EA016056B1 - Тиофенпиразолопиримидиновые соединения - Google Patents

Abstract

В изобретении предлагают соединения формулы Iих фармацевтические композиции и применение указанных соединений в качестве антагонистов рецептора кортикотропин-рилизинг фактора 1 (CRF1) при лечении психиатрических и нейроэндокринных расстройств, неврологических заболеваний и метаболического синдрома.

Description

В настоящем изобретении предложены новые тиофенпиразолопиримидиновые соединения, их фармацевтические композиции и применение в качестве антагонистов СКВ1 рецептора при лечении психиатрических и нейроэндокринных расстройств, неврологических заболеваний и метаболического синдрома.

Предпосылки изобретения

Кортикотропин-рилизинг фактор (СКВ) представляет собой пептид, содержащий 41 аминокислоту, который является важнейшим физиологическим регулятором секреции пептидных производных проопиомеланокортинона (РОМС) из передней доли гипофиза. Помимо его эндокринной роли в гипофизе, иммуногистохимическая локализация СКВ указывает на то, что этот гормон имеет широкое распространение в экстрагипоталамических участках центральной нервной системы и обладает широким спектром автономных, электрофизиологических и поведенческих эффектов, соответствующих роли нейромедиатора или нейромодулятора в головном мозге. Существуют также данные о том, что СКВ играет существенную роль в интегрировании ответа иммунной системы на физиологические, психологические и иммунологические факторы стресса.

СКВ связывают с психиатрическими расстройствами и неврологическими заболеваниями, в том числе депрессией и состоянием тревоги, а также следующими состояниями: болезнью Альцгеймера, болезнью Хантингтона, прогрессирующим супрануклеарным параличом, боковым амиотрофическим склерозом, болезнью Паркинсона, эпилепсией, мигренью, алкоголизмом и токсикоманией и сопутствующими абстинентными синдромами, ожирением, метаболическим синдромом, врожденной гиперплазией надпочечников, болезнью Кушинга, гипертензией, нарушением мозгового кровообращения, синдромом раздраженной толстой кишки, индуцированной стрессом язвой желудка, предменструальным синдромом, сексуальной дисфункцией, преждевременными родами, воспалительными заболеваниями, аллергиями, рассеянным склерозом, висцеральной болью, нарушениями сна, опухолями гипофиза или эктопическими опухолями гипофизарного происхождения, синдромом хронической усталости и фибромиалгией.

Были идентифицированы подтипы рецептора СКВ, СКВ1 и СКВ2, неравномерно распределенные в пределах головного мозга, что позволяет сделать вывод о потенциальном разнообразии функций. Например, считают, широко распространенные рецепторы СКВ1 головного мозга играют важную роль в эмоциональности, сопровождающей воздействие внешних факторов стресса.

Существенно, что рецепторы СКВ1, но не СКВ2, очевидно, обусловливают выбор поведения, подобного тревожному. Более дискретное распространение в области перегородки/гипоталамуса и наличие альтернативных эндогенных лигандов указывают на другую функциональную роль СКВ2 рецептора. Например, как сообщают, новое семейство нейропептидов СКВ с предпочтительной аффинностью к рецепторам СКВ2 относительно рецепторов СКВ1, подавляет аппетит и при этом не создает профиля поведенческой активации, наблюдаемый при действии селективного агониста СКВ1. В других случаях воздействие СКВ2 агониста вызывает эффекты, сходные с эффектами, описанными для антагонистов СКВ1 или делеции гена СКВ1. Например, хотя было предложено использовать агонисты СКВ2 в качестве препаратов против ожирения, антагонисты СКВ1 также могут являться важным средством лечения ожирения.

Некоторые пирроло[2,3-б]пиримидины, пирроло[3,2-б]пиримидины, пиразоло[1,5-а]пиримидины, 1,2,3-триазоло [4,5-Ь]пиридины и пиразоло[1,5-а]-1,3,5-триазины, применяемые в качестве антагонистов СКВ, описаны в АО 94/13676, АО 97/29109, АО 98/08847 и АО 98/03510.

В настоящем изобретении предложены новые тиофенпиразолопиримидины, которые можно применять в качестве антагонистов рецептора СКВ1. Ввиду вышеизложенного, желательно обеспечить новые эффективные и селективные антагонисты КВ1 в качестве потенциально полезных терапевтических средств для лечения психиатрических и нейроэндокринных расстройств, неврологических заболеваний и метаболического синдрома. Кроме того, поскольку большинство коммерческих лекарственных препаратов для ЦНС и сердечно-сосудистой системы проявляет нежелательные характеристики биологической доступности, также желательно найти соединения с характеристиками биологической доступности, превосходящими характеристики известных антагонистов СКВ, таких как СР 154526 и ΝΒΙ30775.

Краткое описание изобретения

Согласно одному варианту реализации настоящее изобретение относится к соединению формулы I кАр²

Формула I где К¹ и К² независимо представляют собой водород или С_гС₃алкил; К³ представляет собой

- 1 016056

К⁴ представляет собой С1 или метил;

К⁵ представляет собой водород, Вг, нитро, метокси, метоксиметил, диметиламино, этоксикарбонил, ацетамидо, ацетокси,

или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к способу лечения депрессии или большого депрессивного расстройства, состояния тревоги, алкоголизма или токсикомании, ожирения, гипертензии, метаболического синдрома, синдрома раздраженной толстой кишки, эпилепсии, удара, нарушения сна, аллергии, мигрени, предменструального синдрома (РМ8), бесплодия, сексуальной дисфункции, врожденной гиперплазии надпочечников, заболевания Кушинга, преждевременных родов, вызванной стрессом язвы желудка, воспалительных заболеваний, опухолей гипофиза или эктопических, вызванных гипофизом опухолей, синдрома хронической усталости, фибромиалгии, висцеральной боли или рассеянного склероза, включающему введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение обеспечивает применение соединения формулы I, или его фармацевтически приемлемой соли, для получения лекарственного средства для лечения депрессии или большого депрессивного расстройства, состояния тревоги, алкоголизма или токсикомании, ожирения, гипертензии, метаболического синдрома, синдрома раздраженной толстой кишки, эпилепсии, удара, нарушений сна, аллергии, мигрени, предменструального синдрома (РМ8), бесплодия, сексуальной дисфункции, врожденной гиперплазии надпочечников, заболевания Кушинга, преждевременных родов, вызванной стрессом язвы желудка, воспалительных заболеваний, опухолей гипофиза или вызванных гипофизом эктопических опухолей, синдрома хронической усталости, фибромиалгии, висцеральной боли или рассеянного склероза.

Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемую соль, для применения в качестве фармацевтического препарата.

Подробное описание изобретения

Приведенные выше и в других местах описания настоящего изобретения нижеуказанные термины, если не указано иное, имеют следующие значения:

Алкил означает насыщенную алифатическую углеводородную группу, которая может иметь прямую или разветвленную цепь, содержащую от 1 до 5 атомов углерода в цепи.

Фармацевтически приемлемый наполнитель обозначает фармацевтически приемлемый носитель, раствор или вспомогательное вещество, добавляемое для улучшения характеристик состава. Указанные наполнители должны быть совместимы с другими ингредиентами состава и не должны наносить вред принимающему их реципиенту, и они хорошо известны специалистам (см., например, КештдФпз Рйагтасеийса1 8с1епсез, 19¹¹¹ Εάίΐίοη, Маск РиЬНзЫпд Сотрапу, 1995).

Фармацевтически приемлемые соли обозначают относительно нетоксичные, неорганические и органические соли присоединения кислоты и соли присоединения основания соединений согласно настоящему изобретению. Эти соли можно получить ίη зйи в процессе конечного выделения и очистки соединений. В частности, соли присоединения кислоты можно получить по отдельности посредством реакции очищенного соединения в форме его свободного основания с подходящей органической или неорганической кислотой и выделения таким образом образовавшейся соли (см., например, КетшдЕопз РйагтасенИса1 8с1епсез, 19¹¹' ЕФйоп, Маск РиЬНзктд Сотрапу, 1995).

Терапевтически эффективное количество или эффективное количество означает количество соединения формулы I согласно настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I согласно настоящему изобретению, которое будет вызывать либо биологическую или медицинскую реакцию, либо требуемый терапевтический эффект на ткань, систему, животное или человека, который добивается исследователь, ветеринар, лечащий врач или другой клиницист.

Термины лечение, лечить, лечащий и т. п. включают как замедление, так и изменение в сторону улучшения развития заболевания. Указанные термины также включают облегчение, улучшение, ослабление, устранение или уменьшение одного или более симптомов заболевания или состояния, даже если заболевание или состояние фактически не устраняется и даже если развитие самого заболевания или состояния не замедляется или не изменяется в сторону улучшения. Термин лечение и аналогичные термины также включают превентивное (например, профилактическое) и паллиативное лечение. Предотвращение заболевания подтверждается пролонгированием или задержкой начала симптомов заболева ния.

Символ — в молекулярной структуре указывает положение присоединения для данного конкретного заместителя.

В случае, если в каком-либо компоненте или в формуле I какая-либо переменная встречается более одного раза, ее определение в каждом случае не зависит от ее определения в любом другом случае, если

- 2 016056 не указано иное. Кроме того, комбинации заместителей и/или группировок являются допустимыми, только если эти комбинации порождают стабильные соединения. При выборе соединений согласно настоящему изобретению обычный специалист в данной области понимает, что различные заместители, т.е. К¹, Я² и т.п., следует выбирать в соответствии с хорошо известными принципами соединяемости химических структур.

Согласно стандартной номенклатуре, применяемой при описании настоящего изобретения, сначала описывают концевую часть обозначенной боковой цепи, а затем соседнюю функциональность по направлению к месту присоединения. Например, арилкарбониламиноалкильный заместитель эквивалентен арил-С(О)-НН-алкилу-.

В настоящем изобретении рассмотрены конкретные разделы изобретений, например следующие:

(a) соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль, где Я¹ и Я² независимо представляют собой этил или н-пропил;

(b) соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль, где Я³ представляет собой или (с) соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль, где Я⁵ представляет собой метокси, метоксиметил, диметиламино или

(ά) применение соединения формулы I, или его фармацевтически приемлемой соли, для лечения депрессии или состояния тревоги;

(е) применение соединения формулы I, или его фармацевтически приемлемой соли, для лечения алкоголизма или токсикомании;

(I) соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемая соль, имеющее значение К, для СЯР1 связывания < 500 нМ;

(д) соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемая соль, имеющее значение К, для СЯЕ1 связывания < 50 нМ;

(II) соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемая соль, имеющее значение К, для СЯЕ1 связывания < 5 нМ;

(ί) соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемая соль, имеющее значение К, для СЯР1 связывания < 500 нМ, и селективное связывание с СЯР1 (т.е. более низкое К₁) относительно СЯР2;

(ί) соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемая соль, имеющее значение К, для СЯБ1 связывания < 50 нМ, и селективное связывание с СЯБ1 (т.е. более низкое К1) относительно СЯБ2; и (к) соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемая соль, имеющее значение К, для СЯБ1 связывания < 5 нМ, и селективное связывание с СЯБ1 (т.е. более низкое К1) относительно СЯБ2;

Соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемая соль, с лучшей характеристикой биологической совместимости, чем известные СЯБ антагонисты (например, СР154526 и NΒI30775).

Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно формулируют в виде фармацевтических композиций, вводимых различными путями. Предпочтительно, если такие композиции предназначены для перорального введения. Указанные фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области (см., например, Яетшд1оп: Т1е 8с1еисе и Ргасйсе о1 Рйагшасу, А. Сеииаго, е! а1., еШ., 19⁴¹¹ еб., Маск РиЬШЫид Со., 1995).

Соединения формулы I, как правило, являются эффективными в широком диапазоне дозирования. Например, суточная дозировка обычно лежит в интервале от примерно 0,0001 до примерно 30 мг/кг массы тела. В некоторых случаях могут быть более адекватными уровни дозирования, лежащие ниже нижнего предела вышеуказанного диапазона, тогда как в других случаях можно применять еще большие дозы, не вызывая никакого вредного побочного эффекта, и, следовательно, вышеуказанный диапазон дозирования никоим образом не ограничивает объем настоящего изобретения. Очевидно, что количество фактически вводимого соединения будет определяться врачом, в свете соответствующих обстоятельств, в том числе состояния, подвергаемого лечению, выбранного способа введения, конкретного вводимого соединения или соединений, возраста, веса и реакции конкретного пациента и серьезности симптомов, наблюдаемых у пациента.

Соединения формулы I являются СЯР-1 антагонистами и, в качестве таковых, могут применяться

- 3 016056 для. лечения состояния, которое поддается лечению путем уменьшения стимуляции СКР1 рецептора. Кортикотропин-рилизинг фактор (СКР), пептид, содержащий 41 аминокислоту, который является важнейшим физиологическим регулятором секреции пептидов, вызванной проопиомеланокортиноном (РОМС) из передней доли гипофиза [1. КМег е! а1., Ргос. №111. Асаб. 8с1 (И8А) 80:4851 (1983); V. Уа1е е! а1., 8с1еисе 213:1394 (1981)], связывали со многими медицинскими состояниями. Например, помимо его эндокринной роли при гипофизе, иммуногистохимическая локализация СКР свидетельствует, что этот гормон имеет широкое экстрагипоталамическое распространение в центральной нервной системе и производит широкий спектр автономных, электрофизиологических и поведенческих эффектов, сопоставимых с ролью нейромедиатора или нейромодулятора в головном мозге [V. Уа1е е! а1., Кес. Ргод. Ногт. Кек. 39:245 (1983); С. Р. КооЬ, Регкр. Вейау. Меб. 2:39 (1985); Е. В. Эе 8ои/а е! а1., 1. №игоксг 5:3189 (1985)]. Существуют также данные, что СКР играет существенную роль в интегрировании отклика иммунной системы на физиологические, психологические и иммунологические стресс-факторы. [см., например, 1. Е. В1а1оск, Рйукю1одка1 Кеу1е\\'8 69:1 (1989); 1. Е. Мог1еу, ЫГе 8ск 41:527 (1987)].

СКР связан с психиатрическими расстройствами и неврологическими заболеваниями, в том числе депрессией и чувством тревоги [Ό. М. №е1кеп, ЫГе 8сг 78:909-919; Н. Е. Кии7е1 е! а1. , 1. РкусЫай·. Кек. 37:525-533; Ό. К. Сей1ег1 е! а1., Еиг. 1. Рйагтасо1. 509:145-153]. Была постулирована роль СКР в этиологии и патофизиологии болезни Альцгеймера, болезни Гентингтона, прогрессирующего супрануклеарного паралича и бокового амиотрофического склероза, так как эти заболевания связаны с дисфункцией СКР нейронов в центральной нервной системе [см. обзор: Е. В. Эе 8оихе. Нокр. Ргасйсе 23:59 (1988)]. Как было показано, постоянное введение СКР вызывает повреждение допаминной системы, что предполагает роль в болезни Паркинсона [Е. Ιζ/о е! а1., Рйагтасо1. Вюсйет. Вейаг. 81:701-708 (2005)]. Другие неврологические расстройства, с которыми связан СКР, включают эпилепсию [Т. Ζ. Вагат е! а1., Вгаш Кек. 770:89-95 (1997)] и мигрень [Т. С. Тйеойапбек е! а1., Епбосппо1оду 136:5745-5750 (1995)]. СКР связан с алкоголизмом и сопутствующими абстинентными синдромами [Ό. Н. ОуегкИее! е! а1., Рйагтасо1. Вюсйет. Вейау. 77:405-413; У. 8йайат е! а1., Ркусйорйагтасо1оду (Вег1) 137:184-190]. Более того, имеются данные, что СКР играет роль в различных эндокринных расстройствах и сердечно-сосудистых заболеваниях, таких как ожирение [Е. ТштоГеега и Ό. Кюйагб, №игоепбосппо1оду 66:327-340 (1997)], метаболический синдром [А. М. \Уагб е! а1., Ме!аЬойкт 53:720-726(2004)], врожденная гиперплазия надпочечников [Ό. Р. Мегке и С. В. Сибег 1г., Епбосгшо1. Ме!аЬ. С1ш. №г1й Ат. 30:121-135 (2001)], заболевание Кущинга [М. ЬаЬеиг е! а1., Сигг. Эгид Тагде!к 1ттипе Епбосг. Ме!аЬо1. Э13огб. 4:335-342 (2004)], гипертензия [К. 1. Впксое, е! а1., Вгаш Кек. 881:204-207 (2000)] и нарушение мозгового кровообращения [8. Ь. 81егепк е! а1., 1. СегеЬ. В1ооб Р1о\у Ме!аЬ. 23:1151-1159 (2003)]. Как было показано, желудочные расстройства, такие как синдром раздраженной толстой кишки [Υ. Тасйе е! а1., Еиг 1. 8игд. 8ирр1: 16-22 (2002)] и вызванная стрессом язва желудка [К. Е. СаЬгу е! а1., Мо1. РкусЫайу 7:474-483, 433 (2002)], связаны с СКР. Кроме того, имеются данные, что СКР играет роль в различных сферах женского здоровья, например предменструальном синдроме [Р. РассйшеЫ е! а1., Ркусйокот. Меб. 56:418-422 (1994)], бесплодии [Ь. Сй^ζζоп^ е! а1., Епбосппо1оду 138:4806-4811 (1997)], сексуальной дисфункции [1. Е. 1опек е! а1., Ат. 1. Рйукю1. Кеди1. 1п!едг. Сотр. Рйукю1. 283:К591-597 (2002) и преждевременных родов [Р. Ό. \Уабй\уа е! а1., Ат. 1. ОЬк!е!. Супесо1. 191:1063-1069 (2004)]. Также существуют свидетельства, что СКР играет существенную роль в иммунной системе, что указывает на терапевтический потенциал для лечения воспалительных заболеваний [А. Сгауатк и А. N. Магдюпк, Сигг. Меб. Сйет. 12:1503-1512 (2005)], аллергии [Ь. К. 8шдй е!. А1., Вгаш Вейау. 1ттип. 13:225-239 (1999)], рассеянного склероза и других аутоиммунных расстройств [С. Вепои е! а1., Ншшипок 174:5407-5413 (2005)]. Помимо вышесказанного, СКР связан с болью в животе [М. №)кеп е! а1., №игодак1гоеп!его1. Мо!11. 17:423-432 (2005)], нарушениями сна [Т. М. Виск1еу и А. Р. 8сйаЫЬегд, 1. С1ш. Епбосппо1. Ме!аЬ. 90:3106-3114(2005)], опухолями гипофиза или эктопическими вызванными гипофизом опухолями [К. Ό. О1е1епсй е! а1., 1. С1ш. Епбосгшо1. Ме!аЬ. 83:33273331 (1998)], синдром хронической усталости и фибромиалгией [С. №еск и Ь. 1. СгоГГогб, Кйеит. Э1к. С1ш. ΝθιΛ Ат. 26:989-1002 (2000)].

Были идентифицированы подтипы СКР рецептора, СКР1 и СКР2, которые неоднородно распределены в пределах головного мозга [Ό. Т. Сйа1тегк е! а1., Т1Р8 17:166-72 (1996)], и тем самым, как полагают, могут проявлять потенциальное функциональное разнообразие [8. С. Нешпсйк е! а1., Кеди1. Рерббек 71:15 (1997)]. Например, широко рассредоточенные СКР1 рецепторы головного мозга сильно связаны с эмоциональностью, сопровождающей воздействие факторов стресса, обусловленных окружающей средой [С. ЫеЬксй е! а1., Кеди1. Рерббек 59: 229-39 (1995); Ό. V. 8сйиН, Р^8 93: 10477-82 (1996)]. Существенно, СКР1, но не СКР2, рецепторы, кажется, обуславливают избранное анксиогенно-подобное поведение [Не1ппсйк е! а1., 1997]. Более дискретное распределение в септальной/гипоталамической области [Ό. Т. Сйа1тегк е! а1., 1. №игоксг 15(10): 6340-50 (1995)] и наличие альтернативных эндогенных лигандов [1. Уаидйап е! а1., №Ш1ге 378: 287-92 (1995)] предполагает другую функциональную роль СКР2 рецептора [Нешпсйк е! а1., 1997]. Например, как сообщают, новое семейство СКР нейропептидов с предпочтительным сродством к СКР2 относительно СКР1 рецепторов, подавляет аппетит, не создавая профиль поведенческой активации, наблюдаемый при действии селективного СКР1 агониста (Н. Теζνа1 е! а1., РNА8 101(25): 9468-9473 (2004)]. В других случаях воздействие СКР2 агониста вызывает эффекты, сходные с

- 4 016056 эффектами, описанными для СРГ1 антагонистов или СРГ1 генной делеции [8. С. Нетпсйз, Тгепбз ΐη Рйагшасо1од1са1 8с1епсез 20(8):311-5 (1999)]. Например, хотя агонисты СРГ2 были предложены в качестве препаратов против ожирения, СРГ1 антагонисты также могут являться важным средством для лечения ожирения [С. СоЩогедд е! а1., Ыеигоепбосппо1оду 80(2):111-23 (2004)].

Получение соединений согласно изобретению

Все соединения согласно настоящему изобретению могут быть получены химическим способом, например, с помощью методов синтеза, представленных ниже на схемах. Однако последующее обсуждение никоим образом не предполагает ограничить объем настоящего изобретения. Например, конкретные стадии синтеза каждого из описанных способов можно комбинировать по-разному, или сочетать со стадиями из других схем для получения дополнительных соединений формулы (I). Продукты каждой стадии можно выделить обычными способами, в том числе, экстракцией, испарением, осаждением, хроматографией, фильтрацией, растиранием в порошок, кристаллизацией и т.п. На схемах, представленных ниже, все заместители, если не указано иное, определены ранее, а подходящие реактивы хорошо известны и применяются в данной области.

Схема 1

Получение соединения формулы (I) можно осуществить согласно реакциям, как показано на схеме 1. Подходящим соединением формулы (I) является соединение, в котором В¹ , В² , В³, В⁴ и В⁵ определены при описании соединения формулы I.

На стадии 1 этилацетоацетат и 5-метил-2Н-пиразол-3-иламин конденсируют с образованием 2,5диметил-4Н-пиразоло[1,5-а]пиримидин-7-она (1) при температуре рефлюкса уксусной кислоты.

Затем пиразоло[1,5-а]пиримидин-7-он формулы (1) превращают в 7-хлор-2,5-диметил- пиразоло[1,5-а]пиримидин на стадии 2, применяя оксихлорид фосфора и диметиланилин в инертном растворителе, таком как толуол, при температуре рефлюкса растворителя.

На схеме 1, стадия 3, реактив Гриньяра формулы (3) (X = С1 или Вг) реагирует с хлоридом формулы (2) в инертном растворителе, таком как толуол, при температуре рефлюкса с получением 7-алкилпиразолопиримидина формулы (4). В качестве альтернативы 7-алкилпиразолопиримидин формулы (4) получают конденсированием дикетона с 5-метил-2Н-пиразол-3-иламином, как показано на стадии 4. Реакцию проводят в этаноле, применяя каталитическое количество пиперидина, при температуре от 60 до 80°С (Ыоушзоп, Т., е!. А1. I. Меб. Сйеш. 1975, 18, 460). Когда В¹ = Н, получают смесь региоизомеров, например, когда В² = пропил, которые разделяют после йодирования на стадии 5.

Пиразолопиримидин формулы (4) функционализируют с образованием йод-пиразолопиримидина формулы (5) на стадии 5, применяя избыток Ν-йодсукцинимида в ацетонитриле.

На схеме 1, стадия 6, йод-пиразолопиримидин формулы (5) реагирует с гетероциклическим галогенидом цинка (Ρ³/ιιΧ) (X = С1 или Вг) в реакции кросс-сочетания Негиши. Гетероциклический галогенид цинка можно получить способами, хорошо известными специалистам в данной области. Например, цинкорганический реактив получают с помощью реакции гетероциклического бромида с металлическим цинком или, в качестве альтернативы, путем применения не-галогенированного гетероцикла с образованием гетероциклического реактива лития с н-, втор- или трет-бутиллитием, с последующим обменом литий-цинк с /пС1₂. Цинкорганический реактив соединяют с йодпиразолопиримидином формулы (5) в присутствии палладиевого катализатора, например, дихлор [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен] палладий (II) дихлорметана, в инертном растворителе, таком как ТГФ, при температуре рефлюкса в течение примерно 12-36 ч с получением пиразолопиримидина формулы (I).

В качестве альтернативы, на стадии 7, применяют гетероциклическую бороновую кислоту (В³В(ОН)₂) в реакции сочетания Сузуки с соединением йода формулы (5). Для проведения процедуры сочетания существуют многочисленные реакционные условия, доступные опытному технику. При пред

- 5 016056 почтительных условиях применяют смесь растворителей толуол/этанол/2 М карбонат натрия с палладиевым катализатором, например, бис(три-трет-бутилфосфин)палладием(0), при температуре от 60°С до температуры орошения, в течение примерно 12-36 ч.

Как легко можно видеть, гетероарильные бороновые кислоты можно получить способами, аналогичными способам, описанным в настоящем документе, применяя процедуры, хорошо известные в данной области. Например, тиофены и бензотиофены можно бромировать посредством Ν-бромсукцинимида и затем конвертировать в бороновую кислоту путем обмена галоген металл с помощью алкиллитиевого реактива, с последующей обработкой триметилборатом и гидролизом после обработки.

Специалисту в данной области очевидно, что тиенопиридин, например, как в соединении формулы (1с), легко получают путем превращения коммерчески доступного тиено[3,2-Ь]пиридин-7-ола в бромид, с последующим обменом галоген - металл, и гашением источником протонов, таким как метанол/вода. Последующее бромирование бромом в положении 3 с последующей реакцией сочетания Сузуки с метилбороновой кислотой позволяет получить 3-метилтиено[3,2-Ь] пиридин, который соединяют с йодпиразолопиримидином формулы (5), применяя Ζηθί₂, как описано выше.

Схема 2

Получение соединения формулы (7), (8) или (9) можно осуществить согласно реакциям, как показано на схеме 2. Подходящим соединением формулы (7), (8) или (9) является соединение, в котором К¹, К² и К⁴ определены при описании соединения формулы I, и Не! определен, как показано.

На схеме 2, стадия 1, тиофен формулы (6) бромируют Ν-бромсукцинимидом в инертном растворителе, таком как дихлорметан или хлороформ.

На стадии 2 бромтиофен формулы (7) соединяют с гетероциклическим реактивом цинка с получением гетероцикла тиофена формулы (8). Гетероциклический реактив цинка получается из бромгетероцикла и металлического цинка и реагирует ίη зйи с бромтиофеном формулы (7). Реакцию проводят в инертном растворителе, таком как ТГФ, при температуре рефлюкса растворителя. В качестве альтернативы, гетероциклический реактив лития можно получить, например, путем применения н-, втор- или трет-бутиллития с 1-метил-1,2,4-триазолом, с последующим обменом литий - цинк с Ζηθί₂ и получением гетероциклического реактива цинка.

На схеме 2, стадия 3, тиофен формулы (6) подвергают нитрованию с получением нитротиофена формулы (9). При предпочтительных условиях применяют смесь растворителей дихлорметана и ТФК (трифторуксусной кислоты) с 70% азотной кислотой. Специалисту в данной области очевидно, что нитротиофен формулы (9) может служить в качестве промежуточного соединения для дальнейшей функционализации. Например, нитрогруппу можно восстановить и ацилировать с получением с получением ацетамида или алкилировать с получением диалкиламина.

Таким образом, очевидно, что стадии, необходимые для получения соединения формулы (8), можно осуществить в любом порядке, так что 2-гетероцикл тиофена можно получить способами, известными в данной области, и затем функционализировать в виде бромтиофена или тиофенилбороновой кислоты, а затем соединить с йод-пиразолопиримидином формулы (5).

Схема 3

Получение соединения формулы (10) можно осуществить согласно реакциям, как показано на схеме

- 6 016056

3, Подходящим соединением формулы (10) является соединение, в котором К¹, К² и К⁴ определены при описании соединения формулы I и К^5а = -ОСН₃, -ОС(О)СН₃, -СН₂ОСН₃ или -СО₂СН₂СН₃.

Как можно видеть, бромтиофен формулы (7) представляет собой полезное промежуточное соединение, которое специалист в данной области легко может превратить в разнообразные замещенные тиофены. Например, образование тиенильного реактива Гриньяра с последующей обработкой кислородом (Нигб, С. Ό. и Кгсих. К. 1АС8 1950, 72, 5543) позволяет получить 2-гидрокситиофен, который ацилируют с получением ацетоксипроизводного. Указанный реактив Гриньяра можно также обработать электрофилом, таким как этилцианоформат, с получением этоксикарбонил-замещенного тиофена. Путем обмена галоген литий с применением н-, втор- или трет-бутиллития можно получить тиениллитиевый реактив, который затем может реагировать с электрофилами, такими как галоидные алкилы, например, йодметилметиловый эфир. Кроме того, обработка оксидом меди, йодидом натрия и метоксидом натрия позволяет получить 2-метокситиофен.

В настоящем документе ТСХ обозначает тонкослойную хроматографию; ВЭЖХ обозначает высокоэффективную жидкостную хроматографию; 5 обозначает часть на миллион сдвига слабого поля относительно тетраметилсилана; ТГФ обозначает тетрагидрофуран; ЕЮАс обозначает этилацетат; НОАс обозначает уксусную кислоту; МеОН обозначает метанол; ΌΜΕ обозначает диметоксиэтан.

Пример

Без дальнейшего уточнения полагают, что специалист в данной области может, применяя предшествующее описание, применить настоящее изобретение на практике в его наиболее полном объеме. Для более детального описания изобретения предложены нижеследующие способы получения и примеры. Они являются только иллюстративными и ни в коей мере не ограничивают изобретение. Реактивы и исходные вещества являются легко доступными для обычного специалиста в данной области или могут быть без труда им синтезированы. В примерах 1-27 представлены типичные соединения и проиллюстрированы способы их получения. В примерах А-С описаны различные биологические анализы, которые можно применять для определения биологических свойств соединений согласно изобретению. Для специалистов, опытных в данной области, сразу же будут очевидными подходящие вариации процедур, описанных в этих примерах. Названия соединений согласно настоящему изобретению соответствуют СйешОгате ИИга® уегхюи 7.0.1.

Приготовление 1. 2,5-Диметил-4Н-пиразоло[1,5-а]пиримидин-7-он.

К уксуснокислому раствору (500 мл) 5-метил-2Н-пиразол-3-иламина (100 г, 0,95 моль) по каплям добавляют этилацетоацетат (128 г, 0,98 моль), поддерживая температуру при 25-28°С. Смесь нагревают при температуре рефлюкса в течение 10 ч и затем охлаждают до комнатной температуры. Реакционную массу добавляют к трет-бутилметиловому эфиру (5 л), охлажденному до 5°С, поддерживая температуру ниже 10°С. Перемешивают в течение 1 ч при 5°С и фильтруют. Образовавшееся вещество высушивают в течение ночи в вакууме с получением белого твердого вещества (158 г, 96%).

Приготовление 2. 7-Хлор-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин.

К суспензии 2,5-диметил-4Н-пиразоло[1,5-а]пиримидин-7-она (10,0 г, 61,3 ммоль) в толуоле (150 мл) добавляют Ν,Ν-диметиланилин (9,7 мл, 76,7 ммоль). По каплям к этой белой суспензии добавляют оксихлорид фосфора (11,2 мл, 122,6 ммоль). Нагревают при температуре рефлюкса в течение 3 ч в инертной атмосфере, охлаждают до комнатной температуры и концентрируют реакцию при пониженном давлении до получения коричневого масла. Масло растворяют в этилацетате (250 мл) и повышают основность посредством 1 N №ЮН. Основную водную фазу отделяют и экстрагируют дополнительным количеством этилацетата (2x100 мл). Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением коричневого твердого вещества. Вещество очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 80% гексан/20% (30% ТГФ/гексан) - 0% гексан/100% (30% ТГФ/гексан) при ступенчатом градиенте с 20% приращениями с получением светло-зеленого твердого вещества (6,65 г, 59%). ЭС/МС т/ζ (³⁵С1) 182,3 (М+1)⁺.

Приготовление 3. 7-(1 -Этилпропил)-2,5-диметилпиразоло [1,5-а]пиримидин.

Высушенную в сушильном шкафу колбу, оборудованную дефлегматором, заполняют каталитическим количеством йода и К1еке® магнием (1,0 М в ТГФ, 52 мл, 52 ммоль) в инертной атмосфере. Нагревают до 45°С и к реакции добавляют 3-бромпентан (5,3 мл, 42,9 ммоль). Инициируют резкие скачки температуры в качестве реакции Гриньяра. Реакционную массу перемешивают еще 4 ч при 50°С и охлаждают до комнатной температуры. Оставляют осаждаться металлический магний и через канюлю помещают реактив Гриньяра при избыточном давлении аргона в колбу, содержащую 7-хлор-2,5-диметилпиразоло [1,5-а]пиримидин (5,19 г, 28,6 ммоль) в безводном толуоле (50 мл). Нагревают до температуры рефлюкса в инертной атмосфере в течение 48 ч. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры и гасят водой. Реакционную массу разбавляют этилацетатом (150 мл) и добавляют воду (50 мл). Водную фазу отделяют и экстрагируют этилацетатом (75 мл). Органические фазы объединяют, высушивают над без

- 7 016056 водным сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Очищают способом флэшхроматографии, элюируя смесью 80% пентан/20% (30% ТГФ/пентан) - 0% пентан/100% (30% ТГФ/пентан) при ступенчатом градиенте с 20% приращениями, с получением желтого масла (2,59 г, 42%). ЭС/МС т/ζ 218,1 (М+1)⁺.

Следующие соединения получают, по существу, как описано в способе получения 3, применяя коммерчески доступный . реактив Гриньяра или получая реактив Гриньяра, как описано выше.

Приготовление Νο.	Химическое название	Физические характеристики: ЯМР или МС (т/ζ)
4	7-(1-Пропил-бутил)-2,5диметил-пиразоло[1,5а]пиримидин	246,3 (М+1)+
5	7-Изопропил-2,5диметилпиразоло[1,5а]пиримидин	ЯМР (400 МГц, СБС13) : 6, 41 (с, 1Н), 6,30 (с, 1Н), 3,813,77 (м, 1Н), 2,52 (с, ЗН), 2,47 (с, ЗН), 1,37 (д, Д=7,0 Гц, 6Н)

Приготовление 6. 7-Бутил-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин.

5-Метил-2Н-пиразол-3-иламин (217 мг, 2,17 ммоль), нонан-2,4-дион (339 мг, 2,39 ммоль) и пиперидин (1 капля) добавляют к этанолу (10 мл) и нагревают при 80°С в течение ночи. Охлаждают до комнатной температуры и концентрируют до сухости. Очищают способом колоночной хроматографии на силикагеле (0-20% этилацетат в гексане) с получением смеси из двух изомеров (2 г).

Приготовление 7. 7-(1-Этилпропил)-3-йод-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин.

I

7-(1-Этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин (2,14 г, 9,84 ммоль) растворяют в безводном ацетонитриле (25 мл) и добавляют 6 частей (0,5 г каждая) Ν-йодсукцинимида (3,0 г, 13,3 ммоль) с 10-минутными интервалами. Реакционную массу перемешивают в течение 4 ч. Удаляют ацетонитрил и образовавшееся масло разбавляют дихлорметаном (100 мл). Оранжевый раствор промывают насыщенным раствором хлорида аммония (2x50 мл). Собирают органическую фазу, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением темнокрасного масла. Очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% пентан/0% (20% этилацетат/пентан) - 0% пентан/100% (20% этилацетат/пентан) при ступенчатом градиенте с 50% приращениями с получением оранжевого масла (3,28 г, 97%). ¹Н ЯМР (400 МГц, СБС1₃): 6,44 (с, 1Н), 3,59 (м, 1Н), 2,61 (с, 3Н), 2,49 (с, 3Н), 1,86-1,76 (м, 4Н), 0,85 (т, 1=7,5 Гц, 6Н).

Следующие соединения получают, по существу, как описано в способе получения 7.

Химическое название

Приготовление Νο.

7-Изопропил-3-йод2,5-диметилпиразоло[1,5а] пиримидин_________

7-Бутил-3-йод-2,5диметилпиразоло[1,5а]пиримидин

7-(1-Пропил-бутил)З-йод-2,5-диметилпиразоло[1,5-а] пиримидин

ХН ЯМР (400 МГц, ΟΏΟ13) :
6, 42	(с,	1Н), 3,74-3,70
(м,	1Н) ,	2,58 (с, ЗН),
2,46	(с,	ЗН), 1,74-1,68
(м,	4Н) ,	1,28-1,14 (м,
4Н) ,	0, 84	(т, 0=7,0 Гц,
6Н) .

Обработка: органическую фазу промывают водным раствором Να₂8₂Θ₃. Реакцию проводят на смеси изомеров способа получения 6. Два изомера разделяют на силикагеле (0-20% ЕЮАс/гексан).

Пример 1. 3-(3-Хлортиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин.

Ке1ке® цинк (5 г/100 мл ТГФ, 20 мл, 15,0 ммоль) суспендируют в безводном ТГФ (10 мл) и добавляют 2-бром-3-хлортиофен (1,98 г, 10,0 ммоль). Смесь нагревают при температуре рефлюкса на масля

- 8 016056 ной бане (85°С) в инертной атмосфере в течение 3 ч. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры и центрифугируют оставшийся металлический цинк. Раствор реактивов через канюлю переносят в новый сосуд при избыточном давлении аргона и добавляют 7-(1-этилпропил)-3-йод-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин (1,72 г, 5,0 ммоль). Раствор дегазируют избыточным давлением аргона, в течение 10-15 мин и добавляют дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий (II) дихлорметан (0,225 г, 0,275 ммоль). Перемешивают при температуре рефлюкса в инертной атмосфере в течение ночи. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, гасят насыщенным хлоридом аммония и разбавляют этилацетатом (75 мл). Водную часть отделяют и экстрагируют этилацетатом (50 мл), органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении.

Образовавшийся остаток очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (15% этилацетат/гексан) - 0% гексан/100% (15% этилацетат/гексан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями с получением желтого твердого вещества (1,35 г, 40%). ЭС/МС т/ζ (³⁵С1) 334,4 (М+1)⁺.

Следующие соединения получают, по существу, как описано в примере 1.

Пример Νο.	Химическое название	МС (ш/ ζ)
2	3-(З-Хлор-тиофен-2-ил)-7- (1пропил-бутил)-2,5-диметил~ пиразоло [ 1 г 5-<з] пиримидин,	(35С1) 362,0 (М+1)+

3

3- (З-Хлор-тиофен-2-ил)-7изопропил-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин

(35С1) 306,0 (М+1)+

Пример 4. 3-(3-Метилтиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин.

Высушенную в сушильном шкафу колбу заполняют бромидом 3-метил-2-тиенилцинка (11,0 мл, 5,5 ммоль), безводным ТГФ (6,0 мл) и 7-(1-этилпропил)-3-йод-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидином (0,536 г, 1,56 ммоль). Дегазируют в течение 10-15 мин избыточным давлением аргона и добавляют дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(11) дихлорметан (0,12 г, 0,15 ммоль). Нагревают при температуре рефлюкса на масляной бане (100°С) в инертной атмосфере в течение ночи. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, гасят насыщенным хлоридом аммония и разбавляют этилацетатом (75 мл). Водную часть отделяют и экстрагируют этилацетатом (50 мл). Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Образовавшийся остаток очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% пентан/0% (25% этилацетат/пентан) - 0% пентан/100% (25% этилацетат/пентан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями с получением белой пены. Растирают в порошок с гексаном и фильтруют. (0,432 г, 8%). ¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС^): 7,26 (д, 1=4,8, МГц, 1Н), 6,96 (д, 1=5,3 Гц, 1Н), 6,42 (с, 1Н), 3,643,60 (м, 1Н), 2,53 (с, 3Н), 2,43 (с, 3Н), 2,14 (с, 3Н), 1,87-1,79 (м, 4Н), 0,88 (т, 1=7,0 Гц, 6Н).

Пример 5. 3-(5-Бром-3-хлортиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин.

3-(3-Хлортиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин (1,16 г, 3,5 ммоль) растворяют в дихлорметане (15 мл) и добавляют Ν-бромсукцинимид в одну аликвоту (0,69 г, 3,85 ммоль). Перемешивают 2 ч в инертной атмосфере и подтверждают завершение реакции способом ТСХ. Реакционную массу разбавляют дихлорметаном (50 мл), промывают водой (75 мл), соляным раствором (50 мл), высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества (1,56 г, количественный выход). ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО): 7,39 (с, 1Н), 6,88 (с, 1Н), 3,48-3,44 (м, 1Н), 2,45 (с, 3Н), 2,39 (с, 3Н), 1,80-1,73 (м, 4Н), 0,76 (т, 1=7,0 Гц, 6Н).

Следующие соединения получают, по существу, как описано в примере 5.

Пример Νο.	Химическое название	МС (т/ζ)
6	3-(5-Бром-3-хлор-тиофен-2-ил)-7(1-пропил-бутил)-2,5-диметилпиразоло [ 1,5-а] пиримидин	(35С181Вг) 441,7 (М+)
7*	3-(5-Бром-3-метил-тиофен-2-ил)-7- (1-этил-пропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин	(81Вг) 393,8 (М+1)+
8*	3-(5-Бром-3-хлор-тиофен-2-ил)-7изопропил-2,5-диметил- пиразоло[1,5-а] пиримидин	(35С181Вг) 385,0 (М+)

- 9 016056

Очищают способом колоночной хроматографии, элюируя смесью гексан/этилацетат.

Пример 9. 3-[3-Хлор-5-(2-метил-2Н-[1,2,4]триазол-3-ил)тиофен-2-ил]-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло [1,5- а] пиримидин.

Ке1ке® цинк (5 г/100 мл ТГФ, 5,5 мл, 4,2 ммоль) суспендируют в безводном ТГФ (5 мл) и добавляют 1-метил-5-бром-1,2,4-триазол (0,4 г, 2,5 ммоль). Нагревают при температуре рефлюкса в инертной атмосфере на масляной бане (85°С) в течение 3 ч. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры и центрифугируют оставшийся металлический цинк. Раствор реагентов через канюлю переносят в новый сосуд при избыточном давлении аргона и добавляют 3-(5-бром-3-хлортиофен-2-ил)-7-(1этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1, 5-а] пиримидин (0,64 г, 1,45 ммоль). Раствор дегазируют избыточным давлением аргона в течение 10-15 мин и добавляют дихлор[1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен] палладий (II) дихлорметан (0,136 г, 0,167 ммоль). Нагревают при температуре рефлюкса в инертной атмосфере в течение ночи. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, гасят насыщенным хлоридом аммония и разбавляют этилацетатом (75 мл). Водную часть отделяют и экстрагируют этилацетатом (50 мл). Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении.

Образовавшийся остаток очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (30% ТГФ/гексан) - 0% гексан/100% (30% ТГФ/гексан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями, с получением желтого твердого вещества (0,298 г, 50%). ЭС/МС т/ζ (³⁵С1) 415,0 (М+1)⁺.

Следующее соединение получают, по существу, как описано в примере 9, применяя коммерчески доступный бромид 6-метил-2-пиридилцинка.

| Пример Νο. | Химическое название МС (ш/ζ) 1

10

3-[3-5-(6-Метил-пиридин-2-ил)тиофен-2-ил]-7-(1-этил-пропил)2,5-диметил-пиразоло [1,5- а]пиримидин

(35С1) 424,8 (М+1)+

Пример 11. 3-(3-Хлор-5-метокситиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин.

Высушенную в сушильном шкафу колбу заполняют 3-(5-бром-3-хлортиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидином (0,46 г, 1,1 ммоль), оксидом меди (0,045 г, 0,56 ммоль), йодидом натрия (0,020 г, 0,11 ммоль), 25% раствором метоксид натрия/метанол (10 мл) и безводным метанолом (10 мл). Реакционную массу нагревают при температуре рефлюкса в инертной атмосфере на масляной бане (90°С) в течение субботы и воскресенья. Реакционную массу гасят ледяной водой и экстрагируют эфиром (3x100 мл). Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Образовавшийся остаток очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (35% этилацетат/гексан) - 0% гексан/100% (35% этилацетат/гексан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями, с получением белой пены (0,086 г, 21%). ЭС/МС т/ζ (³⁵С1) 363,7 (М+1)⁺.

Пример 12. 4-Хлор-5-[7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-иловый] эфир уксусной кислоты.

Изопропилбромид (0,25 мл, 2,7 ммоль) добавляют к суспензии 3-(5-бром-3-хлортиофен-2-ил)-7-(1этил-пропил)-2,5-диметил-пиразоло [1, 5-а] пиримидина (0,74, 1,8 ммоль) в Ке1ке® магнии (1,0 М в ТГФ, 2,7 мл, 2,7 ммоль) и безводном ТГФ (3 мл). Нагревают при температуре рефлюкса в инертной атмосфере в течение 1 ч и реакционную массу охлаждают до комнатной температуры. В экзотермическую реакцию при избыточном давлении при комнатной температуре барботируют кислород в течение 90 мин. Реакционную массу гасят насыщенным хлоридом аммония (30 мл), экстрагируют этилацетатом (2x100 мл) и концентрируют при пониженном давлении. Масло растворяют в эфире (150 мл), промывают 0,1 N гидроксидом натрия (3x75 мл) и основную водную фазу повторно экстрагируют эфиром (50 мл). Водную фазу подкисляют насыщенным хлоридом аммония и экстрагируют дихлорметаном (4x75 мл). Порции дихлорметана объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Неочищенное масло (0,138 г, 0,3 9 ммоль) растворяют в дихлорметане (2 мл) с триэтиламином (0,23 мл, 1,6 ммоль) и ацетилхлоридом (0,034 мл, 0,47 ммоль). Перемешивают в инертной атмосфере в течение 1 ч, разбавляют дихлорметаном (50 мл) и промывают водой (50 мл). Органическую фазу высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Образовавшийся остаток очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100%

- 10 016056 гексан/0% (25% этилацетат/гексан) - 0% гексан/100% (25% этилацетат/гексан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями, с получением белой пены (0,084 г, 21%). ЭС/МС т/ζ (³⁵С1) 392,0 (М+1)⁺.

Пример 13. 3-(3-Хлор-5-метоксиметилтиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло [1,5а]пиримидин.

Высушенную в сушильном шкафу колбу заполняют 3-(5-бром-3-хлортиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидином ( 0,41, 1,0 ммоль) и безводным ТГФ (5 мл). Охлаждают до -70°С в инертной атмосфере и добавляют н-бутиллитий (2,5 М раствор гексана, 0,42 мл, 1,05 ммоль). Желтая реакция становится темно-красной. Добавляют йодметилметиловый эфир (0,09 мл, 1,10 ммоль) и оставляют реакционную массу нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом (100 мл), промывают водой (75 мл) и соляным раствором (75 мл). Органическую часть высушивают над безводным сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении до получения оранжевого масла. Образовавшийся остаток очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (20% этилацетат/гексан) - 0% гексан/100% (20% этилацетат/гексан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями, с получением желтого твердого вещества (0,107 г, 28%). ЭС/МС т/ζ (³⁵С1) 378,3 (М+1)⁺

Пример 14. Этиловый эфир 4-хлор-5-[7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3ил]тиофен-2-карбоновой кислоты.

Смесь 3-(5-бром-3-хлортиофен-2-ил)-7-(1 -этилпропил)-2,5-диметил пиразоло[1,5-а]пиримидина (0,62 г, 1,5 ммоль) в безводном ТГФ (5 мл) охлаждают до 0°С в инертной атмосфере и добавляют хлорид этилмагния (2 М раствор ТГФ, 0,83 мл, 1,65 ммоль). Реакционную массу перемешивают в течение 5 мин, нагревают до комнатной температуры и перемешивают еще 15 мин перед понижением температур реакции до 0°С. Добавляют этилцианоформат (0,16 мл, 1,58 ммоль), разбавленный в безводном ТГФ (1 мл). Реакционную массу нагревают до комнатной температуры и перемешивают 1 ч. Реакционную массу гасят насыщенным бикарбонатом натрия (20 мл) и экстрагируют эфиром (2x75 мл). Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (20% этилацетат/гексан) - 0% гексан/100% (20% этилацетат/гексан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями. Образовавшееся вещество высушивают в вакууме с получением белого твердого вещества (0,114 г, 19%). ЭС/МС т/ζ (³⁵С1) 406,3 (М+1)⁺

Приготовление 11. 2-(5-Бром-4-метилтиофен-2-ил)-6-метилпиридин.

2,0 М Литий диизопропиламид (9,76 мл, 19,52 ммоль) добавляют к охлажденному до -78°С раствору 2-бром-3-метилтиофена (2,0 мл, 17,75 ммоль) и ТГФ (30 мл). Через 45 мин добавляют ΖηΟ₂ (0,5 М в ТГФ, 39,0 мл, 19,50 ммоль) и перемешивают раствор в течение 30 мин. Добавляют 2-бром-6-метилпиридин (2,4 мл, 21,29 ммоль) и Ρά(ΡΡΓ₃)₄ (0,50 г, 0,44 ммоль). Раствор нагревают до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 2 ч. Реакционную массу промывают насыщенным раствором ΝΗ₄Ο (20 мл). Водную фазу промывают СН₂С1₂ (30 мл). Органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором ΝΗ₄Ο (20 мл), высушивают над №₂8О₄, фильтруют и концентрируют. Образовавшийся остаток очищают способом колоночной хроматографии с силикагелем (градиент 10%-20% ЕЮАе/гексан) с получением вышеназванного соединения (2,34 г, 49%). ЖХ-ЭС/МС т/ζ (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 267, 7/269, 5 (М+Н)⁺.

Приготовление 12. 3-Метил-5-(6-метилпиридин-2-ил)-тиофен-2-бороновая кислота.

2-(5-Бром-4-метилтиофен-2-ил)-6-метилпиридин (37,6 г, 0,14 моль) и триизопропилборат (34,2 г, 0,182 моль, 42,3 мл) растворяют в толуоле (100 мл) и ТГФ (160 мл) в атмосфере азота. Раствор охлаждают до -40°С. Медленно через воронку в течение 40 мин добавляют н-бутиллитий (2,5 М в гексане, 70 мл, 0,175 моль). Температура внутри раствора изменялась от -40 до -35°С. После завершения добавления смесь перемешивают при -40°С в течение 2 ч. Реакционную массу нагревают до 0°С и добавляют ТГФ (40 мл) и затем 2 N водный НС1 (120 мл) с образованием белого твердого вещества. Добавляют 1 Ν Να(.)Ι I до рН 7 и растворяют все соли. Органическую фазу отделяют, а водную фазу экстрагируют диэтиловым эфиром (3х). Органические фазы объединяют, высушивают над М§8О₄, фильтруют и концентрируют. К остатку добавляют ТГФ и затем гексан. Фильтруют образовавшийся желтый осадок и повторяют стадию осаждения несколько раз с получением вышеназванного соединения (19,7 г, 60%). 'Н ЯМР (СП₃ОЭ): δ 2,47 (ушир.с, 3Н), 2,61 (с, 3Н), 7,20 (д, 1=7,7 Гц, 1Н), 7,60 (ушир.с, 1Н), 7,64 (ушир.д, 1=7,7 Гц, 1Н), 7,75 (т, 1=7,7 Гц, 1Н).

Пример 15. 7-(1-Этилпропил)-2,5-диметил-3-[3-метил-5-(6-метилпиридин-2-ил)тиофен-2-ил]-пиразоло[1,5-а]пиримидин.

- 11 016056

Высушенную в сушильном шкафу колбу заполняют 2-(5-бороновая кислота-4-метилтиофен-2-ил)-6метил-пиридином (0,29 г, 1,24 ммоль), безводным толуолом (4 мл), абсолютным этанолом (1 мл), 2 М карбонатом натрия (1,1 мл, 2,2 ммоль) и 7-(1-этилпропил)-3-йод-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидином (0,25 г, 0,73 ммоль). Смесь дегазируют в течение 30 мин избыточным давлением аргона и добавляют бис(три-трет-бутилфосфин) палладий (0) (0,10 г, 0,086 ммоль). Реакционную массу нагревают при температуре рефлюкса в течение ночи на масляной бане (100°С) в инертной атмосфере. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры и разбавляют этилацетатом (75 мл) и водой (25 мл). Водную часть отделяют и экстрагируют этилацетатом (50 мл). Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Образовавшийся остаток очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (25% этилацетат/гексан) - 0% гексан/100% (25% этилацетат/гексан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями с получением грязно-белой пены (0,215 г, 73%). ЭС/МС т/ζ 405,4 (М+1)⁺.

Приготовление 13. 7-Бром-тиено[3,2-Ь]пиридин.

Тиено[3,2-Ь]пиридин-7-ол (5,00 г, 33 ммоль) и оксибромид фосфора (50 г, 174 ммоль) нагревают вместе при 110°С в течение 3 ч. Выливают горячую реакционную смесь в смесь льда и 5Ν ΝαΟΗ и экстрагируют СН₂С1₂. Органическую фазу высушивают над Να₂8Ο₄ и испаряют. Образовавшееся неочищенное вещество очищают, применяя хроматографическую колонку с силикагелем (гексан:Е1ОАС = 3:1), с получением вышеназванного соединения (4,19 г, 59%). ЭС/МС т/ζ (⁸¹Вг) 215 (М+).

Приготовление 14. Тиено[3,2-Ь]пиридин.

7-Бром-тиено[3,2-Ь]пиридин (3,69 г, 17 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (20 мл) и охлаждают до -78°С. К смеси при -78°С медленно добавляют н-ВиП (1,6 М в гексане, 21,2 мл, 34 ммоль) и перемешивают при -78°С в течение 20 мин. Добавляют МеОН/Н₂О=1/1 (20 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь экстрагируют СН₂С1₂. Органическую фазу промывают насыщенным раствором ΝαΟ, высушивают над Να₂8Ο₄ и испаряют. Образовавшийся остаток очищают методом хроматографии на силикагеле, элюируя смесью 100% гексан гексан: этилацетат = 10:1, с получением вышеназванного соединения (1,44 г, 62%). ЭС/МС т/ζ 136 (М+1) .

Приготовление 15. 3-Бромтиено[3,2-Ь]пиридин.

Смешивают тиено[3,2-Ь]пиридин (3,45 г, 25,6 ммоль), натрия бикарбонат (2,15 г, 25,6 ммоль), К₂НРО₄ (6,69 г, 38,4 ммоль) и М§8О₄ (4,01 г, 33,3 ммоль) в СНС1₃ (60 мл). Смесь перемешивают при температуре рефлюкса и медленно добавляют Вг₂ (1,57 мл, 30,7 ммоль). Реакционную массу перемешивают при температуре рефлюкса в течение ночи. Добавляют дополнительное количество брома (0,7 мл) и перемешивают реакционную массу при температуре рефлюкса в течение 4 ч. Охлаждают до комнатной температуры, добавляют воду и экстрагируют СНС1₃. Органическую фазу промывают насыщенным раствором Να₂8₂Ο₃ и насыщенным соляным раствором. Высушивают над Να₂8Ο₄ и испаряют. Вещество перекристаллизовывают из смеси гексан/СН2С12 с получением вышеназванного соединения (3,94 г, 72%). ЭС/МС т/ζ (⁸¹Вг) 215 (М+).

Приготовление 16. 3-Метилтиено[3,2-Ь]пиридин.

Подготавливают три реакционные пробирки, которые можно применять в СВЧ-печи, содержащие 3-бром-тиено[3,2-Ь]пиридин (214 мг, 1,0 ммоль) и метилбороновую кислоту (180 мг, 3,0 ммоль) в смеси ДМЭ (диметоксиэтан)/вода/ ЕЮН = 7/3/1 (4 мл).

Добавляют 2 М Να^Ο₃ (1,5 мл, 3,0 ммоль) и барботируют атмосфере азота в течение 15 мин. Добавляют Р0(РРй₃)₄ (58 мг, 0,05 ммоль) и запаивают пробирки. Пробирки нагревают при 130°С в течение 30 мин в СВЧ-печи. Объединяют все реакционные смеси, добавляют воду и СН₂С1₂ и экстрагируют. Фазу СН₂С1₂ отделяют, высушивают над Να₂8Ο₄, фильтруют и испаряют. Образовавшееся вещество очищают методом хроматографии на силикагеле, элюируя смесью гексан :этилацетат:2 М ΝΠ₃ в МеОН = 20:4:1, с получением вышеназванного соединения (193 мг, 43%. ЭС/МС т/ζ 150 (М+1) .

Пример 16. 7-(1-Этилпропил)-2,5-диметил-3-(3-метилтиено[3,2-Ь]пиридин-2-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин.

Высушенную в сушильном шкафу колбу Щренка заполняют 3-метилтиено[3,2-Ь]пиридином (0,213 г, 1,42 ммоль) и безводным ТГФ (5 мл) и охлаждают до -78°С в инертной атмосфере. Добавляют нбутиллитий (2,5 М гексан, 0,72 мл, 1,78 ммоль) и перемешивают при пониженной температуре в течение 30 мин. Добавляют безводный хлорид цинка в одну аликвоту (0,58 г, 4,26 ммоль) и перемешивают 15 мин при пониженной температуре. Реакционную массу оставляют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают еще 30 мин. Реакционную массу разбавляют безводным ТГФ (5 мл) и добавляют 7(1-этилпропил)-3-йод-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин (0,406 г, 0,08 ммоль). Дегазируют 15 мин

- 12 016056 избыточным давлением аргона и добавляют дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(11) дихлорметан (0,093 г, 0,114 ммоль). Реакционную массу нагревают при температуре рефлюкса в течение ночи на масляной бане (90°С) в инертной атмосфере. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, гасят насыщенным хлоридом аммония и разбавляют этилацетатом (75 мл). Водную часть отделяют и экстрагируют этилацетатом (50 мл). Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (15% этилацетат/гексан) - 0% гексан/100% (15% этилацетат/гексан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями, с получением белой пены (0,059 г, 14%). ЭС/МС т/ζ 365,0 (М+1)⁺.

Пример 17. 3-[3-Метил-5-(2-метил-2Н-[1,2,4]триазол-3-ил)тиофен-2-ил]-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин.

Высушенную в сушильном шкафу колбу заполняют 1-метил-1,2,4-триазолом (0,320, 3,81 ммоль), безводным ТГФ (10 мл) и охлаждают до -78°С в инертной атмосфере. Добавляют н-бутиллитий (2,5 М гексан, 1,52 мл, 3,81 ммоль) и перемешивают при пониженной температуре в течение 30 мин. Добавляют безводный хлорид цинка (1,06 г, 7,75 ммоль) в одну аликвоту и перемешивают 15 мин при пониженной температуре. Реакционную массу оставляют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают еще 30 мин. К реакции добавляют 3-(5-бром-3-метилтиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло [1,5-а] пиримидин (0,50 г, 1,27 ммоль) в безводном ТГФ (5 мл). Дегазируют в течение 15 мин избыточным давлением аргона и добавляют дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий (II) дихлорметан (0,147 г, 0,127 ммоль). Реакционную массу нагревают при температуре рефлюкса в течение ночи на масляной бане (90°С) в инертной атмосфере. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, гасят насыщенным хлоридом аммония и разбавляют этилацетатом (75 мл). Водную часть отделяют и экстрагируют этилацетатом (50 мл). Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (40% ТГФ/гексан) - 0% гексан/100% (40% ТГФ/гексан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями. Образовавшееся вещество растирают в порошок со смесью гексан/эфир (3:1) с получением белого твердого вещества (0,371 г, 74%). ЭС/МС т/ζ 395,0 (М+1)⁺.

Пример 18. 3-(5-Нитро-3-метилтиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин.

3-(3-Метилтиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин (0,419 г, 1,33 ммоль) растворяют в дихлорметане (2,5 мл), перемешивают в инертной атмосфере, охлаждают на ледяной бане до 0°С и добавляют трифторуксусную кислоту (5 мл). К реакции по каплям добавляют концентрированную (70%) азотную кислоту (0,132 г, 1,47 ммоль). Цвет раствора изменяется от желтого до темно-зеленого. Перемешивают 1 ч в инертной атмосфере на ледяной бане и подтверждают завершение реакции способом ТСХ. Реакционную массу разбавляют дихлорметаном (80 мл) и гасят насыщенным бикарбонатом натрия. Водную основную фазу отделяют и экстрагируют дихлорметаном (50 мл). Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Образовавшийся остаток очищают способом флэщ-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (30% этилацетат/гексан) - 0% гексан/100% (30% этилацетат/гексан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями, с получением желтого твердого вещества (0,363 г, 76%). ¹Н ЯМР (400 МГц, ΟΌΟ1₃): δ 7,81 (с, 1Н), 6,51 (с,1Н), 3,62-3,58 (м, 1Н), 2,56 (с, 3Н), 2,48 (с, 3Н), 2,18 (с, 3Н), 1,881,70 (м, 4Н), 0,88 (т, 1=7,5 Гц, 6Н).

Пример 19. №{5-[7-(1-Этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил]-4-метилтиофен-2ил}ацетамид.

3-(5-Нитро-3-метилтиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин (0,33 г, 0,92 ммоль) растворяют в ТГФ (10 мл) с применением 10% палладия на углероде (0,10 г), дегазируют в вакууме/потоком водорода (3х) и перемешивают в атмосфере водорода (55 ρκί) при комнатной температуре в течение 3 ч. Завершение реакции подтверждают способом ТСХ. Реакционную массу разбавляют ТГФ (50 мл) и фильтруют через слой диатомовой земли с последующим концентрированием до получения неочищенного оранжевого масла (0,328 г). Масло растворяют в дихлорметане (4 мл) и 1,0 М ΝαΟΗ (1 мл). К реакции добавляют ацетилхлорид (0,038 мл, 0,52 ммоль) и перемешивают в запаянном реакционном сосуде при комнатной температуре в течение субботы и воскресенья. Реакционную массу разбавляют дихлорметаном (100 мл) и промывают водой. Органическую фазу собирают, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении до получения красного масла. Масло очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (15% этилацетат/10% 7 N аммонизированный метанол/75% гексан) - 0% гексан/100% (15% этилацетат/10% 7 N аммонизированный метанол/75% гексан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями, с получением коричневой пены (0,048 г, 26%). ЭС/МС т/ζ 371,0 (М+1)⁺.

Пример 20. 3-[3-Хлор-5-(2-метил-2Н-[1,2,4]триазол-3-ил)тиофен-2-ил]-7-(1-пропилбутил)-2,5диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин.

- 13 016056

Высушенную в сушильном шкафу колбу заполняют 1-метил-1,2,4-триазолом (0,120, 1,43 ммоль) и безводным ТГФ (5 мл) и охлаждают до -78°С в инертной атмосфере. Добавляют н-бутиллитий (2,5 М гексан, 0,60 мл, 1,43 ммоль) и перемешивают при пониженной температуре в течение 30 мин. Добавляют безводный хлорид цинка (0,400 г, 2,90 ммоль) в одну аликвоту и перемешивают 15 мин при пониженной температуре. Реакционную массу оставляют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают еще 30 мин. К реакции добавляют 3-(5-бром-3-хлортиофен-2-ил)-7-(1-пропилбутил)-2,5-диметилпиразоло[1,5а] пиримидин (0,500 г, 1,27 ммоль) в безводном ТГФ (5 мл). Дегазируют 15 мин избыточным давлением аргона и добавляют тетракис(трифенилфосфин) палладий(0) (0,060 г, 0,052 ммоль). Нагревают при температуре рефлюкса в течение ночи на масляной бане (90°С) в инертной атмосфере. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, гасят насыщенным хлоридом аммония и разбавляют этилацетатом (75 мл). Водную фазу отделяют и экстрагируют этилацетатом (50 мл). Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении.

Образовавшийся остаток очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (25% ТГФ/гексан) - 0% гексан/100% (25% ТГФ/гексан) при ступенчатом градиенте с 20% приращениями, с получением желтого твердого вещества (0,140 г, 66%). ЭС/МС т/ζ (³⁵С1) 441,7 (М+1)⁺.

Следующее соединение получают по существу, как описано в примере 20.____________

Пример Νο.	Химическое название	МС (т/ζ)
21	3-[З-Хлор-5-(2-метил-2Я- [1,2,4]триазол-3-ил)-тиофен-2-ил]-7изопропил-2,5-диметил- пиразоло[1,5а]пиримидин	387,0 (М+1)+

Приготовление 17. 2-Бром-5-фтор-3-метилбензо[Ъ]тиофен.

Раствор 5-фтор-3-метилбензо[Ъ] тиофена (50,32 г, 0,303 моль) в ацетонитриле (350 мл) обрабатывают при механическом перемешивании Ν-бромсукцинимидом (56,32 г, 0,318 моль, 1,05 эк.). Начальный эндотерм понижает температуру реакции до 17°С. Затем последующий эндотерм увеличивает температуру реакции до 40°С в течение 10-минутного периода, во время которого реакционную массу охлаждают до 18-20°С путем применения водяной бани со льдом. Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре в течение еще 35 мин и образовавшуюся суспензию медленно разбавляют водой (350 мл). Суспензию перемешивают в течение 10 мин. Продукт фильтруют, промывая смесью 50:50 ацетонитрил:вода (100 мл) и высушивают с образованием бесцветного кристаллического твердого вещества (65,56 г, 88%).

Пример 22. 3-(5-Фтор-3-метилбензо[Ъ]тиофен-2-ил)-7-изопропил-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин.

Высушенную в сушильном щкафу колбу заполняют 2-бром-5-фтор-3-метилбензо[Ъ]тиофеном (0,490, 2,00 ммоль) и безводным ТГФ (5 мл) и охлаждают до -50°С в инертной атмосфере. Добавляют по каплям н-бутиллитий (2,5 М гексан, 0,80 мл, 2,0 ммоль) в одну аликвоту и перемешивают 30 мин. Добавляют безводный хлорид цинка (0,550 г, 4,00 ммоль) и перемешивают 30 мин при пониженной температуре. Реакционную массу оставляют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают еще 30 мин. Добавляют 7-изопропил-3-йод-2,5-диметил-пиразоло[1,5а] пиримидин (0,316 г, 1,00 ммоль) в безводном ТГФ (5 мл). Дегазируют 15 мин избыточным давлением аргона и добавляют дихлор [1,1'-бис(дифенилфосфино) ферроцен] палладий (II) дихлорметан (0,082 г, 0,1 ммоль). Нагревают при температуре рефлюкса в течение ночи на масляной бане (90°С) в инертной атмосфере. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, гасят насыщенным хлоридом аммония и разбавляют этилацетатом (75 мл). Водную часть отделяют и экстрагируют этилацетатом (50 мл). Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Образовавшийся остаток очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (20%

- 14 016056 этилацетат/гексан) - 0% гексан/100% (20% этилацетат/гексан) при ступенчатом градиенте с 20% приращениями, с получением грязно-белой пены (0,206 г, 58%). ЭС/МС ш/ζ 354,0 (М+1)⁺.

Следующие соединения получают по существу, как описано в примере 22.

Пример Νο. Химическое название | МС (т/ζ) |

23	7-(1-Этил-пропил)-3-(5-фтор-Зметил-бензо[Ь]тиофен-2-ил)-2,5диметил-пиразоло[1,5-а]пиримидин	(АРС1) 382,2 (М+1)+
24	7-(1-Пропил-бутил)-3-(5-фтор-Зметил-бензо[Ь]тиофен-2-ил)-2,5диметил-пиразоло[1,5-а]пиримидин	(АРС1) 410,0 (М+1)+

Приготовление 18. Бороновая кислота, 5-фтор-3-метилбензо[Ь]тиофен-2-ил.

В сухой колбе смешивают 5-фтор-3-метилбензо[Ь]тиофен (312 мг, 1,88 ммоль) с сухим ТГФ (4 мл). Охлаждают до -78°С и добавляют н-бутиллитий (1,6 N в гексане, 1,18 мл, 1,90 ммоль). Перемешивают 1,5 ч при -78°С и затем добавляют триметилборат (0,23 мл, 2,02 ммоль). Перемешивают 3 ч и оставляют баню нагреваться до -20°С. Добавляют 5Ν соляную кислоту до тех пор, пока реакция не станет кислой (рН = 4). Разбавляют водой и экстрагируют этилацетатом (3х). Органические фазы смешивают, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и испаряют. Растирают в порошок в метиленхлориде с получением белого твердого вещества (258 мг, 65%). ЭС/МС ш/ζ 209 (М-1)'.

Пример 25. 7-Бутил-3-(5-фтор-3-метилбензо[Ь]тиофен-2-ил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин.

Тетракис(трифенилфосфин)палладий (0) (31 мг, 0,03 ммоль) и 7-бутил-3-йод-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин (174 мг, 0,53 ммоль) добавляют к дегазированному безводному ТГФ (10 мл). Смесь перемешивают в течение 10 мин. Добавляют 2-бороновую кислоту-5-фтор-3-метил-бензо[Ь]тиофен (111 мг, 0,53 ммоль) и водный раствор карбоната натрия (112 мг, 1,06 ммоль в 5 мл воды). Смесь нагревают до 70°С в течение 24 ч. Охлаждают до комнатной температуры. Разбавляют эфиром, затем промывают водой и соляным раствором. Органическую фазу высушивают над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают способом ВЭЖХ, элюируя смесью ацетонитрил/вода/ТФК с получением вышеназванного соединения (55 мг, 28%). ЭС/МС ш/ζ 368 (М+1)⁺.

Приготовление 19. 4-Хлор-тиофен-2-карбонитрил.

22-л реакционную колбу оборудуют охлаждающей ванной, воздушной мешалкой, газовой трубкой и температурным датчиком. Колбу очищают азотом, затем заполняют А1С1₃ (1025 г, 7,69 молей) и СНС1₃ (6,6 л, 16,5 об.). Смесь охлаждают до 0-5°С и по каплям через воронку добавляют 2-тиофенкарбонитрил (400 г, 3,66 моля) в течение 10-15 мин, поддерживая температуру при < 10°С. В нижний слой смеси вводят газообразный С1₂ (300 г, 4,23 моля, 1,16 эк.) при < 10°С в течение 1,25 ч. Протекание реакции контролируют способом газовой хроматографии (ГХ). Аликвоту реакционной смеси гасят в 6Ν НС1, экстрагируют ЕЮАс, высушивают над №₂8О₄, фильтруют и вводят фильтрат.

Когда реакция согласно данным ГХ анализа завершается (считают, что реакция завершена, когда соотношение (исходное вещество:продукт:дихлорсодержащее вещество) составляет приблизительно (1:5,8:1) по площади, %, ГХ пиков), по каплям через воронку добавляют 6 N НС1 (8,0 л) в течение 1,5 ч, поддерживая температуру при < 20°С. Добавление НС1 является чрезвычайно экзотермическим и вызывает выделение газа. Реакционную массу переносят в делительную воронку и фазы разделяют. Водную фазу экстрагируют СНС1₃ (4,0 л), фазы с хлороформом объединяют и промывают водой (6,0 л). Органическую фазу высушивают над №₂8О₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением бледножелтого полутвердого вещества (575 г, 109%). ГХ (температурный градиент 60-280°С) Анализ площадей в % показывает приблизительно 68% продукта (!_1е1 =6,5 мин), при этом основными примесями являются непрореагировавшее исходное вещество (1_ге1 = 5,1 мин) и дихлорсодержащий продукт (1_ге1 = 7,4 мин). Способ ГХ: колонка: ΌΒ1; Т_ввода = 300°С ; Т_нач. = 60°С, ΐ = 2,0 мин; Т_кон. = 280°С, скорость = 18°С /мин.

Приготовление 20. 4-Хлор-2-тиофен карбоксамид.

22-л реакционную колбу оборудуют охлаждающей ванной, воздушной мешалкой и температурным датчиком и заполняют КОН (288,6 г, 5,143 молей) и водой (6,04 л) с образованием раствора, который проявляет экзотермический эффект до примерно 31°С. Раствор оставляют охлаждаться до примерно 28°С и добавляют в смесь 4-хлор-2-тиофен карбонитрил (671,3 г, 4,675 моля) (небольшое количество твердых веществ не растворяется). Добавляют ΕΐΟΗ (675 мл), во время добавления происходит постепенное экзотермическое выделение тепла, которое продолжается в течение 1-1,5 ч, при этом температура достигает примерно 38°С. Реакционную массу перемешивают при температуре окружающей среды в течение ночи. Реакционную смесь фильтруют в вакууме, промывают водой и высушивают с получением неочищенного продукта. Твердое вещество растворяют в ЕЮАс (10,0 л), обрабатывают №₂8О₄ и активированным древесным углем в течение 1-2 ч, затем фильтруют и промывают ЕЮАс. Фильтрат концентрируют в роторном испарителе при 45°С до тех пор, пока твердое вещество не начнет осаждаться. Отключают вакуум и увеличивают температуру до 60-65°С для повторного растворения твердого вещества. При перемешивании при 60°С медленно добавляют гептан (3,5 л) для осаждения твердого вещества. Перемешивают в течение 15-20 мин при 60°С, затем смесь охлаждают до 30-40°С и фильтруют. Твердое

- 15 016056 вещество промывают гептаном (2x0,75 л) и высушивают с получением вышеназванного соединения в виде белого твердого вещества (235,4 г, 31%). Из фильтрата получают вторую порцию (67,8 г, 9%).

Приготовление 21. 4-Хлор-№диметиламинометилен-2-тиофен карбоксамид.

5-л реакционную колбу оборудуют колбонагревателем, воздушной мешалкой, аппаратом ДинСтарка и температурным датчиком. Заполняют 4-хлор-2-тиофенкарбоксамидом (300 г, 1,856 моль) и диметилформамид диметилацеталом (872 мл) для образования суспензии. Смесь постепенно нагревают до 96°С, собирая дистиллят (главным образом, МеОН). Удаляют колбонагреватель и охлаждают до < 25°С. Через воронку добавляют воду (3,0 л) и поддерживают температуру при < 35°С. Реакционную смесь экстрагируют ЕЮАс (3,0 л, 1,5 л). Органические фазы объединяют и промывают водой (1,5 л). Органическую фазу высушивают над Nа₂8О₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением неочищенного продукта (400 г).

Вещество растворяют в ЕЮАс (320 мл, 0,8 об.) при 50-60°С. Медленно добавляют гептан (1700 мл, 4,25 об.), постепенно увеличивая температуру до 70°С. К мутному раствору добавляют затравочный кристалл для инициации осаждения. Образовавшуюся смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, затем фильтруют и промывают гептаном. Твердое вещество высушивают с получением вышеназванного соединения в виде белого твердого вещества (329,8 г, 82%).

Приготовление 22. 5-(4-Хлортиофен-2-ил)-1-метил-¹Н-[1,2,4] триазол.

3-л реакционную колбу оборудуют охлаждающей баней, воздушной мешалкой и температурным датчиком и заполняют 4-хлор-№диметиламинометилен-2-тиофен-карбоксамидом (155 г, 0,715 моль) и НОАс (1500 мл) с образованием раствора. С помощью водяной охлаждающей бани со льдом поддерживают температуру при <30°С, по каплям через воронку добавляют метилгидразин (33,2 г, 0,721 моль) в течение 15-20 мин с образованием светло-желтой суспензии. Реакционную массу постепенно нагревают до 90°С и выдерживают при 90°С в течение 30 мин. Смесь анализируют способом ГХ, затем реакционную массу охлаждают до примерно 70°С и концентрируют до получения вязкого масла/суспензии. Медленно добавляют воду (1,67 л) для осаждения твердого вещества, смесь охлаждают до <30°С, фильтруют и промывают водой (1,67 л). Влажное твердое вещество (125,8 г) растворяют в теплом третбутилметиловом эфире (1,64 л), высушивают над №₂8О₄, фильтруют и концентрируют до сухости с получением вышеназванного соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (85,8 г, 60%).

Приготовление 23. 5-(5-Бром-4-хлор-тиофен-2-ил)- 1-метил-¹Н-[1,2,4]триазол.

3-л реакционную колбу оборудуют охлаждающей баней, воздушной мешалкой и температурным датчиком и заполняют 5-(4-хлор-тиофен-2-ил)-1-метил-1Н-[1,2,4]триазолом (105,3 г, 0,527 моль), ацетонитрилом (1053 мл) и НОАс (105 мл) с образованием раствора. Порциями добавляют Ν-бромсукцинимид (103,2 г, 0,580 моль) в течение 30-60 мин, поддерживая температуру при <31°С. Перемешивают в течение 1 часа, во время которого ГХ анализ указывает на завершение реакции. Реакционную смесь выливают в воду (2,1 л, 20 об. ), перемешивают в течение 30 мин, фильтруют и промывают водой (2x1 л). Вещество высушивают в вакуумной печи при 45°С в течение ночи с получением вышеназванного соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (123,0 г, 84%).

Пример 26. 7-Бутил-3-[3-хлор-5-(2-метил-2Н-[1,2,4]триазол-3-ил)-тиофен-2-ил]-2,5-диметилпиразоло [1,5- а] пиримидин.

5-(5-Бром-4-хлор-тиофен-2-ил)-1-метил-1Н-[1,2,4]триазол (169 мг, 0,61 ммоль) добавляют к безводному ТГФ (5 мл). Охлаждают до -78°С Добавляют трет-бутиллитий (0,81 мл, 1,37 ммоль, 1,7 М в пентане). Перемешивают в течение 45 мин и затем медленно добавляют хлорид цинка (1,5 мл, 1,7 6 ммоль, 0,5 М в ТГФ). Перемешивают в течение 5 мин, затем нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 15 мин. Добавляют бис(три-трет-бутилфосфин)палладий (0) (62 мг, 0,12 ммоль) и 7-бутил-3йод-2,5-диметил-пиразоло[1,5-а]пиримидин (200 мг, 0,61 ммоль). Нагревают для орошения в течение ночи. Реакционную массу фильтруют через слой целита (Се1Пе ®) и концентрируют до сухости. Очищают способом колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя смесью 0-50% этилацетата в гексане, с получением вышеназванного соединения (36 мг, 15 %). ЭС/МС т/ζ (³⁵С1) 401 (М+1)⁺.

Пример 27. {5-[7-(1-Этилпропил)-2,5-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил]-4-метилтиофен-2ил}диметиламин гидрохлорид 3-(5-Нитро-3-метилтиофен-2-ил)-7-(1-этилпропил)-2,5-диметилпиразоло [1,5 а] пиримидин (0,36 г, 1,0 ммоль) растворяют в ТГФ (5 мл) с применением 10% палладия на углероде (0,20 г), дегазируют в вакууме/потоком водорода (3х) и перемешивают в атмосфере водорода (55 ρδί) при комнатной температуре в течение 3 ч. Завершение реакции подтверждают способом ТСХ. Реакционную массу разбавляют ТГФ (50 мл) и фильтруют через слой СеШе®. Добавляют гидрид натрия в виде 60%

- 16 016056 дисперсии в масле (0,10 г, 2,25 ммоль) и перемешивают 20 мин при комнатной температуре. К реакции добавляют йодметан (0,140 мл, 2,25 ммоль) и перемешивают в запаянном реакционном сосуде в течение ночи при 50°С. Реакционную массу гасят водой и разбавляют этилацетатом (100 мл). Органическую фазу промывают водой, насыщенным хлоридом аммония и соляным раствором. Высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении до получения масла. Образовавшийся остаток очищают способом флэш-хроматографии, элюируя смесью 100% гексан/0% (25% этилацетат/гексан) - 0% гексан/100% (25% этилацетат/гексан) при ступенчатом градиенте с 10% приращениями, с получением пены (0,145 г, 41%). Вещество растворяют (0,13 г, 0,365 ммоль) в метаноле (3 мл) и добавляют 4,0 М НС1-диоксан (3 мл). Реакционную массу перемешивают 30 мин и продувают избыточным давлением азота. Высушивают в вакуумной печи с получением белого твердого вещества (0,125 г). ЭС/МС т/ζ 357,2 (М+1)⁺.

Пример А. Оценка эффективности ίη νίνο с применением связывания ех νίνο.

С целью оценки эффективности ίη νίνο, соединение согласно настоящему изобретению исследуют методом связывания ех νίνο. Следуя процедурам, описанным в Ό. К. СеЫей е( а1., Е1Р 509: 145-153 (2005), соединение вводят крысам пероральным путем. Затем оценивают ех νίνο связывание ¹²⁵1саважина (хаихадте) с мозжечком, как описано в СеЫей е( а1. Например, соединение примера 20 обеспечивает 74% ингибирование в дозе 10 мг/кг.

Пример В. Тест на связывание на СКЕ1 фильтрах.

Ограничения экспрессии СКЕ1 человека на основе плазмид, относящиеся к получению линии рекомбинантных клеток с плотностью рецепторов, достаточной для проведения анализа связывания, обходят путем применения системы экспрессии Р1юеЫ.х на основе ретровируса, по лицензии Стэндфордского университета. Для получения мембран используют стабильную клеточную линию НЕК-1СКЕ1, и реакционную смесь для анализа связывания (200 мкл) готовят следующим образом: 50 мкл ¹²⁵1-саважина (0,2 нМ конечн.), 50 мкл соединения и 100 мкл мембраны СКЕ1 (25 мкг/реакционную смесь). Реакционные смеси инкубируют при комнатной температуре в течение 2 ч и затем завершают путем фильтрации через предварительно обработанные стекловолоконные фильтровальные планшеты ЕВ Мб^юю (96 лунок). Планшеты дважды промывают охлажденным льдом буфером для анализа (50 мМ ТРИС, 12,5 мМ №С1, 1мМ ΕΌΤΑ, 10 мМ МдС1₂, 0,05% В8А, рН 7,2), высушивают на воздухе в течение ночи и анализируют в счетчике МюгоВйа, применяя 100 мкл М|сгохст1 40. Неспецифическое связывание (Ν8Β) определяют в присутствии 0,5 мкМ немеченого саважина. Как правило, проводят трехкратное измерение и с помощью программы Стар! Раб Рпхт строят график по медианам экспериментальных точек.

При применении указанного метода, приведенные в настоящем изобретении в качестве примера соединения (за исключением соединений примеров 2, 3, 6, 7 и 8, которые применяли в качестве промежуточных веществ для получения соединений других примеров и не исследовали) ингибируют связывание ¹²⁵1-саважина (4 нМ) в клетках, культивируемых во флаконе/прикрепленных клетках с К₁ (константа ингибирования) < 500 нМ. Например, соединение примера 20 имеет К₁ 4,4 нМ.

Пример С. Тест на связывание на СКЕ2 фильтрах.

Ограничения экспрессии СКЕ1 человека на основе плазмид, относящиеся к получению линии рекомбинантных клеток с плотностью рецепторов, достаточной для проведения анализа связывания, обходят путем применения системы экспрессии Р1юеЫ.х на основе ретровируса, по лицензии Стэндфордского университета. Для получения мембран используют стабильную клеточную линию НЕК-1СКЕ1, и реакционную смесь для анализа связывания (200 мкл) готовят следующим образом: 50 мкл ¹²⁵1-саважина (0,2 нМ-конечная концентрация.), 50 мкл соединения и 100 мкл мембраны СКЕ2 (25 мкг/реакционную смесь). Реакции инкубируют при комнатной температуре в течение 2 ч и затем завершают путем фильтрации через предварительно обработанные стекловолоконные фильтровальные планшеты ЕВ Μί11ίροΐΌ (96 лунок). Планшеты дважды промывают охлажденным льдом буфером для анализа (50 мМ ТРИС, 12,5 мМ ЖС1, 1мМ ΕΌΤΑ, 10 мМ МдС1₂, 0,05% В8А, рН 7,2), высушивают на воздухе в течение ночи и считывают показания в счетчике МюгоВе1а с использованием 100 мкл Мюгохст! 40. Неспецифическое связывание (МВ) определяют в присутствии 0,5 мкМ немеченого саважина. В качестве альтернативы соединения оценивают методом сцинтилляционного приближения (8стб11а1юп РгохипНу аххау). Этот метод реализуют следующим образом: 50 мкл ¹²⁵1-саважина (конечная концентрация 0,2 нМ), 50 мкл соединения или немеченого саважина (МВ) и 100 мкл, содержащих 250 мкг гранул агглютинина из проростков пшеницы (АСА), частицы 8РА и мембрану СКЕ2 (1,5 мкг/реакционную смесь). Планшеты инкубируют в течение 4-5 ч при комнатной температуре и затем центрифугируют при 200 X г в течение 10 мин. Связанную радиоактивность оценивают с применением сцинтилляционного счетчика Аа11ас ТпЫ.х. Как правило, связывание оценивают путем трехкратного измерения, и с помощью программы Сгарй Раб Рпхт строят график по медианам экспериментальных точек.

Первоначально соединения подвергаются скринингу при фиксированной концентрации, и, если отмечается существенная активность, дополнительно получают кривые концентрация - отклик.

Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно проявляют слабую аффинность к СКЕ2 рецептору (относительно СКЕ1). Например, соединения примера 20 демонстрируют 3 9% ингибирование при концентрации 50 мкМ.

- 17 016056

Пример О. Биодоступность и фармакокинетические свойства.

Объем распределения (V _расп.) связывает количество лекарственного препарата в организме с концентрацией этого препарата в крови или плазме. Объем распределения относится к объему жидкостей (организма), необходимому для того, чтобы вместить суммарное количество лекарственного препарата, чтобы при этом его концентрация была равна его концентрации в крови или плазме: V _расп. = содержание лекарственного препарата в организме/концентрация лекарственного препарата в крови или плазме (Оообтап и ОШтап'з). Для дозы 10 мг и концентрации в плазме 10 мг/л объем распределения составил бы 1 л. Объем распределения отражает степень присутствия лекарственного препарата в экстраваскулярной ткани. Большой объем распределения отражает склонность соединения связываться с компонентами ткани по сравнению со связыванием с белками плазмы. В клинических условиях V _расп. можно применять для определения ударной дозы для достижения равновесной концентрации.

Для изучения объема распределения самцам крыс Зргадие 1)а\\'1еу (N=3) вводят однократно внутривенным путем дозу соединения, равную 1 мг/кг. Многократно отбирают пробы плазмы в моменты времени от 0,08 до 24 часов после введения дозы. Пробы плазмы анализируют методами ЖХ/МС/МС и определяют концентрацию соединения в плазме. Выполняют фармакокинетические расчеты с целью определения параметров фармакокинетики, в том числе V _расп. и клиренса из плазмы (С1р).

Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно имеют более благоприятные характеристики биологической доступности, чем другие антагонисты СКВ, например, СР154526 (8сйик е1 а1., Ргос. N11. Асаб. 8с1. (И8А), 93:10477 (1996)) и ΝΒΙ30775 (Сйеп е1 а1., Эгид Оеуе1ортеп1 Кезеагсй, 65:216 (2005)).

Claims (9)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы Ι

   Формула I отличающееся тем, что

   К¹ и К² независимо представляют собой водород или С₁-С₃алкил; К³ представляет собой или

   К⁴ представляет собой С1 или метил;

   К⁵ представляет собой водород, Вг, нитро, метокси, метоксиметил, диметиламино, этоксикарбонил, ацетамидо, ,Ν или ацетокси, или его фармацевтически приемлемая соль.
2. 2. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, отличающееся тем, что К¹ и К² независимо представляют собой этил или н-пропил.
3. 3. Соединение по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, отличающееся тем, что К³ представляет собой

   5.

   или
4. 4. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что К⁵ представляет собой метокси, метоксиметил, диметиламино или
5. 5. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-4, или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый наполнитель.

   - 18 016056
6. 6. Применение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения алкоголизма или токсикомании.
7. 7. Применение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения депрессии или состояния тревоги.
8. 8. Применение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения состояния тревоги или депрессии.
9. 9. Применение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения алкоголизма или токсикомании.