EA018754B1 - Способы и композиции для стимулирования активности противораковых терапий - Google Patents

Способы и композиции для стимулирования активности противораковых терапий Download PDF

Info

Publication number
EA018754B1
EA018754B1 EA200970174A EA200970174A EA018754B1 EA 018754 B1 EA018754 B1 EA 018754B1 EA 200970174 A EA200970174 A EA 200970174A EA 200970174 A EA200970174 A EA 200970174A EA 018754 B1 EA018754 B1 EA 018754B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
cancer
diosgenin
subject
anticancer
cell
Prior art date
Application number
EA200970174A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200970174A1 (ru
Inventor
Майкл Джон Стори
Кеннет Майкл Уэйт
Original Assignee
Онколоджи Рисерч Интернешнл Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AU2006904193A external-priority patent/AU2006904193A0/en
Application filed by Онколоджи Рисерч Интернешнл Лимитед filed Critical Онколоджи Рисерч Интернешнл Лимитед
Publication of EA200970174A1 publication Critical patent/EA200970174A1/ru
Publication of EA018754B1 publication Critical patent/EA018754B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/475—Quinolines; Isoquinolines having an indole ring, e.g. yohimbine, reserpine, strychnine, vinblastine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A61K31/568—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in positions 10 and 13 by a chain having at least one carbon atom, e.g. androstanes, e.g. testosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)

Abstract

Данное изобретение относится к способу ингибирования роста раковой клетки и к способу снижения резистентности, развивающейся в раковой клетке. Изобретение также относится к способу стимулирования активности противораковой терапии и к способу ингибирования и/или роста опухоли. Способы включают воздействие на раковую клетку противораковой терапии и эффективного количества стероидного сапонина. Изобретение также относится к противораковой композиции, содержащей противораковое соединение и стероидный сапонин.

Description

По данной заявке испрашивается приоритет согласно австралийской предварительной патентной заявке № 2006904193, поданной 3 августа 2006 г, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки.
Область техники, к которой относится изобретение
Данное изобретение относится к способам и композициям для ингибирования роста раковых клеток.
Уровень изобретения
Химиотерапия и лучевая терапия продолжают оставаться главными подходами к терапевтическому лечению рака вместе с хирургией, обеспечивающей способы физического удаления рака. Совсем недавно были разработаны биологические средства, такие как антитела, в качестве противораковых терапий.
Применение многих противораковых средств и лучевой терапии было основано на допущении, что гибель клеток, вызываемая лечением данными противораковыми терапиями, будет запускать биологические процессы, которые приводят раковые клетки к тому, что они, в конце концов, разрушаются.
Один из этих процессов представляет собой апоптоз. Апоптоз является сложной клеточной программой самодеструкции, запускаемой множеством стимулирующих действий, что приводит к аутолизу (саморазрушению), когда погибающие клетки сжимаются, конденсируют и затем фрагментируют, высвобождая небольшие мембрано-связанные апоптические образования, которые обычно поглощаются другими клетками, такими как фагоциты.
Обычные химиотерапевтические средства ковалентно связываются с ДНК с образованием аддуктов, тем самым, приводя к поражению ДНК и запуску апоптоза. Традиционные химиотерапевтические средства страдают двумя главными недостатками: (ί) они вызывают тяжелые побочные эффекты, так как они поражают также здоровые пролиферирующие клетки; и (и) повышенная резистентность раковых клеток к средствам. В этом отношении раковые клетки обладают способностью создавать резистентность к химиотерапевтическим средствам в течение долгого времени и, в конце концов, могут развивать резистентность ко многим лекарственным средствам.
Ингибирование апоптоза в опухолях, резистентных к лекарственному средству, не только изменяет вызывающие гибель активности лекарственного средства, но также корректирует возможность клеток, приобретающих дополнительные мутации после поражения ДНК. По существу, данные мутированные клетки могут стать более злокачественными и еще менее чувствительными к последующим терапиям, такими, что лечение высокорезистентных опухолей, содержащих антиапоптические поражения, может приносить больше вреда, чем пользы.
Один из признаков раковых клеток состоит в том, что они избегают апоптоза. Нарушение апоптического пути приводит к важным влияниям на клинический результат химиотерапии. Для того чтобы химиотерапевтические средства были эффективными, клетки должны обладать способностью претерпевать апоптоз. Апоптоз поэтому является жизненно важным явлением в химиотерапии рака, потому что многие противораковые лекарственные средства проявляют свой первоначальный противоопухолевый эффект в отношении клеток рака уменьшением апоптоза.
Однако не только некоторые химиотерапевтические лекарственные средства могут ингибировать апоптоз спустя короткий период времени, но и многие опухоли также имеют дефектные апоптические метаболические пути и сами по себе обладают внутренне присущей большей резистентностью к химиотерапии. Кроме того, хотя скорость апоптоза является не обязательно высокой в опухолевых тканях, индукция апоптоза связана с ответом опухоли и клиническим результатом у раковых пациентов.
Одно из главных затруднений в лечении многих типов рака состоит в развитии или наличии резистентности к химиотерапевтическим средствам, как, например, происходит при немелкоклеточном раке легкого. Например, развитие резистентности к цисплатину является главной причиной неудачи лечения. Несколько механизмов вовлечено в резистентность к цисплатину, по одному из которых меняется экспрессия онкогенов (например, Вс1-2), которые затем подавляют апоптические пути и могут также вносить вклад в развитие резистентности.
Таким образом, существует потребность в средствах, которые можно использовать в сочетании с противораковыми терапиями для усиления их активности против раковых клеток. Данное изобретение относится к применению стероидных сапонинов для стимулирования активности противораковых средств и противораковых терапий.
Ссылка, приводимая в настоящем описании, на патентный документ или другой документ, который дается в качестве предшествующего уровня техники, не должна рассматриваться как признание, что документ или другой предмет/вопрос был известен, или что информация, которую он содержит, была частью обычного общего знания на дату приоритета для любого из пунктов формулы изобретения.
Сущность изобретения
Данное изобретение вытекает из исследований способности стероидных сапонинов ингибировать рост раковых клеток. В частности, было установлено, что стероидные сапонины повышают активность ряда химиотерапевтических и противораковых средств по ингибированию роста раковых клеток.
Не будучи связанной с теорией предполагается, что способность стероидных сапонинов повышать противораковую активность таких средств вероятно будет обусловлена способностью стероидных сапонинов стимулировать апоптоз в раковых клетках при применении с противораковой терапией. Один ме- 1 018754 ханизм способности стероидных сапонинов стимулировать апоптоз может происходить из-за способности стероидных сапонинов выбирать целью или ингибировать молекулы, которые могут иным образом подавлять апоптоз в раковых клетках.
Таким образом, данное изобретение может применяться для стимулирования активности противораковых средств (таких как химиотерапевтические средства) и для стимулирования активности противораковых терапий (таких как лучевая терапия).
Данное изобретение относится к способу ингибирования роста раковой клетки, включающий стадию воздействия на раковую клетку противораковой терапией и эффективного количества стероидного сапонина, где стероидный сапонин выбран из группы, состоящей из делтонина (диосгенин Яйа2, |С1с4|. 61с), диосцина (диосгенин Яйа2, [К.йа4], 61с), просапогенина А (диосгенин К.йа2, 61с) и асперина (диосгенин [К.йа4, К.йа4], Яйа2, 61с), где противораковая терапия представляет воздействие на раковую клетку противораковым средством или лучевой терапией и где противораковое средство выбрано из одного или более средств, выбранных из группы, состоящей из таксола (паклитаксела), доцетаксела, винкристина, доксорубицина, иматиниба и 5-фторурацила.
Указанный способ применяется для ингибирования образования и роста опухоли у субъекта и/или для предупреждения и/или лечения рака у субъекта, где субъект страдает от или восприимчив к раку, выбранному из группы, состоящей из карциномы, рака мочевого пузыря, рака кости, опухолей мозга, рака молочной железы, цервикального рака, колоректального рака, включающего рак толстой кишки, прямой кишки, ануса и аппендикса, рака пищевода, болезни Ходжкина, рака почки, рака гортани, лейкемии, рака печени, рака легкого, лимфомы, меланомы, родимых пятен и диспластических невусов, множественной миеломы, мышечного рака, неходжкинской лимфомы, рака рта, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака простаты, саркомы, рака кожи, рака желудка, тестикулярного рака, тератомы, рака щитовидной железы и рака матки.
Данное изобертение также относится к способу стимулирования активности противораковой терапии у субъекта, снижения количества противораковой терапии, предоставляемой субъекту для предупреждения и/или лечения рака у субъекта, или предупреждения и/или лечения рака у субъекта, имеющего повышенную резистентность к противораковой терапии, включающий воздействие на субъекта эффективного количества стероидного сапонина, где стероидный сапонин выбран из группы, состоящей из делтонина (диосгенин К.йа2, [61с4],61с), диосцина (диосгенин Яйа2, [К.йа4], 61с), просапогенина А (диосгенин К.йа2, 61с) и асперина (диосгенин [К.йа4, К.йа4], Яйа2, 61с), где противораковая терапия представляет собой воздействие на клетку противоракового средства или лучевую терапию и где противораковое средство выбрано из одного или более средств, выбранных из группы, состоящей из таксола (паклитаксела), доцетаксела, винкристина, доксорубицина, иматиниба и 5-фторурацила.
Данный способ также относится к способу ингибирования образования и/или роста опухоли у субъекта или предупреждения и/или лечения рака у субъекта, включающий воздействие на субъекта противораковой терапии и эффективного количества стероидного сапонина, где стероидный сапонин выбран из группы, состоящей из делтонина (диосгенин К.йа2, [61с4],61с), диосцина (диосгенин К.йа2, [К.йа4], 61с), просапогенина А (диосгенин К.йа2, 61с) и асперина (диосгенин [К.йа4, Яйа4], К.йа2, 61с), где противораковая терапия представляет собой воздействие на клетку противоракового средства или лучевую терапию и противораковое средство выбрано из одного или более средств, выбранных из группы, состоящей из таксола (паклитаксела), доцетаксела, винкристина, доксорубицина, иматиниба и 5фторурацила.
Данные способы пригодны при терапии рака, выбранного из группы состоящей из карциномы, рака мочевого пузыря, рака кости, опухоли мозга, рака молочной железы, цервикального рака, колоректального рака, включая рак толстой кишки, прямой кишки, ануса и аппендикса, рака пищевода, болезни Ходжкина, рака почки, рака гортани, лейкемии, рака печени, рака легкого, лимфомы, меланомы, родимых пятен и диспластических невусов, множественной миеломы, мышечного рака, неходжкинской лимфомы, рака рта, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака простаты, саркомы, рака кожи, рака желудка, тестикулярного рака, тератомы, рака щитовидной железы и рака матки.
Данное изобретение относится к противораковой композиции, содержащей противораковое средство и стероидный сапонин, где стероидный сапонин выбран из группы, состоящей из делтонина (диосгенин К.йа2, [61с4],61с), диосцина (диосгенин К.йа2, [Яйа4], 61с), просапогенина А (диосгенин К.йа2, 61с) и асперина (диосгенин [Яйа4, Яйа4], Яйа2, 61с), и противораковое средство выбрано из одного или более средств, выбранных из группы, состоящей из таксола (паклитаксела), доцетаксела, винкристина, доксорубицина, иматиниба и 5-фторурацила.
Данное изобретение также относится к способу снижения резистентности, развивающейся в раковой клетке, к противораковой терапии или стимулирования апоптоза раковой клетки вследствие воздействия на раковую клетку противораковой терапии, включающий воздействие на раковую клетку эффективного количества стероидного сапонина, где стероидный сапонин выбран из группы, состоящей из делтонина (диосгенин К.йа2, [61с4],61с), диосцина (диосгенин Яйа2, [К.йа4], 61с), просапогенина А (диосгенин К.йа2, 61с) и асперина (диосгенин [К.йа4, К.йа4], К.йа2, 61с), где противораковая терапия представляет собой воздействие на клетку противоракового средства или лучевую терапию и противораковое
- 2 018754 средство выбрано из одного или более средств, выбранных из группы, состоящей из таксола (паклитаксела), доцетаксела, винкристина, доксорубицина, иматиниба и 5-фторурацила.
Различные термины, которые будут использованы в рамках описания, имеют значения, которые хорошо понятны специалисту в данной области. Однако для облегчения ссылки некоторые из данных терминов будут определены ниже.
Термин гликозид означает соединение, которое содержит фрагмент сахарида (сахара) (моносахарид, дисахарид или полисахарид), присоединенный к тритерпену, или стероиду, или стероидному алкалоидному агликоновому (несахаридному) фрагменту. В большинстве случаев фрагмент сахарида (сахара) присоединен к положению С-3 агликона, хотя другие типы присоединения входят в объем данного изобретения. Например, гликозиды фуростанола, которые содержат сахарид, присоединенный к положению С-26, и гликозиды спиростанола представляют собой, и те, и другие, подклассы стероидных сапонинов.
Термин сапонин означает гликозид, включающий сахарид (сахар), присоединенный к агликону, обычно через положение С-3 агликона.
Термин стероидный сапонин означает гликозид, включающий один или несколько сахаридных фрагментов (моносахаридных, дисахаридных или полисахаридных), присоединенных к агликону, который не содержит атом азота.
В этом отношении должно быть понятно, что термин стероидный сапонин включает любые соли или любые другие производные соединений, которые функционально являются эквивалентом по их способности усиливать активность противораковой терапии.
Стероидный агликон также называемый генином или сапогенином и термины могут применяться в описании взаимозаменяемо, и все они должны восприниматься как средства для обозначения несахаридной части молекулы сапонина.
Термин сахарид А-(1^п)-сахарид В означает, что сахарид А присоединен посредством его С-1 к С-п сахарида В, причем п является целым числом.
Например, полисахарид с общепринятым названием хакотриоза представляет собой α-Ьрамнопиранозил-(1^2)-[а-Ь-рамнопиранозил-(1^4)]-в-О-глюкопиранозид. Сокращенный вид номенклатуры в соответствии с рекомендациями ГОРАС, использованными в настоящем описании, представляет собой Ρ1ι;·ι2. [Вйа4], С1с.
Термин противораковая терапия должен пониматься как противораковый агент, такой как химиотерапевтический агент (например, цисплатин), или биологический агент (например, антитело), или противораковая терапия, такая как лучевая терапия.
Термин субъект означает человека или животного. В этом отношении должно быть понятно, что данное изобретение охватывает ветеринарные применения. Например, животное может быть млекопитающим, приматом, представителем домашнего скота (например, лошадью, коровой, овцой, свиньей или козой), домашним животным (например, собакой, кошкой), лабораторным опытным животным (например, мышью, крысой, морской свинкой, птицей), животным ветеринарного значения или животным экономического значения.
Термин лечить и его варианты означает терапевтическое вмешательство эффективным количеством стероидного сапонина. Например, данный термин включает терапевтическое вмешательство для того, чтобы иметь один или несколько следующих результатов: (ί) ингибировать или предотвращать рост начальной опухоли у субъекта, включая снижение роста первоначальной опухоли после резекции; (й) ингибировать или предотвращать рост и образование одной или нескольких вторичных опухолей у субъекта; (ш) повышать продолжительность жизни субъекта по сравнению с нелеченым состоянием; и (ίν) повышать качество жизни субъекта по сравнению с нелеченым состоянием.
Термин ингибировать означает снижение прогресса процесса, включающего один или несколько следующих показателей: начало, скорость, вероятность, продолжительность или окончание процесса.
Термин раковая клетка означает клетку, которая иммортализирована и рост которой контактно не ингибируется другими клетками. Раковая клетка может также больше не показывать зависимость от экзогенных факторов роста и/или роста на якорной подложке.
Термин биологическая система означает многоклеточную систему и включает от изолированных групп клеток до целых организмов. Например, биологическая система может представлять собой клетки культуры ткани, ткань или орган или человека в целом, страдающего от нежелательного или неконтролируемого роста раковых клеток.
Краткое описание фигур
На фиг. 1 показано действие дельтонина на объем опухоли в комбинации с 5-фторурацилом на
НТ29 клетке карциномы простаты человека, подкожно введенной мышам.
Подробное описание изобретения
Как указано выше, в одном из вариантов осуществления данного изобретения предлагается способ ингибирования роста раковой клетки, включающий воздействие на раковую клетку противораковой терапии и эффективного количества стероидного сапонина.
Данное изобретение основано на открытии того, что стероидные сапонины обладают способностью
- 3 018754 стимулировать активность противораковых терапий. Таким образом, стероидные сапонины могут быть применены в комбинации с противораковой терапией для ингибирования роста раковой клетки.
Раковая клетка в различных вариантах осуществления данного изобретения может представлять собой клетку человека или животного.
Раковая клетка может быть представлена раковой клеткой ίη νίνο или ίη νίΐτο. Например, раковая клетка может быть представлена раковой клеткой в культуре клеток ίη νίΐτο.
В случае клетки ίη νίΐτο раковая клетка может представлять собой первичную клетку, такую как раковая клетка, выделенная или полученная из опухоли у субъекта. Альтернативно, раковая клетка может представлять собой клетку, полученную из раковой клеточной линии. Примеры раковых клеточных линий включают меланому человека, аденокарциному толстой кишки (ΑίΌτ), карциному молочной железы (МСЕ7), Т-лимфоцитную лимфому мыши (ΑΕΗΙ-7), фибросаркому мыши (АЕН1-164/1С), §КМе128 (меланома), НТ29 (толстая кишка), С180-138 (яичниковая), А549 (легочная), Όυΐ45 (простата - гормонально независимая), РС3 (простата - гормонально независимая), ЕЫСар (простата - гормонально зависимая), К562 (эритролейкоз человека) и ММ96Ь (меланома).
Раковая клетка в различных формах данного изобретения также может представлять собой клетку, присутствующую в биологической системе, такую как раковая клетка, присутствующая ίη νίνο, включая раковую клетку, которая связана с начальной опухолью и/или одной или несколькими вторичными опухолями у субъекта.
С этой точки зрения термин биологическая система означает любую многоклеточную систему и включает изолированные группы клеток до целых организмов. Например, биологическая система может представлять собой ткань или орган или человека в целом, включая субъекта с раком.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данное изобретение относится к способу ингибирования роста раковой клетки в биологической системе, включающий воздействие на раковую клетку противораковой терапии и эффективного количества стероидного сапонина.
В случае присутствия раковой клетки у субъекта раковая клетка может быть связана, например, с одним или несколькими следующими видами рака: карцинома, рак мочевого пузыря, рак кости, опухоли мозга, рак молочной железы, цервикальный рак, колоректальный рак, включая рак толстой кишки, прямой кишки, ануса и аппендикса, рак пищевода, болезнь Ходжкина, рак почки, рак гортани, лейкемия, рак печени, рак легкого, лимфома, меланома, родимые пятна и диспластические невусы, множественная миелома, мышечный рак, неходжкинская лимфома, рак рта, рак яичника, рак поджелудочной железы, рак простаты, саркома, рак кожи, рак желудка, тестикулярный рак, тератома, рак щитовидной железы и рак матки.
В одном варианте осуществления противораковая терапия представляет собой воздействие на раковую клетку противоракового средства, такого как химиотерапевтическое средство или биологическое средство.
В другом варианте осуществления противораковая терапия представляет собой воздействие на раковую клетку противораковой терапии, такой как лучевая терапия.
Данное изобретение также относится к применению стероидного сапонина и противоракового средства для изготовления лекарственного средства для ингибирования роста раковой клетки у субъекта.
Как обсуждено выше, данное изобретение может применяться для стимулирования активности противораковой терапии у субъекта воздействием на субъекта стероидного сапонина.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данного изобретения предлагается способ стимулирования активности противораковой терапии у субъекта, включающий воздействие на субъекта эффективного количества стероидного сапонина.
Стероидный сапонин может быть также использован для изготовления лекарственного средства для стимулирования активности противоракового средства.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данного изобретения предлагается применение стероидного сапонина для изготовления лекарственного средства для стимулирования активности противоракового средства у субъекта.
Данное изобретение может быть также использовано для ингибирования образования и/или роста опухоли у субъекта.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данного изобретения предлагается способ ингибирования образования и/или роста опухоли у субъекта, включающий воздействие на субъекта противораковой терапии и эффективного количества стероидного сапонина.
Стероидный сапонин и противораковое средство могут быть также использованы для изготовления лекарственного средства для ингибирования образования и/или роста опухоли у субъекта.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данного изобретения предлагается применение стероидного сапонина и противоракового средства для изготовления лекарственного средства для ингибирования роста и/или образования опухоли у субъекта.
Опухоль в различных вариантах осуществления данного изобретения может быть первичной опухолью или вторичной опухолью. Таким образом, данное изобретение может быть также использовано для ингибирования образования и роста первичной опухоли и/или использовано для ингибирования об- 4 018754 разования и/или роста метастазов у субъекта.
Методы оценки образования и/или роста опухолей известны в данной области.
Данное изобретение может быть также использовано для предупреждения и/или лечения рака у субъекта.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данного изобретения предлагается способ предупреждения и/или лечения рака у субъекта, включающий воздействие на субъекта противораковой терапии и эффективного количества стероидного сапонина.
Стероидный сапонин и противораковое средство могут быть также использованы для изготовления лекарственного средства для предупреждения и/или лечения рака у субъекта.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данного изобретения предлагается применение стероидного сапонина и противоракового средства для изготовления лекарственного средства для предупреждения и/или лечения рака у субъекта.
Субъектом в различных вариантах осуществления данного изобретения может быть человек или животное.
Например, животное может быть млекопитающим, приматом, представителем домашнего скота (например, лошадью, коровой, овцой, свиньей или козой), домашним животным (например, собакой, кошкой), лабораторным опытным животным (например, мышью, крысой, морской свинкой, птицей), животным ветеринарного значения или животным экономического значения.
В одном варианте осуществления субъектом является человек.
Ингибирование роста раковой клетки в различных вариантах осуществления данного изобретения представляет собой любую форму ингибирования пролиферации клетки. Например, ингибирование пролиферации может включать ингибирование способности клетки начинать пролиферацию, продолжать пролиферацию; или уменьшение возможности того, что определенная клетка начнет или продолжит пролиферацию.
Ингибирование роста раковой клетки в различных вариантах осуществления данного изобретения может быть оценено методом, известным в данной области.
Например, для раковой клетки ίη νίίτο рост раковой клетки может быть определен подходящим методом оценки пролиферации или методом оценки степени включения тритированного тимидина в клеточную ДНК в продолжение данного периода времени.
Для раковой клетки, представленной ίη νίνο, рост раковой клетки может быть определен, например, подходящим методом изображений, известным в данной области.
Как обсуждено в настоящем описании выше, противораковая терапия может представлять собой воздействие противоракового средства и/или воздействие противораковой терапии.
В одном варианте осуществления противораковое средство представляет собой средство, которое стимулирует апоптоз в клетке при воздействии средства на клетку. Методы определения способности средства стимулировать апоптоз известны в данной области.
В одном конкретном варианте осуществления противораковое средство ингибирует активность ингибитора апоптоза в раковой клетке, такого как одного или нескольких из сурвивина, ΧΙΑΡ, Вс1-2 или Вс1-ХЬ.
В другом варианте осуществления противораковое средство представляет собой химиотерапевтическое средство, такое как алкилирующий агент, включающий ВСЫИ (кармустин), бисульфан, ССЫИ (ломустин), хлорамбуцил, цисплатин, оксиплатин, мелфан, митомицин С и тио-тепа; антимитотические средства, включающие таксол (паклитаксел), доцетаксел, винбластина сульфат и винкристина сульфат; ингибиторы топоизомеразы, включающие доксорубицин, даунорубицин, т-АМ8А (амсакрин), митоксантрон и УР-16 (этопозид); антиметаболиты РНК/ДНК, включающие 5-фторурацил и метотрексат; антиметаболиты ДНК, включающие Ага-С (цитарабин), гидроксимочевину (гидроксикарбамид) и тиогуанин.
В другом варианте осуществления противораковое средство представляет собой таргетное средство для клеточного процесса, такое как иматиниба мезилат, трастузумаб и гефитиниб.
Подробности путей введения, дозы и схемы лечения с использованием противораковых средств известны в данной области, например описаны в издании Сапсег Сйшса1 Рйагшасо1о§у (2005) еб. Ву 1ап Н.М. 8сйе11еп5, Ηο\ν;πά Ь. МсЬеоб апб Эау|б В. Ые^еИ, Θχίοτά Иптуегайу Рте55.
Сапонины условно подразделяют на три главных класса: (ί) тритерпеновые гликозиды; (ίί) стероидные гликозиды и (ш) стероидные алкалоидные гликозиды. Все они имеют свойственное им присоединение одного или нескольких фрагментов сахара к агликону, обычно в положении С-3. Стероидные сапонины в общем описаны в издании Нο5ΐеΐΐтаηη К. апб МагеЮп А. (2005). СйетМгу апб рйа^тасο1ο§у οί па1ига1 ргобисК 8арοη^η5. СатЬпбде Ипщегайу Рге55.
Как обсуждено в настоящем описании выше, стероидные сапонины не содержат атом азота во фрагменте агликона.
Следует принять во внимание, что стероидные сапонины в различных вариантах осуществления данного изобретения включают стероидные сапонины природного происхождения и стероидные сапонины неприродного происхождения (т.е. химически синтезированные стероидные сапонины). Кроме того,
- 5 018754 также следует принять во внимание, что стероидный сапонин в различных вариантах осуществления данного изобретения также включает пролекарства стероидного сапонина, производные стероидных сапонинов, включающие, например, любые сложные эфиры, кетоны, карбоновые кислоты, соли, замещенные формы, галогенированные формы или другие формы, содержащие гетероатомы, ненасыщенные формы или любое другое нефункциональное производное.
Сахаридная часть стероидных сапонинов в различных вариантах осуществления данного изобретения может включать один или несколько сахаридных фрагментов, таких как моносахаридный, дисахаридный или полисахаридный.
Также следует принять во внимание, что стероидный сапонин различных вариантов осуществления данного изобретения может также включать агликон с сахаридом, присоединенным в одном или нескольких положениях фрагмента агликона.
В одном варианте осуществления стероидный сапонин включает сахарид, присоединенный к одному положению сапогенинового компонента стероидного сапонина.
Как обсуждено выше, сахаридный фрагмент может быть моносахаридом, дисахаридом или полисахаридом. Сахарид может быть составлен из подходящего моносахарида, такого как Ό-глюкоза (О1с). Ьрамноза (Вйа), Ό-галактоза (Са1), Ό-глюкуроновая кислота (С1сЛ), Ό-ксилоза (Ху1), Ь-арабиноза (Ага), Όфукоза (Вис), Ό-галактуроновая кислота (Са1А). Сахаридный фрагмент также может быть замещенным сахаром, таким как аминосахар, сульфированный сахар, ацилированный сахар, Ν-ацилированный сахар и функциональные производные любых из перечисленных выше моносахаридов.
Аналогично, дисахарид может представлять собой любую комбинацию двух моносахаридов, описанных выше.
Полисахариды в различных вариантах осуществления данного изобретения могут быть линейными или разветвленными и содержат любую комбинацию двух или нескольких моносахаридов, включающих моносахарид, описанный в данном описании выше.
В одном варианте осуществления полисахарид составлен из 1-6 моносахаридных фрагментов.
В соответствии с этим и как представлено в настоящем описании выше, полисахариды обычно описаны в контексте расположения составляющих моносахаридов.
В одном варианте осуществления сахарид стероидного сапонина составлен из 1 моносахаридного фрагмента. Примером моносахарида является глюкоза с химическим названием β-0-глюкопиранозид, который при присоединении к агликондиосгенину через положение С-3 имеет общепринятое название триллин.
В другом варианте осуществления сахарид стероидного сапонина составлен из 2 моносахаридных фрагментов (т.е. дисахарид). Примером дисахарида является К.йа2, С1с с химическим названием α-Ьрамнопиранозил(1^2)-в-О-глюкопиранозид, который при присоединении к агликондиосгенину через положение С-3 имеет общепринятое название просапогенин А.
В другом варианте осуществления сахарид стероидного сапонина составлен из 3 сахаридных фрагментов (т.е. трисахарид). Хакотриозид является типичным примером трисахаридного фрагмента, где гликозильная группа из трех сахаридов содержит два фрагмента рамнозы, присоединенных к фрагменту глюкозы, который, в свою очередь, присоединен через гликозидный мостик к положению С-3 сапогенина. Хакотриоза представляет собой а-Ь-рамнопиранозил(1^2)-[а-Ь-рамнопиранозил(1^4)]-в-Оглюкопиранозид, сокращенный вид которого по номенклатуре в соответствии с рекомендациями ШРАС, использованными в настоящем описании, выглядит как Кйа2, [К.йа4], С1с.
Аналогично солатриозид представляет собой гликозильную группу из трех сахаридов, содержащих один фрагмент рамнозы и нерамнозный фрагмент сахарида, каждый с присоединением к третьему фрагменту сахарида, который, в свою очередь, присоединяется с помощью гликозидного мостика к положению С-3 сапогенина.
Пример тетрасахарида представляет собой [Вйа4, Вйа4], Вйа2, 61с с химическим названием [α-Ьрамнопиранозил( 1 ^4)-а-Ь-рамнопиранозил( 1 ^4)] -а-Ь-рамнопиранозил( 1 ^4)-в-О-глюкопиранозид, который при присоединении к агликондиосгенину через положение С-3 имеет общепринятое название асперин.
Другой пример тетрасахарида представляет собой 61с 4, [Ху1 3], Кйа2, Ага, с химическим названием 3-О-глюкопиранозил( 1 ^4)-[3-О-ксилопиранозил( 1 ^3)] -а-Ь-рамнопиранозил( 1 ^2)-а-Ь-арабинозид.
Как обсуждено в настоящем описании выше, стероидные сапонины не содержат атом азота во фрагменте агликона.
В соответствии с этим следует принять во внимание, что стероидный сапонин в различных вариантах осуществления данного изобретения не будет содержать азотную группу во фрагменте сапогенина, а именно, не содержит азот в Е и/или В кольцах сапогенина.
В одном варианте осуществления стероидный сапонин в различных вариантах осуществления данного изобретения основан на сапогенине химической формулы I или II, указанной ниже
- 6 018754
где Κι, К2, К4, Кб, К7, Кп, К!2, К!4, К!5 и К!7 независимо представляют собой Н, ОН, =0, фармакологически приемлемые сложноэфирные группы или фармакологически приемлемые группы простого эфира;
К5 представляет собой Н, когда между С-5 и С-6 есть простая связь, и отсутствует, когда между С-5 и С-6 есть двойная связь;
А представляет собой либо О одновременно с В, являющейся группой СН2, либо В представляет собой О одновременно с А, являющейся группой СН2;
К27А представляет собой Н одновременно с К27В, являющейся группой СН3, или К27А представляет собой группу СН3 одновременно с К27В, являющейся Н;
К3 содержит гликозильную группу, присоединенную через атом кислорода к стероидному сапогенину в С-3; или ее фармацевтически приемлемую соль, или ее производное.
где Κι, К2, К4, К6, К7, Кп, К!2, К!4, К!5 и К!7 независимо представляют собой Н, ОН, =0, фармакологически приемлемые сложноэфирные группы или фармакологически приемлемые группы простого эфира;
К5 представляет собой Н, когда между С-5 и С-6 есть простая связь, и отсутствует, когда между С-5 и С-6 есть двойная связь;
К22 представляет собой либо гидроксильную, либо алкоксильную группу, когда между С-20 и С-22 есть простая связь, или отсутствует, когда между С-20 и С-22 есть двойная связь;
К27А представляет собой Н одновременно с К27В, являющейся группой СН3, или К27А представляет собой группу СН3 одновременно с К27В, являющейся Н;
К28 представляет собой Н или сахарид; или его фармацевтически приемлемую соль или его производное;
К3 включает гликозильную группу, присоединенную через атом кислорода к стероидному сапогенину в С-3; или ее фармацевтически приемлемую соль или ее производное.
Примеры стероидных сапогенинов включают спиростанол агликоны, такие как диосгенин, ямогенин (неодиосгенин), юккагенин, сарсасапогенин, тигогенин, смилагенин, гекогенин, гитогенин, конвалламарогенин, неорускогенин и солагенин; и фуростанолагликоны, такие как протодиосгенин, псевдопротодиосгенин, метилпротодиосгенин, протоямогенин и метилпротоямогенин.
В одном варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой хакотриозидстероидный сапонин или солатриозид-стероидный сапонин.
Примеры хакотриозид-стероидных сапонинов включают диосцин, который состоит из сапогенин диосгенина, присоединенного через положение С-3 к хакотриозе, диосгенина, присоединенного через положение С-3 к другому хакотриозиду, тигогенина, присоединенного через положение С-3 к хакотриозиду, сарсасапогенина, присоединенного через положение С-3 к хакотриозиду, смилагенина, присоединенного через положение С-3 к хакотриозиду, юккагенина, присоединенного через положение С-3 к хакотриозиду, и ямогенина, присоединенного через положение С-3 к хакотриозиду.
Примеры солатриозид-стероидных сапонинов включают грациллин, который представляет собой диосгенин, присоединенный через положение С-3 к солатриозиду (Кйа2, [01с 3], С1с); дельтонин (диос
- 7 018754 гении, присоединенный через положение С-3 к солатриозиду (Кйа2, [С1с 4], С1с); диосгенин, присоединенный через положение С-3 к солатриозе (К.йа2, [С1с 3], Са1) [в данном контексте, диосгенин, присоединенный к (Кйа2, [С1с 3], Са1), назван как диосгенинсолатриоза]; диосгенин, присоединенный через положение С-3 к другому солатриозиду; тигогенин, присоединенный через положение С-3 к солатриозиду; сарсасапогенин, присоединенный через положение С-3 к солатриозиду; смилагенин, присоединенный через положение С-3 к солатриозиду; юккагенин, присоединенный через положение С-3 к солатриозиду, и ямогенин, присоединенный через положение С-3 к солатриозиду.
Простые моносахаридные стероидные сапонины широко распространены в царстве растений. Моносахарид обычно присоединен к агликону через положение С-3, и примеры включают триллин, который представляет собой диосгенин, присоединенный через положение С-3 к глюкозе. Другие сапогенины, присоединенные к глюкозе через положение С-3, включают сарсасапогенин, родеасапогенин и ямогенин. Некоторые сапогенины присоединены через положение С-3 к другому моносахариду, такому как арабиноза, например ионогенин и конваллагенин, или присоединены через положение С-3 к галактозе и так далее.
Примеры дисахаридных стероидных сапонинов включают сарсасапогенин, присоединенный через положение С-3, например к (Ху12, Са1); (С1с2, С1с); (С1с3, С1с); смилагенин, присоединенный через положение С-3 к (С1с2, С1с); (С1с2, Са1); самогенин, тигогенин, гитогенин, аллиогенин, рускогенин, пенногенин, цепагенин и диосгенин, присоединенный через положение С-3 к (Кйа2, С1с).
Диосгенингликозиды из видов Ою^согса представляют собой большой коммерческий интерес в качестве исходных продуктов для стероидных гормонов. Гликозиды диосгенина и его С-25 изомерного ямогенина находятся среди наиболее часто документированных спиростанолсапонинов. Примеры стероидных спиростанолсапогенинов природного происхождения с двойной связью между С-5 и С-6 в Вкольце перечислены в табл. 1
Таблица 1
- 8 018754
Таблица 2
К2 Н5 К12 К15 К2 в Кг 9
Смилагенин н β н н н н СН3
Тигогенин н а н н н н СНз
Сарсасапогении н β н н н СНз Н
Гитогенин он β н н н н СН3
Гекогенин н а н =0 н н СНз
Хлорогенин н а он (а) н н н СН3
Дигитогенин ОН (а) а н н он (β) н СНз
Дигалогенин н а н н он (β) н СНз
Примеры стероидных фуростанолсапогенинов природного происхождения типа протоспиростана с двойной связью между С-5 и С-6 в В-кольце и простой связью между С-20 и С-22 в Е-кольце перечислены в табл. 3
Глюкоза
Таблица 3
Кгг
Протодиосгенин Н
Метилпротодиосгении СН3
Пример стероидного фуростанолсапогенина природного происхождения типа протоспиростана с простой связью между С-5 и С-6 в В-кольце и простой связью между С-20 и С-22 в Е-кольце представляет собой прототигогенин.
Пример стероидного фуростанолсапогенина природного происхождения типа псевдоспиростана с двойной связью между С-5 и С-6 в В-кольце и двойной связью между С-20 и С-22 в Е-кольце представляет собой псевдодиосгенин.
Пример стероидного фуростанолсапогенина природного происхождения типа псевдопротоспиростана с двойной связью между С-5 и С-6 в В-кольце и двойной связью между С-20 и С-22 в Е-кольце представляет собой псевдопротодиосгенин.
В одном варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин диосгенин, присоединенный через положение С-3 к одному или нескольким моносахаридным фрагментам.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой диосцин или грациллин, где диосцин представляет собой сапогенин диосгенин, присоединенный через положение С-3 к хакотриозе (Вйа2, [Кйа4], С1с), и грациллин представляет собой диосгенин, присоединенный через положение С-3 к солатриозиду (Вйа2, [С1с3], 61с).
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой диосгенин, присоединенный через положение С-3 к солатриозе (Вйа2, [61с3], 6а1). В данном контексте диосгенин, присоединенный к (К.йа2, [61с3], 6а1), называют диосгенин солатриозой.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин диосгенин, присоединенный через положение С-3 к сахариду.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин тигогенин, присоединенный через положение С-3 к сахариду.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин сарсасапогенин, присоединенный через положение С-3 к сахариду.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин смилагенин, присоединенный через положение С-3 к сахариду.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин юккагенин, присоединенный через положение С-3 к сахариду.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин ямогенин, присоединенный через положение С-3 к сахариду.
В одном варианте осуществления стероидный сапонин выбран из группы, состоящей из дельтонина
- 9 018754 (диосгенин Ρ1ι;·ι2. [61с4], 61с), диосцина (диосгенин Кйа2, [Кйа4], 61с), просапогенина А (диосгенин Кйа2, 61с) и асперина (диосгенин [Кйа4, Кйа4], Кйа2, 61с).
В случае дельтонина, просапогенина А и асперина любой один из данных стероидных сапонинов может быть получен в фармацевтической композиции.
В соответствии с этим такие стероидные сапонины могут быть использованы для изготовления лекарственного средства.
Такое лекарственное средство может быть использовано для одного или нескольких типов ингибирования роста раковой клетки; ингибирования образования и/или роста опухоли; предупреждения и/или лечения рака, включая рак, имеющий повышенную резистентность к противораковой терапии; для стимулирования активности противораковой терапии; снижения количества противораковой терапии, обеспечиваемой субъекту; стимулирования апоптоза раковой клетки вследствие воздействия на клетку противораковой терапии; снижения резистентности, развивающейся в раковой клетке, к противораковой терапии.
Как обсуждено в настоящем описании выше, стероидный сапонин в различных вариантах осуществления данного изобретения может быть получен из природных источников, изготовлен синтетическим способом или частичным синтезом или модификацией, примененными к соединениям или промежуточным продуктам природного происхождения.
Экстракция, выделение и идентификация стероидных сапонинов в различных вариантах осуществления данного изобретения могут быть осуществлены методами, известными в данной области.
Например, некоторые стероидные сапонины могут быть получены из растительных источников. Другие источники стероидных сапонинов можно легко получить по литературным данным, например, как описано в издании Но81ейтапп К. апб Мат81оп А. (2005), Сйешщйу апб рйаттасо1оду οί па1ита1 ргобис1к: 8арошпк. СатЬпбде Ишуегейу Ргекк, сйар1ет8 1-3 апб 6. Общепринятые названия стероидных сапонинов использованы в соответствии с приведенным выше текстом и словарным изданием Оюбопату оГ №11ига1 Ртобис18, Сйартап апб На11, СКС, (2004).
В данной области известны методы воздействия противораковых средств и противораковых терапий на раковые клетки ш уйто и ш у1уо.
Также в данной области известны методы воздействия стероидного сапонина на раковую клетку ш уйто и 1п У1Уо.
Подходящий метод воздействия стероидного сапонина на раковую клетку ш уйто состоит в прямом воздействии стероидного сапонина на раковую клетку.
В случае нахождения раковой клетки у субъекта подходящий метод воздействия стероидного сапонина на раковую клетку состоит во введении сапонина субъекту.
Эффективные количества противораковых средств и эффективные уровни противораковых терапий известны в данной области. Методы воздействия противораковых средств и терапий на раковые клетки щ уйто и 1п у1уо известны в данной области.
Эффективное количество стероидного санонина, предназначенного для воздействия на раковую клетку, в различных вариантах осуществления данного изобретения особо не ограничивается. Обычно эффективная концентрация стероидного сапонина будет находиться в интервале от 0,1 до 20 мкМ.
В случае применения стероидного сапонина для повышения активности противоракового средства у субъекта стероидный сапонин и противораковое средство могут быть введены субъекту раздельно в подходящей форме или, альтернативно, могут быть введены субъекту совместно в подходящей форме.
Например, стероидный сапонин и противораковое средство могут быть включены в комбинированный продукт для раздельного или совместного введения субъекту.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данного изобретения предлагается комбинированный продукт, включающий стероидный сапонин и противораковое средство, причем стероидный сапонин и противораковое средство представлены в форме для совместного введения субъекту или в форме для раздельного введения субъекту.
Комбинированный продукт подходит, например, для ингибирования роста раковых клеток, для ингибирования образования и роста опухоли (первичных и/или вторичных опухолей) и для предупреждения и/или лечения рака.
Компоненты комбинированного продукта могут быть упакованы отдельно или вместе подходящим образом в стерилизованных контейнерах, таких как ампулы, пузырьки или флаконы, либо в формах кратной дозы, либо в единичных дозированных формах. Контейнеры обычно герметично закрывают. Способы упаковки компонентов известны в данной области.
Как обсуждено в настоящем описании выше, совместное введение стероидного сапонина и противоракового средства может быть последовательным или одновременным и обычно означает, что средства присутствуют у субъекта в течение определенного периода времени. Обычно, если второе средство вводится в пределах периода полураспада первого средства, два агента считаются введенными совместно.
Соответствующая схема дозирования для введения стероидного сапонина может быть выбрана специалистом в данной области. Например, введение стероидного сапонина субъекту может быть осуществлено перед, одновременно или после воздействия на субъекта противораковой терапии.
- 10 018754
В одном варианте осуществления стероидный сапонин вводят субъекту одновременно с введением противоракового средства субъекту или одновременно с воздействием на субъекта противораковой терапии.
В одном конкретном варианте осуществления стероидный сапонин и противораковое средство могут быть включены в одну композицию для введения субъекту.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данного изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая стероидный сапонин и противораковое средство. В одном варианте осуществления композиция представляет собой противораковую композицию.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данного изобретения предлагается противораковая композиция, содержащая противораковое средство и стероидный сапонин.
Данная композиция может применяться, например, для ингибирования роста раковой клетки ίη νίίτο или ίη νίνο.
Данная композиция может также применяться для ингибирования образования и роста опухоли (первичных и/или вторичных опухолей) и для предупреждения и/или лечения рака у субъекта.
Эффективное количество стероидного сапонина и эффективное количество противоракового средства или противораковой терапии, предназначенное для введения субъекту, особо не ограничивается, пока оно находится в пределах такого количества и в такой форме, которая обычно проявляет полезный или терапевтический эффект. Термин терапевтически эффективное количество представляет собой количество, которое при введении субъекту, нуждающемуся в лечении, улучшает прогноз и/или состояние здоровья субъекта. Количество, предназначенное для введения субъекту, будет зависеть от конкретных характеристик одной или нескольких раковых клеток, рост которых должен быть ингибирован, рака, который подвергают лечению, способа введения и характеристик субъекта, таких как общее состояние здоровья, другие заболевания, возраст, пол, генотип и масса тела. Квалифицированный специалист в данной области сможет определить соответствующие дозировки, зависящие от данных и других факторов.
В этом отношении подробности путей введения, дозы, лечебные схемы противораковых средств и лечение лучевой терапией известны в данной области, например, как описано в изданиях Сапсег С11П1са1 Рйагшасо1оду (2005) еб. Ву 1.Н.М. §сйе11еп8, Н.Ь. МсЬеоб апб Ό.Β. Ые^е11, ОхГогб Иптуегайу Ргезз; и Сапсег апб й§ шападешей (2005). ΡίΠΙι Εάίίίοη Ьу В. §оийаш1 апб 1. ТоЫаз. В1аск\\е11 РиЬШЫпд.
Как обсуждено в настоящем описании выше, введение и доставка композиций согласно данному изобретению может быть осуществлена, например, внутривенным, интраперитонеальным, подкожным, внутримышечным, пероральным путем или местно, или прямой инъекцией в участок первичной опухоли перед, в течение или после дополнительных форм лечения, включая хирургию. Способ и путь введения в большинстве случаев будет зависеть от типа опухоли, которую подвергают лечению.
Лекарственная форма, частота и количество дозы будет зависеть от способа и пути введения. Обычно инъецируемая композиция будет вводиться в количестве от 5 до 500 мг/м2, обычно от 10 до 200 мг/м2. В конкретном случае пероральная композиция будет вводиться в количестве от 5 мг до 5 г, предпочтительно от 50 мг до 1 г.
Например, эффективные количества стероидного сапонина в конкретном случае находятся в интервале примерно от 0,1 мг/кг массы тела в сутки примерно до 1000 мг/кг массы тела в сутки и в одной форме примерно от 1 мг/кг массы тела в сутки до примерно 100 мг/кг массы тела в сутки.
Как описано выше, введение композиции, содержащей стероидный сапонин, также может включать применение одной или нескольких фармацевтически приемлемых добавок, включающих фармацевтически приемлемые соли, аминокислоты, полипептиды, полимеры, растворители, буферные средства, эксципиенты, консерванты и наполнители, с учетом определенных физических, микробиологических и химических характеристик стероидных сапонинов, предназначенных для введения.
Например, стероидный сапонин может быть изготовлен во многих фармацевтически приемлемых композициях в форме, например, водного раствора, масляного препарата, жирной эмульсии, эмульсии, лиофилизованного порошка для разведения и т.д. и может быть введен в виде стерильной и непирогенной внутримышечной или подкожной инъекции или в виде инъекции в орган, или в виде заливаемого препарата, или в виде трансмукозального препарата через назальную полость, прямую кишку, матку, влагалище, легкое и т.д. Композиция может быть введена в форме пероральных препаратов (например, твердых препаратов, таких как таблетки, таблетки в виде капсулы, капсулы, гранулы или порошки; жидкие препараты, такие как сиропы, эмульсии, дисперсии или суспензии).
Композиции, содержащие стероидный сапонин, также могут содержать один или несколько фармацевтически приемлемых консервантов, буферное средство, разбавитель, стабилизатор, хелатообразователь, средство, повышающее вязкость, диспергатор, регулятор рН или изотоническое средство. Такие эксципиенты хорошо известны специалистам в данной области.
Примеры подходящих консервантов представляют собой сложные эфиры бензойной кислоты из парагидроксибензойной кислоты, фенолов, фенилэтилового спирта или бензилового спирта. Примеры подходящих буферных средств представляют собой натриевые фосфатные соли, лимонную кислоту, винную кислоту и тому подобное. Примеры подходящих стабилизаторов представляют собой антиоксиданты,
- 11 018754 такие как α-токоферолацетат, α-тиоглицерин, метабисульфит натрия, аскорбиновая кислота, ацетилцистеин, 8-гидроксихинолин, и хелатообразователи, такие как динатрий эдетат. Примеры подходящих средств, повышающих вязкость, суспендирующих, растворяющих или диспергирующих средств представляют собой замещенные простые эфиры целлюлозы, замещенные сложные эфиры целлюлозы, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоли, карбомер, полипропиленгликоли, сорбитанмоноолеат, сорбитансесквиолеат, полиоксиэтиленовое гидрированное касторовое масло 60.
Примеры подходящих регуляторов рН включают хлористо-водородную кислоту, гидроксид натрия, буферные средства и тому подобное. Примеры подходящих изотонических средств представляют собой глюкозу, Ό-сорбит или Ό-маннит, хлорид натрия.
Введение стероидного сапонина в различных вариантах осуществления данного изобретения может быть проведено также в форме композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, эксципиент, суспендирующее средство, лубрикант, адъювант, растворитель, наполнитель, систему доставки, эмульгатор, дезинтегратор, абсорбент, консервант, поверхностно-активное вещество, краситель, глидант, средство, препятствующее слипанию, связующее вещество, вкусовую добавку или подсластитель с учетом физических, химических и микробиологических свойств стероидного сапонина, который вводят.
Для данных целей композицию можно вводить, например, перорально, парентерально, ингаляционным спреем, адсорбцией, абсорбцией, местно, ректально, назально, через щеку, вагинально, интравентрикулярно, посредством имплантированной емкости в лекарственных композициях, содержащих обычные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, или посредством любой другой удобной лекарственной формы. Термин парентеральный, как используется в настоящем описании, включает подкожную, внутривенную, внутримышечную, внутрибрюшинную, внутриоболочечную, внутрижелудочковую, внутригрудинную и внутричерепную инъекцию или методы инфузии.
Для парентерального введения композиция обычно будет представлена в единичной дозированной, стерильной, непирогенной инъецируемой форме (раствор, суспензия или эмульсия, которая может быть разведена непосредственно перед применением), которая предпочтительно является изотоничной с кровью реципиента с фармацевтически приемлемым носителем. Примеры таких стерильных инъецируемых форм представляют собой стерильные инъецируемые водные или масляные суспензии. Данные суспензии могут быть изготовлены согласно способам, известным в данной области, с использованием подходящих наполнителей, диспергаторов и смачивающих агентов, комплексообразователей, полимеров, средств, способствующих растворению, и суспендирующих средств. Стерильные инъецируемые формы также могут представлять собой стерильные инъецируемые растворы или суспензии в нетоксичных парентерально приемлемых разбавителях или растворителях, например как растворы в 1,3-бутандиоле. Среди фармацевтически приемлемых сред и растворителей, которые можно использовать, находятся вода, этанол, глицерин, физиологический раствор, диметилсульфоксид, Ν-метилпирролидон, диметилацетамид, раствор Рингера, раствор декстрозы, изотонический раствор хлорида натрия и раствор Хенкса. Кроме того, стерильные нелетучие масла обычно используются в качестве растворителей и суспендирующих сред. Для этой цели можно использовать любое легкое нелетучее масло, включающее синтетические моно- или диглицериды, кукурузное, хлопковое, арахисовое и кунжутное масло. Жирные кислоты, такие как этилолеат, изопропилмиристат и олеиновая кислота, и ее триглицеридные производные, включающие оливковое масло и касторовое масло, особенно в их полиэтоксилированных модификациях, используются в изготовлении препаратов для инъекций. Данные масляные растворы или суспензии могут также содержать длинноцепочечные спиртовые разбавители или диспергаторы.
Носитель также может содержать добавки, такие как вещества, которые повышают растворимость, изотоничность и химическую резистентность, например антиоксиданты, буферные средства и консерванты.
Кроме того, композиция, содержащая стероидный сапонин, может иметь форму, предназначенную для разведения непосредственно перед введением. Примеры включают лиофилизацию, сушку распылением и тому подобное для получения подходящей твердой формы для разведения фармацевтически приемлемым растворителем непосредственно перед введением.
Композиция может включать один или несколько буферных средств, объемный наполнитель, изотоническое средство и криопротектор и лиопротектор. Примеры эксципиентов включают фосфатные соли, лимонную кислоту, невосстанавливающиеся сахара, такие как сахароза или трегалоза, полигидроксиспирты, аминокислоты, метиламины, и лиотропные соли являются предпочтительными для восстанавливающихся сахаров, таких как мальтоза или лактоза.
Для перорального применения стероидный сапонин обычно будет изготавливаться в единичных дозированных формах, таких как таблетки, таблетки в виде капсулы, саше, порошки, гранулы, шарики, жевательные лепешки, капсулы, жидкости, водные суспензии или растворы, или подобные лекарственные формы, с использованием обычного оборудования и методик, известных в данной области. Такие препараты обычно включают твердый, полутвердый или жидкий носитель. Примеры носителей включают эксципиенты, такие как лактоза, декстроза, сахароза, сорбит, маннит, крахмалы, аравийская камедь, фосфат кальция, минеральное масло, масло какао, масло семян какао, альгинаты, трагакант, желатин, сироп, за
- 12 018754 мещенные простые эфиры целлюлозы, полиоксиэтиленсорбитанмонолаурат, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и тому подобное.
Таблетка может быть изготовлена прессованием или формованием стероидного сапонина необязательно с одним или несколькими сопутствующими ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть изготовлены прессованием в подходящей машине активного ингредиента в свободно-текучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанные со связующим веществом, лубрикантом, инертным разбавителем, поверхностно-активным веществом или диспергирующим средством. Формованные таблетки могут быть изготовлены формованием в подходящей машине смеси порошкового активного ингредиента и подходящего носителя, увлажненного инертным жидким разбавителем.
Для введения средства из стероидного сапонина может быть применена методика контролируемого высвобождения.
Для местного введения композиция данного изобретения может быть представлена в форме раствора, спрея, лосьона, крема (например, неионного крема), геля, пасты или мази. Альтернативно, композиция может быть доставлена через липосому, наносому, рибосому или питательную диффузионную среду. Местное введение может быть использовано для лечения видов рака, таких как меланомы.
Следует принять во внимание, что в случае фармацевтической композиции, также содержащей противораковое средство, все описанное выше, аналогичным образом применимо к методике изготовления данной композиции.
Данное изобретение может быть также использовано для снижения количества противоракового средства или терапии, предоставляемых субъекту для предупреждения и/или лечения рака.
В этом отношении способность стероидного сапонина повышать уровень активности противораковой терапии может быть использована для снижения дозы противораковой терапии, воздействующей на субъекта для достижения желаемого уровня лечения.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данного изобретения предлагается способ снижения количества противораковой терапии, предоставляемой субъекту для предупреждения и/или лечения рака у субъекта, включающий воздействие на субъекта эффективного количества стероидного сапонина.
В данном изобретении также предлагается применение стероидного сапонина для изготовления лекарственного средства для снижения количества противораковой терапии, предоставляемой субъекту для предупреждения и/или лечения рака.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данное изобретение предлагает применение стероидного сапонина для изготовления лекарственного средства для снижения количества противораковой терапии, предоставляемой субъекту для предупреждения и/или лечения рака.
Данное изобретение также может быть использовано для стимулирования апоптоза раковой клетки вследствие воздействия на клетку противоракового средства. Например, стероидный сапонин может быть применен для стимулирования апоптоза клетки, подверженной воздействию химиотерапевтического средства.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данное изобретение предлагает способ стимулирования апоптоза раковой клетки вследствие воздействия на раковую клетку противораковой терапии, включающий воздействие на раковую клетку эффективного количества стероидного сапонина.
В данном изобретении также предлагается применение стероидного сапонина для изготовления лекарственного средства для стимулирования апоптоза раковой клетки вследствие воздействия на раковую клетку противораковой терапии.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данное изобретение предлагает применение стероидного сапонина для изготовления лекарственного средства для стимулирования апоптоза раковой клетки вследствие воздействия на раковую клетку противораковой терапии.
Данное изобретение может быть также использовано для снижения уровня резистентности раковой клетки к противораковому средству.
Например, воздействие на раковые клетки противоракового средства, такого как химиотерапевтическое лекарственное средство, ведет к повышенному уровню резистентности клетки к химиотерапевтическому лекарственному средству. В конце концов, это может приводить к развивающейся резистентности рака в отношении многих лекарственных средств.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данное изобретение предлагает способ снижения резистентности, развивающейся в раковой клетке, к противораковой терапии, включающий воздействие на раковую клетку эффективного количества стероидного сапонина.
В данном изобретении предлагается также применение стероидного сапонина для изготовления лекарственного средства для снижения резистентности, развивающейся в раковой клетке, к противораковой терапии.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данное изобретение также предлагает применение стероидного сапонина для изготовления лекарственного средства для снижения резистентности, развивающейся в раковой клетке, к противораковой терапии.
В данном изобретении также предлагается применение стероидного сапонина и противоракового
- 13 018754 средства для изготовления лекарственного средства для снижения уровня резистентности раковой клетки к апоптотическому средству.
В соответствии с этим в другом варианте осуществления данное изобретение также предлагает применение стероидного сапонина для изготовления лекарственного средства для снижения уровня резистентности раковой клетки к противораковому средству.
Способы изготовления фармацевтических композиций известны в данной области, например, описаны в публикациях Кетшд1оп'к Ркаттасеийса1 8с1епсек, 18111 ей., 1990, Маск РиЬШкшд Со., ΕαδΙοη. Ра.; Ц.8. Ркагтасоре1а: Ыайопа1 Роттц1агу, 1984, Маск РиЬШкшд Со., Еак1оп, Ра.; и М.Е. Ликой, РкагтасеиДск, Тке 8с1епсе оГ Оокаде Ротт Пе81дп, 2пй ей., СкитскШ Ыушдйопе, ЕйшЬитдк, 2002.
Терапевтическая доставка биомолекул в общем описана в издании В1айоп, С. (2002) Ркаттасеи11са1 Скетщку: Ткегареийс АкресЬ оГ Вюшо1еси1ек 1окп \УПеу апй 8опк Ий.
Описание конкретных вариантов осуществления
Ниже будут сделаны ссылки на примеры, которые воплощают приведенные выше общие принципы данного изобретения. Однако следует понимать, что последующее описание не должно ограничивать применимость приведенного выше описания.
Пример 1. Общие реагенты и способы.
(ί) Стероидные сапонины и противораковые средства.
Диосгенин, диосцин: диосгенин Вка2, [Вка4], О1с и дельтонин: диосгенин Вка2, [С1с4], О1с получали коммерческим путем от ЫшдЬо Напркагт Вю1еск Со Ь1й., грациллин от СктошаЭех, и триллин от Ак1ш СкеткаК
Просапогенин А: диосгенин Кка2, 01с синтезировали в соответствии со способом, описанным Ь1 е! а1. СагЬокуйг. Век., (2001) 331, 1-7. Диосцин и просапогенин А также выделяли из Рапк ро1урку11а.
Стероидные сапонины растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) для получения 10 или 1 мМ запасных растворов, из которых готовили дальнейшие разведения, требуемые для отдельных экспериментов.
Цисплатин, доцетаксел, паклитаксел, доксорубицин, винкристин и иматиниб получали из коммерческих источников и хранили либо при 4°С, либо при -20°С, как требовалось. Ими являлись: паклитаксел (анзатакс для инъекции (Еаи1йшд); винкристина сульфат (8щта); доксорубицин НС1 (8щта); доцетаксел (8щта); цисплатин (81дта) и иматиниба мезилат (ИоуаШк Окуес).
Химиотерапевтические средства получали в требуемых исходных концентрациях (определенных для каждого анализа) в соответствующем разбавителе: ДМСО, стерильная вода или физиологический раствор. Раствор ДМСО в чистом виде использовали в качестве отрицательного контроля.
(ίί) Клетки.
Типы клеток рака человека представляли собой А549 (легкое); С180-138 (яичник); НТ29 (прямая кишка); МСР7 (молочная железа); РС3 (простата); ЭШ45 (простата, гормононезависимая); ЬЫСар (гормонозависимая); К562 (лейкемия). Тип клеток рака мыши представлял собой В16 (меланома).
Раковые клетки высевали днем перед применением лекарственного средства в трех или четырех повторах в 96-луночные планшеты, клеткам давали расти в присутствии лекарственного средства в течение 6 суток перед тем, как определяли рост клеток относительно необработанных контрольных лунок с помощью анализа с красителем.
(ш) Культура клеток.
Клетки высевали в трех или четырех повторах при 3-4000 на микротитровальную лунку в 90 мкл смеси ВРМ1 питательная среда/10% фетальная телячья сыворотка/пенициллин, стрептомицин, обрабатывали 10 мкл лекарственного средства (изготовленного с разведением в требуемой 10х концентрации) и клеткам давали расти до тех пор, пока контроли не становились почти слитыми (6 суток).
8ВВ: планшеты промывали Р8В, фиксировали в метилированных спиртах, промывали водопроводной водой и подкрашивали 50 мкл/лунка 8РВ раствором (сульфородамин, 0,4% в 1% уксусной кислоте), с последующим промыванием водопроводной водой и 1% уксусной кислотой и солюбилизацией в Тпк и поглощение считывали при 564 нм на ЕЬ18А планшет-ридере.
МТ8: добавляли 10 мкл на лунку МТ8 раствора клеток, планшеты оставляли для инкубирования в течение 1-4 ч при 37°С до образования темно-коричневого окрашивания. Затем добавляли на лунку 10 мкл 10% 8Ό8 для диспергирования клеток. Планшеты для анализа затем центрифугировали при 2000 об/мин в течение 15 мин и поглощение считывали при 490 нм на ЕЬ18А планшет-ридере.
Данные собирали, используя программное обеспечение ЕЬ18А планшет-ридера - 8ОЕТтах РВО 3.1.2, затем импортировали в ЕХСЕЬ. Средние значения и 8Ό повторов рассчитывали как % контроля, после вычитания значения для пустого опыта (лунки без клеток). Строили график % контроля в зависимости от дозы агента и определяли значения 1С50 (половина максимальной ингибирующей концентрации).
Альтернативно, клетки высевали в 2 мл лунки и после 24 ч роста обрабатывали стероидным сапонином при 0,1, 0,5 и 1,0 мкМ. Клетки собирали спустя 24, 48 и 72 ч инкубирования с лекарственным средством. В каждой временной точке клетки считали, превращали в пеллеты центрифугированием (5 мин, 1500 об/мин, комнатная температура), суспендировали в 1 мл РВ8 и интенсивно встряхивали. До- 14 018754 бавляли 2 мл охлажденного льдом метанола и клетки встряхивали. После того как клетки от всех временных точек были собраны, каждый образец центрифугировали при 12000 об/мин в течение 4-5 мин, ресуспендировали в 400 мкл РВ8 и добавляли 100 мкл красителя 5х иодида пропидия (ΡΙ) (см. ниже). Образцы встряхивали и фильтровали через нейлоновый фильтр перед поступлением на цитометрический анализ при 488 нм. Относительные ДНК содержания клеточных субпопуляций изображали в виде гистограмм с 20000 клетками, обычно анализируемыми для каждого образца.
Пример 2. Определение величин 1С50 для стероидных сапонинов и противораковых средств.
Использовали следующие линии раковых клеток:
А549 - легкое,
НТ29 - толстая кишка,
МСР7 - молочная железа,
РС3 - простата (гормононезависимая),
Όυΐ45 - простата (гормононезависимая),
ЬИСар - простата (гормонозависимая),
К562 - эритролейкемия человека.
Следующие стероидные сапонины анализировали по ингибированию линий раковых клеток, применяя в качестве индивидуальных средств диосцин: диосгенин Р11а2. [Вйа4], О1е;
дельтонин: диосгенин КБа2, [С1е4], О1е;
просапогенин А: диосгенин Кйа2, О1е.
Следующие химиотерапевтические лекарственные средства и молекулярные таргетные средства анализировали по ингибированию линий раковых клеток, применяя в качестве индивидуальных средств химиотерапевтические средства: цисплатин, доцетаксел, паклитаксел, доксорубицин, винкристин; молекулярное таргетное средство: иматиниб.
Стероидные сапонины и перечисленные выше противораковые средства растворяли в ДМСО и разводили питательной средой до требуемых растворов для каждого применения. Раствор ДМСО в чистом виде использовали в качестве отрицательного контроля.
Клетки опухоли высевали в двух повторах в 96-луночные планшеты при 2-5000 на микротитровальную лунку, содержащую смесь ΚΡΜΙ питательная среда/10% фетальная телячья сыворотка. Клеткам давали расти до тех пор, пока контроли не становились почти слитыми после 5-6 суток. Затем планшеты промывали Р8В, фиксировали в этаноле и подкрашивали 50 мкл/лунка 8КВ раствором (сульфородамин, 0,4% в 1% уксусной кислоте), с последующим промыванием 1% уксусной кислотой и солюбилизацией в Тп8. Поглощение считывали при 564 нм, используя ЕЫ8А планшет-ридер.
1С50 или концентрацию, требуемую для ингибирования роста клеток на 50%, определяли из процентного ингибирования в зависимости от данных по концентрации, используя методы пробит-анализа Иииеу (Ейтсу Ό.Ε (1971). РгоЬй Апа1у5Й. 31'1 Εάίίίοη. СатЬпйдс ишусгайу Ргс88).
Сследующие концентрации, представленные в табл. 4, использовали для 8 ячеек 12x8 ЕЬ18А планшетов.
Таблица 4
Концентрация в ячейке (мкМ)
ЕЫЗА ячейка 1 2 3 4 5 6 7 8
Цисплатин 4 2 1 0, 5 0,25 0, 125 0,0625 0
Доцетаксел 0, 006 0, 003 0,0015 0,00075 0,000375 0,000188 0,000094 0
Паклитаксел 0,0033 0,00167 0,00083 0,00042 0,00021 0,000104 0,000052 0
Доксорубицин 0,2 0, 1 0, 05 0, 025 0,0125 0,00625 0,0031 0
Винкристин 0,02 0, 01 0,005 0,0025 0,00125 0,000625 0,00031 0
Иыатиниб 0,72 0, 36 0, 18 0,09 0,045 0,0225 0,0112 0
Следующие величины 1С50 в табл. 5 были подсчитаны из данных по ингибированию.
Таблица 5
ТС50 (мкМ)
ЦЦ145 ЬИСар МСЕ7 НТ2Э РСЗ А549 К562
Цисплатин 0,54 0, 70 0, 65 0, 93 1, 4 1,2 0, 82
Доцетаксел 0,00015 0,000026 0,000039 0,00051 0, 00009 0,00027 0,00042
Паклитаксел 0,0027 0,0012 0,0011 >0,0033 0,0021 0,0032 >0,0033
Доксорубицин 0, 011 0,0039 0, 014 0,028 0,022 0,016 0,0085
Винкристин 0,0029 0,00049 0,00049 0,0024 0,0011 0,0060 0,00021
Иматиниб >0, 7 >0,7 >0,7 >0,7 >0, 7 >0, 7 0,085
Пример 3. Определение 1С50 величин и снижения дозировки химиотерапевтического средства в смесях стероидных сапонинов с цисплатином, доцетакселом, доксорубицином и винкристином.
Посев клеток и ЕЬ18А планшетную методику примера 1 использовали для детерминирующего ингибирования двух раковых клеточных линий. Величины 1С50 определяли для стероидных сапонинов: ди
- 15 018754 осцина, дельтонина и просапогенина А и их смесей с цисплатином, доцетакселом, доксорубицином и винкристином, используя ЬЫСар и МСБ7 клеточные линии.
Двухкомпонентные смеси составляли смешиванием 50% величин 1С50 для каждого компонента, где 1С50 величины стероидных сапонинов и химиотерапевтических средств даны в табл. 6:
Таблица 6
1С50 величины, использованные в анализе (мкМ)
ЪИСар МСГ7
Диосцин 1 1
Дельтонин 1 1
Просапогенин А 2 2
Цисплатин 0,8 0, 8
Доцетаксел 0,00003 0,00003
Доксорубицин 0, 004 0, 015
Винкристин 0,0005 0,0005
Смеси составляли как показано в табл. 7.
Таблица 7
Концентрации, использованные для диосцина и цисплатина в смеси диосцин:цисплатин, 50:50 1С50, против БЫСар клеточной линии
БЫ ЗА ячейка 1 2 3 4 5 6 7 8
Множительный фактор 8 4 2 1 0,5 0, 25 0,125 0
Диосцин (мкМ) 4 2 1 о, 5 0,25 0, 125 0,0625 0
Цисплатин (мкМ) 3,2 1,6 0,8 0,4 0, 2 0,1 0,05 0
Таким образом, в ЕЬ1БА ячейке номер 4 (множительный фактор равен 4) концентрация составляет 50% от каждой из индивидуальных величин 1С50: 50% от 1 мкМ для диосцина и 50% от 0,8 мкМ для цисплатина.
В табл. 8 предоставлена следующая иллюстрация регулировки концентраций ЕЫБА ячеек, где в ЕЬ18А ячейке номер 4 (множительный фактор равен 1) концентрация составляет 50% от каждой из индивидуальных величин 1С50: 50% от 2 мкМ для просапогенина и 50% от 0,015 мкМ для доксорубицина против МСБ7.
Таблица 8 Концентрации, использованные для диосцина и цисплатина в смеси просапогенин А:доксорубицин, 50:50 1С50, против МСБ7 клеточной линии
ЕЫЗА ячейка 1 2 3 4 5 6 7 8
Множительный фактор 8 4 2 1 0, 5 0,25 0, 125 0
Просапогенин А (мкМ) 8 4 2 1 0,5 0,25 0, 125 0
Доксорубицин (мкМ) 0,06 0, 03 3,015 0,0075 0,00375 0,00188 0,00094 0
Данные по ингибированию от каждой смеси использовали для определения 1С50 из 1С50 величины, где использованные концентрации были равны значениям от множительного фактора. Для того чтобы определить действительный 1С50 вклад каждого компонента в двухкомпонентную смесь, 1С50 из величины 1С50 умножали на 1С50 индивидуального компонента. Это затем можно использовать для того, чтобы определить снижение в 1С50 вклада (т.е. снижение в дозе) химиотерапевтического средства из-за присутствия стероидного сапонина в смеси. Более простой способ определения снижения в дозе состоит в использовании следующей простой формулы:
Снижение в дозе (%) = (1С50 химиотерапевтического средства-0,5х(1С50 из 1С50))х
100 1С50 химиотерапевтического средства
Следующие 1С50 из 1С50 величин в табл. 9 были определены для стероидных сапонинов данного примера.
Таблица 9
ЬЫСар 1С50 м3 ХС$о МСБ7 ТСзо и9 1С50
Ди осцин 0, 56 1,1
Дельтонин 0,42 0, 67
Просапогенин А 0,89 1,1
1С50 из 1С50 величины для химиотерапевтических средств и их смесей со стероидными сапонинами
- 16 018754 плюс снижение в дозе каждого химиотерапевтического средства, определенное при смешивании со стероидными сапонинами, даны в табл. 10.
Таблица 10
Смеси цисплатина
ЬЦСар 1С5о ИЗ 1С„ Цисплатин, снижение дозы МСГ7 1С5О ИЗ 1С50 Цисплатин, снижение дозы
Цисплатин 0,37 0, 92
Цисплатин+диосцин 0,54 27% 1,5 9%
Цисплатин+дельтонин 0,91 -23% 1,5 9%
Цисплатин+просапогенин А 1, 8 -143% 2,2 -34%
Не было какого-либо эффективного или постоянного снижения дозы в дозировке цисплатина, отмеченного в смесях стероидных сапонинов с цисплатином.
Смеси доцетаксела
дне ар 1С60 ИЗ 1С50 Доцетаксел г снижение дозы ΜΟΕΊ 1С50 ИЗ 1С50 Доцетаксел, снижение дозы
Доцетаксел 3,7 8
Доцетакселтдиосцин 1,3 82% 3,2 80%
Доцетакселтдельтонин 0, 97 87% 1,7 89%
Доцетаксел+просапогенин А 2,0 73% 2,0 88%
Имело место постоянное снижение в дозировке доцетаксела, отмеченное в смесях стероидных сапонинов с доцетакселом.
Смеси доксорубицина
дисар 1С50 из 1С50 Доксорубицин г снижение дозы МСР7 1С50 ИЗ 1С5О Доксорубицин, снижение дозы
Доксорубицин 1,4 16
Доксорубицинтдиосцин 0,89 68% 1, 3 59%
Доксорубицин+
дельтонин 1,1 61% 2,0 38%
Доксорубицинт
просапогенин А 1,7 39% 2,5 22%
Имело место снижение в дозировке доксорубицина, отмеченное в смесях стероидных сапонинов с доксорубицином, причем с диосцином и дельтонином обеспечивается большее снижение чем с просапогенином.
Смеси винкристина
ЬЫСар 1С5О из 1С50 Винкристин, снижение дозы МСГ7 1С50 ИЗ 1С50 Винкристин/ снижение дозы
Винкристин 0,77 1,3
Винкристинтдиосцин 0, 68 56% 1,8 31%
Винкристин+дельтонин 1, 1 29% 1,5 42%
Винкристинт
просапогенин А 1,8 -17% 2,1 19%
Имело место снижение в дозировке винкристина, отмеченное в смесях диосцина и дельтонина с винкристином, причем с просапогенином А обнаруживается фактически нулевое снижение в дозировке винкристина.
Пример 4. Определение 1С50 величин и снижения дозировки паклитаксела в смесях стероидных сапонинов с паклитакселом.
Посев клеток и ЕЬ18А планшетную методику примера 1 использовали для детерминирующего ингибирования двух раковых клеточных линий. Величины 1С50 определяли для стероидных сапонинов: диосцина, дельтонина и просапогенина А и их смесей с паклитакселом, используя А549 и МСЕ7 клеточные линии.
Двухкомпонентные смеси составляли способом, аналогично примеру 2, смешиванием 50% из 1С50 величин для каждого компонента, где 1С50 величины стероидных сапонинов и паклитаксела приведены в
- 17 018754 табл. 11.
Таблица 11
1С50 величины, использованные в анализе (мкМ)
А549 МСЕ7
Диосцин 1 1
Дельтонин 1 1
Просапогенин А 2 2
Паклитаксел 0, 003 0, 001
Используя методику вычисления, описанную в примере 2, определяли следующие 1С50 из 1С50 величины в табл. 12 для стероидных сапонинов данного примера.
Таблица 12
А54Э 1С$о из 1Сзо МСР7 ХСзо м3 1С$о
Диосцин 1,9 1,9
Дельтонин 0,7 0,2
Просапогенин А 0, 99 1,0
1С50 из 1С50 величины для паклитаксела и его смесей со стероидными сапонинами плюс снижение в дозе паклитаксела, определенное при смешивании со стероидными сапонинами, приведены в табл. 13.
Таблица 13 Смеси паклитаксела
А549 1С50 из 1С5О Паклитаксел, снижение дозы МСГ7 Паклитаксел, снижение дозы
1С5О 1С ИЗ 50
Паклитаксел 1,7 1, 5
Паклитаксел+
ДИОСЦИН 2,2 35% 1, 9 37%
Паклитаксел!
дельтонин 1,0 71% 1, 5 50%
Паклитаксел!
просапогенин А 2,3 32% 2, 3 23%
Имело место снижение в дозировке паклитаксела, отмеченное в смесях стероидных сапонинов с доксорубицином, причем с дельтонином обеспечивается большее снижение, чем с диосцином и просапогенином А.
Пример 5. Определение 1С50 величин и снижения дозировки химиотерапевтического средства в смесях стероидных сапонинов с цисплатином, доцетакселом, доксорубицином и винкристином.
Посев клеток и ЕЬ18Л планшетную методику примера 1 использовали для детерминирующего ингибирования четырех раковых клеточных линий. Величины 1С50 определяли для стероидных сапонинов: диосцина, дельтонина и просапогенина А и их смесей с цисплатином, доцетакселом, доксорубицином и винкристином, используя РС3, Όυ145, А549 и НТ29 клеточные линии.
Двухкомпонентные смеси составляли способом, аналогичным способу примера 2, смешиванием 50% из 1С50 величин для каждого компонента, где 1С50 величины стероидных сапонинов и химиотерапевтических средств даны в табл. 14.
Таблица 14
1С50 величины,
использованные (мкМ) В анализе
Диосцин 1
Дельтонин 1
Просапогенин А 2
Цисплатин 0, 8
Доцетаксел 0,0002
Доксорубицин 0,015
Винкристин 0,0025
Используя методику вычисления, описанную в примере 2, определяли следующие 1С50 из 1С50 величины в табл. 15 для стероидных сапонинов данного примера.
- 18 018754
Таблица 15
рсз 1С50 из 1С50 ОЦ145 Ю50 из 1СБ0 А549 1СБй из 1С„ НТ29 1С50 из 1С50
Диосцин 2,9 1,9 2,3 2,8
Дельтонин 1,2 0,9 0,9 0,9
Просапогенин А 1,5 1,5 1,5 1,5
1С50 из 1С50 величины для химиотерапевтических средств и для их смесей со стероидными сапонинами плюс снижение в дозе каждого химиотерапевтического средства, определенное при смешивании со стероидными сапонинами, даны в табл. 16-19.
Таблица 16
Смеси цисплатина
РСЗ 1СБо из 1С5О Цисплатин, снижение ДОЗЫ ϋυΐ45 1С50 из 1С5О Цисплатин, снижение дозы
Цисплатин 2,7 1,6
Цисплатин+диосцин 3, 5 35% 2,9 9%
Цисплатин+дельтонин 1,7 69% 1,9 41%
Цисплатин+
Просапогенин А 2,0 63% 2,1 34%
Смеси цисплатина
А549 1С50 из 1С50 Цисплатин, снижение дозы НТ29 1СБо ИЗ 1С50 Цисплатин, снижение дозы
Цисплатин 1,7 1, 5
Цисплатин+диосцин 3,0 12% 3, 0 0%
Цисплатин+дельтонин 1,7 50% 1, 8 40%
Цисплатин+
просапогенин А 2,4 2 9% 2, 8 7%
С цисплатином имело место снижение в дозировке, полученное во всех случаях, за исключением от минимального до нуля снижения для смеси цисплатин+диосцин с Όυ145 и с НТ29, и минимального снижения для смеси цисплатин+просапогенин А с НТ29.
Таблица 17
Смеси доцетаксела
РСЗ 1С5О из 1С50 Доцетаксел, снижение ДОЗЫ ϋυΐ45 1С5О ИЗ 1С50 Доцетаксел, снижение ДОЗЫ
Доцетаксел 2, 9 3,1
Допетаксел+диосцин 3, 9 33% 3, 8 39%
Доцетаксел+дельтонин 2,2 62% 1,9 69%
Доцетаксел+
просапогенин А 2, 6 55% 2,4 61%
Смеси доцетаксела
А549 1С50 ИЗ 1С5О Доцетаксел, снижение ДОЗЫ НТ29 1С50 ИЗ 1С50 Доцетаксел, снижение дозы
Доцетаксел 3,9 3,3
Доцетаксел+диосцин 3,8 51% 3, 6 45%
Доцетаксел+дельтонин 1,7 78% 1,9 71%
Доцетаксел+
просапогенин А 3 62% 3 55%
С доцетакселом имело место снижение в дозировке, обеспечиваемое каждой из смесей стероидных сапонинов с каждой из четырех клеточных линий, показанных в табл. 17.
- 19 018754
Таблица 18
Смеси доксорубицина
РСЗ 1С50 ИЗ 1С5О Доксорубицин, снижение дозы ϋϋ145 1С60 ИЗ 1С5О Доксорубицин г снижение дозы
Доксорубицин 5, 5 3,1
Доксорубицинт
диосцин 5 55% 3,4 45%
Доксорубицин!
дельтонин 2,2 80% 2, 3 63%
Доксорубицин!
просапогенин А 2,9 74% 2,3 63%
Смеси доксорубицина
А549 1С5о ИЗ 1С5() Доксорубицин, снижение дозы НТ29 1С50 ИЗ 1С50 Доксорубицин, снижение дозы
Доксорубицин 3,2 4,7
Доксорубицин!
диосцин 2,3 64% 3,5 63%
Доксорубицин!
дельтонин 1,8 72% 2,2 77%
Доксорубицин!
Просапогенин А 2,7 58% 3 68%
С доксорубицином имело место снижение в дозировке, обеспечиваемое каждой из смесей стероидных сапонинов с каждой из четырех клеточных линий, показанных в табл. 18.
Таблица 19
Смеси винкристина
РСЗ 1С5О из 1С50 Винкристин, снижение дозы ϋϋ145 1С50 из 1С50 Винкристин, снижение дозы
Винкристин 3,2 8
Винкристинтдиосцин 2,3 64% 3,5 78%
Винкристин+дельтонин 1,3 80% 1,8 89%
Винкристин!
просапогенин А 2,7 58% 2,5 84%
Смеси доксорубицина
А549 1С50 из Ю50 Винкристин, снижение дозы НТ2 9 1С50 из Ю50 Винкристин, снижение дозы
Винкристин Винкристин+диосцин 8 3,1 81% 7, 5 4,1 73%
Винкристин+дельтонин 1,7 89% 2,2 85%
Винкристин! просапогенин А 3 81% 3 80%
С винкристином имело место снижение в дозировке, обеспечиваемое каждой из смесей стероидных сапонинов с каждой из четырех клеточных линий, показанных в табл. 19.
Пример 6. Определение 1С5о величин и снижения дозировки иматиниба в смесях стероидных сапонинов с иматинибом. Посев клеток и ЕЫ8А планшетную методику примера 1 использовали для детерминирующего ингибирования К562 клеточной линии. Величины 1С50 определяли для стероидных сапонинов: диосцина, дельтонина и просапогенина А и их смесей с иматинибом, используя К562 клеточную линию.
Двухкомпонентные смеси составляли способом, аналогично примеру 2, смешиванием 50% из 1С50 величин для каждого компонента, где 1С50 величины стероидных сапонинов и иматиниба даны в табл. 20.
- 20 018754
Таблица 20
1С?о величины, использованные в анализе (мкМ)
Диоедин 1
Дельтонин 1
Просапогенин А 2
Иматиниб 0,09
При использовании методики вычисления, описанной в примере 2, определены следующие 1С50 из 1С50 величины для стероидных сапонинов данного примера и показаны в табл. 21.
Таблица 21
К562 Юбо из Ю50
Диосцин 1,2
Дельтонин 0, 69
Просапогенин А 1,2
1С50 из 1С50 величины для иматиниба и для его смесей со стероидными сапонинами плюс снижение в дозе иматиниба, определенное при смешивании со стероидными сапонинами, приведены в табл. 22.
Таблица 22
Смеси иматиниба
К562 1С50 ИЗ Юэд Иматиниб, снижение дозы
Иматиниб 1, 6
Иматиниб+диосцин 1,4 56%
Иматиниб+дельтонин 1,1 66%
Иматиниб+просапогенин А 2 38%
С иматинибом имело место снижение в дозировке, обеспечиваемое каждой из смесей стероидных сапонинов с К562 клеточной линией.
Пример 7. Определение ίη νίνο степени повышения противораковой активности химиотерапевтического лекарственного средства при совместном введении со стероидным сапонином.
5-Фторурацил (5ЕИ) представляет собой важное химиотерапевтическое лекарственное средство, применяемое в лечении рака толстой кишки; чаще всего он вводится совместно с другими химиотерапевтическими средствами. В данном исследовании сравнивали совместное введение 5-фторурацила и дельтонина с введением отдельно введенного как 5-фторурацила, так и дельтонина.
женские особи голых мышей Ва16/с снабжали микрочипами, взвешивали и рандомизировали на основе массы тела в 8 групп по 9 мышей на группу.
Обработки, которые все готовили в виде смеси ИМР:РЕ6300:вода (1:9:10, об./об.) и вводили внутривенной инъекцией для 5-фторурацила и иначе интраперитонеальной инъекцией, являлись такими, как представлено в следующей таблице (ΝΜΡ = Ν-метилпирролидон).
Таблица 23
Обработка Доза Введение
5-Фторурацил 37,5/1,65 мг/кг еженедельно в.б
5-Фторурацил+дельтонин 37,5/3,3 мг/кг еженедельно в.в/ ежедневно в.б.
5-Фторурацил+дельтонин 37,5/ еженедельно в.в./ ежедневно в.б.
5-Фторурацил+дельтонин 37,5 мг/кг еженедельно в.в./ ежедневно в.б.
Дельтонин 1, 65 мг/кг ежедневно в.б.
Дельтонин 3,3 мг/кг ежедневно в.б.
Дельтонин 6,6 мг/кг ежедневно в.б.
НТ29 клетки карциномы простаты человека культивировали в ΚΡΜΙ1640 клеточной питательной среде, которую дополняли с помощью 10% ЕВ8 и пенициллина-стрептомицина (50 Ιυ/мл конечная концентрация). Клетки собирали трипсинизацией, дважды промывали в НВ88 и считали. Затем клетки ресуспендировали в НВ88 и устанавливали до конечного объема, содержащего 2х107 клетки/мл. Для инокуляции вводили иглу через кожу в подкожное пространство чуть-чуть ниже правого плеча, куда запускали 100 мкл клеток (2х 106).
Когда объемы опухоли достигали среднего размера более 200 мм3, начинали обработку (сутки 0).
- 21 018754
Объемы опухоли измеряли 3 раза еженедельно и определяли согласно формуле
V (мм3) = длина х диаметр2 х π/6
Лечение продолжали в течение 17 суток. Средние объемы опухоли для каждой схемы введения лекарственного средства приведены в табл. 24 и представлены графически на фиг. 1.
Таблица 24
Обработка/дни 0 2 4 7 9 11 14 16 18
5-Фторурацил (5ги) {37,5 мг/кг) (1х еженедельно) 236 280 307 330 432 511 681 67 6 824
5Еи/дельтонин (37,5/1,65 мг/кг) (1х еженедельно/ежедневно) 216 207 249 294 255 339 386 441 523
5Еи/дельтонин (37 г5/3,3 мг/кг) {1х еженедельно/ежедневно) 235 212 229 278 264 315 381 451 598
5Ги/дельтонин {37,5/6,6 мг/кг) (1х еженедельно/ежедневно) 236 206 244 281 292 339 440 532 543
Дельтонин (1,65 мг/кг) (ежедневно) 236 260 299 294 350 462 594 644 776
Дельтонин (3,3 мг/кг) {ежедневно) 236 242 271 331 413 489 558 742 842
Дельтонин (6,6 мг/кг) (ежедневно) 235 233 265 310 399 490 588 671 692
Объемы опухоли в случае совместных обработок дельтонином с 5-фторурацилом являются меньшими, чем объемы опухоли при любой из отдельных обработок, то есть при обработке одним 5фторурацилом или любой одной из 3 обработок дельтонином.
Наконец, следует принять во внимание, что различные модификации и варианты способов и композиций изобретения, описанного в данном описании, будут очевидными для специалистов в данной области без отступления от объема и сущности изобретения. Несмотря на то, что изобретение описано согласно определенным вариантам осуществления, следует понимать, что настоящее изобретение не следует неоправданно ограничивать такими конкретными вариантами осуществления. Несомненно, различные модификации описанных способов для осуществления изобретения, которые очевидны специалистам в данной области, предназначены для того, чтобы быть включенными в объем данного изобретения.

Claims (9)

1. Способ ингибирования роста раковой клетки, включающий стадию воздействия на раковую клетку противораковой терапии и эффективного количества стероидного сапонина, где стероидный сапонин выбран из группы, состоящей из делтонина (диосгенин КБа2, [С1с4], С1с), диосцина (диосгенин ИНа2. [КЪа4], С1с) и просапогенина А (диосгенин КБа2, С1с), где противораковая терапия представляет воздействие на раковую клетку противораковым средством или лучевой терапией и где противораковое средство выбрано из одного или более средств, выбранных из группы, состоящей из таксола (паклитаксела), доцетаксела, винкристина, доксорубицина, иматиниба и 5-фторурацила.
2. Способ по п.1, применяемый для ингибирования образования и роста опухоли у субъекта, и/или для предупреждения и/или лечения рака у субъекта.
3. Способ по п.2, где субъект страдает от или восприимчив к раку, выбранному из группы, состоящей из карциномы, рака мочевого пузыря, рака кости, опухолей мозга, рака молочной железы, цервикального рака, колоректального рака, включающего рак толстой кишки, прямой кишки, ануса и аппендикса, рака пищевода, болезни Ходжкина, рака почки, рака гортани, лейкемии, рака печени, рака легкого, лимфомы, меланомы, родимых пятен и диспластических невусов, множественной миеломы, мышечного рака, неходжкинской лимфомы, рака рта, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака простаты, саркомы, рака кожи, рака желудка, тестикулярного рака, тератомы, рака щитовидной железы и рака матки.
4. Способ стимулирования активности противораковой терапии у субъекта, снижения количества противораковой терапии, предоставляемой субъекту для предупреждения и/или лечения рака у субъекта, или предупреждения и/или лечения рака у субъекта, имеющего повышенную резистентность к противораковой терапии, включающий воздействие на субъекта эффективного количества стероидного сапонина, где стероидный сапонин выбран из группы, состоящей из делтонина (диосгенин КБа2, [С1с4],С1с), диосцина (диосгенин ИНа2, [КБа4], С1с) и просапогенина А (диосгенин ИНа2, С1с), где противораковая терапия представляет собой воздействие на клетку противоракового средства или лучевую терапию и где противораковое средство выбрано из одного или более средств, выбранных из группы, состоящей из таксола (паклитаксела), доцетаксела, винкристина, доксорубицина, иматиниба и 5-фторурацила.
5. Способ по п.4, где рак выбран из группы, состоящей из карциномы, рака мочевого пузыря, рака кости, опухоли мозга, рака молочной железы, цервикального рака, колоректального рака, включая рак
- 22 018754 толстой кишки, прямой кишки, ануса и аппендикса, рака пищевода, болезни Ходжкина, рака почки, рака гортани, лейкемии, рака печени, рака легкого, лимфомы, меланомы, родимых пятен и диспластических невусов, множественной миеломы, мышечного рака, неходжкинской лимфомы, рака рта, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака простаты, саркомы, рака кожи, рака желудка, тестикулярного рака, тератомы, рака щитовидной железы и рака матки.
6. Способ ингибирования образования и/или роста опухоли у субъекта или предупреждения и/или лечения рака у субъекта, включающий воздействие на субъекта противораковой терапии и эффективного количества стероидного сапонина, где стероидный сапонин выбран из группы, состоящей из делтонина (диосгенин ККа2, [61с4], 61с), диосцина (диосгенин ККа2, [Кйа4], 61с) и просапогенина А (диосгенин ККа2, 61с), где противораковая терапия представляет собой воздействие на клетку противоракового средства или лучевую терапию и противораковое средство выбрано из одного или более средств, выбранных из группы, состоящей из таксола (паклитаксела), доцетаксела, винкристина, доксорубицина, иматиниба и 5-фторурацила.
7. Способ по п.6, где рак выбран из группы, состоящей из карциномы, рака мочевого пузыря, рака кости, опухолей мозга, рака молочной железы, цервикального рака, колоректального рака, включающего рак толстой кишки, прямой кишки, ануса и аппендикса, рака пищевода, болезни Ходжкина, рака почки, рака гортани, лейкемии, рака печени, рака легкого, лимфомы, меланомы, родимых пятен и диспластических невусов, множественной миеломы, мышечного рака, неходжкинской лимфомы, рака рта, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака простаты, саркомы, рака кожи, рака желудка, тестикулярного рака, тератомы, рака щитовидной железы и рака матки.
8. Противораковая композиция, содержащая противораковое средство и стероидный сапонин, где стероидный сапонин выбран из группы, состоящей из делтонина (диосгенин ККа2, [61с4], 61с), диосцина (диосгенин Р11а2, |РНа4|, 61с) и просапогенина А (диосгенин РНа2, 61с), и противораковое средство выбрано из одного или более средств, выбранных из группы, состоящей из таксола (паклитаксела), доцетаксела, винкристина, доксорубицина, иматиниба и 5-фторурацила.
9. Способ снижения резистентности, развивающейся в раковой клетке, к противораковой терапии или стимулирования апоптоза раковой клетки вследствие воздействия на раковую клетку противораковой терапии, включающий воздействие на раковую клетку эффективного количества стероидного сапонина, где стероидный сапонин выбран из группы, состоящей из делтонина (диосгенин РНа2, [61с4], 61с), диосцина (диосгенин ККа2, [Кйа4], 61с) и просапогенина А (диосгенин РНа2, 61с), где противораковая терапия представляет собой воздействие на клетку противоракового средства или лучевую терапию и противораковое средство выбрано из одного или более средств, выбранных из группы, состоящей из таксола (паклитаксела), доцетаксела, винкристина, доксорубицина, иматиниба и 5-фторурацила.
EA200970174A 2006-08-03 2007-08-03 Способы и композиции для стимулирования активности противораковых терапий EA018754B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2006904193A AU2006904193A0 (en) 2006-08-03 Methods and compositions for promoting apoptosis of cancerous cells
PCT/AU2007/001091 WO2008014563A1 (en) 2006-08-03 2007-08-03 Methods and compositions for promoting activity of anti-cancer therapies

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200970174A1 EA200970174A1 (ru) 2009-08-28
EA018754B1 true EA018754B1 (ru) 2013-10-30

Family

ID=38996791

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200970174A EA018754B1 (ru) 2006-08-03 2007-08-03 Способы и композиции для стимулирования активности противораковых терапий

Country Status (12)

Country Link
US (4) US20090263504A1 (ru)
EP (1) EP2049121B1 (ru)
JP (2) JP5714815B2 (ru)
CN (1) CN101511368B (ru)
AU (1) AU2007281037B2 (ru)
BR (1) BRPI0715071A2 (ru)
CA (1) CA2659537C (ru)
EA (1) EA018754B1 (ru)
ES (1) ES2441593T3 (ru)
MX (1) MX2009001163A (ru)
TW (1) TWI422377B (ru)
WO (1) WO2008014563A1 (ru)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105640969A (zh) * 2014-11-10 2016-06-08 江苏省中国科学院植物研究所 毛冬青次皂苷的抗菌用途
WO2016115431A1 (en) * 2015-01-16 2016-07-21 The Johns Hopkins University Methods for enhancing antigen-specific immune responses
CN105037480B (zh) * 2015-06-24 2017-04-12 中国海洋大学 呋甾皂苷及其作为α‑糖苷酶抑制剂在抗糖尿病药物中的应用
US10925887B2 (en) 2017-02-10 2021-02-23 Oncology Research International Limited Steroid saponins with anti-cancer activity
CN108295085B (zh) * 2018-01-30 2020-05-19 中山大学附属第一医院 原薯蓣皂苷在制备抗耐药性骨肉瘤药物中的应用
CN111303239B (zh) * 2020-03-02 2022-03-01 河南中医药大学 两种治疗食管癌的活性单体、组合物及其应用
CN112940064B (zh) * 2021-02-05 2022-07-01 中国人民解放军空军军医大学 一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物及用途
CN115607561B (zh) * 2021-07-16 2023-09-05 南京市中西医结合医院 一种协同增效抗肺癌药物组合物及其在医药上的应用
CN114209652B (zh) * 2021-12-29 2022-08-09 中山大学附属第一医院 一种微环境nk细胞免疫调控递送系统及其制备方法和应用

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6168795B1 (en) * 1998-06-09 2001-01-02 Sant{acute over (e)} International Inc. Method for anticancer therapy using an herbal extract composition
US6444233B1 (en) * 1998-05-19 2002-09-03 Research Development Foundation Triterpene compositions and methods for use thereof
US20030087836A1 (en) * 2001-07-24 2003-05-08 Dong Huang Novel dammarane sapogenins, their use as anti-cancer agents, and a process for producing same
WO2003055514A1 (en) * 2001-12-21 2003-07-10 Antigenics Inc. Compositions comprising immunoreactive reagents and saponins, and methods of use thereof
US20030203856A1 (en) * 2002-04-19 2003-10-30 Rosazza John P. N. Isoflavone and triterpene glycosides from soybeans
US6759397B2 (en) * 2000-05-01 2004-07-06 The University Of British Columbia Ginsenoside chemotherapy
WO2005060977A1 (en) * 2003-12-22 2005-07-07 Btg International Limited Core 2 glcnac-t inhibitors
US20050288239A1 (en) * 2004-01-27 2005-12-29 Northwestern University Anticancer glycoside compounds
WO2006005581A2 (en) * 2004-07-13 2006-01-19 Charite-Universitäts- Medezin Berlin A composition comprising a pharmacologically active agent coupled to a target cell specific component, and a saponin
WO2007003957A2 (en) * 2005-07-06 2007-01-11 Btg International Limited Steroidal glycoside compounds as core 2 glcnac- t inhibitors

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1237583A (zh) * 1998-06-01 1999-12-08 沈阳药科大学 一种治疗癌症的甾体皂甙类化合物及其制备方法
JP4453884B2 (ja) * 1999-11-24 2010-04-21 大日本印刷株式会社 スパッタ用メタルマスクおよびカラーフィルタの製造方法
CA2335436A1 (en) 2000-02-29 2001-08-29 Glycodesign Inc. Novel core 2 beta-1,6-n-acetylglycosaminyl transferase gene
US20040185057A1 (en) 2001-06-15 2004-09-23 Kirkby Nikolai Soren Therapeutical vaccination
WO2004092329A2 (en) 2003-04-08 2004-10-28 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Semi-synthetic saponin analogs with carrier and immune stimulatory activities for dna and rna vaccines
US20050175623A1 (en) * 2004-02-10 2005-08-11 Zheng-Pin Wang Saponins as anticancer agent
BRPI0715073A8 (pt) * 2006-08-03 2018-04-10 Oncology Res International Limited métodos e composições para inibir a angiogênese
CN100562321C (zh) * 2006-10-13 2009-11-25 吉林天药科技有限公司 薯蓣皂苷元在制备具有增效减毒作用的药物中的应用

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6444233B1 (en) * 1998-05-19 2002-09-03 Research Development Foundation Triterpene compositions and methods for use thereof
US6168795B1 (en) * 1998-06-09 2001-01-02 Sant{acute over (e)} International Inc. Method for anticancer therapy using an herbal extract composition
US6759397B2 (en) * 2000-05-01 2004-07-06 The University Of British Columbia Ginsenoside chemotherapy
US20030087836A1 (en) * 2001-07-24 2003-05-08 Dong Huang Novel dammarane sapogenins, their use as anti-cancer agents, and a process for producing same
WO2003055514A1 (en) * 2001-12-21 2003-07-10 Antigenics Inc. Compositions comprising immunoreactive reagents and saponins, and methods of use thereof
US20030203856A1 (en) * 2002-04-19 2003-10-30 Rosazza John P. N. Isoflavone and triterpene glycosides from soybeans
WO2005060977A1 (en) * 2003-12-22 2005-07-07 Btg International Limited Core 2 glcnac-t inhibitors
US20050288239A1 (en) * 2004-01-27 2005-12-29 Northwestern University Anticancer glycoside compounds
WO2006005581A2 (en) * 2004-07-13 2006-01-19 Charite-Universitäts- Medezin Berlin A composition comprising a pharmacologically active agent coupled to a target cell specific component, and a saponin
WO2007003957A2 (en) * 2005-07-06 2007-01-11 Btg International Limited Steroidal glycoside compounds as core 2 glcnac- t inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
TW200932244A (en) 2009-08-01
AU2007281037B2 (en) 2012-11-15
JP5714815B2 (ja) 2015-05-07
EP2049121B1 (en) 2013-10-09
WO2008014563A1 (en) 2008-02-07
CA2659537A1 (en) 2008-02-07
JP2013241426A (ja) 2013-12-05
CA2659537C (en) 2016-02-16
US9358247B2 (en) 2016-06-07
CN101511368A (zh) 2009-08-19
EA200970174A1 (ru) 2009-08-28
EP2049121A1 (en) 2009-04-22
AU2007281037A1 (en) 2008-02-07
EP2049121A4 (en) 2011-05-11
US20160250240A1 (en) 2016-09-01
US20090263504A1 (en) 2009-10-22
BRPI0715071A2 (pt) 2013-05-28
JP2009545532A (ja) 2009-12-24
US20130273178A1 (en) 2013-10-17
ES2441593T3 (es) 2014-02-05
US20140370122A1 (en) 2014-12-18
MX2009001163A (es) 2009-03-31
TWI422377B (zh) 2014-01-11
CN101511368B (zh) 2012-10-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA018754B1 (ru) Способы и композиции для стимулирования активности противораковых терапий
CN101511369B (zh) 用于抑制血管发生的方法及组合物
US20070105790A1 (en) Pancreatic cancer treatment using Na+/K+ ATPase inhibitors
JP2005515182A (ja) 抗腫瘍剤により誘導される心臓毒性を処置するためのデクスラゾキサン
EP3057593A1 (en) Treatment for pancreatic cancer
BR112021006091A2 (pt) combinação, composto e formulação farmacêutica para uso na terapia do câncer
EP1603575A2 (en) Nemorubicin as radiosensitizer in combination with radiation therapy against tumors
WO2016054472A1 (en) Methods of treating pancreatic cancer
UA70454A (en) Antineoplastic platinum drug for treatment of non-antineoplastic platinum drug for treatment of non-small cell lung cancer and method for its usage small cell lung cancer and method for its usage

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU