JP2010504343A - チオフェンピラゾロピリミジン化合物 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)R1およびR2が独立にエチルまたはn−プロピルである、式Iの化合物またはその薬理学的に許容できる塩;
(b)R3が
(d)うつ病または神経不安症を治療するための式Iの化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用;
(e)アルコール濫用または薬物濫用を治療するための式Iの化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用;
(f)CRF1結合について500nM以下のKi値を示す式Iの化合物またはその薬理学的に許容できる塩;
(g)CRF1結合について50nM以下のKi値を示す式Iの化合物またはその薬理学的に許容できる塩;
(h)CRF1結合について5nM以下のKi値を示す式Iの化合物またはその薬理学的に許容できる塩;
(i)CRF1結合について500nM以下のKi値を示し、かつCRF2よりもCRF1に対して選択的に結合する(すなわち、より小さいKi)式Iの化合物またはその薬理学的に許容できる塩;
(j)CRF1結合について50nM以下のKi値を示し、かつCRF2よりもCRF1に対して選択的に結合する(すなわち、より小さいKi)式Iの化合物またはその薬理学的に許容できる塩;
(k)CRF1結合について5nM以下のKi値を示し、かつCRF2よりもCRF1に対して選択的に結合する(すなわち、より小さいKi)式Iの化合物またはその薬理学的に許容できる塩;ならびに/あるいは
(l)公知のCRFアンタゴニスト(例えば、CP154526およびNBI30775)よりも優れたバイオアベイラビリティプロフィールを有する式Iの化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
本発明の化合物のすべては、例えば以下のスキームに示す合成経路に従って化学的に調製することができる。しかしながら、以下の考察は、本発明の範囲を限定することは決して意図されていない。例えば、記載された経路の各々についての具体的な合成ステップは、式(I)のさらなる化合物を調製するために、異なる様式で組み合わせてもよいし、異なるスキームからのステップと関連させて組み合わせてもよい。各ステップの生成物は、抽出、エバポレーション、沈殿、クロマトグラフィ、濾過、粉末化、結晶化などを含めた従来の方法によって回収することができる。下記のスキームでは、すべての置換基は、別段の記載がない限り、これまで定義されたとおりであり、適切な試薬は、当該分野で周知であり、かつ認識されている。
2,5−ジメチル−4H−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−7−オン
温度を25−28℃に維持しながら、アセト酢酸エチル(128g、0.98mol)を5−メチル−2H−ピラゾール−3−イルアミン(100g、0.95mol)の酢酸溶液(500mL)に滴下した。この混合物を還流状態で10時間加熱し、室温まで冷却した。この反応液を、温度を10℃より低く保って、5℃に冷却したtert−ブチルメチルエーテル(5L)に加えた。5℃で1時間撹拌し、濾過した。生成した物質を真空中で一晩乾燥し、白色固体(158g、96%)を得た。
7−クロロ−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
トルエン(150mL)中の2,5−ジメチル−4H−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−7−オン(10.0g、61.3mmol)の懸濁液にN,N−ジメチルアニリン(9.7mL、76.7mmol)を加えた。オキシ塩化リン(11.2mL、122.6mmol)をこの白色懸濁液に滴下した。不活性雰囲気下で3時間還流させ、室温まで冷却し、減圧を使用してこの反応液を褐色油状物にまで濃縮した。この油状物を酢酸エチル(250mL)に溶解し、1N NaOHを用いて塩基性にした。層分離させ、この塩基性の水相をさらなる酢酸エチル(2×100mL)で抽出した。この有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮し褐色固体を得た。フラッシュクロマトグラフィを使用して、20%増分の段階勾配で80%ヘキサン/20%(30%THF/ヘキサン)から0%ヘキサン/100%(30%THF/ヘキサン)を用いて溶出してこの生成物を精製し、淡緑色固体(6.65g、59%)を得た。ES/MS m/z(35Cl)182.3(M+1)+。
7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
7−ブチル−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
5−メチル−2H−ピラゾール−3−イルアミン(217mg、2.17mmol)、ノナン−2,4−ジオン(339mg、2.39mmol)およびピペリジン(1滴)をエタノール(10mL)に加え、80℃で一晩加熱した。室温まで冷却し、乾固するまで濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィ(0−20%酢酸エチルを含むヘキサン)によって精製し、2つの異性体の混合物(2g)を得た。
7−(1−エチル−プロピル)−3−ヨード−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
3−(3−クロロ−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
3−(3−メチル−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
オーブン乾燥したフラスコに3−メチル−2−チエニル亜鉛ブロミド(11.0mL、5.5mmol)、無水THF(6.0mL)および7−(1−エチル−プロピル)−3−ヨード−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン(0.536g、1.56mmol)を入れた。アルゴンの陽圧で10〜15分間脱気し、ジクロロ[1,1’−ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウム(II)ジクロロメタン(0.12g、0.15mmol)を加えた。オイルバス(100℃)中、不活性雰囲気下で一晩還流させた。この反応液を室温まで冷却し、飽和塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチル(75mL)で希釈した。層分離させ、水層部分を酢酸エチル(50mL)で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィを使用して、10%増分の段階勾配で100%ペンタン/0%(25%酢酸エチル/ペンタン)から0%ペンタン/100%(25%酢酸エチル/ペンタン)を用いて溶出してこの生成した残渣を精製し、白色フォーム状物を得た。ヘキサンで粉末化し、濾過した(0.432g、8%)。1H NMR(400MHz,CDCl3):7.26(d,J=4.8,MHz,1H),6.96(d,J=5.3Hz,1H),6.42(s,1H),3.64−3.60(m,1H),2.53(s,3H),2.43(s,3H),2.14(s,3H),1.87−1.79(m,4H),0.88(t,J=7.0Hz,6H)。
3−(5−ブロモ−3−クロロ−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
3−[3−クロロ−5−(2−メチル−2H−[1,2,4]トリアゾール−3−イル)−チオフェン−2−イル]−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
3−(3−クロロ−5−メトキシ−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
オーブン乾燥したフラスコに3−(5−ブロモ−3−クロロ−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン(0.46g、1.1mmol)、酸化銅(0.045g、0.56mmol)、ヨウ化ナトリウム(0.020g、0.11mmol)、25%ナトリウムメトキシド/メタノール溶液(10mL)および無水メタノール(10mL)を入れた。オイルバス(90℃)中で、この反応液を不活性雰囲気下で週末にわたって還流させた。この反応液を氷水でクエンチし、エーテル(3×100mL)で抽出した。有機部分を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィを使用して、10%増分の段階勾配で100%ヘキサン/0%(35%酢酸エチル/ヘキサン)から0%ヘキサン/100%(35%酢酸エチル/ヘキサン)を用いて溶出してこの生成した残渣を精製し、白色フォーム状物(0.086g、21%)を得た。ES/MS m/z(35Cl)363.7(M+1)+。
酢酸 4−クロロ−5−[7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−3−イル]エステル
臭化イソプロピル(0.25mL、2.7mmol)を、Reike(登録商標)マグネシウム(1.0M THF溶液、2.7mL、2.7mmol)および無水THF(3mL)中の3−(5−ブロモ−3−クロロ−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン(0.74、1.8mmol)の懸濁液に加えた。不活性雰囲気下で1時間還流させ、この反応液を室温まで冷却した。陽圧下、室温で90分間、この発熱性反応液に酸素を吹き込んだ。この反応液を飽和塩化アンモニウム(30mL)でクエンチし、酢酸エチル(2×100mL)で抽出し、減圧下で濃縮した。この油状物をエーテル(150mL)に溶解させ、0.1N 水酸化ナトリウム(3×75mL)で洗浄し、この塩基性の水相をエーテル(50mL)で逆抽出した。この水相を飽和塩化アンモニウムで酸性にし、ジクロロメタン(4×75mL)で抽出した。ジクロロメタン部分を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。この粗油状物(0.138g、0.39mmol)をトリエチルアミン(0.23mL、1.6mmol)および塩化アセチル(0.034mL、0.47mmol)を含むジクロロメタン(2mL)に溶解させた。不活性雰囲気下で1時間撹拌し、ジクロロメタン(50mL)で希釈し、水(50mL)で洗浄した。この有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィを使用して、10%増分の段階勾配で100%ヘキサン/0%(25%酢酸エチル/ヘキサン)から0%ヘキサン/100%(25%酢酸エチル/ヘキサン)を用いて溶出してこの生成した残渣を精製し、白色フォーム状物(0.084g、21%)を得た。ES/MS m/z(35Cl)392.0(M+1)+。
3−(3−クロロ−5−メトキシメチル−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
オーブン乾燥したフラスコに3−(5−ブロモ−3−クロロ−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン(0.41、1.0mmol)および無水THF(5mL)を入れた。不活性雰囲気下で−70℃まで冷却し、n−ブチルリチウム(2.5M ヘキサン溶液、0.42mL、1.05mmol)を加えた。この黄色反応液は暗赤色に変わった。ヨードメチルメチルエーテル(0.09mL、1.10mmol)を加え、この反応液を室温まで戻した。この反応混合物を酢酸エチル(100mL)で希釈し、水(75mL)およびブライン(75mL)で洗浄した。この有機部分を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で橙色油状物になるまで濃縮した。フラッシュクロマトグラフィを使用して、10%増分の段階勾配で100%ヘキサン/0%(20%酢酸エチル/ヘキサン)から0%ヘキサン/100%(20%酢酸エチル/ヘキサン)を用いて溶出してこの生成した残渣を精製し、黄色固体(0.107g、28%)を得た。ES/MS m/z(35Cl)378.3(M+1)+。
4−クロロ−5−[7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−3−イル]−チオフェン−2−カルボン酸 エチルエステル
無水THF(5mL)中の3−(5−ブロモ−3−クロロ−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチルピラゾロ[1,5−a]ピリミジン(0.62g、1.5mmol)の混合物を不活性雰囲気下で0℃まで冷却し、エチルマグネシウムクロリド(2M THF溶液、0.83mL、1.65mmol)を加えた。この反応液を5分間撹拌し、室温まで加温し、さらに15分間撹拌し、次いでこの反応液の温度を0℃まで下げた。無水THF(1mL)で希釈したシアノギ酸エチル(0.16mL、1.58mmol)を加えた。この反応液を室温まで加温し、1時間撹拌した。この反応液を飽和炭酸水素ナトリウム(20mL)でクエンチし、エーテル(2×75mL)で抽出した。有機部分を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィを使用して、10%増分の段階勾配で100%ヘキサン/0%(20%酢酸エチル/ヘキサン)から0%ヘキサン/100%(20%酢酸エチル/ヘキサン)を用いて溶出して精製した。この生成物を真空下で乾燥し、白色固体(0.114g、19%)を得た。ES/MS m/z(35Cl)406.3(M+1)+。
2−(5−ブロモ−4−メチル−チオフェン−2−イル)−6−メチル−ピリジン
2.0M リチウムジイソプロピルアミド(9.76mL、19.52mmol)を2−ブロモ−3−メチル−チオフェン(2.0mL、17.75mmol)およびTHF(30mL)の−78℃の溶液に加えた。45分後ZnCl2(0.5M THF溶液、39.0mL、19.50mmol)を加え、この溶液を30分間撹拌した。2−ブロモ−6−メチル−ピリジン(2.4mL、21.29mmol)およびPd(PPh3)4(0.50g、0.44mmol)を加えた。この溶液を周囲温度まで加温し、2時間撹拌した。この反応液を飽和NH4Cl溶液(20mL)で洗浄した。水層をCH2Cl2(30mL)で洗浄した。有機層を合わせ、飽和NH4Cl溶液(20mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィ(10%−20%EtOAc/ヘキサン勾配)によってこの生成した残渣を精製し、標題の化合物(2.34g、49%)を得た。LC−ES/MS m/z(79Br/81Br)267.7/269.5(M+H)+。
3−メチル−5−(6−メチル−ピリジン−2−イル)−チオフェン−2−ボロン酸
2−(5−ブロモ−4−メチル−チオフェン−2−イル)−6−メチル−ピリジン(37.6g、0.14mol)およびホウ酸トリイソプロピル(34.2g、0.182mol、42.3mL)を窒素雰囲気下でトルエン(100mL)およびTHF(160mL)に溶解させた。この溶液を−40℃まで冷却した。n−ブチルリチウム(2.5M ヘキサン溶液、70mL、0.175mol)を、滴下ロートを使用して、40分間かけてゆっくり加えた。溶液内の温度は−40℃から−35℃まで変化した。添加終了後、この混合物を−40℃で2時間撹拌した。この反応液を0℃まで加温し、THF(40mL)、次いで2N HCl水溶液(120mL)を加えて白色固体を形成させた。pH=7になりすべての塩が溶解するまで1N NaOHを加えた。有機層を分離し、水層をジエチルエーテル(3×)で抽出した。有機層を合わせ、MgSO4で乾燥し、濾過し、濃縮した。THFをこの残渣に加え、次いでヘキサンを加えた。生成した黄色沈殿物を濾過し、沈殿ステップを数回繰り返し、標題の化合物(19.7g、60%)を得た。1H NMR(CD3OD):δ 2.47(bs,3H),2.61(s,3H),7.20(d,J=7.7Hz,1H),7.60(bs,1H),7.64(bd,J=7.7Hz,1H),7.75(t,J=7.7Hz,1H)。
7−(1−エチル−プロピル−2,5−ジメチル−3−[3−メチル−5−(6−メチル−ピリジン−2−イル)チオフェン−2−イル]−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
7−ブロモ−チエノ[3,2−b]ピリジン
チエノ[3,2−b]ピリジン−7−オール(5.00g、33mmol)およびオキシ臭化リン(50g、174mmol)を一緒に110℃で3時間加熱した。この熱反応混合物を氷および5N NaOHの混合物に注ぎ込み、CH2Cl2で抽出した。有機部分をNa2SO4で乾燥し、エバポレーションした。この生成した粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィカラム(ヘキサン:EtOAC=3:1)を使用して精製し、標題の化合物(4.19g、59%)を得た。ES/MS m/z(81Br)215(M+)。
チエノ[3,2−b]ピリジン
7−ブロモ−チエノ[3,2−b]ピリジン(3.69g、17mmol)を無水THF(20mL)に溶解させ、−78℃まで冷却した。n−BuLi(1.6M ヘキサン溶液、21.2mL、34mmol)を−78℃でこの混合物にゆっくり加え、−78℃で20分間撹拌した。MeOH/H2O=1/1(20mL)を加え、室温で1時間撹拌した。この反応混合物をCH2Cl2で抽出した。この有機部分を飽和NaCl溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、エバポレーションした。シリカゲルクロマトグラフィを使用して、100%ヘキサンからヘキサン:酢酸エチル=10:1を用いて溶出してこの生成した残渣を精製し、標題の化合物(1.44g、62%)を得た。ES/MS m/z 136(M+1)+。
3−ブロモ−チエノ[3,2−b]ピリジン
CHCl3(60mL)中でチエノ[3,2−b]ピリジン(3.45g、25.6mmol)、炭酸水素ナトリウム(2.15g、25.6mmol)、K2HPO4(6.69g、38.4mmol)およびMgSO4(4.01g、33.3mmol)を混合した。この混合物を還流状態で撹拌し、Br2(1.57mL、30.7mmol)をゆっくり加えた。この反応混合物を還流状態で一晩撹拌した。さらに臭素(0.7mL)を加え、この反応液を還流状態で4時間撹拌した。室温まで冷却し、水を加え、そしてCHCl3で抽出した。この有機部分を飽和Na2S2O3溶液および飽和ブラインで洗浄した。Na2SO4で乾燥し、エバポレーションした。この生成物をヘキサン/CH2Cl2から再結晶して、標題の化合物(3.94g、72%)を得た。ES/MS m/z(81Br)215(M+)。
3−メチル−チエノ[3,2−b]ピリジン
DME/水/EtOH=7/3/1(4mL)中に3−ブロモ−チエノ[3,2−b]ピリジン(214mg、1.0mmol)およびメチルボロン酸(180mg、3.0mmol)が入っている3つのマイクロ波処理できる反応バイアルを調製した。2M Na2CO3(1.5mL、3.0mmol)を加え、窒素ガスを15分間吹き込んだ。Pd(PPh3)4(58mg、0.05mmol)を加え、このバイアルを封管した。マイクロ波中で、このバイアルを130℃で30分間加熱した。すべてのこの反応混合物を合わせ、水およびCH2Cl2を加え、抽出した。CH2Cl2層を分離し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、エバポレーションした。シリカゲルクロマトグラフィを使用して、ヘキサン:酢酸エチル:MeOH中の2M NH3=20:4:1を用いて溶出してこの生成物を精製し、標題の化合物(193mg、43%)を得た。ES/MS m/z 150(M+1)+。
7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−3−(3−メチル−チエノ[3,2−b]ピリジン−2−イル)−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
3−[3−メチル−5−(2−メチル−2H−[1,2,4]トリアゾール−3−イル)−チオフェン−2−イル]−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
オーブン乾燥したフラスコに1−メチル−1,2,4−トリアゾール(0.320、3.81mmol)、無水THF(10mL)を入れ、不活性雰囲気下で−78℃まで冷却した。n−ブチルリチウム(2.5M ヘキサン、1.52mL、3.81mmol)を加え、低温で30分間撹拌した。無水塩化亜鉛(1.06g、7.75mmol)を一度に加え、低温で15分間撹拌した。この反応液を室温まで加温し、さらに30分間撹拌した。無水THF(5mL)中の3−(5−ブロモ−3−メチル−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン(0.50g、1.27mmol)をこの反応液に加えた。アルゴンの陽圧で15分間脱気し、ジクロロ[1,1’−ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウム(II)ジクロロメタン(0.147g、0.127mmol)を加えた。オイルバス(90℃)中、不活性雰囲気下でこの反応液を一晩還流させた。この反応液を室温まで冷却し、飽和塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチル(75mL)で希釈した。層分離させ、水層部分を酢酸エチル(50mL)で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィを使用して、10%増分の段階勾配で100%ヘキサン/0%(40%THF/ヘキサン)から0%ヘキサン/100%(40%THF/ヘキサン)を用いて溶出して精製した。生成物をヘキサン/エーテル(3:1)で粉末化し白色固体(0.371g、74%)を得た。ES/MS m/z 395.0(M+1)+。
3−(5−ニトロ−3−メチル−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチルピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
3−(3−メチル−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン(0.419g、1.33mmol)をジクロロメタン(2.5mL)に溶解させ、不活性雰囲気下で撹拌し、氷浴中で0℃に冷却し、トリフルオロ酢酸(5mL)を加えた。濃硝酸(70%)(0.132g、1.47mmol)をこの反応液に滴下した。この溶液は、黄色から暗緑色へと色が変化した。氷浴中、不活性雰囲気下で1時間撹拌し、この反応が完結していることをTLCを用いて確認した。この反応液をジクロロメタン(80mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムでクエンチした。層分離させ、塩基性の水層をジクロロメタン(50mL)で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィを使用して、10%増分の段階勾配で100%ヘキサン/0%(30%酢酸エチル/ヘキサン)から0%ヘキサン/100%(30%酢酸エチル/ヘキサン)を用いて溶出してこの生成した残渣を精製し、黄色固体(0.363g、76%)を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ 7.81(s,1H),6.51(s,1H),3.62−3.58(m,1H),2.56(s,3H),2.48(s,3H),2.18(s,3H),1.88−1.70(m,4H),0.88(t,J=7.5Hz,6H)。
N−{5−[7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチルピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−3−イル]−4−メチル−チオフェン−2−イル}アセトアミド
3−(5−ニトロ−3−メチル−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン(0.33g、0.92mmol)を、10%パラジウム炭素(0.10g)を含むTHF(10mL)に溶解させ、真空/水素雰囲気フラッシュ(3×)により脱気し、水素雰囲気下(55psi)(約379kPa)、室温で3時間撹拌した。この反応が完結していることをTLCを用いて確認した。この反応液をTHF(50mL)で希釈し、珪藻土を通して濾過し、次いで橙色粗油状物(0.328g)まで濃縮した。この油状物をジクロロメタン(4mL)および1.0M NaOH(1mL)に溶解させた。塩化アセチル(0.038mL、0.52mmol)をこの反応液に加え、封鎖した反応容器中で、週末にわたって室温で撹拌した。この反応液をジクロロメタン(100mL)で希釈し、水で洗浄した。有機相を集め、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で赤色油状物まで濃縮した。フラッシュクロマトグラフィを使用して、10%増分の段階勾配で100%ヘキサン/0%(15%酢酸エチル/10% 7N アンモニア性メタノール/75%ヘキサン)から0%ヘキサン/100%(15%酢酸エチル/10% 7N アンモニア性メタノール/75%ヘキサン)を用いて溶出してこの油状物を精製し、褐色フォーム状物(0.048g、26%)を得た。ES/MS m/z 371.0(M+1)+。
3−[3−クロロ−5−(2−メチル−2H−[1,2,4]トリアゾール−3−イル)−チオフェン−2−イル]−7−(1−プロピル−ブチル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
2−ブロモ−5−フルオロ−3−メチルベンゾ[b]チオフェン
アセトニトリル(350mL)中の機械的に撹拌した5−フルオロ−3−メチルベンゾ[b]チオフェン(50.32g、0.303mol)溶液をN−ブロモスクシンイミド(56.32g、0.318mol、1.05当量)で処理した。初期の吸熱のため、この反応液の温度は17℃まで低下した。その後、発熱が起こりこの反応液の温度は10分間かけて40℃まで上昇し、この時点で、氷水浴を使用することによりこの反応液を18〜20℃まで冷却した。この反応液を室温でさらに35分間撹拌し、生成したスラリーを水(350mL)でゆっくり希釈した。このスラリーを10分間撹拌した。この生成物を濾過し、50:50のアセトニトリル:水(100mL)で洗浄し、乾燥して無色の結晶性固体(65.56g、88%)を得た。
3−(5−フルオロ−3−メチル−ベンゾ[b]チオフェン−2−イル)−7−イソプロピル−2,5−ジメチルピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
ボロン酸、5−フルオロ−3−メチル−ベンゾ[b]チオフェン−2−イル
乾燥したフラスコで、5−フルオロ−3−メチル−ベンゾ[b]チオフェン(312mg、1.88mmol)を無水THF(4mL)と混合した。−78℃まで冷却し、n−ブチルリチウム(1.6N ヘキサン溶液、1.18mL、1.90mmol)を加えた。−78℃で1.5時間撹拌し、次いでホウ酸トリメチル(0.23mL、2.02mmol)を加えた。3時間撹拌し、この浴を−20℃まで上げた。この反応液が酸性(pH=4)になるまで5N 塩化水素を加えた。水で希釈し、酢酸エチル(3×)で抽出した。有機部分を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、エバポレーションした。塩化メチレン中で粉末化し、白色固体(258mg、65%)を得た。ES/MS m/z 209(M−1)−。
7−ブチル−3−(5−フルオロ−3−メチル−ベンゾ[b]チオフェン−2−イル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(31mg、0.03mmol)および7−ブチル−3−ヨード−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン(174mg、0.53mmol)を脱気した無水THF(10mL)に加えた。この混合物を10分間撹拌した。2−ボロン酸−5−フルオロ−3−メチル−ベンゾ[b]チオフェン(111mg、0.53mmol)および炭酸ナトリウム水溶液(5mLの水の中に112mg、1.06mmol)を加えた。この混合物を70℃で24時間加熱した。室温まで冷却した。エーテルで希釈し、次いで水およびブラインで洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。アセトニトリル/水/TFAを用いて溶出するHPLCによりこの残渣を精製し、標題の化合物(55mg、28%)を得た。ES/MS m/z 368(M+1)+。
4−クロロ−チオフェン−2−カルボニトリル
22L反応フラスコに冷却浴、空気撹拌機、ガス添加管、および温度計プローブを取り付けた。このフラスコに窒素をパージし、次いでAlCl3(1025g、7.69mol)およびCHCl3(6.6L、16.5倍量)を入れた。この混合物を0〜5℃に冷却し、温度を10℃以下に保ちながら、滴下ロートを使用して10〜15分間かけて2−チオフェンカルボニトリル(400g、3.66mol)を滴下した。この混合物に、10℃以下で1.25時間にわたって液面下にCl2ガス(300g、4.23mol、1.16当量)を導入した。この反応の進行をGCによってモニタリングした。この反応混合物の一部分を6N HClの中へとクエンチし、EtOAcで抽出し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濾液を注入した。
4−クロロ−2−チオフェンカルボキサミド
12L反応フラスコに冷却浴、空気撹拌機、および温度計プローブを取り付け、KOH(288.6g、5.143mol)および水(6.04L)を入れて溶液を形成した。この溶液は約31℃まで発熱した。この溶液を約28℃まで冷却し、この混合物に4−クロロ−2−チオフェンカルボニトリル(671.3g、4.675mol)を加えた(少量の固体は溶解しなかった)。EtOH(675mL)を加え、この時点で徐々に発熱が起こり、1〜1.5時間にわたって約38℃まで発熱が続いた。この反応液を周囲温度で一晩撹拌した。この反応合物を真空下で濾過し、水で洗浄し、乾燥し、粗生成物を得た。この固体をEtOAc(10.0L)に溶解させ、Na2SO4および活性炭で1〜2時間処理し、濾過し、EtOAcで洗浄した。固体が沈殿し始めるまで、この濾液を45℃でロータリーエバポレータで濃縮した。真空を開放し、温度を60〜65℃まで上昇させ、この固体を再溶解させた。60℃で撹拌しながら、ヘプタン(3.5L)をゆっくり加え、固体を沈殿させた。60℃で15〜20分間撹拌し、次いでこの混合物を30〜40℃まで冷却し、濾過した。この固体をヘプタン(2×0.75L)で洗浄し、乾燥して、標題の化合物を白色固体(235.4g、31%)として得た。濾液から第2の収量(67.8g、9%)を得た。
4−クロロ−N−ジメチルアミノメチレン−2−チオフェンカルボキサミド
5L反応フラスコに加熱マントル、空気撹拌機、ディーン−スターク装置、および温度計プローブを取り付けた。4−クロロ−2−チオフェンカルボキサミド(300g、1.856mol)およびジメチルホルムアミドジメチルアセタール(872mL)を入れ、スラリーを形成させた。留出分(ほとんどがMeOH)を集めながら、この混合物を徐々に96℃まで加熱した。加熱マントルを取り除き、25℃以下まで冷却した。滴下ロートを使用して水(3.0L)を加え、温度を35℃以下に保った。この反応混合物をEtOAc(3.0L、1.5L)で抽出した。有機層を合わせ、水(1.5L)で洗浄した。この有機相をNa2SO4で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮し、粗生成物(400g)を得た。
5−(4−クロロ−チオフェン−2−イル)−1−メチル−1H−[1,2,4]トリアゾール
3L反応フラスコに冷却浴、空気撹拌機、および温度計プローブを取り付け、4−クロロ−N−ジメチルアミノメチレン−2−チオフェンカルボキサミド(155g、0.715mol)およびHOAc(1500mL)を入れ、溶液を形成させた。温度を30℃以下に保つために氷水冷却浴を使用して、滴下ロートを用いて15〜20分間かけてメチルヒドラジン(33.2g、0.721mol)を滴下し、淡黄色スラリーを形成させた。この反応液を徐々に90℃まで加熱し、90℃で30分間保持した。GCによりこの混合物を分析し、それからこの反応液を約70℃まで冷却し、濃厚な油状物/スラリーまで濃縮した。水(1.67L)をゆっくりと加えて固体を沈殿させ、この混合物を30℃未満まで冷却し、濾過し、水(1.67L)で洗浄した。この湿った固体(125.8g)を暖めたt−ブチルメチルエーテル(1.64L)に溶解させ、Na2SO4で乾燥し、濾過し、乾固するまで濃縮し、標題の化合物を淡黄色固体(85.8g、60%)として得た。
5−(5−ブロモ−4−クロロ−チオフェン−2−イル)−1−メチル−1H−[1,2,4]トリアゾール
3L反応フラスコに冷却浴、空気撹拌機、および温度計プローブを取り付け、5−(4−クロロ−チオフェン−2−イル)−1−メチル−1H−[1,2,4]トリアゾール(105.3g、0.527mol)、アセトニトリル(1053mL)およびHOAc(105mL)を入れ、溶液を形成させた。N−ブロモスクシンイミド(103.2g、0.580mol)を、温度を31℃以下に維持しながら30〜60分間かけて少しずつ加えた。1時間撹拌し、この時点でGC分析を行ったところ、反応が完結していることがわかった。この反応混合物を水(2.1L、20倍量)に注ぎ込み、30分間撹拌し、濾過し、水(2×1L)で洗浄した。この生成物を真空オーブン中で45℃で一晩乾燥し、標題の化合物を淡黄色固体(123.0g、84%)として得た。
7−ブチル−3−[3−クロロ−5−(2−メチル−2H−[1,2,4]トリアゾール−3−イル)−チオフェン−2−イル]−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン
{5−[7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−3−イル]−4−メチル−チオフェン−2−イル}−ジメチル−アミン塩酸塩
3−(5−ニトロ−3−メチル−チオフェン−2−イル)−7−(1−エチル−プロピル)−2,5−ジメチル−ピラゾロ[1,5a]ピリミジン(0.36g、1.0mmol)を、10%パラジウム炭素(0.20g)を含むTHF(5mL)に溶解させ、真空/水素雰囲気フラッシュ(3×)によって脱気し、水素雰囲気下(55psi)(約379kPa)で室温で3時間撹拌した。この反応が完結していることをTLCを用いて確認した。この反応液をTHF(50mL)で希釈し、セライト(登録商標)で濾過した。水素化ナトリウム(0.10g、2.25mmol)を60%オイル懸濁液として加え、室温で20分間撹拌した。ヨードメタン(0.140mL、2.25mmol)をこの反応液に加え、密閉した反応容器中で50℃で一晩撹拌した。この反応液を水でクエンチし、酢酸エチル(100mL)で希釈した。この有機部分を水、飽和塩化アンモニウム、およびブラインで洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で油状物まで濃縮した。フラッシュクロマトグラフィを使用して、10%増分の段階勾配で100%ヘキサン/0%(25%酢酸エチル/ヘキサン)から0%ヘキサン/100%(25%酢酸エチル/ヘキサン)を用いて溶出してこの生成した残渣を精製し、フォーム状物(0.145g、41%)を得た。この生成物(0.13g、0.365mmol)をメタノール(3mL)に溶解させ、4.0M HCl−ジオキサン(3mL)を加えた。この反応液を30分間撹拌し、この反応液に窒素の陽圧を吹き込んだ。真空オーブン中で乾燥し、白色固体(0.125g)を得た。ES/MS m/z 357.2(M+1)+。
(生体外結合を使用する生体内効力評価)
生体内効力を評価するために、生体外結合を使用して本発明の化合物を評価した。D.R.Gehlertら, EJP 509:145−153(2005)に提供された手順を使用して、化合物を経口経路によってラットに投与した。Gehlertらによって記載されたようにして、小脳への125I−ソーバジンの結合を生体外で評価した。例えば、実施例20は、10mg/kgで74%阻害をもたらした。
(CRF1フィルター結合法)
結合試験を展開するために充分な受容体密度を有する組換え細胞株を生成するという点でのプラスミドベースのヒトCRF1発現の限界は、スタンフォードからライセンス供与されたPhoenixレトロウイルス発現系を用いて克服した。安定なHEK−hCRF1細胞株を使用して膜を調製し、結合反応(200μl)を、以下のとおりに設定した:50μlの125I−ソーバジン(0.2nMの最終濃度)、50μlの化合物および100μlのCRF1膜(25μg/反応)。この反応液を室温で2時間インキュベーションし、前処理したFB Milliporeガラス繊維フィルタープレート(96ウェル)を通して濾過することによって停止させた。このプレートを氷冷した試験緩衝液(50mM トリス、12.5mM NaCl、1mM EDTA、10mM MgCl2、0.05% BSA、pH7.2)で2回洗浄し、一晩風乾し、MicroBetaカウンタ中で100μl Microscint40を用いてカウントした。非特異的結合(NSB)を、0.5μM非標識ソーバジンの存在下で測定した。通常は3回の測定を行い、平均のデータ点をGraph Pad Prismによってプロットした。
(CRF2フィルター結合法)
結合試験を展開するために充分な受容体密度を有する組換え細胞株を生成するという点についてのプラスミドベースのヒトのCRF2発現の限界は、スタンフォードからライセンス供与されたPhoenixレトロウイルス発現系を用いて克服した。安定なHEK−hCRF2細胞株を使用して膜を調製し、結合反応(200μl)を、以下のとおりに設定した:50μlの125I−ソーバジン(0.2nMの最終濃度)、50μlの化合物および100μlのCRF2膜(25μg/反応)。この反応液を室温で2時間インキュベーションし、前処理したFB Milliporeガラス繊維フィルタープレート(96ウェル)を通して濾過することによって停止させた。このプレートを氷冷した試験緩衝液(50mM トリス、12.5mM NaCl、1mM EDTA、10mM MgCl2、0.05% BSA、pH7.2)で2回洗浄し、一晩風乾し、MicroBetaカウンタ中で100μl Microscint40を用いてカウントした。非特異的結合(NSB)を、0.5μM非標識ソーバジンの存在下で測定した。あるいは、化合物をシンチレーション近接アッセイを使用して評価した。この試験法を、以下のように設定した:50μlの125I−ソーバジン(0.2nM 最終濃度)、50μlの化合物または非標識ソーバジン(NSB)、ならびに250μgのコムギ胚芽凝集素(WGA)SPAビーズおよびCRF2膜(1.5μg/反応)を含む100μl。プレートを4〜5時間室温でインキュベーションし、200×gで10分間遠心分離した。結合した放射活性を、Wallac Triluxシンチレーションカウンタを用いて評価した。通常は3回の測定を行って結合を評価し、平均のデータ点をGraph Pad Prismによってプロットした。最初に固定した濃度で化合物をスクリーニングし、十分な活性が認められると、引き続いて濃度−応答曲線を作成した。
(バイオアベイラビリティおよび薬物動態特性)
分布容積(Vdist)は、体内の薬物量を血中または血漿中の薬物濃度に関連付ける。分布容積とは、血中または血漿中と同じ濃度で薬物の全量を体内に含むのに必要とされるであろう流体の体積を指す:Vdist=体内の薬物量/血中または血漿中の薬物濃度(GoodmanおよびGillmanの文献)。10mg用量および10mg/Lの血漿濃度に対しては、分布容積は1リットルになる。分布容積は、その薬物が血管外組織中に存在する程度を反映する。大きい分布容積は、ある化合物が血漿タンパク質結合よりも組織成分に結合しようとする傾向があることを反映する。臨床の場面では、Vdistは定常状態濃度を実現するための負荷用量を決定するのに使用することができる。
Claims (12)
- R1およびR2が独立にエチルまたはn−プロピルである、請求項1に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
- 請求項1から4のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩と薬理学的に許容できる賦形剤とを含む、医薬組成物。
- 患者のうつ病、不安神経症、アルコール濫用または薬物濫用、肥満、高血圧、メタボリックシンドローム、過敏性大腸症候群、癲癇、発作、睡眠障害、アレルギー、片頭痛、月経前症候群、不妊症、性的機能不全、先天性副腎過形成、クッシング病、早産、ストレスにより誘発される胃潰瘍、炎症性障害、下垂体または異所性下垂体由来の腫瘍、慢性疲労症候群、線維筋痛、内臓痛または多発性硬化症を治療する方法であって、それを必要とする患者に治療上有効量の請求項1から4のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を投与することを含む、方法。
- 患者の不安神経症またはうつ病を治療する方法であって、それを必要とする患者に治療上有効量の請求項1から4のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を投与することを含む、方法。
- 患者のアルコール濫用または薬物濫用を治療する方法であって、それを必要とする患者に治療上有効量の請求項1から4のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を投与することを含む、方法。
- うつ病、不安神経症、アルコール濫用または薬物濫用、肥満、高血圧、メタボリックシンドローム、過敏性大腸症候群、癲癇、発作、睡眠障害、アレルギー、片頭痛、月経前症候群、不妊症、性的機能不全、先天性副腎過形成、クッシング病、早産、ストレスにより誘発される胃潰瘍、炎症性障害、下垂体または異所性下垂体由来の腫瘍、慢性疲労症候群、線維筋痛、内臓痛または多発性硬化症の治療のための医薬の製造のための、請求項1から4のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用。
- 不安神経症またはうつ病の治療のための医薬の製造のための、請求項1から4のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用。
- アルコール濫用または薬物濫用の治療のための医薬の製造のための、請求項1から4のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用。
- 医薬として使用するための、請求項1から4のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
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