic vectors
US5462734A (en) * 1990-11-02 1995-10-31 Wisconsin Alumni Research Foundation Bovine herpesvirus vaccine and method of using same
US5240703A (en) * 1991-03-01 1993-08-31 Syntro Corporation Attenuated, genetically-engineered pseudorabies virus s-prv-155 and uses thereof
US6034298A (en) * 1991-08-26 2000-03-07 Prodigene, Inc. Vaccines expressed in plants
US5955088A (en) * 1992-02-03 1999-09-21 Cedars-Sinai Medical Center Pharmaceutical compsition of herpes simplex virus type-1 (HSV-1), glycoproteins
NZ262582A (en) 1993-01-26 1997-10-24 David B Weiner Compositions and methods for delivery of genetic material
US5981505A (en) * 1993-01-26 1999-11-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for delivery of genetic material
US5593972A (en) * 1993-01-26 1997-01-14 The Wistar Institute Genetic immunization
AU700371B2 (en) * 1993-06-07 1999-01-07 Genentech Inc. Hiv envelope polypeptides
US5739118A (en) * 1994-04-01 1998-04-14 Apollon, Inc. Compositions and methods for delivery of genetic material
US6156319A (en) * 1994-07-25 2000-12-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Soluble herpesvirus glycoprotein complex vaccine
NL9401820A (nl) * 1994-11-02 1996-06-03 Meyn Maschf Inrichting voor het bewerken van aan zijn poten opgehangen gevogelte.
US5962428A (en) * 1995-03-30 1999-10-05 Apollon, Inc. Compositions and methods for delivery of genetic material
US5650309A (en) * 1995-05-16 1997-07-22 The Regents Of The University Of California Viral vectors
US5698202A (en) * 1995-06-05 1997-12-16 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Replication-defective adenovirus human type 5 recombinant as a rabies vaccine carrier
AUPN443995A0 (en) * 1995-07-27 1995-08-17 Csl Limited Papillomavirus polyprotein
GB9717953D0 (en) 1997-08-22 1997-10-29 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9727262D0 (en) * 1997-12-24 1998-02-25 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
US6589529B1 (en) * 1998-10-30 2003-07-08 Children's Hospital Medical Center Rotavirus subunit vaccine
US8209006B2 (en) * 2002-03-07 2012-06-26 Vgx Pharmaceuticals, Inc. Constant current electroporation device and methods of use
US7245963B2 (en) * 2002-03-07 2007-07-17 Advisys, Inc. Electrode assembly for constant-current electroporation and use
WO2005033333A2 (en) * 2003-10-07 2005-04-14 Dako Denmark A/S Methods and compositions for the diagnosis of cancer
MX2008013489A (es) 2006-04-21 2008-10-30 Transgene Sa Vacuna de virus de papiloma basado en hpv-18 (virus de papiloma humano 18).
CN105132439A (zh) 2006-07-28 2015-12-09 宾夕法尼亚大学托管会 改进的疫苗及其使用方法
KR20140137679A (ko) 2013-05-23 2014-12-03 삼성전자주식회사 카드 소켓 장치

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050031638A1 (en) * 1997-12-24 2005-02-10 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Vaccine
WO2007119896A1 (en) * 2006-04-19 2007-10-25 Postech Foundation Compositions comprising hpv polypeptides and immunoenhancement peptides for the treatment and prevention of cervical cancer

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MAHDAVI et al., Vaccines Against Human Papillomavirus and Cervical Cancer Promises and Challenges The Oncologist, August 2005, vol. 10, no 7, p. 528-538, pg. 533, right col., para 1, ln 16-23, pg. 534, left col., para 2, ln 16-21 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018144545A1 (en) * 2017-01-31 2018-08-09 Stc.Unm Arginine-rich polypeptide compositions and methods of using same
US11045519B2 (en) 2017-01-31 2021-06-29 Unm Rainforest Innovations Arginine-rich polypeptide compositions and methods of using same

Also Published As

Publication number Publication date
US8389706B2 (en) 2013-03-05
CN102292089A (zh) 2011-12-21
US20100189730A1 (en) 2010-07-29
EA201170965A1 (ru) 2012-01-30
KR20110106901A (ko) 2011-09-29
WO2010085697A1 (en) 2010-07-29
EP2393496A4 (en) 2012-08-29
KR101652764B1 (ko) 2016-08-31
PT2393496T (pt) 2016-11-10
HK1245334A1 (zh) 2018-08-24
JP5996191B2 (ja) 2016-09-21
CA2653478A1 (en) 2010-07-23
CA2749120A1 (en) 2010-07-29
EP2393496B1 (en) 2016-08-03
MX2011007692A (es) 2011-08-12
JP2015192673A (ja) 2015-11-05
PL2393496T3 (pl) 2017-02-28
JP2012515557A (ja) 2012-07-12
EP2393496A1 (en) 2011-12-14
ES2592204T3 (es) 2016-11-28
CN107267530A (zh) 2017-10-20
AU2010206611B2 (en) 2015-09-17
CA2749120C (en) 2019-09-17
AU2010206611A1 (en) 2011-07-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA023892B1 (ru) Иммуногенные белки вируса человеческой папилломы и способы их применения
JP7269987B2 (ja) 口蹄疫ウイルス（ｆｍｄｖ）コンセンサスタンパク質、そのコード配列およびそれから生成されるワクチン
JP2023171837A (ja) コンセンサス前立腺抗原、それをコードする核酸分子、ならびにそれを含むワクチンおよび用途
JP2018134100A (ja) 改善されたｉｌ−１２遺伝子構築物を含む組成物、及びそれを用いたワクチン、免疫治療剤及び方法
JP2004510440A (ja) 高発現可能遺伝子
JP2013509203A5 (ru)
US11801288B2 (en) Cancer vaccines and methods of treatment using the same
JP6117781B2 (ja) 交差防御性アレナウイルスワクチンおよびそれらの使用方法
EA034056B1 (ru) Усовершенствованные вакцины против вируса папилломы человека и способы их применения
JP6817062B2 (ja) 蹄疫ウイルス（ｆｍｄｖ）コンセンサスタンパク質、そのコード配列、およびそれから作成されるワクチン
US20230256074A1 (en) Vaccines against african swine fever virus, and methods of using same
ES2270120T3 (es) Vacuna contra infecciones causadas por oncovirus tales como el virus de la leucemia felina.
US20210252134A1 (en) Vaccines against nipah virus, and methods of using same
CN118382457A (zh) 用于治疗肛门高级鳞状上皮内病变(hsil)的组合物和方法

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM