EA025047B1 - Вагинальная таблетка, содержащая рифаксимин, способ ее приготовления и способ лечения бактериального вагиноза - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к вагинальным таблеткам, содержащим рифаксимин, эффективным при лечении бактериального вагиноза. Вагинальные таблетки, содержащие гранулы рифаксимина, характеризуются тем, что они высвобождают рифаксимин во влагалище контролируемым образом. Изобретение также относится к способам приготовления вагинальных таблеток, содержащих рифаксимин, и их применению в лечении бактериального вагиноза. Также предложены эффективные дозы и курсы лечения, применяемые и эффективные при излечении заболевания и предупреждении любого возможного рецидива.

Description

Настоящее изобретение относится к композициям, содержащим гранулы рифаксимина вместе с фармацевтически приемлемыми эксципиентами, характеризующееся тем, что композиции имеют контролируемое высвобождение. В настоящем изобретении также описаны способы их приготовления и их применение при лечении вагинальных инфекций, в частности бактериального вагиноза. Более того, в нем также описаны дозы рифаксимина, используемые и эффективные при излечении от заболевания и предупреждении любого возможного рецидива.

Предшествующий уровень техники

Рифаксимин (МНН (международное непатентованное наименование) см. ТНе Мегск 1пйс.\. XIII ей., 8304, САБ Νο.80621-81-4), (2δ, 16Ζ, 18Е, 208, 218, 22К, 23К, 24К, 258, 268, 278, 28Е)-5,6,21,23,25пентагидрокси-27-метокси-2,4,11,16,20,22,24,26-октаметил-2,7-(эпоксипентадека-(1,11,13)-триенимин)бензофуро-(4,5-е)-пиридо(1,2-а-бензимидазол-1,15(2Н)диона 25-ацетат) по номенклатуре ШРАС (Международный союз теоретической и прикладной химии) представляет собой полусинтетический антибиотик, принадлежащий к группе рифампицина, точнее пиридо-имидазо-рифамицин, описанный в патенте 1Т 1154655, а в патенте ЕР 0161534 описан способ его получения из рифамицина О (ТНс Мегск 1пйе\ XIII ей., 8301).

В И8 7045620, ЕР 1557421В1, ЕР 1676847В1, ЕР 1676848В1, АО 2005/044823, АО 2006/094662 описаны кристаллические формы α, β, γ, δ и ε рифаксимина. В АО 2008/155728, И8 2009/312357 и И8 2008/008253 описаны способы получения аморфных форм.

В АО 2009/108730 описаны полиморфные формы рифаксимина, названные дзета, эта, α-безводный, йота, β-1, β-2 и ε-безводный.

В АО 2011/153444 описаны полиморфные формы к и θ и в АО 2011/156897 описаны полиморфные формы, названные АРО-1 и АРО-2.

У1ксот1 С. е! а1. в Сгук!. Епд. Сотт., 2008, 10, 1074-1081 (2008) описывает полиморфы α, β, γ, δ, ε, способ их получения и их физико-химические и биологические свойства.

Рифаксимин представляет собой антибиотик, активный в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, характеризующийся низкой системной абсорбцией, незначительной при введении посредством перорального пути, как описано ЭексотЬе Ы. е! а1. в Шк I. СНп. РНагтасо1. Кек., 14 (2), 51-56, (1994); он известен своей антибактериальной активностью, проявляемой, например, в отношении бактерий, локализованных в желудочно-кишечном тракте, вызывающих кишечные инфекции, диарею и синдром раздраженного кишечника (ГВ8), также известно, что бактериальный рост в тонкой кишке или избыточный бактериальный рост в тонкой кишке (8ГВО) связан с болезнью Крона (СО), недостаточностью поджелудочной железы, энтеритом, фибромиалгией.

Благодаря этому рифаксимин играет значительную роль в терапии инфекционных и воспалительных заболеваний кишечника как в острой, так и в хронической форме.

Различные формы рифаксимина соответствуют различным уровням системной абсорбции. В настоящее время рифаксимин одобрен для лечения острых и хронических патологий, этиология которых частично или полностью связана с грамположительными и грамотрицательными кишечными бактериями, таких как диарейные синдромы, вызываемые измененным балансом кишечной микробной флоры, такие как летние диареи, диарея путешественников и энтероколит. Рифаксимин полезен для до- и послеоперационной профилактики инфекционных осложнений при операциях на желудочно-кишечном тракте в качестве адъювантного средства при терапии гипераммониемии и для снижения риска острых эпизодов печеночной энцефалопатии.

Рифаксимин также может быть полезен при лечении синдрома беспокойных ног; для предупреждения спонтанного бактериального перитонита у пациентов, страдающих от печеночной недостаточности, и при инфекциях, вызванных постоянным применением ингибиторов протонной помпы.

Кроме того, тот факт, что рифаксимин плохо абсорбируется системно, благоприятен для вышеупомянутого применения, поскольку рифаксимин нетоксичен даже в высоких дозах и уменьшает частоту нежелательных побочных эффектов, таких как, например, отбор антибиотикорезистентных штаммов бактерий и риск возможных фармакологических взаимодействий.

Свойства рифаксимина делают его соединением, полезным при местных видах лечения, таких как те, которые полезны при лечении вагинальных инфекций, например бактериального вагиноза.

Бактериальный вагиноз является чрезвычайно часто встречающейся патологией, составляя 40-50% всех вагинальных инфекций. Когда он является симптоматическим и не имеет осложнений, бактериальный вагиноз характеризуется влагалищными отделениями с неприятным запахом, не связанными с клинической картиной воспаления (вагиноз) и объясняется изменением вагинальной экосистемы.

Нормальная вагинальная флора здоровой женщины вследствие преобладания молочнокислых бактерий, в частности Ьас1оЬасШик спкраШк и даккеп, вырабатывает пероксид водорода и поддерживает кислый уровень вагинального рН, таким образом подавляя рост большинства патогенных микроорганизмов.

При бактериальном вагинозе бактерии рода Ьас1оЬасШик вытесняются чрезмерным ростом, даже более чем в тысячи раз превышающим нормальные значения, факультативных анаэробных и аэробных

- 1 025047 бактерий, представленных главным образом Оагбпеге11а уадтаП^ которая присутствует практически у всех женщин, пораженных бактериальным вагинозом, Мусор1а§та ΙιοιηίηΡ. грамотрицательными анаэробными бактериями, такими как Вас1егснбе5 и Ртеуо1е11а, анаэробами, такими как РерЮЧгерЮсоссщ, грамположительными анаэробами, такими как МоЫ1ипси8, которые присутствуют в 50% случаев, и грамположительными бациллами, такими как ЛЮроЬшт уадша1е, которые присутствуют в 95% случаев бактериального вагиноза.

Факторы, провоцирующие начало заболевания, главным образом создаются у женщин репродуктивного возраста, имеющих низкий социально-экономический уровень, принадлежащих к негроидной расе, регулярно применяющих влагалищные спринцевания, курящих и имеющих половые отношения с несколькими разными партнерами. С другой стороны, прием эстропрогестиновых лекарственных препаратов, по-видимому, играет защитную роль. Также, оказывается, что в этиопатогенез вовлечен гормональный компонент, поскольку эта патология главным образом обнаруживается у женщин репродуктивного возраста.

Бактериальный вагиноз может быть связан с некоторыми серьезными гинекологическими и акушерскими осложнениями, такими как, например, воспалительное заболевание органов малого таза, частая причина бесплодия и внематочной беременности; инфекция, возникшая в результате повреждения, полученного в ходе проведения гинекологической операции; преждевременный разрыв плодных оболочек у беременных женщин; преждевременные роды и выкидыш.

Кроме того, хотя заболевание, передаваемое половым путем, не рассматривается, бактериальный вагиноз связан с повышенным риском заражения пандемическими заболеваниями, передаваемыми половым путем, включая ВИЧ-инфекцию, как для ^беременных, так и для беременных женщин. В настоящее время, он также обусловливает повышение риска передачи ВИЧ (вируса иммунодефицита человека) от матери плоду.

Диагноз бактериальный вагиноз может быть основан на клинических и/или микробиологических критериях.

Клинический диагноз ставят на основании критериев Амселя, как описано Ат§е1 К. е! а1. в Ат. 1. Меб. 1983; 74(1): 14-22. Диагноз считается положительным, когда представлены по меньшей мере три из четырех следующих симптомов: 1) гомогенные влагалищные отделения, которые покрывают стенки влагалища; 2) положительный аминный тест (появление рыбного запаха после добавления 10%-ного гидроксида калия к влагалищным отделениям); 3) вагинальное рН более 4,5, и 4) увеличение более чем на 20% количества ключевых клеток (клетки плоского эпителия влагалища, покрытые бактериями, идентифицируемыми посредством микроскопического исследования свежего материала).

Микробиологическая диагностика основана на подсчете количества баллов по шкале Ньюджента, которая включает микроскопическое исследование влагалищных отделений с помощью окрашивания по Граму. Определяют наличие и количество трех различных видов бактерий, обитающих во влагалище. В частности, низкие баллы получают, если концентрация молочнокислых бактерий высокая, баллы повышаются, если установлено наличие бактерий рода Оатбиетейа и Вас1ето1б1, и баллы становятся еще более высокими, если также установлено наличие бактерий рода МоЬбиисик. Полученные баллы от 0 до 3 соответствуют вагинальной флоре здоровой женщины, баллы от 4 до 6 указывают на то, что вагинальная флора начинает изменяться, и баллы от 7 до 10 указывают на достоверную диагностику бактериального вагиноза, как описано Иидеп! К.Р. е! а1. в 1. С1ш. МютоЬю1. 1991, 29(2), 297-301.

Более того, в последние годы были разработаны дополнительные методы молекулярной диагностики, такие как ПЦР-ДГГЭ (полимеразная цепная реакция-денатурирующий градиентный гельэлектрофорез) и ПЦР в режиме реального времени, основанные на анализе последовательности РНК (рибонуклеиновой кислоты) и делающие возможной идентификацию микробного состава вагинальной экосистемы, как описано 2йои X е! а1. в М1стоЬю1оду 2004, 150 (Р!8), 2565-2573 и в Арр1. Епушоп. МюгоЬю1. 2004, 70(6), 3575-3581. Поэтому эти методы могут быть непосредственно использованы для определения присутствия патогенных агентов, вызывающих заболевание, а также для подтверждения действия на них терапии с количественной точки зрения.

Хотя этиология бактериального вагиноза до конца не ясна, лечение имеет целью стимулирование как клинического, так и микробиологического выздоровления, и по возможности недопущение рецидивирующих инфекций. Поэтому, идеальная терапия должна быть эффективной в том, что касается уменьшения патогенных видов, и в то же время она должна также стимулировать восстановление и пролиферацию защитных видов бактерий рода Ьас1оЬасШи8 с целью предупреждения возможных рецидивов заболевания.

Согласно рекомендациям центра контроля над заболеваниями (СИС), 2010, 59, ИоКК-12 утверждено, что все женщины, пораженные бактериальным вагинозом, у которых имеются клинические проявления, и небеременные, должны получать лечение посредством антибиотикотерапии.

В этом отношении СИС предлагает в качестве терапевтической тактики первой очереди лечение антибиотиками, такими как, например, метронидазол, таблетки для перорального приема 500 мг, дважды в сутки в течение 7 суток; или метронидазол, вагинальный гель, 0,75%, один аппликатор (5 г один раз в сутки в течение 5 суток или клиндамицин, вагинальный крем, 2%, один аппликатор (5 г) один раз в сутки

- 2 025047 в течение 7 суток.

И метронидазол, и клиндамицин, вводимые либо системно (перорально), либо местно (вагинально), эффективны при лечении бактериального вагиноза. Однако ингибиторное действие обоих действующих начал на защитную молочнокислую флору, как описано Знносв ТА. с! а1. в 1пГсс1. Όίβ. 0Ъв1с1. Суиеео1. 2001, 9(1), 41-45, ограничивает их эффективность в отношении предупреждения рецидивов.

Кроме того, оба вышеупомянутых антибиотика ассоциированы с системными побочными эффектами, некоторые из которых весьма значительны, такие как, например, неврологические реакции на метронидазол или псевдомембранозный колит на фоне приема клиндамицина, даже при введении посредством вагинального пути.

Более того, при неоднократном введении и метронидазол, и клиндамицин могут вызывать микробиологическую резистентность не только на вагинальном уровне, но также и на системном уровне, поскольку они системно абсорбируются даже после вагинального введения.

В ЕР 0547294 описаны композиции, содержащие рифаксимин в количествах от 50 до 500 мг, которые, как утверждают, полезны при лечении вагинальных инфекций, вызванных микроорганизмами, чувствительными к рифаксимину. В частности, в ЕР 0547294 описано клиническое испытание, проведенное с препаратом рифаксимина в форме вагинальной пены или крема, содержащим 200 мг рифаксимина, подтверждающее более высокую эффективность пены по сравнению с кремом. В этом документе также описаны композиции для лечения бактериального вагиноза, содержащие рифаксимин в капсулах, овулях и таблетках, и в нем также описано антибактериальное действие рифаксимина в отношении бактерий, обычно присутствующих во влагалищных отделениях. В табл. 1 ЕР 0547294 описано, что рифаксимин проявляет значительную антибактериальную активность и в отношении патогенных бактерий, таких как Сагбпсгс11а уадшаПв, Вас1сгоМс5 ЪМив-Фвюив, МоЪйиисив, а также и в отношении непатогенных бактерий, таких как молочнокислые бактерии.

Подавление молочнокислых бактерий, присутствие которых полезно для поддержания здоровой среды во влагалище, следует считать нежелательным явлением относительно терапевтической эффективности. Фактически, как уже отмечалось, кислая среда, созданная молочнокислыми бактериями, является необходимым условием предупреждения колонизации патогенными бактериями.

В табл. 1 ЕР 0547292 также показано, что ингибиторное действие рифаксимина (М1С₅₀ и М1С₉₀) на молочнокислые бактерии является равным или даже более сильным, чем его действие на патогенные бактерии, такие как, например, СагбисгсИа уадтаПв, МоЪйиисив врр., Вас1сго1бс5 ЪМив-Фвюив. Таким образом, при введении посредством вагинального пути рифаксимин действует без исключения на всю бактериальную флору, включая молочнокислые бактерии.

ЭсЪЫа Α. с! а1. описывает в 1. СЬстоШст. 20, (2), 186-194, 2008 проявление рифаксимином времязависимой бактериальной активности, поэтому необходимы новые фармацевтические композиции рифаксимина, которые эффективны при лечении вагинальных инфекций, обеспечивающие соответствующий период времени воздействия рифаксимина, и местные концентрации рифаксимина, полезные при лечении вагинальных инфекций, таких как бактериальный вагиноз, и которые не снижают концентрацию молочнокислых бактерий, что важно для предупреждения рецидива вагинальных инфекций. Более того, было важно, чтобы концентрации рифаксимина, обеспечиваемые композицией, являлись эффективными без необходимости в высоких дозах рифаксимина.

Принимая во внимание насыщенную окраску рифаксимина, было также важно, чтобы композиции, содержащие рифаксимин, хорошо переносились пациентами, не вызывая окрашенных выделений, и чтобы композиции находились предпочтительно в твердой лекарственной форме.

Также было важно, чтобы фармацевтические композиции были бы эффективны для искоренения заболевания (вагинальных инфекций) и для уменьшения количества рецидивов при более коротких периодах лечения и при уменьшенных общих количествах вводимого рифаксимина по сравнению с композицией, описанной в ЕР 0547294.

Задачей настоящего изобретения, которая неожиданно осуществляется в настоящее время, являются твердые фармацевтические композиции, в частности в виде вагинальных таблеток, а именно таблеток, образованных посредством прессования гранул рифаксимина с экстрагранулярными эксципиентами.

Гранулы рифаксимина характеризуются тем, что они содержат фармацевтически приемлемые эксципиенты, выбранные из разбавителя, связующего вещества и смазывающего вещества, где, по меньшей мере, присутствует связующее вещество. Экстрагранулярные эксципиенты характеризуются тем, что они содержат по меньшей мере один разрыхлитель и возможно другие экстрагранулярные эксципиенты, выбранные из связующего вещества, разбавителя и смазывающего вещества. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению характеризуются тем, что они высвобождают рифаксимин, содержащийся в гранулах, за короткое время, даже в среде с пониженным содержанием воды, такой как физиологическая среда влагалища. Композиции полностью распадаются на гранулы во влагалище и обеспечивают эффективные количества рифаксимина для лечения вагинальных инфекций.

Новые композиции могут быть приготовлены с помощью различных полиморфов рифаксимина, уже известных в данной области техники, и полезны при лечении бактериального вагиноза и для предупреждения рецидивов заболевания.

- 3 025047

В частности, новые композиции не снижают концентрацию молочнокислых бактерий, естественным образом присутствующих в вагинальной флоре, а неожиданно способствуют ее увеличению во время курса лечения.

Эти композиции, которые являются задачей настоящего изобретения, могут быть полезны при лечении вагинальных инфекций, и в частности бактериального вагиноза, в дозах менее 200 мг/сутки, с курсом лечения менее недели и обеспечивают выздоровление при использовании меньших количеств рифаксимина во время курса лечения, более короткого, чем те, о которых сообщалось в литературе, доступной специалисту в данной области техники, и в клинической практике, достигая таким образом выздоровления от болезни при общих количествах вводимого рифаксимина, которые примерно в десять раз меньше, чем количества, упомянутые в патенте ЕР 0547294. В частности, согласно изобретению предложены эффективные дозы и курс лечения, полезные для достижения полного выздоровления, особенно по сравнению с плацебо.

Фармацевтические композиции, содержащие рифаксимин, которые являются задачей настоящего изобретения, эффективны при лечении вагинальных инфекций, и в частности бактериального вагиноза, в концентрациях ниже 200 мг/сутки при продолжительности лечения менее недели по сравнению с плацебо.

Помимо доз, согласно настоящему изобретению также выбрана продолжительность лечения, полезная для достижения полного выздоровления.

Полученные композиции, как оказалось, являются приемлемыми, хорошо переносятся и лишены побочных эффектов.

Краткое изложение сущности изобретения

Примеры осуществления, описанные здесь, преодолевают вышеописанные недостатки традиционных композиций рифаксимина, предлагая фармацевтические композиции, содержащие рифаксимин, эффективные при лечении вагинальных инфекций, и в частности бактериального вагиноза.

Одним аспектом изобретения являются фармацевтические композиции, содержащие гранулы рифаксимина, содержащие рифаксимин в количестве менее 500 мг, например менее 200 мг, предпочтительно от 2,5 до 100 мг, например 12,5, 25, 50 и 100 мг, и один или более чем один экстрагранулярных эксципиентов, включающих по меньшей мере один разрыхлитель; где указанная фармацевтическая композиция обладает избирательной бактерицидной активностью в отношении патогенных бактерий, обитающих во влагалище. Другим аспектом изобретения является фармацевтическая композиция, характеризующаяся тем, что обладает избирательным антибактериальным действием, что поддерживает или увеличивает количество молочнокислых бактерий после курса лечения.

Фармацевтическая композиция может иметь по меньшей мере один экстрагранулярный разрыхлитель, присутствующий в количестве предпочтительно 2-20% от массы фармацевтической композиции.

Фармацевтическая композиция может представлять собой препарат с контролируемым высвобождением и может находиться в форме вагинальной таблетки или овуля. Предпочтительно фармацевтическая композиция находится в форме вагинальной таблетки. Вагинальная таблетка может иметь время распада менее 5 мин, предпочтительно менее 2 мин.

Также здесь описаны новые способы I) лечения вагинальной инфекции (например, бактериального вагиноза) и II) предупреждения рецидива вагинальной инфекции (например, бактериального вагиноза), причем эти способы включают вагинальное введение терапевтически эффективного количества описанной фармацевтической композиции, которое избирательно снижает количество патогенных бактерий, обитающих во влагалище, при этом поддерживая или увеличивая количество молочнокислых бактерий за время курса лечения. В одном аспекте раскрытого здесь способа количество молочнокислых бактерий увеличивается за время курса лечения.

В одном воплощении терапевтически эффективное количество может представлять собой суточную дозу рифаксимина менее 500 мг, предпочтительно 200 мг, например менее 100 мг. Предпочтительно суточная доза рифаксимина составляет 100, 50 или 25 мг.

Курс лечения составляет предпочтительно десять суток или менее, например одну неделю или менее. Количество рифаксимина, вводимое за курс лечения, может составлять 700 мг рифаксимина или менее, например 500 мг рифаксимина или менее.

Терапевтически эффективное количество рифаксимина может составлять 12,5 или 25 мг в сутки, при котором курс лечения составляет 5 суток. Альтернативно, в другом воплощении терапевтически эффективное количество рифаксимина в сутки может составлять 100 мг, и при этом курс лечения составляет 2 суток.

В одном воплощении способ лечения вагинальной инфекции по настоящему изобретению приводит к снижению числа баллов по шкале Ньюджента на 3 пункта или более после курса лечения.

Также здесь описан способ получения фармацевтической композиции, включающий стадии образования гранул рифаксимина посредством сухого гранулирования смеси рифаксимина и одного или более чем одного интрагранулярного эксципиента, образование таблетки посредством первоначального смешивания, а затем прессования гранул рифаксимина с одним или более чем одним экстрагранулярным эксципиентом, включающим по меньшей мере один разрыхлитель. В предпочтительном воплощении при

- 4 025047 использовании раскрытого способа форма рифаксимина перед стадией сухого гранулирования и форма рифаксимина после стадии сухого гранулирования являются одинаковыми.

Описание изобретения

В настоящем изобретении описаны фармацевтические композиции, содержащие менее 200 мг рифаксимина в твердой форме, в частности в форме таблеток, характеризующихся тем, что они высвобождают рифаксимин контролируемым образом, обеспечивая избирательную бактерицидную активность в отношении патогенных бактерий.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению характеризуются тем, что они содержат гранулы и/или микрогранулы рифаксимина с экстрагранулярными эксципиентами. Гранулы рифаксимина содержат эксципиенты, выбранные из одного или более чем одного разбавителя, связующего вещества и смазывающего вещества; экстрагранулярные эксципиенты содержат одно или более чем одно связующее вещество, разбавитель, смазывающее вещество и разрыхлитель.

Фармацевтические композиции в твердой форме, в частности в форме таблеток, обеспечивают быстрый распад, например менее чем за 5 мин, и способны высвобождать гранулы рифаксимина даже в присутствии небольших количеств водосодержащей жидкости, такой как слизистая оболочка влагалища.

В одном воплощении фармацевтическая композиция содержит гранулы и/или микрогранулы рифаксимина, содержащие менее 200 мг рифаксимина, предпочтительно менее 100 мг рифаксимина. Новая композиция дополнительно содержит один или более чем один интрагранулярных эксципиентов и один или более чем один экстрагранулярных эксципиентов, включающих по меньшей мере один разрыхлитель. Интрагранулярные эксципиенты выбраны из группы, состоящей из разбавителя, связующего вещества, смазывающего вещества и их смесей. Экстрагранулярные эксципиенты включают по меньшей мере один разрыхлитель и возможно дополнительные экстрагранулярные эксципиенты, выбранные из группы, состоящей из связующих веществ, разбавителей, смазывающих веществ и их смесей.

Гранулы, содержащие рифаксимин, характеризуются тем, что они содержат рифаксимин в количестве от 1 до 80% (мас./мас.), одно или более чем одно связующее вещество в количестве от 0,5 до 20% (мас./мас.), один или более чем один разбавитель в количестве от 30 до 90% (мас./мас.), одно или более чем одно смазывающее вещество в количестве от 0,1 до 5% относительно массы гранулы.

Согласно предпочтительному воплощению изобретения гранулы рифаксимина содержат рифаксимин в количестве от 5 до 30% (мас./мас.), одно или более чем одно связующее вещество в количестве от 1 до 10% (мас./мас.), один или более чем один разбавитель в количестве от 50 до 90% (мас./мас.) и одно или более чем одно смазывающее вещество в количестве от 0,5 до 4% (мас./мас.) относительно массы гранулы.

Разбавитель, подходящий для приготовления гранул рифаксимина, предпочтительно выбран из группы, содержащей целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, фосфат кальция, крахмал, каолин, дигидрат сульфата кальция, карбонат кальция, безводную или гидратированную лактозу, сахарозу, маннит, полисахариды, глюканы, ксилоглюкан и их смесь.

Связующее вещество, подходящее для приготовления гранул рифаксимина, выбрано из группы, содержащей кукурузный крахмал, прежелатинизированный крахмал, гуммиарабик, лактозу, мальтодекстрин, сополимер 1-винил-2 пирролидона и винилацетата (коповидон), сахарозу и их смеси.

Смазывающее вещество, подходящее для приготовления гранул рифаксимина, выбрано из группы, содержащей глицерил дибегенат, стеараты кальция или магния, алюминий, стеарилфумарат натрия, гидрогенизированные масла, растительные масла, пальмитиновую кислоту, спирт, крахмал, минеральные масла, полиэтиленгликоль, лаурилсульфат натрия, тальк, глицериды, бензоат натрия и их смесь.

Согласно предпочтительному воплощению настоящего изобретения связующее вещество выбрано из группы, состоящей из коповидона и кукурузного крахмала. Более предпочтительно связующее вещество представляет собой коповидон.

Согласно предпочтительному воплощению настоящего изобретения разбавитель выбран из группы, состоящей из моногидрата лактозы или безводной лактозы, целлюлозы и микрокристаллической целлюлозы, гидроксипропилметилцеллюлозы. Более предпочтительно разбавитель представляет собой моногидрат лактозы или безводную лактозу.

Согласно предпочтительному воплощению настоящего изобретения смазывающее вещество выбрано из группы, состоящей из стеарата магния и глицерил дибегената. Более предпочтительно смазывающее вещество представляет собой стеарат магния.

Гранулы рифаксимина получают посредством способа сухого гранулирования, когда рифаксимин смешивают с выбранными эксципиентами (интрагранулярными эксципиентами) в вышеупомянутых количествах, и затем перемешивают с получением гомогенной смеси. Смесь затем помещают в устройство прессования для получения гранул.

Гранулы рифаксимина затем дополнительно обрабатывают и смешивают с экстрагранулярными эксципиентами, включающими по меньшей мере один раскрытый разрыхлитель.

Дополнительные экстрагранулярные эксципиенты выбраны из группы, состоящей из связующего вещества, разбавителя и смазывающего вещества и их комбинации.

Согласно предпочтительному воплощению связующее вещество выбрано из группы, содержащей

- 5 025047 коповидон, прежелатинизированный крахмал и кукурузный крахмал; разбавитель выбран из группы, состоящей из лактозы, целлюлозы, микрокристаллической целлюлозы и гидроксипропилметилцеллюлозы; смазывающее вещество выбрано из группы, состоящей из стеарата магния и глицерил дибегената.

Разрыхлитель, подходящий для приготовления композиции согласно настоящему изобретению, выбран из группы, состоящей из крахмалгликолята натрия, прежелатинизированного крахмала, сополимера поливинилпирролидона (РРРУ или кросповидон), карбоксиметилцеллюлозы натрия (кармеллоза натрия), сшитой карбоксиметилцеллюлозы натрия (кроскармеллоза натрия), силикатов щелочных и щелочноземельных металлов (например, силиката кальция) и их смеси.

Предпочтительно экстрагранулярный разрыхлитель выбран из группы, состоящей из кросповидона, крахмалгликолята натрия, прежелатинизированного крахмала, силикатов щелочных металлов и их смеси.

Более предпочтительно экстрагранулярный разрыхлитель выбран из группы, состоящей из кросповидона, силиката кальция и их смеси. В частности, в предпочтительном воплощении разрыхлитель представляет собой смесь кросповидона и силиката кальция.

Согласно предпочтительному воплощению настоящего изобретения твердая фармацевтическая композиция, предпочтительно в форме таблеток, может содержать гранулы рифаксимина в количестве от 10 до 85% (мас./мас.); разрыхлитель (-и) или их смесь, где общее количество составляет от 2 до 20% (мас./мас.), независимо от их относительных пропорций; связующее вещество в количестве от 0,5 до 5,0% (мас./мас.) и смазывающее вещество в количестве от 0,1 до 10,0% (мас./мас.), относительно общей массы композиции, как указано в табл. 1.

Таблица 1

Компонент	Массовый процент (%)
Г ранулы рифаксимина	10-85%
Смазывающее вещество	0,1-10%
Связующее вещество	0,5-5%
Разбавитель	10-80%
Разрыхлитель	2-20%

Согласно предпочтительному воплощению настоящего изобретения экстрагранулярный разбавитель выбран из группы, состоящей из безводной лактозы или моногидрата лактозы, кукурузного крахмала и кристаллической целлюлозы; экстрагранулярное смазывающее вещество представляет собой стеарат магния, связующее вещество выбрано из прежелатинизированного крахмала и коповидона, гидроксипропилметилцеллюлозы, и экстрагранулярный разрыхлитель выбран из кросповидона, прежелатинизированного крахмала и силиката кальция и их смеси.

Согласно более предпочтительному воплощению экстрагранулярный разбавитель выбран из группы, содержащей безводную лактозу или моногидрат лактозы; экстрагранулярное связующее вещество выбрано из группы, содержащей коповидон и прежелатинизированный крахмал; экстрагранулярное смазывающее вещество представляет собой стеарат магния; экстрагранулярный разрыхлитель выбран из группы, содержащей кросповидон, силикат кальция, прежелатинизированный крахмал и гликолят крахмала.

Согласно более предпочтительному воплощению композиция в виде таблетки, содержащая рифаксимин, указана в табл. 2.

Таблица 2

Компонент	Массовый процент (%)
Гранулы рифаксимина	20-60%
Стеарат магния	0,1-10%
Коповидон	0,5-4%
Лактоза	10-80%
Кросповидон и силикат кальция	2-20%

Композиция в виде таблетки может дополнительно содержать покрытие, такое как пленкообразующее покрытие.

Твердая композиция в форме таблеток может содержать рифаксимин в количестве 2,5-500 мг, предпочтительно 2,5-100 мг, более предпочтительно 10-50 мг.

Твердая композиция в форме таблеток также может содержать рифаксимин в количестве предпочтительно от 0 до 100 мг, от 10 до 50 мг и от 10 до 25 мг, более предпочтительно от 25 до 100 и от 25 до 50 мг и наиболее предпочтительно 25 мг.

Композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно возможно содержать биоадгезивные агенты, консерванты, буферные агенты, антисептические вещества и ароматизаторы.

Когда присутствует биоадгезивный агент, композиция может обладать биоадгезивными свойствами, что означает, что гранулы рифаксимина могут прилипать к слизистой оболочке влагалища.

- 6 025047

Примерами полимеров и олигомеров или их смесей, которые могут быть включены в микрогранулы, являются пектины, зеины, казеин, желатин, альбумин, коллаген, хитозан, олигосахариды и полисахариды, такие как, например, целлюлоза, декстран, полисахариды из семян тамаринда, ксантановая камедь, гуммиарабик, гиалуроновая кислота, альгиновая кислота, альгинат натрия.

Когда биоадгезивный агент представляет собой синтетический полимер, полимер выбирают из полиамидов, поликарбонатов, полиалкиленов, полиалкиленгликолей, полиалкиленоксидов, полиалкилентерефталатов, поливинилового спирта, простых поливиниловых эфиров, сложных поливиниловых эфиров, поливинилпирролидона, полисилоксанов, полиуретанов, полистиролов, полимеров акриловой кислоты и метакриловых эфиров, сополимера метакриловой кислоты и этилакрилата, полилактидов, полибарбитуровых кислот, полиангидридов, сложных полиортоэфиров и их смесей. Другими используемыми полимерами являются метилцеллюлоза, этилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксибутилметилцеллюлоза, ацетат целлюлозы, пропионат целлюлозы, ацетат бутират целлюлозы, карбоксиметилцеллюлоза, триацетат целлюлозы, натриевая соль сульфата целлюлозы, полиметилметакрилат, полиизопропилметакрилат, полиизобутилакрилат, поли(октадецилакрилат), полипропилен, полиэтиленгликоль, полиэтиленоксид, полиэтилентерефталат, поливинилацетат, поливинилхлорид, полистирол, поливинилпирролидон, поливинилфенол и их смеси.

Другой группой полимеров, используемых для получения биоадгезивности, являются полимеры, имеющие разветвляющуюся группу, содержащую по меньшей мере одну связанную гидрофобную группу, где гидрофобные группы в основном являются неполярными группами. Неограничивающие примеры таких гидрофобных групп включают алкильные, алкенильные и алкинильные группы. Предпочтительно гидрофобные группы выбирают для увеличения биоадгезивности полимеров. Другие полимеры характеризуются разветвлением гидрофобной части по меньшей мере с одной гидрофильной группой, такой как карбоновые кислоты, сульфокислоты и фосфоновые кислоты, нейтральные и положительно заряженные амины, амиды и имины, где гидрофильные группы являются такими, что они увеличивают биоадгезивность полимера.

Гранулы рифаксимина получают посредством способа сухого гранулирования, который позволяет поддерживать исходную кристаллическую или аморфную форму рифаксимина без каких-либо полиморфных превращений, которые происходят, как описано в литературе, в присутствии воды или органических растворителей.

При предпочтительном способе получения композиции сохраняется выбранная полиморфная форма, поскольку в данной области техники известно, что формы полиморфов рифаксимина обладают различной растворимостью и дают уровни абсорбции в плазме, отличающиеся по меньшей мере на два порядка.

Термин рифаксимин используется в широком смысле и включает не только рифаксимин, но также его фармацевтически приемлемые соли, сольваты, гидраты, производные энантиомеры, полиморфы, аморфные формы, сокристаллы и фармацевтически приемлемые комплексы, без ограничений.

Рифаксимин, содержащийся в фармацевтических композициях, являющихся задачей настоящего изобретения, предпочтительно находится в малорастворимой форме, когда его используют для лечения бактериального вагиноза, чтобы оказывать местное действие без системной абсорбции. Это избавляет на системном уровне от потенциального риска отбора антибиотикорезистентных бактериальных штаммов, который может происходить даже при низких концентрациях в плазме.

Путем отбора различных полиморфов рифаксимина, характеризующихся тем, что они обладают различной растворимостью и абсорбцией, или их смеси, возможно приготовить композицию, в частности в форме таблеток, для лечения вагинальных инфекций, и более конкретно для различных фаз инфекции.

Гранулы рифаксимина затем смешивают со смесью, содержащей экстрагранулярные эксципиенты, как описано в табл. 1; смесь прессуют на таблеточном прессе, известном в данной области техники, для получения таблеток, которые предпочтительно покрывают пленкообразующим покрытием.

Экстрагранулярные компоненты, присутствующие в фармацевтической композиции в форме таблеток, вместе с гранулами рифаксимина в количествах, описанных в настоящем изобретении, делают возможным контролируемое высвобождение рифаксимина.

Гранулы рифаксимина высвобождаются из таблеток даже в среде с пониженным количеством водосодержащей жидкости, такой как физиологическая среда влагалища. Гранулы рифаксимина, высвобождаемые таблетками в полости влагалища, оказывают местное действие на слизистую оболочку влагалища в течение соответствующего периода времени благодаря комбинированному эффекту высокой скорости распада таблеток и пониженной скорости растворения гранул.

В настоящем изобретении также описано применение фармацевтических композиций рифаксимина для лечения вагинальных инфекций, например конкретно бактериального вагиноза.

Согласно настоящему изобретению также предложен способ лечения бактериальной инфекции и способ предупреждения рецидива бактериальной инфекции посредством введения новой композиции. В частности, фармацевтические композиции, которые являются задачей настоящего изобретения, при введении посредством раскрытого способа лечения не снижают концентрацию молочнокислых бактерий, которые необходимы для поддержания вагинальной экосистемы и полезны для предупреждения рециди- 7 025047 вирующих инфекций, сходных с теми, о которых сообщалось в отношении композиций, известных в данной области техники.

Твердые фармацевтические композиции по настоящему изобретению являются терапевтически эффективными при лечении бактериальных инфекций в суточных дозах рифаксимина ниже 500 мг, предпочтительно менее 200 мг, более предпочтительно менее 100 мг, и при общем количестве вводимого рифаксимина менее 700 мг, более предпочтительно менее 500 мг, для достижения полного выздоровления и предупреждения рецидивов по сравнению с плацебо.

В частности, композиции в форме таблеток, содержащие рифаксимин, являются эффективными при лечении бактериальных инфекций, о чем свидетельствует снижение числа баллов по шкале Ньюджента и критерии Амселя, при введении терапевтически эффективных суточных доз менее 500 мг, предпочтительно менее 200 мг и более предпочтительно менее 100 мг, например 100, 50, 25, 12,5 или 2,5 мг, при продолжительности лечения менее десяти суток и, в частности, менее одной недели по сравнению с плацебо.

Композиции в виде таблеток могут быть введены один или несколько раз в сутки, предпочтительно один раз в сутки.

Описанные фармацевтические композиции характеризуются тем, что они оказывают избирательное антибактериальное действие предпочтительно на патогенные бактерии, а не на молочнокислые бактерии.

Композиция в форме таблеток, содержащая рифаксимин в количестве менее 500 мг, в частности менее 200 мг и более конкретно менее 100 мг, повышает и поддерживает концентрацию молочнокислых бактерий на высоком уровне даже после завершения курса лечения по сравнению с плацебо.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена композиция и курс терапии, применяемые при лечении вагинальных инфекций, как для достижения выздоровления, так и для предупреждения рецидива у пациентов, страдающих от бактериальных инфекций.

В частности, описанные композиции поддерживают процесс выздоровления после заболевания в течение периода времени, превышающего 30 суток по окончании терапии, включающей суточные вводимые дозы менее 200 мг, предпочтительно менее 100 мг, в течение периода введения менее одной недели.

Другой конкретный аспект новых фармацевтических композиций, содержащих количество рифаксимина от 12,5 до 100 мг, состоит в том, что они являются полезными при лечении вагинальных инфекций при продолжительности лечения менее одной недели. Более конкретно, показано, что композиции, содержащие 25 мг рифаксимина, при продолжительности лечения пять суток являются особенно полезными при лечении бактериальных инфекций.

Пациенты, получающие лечение композициями, содержащими 25 мг рифаксимина, которые получают одну таблетку один раз в сутки в течение пяти суток, демонстрируют более высокую степень излечения (процент пациентов, демонстрирующих выздоровление в конце курса терапии) согласно количеству баллов по шкале Ньюджента и критериям Амселя, чем степень излечения, демонстрируемая пациентами, получающими плацебо.

В частности, пациенты, получающие лечение композициями, содержащими 25 мг рифаксимина, в течение пяти суток, демонстрируют более высокую степень излечения, то есть 48%, по сравнению с примерно 25,9%-ной степенью излечения пациентов, получающих лечение 100 мг рифаксимина в течение пяти суток, примерно 36%-ной степенью излечения пациентов, получающих лечение 100 мг/сутки в течение двух суток, и примерно 19,2%-ной степенью излечения пациентов, получающих плацебо, как указано в табл. 18.

Более конкретно, пациенты, получающие лечение композициями, содержащими 25 мг рифаксимина, демонстрируют более высокую степень излечения согласно количеству баллов по шкале Ньюджента, чем степень излечения, достигаемая другими группами, получающими лечение. В частности, более высокую степень излечения - 47% по сравнению с примерно 25%-ной степенью излечения пациентов, получающих лечение 100 мг рифаксимина в течение пяти суток, примерно 36%-ной степенью излечения пациентов, получающих лечение в течение двух суток, и примерно 19%-ной степенью излечения пациентов, получающих плацебо.

Другой аспект настоящего изобретения представлен тем фактом, что композиции, содержащие рифаксимин, в виде вагинальных таблеток приводят к снижению количества баллов по шкале Ньюджента на три пункта у всех получающих лечение пациентов по сравнению с пациентами, получающими плацебо.

В частности, снижение количества баллов по шкале Ньюджента на три пункта достигается при процентном отношении выше чем примерно 65% в группе пациентов, получающих лечение композицией в виде вагинальных таблеток, содержащей 25 мг рифаксимина, в течение пяти суток; при процентном отношении выше чем 50% пациентов, получающих лечение композицией, содержащей 100 мг рифаксимина, в течение пяти суток; при процентном отношении выше чем 30% пациентов в группе, получающей лечение композицией в виде таблеток, содержащей 100 мг рифаксимина, в течение двух суток по сравнению с процентным отношением примерно 18% пациентов, получающих плацебо.

В частности, композиции в виде вагинальных таблеток, содержащие 25 мг рифаксимина, при вве- 8 025047 дении пациентам, пораженным бактериальным вагинозом, в течение курса лечения, длящегося пять суток, приводили к снижению количества баллов по шкале Ньюджента на пять пунктов у примерно 48% пациентов, получающих лечение, примерно 28% пациентов, получающих лечение 100 мг рифаксимина в течение пяти суток, и примерно 26% пациентов, получающих лечение 10 мг в течение двух суток, по сравнению с процентным отношением примерно 0% пациентов, получающих плацебо.

Кроме того, и более конкретно, композиции в виде вагинальных таблеток, содержащие 25 мг рифаксимина, в течение курса лечения, длящегося пять суток, приводят к снижению количества баллов по шкале Ньюджента на 8-10 пунктов при более высоком процентном отношении по сравнению с другими группами, получающими лечение, включенными в это исследование.

Описанные фармацевтические композиции благодаря особенности сочетания выбранных гранулярных и экстрагранулярных эксципиентов и способу получения обеспечивают контролируемое высвобождение рифаксимина во влагалище так, чтобы быть эффективными лишь при однократном введении дозы в сутки.

Описанные фармацевтические композиции являются полезными и эффективными при лечении пациентов, пораженных вагинальными инфекциями, в частности бактериальным вагинозом, в суточных дозах менее 200 мг и, в частности, в дозах, составляющих от 100 до 25 мг, например 100, 50, 25 и 12,5 мг рифаксимина, при продолжительности лечения менее одной недели.

Другой аспект описанных композиций, содержащих 25 мг рифаксимина, в форме вагинальных таблеток состоит в том, что они полезны при лечении пациентов, пораженных вагинальными инфекциями, в частности тяжелым бактериальным вагинозом, характеризующимися тем, что они имеют высокие баллы по шкале Ньюджента (не менее 6, предпочтительно не менее 7, или более предпочтительно не менее 9 или согласно критериям Амселя имеют 3 фактора из 4).

Другим аспектом настоящего изобретения является применение композиций рифаксимина, содержащих рифаксимин в концентрациях менее 200 мг и, в частности, 100, 50, 25 и 12,5 мг, в соответствии с раскрытой продолжительностью лечения для излечения и предупреждения рецидива бактериального вагиноза.

Другой аспект настоящего изобретения представляет собой фармацевтические композиции, содержащие рифаксимин, характеризующиеся тем, что они хорошо переносятся и безопасны при введении, и, в частности, тем, что они приводят к сниженной системной абсорбции, демонстрируемой незначительным уровнем рифаксимина, измеряемым в плазме.

Твердые фармацевтические композиции в форме таблеток обладают неожиданным свойством высвобождать гранулы рифаксимина в слизистой оболочке влагалища даже при сниженных количествах вагинальной жидкости. Результаты клинического испытания по настоящему изобретению показывают, что указанные гранулы способны высвобождать рифаксимин в количествах, эффективных для пациентов, пораженных бактериальным вагинозом, даже при лечении низкими дозами рифаксимина и курсе лечения, например, не более десяти суток и, в частности, не более пяти суток, и способны предупреждать рецидивирующие инфекции на протяжении четырех недель после завершения курса лечения.

Более того, особенно существенно, что композиция в виде таблетки, содержащая рифаксимин в количествах ниже 200 мг и, в частности, ниже 100 мг, повышает или сохраняет на высоком уровне концентрацию молочнокислых бактерий даже после окончания терапии по сравнению с плацебо.

В примере 1 описано получение гранул рифаксимина и получение вагинальных таблеток, содержащих 25 мг рифаксимина. Таблетки получают посредством смешивания гранул рифаксимина с экстрагранулярными эксципиентами.

Полученные таблетки имеют твердость, определяемую, как описано в Европейской Фармакопее, 7-е изд., глава 2.9.8, учетный номер 01/2008:20908, выше 5 кп (49,035 Н), и характеризуются тем, что они имеют время распада в условиях, описанных в Европейской Фармакопее, 7-е изд., глава 2.9.2, учетный номер 01/2008:20902, примерно 1 мин.

В примере 2 описано получение таблеток рифаксимина 100 мг, где гранулы рифаксимина смешивают с экстрагранулярными эксципиентами, демонстрируя гибкость способа производства таблеток также при изменяющихся количествах рифаксимина, не увеличивая массу конечной таблетки. В примере 3 описано получение таблеток рифаксимина, где гранулы получают с различными связующими веществами, учитывая те, которые используют в примере 1, и их смешивают с экстрагранулярными эксципиентами.

В частности, в примере 3 описано получение композиций, где используют различные эксципиенты по сравнению с примером 1 и 2.

В частности, разрыхлитель выбран из силиката кальция, кросповидона, крахмалгликолята натрия или их смеси; связующее вещество представляет собой гидроксипропилметилцеллюлозу и разбавитель представляет собой моногидрат лактозы.

Эта композиция 7, где связующее вещество не присутствует в экстрагранулярных эксципиентах, наглядно демонстрирует проблему при образовании смеси, и при визуальном контроле смесь не выглядит однородной в отсутствие связующего вещества. В примере 4 представлено полученное согласно Европейской Фармакопее, 7-е изд., глава 2.9.2, учетный номер 01/2008:20902 время распада таблеток ри- 9 025047 факсимина в композициях 1-8, полученных согласно примерам 1-3. Время распада варьируется от примерно от 1 до 10 мин, в зависимости от компонентов, содержащихся в композициях; композиция без какого-либо разрыхлителя (композиция 4) демонстрирует время распада примерно 5 мин, а когда присутствует только кросповидон (композиции 3, 5 и 6), время распада составляет от 1 мин 30 с до 5 мин 30 с. Меньшее время распада композиции 3 соответствует композиции, где добавлено большее количество кросповидона.

Меньшее время распада, демонстрируемое композицией 1, композицией 2 и композицией 7, является предпочтительным, но композиция 7 в настоящее время не является предпочтительной для промышленных масштабов.

Композиции 1 и 2 соответствуют таблеткам, содержащим рифаксимин в количестве 25 и 100 мг, характеризующимся тем, что интрагранулярное связующее вещество представляет собой коповидон, и экстрагранулярный разрыхлитель представляет собой смесь кросповидона и силиката кальция. Эти композиции способны распадаться за время менее 2 мин и высвобождать рифаксимин в месте приложения его действия.

В примере 5 описано получение липофильных овулей, где рифаксимин составляет от 50 до 200 мг, в присутствии полусинтетических глицеридов, поверхностно-активных веществ и ксилоглюкана. Количество рифаксимина, высвобождаемое липофильными овулями спустя примерно 2 ч, составляет от 15 до 25% относительно общего количества рифаксимина, содержащегося в овулях.

В примере 6 описано получение гидрофильных овулей, где рифаксимин составляет от 25 до 100 мг, в присутствии 2(2-этоксиэтокси)этанола, транскутола, глицерина, полиэтиленгликоля (ПЭГ) и ксилоглюкана. Эти композиции характеризуются быстрым высвобождением рифаксимина, и количество высвобожденного рифаксимина составляет более 70% (мас./мас.) спустя 20 мин.

В примере 7 описано высвобождение композиций в виде таблеток и вагинальных овулей, приготовленных как в примерах 1-5, в раствор с объемом и температурными условиями, сходными с физиологическими условиями во влагалище. Сравнивают различные композиции, содержащие от 25 до 100 мг рифаксимина, чтобы оценить высвобождение рифаксимина в термостатируемой среде при 37°С. Количество рифаксимина, высвобождаемого в 10 мл водного раствора, определяют спектрофотометрически. Описанные эксперименты показывают, что таблетки, содержащие 100 мг рифаксимина, полученные, как описано в примере 1, и имеющие состав, описанный в примере 2, высвобождают спустя 1 ч количество рифаксимина менее примерно 0,5 мг; гидрофильные овули, содержащие 100 мг рифаксимина, высвобождают спустя один час примерно 8,5 мг рифаксимина, гидрофильные овули, содержащие 25 мг рифаксимина, высвобождают спустя один час примерно 7 мг рифаксимина, и липофильные овули, содержащие примерно 100 мг рифаксимина, высвобождают спустя один час примерно 4 мг рифаксимина.

В примере 8 описано исследование биодоступности, которое проводили на фармацевтических композициях в виде таблеток, описанных в настоящем изобретении, где таблетки и овули, содержащие количество рифаксимина, соответствующее 12,5 мг, полученные посредством способа, идентичного способу, описанному в примерах 1 и 4, вводили самкам новозеландских белых кроликов, свободных от специфических патогенов (§РР), нерожавшим и небеременным. Во время лечения не наблюдали никаких местных клинических проявлений, ни реакций на лечение, ни изменений массы тела животных, подвергавшихся лечению, по сравнению с контрольной группой.

Концентрацию рифаксимина в плазме определяли посредством валидированного метода ЖХМС/МС (жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией), имеющего нижний предел количественного определения (НПКО) 0,5 нг/мл.

В табл. 15 примера 8 представлены фармакокинетические параметры рифаксимина у кролика после введения вагинальных таблеток и овулей. Только в некоторых случаях фармакокинетические параметры незначительно выше НПКО. Средняя величина максимальной концентрации в плазме (Стах) для овулей примерно в четыре раза выше чем величина С_тах таблеток, тогда как величина площади, замыкаемой кривой концентрации в плазме в зависимости от времени (АиС₀₁ конечное) (площадь под кривой) для овулей примерно в двенадцать раз выше по сравнению с величиной для таблеток.

Эти результаты показывают, что при введении одинаковой дозы рифаксимина вагинальные таблетки дают более низкую величину абсорбции в плазме по сравнению с овулями. Этот результат соответствует профилям растворимости, показанным в примере 7.

В примере 9 описана эффективность композиций рифаксимина в виде овулей и таблеток на животной модели, где вагинальная инфекция была вызвана посредством заражения Оагбпеге11а уащпаПх, выделенных у женщин, пораженных бактериальным вагинозом. Новозеландских кроликов, имеющих массу, составляющую от 2 до 3 кг, инфицировали физиологическим раствором, содержащим ОагбпегеИа уащпаБ Ϊ5 в количестве более 10⁵, а для того чтобы получить устойчивую инфекцию, заражение повторяли дважды или трижды. Через семь суток после последнего заражения животных лечили композициями рифаксимина в виде таблеток и овулей, содержащих рифаксимин в количествах, составляющих от 1,5 до 12,5 мг, получение которых проводили согласно примеру 1 и примеру 4, где долю эксципиентов пропорционально снижали, чтобы получить композиции с различными количествами рифаксимина. Дозы рифаксимина, составляющие от 1,5 до 12,5 мг, соответствуют дозе примерно 12,5 и 100 мг соответственно у

- 10 025047 женщин, в пересчете на площадь поверхности тела.

Композиции не демонстрировали какого-либо побочного эффекта у животных, а демонстрировали эффективность, как указано в табл. 16 и 17. Изученные дозировки рифаксимина в таблетках и в овулях приводят к полному уничтожению инфекции через семь суток после окончания лечения.

Оказалось, что композиции и в виде овулей, и в виде таблеток являются эффективными и хорошо переносятся животными. Однако, поскольку таблетки имеют более низкие уровни системной абсорбции, чем овули, как описано в примере 8, следует рассматривать более подходящий фармацевтический препарат для применения пациентами, пораженными бактериальным вагинозом.

Клиническое исследование, описанное в примере 12, проводили с таблетками, содержащими 25 и 100 мг рифаксимина, полученными, как описано в примерах 1 и 2.

В примерах 10 и 11 описана системная абсорбция и переносимость таблеток рифаксимина в клиническом исследовании на здоровых добровольцах. В примере показано, что концентрации рифаксимина в плазме после введения таблетки, содержащей 100 мг рифаксимина, посредством интравагинального пути пренебрежимо малы, поскольку они всегда ниже НПКО прибора, равного 0,5 нг/мл.

Эффективность композиции в виде таблеток при лечении бактериального вагиноза определяли посредством клинического исследования, проводимого на 114 небеременных женщинах в возрасте от 18 до 50 лет, и представляли в примере 12. Клиническое исследование, описанное в примере 12, проводили с таблетками, содержащими 25 и 100 мг рифаксимина, полученными, как описано в примере 1 и 2.

Первичной конечной точкой этого испытания была оценка излечения от бактериального вагиноза на основании количества баллов по шкале Ньюджента и критериев Амселя при первом контрольном визите (У3) через 7-10 суток после окончания терапии.

Вторичной конечной точкой этого испытания было излечение от заболевания, оцениваемое по отдельности согласно количеству баллов по шкале Ньюджента и критериям Амселя через 7-10 суток после окончания терапии, поддержание здорового состояния при втором контрольном визите примерно через один месяц после окончания терапии (У4) и оценка состава вагинальной микробиоты посредством молекулярных методов, ПЦР в режиме реального времени и ПЦР-ДГГЭ (полимеразная цепная реакцияденатурирующий градиентный гель-электрофорез). ПЦР в режиме реального времени является количественным методом, в котором образец ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) амплифицируют различными родо- и/или видоспецифическими праймерами, мишенью которых является бактериальный ген 168 рРНК (рибосомная РНК) или участок 168-238 рРНК; в частности, использовали специфические зонды для бактерий рода Ьас1оЪасШи8, для Оагбпеге11а ναβίηαΐίδ. ЛЮроЬшт. Ргеуо1е11а и УеП1опе11а, поскольку они представляют собой основные группы бактерий, страдающих от изменений в случае бактериального вагиноза. С другой стороны, ПЦР-ДГГЭ представляет собой качественный метод, поэтому в настоящем исследовании амплификацию проводили с универсальными праймерами эубактерий.

В частности, пациентов, пораженных бактериальным вагинозом и не пораженных сопутствующими вирусными, протозойными и грибковыми вагинальными инфекциями, относили к одной из следующих лечебных групп, используя процедуру централизованной рандомизации и двойной слепой дизайн эксперимента.

Группа А: пациенты, получающие вагинальную таблетку рифаксимина, содержащую 100 мг рифаксимина, полученную согласно примеру 2, один раз в сутки в течение пяти суток вечером.

Группа Б: пациенты, получающие вагинальную таблетку рифаксимина, содержащую 25 мг рифаксимина, полученную согласно примеру 1, один раз в сутки в течение пяти суток вечером.

Группа В: пациенты, получающие вагинальную таблетку рифаксимина, содержащую 100 мг рифаксимина, полученную согласно примеру 2, один раз в сутки в течение двух суток вечером плюс вагинальную таблетку плацебо один раз в сутки в течение оставшихся трех суток вечером.

Группа Г: пациенты, получающие таблетку плацебо, полученную согласно примеру 1, где количество рифаксимина заменено гидратированной лактозой, один раз в сутки в течение пяти суток вечером.

Диагноз бактериальный вагиноз ставился на основании критериев Амселя (по меньшей мере три положительных критерия из четырех) и по количеству баллов по шкале Ньюджента (не менее 4). Исследование включало скрининговый визит (У1), за которым следовал рандомизационный визит через семь суток (У2), первый контрольный визит через 7-10 суток после окончания терапии (У3) и второй и завершающий контрольный визит через 28-35 суток после окончания терапии (У4). Оценку достижения первичной конечной точки проводили во время визита У3, и оценку вторичной конечной точки проводили во время визита У4.

В табл. 18 представлены процентные значения числа пациентов после лечения композицией, приготовленной согласно примерам 1 и 2, по сравнению с композициями, приготовленными с плацебо. В клиническом испытании показано, что все группы пациентов, получавших лечение композициями в виде таблеток рифаксимина, демонстрировали процент выздоровления больше, чем группы пациентов, получавших плацебо.

Пациенты, принадлежащие к группе, получающей лечение таблеткой, содержащей 25 мг рифаксимина, полученной согласно примеру 1, в течение пяти суток, демонстрировали процент излечения от заболевания больше чем в других группах.

- 11 025047

Более конкретно, пациенты, принадлежащие к группе, получающей лечение таблеткой, содержащей 25 мг рифаксимина (группа Б), приготовленной согласно примеру 1, в течение пяти суток, демонстрировали процент излечения более 40%; пациенты, получающие лечение таблеткой, содержащей 100 мг рифаксимина, в течение двух суток (группа В), демонстрировали процент излечения более 30%; пациенты, получающие лечение таблеткой, содержащей 100 мг рифаксимина, в течение пяти суток (группа А), демонстрировали процент излечения более 20%. Группа, получающая плацебо (группа Г), демонстрировала процент излечения почти 19%.

В табл. 19 представлены процентные значения числа пациентов, подсчитанные согласно критериям Амселя через 7-10 суток после окончания терапии. Этот результат подтверждает, что группа, которая получала композицию, содержащую 25 мг рифаксимина, в течение пяти суток, демонстрировала процент излечения выше, чем группа, получающая плацебо.

В табл. 20 показано, что согласно количеству баллов по шкале Ньюджента, при визите У3 процент излечения от заболевания у пациентов, принадлежащих к группе, получающей лечение композицией, содержащей 25 мг рифаксимина, в течение пяти суток, то есть к группе Б, выше, чем у других групп и у группы, получающей плацебо.

В этом примере, описывающем клиническое исследование, пациентов дополнительно делили на пациентов с рецидивом бактериального вагиноза и пациентов с первым эпизодом бактериального вагиноза. Процент излечения от заболевания во всех получающих лечение рифаксимином группах был больше у пациентов, страдающих от рецидива бактериального вагиноза. Более того, группа, получающая лечение 25 мг рифаксимина в течение пяти суток, демонстрировала более высокий процент излечения даже у субъектов, страдающих от первого эпизода заболевания.

Процент излечения от заболевания, подсчитанный согласно количеству баллов по шкале Ньюджента и критериям Амселя, во всех группах, получающих лечение рифаксимином, как оказалось, выше у пациентов, страдающих бактериальным вагинозом, по сравнению с пациентами, страдающими от первого эпизода бактериального вагиноза. Кроме того, в группе, получающей лечение 25 мг рифаксимина в течение пяти суток, то есть в группе Б, продемонстрирован более высокий процент излечения также и у субъектов, страдающих от первого эпизода заболевания, как представлено в табл. 23.

Пациенты, получающие лечение 25 и 100 мг рифаксимина в виде вагинальных таблеток, в клиническом исследовании не демонстрировали какого-либо конкретного побочного эффекта, и никто из группы, получающей лечение, не демонстрировал каких-либо случаев вульвовагинального кандидоза, связанного с приемом рифаксимина, во время лечения.

В представленном клиническом исследовании продемонстрировано, что лечение пациентов, пораженных бактериальным вагинозом, вагинальными таблетками с контролируемым высвобождением, полученными согласно примеру 1 и содержащими 25 мг рифаксимина, один раз в сутки в течение пяти суток является более эффективным для излечения заболевания.

В примерах 13-16 описано достижение выздоровления согласно критериям Ньюджента у четырех групп пациентов, отобранных в группы А, Б, В и Г клинического исследования. В примере 17 представлено микробиологическое исследование, проведенное на вагинальных смывах пациентов, получающих лечение 100 и 25 мг рифаксимина в течение пяти суток (группы А и Б) и 100 мг рифаксимина в течение двух суток (группа В), при использовании молекулярных методов, ПЦР в режиме реального времени и ПЦР-ДГГЭ, для определения состава вагинальной микробиоты.

В табл. 28 примера 17 представлены результаты, полученные при помощи ПЦР в режиме реального времени, выраженные в нг ДНК-мишени/мкг всей геномной ДНК, для видов микроорганизмов, анализируемых в отношении группы пациентов, включенных в клиническое исследование, при визитах У3 и У4 по сравнению с данными, полученными путем анализа перед лечением.

Результаты анализа ПЦР в режиме реального времени показывают возрастание числа молочнокислых бактерий во всех группах, получающих лечение рифаксимином, тогда как концентрации патогенных бактерий, таких как СагйпегеПа уадшаПк, АШроршт и Ргеуо!е11а демонстрировали уменьшение во всех группах, получающих лечение рифаксимином, по сравнению с плацебо, таким образом демонстрируя эффективность композиции в виде таблеток.

В частности, пациенты, получающие лечение рифаксимином в таблетках, полученных согласно примеру 1 и содержащих 25 мг рифаксимина, в течение пяти суток, при визите У3 демонстрируют возрастание числа молочнокислых бактерий по сравнению с другими группами, получающими лечение.

Более того, лечение таблетками с контролируемым высвобождением, содержащими 25 мг рифаксимина, в течение пяти суток, как оказалось, является наиболее эффективным как по активности в отношении анаэробных бактерий, так и по восстановлению молочнокислых бактерий, тем самым благоприятствуя физиологической микросреде влагалища.

Анализ образцов из влагалища при визите У4 подтвердил данные, полученные при визите У3 по окончании лечения для пациентов, получающих лечение композицией в виде вагинальных таблеток, содержащих 25 мг рифаксимина, полученных согласно примеру 1, в течение пяти суток, поскольку концентрация молочнокислых бактерий сохранялась, тогда как концентрация патогенных бактерий в дальнейшем снижалась. Этот результат подтвердил избирательное бактерицидное действие композиции, опи- 12 025047 санной в примерах 1 и 2, на патогенные вагинальные бактерии, а не против молочнокислых бактерий.

Также у группы пациентов, получающих лечение композицией в виде таблеток, содержащих 100 мг рифаксимина, в течение пяти суток (группа А) при визите У4 сохранялись показатели, наблюдаемые при третьем визите через 7-10 суток после окончания терапии. Результаты, полученные с помощью метода ПЦР в режиме реального времени, были подтверждены данными ПЦР-ДГГЭ и представлены в примере 18, показывая эффективность лечения рифаксимином при регулировании состава вагинальной микробиоты. Также по этому методу доза рифаксимина, которая является наиболее эффективной при регулировании вагинальной микробиоты, представляет собой дозу, установленную при лечении посредством таблеток, содержащих 25 мг рифаксимина, один раз в сутки в течение пяти суток.

В примере 18 описан удивительный и неожиданный результат, полученный с помощью композиций в виде таблеток, содержащих рифаксимин, описанных в настоящем изобретении, и результаты концентраций вагинальной микробиоты при визите У4 представлены в табл. 29. Описанные композиции в виде вагинальных таблеток, содержащие рифаксимин, в лечебных дозах 100 мг/5 суток, 25 мг/5 суток и 100 мг/2 суток являются эффективными для поддержания низких концентраций патогенных бактерий и повышения концентрации молочнокислых бактерий по сравнению с плацебо.

В частности, лечебная группа А, которая получала таблетку, содержащую 100 мг рифаксимина, в течение пяти суток, демонстрирует двадцатикратное повышение концентрации молочнокислых бактерий; лечебная группа Б, которая получала таблетку, содержащую 25 мг рифаксимина, в течение пяти суток, демонстрирует сорокакратное повышение концентрации молочнокислых бактерий, и лечебная группа В, которая получала таблетку, содержащую 100 мг рифаксимина, в течение двух суток, демонстрирует восьмикратное повышение концентрации молочнокислых бактерий.

Результаты, представленные в табл. 29, показывают избирательное благоприятное действие, которое композиция рифаксимина в форме таблеток, полученных как в примерах 1 и 2, оказывает на колонизацию молочнокислых бактерий. Количество молочнокислых бактерий при визите У4 у групп Б и В и, в частности, в группе Б является преобладающим при сравнении с патогенными видами, присутствующими у пациентов, получающих лечение рифаксимином, тогда как у пациентов, получающих плацебо, сохраняется минимальное количество молочнокислых бактерий, в том числе у тех, кто демонстрировал выздоровление.

Эти факты подтверждают гипотезу, что у пациентов, получающих лечение препаратами рифаксимина, может сохраняться состояние выздоровления, тогда как другие вероятно будут страдать от рецидива.

Описанная композиция в виде вагинальных таблеток полезна при излечении от вагинальной инфекции, и, в частности, композиция, содержащая 25 мг рифаксимина, вводимая в течение пяти суток, поддерживает низкую концентрацию патогенных бактерий в течение примерно одного месяца после окончания лечения и приводит к увеличению концентрации молочнокислых бактерий во влагалище.

В примере 19 описано определение профилей ДГГЭ у женщин, получающих лечение рифаксимином, демонстрирующих меньшее число полос, указывающее на присутствие меньшего числа патогенных видов, по сравнению с исходными профилями.

В табл. 30 представлен процент женщин, имеющих кластеризованные профили, где подтверждается более высокая интравариабельность у женщин, получающих лечение рифаксимином по сравнению с женщинами, получающими плацебо. В частности, наблюдается, что лечение таблетками, содержащими 25 мг рифаксимина, в течение пяти суток оказывает более сильное влияние на вагинальную микробиоту, приводя к процентному значению меньшему, чем значение в других группах, получающих лечение.

Чтобы оценить фармакологическое действие исследуемой композиции рифаксимина, различные лечебные группы сравнивали с помощью так называемых индексов сходства (81).

В табл. 31 представлены средние значения 81 (индекса сходства), подтверждающие, что лечение рифаксимином восстанавливает менее разнообразную и более физиологическую микросреду влагалища.

Другим критерием, используемым для оценки образцов, является так называемый Индекс видового богатства (К1). Этот критерий, основанный на полосах каждого профиля ДГГЭ, показывает меру разнообразия бактериальной популяции, которая является признаком заболевания при резком возрастании количества новых патогенных видов. В табл. 32 представлены средние значения К1, измеренные при визитах У1 и У3.

Результаты в табл. 32 показывают, что профили вагинальной микробиоты становятся менее сложными в группах, получающих лечение препаратами рифаксимина, по сравнению с группой, получающей плацебо.

В настоящем изобретении раскрыты фармацевтические композиции в виде таблеток с контролируемым высвобождением, содержащие рифаксимин, полезные при лечении бактериального вагиноза, с незначительной системной абсорбцией, которые способны высвобождать рифаксимин также в присутствии небольшого количества водных растворов. В частности, описанные композиции действуют избирательно против патогенных бактерий, сохраняя и благоприятствуя увеличению количества молочнокислых бактерий в вагинальной флоре.

Более того, композиции по настоящему изобретению являются эффективными для уменьшения

- 13 025047 числа патогенных бактерий, благоприятствуя молочнокислым бактериям в вагинальной флоре, всего лишь после однократной суточной дозы.

Здесь также предложен набор, например набор, содержащий вагинальные таблетки, содержащие эффективное количество рифаксимина для лечения пациентов с вагинальными инфекциями, и инструкцию по использованию указанных композиций.

Вышеупомянутые примеры относятся к вагинальным таблеткам, содержащим различные количества рифаксимина и эксципиенты, представлены способы их получения, исследование ίη νίνο на животных и женщинах, пораженных вагинальными инфекциями.

Пример 1. Получение вагинальных таблеток, содержащих рифаксимин.

Композиция 1.

Твердые композиции, содержащие 25 мг рифаксимина, готовили посредством способа, включающего следующие стадии:

а) приготовление гранул рифаксимина и смешивание гранул в матрице, содержащей смесь разрыхлителей;

б) прессование гранул и получение таблеток;

в) нанесение на полученные таблетки пленочного покрытия. Количество рифаксимина, равное 375 г, смешивают с эксципиентами для получения гранул в соответствующих количествах, как указано в табл. 3.

Эксципиенты, коповидон, гидроксипропилметилцеллюлозу и гидратированную лактозу предварительно просеивали через сито с диаметром отверстий 1,0 мм. Стеарат магния, предварительно просеянный через сито с диаметром отверстий 0,5 мм, затем добавляли в смесь в количествах, указанных в табл. 3.

Таблица 3

Компоненты	Количества компонентов гранул (г)	Массовый процент (%)
Рифаксимин	375 г	11,1
Коповидон (Коллидон УА 64)	84,4 г	2,5
Гидратированная лактоза (Таблетоза-80)	2881,8 г	85,4
Стеарат магния	33,8 г	1,0
Общая масса	3375 г

Компоненты помещают в смеситель и перемешивают в течение 20 мин при 15 об/мин.

Смесь затем помещали во вращающийся пресс при применении давления 75 бар (1,5 х10^-5 Па) для получения гранул.

Полученные гранулы смешивали с силикатом кальция (ΚχοίρίοηΙ РМ1000), кросповидоном (Коллидон СЬ), гидратированной лактозой (Таблетоза-80) и коповидоном (Коллидон УЛ64) в количествах, указанных в табл. 4, предварительно просеяв через сито с диаметром отверстий 1 мм, при использовании 80 л аппарата бункерного типа (бункер) в течение 20 мин при 15 об/мин. Затем добавляли стеарат магния, предварительно просеянный через сито с диаметром отверстий 0,5 мм, и конечную смесь перемешивали в течение 3 мин при 10 об/мин.

Конечный состав вагинальных таблеток указан в табл. 4.

Таблица 4

Компоненты	Количества компонентов (г)	Массовый процент (%)
Гранулы рифаксимина	3375 г гранулят 1	18,75% (2,1% рифаксимина)
Силикат кальция (Ρχοίρΐβηί РМ1000)	2250 г	12,5%
Кросповидон (Коллидон СЬ)	540 г	3,0 %
Моногидрат лактозы (Таблетоза-80)	11390,5 г	63,3 %
Коповидон (Коллидон νΑ64)	253,2 г	1,4 %
Стеарат магния	191,2 г	1,1 %
Общая масса	18000 г

Смесь, полученную на стадии (а), прессовали в таблеточной машине для получения таблеток размером 22,8x10,15 мм.

Таблетки покрывали пленочным покрытием. Таблетки, предварительно нагретые при 45°С, помещали в стальной сосуд, где распыляли пленкообразующий раствор, причем указанный раствор получали посредством диспергирования 0,22 кг Орабгу II Ипк (опадрай розовый) в 2,88 кг воды. Орабту II Ипк представлял собой порошкообразную смесь, образованную диоксидом титана, красным оксидом железа, желтым оксидом железа, поливиниловым спиртом и полиэтиленгликолем.

Пленкообразующую дисперсию распыляли на таблетки до тех пор, пока не получали среднюю массу таблетки, равную 1248 мг±5% (1185,6-1310,4 мг).

Стадия распыления протекала одновременно со стадией сушки таблеток. После достижения требуемой массы стадия распыления заканчивалась, а стадия сушки продолжалась при контроле содержания воды в таблетках до тех пор, пока не достигали содержания воды менее или равного 5%.

Таблетки затем хранили во влагонепроницаемых резервуарах, таких как пластины, образованные из

- 14 025047 трех белых с алюминиевым покрытием слоев ПВХ/ПЭ/ПВДХ (поливинилхлорид/полиэтилен/поливинилденхлорид), где слой ПВДХ является покровным. Конечный состав (композиция 1) полученных таблеток представлен в табл. 5.

Таблица 5

Компонент	Композиция 1	Массовый процент (%)
Рифаксимин	25 мг	2,0
Стеарат магния	15 мг	1,2
Коповидон (Коллидон νΑ64)	22,5 мг	1,8
Кросповидон (Коллидон СЬ)	36 мг	2,9
Силикат кальция или (Ρχοίρίβηί РМ1000)	150 мг	12,0
Моногидрат лактозы (Таблетоза-80)	951,5 мг	76,2
Пленкообразующее покрытие (Орабгу II р!пк 85Р34503)	48 мг	3,8
Общая масса	1248 мг

Полученные таблетки имеют среднюю массу от 1185,6 до 1310,4 мг и твердость примерно 14,75 кп (144,65 Н).

Пример 2. Получение вагинальных таблеток, содержащих 100 мг рифаксимина.

Таблетки получали, как описано в примере 1, и в табл. 6 представлен конечный состав таблеток, содержащих 100 мг рифаксимина.

Таблетки получали исходя из гранулята, имеющего такой же состав как гранулят, представленный в табл. 3 примера 1, с которым смешивали эксципиенты перед последующим прессованием, чтобы получить конечную композицию, представленную в табл. 6.

Таблица 6

Компонент	Композиция 2	Массовый процент(%)
Рифаксимин	100 мг	8,0
Стеарат магния	15 мг	1,2
Коповидон (Коллидон νΑ 64)	22,5 мг	1,8
Кросповидон (Коллидон СЬ)	36 мг	2,9
Силикат кальция (ΡχΌΙρίθΠΐ РМ 1000)	150 мг	12,0
Моногидрат лактозы (Таблетоза-80)	876,5 мг	70,2
Пленкообразующее покрытие (Орабгу II рюк 85Р34503)	48 мг	3,8
Общая масса	1248 мг

Пример 3. Получение вагинальных таблеток, содержащих 25 мг рифаксимина (композиции 3-8). Композиции 3-8, содержащие 25 мг рифаксимина, готовили согласно способу, который описан в примере 1.

Состав гранул, содержащих рифаксимин, связующее вещество, разбавитель и смазывающее вещество, представлен в табл. 7.

Таблица 7

Компонент	Гранула А (мг)	Гранула Б (мг)	Г ранула В (мг)
Рифаксимин	25,00	25,00	25,00
Стеарат магния	2,25	2,25	2,25
Коповидон (Коллидон νΑ 64)	5,63	-	-
Г идроксипропилметилцеллюлоза (РМагтасоа! 606)		-	4,5
Моногидрат лактозы (Таблетоза-80)	192,12	197,75	197,75

Содержащие рифаксимин гранулы, имеющие составы, описанные в табл. 7 (составы А, Б, В), смешивают с экстрагранулярными эксципиентами, как описано в примере 1.

Композиции 3-8 представлены в табл. 8.

- 15 025047

Таблица 8

Компонент	Комп. 3 (мг)	Комп. 4 (мг)	Комп. 5 (мг)	Комп. 6 (мг)	Комп. 7 (мг)	Комп. 8 (мг)
Гранулят	Г ранулят А (225 мг)	Гранулят А (225 мг)	Г ранулят А (225 мг)	Г ранулят А (225 мг)	Гранулят В (225 мг)	Гранулят С (225 мг)
Стеарат магния	12,75	12,75	12,75	12,75	12,75	12,75
Коповидон (Коллидон \/А 64)	16,88	16,88	16,88	16,88	-	-
Кросповидон (Коллидон СЬ)	60,00	-	36,00	36,00	36,00	36,00
Силикат кальция	-	-	-	-	150,00	150,00
крахмал гл икол ят натрия	-	96,00	24,00	-	-	-
Прежелатинизированный крахмал	-	-	-	150,00	-	-
Гидроксипропил- метилцеллюлоза					-	16,88
Моногидрат лактозы	885,37	849,37	885,37	759,37	776,25	759,37
Пленкообразующее покрытие	30,8-43,5	30,8-43,5	30,8-43,5	30,8-43,5	30,8-43,5	30,8-43,5

Комп. - композиция.

Композиция 7 демонстрировала при визуальном контроле неоднородную консистенцию порошка с присутствием больших агрегатов.

Пример 4. Определение времени распада таблеток рифаксимина. Композиции 1-8.

Величины времени распада таблеток, имеющих составы 1-8, полученных согласно примерам 1-3, получали, как описано в Европейской Фармакопее 7-е изд., глава 2.9.2, учетный номер 01/2008:20902.

Таблетки, имеющие составы 1-8, помещали на сетку в водяной бане, нагретой до 37°С, и нижняя часть таблетки находится в контакте с водой.

Величины времени распада таблеток оценивают как визуально, так и, при необходимости, с помощью стеклянной палочки для проверки потери консистенции. Анализ повторяли на шести таблетках и подсчитывали среднее время.

Полученные результаты представлены в табл. 9.

Таблица 9

	Комп. 1	Комп. 2	Комп. 3	Комп. 4	Комп. 5	Комп. 6	Комп. 7	Комп. 8
Время распада	Γ40	1'35	Γ50	5Ό0	2'30	5'30	Γ45	5'30

Пример 5. Получение липофильных овулей, содержащих рифаксимин, и оценка высвобождения рифаксимина.

Овули, содержащие 50 и 200 мг рифаксимина, получали в присутствии полусинтетических глицеридов с поверхностно-активным веществом (суппоцир В82Х) в присутствии и в отсутствие ксилоглюкана. Соответствующие композиции имеют количества компонентов, представленные в табл. 10.

Овули получали посредством плавления полусинтетических глицеридов при 40°С и последовательного диспергирования других компонентов в расплавленную массу триглицерида. Расплавленную массу затем помещали в специальные формы и охлаждали для получения овулей.

Таблица 10

Компонент	ОУ-ЫР. 1 (мг)	ОУ-ЫР. 2 (мг)	ον-ыр. 3 (мг)	ОУ-ЫР. 4 (мг)	ον-ыр. 5 (мг)
Рифаксимин	200	200	50	50	100

Ксилоглюкан	-	30	-	30	-
Суппоцир В32Х (полусинтетические глицериды)	2800	2770	2950	2720	2900

Овуль каждого состава ОУ-ЫР 1-5, приведенного в табл. 10, затем помещали в цилиндр, содержащий 900 мл воды, при 37°С при перемешивании, и количество рифаксимина, высвобождаемого с течением времени, определяют посредством спектрофотометрии и приводят в табл. 11.

Эксперименты повторяли в шести различных сосудах и определяли среднюю полученную величину.

- 16 025047

Таблица 11

Время (мин)	Величины растворимости (мкг/мл)
ον-υρ. 1	ον-υρ. 2	ον-υρ. з	ον-υρ. 4	ον-υρ. 5
0	0,0	ο,ο	ο,ο	ο,ο	0,00
5	0,8	0,6	0,8	1,8	η,ά
10	1,6	2,1	1,2	1,4	0,20
20	3,4	1,9	2,8	2,0	η,ά
30	4,1	3,0	3,6	3,3	0,28
40	4,3	3,4	3,7	2,7	0,35
50	4,8	3,8	4,3	2,8	η,ά
60	5,8	4,8	4,8	3,7	0,37
70	7,2	5,0	5,9	5,2	η.ά
80	8,4	6,9	6,5	6,5	η.ά
90	9,4	7,9	7,0	7,2	η.ά
100	10,2	11,8	7,7	8,0	η.ά
110	18,6	13,6	9,5	10,0	η.ά
120	21,1	16,5	16,4	19,0	η.ά

Пример 6. Получение гидрофильных овулей, содержащих рифаксимин, и оценка высвобождения рифаксимина.

Получали овули, содержащие 100 мг рифаксимина с эксципиентами и различными количествами последних, чтобы оценить их действие на высвобождение рифаксимина.

Шесть композиций в виде гидрофильных овулей (ОУ-ГОК 1-6) и их относительные составы представлены в табл. 12.

Таблица 12

Компонент	Состав (мг)
ον-юк. 1	θν-ЮК. 2	ον-юк. 3	θν-ЮК. 4	θν-ЮК. 5	ОУ-ЮК. 6
Рифаксимин	100	100	100	100	100	25
Транскутол	400	400	250	-	-	400
Глицерин	400	400	250	400	800	400
Ксилоглюкан	150	-	150	150	150	150
ПЭГ 4000	1950	2100	1950	1950	1950	2025
Вода	-		300	400	-	-

Гидрофильный овуль составов ОУ-ГОК 1-6 помещали в цилиндр, содержащий 90 мл воды, и определяли количество рифаксимина посредством спектрофотометрического анализа. Тест повторяли на шести овулях.

Количества рифаксимина, соответствующие композициям 5-9, высвобождаемые с течением времени, представлены в табл. 13.

Таблица 13

Время (мин)	Величины растворимости (мкг/мл)
ον-юк. 1	ον-юк. 2	ον-юк. 3	ον-юк. 4	ον-юк. 5	ον-юк. 6
0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
5	22,30	29,41	3,16	1,35	25,72	η.ά.
10	37,85	57,99	6,33	2,64	49,15	η.ά.
20	56,92	105,81	12,07	3,38	91,60	0,38
30	66,39	124,15	15,23	3,62	112,72	0,64
40	72,30	127,45	16,63	3,72	115,00	η.ά.
50	76,26	102,55	17,16	3,72	101,45	0,60
60	78,81	59,28	17,27	3,76	78,08	0,70
70	79,29	35,07	17,32	3,77	53,12	η.ά.
80	77,23	24,69	17,29	3,76	35,28	η.ά.
90	72,52	19,70	15,93	3,77	16,12	η.ά.
100	65,62	16,98	15,86	3,77	12,42	η.ά.
110	60,35	15,31	20,74	3,77	10,35	η.ά.
120	54,76	14,09	23,73	4,87	0,00	η.ά.

Пример 7. Сравнение высвобождения рифаксимина из вагинальных таблеток, гидрофильных и липофильных овулей.

Липофильный овуль, содержащий 100 мг рифаксимина, полученный согласно примеру 5, и гидрофильный овуль, полученный согласно примеру 6, содержащий соответственно 25 и 100 мг рифаксимина, и таблетку, полученную согласно примеру 2, содержащую 100 мг рифаксимина, помещали в контейнер, содержащий 10 мл воды в условиях нагревания при 37°С. Высвобождаемое количество рифаксимина измеряли через равные промежутки времени. Эксперимент повторяли трижды для каждой композиции.

Рифаксимин, высвобождаемый исследуемыми композициями, измеряли с течением времени с помощью УФ-спектрофотометрии, и концентрации рифаксимина представлены в табл. 14.

- 17 025047

Таблица 14

Время (мин)	Величины растворимости (мг/мл)
ον-юк. 1	ον-юв. 6	ον-υρ. 5	Композиция 2 в виде таблеток
0	0,00	0,00	0,00	0,00
15	0,56	0,38	0,21	0,06
30	0,56	0,64	0,28	0,07
45	0,63	0,61	0,40	0,11
60	0,82	0,70	0,37	0,05

Ον-ΙΏΕ.1: полученный, как в примере 6, и содержащий 100 мг рифаксимина; ОУ-ГОК.6: полученный, как в примере 6, и содержащий 25 мг рифаксимина; Ον-υΡ.5: полученный, как в примере 2, и содержащий 100 мг рифаксимина.

Пример 8. Исследование биодоступности на кроликах при введении рифаксимина в виде вагинальных таблеток и овулей посредством интравагинального пути.

Двенадцать самок новозеландских белых кроликов, свободных от специфических патогенов (3ΡΡ), нерожавших и небеременных (по 6 в каждой группе), подвергали лечению вагинальными таблетками и овулями, содержащими 12,5 мг рифаксимина, полученными, как в примерах 1 и 4, в однократной дозе. Во время лечения не наблюдали никаких местных клинических проявлений, ни реакций на лечение, ни изменений массы тела у животных, подвергавшихся лечению, по сравнению с контрольной группой.

Гепаринизированную кровь отбирали из краевой ушной вены до начала лечения и примерно через 1, 2, 4, 6 и 24 ч после введения. Концентрацию рифаксимина в плазме определяли посредством валидированного метода ЖХ-МС/МС при НПКО 0,5 нг/мл.

Фармакокинетический анализ проводили согласно стандартному анализу без компартментализации и подсчитывали следующие фармакокинетические параметры:

С_тах: максимальная концентрация, определяемая в плазме;

1_тах: время, необходимое для достижения максимальной концентрации в плазме;

ЛиС(₀.₁ п_ос_ле_днее): площадь, под кривой концентрации в плазме в зависимости от времени, от 1=0 (до начала лечения) до конечного времени (последней количественной оценки концентрации в плазме);

АиС(_{бесконечное}): площадь, под кривой концентрации в плазме в зависимости от времени, от 1=0 до 1=бесконечности.

В табл. 15 представлены фармакокинетические параметры после введения вагинальных таблеток и овулей, содержащих 12,5 мг рифаксимина.

Таблица 15

Препараты	Фармакокинетические параметры
1гш«(час)	Стах (НГ/МЛ)	АиСщц; последнее) (нг/мл)	А11С(5есконечное) (нг/мл-ч)
Овули	2	6,06±5,38	26,74±28,31	20,57 (П=2)
Таблетки	1	1,48±0,8	2,12±1,08	Ν/С

Пример 9. Определение эффективности композиций рифаксимина в виде овулей и вагинальных таблеток на животной модели инфекции.

Эффективность вагинальных композиций в виде таблеток и овулей, содержащих рифаксимин, оценивали на животной модели персистирующей бактериальной инфекции у кроликов.

Модель вагинальной инфекции индуцировали посредством заражения Сагйпсгс11а ναβίηαΐίδ. выделенных у женщин, пораженных бактериальным вагинозом. Бактериальные штаммы выращивали на агаре с бычьими эритроцитами при 37°С при добавлении питательной добавки Э1ЕСО-С и хранили в контролируемой атмосфере 5%-ного СО₂ в течение 24-48 ч.

Для разработки модели инфекции на животных использовали новозеландских кроликов (Огус1о1адиз сишсойз), имеющих массу, составляющую от 2 до 3 кг.

Животных анестезировали посредством введения внутримышечным путем смеси кетамина (30 мг/кг) и ксилазина (2 мг/кг) как в момент заражения, так и в момент введения рифаксимина в виде таблеток или овулей.

Перед заражением животных обрабатывали 1 мл 10%-ного раствора энрофлоксацина для уменьшения количества эндогенных молочнокислых бактерий и для содействия росту возбудителя заболевания. Инфекцию вызывали посредством инокуляции во влагалища животных 1 мл стерильного физиологического раствора, содержащего 10^6-7 КОЕ (колониеобразующих единиц) СагйпсгсПа уадшайз при использовании тефлонового катетера размером 22-240. Присутствие О. уадшайз у животных контролировали перед инокуляцией и через 24 и 48 ч после инокуляции.

Животных инокулировали дважды и трижды с интервалами в трое суток. Через 14 суток после последней инокуляции всех животных обрабатывали 1 мл 10%-ного раствора энрофлоксацина для проверки чувствительности модели к антибиотикам. Лечение способствовало излечению от инфекции, тем самым подтверждая, что модель может быть использована для оценки эффективности антибиотиков, вводимых посредством интравагинального пути.

Присутствие О. уадлгаПз контролировали по вагинальному секрету через 1, 2, 4, 10 и 14 суток после последней инокуляции, помещая вагинальные секреты на чашки с агаром с бычьими эритроцитами и

- 18 025047 питательной добавкой ЭГРСО-С и культивируя их при 37°С в течение 48 ч. Присутствие О. уащпаЮ контролировали с помощью морфологической идентификации при микроскопировании (1000х) и окраски по Граму.

Животных с персистирующей инфекцией затем лечили таблетками и овулями, содержащими рифаксимин в количествах 1,5, 3, 6 и 12,5 мг.

Композиции в форме таблеток, содержащих рифаксимин, для исследований на животных получали согласно примеру 1, где долю эксципиентов пропорционально уменьшают, чтобы получить композиции с различными количествами рифаксимина.

Овули для исследований на животных получали согласно примеру 5, композиция ОУ-2, где количество эксципиентов пропорционально уменьшали, чтобы получить композиции с различными количествами рифаксимина.

Содержащий рифаксимин вагинальный овуль или таблетку вводили во влагалище и в случае вагинальных таблеток вводили 1 мл физиологического раствора при 37°С для облегчения распада таблетки. Никакого побочного действия не наблюдали во время лечения.

Через трое и семь суток после окончания лечения рифаксимином оценивали присутствие Оатйпеге11а уащпаПх по вагинальным секретам, как описано выше.

Результаты для вагинальных секретов считали положительными, если насчитывали 10 или более колоний, а наличие влагалищных отделений с неприятным запахом служило клиническим проявлением текущей инфекции.

Эффективность вагинальных таблеток, полученных, как в примере 1, с различными дозами рифаксимина, выраженная в виде процента подавления инфекции, вызванной ОатйпетеИа 8рр. у кроликов, представлена в табл. 16.

Таблица 16

Количество животных	Доза рифаксимина (мг)	Подавление(%,
Через 3 суток	Через 7 суток
6	0	0	0
8	1,5	88	100
8	3	63	100
8	6	88	100
12	12,5	100	100

Эффективность вагинальных овулей, полученных, как в примере 4, с различными дозами рифаксимина, при подавлении персистирующей инфекции, вызванной ОатйпетеИа 8рр., у кроликов выражена в виде процента подавления и представлена в табл. 17.

Таблица 17

Количество животных	Доза рифаксимина (мг)	Подавление(%)
Через 3 суток	Через 7 суток
6	0	0	0
8	1,5	100	100
8	3	88	100
8	6	88	100
12	12,5	100	100

Анализ кроликов, подвергавшихся лечению рифаксимином, был отрицательным через 7 суток после окончания лечения, тогда как кролики, не получавшие лечения (контрольные кролики), оставались инфицированными.

Также после лечения исчезли все клинические проявления.

Пример 10. Определение системной абсорбции, местной и системной переносимости в фармакокинетическом исследовании (фаза Ι клинических испытаний) вагинальных таблеток рифаксимина.

Фазу I на здоровых добровольцах проводят для оценки возможной системной абсорбции и местной и системной переносимости вагинальных таблеток рифаксимина после однократного введения посредством вагинального пути.

Однократную дозу 100 мг рифаксимина, содержащуюся в вагинальной таблетке, полученной, как описано в примере 2, вводили 24 здоровым добровольцам в возрасте от 18 до 50 лет.

Образцы крови отбирали у каждого субъекта (8) перед введением (момент времени 0) и после введения, а именно через 30 мин, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16 и 24 ч, однократной дозы 100 мг рифаксимина, содержащейся в вагинальной таблетке. Образцы анализировали посредством жидкостной хроматографии, оснащенной масс-спектрометрическим детектором, с нижним пределом количественного определения (ЪЬОО) концентрации рифаксимина 0,5 нг/мл.

Все концентрации рифаксимина в плазме в различные моменты времени у исследуемых субъектов, как оказалось, были ниже аналитического предела обнаружения.

Пример 11. Определение переносимости после введения вагинальных таблеток рифаксимина.

В I фазе исследования также оценивали местную и системную переносимость на 24 здоровых добровольцах после однократного введения вагинальной таблетки, содержащей 100 мг рифаксимина.

- 19 025047

Ни у одного из субъектов не проявлялось вагинального зуда или боли в различные моменты времени после введения, что, таким образом, подтверждает хорошую местную переносимость. Только у одного добровольца появилась легкая вагинальная боль, самопроизвольно прекратившаяся несколько часов спустя.

Для оценки системной переносимости контролировали основные физиологические показатели, такие как ЭКГ (электрокардиограмма), биохимические параметры крови и мочи и побочные эффекты, о которых сообщали добровольцы. Отсутствие определяемых системных концентраций рифаксимина и системных симптомов указывает на хорошую переносимость вагинальной таблетки, содержащей 100 мг рифаксимина.

Пример 12. Лечение бактериального вагиноза вагинальными таблетками рифаксимина.

В примере описана фаза II клинических испытаний, проводимых на 114 пациентах, пораженных бактериальным вагинозом, небеременных, в возрасте от 18 до 50 лет.

Диагноз бактериальный вагиноз ставили на основании критериев Амселя, когда по меньшей мере три критерия из четырех должны быть положительными, и по количеству баллов по шкале Ньюджента, когда число баллов выше четырех указывает на присутствие патогенных вагинальных бактерий.

Целями испытания являлась оценка излечения от бактериального вагиноза как на основании критериев Амселя (индекс Амселя менее 3), так и на основании количества баллов по шкале Ньюджента (индекс Ньюджента менее 4) через 7-10 суток после окончания терапии.

Вторичными целями испытания являлось излечение, оцениваемое по отдельности согласно критериям Амселя и количеству баллов по шкале Ньюджента при первом контрольном визите (У3), поддержание здорового состояния при втором контрольном визите (У4) и оценка состава вагинальной микробиоты посредством ПЦР и ПЦР-ДГГЭ.

В частности, пациентов, пораженных бактериальным вагинозом и не пораженных сопутствующими вирусными, протозойными и грибковыми вагинальными инфекциями, относили к одной из следующих лечебных групп, используя процедуру централизованной рандомизации и двойной слепой дизайн эксперимента.

Группа А: 21 пациент, получающий вагинальную таблетку рифаксимина, содержащую 100 мг рифаксимина, полученную согласно примеру 2, один раз в сутки в течение пяти суток вечером.

Группа Б: 23 пациента, получающих вагинальную таблетку рифаксимина, содержащую 25 мг рифаксимина, полученную согласно примеру 1, один раз в сутки в течение пяти суток вечером.

Группа В: 19 пациентов, получающих вагинальную таблетку рифаксимина, содержащую 100 мг рифаксимина, полученную согласно примеру 2, один раз в сутки в течение двух суток вечером плюс вагинальную таблетку плацебо один раз в сутки в течение оставшихся трех суток вечером.

Группа Г: 22 пациента, получающие таблетку плацебо, полученную согласно примеру 1, где количество рифаксимина заменено моногидратом лактозы, один раз в сутки в течение пяти суток вечером.

Исследование включало скрининговый визит (У1), за которым следовал рандомизационный визит через семь суток (У2), первый контрольный визит через 7-10 суток после окончания терапии (У3) и второй и завершающий контрольный визит через 28-35 суток после окончания терапии (У4). Оценку достижения первичной цели проводили во время визита У3, и оценку достижения вторичных целей проводили во время второго и завершающего визита (У4). В табл. 18 представлен процент излечения от заболевания при визите У3 на основании обоих критериев, а именно клинического (Амселя) и микробиологического (Ньюджента).

Таблица 18

Излечение от заболевания при визите λ/З на основании обоих критериев, клинического (Амселя) и микробиологического (Ньюджента)
Группа	А	Б	В	Г
Вводимая доза	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг х 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х 2 суток	Плацебо
Вылеченные пациенты (%)	25,9	48,0	36,0	19,2

Излечение, оцениваемое на основании клинического критерия Амселя при визите У3, представлено в табл. 19.

Таблица 19

Излечение от заболевания при визите М3 на основании клинического критерия оценки (Амселя)
Группа	А	Б	В	Г
Вводимая доза	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг х 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х 2 суток	Плацебо

Вылеченные	66,7	80,0	72,0	42,3
пациенты (%)

- 20 025047

Излечение оценивали на основании количества баллов по шкале Ньюджента при использовании окрашенного по Граму препарата и посредством оценки количественного соотношения между молочнокислыми бактериями и другими бактериями, такими как грамвариабельные или грамотрицательные коккобациллы, грамвариабельные изогнутые бациллы.

В табл. 20 представлены значения, полученные в различных группах пациентов, получающих лечение, на основании критериев Ньюджента.

Таблица 20

Излечение от заболевания при визите ν3 на основании микробиологического критерия оценки (Ньюджента)
Г руппа	А	Б	В	Г
Вводимая доза	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг χ 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг χ 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг χ 2 суток	Плацебо
Вылеченные пациенты (%)	25,9	48,0	36,0	19,2

Поддержание здорового состояния оценивали при четвертом визите У4. В табл. 21 представлен процент излечения от заболевания при визите Υ4.

Таблица 21

Излечение от заболевания при визите У4 на основании обоих критериев, клинического (Амселя) и микробиологического (Ньюджента)
Группа	А	Б	В	Г
Вводимая доза	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг χ 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг χ 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг χ 2 суток	Плацебо
Вылеченные пациенты (%)	14,8	28,0	4,0	7,7

Таблица 22

Излечение от заболевания при визите У4 на основании обоих критериев, клинического (Амселя) и микробиологического (Ньюджента) у пациентов, страдающих от первого эпизода или рецидива бактериального вагиноза
Г руппа	А	Б	В	Г
Вводимая доза	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг χ 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг χ 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг χ 2 суток	Плацебо

Излечение пациентов, страдающих от первого эпизода бактериального вагиноза (%)	14,3	41,7	25,0	21,4
Излечение пациентов после рецидива бактериального вагиноза (%)	38,5	53,8	46,2	16,7

Определение побочных явлений проводили путем оценки как местных, так и системных эффектов у пациентов, применяющих таблетки рифаксимина.

Побочные явления, о которых сообщали пациенты, регистрировали, и наиболее частым из них был связанный с приемом рифаксимина вульвовагинальный зуд и жжение.

В табл. 23 представлено процентное отношение пациентов, принадлежащих к различным лечебным группам, сообщивших о побочных явлениях, как системных, так и местных, связанных с приемом рифаксимина вульвовагинальном зуде и жжении.

- 21 025047

Таблица 23

Частота побочных явлений
Г руппа	А	Б	В	Г
Вводимая доза	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг х 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х 2 суток	Плацебо
Пациенты с побочными явлениями (%)	35,7	34,6	7,7	46,0
Пациенты с вульвовагинальным зудом (%)	25,0	19,2	3,8	19,2
Пациенты с вульвовагинальным жжением (%)	3,6	19,2	3,8	30,8

Не было продемонстрировано никаких случаев вульвовагинального кандидоза, связанного с приемом рифаксимина, во время лечения ни в одной из лечебных групп.

Пример 13. Оценка пациентов, демонстрирующих снижение числа баллов на 3 или более по шкале Ньюджента при визите по окончании лечения (У3) по сравнению с визитом до начала терапии.

Пациенты, включенные в клиническое испытание и принадлежащие к лечебным группам А, Б, В и Г, как описано в примере 12, демонстрировали при визите до начала терапии количество баллов по шкале Ньюджента от 7 до 10.

В табл. 24 представлено число и процентное отношение пациентов, которые при визите по окончании терапии демонстрировали снижение количества баллов по шкале Ньюджента на 3 или более.

Таблица 24

Снижение количества баллов по шкале Ньюджента на 3 или более при визите УЗ
Г руппа	А	Б	В	Г
Вводимая доза	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг х 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х 2 суток	Плацебо
Пациенты со сниженным количеством баллов по шкале Ньюджента на 3 или более (%)	52,4	65,2	36,9	18,2

Пример 14. Оценка пациентов, демонстрирующих снижение числа баллов на 3 или более по шкале Ньюджента при визите по окончании лечения (У3) по сравнению с визитом до начала терапии (У1).

Пациенты, включенные в клиническое испытание и принадлежащие к лечебным группам А, Б, В и Г, как описано в примере 12, демонстрировали при визите до начала терапии количество баллов по шкале Ньюджента от 7 до 10.

В табл. 25 представлено число и процентное отношение пациентов, которые при визите по окончании терапии демонстрировали снижение количества баллов по шкале Ньюджента на 5 или более.

Таблица 25

Снижение количества баллов по шкале Ньюджента на 5 или более при визите ν3
Группа	А	Б	В	Г
Вводимая доза	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг х 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х 2 суток	Плацебо
Пациенты со сниженным количеством баллов по шкале Ньюджента на 5 или более (%)	28,6	47,8	26,3	0,1

Пример 15. Оценка пациентов, демонстрирующих снижение числа баллов на 8 или более по шкале Ньюджента при визите по окончании лечения (У3) по сравнению с визитом до начала терапии (У1).

Пациенты, включенные в клиническое испытание и принадлежащие к лечебным группам А, Б, В и Г, как описано в примере 12, демонстрировали при визите до начала терапии количество баллов по шкале Ньюджента от 7 до 10.

В табл. 26 представлено число и процентное отношение пациентов, которые при визите по окончании терапии демонстрировали снижение количества баллов по шкале Ньюджента на 8 или более.

- 22 025047

Таблица 26

Снижение количества баллов по шкале Ньюджента на 8 или более при визите ν3
Группа	А	Б	В	Г
Вводимая доза	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг χ 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг χ 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг χ 2 суток	Плацебо
Пациенты со сниженным количеством баллов по шкале Ньюджента на 8 или более (%)	14,29	17,39	15,79	0

Пример 16. Определение пациентов, не реагирующих на терапию вагинальными таблетками, содержащими рифаксимин.

Пациенты, включенные в клиническое исследование и принадлежащие к лечебным группам А, Б, В и Г, как описано в примере 12, демонстрировали при визите до начала терапии количество баллов по шкале Ньюджента от 7 до 10.

В табл. 27 представлено число и процентное отношение пациентов, которые при визите по окончании терапии не реагировали на саму терапию, обнаруживая снижение количества баллов по шкале Ньюджента на 0 пунктов, или демонстрировали усугубление заболевания, соответственно обнаруживая увеличение количества баллов по шкале Ньюджента.

Таблица 27

Снижение количества баллов по шкале Ньюджента на величину меньшую или равную 0 при визите 1/3
Г руппа	А	Б	В	Г
Вводимая доза	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг χ 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг χ 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг χ 2 суток	Плацебо
Пациенты со сниженным количеством баллов по шкале Ньюджента на величину меньшую или равную 0 (%)	9,52	17,39	36,84	68,18

Пример 17. Определение состава вагинальной микробиоты с помощью метода количественной ПЦР в режиме реального времени при визитах У1 и У3.

Во время клинического испытания, описанного в примере 12, собирали образцы вагинальных смывов и определяли состав вагинальной микробиоты посредством количественной ПЦР в режиме реального времени.

С помощью ПЦР в режиме реального времени образцы ДНК амплифицируют родо- и/или видоспецифическими праймерами, мишенью которых является бактериальный ген 168 рРНК или участок 168238 рРНК.

В частности, использовали специфические зонды для бактерий рода Ьас1оЬасШи5, для ОагбпегеПа уаЦпаШ, для А1ороЬшт, для Ргеуо1е11а и для УеШопе11а, поскольку они представляют собой основные группы бактерий, страдающих от изменений в случае бактериального вагиноза.

В табл. 28 представлены значения ПЦР в режиме реального времени, относящиеся к родам и видам бактерий, измеренные в вагинальных смывах женщин, принадлежащих к различным лечебным группам, выраженные в нг всей ДНК-мишени/мкг геномной ДНК, для видов микроорганизмов, анализируемых в отношении каждой группы при визите У3, по сравнению с визитом У1.

- 23 025047

Таблица 28

с с >1 о. 1_	Доза	Визит	ДНК-мишень/геномная ДНК содержимом (нг/мкг, (среднее отклонение	в вагинальном ± 30 (стандартное »
Еас/о- ЬасШиз	Сагс/ле- геИа уадтаНз	Αίορο- Ыит	Ргеуо(е11а	УеШопеИа
А	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х 5 дней	VI'1»	1.683Е+01 + 1.695Е+00	3.492Е+01 + 7.994Е+00	9.307Е+01 + 7.086Е+00	1.880Е+01 + 3.182Е+00	4.128Е-02 + 1,341Е-02
73(1>	2.009Е+01 ± 2.885Е+00	2.356Е+01 ± 3.386Е+00	6.146Е+01 ± 3.623Е+00	1,220Е+01 ± 1,324Е+00	7,807Е-03 ± 4.069Е-03
Б	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг х 5 дней	νι<2>	1,006Е+01 ± 6.863Е+01	1.194Е+02 ± 1.393Е+01	1.082Е+02 ± 1.388Е+01	1,847Е+01 ± 1 308Е+00	3.492Е-02 ± 1,118Е-02
ν3<2>	3.378Е+01 + 4.434Е+00	6.626Е+01 + 1.312Е+01	4.880Е+01 + 1.444Е+01	3,712Е+00 + 8.556Е-01	1,761 Е-02 + 8,451 Е-03
В	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х2 дня	ν·|<3>	1.266Е+01 + 1,378Е+00	6.674Е+01 + 9.774Е+00	1.704Е+02 + 2.164Е+01	1,791 Е+01 + 2,802Е+00	2.214Е-01 + 5.992Е-02
ν3<3>	2.536Е+01 ± 2,110Е+00	2.944Е+01 ± 6.199Е+00	5.999Е+01 ± 1.260Е+01	7.248Е+00 ± 2,176Е+00	5.642Е-03 ± 2,001 Е-03
Г	Плацебо	νι(4)	1,488Е+01 ± 1.482Е+00	1.272Е+02 ± 1.406Е+01	1.210Е+02 ± 1.943Е+01	1,729Е+01 ± 3,359Е+00	1,878Е-02 ± 3,581 Е-03
ν3№	9,040Е+00 + 1.039Е+00	6.674Е+01 + 8.032Е+00	5,371 Е+01 + 1.015Е+01	1,292Е+01 + 2.537Е+00	4.826Е-02 + 1,600Е-02

(1) 27 пациентов; (2) 25 пациентов; (3) 25 пациентов; (4) 25 пациентов.

При сравнении значений при визите У1 со значениями при визите У4 результаты показывают, что количества всех патогенных видов снижались, тогда как при том же сравнении количество бактерий рода Ьас(оЪасШи8 возрастало. В частности, для группы Б эти различия были статистически значимы все, за исключением бактерий рода УсШоисПа.

Пример 18. Определение состава вагинальной микробиоты с помощью количественной ПЦР в режиме реального времени при визитах У1 и У4 после лечения вагинальными таблетками рифаксимина.

Состав вагинальной микробиоты определяли посредством метода количественной ПЦР в режиме реального времени у пациентов, сохраняющих состояние выздоровления при визите У4, через 30-40 суток после окончания терапии, и образцы ДНК, амплифицированные родо- и/или видоспецифическими праймерами, оценивали посредством метода ПЦР в режиме реального времени.

В частности, использовали специфические зонды для бактерий рода Ьас(оЪасШи8, для ОагПисгсПа уадшаНк, А(ороЪшт, Ргсуо1с11а и УсШоисПа, поскольку они представляют собой основные группы бактерий, страдающих от изменений в случае бактериального вагиноза.

В табл. 29 представлены значения ПЦР в режиме реального времени, относящиеся к родам и видам бактерий-мишеней, измеренные в вагинальных смывах женщин, принадлежащих к различным лечебным группам, выраженные в нг всей ДНК-мишени/мкг геномной ДНК, для видов микроорганизмов, анализируемых в отношении каждой группы при визите У4, в сравнении со значениями, наблюдаемыми при визите У1 у всех пациентов, получающих лечение.

Таблица 29

Группа	Доза	Визит	ДНК-мишень/геномная ДНК содержимом (нг/мкг) (среднее отклонение	в вагинальном ;± 30 (стандартное )
ЕасГо- ЬасШиз	Сагс1пе- геПа уад/паНз	Αίορο- Ыит	Ргеуо(е11а	УеИктеИа
А	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг х 5 дней	VI'1'	1.683Е+01 ± 1.695Е+00	3.492Е+01 ± 7.994Е+00	9.307Е+01 ± 7.086Е+00	1.880Е+01 ± 3.182Е+00	4.128Е-02 ± 1,341 Е-02
У4‘2’	2,130Е+01 ± 2.152Е+00	3,067Е+00 ± 2.904Е-01	5,348Е+00 ± 5.819Е-01	4.296Е-02 ± 1.232Е-02	Ο,ΟΟΟΕ-ΟΟ ± Ο,ΟΟΟΕ-ΟΟ
Б	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг х 5 дней	VI'3'	1.006Е+01 + 6.863Е+01	1.194Е+02 + 1.393Е+01	1.082Е+02 + 1.388Е+01	1.847Е+01 + 1.308Е+00	3.492Е-02 + 1.118Е-02
У4|4‘	3,957Е+01	1.757Е+01	2.825Е+01	2.345Е+00	Ο,ΟΟΟΕ-ΟΟ

- 24 025047

			+ 9.400Ε+00	+ 2,908Ε+00	+ 2.719Ε+00	+ 2,348Ε-01	+ Ο,ΟΟΟΕ-ΟΟ
В	Рифакоимин 1 таблетка 100 мг х2 дня	¥1<з>	1.266Ε+01 + 1.378Ε+00	6.674Ε+01 + 9.774Ε+00	1.704Ε+02 + 2.164Ε+01	1.791Ε+01 + 2.802Ε+00	2.214Ε-Ο1 + 5.992Ε-Ο2
У4<6>	8.959Ε+00 ± 1.725Ε+00	7.509Ε+01 ± 1.295Ε+01	1.399Ε+02 ± 1.708Ε+01	5.400Ε+01 ± 1.003Ε+01	2.748Ε-Ο1 ± 1.020Ε-00
г	Плацебо	νι<’>	1.488Ε+01 + 1.482Ε+00	1.272Ε+02 + 1.406Ε+01	1 210Ε+02 + 1.943Ε+01	1.729Ε+01 + 3.359Ε+00	1.878Ε-Ο2 + 3,581 Ε-03
У4|й|	1.408Ε+01 + 9.778Ε-01	6.095Ε+01 + 4,117Ε+00	2.537Ε+01 + 1.323Ε+00	1.444Ε-01 + 3,709Ε-02	Ο,ΟΟΟΕ-ΟΟ + Ο,ΟΟΟΕ-ΟΟ

(1) 27 пациентов; (2) 6 пациентов; (3) 25 пациентов; (4) 12 пациентов; (5) 25 пациентов; (6) 9 пациентов; (7) 9 пациентов; (8) 4 пациента.

Пример 19. Определение состава вагинальной микробиоты с помощью ПЦР-ДГГЭ после лечения препаратами рифаксимина.

Во время клинического испытания отбирали образцы вагинальных смывов и определяли состав вагинальной микробиоты посредством метода ПЦР-ДГГЭ, делающего возможной идентификацию различной бактериальной ДНК с помощью электрофоретического способа и амплификацию ДНК с универсальными праймерами для участка 168 рРНК бактерий. Результат этого метода представлял собой последовательность видимых полос, называемых кластерами, где каждый из них является характерным для ДНК вида бактерий, присутствующего в рассматриваемом образце.

Анализ кластеров профилей ДГГЭ образцов, проводимый при использовании программного обеспечения РРОиеЧ (Βίο-Каб), дает информацию, касающуюся сходства двух образцов. В конкретном случае, когда излечение представляется как уменьшение числа патогенных видов, положительным моментом является то, что образец, взятый у пациента после лечения, совершенно отличается от образца, взятого у того же пациента, до лечения.

Анализ проводили с вагинальными образцами при визитах У1, У3 и У4 для четырех групп А, Б, В и Г пациентов, получающих лечение. В табл. 30 представлено процентное отношение пациентов с кластеризованными профилями.

Таблица 30

Процентное отношение пациентов с кластеризованными профилями
Г руппа	А	Б	В	г
Вводимая доза	Рифакоимин 1 таблетка 100 мг х 5 суток	Рифакоимин 1 таблетка 25 мг х 5 суток	Рифакоимин 1 таблетка 100 мг х 2 суток	Плацебо
VI относительно \/3 (%)	37	24	28	56
VI относительно М3 относительно \/4 (%)	0	0	11	50

Результаты, представленные в табл. 30, показывают, что существует высокая вариабельность в бактериальной популяции, идентифицируемой при визитах У1, У3 и У4 у пациентов, получающих лечение препаратами рифаксимина, таким образом демонстрирующая, что вагинальная микробиота значительно видоизменяется при фармакологическом действии рифаксимина в концентрациях, высвобождаемых вводимыми препаратами.

В частности, оказывается, что препарат, вводимый пациентам группы Б, является наиболее эффективным при визите У3.

Действие препаратов рифаксимина дополнительно подтверждалось после визита У4, когда, в частности, в группах А и Б бактериальная популяция полностью изменяется.

Чтобы оценить фармакологическое действие исследуемых препаратов рифаксимина, различные лечебные группы сравнивали с помощью так называемых индексов сходства (81). Анализ состоит в оценке сходства электрофоретических профилей, высчитанных на основании коэффициента корреляции Пирсона. В исследуемом случае 81 показывает процент сходства между двумя или более профилями ДГГЭ, принадлежащими одной и той же женщине во время разных визитов.

Таблица 31

Индекс сходства
Группа	А	Б	В	Г
Вводимая доза	Рифакоимин 1 таблетка 100 мг х 5 суток	Рифакоимин 1 таблетка 25 мг х 5 суток	Рифакоимин 1 таблетка 100 мг х 2 суток	Плацебо

νι-ν3	61,6	48,4	54,0	75,4
νΐΛ/4	52,1	40,0	47,1	57,6
ν3-ν4	66,8	62,1	42,8	58,7
νΐ-ν3Λ/4	50,8	36,4	37,6	56,7

- 25 025047

Результаты в табл. 31 показывают, что в случае сравнения У1-У3 индекс сходства групп, получающих лечение препаратами рифаксимина, значительно отличается от индекса группы, получающей плацебо.

Другим принятым критерием оценки образцов является так называемый индекс видового богатства (К1). Этот критерий, основанный на полосах каждого профиля ДГГЭ, показывает меру разнообразия бактериальной популяции, которая является признаком заболевания при появлении новых патогенных видов. В табл. 32 представлены средние значения К1, измеренные при визитах У1 и У3.

Таблица 32

Индекс видового богатства
Группа	А	Б	В	Г
Вводимая доза	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг χ 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 25 мг χ 5 суток	Рифаксимин 1 таблетка 100 мг χ 2 суток	Плацебо
VI	13,5	14,0	15,4	13,3
Υ2	10,9	10,7	12,2	13,9

Результаты в табл. 32 показывают, что профили вагинальной микробиоты становятся менее разнообразными в группах, получающих лечение препаратами рифаксимина, по сравнению с группой, получающей плацебо.

Claims (16)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Вагинальная таблетка, содержащая:

   а) гранулы рифаксимина, содержащие рифаксимин в количестве от 2,5 до 200 мг и один или более чем один интрагранулярный эксципиент, включающий по меньшей мере одно связующее вещество; и

   б) два или более экстрагранулярных эксципиента, включающих по меньшей мере два разрыхлителя, представляющих собой смесь кросповидона и силиката кальция.
2. 2. Вагинальная таблетка по п.1, дополнительно покрытая пленкообразующим покрытием.
3. 3. Вагинальная таблетка по п.1, содержащая рифаксимин в количестве от 2,5 до 100 мг.
4. 4. Вагинальная таблетка по п.1, дополнительно содержащая один или более разрыхлителей, выбранных из крахмалгликолята натрия, прежелатинизированного крахмала, карбоксиметилцеллюлозы натрия (кармеллоза натрия), сшитой карбоксиметилцеллюлозы натрия (кроскармеллоза натрия), силикатов щелочных и щелочно-земельных металлов и их смеси.
5. 5. Вагинальная таблетка по п.1, где интрагранулярные эксципиенты дополнительно включают по меньшей мере одно вещество из следующих: разбавитель и смазывающее вещество; экстрагранулярные эксципиенты дополнительно включают по меньшей мере одно вещество из следующих: связующее вещество, разбавитель и смазывающее вещество, биоадгезивные агенты, консерванты, буферные агенты, антисептические агенты и натуральный ароматизатор.
6. 6. Вагинальная таблетка по п.5, где разбавитель выбран из группы, состоящей из целлюлозы, микрокристаллической целлюлозы, гидроксипропилметилцеллюлозы, фосфата кальция, крахмала, каолина, дигидрата сульфата кальция, карбоната кальция, безводной или гидратированной лактозы, сахарозы, маннита, полисахаридов, глюканов, ксилоглюкана и их смеси;

   связующее вещество выбрано из группы, содержащей кукурузный крахмал, прежелатинизированный крахмал, гуммиарабик, лактозу, мальтодекстрин, сополимер 1-винил-2-пирролидона и винилацетата (коповидон), сахарозу и их смеси;

   смазывающее вещество выбрано из группы, состоящей из глицерил дибегената, стеаратов кальция или магния, алюминия, стеарилфумарата натрия, гидрогенизированных масел, растительных масел, пальмитиновой кислоты, спирта, крахмала, минеральных масел, полиэтиленгликоля, лаурилсульфата натрия, талька, глицеридов, бензоата натрия и их смеси.
7. 7. Вагинальная таблетка по п.2, содержащая рифаксимин 25 мг;

   стеарат магния 15 мг; коповидон 22,5 мг; кросповидон 36 мг; силикат кальция 150 мг; лактозу 951,5 мг;

   пленкообразующее покрытие 48 мг.
8. 8. Вагинальная таблетка по п.2, содержащая рифаксимин 100 мг;

   стеарат магния 15 мг; коповидон 22,5 мг; кросповидон 36 мг;

   - 26 025047 силикат кальция 150 мг; лактозу 876,5 мг;

   пленкообразующее покрытие 48 мг.
9. 9. Вагинальная таблетка по п.1, содержащая рифаксимин в полиморфной или аморфной форме.
10. 10. Способ приготовления вагинальной таблетки, содержащей рифаксимин в количестве от 2,5 до 200 мг и один или более интрагранулярный эксципиент, включающий по меньшей мере одно связующее вещество, и два или более экстрагранулярных эксципиента, включающих по меньшей мере два разрыхлителя, представляющих собой смесь кросповидона и силиката кальция, где указанный способ включает стадии образования гранул рифаксимина посредством сухого гранулирования смеси рифаксимина и одного или более интрагранулярных эксципиентов;

    образования таблетки посредством первоначального смешивания, а затем прессования гранул рифаксимина с двумя или более экстрагранулярными эксципиентами, включающими два или более разрыхлителя.
11. 11. Вагинальная таблетка по п.1 для лечения или предупреждения бактериальной вагинальной инфекции.
12. 12. Вагинальная таблетка по п.11, где вагинальная инфекция вызвана бактериями, выбранными из группы, состоящей из ОагбпегеИа уадтаП^ Мусор1а§та Ъош1П18, Вае1сгснбс5. АЮроЬшт уадша1е, Рер1о81гер1ососси8, МоЬйиисик, Ргеуо1е11а, УеШоие11а и их смесей.
13. 13. Вагинальная таблетка по п.11 для снижения баллов по шкале Ньюджента и критериев Амселя у пациентов, пораженных бактериальным вагинозом.
14. 14. Способ лечения бактериального вагиноза, включающий стадию введения вагинальной таблетки по любому из пп.1-9 субъекту в дозе рифаксимина менее 200 мг/сутки с курсом лечения менее недели.
15. 15. Способ по п.14, где общее количество рифаксимина на курс лечения составляет менее 700 мг.
16. 16. Способ по п.14, где вагинальная таблетка содержит от 12,5 до 100 мг рифаксимина.