CN101506211B - 激酶拮抗剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供作为PI3激酶，PI3激酶和酪氨酸激酶，PDK激酶和mTOR，或PI3激酶、mTOR和酪氨酸激酶的拮抗剂的新型化合物。

Description

激酶拮抗剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2006年4月4日提交的美国临时专利申请号60/744,269，和2006年4月4日提交的美国临时专利申请号60/744,270的优先权，二者均出于所有目的全文纳入本文以供参考。

在联邦资助研发下所作发明权利的声明

本发明受国立卫生研究院的基金(AI44009)的资助。政府对本发明享有某些权利。

发明背景

磷酸肌醇3-激酶(PI3-K)催化磷脂酰肌醇(PI)第二信使PI(3)P、PI(3，4)P2和PI(3，4，5)P3(PIP3)的合成(Fruman等，1998)。在适当的细胞环境中，这三种脂质控制不同的生理学过程，包括细胞生长、存活、分化和趋化性(Katso等，2001)。PI3-K家族包括底物特异性、表达模式和调节模式不同的15种激酶(Katso等，2001)。I类PI3-K(p110α、p110β、p110δ和p110γ)由酪氨酸激酶或G-蛋白偶联受体激活，从而产生PIP3，其结合下游效应物，例如Akt/PDK1途径、Tec家族激酶和Rho家族GTP酶。II类和III类PI3-K通过PI(3)P和PI(3，4)P2的合成而在胞内运输中起关键作用。PIKK是控制细胞生长(mTORC1)或监测基因组完整性(ATM、ATR、DNA-PK和hSmg-1)的蛋白激酶。

这些酶在不同病理生理学过程中的重要性使得PI3-K家族作为新一类药物靶点而引起极大关注(Ward等，2003)。最近发现原发性肿瘤中p110α频繁突变(Samuels等，2004)以及脂质磷酸酶PTEN(PI3-K信号转导的抑制剂)是通常呈失活状态的肿瘤抑制物的证据(Cantley和Neel，1999)更增加了这种兴趣。现正致力于开发小分子PI3-K抑制剂来治疗炎症和自身免疫疾病(p110δ、p110γ和mTOR)、血栓形成(p110β)、病毒感染(PIKK)和癌症(p110α、mTOR等)。最近，这些酶的第一种选择性抑制剂已见诸报道(Camps等，2005；Condliffe等，2005；Jackson等，2005；Knight等，2004；Lau等，2005；Sadhu等，2003)。

蛋白质酪氨酸激酶、蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶和脂质激酶是在细胞活性的调节和增殖中发挥关键作用的不同类蛋白质。抑制这些蛋白质类型的小分子有可能在不同的两个点干扰失调/病理学途径。例如，已知在几类癌症中，经酪氨酸激酶受体的信号转导失调。该信号转导途径涉及下游蛋白质，例如PI3激酶。已知经丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶mTOR(也称为哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)的信号转导调节细胞生长、细胞增殖、细胞迁移、细胞存活、蛋白质合成和转录。干扰mTOR途径可能成为各种人类疾病过程，特别是各类癌症的诱发因素。阻断蛋白质酪氨酸激酶和PI3激酶，mTOR和PI3激酶或mTOR、蛋白质酪氨酸激酶和PI3激酶的活性的抑制剂可能在两个或三个不同水平上阻止异常信号转导。小分子的双重或三重抑制可放大药物效力，增加该化合物的治疗潜能。

本发明通过提供一类新的PI3蛋白质激酶拮抗剂，PI3激酶和酪氨酸激酶拮抗剂，PI3激酶和mTOR拮抗剂，以及PI3激酶、mTOR和酪氨酸激酶拮抗剂而满足了本领域的这些和其它需求。

发明概述

现已发现本文所述的某些化合物是PI3激酶，PI3激酶和酪氨酸激酶，PI3激酶和mTOR，或PI3激酶、mTOR和酪氨酸激酶的强效拮抗剂。

一方面，本发明提供作为PI3-激酶亲和口袋(affinity pocket)结合拮抗剂的新激酶拮抗剂(例如，与PI3-激酶亲和口袋结合的吡唑并嘧啶拮抗剂或与PI3-激酶亲和口袋结合的吡咯并嘧啶拮抗剂)。PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂是含有PI3-激酶亲和口袋结合部分的化合物。本发明的与PI3-激酶亲和口袋结合的吡唑并嘧啶拮抗剂是含有PI3-激酶亲和口袋结合部分的取代的吡唑并嘧啶化合物。类似地，本发明的与PI3-激酶亲和口袋结合的吡咯并嘧啶拮抗剂是含有PI3-激酶亲和口袋结合部分的取代的吡咯并嘧啶化合物。

在另一方面，本发明提供如下所述的式(I)所示新型激酶拮抗剂。

在另一方面，本发明提供降低PI3激酶(例如，p110δ激酶)的催化活性的方法。所述方法包括使所述PI3激酶与活性降低量的本发明化合物(即，PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂，或式I所示拮抗剂)接触。

在另一方面，本发明提供在需要治疗的对象中治疗PI3激酶活性，PI3激酶活性和酪氨酸激酶活性，PI3激酶活性和mTOR活性，或PI3激酶活性、酪氨酸激酶活性和mTOR活性所介导疾病的方法。该方法包括给予所述对象治疗有效量的本发明化合物(即，PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂，或式I所示拮抗剂)。

附图简述

图1说明11种化学类型的PI3-K抑制剂的代表性化合物结构。

图2说明同种型-选择性PI3-K抑制剂的结构。A.p110γ的活性位点中ATP的结构，ATP结合口袋的不同区域加亮显示。B.所有报道的PI3-K抑制剂共结晶结构的比对。除PIK-39外，所有结构中Met804采取上构象(upconformation)。C.与p110γ结合的同种型选择性PI3-K抑制剂的结构或模型。D.与p110γ结合的多靶点PI3-K抑制剂的结构或模型。

图3说明了选择性探测和PI3-激酶亲和口袋。A.与p110γ结合的PIK-39的结构提示IC87114结合的模型。PIK-293和PIK-294是IC87114的吡唑并嘧啶类似物。PIK-294的间-苯酚伸入亲和口袋，该化合物更有效地抗I类PI3-K。B.(左)p110δ抑制剂和p110α/多靶点抑制剂的突变型和野生型之间的IC50比值。(中间)两种p110δ抑制剂与野生型、M725I和M725V p110δ结合的剂量反应曲线。(右)提示p110δ中M725I和M725V突变对不同类型的抑制剂结合的影响的模型。

图4.其它PI3-K抑制剂和无活性类似物的结构。

图5.选择性PI3-K抑制剂抵御脂质激酶的IC50值(μM)。

图6.PI3-K抑制剂对蛋白质激酶的抑制。数值表示有10μM抑制剂存在下剩余的活性％。数值是一式三份检测的平均值。适当处将IC50值置于括号内(μM)。

图7列出人p110δ激酶的序列。

图8列出人p110γ激酶的序列。

图9列出人p110α激酶的序列。

图10列出人p110β激酶的序列。

发明详述

I.定义

本文所用的缩写具有它们在化学和生物学领域中的常规意义。

如果利用常规化学式描述取代基，则它们从左向右书写同样包括从右向左书写结构所得的化学上相同的取代基，例如-CH₂O-等于-OCH₂-。

除非另有表述，术语“烷基”本身或作为另一取代基的一部分表示具有指定碳原子数(即，C₁-C₁₀表示1-10个碳)的直链(即，无分支)或支链，或环形烃基团，或它们的组合，烷基可以是完全饱和的，单一不饱和或多不饱和的，可以包括二价或多价基团。饱和烃基团的例子包括但不限于：例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基、诸如正戊基、正己基、正庚基、正-辛基的同系物和异构体等基团。不饱和的烷基是具有一个或多个双键或三键的基团。不饱和烷基的例子包括但不限于：乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基和高级同系物及异构体。

术语“亚烷基”本身或作为另一取代基的一部分表示衍生自烷基的二价基团，例如但不限于-CH₂CH₂CH₂CH₂-、-CH₂CH＝CHCH₂-、-CH₂C≡CCH₂-、-CH₂CH₂CH(CH₂CH₂CH₃)CH₂-。烷基(或亚烷基)通常具有1-24个碳原子，本发明优选具有10个或更少碳原子的那些基团。“低级烷基”或“低级亚烷基”是通常具有8个或更少碳原子的短链烷基或亚烷基。

除非另有表述，术语“杂烷基”本身或与另一术语组合表示稳定的直链或支链，或环状烃基团，或它们的组合，杂烷基由至少一个碳原子和至少一个选自O、N、P、Si和S的杂原子构成，其中氮、磷和硫原子可任选被氧化，而氮杂原子可任选季铵化。可将杂原子O、N、P和S及Si置于杂烷基的任何内部位置或烷基与该分子的其余部分相连的位置。例子包括但不限于：-CH₂-CH₂-O-CH₃、-CH₂-CH₂-NH-CH₃、-CH₂-CH₂-N(CH₃)-CH₃、-CH₂-S-CH₂-CH₃、-CH₂-CH₂，-S(O)-CH₃、-CH₂-CH₂-S(O)₂-CH₃、-CH＝CH-O-CH₃、-Si(CH₃)₃、-CH₂-CH＝N-OCH₃、-CH＝CH-N(CH₃)-CH₃、O-CH₃、-O-CH₂-CH₃和-CN。最多两个或三个杂原子可以是连续的，例如-CH₂-NH-OCH₃和-CH₂-O-Si(CH₃)₃。类似地，术语“杂亚烷基”本身或作为另一取代基的一部分表示衍生自杂烷基的二价基团，例如但不限于：-CH₂-CH₂-S-CH₂-CH₂-和-CH₂-S-CH₂-CH₂-NH-CH₂-。对于杂亚烷基，杂原子还可以占据链末端的一端或两端(例如，亚烷基氧代(alkyleneoxo)、亚烷基二氧代(alkylenedioxo)、亚烷基氨基、亚烷基二氨基等)。此外，对于亚烷基和杂亚烷基连接基团，连接基团化学式的书写方向不暗示该连接基团的取向。例如，式-C(O)OR′-同时代表-C(O)OR′-和-R′OC(O)-。如上所述，本文所用的杂烷基包括通过杂原子与分子的其余部分相连的那些基团，例如-C(O)R′、-C(O)NR′、-NR′R＂、-OR′、-SR′和/或-SO₂R′。如果在述及“杂烷基”之后述及具体杂烷基，例如-NR′R＂等，应该理解为术语杂烷基和-NR′R＂不是多余的或互相排斥的。叙述具体杂烷基反而是为了更清楚。因此，在本文中术语“杂烷基”不应理解成排除具体的杂烷基，例如-NR′R”等。

除非另有表述，术语“环烷基”和“杂环烷基”本身或与其它术语的组合分别表示环状“烷基”和“杂烷基”。此外，对于杂环烷基，杂原子可占据该杂环与分子的其余部分相连的位置。环烷基的例子包括但不限于：环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环烷基的例子包括但不限于：1-(1，2，5，6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基、1-哌嗪基、2-哌嗪基等。术语“亚环烷基(cycloalkylene)”和“杂环亚烷基(heterocycloalkylene)”分别指环烷基和杂环烷基的二价衍生物。

除非另有表述，术语“卤代”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，诸如“卤代烷基”等术语表示包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C₁-C₄)烷基”表示包括但不限于：三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。

除非另有表述，术语“芳基”表示多不饱和的、芳族烃取代基，其可以是单环或稠合在一起(例如，萘基)或共价相连的多环(优选1-3个环)。术语“杂芳基”指含有1-4个杂原子(在多环情况中，各杂原子分处不同的环中)的芳基(或环)，所述杂原子选自N、O或S，其中氮和硫原子任选被氧化，氮原子任选季铵化。杂芳基可以通过碳原子或杂原子与分子的其余部分相连。芳基和杂芳基的非限制性例子包括：苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、6-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。因此，术语“杂芳基”包括至少一个环包含至少两个双键的稠环结构。上述芳基和杂芳基环体系各自的取代基可选自下述可接受的取代基。术语“亚芳基”和“杂亚芳基”分别指芳基和杂芳基的二价基团。

为简明起见，术语“芳基”与其它术语(例如，芳基氧代(aryloxo)、芳基硫氧代(arylthioxo)、芳基烷基)联用时，包括上述芳环和杂芳环。因此，术语“芳基烷基”表示其中芳基与烷基相连的那些基团(例如，苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括其中的碳原子(例如亚甲基)被，例如氧原子替代的那些烷基(例如，苯氧基甲基、2-吡啶基氧基甲基、3-(1-萘基氧基)丙基等)。然而，本文所用的术语“杂芳基”表示只涵盖用一个或多个卤素取代的芳基。

如果杂烷基、杂环烷基或杂芳基包含特定数目的成员(例如，“3-7元”)，术语“元”指碳原子或杂原子。

本文所用的术语“氧代(oxo)”表示与碳原子双键相连的氧。

上述各术语(例如，“烷基”、“杂烷基”、“环烷基”和“杂环烷基”、“芳基”、“杂芳基”以及它们的二价衍生物)表示包括所述基团的取代和未取代形式。各类基团的优选取代基如下所示。

烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基单价和二价衍生基团(包括常称为亚烷基、烯基、杂亚烷基(heteroalkylene)、杂烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基和杂环烯基)的取代基可以是以下基团(但不限于)的一种或多种：-OR′、＝O、＝NR′、＝N-OR′、-NR′R”、-SR′、-卤素、-SiR′R”R”′、-OC(O)R′、-C(O)R′、-CO₂R′，-C(O)NR′R”、-OC(O)NR′R”、-NR”C(O)R′、-NR′-C(O)NR”R”′、-NR”C(O)OR′、-NR-C(NR′R”)＝NR′“、-S(O)R′、-S(O)₂R′、-S(O)₂NR′R”、-NRSO₂R′、-CN和-NO₂，数量范围是0-(2m′+1)，其中m′是这种基团中的碳原子总数。R′、R”、R”′和R”“各自独立优选指氢、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基(例如，用1-3个卤素取代的芳基)、取代或未取代的烷基、烷氧基或硫代烷氧基或芳基烷基。本文所用的“烷氧基”是经二价氧基团与分子的其余部分相连的烷基。例如，与R′、R”、R′“和R”“基团中有多个存在时这些基团各自独立选择一样，本发明化合物包含一个以上R基团时，R基团各自独立选择。当R’和R”与同一氮原子相连时，它们可与该氮原子组合形成4-、5-、6-或7-元环。例如，-NR’R”表示包括但不限于：1-吡咯烷基和4-吗啉基。本领域技术人员从上述取代基讨论中应该知道术语“烷基”表示包括含有与除氢以外的基团相连的碳原子的基团，例如卤代烷基(如-CF₃和-CH₂CF₃)和酰基(如-C(O)CH₃、-C(O)CF₃、-C(O)CH₂OCH₃等)。

与上述烷基的取代基相似，芳基和杂芳基(以及它们的二价衍生物)的示范性取代基可以变化，可以选自，例如：卤素、-OR′、-NR′R”、-SR′、-卤素、-SiR′R”R”′、-OC(O)R′、-C(O)R′、-CO₂R′、-C(O)NR′R”、-OC(O)NR′R”、-NR”C(O)R′、-NR′-C(O)NR”R”′、-NR”C(O)OR′、-NR-C(NR′R”R′“)＝NR”“、-NR-C(NR′R”)＝NR′“、-S(O)R′、-S(O)₂R′、-S(O)₂NR′R”、-NRSO₂R′、-CN和-NO₂、-R′、-N₃、-CH(Ph)₂、氟(C₁-C₄)烷氧基(alkoxo)和氟(C₁-C₄)烷基，数量范围是0至芳环体系上开放化合价(open valence)的总数；其中R′、R”、R”′和R”“优选独立选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基和取代或未取代的杂芳基。例如，与R′、R”、R′“和R”“基团中有多个存在时这些基团各自独立选择一样，本发明化合物包含一个以上R基团时，R基团各自独立选择。

芳环或杂芳环的毗邻原子上的两个取代基可任选形成式-T-C(O)-(CRR′)_q-U-所示的环，其中T和U独立为-NR-、-O-、-CRR′-或单键，q是0-3的整数。或者，芳环或杂芳环的毗邻原子上的两个取代基可任选被式-A-(CH₂)_r-B-所示取代基替代，其中A和B独立为-CRR′-、-O-、-NR-、-S-、-S(O)-、-S(O)₂-、-S(O)₂NR′-或单键，r是1-4的整数。如此形成的新环的单键之一可任选被双键替代。或者，芳环或杂芳环的毗邻原子上的两个取代基可任选被式-(CRR′)_s-X′-(C＂R″′)_d-所示取代基替代，其中s和d独立为0-3的整数，X′是-O-、-NR′-、-S-、-S(O)-、-S(O)₂-或-S(O)₂NR′-。取代基R、R′、R”和R′“优选独立选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基，以及取代或未取代的杂芳基。

本文所述的术语“杂原子”或“环杂原子”表示包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、磷(P)和硅(Si)。

本文所用的“氨基烷基”指与亚烷基连接键共价相连的氨基。所述氨基是-NR′R＂，其中R′和R＂通常选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。

本文所用的“取代基”表示选自以下部分的基团：

(A)-OH、-NH₂、-SH、-CN、-CF₃、-NO₂、氧代、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基、未取代的杂芳基，和

(B)烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，它们用至少一个选自以下的取代基取代：

(i)氧代、-OH、-NH₂、-SH、-CN、-CF₃、-NO₂、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基、未取代的杂芳基，和

(ii)烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，它们用至少一个选自以下的取代基取代：

(a)氧代、-OH、-NH₂、-SH、-CN、-CF₃、-NO₂、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基、未取代的杂芳基，和

(b)烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，用至少一个选自以下的取代基取代：氧代、-OH、-NH₂、-SH、-CN、-CF₃、-NO₂、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基和未取代的杂芳基。

本文所用的“尺寸限制的取代基”或“尺寸限制的取代基团”表示选自上文“取代基”所述的所有取代基的基团，其中各取代或未取代的烷基是取代或未取代的C₁-C₂₀烷基，各取代或未取代的杂烷基是取代或未取代的2-20元杂烷基，各取代或未取代的环烷基是取代或未取代的C₄-C₈环烷基，各取代或未取代的杂环烷基是取代或未取代的4-8元杂环烷基。

本文所用的“低级取代基”或“低级取代基团”表示选自上文“取代基”所述的所有取代基的基团，其中各取代或未取代的烷基是取代或未取代的C₁-C₈烷基，各取代或未取代的杂烷基是取代或未取代的2-8元杂烷基，各取代或未取代的环烷基是取代或未取代的C₅-C₇环烷基，各取代或未取代的杂环烷基是取代或未取代的5-7元杂环烷基。

本发明的化合物可作为盐存在。本发明包括这些盐。适用的盐形式的例子包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、马来酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、延胡索酸盐、酒石酸盐(例如(+)-酒石酸盐，(-)-酒石酸盐或它们包含外消旋混合物的混合物)、琥珀酸盐、苯甲酸盐和氨基酸，例如谷氨酸的盐。可通过本领域技术人员已知的方法制备这些盐。还包括碱加成盐，例如钠、钾、钙、铵、有机氨基或镁盐，或类似的盐。当本发明化合物含有相对碱性的官能团时，可将中性形式的这种化合物与充足量的所需酸(净相的或在合适的惰性溶剂中)接触以获得酸加成盐。可接受的酸加成盐的例子包括衍生自无机酸以及有机酸的盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、单氢碳酸(monohydrogencarbonic)、磷酸、单氢磷酸(monohydrogenphosphoric)、二氢磷酸(dihydrogenphosphoric)、硫酸、单氢硫酸(monohydrogensulfuric)、氢碘酸或亚磷酸等，所述有机酸例如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、延胡索酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对-甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等。还包括氨基酸的盐，例如谷氨酸盐等，和有机酸，例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸(galactunoric acid)的盐。本发明的某些具体化合物同时含有碱性和酸性官能团，从而能将这些化合物转化成碱加成盐或酸加成盐。

优选将所述的盐与碱或酸接触并以常规方式分离亲代化合物(parentcompound)来重新生成中性形式的这些化合物。所述化合物的亲代形式在某些物理特性上不同于各种盐形式，例如在极性溶剂中的溶解性。

本发明的某些化合物可存在未溶剂化的形式以及溶剂化的形式，包括水合形式。溶剂化的形式通常等于未溶剂化的形式，属于本发明的范围。本发明的某些化合物可存在多种结晶或无定形的形式。就本发明考虑的应用而言，所有物理形式通常是等效的，属于本发明的范围。

本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学或手性中心)或双键，对于氨基酸，可按照绝对立体化学将对映体、外消旋物、非对映体、互变体、几何异构体、立体异构形式定义为(R)-或(S)-，或(D)-或(L)-，各异构体属于本发明的范围。本发明的化合物不包括本领域已知太不稳定从而不能合成和/或分离的那些化合物。本发明表示应包括外消旋形式和光学纯形式的化合物。可利用手性合成子或手性试剂制备光学活性的(R)-和(S)-，或(D)-和(L)-异构体，或可采用常规技术拆分(resolve)。当本文所述化合物含有烯键或其它几何不对称中心时，除非另有表述，所述化合物应同时包括E和Z几何异构体。

本文所用的术语“互变体”指平衡存在，而且不难从一种异构形式转化成另一种的两种或更多种结构异构体中的一种。

本领域技术人员应该知道本发明的某些化合物可存在互变形式，所述化合物的所有这种互变形式属于本发明的范围。

除非另有表述，本文所述的结构还表示包括该结构的所有立体化学形式，即各手性中心的R和S构型。因此，本发明化合物的一种立体化学异构体以及对映体和非对映体的混合物属于本发明的范围。

除非另有表述，本文所述的结构还表示包括区别仅在于存在一个或多个富含同位素的原子的化合物。例如，除了用氘或氚取代氢，或用富含¹³C-或¹⁴C的碳取代碳以外，具有目前结构的化合物属于本发明的范围。

本发明的化合物还可在构成这些化合物的一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素，如氚(³H)、碘-125(¹²⁵I)或碳-14(¹⁴C)对这些化合物作放射性标记。本发明化合物的所有同位素差异(无论是放射性的或不是)均属于本发明的范围。

术语“药学上可接受的盐”表示包括活性化合物的盐，所述盐可根据本文所述化合物上发现的特定取代基部分，用相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物含有相对酸性官能团时，可通过将中性形式的这些化合物与充足量的所需碱(净相或在合适的惰性溶剂中)接触以获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐的例子包括钠、钾、钙、铵、有机氨基或镁盐，或相似的盐。当本发明化合物含有相对碱性的官能团时，可将中性形式的这种化合物与充足量的所需酸(净相的或在合适的惰性溶剂中)接触以获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的例子包括衍生自无机酸以及相对无毒的有机酸的盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、单氢碳酸、磷酸、单氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、单氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等，所述有机酸例如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、延胡索酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对-甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等。还包括氨基酸的盐，例如谷氨酸盐等，和有机酸，例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐(参见，例如Berge等，“药物盐”(Pharmaceutical Salts)，Journal of Pharmaceutical Science，1977，66，1-19)。本发明的某些具体化合物同时含有碱性和酸性官能团，从而能将这些化合物转化成碱加成盐或酸加成盐。

除了盐形式，本发明提供前药形式的化合物。本文所述化合物的前药是不难在生理条件下经化学改变而提供本发明化合物的那些化合物。此外，可在离体环境中通过化学或生物化学方法将前药转化成本发明化合物。例如，当将前药置于含合适的酶或化学试剂的透皮贴片储器中时，其可缓慢转化成本发明化合物。

在本文中，利用术语“一”、“一个”或“一种”表述一组取代基时，其表示至少一个。例如，某化合物被“一个”烷基或芳基取代时，该化合物任选被至少一个烷基和/或至少一个芳基取代。此外，某部分被R取代基取代时，该基团可称为“R-取代的”。如果某部分是R-取代的，则该部分被至少一个R取代基取代，而且各R取代基任选不同。

本发明化合物的描述受本领域技术人员已知的化学键合原则的限制。因此，如果某基团可以被许多取代基中的一个或多个取代，那么这些取代的选择应符合化学键合的原则，从而得到本身不会不稳定和/或本领域普通技术人员已知在环境条件，例如水性、中性和几种已知的生理条件下可能(不会)不稳定的化合物。例如，杂环烷基或杂芳基经环杂原子与分子的其余部分相连符合本领域技术人员已知的化学键合原则，从而能避免生成本身不稳定的化合物。

术语“治疗的”或“治疗”指在治疗或改善损伤、病状或病症中的任何成功的迹象，包括任何主观或客观参数，例如症状的减少、缓解、降低损伤、病状或病症或使得患者对该损伤、病状或病症更能够耐受；减缓退化或衰退的速度；使得退化的终点不那么虚弱；改善患者的身体或精神健康。症状的治疗或缓解可以依据主观或客观参数，包括体检、神经精神医学检查和/或精神病学评估的结果。例如，本文所述的某些方法通过降低癌症发病率或导致癌症消退而成功地治疗癌症。

“有效量”是足以导致治疗、预防或降低疾病的一种或多种症状的用量。“有效量”还指“治疗有效量”。一种或多种症状的降低(和该短语在语法上的等价短语)表示所述一种或多种症状的严重性或频率降低，或所述一种或多种症状的消除。药物的“预防有效量”是给予对象时会具有所需预防效果，例如防止或延迟疾病发作(或复发)，或降低疾病或其症状发作(或复发)可能性的药物用量。给予一次剂量不一定会产生完全的预防效果，只有在给予有效量剂量后才会产生。因此，可以在一次或多次给药中给予预防有效量。本文所用的“活性降低量”指与不存在拮抗剂时相比，将酶的活性降低所需的拮抗剂用量。本文所用的“功能干扰量”指与不存在拮抗剂时相比，干扰破骨细胞或白细胞功能所需的拮抗剂用量。

本文所用的“拮抗剂”或“本发明化合物”指式(I)所示化合物或PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂(例如，PI3-激酶亲和口袋结合吡唑并嘧啶拮抗剂，或PI3-激酶亲和口袋结合吡咯并嘧啶拮抗剂)。“式(I)所示化合物”包括下述式(I)-(X)所示化合物。

II.激酶拮抗剂

在一方面，本发明提供新型激酶拮抗剂。激酶拮抗剂可以是PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂(例如，PI3-激酶亲和口袋结合吡唑并嘧啶拮抗剂，或PI3-激酶亲和口袋结合吡咯并嘧啶拮抗剂)或式(I)所示化合物。本发明的PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂是含有PI3-激酶亲和口袋结合部分的化合物。本发明的PI3-激酶亲和口袋结合吡唑并嘧啶拮抗剂是含有PI3-激酶亲和口袋结合部分的取代的吡唑并嘧啶化合物。类似地，本发明的PI3-激酶亲和口袋结合吡咯并嘧啶拮抗剂是含有PI3-激酶亲和口袋结合部分的取代的吡咯并嘧啶化合物。

所述PI3-激酶亲和口袋结合部分是与p110α、p110β、p110γ或p110δ激酶接触后能填充相应PI3-激酶亲和口袋内空间的取代基。在一些实施方式中，PI3-激酶亲和口袋结合部分替代PI3-激酶亲和口袋中的至少一个水分子。PI3-激酶亲和口袋结合部分还可与PI3-激酶亲和口袋部分的一个或多个氨基酸相互作用。PI3-激酶亲和口袋的描述和测定取代基是否填充PI3-激酶亲和口袋内空间的方法如下所示。

在一些实施方式中，本发明的激酶拮抗剂如下式所示：

在式(I)中，R¹是氢、卤素、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基、或取代或未取代的杂芳基。R²是卤素、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基、或取代或未取代的杂芳基。X是＝N-或＝C(H)-。R³⁶是卤素、-NR³⁷R³⁸、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基、或取代或未取代的杂芳基。R³⁷和R³⁸独立为氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基、或取代或未取代的杂芳基。在一些实施方式中，R³⁷和R³⁸独立为氢、或未取代的烷基。R²可以是PI3-激酶亲和口袋结合部分。

在一些实施方式中，R³⁶是-NH₂。因此，激酶拮抗剂可如下式所示：

在一些实施方式中，R¹、R²和X如以上式(I)所述。在一些实施方式中，X是＝N-。

在式(I)和(II)的一些实施方式中，R¹是氢、R³-取代或未取代的烷基、R³-取代或未取代的杂烷基、R³-取代或未取代的环烷基、R³-取代或未取代的杂环烷基、R³-取代或未取代的芳基、或R³-取代或未取代的杂芳基。R²是卤素、R⁴-取代的芳基、或取代或未取代的杂芳基；

R³是卤素、-CN、-OR⁵、-S(O)_nR⁶、-NR⁷R⁸、-C(O)R⁹、＝N-NH₂、-NR¹⁰-C(O)R¹¹、-NR¹²-C(O)-OR¹³、-C(O)NR¹⁴R¹⁵、-NR¹⁶S(O)₂R¹⁷、-S(O)₂NR¹⁸、R¹⁹-取代或未取代的烷基、R¹⁹-取代或未取代的杂烷基、R¹⁹-取代或未取代的环烷基、R¹⁹-取代或未取代的杂环烷基、R¹⁹-取代或未取代的芳基、或R¹⁹-取代或未取代的杂芳基。标记n是0-2的整数。

R⁴是卤素、-CN、-OR²⁰、-S(O)_qR²¹、-NR²²R²³、-C(O)R²⁴、＝N-NH₂、-NR²⁵-C(O)R²⁶、-NR²⁷-C(O)-OR²⁸、-C(O)NR²⁹R³⁰、-NR³¹S(O)₂R³²、-S(O)₂NR³³、R³⁴-取代或未取代的烷基、R³⁴-取代或未取代的杂烷基、R³⁴-取代或未取代的环烷基、R³⁴-取代或未取代的杂环烷基、R³⁴-取代或未取代的芳基、或R³⁴-取代或未取代的杂芳基。标记q表示0-2的整数。

R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R²⁰、R²¹、R²²、R²³、R²⁴、R²⁵、R²⁶、R²⁷、R²⁸、R²⁹、R³⁰、R³¹、R³²和R³³独立为氢、R³⁵-取代或未取代的烷基、R³⁵-取代或未取代的杂烷基、未取代的环烷基、R³⁵-取代或未取代的杂环烷基、R³⁵-取代或未取代的芳基、或R³⁵-取代或未取代的杂芳基。R¹⁹、R³⁴和R³⁵独立为氢、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基、或未取代的杂芳基。

在一些实施方式中，R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R²⁰、R²¹、R²²、R²³、R²⁴、R²⁵、R²⁶、R²⁷、R²⁸、R²⁹、R³⁰、R³¹、R³²、和R³³独立为氢、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基、或未取代的杂芳基。R²⁰、R²¹、R²²、R²³、R²⁴、R²⁵、R²⁶、R²⁷、R²⁸、R²⁹、R³⁰、R³¹、R³²、和R³³可独立为氢、未取代的烷基、或未取代的杂烷基。

R¹可以是R³-取代或未取代的烷基、R³-取代或未取代的环烷基、或R³-取代或未取代的芳基。R¹还可以是R³-取代或未取代的烷基、或R³-取代或未取代的环烷基。在一些实施方式中，R¹是R³-取代或未取代的C₁-C₄烷基、或R³-取代或未取代的C₃-C₆环烷基。在其它实施方式中，R¹是R³-取代或未取代的C₁-C₄烷基、或R³-取代或未取代的环戊基。R¹还可以是甲基或未取代的C₃-C₆支链烷基(例如异丙基、异丁基等)。

在某些实施方式中，R³是R¹⁹-取代或未取代的烷基、R¹⁹-取代或未取代的环烷基、或R¹⁹-取代或未取代的芳基。R³还可以是R¹⁹-取代或未取代的烷基、R¹⁹-取代或未取代的环烷基、或R¹⁹-取代或未取代的芳基。在一些实施方式中，R³是R¹⁹-取代或未取代的烷基、或R¹⁹-取代或未取代的环烷基。

R¹⁹可以是未取代的烷基或未取代的环烷基。在一些实施方式中，R¹⁹是未取代的C₁-C₄烷基或未取代的环戊基。

在一些实施方式中，R²是R⁴-取代的芳基、或R⁴-取代或未取代的杂芳基。R²可以是R⁴-取代的苯基、R⁴-取代或未取代的萘基、R⁴-取代或未取代的吡啶基、R⁴-取代或未取代的嘧啶基、R⁴-取代或未取代的噻吩基、R⁴-取代或未取代的呋喃基、R⁴-取代或未取代的吲哚基、R⁴-取代或未取代的苯并噁二唑基、R⁴-取代或未取代的苯并间二氧杂环戊烯基、R⁴-取代或未取代的苯并二噁烷基、R⁴-取代或未取代的硫代十氢化萘基(thianaphthanyl)、R⁴-取代或未取代的吡咯并吡啶基、R⁴-取代或未取代的吲唑基、R⁴-取代或未取代的四氢化萘基、R⁴-取代或未取代的喹啉基、R⁴-取代或未取代的喹喔啉基、R⁴-取代或未取代的吡啶并吡嗪基、R⁴-取代或未取代的喹唑啉酮基(quinazolinonyl)、R⁴-取代或未取代的苯并呋喃酮基(chromenonyl)、R⁴-取代或未取代的苯并异噁唑基、R⁴-取代或未取代的咪唑并吡啶基、R⁴-取代或未取代的苯并呋喃基、R⁴-取代或未取代的二氢-苯并呋喃基、R⁴-取代或未取代的二氢-苯并二噁烯基、R⁴-取代或未取代的苯并咪唑啉酮基、或R⁴-取代或未取代的苯并噻吩基。

在某些实施方式中，R²是R⁴-取代的苯基、R⁴-取代或未取代的吡咯并吡啶基、R⁴-取代或未取代的喹啉基、R⁴-取代或未取代的吲唑基、R⁴-取代或未取代的喹啉基吲哚基、或R⁴-取代或未取代的萘基。R⁴可以是卤素、-CN、-OR²⁰、或-NR²²R²³。R⁴还可以简单地是卤素、或-OR²⁰。

在某些实施方式中，R²如下式所示：

在式(III)中，W¹、W²、W³和W⁴独立为＝CH-、＝CR⁴-、或＝N-。各R⁴如上式(I)和(II)所述。环A是取代或未取代的杂芳基或取代或未取代的杂环烷基。在一些实施方式中，环A是6-7元杂环烷基或6-7元杂芳基。因此，在一些实施方式中，环A是部分或完全不饱和的6-或7-元环。

R²⁰可以是氢或未取代的C₁-C₁₀烷基。在一些实施方式中，R²⁰是氢或未取代的C₁-C₄烷基。R²⁰还可以简单地是氢或甲基。

在一些实施方式中，R²如下式所示：

或

在式(IV)、(V)和(VI)中，R⁴不存在、为卤素、未取代的C₁-C₄烷基或-OR²⁰。所述卤素可以是F、Cl或Br。在一些实施方式中，所述卤素是F或Cl。在其它实施方式中，所述卤素是F。R²⁰可以是氢或未取代的C₁-C₄烷基。

在一些实施方式中，R²是6-羟基萘基、未取代的7-氮杂吲哚基、未取代的吲哚基、未取代的吲唑基或未取代的喹啉基。

在一些实施方式中，R²如下式所示：

或

在式(VII)和(VIII)中，R²⁰如上所述。应该知道，按照以上R²⁰的描述，各R²⁰任选不同。标志z是1-5的整数(例如1或2)。在一些实施方式中，R²⁰是氢或未取代的C₁-C₁₀烷基(例如，C₁-C₅烷基，如甲基或乙基)。

在一些实施方式中，R²如下式所示：

或

在上述式(IX)和(X)中，R²⁰如上所述，例如以上式(I)、(II)、(VI)和(VII)的描述。

在一些实施方式中，本发明化合物的上述各取代基团被至少一种取代基团取代。更具体地说，在一些实施方式中，上述各取代的烷基、取代的杂烷基、取代的环烷基、取代的杂环烷基、取代的芳基、取代的杂芳基、芳基(C₁-C₆)烷基、以及杂芳基(C₁-C₆)烷基被至少一种取代基取代。在其它实施方式中，这些基团中的至少一种或全部被至少一种尺寸限制的取代基团取代。或者，这些基团中的至少一种或全部被至少一种低级取代基取代。

在上述化合物的其它实施方式中，各取代或未取代的烷基是取代或未取代的C₁-C₂₀烷基，各取代或未取代的杂烷基是取代或未取代的2-20元杂烷基，各取代或未取代的环烷基是取代或未取代的C₄-C₈环烷基，各取代或未取代的杂环烷基是取代或未取代的4-8元杂环烷基。

或者，各取代或未取代的烷基是取代或未取代的C₁-C₈烷基，各取代或未取代的杂烷基是取代或未取代的2-8元杂烷基，各取代或未取代的环烷基是取代或未取代的C₅-C₇环烷基，各取代或未取代的杂环烷基是取代或未取代的5-7元杂环烷基。

在另一实施方式中，式(I)所示化合物包括下表1所列任何或全部化合物。

III.PI3-激酶亲和口袋

本文所用的术语“PI3-激酶亲和结合口袋”指p110α、P110β、p110γ和p110δ内对应于图2A、2C和2D中所示标记为“亲和口袋”的浅阴影区的空腔。图2A、2C和2D描述了p110γ晶体结构的计算机模型。在p110γ中，K833、D964、I879和D841的侧链结合(至少部分结合)PI3-激酶亲和口袋的表面(p110γ编号，参见图8)。K779、D911、I825和D787的侧链结合(至少部分结合)p110δ中相应空腔的表面(p110δ编号，参见图7)。K802、D933、I848和D810的侧链结合(至少部分结合)p110α中的相应空腔(p110α编号，参见图9)。K805、D937、I851和D813的侧链结合(至少部分结合)p110β中的相应空腔(p110β编号，参见图10)。ATP不能接近PI3-激酶亲和口袋。

本文将p110δ的PI3-激酶亲和口袋称为p110δ亲和口袋。类似地，本文将p110γ的PI3-激酶亲和口袋称为p110γ亲和口袋。根据计算机模型，PI3-激酶亲和口袋包括赖氨酸779，其与PIK-90的吡啶氮和PI103的苯酚氧构成氢键(图2D)，二者均是p110δ的抑制剂。根据这些计算机模型结果，按照以下详述的PIK-39和IC87114的化学结构设计新型拮抗剂。

如图2C所示，PIK-39不含PI3-激酶结合口袋部分。如图3A所示，IC87114维持与p110δ的ATP结合区中E880和V882接触，但也缺失PI3-激酶结合口袋部分。将间-苯酚(PI3-激酶结合口袋部分)插入IC87114的吡唑并嘧啶的C3，可接近PI3-激酶亲和口袋(图3A)从而将p110δ抑制效力增强60-倍。

如上所述，PI3-激酶结合口袋部分是与p110α、p110β、p110γ或p110δ接触后填充相应的PI3-激酶结合口袋内空间的取代基。例如，PI3-激酶亲和口袋结合部分是与p110δ接触后填充p110α结合口袋内空间的取代基。类似地，p110α亲和口袋结合部分是与p110α接触后填充p110α结合口袋内空间的取代基。

在一些实施方式中，PI3-激酶结合口袋部分还与构成PI3-激酶结合口袋一部分的氨基酸相互作用(例如，键合)。在一些相关的实施方式中，所述相互作用是氢键、范德华相互作用、离子键、共价键(例如，二硫键)或疏水相互作用。

IV.测定PI3-激酶亲和口袋内的空间填充

为测定PI3-激酶亲和口袋结合部分是否填充PI3-激酶亲和口袋内的空间，采用计算机建模技术。将查询PI3-激酶亲和力袋结合拮抗剂(即，测试化合物)拟合成p110γ的计算机图像。p110γ计算机图像获自与PIK-39结合的人p110γ的分辨共结晶结构。可采用PyMOL分子图形系统(PyMOL MolecularGraphics System)产生图像。图3A描述了一个例子，其中IC87114和PIK-294构建成p110γ激酶的计算机图像，该图像获自p110γ-PIK-39共结晶。参见Knight等，Cell125：733-745(2006)。

通常分析计算机模型以防止任何总体立体碰撞(gross steric clashes)并满足查询PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂与p110γ蛋白之间的关键氢键(例如，V882和M804)。在一些实施方式中，实施能量最小化计算(energy minimizationcalculation)以优化结合能量。采用这些技术，本领域技术人员不难测定查询PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂是否包含填充PI3-激酶亲和口袋内空间的PI3-激酶亲和口袋结合部分。

在一些实施方式中，分析查询PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂以测定在查询PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂与构成PI3-激酶亲和口袋的一部分的氨基酸之间是否形成至少一根键(例如氢键)。采用上述计算机建模技术，可以测定构成PI3-激酶亲和口袋一部分的一个或多个氨基酸与PI3-激酶亲和口袋结合部分上潜在接触点之间的距离。依据该距离，本领域技术人员可测定构成PI3-激酶亲和口袋的一部分的一个或多个氨基酸与PI3-激酶亲和口袋结合部分之间是否形成至少一根键。

V.通用合成

通过适当联用熟知的合成方法合成本发明的化合物。相关领域技术人员不难知道和理解用于合成本发明化合物的技术。以下讨论说明了可用于装配本发明化合物的各种方法中的某些方法。然而，这些讨论并非要限制用于制备本发明化合物的反应或反应顺序。

方案I

在以上方案I中，利用合适的碘化试剂，例如n-碘代-琥珀酰胺完成吡唑或吡咯并嘧啶的碘化。可通过溴化取代基(例如，取代或未取代的烷基溴)的卤素置换进行1-位修饰。然后采用有机硼酸(organoboronic acid)和碘卤化物之间的钯催化交联(即，铃木偶联)修饰3-位。最近的催化剂和方法开发极大拓宽了可能的铃木偶联应用，从而使得反应伴侣的范围不限于芳基。可利用三氟硼酸钾和有机硼烷(organoborane)或硼酸酯替代硼酸。还可利用一些类卤化物(例如，三氟甲磺酸酯(triflate))作为偶联伴侣(coupling partner)。铃木偶联的其它信息可见，例如Kudo等，Angew.Chem.Int.Ed.45：1282-1284(2006)；Kirchhoffet等，J.Am.Chem.Soc.，124：13662-13663(2002)；Wu等，J.Org.Chem.，68：670-673(2003)；和Molander等，J.Org.Chem.，67：8424-8429(2002)。

VI.方法

在另一方面，本发明提供降低PI3激酶(例如，p110α激酶)催化活性的方法。该方法包括将PI3激酶与活性降低量的本发明化合物(即，PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂或式(I)所示化合物)接触的步骤。在一些实施方式中，所述拮抗剂能降低酪氨酸激酶的催化活性。在一些实施方式中，所述拮抗剂是PI3-激酶亲和口袋结合吡唑并嘧啶拮抗剂，或PI3-激酶亲和口袋结合吡咯并嘧啶拮抗剂。

在一些实施方式中，与针对p110δ、p110β和/或p110γ的拮抗作用相比，所述拮抗剂对p110α具有特异性。在一些实施方式中，p110α的IC50比针对p110δ、p110β和/或p110γ的IC50至少低1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500或1000倍。在其它实施方式中，所述拮抗剂针对p110α的IC50低于100μM、50μM、40μM、30μM、20μM、10μM、5μM、1μM、0.5μM、0.1μM、50nM、10nM、1nM、0.5nM、0.1nM、50pM、10pM或1pM。

在一些实施方式中，与针对胰岛素受体酪氨酸激酶的拮抗作用相比，所述拮抗剂对p110α具有特异性。在一些实施方式中，p110α的IC50比针对胰岛素受体酪氨酸激酶的IC50至少低1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500或1000倍。在其它实施方式中，所述拮抗剂针对p110α的IC50低于100μM、50μM、40μM、30μM、20μM、10μM、5μM、1μM、0.5μM、0.1μM、50nM、10nM、1nM、0.5nM、0.1nM、50pM、10pM或1pM。

在一些实施方式中，所述拮抗剂降低或能降低酪氨酸激酶的催化活性。在一些实施方式中，所述拮抗剂针对酪氨酸激酶的IC50低于100μM、50μM、40μM、30μM、20μM、10μM、5μM、1μM、0.5μM、0.1μM、50nM、10nM、1nM、0.5nM、0.1nM、50pM、10pM或1pM。一些酪氨酸激酶包括，例如DNA-依赖性蛋白激酶DNA-依赖性蛋白激酶(pubmed蛋白质登录号(PPAN)AAA79184)、Ab1酪氨酸激酶(CAA52387)、Bcr-Ab1、造血细胞激酶(PPAN CAI19695)、Src(PPAN CAA24495)、血管内皮生长因子受体2(PPAN ABB82619)、血管内皮生长因子受体-2(PPAN ABB82619)、上皮生长因子受体(PPAN AG43241)、EPH受体B4(PPAN EAL23820)、干细胞因子受体(PPAN AAF22141)、酪氨酸-蛋白激酶受体TIE-2(PPANQ02858)、fms-相关酪氨酸激酶3(PPAN NP_004110)、血小板-衍生的生长因子受体α(PPAN NP_990080)、RET(PPAN CAA73131)和它们的功能片段。在一些实施方式中，所述酪氨酸激酶是Ab1、Bcr-Ab1、EGFR或Flt-3。

在一些实施方式中，所述拮抗剂降低或能降低mTOR(PPAN AAI17167)的催化活性。在一些实施方式中，所述拮抗剂针对mTOR的IC50低于100μM、50μM、40μM、30μM、20μM、10μM、5μM、1μM、0.5μM、0.1μM、50nM、10nM、1nM、0.5nM、0.1nM、50pM、10pM或1pM。

在一些实施方式中，所述拮抗剂降低或能降低mTOR和p110α的催化活性至IC50低于100μM、50μM、40μM、30μM、20μM、10μM、5μM、1μM、0.5μM、0.1μM、50nM、10nM、1nM、0.5nM、0.1nM、50pM、10pM或1pM。在其它实施方式中，所述拮抗剂降低或能降低酪氨酸激酶和p110α的催化活性至IC50低于100μM、50μM、40μM、30μM、20μM、10μM、5μM、1μM、0.5μM、0.1μM、50nM、10nM、1nM、0.5nM、0.1nM、50pM、10pM或1pM。在其它实施方式中，所述拮抗剂降低或能降低酪氨酸激酶、mTOR和p110α的催化活性至IC50低于100μM、50μM、40μM、30μM、20μM、10μM、5μM、1μM、0.5μM、0.1μM、50nM、10nM、1nM、0.5nM、0.1nM、50pM、10pM或1pM。

在另一方面，本发明提供在需要治疗的对象中治疗PI3激酶活性，PI3激酶活性和酪氨酸激酶活性，PI3激酶活性和mTOR活性，或PI3激酶活性、mTOR活性和酪氨酸激酶活性所介导的疾病或病症的方法。该方法包括给予所述对象治疗有效量的拮抗剂。所述拮抗剂是PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂，或式(I)所示化合物。在一些实施方式中，所述拮抗剂是PI3-激酶亲和口袋结合吡唑并嘧啶拮抗剂，或PI3-激酶亲和口袋结合吡咯并嘧啶拮抗剂。

所述疾病还可以是骨吸收障碍、慢性髓细胞性白血病、异常炎症、自身免疫疾病、血栓形成或哮喘。所述疾病还可以是某类型的癌症或癌症转移，包括，例如白血病、癌和肉瘤，例如脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、头颈癌、肝癌、肾癌、肺癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、卵巢癌、肉瘤、胃癌、子宫癌和成神经管细胞瘤。其它例子包括霍奇金病、非霍奇金病、多发性骨髓瘤、成神经细胞瘤、卵巢癌、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多症、原发性巨球蛋白血症、原发性脑瘤、癌症、恶性胰腺胰岛素瘤(malignant pancreaticinsulanoma)、恶性类癌、膀胱癌、恶化前皮肤病损、睾丸癌、淋巴瘤、甲状腺癌、成神经细胞瘤、食道癌、泌尿生殖道癌症、恶性高钙血症、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、内分泌和外分泌胰腺的赘生物、和前列腺癌。在一些实施方式中，所述疾病选自肝癌、结肠癌、乳腺癌、黑色素瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病或非小细胞肺癌。

在另一方面，本发明提供干扰白细胞功能或干扰破骨细胞功能的方法。该方法包括使白细胞或破骨细胞与功能干扰量的拮抗剂接触。所述拮抗剂是PI3-激酶亲和口袋结合拮抗剂，或式(I)所示化合物。在一些实施方式中，所述拮抗剂是PI3-激酶亲和口袋结合吡唑并嘧啶拮抗剂，或PI3-激酶亲和口袋结合吡咯并嘧啶拮抗剂。

VII.药物制剂

在另一方面，本发明提供包含与药学上可接受的赋形剂相混合的拮抗剂的药物组合物。本领域技术人员应知道药物组合物包含上述本发明PI3-激酶拮抗剂的药学上可接受的盐。

在治疗性和/或诊断性应用中，可将本发明化合物配制成用于各种给药方式，包括全身性和局部或定位给药。技术和制剂通常参见《雷明顿：药学科学和实践》(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)(第20版)Lippincott，Williams & Wilkins(2000)。

本发明化合物有效剂量范围宽。例如，治疗成年人时，所用剂量的例子是每日0.01-1000mg、0.5-100mg、1-50mg和5-40mg的剂量。最有效的剂量是10-30mg/天。确切的剂量取决于给药途径、化合物以何形式给予、待治疗的对象、待治疗对象的体重和主治医师的偏好和经验。

本领域普通技术人员通常熟知药学上可接受的盐，包括，例如但不限于：乙酸盐、苯磺酸盐、苯磺酸盐(besylate)、苯甲酸盐、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙、卡恩磺酸盐(carnsylate)、碳酸盐、柠檬酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐(edisylate)、伊斯特酸盐(estolate)、乙磺酸盐(esylate)、延胡索酸盐、葡糖酸盐(gluceptate)、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰基阿散酸盐(glycollylarsanilate)、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、水合胺(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐(isethionate)、乳酸盐、乳糖醛酸盐(lactobionate)、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、粘酸盐(mucate)、萘磺酸盐(napsylate)、硝酸盐、双羟萘酸盐(双羟萘酸盐(embonate))、泛酸盐(pantothenate)、磷酸盐/二磷酸盐(diphosphate)、聚半乳糖醛酸盐(polygalacturonate)、水杨酸盐、硬脂酸盐、次醋酸盐(subacetate)、琥珀酸盐、硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐或8-氯茶碱盐(teoclate)。其它药学上可接受的盐可见，例如《雷明顿：药学科学和实践》，(第20版)Lippincott，Williams&Wilkins(2000)。优选的药学上可接受的盐包括，例如乙酸盐、苯甲酸盐、溴化物、碳酸盐、柠檬酸盐、葡糖酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、双羟萘酸盐(双羟萘酸盐(embonate))、磷酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐或酒石酸盐。

根据所治疗的具体疾病，可将这些物质配制成液体或固体剂型，全身性或局部给予。例如，可采用本领域技术人员已知的定时释放形式或持续低速释放形式递送这些物质。配制和给药的技术可参见：《雷明顿：药学科学和实践》，(第20版)Lippincott，Williams & Wilkins(2000)。合适的途径可包括口服、含服、吸入喷雾、舌下、直肠、透皮、阴道、经粘膜、鼻部或肠道给药；胃肠外递送，包括肌肉内、皮下、髓内注射，以及鞘内、直接心室内、静脉内、关节内、胸骨内、滑膜内、肝内、伤口内、颅内、腹膜内、鼻内或眼内注射或其它递送方式。

对于注射，可将本发明的物质配制并稀释成水溶液，例如用生理相容的缓冲液，如Hanks液、林格液或生理盐水缓冲液。对这种经粘膜给药，制剂中使用对于待渗透的屏障而言合适的渗透剂。这种渗透剂通常是本领域已知的。

利用药学上可接受的惰性载体将用于实施本发明而披露的本文化合物配制成适合于全身性给药的剂型属于本发明范围。适当地选择载体和合适的生产管理规范，可以胃肠外，例如通过静脉内注射给予本发明化合物，特别是配制成溶液的那些化合物。利用本领域熟知的药学上可接受的载体可将这些化合物配制成适合于口服给药的剂型。这种载体能将本发明化合物配制成片剂、丸剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、膏剂、混悬液等，由待治疗的对象(例如患者)口服摄入。

对于鼻部或吸入递送，还可采用本领域技术人员已知的方法配制本发明物质，包括，例如但不限于增溶、稀释或分散物质，如盐水、防腐剂，如苄醇、吸收促进剂和碳氟化合物。

适用于本发明的药物组合物包括其中活性成分的含量足以实现其所需目的的组合物。本领域技术人员熟知如何测定有效量，特别是在借鉴本文提供的详述后。

除了活性成分，这些药物组合物可含有合适的药学上可接受的载体，包括有助于将活性成分加工成可药学使用的制品的赋形剂和助剂。配制成用于口服给予的这些制品可采取片剂、糖锭、胶囊或溶液的形式。

可通过以下步骤获得口服应用的药物制品：混合活性化合物与固体赋形剂，任选研磨得到的混合物；如果需要，先加入合适的助剂，再加工颗粒混合物从而获得片剂或糖锭核心。合适的赋形剂是(尤其是)填充剂，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖或山梨醇；纤维素制品，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠(CMC)和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP:聚乙烯吡咯酮)。如果需要，可加入崩解剂，例如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。

可给糖锭核心提供合适的包衣。出于该目的，可使用浓缩的糖溶液，所述溶液可任选含有阿拉伯胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯凝胶(carbopolgel)、聚乙二醇(PEG)和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可将染料或色素加入片剂或糖锭包衣以区分或表征活性化合物剂量的不同组合。

可口服使用的药物制品包括明胶制成的推入配合式胶囊(push-fit capsule)以及明胶和增塑剂，例如甘油或山梨醇制成的软密封胶囊。推入配合式胶囊可含有与填充剂，例如乳糖，粘合剂，例如淀粉，和/或润滑剂，例如滑石粉或硬脂酸镁以及任选的稳定剂相混合的活性成分。在软胶囊中，可将活性化合物溶解于或悬浮于合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇(PEG)。此外，可加入稳定剂。

根据要治疗或预防的具体病症或疾病状态，通常联合给予治疗该病症的其它治疗剂与本发明的抑制剂。例如，化疗剂或其它抗增生剂可与本发明抑制剂组合给予以治疗增生性疾病和癌症。已知化疗剂的例子包括但不限于：阿霉素、地塞米松、长春新碱、环磷酰胺、氟尿嘧啶、拓扑替康、紫杉醇、干扰素和铂衍生物。

可与本发明抑制剂联用的药剂的其它例子包括但不限于：抗炎剂，例如皮质类固醇、TNF阻断剂、IL-1RA、硫唑嘌呤、环磷酰胺、和柳氮磺吡啶；免疫调节剂和免疫抑制剂，例如环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、霉酚酸、干扰素、皮质类固醇、环磷酰胺、硫唑嘌呤、和柳氮磺吡啶；神经营养因子，例如乙酰胆碱酯酶抑制剂、MAO抑制剂、干扰素、抗-惊厥剂、离子通道阻断剂、利鲁唑、和抗-帕金森剂；治疗心血管疾病的药剂，例如β-阻断剂、ACE抑制剂、利尿剂、硝酸盐、钙通道阻断剂、和他汀类药物；治疗肝脏疾病的药剂，例如皮质类固醇、考来烯胺、干扰素、和抗病毒剂；治疗血液疾病的药剂，例如皮质类固醇、抗-白血病剂、和生长因子；治疗糖尿病的药剂，例如胰岛素、胰岛素类似物、α葡萄糖苷酶抑制剂、双胍、和胰岛素致敏剂；和治疗免疫缺陷疾病的药剂，例如γ球蛋白。

组合物中的这些其它药剂可作为多剂量方案的一部分而分别给予。或者，这些药剂可以是单一剂型的一部分，与抑制剂一起混合在一种组合物中。

本发明不限于所示例实施方式的范围，这些实施方式只说明了本发明的一方面。实际上，除了本文所述那些实施方式，本领域技术人员从以上描述中可以知道本发明的各种改进。这些改进应属于本发明的范围。此外，本发明任何实施方式的任一或多个特征可以与本发明任何其它实施方式的任一或多个特征相组合而不脱离本发明的范围。例如，上述本发明PI3-激酶拮抗剂等效适用于本文上述治疗方法和抑制激酶的方法。本申请引用的参考文献是本领域技术人员水平的实例，这些参考文献出于所有目的全文纳入本文以供参考，而无论以前是否专门纳入或未纳入。

VIII.实施例

以下实施例说明了本发明的某些实施方式，而非限制本发明的范围。

通用方法：所用的所有化学物质、试剂和溶剂均市售购得，按照得到的状态直接使用。dH2O指去离子水。用旋转蒸发仪减压蒸发溶剂。除非另有表述，通过高压液相色谱(HPLC)，用dH₂O-MeCN-三氟乙酸，50:50:0.1洗脱纯化各化合物。用MeCN-0.1％甲酸(比例可变)作为洗脱剂，以液相色谱质谱仪(LCMS)分析各产物。

A.选择的反应流程

合成1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA18)。氩气气氛下，将250mL甲酰胺和3-氨基-4-吡唑腈(25g，0.231mol)的溶液加热至180℃，保持过夜。将反应(体系)冷却，加入400mL dH₂O。滤出得到的固体，用冷dH₂O清洗。收集白色的固体沉淀物，真空干燥过夜得到BA18(39g，100％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值136.1，实测值136.1。

合成3-碘代-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA19)。氩气气氛下，将3H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(10g，0.074mol)和n-碘代-琥珀酰胺(25g，0.111mol)的DMF(80mL)溶液加热至80℃，保持过夜。滤出得到的固体，用冷EtOH清洗。真空干燥产物过夜得到BA19(24g，100％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值262.0，实测值262.0。

合成3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA12)。氩气气氛中，将3-碘代-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2g，0.0077mol)和K₂CO₃(4.2g，0.031mol)的DMF(50mL)溶液加热至80℃。用注射器加入异丙基溴(1.0g，0.0084mol)。氩气气氛下，使反应(体系)回流2小时。过滤除去固体K₂CO₃。真空部分除去溶剂。加入柠檬酸钠(50mL)，用EtOAc萃取反应(体系)。真空浓缩有机相，硅胶柱层析纯化[MeOH—CH₂Cl₂，5:95]得到BA12(1.68g，72％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值304.0，实测值304.1。

通用铃木偶联。制备终产物(终产物名称和结构见表1)。

将3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol，1当量)溶解于DME(12ml)中。将硼酸(1.1当量)溶解于EtOH(3.3ml)中，并加入反应混合物中。氩气气氛中，将Pd(PPh₃)₄(30mg，0.026mmol，0.2当量)和饱和的Na2CO3(1.9ml)加入反应混合物，加热至80℃并回流8小时。冷却后，用饱和的NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，除去溶剂。将得到的固体(或油状物)溶解于dH2O—MeCN—三氟乙酸，50:50:0.1，HPLC纯化。LCMS证实纯化产物(产率可变)。

合成4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-苯磺酰胺(BA14)。将苯磺酰胺-4-硼酸频哪醇酯(23mg，0.08mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(16mg，0.014mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和的NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)产生BA14(2.2mg，l0％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值333.1，实测值333.1。

合成1-异丙基-3-(3-甲氧基-4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA15)。将2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-2-二氧杂硼烷(dioxaborolan)-2-基)苯酚(19mg，0.08mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(16mg，0.014mmol)和饱和的Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和的NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)得到BA15(4.3mg，20％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值300.1，实测值300.2。

合成6-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)萘-2-醇(BA17)。将6-羟基萘-2-基-2-硼酸(15mg，0.08mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12mL)溶液。加入Pd(PPh₃)₄(16mg，0.014mmol)和饱和的Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和的NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)得到BA15(4.8mg，23％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值320.1，实测值320.1。

合成4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基氨基甲酸叔丁酯(BA20)。将44-N-Boc-氨基-3-甲氧基-苯硼酸(benzeneboronicacid)(48mg，0.18mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.18mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(40mg，0.03mmol)和饱和的Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和的NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)得到BA20。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值399.2，实测值399.1。

合成3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA20d)。室温下将4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基氨基甲酸叔丁酯(BA20)(20mg，0.05mmol)的CH₂Cl₂、TFA、S(CH₂)₂、H₂O(45:45:5:5)(1mL)溶液搅拌15分钟。加入NaHCO₃(2mL)直至反应(体系)呈碱性。用H₂O和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA20d。

合成5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)吡啶-2-腈(BA21)。将2-氰基吡啶5-硼酸频哪醇(pinocol)酯(18mg，0.08mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(16mg，0.014mmol)和饱和的Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA21(2.5mg，14％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值280.1，实测值280.1。

合成3-(3-(苄氧基)-5-氟苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。将(3-苄氧基-5-氟苯基)硼酸(29mg，5.80mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(16mg，0.014mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA22(15.6mg，60％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值378.1，实测值378.0。

合成3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-5-氟苯酚(BA22)。用氩气吹扫-(3-(苄氧基)-5-氟苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(15mg，0.04mmol)的MeOH(0.9mL)溶液。小心地加入活性炭负载的Pd(10mL)，同时使反应(体系)维持在氩气气氛中。室温下，反应(体系)用H₂吹扫，并置于H₂气氛中过夜。硅藻土过滤反应(体系)，用MeOH清洗获得BA22(15mg，100％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值288.1，实测值288.1。

合成1-异丙基-3-(3，4-二甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA23)。将3，4-二甲氧基苯基硼酸(24mg，0.13mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12mL)溶液。加入Pd(PPh₃)₄(16mg，0.014mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA23(13.1mg，60％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值314.0，实测值314.1。

合成(3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)甲醇(BA26)。将(3-羟甲基苯基)硼酸(24mg，0.13mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(16mg，0.014mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA26(8.4mg，42％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值283.1，实测值284.2。

合成3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-N-(4，5-二氢噻唑-2-基)苯甲酰胺(BA30)。将[3-((4，5-二氢噻唑-2-基)氨甲酰基)苯基]硼酸(19mg，0.08mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16

mg，0.014mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA30(17.8mg，67％产率)。

合成1-(4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙酮(BA31)。将4-乙酰基苯基硼酸(12.7mg，0.08mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(16mg，0.014mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA31(12.9mg，62％产率)。

合成(3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)甲醇(BA32)。将(4-氨基羰基-3-氯苯基)硼酸(16mg，0.08mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(16mg，0.014mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA32(9.7mg，42％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值331.1，实测值331.1。

合成5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-3-甲基噻吩-2-碳醛(carbaldehyde)(BA34)。将5-甲酰基-3-甲基噻吩-2-硼酸(26mg，0.14

mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(16mg，0.014mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA34(14.7mg，38％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值302.1，实测值302.0。

合成5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)呋喃-3-碳醛(BA35)。将4-甲酰基呋喃-2-硼酸(20mg，0.14mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(16mg，0.014mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA35(13.5mg，39％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值272.1，实测值272.1。

合成N-[3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-苯基]-甲磺酰胺(BA38)。将3-甲磺酰基氨基苯基硼酸(32mg，0.15mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(16mg，0.014mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA38(24.3mg，54％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值347.1，实测值347.0。

合成3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苄腈(BA39)。将3-氰基苯基硼酸(23mg，0.15mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA39(14.9mg，41％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值279.1，实测值279.0。

合成N-[4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-苯基]-甲磺酰胺(BA40)。将4-甲磺酰基氨基苯基硼酸(24mg，0.11mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA40(0.9mg，3％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值347.1，实测值347.0。

合成3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-苯磺酰胺(BA41)。将苯磺酰胺-3-硼酸频哪醇酯(31mg，0.11mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA41(9.2mg，28％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值333.1，实测值333.0。

合成2-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯并[b]噻吩-5-碳醛(BA42)。将5-甲酰基苯并[b]噻吩-2-硼酸频哪醇酯(31mg，0.11mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA42(15.2mg，45％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值338.1，实测值338.0。

合成5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-1H-吲哚-3-碳醛(BA43)。将N-Boc-3-甲酰基-5-吲哚硼酸频哪醇酯(40mg，0.11mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。纯化的TFA水解Boc从而获得BA43。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值321.1，实测值321.0。

合成3-(苯并[c][1，2，5]噁二唑-6-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA44)。将苯并[c][1，2，5]噁二唑-5-硼酸(18mg，0.11mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA44。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值296.1，实测值296.1。

合成2-(4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙腈(BA45)。将(4-氰基甲基苯基)硼酸(18mg，0.11mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA45。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值293.1，实测值293.1。

合成2-(3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙腈(BA46)。将(3-氰基甲基苯基)硼酸(18mg，0.11mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA45。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值293.1，实测值293.1。

合成1-异丙基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA48)。将(4-甲氧基苯基硼酸(17mg，0.11mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA48(4.5mg，16％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值284.1，实测值284.1。

合成1-异丙基-3-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA49)。将3-甲氧基苯基硼酸(17mg，0.11mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA49。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值284.1，实测值284.0。

合成1-异丙基-3-(吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA52)。将3-吡啶基硼酸(15mg，0.14mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(15mg，0.015mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O)从而获得BA52。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值255.1，实测值255.0。

合成1-异丙基-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA53)。将5-嘧啶基硼酸(15mg，0.14mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(15mg，0.015mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O)从而获得BA53。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值256.1，实测值256.1。

合成3-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二噁烯(dioxin)-6-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA54)。将2，3-二氢-1，4-苯并二噁烯-6-基硼酸(26mg，0.14mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA54(6mg，15％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值312.1，实测值312.0。

合成1-(3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙酮(BA55)。将3-乙酰基苯基硼酸(23mg，0.14mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA55(7mg，18％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值296.1，实测值296.1。

合成4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(BA56)。将4-羟基苯基硼酸(30mg，0.14mmol)的EtOH(3.3mL)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12mL)溶液中。加入Pd(PPh₃)₄(30mg，0.03mmol)和饱和Na₂CO₃(1.9mL)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得BA56(12mg，32％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值270.1，实测值270.1。

合成PI3-K/酪氨酸激酶双重抑制剂

合成1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA18)。氩气气氛下，将250ml甲酰胺和3-氨基-4-吡唑-腈(25g，0.231mol)的溶液加热至180℃，过夜。将反应(体系)冷却，加入400ml dH2O。滤出得到的固体，用冷的dH2O清洗。收集白色固体沉淀物，真空干燥过夜从而获得BA18(39g，100％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值136.1，实测值136.1。

合成3-碘代-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA19)。氩气气氛下，将3H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(10g，0.074mol)和n-碘代-琥珀酰胺(25g，0.111

mol)的DMF(80ml)溶液加热至80℃，过夜。滤出得到的固体，用冷的EtOH清洗。真空干燥产物过夜从而获得BA19(24g，100％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值262.0，实测值262.0。

合成3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA12)。氩气气氛下，将3-碘代-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2g，0.0077mol)和K2CO3(4.2g，0.031mol)的DMF(50ml)溶液加热至80℃。用注射器加入异丙基溴(1.0g，0.0084mol)。氩气气氛下，使反应(体系)回流2小时。过滤除去固体K2CO3。真空条件下除去部分溶剂。加入柠檬酸钠(50ml)，用EtOAc萃取反应(体系)。真空浓缩有机相，硅胶柱层析纯化[MeOH—CH2Cl2，5:95]获得BA12(1.68g，72％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值304.0，实测值304.1。

合成4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-苯磺酰胺(BA14)。将苯磺酰胺-4-硼酸频哪醇酯(23mg，0.08mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA14(2.2mg，10％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值333.1，实测值333.1。

合成1-异丙基-3-(3-甲氧基-4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA15)。将2甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-2-二氧杂硼烷(dioxaborolan)-2-基)苯酚(19mg，0.08mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA15(4.3mg，20％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值300.1，实测值300.2。

合成6-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)萘-2-醇(BA17)。将6-羟基萘-2-基-2-硼酸(15mg，0.08mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA15(4.8mg，23％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值320.1，实测值320.1。

合成4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基氨基甲酸叔丁酯(BA20)。将44-N-Boc-氨基-3-甲氧基-苯硼酸(benzeneboronicacid)(48mg，0.18mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.18mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(40mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH2Cl2萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA20。ESI-MS(M+H)+m/z计算值399.2，实测值399.1。

合成3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA20d)。室温下将4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基氨基甲酸叔丁酯(BA20)(20mg，0.05mmol)的CH2Cl2、TFA、S(CH2)2、H2O(45:45:5:5)(1ml)溶液搅拌15分钟。加入NaHCO3(2ml)直至反应(体系)呈碱性。用H2O和CH2Cl2萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)获得BA20d。

合成2-氨基-5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(BA20dd)。将BA20(4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基氨基甲酸叔丁酯，7mg，0.018mmol)溶解于CH2Cl2(2.5ml)中，室温下在氩气气氛中搅拌。用注射器滑缓慢加入BBr3(0.500ml)。室温下在氩气气氛中将反应混合物搅拌过夜。真空除去BBr3，RP-HPLC纯化留下的固体(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA20dd。

合成5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)吡啶-2-腈(BA21)。将2-氰基吡啶5-硼酸频哪醇(pinocol)酯(18mg，0.08mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA21(2.5mg，14％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值280.1，实测值280.1。

合成3-(3-(苄氧基)-5-氟苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。将(3-苄氧基-5-氟苯基)硼酸(29mg，5.80mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA22(15.6mg，60％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值378.1，实测值378.0。

合成3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-5-氟苯酚(BA22)。用氩气吹扫-(3-(苄氧基)-5-氟苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(15mg，0.04mmol)的MeOH(0.9ml)溶液。小心地加入负载于活性炭上的Pd(10mL)，同时使反应(体系)维持在氩气气氛中。室温下，反应(体系)用H₂吹扫，并置于H₂气氛中过夜。硅藻土过滤反应(体系)，用MeOH清洗获得BA22(15mg，100％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值288.1，实测值288.1。

合成1-异丙基-3-(3，4-二甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA23)。将3，4-二甲氧基苯基硼酸(24mg，0.13mmol)的EtOH(3.3ml)加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA23(13.1mg，60％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值314.0，实测值314.1。

合成2-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-5-(苄氧基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(BA24)。将5-苄氧基-1-BOC-吲哚-2-硼酸(303mg，0.83mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.33mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，硅胶柱层析纯化[EtOAc—己烷，5:95]从而获得BA24。ESI-MS(M+H)+m/z计算值499.2，实测值499.2。

合成2-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-1H-吲哚-5-醇(BA24dd)。将BA24(3-(4-氟-3-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，30mg，0.10mmol)溶解于甲酸(4.5ml，10当量)和HCl(0.45ml，1当量)溶液中。氩气气氛中加热反应并搅拌1小时。然后真空浓缩反应(体系)，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA24dd。ESI-MS(M+H)+m/z计算值309.1，实测值309.1。

合成(3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)甲醇(BA26)。将(3-羟甲基苯基)硼酸(24mg，0.13mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12ml)溶液。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而产生BA26(8.4mg，42％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值283.1，实测值284.2。

合成3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-N-(4，5-二氢噻唑-2-基)苯甲酰胺(BA30)。将[3-((4，5-二氢噻唑-2-基)氨甲酰基)苯基]硼酸(19mg，0.08mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA30(17.8mg，67％产率)。

合成1-(4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙酮(BA31)。将4-乙酰基苯基硼酸(12.7mg，0.08mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA31(12.9mg，62％产率)。

合成(3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)甲醇(BA32)。将(4-氨基羰基-3-氯苯基)硼酸(16mg，0.08mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(20mg，0.07mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA32(9.7mg，42％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值331.1，实测值331.1。

合成5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-3-甲基噻吩-2-碳醛(BA34)。将5-甲酰基-3-甲基噻吩-2-硼酸(26mg，0.14mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA34(14.7mg，38％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值302.1，实测值302.0。

合成5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)呋喃-3-碳醛(BA35)。将4-甲酰基呋喃-2-硼酸(20mg，0.14mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA35(13.5mg，39％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值272.1，实测值272.1。

合成N-[3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-苯基]-甲磺酰胺(BA38)。将3-甲磺酰基氨基苯基硼酸(32mg，0.15mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(16mg，0.014mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA38(24.3mg，54％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值347.1，实测值347.0。

合成3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苄腈(BA39)。将3-氰基苯基硼酸(23mg，0.15mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA39(14.9mg，41％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值279.1，实测值279.0。

合成N-[4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-苯基]-甲磺酰胺(BA40)。将4-甲磺酰基氨基苯基硼酸(24mg，0.11mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA40(0.9mg，3％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值347.1，实测值347.0。

合成3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-苯磺酰胺(BA41)。将苯磺酰胺-3-硼酸频哪醇酯(31mg，0.11mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA41(9.2mg，28％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值333.1，实测值333.0。

合成2-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯并[b]噻吩-5-碳醛(BA42)。将5-甲酰基苯并[b]噻吩-2-硼酸频哪醇酯(31mg，0.11mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA42(15.2mg，45％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值338.1，实测值338.0。

合成5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-1H-吲哚-3-碳醛(BA43)。将N-Boc-3-甲酰基-5-吲哚硼酸频哪醇酯(40mg，0.11mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)。纯化的TFA水解Boc从而获得BA43。ESI-MS(M+H)+m/z计算值321.1，实测值321.0。

合成3-(苯并[c][1，2，5]噁二唑-6-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA44)。将苯并[c][1，2，5]噁二唑-5-硼酸(18mg，0.11mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA44。ESI-MS(M+H)+m/z计算值296.1，实测值296.1。

合成2-(4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙腈(BA45)。将(4-氰基甲基苯基)硼酸(18mg，0.11mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA45。ESI-MS(M+H)+m/z计算值293.1，实测值293.1。

合成2-(3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙腈(BA46)。将(3-氰基甲基苯基)硼酸(18mg，0.11mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12ml)溶液。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA45。ESI-MS(M+H)+m/z计算值293.1，实测值293.1。

合成1-异丙基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA48)。将(4-甲氧基苯基硼酸(17mg，0.11mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA48(4.5mg，16％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值284.1，实测值284.1。

合成1-异丙基-3-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA49)。将3-甲氧基苯基硼酸(17mg，0.11mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.10mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA49。ESI-MS(M+H)+m/z计算值284.1，实测值284.0。

合成1-异丙基-3-(吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA52)。将3-吡啶基硼酸(15mg，0.14mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(15mg，0.015mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O)从而获得BA52。ESI-MS(M+H)+m/z计算值255.1，实测值255.0。

合成1-异丙基-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA53)。将5-嘧啶基硼酸(15mg，0.14mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(15mg，0.015mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH2Cl2.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O)从而获得BA53。ESI-MS(M+H)+m/z计算值256.1，实测值256.1。

合成3-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二噁烯(dioxin)-6-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA54)。将2，3-二氢-1，4-苯并二噁烯-6-基硼酸(26mg，0.14mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA54(6mg，15％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值312.1，实测值312.0。

合成1-(3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙酮(BA55)。将3-乙酰基苯基硼酸(23mg，0.14mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA55(7mg，18％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值296.1，实测值296.1。

合成4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(BA56)。将4-羟基苯基硼酸(30mg，0.14mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA56(12mg，32％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值270.1，实测值270.1。

合成4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯酚(BA59)。将3-氟-4-羟基苯基硼酸(103mg，0.66mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.33mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，氩气气氛中将反应(体系)加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，采用硅胶柱层析反相纯化[MeOH—CH2Cl2，2:98]从而获得BA59(26mg，27％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值288，实测值288。

合成4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-3-甲基苯酚(BA60)。将4-羟基-2-甲基苯基硼酸(110mg，0.66mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.33mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，氩气气氛中将反应(体系)加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，采用硅胶柱层析纯化[MeOH—CH2Cl2，2:98]从而获得BA60(42mg，22％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值284，实测值284。

合成3-(4-氟-3-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA62)。将4-氟-3-甲氧基苯基硼酸(61mg，0.36mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(90mg，0.30mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，氩气气氛中将反应(体系)加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，采用硅胶柱层析纯化[MeOH—CH2Cl2，2:98]从而获得BA62(40mg，44％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值302，实测值302。

合成5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苯酚(BA62d)。在氩气气氛下将BA62(3-(4-氟-3-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺，30mg，0.10mmol)溶解于CH2Cl2(5ml)中并搅拌。用注射器缓慢加入BBr3(500uL，0.5mol)同时搅拌。室温下搅拌反应(体系)3小时，然后真空浓缩，采用硅胶柱层析纯化[MeOH—CH2Cl2，2:98]从而获得BA62d(23mg，44％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值288.1，实测值288.1。

合成3-(2，5-二氟-4-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA63)。将2，5-二氟-4-甲氧基苯基硼酸(84mg，0.45mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(54mg，0.18mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，氩气气氛下将反应(体系)加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，采用硅胶柱层析纯化[MeOH—CH2Cl2，2:98]从而获得BA63(50mg，17％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值320.1，实测值320.0。

合成4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2，5-二氟苯酚(BA93)。将3-(2，5-二氟-4-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA63)(20mg，0.06mmol)溶解于CH2Cl2(2ml)，用注射器缓慢加入BBr3(0.630mL，0.63mmol)，同时搅拌。室温下搅拌反应(体系)过夜，然后真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA93(6.7mg，35％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值306.1，实测值306.0。

合成1-异丙基-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA64)。将3，4，5-三甲氧基苯基硼酸(123mg，0.58mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(70mg，0.23mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，氩气气氛中将反应(体系)加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，采用硅胶柱层析纯化[MeOH—CH2Cl2，2:98]从而获得BA64(70mg，89％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值344.1，实测值344.0。

合成1-异丙基-3-(2，3-二甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA65)。将2，3-二甲氧基苯基硼酸(105mg，0.58mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(70mg，0.23mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，氩气气氛中将反应(体系)加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，采用硅胶柱层析纯化[MeOH—CH2Cl2，2:98]从而获得BA65(63mg，88％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值314.1，实测值314.1。

合成1-异丙基-3-(2，4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA66)。将2，4-二甲氧基嘧啶-5-基-5-硼酸(106mg，0.58mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(70mg，0.23mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，氩气气氛中将反应(体系)加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，采用硅胶柱层析纯化[MeOH—CH2Cl2，2:98]从而获得BA66。ESI-MS(M+H)+m/z计算值316.1，实测值316.0。

合成1-环戊基-3-(3-氟-5-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA79)。0℃，在氩气气氛中将3-氟-5-甲氧基苯甲酸(5g，0.029mol)在CH2Cl2(50ml)中搅拌。加入DMF(9滴，催化性)，然后加入草酰氯(12.7ml，0.147mol)。将反应(体系)升温至室温，然后在氩气气氛中搅拌1小时。真空浓缩反应(体系)获得3-氟-5-甲氧基苯甲酰氯(BA67)。

0℃，氩气气氛下搅拌丙二腈(2.87g，0.044mol)的无水THF(50ml)溶液。分批向该溶液中加入石蜡油(4.64g，0.116mol)配制的NaH。将3-氟-5-甲氧基苯甲酰氯(BA67，0.029mol)溶解于50ml干燥THF中，将其缓慢加入反应(体系)。将该反应(体系)升温至室温，氩气气氛中搅拌24小时。缓慢加入1N HCl(200ml)，然后用EtOAc萃取反应混合物。合并有机相，硫酸镁干燥，然后真空浓缩得到2-((3-氟-5-甲氧基苯基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈(BA69)。

室温下，氩气气氛中将2-((3-氟-5-甲氧基苯基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈(BA69，0.029mol)在EtOH(20ml)中搅拌。加入肼(1.4ml，29mmol)，继续搅拌反应(体系)90分钟。真空浓缩反应混合物，用真空泵干燥过夜获得中间体5-氨基-3-(3-氟-5-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-腈(BA73)。加入甲酰胺(20ml)，氩气气氛中将该反应(体系)加热至180℃，过夜。冷却反应(体系)，加入dH2O(40ml)从而使得溶液中出现白色沉淀物。收集沉淀物，用dH2O洗涤。干燥固体，硅胶柱层析纯化[MeOH—CH2Cl2，10:90]从而获得3-(3-氟-5-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA75)。

将3-(3-氟-5-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA75，100mg，0.386mmol)溶解于DMF(10ml)中。加入K2CO3(250mg，1.54mmol)，室温下在氩气气氛中搅拌反应(体系)。用注射器加入碘代环戊烷(0.134ml，1.16mmol)，搅拌反应(体系)2小时。过滤除去固体K2CO3。真空部分除去溶剂。加入柠檬酸钠(50ml)，用EtOAc萃取反应(混合物)。真空浓缩有机相，采用RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA79。

合成1-环戊基-3-(3-氟-5-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA79d)。将1-环戊基-3-(3-氟-5-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA79，0.386mmol)溶解于CH2Cl2(2ml)。用注射器缓慢加入BBr3(4mL，4mol)，同时搅拌。室温下搅拌该反应(体系)2小时，然后真空浓缩，采用RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA79(69mg，57％产率)。

合成1-环戊基-3-碘代-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA80)。室温下，在氩气气氛中搅拌3-碘代-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(400mg，1.53mmol)和K2CO3(1g，6mmol)的DMF(5ml)溶液。用注射器加入碘代环戊烷(1.0

g，0.0084mol)。氩气气氛下使反应(体系)回流2小时。过滤除去固体K2CO3。真空部分除去溶剂。加入柠檬酸钠(50ml)，用EtOAc萃取反应(体系)。真空浓缩有机相，采用硅胶柱层析纯化[MeOH—CH2Cl2，5:95]从而获得BA80(300mg，60％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值330.0，实测值330.0。

合成1-(3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙酮(BA81、BA81d和BA81dd)。将2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷(dioxaborolan)-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.76mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入1-环戊基-3-碘代-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA80，100mg，0.30mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，氩气气氛中将反应(体系)加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，采用硅胶柱层析纯化[MeOH—CH2Cl2，5:95]从而获得BA81。将BA81溶解于50:50CH2Cl2:TFA中，室温下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物，采用RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA81d。将BA81d溶解于CH2Cl2(2ml)中，用注射器缓慢加入BBr3(4mL，4mol)，同时搅拌。室温下搅拌该反应(体系)2小时，然后真空浓缩，采用RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA81dd。

合成3-(3-溴-5-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA85)。将2-(3-溴-5-甲氧基苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷(dioxaborolane)(137mg，0.43mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(65mg，0.216mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH2Cl2.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA85(28mg，36％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值362.1，实测值362.0。

合成3-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-5-溴苯酚(BA87)。将3-(3-溴-5-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA85，0.1mmol)溶解于CH2Cl2(1ml)中，用注射器缓慢加入BBr3(1mL，1mol)，同时搅拌。室温下搅拌该反应(体系)35分钟，然后真空浓缩，采用RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA87(10.7mg，31％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值348.0，实测值348.0。

合成5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(BA86)。将5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷(dioxaborolan)-2-基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(212mg，0.61mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(75mg，0.25mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH2Cl2.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O)从而获得BA86(9.3mg，9％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值362.1，实测值362.0。

合成3-(1H-吲哚-5-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA89)。将5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(BA86，9mg，0.022mmol)溶解于50:50CH2Cl2:TFA中，室温下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物，采用RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA89(4.8mg，75％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值293.1，实测值293.0。

合成5-(4-氨基-1-环戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(BA88)。将5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(130mg，0.38mmol)的EtOH(3.3ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.15mmol)的DME(12ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(1.9ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH2Cl2.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O)从而获得BA88。ESI-MS(M+H)+m/z计算值419.2，实测值419.1。

合成3-(1H-吲哚-5-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA94)。将5-(4-氨基-1-环戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(BA88)溶解于50:50CH2Cl2:TFA中，室温下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物，采用RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA89(6.3mg)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值319.1，实测值319.2。

合成1-环戊基-3-(3，4-二甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA90)。将3，4-二甲氧基苯基硼酸(41mg，0.23mmol)的EtOH(1.65ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.09mmol)的DME(6ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(0.95ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O)从而获得BA90(8.4mg，28％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值340.2，实测值340.1。

合成3-(1H-吲哚-4-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA91)。将1H-吲哚-4-基-4-硼酸(40mg，0.25mmol)的EtOH(1.65ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.1mmol)的DME(6ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(0.95ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA91(14.6mg，50％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值293.1，实测值293.1。

合成1-环戊基-3-(1H-吲哚-4-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA92)。将1H-吲哚-4-基-4-硼酸(30mg，0.19mmol)的EtOH(1.65ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(25mg，0.076mmol)的DME(6ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(0.95ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA92(23mg，95％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值319.2，实测值319.1。

合成3-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA95)。将2，3-二氢-1-苯并呋喃-5-基硼酸(38mg，0.23mmol)的EtOH(1.65ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.1mmol)的DME(6ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(0.95ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH₂Cl₂萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA95(15.7mg，59％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值296.1，实测值296.1。

合成3-(苯并呋喃-5-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA96)。将5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-1-苯并呋喃(56mg，0.23mmol)的EtOH(1.65ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.1mmol)的DME(6ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(30mg，0.03mmol)和饱和Na2CO3(0.95ml)，将反应(体系)在氩气气氛下加热至80℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH2Cl2.萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA96(19mg，72％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值296.1，实测值296.1。

合成5-(4-氨基-1-环戊基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-乙氧基苯酚(BA98)。将1-环戊基-3-(4-乙氧基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK359，25mg，0.071mmol)溶解于CH2Cl2(5ml)，-10℃在氩气气氛中搅拌。30分钟后，使反应(体系)暖至0℃，搅拌2.5小时。室温下再搅拌反应(体系)4小时，然后真空浓缩，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA98(3mg，13％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值340.1，实测值340.1。

合成2-(4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基氨基)丙-1-醇(BA99)。将3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA20d)(30mg，0.10mmol)溶解于DMF(0.400ml)中。加入K2CO3(55mg，0.4mmol)，70℃搅拌反应(体系)。加入3-溴代-1-丙醇(0.050ml，0.6mmol)，反应(体系)搅拌过夜。过滤除去固体K2CO3。真空部分除去溶剂。加入柠檬酸钠(50ml)，用饱和NaCl和CH2Cl2萃取该反应(体系)。真空浓缩有机相，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA99(8.4mg，24％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值357.2，实测值357.1。

合成3-碘代-1-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA109)。室温下，在氩气气氛中搅拌3-碘代-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2g，7.69mmol)和K2CO3(4.25g，30.8mmol)的DMF(5ml)溶液。用注射器加入碘甲烷(1.17ml，7.69mmol)。室温下，在氩气气氛中搅拌反应(体系)2小时。过滤除去固体K2CO3。真空部分除去溶剂。加入柠檬酸钠(50ml)，用EtOAc萃取反应(体系)。真空浓缩有机相，采用硅胶柱层析纯化[MeOH—CH2Cl2，5:95]从而获得BA109(212mg，10％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值275.9，实测值275.9。

BA102、BA105-108、BA110、BA118、BA128-BA135、BA137、BA139-140、BA143、BA147、BA149-BA152、BA156、BA158、BA160-BA162的通用合成方案。将硼酸(2.5当量)的EtOH(1.65ml)溶液加入3-碘代-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA12，1当量)的DME(6ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(15mg，0.15mmol)和饱和Na2CO3(0.95ml)，氩气气氛中将反应(体系)加热至90℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH2Cl2萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得所需产物。LC-MS分析产物。

BA112、BA115、BA121、BA122、BA124、BA136、BA138、BA141和BA144的通用合成方案。将硼酸(2.5当量)的EtOH(1.65ml)溶液加入1-环戊基-3-碘代-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA80，1当量)的DME(6ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(15mg，0.15mmol)和饱和Na2CO3(0.95ml)，氩气气氛中将该反应(体系)加热至90℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH2Cl2萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得所需产物。LC-MS分析产物。

BA111、BA114、BA116、BA117、BA119和BA120的通用合成方案。将硼酸(2.5当量)的EtOH(1.65ml)溶液加入3-碘代-1-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA109，1当量)的DME(6ml)溶液中。加入Pd(PPh3)4(15mg，0.15mmol)和饱和Na2CO3(0.95ml)，氩气气氛中将反应(体系)加热至90℃，过夜。冷却后，用饱和NaCl和CH2Cl2萃取反应(体系)。合并有机相，真空浓缩，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得所需产物。LC-MS分析产物。

合成6-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)喹啉-2-胺(BA146)。混合3-(2-氯代喹啉-6-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA130，50mg，0.15mmol)、乙酰胺(174mg，3.0mmol)和K2CO3(104mg，0.75mmol)。氩气气氛中加热至200℃，1小时。冷却反应(体系)，然后用H2O和CH2Cl2萃取。合并有机相，真空浓缩，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA146(22mg，46％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值320.2，实测值320.4。

合成3-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA154)。将4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苄腈(BA150，20mg，0.07mmol)溶解于n-BuOH(2ml)。加入肼一水合物(0.400ml)，氩气气氛中将该反应(体系)加热至110℃，搅拌过夜。真空浓缩反应混合物，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA154(15mg，70％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值309.2，实测值309.4。

合成4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-羟基苄腈(BA155_2)。将4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苄腈(BA150，25mg，0.1mmol)溶解于DMF(1ml)中。加入t-BuOK(24mg，0.21mmol)，室温下搅拌该反应(体系)过夜。然后将反应(体系)加热至150℃，处理24小时。然后真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA155_2(21mg，89％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值295.1，实测值295.4。

合成3-(3-氨基苯并[d]异噁唑-5-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA157_2)和5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-羟基苄腈(BA157_3)。将5-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-氟苄腈(BA151，20mg，0.07mmol)溶解于DMF(1ml)中。加入t-BuOK(24mg，0.21mmol)，室温下搅拌该反应(体系)过夜。然后将反应(体系)加热至150℃，24小时。随后真空浓缩该反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA157_2(7mg)，ESI-MS(M+H)+m/z计算值295.1，实测值295.4和BA157_3(8mg)，ESI-MS(M+H)+m/z计算值310.1，实测值310.4。

合成3-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(BA159)。将4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2，6-二氟苯甲醛(BA149，20mg，0.063mmol)溶解于n-BuOH(1ml)。加入肼一水合物(0.400ml)，氩气气氛中将该反应(体系)加热至100℃，继续搅拌2.5小时。真空浓缩反应混合物，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H2O:0.1％TFA)从而获得BA159(15mg，77％产率)。ESI-MS(M+H)+m/z计算值312.1，实测值312.4。

合成4-氯代-7-甲基-5-(萘-2-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(ZK102)。氩气气氛下，将4-氯代-5-碘代-7-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(19mg，0.065mmol)、萘-2-基-2-硼酸(12.2mg，0.071mmol)、Na₂CO₃(68.9mg，0.65mmol)和PdCl₂(dppf)(26.5mg，0.00325mmol)的THF(3mL)溶液加热回流过夜。真空浓缩该反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得ZK102(5mg，26％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值294.1，实测值294.3。

合成4-氯代-7-甲基-5-(3-联苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(ZK103)。氩气气氛下，将4-氯代-5-碘代-7-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(10mg，0.034mmol)、3-联苯基-硼酸(7.4mg，0.038mmol)、Na₂CO₃(36.1mg，0.34mmol)和PdCl₂(dppf)(1.4mg，0.0017mmol)的THF(10mL)溶液加热回流过夜。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得ZK103(3mg，28％产率)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值320.1，实测值320.0。

合成3-(4-叔丁基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK125)。将1-叔丁基-3-(4-叔丁基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺溶解于甲酸(1mL)和浓盐酸(0.1mL)的溶液中，加热回流2小时。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)从而获得ZK125(定量)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值268.2，实测值268.4。

合成3-(3-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK126)。将1-叔丁基-3-(3-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.16mmol)溶解于甲酸(5mL)和浓盐酸(0.1mL)的溶液中，加热回流2.5小时。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值304.1，实测值304.3。

合成3-间-甲苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK127)。将1-叔丁基-3-间-甲苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(23mg，0.1mmol)溶解于甲酸(1mL)和浓盐酸(0.3mL)的溶液中，加热回流2.5小时。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值226.1，实测值226.3。

合成3-(3-硝基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK128)。将1-叔丁基-3-(3-硝基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(23mg，0.055mmol)溶解于甲酸(5mL)和浓盐酸(0.1mL)的溶液中，加热回流2小时。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值257.1，实测值257.3。

合成3-(苯并[d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK129)。将1-叔丁基-3-(苯并[d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(21mg，0.082mmol)溶解于甲酸(1mL)和浓盐酸(0.2mL)的溶液中，加热回流2小时。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值256.1，实测值256.3。

合成3-(4-硝基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK130)。将1-叔丁基-3-(4-硝基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(21mg，0.082mmol)溶解于甲酸(2mL)和浓盐酸(0.2mL)的溶液中，加热回流30分钟。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值257.1，实测值257.3。

合成3-(3-(2，6-二氯代苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK131)。将1-叔丁基-3-(3-(2，6-二氯苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(19.5mg，0.05mmol)溶解于甲酸(2mL)和浓盐酸(0.2mL)的溶液中，加热回流30分钟。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值386.1，实测值386.2。

合成3-(2，3-二甲基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK132)。将1-叔丁基-3-(2，3-二甲基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(34mg，0.14mmol)溶解于甲酸(2mL)和浓盐酸(0.2mL)的溶液中，加热回流30分钟。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值240.1，实测值240.4。

合成2-(4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(ZK133)。将1-叔丁基-2-(4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(5mg，0.014mmol)溶解于甲酸(2mL)和浓盐酸(0.2mL)的溶液中，加热回流30分钟。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值228.1，实测值228.3。

合成3-邻-甲苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK134)。将1-叔丁基-3-邻-甲苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺溶解于甲酸(2mL)和浓盐酸(0.2mL)的溶液中，加热回流30分钟。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值226.1，实测值226.3。

合成3-(3-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK135)。将1-叔丁基-3-(3-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺溶解于甲酸(2mL)和浓盐酸(0.2mL)的溶液中，加热回流30分钟。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值227.1，实测值227.3。

合成3-(3-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK136)。将1-叔丁基-3-(3-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(19mg，0.052mmol)溶解于甲酸(1mL)和浓盐酸(0.1mL)的溶液中，加热回流30分钟。反应产生ZK136和3-(4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯酚(ZK138)的混合物。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化产物(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ZK136：ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值318.1，实测值318.3。ZK138：ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值228.1，实测值228.3。

合成3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK137)。将1-叔丁基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(9mg，0.032mmol)溶解于甲酸(1mL)和浓盐酸(0.2mL)的溶液中并加热回流。反应进行30分钟，然后真空浓缩，通过RP-HPLC纯化产物(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值227.1，实测值227.3。

合成3-(1，2，3，4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK139)。将1-叔丁基-3-(1，2，3，4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(9mg，0.029mmol)溶解于甲酸(1mL)和浓盐酸(0.1mL)的溶液中并加热回流。反应进行30分钟，然后真空浓缩，通过RP-HPLC纯化产物(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值266.1，实测值266.4。

合成5-碘代-7-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(ZK140)。将4-氯代-5-碘代-7-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(90mg，0.31mmol)溶解于7NNH₃/MeOH中，在密封试管中于110℃加热过夜。真空浓缩反应(体系)得到棕色/灰白色固体。

合成3-对-甲苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK141)。将1-叔丁基-3-对-甲苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺溶解于甲酸(1mL)和浓盐酸(0.1mL)的溶液中并加热回流。反应进行30分钟，然后真空浓缩，通过RP-HPLC纯化产物(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值226.1，实测值226.3。

合成3-(4-联苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK142)。将1-叔丁基-3-(4-联苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(22mg，0.066mmol)溶解于甲酸(1mL)和浓盐酸(0.1mL)的溶液中并加热回流。反应进行30分钟，然后真空浓缩，通过RP-HPLC纯化产物(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值288.1，实测值288.3。

合成3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK143)。将1-叔丁基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(19mg，54.1mmol)溶解于甲酸(1mL)和浓盐酸(0.1mL)的溶液中并加热回流。反应进行30分钟，然后真空浓缩，通过RP-HPLC纯化产物(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值304.1，实测值304.3。

合成1-苄基-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK147)。将3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(110mg，0.42mmol)溶解于DMF(2mL)中，加入K₂CO₃(220mg，1.6mmol)和苄基溴(71.8mg，0.42mmol)。将反应(体系)加热至60℃，过夜，然后冷却至室温并倒入水(30mL)中。过滤收集沉淀物，然后通过硅胶柱层析进一步纯化(5％MeOH/CH₂Cl₂)从而获得白色固体。

合成5-(4-(苄氧基)苯基)-7-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(ZK150)。氩气气氛下，将5-碘代-7-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(5mg，0.018mmol)、4-(苄氧基)苯基硼酸(21mg，0.091mmol)、K₃PO₄(19.3mg，0.091mmol)和Pd(PPh₃)₄(12.5mg，0.011mmol)的DMF(3mL)溶液加热至60℃。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值331.1，实测值331.3。

合成5-(3-联苯基)-7-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(ZK151)。氩气气氛下，将5-碘代-7-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(5mg，0.018mmol)、3-联苯基硼酸(18mg，0.091mmol)、K₃PO₄(19.3mg，0.091mmol)和Pd(PPh₃)₄(12.5mg，0.011mmol)的DMF(3mL)溶液加热至60℃。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值301.1，实测值301.3。

合成5-(苯并[b]噻吩-2-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(ZK152)。氩气气氛下，将5-碘代-7-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(5mg，0.018mmol)、苯并[b]噻吩-2-基-2-硼酸(16mg，0.091mmol)、K₃PO₄(19.3mg，0.091mmol)和Pd(PPh₃)₄(12.5mg，0.011mmol)的DMF(3mL)溶液加热至60℃。真空浓缩反应(体系)，通过RP-HPLC纯化(MeCN:H₂O:0.1％TFA)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值281.1，实测值281.3。

合成3-(萘-2-基)-1-苯乙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK155)。将2-(甲氧基(萘-6-基)亚甲基)丙二腈(100mg，0.43mmol)和盐酸苯乙基肼(58.5mg，0.43mmol)溶解于EtOH(3mL)和TEA(60L，0.43mmol)中，加热回流1小时。用二乙醚萃取产物并真空浓缩。然后将该浓缩物溶解于甲酰胺(10mL)中，加热至160-180℃，过夜。第二天将反应(体系)冷却，倒入水中，过滤收集沉淀的产物。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值366.2，实测值366.2。

合成1-异丙基-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK156)。将2-(甲氧基(萘-6-基)亚甲基)丙二腈(100mg，0.43mmol)和盐酸异丙基肼(47.3mg，0.43mmol)溶解于EtOH(3mL)和TEA(1当量)中，加热至回流1小时。用二乙醚萃取产物并真空浓缩。然后将该浓缩物溶解于甲酰胺(10

mL)中，加热至160-180℃，过夜。第二天将反应(体系)冷却，倒入水中，过滤收集沉淀的产物。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值304.2，实测值304.2。

合成1-乙基-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK157)。将3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.42mmol)溶解于DMF(3mL)中，加入K₂CO₃(220mg，1.6mmol)和乙基碘(37L，0.46mmol)。将反应(体系)加热至60℃，过夜，然后冷却至室温并倒入水(30ml)中。过滤收集沉淀物。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值290.1，实测值290.2。

合成1-环戊基-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK158)。将3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.42mmol)溶解于DMF(3mL)中，加入K₂CO₃(220mg，1.6mmol)和环戊基溴(49.5μL，0.46mmol)。将反应(体系)加热至60℃，过夜，然后冷却至室温并倒入水(30ml)中。过滤收集沉淀物。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值330.2，实测值330.2。

合成1-烯丙基-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK159)。将3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.21mmol)溶解于DMF(1.5mL)中，加入K₂CO₃(110mg，0.8mmol)和烯丙基碘(23μL，0.25mmol)。将反应(体系)加热至60℃，过夜，然后冷却至室温并倒入水(30ml)中。过滤收集沉淀物。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值302.1，实测值302.2。

合成2-(4-氨基-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酰胺(ZK162)。将3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.21mmol)溶解于DMF(1.5mL)中，加入K₂CO₃(110mg，0.8mmol)和碘代乙酰胺(46mg，0.25mmol)。将反应(体系)加热至60℃，过夜，然后冷却至室温并倒入水(30ml)中。过滤收集沉淀物。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值319.1，实测值319.2。

合成1-(环丙基甲基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK165)。将3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.21mmol)溶解于DMF(1.5mL)中，加入K₂CO₃(110mg，0.8mmol)和环丙基甲基溴(22μL，0.25mmol)。将反应(体系)加热至60℃，过夜，然后冷却至室温并倒入水(30ml)中。过滤收集沉淀物。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值316.2，实测值316.2。

合成1-异戊基-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK161)。将3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.21mmol)溶解于DMF(1.5mL)中，加入K₂CO₃(110mg，0.8mmol)和异丁基溴。将反应(体系)加热至60℃，过夜，然后冷却至室温并倒入水(30ml)中。过滤收集沉淀物。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值332.2，实测值332.3。

合成3-(萘-2-基)-1-((E)-3-苯基丙-1-烯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK167)。将3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.21mmol)溶解于DMF(1.5mL)中，加入K₂CO₃(110mg，0.8mmol)和1-((E)-3-溴代丙-1-烯基)苯。将反应(体系)加热至60℃，过夜，然后冷却至室温并倒入水(30ml)中。过滤收集沉淀物。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值378.2，实测值378.2。

合成3-(萘-2-基)-1-(丙-2-炔基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK168)。将3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.21mmol)溶解于DMF(1.5mL)中，加入K₂CO₃(110mg，0.8mmol)和炔丙基溴。将反应(体系)加热至60℃，过夜，然后冷却至室温并倒入水(30ml)中。过滤收集沉淀物。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值300.1，实测值300.2。

合成3-乙氧基-4-甲氧基苯甲酰氯(ZK299)。将3-乙氧基-4-甲氧基苯甲酸(5g，25.5mmol)加入150mL火焰干燥的圆底烧瓶中的CH₂Cl₂(40mL)和苯(20mL)溶液中。加入无水DMF(9滴)，用冰冷却溶液。滴加草酰氯(11mL，128mmol)，然后使反应(体系)升温至室温。室温下搅拌该反应(体系)90分钟，然后真空浓缩获得灰白色固体。将该固体置于高真空管(high-vacuum

line)中，2小时，然后无需进一步表征即可用于下一步骤。

合成2-((3-乙氧基-4-甲氧基苯基)(羟基)亚甲基)丙二腈(ZK301)。在冰上将NaH(2.2g，56mmol，60％石蜡油分散液)加入丙二腈(1.85g，28mmol)的THF(30mL)溶液中。将3-乙氧基-4-甲氧基苯甲酰氯(25.5mmol)溶解于THF(50mL)中，在0℃利用注射器滴加第一溶液。然后撤去冰，使反应在室温下进行60分钟。加入1N HCl(100mL)，用EtOAc萃取该溶液三次。用MgSO₄干燥有机相，过滤，真空浓缩得到橙色固体，该固体无需进一步表征即可用于下一步骤。

合成2-((3-乙氧基-4-甲氧基苯基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈(ZK302)。将2-((3-乙氧基-4-甲氧基苯基)(羟基)亚甲基)丙二腈(25.5mmol)和碳酸氢钠(17g，204mmol)混合在1，4-二噁烷(48mL)和水(8mL)的溶液中。缓慢加入硫酸二甲酯(17mL，178mmol)，将该反应(体系)加热至80-90℃，2小时。将反应(体系)冷却至室温，加入水，用EtOAc(200mL)萃取水相三次。合并有机相，用MgSO₄干燥，经过滤得到红色油状物。该油状物经硅胶层析纯化(10％EtOAc/己烷，R_f约为0.1)得到白色固体(3.59g，经过三步产率为54.5％)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值259.1，实测值259.0。

合成5-氨基-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-腈(ZK303)。将2-((3-乙氧基-4-甲氧基苯基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈(200mg，0.78mmol)、盐酸异丙基肼(86mg，0.78mmol)和三乙胺(0.10mL，0.78mmol)在乙醇(5mL)中混合，加热至回流，90分钟。然后使该反应(体系)冷却至室温，加入水，用EtOAc萃取水相三次。浓缩有机相，无需进一步表征即可用于下一步骤。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值301.1，实测值301.0。

合成3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(ZK305)。将5-氨基-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-腈溶解于甲酰胺(20mL)中，加热至180℃，过夜。第二天，将该反应(体系)冷却至室温，加入水，过滤收集沉淀物。然后将沉淀物溶解于CH₂Cl₂/MeOH中，使之流经二氧化硅塞。然后用苯冻干该产物从而获得灰白色固体(48mg，两步收率为19％)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值328.2，实测值328.0。

合成5-氨基-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(2-羟乙基)-1H-吡唑-4-腈(ZK304)。将2-((3-乙氧基-4-甲氧基苯基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈(200mg，0.78mmol)、2-羟乙基肼(0.056mL，0.78mmol)和三乙胺(0.10mL，0.78mmol)混合在乙醇(5mL)中，加热至回流，90分钟。然后将该反应(体系)冷却至室温，加入水，用EtOAc、CH₂Cl₂和CHCl₃萃取水相三次。浓缩有机相，无需进一步表征即可用于下一步骤。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值303.1，实测值303.0。

2-(4-氨基-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙醇(ZK306)。将5-氨基-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(2-羟乙基)-1H-吡唑-4-腈溶解于甲酰胺(20mL)中，加热至180℃，过夜。第二天将该反应(体系)冷却至室温，加入水，过滤收集沉淀物。然后将该沉淀物溶解于CH₂Cl₂/MeOH中，使之流经二氧化硅塞。然后用苯冻干该产物从而获得棕色固体(6.4mg，两步产率为2.5％)。ESI-MS(M+H)⁺m/z计算值330.1，实测值330.0。

B.结构研究

p110γ单独和与ATP或泛特异性抑制剂，例如LY294002及渥曼青霉素形成复合物的晶体结构已见诸报道(Walker等，2000；Walker等，1999)。为研究抑制剂结合的效力和选择性，以2.5-2.6

分辨率测定与人p110γ结合的三种化学型PI3-K抑制剂：喹唑啉嘌呤PIK-39，咪唑并吡啶PIK-90和苯基噻唑PIK-93的晶体结构(图2)。

根据这些共结晶结构和保守性芳基吗啉(arylmorpholine)药效团模型，产生了与p110γ结合的三种其它化学型：吡啶基呋喃并嘧啶PI-103、吗啉代色酮(morpholinochromone)PIK-108和吗啉代吡喃酮(morpholinopyranone)KU-55933的结构模型(图2)。根据各化合物含有LY294002中所见的关键芳基吗啉药效团这一观察结果指导这些抑制剂的模型构建。

PIK-39是在中等纳摩尔浓度抑制p110δ的异喹啉嘌呤，在浓度高约100倍时抑制p110γ和p110β，在浓度最高达100μM时对包括p110α在内的任何其它PI3-K家族成员无活性(图5)。该化合物通过在其与p110γ的共结晶结构中揭示的非常规结合模式实现生物化学选择性(图2C)。只有PIK-39的巯基嘌呤部分与ATP结合口袋的内部接触，相对于ATP的腺嘌呤的平面，该环系统偏离平面旋转约110°，扭转约35°。以此取向，其符合与Val882和Glu880的骨架酰胺(形成)氢键(从而重建(recapitulate)腺嘌呤的N1和N6构成的氢键)。

与其它PI3-K抑制剂结构相反，PIK-39不接近活性位点内部更深的口袋(图2C，标记为“亲和口袋”的浅阴影区域)。PIK-39的芳基-异喹啉部分反而延伸出来，延伸到ATP结合口袋的入口(图2B)。在该区域，激酶通过经历构象重排而容纳抑制剂，其中Met804自构成所述ATP结合口袋顶部的“上”位变成对着异喹啉部分挤压的“下”位。该运动的作用是在所述ATP结合位点入口处的Met804和Trp812之间产生新的疏水口袋，这是PIK结构所独有的(见图2B)。该诱导-契合口袋掩盖溶剂可接近抑制剂表面区域的约180

2，使得PIK-39能达到纳摩尔亲和力，虽然在活性位点核心内的接触有限。

测定了与p110γ结合的PIK-90和PIK-93化合物的共结晶结构。PIK-90和PIK-93均与Val882的骨架酰胺氮形成氢键(图2D)，所有已知PI3-K抑制剂均具有的一种相互作用(Walker等，2000)。除该氢键外，PIK-93还与Val882的骨架羰基形成第二氢键，在其磺酰胺部分与Asp964的侧链之间形成第三氢键。PIK-93是我们的研究对象中极性最高的抑制剂之一(clogP＝1.69)，这些扩伸的极性相互作用可弥补其有限的疏水性表面区域。

PIK-90的结合模式与PIK-93类似，虽然该较大化合物的疏水相互作用更广泛，掩盖了溶剂可接近表面区域327

²。为达到该结果，PIK-90将其吡啶环伸入PIK-92部分接近但ATP未占据的更深空腔中(图2D，浅阴影区域)。在该区域中，PIK-90的吡啶环维持与Lys833形成氢键，我们发现用碳取代该吡啶氮导致亲和力降低100倍(PIK-95，图4)。根据芳基吗啉药效团模型，PI-103(第三种多靶向PI3K抑制剂)将苯酚伸入同一口袋中(图2D)。

两种结构特征使这些强效的多靶向抑制剂与我们研究对象中更具选择性的化合物相区别。首先，这些化合物在ATP结合口袋中采取平面构象，而高度选择性抑制剂伸出ATP所占据的平面(图2)。第二，最强效的抑制剂伸入ATP不接近的更深结合口袋(图2A)。Ile879的侧链构成该亲和口袋的多数表面。

用腺嘌呤替代PIK-39结构中的巯基嘌呤从而产生IC87114的模型(图3A)。该取代提供正确取向的IC87114的腺嘌呤从而形成与PIK-39的巯基嘌呤相同的氢键，即使这两个环体系相对彼此旋转110°。

与其它抑制剂化学型不同，PIK-39不利用PIK-激酶亲和口袋(图2C)。然后检测IC87114的吡唑并嘧啶类似物(PIK-293)以及含有间-苯酚的新型类似物(PIK-294，图3A)对I类PI3-K的抑制作用。PIK-294比PIK-293强60倍(图3A)。

与p110γ结合的PIK-39的结构揭示了产生诱导口袋的Met804构象重排，我们假设该构象重排是PIK-39对p110δ具有选择性的基础。该模型预测Met804突变会干扰p110δ-选择性抑制剂(接近诱导口袋)的结合，但不会影响其它类抑制剂(不接近该口袋)。建模提示Met804突变成β-支链氨基酸(例如缬氨酸或异亮氨酸)应约束通过该残基重排形成的口袋(图3B，右)。因此，我们将p110δ中的相应残基(Met752)突变为缬氨酸或异亮氨酸，表达并纯化这些激酶，检验它们对PI3-K抑制剂的敏感性(图3B)。我们发现M752I和M752V p110δ对p110δ-选择性抑制剂PIK-39和IC87114有耐受性，但对p110α/多靶向抑制剂PIK-90、PIK-93和PI-103保持敏感。该化学型特异性耐受性支持Met752选通可诱导选择性口袋中的独特作用。

利用PyMOL分子图形系统进行拮抗剂建模。利用PyMOL的比对功能在结构上比对所有p110γ晶体结构(括号内的PDB码)，包括Apo(1E8Y)、ATP(1E8X)、渥曼青霉素(1E7U)、LY294002(1E7V)、槲皮素(1E8W)、杨梅黄酮(1E90)和星孢素(1E8Z)、PIK-90、PIK-93及PIK-39结合形式。利用PyMOL的片段构建功能，在LY294002芳基吗啉支架(1E7V)上构建抑制剂PIK-108、KU-55933和PI-103的模型。在PIK-39芳基异喹啉支架上类似地构建抑制剂IC87114的模型。

将PI-103的模型构建成与PIK-90结合的p110γ的蛋白质结构，因为PIK-90结构含有容纳PIK-103的苯酚部分所必需的扩大亲和口袋(或者，与结合p110γ结构的LY294002相比，PIK-90p110γ结构在芳基吗啉-结合区域中不显示任何构象差异)。将PIK-108、KU-55933和IC87114的模型构建成与PIK-39结合的p110γ的蛋白质结构，因为这些抑制剂具有伸出腺嘌呤平面的大基团并可能利用独特的“Met804下”诱导-契合口袋。在所有抑制剂模型中，根据广泛的生物化学SAR以及抑制剂几何特性选择蛋白质结构和抑制剂结合模式。未最小化蛋白质结构和抑制剂模型以优化结合能量，但尽量小心以防止任何总体立体碰撞并满足关键氢键。

C.p110α/p85α、p110β/p85α、p110δ/p85α和p110γ试验

I类PI3-K可购得(p110α/p85α、p110β/p85α、p110δ/p85α购自爱普司达特公司(Upstate)，p110γ购自西格玛公司(Sigma))或如前所述(Knight等，2004)表达。采用脂质激酶活性的标准TLC试验(下述)或高通量膜捕捉试验检测IC50值。制备含有激酶、抑制剂(2％DMSO终浓度)、缓冲液(25mM HEPES，pH7.4，10mM MgCl2)和新鲜超声处理的磷脂酰肌醇(100μg/ml)的反应混合物来进行激酶反应。如图5所示，将含有10μCiγ-32P-ATP的ATP加入至10或100μM终浓度来启动反应，反应在室温下进行5分钟。对于TLC分析，随后通过依次加入105μl1N HCl和160μl CHCl3:MeOH(1:1)终止反应。旋振两相混合物，简单离心，利用预先涂布了CHCl₃的凝胶加样移液管吸头将有机相转移至新试管中。将该提取物点样在TLC平板上，在正丙醇:1M乙酸的65:35溶液中展开3-4小时。然后干燥TLC平板，与磷酸成像屏(phosphorimager screen)(Storm，阿姆山姆公司(Amersham))接触并定量测定。对于各化合物，检测10-12种抑制剂浓度时的激酶活性，这些浓度代表所测试最高浓度的两倍稀释液(通常是200μM)。对于显示明显活性的化合物，IC50测定重复2-4次，报道的数值是这些独立检测结果的平均值。

结果示于下表2。

D.Abl试验

采用含25mM HEPES、pH7.4、10mM MgCl2、200μM ATP(2.5μCiγ-32P-ATP)和0.5mg/mL BSA的试验一式三份检测抗重组全长Ab1或Ab1(T315I)(爱普司达特公司)的抑制剂(终浓度：10μM)。优化的Ab1肽底物EAIYAAPFAKKK用作磷酸受体(phosphoacceptor)(200μM)。通过点样在用0.5％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的磷酸纤维素片上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表3。

E.Hck试验

Hck：采用含25mM HEPES、pH7.4、10mM MgCl2、200μM ATP(2.5μCiγ-32P-ATP)和0.5mg/mL BSA的试验一式三份检测抗重组全长Hck的抑制剂(终浓度：10μM)。优化的Src家族激酶肽底物EIYGEFKKK用作磷酸受体(200μM)。通过点样在用0.5％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的磷酸纤维素片上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表3。

F.胰岛素受体(IR)试验

采用含25mM HEPES、pH7.4、10mM MgCl2、10mM MnCl2、200μMATP(2.5μCiγ-32P-ATP)和0.5mg/mL BSA的试验一式三份检测抗重组胰岛素受体激酶结构域(爱普司达特公司)的抑制剂(终浓度：10μM)。多聚E-Y(西格玛公司；2mg/mL)用作底物。通过点样在用1M NaCl/1％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的硝酸纤维素上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表4。

G.Src试验

Src，Src(T338I)：采用含25mM HEPES、pH7.4、10mM MgCl2、200μMATP(2.5μCiγ-32P-ATP)和0.5mg/mL BSA的试验一式三份检测抗重组全长Src或Src(T338I)的抑制剂(终浓度：10μM)。优化的Src家族激酶肽底物EIYGEFKKK用作磷酸受体(200μM)。通过点样在用0.5％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的磷酸纤维素片上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表3。

H.DNA-PK(DNAK)试验

DNA-PK购自普罗迈格公司(Promega)，按照生产商的使用说明书利用DNA-PK试验系统(普罗迈格公司)进行试验。

结果示于下表2。

I.mTOR试验

采用含50mM HEPES，pH7.5，1mM EGTA，10mM MgCl2，2.5mM、0.01％吐温，10μM ATP(2.5μCiμ-32P-ATP)和3μg/mL BSA的试验检测抗重组mTOR(英杰公司(Invitrogen))的抑制剂(终浓度：50μM-0.003μM)。大鼠重组PHAS-1/4EBP1(卡尔生物化学公司(Calbiochem)；2mg/mL)用作底物。通过点样在用1M NaCl/1％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的硝酸纤维素上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表4。

J.血管内皮生长受体

血管内皮生长受体2(KDR)：采用含25mM HEPES，pH7.4，10mMMgCl2，0.1％BME，10μM ATP(2.5μCiμ-32P-ATP)和3μg/mL BSA的试验检测抗重组KDR受体激酶结构域(英杰公司)的抑制剂(终浓度：50μM-0.003μM)。多聚E-Y(西格玛公司；2mg/mL)用作底物。通过点样在用1M NaCl/1％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的硝酸纤维素上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表3。

K.肝配蛋白受体B4(EphB4)试验

采用含25mM HEPES，pH7.4，10mM MgCl2，0.1％BME，10μM ATP(2.5μCiμ-32P-ATP)和3μg/mL BSA的试验检测抗重组肝配蛋白受体B4激酶结构域(英杰公司)的抑制剂(终浓度：50μM-0.003μM)。多聚E-Y(西格玛公司；2mg/mL)用作底物。通过点样在用1M NaCl/1％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的硝酸纤维素上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表3。

L.表皮生长因子受体(EGFR)试验

采用含25mM HEPES，pH7.4，10mM MgCl2，0.1％BME，10μM ATP(2.5μCiμ-32P-ATP)和3μg/mL BSA的试验检测抗重组EGF受体激酶结构域(英杰公司)的抑制剂(终浓度：50μM-0.003μM)。多聚E-Y(西格玛公司；2mg/mL)用作底物。通过点样在用1M NaCl/1％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的硝酸纤维素上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表3。

M.KIT试验

采用含25mM HEPES，pH7.4，10mM MgCl2，1mM DTT，10mMMnCl2，10μM ATP(2.5μCiμ-32P-ATP)和3μg/mL BSA的试验检测抗重组KIT激酶结构域(英杰公司)的抑制剂(终浓度：50μM-0.003μM)。多聚E-Y(西格玛公司；2mg/mL)用作底物。通过点样在用1M NaCl/1％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的硝酸纤维素上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表4。

N.RET试验

采用含25mM HEPES，pH7.4，10mM MgCl2，2.5mM DTT，10μM ATP(2.5μCiμ-32P-ATP)和3μg/mL BSA的试验检测抗重组RET激酶结构域(英杰公司)的抑制剂(终浓度：50μM-0.003μM)。优化的Ab1肽底物EAIYAAPFAKKK用作磷酸受体(200μM)。通过点样在用0.5％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的硝酸纤维素上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表4。

O.血小板衍生生长因子受体(PDGFR)试验

采用含25mM HEPES，pH7.4，10mM MgCl2，2.5mM DTT，10μM ATP(2.5μCiμ-32P-ATP)和3μg/mL BSA的试验检测抗重组PDG受体激酶结构域(英杰公司)的抑制剂(终浓度：50μM-0.003μM)。优化的Ab1肽底物EAIYAAPFAKKK用作磷酸受体(200μM)。通过点样在用0.5％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的磷酸纤维素片上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表4。

P.FMS相关的酪氨酸激酶3(FLT-3)试验

采用含25mM HEPES，pH7.4，10mM MgCl2，2.5mM DTT，10μM ATP(2.5μCiμ-32P-ATP)和3μg/mL BSA的试验检测抗重组FLT-3激酶结构域(英杰公司)的抑制剂(终浓度：50μM-0.003μM)。优化的Ab1肽底物EAIYAAPFAKKK用作磷酸受体(200μM)。通过点样在用0.5％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的磷酸纤维素片上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表4。

Q.TEK受体酪氨酸激酶(TIE2)试验

采用含25mM HEPES，pH7.4，10mM MgCl2，2mM DTT，10μM ATP(2.5μCiμ-32P-ATP)和3μg/mL BSA的试验检测抗重组FLT-3激酶结构域(英杰公司)的抑制剂(终浓度：50μM-0.003μM)。多聚E-Y(西格玛公司；2mg/mL)用作底物。通过点样在用1M NaCl/1％磷酸洗涤(约6次，每次5-10分钟)的磷酸纤维素片上终止反应。干燥各片，通过磷酸成像定量测定转移的放射性。

结果示于下表4。

R.结果

在表1中，化合物如下式所示：

R¹和R²如表1所定义。X是＝N-，另有说明的情况除外。R³⁶是-NH₂，另有说明的情况除外。

表1

表2

 

化合物

110α

110β

110δ

110γ

DPK

化合物

110α

110β

110δ

110γ

DPK

KS167

++

+

++

++

++

BA46

++

++

+++

++

+++

ZK141

++

++

++

++

+++

BA45

++

+

++

++

++

KS84

++

+

++

+

+++

BA39

++

+++

++

++

ZK127

++

++

++

++

+++

BA150

++

+

++

++

++

ZK134

++

+

++

++

+++

BA151

++

+

++

++

++

ZK132

++

++

++

++

+++

BA21

++

++

++

++

ZK125

++

+

++

++

+++

BA52

++

++

++

++

++

BA56

+++

+++

+++

+++

+++

BA53

++

+

+

+

++

ZK138

++

++

++

++

+++

BA31

++

++

+++

+++

++

KS287

++

++

++

++

++

BA152

++

++

+++

++

+++

KS288

+

+

+

+++

BA149

++

++

++

++

+

KS284

+++

++

+++

++

+++

BA32

++

++

+++

+++

BA60

++

++

+++

++

+++

BA55

++

++

+++

++

++

ZK318

++

+

++

++

++

BA35

++

+++

+++

+++

ZK320

++

++

+++

+++

++

BA34

++

++

+++

++

+++

ZK333

+++

++

+++

+++

+++

BA38

++

+++

+++

+++

ZK323

+++

++

+++

+++

+++

BA40

++

++

++

+++

ZK327

+++

++

+++

+++

+++

BA41

++

++

+++

+++

+++

BA77d

++

++

+++

++

++

BA14

++

++

+++

++

+++

BA78d

++

++

+++

++

+++

BA12

++

++

+++

++

++

BA22

+++

+++

+++

+++

+++

BA30

++

++

+++

+++

+++

BA79d

+++

+++

+++

+++

+++

ZK149

+

++

++

++

+

BA85

++

++

++

++

+++

ZK126

++

+

++

+

++

BA87

+++

+++

+++

+++

+++

ZK143

+

+

+

+

+

ZK502

++

++

+++

++

+++

ZK150

++

+

+

+

++

ZK489

+++

+++

+++

+++

+++

ZK136

++

+

+

++

+++

ZK487

+++

+++

+++

+++

+++

ZK131

+

+

+

+

+

Zk491

+++

+++

+++

+++

++

ZK151

+

+

+

+

+++

Zk493

+++

+++

+++

+++

+++

ZK142

+

+

+

+

+

BA62d

+++

+++

+++

+++

++

ZK139

+

+

+

++

++

ZK450

++

++

++

+++

+

KS207

++

+

+++

+++

+++

ZK454

++

++

++

+++

+++

KS208

++

++

++

+++

+++

ZK469

+++

+++

++

+++

+++

ZK102

+

+

+

+

+++

ZK471

+++

+++

+++

+++

++

ZK157

+++

+++

ZK461

+++

++

+++

++

++

ZK159

++

++

++

++

+++

ZK413

++

+++

+++

+++

+++

ZK156

++

++

++

++

+++

ZK379

+++

++

+++

+++

+++

KS63

+

+

+

+

+++

ZK421

+++

++

+++

+++

+++

ZK158

++

++

++

++

+++

ZK403

++

+++

+++

+++

++

ZK147

+

++

++

++

++

ZK405

++

++

+++

++

+++

ZK155

++

++

++

++

+++

ZK432

+++

++

+++

+++

+++

ZK162

++

+

++

++

+++

ZK434

+++

+++

+++

+++

+++

ZK165

++

+

++

++

+++

ZK465

+++

+

+++

+++

+++

ZK161

++

+

++

++

++

ZK377

++

++

++

++

+++

ZK167

++

++

ZK399

++

++

+++

++

+++

ZK168

++

+++

ZK401

++

+

++

+

+++

BA116

+

++

++

++

+++

BA62

+++

++

+++

+++

+++

BA17

+++

++

+++

++

+++

ZK358

+++

++

+++

+++

+++

BA134

++

+

++

+

++

ZK452

++

++

++

+++

+++

BA105

++

++

+++

++

+++

ZK456

+++

++

++

+++

+++

BA122

++

++

+++

++

+++

ZK463

+++

++

+++

+++

+++

BA111

+++

++

+++

+++

+++

ZK371

+++

+++

+++

+++

+++

BA102

+++

+++

+++

+++

+++

ZK409

+++

+++

+++

+++

+++

BA112

+++

++

+++

+++

+++

ZK428

+++

+++

+++

+++

+++

BA118

+++

++

+++

+++

+++

 

化合物

110α

110β

110δ

110γ

DPK

化合物

110α

110β

110δ

110γ

DPK

ZK430

+++

+++

+++

+++

+++

BA130

+++

++

+++

+++

+++

ZK387

++

++

++

++

+++

BA132

+++

+++

+++

+++

+++

ZK389

++

+++

+++

++

+++

BA139

++

++

+++

+

++

ZK369

++

+

++

++

++

BA158

+++

+++

+++

+++

+++

ZK385

++

++

+++

++

+++

BA140

+

++

+

+

++

ZK391

++

++

+++

++

+++

BA141

+

+

+

+

+

BA155_2

+++

+++

+++

+++

+++

BA146

+++

+++

+++

+++

+++

BA1572

+++

+++

+++

+++

+++

BA142

+++

++

++

+++

+++

BA59

+++

++

+++

+++

+++

BA145

++

++

++

++

++

BA63

++

+++

+++

BA147

++

++

++

++

++

BA93

+++

++

+++

+++

+++

BA148

++

++

++

++

+++

BA49

++

+

++

++

++

BA143

++

++

++

++

+++

BA15

+++

++

+++

+++

+++

BA144

+++

++

+++

+++

+++

ZK321

+++

++

+++

+++

+++

BA129

++

+

++

+

++

ZK337

+++

+++

+++

+++

+++

BA131

+++

++

+++

+++

+++

ZK347

+++

+++

+++

+++

+++

BA133

+++

+++

+++

+++

+++

ZK325

+++

+++

+++

+++

+++

BA120

+++

++

+++

+++

+++

ZK349

+++

+++

+++

+++

+++

BA108

+++

++

+++

++

+++

ZK423

+++

+++

+++

+++

+++

BA121

+++

++

+++

++

+++

ZK411

++

+++

+++

+++

+++

BA89

+++

++

+++

+++

+++

ZK407

++

+++

+++

++

++

BA94

+++

++

+++

+++

+++

BA98

+++

+++

+++

+++

+++

BA135

+++

+++

+++

+++

+++

S1

++

+

++

+

+

BA136

+++

++

+++

++

+++

BA23

+++

+++

+++

+++

+++

BA137

+++

+++

+++

+++

+++

ZK485

+++

+++

+++

++

++

BA138

+++

++

+++

+++

+++

ZK495

+++

++

+++

++

+++

BA160

++

++

+++

+++

+++

ZK496

++

++

+++

++

+++

BA157 3

+++

++

+++

+++

+++

ZK494

+++

+++

+++

+++

+++

BA154

+++

+++

+++

+++

+++

BA90

+++

+++

+++

+++

+++

BA110

+++

++

+++

+++

+++

ZK341

++

++

+++

+++

++

BA115

+++

++

+++

+++

+++

ZK343

+++

++

+++

++

+++

BA159

+++

+++

+++

+++

++

ZK361

++

++

+++

+++

+++

BA119

++

++

+++

++

+++

ZK359

+++

+++

+++

+++

+++

BA107

++

++

+++

++

+++

ZK362

+++

+++

+++

+++

++

BA124

++

++

+++

++

+++

BA64

+

+

++

+

++

BA161

+

+

+

+

+++

BA65

+

+

++

+

++

BA162

++

++

++

++

+++

ZK305

+++

+++

+++

+++

+++

BA24dd

++

++

+++

++

+++

ZK306

++

+

++

++

++

BA43

+++

+++

+++

+++

BA66

++

++

+++

++

+++

BA91

++

++

++

++

+++

BA48

++

++

+++

++

+++

BA92

++

++

+++

++

+++

ZK133

+

+

+

++

++

BA86

++

++

++

+++

+++

BA20dd

++

++

++

++

+++

BA88

+

+

++

+++

+++

BA20d

++

++

+++

+++

+++

BA96

++

+

+++

+++

+++

BA20

++

++

++

++

BA97

++

++

+++

+++

+++

BA99

++

+

++

+

++

BA44

++

+++

++

++

++

BA81dd

+++

++

+++

+++

+

BA156

++

++

++

++

+++

BA81d

+++

++

+++

+++

+++

BA95

++

++

+++

+++

+++

ZK137

++

+

++

++

+++

ZK129

++

++

++

++

+++

ZK135

++

+

+

++

++

BA54

++

++

++

++

+++

ZK130

+

+

+

+

+

ZK152

++

++

++

++

+++

ZK128

++

+

++

++

++

BA42

++

++

++

++

+++

BA26

++

++

+++

+++

++

PIK294

++

+++

+++

+++

++

SU11248

++

+

++

++

+

易瑞沙

+

+

+

+

+

BAY43-9006

++

+

+

+

+

PIK103

+++

+++

+++

+++

+++

达沙替尼

++

+

++

+

++

PIK90

+++

+++

+++

+++

+++

表3

 

化合物

Abl

Hck

Src

Src(T/l)

VEGFR

EGFR

EphB4

KS84

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

BA56

++

+++

+++

++

++

+++

++

KS284

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

BA60

++

+++

+++

+++

++

+

++

ZK318

++

++

+++

++

+

++

ZK320

+++

+++

+++

++

+++

++

++

ZK333

+++

+++

+++

++

+++

++

++

ZK323

+++

+++

+++

+++

+++

+++

+++

ZK327

+++

+++

+++

++

+++

++

++

BA77d

+++

+++

+++

++

++

++

+++

BA78d

+++

+++

+++

++

+++

++

++

BA22

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

BA79d

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

BA85

++

+++

+++

++

++

++

++

BA87

+++

+++

+++

+++

+++

+++

+++

ZK502

+++

+++

+++

++

++

++

+

ZK489

+++

+++

+++

+

++

+

++

ZK487

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

Zk491

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

Zk493

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

BA62d

+++

+++

+++

+++

+++

++

+++

ZK450

+++

+++

+++

+

++

+

++

ZK454

+++

++

+++

+

++

++

+

ZK469

+++

+++

+++

+

++

++

++

ZK471

+++

+++

+++

+

++

++

+

ZK461

+++

+++

+++

+

+++

++

++

ZK413

+++

+++

+++

+

++

++

ZK379

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

ZK421

+++

+++

+++

+++

+++

+++

+++

ZK403

+++

+++

+++

++

+++

++

+++

ZK405

+++

+++

+++

++

++

++

+

ZK432

+++

+++

+++

++

+++

++

+++

ZK434

+++

+++

+++

++

+++

++

+++

ZK465

+++

+++

+++

+

+++

+++

+++

ZK377

++

++

+++

+

++

+

+

ZK399

+++

+++

+++

+

+

+

++

ZK401

+++

+++

+++

+

+

+

+

BA62

+++

+++

+++

+

+

++

+++

ZK358

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

ZK452

+++

+++

+++

++

+++

++

++

ZK456

+++

+++

+++

+

++

++

++

ZK463

+++

+++

+++

++

+++

++

++

ZK371

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

ZK409

+++

+++

+++

++

+++

++

+++

ZK428

+++

+++

+++

++

+++

++

+++

ZK430

+++

+++

+++

++

+++

++

+++

ZK387

+++

+++

+++

+

++

++

++

ZK389

+++

+++

+++

++

+++

++

+++

ZK369

++

++

+++

+

++

++

+

ZK385

++

+++

+++

+

++

+

++

ZK391

++

+++

+++

+

++

++

++

BA155_2

++

+++

+++

++

++

++

++

BA1572

++

++

++

++

++

++

++

 

化合物

Abl

Hck

Src

Src(T/l)

VEGFR

EGFR

EphB4

BA59

+++

+++

+++

+++

++

++

+++

BA63

++

+++

+++

++

++

++

++

BA93

++

+++

+++

++

++

++

++

BA49

++

+++

+++

++

+

++

+++

BA15

++

+++

+++

++

+

+++

++

ZK321

+++

+++

+++

++

++

+

++

ZK337

+++

+++

+++

+

++

ZK347

+++

+++

+++

++

+++

++

++

ZK325

+++

+++

+++

++

+++

++

+++

ZK349

+++

+++

+++

+++

+++

+++

+++

ZK423

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

ZK411

++

++

+++

+

++

++

++

ZK407

++

+++

+++

+

+++

++

+

BA98

+++

+++

+++

++

+++

+++

++

S1

+++

+

++

+

+

+

+

BA23

++

++

+++

++

+

++

++

ZK485

++

+++

+++

+

+

++

++

ZK495

++

+++

++

++

+

++

++

ZK496

++

++

++

++

++

++

++

ZK494

+++

+++

+++

++

++

++

++

BA90

++

+++

+++

++

++

++

++

ZK341

++

++

+

+

+

+

+

ZK343

++

+++

+++

+

++

++

++

ZK361

++

++

++

+

+

++

+

ZK359

+++

+++

+++

++

++

++

+++

ZK362

++

+++

+++

+

+

++

+

BA64

+++

+++

+++

++

+

++

+++

BA65

++

+++

+++

++

++

++

++

ZK305

++

++

++

++

+

+

++

ZK306

+

++

++

++

++

++

+

BA66

++

++

++

+

+

++

BA48

++

+++

+++

++

++

++

++

BA20dd

+++

+++

+++

++

++

++

++

BA20d

+++

+++

+++

++

++

++

++

BA20

+++

+++

+++

+++

++

+++

+

BA99

++

+++

+++

++

+++

++

++

BA81dd

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

BA81d

+++

+++

+++

++

+++

+++

+++

BA26

++

++

+++

++

+

+

+

BA46

++

++

++

+

++

++

++

BA45

++

+++

+++

++

++

++

+

BA39

++

++

++

++

++

+

++

BA150

++

++

++

+

++

+

++

BA151

++

++

++

+

+

++

++

BA21

++

++

++

+

+

+

+

BA52

++

++

++

+

+

+

+

BA53

++

++

++

+

+

+

+

BA31

++

++

++

+

+

++

+

BA152

+++

+++

+++

+

++

++

++

BA149

++

+++

+++

++

++

++

++

BA32

++

++

++

+

+

+

++

BA55

++

++

++

+

+

++

++

BA35

++

++

++

++

++

++

++

BA34

++

++

++

++

++

++

++

BA38

++

++

++

++

+

+

+

BA40

++

++

++

++

++

++

+

 

化合物

Abl

Hck

Src

Src(T/l)

VEGFR

EGFR

EphB4

BA41

++

++

++

++

++

+

++

BA14

++

++

++

++

+

+

++

BA12

++

++

++

++

++

++

++

BA30

++

++

++

++

++

+++

++

KS208

++

+++

++

++

++

+++

++

BA116

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BA17

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BA134

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+

+

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BA105

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BA122

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BA111

+

+

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BA102

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BA112

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BA118

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+

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BA130

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+

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BA132

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+

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BA139

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+

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+

BA158

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BA140

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BA141

+

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+

BA146

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BA142

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+

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BA145

+

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BA147

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BA148

+

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+

BA143

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+

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BA144

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+

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BA129

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+

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+

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BA131

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++

11

+

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+

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BA133

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+

+

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BA120

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BA108

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BA121

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BA89

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BA94

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BA135

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+

BA136

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BA137

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BA138

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BA160

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BA157_3

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BA154

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BA110

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BA115

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BA159

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BA119

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BA107

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BA124

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BA161

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+

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+

+

++

+

BA162

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++

+

+

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BA24dd

++

++

++

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BA43

++

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BA91

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BA92

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BA86

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BA88

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+++

+++

+++

 

化合物

Abl

Hck

Src

Src(T/l)

VEGFR

EGFR

EphB4

BA96

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++

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BA97

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BA44

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+

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BA156

++

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BA95

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+

+

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BA54

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BA42

+

++

++

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+

++

SU11248

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++

+

BAY43-9006

+++

+++

+++

+++

+++

+

++

达沙替尼

++

+

+++

易瑞沙

++

+++

+++

++

++

++

PIK103

+

+

+

+

+

+

+

PIK90

+

+

+

+

+

+

+

P11K294

++

+

++

+

+

+

+

表4

 

化合物

cKIT

Tie2

FLT3

PDGFR

RET

IR

mTOR

ZK358

+++

++

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+++

++

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ZK487

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+

+++

ZK349

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++

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ZK494

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++

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+

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BA102

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+++

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+++

+++

+

+++

BA121

+++

+++

+++

+++

++

+++

KS84

+++

+

+++

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++

++

SU11248

+++

++

+++

+++

+++

++

+

BAY43-9006

+++

+++

+

+++

+++

++

+

达沙替尼

+++

++

+++

+++

++

+

+

易瑞沙

+

++

+++

+++

++

+

+

在上表2-4中，+++表示IC50小于1μM；++表示IC50为1μM-50μM；+表示IC50大于50μM。

IX.参考文献

Alaimo，P.J.，Knight，Z.A.和Shokat，K.M.(2005).“靶向磷酸肌醇3-激酶中的看家残基”(Targeting the gatekeeper residue in phosphoinositide3-kinases)，Bioorg Med Chem13，2825-2836。

Asano，T.，Kanda，A.，Katagiri，H，Nawano，M.，Ogihara，T.，Inukai，K.，Anai，M，Fukushima，Y，Yazaki，Y.，Kikuchi M.等，(2000)“p110β在3T3-L1细胞的分化期间上调并促进高度胰岛素响应性葡萄糖转运活性”(p110beta is up-regulated during differentiation of 3T3-L1 cells and contributesto the highly insulin-responsive glucose transport activity).J Biol Chem275，17671-17676。

Bi，L.，Okabe，I.，Bernard，D.J，和Nussbaum，R.L.(2002).“PI3-激酶的p110β催化亚单位缺陷小鼠的早期胚胎致死率”(Early embryoniclethality in mice deficient in the p110beta catalytic subunit of PI3-kinase).Mamm Genome13，169-172。

Bi，L.，Okabe，I.，Bernard，D.J.，Wynshaw-Boris，A.，和Nussbaum，R.L.(1999).“磷酸肌醇3-激酶的p110α亚单位缺失的纯合小鼠的增殖缺陷和胚胎致死率”(Proliferative defect and embryonic lethality in micehomozygous for a deletion in the p110alpha subunit of phosphoinositide3-kinase).J Biol Chem274，10963-10968.

Brachmann，S.M.，Ueki，K.，Engelman，J.A.，Kahn，R.C.和Cantley，L.C.(2005).“小鼠中磷酸肌醇3-激酶催化亚单位缺失和调节亚单位缺失对胰岛素敏感具有反作用”(Phosphoinositide3-kinase catalytic subunit deletionand regulatory subunit deletion have opposite effects on insulin sensitivity inmice)Mol Cell Biol25，1596-1607.

Camps，M.，Ruckle，T.，Ji，H.，Ardissone，V.，Rintelen，F.，Shaw，J.，Ferrandi，C.，Chabert，C.，Gillieron，C.，Francon，B.等，(2005).“阻断PI3Kγ抑制类风湿性关节炎小鼠模型的关节炎症和损伤”(Blockade ofPI3Kgamma suppresses joint inflammation and damage in mouse models ofrheumatoid arthritis).Nat Med.

Cantley，L.C.，和Neel，B.G.(1999).“肿瘤抑制新看法：PTEN通过限制磷酸肌醇3-激酶/AKT途径抑制肿瘤形成”(New insights into tumorsuppression：PTEN suppresses tumor formation by restraining thephosphoinositide3-kinase/AKT pathway)Proc Natl Acad Sci USA96，4240-4245.

Condliffe，A.M.，Davidson，K.，Anderson，K.E.，Ellson，C.D.，Crabbe，T.，Okkenhaug，K.，Vanhaesebroeck，B.，Turner，M.，Webb，L.，Wymann，M.P.等，(2005)“顺序激活IB和IA类PI3K对于人的致敏突发性呼吸至关重要而不是鼠科中性白细胞”(Sequential activation ofclass IB and class IAP13K is important for the primed respiratory burst of human but not murineneutrophils)Blood106，1432-1440.

Domin，J.和Waterfield，M.D.(1997)“利用结构测定磷酸肌醇3-激酶家族成员的功能”(Using structure to define the function of phosphoinositide3-kinase family members)FEBS Left410，91-95.

Feng，J.，Park，J.，Cron，P.，Hess，D.和Hemmings，B.A.(2004)“将PKB/Akt疏水性基序Ser-473激酶鉴定为DNA-依赖性蛋白质激酶”(Identification of a PKB/Akt hydrophobic motif Ser-473 kinase asDNA-dependent protein kinase)J Biol Chem279，41189-41196.

Fruman，D.A.，Meyers，R.E.和Cantley，L.C.(1998)“磷酸肌醇激酶”(Phosphoinositide kinases)Annu Rev Biochem67，481-507.

Harrington，L.S.，Findlay，G.M.和Lamb，R.F.(2005)“抑制PI3K：mTOR信号转导返回膜”(Restraining PI3K：mTOR signalling goes back to themembrane)Trends Biochem Sci30，35-42.

Hickson，I.，Zhao，Y.，Richardson，C.I.，Green，S.J.，Martin，N.M.，Orr，A.I，Reaper，P.M.，Jackson，S.P.，Curtin，N.J.和Smith，G.C.(2004).“鉴定和表征共济失调-毛细管扩张突变的激酶ATM的新型特异性抑制剂”(Identification and characterization of a novel and specific inhibitor of theataxia-telangiectasia mutated kinase ATM).Cancer Res64，9152-9159.

Jackson，S.P.，Schoenwaelder，S.M.，Goncalves，I.，Nesbitt，W.S.，Yap，C.L.，Wright，C.E.，Kenche，V.，Anderson，K.E.，Dopheide，S.M.，Yuan，Y.等(2005).“PI3-激酶p110β：抗血栓治疗的新靶标”(PI3-kinasep110beta：a new target for antithrombotic therapy)Nat Med11，507-514.

Katso，R.，Okkenhaug，K.，Ahmadi，K.，White，S.，Timms，J.和Waterfield，M.D.(2001)“磷酸肌醇3-激酶的细胞功能：包括开发、稳态和癌症”(Cellular function of phosphoinositide 3-kinases：implications fordevelopment，homeostasis，and cancer)Annu Rev Cell Dev Biol17，615-675.

Knight，Z.A.，Chiang，G.G.，Alaimo，P.J.，Kenski，D.M.，Ho，C.B.，Coan，K.，Abraham，R.T.和Shokat，K.M.(2004)“芳基吗啉支架的同种型特异性磷酸肌醇3-激酶抑制剂”(Isoform-specific phosphoinositide 3-kinaseinhibitors from an arylmorpholine scaffold).Bioorg Med Chem12，4749-4759.

Knight，Z.A.和Shokat，K.M.(2005)“选择性激酶抑制剂的特征”(Features of selective kinase inhibitors)ChemBiol12，621-637.

Lau，A.，Swinbank，K.M.，Ahmed，P.S.，Taylor，D.L.，Jackson，S.P.，Smith，G.C.和O’Connor，M.J.(2005).“通过ATM激酶的小分子抑制剂抑制HIV-1感染”(Suppression of HIV-1infection by a small moleculeinhibitor of the ATM kinase)Nat Cell Biol7，493-500.

Luo，J.，Field，S.J.，Lee，J.Y.，Engelman，J.A.和Cantley，L.C.(2005).“磷酸肌醇3-激酶的p85调节亚单位通过形成螯合复合物下调IRS-1信号转导”(The p85regulatory subunit of phosphoinositide 3-kinase down-regulatesIRS-1signaling via the formation of a sequestration complex)J Cell Biol170，455-464.

Madhusudan，Trafny，B.A.，Xuong，N.H.，Adams，J.A.，Teneyck，L.F.，Taylor，S.S.和Sowadski，J.M.(1994).“底物识别和磷酸转移的cAMP-依赖性蛋白质-激酶-晶体学观点”(cAMP-DependentProtein-Kinase-Crystallographic Insights Into Substrate Recognition andPhosphotransfer).Protein Science3，176-187.

Patrucco，E.，Notte，A.，Barberis，L.，Selvetella，G.，Maffei，A.，Brancaccio，M.，Marengo，S.，Russo，G.，Azzolino，O，Rybalkin，S.D.等，(2004).“PI3Kγ通过不同的激酶-依赖性和不依赖性作用调节针对慢性压力过载的心脏应答”(PI3Kgamma modulates the cardiac response to chronicpressure overload by distinct kinase-dependent and -independent effects).Cell118，375-387.

Peng，Y.，Woods，R.G.，Beaxnish，H.，Ye，R.，Lees-Miller，S.P.，Lavin，M.F.和Bedford，J.S.(2005).“DNA-依赖性蛋白质激酶的催化亚单位缺陷导致ATM下调”(Deficiency in the catalytic subunit of DNA-dependentprotein kinase causes down-regulation of ATM).Cancer Res65，1670-1677.

Ruderman，N.B.，Kapeller，R.，White，M.F.和Cantley，L.C.(1990).“通过胰岛素激活磷酸肌醇3-激酶”(Activation of phosphatidylinositol 3-kinaseby insulin).Proc Natl Acad Sci USA87，1411-1415.

Sadhu，C.，Masinovsky，B.，Dick，K.，Sowell，C.G.和Staunton，IXE.(2003).“磷酸肌醇3-激酶δ在中性白细胞定向移动中的关键作用”(Essential role of phosphoinositide 3-kinase delta in neutrophil directionalmovement).J Immunol170，2647-2654.

Samuels，Y.，Wang，Z.，Bardelli，A，Silliman，N.，Ptak，J.，Szabo，S.，Yan，H.，Gazdar，A.，Powell，S.M.，Riggins，G.J.等，(2004).“PIK3CA基因在人癌症中的高频率突变”(High frequency of mutations of the PIK3CAgene in human cancers).Science304，554.

Schindler，T.，Bornmann，W.，Pellicena，P.，Miller，W.T.，Clarkson，B.和Kuriyan，J.(2000).“STI-57l抑制abelson酪氨酸激酶的结构机制”(Structural mechanism for STI-571inhibition of abelson tyrosine kinase).Science289，1938-1942.

Schindler，T.，Sicheri，F.，Pico，A.，Gazit，A.，Levitzki，A.和Kuriyan，J.(1999).“Hck与Src家族选择性酪氨酸激酶抑制剂形成复合物的晶体结构”(Crystal structure of Hck in complex with a Src family-selective tyrosinekinase inhibitor).Mol Cell3，639-648.

Schmid，A.C.，Byrne，R.D.，Vilar，R.和Wosohoiski，R.(2004).“Bisperoxovanadium化合物是强效的PTEN抑制剂”(Bisperoxovanadiumcompounds are potent PTEN inhibitors).FEBS Lett566，35-38.

Ueki，K.，Fruman，D.A.，Yballe，C.M.，Fasshauer，M.，Klein，J.，Asano，T.，Cantley，L.C.和Kahn，C.R.(2003).“磷酸肌醇3-激酶的p85α和p85β调节性亚单位在胰岛素信号转导中的正面和负面作用”(Positive andnegative roles of p85 alpha and p85 beta regulatory subunits ofphosphoinositide 3-kinase in insulin signaling).J Biol Chem278，48453-48466.

Ueki，K.，Yballe，C.M.，Brachmann，S.M.，Vicent，D.，Watt，J.M.，Kahn，C.R.和Cantley，L.C.(2002).“增强缺乏磷酸肌醇3-激酶的p85β亚单位的小鼠的胰岛素敏感性”(Increased insulin sensitivity in mice lackingp85beta subunit of phosphoinositide 3-kinase).Proc Natl Acad Sci USA99，419-424.

Vanhaesebroeck，B.，Ali，K..，Bilancio，A.，Geering，B.和Foukas，L.C.(2005).“通过PI3K同种型的信号转导：基因靶向小鼠的观点”(Signalling by PI3K isoforms：insights from gene-targeted mice).TrendsBiochem Sci30，194-204.

Viniegra，J.G.，Martinez，N.，Modirassari，P.，Losa，J.H.，Parada Cobo，C.，Lobo，V.J.，Luquero，C.I.，Alvarez-Vallina，L.，Ramon y Cajal，S.，Rojas，J.M.和Sanchez-Prieto，R.(2005).“通过ATM介导对胰岛素或电离辐射起反应的PKB/Akt的完全激活”(Full activation of PKB/Akt in responseto insulin or ionizing radiation is mediated through ATM).J Biol Chem280，4029-4036.

Walker，E.H.，Pacold，M.E.，Perisic，O.，Stephens，L.，Hawkins，P.T.，Wymann，M.P.和Williams，R.L.(2000).“通过渥曼青霉素、LY294002、槲皮素、杨梅黄酮和星孢素抑制磷酸肌醇3-激酶的结构决定因素”(Structuraldetenninants of phosphoinositide 3-kinaseinhibition by wortmannin，LY294002，quercetin，myricetin，and staurosporine).Mol Cell6，909-919.

Walker，E.H，Perisic，O.，Ried，C.，Stephens，L.和Williams，R.L.(1999).“磷酸肌醇3-激酶催化和信号转导的结构了解”(Structural insightsinto phosphoinositide 3-kinase catalysis and signalling).Nature402，313-320.

Ward，S.，Sotsios，Y.，Dowden，J.，Bruce，I.和Finan，P.(2003).“磷酸肌醇3-激酶抑制剂的治疗潜能”(Therapeutic potential of phosphoinositide3-kinase inhibitors).Chem Biol10，207-213.

Yart，A.，Roche，S.，Wetzker，R.，Laffargue，M.，Tonks，N.，Mayeux，P.，Chap，H.和Raynal，P.(2002).“磷酸肌醇3-激酶β脂质产物在对溶血磷脂酸起反应而将βγ偶联于Ras中的功能”(A function for phosphoinositide3-kinase beta lipid products in coupling beta gamma to Ras activation inresponse to lysophosphatidic acid).J Biol Chem277，21167-21178.

Yu，J.，Zhang，Y.，Mcllroy，J.，Rordorf-Nikolic，T.，Orr，G.A.和Backer，J.M.(1998).“调节p85/p110磷脂酰肌醇3’-激酶：p85调节性亚单位的稳定和抑制p110α催化亚单位”(Regulation of the p85/p110phosphatidylinositol 3’-kinase：stabilization and inhibition of the p110alphacatalytic subunit by the p85regulatory subunit).Mol Cell Biol18，1379-1387.

Almirante，L，Mugnaini，A.，De Toma，N.，Gamba，A.和Murrnann，W.(1970).“咪唑衍生物IV.咪唑并[1，2-a]吡啶的氧化衍生物的合成和药理学活性”(Imidazole Derivatives.IV.Synthesis and Pharmacological Activity ofOxygenated Derivatives of Imidazo[1，2-a]pyridine).Journal of MedicinalChemistry13，1048-1051.

Armstrong，V.W.，N.H.，C.和Ramage，R.(1975).“一种新的溴化试剂：2-羧乙基三苯基磷过溴化物”(A new brominating reagent：2-carboxyethyltriphenylphosphonium perbromide).Tetrahedron Letters6，373-376.

Bateman，A.，Birney，E.，Durbin，R.，Eddy，S.R.，Howe，K.L.和Sonnhammer，B.L.(2000).“Pfam蛋白质家族数据库”(The Pfam proteinfamilies database).Nucleic Acids Res28，263-266.

Jacinto，E.，Loewith，R.，Schmidt，A.，Lin，S.，Ruegg，M.A.，Hall，A和Hall，M.N.(2004).“哺乳动物TOR复合物2控制肌动蛋白细胞骨架，其对雷帕霉素不敏感”(Mammalian TOR complex2controls the actincytoskeleton and is rapamycin insensitive).Nat Cell Biol6，1122-1128.

Jolliffe，I.T.(2002).《主要组分分析》(Principal component analysis)，第2版(纽约：斯普林格出版社(Springer)).

Knight，Z.A.，Chiang，G.G.，Alaimo，P.J.，Kenski，D.M.，Ho，C.B.，Coan，K.，Abraham，R.T.和Shokat，K.M.(2004).“芳基吗啉支架的同种型特异性磷酸肌醇3-激酶抑制剂”(Isoform-specific phosphoinositide3-kinaseinhibitors from an arylmorpholine scaffold).Bioorg Med Chem12，4749-4759.

Laksbmanan，J.，Elmendorf，J.S.和Ozcan，S.(2003).“分化的3T3-L1脂肪细胞中胰岛素-刺激葡萄糖摄取的分析”(Analysis of insulin-stimulatedglucose uptake in differentiated3T3-L1adipocytes).Methods Mol Med83，97-103.

Lombardino，J.G.(1965).“咪唑并[1，2-a]吡啶的制备和新反应”(Preparation and new reactions of imidazo[1，2-a]pyridines).Journal of OrganicChemistry30，2403-2407.

Mathworks(2004).统计学工具箱：用于MATLAB。用户指南，第5版，第7章：主要组分分析：数学方法(Statistics Toolbox：For use withMATLAB.User’s Guide，Version5.Chapter7：Principal Component Analysis：Mathworks)).

Mhaske，S.B.和Argade，N.P.(2004).“区域选择性喹唑啉酮指导的喹唑啉酮基喹啉的邻位锂化：天然人DNA拓扑异构酶I毒物luotonina和luotoninB及E的实际合成”(Regioselective quinazolinone-directed ortholithiation of quinazolinoylquinoline：practical synthesis of naturally occurringhuman DNA topoisomerase I poison luotonin a and luotonins B and E).J OrgChem69，4563-4566.

Morris，J.，Wishka，D.G.和Fang，Y.(1994).“2-氨基色酮的环化脱水途径”(A cyclodehydration route to 2-aminochromones).SyntheticCommunications24，849-858.

Serunian，LA.，Auger，K.R.和Cantley，L.C.(1991).“对血小板衍生生长因子刺激起反应而产生的聚磷酸肌醇的鉴定和定量测定”(Identificationand quantification of polyphosphoinositides produced in response toplatelet-derived growth factor stimulation).Methods Enzymol198，78-87.

Claims (16)

1.一种如下式所示的化合物：

式中

X是=N-；

R¹是氢、R³-取代的C₁-C₈烷基、未取代的C₁-C₈烷基、未取代的C₅-C₇环烷基、未取代的5-7元杂环烷基；

R²是R⁴-取代的杂芳基，该杂芳基具有2或3个稠合在一起的环并含有1-4个选自N、O或S的杂原子；

R³是卤素、-CN、-OR⁵、-S(O)_nR⁶、-NR⁷R⁸、-C(O)R⁹、-NR¹⁰-C(O)R¹¹、-NR¹²-C(O)-OR¹³、-C(O)NR¹⁴R¹⁵、-NR¹⁶S(O)₂R¹⁷、R¹⁹-取代或未取代的C₁-C₈烷基、R¹⁹-取代或未取代的2-8元杂烷基、R¹⁹-取代或未取代的C₅-C₇环烷基、或R¹⁹-取代或未取代的5-7元杂环烷基，其中n是0-2的整数；

R³⁶是-NR³⁷R³⁸或卤素；

R⁴是卤素、-OR²⁰、或-NR²²R²³；

R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、和R¹⁷独立为氢、R³⁵-取代或未取代的C₁-C₈烷基、R³⁵-取代或未取代的2-8元杂烷基、未取代的C₅-C₇环烷基、或R³⁵-取代或未取代的5-7元杂环烷基；

R²⁰、R²²、和R²³是氢；

R¹⁹、和R³⁵独立为氢、卤素、未取代的C₁-C₈烷基、未取代的2-8元杂烷基、未取代的C₅-C₇环烷基、或未取代的5-7元杂环烷基；和

R³⁷和R³⁸是氢。

2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R²是

式中

W¹、W²、W³和W⁴独立为=CH-、=CR⁴-、或=N-；和

环A是部分或完全不饱和的6-或7-元环。

3.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、和R¹⁷独立为氢、未取代的C₁-C₈烷基、未取代的2-8元杂烷基、未取代的C₅-C₇环烷基、或未取代的5-7元杂环烷基。

4.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，R¹是R³-取代或未取代的C₁-C₈烷基、或未取代的5-7元杂环烷基。

5.如权利要求4所述的化合物，其特征在于，R¹是R³-取代或未取代的C₁-C₈烷基。

6.如权利要求5所述的化合物，其特征在于，R¹是R³-取代或未取代的C₁-C₄烷基。

7.如权利要求5所述的化合物，其特征在于，R¹是甲基或未取代的C₃-C₆支链烷基。

8.如权利要求7所述的化合物，其特征在于，R¹是异丙基。

9.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，R³是R¹⁹-取代或未取代的C₁-C₈烷基、或未取代的C₅-C₇环烷基。

10.如权利要求9所述的化合物，其特征在于，R¹⁹是未取代的C₁-C₈烷基或未取代的C₅-C₇环烷基。

11.如权利要求10所述的化合物，其特征在于，R¹⁹是未取代的C₁-C₄烷基、或未取代的环戊基。

12.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R²是R⁴-取代的吲哚基、R⁴-取代的苯并

二唑基、R⁴-取代的苯并间二氧杂环戊烯基、R⁴-取代的苯并二

烷基、R⁴-取代的硫代十氢化萘基、R⁴-取代的吡咯并吡啶基、R⁴-取代的吲唑基、R⁴-取代的喹啉基、R⁴-取代的喹喔啉基、R⁴-取代的吡啶并吡嗪基、R⁴-取代的喹唑啉酮基、R⁴-取代的苯并异

唑基、R⁴-取代的咪唑并吡啶基、R⁴-取代的苯并呋喃基、或R⁴-取代的苯并噻吩基。

13.如权利要求12所述的化合物，其特征在于，R²是R⁴-取代的吲哚基。

14.如权利要求13所述的化合物，其特征在于，其中R²是5-羟基吲哚-2-基，R¹是异丙基。

15.一种包含权利要求1-3或5-14任一所述化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

16.一种包含权利要求4所述化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

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