CN112940064B - 一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物及用途 - Google Patents

一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物及用途 Download PDF

Info

Publication number
CN112940064B
CN112940064B CN202110161901.9A CN202110161901A CN112940064B CN 112940064 B CN112940064 B CN 112940064B CN 202110161901 A CN202110161901 A CN 202110161901A CN 112940064 B CN112940064 B CN 112940064B
Authority
CN
China
Prior art keywords
starfish
bread
compound
polyhydroxy
steroid saponin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110161901.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112940064A (zh
Inventor
陆云阳
汤海峰
高凯
刘美佑
刘杨
邱鹏程
冯颖达
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Air Force Medical University of PLA
Original Assignee
Air Force Medical University of PLA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Air Force Medical University of PLA filed Critical Air Force Medical University of PLA
Priority to CN202110161901.9A priority Critical patent/CN112940064B/zh
Publication of CN112940064A publication Critical patent/CN112940064A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112940064B publication Critical patent/CN112940064B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J17/005—Glycosides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物及用途，该多羟基甾体皂苷类化合物分子式为C39H64O15，化学结构式为：
Figure DDA0002935734250000011
本发明的多羟基甾体皂苷类化合物对TGF‑β诱导的人肾小管上皮HK‑2细胞损伤具有明显的抑制作用，其半数有效浓度(EC50值)为9.18±1.52μmol/L，表明其可以进一步作为新的抗纤维化药物进行研究开发。

Description

一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物及用途
技术领域
本发明涉及医药技术领域，是从瘤海星科(Oreasteridae)面包海星属(Culcita)海洋动物中分离的新化合物及用途，具体地说是一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物及用途。
背景技术
海星(starfish)属于棘皮动物门(Echinodermata)海星纲(Asteroidea)，是一种在全球范围内广泛分布的海洋动物，据报道现有370余属，1900多种。《中华海洋本草》记载海星味咸、性平，归肝、胃经，具有软坚散结、和胃止痛之功效，主治瘿瘤、瘰疬、甲状腺肿大等症。
面包海星又名馒头海星来源于瘤海星科(Oreasteridae)面包海星属(Culcita)动物，体为圆五角形，幼小个体扁平，缘板明显，成体背面因吸满水而膨胀像面包。面包海星属于大型海星，其最大个体直径可达30cm，个体间颜色差异较大。本种海星主要以珊瑚虫的活体组织为食，因此主要分布于珊瑚礁区。面包海星广泛分布于印度洋和太平洋之间，在我国海南岛南部和西沙群岛有着大量分布。
迄今对其化学成分的研究报道甚少。我们对面包海星总皂苷进行了系统分离，从中获得了一种新的多羟基甾体皂苷类化合物，其化学结构和抗纤维化活性未见有过报道。
发明内容
本发明的目的旨在提供一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物及用途。
为此，本发明的目的是这样实现的，一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物，所述多羟基甾体皂苷类化合物分子式为C39H64O15，化学结构式为：
Figure BDA0002935734230000021
上述结构化学名称为(25S)-3-O-(2-甲氧基-β-D-吡喃木糖基)-26-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-4,24(28)-二烯-胆甾-3β,6β,7α,8,15α,16β,26-庚醇，是从面包海星中分离的多羟基甾体皂苷类化合物，以下简称其为CNPG1。
进一步，所述的一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物的制备方法，具体如下：
将原料面包海星，经切碎后，取80公斤，加入400升质量百分比浓度为75％的乙醇进行回流提取，共提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收溶剂，得乙醇提取物10千克；
提取物分散于10升水中，用石油醚萃取3次，每次10升；
萃取后的水相再用正丁醇萃取3次，每次10升，合并正丁醇萃取液，减压回收溶剂后得到总皂苷提取物240克；
将总皂苷提取物进行硅胶柱层析，以体积比为50:1:0～6.5:3.5:1的氯仿-甲醇-水混合溶剂梯度洗脱，按500mL为一个流份接收，并用硅胶薄层层析检测，收集Rf值在0.4～0.65处显示紫红色斑点的流份，即为含化合物CNPG1的总皂苷混合物，减压蒸干溶剂后得19.3克样品；
将19.3克样品采用Sephdex LH-20葡聚糖凝胶柱层析，以氯仿:甲醇按体积比1:1洗脱，按50mL为一个流份接收，薄层层析检测，合并含CNPG1的第10～14流份，减压蒸干溶剂后得2.4克样品；
将2.4克样品再用C18反相柱层析，以甲醇:水按体积比2:3～1:0洗脱，按50mL为一个流份接收，薄层层析检测，合并含CNPG1的第22～26流份，减压蒸干溶剂后得61毫克样品；最后经高效液相色谱仪分离纯化，得到CNPG1的纯品1.9mg。
进一步，所述的一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物的用途，即：所述多羟基甾体皂苷类化合物在制备抗纤维化药物中的应用。
进一步，所述的一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物的用途，所述多羟基甾体皂苷类化合物单独使用或与其他药物混合，配制成在临床上使用的注射剂、或散剂、或丸剂、或片剂、或微囊剂、或软胶囊剂、或膜剂、或膏剂、或酊剂、或颗粒剂、或气雾剂。
本发明的特点是：本发明化合物CNPG1苷元中6,7,8-三羟基与26位糖链结构非常罕见。该化合物对TGF-β诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤和纤维化有抑制作用，表明其可以进一步作为新的抗纤维化药物进行研究开发。
附图说明
图1是本发明的多羟基甾体皂苷类化合物CNPG1的二维核磁1H-1H COSY、HMBC和NOESY谱相关信号。
具体实施方式
实施例1：
本实施例提供了一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物的提取和分离，是从面包海星中分离获得，分子式为C39H64O15，化学结构式为：
Figure BDA0002935734230000041
上述结构其化学名称为(25S)-3-O-(2-甲氧基-β-D-吡喃木糖基)-26-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-4,24(28)-二烯-胆甾-3β,6β,7α,8,15α,16β,26-庚醇，即(25S)-3-O-(2-O-methyl-β-D-xylopyranosyl)-26-O-α-L-arabinofuranosyl-cholesta-4,24(28)-diene-3β,6β,7α,8,15α,16β,26-heptaol，以下简称其为CNPG1。
制备CNPG1的原料为采自中国南海西沙群岛永兴岛附近海域的面包海星，经切碎后，取80公斤，加入400升质量百分比浓度为75％的乙醇进行回流提取，共提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收溶剂，得乙醇提取物10千克。提取物分散于10升水中，用石油醚萃取3次，每次10升。萃取后的水相再用正丁醇萃取3次，每次10升，合并正丁醇萃取液，减压回收溶剂后得到总皂苷提取物240克。将总皂苷提取物进行硅胶柱层析，以体积比为50:1:0～6.5:3.5:1(均取下层作为洗脱液)的氯仿-甲醇-水混合溶剂梯度洗脱，按500mL为一个流份接收，并用硅胶薄层层析检测(薄层展开溶剂采用体积比为10:1的水饱和正丁醇-甲醇混合溶剂，显色剂为体积比为1:4的硫酸-甲醇溶液，喷显色剂后于105℃加热显色)，收集Rf值在0.4～0.65处显示紫红色斑点的流份，即为含化合物CNPG1的总皂苷混合物，减压蒸干溶剂后得19.3克样品。将19.3克样品采用Sephdex LH-20(GE-Healthcare公司)葡聚糖凝胶柱层析，以氯仿:甲醇(按体积比为1:1)洗脱，按50mL为一个流份接收，薄层层析检测，合并含CNPG1的第10～14流份，减压蒸干溶剂后得2.4克样品。该样品再用C18反相柱层析，以甲醇:水(按体积比为2:3～1:0)洗脱，按按50mL为一个流份接收，薄层层析检测，合并含CNPG1的第22～26流份，减压蒸干溶剂后得61毫克样品。最后经高效液相色谱仪(戴安公司)分离纯化(HPLC条件为：YMC-Pack R&D ODS-A色谱柱20×250mm，40％乙腈为流动相，流速6mL/min，25℃，206nm紫外检测)，得到CNPG1的纯品1.9mg。
实施例2：
在实施例1的基础上，对化合物CNPG1的结构进行鉴定：
化合物CNPG1为白色粉末，溶于吡啶，Liebermann-Burchard和Molish反应呈阳性，20％硫酸乙醇溶液显色反应呈紫红色，表明该化合物可能是甾体皂苷类化合物。ESI-MS显示分子离子峰为m/z 795[M+Na]+(positive mode)，HR-ESI-MS显示分子离子峰在m/z795.4160[M+Na]+(计算值为795.4143)结合化合物的1D NMR数据推测化合物的分子式为C39H64O15。
通过分析化合物的13C NMR(C5D5N,125MHz)、1H NMR(C5D5N,500MHz)和DEPT谱发现其分子结构中39个碳信号中的28个归属于苷元和侧链部分，其中包括两个角甲基δC 17.5和23.6分别对应δH 1.76(3H,s)和1.67(3H,s)，两个双峰甲基氢δH 1.13(d,6.7)和1.16(d,6.9)分别对应δC 18.7和17.9，五个连氧次甲基δC 74.4、76.6、80.0、80.4和82.3分别对应δH4.84、4.51、4.88、5.10和4.71，一个连氧季碳δC 78.1，一个三取代双键δC 129.7对应δH6.17和δC 146.2，一个末端双键δC 109.1对应δH4.87和4.95和δC 153.8。化合物的碳谱中还有两个化学位移为δC 104.7和110.3的端基碳，通过HSQC谱(图1)发现它们的端基氢分别为δH4.77(d,7.6)和5.52(d,2.0)。其中，化学位移为δC 104.7的碳信号和碳谱中化学位移为δC61.1、67.5、71.6、78.5和85.5的碳信号是特征的2-O-methyl-β-D-xylopyranosyl单糖结构。其端基氢的耦合常数J＝7.6Hz证实了其β构型。HMBC谱(图1)中，H-1’与C-3相关表明Xyl连接在化合物的C-3位。通过分析发现，以上数据和已知化合物culcinoside C的碳氢数据极其相近，进一步对比这两个化合物的1D NMR和2D NMR数据发现它们拥有一样的苷元、侧链和单糖结构。化合物CNPG1比化合物culcinoside C多了一个端基碳，表明化合物CNPG1是化合物culcinoside C的糖苷化衍生物。化合物CNPG1的碳谱中化学位移为δC 110.3的端基碳和化学位移为δC 63.2、79.1、84.1和86.1的碳信号和与之相对应的氢信号δH5.52、4.26和4.39、4.84、4.88和4.72表明了分子中的另一个单糖为α-L-arabinofuranosyl结构。其端基氢的耦合常数J＝2.0Hz证实了其为α构型。HMBC谱中H-1”与C-26相关表明其连接在化合物的C-28位。与化合物culcinoside C相比化合物CNPG1的C-26位碳原子的化学位移向低场方向移动到δC＝73.1也证实了这种连接。通过2D NMR(HSQC、1H-1H COSY、HMBC、TOCSY)数据归属化合物CNPG1的碳氢信号(表1)。NOESY谱(图1)中H-3与H-1’、H-1b和H-2a相关，H-1b与H-9相关，表明H-3为α构型，H-6与H-4相关，H-7与H-15相关，而H-6与H-7不相关，以上数据表明H-6为α构型，H-7和H-15为β构型；H-16与H-14和H-17相关，H-14与H-9和H-17相关，表明H-16为α构型。
综上所述，化合物CNPG1的结构被鉴定为(25S)-3-O-(2-甲氧基-β-D-吡喃木糖基)-26-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-4,24(28)-二烯-胆甾-3β,6β,7α,8,15α,16β,26-庚醇，即(25S)-3-O-(2-O-methyl-β-D-xylopyranosyl)-26-O-α-L-arabinofuranosyl-cholesta-4,24(28)-diene-3β,6β,7α,8,15α,16β,26-heptaol。采用高分辨质谱和二维核磁共振谱等光谱技术及化学方法，通过系统命名法确定了该化合物的分子式为C39H64O15，化学结构式为：
Figure BDA0002935734230000071
表1式Ι化合物的1H和13C核磁共振数据(测试溶剂：氘代吡啶)
Figure BDA0002935734230000072
实施例3：
对实施例1分离提纯得到的化合物CNPG1进行体外抗纤维化试验，试验所采用的细胞为人肾小管上皮HK-2细胞(美国ATCC细胞库)，采用常规的CCK-8法测试。
实施方法为：取在对数生长期生长状态良好的人肾小管上皮HK-2细胞，接种至96孔板上(6×103个/孔)，置于含5％CO2恒温37℃的培养箱中培养，当细胞生长至60％～70％时，吸去培养基换成无血清培养基继续培养24小时。将细胞分为①空白对照组、②模型组(TGF-β10ng/mL)和③给药组(TGF-β10ng/mL+CNPG1)，CNPG1的浓度分别为0.1、1、10、50和100μg/mL，每组分别设置5个复孔。细胞培养24小时后，按照CCK-8试剂使用说明操作，每孔加入10μL试剂，再培养2个小时后，用酶联免疫检测仪在波长为450nm处测定每孔的吸光值(OD值)。并计算CNPG1对TGF-β诱导的HK-2细胞损伤的保护有效率(计算公式：细胞保护率＝(给药组OD值-模型组OD值)/(空白对照组OD值-模型组OD值)×100％。再采用SPSS 16.0计算半数有效浓度(EC50)。
结果显示，化合物CNPG1对TGF-β诱导的HK-2细胞损伤有显著的抑制作用，其半数有效浓度(EC50值)为9.18±1.52μmol/L，表明其可以进一步作为新的抗纤维化药物进行研究开发。
因此，本发明的多羟基甾体皂苷类化合物CNPG1可以单独使用或与其他药物混合，采用常规方法配制成在临床上可以使用的注射剂、或散剂、或丸剂、或片剂、或微囊剂、或软胶囊剂、或膜剂、或膏剂、或酊剂、或颗粒剂、或气雾剂。
本实施例没有详细叙述的测试方法和英文缩写属本行业的公知常识，这里不一一叙述。
以上例举仅仅是对本发明的举例说明，并不构成对本发明的保护范围的限制，凡是与本发明相同或相似的设计均属于本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物，其特征在于：所述多羟基甾体皂苷类化合物分子式为C39H64O15，化学结构式为：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
上述结构化学名称为(25S)-3-O-(2-甲氧基-β-D-吡喃木糖基)-26-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-4,24(28)-二烯-胆甾-3β,6β,7α,8,15α,16β,26-庚醇，是从面包海星中分离的多羟基甾体皂苷类化合物，以下简称其为CNPG1；
所述的多羟基甾体皂苷类化合物的制备方法，具体如下：
将原料面包海星，经切碎后，取80公斤，加入400升质量百分比浓度为75%的乙醇进行回流提取，共提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收溶剂，得乙醇提取物10千克；
提取物分散于10升水中，用石油醚萃取3次，每次10升；
萃取后的水相再用正丁醇萃取3次，每次10升，合并正丁醇萃取液，减压回收溶剂后得到总皂苷提取物240克；
将总皂苷提取物进行硅胶柱层析，以体积比为50:1:0～6.5:3.5:1的氯仿-甲醇-水混合溶剂梯度洗脱，按500 mL为一个流份接收，并用硅胶薄层层析检测，收集Rf值在0.4～0.65处显示紫红色斑点的流份，即为含化合物CNPG1的总皂苷混合物，减压蒸干溶剂后得19.3克样品；
将19.3克样品采用Sephdex LH-20葡聚糖凝胶柱层析，以氯仿:甲醇按体积比1:1洗脱，按50 mL为一个流份接收，薄层层析检测，合并含CNPG1的第10～14流份，减压蒸干溶剂后得2.4克样品；
将2.4克样品再用C18反相柱层析，以甲醇:水按体积比2:3~1:0洗脱，按50 mL为一个流份接收，薄层层析检测，合并含CNPG1的第22~26流份，减压蒸干溶剂后得61毫克样品；最后经高效液相色谱仪分离纯化，得到CNPG1的纯品1.9 mg。
2.如权利要求1所述的一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物的用途，其特征在于：所述多羟基甾体皂苷类化合物在制备抗纤维化药物中的应用。
CN202110161901.9A 2021-02-05 2021-02-05 一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物及用途 Active CN112940064B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110161901.9A CN112940064B (zh) 2021-02-05 2021-02-05 一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物及用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110161901.9A CN112940064B (zh) 2021-02-05 2021-02-05 一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物及用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112940064A CN112940064A (zh) 2021-06-11
CN112940064B true CN112940064B (zh) 2022-07-01

Family

ID=76242615

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110161901.9A Active CN112940064B (zh) 2021-02-05 2021-02-05 一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物及用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112940064B (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101348514A (zh) * 2008-09-08 2009-01-21 中国人民解放军第四军医大学 一种从面包海星提取的海星皂苷类化合物的用途

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008014563A1 (en) * 2006-08-03 2008-02-07 Oncology Research International Limited Methods and compositions for promoting activity of anti-cancer therapies
CN102504006B (zh) * 2011-09-26 2013-12-25 李国玉 一组伊贝母中的甾体皂苷类化合物

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101348514A (zh) * 2008-09-08 2009-01-21 中国人民解放军第四军医大学 一种从面包海星提取的海星皂苷类化合物的用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN112940064A (zh) 2021-06-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109912680B (zh) 一种齐墩果烷型三萜皂苷及其提取分离方法和应用
Wang et al. Lycodine-type alkaloids and their glycosides from Lycopodiastrum casuarinoides
CN104262445B (zh) 金花茶皂苷a及其制备方法和抗肿瘤用途
WO2014183630A1 (zh) 一种木脂素苷类化合物及其制备方法
Dini et al. Furostanol saponins in Allium caepa L. Var. tropeana seeds
CN101463058B (zh) 羊毛脂烷型三萜化合物海莲酸、其衍生物及其制备方法和用途
JPH08291194A (ja) ニンジンサポゲニン及びその製造法
CZ288170B6 (en) Pharmaceutical composition and use thereof
CN112940064B (zh) 一种从面包海星中提取的多羟基甾体皂苷类化合物及用途
CN110452248B (zh) 一种新颖倍半萜化合物及其制备方法与应用
CN101333239B (zh) 从九节龙提取的三萜皂苷类抗胶质瘤化合物
CN113214214B (zh) 关苍术中一种萜类化合物的制备方法和应用
Lu et al. Unusual cytotoxic steroidal saponins from the gorgonian Astrogorgia dumbea
CN111377933B (zh) 诸葛菜种子提取的生物碱类化合物及其提取方法与应用
CN112194702B (zh) 一种达玛烷型三萜类化合物及其在制备治疗心血管疾病药物上的用途
CN109879926B (zh) 连钱草中的三萜苷类化合物及其提取分离方法
CN109485570B (zh) 一种异戊烯基取代联苯类化合物及其制备方法和应用
CN106822088B (zh) 一种双烯环烯醚萜化合物在制备抗癌药物中的用途
CN114920796B (zh) 一种从具柄重楼中提取的甾体皂苷类化合物和制备及用途
CN101348514B (zh) 一种从面包海星提取的海星皂苷类化合物的用途
CN113372407B (zh) 甾体皂苷类化合物及其制备方法和应用
CN114262354B (zh) 一种化合物及其用途
CN116178478A (zh) 一种从宽叶重楼中提取的甾体皂苷类化合物、方法及应用
CN112209978B (zh) 达玛烷三萜皂苷化合物及其应用
CN112480203B (zh) 一种醉茄内酯类化合物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant