EA025465B1 - СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ СТАБИЛЬНОСТИ К ХИМИЧЕСКОМУ РАЗЛОЖЕНИЮ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩЕЙ 6-(2-((4-АМИНО-3-(3-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1Н-ПИРАЗОЛО[3,4-d]ПИРИМИДИН-1-ИЛ)МЕТИЛ)-3-(2-ХЛОРБЕНЗИЛ)-4-ОКСО-3,4-ДИГИДРОХИНАЗОЛИН-5-ИЛ)-N,N-БИС(2-МЕТОКСИЭТИЛ)ГЕКС-5-ИНАМИД - Google Patents

Abstract

Данное изобретение относится к способу повышения стабильности к химическому разложению фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I)которое представляет собой 6-(2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-илметил)-3-(2-хлорбензил)-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-5-ил)-N,N-бис(2-метоксиэтил)гекс-5-инамид или его фармацевтически приемлемую соль, включая все его изотопные производные, в измельченной форме в качестве активного ингредиента; и измельченную лактозу, где способ предусматривает включение в указанную композицию стабилизирующего количества измельченного стабилизирующего агента, выбранного из металлических солей стеариновой кислоты, в которых металл представляет собой магний, кальций или натрий.

Description

В настоящем изобретении предложен способ повышения стабильности к химическому разложению фармацевтической композиции, содержащей 6-(2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4б]пиримидин-1-илметил)-3-(2-хлорбензил)-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-5-ил)-К,К-бис(2-метоксиэтил)гекс-5-инамид или его фармацевтически приемлемую соль.

Известный уровень техники

Липидкиназы катализируют фосфорилирование липидов с образованием соединений, участвующих в регуляции широкого круга физиологических процессов, включая клеточную миграцию и адгезию. ΡΙ3киназы представляют собой связанные с мембранами белки, и принадлежат к классу ферментов, которые катализируют фосфорилирование липидов, которые сами связаны с клеточными мембранами. Изоцим Р13-киназы дельта (Р13-киназа δ) представляет собой одну из четырех изоформ типа I Р13-киназы, ответственную за создание различных 3'-фосфорилированных фосфоинозитидов, которые опосредуют клеточные сигнальные системы и принимают участие в воспалениях, сигнальных системах факторов роста, злокачественных превращениях и в иммунитете [8ее Ке\зе\у Ьу Катей Ь. Е. и Сап!1еу Ь. С. Д. ΒίοΙ. Сйет., 1999, 274: 8347-8350].

Участие Р13-киназы в контролировании воспалений было подтверждено на некоторых моделях с использованием ингибиторов рап-Р13-киназы, таких как ЬУ-294002 и вортманин [Йо К. е! а1., Д Рйагтасо1. Ехр. Тйег., 2007, 321:1-8]. Недавние исследования проводились с использованием или селективных ингибиторов Р13-киназы или с использованием нокаутных мышей, у которых отсутствовала специфическая изоформа фермента. Указанные исследования продемонстрировали роль путей, контролируемых ферментами Р13-киназы в воспалительных процессах. Было обнаружено, что Р13-киназа δ является селективным ингибитором 1С-87114, который ингибирует гиперчувствительность дыхательных путей, выделение 1дЕ, экспрессию провоспалительных цитокинов, накопление воспалительных клеток в легких и сосудистую проницаемость у овальбумин-сенсибилизированных, овальбумин-индуцированных мышей [Бее К. δ. е! а1., Д. А11егду Сйп. 1ттипо1., 2006, 118:403-409 и Бее К. δ. е! а1., ΡΑδΕΒ Д., 2006, 20:455-65]. Кроме того, 1С-87114 снижает накопление нейтрофилов в легкие мышей и ослабляет функции нейтрофилов, стимулированных ТЯРа ^абйц С. е! а1., Вюсйет. Вюрйуз. Кез. Соттип., 2003, 308:764-9]. Изоформа Р13-киназы δ активируется инсулином и другими факторами роста, а также сигнальной системой белка, соединенного с О-белком, и воспалительными цитокинами. Недавно сообщалось, что двойной δ/γ ингибитор Р13-киназы ТО100-115 ингибируэт легочную эозинофилию и накопление интерлейкина-13, а также муцина, и гиперчувствительность дыхательных путей на мышиных моделях, при введении в виде аэрозолей. Те же авторы сообщают также, что указанное соединение способно ингибировать легочную нейтрофилию, вызванную или ^Ρδ (липополисахаридами), или табакокурением [Бойкая Д. е! а1., Д. Рйагтасо1. Ехр. Тйег, 2009, 328:758-765].

Поскольку она также активируется оксидативным стрессом, по-видимому, изоформа Р13-киназы δ может служить мишенью для терапевтических вмешательств в указанные заболевания, при которых наблюдаются высокие уровни оксидативного стресса. Нижележащие медиаторы пути передачи сигнала Р13-киназы включают Ак! (серин/треонин-протеинкиназа) и мишень рапамицина в клетках млекопитающих, фермент тТОК. Последние работы позволяют предположить, что активирование Р13-киназы δ, приводящее к фосфорилированию Ак!, способно вызвать состояние устойчивости к кортикостероидам в иных случаях кортикостероид-чувствительных клетках [То Υ. е! а1., Ат. Д. Кеярц. Сгй. Саге Мей, 2010, 182:897-904]. Указанные наблюдения привели к гипотезе, что указанный сигнальный каскад может быть одним из механизмов, ответственных за кортикостероидную невосприимчивость при воспалениях, наблюдающихся у легочных пациентов, страдающих ХОБЛ, а также у астматиков, которые курят, тем самым, подвергая свои легкие повышенному оксидативному стрессу. Действительно, предполагают, что теофиллин, соединение, которое используют при лечении как ХОБЛ, так и астмы, изменяет на обратное стероидную невоспрлимчивость за счет механизма, включающего взаимодействие с сигнальными путями, контролируемыми Р13-киназой 8 [То Υ. е! а1., Ат. Д. Кеярц. Сгй. Саге Мей, 2010, 182:897-9041].

В международной латентной заявке ^О 2011/04 8111 раскрыт ряд соединений, которые ингибируют Р13-киназы, особенно Р13-киназу δ, включая 6-(2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4б]пиримидин-1-ил)метил)-3-(2-хлорбензил)-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-5-ил)-К,К-бис(2-метоксиэтил)гекс-5-иламид в форме свободного основания, который раскрыт в описании как пример 83. Указанное соединение раскрыто также в ^О 2012/052753.

- 1 025465

Вышеуказанное соединение в указанном описании называют соединением формулы (I) или свободным основанием соединения формулы (I).

До появления более раннего изобретения заявителей (ν0 2011/048111) известные к тому времени ингибиторы Р13-киназы предназначались для перорального введения. Однако нежелательное следствие такого подхода состоит в том, что немишеневые ткани организма, особенно печень и кишечник, повидимому, подвергаются воздействию фармакологически активных концентраций указанного лекарственного средства. Альтернативная стратегия состоит в том, чтобы создать такие способы лечения, при которых указанное лекарственное средство вводилось непосредственно в воспаленный орган посредством местной терапии. В случае контролируемого воспаления (или создания другого терапевтического эффекта) в легких этого можно достичь путем ингаляции указанного лекарственного средства, которая обладает преимуществом сохранения указанного лекарственного средства преимущественно в легких, тем самым, минимизируя риск системной токсичности. Для достижения длительного действия можно использовать подходящую лекарственную форму, которая создает резервуар активного лекарственного средства.

Соединение формулы (I) было, соответственно, раскрыто как соединение, которое можно использовать для местного введения в легкие (см. νθ 2011/048111).

Лекарственное средство для местного введения в легкие путем ингаляции, которое должно обеспечивать аффинность в отношении органа-мишени и длительную эффективность, также должно быть сформулировано таким образом, чтобы обеспечить заранее определенную дозу указанного лекарственного средства, которое, в свою очередь, должно обладать прогнозируемыми и воспроизводимыми свойствами. Обеспечение приемлемой и воспроизводимой химической и физической стабильности указанного лекарственного средства в лекарственной форме является ключевой задачей при создании фармацевтических продуктов для всех типов фармацевтических дозированных форм.

Для использования в качестве ингаляций существуют 3 основные лекарственные формы - сухой порошковый ингалятор (ΌΡΙ), дозирующий ингалятор (ΜΌΙ) и небулайзер на водной основе (ручной или настольный). Однако большую часть имеющихся в продаже устройств для ингаляции составляют порошковые ингаляторы (ΌΡΙ) и, таким образом, обеспечивают общепринятый способ доставки лекарственных средств путем ингаляции.

Существует множество коммерческих ΌΡΙ продуктов, таких как фликсотид (флутиказонпропионат), адваир (флутиказонпропионат/салметерол), симбикорт (будезокид/формотерол), пулмикорт (будезонид), серевент (салметерол) и форадил (формотерол).

Сухие порошковые лекарственные формы для ингаляций обычно состоят из смеси частиц лекарственного средства (размером менее 10 мкм и обычно менее 5 мкм) с разбавителем, обычно лактозой. Так как обычные дозы, требующиеся для лечения путем ингаляций, находятся в пределах микрограммов, разбавитель облегчает обработку и распределение фармацевтических средств в индивидуальные дозированные формы, например в капсулы или блистеры или облегчает процесс отмеривания определенных доз из объемного контейнера, для последующего введения пациенту. Поэтому обычно масса разбавителя (которым чаще всего является лактоза) может быть больше массы вещества указанного лекарственного средства. В таком окружении можно получить приемлемые лекарственные формы некоторых продуктов, простым смешиванием указанного лекарственного средства с лактозой. Другие продукты могут потребовать добавления дополнительных эксципиентов или других стадий обработки для того, чтобы указанный продукт отвечал требованиям контролирующих органов.

Одним из таких дополнительных эксципиентов является стеарат магния, который, как известно, используют для улучшения некоторых свойств содержащих его лекарственных форм. Так, в и8718640Ь В2 (1адо1ес АО с1 а1.) раскрыто, что добавление стеарата магния к сухим порошковым лекарственным формам для ингаляций повышает влагоустойчивость указанных лекарственных форм и позволяет сохранять дозы очень мелких частиц или фракции очень мелких частиц во влажных условиях. В ν000/53157 (СЫβδί) раскрыт стеарат магния в качестве лубриканта, предназначенного для использования в сухих порошковых лекарственных формах для ингаляции, который эффективен в случае увеличения дозы очень мелких частиц некоторых лекарственных средств. В И8 2006/0239932 (ΜοηΙοίΐΠ) раскрыта твердая фармацевтическая лекарственная форма для ингаляций, включающая некоторые вещества активных ингредиентов, которые подвержены химическому взаимодействию с лактозой, лактозу и стеарат магния. В указанном документе раскрыто, что стеарат магния ингибирует вызываемое лактозой разложение активного ингредиента, предположительно за счет реакции Майара, которая включает взаимодействие аминогруппы активного ингредиента с лактозой. В И8 2012/0082727 (СЫе81) раскрыт способ ингибирования или уменьшения химического разложения активного ингредиента, содержащего подверженную гидролизу группу, выбранную из группы, состоящей из карбонатной группы, карбаматной группы и сложноэфирной группы, в порошковой лекарственной форме для ингаляций, включающей частицы носителя (такого, как частицы лактозы), причем указанный способ включает покрытие го меньшей мере части поверхности указанных частиц носителя стеаратом магния.

Таким образом, сохраняется необходимость в создании лекарственных форм селективных ингибиторов Р13-киназы для применения при лечении ингаляциями, которые будут обладать потенциалом для

- 2 025465 обеспечения терапевтической эффективности при астме, ХОБЛ и других воспалительных заболеваниях легких. В частности, остается цель создания лекарственной формы указанного соединения формулы (I), которая будет обладать соответствующей физической и химической стабильностью и другими свойствами, необходимыми для лечения путем ингаляций.

Сущность изобретения

В настоящем изобретении предложен способ повышения стабильности к химическому разложению фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I)

которое представляет собой 6-(2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-й]пиримидин-1илметил)-3-(2-хлорбензил)-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-5-ил)-Х,Ы-бис(2-метоксиэтил)гекс-5-инамид или его фармацевтически приемлемую соль, включая все его изотопные производные, в измельченной форме в качестве активного ингредиента; и измельченную лактозу, где способ предусматривает включение в указанную композицию стабилизирующего количества измельченного стабилизирующего агента, выбранного из металлических солей стеариновой кислоты, в которых металл представляет собой магний, кальций или натрий.

В предпочтительном варианте осуществления соединение формулы (I) находится в форме свободного основания.

Указанное соединение формулы (I) может находиться в твердой кристаллической безводной форме, при этом его картина порошковой дифракции рентгеновских лучей содержит пики при (±0,2) 17,6, 18,4, 22,5 и 24,2 градусах 2-тета.

В предпочтительном варианте осуществления стабилизирующий агент представляет собой стеарат магния.

Согласно данному способу активный ингредиент может быть микронизирован, а лактоза представляет собой моногидрат α-лактозы.

Как разъясняется в разделе примеры, лекарственные формы настоящего изобретения, повидимому, обладают хорошей физической стабильностью (по данным порошковой дифракции рентгеновских лучей (ΧΡΌΚ) и ИК-анализов) и хорошей химической стабильностью (по данным ВЭЖХ анализов). Не ограничиваясь какой-либо теорией, из открытий авторов изобретения следует, что алкинная группа соединений формулы (I) подвержена катализируемому металлом оксидативному разрушению, включающему гидратирование алкина. Из открытий авторов настоящего изобретения также следует, что пиримидиноновое кольцо соединения формулы (I) подвержено гидролитическому расщеплению.

Эксперименты, проведенные авторами изобретения, установили, что лекарственные формы настоящего изобретения, содержащие лактозу и металлическую соль стеариновой кислоты, такую как стеарат магния, обладают более высокой химической стабильностью, чем соответствующие лекарственные формы, которые не содержат металлических солей стеариновой кислоты, таких как стеарат магния. Авторам настоящего изобретения не известно более ранних сообщений том, что металлические соли стеариновой кислоты, такие как стеарат магния, могут действовать в качестве агентов, защищающих от химического разложения содержащих алкин соединений (особенно в отношении катализируемого металлом оксидативного разрушения, включающего гидратирование алкина) в сухих порошковых лекарственных формах для ингаляций. Авторам настоящего изобретения также не известно более ранних сообщений том, что металлические соли стеариновой кислоты, такие как стеарат магния, могут действовать в качестве защитного агента против гидролитического расщепления лекарственных средств, содержащих пиримидиноновое кольцо. Авторы изобретения экстраполировали указанные открытия, касающиеся металлических солей стеариновой кислоты, на металлические соли стеарилфумарата.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 показана картина порошковой дифракции рентгеновских лучей, полученная для образца соединения формулы (I) в безводной твердой кристаллической форме.

На фиг. 2 показан ИК спектр образца, состоящего из смеси соединения формулы (I) в безводной форме (микронизированного) с Ьас!ойа1е200® и стеаратом магния.

На фиг. 3 показана картина порошковой дифракции рентгеновских лучей, полученная для образца, состоящего из смеси соединения формулы (I) в безводной форме (микронизированной) с Ьас!ойа1е200® и стеаратом магния.

- 3 025465

Подробное описание предпочтительного варианта настоящего изобретения Соединение формулы (I) в качестве активного ингредиента

Соединение формулы (I) представляет собой двойной ингибитор ΡΙ3Κ дельта/Р13К гамма, где термин ингибитор, как использовано в данном описании, относится к соединению, которое снижает (например, по меньшей мере на 50%) или исключает биологическую активность белка-мишени, например ΡΙ3Κ дельта изоцима, в ίη νίΐτο ферментном анализе. Термин ингибитор дельта/гамма, как использовано в данном описании, относится к тому факту, что указанное соединение ингибирует до некоторой степени обе ферментные изоформы, хотя не обязательно до одной и той же степени. Соединение формулы (I) является активным в клеточных системах скринирования и, тем самым, демонстрирует, что обладает подходящими свойствами для проникновения в клетки и, тем самым, вызывает внутриклеточные фармакологические эффекты.

Общие способы синтеза указанного соединения формулы (I) раскрыты в АО 2011/048111, содержание которого включено в данное описание посредством ссылки во всей полноте, и можно использовать способ, аналогичный способу примера 1. См. также АО 2012/052753, содержание которого включено в данное описание посредством ссылки во всей полноте, где конкретный способ синтеза указанного соединения формулы (I) представлен в примере.

Подходящим является, если соединение формулы (I) защищено от света во время и после синтеза путем использования, например, лабораторной посуды желтого цвета или светонепроницаемой упаковки (например, упаковки в фольге).

Сухая порошковая фармацевтическая лекарственная форма настоящего изобретения включает соединение формулы (I) в качестве активного ингредиента в терапевтическом и эффективном количестве. Терапевтическое и эффективное количество соединения формулы (I) определяют как количество, достаточное для данной дозы или множества разделенных доз, для достижения терапевтического и значимого эффекта у субъекта, когда его вводят указанному субъекту в соответствии со схемой лечения.

В одном из вариантов осуществления сухая порошковая фармацевтическая лекарственная форма включает от около 0,004 до около 50 мас.% соединения формулы (I) в расчете на массу указанной сухой порошковой фармацевтической лекарственной формы и в расчете на массу соединения формулы (I) в форме свободного основания; например, от около 0,02 до около 50 мас.%, от около 0,02 до около 25 мас.%, от около 0,02 до около 20 мас.%, или от около 0,02 до около 15 мас.%. Предпочтительно сухая порошковая фармацевтическая лекарственная форма включает от около 0,1 до около 20 мас.%, например, от около 0,1 до около 5 мас.% соединения формулы (I) в расчете на массу указанной сухой порошковой фармацевтической лекарственной формы и в расчете на массу соединения формулы (I) в форме свободного основания.

Фармацевтическая лекарственная форма настоящего изобретения может содержать соединение формулы (I) в качестве единственного активного ингредиента. Однако указанная фармацевтическая лекарственная форма может содержать дополнительные активные ингредиенты. Фармацевтическую лекарственную форму можно также вводить совместно с одним или более другими активными ингредиентами (или одной или более фармацевтическими композициями, содержащими один или более активных ингредиентов). Примеры других активных ингредиентов перечислены ниже.

Соединение формулы (I) получают в измельченной форме, такой, которая удобна для сухой порошковой ингаляции. Фармацевтическая композиция настоящего изобретения обычно может содержать частицы лекарственного средства со средним объемным диаметром (Ό50) от около 0,5 до около 10 мкм, особенно от около 1 до около 5 мкм.

Подходящим способом определения размера частиц является лазерная дифракция, например, с использованием прибора Ма51ег51/ег 20008 от Макет ПтЛгитспК Приборы доступны также от §ущра!ес. Для определения распределения частиц по размерам среднее значение Ό50 представляет собой размер в микронах, что разделяет распределение частиц по размерам на значения выше и ниже половины. Основным результатом, получаемым с помощью лазерной дифракции, является распределение по объемам, поэтому Ό50 является актуальным, и Όν50 (среднее для распределения по объемам) и, как использовано в данном описании, относится к распределению частиц по размерам, полученному с использованием лазерной дифракции. Величины Ό10 и Ό90 (когда их используют в контексте со способом лазерной дифракции, в применении к значениям Όν10 и Όν90) относятся к размерам частиц, где 10% распределения лежит ниже значения Ό10, и 90% распределения лежит ниже значения Ό90 соответственно.

Частицы подходящего размера для использования в сухих порошковых лекарственных композициях для ингаляций можно получить любым подходящим способом, хорошо известным специалистам в данной области. Частицы лекарственного средства подходящего для ингаляций размера можно получить различными способами уменьшения размеров частиц, включая размалывание или более предпочтительно микронизацию, например, используя прибор микронизации струйную мельницу (например, производства Но5ока\уа А1рше). Альтернативно, частицы подходящего размера можно получить, прежде всего, путем сушки распылением, замораживания распылением, контролируемой кристаллизацией, например, контролируемым осаждением, супер-критической кристаллизацией жидкости, кристаллизацией ультразвуком или другими подходящими методами кристаллизации, например, в аппаратах непрерывной кри- 4 025465 сталлизации.

В одном из вариантов осуществления соединение формулы (I) находится в форме свободного основания, в форме фармацевтически приемлемой соли или в форме сольвата любой из них. Подходящим является, если соединение формулы (I) находится в форме свободного основания, например в безводной форме.

Подходящим является, если соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль или сольват находится в форме твердой кристаллической соли.

Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I)

В одном из вариантов осуществления предложена фармацевтически приемлемая соль соединения формулы (I).

Подразумевают, что фармацевтически приемлемые соли, как использовано в данном описании, включают терапевтически активные нетоксичные формы кислотно-аддитивных солей, которые указанное соединение формулы (I) способно образовывать. Указанные фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли обычно могут быть получены обработкой формы основания соответствующей кислотой. Подходящие кислоты включают, например, неорганические кислоты, такие как гидрогалогеновые кислоты, например хлористо-водородная или бромисто-водородная кислота, серная, азотная, фосфорная и подобные кислоты; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, пропановая, гликолевая, молочная, пировиноградная, щавелевая (т.е. этандиоевая), малоновая, янтарная (т.е. бутандиоевая кислота), малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая, памоевая и подобные кислоты. Так, конкретные примеры солей соединений формулы (I) включают кислотноаддитивные соли, образованные с НС1, НВг и п-толуолсульфоновой кислотой.

Сольваты

Настоящее изобретение также относится к сольватам соединений формулы (I) . Примеры сольватов включают гидраты и гигроскопические продукты, такие как канальные гидраты.

Безводная форма соединения формулы (I)

В одном из вариантов осуществления предложено соединение формулы (I) в безводной форме. В частности, предложено соединение формулы (I) в безводной твердой кристаллической форме, полученное путем кристаллизации соединения формулы (I) из 1-пропанола. Подходящим является, если указанный 1-пропанол является сухим, например содержит максимально около 0,9% мас./мас. воды. В одном из вариантов осуществления 1-пропанол содержит максимально 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2 или 0,05% мас./мас. воды. Подходящим является, если указанный 1-пропанол содержит максимально 0,2% воды. Подходящим является, если кристаллизацию осуществляют в присутствии акцептора металлов. Подходящие акцепторы металлов представляют собой материалы, которые адсорбируют металлы, причем их легко отделять от представляющего интерес соединения (т.е. соединения формулы (I)). Например, функционализированные диоксиды кремния особенно пригодны в качестве акцепторов металлов, так как после того, как металл адсорбируется, указанный комплекс металл-диоксид кремния можно затем легко отделить от представляющего интерес соединения. Функциональные группы, которые образуют стабильные комплексы с ионами металлов, включают группы, содержащие один или более азотных и/или серных центров, и хорошо известны специалистам в данной области.

Примером подходящего коммерчески доступного акцептора металлов является §ШаМе18® Т1йо1 (тиольное производное силикагеля, которое можно использовать в качестве акцептора различных металлов, включая Ρά, Ρί, Си, Аг и РЬ). Подходящим является, если акцептор металлов присутствует в количестве, достаточном для обеспечения достигаемой концентрации ионов металла ниже 20 ч./млн, предпочтительно ниже 10 ч./млн. В одном из вариантов осуществления указанный акцептор металла присутствует в количестве 1-10% мас./мас., например 2-8% мас./мас. или 5% мас./мас. в расчете на массу соединения формулы (I). Подходящим является, если кристаллизацию осуществляют охлаждением раствора соединения формулы (I) и растворителя, начиная с повышенной температуры (например, 80-95°С), непрерывно (т.е. непрерывное охлаждение) или поэтапно (т.е. чередуя охлаждение и выдерживание раствора при конкретной температуре). Подходящие температурные градиенты (непрерывные или поэтапные) для охлаждения включают интервалы 95-15°С, 95-20°С, 90-20°С, 80-20°С 95-90°С, 95-85°С, 95-80°С, 90-85°С и 80-20°С. В одном из вариантов осуществления указанный раствор охлаждают от около 80-95°С до комнатной температуры (например, около 20-22°С). Подробное получение такой твердой кристаллической безводной формы соединения формулы (I) предоставлено в примере 2. Кристаллы соединения формулы (I) в твердой кристаллической форме можно собрать, используя обычные методики выделения (например, используя фильтрование или центрифугирование).

В одном из вариантов осуществления предложена твердая кристаллическая безводная форма соединения формулы (I), картина порошковой дифракции рентгеновских лучей которой по существу соответствует картине, представленной на фиг. 1. Способ получения данных порошковой дифракции рентгеновских лучей раскрыт в разделе Общие методики, и полученные результаты обсуждаются в примере 3.

Так предложено соединение формулы (I) в кристаллической безводной форме, картина рентгеновской порошковой дифракции которой содержит по меньшей мере один (например, один, два, три, четы- 5 025465 ре, пять, шесть, семь, восемь, девять или все десять) пиков при 5,6, 7,9, 11,2, 12,3, 15,6, 17,6, 18,4, 21,4, 22,5, 24,2 (±0,2°, 2-тета величины), причем указанные пики являются характеристическими для кристаллической безводной формы. Пики при 17,6, 18,4, 22,5 и 24,2 являются особенно характеристическими для безводной формы, и поэтому предпочтительно наблюдать по меньшей мере один (например, один, два, три или все четыре) из указанных пиков.

Проводили исследования химической совместимости безводной формы соединения (1) с лактозой. Для оценки химической совместимости, композиции безводной формы соединения формулы (I) с лактозой анализировали, используя ВЭЖХ. Полученные результаты обобщены в примере 4, где указано, что в определенных условиях указанная композиция безводной формы и лактозы претерпевает разложение. Продукты разложения были исследованы, и основной продукт разложения был идентифицирован с помощью масс-спектрометрии как являющийся одним или обоими веществами, изображенными как Ό019328:

Указанный продукт разложения, по-видимому, является результатом добавления воды по тройной связи алкина и может существовать как одна или две формы с идентичными массами (или может существовать в обеих формах) в зависимости от ориентации добавления воды по тройной связи. Тот же самый продукт разложения наблюдался во время вынужденного разложения безводной формы соединения формулы (I) ионами металла. В результате дальнейших исследований выдвинуто предположение, что разложение безводной формы соединения формулы (I) требует присутствия ионов металла и воды и ускоряется при повышенных температурах.

Дальнейшее исследование, включающее тестирование повышенной стабильности (т.е. экспонирование вещества указанного лекарственного средства при 80°С в закрытой ампуле, см. пример 7), привело авторов изобретения к подтверждению того, что, по меньшей мере, образуется продукт разложения, изображенный как Ό019492 на схеме 1 (ниже). Более того, авторы настоящего изобретения также пришли к выводу, что дальнейший продукт разложения (Ό019493) может образовываться в результате гидролитического расщепления пиримидинонового кольца и последующей внутримолекулярной реакции с группой алкина. Ό019349 представляет собой предположительно промежуточный продукт разложения, который наблюдался в некоторых условиях температуры и относительной влажности при тестировании стабильности (данные не представлены).

Исследовали добавление стеарата магния к комбинации безводной формы соединения формулы (I) и лактозы. Было обнаружено, что указанная комбинация безводной формы соединения формулы (I) с лактозой и стеаратом магния является физически стабильной (пример 5). Однако неожиданно было обнаружено, что добавление стеарата магния вызывает повышение химической стабильности комбинации безводной формы соединения формулы (I) и лактозы (пример 6). Аналогичный стабилизирующий эффект был обнаружен и с использованием других металлических солей стеариновой кислоты, особенно

- 6 025465 стеарата натрия и стеарата кальция (пример 7).

Не связываясь с какой-либо теорией, по-видимому, металлическая соль стеариновой кислоты, такая как стеарат магния (или, предположительно, металлическая соль стеарилфумарата) может действовать в качестве защитного агента против химического разложения алкинной группы в указанном соединении формулы (I) и против химического разложения указанного пиримидинонового кольца в соединении формулы (I), которое наблюдают, если безводная форма соединения формулы (I) находится в смеси с лактозой.

Измельченная лактоза в качестве носителя

Как использовано в данном описании, термин лактоза относится к содержащему лактозу компоненту, включая моногидрат α-лактозы, моногидрат β-лактозы, безводную α-лактозу, безводную βлактозу и аморфную лактозу. Лактозные компоненты можно обрабатывать путем микронизации, просеивания, размалывания, прессования, агломерации или сушки распылением. Коммерчески доступные формы лактозы в различных формах также включены в изобретение, например, Ьас1ойа1е® (лактоза ингаляционной степени чистоты; Рйе81аий&оЙ8), 1ийаЬас®70 (просеянная лактоза для сухих порошковых ингаляторов; Медд1е) и Кезршозе® (просеянная лактоза ингаляционной степени чистоты; ΌΡΕ Рйатша) продукты. В одном из вариантов осуществления лактозный компонент выбирают из группы, состоящей из моногидрата α-лактозы, безводной и аморфной лактозы. Предпочтительно, если лактоза представляет собой моногидрат α-лактозы.

Для проникновения достаточно глубоко в легкие измельченный активный ингредиент (в случае соединения (I)) должен быть подходящего размера, как описано выше. Указанные мелкие частицы будут иметь тенденцию к образованию агломератов. Использование носителей, таких как лактоза, предотвращает указанную агломерацию и может повысить текучесть. Кроме того, использование носителя обеспечивает правильную и постоянную дозировку, достигающую легких. Активный ингредиент обычно образует монослой на более крупных частицах лактозы, затем во время ингаляции указанный активный ингредиент и указанный носитель разделяются, и указанный активный ингредиент ингалируется, тогда как основная часть носителя - нет. Как таковое, использование измельченной лактозы в качестве носителя для активного ингредиента обеспечивает то, что каждая доза сухой порошковой фармацевтической лекарственной формы выделяет одно и то же количество активного ингредиента.

Как правило, для предотвращения агломерации мелких активных частиц используют лактозу с размером частиц приблизительно или по меньшей мере в десять раз больше размеров активного ингредиента (например, используют лактозу с И50 приблизительно или по меньшей мере в десять раз больше размеров активного ингредиента).

В одном из вариантов осуществления сухая порошковая лекарственная форма настоящего изобретения включает измельченную лактозу с И50 в интервале 40-150 мкм.

Сухая порошковая фармацевтическая лекарственная форма настоящего изобретения включает измельченную лактозу в качестве носителя в количестве, достаточном, чтобы обеспечить правильную и постоянную доставку доз активного ингредиента в легкие. В одном из вариантов осуществления указанная сухая порошковая фармацевтическая лекарственная форма включает от около 40 до около 99,88 мас.%, например, от около 50 до около 99,88 мас.%, например, от около 65 до около 99,88 мас.%, например, от около 75до около 99,99 мас.% измельченной лактозы в расчете на массу сухой порошковой фармацевтической лекарственной формы. Предпочтительно сухая порошковая фармацевтическая лекарственная форма включает от около 80до около 99,98 мас.% или, например, от около 80 до около 99,9 мас.%, например, от около 85 до около 99,98 мас.%, например, от около 95 до около 99 мас.% измельченной лактозы в расчете на массу указанной сухой порошковой фармацевтической композиции.

Измельченные металлические соли стеариновой кислоты, такие как стеарат магния или металлические соли стеарилфумарата, в качестве стабилизирующих агентов

Примером металлической соли стеариновой кислоты является стеарат магния.

Альтернативные металлические соли стеариновой кислоты, которые можно использовать, включают соли стеариновой кислоты, образованные с металлами группы I и группы II, такие как стеарат натрия, стеарат кальция и стеарат лития. Другие металлические соли стеариновой кислоты, которые можно привести, включают стеарат цинка и стеарат алюминия.

Металлические соли стеарилфумарата (например, стеарилфумарат натрия), по-видимому, обладают такими же свойствами, как и металлические соли стеариновой кислоты (см. §йай е! а1, Итид Йете1ортеи1 апй !пйи51па1 рйаттасу 1986, νοί. 12 Νο. 8-9, 1329-1346). По мнению авторов изобретения их можно использовать в качестве альтернативы металлическим солям стеариновой кислоты в настоящем изобретении.

Как использовано в данном описании, термин стеарат магния включает тригидрат стеарата магния, дигидрат стеарата магния, моногидрат стеарата магния и аморфный стеарат магния. Стеарат магния, как определено в данном описании, включает допущение, состоящее в том, что любой материал, определенный как стеарат магния, может содержать вплоть до 25% (например, вплоть до 10%, например, вплоть до 5%, например, вплоть до 1%) пальмитатной соли.

- 7 025465

Обычно металлические соли стеариновой кислоты или металлические соли стеарилфумарата можно использовать в безводной форме или в виде гидратов, и они могут содержать вплоть до 25% (например, вплоть до 10%, например, вплоть до 5%, например, вплоть до 1%) пальмитатной соли.

Как использовано в данном описании, выражение стабилизирующий агент, выбранный из металлических солей стеариновой кислоты, таких как стеарат магния и металлических солей стеарилфумарата, может включать смесь металлических солей стеариновой кислоты и/или стеарилфумарата, хотя предпочтительно использовать только одну соль.

Металлические соли стеариновой кислоты, такие как стеарат магния или металлические соли стеарилфумарата, обычно получают в виде тонкого порошка, который нет необходимости подвергать микронизации. Предпочтительно, если Ό50 металлической соли стеариновой кислоты, такой как стеарат магния, или металлической соли стеарилфумарата больше чем 5 мкм, например, около 10 мкм или больше чем 10 мкм, например, в интервале от 5 до 100 мкм, например, от 5 до 50 мкм, например, от 5 до 20 мкм, например, от 10 до 20 мкм. Стеарат магния можно получить, например, от ЛуаШог (Нус|иа1 2257 Ътаий) или Ре1ет Отеуеи. Стеарат натрия и стеарат кальция можно, например, получить от §1§та-А1йт1сЬ. Стеарилфумарат натрия можно, например, получить от §с1еисеЬаЪ.

Сухая порошковая фармацевтическая лекарственная форма настоящего изобретения включает измельченный стабилизирующий агент, выбранный из металлических солей стеариновой кислоты, таких как стеарат магния, и металлических солей стеарилфумарата в количестве, достаточном для обеспечения химической стабильности указанной лекарственной формы (стабилизирующее количество). Химическая стабильность, например, демонстрируется, если образование продукта разложения Ό019328 (одного или обоих веществ) находится на уровне менее чем 0,2 мас.% после хранения композиции, содержащей соединение формулы (I), в течение 4 недель при 50°С. Альтернативно или дополнительно, химическая стабильность, например, демонстрируется, если образование продукта разложения Ό019493 находится на уровне менее чем 0,5 мас.% после хранения композиции, содержащей соединение формулы (I), в течение 2 недель при 80°С. Альтернативно или дополнительно, химическая стабильность, например, демонстрируется, если образование продукта разложения Ό019492 находится на уровне менее чем 0,4 мас.% после хранения композиции, содержащей соединение формулы (I), в течение 2 недель при 80°С. В одном из вариантов осуществления указанная сухая порошковая фармацевтическая лекарственная форма содержит от около 0,01 до около 15 мас.% например, от около 0,1 до около 10 мас.%, 10, 5, 2 или 1 мас.% измельченного стабилизирующего агента, выбранного из металлических солей стеариновой кислоты, таких как стеарат магния, и металлических солей стеарилфумарата в расчете на массу сухой порошковой фармацевтической лекарственной формы. Предпочтительно, если сухая порошковая фармацевтическая лекарственная форма включает от около 0,5 до около 5 мас.%, например 1-2% мас./мас. измельченного стабилизирующего агента, выбранного из металлических солей стеариновой кислоты, таких как стеарат магния, и металлических солей стеарилфумарата в расчете на массу указанной сухой порошковой фармацевтической композиции. Подходящим является, если стабилизирующий агент, выбранный из металлической соли стеариновой кислоты, такой как стеарат магнии, и металлических солей стеарилфумарата, присутствует в количестве, достаточном для обеспечения физической стабильности указанной лекарственной формы. Физическая стабильность, например, демонстрируется, если ИК спектр и картина порошковой дифракции рентгеновских лучей композиции (особенно в отношении характеристических пиков соединения формулы (I)) являются постоянными и неизмененными после хранения композиции, содержащей соединение формулы (I), в течение 4 недель при 50°С.

В одном из вариантов осуществления сухая порошковая фармацевтическая лекарственная форма для ингаляций настоящего изобретения включает:

(ί) от около 0,02 до 50 мас.% 6-(2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-й]пиримидин-1ил)метил)-3-(2-хлорбензил)-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-5-ил)-Х,Ы-бис(2-метоксиэтил)гекс-5-инамида или его фармацевтически приемлемой соли, включая все его стереоизомеры, таутомеры и изотопные производные и сольваты в измельченной форме, в качестве активного ингредиента;

(ίί) от около 40 до около 99,88 мас.% измельченной лактозы и (ίίί) от около 0,1 до около 10 мас.% измельченного стабилизирующего агента, выбранного из металлических солей стеариновой кислоты (таких как стеарат магния) и металлических солей стеарилфумарата.

В следующем варианте осуществления сухая порошковая фармацевтическая лекарственная форма для ингаляций настоящего изобретения включает:

(ί) от около 0,02 до 50 мас.% 6-(2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-й]пиримидин-1ил)метил)-3-(2-хлорбензил)-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-5-ил)-Х,Ы-бис(2-метоксиэтил)гекс-5-инамида в форме свободного основания;

(ίί) от около 40 до около 99,88 мас.% измельченной лактозы и (ίίί) от около 0,1 до около 10 мас.% измельченного стабилизирующего агента, выбранного из металлических солей стеариновой кислоты (таких как стеарат магния) и металлических солей стеарилфумарата.

Следующий аспект настоящего изобретения относится к применению стабилизирующего агента,

- 8 025465 выбранного из металлических солей стеариновой кислоты, таких как стеарат магния, и металлических солей стеарилфумарата в фармацевтической лекарственной форме, содержащей соединение формулы (I) и лактозу, для повышения стабильности соединения формулы (I) к химическому разложению (особенно в отношении ионов металлов, катализирующих добавление воды к алкинной группе и/или гидролиза пиримидинонового кольца соединения формулы (I)) и к способу повышения стабильности фармацевтической лекарственной формы, содержащей соединение формулы (I) и лактозу, к химическому разложению (особенно в отношении ионов металлов, катализирующих добавление воды к алкинной группе и/или гидролиза пиримидинонового кольца соединения формулы (I)), включающему включение в указанную лекарственную форму стабилизирующего количества стабилизирующего агента, выбранного из металлических солей стеариновой кислоты, таких как стеарат магния, и металлических солей стеарилфумарата. Подходящим является, если указанное соединение формулы (I) находится в безводной твердой кристаллической форме.

Предпочтительным стабилизирующим агентом является стеарат магния.

Фармацевтические применения и способы введения

В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения предложено применение фармацевтической лекарственной формы настоящего изобретения в качестве ингибитора ИЗ-киназы.

В одном из вариантов осуществления предложено применение фармацевтической лекарственной формы настоящего изобретения для лечения ХОБЛ и/или астмы, в частности ХОБЛ или тяжелой астмы, путем ингаляции, т.е. путем местного введения в легкие. Важно, что введение в легкие обеспечивает благоприятные эффекты вводимого соединения, при этом минимизируя побочные эффекты для пациентов.

В одном из вариантов осуществления фармацевтическую лекарственную форму настоящего изобретения можно использовать для сенсибилизации пациентов к лечению кортикостероидами.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения удобно вводить в единичной дозированной форме и ее можно получить любым способом, хорошо известным специалистам в указанной фармацевтической области, например, как описано в КетшдГоп'к РЪагтасеиНса1 8с1спсс5. 171П ей., Маек РиЪНкЫпд Сотрапу, Еак1оп, РА., (1985).

Местное введение в легкие осуществляют, используя устройство для ингаляции.

Так, аспект настоящего изобретения включает устройство для ингаляции, включающее одну или более доз фармацевтической лекарственной формы согласно настоящему изобретению. Устройства для ингаляции для сухих порошковых лекарственных форм обычно активируются дыханием, так что доза выводится из устройства и вводится субъекту за счет силы легких путем ингаляции из мундштука. Однако необязательно можно использовать внешнюю энергию для того, чтобы способствовать введению дозы. Обычно устройства для ингаляции включают множественные дозы фармацевтической лекарственной формы согласно настоящему изобретению, например, 2 или 4, или 8, или 28, или 30, или 60, или больше доз. Так, устройство для ингаляции может включать месячный запас доз. Необязательно дозы можно делить, например, так, чтобы дозу вводить, используя две (или более) ингаляции из устройства для ингаляции. В соответствии с одним вариантом настоящего изобретения дозы лекарственной формы предварительно отмериваются в устройстве для ингаляции. Например, отмеренные дозы могут содержаться в карманах блистерных полосок или в дисках или внутри капсул. В одном из вариантов осуществления дозы отмеривают в капсулы для использования одну за другой в устройстве для ингаляции, приспособленном для доставки содержания капсул субъекту после ингаляции. В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения дозы отмеривают во время использования. Такие устройства для ингаляции включают резервуар сухого порошка и устройство для отмеривания дозы порошка (обычно на основании фиксированного объема) до или во время введения.

Примеры сухих порошковых устройств для ингаляции включают ЗРГЛНАТЕК, ЕСЫР8Е, КОТАНАЬЕК, НАЫОШАЬЕК, АЕКОЫ8ЕК, СУСЬОНАТЕК, ВН1Л/1 ΙΑΙ.ΗΗ/Μ/ΟΙΙΑΙ.ΗΙΤ РЬОУСАРЗ, ТУШСАРЗ, Х-САР8, ТЦКВОЗРШ, ЕРРЕННАЬЕК, ПККНАЬЕК, ТиКВиНАЬЕК, М^ТНАЬЕК, ТУКТНАЬЕК, ЫОУОРКЕК, 1ЖК1% ЗКУЕНАЬЕК, ОИЕЬ сухой порошковый ингалятор, МЮКОООЗЕ, АССиНАЬЕК, РиЬУШАЬ, ЕАЗУНАЬЕК, иЬТКАНАЬЕК, ТАШиЫ, РиЬМОГЕТ, ОММНАЬЕК, СУКОНАЬЕК, ТАРЕК, СОМХ, ХСЕЬОУАИ, РКОНАЬЕК и СЫСКНАЬЕК. Другим примером является ингалятор МОЫОООЗЕ.

Необязательно устройство для ингаляции может быть упаковано для хранения для защиты от проникновения влаги. Необязательно может быть использован осушитель внутри упаковки или внутри устройства. Предпочтительно, если фармацевтическая лекарственная форма согласно настоящему изобретению в устройстве для ингаляции защищена от света.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно также применять при лечении респираторных нарушений, включая ХОБЛ, хронические бронхиты, эмфиземы, астму, педиатрическую астму, кистозный фиброз, саркоидоз и идиопатический легочный фиброз, и особенно астмы, хронических бронхитов и ХОБЛ.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут содержать соединение формулы (I) в качестве единственного активного ингредиента, или могут содержать дополнительные активные ингредиенты, например, активные ингредиенты, которые можно применять при лечении вы- 9 025465 шеуказанных состояний. Например, возможные комбинации для лечения респираторных нарушений включают комбинации со стероидами (например, будезониомдом, беклометазоном, дипропионатом, флутиказонпропионатом, мометазонфуркатом, флутиказонфуроатом, флунизолидом, циклезонидом, триамцинолоном), бета-агонистами (например, тербуталином, бамбутеролом, салбутамолом, левалбутеролом, салметеролом, формотеролом, клетбутеролом, фенотеролом, броксатеролом, индакатеролом, репротеролом, прокатеролом, вивлантеролом) и/или ксантинами (например, теофиллином), мускариновыми антагонистами, (например, ипратропием, тиогтропием, окситропием, гликопирронием, гликопирролатом, аклидинием, троспием), антагонистами лейкотриена (например, зафирлукастом, пранлукастом, зилеутоном, монтелукастом) и/или ингибиторами р38 МАР киназы. Следует понимать, что любые из перечисленных выше активных ингредиентов можно использовать в форме фармацевтически приемлемых солей.

В одном из вариантов осуществления фармацевтическую лекарственную форму настоящего изобретения вводят в комбинации с противовирусным агентом, например, ацикловиром, оселтамивиром (ТатШи®), занамивиром (Рс1сп/а®) или интерфероном.

В одном из вариантов осуществления комбинацию соединения формулы (I) и другого активного ингредиента(ов) совместно получают в фармацевтической лекарственной форме настоящего изобретения. В другом варианте другой активный ингредиент(ы) вводят с одним или более отдельными фармацевтическими лекарственными формами.

В одном из вариантов осуществления соединение формулы (I) совместно формулируют в фармацевтической лекарственной форме настоящего изобретения или совместно вводят в отдельной лекарственной форме с кортикостероидом, например, для применения в поддерживающей терапии астмы, ХОБЛ или рака легких, включая профилактику последнего.

В одном из вариантов осуществления фармацевтическую лекарственную форму настоящего изобретения вводят путем ингаляции, и кортикостероид вводят перорально или путем ингаляции или в комбинации или отдельно.

Фармацевтическая лекарственная форма настоящего изобретения может также повторно сенсибилизировать состояние пациентов для лечения с помощью кортикостероидов, если ранее состояние пациентов стало трудно поддаваться лечению ими.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения применяемая доза указанной фармацевтической лекарственной формы равна дозе, подходящей для применения в качестве монотерапии, но ее вводят в комбинации с кортикостероидом.

В одном из вариантов осуществления используют такую дозу указанной фармацевтической лекарственной формы, которая будет суб-терапевтической в качестве единственного агента, и вводят в комбинации с кортикостероидом, тем самым восстанавливая восприимчивость пациента к последнему, в случае, если пациент ранее стал невосприимчивым к кортикостероиду.

Кроме того, фармацевтическая лекарственная форма настоящего изобретения может проявлять противовирусную активность и проявить полезность при лечении вирусных обострений воспалительных состояний, таких как астма и/или ХОБЛ.

Фармацевтическую лекарственную форму настоящего изобретения можно также применять для профилактики, лечения или ослабления вируса гриппа, риновируса и/или респираторного синцитиального вируса.

В одном из вариантов осуществления описанные в настоящем изобретении фармацевтические композиции можно применять при лечении или для профилактики рака, в частности рака легких, особенно путем местного введения в легкие.

Так, в следующем аспекте в настоящем изобретении предложена фармацевтическая лекарственная форма, как описано в данном описании, для применения при лечении одного или более вышеперечисленных состояний.

В следующем аспекте в настоящем изобретении предложена фармацевтическая лекарственная форма, как описано в данном описании, для изготовления лекарственного средства для лечения одного или более вышеперечисленных состояний.

В следующем аспекте в настоящем изобретении предложен способ лечения вышеперечисленных состояний, включающий введение субъекту эффективного количества фармацевтической лекарственной формы настоящего изобретения.

Фармацевтические композиции, описанные в данном описании, можно также использовать при получении лекарственных средств для лечения одного или более вышеперечисленных заболеваний.

Выражение лечение включает профилактику, а также терапевтическое лечение.

Если не указано иное, % значения, как использовано в данном описании, представляют собой % значения по массе (% мас.).

Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут иметь преимущество, так как они имеют повышенную физическую стабильность (например, по данным порошковой дифракции рентгеновских лучей и/или ИК анализа), повышенную химическую стабильность (например, по данным ВЭЖХ), повышенную физическую совместимость с лактозой, повышенную химическую совместимость с лактозой, улучшенное распределение частиц по размерам при введении (такое, которое следует из повышенной массы очень мелких

- 10 025465 частиц) или могут обладать другими благоприятными свойствами по сравнению с аналогичными лекарственными формами, которые не содержат стабилизирующего агента, выбранного из металлических солей стеариновой кислоты, таких как стеарат магния, и металлических солей стеарилфумарата.

Сокращения

Водн. - водный

ХОБЛ - хроническая обструктивная болезнь легких д- дублет

БСМ - дихлорметан

БМАР - 4-диметиламинопиридин

ДМСО - диметилсульфоксид

БР1 - сухой порошковый ингалятор

ДСК - дифференциальная сканирующая калориметрия

ДСП - динамическая сорбция паров

ЕБС.НС1 - гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (Е8+) - ионизация электрораспылением, режим определения положительных ионов

ЕЮАс - этилацетат

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ВЭЖХ-МС - высокоэффективная жидкостная хроматография масс-спектрометрия ч - час (часы)

ИК - инфракрасный ЬР8 - липополисахарид (М+Н)+ - протонированный молекулярный ион

МБ1 - дозирующий ингалятор

МеОН - метанол

МЕК - метилэтилкетон

МГц - мегагерц мин - минута (минуты) мл - миллиметр

МС - масс-спектрометрия тТОК - мишень рапамицина в клетках млекопитающих т/ζ - отношение масса/заряд ΝΗ-ОАс - ацетат аммония

ЯМР - ядерный магнитный резонанс (спектроскопия)

Рб(брр£)С1₂-1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) ч./млн - частей на миллион м.д. - миллионные доли кв - квартет квин. - квинтет отн. вл. - относительная влажность

ККТ - относительное время удерживания

К¹ - время удерживания

КТ - комнатная температура с - синглет т - триплет

ТВБМ8С1 - трет-бутилдиметилсилилхлорид

ТГ А - термогравиметрический анализ

ΤΝΡα - альфа фактор некроза опухоли

ХКРБ - порошковая дифракция рентгеновских лучей

Примеры Общие методики ВЭЖХ-МС

Осуществляли при использовании системы Ащ1сп1 НР1200 с колонками Ащ1сп1 Ех1еиб С18, (1,8 мкм, 4,6x30 мм) при 40°С и скорости потока 2,5-4,5 мл.мин^-1, элюируя с градиентом Н2О-МеСН содержащим 0,1% об./об. муравьиной кислоты, в течение 4 мин. Информация о градиенте: 0-3,00 мин, изменение с 95% Н2О-5% МеСН до 5% Н2О-95% МеСН 3,00-3,01 мин, выдерживают при 5% Н2О-95% МеСН скорость потока повышают до 4,5 мл.мин^-1; 3,01-3,50 мин, выдерживают при 5% Н2О-95% МеСЮ: 3,503,60 мин, возвращают к 95% Н₂О-5% МеСЮ; скорость потока снижают до 3,50 мл.мин^-1; 3,60-3,90 мин, выдерживают при 95% Н₂О-5% МеСЮ; 3,90-4,00 мин, выдерживают при 95% Н₂О-5% МеСЮ. скорость потока снижают до 2,5 мл.мин^-1. УФ-детектирование осуществляют на 254 нм, используя детектор с переменной длиной волны Ащ1еп1 01314В.

- 11 025465

Масс-спектры (МС)

Получали при использовании ионизации электрораспылением (Ε8Ι) в интервале т/ζ 60-2000 при частоте отбора образца 1,6 сек/цикл, используя ЛдПсШ 01956В, в интервале т/ζ 150-850 при частоте отбора образца 2 Гц, используя ^а1ег8 ΖΜΌ или в интервале т/ζ 100-1000 при частоте отбора образца 2 Гц, используя систему ЖХ-МС 81ιίιη;·ιάζιι 2010.

ЯМР-спектры 'Н ЯМР-спектры (за исключением полученных в примере 7) получали на спектрометре Вгикег Луаисе III с рабочей частотой 400 МГ ц при использовании в качестве стандарта остаточного недейтерированного растворителя.

¹Н ЯМР-спектр в примере 7 получен на спектрометре Вгикег Луаисе с рабочей частотой 600 МГц, с использованием в качестве стандарта остаточного недейтерированного растворителя.

Порошковая дифракция рентгеновских лучей (ΧΚΡϋ)

Картину порошковой дифракции рентгеновских лучей получали, используя дифрактометр ΡΑΝα1уйса1 (РЫНрк) Х'РейРКО ΜΡΌ, снабженный рентгеновской трубкой Си ЬЕР (45 кВ; 40 мА; ВгаддВгеи!аио; 8р1ииег 81аде), при использовании СиКа излучения и следующих условий измерения:

Тип сканирования: непрерывный

Интервал сканирования: с 3 до 50° 2Θ

Размер шага: 0,02°/шаг

Время счета импульсов: 30 с/шаг

Время одного оборота спиннера: 1 с

Тип излучения: СиКа

Программа траектории пучка

Программируемая, щель расходимости: 15 мМ

Щель Соллера: 0,04 рад

Фильтр пучка: 15 мм

Антирассеивающая щель: 1°

Ножевой луч: +

Дифрагируемая траектория пучка

Длинный противорассеивающий экран: +

Щель Соллера: 0,04 рад

Νί фильтр: +

Детектор: Х'Се1ега1ог

Образцы готовили нанесением на держатель образца с нулевым фоном.

Инфракрасная спектрометрия (ИК)

Использовали Микро ИК-спектроскопию нарушенного полного внутреннего отражения (микроΑΤΚ) и образец анализировали при использовании подходящих микро-ΑΤΚ аксессуаров и следующих условий измерения:

прибор: спектрометр Тйегто №хи8 670 ΡΤΙΚ число сканирований: 32

Разрешение: 1 см^-1

Длина волны: от 4000 до 400 см^-1

Детектор: ΌΤ08 с окнами КВг

Расщепитель пучка: 0е на КВг

Микро-ΑΤΚ аксессуары: Натск 8р1й Реа с кристаллом δί

Химическая стабильность - высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

ВЭЖХ анализ осуществляли при использовании следующих технических условий:

Колонка \Уа1ег8 ХЬпйде С18 (150x3,0x3,5 мм) или эквивалент (колонку считают эквивалентной, если ее характеристики отвечают параметрам δδΤ, и она демонстрирует сопоставимое разделение всех рассматриваемых соединений).

Температура колонки 35°С

Температура образца 10°С

Скорость потока 0,45 мл/мин

Объем впрыска: Объем вводимой пробы можно регулировать до тех пор, пока не превышаются аттестационные параметры системы (детектора и инжектора), и форма пиков основного соединения остается приемлемой. Так, например, 30 мкл считают подходящим значением.

УФ-детектирование на длине волны 2 55 нм

Подвижная фаза.

Получение и состав:

А 10 мМ ацетат аммония (0,771 г/л)+0,1% об./об. трифторуксусной кислоты в воде

В Ацетонитрил

Градиент: Время аналитической серии составляет 41 мин

- 12 025465

Растворитель	Время	(минуты)
	0	35	36	41	42	48
	95	30	0	0	95	95
%в	5	70	100	100	5	5

При использования указанного режима ВЭЖХ продукт разложения ΌΘ19492 элюируется при ККТ=0,86.

Химическая стабильность - сверхэффективная жидкостная хроматография (СЭЖХ)

СЭЖХ анализ осуществляли при использовании следующих технических условий:

Колонка ЛссцЩу ВЕН С18; 2,1x150 мм; 1,7 мкм или эквивалент (колонку считают эквивалентной, если ее характеристики отвечают параметрам 88Т, и она демонстрирует сопоставимое разделение всех рассматриваемых соединений)

Температура колонки 35°С

Температура образца 10°С

Скорость потока 0,40 мл/мин

Объем впрыска: Объем вводимой пробы можно регулировать до тех пор, пока не превышаются аттестационные параметры системы (детектора и инжектора) и форма пиков основного соединения остается приемлемой. Так, например, 4 мкл считают подходящим значением.

Детектирование: УФ-детектирование на 255 нм

Подвижная фаза.

Получение и состав:

А 10 мМ ацетат аммония (0,771 г/л)+0,1% об./об. трифторуксусная кислота в воде

В Ацетонитрил

Градиент: Время аналитической серии составляет 41 мин

Растворитель	Время (минуты)
	0	19	20	23	23, 5	28
%А	95	30	0	0	95	95
%В	5	70	100	100	5	5

При использовании указанного способа СЭЖХ продукт разложения Ό019492 элюируется при ККТ=0,92-0,93, и продукт разложения Ό019493 элюируется при ККТ=0,86-0,87.

Реагенты и поставщики

Ьас1оЬа1е200®: поставщик Рпе51апбГооб5. Размер частиц (8утра1ес): Ό10: 5-15 мкм; Ό50: 50-100 мкм; Ό90: 120-160 мкм.

Стеарат магния: Огабе Нуциа1® 2257; поставщик ЛуаШог. Размер частиц: Ό10: обычно 3 мкм; Ό50: обычно 11,5 мкм (10,5-16,5 мкм ); Ό90: обычно 24 мкм (18-28 мкм). Поставляется в виде тонко измельченного порошка.

Пример 1. Получение 6-(2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-б]пиримидин-1ил)метил)-3-(2-хлорбензил)-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-5-ил)-Х,Ы-бис(2-метоксиэтил)гекс-5-инамида5-бром-3-(2-хлорбензил)-2-(хлорметил)хиназолин-4(3Н)-он (2)

К перемешиваемому раствору 2-амино-6-бромбензойной кислоты (3,06 г, 14,2 ммоль) в толуоле (75 мл), охлажденному до 0°С на бане со льдом, добавляют пиридин (0,60 мл, 7,10 ммоль), затем добавляют по каплям раствор хлорацетилхлорида (2,26 мл, 28,4 ммоль) в толуоле (75 мл) в течение 1 ч. Полученную реакционную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры, затем нагревают при 115°С в течение 3 ч и затем оставляют охлаждаться до комнатной температуры. Объем растворителя уменьшают на половину выпариванием в вакууме. После выстаивания в течение ночи продукт осаждается, и его собирают фильтрованием, с получением 2-бром-6-(2-хлорацетамидо)бензойной кислоты (1а, Х=С1) (1,44 г) в виде белого твердого вещества: т/ζ 290/292 (М+Н)+ (Е8+). Полученный фильтрат концентрируют в вакууме и остаток тщательно растирают со смесью этанол/гептан, с получением 2-бром-6-(2гидроксиацетамидо)бензойной кислоты (1Ь, Х=ОН) (1,02 г, общий выход, 59%): т/ζ 274/276 (М+Н)+ (Е8+). Как соединение 1а, так и 1Ь можно использовать на следующей стадии без дополнительной очистки.

К перемешиваемой смеси соединения (1а) (7,50 г, 27,4 ммоль), 2-хлорбензиламина (5,00 мл, 41,05 ммоль) и триэтиламина (5,70 мл, 41,1 ммоль) в толуоле (250 мл) добавляют по каплям раствор треххлористого фосфора (2,60 мл, 30,1 ммоль) в толуоле (250 мл) в течение 1 ч. Полученную реакционную смесь нагревают при 110°С в течение 24 ч, после чего горячий раствор декантируют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток тщательно растирают с пропан-2-олом (50 мл), с получением указанного в заго- 13 025465 ловке соединения (2) (6,41 г, 59%) в виде желтого твердого вещества: К¹ 2,67 мин; т/ζ 397/399 (М+Н)' (Б§+).

3-(3-(трет-бутилдиметилсилилокси)фенил)-1Н-пиразоло[3,4-й]пиримидин-4-амин (6)

К перемешиваемой суспензии 3-йод-1Н-пиразоло[3,4-с]пиримидин-4-амина (3) (8,22 г, 31,5 ммоль), 3-фенолбороновой кислоты (13,0 г, 94,5 ммоль) и фосфата калия (10,0 г, 47,3 ммоль) в дегазированной смеси ДМФ/вода (3:2, 140 мл) добавляют Ρά(άρρί)01₂ (13,0 г, 15,7 ммоль). Полученную реакционную смесь продувают азотом, нагревают при 120°С в течение 2 ч и затем оставляют охлаждаться до комнатной температуры. Полученную реакционную смесь разбавляют ЕЮЛс (500 мл) и хлористо-водородной кислотой (2М, 500 мл) и полученную суспензию фильтруют. Фильтрат экстрагируют хлористоводородной кислотой (2М, 2x500 мл). Объединенные органические экстракты подщелачивают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия до рН 10. Образовавшийся осадок фильтруют и полученный фильтрат экстрагируют ЕЮЛс (3x1 л). Объединенные органические экстракты сушат, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме с получением серого твердого вещества. Все твердые материалы, образовавшиеся во время обработки, объединяют и тщательно растирают с Ό0Μ, с получением 3-(4-амино-1Нпиразоло[3,4-с]пиримидин-3-ил)фенола (5) (6,04 г, 84%) в виде серого твердого вещества: т/ζ 228 (М+Н)+ (Е8+).

К перемешиваемому раствору полученного фенола (5) (4,69 г, 20,66 ммоль) и имидазола (2,10 г, 30,99 ммоль) в сухом ДМФ (100 мл) добавляют ΤΒΌΜ8Ο1 (4,70 г, 30,99 ммоль). Через 16 ч добавляют дополнительную порцию имидазола (2,10 г, 30,99 ммоль) и ΤΒΌΜ8Ο1 (4,70 г, 30,99 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение 48 ч. Полученную реакционную смесь разбавляют водой (120 мл) и экстрагируют Ό0Μ (2x200 мл). Объединенные органические экстракты промывают водой (2x200 мл), сушат, фильтруют и объем уменьшают до примерно 100 мл выпариванием в вакууме. Полученную суспензию фильтруют и твердую часть промывают гептаном (50 мл, с получением указанного в заголовке соединения (6) (6,05 г, 85%) в виде не совсем белого твердого вещества: т/ζ 343 (М+Н)+ (Е8+).

Промежуточное соединение А: 2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло [3,4-й]пиримидин-1ил)метил)-5-бром-3-(2-хлорбензил)хиназолин-4(3Н)-он

К перемешиваемой смеси 5-бром-3-(2-хлорбензил)-2-(хлорметил)хиназолин-4(3Н)-она (2) (100 мг, 0,25 ммоль) и карбоната калия (42 мг, 0,30 ммоль) в ДМФ (2,5 мл) добавляют раствор 3-(3-(третбутилдиметилсилилокси)фенил)-1Н-пиразоло[3,4-й]пиримидин-4-амина (6) (94 мг, 0,28 ммоль) в ДМФ (2,5 мл) и полученную реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Тремя порциями добавляют карбонат калия (3x35 мг, 0,75 ммоль) в течение 30 ч, после чего растворитель удаляют в вакууме и неочищенный материал очищают колоночной флэш-хроматографией, элюируя 4,5% метанолом Ό0Μ, с получением указанного в заголовке промежуточного соединения А (94 мг, 64%) в виде не сосем белого твердого вещества: К¹ 2,01 мин; т/ζ 588/590 (М+Н)+, (Е8+).

Промежуточное соединение В: Ы,П-бис(2-метоксиэтил)гекс-5-инамид

К раствору гекс-5-иновой кислоты (7,11 г, 63,4 ммоль), ЕОС.НС1 (14,0 г, 72,9 ммоль) и ΌΜΆΡ (387 мг, 3,17 ммоль) в Οί'Μ (600 мл) при 0°С добавляют бис(2-метоксиэтил)амин (9,3 мл, 63 ммоль). Полученную смесь нагревают до комнатной температуры в течение 20 часов, и затем промывают хлористоводородной кислотой (1М, 2x500 мл) и водой (500 мл). Органический слой сушат и выпаривают в вакууме, с получением указанного в заголовке соединения, промежуточное соединение В, в виде желтого масла (16 г, 97%):

'II ЯМР (400 МГц, СОС1_;) δ: 1,88 (3Н, м), 2,26 (2Н, м), 2,49 (2Н, м), 3,32 (6Н, с), 3,51 (4Н, м), 3,55

- 14 025465 (4Н, м).

6-(2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-б]пиримидин-1-ил)метил)-3-(2-хлорбензил)-4оксо-3,4-дигидрохиназолин-5-ил)-М,Ы-бис(2-метоксиэтил)гекс-5-инамид (I)

Промежуточное соединение А ((2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-б]пиримидин-1ил)метил)-5-бром-3-(2-хлорбензил)хиназолин-4(3Н))-он (65,7 г, 1,0 экв.)), йодид меди (I) (1,06 г, 0,05 моль/моль), бис(трифенилфосфин)палладий(П)хлорид (3,92 г, 0,05 моль/моль), промежуточное соединение В (Ы,М-бис(2-метоксиэтил)гекс-5-инамид (63,42 г, 2,5 моль/моль) и диэтиламин (837,05 мл; 591,21 г, 7,5 л/моль) добавляют в 2 л реактор и полученную смесь дегазируют, продувая аргоном. Полученную реакционную смесь нагревают до 55°С (температура кипения с обратным холодильником) в течение 30 мин и затем перемешивают при 55°С. Через 2 ч смесь охлаждают до 22°С, затем концентрируют в вакууме, с получением полутвердого темно-коричневого остатка (201,0 г). Остаток затем растворяют в МЕК (781 мл) и добавляют воду (223 мл). После интенсивного перемешивания в течение 5 мин слои разделяют и водный слой удаляют. Органический слой промывают 10% мас./об. водным ИН₄ОЛс (300 мл) и 2% мас./об. водным ЫаС1 (112 мл), затем частично концентрируют в вакууме до получения гетерогенной смеси в МЕК (230 г). Полученную смесь перемешивают в течение 16 ч, затем фильтруют и образовавшийся осадок промывают МЕК (3x25 мл). Полученное твердое вещество сушат при 50°С в вакууме в течение 18 ч с получением неочищенного 6-(2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4б]пиримидин-1-ил)метил)-3-(2-хлорбензил)-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-5-ил)-М,Ы-бис(2-метоксиэтил)гекс-5-инамида (соединение формулы (I)) (54,13 г; 0, 66 экв.; 65,97% выход).

Неочищенное соединение формулы (I) (53,5 г; 1,00 экв.), метанол (7,28 мл, 0,1 л/моль) и дихлорметан (145,53 мл, 2 л/моль) перемешивают в 250 мл реакторе при 22°С. Через 4 ч твердую часть отфильтровывают и промывают дихлорметаном (29 мл), затем сушат в вакууме при 40°С в течение 18 ч, с получением соединения формулы (I) (указанное в заголовке соединение) (45,3 г; 0,85 экв.; 84,67% кристаллизационный выход) в виде не совсем белого твердого вещества.

Пример 2. Получение соединения формулы (I) в безводной твердой кристаллической форме

Все реакции, описанные в данном примере, ведут в токе газообразного азота. Соединение формулы (I), полученное по способу примера 1, (14,0 г) и 1-пропанол (210 мл, 15 л/кг) добавляют в 400 мл кристаллизационный реактор. Полученную гетерогенную смесь перемешивают и нагревают до 90°С (причем указанная смесь становится гомогенной при 85°С). После достижения температуры раствора 90°С добавляют акцептор металла (8ШаМе18® ТЫо1 0,7 г (5% мас./мас.)) и полученную смесь нагревают до 95°С. После перемешивания в течение 15 мин при 95°С смесь охлаждают до 90°С и перемешивают еще 2 ч при 90°С. Затем указанный акцептор металла отфильтровывают и гомогенный фильтрат снова перемешивают и нагревают до 95°С, затем охлаждают до 85°С и перемешивают в течение 8 ч. Затем полученный фильтрат охлаждают в течение 8 ч до 20°С и перемешивают дополнительно 6 ч при 20°С. Затем полученный продукт отфильтровывают и промывают 1-пропанолом (6 мл), затем сушат в вакууме при 50°С в течение 18 ч с получением соединения формулы (I) в безводной форме (12,6 г, 90%) в виде белого твердого вещества.

Вышеуказанный способ можно необязательно адаптировать для облегчения кристаллизации, используя затравку.

Пример 3. Анализ порошковой дифракции рентгеновских лучей соединения формулы (I) в твердой кристаллической безводной форме

Анализ порошковой дифракции рентгеновских лучей безводной формы соединения формулы (I) (пример 2) предпринимают, используя способ, описанный в разделе Общие методики. Полученная дифракционная картина представлена на фиг. 1. Картина порошковой дифракции рентгеновских лучей демонстрирует дифракционные пики без присутствия гало, тем самым, свидетельствуя о том, что оба материала являются кристаллическими. Характеристические пики форм представлены ниже в табл. 1.

- 15 025465

Таблица 1. Характеристические пики порошковой дифракции рентгеновских лучей для безводной формы соединения формулы (I)

Пики порошковой дифракции рентгеновских лучей (+0,2 градуса, 2-тета значения)

5, 6	Ί, 9	11,2	12,3	15,	6
17, 6	18,4	21, 4	22, 5	24,	2

Пример 4. ВЭЖХ анализ соединения формулы (I) в безводной твердой кристаллической форме (микронизированной) с лактозой

Химическую совместимость безводной твердой кристаллической формы соединения формулы (I) (микронизированного) в комбинации с лактозой определяют по данным ВЭЖХ анализа.

Микронизированную безводную форму соединения формулы (I) получают, используя устройство для микронизации - струйную мельницу (1,5 бар) (производства Но5ока\\а Л1рше), с получением следующего распределения по размерам частиц: 010=1,40 мкм; Б50=2,77 мкм и Б90=5,29 мкм (распределение по размерам частиц определяют, используя лазерную дифракцию (прибор Ма1ует Ма51ег51/ег).

Тестируемую порцию отбирают из исходной массы, содержащей 3,519 мг безводной формы соединения формулы (I) (микронизированной) и 6006,64 мг Ьас!оЬа1е200.

Полученные смеси анализируют, используя ВЭЖХ в момент времени ноль и после хранения в различных условиях. Образцы хранят в следующих условиях: (ί) 1, 2, 3 и 4 недели при 50°С (ίί), 1 неделю при 80°С (ίίί), 1, 2, 3 и 4 недели при 40°С/75% относительно влажности. Результаты, представленные в табл. 2, показывают, что значительное разложение наблюдается после хранения в течение 1 недели при 80°С, и разложение также наблюдается после хранения в течение 4 недель при 50°С. Полученные результаты свидетельствуют о том, что безводная форма (микронизированная) соединения формулы (I) химически нестабильна в комбинации с лактозой, и поэтому указанные два компонента несовместимы в фармацевтической лекарственной форме.

Пик при РКТ 0,86 был отнесен к гидратированному производному (производным) Ό019328 представленному выше.

Таблица 2. Результаты исследования стабильности твердой кристаллической безводной формы соединения формулы (I) (микронизированной) с лактозой

Условия	ЕКТ* 0,80	КЕТ* 0,86	КЕТ* 0,97	КЕТ* 1,14	КЕТ* 1,32
Т=ноль	0, 21	0, 12		0, 12	0, 13
1 неделя 50°С	0, 17	0, 23		0, 10	0, 12
1 неделя 80°С	0, 52	2, 53	0, 78	0, 19	0, 12
1 неделя 40°С/75% отн. вл.	0, 19	0, 12		0, 11	0, 13
2 недели 50°С	0, 19	0, 30		0, 12	0, 13
2 недели 40°С/75% отн. вл.	0, 17	0, 11		0, 12	0, 13
3 недели 50°С	0, 19	0, 38		0, 12	0, 14
3 недели 40°С/75% отн. вл.	0, 19	0, 08		0, 11	0, 14
4 недели 50°С	0, 19	0, 54		0, 11	0, 13
4 недели 40°С/75% отн. вл.	0, 18	0, 20		0, 11	0, 14

*Указан % площади по данным ВЭЖХ для ККТ. Соединение формулы (I) имеет ККТ=1,0

Пример 5. Анализ порошковой дифракции рентгеновских лучей/ИК соединения формулы (I) в безводной твердой кристаллической форме с лактозой и стеаратом магния

Смесь твердой кристаллической безводной формы (микронизированной) соединения формулы (I) с лактозой готовят добавлением 1% стеарата магния (микронизацию соединения формулы (I) осуществляют по способу примера 4).

Получение смеси: около 500 мг Ьас1оЬа1е200® и около 10 мг стеарата магния добавляют в агатовую ступку до смешивания, используя пестик и пластиковый шпатель (Ре1ои) в течение 5 мин. К полученной смеси добавляют около 500 мг безводного соединения формулы (I) (микронизированного) и смесь перемешивают еще в течение 5 мин.

Полученные смеси хранят при различных температурах и при различной влажности и анализируют, используя порошковую дифракцию рентгеновских лучей и ИК в момент времени 0 и после 1 недели и 4 недель хранения. Условия в течение 1 недели хранения: 40°С/75% относительная влажность открыто; 1 недели 50°С закрыто и 1 недели 80°С закрыто. Условия для определения стабильности хранения в течение 4 недель: 4 недели при 50°С закрыто; 4 недели 40°С/75% относительная влажность открыто.

ИК-спектр, полученный для момента времени ноль, представлен на фиг. 2. ИК получены для образцов при исследовании стабильности. Каких-либо различий не наблюдают в ИК-спектрах образцов, для 1 и 4 недель изучения стабильности и ИК-спектра, полученного в момент времени ноль. Какого-либо взаимодействия между безводной формой, лактозой и стеаратом магния не наблюдается, и безводная форма остается стабильной для всех условий хранения.

- 16 025465

ΧΡΌΚ спектры, полученные для момента времени ноль, представлены на фиг. 3. Спектры порошковой дифракции рентгеновских лучей получают для образцов, использованных в исследованиях стабильности. Полученные картины порошковой дифракции рентгеновских лучей для образцов исследования стабильности в течение 1 и 4 недель были идентичны дифракционной картине для момента времени ноль. Совершенно очевидно, что характеристические дифракционные пики безводной формы не изменяются в присутствии Ьас1ока1е200® и стеарата магния, свидетельствуя о том, что безводная форма является стабильной в присутствии лактозы и стеарата магния.

ИК-спектры не выявляют взаимодействия между безводной формой, лактозой и стеаратом магния, и результаты порошковой дифракции рентгеновских лучей свидетельствуют о том, что превращения твердого состояния безводной формы отсутствует. В результате можно сделать вывод, что безводная форма является физически совместимой с лактозой и стеаратом магния.

Пример 6. ВЭЖХ анализ соединения формулы (I) в безводной форме с лактозой и стеаратом магния

Химическую совместимость твердой кристаллической безводной формы (микронизированной) соединения формулы (I) в комбинации с лактозой и 1% стеарата магния определяют по данным ВЭЖХ анализа (микронизацию соединения формулы (I) осуществляют по способу примера 4).

Тестируемая порция, которую отбирают из исходной массы, содержит 3,704 мг безводной формы соединения формулы (I) (микронизированной), 6017,90 мг Ьас1ока1е200 и 67,33 мг стеарата магния.

Представленные в табл. 3 результаты свидетельствуют о значительном повышении химической стабильности по сравнению со стабильностью той же композиции в отсутствие стеарата магния (см. табл. 2), доказательством является только небольшое количество разложившегося вещества, наблюдаемое после хранения в течение 1 недели при 80°С (см., например, ККТ 0,86, 0,28%). Представленные результаты предполагают, что химическая стабильность безводной формы (микронизированной) соединения формулы (I) с лактозой существенно повышается при добавлении к указанной композиции стеарата магния. Как таковое, добавление стеарата магния улучшает химическую совместимость безводной формы (микронизированной) соединения формулы (I) в комбинации с лактозой, так что они должны быть совместимы в фармацевтической лекарственной форме.

Таблица 3. Результаты исследования стабильности для безводной формы соединения формулы (I) (микронизированной) с лактозой и стеаратом магния

Условия	ЕЕТ* 0,80	ЕЕТ* 0,86	ЕЕТ* 1,14	ЕЕТ* 1,32
	=ноль				0, 21	0, 10	0, 12	0, 13
1	неделя	5 0°С			0, 20	0, 11	0, 11	0, 13
1	неделя	8 0°С			0, 19	0, 28	0, 11	0, 13
1	неделя	40°С/755з	отн.	ВЛ.	0, 20	0, 11	0, 11	0, 13
2	недели	5 0°С			0, 20	0, 08	0, 11	0, 14
2	недели	40°С/75%	ОТН .	вл.	0, 21	0, 11	0, 11	0, 13
3	недели	5 0°С			0, 20	0, 13	0, 11	0, 13
3	недели	4 0°С/75%	отн.	вл.	0, 20	0, 11	0, 11	0, 14
4	недели	5 0°С			0, 19	0, 12	0, 11	0, 14
4	недели	40°С/755а	отн.	вл·	0, 20	0, 10	0, 10	0, 13

* Указан % площади по данным ВЭЖХ для ККТ.

Соединение формулы (I) имеет ККТ=1,0

Пример 7. СЭЖХ анализ соединения формулы (I) в безводной форме с лактозой и металлическими солями стеариновой кислоты

Химическую совместимость твердой кристаллической формы (микронизированной) соединения формулы (I) в комбинации с лактозой и 1% металлическими солями стеариновой кислоты (стеарат магния, стеарат натрия и стеарат кальция) определяют, используя данные СЭЖХ анализа (микронизацию соединения формулы (I) осуществляют по способу примера 4).

Тестируемые образцы готовят способом, приведенным в табл. 4 ниже.

- 17 025465

Таблица 4. Тестируемые образцы для СЭЖХ анализа после ускоренного теста на стабильность

Образец	Твердая кристаллическая безводная форма соединения формулы (I) (микрониЗированная) образец 1/образец 2	ЬасРоНа1е200 образец 1/ образец 2	Металлическая соль стеариновой кислоты образец 1/ образец 2
Только лекарственное средство	0,50 мг/0,47 мг
Лекарственное средство и лактоза	0,58 мг/0, 47 мг	749, 84 мг/750, 06 мг
Лекарственное средство, лактоза, стеарат Мд	0,46 мг/0, 51 МГ	749,97 мг/751,59 мг	7,40 мг/7,55 мг
Лекарственное средство, лактоза, стеарат Са	0,49 мг/0, 45 мг	751,08 мг/753, 53 мг	7,67 мг/7,80 мг
Лекарственное средство, лактоза, стеарат Ыа	0,48 мг/0, 45 мг	750,20 мг/750, 42 мг	7,78 мг/7,59 мг

Образцы помещают в ампулы, закрывают крышками и хранят при 80°С в течение 1 или 2 недель. Образец 1 используют для 1 недельных исследований, и образец 2 используют для 2 недельных исследований.

Результаты представлены в табл. 5 ниже.

Таблица 5. Результаты СЭЖХ анализа после ускоренного тестирования стабильности

Образец	1 неделя 80°С ЕЕТ* 0,87	1 неделя 80°С КЕТ* 0,92	2 недели 80°С НЕТ* 0,87	2 недели 80°С ЕЕТ* 0,92
Только лекарственное средство	0, 00	0, 08	0, 00	о, ое
Лекарственное средство и лактоза	0, 58	0, 39	1,80	0, 77
Лекарственное средство, лактоза, стеарат Мд	0,28	0, 29	0, Об	0, 18
Лекарственное средство, лактоза, стеарат Са	0, 11	0, 19	0, 17	0, 19
Лекарственное средство, лактоза, стеарат Ыа	0, 00	0, 09	0, 00	0, 09

*Указан % площади по данным ВЭЖХ для ККТ. Соединение формулы (I) имеет ККТ=1,0 Результаты масс-спектроскопического анализа свидетельствуют о том, что вещество с ККТ=0,87 представляет собой Ό019493, и вещество с ККТ=0,92 представляет собой Ό019492 (подтверждено данными ЯМР) (см. схему 1). Отнесения данных ЯМР для Ό019492 представлены в табл. 6.

Таблица 6. Распределение сигналов в спектре 'Н ЯМР для Ό019492

2н ямр (600 мгц, дмсо-а6) δ м.д.

ϋΟ19492

1,59 (квин., 7=7,30 Гц, 2Н) 2,20 (т, 7=7,55 Гц, 2Н) 2, 46-2, 49 (м, 2Н) 3,18 (д, Л=7,90 Гц, 6Н) 3,29-3,39 (м, 8Н) 4,23 (с, 2Н) 5,24 (с, 2Н) 5,76 (с, 2Н) 6,08 (д, 7=7,55 Гц, 1Н) 6,75 (т, 7=7,55 Гц, 1Н) 6,83 (дд, 7=8,12, 1,70 Гц, 1Н) 6,90 (д, 7=7,55 Гц, 1Н) 6,91-6,93 (м, 1Н) 7,01 (т, 7=7,55 Гц, 1Н) 7,09 (д, 7=7,55 Гц, 1Н) 7,29 (м, 7=7,93, 7,93 Гц, 1Н) 7,32 (д, 7=7,18 Гц, 1Н) 7,66 (д, 7=7,93 Гц, 1Н) 7,77-7, 82 (м, 1Н) 8,17 (с, 1Н) 9,67 (с, 1Н)

Результаты, представленные в табл. 5, свидетельствуют о значительном повышении химической стабильности лекарственных форм, содержащих металлические соли стеариновой кислоты, по сравнению с такими же композициями без металлических солей стеариновой кислоты, о чем свидетельствует относительно небольшое количество продуктов разложения после хранения в течение 1 или 2 недель при 80°С. Полученные результаты позволяют предположить, что химическая стабильность безводной формы

- 18 025465 соединения формулы (I) с лактозой существенно повышена за счет добавления к указанной композиции металлических солей стеариновой кислоты. Поэтому добавление металлических солей стеариновой кислоты улучшает химическую совместимость безводной формы соединения формулы (I) в комбинации с лактозой, так что они могут быть совместимы в фармацевтической лекарственной форме.

Пример 8. Получение фармацевтических композиций согласно способу настоящего изобретения

Иллюстративная фармацевтическая лекарственная форма настоящего изобретения состоит из 0,5 мас.% соединения формулы (I) (твердая кристаллическая безводная форма, микронизированная), 98,5 мас.% моногидрата лактозы (ингаляционной степени чистоты) и 1,0 мас.% стеарата магния, где мас.% всех компонентов даны в расчете на массу сухой фармацевтической лекарственной формы.

Во всем описании и в формуле изобретения, если из контекста не следует иное, следует понимать, что слово включают, и такие варианты, как включает и включающий означают включение указанного объекта, стадии, группы объектов или группы стадий, но не исключение какого-либо иного объекта, стадии, группы объектов или группы стадий.

Claims (7)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ повышения стабильности к химическому разложению фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) которое представляет собой 6-(2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-б]пиримидин-1ил)метил)-3-(2-хлорбензил)-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-5 -ил)-У,У-бис(2-метоксиэтил)гекс-5-инамид или его фармацевтически приемлемую соль, включая все его изотопные производные, в измельченной форме в качестве активного ингредиента; и измельченную лактозу, путем включения в указанную композицию стабилизирующего количества измельченного стабилизирующего агента, выбранного из металлических солей стеариновой кислоты, в которых металл представляет собой магний, кальций или натрий.
2. 2. Способ по п.1, в котором соединение формулы (I) находится в форме свободного основания.
3. 3. Способ по п.2, где указанное соединение формулы (I) находится в твердой кристаллической безводной форме.
4. 4. Способ по п.3, где указанное соединение формулы (I) находится в твердой кристаллической форме и его порошковая дифрактограмма рентгеновских лучей содержит пики при (±0,2) 17,6, 18,4, 22,5 и 24,2° 2-тета.
5. 5. Способ по любому из пп.1-4, где указанный стабилизирующий агент представляет собой стеарат магния.
6. 6. Способ по любому из пп.1-5, где активный ингредиент микронизирован.
7. 7. Способ по любому из пп.1-6, где лактоза представляет собой моногидрат α-лактозы.