EA018000B1 - Пептидомиметики с активностью антагонистов глюкагона и агонистов glp-1 - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к новым пептидомиметикам формулы (I), которые преимущественно действуют как стимуляторы глюкозозависимой секреции инсулина. Кроме того, выявлено, что эти пептидомиметики наряду с активностью агониста рецептора GLP-1 демонстрируют активность антагониста рецептора глюкагона.

Description

Настоящее изобретение относится к новым соединениям общей формулы (I), к их таутомерным формам, их фармацевтически приемлемым солям и к содержащим их фармацевтическим композициям

Настоящее изобретение также относится к способу получения соединений общей формулы (I), их таутомерных форм, их фармацевтически приемлемых солей и содержащих их фармацевтических композиций.

Предпосылки изобретения

Диабет характеризуется нарушенной секрецией инсулина из β-клеток поджелудочной железы, резистентностью к инсулину или и тем, и другим (Сахадкап, М.К., е! а1., 1. С1т. 1пуе81. 2000, 106, 329). Большинство пациентов с диабетом 2 типа можно лечить средствами, снижающими продукцию глюкозы печенью (антагонист глюкагона), снижающими всасывание глюкозы из ЖКТ, стимулирующими функцию β-клеток (стимуляторы секреции инсулина), или средствами, увеличивающими чувствительность ткани пациентов к инсулину (сенсибилизаторы инсулина). Лекарственные средства, применяемые в настоящее время для лечения диабета 2 типа, включают ингибиторы α-глюкозидазы, сенсибилизаторы инсулина, стимуляторы секреции инсулина и блокаторы К_АТР-каналов (СБеБабе, 1.М., е! а1., 1)шд8, 2000, 60, 95). Однако почти у половины индивидуумов с диабетом 2 типа через определенный промежуток времени исчезает ответ на эти средства, после чего им необходима инсулинотерапия. У лечения инсулином существует несколько недостатков, он является инъецируемым, вызывает гипогликемию и вызывает увеличение массы (Вигде, М.К., О1аЬе!е8 ОЬез. Ме!аЬ., 1999, 1, 199).

Недостатки современных способов лечения делают необходимыми новые средства лечения диабета 2 типа. В связи с этим признано, что терапевтически потенциальными являются агонист глюкагоноподобного пептида 1 (СВР-1), стимулирующий глюкозозависимую секрецию инсулина в поджелудочной железе, и антагонист рецептора глюкагона, ингибирующий продукцию глюкозы печенью, ингибируя гликогенолиз и глюконеогенез. Таким образом, выявлено, что агонист СЬР-1 и антагонист глюкагона вместе снижают уровни циркулирующей глюкозы и представляют собой пригодные терапевтические средства для лечения и профилактики диабета 2 типа (Реггу, Т.А., е! а1., Тгепбз РБагтасо1. 8с1, 2003, 24, 377).

Глюкагон и СЬР-1 являются представителями семейства структурно родственных пептидных гормонов (семейство секретина). Глюкагон и СЬР-1 составляют набор высокогомологичных пептидов, так как эти два гормона происходят от общего предшественника, препроглюкагона, который после тканеспецифического процессинга приводит к продукции СЬР-1, преимущественно в кишечнике, и глюкагона в поджелудочной железе (Банд, С., е! а1., Ат. 1. РБузю1. Епбосппо! Ме!аЬ., 2003, 284, Е671-678). Рецепторы этих двух пептидов являются гомологичными (идентичными на 58%) и принадлежат к классу В семейства связанных с С-белками рецепторов (СРСК). СРСК класса В также называют семейством секретиновых рецепторов, состоящем у людей из 15 связывающих пептиды рецепторов. Рецепторы СРСК включают внеклеточный Ν-концевой домен из 100-160 остатков, соединенный с околомембранным доменом (1-домен) из семи трансмембранных α-спиралей с промежуточными петлями, и С-концевой хвост (ВгиЬакег, Р.Б., е! а1., Кесер!ог8 СБаппе18, 2002, 8, 179). СРСК класса В активируются эндогенными пептидными лигандами промежуточного размера, как правило, из 30-40 аминокислот (Ноаге, 8.К.Г, Огад. О18соуегу Тобау, 2005, 10, 423; Се1Бег, и., Епбосппе Ке\те\\8, 2000, 21, 90).

Глюкагон представляет собой пептидный гормон из 29 аминокислот, процессируемый РС2 из проглюкагона в α-клетках поджелудочной железы. Глюкагон действует через семь трансмембранных СРСК, состоящих из 485 аминокислот. Глюкагон высвобождается в кровоток при низком уровне циркулирующей глюкозы. Основной физиологической ролью глюкагона является стимуляция продукции глюкозы печенью, приводящая, таким образом, к увеличению гликемии (Тап, К., е! а1., О1аЬе!о1од1а, 1985, 28, 435). Глюкагон обеспечивает основной противодействующий инсулину механизм регуляции поддержания гомеостаза глюкозы т νΐνϋ. Глюкагон и его рецептор представляют собой потенциальные мишени для лечения диабета. Противодействие действию глюкагона посредством блокирования действия секретируемого глюкагона на рецептор глюкагона (антагонист глюкагона) или посредством ингибирования (супрессии) продукции самого глюкагона является новым направлением для воздействия на диабет и нарушения обмена веществ (Ьп8оп, С.С., е! а1., РерБбе8, 1989, 10, 1171; Рагкег, ЕС., О1аЬе!е8, 2000, 49, 2079; 1оБп8оп, Ώ.α, 8с1епсе, 1982, 215, 1115; Апп, 1.М., 1МС, 2001, 44(9), 1372-1379).

Амид СОР-1 (7-36) представляет собой продукт гена препроглюкагона, секретируемый Б-клетками кишечника в ответ на потребление пищи. Физиологическое действие СОР-1 стало объектом значительного интереса. СОР-1 оказывает множественное действие, стимулируя секрецию инсулина из β-клеток поджелудочной железы, независимым от глюкозы способом (инсулинотропное действие). СОР-1 снижает концентрацию циркулирующего в плазме глюкагона, ингибируя его секрецию (продукцию) из α-клеток (Югаскег Ώ.Γ, Епбосппо1оду, 2001, 142, 521-527). СБР-1 также проявляет свойства, подобные стимуляции роста β-клеток, подавлению аппетита, задержке эвакуации желудочного содержимого и стимуляции чувствительности к инсулину (Жаиск, М.А., Ногт. Ме!аЬ. Ке8., 2004, 36, 852). В настоящее вре

- 1 018000 мя на различных стадиях клинических исследований находятся различные аналоги ОЬР-1 и ЕХ-4, такие как лираглутид/МЫ2211 (Νονο ЫогЛзк; фаза III; АО 1998/008871), ΒΙΜ 51077 (Зрзеи; фаза II; АО 2000/034331), С1С-1131 (СоищСЬет; фаза II; АО 2000/069911) и ΖΡ-10 ^еа1апб апб Луепбз; фаза II; АО 2001/004156) (№шек Μ.Α., Кеди1а1огу Рерббез, 2004, 115, 13). Недавно на рынок США выпущена баета (ВУЕТТА®) (экзендин 4, АС 2933; И8 5424286) (Лту1ш апб ЬШу). Однако все существующие агонисты ОЬР-1 вводят парентеральным способом введения так, что основной проблемой существующей терапии на основе ОЬР-1 является несоблюдение пациентом схемы лечения.

Эффекторная система рецепторов глюкагона и ОЬР-1 представляет собой фермент аденилатциклазу (АС). Взаимодействие глюкагона или агониста ОЬР-1 с рецепторами глюкагона или ОЬР-1 (ОЬР-1К) соответственно вызывает активацию АС, преобразующую АТФ в цАМФ. Увеличение уровня внутриклеточного цАМФ увеличивает отношение АДФ/АТФ, таким образом вызывая деполяризацию клетки (вследствие закрытия К_АТР-каналов). Увеличение уровня внутриклеточного цАМФ также активирует протеинкиназу (РК-А и РК-С), увеличивающую концентрацию Са²⁺ в цитозоле, открывая Ь-тип Са²⁺ каналов. Увеличение внутриклеточного Са²⁺ приводит к экзоцитозу инсулина в β-клетках поджелудочной железы и пептида глюкагона в α-клетках (Еейтапп, Н.С., Епбосг. Ксу., 1995, 16, 390).

Приведенное ниже выравнивание последовательностей ОЬР-1 и глюкагона представляет соответствие первичных структур.

Глюкагон:

ХН₂-¹Н8ООТЕТ8П⁹¥§К¥ЬП§ККАОПЕУОАЬМХТ²⁹-СОХН₂ (8ед. ГО. Νο. 1),

ОЬР-1 (7-36):

NН₂-¹НΑЕОΤΕΤ8^⁹У88Υ^ЕО^ΑΑКЕΕIΑА^УКОК³⁰-СОNН₂ (8ед. ГО. Νο. 2).

Первые Ν-концевые 1-9 остатки пептида ОЬР-1 с С-концевым амидом:

ΝΗ₃,^{ι ι}-¹ΗΑΕ^ι' ^ιΟΤΡΤ8Ο^9,ι' ^ι-ί.ΌΝΗ₂ (8ес.|. ГО. Νο. 3): суммарный заряд отрицательный.

Первые Ν-концевые 1-9 остатки пептида глюкагона с С-концевым амидом:

ХНз⁽⁺⁾-¹Н8ООТЕТ8П^9(-)-СОХН₂ (8ес|. ГО. Νο. 4): суммарный заряд нейтральный.

Однобуквенные сокращения для аминокислот можно найти в ΖиЬау, О., ВюсЬешЩгу 2^пб еб., 1988, МасМШап РиЫщЫпд, Νον Уогк, р. 33.

Природные или синтетические пептиды ОЬР-1 быстро метаболизируются протеолитическими ферментами, такими как дипептидилпептидаза IV (ОРР-ГУ), в неактивный метаболит, ограничивая, таким образом, применение ОЬР-1 в качестве лекарственного средства (Эеасоп, С.Е., КещбаЮгу РерНбез, 2005, 128, 117). Аналогично, в последние годы опубликовано несколько непептидных и пептидных антагонистов рецепторов глюкагона различной структуры, но ни один из них не находится в активной разработке или в клинических испытаниях (Кигики1а8ипуа, К., Ехрей Оршюп ТЬегареибс Ра1еп18. 2005, 15, 1739; Ьаи, 1., 1. Меб. СЬет., 2007, 50, 113; Ре1егзеп, К.Е. П1аЬе1о1о§1а, 2001, 44, 2018; Сазшеп, Μ.Α., 1ВС, 1999, 274, 8694). Полагают, что выявление непептидных лигандов (особенно агонистов) для ОРСК класса Β является основной трудностью при поиске лекарственных средств. НТ8 по-видимому дало несколько вариантов (И8 2005/6927214; АО 2000/042026; И8 2007/0043093), однако скрининг этих вариантов в отношении соответствующих рецепторов, особенно в условиях 1п νίνο (модели на животных), имеет тенденцию к ложноотрицательным результатам (МигрЬу, К.О., ΡNΑ8, 2007, 104, 689).

Глюкагон и ОЬР-1 играют большую роль в общем гомеостазе глюкозы (Эгискег, Ό.Ι., 1. С1ш. [пуез!., 2007, 117, 24; Во11уку, 1., 1. С1ш. Епбосппо1. Ме!аЬ., 2007, 92, 2879). Глюкагон увеличивает концентрации глюкозы в плазме, стимулируя глюконеогенез и гликогенолиз в печени, тогда как ОЬР-1 снижает концентрации глюкозы в плазме, опосредуемые глюкозозависимой секрецией инсулина (Μο_)8ον, 8., е! а1., 1ВС, 1990, 265, 8001). С учетом важности пептида глюкагона и ОЬР-1 в поддержании нормальной концентрации глюкозы в крови в последние годы возник значительный интерес в идентификации одного лиганда, действующего в качестве антагонистов рецепторов глюкагона и агонистов рецепторов ОЬР-1 (С1аиз, Т.Н., 1. Епбосппо1о§у, 2007, 192, 371; Рап С.ф., 1ВС, 2006, 281, 12506).

Хотя идентификация эффективного непептидного агониста ОЬР-1 может быть затруднительной (СЬеп, Ό., ΡNΑ8, 2007, 104, 943; Кпибзеп, Ь.В., ΡNΑ8, 2007, 104, 937), разработка гибридного пептидомиметика, действующего в качестве и антагониста глюкагона, и агониста рецептора ОЬР-1, вероятно, может предоставить новый подход для лечения диабета 2 типа (С1аиз, Т.Н., 1. Епбосгшо1о§у, 2007, 192, 371). В последнее время опубликован ряд химерных пептидов, которые действуют и как агонист рецептора ОЬР-1, и как антагонист рецепторов глюкагона, сконструированных в основном посредством комбинирования Ν-концевых остатков пептида глюкагона (остатки 1-26) с последними 4 С-концевыми остатками пептида ОЬР-1 (УКОК) (Рап С.ф., е! а1., И8 6864069 В2; Рап С.ф., 1ВС, 2006, 281, 12506).

В литературе опубликованы исследования зависимости структура-активность (8АК) с определением роли индивидуальных аминокислот в последовательностях глюкагона и ОЬР-1 (Кипде, 8., 1ВС, 2003, 278, 28005; Мапп, К., ВюсЬет. 8ос. Тгапз., 2007, 35, 713). У глюкагона и ОЬР-1 в водном растворе нет определенной структуры, но в присутствии мицелл или в окружении мембраномиметиков они принимают в центральном участке альфа-спиральную структуру с подвижными Ν- и С-концевыми областями (ТЬот1оп, К., ВюсЬетщ1гу, 1994, 33, 3532; №1б1дЬ, 1.А., ВюсЬетщЦу, 2001, 40, 13188). Это позволяет

- 2 018000 предположить, что спиральная структура необходима для связывания пептидных лигандов с их соответствующими рецепторами. Мутации или делеции аминокислот в Ν-концевой области у обоих пептидов приводят к антагонистам рецепторов или неактивным соединениям, что позволяет предположить важность Ν-конца для активации рецептора пептидами глюкагоном и СЬР-1 (Н)ог111. 8.Л., ДБС, 1994, 269, 30121; Сгееп, Β.Ό., I. Мо1. Епбостшо1о§у, 2003, 31, 529). Ιη νίνο, СЬР-1 быстро разрушается дипептидилпептидазой IV (ΌΡΡ IV), протеазой, отвечающей за расщепление пептидов, содержащих остатки пролина и аланина в предпоследнем положении Ν-конца, что приводит к неактивным метаболитам. Замены чувствительных к ΌΡΡ-ΐν участков, таких как замена А1а во 2 положении пептида СЬР-1 на Ό-АЦ А1Ь или ΗΙ1 (гексафторлейцин) значительно увеличивают стабильность в плазме (Ьеасоп, С.Е., О1аЬе1С8, 1998, 47, 764; Мепд, Η., I. Меб. СЬет., 2008, 51, 7303-7307).

В настоящем исследовании авторы выявили, что связывание Ν-концевой последовательности пептида глюкагона (первые 1-9 остатки, 8ес.|. ΙΌ. №. 4) с дипептидом из двух неприродных аминокислот, приводит к получению нового класса пептидомиметиков с активностью в качестве антагониста глюкагона и агониста СЬР-1 с различной степенью селективности. Для увеличения продолжительности действия и стабильности в отношении фермента ЬРР-ΐν авторы сайт-специфически модифицировали гибридные пептидомиметики селективно в положении Ζ₂ неприродными аминокислотами, такими как Ό-АЦ А1Ь, α-метилпролин (α-Ме-Рго), 1-аминоциклопентанкарбоновая кислота (АРР) и 1-аминоциклопропанкарбоновая кислота (АСР), и добились получения коротких пептидомиметиков. Некоторые из пептидомиметиков продемонстрировали эффективность даже при пероральном способе введения при сохранении активности антагониста глюкагона и агониста СЬР-1.

Предшествующий уровень техники и стратегия конструирования

Опубликован ряд модифицированных по Ν-концу модуляторов СЬР-1 с общей формулой Хаа1Хаа11, где Хаа1-Хаа9 представляет первые 1-9 остатки пептида СЬР-1 (НАЕСТЕТ8П; 8ес.|. ΙΌ. №. 3), с некоторыми аналогами, где Хаа2 или представляет собой А1а, или необязательно замещен А1Ь; Хаа3 представляет собой аминокислоты с боковой цепью в виде карбоновой кислоты, такие как глутаминовая кислота и аспарагиновая кислота, но не С1п (С), который консервативен в Ν-концевой последовательности пептида глюкагона (ΗδρΟΤΕΤδΌ, 8ес.|. ΙΌ. №. 4); Хаа6 представляет РЬе или необязательно замещен -а-Ме-2Е-РЬе-; Хаа9 представляет собой аминокислоты с боковыми цепями в виде карбоновой кислоты или амида, такие как аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, аспарагин и т.д.; Хаа10 представляет собой производные замещенного или незамещенного бифенилаланина (Βίρ) и Хаа11 представляет собой производные замещенного или незамещенного бифенилаланина (Βίρ) или производные замещенной или незамещенной 2-амино-5-фенилпентановой кислоты (АРРА) АО 2003/033671А2; И8 2004/0127423 А1; АО 2004/094461 А2; ϋδ 2006/0004222 А1; АО 2006/014287 А1; АО 2006/127948 А2; АО 2007/082264 А2; ϋδ 2007/0021346 А1; И82007/0099835; ϋδ 2007/0238669 А1; АО 2007/140284 А2; ϋδ 2006/7145040 Β2; υδ 2007/7238671 Β2; ϋδ 2007/7238670 Β2; ϋδ 2007/0287670 А1; ϋδ 2008/0045461 А1).

Ранее опубликован ряд новых пептидомиметиков из 11 аминокислот, в основном состоящих из Ν-концевой последовательности пептида глюкагона (первые 1-9 остатки, δе^. ΙΌ. №. 4) в качестве активирующего компонента, ковалентно связанных с дипептидом из двух неприродных аминокислот (производные замещенного или незамещенного бифенилаланина (Βίρ)) в качестве связывающего компонента, которые преимущественно продемонстрировали глюкозозависимую секрецию инсулина. Кроме того, эти пептидомиметики, наряду с активностью агониста рецептора СЬР-1, продемонстрировали активность антагониста рецептора глюкагона (АО 2008/062457 А2).

В настоящем изобретении предоставлены новые пептидомиметики формулы (Ι) (далее в настоящем документе обозначаемые как пептидомиметики). В настоящем изобретении вместо основанном на бифенилаланине (Βίρ) дипептидном связывающем компоненте авторы в качестве связывающих компонентов использовали производные на основе замещенного или незамещенного дипептида Β^ρ(ОМе)-АΡΡА. Неожиданно вместо первых 9 остатков Ν-концевой последовательности пептида СЬР-1 (ΗΛΕΟΤΡΤδΌ; δе^. ΙΌ. №. 3), когда этот дипептид присоединили к первым 9 остаткам Ν-концевой последовательности пептида глюкагона ('ΗδΟΟΤΕΤδΌ⁹'; δе^. ΙΌ. №. 4), авторы обнаружили, что этот пептидомиметик (ΝΗ3⁺Ηδ^СΤΕΤδ^-Β^ρ(ОМе)-(ΛΡΡА)-СОNΗ2; δе^. ΙΌ. №. 5), наряду с активностью агониста рецептора СЬР1, преимущественно демонстрировал активность антагониста рецептора глюкагона, фиг. 1.

Новые пептидомиметики формулы (Ι) преимущественно действуют в качестве антагониста рецепторов глюкагона, а также демонстрируют эффекты агониста СЬР-1К Различные пептидомиметики, представленные в настоящем изобретении, продемонстрировали существенную глюкозозависимую секрецию инсулина (ίη νίΙΐΌ) и снижали уровни циркулирующей глюкозы (ίη νί\Ό) с различным уровнем аффинности/селективности к рецепторам глюкагона и СЬР-1. Кроме того, по сравнению с предыдущими опубликованными пептидомиметиками (например, как в АО 2008/062457 А2), данные пептидомиметики с производными на основе замещенного или незамещенного дипептида Β^ρ(ОМе)-ΛΡΡА в качестве связывающих компонентов продемонстрировали увеличенную стабильность в отношении протеолитического расщепления, особенно в отношении ОРР-Ιν, желудочных и кишечных ферментов. Таким образом, выявлено несколько стабильных в отношении ферментов ЖКТ и кислого рН желудка пептидомиметиков с

- 3 018000 улучшенной пероральной биодоступностью, что делает их подходящими кандидатами для лечения/облегчения/профилактики диабета 1 и 2 типа, нарушений обмена веществ и связанных нарушений.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к группе новых пептидомиметиков, функционирующих в качестве как антагониста рецептора глюкагона, так и агониста рецептора СЬР-1 с различной степенью аффинности/селективности в отношении обоих рецепторов и пригодных для снижения уровней циркулирующей глюкозы и для лечения диабета. Эти пептидомиметики определены основной формулой (I), как приведено ниже. Пептидомиметики по настоящему изобретению пригодны для лечения человека или животного, регулируя действие инсулина и глюкагона. Вследствие встраивания нового и метаболически стабильного связывающего компонента пептидомиметики по настоящему изобретению продемонстрировали улучшенную пероральную биодоступность, и, таким образом, выявлено, что они подходят для лечения/облегчения/регуляции или профилактики диабета 1 и 2 типа и ассоциированных нарушений обмена веществ.

Предпочтительные варианты осуществления

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения предоставлены новые пептидомиметики общей формулы (I), их таутомерные формы, новые промежуточные соединения, участвующие в их синтезе, их фармацевтически приемлемые соли, их фармацевтически приемлемые сольваты и содержащие их или их смеси фармацевтические композиции, пригодные для лечения/облегчения/регуляции диабета.

В другом предпочтительном варианте осуществления предоставлен способ получения новых пептидомиметиков общей формулы (I), их таутомерных форм, их фармацевтически приемлемых солей, фармацевтически приемлемых сольватов и фармацевтических композиций, содержащих их.

В дополнительном предпочтительном варианте осуществления предоставлены фармацевтические композиции, содержащие пептидомиметики общей формулы (I), их таутомерные формы, их фармацевтически приемлемые соли, сольваты и их смеси с фармацевтически приемлемыми носителями, растворителями, разбавителями, эксципиентами и другими средствами, как правило, применяемыми для их производства.

В дополнительном предпочтительном варианте осуществления предоставлено применение новых пептидомиметиков по настоящему изобретению в качестве противодиабетических средств посредством введения терапевтически эффективного и нетоксичного количества пептидомиметиков формулы (I) или их фармацевтически приемлемых композиций млекопитающим, нуждающимся в таком лечении.

Используемые сокращения

В примерах и других разделах настоящего документа использовались следующие сокращения:

А1Ь - α-аминоизомасляная кислота,

АСЫ - ацетонитрил,

АРРА - 2-амино-5-фенилпентановая кислота,

АСРР - 2-амино-5-(3-хлорфенил)пентановая кислота,

АЭМР - 2-амино-5-(3,5-диметилфенил)пентановая кислота,

АМСВ - 2-амино-5-(4-хлор-2-метилфенил)пентановая кислота,

2Е-АРРА - 2-амино-5-(2-фторфенил)пентановая кислота,

2.4-ФЕ-АРРА - 2-амино-5-(2,4-дифторфенил)пентановая кислота,

2СЕ₃-АРРА - 2-амино-5-(2-(трифторметил)фенил)пентановая кислота,

2СЕ₃,4Е-АРРА - 2-амино-5-(4-фтор-2-(трифторметил)фенил)пентановая кислота, 2Е,4СЕ₃-АРРА - 2-амино-5-(2-фтор-4-(трифторметил)фенил)пентановая кислота, 2С1-АРРА - 2-амино-5-(2-хлорфенил)пентановая кислота,

2С1,4ОМе-АРРА - 2-амино-5-(2-хлор-4-метоксифенил)пентановая кислота,

Βίρ - бифенилаланин,

В1р(ОМе) - 2'-этил-4'-метоксибифенилаланин, а-Ме-В1р(ОМе) - α-метилированный В1р(ОМе), И(Ме)-В1р(ОМе) - Ν-метилированный В1р (ОМе), Вп - бензил,

Вос - трет-бутоксикарбонил,

Ви¹ - О-трет-бутильная группа,

ЦАМФ - аденозин 3',5'-циклический монофосфат,

ЭСМ - дихлорметан,

ЭМЕ - Ν,Ν-диметилформамид, □ [РОЭ! - диизопропилкарбодиимид,

ЭГРЕА - диизопропилэтиламин,

Е1 - этил,

ЕьО - простой диэтиловый эфир,

Етос - флуоренилметоксикарбонил,

- 4 018000 г - грамм(ы),

СРР-1К - рецептор 1 глюкагоноподобного пептида, глюкагон К - рецептор глюкагона, ч - час(ы),

ΗίΊ - 5,5,5,5',5',5'-28-гексафторлейцин,

ΗΟΒΐ - гидроксибензотриазол,

ΗΟΆΐ- 7-азагидроксибензотриазол,

ΗΒΤυ - гексафторфосфат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламмония,

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография, в/б - внутрибрюшинно, л - литр,

ЬС/М8 - жидкостная хроматография/масс-спектрометрия,

Ме - метил, мин - минута(ы), мл - миллилитр, мкл - микролитр, мг - миллиграмм(ы), ммоль - миллимоль(и), М8 - масс-спектрометрия, РуВОР - гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси-трис-пирролидинофосфония, 8РР8 - твердофазный пептидный синтез, п/к - подкожно,

ΤΜ8 - триметилсилил,

ΤΙΡ8 - триизопропилсилан,

ΤΡΆ - трифторуксусная кислота,

ΤΒΤυ - тетрафтороборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламмония,

Ττΐ - тритильная группа.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 проиллюстрирована активность антагониста рецептора глюкагона человека и активность агониста рецептора СЬР-1 с 8ец. ΙΌ. Νο. 5 ίη νίΐτο.

На фиг. 2 проиллюстрированы примеры ортогонально защищенных аминокислот, используемых в основанном на Ршое твердофазном пептидном синтезе (8РР8) пептидомиметиков.

На фиг. 3 проиллюстрировано определение ЭКС и ЕС₅₀ экзендина (фиг. А) и 8ец. ΙΌ. Νο. 38 (фиг. В) ίη νίΐτο в анализе с ΗС^Ρ-1К.

На фиг. 4 проиллюстрировано снижение уровня глюкозы ίη νίνο у мышей С57, при применении 8ец. ΙΌ. Νο. 38, после внутрибрюшинного (в/б) введения.

На фиг. 5 проиллюстрировано снижение уровня глюкозы ίη νίνο у мышей С57 при применении 8ец. ΙΌ. Νο. 38, после перорального (п/о) введения.

На фиг. 6 проиллюстрировано снижение уровня глюкозы ίη νίνο у мышей 6Ь/6Ь при применении 8ец. ΙΌ. Νο. 38, после перорального (п/о) введения.

На фиг. 7 проиллюстрированы уровни сывороточного инсулина после однократного перорального введения носителей/тестируемых пептидомиметиков (8ец. ΙΌ. Νο. 10, 20 и 25) мышам С57ВЬ/61 (ίη νίνο).

Подробное описание изобретения

По настоящему изобретению предоставлены синтетические пептидомиметики со структурной формулой (Ι), демонстрирующие глюкозозависимую секрецию инсулина. Кроме того, выявлено, что эти пептидомиметики, наряду с активностью агониста рецептора СРР-1, продемонстрировали активность антагониста рецептора глюкагона. Это двойное действие пептидомиметиков демонстрирует увеличенную стабильность в отношении протеолитического расщепления, особенно в отношении фермента БРР-ГУ (дипептидилпептидазы Ιν). Выявлено, что большинство пептидомиметиков стабильны в плазме крыс в пределах 24 ч (ίη νίΐτο), демонстрируя увеличенную стабильность в отношении ферментов ЖКТ, таких как пепсин, и кислого рН желудка, а также в отношении микросом печени (ίη νίΐτο). Вследствие увеличенной метаболической стабильности некоторые из этих пептидомиметиков для лечения или профилактики диабета и связанных нарушений обмена веществ также можно вводить пероральным способом

в которой А представляет собой группы -ΝΗ-Κ₁, К₃-СО-, К₃-О-СО- или К₃-8О₂-, где К₁ представляет собой водород или необязательно замещенную линейную или разветвленную (С₁-С₁₀)алкильную цепь; К₃ выбран из линейных или разветвленных (С₁-С₁₀)алкильной, (С_3-С₆)циклоалкильной, арильной, гетероарильной или арилалкильной групп; в предпочтительном варианте осуществления арильная группа выбрана из фенильной, дифенильной, нафтильной, инданильной, флуоренильной или бифенильной групп; гетероарильная группа выбрана из пиридильной, тиенильной, фурильной, имидазолильной, бензофуранильной групп;

- 5 018000

В представляет собой -СООВ₂, -СОХ’НИ₂ или СН₂ОВ₂, где В₂ представляет собой Н, необязательно замещенные группы, выбранные из линейных или разветвленных (С₁-С₁₀)алкильной, арильной или аралкильной групп, как определено ранее;

Ζ₁-Ζ₁₁ представляет собой природные или неприродные аминокислоты, связанные вместе амидной связью, если не указано иначе;

Ζ₁ представляет собой Ь-гистидин (Н), Ό-гистидин (ЙН) или урокановую кислоту (ϋΆ)

Ζ₂ представляет собой природную или неприродную аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Ь-серина (8), Ό-серина (Й8), Ь-аланина (А), Ό-аланина (ЙА), α-метилпролина (а-Ме-Рго), а-аминоизомасляной кислоты (А1Ь), 1-аминоциклопропанкарбоновой кислоты (АСР), 1-аминоциклопентанкарбоновой кислоты (АРР):

Ζ₃ представляет собой Ь-глутамин (О1п; О). Ό-глутамин (ЙО) или соединения формулы (II) (СХВ или Нй):

Ζ₄ представляет собой глицин (О) или неприродные аминокислоты 1-аминоциклопропанкарбоновую кислоту (АСР) или 1-аминоциклопентанкарбоновую кислоту (АРР);

Ζ₅ представляет собой природную или неприродную аминокислоту, содержащую гидроксильную боковую цепь; предпочтительно Ζ₅ представляет собой Ь-треонин (Т), Ό-треонин (ЙТ), Ь-аллотреонин (алло-ТЬт; алло-Т), Ό-аллотреонин (Й-алло-ТЪг; Й-алло-Т);

Ζ₆ представляет собой природную или неприродную аминокислоту с двузамещенным альфа-атомом углерода с двумя боковыми цепями, где каждая из них независимо может необязательно быть замещена алкильной, или арильной, или аралкильной группой, где заместители можно выбирать из одной или нескольких алкильных групп или одной или нескольких галогеновых групп. Предпочтительно Ζ₆ представляет собой фенилаланин (РЪе; Р), альфа-метилфенилаланин (-α-Ме-РЪе-), альфа-метил-2фторфенилаланин (-а-Ме-2Р-РЪе-) или альфа-метил-2,6-дифторфенилаланин (-а-Ме-2,6-Р-РЪе-) или 2фторфенилаланин (-2Р-РЪе-):

Ζ₇ и Ζ₈ независимо представляет собой природную или неприродную аминокислоту, содержащую гидроксильную боковую цепь, предпочтительные Ζ₇ и Ζ₈ независимо выбраны из треонина, серина, 1-аминоциклопропанкарбоновой кислоты (АСР), как определено ранее;

Ζ₉ независимо представляет собой природную или неприродную аминокислоту с аминокислотной боковой цепью, содержащей кислотную группу. Предпочтительный Ζ₉ выбран из Ь-аспарагиновой кислоты (Ό), Ό-аспарагиновой кислоты (ЙО) или соединений формулы (II), как определено ранее;

- 6 018000

Ζ₁₀ представляет собой к или Ό неприродную аминокислоту формулы 111а-111с, выбранную из замещенного или незамещенного 2'-этил-4'-метоксибифенилаланина (В1р(ОМе)) и его производных:

Ζιι представляет собой к или Ό неприродную аминокислоту формулы IV (а-1), выбранную из замещенной или незамещенной 2-амино-5-фенилпентановой кислоты (АРРА) и ее производных.

В дополнительном варианте осуществления амидная связь между Ζ₉ и Ζ₁₀, или Ζ₁₀ и Ζ₁₁, или Ζ₉-Ζ₁₁ может являться Ν-метилированной, представленной аббревиатурой (№Ме), такой как Б-(КМе)(В1р(ОМе)); (В^р(ОМе))-(NМе)-АРРА; ^-(NМе)-(В^р(ОМе))-(NМе)-АРРА, может представлять собой тиоамидную связь, представленную аббревиатурой С=8, такую как О-(С=8)-(В1р(ОМе)); В1р(ОМе)(С=8)-(АРРА); Б-(С=8)-(В1р(ОМе))-(С=8)-(АРРА), или тиоамидную связь между Ζ₉ и Ζ₁₀, или Ζ₁₀ и Ζ₁₁, или Ζ₉-Ζ₁₁ можно восстанавливать до группы -СН₂- (дезоксопептид), такой как О-(СН₂)-(В1р(ОМе)); В1р(ОМе)-(СН2)-(АРРА); В-(СН2)-(В1р(ОМе))-(СН2)-(АРРА):

Определения

Термин природные аминокислоты означает все 20 аминокислот, которые существуют в природе.

Термин неприродные аминокислоты представляет или замещение Ь-аминокислот соответствующими Ό-аминокислотами, такое как замещение Ь-А1а на Б-А1а и т.п., или подходящие модификации Ь- или Ό-аминокислот, аминоалкилкислот, любым из α-алкилирования, таким как замещение А1а на а-метил-А1а (А1Ъ), замещение РЬе на альфаметилфенилаланин (-α-Ме-РЬе-), альфа-метил-2-фторфенилаланин (-а-Ме-2Т-РЬе-) или альфа-метил-2,6дифторфенилаланин (-а-Ме-2,6-Т -РЬе-);

замещения на боковой цепи аминокислоты, такого как замещение ароматической боковой цепи аминокислоты галогеном, (С₁-С₃)алкильной, арильной группами, более конкретно, замещение РЬе альфаметил-2-фторфенилаланином (-а-Ме-2Т-РЬе-) или альфа-метил-2,6-дифторфенилаланином (-а-Ме-2,6-ТРЬе-);

Ν-метилирования аминокислот, представленного аббревиатурой (NМе), такого как (NМе)-В^р(ОМе) или (NМе)-АРРА;

- 7 018000 замещения амидной связи тиоамидной связью, представленной аббревиатурой С=8, где химически модификацию дипептида из амида в тиоамид можно осуществлять, обрабатывая защищенный дипептид, в фазе раствора или на твердой подложке реагентом Лавессона. Кроме того, тиоамидную связь в дипептиде можно конвертировать в группу -СН₂- (дезоксопептид) с использованием никель-боридного восстановления (1т. Си/1сс. Е.8., Тс1га11сбгоп Ьейетк, 1990, 31(1), 23-26).

В следующих абзацах описаны различные группы, радикалы и заместители, используемые по всему описанию.

Термин алкил, используемый в настоящем документе, отдельно или в сочетании с другими радикалами, означает линейный или разветвленный радикал, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, такой как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, амил, трет-амил, н-пентил, н-гексил, изогексил, гептил, октил, децил и т.п.

Термин циклоалкил, используемый в настоящем документе, отдельно или в сочетании с другими радикалами, означает радикал, содержащий от 3 до 7 атомов углерода, такой как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и т.п.

Термин арил или ароматический, используемый в настоящем документе, отдельно или в сочетании с другими радикалами, означает ароматическую систему, содержащую один, два или три цикла, где такие циклы могут быть соединены вместе боковыми цепями или могут быть слитыми, такую как фенил, нафтил, тетрагидронафтил, индан, бифенил и т.п.

Термин арилалкил означает алкильную группу, как определено выше, соединенную с арилом, таким как бензил, фенилэтил, нафтилметил и т.п. Термин арилокси означает арильный радикал, как определено выше, соединенный с алкоксигруппой, такой как фенокси, нафтилокси и т.п., которая может быть замещенной.

Термин аралкокси означает арилалкильную группу, как определено выше, такую как бензилокси, фенэтилокси, нафтилметилокси, фенилпропилокси и т.п., которая может быть замещенной.

Термин гетероарил или гетероароматический, используемый в настоящем документе, отдельно или в сочетании с другими радикалами, означает ароматическую систему, содержащую один, два или три цикла, где такие циклы могут быть соединены вместе боковыми цепями или могут быть слитыми, содержащую один или несколько гетероатомов, выбранных из О, N или 8.

Термин гетероаралкил, используемый в настоящем документе, отдельно или в сочетании с другими радикалами, означает гетероарильную группу, как определено выше, присоединенную к неразветвленной или разветвленной насыщенной углеродной цепи, содержащей от 1 до 6 атомов углерода. Термины гетероарилокси, гетероаралкокси, гетероциклокси означают гетероарильную, гетероарилалкильную группу соответственно, как определено выше, присоединенную к атому кислорода.

Термин ацил, используемый в настоящем документе, отдельно или в сочетании с другими радикалами, означает радикал, содержащий от 1 до 8 атомов углерода, такой как формил, ацетил, пропаноил, бутаноил, изобутаноил, пентаноил, гексаноил, гептаноил, бензоил и т.п., который может быть замещенным.

Термин карбоновая кислота, используемый в настоящем документе, отдельно или в сочетании с другими радикалами, означает группу -СООН и включает производные карбоновых кислот, такие как сложные эфиры и амиды. Термин сложный эфир, используемый в настоящем документе, отдельно или в сочетании с другими радикалами, означает группу -СОО- и включает производные карбоновых кислот, где остатки сложных эфиров представляют собой алкоксикарбонил, такой как метоксикарбонил, этоксикарбонил и т.п., который может быть замещенным.

Если не указано иначе, термин аминокислота, как применяют в настоящем документе отдельно или как часть другой группы, включает в качестве неограничивающих примеров аминогруппу и карбоксильную группу, связанные с одним и тем же атомом углерода, обозначаемым как а-атом углерода.

Абсолютную 8''-конфигурацию у а-атома углерода, как правило, обозначают как Ь или природную конфигурацию. ^-конфигурацию у а-атома углерода, как правило, обозначают как Ό''-аминокислоту. В случае, когда оба α-заместителя являются одинаковыми, такими как водород или метил, аминокислоты представляют собой С1у или А1Ь и являются нехиральными. Строчная ά означает хиральность Ό-аминокислот. В описании, когда бы ни была описана аминокислота, если не указано иначе, она включает и Ь-, и Ό-формы. Таким образом, в табл. 2 приведен список пептидомиметиков, получаемых по настоящему изобретению, в котором каждая из аминокислот может представлять собой или Ь, или Ό.

Термин антагонист рецептора относится к соединениям, которые ингибируют активацию рецептора и образование вторичного мессенджера, такого как циклический АМФ, посредством конкурентного или неконкурентного связывания.

Термин антагонист рецептора глюкагона относится к соединениям, которые ингибируют активацию рецептора глюкагона.

Термин модулятор или агонист рецептора СЬР-1 относится к соединению, которое действует на рецептор СЬР-1, изменяя его способность регулировать нисходящие сигнальные события, такие как про

- 8 018000 дукцию цАМФ и высвобождение инсулина. Примеры модуляторов рецепторов включают агонист, частичный агонист, обратный агонист и аллостерические потенцирующие средства.

В соответствии с настоящим изобретением синтетически выделенные пептидомиметики, описываемые в настоящем документе, преимущественно действуют в качестве антагонистов рецепторов глюкагона. Кроме того, выявлено, что эти пептидомиметики также действуют в качестве агонистов рецепторов СЬР-1. Эти синтетические пептидомиметики демонстрируют желаемые свойства антагонистов рецепторов глюкагона, а также активность агонистов рецепторов СЬР-1 ίη νίΐτο в клетках СНО, трансфицированных рецептором глюкагона или СЬР-1 человека (Н глюкагон В или НСЬР-1В), в диапазоне концентраций 1-100 нМ. Активность агониста НСЬР-1В оценивают, рассчитывая количество высвобождаемого цАМФ, тогда как активность антагониста глюкагона оценивали, измеряя количество продуцируемого цАМФ, ингибируемого при тестировании пептидомиметиков, в присутствии пептида глюкагона. Новые пептидомиметики демонстрируют желаемую активность антагонистов рецепторов глюкагона ίη νίίτο в клетках СНО, трансфицированных рецептором глюкагона человека, в диапазоне концентраций 1-100 нМ. Некоторые из полученных тестируемых пептидомиметиков, при тестировании ίη νίνο в различных моделях диабета на животных, таких как гипергликемические мыши С57, мыши оЬ/оЬ и бЬ/бЬ, продемонстрировали глюкозозависимое высвобождение инсулина и снижали гипергликемию при голодании, не вызывая гипогликемии, что, таким образом, делает их идеальными кандидатами в лекарственные средства для лечения и профилактики диабета 2 типа. Эти новые классы пептидомиметиков можно вводить пероральным или парентеральным способом введения.

Настоящее изобретение относится к пептидомиметикам формулы (I), фармацевтическим композициям, где используют такие пептидомиметики отдельно или в сочетании, и к способам применения таких пептидомиметиков. В частности, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество пептидомиметиков формулы (I), отдельно или в сочетании(ях) с фармацевтически приемлемым носителем.

Дополнительно предоставлен способ лечения или задержки развития или начала диабета, особенно диабета 2 типа, включая осложнения диабета, включая ретинопатию, нейропатию, нефропатию и замедленное заживление ран и связанные заболевания, такие как резистентность к инсулину (ухудшенный гомеостаз глюкозы), гипергликемия, гиперинсулинемия, повышенные уровни жирных кислот или глицерина в крови, гиперлипидемия, включая гипертриглицеридемию, синдром X, атеросклероз и гипертензия, где терапевтически эффективное количество пептидомиметиков формулы (I) или их сочетания(ий) вводят нуждающемуся в этом пациенту-млекопитающему, например человеку.

Получение пептидомиметиков.

Для получения пептидомиметиков по настоящему изобретению можно использовать несколько способов синтеза, хорошо известных специалисту в области пептидного синтеза. Пептидомиметики формулы (I), где все символы являются такими, как определено ранее, можно синтезировать описанными ниже способами совместно с общепринятыми способами, известными специалистам в области пептидного синтеза, или их вариаций, как очевидно специалистам в данной области. Указанные способы включают способы, но не ограничиваются ими, описанные ниже.

Соответствующие пептидомиметики, описываемые в настоящем документе, можно получать химическим синтезом с использованием подходящих вариаций различных способов твердофазного синтеза, как правило, известных, таких как способы, описанные в 6. Вагапу апб В.В. Мстйс1б, Т11С рср(1бс8: Апа1уз1з, зуп(11сз1з, Вю1оду; Уо1ишс 2. - 8рсс1а1 тсбюбз ίη рерббс 5уп(Ьс818, Рай А, р. 3-284, Е. 6гозз апб 1. МсгопйоРсг, Ебз., Асабсшк Ргсзз, №\ν Уогк, 1980 и в РМ. 81с\уай апб ΡΌ. Уоипд, 8ойб-рйазс рсрббс зуп111сз1з. 2^пб Еб., Рюгсс сйсш1са1 Со., Воск&гб, В, 1984.

Предпочтительная стратегия для получения пептидомиметиков по данному изобретению основана на применении основанного на Ршос подхода 8РР8, где группу Ршос (9-флуоренилметилметилоксикарбонил) используют для временной защиты α-аминогруппы, в сочетании с кислыми лабильными защитными группами, такими как трет-бутилоксикарбонильная (Вос), трет-бутильная (Ви¹), тритильная (Тй) группа (фиг. 2), для временной защиты боковых цепей аминокислот (см., например, Е. АШсйоп апб В.С. 8йсррагб, Т11с Р1иогспу1шс1йохусагЬопу1 ашшо рго!сс(1пд дгоир, Тйс рсрПбсз: Апа1уз1з, зуп1йсз1з, Вю1оду; Уо1ишс 9. - 8рсаа1 тсбюбз ίη рсрПбс зуп(Нсз1з, Рай С, р. 1-38, 8. ИпбспРпспб апб Р Мс1спйо1сг, Ебз., Асабсиис Ргсзз, 8ап Эйдо, 1987).

Пептидомиметики можно синтезировать поэтапным способом на нерастворимой полимерной подложке (смоле), начиная с С-конца пептида. В одном из вариантов осуществления синтез начинают, присоединяя С-концевую аминокислоту пептида к смоле посредством образования амидной, сложноэфирной или простой эфирной связи. Это обеспечивает последующее высвобождение полученного пептида в виде С-концевого амида, карбоновой кислоты или спирта соответственно.

В основанном на Ртос 8РР8 необходимо, чтобы у С-концевой аминокислоты и всех остальных аминокислот, используемых в синтезе, их α-аминогруппы и функциональные группы боковых цепей (если присутствуют) были защищены различным способом (ортогональная защита) так, чтобы в течение синтеза можно было селективно удалять α-аминозащитную группу, используя подходящее основание,

- 9 018000 такое как 20% раствор пиперидина, без какого-либо предварительного отщепления пептида от смолы или удаления защитных групп боковых цепей, как правило, защищенных кислыми лабильными защитными группами.

Связывание аминокислоты осуществляют, активируя ее карбоксильную группу в виде активного сложного эфира и проводя ее реакцию с разблокированной α-аминогруппой Ν-концевой аминокислоты, добавляемой к смоле. После каждого связывания и снятия защиты пептидил-смолу отмывают избытком растворителей, таких как ΌΜΕ, ЭСМ и простой диэтиловый эфир. Последовательность снятия защиты с α-аминогруппы и связывания повторяют до сборки желаемой пептидной последовательности (схема 1). Затем пептид отщепляют от смолы с одновременным снятием защиты функциональных групп боковых цепей, используя соответствующую смесь для отщепления, как правило, в присутствии соответствующих акцепторов радикалов для ограничения побочных реакций. В заключение полученный пептид очищают посредством ВЭЖХ с обратной фазой.

В синтезе пептидил-смол, необходимых в качестве предшественников конечных пептидов, используют коммерчески доступные поперечно сшитые полистирольные полимерные смолы (ЫоуаЬюсйет, 8ап Όίο§ο. СА). Для применения по настоящему изобретению предпочтительны смола Ртос-РАЬ-РЕС-Р8, 4- (2',4'-диметоксифенил-Етос-аминометил)феноксиацетил-п-метилбензгидриламиновая смола (смола Етос-Кзик амид МВНА), 2-хлортритилхлоридная смола или смола с п-бензилоксибензиловым спиртом (смола НМР), к которым уже может быть или не быть присоединена С-концевая аминокислота. Если С-концевая аминокислота не присоединена, ее присоединение можно обеспечить посредством активного сложного эфира НОВ! защищенной Етос аминокислоты, формируемого ее реакцией с ΌΙΡΟΌΙ. В случае 2-хлортритиловой смолы связывание первой защищенной Етос аминокислоты обеспечивают, применяя ΌΙΡΕΑ. Для присоединения следующей аминокислоты Ν-концевую защиту пептидил-смолы селективно снимают, используя раствор 10-20% пиперидина. После каждого связывания и снятия защиты избыток аминокислот и связывающих реагентов удаляют посредством отмывки ΌΜΡ, ЭСМ и простым диэтиловым эфиром. Связывание последующих аминокислот можно осуществлять с применением активных сложных эфиров НОВ! или НОАТ, получаемых из ΌΙΡΟΌΙ/ΗΟΒΙ или ΌΙΡΟΌΙ/ΗΟΑΤ соответственно. В случае какого-либо сложного связывания, особенно связывания тех аминокислот, которые являются гидрофобными, или аминокислот с объемной защитой боковой цепи, полное связывание можно обеспечить, используя сочетание высокоэффективных средств связывания, таких как НВТИ, РуВОР или ТВТИ, с добавками, такими как ОГРЕА.

Синтез пептидомиметиков, описываемых в настоящем документе, можно осуществлять с использованием устройства для периодического пептидного синтеза или устройства для пептидного синтеза в непрерывном потоке, такого как пептидный синтезатор С8-Вю или ААРРТЕС, с использованием технологии защиты Етос/трет-бутил. Неприродные некоммерческие аминокислоты, находящиеся в различных положениях, вводили в пептидную цепь одним или несколькими известными в данной области способами. В одном из подходов защищенные Етос неприродные аминокислоты получали в растворе соответствующими описанными в литературе способами. Например, защищенные Етос α-метилированные аминокислоты, такие как Етос-А1Ь-ОН, Етос-(а-Ме-2Е-Рйе)-ОН, Етос-(а-Ме-2,6-Е-Рйе)-ОН, получали модифицированным описанным в литературе способом (Воейеи, ^.Н.1, е! а1., Огд. Ье!!., 2001, 3(8), 1121; КараЛа, 8.К.., е! а1., ЮС, 2001, 66, 1903-1905). Синтез Ы-Етос-2-амино-5-фенилпентановой кислоты (Етос-АРРА) и ее производных, как приведено в формуле ^(а-1), модифицированным описанным в литературе способом (Векйгидде, IV., Те!гайебгои, 1998, 54, 1753-1762; \УО 2003/087036). Етос-В1р(ОМе)ОН (2'-этил-4'-метоксибифенилаланин; 2-амино-3-(2'-этил-4'-метоксибифенил-4-ил)пропионовую кислоту) получали описанным в литературе способом (Ко!йа, 8., е! а1., Те!гайебгои. 2002, 58, 9633; И8 2006/0004222 А1), а Етос-5,5,5,5',5',5'-28-гексафторлейцин (Етос-(НЙ)-ОН) получали опубликованным способом (СЫи, Н.Р., Сйеид, КР., Огд. Ье!!., 2007, 9(26), 5517-5520). Затем полученные производные использовали в поэтапном синтезе пептида. Альтернативно, необходимую неприродную аминокислоту получали непосредственно на смоле способами синтеза органической химии и достраивали линейную пептидную цепь.

- 10 018000

Схема 1

Общая схема основанного на Ртос 8РР8

Предшественники пептид-смола их соответствующих пептидомиметиков можно расщеплять и снимать с них защиту с применением подходящих вариаций стандартных способов расщепления, описанных в литературе (Κίη§, Ό.8., с1 а1., Ιηΐ. 1. Рерйбе Рго1еш Кек., 1990, 36, 255). Предпочтительный способ для применения по настоящему изобретению представляет собой использование расщепляющей смеси с ΤΡΆ, в присутствии воды и ΤΙΡ8 в качестве акцепторов радикалов. Как правило, пептидил-смолу инкубируют в ТЕА/воде/Т1Р8 (94:3:3; об.:об.:об.; 10 мл/100 мг пептидил-смолы) в течение 1,5-2 ч при комнатной температуре. Отщепленную смолу отфильтровывают, раствор ТРА концентрируют или сушат при пониженном давлении. Полученный неочищенный пептид осаждают или отмывают Е1₂О или повторно растворяют непосредственно в ΌΜΡ или 50% водной уксусной кислоте для очистки посредством препаративной ВЭЖХ.

Пептидомиметики с желаемой степенью очистки можно получать посредством очистки с применением препаративной ВЭЖХ. Раствор неочищенного пептида вносят в колонку кеии-Ргер (Ьипа 10 мкм; С₁₈; 100 А) с размерами 250x50 мм и элюируют в линейном градиенте АСЫ в воде, забуференных 0,1% ТРА, при скорости потока 15-50 мл/мин с мониторингом выходящего потока детектором РЭА при 220 нм. Структуры очищенных пептидомиметиков можно подтверждать посредством анализа электроспрейной масс-спектроскопии (Е8-М8).

После очистки посредством препаративной ВЭЖХ все получаемые пептиды выделяли в виде трифторацетатной соли с ТРА в качестве противоиона. Однако некоторые пептиды подвергали обессоливанию, пропуская через слой подходящей ионообменной смолы, предпочтительно через анионообменную смолу Эо\\ех 8ВК Р(С1) или эквивалентную основную анионообменную смолу. В некоторых случаях противоионы ТРА заменяли ацетатными ионами, пропуская через подходящую ионообменную смолу, элюируя разбавленным раствором уксусной кислоты. Для получения гидрохлоридной соли пептидов на последней стадии получения выбранные пептиды с ацетатной солью обрабатывали 4 М НС1. Получен

- 11 018000 ный раствор фильтровали через мембранный фильтр (0,2 мкм) и затем высушивали в вакууме с выходом соли НС1 с цветом от белого до кремового. В результате применения сходных способов и/или определенных подходящих модификаций, которые все хорошо известны специалистам в данной области, получали другие подходящие фармацевтически приемлемые соли пептидомиметиков по настоящему изобретению.

Основной способ получения пептидомиметиков с применением подхода 8РР8.

Получение пептидомиметиков на смоле.

Достаточному количеству (50-100 мг) смолы Ртос-РАЬ-РЕО-Р8 или смолы Ртое-К1ик амид МВНА, нагруженной 0,5-0,6 ммоль/г позволяли набухать в ΌΜΡ (10-20 мл/100 мг смолы) в течение 2-10 мин. Затем группу Ртос на смоле удаляли посредством инкубации смолы с 10-20% пиперидином в ΌΜΡ (10-30 мл/100 мг смолы) в течение 10-30 мин. Смолу со снятой защитой фильтровали и отмывали избытком ΌΜΡ, ΌΟΜ и простого диэтилового эфира (4x50 мл). Отмытую смолу инкубировали в свежеперегнанном ΌΜΡ (1 мл/100 мг смолы) в атмосфере азота в течение 5 мин. К смоле добавляли 0,5 М раствор первой защищенной Ртос аминокислоты (1-3 экв.), предварительно активированной НОВ! (1-3 экв.) и ΌΓΓΟΟΙ (1-2 экв.) в ΌΜΡ и затем смолу перемешивали в течение 1-3 ч в атмосфере азота. Завершение связывания контролировали посредством качественной нингидриновой реакции. После связывания первой аминокислоты смолу отмывали ΌΜΡ, ΌΟΜ и простым диэтиловым эфиром (4x50 мл). Для присоединения следующей аминокислоты сначала снимали защиту Ρтос на первой аминокислоте, связанной со смолой с использованием 20% раствора пиперидина, с последующим присоединением защищенной Ρтос второй аминокислоты с использованием подходящих связывающих средств, как описано выше. Проводили повторяющиеся циклы снятия защиты, отмывки, присоединения и отмывки, как на основной схеме 1 выше, до получения желаемой пептидной цепи.

В заключение, с защищенной Ρтос пептидил-смолы. полученной выше, снимали защиту посредством обработки 20% пиперидином, как описано выше, и пептидил-смолы отмывали ΌΜΡ, ΌΟΜ и простым диэтиловым эфиром (4x50 мл). Смолу, содержащую желаемый пептид, сушили в атмосфере азота в течение 10-15 мин и подвергали отщеплению/снятию защиты.

Иллюстративный пример автоматизированного твердофазного синтеза последовательности пептида ΙΌ. Ио. 37 (1РХ-11-А1Ь-(К,Т-(а-\1е-21%Р1е)-Т51)-В1р (ОΜе)-(АРРА)-СОNН₂).

Линейную пептидную цепь Н₂N-Н-А^Ь-^6Τ-(α-Μе-2Ρ-Рйе)-Τ8^-В^ρ(ОΜе)-(АРРА)-РА^-РЕ6-Р8 получали на автоматизированном синтезаторе С8-Вю 536 РерЗуиШеыкет™ способом твердофазного пептидного синтеза (8РР8) с Ρтос (схема 2). Ρтос-аминокислоты и 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3тетраметилуронийтетрафтороборат (ТВТИ) помещали вместе в ампулы и располагали в модуле синтезатора для аминокислот. Исходный раствор диизопропилэтиламина (И1РЕА; 0,9 М) и ΌΜΡ хранили в бутылках для реагентов в атмосфере сухого азота. Смолу Ρтос-РА^-РЕ^-Р8 (0,38 ммоль/г; 1 г) сушили над Р₂О₅, в вакууме (1 ч) и позволяли набухать в свежеперегнанном ΌΜΡ (5 мл). Набухшую смолу в виде суспензии помещали в стеклянную колонку и размещали в синтезаторе. Все циклы синтеза проводили со скоростью потока 5 мл-мин^-1, табл. 1. Смолу отмывали свежеперегнанным ΌΜΡ в течение 10 мин. Снятие защиты группой Ρтос проводили 20% пиперидином в ΌΜΡ в течение 10 мин, и снятие защиты контролировали посредством УФ-детектирования стока колонки при 304 нм.

- 12 018000

Схема 2

8РР8 8ед. ΙΌ. Νο. 37

Смола Ктос-РАЬ-РЕСг-1'8

1) Пиперидин (снятие защиты Ртос)

2) Ртос-АРРА-ОН (4 экв.); ϋΜΡ; ΤΒΤϋ (3,9 экв.); ϋΙΡΕΑ (8 экв.); 2 ч

3) Отмывка ϋΜΓ и ОСМ

4) Повторение этапа 1-3, со следующими аминокислотами: Ртос-В|р(ОМе)-ОН

Ртос-А5р(Ви‘)-ОН

Ртос-8ег(Ви‘)-ОН

Ртос-ТИг(Ви¹)-ОН

Ртос-(а'Ме-2Р-РЬе)-ОН

Ртос-ТЬг(Ви¹)-ОН

Ртос-О1у-ОН

Ртос-С1л(Тй)-ОН

Ртос-А1Ь-ОН

Ртос-Н1₅(Тг1)-ОН

5) Пиперидин (снятие защиты Ртос)

6) Отщепление посредством ТРА

7) Очистка посредством ОФ-ВЭЖХ

Н₂М-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т8В-В1р(ОМе)-(АРРА)-СОНН2 (8βη. ΙΟ. Νο. 37)

Избыток пиперидина удаляли тремя дополнительными циклами отмывки и циклом отмывки перегнанным ΌΜΡ с длительностью каждого цикла 15 мин. Аминогруппу обрабатывали Ршосаминокислотой (4 экв.), предварительно активированной ТВТИ (3,9 экв.) в присутствии ΌΙΡΕΆ (8 экв.) и повторяли цикл в течение 120 мин. Избыток аминокислоты и растворимые побочные продукты удаляли из колонки и контура четырьмя дополнительными циклами отмывки и циклами отмывки перегнанным ΌΜΡ с длительностью каждого цикла 10 мин. Далее циклы синтеза (снятие защиты, отмывка, ацилирование и отмывка) повторяли до полной сборки линейного пептида. Последний цикл снятия защиты проводили с 20% пиперидином в ΌΜΡ в течение 15 мин с удалением концевой группы Ршос с последующим циклом отмывки (10x4 мин). Полученный пептид-смолу фильтровали через полученный спеканием стеклянный фильтр, последовательно 3 раза отмывали ΌΜΡ, Ό0Μ, метанолом, ΌΜΡ и простым диэтиловым эфиром (100 мл каждого). Пептид-смолу сушили в вакууме над Р₂О₅ (2 ч) и хранили при -20°С. Проводили реакцию смолы с нингидрином для проверки Ν-концевой свободной аминогруппы связанного со смолой пептида. Появление сине-фиолетового окрашивания раствора и гранул смолы указывает на наличие у связанного со смолой пептида свободной аминогруппы, и это рассматривали как положительный результат теста.

Таблица 1 Автоматизированные циклы для твердофазного пептидного синтеза

Этап	Функция	Реагент/Растворитель	Количество циклов	Время (минут)
1	Отмывка	Диметилформамид (ЭМЕ)	1	10
2	Снятие защиты	20% пиперидин в ΡΜΕ	2	15
3	Отмывка	ϋΜΕ	3	15
4	Ацилирование	Аминокислота; ΤΒΤϋ и диизопропилэтиламин (в ΏΜΕ)	Повторение цикла	120
5	Отмывка	Диметилформамид	4	10

Проводили расщепление в малом масштабе для определения чистоты связанного со смолой пептида. Высушенную пептид-смолу (приблизительно 10 мг) обрабатывали смесью (1 мл) ТРА, воды, триизопропилсилана (95: 2,5: 2,5 об./об.) в течение 90 мин при комнатной температуре со слабым периодиче

- 13 018000 ским помешиванием. Смолу отфильтровывали, тщательно отмывали чистым ТЕЛ (1 мл) и весь фильтрат выпаривали при пониженном давлении. Оставшийся ТЕА 3 раза подвергали азеотропному смешиванию с простым диэтиловым эфиром (2 мл). Полученный осадок суспендировали в дистиллированной воде (2 мл) и водный слой 3 раза экстрагировали простым диэтиловым эфиром (3 мл). Водный слой отделяли и лиофилизировали с выходом неочищенного пептида Н₂М-Н-А1Ь-рСТ-(а-Ме-2Е-Рйе)-Т8П-В1р(ОМе)(АРРА)-СОИН₂. Лиофилизированный пептид Н₂Ы-Н-А1Ь-рСТ-(а-Ме-2Е-Рйе)-Т§П-В1р(ОМе)-(АРРА)ί.ΌΝΗ₂ растворяли в 0,1% водном ТЕА (приблизительно 1 мг/1 мл) и его чистоту анализировали посредством аналитической ОФ-ВЭЖХ и характеризовали масс-спектрометрией с электроспрейной ионизацией (Е81-М8). Процент чистоты: 90% (неочищенный пептид). Е81-М8; вычислено для Н₂№Н-А1Ь-рСТ-(аМе-2Е-Рйе)-Т8П-В1р(ОМе)-(АРРА)-СО1МН₂: 1465 (М⁺), 1487 (М+№⁺) и 1503 (М+К⁺); выявлено (т/ζ): 1465 (М⁺), 1487 (М+Νί) и 1503 (М+К⁺).

Используя указанный выше протокол и его подходящие вариации, которые известны специалистам в данной области, получали пептидомиметики, предусмотренные по настоящему изобретению, с применением подхода Етос-8РР8. Далее, связанные со смолой пептидомиметики отщепляли и снимали защиту, очищали и характеризовали с использованием приведенного ниже протокола.

Отщепление и снятие защиты.

Желаемые пептидомиметики отщепляли и снимали защиту из их соответствующих пептидил-смол посредством обработки смесью для отщепления с ТЕА, как указано ниже. К пептидил-смолам добавляли раствор ТЕА/воды/триизопропилсилана (95:2,5:2,5) (10 мл/100 мг пептидил-смолы) и смесь оставляли при комнатной температуре с периодическим перемешиванием. Смолу отфильтровывали, отмывали смесь для отщепления и объединенный фильтрат выпаривали до сухости. Полученный остаток растворяли в 10 мл воды и водный слой 3 раза экстрагировали простым диэтиловым эфиром (20 мл каждый) и в заключение водный слой лиофилизировали. Полученный после лиофилизации неочищенный пептид очищали препаративной ВЭЖХ, как указано ниже.

Очистка неочищенных пептидомиметиков препаративной ВЭЖХ.

Препаративную ВЭЖХ проводили на жидкостном хроматографе 81ιίιηαάζι.ι ЬС-8А. Раствор неочищенного пептида, растворенный в ИМЕ или воде, наносили в колонку 8ет1-Ргер (Ьииа 10 мкм; С₁₈; 100 А), с размерами 250x50 мм и элюировали в линейном градиенте АСN в воде, забуференных 0,1% ТЕА, при скорости потока 15-50 мл/мин с мониторингом выходящего потока детектором РИА при 220 нм. Как правило, использовали градиент смеси вода-АСN от 20 до 70%, забуференных 0,1% ТЕА, в течение периода 50 мин с изменением градиента на 1%/мин. Элюируемый желаемый продукт собирали в одну фракцию 10-20 мл и чистые пептидомиметики получали в виде аморфных белых порошков посредством лиофилизации соответствующих фракций ВЭЖХ.

Анализ ВЭЖХ очищенных пептидомиметиков.

После очистки препаративной ВЭЖХ, как описано выше, каждый пептид анализировали посредством аналитической ОФ-ВЭЖХ на аналитической системе ВЭЖХ 81ιίιηαάζι.ι ЬС-10АЭ. Для анализа пептидомиметиков посредством аналитической ВЭЖХ использовали колонку Ьциа 5 мкм; С₁₈; 100 А, с размерами 250x4,6 мм с линейным градиентом буфера 0,1% ТЕА и АС^ а оценку хроматограммы проводили при 220 нм с применением детектора РИА.

Характеристика посредством масс-спектрометрии.

Каждый пептид характеризовали посредством масс-спектрометрии с электроспрейной ионизацией (Е81-М8) в режиме впрыска в поток или ЬС/М8. Во всех анализах в режиме электроспрея положительных и отрицательных ионов использовали масс-спектрометры с тройным квадруполем (АР1-3000 (МЭ8-8С1Е8. Саиаба). В диапазоне масс квадруполя, действующего при одиночном разрешении, получали данные полного сканирования. Во всех случаях экспериментально измеряемая молекулярная масса находилась в пределах 0,5 Да от рассчитанной моноизотопной молекулярной массы. Количественное определение массовой хроматограммы проводили с применением программного обеспечения Аиа1у81 1.4.1.

Используя способы синтеза, описываемые в настоящем документе, вместе с другими широкоизвестными способами и их подходящими вариациями, получали приведенные ниже новые пептидомиметики. Этот список указывает на различные группы пептидомиметиков, которые можно получать по настоящему изобретению, и подразумевают, что они включат, по меньшей мере, очевидные вариации этих пептидомиметиков. Однако такое описание не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающее объем изобретения. В табл. 2 (ί-ν) новые пептидомиметики по настоящему изобретению перечислены вместе с их соответствующими номерами 8ес.|. ГО. Νο.

- 14 018000

Таблица 2 (ί)

Список полученных пептидомиметиков

Η3ΏΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ оме -(АРРА

Η3ζ)ΟΤΕΤ3ϋ-Βιρ (ОМе) - (ΑϋΜΡ)

Η3ζ)σΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АСРР)

Η3ΩΟΤΕΤ3ϋ-Βιρ(ОМе)-(АМСВ)

Н-(α-Ме-Рго)-ζ)(3ΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АРРА)

Н- (α-Ме-Рго) -ζ)0ΤΕΤ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (ΑϋΜΡ)

Н- (α-Ме-Рго) -ζ)0ΤΕΤ5ϋ-Βίρ (ОМе) - (АСРР)

Н-(α-Ме-Рго)-<2ΟΤΕΤ3ϋ-Βιρ(ОМе)-(АМСВ)

ΗΑ0ΟΤΕΤ3ϋ-Βιρ(ОМе)-(АРРА)

ΗΑ0ΟΤΓΤ3ϋ-Βιρ(ОМе)-(ΑϋΜΡ)

ΗΑζ)ΟΤΕΤ3ϋ-Βιρ (ОМе) - (АСРР)

ΗΑΩσΤΕΤ3ϋ-Βιρ(ОМе)-(АМСВ)

Η-Αιϋ-ΟΟΤΕΤ3ϋ-Βιρ(ОМе)-(АРРА)

Η-Αιϋ-ΩΟΤΕΤ3ϋ-Βιρ(ОМе)-(ΑϋΜΡ)

Η-Αιϋ-ΟΟΤΕΤ3ϋ-Βιρ ОМе)- АСРР)

Н- (АСР ~ζ)εΤΕΤ3ϋ-Βιρ (ОМе) - ΑϋΜΡ)

Н-(АСР -0ΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)- АСРР)

Н-(АСР)-0ΟΤΕΤ3ϋ-Βιρ(ОМе)-(АМСВ)

Н- (АРР) -<2ΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ (ОМе) - АСРР)

Н- (АРР) -ζ)0ΤΕΤ3ϋ-Βιρ (ОМе) - (АРРА)

Н-(АРР)-ζ)0ΤΕΤ3ϋ-Βιρ(ОМе)-(ΑϋΜΡ)

Η-Αίϋ“06ΤΕΤ3ϋΒίρ(ОМе)-(АМСВ)

Н- (АСР) -ζ)0ΤΕΤ5ϋ-Βιρ (ОМе) - (АРРА)

Н- (АРР) -ζ)(ΞΤΕΤ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (АМСВ)

Н-А1Ь-(СИВ)-ΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АРРА)

Н-АгЬ-(СНВ)-ΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(ΑϋΜΡ)

Н-А1Ь-(СИВ)-ΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ ОМе)- АСРР)

32	Н-АЪЬ-(СИВ)-ΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АМСВ)
33	Н-А1Ь-0СТ-(α-Ме-Рйе)-Τ8ϋ-Βίρ(ОМе)-(АРРА)
34	Н-А1Ь-<2СТ- (α-Ме-РЪе) -Τ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (ΑϋΜΡ)
35	Η-ΑίΒ-ΩΟΤ-(а-Ме-РЪе)-Τ5ϋ-Βίρ(ОМе)-(АСРР)
36	Н-А1Ъ-(2СТ“ (а-Ме-РЪе) -Τ3ϋ~Βίρ (ОМе) - (АМСВ)
37	Η-ΑίΒ-ςΟΤ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АРРА)
38	Н-А1Ь-(2СТ- (а-Ме-2Е-Рйе)-Τ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (ΑϋΜΡ)
39	Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-Рйе)-Τ8ϋ-Βίρ(ОМе)-(АСРР)
40	Н-А1Ь-<2СТ- (а-Ме-2Е-Рйе)-Τ8ϋ-Βίρ (ОМе) - (АМСВ)
41	Н-А1Ь-<2СТ- (2Е-РЪе) -Τ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (АРРА)
42	Η-ΑίΒ-βΟΤ-(2Е-Рйе)-Τ8ϋ-Βίρ(ОМе)-(ΑϋΜΡ)
43	Н-А1Ь-<2СТ- (2Е-Рйе) -Τ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (АСРР)
44	Н-А1Ь-ОСТ-(2Е-Рйе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АМСВ)

- 15 018000

Список полученных пептидомиметиков

Таблица 2 (ΐΐ) &7

ТУ

Т8

Η-ΆίΒ-ΩΟΤΕΤ3Ο-Βίρ(ОМе)-(2Ε-ΆΡΡΑ)

Η-Αίά-ΟΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2,4-άίΕ-ΑΡΡΑ)

Н-А1Ь-<2СТЕТ8О-В1р (ОМе) - (2СЕ₃-АРРА)

Η-ΑίΒ-ΟΟΤΕΤΒϋ-Βίρ(ОМе)- (2СЕ₃, 4Е-АРРА)

Η-ΑίΒ-00ΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2Е,4СЕ₃-АРРА)

Η-ΑίΒ-0ΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2С1-АРРА)

Η-Αίά-ΟΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2,4-άίΟ1-ΑΡΡΑ)

Η-ΑίΒ-00ΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2С1,4ΟΜΘ-ΑΡΡΑ)

Н-(АСР)-ΟΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2Е-АРРА)

Н-(АСР)-0ΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2,4-άίΕ-ΑΡΡΑ)

Н-(АСР)-0ΟΤΓΤ3υ-Βίρ (ОМе)- (2СЕ₃-АРРА)

Н-(АСР)-0ΟΤΓΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2СЕ₃, 4Е-АРРА)

Н-(АСР)-ОСТЕТЗО-Βίρ(ОМе)-(2Е,4СЕ₃-АРРА)

Н-(АСР)-ОСТЕТЗО-Βίρ(ОМе)-(2С1-АРРА)

Н-(АСР)-ΟΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2,4-άίΟ1-ΑΡΡΑ)

Н- (АСР) -<2ΟΤΕΤ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (2С1, 4ОМе-АРРА)

Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-СТЕТЗО-Βίρ(ОМе)-(2Е-АРРА)

Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-СТЕТЗО-Βίρ(ОМе)-(2,4-άίΕ-ΑΡΡΑ)

Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-СТЕТЗО-Βίρ(ОМе)-(2СЕ₃-АРРА)

Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-СТЕТЗО-Βίρ(ОМе)- (2СЕ₃, 4Е-АРРА)

Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-СТЕТЗО-Βίρ(ОМе)-(2Е,4СЕ₃-АРРА)

Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-СТЕТЗО-Βίρ(ОМе)-(2С1-АРРА)

Н-А1Ь-(СИВ)-СТЕТЗО-Βίρ(ОМе)-(2,4-άίΟ1-ΑΡΡΑ)

Н-А1Ь-(СЫВ)-СТЕТЗО-Βίρ(ОМе)-(2С1,4ОМе-АРРА)

Н-АхЬ-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-ТЗО-Βίρ(ОМе)-(2Е-АРРА)

Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-ТЗО-Βίρ(ОМе)-(2,4-άίΕΆΡΡΑ)

Н-А1Ь-ОСТ- (а-Ме-2Е-Р]ле) -ТЗО-Βίρ(ОМе) - (2СЕ₃-АРРА)

Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-РНе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2СЕ₃, 4ЕАРРА)

Н-А1Ь-0СТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2Е,4СЕ₃АРРА)

Н-А1Ь-<2СТ- (а-Ме-2Е-РЬе) -Τ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (2С1-АРРА)

Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2,4-άίΟ1АРРА)

Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2С1,4ОМеАРРА)

- 16 018000

Список полученных пептидомиметиков

Таблица 2 (ΐΐΐ)

Зеч.Ю. Νο.	Последовательность пептидомиметиков
93	СН3СО-Н-А1Ь-(2СТ- (сх-Ме-2Е-РЬе) -Τ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (АРРА)
94	СНзОСО-Н-АтЬ-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- (АРРА)
95	СН3СО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-ΤΞϋ-Βίρ(ОМе)-(2Е- АРРА)
96	СН3ОСО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3Ώ-Βίρ(ОМе)-(2Е- АРРА)
97	СН3СО-Н-А1Ь-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3Ώ- Βίρ(ОМе)-(АРРА)
98	СНзОСО-Н-АхЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-ТЗО- Βίρ(ОМе)-(АРРА)
99	СН3СО-Н-А1Ь-<2С-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РИе) -Τ3ϋ- Βίρ(ОМе)-(2Е-АРРА)
100	СН3ОСО-Н-А1Ь-(2С-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РЬе) -Τ3ϋ- Βίρ(ОМе)-(2Г-АРРА)
101	СНзСО-Н-АтЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЪе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-(АРРА)
102	СН3ОСО-Н-А1Ь-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РИе)-Т(алло)-5Ώ- Βίρ(ОМе)-(АРРА)
103	СН3СО-Н-А1Ь-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-ЗВ- Βίρ(ОМе)-(2Е-АРРА)
104	СН3ОСО-Н-А1Ь-<2С-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РНе) -Т (алло) -3ϋ- Βίρ(ОМе)-(2Е-АРРА)
105	СН3СО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-(АРРА)

- 17 018000

106	СН3ОСО-Н-А1Р-ОСТ- (а-Ме-2Е-РЬе) -Т (алло) -5Ό- Βίρ(ОМе)-(АРРА)
107	СНзСО-Н-АхЬ-ОСТ- (а-Ме-2Е-РЬе) -Т (алло) -5Ό- Βίρ(ОМе)-(2Е-АРРА)
108	ΟΗ3ΟΟΟ-Η-ΑίΡ-ζ)ΟΤ- (а-Ме-2Е-РЬе) -Т (алло) -30- Βίρ(ОМе)-(2Е-АРРА)
109	Η-ΑίΡ-ΩΟ-Τ(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- (АРРА)
110	Η-ΑίΡ-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-ТЗО-Βίρ(ОМе)- (АРРА)
111	Η-ΑίΡ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РРе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2Е- АРРА)
112	Η-ΑίΡ-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РРе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- (2Е-АРРА)
113	Η-ΑίΡ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-(АРРА)
114	Η-ΑίΡ- (ΟΝΒ) -С-Т (алло) - (сх-Ме-2Е-РЬе) -Т (алло) -3ϋ- Βίρ (ОМе) - (АРРА)
115	Η-ΑίΡ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РРе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-(2Е-АРРА)
116	Η-ΑίΡ- (ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Г-РРе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-(2Е-АРРА)
117	Η-ΑίΡ-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ОМе)- (АРРА)
118	Η-ΑίΡ-(ΟΝΒ)-СТ-(а-Ме-2Г-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ОМе)- (АРРА)
119	Η-ΑίΡ-ΩΟΤ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-ЗО-Βίρ(ОМе)-(2Е- АРРА)
120	Η-ΑίΡ-(ΟΝΒ)-СТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ОМе)- (2Е-АРРА)
121	ΟΗ3ΟΟ-Η-ΑίΡ-ΩΟΤ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- ((ΝΜβ)(АРРА))
122	СН3ОСО-Н-А1Р-ОСТ- (сх-Ме-2Е-РЬе) -Τ3ϋ-Βίρ (ОМе) - ((ΝΜβ)(АРРА))

- 18 018000

123	СНзСО-Н-АхЬ-ОСТ- (сх-Ме-2Е-РИе) -ТЗЭ-Βίρ (ОМе) - ((ΝΜβ)(2Е-АРРА))
124	СН3ОСО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-Рке)-Τ5ϋ-Βίρ(ОМе)- ((ΝΜβ)(2Е-АРРА))
125	СНзСО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЪе)-Т(алло)-3Ώ- Βίρ(ОМе)-((ΝΜβ)(АРРА))
126	СНзОСО-Н-А1Ь-06-Т(алло)-(а-Ме-2Е-Рке)-Т(алло)-3Ώ- Βίρ(ОМе)-((ΝΜβ)(АРРА))
127	СН3СО-Н-А1Ь-0С-Т (алло) - (сх-Ме-2Е-РИе) -Т (алло) -3ϋ- Βίρ(ОМе)-((ΝΜβ)(2Е-АРРА))
128	СНзОСО-Н-АБЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-Рке)-Т(алло)-30- Βίρ(ОМе)-((ΝΜβ)(2Е-АРРА))
129	Н-А1Ь-<2С-Т (алло) - (а-Ме-2Е-Р1пе) -Т (алло) -3Ώ- Βίρ(ОМе)-((ΝΜβ)(АРРА))
130	Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-((ΝΜβ)(АРРА))
131	Н-А1Ь-0С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-((ΝΜβ)(2Е-АРРА))
132	Н-А1Ь- (ΟΝΒ) -О-Т (алло) - (сх-Ме-2Е-РНе) -Т (алло) -3ϋ- Βίρ(ОМе)-((ΝΜβ)(2Е-АРРА))
133	СНзСО-Н-АхЬ-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ- ((ΝΜθ)Βίρ(ОМе))-((ΝΜβ)(АРРА))
134	СНзОСО-Н-А1Ь-<2ОТ- (а-Ме-2Е-РЬе) -Τ3ϋ- ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜβ) (АРРА))
135	СНзСО-Н-АтЬ-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ- ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜβ) (2Е-АРРА))
136	СНзОСО-Н-АхЬ-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-ТЗО- ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе))-((ΝΜβ)(2Е-АРРА))
137	СНзСО-Н-АхЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3Ώ- ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе))-((ΝΜβ)(АРРА))
138	СНзОСО-Н-АхЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РНе)-Т(алло)-3ϋ- ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜβ) (АРРА))
139	СНзСО-Н-АхЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РИе)-Т(алло)-3ϋ- ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜβ) (2Е-АРРА))

- 19 018000

140	СНзОСО-Н-АДЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ- ((ΝΜθ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜθ) (2Е-АРРА))
141	Н-АДЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3Ό- ((ΝΜθ)Βίρ(ОМе))-((ΝΜβ)(АРРА))
142	Η-ΑίΡ-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3Ώ- ((ΝΜθ)Βίρ(ОМе))-((ΝΜθ)(АРРА))
143	Н-А1Ь-<2О-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РЬе) -Т (алло) -3Ώ((ΝΜθ)Βίρ(ОМе))-((ΝΜθ)(2Е-АРРА))
144	Н-АДЬ-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-Рйе)-Т(алло)-3Ό- ((ΝΜθ)Βίρ(ОМе))-((ΝΜθ)(2Е-АРРА))
145	СН3СО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-ТЗ-(ΝΜθ)ϋ- ((ΝΜθ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜθ) (АРРА))
146	СН3ОСО-Н-А1Ь-ОСТ- (θί-Μθ-2Ε-ΡΗθ) -ТЗ- (ΝΜθ) Ώ- ((ΝΜθ)Βίρ(ΟΜθ))-((ΝΜθ)(ΑΡΡΑ))
147	СН3СО-Н-А1Ь-ОСТ- (а-Ме~2Е-Р1пе) -Τ3- (ΝΜθ) Ο- ((ΝΜθ)Βίρ(ΟΜθ))-((ΝΜθ)(2Ε-ΑΡΡΑ))
148	СН3ОСО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-ТЗ-(ΝΜθ)ϋ- ((ΝΜθ)Βίρ(ΟΜθ))-((ΝΜθ)(2Ε-ΑΡΡΑ))
149	СН3СО-Н-А1Ь-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РИе)-Τ(алло)-3- (ΝΜθ)ϋ-((ΝΜθ)Βίρ(ΟΜθ))-((ΝΜθ)(ΑΡΡΑ))
150	СН3ОСО-Н-А1Ь-ОС-Т (алло) - (сх-Ме-2Е-РНе) -Τ (алло) -3- (ΝΜθ)ϋ-( (ΝΜθ) Βίρ (ОМе) )-( (ΝΜθ) (ΑΡΡΑ) )

- 20 018000

	Таблица 2 (ίν) Список полученных пептидомиметиков
5θς. Ю. Νο.	Последовательность пептидомиметиков
151	СНзСО-Н-АтЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Г-РБе)-Т(алло)-3- (Же) Ό- ( (Же) Βίρ (ОМе) ) - ( (Же) (2Ε-ΑΡΡΆ) )
152	СН3ОСО-Н-А1Ь-0С-Т(алло)-(а-Ме-2Г-РБе)-Т(алло)-3- (Же) ϋ- ( (Же) Βίρ (ОМе) ) - ( (Же) (2Г-АРРА) )
153	Н-А1Ь-<2С-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РЬе) -Т (алло) -3- (Же) ϋ( (Же) Βίρ (ОМе) ) - ( (Же) (АРРА) )
154	Н-А1Ь-(СИВ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3- (Же) ϋ- ( (Же) Βίρ (ОМе) ) - ( (Же) (АРРА) )
155	Н-А1Ь-<2О-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РЬе) -Т (алло) -3- (Же) ϋ( (Же) Βίρ (ОМе) ) - ( (Же) (2Е-АРРА) )
156	Н-А1Ь-(СИВ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3- (Же) Ώ- ( (Же) Βίρ (ОМе) ) - ( (Же) (2Е-АРРА) )
157	СН3СО-Н-А1Ь-ОСТ-(сх-Ме-2Е-РНе)-Τ3Ώ-Βίρ(ОМе)-(С=3)- (АРРА)
158	СН3ОСО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Г-РБе)-ТЗО-Βίρ(ОМе)- (С=3)-(АРРА)
159	СН3СО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(С=3)- (2Е-АРРА)
160	СН3ОСО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Г-РНе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- (С=3)-(2Г-АРРА)
161	СН3СО-Н-А1Ь-0С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РБе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-(С=8)-(АРРА)
162	СН3ОСО-Н-А1Ь-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3Ό- Βίρ(ОМе)-(С=3)-(АРРА)
163	СН3СО-Н-А1Ь-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Е-АРРА)
164	СН3ОСО-Н-А1Ь-0С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-30- Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Е-АРРА)
165	Н-А1Ь-0С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РНе)-Т(алло)-3Ώ- Βίρ(ОМе)-(С=3)-(АРРА)
166	Н-А1Ь-(СНВ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РНе)-Т(алло)-30- Βίρ(ОМе)-(0=3)-(АРРА)
167	Н-А1Ь-<2С-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РНе) -Т (алло) -30- Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Е-АРРА)
168	Н-А1Ь-(СИВ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3Ώ- Βίρ(ОМе)-(0=3)-(2Е-АРРА)
169	СН3СО-Н-А1Ь-0СТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-(С=3)-Βίρ(ОМе)- (С=3)-(АРРА)
170	СН3ОСО-Н-А1Ь-0СТ-(а-Ме-2Е-РНе)-Τ3Ώ-(С=3)- Βίρ(ОМе)-(С=3)-(АРРА)
171	СН3СО-Н-А1Ь-0СТ-(а-Ме-2Е-РБе)-Τ3ϋ-(0=3)-Βίρ(ОМе)- (С=3)-(2Е-АРРА)

- 21 018000

172

173

174

175

176

177

178

179

180

181

182

183

184

185

186

187

188

СНзОСО-Н-АгЬ-ОСТ-(а-Ме-2Е-РНе)-Τ3Ώ-(С=3)Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Е-АРРА)

СНзСО-Н-АгЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2В-РЬе)-Т(алло)-30(С=3)-Βίρ(ОМе)-(С=3)-(АРРА)

СНзОСО-Н-А1Ь-<2О-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РИе) -Т (алло) -3ϋ(С=5)-Βίρ(ОМе)-(С=3)-(АРРА)

СН₃СО-Н-А1Ь-<2С-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РЪе) -Т (алло) -3ϋ(С=3)-Βίρ(ОМе)-(С=8)-(2Е-АРРА)

СНзОСО-Н-А1Ь-<2С-Т (алло) - (α-Μθ-2Γ-Ρίιβ) -Т (алло) -3ϋ(С=3)-Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Е-АРРА)

Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Е-Рке)-Т(алло)-3Ώ-(С=3) Βίρ(ОМе)-(С=3)-(АРРА)

Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(о<-Ме-2Е-РИе)-Т(алло) -3ϋ(С=3)-Βίρ(ОМе)-(С=3)-(АРРА)

Н-А1Ь-<2О-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РЬе) -Т (алло) -3Ώ- (С=3) Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Е-АРРА)

Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-Рке)-Т(алло)-3Ώ(С=3)-Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Е-АРРА)

СН₃СО-Н-А1Ь-0СТ-(а-Ме-2Е-РЪе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(СН₂) (АРРА)

СН₃ОСО-Н-А1Ь-<2СТ- (а-Ме-2Г-Рке) -Τ3ϋ-Βίρ (ОМе) (СН₂) - (АРРА)

СН₃СО-Н-А1Ь-<2ОТ- (а-Ме-2Е-РНе) -ТЗО-Βίρ (ОМе) - (СН₂) (2Е-АРРА)

СН₃ОСО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-РИе)-ТЗО-Βίρ(ОМе)(СН₂) - (2Е-АРРА)

СН₃СО-Н-А1Ь-<2С-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РЪе) -Т (алло) -30Βίρ (ОМе) - (СН₂) - (АРРА)

СН₃ОСО-Н-А1Ь-0С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЪе)-Т(алло)-3ϋΒίρ(ΟΜθ)- (СН₂)-(АРРА)

СНзСО-Н-АхЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-30Βίρ (ОМе) - (СН₂) - (2Γ-ΆΡΡΑ)

СН₃ОСО-Н-А1Ь-0С-Т(алло)-(а-Ме-2Г-РИе)-Т(алло)-3ϋΒίρ (ОМе) - (СН₂) - (2Е-АРРА)

- 22 018000

189	Н-А1Ь-<2С-Т (алло) - (а-Ме-2Е-Рке) -Т (алло) -50- Βίρ (ОМе) - (СН2) - (АРРА)
190	Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РНе)-Т(алло)-3Ώ- Βίρ (ОМе) - (СН2) - (АРРА)
191	Н-А1Ь-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Г-РНе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ (ОМе) - (СН2) - (2Е-АРРА)
192	Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-30- Βίρ (ОМе) - (СН2) - (2Е-АРРА)
193	СН3СО-Н-А1Ь-0СТ-(а-Ме-2Е-РИе)-Τ5Ώ-(СН2) - Βίρ (ОМе) ) - (СН2) - (АРРА)
194	СН3ОСО-Н-А1Ь-<2СТ- (ос-Ме-2Е-РЬе) -Τ3Ώ- (СН2) - Βίρ(ОМе)-(СН2) - (АРРА)
195	СН3СО-Н-А1Ь-0СТ- (а-Ме-2Е-РЬе) -Τ3Ώ- (СН2) -Βίρ (ОМе) - (СН2) - (2Е-АРРА)
196	СН3ОСО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ8ϋ-(СН2) - Βίρ (ОМе) - (СН2) - (2Е-АРРА)
197	СН3СО-Н-А1Ь-0С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РИе)-Т(алло)-3ϋ- (СН2) -Βίρ (ОМе) - (СН2) - (АРРА)
198	СН30С0-Н-А1Ь-<2С-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РЬе) -Т (алло) -5ϋ- (СН2) -Βίρ (ОМе) - (СН2) - (АРРА)
199	СН3СО-Н-А1Ь-0С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-5Ώ- (СН2) -Βίρ (ОМе) - (СН2) - (2Е-АРРА)
200	СН3ОСО-Н-А1Ь~<2С-Т (алло) - (а-Ме-2Е-Рке) -Т (алло) -3ϋ- (СН2) -Βίρ (ОМе) - (СН2) - (2Е-АРРА)
201	Н-А1Ь-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РНе)-Т(алло)-30-(СН2) - Βίρ (ОМе) - (СН2) - (АРРА)
202	Н-А±Ь-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(с<-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-30- (СН2) -Βίρ (ОМе) - (СН2) - (АРРА)
203	Н-А1Ь-<2С-Т (алло) - (а-Ме-2Е-РЬе) -Т (алло) -30- (СН2) - Βίρ (ОМе) - (СН2) - (2Е-АРРА)
204	Н-А1Ь- (ΟΝΒ) -С-Т (алло) - (сх-Ме-2Е-РНе) -Т (алло) -3ϋ- (СН2) -Βίρ (ОМе) - (СН2) - (2Е-АРРА)
205	СН3СО-Н-А1Ь-(СЫВ)-СТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- (АРРА)
206	СН3ОСО-Н-А1Ь-(СЫВ)-СТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- (АРРА)
207	СН3СО-Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-СТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- (2Е-АРРА)
208	СН3ОСО-Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-СТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-ТЗО-Βίρ(ОМе)- (2Е-АРРА)

- 23 018000

Таблица 2 (ν)

Список полученных пептидомиметиков

Зеч.ΙΏ. Νο.	Последовательность пептидомиметиков
209	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ- (СН2) -Βίρ (ОМе) - (СН2) - (АРРА)
210	СН3СО-Н-А1Ь-(Н£1)-СТ-(а-Ме~2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- (АРРА)
211	СН3ОСО-Н-А1Ь-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-ТЗО-Βίρ(ОМе)- (АРРА)
212	СН3СО-Н-А1Ь-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- (2Е-АРРА)
213	СН3ОСО-Н-А1Ь-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Е-РЪе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- (2Е-АРРА)
214	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЪе)-Т(алло)-3Ό- Βίρ (ОМе) - (СН2) - (2Ε-ΆΡΡΑ)
215	Н-А1Ь- (Н£1) -С-Т (алло) - (сх-Ме-2Е-РЬе) -Т (алло) -3ϋ- Βίρ(ОМе)- (СН2)-(АРРА)
216	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3Ό- (С=3)-Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Е-АРРА)
217	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3Ό- (С=3)-Βίρ(ОМе)-(С=3)-(АРРА)
218	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Е-АРРА)
219	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РПе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-(С=3)~(АРРА)
220	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3- (ΝΜθ)О-((ΝΜβ)Βίρ(ОМе))-((ΝΜβ)(АРРА))

- 24 018000

221	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3- (ΝΜθ)ϋ-((ΝΜθ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜθ) (2Ε-ΑΡΡΑ))
222	Н-А1Ь-(Η£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-((ΝΜθ)(АРРА))
223	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Г-РЬе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-((ΝΜθ)(2Е-АРРА))
224	Н-А1Ь-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ОМе)- (2Е-АРРА)
225	Н-А1Ь-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Е-РНе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ОМе)- (АРРА)
226	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- (АРРА)
227	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)- (2Е-АРРА)
228	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЪе)-Т(алло)-3ϋ- Βίρ(ОМе)-(АРРА)
229	Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РИе)-Т(алло)-3Ό- Βίρ(ОМе)-(2Е-АРРА)
230	Н-А1Ь-(Н£1)-СТ-(а-Ме-РЬе)-ТЗО-Βίρ(ОМе)-(АРРА)
231	Н-А1Ь- (Н£1)-СТ- (θί-Ме-РЬе) -Τ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (ΑϋΜΡ)
232	Н-А1Ь-(Н£1)-СТ-(а-Ме-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АСРР)
233	Н-А1Ь-(Н£1)-СТ-(α-Ме-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АМСВ)
234	Н-А1Ь- (Н£1) -СТ- (о-Ме-2Е-Р1пе) -Τ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (АРРА)
235	Н-А1Ь-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Е-РНе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АВМР)
236	Н-А1Ь-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Е-РНе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АСРР)
237	Н-А1Ь-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Е-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АМСВ)

Исследования новых пептидомиметиков ίη νίΐϊΌ и ίη νί\Ό.

Пептидомиметики, полученные, как описано выше, тестировали на:

a) глюкозозависимую секрецию инсулина ίη νίΐϊΌ (протокол скрининга анализа клеток ΚΙΝ5Ρ);

b) активность агониста СЬР-1К человека ίη νίΐϊΌ (определение циклического АМФ);

c) активность антагониста глюкагона человека ίη νίΐϊΌ (определение циклического АМФ);

б) стабильность пептидомиметиков в отношении фермента ИРР Ιν, плазмы человека, имитированной желудочной жидкости, жидкости кишечника и микросом печени;

е) демонстрацию эффективности тестируемых соединений (пептидомиметиков) ίη νί\·Ό у мышей С57Β^/6^ (ίη ν^νο), с использованием различных анализов ίη νίΐϊΌ и ίη ντ^, как описано ниже.

Исследования ίη νίΐϊΌ.

Глюкозозависимая секреция инсулина ίη νίΐϊΌ (протокол скрининга анализа клеток ΚΙΝ5Ρ).

Клетки ΚΙΝ5Ρ (инсулиномы крыс) культивировали в среде ΚΡМI 1640, дополненной пируватом натрия (1 мМ) ΗЕΡЕδ и глюкозой (4,5 г/л) во влажном инкубаторе (5% СО₂) при 37°С. После трипсинизации клетки ΚΙΝ5Ρ высевали при концентрации 0,2х10⁶ клеток на лунку в 12-луночные планшеты. Клетки растили в течение ночи до 80% конфлюентности и проводили эксперименты с секрецией инсулина, как указано ниже (Мοηΐ^ο8е-Κа^^?^ζаάеЬ С., еΐ а1., Мо1. Се11. Еп6о. 1997, 130, 109.; Аа^, X., еΐ а1., Еп6осппо1о§у, 2001, 5, 1820).

Клетки однократно отмывали раствором ΡΒδ с последующими 40 мин инкубации в свежем уравновешенном буфере Кребса-Рингера, содержащем №С1 (115 ммоль/л), КС1 (4,7 ммоль/л), СаС1₂ (1,28 ммоль/л), М^О₄-7Н₂О (1,2 ммоль/л), КН₂РО₄ (1,2 ммоль/л), №11СО₃ (10 ммоль/л) и ΗЕΡЕδ (25 ммоль/л), содержащем глюкозу (1,1 мМ) и ΒδА (0,5%), рН 7,4. Через 40 мин буфер заменяли и клетки инкубировали (37°С) с тестируемыми пептидомиметиками при различных концентрациях в течение 30 мин в присутствии (16,7 мМ) и в отсутствие (0 мМ) глюкозной нагрузки. Супернатант собирали и количество инсулина измеряли ультрачувствительным набором ЕЬКА для инсулина крыс (С^у8ΐа1 СЬет, ΙΡ). Количество белка в супернатанте рассчитывали с применением набора Β^с^ηсЬοη^η^с Ас1б по протоколу производителя ^1§та АИпсЬ, МО). Общее содержание инсулина, полученное в пикограммах (пг), делили на общее содержание белка (мкг) для нормализации различий в плотности клеток между лунками. Активность глюкозозависимой секреции инсулина иллюстративных пептидомиметиков ίη νίΐϊΌ представлена в табл. 3.

- 25 018000

Таблица 3

Активность глюкозозависимой секреции инсулина иллюстративных пептидомиметиков ίη νΐΐΓο

Зеч. Ю. Νο.	Концентрация тестируемого соединения (нМ)	Секреция инсулина (пг/мкг/час)*
Контроль 1 (0 мМ глюкозы)		5,9±0,61
Контроль 2 (16,7 мМ глюкозы)		10,2±0,51
Экзендин-4	0,1/1/10	16,2±0,10/22,1±0,12/ 36,2±0,12
25	0,1/1/10	15,6±0,30/21,8±0,11/ 35,б±0,20
26	0,1/1/10	16,6±0,41/22,9±0,32/ 36,6±0,19
27	0,1/1/10	16,4±0,12/22,7±0,17/ 36,6±0,05
29	0,1/1/10	16,3±0,15/22,4±0,21/ 36,2±0,11
30	0,1/1/10	17,1±0,11/23,1±0,16/ 37,0±0,29
31	0,1/1/10	16,8±0,20/22,7±0,29/ 36,6±0,31
32	0,1/1/10	12,1±0,52/14,1±0,16/ 28,0±0,36
39	0,1/1/10	11,1±0,12/13,1±0,13/ 19,0±0,16

- 26 018000

40	0,1/1/10	12,6±0,20/15,9±0,31/ 28,4±0,11
45	0,1/1/Ю	11,8±0,50/14,9±0,11/ 27,9±0,31
46	0,1/1/10	12,7±0,21/15,8+0,33/ 29,3±0,19
47	0,1/1/10	13,1±0,11/14,9±0,17/ 28,8±0,44
48	0,1/1/10	12,9±0,14/15,8±0,13/ 29,9±0,15
49	0,1/1/10	16,1±0,22/22,1±0,26/ 36,0±0,36
50	0,1/1/10	15,4±0,14/21,2±0,18/ 35,6+0,17
77	0,1/1/10	15, 6±0, 33/21,8±0,16/ 35,6±0,26
78	0,1/1/10	16,6±0,41/22,9±0,32/ 36,7±0,11
79	0,1/1/10	16,5±0,12/22,7±0,17/ 36,5+0,05
80	0,1/1/10	16,2+0,13/22,4±0,19/ 36,2±0,09
81	0,1/1/10	17,1±0,15/23,1±0,12/ 37,0+0,19
82	0,1/1/10	16,9+0,22/22,8±0,31/ 36,7+0,34
83	0,1/1/10	12,3±0,33/14,1±0,36/ 28,0±0,16
84	0,1/1/10	12,1±0,42/14,6±0,41/ 27,8±0,46

- 27 018000

85	0,1/1/10	11,9+0,17/14,2+0,13/ 27,6+0,16
86	0,1/1/10	12,3+0,33/14,8+0,16/ 28,1+0,22
101	0,1/1/10	12,4+0,22/15,2+0,32/ 29,6+0,50
103	0,1/1/10	12,1+0,51/14,1+0,19/ 28,1+0,29
109	0,1/1/10	12,6+0,25/15,3+0,31/ 29,7+0,48
110	0,1/1/10	12,0+0,14/14,3+0,12/ 27,8+0,32
111	0,1/1/10	16,2+0,20/22,2+0,20/ 36,1+0,31
112	0,1/1/10	15,3+0,19/21,2+0,11/ 35,5+0,19
113	0,1/1/10	15,6+0,31/21,8+0,16/ 35,6+0,28
114	0,1/1/10	16,6+0,41/22,9+0,32/ 36,6+0,19
116	0,1/1/10	16,4+0,12/22,7+0,17/ 36,6+0,05
120	0,1/1/10	16,3+0,15/22,4+0,21/ 36,2+0,11
130	0,1/1/10	17,1+0,11/23,1+0,16/ 37,0+0,29
132	0,1/1/10	13,1+0,11/14,9+0,17/ 28,8+0,44
142	0,1/1/10	12,9+0,14/15,8+0,13/ 29,9+0,15

- 28 018000

154	0,1/1/Ю	16,1±0,22/22,1±0,26/ 36,0±0,36
166	0,1/1/10	15,4+0,14/21,2+0,18/ 35,6±0,17
175	0,1/1/10	15,6±0,33/21,8±0,16/ 35,6+0,26
192	0,1/1/10	16,6±0,41/22,9±0,32/ 36,7±0,11
200	0,1/1/10	16,5±0,12/22,7±0,17/ 36,5±0,05
202	0,1/1/10	16,8±0,20/22,7±0,29/ 36,б±0,31
206	0,1/1/10	12,1±0,42/14,6±0,41/ 27,8±0,46
210	0,1/1/10	11,9±0,17/14,2±0,13/ 27,6±0,16
218	0,1/1/10	12,3±0,33/14,8±0,16/ 28,1±0,22
225	0,1/1/10	12,4±0,22/15,2±0,32/ 29,6±0,50
230	0,1/1/10	12,1±0,51/14,1±0,19/ 28,1±0,29
235	0,1/1/10	12,6±0,25/15,3±0,31/ 29,7±0,48
237	0,1/1/10	12,0±0,14/14,3±0,12/ 27,8+0,32

*Глюкозозависимую (16,7 мМ глюкозной нагрузки) секрецию инсулина ΐη νΐίΐΌ с различными концентрациями пептидомиметиков измеряли с использованием клеток инсулиномы крыс (ВШ5Р). Общее содержание инсулина (пг) делили на общее содержание белка (мкг) для нормализации различий в плотности клеток между лунками; п=3, значения представляют собой среднее ± 8.Ό. При концентрации глюкозы 0 мМ для всех тестируемых соединений наблюдали базальную секрецию инсулина.

Активность агониста 6ЬР-1В человека ΐη У11го (определение циклического АМФ).

Новые пептидомиметики скринировали на активность агониста рецептора 6ЬР-1 человека (Н6ЬР-1В) (ΐη ν^ΐ^ο) с использованием анализа цАМФ в стабильно трансфицированных клетках СНО/6ЬР-1В человека. Клетки СНО-К1 (СВЬ 9618) получали из Атспсап Турс Си11игс СоПссИоп (ВоскуШс, ΜΌ). Клетки СНО растили в среде Хама Р12, содержащей Ь-глутамин (2 мМ), НЕРЕ8 (25 мМ), №11СО₃ (1,1 г/л) и дополненной сывороткой новорожденных телят (ХВС8; 10%), пенициллином (50 Ед/мл (об./об.)) и стрептомицином (50 мкг/мл (об./об.)). Клетки каждые 3 суток разделяли 1:8.

Получение стабильных клеточных линий СНО, экспрессирующих рецептор 6ЬР-1 человека. кДНК, кодирующую рецептор 6ЬР-1 человека, выделяли посредством ОТ-ПЦР в соответствии со стандартным протоколом. Полноразмерную кДНК клонировали в рсБХА3.1(+). Для получения клеточных линий СНО, экспрессирующих рецептор 6ЬР-1, клетки СНО трансфицировали 10 мкг экспрессирующей плазмиды рсВХА/к6ЬР-1В с использованием СаРО₄ в соответствии со стандартным протоколом (ШНсс1сг, М.В., с! а1., Епбосппо1о§у. 1993, 133, 57). Экспрессирующие рецептор клоны получали посредством селекции с 6418 (800 мкг/мл активного, 81§та). Затем стабильные клоны поддерживали при 500 мкг/мл (6418). Выбранный клон для анализов цАМФ использовали между пересевами 9-25.

Определение образования цАМФ.

Клетки СНО, стабильно трансфицированные 6ЬР-1В человека, поддерживали в среде Хама Р12 + 10% ХВС8 + 500 мкг/мл 6418 до конфлюентности 70-75%. Клетки трипсинизировали с использованием 2 мл ТРУ6 (0,25% трипсин, 0,53 мМ ЭДТА, 1,38 мМ глюкоза).

Трипсин инактивировали с использованием среды Хама Р12, содержащей 10% ХВС8, и клетки суспендировали в 2 мл полной среды. Затем 2х10⁵ клеток/лунку высевали в 12-луночный планшет и планшеты инкубировали во влажной атмосфере при 37°С в течение 16-18 ч (Рсктапп, Н.С., с! а1., Рсрйбсз

- 29 018000

1994, 15, 453). На следующие сутки проводили анализ, когда клетки демонстрировали 90-95% конфлюентности. Среду из 12-луночного планшета удаляли и клетки однократно отмывали с использованием среды Хама Р12 (обычной). Клетки инкубировали при 37°С с 500 мкл среды Хама Р12 + 1% В8А + 0,125 мМ ΚΌ-20 в течение 30 мин. После инкубации среду удаляли и добавляли свежую среду (обычная среда Хама Р12 + 1% В8А + 0,25 мМ ΚΌ-20) с 5 мкл тестируемых соединений (пептидомиметиков), которые растворяли в воде (Μί11ίΟ). Клетки инкубировали с тестируемыми соединениями в течение 30 мин во влажной атмосфере и при 37°С. После инкубации среду удаляли и клетки однократно отмывали обычной средой Хама Р12. Затем клетки лизировали, добавляя в каждую лунку 500 мкл охлажденного на льду 0,1н. НС1 и перемешивая в течение 30 мин при 200 об/мин. Затем клетки разрушались, лизат собирали в микроцентрифужные пробирки и центрифугировали при 12000 об/мин в течение 10 мин с удалением дебриса. Затем из каждой микроцентрифужной пробирки отбирали 300 мкл супернатанта в стеклянную пробирку и сушили в атмосфере Ν₂ в течение 30 мин для оценки содержания цАМФ. Общее содержание цАМФ в образце оценивали по протоколу производителя с применением анализа для иммунологического анализа циклического АМФ (Κ&Ό 8у81ет8, Μίηικαροΐίδ. ΜΝ). Оставшийся супернатант использовали для определения концентрации белка с использованием микро ВСА (81дта). Данные рассчитывали как процент от контроля (носитель:вода) и выражали в виде среднего ± 8Ό. Активность иллюстративных пептидомиметиков в качестве агониста рецептора СЬР-1 человека представлена в табл. 4.

- 30 018000

Таблица 4

Активность тестируемых соединений (пептидомиметиков) в отношении ОЬР-1К человека (высвобождение цАМФ) ίη νΐΐΓο, представленная как % активности относительно контроля

Зеч. Ю. Νο.	Концентрация тестируемых соединений
1 нМ	10 нМ	100 нМ	1 мкМ	10 мкМ
Экзендин- 4	88±0,11	95+0,10	99±0,04	99+0,08	99±0,07
11	99±0,03	99±0,01	99±0,06	99±0,09	99±0,11
16	99±0,11	99±0,13	99±0,16	99±0,06	99±0,10

19	99±0,12	99±0,08	99+0,11	99±0,12	99±0,16
22	99±0,02	99±0,26	99±0,31	99±0,60	99±0,08
29	96±0,09	99±0,07	99±0,04	99±0,01	99+0,08
30	38±0,12	78+0,15	86±0,18	95+0,03	98±0,09
32	39±0,11	80±0,09	88±0,06	96±0,14	99±0,19
39	40±0,09	81±0,07	87+0,04	95±0,01	98±0,08
40	38±0,11	77±0,16	85±0,11	94±0,08	97±0,05
' 42	3 9±0,10	81±0,08	89±0,09	96±0,11	99±0,16
45	51±0,03	86±0,40	91±0,21	99±0,32	99±0,21
47	55±0,16	89±0,05	93±0,09	99±0,02	99±0,04
50	60±0,12	92±0,15	98±0,18	99±0,03	99±0,09
62	38+0,12	78±0,15	86±0,18	95±0,03	98±0,09
68	39±0,11	80±0,09	88±0,06	96±0,14	99±0,19
72	45±0,022	84±0,46	90±0,41	99±0,66	99±0,03
77	40+0,09	81±0,07	87±0,04	95±0,01	98±0,08
79	62+0,11	94±0,09	99±0,06	99±0,14	99±0,19
80	66±0,022	97±0,46	99+0,41	99+0,66	99+0,03
81	69+0,09	98+0,07	99±0,04	99±0,01	99+0,08
82	78±0,12	99±0,15	99+0,18	99±0,03	99±0,09
84	38±0,11	77+0,16	85±0,11	94±0,08	97±0,05
101	41+0,09	82+0,07	87±0,04	95±0,01	98±0,08
110	38±0,11	77+0,16	85±0,11	94±0,08	97+0,05
112	39±0,10	81+0,08	89±0,09	96±0,11	99±0,16
114	82±0,22	87±0,12	92±0,14	99±0,22	99±0,26
116	55±0,16	88±0,13	92+0,11	99±0,07	99±0,09
120	99+0,12	99±0,15	99±0,18	99±0,03	99±0,09
130	39±0,10	81±0,08	8 9±0,09	96±0,11	99±0,16
140	51+0,03	86±0,40	91±0,21	99+0,32	99±0,21
144	55+0,16	89±0,05	93±0,09	99±0,02	99±0,04
154	60±0,12	92±0,15	98±0,18	99±0,03	99±0,09

- 31 018000

156	86±0,11	99±0,09	99±0,06	99±0,14	99±0,19
166	96±0,02	99±0,46	99±0,41	99±0,66	99±0,03
168	96±0,09	99±0,07	99±0,04	99±0,01	99±0,08
178	3 9±0,12	80±0,15	86±0,18	95±0,03	98+0,09
180	40±0,11	81+0,09	89+0,06	96±0,14	99±0,19
185	46±0,022	85±0,46	90±0,41	99±0,66	99±0,03
190	41±0,09	82±0,07	87±0,04	95±0,01	98±0,08
194	38±0,11	77+0,16	85±0,11	94±0,08	97±0,05
196	3 9±0,10	81±0,08	89±0,09	96±0,11	99±0,16
198	82±0,22	87±0,12	92+0,14	99+0,22	99±0,26
200	55±0,16	88+0,13	92±0,11	99±0,07	99±0,09
202	99±0,12	99+0,15	99±0,18	99±0,03	99±0,09
203	8 6±0,11	99±0,09	99±0,06	99±0,14	99±0,19
204	96±0,02	99±0,46	99±0,41	99±0,66	99±0,03
205	96±0,09	99±0,07	99±0,04	99±0,01	99±0,08
206	39±0,12	80±0,15	86±0,18	95±0,03	98±0,09
207	40±0,11	81±0,09	89±0,06	96±0,14	99±0,19
210	46+0,022	85±0,46	90±0,41	99±0,66	99±0,03
216	93±0,11	99±0,09	99±0,06	99±0,14	99±0,19
220	93±0,10	99±0,46	99±0,41	99±0,66	99±0,03
224	99+0,06	99±0,06	99±0,08	99±0,10	99±0,12
228	99±0,11	99±0,13	99±0,16	99±0,06	99±0,10
230	99+0,12	99±0,08	99±0,11	99±0,12	99±0,16
235	99±0,02	99±0,26	99±0,31	99±0,60	99±0,08
237	96±0,09	99±0,07	99±0,04	99±0,01	99±0,08

На основе активности агониста рецептора СЬР-1 человека ίη νΐΐΓο для новых пептидомиметиков определяли значения ЕС₅₀, и сравнительные кривые доза-ответ (ОКС) для экзендина (ЕС₅₀=0,56 нМ) и 8ед. ΙΌ. Νο. 38: Η-Α^Ь-^СΤ-(α-Μе-2Ρ-ΡИе)-Τ8^-Β^ρ(ΟΜе)-(Α^ΜΡ) (ЕС₅₀=0,34 нМ) представлены на фиг. 3 в виде иллюстративного примера.

Активность антагониста глюкагона человека ίη νΐΐΓο (количественное измерение ингибирования продукции циклического АМФ тестируемыми пептидомиметиками).

Новые пептидомиметики скринировали на активность антагониста рецептора глюкагона человека (Н-глюкагон-К) {ίη νΐΐΓο) с использованием анализа цАМФ в стабильно трансфицированных клетках СΗΟ/К глюкагона человека. Клетки СΗΟ-Κ1 (СКЕ 9618) получали из Атепеап Τуρе СиЙиге Οοίίβοΐίοη (ΚοοΕνίίίβ, ΜΌ). Клетки СΗΟ растили в среде Хама Р12, содержащей Е-глутамин (2 мМ), ΗЕΡЕ8 (25 мМ), NаΗСΟ₃ (1,1 г/л) и дополненной сывороткой новорожденных телят (ΝΒί'8; 10%), пенициллином (50 Ед/мл (об./об.)) и стрептомицином (50 мкг/мл (об./об.)). Клетки каждые 3 суток разделяли 1:8.

Получение стабильных клеточных линий СΗΟ, экспрессирующих рецептор глюкагона человека.

кДНК, кодирующую рецептор глюкагона человека, выделяли посредством ОТ-ПЦР в соответствии со стандартным протоколом. Полноразмерную кДНК клонировали в ροΌΝΑ3.1(+) (Iпν^ΐ^οдеп). Для получения клеточных линий СΗΟ, экспрессирующих рецептор глюкагона, клетки СΗΟ трансфицировали 10 мкг экспрессирующей плазмиды ροΌΝΑ/Η-глюкагон-К с использованием СаРО₄ в соответствии со стандартным протоколом. Экспрессирующие рецептор клоны получали посредством селекции с С418 (800 мкг/мл активного, 81§та). Стабильные клоны поддерживали при 500 мкг/мл (С418). Выбранный клон для анализов цАМФ использовали между пересевами 9-25.

Определение активности антагониста глюкагона посредством количественного измерения продукции цАМФ, ингибированной после добавления тестируемых пептидомиметиков вместе с пептидом глюкагона

Клетки СΗΟ, стабильно трансфицированные рецептором глюкагона человека, поддерживали в среде Хама Р12 + 10% NΒС8 + 500 мкг/мл С418 до конфлюентности 70-75%. Клетки трипсинизировали с использованием 2 мл ΤΡVС (0,25% трипсин, 0,53 мМ ЭДТА, 1,38 мМ глюкоза). Трипсин инактивировали с использованием среды Хама Р12, содержащей 10% NΒС8, и клетки суспендировали в 2 мл полной среды. Затем 2х10⁵ клеток/лунку высевали в 12-луночный планшет и планшеты инкубировали во влажной атмосфере при 37°С в течение 16-18 ч. На следующие сутки проводили анализ, когда клетки демонстри

- 32 018000 ровали 90-95% конфлюентности. Среду из 12-луночного планшета удаляли и клетки однократно отмывали с использованием среды Хама Р12 (обычной). Клетки инкубировали при 37°С с 500 мкл среды Хама Р12 + 1% В8А + 0,125 мМ КО-20 в течение 30 мин. После инкубации среду удаляли и добавляли свежую среду (обычная среда Хама Р12 + 1% В8А + 0,25 мМ КО-20) с 5 мкл тестируемых соединений (пептидомиметиков), которые растворяли в воде (МП^) с последующим добавлением пептида глюкагона (в качестве агониста). Клетки инкубировали с пептидомиметиками и пептидом глюкагона в течение 30 мин во влажной атмосфере и при 37°С. После инкубации среду удаляли и клетки однократно отмывали обычной средой Хама Р12. Затем клетки лизировали, добавляя в каждую лунку 500 мкл охлажденного на льду 0,1н. НС1 и перемешивая в течение 30 мин при 200 об/мин. Затем клетки разрушались, лизат собирали в микроцентрифужные пробирки и центрифугировали при 12000 об/мин в течение 10 мин с удалением дебриса. Затем из каждой микроцентрифужной пробирки отбирали 300 мкл супернатанта в стеклянную пробирку и сушили в атмосфере Ы₂ в течение 30 мин для оценки содержания цАМФ. Общее содержание цАМФ в образце оценивали по протоколу производителя с применением анализа для иммунологического анализа циклического АМФ (К&Э 8у81ет8, МтпеароИк. МЫ). Оставшийся супернатант использовали для определения концентрации белка с использованием микро ВСА (8щта). Данные рассчитывали как процент от контроля (носитель:вода) и выражали в виде среднего ± 8Ώ. Активность иллюстративных пептидомиметиков в качестве антагониста рецептора глюкагона человека представлена в табл. 5.

Таблица 5

Активность тестируемых соединений (пептидомиметиков) в качестве антагониста рецептора глюкагона человека ίη νίΐΐΌ, представленная как ингибирование тестируемыми соединениями, инкубируемыми при различных концентрациях вместе с пептидом глюкагона в насыщенной концентрации, продукции цАМФ (пмоль/мл/мкг белка) пептидом глюкагона

5θς. Ю. Νο.	Концентрация тестируемых соединений
1 нМ	10 нМ	100 нМ	1 мкМ	10 мкМ
Глюкагон	23+0,01	Зб±0,09	36,1±0,08	37,2±0,11	36,9±0,02
5	6±0,02	5±0,04	3±0,14	0	0
9	5±0,02	3±0,15	0	0	0
11	3±0,04	0	0	0	0
19	0	0	0	0	0
22	17±0,12	15±0,13	12±0,13	8±0,16	6±0,12
26	15±0,11	12±0,13	8±0,09	4±0,01	2±0,08
28	14+0,02	11+0,03	7±0,22	3+0,12	0
29	20+0,06	18+0,09	16±о,01	14±0,03	12±0,01
30	22±0,03	21±0,05	20±0,07	18±0,04	18±0,03
31	6±0,02	5+0,03	2±0,61	' 0	0
40	18±0,07	16+0,01	12±0,03	8±0,02	6±0,08
45	15+0,11	12±0,13	8±0,09	4±0,01	2+0,08
49	10±0,03	8±0,03	6±0,22	2±0,13	0
51	5±0,09	3±0,11	0	0	0
65	10±0,12	8±0,02	б±0,04	4±0,05	1±0,02
72	9±0,11	6±0,12	5+0,14	3±0,22	0
77	20+0,06	18±0,09	16±0,01	14±0,03	12+0,01
78	22±0,03	21±0,05	20±0,07	18±0,04	18±0,03
79	6±0,02	5±0,03	2±0,61	0	0
84	4±0,01	2+0,17	0	0	0
110	18±0,07	16+0,01	12+0,03	8+0,02	6±0,08
112	6±0,01	5+0,02	2±0,13	0	0

- 33 018000

114	4±0,02	2±0,15	0	0	0
116	2±0,03	0	0	0	0
120	0	0	0	0	0
130	5+0,04	3±0,02	1±0,11	0	0
132	15±0,11	12+0,13	8+0,09	4±0,01	2±0,08
142	10±0,03	8±0,03	6+0,22	2±0,13	0
144	5±0,09	3±0,11	0	0	0
150	10±0,12	8±0,02	6+0,04	4±0,05	1±0,02
154	9±0,11	6±0,12	5+0,14	3±0,22	0
156	5±0,01	2+0,17	0	0	0
166	19+0,03	17±0,08	15±0,01	14±0,02	12±0,11
168	21±0,11	19±0,02	18±0,07	18±0,03	16+0,02
170	6±0,05	5+0,04	2±0,16	0	0
172	4+0,16	2±0,11	0	0	0
177	0	0	0	0	0
178	0	0	0	0	0
188	5±0,04	3±0,15	1±0,15	0	0
189	3±0,12	1±0,12	0	0	0
191	4±0,05	2±0,13	2±0,12	0	0
192	4±0,09	2±0,12	0	0	0
194	18±0,12	16±0,11	12±0,13	8±0,12	6+0,18
195	15±0,11	12±0,13	8±0,09	4±0,01	2±0,08
197	14±0,02	11±0,03	7±0,22	3±0,12	0
199	4±0,06	3±0,11	0	0	0
200	10±0,16	8±0,12	б±0,14	4±0,15	1±0,12
202	9±0,14	6±0,14	5±0,13	3±0,24	0
204	6±0,05	5±0,04	2±0,16	0	0
205	4±0,16	2±0,11	0	0	0
206	0	0	0	0	0
207	' 0	0	0	0	0
208	5±0,04	3±0,15	1±0,15	0	0

212	10±0,12	8±0,02	6+0,04	4±0,05	1±0,02
218	9±0,11	6±0,12	5±0,14	3±0,22	0
225	5±0,01	2±0,17	0	0	0
228	19+0,03	17±0,08	15±0,01	14±0,02	12±0,11
237	21±0,11	19±0,02	18±0,07	18±0,03	16±0,02

Стабильность пептидомиметиков в отношении фермента БРР IV, плазмы человека, имитированной желудочной жидкости, жидкости кишечника и микросом печени.

Различные пептидомиметики (конечная концентрация 2 мкМ) инкубировали с БРР IV (1:25 мЕд) или общей плазмой человека (7,5 мкл), или имитированной жидкостью желудка (рН 1,5; состав НС1, ЫаС1 и пепсин), или имитированной жидкостью кишечника (рН 7,5), или микросомами печени человека в течение 0, 2, 4, 6, 12 и 24 ч (37°С; 50 мМ буфера триэтаноламин-НС1; рН 7,8). Концентрации фермента БРР ^/плазмы человека/имитированной жидкости желудка/имитированной жидкости кишечника/микросом печени человека выбирали в предварительных элементах так, чтобы обеспечить деградацию приблизительно 50% экзендина в пределах 2-4 ч, таким образом обеспечивая наблюдение за зависимостью разрешения от времени в течение 24 ч. Реакции останавливали добавлением ТЕА/Н₂О (15 мл, 10%

- 34 018000 (об./об.)). Затем продукты реакций наносили на аналитическую колонку Уубас С₁₈ (4,6x250 мм) и основной фрагмент деградации отделяли от исходного пептидомиметика. Колонку уравновешивали ТРА/Н₂О при скорости потока 1 мл/мин. Используя 0,1% (об./об.) ТРА в 70% ацетонитриле/Н₂О создавали концентрацию ацетонитрила в элюирующем растворителе от 0 до 28% в течение 10 мин и от 28 до 42% в течение 30 мин. Поглощение измеряли при 206 нм с использованием детектора УФ-излучения и пики до анализа Е8КМ8 отбирали вручную. Для тестируемых пептидомиметиков и их метаболитов измеряли площадь под кривой и рассчитывали процент деградации в каждый момент времени в течение периода 24 ч. Результаты исследования стабильности выбранных пептидомиметиков в отношении фермента БРР IV, плазмы человека, имитированной жидкости желудка, жидкости кишечника и микросом печени (т νΐίΓο) приведены в табл. 6.

Таблица 6

Результаты исследования стабильности выбранных пептидомиметиков в отношении фермента БРР IV, плазмы человека, имитированной жидкости желудка, жидкости кишечника и микросом печени (т νΐίΓο)

8θς. Ю. Νο.	Фермент ΌΡΡ IV3	Плазма человека0	Имитированная жидкость желудка0	Имитиро- ванная жидкость кишеч- ника91	Микросомы печение
Экз-4	88 (6,1)	87 (6,1)	100 (0,4)	100 (0,2)	100 (0,2)
7	71 (8)	69 (8)	11 (7)	43 (6)	77 (2)
8	00 (>24)	00 (>24)	00 (>24)	00 (>24)	35 (5)
12	76(9)	78 (8)	14 (8)	43 (6)	80 (1)
14	74 (9)	75 (8)	12 (8)	46 (6)	83 (1)
16	70(9)	71 (8)	14 (8)	40 (6)	78 (1)
19	86(9)	70 (8)	15 (8)	. 41 (6)	77 (1)
27	00 (>24)	00 (>24)	00 (>24)	00 (>24)	31 (5)
29	00 (>24)	00 (>24)	00 (>24)	00 (>24)	32 (5)
30	00 (>24)	00 (>24)	00 (>24)	00 (>24)	33 (5)
31	76(10)	78 (9)	100 (0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
32	75 (10)	77 (9)	100 (0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
45	77 (10)	80(9)	100 (0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
47	76(9)	78 (8)	12 (8)	55 (6)	79 (1)
49	75 (9)	77 (8)	14 (8)	45 (6)	81 (1)
50	77 (9)	80 (8)	13 (8)	50 (6)	82 (1)
65	76(9)	78 (8)	14 (8)	43 (6)	80 (1)
68	74 (9)	75 (8)	12 (8)	46 (6)	83 (1)

- 35 018000

70	70(9)	71 (8)	14 (8)	40 (6)	78 (1)
72	86(9)	70 (8)	15 (8)	41 (6)	77 (1)
74	76 (10)	78 (9)	100 (0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
77	74(10)	75(9)	100 (0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
78	70 (10)	71 (9)	100 (0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
79	86(10)	70(9)	100 (0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
80	72 (10)	70 (9)	100 (0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
81	00 (>24)	00 (>24)	50 (4)	00 (>24)	86 (2)
82	00 (>24)	00 (>24)	55 (4)	00 (>24)	84 (2)
84	00 (>24)	00 (>24)	45 (4)	00 (>24)	85 (2)
110	00 (>24)	00 (>24)	43 (4)	00 (>24)	84 (2)
112	00 (>24)	00 (>24)	49 (4)	00 (>24)	82 (2)
114	00 (>24)	00 (>24)	52 (4)	00 (>24)	81 (2)
116	00 (>24)	00 (>24)	43 (4)	00 (>24)	84 (2)
120	00 (>24)	00 (>24)	'41 (4)	00 (>24)	80 (2)
130	76(9)	78 (8)	12 (8)	55 (6)	79 (1)
132	75(9)	77 (8)	14 (8)	45 (6)	81 (1)
142	77(9)	80 (8)	13 (8)	50 (6)	82 (1)
144	76(9)	78 (8)	14 (8)	43 (6)	80 (1)
154	74 (9)	75 (8)	12 (8)	46 (6)	83 (1)
156	70(9)	71 (8)	14 (8) '	40 (6)	78 (1)
166	86(9)	70 (8)	15 (8)	41 (6)	77 (1)
168	72 (9)	70 (8)	12 (8)	42 (6)	78 (1)
178	00 (>24)	00 (>24)	00 (>24)	00 (>24)	35 (5)
180	00 (>24)	00 (>24)	50 (4)	00 (>24)	86 (2)
185	00 (>24)	00 (>24)	55 (4)	00 (>24)	84 (2)
190	00 (>24)	00 (>24)	45 (4)	00 (>24)	85 (2)
194	00 (>24)	00 (>24)	43 (4)	00 (>24)	84 (2)
198	00 (>24)	00 024)	49 (4)	00 (>24)	82 (2)

- 36 018000

200	00 (>24)	00 (>24)	52	(4)	00 (>24)	81 (2)
201	00 (>24)	00 (>24)	43	(4)	00 (>24)	84 (2)
202	00 (>24)	00 (>24)	00	(>24)	00 (>24)	33 (5)
203	00 (>24)	00 (>24)	00	{>24)	00 (>24)	31 (5)
204	00 (>24)	00 (>24)	00	024)	00 (>24)	32 (5)
205	00 (>24)	00 (>24)	00	(>24)	00 (>24)	33 (5)
206	00 (>24)	00 (>24)	00	(>24)	00 (>24)	32 (5)
207	00 (>24)	00 (>24)	00	024)	00 (>24)	26 (5)
208	76 (10)	78 (9)	100	(0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
210	75 (10)	77 (9)	100	(0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
212	77 (10)	80 (9)	100	(0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
214	76(10)	78 (9)	100	(0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
215	00 (>24)	00 (>24)	00	(>24)	00 (>24)	32 (5)
219	00 (>24)	00 (>24)	00	(>24)	00 (>24)	33 (5)
221	00 (>24)	00 (>24)	00	(>24)	00 (>24)	32 (5)
224	00 (>24)	00 (>24)	00	(>24)	00 (>24)	26 (5)
226	74(10)	75(9)	100	(0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
229	70(10)	71 (9)	100	(0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
230	86 (10)	70 (9)	100	(0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
234	72(10)	70 (9)	100	(0,5)	100 (0,5)	100 (0,5)
236	00 (>24)	00 (>24)	00	(>24)	00 (>24)	35 (5)

а: % деградации пептидомиметиков за 24 ч при инкубации с ферментом ОРРЙУ, а значения в скобках представляют собой время полужизни (11/2), в часах;

Ь: % деградации пептидомиметиков за 24 ч при инкубации с плазмой человека, а значения в скобках представляют собой время полужизни (11/2), в часах;

с: % деградации пептидомиметиков за 24 ч при инкубации с имитированной жидкостью желудка, а значения в скобках представляют собой время полужизни (11/2), в часах;

Й: % деградации пептидомиметиков за 24 ч при инкубации с имитированной жидкостью кишечника, а значения в скобках представляют собой время полужизни (11/2), в часах;

е: % деградации пептидомиметиков за 24 ч при инкубации с микросомами печени, а значения в скобках представляют собой время полужизни (11/2), в часах.

Исследования эффективности т νΐνο.

Демонстрация эффективности (антигипергликемической/антидиабетической активности) тестируемых соединений (пептидомиметиков) т νΐνο у мышей С57ВЬ/6й или ЙЬ/ЙЬ при парентеральном и пероральном способах введения.

Животные.

На самцах мышей С57ВЬ/6й или ЙЬ/ЙЬ в возрасте 8-12 недель, выращенных внутрилабораторно, проводили эксперименты длительностью 120 мин с однократной кратковременной дозой. Животных содержали в группах из 6 животных на клетку в течение недели для приучения их к условиям вивариума (25±4°С, относительная влажность 60-65%, цикл день:ночь 12:12 ч, с включением света в 7.30 утра). Все эксперименты на животных проводили в соответствии с действующими на международном уровне руководствами, в соответствии с разрешением '^уЙи§ КезеагсЬ Сеп1ег ашша1 е1Ыса1 сошшШее.

- 37 018000

Способ.

Свойства снижать глюкозу ίη νί\Ό некоторых тестируемых соединений (пептидомиметиков) и экзендина 4 оценивали в моделях животных С57ВБ/61 (умеренно гипергликемических) или бЬ/бЬ, как описано ниже. За двое суток до исследования животных брали в случайном порядке и разделяли на 5 групп (η=6), на основе их уровней потребления глюкозы. В сутки эксперимента из всех клеток забирали пищу, воду предоставляли неограниченно и животных держали ночь голодными. Внутрибрюшинно (в/б) или перорально вводили носитель (обычный физиологический раствор)/тестируемые/стандартные соединения, в зависимости от массы тела. У каждого животного вскоре после момента времени 0 мин брали кровь, последующие заборы крови проводили на 30, 60 и 120 или на 240 мин, ретроорбитальным способом под легкой анестезией простым эфиром (СНеп, Ό., е! а1., И1аЬе!е8 ОЬекйу Ме!аЬо1кт, 2005, 7, 307. К1т, 1.6. е! а1., И1аЬе!е8, 2003, 52, 751).

Образцы крови центрифугировали и выделенную сыворотку сразу же подвергали оценке содержания глюкозы. Сыворотку для оценки содержания инсулина хранили при -70°С до использования для оценки содержания инсулина. Оценку содержания глюкозы проводили способом ЭРЕС-бОЭ/РОЭ (КапЬаху Еше Сйеткак Ытйеб, И1адпо81к бламом, Ιη6ίη) с использованием 8рес!гатах-190, в 96-микролуночном спектрофотометре для чтения планшетов (Мо1еси1аг беткек Согрогабоп, 8ипп^а1е, Саййзгша). Средние значения двойных образцов рассчитывали с использованием Мкгокой Ехсе1 и для составления скорректированного на базовый уровень 0 мин линейного графика, площади под кривой (0-120 мин АИС) и скорректированной на базовый уровень площади под кривой (0 мин ВСАИС) использовали программное обеспечение 6гарН Раб Рбкт (версия 4.0). Полученные из графиков АИС и ВСАИС анализировали однофакторным ΑNΟVΑ с последующим повторным тестом Даннетта с применением программного обеспечения 6гарН Раб Рбкт. Кроме того, проводили оценку содержания инсулина с применением набора ЕЫ8А для инсулина крысы/мыши (Ыпсо гекеагсН, Мккоиб И8А). Изменения уровней глюкозы в крови на 0, 30, 60 и 120 мин при применении выбранных пептидомиметиков показаны в табл. 7 (при в/б способе введения) и табл. 8 (при пероральном способе введения) соответственно.

- 38 018000

Таблица 7

Эксперименты длительностью 120 мин с однократной кратковременной дозой у самцов мышей С57ВЬ/61 (снижение глюкозы ΐη νί\Ό); п=8, все значения представляют собой среднее ± 8ЕМ при внутрибрюшинном (в/б) способе введения

- 39 018000

Зеч- Ю. 77 (20 нМ/кг, в/б)	183	±	4, 9	120	+	2,8	129	±	3,0	139	±	2,0
Зеч. 10. нМ/кг,	78 (10 в/б)	182	±	2,1	111	+	2,1	112	±	2,8	113	±	2,2
Зеч- Ю. нМ/кг,	80 (10 в/б)	183	+	2,2	113	+	2,8	113	+	2,9	114	+	2,0
Зеч- 10· 84 (Ю нМ/кг, в/б)	182	+	2,3	110	±	2,3	112	+	3,0	112	±	1,9
Зеч- 10· 9θ (Ю нМ/кг, в/б)	181	+	2,5	111	±	3,4	113	±	3,1	110	±	1,8
Зеч- Ю. 92 (10 нМ/кг, в/б)	180	±	4,2	113	±	3,2	112	+	2,4	110	+	1, 9
Зеч- Ю. нМ/кг,	94 (10 в/б)	182	±	4,1	112	±	3,1	113	±	2,6	111	±	1,8
Зеч- Ю. 96 (50 нМ/кг, в/б)	181	+	5, 1	120	+	3, 8	128	+	2,2	149	+	1,6
Зеч- Ю. ЮО (50 нМ/кг, в/б)	180	+	5,2	119	±	3,2	129	±	2,6	148	±	1,8
Зеч- Ю. ЮЗ (50 нМ/кг, в/б)	182	+	5,3	121	±	3,3	127	+	2,8	149	+	2,0
Зеч- Ю. нМ/кг,	108 (50 в/б)	183	±	5,1	122	±	3,1	130	+	2,3	148	+	2,2
Зеч- Ю.1Ю (5 нМ/кг, в/б)	180	±	5,2	120	±	2,9	138	±	2,4	149	±	2,0
Зеч- Ю. 112 (50 нМ/кг, в/б)	181	+	5,3	119		3,0	128	+	2, 6	147	+	1, 9
Зеч- Ю. 114 (5 нМ/кг, в/б)	179	+	5, 0	120	±	3, 6	129	±	2,0	148	±	1,7
Зеч- Ю. 116 (50 нМ/кг, в/б)	184	±	5, 0	122	±	3,8	128	±	2,1	149	+	2,3
Зеч- Ю. 120 (30 нМ/кг, в/б)	182	+	5,1	118	+	2, 1	116	±	2,2	118	±	2,4
Зеч- Ю. 130 (30 нМ/кг, в/б)	181	±	5,2	119	+	2, 6	117	±	2,1	119	+	2,3
Зеч- Ю. нМ/кг,	132 (30 в/б)	180	+	5,3	118	±	2,8	118	±	2,4	118	+	2,1
Зеч- Ю. 142 (30 нМ/кг, в/б)	183	+	4, 9	117	+	2,5	116	±	2,3	119	±	2,0
Зеч- Ю. 144 (30 нМ/кг, в/б)	182	+	4,8	118	±	2,8	116	+	2,6	118	±	1,2
Зеч- Ю. 154 (30 нМ/кг, в/б)	181	+	4,1	117	+	3,8	117	+	3,0	117	+	1,6

- 40 018000

5βς. Ю. 156 (30 нМ/кг, в/б)	180	+	3,2	119	±	3,2	117	+	3,1	118	+	1,8
Зеч. Ю. 166 (30 нМ/кг, в/б)	183	±	3, 6	118	+	3,3	116	+	3,2	117	+	1,9
Зеч. Ю. 168 (20 нМ/кг, в/б)	182	±	3, 3	120	±	3, 6	127	±	3, 4	145	±	2,1
Зеч- Ю. нМ/кг,	170 (20 в/б)	181	±	3,0	121	+	3,4	128	+	2,8	141	±	2,3
Зеч- 10· нМ/кг,	180 (20 в/б)	180	±	з, 1	122	±	3, 9	129	±	2,2	140	+	2, 9
Зеч- Ю. нМ/кг,	185 (20 в/б)	179	+	2,9	121	±	3, 0	129	+	3,8	142	±	1,6
Зеч. Ю. 186 (20 нМ/кг, в/б)	182	±	2,8	122	±	3,2	128	+	3, 4	141	±	1,7
Зеч. Ю· 187 (10 нМ/кг, в/б)	181	±	3,0	123	+	3,8	128	±	3,2	146	±	1,8
Зеч- Ю. 188 (10 нМ/кг, в/б)	183	± :	4, 9	120	+	2,8	129	±	3,0	139	+	2,0
Зеч. Ю. 190 (10 нМ/кг, в/б)	182	±	2,1	121	+	2, 9	130	±	з, 1	138	±	2,4
Зеч- Ю. 192 (10 нМ/кг, в/б)	180	±	2,5	110	+	2,6	111	+	3,2	112	±	2,3
Зеч. Ю. 193 (10 нМ/кг, в/б)	182	±	2,1	111	+	2, 1	112	+	2,8	113	±	2,2
Зеч. 10· нМ/кг,	194 (10 в/б)	183	±	2,2	113	+	2,8	113	±	2,9	114	±	2,0
Зеч· 10· 195 (10 нМ/кг, в/б)	182	+	2,3	110	+	2,3	112	+	3,0	112	±	1,9
Зеч- Ю. 196 (50 нМ/кг, в/б)	181	±	2,5	111	+	3, 4	113	±	3,1	110	±	1,8
Зеч- Ю. 197 (50 нМ/кг, в/б)	180	±	4,2	113	±	3,2	112	+	2,4	110	±	1,9
Зеч. Ю. 198 (50 нМ/кг, в/б)	182	±	4,1	112	+	3,1	113	+	2, 6	111	+	1,8
Зеч· 10· нМ/кг,	199 (50 в/б)	181	±	5, 1	120	+	3,8	128	±	2,2	149	±	1,6
Зеч- 10· 200 (50 нМ/кг, в/б)	180	±	5,2	119	+	3,2	129	+	2, 6	148	+	1,8
Зеч- Ю. 201 (5 нМ/кг, в/б)	182	±	5, 3	121	±	3, 3	127	+	2,8	149	+	2,0
Зеч. 10. 202 (50 нМ/кг, в/б)	183	±	5, 1	122	±	3,1	130	+	2,3	148	±	2,2

- 41 018000

Зеч- Ю. 204 (10 нМ/кг, в/б)	180	±	5,2	120	+	2, 9	138	±	2,4	149	±	2,0
Зеч- Ю. 205 (50 нМ/кг, в/б)	181	+	5,3	119	±	3,0	128	±	2,6	147	+	1,9
Зеч· 10. 206 (50 нМ/кг, в/б)	179	+	5,0	120	+	3, 6	129	+	2,0	148	+	1,7
Зеч· Ю. 207 (50 нМ/кг, в/б)	184	±	5,0	122	±	3,8	128	+	2,1	149	±	2,3
Зеч· Ю· 208 (30 нМ/кг, в/б)	181	+	5,3	119	+	3,0	128	±	2,6	147	+	1,9
Зеч· 10· 215 (10 нМ/кг, в/б)	179	+	5,0	120	±	3, 6	129	±	2,0	148	+	1,7
Зеч- Ю. 225 (10 нМ/кг, в/б)	184	±	5,0	122	±	3, 8	128	±	2, 1	14 9	±	2,3
Зеч- Ю. 235 (10 нМ/кг, в/б)	182	+	5,1	118	±	2,1	116	+	2,2	118	+	2,4

Таблица 8 Эксперименты длительностью 120 мин с однократной кратковременной дозой у самцов мышей С57ВЬ/61 (снижение глюкозы ίη νΐνο) с выбранными пептидомиметиками; п=8, все значения представляют собой среднее ± 8ЕМ при пероральном способе введения

Группа обработки	0	МИН	30 мин	60 мин	120 мин
Контрольные С57	185	+	2,1	189	+	1, 1	191	+	3,2	179	+	1,4
Зеч- Ю. 11 (2 мкМ/кг, перорально)	184	±	2,2	118	±	3, 3	112	±	4,4	110	+	2, 9
Зеч- Ю. 15 (2 мкМ/кг, перорально)	183	±	2,4	116	±	3,1	112	+	4,8	110	+	2,5
Зеч· Ιθ· 18 (2 мкМ/кг, перорально)	185	±	2,3	115	+	3, 8	113	±	4,9	109	±	2,2
Зеч- Ю. 24 (2 мкМ/кг, перорально)	183	±	2,3	119	+	3,0	112	±	4,3	109	±	2,6

- 42 018000

Зеч- Ю. 28 (2 мкМ/кг, перорально)	183	+	2,1	118	±	3,4	113	±	4,6	111	±	2,8
Зеч- Ю. 29 (2 мкМ/кг, перорально)	184	±	2,5	118	±	3, 6	113 .	±	4,2	110	±	2,4
Зеч- Ю. 30 (2 мкМ/кг, перорально)	183	+	2,4	119	±	3, 1	112	±	4,8	110	+	2,5
Зеч· ΙΏ. 31 (2 мкМ/кг, перорально)	185	+	2,3	116	±	3,8	113	±	4, 9	109	+	2,2
Зеч. 10. 32 (2 мкМ/кг, перорально)	181	+	2,5	117	±	3,3	112	+	4,0	108	±	2,9
Зеч· Ю. 44 (1 мкМ/кг, перорально)	182	±	2,5	116	+	3,1	113	±	4,1	110	±	2,8
Зеч. Ю. 54 (2 мкМ/кг, перорально)	184	±	2,2	118	±	3,3	112	±	4,4	110	±	2,9
Зеч- Ю- 77 (2 мкМ/кг, перорально)	183	±	2,1	118	±	3,4	113	±	4,6	111	±	2,8
Зеч. 10· θΟ (0,5 мкМ/кг, перорально)	184	±	2,5	115	+	3, 6	113	±	4,2	110	±	2,4
Зеч· 10· 84 (2 мкМ/кг, перорально)	183	±	2,4	116	±	3, 1	112	+	4,8	110	+	2,5
Зеч. 10· 116 (2 мкМ/кг, перорально)	185	±	2,1	115	±	2,8	112	±	4, 9	111	±	2,2
Зеч- Ю. 120 (2 мкМ/кг, перорально)	184	±	2,5	115	±	1,6	113	+	3,2	110	+	2,4
Зеч· 10· 130 (2 мкМ/кг, перорально)	183	±	2,4	116		3,1	112	±	4,8	110	+	2,5
Зеч- Ю. 142 (2 мкМ/кг, перорально)	185	±	2,3	115	±	3,8	113	±	4, 9	109	±	2,2

- 43 018000

Зеч. Ю. 154 (2 мкМ/кг, перорально)	181	±	2,5	117	+	3,3	112	+	4,0	108	+	2, 9
Зеч. Ю. 168 (1,5 мкМ/кг, перорально)	183	±	2,0	117	±	1,1	112	+	1,1	110	±	1,8
3βς. 10. 180 (2 мкМ/кг, перорально)	184	+	2,2	118	±	3, 3	112	±	4,4	110	±	2, 9
3ες. Ю. 190 (2 мкМ/кг, перорально)	183	+	2,1	118	+	з, 4	113	+	4, 6	111	±	2,8
3θς. Ю. 202 (2 мкМ/кг, перорально)	184	+	2,5	115	+	3, 6	113	±	4,2	110	±	2,4
3ες. Ю. 207 (2 мкМ/кг, перорально)	183	±	2,4	116	±	3,1	112	±	4,8	110	±	2,5
5βς. Ю. 225 (2 мкМ/кг, перорально)	183	+	2,3	119	+	3,0	112	+	4,3	109	±	2, 6

Некоторые из уровней глюкозы в сыворотке, скорректированные на базовый уровень, представлены в виде иллюстративных фигур: после кратковременной обработки 8ец. ΙΌ. Жо. 38 (Н-А1Ь-РСТ-(а-Ме-2ЕРБе)-Т8В-В1р(ОМе)-(АВМР)) при различных дозах (2/5/8/10/15 нМ/кг), у мышей С57 при в/б способе введения (фиг. 4), при пероральном способе введения при дозе 100/200/500/1000/2000 нМ/кг (фиг. 5) или у бЬ/бЬ при пероральном способе введения при дозе 1000 и 2000 нМ/кг (фиг. 6). Фиг. 7 представляет собой изменение уровней сывороточного инсулина после кратковременного перорального введения носителей/тестируемых соединений [8ец. ΙΌ. Жо. 10 (Н-(а-Ме-Рго)-РСТРТ8Э-В1р(ОМе)-(АВМР)), 20 (Н-А1ЬрСТРТ8Э-В1р(ОМе)-(АМСВ)) и 25 (Н-(АРР)-рСТРТ8Э-В1р(ОМе)-(АРРА))] мышам С57ВБ/61 при дозе 0,5/1/2 мкМ/кг (ΐπ νί\·Ό).

Обзор результатов для пептидомиметиков т νίΙΐΌ и т ν^;ί\·Ό.

Как описано выше, все пептидомиметики, полученные в настоящем изобретении, оценивали т νΐ!ΐΌ и т ν^;ί\·Ό, и данные выбранных пептидомиметиков представлены в приведенных выше разделах в качестве примеров иллюстративных пептидомиметиков. В основанном на клетках ΚΙΝ5Ρ (инсулинома крыс) анализе все пептидомиметики продемонстрировали только глюкозозависимую секрецию инсулина в диапазоне концентраций 1-10 нМ (табл. 3), таким образом, у этого класса пептидомиметиков, вероятно, не будет гипергликемических эпизодов, которые часто наблюдают при использовании других классов стимуляторов секреции инсулина, таких как сульфонилкарбамиды. В анализе рецептора глюкагона человека рассчитывали активность пептидомиметиков в качестве антагонистов т Х1'1го посредством количественного измерения ингибирования продукции цАМФ тестируемыми пептидомиметиками при инкубации с пептидом глюкагона. Как показано в табл. 5, в основном все пептидомиметики продемонстрировали значительную активность антагониста рецептора глюкагона в диапазоне от 1 до 1000 нМ. В анализе НСБР-1К новые пептидомиметики продемонстрировали зависимую от концентрации продукцию цАМФ (активность агониста СЬР-1 т νΐϋΌ) в диапазоне концентраций 1-100 нМ (табл. 4). Эта двойственная природа пептидомиметиков (антагонист рецептора глюкагона и агонист рецептора СЬР-1) делает их идеальными кандидатами для безопасного и эффективного лечения диабета 2 типа и ассоциированных нарушений обмена веществ.

Результаты исследования стабильности выбранных пептидомиметиков в отношении фермента ЭРРIV, плазмы человека, имитированной жидкости желудка и жидкости кишечника и микросом печени указывают, что большинство пептидомиметиков стабильны в отношении фермента ЭРР-ΐν при инкубации до 24 ч. Подобным образом выявлено, что в плазме человека, имитированной жидкости желудка и кишечника большинство пептидомиметиков стабильны при инкубации до 24 ч. Инкубация пептидомиметиков с микросомами печени показала значительную стабильность и за 24 ч наблюдали только 26-35% деградацию, что означает, что некоторые из пептидомиметиков можно доставлять пероральным способом введения.

У мышей С57 или бЬ/бЬ определяли антигипергликемическую/антидиабетическую активность пептидомиметиков 1п νί\·Ό при парентеральном и пероральном способе введения с применением эксперимента с кратковременной однократной дозой длительностью 120/240 мин. Как показано в табл. 7, большинство пептидомиметиков активны при в/б способе введения в диапазоне доз 5-50 нМ, тогда как перорально некоторые из выбранных пептидомиметиков (табл. 8) активны в диапазоне 0,5-2 мкМ/кг дозу.

- 44 018000

Таким образом, новые пептидомиметики демонстрируют активность антагонистов глюкагона и агонистов СЬР-1 и биологически доступны при пероральном приеме, что делает их идеальными кандидатами для безопасного и эффективного лечения диабета 2 типа и ассоциированных нарушений обмена веществ.

Полезность.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения пептидомиметиков, функционирующих одновременно как антагонист рецептора глюкагона и агонист рецептора СЬР-1 с различной степенью аффинности/селективности к обоим рецепторам и пригодных для снижения уровней циркулирующей глюкозы и для лечения диабета.

Синтетические пептидомиметики, описанные в настоящем варианте осуществления, демонстрируют желательную активность антагониста глюкагона и агониста СЬР-1 ίη νί1το в клетках СНО, трансфицированных глюкагоном человека или НСЬР-1К в нМ концентрации, а ίη νΐνο некоторые из пептидомиметиков при тестировании в различных моделях диабета на животных, таких как гипергликемические мыши С57 и мыши ЙЬ/ЙЬ, продемонстрировали глюкозозависимое высвобождение инсулина и снижали гипергликемию при голодании без вызова гипогликемии.

Новые пептидомиметики по настоящему изобретению продемонстрировали стабильность в отношении различных протеолитических ферментов, и, вследствие увеличенной стабильности и короткой длины цепи, такие пептидомиметики, наряду с другими инвазивными и неинвазивными способами введения, также можно доставлять пероральным способом введения.

Новые пептидомиметики по настоящему изобретению можно формулировать в подходящие фармацевтически приемлемые композиции, комбинируя с подходящими эксципиентами, которые хорошо известны.

Фармацевтическую композицию получают общепринятыми способами. Предпочтительно композиция находится в стандартной лекарственной форме, содержащей эффективное количество активного компонента, т.е. пептидомиметиков формулы (I), по данному изобретению, отдельно или в сочетании.

Количество активного компонента, т.е. пептидомиметиков формулы (I) по данному изобретению, в фармацевтической композиции и ее стандартной лекарственной форме можно широко варьировать или корректировать в зависимости от конкретного способа применения и эффективности конкретных пептидомиметиков и желаемой концентрации. Как правило, количество активного компонента находится в диапазоне от 0,5 до 90 мас.% композиции.

Таким образом, пептидомиметики по настоящему изобретению можно вводить млекопитающим, предпочтительно людям, для лечения множества патологических состояний и нарушений, включая в качестве неограничивающих примеров лечение или задержки развития или начала диабета (предпочтительно 2 типа, нарушенной толерантности к глюкозе, резистентности к инсулину и осложнений диабета, таких как нефропатия, ретинопатия, нейропатия и катаракта), гипергликемии, гиперинсулинемии, гиперхолестеринемии, повышенных уровней свободных жирных кислот или глицерина в крови, гиперлипидемии, гипертриглицеридемии, заживления ран, ишемии ткани, атеросклероза, гипертензии, заболеваний кишечника (таких как некротизирующий энтерит, болезни включения микроворсинок или глютеновой болезни). Пептидомиметики по настоящему изобретению также можно применять для увеличения уровней липопротеинов высокой плотности (ЛВП) в крови.

Кроме того, с применением пептидомиметиков по изобретению можно лечить патологические состояния, заболевания, в совокупности обозначаемые как синдром X или метаболический синдром, как подробно описано в 1оЬапп88оп С., 1., С11п. ЕпЙосипо1. Ме1аЬ., 1997, 82, 727. Для лечения некоторых из указанных выше патологических состояний пептидомиметики по настоящему изобретению необязательно можно применять в сочетании с подходящими ингибиторами ЭРРЛУ или посредством последовательного введения соединения, или в составе, содержащем пептидомиметики по настоящему изобретению совместно с подходящими ингибиторами ЭРРДУ.

Для любых указанных пептидомиметиков по изобретению неблагоприятных воздействий не наблюдали. Соединения по настоящему изобретению продемонстрировали хорошую активность снижения уровня сывороточной глюкозы у использованных экспериментальных животных. Эти пептидомиметики используют для тестирования/профилактики заболеваний, вызываемых гиперинсулинемией, гипергликемией, таких как МОЭМ, нарушения обмена веществ, так как такие заболевания взаимосвязаны друг с другом.

Claims (15)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Выделенные пептидомиметики с последовательностью формулы (I)

   Α·“Ζ1'Ζ2”Ζ3”Ζ4“Ζ5Ζ6~Ζ7^_Ζ3”Ζ9~Ζ1Ο“Ζ11”Β (I) в которой А представляет собой группы -ΝΗ-Κ_1? К₃-СО-, К₃-О-СО- или К₃-8О₂-, где К₁ представляет собой водород или необязательно замещенную линейную или разветвленную (С₁-С₁₀)алкильную цепь; К₃ выбран из линейных или разветвленных (С₁-С₁₀)алкильной, (С₃-С₆)циклоалкильной, арильной, гетероарильной или арилалкильной групп;

   В представляет собой -СООК₂, -СОNΗΚ₂ или СН₂ОК₂, где К₂ представляет собой Н, необязательно замещенные группы, выбранные из линейных или разветвленных (С₁-С₁₀)алкильной, арильной или аралкильной групп;

   Ζι-Ζιι представляют собой природные или неприродные аминокислоты, связанные вместе амидной связью;

   Ζ₁ представляет собой Ь-гистидин (Н), Ό-гистидин (άΗ) или урокановую кислоту (ИА):

   Ζ2 представляет собой природные или неприродные аминокислоты, выбранные из группы, содержащей Ь-серин (8), Ό-серин (ά8), Ь-аланин (А), Ό-аланин (άΑ), α-метилпролин (α-Ме-Рго), αаминоизомасляную кислоту (А1Ь), 1-аминоциклопропанкарбоновую кислоту (АСР) и 1аминоциклопентанкарбоновую кислоту (АРР):

   Ζ₃ представляет собой Ь-глутамин (С1п; ^), Ό-глутамин или Нй):
2. 2-Амино-4-цианомасляная кислота (СЫВ) (^) или соединения формулы (II) (ί'ΝΒ (II)

   Ζ₄ представляет собой глицин (С) или неприродные аминокислоты: 1аминоциклопропанкарбоновую кислоту (АСР) или 1 -аминоциклопентанкарбоновую кислоту (АРР);

   Ζ₅ представляет собой природную или неприродную аминокислоту, содержащую гидроксильную боковую цепь; предпочтительно Ζ₅ представляет собой Ь-треонин (Т), Ό-треонин (άΤ), Ь-аллотреонин (алло-Тйг; алло-Т), Ό-аллотреонин (ά-алло-Тйг; ά-алло-Т);

   Ζ6 представляет собой природную или неприродную аминокислоту с двузамещенным альфа-атомом углерода с двумя боковыми цепями, где каждая из них может независимо быть необязательно замещена алкильной, или арильной, или аралкильной группой, где заместители могут быть выбраны из одной или нескольких алкильных групп или из одной или нескольких галогеновых групп;

   Ζ₇ и Ζ₈ независимо представляют собой природную или неприродную аминокислоту, содержащую гидроксильную боковую цепь;

   Ζ₉ независимо представляет собой природную или неприродную аминокислоту с боковой аминокислотной цепью, содержащей кислую группу;

   Ζ₁₀ представляет собой Ь- или Ό-неприродную аминокислоту формул 111а-111с:

   - 46 018000

   2. Соединение формулы (I) по п.1, где Ζ₆ представляет собой группы РЬе (Р), альфаметилфенилаланин (-α-Ме-РЬе-), альфа-метил-2-фторфенилаланин (-а-Ме-2Р-РЬе-) или альфа-метил-2,6дифторфенилаланин (-а-Ме-2,6-Р-РЬе-) или 2-фторфенилаланин (-2Р-РЬе-).
3. 3. Соединение формулы (I) по п.1, где каждый из Ζ₇ и Ζ₈ выбран из треонина, серина, 1аминоциклопропанкарбоновой кислоты.
4. 4. Соединение формулы (I) по п.1, где Ζ₉ выбран из Ь-аспарагиновой кислоты (Ώ), Ώ-аспарагиновой кислоты (60) или соединений формулы (II).
5. 5. Соединение формулы (I) по п.1, где арильная группа выбрана из фенильной, нафтильной, инданильной, флуоренильной или бифенильной групп; гетероарильная группа выбрана из пиридильной, тиенильной, фурильной, имидазолильной, бензофуранильной групп.
6. 6. Соединение формулы (I) по п.1, где амидная связь между Ζ₉ и Ζ₁₀, или Ζ₁₀ и Ζ₁₁, или Ζ₉-Ζ₁₁ является дополнительно Ν-метилированной, представленной (ЫМе).
7. 7. Соединение формулы (I) по п.1, где амидная связь между Ζ₉ и Ζ₁₀, или Ζ₁₀ и Ζ₁₁, или Ζ₉-Ζ₁₁ дополнительно является тиоамидной связью.
8. 8. Соединение формулы (I) по п.7, где дополнительно тиоамидная связь между Ζ₉ и Ζ₁₀, или Ζ₁₀ и Ζ₁₁, или Ζ₉-Ζ₁₁ восстановлена до связи -СН₂-.
9. 9. Соединение формулы (I) в которой А представляет собой группы -ЫН-К₁, К₃-СО-, К₃-О-СО- или К₃-8О₂-, где К₁ представляет собой водород или необязательно замещенную линейную или разветвленную (С₁-С₁₀)алкильную цепь; К₃ выбран из линейных или разветвленных (С₁-С₁₀)алкильной, (С₃-С₆)циклоалкильной, арильной, гетероа

   - 47 018000 рильной или арилалкильной групп;

   В представляет собой -СООК₂, -СОИНК₂ или СН₂ОК₂, где К₂ представляет собой Н, необязательно замещенные группы, выбранные из линейных или разветвленных (С₁-С₁₀)алкильной, арильной или аралкильной групп;

   Ζ₁ представляет собой Ь-гистидин (Н), Ό-гистидин (6Н) или урокановую кислоту (ИА);

   Ζ₂ выбран из Ь-серина, Ό-серина, Ь-аланина, Ό-аланина, α-аминоизомасляной кислоты, 1аминоциклопропанкарбоновой кислоты (АСР) и 1-аминоциклопентанкарбоновой кислоты (АРР):

   Ζ₃ представляет собой Ь-глутамин (О1п; ^), Ό-глутамин (^) или соединения формулы (II) (СИВ или Нй):

   кислота (ΟΝΒ) (II)

   Ζ₄ представляет собой глицин (О) или неприродные аминокислоты: 1аминоциклопропанкарбоновую кислоту (АСР) или 1-аминоциклопентанкарбоновую кислоту (АРР);

   Ζ₅ представляет собой Ь-треонин (Т), Ό-треонин (бТ), Ь-аллотреонин (алло-ТЬг; алло-Т), Όаллотреонин (ά-алло-ТЬг; б-алло-Т);

   Ζ₆ представляет собой фенилаланин (РЬе; Ρ), альфа-метилфенилаланин (-α-Μе-Рйе-), альфа-метил2-фторфенилаланин (-α-Μе-2Ρ-Рйе-), альфа-метил-2,6-дифторфенилаланин (-α-Μе-2,6-Ρ-Рйе-) или 2фторфенилаланин (^-РЬе-):

   α-Ме-РЬе _а-Ме-2Р-РЬе а-Ме-2,6-Р-РЬе 2Р-РЬе

   Ζ₇ и Ζ₈ независимо выбраны из треонина, серина, 1-аминоциклопропанкарбоновой кислоты (АСР);

   Ζ₉ выбран из Ь-аспарагиновой кислоты (Ό), Ό-аспарагиновой кислоты (άΌ) или соединений формулы (II);

   Ζ₁₀ представляет собой Ь- или Ό-неприродную аминокислоту формул Ша-Шс:

   Ζ₁₁ представляет собой Ь- или Ό-неприродную аминокислоту формул ГУа-ГУ1:

   - 48 018000
10. 10. Соединение формулы (I), выбранное из:

    Η3ΩΟΤΡΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АРРА);

    Η3<2ΟΤΡΤ3Ό-Βίρ (ОМе) - (ΑΌΜΡ) ;

    Η3ΩΟΤΡΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АСРР);

    Η3ΩΟΤΡΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АМСВ);

    Н- (θί-Ме-Рго) -ΩΟΤΡΤ3Ό-Βίρ (ОМе) - (АРРА)

    Н-(α-Ме-Рго)-ΩΟΤΡΤ3Ό-Βίρ(ΟΜθ)-(ΑΌΜΡ)

    Η-(α-Ме-Рго)-ΩΘΤΡΤ3Ό-Βίρ(ОМе)-(АСРР)

    Η-(α-Ме-Рго)-ΩΟΤΡΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АМСВ)

    ΗΑΩΘΤΡΤ3Ό-Βίρ(ОМе)-(АРРА);

    ΗΑΩΟΤΡΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АБМР);

    ΗΑΩΟΤΡΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АСРР);

    ΗΑΩΟΤΡΤ3Ό-Βίρ(ОМе)-(АМСВ);

    Η-Αΐ17-ζ)ΟΤΡΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АРРА);

    - 49 018000

    Н-А1Ь-<2СТРТ5О-В1р(ОМе) - (ΑΌΜΡ) ;

    Н-А1Ь-<2СТРТЗО-В1р (ОМе) - (АСРР) ; Н-АхЬ-ОСТЕТЗО-ВхрСОМе)-(АМСВ);

    Η-(АСР)-0ΟΤΡΤ5ϋ-Βίρ(ОМе)-(АРРА);

    Н-(АСР)-0ΟΤΡΤ5Ό-Βίρ(ОМе)-(ΑΌΜΡ);

    Н- (АСР) -ζ2<3ΤΡΤ5Ό-Βίρ (ОМе) - (АСРР) ;

    Н-(АСР)-0ΘΤΡΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АМСВ);

    Н- (АРР) -<2ΟΤΡΤ3ϋ-Βϊρ(ΟΜθ) - (АРРА) ;

    Н- (АРР) -<2ΟΤΡΤ5Ό-Βίρ (ОМе) - (АОМР) ;

    Н-(АРР)-0ΟΤΡΤ3Ό-Βίρ(ОМе)-(АСРР);

    Н- (АРР) -ζ)ΟΤΡΤ5ϋ~Βίρ (ОМе) - (АМСВ) ;

    Н-А1Ь-(СЫВ)-СТРТЗО-Βίρ(ОМе)-(АРРА);

    Н-А1Ь-(СЫВ)-СТРТЗО-Βίρ(ОМе)-(ΑϋΜΡ);

    Н-А1Ь-(СЫВ)-СТРТЗО-Βίρ(ОМе)-(АСРР);

    Н-А1Ь-(СЫВ)-СТРТЗО-Βίρ(ОМе)-(АМСВ);

    Н-А1Ь-<ЭСТ- (α-Ме-РЬе) -ΤΒϋ-Βίρ (ОМе) - (АРРА) ;

    Н-А1Ь-<2СТ- (α-Ме-РЬе) -Τ3ϋ-Βίρ(ОМе) - (ΑϋΜΡ) ;

    Н-А1Ъ-<2СТ- (α-Ме-РИе) -Τβϋ-Βίρ(ОМе) - (АСРР) ;

    Н-А1Ь-<ЭСТ- (α-Ме-РЬе) -ТЗО-Βίρ(ОМе) - (АМСВ) ;

    Н-А1Ъ-ОСТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗО-Βίρ(ОМе)-(АРРА)

    Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗО-Βίρ(ОМе)-(АОМР)

    Н-АхЬ-ОСТ-(а-Ме-2Р-Р11е)-ТЗО-Βίρ(ОМе)-(АСРР)

    Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Р-РИе)-Τ3ϋ-Βϊρ(ОМе)-(АМСВ)

    Н-А1Ь-ОСТ-(2Р-РЬе)-ТЗО-Βίρ(ОМе)-(АРРА);

    Н-А1Ь-<2СТ- (2Р-РЬе) -Τ3ϋ-Βίρ(ОМе) - (АОМР) ;

    Н-А1Ь-<2СТ- (2Р-РЬе) -Τ3ϋ-Βίρ(ОМе) - (АСРР) ;

    Н-А1Ь-ООТ-(2Р-РЬе)-ТЗО-Βίρ(ОМе)-(АМСВ);

    НЗОСТРТЗО-Βίρ(ОМе)-(2Р-АРРА);

    Η3ζ)ΟΤΡΤ3Ο-Βίρ (ОМе) - (2,4-άίΡ-ΑΡΡΑ) ;

    Η3ΩΟΤΡΤ3Ο-Βίρ(ΟΜθ) - (2СР₃-АРРА) ;

    НЗОСТРТЗО-Βίρ(ОМе)-(2СР₃, 4Р-АРРА);

    НЗОСТРТЗО-Βίρ (ОМе) - (2Р, 4СР₃-АРРА) ;

    Η30ΟΤΡΤ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2С1-АРРА);

    НЗОСТРТЗО-Βίρ(ОМе)-(2,4-άίΟΙ-ΑΡΡΑ);

    НЗОСТРТЗО-Βίρ(ОМе)-(2С1, 4ОМе-АРРА);

    НАОСТРТЗО-Βίρ(ОМе)-(2Р-АРРА);

    - 50 018000

    ΗΆζ)ΘΤΡΤ8ϋ-Βίρ (ОМе) - (2,4-άίΡ-ΑΡΡΑ) ;

    ΗΑ<2ΘΤΡΤ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (2СР₃-АРРА) ;

    ΗΑζ)ΘΤΡΤ5ϋ-Βίρ (ОМе) - (2СР₃,4Ρ-ΑΡΡΑ) ;

    ΗΑζ)ΘΤΡΤ8ϋ-Βίρ (ОМе) - (2Р,4СР₃-АРРА) ;

    ΗΑΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ(ОМе)-(2С1-АРРА);

    ΗΑζ)ΘΤΡΤ8ϋ-Βίρ (ОМе) - (2,4-άίΟΙ-ΑΡΡΑ) ;

    ΗΑΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ(ОМе)-(2С1,4ОМе-АРРА);

    Η-Αίί>-ζ)ΘΤΡΤ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (2Ρ-ΑΡΡΑ) ;

    Η-ΑίΙο-ΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ (ОМе) - (2,4-άίΡ-ΑΡΡΑ) ;

    Η-ΑίΙο-ΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ (ОМе) - (2СР₃-АРРА) ;

    Η-Αίϋ-0ΘΤΡΤ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (2СР₃,4Ρ-ΑΡΡΑ) ;

    Η-Αί^0ΟΤΡΤ5Ό-Βίρ (ОМе) - (2Ρ, 4СР₃-АРРА) ;

    Η-Αϋο-ΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ (ОМе) - (2С1-АРРА) ;

    Η-Αίί>-ζ)ΘΤΡΤ8ϋ-Βίρ (ОМе)-(2,4-άίΟΙ-ΑΡΡΑ);

    Η-ΑίΙο-ΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ (ОМе)-(2С1,4ОМе-АРРА);

    Н-(АСР)-ΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ(ОМе)-(2Р-АРРА);

    Н- (АСР) -ΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ(ОМе) - (2,4-άίΡ-ΑΡΡΑ) ;

    Н- (АСР) -ΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ (ОМе) - (2СР₃-АРРА) ;

    Н- (АСР) -ΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ (ОМе) - (2СР₃,4Р-АРРА) ;

    Н- (АСР) -ΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ (ОМе) - (2Р, 4СР₃-АРРА) ;

    Н- (АСР) -ΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ (ОМе) - (2С1-АРРА) ;

    Н- (АСР) -ΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ (ОМе) - (2,4-άίΟΙ-ΑΡΡΑ) ;

    Н- (АСР) -ΟΘΤΡΤδϋ-Βίρ(ОМе) - (2С1, 4ОМе-АРРА) ;

    Н-А1Ь- (СЫВ) -ΘΤΡΤ3ϋ-Βίρ(ОМе) - (2Р-АРРА) ;

    Н-А1Ь- (СЫВ) -ΘΤΡΤδϋ-Βίρ (ОМе) - (2,4-άίΡ-ΑΡΡΑ) ;

    Н-А±Ь- (СЫВ) -ΘΤΡΤδϋ-Βίρ (ОМе) - (2СР₃-АРРА) ;

    Н-А1Ь- (СЫВ) -ΘΤΡΤδϋ-Βίρ(ОМе) - (2СР₃,4Р-АРРА) ;

    Н-А1Ь- (СЫВ) -ΘΤΡΤδϋ-Βίρ(ОМе) - (2Р, 4СР₃-АРРА) ;

    Н-А1Ь-(СЫВ)-ΘΤΡΤδϋ-Βίρ(ОМе)-(2С1-АРРА);

    Н-А1Ь-(СЫВ)-ΘΤΡΤδϋ-Βίρ(ОМе)-(2,4-άίΟΙ-ΑΡΡΑ);

    Н-А1Ь-(СЫВ)-ΘΤΡΤδϋ-Βίρ(ОМе)-(2С1,4ОМе-АРРА);

    Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-Τ8ϋ-Βίρ(ОМе)-(2Р-АРРА);

    Н-АтЬ-ОСТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-Τδϋ-Βίρ(ОМе)-(2,4-άίΡ-ΑΡΡΑ);

    Н-АтЬ-ОСТ-(а-Ме-2Р-РИе)-Τδϋ-Βίρ(ОМе)-(2СР₃-АРРА) ;

    Н-А1Ь-(2СТ- (а-Ме-2Р-РЬе) -Τδϋ-Βίρ (ОМе) - (2СР₃,4Р-АРРА) ;

    Н-А1Ь-ОСТ- (сх-Ме-2Р-РИе) -Τδϋ-Βίρ (ОМе) - (2Р, 4СР₃-АРРА) ;

    - 51 018000

    Н-АДЬ-ΟΘΤ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗО-ВДр(ОМе)-(2С1-АРРА);

    Н-АДЬ-ООТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗО-ВДр(ОМе)-(2,4-άίΟΙ-ΑΡΡΑ);

    Н-АДЬ-ООТ- (а-Ме-2Р-Р1ае) -ТЗО-ВДр(ОМе) - (2С1,40Ме-АРРА) ;

    СНзСО-Н-АДЬ-ООТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗО-ВДр(ОМе)-(АРРА);

    СНзОСО-Н-АДЬ-ООТ-(а-Ме-2Р-РИе)-ТЗО-ВДр(ОМе)-(АРРА);

    СНзСО-Н-АДЬ-ООТ-(а-Ме-2Р-РИе)-ТЗО-ВДр(ОМе)-(2Р-АРРА);

    СНзОСО-Н-АДЬ-ООТ-(а-Ме-2Р-РИе)-ТЗБ-ВДр(ОМе)-(2Р-АРРА);

    СНзСО-Н-АДЬ-ОО-Т (алло) - (а-Ме-2Р-Р11е) -ТЗО-ВДр (ОМе) - (АРРА) ;

    СНзОСО-Н-АДЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-ΤΒϋ-ВДр(ОМе)-(АРРА)

    СНзСО-Н-АДЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-ТЗО-ВДр(ОМе)-(2РАРРА);

    СНзОСО-Н-АДЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗБ-ВДр(ОМе)-(2РАРРА);

    СНзСО-Н-АДЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-ЗО-ВДр(ОМе)(АРРА);

    СНзОСО-Н-АДЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-ЗИ-ВДр(ОМе) (АРРА) ;

    СНзСО-Н-АДЬ-ОО-Т (алло) - (а-Ме-2Р-РИе) -Т(алло) -ЗО-ВДр(ОМе) (2Р-АРРА);

    СНзОСО-Н-АДЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-ЗО-ВДр(ОМе) (2Р-АРРА);

    СНзСО-Н-АДЬ-ООТ-(а-Ме-2Р-РИе)-т(алло)-ЗО-ВДр(ОМе)-(АРРА);

    СНзОСО-Н-АДЬ-ООТ-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-ЗО-ВДр(ОМе)-(АРРА)

    СНзСО-Н-АДЬ-ООТ-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-ЗО-ВДр(ОМе)-(2РАРРА);

    СНзОСО-Н-АДЬ-ООТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-ЗО-ВДр(ОМе)-(2РАРРА);

    Н-АДЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-ТЗО-ВДр(ОМе)-(АРРА);

    Н-АДЬ-(СЫВ)-О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-ТЗБ-ВДр(ОМе)-(АРРА);

    Н-АДЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗО-ВДр(ОМе)-(2Р-АРРА);

    Н-АДЬ-(ΟΝΒ)-О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗО-ВДр(ОМе)-(2РАРРА);

    Н-АДЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-ЗО-ВДр(ОМе)-(АРРА)

    Н-АДЬ-(ΟΝΒ)-О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-Рке)-Т(алло)-ЗО-ВДр(ОМе)(АРРА) ;

    Н-АДЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-ЗО-ВДр(ОМе)-(2Р- 52 018000

    АРРА) ;

    Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-Рйе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ОМе)(2Р-АРРА);

    Н-А1Ь-ООТ-(а-Ме-2Р-РНе)-Т(алло)-3Ό-Βίρ(ΟΜβ)-(АРРА);

    Н-А1Ь-(СИВ)-ОТ-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-3Ό-Βίρ(ΟΜθ)-(АРРА);

    Н-А1Ь-<ЭОТ- (а-Ме-2Р-РЪе) -Т(алло) -3Ώ-Βίρ(ΟΜβ) - (2Р-АРРА) ;

    Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-ОТ-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-3Ό-Βίρ(ОМе)-(2РАРРА);

    СН₃СО-Н-А1Ь-<ЭОТ- (а-Ме-2Р-Рйе) -Τ3ϋ-Βίρ(ОМе) - ( (ΝΜβ) (АРРА) ) ;

    СНзОСО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-((ΝΜβ)(АРРА))

    СНзСО-Н-АтЬ-ООТ-(а-Ме-2Р-РИе)-ТЗБ-Βίρ(ОМе)-((ΝΜβ)(2РАРРА));

    СНзОСО-Н-АгЬ-ООТ-(а-Ме-2Р-РИе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-((ΝΜβ)(2РАРРА));

    СНзСО-Н-А1Ь-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Р-Рйе)-Т(алло)-ЗБ-Βίρ(ОМе)((ΝΜβ)(АРРА));

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-0С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-ЗБ-Βίρ(ОМе) ((ΝΜβ)(АРРА));

    СНзСО-Н-А1Ь-<2О-Т (алло) - (а-Ме-2Р-Р11е) -Т(алло) -ЗБ-Βίρ(ОМе) ((ΝΜβ)(2Ρ-ΆΡΡΑ));

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЪе)-Т(алло)-ЗБ-Βίρ(ОМе) ((ΝΜβ)(2Ρ-ΑΡΡΆ));

    Н-АЪЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-Рйе)-Т(алло)-ЗБ-Βίρ(ОМе)((ΝΜβ)(АРРА));

    Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-ЗБ-Βίρ(ОМе)((ΝΜβ)(АРРА));

    Н-А1Ь-<2О-Т (алло) - (α-Μβ-2Ρ-Ρ1ιβ) -Т (алло) -ЗБ-Βίρ (ОМе) ((ΝΜβ)(2Р-АРРА));

    Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЪе)-Т(алло)-ЗБ-Βίρ(ОМе)((ΝΜβ)(2Ρ-ΑΡΡΆ));

    СН₃СО-Н-А1Ь-0ОТ-(а-Ме-2Р-Рйе)-ТЗБ-((ΝΜβ)Βίρ(ОМе))((ΝΜβ)(АРРА));

    СНзОСО-Н-АтЬ-ООТ-(а-Ме-2Р-Рке)-ТЗБ-((ΝΜβ)Βίρ(ОМе))((ΝΜβ)(АРРА));

    СНзСО-Н-АПэ-ООТ- (а-Ме-2Р-Р11е) -ТЗБ- ( (ΝΜβ) Βίρ (ОМе) ) ((ΝΜβ)(2Ρ-ΆΡΡΑ));

    - 53 018000

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-(2СзТ- (α-Μβ-2Ρ-Ρ1ιβ) -Τ5Ό- ( (ΝΜβ) Βίρ (ОМе) ) ((ΝΜβ)(2Р-АРРА));

    СН₃СО-Н-А1Ь-<ЭС-Т (алло) - (а-Ме-2Р-РЬе) -Т(алло) -3ϋ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜβ) (АРРА)) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3Ό((ΝΜβ)Βίρ(ОМе))-((ΝΜβ)(АРРА));

    СН₃СО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-3ϋ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜβ) (2Р-АРРА)) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-<2О-Т (алло) - (а-Ме-2Р-РЬе) -Т(алло) -3ϋ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜβ) (2Р-АРРА)) ;

    Н-А1Ь-ОС-Т (алло) - (α-Μβ-2Ρ-Ρ1ιβ) -Т(алло) -3ϋ- ( (ΝΜβ) Βίρ (ОМе) ) ((ΝΜβ)(АРРА));

    Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3ϋ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе))-((ΝΜβ)(АРРА));

    Н-А1Ь-<2<3-Т (алло) - (а-Ме-2Р-РЬе) -Т(алло) -3Ό- ( (ΝΜβ) Βίρ (ОМе) ) ((ΝΜβ)(2Р-АРРА));

    Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3Ό((ΝΜβ)Βίρ(ОМе))-((ΝΜβ)(2Р-АРРА));

    СН₃СО-Н-А1Ь-0СТ- (θί-Μβ-2Ρ-Ρ1ιβ) -ТЗ- (ΝΜβ)Ό- ( (ΝΜβ) Βίρ (ОМе) ) ((ΝΜβ)(АРРА));

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-0<ЗТ- (а-Ме-2Р-РЬе) -ТЗ- (ΝΜβ)Ό- ( (ΝΜβ) Βίρ (ОМе) ) ((ΝΜβ)(АРРА));

    СН₃СО-Н-А1Ь-0ОТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗ-(ΝΜβ)ϋ-((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) ((ΝΜβ)(2Р-АРРА));

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-0ОТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗ-(ΝΜβ)ϋ-((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) ((ΝΜβ)(2Р-АРРА));

    СН₃СО-Н-А1Ь-СХд-Т (алло) - (α-Μβ-2Ρ-Ρ1ιβ) -Т(алло) -3- (ΝΜβ)ϋ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜβ) (АРРА)) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-0О-Т (алло) - (α-Μβ-2Ρ-Ρ11β) -Т(алло) -3- (ΝΜβ)Ώ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜβ) (АРРА)) ;

    СН₃СО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3-(ΝΜβ)Ώ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) -( (ΝΜβ) (2Р-АРРА)) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3-(ΝΜβ)ϋ((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜβ) (2Р-АРРА)) ;

    Н-А1Ь-<2О-Т (алло) - (а-Ме-2Р-РЬе) -Т (алло) -3- (ΝΜβ) Ό((ΝΜβ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜβ) (АРРА)) ;

    - 54 018000

    Н-АхЬ-(СЫВ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-Р1хе)-Т(алло)-3-(ЫМе)Б((ЫМе)Вхр(ОМе))-((ЫМе)(АРРА));

    Н-АхЬ-ОС-Т(алло) - (а-Ме-2Р-РЬе) -Т(алло) -3- (ЫМе)Б((ЫМе)Βίρ(ОМе))-((ЫМе)(2Р-АРРА));

    Н-АхЬ-(СЫВ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3-(ЫМе)Б((ЫМе)Βίρ(ОМе))-((ЫМе)(2Р-АРРА));

    СН₃СО-Н-А1Ь-ООТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗБ-Βίρ(ОМе)-(С=3)-(АРРА);

    СН₃ОСО-Н-АхЬ-ОСТ- (а-Ме-2Р-РИе) -ТЗБ-Βίρ (ОМе) - (С=3) - (АРРА) ;

    СН₃СО-Н-А1Ь-ОСТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗБ-Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2РАРРА);

    СН₃ОСО-Н-АхЬ-ОСТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗБ-Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2РАРРА);

    СН₃СО-Н-А1Ь-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-ЗБ-Вхр(ОМе)(С=3) - (АРРА) ;

    СН₃ОСО-Н-АхЬ-ОС-Т (алло) - (а-Ме-2Р-Р11е) -Т (алло) -ЗБ-Βίρ (ОМе) (С=3)-(АРРА) ;

    СН₃СО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-ЗБ-Βίρ(ОМе)(С=3)-(2Р-АРРА);

    СНзОСО-Н-АхЬ-ОС-Т (алло) - (а-Ме-2Р-Р1хе) -Т (алло) -ЗБ-Βίρ (ОМе) (С=3)-(2Р-АРРА);

    Н-АхЬ-ОС-Т (алло) - (а-Ме-2Р-Р1ае) -Т (алло) -ЗБ-Βίρ (ОМе) - (С=3) (АРРА) ;

    Н-АхЬ- (СЫВ) -С-Т (алло) - (а-Ме-2Р-Р11е) -Т(алло) -ЗБ-Вхр(ОМе) (С=3)-(АРРА);

    Н-АхЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-ЗБ-Βίρ(ОМе)-(С=3)(2Р-АРРА);

    Н-АхЬ-(СЫВ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-ЗБ-Вхр(ОМе)(С=3)-(2Р-АРРА);

    СНзСО-Н-АхЬ-ОСТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗБ-(С=3)-Вхр(ОМе)-(С=3)(АРРА);

    СНзОСО-Н-АхЬ-ОСТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗБ-(С=3)-Вхр(ОМе)-(С=3)(АРРА);

    СНзСО-Н-АхЬ-ОСТ- (а-Ме-2Р-Р11е) -ТЗБ- (С=3) -Вхр(ОМе) - (С=3) (2Р-АРРА);

    СНзОСО-Н-АхЬ-ςαΤ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗБ-(С=3)-Вхр(ОМе)-(С=3)(2Р-АРРА);

    - 55 018000

    СНзСО-Н-АтЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-5Ό-(С=3)Βίρ(ОМе)-(С=3)-(АРРА);

    СНзОСО-Н-А1Ь-<Э<3-Т (алло) - (а-Ме-2Р-РЬе) -Т (алло) -3ϋ- (С=3) Βίρ(ОМе)-(С=3)-(АРРА);

    СИзСО-Н-АтЬ-ОО-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-3Ό-(С=3)Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Е-АРРА);

    СНзОСО-Н-АхЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3Ό-(С=3)Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Р-АРРА);

    Н-АхЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-8Ό-(С=3)-Βίρ(ОМе)(С=3)-(АРРА);

    Н-А1Ь-(СЫВ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3Ό-(С=3)Βίρ (ОМе) - (С=3) - (АРРА) ;

    Н-АхЬ-ОС-Т(алло)-(а-Ме-2Е-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-(С=3)-Βίρ(ОМе)(С=3)-(2Γ-ΑΡΡΆ);

    Н-А1Ь-(СЫВ)-О-Т(алло)-(а-Ме-2Г-РЬе)-Т(алло)-3Ό-(С=3)Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Г-АРРА);

    СН₃СО-Н-А1Ъ-ООТ- (а-Ме-2Р-РНе) -Τβϋ-Βίρ (ОМе) - (СН₂) - (АРРА) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-0ОТ- (а-Ме-2Е-РЬе) -Τ3ϋ-Βίρ (ОМе) - (СН₂) - (АРРА) ;

    СН₃СО-Н-А1Ь-ООТ- (а-Ме-2Г-РЬе) -ΤΒϋ-Βίρ (ОМе) - (СН₂) - (2Г-АРРА) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-ООТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ΤΒϋ-Βίρ(ОМе)-(СН₂) - (2РАРРА);

    СН₃СО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ΟΜβ)(СН₂) - (АРРА) ; '

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-βΌ-Βίρ(ΟΜε)(СН₂) - (АРРА) ;

    СН₃СО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ΟΜθ)(СН₂) - (2Р-АРРА) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-<2О-Т (алло) - (а-Ме-2Р-РЬе) -Т(алло) -5О-В1р(ОМе) (СН₂) - (2Р-АРРА) ;

    Η-ΑίΕ-ΟΟ-Τ (алло) - (сс-Ме-2Р-РИе) -Т (алло) -3Ώ-Βίρ (ОМе) - (СН₂) (АРРА) ;

    Η-ΑίΕ-(СЫВ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ΟΜβ)(СН₂) - (АРРА) ;

    Η-ΑίΕ-00-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-5Ό-Βίρ(ΟΜβ)-(СН₂) (2Р-АРРА);

    Н-А1Ь-(СЫВ)-О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ΟΜβ)- 56 018000 (СН₂) - (2Р-АРРА) ;

    . СНзСО-Н-АтЬ-ООТ- (а-Ме-2Р-РЬе) -Т8Б- (СН₂) -Βίρ (ОМе) ) - (СН₂) (АРРА) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-0СТ- (а-Ме-2Р-РЬе) -ТЗБ- (СН₂) -Βίρ (ОМе) - (СН₂) (АРРА) ;

    СН₃СО-Н-А1Ь-0ОТ- (а-Ме-2Р-Рйе) -ТЗБ- (СН₂) -Βίρ (ОМе) - (СН₂) - (2Р АРРА) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-ООТ- (а-Ме-2Р-РЬе) -Т8Б- (СН₂) -Βίρ (ОМе) - (СН₂) (2Р-АРРА);

    СН₃СО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-ЗБ-(СН₂) Βίρ(ОМе)- (СН₂) - (АРРА) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-ЗБ-(СН₂) Βίρ(ОМе)- (СН₂)-(АРРА);

    СН₃СО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-ЗБ-(СН₂) Βίρ (ОМе) - (СН₂) - (2Р-АРРА) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-0О-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-ЗБ-(СН₂) Βίρ (ОМе) - (СН₂) - (2Р-АРРА) ;

    Н-АхЬ-ОС-Т (алло) - (а-Ме-2Р-Р11е) -Т(алло) -ЗБ- (СН₂) -Βίρ (ОМе) (СН₂) - (АРРА) ;

    Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-Рйе)-Т(алло)-ЗБ-(СН₂) Βίρ(ОМе)-(СН₂) -(АРРА) ;

    Н-А1Ь-(2О-Т (алло) - (а-Ме-2Р-Рйе) -Т(алло) -ЗБ- (СН₂) -Βίρ (ОМе) (СН₂) - (2Р-АРРА) ;

    Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-ЗБ-(СН₂) Βίρ(ОМе)-(СН₂) -(2Р-АРРА) ;

    СН₃СО-Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-СТ-(а-Ме-2Р-РИе)-ТЗБ-Βίρ(ОМе)-(АРРА);

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-СТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗБ-Βίρ(ОМе)-(АРРА);

    СН₃СО-Н-А1Ь-(ΟΝΒ)-СТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗБ-Βίρ(ОМе)-(2Р-АРРА);

    СН₃ОСО-Н-А1Ь-(СИВ)-СТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-ТЗБ-Βίρ(ОМе)-(2РАРРА);

    Н-А1Ь- (Н£1) -С-Т(алло) - (а-Ме-2Р-Р11е) -Т(алло) -ЗБ- (СН₂) Βίρ(ОМе)-(СН₂) -(АРРА) ;

    СН₃СО-Н-А1Ь- (Н£1) -СТ- (а-Ме-2Р-РИе) -ТЗБ-Βίρ (ОМе) - (АРРА) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь- (Н£1) -СТ- (а-Ме-2Р-РЬе) -ТЗБ-Βίρ (ОМе) - (АРРА) ;

    СН₃СО-Н-А1Ь- (Н£1) -СТ- (а-Ме-2Р-Рке) -ТЗБ-Βίρ (ОМе) - (2Р-АРРА) ;

    СН₃ОСО-Н-А1Ь- (Н£1) -СТ- (а-Ме-2Р-Р11е) -ТЗБ-Βίρ (ОМе) - (2Р- 57 018000

    АРРА) ;

    Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(0Μβ)(СН₂) - (2Р-АРРА) ;

    Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ΟΜθ)(СН₂) - (АРРА) ;

    Н-А1Ь- (Н£1) -С-Т (алло) - (а-Ме-2Р-Р11е) -Т(алло) -3Ό- (С=3) Βίρ(ОМе)-(С=3)-(2Р-АРРА);

    Н-А±Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3Ό-(С=3)Βίρ(ОМе)-(С=3)-(АРРА);

    Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ΟΜθ)(С=3)-(2Р-АРРА);

    Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-3ϋ-Βίρ(ΟΜβ)(С=3)-(АРРА);

    Н-А1Ь-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РИе)-Т(алло)-3-(ΝΜθ)ϋ((ΝΜθ)Βίρ(ОМе))-((ЫМе)(АРРА));

    Н-А1Ь- (Н£1) -С-Т (алло) - (а-Ме-2Р-Р11е) -Т(алло) -3- (ΝΜβ)ϋ((ΝΜθ)Βίρ(ОМе)) -((ΝΜβ) (2Р-АРРА)) ;

    Н-А1Ь- (Н£1) -С-Т (алло) - (а-Ме-2Р-РИ.е) -Т(алло) -3Ό-Βίρ(ΟΜθ) ((ΝΜθ)(АРРА));

    Н-АхЬ-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-Рке)-Т(алло)-3ϋ-Βχρ(0Μθ)((ΝΜθ)(2Р-АРРА));

    Н-АхЬ-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Р-Рке)-Т(алло)-ЗБ-Вхр(ОМе)-(2РАРРА);

    Н-АхЬ-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3Ό-Βίρ(ΟΜθ)-(АРРА);

    Н-АхЬ-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Τ3ϋ-Βχρ(ОМе)-(АРРА);

    Н-АхЬ-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-Рке)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(2РАРРА);

    Н-АхЬ- (Н£1) -С-Т (алло) - (а-Ме-2Р-Р11е) -Т(алло) -ЗБ-Вхр(ОМе) (АРРА) ;

    Н-АхЬ-(Н£1)-С-Т(алло)-(а-Ме-2Р-РЬе)-Т(алло)-3ϋ-Βχρ(ΟΜθ)(2Р-АРРА);

    Н-АхЬ-(Н£1)-СТ-(α-Ме-РЬе)-Τ3Ό-Βίρ(ОМе)-(АРРА);

    Н-АхЬ-(Н£1)-СТ-(а-Ме-Рке)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(ΑΌΜΡ);

    Н-АхЬ-(Н£1)-СТ-(α-Ме-РИе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АСРР);

    Н-АхЬ-(Н£1)-СТ-(α-Ме-РЬе)-Τ3ϋ-Βχρ(ОМе)-(АМСВ);

    Н-АхЬ-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АРРА);

    Н-АхЬ- (Н£1) -СТ- (а-Ме-2Р-Р11е) -Τ3Ό-Βίρ (ОМе) - (ΑΌΜΡ) ;

    Н-АхЬ-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Р-РЬе)-Τ3Ό-Βίρ(ОМе)-(АСРР);

    Н-АхЬ-(Н£1)-СТ-(а-Ме-2Р-Рке)-Τ3ϋ-Βίρ(ОМе)-(АМСВ)
11. 11. Фармацевтическая композиция, предназначенная для снижения уровней циркулирующей глюкозы и для лечения диабета, содержащая соединения формулы (Ι) по любому из предшествующих пунктов и подходящий фармацевтически приемлемый носитель(и).
12. 12. Способ профилактики или лечения заболеваний, вызываемых гиперлипидемией, гиперхолестеринемией, гипергликемией, гиперинсулинемией, повышенными уровнями свободных жирных кислот или глицерина в крови, гипертриглицеридемией; замедленным заживлением ран, нарушенной толерантностью к глюкозе, резистентностью к лептину, резистентностью к инсулину или другими осложнениями диабета, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного нетоксического количества соединения формулы (Ι) по любому из пп.1-10.
13. 13. Способ по п.12, где заболевание представляет собой диабет 2 типа, нарушенную толерантность к глюкозе, дислипидемию, гипертензию, атеросклероз, гиперлипидемию, ишемическую болезнь сердца, сердечно-сосудистые нарушения и другие заболевания, где лежащим в основе патофизиологическим механизмом является резистентность к инсулину.
14. 14. Лекарственное средство для лечения/устранения любого из болезненных состояний, указанных в пп.12 и 13, включающее соединение формулы (Ι) по любому из пп.1-10 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, эксципиент или сольват.
15. 15. Применение соединений формулы (Ι) по любому из пп.1-10 или их фармацевтической композиции по п.11 или содержащего их лекарственного средства по п.14 для лечения заболеваний, указанных в пп.12 и 13.