KR20240099266A

KR20240099266A - 항문 고등급편평상피내병변(hsil)을 치료하기 위한 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20240099266A
Application number: KR1020247015465A
Authority: KR
Inventors: 지안 얀; 종 요셉 김; 프라카쉬 부얀; 제프리 스콜닉
Original assignee: 이노비오 파마수티컬즈, 인크.
Priority date: 2021-10-22
Filing date: 2022-10-21
Publication date: 2024-06-28

Abstract

항문 고등급편평상피내병변의 치료 및 예방을 위한 항-HPV 면역원 및 이를 인코딩하는 핵산 분자의 용도가 개시된다. 약학적 조성물, DNA 플라스미드를 포함하는 재조합 백신 및 약독화 생백신뿐만 아니라 항문 고등급편평상피내병변을 치료 또는 예방하기 위한 면역 반응을 유도하는 방법이 개시된다.

Description

항문 고등급편평상피내병변(HSIL)을 치료하기 위한 조성물 및 방법

본 출원은 2021년 10월 22일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 63/270,929의 우선권을 주장하며, 상기 출원의 개시 내용 전체가 본원에 참조로 원용된다.

본 발명은 면역 반응을 유도하기 위한 그리고 항문 고등급편평상피내병변(HSIL: high-grade squamous intraepithelial lesion)에 대해 개인을 예방적 및/또는 치료적으로 면역화하기 위한 개선된 백신 및 개선된 방법에 관한 것이다.

항문 편평상피내병변은 저등급 편평상피내병변(LSIL)과 고등급 편평상피내병변(HSIL)을 모두 포함하며 인간 유두종 바이러스(HPV)의 만성 감염으로 발생한다. 항문 고등급편평상피내병변(HSIL)의 현재 관리는 어려운 일이며, 치료되지 않은 HSIL이 편평세포암종으로 진행될 수 있다는 상당한 증거가 있다.

따라서 항문 HSIL의 치료 또는 예방을 위한 개선된 조성물 및 방법이 필요한 실정이다. 본 발명은 이러한 미충족 수요를 충족시킨다.

본 발명의 양태는 HPV16 E6-E7 융합 항원, HPV18 E6-E7 융합 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는 적어도 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물을 제공하고 상기 조성물을 항문 고등급편평상피내병변의 치료 또는 예방에 사용한다.

또 다른 양태는 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물을 제공하되, 상기 서열은 다음으로 구성된 군에서 선택된다. 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열. 일부 실시형태예에서 HPV6 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 5' 말단에 선도(leader) 서열이 없다.

본 발명의 또 다른 양태에서 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물이 제공되며, 상기 서열은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다. 서열식별번호:1, 서열식별번호:1과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:1의 단편; 서열식별번호:1의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열. 일부 실시형태예에서 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 5' 말단에 선도(leader) 서열이 없다.

또 다른 양태는 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물을 제공하되, 상기 서열은 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서 HPV6 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 5' 말단에 선도 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드를 더 포함한다.

본 발명의 또 다른 양태에서 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물이 제공되며, 상기 서열은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다. 서열식별번호:9, 서열식별번호:9과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:9의 단편; 서열식별번호:9의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열. 일부 실시형태에서 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 5' 말단에 선도 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드를 더 포함한다.

제공된 뉴클레오티드 서열은 플라스미드일 수 있다.

또 다른 양태에서 개시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 약학 조성물이 제공된다.

일부 양태는 제공된 뉴클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 것을 포함해서 개체에게서 효과적인 면역 반응을 유도함으로써 개체의 항문 고등급편평상피내병변을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 본원의 방법은 바람직하게는 제공된 뉴클레오티드 서열을 전기천공법으로 개체에게 도입하는 단계를 포함한다.

도 1은 본 연구의 연구 설계를 도시한다.
도 2는 36주차와 64주차의 백신 효능에 대한 데이터를 제공한다.
도 3은 VGX-3100이 HPV16 및 HPV18 항원 모두에 대해 세포성 면역 반응을 유도한다는 것을 입증하는 데이터를 제공한다.
도 4는 VGX-3100이 HPV16E7 및 HPV18E7 항원에 대한 체액성 면역 반응을 유도한다는 것을 입증하는 데이터를 제공한다.
도 5는 VGX-3100 백신의 안전성에 대한 데이터를 제공한다.

정의.

개시된 방법은 본 개시의 일부를 형성하는 다음의 상세한 설명을 참조하여 보다 용이하게 이해될 수 있다. 본 발명은 본 명세서에 기재 및/또는 도시된 특정 방법으로 한정되지 않고, 본원에 사용된 용어는 단지 예로서 특정 실시형태를 설명하기 위한 것이며 청구된 발명을 그로 한정하는 의도를 갖지 않는 것으로 이해되어야 한다.

달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 개선을 위한 가능한 작용 메커니즘 또는 방식 또는 이유에 관한 어떤 설명도 단지 예시를 위한 것이며, 개시된 방법은 개선을 위해서 제안된 임의의 메커니즘 또는 방식 또는 이유의 정확성 또는 부정확성으로 한정되지 않는다.

값이 근사치로 표현될 때 "약"을 앞에 사용하면, 특정 값이 또 다른 실시형태를 형성하는 것으로 이해될 것이다. 특정 숫자 값에 대한 언급은 문맥상 명백하게 달리 지시하지 않는 한 적어도 해당 특정 값을 포함한다.

명확성을 위해 별개의 실시형태의 맥락에서 설명되는 본 발명의 일부 특징들은 하나의 실시형태에서 조합된 형태로도 제공될 수 있다는 점이 인정되어야 한다. 반대로, 간략화를 위해, 하나의 실시형태의 맥락에서 기재된 다양한 특징들은 또한 개별적으로 또는 임의의 하위조합의 형태로 제공될 수도 있다.

설명의 측면과 관련된 다양한 용어가 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용된다. 이러한 용어는 달리 명시하지 않는 한 해당 기술 분야에서 통용되는 일반적인 의미를 갖는다. 기타 구체적으로 정의된 용어는 본 문서에 제공된 정의와 일치하는 방식으로 해석되어야 한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어는 단지 특정한 실시형태를 설명하기 위해 사용된 것으로서, 제한하려는 의도가 아니다. 명세서 및 첨부된 청구 범위에서 사용될 때, 단일형 "하나", "하나의" 및 "상기"는 문맥상 달리 명시하지 않는 한 그 복수의 형태도 포함한다.

본원에서 수치 범위를 기술할 때 동일 정도의 정밀도로 그 사이에 포함된 각 숫자는 명시적으로 고려된다. 예를 들어, 6 내지 9 범위의 경우, 숫자 7 및 8이 6 및 9 외에 추가로 고려되며, 6.0 내지 7.0 범위의 경우, 숫자 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9 및 7.0이 명시적으로 고려된다.

본 명세서에서 사용된 용어 "적어도 하나"는 "하나 이상"을 의미한다.

본 명세서에 사용된 용어 "대상" 또는 "개체"는 모든 동물을 의미하지만, 특히 인간을 의미한다. 따라서, 방법은 인간 및 인간이 아닌 동물에 적용 가능하지만, 가장 바람직하게는 인간에게 사용되는 것이 가장 바람직하다. "대상", "환자" 및 "개체"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다.

본 명세서에 사용된 용어 "포함하는"은 "필수적으로 구성되는" 및 "구성되는"이라는 용어에 포함되는 예를 포함하는 의도를 갖는다. 마찬가지로 "필수적으로 구성되는"이라는 용어는 "구성되는"이라는 용어에 포함되는 예를 포함하는 의도를 갖는다.

본원에 사용된 "아주반트"는 DNA 플라스미드가 인코딩하는 하나 이상의 항원 및 이하 기술된 인코딩 핵산 서열의 항원성을 강화하기 위해 본원에 기술된 DNA 플라스미드 백신에 첨가된 임의의 분자를 의미할 수 있다.

"항체"는 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE 클래스의 항체 또는 Fab, F(ab')2, Fd를 포함한 상기 항체의 단편 또는 유도체, 단일 사슬 항체, 이중항체, 이중 특이적 항체, 이중 작용성 항체 및 그 유도체를 뜻할 수 있다. 항체는 포유동물의 혈청 샘플로부터 분리된 항체, 다클론 항체, 친화성 정제 항체, 또는 원하는 항원결정기 또는 이로부터 유래된 서열과 충분한 결합 특이성을 나타내는 그 혼합물일 수 있다.

"항원"은 HPV E6 또는 HPV E7 도메인, 바람직하게는 그 사이에 내부단백질분해 절단 부위가 있는 E6 및 E7 융합을 갖는 단백질을 의미한다. 항원은 서열식별번호: 2(아형 16) 및 서열식별번호: 4(아형 18); 본원에 제시된 길이의 단편, 변이체, 즉 본원에 제시된 서열식별번호:2 또는 서열식별번호:4와 상동성을 갖는 서열의 단백질, 본원에 제시된 길이를 갖는 변이체의 단편, 및 이들의 조합을 포함한다. 항원은 서열식별번호:7 또는 12의 IgE 선도 서열을 가질 수 있거나 대안적으로 N-말단 끝에서 제거된 그러한 서열을 가질 수 있다. 항원은 선택적으로 다른 단백질에서 유래된 것과 같은 신호 펩티드를 포함할 수 있다.

"바이오시밀러"(승인된 대조약/생물학적 약물, 즉, 등재 대조약의 바이오시밀러)는 안전성, 순도 및 효능 측면에서 바이오시밀러와 대조약 간에 임상적으로 의미있는 차이 없이, 임상적 비활성 성분의 사소한 차이에도 불구하고 대조약과 매우 유사한 생물학적 생성물을 지칭하며 이는 (a) 임상적 비활성 성분의 사소한 차이에도 불구하고, 생물학적 생성물이 대조약과 매우 유사함을 입증하는 분석 연구; (b) 동물 연구(독성 평가 포함); 및/또는 (c) 기준 제품이 허가되고 사용되도록 의도되고 바이오시밀러에 대해 추구되는 라이센스에 대해 적절한 하나 이상의 사용 조건에서 안전성, 순도 및 효능을 입증하기에 충분한 임상 연구 또는 연구들(면역원성 및 약동학 또는 약력학 평가 포함)의 데이터를 근거로 한다. 바이오시밀러는 처방 의료 전문가 의 개입 없이 약국에서 기준 제품을 대체할 수 있는 상호 교환 가능한 제품일 수 있다. "상호 교환성"이라는 부가적인 기준을 충족하기 위해, 바이오시밀러는 임의의 주어진 환자에서 기준 제품과 동일한 임상 결과를 나타낼 것으로 예상되어야 하며, 바이오시밀러가 개체에게 1회 초과로 투여되는 경우, 바이오시밀러와 기준 제품의 사용 사이에 대체 또는 교환 시 효능 감소 또는 안전성 측면의 위험은 이러한 대체 또는 교환 없이 기준 제품 사용 시의 위험보다 크지 않다. 바이오시밀러는 기준 제품에 대해 메커니즘이 알려진 정도까지 제안된 사용 조건에서 동일한 작용 메커니즘을 활용한다. 바이오시밀러에 대해 제안된 라벨링에 규정, 권장 또는 제안된 사용 조건 또는 조건들은 기준 제품에 대해 이전에 승인된 것이다. 투여 경로, 투여 형태 및/또는 바이오시밀러의 강도는 기 준 제품과 동일하며, 바이오시밀러가 계속 안전하고 순수하며 강력하도록 설계된 표준을 충족하는 시설에서 바이오시밀러가 제조, 가공, 포장 또는 보관된다. 바이오시밀러는 이 바이오시밀러 성능을 변경할 것으로 예상되지 않는 N- 또는 C-말단 절단과 같이, 기준 제품과 비교 시, 아미노산 서열에 사소한 변형을 포함할 수 있다.

본원에 사용된 "코딩 서열" 또는 "인코딩 핵산"은 섹션 c에 제시된 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산(RNA 또는 DNA 분자)을 의미할 수 있다. 코딩 서열은 핵산이 투여되는 개체 또는 포유동물의 세포에서 발현을 지시할 수 있는 프로모터 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된 개시 및 종결 신호를 더 포함할 수 있다. 코딩 서열은 신호 펩티드, 예를 들어 서열식별번호:7 또는 12와 같은 IgE 선도 서열을 인코딩하는 서열을 더 포함할 수 있다.

본원에서 사용되는 "보체" 또는 "상보적"은 핵산 분자의 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체 사이에 왓슨-크릭(Watson-Crick)(예를 들어, A-T/U 및 C-G) 또는 후그스틴(Hoogsteen) 염기 쌍이 있는 핵산을 의미한다.

"단편"은 포유동물에서 항원에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 항원의 폴리펩티드 단편을 의미할 수 있다. 항원 단편은 N 및/또는 C 말단에서 적어도 하나의 아미노산이 누락된 것을 제외하고 전장(full length)과 100% 동일할 수 있으며, 각 경우 위치 1에 신호 펩티드 및/또는 메티오닌이 있거나 없을 수 있다. 단편은 특정 전장 항원의 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상을 포함할 수 있으며 여기에서 추가된 임의의 이종 신호 펩티드는 제외된다. 단편은 바람직하게는 항원과 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드의 단편을 포함할 수 있고 상동성 백분율을 계산할 때 포함되지 않은 N 말단 메티오닌 또는 이종 신호 펩티드를 더 포함한다. 단편은 N 말단 메티오닌 및/또는 면역글로불린 신호 펩티드, 예를 들어 IgE 또는 IgG 신호 펩티드와 같은 신호 펩티드를 더 포함할 수 있다. N 말단 메티오닌 및/또는 신호 펩티드는 항원의 단편에 연결될 수 있다.

항원을 인코딩하는 핵산 서열의 단편은 5' 및/또는 3' 말단에서 적어도 하나의 뉴클레오티드가 누락된 것을 제외하고 전장과 100% 상동성을 가질 수 있으며, 각 경우에 위치 1에 신호 펩티드 및/또는 메티오닌을 인코딩하는 서열이 있거나 없을 수 있다. 단편은 특정 전장 코딩 시퀀스의 전장의 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상을 포함할 수 있으며 여기에서 추가된 임의의 이종 신호 펩티드는 제외된다. 단편은 바람직하게는 항원과 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드를 인코딩하는 단편을 포함할 수 있고, 선택적으로 상동성 백분율을 계산할 때 포함되지 않는 N 말단 메티오닌 또는 이종 신호 펩티드를 더 포함할 수 있다. 단편은 N 말단 메티오닌 및/또는 면역글로불린 신호 펩티드, 예를 들어 IgE 또는 IgG 신호 펩티드와 같은 신호 펩티드에 대한 인코딩 서열을 더 포함할 수 있다. N 말단 메티오닌 및/또는 신호 펩티드를 인코딩하는 코딩 서열은 코딩 서열의 단편에 연결될 수 있다.

2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열과 관련하여 본원에 사용된 "동일한" 또는 "동일성"은 서열이 특정 영역에 걸쳐 동일한 특정 비율의 잔기를 가짐을 의미할 수 있다. 시퀀스 동일성의 백분율은 2개의 서열을 최적으로 정렬하고, 지정된 영역에 걸쳐 2개의 서열을 비교하고, 일치하는 위치의 수를 산출하기 위해 두 서열에서 동일한 잔기가 발생하는 위치의 수를 결정하고, 일치하는 위치의 수를 해당 영역의 위치의 총수로 나누고, 거기에 100을 곱하여 산출한다. 두 서열의 길이가 다르거나 정렬이 하나 이상의 엇갈린 끝을 생성하고 특정 비교 영역이 단일 서열만을 포함하는 경우, 단일 서열의 잔기는 계산의 분자가 아닌 분모에 포함된다. DNA와 RNA를 비교할 때 티민(T)과 우라실(U)은 동등한 것으로 간주될 수 있다. 동일성은 수동으로 수행하거나 BLAST 또는 BLAST 2.0과 같은 컴퓨터 시퀀스 알고리즘을 사용하여 수행할 수 있다.

본원에 사용된 "면역 반응"은 제공된 DNA 플라스미드 백신을 통한 하나 이상의 항원의 도입에 반응하여 숙주의 면역 체계, 예를 들어 포유동물의 면역 체계의 활성화를 의미할 수 있다. 면역 반응은 세포성 반응이나 체액성 반응, 또는 둘 다의 형태일 수 있다.

본원에 사용된 "핵산" 또는 "올리고뉴클레오티드" 또는 "폴리뉴클레오티드"는 서로 공유적으로 연결된 적어도 2개의 뉴클레오티드를 의미할 수 있다. 단일 가닥의 묘사는 또한 상보적 가닥의 서열을 정의한다. 따라서 핵산은 또한 묘사된 단일 가닥의 상보적 가닥을 포함한다. 핵산의 많은 변이체는 주어진 핵산과 동일한 목적으로 사용될 수 있다. 따라서 핵산은 또한 실질적으로 동일한 핵산 및 이의 상보체를 포함한다. 단일 가닥은 엄격한 혼성화 조건 하에서 표적 서열에 혼성화할 수 있는 프로브를 제공한다. 따라서 핵산은 엄격한 혼성화 조건 하에서 혼성화하는 프로브도 포함한다.

핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있거나, 이중 가닥 및 단일 가닥 서열 모두의 부분을 함유할 수 있다. 핵산은 게놈성 및 cDNA 둘 다인 DNA, RNA 또는 혼성체(hybrid)일 수 있으며, 여기서 핵산은 데옥시리보뉴클레오티드 및 리보뉴클레오티드의 조합 및 우라실, 아데닌, 티민, 시토신, 구아닌, 이노신, 크산틴 하이포크산틴, 아이소시토신 및 아이소구아닌을 포함하는 염기의 조합을 함유할 수 있다. 핵산은 화학적 합성 방법 또는 재조합 방법에 의해 수득될 수 있다.

본원에 사용된 "작동가능하게 연결된"은 유전자의 발현이 공간적으로 연결된 프로모터의 제어 하에 있음을 의미할 수 있다. 프로모터는 이의 제어 하에 유전자의 5'(상류) 또는 3'(하류) 말단에 위치할 수 있다. 프로모터와 유전자 사이의 거리는 프로모터가 유래되는 유전자에서 프로모터와 이것이 제어하는 유전자 사이의 거리와 거의 동일할 수 있다. 본 기술분야에 공지된바, 이 거리의 변동은 프로모터 기능의 상실 없이 수용될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "위약"은 VGX-3100을 포함하지 않는 약학적 조성물의 투여를 의미한다.

본원에 사용된 "프로모터"는 세포 내에서 핵산의 발현을 부여, 활성화 또는 향상시킬 수 있는 합성 또는 천연 유래 분자를 의미할 수 있다. 프로모터는 발현을 더 향상시키고/시키거나 그의 공간적 발현 및/또는 시간적 발현을 변경시키기 위한 하나 이상의 특정 전사 조절 서열을 포함할 수 있다. 프로모터는 또한 전사 시작 부위로부터 수천 염기쌍만큼 이격되어 위치할 수 있는 원위 인핸서 또는 억제인자 요소를 포함할 수 있다. 프로모터는 바이러스, 박테리아, 진균, 식물, 곤충 및 동물을 비롯한 공급원으로부터 유래될 수 있다. 프로모터는 발현이 일어나는 세포, 조직 또는 기관에 대해, 또는 발현이 일어나는 발육 단계에 대해, 또는 생리학적 스트레스, 병원체, 금속 이온 또는 유도제와 같은 외부 자극에 대한 반응에 대하여 구성적으로 또는 차별적으로 유전자 구성요소의 발현을 조절할 수 있다. 프로모터의 대표적인 예에는 박테리오파지 T7 프로모터, 박테리오파지 T3 프로모터, SP6 프로모터, lac 오퍼레이터-프로모터, tac 프로모터, SV40 후기 프로모터, SV40 초기 프로모터, RSV-LTR 프로모터, CMV IE 프로모터, SV40 초기 프로모터 또는 SV40 후기 프로모터 및 CMV IE 프로모터가 있다.

본원에 사용된 "엄격한 혼성화 조건"은 핵산의 복합 혼합물에서와 같이 제1 핵산 서열(예를 들어, 프로브)이 제2 핵산 서열(예를 들어, 표적)에 혼성화하는 조건을 의미할 수 있다. 엄격한 조건은 서열-의존적일 수 있고, 상이한 상황에 따라 다를 수 있다. 엄격한 조건은 정의된 이온 강도 pH에서 특정 서열에 대한 열 융점(Tm)보다 약 5 10°C 더 낮도록 선택될 수 있다. Tm은 표적에 상보적인 프로브의 50%가 평형 상태에서 표적 서열에 혼성화되는 온도(정의된 이온 강도, pH 및 핵산 농도 하에서)일 수 있다(표적 서열이 Tm에서 과도 존재하기 때문에 프로브의 50%가 평형 상태에서 점유된다). 엄격한 조건은 염 농도가 pH 7.0 내지 8.3에서 약 0.01-1.0 M 나트륨 이온 농도(또는 다른 염)와 같이 약 1.0 M 나트륨 이온 미만이고 온도가 짧은 프로프의 경우 적어도 약 30℃ 이상(예: 약 10-50개 뉴클레오티드) 및 긴 프로브의 경우 적어도 약 60℃ 이상(예: 약 50개 뉴클레오티드 초과)인 조건이다. 엄격한 조건은 포름아마이드와 같은 불안정화제를 첨가해서 달성할 수 있다. 선택적 또는 특이적 혼성화의 경우 양성 신호는 배경 혼성화의 최소 2 내지 10배일 수 있다. 예시적인 엄격한 혼성화 조건은 다음을 포함한다. 50% 포름아미드, 5x SSC 및 1% SDS, 42°C에서 정치 또는 5x SSC, 1% SDS, 65°C에서 정치, 0.2x SSC에서 세척 및 65°C에서 0.1% SDS.

본원에서 사용되는 "실질적으로 상보적인"은 제1 서열이 제2 서열의 보체에 대해 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100개 이상의 뉴클레오티드 또는 아미노산의 영역에 걸쳐 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99%의 상동성을 갖거나 두 서열이 엄격한 혼성화 조건 하에 혼성화하는 것을 의미한다.

본원에서 사용되는 "실질적으로 동일한"은 제1 서열이 제2 서열의 보체에 실질적으로 상보적이라면, 제1 서열과 제2 서열이 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100개 이상의 뉴클레오티드 또는 아미노산의 영역에 걸쳐 또는 핵산에 대해서 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 것을 의미한다.

본원에 사용된 "치료하는" 및 유사한 용어는 항문 및/또는 항문주위 증상의 인간 유두종 바이러스(HPV) 16형 또는 HPV 18형 관련 항문 또는 항문/항문 주위 고등급편평상피내병변(HSIL), 예를 들면 항문 또는 항문/항문 주위 고등급편평상피내병변(HSIL) 병변의 중증도 및/또는 빈도를 감소시키는 것; HPV 유형 16 또는 HPV 유형 18 감염 증상, 특히 HSIL 병변의 제거 및/또는 대상으로부터 HPV 유형 16 또는 HPV 유형 18 바이러스를 제거하는 것; 및/또는 항문 또는 항문/항문주위 저등급편평상피내병변(LSIL) 또는 정상 조직의 해소(resolution)를 뜻한다.

핵산과 관련하여 본원에서 사용되는 "변이체"는 (i) 기준 뉴클레오티드 서열의 부분 또는 단편; (ii) 기준 뉴클레오티드 서열의 보체 또는 이의 부분; (iii) 기준 핵산 또는 이의 보체와 실질적으로 동일한 핵산; 또는 (iv) 엄격한 조건 하에 기준 핵산, 이의 보체 또는 이와 실질적으로 동일한 서열과 혼성화하는 핵산을 의미한다.

펩티드 또는 폴리펩티드 측면에서 "변이체"는 아미노산의 삽입, 결실 또는 보존적 치환에 의해 아미노산 서열이 다르지만, 적어도 하나의 생물학적 활성을 유지하는 것이다. 변이체는 또한 적어도 하나의 생물학적 활성을 유지하는 아미노산 서열을 갖는 기준 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질을 의미할 수 있다. 아미노산의 보존적 치환, 즉 아미노산을 유사한 특성(예를 들어 친수성, 하전된 영역의 정도 및 분포)을 갖는 다른 아미노산으로 대체하는 것은 일반적으로 사소한 변화를 수반하는 것으로 당업계에서 인정된다. 이러한 작은 변화는 당업계에서 이해되는 바와 같이 아미노산의 수성 지수(hydropathic index)를 고려함으로써 부분적으로 식별될 수 있다. Kyte 등, J. Mol. Biol. 157:105-132 (1982). 아미노산의 수성 지수는 그 소수성과 전하를 고려하여 결정된다. 유사한 수성 지수의 아미노산이 치환될 수 있고 여전히 단백질 기능을 유지할 수 있다는 것이 당업계에 공지되어 있다. 일 양태에서 ±2의 수성 지수를 갖는 아미노산이 치환된다. 아미노산의 친수성은 단백질이 생물학적 기능을 유지하게 만드는 치환을 밝히는 데에도 사용될 수 있다. 펩티드의 맥락에서 아미노산의 친수성을 고려하면 해당 펩티드의 가장 큰 국소 평균 친수성을 계산할 수 있으며, 이는 항원성 및 면역원성과의 연관성이 높은 것으로 보고된 유용한 척도이다. 미국 특허 제4,554,101호의 전체가 본원에 참조로 원용된다. 유사한 친수성 값을 갖는 아미노산의 치환은 당업계에서 이해되는 바와 같이 생물학적 활성, 예를 들어 면역원성을 유지하는 펩티드를 생성할 수 있다. 친수성 값이 ±2 이내인 아미노산으로 치환이 수행될 수 있다. 아미노산의 소수성 지수와 친수성 값은 모두 해당 아미노산의 특정 측쇄에 의해 영향을 받는다. 이러한 관찰에 따라 생물학적 기능과 양립할 수 있는 아미노산 치환은 소수성, 친수성, 전하, 크기 및 기타 특성으로 밝혀지는 바와 같이 아미노산, 특히 이러한 아미노산의 측쇄의 상대적 유사성에 따라 달라지는 것으로 이해된다.

본원에서 사용되는 "벡터"는 복제 원점(origin of replication)을 포함하는 핵산 서열을 의미할 수 있다. 벡터는 플라스미드, 박테리오파지, 박테리아 인공 염색체 또는 효모 인공 염색체일 수 있다. 벡터는 DNA 또는 RNA 벡터일 수 있다. 벡터는 자가 복제 염색체외 벡터이거나 숙주 게놈에 통합되는 벡터일 수 있다.

설명

면역원으로 유도된 세포성 면역 반응을 향상시키기 위한 다단계 전략으로부터 발생하는 개선된 백신이 개시된다. 수정된 공통 염기 서열이 생성되었다. 코돈 최적화, RNA 최적화 및 고효율 면역글로빈 선도 서열의 추가를 포함하는 유전적 변형도 개시된다. 신규 구조는 상응하는 코돈 최적화 면역원보다 더 강력하고 더 넓은 세포성 면역 반응을 유도하도록 설계되었다.

개선된 HPV 백신은 면역원으로서 특히 효과적이게 만드는 항원결정기가 있는 단백질을 인코딩하는 단백질 및 유전자 구조를 기반으로 함으로써 항문 고등급편평상피내병변(HSIL)에 대한 예방 또는 치료 전략을 가능하게 한다. 따라서 백신은 치료적 또는 예방적 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시형태에서 면역원을 전달하는 수단은 DNA 백신, 재조합 백신, 단백질 서브유닛 백신, 면역원을 포함하는 조성물, 약독화 백신 또는 사백신이다. 일부 실시형태에서 백신은 하나 이상의 DNA 백신, 하나 이상의 재조합 백신, 하나 이상의 단백질 서브유닛 백신, 면역원을 포함하는 하나 이상의 조성물, 하나 이상의 약독화 백신 및 하나 이상의 사백신이다.

일부 실시형태에 따라 백신은 개체에게 전달되어 개체의 면역 체계의 활성을 조절하여 HPV에 대한 면역 반응을 향상시킴으로써 항문 고등급편평상피내병변을 치료한다. 단백질을 인코딩하는 핵산 분자가 개체의 세포에 흡수되면 뉴클레오티드 서열이 세포에서 발현되고 그에 따라 단백질이 개체에게 전달된다. 재조합 백신의 일부로서, 약독화 백신의 일부로서, 단리된 단백질 또는 벡터의 단백질 일부로서, 플라스미드와 같은 핵산 분자 상의 단백질 인코딩 서열을 전달하는 방법이 제공된다.

개체의 항문 고등급편평상피내병변에 대한 예방적 및/또는 치료적 치료를 제공하는 조성물 및 방법이 제공된다.

면역원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 전달하기 위한 조성물은 조절 요소에 작동가능하게 연결된다. 조성물은 면역원을 인코딩하는 플라스미드, 면역원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 재조합 백신, 본 발명의 단백질을 인코딩하고/하거나 본 발명의 단백질을 포함하는 약독화 생균 병원체; 본 발명의 단백질을 포함하는 사멸된 병원체; 또는 본 발명의 단백질을 포함하는 리포솜 또는 서브유닛 백신과 같은 조성물을 포함할 수 있다. 본 발명은 또한 조성물을 포함하는 주사용 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 양태는 적어도 하나의 HPV E6-E7 융합 항원, 예를 들어 HPV16 E6-E7 융합 항원 또는 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물을 제공한다. 일 실시형태에서 조성물은 HPV16 E6-E7 융합 항원 및 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.

한 실시형태에서 본 발명은 본 발명의 조성물을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 방법을 포함한다. 한 실시형태에서 대상은 항문 고등급편평상피내병변으로 진단받은 대상이다. 한 실시형태에서 대상은 항문 고등급편평상피내병변을 갖는 대상이다. 한 실시형태에서 대상은 항문 고등급편평상피내병변이 발생할 위험이 있는 대상이다.

HPV16 E6-E7 융합

또 다른 양태는 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물을 제공하되, 상기 서열은 다음으로 구성된 군에서 선택된다. 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편; 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열.

일부 실시형태에서 조성물은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되는 HPV16 E6-E7 융합 항원을 포함한다: 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편; 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열.

본 발명의 또 다른 양태에서 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물이 제공되며, 상기 서열은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다. 서열식별번호:1, 서열식별번호:1과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:1의 단편; 서열식별번호:1의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열.

일부 실시형태에서 본원에 기재된 뉴클레오티드 서열에는 선도 서열이 없다. 일 실시형태에서 HPV16 E6-E7 융합 항원을 포함하는 뉴클레오티드 서열에는 선도 서열이 없다. 특히 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 HPV16 E6-E7 융합 항원은 5' 말단에 선도 서열, 예를 들어, 서열식별번호:7을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 없다. 특히, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호:1을 포함하는 HPV6 E6-E7 융합 항원에는 5' 말단에 선도 서열, 예를 들어, 서열식별번호:7을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 없다.

일부 실시형태에서 본 발명의 뉴클레오티드 서열은 제공된 뉴클레오티드 서열과 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 상동성, 바람직하게는 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%; 또는 98% 또는 99%의 상동성을 가질 수 있다.

제공된 뉴클레오티드 서열은 플라스미드, 바이러스 벡터, 지질 벡터, 나노입자를 포함하는 다양한 공지된 벡터 또는 전달 시스템 중 하나에 포함될 수 있으며, 바람직하게는 플라스미드에 포함될 수 있다.

일부 양태에서 둘 이상의 HPV 아형에 대해 개체에게서 효과적인 면역 반응을 유도하여 항문의 고등급편평상피내병변에 대한 예방적 또는 치료적 처치를 제공하는 방법은 해당 개체에게 하나 이상의 제공된 뉴클레오티드를 포함하는 조성물, 바람직하게는 둘 이상의 항원을 갖는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 본원의 방법은 바람직하게는 제공된 뉴클레오티드 서열을 전기천공법으로 개체에게 도입하는 단계를 포함한다.

서열식별번호:1은 단백질 분해 절단 서열에 의해 HPV E7에 대한 공통 서열에 연결된 HPV E6에 대한 공통 서열인 IgE 선도 서열을 포함하는 HPV16 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 서열식별번호: 2는 단백질 분해 절단 서열에 의해 HPV E7에 대한 공통 서열에 연결된 HPV E6에 대한 공통 서열인 IgE 선도 서열을 포함하는 HPV16 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원의 아미노산 서열을 포함한다. HPV16 E6에 대한 공통 서열은 서열식별번호:3에 제시된 면역우세 항원결정기를 포함한다. HPV16 E7에 대한 공통 서열은 서열식별번호:4에 제시된 면역우세 항원결정기를 포함한다. HPV E6에 대한 공통 서열은 서열식별번호:5이다. HPV E6에 대한 공통 서열은 서열식별번호:6이다. IgE 선도 서열은 서열식별번호:7이다. 2개의 공통 서열을 연결하는 데 유용한 단백질분해 절단 서열은 서열식별번호:8이다.

HPV16 E6-E7 융합 항원에 관한 추가 정보는 적어도 그 전문이 참조로 본원에 원용된 미국 특허 번호 8,168,769에서 확인할 수 있다.

일부 실시형태에서 백신은 서열식별번호:2, 또는 서열식별번호:2를 인코딩하는 핵산 분자를 포함한다. 일부 실시형태에서 본 발명의 백신은 서열식별번호:3 및/또는 서열식별번호:4, 또는 둘 중 하나 또는 둘 다를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 본 발명의 백신은 서열식별번호:5 및/또는 서열식별번호:6, 또는 둘 중 하나 또는 둘 다를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 본 발명의 백신은 서열식별번호:8과 같은 단백질 분해 절단 서열, 또는 융합 단백질을 인코딩하는 핵산 서열에 의해 서열식별번호:6에 연결된 서열식별번호:5를 포함한다. 일부 실시형태에서 본 발명의 백신은 IgE 선도 서열 서열식별번호:7 또는 이를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서 본 발명의 백신은 서열식별번호:2 또는 서열식별번호:1의 핵산 서열을 포함한다.

서열식별번호:2의 단편은 N 및/또는 C 말단에서 하나 이상의 아미노산이 누락된 것을 제외하고 전장과 100% 동일할 수 있으며, 각 경우 위치 1에 신호 펩티드 및/또는 메티오닌이 있거나 없을 수 있다. 서열식별번호:2의 단편은 추가된 이종 신호 펩티드를 제외하고 전장 서열식별번호: 2의 길이의 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상을 포함할 수 있다. 단편은 바람직하게는 서열식별번호:2와 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 서열식별번호:2의 단편을 포함할 수 있고, 추가로 상동성 백분율을 계산할 때 포함되지 않는 N 말단 메티오닌 또는 이종 신호 펩티드를 포함한다. 단편은 N 말단 메티오닌 및/또는 면역글로불린 신호 펩티드, 예를 들어 IgE 또는 IgG 신호 펩티드와 같은 신호 펩티드를 더 포함할 수 있다. N 말단 메티오닌 및/또는 신호 펩티드는 단편에 연결될 수 있다.

핵산 서열 서열식별번호:1의 단편은 5' 및/또는 3' 말단에서 적어도 하나의 뉴클레오티드가 누락된 것을 제외하고 전장과 100% 동일할 수 있으며, 각 경우 위치 1에 신호 펩티드 및/또는 메티오닌을 인코딩하는 서열이 있거나 없을 수 있다. 단편은 추가된 이종 신호 펩티드를 제외하고 전장 인코딩 서열 서열식별번호:1의 길이의 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99%을 포함할 수 있다. 단편은 바람직하게는 항원 서열식별번호:2에 대해 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드를 인코딩하는 단편을 포함할 수 있으며, 선택적으로 상동성 백분율을 계산할 때 포함되지 않는 N 말단 메티오닌 또는 이종 신호 펩티드를 인코딩하는 서열을 더 포함한다. 단편은 N 말단 메티오닌 및/또는 면역글로불린 신호 펩티드, 예를 들어 IgE 또는 IgG와 같은 신호 펩티드에 대한 인코딩 서열을 더 포함할 수 있다. N 말단 메티오닌 및/또는 신호 펩티드를 인코딩하는 인코딩 서열은 단편에 연결될 수 있다.

서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 30개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 45개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 60개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 75개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 90개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 120개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 150개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 180개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 210개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 240개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 270개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 300개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 360개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 420개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 480개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 540개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 600개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 300개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 660개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 720개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 780개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 IgE 선도 서열에 대한 코딩 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:1의 단편은 IgE 선도 서열에 대한 코딩 서열을 포함하지 않는다. 단편은 60개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 75개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 90개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시 형태에서는 120개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 150개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 180개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 210개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 240개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 270개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 300개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 360개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 420개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 480개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 540개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 600개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 660개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 720개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 780개 미만의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 15개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 18개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 21개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 24개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 30개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 36개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 42개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 48개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 54개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 60개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 18개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 72개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 90개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 120개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 150개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 180개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 210개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 240개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 바람직하게는 면역우세 항원결정기를 인코딩하는 서열을 포함하여 260개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 IgE 선도 서열에 대한 코딩 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:2의 단편은 IgE 선도 서열에 대한 코딩 서열을 포함하지 않는다. 단편은 24개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 30개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 36개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 42개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 48개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 54개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 60개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 72개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 90개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 120개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 150개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 180개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 210개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 240개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 260개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다.

HPV18 E6-E7 융합

또 다른 양태는 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물을 제공하되, 상기 서열은 다음으로 구성된 군에서 선택된다. 서열식별번호:10를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:10를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:10를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편; 서열식별번호:10를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열.

일부 실시형태에서 조성물은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되는 HPV18 E6-E7 융합 항원을 포함한다: 서열식별번호:10를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:10를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:10를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편; 서열식별번호:10를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열.

본 발명의 또 다른 양태에서 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물이 제공되며, 상기 서열은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다. 서열식별번호:9, 서열식별번호:9과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:9의 단편; 서열식별번호:9의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열.

일부 실시형태에서 본원에 기재된 뉴클레오티드 서열에는 선도 서열이 없다. 일 실시형태에서 HPV18 E6-E7 융합 항원을 포함하는 뉴클레오티드 서열에는 선도 서열이 없다. 특히 서열식별번호:10를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 HPV18 E6-E7 융합 항원은 5' 말단에 선도 서열, 예를 들어, 서열식별번호:12을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 없다. 특히 뉴클레오티드 서열 서열식별번호:9를 포함하는 HPV16 E6-E7 융합 항원은 5' 말단에 선도 서열, 예를 들어 서열식별번호:11을 포함하는 뉴클레오티드 서열이 없다.

일부 실시형태에서 조성물은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되는 HPV18 E6-E7 융합 항원을 포함한다: 서열식별번호:14를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:14를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:14를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편; 서열식별번호:14를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열. 서열식별번호:14는 서열식별번호:10의 HPV18 E6-E7 융합 항원의 아미노산 서열을 포함하고 IgE 선도 서열을 더 포함한다.

본 발명의 또 다른 양태에서 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물이 제공되며, 상기 서열은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다. 서열식별번호:13, 서열식별번호:13과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:9의 단편; 서열식별번호:13의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열. 서열식별번호:13은 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 서열식별번호:9의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 IgE 선도 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.

서열식별번호:9는 HPV18 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 서열식별번호:13은 서열식별번호:9를 포함하고 HPV18 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 연결된 IgE 선도 서열을 더 포함한다. 서열식별번호:10은 HPV18 E6 및 E7 단백질의 공통 면역원에 대한 아미노산 서열을 포함한다. 서열식별번호:14는 서열식별번호:10을 포함하고 공통 면역원 서열에 연결된 IgE 선도 서열을 더 포함한다. IgE 선도 서열은 서열식별번호:12이고 서열식별번호:11가 인코딩할 수 있다. 서열식별번호:15는 발현을 위해 삽입된 서열식별번호:13을 갖는 플라스미드 pGX3002의 핵산 서열이다.

HPV16 E6-E7 융합 항원에 관한 추가 정보는 적어도 그 전문이 참조로 본원에 원용된 미국 특허 번호 8,389,706에서 확인할 수 있다.

일부 실시형태에서 백신은 서열식별번호:10, 또는 서열식별번호:10를 인코딩하는 핵산 분자를 포함한다. 일부 실시형태에서 백신은 서열식별번호:10을 인코딩하는 핵산 분자로서 서열식별번호:9를 포함한다. 일부 실시형태에서 백신은 서열식별번호:14 또는 서열식별번호:14를 인코딩하는 핵산 분자를 포함한다. 일부 실시형태에서 백신은 서열식별번호:14를 인코딩하는 핵산 분자로서 서열식별번호:13을 포함한다. 일부 실시형태에서 백신은 서열식별번호:15를 포함한다.

서열식별번호:10 또는 14의 단편은 N 및/또는 C 말단에서 하나 이상의 아미노산이 누락된 것을 제외하고 전장과 100% 동일할 수 있으며, 각 경우 위치 1에 신호 펩티드 및/또는 메티오닌이 있거나 없을 수 있다. 서열식별번호:10 또는 15의 단편은 추가된 이종 신호 펩티드를 제외하고 전장 서열식별번호:10 또는 14의 길이의 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상을 포함할 수 있다. 단편은 바람직하게는 서열식별번호:10 또는 14와 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 서열식별번호:10 또는 15의 단편을 포함할 수 있고 상동성 백분율을 계산할 때 포함되지 않는 N 말단 메티오닌 또는 이종 신호 펩티드를 더 포함한다. 단편은 N 말단 메티오닌 및/또는 면역글로불린 신호 펩티드, 예를 들어 IgE 또는 IgG 신호 펩티드와 같은 신호 펩티드를 더 포함할 수 있다. N 말단 메티오닌 및/또는 신호 펩티드는 단편에 연결될 수 있다.

핵산 서열 서열식별번호:9 또는 13의 단편은 5' 및/또는 3' 말단에서 적어도 하나의 뉴클레오티드가 누락된 것을 제외하고 전장과 100% 동일할 수 있으며, 각 경우 위치 1에 신호 펩티드 및/또는 메티오닌을 인코딩하는 서열이 있거나 없을 수 있다. 단편은 추가된 이종 신호 펩티드를 제외하고 전장 코딩 서열 서열식별번호:9 또는 13의 길이의 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상을 포함할 수 있다. 단편은 바람직하게는 서열식별번호:10 또는 14의 항원과 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드를 인코딩하는 단편을 포함할 수 있으며, 선택적으로 상동성 백분율을 계산할 때 포함되지 않는 N 말단 메티오닌 또는 이종 신호 펩티드를 인코딩하는 서열을 더 포함한다. 단편은 N 말단 메티오닌 및/또는 면역글로불린 신호 펩티드, 예를 들어 IgE 또는 IgG 신호 펩티드와 같은 신호 펩티드에 대한 인코딩 서열을 더 포함할 수 있다. N 말단 메티오닌 및/또는 신호 펩티드를 인코딩하는 인코딩 서열은 단편에 연결될 수 있다.

서열식별번호:9의 단편은 90개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:9의 단편은 180개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 270개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 360개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 450개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 540개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 630개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 720개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 770개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 본원에 제시된 것과 같은 서열식별번호:9의 단편은 IgE 선도 서열에 대한 인코딩 서열을 더 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:9의 단편은 IgE 선도 서열에 대한 코딩 서열을 포함하지 않는다. 서열식별번호:9의 단편은 180개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 270개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 360개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 450개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 540개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 630개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 690개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 760개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 780개 미만의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

서열식별번호:10의 단편은 30개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:10의 단편은 60개 이상의 아미노산, 일부 실시형태에서는 90개 이상의 아미노산, 일부 실시형태에서는 120개 이상의 아미노산, 일부 실시예에서는 150개 이상의 아미노산, 일부 실시형태에서는 180개 이상의 아미노산, 일부 실시형태에서는 210개 이상의 아미노산, 일부 실시형태에서는 240개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 단편은 90개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 120개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 150개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 180개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 210개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 240개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다.

서열식별번호:13의 모든 단편은 HPV 서열을 인코딩하는 코딩 서열을 포함하는데, 즉, 서열식별번호:13의 단편은 IgE 선도 펩티드를 인코딩하는 서열에 추가되는 서열을 더 포함한다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:13의 단편은 90개 이상의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:13의 단편은 180개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 270개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 360개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 450개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 540개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 630개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 720개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 810개 이상의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 830개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 서열식별번호:13의 단편은 180개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 270개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 360개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 450개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 540개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 630개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 690개 미만의 뉴클레오티드, 일부 일시형태에서는 720개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 780개 미만의 뉴클레오티드, 일부 실시형태에서는 840개 미만의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

서열식별번호:14의 단편은 HPV 서열을 포함하여 30개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서 서열식별번호:14의 단편은 HPV 서열을 포함하는 60개 이상의 아미노산, 일부 실시형태에서 HPV 서열을 포함하는 90개 이상의 아미노산, 일부 실시형태에서 HPV 서열을 포함하는 120개 이상의 아미노산, 일부 실시예에서는 HPV 서열을 포함하는 150개 이상의 아미노산, 일부 실시형태에서는 HPV 서열을 포함하는 180개 이상의 아미노산, 일부 실시형태에서 HPV 서열을 포함하는 210개 이상의 아미노산, 일부 실시형태에서는 HPV 서열을 포함하는 240개 이상의 아미노산, 일부 실시형태에서는 HPV 서열을 포함하는 270개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 단편은 HPV 서열을 포함하는 90개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 HPV 서열을 포함하는 120개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 HPV 서열을 포함하는 150개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 HPV 서열을 포함하는 180개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 HPV 서열을 포함하는 210개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 HPV 서열을 포함하는 240개 미만의 아미노산, 일부 실시형태에서는 HPV 서열을 포함하는 270개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다.

일 실시형태에서 HPV16 E6-E7 면역원, HPV18 E6-E7 면역원 또는 HPV16 E6-E7 면역원 또는 HPV16 E6-E7 면역원을 인코딩하는 핵산 분자는 IL-12와 함께 투여된다. 일 실시형태에서 IL-12는 합성 DNA 플라스미드로부터 인코딩된다.

본원은 제공된 핵산 서열을 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함해서 HPV에 대한 개체의 면역 반응을 유도함으로써 개체의 항문 고등급편평상피내병변을 치료 또는 예방하는 방법을 제시한다. 일부 실시형태에서 본원의 방법은 또한 전기천공으로 핵산 서열을 개체에게 도입하는 단계를 포함한다.

일부 양태는 본원에 제공된 아미노산 서열을 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함해서 HPV에 대한 개체의 면역 반응을 유도함으로써 개체의 항문 고등급편평상피내병변을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서 본원의 방법은 또한 전기천공으로 아미노산 서열을 개체에게 도입하는 단계를 포함한다.

개선된 백신은 항-HPV 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 특히 효과적이게 하는 항원결정기를 갖는 단백질을 인코딩하는 단백질 및 유전적 구조물로 구성된다. 따라서 치료적 또는 예방적 면역 반응을 유도하기 위해 백신이 제공될 수 있다. 일부 실시형태에서 면역원을 전달하는 수단은 DNA 백신, 재조합 백신, 단백질 서브유닛 백신, 면역원을 포함하는 조성물, 약독화 백신 또는 사백신이다. 일부 실시형태에서 백신은 하나 이상의 DNA 백신, 하나 이상의 재조합 백신, 하나 이상의 단백질 서브유닛 백신, 면역원을 포함하는 하나 이상의 조성물, 하나 이상의 약독화 백신 및 하나 이상의 사백신이다.

본 발명의 양태는 재조합 백신의 일부로서, 약독화 백신의 일부로서, 단리된 단백질 또는 벡터의 단백질 부분으로서, 플라스미드와 같은 핵산 분자 상의 단백질의 코딩 서열을 전달하는 방법을 제공한다.

본 발명의 일부 양태에 따라 개체를 예방적으로 및/또는 치료적으로 면역화하는 조성물 및 방법이 제공된다.

DNA 백신은 미국 특허 번호 5,593,972, 5,739,118, 5,817,637, 5,830,876, 5,962,428, 5,981,505, 5,580,859, 5,703,055, 5,676,594, 및 본원에 인용된 우선권 출원에 기술되어 있으며 이들 문헌의 각각이 본원에 참조로서 원용된다. 이들 출원에 기술된 전달 프로토콜 외에도 DNA를 전달하는 대체 방법이 미국 특허 번호 4,945,050 및 5,036,006에 기술되어 있으며, 두 특허 모두 본원에 참조로서 원용된다.

본 발명은 개선된 약독화 생백신, 개선된 사백신, 항원을 인코딩하는 외래 유전자를 전달하기 위해 재조합 벡터를 사용하는 개선된 백신, 뿐만 아니라 서브유닛 및 당단백질 백신에 관한 것이다. 약독화 생백신, 외래 항원을 전달하기 위해 재조합 벡터를 사용하는 백신, 서브유닛 백신 및 당단백질 백신의 예는 미국 특허 번호: 4,510,245; 4,797,368; 4,722,848; 4,790,987; 4,920,209; 5,017,487; 5,077,044; 5,110,587; 5,112,749; 5,174,993; 5,223,424; 5,225,336; 5,240,703; 5,242,829; 5,294,441; 5,294,548; 5,310,668; 5,387,744; 5,389,368; 5,424,065; 5,451,499; 5,453,3 64; 5,462,734; 5,470,734; 5,474,935; 5,482,713; 5,591,439; 5,643,579; 5,650,309; 5,698,202; 5,955,088; 6,034,298; 6,042,836; 6,156,319 및 6,589,529에 기술되어 있으며 이들 각각이 본원에 참조로서 원용된다.

세포에 의해 흡수될 때 유전적 구조(들)는 세포 내에서 기능하는 염색체외 분자로 존재할 수 있고/거나 세포의 염색체 DNA에 통합될 수 있다. DNA는 세포 내로 도입되어 플라스미드 또는 플라스미드 형태로 분리된 유전 물질로 남아 있을 수 있다. 아니면 염색체에 통합될 수 있는 선형 DNA가 세포 내로 도입될 수 있다. DNA를 세포에 도입할 때 염색체로의 DNA 통합을 촉진하는 시약이 추가될 수 있다. 통합을 촉진하는 데 유용한 DNA 서열도 DNA 분자에 포함될 수 있다. 아니면 RNA가 세포에 투여될 수 있다. 동원체, 텔로미어 및 복제 원점을 포함하는 선형 미니염색체로서 유전자 구조를 제공하는 것도 고려된다. 유전자 구조는 약독화된 살아있는 약독화된 살아 있는 미생물 내 유전 물질의 일부로서 또는 세포 내에 사는 재조합 미생물 벡터의 일부로서 남아 있을 수 있다. 유전자 구조는 유전 물질이 세포의 염색체에 통합되거나 염색체 외로 남아 있는 재조합 바이러스 백신 게놈의 일부일 수 있다. 유전자 구조에는 핵산 분자의 유전자 발현에 필요한 조절 요소가 포함된다. 요소에는 프로모터, 개시 코돈, 정지 코돈 및 폴리아데닐화 신호가 포함된다. 또한 표적 단백질이나 면역조절 단백질을 인코딩하는 서열의 유전자 발현을 위해서는 인핸서가 필요한 경우가 많다. 이들 요소는 원하는 단백질을 인코딩하는 서열에 작동 가능하게 연결되어야 하고, 조절 요소는 투여 대상 개체에게서 작동 가능해야 한다.

개시 코돈과 정지 코돈은 일반적으로 원하는 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열의 일부로 간주된다. 그러나 이러한 요소는 유전자 구조가 투여되는 개인에게 기능적이어야 한다. 개시 및 종결 코돈은 코딩 서열과 프레임 내에 있어야 한다.

사용되는 프로모터와 폴리아데닐화 신호는 개인의 세포 내에서 기능을 발휘해야 한다.

특히 인간을 위한 유전자 백신의 생산에서 본 발명을 실시하는 데 유용한 프로모터의 예에는 원숭이 바이러스 40(SV40), 생쥐유방종양 바이러스(MMTV) 프로모터, BIV 긴 말단 반복(LTR) 프로모터와 같은 인간 면역결핍 바이러스(MV)의 프로모터, 몰로니 바이러스, ALV, CMV 즉시 초기 프로모터와 같은 거대세포바이러스(CMV), 엡스타인 바 바이러스(EBV), 라우스 육종 바이러스(RSV)뿐만 아니라 인간 유전자로부터의 프로모터, 예를 들면 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴, 인간 메탈로티오네인 등을 포함하되 그로 국한되지 않는다.

특히 인간을 위한 유전자 백신의 생산에서 본 발명을 실시하는 데 유용한 폴리아데닐화 신호의 예에는 SV40 폴리아데닐화 신호 및 LTR 폴리아데닐화 신호가 포함되지만 이에 국한되지는 않는다. 특히 SV40 폴리아데닐화 신호로 지칭되는 pCEP4 플라스미드(Invitrogen, 캘리포니아주 샌 디에고)에 있는 SV40 폴리아데닐화 신호가 사용된다.

DNA 발현에 필요한 조절 요소 외에도 DNA 분자에는 다른 요소도 포함될 수 있다. 이러한 추가 요소에는 인핸서가 포함된다. 인핸서는 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 및 CMV, RSV 및 EBV와 같은 바이러스 인핸서를 포함하지만 이에 국한되지 않는 군으로부터 선택될 수 있다.

유전적 구조는 염색체외에서 구조를 유지하고 세포에서 구조의 다중 복사본을 생성하기 위해 포유동물 복제 원점을 제공할 수 있다. Invitrogen(캘리포니아주 샌 디에고)의 플라스미드 pVAX1, pCEP4 및 pREP4는 엡스타인 바(Epstein Barr) 바이러스 복제 원점과 통합 없이 높은 사본의 에피솜 복제를 생성하는 핵 항원 EBNA-1 코딩 영역을 포함한다.

면역화 적용과 관련된 일부 바람직한 실시형태에서 본 발명의 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열 및 이러한 표적 단백질에 대한 면역 반응을 더 향상시키는 단백질에 대한 유전자를 포함하는 핵산 분자(들)가 전달된다. 이러한 유전자의 예는 알파-인터페론, 감마-인터페론, 혈소판 유래 성장 인자(PDGF), TNFα, TNFβ, GM-CSF, 표피 성장 인자(EGF), IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12, IL-18, MHC, CD80, CD86 및 IL-15는 물론 신호 서열을 결실하고 선택적으로 IgE의 신호 펩티드를 포함하는 IL-15와 같은 다른 사이토카인 및 림포카인을 인코딩하는 유전자이다. 유용할 수 있는 다른 유전자에는 다음을 암호화하는 유전자가 포함된다. MCP-1, MIP-lα, MIP-1p, IL-8, RANTES, L-셀렉틴, P-셀렉틴, E-셀렉틴, CD34, GlyCAM-1, MadCAM-1, LFA-1, VLA-1, Mac-1, pl50.95, PECAM, ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, CD2, LFA-3, M-CSF, G-CSF, IL-4, IL-18의 돌연변이 형태, CD40, CD40L, 혈관 성장 인자, IL-7, 신경 성장 인자, 혈관 내피 성장 인자, Fas, TNF 수용체, Flt, Apo-1, p55, WSL-1, DR3, TRAMP, Apo-3, AIR, LARD, NGRF, DR4, DR5, KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR6, 카스파제 ICE, Fos, c-jun, Sp-1, Ap-1, Ap-2, p38, p65Rel, MyD88, IRAK, TRAF6, IkB, 불활성 NIK, SAP K, SAP-1, JNK, 인터페론 반응 유전자, NFkB, Bax, TRAIL, TRAILrec, TRAILrecDRC5, TRAIL-R3, TRAIL-R4, RANK, RANK 리간드, Ox40, Ox40 리간드, NKG2D, MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C, NKG2E, NKG2F, TAP1, TAP2 및 이의 기능성 단편.

어떤 이유로든 유전자 구조를 수용하는 세포를 제거하는 것이 바람직한 경우 세포 파괴의 표적으로 작용하는 추가 요소가 추가될 수 있다. 발현 가능한 형태의 헤르페스 티미딘 키나제(tk) 유전자가 유전자 구조에 포함될 수 있다. 간시클로비르라는 약물을 개체에게 투여할 수 있으며 해당 약물은 tk를 생성하는 모든 세포를 선택적으로 사멸시켜 유전적 구조를 지닌 세포를 선택적으로 파괴하는 수단을 제공한다.

단백질 생산을 최대화하기 위해 구조가 투여되는 세포에서의 유전자 발현에 매우 적합한 조절 서열을 선택할 수 있다. 더욱이 세포 내에서 가장 효율적으로 전사되는 코돈이 선택될 수 있다. 통상의 기술자라면 세포에서 기능적인 DNA 구조를 생산할 수 있다.

일부 실시형태에서 본원에 기술된 단백질에 대한 코딩 서열이 IgE 신호 펩티드에 연결된 유전자 구조가 제공될 수 있다. 일부 실시형태에서 본원에 기술된 단백질은 IgE 신호 펩티드에 연결된다.

단백질이 사용되는 일부 실시형태에서, 예를 들면, 통상의 기술자라면 기존의 기술을 사용해서 본 발명의 단리된 단백질을 생성할 수 있다. 단백질이 사용되는 일부 실시형태에서, 예를 들면, 통상의 기술자라면 기존의 기술을 사용해서 본원의 단백질을 인코딩하는 DNA 분자를 알려진 발현 시스템에 사용하기 위해서 상업적으로 이용 가능한 발현 벡터에 삽입할 수 있다. 예를 들면, 상용 플라스미드 pSE420(Invitrogen, 캘리포니아주 샌 디에고)을 대장균(E. coli)에서 단백질 생성에 사용할 수 있다. 상용 플라스미드 pYES2(Invitrogen, 캘리포니아주 샌 디에고)를 효모의 사카로미세스 세레비시아 종(S. cerevisiae strains)에서 단백질 생성에 사용할 수 있다. 상용 MAXBAC™ 완전 배큘로바이러스 발현 시스템(Invitrogen, 캘리포니아주 샌 디에고)은 예를 들면 곤충 세포에서 단백질 생성에 사용할 수 있다. 상용 플라스미드 pcDNA I 또는 pcDNA3(Invitrogen, 캘리포니아주 샌 디에고)은 중국 햄스터 난소 세포와 같은 포유류 세포에서 단백질 생성에 사용할 수 있다. 통상의 기술자라면 이들 상용 발현 벡터와 시스템 또는 기타 시스템을 갖고 통상의 기법과 즉시 이용 가능한 시작 물질을 사용해서 단백질을 생성할 수 있다. (예를 들면, Sambrook 등, Molecular Cloning a Laboratory Manual, 제2판 Cold Spring Harbor Press (1989)를 참고할 수 있는데 이 문헌이 본원에 참조로서 원용된다.) 따라서 원하는 단백질은 원핵세포 및 진핵세포 시스템에서 준비할 수 있으며 이들은 단백질의 처리된 형태의 한 스펙트럼을 생성한다.

통상의 기술자라면 다른 상용 발현 벡터와 시스템 또는 기타 시스템을 갖고 통상의 기법과 즉시 이용 가능한 시작 물질을 사용해서 단백질을 생성할 수 있다. 프로모터 및 폴리아데닐화 신호, 바람직하게는 인핸서와 같은 필수 제어 서열을 함유하는 발현 시스템은 다양한 숙주에 대해 쉽게 이용 가능하고 당업계에 공지되어 있다. 예를 들면, Sambrook 등, Molecular Cloning a Laboratory Manual, 제2판 Cold Spring Harbor Press (1989)를 참고할 수 있다. 유전적 구조는 해당 구조가 형질주입되는 세포주에서 기능적인 프로모터에 작동가능하게 연결된 단백질 코딩 서열을 포함한다. 구성적 프로모터의 예에는 거대세포바이러스 또는 SV40의 프로모터가 포함된다. 유도 프로모터의 예에는 생쥐 유방 백혈병 바이러스 또는 메탈로티오네인 프로모터가 포함된다. 통상의 기술자라면 즉시 입수할 수 있는 출발 물질로부터 본 발명의 단백질을 인코딩하는 DNA를 사용하여 세포에 형질주입하는 데 유용한 유전적 구조를 용이하게 생산할 수 있다. 단백질을 인코딩하는 DNA를 포함하는 발현 벡터는 적합성 숙주를 형질전환하는 데 사용되며, 그런 다음 상기 숙주를 외래 DNA의 발현이 일어나는 조건에서 배양 및 유지한다.

생산된 단백질은 세포를 용해하거나 적절한 그리고 통상의 기술자에게 공지된 배양 배지로부터 회수된다. 통상의 기술자는 잘 알려진 기법을 사용하여 이러한 발현 시스템을 사용하여 생산된 단백질을 분리할 수 있다. 상기와 같이 특정 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 천연물로부터 단백질을 정제하는 방법은 재조합 DNA 방법으로 생산된 단백질을 정제하는 데에도 동일하게 적용될 수 있다.

재조합 기술로 단백질을 생산하는 것 외에도 자동화된 펩티드 합성기를 사용하여 분리된 기본적으로 순수한 단백질을 생산할 수도 있다. 이러한 기술은 통상의 기술자에게 잘 알려져 있으며, DNA 인코딩 단백질 생산에 제공되지 않는 치환을 갖는 유도체인 경우 유용하다.

핵산 분자는 DNA 주입(DNA 접종이라고도 함), 재조합 아데노바이러스와 같은 재조합 벡터, 재조합 아데노바이러스 관련 바이러스 및 재조합 백시니아(vaccinia)를 포함하는 여러 잘 알려진 기술 중 하나를 사용하여 전달될 수 있다.

투여 경로에는 근육내, 비강내, 복강내, 피내, 피하, 정맥내, 동맥내, 안구내 및 경구뿐만 아니라 국소, 경피, 흡입 또는 좌제 또는 질, 직장, 요도, 협측 및 설하 조직의 세척을 통한 점막 조직을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 투여 경로는 근육내, 복강내, 피내 및 피하 주사를 포함한다. 유전적 구조는 전기천공 방법 및 장치, 전통적인 주사기, 바늘 없는 주입 장치 또는 "미세 발사체 유전자 총"을 포함하되 이에 국한되지 않는 수단으로 투여될 수 있다.

DNA 백신의 전달을 촉진하기 위해 바람직한 전기천공 장치 및 전기천공 방법의 예는 Draghia-Akli 등이 출원한 미국 특허 제7,245,963호, Smith 등이 출원한 미국 특허 제2005/0052630에 기술되어 있으며 상기 출원의 전체가 본원에 참조로서 원용된다. 또한 DNA 백신의 전달을 촉진하기 위한 전기천공 장치 및 전기천공 방법이 바람직하며 이는 2007년 10월 17일에 출원된 미국 특허 출원 번호 11/874072에 기술되어 있으며, 상기 출원은 35 USC 119(e)에 따라 2006년 10월 17일에 출원된 미국 가출원 번호 60/852,149 및 2007년 10월 10일에 출원된 60/978,982의 우선권을 주장하며, 상기 출원 각각의 전체가 본원에 참조로서 원용된다.

다음은 전기천공 기술을 사용하는 실시형태의 예이며 위에서 논의된 특허 참조 문헌에 더 자세히 논의되어 있다. 전기천공 장치는 포유동물의 원하는 조직에 사용자가 설정한 전류 입력값과 유사한 정전류를 생성하는 펄스 에너지를 전달할 수 있도록 구성된다. 전기천공 장치는 전기천공 구성요소와 전극 집합체 또는 핸들 집합체를 포함한다. 전기천공 구성요소는 제어기, 전류 파형 발생기, 임피던스 테스터, 파형 로거, 입력 요소, 상태 보고 요소, 통신 포트, 메모리 구성요소, 전원 및 전원 스위치를 포함한 전기천공 장치의 다양한 요소 중 하나 이상을 포함하고 통합할 수 있다. 전기천공 구성용소는 전기천공 장치의 한 요소로서 기능할 수 있고, 다른 요소는 전기천공 구성요소와 통신하는 별도의 요소(또는 구성요소)이다. 일부 실시형태에서 전기천공 구성요소는 전기천공 구성요소와 별개인 전기천공 장치의 또 다른 구성요소와 통신할 수 있는 전기천공 장치의 하나 이상의 요소로서 기능할 수 있다. 개선된 HPV 백신을 전달하기 위한 전기천공 기술의 사용은 하나의 전기기계 또는 기계 장치의 일부로 존재하는 전기천공 장치의 요소로 한정되지 않는데, 왜냐하면 상기 요소는 하나의 장치로 기능하거나 서로 통신하는 별도의 요소로 기능할 수 있기 때문이다. 전기천공 구성요소는 원하는 조직에 정전류를 생성하는 에너지 펄스를 전달할 수 있으며 피드백 메커니즘을 포함한다. 전극 집합체는 하나의 공간적 배열에서 복수의 전극을 갖는 전극 어레이를 포함하며, 여기서 전극 집합체는 전기천공 구성요소로부터 에너지 펄스를 수신하고 이를 전극을 통해 원하는 조직에 전달한다. 복수의 전극 중 적어도 하나는 에너지 펄스의 전달 동안 중성이며 원하는 조직의 임피던스를 측정하고 임피던스를 전기천공 구성요소에 전달한다. 피드백 메커니즘은 측정된 임피던스를 수신할 수 있고 전기천공 구성요소에 의해 전달되는 에너지 펄스를 조정하여 정전류를 유지할 수 있다.

일부 실시형태에서 복수의 전극은 분산된 패턴으로 에너지 펄스를 전달할 수 있다. 일부 실시형태에서 복수의 전극은 프로그래밍된 시퀀스 하에서 전극의 제어를 통해 분산된 패턴으로 에너지 펄스를 전달할 수 있고, 프로그래밍된 시퀀스는 사용자가 전기천공 구성요소에 입력한다. 일부 실시형태에서 프로그래밍된 시퀀스는 순차적으로 전달되는 복수의 펄스를 포함하며, 여기서 복수의 펄스 중 각 펄스는 임피던스를 측정하는 하나의 중성 전극을 갖는 적어도 두 개의 활성 전극에 의해 전달되고, 복수의 펄스 중 후속 펄스는 임피던스를 측정하는 하나의 중성 전극이 있는 적어도 두 개의 활성 전극 중 다른 하나에 의해 전달된다.

일부 실시형태에서 피드백 메커니즘은 하드웨어 또는 소프트웨어로 수행된다. 피드백 메커니즘은 아날로그 폐루프 회로로 수행되는 것이 바람직하다. 바람직하게는 이 피드백은 50 μs, 20 μs, 10 μs 또는 1 μs마다 발생하지만, 바람직하게는 실시간 피드백 또는 순간적(즉, 응답 시간을 결정하기 위해 이용 가능한 기술에 의해 결정되는 실질적으로 순간적)이다. 일부 실시형태에서 중성 전극은 원하는 조직의 임피던스를 측정하고 피드백 메커니즘에 임피던스를 전달하며, 피드백 메커니즘은 임피던스에 응답하고 에너지 펄스를 조정하여 미리 설정된 전류와 유사한 값으로 정전류를 유지한다. 일부 실시형태에서 피드백 메커니즘은 에너지 펄스가 전달되는 동안 연속적이고 순간적으로 정전류를 유지한다.

일부 실시형태에서 핵산 분자는 폴리뉴클레오티드 기능 인핸서 또는 유전자 백신 촉진제의 투여와 함께 세포에 전달된다. 폴리뉴클레오티드 기능 인핸서는 미국 특허 번호 5,593,972, 5,962,428 및 1994년 1월 26일에 출원된 국제 특허 출원 번호 PCT/US94/00899에 기술되어 있으며, 상기 문헌 각각이 본원에 참조로서 원용된다. 유전자 백신 촉진제는 1994년 4월 1일에 출원된 특허 번호 021,579에 기술되어 있으며 상기 특허가 본원에 참조로서 원용된다. 핵산 분자와 함께 투여되는 보조작용제는 핵산 분자와의 혼합물로서 투여되거나, 핵산 분자의 투여와 동시에 또는 그 전 또는 후에 별도로 투여될 수 있다. 또한 형질주입제 및/또는 복제제 및/또는 염증제 기능을 할 수 있고 GVF와 함께 투여될 수 있는 다른 제제는 성장 인자, α-인터페론, 감마-인터페론, GM-CSF와 같은 사이토카인 및 림포카인, 혈소판 유래 성장 인자(PDGF), TNF, 표피 성장 인자(EGF), IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 및 IL-15뿐만 아니라 섬유아세포 성장 인자, 면역자극 복합체(ISCOMS), 프로인트 불완전 보조제, 모노포스포릴 지질 A(WL)를 포함하는 LPS 유사체, 퀴논 유사체와 같은 표면 활성제, 스쿠알렌과 같은 소포체를 포함하며 히알루론산은 유전자 구조와 함께 투여되는 데 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서 면역 조절 단백질은 GVF로 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서 핵산 분자는 전달/흡수를 향상시키기 위해 PLG와 함께 제공된다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약 1 나노그램 내지 약 2000 마이크로그램의 DNA를 포함한다. 일부 바람직한 실시형태에서 본 발명에 따른 약학적 조성물은 약 5 나노그램 내지 약 1000 마이크로그램의 DNA를 포함한다. 일부 바람직한 실시형태에서 약학적 조성물은 약 10 나노그램 내지 약 800 마이크로그램의 DNA를 함유한다. 일부 바람직한 실시형태에서 약학적 조성물은 약 0.1 내지 약 500 마이크로그램의 DNA를 함유한다. 일부 바람직한 실시형태에서 약학적 조성물은 약 1 내지 약 350 마이크로그램의 DNA를 함유한다. 일부 바람직한 실시형태에서 약학적 조성물은 약 25 내지 약 250 마이크로그램의 DNA를 함유한다. 일부 바람직한 실시형태에서 약학적 조성물은 약 100 내지 약 200 마이크로그램의 DNA를 함유한다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 사용되는 투여 방식에 따라 제형화된다. 약학적 조성물이 주사 가능한 약제학적 조성물인 경우, 이는 무균이고 발열원이 없으며 미립자가 없다. 등장성 제제를 사용하는 것이 바람직하다. 일반적으로 등장성을 위한 첨가제에는 염화나트륨, 포도당, 만니톨, 소르비톨 및 유당이 포함될 수 있다. 일부 경우에 인산염 완충 식염수와 같은 등장성 용액이 바람직하다. 안정제에는 젤라틴과 알부민이 포함된다. 일부 실시형태에서 혈관수축제가 제제에 첨가된다.

본원에서는 이를 필요로 하는 대상에서 인간 유두종바이러스(HPV) 16형 또는 HPV 18형 관련 항문 또는 항문/항문주위 고등급상피내병변(HSIL)을 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본 발명에 따른 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하거나, 그로 구성되거나, 그를 필수적으로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에 따라 약학적 조성물은 VGX-3100 또는 이의 바이오시밀러이다.

또한 본원은 이를 필요로 하는 대상에서 인유두종바이러스(HPV) 16형 또는 HPV 18형 관련 항문 또는 항문/항문주위 고등급상피내 병변(HSIL)을 치료하는 방법에 사용하기 위한 VGX-3100이 제공하며. 상기 방법은 본 발명에 따른 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하거나, 그로 구성되거나, 그를 필수적으로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에 따라 약학적 조성물은 VGX-3100 또는 이의 바이오시밀러이다.

또한 인간 유두종 바이러스(HPV) 16형 또는 HPV 18형 관련 항문 또는 항문/항문 주위 고등급상피내병변(HSIL)을 치료하기 위한 약제 제조에서 VGX-3100의 용도가 제공되며, 상기 방법은 본 발명에 따른 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하거나, 그로 구성되거나, 그를 필수적으로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에 따라 약학적 조성물은 VGX-3100 또는 이의 바이오시밀러이다.

또한 이를 필요로 하는 대상에서 항문 또는 항문/항문주위 HSIL의 조직병리학적 퇴행을 개선하는 방법이 본원에 제공되며 상기 방법은 본 발명에 따른 약학적 조성물의 치료 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하거나, 그로 구성되거나, 그를 필수적으로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에 따라 약학적 조성물은 VGX-3100 또는 이의 바이오시밀러이다. 특정 실시형태에서 항문 또는 항문/항문주위 HSIL의 조직병리학적 퇴행의 개선은 대상 또는 대상 집단의 미치료 상태에 상대적이다. 특정 실시형태에서 항문 또는 항문/항문주위 HSIL의 조직병리학적 퇴행의 개선은 표준 치료를 통한 대상 집단 중 한 대상의 치료에 상대적이다.

또한 항문 또는 항문/항문주위 HSIL을 앓고 있는 대상에서 HPV-16 및/또는 HPV-18의 바이러스 제거를 개선하는 방법이 본원에 제공되며, 상기 방법은 대상에게 본 발명에 따른 약학적 조성물의 치료 유효량을 투여하는 단계를 포함하거나, 그로 구성되거나, 필수적으로 포함한다. 일부 실시형태에 따라 약학적 조성물은 VGX-3100 또는 이의 바이오시밀러이다.

또한 HPV 16형 또는 HPV 18형 관련 항문 또는 항문주위 HSIL을 앓고 있는 대상에서 항문 또는 항문/항문주위 HSIL의 정상으로의 부분적인 또는 완전한 조직병리학적 퇴행 또는 조직병리학적 비진행을 달성하는 방법이 본원에 제공되며, 상기 방법은 본 발명에 따른 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하거나, 그로 구성되거나 필수적으로 포함한다. 일부 실시형태에 따라 약학적 조성물은 VGX-3100 또는 이의 바이오시밀러이다. 특정 실시형태에서 항문 또는 항문/항문주위 HSIL의 정상으로의 부분적 또는 완전한 조직병리학적 퇴행 또는 조직병리학적 비진행의 달성은 대상 또는 대상 집단에 대한 위약의 투여에 상대적이다. 특정 실시형태에서 항문 또는 항문/항문주위 HSIL의 정상으로의 부분적 또는 완전한 조직병리학적 퇴행 또는 조직병리학적 비진행의 달성은 대상 또는 대상 집단에 대한 미치료에 상대적이다. 특정 실시형태에서 항문 또는 항문/항문주위 HSIL의 정상으로의 부분적 또는 완전한 조직병리학적 퇴행 또는 조직병리학적 비진행의 달성은 표준 치료에 의한 대상체 집단의 치료에 상대적이다.

또한 HPV 16형 또는 HPV 18형 관련 항문 또는 항문주위 HSIL을 보유하는 대상에서 비항문 해부학적 위치로부터 HPV 16형 및/또는 HPV 18형 감염의 제거를 개선하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 대상에게 본 발명에 따른 약학적 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하거나, 그로 구성되거나, 그를 필수적으로 포함한다. 일부 실시형태에 따라 약학적 조성물은 VGX-3100 또는 이의 바이오시밀러이다.

일부 실시형태에서 VGX-3100은 근육내 주사에 이어 전기천공법에 의해 대상에 투여된다. 특정 실시형태에서 VGX-3100은 6 mg의 용량으로 대상에 투여된다. 또 다른 실시형태에서 VGX-3100은 12주에 걸쳐 대상에 3회 투여된다. 또 다른 실시형태에서 VGX-3100은 40주에 걸쳐 대상에 4회 투여된다. 또 다른 실시형태에서 VGX-3100은 150 mM 염화나트륨 및 15 mM 시트르산나트륨 중에 6 mg/ml의 농도로 제제화된다.

특정 실시형태에서 VGX-3100의 투여는 HPV-16 및/또는 HPV-18의 바이러스 제거 및/또는 항문 HSIL의 조직병리학적 퇴행을 초래한다. 또 다른 실시형태에서 VGX-3100의 투여는 항문 HSIL의 조직병리학적 퇴행을 초래한다. 또 다른 실시형태에서 VGX-3100의 투여는 HPV-16 및/또는 HPV-18의 바이러스 제거를 초래한다. 일부 실시형태에서 VGX-3100의 투여는 항문 HSIL이 정상으로 완전히 조직병리학적 퇴행하도록 한다. 또 다른 실시형태에서 VGX-3100의 투여는 항문 HSIL의 정상으로의 완전한 조직병리학적 퇴행 그리고 및 HPV-16 및/또는 HPV-18의 바이러스 제거를 초래한다. 또 다른 실시형태에서 VGX-3100의 투여는 조직병리학적 비진행을 초래한다. 일부 실시형태에서 VGX-3100의 투여는 비항문 해부학적 위치로부터 HPV-16 및/또는 HPV-18 감염을 제거하는 결과를 가져온다. 또 다른 실시형태에서 VGX-3100의 투여는 기준점과 비교하여 평가한바, VGX-3100의 제3차 투여 후 및 VGX-3100 투여 후 36주차 VGX-3100에 대한 체액성 및 세포성 면역 반응을 개선시킨다.

또 다른 실시형태에서 VGX-3100의 투여는 기준점과 비교하여 평가한바, VGX-3100의 제4차 투여 후 VGX-3100에 대한 체액성 및 세포성 면역 반응을 개선시킨다.

일부 실시형태에서 VGX-3100 투여 결과는 VGX-3100 투여 후 36주차에 평가된다.

본 발명의 일부 실시형태에 따라 면역 반응을 유도하는 방법이 제공된다. 백신은 단백질 기반, 약독화 생백신, 세포 백신, 재조합 백신 또는 핵산 또는 DNA 백신일 수 있다. 일부 실시형태에서 점막 면역 반응을 유도하는 방법을 포함하여, 면역원에 대해 개체에게서 면역 반응을 유도하는 방법은 개체에게 CTACK 단백질, TECK 단백질, MEC 단백질 및 이의 기능적 단편 또는 이의 발현 가능한 코딩 서열 중 하나 이상과 조합하여 본 발명의 단백질을 인코딩하는 분리된 핵산 분자 및/또는 본 발명의 단백질을 인코딩하는 재조합 백신 및/또는 본 발명의 단백질을 인코딩하는 서브유닛 백신 및/또는 약독화 생백신 및/또는 사백신을 투여하는 단계를 포함한다. CTACK 단백질, TECK 단백질, MEC 단백질 및 이의 기능성 단편 중 하나 이상은 면역원을 인코딩하는 분리된 핵산 분자 및/또는 면역원을 인코딩하는 재조합 백신 및/또는 면역원을 포함하는 서브유닛 백신 및/또는 약독화 생백신 및/또는 사백신의 투여 전에, 그와 동시에, 또는 그 후에 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서 다음으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 단백질을 인코딩하는 단리된 핵산 분자가 제공된다: CTACK, TECK, MEC 및 이들의 기능적 단편이 개체에게 투여된다.

본 발명은 다음 실시예를 통해서 더 상세하게 기술된다. 본 실시예는 본 발명의 실시형태를 나타내기는 하지만 단지 예시로 제공된 것으로 이해되어야 한다. 상기 설명으로부터 통상의 기술자는 본 발명의 본질적인 특징을 쉽게 확인할 수 있고, 그 사상과 범위를 벗어나지 않고도 본 발명을 다양한 용도 및 조건에 맞게 다양하게 변경 및 수정할 수 있다. 따라서 본원에 기재된 것들에 더하여 본 발명의 다양한 수정은 전술한 설명으로부터 통상의 기술자에게 자명하게 될 것이다. 이러한 수정은 첨부된 청구범위에 포함되는 것으로 한다.

본 명세서 전반에 걸쳐 인용된 각각의 미국 특허, 미국 출원 및 참고문헌은 그 전체가 참조로 본원에 원용된다.

실시형태:

실시형태 1. 개체에게서 고등급편평상피내병변을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 상기 개체에게 HPV16 항원과 HPV18 항원으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 하나의 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 분자를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법.

실시형태 2. 실시형태 1에 있어서, 상기 HPV16 항원은 HPV16 E6-E7 융합 항원인 방법.

실시형태 3. 실시형태 1 또는 2에 있어서, 상기 HPV16 항원이 서열식별번호:5의 아미노산 서열 및 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 방법.

실시형태 4. 실시형태 1 내지 3에 있어서, 상기 HPV16 항원이 서열식별번호:17의 뉴클레오티드 서열 및 서열식별번호:19의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 5. 실시형태 1 내지 4에 있어서, 상기 HPV18 항원이 HPV18 E6-E7 융합 항원인 방법.

실시형태 6. 실시형태 1 내지 5에 있어서, 상기 HPV18 항원이 서열식별번호:21의 아미노산 서열 및 서열식별번호:22의 아미노산 서열을 포함하는 방법.

실시형태 7. 실시형태 1 내지 6에 있어서, 상기 조성물이 HPV16 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열 및 HPV18 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 8. 실시형태 1 내지 7에 있어서, 상기 핵산 분자가

서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열;

서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열;

서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편;

서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 9. 실시형태 8에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 98%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 10. 실시형태 8에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 11. 실시형태 1 내지 10에 있어서, 상기 핵산 분자가

서열식별번호:1의 뉴클레오티드 19-795를 포함하는 뉴클레오티드 서열;

서열식별번호:1의 뉴클레오티드 1-795를 포함하는 뉴클레오티드 서열;

서열식별번호:1을 포함하는 뉴클레오티드 서열;

서열식별번호:1과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열;

서열식별번호:1의 단편;

서열식별번호:1의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 12. 실시형태 11에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:1에 대해서 적어도 98%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 13. 실시형태 11에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:1에 대해서 적어도 99%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 14. 실시형태 1 내지 13 중 어느 한 형태에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:23의 뉴클레오티드 서열 및 서열식별번호:24의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 15. 실시형태 1 내지 14에 있어서, 상기 핵산 분자가

서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열;

서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열;

서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편;

서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 16. 실시형태 15에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:10를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 98%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 17. 실시형태 15에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:10를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 18. 실시형태 1 내지 7 또는 14 내지 17 중 어느 한 형태에 있어서, 상기 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 상기 핵산 분자가 선도 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하되, 상기 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 상기 뉴클레오티드 서열이 선도 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하거나, 상기 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 상기 뉴클레오티드 서열이 선도 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하고, 상기 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 상기 뉴클레오티드 서열이 선도 서열을 인코딩하는 상기 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는 방법.

실시형태 19. 실시형태 1 내지 18에 있어서, 상기 핵산 분자가

서열식별번호:9의 뉴클레오티드 1-780을 포함하는 뉴클레오티드 서열;

서열식별번호:9를 포함하는 뉴클레오티드 서열;

서열식별번호:9와 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열;

서열식별번호:9의 단편;

서열식별번호:9의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 20. 실시형태 19에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:9에 대해서 적어도 98%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 21. 실시형태 19에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:9에 대해서 적어도 99%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 22. 실시형태 1 내지 21 중 어느 한 형태에 있어서, 적어도 하나의 핵산 분자가 적어도 하나의 플라스미드를 포함하는 방법.

실시형태 23. 실시형태 1 내지 22 중 어느 한 형태에 있어서, 조성물이 약제학적 조성물인 방법.

실시형태 24. 실시형태 1 내지 23 중 어느 한 형태에 있어서, 보조제를 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 더 포함하는 방법.

실시형태 25. 실시형태 1 내지 24 중 어느 한 형태에 있어서, HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자 및 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 개체에게 투여하는 단계를 포함하되,

상기 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편; 및 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택되며,

HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편; 및 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.

실시형태 26. 실시형태 25에 있어서, 하나의 핵산 분자가 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열 및 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.

실시형태 27. 실시형태 1 내지 26 중 어느 한 형태에 있어서, 상기 핵산 분자를 개체에게 투여하는 단계가 전기천공을 포함하는 방법.

실시형태 28. 실시형태 1 내지 27 중 어느 한 형태에 있어서, 상기 조성물이 근육내로 투여되는 방법.

실시형태 29. 실시형태 1 내지 28 중 어느 한 형태에 있어서, 상기 조성물이 VGX-3100 또는 이의 바이오시밀러를 포함하는 방법.

실시형태 30. 실시형태 1 내지 29 중 어느 한 형태에 있어서, 상기 조성물이 3회 또는 4회로 투여되는 방법.

실시형태 31. 실시형태 30에 있어서, 상기 조성물의 상기 제2차 투여가 상기 제1 투여 후 약 4주차에 투여되는 방법.

실시형태 32. 실시형태 30에 있어서, 상기 제3차 투여가 상기 제1차 투여 후 약 12주차에 투여되는 방법.

실시형태 33. 실시형태 30에 있어서, 상기 제4차 투여가 상기 제1차 투여 후 약 40주차에 투여되는 방법.

실시형태 34. 실시형태 1 내지 33 중 어느 한 형태에 있어서, 상기 HSIL이 항문 또는 항문/항문주위 HSIL인 방법.

실시형태 35. 실시형태 34에 있어서, 상기 선도 서열이 서열식별번호:7의 상기 아미노산 서열을 포함하는 방법.

실시형태 36. 실시형태 18에 있어서, 상기 선도 서열이 서열식별번호:11의 상기 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자로 인코딩되는 방법.

실시예

본 발명은 하기 실시예를 통해서 더 상세하게 기술된다. 이들 실시예는 본 발명의 실시형태를 나타내기는 하지만 단지 예시로 제공된 것으로 이해되어야 한다. 상기 설명으로부터 통상의 기술자는 본 발명의 본질적인 특징을 쉽게 확인할 수 있고, 그 사상과 범위를 벗어나지 않고도 본 발명을 다양한 용도 및 조건에 맞게 다양한 변경 및 수정할 수 있다. 따라서 본원에 기재된 것들에 더하여 본 발명의 다양한 수정은 전술한 설명으로부터 통상의 기술자에게 자명하게 될 것이다. 이러한 수정은 첨부된 청구범위에 포함되는 것으로 한다.

실시예 1: 인간 면역결핍 바이러스(HIV)-1/2에 대한 혈청 음성인 개체에게서 HPV-16 및/또는 HPV-18 관련 항문 또는 항문/항문 주위, 고등급편평상피내병변(HSIL) 치료를 위해 근육 내(IM)에 이어 전기천공법(EP)으로 전달되는 VGX-3100 (임상시험_gov 식별자: NCT03499795)

이는 인간면역결핍 바이러스(HIV)에 대해서 음성이고 인간 유두종 바이러스(HPV)-16 및/또는 HPV-18과 관련된 항문/항문 주위 고등급 편평상피내병변(HSIL)이 조직학적으로 확진된 성인 남성과 여성에게 근육내(IM) 주사에 이어서 전기천공(EP)을 통해 투여된 VGX-3100의 효능에 대한 제2상 오픈라벨 임상시험이다.

항문 고등급편평상피내병변(HSIL) 관리는 여전히 어려운 과제로 남아 있다. VGX-3100은 HPV16 및 18 E6/E7 단백질을 인코딩하는 DNA 기반 HPV16/18 특이적 면역치료제이며 항문 HSIL 치료를 위한 오픈라벨 제2 임상연구에서 평가되었다(도 1).

포함 기준:

18세 이상;

1차 투여 후 30일 이내에 HIV-1/2에 대한 선별검사 음성;

HSIL 검체로부터 중합효소연쇄반응(PCR)을 통한 선별검사 시 항문 또는 항문/항문주위 HPV-16/18 감염 확진;

선별검사에서 조직학적으로 HSIL로 확진된 적어도 하나의 항문 또는 항문/항문 주위(AIN2/3 및/또는 PAIN2/PAIN3) 병변;

조직학 검체 채취 절차(예를 들면, 절제 또는 생검)에 적합한 후보자;

여성 피험자는 폐경 후이거나, 수술적으로 불임이거나, 선별검사부터 연구 약물의 마지막 투여 후 1개월(12주차 또는 40주차)까지 연간 실패율이 1% 미만인 지속적인 금욕 또는 피임법 사용을 통해 임신을 피하는 데 동의해야 한다

아이를 낳을 수 있는 남성은 연구 전, 연구 참여 기간 동안, 그리고 연구 약물의 마지막 투여 후 1개월 동안 이성애 성교 중 또는 지속적인 금욕 중 적어도 한 가지 형태의 피임법을 사용하는 데 동의해야 한다.

정상 선별 심전도(ECG).

제외 기준:

치료되지 않은 미세침윤성 또는 침윤성 암;

생검으로 입증된 질상피내종양(VAIN)이 있지만 VAIN에 대한 의료적 관리 및/또는 치료를 받고 있지 않은 경우,

생검으로 입증된 외음부상피내종양(VIN)이 있지만 VIN에 대한 의료적 관리 및/또는 치료를 받고 있지 않은 경우,

생검으로 입증된 자궁경부상피내종양(CIN) 2/3이 있지만 CIN에 대한 의료적 관리 및/또는 치료를 받고 있지 않은 경우,

생검으로 입증된 음경상피내종양(PIN)이 있지만 PIN에 에 대한 의료적 관리 및/또는 치료를 받고 있지 않은 경우,

생검 기구로 샘플링할 수 없는 항문 또는 항문/항문 주위 HSIL;

선별검사에서 완전히 시각화할 수 없는 항문 내 및/또는 항문 주위 병변,

완전하고 만족스러운 고해상도 항문경 검사(HRA)를 받을 수 없음;

선별검사 4주 이내에 항문 또는 항문/항문주위 HSIL에 대한 치료(예: 수술);

임신, 모유 수유 또는 연구 약물의 마지막 투여 후 1개월 이내에 임신을 고려하는 경우;

0일차 전 45일 이내에 CTCAE(Common Toxicity Criteria for Adverse Events) 버전 4.03에 따라 1등급을 초과하거나 1등급 미만이지만 시험자가 임상적으로 유의하다고 간주하는 비정상적인 임상 실험실 값이 존재하는 경우;

기저 질환이나 치료로 인한 면역억제;

이전 치료 HPV 예방접종 이력:

VGX-3100 투여 후 2주 이내에 연구와 관련되지 않은 비생백신을 접종한 경우;

VGX-3100 투여 후 4주 이내에 연구와 관련되지 않은 생백신(예: 홍역 백신)을 접종한 경우;

시험자 판단에 따라 치료된 전기천공법에 의해 부정적인 영향을 받을 수 있는 심각한 급성 또는 만성 의학적 질병;

시험자의 판단에 따라 피험자의 안전을 위태롭게 하거나 연구 평가 또는 평가변수 평가를 저해하거나 연구 결과의 타당성에 영향을 미칠 수 있는 임상적으로 유의미하고 의학적으로 불안정한 질병의 현재 또는 병력;

0일차로부터 4주 이내에 이루어진 이전 대수술;

연구용 화합물 또는 장치를 이용한 중재적 연구에 참여;

시험자의 의견에서 피험자의 안전이나 평가변수의 평가에 영향을 미칠 수 있는 모든 질병 또는 상태.

1차 결과 측정:

36주차에 항문 또는 항문/항문주위 HSIL의 조직학적 증거가 없고 HPV-16/18의 증거가 없는 참가자의 비율 [기간: 36주차에]

2차 결과 측정:

각 투여 후 7일 동안 국소 및 전신 안전 사건의 수[기간: 0 내지 7일(0일차 투여 후 7일), 22 내지 29일(4주차 투여 후 7일) 및 78 내지 85일(12주차 투여 후 7일)]

이상사례 수[기간: 기준점부터 88주차 방문까지]

36주차 방문 시 조직학에서 항문 또는 항문/항문주위 HSIL의 증거가 없는 참가자의 비율[기간: 36주차에]

36주차 방문 시 유형별 HPV 테스트를 통해 항문 내 및/또는 항문 주위 조직에서 HPV-16/18의 증거가 없는 참가자의 비율[기간: 36주차에]

36주차, 64주차, 88주차 방문 시 특정 HPV 테스트를 통해 항문 내 면봉 채취에서 HPV-16/18의 증거가 없는 참가자의 비율[기간: 36주차, 64주차, 88주차]

36주차 방문 시 조직학상 항문 또는 항문/항문주위 저등급편평상피내 병변(LSIL) 또는 HSIL의 증거가 없는 참가자의 비율[기간: 36주차에]

36주차 방문에서 조직학 기준점에서 항문 또는 항문/항문주위 HSIL이 암종으로 진행되지 않은 참가자의 비율[기간: 기준점부터 36주차까지]

36주차, 64주차 및 88주차 방문에서 연구자가 결정한 항문 내 및/또는 항문 주위 병변 수의 기준점 대비 백분율 감소[기간: 기준점부터 36주차, 64주차, 88주차까지]

36주, 64주 및 88주 방문에서 시험자가 결정한 항문주위 병변 크기의 기준점 대비 백분율 감소[기간: 기준점부터 36주차, 64주차, 88주차까지]

유세포분석 반응 크기[시간 범위: 기준점 및 15주차]

36주차에 항문 또는 항문/항문주위 HSIL의 조직학적 증거가 없거나 HPV-16/18의 증거가 없는 참가자의 비율[기간: 36주차에]

임상시험용 의약품

일반 이름: VGX-3100

화학명: pGX3001 플라스미드의 경우 3782개 염기쌍, pGX3002 플라스미드의 경우 3824개 염기쌍으로 구성된 원형, 이중 가닥, 데옥시리보핵산.

식별 이름: 합성 CMV 프로모터가 제어하는 HPV 16 및 18-E6 및 E7 인코딩 전사 단위와 대장균에서 복제 및 선택에 필요한 요소,즉 pUC 복제 원점(pUC Ori) 및 카나마이신 저항 유전자를 포함하는 진핵생물 발현 플라스미드 유전자(Kan R).

상세한 설명: VGX-3100, HPV 치료 백신은 두 개의 플라스미드를 동일한 양으로 결합한 것이다(즉, 6 mg 용량은 pGX3001 및 pGX3002 플라스미드를 각각 3 mg씩 전달한다). a) pGX3001: p16ConE6E7, 거대세포바이러스 조기반응(CMV) 프로모터의 제어 하에 합성 HPV16 공통 E6 및 E7 융합 유전자("공통 HPV 16-6&7")를 pVAX1 백본에 인코딩하는 플라스미드(Invitrogen, 캘리포니아주 칼즈배드), 및 b) pGX3002: p18ConE6E7, 거대세포바이러스 조기반응(CMV) 프로모터의 제어 하에 합성 HPV18 공통 E6 및 E7 융합 유전자("공통 HPV 18-6&7")를 pVAX1 백본에 인코딩하는 플라스미드(Invitrogen, 캘리포니아주 칼즈배드). VGX-3100은 WO2014/165291에 기술되어 있으며, 상기 출원의 전체가 참조로 본원에 원용된다. 핵산 및 아미노산 공통 서열은 각각 표 1 및 표 2에 제시되어 있다.

VGX-3100 공통 서열(핵산)

공통 융합 유전자	서열식별번호
공통 HPV 16-6&7	1
공통 HPV 18-6&7	13

VGX-3100 공통 서열(아미노산)

공통 융합 유전자	서열식별번호
공통 HPV 16-6&7	2
공통 HPV 18-6&7	14

HPV16/18 양성 항문 HSIL이 있는 피험자는 근육 내로 VGX-3100을 3 내지 4회 투여한 후 CELLECTRA^® 전기천공법을 받았다. 피험자들은 HSIL 생검을 받았고 조직학 기반 임상 평가변수는 VGX-3100 치료 개시 후 36주차에 평가되었다. 평가변수에는 항문 HSIL의 해소와 항문 조직에서 HPV16/18의 제거(1차), 병변 수와 크기의 감소(2차)가 포함되었다. 또한 기준점에서 HPV에 대한 항문 면봉과 절제된 조직 간의 일치성을 입증하기 위한 샘플을 수집하고 SPF10-LiPA25(라인 프로브 분석) 버전 1 시스템(조직) 및 Roche cobas® HPV 테스트(면봉)를 사용하였다.

도 2는 36주차와 64주차의 백신 효능에대한 데이터를 제공한다.

도 3은 VGX-3100이 HPV16 및 HPV18 항원 모두에 대해 세포성 면역 반응을 유도한다는 것을 입증하는 데이터를 제공한다.

도 4는 VGX-3100이 HPV16E7 및 HPV18E7 항원에 대한 체액성 면역 반응을 유도한다는 것을 입증하는 데이터를 제공한다.

도 5는 VGX-3100 백신의 안전성에 대한 데이터를 제공한다.

항문 HSIL의 까다로운 특성을 고려할 때 VGX-3100과 같은 면역치료적 방법은 해당 질병의 관리에서 상당한 발전을 가져올 것이다. VGX-3100은 내약성이 있고 면역원성이 있으며 HPV-16/18 관련 항문 HSIL에 치료 효과가 있다. 또한 항문 면봉과 조직에서 HPV-16/18을 검출한 결과가 매우 일치하며(데이터 미도시) 항문 병변을 검출하기 위한 덜 침습적인 선별 전략을 제공하여 선별 및 모니터링을 단순화할 수 있다.

실시예 2: 서열

HPV 유전자형 16 공통 E6-E7 DNA 서열(서열식별번호:1)

atggactg gacctggatc ctgttcctgg tggccgccgc cacacgggtg

cacagcttcc aggaccccca ggagagcggc agaaagctgc ctcagctgtg taccgagctg

cagaccacca tccacgacat catcctggag tgtgtgtact gtaagcagca gctgctgagg

agagaggtgt acgaccggga cctgtgtatc gtgtacaggg acggcaatcc ctacgccgtg

tgtgacaagt gcctgaagtt ctacagcaag atcagcgagt accggcacta ctgctacagc

ctgtacggca ccaccctgga gcagcagtac aacaagcccc tgtgtgacct gctgatccgg

tgtatcaact gccagaagcc cctgcagaga cacctggaca agaagcagcg gttccacaac

atcaggggca gatggaccgg cagatgtatg agctgctgcc ggagcagcag aaccagaagg

gagacccagc tgagaggccg gaagagaaga agccacggcg atacccccac cctgcacgag

tacatgctgg acctgcagcc tgagaccacc gatctgtacg gctacggcca gctgaatgac

agcagcgagg aggaggatga gatcgacggc cctgccggcc aggccgagcc cgacagagcc

cactacaaca tcgtgacctt ttgctgtaag tgtgacagca ccctgagact gtgcgtgcag

agcacccacg tggacatcag aaccctggag gatctgctga tgggcaccct gggcatcgtg

tgtcccatct gctcccagaa accctgatga

HPV 유전자형 16 공통 E6-E7 단백질 서열(서열식별번호:2)

Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val

His Ser Phe Gln Asp Pro Gln Glu Ser Gly Arg Lys Leu Pro Gln Leu

Cys Thr Glu Leu Gln Thr Thr Ile His Asp Ile Ile Leu Glu Cys Val

Tyr Cys Lys Gln Gln Leu Leu Arg Arg Glu Val Tyr Asp Arg Asp Leu

Cys Ile Val Tyr Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Cys Asp Lys Cys

Leu Lys Phe Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr Cys Tyr Ser

Leu Tyr Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Cys Asp

Leu Leu Ile Arg Cys Ile Asn Cys Gln Lys Pro Leu Gln Arg His Leu

Asp Lys Lys Gln Arg Phe His Asn Ile Arg Gly Arg Trp Thr Gly Arg

Cys Met Ser Cys Cys Arg Ser Ser Arg Thr Arg Arg Glu Thr Gln Leu

Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu

Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Gly Tyr Gly

Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala

Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys

Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val

Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val

Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro

HPV16 E6 면역우세 항원결정기(서열식별번호:3)

Leu Cys Ile Val Tyr Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Cys Asp

HPV16 E7 면역우세 항원결정기(서열식별번호:4)

Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys

HPV16 E6 공통 서열(서열식별번호:5)

Phe Gln Asp Pro Gln Glu Ser Gly Arg Lys Leu Pro Gln Leu Cys Thr

Glu Leu Gln Thr Thr Ile His Asp Ile Ile Leu Glu Cys Val Tyr Cys

Lys Gln Gln Leu Leu Arg Arg Glu Val Tyr Asp Arg Asp Leu Cys Ile

Val Tyr Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Cys Asp Lys Cys Leu Lys

Phe Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr Cys Tyr Ser Leu Tyr

Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Cys Asp Leu Leu

Ile Arg Cys Ile Asn Cys Gln Lys Pro Leu Gln Arg His Leu Asp Lys

Lys Gln Arg Phe His Asn Ile Arg Gly Arg Trp Thr Gly Arg Cys Met

Ser Cys Cys Arg Ser Ser Arg Thr Arg Arg Glu Thr Gln Leu

HPV16 E7 공통 서열(서열식별번호:6)

His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro

Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Gly Tyr Gly Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu

Glu Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg

Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu

Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp

Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys

Pro

IgE 선도서열(서열식별번호:7)

Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val

His Ser

단백질 분해 절단 서열(서열식별번호:8)

Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser

E6 및 E7을 인코딩하는 HPV18 공통 서열 (서열식별번호:9)

gccagattcg aggaccccac caggagcggc tacaagctgc ccgatctgtg taccgagctg 60

aacaccagcc tgcaggacat cgagatcacc tgtgtgtact gtaagaccgt gctggagctg 120

accgaggtgt tcgagaagga cctgttcgtg gtgtacaggg acagcatccc ccacgccgcc 180

tgccacaagt gtatcgactt ctacagccgg atccgggagc tgagacacta cagcgacagc 240

gtgtacggcg ataccctgga gaagctgacc aacaccggcc tgtacaacct gctgatccgg 300

tgcctgagat gccagaagcc cctgctgaga cacctgaacg agaagcggcg gttccacaac 360

atcgccggcc actacagagg ccagtgccac agctgctgta acagggccag gcaggagaga 420

ctgcagcgga gaagagagac ccaggtgagg ggcaggaaga gaagaagcca cggccccaag 480

gccaccctgc aggatatcgt gctgcacctg gagccccaga atgagatccc cgtggatctg 540

ctgggccacg gccagctgtc cgacagcgag gaggagaacg acgagatcga cggcgtgaat 600

caccagcacc tgcctgccag aagagccgag cctcagaggc acaccatgct gtgtatgtgc 660

tgtaagtgtg aggcccggat cgaactggtg gtggagagca gcgccgacga cctgagagcc 720

ttccagcagc tgttcctgaa caccctgagc ttcgtgtgtc cttggtgtgc cagccagcag 780

tga 783

E6 및 E7을 포함하는 HPV18 공통 HPV 펩티드 서열 (서열식별번호:10)

Ala Arg Phe Glu Asp Pro Thr Arg Ser Gly Tyr Lys Leu Pro Asp Leu

Cys Thr Glu Leu Asn Thr Ser Leu Gln Asp Ile Glu Ile Thr Cys Val

Tyr Cys Lys Thr Val Leu Glu Leu Thr Glu Val Phe Glu Lys Asp Leu

Phe Val Val Tyr Arg Asp Ser Ile Pro His Ala Ala Cys His Lys Cys

Ile Asp Phe Tyr Ser Arg Ile Arg Glu Leu Arg His Tyr Ser Asp Ser

Val Tyr Gly Asp Thr Leu Glu Lys Leu Thr Asn Thr Gly Leu Tyr Asn

Leu Leu Ile Arg Cys Leu Arg Cys Gln Lys Pro Leu Leu Arg His Leu

Asn Glu Lys Arg Arg Phe His Asn Ile Ala Gly His Tyr Arg Gly Gln

Cys His Ser Cys Cys Asn Arg Ala Arg Gln Glu Arg Leu Gln Arg Arg

Arg Glu Thr Gln Val Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser His Gly Pro Lys

Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile

Pro Val Asp Leu Leu Gly His Gly Gln Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu

Asn Asp Glu Ile Asp Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg

Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu

Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala

Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys

Ala Ser Gln Gln

IgE 선도 DNA 서열 (서열식별번호:11)

atggactgga cctggatcct gttcctggtg gccgctgcca cacgggtgca cagc 54

IgE 선도 펩티드 서열 (서열식별번호:12)

Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val

His Ser

E6 및 E7을 인코딩하는 HPV18 공통 시퀀스; IgE 선도 서열 포함 (서열식별번호:13)

atggactgga cctggatcct gttcctggtg gccgctgcca cacgggtgca cagcgccaga 60

ttcgaggacc ccaccaggag cggctacaag ctgcccgatc tgtgtaccga gctgaacacc 120

agcctgcagg acatcgagat cacctgtgtg tactgtaaga ccgtgctgga gctgaccgag 180

gtgttcgaga aggacctgtt cgtggtgtac agggacagca tcccccacgc cgcctgccac 240

aagtgtatcg acttctacag ccggatccgg gagctgagac actacagcga cagcgtgtac 300

ggcgataccc tggagaagct gaccaacacc ggcctgtaca acctgctgat ccggtgcctg 360

agatgccaga agcccctgct gagacacctg aacgagaagc ggcggttcca caacatcgcc 420

ggccactaca gaggccagtg ccacagctgc tgtaacaggg ccaggcagga gagactgcag 480

cggagaagag agacccaggt gaggggcagg aagagaagaa gccacggccc caaggccacc 540

ctgcaggata tcgtgctgca cctggagccc cagaatgaga tccccgtgga tctgctgggc 600

cacggccagc tgtccgacag cgaggaggag aacgacgaga tcgacggcgt gaatcaccag 660

cacctgcctg ccagaagagc cgagcctcag aggcacacca tgctgtgtat gtgctgtaag 720

tgtgaggccc ggatcgaact ggtggtggag agcagcgccg acgacctgag agccttccag 780

cagctgttcc tgaacaccct gagcttcgtg tgtccttggt gtgccagcca gcagtga 837

E6 및 E7을 포함하는 HPV18 공통 HPV 펩티드 서열; IgE 선도 서열 포함 (서열식별번호:14)

Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val

His Ser Ala Arg Phe Glu Asp Pro Thr Arg Ser Gly Tyr Lys Leu Pro

Asp Leu Cys Thr Glu Leu Asn Thr Ser Leu Gln Asp Ile Glu Ile Thr

Cys Val Tyr Cys Lys Thr Val Leu Glu Leu Thr Glu Val Phe Glu Lys

Asp Leu Phe Val Val Tyr Arg Asp Ser Ile Pro His Ala Ala Cys His

Lys Cys Ile Asp Phe Tyr Ser Arg Ile Arg Glu Leu Arg His Tyr Ser

Asp Ser Val Tyr Gly Asp Thr Leu Glu Lys Leu Thr Asn Thr Gly Leu

Tyr Asn Leu Leu Ile Arg Cys Leu Arg Cys Gln Lys Pro Leu Leu Arg

His Leu Asn Glu Lys Arg Arg Phe His Asn Ile Ala Gly His Tyr Arg

Gly Gln Cys His Ser Cys Cys Asn Arg Ala Arg Gln Glu Arg Leu Gln

Arg Arg Arg Glu Thr Gln Val Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser His Gly

Pro Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn

Glu Ile Pro Val Asp Leu Leu Gly His Gly Gln Leu Ser Asp Ser Glu

Glu Glu Asn Asp Glu Ile Asp Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala

Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys

Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu

Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro

Trp Cys Ala Ser Gln Gln

공통 및 IgE 선도 서열이 있는 pGX3002 플라스미드 (서열식별번호:15)

gctgcttcgc gatgtacggg ccagatatac gcgttgacat tgattattga ctagttatta 60

atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata 120

acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat 180

aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga 240

gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc 300

ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt 360

atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat 420

gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag 480

tctccacccc attgacgtca atgggagttt gttttggcac caaaatcaac gggactttcc 540

aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga 600

ggtctatata agcagagctc tctggctaac tagagaaccc actgcttact ggcttatcga 660

aattaatacg actcactata gggagaccca agctggctag cgtttaaact taagcttggt 720

accgagctcg gatccactag tccagtgtgg tggaattcgc caccatggac tggacctgga 780

tcctgttcct ggtggccgct gccacacggg tgcacagcgc cagattcgag gaccccacca 840

ggagcggcta caagctgccc gatctgtgta ccgagctgaa caccagcctg caggacatcg 900

agatcacctg tgtgtactgt aagaccgtgc tggagctgac cgaggtgttc gagaaggacc 960

tgttcgtggt gtacagggac agcatccccc acgccgcctg ccacaagtgt atcgacttct 1020

acagccggat ccgggagctg agacactaca gcgacagcgt gtacggcgat accctggaga 1080

agctgaccaa caccggcctg tacaacctgc tgatccggtg cctgagatgc cagaagcccc 1140

tgctgagaca cctgaacgag aagcggcggt tccacaacat cgccggccac tacagaggcc 1200

agtgccacag ctgctgtaac agggccaggc aggagagact gcagcggaga agagagaccc 1260

aggtgagggg caggaagaga agaagccacg gccccaaggc caccctgcag gatatcgtgc 1320

tgcacctgga gccccagaat gagatccccg tggatctgct gggccacggc cagctgtccg 1380

acagcgagga ggagaacgac gagatcgacg gcgtgaatca ccagcacctg cctgccagaa 1440

gagccgagcc tcagaggcac accatgctgt gtatgtgctg taagtgtgag gcccggatcg 1500

aactggtggt ggagagcagc gccgacgacc tgagagcctt ccagcagctg ttcctgaaca 1560

ccctgagctt cgtgtgtcct tggtgtgcca gccagcagtg atgagcggcc gctcgagtct 1620

agagggcccg tttaaacccg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct 1680

gttgtttgcc cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt 1740

tcctaataaa atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg 1800

ggtggggtgg ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg 1860

gatgcggtgg gctctatggc ttctactggg cggttttatg gacagcaagc gaaccggaat 1920

tgccagctgg ggcgccctct ggtaaggttg ggaagccctg caaagtaaac tggatggctt 1980

tcttgccgcc aaggatctga tggcgcaggg gatcaagctc tgatcaagag acaggatgag 2040

gatcgtttcg catgattgaa caagatggat tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg 2100

agaggctatt cggctatgac tgggcacaac agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt 2160

tccggctgtc agcgcagggg cgcccggttc tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc 2220

tgaatgaact gcaagacgag gcagcgcggc tatcgtggct ggccacgacg ggcgttcctt 2280

gcgcagctgt gctcgacgtt gtcactgaag cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag 2340

tgccggggca ggatctcctg tcatctcacc ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg 2400

ctgatgcaat gcggcggctg catacgcttg atccggctac ctgcccattc gaccaccaag 2460

cgaaacatcg catcgagcga gcacgtactc ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg 2520

atctggacga agagcatcag gggctcgcgc cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcga 2580

gcatgcccga cggcgaggat ctcgtcgtga cccatggcga tgcctgcttg ccgaatatca 2640

tggtggaaaa tggccgcttt tctggattca tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc 2700

gctatcagga catagcgttg gctacccgtg atattgctga agagcttggc ggcgaatggg 2760

ctgaccgctt cctcgtgctt tacggtatcg ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct 2820

atcgccttct tgacgagttc ttctgaatta ttaacgctta caatttcctg atgcggtatt 2880

ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcatcag gtggcacttt tcggggaaat 2940

gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg 3000

agacaataac cctgataaat gcttcaataa tagcacgtgc taaaacttca tttttaattt 3060

aaaaggatct aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag 3120

ttttcgttcc actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct 3180

ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt 3240

tgtttgccgg atcaagagct accaactctt tttccgaagg taactggctt cagcagagcg 3300

cagataccaa atactgttct tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt caagaactct 3360

gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc 3420

gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg 3480

tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa 3540

ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg 3600

gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg 3660

ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga 3720

tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt 3780

ttacggttcc tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctt 3824

IgE 선도 인코딩 서열이 없는 HPV 유전자형 16 공통 E6-E7 펩티드 서열 (서열식별번호:16) ttcc aggaccccca ggagagcggc agaaagctgc ctcagctgtg taccgagctg

cagaccacca tccacgacat catcctggag tgtgtgtact gtaagcagca gctgctgagg

agagaggtgt acgaccggga cctgtgtatc gtgtacaggg acggcaatcc ctacgccgtg

tgtgacaagt gcctgaagtt ctacagcaag atcagcgagt accggcacta ctgctacagc

ctgtacggca ccaccctgga gcagcagtac aacaagcccc tgtgtgacct gctgatccgg

tgtatcaact gccagaagcc cctgcagaga cacctggaca agaagcagcg gttccacaac

atcaggggca gatggaccgg cagatgtatg agctgctgcc ggagcagcag aaccagaagg

gagacccagc tgagaggccg gaagagaaga agccacggcg atacccccac cctgcacgag

tacatgctgg acctgcagcc tgagaccacc gatctgtacg gctacggcca gctgaatgac

agcagcgagg aggaggatga gatcgacggc cctgccggcc aggccgagcc cgacagagcc

cactacaaca tcgtgacctt ttgctgtaag tgtgacagca ccctgagact gtgcgtgcag

agcacccacg tggacatcag aaccctggag gatctgctga tgggcaccct gggcatcgtg

tgtcccatct gctcccagaa accc

HPV 유전자형 16 공통 E6 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호:17)

ttcc aggaccccca ggagagcggc agaaagctgc ctcagctgtg taccgagctg

cagaccacca tccacgacat catcctggag tgtgtgtact gtaagcagca gctgctgagg

agagaggtgt acgaccggga cctgtgtatc gtgtacaggg acggcaatcc ctacgccgtg

tgtgacaagt gcctgaagtt ctacagcaag atcagcgagt accggcacta ctgctacagc

ctgtacggca ccaccctgga gcagcagtac aacaagcccc tgtgtgacct gctgatccgg

tgtatcaact gccagaagcc cctgcagaga cacctggaca agaagcagcg gttccacaac

atcaggggca gatggaccgg cagatgtatg agctgctgcc ggagcagcag aaccagaagg

gagacccagc tg

단백질 분해 절단 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호:18)

agaggccg gaagagaaga agc

HPV 유전자형 16 공통 E7 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호:19)

cacggcg atacccccac cctgcacgag

tacatgctgg acctgcagcc tgagaccacc gatctgtacg gctacggcca gctgaatgac

agcagcgagg aggaggatga gatcgacggc cctgccggcc aggccgagcc cgacagagcc

cactacaaca tcgtgacctt ttgctgtaag tgtgacagca ccctgagact gtgcgtgcag

agcacccacg tggacatcag aaccctggag gatctgctga tgggcaccct gggcatcgtg

tgtcccatct gctcccagaa accc

IgE 선도 서열이 없는 HPV 유전자형 16 공통 E6-E7 펩티드 서열 (서열식별번호:20)

Phe Gln Asp Pro Gln Glu Ser Gly Arg Lys Leu Pro Gln Leu

Cys Thr Glu Leu Gln Thr Thr Ile His Asp Ile Ile Leu Glu Cys Val

Tyr Cys Lys Gln Gln Leu Leu Arg Arg Glu Val Tyr Asp Arg Asp Leu

Cys Ile Val Tyr Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Cys Asp Lys Cys

Leu Lys Phe Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr Cys Tyr Ser

Leu Tyr Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Cys Asp

Leu Leu Ile Arg Cys Ile Asn Cys Gln Lys Pro Leu Gln Arg His Leu

Asp Lys Lys Gln Arg Phe His Asn Ile Arg Gly Arg Trp Thr Gly Arg

Cys Met Ser Cys Cys Arg Ser Ser Arg Thr Arg Arg Glu Thr Gln Leu

Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu

Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Gly Tyr Gly

Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala

Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys

Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val

Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val

Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro

HPV18 공통 E6 펩티드 (서열식별번호:21)

Ala Arg Phe Glu Asp Pro Thr Arg Ser Gly Tyr Lys Leu Pro

Asp Leu Cys Thr Glu Leu Asn Thr Ser Leu Gln Asp Ile Glu Ile Thr

Cys Val Tyr Cys Lys Thr Val Leu Glu Leu Thr Glu Val Phe Glu Lys

Asp Leu Phe Val Val Tyr Arg Asp Ser Ile Pro His Ala Ala Cys His

Lys Cys Ile Asp Phe Tyr Ser Arg Ile Arg Glu Leu Arg His Tyr Ser

Asp Ser Val Tyr Gly Asp Thr Leu Glu Lys Leu Thr Asn Thr Gly Leu

Tyr Asn Leu Leu Ile Arg Cys Leu Arg Cys Gln Lys Pro Leu Leu Arg

His Leu Asn Glu Lys Arg Arg Phe His Asn Ile Ala Gly His Tyr Arg

Gly Gln Cys His Ser Cys Cys Asn Arg Ala Arg Gln Glu Arg Leu Gln

Arg Arg Arg Glu Thr Gln Val

HPV18 공통 E7 펩티드 (서열식별번호: 22)

His Gly Pro Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn

Glu Ile Pro Val Asp Leu Leu Gly His Gly Gln Leu Ser Asp Ser Glu

Glu Glu Asn Asp Glu Ile Asp Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala

Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys

Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu

Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro

Trp Cys Ala Ser Gln Gln

E6 인코딩 HPV18 공통 서열 (서열식별번호:23)

gccagattcg aggaccccac caggagcggc tacaagctgc ccgatctgtg taccgagctg

aacaccagcc tgcaggacat cgagatcacc tgtgtgtact gtaagaccgt gctggagctg

accgaggtgt tcgagaagga cctgttcgtg gtgtacaggg acagcatccc ccacgccgcc

tgccacaagt gtatcgactt ctacagccgg atccgggagc tgagacacta cagcgacagc

gtgtacggcg ataccctgga gaagctgacc aacaccggcc tgtacaacct gctgatccgg

tgcctgagat gccagaagcc cctgctgaga cacctgaacg agaagcggcg gttccacaac

atcgccggcc actacagagg ccagtgccac agctgctgta acagggccag gcaggagaga

ctgcagcgga gaagagagac ccaggtg

E7 인코딩 HPV18 공통 서열 (서열식별번호:24)

ca cggccccaag gccaccctgc aggatatcgt gctgcacctg gagccccaga atgagatccc cgtggatctg ctgggccacg gccagctgtc cgacagcgag gaggagaacg acgagatcga

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본 명세서에 기재된 실시예 및 실시형태는 단지 설명을 위한 것이며, 당업자에게 제안된 다양한 변형 또는 변경은 본 출원의 사상 및 범위 및 첨부된 청구범위의 범주 내에 포함되어야 한다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims

개체에서 항문 고등급편평상피내병변(HSIL)을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 상기 개체에게 인간유두종바이러스(HPV)16 항원과 HPV18 항원으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 하나의 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 분자를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 HPV16 항원은 HPV16 E6-E7 융합 항원인 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 HPV16 항원이 서열식별번호:5의 아미노산 서열 및 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HPV16 항원이 서열식별번호:17의 뉴클레오티드 서열 및 서열식별번호:19의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자로 인코딩되는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HPV18 항원이 HPV18 E6-E7 융합 항원인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HPV18 항원이 서열식별번호:21의 아미노산 서열 및 서열식별번호:22의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 HPV16 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자 및 HPV18 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 분자가
서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열;
서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열;
서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편;
서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
제8항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 98%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
제8항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 분자가
서열식별번호:1의 뉴클레오티드 19-795를 포함하는 뉴클레오티드 서열;
서열식별번호:1의 뉴클레오티드 1-795를 포함하는 뉴클레오티드 서열;
서열식별번호:1을 포함하는 뉴클레오티드 서열;
서열식별번호:1과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열;
서열식별번호:1의 단편;
서열식별번호:1의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
제11항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:1과 적어도 98%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
제11항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:1과 적어도 99%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HPV18 항원이 서열식별번호:23의 뉴클레오티드 서열 및 서열식별번호:24의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자로 인코딩되는 방법.
제5항에 있어서, 상기 핵산 분자가
서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열;
서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열;
서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편;
서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
제15항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 98%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
제15항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 상기 핵산 분자가 선도 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하거나, 상기 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 상기 뉴클레오티드 서열이 선도 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하거나, 상기 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 상기 뉴클레오티드 서열이 선도 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하고, 상기 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 상기 뉴클레오티드 서열이 선도 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는 방법.
제5항에 있어서, 상기 핵산 분자가
서열식별번호:9의 뉴클레오티드 1-780을 포함하는 뉴클레오티드 서열;
서열식별번호:9를 포함하는 뉴클레오티드 서열;
서열식별번호:9와 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열;
서열식별번호:9의 단편;
서열식별번호:9의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
제19항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:9에 대해서 적어도 98%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
제19항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열식별번호:9에 대해서 적어도 99%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 핵산 분자가 적어도 하나의 플라스미드를 포함하는 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 약학적 조성물인 방법.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 보조제를 포함하는 조성물을 상기 개체에게 투여하는 단계를 더 포함하는 방법.
제7항에 있어서, HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자 및 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하되,
상기 HPV16 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편; 및 서열식별번호:2를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택되며,
상기 HPV18 E6-E7 융합 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열; 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편; 및 서열식별번호:10을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 단편과 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 분자를 개체에게 투여하는 단계가 전기천공을 포함하는 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 근육내로 투여되는 방법.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 VGX-3100 또는 이의 바이오시밀러를 포함하는 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 3회차 또는 4회차로 투여되는 방법.
제29항에 있어서, 상기 조성물의 제2차 투여가 제1차 투여 후 약 4주차에 수행되는 방법.
제29항에 있어서, 제3차 투여가 제1차 투여 후 약 12주차에 수행되는 방법.
제29항에 있어서, 제4차 투여가 제1차 투여 후 약 40주차에 수행되는 방법.
제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HSIL이 항문 또는 항문/항문주위 HSIL인 방법.
제18항에 있어서, 상기 선도 서열이 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
제18항에 있어서, 상기 선도 서열이 서열식별번호:11의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자로 인코딩되는 방법.