KR20110106901A

KR20110106901A - 인간 파필로마 바이러스에 대한 개선된 백신 및 이것을 사용하는 방법

Info

Publication number: KR20110106901A
Application number: KR1020117017259A
Authority: KR
Inventors: 데이비드 비. 와이너; 지안 얀
Original assignee: 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아
Priority date: 2009-01-23
Filing date: 2010-01-22
Publication date: 2011-09-29
Also published as: EP2393496A1; CA2749120C; EA201170965A1; MX2011007692A; JP2015192673A; CA2653478A1; JP2012515557A; EP2393496B1; CA2749120A1; CN107267530A; ES2592204T3; WO2010085697A1; CN102292089A; AU2010206611B2; KR101652764B1; HK1245334A1; EA023892B1; EP2393496A4; US20100189730A1; PL2393496T3

Abstract

개선된 항-HPV 면역원 및 이를 암호화하는 핵산 분자를 개시한다. 개시된 면역원은 공통 HPV 18 E6 및 E7을 갖는 것을 포함한다. 약제학적 조성물, 재조합 백신 및 약독화 생백신을 개시하고, 또한 HPV에 대응하여 개체의 면역반응을 유도하는 방법을 개시한다.

Description

인간 파필로마 바이러스에 대한 개선된 백신 및 이것을 사용하는 방법{IMPROVED VACCINES FOR HUMAN PAPILLOMA VIRUS AND METHODS FOR USING THE SAME}

본 발명은 개선된 인간 파필로마 바이러스 (papillomavirus) (HPV) 백신, 면역반응을 유도하는 개선된 방법, 및 개체를 HPV에 대해서 예방적 및/또는 치료학적으로 면역화시키는 개선된 방법에 관한 것이다.

본 출원은 2009년 1월 23일에 출원된 미국 임시출원 제61/146,942호 및 2010년 1월 21일에 출원된 미국 임시출원 제12/691,588호 (이들의 기술내용은 각각 본 발명에 온전히 포함된다)를 우선권으로 주장한다.

파필로마 바이러스는 7개의 조기 유전자 (early genes) 및 2개의 후기 유전자 (late genes)까지로 이루어진 작은 DNA 바이러스이다. 일반적으로, 파필로마 바이러스 조기 유전자는 E1-E7로 지정되며, 파필로마 바이러스 후기 유전자는 L1 및 L2로 지정된다. 몇 가지의 동물 종이 파필로마 바이러스 패밀리의 구성원에 의해서 감염될 수 있다.

인간 파필로마 바이러스 (HPV) 감염은 통상적이며, 성행위에 의해서 전파될 수 있다. HPV는 DNA 서열 상동성을 기초로 하여 56 개 또는 그 이상의 타입으로 구분된다. 상피 이형성증 및 그 밖의 다른 병변을 야기하는 HPV 타입 16 및 18은 종종 암, 특히 경부, 질, 외음부 및 도관 (canal)의 제자리 및 침습성 암의 증가한 위험과 연관된다.

DNA 백신은 생약독화 바이러스 및 재조합 단백질-기본 백신과 같은 더 전통적인 백신접종 방법에 비해서 다수 개념적 이점을 갖는다. DNA 백신은 안전하고, 안정하며, 쉽게 생산되고, 인간에게서 잘 허용되는데, 전임상 실험은 플라스미드 통합의 증거를 거의 나타내지 않는다 [Martin, T., et al., Plasmid DNA malaria vaccine: the potential for genomic integration after intramuscular injection. Hum Gene Ther, 1999. 10(5): p. 759-68; Nichols, W.W., et al., Potential DNA vaccine integration into host cell genome. Ann N Y Acad Sci, 1995. 772: p. 30-9]. 또한, DNA 백신은 백신의 효능이 벡터에 대한 기존의 항체 역가에 의해서 영향을 받지 않는다는 사실로 인하여 반복 투여하는데 꽤 적합하다 [Chattergoon, M., J. Boyer, and D.B. Weiner, Genetic immunization: a new era in vaccines and immune therapeutics. FASEB J, 1997. 11(10): p. 753-63]. 그러나, DNA 백신의 임상적 적용에 관한 한가지 주된 장애는 더 큰 동물에게 이동시키는 경우에 플랫폼 면역원성 (platforms immunogenicity)에 있어서의 감소였다 [Liu, M.A. and J.B. Ulmer, Human clinical trials of plasmid DNA vaccines. Adv Genet, 2005. 55: p. 25-40]. 코돈 최적화, RNA 최적화 및 면역글로불린 리더 (leader) 서열의 부가와 같은 DNA 백신 면역원의 조작에 있어서의 최근의 기술적 진보는 DNA 백신의 발현 및 면역원성을 개선시켰으며 [Andre, S., et al., Increased immune response elicited by DNA vaccination with a synthetic gp120 sequence with optimized codon usage. J Virol, 1998. 72(2): p. 1497-503; Deml, L., et al., Multiple effects of codon usage optimization on expression and immunogenicity of DNA candidate vaccines encoding the human immunodeficiency virus type 1 Gag protein. J Virol, 2001. 75(22): p. 10991-1001; Laddy, D.J., et al., Immunogenicity of novel consensus-based DNA vaccines against avian influenza. Vaccine, 2007. 25(16): p. 2984-9; Frelin, L., et al., Codon optimization and mRNA amplification effectively enhances the immunogenicity of the hepatitis C virus nonstructural 3/4A gene. Gene Ther, 2004. 11(6): p. 522-33], 뿐만 아니라 전기천공과 같은 플라스미드 송달 시스템에서 있어서의 기술이 최근에 개발되었다 [Hirao, L.A., et al., Intradermal/subcutaneous immunization by electroporation improves plasmid vaccine delivery and potency in pigs and rhesus macaques. Vaccine, 2008. 26(3): p. 440-8; Luckay, A., et al., Effect of plasmid DNA vaccine design and in vivo electroporation on the resulting vaccine-specific immune responses in rhesus macaques. J Virol, 2007. 81(10): p. 5257-69; Ahlen, G., et al., In vivo electroporation enhances the immunogenicity of hepatitis C virus nonstructural 3/4A DNA by increased local DNA uptake, protein expression, inflammation, and infiltration of CD3+ T cells. J Immunol, 2007. 179(7): p. 4741-53]. 또한, 연구들은 공통 면역원의 사용이 천연 항원 단독에 비해서 세포성 면역반응의 폭을 증가시킬 수 있음을 시사하였다 [Yan., J., et al., Enhanced cellular immune responses elicited by an engineered HIV-1 subtype B consensus-based envelope DNA vaccine. Mol Ther, 2007. 15(2): p. 411-21; Rolland, M., et al., Reconstruction and function of ancestral center-of-tree human immunodeficiency virus type 1 proteins. J Virol, 2007. 81(16): p. 8507-14].

HPV 감염을 예방 및 치료하는 개선된 백신 및 방법에 대한 필요성은 여전히 존재한다.

발명의 요약

공통 HPV 타입 18 (HPV 18) E6 및 E7 아미노산 서열을 포함하는 단백질, 및 이러한 단백질을 코드화한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자가 제공된다. 이들 핵산 구조물 및 이에 의해서 코드화된 단백질은 그에 대한 항-HPV 면역반응이 생성될 수 있는 개선된 면역원성 표적을 제공한다.

이러한 단백질을 코드화한 구조물, 이러한 단백질을 포함하는 백신, 이러한 단백질을 코드화한 핵산 분자를 포함하는 백신, 및 항-HPV 면역반응을 유도하는 방법이 또한 제공된다.

본 발명의 측면은 SEQ ID NO:1; SEQ ID NO:1의 단편; SEQ ID NO:1에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열; SEQ ID NO:1에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열의 단편; SEQ ID NO:5; HPV 코딩 서열을 포함하는 SEQ ID NO:5의 단편; SEQ ID NO:5에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열; 및 HPV 코딩 서열을 포함하는 SEQ ID NO:5에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열의 단편; SEQ ID NO:7; HPV 코딩 서열을 포함하는 SEQ ID NO:7의 단편; SEQ ID NO:7에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열; 및 HPV 코딩 서열을 포함하는 SEQ ID NO:7에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열의 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함한다.

본 발명은 SEQ ID NO:2를 암호화하는 뉴클레오티드 서열; SEQ ID NO:2에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열; SEQ ID NO:2를 암호화하는 뉴클레오티드 서열의 단편; SEQ ID NO:2에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열의 단편; SEQ ID NO:6을 암호화하는 뉴클레오티드 서열; HPV 서열을 포함하는 SEQ ID NO:6의 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열; HPV 서열을 포함하는 SEQ ID NO:6에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열; 및 HPV 서열을 포함하는 SEQ ID NO:6의 단편에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 그와 같은 핵산 분자를 포함하는 약제학적 조성물 및 개체에게 그와 같은 핵산 분자를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, HPV에 대응하여 개체의 면역반응을 유도하는 방법에서의 그의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한, 그와 같은 핵산 분자를 포함하는 재조합 백신 및 개체에게 그와 같은 재조합 백신을 투여하는 것을 포함하는, HPV에 대응하여 개체의 면역반응을 유도하는 방법에서의 그의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한, 그와 같은 핵산 분자를 포함하는 약독화 생병원체 및 개체에게 그와 같은 약독화 생병원체를 투여하는 것을 포함하는, HPV에 대응하여 개체의 면역반응을 유도하는 방법에서의 그의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:2에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열; SEQ ID NO:2의 단편; SEQ ID NO:2에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열의 단편, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:6에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열; SEQ ID NO:6의 단편; 및 SEQ ID NO:6에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열의 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 제공한다.

본 발명은 또한, 이러한 단백질을 포함하는 약제학적 조성물, 및 개체에게 이러한 단백질을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하여 개체에게서 HPV에 대한 면역반응을 유도하는 방법에서의 이들의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한, 이러한 단백질을 포함하는 재조합 백신, 및 개체에게 이러한 재조합 백신을 투여하는 것을 포함하여 개체에게서 HPV에 대한 면역반응을 유도하는 방법에서의 이들의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한, 이러한 단백질을 포함하는 생약독화 병원체, 및 이러한 생약독화 병원체를 투여하는 것을 포함하여 개체에게서 HPV에 대한 면역반응을 유도하는 방법에서의 이들의 용도를 제공한다.

도 1은 플라스미드 구조물의 묘사를 제공한다.

본 발명에서 사용된 것으로서, 문구 "스트린전트 (stringent) 하이브리드화 조건" 또는 "스트린전트 조건"은 핵산 분자가 또 다른 핵산 분자에 하이브리드화할 수 있지만, 다른 서열에는 하이브리드화하지 않는 조건을 나타낸다. 스트린전트 조건은 서열-의존적이며, 상이한 환경에서는 상이할 수 있다. 더 긴 서열은 더 고온에서 특이적으로 하이브리드화한다. 일반적으로, 스트린전트 조건은 규정된 이온 강도 및 pH에서 특이적 서열에 대해 열융점 (Tm)보다 약 5℃ 더 낮도록 선택된다. Tm은 표적 서열에 대해서 상보적인 프로브의 50%가 평형상태에서 표적 서열에 하이브리드화하는 온도 (규정된 이온 강도, pH 및 핵산 농도 하에서)이다. 표적 서열은 일반적으로 과량으로 존재하기 때문에, Tm에서 프로브의 50%가 평형상태에서 점유된다. 전형적으로, 스트린전트 조건은 염 농도가 pH 7.0 내지 8.3에서 약 1.0 M 미만의 나트륨 이온, 전형적으로는 약 0.01 내지 1.0 M의 나트륨 이온 (또는 다른 염)이고, 온도는 짧은 프로브, 프라이머 또는 올리고뉴클레오타이드 (예를 들어, 10 내지 50 뉴클레오타이드)의 경우에는 적어도 약 30℃, 및 더 긴 프로브, 프라이머 또는 올리고뉴클레오타이드 (예를 들어, 10 내지 50 뉴클레오타이드)의 경우에는 적어도 약 60℃인 것이다. 스트린전트 조건은 또한, 포름아미드와 같은 불안정화제를 첨가함으로써 달성될 수도 있다.

뉴클레오타이드 및 아미노산에 대한 서열 상동성은 FASTA, BLAST 및 갭드 (Gapped) BLAST [Altschul et al., Nuc. Acids Res., 1997, 25, 3389; 이것은 본 발명에 온전히 참고로 포함된다] 및 PAUP* 4.0b10 소프트웨어 (D. L. Swofford, Sinauer Associates, Massachusetts)를 사용하여 결정될 수 있다. "유사성의 백분율"은 PAUP* 4.0b10 소프트웨어 (D. L. Swofford, Sinauer Associates, Massachusetts)를 사용하여 계산된다. 공통 서열의 평균 유사성은 계통수 (phylogenic tree) 내의 모든 서열과 비교하여 계산된다.

간략하면, 기본적 국소 정렬 탐색도구 (Basic Local Alignment Search Tool)를 의미하는 BLAST 알고리즘이 서열 유사성을 결정하는데 적합하다 [Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403-410; 이것은 본 발명에 온전히 참고로 포함된다]. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 National Center for Biotechnology Information (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)으로부터 공공연히 이용할 수 있다. 이 알고리즘은 우선, 데이터베이스 서열에서 동일한 길이의 단어로 정렬하는 경우에 일부의 양의 값을 갖는 역치 스코어 T와 부합하거나, 그를 충족시키는 문제의 서열 내의 길이 W인 짧은 단어를 확인함으로써 높은 스코어의 서열 쌍 (HSPs)을 확인하는 것을 포함한다. T는 근접 단어 스코어 역치 (neighborhood word score threshold)로 불린다 [Altschul et al., supra]. 이들 초기 근접 단어 히트 (hits)는 이들을 함유하는 HSPs를 찾기 위한 탐색을 개시하기 위한 근원으로 작용한다. 단어 히트는 누적 정렬 스코어가 증가될 수 있는 한은 각각의 서열을 따라서 양 방향으로 연장된다. 각 방향에서 단어 히트에 대한 연장은 다음의 경우에 중단된다: 1) 누적 정렬 스코어가 그의 도달된 최대값으로부터 양 X만큼 떨어지는 경우; 2) 누적 스코어가 하나 또는 그 이상의 음의 스코어를 갖는 잔기 정렬의 축적으로 인하여 0 또는 그 이하가 되는 경우; 또는 3) 각 서열의 말단에 도달한 경우. Blast 알고리즘 파라메터 W, T 및 X는 정렬의 민감성 및 속도를 결정한다. Blast 프로그램은 디폴트 (defaults)로서 11의 단어 길이 (W), 50의 BLOSUM62 스코어링 매트릭스 [참조: Henikoff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89, 10915-10919; 이것은 본 발명에 온전히 참고로 포함된다] 얼라인먼트 (B), 10의 기대값 (E), M=5, N=4, 및 양 스트랜드의 비교를 사용한다. BLAST 알고리즘 [Karlin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 5873-5787; 이것은 본 발명에 온전히 참고로 포함된다] 및 갭드 BLAST는 두개의 서열 사이의 유사성의 통계학적 분석을 수행한다. BLAST 알고리즘에 의해서 제공된 유사성의 한가지 척도는 2개의 뉴클레오타이드 서열 사이의 부합이 우연히 나타날 수 있는 확률의 지표를 제공하는 최소 합계 확률 (smallest sum probability; P(N))이다. 예를 들어, 핵산은 시험 핵산과 다른 핵산의 비교 시에 최소 합계 확률이 약 1 미만, 바람직하게는 약 0.1 미만, 더욱 바람직하게는 약 0.01 미만, 가장 바람직하게는 약 0.001 미만인 경우에 또 다른 것과 유사한 것으로 생각된다.

본 발명에서 사용된 것으로서, 용어 "유전자 구조물"은 단백질을 코드화한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 DNA 또는 RNA 분자를 나타낸다. 코드화 서열은 프로모터를 포함하는 조절 요소에 작동가능하게 연결된 개시 및 종결 시그날, 및 핵산 분자가 투여된 개체의 세포에서 발현을 지시할 수 있는 폴리아데닐화 시그날을 포함한다.

본 발명에서 사용된 것으로서, 용어 "발현가능한 형태"는 개체의 세포에 존재하는 경우에 코드화 서열이 발현될 수 있도록 단백질을 코드화한 코드화 서열에 작동가능하게 연결된 필요한 조절 요소를 함유하는 유전자 구조물을 나타낸다.

면역원에 의해서 유도된 세포성 면역반응을 증진시키는 다중-상 전략 (multi-phase strategy)으로부터 발생하는 개선된 백신이 기술되어 있다. 변형된 공통 서열이 생성되었다. 코돈 최적화, RNA 최적화, 및 고효율 면역글로불린 리더 서열의 부가를 포함하는 유전자 변형이 또한 기술된다. 신규 구조물은 상응하는 코돈 최적화 면역원보다 더 강하고 더 광범한 세포성 면역반응을 야기하도록 고안되었다.

개선된 HPV 백신은 그에 대한 항-HPV가 유도될 수 있는 면역원으로서 특히 효과적이도록 만드는 에피토프를 갖는 단백질을 코드화한 유전자 구조물 및 단백질을 기초로 한다. 따라서, 백신은 치료학적 또는 예방적 면역반응을 유도할 수 있다. 일부의 구체예에서, 면역원을 송달하는 수단은 DNA 백신, 재조합 백신, 단백질 서브유니트 백신, 면역원을 포함하는 조성물, 약독화 백신 또는 사멸 백신이다. 일부의 구체예에서, 백신은 하나 또는 그 이상의 DNA 백신, 하나 또는 그 이상의 재조합 백신, 하나 또는 그 이상의 단백질 서브유니트 백신, 면역원을 포함하는 하나 또는 그 이상의 조성물, 하나 또는 그 이상의 약독화 백신 및 하나 또는 그 이상의 사멸 백신으로 구성된 그룹으로부터 선택된 조합물을 포함한다.

일부의 구체예에 따르면, 백신을 개체에게 송달하여 개체의 면역 시스템의 활성을 변조시키고, 이에 의해서 HPV에 대한 면역반응을 증진시킨다. 단백질을 코드화한 핵산 분자가 개체의 세포에 의해서 흡수되면, 뉴클레오타이드 서열이 세포 내에서 발현되며, 이에 의해서 단백질이 개체에게 송달된다. 재조합 백신의 일부분으로서, 및 약독화 백신의 일부분으로서, 벡터의 분리된 단백질 또는 단백질 부분으로서 플라스미드와 같은 핵산 분자 상에 단백질의 코드화 서열을 송달하는 방법이 제공된다.

HPV에 대해서 개체를 예방적으로 및/또는 치료학적으로 면역시키는 조성물 및 방법이 제공된다.

면역원을 코드화한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 송달하는 조성물은 조절 요소에 작동적으로 연결된다. 조성물은 면역원을 코드화한 플라스미드, 면역원을 코드화한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 재조합 백신, 본 발명의 단백질을 코드화하고/하거나 본 발명의 단백질을 포함하는 생약독화 병원체; 본 발명의 단백질을 포함하는 사멸 병원체; 또는 본 발명의 단백질을 포함하는 리포좀 또는 서브유니트 백신과 같은 조성물을 포함할 수 있다. 본 발명은 또한, 조성물을 포함하는 주사용 약제학적 조성물에 관한 것이다.

SEQ ID NO:1은 HPV 18 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. SEQ ID NO:5는 SEQ ID NO:1을 포함하고, 또한 HPV 18 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원을 암호화하는 뉴클레오티드 서열에 연결된 IgE 선도 서열을 포함한다. SEQ ID NO:2는 HPV 18 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원에 대해 아미노산 서열을 포함한다. SEQ ID NO:6는 SEQ ID NO:2를 포함하고, 또한 공통 면역원 서열에 연결된 IgE 선도 서열을 포함한다. IgE 선도 서열은 SEQ ID NO:4이고, SEQ ID NO:3에 의해 암호화될 수 있다. SEQ ID NO:7은 발현을 위해 혼입된 SEQ ID NO:5를 갖는 플라스미드 pGX302의 핵산 서열이다.

일부 구체예에서, 백신은 SEQ ID NO:2, 또는 SEQ ID NO:2를 암호화하는 핵산 분자를 포함한다. 일부 구체예에서, 백신은 SEQ ID NO:2를 암호화하는 핵산 분자로서 SEQ ID NO:1을 포함한다. 일부 구체예에서, 백신은 바람직하게는 SEQ ID NO:6 또는 이를 암호화하는 핵산 분자를 포함한다. 일부 구체예에서, 백신은 바람직하게는 SEQ ID NO:6를 암호화하는 핵산 분자로서 SEQ ID NO:5를 포함한다. 일부 구체예에서, 백신은 바람직하게는 SEQ ID NO:7일 포함한다.

SEQ ID NO:1의 단편은 90개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, SEQ ID NO:1의 단편은 180개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서, 270개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서 360개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서, 450개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서 540개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서, 630개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서, 720개 이상의 뉴클레오티드; 및 일부 구체예에서, 770개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 본 명세서에 나타나 있는 것과 같은 SEQ ID NO:1의 단편은 IgE 선도 서열에 대한 코딩 서열을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, SEQ ID NO:1의 단편은 서열 for IgE 선도 서열에 대해 코딩 서열을 포함하지 않는다. SEQ ID NO:1의 단편은 180개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 270개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 360개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 450개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 540개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 630개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 690개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 760개 미만의 뉴클레오티드, 및 일부 구체예에서 780개 미만의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

SEQ ID NO:2의 단편은 30개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, SEQ ID NO:2의 단편은 60개 이상의 아미노산; 일부 구체예에서, 90개 이상의 아미노산; 일부 구체예에서, 120개 이상의 아미노산; 일부 구체예에서; 150개 이상의 아미노산; 일부 구체예에서 180개 이상의 아미노산; 일부 구체예에서, 210개 이상의 아미노산; 및 일부 구체예에서, 240개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 단편은 90개 미만의 아미노산, 일부 구체예에서 120개 미만의 아미노산, 일부 구체예에서 150개 미만의 아미노산, 일부 구체예에서 180개 미만의 아미노산, 일부 구체예에서 210개 미만의 아미노산, 및 일부 구체예에서 240개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다.

SEQ ID NO:5의 모든 단편은 HPV 서열을 암호화하는 코딩 서열을 포함하고, 즉, 상기 SEQ ID NO:5의 단편은 IgE 선도 펩타이드를 암호화하는 것 외에 서열을 포함해야 한다. 일부 구체예에서, SEQ ID NO:5의 단편은 90개 이상의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구체예에서, SEQ ID NO:5의 단편은 180개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서, 270개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서 360개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서, 450개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서 540개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서, 630개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서, 720개 이상의 뉴클레오티드; 일부 구체예에서, 810개 이상의 뉴클레오티드; 및 일부 구체예에서, 830개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. SEQ ID NO:5의 단편은 180개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 270개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 360개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 450개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 540개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 630개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 690개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 720개 미만의 뉴클레오티드, 일부 구체예에서 780개 미만의 뉴클레오티드, 및 일부 구체예에서 840개 미만의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

SEQ ID NO:6의 단편은 HPV 서열을 포함하는 30개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, SEQ ID NO:6의 단편은 HPV 서열을 포함하는 60개 이상의 아미노산; 일부 구체예에서, HPV 서열을 포함하는 90개 이상의 아미노산; 일부 구체예에서, HPV 서열을 포함하는 120개 이상의 아미노산; 일부 구체예에서; HPV 서열을 포함하는 150개 이상의 아미노산; 일부 구체예에서 HPV 서열을 포함하는 180개 이상의 아미노산; 일부 구체예에서, HPV 서열을 포함하는 210개 이상의 아미노산; 일부 구체예에서, HPV 서열을 포함하는 240개 이상의 아미노산; 및 일부 구체예에서, HPV 서열을 포함하는 270개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 단편은 HPV 서열을 포함하는 90개 미만의 아미노산, 일부 구체예에서 HPV 서열을 포함하는 120개 미만의 아미노산, 일부 구체예에서 HPV 서열을 포함하는 150개 미만의 아미노산, 일부 구체예에서 HPV 서열을 포함하는 180개 미만의 아미노산, 일부 구체예에서 HPV 서열을 포함하는 210개 미만의 아미노산, 일부 구체예에서 HPV 서열을 포함하는 240개 미만의 아미노산, 및 일부 구체예에서 HPV 서열을 포함하는 270개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다.

일부 구체예에 따라서, 면역원에 대응하여 개체의 면역반응을 유도하는 방법은 개체에게 HPV 18 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원, 또는 이의 기능적 단편에 대한 아미노산 서열 또는 그의 발현가능 코딩 서열을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예는 HPV 18 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원 또는 이의 단편에 대한 아미노산 서열을 암호화하는 단리된 핵산 분자를 포함한다. 일부 구체예는 HPV 18 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원 또는 이의 단편에 대한 아미노산 서열을 암호화하는 재조합 백신을 포함한다. 일부 구체예는 HPV 18 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원 또는 이의 단편에 대한 아미노산 서열을 포함하는 서브유닛 백신을 포함한다. 일부 구체예는 HPV 18 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원에 대한 아미노산 서열을 포함하는 약독화 생백신 및/또는 사멸된 백신을 포함한다.

개선된 백신은 그에 대한 항-HPV 면역반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 특히 효과적이도록 만드는 에피토프를 갖는 단백질을 코드화한 유전자 구조물 및 단백질을 포함한다. 따라서, 백신은 치료학적 또는 예방적 면역반응을 유도하도록 제공될 수 있다. 일부의 구체예에서, 면역원을 송달하는 수단은 DNA 백신, 재조합 백신, 단백질 서브유니트 백신, 면역원을 포함하는 조성물, 약독화 백신 또는 사멸 백신이다. 일부의 구체예에서, 백신은 하나 또는 그 이상의 DNA 백신, 하나 또는 그 이상의 재조합 백신, 하나 또는 그 이상의 단백질 서브유니트 백신, 면역원을 포함하는 하나 또는 그 이상의 조성물, 하나 또는 그 이상의 약독화 백신 및 하나 또는 그 이상의 사멸 백신으로 구성된 그룹으로부터 선택된 조합물을 포함한다.

본 발명의 관점은 재조합 백신의 일부분으로서, 및 약독화 백신의 일부분으로서, 벡터의 분리된 단백질 또는 단백질 부분으로서 플라스미드와 같은 핵산 분자 상에 단백질의 코드화 서열을 송달하는 방법을 제공한다.

본 발명의 일부의 관점에 따르면, 개체를 예방적으로 및/또는 치료학적으로 면역시키는 조성물 및 방법이 제공된다.

DNA 백신은 각각 본 발명에 참고로 포함된 미국 특허 제5,593,972, 5,739,118, 5,817,637, 5,830,876, 5,962,428, 5,981,505, 5,580,859, 5,703,055, 5,676,594호, 및 여기에 인용된 선행 출원에 기술되어 있다. 이들 출원에 기술된 송달 프로토콜 이외에도, DNA를 송달하는 대체 방법은 모두 본 발명에 참고로 포함된 미국 특허 제4,945,050 및 5,036,006호에 기술되어 있다.

본 발명은 개선된 약독화 생백신, 개선된 사멸 백신, 및 항원을 코드화한 외래 유전자를 송달하기 위해서 재조합 벡터를 사용하는 개선된 백신뿐만 아니라 서브유니트 및 당단백 백신에 관한 것이다. 약독화 생백신, 외래 유전자를 송달하기 위해서 재조합 벡터를 사용하는 것, 서브유니트 백신 및 당단백 백신의 예는 각각 본 발명에 참고로 포함된 미국 특허 제4,510,245; 4,797,368; 4,722,848; 4,790,987; 4,920,209; 5,017,487; 5,077,044; 5,110,587; 5,112,749; 5,174,993; 5,223,424; 5,225,336; 5,240,703; 5,242,829; 5,294,441; 5,294,548; 5,310,668; 5,387,744; 5,389,368; 5,424,065; 5,451,499; 5,453,364; 5,462,734; 5,470,734; 5,474,935; 5,482,713; 5,591,439; 5,643,579; 5,650,309; 5,698,202; 5,955,088; 6,034,298; 6,042,836; 6,156,319 및 6,589,529호에 기술되어 있다.

세포에 의해서 흡수되면, 유전자 구조물(들)은 세포 내에 기능적 염색체외 분자로 존재할 수 있고/있거나 세포 내의 염색체 DNA 내에 통합될 수 있다. DNA는 세포 내에 도입될 수 있으며, 여기에서 이것은 플라스미드 또는 플라스미드들의 형태의 별개의 유전자 물질로서 존재한다. 대신으로, 염색체 내로 통합될 수 있는 선형 DNA가 세포 내로 도입될 수 있다. DNA를 세포 내로 도입시키는 경우에는, 염색체 내로의 DNA 통합을 촉진시키는 시약이 첨가될 수 있다. 통합을 촉진시키는데 유용한 DNA 서열이 또한 DNA 분자 내에 포함될 수 있다. 대신으로, RNA가 세포에 투여될 수 있다. 또한, 동원체 (centromere), 말단소체 (telomeres) 및 복제 기점을 포함하는 선형 미니염색체로서 유전자 구조물을 제공하는 것도 고려된다. 유전자 구조물은 세포 내에서 생존하는 약독화된 생미생물 또는 재조합 미생물 벡터 내에 유전자 물질의 일부분으로서 잔류할 수 있다. 유전자 구조물은 유전자 물질이 세포의 염색체에 통합하거나 염색체외에 잔류하는 재조합 바이러스 백신의 게놈의 일부분일 수 있다. 유전자 구조물은 핵산 분자의 유전자 발현에 필요한 조절 요소를 포함한다. 상기의 요소에는 다음이 포함된다: 프로모터, 개시 코돈, 정지 코돈, 및 폴리아데닐화 시그날. 또한, 인핸서 (enhancers)는 종종, 표적 단백질 또는 면역조절 단백질을 코드화한 서열의 유전자 발현을 위해서 필요하다. 이들 요소는 원하는 단백질을 코드화한 서열에 작동가능하게 연결되며, 조절 요소는 이들이 투여되는 개체에게서 작동가능한 것이 필요하다.

개시 코돈 및 정지 코돈은 일반적으로, 원하는 단백질을 코드화한 뉴클레오타이드 서열의 일부분인 것으로 간주된다. 그러나, 이들 요소는 유전자 구조물이 투여되는 개체에게서 기능성인 것이 필요하다. 개시 및 정지 코돈은 코드화 서열과 함께 골격 내에 존재하여야 한다.

사용된 프로모터 및 폴리아데닐화 시그날은 개체의 세포 내에서 반드시 기능성이어야 한다.

본 발명을 실시하는데, 특히 인간을 위한 유전자 백신의 생산에 유용한 프로모터의 예로는 시미안 바이러스 (Simian Virus) 40 (SV40), 마우스 유선종양 바이러스 (MMTV) 프로모터, BIV 긴 말단 반복 (LTR) 프로모터와 같은 인간 면역결핍 바이러스 (MV), 몰로니 (Moloney) 바이러스, ALV, CMV 즉시 초기 프로모터 (immediate early promoter)와 같은 사이토메갈로바이러스 (CMV), 엡스타인 바르 바이러스 (Epstein Barr Virus; EBV), 로우스 육종 바이러스 (Rous Sarcoma Virus; RSV)로부터의 프로모터뿐만 아니라 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 및 인간 메탈로티오네인과 같은 인간 유전자로부터의 프로모터가 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.

본 발명을 실시하는데, 특히 인간을 위한 유전자 백신의 생산에 유용한 폴리아데닐화 시그날의 예로는 SV40 폴리아데닐화 시그날 및 LTR 폴리아데닐화 시그날이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 특히, SV40 폴리아데닐화 시그날로 불리는, pCEP4 플라스미드 (Invitrogen, San Diego CA) 내에 존재하는 SV40 폴리아데닐화 시그날이 사용된다.

DNA 발현에 필요한 조절 요소 이외에도, 다른 요소가 또한 DNA 분자 내에 포함될 수 있다. 이러한 추가의 요소는 인핸서를 포함한다. 인핸서는 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴, 및 CMV, RSV 및 EBV로부터 유래하는 것과 같은 바이러스 인핸서를 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 그룹으로부터 선택될 수 있다.

유전자 구조물에는 구조물을 염색체외적으로 유지시키고, 세포 내에서 구조물의 다수의 카피를 생산시키기 위해서 복제의 포유동물 기점이 제공될 수 있다. Invitrogen (San Diego, CA)으로부터의 플라스미드 pVAX1, pCEP4 및 pREP4는 복제의 엡스타인 바르 바이러스 기점 및 통합이 없이 높은 카피의 에피좀성 복제를 제공하는 핵 항원 EBNA-1 코드화 부분을 함유한다.

면역화 적용과 관련된 일부의 바람직한 구체예에서는, 본 발명의 단백질을 코드화한 뉴클레오타이드 서열, 및 추가로, 이러한 표적 단백질에 대한 면역반응을 더 증진시키는 단백질에 대한 유전자를 포함하는 핵산 분자(들)이 유도된다. 이러한 유전자의 예는 알파-인터페론, 감마-인터페론, 혈소판 유래 성장인자 (PDGF), TNFα, TNFβ, GM-CSF, 표피성장인자 (EGF), IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12, IL-18, MHC, CD80, CD86, 및 결실된 시그날 서열을 갖는 IL-15를 포함하며, 임의로 IgE로부터의 시그날 펩타이드를 포함하는 IL-15와 같은 다른 사이토킨 및 림포킨을 코드화한 것이다. 유용할 수 있는 다른 유전자에는 다음을 코드화한 것이 포함된다: MCP-1, MIP-lα, MIP-1p, IL-8, RANTES, L-셀렉틴, P-셀렉틴, E-셀렉틴, CD34, GlyCAM-1, MadCAM-1, LFA-1, VLA-1, Mac-1, pl50.95, PECAM, ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, CD2, LFA-3, M-CSF, G-CSF, IL-4, IL-18의 돌연변이체 형태, CD40, CD40L, 혈관성장인자, IL-7, 신경성장인자, 혈관내피성장인자, Fas, TNF 수용체, Flt, Apo-1, p55, WSL-1, DR3, TRAMP, Apo-3, AIR, LARD, NGRF, DR4, DR5, KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR6, 카스파제 ICE, Fos, c-jun, Sp-1, Ap-1, Ap-2, p38, p65Rel, MyD88, IRAK, TRAF6, IkB, 불활성 NIK, SAP K, SAP-1, JNK, 인터페론 반응 유전자, NFkB, Bax, TRAIL, TRAILrec, TRAILrecDRC5, TRAIL-R3, TRAIL-R4, RANK, RANK 리간드, Ox40, Ox40 리간드, NKG2D, MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C, NKG2E, NKG2F, TAP1, TAP2 및 이들의 기능적 단편.

어떤 이유로든 유전자 구조물을 수용하는 세포를 제거하는 것이 바람직하다면, 세포 파괴에 대한 표적으로 작용하는 추가의 요소가 첨가될 수 있다. 발현가능한 형태의 헤르페스 티미딘 키나제 (tk) 유전자가 유전자 구조물 내에 포함될 수 있다. 약물 간사이클로비르가 개체에 투여될 수 있으며, 이 약물은 tk를 생산하는 모든 세포의 선택적 사멸을 야기할 수 있으며, 따라서 유전자 구조물에 의한 세포의 선택적 파괴를 위한 수단을 제공할 수 있다.

단백질 생산을 최대화시키기 위해서, 구조물이 투여되는 세포 내에서의 유전자 발현에 매우 적합한 조절 서열이 선택될 수 있다. 더구나, 세포 내에서 가장 효율적으로 전사되는 코돈이 선택될 수 있다. 본 기술분야에서 통상적인 기술을 갖는 전문가는 세포 내에서 기능성인 DNA 구조물을 생산할 수 있다.

일부의 구체예에서는, 본 발명에 기술된 단백질에 대한 코드화 서열이 IgE 시그날 펩타이드에 연결된 유전자 구조물이 제공될 수 있다. 일부의 구체예에서, 본 발명에 기술된 단백질은 IgE 시그날 펩타이드에 연결된다.

단백질이 사용되는 일부의 구체예에서, 예를 들어, 본 기술분야에서 통상적으로 숙련된 전문가는 잘 알려진 기술을 사용하여 본 발명의 단백질을 생산하고 분리시킬 수 있다. 단백질이 사용되는 일부의 구체예에서, 예를 들어, 본 기술분야에서 통상적으로 숙련된 전문가는 잘 알려진 기술을 사용하여. 잘 알려진 발현 시스템에서 사용하기 위한 상업적으로 이용할 수 있는 발현 벡터 내로 본 발명의 단백질을 코드화한 DNA 분자를 삽입할 수 있다. 예를 들어, 상업적으로 이용할 수 있는 플라스미드 pSE420 (Invitrogen, San Diego, Calif.)이 이. 콜라이 내에서 단백질의 생산을 위해서 사용될 수 있다. 상업적으로 이용할 수 있는 플라스미드 pYES2 (Invitrogen, San Diego, Calif.)는 예를 들어, 효모의 사카로마이세스 세레비지아에 (S. cerevisiae) 스트레인 내에서의 생산을 위해서 사용될 수 있다. 상업적으로 이용할 수 있는 MAXBAC™ 완전 바큘로바이러스 발현 시스템 (Invitrogen, San Diego, Calif.)은 예를 들어, 곤충 세포에서의 생산을 위해서 사용될 수 있다. 상업적으로 이용할 수 있는 플라스미드 pcDNA I 또는 pcDNA3 (Invitrogen, San Diego, Calif.)은 예를 들어, 차이니즈 햄스터 (Chinese Hamster) 난소 세포와 같은 포유동물 세포에서의 생산을 위해서 사용될 수 있다. 본 기술분야에서 통상적으로 숙련된 전문가는 이들 상업적 발현 벡터 및 시스템 또는 그 밖의 것을 사용하여 일상적인 기술 및 쉽게 이용할 수 있는 출발물질에 의해서 단백질을 생산할 수 있다 [참조: 예를 들어, Sambrook et al., Molecular Cloning a Laboratory Manual, Second Ed. Cold Spring Harbor Press (1989); 이것은 본 발명에 참고로 포함된다]. 따라서, 바람직한 단백질은 원핵 및 진핵 시스템 둘 다에서 제조될 수 있어서 광범한 스펙트럼의 단백질의 가공된 형태를 제공할 수 있다.

본 기술분야에서 통상적으로 숙련된 전문가는 그 밖의 다른 상업적으로 이용할 수 있는 발현 벡터 및 시스템을 사용할 수 있거나, 잘 알려진 방법 및 쉽게 이용할 수 있는 출발물질을 사용하여 벡터를 생산할 수 있다. 프로모터 및 폴리아데닐화 시그날, 및 바람직하게는 인핸서와 같은 필요한 조절 서열을 함유하는 발현 시스템은 다양한 숙주에 관해서 본 기술분야에서 쉽게 이용할 수 있으며, 공지되어 있다 [참조: 예를 들어, Sambrook et al., Molecular Cloning a Laboratory Manual, Second Ed. Cold Spring Harbor Press (1989)]. 유전자 구조물은 구조물이 형질감염되는 세포주 내에서 기능성인 프로모터에 작동가능하게 연결된 단백질 코드화 서열을 포함한다. 구성적 프로모터의 예로는 사이토메갈로바이러스 또는 SV40로부터의 프로모터가 포함된다. 유도성 프로모터의 예로는 마우스 유방 백혈병 바이러스 또는 메탈로티오네인 프로모터가 포함된다. 본 기술분야에서 통상적으로 숙련된 전문가는 쉽게 이용할 수 있는 출발물질로부터 본 발명의 단백질을 코드화한 DNA로 세포를 형질감염시키는데 유용한 유전자 구조물을 쉽게 생산할 수 있다. 단백질을 코드화한 DNA를 포함하는 발현 벡터를 사용하여 허용되는 숙주를 형질전환시킨 다음에, 이것을 외래 DNA의 발현이 일어나는 조건 하에서 배양 및 유지시킨다.

생산된 단백질은 세포를 용해시키거나 본 기술분야의 전문가에게 공지되고 적절한 배양 배지로부터 분리시킴으로써 배양물로부터 회수된다. 본 기술분야에서 통상적으로 숙련된 전문가는 잘 알려진 기술을 사용하여, 이러한 발현시스템을 사용하여 생산된 단백질을 분리시킬 수 있다. 상술한 바와 같은 특정의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 사용하여 천연 공급원으로부터 단백질을 정제하는 방법이 재조합 DNA 방법에 의해서 생산된 단백질을 정제하는데 동등하게 적용될 수 있다.

재조합 기술에 의해서 단백질을 생산하는 이외에도, 자동화된 펩타이드 합성기를 또한 사용하여 분리되고 본질적으로 순수한 단백질을 생산할 수 있다. 이러한 기술은 본 기술분야에서 통상적으로 숙련된 전문가에게 잘 알려져 있으며, 치환을 갖는 유도체가 DNA-코드화된 단백질 생산 시에 제공되지 않는 경우에 유용하다.

핵산 분자는 DNA 주사 (또한, DNA 백신접종으로도 불림), 재조합 아데노바이러스, 재조합 아데노바이러스 연관된 바이러스 및 재조합 백시니아와 같은 재조합 벡터를 포함하는 몇 가지 잘 알려진 기술 중의 어떤 것을 사용하여서도 송달될 수 있다.

투여의 경로에는 근육내, 비내, 복강내, 피내, 피하, 정맥내, 동맥내, 안내 및 경구뿐만 아니라 국소적으로, 경피적으로, 흡입 또는 좌제에 의해서, 또는 질, 직장, 요도, 협측 및 설하 조직에 대한 세척에 의한 것과 같은 점막 조직이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 바람직한 투여의 경로에는 근육내, 복강내, 피내 및 피하 주사가 포함된다. 유전자 구조물은 전기천공 방법 및 장치, 전통적인 시린지, 무침 주사장치, 또는 "마이크로프로젝틸 봄바드먼트 곤건즈 (microprojectile bombardment gone guns)"를 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 수단에 의해서 투여될 수 있다.

DNA 백신의 송달을 용이하게 하는데 바람직한 전기천공 장치 및 전기천공 방법의 예는 미국 특허 제7,245,963호 (Draghia-Akli, et al.), 미국 특허공개 제2005/0052630호 (Smith, et al.) (이들의 내용은 이에 의해서 온전히 참고로 포함된다)에 기술된 것을 포함한다. 또한, 35 USC 119(e)에 따라 2006년 10월 17일자 미국 임시출원 제60/852,149호 및 2007년 10월 10일자 제60/978,982호를 우선권으로 주장하는, 2007년 10월 17일에 출원된 공동 계류 중이고 공동-소유된 미국 특허출원 제11/874072호 (이들은 모두 이에 의해서 온전히 참고로 포함된다)에 제시된 DNA 백신의 송달을 용이하게 하는 전기천공 장치 및 전기천공 방법이 바람직하다.

다음은 전기천공 기술을 사용한 구체예의 예이며, 상기 검토된 특허문헌에서 더 상세하게 거론된다: 전기천공 장치를 포유동물의 원하는 조직에 사용자에 의해서 미리 설정된 전류 입력과 유사한 정전류를 생성하는 에너지의 펄스를 포유동물의 원하는 조직에 송달하도록 배열될 수 있다. 전기천공 장치는 전기천공 성분 및 전극 어셈블리 또는 핸들 어셈블리를 포함한다. 전기천공 성분은 다음을 포함하는 전기천공 장치의 다양한 요소 중의 하나 또는 그 이상을 포함하고 통합할 수 있다: 조절기, 전류 파형 생성기, 임피던스 (impedance) 시험기, 파형 로거 (logger), 입력 요소, 상태 보고 요소, 통신 포트, 메모리 성분, 동력원 및 동력 스위치. 전기천공 성분은 전기천공 장치의 하나의 요소로서 작용할 수 있으며, 다른 요소들은 전기천공 성분과 연결되는 별개의 요소 (또는 성분)이다. 일부의 구체예에서, 전기천공 성분은 전기천공 성분과는 별개의 전기천공 장치의 또 다른 요소와 연결될 수 있는 전기천공 장치의 하나 이상의 요소로서 작용할 수 있다. 요소들은 하나의 장치로서 또는 또 다른 것과 연결되는 별개의 요소로서 작용할 수 있기 때문에, 개선된 HCV 백신을 송달하기 위한 전기천공 기술의 사용은 하나의 전기기계 또는 기계 장치의 일부분으로 존재하는 전기천공 장치의 요소에 의해서 제한되지 않는다. 전기천공 성분은 원하는 조직에서 정전류를 발생시키는 에너지의 펄스를 송달할 수 있으며, 피드백 기전을 포함한다. 전극 어셈블리는 공간적 배열로 다수의 전극을 갖는 전극 어레이를 포함하며, 여기에서 전극 어셈블리는 전기천공 성분으로부터 에너지의 펄스를 수용하고, 이것을 전극을 통해서 원하는 조직에 송달한다. 다수의 전극 중의 적어도 하나는 에너지의 펄스의 송달 중에 중성이며, 원하는 조직에서 임피던스를 측정하고 임피던스를 전기천공 성분에 전달한다. 피드백 기전은 측정된 임피던스를 수용할 수 있으며, 전기천공 성분에 의해서 송달된 에너지의 펄스를 조정하여 정전류를 유지시킬 수 있다.

일부의 구체예에서, 다수의 전극은 분산된 패턴으로 에너지의 펄스를 송달할 수 있다. 일부의 구체예에서, 다수의 전극은 프로그래밍된 순서로 전극의 제어 하에서 분산된 패턴으로 에너지의 펄스를 송달할 수 있으며, 프로그래밍된 순서는 전기천공 성분에 대한 사용자에 의한 입력이다. 일부의 구체예에서, 프로그래밍된 순서는 순서대로 송달된 다수의 펄스를 포함하며, 여기에서 다수의 펄스 중의 각각의 펄스는 임피던스를 측정하는 하나의 중성 전극을 갖는 적어도 2개의 활성 전극에 의해서 송달되며, 다수의 펄스 중의 후속 펄스는 임피던스를 측정하는 하나의 중성 전극을 갖는 적어도 2개의 활성 전극 중의 다른 하나에 의해서 송달된다.

일부의 구체예에서, 피드백 기전은 하드웨어 또는 소프트웨어에 의해서 수행된다. 바람직하게는, 피드백 기전은 아날로그 폐쇄-루프 회로에 의해서 수행된다. 바람직하게는, 이 피드백은 매 50 ㎲, 20 ㎲, 10 ㎲ 또는 1 ㎲마다 일어나지만, 바람직하게는 실시간 피드백이거나 순간적이다 (즉, 응답시간을 측정하기 위해서 이용할 수 있는 기술에 의해서 측정되는 것으로서 실질적으로 순간적이다). 일부의 구체예에서, 중성 전극은 원하는 조직에서 임피던스를 측정하고, 임피던스를 피드백 기전에 전달하며, 피드백 기전은 임피던스에 응답하여 정전류가 미리 설정된 전류와 유사한 값으로 유지되도록 에너지의 펄스를 조정한다. 일부의 구체예에서, 피드백 기전은 에너지의 펄스의 송달 중에 정전류를 연속적으로 및 순간적으로 유지시킨다.

일부의 구체예에서, 핵산 분자는 폴리뉴클레오타이드 기능 인핸서 또는 유전자 백신 촉진제의 투여와 함께 세포에 송달된다. 폴리뉴클레오타이드 기능 인핸서는 각각 본 발명에 참고로 포함된 미국 특허 제5,593,972 및 5,962,428호 및 1994년 1월 26일에 출원된 국제출원 제PCT/US94/00899호에 기술되어 있다. 유전자 백신 촉진제는 본 발명에 참고로 포함된 1994년 4월 1일자 미국 특허출원 제021,579호에 기술되어 있다. 핵산 분자와 함께 투여되는 공동-약제는 핵산 분자와의 혼합물로 투여될 수 있거나, 별도로 핵산 분자의 투여와 동시에, 또는 그 전 또는 후에 투여될 수 있다. 또한, 형질감염제 및/또는 복제성 약제 및/또는 염증성 성분으로 작용할 수 있으며, GVF와 공동-투여될 수 있는 다른 약제에는 성장인자, 사이토킨 및 림포킨, 예를 들어, α-인터페론, 감마-인터페론, GM-CSF, 혈소판 유래 성장인자 (PDGF), TNF, 표피성장인자 (EGF), IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 및 IL-15뿐만 아니라 섬유아세포 성장인자, 표면활성제, 예를 들어, 면역-자극성 컴플렉스 (ISCOMS), 프로인드 (Freunds) 불완전 보조제, 모노포스포릴 지질 A (WL)를 포함하는 LPS 유사체, 뮤라밀 펩타이드, 퀴논 유사체 및 스쿠알렌 및 스쿠알렌과 같은 소포체가 포함되며, 히알우론산이 또한 유전자 구조물과 함께 투여될 수 있다. 일부의 구체예에서는, 면역조절성 단백질이 GVF로 사용될 수 있다. 일부의 구체예에서, 핵산 분자는 송달/흡수를 증진시키기 위해서 PLG와 함께 제공된다.

본 발명에 따르는 약제학적 조성물은 약 1 나노그램 내지 약 2000 마이크로그램의 DNA를 포함한다. 일부의 바람직한 구체예에서, 본 발명에 따르는 약제학적 조성물은 약 5 나노그램 내지 약 1000 마이크로그램의 DNA를 포함한다. 일부의 바람직한 구체예에서, 약제학적 조성물은 약 10 나노그램 내지 약 800 마이크로그램의 DNA를 함유한다. 일부의 바람직한 구체예에서, 약제학적 조성물은 약 0.1 내지 약 500 마이크로그램의 DNA를 함유한다. 일부의 바람직한 구체예에서, 약제학적 조성물은 약 1 내지 약 350 마이크로그램의 DNA를 함유한다. 일부의 바람직한 구체예에서, 약제학적 조성물은 약 25 내지 약 250 마이크로그램의 DNA를 함유한다. 일부의 바람직한 구체예에서, 약제학적 조성물은 약 100 내지 약 200 마이크로그램의 DNA를 함유한다.

본 발명에 따르는 약제학적 조성물은 사용될 투여의 모드에 따라 제제화된다. 약제학적 조성물이 주사용 약제학적 조성물인 경우에, 이들은 멸균되고, 발열성 물질을 함유하지 않으며, 미립자를 함유하지 않는다. 등장성 제제가 바람직하게 사용된다. 일반적으로, 등장성을 위한 첨가제에는 염화나트륨, 덱스트로즈, 만니톨, 소르비톨 및 락토즈가 포함될 수 있다. 일부의 경우에, 포스페이트 완충된 식염수와 같은 등장성 용액이 바람직하다. 안정화제에는 젤라틴 및 알부민이 포함된다. 일부의 구체예에서는, 혈관수축제가 제제에 첨가된다.

본 발명의 일부의 구체예에 따르면, 면역반응을 유도하는 방법이 제공된다. 백신은 단백질 기본, 생약독화 백신, 세포 백신, 재조합 백신 또는 핵산 또는 DNA 백신일 수 있다. 일부의 구체예에서, 점막 면역반응을 유도하는 방법을 포함하는, 개체에게서 면역원에 대한 면역반응을 유도하는 방법은 개체에게 CTACK 단백질, TECK 단백질, MEC 단백질 및 그의 기능적 단편 또는 그의 발현가능한 코드화 서열 중의 하나 또는 그 이상을 본 발명의 단백질을 코드화한 분리된 핵산 분자 및/또는 본 발명의 단백질을 코드화한 재조합 백신 및/또는 본 발명의 단백질의 서브유니트 백신 및/또는 생약독화 백신 및/또는 사멸 백신을 함께 투여하는 것을 포함한다. CTACK 단백질, TECK 단백질, MEC 단백질 및 그의 기능적 단편 중의 하나 또는 그 이상은 면역원을 코드화한 분리된 핵산 분자; 및/또는 면역원을 코드화한 재조합 백신 및/또는 면역원을 포함하는 서브유니트 백신 및/또는 생약독화 백신 및/또는 사멸 백신의 투여 전에, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 투여될 수 있다. 일부의 구체예에서는, CTACK, TECK, MEC 및 그의 기능적 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 단백질을 코드화한 분리된 핵산 분자가 개체에게 투여된다.

본 발명은 이하의 실시예에서 더 설명된다. 이 실시예는 본 발명의 구체예를 나타내지만 단지 설명을 목적으로 제시된 것으로 이해되어야 한다. 상기한 검토 및 이 실시예로부터, 본 기술분야에서 숙련된 전문가는 본 발명의 필수적인 특징을 확인할 수 있으며, 그의 정신 및 범위를 벗어남이 없이 본 발명이 다양한 용도 및 조건에 적합하도록 본 발명의 다양한 변화 및 변형을 만들 수 있다. 따라서, 본 발명에 나타내고 기술된 것 이외에도 본 발명의 다양한 변형은 전술한 설명으로부터 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 명백할 것이다. 이러한 변형은 또한, 첨부된 특허청구의 범위의 범위 내에 포함시키고자 한다.

본 발명 전체에 걸쳐서 인용된 미국 특허, 미국 특허출원 및 참고문헌은 각각 이에 의해서 온전히 참고로 포함된다.

실시예

인간 파필로마 바이러스 (HPV) 바이러스성 단백질 18 E6 및 7에 대한 최적화된 공통 서열을 제조하였다. 상기 서열은 높은 레벨의 발현을 위해서 고안된다. 이 서열은 본 발명자들의 유전적 면역화 기술에서 유용하다. 공통 서열을 사용하여 수행된 실험으로부터의 결과는 양성이었다. 도 1은 플라스미드 pGX3002 내에 공통 HPV 18-6&7의 핵산 서열 (SEQ ID NO:7)을 포함하는 플라스미드 구조물의 묘사를 제공한다. 플라스미드 pGX3002 내에 통합된 공통 HPV 18-6&7의 핵산 서열은 공통 HPV 18-6&7의 코드화 서열에 연결된 IgE 리더 펩타이드에 대한 코드화 서열을 포함한다.

플라스미드 pGX3002는 카나마이신 저항성 유전자 (Kan) 및 플라스미드 복제 기점 (pUC ori)을 포함하는 pVAX 골격을 사용하여 소 성장 호르몬 3' 말단을 갖는 CMV 프로모터 (pCMV) 및 폴리아데닐화 시그날 (bGHpA)에 의해서 구동된 최적화된 인간 파필로마 바이러스 18-6&7 항원 (HPV18 E6&7)을 발현한다.

요소: 염기쌍

CMV 프로모터: 137-724

HPV 18-6&7 코드화 서열: 754-1606

bGH PolyA: 1649-1879

Kan 저항성: 2052-2846

pUC Ori: 3145-3818

SEQUENCE LISTING <110> The Trustees of the University of Pennsylvania Weiner, David B Yan, Jian <120> IMPROVED VACCINES FOR HUMAN PAPILLOMA VIRUS AND METHODS FOR USING THE SAME <130> 133172.02700 <150> US 61/146,942 <151> 2009-01-23 <150> US 12/691,588 <151> 2010-01-21 <160> 7 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 783 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HPV Consensus Sequence encoding E6 and E7 <400> 1 gccagattcg aggaccccac caggagcggc tacaagctgc ccgatctgtg taccgagctg 60 aacaccagcc tgcaggacat cgagatcacc tgtgtgtact gtaagaccgt gctggagctg 120 accgaggtgt tcgagaagga cctgttcgtg gtgtacaggg acagcatccc ccacgccgcc 180 tgccacaagt gtatcgactt ctacagccgg atccgggagc tgagacacta cagcgacagc 240 gtgtacggcg ataccctgga gaagctgacc aacaccggcc tgtacaacct gctgatccgg 300 tgcctgagat gccagaagcc cctgctgaga cacctgaacg agaagcggcg gttccacaac 360 atcgccggcc actacagagg ccagtgccac agctgctgta acagggccag gcaggagaga 420 ctgcagcgga gaagagagac ccaggtgagg ggcaggaaga gaagaagcca cggccccaag 480 gccaccctgc aggatatcgt gctgcacctg gagccccaga atgagatccc cgtggatctg 540 ctgggccacg gccagctgtc cgacagcgag gaggagaacg acgagatcga cggcgtgaat 600 caccagcacc tgcctgccag aagagccgag cctcagaggc acaccatgct gtgtatgtgc 660 tgtaagtgtg aggcccggat cgaactggtg gtggagagca gcgccgacga cctgagagcc 720 ttccagcagc tgttcctgaa caccctgagc ttcgtgtgtc cttggtgtgc cagccagcag 780 tga 783 <210> 2 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus HPV peptide sequence with E6 and E7 <400> 2 Ala Arg Phe Glu Asp Pro Thr Arg Ser Gly Tyr Lys Leu Pro Asp Leu 1 5 10 15 Cys Thr Glu Leu Asn Thr Ser Leu Gln Asp Ile Glu Ile Thr Cys Val 20 25 30 Tyr Cys Lys Thr Val Leu Glu Leu Thr Glu Val Phe Glu Lys Asp Leu 35 40 45 Phe Val Val Tyr Arg Asp Ser Ile Pro His Ala Ala Cys His Lys Cys 50 55 60 Ile Asp Phe Tyr Ser Arg Ile Arg Glu Leu Arg His Tyr Ser Asp Ser 65 70 75 80 Val Tyr Gly Asp Thr Leu Glu Lys Leu Thr Asn Thr Gly Leu Tyr Asn 85 90 95 Leu Leu Ile Arg Cys Leu Arg Cys Gln Lys Pro Leu Leu Arg His Leu 100 105 110 Asn Glu Lys Arg Arg Phe His Asn Ile Ala Gly His Tyr Arg Gly Gln 115 120 125 Cys His Ser Cys Cys Asn Arg Ala Arg Gln Glu Arg Leu Gln Arg Arg 130 135 140 Arg Glu Thr Gln Val Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser His Gly Pro Lys 145 150 155 160 Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile 165 170 175 Pro Val Asp Leu Leu Gly His Gly Gln Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu 180 185 190 Asn Asp Glu Ile Asp Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg 195 200 205 Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu 210 215 220 Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala 225 230 235 240 Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys 245 250 255 Ala Ser Gln Gln 260 <210> 3 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgE Leader DNA sequence <400> 3 atggactgga cctggatcct gttcctggtg gccgctgcca cacgggtgca cagc 54 <210> 4 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgE leader peptide sequence <400> 4 Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val 1 5 10 15 His Ser <210> 5 <211> 837 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus HPV Nucleic Acid Sequence Transgene including IgE <400> 5 atggactgga cctggatcct gttcctggtg gccgctgcca cacgggtgca cagcgccaga 60 ttcgaggacc ccaccaggag cggctacaag ctgcccgatc tgtgtaccga gctgaacacc 120 agcctgcagg acatcgagat cacctgtgtg tactgtaaga ccgtgctgga gctgaccgag 180 gtgttcgaga aggacctgtt cgtggtgtac agggacagca tcccccacgc cgcctgccac 240 aagtgtatcg acttctacag ccggatccgg gagctgagac actacagcga cagcgtgtac 300 ggcgataccc tggagaagct gaccaacacc ggcctgtaca acctgctgat ccggtgcctg 360 agatgccaga agcccctgct gagacacctg aacgagaagc ggcggttcca caacatcgcc 420 ggccactaca gaggccagtg ccacagctgc tgtaacaggg ccaggcagga gagactgcag 480 cggagaagag agacccaggt gaggggcagg aagagaagaa gccacggccc caaggccacc 540 ctgcaggata tcgtgctgca cctggagccc cagaatgaga tccccgtgga tctgctgggc 600 cacggccagc tgtccgacag cgaggaggag aacgacgaga tcgacggcgt gaatcaccag 660 cacctgcctg ccagaagagc cgagcctcag aggcacacca tgctgtgtat gtgctgtaag 720 tgtgaggccc ggatcgaact ggtggtggag agcagcgccg acgacctgag agccttccag 780 cagctgttcc tgaacaccct gagcttcgtg tgtccttggt gtgccagcca gcagtga 837 <210> 6 <211> 278 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus HPV Protein Sequence with IgE leader peptide <400> 6 Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val 1 5 10 15 His Ser Ala Arg Phe Glu Asp Pro Thr Arg Ser Gly Tyr Lys Leu Pro 20 25 30 Asp Leu Cys Thr Glu Leu Asn Thr Ser Leu Gln Asp Ile Glu Ile Thr 35 40 45 Cys Val Tyr Cys Lys Thr Val Leu Glu Leu Thr Glu Val Phe Glu Lys 50 55 60 Asp Leu Phe Val Val Tyr Arg Asp Ser Ile Pro His Ala Ala Cys His 65 70 75 80 Lys Cys Ile Asp Phe Tyr Ser Arg Ile Arg Glu Leu Arg His Tyr Ser 85 90 95 Asp Ser Val Tyr Gly Asp Thr Leu Glu Lys Leu Thr Asn Thr Gly Leu 100 105 110 Tyr Asn Leu Leu Ile Arg Cys Leu Arg Cys Gln Lys Pro Leu Leu Arg 115 120 125 His Leu Asn Glu Lys Arg Arg Phe His Asn Ile Ala Gly His Tyr Arg 130 135 140 Gly Gln Cys His Ser Cys Cys Asn Arg Ala Arg Gln Glu Arg Leu Gln 145 150 155 160 Arg Arg Arg Glu Thr Gln Val Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser His Gly 165 170 175 Pro Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn 180 185 190 Glu Ile Pro Val Asp Leu Leu Gly His Gly Gln Leu Ser Asp Ser Glu 195 200 205 Glu Glu Asn Asp Glu Ile Asp Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala 210 215 220 Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys 225 230 235 240 Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu 245 250 255 Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro 260 265 270 Trp Cys Ala Ser Gln Gln 275 <210> 7 <211> 3824 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pGX3002 plasmid with consensus and IgE leader <400> 7 gctgcttcgc gatgtacggg ccagatatac gcgttgacat tgattattga ctagttatta 60 atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata 120 acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat 180 aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga 240 gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc 300 ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt 360 atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat 420 gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag 480 tctccacccc attgacgtca atgggagttt gttttggcac caaaatcaac gggactttcc 540 aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga 600 ggtctatata agcagagctc tctggctaac tagagaaccc actgcttact ggcttatcga 660 aattaatacg actcactata gggagaccca agctggctag cgtttaaact taagcttggt 720 accgagctcg gatccactag tccagtgtgg tggaattcgc caccatggac tggacctgga 780 tcctgttcct ggtggccgct gccacacggg tgcacagcgc cagattcgag gaccccacca 840 ggagcggcta caagctgccc gatctgtgta ccgagctgaa caccagcctg caggacatcg 900 agatcacctg tgtgtactgt aagaccgtgc tggagctgac cgaggtgttc gagaaggacc 960 tgttcgtggt gtacagggac agcatccccc acgccgcctg ccacaagtgt atcgacttct 1020 acagccggat ccgggagctg agacactaca gcgacagcgt gtacggcgat accctggaga 1080 agctgaccaa caccggcctg tacaacctgc tgatccggtg cctgagatgc cagaagcccc 1140 tgctgagaca cctgaacgag aagcggcggt tccacaacat cgccggccac tacagaggcc 1200 agtgccacag ctgctgtaac agggccaggc aggagagact gcagcggaga agagagaccc 1260 aggtgagggg caggaagaga agaagccacg gccccaaggc caccctgcag gatatcgtgc 1320 tgcacctgga gccccagaat gagatccccg tggatctgct gggccacggc cagctgtccg 1380 acagcgagga ggagaacgac gagatcgacg gcgtgaatca ccagcacctg cctgccagaa 1440 gagccgagcc tcagaggcac accatgctgt gtatgtgctg taagtgtgag gcccggatcg 1500 aactggtggt ggagagcagc gccgacgacc tgagagcctt ccagcagctg ttcctgaaca 1560 ccctgagctt cgtgtgtcct tggtgtgcca gccagcagtg atgagcggcc gctcgagtct 1620 agagggcccg tttaaacccg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct 1680 gttgtttgcc cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt 1740 tcctaataaa atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg 1800 ggtggggtgg ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg 1860 gatgcggtgg gctctatggc ttctactggg cggttttatg gacagcaagc gaaccggaat 1920 tgccagctgg ggcgccctct ggtaaggttg ggaagccctg caaagtaaac tggatggctt 1980 tcttgccgcc aaggatctga tggcgcaggg gatcaagctc tgatcaagag acaggatgag 2040 gatcgtttcg catgattgaa caagatggat tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg 2100 agaggctatt cggctatgac tgggcacaac agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt 2160 tccggctgtc agcgcagggg cgcccggttc tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc 2220 tgaatgaact gcaagacgag gcagcgcggc tatcgtggct ggccacgacg ggcgttcctt 2280 gcgcagctgt gctcgacgtt gtcactgaag cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag 2340 tgccggggca ggatctcctg tcatctcacc ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg 2400 ctgatgcaat gcggcggctg catacgcttg atccggctac ctgcccattc gaccaccaag 2460 cgaaacatcg catcgagcga gcacgtactc ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg 2520 atctggacga agagcatcag gggctcgcgc cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcga 2580 gcatgcccga cggcgaggat ctcgtcgtga cccatggcga tgcctgcttg ccgaatatca 2640 tggtggaaaa tggccgcttt tctggattca tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc 2700 gctatcagga catagcgttg gctacccgtg atattgctga agagcttggc ggcgaatggg 2760 ctgaccgctt cctcgtgctt tacggtatcg ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct 2820 atcgccttct tgacgagttc ttctgaatta ttaacgctta caatttcctg atgcggtatt 2880 ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcatcag gtggcacttt tcggggaaat 2940 gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg 3000 agacaataac cctgataaat gcttcaataa tagcacgtgc taaaacttca tttttaattt 3060 aaaaggatct aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag 3120 ttttcgttcc actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct 3180 ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt 3240 tgtttgccgg atcaagagct accaactctt tttccgaagg taactggctt cagcagagcg 3300 cagataccaa atactgttct tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt caagaactct 3360 gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc 3420 gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg 3480 tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa 3540 ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg 3600 gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg 3660 ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga 3720 tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt 3780 ttacggttcc tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctt 3824

Claims

SEQ ID NO:1; SEQ ID NO:1의 단편; SEQ ID NO:1에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열; SEQ ID NO:1에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열의 단편; SEQ ID NO:5로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열; HPV 코딩 서열을 포함하는 SEQ ID NO:5의 단편; SEQ ID NO:5에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열; 및 HPV 코딩 서열을 포함하는 SEQ ID NO:5에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열의 단편로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
제1항에 있어서, SEQ ID NO:1을 포함하는 핵산 분자.
제1항에 있어서, SEQ ID NO:1에 대해 적어도 95% 유사성을 갖는 서열을 포함하는 핵산 분자.
제1항에 있어서, SEQ ID NO:1에 대해 적어도 98% 유사성을 갖는 서열을 포함하는 핵산 분자.
제1항에 있어서, SEQ ID NO:1로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99% 유사성을 갖는 서열을 포함하는 핵산 분자.
제1항에 있어서, SEQ ID NO:5을 포함하는 핵산 분자.
제1항에 있어서, SEQ ID NO:5에 대해 적어도 95% 유사성을 갖는 서열을 포함하는 핵산 분자.
제1항에 있어서, SEQ ID NO:5에 대해 적어도 98% 유사성을 갖는 서열을 포함하는 핵산 분자.
제1항에 있어서, SEQ ID NO:5로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99% 유사성을 갖는 서열을 포함하는 핵산 분자.
SEQ ID NO:2를 암호화하는 뉴클레오티드 서열; SEQ ID NO:2에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열; SEQ ID NO:2를 암호화하는 뉴클레오티드 서열의 단편; SEQ ID NO:2에 대해 아미노산 적어도 90% 유사성을 갖는 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열의 단편; SEQ ID NO:6을 암호화하는 뉴클레오티드 서열; SEQ ID NO:6에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열; HPV 서열을 포함하는 SEQ ID NO:6을 암호화하는 뉴클레오티드 서열의 단편; 및 HPV 서열을 포함하는 SEQ ID NO:6에 대해 아미노산 적어도 90% 유사성을 갖는 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열의 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열 포함하는 핵산 분자.
제10항에 있어서, SEQ ID NO:2를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
제10항에 있어서, SEQ ID NO:6을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
제1항에 있어서, 상기 분자는 플라스미드인 핵산 분자.
제1항의 핵산 분자를 포함하는 약제학적 조성물.
제1항의 핵산 분자를 포함하는 주사가능 약제학적 조성물.
HPV에 대응하여 개체의 면역반응을 유도하는 방법으로서, 상기 개체에게 제1항의 핵산 분자를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법 .
제16항에 있어서, 상기 핵산 분자는 DNA 분자인 방법.
제17항에 있어서, 상기 핵산 분자는 플라스미드인 방법.
제16항에 있어서, 상기 핵산 분자는 전기천공으로 개체에 도입되는 방법.
제1항의 핵산 분자를 포함하는 재조합 백신.
제20항에 있어서, 상기 재조합 백신은 재조합 우두종 백신인 재조합 백신.
제1항의 핵산 분자를 포함하는 약독화 생백신.
SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:2에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열; SEQ ID NO:2의 단편; SEQ ID NO:2에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열의 단편; SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:6에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열; HPV 서열을 포함하는 SEQ ID NO:6의 단편; 및 HPV 서열을 포함하는 SEQ ID NO:6에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 서열의 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
제23항에 있어서, SEQ ID NO:2를 포함하는 단백질.
제23항에 있어서, SEQ ID NO:2에 대해 적어도 95% 유사성을 갖는 서열을 포함하는 단백질.
제23항에 있어서, SEQ ID NO:2에 대해 적어도 98% 유사성을 갖는 서열을 포함하는 단백질.
제23항에 있어서, SEQ ID NO:2에 대해 적어도 99% 유사성을 갖는 서열을 포함하는 단백질.
제23항에 있어서, SEQ ID NO:6을 포함하는 단백질.
제23항에 있어서, SEQ ID NO:6에 대해 적어도 95% 유사성을 갖는 서열을 포함하는 단백질.
제23항에 있어서, SEQ ID NO:6에 대해 적어도 98% 유사성을 갖는 서열을 포함하는 단백질.
제23항에 있어서, SEQ ID NO:6에 대해 적어도 99% 유사성을 갖는 서열을 포함하는 단백질.
제23항의 단백질을 포함하는 약제학적 조성물.
제23항의 단백질을 포함하는 주사가능 약제학적 조성물.
제23항의 단백질을 포함하는 재조합 백신.
제34항에 있어서, 상기 재조합 백신은 재조합 우두종 백신인 재조합 백신.
제23항의 단백질을 포함하는 약독화 생백신.
HPV에 대응하여 개체의 면역반응을 유도하는 방법으로서, 상기 개체에게 제23항의 단백질을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
HPV에 대응하여 개체의 면역반응을 유도하는 방법으로서, 상기 개체에게 제20항의 재조합 백신을 투여하는 것을 포함하는 방법.
HPV에 대응하여 개체의 면역반응을 유도하는 방법으로서, 상기 개체에게 제22항의 약독화 생백신을 투여하는 것을 포함하는 방법.
제16항에 있어서, 상기 개체는 HPV 감염을 가지고 있는 것으로 진단되었던 방법.