EA024109B1 - Ингибиторы протеинкиназ - Google Patents

Ингибиторы протеинкиназ Download PDF

Info

Publication number
EA024109B1
EA024109B1 EA201001619A EA201001619A EA024109B1 EA 024109 B1 EA024109 B1 EA 024109B1 EA 201001619 A EA201001619 A EA 201001619A EA 201001619 A EA201001619 A EA 201001619A EA 024109 B1 EA024109 B1 EA 024109B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
compounds
group
alkyl
cells
Prior art date
Application number
EA201001619A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201001619A1 (ru
Inventor
Шон М. Бауэр
Чжаочжон Ц. Цзя
Йонхон Сон
Цин Сюй
Мукунд Мехротра
Джек У. Роуз
Волинь Хуан
Чандрасекар Венкатарамани
Анджали Панди
Original Assignee
Портола Фармасьютиклз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Портола Фармасьютиклз, Инк. filed Critical Портола Фармасьютиклз, Инк.
Publication of EA201001619A1 publication Critical patent/EA201001619A1/ru
Publication of EA024109B1 publication Critical patent/EA024109B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/48—Two nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым таутомерам, солям или стереоизомерам, которые являются ингибиторами syk и/или JAK-киназы. Настоящее изобретение также относится к промежуточным соединениям, используемым для получения таких соединений, к получению таких соединений, к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, к способам ингибирования активности syk и/или JAK-киназы, к способам ингибирования агрегации тромбоцитов и к способам предотвращения или лечения ряда состояний, по меньшей мере частично, опосредованных активностью syk и/или JAK-киназы, таких как нежелательный тромбоз и неходжкинская лимфома.

Description

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым таутомерам, солям или стереоизомерам, которые являются ингибиторами §ук и/или 1АК-киназы. Настоящее изобретение также относится к промежуточным соединениям, используемым для получения таких соединений, к получению таких соединений, к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, к способам ингибирования активности §ук и/или 1АК-киназы, к способам ингибирования агрегации тромбоцитов и к способам предотвращения или лечения ряда состояний, по меньшей мере частично, опосредованных активностью 8ук и/или 1АК-киназы, таких как нежелательный тромбоз и неходжкинская лимфома.
Р1
(I)
Перекрестные ссылки на родственные заявки
По данной заявке заявляется приоритет предварительной заявки на патент США № 61120348, поданной 5 декабря 2008 г.; предварительной заявки на патент США № 61120344, поданной 5 декабря 2008 г.; предварительной заявки на патент США № 61045406, поданной 16 апреля 2008 г.; и предварительной заявки на патент США № 61045417, поданной 16 апреля 2008 г.; полные раскрытия которых включены в данный документ путем ссылки.
Предпосылки создания изобретения Область техники, к которой относится изобретение
Данное изобретение направлено на пиримидин-5-карбоксамидные соединения, которые действуют в качестве ингибиторов селезеночной тирозинкиназы (кук) и/или 1АК-киназ. Данное изобретение также направлено на фармацевтические композиции, содержащие пиримидин-5-карбоксамидные соединения, и способы применения соединений или композиций для лечения состояний, характеризующихся нежелательным тромбозом. Изобретение также направлено на способы получения соединений, описанных здесь.
Уровень техники
Протеинкиназы составляют большое семейство структурно родственных ферментов, которые являются ответственными за контроль ряда процессов сигнальной трансдукции внутри клеток (см., например, НатФе апб Напкк, Тке Ртокш Шпаке Рас1к книга, I и II, Асабетк Ргекк, Сан-Диего, Калифорния, 1995). Полагают, что протеинкиназы вследствие сохранения их структуры и каталитической функции эволюционировали из общего предкового гена. Едва не все киназы содержат схожий 250-300 аминокислотный каталитический домен. Киназы можно сгруппировать в семейства по субстратам, которые они фосфорилируют (например, белок тирозин, белки серин/треонин, липиды и т.д.). Были идентифицированы мотивы последовательностей, которые в основном соответствовали каждому из этих семейств (см., например, Напкк & Нийет, (1995), РА8ЕВ 1. 9:576-596; Кйдйоп и др., (1991), §скпсе 253:407-414; Нбек и др., (1992), Се11 70:419-429; Кип/ и др., (1993), Се11 73:585-596; Оатаа-Вийок и др., (1994), ЕМВО 1. 13:2352-2361).
Многие заболевания являются связанными с аномальными клеточными ответами, инициированными протеинкиназа-опосредованными событиями. Эти заболевания включают аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания, заболевания костей, метаболические заболевания, неврологические и нейродегенеративные заболевания, злокачественную опухоль, сердечно-сосудистые заболевания, аллергию, астму, болезнь Альцгеймера и гормоносвязанные заболевания. Вследствие этого предпринимались значительные усилия в медицинской химии для поиска ингибиторов протеинкиназ для применения в качестве терапевтических средств. Опосредованная иммунорецепторным тирозиновым активирующим мотивом (1ТАМ) передача сигналов возникает в качестве первичного события в сигнальных путях, ответственных за патологии у человека. 1ТАМ-опосредованная передача сигналов является ответственной за передачу сигналов активирования, инициируемых классическими иммунорецепторами, такими как Тклеточные рецепторы, В-клеточные рецепторы, Рс рецепторы в иммунных клетках и ОРУ! и РсуЕИа в тромбоцитах, к расположенным далее внутриклеточным молекулам, таким как кук и 2АР-70 (ИпбеткШ, Ό.Μ и Оообпбде, Н.8., Тгепбк 1ттипо1, 28:66-73, 2007).
Связывание лиганда 1ТАМ-содержащим рецептором запускает передачу сигналов, которая позволяет рекруитмент белков из семейства нерецепторных тирозинкиназ, называемых §тс семейством. Эти киназы фосфорилируют остатки тирозина в 1ТАМ последовательности, области, с которой взаимодействуют тандемные 8Н2 домены на или кук или ΖΛΡ-70.
8ук, наряду с Ζаρ-70, является членом кук семейства протеиновых тирозинкиназ. Взаимодействие кук или ΖΛΡ-70 с дифосфорилированной 1ТАМ последовательностью индуцирует конформационное изменение в киназах, которые позволяют фосфорилирование тирозина самих киназ. Фосфорилированные члены §ук семейства активируют множество расположенных ниже белков сигнальных путей, которые включают §тс гомологичный 2 (§Н2) домен, содержащий лейкоцит-специфический фосфопротеин 76 кДа (8ЬР-76), линкер активирования Т-клетки (ЬАТ) и РЬС (фосфолипаза С)у2.
Патологии у человека, приписываемые дисфункциональной 1ТАМ-опосредованной передаче сигналов, включают аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит, системная волчанка, рассеянный склероз, гемолитическая анемия, иммуно-тромбоцитопеническая пурпура, и гепарининдуцированная тромбоцитопения и артериосклероз. Интересно, что многие из вышеуказанных заболеваний, как полагают, случаются из-за поперечного связывания Рс рецепторов антителами, которые посредством кук активируют каскад передачи сигналов в тучных, базофильных и других иммунных клетках, что приводит к высвобождению клеточных медиаторов, ответственных за воспалительные реакции. Высвобождение медиаторов и продуцирование цитокинов в зависимых от стимулирования 1дЕ аллергических и воспалительных реакциях из тучных клеток и базофилов может контролироваться ингибированием тирозинкиназной активности кук (Роккк А.В. и др., !А11ег§у Сйп 1ттипо1, 118:749-755, 2006). При иммуно-тромбоцитопении, антитело-связанные тромбоциты разрушаются селезенкой посредством Рс рецеитор/ГГАМ/кук-опосредованного процесса (Стому А.Е. и др., В1ооб, 106:реферат 2165, 2005). Инду- 1 024109 цированная лекарственными средствами тромбоцитопения, вызываемая гепарин-тромбоцитарный фактор 4 - иммунными комплексами, которые активируют РеуКЛа тромбоцитов, также включает кук передачу сигналов ниже контактирования с рецептором (КеШу, М.Р., Βίοοά, 98:2442-2447, 2001).
Тромбоцитные агонисты индуцируют передачу сигналов изнутри наружу посредством интегринов, что приводит к связыванию фибриногена и агрегации тромбоцитов. Это инициирует передачу сигналов снаружи внутрь, которая порождает дополнительную стимуляцию тромбоцитов. Бук активируется в течение обеих фаз передачи сигналов посредством интегринов, и ингибирование кук, как показано, ингибирует адгезию тромбоцитов к иммобилизованным белкам (Ьате, Ό.Α. и др., Βίοοά, 93:2645-2652, 1999). Высвобождение арахидоновой кислоты и серотонина и агрегация тромбоцитов, индуцированная коллагеном, заметно ингибируются в тромбоцитах, полученных от кук дефектных мышей (Ροοίο. А. и др., ЕМВОк, 16:2333-2341, 1997). Таким образом кук-ингибиторы также могут обладать антикоагулянтным действием. Исходя из роли, которую кук играет в 1§-индуцированной активации тромбоцитов, она, вероятно, будет иметь важное значение при артериосклерозе и рестенозе. Артериосклероз является классом заболеваний, характеризующихся уплотнением и отвердеванием артериальных стенок кровеносных сосудов. Хотя все кровеносные сосуды являются восприимчивыми к этому серьезному дегенеративному состоянию, аорта и коронарные артерии, питающие сердце, подвергаются ему чаще. Артериосклероз имеет важное клиническое значение, так как он может увеличить риск сердечных приступов, инфарктов миокарда, ударов и аневризм. Традиционное лечение артериосклероза включает процедуры васкулярной реканализации в случае менее серьезной закупорки и хирургическое коронарное шунтирование для крупной закупорки. Серьезный недостаток интраваскулярных процедур заключается в том, что у значительного числа прошедших лечение индивидуумов, некоторые или все из лечившихся сосудов подвергаются рестенозу (т.е. повторно сужаются). Например, рестеноз атеросклеротической коронарной артерии после ЧТКА (чрескожной транслюминальной коронарной ангиопластики) случается в 10-50% пациентов, подвергающихся этой процедуре, и впоследствии требует либо дополнительной ангиопластики, либо обходного сосудистого шунта для коронарной артерии. Кроме того, рестеноз атеросклеротической коронарной артерии после стентирования случается в 10-20% пациентов, подвергающихся этой процедуре, и впоследствии требует повторения лечения для сохранения достаточного кровотока через пораженную артерию. Рестеноз обычно случается в относительно короткий промежуток времени, например, приблизительно меньше чем шесть месяцев, после лечения. Хотя точные гормональные и клеточное процессы, промотирующие рестеноз, не были определены, рестеноз, как полагают, частично обязан механическому повреждению стенок кровеносных сосудов, вызываемому баллонным катетером или другим интраваскулярным приспособлением. Например, процесс ЧТКА, в дополнение к открыванию закупоренной артерии, также вызывает повреждение резидентных гладкомышечных клеток (ГМК) коронарной артерии. В ответ на это повреждение слипающиеся тромбоциты, инфильтрирующие макрофаги, лейкоциты или гладкие мышцы клеток сами высвобождают клеточные факторы роста, такие как тромбоцитарный фактор роста (РИОР), с последующей пролиферацией и миграцией медиальных ГМК через внутреннюю элластичную ламину в область интимы сосуда. Дальнейшая пролиферация и гиперплазия ГМК интимы и наиболее значительно продуцирование больших количеств внеклеточного матрикса на протяжении трехшести месяцев вызывает заполнение и сужение васкулярного пространства, достаточное для значительного затруднения кровотока.
В дополнение к роли, которую кук играет в 1§-индуцированной активации тромбоцитов, кук играет очень важную роль в коллаген-опосредованной передаче сигнала. Первичным адгезивным белком, ответственным за адгезию и активирование тромбоцитов, является коллаген. Коллаген является нитевидным белком, содержащимся в фиброзных колпачках атеросклеротических бляшек, который подвергается воздействию крови во время разрушения бляшек. Коллаген функционирует, в первую очередь, путем связывания фактора фон Виллебранда, который связывает тромбоциты благодаря СР1Ь на их мембране. Коллаген функционирует, во вторую очередь, путем вовлечения двух коллагеновых рецепторов на тромбоцитах, ОРУ1 и интегрина α2β1. ОРУ1 присутствует в мембранах тромбоцитов в виде комплекса с РсКу, взаимодействие необходимо для экспрессии ОРУ1. Активирование РеуКЛа на тромбоцитах вызывает изменение формы тромбоцитов, секрецию и тромбоз. Передача сигналов посредством ОРУ1/РсКу комплекса инициируется фосфорилированием тирозина 1ТАМ домена РсКу и далее рекруитментом кук. Активирование ОРУ1 вызывает индукцию разнообразных тромбоцитарных функций, включая активирование интегринов α2β1 с получением прочной адгезии тромбоцитов, и ОР 11Ь-111а, которые опосредствуют агрегацию тромбоцитов и развитие тромбоза; секрецию тромбоцитов, позволяющей доставку воспалительных белков, таких как СП40Ь, ΚΑΝΤΕδ и ΤΟΡβ, к стенкам сосудов; и экспрессию Р-селектина, который позволяет рекруитмент лейкоцитов. Поэтому полагают, что кук-ингибиторы могут ингибировать тромботические события, опосредованные адгезией тромбоцитов, активированием и агрегацией.
Было сообщено, что фосфорилирование тирозина внутриклеточного белка (активация), индуцированное стимуляцией рецептора для антитела 1дО, РсуК, и фагоцитоз, опосредованный РсуК, значительно ингибируются в макрофагах, полученных от кук дефектной мыши (С^ο\γ1еγ. М.Т. и др., 1. Ехр. Меб., 186:1027-1039, 1997). Это предполагает то, что кук играет довольно важную роль в РсуК-опосредованном
- 2 024109 фагоцитозе макрофагами.
Также было сообщено, что антисмысловой олигонуклеотид кук подавляет ингибирование апоптоза эозинофилов, индуцированное ОМ-С8Р (Уоикей, 8. и др., 1. Е. Меб., 183:1407-1414, 1996), и показано, что 8ук является существенным для сигнала увеличения жизни эозинофилов, вызываемого ОМ-С8Р и т.п. Так как увеличение жизни эозинофилов при аллергических нарушениях, таких как астма, тесно связано с переходом заболевания в хроническую стадию, 8ук-ингибиторы также могут служить в качестве терапевтических средств для хронических эозинофильного воспаления. 8ук является важной для активирования Β-клеток посредством В-клеточного рецептора для антигена и вовлечена в метаболизм фосфатидилинозитола и увеличение концентрации внутриклеточного кальция, вызываемого стимуляцией рецептора антигена (Ни1сЬсгой, ТЕ. и др., 1. ΒίοΙ. СЬет., 267:8613-8619, 1992; и Така1а, М. и др., ЕМВО 1., 13:1341-1349, 1994). Таким образом, 8ук-ингибиторы можно использовать для контроля функционирования Β-клеток и, следовательно, можно полагать, что они могут служить в качестве терапевтических средств для антитело-связанных заболеваний.
8ук связывается с Т-клеточным рецептором для антигена, быстро подвергается фосфорилированию тирозина посредством перекрестного связывания рецептора и синергически действует на внутриклеточные сигналы, опосредованные 8гс тирозинкиназами, такими как Ьск (Сои1иге, С. и др., Ргос. Ναΐΐ. Асаб. 8с1. И8А, 91:5301-5305, 1994; и Сои1иге, С. и др., Мо1. Се11. Вю1., 14:5249-5258, 1994). 8ук присутствует в популяциях зрелых Т-клеток, таких как внутриэпителиальные γδ Т-клетки и непримированные αβ Тклетки, и, как сообщалось, являются способными фосфорилировать многочисленные компоненты ТСК каскада передачи сигналов (Ба1оиг, 8. и др., Мо1. Се11 Вю1., 17:4434-4441, 1997). Вследствие этого, 8укингибиторы могут служить в качестве агентов для ингибирования клеточного иммунитета, опосредованного Т-клеточным рецептором для антигена.
В недавних сравнительных исследованиях геномной гибридизации было установлено, что 8ук является другим геном, важным в патогенезе лимфомы из клеток мантии (ЛКМ) (СЬеп, К. и др. 1оигиа1 о! СЬшса1 Оисо1оду, 2007 А8СО Аиииа1 Меейпд Ргосеебшдк (издание на основе материалов конференции) т. 25, № 188 (20 июня, дополнение), 2007: 8056). ЛКМ представляет 5-10% от всех неходжкинских лимфом и является трудной для лечения формой лимфомы. Она среди В клеточных лимфом имеет наихудший прогноз со средней выживаемостью три года. Было сообщено, что 8ук сверхэкспресируется в ЛКМ (К1иа1б1, А., и.др., Вг. 1. Наета1о1, 2006; 132:303-316) и что 8ук опосредствует сигналы выживаемости тТОК (мишень рапамицина в клетках млекопитающих) в фолликулярных, мантийных клетках, клетках Беркитта и диффузных больших В-клетках неходжкинских лимфом (Бекеих, Ь., и др., В1ооб, 2006; 108:4156-4162).
Некоторые доказательства говорят о том, что многие В-клеточные лимфомы зависят от сигналов выживаемости, опосредованных В-клеточным рецептором (ВСК). ВСК передача сигналов индуцирует олигомеризацию рецептора и фосфорилирование 1да и β иммунорецепторных тирозиновых активирующих мотивов посредством 8КС семейства киназ. 1ТАМ фосфорилирование вызывает рекруитмент и активирование 8ук, которая инициирует расположенные ниже события и усиливает первоначальный сигнал ВСК. Показана роль тонической ВСК передачи сигналов в нормальных В-клетках и 8ук-зависимой выживаемости линии клеток неходжкинской лимфомы ίη уйго (СЬеп, Ь., и.др., В1ооб, 2006; 108:3428-3433), 8ук ингибирование является многообещающей разумной мишенью лечения определенных В-клеточных лимфом и хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) (81еГап1а ОоЬекк1, Биса Ьаигепй, РаЫо Ьоидо. Байга Сагкей, Ошкерре Беопе, ОйШаг О. ЕГгетоу, Сопкйййуе асйуайоп оГ Йе рго1еш 1угокше кшаке 8ук ш СЬгошс БутрЬосуйс Беикет1а В-се11к, В1ооб, 2007, 110, реферат 1123). Недавние данные показывают, что введение мультикиназного ингибитора, который ингибирует кук, может иметь значительную клиническую активность у ХЛЛ пациентов (РйебЬегд IV. и др., В1ооб 2008; 112(11), реферат 3).
Онкогенный потенциал селезеночной тирозинкиназы (8ук) был описан рядом разных параметров. Клинически сообщается о сверхэкспрессии 8ук в лимфоме из мантийных клеток (Кша1бц А., и др., Вг. 1. Наетай1, 2006; 132:303-316) и ТЕБ-8ук составном белке (Тгапк1оса1еб ЕТ8 Беикет1а (лейкоз с транслокацией ЕТ8)), генерированной хромосомной транслокацией (1(9;12)(ц22;р12)), которая приводит к повышенной 8ук активности и связана с миелодиспластическим синдромом (Кипо, Υ., и.др., В1ооб, 2001; 97:1050-1055). Лейкоз индуцируют у мышей посредством адаптивно перенесенных клеток костного мозга, которые экспрессирует человеческая ТЕБ-8ук ^оккшпд, Т., 1ЕМ, 2006; 203:2829-2840). Более того, в мышиных первичных клетках костного мозга, сверхэкспрессия 8ук вызывает 1Б-7 независимый рост в культуре ^оккшпд, Т., и.др., ЕЕМ, 2006; 203:2829-2840).
Интересно то, что 8ук передача сигналов по-видимому необходима для развития и выживаемости В-клеток у человека и мыши. Индуцируемое ослабление В-клеточного рецептора (Бат, К., и.др., Се11, 1997; 90:1073-1083) или 1§α (Кгаик, М., и.др., Се11, 2004; 117:787-800) вызывает гибель периферических В-клеток у мышей. Сверхэкспрессия протеиновой тирозинфосфатазы РТР-КО, которая, как известно отрицательно регулирует 8ук активность, ингибирует пролиферацию и индуцирует апоптоз у линии клеток, происходящих из неходжкинских лимфом (СЬеп, Б., и.др., В1ооб, 2006; 108:3428-3433). Наконец, Вклеточные лимфомы редко демонстрируют потерю ВСК экспрессии, и антиидиотипная терапия редко
- 3 024109 вызывает резистентность (Киррегк, К. ΝαΙ Кеу Сапсег, 2005; 5:251-262).
Включение антиген-специфического В-клеточного рецептора (ВСК) активирует многочисленные сигнальные пути, которые в итоге регулируют статус клеточного активирования, промотируя выживаемость и размножение клона. Передача сигналов через ВСК становится возможной путем ее ассоциации с двумя другими членами иммуноглобулинового суперсемейства; 1да и 1§β, каждый из которых несет иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ΙΤΑΜ) Питаа. Непйпкк и др. Аппи Кеу 1ттипо1 23: 415-45 (2005). ΙΤΑΜ домен непосредственно фосфорилируется Згс семейством киназ в ответ на включение ВСК. Селезеночная тирозинкиназа (Зук) стыкуется с ΙΤΑΜ и фосфорилирует его, что приводит к процессу, который усиливает киназную активность и к аутофосфорилированию Зук и фосфорилированию тирозина многочисленных субстратов, расположенных ниже по ходу сигнала (КоШ, Са11\\й/ и др. Мо1 Се11 10(5): 1057-69 (2002). Этот сигнальный путь активен в В-клетках, начиная с перехода из пров пре-В клеточную стадию развития, когда экспрессируется вновь образованный пре-ВСК. В действительности, В-клеточное развитие задерживается на про-В клеточной стадии в Зук нокаутных мышах (СЬепд, Коу1еу и др. 1995; Тигпег, Мее и др. №Циге 378(6554): 303-6 (1995). Индуцируемое ослабление Вклеточного рецептора (Ьат, КиЬп и др. Се11 90(6): 1073-83 (1997) или 1да (Кгаик, АПт/Напоу и др. Се11 117(6): 787-800 (2004) вызывает гибель периферических В-клеток у мышей. В-клетки человека вероятно также требуют Зук для пролиферации и выживания. Сверхэкспрессия протеин тирозинфосфатазы РТРКО, отрицательного регулятора Зук активности, ингибирует пролиферацию и индуцирует апоптоз в линии клеток, происходящих из неходжкинских лимфом (НХЛ) (СЬеп, 1и5/с/упкк| и др. В1оой 108(10): 3428-33 (2006). Разрушение Зук посредством миРНК в НХЛ линии ЗиИНЬМ приводила к блокировке С1/З перехода клеточного цикла (Оигига_|ап, Иаки и др. 1. 1ттипо1 178(1): 111-21 (2007). Вместе эти данные указывают на то, что Зук передача сигналов является необходимой для развития, пролиферации и даже выживаемости В-клеток человека и мыши. Наоборот, онкогенный потенциал Зук был описан рядом разных параметров. Клинически сообщается о сверхэкспрессии Зук в лимфоме из мантийных клеток (ΡίпаШ, К\уее и др. Вг 1. Наета1о1 132(3): 303-16 (2006) и ТЕЬ-Зук составном белке (лейкоз с транслокацией ЕТЗ), генерированной хромосомной транслокацией (1(9;12)(д22;р12)), которая приводит к повышенной Зук активности и связана с миелодиспластическим синдромом (Кипо, АЬе и др. В1оой 97(4): 1050-5 (2001). Лейкоз индуцируют у мыши посредством адоптивно перенесенных клетках костного мозга, которые экспрессирует человеческая ТЕЬ-Зук ^оккпшд, Нег/од и др. 1. Ехр Мей 203(13): 2829-40 (2006). Более того, в мышиных первичных клетках костного мозга сверхэкспрессия Зук вызывает 1Ь-7 независимый рост в культуре ^оккшпд, Нег/од и др. 2006). Равным образом, Зук, как сообщено, опосредует сигналы выживаемости тТОК (мишень рапамицина в клетках млекопитающих) в фолликулярных, мантийных клетках, клетках Беркитта и диффузных больших В-клетках НХЛ (Ьекеих, Нашей и др. В1оой 108(13): 4156-62 (2006). Дополнительные недавние исследования также указывают на то, что Зукзависимые сигналы выживаемости могут играть роль в злокачественности В-клеток, включая ОБВСй (диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому), лимфому из клеток мантии и фолликулярную лимфому (Сигига.)ап, 1епшп§8 и др. 2006; Ιγι^Π, С/егцйМй и др. 1 1ттипо1 176(10): 5715-9 (2006). Показана роль тонической ВСК передачи сигналов в нормальных В-клетках и Зук-зависимой выживаемости линии клеток НХЛ ш уйго, специфическое ингибирование Зук может указывать на возможность применимости для лечения определенных В-клеточных лимфом.
Недавно К406 (Кгде1 РЬагтасеийсаП) был предложен для ингибирования 1ТАМ передачи сигналов в ответ на различные стимулы, включая РсеК1 и ВСК индуцированное Зук активирование (Вгаке1тапп, Тау1ог и др. 1. РПагтасо1 Ехр ТЬег 319(3): 998-1008( 2006). Интересно, этот АТФ-конкурентный ингибитор Зук являлся также активным и против Р113, сКЬ, и 1АК-киназ, но не против Згс киназы (Вга8е1тапи, Тау1ог и др. 2006). Активирующие мутации Р113 связывают с ОМЛ (острый миелолейкоз), и ингибирование этой киназы в настоящее время является объектом клинического исследования (Витей и Кпаррег Нета1о1оду Ат Зос Нета1о1 Ейис Ргодгат 2007: 429-34 (2007). Сверхактивирование тирозинкиназы сКй также связывают с гематологическими злокачественными образованиями, и она является мишенью для терапии злокачественной опухоли (Не1шгсй, СпГГйН и др. В1оой 96(3): 925-32 (2000). Подобным образом, 1АК3 передача сигналов вовлечена в лейкозы и лимфомы, и в настоящее время ее используют в качестве потенциальной терапевтической мишени (Не1шгсй, ОпГГйй и др. 2000). Существенно то, что, мультикиназная ингибирующая активность К406 ослабляет ВСК передачу сигналов в образцах линии клеток лимфомы и первичной лимфомы человека, что приводит к апоптозу первых (СЬеп, МопО и др. В1оой 111(4): 2230-7 (2008). Более того, сообщено о благоприятных результатах при проведении II фазы клинического испытания с применением этого соединения при рефрактерной НХЛ и хроническом лимфоцитарном лейкозе (ЕпейЬегд Ρ\ν. и др., В1оой, 2008; 112(11), реферат 3). Несмотря на то, что точный механизм действия К406 неясен, данные свидетельствуют о том, что ингибирование киназ, опосредствующих передачу сигналов выживаемости в лимфоцитах, является клинически полезным. Дополнительные недавние исследования также говорят о том, что кук-зависимые сигналы выживаемости могут играет роль в злокачественности В-клеток, включая ИРВСЬ, мантийно клеточную лимфому и фолликулярную лимфому (см., например, З. ЬшГепдкйеп и др. В1оой, февр. 2008; 111: 2230-2237; 1. М. йгкй и др. В1оой, 2006; 108:
- 4 024109
3135-3142; А. Кепа1й1 и др. ВтЪ 1. Наета1о1о§у, 2006; 132: 303-316; М. Сигиоа.)ап и др. 1. 1ттипо1, 2006; 176: 5715-5719; Ь. Ьакеих и др. В1оой, 2006; 108: 4156-4162.
1АК киназы (Янус киназы) представляют семейство цитоплазматических протеиновых тирозинкиназ, включая 1АК1, 1АК2, 1АК3 и ΤΥΚ2. Киназы 1АК играют ключевую роль передачи сигналов цитокинами. Каждая из 1АК киназ является селективной в отношении рецепторов определенных цитокинов, однако многие 1АК киназы могут находиться под влиянием отдельного цитокина или сигнального пути. Исследования показали, что 1АК3 соединяется с общим цитокиновым рецептором гамма цепи (Рсу или ус) различных цитокиновых рецепторов. 1АК3, в частности, селективно связывается с рецепторами и является частью цитокинового сигнального пути и активируется 1Ь-2, 1Ь-4, 1Ь-7, 1Ь-9, 1Ь-15 и 1Ь-21. 1АК1 взаимодействует, среди прочего, с рецепторами цитокинов 1Ь-2, 1Ь-4, 1Ь-7, 1Ь-9 и 1Ь-21, тогда как 1АК2 взаимодействует, среди прочего, с рецепторами 1Ь-9 и ΤΝΕ-α. Во время связывания определенных цитокинов к своим рецепторам (например, 1Ь-2, 1Ь-4, 1Ь-7, 1Ь-9, 1Ь-15 и 1Ь-21), происходит олигомеризация рецептора, что приводит к приближению цитоплазматических концевых сегментов связанных 1АК киназ и облегчению транс-фосфорилирования остатков тирозина на 1АК-киназе. Это трансфосфорилирование вызывает активирование 1АК-киназы.
Расположенные ниже по пути передачи сигнала субстраты 1АК семейства киназы включают белкипереносчики сигнала и активаторы транскрипции (8ΤΛΤ). Фосфорилированные 1АК киназы связывают различные белки 8ΤАΤ (переносчик сигнала и активатор транскрипции). 8ΤАΤ белки, которые являются ДНК-связывающими белками, активируемые фосфорилированием остатков тирозина, функционируют и в качестве молекул-передатчиков сигналов, и в качестве факторов транскрипции, и в итоге связываются со специфическими ДНК последовательностями, присутствующими в промоторах цитокинвосприимчивых генов (Ьеопатй и др., (2000), 1. А11егду СИп. 1ттипо1. 105:877-888).
^ΛΚ/8ΤΛΤ передача сигналов вовлечена в медиацию многих аномальных иммунных ответов, таких как аллергия, астма, аутоиммунные заболевания, такие как отторжение трансплантата (аллотрансплантата), ревматоидный артрит, боковой амиотрофический склероз и рассеянный склероз, а также солидных и гематологических злокачественных образований, таких как лейкоз и лимфомы. Для обзора фармацевтического вмешательства в путь .^^δ^Τ см. Ртапк, (1999), Мо1. Мей. 5:432:456 и 8е1йе1 и др., (2000), Опсодепе 19:2645-2656.
1АК3, в частности, вовлечена во множество биологических процессов. Например, пролиферация и выживаемость мышиных тучных клеток, индуцированная 1Ь-4 и 1Ь-9, как было показано, является зависимой от 1АК3- и у-цепочечной передачи сигналов (διιζιιΐί и др., (2000), В1оой 96:2172-2180). 1АК3 также играет ключевую роль в 1дЕ рецептор-опосредованных дегрануляционных ответах тучных клеток (Ма1ау1уа и др., (1999), ВюсЬет. ВюрЬук. Кек. Соттип. 257:807-813), а ингибирование 1АК3 киназы, как было показано, предотвращает реакции гиперчувствительности типа I, включая анафилаксию (Ма1ау1уа и др., (1999), 1. Вю1. СЬет. 274:27028-27038). 1АК3 ингибирование, как также было показано, приводит к иммуносупрессии отторжения аллотрансплантата (Кпкеп. (2001), ΤπΗΐκρ1. Ргос. 33:3268-3270). 1АК3 киназы также вовлечены в механизмы, проходящие на ранней и поздней стадиях ревматоидного артрита (Ми11ет-Еайпег и др., (2000), 1. 1ттипа1. 164:3894-3901); наследственного бокового амиотрофического склероза (Меи и др., (2000), ВюсЬет ВюрЬук. Кек. Соттип. 267:22-25); лейкоза (8ийЬеск и др., (1999), СЬп. Сапсег Кек. 5:1569-1582); грибовидного микоза, формы Τ-клеточной лимфомы (№е1кеп и др., (1997), Ргас. №11. Асай. δα. И8А 94:6764-6769); и аномального клеточного роста (Уи и др., (1997), 1. 1ттипо1. 159:5206-5210; СаЙеЬ-Ра1сопе и др., (1999), 1ттцпЪу 10:105-115).
1АК1, 1АК2 и ΤΥΙ<2 эксперессируются повсеместно, тогда как 1АК3 экспрессируется преимущественно в гематопоэтических клетках. .ТАК-киназы, включая 1АК3, чрезмерно эксперессируются в первичных лейкозных клетках у детей с острым лимфобластным лейкозом, наиболее часто при детских злокачественных опухолях, и исследования говорят о взаимосвязи активирования δΤАΤ в определенных клетках с сигналами, регулирующими апоптоз (ИетоиЬп и др., (1996), Мо1. Се11. Вю1. 16:4710-6; 1ит1апйег и др., (1997), В1оой. 89:4146-52; Капеко и др., (1997), СЬп. Ехр. 1ттип. 109:185-193; и №-1катига и др.,(1996), 1. Вю1. СЬет. 271: 19483-8). Также известно, что они являются важными для дифференциации, функционирования и выживания лимфоцитов. 1АК-3, в частности, играет важнейшую роль в функционировании лимфоцитов, макрофагов и тучных клеток. Учитывая важность этой .ТАК-киназы, соединения которые модулируют 1АК-сигнальный путь, включая соединения, селективные к 1АК3, могут быть пригодными для лечения заболеваний или состояний, в которые вовлечены функции лимфоцитов, макрофагов или тучных клеток (^^πεζ и др., (2004) Ат. 1. Τ^апкр1апΐ 4:51-57; СЬапдеЬап (2003) 8с1епсе 302:875-878). Состояния, при которых нацеливание на 1АК-сигнальный путь или модуляцию .ТАК-киназ, особенно 1АК3, рассматривают как терапевтически пригодное, включают лейкоз, лимфому, отторжение трансплантата (например, отторжение трансплантата - островков поджелудочной железы), использование трансплантата костного мозга (например, заболевание трансплантат-против-хозяина), аутоиммунные заболевания (например, диабет, ревматоидный артрит, волчанка, псориаз) и воспаление (например, астма, аллергические реакции). Состояния, при которых можно добиться улучшения ингибированием 1АК3, рассматриваются более подробно ниже. В последних сообщениях касательно ингибирования 1АК сооб- 5 024109 щалось о пациентах с почечными аллотрансплантатами, получающих лечение СР-690550 (тофацитиниб), и показано, что количество маркеров аллогеного ответа (интерферон гамма) может быть снижено (Уаи Оитр ЕА и др. (2009) Тгаи8р1аиа1айои 87:79-86).
Принимая во внимание множество состояний, на которые, предполагается, будет оказывать благоприятное действие лечение, вызывающее модуляцию 1АК-сигнального пути, непосредственно видно, что новые соединения, которые модулируют 1АК-сигнальные пути, и способы применения этих соединений будут обеспечивать существенные терапевтические преимущества широкому кругу пациентов. В заявке обеспечиваются новые 2,4-пиримидиндиаминовые соединения для применения при лечении состояний, при которых нацеливание на 1АК-сигнальный путь или ингибирование 1АК-киназ, особенно 1АК3, является терапевтически полезным. Патенты и заявки на патенты, касающиеся модуляции 1АК-сигнального пути включают патенты США №№ 5728536; 6080747; 6080748; 6133305; 6177433; 6210654; 6313130; 6316635; 6433018; 6486185; 6506763; 6528509; 6593357; 6608048; 6610688; 6635651; 6677368; 6683082; 6696448; 6699865; 6777417; 6784195; 6825190; 6506763; 6784195; 6528509; 6608048; 7105529; 6699865; 6825190; 6815439; 6949580; 7056944; 6998391; 7074793; 6969760; публ. заявок на патенты США №№ 2001/0007033 А1; 2002/0115173 А1; 2002/0137141 А1; 2003/0236244 А1; 2004/0102455 А1; 2004/0142404 А1; 2004/0147507 А1 и 2004/0214817 А1 и международные заявки на патенты νϋ 95/03701 А1; νϋ 99/15500 А1; νϋ 00/00202 А1; νϋ 00/10981 А1; νϋ 00/47583 А1; νϋ 00/51587 А2; νϋ 00/55159 А2; νϋ 01/42246 А2; νϋ 01/45641 А2; νϋ 01/52892 А2; νϋ 01/56993 А2; νϋ 01/57022 А2; νϋ 01/72758 А1; νϋ 02/00661 А1; νϋ 02/43735 А1; νϋ 02/48336 А2; νϋ 02/060492 А1; νϋ 02/060927 А1; νϋ 02/096909 А1; νϋ 02/102800 А1; νϋ 03/020698 А2; νϋ 03/048162 А1; νϋ 03/101989 А1; νϋ 2004/016597 А2; νϋ 2004/041789 А1; νϋ 2004/041810 А1; νϋ 2004/041814 А1; νϋ 2004/046112 А2; νϋ 2004/046120 А2; νϋ 2004/047843 А1; νϋ 2004/058749 А1; νϋ 2004/058753 А1; νϋ 2004/085388 А2; νϋ 2004/092154 А1; νϋ 2005/009957 А1; νϋ 2005/016344 А1; νϋ 2005/028475 А2; и νϋ 2005/033107 А1. Патенты и заявки на патенты, описывающие замещенные пиримидиндиаминовые соединения, включают заявку США рег. № 10/355543, поданную 31 января 2003 г. (И8 2004/0029902 А1), международную заявку рег. № РСТ/ϋδ 03/03022, поданную 31 января 2003 г. (νϋ 03/063794), заявку США рег. № 10/631029, поданную 29 июля 2003 г., международную заявку рег. № РСТ/И8 03/24087 (νϋ 04/014382), заявку США рег. № 10/903263, поданную 30 июля 2004 г., и международную заявку рег. № РСТ/И8 2004/24716 (νϋ 05/016893), раскрытия которых включены в данный документ путем ссылки. Замещенные пиримидиндиаминовые соединения также описаны в публикациях международных заявок на патенты №№ νϋ 02/059110, νϋ 03/074515, νϋ 03/106416, νϋ 03/066601, νϋ 03/063794, νϋ 04/046118, νϋ 05/016894, νϋ 05/122294, νϋ 05/066156, νϋ 03/002542, νϋ 03/030909, νϋ 00/39101, νϋ 05/037800 и в США пат. публ. №: 2003/0149064.
Несмотря на то, что в данной области достигнут определенный прогресс, остается необходимость в соединениях, которые ингибируют кук- и/или 1АК-киназу, а также в способах лечения у пациентов состояний, таких как рестеноз, тромбоз и/или воспаление, которые могут облегчаться при таком ингибировании. Кроме того, доступность соединений, которые селективно нгибируют одну из этих киназ по сравнению с другими киназами, также была бы желательна. Настоящее изобретение удовлетворяет эту и другие потребности.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение обеспечивает новые соединения, которые действуют в качестве ингибиторов кук активности (также упомянуты здесь как кук-ингибиторы) и/или 1АК-киназной активности (также упомянуты здесь как .ТАК-ингибиторы), а также способы их получения и применения и содержащие их фармацевтические композиции. Такие соединения имеют следующую структуру (I):
или представляют фармацевтически приемлемый таутомер, соль или стереоизомер соединения указанной структуры, где Ό1, К1, Υ1 и К2 принимают определенные ниже значения.
Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтическую композицию, которая включает терапевтически эффективное количество соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель.
Соединения настоящего изобретения полезны в широком диапазоне терапевтических применений и могут использоваться для лечения разнообразных состояний, опосредованных, по меньшей мере частично, активностью кук, и у мужчин, и у женщин, а также у млекопитающих в целом (также упомянуты здесь как субъект). Например, такие состояния включают, но не ограничиваются перечисленным, со- 6 024109 стояния, связанные с сердечно-сосудистым заболеванием, воспалительным заболеванием или аутоиммунной болезнью. Более конкретно, соединения настоящего изобретения полезны для лечения состояний или нарушения, включая, но не ограничиваясь перечисленным, рестеноз, тромбоз, воспаление, гепарининдуцированную тромбоцитопению, дилатационную кардиомиопатию, серповидно-клеточное заболевание, атеросклероз, инфаркт миокарда, васкулярное воспаление, нестабильную стенокардию, острые коронарные синдромы, аллергию, астму, ревматоидный артрит, опосредованные В-клетками заболевания, такие как неходжкинская лимфома, антифосфолипидный синдром, волчанку, псориаз, рассеянный склероз, терминальную стадию почечной недостаточности, гемолитическую анемию, иммунную тромбоцитопеническую пурпуру и хронический лимфоцитарный лейкоз. Таким образом, в одном варианте осуществления, раскрытые способы включают введение эффективного количества соединения формулы (I), типично в виде фармацевтической композиции, нуждающемуся в этом субъекту. Состояния, связанные с сердечно-сосудистым заболеванием, выбирают из группы, состоящей из острого коронарного синдрома, инфаркта миокарда, нестабильной стенокардии, рефрактерной стенокардии, окклюзивного коронарного тромбоза, случающегося после тромболитической терапии или после коронарной ангиопластики, тромботически опосредованного цереброваскулярного синдрома, эмболического инсульта, тромботического инсульта, преходящих ишемических нарушений мозгового кровообращения, тромбоза вен, тромбоза глубоких вен, эмболии сосудов легких, коагулопатии, генерализованного тромбогеморрагического синдрома, тромботической тромбоцитопенической пурпуры, облитерирующего тромбангиита, тромботического заболевания, связанного с гепарин-индуцированной тромбоцитопенией, тромботических осложнений, связанных с искусственным кровообращением, тромботических осложнений, связанных с применением инструментария, такого как используемый при сердечной или другой интраваскулярной катетеризации, внутриаортальный баллон-насос, коронарный стент или сердечный клапан, и состояний, требующих установки протезных приспособлений. Настоящее изобретение также обеспечивает способ ингибирования 8ук-активности образца крови, включающий введение в контакт указанного образца с соединением настоящего изобретения.
Настоящее изобретение далее обеспечивает соединения в очищенных формах, а также химические промежуточные соединения.
Эти и другие аспекты, цели, признаки и преимущества изобретения будут видны из приведенных далее детального описания и фигур. В этих целях здесь приводятся различные ссылки, которые более детально описывают определенную дополнительную информацию, методики, соединения и/или композиции, и каждая из которых включена, таким образом, посредством ссылки во всей своей полноте.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 показывает, каким образом 8ук служит ключевым медиатором опосредованной Те рецептором передачи сигналов в биологии клетки и при многочисленных заболеваниях.
Фиг. 2 показывает, каким образом направленное воздействие на гены 8ук указывает на то, что 8ук служит ключевым медиатором в биологии тромбоцитов в артериях и селективной мишенью для лечения артериального тромбоза.
показывает общий синтез соединений настоящего изобретения.
обеспечивает табл. 1, иллюстрирующую соединения настоящего изобретения и значения 8ук обеспечивает табл. 2, иллюстрирующую соединения настоящего изобретения и значения 8ук обеспечивает табл. 3, иллюстрирующую соединения настоящего изобретения и значения 8ук
7А и В обеспечивают табл. 4А и 4В, иллюстрирующие соединения настоящего изобретения и значения 8ук 1С50.
На фиг. 8А, 8В и 8С показан ряд соединений, которые, как было установлено, селективно нгибируют 8ук в анализах с очищенной киназой. Фиг. 8А - соединения из 8ук-специфических рядов (Р459-72 и Р505-15) и мультикиназных рядов (пример 100а) скринировали при 300 нМ в отношении панели Μίΐΐίроге с очищенными киназами (270 киназ тестировали с 10 мкМ АТФ) для определения активности и селективности к 8ук. Данные представляются в виде тепловой карты, определенной по дну. Фиг. 8В - подмножество очищенных киназ, которые демонстрировали ингибирование >80% любым из трех соединений. Р459-72 ингибировало только 8ук и МЬК1. Р505-15 при 50 нМ (в ~10х больше, чем его 8ук 1С50) ингибировало только 8ук. Примерное соединение 100а ингибировало множество киназ, включая 8ук, 1АК2 и 1АК3. 1С50 ингибирование 8ук приводится для каждого соединения слева тепловой карты. Ингибирование киназ, выраженное в процентах, дано в каждой панели в рамках тепловой карты.
На фиг. 9А, 9В и 9С показано селективное ингибирование 8ук в линии клеток неходжкинской лимфомы. В-клетки стимулировали анти-ВСК антителом в присутствии указанных концентраций 8укспецифических ингибиторов Р459-72 и Р505-15 (фиг. 9А и 9В) или двойного 8ук/1АК ингибитора - пример 100Ь (фиг. 9С). Анализы вестерн-блоттинга полных клеточных лизатов затем осуществляли для оценки активности 8ук киназы (ρΒΤΝΚ Υ84 и общий ΒΤΝΚ; верхние два геля) и активности 8гс киназы (р8ук Υ352 и общий 8ук; нижние два геля). Эксперименты выполняли 2-3 раза каждый, гистограммы
Фиг. Фиг.
1С50. Фиг.
1С50. Фиг.
1С50. Фиг.
- 7 024109 представляют среднее ± СКО рВЬМК Υ84. Вычисленные значения 1С50 ингибирования 8ук киназы приводятся наверху графика.
Фиг. 10А и 10В обеспечивают сравнение 8ук-специфического и двойного 8ук/1АК ингибирования в линии клеток НХЛ. В-клетки стимулировали анти-ВСК (фиг. 10А) или 1Ь-4 (фиг. 10В) в течение 15 мин в присутствии различных концентраций каждого ингибитора, как указано. Клетки затем оценивали на ингибирование сигнальных путей с помощью фосфопроточной цитометрии. Фиг. 10А - гистограммы (среднее ± СКО, п=3), представляющие 8гс активность (р8ук Υ352 ΜΡΙ) и 8ук активность (рЕКК Υ204 ΜΡΙ) в результате ВСК стимуляции при различных условиях обработки. Фиг. 10В - гистограммы, изображающие р8ТАТ-6 Υ641 ΜΡΙ (среднее ± СКО, п=3) в результате стимуляции посредством 1Ь-4 в присутствии различных концентраций каждого ингибитора, как указано.
Фиг. 11А и 11В показывают каким образом 8ук-специфические ингибиторы нарушают пролиферацию и выживаемость и индуцируют апоптоз в НХЛ линии клеток. 8ук-зависимый ВСК тип и 8укнезависимый не-ВСК тип НХЛ линии клеток был описан ранее (Ро1о, 1и5/с/уп5к| и др. Ргос Ναΐΐ Асаб 8с1 И8А 104(9): 3207-12 (2007). Фиг. 11А - клетки обрабатывали в течение 72 ч 1 и 3 мкМ 8укспецифическим ингибитором Р505-15. Апоптоз определяли с помощью РАС8 анализа активной каспазы 3; данные представляются в виде гистограмм. Фиг. 11В - дополнительные линии клеток тестировали на чувствительность к 8ук-специфическому (Р459-72 и Р505-15) в сравнении с двойным 8ук/1АК (пример 100Ь) ингибированием. Гистограммы представляют средний ± СКО (п=3) процент каспаза 3 - положительных клеток после каждого состояния.
Детальное описание изобретения
Нижеприведенные термины, использованные в данном документе, если не оговорено иное, имеют следующие значения.
Сокращения и определения.
Использованные здесь сокращения, если не определено иное, являются общепринятыми. Используются следующие сокращения: АсОН = уксусная кислота, ΑΙΕΝ = азобисизобутиронитрил (также азобисизобутилонитрил), водн. = водный, Вос = т-бутилкарбокси, В/ - бензил, ВОР = бензотриазол-1илокси-трис(диметиламино)гексафторфосфат фосфония, ВРО = пероксид бензоила, пВиОН = н-бутанол, СВг4 = тетрабромметан, тСРВА = м-хлорпероксибензойная кислота, СН2С12 или ДХМ = дихлорметан, С§2СОз = карбонат цезия, СиС12 = дихлорид меди; ИГВАИ = гидрид диизобутилалюминия, ΩΙΕΛ = основание Хюнига или диизопропилэтиламин, ΌΜΕ = диметиловый простой эфир, ДМФА = диметилформамид, ДМСО = диметилсульфоксид, ИРРА = дифенилфосфорилазид, Εΐ3Ν = триэтиламин, ЕЮАс = этилацетат, г = грамм, НАТИ = гексафторфосфат 2-(1Н-7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония, Н2 = водород; Н2О = вода; НВг = бромистый водород; НС1 = хлористый водород, ВИЧ = вирус иммунодефицита человека, ЖХВД = жидкостная хроматография высокого давления, ч = час, 1дЕ = иммуноглобулин Е, 1С50 = концентрация ингибитора, которая требуется для 50%-го ингибирования фермента ίη νίΙΐΌ, 1РА = изопропиловый спирт, кг = килограмм, КСN = цианид калия, КОН = гидроксид калия, К2РО4 = фосфат калия, БИА = диизопропиламид лития, Ь1А1Н4 = алюмогидрид лития, ЬЮН = гидроксид лития; ΜеСN = ацетонитрил; МС = масс-спектр, т/ζ = отношение массы к заряду, МГц = мегагерц, МеОН = метанол, мкМ = микромолярный, мкл = микролитр, мг = миллиграмм, мм = миллиметр, мМ = миллимолярный, ммоль = миллимоль, мл = миллилитр, мОП/мин = единицы миллиоптической плотности на минуту, мин = минута, М = молярный, №ьСО3 = карбонат натрия, нг = нанограмм, NаНСО3 = бикарбонат натрия; NаNО2 = нитрит натрия; №ЮН = гидроксид натрия; №282О3 = бисульфат натрия; №28О4 = сульфат натрия; ΝΕ8 = Ν-бромсукцинамид; ИН4С1 = хлорид аммония; ИН4ОАс = ацетат аммония; Ν;·ι8Μο = метилтиолят натрия, ΝΕ8 = Ν-бромсукцинамид, н-ВиЕ1 = н-бутил литий, нм = нанометр, нМ = наномолярный, н. = нормальный, ΝΜΓ = Ν-метилпирролидин, ЯМР = ядерный магнитный резонанс, Рб/С = палладий на угле, Рб(РРй3)4 = тетракис-(трифенилфосфин)палладий, пМ = пикомолярный, Рт = пинаколято, ПЕГ = полиэтиленгликоль, РРй3 или Рй3Р = трифенилфосфин, РЛВ = вирус лейкоза Раушера, Ка-Νί = никель Ренея, 8ОС12 = тионилхлорид, КТ = комнатная температура, ТЕА = триэтиламин, ТГФ = тетрагидрофуран, ТФУ = трифторуксусная кислота, ТСХ = тонкослойная хроматография, ТМС = триметилсилил, Т1= трифторметилсульфонил и Т8С = тринатрий цитрат.
Следует отметить, что используемые в описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают множественные упоминания, если контекст ясно не диктует иначе.
Алкил сам по себе или в качестве части другого заместителя означает, если не указано иное, прямую или разветвленную цепь, полностью насыщенный алифатический углеводородный радикал, который имеет указанное число атомов углерода. Например, С1-8алкил относится к прямому или разветвленному углеводородному радикалу, содержащему от 1 до 8 атомов углерода, который получается путем удаления одного атома водорода от одного атома углерода исходного алкана. Выражение незамещенный алкил относится к алкильным группам, которые не содержат групп, других, чем полностью насыщенные алифатические углеводородные радикалы. Таким образом, выражение включает алкильные группы с прямой цепью, такие как метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, гептил, октил, нонил, децил, ундецил, додецил и т.п. Выражение также включает изомеры с разветвленной цепью алкильных
- 8 024109 групп с прямой цепью, такие как изопропил, т-бутил, изобутил, втор-бутил и т.п. Типичные алкильные группы включают алкильные группы с прямой и разветвленной цепью, которые имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 атомов углерода. Дальнейшие типичные алкильные группы включают алкильные группы с прямой и разветвленной цепью, которые имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 атомов углерода.
Алкенил сам по себе или в качестве части другого заместителя относится к прямой или разветвленной цепи, которая может быть моно- или полиненасыщенной и содержащей указанное число атомов углерода. Например, С2-С8алкенил означает алкенильный радикал, который имеет 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 атомов, который получается путем удаления одного атома водорода от одного атома углерода исходного алкана. Примеры включают, но не ограничиваются перечисленным, винил, 2-пропенил, т.е. -СН=С(Н)(СНз), -СН=С(СНз)2, -С(СНз)-С(Н)2, -С(СНз)=С(Н)(СНз), -С(СН2СНз)=СН2, бутадиенил, например 2-(бутадиенил), пентадиенил, например 2,4-пентадиенил и з-(1,4-пентадиенил), и гексадиенил, среди прочего, и их высшие гомологи и стереоизомеры. Замещенная алкенильная группа включает алкенильные группы, в которых неуглеродный или неводородный атом присоединен к углероду, присоединенному двойной связью к другому углероду, и те, в которых один из неуглеродных или неводородных атомов присоединен к углероду, не вовлеченному в двойную связь к другому углероду. Каждое место ненасыщенности может находиться либо в цис-, либо в транс-конфигурации относительно двойной связи(ей). Термин алкинил сам по себе или в качестве части другого заместителя означает углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, который может быть моно- или полиненасыщенным и содержащим указанное число атомов углерода. Например, С2-С8алкинил означает алкинильный радикал, который имеет от 2 до 8 атомов углерода, который получается путем удаления одного атома водорода от одного атома углерода исходного алкана. Незамещенный алкинил относится к группам с прямой или разветвленной цепью, таким как те, что описаны в отношении незамещенных алкильных групп согласно вышеприведённому определению, за исключением того, что по меньшей мере одна тройная связь присутствует между двух атомов углерода. Примеры включают, но не ограничиваются перечисленным, этинил, например -С'АС(Н). 1-пропинил, например -С=С(СНз), -С.=С(СН2СНз). -С(Н2)С'.=С(Н). -С(Н)2С=С(СНз) и -С(Н)2С'.=С(СН2СНз). среди прочего, и их высшие гомологи и изомеры. Замещенные алкинильные группы включают алкинильные группы, в которых неуглеродный или неводородный атом присоединен к углероду, присоединенному тройной связью к другому углероду, и те, в которых неуглеродный или неводородный атом присоединен к углероду, не вовлеченному в тройную связь к другому углероду.
Алкилен сам по себе или в качестве части другого заместителя означает двухвалентный радикал, производный от алкана, примерами которого является -СН2СН2СН2СН2-. Типично алкиленовая группа будет иметь 1, 2, з, 4, 5, 6, 7 или 8 атомов углерода и получаться путем удаления одного атома водорода от одного атома углерода исходного алкила.
Циклоалкил или карбоцикл сам по себе или в комбинации с другими терминами представляет, если не указано иное, циклические варианты алкила, алкенила и алкинила, в которых все атомы кольца являются углеродом. Циклоалкил или карбоцикл относится к моно- или полициклической группе. При использовании применительно к циклоалкильным заместителям термин полициклический относится здесь к конденсированным и неконденсированным алкильным циклическим структурам. Циклоалкил или карбоцикл может образовывать мостиковое кольцо или спирокольцо. Циклоалкильная группа может иметь одно или несколько двойных или тройных связей. Термин циклоалкенил относится к циклоалкильной группе, которая имеет по меньшей мере одно место алкенильной ненасыщенности между вершинами кольца. Термин циклоалкинил относится к циклоалкильной группе, которая имеет по меньшей мере одно место алкинильной ненасыщенности между вершинами кольца. Когда циклоалкил используют в комбинации с алкилом, как в Сз-8циклоалкилСз-8алкилене-, подразумевают, что циклоалкильная часть имеет указанное число атомов углерода (например, от трех до восьми атомов углерода), в то время как алкиленовая часть имеет от одного до восьми атомов углерода. Типично циклоалкильные заместители имеют от з до 8 атомов кольца. Примеры циклоалкила включают циклопентил, циклогексил, 1-циклогексенил, з-циклогексенил, циклогептил и т.п.
Арил сам по себе или в качестве части другого заместителя относится к полиненасыщенной, ароматической, углеводородной группе, содержащей от 6 до 14 атомов углерода, которая может являться одним кольцом или несколькими кольцами (вплоть до трех колец), которые конденсированы вместе или соединены ковалентной связью. Таким образом, выражение в качестве примера включает, но не ограничивается перечисленным, группы, такие как фенил, бифенил, антраценил, нафтил. Неограничивающие примеры незамещенных арильных групп включают фенил, 1-нафтил, 2-нафтил и 4-бифенил. Замещенная арильная группа включает, например, -СН2ОН (один атом углерода и один гетероатом, заменяющий атом углерода) и -СН2§Н. Термин гетероалкилен сам по себе или в качестве части другого заместителя означает двухвалентный радикал, производный от гетероалкила, примерами которого является -СН2СН2-§-СН2СН2- и -СН2-§-СН2-СН2-НН-СН2-. В случае гетероалкиленовых групп гетероатомы могут также занимать либо один, либо оба конца цепи (например, алкиленокси, алкилендиокси, алкиленамино, алкилендиамино и т.п.). Более того, в случае алкиленовых и гетероалкиленовых связывающих групп ка- 9 024109 кая-либо ориентация связывающий группы не подразумевается. Термины гетероцикл, гетероциклил или гетероциклический относятся к насыщенной или ненасыщенной неароматической циклической группе, содержащей по меньшей мере один гетероатом. Подразумевают, что использованный здесь термин гетероатом включает кислород (О), азот (Ν), серу (8) и кремний (δί). Каждый гетероцикл может быть присоединен по любому доступному атому углерода или гетероатому кольца. Каждый гетероцикл может иметь одно или несколько колец. Когда присутствуют несколько колец, они могут быть конденсированы вместе или соединены ковалентной связью. Каждый гетероцикл типично содержит 1, 2, 3, 4 или 5 независимо выбранных гетероатомов. Предпочтительно эти группы включают 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 атомов углерода, 0, 1, 2, 3, 4 или 5 атомов азота, 0, 1 или 2 атома серы и 0, 1 или 2 атома кислорода. Более предпочтительно эти группы включают 1, 2 или 3 атома азота, 0-1 атом серы и 0-1 атом кислорода. Неограничивающие примеры гетероциклильных групп включают морфолин-3-он, пиперазин-2-он, пиперазин-1-оксид, пиридин-2-он, пиперидин, морфолин, пиперазин, изоксазолин, пиразолин, имидазолин, пиразол-5-он, пирролидин-2,5-дион, имидазолидин-2,4-дион, пирролидин, тетрагидрохинолинил, декагидрохинолинил, тетрагидробензооксазепинил дигидродибензооксепин и т.п.
Гетероарил относится к циклическому или полициклическому ароматическому радикалу, который содержит от одного до пяти гетероатомов, выбранных из Ν, О, и δ, где атомы азота и серы необязательно окислены, и атомы азота необязательно кватернизированы. Гетероарильная группа может быть присоединена к остатку молекулы через гетероатом или через атом углерода и может содержать от 5 до 10 атомов углерода. Неограничивающие примеры гетероарильной группы включают 1-пирролил, 2пирролил, 3-пирролил, 1-пиразолил, 3-пиразолил, 2-имидазолил, 4-имидазолил, пиразинил, 2-оксазолил, 4-оксазолил, 5-оксазолил, 3-изоксазолил, 4-изоксазолил, 5-изоксазолил, 2-тиазолил, 4-тиазолил, 5тиазолил, 2-фурил, 3-фурил, 2-тиенил, 3-тиенил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 2-пиримидил и 4пиримидил. Если специально не изложено иное, заместители для каждой из вышеупомянутых арильных и гетероарильных кольцевых систем выбирают из группы приемлемых заместителей, описанных здесь. Замещенный гетероарил относится к незамещенной гетероарильной группе согласно вышеприведённому определению, в которой один или несколько членов кольца присоединен к неводородному атому, так как описано выше в отношении замещенных алкильных групп и замещенных арильных групп. Типичные заместители включают алкильные группы с прямой и разветвленной цепью -СН3, -С2Н5, -СН2ОН, -ОН, -ОСН3, -ОС2Н5, -ОСР3, -ОС(=О)СН3, -ОС(=О)1Ж2,- ОС(=О)^СН3)2, -ΟΝ, -ΝΟ2, -С(=О)СН3, -СО2Н, -СО2СН3, -СО1Ж2, -ΝΠ2, -Л(СН3)2, -1Ж8О2СНз, -ЖСОСН3, -ЖС(=О)ОСН3, -1Ж8О2СНз, -8О2СН3, -δΟ2NН2 и гало. Бициклический гетероарил относится к бициклическому ароматическому радикалу, который содержит от одного до пяти гетероатомов, выбранных из Ν, О, и 8, где атомы азота и серы необязательно окислены, и атомы азота необязательно кватернизированы. Бициклическая гетероарильная группа может быть присоединена к остатку молекулы через гетероатом или через атом углерода и может содержать от 5 до 10 атомов углерода. Неограничивающие примеры бициклической гетероарильной группы включают 5-бензотиазолил, пуринил, 2-бензимидазолил, бензопиразолил, 5-индолил, азаиндол, 1-изохинолил, 5-изохинолил, 2-хиноксалинил, 5-хиноксалинил, 3-хинолил и 6-хинолил. Если специально не изложено иное, заместители для каждой из вышеупомянутых арильных и гетероарильных кольцевых систем выбирают из группы приемлемых заместителей, описанных здесь.
В каждом вышеупомянутом варианте осуществления указание числа атомов, например С1-8, подразумевается включающим все возможные варианты, которые имеют на один атом меньше. Неограничивающие примеры включают С1-7, С2-8, С2-7, С3-8, С3-7 и т.п.
Каждый из терминов в данном документе (например, алкил, гетероалкил, арил и гетероарил), если не указано иначе, подразумевается включающим и незамещенную, и необязательно замещенную формы указанного радикала. Типично каждый радикал, если не указано иначе, замещен 0, 1, 2, 3, 4 или 5 заместителями. Примеры заместителей для каждого типа радикала приведены ниже. Замещенный относится к группе согласно приведенному здесь определению, в которой одна или несколько связей к углероду(ам) или водороду(ам) заменена на связь к неводородному и неуглеродному атому заместителям, таким как, без ограничения перечисленным, атом галогена, такой как Р, С1, Вг и I; атом кислорода в группах, таких как гидроксильные группы, алкоксигруппы, арилокси и ацилоксигруппы; атом сера в группах, таких как тиольные группы, алкил- и арилсульфидные группы, сульфонные группы, сульфонильные группы и сульфоксидные группы; атом азота в группах, таких как амино, алкиламинные, диалкиламинные, ариламинные, алкилариламинные, диариламинные группы, алкоксиамино, гидроксиамино, ациламино, сульфониламино, Ν-оксиднные, имидные и енаминные группы; и другие гетероатомы в различных других группах. Заместители также включают группы, в которых одна или несколько связей к углеродному(ным) или водородному(ным) атомам заменена связью более высокого порядка (например, двойной или тройной связью) к гетероатому, такому как кислород в оксо, ацильной, амидо, алкоксикарбонильной, аминокарбонильной, карбоксильной и сложноэфирной группах; азот в группах, такие как иминные, оксимные, гидразонные и нитрильные группы. Заместители дополнительно включают группы, в которых одна или несколько связей к углеродному(ым) или водородному(ым) атомам заменена связью к циклоалкильной, гетероциклильной, арильной и гетероарильной группам. Типичные заместители включают, среди прочего, группы, в которых одна или несколько связей к атому углерода
- 10 024109 или водорода заменены одной или несколькими связями к такой группе, как фтор, хлор или бром. Другим типичным заместителем является трифторметильная группа и другие группы, которые содержат трифторметильную группу. Другие типичные заместители включают те заместители, в которых одна или несколько связей к атому углерода или атому водорода заменена связью к кислородному атому, при условии что замещенная алкильная группа содержит гидроксильную, алкокси, или арилоксигруппу. Другие типичные заместители включают алкильные группы, которые имеют аминную или замещенную или незамещенную алкиламинную, диалкиламинную, ариламинную, (алкил)(арил)аминную, диариламинную, гетероциклиламинную, дигетероциклиламинную, (алкил)(гетероциклил)аминную, или (арил) (гетероциклил)аминную группу. Кроме того, другие типичные заместители включают те заместители, в которых одна или нескольких связей к углеродному(ым) или водородному(ым) атомам заменена связью к алкильной, циклоалкильной, арильной, гетероарильной или гетероциклильной группе.
Определенные в данном документе группы могут включать приставку и/или суффикс, которые широко применяются в данной области техники для создания дополнительных хорошо узнаваемых замещающих групп. В качестве примеров алкиламино относится к группе формулы -ΝΚ''ΚΙ:ι. Если не оговорено иное, в случае следующих групп, содержащих К3, ΚΙ:ι, Кс, К4 и Ке: К3 и Кь, каждый независимо, выбирают из Н, алкила, алкокси, тиоалкокси, циклоалкила, арила, гетероарила или гетероциклила, или они необязательно объединяются вместе с атомом(ами), к которым они присоединены с образованием циклической группы. Когда Ка и ΚΙ:ι присоединены к одному и тому же атому азота, они могут быть объединены с атомом азота с образованием 5-, 6- или 7-членного кольца. Например, -ΝΚ''ΚΙ:ι подразумевается включающим 1-пирролидинил и 4-морфолинил.
Кс, К4 , Ке и К, каждый независимо, выбирают из алкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, циклоалкенила, арила, гетероарила, гетероциклила или алкиленарила согласно приведенному здесь определению.
Типично отдельный радикал будет иметь 0, 1, 2 или 3 заместителя, причем те группы, которые имеют два или меньше заместителей, в настоящем изобретении являются предпочтительными. Более предпочтительно радикал будет незамещенным или монозамещенным. Наиболее предпочтительно радикал будет незамещенным. Заместители для алкильных и гетероалкильных радикалов (а также тех групп, которые упоминаются как алкилен, алкенил, гетероалкилен, гетероалкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклил) могут представлять разные группы, выбранные из -ОКа, =0, =ΝΚα, =Ν-0Κα, -ΝΚ''ΚΙ:ι. -8Κ3, галогена, -8ιΚ':Κ Кс, -ОС(О)Ка, -С(О)Ка, -СО2Ка, -(ΌΝΚΊΚ-0С(0)НК3Кь, -НКьС(0)К3, -ΝΚ3-0(0)ΝΚιΚ\ -НК3-8О2МКьКс, -НКЬСО2К3, -МН-С(МН2)=МН, -ΝΚΥ(ΝΗ2)=ΝΗ, -ΝΗΥ(ΝΗ2)=ΝΚ3, -8(0)Κα, -802Κα, -802ΝΚηΚΙ:ι, -ΝΚΙ:'802Κ, -СЫ и -Ν02, в числовом диапазоне от ноля до трех, причем те группы, которые имеют ноль, один или два заместителя являются особенно предпочтительными.
В некоторых вариантах осуществления заместители для алкильных и гетероалкильных радикалов -8Κ, галогена, -8ιΚ':Κ''Κ\ -ОС(О)Ка, -С(О)Ка, -СО2Ка, -С0НК3Кь, выбирают из -ОКа, =0, -ΝΚ'Κ -0С(0)НК3Кь, -ΝΚ'Υ^Κ3, -ΝΚΎ02Κ/ ·ΝΚ8-502ΝΚ,’Κο, -8(0)Κα, -802Κα, -802ΝΚ3Κ°, -^80^, -СМ и
-Ν02, где Κ3 и ΚΙ:ι принимают значения согласно вышеприведённому определению. В некоторых вариантах осуществления заместители выбирают из -0Κ3, =0, -ΝΚΗΚΙ:ι, галогена, -ОС(О)И3, -СО2И3, -ΟΘΝΚΚ1’, -0^0)ΝΚ3ΚΙ, -ΝΚΌ^Κ3, -М^СО^3, -ΝΚί1-802ΝΚ,’Κο, -802Κα, -802ΝΚ3ΚΙ, -ΝΚ802Κ, -СН и -Ν02.
Примерами замещенного алкила являются -(ΟΗ2)3ΝΗ2, -(СН2)3ЫН(СН3), -(СН2)3МН(СН3)2, -СН2С(=СН2)СН2МН2, -СН2С(=О)СН2ЫН2, -СН28(=О)2СН3, -СН2ОСН2МН2, -СО2Н.
Примерами заместителей замещенного алкила являются СН2ОН, -ОН, -ОСН3, -ОС2Н5, -ОСР3, -ОС(=О)СНз, -О^^М^-ОСаОЖСНзЬ -ΟΝ, -Ν02, -С(=О)СН3, -СО2Н, -СО2СН3, -СОМН^ -Ы(СНз)2, -МН8О2СНз, -ЛНСОСНз, -МНС(=О)ОСН3, -ΝΙΙδίΚΊΠ -8О2СН3, -80ΧΊΙ; и гало.
Подобным образом, заместители для арильных и гетероарильных групп варьируют и выбирают из -галогена, -0Κ3, -0С(0)И3, -ΝΚΊά -8Κα, -Κ3, -СК, -Ν02, -СО2И3, -С0NΚ3Κь, -С(0)И3, -0С(0)NΚ3Κь, -ΝΚ'Υ^Κ3, -ΝΚ^Θ^Κ3, -NΚ3-С(0)NΚьΚс, -NН-С(NН2)=NН, -ΝΚ/^ΝΠ^ΝΠ, -\Н-С(\Н2) \Κ3 -8(0)Κ, -8(0)2Κ3, -8(0)2ΝΚ3ΚΙ, -Ν3, -СН(Рй)2, перфторС1-8алкокси и перфторС1-8алкила, в числовом диапазоне от ноля до суммарного числа открытых валентностей на ароматической кольцевой системе; и где Κ3, ΚΙ:ι и Κ независимо выбирают из водорода, С1-6алкила и гетероалкила, незамещенного арила и гетероарила, (незамещенный арил)-С1-8алкила и (незамещенный арил)окси-С1-8алкила.
Два заместителя на расположенных рядом атомах арильного или гетероарильного кольца необязательно могут быть замещены заместителем формулы -Т-С(О)-(СН2)Ч-И-, где Т и и независимо означают -ΝΉ-, -О-, -СН2- или одинарную связь, и с.| принимает значение 0, 1 или 2. Альтернативно, два заместителя на расположенных рядом атомах арильного или гетероарильного кольца необязательно могут быть замещены заместителем формулы -А-(СН2)Г-В-, где А и В независимо означают -СН2-, -О-, -ΝΉ-, -8-, -8(0)-, -8(0)2-, -8(0)2ΝΚα- или одинарную связь, и г принимает значение 1, 2 или 3. Одна из одинарных связей таким образом образованного нового кольца необязательно может быть заменена двойной связью. Альтернативно, два заместителя на расположенных рядом атомах арильного или гетероарильного кольца необязательно могут быть замещены заместителем формулы -(СН2)8-Х-(СН2)|-, где 8 и ΐ независимо означают целые числа от 0 до 3 и X означает -О-, -ΝΚ3-, -8-, -8(0)-, -8(О)2- или -8(0)2ΝΚ3-. Заместитель Κ3 в -ΝΚ3- и -8(0)2ΝΚα- выбирают из водорода или незамещенного С1-6алкила. В противном случае, Κ' прини- 11 024109 мает значение согласно вышеприведённому определению.
Если не указано иное, номенклатура заместителей, которые не определены детально в данном документе, составлена путем присваивания названия терминальной части функциональности и далее расположенный рядом функциональности по направлению к точке присоединения. Например, заместитель арилалкилоксикарбонил относится к группе (арил)-(алкил)-О-С(О)-.
Термин ацил относится к группе -С(=О)Кс, где Кс означает алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, циклоалкенил, арил, гетероарил или гетероциклил. Ацил включает ацетильную группу -С(=О)СН3.
Ациламино- относится к группе -ЫКаС(=О)Кс, где Кс означает алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, циклоалкенил, арил, гетероарил или гетероциклил.
Ацилокси относится к -ОС(=О)-Кс, где Кс означает алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, циклоалкенил, арил, гетероарил или гетероциклил.
Алкокси относится к -ОК'1. где К'1 означает алкил согласно приведенному здесь определению. Типичные примеры алкоксигруппы включают метокси, этокси, т-бутокси, трифторметокси и т.п.
Алкоксиамино относится к группе -ННОК', где К' означает алкил.
Алкоксикарбонил относится к -С(=О)ОК', где К' означает алкил. Типичные алкоксикарбонильные группы включают, например, те группы, которые показаны ниже
Эти алкоксикарбонильные группы могут быть дополнительно замещены путем, который будет очевиден специалисту в области органической и медицинской химии в сочетании с раскрытием данного документа.
Алкоксикарбониламино относится к -МКаС(=О)ОК', где К' означает алкил.
Алкоксисульфониламино относится к группе -ЫКаЗ(=О)2-ОК', где К' означает алкил.
Алкилкарбонил относится к группе -С(=О)Кс, где Кс означает алкил.
Алкилкарбонилокси относится к -ОС(=О)-Кс, где Кс означает алкил.
Алкилкарбониламино относится к -ЫКаС(=О)Кс, где Кс означает алкил.
Типичные алкилкарбониламино группы включают, например, -ННС(=О)СН3, -ЫНС(=О)СН2СН3, -ННС(=О)СН2ЫН(СН3), -\НС( О)СН2\(СН;)2 или -МНС(=О)(СН2)3ОН.
Алкилсульфанил, алкилтио или тиоалкокси относится к группе 8-К', где К' означает алкил.
Алкилсульфонил относится к -3(=О)2Ке, где Ке означает алкил.
Алкилсульфонильные группы, используемые в соединениях настоящего изобретения, типично представляют собой С^алкилсульфонильные группы. Алкилсульфониламино относится к -ЫКаЗ(=О)2Ке, где Ке означает алкил. Алкинилокси относится к группе -О-алкинил, где алкинил принимает значение согласно приведенному здесь определению. Алкинилокси включает в качестве примера этинилокси, пропинилокси и т.п.
Амидино относится к группе -С(=НКа)МКьКс, где Кь и Кс независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, замещенного алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циклоалкенила, гетероарила, гетероциклического радикала, и где Кь и Кс необязательно объединяются вместе с азотом, связанным с ними, с образованием гетероциклической или замещенной гетероциклической группы. Ка выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, алкенила, алкинила, циклоалкинила, арила, циклоалкила, циклоалкенила, гетероарила, гетероциклического радикала, замещенного гетероциклического радикала, нитро, нитрозо, гидрокси, алкокси, циано, -Н=Ы-Н-алкила, -Ы(алкил)ЗО2-алкила, Н=Н=Н-алкила, ацила и -ЗО2-алкила.
Амино относится к моновалентному радикалу -ЫКаКь или двухвалентному радикалу -ΝΕ'1-. Термин алкиламино относится к группе -МКаКь, где Ка означает алкил и Кь означает Н или алкил. Термин ариламино относится к группе -ЫКаКь, где по меньшей мере один Ка или Кь означает арил. Термин (алкил)(арил)амино относится к группе -МКаКь, где Ка означает алкил и Кь означает арил. Кроме того, в случае диалкиламиногрупп, алкильные части могут быть одинаковыми или разными и могут также быть объединены с образованием 3-7-членного кольца с атомом азота, к которому каждая из частей присоединена. Соответственно, подразумевается, что группа, представленная в виде -МКаКь, включает пиперидинил, пирролидинил, морфолинил, азетидинил и т.п.
Аминокарбонил или аминоацил относится к амиду -С(=О)-НКаКь Термин алкиламинокарбо- 12 024109 нил относится здесь к группе -С(=О)-МКаКь, где К3 означает алкил и К1 означает Н или алкил. Термин ариламинокарбонил относится здесь к группе -Ο(=ϋ)-ΝΚΗΚΙ:ι. где Ка или К1 означает арил. Типичные аминокарбонильные группы включают, например, те группы, которые показаны ниже. Эти аминокарбонильные группы могут быть дополнительно замещены путем, который будет очевиден специалисту в области органической и медицинской химии в сочетании с раскрытием данного документа.
Аминокарбониламино относится к группе -ΝΚ3Ο(Θ)ΝΚ3ΚΙ, где Ка означает водород или алкил и Ка и К1 независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циклоалкенила, гетероарила, гетероциклического радикала, и где Ка и К1 необязательно объединяются вместе с азотом, связанным с ними, с образованием гетероциклической или замещенной гетероциклической группы.
Аминосульфонил относится к -§(О)2МКаКь, где К независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, замещенного алкила, алкенила, замещенного алкенила, алкинила, замещенного алкинила, арила, замещенного арила, циклоалкила, замещенного циклоалкила, циклоалкенила, замещенного циклоалкенила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклического радикала, замещенного гетероциклического радикала, и где Ка и К1 необязательно объединяются вместе с азотом, связанным с ними, с образованием гетероциклической или замещенной гетероциклической группы, и алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, арил, замещенный арил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклический радикал и замещенный гетероциклический радикал принимают значения согласно приведенному здесь определению.
Аминосульфонилокси относится к группе -О-8О2МКаКь, где Ка и К1 независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циклоалкенила, гетероарила и гетероциклического радикала; Ка и К1 необязательно объединяются вместе с азотом, связанным с ними, с образованием гетероциклической или замещенной гетероциклической группы. Аминосульфониламино относится к группе -МКа-8О2МКьКс, где Ка означает водород или алкил, и К1 и Кс независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, замещенного алкила, алкенила, замещенного алкенила, алкинила, замещенного алкинила, арила, замещенного арила, циклоалкила, замещенного циклоалкила, циклоалкенила, замещенного циклоалкенила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклического радикала и замещенного гетероциклического радикала, и где К1 и Кс необязательно объединяются вместе с азотом, связанным с ними, с образованием гетероциклической или замещенной гетероциклической группы, и где алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, арил, замещенный арил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклический радикал и замещенный гетероциклический радикал принимают значения согласно приведенному здесь определению.
Аминотиокарбонил относится к группе -С(8)МКаКь, где Ка и К1 независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, замещенного алкила, алкенила, замещенного алкенила, алкинила, замещенного алкинила, арила, замещенного арила, циклоалкила, замещенного циклоалкила, циклоалкенила, замещенного циклоалкенила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклического радикала, и замещенного гетероциклического радикала, и где Ка и К1 необязательно объединяются вместе с азотом, связанным с ними, с образованием гетероциклической или замещенной гетероциклической группы, и где алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, арил, замещенный арил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклический радикал и замещенный гетероциклический радикал принимают значения согласно приведенному здесь определению.
Аминотиокарбониламино относится к группе -ККаС(8)ХКаКь, где Ка означает водород или алкил, и К1 и Кс необязательно объединяются вместе с азотом, связанным с ними, с образованием гетероциклической или замещенной гетероциклической группы.
Арилкарбонил относится к группе -С(=О)Кс, где Кс означает арил.
Арилкарбониламино относится к -МКаС(=О)Кс, где Кс означает арил.
Арилкарбонилокси относится к -ОС(=О)-Кс, где Кс означает арил.
Арилокси относится к -ОК4, где К4 означает арил. Типичные примеры арилоксигруппы включают фенокси, нафтокси и т.п.
Арилоксикарбонил относится к -С(=О)ОК4, где К4 означает арил.
Арилоксикарбониламино относится к -МКаС(=О)ОК4, где К4 означает арил.
Арилсульфанил, арилтио или тиоарилокси относится к группе 8-К4, где К4 означает арил.
Арилсульфонил относится к -8(=О)2Ке, где Ке означает арил.
Арилсульфониламино относится к ^Ка8(=О)2-Ке, где Ке означает арил.
Арилтио относится к группе -8-арил, где арил принимает значение согласно приведенному здесь определению. В других вариантах осуществления сера может быть окислена до -8(О)- или -8О2- фрагментов. Сульфоксид может существовать в виде одного или нескольких стереоизомеров.
Азидо относится к -Ν3.
Связь при использовании элемента в группе Маркуша означает, что соответствующая группа не
- 13 024109 существует, а группы с обеих сторон связаны непосредственно.
Карбонил относится к двухвалентной группе -С(=О)-.
Карбокси или карбоксил относится к группе -СО2Н.
Карбоксил-сложный эфир или карбоксисложный эфир относится к группам -С(=О)ОКс.
(Карбоксил-сложный эфир)амино относится к группам -ЫКа-С(О)ОКс, где К3 означает алкил или водород.
(Карбоксил-сложный эфир)окси или Карбонат-сложный эфир относится к группам -ОС(=О)ОКс.
Циано относится к -СЫ.
Циклоалкокси относится к -ОК'1. где К'1 означает циклоалкил.
Циклоалкоксикарбонил относится к -С(=О)ОК', где К' означает циклоалкил.
Циклоалкоксикарбониламино относится к -ЫКаС(=О)ОК', где К' означает циклоалкил.
Циклоалкилалкилен относится к радикал -КХКУ, где КХ означает алкиленовую группу и Ку означает циклоалкильную группу согласно приведенному здесь определению, например циклопропилметил, циклогексенилпропил, 3-циклогексил-2-метилпропил и т.п.
Циклоалкилкарбонил относится к группе -С(-О)Кс, где Кс означает циклоалкил.
Циклоалкилкарбониламино относится к -ЫКаС(=О)Кс, где Кс означает циклоалкил.
Циклоалкилкарбонилокси относится к -ОС(=О)-Кс, где Кс означает циклоалкил.
Циклоалкилсульфониламино относится к -МКа§(=О)2-Ке, где Ке означает циклоалкил.
Циклоалкилтио относится к -8-циклоалкилу. В других вариантах осуществления, сера может быть окислена до -8(О)- или -8О2- фрагментов. Сульфоксид может существовать в виде одного или нескольких стереоизомеров.
Циклоалкенилокс относится к -О-циклоалкенилу.
Циклоалкенилтио относится к -δ-циклоалкенилу. В других вариантах осуществления сера может быть окислена до сульфинильных или сульфонильных фрагментов. Сульфоксид может существовать в виде одного или нескольких стереоизомеров.
Сложный эфир относится к -С(=О)ОК', где К' означает алкил, циклоалкил, арил, гетероарил или гетероциклил.
Гуанидино относится к группе -ЫНС(=ЫН)ЫН2.
Гало или галоген сам по себе или в качестве части другого заместителя означает, если не указано иное, атом фтора, хлора, брома или йода. Кроме того, термины, такие как галоалкил, подразумеваются включающими алкил, в котором один или несколько водородов замещены атомами галогена, которые могут быть одинаковыми или разными, в числовом диапазоне от одного вплоть до максимально разрешенного числа галогенов, например для алкила, (2т'+1), где т' означает суммарное число атомов углерода в алкильной группе. Например, термин галоС1-8алкил подразумевается включающим трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, 4-хлорбутил, 3-бромпропил и т.п. Термин пергалоалкил означает, если не указано иное, алкил, замещенный посредством (2т'+1) атомов галогена, где т' означает суммарное число атомов углерода в алкильной группе. Например, термин пергалоС1-8алкил подразумевается включающим трифторметил, пентахлорэтил, 1,1,1-трифтор-2-бром-2-хлорэтил и т.п. Кроме того, термин галоалкокси относится к алкоксирадикалу, замещенному одним или несколькими атомами галогена. Гетероалкил означает алкильный радикал согласно приведенному здесь определению с одним, двумя или тремя заместителями, независимо выбранными из циано, -ОК, -ЫКХКУ и -8(О)ПК2 (где η означает целое число от 0 до 2), с пониманием того, что точкой присоединения гетероалкильного радикала является атом углерода гетероалкильного радикала. К означает водород, алкил, циклоалкил, циклоалкил-алкил, арил, аралкил, алкоксикарбонил, арилоксикарбонил, карбоксамидо или моно- или диалкилкарбамоил. КХ означает водород, алкил, циклоалкил, циклоалкил-алкил, арил или аралкил. КУ означает водород, алкил, циклоалкил, циклоалкил-алкил, арил, аралкил, алкоксикарбонил, арилоксикарбонил, карбоксамидо, моно- или диалкилкарбамоил или алкилсульфонил. Κζ означает водород (при условии, что η означает 0), алкил, циклоалкил, циклоалкил-алкил, арил, аралкил, амино, моноалкиламино, диалкиламино или гидроксиалкил. Типичные примеры включают, например, 2-гидроксиэтил, 2,3-дигидроксипропил, 2метоксиэтил, бензилоксиметил, 2-цианоэтил и 2-метилсульфонилэтил. В случае каждого из вышеупомянутых К, КХ, Ку и Κζ могут быть дополнительно замещены с помощью амино, фтора, алкиламино, диалкиламино, ОН или алкокси. Кроме того, приставка, указывающая число атомов углерода (например, С1-С10), относится к суммарному числу атомов углерода в части гетероалкильной группы, не считая циано, -ОК, -ЫКХКУ или -8(О)ПК части.
Гетероарилкарбонил относится к группе -С(=О)Кс, где Кс означает гетероарил.
Гетероарилкарбониламино относится к -ЫКаС(=О)Кс, где Кс означает гетероарил.
Гетероарилкарбонилокси относится к -ОС(=О)-Кс, где Кс означает гетероарил.
Гетероарилокси относится к -ОК', где К' означает гетероарил.
Гетероарилоксикарбонил относится к -С(=О)ОК', где К' означает гетероарил.
Гетероарилоксикарбониламино относится к -НКаС(=О)ОКа, где Ка означает гетероарил.
Гетероарилсульфониламино относится к -ЫКа8(=О)2-Ке, где Ке означает гетероарил.
- 14 024109
Гетероарилтио относится к группе -8-гетероарил. В других вариантах осуществления сера может быть окислена до -8(О)- или -8О2- фрагментов. Сульфоксид может существовать в виде одного или нескольких стереоизомеров.
Гетероциклилалкил или циклогетероалкил-алкил означает радикал -ЕхЕу, где Ех означает алкиленовую группу и Еу означает гетероциклильную группу согласно приведенному здесь определению, например тетрагидропиран-2-илметил, 4-(4-замещенный-фенил)пиперазин-1-илметил, 3-пиперидинилэтил и т.п.
Гетероциклоксикарбониламино относится к -ЫЕаС(=О)ОЕб, где Еб означает гетероциклил.
Гетероциклилкарбонил относится к -С(=О)Ес, где Ес означает гетероциклил.
Гетероциклилкарбониламино относится к -ИЕаС(=О)Ес, где Ес означает гетероциклил.
Гетероциклилкарбонилокси относится к -ОС(=О)-Ес, где Ес означает гетероциклил.
Гетероциклилокси относится к -ОЕб, где Еб означает гетероциклил.
Гетероциклилоксикарбонил относится к -С(=О)ОЕб, где Еб означает гетероциклил.
Гетероциклилсульфонил относится к -8(=О)2Ее, где Ее означает гетероциклил.
Гетероциклилсульфониламино относится к -ИЕа8(=О)2-Ее, где Ее означает гетероциклил.
Гетероциклилтио относится к группе -8-гетероциклил. В других вариантах осуществления сера может быть окислена до -8(О)- или -8О2- фрагментов. Сульфоксид может существовать в виде одного или нескольких стереоизомеров.
Гидрокси или гидроксил относится к группе -ОН.
Гидроксиамино относится к группе -ИНОН.
Нитро относится к -ИО2.
Нитрозо относится к группе -ИО.
Термины необязательный или необязательно, используемые по всему описанию, означают, что позже описанное событие или обстоятельство может, но не должно произойти, и что описание включает примеры, где событие или обстоятельство случается, и примеры, в которых событие или обстоятельство не возникает. Например, гетероциклическая группа, необязательно моно- или дизамещенная алкильной группой, подразумевает, что алкил может, но не должен присутствовать, и описание включает ситуации, где гетероциклическая группа является моно- или дизамещенный алкильной группой, и ситуации, где гетероциклическая группа не замещена указанной алкильной группой.
Необязательно замещенный означает кольцо, которое необязательно независимо замещено заместителями. Место группы, которое является незамещенным, может быть замещено водородом.
Оксо относится к двухвалентной группе =О.
Сульфанил относится к группе -8ЕГ, где Ег принимает значение согласно приведенному здесь определению.
Сульфинил относится к группе -8(=О)-Ее, где Ее принимает значение согласно приведенному здесь определению. Сульфоновая кислота относится к группе -8(О)2-ОН. Сульфонил относится к группе -8(О)2-Ее, где Ее принимает значение согласно приведенному здесь определению.
Сульфониламино относится к -ХЕа8(=О)2-Ее, где Еа выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циклоалкенила, гетероарила и гетероциклила, и Ее принимает значение согласно приведенному здесь определению. Сульфонилокси относится к группе -О8О2-Ес. Соединения, которые имеют одинаковую молекулярную формулу, но отличаются по природе или последовательности соединения своих атомов или расположению своих атомов в пространстве, называют изомерами. Изомеры, которые отличаются по расположению своих атомов в пространстве, называют стереоизомерами. Стереоизомер и стереоизомеры относится к соединениям, которые существуют в разных стереоизомерных формах, если они имеют один или несколько асимметричных центров или двойную связь с асимметрическим замещением и, следовательно, могут быть получены в виде индивидуальных стереоизомеров или в виде смесей. Стереоизомеры включают энантиомеры и диастереоизомеры. Стереоизомеры, которые не являются зеркальным отражением друг друга, называют диастереоизомерами, а те, которые являются неналагающимся зеркальным отражением друг друга, называют энантиомерами. Когда соединение имеет асимметричный центр, например, он присоединен к четырем разным группам, возможна пара энантиомеров. Энантиомер может быть охарактеризован с помощью абсолютной конфигурации его асимметричного центра и описан с помощью правил Е- и 8последовательности Кана и Прелога или с помощью способа, основанного на вращении молекулой плоскости поляризованного света, и обозначен как правовращающий или левовращающий (то есть в качестве (+)- или (-)-изомеров соответственно). Хиральное соединение может существовать в виде или отдельного энантиомера, или в виде их смеси. Смесь, содержащая равные доли энантиомеров, именуют рацемической смесью. Если не указано иначе, предполагается, что описание включает отдельные стереоизомеры, а также смеси. Способы определения стереохимии и разделения стереоизомеров хорошо известны в данной области техники (см. дискуссию в гл. 4 Абуапсеб Огдатс Скет1к!гу, 4-е издание I. МагсЬ, 1оЬп \УПеу и 8опк, Нью-Йорк, 1992) и различаются по хиральности одного или нескольких стереоцентров.
Тиоацил относится к группам Еа-С(8)-.
Тиол относится к группе -8Н.
- 15 024109
Таутомер относится к альтернативным формам молекулы, которые отличаются по положению протона, как, например, енол-кетонные и имин-енаминные таутомеры, или таутомерные формы гетероарильных групп, характеризующиеся расположением кольцевых атомов -Ν=^Η)-ΝΗ-, таким как пиразолы, имидазолы, бензимидазолы, триазолы и тетразолы. Средний специалист в данной области техники будет осознавать, что возможны иные варианты таутомерного расположения кольцевых атомов.
Следует понимать, что для всех замещенных групп, определенных выше, полимеры, полученные при определении заместителей, которые сами содержат дальнейшие заместители (например, замещенный арил, который имеет замещенную арильную группу в качестве заместителя, которая сама замещена замещенной арильной группой, которая далее замещена замещенной арильной группой, и т.д.), не входят в объем изобретения. В таких случаях максимальное число таких замещений равно трем. Например, последовательные замещения замещенных арильных групп ограничены -замещенный арил-(замещенный арил)-замещенный арилом.
Защитная группа относится к группе атомов, которая, когда присоединена к реакционноспособной функциональной группе в молекуле, маскирует, снижает или предупреждает реакционную способность такой функциональной группы. Типично защитная группа может быть селективно удалена в желательный момент осуществления синтеза. Примеры защитных групп могут быть найдены в работах Огеепе и \Уи1к, РгоЮсИсе Огоирк ίη Огдашс Скеш1к1гу, 3е изд., 1999, ίοΐιη \УПеу & δοη^ ΝΥ и Натю!·! и др., С-отрепЛит οί 5уп1Не11С Огдатс МеПюбк, т. 1-8, 1971-1996, ίοΐιη \УПеу & δοη^ ΝΥ. Типичные аминозащитные группы включают, но не ограничиваются перечисленным, формильную, ацетильную, трифторацетильную, бензильную, бензилоксикарбонильную (С-'ΒΖ), трет-бутоксикарбонильную (Βο^'), триметилсилильную (ТМС), 2-триметилсилилэтансульфонильную (ΤΕδ), тритильную и замещенную тритильную группы, аллилоксикарбонил, 9-флуоренилметилоксикарбонил (РМОС), нитровератрилоксикарбонил (КУОС) и т.п. Типичные гидроксизащитные группы включают, но не ограничиваются перечисленным, те группы, посредством которых гидроксильная группа либо ацилируется или алкилируется, например, образуя бензиловые и тритиловые простые эфиры, а также алкиловые простые эфиры, тетрагидропираниловые простые эфиры, триалкилсилиловые простые эфиры (например, ТМС или ΤIΡΡδ группы) и аллиловые простые эфиры.
Термин фармацевтически приемлемые соли подразумевается включающим соли активных соединений, которые получают с относительно нетоксичными кислотами или основаниями, в зависимости от конкретных заместителей, встречающихся в соединениях, описанных здесь. Когда соединения настоящего изобретения содержат относительно кислотные функциональности, соли присоединения основания могут быть получены путем введения в контакт нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством целевого основания, либо в чистом виде, либо в подходящем инертном растворителе. Примеры солей, производных от фармацевтически приемлемых неорганических оснований, включают соли алюминия, аммония, кальция, меди, железа(111), железа(11), лития, магния, марганца(Ш), марганца(П), калия, натрия, цинка и т.п. Соли, производные от фармацевтически приемлемых органических оснований включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, включая замещенные амины, циклические амины, встречающиеся в природе амины и т.п., такие как аргинин, бетаин, кофеин, холин, Ν,Ν'дибензилэтилендиамин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2-диметиламиноэтанол, этаноламин, этилендиамин, Ν-этилморфолин, Ν-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лизин, метилглюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминные смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин, трометамин и т.п. Когда соединения настоящего изобретения содержат относительно основные функциональности, соли присоединения кислоты могут быть получены путем введения в контакт нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством целевой кислоты, либо в чистом виде, либо в подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты включают соли, производные от неорганических кислот, например соли соляной, бромисто-водородной, азотной, угольной кислоты, гидрокарбонаты, соли фосфорной кислоты, гидрофосфаты, дигидрофосфаты, соли серной кислоты, гидросульфаты, соли йодисто-водородной или фосфористой кислоты и т.п., а также соли, производные от относительно нетоксических органических кислот, подобных уксусной, пропионовой, изомасляной, малоновой, бензойной, янтарной, субериновой, фумаровой, миндальной, фталевой, бензолсульфоновой, ηтолилсульфоновой, лимонной, винной, метансульфоновой и т.п. Также включенными являются соли аминокислот, такие как аргинат и т.п., и соли органических кислот, подобных глюкуроновой или галактуроновой кислотам и т.п. (см., например, Βе^де. δΜ. и др., Ркагтасен11са1 8а11к, ίοΗΓη-ιί οί Ркагтасеикса1 δ^ι^, 66:1-19, 1977). Определенные отдельные соединения настоящего изобретения содержат и основные и кислотные функциональности, что позволяет превращение соединений в соли присоединения либо основания, либо кислоты. Нейтральные формы соединений могут быть регенерированы путем введения соли в контакт с основанием или кислотой и выделения исходного соединения общепринятым способом. Исходная форма соединения отличается от различных солевых форм определенными физическими свойствами, такими как растворимость в полярных растворителях, но в ином случае соли являются равноценными исходной форме соединения для целей настоящего изобретения.
Помимо солевых форм настоящее изобретение обеспечивает соединения, которые находятся в про- 16 024109 лекарственной сложноэфирной форме. Пролекарство(а) соединений, описанные здесь, являются теми соединениями, которые легко подвергаются химическим реакциям в физиологических условиях с обеспечением соединений настоящего изобретения. Кроме того, пролекарства могут быть превращены в соединения настоящего изобретения с помощью химических или биохимических способов в ех νίνο среде. Например, пролекарства могут быть медленно превращаться в соединения настоящего изобретения при помещении в слой трансдермального пластыря с подходящим ферментом или химическим реагентом. Пролекарства часто, но не обязательно, являются фармакологически инертными до момента превращения в активное лекарственное средство. Пролекарства типично получают путем маскирования функциональной группы в лекарственном средстве, которая, как полагают, отчасти необходима для проявления активности, прогруппой (определенной ниже) с образованием профрагмента, который подвергается превращению, такому как расщепление, в определенных условиях применения с высвобождением функциональных групп и, следовательно, активного лекарственного средства. Расщепление профрагмента может идти самопроизвольно, например путем реакции гидролиза, или его можно катализировать или индуцировать с помощью другого агента, например с помощью фермента, освещения, кислоты или основания, или с помощью изменения или воздействия физических параметров или характеристик среды, таких как изменение температуры. Агент может быть эндогенным относительно условий применения, таким как фермент, присутствующий в клетках, в которые введено пролекарство, или кислая среда желудка, или он может доставляться экзогенно.
Прогруппа относится к типу защитной группы, которая при использовании для маскирования функциональной группы в рамках активного лекарственного средства с образованием профрагмента превращает лекарственное средство в пролекарство. Прогруппы типично присоединяются к функциональной группе лекарственного средства посредством связей, которые расщепляются в определенных условиях применения. Таким образом, прогруппа является частью профрагмента, которая отщепляется с высвобождением функциональной группы в определенных условиях применения. В качестве специфического примера амидный профрагмент формулы -ЙН-С(О)СН3, включает прогруппу -С(О)СН3. Широкий выбор прогрупп, а также получающихся в результате профрагментов, пригодных для маскирования функциональных группы в активных кук и/или ίΛΙ< селективно ингибирующих соединениях с получением пролекарства, хорошо известны в уровне техники. Например, гидроксильная функциональная группа может быть замаскирована в виде сульфонатного, сложноэфирного (такого как ацетат или малеат) или карбонатного профрагмента, который можно гидролизовать ίη νίνο с обеспечением гидроксильной группы. Аминофункциональная группа может быть замаскирована в виде амидного, карбаматного, иминного, мочевинного, фосфенильного, фосфорильного или сульфенильного профрагмента, который можно гидролизовать ίη νίνο с обеспечением аминогруппы. Карбоксильная группа может быть замаскирована в виде сложноэфирного (включая метальный, этильный, пивалоилоксиметильный, силилсложноэфирный и тиосложноэфирный), амидного или гидразидного профрагмента, который можно гидролизовать ίη νίνο с обеспечением карбоксильной группы. Изобретение включает сложноэфирные и ацильные группы, известные в данной области техники для модифицирования характеристик растворимости или гидролиза для применения в качестве композиций замедленного высвобождения или пролекарств. Другие специфические примеры пригодных прогрупп и их соответствующих профрагментов будут очевидны специалисту в данной области техники.
Определенные соединения настоящего изобретения могут существовать в несольватированных формах, а также в сольватированных формах, включая гидратированные формы. Сольват относится к комплексу, образованному путем соединения молекул растворителя с молекулами или ионами растворенного вещества. Растворитель может быть органическим соединением, неорганическим соединением или смесью обеих. Некоторые примеры растворителей включают, но не ограничиваются перечисленным, метанол, Ν,Ν-диметилформамид, тетрагидрофуран, диметилсульфоксид и воду. В общем, сольватированные формы равноценны несольватированным формам и включены в рамки настоящего изобретения. Определенный соединения настоящего изобретения могут существовать в разнообразных кристаллических или аморфных формах. В общем, все физические формы равноценны для использования, рассмотренного настоящим изобретением, и включены в рамки настоящего изобретения.
Определенные соединения настоящего изобретения имеют асимметричные атомы углерода (оптические центры) или двойные связи; все, диастереоизомеры, геометрические изомеры, региоизомеры и отдельные изомеры (например, разделенные энантиомеры) включены в рамки настоящего изобретения. Эти изомеры могут быть разделены или асимметрично синтезированы с использованием общепринятых способов с получением оптически чистых изомеров, то есть изомеров, по существу, свободных от других изомеров конкретного соединения. Если, например, желателен отдельный энантиомер соединения согласно настоящему изобретению, он может быть получен путем асимметричного синтеза, или путем деривации хиральным вспомогательным агентом, где получающуюся диастереоизомерную смесь разделяют и вспомогательную группу расщепляют с обеспечением чистых целевых энантиомеров. Альтернативно, если молекула содержит основную функциональную группу, такую как амино, или кислотную функциональную группу, такую как карбоксил, проводят образование диастереоизомерных солей с соответствующей оптически активной кислотой или основанием и далее расщепляют таким образом образо- 17 024109 ванные диастереомеры путем фракционной кристаллизации или хроматографическим способом, хорошо известным в уровне техники, и затем проводят регенерацию чистых энантиомеров.
Соединения настоящего изобретения также могут содержать несвойственные пропорции изотопов атомов в одном или нескольких атомах, которые составляют такие соединения. Например, соединения могут быть меченны радиоактивными изотопами, такими как, например, тритий (3Н), йод-125 (1251) или углерод-14 (14С). Все изотопные вариации соединений настоящего изобретения, или радиоактивные, или нет, включены в рамки настоящего изобретения.
Термин введение относится к пероральному введению, введению в виде суппозитория, местному применению, внутривенному, внутрибрюшинному, внутримышечному введению, введению внутрь пораженных тканей, интраназальному или подкожному введению, или имплантации приспособлений с медленным высвобождением, например, миниосмотических насосов, субъекту. Введение осуществляют любым путем, включая парентеральный и чресслизистый (например, буккальный, сублингвальный, палатальный, гингивальный, назальный, вагинальный, ректальный, или трансдермальный). Парентеральное введение включает, например, внутривенное, внутримышечное, внутриартериольное, внутрикожное, подкожное, внутрибрюшинное, внутрижелудочковое и внутричерепное. Другие способы доставки включают, но не ограничиваются перечисленным, использование липосомальных композиций, внутривенное вливание, трансдермальные пластыри и т.д. Агонист или активатор относится к агенту или молекуле, который(ая) связывается с рецептором изобретения, стимулирует, увеличивает, открывает, активирует, содействует, усиливает активирование или ферментативную активность, сенсибилизирует или повышающе регулирует активность рецептора изобретения. Антагонист или ингибитор относится к агенту или молекуле, который(ая) ингибирует рецептор или связывается с ним, частично или полностью блокирует стимуляцию или активность, уменьшает, закрывает, предотвращает, задерживает активирование или ферментативную активность, инактивирует, десенсибилизирует или понижающе регулирует активность рецептора изобретения. Использованный здесь антагонист также включает понятия реверсный или обратный агонист. Использованный здесь термин состояние или нарушение, чувствительное к модуляции зук и/или 1АК и связанные термины и фразы относятся к состоянию или нарушению, связанному с несоответствующей, например, меньше чем или больше чем нормальная, активностью зук и/или 1АК, и, по меньшей мере частично, чувствительному к или находящемуся под влиянием модуляции зук и/или 1АК (например, зук и/или 1АК антагонист или агонист вызывает некоторое улучшение самочувствия, по меньшей мере, у некоторых пациентов). Несоответствующая функциональная активность зук и/или 1АК может возникнуть как результат экспрессии зук и/или 1АК в клетках, которые нормально не экспрессируют рецептор, более чем нормального продуцирования зук и/или 1АК или более медленного, чем нормальное, метаболического инактивирования или элиминации киназы зук и/или 1АК или ее активных метаболитов, повышенной экспрессии зук и/или 1АК или уровня внутриклеточного активирования (что приводит, например, к воспалительным и иммунозависимым нарушениям и состояниям) или уменьшенной экспрессии зук и/или 1АК. Состояние или нарушение, связанное с зук и/или 1АК, может включать зук и/или 1АК-опосредованное состояние или нарушение.
Использованные здесь фразы состояние или нарушение, опосредованное, по меньшей мере частично, зук или 1АК-киназной активностью и родственные фразы и термины относятся к состоянию или нарушению, характеризующемуся несоответствующей, например больше чем нормальной, зук и/или 1АК активностью. Несоответствующая зук и/или 1АК функциональная активность может возникнуть как результат зук и/или 1АК экспрессии в клетках, которые нормально не экспрессируют зук и/или 1АК, или повышенной зук и/или 1АК экспрессии или уровня внутриклеточного активирования (что приводит, например, к воспалительным и иммунозависимым нарушениям и состояниям). Состояние или нарушение, опосредованное, по меньшей мере частично, зук или 1АК-киназной активностью, может быть полностью или частично опосредовано несоответствующей зук и/или 1АК функциональной активностью. Однако состояние или нарушение, опосредованное, по меньшей мере частично, активностью зук или 1АКкиназы, является тем, в котором модуляция зук и/или 1АК вызывает некоторое действие на основное состояние или нарушение (например, зук и/или 1АК антагонист вызывает некоторое улучшение самочувствия, по меньшей мере, у некоторых пациентов).
Использованный здесь термин воспаление относится к инфильтрации белых кровяных клеток (например, лейкоцитов, моноцитов и т.д.) в область, лечившуюся от рестеноза.
Термин вмешательство относится к действию, которое дает эффект или которое предназначено для изменения направления течения патологического процесса. Например, васкулярное вмешательство относится к применению интраваскулярной процедуры, такой как ангиопластика или стенирование, с целью открыть закупоренный кровеносный сосуд.
Термин интраваскулярное приспособление относится к приспособлению, пригодному для процедуры васкулярной реканализации с целью восстановления кровотока через закупоренный кровеносный сосуд. Примеры интраваскулярных приспособлений включают, без ограничения, стенты, баллонные катетеры, аутологичные венозные/артериальные трансплантаты, протезные венозные/артериальные трансплантаты, васкулярные катетеры и васкулярные шунты.
Использованный здесь термин 1АК относится к Янус-киназе (Ке£8ед инв. № Р-43408) или ее ва- 18 024109 рианту, который является способным опосредствовать генную экспрессию ίη νίίτο или ίη νίνο. 1АК варианты включают белки, по существу, гомологичные природной 1АК, то есть белки, имеющие одну или несколько природных или неприродных аминокислотных делеций, инсерций или замен (например, 1АК производные, гомологи и фрагменты). Аминокислотная последовательность 1АК варианта предпочтительно является по меньшей мере на около 80% идентичной природной 1АК, более предпочтительно идентичной по меньшей мере на около 90% и наиболее предпочтительно идентичной по меньшей мере на около 95%.
Термин лейкоцит относится к любым из различных клеток крови, которые имеют ядро и цитоплазму и отделяются в тонкий белый слой при центрифугировании цельной крови, и помогают защищать тело от инфекции и болезни. Примеры лейкоцитов включают, без ограничения, нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, лимфоциты и моноциты.
Термин млекопитающее включает, без ограничения, людей, домашних животных (например, собак или кошек), сельскохозяйственных животных (коров, лошадей или свиней), обезьян, кроликов, мышей, и лабораторных животных. Термины модулировать, модуляция и т.п. относится к способности соединения усиливать или ослаблять функцию и/или экспрессию 8ук и/или 1АК. где такая функция может включают транскрипционную регуляторную активность и/или связывание с белком. Модуляция может происходить ίη νίίτο или ίη νίνο. Модуляция, как описано в данном документе, включает ингибирование, антагонизм, частичный антагонизм, активацию, агонизм или частичный агонизм функции или характеристики, связанной с 8ук и/или 1АК, либо непосредственно, либо опосредованно, и/или повышающую регуляцию или понижающую регуляцию экспрессии 8ук и/или 1АК, либо непосредственно, либо опосредованно. В предпочтительном варианте осуществления модуляция является непосредственной. Ингибиторами или антагонистами являются соединения, которые, например, присоединяясь, частично или полностью блокируют стимуляцию, уменьшают, предотвращают, ингибируют, задерживают активацию, инактивируют, десенсибилизируют или понижающе регулируют сигнальную трансдукцию. Активаторами или агонистами являются соединения, которые, например, присоединяясь, стимулируют, увеличивают, открывают, активируют, облегчают, усиливают активацию, активируют, сенсибилизируют или повышающе регулируют сигнальную трансдукцию. Способность соединения ингибировать функцию 8ук и/или 1АК можно продемонстрировать в биохимическом анализе, например анализе связывания, или клеточном анализе, например анализе временной трансфекции.
Понятие модуляторы активности используют в отношении к лигандам, антагонистам и агонистам, идентифицированных с использованием ίη νίίτο и ίη νίνο анализов на активность, и их гомологам и миметикам. Модуляторы включают природные и синтетические лиганды, антагонисты, агонисты, молекулы и т.п. Анализы для идентификации антагонистов и агонистов включают, например, нанесение предполагаемого модулятора-соединения на клетки в присутствии или отсутствие рецептора изобретения и затем определение функциональных эффектов на рецептор, вызываемых активностью агентов изобретения. Образцы или анализы, включающие рецептор изобретения, который обрабатывают потенциальным активатором, ингибитором или модулятором, сравнивают с контрольными образцами без ингибитора, активатора или модулятора с целью исследовать степень действия. Относительное значение активности контрольных образцов (необработанных модуляторами) принимают равной 100%. Ингибирование достигается, когда значение активности рецептора изобретения относительно контроля составляет около 80%, необязательно 50% или 25-1%. Активирование достигается, когда значение активности рецептора изобретения относительно контроля составляет 110%, необязательно 150%, необязательно 200500% или 1000-3000% выше.
Пациент относится к человеку и животным, в особенности млекопитающим. Примеры пациентов включают, но не ограничиваются перечисленным, людей, коров, собак, кошек, коз, овец, свиней и кроликов.
Возвращаясь к композициям изобретения термин фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент означает носитель или эксципиент, который пригоден для приготовления фармацевтической композиции и который обычно является безопасным, нетоксичным и ни биологически, ни иным образом нежелательным, и включает носитель или эксципиент, который является приемлемым для ветеринарного применения, а также для фармацевтического применения человеком. Фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент, как используется в описании и формуле изобретения, включает и один, и больше чем один такой носитель или эксципиент.
Термины фармацевтически эффективное количество, терапевтически эффективное количество или терапевтически эффективная доза относится к количеству соединения изобретения, которое будет вызывать биологический или медицинский ответ ткани, системы, животного или человека, который добивается исследователь, ветврач, врач или другой клиницист. Термин терапевтически эффективное количество включает то количество соединения, которое при введении является достаточным для предотвращения развития или облегчения в известной мере одного или нескольких симптомов состояния или нарушения, подлежащего лечению. Терапевтически эффективное количество будет варьироваться в зависимости от соединения, нарушения или состояния и его серьезности и возраста, веса и т.д. подлежащего лечению млекопитающего.
- 19 024109
Термин тромбоцит относится к мелким, неядерным, дискообразным клеткам, которые встречаются в плазме крови млекопитающих и которые обладают функциями, способствующими свертыванию крови.
Термины предотвращать, предотвращение, предупреждение и их грамматические вариации, использованные здесь, относятся к способу частичной или полной задержки или пресечения начала или рецидива расстройства или состояния и/или одного или нескольких его сопутствующих симптомов, или ограждения субъекта от приобретения или повторного приобретения расстройства или состояния, или снижения риска для субъекта приобретения или повторного приобретения расстройства или состояния или одного или нескольких его сопутствующих симптомов. Термин реканализация относится к процессу восстановления течения или воссоединения прерванного канала тела, такого как кровеносный сосуд. Термин рестеноз относится к повторному сужению или закупорке артерии в том же месте, где уже осуществлялось лечение, такое как ангиопластика или стенирование.
Выражение селективно или специфически, когда относится к связыванию с рецептором, относится к реакции связывания, решающим фактором протекания которой является присутствие рецептора часто в виде неоднородной совокупности рецепторов и других биоагентов. Таким образом, при обозначенных условиях соединения связываются с отдельным рецептором по меньшей мере в два раза эффективнее, чем с фоном, и более типично более чем в 10-100 раз. Специфическое связывание соединения при таких условиях требует соединение, которое выбирают по его специфичности относительно отдельного рецептора. Например, небольшие органические молекулы могут быть скринированы с получением только тех соединений, которые специфически или селективно связываются с выбранным рецептором, а не с другими рецепторами или белками. Разнообразные форматы анализов можно использовать для выбора соединений, которые являются селективными для отдельного рецептора. Например, для выбора соединений, которые являются селективными для отдельного рецептора, обычно используют высокопроизводительный скрининг.
Использованный здесь термин серповидно-клеточная анемия относится к наследственному нарушению красных клеток крови, в которых обе аллели гемоглобина кодируют серповидный гемоглобиновый (8) белок, то есть 8/8 генотип. Присутствие аномального гемоглобина вызывает продуцирование клеток необыкновенной формы, которые в системе кровообращения не остаются жизнеспособными в течение обычного промежутка времени. Таким образом возникает анемия. Анемия состоит в уменьшении числа красных клеток крови и/или гемоглобина в крови. Термин серповидно-клеточное заболевание относится к наследственному нарушению красных клеток крови, в которых одна аллель гемоглобина кодирует серповидный гемоглобиновый (8) белок, а другая аллель кодирует другой необычный гемоглобиновый белок, такой как гемоглобин (8), (С), (Ό), (Е) и (βΤΙιαΙ). Примеры генотипов серповидноклеточного заболевания включают, без ограничения, 8/8, 8/С, 8/Ό, 8/Е и 8/βΤΗαΙ генотипы. Наиболее общие типы серповидно-клеточного заболевания включают серповидно-клеточную анемию, гемоглобинопатию С, серповидную β-плюс талассемию и серповидную β-нуль талассемию. Термин субъект, определенный здесь, включает животных, таких как млекопитающие, включая, но не ограничиваясь перечисленным, приматов (например, людей), коров, овец, коз, лошадей, собак, кошек, кроликов, крыс, мышей и т.п. В предпочтительных вариантах субъектом является человек.
Использованный здесь термин кук относится к селезеночной тирозинкиназе (РсГ8сс| инв. № Р04з405) или ее варианту, который является способным опосредствовать клеточный ответ к Τ-клеточным рецепторам ίη νίίτο или ίη νίνο, кук-варианты включают белки, по существу, гомологичные природной кук, то есть белки, имеющие один или несколько природных или неприродных аминокислотных делеций, инсерций или замен (например, кук производные, гомологи и фрагменты). Аминокислотная последовательность кук варианта предпочтительно является по меньшей мере на около 80% идентичной природной кук, более предпочтительно идентичной по меньшей мере на около 90% и наиболее предпочтительно идентичной по меньшей мере на около 95%.
Термин кук ингибитор относится к любому агенту, который ингибирует каталитическую активность селезеночной тирозинкиназы.
Термин тромбоз относится к блокировке или свертыванию крови в кровеносном сосуде, вызванном агрегацией клеток, что приводит к закупорке кровотока. Термин тромбоз относится к сгустку, который образуется внутри кровеносного сосуда.
Термины лечить, проводить лечение, лечение и их грамматические вариации, использованные здесь, включают частично или полностью задержку, облегчение, уменьшение или снижение интенсивности одного или нескольких сопутствующих симптомов расстройства или состояния и/или смягчение, уменьшение или воспрепятствование одному или нескольким причинам расстройства или состояния.
Лечение в соответствии с изобретением можно осуществлять превентивно, профилактически, паллиативно или ремедиально.
Термин сосуд относится к любому каналу для переноса текучей среды, такому как артерия или вена. Например, кровеносный сосуд относится к любому из сосудов, через которые кровь циркулирует в теле. Просвет кровеносного сосуда относится к внутреннему открытому пространству или полости
- 20 024109 кровеносного сосуда.
Варианты осуществления изобретения
а) Соединения.
Настоящее изобретение в одном варианте обеспечивает соединение, которое имеет формулу I
или его таутомер или фармацевтически приемлемую соль, где Ό1 означает Сз-8-циклоалкил, необязательно замещенный заместителем, независимо выбранным из группы, состоящей из Ц-8-алкила, амино, гидрокси, аминокарбонила и фенила;
К1 означает Н;
Υ1 означает фенил, необязательно замещенный С1-8-алкилом;
К2 означает гетероциклил, замещенный от 1 до 2 группами К3, выбранными из группы, состоящей из амино-С!-8-алкила-, С!-8-алкокси-С1-8-алкила-, оксо-, С1-8-алкилкарбонила, С3-8-циклоалкилкарбонила, гетероциклилкарбонила, С!-8-алкилкарбониламино, С!-8-алкилсульфонила и С3-8-циклоалкилсульфонила; и К2 является необязательно замещенным заместителем, выбранным из группы, состоящей из С1-8алкила, аминокарбонила и оксо;
где гетероциклил означает насыщенную или ненасыщенную неароматическую циклическую группу, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 атомов углерода и 1, 2, 3, 4 или 5 гетероатомов, независимо выбранных из кислорода, азота и серы. Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, где фрагмент -Υ1 -К2 выбирают из группы, состоящей из радикалов
Υ2 означает СН или С;
К4а выбран из группы, состоящей из Н и С1-8-алкила;
каждый К4с независимо выбран из группы, состоящей из Н, С1-8-алкила, аминокарбонила- и оксо; каждый К4Ь независимо выбран из группы, состоящей из Н, С1-8-алкила, амино, С1-8-алкокси и гетероциклила;
нижний индекс р равен 0, 1, 2 или 3;
волнистая линия показывает точку присоединения к остатку молекулы.
Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, где фрагмент -Υ’-К2 означает
и волнистая линия показывает точку присоединения к остатку молекулы.
Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, которое имеет формулу 1б1
- 21 024109
или его таутомер или его фармацевтически приемлемую соль.
Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, которое имеет формулу И2
О
Н3Лу
Ун п1 и ΝΗ О лУ
N N Н
ΝΗ, (М2) или его таутомер или его фармацевтически приемлемую соль.
Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, где Ό1 означает циклопропил. Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, где Ό1 означает циклобутил. Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, где Ό1 означает циклопентил. Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, которое имеет формулу о
Ум или его таутомер или его фармацевтически приемлемая соль.
Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, которое имеет формулу
или его таутомер или его фармацевтически приемлемую соль.
Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, которое имеет формулу
или его таутомер или его фармацевтически приемлемую соль, где Ό1 означает С3-8циклоалкил. Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, где Ό1 означает циклопропил или циклобутил.
Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, где Ό1 означает циклопропил. Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, где Ό1 означает циклобутил. Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение
- 22 024109
Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, где соединение является рассмотренным в примерах.
Настоящее изобретение в другом варианте обеспечивает соединение, которое имеет структуру, рассмотренную в таблицах.
Следует понимать, что в другой группе вариантов, любой из вышеупомянутых вариантов можно также объединять с другими вариантами, перечисленными здесь, с образованием иных вариантов осуществления изобретения.
b) Способы синтеза.
Соединения настоящего изобретения могут быть получены с помощью известных методик органического синтеза, включая, способы, описанные более детально в примерах. В общем, соединения вышеуказанной структуры (I) могут быть получены согласно следующей фиг. 3, где все заместители, если не указано иное, принимают значения согласно вышеприведённому определению.
Соединения, которые имеют формулу I, могут быть получены в соответствии с фиг. 3. Карбоновую кислоту 1.1 превращают в хлорангидрид кислоты 1.2 посредством одностадийной методики путем обработки хлорирующим агентом, таким как тионилхлорид, и затем осуществляют эстерификацию спиртом, таким как этанол, с образованием соединения 1.3, используя условия, подобные описанным ниже. Сложный эфир 1.3 дихлорируют хлорирующим агентом, таким как оксихлорид фосфора. Селективное замещение группы 4-хлор в 2,4-дихлорпиримидине с помощью соответствующего амина, такого как К1-Э1ΝΗ2 (доступный для приобретения или синтезированный с использованием способов, известных специалисту из уровня техники), в основных условиях, таких как использование диизопропиламина (ΌΙΑ), обеспечивает соединения формулы 1.5. Последующий гидролиз сложного эфира, замещение второй хлоргруппы с помощью БОС и обработка аммиаком дает соединение 1.7. Бензотриазолиловый простой эфир - соединение 1.7 - также может быть получен прямым путем. Замещение бензотриазолиловой простоэфирной группы соответствующим амином, таким как Ρ^Υ^ΝΗ (доступный для приобретения или синтезированный, с использованием способов, известных специалисту из уровня техники), дает целевой продукт I, где К1 и К2 принимают определенные ранее значения. Специалист в данной области техники осознает, что в определенных вариантах осуществления соединения структуры (I), когда К1-Э1 или К2-У! включают концевой гетероатом, может быть полезным при синтезе использовать стратегию защитных групп. Защитная группа может быть удалена с использованием способов, известных специалисту в данной области техники, с получением соединения структуры (1). Соединения настоящего изобретения обычно могут использоваться в виде свободных оснований. Альтернативно, соединения данного изобретения могут использоваться в виде соли присоединения кислоты, как описано ниже.
c) Ингибирование кук и ίΑΚ киназ.
Активность определенных соединений в качестве ингибитора ίΑΚ-киназы можно оценить ίη νίίτο или ίη νίνο. В некоторых вариантах осуществления активность определенного соединения можно тестировать в клеточном анализе. Селективность также можно было бы установить в биохимических анализах с изолированными киназами.
Подобный типы анализов можно использовать для оценки ΙΑΚ-киназной ингибирующий активность и для определения уровня селективности отдельного соединения к кук киназе. Одним из возможных анализов для определения такого ингибирования является детектирование действия соединений настоящего изобретения на повышающую регуляция нижележащих генных продуктов. В анализе Каток/ША В-клетки стимулируют цитокина интерлейкина-4 (ГБ-4), что приводит к активированию ίΑΚ/8ΐ;·ιΙ пути через фосфорилирование 1ΑΚ семейства киназ, 1ΑΚ1 и 1ΑΚ3, которые, в свою очередь, фосфорилируют и активируют фактор транскрипции 8ίаί-6. Один из генов, повышающе регулируемый посредством активированного 8ΤΑΤ-6, представляет собой низкоафинный !дЕ рецептор, СЭ23. Для изучения действия ингибиторов (например, 2,4-замещенных пиримидиндиаминовых соединений, описанных здесь) на ίΑΚ1 и 1ΑΚ3 киназы, Каток В-клетки человека стимулируют !Б-4 человека. Через 10' после стимуляции клетки подвергают внутриклеточный проточной цитометрии для измерения степени фосфорилирования 8ΤΑΤ-6. Через 20-24 ч после стимуляции клетки окрашивают для определения повышающей регуляции СИ23 и анализируют, используя проточную цитометрию. Снижение количества фосфорилированного 8ΤΑΤ-6 и/или СИ23 на клеточной поверхности в сравнении с контрольными условиями показывает, что тестируемое соединение активно ингибирует ίΑΚ-киназный путь. Кроме того, Ш-б стимуляция Каток В-клетки индуцирует ίΑΚκ 1, 2 и Τук2, что приводит к 8ίаί-3 и Егк фосфорилированию. Через 10' после стимуляции клетки подвергают внутриклеточный проточной цитометрии для измерения способности соединения ингибировать эти случаи фосфорилирования. Чтобы конкретно измерить активность 1ΑΚ2, используют линию клеток Се118епког ίτΠ-Ыа НЕБ, экспрессирующую β-лактамазный генрепортер, контролируемый 8ίаί5 Д^йтодеп, Карлсбад, Калифорния). Эти клетки экспрессируют конститутивно активный 1ΑΚ2 мутант (1ΑΚ2Υ617Ρ), найденный, как и следовало ожидать, в миелопролиферативных неоплазмах (Сопкйпйпекси, 8., и.др., Τιόη4κ Вюсйет δοΐ., 2008; 33:122-31). Уменьшение количества экспрессии β-лактамазного гена-репортера используют мерой 1ΑΚ2 ингибирующий активности соединения.
- 23 024109
Кроме того, активность соединений изобретения можно характеризовать с помощью анализа действия соединений настоящего изобретения, описанных здесь, на А549 эпителиальные клетки легкого и И937 клетки. А549 эпителиальные клетки легкого и И937 клетки повышающе регулируют IСΛΜ-1 (СЭ54) поверхностную экспрессию в ответ на разные стимулы. Следовательно, используя IСΛΜ-1 экспрессию в качестве индикатора, действия тестируемых соединений на разные сигнальные пути можно оценивать в таком же типе клеток. Стимуляция Ιϋ-1β через Ιϋ-1β рецептор активирует ТКАРб/ЫРкВ путь, что приводит к повышающей регуляции IСΛΜ-1. ΙΡΝγ индуцирует IСΛΜ-1, повышающую регуляцию через активирование 1АК1/1АК2 пути. Повышающая регуляция IСΛΜ-1 может быть измерена количественно с помощью проточной цитометрии через кривую дозы соединения, а значения ЕС50 подсчитаны.
Кроме того, активность соединений изобретения можно характеризовать с помощью анализа действия соединений настоящего изобретения, описанных здесь, на А549 эпителиальные клетки легкого и И937 клетки. А549 эпителиальные клетки легкого и И937 клетки повышающе регулируют IСΛΜ-1 (СЭ54) поверхностную экспрессию в ответ на разные стимулы. Следовательно, используя IСΛΜ-1 экспрессию в качестве индикатора, действия тестируемых соединений на разные сигнальные пути, можно оценивать в таком же типе клеток. Стимуляция Ιϋ-1β через Ιϋ-1β рецептор активирует ТКАРб/ЫРкВ путь, что приводит к повышающей регуляцией IСΛΜ-1. ΙΡΝγ индуцирует IСΛΜ-1, повышающую регуляцию через активирование 1АК1/1АК2 пути. Повышающая регуляция IСΛΜ-1 может быть измерена количественно с помощью проточной цитометрии через кривую дозы соединения, а значения ЕС50 подсчитаны. Иллюстративные анализы этого типа описываются более подробно в примерах.
Активные соединения, описанные здесь, обычно ингибируют 1АК-киназный путь, как измерено в описанных здесь анализах, с Ιί\0 в диапазоне около 1 мМ или менее. Несомненно, специалисты в данной области поймут, что соединения, которые демонстрируют более низкие значения Ιί\0 (приблизительно, например, 100, 75, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 5, 1 мкМ, 500, 100, 10, 1 нМ или даже ниже), могут быть особенно пригодными для терапевтических применений. В случаях, где желательна специфическая активность к отдельному типу клеток, соединение можно анализировать на активность с целевым типом клеток и проводить контрскрининг на отсутствие активности против других клеточных типов. Целевой уровень инертности в таких контрскринингах, или целевое отношение активности к инертности, может варьироваться для разных ситуаций и может быть выбран пользователем.
Активные соединения также типично ингибируют ΙΡ-4 стимулированную экспрессию СЭ23 в Вклетках с Ιί\0 в диапазоне около 20 мкМ или менее, типично в диапазоне около 10, 1 мкМ, 500, 100, 10, 1 нМ или даже ниже. Пригодными анализами, которые можно использовать, являются анализы, описанные в примерах Анализ линии В-клеток Каток, стимулированных ΙΡ-4. В определенных вариантах активные соединения настоящего изобретения в анализах, описанных в примерах, имеют Ιί\0 меньше чем или равную 5 мкМ, больше чем 5 мкМ, но меньше чем 20 мкМ, больше чем 20 мкМ или больше чем 20 мкМ, но меньше чем 50 мкМ. Активные соединения также типично ингибируют экспрессию IСΛΜ-1 (СЭ54), индуцированную ΙΡΝγ воздействием в И937 или А549 клетках с Ιί\0 в диапазоне около 20 мкМ или менее, типично в диапазоне около 10 мкМ, 1 мкМ, 500, 100, 10, 1 нМ или даже ниже. Ιί\0 относительно экспрессии IСΛΜ (СЭ54) в ΙΡΝγ в стимулированных клетках можно определять в функциональном клеточном анализе с изолированной А549 или И937 линией клеток. Пригодными анализами, которые можно использовать, являются анализы, описанные в примерах А549 Эпителиальная линия, стимулированная ΙΡΝ© и И937 ΙΡΝγ. ΚΑΜ! РАС8 анализ соответственно. В определенных вариантах активные соединения настоящего изобретения в анализах, описанных в примерах, имеют Ιί\0 меньше чем или равную 20 мкМ, больше чем 20 мкМ или больше чем 20мкМ, но меньше чем 50 мкМ.
б) Композиции и способы введения.
Настоящее изобретение далее обеспечивает композиции, включающие одно или несколько соединений формулы (Ι) или его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или пролекарство и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Чрезвычайно выгодно, что соединения формулы (Ι) в данном изобретении могут быть дериватизированы по функциональным группам с обеспечением пролекарственных производных, которые способны превращаться назад в исходные соединения ίη угуо. Примеры таких пролекарств включают физиологически приемлемые и метаболически нестабильные сложноэфирные производные, такие как метоксиметиловые сложные эфиры, метилтиометиловые сложные эфиры или пивалоилоксиметиловые сложные эфиры, производные от гидроксильной группы соединения или производные с карбамоильным фрагментом, производные от аминогруппы соединения. Кроме того, любые физиологически приемлемые эквиваленты соединений формулы (Ι), подобный метаболически нестабильным сложным эфирам или карбаматам, которые способны продуцировать исходные соединения формулы (Ι) ίη γί\Ό, находятся в рамках данного изобретения. Использованный здесь термин фармацевтически приемлемые соли относится к любой соли присоединения кислоты или основания, чьи противоионы являются нетоксичными для пациента в фармацевтических дозах указанной соли. Масса фармацевтически приемлемых солей хорошо известна в области фармацевтики. Если фармацевтически приемлемые соли соединений данного изобретения используют в этих композициях, то соли пред- 24 024109 почтительно являются производными от неорганический или органический кислоты и основания. Среди таких солей можно назвать следующие: ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептпноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат, ундеканоат, гидрогалогениды (например, гидрохлориды и гидробромиды), сульфаты, фосфаты, нитраты, сульфаматы, малонаты, салицилаты, метилен-бис-Ъ-гидроксинафтоаты, гентизаты, изетионаты, ди-п-толуоилтартраты, этансульфонаты, циклогексилсульфаматы, хинаты и т.п. Фармацевтически приемлемые соли присоединения основания включают, без ограничения, производные оснований щелочных или щелочно-земельных металлов или общепринятых органических оснований, таких как триэтиламин, пиридин, пиперидин, морфолин, Νметилморфолин, соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли натрия и калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и магния, соли органических оснований, такие как дициклогексиламиновые соли, Ν-метил-Э-глюкаминовые соли, и соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин и прочие.
Кроме того, группы, содержащие основной азот, могут быть кватернизированы агентами, подобными низшим алкилгалогенидам, таким как метил-, этил-, пропил- и бутилхлориды, -бромиды и -йодиды; диалкилсульфаты, такие как диметил-, диэтил-, дибутил- и диамилсульфаты, длинноцепочечные галогениды, такие как децил-, лаурил-, миристил- и стеарилхлориды, -бромиды и -йодиды; аралкилгалогениды, такие как бензил- и фенэтилбромиды и другие. Таким образом получают водо- или маслорастворимые или диспергируемые продукты.
Соединения, используемые в композициях и способах данного изобретения, также могут быть модифицированы путем дополнения соответствующей функциональностью для усиления селективных биологических свойств. Такие модификации известны в данной области техники и включают модификации, которые увеличивают биологическую проницаемость в данной биологической системе (такой как, кровь, лимфатическая система, центральная нервная система и т.д.), увеличивают пероральную доступность, увеличивают растворимость делая возможным введение путем инъекции, изменяют метаболизм и изменяют скорость экскреции. Фармацевтические композиции изобретения могут быть приготовлены с помощью способов, хорошо известных в данной области техники, таких как, среди прочего, общепринятые процессы гранулирования, смешивания, растворения, инкапсулирования, лиофилизации или эмульгирования. Композиции могут быть приготовлены в различных формах, включая гранулы, осадки или частицы, порошки, включая высушенные с помощью сублимации, ротационой сушилки или распыления порошки, аморфные порошки, таблетки, капсулы, сиропы, суппозитории, формы для инъекции, эмульсии, эликсиры, суспензии или растворы. Составы необязательно могут содержать стабилизаторы, рН модификаторы, поверхностно-активные вещества, модификаторы бионакопления и их комбинации.
Термин единичная лекарственная форма относится к физически отдельным единицам, пригодным в качестве однократного дозирования субъектам-людям и другим млекопитающим, каждая единица содержит заранее установленное количество лекарственного препарата, рассчитанное на то, чтобы привести к целевому проявлению, быть переносимым и/или вызвать терапевтические эффекты, совместно с подходящим фармацевтическим эксципиентом (например, в ампуле). Кроме того, могут быть приготовлены более концентрированные композиции, из которых затем могут быть приготовлены более разбавленные единичные лекарственные композиции. Более концентрированные композиции таким образом будут содержать, по существу, большее чем, например, по меньшей мере в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более раз количество одного или нескольких кук и/или ίΛΚ-ингибиторов.
Способы приготовления таких лекарственных форм известны специалистам в данной области техники (см., например, КеиппдЮп'к РЬаттасеиБса1 Заепсек, 18е изд., Маск РиЪБкЫпд Со., Истон, Пенсильвания (1990)). Кроме того, фармацевтически приемлемые соли кук и/или ίΛΚ-ингибиторов настоящего изобретения (например, соли присоединения кислоты) могут быть получены и включены в композиции с использованием стандартных методик, известных специалистам в области синтетической органической химии и описанных, например, в издании 1. Магск, Л'уапсе' Огдатс СкепикЦу: КеасБопк, Мескатктк ап' ЗБисШге, 4е изд. (Нью-Йорк: ХУПеу-БЛегкаепсе, 1992).
Композиции типично включают общепринятый фармацевтический носитель или эксципиент и могут, кроме того, включать другие лекарственные препараты, носители, адъюванты, разбавители, усилители проницаемости в ткани, солюбилизаторы и т.п. Предпочтительно композиция должна содержать от приблизительно 0,01 до приблизительно 90%, предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 75%, более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 50%, еще более предпочтительно от приблизительно 0,1 до 10 мас.% одного или нескольких кук и/или ίΛΚ-ингибиторов с остатком, состоящим из пригодных фармацевтических носителей и/или эксципиентов. Соответствующие эксципиенты могут быть приспособлены к каждой отдельной композиции и пути введения с помощью способов, хорошо известных в уровне техники, например, из КеиипдЮп'к РБаттасеиБса1 8с1епсек, кирга.
Фармацевтически приемлемые носители, которые можно использовать в этих композициях, вклю- 25 024109 чают ионообменные смолы, окись алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как сывороточный альбумин человека, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновую кислоту, сорбат калия, неполные глицеридные смеси насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протаминсульфат, вторичный кислый фосфат натрия, вторичный кислый фосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный кремнезём, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, полиакрилаты, воски, полиэтилен-полиоксипропиленовые блокполимеры, полиэтиленгликоль и шерстяной жир.
Примеры пригодных эксципиентов включают, но не ограничиваются перечисленным, лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмалы, гуммиарабик, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, раствор соли, сиропы, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и полиакриловые кислоты, такие как карбополы. Кроме того, композиции могут включать замасливатели, такие как тальк, стеарат магния и минеральное масло; смачивающие вещества; эмульгирующие агенты; суспендирующие агенты; консерванты, такие как метил-, этил- и пропилгидроксибензоаты; регуляторы рН, такие как неорганические и органические кислоты и основания; подсластители и ароматизирующие вещества.
Введение композиции, включающей один или несколько кук и/или 1АК-ингибиторов с одним или несколькими пригодными фармацевтическими эксципиентами, с преимуществом можно осуществить с помощью любого из общепринятых методов введения. Таким образом, введение может представлять собой, например, пероральное, местное, внутривенное, подкожное, чрескожное, трансдермальное, внутримышечное, внутрисуставное, парентеральное, внутриартериольное, внутрикожное, внутрижелудочковое, внутричерепное, внутрибрюшинное введение, введение внутрь пораженных тканей, интраназальное, ректальное, вагинальное введение, введение путем ингаляции или через имплантируемый резервуар. Использованный здесь термин парентеральный включает подкожное, внутривенное, внутримышечное, внутрисуставное, внутрисиновиальное, надчревное, интратекальное, внутрипеченочное введение, введение внутрь пораженных тканей и внутричерепные инъекции или методики вливания. Предпочтительно композиции вводят перорально или внутривенно. Составы изобретения могут предназначаться для осуществления кратковременного действия, быстрого действия или длительного действия. Более того, соединения предпочтительно можно вводить местными, а не системными методами, такими как введение (например, инъекция), поскольку местное введение обеспечивает длительное высвобождение состава. В соответствии с типичным вариантом композиции данного изобретения составлены для фармацевтического введения млекопитающему, предпочтительно человеку. Композиции настоящего изобретения, содержащие один или несколько кук и/или 1АК-ингибиторов, могут быть введены неоднократно, например по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или большее количество раз, или композиции могут быть введены путем непрерывного вливания. Пригодные места введения включают, но не ограничиваются перечисленным, кожу, бронхиальный участок, желудочно-кишечный тракт, анальный, вагинальный участки, глаза и ухо. Составы можно брать в форме твердого, полутвердого вещества, лиофилизированного порошка или жидких дозированных форм, таких как, например, таблетки, пилюли, капсулы, порошки, растворы, суспензии, эмульсии, суппозитории, удерживающие клизмы, кремы, мази, лосьоны, гели, аэрозоли или т.п., предпочтительно в единичных лекарственных формах, пригодных для простого введения точных дозировок. Фармацевтические композиции данного изобретения могут находиться в любой перорально приемлемой лекарственной форме, включая таблетки, капсулы, облатки, эмульсии, суспензии, растворы, сиропы, эликсиры, спреи, болюсы, пастилки, порошки, гранулы и составы с замедленным высвобождением. Пригодные эксципиенты для перорального введения включают фармацевтические категории маннита, лактозы, крахмала, стеарата магния, сахарина натрия, талька, целлюлозы, глюкозы, желатина, сахарозы, карбоната магния и т.п. В случае таблетки для перорального применения обычно используемые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Также типично добавляют замасливатели, такие как стеарат магния. Для инкапсулированной формы, пригодные разбавители включают лактозу и сухой кукурузный крахмал. Когда водные суспензии необходимы для перорального применения, активный ингредиент комбинируют с эмульгирующими и суспендирующими агентами. При необходимости, также могут быть добавлены определенные подсластители, ароматизирующие вещества или красители.
В некоторых вариантах осуществления композиции берут в форме пилюли, таблетки или капсулы, и, таким образом, композиция может содержать наряду с одним или несколькими кук и/или 1АКингибиторами разбавитель, такой как лактоза, сахароза, дикальций фосфат и т.п.; агент, вызывающий дезинтеграцию, такой как крахмал или его производные; смазывающее вещество, такое как стеарат магния и т.п.; и/или связующее вещество, такое как крахмал, гуммиарабик, поливинилпирролидон, желатин, целлюлоза и ее производные. Таблетка может быть изготовлена путем какого-либо процесса прессовки или литья, известного специалисту в данной области техники. Прессованные таблетки могут быть получены путем прессования в подходящей машине кук и/или 1АК-ингибиторов в сыпучей форме, например порошка или гранул, необязательно смешанных с вспомогательными ингредиентами, например связующими веществами, смазочными веществами, разбавителями, агентами, вызывающими дезинтеграцию, или диспергирующими веществами. Литые таблетки могут быть получены литьем на подходящей машине смеси порошкообразных кук и/или 1АК-ингибиторов с каким-либо пригодным носителем.
- 26 024109
Альтернативно, фармацевтические композиции данного изобретения могут находиться в виде суппозиториев для ректального введения. Они могут быть получены путем смешивание агента с подходящим эксципиентом, не вызывающим раздражение, который является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре, и, следовательно, будет плавиться в прямой кишке с высвобождением лекарственного средства. Такие вещества включают какао-масло, пчелиный воск, полиэтиленгликоль (ПЕГ), твердый жир и/или гидрированный кокоглицерид. Композиции, пригодные для ректального введения, могут также включать единицу в виде ректальной клизмы, содержащей один или несколько кук и/или 1АК-ингибиторов и фармацевтически приемлемые наполнители (например, 50% водный этанол или водный раствор соли), которые являются физиологически совместимыми с прямой кишкой и/или толстой кишкой. Единица ректальной клизмы содержит подающий наконечник, защищенный инертным покрытием, предпочтительно включающим полиэтилен, смазанный смазывающим веществом, таким как белый вазелин, и предпочтительно защищенный с помощью проточного клапана для предотвращения обратного течения дозированной смеси. Единица ректальной клизмы также имеет достаточную длину, предпочтительно два дюйма, подлежащей введению в толстую кишку через анальное отверстие.
Жидкие композиции могут быть приготовлены путем растворения или диспергирования одного или нескольких кук и/или 1АК-ингибиторов и необязательно одного или нескольких фармацевтически приемлемых адъювантов в носителе, таком как, например, водный раствор соли, водный раствор декстрозы, глицерин, этанол и т.п., с образованием раствора или суспензии, например, для перорального, местного или внутривенного введения. Фармацевтические составы могут быть получены в виде жидких суспензий или растворов с использованием стерильной жидкости, такой как масло, вода, спирт и их комбинации. Фармацевтически пригодные поверхностно-активные вещества, суспендирующие агенты или эмульгирующие агенты могут быть добавлены в составы для перорального или парентерального введения. Суспензии могут включать масла, такие как арахисовое масло, сезамовое масло, хлопковое масло, кукурузное масло и оливковое масло. Суспензионный препарат также может содержать сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат, изопропилмиристат, глицериды жирных кислот и ацетилированные глицериды жирных кислот. Суспензионные составы могут включать спирты, такие как этанол, изопропиловый спирт, гексадециловый спирт, глицерин и пропиленгликоль. Простые эфиры, такие как поли(этиленгликоль), углеводороды нефти, такие как минеральное масло и вазелин, и воду также можно использовать в суспензионных препаратах.
Фармацевтические композиции данного изобретения также могут находиться в форме для местного введения, в особенности когда цель лечения включает участки или органы, легко доступные путем местного применения, включая болезни глаз, кожи, или нижнего кишечного тракта. Пригодные составы местного применения быстро приготовляются для каждого из этих участков или органов. Для местного введения композиция, содержащая один или несколько кук и/или 1АК-ингибиторов, может находиться в виде эмульсий, лосьонов, гелей, пен, кремов, гелей, растворов, суспензий, мазей и трансдермальных пластырей.
Местное применение для нижнего кишечного тракта можно осуществлять посредством препарата ректального суппозитория (см. выше) или подходящего препарата клизмы. Также можно использовать местно-трансдермальные пластыри. Для местных применений фармацевтические композиции могут быть составлены в подходящую мазь, содержащую активный компонент, суспендированный или растворенный в одном или нескольких носителях. Носители для местного введения соединений данного изобретения включают, но не ограничиваются перечисленным, минеральное масло, жидкий вазелин, белый вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтиленовое, полиоксипропиленовое соединение, эмульгированный воск и воду. Альтернативно, фармацевтические композиции могут быть составлены в подходящий лосьон или крем, содержащий активные компоненты, суспендированные или растворенные в одном или нескольких фармацевтически приемлемых носителях. Пригодные носители включают минеральное масло, моностеарат сорбита, полисорбат 60, цетиловые сложные эфиры, воск, цетиловый спирт, 2октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.
Фармацевтические композиции данного изобретения также могут быть введены с помощью назального аэрозоля или ингаляции. Для доставки путем ингаляции композиции можно доставлять в виде сухого порошка или в жидкой форме через распылитель. Такие композиции получают в соответствии с технологией, известной в области фармацевтических препаратов, и могут быть получены в виде растворов в растворе соли с использованием бензилового спирта или других пригодных консервантов, промоторов абсорбции для увеличения биодоступности, фторуглеродов и/или других общепринятых солюбилизирующих или диспергирующих веществ.
Для офтальмологического применения фармацевтические композиции могут быть составлены в виде микронизированной суспензии в изотоническом, рН отрегулированном стерильном растворе соли, или предпочтительно в виде растворов в изотоническом, рН отрегулированном стерильном растворе соли, либо с, либо без консерванта, такого как хлорид бензилалкония. Альтернативно, для офтальмологических применений фармацевтические композиции могут быть составлены в мази, такие как вазелин.
Для парентерального введения композиции могут находиться в виде стерильных инъецируемых
- 27 024109 растворов и стерильных упакованных порошков. Предпочтительно инъецируемые растворы составляют при рН от приблизительно 4.5 до приблизительно 7.5.
Стерильные инъецируемые формы композиций данного изобретения могут быть водными или масляными суспензиями. Эти суспензии могут быть составлены в соответствии с технологией, известной в данной области техники, используя пригодные диспергирующие или смачивающие вещества и суспендирующие агенты. Стерильным инъецируемым препаратом также может быть стерильный инъецируемый раствор или суспензия в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например раствор в 1,3-бутандиоле. Среди приемлемых наполнителей и растворителей, которые можно использовать для данной цели, присутствуют вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильными, нелетучими маслами являются общеиспользуемые в качестве растворителя или суспендирующей среды масла. Для этой цели могут использоваться любые легкие нелетучие масла, включая синтетические моно- или диглицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, так же как и природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, в особенности в форме своих полиоксиэтилированных производных, являются пригодными при приготовлении инъецируемых форм. Эти масляные растворы или суспензии могут также содержать длинноцепочечный спирт - разбавитель или дисперсант, такой как карбоксиметилцеллюлоза или подобные диспергирующие вещества, которые широко применяются при приготовлении фармацевтически приемлемых лекарственных форм, включая эмульсии и суспензии. Другие широкоприменяемые поверхностно-активные вещества, такие как Т\уеепк, 8рапк и другие эмульгирующие агенты или усилители бионакопления, которые широко применяются при изготовлении фармацевтически приемлемых твердых, жидких или других лекарственных форм, также можно использовать с целью приготовления препарата. Соединения могут быть составлены для парентерального введения путем инъекции, например посредством болюсной инъекция или непрерывного вливания. Единичная лекарственная форма для инъекций может находиться в ампуле или в многодозовых контейнерах.
Композиции настоящего изобретения также могут быть обеспечены в лиофилизированной форме. Такие композиции могут включать буфер, например бикарбонат, для восстановления перед введением, или буфер может быть включен в лиофилизированную композицию для восстановления, например, с помощью воды. Лиофилизированная композиция может дополнительно включать подходящий вазоконстриктор, например эпинефрин. Лиофилизированную композицию можно обеспечить в шприце, необязательно упакованном в комбинации с буфером для восстановления, так что восстановленную композицию можно непосредственно вводить пациенту.
Любые вышеприведенные лекарственные формы, содержащие эффективные количества, находятся в рамках стандартного экспериментирования и в рамках изобретения. Терапевтически эффективная доза может изменяться в зависимости от пути введения и лекарственной формы. Типичное соединение или соединения изобретения являются препаратом, который демонстрирует высокий терапевтический индекс. Терапевтический индекс представляет собой дозовое отношение между токсическим и терапевтическим действием, которое можно представить в виде отношения между ΕΌ50 и ΕΌ50. ΕΌ50 означает дозу, летальную для 50% популяции, а ΕΌ50 означает дозу, терапевтически эффективную для 50% популяции. ЬП50 и ΕΌ50 определяют с помощью стандартных фармацевтических процедур в культурах клеток животных или на подопытных животных.
Кроме типичных лекарственных форм, описанных выше, другие фармацевтически приемлемые эксципиенты и носители и лекарственные формы, общеизвестные специалистам в данной области техники, включены в изобретение. Должно быть понятно, что конкретная дозировка и схема лечения для какого-либо отдельного пациента будут зависеть от множества факторов, включая активность конкретно используемого соединения, возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол и режим питания пациента и время введения, скорость экскреции, комбинации лекарственных препаратов, мнения проводящего лечение врача и серьезности отдельного заболевания, подлежащего лечению. Количество активного(ых) ингредиент(ов) также будет зависеть от конкретно используемого в композиции соединения и в случае присутствия других терапевтических средств.
е) Способы применения.
Изобретение обеспечивает способы ингибирования или понижения активности кук и/или .ТАК, а также лечения или улучшения кук- и/или .ТАК-связанных положений, симптома, состояния, расстройства или заболевания у пациентов, нуждающихся в этом (например, у человека или животного, не являющегося человеком). В одном варианте осуществления кук- и/или .ТАК-связанное положение, симптом, состояние, расстройство или заболевание является опосредованным, по меньшей мере частично, кук- и/или .ТАК-киназной активностью. В более специфических вариантах настоящее изобретение обеспечивает способ лечения состояния или нарушения, опосредованного, по меньшей мере частично, кук- и/или 1АКкиназной активностью, которое представляет собой сердечно-сосудистое заболевание, воспалительное заболевание или аутоиммунную болезнь.
В одном варианте осуществления изобретение обеспечивает способы предотвращения или лечения состояния у млекопитающих, характеризующегося нежелательным тромбозом, включающие стадию введения млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения настоящего изобретения.
- 28 024109
Такие состояния включают, но не ограничиваются перечисленным, рестеноз, острый коронарный синдромом, инфаркт миокарда, нестабильную стенокардию, рефрактерную стенокардию, окклюзивный коронарный тромбоз, случающийся после тромболитической терапии или после коронарной ангиопластики, тромботически опосредованный цереброваскулярный синдром, эмболический инсульт, тромботический инсульт, преходящие ишемические нарушения мозгового кровообращения, тромбоз вен, тромбоз глубоких вен, эмболию сосудов легких, коагулопатию, генерализованный тромбогеморрагический синдром, тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру, облитерирующий тромбангиит, тромботическое заболевание, связанное с гепарин-индуцированной тромбоцитопенией, тромботические осложнения, связанные с искусственным кровообращением, тромботические осложнения, связанные с применением инструментария, такого как используемый при сердечной или другой интраваскулярной катетеризации, внутриаортальный баллон-насос, коронарный стент или сердечный клапан, состояния, требующие установки протезных приспособлений, и т.п.
В дальнейшем варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения тромбоза, иммунной тромбоцитарной пурпуры, гепарин-индуцированной тромбоцитопении, дилатационной кардиомиопатии, серповидно-клеточного заболевания, атеросклероза, инфаркта миокарда, васкулярного воспаления, нестабильной стенокардии или острых коронарных синдромов.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения аллергии, астмы, ревматоидного артрита, опосредованного В-клетками заболевания, такого как неходжкинская лимфома, антифосфолипидного синдрома, волчанки, псориаза, рассеянного склероза, терминальной стадии почечной недостаточности или хронической лимфоцитарной лейкоза. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения гемолитической анемии или иммунной тромбоцитопенической пурпуры.
Соединения, описанные здесь, также являются эффективными и/или селективными ингибиторами .ТАК-киназ. В качестве результата этой активности соединения можно использовать в разнообразных ш νίίΐΌ, ш У1уо и ех У1уо средах для регулирования или ингибирования .ТАК-киназной активности, каскадов передачи сигналов, в которых играют роль .ТАК киназы, и биологических реакций, осуществляемых такими каскадами передачи сигналов. Например, в одном варианте осуществления соединения можно использовать для ингибирования .ТАК-киназы, либо ш νίΙΐΌ или ш У1уо, в фактически любом типе клеток, экспрессирующих .ТАК-киназу, например, в гематопоэтических клетках, в которых, например, преимущественно экспрессируется 1АК3. Они также могут использоваться для регулирования каскадов сигнальной трансдукции, в которых играют роль .ТАК-киназы, особенно 1АК3. Такие .ТАК-зависимые каскады сигнальной трансдукции включают, но не ограничиваются перечисленным, каскады передачи сигналов цитокиновых рецепторов, которые вовлекают общую гамма цепь, такие как, например, каскады передачи сигналов 1Ь-4, 1Ь-7, 1Ь-5, 1Ь-9, 1Ь-15 и 1Ь-21 или 1Ь-2, 1Ь-4, 1Ь-7, 1Ь-9, 1Ь-15 и 1Ь-21 рецепторов. Соединения также можно использовать ш У11го или ш У1уо для регулирования и, в частности, для ингибирования клеточных или биологических реакций, находящихся под влиянием таких .ТАК-зависимых каскадов сигнальной трансдукции. Такие клеточные или биологические реакции включают, но не ограничиваются перечисленным, 1Ь-4/гаток СИ23 повышающую регуляцию и 1Ь-2 опосредованную Τклетками пролиферацию. Существенно, что соединения можно использовать для ингибирования .ТАК киназ 1п У1уо в качестве терапевтического подхода для лечения или предупреждения заболеваний, опосредованных либо полностью, либо частично активностью .ТАК-киназы (упомянуты здесь как заболевания, опосредованные .ТАК-киназой). Неограничивающие примеры заболеваний, опосредованных 1АКкиназой, которые можно лечить или предотвращать с помощью соединений, включают, но не ограничиваются перечисленным, следующие: аллергию; астму; аутоиммунные заболевания, такие как отторжение трансплантата (например, почки, сердца, лёгкого, печени, поджелудочной железы, кожи, тонкой кишки, толстой кишки, реакция хозяин против трансплантата (НУОК) и реакция трансплантат против хозяина (ОУНК)), ревматоидный артрит и боковой амиотрофический склероз; опосредованные Т-клетками аутоиммунные заболевания, такие как рассеянный склероз, псориаз и ксеродерматоз; воспалительные заболевания типа II, такие как васкулярное воспаление (включая васкулит, артериит, атеросклероз, и заболевание коронарной артерии); заболевания центральной нервной системы, такие как удар; заболевания легких, такие как облитерирующий бронхит и первичная легочная гипертензия; серьезные, отсроченные реакции гиперчувствительности IV типа; и гематологические злокачественные образования, такие как лейкоз и лимфомы.
Примеры заболеваний, которые опосредуются, по меньшей мере частично, .ТАК киназами, которые можно лечить или предотвращать в соответствии с указанными способами, включают, но не ограничиваются перечисленным, аллергию, астму, аутоиммунные заболевания, такие как отторжение трансплантата (например, почки, сердца, лёгкого, печени, поджелудочной железы, кожи, реакция хозяин против трансплантата (ΗνΟΚ) и т.д.), ревматоидный артрит, боковой амиотрофический склероз, рассеянный склероз, псориаз и ксеродерматоз, воспалительное заболевание II типа, такое как васкулярное воспаление (включая васкулит, артериит, атеросклероз и заболевание коронарной артерии) или другие воспалительные заболевания, такие как остеоартрит, воспалительные заболевания кишечника, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, идиопатическое воспалительное заболевание кишечника, синдром раздра- 29 024109 женной кишки, спастическую толстую кишку, неудовлетворительное рубцевание (например, склеродермия, повышенный фиброз, келоиды, послеоперационные рубцы, пульмональный фиброз, васкулярные спазмы, мигрень, реперфузионное повреждение и рубцы после инфаркта миокарда), комплекс или синдром Сикка, заболевания центральной нервной системы, такие как удар, заболевания легких, такие как облитерирующий бронхит и первичная легочная гипертензия, отсроченная или клеточно-опосредованная гиперчувствительность IV типа и солидные и гематологические злокачественные образования, такие как лейкоз и лимфомы. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ ингибирования активности .ГАК-киназы, включающий введение в контакт .ГАК-киназы с количеством соединения, эффективным для ингибирования активности .ТЛК-киназы, где соединение выбирают из соединений данного изобретения. В определенных вариантах осуществления способов, описанных здесь, способ проводят ίη νίνο.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ ингибирования активности .ТЛК-киназы, включающий введение в контакт ίη νίίτο 1ЛКз киназы с количеством соединения, эффективным для ингибирования активности .ТЛК-киназы, где соединение выбирают из соединений данного изобретения.
В отдельном варианте соединения можно использовать для лечения и/или предотвращения отторжения органа и/или ткани у реципиентов, которым произвели их пересадку (то есть для лечения и/или предотвращения отторжения аллотрансплантата). Аллотрансплантаты могут быть отторгнуты из-за либо клеточно-опосредованной, либо гуморальной иммунной реакции реципиента против трансплантата (гистосовместимость) антигенов, присутствующих на мембранах клеток донора. Сильнейшие антигены регулируются комплексом генетических локусов, названных антигенами лейкоцитов человека группы А (НЬА). Вместе с антигенами групп крови АВО они руководят трансплантационными антигенами, которые поддаются обнаружению у людей.
Отторжение после трансплантации обычно можно разделить на три категории: сверхострое, случающееся во временной промежуток от часа до нескольких дней после трансплантации; острое, случающееся во временной промежуток от нескольких дней до нескольких месяцев после трансплантации; и хроническое, случающееся во временной промежуток от нескольких месяцев до нескольких лет после трансплантации.
Сверхострое отторжение вызывается, главным образом, продуцированием антител хозяина, которые атакуют ткани трансплантата. При реакции сверхострого отторжения антитела наблюдают в сосудах трансплантата через очень короткое время после трансплантатации. Вскоре после этого происходит свертывание крови в сосудах, что приводит к ишемии, окончательному некрозу и смерти. Инфаркт трансплантата нечувствителен к известным иммуносупрессорным терапиям. Так как НЬА антигены могут быть идентифицированы ίη νίίτο для значительного уменьшения случаев сверхострого отторжения используют скрининг перед трансплантацией. Благодаря такому скринингу, сверхострое отторжение относительно редко встречается сегодня. Острое отторжение, как полагают, является опосредованным накоплением антиген-специфических клеток в ткани трансплантата. Опосредованная Τ-клетками иммунная реакция против этих антигенов (то есть НVΟΚ или ОУНК.) является главным механизмом острого отторжения. Накопление этих клеток вызывает повреждение ткани трансплантата. Полагают, что и СЭ4+ хелперные Τ-клетки и СЭ8+ цитотоксические Τ-клетки вовлекаются в данный процесс, и что антиген представляется донором и дендритными клетками хозяина. СЭ4+ хелперные Τ-клетки помогают ректутированию других эффекторных клеток, таких как мегалофаги и эозинофилы, в трансплантат. Подключение каскадов сигнальной трансдукции активирования Τ-клеток (например, СЭ28. СО40Ь и СЭ2 каскадов) также вовлечено.
Развитие клеточно-опосредованного острого отторжения может быть обращено во многих случаях путем усиления иммунотерапии. После успешного обращения отторжения сильно повреждённые элементы трансплантата заживают путем образования фиброзной ткани, а остальная часть трансплантата является нормальной. После прекращения острого отторжения дозировка иммуносупрессоров может быть снижена до очень низких уровней.
Хроническое отторжение, которое является специфической проблемой почечных трансплантатов, часто развивается незаметно, несмотря на усиленную иммуносупрессивную терапию. Оно, как полагают, в значительной степени обусловлено клеточно-опосредованной гиперчувствительностью IV типа. Патологический профиль отличается от такового острого отторжения. Артериальный эндотелий прежде всего вовлекается в экстенсивную пролиферацию, которая постепенно закрывает просвет сосуда, что приводит к ишемии, фиброзу, утолщению интимы и атеросклеретическим изменениям. Хроническое отторжение развивается, главным образом, вследствие прогрессивной облитерации сосудистой сети трансплантата и похоже на медленный, васкулитический процесс. При гиперчувствительности IV типа, СЭ8 цитотоксические Τ-клетки и СЭ4 хелперные Т клетки опознают либо внутриклеточный либо внеклеточный синтезированный антиген, когда он образует комплекс, соответственно, либо с классом I, либо с классом II МНС молекул. Макрофаги функционируют в качестве антиген-представляющих клеток и высвобождают ГН, который промотирует пролиферацию хелперных Τ-клеток. Хелперные Τ-клетки высвобождают интерферон гамма и ^-2, которые вместе регулируют отсроченные реакции гиперактивности, опосредо- з0 024109 ванные активированием макрофагов и иммунитет, опосредованный Т клетками. В случае органатрансплантата цитотоксические Т-клетки разрушают клетки трансплантата при соприкосновении.
Так как 1АК киназы играют решающую роль в активировании Т-клеток, соединения, описанные здесь, можно использовать для лечения и/или предотвращения многих аспектов отторжения трансплантата, и являются особенно пригодными при лечении и/или предупреждении реакций отторжения, которые опосредуются, по меньшей мере частично, Т-клетками, такими как НУОК или ОУНК. Соединения также можно использовать для лечения и/или предотвращения хронического отторжения у реципиентов, которым произвели их пересадку, и, в особенности, у реципиентов, которым произвели пересадку почки. Соединение также можно вводить в ткани или органы перед осуществлением трансплантации ткани или органа реципиенту трансплантата.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения опосредованного Т-клетками аутоиммунного заболевания, включающий введение пациенту, страдающего от такого аутоиммунного заболевания, количества соединения, эффективного для лечения аутоиммунного заболевания, где соединение выбирают из соединений изобретения. В определенных вариантах осуществления способов аутоиммунное заболевание является рассеянным склерозом (РС), псориазом или ксеродерматозом. Такое аутоиммунное заболевание включает, но не ограничиваются перечисленным, аутоиммунные заболевания, которые часто называют аутоиммунными нарушениями одного органа или одного типа клеток, и аутоиммунное заболевание, которое часто называют системным аутоиммунным нарушением. Неограничивающие примеры заболеваний, которые часто называют аутоиммунными нарушениями одного органа или одного типа клеток, включают тиреоидит Хашимото, аутоиммунную гемолитическую анемию, злокачественную анемию при аутоиммунном атрофическом гастрите, аутоиммунный энцефаломиелит, аутоиммунный орхит, синдром Гудпасчера, аутоиммунную тромбоцитопению, симпатическую офтальмию, миастению гравис, болезнь Грейвса, первичный билиарный цирроз печени, хронический агрессивный гепатит, неспецифический язвенный колит и мембранозную гломерулопатию. Неограничивающие примеры заболеваний, которые часто называют системным аутоиммунным нарушением включают: системную красную волчанку, ревматоидный артрит, ксеродерматоз, синдром Рейтера, полимиозит-дерматомиозит, системный склероз, нодозный полиартериит, рассеянный склероз и буллёзный пемфигоид. Дополнительные аутоиммунные заболевания, которые могут опосредствоваться β-клетками (гуморальными) или Т-клетками, включают синдром Когана, анкилозирующий спондилоартрит, гранулематоз Вегенера, аутоиммунную алопецию, диабет типа I или юношеский диабет и тиреоидит.
Типы аутоиммунных заболеваний, которые можно лечить или предотвращать такими пролекарствами, обычно включают нарушения, вызывающие повреждение ткани, которое случается в результате гуморального и/или клеточно-опосредованного ответа на иммуногены или антигены эндогенного и/или экзогенного происхождения. Такие заболевания часто называют заболеваниями, вызывающими неанафилактические (то есть типа II, типа III и/или типа 1У) реакции гиперчувствительности.
Реакции гиперчувствительности типа I обычно происходят вследствие высвобождения фармакологически активных веществ, таких как гистамин, из тучных клеток и/или базофильных клеток после контакта с специфическим экзогенным антигеном. Как отмечалось выше, такие реакции типа I играют роль в многочисленных заболеваниях, включая аллергическую астму, аллергический ринит и т.д. Реакции гиперчувствительности типа II (также рассматриваемые как цитотоксические, цитолитические комплементзависимые или клеточностимулирующие реакции гиперчувствительности) происходят, когда иммуноглобулины реагируют с антигенными компонентами клеток или ткани или с антигеном или гаптеном, который становится тесно связанным с клетками или тканью. Заболевания, которые обычно связанны с реакциями гиперчувствительности типа II, включают, но не ограничиваются перечисленным, аутоиммунную гемолитическую анемию, гемолитическую желтуху новорождённых и синдром Гудпасчера.
Реакции гиперчувствительности типа III, (также рассматриваемые как реакции гиперчувствительности токсичного, растворимого или иммунного комплекса) происходят вследствие отложения растворимых циркулирующих антиген-иммуноглобулиновых комплексов в сосудах или в тканях, с сопутствующими острыми воспалительными реакциями в местах отложения иммунных комплексов. Неограничивающие примеры заболеваний, связанных с реакциями прототипичного типа III, включают феномен Артюса, ревматоидный артрит, сывороточную болезнь, системную красную волчанку, определенные типы гломерулонефрита, рассеянный склероз и буллезный пемфингоид.
Реакции гиперчувствительности типа IV типа (часто называемые клеточными, клеточноопосредованными, отсроченными реакциями гиперчувствительности или реакциями гиперчувствительности туберкулинового типа) вызываются сенсибилизированными Т-лимфоцитами, которые являются следствием контакта с специфическим антигеном. Неограничивающими примерами заболеваний, цитированых в качестве касающихся реакций типа IV, являются контактный дерматит и отторжение аллотрансплантата.
Аутоиммунные заболевания, связанные с любой из вышеперечисленных реакций неанафилактической гиперчувствительности, можно лечить или предотвращать с помощью пролекарств в соответствии со структурными формулами (I) и (Ш). В особенности способы можно использовать для лечения или предотвращения аутоиммунных заболеваний, часто характеризующихся как аутоиммунные нарушения
- 31 024109 одного органа или одного типа клеток, включая, но не ограничиваясь перечисленным, тиреоидит Хашимото, аутоиммунную гемолитическую анемию, злокачественную анемию при аутоиммунном атрофическом гастрите, аутоиммунный энцефаломиелит, аутоиммунный орхит, синдром Гудпасчера, аутоиммунную тромбоцитопению, симпатическую офтальмию, миастению гравис, болезнь Грейвса, первичный билиарный цирроз печени, хронический агрессивный гепатит, неспецифический язвенный колит и мембранозную гломерулопатию, а также аутоиммунные заболевания, часто характеризующиеся как системные аутоиммунные нарушения, которые включают, но не ограничиваются перечисленным: системную красную волчанку (8ЬЕ), ревматоидный артрит, ксеродерматоз, синдром Рейтера, полимиозит-дерматомиозит, системный склероз, нодозный полиартериит, рассеянный склероз и буллёзный пемфигоид.
Специалистам в данной области будет ясно, что многие из перечисленных выше аутоиммунных заболеваний связаны с серьёзными симптомами, уменьшение интенсивности которых обеспечивает существенное терапевтическое преимущество даже в тех случаях, где основное аутоиммунное заболевание не может быть облегчено. Терапия с использованием описанных здесь соединений может проводиться самостоятельно, или она может проводиться в комбинации с другими или дополнительно к другим общественным иммуносупрессорным терапиям, таким как, например, следующие: меркаптопурины; кортикостероиды, такие как преднизон; метилпреднизолон и преднизолон; алкилирующие агенты, такие как циклофосфамид; ингибиторы кальциневрина, такие как циклоспорин, сиролимус и такролимус; ингибиторы инозинмонофосфатдегидрогеназы (ΙΜΡΌΗ), такие как микофенолат, микофенолат мофетил и азатиоприн; и агенты, предназначенные для подавления клеточного иммунитета без влияния на гуморальный иммунный ответ реципиента, включая различный антитела (например, антилимфоцитарный глобулин (ЛЬО), антитимоцитарный глобулин (ЛТО), моноклональные анти-Т-клеточные антитела (ОКТ3)) и облучение. Эти различные агенты можно использовать в их стандартных или общепринятых дозировках, как указанно в инструкциях по медицинскому применению препаратов, доступных для приобретения форм лекарственных средств (см. также указания по применению препаратов 2006 г. изд. ТНе РНукШап'к Эекк КеГегепсе), раскрытия которых включены в данный документ путем ссылки. Азатиоприн в настоящее время доступен от фирмы 8аНх РНагтасеийса1к, 1пс., под фирменным названием ΛΖΆ8ΆΝ; меркаптопурины в настоящее время доступны от фирмы Са1е РНагтасеиНсак, 1пс., под фирменным названием РиКГЫЕТНОЬ; преднизон и преднизолон в настоящее время доступны от фирмы Кохапе ЬаНоНсрЫсаопек, 1пс.; метил преднизолон в настоящее время доступен от фирмы Р^ег; сиролимус (рапамицин) в настоящее время доступен от фирмы \Ууе1Н-Ауегк1 под фирменным названием КАРАМиЫЕ; такролимус в настоящее время доступен от фирмы Риркаа под фирменным названием РКООКАР; циклоспорин в настоящее время доступен от фирмы ЫоуагНк под фирменным названием 8ΑΝΏΙΜΜυΝΕ и от фирмы АНЬой под фирменным названием ОЕЫОКАР; 1МРЭН ингибиторы, такие как микофенолат мофетил и микофеноловая кислота в настоящее время доступны от фирмы КосНе под фирменным названием СЕЬЬСЕРТ и от фирмы ЫоуагНк под фирменным названием МУРОКТ1С; азатиоприн в настоящее время доступен от фирмы О1ахо 8тйН КНпе под фирменным названием ГМПКАЫ; и антитела в настоящее время доступны от фирмы ОйНо Вю1есН под фирменным названием ОКТНОСЬОЫЕ, от фирмы ЫоуагНк под фирменным названием 81МиЬЕСТ (базиликсимаб) и от фирмы КосНе под фирменным названием ΖЕNΑРАХ (даклизумаб).
В другом варианте осуществления соединения могли бы вводиться либо в комбинации с ингибитором кук киназы, либо дополнительно к нему, кук киназа является тирозинкиназой, известной по ее решающей роли в Рсу-рецепторной передаче сигналов, а также в других каскадах передачи сигналов, таких как те, которые вызывают передачу сигналов через В-клеточный рецептор (Тигпег и др., (2000), 1ттипо1оду То'ау 21:148-154) и интегрины β (1), β (2), и β (3) в нейтрофилах (Моска1 и др., (2002), 1ттипНу 16:547-558). Например, кук киназа играет центральную роль в передаче сигналов через высокоаффинный 1дЕ рецептор в тучных клетках, что вызывает активирование и последующее высвобождение множества химических медиаторов, которые инициируют аллергические атаки. Однако в отличие от 1АК-киназ, которые помогают регулировать пути, вовлеченные в отсроченные или клеточно-опосредованные реакции гиперчувствительности IV типа, кук киназа помогает регулировать пути, вовлеченные в непосредственно 1дЕ-опосредованные реакции гиперчувствительности I типа. Определенные соединения, которые оказывают воздействие на кук путь могут или также не могуг оказывать воздействие на 1АК-сигнальные пути.
Пригодные соединения, ингибирующие кук, описываются, например, в заявках порядк. № 10/355543, поданной 31 января 2003 (публикация № 2004/0029902); \УО 03/063794; порядк. № 10/631029, поданной 29 июля 2003; \УО 2004/014382; порядк. № 10/903263, поданной 30 июля 2004; РСТ/и8 2004/24716, поданной 30 июля 2004 (\УО 005/016893); порядк. № 10/903870, поданной 30 июля 2004; РСТ/и8 2004/24920, поданной 30 июля 2004; порядк. № 60/630808, поданной 24 ноября 2004; порядк. № 60/645424, поданной 19 января 2005; и порядк. № 60/654620, поданной 18 февраля 2005, раскрытия которых включены в данный документ путем ссылки. Описанные здесь кук-ингибирующие соединения могут использоваться одни, или в комбинации с одним или несколькими общепринятыми курсами лечения отторжения трансплантата, как описано выше. В отдельном варианте соединения можно использовать
- 32 024109 для лечения или предотвращения этих заболеваний у пациентов, которые либо в начальной стадии нечувствительны (стойки), либо которые становятся нечувствительными к лечению зук-ингибирующими соединениями или одним из других современных методов лечения для конкретного заболевания. Данные соединения также можно было бы использовать в комбинации с зук-ингибирующими соединениями у пациентов, которые являются стойкими или нечувствительными к зук-соединениям. Пригодные зукингибирующие соединения, с которыми могут быть введены данные соединения, обеспечиваются ниже.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения опосредованного Т-клетками аутоиммунного заболевания, включающий введение пациенту, страдающему от такого аутоиммунного заболевания, количества соединения, эффективного для лечения аутоиммунного заболевания, где соединение выбирают из соединений изобретения, как описано в данном документе, и соединение вводят в комбинации с соединением или дополнительно к соединению, которое ингибирует зук киназу с 1С50 в диапазоне по меньшей мере 10 мкМ. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения отторжения аллотрансплантата у реципиента трансплантата, включающий введение реципиенту трансплантата количества соединения, эффективного для лечения или предотвращения отторжения, где соединение выбирают из соединений изобретения, как описано в данном документе. В дальнейшем варианте осуществления соединение вводят в ткань или орган перед осуществлением трансплантации ткани или органа реципиенту трансплантата. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения отторжения аллотрансплантата у реципиента трансплантата, в котором отторжение является острым отторжением, включающий введение реципиенту трансплантата количества соединения, эффективного для лечения предотвращения отторжения, где соединение выбирают из соединений изобретения. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения отторжения аллотрансплантата у реципиента трансплантата, в котором отторжение является хроническим отторжением, включающим введение реципиенту трансплантата количества соединения, эффективного для лечения предотвращения отторжения, где соединение выбирают из соединений изобретения.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения отторжения аллотрансплантата у реципиента трансплантата, в котором отторжение является опосредованным НУОК или ОУНК, включающий введение реципиенту трансплантата количества соединения, эффективного для лечения предотвращения отторжения, где соединение выбирают из соединений данного изобретения, как описано в данном документе. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения отторжения аллотрансплантата у реципиента трансплантата, в котором аллотрансплантат выбирают из почки, сердца, печени и лёгкого, включающий введение реципиенту трансплантата количества соединения, эффективного для лечения предотвращения отторжения, где соединение выбирают из соединений данного изобретения, как описано в данном документе. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения отторжения аллотрансплантата у реципиента трансплантата, в котором аллотрансплантат выбирают из почки, сердца, печени и лёгкого, включающий введение реципиенту трансплантата количества соединения, эффективного для лечения или предотвращения отторжения, где соединение выбирают из соединений изобретения, как описано в данном документе, в котором соединение вводят в комбинации с другим иммуносупрессором или дополнительно к нему. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения отторжения аллотрансплантата у реципиента трансплантата, в котором аллотрансплантат выбирают из почки, сердца, печени и лёгкого, включающий введение реципиенту трансплантата количества соединения, эффективного для лечения предотвращения отторжения, где соединение выбирают из соединений изобретения, как описано в данном документе, в котором соединение вводят в комбинации с другим иммуносупрессором или дополнительно к нему, в котором иммуносупрессор выбирают из циклоспорина, такролимуса, сиролимуса, ингибитора ΙΜΡΌΗ, микофенолата, микофенолат мофетила, анти-Т-клеточного антитела и ОКТ3.
Соединения, описанные здесь, являются цитокиновыми модераторами сигнализации 1Ь-4. Вследствие этого, соединения могли бы замедлять ответ реакции гиперчувствительности типа Ι. Таким образом, в отдельном варианте соединения могли бы быть применены для профилактического лечения таких реакций и, следовательно, заболеваний, связанных, опосредованных или вызываемых такими реакциями гиперчувствительности (например, аллергии). Например, страдающий аллергией пациент мог бы один или несколько 1АК-селективных соединений, описанных здесь, перед вероятным контактом с аллергенами для задержки начала или развития, или полного устранения аллергической реакции.
При использовании для лечения или предотвращения таких заболеваний соединения могут быть введены отдельно, в виде смеси одного или нескольких соединений или в смеси или комбинации с другими агентами, пригодными для проведения лечения таких заболеваний и/или симптомов, связанных с такими заболеваниями. Соединения можно также вводить в смеси или в комбинации с агентами, пригодными для лечения других нарушений или недомоганий, такими как, например, стероиды, стабилизаторы мембраны, ингибиторы 5-липоксигеназы (5ЬО), ингибиторы синтеза и рецепторов лейкотриена, ингибиторы 1дЕ переключения изотипа или 1дЕ синтеза, 1дС переключения изотипа или 1§О синтеза, β- 33 024109 агонисты, ингибиторы триптазы, аспирин, ингибиторы циклооксигеназы (СОХ), метотрексат, анти-ΤΝΡ лекарственные препараты, анти СЭ20 антитело, ингибиторы ΡΌ4, ингибиторы р38, ингибиторы ΡΌΕ4 и антигистамины. Соединения могут быть введены как таковые в виде пролекарства или в виде фармацевтических композиций, включающих активное соединение или пролекарство.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращение реакции гиперчувствительности IV типа, включающий введение субъекту количества соединения, эффективного для лечения или предотвращения реакции гиперчувствительности, где соединение выбирают из соединений данного изобретения, как описано в данном документе. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращение реакции гиперчувствительности IV типа, который является практически профилактическим, включающий введение субъекту количества соединения, эффективного для лечения или предотвращения реакции гиперчувствительности, где соединение выбирают из соединений данного изобретения, как описано в данном документе, и вводят перед контактом с аллергеном. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ ингибирования каскада сигнальной трансдукции, в котором играет роль ΙΑΚ3 киназа, включающий введение в контакт клетки, экспрессирующей рецептор, вовлеченный в такой каскад передачи сигналов, с соединением, где соединение выбирают из соединений данного изобретения, как описано в данном документе. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращение ΙΆΚ-киназа-опосредованного заболевания, включающий введение субъекту количества соединения, эффективного для лечения или предотвращения ΙΛΚ-киназаопосредованного заболевания, где соединение выбирают из соединений данного изобретения, как описано в данном документе. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения ΙΛΚ-киназа-опосредованного заболевания, в котором ΙΛΚ-опосредованное заболевание является НVСΚ или О’УНК, включающий введение субъекту количества соединения, эффективного для лечения или предотвращения ΙΛΚ-киназа-опосредованного заболевания, где соединение выбирают из соединений изобретения, как описано в данном документе. В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения ΙΛΚ-киназаопосредованного заболевания, в котором ΙΛΚ-опосредованное заболевание является острым отторжением аллотрансплантата, включающий введение субъекту количества соединения, эффективного для лечения или предотвращения ΙΆΚ-киназа-опосредованного заболевания, где соединение выбирают из соединений изобретения, как описано в данном документе.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращение 8ук и/или ΙΆΚ-киназа-опосредованного заболевания, в котором ΙΛΚ-опосредованное заболевание является хроническим отторжением аллотрансплантата, включающий введение субъекту количества соединения, эффективного для лечения или предотвращения ΙΆΚ-киназа-опосредованного заболевания, где соединение выбирают из соединений изобретения, как описано в данном документе.
Активные соединения изобретения типично инибируют 8ук и/или ίΑΚ/δΙαΙ путь. Активность определенных соединений в качестве ингибитора 8ук и/или ΙΑΚ-киназы можно оценивать ίη νίίτο или ίη νίνο. В некоторых вариантах осуществления активность определенных соединений можно тестировать в клеточном анализе. Клеточно-пролиферативные нарушения относятся к нарушению, характеризующемуся аномальной пролиферацией клеток. Пролиферативные нарушения не подразумевают какого-либо ограничения в отношении скорости клеточного роста, а только указывают на утрату нормального управления, что влияет на рост и клеточное деление. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления клетки пролиферативного нарушения могут иметь ту же скорость клеточного деления, что и нормальные клетки, но не отвечают на сигналы, которые ограничивают такой рост. В рамках клеточнопролиферативных нарушений находится неоплазма или опухоль, которая характеризуется аномальным ростом ткани. Злокачественная опухоль относится к любой из различных злокачественных неоплазм, характеризующихся пролиферацией клеток, которые имеют способность поражать окружающую ткань и/или метастазировать в новые места образования колоний.
Как правило, клеточно-пролиферативные нарушения поддаются лечению соединениями, раскрытыми здесь, в отношении к любому нарушению, характеризующемуся аберрантной клеточной пролиферацией. Такие нарушения включают различные опухоли и злокачественные опухоли, доброкачественные или злокачественные, метастатические или неметастатические. Специфические свойства злокачественных опухолей, такие как тканевая инвазивность или метастазирование, могут быть мишенью применения описанных здесь способов. Клеточно-пролиферативные нарушения включают множество злокачественных опухолей, включая, среди прочего, рак яичников, ренальный рак, желудочно-кишечные злокачественные опухоли, рак почки, рак мочевого пузыря, рак поджелудочной железы, чешуевидную карциному легкого и аденокарциному. В некоторых вариантах осуществления клеточно-пролиферативные нарушения, подлежащие лечению, означают гемопоэтическую неоплазму, которая характеризуется аберрантным ростом клеток гемопоэтической системы. Гемопоэтические злокачественные новообразования могут иметь свое происхождение из плюрипотенциальных стволовых клеток, мультипотенциальных клетокпредшественников, олигопотенциальных коммитированных клеток-предшественников, клетокпредшественников и терминально дифференцированных клеток, вовлеченных в гемопоэз. Некоторые
- 34 024109 гематологические злокачественные новообразования, как полагают, происходят из гемопоэтических стволовых клеток, которые имеют способность к самообновлению. Например, клетки, способные развить специфические подтипы острого миелоидного лейкоза (ОМЛ) (САп11йа К. На1т, Кеппеб! Ν. Κοδδ, Кпве М. Какοζа, 8ίеνеη Кагг, Ιίηναη Ои, 81αο-Ε ϋη§, Τοάά К. ΟοΙιιΚ КипЬебу 81едт;иег, 8ук ίδ а пе\у 1агде1 Юг АМЬ 6ίΓΓοΐΌΠΙί;·ιΙίοπ, Βίοοφ 2007, 110, А^1гас1 209) после трансплантации, демонстрируют поверхностные маркеры гемопоэтических стволовых клеток, подразумевая участие гемопоэтических стволовых клеток в качестве источника лейкозных клеток. Властные клетки, которые не имеют особенностей клеточных маркеров гемопоэтических стволовых клеток, вероятно неспособны образовывать опухоли после трансплантации (ВЫге еί а1., 1997, Βίοοά 89:3104-3112). Происхождение из стволовых клеток определенных гематологических злокачественных новообразований также находит поддержку в наблюдении, что специфические хромосомные аномалии, связанные с отдельными типами лейкоза, могут быть найдены в нормальных клетках гемопоэтического происхождения, а также в лейкозных бластных клетках. Например, реципрокная транслокация 1(9с.|34;22с]11)„ связанная с приблизительно 95% случаев хронического миелогенного лейкоза, вероятно, присутствует в клетках миелоидного, эритроидного и лимфоидного происхождения, что предполагает то, что хромосомная аберрация появляется в гемопоэтических стволовых клетках. Подгруппа клеток в определенных типах ХМЛ демонстрирует фенотип клеточного маркера гемопоэтических стволовых клеток. Хотя гемопоэтические неоплазмы часто возникают из стволовых клеток, коммитированные клетки-предшественники или более терминально дифференцированные клетки развивающихся линий также могут быть источником лейкозов. Например, вынужденная экспрессия составного белка Всг/АЬ1 (связанный с хроническим миелогенным лейкозом) в общих миелоидных клетках-предшественниках или гранулоцит/макрофагоцитных клетках-предшественниках порождает состояние, подобное лейкозу. Кроме того, некоторые хромосомные аберраци, связанные с подтипами лейкоза, не найдены в клеточной популяции с маркерным фенотипом гемопоэтических стволовых клеток, но найдены в клеточной популяции, демонстрирующей маркеры более дифференцированного состояния гемопоэтического пути (ТигЬац и др., 1995, Εΐοοά 85:2154-2161). Таким образом, в то время как коммитированные клетки-предшественники и другие дифференцированные клетки могут иметь только ограниченный потенциал клеточного деления, лейкозные клетки могут иметь приобретенную способность расти нерегулируемо, в некоторых случаях имитируя характеристики самообновления гемопоэтических стволовых клеток Ш^едие и др., Ртос. №6. Асаб. 8с1. И8А, 2003, 100:11842-9). В некоторых вариантах осуществления гемопоэтическая неоплазма, подлежащая лечению, представляет собой лимфоидную неоплазму, где аномальные клетки происходят от и/или демонстрируют характеристический фенотип клеток лимфоидного происхождения. Лимфоидную неоплазму можно подразделить на В-клеточные неоплазмы, Т и М<-клеточные неоплазмы и лимфому Ходжкина. В-клеточную неоплазму далее можно подразделить на пре-В-клеточную неоплазму и зрело/периферически В-клеточную неоплазму. Иллюстративными В-клеточными неоплазмами являются пре-В-лимфобластный лейкоз/лимфома (пре-Вклеточный острый лимфобластный лейкоз), в то время как иллюстративными зрело/периферически Вклеточными неоплазмами являются В-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз/мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома, В-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, лимфоплазмацитарная лимфома, Вклеточная лимфома селезёночной маргинальной зоны, волосковоклеточный лейкоз, плазмаклеточная миелома/плазмацитома, экстранодальная В-клеточная лимфома маргинальной зоны МАЬТ типа, нодальная В-клеточная лимфома маргинальной зоны, фолликулярная лимфома, лимфома из клеток мантии, диффузная В-крупноклеточная лимфома, медиастинальная В-крупноклеточная лимфома, первичная эффузионная лимфома и лимфома Беркитта/клеточный лейкоз Беркитта. Т-клеточные и Мк-клеточные неоплазмы далее подразделяются на пре-Т-клеточную неоплазму и зрело-(периферически-) Т-клеточные неоплазмы. Иллюстративной пре-Т-клеточной неоплазмой является пре-Т-лимфобластная лимфома/лейкоз (пре-Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз), в то время как иллюстративными зрело(периферически-) Т-клеточными неоплазмами являются Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, Тклеточный гранулярный лимфоцитарный лейкоз, агрессивный М<-клеточный лейкоз, Т-клеточная лимфома/лейкоз взрослых (НТЬУ-1), внеузловая МК/Т-клеточная лимфома, назальный тип, Т-клеточная лимфома энтеропатийного типа, печёночно-селезеночная гамма-дельта Т-клеточная лимфома, подкожная панникулитоподобная Т-клеточная лимфома, фунгоидный микоз/синдром Сезари, анапластическая крупноклеточная лимфома, Т/ноль-клеточная, первичная кожного типа, периферическая Т-клеточная лимфома, без дополнительных характеристик, ангиоиммунобластная Т-клеточная лимфома, анапластическая крупноклеточная лимфома, Т/нуль-клеточная, первичная системного типа. Третьим членом лимфоидной неоплазмы является лимфома Ходжкина, также рассматриваемая как болезнь Ходжкина. Иллюстративные диагнозы этого класса, которые можно лечить соединениями, включают, среди прочего, узловую лимфому Ходжкина с лимфоцитарным преобладанием и различные классические формы болезни Ходжкина, иллюстративными членами которых являются узловая склерозная лимфома Ходжкина (стадия 1 и 2), лимфоцит-обогащённая классическая лимфома Ходжкина, смешанная насыщенная клетками лимфома Ходжкина и лимфома Ходжкина с лимфопенией. В различных вариантах любая из лимфоидных неоплазм, которая связывается с аберрантной 1АК активностью, может подвергаться лечению соединениями, ингибирующими δук и/или 1АК.
- 35 024109
В некоторых вариантах осуществления гемопоэтической неоплазмой, подлежащей лечению, является миелоидная неоплазма. Эта группа включает большой класс клеточных пролиферативных нарушений, вызывающих или отображающих характеристический фенотип клеток миелоидного происхождения. Миелоидные неоплазмы можно подразделить на миелопролиферативные заболевания, миелодиспластические/миелопролиферативные заболевания, миелодиспластические синдромы и острые миелоидные лейкозы. Иллюстративными миелопролиферативными заболеваниями являются хронический миелогенный лейкоз (например, положительный относительно филадельфийской хромосомы (1(9;22)(ςς34;ς11)), хронический нейтрофильный лейкоз, хронический эозинофильный лейкоз/гиперэозинофильный синдром, хронический идиопатический миелофиброз, истинная полицитемия и эссенциальная тромбоцитемия. Иллюстративными миелодиспластическими/миелопролиферативными заболеваниями являются хронический миеломоноцитарный лейкоз, атипичный хронический миелогенный лейкоз и ювенильный миеломоноцитарный лейкоз. Иллюстративными миелодиспластическими синдромами являются рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами и без кольцевых сидеробластов, рефрактерная цитопения (миелодиспластический синдром) с мультилинейной дисплазией, рефрактерная анемия (миелодиспластический синдром) с избытком бластов, 5с|-синдром и миелодиспластический синдром. В различных вариантах любая из миелоидных неоплазм, которая связывается с аберрантной кук и/или 1АК активностью, может подвергаться лечению соединениями, ингибирующими кук и/или .ТАК.
В некоторых вариантах осуществления соединения можно использовать для лечения острых миелоидных лейкозов (ОМЛ), которые представляют большой класс миелоидных неоплазм, имеющий свои собственные подгруппы нарушений. Эти подгруппы включают, среди прочего, типы ОМЛ с рекуррентными патогенетическими транслокациями, ОМЛ с мультилинейной дисплазией, и другие ОМЛ, не отнесённые к другим типам. Иллюстративные типы ОМЛ с рекуррентными цитогенетическими транслокациями включают, среди прочего, ОМЛ с 1(8;21)(ς22;ς22), ОМЛ1(СΒΡ-альфа)/ЕТО, острый промиелоцитарный лейкоз (ОМЛ с 1(15;17)(д22;д11-12) и варианты, РМЬ/КАК-альфа), ОМЛ с аномальными эозинофиами костного мозга (ΐην(16)(ρ13η22) или ί(16;16)(ρ13^11), СΒΡЬ/мΥн11X), и ОМЛ с 11η23 (МЬЬ) аномалиями. Иллюстративными ОМЛ с мультилинейной дисплазией являются те, которые связаны или не связаны с предшествующим миелодиспластическим синдромом. Другие острые миелоидные лейкозы, не классифицированные в рамках какой-либо определимой группы, включают ОМЛ минимальнодифференцированный, ОМЛ без созревания, ОМЛ с созреванием, острый миеломоноцитарный лейкоз, острый моноцитарный лейкоз, острый эритроидный лейкоз, острый мегакариоцитарный лейкоз, острый базофильный лейкоз и острый панмиелоз с миелофиброзом. Проводить лечение в рамках контекста изобретения означает облегчение симптомов, связанных с расстройством или заболеванием, или остановку дальнейшего развития или ухудшения таких симптомов или предупреждение или профилактику заболевания или расстройства.
Термин млекопитающее включает организмы, которые экспрессируют кук и/или 1АК. Примеры млекопитающих включают мышей, крыс, коров, овец, свиней, коз, лошадей, медведей, обезьян, собак, кошек и предпочтительно людей. Трансгенные организмы, которые экспрессируют кук и/или 1АК также включаются в данное определение.
Способы изобретения включают введение эффективного количества соединения или композиции, описанных здесь, млекопитающему или животному нечеловеку. Использованный здесь термин эффективное количество соединения или композиции изобретения включает те количества, которые вызывают антагонизм или ингибируют кук и/или 1АК. Количество, которое вызывает антагонизм или ингибирует кук и/или 1АК выявляют, например, с помощью какого-либо анализа, способного определять кук и/или .ТАК активность, включая один описанный ниже анализ в качестве иллюстративного метод тестирования. Эффективные количества также могут включают количества, которые облегчают симптомы кук и/или .ТАК-связанного расстройства, поддающегося лечению путем ингибирования кук и/или .ГАК. Соответственно, антагонисты кук или антагонисты .ТАК включают соединения, которые взаимодействуют с кук или .ТАК соответственно, и модулируют, например ингибируют или уменьшают, способность второго соединения, например, другого кук или .ТАК лиганда, взаимодействовать с кук или 1АК соответственно, кук или .ТАК связывающие соединения предпочтительно являются антагонистами кук или .ГАК соответственно. Формулировка кук связывающее соединение и .ТАК-связывающее соединение (например, когда показывает связывающую способность к рецептору) включает соединения, которые взаимодействуют с кук или .ТАК, что приводит к модуляции активности кук или 1АК, соответственно, кук и/или .ГАК связывающие соединения можно идентифицировать с использованием ίη νίίτο (например, на основе клеточного и неклеточного метода) или ίη νίνο методик. Описание ίη νίίτο методик приведено ниже.
Количество соединения, использующееся в способах и присутствующее в композициях, описанных здесь, должно быть достаточным для заметного, обнаруживаемого с помощью любого из описанных в примерах анализов, уменьшения серьезности расстройства. Необходимое количество кук и/или .ГАК модулятора будет зависеть от эффективности модулятора для данного типа клеток и отрезка времени, необходимого для лечения расстройства. В определенных вариантах композиции данного изобретения могут дополнительно включать другое терапевтическое средство. В случае применения второго средства его
- 36 024109 можно вводить либо в виде отдельной лекарственной формы, либо в виде компонента одной лекарственной формы с соединениями или композициями данного изобретения. Тогда как одно или несколько соединений изобретения можно применять для монотерапии при лечении нарушений, болезней или симптомов, они также могут применяться в комбинационной терапии, в которой применение соединения или композиции согласно изобретению (терапевтическое средство) комбинируют с применением одного или нескольких других терапевтических средств для лечения тех же и/или других типов нарушений, симптомов и заболеваний. Комбинационная терапия включает введение двух или большего количества терапевтических средств одновременно или последовательно. Агенты могут быть введены в любом порядке. Альтернативно, несколько терапевтических средств можно объединять в одну композицию, которая может быть введена пациенту. Например, одна фармацевтическая композиция могла бы включать соединение или его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или пролекарство в соответствии с формулой I, другое терапевтическое средство (например, метотрексат) или его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или пролекарство и фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель. Изобретение включает соединение, которое имеет формулу I, способ получения соединения изобретения, способ приготовления фармацевтической композиции по меньшей мере из одного соединения изобретения и по меньшей мере одного фармацевтически приемлемого носителя или эксципиента, и способ применения одного или нескольких соединений изобретения для лечения ряда расстройств, симптомов и заболеваний (например, воспалительных, аутоиммунных, неврологических, нейродегенеративных, онкологических и сердечно-сосудистых), таких как ЕА, остеоартрит, синдром раздражённого кишечника ШЭ, астма, хроническое обструктивное заболевание легких ХОЗЛ и РС. Соединения и их фармацевтически приемлемые соли и/или нейтральные композиции согласно изобретению могут быть составлены вместе с фармацевтически приемлемым эксципиентом или носителем и получающаяся композиция может быть введены ш У1уо млекопитающим, таким как мужчина, женщина и животные, для лечения ряда расстройств, симптомов и заболеваний. Кроме того, соединения изобретения можно использовать для приготовления лекарственного средства, которое пригодно для лечения ряда расстройств, симптомов и заболеваний.
Все соединения настоящего изобретения являются или эффективными ингибиторами кук и/или .ГАК-киназ, демонстрирующими значения Κ.'50 в соответствующем анализе в диапазоне менее чем 5 мкМ, с большинством значений в наномолярном, и с некоторыми значениями в субнаномолярном диапазоне. В некоторых вариантах осуществления соединения настоящего изобретения могут быть двойными кукЛАК-ингибиторами, проявляющимися в том, что они ингибируют и кук и .ГАК-киназу до некоторого уровня. В других вариантах осуществления соединения настоящего изобретения могут селективно ингибировать кук киназу, но заметно не ингибировать одну или несколько ГАК-киназ. В других вариантах осуществления, соединения настоящего изобретения могут селективно ингибировать .ГАК-киназу, но заметно не ингибировать одну или несколько кук киназ.
ί) Наборы.
Еще одним аспектом данного изобретения является обеспечение набора, включающего отдельные емкости в одной упаковке, где фармацевтические соединения, композиции и/или их соли согласно изобретению применяют в комбинации с фармацевтически приемлемыми носителями для лечения состояний, расстройств, симптомов и заболеваний, где играет роль кук и/или 1АК киназа.
Примеры
Следующее примеры предлагаются для иллюстрации, а не для ограничения, заявленного изобретения.
Исходные вещества и реагенты, используемые для получения этих соединений, обычно либо доступны от коммерческих поставщиков, таких как А1бгюЬ СЬетюа1 Со., либо получают с помощью способов, известных специалистам в данной области техники, следуя методикам, изложенным в ссылках, таких как Р1екег апб Р1екег'к ЕеадепГк Гог Огдатс 8упГЬек1к; \УПеу & 8опк: Нью-Йорк, 1967-2004, тт. 1-22; Еобб'к СНепийгу оГ СагЬоп Сотроипбк, Е1кеу1ег 8аепсе РиЬНкЬегк, 1989, тт. 1-5 и дополнительные; и Огдатс ЕеасЬопк, \УПеу & 8опк: Нью-Йорк, 2005, тт. 1-65. Исходные вещества и промежуточные соединения схем реакций синтеза могут быть выделены и очищены при необходимости с использованием общепринятых технических приёмов, включая но не ограничиваясь перечисленным, фильтрование, дистилляцию, кристаллизацию, хроматографию и т.п. Такие вещества могут быть охарактеризованы с использованием общепринятых методов, включая физические константы и спектральные данные.
Если не указано иное, описанные здесь реакции предпочтительно проводят в инертной атмосфере при атмосферном давлении в диапазоне реакционных температур от приблизительно -78 до приблизительно 150°С, более предпочтительно от приблизительно 0 до приблизительно 125°С и наиболее предпочтительно и удобно при приблизительно комнатной температуре (или температуре окружающей среды), например при температуре от приблизительно 20 до приблизительно 75°С. Относительно к примерам, следующим ниже, соединения настоящего изобретения синтезировали с использованием способов, описанных здесь, или другими способами, которые хорошо известны в уровне техники.
Соединения и/или промежуточные соединения могут быть охарактеризованы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), используя ^аГегк АШапсе хроматографическую сис- 37 024109 тему с разделительным модулем 2695 Зерагайоп Мойи1е (МПГогй, Макк.). Аналитические колонки могут представлять собой С-18 ЗреейКОЭ КР-18Е Со1итпк от Мегск КСаА (Дармштадт, Германия). Альтернативно, соединения могут быть охарактеризованы с использованием Цш1у (ИРЬС) системы с Vа1егк Асс|ш1у ИРЬС ВЕН С-18 2.1 ммх15 мм колонками. Можно применять градиентное элюирование, типично начиная со смеси 5% ацетонитрила/95% воды и доводя до 95% ацетонитрила на протяжении 5 мин в случае системы АШапсе и 1 мин в случае системы Асс|ш1у. Все растворители могут содержать 0.1% трифторуксусную кислоту (ТФУ). Соединения можно обнаружить с помощью поглощения ультрафиолетового излучения (УФ) на длине волны либо 220 нм, либо 254 нм. ВЭЖХ растворители могут быть получены от фирмы ЕМО СНенисаН 1пс. (Гиббстоун, Нью-Джерси). В некоторых случаях чистоту можно оценить с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ), используя стеклянные пластинки с нанесенным силикагелем, такие как, например, пластинки ЕМЭ ЗШса Се1 60 2.5 смх7.5см. Результаты ТСХ можно легко наблюдать визуально под ультрафиолетовым светом или с помощью использования хорошо известного метода с применением паров йода и других различных технических приёмов окрашивания.
Масс-спектрометрический анализ может быть осуществлен на одном из двух приборов серии АдПеп! 1100 ЖХМС со смесью ацетонитрил/вода в качестве подвижной фазы. В одной системе в качестве модификатора можно применять ТФУ и осуществлять измерение в режиме определения положительных ионов [указано в виде МН+, (М+1) или (М+Н)+], а в другом случае можно применять либо муравьиную кислоту, либо ацетат аммония и осуществлять измерение в режиме определения и положительных ионов [указано в виде МН+, (М+1) или (М+Н)+], и отрицательных ионов [указано в М-, (М-1) или (М-Н)-].
Анализ некоторых соединений с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР) может быть осуществлен на устройстве Уапап 400 МГц ЯМР (Пало-Альто, Калифорния). В качестве стандарта можно использовать либо ТМС, либо известный химический сдвиг растворителя.
Чистоту некоторых соединений изобретения можно оценить с помощью элементного анализа (КоЬеПкоп МюгоШ, Мэдисон, Нью-Джерси). Температуры плавления могут быть определены на приборе ЬаЬогаЮгу Эехюек Ме1-Тетр (Холлистон, Массачусетс).
Препаративные разделения могут быть проведены при необходимости, используя либо Зц16х, либо Зд100с хроматографическую систему и предварительно набитые силикагелевые колонки, закупленные в фирме Те1ейупе 1ксо, (Линкольн, Небраска). Альтернативно, соединения и промежуточные соединения могут быть очищены с помощью флэш-колоночной хроматографии с использованием силикагельного (230-400 меш) набивочного материала или с помощью ВЭЖХ, используя С-18 колонку для обращеннофазовой хроматографии. Растворителями, типично используемыми для систем 1ксо и флэш-колоночной хроматографии, могут быть дихлорметан, метанол, этилацетат, гексан, ацетон, водный гидроксиамин и триэтиламин. Растворителями, типично используемыми для ВЭЖХ с обращенной фазой, могут быть растворители, включающие переменные концентрации ацетонитрила и воды с 0.1% трифторуксусной кислотой.
Общие методы.
Следующие схемы реакций синтеза являются только иллюстративными некоторых методов, с помощью которых можно синтезировать соединения настоящего изобретения, и различные модификации этих схем реакций синтеза могут быть выполнены и будут понятны специалисту в данной области техники, обладающему упомянутым раскрытием, содержащимся в данной заявке.
Пример 1. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5карбоксамид 1.
Стадия 1.
К перемешиваемому раствору карбоновой кислоты 1.1 (85 г, 540 ммоль) в тионилхлориде (425 мл) медленно добавляли пиридин (8.5 мл, 0.11 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 75°С в тече- 38 024109 ние ночи, после чего ее концентрировали и сушили под вакуумом до светло-желтого порошка, который непосредственно использовали на следующей стадии.
Стадия 2.
Желтое твердое вещество из предыдущей стадии медленно разбавляли 750 мл этанола и нагревали с обратным холодильником в течение ночи. На следующий день с помощью ВЭЖХ устанавливали, что реакция завершена, и затем смесь охлаждали на ледяной бане и твердое вещество отфильтровывали и промывали с помощью диэтилового эфира с получением целевого сложного этилового эфира (1.3) в виде не совсем белого порошка (91 г, 87% для двух стадий).
МС, найдено для С7Н^2О4 в виде (М+Н)+, 185.0.
Стадия 3.
Сложный эфир 1.3 (22 г, 120 ммоль) растворяли в оксихлориде фосфора (60 мл, 600 ммоль), смесь обрабатывали Ν,Ν-диэтиланилином (27 мл, 167 ммоль) и нагревали до 105°С до тех пор, пока с помощью ВЭЖХ не устанавливали, что реакция завершена. Реакционную смесь затем охлаждали до кт и медленно добавляли до 1 л дробленного льда, что приводило к образованию бежевого осадка, который собирали с помощью фильтрования и сушили под вакуумом с получением целевого дихлорида (1.4) в виде светложелтого порошка (22.5 г, 85%).
’Н ЯМР (ДМСО-б6, 400 МГц): δ 9.13 (к, 1Н), 4.37 (ц, 2Н), 1.32 (ί, 3Н).
Стадия 4.
Дихлорпиримидин 1.4 (5.9 г, 27 ммоль) растворяли в ацетонитриле (50 мл) и последовательно обрабатывали диизопропилэтиламином (5.2 мл, 30 ммоль) и далее циклобутиламином (1.9 г, 27 ммоль), перемешивали при кт до тех пор, пока все исходное вещество не израсходуется. Реакционную смесь затем разбавляли водой до общего объема 150 мл и осадок собирали с помощью фильтрования с получением целевого продукта в виде светло-желтого твердого вещества (6.02 г, 87%).
’Н ЯМР (ДМСО-б6, 400 МГц): δ 8.60 (к, 1Н), 8.48 (б, 1Н), 4.52 (т, 1Н), 4.29 (ц, 2Н), 2.30 (т, 2Н), 2.04 (т, 2Н), 1.73 (т, 2Н), 1.30 (ί, 3Н).
Стадия 5.
Сложный этиловый эфир 1.5 (6.02 г, 24 ммоль) разбавляли 1,4-диоксаном (26 мл) и далее водным гидроксидом лития (1.0 М, 26 мл, 26 ммоль), перемешивали при кт до тех пор, пока все исходное вещество не превратится в карбоновую кислоту. Реакционную смесь затем разбавляли водой до общего объема 100 мл и подкисляли до рН 2 с помощью 6 М НС1. Получающуюся суспензию затем отфильтровывали и сушили путем отсасывания с получением 3.51 г карбоновой кислоты (64%).
’Н ЯМР (ДМСО-б6, 400 МГц): δ 8.64 (б, 1Н), 8.74 (к, 1Н), 4.50 (т, 1Н), 2.31 (т, 2Н), 2.03 (т, 2Н), 1.72 (т, 2Н).
Стадия 6.
Карбоновую кислоту 1.6 (3.15 г, 15 ммоль) растворяли в Ν,Ν-диметилформамиде (70 мл) и обрабатывали НОВ! (3.13 г, 23 ммоль) и ЕЭС (4.4 г, 23 ммоль). После перемешивания в течение приблизительно 25 мин добавляли аммиак (0.5 М в 1,4-диоксане, 72 мл, 36 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. На следующее утро реакционную смесь разбавляли водой до общего объема 500 мл и целевой продукт собирали с помощью фильтрования с получением 3.62 г (74%) светло-бежевого твердого вещества.
’Н ЯМР (ДМСО-б6, 400 МГц): δ 9.30 (б, 1Н), 8.54 (к, 1Н), 8.15 (б, 1Н), 8.09 (к, 1Н), 7.74 (б, 1Н), 7.64 (т, 2Н), 7.51 (ί, 1Н), 3.77 (т, 1Н), 1.79 (т, 2Н), 1.74 (т, 2Н), 1.53 (т, 1Н), 1.41 (т, 1Н).
Стадия 7.
Бензотриазолиловый простой эфир 1.7 (50 мг, 0.17 ммоль), 1-(4-(4-аминофенил)пиперазин-1ил)этанон (полученный из 1-ацетилпиперазина и 4-фторнитробензола в две стадии) (45 мг, 0.20 ммоль) и п-толуолсульфоновую кислоту (30 мг, 0.17 ммоль) разбавляли 1,4-диоксаном (5 мл) и перемешивали при 120°С до тех пор, пока все исходное вещество не израсходуется. Реакционную смесь охлаждали до кт, разбавляли водой и непосредственно очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением после лиофилизации целевого продукта 1. МС, найдено для С21Н2Ю7О2 в виде (М+Н)+,410.2.
Следующее соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1 с реагентом А вместо циклобутиламина на стадии 4.
- 39 024109
Таблица 6
Прим. № Структура Реагент А ММ МС Название
2 н3с^м^НзС\гО^н о νΑΑ-νη νΝΛΝ7 Η ыета- анизидин 461.526 462.3 2-(4-(4- ацетилпиперазин-1 ил)фениламино)-4-(3метоксифениламино)пир имидин-5-карбоксамид
3 А _ А К3С ''ΝΗ 0 Άι#· Η циклопропил амин 395.467 396 2-(4-(4- ацетилпиперазин-1 ил)фениламино)-4(циклопропиламино)пир имидин-5-карбоксамид
4 0 /0 Η3Ο^Ν^ <4ΑΝΗ θ ''Ύν/· Η циклопентила мин 423.521 424 2-(4/4- ацетилпиперазин-1 ил)фениламино)-4(циклопентиламино)пир имидин-5-карбоксамид
5 о сн3 χ н3сТ НэС Νη НзС ΝΗ 0 Η /и-бутиламин 411.51 412.3 2-(4-(4- ацетилпиперазин-1 ил)фениламино)-4-(третбутиламино)пиримидин5-карбоксамид
6 н3с_ £УмнУнн2 ыЦ Нз\ /—\ /=\ )—N 0^Νν/ΝΛ/ ΝΗ 3-толуилин 445.527 446.1 2-(4-(4- ацетилпиперазин-1 ил)фениламино)-44мтолиламино)пиримидин5-карбоксамид
7 о сн3 1 1 Н3С Νη Н3С ΝΗ 0 'ЮхлУ- н изопропилам ин 397.483 398.3 24444- ацетил пиперазин-1ил)фениламино)-4(изопропиламино)пирим идин-5-карбоксамид
8 0 Η3(Αν^| НзС—^ΝΗ О ο,ύ4 н н-бутиламин 411.51 412 2-(4-(4- аиетилпиперазин-1ил)фениламино)-4(бутиламино)пиримидин -5-карбоксамид
9 о ФсА'-] Η3σ'°'^ζΖ4·ΝΗ о ΑΝ·γ^ νΑΑνη νΝΛ/ Η 2-метокси этиламин 413.482 413 2-(444- ацетилпиперазин-1- ил)фениламино)-4-(2- метоксиэтиламино)пири мидин-5-карбоксамид
10 О Н3СЧ^Нз%^^МН о ΑΝ-γΑΐ νΑΑνη 3- метоксипроп иламин 427.509 428 2-(444- ацетилпиперазин-1- ил)фениламино)-4-(3- метоксипропиламино)пи римидин-5-карбоксамид
11 У \— ΝΗ V ΝΗ, Ац нзС /—\ /=\ )—N тетрагидро- 2Н-пиран-4- амии 439.52 440 24444- ацетил пиперазин-1- ил)фениламино)-4- (тетрагидро-2Н-пиран-4- иламино)пиримидин-5- карбоксамид
- 40 024109
12 ° τ Η3ΟΧ^'Ν'^| ^ΝΗ 0 ‘'''Ο#· Η циклопропил метиламин 409.494 410.2 2-(4-(4- аиетилпиперазин-1 - ил)фениламино)-4- (циклопропилметиламин о)пиримидин-5- карбоксамид
13 0 Η»0ΛΝ^| γγ-'ΝΗ 0 Ν'Ύ^ΝΗ;, Η пропаргилам ин 393.451 394.2 2-(4-(4- ацетилпиперазнн-1 ил)фениламино)-4(проп-2- иниламино)пиримидин- 5-карбоксамид
14 0 Η3Ο^'Ν'^η Нз%н 0 Ν^ν^ΝΗ2 Η метиламин 369.429 370.2 2-(4-(4- ацетилпиперазин-1- ил)фениламино)-4- (метиламино)пиримиди н-5-карбоксамид
15 ο Η3€^Ν^, НзС^ЫН 0 ШУ· Η этиламин 383.456 384.2 2-(444- ацетилпиперазин-1- ил)фениламино)-4- (этиламино)пиримидин- 5-карбоксамид
16 о НзС'^ы'^А ρ>Α^νη о Ο^ΤΧλΝΗ2 ’чАм-'^гГ Η 2,2,2- трифторэтнла мин 437.426 438.2 2-(4-(4- ацетилпиперазнн-1 ил)фениламино)-4(2,2,2- трифторэтиламино)пири мидин-5-карбоксамид
17 Ν^γ^ΝΗ2 нЛУ φ ύ Ν О^СНз (5)-альфа метил бензиламин 459.554 460 (8)-2-(4-(4- ацетилпиперазин-1- ил)фениламино)-4-(1- фенилэтиламино)пирим идин-5-карбоксамид
18 ο 0 Η3Ο'^'Ν'^| ΤΗ Ο ---Ν'ΥίΧι Ν·^ν^ΝΗ2 кЛл/ Η бензиламин 445.527 446 2-(4-(4- ацетилпиперазин-1 ил)фениламино)-4(бензиламино)пиримиди н-5-карбоксамид
19 (ί^γ^ΝΗ 0 ..ν φ <-Ν 0 н3сЧ-0 4- хлорбензилам ин 479.972 480 2-(4-(4- ацетилпиперазнн-1 ил)фениламино)-444хлорбензиламино)пирим идин-5-карбоксамид
20 СНз ΜνλαΝΗ2 нЛФ φ 0 н3с-Л0 (К>альфа метил бензиламин 459.554 460 (К)-2-(4-(4ацетнлпиперазин-1 ил)фениламино)-441· фенилэтиламино)пирим идин-5-карбоксамид
21 ε['γ^γχ^ΝΗ ο Ν^Υ^ΝΗ, нЛф 0 <0 Кг н3сЧ0 3,4- дихлорбензил амин 514.417 514 2-(444- ацетилпиперазин-1ил)фениламино )-4-(3,4дихлорбензиламино)пир имидин-5-карбоксамид
22 _ -°Η 0 <ΦΎ Н3С'^'Ы'У '•'^•ΝΗ 0 ^ΝνίΧΐ Ν'^ν^'ΝΗ2 Η рацемический транс-2- гидроксицикл опропиламин 439.52 440.5 24444- ацетил пиперазин- 1 ил)фениламино)-4Ч(1Ю- 2- гидроксициклопентилам ино)пиримидин-5- карбоксамид
- 41 024109
Пример 32. 2,4-бис(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид.
Соединение 1.4 (пример 1, 1.05 г, 4.8 ммоль) растворяли в 40 мл ацетонитрила. К раствору добавляли тиометоксид натрия (0.74 г, 10.5 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи, разбавляли этилацетатом, три раза промывали с помощью раствора соли, сушили и концентрировали в вакууме. Остаток затем вносили в 20 мл диоксана и 10 мл воды. Туда же добавляли 500 мг гидрата ЫОН. Смесь перемешивали в течение 4 ч. К смеси добавляли 1н. НС1 до достижения значения рН 3. Ее концентрировали, три раза экстрагировали этилацетатом. Органические фазы объединяли, сушили и концентрировали в вакууме с получением белого твердого вещества. Твердое вещество затем растворяли в 30 мл сухого ДМФА. К нему добавляли БОС гидрохлорид (1.10 г, 5.7 ммоль) и НОВ! (0.77 г, 5.7 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин и к ней добавляли аммиак (коммерческий, 0.5н. раствор в диоксане, 29 мл, 14.5 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи, концентрировали в вакууме, разбавляли этилацетатом, три раза промывали с помощью раствора соли, сушили и концентрировали в вакууме с получением сырого соединения 30.1. МС, найдено для С7Н9NзО82 в виде (М+Н)+, 216.1.
Стадия 2.
Сырое соединение 30.1 (42 мг, 0.20 ммоль) растворяли в 4 мл ΝΜΡ. К раствору добавляли МСРВА (133 мг, 0.50 ммоль). Смесь перемешивали при кт в течение 1 ч. К ней затем добавляли 1-(4-(4аминофенил)пиперазин-1-ил)этанон (175 мг, 0.80 ммоль) и ΌΙΕΑ (140 мкл, 0.80 ммоль). Смесь затем перемешивали на 120°С бане в течение 90 мин. Смесь затем подвергали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с выделением указанного в заголовке соединения.
МС, найдено для С29Н35Ы9О3 в виде (М+Н)+, 558.2.
Пример 3 3. 4-(1Н-Индазол-6-иламино)-2-(4-(4-ацетилпиперазин-1 -ил)фениламино)пиримидин-5 карбоксамид.
Стадия 3.
Дихлорпиримидин 1.4 (см. пример 1; 1.04 г, 4.7 ммоль) растворяли в ΝΜΡ (30 мл) и перемешивали на ледяной бане. К раствору добавляли 6-аминоиндазол 31.1 (690 мг, 5.2 ммоль) и затем по каплям этилдиизопропиламин (ΌΙΕΑ, 1.64 мл, 9.4 ммоль). Смесь перемешивали в течение 40 мин и к ней добавляли тиометоксид натрия (660 мг, 9.4 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи, разбавляли этилацетатом, три раза промывали с помощью раствора соли и концентрировали в вакууме с получением сырого соединения 31.2 в виде светло-коричневого твердого вещества с количественным выходом. МС, найдено для С15Н15Ы5О28 в виде (М+Н)+, 330.1.
Стадия 4.
Сложный этиловый эфир 31.2 (4.7 ммоль) растворяли в 60 мл ТГФ. К раствору добавляли гидрат гидроксида лития (236 мг, 5.6 ммоль) и 20 мл воды. Смесь перемешивали в течение ночи и к ней осторожно добавляли 1н. НС1 раствор до достижения значения рН 2. Смесь концентрировали в вакууме до удаления ТГФ. Выделялось белое твердое вещество, которое отделяли используя воронку Бюхнера. Вещество промывали водой и сушили в вакуум-сушильном шкафу с получением соединения 31.3 (1.14 г, 81%) в виде белого твердого вещества. МС, найдено для С13Н11Х5О28 в виде (М+Н)+, 302.1.
- 42 024109
Стадия 5.
Карбоновую кислоту 31.3 (1.14 г, 3.8 ммоль) растворяли в 30 мл ДМФА. К раствору добавляли ЕЭС гидрохлорид (1.09 г, 5.7 ммоль) и ΗОВί гидрат (770 мг, 5.7 ммоль). Смесь перемешивали при КТ в течение 1 ч. К ней затем добавляли аммиак (коммерческий, 0.5н. раствор в диоксане, 22 мл, 11.4 ммоль). Смесь перемешивали в течение 2 ч. Ее затем концентрировали в вакууме и вносили в воду и этилацетат. Органическую фазу отделяли и четыре раза промывали с помощью раствора соли. Органическую фазу затем сушили над Мд8О4 и концентрировали в вакууме с получением соединения 31.4 в виде светложелтого твердого вещества (820 мг, 72%). МС, найдено для С13Н12Н5О8 в виде (М+Н)+, 301.1. Стадия 6: Соединение 31.4 (36 мг, 0.12 ммоль) растворяли в 3 мл ΝΜΡ. К раствору добавляли МСРВА (чистота 65%, 48 мг, 0.18 ммоль). Смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин. К ней затем добавляли 1-(4-(4аминофенил)пиперазин-1-ил)этанон (53 мг, 0.24 ммоль) и пТСК (21 мг, 0.12 ммоль). Смесь перемешивали в течение 90 мин на 120°С бане. Эту смесь затем подвергали препаративной ВЭЖХ с выделением указанного в заголовке соединения 31. МС, найдено для С24Н25^О2 в виде (М+Н)+, 472.2.
Пример 34. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)-3-хлорфениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина на стадии 4. Синтез хлорпиперазиниланилина завершали путем хлорирования нитропиперазинильного промежуточного соединения, синтезированного способом, подобным тому, который описан в примере 36, с NС8, и далее восстановления, используя сульфидированную платину. МС, найдено для С20Н24^О2С1 в виде (М+Н)+, 430.0. УФ: λ= 290.
Пример 3 5. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)-3 -хлорфениламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5 карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 32. МС, найдено для С21Н26^О2С1 в виде (М+Н)+, 444.0. УФ: λ= 211, 290.
Пример 36. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-пропионилпиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. Пиперазиниланилин синтезировали из Вос пиперазина и 4-фторнитробензола с последующим снятием защиты, используя НС1 в диоксане, и ацилированием, используя пропионилхлорид, и в заключение гидрированием, используя Р4/С. МС, найдено для С21Н27^О2 в виде (М+Н)+, 410.3.
Ή ЯМР (С1);О1Е 400 МГц): δ 8.22 (к, 1Н), 7.49 (широкий к, 2Н), 7.06 (4, 2Н), 3.73 (т, 4Н), 3.22 (т, 4Н), 2.47 φ 2Н), 3.03 (т, 1Н), 1.12 (ί, 3Н), 0.90 (т, 2Н), 0.70 (т, 2Н).
Пример 37. 2-(4-(4-(Циклопропанкарбонил)пиперазин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 36, с циклопропилкарбонилхлоридом вместо пропионилхлорида.
МС, найдено для С22Н27^О2 в виде (М+Н)+, 422.4.
Ή ЯМР (С1);О1Е 400 МГц): δ 8.22 (к, 1Н), 7.45 (широкий к, 2Н), 7.08 (4, 2Н), 3.93 (т, 4Н), 3.73 (т,
- 43 024109
4Н), 3.02 (т, 1Н), 2.01 (т, 1Н), 0.88 (т, 6Н), 0.69 (т, 2Н). УФ: λ= 203, 273.
Пример 38. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(2-метоксиацетил)пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
К
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 36, с метоксиацетилхлоридом вместо пропионилхлорида. МС, найдено для С21Н27Ы7О3 в виде (М+Н)+, 426.2.
Ή ЯМР (С1ГО1). 400 МГц): δ 8.38 (з, 1Н), 7.55 (широкий з, 2Н), 7.08 (б, 2Н), 4.21 (з, 2Н), 3.74 (т, 4Н), 3.64 (т, 4Н), 3.40 (з, 3Н), 3.06 (т, 1Н), 0.94 (т, 2Н), 0.71 (т, 2Н).
Пример 39. 2-(4-(4-Ацетил-2-оксопиперазин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина на стадии 4.
Оксопиперазиниланилин синтезировали из 4-нитройодбензола и 4-Вос-2-оксопиперидина, используя каталитические условия - иодид меди/диметилэтилендиамин. Вос-группу затем удаляли, используя НС1 в диоксане, получающийся амин ацилировали, используя ацетилхлорид, и в заключение нитрогруппу восстанавливали, используя водород и Рб/С. МС, найдено для С20Н23Ы7О3 в виде (М+Н)+,410.2. УФ: λ= 275.
Пример 40. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)-3-фторфениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина на стадии 4. Анилин синтезировали из соответствующий карбоксилазид путем нагревания в воде/ДМФА. Азид в итоге синтезировали из 3,4дифторбензойной кислоты. МС, найдено для С20Н24Ы7О2Р в виде (М+Н)+, 414.2. УФ: λ= 293.
Пример 41. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-((1з,4з)-4-аминоциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Схема 4
- 44 024109
К смеси транс-4-аминоциклогексанола (2.07 г, 13.6 ммоль) и ЫаНСО3 (3.50 г, 41.7 ммоль) в Н2О (20 мл) при комнатной температуре добавляли раствор бензилхлорформиата (1.92 мл, 13.6 ммоль) в диоксане (15 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Белый осадок собирали в виде бензил (1К,4К)-4-гидроксициклогексилкарбамата (3.37 г).
К суспензии бензил (1К,4К)-4-гидроксициклогексилкарбамата (1.14 г, 4.58 ммоль) и триэтиламина (1.30 мл, 9.34 ммоль) в СН2С12 (15 мл) при комнатной температуре добавляли метансульфонилхлорид (0.425 мл, 5.49 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Добавляли дополнительное количество метансульфонилхлорида (0.425 мл, 5.49 ммоль) и триэтиламина (1.00 мл). Перемешивание продолжали в течение 48 ч. Реакционный раствор промывали с помощью 5% ЫаНСО3, затем с помощью 1н. НС1. Органическую фазу отделяли, сушили над Ыа28О4, концентрировали в вакууме с получением (1К,4К)-4-(бензилоксикарбонил)циклогексилметансульфоната в виде твердого вещества (1.13 г). Смесь (1К,4К)-4-(бензилоксикарбонил)циклогексилметансульфоната (1.13 г, 3.46 ммоль) и ΝηΝ3 (0.674 г, 10.4 ммоль) в ДМФА (10 мл) перемешивали при 100°С в течение 20 ч. Добавляли воду и ЕЮАс. Органическую фазу отделяли, промывали с помощью воды, сушили над Ыа28О4, концентрировали в вакууме с получением бензил (15,4к)-4-азидоциклогексилкарбамата (0.819 г).
К раствору бензил (15,4к)-4-азидоциклогексилкарбамата (0.410 г, 1.50 ммоль) в ТГФ (8 мл) и Н2О (0.100 мл, 5.56 ммоль) при комнатной температуре добавляли РЬ3Р (0.590 г, 2.25 ммоль). Раствор перемешивали при 70°С в течение 20 ч. Добавляли ЕЮАс и 1н. НС1. Водную фазу отделяли, промывали с помощью ЕЮАс. Ее затем подщелачивали 5н. ЫаОН до рН 12. Продукт - свободный амин экстрагировали ЕЮАс. ЕЮАс раствор сушили над Ыа28О4, и концентрировали в вакууме с получением бензил (1к,4к)4-аминоциклогексилкарбамата (0.270 г).
Смесь этил 2,4-дихлорпиримидин-5-карбоксилата (0.241 г, 1.09 ммоль), бензил (1к,4к)-4аминоциклогексилкарбамата (0.270 г, 1.09 ммоль) и триэтиламина (0.300 мл, 2.16 ммоль) в СН3СЫ (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Добавляли воду и ЕЮАс. Органическую фазу отделяли, промывали с помощью 1н. НС1, затем с помощью 5% ЫаНСО3, сушили над Ыа28О4, концентрировали в вакууме с получением этил 4-((1к,4к)-4-(бензилоксикарбонил)циклогексиламино)-2хлорпиримидин-5-карбоксилата (0.458 г).
К раствору этил 4-((1к,4к)-4-(бензилоксикарбонил)циклогексиламино)-2-хлорпиримидин-5карбоксилата (0.458 г, 1.06 ммоль) в ТГФ (5 мл), добавляли водн. 1н. ЬЮН (1.16 мл, 1.16 ммоль). После перемешивания в течение 3 ч добавляли воду (10 мл). Раствор подкисляли 1н. НС1 (2 мл) до рН 1-2. Продукт экстрагировали ЕЮАс. ЕЮАс раствор промывали с помощью раствора соли, сушили над Ыа28О4, концентрировали в вакууме с получением 4-((1к,4к)-4-(бензилоксикарбонил)циклогексиламино)-2хлорпиримидин-5-карбоновой кислоты в виде твердого вещества (0.409 г).
К раствору 4-((1к,4к)-4-(бензилоксикарбонил)циклогексиламино)-2-хлорпиримидин-5-карбоновой кислоты (0.409 г, 1.01 ммоль) и НОВ! (0.232 г, 1.52 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавляли ЕЭС (0.291 г, 1.52 ммоль). После перемешивания в течение 2 ч добавляли ΝΉ3 (0.5 М в диоксане, 6.0 мл, 3.00 ммоль). Смесь перемешивали в течение 20 ч. Добавляли воду и ЕЮАс. Органическую фазу отделяли, промывали с помощью 1н. НС1, затем с помощью 5% ЫаНСО3, сушили над Ыа28О4, концентрировали в вакууме с получением бензил (1 к,4к)-4-(2-(1Н-бензо [б] [ 1,2,3]триазол-1-илокси)-5 -карбамоилпиримидин-4-иламино)циклогексилкарбамата в виде твердого вещества (0.440 г).
Смесь бензил (15,4к)-4-(2-(1Н-бензо[б][1,2,3]триазол-1-илокси)-5-карбамоилпиримидин-4иламино)циклогексилкарбамата (0.220 г, 0.438 ммоль), 1-(4-(4-аминофенил)пиперазин-1-ил)этанона (0.192 г, 0.877 ммоль) и моногидрата рТкОН (0.083 г, 0.437 ммоль) в диоксане (4 мл) перемешивали при 100°С в течение 3 ч. Смесь затем очищали с помощью ВЭЖХ с получением бензил (1к,4к)-4-(2-(4-(4ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-5-карбамоилпиримидин-4-иламино)циклогексилкарбамата (0.123 г).
Смесь бензил (1к,4к)-4-(2-(4-(4-ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-5-карбамоилпиримидин-4иламино)циклогексилкарбамата (0.123 г, 0.21 ммоль) и Рб-С (10%, 40 мг) в ΜеОН (5 мл, содержащий три капли 6н. НС1), гидрировали под баллонным Н2 в течение 4 ч. Смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества. МС 453.45 (Μ+Н).
Пример 42. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(пиперидин-4-илметиламино)пиримидин-5 -карбоксамид.
- 45 024109
Схема 5
1ЕГЭС: ηοβι ΝΗ3
Смесь этил 2,4-дихлорпиримидин-5-карбоксилата (0.221 г, 1.00 ммоль), гидрохлорида 1-Вос-4аминометилпиперидина (0.251 г, 1.00 ммоль) и триэтиламина (0.556 мл, 4.00 ммоль) в Ο^ΟΝ (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Добавляли воду и ЕЮАс. Органическую фазу отделяли, промывали с помощью 1н. НС1, затем с помощью 5% NаНСО3, сушили над №-ь8О4, концентрировали в вакууме с получением этил 4-((1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2хлорпиримидин-5-карбоксилата (0.390 г).
К раствору этил 4-((1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-хлорпиримидин-5карбоксилата (0.390 г, 0.979 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавляли водн. 1н. ЫОН (1.10 мл, 1.10 ммоль). После перемешивания в течение 20 ч добавляли воду (10 мл). Раствор подкисляли 1н. НС1 (2 мл) до рН 1-2. Продукт экстрагировали ЕЮАс. ЕЮАс раствор промывали с помощью раствора соли, сушили над №-ь8О4, концентрировали в вакууме с получением 4-((1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4ил)метиламино)-2-хлорпиримидин-5-карбоновой кислоты в виде твердого вещества (0.353 г).
К раствору 4-((1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-хлорпиримидин-5карбоновой кислоты (0.353 г, 0.953 ммоль) и НОВ! (0.219 г, 1.43 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавляли ЕЭС (0.274 г, 1.43 ммоль). После перемешивания в течение 1 ч добавляли ИН3 (0.5 М в диоксане, 5.5 мл, 2.75 ммоль). Смесь перемешивали в течение 20 ч. Добавляли воду и ЕЮАс. Органическую фазу отделяли, промывали с помощью 1н. НС1, затем с помощью 5% NаНСО3, сушили над №-ь8О4, концентрировали в вакууме с получением трет-бутил 4-((2-(1Н-бензо['][1,2,3]триазол-1-илокси)-5-карбамоилпиримидин-4иламино)метил)пиперидин-1-карбоксилата в виде твердого вещества (0.410 г).
Смесь трет-бутил 4-((2-(1Н-бензо['][1,2,3]триазол-1-илокси)-5-карбамоилпиримидин-4-иламино) метил)пиперидин-1-карбоксилата (0.205 г, 0.438 ммоль), 1-(4-(4-аминофенил)пиперазин-1-ил)этанона (0.192 г, 0.877 ммоль) и моногидрата рТкОН (0.166 г, 0.874 ммоль) в диоксане (4 мл) перемешивали при 100°С в течение 3 ч. Смесь затем очищали с помощью ВЭЖХ с получением трет-бутил 4-((2-(4-(4ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-5-карбамоилпиримидин-4-иламино)метил)пиперидин-1-карбоксилата (0.105 г).
Раствор трет-бутил 4-((2-(4-(4-ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-5-карбамоилпиримидин-4иламино)метил)пиперидин-1-карбоксилата (0.105 г, 0.190 ммоль) в ТФУ (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. ТФУ удаляли в вакууме. Остаток очищали с помощью ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (90 мг). МС 453.41 (М+Н).
Пример 43. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(( 1 -ацетилпиперидин-4-ил)метил-
К раствору 2-(4-(4-ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(пиперидин-4-илметиламино)пиримидин5-карбоксамида (22 мг, 0.049 ммоль) и триэтиламина (0.040 мл, 0.29 ммоль) в ацетонитриле (2 мл) при комнатной температуре добавляли уксусный ангидрид (0.020 мл, 0.21 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь затем очищали с помощью ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (8 мг). МС 495.41 (М+Н).
Пример 44. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-((1-(метилсульфонил)пиперидин-4ил)метиламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 46 024109
К раствору 2-(4-(4-ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(пиперидин-4-илметиламино)пиримидин5-карбоксамида (22 мг, 0.049 ммоль) и триэтиламина (0.040 мл, 0.29 ммоль) в ацетонитриле (2 мл) при комнатной температуре добавляли метансульфонилхлорид (0.020 мл, 0.26 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь затем очищали с помощью ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (14 мг). МС 531.36 (М+Н).
Пример 45. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-((1-метилпиперидин-4-ил)метиламино) пиримидин-5 -карбоксамид
К раствору 2-(4-(4-ацетилпиперазин-1 -ил)фениламино)-4-(пиперидин-4-илметиламино)пиримидин5-карбоксамида (25 мг, 0.055 ммоль) и 37% водн. СН2О (0.020 мл, 0.27 ммоль) в МеОН (1 мл) и СН3СО2Н (0.1 мл) при комнатной температуре добавляли NаВНзСN (23 мг, 0.36 ммоль). Раствор перемешивали в течение 20 ч. Смесь затем очищали с помощью ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (20 мг). МС 467.46 (М+Н).
Пример 46. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-((1-карбамоилпиперидин-4-ил)метиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Смесь 2-(4-(4-ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(пиперидин-4-илметиламино)пиримидин-5карбоксамида (25 мг, 0.055 ммоль) и ΚΟСN (20 мг, 0.25 ммоль) в уксусной кислоте (2 мл) перемешивали при 100°С в течение 4 ч. Смесь затем очищали с помощью ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (8 мг). МС 496.45 (М+Н).
Пример 47. Бензил 3-((2-(4-(4-ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-5-карбамоилпиримидин-4иламино)метил)пиперидин-1-карбоксилат.
Пример 48. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(пиперидин-3-илметиламино)пиримидин-5-карбоксамид.
Схема 6
Смесь этил 2,4-дихлорпиримидин-5-карбоксилата (0.221 г, 1.00 ммоль), 3-аминометил-1-Н-СВгпиперидина (0.248 г, 1.00 ммоль) и триэтиламина (0.300 мл, 2.15 ммоль) в СНзСN (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Добавляли воду и ЕЮАс. Органическую фазу отделяли, промывали с помощью 1н. НС1, затем с помощью 5% NаΠСΟз, сушили над №28О4, концентрировали в вакууме с получением этил 4-((1-(бензилоксикарбонил)пиперидин-3-ил)метиламино)-2-хлорпиримидин-5карбоксилата (0.382 г).
К раствору этил 4-((1-(бензилоксикарбонил)пиперидин-3-ил)метиламино)-2-хлорпиримидин-5- 47 024109 карбоксилата (0.382 г, 0.88 ммоль) в ТГФ (5 мл), добавляли водн. 1н. ПОН (1.00 мл, 1.00 ммоль). После перемешивания в течение 20 ч добавляли воду (10 мл). Раствор подкисляли 1н. НС1 (2 мл) до рН 1-2.
Продукт экстрагировали ЕЮАс. ЕЮАс раствор промывали с помощью раствора соли, сушили над №28О4, концентрировали в вакууме с получением 4-((1-(бензилоксикарбонил)пиперидин-3ил)метиламино)-2-хлорпиримидин-5-карбоновой кислоты (0.350 г). К раствору 4-((1-(бензилоксикарбонил)пиперидин-3-ил)метиламино)-2-хлорпиримидин-5-карбоновой кислоты (0.350 г, 0.87 ммоль) и НОВ1 (0.200 г, 1.31 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавляли ЕЭС (0.250 г, 1.30 ммоль). После перемешивания в течение 1 ч добавляли Ν^ (0.5 М в диоксане, 6.0 мл, 3.0 ммоль). Смесь перемешивали в течение 20 ч. Добавляли воду и ЕЮАс. Органическую фазу отделяли, промывали с помощью 1н. НС1, затем с помощью 5% NаΗСОз, сушили над №28О4, концентрировали в вакууме с получением бензил 3-((2-(1Нбензо [й] [ 1,2,3]триазол-1 -илокси) -5 -карбамоилпиримидин-4 -иламино)метил)пиперидин-1 -карбоксилата (0.404 г). Смесь бензил 3-((2-(1Н-бензо[й][1,2,3]триазол-1-илокси)-5-карбамоилпиримидин-4-иламино) метил)пиперидин-1-карбоксилата (0.404 г, 0.805 ммоль), 1-(4-(4-аминофенил)пиперазин-1-ил)этанона (0.220 г, 1.00 ммоль) и моногидрата рПОН (0.167 г, 0.879 ммоль) в диоксане (8 мл) перемешивали при 100°С в течение 3 ч. Смесь затем очищали с помощью ВЭЖХ с получением бензил 3-((2-(4-(4ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-5-карбамоилпиримидин-4-иламино)метил)пиперидин-1-карбоксилата 45 (0.270 г). Смесь бензил 3-((2-(4-(4-ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-5-карбамоилпиримидин-4-иламино)метил)пиперидин-1-карбоксилата (90 мг, 0.15 ммоль) и Рй-С (10%, 30 мг) в МеОН (10 мл, содержащий 4 капли 6н. НС1) гидрировали под баллонным Н2 в течение 4 ч. Смесь фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения 46 (56 мг). МС 453.45 (М+Н).
Пример 49. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-((1-карбомо
К суспензии 2-(4-(4-ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(пиперидин-3-илметиламино)пиримидин-5-карбоксамида (24 мг, 0.053 ммоль) в СΗзСN (1 мл) добавляли раствор ΚОСN (27 мг, 0.33 ммоль) в Н2О (1 мл). Суспензия становилась прозрачной. После перемешивания при 70°С в течение 2 ч смесь очищали с помощью ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (14 мг). МС 497 (М+Н).
Пример 50. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(5-гидроксипентиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1, используя 5-аминопентанол вместо циклобутиламина. МС, найдено для С22Н3^7О3 в виде (М+Н)+, 442.0.
Пример 51. (8)-2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(1-гидроксипропан-2-иламино)пиримидин-5-карбоксамид.
- 48 024109
Стадия 1.
Превращение дихлорпиримидина 1.4 в тиометил 49.1 совершали, используя методику, подобную той, которая описана в 8уп1ке515 ап4 еуа1иайоп οί 2-{[2-(4-йу4гохурЬепу1)-еГЬу1]ат1по}рупт14те-5саЛохатйе Пепуайуек ак поуе1 8ТАТ6 ίπΗίΙίΙοΓκ. ЫадакЫта, 8Ыпуа; Уоко1а, Макай; Ыака1, ЕНсЫ; Киготйки, 8а4ао; ОЬда, Ке1ко; ТакеисЫ, МакоЮ; ТкикатоЮ, 8Ып-ЫЫ; ОШа, Мйкиай. 1пкЫиГе Гог Эгад Όίκсоуегу ИекеагсЬ, АкГе11ак Ркагт 1пс., Уо4одауа-ки, Осака, Япония. Вюогдатс & Ме4юта1 СЬетЫГгу (2007), 15(2), 1044-1055.
Стадии 2-4 совершали, используя методики, подобные тем, которые описаны в примере 1.
Стадия 5.
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 25,
Стадия 2. МС, найдено для С20Н27N7О3 в виде (М+Н)+,414.4.
Пример 53. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(цианометиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51. МС, найдено для С19Н22Ы8О2 в виде (М+Н)+, 395.2. УФ: λ= 203, 273.
Пример 54. (И)-2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(1-гидроксипропан-2-иламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51. МС, найдено для С20Н27Ы7О3 в виде (М+Н)+,414.3. УФ: λ= 201, 274.
Пример 55. 2-(4-(4-Ацетил-2-карбамоилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и Вос-защищенную пиперазинкарбоновую кислоту вместо ацетилпиперазина. МС, найдено для С21Н26Ы8О3 в виде (М+Н)+, 439.4.
- 49 024109
Пример 56. (К)-2-(4-(4-Ацетил-3-метилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С21Н27Ы7О2 в виде (М+Н)+, 410.4.
Пример 57. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(2-амино-2-оксоэтиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51. МС, найдено для С19Н24Ы8О3 в виде (М+Н)+, 413.4.
Пример 58. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(3-амино-3-оксопропиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51. МС, найдено для С20Н26Ы8О3 в виде (М+Н)+, 427.4. УФ: λ= 200, 270.
Пример 59. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(4-амино-4-оксобутиламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51. МС, найдено для С21Н28Ы8О3 в виде (М+Н)+, 441.3.
Пример 60. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(2-цианоэтиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51. МС, найдено для С20Н24Ы8О2 в виде (М+Н)+, 409.3. УФ: λ= 202, 251.
Пример 61. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(1-карбамоилциклопропиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в
- 50 024109 примере 1. МС, найдено для С21Н2&Ы8О3 в виде (М+Н)+, 439.3.
Пример 62. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(2-морфолиноэтиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51. МС, найдено для С23Н32Ы8О3 в виде (М+Н)+, 469.4.
Пример 63. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-((1К,2К)-2-карбамоилциклопентиламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51, используя амин, полученный с использованием методики из работы Ап ЕГПаеШ Κουε ίο ЕйЬег Епайютег οί Г^аηкк-2-Αт^ηοсус1οреηίаηеса^Ьοxу1^с АсМ. ЬеР1ае, Р.К.; Ьте/а^а, Ν.; Ьее, Η.-δ.; Ое11тап, δ.Η. ί. Огд. СЬет.; (Nοίе); 2001; 66(16); 5629-5632. МС, найдено для С23Н3А8О3 в виде (М+Н)+, 467.4. УФ: λ= 202, 258.
Пример 64. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(-2-транс-фенилциклопропиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51. МС, найдено для С26Н29АО2 в виде (М+Н)+, 472.3.
Пример 65. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин- 1-ил)фениламино)-4-(3-гидроксипропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51. МС, найдено для С20Н27АО3 в виде (М+Н)+, 414.3.
Пример 66. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(4-гидроксибутиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51. МС, найдено для С21Н29^О3 в виде (М+Н)+, 428.4.
Пример 67. 2-(4-(4-Ацетил-2-(метилкарбамоил)пиперазин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 51 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и Вос-защищенную пиперазинкарбоновую кислоту вместо ацетилпиперазина. МС, найдено для С22Н28^О3 в виде (М+Н)+, 453.3.
Пример 69. (К)-2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(2,3-дигидроксипропиламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51. МС, найдено для С20Н27^О4 в виде (М+Н)+, 430.3.
Пример 70. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-((1К,3К)-3-карбамоилциклопентиламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 51, используя амин, производный Вос-защищенной (1К,3К)-3-аминоциклопентанкарбоновой кислоты. МС, найдено для С23Н30^О3 в виде (М+Н)+, 467.4.
Пример 71. Метил 4-(4-(5-карбамоил-4-(циклопропиламино)пиримидин-2-иламино)фенил)пиперазин-1 -карбоксилат
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и подходящий анилин. МС, найдено для С20Н25^О3 в виде (М+Н)+, 412.3.
Пример 72. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(2-оксо-1,2,3,4-тетрагидрохинолин-6иламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Указанное в заголовке соединение синтезировали аналогично, путем использования 6-амино-3,4дигидрохинолин-2(1Н)-она. МС 501.3 (М+Н); УФ: λ= 207.8, 293.8.
Пример 73. 4-((18,48)-4-Аминоциклогексиламино)-2-(4-(пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид.
- 52 024109
Схема 8
К раствору 2-(4-(4-ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-((1к,4к)-4-аминоциклогексиламино)пиримидин-5-карбоксамида (52 мг, 0.12 ммоль) в ЕЮН (3 мл) добавляли водн. 3М КОН (1.0 мл, 3.0 ммоль). Смесь перемешивали при 85°С в течение 4 ч, затем при 70°С в течение 20 ч. Смесь концентрировали в вакууме. Остаток подкисляли уксусной кислотой (2 мл) и затем очищали с помощью ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (25 мг). МС 411.43 (М+Н); УФ: λ= 228.5,285.3.
Пример 74. (К)-2-(4-(4-Ацетил-2-метилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Н
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С21Н2Ю7О2 в виде (М+Н)+, 410.4. УФ: λ= 209, 265.
Пример 75. (К)-2-(4-(4-Ацетил-2-метилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н24РЮ7О2 в виде (М+Н)+, 452.4. УФ: λ= 216, 276.
Пример 76. (8)-2-(4-(4-Ацетил-2-метилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Н
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н24РЮ7О2 в виде (М+Н)+, 452.4. УФ: λ= 201, 274.
2-(4-(4-Карбамоилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5Пример 77. карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1. МС, найдено для С20Н26^О2 в виде (М+Н)+, 411.2. УФ: λ= 204, 262.
Пример 78. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(4-(диметилкарбамоил)пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 53 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1. МС, найдено для С22Н30Ы8О2 в виде (М+Н)+, 439.3. УФ: λ= 206, 263.
Пример 79. 2-(6-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)пиридин-3-иламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
СР3 к
ΝΗ О νη2 'νη2
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С18Н21Р3Ы8О2 в виде (М+Н)+, 439.4.
Ή ЯМР (СП3ОП, 400 МГц): δ 8.52 (к, 1Н), 8.49 (к, 1Н), 7.98 (ПП, 1Н), 7.23 (П, 1Н), 4.52 (ф 2Н), 3.74 (т, 6Н), 3.64 (т, 2Н), 2.15 (к, 3Н).
Пример 80. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)-2-метилфениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
О
Ап .....
'Ν^Ν^
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н24Р3Ы7О2 в виде (М+Н)+, 452.4. УФ: λ= 204, 227.
Пример 81. (8)-2-(4-(4-(2-Метоксиацетил)-2-метилпиперазин-1 -ил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
О СР3
Ар/ ''νη О
АА,
Η
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С21Н26Р3Ы7О3 в виде (М+Н)+, 482.5. УФ: λ= 202, 274.
Пример 82. (8)-Метил 4-(4-(5-карбамоил-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-2-иламино)фенил)3 -метилпиперазин-1 -карбоксилат
XI
СР3
ΝΗ О
АА
А/ н
νη2
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н24Р3Ы7О3 в виде (М+Н)+, 468.5. УФ: λ= 202, 274.
Пример 83. 2-(4-(4-Ацетшшиперазин-1 -ил)фениламино)-4-( 1 -метил-1Н-индазол-4-иламино)пиримидин-5 -карбоксамид
- 54 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 48. МС, найдено для С25Н27^О2 в виде (М+Н)+ 486.4. УФ: λ= 205.8, 299.4.
Пример 84. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(бензо[с]тиадиазол-4-иламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 48. МС, найдено для С23Н23^О2З в виде (М+Н)+, 490.4. УФ: λ= 236.2, 283.4, 305.6.
Пример 85. 4-(Бензо [с]тиадиазол-4-иламино)-2-(4-(4-пропионилпиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 48. МС, найдено для С24Н25^О2З в виде (М+Н)+, 504.4. УФ: λ=202.8, 236.2, 301.9, 314.9.
Пример 86. 4-(1-Метил-1Н-индол-4-иламино)-2-(4-(4-пропионилпиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали, используя ту же синтетическую схему, что и продемонстрированная в примере 33. МС, найдено для С27Н30^О2 в виде (М+Н)+, 499.4. УФ: λ = 219.2.
Пример 87. 4-(1,2-Диметил-1Н-индол-4-иламино)-2-(4-(4-пропионилпиперазин-1-ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали, используя ту же синтетическую схему, что и продемонстрированная в примере 32. МС, найдено для С28Н32^О2 в виде (М+Н)+, 513.4. УФ: λ= 208.6.
Пример 88. 4-(1-Метил-1Н-индол-4-иламино)-2-(4-(4-пропионилпиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
- 55 024109
Указанное в заголовке соединение получали, используя ту же синтетическую схему, что и продемонстрированная в примере 33. МС, найдено для С27Н30ЖО2 в виде (М+Н)+, 499.4. УФ: λ= 219.2.
Пример 89. 4-(1,2-Диметил-1Н-индол-4-иламино)-2-(4-(4-пропионилпиперазин-1-ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали, используя ту же синтетическую схему, что и продемонстрированная в примере 33. МС, найдено для С28Н32ЖО2 в виде (М+Н)+, 513.4. УФ: λ= 208.6.
Пример 92. 4-(Циклобутиламино)-2-(2-оксоиндолин-5-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
Н
МС, найдено для С15НК5ЖОС1 в виде (М+Н)+, 318.0, 320.0.
Ή ЯМР (ДМСО-б6, 400 МГц): δ 8.32 (δ, 1Н), 7.56 (б, 2Н), 7.41 (б, 2Н), 4.51 (т, 1Н), 2.43 (т, 2Н), 2.08 (т, 2Н), 1.88 (т, 2Н). УФ: λ= 205, 264.
Пример 93. 2-(6-(4-Ацетилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя промежуточное соединение, синтезированное, как описано на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и 1-(4-(5-аминопиридин-2ил)пиперазин-1-ил)этанон (полученный из 1-ацетилпиперазина и 2-хлор-5-нитропиридина в две стадии). МС, найдено для С1эН24ЖО2 в виде (М+Н)+, 397.0.
Ή ЯМР (СШОХ 400 МГц): δ 8.62 (δ, 1Н), 8.41 (δ, 1Н), 8.08 (широкий δ, 1Н), 7.17 (б, 1Н) 3.64-3.78 (т, 8Н), 2.98 (η, 1Н), 2.15 (δ, 3Н), 0.96 (т, 2Н), 0.70 (т, 2Н).
Пример 94. (К)-2-(4-(2-Метил-4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С19Н24Р3ЖО38 в виде (М+Н)+, 488.4.
Пример 95. (8)-2-(4-(2-Метил-4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 56 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С19Н24Р3^О38 в виде (М+Н)+, 488.3. УФ: λ= 201, 275.
Пример 96. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(1-(метилсульфонил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н24Н5О38 в виде (М+Н)+, 429.3.
Пример 97. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(1-(метилсульфонил)пиперидин-4-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н26Н5О3 в виде (М+Н)+, 431.3.
Пример 98. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-^-метилметилсульфонамидо)пиперидин-1-ил)фенил-
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный трет-бутил пиперидин-4-илкарбамата и 4-фторнитробензола. МС, найдено для С21Н29^О38 в виде (М+Н)+, 460.2. УФ: λ= 202, 272.
Пример 99. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С19Н25^О38 в виде (М+Н)+, 432.0.
Пример 100а. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(этилсульфонил)пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н27^О38 в виде (М+Н)+, 446.2.
Ή ЯМР (СП.ОП, 400 МГц): δ 8.37 (к, 1Н), 7.59 (широкий к, 2Н), 7.09 (4, 2Н), 3.45 (т, 4Н), 3.50 (т,
4Н), 3.12 (д, 2Н), 3.07 (т, 1Н), 1.35 (ί, 3Н), 0.93 (т, 2Н), 0.73 (т, 2Н). УФ: λ= 275.
Пример 100Ь. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)фениламино)пирими- 57 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1. МС, найдено для С20Н27^О38 в виде (М+Н)+, 446.0.
Пример 100с. 2-(2-Метил-4-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5 -карбоксамид дин-5-карбоксамид
О О 'е'
СР3
ΝΗ |'^τ^'ΝΗ2 υ
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4-фтор-2метилнитробензола. МС, найдено для С19Н24Р3^О38 в виде (М+Н)+, 488.4. УФ: λ = 227.
Пример 101а. (8)-2-(4-(4-(Этилсульфонил)-2-метилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
О О СР3
ΑνΆ' Ун о гп- У4·* н
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н2бРА7О38 в виде (М+Н)+, 502.4. УФ: λ= 203, 274.
Пример 102. (8)-2-(4-(4-(Циклопропилсульфонил)-2-метилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(2,2,2трифторэтиламино)пиримидин-5-карбоксамид о„о «Ό
СР3 к
ΝΗ та
-у
Ν^Ν Η
ΝΗ,
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С21Н26Р3^О38 в виде (М+Н)+, 514.5. УФ: λ = 202, 274.
Пример 103. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-сульфамоилфениламино)пиримидин-5-карбоксамид
ΝΗ О 'У'МНг
Вышеупомянутое соединение получали, используя 4-аминобензолсульфонамид с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С15Н18^О38 в виде (М+Н)+, 363.0.
Пример 104. Метил 4-(5-карбамоил-4-(циклобутиламино)пиримидин-2-иламино)фенил(метил)карбамат
Вышеупомянутое соединение получали, используя метил 4-аминофенил(метил)карбамат (синтезированный из Ν-метил 4-нитроанилина в две стадии) с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С18Н22^О3 в виде (М+Н)+, 371.0. УФ: λ = 203, 263.
Пример 105. Изопропил 4-(5-карбамоил-4-(циклобутиламино)пиримидин-2-иламино)фенил(ме- 58 024109 тил)карбамат
Вышеупомянутое соединение получали, используя изопропил 4-аминофенил(метил)карбамат (синтезированный из Ν-метил 4-нитроанилина в две стадии) с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С20Н26Н6О3 в виде (М+Н)+, 399.0. УФ: λ = 277.
Пример 106. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-^^-диметилсульфамоил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя 4-амино-Ы^-диметилбензолсульфонамид (полученный из хлорангидрида 4-нитробензолсульфоновой кислоты и диметиламина и далее восстановлением) с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С17Н22^О33 в виде (М+Н)+, 391.0. УФ: λ = 213, 288.
Пример 107. Метил 4-(5-карбамоил-4-(циклопропиламино)пиримидин-2-иламино)фенил(метил)карбамат
Вышеупомянутое соединение получали, используя промежуточное соединение, синтезированное, как описано на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и метил 4аминофенил(метил)карбамат (синтезированный из Ν-метил 4-нитроанилина в две стадии) с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С17Н20Н5О3 в виде (М+Н)+, 357.0. УФ: λ = 204,273.
Пример 108. Изопропил 4-(5-карбамоил-4-(циклопропиламино)пиримидин-2-иламино)фенил(метил)карбамат
Вышеупомянутое соединение получали, используя промежуточное соединение, синтезированное, как описано на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина на стадии 4, и изопропил 4аминофенил(метил)карбамат (синтезированный из Ν-метил 4-нитроанилин в две стадии). МС, найдено для С19Н24Н6О3 в виде (М+Н)+, 385.0. УФ: λ = 201, 276.
Пример 109. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-сульфамоилфениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя промежуточное соединение, синтезированное, как описано на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и 4-аминобензолсульфонамид. МС, найдено для СДДОзБ в виде (М+Н)+, 349.0.
1Н ЯМР (ДМСО-'6, 400 МГц): δ 8.38 (к, 1Н), 7.93 (', 2Н), 7.73 (', 2Н), 4.76 (т, 1Н), 2.47 (т, 2Н), 2.08 (т, 2Н), 1.87 (т, 2Н). УФ: λ = 285.
Пример 110. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(1-метилуреидо)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 59 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, полученный из защищенного И'Вос-И-метилфенилендиамина в две стадии. МС, найдено для С16Н19И7О2 в виде (М+Н)+, 342.0. УФ: λ = 205, 272.
Пример 111. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(метилсульфинил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина, и используя 4-тиометиланилин и далее окисление, используя тСРВА. МС, найдено для С15Н17И5О28 в виде (М+Н)+, 332.1.
Пример 112. 2-(4-(4-Ацетилпиперазин-1-карбонил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, полученный из 4нитробензоилхлорида и Ν-ацетилпиперазина в две стадии. МС, найдено для С21Н25И7О3 в виде (М+Н)+, 424.1.
Пример 113. 2-(4-(1-Ацетилпиперидин-4-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С21Н26И6О2 в виде (М+Н)+, 395.3.
Пример 114. (Циклопропиламино)-2-(4-(4-(пирролидин-1-карбонил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4фторнитробензола и этилизонипекотата. МС, найдено для С24Н31И7О2 в виде (М+Н)+, 450.3. УФ: λ = 271.
Пример 115. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(пиперидин-1-карбонил)пиперидин-1-ил)фениламино) пиримидин-5-карбоксамид
- 60 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4фторнитробензола и этилизонипекотата. МС, найдено для С25Н33Ы7О2 в виде (М+Н)+, 464.3. УФ: λ = 201, 271.
Пример 116. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(морфолин-4-карбонил)пиперидин-1-ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4фторнитробензола и этилизонипекотата. МС, найдено для С24Н31Ы7О3 в виде (М+Н)+, 466.3. УФ: λ = 201, 230, 285.
Пример 117. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(циклопропилсульфонил)пиперазин-1-ил)фенил-
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С21Н27Ы7О38 в виде (М+Н)+, 458.2. УФ: λ = 201, 231, 282.
Пример 118. 2-(4-(4-Ацетил-1,4-диазепан-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С21Н27Ы7О2 в виде (М+Н)+, 410.2. УФ: λ = 234, 258.
Пример 119. 2-(4-(4-Ацетамидопиперидин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя анилин, производный 4-Вос-аминопиперидина и 4-фторнитробензола, который превращали в ацетил после снятия Вос-защиты, с последующим восстановлением нитрогруппы до анилина, используя гидрирование. МС, найдено для С21Н27Ы7О2 в виде (М+Н)+, 410.2.
Пример 120. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(2-оксопиридин-1(2Н)-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя анилин, производный 4-йоданилина и 2-гидроксипиридина, которые сочетали, ис- 61 024109 пользуя Си1 и подходящий лиганд. МС, найдено для С21Н22Ы7О2 в виде (М+Н)+, 363.2. УФ: λ = 201, 274. Пример 121. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-диоксотиоморфолинофениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С18Н22Ы6О28 в виде (М+Н)+, 403.2.
Пример 122. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(2-метоксиэтил)пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4фторнитробензола и 1-метоксиэтилпиперазина в две стадии. МС, найдено для С21Н29Ы7О2 в виде (М+Н)+, 412.0.
Пример 123. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-( 1 -метилциклопропил)пиперазин-1 -ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С22Н22Ы7О в виде (М+Н)+, 408.3.
Пример 124. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-^-метилацетамидо)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, описанный ранее с метилированием Ν-ацетильной группы (СН31, С§2СО3, ДМФА), осуществляемым перед стадией восстановления нитрогруппы. МС, найдено для С22Н29Ы7О2 в виде (М+Н)+, 424.2.
Пример 125. 2-(4-^-циклобутилсульфамоил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина и анилином, производным 4нитробензолсульфонилхлорида и циклобутиламина. МС, найдено для С18Н22Ы6О38 в виде (М+Н)+, 403.0.
Пример 126. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-^-циклопропилсульфамоил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
- 62 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина и анилином, подобным тому, что описан ранее. МС, найдено для С17Н20^О38 в виде (М+Н)+, 389.0.
Пример 127. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-Щ-(2-метоксиэтил)сульфамоил)фениламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина и анилином, подобным тому, что описан ранее. МС, найдено для С17Н22^О4З в виде (М+Н)+, 407.0.
Пример 128. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-Щ-(2-гидроксиэтил)сульфамоил)фениламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина и анилином, подобным тому, что описан ранее. МС, найдено для С1бН20^О4З в виде (М+Н)+, 393.0.
Пример 129. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(метилсульфонил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С16Н19^О3З в виде (М+Н)+, 362.1. УФ: λ = 292.
Пример 130. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С19Н25^О в виде (М+Н)+, 368.3. УФ: λ = 203, 229, 256, 288.
Пример 131. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(пиридин-2-ил)пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С23Н26^О в виде (М+Н)+,
431.4.
Пример 132. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(метилсульфонил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 63 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1. МС, найдено для Ск,НкД3О38 в виде (М+Н)+, 362.1.
Пример 133. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 1. МС, найдено для С’эН25^О в виде (М+Н)+, 368.3.
Пример 134. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(пиридин-2-ил)пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С23Н26^О в виде (М+Н)+,
431.4.
Пример 135. 2-(4-(4-(Аминометил)пиперидин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н2Ю7О в виде (М+Н)+,
382.5.
Пример 136. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-^-пиримидин-2-илсульфамоил)фениламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С18Н18^О38 в виде (М+Н)+, 427.0.
Пример 137. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-^-тиазол-2-илсульфамоил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С17Н’Ю7О382 в виде (М+Н)+, 432.0.
Пример 138. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-^-(5-метилизоксазол-3-ил)сульфамоил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
- 64 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С^Н^АО^ в виде (М+Н)+,
430.0.
Пример 139. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-^-(2,6-диметилпиримидин-4-ил)сульфамоил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н22Н8О^ в виде (М+Н)+, 455.0.
Пример 140. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(1-метилуреидо)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С17Н2А7О2 в виде (М+Н)+, 356.3. УФ: λ = 202, 263.
Пример 141. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(трифторметокси)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С16Н1&Н5О2Р3 в виде (М+Н)+, 368.0.
Пример 143. 2-(4-(2-Морфолино-2-оксоэтокси)фениламино)-4-(м-толиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, метатолуидином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С24Н2&Н6О4 в виде (М+Н)+, 463.3. УФ: λ = 282.
Пример 145. 2-(4-(2-Морфолиноэтокси)фениламино)-4-(м-толиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с метатолуидином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С24Н28Н5О3 в виде (М+Н)+, 449.3. УФ: λ = 281.
Пример 147. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(изоксазол-3-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на
- 65 024109 схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С17Н16М6О2 в виде (М+Н)+
337.3. УФ: λ = 298.5.
Пример 148. (8)-2-(4-(1-Амино-3-метил-1-оксобутан-2-иламино)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный (8)-валина и 4фторнитробензола. МС, найдено для С18Н22Р3ЖО2 в виде (М+Н)+, 426.4. УФ: λ = 225, 294.
Ή ЯМР (СО3ОО, 400 МГц): δ 8.32 (δ, 1Н), 7.19 (широкий δ, 2Н), 6.76 (б, 2Н), 4.35 (широкий δ, 2Н), 3.58 (б, 1Н), 2.11 (т, 1Н), 1.10 (бб, 6Н).
Пример 149. (8)-2-(4-(1-Амино-4-метил-1-оксопентан-2-иламино)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина и анилин, подобный тому, что описан ранее. МС, найдено для С19Н24Р3ЖО2 в виде (М+Н)+, 440.4. УФ: λ = 226, 303.
Пример 151. 4-(1 -Метил-1Н-индол-4-иламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
К раствору этил 2,4-дихлорпиримидин-5-карбоксилата (328 мг, 1.48 ммоль) и 1-метил-1Н-индол-4амина (260 мг, 1.78 ммоль) в ί'.Ή3ί'.'Ν (6 мл) при комнатной температуре добавляли ΌΙΕΆ (0.4 мл, 2.22 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Для индуцирования осаждения добавляли воду (15 мл). Осадок собирали, сушили в вакууме с получением этил 2-хлор-4-(1-метил-1Ниндол-4-иламино)пиримидин-5-карбоксилата в виде твердого вещества.
Стадия 2.
К раствору этил 2-хлор-4-(1-метил-1Н-индол-4-иламино)пиримидин-5-карбоксилата (сырой со стадии 1) в ТГФ (4 мл) добавляли водн. 1н. ЫОН (2.25 мл, 2.25 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. При подкислении смеси 1н. НС1 выделялись белые твердые вещества, которые собирали и сушили в вакууме с получением 2-хлор-4-(1-метил-1Н-индол-4-иламино)пиримидин- 5карбоновой кислоты (325 мг). МС 303.3, 305.3 (М+Н, С1 модель).
- 66 024109
Стадия 3.
К раствору 2-хлор-4-(1-метил-1Н-индол-4-иламино)пиримидин-5-карбоновой кислоты (325 мг, 1.08 ммоль) и НОВ! (198 мг, 1.29 ммоль) в ДМФА (4 мл) добавляли ЕЭС (248 мг, 1.29 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1.5 ч. Добавляли аммиак (0.5 М в диоксане, 8.00 мл, 4.00 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду и Е!ОАс. Органическую фазу отделяли, промывали с помощью 1н. НС1, затем с помощью 5% NаНСО3, сушили над Ыа28О4, концентрировали в вакууме с получением 2-(1Н-бензо[4][1,2,3]триазол-1-илокси)-4-(1-метил-1Ниндол-4-иламино)пиримидин-5-карбоксамида (378 мг). МС 401.4 (М+Н).
Стадия 4. К раствору 2-(1Н-бензо[4][1,2,3]триазол-1-илокси)-4-(1-метил-1Н-индол-4-иламино)пиримидин-5-карбоксамида (62 мг, 0.15 ммоль) в ММР (1 мл) добавляли 4-(2-(пирролидин-1ил)этокси)анилин (31 мг, 0.15 ммоль) и гидрат п-толуолсульфоновой кислоты (28 мг, 0.15 ммоль). Смесь нагревали до 100°С в течение 4 ч и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением 4-(1-метил1Н-индол-4-иламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин-5-карбоксамида (32 мг). МС, найдено для С26Н29N7О2 в виде (М+Н)+, 472.4. УФ: λ = 216.9, 257.0.
Пример 152. 4-(1Н-Индол-4-иламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 151. МС, найдено для С25Н27N7О2 в виде (М+Н)+, 458.4. УФ: λ = 214.5, 249.9, 280.7.
Пример 153. 4-(2-Метил-2Н-индазол-7-иламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1 -ил)этокси)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 151. МС, найдено для С25Н28Ы8О2 в виде (М+Н)+, 473.4. УФ: λ = 211.0, 275.9.
Пример 154. 4-(1-Метил-1Н-индазол-7-иламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 151. МС, найдено для С25Н28Ы8О2 в виде (М+Н)+, 473.4. УФ: λ = 208.6, 286.6.
Пример 155. 2-(4-(1Н-Имидазол-1-илфениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана выше. МС, найдено для СрИ^О в виде (М+Н)+, 336.3. УФ: λ = 245.2, 321.1.
Пример 156. 2-(4-(2-(Пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)-4-(м-толиламино)пиримидин-5карбоксамид
- 67 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя метаанизидин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С24Н28И6О2 в виде (М+Н)+,
433.3. УФ: λ = 283.
Пример 157. 4-(3,5-Диметилфениламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя 3,5-диметиланилин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С25Н30И6О2 в виде (М+Н)+, 447.3. УФ: λ = 283.
Пример 158. 4-(3-Метоксифениламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1 с метаанизидином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С24Н28И6О3 в виде (М+Н)+, 449.3. УФ: λ = 282.
Пример 161. 2-(4-(2-Гидроксиэтилкарбамоил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С16Н17Р3И6О3 в виде (М+Н)+, 399.3.
Пример 162. 4-(4-(2-Морфолиноэтокси)фениламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 2. МС, найдено для С29Н37И7О4 в виде (М+Н)+, 548.3. УФ: λ = 283.
Пример 163. 2-(4-(2-(Пиперидин-1-ил)этокси)фениламино)-4-(м-толиламино)пиримидин-5карбоксамид
- 68 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя метатолуидин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С25Н30Ы6О2 в виде (М+Н)+,
447.3.
Пример 165. 2-(4-(2-Метоксиэтокси)фениламино)-4-(м-толиламино)пиримидин-5-карбоксамид
МС, найдено для С21Н23Ы5О3 в виде (М+Н)+, 394.3. УФ: λ = 285.
Пример 166. 2-(4-(3-Гидроксипропилкарбамоил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для СУН-рУсО в виде (М+Н)+, 413.4.
Ή ЯМР (С1РО1). 400 МГц): δ 8.59 (з, 1Н), 7.88 (б, 2Н), 7.77 (б, 2Н), 4.42 (ц, 2Н), 3.64 (ΐ, 2Н), 3.49 (ΐ, 2Н), 1.83 (т, 2Н).
Пример 167. 2-(4-(5,6-Дигидро-4Н-1,3-оксазин-2-ил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали путем обработки соединения примера 166 диэтиламиносератрифторидом и ΌΙΡΕΆ в дихлорметане. МС, найдено для С'УН1-ру6О2 в виде (М+Н)+, 395.2. УФ: λ =
221, 310.
Ή ЯМР (С1РО1). 400 МГц): δ 8.60 (з, 1Н), 7.97 (бб, 2Н), 7.93 (бб, 2Н), 4.33 (ц, 2Н), 3.73 (ΐ, 2Н), 253 (т, 2Н), 1.21 (ΐ, 2Н).
Пример 168. 4-(Циклобутиламино)-2-(п-толиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя паратолуидин и методику, подобную той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С16Н19М5О в виде (М+Н)+, 298.0.
Пример 169. 2-(4-Карбамоилфениламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя 4-аминобензамид с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для СУН^НО в виде (М+Н)+, 327.0.
- 69 024109
Пример 170. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-^-метилциклопропанкарбоксамидо)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид сн3
N
ΝΗ О
Ν0Ανη
Вышеупомянутое соединение получали, используя ^(4-аминофенил)-Ы-метилциклопропанкарбоксамид (синтезированный из Ν-метил 4-нитроанилина в две стадии) с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С20Н24^О2 в виде (М+Н)+, 381.0.
Пример 171. 2-(3-Хлор-4-^-метилацетамидо)фениламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя ^(4-амино-2-хлорфенил)-Ы-метилацетамид (полученный из 2-хлор-4-нитроанилин в три стадии), с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для в виде (М+Н)+, 375.0, 377.0.
Пример 172. 2-(3-Хлор-4-^-метилацетамидо)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя промежуточное соединение, синтезированное, как описано на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина на стадии 4, и ^(4-амино-2хлорфенил)-Ы-метилацетамида (полученный из 2-хлор-4-нитроанилин в три стадии) с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для СгЦуОНО в виде (М+Н)+, 375.0, 377.0.
1Н ЯМР (СО3ОО, 400 МГц): δ 8.43 (', 1Н), 8.20 (к, 1Н), 7.61 ('', 1Н), 7.43 (', 1Н), 3.18 (к, 3Н), 2.98 (т, 1Н), 1.82 (к, 3Н), 1.01 (т, 2Н), 0.73 (т, 2Н).
Пример 173. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-^-метилциклопропанкарбоксамидо)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Дч
А СН3 ΝΗ О
I
N4' н
Вышеупомянутое соединение получали, используя промежуточное соединение, синтезированное, как описано в примере 139, с циклопропиламином вместо циклобутиламина на стадии 4, и Ν-(4аминофенил)-Н-метилциклопропанкарбоксамидом (синтезированный из Ν-метил 4-нитроанилина в две стадии) с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С19Н22^О2 в виде (М+Н)+, 367.1.
Пример 174. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н27^О2 в виде (М+Н)+,
398.3.
Пример 175. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
- 70 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4фторнитробензола и этилизонипекотата. МС, найдено для С2!Н27^О2 в виде (М+Н)+, 410.0.
Пример 176. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(диметилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4фторнитробензола и этилизонипекотата. МС, найдено для С22Н29^О2 в виде (М+Н)+, 424.0.
Пример 177. 4-(Цциклопропиламино)-2-(4-(4-(диметилкарбамоил)пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали путем обработки 4-(4-нитрофенил)пиперазин-1карбоксамида гидридом натрия и метилйодидом, затем восстановления нитрогруппы, используя гидрирование. Анилин затем сочетали с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С21Н28^О2 в виде (М+Н)+, 425.2.
Пример 178. 2-(3 -Хлор-4 -морфолинофениламино)-4 -(циклопропиламино)пиримидин-5 карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для в виде (М+Н)+,
389.0, 391.0.
Пример 179. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина и анилином, производным 3,3дифторпирролидина и 4-фторнитробензола, в две стадии. МС, найдено для С18Н20^ОР2 в виде (М+Н)+, 375.0.
Пример 180. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(метилкарбамоил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 71 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина и анилином, производным 4нитробензоилхлорида и метиламина. МС, найдено для С16Н18Ы6О2 в виде (Μ+4)+, 327.0.
Пример 181. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(диметилкарбамоил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина и анилином, производным 4нитробензоилхлорида и диметиламина. МС, найдено для С1-Н20Н6О2 в виде (Μ+4)+, 341.0.
Пример 182. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-карбонил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина и анилином, производным 4нитробензоилхлорида. МС, найдено для С20Н25Ы7О48 в виде (Μ+4)+, 460.1.
Пример 183. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(тиазол-4-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С1-Н16Н6О8 в виде (Μ+4)+,
353.2.
Пример 184. 2-(4-(1Н-Пиразол-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С1-Н1-Н-О в виде (Μ+4)+,
336.3.
Пример 185. 2-(4-(1Н-Тетразол-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на ссхеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С^Н^ЫдО в виде (Μ+4)+,
338.2.
Пример 186. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(тиофен-2-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 72 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С^Н^^ОЗ в виде (М+Н)+,
352.2.
Пример 187. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-формамидо-3-гидроксифениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, используя 6-аминобензоксазол, который впоследствии гидролизовался во время очистки с получением указанного в заголовке соединения. МС, найдено для С/ 5Н16Н-,О3, в виде (М+Н)+, 329.2.
Пример 188. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(пиридин-2-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С19Н18^О в виде (М+Н)+,
347.3.
Пример 189. 2-(4-(1-Ацетил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С^Щд^Ог в виде (М+Н)+,
393.3.
Пример 190. (К)-4-(Циклопропиламино)-2-(4-(2-(метоксиметил)пирролидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и используя анилин, полученный в две стадии из 4-фторнитробензола и (К)-2-метоксиметилпирролидина. МС, найдено для С20Н26Н5О2 в виде (М+Н)+,
383.3.
Пример 191. (З)-4-(Циклопропиламино)-2-(4-(2-(метоксиметил)пирролидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
- 73 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 190, используя ^)-2-метоксиметилпирролидин вместо (К)-изомера МС, найдено для С20Н26Н5О2 в виде (М+Н)+, 383.3.
Ή ЯМР (СП3ОП, 400 МГц): δ 8.21 (к, 1Н), 7.38 (широкий к, 2Н), 6.78 (ά, 2Н), 3.89 (т, 1Н), 3.49 (т, 2Н), 3.33 (к, 3Н), 3.18 (т, 2Н), 3.03 (т, 1Н), 2.03 (т, 4Н), 0.93 (т, 2Н), 0.72 (т, 2Н).
Пример 192. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(пиридин-3-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С19Н18^О в виде (М+Н)+,
347.3.
Пример 193. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(этилсульфонил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С^Н^АО^ в виде (М+Н)+, 362.1.
Пример 194. 2-(1Н-Индол-6-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для Ο16Η16Ν6Θ в виде (М+Н)+,
309.2.
Пример 195. 1-(4-(5-Карбамоил-4-(циклопропиламино)пиримидин-2-иламино)фенил)пиперидин-4карбоновая кислота
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и анилин, производный этилизонипекотата и 4фторнитробензола. МС, найдено для С20Н24Ы6О3 в виде (М+Н)+, 397.2.
Пример 196. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-(метилсульфонил)-1,4-диазепан-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина и анилином, производным Вос-защищенного гомопиперазина и 4-фторнитробензола. МС, найдено для С20Н22Ы7О^ в виде (М+Н)+, 446.2.
- 74 024109
Пример 197. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для СщН^^О в виде (М+Н)+,
364.2.
Пример 198. (8)-2-(4-(2-Карбамоилпирролидин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина и анилином, производным (8)-пролинамида и 4фторнитробензола. МС, найдено для С19Н23Ы7О2 в виде (М+Н)+, 382.0.
Пример 199. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(циклопропилкарбамоил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, используя анилин, производный 4нитробензоилхлорида в две стадии. МС, найдено для С18Н20^О2 в виде (М+Н)+, 353.0.
Пример 200. 2-(4-(Циклобутилкарбамоил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 199. МС, найдено для С19Н22Ы6О2 в виде (М+Н)+, 367.3.
Пример 201. (8)-4-(Циклопропиламино)-2-(4-(2-(метилкарбамоил)пирролидин-1-ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина и анилином, производным (8)-пролина и 4фторнитробензола. МС, найдено для С20Н25^О2 в виде (М+Н)+, 396.0.
Пример 202. (8)-4-(Циклопропиламино)-2-(4-(2-(диметилкарбамоил)пирролидин-1-ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
- 75 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С2]Н2-И-О2 в виде (М+Н)+, 410.0.
Пример 203. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(2-гидроксиэтилкарбамоил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4нитробензоилхлорида и этаноламина. МС, найдено для С17Н20И6О3 в виде (М+Н)+, 357.0.
Пример 204. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(3-гидроксипропилкарбамоил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4нитробензоилхлорида и пропаноламина. МС, найдено для С18Н22И6О3 в виде (М+Н)+, 371.0.
Пример 205. (Е)-4-(Циклопропиламино)-2-(4-(3 -(метилкарбамоил)пиперидин-1 -ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С2!Н27И7О2 в виде (М+Н)+, 410.0.
Пример 206. (Е)-4-(Циклопропиламино)-2-(4-(3 -(диметилкарбамоил)пиперидин-1 -ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С22Н29И7О2 в виде (М+Н)+, 424.0.
Пример 207. (8)-4-(Циклопропиламино)-2-(4-(3-(метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С2]Н2-И-О2 в виде (М+Н)+, 410.2.
Пример 208. (8)-4-(Циклопропиламино)-2-(4-(3 -(диметилкарбамоил)пиперидин-1 -ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
- 76 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С22Н2Ю7О2 в виде (М+Н)+, 424.2.
Пример 209. (8)-4-(Циклопропиламино)-2-(4-(2-(метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С21Н2Ю7О2 в виде (М+Н)+, 410.2.
Пример 210. (8)-4-(Циклопропиламино)-2-(4-(2-(диметилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С22Н2Ю7О2 в виде (М+Н)+, 424.2.
Пример 211. 4-(Циклопропиламино)-2-(хиноксалин-6-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С’Ю^^О в виде (М+Н)+, 322.1.
Пример 212. (8)-2-(4-(2-Карбамоилазетидин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С18Н2Ю7О2 в виде (М+Н)+, 368.1.
Пример 213. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-гидроксипиперидин-1-илсульфонил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, полученный из 4нитробензолсульфонилхлорида и 4-гидроксипиперидин. МС, найдено для С19Н24Н5О48 в виде (М+Н)+,
433.0.
- 77 024109
Пример 214. 2-(4-(Циклопропил(метил)карбамоил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С19Н22Ы6О2 в виде (М+Н)+, 367.0.
Пример 215. 2-(4-(Циклобутил(метил)карбамоил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н24Ы6О2 в виде (М+Н)+, 381.0.
Пример 216. 2-(4-(2-Аминопиридин-4-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для СлдН^^О в виде (М+Н)+, 362.4.
Пример 217. (И)-4-(Циклопропиламино)-2-(4-(2-(метилкарбамоил)пирролидин-1-ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С20Н25N7О2 в виде (М+Н)+, 396.0.
Пример 218. (И)-4-(Циклопропиламино)-2-(4-(2-(диметилкарбамоил)пирролидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С21Н27N7О2 в виде (М+Н)+, 410.0.
Пример 219. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(3 -(метилкарбамоил)пирролидин-1 -ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в
- 78 024109 примере 201. МС, найдено для С20Н25ЖО2 в виде (М+Н)+, 396.5.
Пример 220. 2-(4-((28,48)-2-Карбамоил-4-гидроксипирролидин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С^Н^ЖОз в виде (М+Н)+, 398.5.
Пример 221. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-((28,48)-4-гидрокси-2-(метилкарбамоил)пирролидин-1ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С20Н25ЖО3 в виде (М+Н)+, 412.5.
Пример 222. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(диметиламино)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Н
Вышеупомянутое соединение получали, используя ЖМ-диметилбензол-1,4-диамин с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С17Н22ЖО в виде (М+Н)+, 327.0.
Пример 223. 2-(4-Ацетамидофениламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя М-(4-аминофенил)ацетамид с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С17Н20ЖО2 в виде (М+Н)+, 341.0.
Пример 224. 2-(1Н-Индазол-5-иламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамид 16.
Вышеупомянутое соединение получали, используя 1Н-индазол-5-амин с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С16Н17ЖО в виде (М+Н)+, 324.0.
Пример 225. 2-(1Н-Индазол-6-иламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя 1Н-индазол-6-амин с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С36Н17М7О в виде (М+Н)+, 324.0.
Ή ЯМР (СО3ОО, 400 МГц): δ 8.44 (δ, 1Н), 8.13 (δ, 1Н), 7.99 (δ, 1Н), 7.88 (б, 1Н), 7.27 (т, 2Н), 4.63 (т, 1Н), 2.48 (т, 2Н), 2.13 (т, 2Н), 1.92 (т, 2Н).
Пример 226. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-метоксифениламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 79 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя п-анизидин с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для СИН|У5О2 в виде (М+Н)+, 314.0.
Пример 227. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(диэтиламино)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя Ν,Ν-диэтилфенилендиамин с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С19Н2у6О в виде (М+Н)+, 355.2.
Пример 228. 4-(Циклобутиламино)-2-(фениламино)пиримидин-5-карбоксамид.
Вышеупомянутое соединение получали, используя анилин с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С^Н^^О в виде (М+Н)+, 284.0.
Пример 229. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-у-метилпропионамидо)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя ^(4-аминофенил)-Ы-метилпропионамид (синтезированный из Ν-метил 4-нитроанилин в две стадии) с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С19Н2У6О2 в виде (М+Н)+, 369.0.
Пример 230. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-у-метилпропионамидо)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя промежуточное соединение, синтезированное, как описано на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и ^(4-аминофенил)-Ыметилпропионамид (синтезированный из Ν-метил 4-нитроанилина в две стадии). МС, найдено для С!8Н2у6О2 в виде (М+Н)+, 355.0.
Пример 231. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-у-метилацетамидо)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя промежуточное соединение, синтезированное, как описано на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и ^(4-аминофенил)-Ыметилацетамид (который получали из Ν-метил 4-нитроанилина в две стадии) МС, найдено для С17Н2у6О2 в виде (М+Н)+, 341.0.
Пример 232. Изопропил 4-(5-карбамоил-4-(циклопропиламино)пиримидин-2-иламино)фенил(метил)карбамат
- 80 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя промежуточное соединение, синтезированное, как описано на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и изопропил 4аминофенил(метил)карбамат (синтезированный из Ν-метил 4-нитроанилина в две стадии). МС, найдено для С19Н24Ы6О3 в виде (М+Н)+, 385.0.
Пример 233. 4-(Циклопропиламино)-2-(2,3-дигидробензо [Н] [ 1,4]диоксин-6-иламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С'кНгАОз в виде (М+Н)+,
328.2.
Пример 234. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-морфолинофениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С18Н22Ы6О2 в виде (М+Н)+, 355.0.
Ή ЯМР (ДМСО-П6, 400 МГц): δ 8.24 (к, 1Н), 7.50 (широкий к, 2Н), 7.06 (П, 2Н), 3.84 (т, 4Н), 3.21 (т, 4Н), 0.92 (т, 2Н), 0.71 (т, 2Н).
Пример 235. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на Схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С19Н24Ых6О в виде (М+Н)+, 353.2.
Пример 236. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-гидроксипиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и анилин, производный 4-фторнитробензола и 4-гидроксипиперидина. МС, найдено для С!9Н24Ы6О2 в виде (М+Н)+, 369.0.
Пример 237. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-фторпиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на
- 81 024109 схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и анилин, производный 4-фторнитробензола и
4-фторпиперидина. МС, найдено для С^Н^^ОР в виде (М+Н)+, 371.0.
Пример 238. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фениламино)пиримидин-5 карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и анилин, производный 4-фторнитробензола и 1-метилпиперазина. МС, найдено для СУН^-О в виде (М+Н)+, 368.3.
Пример 239. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(3,3-дифторпиперидин-1 -ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и анилин, производный 4-фторнитробензола и 3,3-дифторпиперидина. МС, найдено для С9Н22Н5ОР2 в виде (М+Н)+, 389.0.
Пример 240. 2-(4-(4-Карбамоилпиперидин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и анилин, полученный из 4-фторнитробензола и изонипекотамида, и далее путем восстановления, используя водород и Р4/С в метаноле. МС, найдено для С20Н25^О2 в виде (М+Н)+, 396.2.
Пример 241. 2-(4-(4-Карбамоилпиперазин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя анилин, полученный из 4-пиперазинилнитробензола в две стадии. МС, найдено для С11;Л'8О; в виде (М+Н)+, 397.2.
Пример 242. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, с циклопропиламином вместо циклобутиламина, и анилин, производный 4-фторнитробензола и
4,4-дифторпиперидина. МС, найдено для С19Н22Н5ОР2 в виде (М+Н)+, 389.0.
Пример 244. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(метилсульфонил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 82 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С15НГЩО3З в виде (М+Н)+, 348.1.
Пример 245. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(метилтио)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С15Н17^ОЗ в виде (М+Н)+, 316.1.
Пример 246. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н27^О3З в виде (М+Н)+, 446.3.
Пример 247. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С18Н2Щ-О в виде (М+Н)+, 354.2.
Пример 248. 2-(4-(1Н-1,2,4-Триазол-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для СцЩ^Ю в виде (М+Н)+, 352.2.
Пример 249. 2-(1Н-Индол-5-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для СцЩ^Ю в виде (М+Н)+, 309.2.
- 83 024109
Пример 250. 2-(1Н-Индазол-5-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для САН^'Ы-О в виде (М+Н)+, 310.2.
Пример 251. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(оксазол-5-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С1-Η16N6О2 в виде (М+Н)+, 337.1.
Пример 252. 2-(1Н-Индазол-6-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С15Н15АО в виде (М+Н)+, 310.2.
Пример 253. 4-(Циклопропиламино)-2-(хинолин-6-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С17Н16ЫО в виде (М+Н)+, 321.2.
Пример 254. (К)-2-(4-(3-Карбамоилпиперидин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С20Н25Ы7О2 в виде (М+Н)+, 396.0.
Пример 255. (δ)-2-(4-(3 -Карбамоилпиперидин-1 -ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С20Н25Ы7О2 в виде (М+Н)+, 396.2.
Пример 256. 4-(Циклобутиламино)-2-(2,3-дигидробензо[Ь][1,4]диоксин-6-иламино)пиримидин-5карбоксамид
- 84 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для СгНиМ-Ю’ в виде (М+Н)+, 342.2.
Пример 257. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный пиперидина и 4фторнитробензола. МС, найдено для С20Н2&Ы6О в виде (М+Н)+, 367.3.
Пример 258. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(4-гидроксипиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4гидроксипиперидина и 4-фторнитробензола. МС, найдено для С20Н2&Ы6О2 в виде (М+Н)+, 383.3.
Пример 259. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(4-фторпиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4фторпиперидина и 4-фторнитробензола. МС, найдено для Со^^Ор в виде (М+Н)+, 385.0.
Пример 260. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-морфолинофениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4-морфолина и 4фторнитробензола. МС, найдено для С19Н24Н6О2 в виде (М+Н)+, 369.0.
Пример 261. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 1метилпиперазина и 4-фторнитробензола. МС, найдено для С^Н^^О в виде (М+Н)+, 382.3.
- 85 024109
Пример 262. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 3,3дифторпиперидина и 4-фторнитробензола. МС, найдено для С20Н24Ы6ОР2 в виде (Μ+4)+, 403.0.
Пример 263. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина и анилин, производный 4,4дифторпиперидина и 4-фторнитробензола. МС, найдено для С20Н24Ы6ОР2 в виде (Μ+4)+, 403.0.
Пример 264. (К)-2-(4-(2-Карбамоилпирролидин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С19,Н23Н-О2 в виде (Μ+4)+, 382.0.
Пример 265. 2-(4-((28,4К)-2-Карбамоил-4-гидроксипирролидин-1-ил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201.
Пример 266. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-((28,4К)-4-гидрокси-2-(метилкарбамоил)пирролидин-1 ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201. МС, найдено для С20Н25Ы7О3 в виде (Μ+4)+, 412.5.
Пример 267. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-((28,4К)-2-(диметилкарбамоил)-4-гидроксипирролидин-1 ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в
- 86 024109 примере 201. МС, найдено для С21Н2Ю7О3 в виде (М+Н)+, 426.5.
Пример 268. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(4-(метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя анилин, производный этилизонипекотата и 4-фторнитробензола. МС, найдено для С22Н29И7О2 в виде (М+Н)+, 424.0.
Пример 269. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(4-(диметилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя анилин, производный этилизонипекотата и 4-фторнитробензола. МС, найдено для С23Н3Ю7О2 в виде (М+Н)+, 438.3.
Пример 270. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя анилин, производный 1-гидроксиэтилпиперазина и 4-фторнитробензола. МС, найдено для С2’Н2Ю7О2 в виде (М+Н)+, 412.3.
Пример 271. 2-(3-Хлор-4-морфолинофениламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С’9Н2Юх6О2С1 в виде (М+Н)+, 403.0, 405.0.
Пример 272. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя анилин, производный 3,3-дифторпирролидина и 4-фторнитробензола. МС, найдено для С’9Н22Ц5ОР2 в виде (М+Н)+, 389.0.
Пример 273. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(метилкарбамоил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на
- 87 024109 схеме 1. МС, найдено для С]-Н20И6О2 в виде (М+Н)+, 341.0.
Пример 274. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-(диметилкарбамоил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С18Н22И6О2 в виде (М+Н)+, 355.2.
Пример 275. (8)-4-(Метиламино)-2-(4-(2-(метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
ΝΗ
О
ΝΗ О
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1 метиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С!9Н25И7О2 в виде (М+Н)+, 384.3. УФ: λ = 208, 276.
Пример 276. (8)-4-(Этиламино)-2-(4-(2-(метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин5-карбоксамид
ΝΗ •О
ΝΗ О γΟι ν'^υΑνη2 Η
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1 этиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н27И7О2 в виде (М+Н)+, 398.3. УФ: λ = 203, 272.
Пример 277. (8)-2-(4-(2-(Метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)-4-(проп-2-иниламино)пиримидин-5 -карбоксамид 'ΝΗ ч,
ЮЛ г а
ΝΗ О 'Ν
Н
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя пропаргиламин вместо циклобутиламина в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1 с пропаргиламином вместо метиламина. МС, найдено для С21Н25И7О2 в виде (М+Н)+, 408.3. УФ: λ = 207, 273.
Пример 278. (8)-4-(Циклопропилметиламино)-2-(4-(2-(метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1, циклопропилметиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С22Н29И7О2 в виде (М+Н)+, 424.4. УФ: λ = 204, 260.
Пример 279. (Е)-2-(4-(3-Карбамоилпиперидин-1-ил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 88 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1, трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С19Н22Р3^О2 в виде (М+Н)+, 438.3.
Пример 280. (К)-2-(4-(3-(Метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5-карбоксамид
I
ΗΝ
СР3 к
ΝΗ с\хдУ
N Н
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1, трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С20Н24Р3^О2 в виде (М+Н)+, 452.3.
Пример 281. (8)-2-(4-(2-Карбамоилпиперидин-1-ил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5 -карбоксамид νη2 ср3
ΝΗ О
N Н
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1, трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С19Н22Р3^О2 в виде (М+Н)+, 438.3.
Пример 282. (8)-2-(4-(2-(Диметилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5-карбоксамид νη2
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1, трифторэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С2|Н26Е3Х-О2 в виде (М+Н)+, 466.4.
Пример 283. 2-(4-Метоксифениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5-карбоксамид
СР3
ΝΗ _ „V н
ΝΗ,
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина, и путем использования пораанизидина на последней стадии. МС, найдено для СиНиЕМО: в виде (М+Н)+, 342.2. УФ: λ = 217.
Пример 284. 2-(4-Карбамоилфениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5-карбоксамид
СР.
'ΝΗ О мН! н
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на
- 89 024109 схеме 1, используя трифторэтиламин вместо циклобутиламина, и путем использования 4-аминобензамида на последней стадии. МС, найдено для С14Н13Р3Ы6О2 в виде (М+Н)+, 355.2. УФ: λ = 200, 290.
Пример 285. (8)-4-(трет-Бутиламино)-2-(4-(2-(метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1, трет-бутиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С22Н31N7О2 в виде (М+Н)+, 426.3.
Пример 286. (8)-4-(2-Метоксиэтиламино)-2-(4-(2-(метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
Н
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1, 2-метоксиэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С21Н29N7О3 в виде (М+Н)+, 428.3. УФ: λ = 202, 268.
Пример 287. (8)-4-(Циклопентиламино)-2-(4-(2-(метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Н
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1, циклопентиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С23Н31Ы7О2 в виде (М+Н)+, 438.3. УФ: λ = 203, 262.
Пример 288. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-этоксифениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Промежуточное соединение 361.1 перемешивали с 4-этоксианилином 361.2 [СА8 156-43-4] и пТСК в ММР. Реакционную смесь нагревали в запаянной трубке при 120°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали, делали слабокислой с помощью ТФУ и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением указанного в заголовке соединения. МС, найдено для С16Н19N5О2 в виде (М+Н)+, 314.3. λ=275 нм.
Пример 289. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-феноксифениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Промежуточное соединение 361.1 перемешивали с 4-феноксианилином [СА8 139-59-3] и пТСК в
- 90 024109
ЫМР, как описано в примере 288. Препаративная ВЭЖХ с обращенной фазой давала указанное в заголовке соединение. МС, найдено для С20Н19Ы5О2 в виде (М+Н)+, 362.2. УФ: λ = 277 нм.
Пример 290. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(трифторметокси)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Промежуточное соединение 361.1 перемешивали с 4-(трифторметокси)анилином [СА8 461-82-5] и пТСК в ЫМР, как описано в примере 288. Препаративная ВЭЖХ с обращенной фазой давала указанное в заголовке соединение. МС, найдено для С15Н14Р3Ы5О2 в виде (М+Н)+, 354.2. УФ: λ = 265 нм.
Пример 291. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(пиридин-3-илокси)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Промежуточное соединение 361.1 перемешивали с 4-(3-пиридилокси)анилином [СА8 80650-45-9] и пТСК в ЫМР, как описано в примере 288. Препаративная ВЭЖХ с обращенной фазой давала указанное в заголовке соединение. МС, найдено для С19Н!8Ы6О2 в виде (М+Н)+, 363.3. УФ: λ = 205, 267 нм.
Пример 292. 2-(4-(2-Цианоэтилсульфонил)фениламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
Промежуточное соединение 361.1 перемешивали с 3-(4-аминофенил)сульфонилпропаннитрилом [СА8 84362-27-6] и пТСК в ЫМР, как описано в примере 288. Препаративная ВЭЖХ с обращенной фазой давала указанное в заголовке соединение. МС, найдено для С,-Н|8Ы6О3,8 в виде (М+Н)+, 387.2. УФ: λ = 290 нм.
Пример 293. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-изобутоксифениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Промежуточное соединение 361.1 перемешивали с гидрохлоридом 4-(2-метилпропокси)анилина [СА8 1050161-26-6] и пТСК в ЫМР, как описано в примере 288. Препаративная ВЭЖХ с обращенной фазой давала указанное в заголовке соединение. МС, найдено для С18Н23Ы5О2 в виде (М+Н)+, 342.4. УФ λ = 280 нм.
Пример 294. 4-(Циклопропиламино)-2-(4-(тиазол-4-илметилсульфонил)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Промежуточное соединение 361.1 перемешивали с 4-(тиазол-4-илметилсульфонил)анилином и пТСК в ЫМР, как описано в примере 288. Препаративная ВЭЖХ с обращенной фазой давала указанное в заголовке соединение. МС, найдено для С’|8Н|8М1О38; в виде (М+Н)+, 431.2. УФ λ = 291 нм.
Пример 295. (8)-4-(Бензиламино)-2-(4-(2-(метилкарбамоил)пиперидин-1 -ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
- 91 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1, бензиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С25Н29ЖО2 в виде (М+Н)+, 460.3. УФ: λ = 208, 261.
Пример 296. (8)-4-(Изопропиламино)-2-(4-(2-(метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
ΝΗ ъ
ΝΗ О
ШУ4 н
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1, изопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С21Н29ЖО2 в виде (М+Н)+, 412.4. УФ: λ = 202, 271.
Пример 297. (8)-2-(4-(2-(Метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино)-4-(2,3,6-трифторбензиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1, 2,3,6-трифторбензиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С25Н26Р3ЖО2 в виде (М+Н)+, 514.4.
Пример 298. (8)-4-(2-Метоксиэтиламино)-2-(4-(2-(метилкарбамоил)пиперидин-1-ил)фениламино) пиримидин-5 -карбоксамид
I
ΝΗ О
ΝΗ О γΎι ν'^γ'νη2
Η
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 201, используя в синтезе исходного вещества, описанного на схеме 1, 2-метоксиэтиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С22Н31ЖО3 в виде (М+Н)+, 442.4. УФ: λ = 203, 273.
Пример 299. 4-(1-Метил-1Н-индазол-4-иламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 151. МС, найдено для С25Н28ЖО2 в виде (М+Н)+, 473.4. УФ: λ = 212.2,285.4.
Пример 300. 4-(1,2-Диметил-1Н-индол-4-иламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 92 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 48. МС, найдено для С27Н31Ы7О2 в виде (М+Н)+, 486.5. УФ: λ = 218.6, 258.9.
Пример 301. 4-(4-Хлорнафталин-1-иламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 48. МС, найдено для С27Н27СШ6О2 в виде (М+Н)+, 503.4, 505,4 (С1 модель). УФ: λ = 222.8, 284.2.
Пример 302. 4-(3-Метилциннолин-5-иламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 48. МС, найдено для С26Н28Ы8О2 в виде (М+Н)+, 485.4. УФ: λ = 276.1.
Пример 303. 4-(Бензо[й]тиазол-7-иламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 48. МС, найдено для С24Н25Ы7О2З в виде (М+Н)+, 476.4. УФ: λ = 216.9, 281.9.
Пример 304. 4-(Нафталин-1-иламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 48. МС, найдено для С27Н28Ы6О2 в виде (М+Н)+, 469.4. УФ: λ = 219.2, 280.7.
Пример 305. 4-(4-(Метилсульфонил)фениламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)пиримидин-5 -карбоксамид
- 93 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 48. МС, найдено для С24Н28Ы6О^ в виде (М+Н)+, 497.4. УФ: λ = 292.
Пример 306. 2-(4-(2-(Пирролидин-1-ил)этокси)фениламино)-4-(2,2,2-трифторэтиламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Это соединение синтезировали используя химию, описанную на схеме 1, с трифторэтиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С19Н23Р3Ы6О2 в виде (М+Н)+, 425.3. УФ: λ = 215, 245, 275 нм.
Пример карбоксамид
307.
4-(Бензиламино)-2-(4-(2-(пирролидин-1 -ил)этокси)фениламино)пиримидин-5 -
Это соединение синтезировали используя химию, описанную на схеме 1, с бензиламином вместо циклобутиламина. МС, найдено для С24Н28Ы6О2 в виде (М+Н)+, 433.4. УФ: λ = 251 нм.
Пример 309. 4-(Циклобутиламино)-2-(2-оксоиндолин-5-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
ΝΗ О
Вышеупомянутое соединение получали, используя 5-аминоиндолин-2-он и методику, описанную на схеме 1. МС, найдено для С17Н18Ы6О2 в виде (М+Н)+, 339.0.
Пример 310. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-метил-3-оксо-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-7иламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя Ы7-амино-4-метил-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин3(4Н)-он (синтезированный из 2-амино-5-нитрофенола и этилбромацетата в три стадии) с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С18Н20Ы6О3 в виде (М+Н)+, 369.0.
Пример 311. 4-(Циклобутиламино)-2-(2-оксо-1,2,3,4-тетрагидрохинолин-6-иламино)пиримидин-5карбоксамид
Н
Вышеупомянутое соединение получали, используя 6-амино-3,4-дигидрохинолин-2(1Н)-он (полученный путем нитрования 3,4-дигидрохинолин-2(1Н)-она и далее восстановления порошком железа) с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С18Н20Ы6О2 в виде (М+Н)+, 353.0.
Пример 312. 4-(Циклобутиламино)-2-(2,2,4-триметил-3-оксо-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин7-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
- 94 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя 1Н-амино-4-метил-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин3(4Н)-он (синтезированный из 2-амино-5-нитрофенол и этил 2-бром-2-метилпропаноата в три стадии) с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С20Н24Н5О3 в виде (М+Н)+, 397.0.
Пример 313. 4-(Циклобутиламино)-2-(1-метил-2-оксо-1,2,3,4-тетрагидрохинолин-6-иламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя 6-амино-1-метил-3,4-дигидрохинолин-2(1Н)-он (полученный путем нитрования 3,4-дигидрохинолин-2(1Н)-она и далее метилированием и последующим восстановлением порошком железа), с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С^ггИ^г в виде (М+Н)+, 367.0.
Пример 314. 4-(Циклобутиламино)-2-(4-метил-3-оксо-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6иламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя 6-амино-4-метил-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-3(4Н)он (синтезированный из 2-амино-4-нитрофенола и этилбромацетата в три стадии), с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С18Н20К6О3 в виде (М+Н)+, 369.0.
Пример 315. 4-(Циклобутиламино)-2-(3-оксо-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-иламино)пиримидин-5 -карбоксамид
Н Н
Вышеупомянутое соединение получали, используя 6-амино-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-3(4Н)-он (синтезированный из 2-амино-4-нитрофенола и этилбромацетата в две стадии), с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С17Н18К6О3 в виде (М+Н)+, 355.0.
Пример 316. 2-(1Н-Бензо[4][1,2,3]триазол-6-иламино)-4-(циклобутиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя 1Н-бензо[4][1,2,3]триазол-6-амин с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С^Н^^О в виде (М+Н)+, 325.0.
Пример 317. 4-(Циклобутиламино)-2-(2-оксо-2,3-дигидробензофуран-5-иламино)пиримидин-5карбоксамид
Н
- 95 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя 5-аминобензофуран-2(3Н)-он, с использованием методики, подобной той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С17Н’Ю5О3 в виде (М+Н)+, 340.0.
’Н ЯМР (ДМСО-б6, 400 МГц): δ 8.41 (к, 1Н), 8.05 (к, 1Н)7.88 (б, 1Н)7.78 (б, 1Н), 4.59 (т, 1Н), 2.47 (т, 2Н), 2.09 (т, 2Н), 1.90 (т, 2Н).
Пример 318. 4-(Циклопропиламино)-2-(2,2-дифторбензо[б][1,3]диоксол-5-иламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С13Н13ЮО3Р2 в виде (М+Н)+, 350.1.
Пример 319. 4-(Циклопропиламино)-2-(2-метилбензо[б]тиазол-5-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С’6Н’6Н5О8 в виде (М+Н)+, 341.0.
Пример 320. 2-(Бензо[б]тиазол-5-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С13Н12Н-,О8 в виде (М+Н)+, 327.1.
Пример 321. 4-(Циклопропиламино)-2-(имидазо[1,2-а]пиридин-6-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для СЦН^^О в виде (М+Н)+, 310.2.
Пример 322. 2-(1Н-Бензо[б]имидазол-6-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С’5Н’5^О в виде (М+Н)+, 310.1.
Пример 323. 2-(1Н-Бензо[б][1,2,3]триазол-6-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5карбоксамид
- 96 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для СщН^^О в виде (М+Н)+, 311.2.
1Н ЯМР (С1ГО1). 400 МГц): δ 8.63 (5, 1Н), 8.42 (5, 1Н), 7.92 (ά, 1Н), 7.58 (ά, 1Н), 3.04 (т, 1Н), 1.03 (т, 2Н), 0.87 (т, 2Н).
Пример 324. 4-(Циклопропиламино)-2-(3-метил-1Н-индазол-6-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для Ο^^Ν^ в виде (М+Н)+, 324.
Пример 325. 2-(Бензо[с][1,2,5]тиадиазол-5-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для СщНв^ОЗ в виде (М+Н)+, 328.2.
Пример 326. 2-(7-Хлор-1Н-индазол-6-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя, после хлорирования 6-аминоиндазольного кольца с использованием Νхлорсукцинимида, циклопропиламин вместо циклобутиламина. МС, найдено для С^Нп^ОО в виде (М+Н)+, 344.2, 346.2.
Пример 327. 2-(3-Хлор-1Н-индазол-5-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана в примере 326. МС, найдено для С^Н^^Оа в виде (М+Н)+, 344.2, 346.2.
1Н ЯМР (С1ГО1). 400 МГц): δ 8.24 (5, 1Н), 8.18 (5, 1Н), 7.59 (т, 2Н), 2.97 (т, 1Н), 0.80 (т, 2Н), 0.64 (т, 2Н).
Пример 328. 2-(1-(2-Амино-2-оксоэтил)-1Н-индазол-6-иламино)-4-(циклопропиламино)пиримидин5-карбоксамид
- 97 024109
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1, используя циклопропиламин вместо циклобутиламина, используя промежуточное соединение производное 6-нитроиндазола и этилбромацетата. МС, найдено для С1-Н18Н8О2 в виде (Ы+Н)+, 367.2.
Пример 329. 4-(Циклобутиламино)-2-(2,2-дифторбензо[б][1,3]диоксол-5-иламино)пиримидин-5карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для СцзН^^О^ в виде (Ы+Н)+, 364.1.
Пример 330. 4-(Циклобутиламино)-2-(имидазо[1,2-а]пиридин-6-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С16Н17К7О в виде (Ы+Н)+, 324.2.
Пример 331. 4-(Циклобутиламино)-2-(3 -метил-1Н-индазол-6-иламино)пиримидин-5-карбоксамид
Вышеупомянутое соединение получали, используя методику, подобную той, которая описана на схеме 1. МС, найдено для С17Н19Ы7О в виде (Ы+Н)+, 338.0.
Пример 332.
Этот пример иллюстрирует методы оценки соединения изобретения наряду с результатами, полученными в таких анализах. Активность ίη уйго и ίη угуо соединений изобретения на кук человека можно определить с помощью различных методик, известных в уровне техники, таких как тест на их способность ингибировать активность кук плазмы человека. Сильные афинности для ингибирования кук человека, показанные соединениями изобретения, могут быть измерены в виде значения Ιί\0 (в нМ). Ιί\0 значение представляет собой концентрацию (в нМ) соединения, необходимую для обеспечения 50% ингибирования протеолитической активности кук человека. Чем меньшее значение ΙΟ50, тем более активным (сильным) является соединение в отношении ингибирования кук активности.
Анализ ίη уйго обнаружения и измерения ингибирующей активности по отношению к кук проводят, как изложено ниже: Ингибирование кук тирозин-фосфорилирующей активности Активность молекулыкандидата для ингибирования кук тирозин-фосфорилирующей активности оценивают с помощью измерения способности тестируемого соединения ингибировать кук-опосредованное фосфорилирование тирозина кук-специфического субстрата.
8ук тирозин-фосфорилирующую активность измеряют, используя технологию ЬАЫСЕ™, разработанную Регкш Е1тег ЫГс и Ат^са! 8с1спсск (Бостон, Массачусетс). РАИСЕ™ относится к флуорометрическим с однородным временным разрешением приложениям с использованием технологий, таких как анализ с временным разрешением резонансного переноса энергии флуоресценции (ТК-РКЕТ) (см. в общих чертах методики в Регкш Е1тег Арр^аНом Ыо1е-Но№ 1о Орί^т^ζе а Тугокше Кшаке Аккау Икт§ Типе Кеко1уеб Ρ1ио^ексеηсе-Вакеб РАИСЕ □еШсНом, №№№.ре^к^ηе1те^.сот/1^Гекс^еηсек). Принцип анализа включает детектирование фосфорилированного субстрата, используя перенос энергии от фосфоспецифического меченного европием антитела к стрептавидин-аллофикоцианину в качестве акцептора. Чтобы
- 98 024109 протестировать способность молекулы-кандидата ингибировать §ук тирозин-фосфорилирующую активность, молекулы растворяют в 30% ДМСО и серийно разбавляют 1:3, с конечным разбавлением, содержащим ДМСО при отсутствии молекулы-кандидата. Конечная концентрация ДМСО при анализе составляет 3%. Киназные анализы выполняют в виде реакции, состоящей из двух стадий. Первая реакция является киназной реакцией и включает взаимодействие молекулы-кандидата, полноразмерного активного рекомбинантного 8УК фермента (МИЬроге, Калифорния) и биотин-меченого §УК-специфического субстрата биотин-ЭЕЕПУЕ§Р-ОН. Вторая реакция включает завершение киназной реакции и одновременное добавление детектирующих реагентов - меченного европием антифосфотирозинового реагента (Еи^1024-РУ100, Регкш Е1тег, Бостон, Массачусетс) и стрептавидин-аллофикоцианинового детектирующего реагента (§А-АРС, Рго/уте. Калифорния). Киназную реакцию выполняют в черном И-образном 96луночном микротитрационном планшете. Конечный реакционный объем составляет 50 мкл и содержит 1 нМ конечную концентрацию активного 8УК фермента, 550 нМ §УК-субстрата и 100 мкМ АТФ, разбавленную в буфере, содержащем 50 мМ Тпз рН 7.5, 5 мМ М§С12 и 1 мМ ЭТТ. Реакции позволяют протекать в течение 1 ч при комнатной температуре. Гасящий буфер содержит 100 мМ Тпз рН 7.5, 300 мМ №С12, 20 мМ ЭДТК, 0.02% Вгу 35 и 0.5% В§А. Детектирующие реагенты добавляют к реакционной смеси при следующих разбавлениях - 1:500 для Ец-^1024-РУ100 и 1:250 для §А-АРС. Киназную реакцию завершают путем добавления 50 мкл гасящего буфера, содержащего детектирующие реагенты. Детектированию позволяют протекать в течение 1 ч при комнатной температуре. Детектирование фосфорилированного субстрата при отсутствии и присутствии ингибиторов, измеряют на приспособлении ТК-РКЕТ, Апа1уз1 НТ (Мо1еси1аг РгоЬез, Саннивейл, Калифорния), а условия измерений устанавливают, используя СгПепопНоз! Ке1еазе 2.0 (Мо1еси1аг РгоЬез, Саннивейл, Калифорния). Используемые установочные параметры являются следующими: возбуждение 360 нм, эмиссия 665-7.5 нм, светоделитель 350 нм 50/50, вспышка 100 импульсов, задержка 60 мкс, интегрирование 400 мкс, ζ-высота 2 мм. Ингибирование 8УКтирозинкиназной активности вычисляют в виде максимального ответа, наблюдаемого в присутствии ингибитора, в сравнении с таковым при отсутствии ингибитора. Значения 1С50 выводили с помощью нелинейного регрессионного анализа. Внутриклеточную фосфопроточную цитометрию использовали с целью протестировать ингибирование соединением §ук активности в незатронутых неходжкинской лимфомой линиях клеток Катоз и §ИОНЬ-6. 10х106 клеток в логарифмической фазе роста аликвотировали; §ук киназу активируют путем инкубирования клеток в течение 10 мин 3 мг/мл антитела, специфического к В-клеточному рецептору. Непосредственно затем клетки фиксируют в 1% параформальдегиде в течение 5 мин при комнатной температуре, промывают в забуференном фосфатом физиологическом растворе и затем пермеабилизуют путем инкубирования в течение 2 ч в охлажденном льдом метаноле. Клетки опять промывают в забуференном фосфатом физиологическом растворе, затем инкубируют в течение 30 мин с антителом, специфическим для фосфорилированной Егк (Υ204) и ВЬИК (Υ84), которые являются индикаторами активности киназы §ук и фосфорилированной §ук (Υ352), меры активности §гс семейства киназ. Все использованные антитела поставляются от ΒΌ РЬагшшдеп (Сан-Хосе, Калифорния). После инкубирования с антителами клетки опять промывают и подвергают проточной цитометрии. Репрезентативная детализация данных ингибирования соединениями передачи сигналов посредством В-клеточного рецептора показана в табл. 1 в виде диапазонов 1С50.
Также оценивали антипролиферативные действия соединений на неходжкинскую лимфому В линии клеток §иПНЬ-4, §иИНЬ-6 и То1ебо. §иИНЬ-4 и §иИНЬ-6 для роста и выживания требует передачи сигналов посредством В клеточного рецептора, в то время как линия клеток То1ебо (служащая здесь в качестве негативного контроля) - не требует. Клетки аликвотировали в каждую лунку 96-луночного планшета и инкубировали с возрастающими концентрациями соединения в течение 72 ч, после чего выживаемость и пролиферацию клеток определяли, используя МТТ анализ (СНеписоп 1п1егпа11опа1, 1пс., Темекула, Калифорния), следуя протоколам, предоставляемым изготовителем. Данные детализируются в табл. 2 в виде 1С50 значений плюс или минус среднеквадратическое отклонение из 5 или 6 независимых экспериментов.
Индукцию апоптоза у линии клеток неходжкинской лимфомы В §ИОНЬ-4, §ИОНЬ-6 и То1ебо оценивали с помощью измерения маркера апоптоза каспазы-3. Клетки инкубировали с 1, 3 или 10 мкМ соединением в течении 24, 48 и 72 ч. В заключение каждого момента времени клетки обрабатывали согласно анализу проточной цитометрии, используя набор моноклонального кроличьего антитела против активной формы каспазы-3 и соответствующие протоколы (ΒΌ РНагтшдеп). Данные из двух независимых экспериментов, представляющие процентную долю всех клеток, подвергающихся апоптозу после инкубирования с соединениями в указанных условиях, представлены в табл. 3А и 3В.
8ук активность, как показано, не только необходима для передачи сигналов посредством В клетки, пролиферации и выживания, но также является решающей для клеточного активирования при перекрестном связывании В клеточного рецептора. Активирование В клетки вызывает повышенную экспрессию на поверхности клетки некоторых белков, вовлеченных в сигнальную систему клетки, презентацию антигена и адгезию. Среди них СИ80, СИ86 и СИ69 измеряют обычно для определения статусов активирования В клеток. Следовательно, первичные мышиные В клетки, отделенные от селезенки, аликвотировали и инкубировали с возрастающими концентрациями соединения (0.05-2 мкМ) в присутствии козлиного
- 99 024109 антимышиного ΙβΩ (еВюкаепсек, 1пс., Сан-Диего, Калифорния) в течение 20 ч до перекрестного связывания В-клеточного рецептора. Затем клетки промывали и инкубировали в течение 30 мин на льду с антителами специфическими для ί'Ό80, СЭ86 и СЭ69 В-клеточных активированных маркеров. В клетки идентифицировали из общей популяции путем окрашивания В-клеточным маркером СЭ45КО. Все антитела закупали в ΒΌ РЬатшшдеп. Табл. 4 представляет диапазон 1С50, в котором эти соединения ингибировали индуцированное В-клеточными рецепторами активирование мышиных первичных В клеток.
В таблице ниже обеспечивается активность в 8ук и/или 1ак анализах, как изложено ниже: +++++ = 1С50 <0.0010 мкМ; ++++ = 0.0010 мкМ <1С50< 0.010 мкМ; +++ = 0.010 мкМ <1С50< 0.10 мкМ; ++ = 0.10 мкМ <1С50< 1 мкМ; + = 1С50 >1 мкМ.
Таблица 7
Пример УФ ММ МН+ 8ук 1С50
1 409.49 410.0 410.2 +++
2 461.53 462.3 ++
3 395.47 396.0 396.3 396.4 Е8 (+) МС М+Н“396 +++
4 423.52 424 ++
5 411.51 412.3 ++
6 445.53 446.1 ++
7 397.48 398.3 ++
8 411.51 412 ++
9 413.48 413 ++
10 427.51 428 ++
12 409.49 410.2 ++
13 393.45 394.2 -н-
14 369.43 370.2 ++
15 383.46 384.2 Турбо распыление МС[М+1]=384 Турбо распыление МС [М+11=384 ++
16 437.43 438.2 ++
17 459.55 М+1 =460 ++
18 445.53 446 ++
32 557.66 558.2 ++
- 100 024109
33 471.53 472.2 ++
34 429.91 430.0, 432.0 +++
35 443.94 444.0,446.0 +++
36 256, 249.5 409.49 410.3 420.2 420.4 Εδ(+) МС [Μ+1 )=410 Турбо распыление МС [М+1]=410 +++
37 421.51 422.4 ++Ψ
38 425.49 426.2 Е5(+) МС [М-1 )=426 Турбо распыление МС [М+11-426 +++
39 409.45 410.2 ++
40 413.46 414.2 +-Н-
41 452.56 453.45 +-Н-+
42 452.56 453.41 +++
45 466.59 467.46 ++
46 495.59 496.45 -н-
48 452.56 453.45 +++
49 495.59 497 ++
50 441.54 Е8(+) МС [М+11=442 ++
51 413.48 414.4 ++
52 413.48 414.4 ++
53 394.44 395.2 ++
54 413.48 414.3 ++
55 438.49 439.4 +++
56 409.49 410.4 +++ ++
58 426.48 427.4
59 440.51 441.3 ++
60 408.47 409.3 ++
63 466.55 467.4 ++
64 471.57 472.3 ++
65 413 48 414.3 ++
66 427.51 428.4 ++
67 452.52 453.3 +++
69 429.48 430.3 ++
70 466.55 467.4 +++
71 425.49 426.3 +++
72 207.8, 293.8 500.56 501.3 ++
73 228.5, 285.3 410.53 411.43 Ή-+
77 410.48 342 +++
78 438.54 439.3 ++
86 219.2 498.59 499.4 ++
87 208.6 512.62 513.4 ++
92 317.78 318.0,320.0 ++
93 396.46 397 ++
96 428.52 429.3 (М+1) +++
97 430.53 431.3 (М+1) +++
459.57
460.2
- 101 024109
99 431.52 432.0 432.2 ЕЗ (+) МС [М+1 >432 Е5(+) МС [М+Н]=432 Турбо распыление МС [М+1 )=432 Турбо распыление МС [М+1 )=432 -Н-+
100 445.55 426 (Μ + Н) 446 446.2 446.2 (Μ + Н) 446.4 Е5(+)МС [М+1 )=446 Турбо распыление МС [М+11=446 +++
101 203.6, 230.8, 258.0 445.55 446.0 Е5(+) МС [М+1 [=446 +++
103 362.41 363 +++
104 370.41 371 +++
105 398.47 399 ++
106 390.47 391 +++
107 356.39 355 +++
108 201.4, 275.8 384.44 385.0 Е8(+)МС [М+1 >385 ++
109 348.39 349.0 349.1 +++
ПО 341.38 342 +4-
111 331.4 332.1 ++
112 423.48 424.1 (М+1) -н-
113 394.48 395.3 (М+1) +-Н-
114 449.56 450.3 ++
115 463.59 464.3 ++
116 465.56 466.3 ++
117 457.56 458.2 -н-+
118 409.49 410.2 -н-+
119 409.49 410.2 ++
120 362.39 363.2 -н-
121 402.48 403.2 ++Ψ
122 411.51 М+1 =412 ++
123 407.52 408.3 (М+1) +++
124 423.52 424.2 +++
125 402.48 М+1 =403 +++
127 406.47 М+1 =407 +++
128 392.44 М+1 =393 +++
129 361.42 362.1 ++
130 367.46 368.3 +++
131 430.52 МС: 431.42 (М + Н) ++
135 381.48 382.5 (М+1) +++
136 426.46 М+1 = 427 ++
137 431.5 М+1 = 432 +++
138 429.46 М+ 1 = 430 +++
139 454.51 М+ 1 = 455 +++
140 355.4 356.3 ++
141 367.33 368 ++
168 297.36 298 ++
169 326.36 327 ++
- 102 024109
170 380.45 381 +++
171 207.3, 266.2 388.86 389.0,391.0 Εδ (+) МС М+Н=389, модель с хлором ++
172 374.83 375.0,377.0 ++
173 366.43 367.1 ++
174 397.48 398.3 Е8 (+/-) МС М+Н=398 Турбо распыление МС [М+11=398 -Н-+
175 409.49 410 +++
176 206.1, 268.7 423.52 424 (Μ + Н) 424 (М+Н) 424.0 424.4 Е8(+) МС [М+1 ]=424 +-Н-
177 424.51 425.2 -н-
178 388.86 389.0, 391.0 -и-
179 374.4 375 ++
180 326.36 8 -н-
181 340.39 341 -н-
182 459.53 460.1 (М+1) -н-
183 352.42 МС: 353.2 (М + Н) -н-
184 335.37 МС: 336.3 (Μ + Н) -н-
185 337.35 МС: 338.2 -н-
186 351.43 МС: 352.2 (М + Н) -н-
187 328.33 329.2 +++
188 346.39 МС: 347.3 (Μ + Н) ++
189 392.46 393.3 (М+1) +++
191 382.47 383.3 -н-
192 346.39 МС: 347.3 (М+Н) +++
193 361.42 362.1 (М+1) +-Н-
194 308.35 309.2 ^н-
195 396.45 397.2 ++Ί-
196 445.55 446.2 +++
197 363.43 МС: 364.2 (Μ + Н) ++
198 232.0, 305.0 381.44 Е8(+) МС [ М+1 ]=382 +++
199 352.4 М+1=353 +++
200 366.43 М+!=367 +++
201 252.0, 299.5, 313.6 395.47 Е3(+)МС [М+11=396 +++
202 232.0, 252.1 409.49 Е8(+) МС [М+1 ]=410 ++
203 356.39 М+! = 357 +++
204 370.41 М+1 =371 +++
205 409.49 М+1=410 +-Н-
206 423.52 М+1 =424 -Н-+
207 409.49 410.2 +++
208 423.52 424.2 +++
209 409.49 410.2 Е8(+)МС [М+1]=410 ++
210 423.52 424,2 ++
211 321.34 322.1 ++
212 367.41 368.1
- 103 024109
212 411.47 412.5 ++
213 432.5 т+1 =433 +++
2)4 366.43 367.1 -н-
215 380,45 М+1 =381 ++
216 361.41 362.4 (М+1) +++
218 205.3 232.1 252.3 409.49 Е8(+) МС [М+1]=410 ++
219 395.47 396.5 ++
220 397.44 398.5
222 326.4 327 +++
223 340.39 341 ++
225 323.36 324 +++
226 313.36 314 +++
227 354.46 355.2
228 283.34 284 -н-
229 368.44 369 +++
230 354.41 355 Ц-
231 340.39 341 +++
233 327.34 328.2,329.1 ++
234 205.0, 254.4 354.41 355.0 Е5 (+) МС М+Н=355 Турбо распыление МС [М+1]=355 +++
235 236 230.8, 280.5 352.44 353.2 ЕЗ (+) МС [М+1]=353 +++
201.4, 271.0 368.44 369.0 Е3(+) МС [М+11=369 +++
237 370.43 371 +++
238 201.4, 227.3 367.46 368.3 Е8(+) МС [М+Н]=368 Турбо распыление МС [М+1]=368 +++
239 388.42 389 +++
240 395.47 396.2 +-Н-
241 396.46 397.2 +++
242 388.42 389 -Н-+
244 347.4 348 (Μ + Н) 348.1 348.3 349 (М+Н) Е5{+) МС [М+1]=348 Турбо распыление МС [М+1]=348 +++
245 315.4 316.1 ++
246 445.55 446.3 (М+1) -н-
247 353.43 354.2 +++
248 336.36 МС: 337.3 (Μ + Н) -н-
249 308.35 309.2 +++
250 309.33 310.2 +++
251 336.36 МС: 337.1 (М+Н) ++
252 309.33 310.2 Е3(+) МС [М+1]=310 Е8(+) МС [М+Н]=310 Турбо распыление МС [М+11=310 +++
253 320.36 321.2
254 395.47 М+1 =396 +-н-
- 104 024109
256 341.37 342.2, 343.2 ++
257 366.47 367.3 ++
258 382.47 383.3 +++
259 384.46 385 +++
260 368.44 369 +++
261 201.5, 228.5 381.48 382.3 Е5 (+) МС М+Н=382 ++
262 402.45 403 ++
263 402.45 403 +++
264 200.8, 231.8, 304.8 381.44 Е8(+) МС [М+1 ]=382 +++
265 397.44 398.4 +4-
266 41147 412.5 ++
267 425.49 426.5 Н-
268 423.52 424 -н-+а
269 210.8, 253.2 437.55 438.3 Ё8 (+) МС М+Н=438 +4·
270 411.51 412.3 +++
271 402.89 403.0,405.0 +++
272 388,42 389
273 340.39 341 ++
274 354.41 355.2 4-+
288 275 313.36 ММ=313.35; М+1=314.2 ++
289 277 361.41 ММ=361.4; М+1 =362.2 +4-
290 265 353.3 ММ=353.3; М+1 =354.1 ++
291 205, 267 362.39 ММ=362.4; М+1-163.2 ++
292 290 386.43 ММ=386.4, М+1= 387.2 ++
309 338.37 339.0 (М+1) +++
314 368.4 369 ++
320 326.38 327.1 ++
322 309.33 310.1 +++
323 310.32 311,2 +++
324 2186 247.8 323.36 Е8(+) МС [М+1]=324 +++
325 327.37 328.2 ++
326 343.78 344.2, 346.2 ++
328 366.39 367.2 ++
330 324.35 325 +++
331 214.9 252.1, 298.2 337.39 Е8(+) МС (М+1]=338 +++
Ингибирование ОРУЬопосредованной тромбоцитарной функции ш νίΙΐΌ.
Способность молекулы-кандидата ингибировать кук-опосредованные тромбоцитарные функции тестируют путем измерения ингибирования ОРУЬспецифического агониста конвульксин-индуцированной мобилизации кальция в тромбоцитах человека или их агрегации. Мобилизацию кальция оценивают у человека, промывая тромбоциты в 96-луночном микротитровальном формате. Агрегацию оценивают путем анализа в 96-луночных микротитровальном планшете (см. в целом методики в Лап1хеп„ Н.М. и др. (1999) ΤΙιΐΌΐη!. НетокС 81:11-117) или путем стандартной кюветной оптической агрегометрии, используя обогащенную тромбоцитами человека плазму (РКР).
Ингибирование конвульксин-опосредованной мобилизации кальция тромбоцитов ш νίΙΐΌ.
Ингибирование конвульксин-индуцированной мобилизации кальция у человека определяли в отмытых тромбоцитах с использованием набора реактивов РЫКР Са1сшт 3 (Мо1еси1аг □еЛсек, Саннивейл, Калифорния). Для получения отмытых тромбоцитов собирают венозную кровь человека у здоровых, не получающих лекарственных средств добровольцах в ЛСЭ (85 мМ цитрат натрия, 111 мМ глюкоза, 71.4 мМ лимонная кислота), содержащем РОД (1.25 мл ЛС^, содержащий конечную концентрацию 0.2 мкМ РОД; РОД получен от 81дта, Сент-Луис, Миссури). Обогащенную тромбоцитами плазму (РКР) получают путем центрифугирования при 160 хд в течение 20 мин при комнатной температуре. Отмытые тромбоциты получают путем центрифугирования РКР в течение 10 мин при 730 д и ресуспендирования тромбоцитного осадка в СО8 (13 мМ цитрат натрия, 30 мМ глюкоза, 120 мМ №С1; 2 мл СО8/10 мл первоначального объема крови). После инкубирования при 37°С в течение 15 мин тромбоциты собирают путем центрифугирования при 730 д в течение 10 мин и ресуспендируют при концентрации 3х108 тромбоцитов/мл в Ηерек-Τу^ο4е буфере (10 мМ Нерек, 138 мМ №С1, 5.5 мМ глюкоза, 2.9 мМ 1<С1„ 12 мМ NаΗСО3, рН 7.4). Эту суспензию тромбоцитов выдерживают >45 мин при комнатной температуре перед использованием в анализах на мобилизацию кальция. Для экспериментов в 96-луночном планшете по мобилизации кальция одинаковые объемы 3х108 отмытых тромбоцитов/мл инкубировали с одинаковыми объема- 105 024109 ми реактива Са1сшт-3 Аккау Кеадеп! А, ресуспендированном в 1х сбалансированном солевом растворе Хенкса, рН 7.4, 20 мМ Нерек буфер. Общий реакционный объем 0.2 мл/лунку включает смесь 1.5х108/мл отмытых тромбоцитов/Са1сшт-3 Аккау Кеадеп! А, 10 мкМ эптифибатид (МШептит РЬагтасеийса1к 1пс., Кембридж, Массачусетс), серийные разведения (1:3) тестируемых соединений в 0.75% ДМСО. Один только ДМСО добавляют к 1 лунке каждого из 8 наборов для возможности снятия показаний максимальной мобилизации кальция.
Спустя 20 мин предварительного инкубирования при комнатной температуре 96-луночнй планшетридер загружают в Р1ех8!айоп (Мо1еси1аг Оеуюек. Саннивейл, Калиф.). Р1ех8!айоп условия эксперимента для измерения мобилизации кальция устанавливают, используя 8ОРТМах Рго. Используемые установочные параметры детально изложены ниже. Параметры флуоресценции-метод анализа: Йех-режим, возбуждение 485 нм, 525 нм с отсечкой 515 нм; параметры - РМТ чувствительности - 6, уровень пипетки 230 мкл, время считывания 2 мин и 40 с, интервалы между считыванием 2 с, температура -23-25°С. Спустя 18 с считывания фона мобилизацию кальция инициируют путем добавления конвульксина до конечной концентрации 125 нг/мл. Ингибирование мобилизации кальция вычисляли в виде максимального ответа, наблюдаемого в присутствии ингибитора, в сравнении с таковым при отсутствии ингибитора. 1С50 выводили с помощью нелинейного регрессионного анализа.
Ингибирование конвульксин-опосредованной агрегации тромбоцитов ш νίίτο.
Для получения обогащенной тромбоцитами человека плазмы для анализа на агрегацию собирали венозную кровь человека у здоровых, не получающих лекарственных средств добровольцах в 0.38% цитрат натрия (0.013 М, конечный рН 7.0). Обогащенную тромбоцитами плазму (РКР) получают путем центрифугирования цельной крови при 160 хд в течение 20 мин при комнатной температуре. РКР слой удаляют, переносят в новую пробирку, и регулируют число тромбоцитов, если полезно, с получением концентрация тромбоцитов ~3х108 тромбоцитов/мл, используя обедненную тромбоцитами плазму (РРР). РРР получали путем центрифугирования остающегося образца крови (после удаления РКР) в течение 20 мин при 800хд. Этот препарат РКР можно впоследствии использовать для анализов агрегации либо в 96луночных планшетах, или либо путем кюветной агрегометрии. Ингибирование конвульксининдуцированной агрегации определяют в 96-луночных плоскодонных титрационных микропланшетах, используя встряхивающее устройство для титрационных микропланшетов и планшет-ридер, подобно методике, описанной Ргайайот и др., Ат. ί. С1ш. Ра11ю1. 94, 613 (1990). Все стадии выполняли при комнатной температуре. Для агрегации в 96-луночном планшете, используемая обогащенная тромбоцитами плазма (РКР), общий реакционный объем 0.2 мл/лунку включает 190 мкл РКР (~3х108 тромбоцитов/мл, см. выше), и 5 мкл или серийное разбавление тестируемых соединений в 30% ДМСО или буфер (для контрольных ячеек). Спустя 20 мин предварительного инкубирования при комнатной температуре к каждой лунке добавляют 5 мкл 320 нг/мл раствора агониста - конвульксина с получением конечной концентрации конвульксина 8 нг/мл. Планшеты встряхивают в течение 5 мин на встряхивающем устройстве для титрационных микропланшетов и 5 мин проводят считывание на ридере для микротитрационных планшетов (8ойтах, Мо1еси1аг Ое\лсек, Меп1о Рагк, Калифорния). Агрегацию вычисляют на основании уменьшения ОИ при длине волны 650 нм при ί=5 мин. 1С50 выводили с помощью нелинейного регрессионного анализа.
Ингибирование конвульксин-индуцированной агрегации также определяли в кюветных оптических агрегационных анализах, серийные разведения (1:2) тестируемых соединений получали в 30% ДМСО в 96-луночном планшете с У-образным дном (конечная концентрация ДМСО в кювете составляла 0.3%). Тестируемое соединение (5 мкл серийных разведений в ДМСО) предварительно икубировали с РКР в течение 20 мин перед инициированием реакций агрегации, которую осуществляли в СЬгопоЬод агрегометре путем добавления агониста (125-250 нг/мл конвульксина) к 495 мкл РКР при 37°С. Реакцию агрегации записывали в течение 4 мин и максимальную степень агрегации определяли с помощью различия в степени агрегации на базовой линии и на максимуме агрегации, который случается в течение 4минутного периода анализа. Ингибирование агрегации вычисляли в виде максимума агрегация, наблюдаемого в присутствии ингибитора, в сравнении с таковым при отсутствии ингибитора. Значения 1С50 выводили с помощью нелинейного регрессионного анализа.
Примеры соединений и их-кук и РКР 1С50 значений даны в табл. 1-5.
Анализ тока кальция в клетках Каток, индуцированный ВСК перекрестным связыванием.
Клетки Каток (2О6.4С10, лимфома Беркитта, АТСС номер: СКЬ-1923) субкультивируют при концентрации 5х105 клеток/мл в свежей среде 3 или 4 дня перед экспериментами. Клетки собирают и повторно суспендируют в свежей среде при концентрации 8х106 клеток/мл перед внесением загрузочного красителя. Добавляют одинаковый объем Са1сшт 3 загрузочного красителя (Мо1еси1аг Ое\асе), и суспензию клеток примешивают. Внесенные клетки распределяют в 96-луночные планшеты и инкубируют 30 мин. Затем к загруженным красителем клеткам добавляют соединения и инкубируют в течение новых 30 мин. Перед измерением флуоресценции на приборе Р1ех81айоп центрифугированием при 1000 об/мин в течение 3 мин клетки осаждают.
ВСК стимуляцию проводят путем добавления 5 мг/мл антитела (АййпгРиге Р(аЬ')2 фрагмент ослино- 106 024109 го античеловеческого 1дМ, Люкю! [ттигюКекеагск ^аЬο^аοί^^ек).
Анализ тока кальция в клетках ЛикаЕ индуцированный перекрестным связыванием ТСК.
Протокол подобен такому исследованию В клеточного кальциевого тока, как описано в предыдущем параграфе. Он отличается только тем, что Т клетками (клон Е6-1, острый Т-клеточный лейкоз, АТСС номер ПЬ-152) и античеловеческим СЭ3 (функциональной степени очистки античеловеческое СИ3, клон ОКТ3, еВюкиепсе, № 16-0037) заменяют В клетки и античеловеческий 1дМ. Плотность клеток выдерживают такой же, но антитело используют в концентрации 100 нг/мл.
1Ь-2 секреция в клетках Ликак индуцированная перекрестным связыванием ТСК.
Культивирование клеток Л.иЛа1 и методики инкубирования соединения являются такими же, как описанные в анализе тока кальция в клетках Л.иЛа1 в предыдущем параграфе. Антителом (анти-СП3, ОКТ3) покрывают свежие планшеты (без клеток) при плотности 100 нг/лунку. Клетки суспендируют при плотности 8х106 клеток/мл и инкубируют с соединениями в течение 30 мин в отдельном планшете. В конце инкубирования клетки переносят в покрытый антителом планшет и инкубируют в течение 16 ч. 100 мкл клеточной среды после инкубирования используют для 1Ь-2 измерения после инкубирования. Уровень 1Ь-2 определяют, используя 1Ь-2 ЕЛ-ΙδΛ набор (Нитап 1Ь-2 ЕЛ-ΙδΛ ΚίΙ II, ΒΌ Вюкаепсе, № 550611).
Пример 333. МИ^^ге ирк1а1е КапакеРгоГПег1™ скрининг.
Этот анализ направлен на измерение влияние соединения на каталитическую активность 1АК3.
Очищенную 1АК3 (СепВапк АР513860) последовательность человека (остаток 781 - С-конец цепи) получали из клеток насекомых. Каталитический гидролиз АТФ измеряют, используя способ радиометрического связывания на фильтре. Инкубирование киназы 33[Р]АТФ и субстрата вызывает вхождение 33[Р] в субстрат, который можно затем отделить от других компонентов реакции путем фильтрования. Анализы выполняли, используя 10 мкМ АТФ и при отсутствии или в присутствии 1, 0.3 или 0.1 мкМ соединения. Активность выражали в виде % ингибирования относительно контроля.
Таблица 8
Ингибирование (%) каталитической активности 1АК3 с помощью 1, 0.3 или 0.1 мкМ соединения, как определенно согласно М^11^ρο^е, используя ее анализ КапакеРгоГПег Аккау
Соединение Концентрация (мкМ)
1 мкМ 0.3 мкМ 0.1 мкМ
1 _ А н3с ν'Α γκ о шУ·· н 98 96 97
Н,С' 'νΆ ΝΗ О ΝΛΛΝΗί н 100 84 НВ
НВ: не выполняли
Пример 334. Скрининг АтЬЛ КЛюп^сап.
Этот анализ является анализом на АТФ сайт-зависимое конкурентное связывание, в котором представляющие интерес человеческие киназы конденсируют с собственной меткой (Т7 бактериофаг). Количество связанной киназы с иммобилизованным, направленным на активный сайт лигандом измеряют в присутствии и отсутствие тестируемого соединения. В 1АК анализах АтЬП используют киназные домены и неполноразмерные первичные продукты трансляции. Используемый для 1АК1 связывания домен является псевдокиназным доменом, в то время как используемый для 1АК3 связывания является каталитическим доменом (Ма/еп XV Кагатап, δапηа Неггдагб, Оате1 К. ТгеФег, и др. А ОиапШаПуе апа1уык οί Опаке ίηΠίόίΙοίΓ ке1ес11У11у. ЫаЛие В^есЬюФду, 2008, т. 26, № 1, сс. 127-132).
- 107 024109
Таблица 9а
КО (константа диссоциации) значений (нМ) для соединения, ингибирующего связывание 1АК1 и 1АКз к иммобилизованному лиганду в анализе ЛтЬй К^ηοте8саη
Таблица 9Ь
Активность и специфичность ингибирования киназы (ТС50 в нМ)
Соединение 5ук Зак 1 .Гак 2 ДакЗ
ПРИМЕР 99 15 6.7 3.2 0.8
Р420-89 31 6.2 2.0 0.6
Таблица 10 (Панель АтЬй) ингибирование киназ в Кй (нМ)
„с ’У.'Ч % о АдУ' н Л. Н3с Ν-η ΝΗ о ^АаУ' н А, У ι УэдУ”·· н
ЛАК1 (Кин. дом. 1 > 6.7 4.7 14
ЛАК2 (Кин. дом. 2) 5.1 5.1 10
Л А КЗ (Кин. дом. 2) 2.9 2.7 4.1
Зук 98 4.5 9.4
Пример зз5. ^АК3/8ΤАΤ6 клеточный анализ.
Стимуляция Κатοк В клеток интерлейкином 4 (^4) вызывает передачу сигналов через .ГАКШАКз, что приводит к фосфорилированию 8ΤАΤ6 (синальные трансдукторы и активаторы транскрипции). Действие соединений на ингибирование 1АКз и/или 1АК1 можно оценивать путем измерения количества фосфорилированного 8ΤАΤ6. Это осуществляется путем вестерн-блоттинга с использованием специфи- 108 024109 ческого фосфо-8ТАТ6 антитела.
Като5 В клетки суспендировали в 10 мМ Нере5-забуференной КРМ1 среде (2х 107 клеток/мл). Клетки (90 мкл) инкубировали с 10 мкл 3.3 мкг/мл интерлейкина 4 (К & Ό ЗуЧепъ 1пс, кат. № 204-1Ь; конечная концентрация: 0.33 мкг/мл). Инкубирование осуществляли в течение 10 мин при температуре 37°С при отсутствии или в присутствии 2 мкл соединения, разбавленного в 30% ДМСО. Реакции завершали путем добавления одинакового объема 2х лизирующего буфера (100 мМ ТК1З-НС1 рН 8.0, 2% Тритон-Х100, 5 мМ ЭДТК, 250 мМ №С1, 20% глицерин, 1.25 мМ РМЗР, 5 мМ ортованадат натрия, 5 мМ βглицерофосфат, минимально полная ЭДТК смесь ингибиторов протеаз (81дта)).
Образцы в течение 1 ч при комнатной температуре инкубировали с 1 мкл нуклеазы, бензоназы (Νοуадеп, кат. № 71205-3) и затем добавляли 50 мкл 5х загрузочного буфера (330 мМ ТК1З рН 6.8, 9.5% 8Ό8, 34% глицерин, 0.01% бромфенол синий, 10% β-меркаптоэтанол).
Клеточные лизаты (15 мкл) подвергали 8Ό8-ΡΑΟΕ (электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия) (Νο\Ό.\ 4-12% ТК1З-глициновые гели, 1п\Цгодеп) при восстановительных условиях и далее переносили путем электроблоттинга на нитроцеллюлозные мембраны. Мембраны затем инкубировали в блокирующем буфере Ζνιικά (1пуйтодеп) в течение 1 ч при комнатной температуре (КТ), затем в течение ночи при 4°С с 1:500 антифосфотирозин-ЗТАТ6 (Се11 81дпа1шд ТесЬпо1оду, кат. № 9364) первичным антителом в блокирующем буфере Ζутеά. После 5х10 мин промываний Тп5-забуференным раствором соли, 0.25% ΝΡ40 (ТВЗ^, пятна инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре в присутствии 1:10,000 НКР-конъюгированного ослиного антикроличьего вторичного антитела (АтегеЬат Вю5с1епсе5, кат. № ΝΑ934ν) в блокирующем буфере Ζутеά. После 4х10 мин промываний ТВЗN пятна визуализировали с помощью ЕСЬ (усиленная хемилюминесценция) (Р1етсе \Уе51егп ЫдЫетпд, Регкт Е1тег кат. № ΝΕΠ01). Для того чтобы определить общее содержание β3, пятна отделяли, промывали 4х ΊΒ8Ν и повторно зондировали 1:2000 С3 А антитела в блокирующем буфере в течение ночи при 4°С. После 4х10 мин промываний ТВЗN пятна инкубировали с 1:10,000 козлиного антимышиного вторичного антитела в блокирующем буфере, промывали 4 и большее количество раз ТВЗN и подвергали воздействию вестерн-осветляющего реагента. Уровни стимуляции над фоном и степень ингибирования соединением определяют с помощью денситометрии.
Пример 336. Анализ ингибирования ΙΑΚ-киназной активности на линии В-клеток Като5, стимулированных 1Ь-4.
Эти примеры иллюстрируют ш уПго и ш утуо методы оценки влияния на активности ΙΑΚ-киназы человека соединений изобретения - влияние можно определить с помощью различных методик, известных в уровне техники, таких как тест на способность соединений ингибировать активность ΙΑΚ-киназы плазмы человека. Сильные афинности для ингибирования ΙΑΚ-киназы человека, показанные соединениями изобретения, могут быть измерены в виде 1С50 значения (в нМ). 1С50 значение представляет собой концентрацию (в нМ) соединения, необходимую для обеспечения 50% ингибирования активности ΙΑΚкиназы человека. Чем меньше значение 1С50, тем более активным (сильным) является соединение относительно ингибирования ΙΑΚ-киназной активности.
Анализ ш νίΙΐΌ для обнаружения и измерения ингибирующей активности по отношению к ΙΑΚкиназе проводят, как изложено ниже.
Активность соединений на ΙΑΚ-киназы подтверждают в клеточных анализах, предназначенных для тестирования ингибирования ΙΑΚ. Кратко, ингибирование ΙΑΚ тестируют на Като5 В-клетках человека, активированных цитокином интерлейкин-4 (1Ь-4). Через 20-24 ч после стимуляции клетки окрашивают для повышающей регуляции СЭ23 и анализируют с помощью ΡΑСЗ. Стимуляция В-клеток 1Ь-4 вызывает активирование ^ΑΚ/ЗТΑТ пути через фосфорилирование ΙΑΚ-киназ ΙΑΚ1 и ΙΑΚ3, которые в свою очередь фосфорилируют и активируют факторы транскрипции ЗТΑТ5 и ЗТΑТ6. Низкоаффинный 1дЕ рецептор (СИ23) повышающе регулируется посредством активированного ЗТΑТ5.
Для анализа Като5 В-клетки человека (АТСС, кат. № СКЬ-1596) культивируют в КРМ1 1640 среде (Се11дго, кат. № 10-040-СМ), содержащей 10% фетальную бычью сыворотку ОКН, кат. № 12106-500М) в соответствии с протоколом размножения, входящем в комплект с клетками, и выдерживают при плотности приблизительно 3.5 х105 клеток/мл. За день перед анализом клетки разбавляют до 3.5х105 клеток/мл, чтобы гарантировать, что они находятся в логарифмической фазе роста. Клетки осаждают и суспендируют в среде КРМ11640 (Се11дго, МеФаТесЬ, 1пс., Херндон, Вирджиния, кат. № 10-040-СМ), содержащей 5-10% термоинактивированную фетальную бычью сыворотку (РВЗ) ОКН Вю5с1епсе5, 1пс, Ленекса, Канзас, кат. № 12106-500М) в соответствии с АТСС протоколом размножения. Клетки выдерживают при плотности 3.5 х104-5 клеток/мл. За день перед экспериментом Като5 В-клетки разбавляют до плотности 3.5 х105 клетки/мл, следя за тем, чтобы они находились в логарифмической фазе роста, и аликвоты распределяют в 96-луночные планшеты для тканевой культуры. Клетки инкубируют с тестируемыми соединениями (растворенными в ДМСО) или ДМСО (контроль) в течение 1 ч при 37°С и затем стимулируют 1Ь-4 (Реро!есЬ, кат. № 200-04) в течение 20-24 ч (конечная концентрация составляет 50 ед./мл).
Клетки осаждают и суспендируют в КРМ1 с 5% сывороткой. Используют 5х104 клеток на точку в 96-луночном планшете для культур ткани. Клетки предварительно инкубируют с соединением или
- 109 024109
ДМСО (81дта-А1бг1сЬ, Сент-Луис, Миссури, кат. № 02650) наполнителем в качестве контроля в течение 1 ч при 37°С в инкубаторе. Клетки затем стимулируют при помощи 1Ь-4 (Рер^οίесЬ 1пс., Роки Хилл, НьюДжерси, кат. № 200-04) с конечной концентрацией 50 ед./мл в течение 20-24 ч. Клетки затем осаждают центрифугированием и окрашивают анти-СО23-РЕ (ВО РЬагшшдеи, Сан-Диего, Калифорния, кат. № 555711) и анализируют с помощью РАС8. Детектирование осуществляют, используя проточный цитометр ВО Ь8К1, поставляемый фирмой ВесЮн ΟΚΚίηδοη Β^οδс^еηсеδ. Сан-Хосе, Калифорния.
Пролиферацию измеряют, используя люминесцентный анализ жизнеспособности клеток Се11 ТПегОЫ.КТМ. (Ргошеда), который определяет число жизнеспособных клеток в культуре на основе количественного определения присутствующей АТФ в качестве индикатора метаболически активных клеток. Субстрат оттаивают и оставляют нагреться до комнатной температуры. После смешивания реагента Се11 ТПег-С^ и разбавителя вместе 100 мкл смеси добавляют к каждой лунке. Планшеты перемешивают на орбитальном встряхивателе в течение двух минут для индуцирования лизиса и инкубируют при комнатной температуре в течение дополнительных десяти минут, позволяя уравновеситься сигналу. Детектирование осуществляют, используя мультиметочный счетчик №а11ас УюЮг2 1420, поставляемый фирмой Регкш Е1тег, Шелтон, Коннектикут.
На второй день А549 клетки предварительно инкубируют в течение 1 ч с 2,4пиримидиндиаминовым тестируемым соединением или ДМСО (контроль) (81дта-А1бгюЬ, Сент-Луис, Миссури, кат. № 02650). Клетки затем стимулируют при помощи ΙΡΝγ (75 нг/мл) (Рер^οίесЬ 1ис., Роки Хилл, Нью-Джерси, кат. № 300-02) и оставляют инкубироваться в течение 24 ч. Конечный диапазон доз тестируемого соединения составляет 30 мкМ - 14 нМ в 200 мкл Р12К среде, содержащей 5% РВ8, 0.3% ДМСО. На третий день удаляют клеточную среду и клетки промывают с помощью 200 мкл РВ8 (забуференный фосфатом физиологический раствор). Каждую лунку хорошо трипсинизируют для разъединения клеток, затем нейтрализуют путем добавления 200 мкл полной Р12К среды. Клетки пеллетируют и окрашивают АРС конъюгированным мышиным античеловеческим 1САМ-1 (СО54) (ВО РНагттдеп, СанДиего, Калифорния, катал. № 559771) антителом в течение 20 мин при 4°С. Клетки промывают с помощью охлажденного льдом РАС8 буфера (РВ8+2% РВ8), и поверхностную 1САМ-1 экспрессию анализируют с помощью проточной цитометрии. Детектирование осуществляют, используя проточный цитометр ВО Ь8К1, поставляемый фирмой ВО Ρίοδ^ικχδ из Сан-Хосе, Калифорния. Результаты стробируют относительно живого разброса значений и вычисляют среднее геометрическое (программное обеспечение Βесίοи-^^ск^иδοи Се11^иеδί, версия 3.3, Франклин Лэйкс, Нью-Джерси). Средние геометрические наносят на график против концентрации соединения для генерирования кривой доза-эффект.
Пример 337. Ингибирование 8ук-опосредованной сигнальной трансдукции посредством Вклеточного рецептора в линии клеток неходжкинской лимфомы.
Клетки перед стимуляцией передачи сигналов посредством В-клеточного рецептора путем инкубирования клеток с 3 мг/мл антимышиного антитела в течение 10 мин при 37°С, предварительно обрабатывали в течение 1 ч средой без соединения или с соединением (0.02-2 мкМ). Ток Са2+ измеряли, используя Са1сшш 3 загрузочный краситель и Не.\81а1юп ^ο^^Πτ Ое\асе). Передачу сигналов посредством Вклеточного рецептора анализировали с помощью внутриклеточной фосфопроточной цитометрии, следующие протоколы предоставляются ВО РЬагшшдеи (Сан-Хосе, Калифорния). 8ук активирование измеряли путем индукции фосфорилирования тирозина ВЬМК по аминокислотному положению 84 (рВЬМК Υ84) и индукции фосфорилирования тирозина ЕКК1/2 по аминокислотному положению 204 (рЕКК Υ204). Активирование члена 8гс семейства Ьуи измеряли путем индукции фосфорилирования тирозина 8ук по аминокислотному положению 352 (р8ук Υ352). Данные представляются в виде мкМ значений 1С50. Каждое соединение эффективно ингибировало индуцированный В-клеточным рецептором Са2+ ток и активирование 8ук, но не члена 8гс семейства Ьуи.
Пример 338. Проявление антипролиферативного действия на линии клеток неходжкинской лимфомы при ингибировании 8ук.
Клетки инкубировали с возрастающими концентрациями каждого соединения, затем на 72 ч оценивали степень пролиферации, используя МТТ анализ (компания, город, штат), следующий протокол предоставляется изготовителем. Данные представляются в виде мкМ значений 1С50, представляющих среднее плюс/минус стандартное отклонение из 5 или 6 независимых экспериментов. Каждое соединение ингибировало пролиферацию 8иОНЬ-4 и -6 линий клеток, которые зависят от 8ук относительно сигналов выживаемости и роста в низком мкМ диапазоне. Клетки Ή^ώο, которые не нуждаются в 8ук, были заметно менее чувствительны к антипролиферативным действиям ингибирования 8ук.
Пример 339. 8ук ингибирование индуцирует апоптоз в линии клеток неходжкинской лимфомы.
Данные представляют два независимых эксперимента оценки действия ингибирования 8ук и 8ук/1АК на выживаемость линии клеток диффузной неходжкинской В-крупноклеточной лимфомы. 8иОНЬ-4 и 8иОНЬ-6 линии клеток зависят от 8ук-опосредованной передачи сигналов посредством Вклеточного рецептора касательно выживания, в то время как клетки ^Κ6ο нет. Клетки инкубировали с соединениями в указанных концентрациях и временных интервалах; индукцию апоптоза измеряли с помощью проточной цитометрии, используя набор для детектирования каспазы 3 (Ыдта-МбпсН, СентЛуис, Миссури). Данные представляются в виде процентной доли от всех клеток, положительных для
- 110 024109 апоптозных маркеров, каспазы-3. Как и следовало ожидать, ингибирование 8ук приводило к индукции апоптоза в 8ИПНЬ-4 и -6 линиях клеток, но не в линии клеток То1ебо.
Пример 340. Ингибирование активирования мышиных первичных В клеток с помощью 8укингибиторов.
Мышиные первичные спленоциты предварительно обрабатывали в течение 1 ч возрастающими концентрациями каждого соединения (0.05-2 мкМ) перед добавлением контроля или козлиной антимышиной Ι§ϋ сыворотки. АнтиЧдр-индуцированное активирование В клеток измеряли через 16 ч с помощью проточной цитометрии, с окрашиванием для маркеров активирования СО80/86 и СЭ69.
Пример 341. Мышиная модель иммуно-опосредованной тромбоцитопении.
Иммуно-опосредованная тромбоцитопения вызывается антителами, направленными против поверхностных гликопротеиновых тромбоцитов, антителами против комплексов, содержащих лекарственный препарат, на поверхности тромбоцитов, или покрытыми антителами клетками или иммунокомплексами, которые взаимодействуют с поверхностью тромбоцитов. Подобранные соединения оценивали на их способность ингибировать клиренс тромбоцитов в мышиной модели антитело-опосредованной тромбоцитопении. В этой модели быстрый клиренс циркулирующих тромбоцитов (приблизительно 50%) является следствием внутривенного введения крысиного антимышиного ОРПЬ (клон Ы^Кед30) антитела (ВО В1окс1Спсск, РЬагтшдец). Для оценки способности ингибировать клиренс тромбоцитов соединения суспендировали в 0.5% метилцеллюлозе в воде и вводили посредством перорального желудочного зонда (100 мкл/мышь) за один раз перед инъекциям антитела, когда концентрация соединения в плазме достигала максимального значения (типично через 1-2 ч на основе отдельных фармакокинетических экспериментов для индивидуального соединения). На 4 и 8 ч после инъекции антитела конечные образцы крови получали из групп мышей, получавших наполнитель и мышей, получавших тестируемый препарат (η=510 мыши/группу) посредством сердечной пункции. Кровь предохраняли от свертывания, используя тринатрий цитрат или ЭДТК. Образцы цельной крови анализировали, подсчитывая тромбоциты на гематологическом анализаторе (Нетауе!, Оге\у 8с1еШ|Пс). Остающуюся кровь перерабатывали на плазму и концентрации соединений измеряли с помощью масс-спектрометрии. Клиренс тромбоцитов определяли с помощью измерения разницы числа тромбоцитов между средними значениями группы животных, не получавших лечение антителом, и группы животных, которым вводилось крысиное антимышиное ОРПЬ антитело. Ингибирование клиренса тромбоцитов определяли с помощью сравнения различия между клиренсом тромбоцитов у животных, получавших наполнитель, и у животных, получавших соединение.
Пример 342. Мышиная модель артрита, индуцированного антителами к коллагену.
Ингибирующую активность подобранных соединений изучали на мышиной модели индуцированного антителами к коллагену артрита (СА[А). Коллаген-индуцированный артрит опосредствуется аутоантителами к коллагену типа ΙΙ и комплементу, таким образом, артрит можно индуцировать путем введения поликлонального антитела или смеси моноклональных антител к коллагену типа ΙΙ. САМ модель (СНоибгех, Пю., Редмонд, Вашингтон) использует смесь 4 клонов, которые опознают индивидуальные эпитопы, сгруппированные в 83 аминокислотный пептидный фрагмент коллагена типа ΙΙ. Эти эпитопы делят общие аминокислотные последовательности со многими разными видами коллагена типа ΙΙ, включая таковой курицы, мыши, крысы, коровы, свиньи, обезьяны и человека. Модель использует смесь моноклональных антител и далее бактериальный липополисахарид (ЬР8) для индуцирования сильно выраженного и стойкого артрита у мышей в пределах 7 дней. Эта модель была разработана на основе предположения, что бактериальные токсины, абсорбированные через желудочно-кишечный тракт, играют синергическую и патологическую роль с аутоантителами к коллагену типа ΙΙ в инициировании артрита у пациентов с ревматоидным артритом.
Для этих экспериментов смесь моноклональных антител (партия № ОС-708) инъецировали внутривенно через хвостовую вену в дозе 4 мг/мышь (40 мг/мл) в 0 день и далее осуществляли внутрибрюшинную инъекцию ЬР8, разбавленного в изотоническом растворе соли в дозе 25 мкг/мышь самкам возрастом 8 недель Ва1Ь/С мышей (СЬаг1ек Куег, Огс.). Дозирование тестируемых препаратов начинали непосредственно перед или после Ιν инъекции смеси антитела. Соединения суспендировали в растворе 0.5% метилцеллюлозы в воде и вводили посредством перорального желудочного зонда (100 мкл/мышь) ежедневно на протяжении 7-10 дней исследования. Показатели клинического воспаления получали ежедневно.
Показатели ингибирования клинического воспаления определяли на основе различия между данными мышей, получавших наполнитель и мышей, получавших тестируемый препарат в конце эксперимента. Концентрации в плазме представляют пик концентрации через 1 ч после последний дозы в день завершения исследования.
Пример 343. Ингибирование Ш-4 индуцированного 1АК1/3 фосфорилирования 81а1-6 в В клетках Каток.
В клетки Каток предварительно обрабатывали в течение 1 ч возрастающими концентрациями соединения, как указано, перед добавлением ГЬ-4.
Клетки инкубировали с ГЬ-4 в течение 10 мин и затем подвергали внутриклеточной проточной цитометрии для измерения процента ингибирования ГЬ-4 индуцированного 81а1-6.
Пример 344. Ингибирование Ш-4 индуцированного 1АК1/3 фосфорилирования 81а1-6 в В клетках
- 111 024109
Каток.
В-клетки Каток предварительно обрабатывали в течение 1 ч возрастающими концентрациями соединения, как указано, перед добавлением Ш-4.
Клетки инкубировали с Ш-4 в течение 10 мин, и затем подвергали внутриклеточной проточной цитометрии для измерения процента ингибирования Ш-4 индуцированной 81а1-6.
Пример 345. Анализ пролиферации первичных Τ-клеток человека, стимулированной при помощи
Ш-2.
Первичные Τ-клетки человека, полученные из периферической крови и предварительно активированные вследствие стимуляции Τ-клеточного рецептора и СЭ28, пролиферируются Ш уПго в ответ на цитокин интерлейкин-2 (ГШ-2). Этот пролиферативный ответ зависит от активирования .ТАК-1 и 1АК-3 тирозинкиназ, которые фосфорилируют и активируют фактор транскрипции 8ТаТ-5.
Первичные Τ-клетки человека получают, как изложено ниже. Цельную кровь получают от здоровых добровольцев, смешивают 1:1 с РВ8, наносят слоями на фиколл-гепак (АтегкЬат РЬагтааа ВюТесЬ, Р1ксаТатеау, Нью-Джерси, катал. № 17-1440-03) в соотношении 2:1 кровь/РВ8:фиколл и центрифугируют в течение 30 мин при температуре 4°С при 1750 об/мин. Лимфоциты в сыворотке: фиколловый сопряженный продукт извлекают и промывают дважды 5 об. РВ8. Клетки ресуспендируют в среде Иссельса (Сетίπί Вю-ргойисТк, \Уоой1апй, Калифорния, катал. № 400-103), содержащей 40 Ед/мл рекомбинантного ТШ2 (К апй Ό 8укТетк, Миннеаполис, Миннесота, катал. № 202-Ш (20 мкг)) и сеют в колбе, предварительно покрытой 1 мг/мл анти-СЭ3 (ВО РЬагттдеи, Сан-Диего, Калифорния, катал. № 555336) и 5 мг/мл антиСЭ28 ДштииоТесЬ, Весктап СоиИег о£ Вгеа, Калифорния, катал. № ТМ1376). Первичные Τ-клетки стимулируют в течение 3-4 дней, затем переносят в новую колбу и выдерживают в КРМI с 10% РВ8 и 40 Ед/мл Ш-2. Первичные Τ-клетки дважды промывают РВ8 для удаления Ш-2 и ресуспендируют в среда Иссельса при плотности 2х106 клеток/мл. 50 мкл суспензии клеток, содержащей 80 Ед/мл Ш-2, добавляют к каждой лунке 96-луночных черных планшетов с плоским дном. Для нестимулированного контроля Ш-2 исключают из последней колонки на планшете. Соединения серийно разбавляют в диметилсульфоксиде (ДМСО, 99.7% чистота, проверен на культуре клеток, 8^дта-Λ1й^^сЬ, Сент-Луис, Миссури, кат. № Ό2650), исходя из 5 мМ раствора 3-кратными разбавлениями, и затем разбавляют 1:250 в среде Иссельса. 50 мкл 2х соединения добавляют на лунку в двух повторностях и клетки оставляют пролиферироваться в течение 72 ч при 37°С.
Пролиферацию измеряют, используя Се11 Τ^ΐе^-С1о.КΤМ. Люминесцентный анализ жизнеспособности клеток (Рготеда), который определяет число жизнеспособных клеток в культуре на основе количественного определения присутствующей АТФ в качестве индикатора метаболически активных клеток. Субстрат оттаивают и оставляют нагреться до комнатной температуры. После смешивания реагента Се11 Мег-Со и разбавителя вместе, 100 мкл смеси добавляют к каждой лунке. Планшеты перемешивают на орбитальном встряхивателе в течение двух минут для индуцирования лизиса и инкубируют при комнатной температуре в течение дополнительных десяти минут, позволяя уравновеситься сигналу. Детектирование осуществляют, используя мультиметочный счетчик \Уа11ас ПсТог2 1420, поставляемый фирмой Регкт Е1тег, Шелтон, Коннектикут.
Пример 346. А549 эпителиальная линия, стимулированная ΣΡΝγ.
А549 эпителиальные клетки легкого повышающе регулируют ШАМ-1 (СЭ54) поверхностную экспрессию в ответ на разные стимулы. Следовательно, используя ШАМ-1 экспрессию в качестве индикатора, действия соединений на разные сигнальные пути можно оценивать в таком же типе клеток. ΣΡΝγ повышающе регулирует ШАМ-1 через активирование .1АК/8ТаТ пути. В этом примере оценена повышающая регуляция ШАМ-1 с помощью ΣΡΝγ.
Линию эпителиальных клеток А549 карциномы лёгкого получали из американской коллекции типовых культур. Обычное культивирование проводят в Р12К среде (МеФаТесЬ Шс., Ленекса, Канзас, кат. № 10-025-0ν) с 10% фетальной бычьей сыворотки, 100 МЕ пенициллина и 100 нг/мл стрептомицина (полная Р12К среда). Клетки инкубируют во влажной атмосфере 5% СО2 при 37°С. Перед использованием в анализе А549 клетки промывают с помощью РВ8 и трипсинизируют (МеФаТесЬ Шс., кат. № 25-052С^ для подъема клеток. Трипсинизированную клеточную суспензию нейтрализуют полной Р12К средой и центрифугируют с получением клеточных пеллет. Клеточные пеллеты ресуспендируют в полной Р12К среде до концентрации 2.0х 105/мл. Клетки сеют с плотностью 20000 на лунку, общим объемом 100 мкл, в планшет с плоским дном для культур ткани и оставляют срастаться в течение ночи. На второй день клетки А549 предварительно инкубируют с 2,4-пиримидиндиаминовым тестируемым соединением или ДМСО (контроль) (8^дта-Λ1й^^сЬ, Сент-Луис, Миссури, кат. № Ό2650) в течение 1 ч. Клетки затем стимулируют при помощи ΣΡΝγ (75 нг/мл) (РергоТесЬ Шс., Роки Хилл, Нью-Джерси, кат. № 300-02) и оставляют инкубироваться в течение 24 ч. Конечный диапазон доз тестируемого соединения составляет 30 мкМ - 14 нМ в 200 мкл Р12К среде, содержащей 5% РВ8, 0.3% ДМСО.
На третий день удаляют клеточную среду и клетки промывают с помощью 200 мкл РВ8 (забуференный фосфатом физиологический раствор). Каждую лунку хорошо трипсинизируют для разъединения клеток, затем нейтрализуют путем добавления 200 мкл полной Р12К среды. Клетки пеллетируют и ок- 112 024109 рашивают АРС конъюгированным мышиным античеловеческим 1САМ-1 (СЭ54) (ΒΌ Ркагттдеп, СанДиего, Калифорния, катал. № 559771) антителом в течение 20 мин при 4°С. Клетки промывают с помощью охлажденного льдом РАС8 буфера (РВ8+2% РВ8) и поверхностную 1САМ-1 экспрессию анализируют с помощью проточной цитометрии. Детектирование осуществляют, используя проточный цитометр ВЭ Ь8К I, поставляемый фирмой ВО Вюкаепсек из Сан-Хосе, Калифорния. Результаты стробируют относительно живого разброса значений и вычисляют среднее геометрическое (программное обеспечение ВесЮп-Эюкткоп СеНЦиек!:, версия 3.3, Франклин Лэйкс, Нью-Джерси). Средние геометрические наносят на график против концентрации соединения для генерирования кривой доза-эффект.
Пример 347. И937 ШЫу1САМ1 РАС8 анализ.
Моноцитарные клетки И937 человека повышающе регулируют 1САМ-1 (СЭ54) поверхностную экспрессию в ответ на разные стимулы. Следовательно, используя 1САМ-1 экспрессию в качестве индикатора, действия соединений на разные сигнальные пути можно оценивать в таком же типе клеток. ΙΡΝγ повышающе регулирует 1САМ-1 через активирование 1АК/81а1 пути. В этом примере оценивают повышающую регуляцию 1САМ-1 посредством ΙΡΝγ.
Линию моноцитарных клеток И937 человека получают из АТСС из Роквилла, Мэриленд, каталожный номер СКЬ-1593.2 и культивируют в КРМ1-1640 среде, содержащей 10% (об./об.) РС8. Клетки И937 выращивают в 10% КРМ1. Клетки затем помещают при концентрации 100000 клеток на 160 мкл в 96луночные планшеты с плоским дном. Тестируемые соединения затем разбавляют, как изложено ниже. 10 мМ тестируемое соединение разбавляют в соотношении 1:5 в ДМСО (3 мкл, 10 мМ тестируемого соединения в 12 мкл ДМСО), и, далее, серийно разбавляют тестируемое соединение в ДМСО в соотношении 1:3 (6 мкл тестируемого соединения серийно разбавляют в 12 мкл ДМСО с получением 3-кратного разбавления). Затем 4 мкл тестируемого соединения переносят в 76 мкл 10% КРМ1, что приводит к 10х раствору (100 мкМ тестируемое соединение, 5% ДМСО). Для контрольных ячеек 4 мкл ДМСО разбавляют в 76 мкл 10% КРМ1.
Анализ осуществляют в двух повторностях с 8 точками (8 концентраций 3-кратных разбавлений из 10 мкл) и с 4 лунками только ДМСО (контрольные лунки) при стимулированных условиях и с 4 лунками только ДМСО при нестимулированных условиях.
Планшет с разбавленными соединениями перемешивают 2х, используя мультимек (Весктап Сои1!ег оГ Вгеа, Калифорния) и затем 20 мкл разбавленных соединений переносят в 96-луночный планшет, содержащий 160 мкл клеток, которые затем перемешивают опять дважды при низких скоростях. Клетки и соединения затем предварительно инкубируют в течение 30 мин при 37°С с 5% СО2. 10х стимуляционную смесь приготовляют путем получения 100 нг/мл раствора человеческого ΙΡΝγ в 10% КРМ1. Клетки и соединение затем стимулируют при помощи 20 мкл ΙΡΝγ стимуляционной смеси с получением конечной концентрации 10 нг/мл ΙΡΝγ, 10 мкМ тестируемого соединения, и 0.5% ДМСО. Клетки содержат при условиях для стимуляции в течение 18-24 ч при 37°С с 5% СО2.
Клетки переносят в 96-луночный планшет с круглым дном для окрашивания и затем держат на льду на протяжении процедуры окрашивания. Клетки в течение 5 мин при 4°С осаждают при центрифугировании со скоростью 1000 об/мин, после чего супернатант удаляют. После удаления супернатанта добавляют 1 мкл АРС конъюгированного мышиного античеловеческого ГСАМ-1 антитела на 100 мкл ΡАС8 буфера. Клетки затем инкубируют на льду в темноте в течение 30 мин. После инкубирования добавляют 150 мкл ΡАС8 буфера и клетки центрифугируют при скорости 1000 об/мин в течение 5 мин при 4°С, после чего супернатант удаляют. После удаления супернатанта добавляют 200 мкл ΡАС8 буфера и клетки ресуспендируют. После суспендирования клетки центрифугируют при скорости 1000 об/мин в течение 5 мин при 4°С. Супернатант затем удаляют перед ресуспендированием клеток в 150 мкл ΡАС8 буфера.
Детектирование осуществляют, используя проточный цитометр ВО Ь8К Ι, поставляемый фирмой ВО Вюкаепсек из Сан-Хосе, Калифорния. Живые клетки стробируют относительно живого разброса и вычисляют среднее геометрическое К’АМ-АРС (программное обеспечение ВесЮп-Эюкткоп СеНЦиек!:, версия 3.3, Франклин Лэйкс, Нью-Джерси). Анализируют и % живых клеток, и экспрессию К'АМ-Р Анализы тестируемых соединений проводят параллельно с контрольным соединением с известной активностью. ЕС50 для контрольного соединения типично составляет 40-100 нМ.
Пример 348. Анализ передачи сигналов посредством В клетки.
Линии В клеток неходжкинской лимфомы человека 8иОНЬ-4 (#АСС 495), 8иОНЬ-6 (#АСС572) и Каграк-422 (#АСС32) получали от Э8М2 (Брауншвейг, Германия); То1е'о (#СКЬ-2631) и Каток (#СКЬ1596) получали из американской коллекции типовых культур (АТСС; Манассас, Вирджиния). Все клетки выдерживали в КРМI среде ОпуЦгодеп, Карлсбад, Калифорния), дополненной 10% фетальной телячьей сывороткой (АТСС) и пенициллином/стрептомицином Дпуйтодеп), и выдерживали во влажном инкубаторе для культур тканей при 37°С. Антитела, используемые в этих исследованиях, включают поликлональное козлиное Ρ^^'2 античеловеческое ЦС (Н+Ь) и античеловеческое ЦМ (Вю8оитсе, Камарилло, Калифорния); кроличье человеческое анти-кук, кроличье античеловеческое фосфо-8ук (Υ525/526), кроличье античеловеческое фосфо-8ук (Υ352), античеловеческое ВЬИК, античеловеческое фосфо-ВЬИК (Υ84), которые получали от Се11 81дпакпд Тескпо1од1ек, Шс. (Данверс, Массачусетс). Следующее антите- 113 024109 ла получали от Вес!оп ЭКкепкоп (Сан-Хосе, Калифорния) для фосфопроточной цитометрии: А1еха Г1иог 488-конъюгированное мышиное античеловеческое фосфо-ЗТАТ6 (Υ641), фикоэритрин (РЕ)конъюгированное мышиное античеловеческое фосфо-2ар70 ^319)/8ук^352) и флуоресцеин изотиоцианат (ИТС)-конъюгированное мышиное античеловеческое фосфо-ЕКК1/2 (Т202^204).
Фосфопроточную цитометрию выполняли, по существу, как описано в литературе (Ιπκΐι, С'хепуткй и др. В1оо4 108(9): 3135-42 (2006). 0.5х106 клеток в среде для выращивания стимулировали 1 мг/мл антиμ или анти-γ антитела в течение 10 мин. Индуцированную передачу сигналов завершали непосредственно после указанного времени путем добавления параформальдегида (Е1ес!гоп Мютоксору Заепсек, Хатфилд, Пенсильвания) до конечной концентрации 1%. Клетки инкубировали с параформальдегидом в течение 5 мин при комнатной температуре, промывали один раз забуференным фосфатом физиологическим раствором (РВЗ), затем ресуспендировали и инкубировали в течение ночи при 4°С в предварительно охлажденном метаноле (-80°С) (компания, адрес). Фиксированные и пермеабилизированные клетки впоследствии промывали один раз в РВЗ, второй раз в РВЗ, содержащем 1% коровьего сывороточного альбумина (ВЗА) (З1дта-А14гюк, Сент-Луис, Миссури) и затем окрашивали указанными антителами, разбавленными 1:20 в РВЗ + 1% ВЗА. Через 30 мин клетки промывали один раз в РВЗ и подвергали проточной цитометрии, используя РАСЗ СаШиг (Вес!оп Эюкепкоп). Для анализов вестерн-блоттинга, 106 клеток стимулировали в течение 30 мин с помощью 2 мг/мл указанного ВСК-специфического антитела. Передачу сигналов завершали путем ресуспендирования клеток в лизирующем буфере и инкубирования на льду в течение 1 ч. Клеточный детрит удаляли путем центрифугирования и просветлённые белковые лизаты расщепляли посредством 10% ЗЭЗ-РАСЕ и зондировали указанными антителами, следуя рекомендациям, предоставленными изготовителями. Где указано, клетки предварительно обрабатывали в течение 1 ч при 37°С Зук-ингибиторами или наполнителем в качестве контроля (0.5% ДМСО) в нескольких концентрациях перед стимуляцией анти-ВСК антителом.
Пример 349. Селективное ингибирование активности Зук.
Соединения тестировали на их способность ингибировать очищенную Зук. Были обнаружены соединения Р459-72 и Р505-15 (два соединения из Зук-специфического ряда, как показано в табл. 9Ι) и примере 100Ι (из ряда с двойной Зук и 1АК ингибирующий активностью) в качестве агентов, подавляющих активность Зук-киназы со значениями 1С50 43 нМ, 6 нМ и 31 нМ соответственно. Селективность каждого из этих соединений для Зук определяли с помощью скрининга против панели 270 независимых очищенных киназ концентрацией 300 нМ (МППроге). Вычисляли процентное ингибирование относительно наполнителя в качестве контроля и числа конвертировали в тепловую карту; где отсутствие ингибирования представляется зеленым цветом, изменение цвета в направлении красного указывает на увеличение процентного ингибирования, причем желтый цвет представляет 50% ингибирование, а красный представляет 100% ингибирование (фиг. 8). Как изображено на фиг. 8А, Р459-72 и Р505-15 являлись высокоспецифическими к Зук (первый и второй ряды соответственно), тогда как соединение примера 100Ι ингибировало разнообразные киназы (третий ряд). Подмножество киназ, которые ингибировались на >80% с помощью любого из трех соединений, показаны на фиг. 8В. Соединения примера 100Ι ингибировало Зук и МЬК-1 (первый ряд). При 300 нМ концентрации Р505-15 ингибировало 10 разных киназ (второй ряд). При повторении исследования при концентрации 50 нМ (приблизительно 10х выше его Зук 1С50 значения - 6 нМ), однако Зук была единственной киназой, которая оставалась ингибированной (третий ряд). Р420-89 ингибировало Зук, 1АК2 и 1АК3 наряду с некоторыми другими киназами (четвертый ряд).
При использовании панели МШроге очищенных киназ соединение Р505-15 (1С50 = 1 нМ), ингибировало на 98% активность очищенной Зук-киназы при концентрации 50 нМ. 1С50 значения определяли для той киназы, которая ингибировалась на >80% при концентрации 300 нМ в киназной панели МППроге.
В отличие от этого, мультикиназный ингибитор Р420-89 является более родственным к К788 фирмы
К1де1. При концентрации 300 нМ Р420-89 ингибировал Зук на 88%, наряду с >80% ингибированием 32 дополнительных киназ. Среди них были 1АК 2 и 3 (93% и 85% ингибированные соответственно), Р1!-3
- 114 024109 (8з-92% ингибированная), и сКй (95-97% ингибированная), все цели для терапевтического манипулирования лимфоцитной функции.
Пример з50. Анализ тока кальция и селективное ингибирование 8ук в В линии клеток неходжкинской лимфомы.
Клетки Катοк культивировали (поддержание приблизительно 0.5х106 клеток/мл) в среде для выращивания з-4 дня перед экспериментами. Клетки собирали и перед внесением красителя повторно суспендировали в свежей среде при концентрации 8х106 клеток/мл. К клеточной суспензии добавляли одинаковые объемы Са1сшт з загрузочного красителя (ΜοΑιιΕίΓ Осу1сс, Саннивейл, Калифорния). Загруженные клетки распределяли в 96-луночном планшете и инкубировали в течение 20 мин. Затем к загруженным клеткам добавляли 8ук-ингибиторы и инкубировали в течение других з0 мин. В клетки стимулировали 5 мг/мл анти-μ антителом. Изменения во внутриклеточной Са2+ концентрации измеряли, используя прибор Ρ1еx8ΤАΤ^οη (ΜοΡαιΐ3Γ Осуюск, Саннивейл, Калифорния).
Селективность и активность кук ингибирования в В клетках вначале детально исследовали с помощью вестерн-блоттинга, измеряя ВСК-опосредованную индукцию р8ук Υ525/526 и рВЬМК Υ84, в обеих случаях меры активности киназы 8ук, и индукцию р8ук Υ352, меры активности 8гс киназы. 8иОНЬ-6 В клетки стимулировали анти-ВСК специфическим антителом в течение з0 мин в присутствии или отсутствие каждого ингибитора 8ук или наполнителя в качестве контроля. Обработка 0.16 или 1 мкМ концентрациями каждого соединения снижает ВСК-индуцированное 8ук аутофосфорилирование (Υ525/526) приблизительно на 40 и 60% соответственно, как оценено с помощью денситометрии (данные не показаны). Расширенный диапазон концентраций использовали для дальнейшей оценки действия этих соединений на ВСК индуцированную активность 8ук и 8гс киназ. Как показано на фиг. 9А-С, каждое соединение ингибировало 8ук активность (рВЬМК Υ84) со значениями Κ.'50 в диапазоне от 0.16 до 1 мкМ, в то время как не наблюдалось влияния на 8гс активность (р8ук Υ352) концентраций до 2.5 мкМ.
Способность каждого соединения подавлять случаи передачи сигналов, более отдаленных к ВСК, также определяли. Клетки вновь стимулировали с помощью анти-ВСК антитела в присутствии или отсутствие различных концентраций каждого 8ук ингибитора. Индукцию р8ук Υ352 измеряли в виде контроля специфичности, в то время как рЕКК1/2 Τ202/Υ204 использовали в качестве меры более отдаленных сигналов 8ук-зависимой передачи (Ланд, ΡπιχΙοη и др. ί. Ехр. Мей. 188(7): 1297-з06 (1998). При 125 нМ, ЕКК1/2 активирование было полностью подавленным, тогда как стимулированные клетки попрежнему окрашивались положительно для 8ук Υ352. Эти эксперименты повторяли, благодаря чему определяли действие всех трех соединений на 8гс и 8ук активность (фиг. 10А). Концентрации меньше чем 125 нМ были достаточными для подавления ВСК-индуцированной 8ук передачи сигналов к ЕКК1/2. В отличие от этого весьма большие концентрации требовались, чтобы вызвать умеренную супрессию 8гс активности; действие на 8гс, которое не наблюдалось в вестерн-блоттинге (фиг. 9А-С). Ни один из этих 8ук-ингибиторов не подавлял РМА-индуцированное фосфорилирование ЕКК1/2 тирозина, показывая эти соединения не способными ингибировать случаи передачи сигналов ниже РКС. Тогда как Р459-72 и Р505-15 специфически ингибировали 8ук в очищенных и клеточных анализах, пример 100Ь, кроме того, демонстрировал активность против очищенных 1АК-киназ. Эти соединения тестировали на ингибирование в В клетках ^-4 передачи сигналов к 8ΤАΤ-6 через 1АК1/з сигнальный путь, который не требует 8ук. 8ук-специфические соединения не подавляли [Ш4 передачу сигналов при концентрациях до 2 мкМ. Наоборот, пример 100Ь подавлял [Ш4 передачу сигналов с Ю50 около 125 нМ (фиг. 10В).
Это показывает, что селективное ингибирование 8ук подавляло ВСК-индуцированный Са2+ ток в В клетках с Κ.'50 значениями около 100 нМ. Это указывает на то, что путем ингибирования 8ук эти соединения подавляют сигнальный путь, блокируя клеточный ответ.
Селективное ингибирование 8ук было достаточным для подавления ВСК передачи сигналов без затрагивания 8гс (фиг. 11) или 1АК (фиг. 10В). Кроме того, Р505-15 и соединение примера 100Ь в равной степени индуцировали апоптоз в этих клетках (фиг. 11В). Эти данные демонстрируют роль 8ук передачи сигналов в выживаемости НХЛ линии клеток и демонстрируют, что ингибирование киназ, других, чем 8ук, не является необходимым для получения этого действия.
Пример з51. Анализы на каспазу-з и пролиферацию: ингибирование 8ук нарушает пролиферацию и выживаемость В линия клеток неходжкинской лимфомы.
Индукцию апоптоза измеряли, используя апоптозный набор с РЕ-конъюгированным моноклональным антителом к активной каспазе-з (Весίοη ^^скеηкοη), следуя приложенному производителем протоколу. Клетки суспендировали в среде для выращивания (0.5х106 клеток/мл) и обрабатывали указанной концентрацией каждого 8ук ингибитора или наполнителем в качестве контроля в течение 24, 48 или 72 ч перед РАС8 анализом. МТТ (бромид з-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия, тетразол) - анализ (название компании) использовали в качестве меры жизнеспособности и роста клеток, следуя протоколам, предоставляемым изготовителем. Клетки обрабатывали указанными концентрациями каждого 8ук ингибитора или наполнителя в качестве контроля в течение 72 ч. 8иПНЬ-4 и 8иПНЬ-6 клетки были ранее классифицированы как ВСК-тип (Μοηίί, 8ауаде и др. В^й 105(5): 1851-61 (2005); Ρο1ο, Л^/с/упА и др. Ртос Ν;·ι11 Асай 8с1 и 8 А 104(9): з207-12 (2007) и являются чувствительными к 8ук ингибированию
- 115 024109 посредством Е406 (СЬеп, МопЬ и др. 2008). Линии клеток То1ебо и Каграк-422, которые испытывают недостаток ВСЕ и ВЬИК экспрессии соответственно (СаЬау, Веп-Вакка! и др. Еиг. I. Наета1о1 63(3): 180-91 (1999); 8ргапдегк, Ре1бЬаЬп и др. Опсодепе 25(36): 5056-62 (2006), имеющие, следовательно, адаптированную невосприимчивость и независящие от ВСЕ сигналов, были нечувствительными к Е406 (СЬеп, МопЬ и др. 2008). Исследовали пролиферацию этих линий клеток при культивировании в присутствии или отсутствие различных концентраций каждого 8ук ингибитора в течение 72 ч. Селективное ингибирование 8ук было достаточным для индуцирования апоптоза в ВСЕ-типа линии клеток НХЛ. Клетки инкубировали с 1 или 3 мкМ ингибитором в течение 72 ч. Как продемонстрировано на фиг. 11А, каждая 80)111.-4 и -6 клетки испытывала апоптоз, тогда как клетки То1ебо и Каграк-422 - нет (фиг. 11А). В дополнительных экспериментах специфическое ингибирование 8ук посредством Р459-72 и Р505-15 (структуры представлены ниже) индуцировало апоптоз только в линиях клеток 8ИПНЬ и Еаток. Для сравнения соединение примера 100Ь, которое сильно ингибирует 8ук и .ГАК-киназы, индуцировало апоптоз во всех линиях клеток ВСЕ-типа, а также в Каграк-422 и ΒΝ-3, линии клеток множественной миеломы, которая испытывает недостаток ВСЕ и ВЬИК экспрессии (8ргапдегк, Ре1бЬаЬп и др. Опсодепе 25(36): 5056-62 (2006). Клетки То1ебо оставались нечувствительными ко всем трем соединениям (фиг. 11В). В отдельном эксперименте было найдено, что клетки 8иЭНЬ-6 и То1ебо являются в равной степени чувствительными к индукции апоптоза при 72 ч обработке 1 мкМ РМА. Эти данные демонстрируют определенную потребность в 8ук для выживаемости определенных линий клеток НХЛ.
Пример 352. Исследования с использованием ксенотрансплантата и анализ концентраций в опухоли и плазме.
Ингибирование 8ук защищает от образования опухоли в мышиной модели ксенотрансплантата. Мыши получали (компания) и акклиматизировали на месте по меньшей мере три дня перед использованием в исследованиях. Клетки Еаток (3х 106) инъецировали подкожно в область заднего паха находящихся в сознании мышей, используя 27 размер иглы в инъецируемом объеме меньше чем 0.5 мл. После инъекции мышей рандомизировали на группы, получающие лечение (п = 15), и дважды в день дозировали путем перорального введения через желудочный зонд наполнитель или 10, 15 или 20 мг/кг ингибитора. Вес тела животных регистрировали по меньшей мере один раз в неделю, а измерения диаметра опухолей штангенциркулем проводили дважды в неделю, начиная с момента, когда образуются пальпируемые опухоли, и до конца исследования. Объем опухоли оценивали с помощью измерения штангенциркулем, используя формулу [максимальная длинах ширинах высотахп/6]. Дозирование наполнителя или ингибитора дважды в день продолжали до тех пор, пока опухоли в группе, получавшей наполнитель или какое-либо лечение, не превышали массу 1.5 г. В момент завершения исследования (5 недель после инокуляции Еаток) мышей анестезировали кетаминовой смесью. Образец крови получали для выполнения СВС (клинического анализа крови) и определения концентрации ингибитора в плазме посредством пункции сердца и мышей умерщвляли с помощью смещения шейных позвонков. Опухоли затем вырезали и взвешивали. Одну половину опухоли быстро замораживали в жидком азоте для определения концентрации ингибитора в опухолевой ткани, а другую половину вносили в 10% забуференный формалин для гистологического исследования.
Оценивали действие 8ук-ингибирования на образование опухоли Еаток на ксенотрансплантатной мышиной модели. Мышам дважды в день дозировали 10, 15 или 20 мг/кг Р505-15 или наполнитель в качестве контроля, начиная со дня инокуляции опухолевыми клетками. Измерения диаметра начинали с момента, когда опухоли только начинали образовываться, приблизительно через три недели после инокуляции опухоли, и повторяли каждый третий день до момента завершения исследования. Исследование завершали, когда массы опухолей начали достигать приблизительно 1.5 мг, и в это время опухоли вырезали и взвешивали. Образцы опухоли и плазмы подвергали фармакокинетическим анализам.
Каждый образец опухоли гомогенизировали в 3 мл раствора соли на 1 г опухоли, используя устройство Койек® МютойЬе Ре11е1 РекЬе® Еобк апб МоЮг (К1тЬ1е СЬаке, Вайнленд, Нью-Джерси). Образцы плазмы и опухоли анализировали на концентрацию Р505-15, используя жидкостную хроматографию с масс-спектрометрией (ЖХ/МС/МС). Вкратце, образцы плазмы и опухоли обрабатывали на 96-луночном СарЬуа™ фильтровальном планшете (0.2 мкм, Уапап Ьк., Пало-Альто, Калифорния). Аликвоты плазмы и образцы гомогенизированной опухоли осаждали ацетонитрилом, содержащим 200 нг/мл соединения А в качестве внутреннего стандарта.
- 116 024109
Смесь встряхивали и охлаждали до 4°С в течение 30 мин, делая возможной полную пептизацию белка. Смесь фильтровали на 96-луночном собирающем планшете. Фильтрат инъецировали в прибор §с1ех АР13000 ЖХ/МС/МС, оборудованный источником турбораспыления ионов. Р505-15 и соединение А разделяли на РНепотепех Ьипа 5μ НШС колонке (4.6x100 мм, 5 мм; РНепотепех, Торранс, Калифорния). Градиент подвижной фазы - от 10% подвижной фазы А (0.1% муравьиная кислота в воде) и 90% подвижной фазы В (0.1% муравьиная кислота в 90% ацетонитрила, 10% воды) до 65% подвижной фазы В программировали в течение 1.1 мин и далее обеспечивали градиент подвижной фазы В от 65 до 90% в течение 0.01 мин. Площади пиков т/ζ 394/360 ионов-продуктов Р505-15 измеряли против таковых пиков т/ζ 357/295 ионов-продуктов соединения А (внутренний стандарт) в режиме определения положительных ионов. Аналитический ряд составлял 2-5000 нг/мл. Фармакокинетический анализ показал, что установившиеся концентрации Р505-15 в опухоли следовали профилям концентрация-время, наблюдаемым в плазме в группах с дозировкой 10, 15 и 20 мг/кг. С увеличением дозы наблюдали нелинейное увеличение Смакс, АИС (0-8), и Смин опухоли, но было замечено пропорциональное увеличение концентрации в плазме Смин. Ссреднее Смакс и АИС (0-8) в плазме по меньшей мере в 2 раза больше, чем в опухоли для всех исследуемых доз; однако средние низшие концентрации (Смин) были выше в опухоли, чем в плазме (табл. 11А), что указывает на накопление Р505-15 в опухолевых образованиях.
Таблица 11А
Определено в плазме
Режим дозирования Тмакс (ч) Смин (нг/мл) Смакс (нг/мл) Аис (0-8) (нг*ч/мл)
10 мг/кг ВГО (2 раза в день) 1.50 17.6 179 738
15 мг/кг ВГО 1.50 26.6 343 1671
20 мг/кг ВГО 4.00 39.5 570 3191
Определено в опухоли
Режим дозирования Тмакс (ч) Смин (нг/мл) Смакс (нг/мл) Аис (0-8) (нг*ч/мл)
10 мг/кг ВГО 8.00 24.5 55.2 353
15 мг/кг ВГО* 4.00 67.8 163 475
20 мг/кг ВГО 4.00 125 252 1453
Таблица 11В
Режим дозирования опухоль/плазма соотношение
На основе АТбС На основе Смакс На основе Смин
10 мг/кг ВГО 0.478 0.308 1.39
15 мг/кг ВГО* 0.284 0.475 2.55
20 мг/кг ВГО 0.455 0.442 3.15
Примечание: образцы в начальный момент времени (0), 1.5, 4 и 8 ч брали в день сбора материала после АМ (утреней) дозы. Вторую дозу не вводили в день сбора материала; следовательно, фармакокинетические значения, приведенные выше, определяли после одной АМ дозы в виде установившейся концентрации.
* Только один образец опухоли был доступен на 8 ч момент времени и мог показать резко отличающееся значение (концентрации в опухоли на 8 ч - 608 нг/мл); следовательно, фармакокинетические параметры определяли между 0-4 ч для групп с дозировкой 15мг/кг ВГО (два раза в сутки) Р505-15. В результате, значения АИС (0-8) и АИС на основе соотношения опухоль/плазма для группы с данной дозировкой могут быть занижены.
Различия между значениям Смин плазмы и опухоли становились более заметными при повышении дозировки, как указано посредством увеличения соотношений опухоль/плазма, установленных из Смин (табл. 11В). Соотношения опухоль/плазма, установленные из Смаке и АЛС (0-8) являются подобными по всем группам с различной дозировкой. Уравновешенные концентрации в опухоли были стабильно выше 60, 170 и 640 нМ за весь промежуток между введениями Р505-15 при дозировке 10, 15 и 20 мг/кг соот- 117 024109 ветственно.
Мыши, получавшие дозировку Р505-15 в любой из трех концентраций, были защищены от развития опухоли Каток ш νί\Ό. Это изначально было заметно из измерений диаметра (данные не показаны), которые показали уменьшенную скорость роста опухоли в присутствии ингибитора 8ук. После завершения исследования мышей умерщвляли и опухоли вырезали и взвешивали. Сопоставимого с измерениями штангенциркулем, статистически значимого уменьшения среднего веса опухоли достигали во всех группах с различной дозировкой в сравнении с контрольной группой, получавшей наполнитель.
8ук-специфический ингибитор Р505-15 также тестировали на активность на ксенотрансплантатной мышиной модели с опухолью Каток. При всех тестируемых концентрациях статистически значимые уменьшения роста опухоли наблюдали в группе мышей, получавшей дозу ВГО Р505-15. Самая низкая тестируемая концентрация составляла 10 мг/кг и позволяла достичь концентраций в опухоли в диапазоне 64-140 нМ в течение дня. Супрессия роста опухоли при этих концентрациях ш νί\Ό согласуется с концентрациями <125 нМ, найденными для подавления ВСК-индуцированного Са2+ тока и отдаленной ВСК передачи сигналов к рЕКК Υ204 (фиг. 12). Селективное фармакологическое ингибирование 8ук приводит к действию на пролиферацию и выживаемость линий клеток НХЛ. Эти данные наводят на мысль, что селективное нацеливание на 8ук также может обладать клиническими преимуществами при ряде Вклеточных пролиферативных нарушений.
Как подробно описывается в данном документе, 8ук экспериментально вовлекалась в развитие, пролиферацию и выживание В-клеток. Кроме того, 8ук вовлекали в качестве онкогена. Экспрессия конститутивно активной 8ук в адоптивно перенесенных клетках костного мозга индуцирует лейкоз у мышей, и сверхактивность кук связывают с разнообразными лимфомами у человека. Намечена роль 8ук в биологии В клетки, ее селективное ингибирование может быть достаточным для обеспечения клинических преимуществ при В клеточно-пролиферативных нарушениях, наряду со снижением токсичностей, которые могут возникать вследствие супрессии других нецелевых киназ.
Настоящее изобретение обеспечивает ряд вариантов. Очевидно, что приведенные примеры могут быть изменены с обеспечением других вариантов осуществления данного изобретения. Следовательно, является важным то, что рамки данного изобретения должны быть определены приложенной формулой изобретения, а не отдельными вариантами осуществления, которые были представлены в качестве примера.
Все из упомянутых ранее патентов США, публикаций заявок на патент США, заявок на патент США, иностранных патентов, иностранных заявок на патенты и непатентных публикаций, указанных в данном описании и/или включенных в инструкции по применению, включены в данный документ путем ссылки, во всей своей полноте. Из вышеизложенного будет ясно, что, хотя специфические варианты осуществления изобретения были описаны здесь в целях иллюстрации, могут быть выполнены различные модификации без отклонения от сущности и объема изобретения. Соответственно, изобретение не ограничивается какими-либо приведенными вариантами, кроме прилагаемой формулы изобретения.

Claims (3)

1. Соединение формулы I или его таутомер или фармацевтически приемлемая соль, где Ό’ означает С3-8-циклоалкил, необязательно замещенный заместителем, независимо выбранным из группы, состоящей из С1-8-алкила, амино, гидрокси, аминокарбонила и фенила;
К1 означает Н;
Υ1 означает фенил, необязательно замещенный С1-8-алкилом;
К2 означает гетероциклил, замещенный от 1 до 2 группами К3, выбранными из группы, состоящей из амино-С’-8-алкила-, С1-8-алкокси-С1-8-алкила-, оксо-, С1-8-алкилкарбонила, С3-8-циклоалкилкарбонила, гетероциклилкарбонила, С1-8-алкилкарбониламино, С1-8-алкилсульфонила и С3-8-циклоалкилсульфонила; и К2 является необязательно замещенным заместителем, выбранным из группы, состоящей из С1-8алкила, аминокарбонила и оксо;
где гетероциклил означает насыщенную или ненасыщенную неароматическую циклическую группу, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 атомов углерода и 1, 2, 3, 4 или 5 гетероатомов, независимо выбранных из кислорода, азота и серы.
- 118 024109
2. Соединение по п.1 формулы или его таутомер или его фармацевтически приемлемая соль.
3. Соединение по п.1 формулы Ιά1 или его таутомер или его фармацевтически приемлемая соль.
4. Соединение по п.1 формулы Ιά2 или его таутомер или его фармацевтически приемлемая соль.
5. Соединение по пп.1-4, в котором Ό1 означает цикло пропил.
6. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
- 119 024109
- 120 024109
- 121 024109
- 122 024109 или его таутомер или его фармацевтически приемлемая соль.
7. Соединение по п. 1 формулы или его таутомер или его фармацевтически приемлемая соль.
8. Соединение по п.1 формулы или его таутомер или его фармацевтически приемлемая соль.
9. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по любому из предшествующих пунктов в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.
10. Способ ингибирования Зук, 1ЛК-киназы или пути сигнальной трансдукции, по меньшей мере частично, опосредованного активностью Зук или 1ЛК-киназы, включающий стадию контактирования клетки с соединением по любому из предшествующих пунктов.
11. Способ лечения состояния или нарушения у субъекта, опосредованного, по меньшей мере частично, активностью Зук, включающий стадию введения субъекту, нуждающемуся в таком лечении, композиции по п.9 в терапевтически эффективном количестве.
12. Набор, включающий композицию по п.9 и дополнительно включающий упаковку и инструкции по применению.
13. Соединение по п.1, в котором -Υ'-К2 выбран из группы, состоящей из
- 123 024109 где Υ2 означает СН или С;
К4а выбран из группы, состоящей из Н и С1-8-апкипа;
каждый К4с независимо выбран из группы, состоящей из Н, С1-8-апкипа, аминокарбонила- и оксо; каждый К4Ь независимо выбран из группы, состоящей из Н, С1-8-апкипа, амино, С1-8-алкокси и гетероциклила;
нижний индекс р равен 0, 1, 2 или 3 и волнистая линия показывает точку присоединения к остатку молекулы.
Фиг. 1
Фиг. 2
- 124 024109
Фиг. 2 (продолжение)
Фиг. 3
- 125 024109
Пример № Структура ΜΜ ΜΗ+ Зук 1С50 код 400 '^ΝΗ О „Αν н 334.38 335.2 +++ 401 ^>—ΝΗ ^~ΝΗ2 ~ о ~<_£)_ν>Γν 390.45 390.1 ++ 402 ΝΗ ΝΗ2 - ΝΗ> / ч /~Л >—N О\ /Ν—у— N Н 404.47 404.1 ++ 403 , ά„ΗΟ Η 402.46 403.3 (Μ+1) ++ 404 ά Η ^'νη о ΎΧΧ Η 390.4 391.0 (Μ+1) ++ 405 ° Ν-''γ''+ΙΗ2 Η2Ν''/+ Η 402.38 403.0 (Μ+1) ++
- 126 024109
406 ά.. „ руУ УуУн2 Η 352.37 353.2 (Μ+1) ++ 407 У- ΝΗ ΝΗ2 - /> \ /=% ^“Ν /Ч_У ΝΗ 381.46 382.1 ++ 408 Τ’—ΝΧΗ ^~νη2 /> Η2Ν =4 >=Ν °^Α_>νη Ο - 398.45 399.1 ++ 409 ό. ΝΗ Ο °'χχхУΝΗ2 η2να^/'^ν'^ν^ Η 368.83 369.2 (Μ+1) ++ 410 ύ^ΝΗ 0 УоУУ Η 374.4 375.2 (Μ+1) +++ 411 Ο--νη Ο -Ух хУΝΗ2 Η 359.39 360.1 (Μ+1) ++
- 127 024109
412 О 388.43 389.1 (Μ+1) ++ ΎΧλ/Φ Η Χ^νη2 413 Λ 358.41 359.1 (Μ+1) ++ Η ο ^νη2 414 XX ο 406.45 407.3 ++ τχχχδ Η 415 4 /=\ 4Ν Α~νη -νη2 398.45 399.1 ++ Η2Μ-^Ο Ο 416 ο X ο II 363.38 364.2 (Μ+1) ++ ηοΑχλ5 Η ^νη2 417 Λ 335.37 334.0 (Μ-1) ++ ΧΧΗ ο |Ι Αν Η ^νη2
- 128 024109
418 О 335.37 336.0 (Μ+1) ++ и о I νΧΝΗ2 Η 419 Ν—ΝΗ ъ ά Ο /лУ“г Η 359.39 360.0 (Μ+1) ++ 420 348.41 349 ++ 421 362.44 363 ++ ΝηΥ—ΝΗ2 ыЦ \ /=4 ΡΝ /Ν ννΝΗ 422 Λ 334.38 335.0 (Μ+1) ++ Н2Мк^ ο ι Ν^γΉΗ2 Η 423 Ϋ' Ο 1 1 406.45 407 ++ -Ό-Ά/ 1 I ; ΝΗζ Η
- 129 024109
424 ΝΗ Ν Η2 но^ч О 349.39 350 ++ 425 УΝΗ νη2 У) ο-'α/^λ ΓΝ зУ_Умн ^ΝΗ ' 412.47 413 ++ 426 ότ О О нгм УадУ“2 н 362.39 363.0 (Μ+1) ++ 427 , Чн о тодУ”’ н 404.47 405.0 (Μ+1) ++ 428 ά тодУ н 376.42 377.0 (Μ+1) ++ 429 ά <χι аУ νηϊ Η 372.4 373.0 (Μ+1) ++
- 130 024109
430 О А-О-ДУ2 Η Η 376.42 377.0 (Μ+1) ++ 431 ^>— ΝΗ ΝΗ2 ΝΗ> Η2Ν /=χ Αν АЧ λ-ΝΗ ΗΝ —У 361.41 362 ++ 432 ΝΗ ^-ΝΗ2 “ νΚ> ^Ν УУу-нУ Г ν_/ '“Ν 476.52 477 ++ 433 —ΗΗ —ΝΗ, - Α 0 ΗΟ 482.56 483 ++ 434 У~ ΝΗ ΝΗ2 Η2Ν—\ Ν^ / 0Ν УУН 348.41 349 ++ 435 ^>—ΝΗ У ΝΗ2 ΗΝ—, Ν^-0 У=\ ΑΝ ν/-ΝΗ 362.44 363 ++
- 131 024109
436 ΝΗ ΝΗ2 'ν—λ Ν^)> 376.46 377 ++ V у—-ΝΗ 437 -νη2 418.5 419 ++ Ο Ν— У У Ь-л 438 Λ 381.37 382.1 (Μ+1) ++ 0 II УУн Ο I ϊ нет' X Η νη2 439 Α 376.42 377.1 (Μ+1) ++ ι и ^^'ΝΗ Ο Ο г У Уд ''Инг η2ν^™ Η 440 Α 358.41 359.0 (Μ+1) ++ ^^ΝΗ Ο лХхУмнг ΗΝ\Χ Η Ν 441 Η Ν -у ^^'ΝΗ Ο АлУ ЛЛ Η νη2 372.43 373.0 (Μ+1) ++
- 132 024109
442 ^~Υ~ΝΗ 4ΝΗ2 ηο^ ~ мН χ—ΝΗ == 0%\ΑΝΗ 442.5 443 ++ 443 υ ЧчЧиг ί ο X—ΝΗ /=ч )=Ν οή-Ο 456.53 457 ++ 444 НО ΝΗ^—ΝΗ2 ί. ~ Ο Χ—ΝΗ /=\ )=Ν ΝΗ 456.53 457 ++ 445 ^2)-νηΥνη2 η20 -0 <-ΝΗ /==\ /==Ν <ΜίΝΗ ο - 455.5 456 ++ 446 г „ { ϊΌ00 Η 422.45 423.0 (Μ+1) ++ 447 ΗανΑη2 η2ν—λ νΖ 7 X—ΝΗ /=ч 0Ν οΛγ\ΑΝΗ 441.51 442.1 ++
- 133 024109
448 /ώ-ΝΗ О Ι^ΝΗζ ΗΝ^Ν^Ο η ο +++ 449 ά. Ο == 'ΝΗ Ο ноЛшУΝΗ2 Ιη η 379.38 380.0 (Μ+1) ++ 450 ό.... со/У- Η Η 358.41 359.0 (Μ+1) ++ 451 н к-кн ο ΎΝΧ> хУΝΗ2 Η 376.42 377.0 (Μ+1) ++ 452 . ό.... ноЛо. хУ1'2 378.39 379.0 (Μ+1) +++ 453 о У УалУ Η 377.4 378.2 (Μ+1) ++
- 134 024109
454 . ό Η 376.42 377.0 (Μ+1) ++ 455 ^_ΝΗ%_ΝΗ2 ο Η2Ν /=< )=Ν οΛ4_>ΝΗ 402.41 403 ++ 456 Ρ—/ Υ-ΝΗ V—ΝΗ2 - /5 Η2ΝΧ /Α / Ν ο-ν<_0ΝΗ 402.4 403 ++ 457 Ο ύ-ΝΗ Ο Η 445.48 446.4 (Μ+1) ++ 458 ό. ^“'й\\лУНг Η 445.53 446.5 (Μ+1) ++ 459 ά. НОЗДЗД ο Η 418.5 419.4 (Μ+1) ++
- 135 024109
460 Λ ό. η2ν ν^ί 4/%η ο влУнг Η 446.52 447.3 (Μ+1) ++ 461 ο У'|| η л ? ^олУ Η 417.47 418.0 (Μ+1) ++ 462 он УУн о СиУ Η 418.5 419.2 (Μ+1) ++ 463 ίΗ 418.5 419.2 (Μ+1) ++ ό ϊ ^ΝΤΊ ц^уХ*”2 уууу Η 464 ^Νχι χΥνη2 Η 438.92 439.2 (Μ+1) ++ 465 Λ 377.41 378.2 (Μ+1) ++ %Ак Ο УХкУУ Η
- 136 024109
466 άΝΗο „Α<λν Ν 2 Η Η 377.41 378.2 (Μ+1) ++ 467 ά °\ ο Ο Η’Ν'νΧΧνΝΗ2 Η 414.44 Μ3+ 415 ++ 468 ύ-ΝΗ Ο Ν ГГ Η 377.4 378.2 379.2 ++
М8 = МС
469 Ο II ΝΉ ΝΗ2 ““ ιΖ> Η2Ν /=4 )=ν ο-νν7“ΝΗ 462.51 463.2 ++ 470 ολ-0^Ν'Η//~ΝΗ2 ° Η2Ν /==\ >—Ν ΝΗ 462.51 463.2 +++
Фиг. 4
- 137 024109
Пример № Структура мм МН+ Зук 1С50 КОД 471 Ск ΝΗ О и 313.36 314.3 ++ н 472 Ск ι ΝΗ О 354.41 355.2 +++ н 473 Ск ΝΗ О 298.35 299.3 ++ н 474 Ск 1 ΝΗ О 1 ι и 368.4 369 ++ талУнг н 475 Η ^''ΝΗ О н 352.4 353 +++ 476 | ^''кмн о кХхдУ н 396.45 397 ++
- 138 024109
477 Ск | ΝΗ О н 366.43 367 +++ 478 Ск ΝΗ О н н 354.37 355 +++ 479 , <Х о тххкУ н 368.44 369 ++ 480 Ск ΝΗ О Н 323.36 324 +++ 481 Ск ΝΗ О °ЧХХ И”! Н 339.36 340 ++ 482 ° гл к'мА Лн о ^'^'Унг 410.48 411 ++
- 1з9 024109
483 О Γζ\ Η2νΛΟ λ ϊ Η Ν 409.49 410.2 +++ 484 0 ΝΗ 0 УиУ2 Η 329.36 330.1 (Μ+1) ++ 485 0 ΝΗ 0 ФадУ“нг Η 343.39 344.1 (Μ+1) ++ 486 ο [У—ΝΗ —ΝΗ2 N0 /“Λ. ΑΝ <0>-ΝΗ °=\ 331.4 332.1 ++ 487 Ο [>—ΝΗ V·—ΝΗ2 ΝΗ> Ο-Υ X 347.4 348.1 ++ 488 ο [>—ΝΗ ν~ΝΗ2 /==\_ Αν γνγ ΝΗ 326.38 327.1 +++
- 140 024109
489 О Ο—ΝΗ Υ—ΝΗ2 ыЦ У 99 340.41 341 ++ 490 сУ У ЛД Г и пдУ н 382.47 383.3 +++ 491 χ /г ? тУ 74 ° н 411.47 412.3 +++ 492 у η η ΝΗ О ГУдУНг н 388,45 М+1= 389 +++ 493 у о ΝΗ О УУ дУ * Ν N Н 366.43 СО О) Т -и А II ++ 494 х оуГ>-^ 9° ^У ί /Ό |Д“” ’кЛУУ н Н 466.55 467.38 +++
- 141 024109
495 ΝΗ О л XX ХГ”4 н н 326.36 327.3 327.4 +++ 496 А. ΝΗ О -аАлУМН! X о Н 348.39 349.4 ++ 497 А. ΝΗ О -γΧΧΛΥ’ ί н 312.33 313.4 +++ 498 /0 ΛΊ ?н ° χΝΥΐлЛ ΝΗ2 ηνΆ ΧΑ^ν^ / Η 395.47 ЕЗД Μδ [Μ+1]= 396 ++ 499 ΝΗ Ο Υΐ Ίί ηρ νη2 ν^..Α0Χ.,ΑκιΧ V Η 337.35 Μδ: 338.4 (Μ+Η) +++ 500 ΝΗ 0 γγΧλΖΥ Υ2 η 336.36 Μδ: 337.4 (Μ+Η) +++
М8 = МС
- 142 024109
- 143 024109
507 η2ν-/° /X У Γ ϊ νΝχΊ XXΝΗζ 381.44 382.5 ++ 508 л У УУиХ н Ν 454.51 455.5 ++ 509 А У ΝΛΝ о о Г ° УзУ н 486.51 487.4 +++ 510 о 0—ΝΗ ν~ΝΗ2 О /~\ У Г ΖΝ~\ /—ΝΗ /—N О 420.48 421.4 ++ 511 ХХЧнАΝΗ о влУ н 474.54 475.3 +++ 512 /—У'04 У^мн о н 368.44 369.4 ++
- 144 024109
513 < ηΚ νη о ^ΝΌυνΝΗ2 Η 366.47 367.4 ++ 514 °ν° I ^δ'Ν^ ΝΗ Ο ^одУ-2 Η 445.55 446.3 +++ 515 °ν°1 Δ. ΝΗ ο ^адУ2 Η 445.55 446.3 +++ 516 Η2Ν^ο Χ/'ΝΗ Ο <υί ^Лмн2 Η Η 352.36 353.3 ++ 517 Ο [>—νηΥ-νη2 νΝ> /у °_Ул ΔΝ 0=5—ς у—ΝΗ 432.5 433.3 ++ 518 % Δ. Λ-Ν-^ ΝΗ ο ^одУн2 Η 407.48 Μ5+ 408 +++
М5 = МС
- 145 024109
519 η2ν—/° О У] ΛΟ ύη ϊ ОдУ“Н2 Η 466.55 467.4 +++ 520 ° Α Ο'^Ύ^'ΝΗ2 ΝΗ Ο ^ОдУ- Η 397.44 398.3 +++ 521 Ο^ΝΗ2 Τ У Ο Ί 'ΝΗ Ο υπ лУ- Η 397.44 398.4 +++ 522 °νθ У -+ 'νΎ γΗ ο ΥΟ ΙΤΝΗ2 η Η 488.57 489.3 ++ 523 1 У АА'. ΝΗ ο Уо/У2 1 Η 466.55 467.2 ++ 524 °ν° У Η У ϊ ΫΟ ΓΧΝΗ2 ^у У V 502.6 503.3 ++
- 146 024109
525 о А X 1 Ан О Ά- н 383.46 Е8(+) МЗ [М+1]= 384 +++ 526 о А ι Ά о N N Н 397.48 Е5(+) МЗ [М+1]= 398 +++ 527 О А аА ι Г ? ΧνΟλΧ н 411.51 Е5(+) МЗ [М+1]= 412 ++
М5 = МС
528 Ан /у. Ан νΧ- н о л νη2 411.47 412.3 412.4 ++ кА о Ό 529 о'Чу кА Р X к /к Ан ик н о л 'νη2 425.49 426.3 ++ 530 о 451.53 452.4 ++ сУА кА N X кк Ά Ан Л о л νη2 Χϊ4 А-^А н
- 147 024109
531 0 сС'А'Уэ ^Ун о УДдУН! н 467.53 468,3 ++ 532 н У О Υ44γ-ΝΎΝΎ'ΝΗ н 02 355.4 Е8(+) М3 [М+1]= 356 ++ 533 „ Υ ° [04ΓΝΊΓΝ<ΥΝΗ н н Ан2 369.43 Е8(+) М3 [М+1]= 370 ++
М5 = МС
534 ^АД I Н Υ ,ΝΗ νη2 383.46 Ε3(+) М3 [Μ+1)= 267 ++ 535 н 411.47 412.3 +++ У У ΝΗ η V -Ζ Υ 1ДД 0Η2 Η 536 Н о у 425.49 426.3 +++ о '1 ΝΗ ο X хдУ Η ήη2
М5 = МС
- 148 024109
537 <:/ =,. ШУ Η 451.53 452.3 452.5 +++ 538 Уу° А сг> >Η о хУ ЧАЛ,? 467.53 468.4 +++ 539 X и ΗΝ + ΝΗ О идУнг н 367.41 368.2 ++ 540 ЛУ, ^ΝΗ о ^одУ н 409.49 410.4 +++ 541 „ У Ογ^Α=ΝΑ0 »Ί0γΝΗ2 /А Н О 397.48 Е8(+) М5 [М+1]= 398 ++ 542 „ N ¥ ΓΎΝΤ Ύ ΗΝ^ Н О 383.46 Е3(+) Μδ [М+1]= 384 ++
М5 = МС
- 149 024109
543 Η У ΎΝ-^ ο Υ ^ΝΗ ΝΗ2 Ο 409.49 Εδ(+) Μ5 [Μ+1]= 410 +++ 544 τ'4 Υ -ΝΗ 445.55 Ε5(+) Μδ [Μ+1]= 446 +++ А'гЛУ 4° Χνη2 Ο 545 ΧΎ ο 453.55 II ++ X Μδ = МС 546 Ν ΝΗ~ ν-ν ку ο Ανη2 ) Ν 336.36 337.3 ++ 547 [>^ΝΗ / ΝΗ~ Ν-Ν Ί \ Ο Υ-νη2 > =Ν 336.36 337.3 ++ 548 445.55 446.4 +++ У Α Η У
- 150 024109
549 <ΑΟ А α5ΆΊ ι η ° ' иОлУНг Η 459.57 460.4 +++ 550 г Ν [У| Τ ° Η 414.45 Μ3+ 414 +4- 551 ο £>—ΝΗ У—ΝΗ2 / ο 327.39 328.3 +++
Μδ = МС
552 \ >—ΝΗ βΝΗ2 °~Α У> 343.39 344.3 ++ 553 о О—ΝΗ ΝΗ2 -о νΑ Ауу-мЧ 343.39 344.3 ++ 554 о [>—ΝΗ V-ΝΗ2 о-,, о 398.47 399.3 ++
- 151 024109
- 152 024109
561 °ν° Г А^ I ΝΗ о УУнг н 459.57 460.3 +++ 562 7ο. А. I ΝΗ о 6лл“Вг н 439.52 440.3 +++ 563 О н2гУ^д Ха А^ I ун о илУ н 410.48 411.3 +++ 564 ΝΗ О 308.35 309.3 ++ у--· 565 А^ ΝΗ 0 1 1 309.33 310.2 ++ нУ /У”2 566 о сУо о [У—ΝΗ Υ- ΝΗ2 о 412.45 413.3 ++
- 153 024109
- 154 024109
573 Я ν —Ν Υ ή 0 Ί ιΗ ° 421.51 Μ5+ 422 + Ο„0 Η Ν ΝΗ2 574 494.6 495.3 ++ Η2Ν—/° 0 α. Γ 0 1 0 01 ί] 575 У~ Ο-νηΑ- N0 ΑΝ < /—N14 νη2 341.42 ΜΜ= 341.41 Μ+1= 342.2 ++ Μδ = мс 576 417.49 418.2 +++ 0νΛ νη2 У «у (У^ы 577 π 430.51 ΜΜ= 430.5 ++ ^νηΥ МУл 0 -νη2 Μ+1= 431.4 ζν 578 430.51 431.3 ++ Ο У>у 0 Ίι Γ ο ΌΟ Η 0Η2
- 155 024109
579 _ А ау г ° γΜί ϊVΝΚζ о^У ЧААА н 430.51 431.3 ++ 580 о Ο^ΝΗ ΑνΗ2 О о АА 418.48 419.3 +++· 581 о >-ΝΗ У—ΝΗ2 о о 382.42 383.3 + 582 „ Υ /^γΝ^Ν^ΝΗ Μ-ρΐΧ Γ^ΑγΝΗ2 О ' О 355.4 ЕЗД МЗ [М+1]= 356 +++ 583 о ' о 369.43 Е8(+) МЗ [М+1]= 370 ++ 584 „ У -у-м-М Ά“2 О 1 О 383.46 Е5(+) МЗ [М+1]= 384 ++
М5 = МС
- 156 024109
585 „ Υ /Ч-Ч ΝΗ Η2Νγ%Υ^ Ν\0γΝΗ2 ο Η ο 341.38 Ε8(+) Μδ [Μ+1]= 342 ++ 586 „ Υ Ν0.ΝΗ2 I Η ! 355.4 Εδ(+) Μδ [Μ+1]= 356 ++ 587 „ Υ ^Νγ^Ν^ν 44γΝΗ2 ο Η Ο 369.43 Εδ(+) Μδ (Μ+1]= 370 ++
М8 = мс
588 „ Υ ° ρΑγ Η2ν4ζ^ν-4^ I νη2 369.43 Ε5(+) Μδ [Μ+1]= 370 ++ 589 „ Υ Ο ,- ,, γΝΗ Κ 1 νη2 383.46 Εδ(+) Μδ [Μ+1]= 384 ++ 590 η Υ ο ΝΗ 1 1 νη2 397.48 Εδ(+) Μδ [Μ+1]= 398 ++
М5 = МС
- 157 024109
591 >-νη\ <5 —ΝΗ2 351.41 352.3 ++ 592 О 351.41 352.3 ++ £>—ΝΗ V- νη2 Л уА О 593 >-ΝΗ Л —νη2 353.43 354.3 +++ °\ / Ο / Ν < 7—ΝΗ 594 Ο Α~ΝΗ γ-ΝΗ2 353.43 354.3 ++ л Ο Ζ>-Α V 595 445.55 446.4 ++ V у / Ν'-'Ύ^ ΝΗ Η 4 ο Λνη2 596 ? У I Γ ο ϊ 383.46 384.4 +++ η2νΧ< Ό,ύ Η
- 158 024109
597 у О ΝΗ 0 397.48 398.4 ++ 598 о одУ н 445.55 446.4 +++ 599 у О ΝΗ О УодУ н 368.4 369.3 +++ 600 у о у о оУуУ УдУ У 382.42 383.3 +++ 601 „ У ДУУ γΝΗ о ' ρ νη2 373.39 374 +++ 602 „ У У0γΝΗ О ' С! νη2 389.85 390 392 +++
- 159 024109
603 А νη о УахУ Η 352.4 353.3 ++ 604 о А. <У У Г о ^олУ н м 451.53 452.4 +++ 605 О 1 1 о 369.43 370 +++ 606 Хз> 471.57 472.4 ++ 607 ϊ У УхХ н Ν 423.52 424 ++ 608 ι 5 У Л00 ΝΗ о 0ΑΛΝΗ2 н Ν 437.55 438 ++
- 160 024109
609 ? у Η Ν 457.54 458 ++ 610 Αγ° Уно Α ΗΝ0Λ> 398.42 399 ++ 611 ? У ΝΗ ο ^Ν0Α>’ Η 409.49 410.4 +++ 612 ο Δ. ΓΟ' ΝΗ ο ο^αί> Η 439.52 440.5 +++ 613 °ν° , У Η 459.57 460.4 +++ 614 °ν° χ У γχ >0·· А ο О0Х> Η Ν 471.58 472.4 +++
- 161 024109
615 и А. ΟΛΝ^Υ·^ ^ΝΗ ο Η Ν 425.49 426.4 ++ 616 Гт Α θ АУ Η Η 471.57 472.4 ++ 617 Ο Α <Υ а γ ο Υ> Η 447.5 448.3 ++ 618 ο Α Ау ιΗ θ ΑΥ Η Ν 423.48 424 +++ 619 5 У Сг Α ΐΗ ° Η Ν 463.56 464 ++ 620 у У Α ΪΗ ° °^ΌΝν ΝΗ2 Η Ν 421.51 422.5 +++
- 162 024109
621 г, Δ. У^° У Η о годУ н ,Ν 380.41 381 ++ 622 ^Ун о садУ н 352.4 353 ++ 623 °У г ϊ АХХДУ н 366.43 367 +++ 624 у ΝΗ О уодУ н 338.37 339 ++ 625 у а н ?н 9 йадУг н 352.4 353 +++ 626 у о / Ун ° 0ад!У н 366.43 367 +++
- 163 024109
627 °7х А^ ΝΗ О хдУ н 338.37 339 +++ 628 ХтС А. ΝΗ О хдУ н 352.4 353 +++ 629 Н2УО σ' о 5^' ΖΑ 1н ° о ιΎνη2 Ν 430.51 431.3 ++ 630 / ΗΝ ^-τι ΧΪ о' чоз·] у 7но У К ]^ΝΗ2 444.54 445.2 ++ 631 / А. г° ОьУ \Ζν η Ν 458.56 459.2 ++ •
Фиг. 5
- 164 024109
Пример № Структура ММ ΜΗ+ Зук 1С50 код 632 н /1—Τ Ρ~ΝΗζ νΛ=\ ΝΡ 385.39 386.1 +++ 633 ΗΝ-~^~γ_ΝΗ νη2 чу—, η4Ζ>δ 385.39 386.1 +++ 634 Α ’-Оуу О у-у /=\ >^Ν >-Ν Ν-Ч >-ΝΗ η2ν \/ 472.51 473.2 +++ 635 Η Ν-Νχ ΝΗ^-Ν Η2 - ΝΜ ΗΝ^_Ζ ΝΧ^^~ΝΗ 429.49 430.2 ++ 636 Η Ν^Νγ_ Δ/ /^ΝΗ Ν Η2 ο /> Ά ηη ΡΝ /Ν ν_/ΝΗ 416.45 417.2 ++ 637 Η ν/\ ο ΔζΛ—ΝΗν~ΝΗ2 /у η2/Δ-/ΝΗ 424.44 425.1 +++
- 165 024109
- 166 024109
644 _ о гфУ н 385.39 386.2 +++ 645 ην-2^ унн γΐΗ2 <чР/~л У ;з—< Υ-νη η2ν \=/ 424.44 425.2 ++ 646 Ν—А~ЧН /νη2 Ух О ΎΥγν 402.44 403.2 ++
Фиг. 6
- 167 024109
650 О Ууд о н ++ 651 о УуД ^Ο—^ΝΗΟ ^0,х> н ++ 652 о У о одУ н ++ 653 т I >н о УУддУ н п 0.517 654 ° Υ УдУ А О одУ”г н ++ 655 | Р н ++
- 168 024109
- 169 024109
- 170 024109
668 ρ Η2Ν-ρ Ο /Ν~λ кк-Ч к_/\Н ο ΟλΑ Η ++ 669 γο α<Κ ο ολΑ Η + 670 Λα Χ· ° Η + 671 Λ А'кь ο ΟλΑ Η + 672 Αά ι θ ολΑ Η ++ 673 ο ΗΟγ ΑΆ Γ ° влА Η ++
- 171 024109
- 172 024109
- 173 024109
686 А I ^ΧΝΗ О ΆΑα мнг Η 356.43 357.2 ++ 687 Λ I ΝΗ Ο ντχν4 2 Η 342.403 343 ++ 688 ДХуУ2 Η 356.43 357.2 ++ 689 дудУнг Η 358.402 359 ++ 690 АУдУ^ Η 372.429 373 ++ 691 I | ΝΗ Ο ΑΝΌΝίΑΝΗ2 I η ΙΝ 370.413 371.2 ++
- 174 024109
692 | ЛЛ О уолХ н 354.37 355.2 ++ 693 θΆ ΝΗ о ^^ N N Η 458.444 459 ++ 694 | Ан О У ту н 314.349 315.2 ++ 695 1 'Ά'ΙΗ О Шу νηι Η Ν 328.376 329.2 ++ 696 | ΑΐΗ О ΥτχιΧ Η 404.474 Μ+1= 405 ++ 697 9 | ΝΗ Ο ΥΧ> лТ“2 Η 390.447 391 ++
- 175 024109
698 о III ---^^ΝΗ2 ^ΝΗ о ΌχΥΝ 2 Η 379.424 380 ++ 699 —7 ин2 ,|Η о ΌχΥΝΗ2 Η 395.467 396 ++ 700 Τ νχΥΝΗ2 Η 409.494 411 ++ 701 η2ν^ο 1 ί иХХлУ2 Η 441.536 442.6 ++ 702 \ он ΝΗ I 0=/ Μ1- Η 441.536 Ε3(+) М3 [Μ+1]= 442 ++ 703 он /—-Λ Ο л Ο хУ2 η2νΑο ХАЛ/ Η 427.509 Ε3(+) М3 [Μ+1]= 428 ++
М5 = МС
- 176 024109
Фиг. 7А
Пример № Структура ЗуК 1С50 708 7-\ О о2 У-νη Ανη2 /X η2ν /==. /=Ν ο^ςνλΝΗ + 709 ^>—ΝΗ ΝΗ2 νΚ \ /—\ /=\ /~Ν /—Ν Ν—< /~ΝΗ + 710 —Ν0>—ΝΗ Υ-ΝΗ2 нЦ η2ν /== )—ν' <Μ>Η +
- 177 024109
Фиг. 7В
А АМРК(г) В АРК5(Ь) С СНК1(П) М Ик(й) N 1АК2(И) X ΡΘϋΡ Υ ΡϋΘΡΚ3(ν5610)(11) Ζ Ке((И) ϋ сКИ(О816Н)(И) 0 1АКЗ(К) АА ΡβΙ(ν804Ι_)(Κ) Е сКй(У560С)(Ь) Ρ ΙΝΚ3((ι) АВ Ре1(У804М)(Ь) Р сКИ(У654А)(Ь) 0 МАРК1(К) АС Рзк2(К) 6 РСРР1(\/561М)(Ь) Р МЕ1_К(Ь) Αϋ Рзк4(Ь) Η ΡΙ13(Ο835Υ)(Κ) 5 М1К1(К) АЕ Згс(Т341М)(Ь) 1 РИЗ(Ь) Т МЗТ1(Ь) АР Зук(К) ΰ Р1(4(И) и Μ5Τ2(ή) АС ΤΒΚ10Ί) К Ртз(И) V РАКЗ АН ТЗЗК1(К) Ь ССК(Ь) УУ РАК <£0ООши.О1 <тиоши.О1 —>^-12гОо.оо:а>нэ
© Р459-72 0 17 4 28 11 39 0 46 56 2 5 44 0 0 0 2 0 0 86 6 2 51 0 4 14 20 4 28 0 0 13 87 0 26 © Р505-15 14 0 11 45 25 46 9 66 62 12 16 22 0 12 4 3 8 5 39 2 10 61 5 36 16 28 12 34 33 0 34 1 4 18 © Р420-89 91 97 83 95 95 1 97 83 93 91 81 1 ! 85 1 1 79 90 88 1 1 ί 1 83 85 93 88 94 38
© ® ®
Пр. 596 Зук 1С50 = 43 нм Пр. 587 Зук 1С50 = 46 нм Р-420-89 Зук 1С50 = 31 нм % Ингиб. при 300 нМ % Ингиб. при 50 нМ % Ингиб. при 300 нМ
Фиг. 8
- 178 024109 аВСР + Пр. 596 (мкМ) дОСМт-ОООО О
Ьод [Пр. 596] мкМ аВСР + Пр. 87 (мкМ)
Зук ΙΟ^θ = 0.16-0.4 мкМ
Фиг. 9
- 179 024109
ВСК Передача сигналов
И.-4 Передача сигналов
Фиг. 10
- 180 024109
3 мкМ Соединение: 72ч
1С50 (мкМ) среднее ± СКО Соединение 51ЮН1--4 31ЮН1--6 ΤοΙβάο Пример 5.4 ± 2.6 ± 38 ± 596(5ук) 1.8 1.4 19 Пример 1.8 ± 1.1 ± 9.3 ± 87(5ук) 0.7 0.4 4.0 Пример х 1.8 ± 0.9 ± 9.3 + (5укЛ1АК) 0.6 0.3 5.4
Фиг. 11
EA201001619A 2008-04-16 2009-04-16 Ингибиторы протеинкиназ EA024109B1 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US4540608P 2008-04-16 2008-04-16
US4541708P 2008-04-16 2008-04-16
US12034808P 2008-12-05 2008-12-05
US12034408P 2008-12-05 2008-12-05
PCT/US2009/002420 WO2009145856A1 (en) 2008-04-16 2009-04-16 2, 6-diamino-pyrimidin- 5-yl-carboxamides as syk or jak kinases inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201001619A1 EA201001619A1 (ru) 2011-06-30
EA024109B1 true EA024109B1 (ru) 2016-08-31

Family

ID=40750850

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201001619A EA024109B1 (ru) 2008-04-16 2009-04-16 Ингибиторы протеинкиназ

Country Status (13)

Country Link
EP (1) EP2321283B1 (ru)
JP (2) JP5705720B2 (ru)
KR (1) KR101623997B1 (ru)
CN (1) CN102066340B (ru)
CA (2) CA2723205C (ru)
DO (1) DOP2010000310A (ru)
EA (1) EA024109B1 (ru)
HN (1) HN2010002119A (ru)
HR (1) HRP20161310T1 (ru)
MA (1) MA32280B1 (ru)
MY (1) MY155639A (ru)
SV (1) SV2010003706A (ru)
WO (1) WO2009145856A1 (ru)

Families Citing this family (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ589315A (en) 2008-04-16 2012-11-30 Portola Pharm Inc 2,6-diamino-pyrimidin-5-yl-carboxamides as Spleen tryosine kinase (syk) or Janus kinase (JAK) inhibitors
WO2009136995A2 (en) * 2008-04-16 2009-11-12 Portola Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of syk protein kinase
US8138339B2 (en) 2008-04-16 2012-03-20 Portola Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of protein kinases
WO2010043721A1 (en) 2008-10-17 2010-04-22 Oryzon Genomics, S.A. Oxidase inhibitors and their use
WO2010084160A1 (en) 2009-01-21 2010-07-29 Oryzon Genomics S.A. Phenylcyclopropylamine derivatives and their medical use
TW201040162A (en) 2009-05-06 2010-11-16 Portola Pharm Inc Inhibitors of JAK
ES2667706T3 (es) * 2009-05-08 2018-05-14 Astellas Pharma Inc. Compuesto de diamino-carboxamida heterocíclica
CA2812683C (en) 2009-09-25 2017-10-10 Oryzon Genomics S.A. Lysine specific demethylase-1 inhibitors and their use
EP2486002B1 (en) 2009-10-09 2019-03-27 Oryzon Genomics, S.A. Substituted heteroaryl- and aryl- cyclopropylamine acetamides and their use
MA33926B1 (fr) 2009-12-17 2013-01-02 Merck Sharp & Dohme Aminopyrimidines en tant qu'inhibiteurs de la syk
EP2512246B1 (en) 2009-12-17 2015-09-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Aminopyrimidines as syk inhibitors
SI2516434T1 (sl) 2009-12-23 2015-10-30 Takeda Pharmaceutical Company Limited Zliti heteroaromatski pirolidinoni kot inhibitorji SYK
WO2011106105A2 (en) 2010-02-24 2011-09-01 Oryzon Genomics, S.A. Inhibitors for antiviral use
US9186337B2 (en) 2010-02-24 2015-11-17 Oryzon Genomics S.A. Lysine demethylase inhibitors for diseases and disorders associated with Hepadnaviridae
JP2011182847A (ja) 2010-03-05 2011-09-22 Three M Innovative Properties Co 医療用粘着剤組成物
BR112012026694A2 (pt) 2010-04-19 2016-07-12 Oryzon Genomics Sa inibidores da desmetilase específica para lisina 1 e seu uso
BR112012033770A2 (pt) 2010-06-30 2016-11-22 Fujifilm Corp novo derivado de nicotinamida ou sal do mesmo
CA2801781C (en) 2010-07-21 2018-02-27 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Protein kinase c inhibitors and uses thereof
WO2012013727A1 (en) 2010-07-29 2012-02-02 Oryzon Genomics S.A. Cyclopropylamine derivatives useful as lsd1 inhibitors
SI2598482T1 (sl) 2010-07-29 2018-09-28 Oryzon Genomics, S.A. Inhibitorji demetilaze lsd1 na osnovi arilciklopropilamina in njihova medicinska uporaba
US20130237493A1 (en) * 2010-09-30 2013-09-12 Portola Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy of 4-(cyclopropylamino)-2-(4-(4-(ethylsulfonyl)piperazin-1-yl)phenylamino)pyrimidine-5-carboxamide and fludarabine
WO2012045883A1 (en) 2010-10-08 2012-04-12 Oryzon Genomics S.A. Cyclopropylamine inhibitors of oxidases
WO2012072713A2 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Oryzon Genomics, S.A. Lysine demethylase inhibitors for diseases and disorders associated with flaviviridae
EP2712315B1 (en) 2011-02-08 2021-11-24 Oryzon Genomics, S.A. Lysine demethylase inhibitors for myeloproliferative disorders
WO2012107499A1 (en) * 2011-02-08 2012-08-16 Oryzon Genomics S.A. Lysine demethylase inhibitors for myeloproliferative or lymphoproliferative diseases or disorders
EP2489663A1 (en) 2011-02-16 2012-08-22 Almirall, S.A. Compounds as syk kinase inhibitors
RU2697712C2 (ru) 2011-04-22 2019-08-19 СИГНАЛ ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ЭлЭлСи Замещенные диаминокарбоксамидные и диаминокарбонитрильные производные пиримидинов, их композиции и способы лечения с их помощью
AU2012253886A1 (en) 2011-05-10 2013-10-31 Merck Sharp & Dohme Corp. Pyridyl aminopyridines as Syk inhibitors
KR20140028062A (ko) 2011-05-10 2014-03-07 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 Syk 억제제로서의 아미노피리미딘
EP2706852B1 (en) 2011-05-10 2018-08-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Bipyridylaminopyridines as syk inhibitors
EP2750671A2 (en) * 2011-05-19 2014-07-09 Oryzon Genomics, S.A. Lysine demethylase inhibitors for thrombosis and cardiovascular diseases
WO2012156531A2 (en) * 2011-05-19 2012-11-22 Oryzon Genomics, S.A. Lysine demethylase inhibitors for inflammatory diseases or conditions
KR101255939B1 (ko) * 2011-05-31 2013-04-23 동화약품주식회사 4-(1ｈ-인다졸-6-일아미노)-ｎ-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물
JP6026525B2 (ja) 2011-06-22 2016-11-16 武田薬品工業株式会社 置換６−アザ−イソインドリン−１−オン誘導体
WO2013054351A1 (en) * 2011-08-08 2013-04-18 Cadila Healthcare Limited Heterocyclic compounds
WO2013052394A1 (en) 2011-10-05 2013-04-11 Merck Sharp & Dohme Corp. 2-pyridyl carboxamide-containing spleen tyrosine kinase (syk) inhibitors
US8987456B2 (en) 2011-10-05 2015-03-24 Merck Sharp & Dohme Corp. 3-pyridyl carboxamide-containing spleen tyrosine kinase (SYK) inhibitors
WO2013052391A1 (en) 2011-10-05 2013-04-11 Merck Sharp & Dohme Corp. PHENYL CARBOXAMIDE-CONTAINING SPLEEN TYROSINE KINASE (Syk) INHIBITORS
BR112014009238B1 (pt) 2011-10-20 2022-08-09 Oryzon Genomics S.A. Compostos de (hetero)aril ciclopropilamina, seus usos e composições farmacêuticas
JP6215212B2 (ja) 2011-10-20 2017-10-18 オリゾン・ジェノミックス・ソシエダッド・アノニマＯｒｙｚｏｎ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｓ．Ａ． Ｌｓｄ１阻害剤としての（ヘテロ）アリールシクロプロピルアミン化合物
EP2782580A4 (en) * 2011-11-23 2015-10-07 Portola Pharm Inc SELECTIVE INHIBITORS OF KINASES
EP2782579B1 (en) * 2011-11-23 2019-01-02 Portola Pharmaceuticals, Inc. Pyrazine kinase inhibitors
JP2015500862A (ja) 2011-12-23 2015-01-08 セルゾーム リミティッド キナーゼ阻害剤としてのピリミジン−２，４−ジアミン誘導体
ES2661444T3 (es) 2011-12-28 2018-04-02 Fujifilm Corporation Nuevo derivado de nicotinamida o sal del mismo
KR20140108594A (ko) * 2012-01-10 2014-09-11 에프. 호프만-라 로슈 아게 피리다진 아미드 화합물 및 syk 저해제로서의 이의 용도
RS55704B1 (sr) * 2012-01-17 2017-07-31 Astellas Pharma Inc Jedinjenje pirazin karboksamida
MX358311B (es) * 2012-04-17 2018-08-14 Fujifilm Corp Compuesto heterociclico que contiene nitrogeno o sal del mismo.
CN102731412A (zh) * 2012-06-13 2012-10-17 盛世泰科生物医药技术(苏州)有限公司 一种2,4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法
EP2863913B1 (en) 2012-06-20 2018-09-12 Merck Sharp & Dohme Corp. Imidazolyl analogs as syk inhibitors
CN102731375A (zh) * 2012-06-20 2012-10-17 盛世泰科生物医药技术(苏州)有限公司 4,6-二氯-5-嘧啶甲醛的合成
EP2863914B1 (en) 2012-06-20 2018-10-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Pyrazolyl derivatives as syk inhibitors
US9416111B2 (en) 2012-06-22 2016-08-16 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted diazine and triazine spleen tyrosine kinease (Syk) inhibitors
EP2863916B1 (en) 2012-06-22 2018-07-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted pyridine spleen tyrosine kinase (syk) inhibitors
KR101446742B1 (ko) * 2012-08-10 2014-10-01 한국화학연구원 Ｎ2,ｎ4-비스(4-(피페라진-1-일)페닐)피리미딘-2,4-디아민 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2014031438A2 (en) 2012-08-20 2014-02-27 Merck Sharp & Dohme Corp. SUBSTITUTED PHENYL SPLEEN TYROSINE KINASE (Syk) INHIBITORS
WO2014044025A1 (zh) * 2012-09-20 2014-03-27 山东亨利医药科技有限责任公司 嘧啶胺衍生物及其制备方法和应用
US9586931B2 (en) 2012-09-28 2017-03-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Triazolyl derivatives as Syk inhibitors
BR112015007217A2 (pt) * 2012-10-19 2017-08-08 Hoffmann La Roche compostos e usos do composto
CN104903301B (zh) * 2012-11-08 2017-08-29 百时美施贵宝公司 可用于调节IL‑12、IL‑23和/或IFNα的烷基酰胺取代的嘧啶化合物
EP2931281B1 (en) 2012-12-12 2018-01-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Amino-pyrimidine-containing spleen tyrosine kinase inhibitors
WO2014100314A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Thiazole-substituted aminopyridines as spleen tyrosine kinase inhibitors
US9499534B2 (en) 2013-04-26 2016-11-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Thiazole-substituted aminopyrimidines as spleen tyrosine kinase inhibitors
US9745295B2 (en) 2013-04-26 2017-08-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Thiazole-substituted aminoheteroaryls as spleen tyrosine kinase inhibitors
US9556148B2 (en) 2013-08-07 2017-01-31 Cadila Healthcare Limited N-cyanomethylamides as inhibitors of janus kinase
DK3060550T3 (da) * 2013-10-21 2019-07-22 Merck Patent Gmbh Heteroarylforbindelser som btk-inhibitorer og anvendelser deraf
MX2016007111A (es) 2013-12-05 2016-08-11 Pharmacyclics Llc Inhibidores de tirosina quinasa de bruton.
EP3082807B1 (en) 2013-12-20 2018-07-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Thiazole-substituted aminoheteroaryls as spleen tyrosine kinase inhibitors
EP3083559B1 (en) 2013-12-20 2021-03-10 Merck Sharp & Dohme Corp. Thiazole-substituted aminoheteroaryls as spleen tyrosine kinase inhibitors
EP3083560B1 (en) 2013-12-20 2021-10-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Thiazole-substituted aminoheteroaryls as spleen tyrosine kinase inhibitors
NZ715903A (en) 2014-01-30 2017-06-30 Signal Pharm Llc Solid forms of 2-(tert-butylamino)-4-((1r,3r,4r)-3-hydroxy-4-methylcyclohexylamino)-pyrimidine-5-carboxamide, compositions thereof and methods of their use
US9775839B2 (en) 2014-03-13 2017-10-03 Merck Sharp & Dohme Corp. 2-pyrazine carboxamides as spleen tyrosine kinase inhibitors
JP6517318B2 (ja) * 2014-03-28 2019-05-22 キャリター・サイエンシーズ・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーＣａｌｉｔｏｒ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｌｌｃ 置換されたヘテロアリール化合物および使用方法
JP6684780B2 (ja) 2014-08-25 2020-04-22 ソーク インスティテュート フォー バイオロジカル スタディーズ 新規ｕｌｋ１阻害剤およびそれを使用する方法
WO2016060963A1 (en) * 2014-10-14 2016-04-21 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. Substituted heteroaryl compounds and methods of use
ES2877642T3 (es) 2014-12-16 2021-11-17 Signal Pharm Llc Formulaciones de 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroxi-4-metilciclohexilamino)-pirimidin-5-carboxamida
WO2016100308A1 (en) * 2014-12-16 2016-06-23 Signal Pharmaceuticals, Llc Methods for measurement of inhibition of c-jun n-terminal kinase in skin
CA2975260A1 (en) 2015-01-29 2016-08-04 Signal Pharmaceuticals Llc Isotopologues of 2-(tert-butylamino)-4-((1r,3r,4r)-3-hydroxy-4-methylcyclohexylamino)-pyrimidine-5-carboxamide
WO2016196385A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Portola Pharmaceuticals, Inc. Cerdulatinib for the treatment of b-cell malignancies
MX2018001004A (es) 2015-07-24 2018-06-07 Celgene Corp Metodos de sintesis de clorhidrato de (1r,2r,5r)-5-amino-2-metilci clohexanol e intermedios utiles en este.
CN108348779A (zh) * 2015-08-02 2018-07-31 H·李·莫菲特癌症中心研究有限公司 Ack1/tnk2酪氨酸激酶的抑制剂
AR106830A1 (es) * 2015-12-04 2018-02-21 Asana Biosciences Llc Usos de piridazinonas para tratar el cáncer
WO2017096303A2 (en) 2015-12-04 2017-06-08 Portola Pharmaceuticals, Inc. Cerdulatinib for treating hematological cancers
KR101936054B1 (ko) 2017-06-23 2019-01-11 한국과학기술연구원 항염증 활성을 가지는 6-페녹시피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 활성성분으로 하는 약학 조성물
KR20200041954A (ko) * 2017-08-18 2020-04-22 북경한미약품 유한공사 화합물, 이의 약제학적 조성물, 및 이의 용도 및 응용
CA3076276C (en) 2017-09-21 2022-10-25 Beijing Scitech-Mq Pharmaceuticals Limited 2-substituted pyrazole amino-4-substituted amino-5-pyrimidine formamide compound, composition, and application thereof
JP2020537678A (ja) 2017-10-19 2020-12-24 バイエル・アニマル・ヘルス・ゲーエムベーハー 動物における疾患の治療および予防のための縮合ヘテロ芳香族ピロリドンの使用
US11166959B2 (en) 2017-11-06 2021-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Isofuranone compounds useful as HPK1 inhibitors
WO2019099311A1 (en) * 2017-11-19 2019-05-23 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. Substituted heteroaryl compounds and methods of use
CN108299312B (zh) * 2018-03-29 2020-10-30 郑州大学第一附属医院 一组嘧啶类衍生物及其在制备抗肿瘤药物中的应用
JP7343526B2 (ja) * 2018-05-04 2023-09-12 ポートラ ファーマシューティカルズ， エルエルシー セルデュラチニブの合成
EP3788035A2 (en) 2018-05-04 2021-03-10 Portola Pharmaceuticals, Inc. Solid forms of cerdulatinib
WO2020187292A1 (zh) * 2019-03-19 2020-09-24 北京赛特明强医药科技有限公司 2-取代吡唑氨基-4-取代氨基-5-嘧啶甲酰胺类化合物、组合物及其应用
AU2020242287A1 (en) 2019-03-21 2021-09-02 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) A Dbait molecule in combination with kinase inhibitor for the treatment of cancer
WO2021089791A1 (en) 2019-11-08 2021-05-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of cancers that have acquired resistance to kinase inhibitors
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
WO2022078305A1 (zh) * 2020-10-12 2022-04-21 四川海思科制药有限公司 一种杂环衍生物及其在医药上的应用
CA3224094A1 (en) * 2021-03-09 2022-09-15 Cspc Zhongqi Pharmaceutical Technology (Shijiazhuang) Co., Ltd Use of tricyclic heteroaryl-containing compound
WO2023108536A1 (en) * 2021-12-16 2023-06-22 Lynk Pharmaceuticals Co. Ltd. Tyk2 inhibitors and compositions and methods thereof
CN114621206B (zh) * 2022-03-24 2023-11-24 安徽医科大学 一种5-取代的嘧啶二胺类衍生物及其制备方法与应用
CN115304550A (zh) * 2022-07-25 2022-11-08 南通大学 哌嗪苯基氨基取代的嘧啶氨基酸衍生物及制备方法与应用
CN115141150B (zh) * 2022-07-25 2024-04-26 南通大学 2,4,5-三取代嘧啶羟胺酰衍生物及其制备方法与应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040029902A1 (en) * 2002-02-01 2004-02-12 Rajinder Singh 2,4-Pyrimidinediamine compounds and their uses
EP1518855A1 (en) * 2002-06-28 2005-03-30 Yamanouchi Pharmaceutical Co. Ltd. Diaminopyrimidinecarboxa mide derivative
WO2008009458A1 (en) * 2006-07-21 2008-01-24 Novartis Ag 2, 4 -di (arylaminio) -pyrimidine-5-carboxamide compounds as jak kinases inhibitors

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2308821T3 (es) * 1997-12-15 2008-12-01 Astellas Pharma Inc. Nuevos derivados de pirimidin-5-carboxamida.
TW201040162A (en) * 2009-05-06 2010-11-16 Portola Pharm Inc Inhibitors of JAK

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040029902A1 (en) * 2002-02-01 2004-02-12 Rajinder Singh 2,4-Pyrimidinediamine compounds and their uses
EP1518855A1 (en) * 2002-06-28 2005-03-30 Yamanouchi Pharmaceutical Co. Ltd. Diaminopyrimidinecarboxa mide derivative
WO2008009458A1 (en) * 2006-07-21 2008-01-24 Novartis Ag 2, 4 -di (arylaminio) -pyrimidine-5-carboxamide compounds as jak kinases inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
HN2010002119A (es) 2013-06-17
CN102066340B (zh) 2014-05-14
DOP2010000310A (es) 2011-03-15
JP5705720B2 (ja) 2015-04-22
KR20100126863A (ko) 2010-12-02
SV2010003706A (es) 2011-03-23
MA32280B1 (fr) 2011-05-02
HRP20161310T1 (hr) 2016-12-02
JP2011518158A (ja) 2011-06-23
CA2723205C (en) 2017-03-14
MY155639A (en) 2015-11-13
EA201001619A1 (ru) 2011-06-30
CA2723205A1 (en) 2009-12-03
CN102066340A (zh) 2011-05-18
KR101623997B1 (ko) 2016-05-24
EP2321283A1 (en) 2011-05-18
CA2960692A1 (en) 2009-12-03
WO2009145856A1 (en) 2009-12-03
CA2960692C (en) 2019-09-24
EP2321283B1 (en) 2016-07-13
JP2015078194A (ja) 2015-04-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA024109B1 (ru) Ингибиторы протеинкиназ
EA019973B1 (ru) ИНГИБИТОРЫ Syk ПРОТЕИНКИНАЗ
KR101773313B1 (ko) ｓｙｋ 또는 ＪＡＫ 키나제 억제제로서의 ２,６－디아미노-피리미딘－５－일－카르복스아미드
CA2996318C (en) Heteroaryl compounds as irak inhibitors and uses thereof
US7705004B2 (en) Protein kinase inhibitors
EP1513821B1 (en) Protein kinase inhibitors
JP2017536369A (ja) Ｉｒａｋインヒビターとしてのヘテロアリール化合物及びその使用
CN104066431B (zh) 吡嗪激酶抑制剂
WO2014040555A1 (zh) 作为酪氨酸激酶抑制剂的含氮杂芳环衍生物
JP2018531225A6 (ja) Ｉｒａｋ阻害剤としてのヘテロアリール化合物及びその使用
TW201300360A (zh) 做為ｊａｋ激酶調節劑之菸鹼醯胺
JP2012524123A (ja) へテロアリール化合物およびその使用
JP2011518219A (ja) タンパク質キナーゼの阻害剤
TW200813042A (en) Six membered heteroaromatic inhibitors targeting resistant kinase mutations
US9834548B2 (en) Pyridazine compounds as JAK inhibitors
CN104619696A (zh) 布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制剂
CN105073750A (zh) 布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制剂
ES2597441T3 (es) 2,6-diamino-pirimidin-5-il-carboxamidas como inhibidores de las syk o JAK quinasas
CN104837837A (zh) 作为布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制剂的噻唑衍生物

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM