EA015680B1 - Противоопухолевое средство, способ его получения и способ его стабилизации - Google Patents

Противоопухолевое средство, способ его получения и способ его стабилизации Download PDF

Info

Publication number
EA015680B1
EA015680B1 EA201100618A EA201100618A EA015680B1 EA 015680 B1 EA015680 B1 EA 015680B1 EA 201100618 A EA201100618 A EA 201100618A EA 201100618 A EA201100618 A EA 201100618A EA 015680 B1 EA015680 B1 EA 015680B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
dna
solution
fluorouracil
sodium
aqueous solution
Prior art date
Application number
EA201100618A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201100618A1 (ru
Inventor
Олег Сергеевич Сокирко
Илима Илиодоровна Волченскова
Надежда Николаевна Майданевич
Original Assignee
Олег Сергеевич Сокирко
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from UAA200906849A external-priority patent/UA90233C2/ru
Application filed by Олег Сергеевич Сокирко filed Critical Олег Сергеевич Сокирко
Publication of EA015680B1 publication Critical patent/EA015680B1/ru
Publication of EA201100618A1 publication Critical patent/EA201100618A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A61K31/282—Platinum compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине, а именно к противоопухолевым средствам на основе водного раствора соединений платины, способам получения указанных средств и к способам их стабилизации. Способ стабилизации противоопухолевых средств на основе водного раствора соединения платины осуществляют путем использования смеси основания фторурацила с урацилом и мочевиной, а также за счет использования раствора со сниженной концентрацией протонов.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к противоопухолевым средствам на основе водного раствора соединений платины, которые могут быть использованы для лечения злокачественных опухолей, к способам их получения и к способам их стабилизации.
Среди противоопухолевых средств, широко применяемых в медицинской практике, одни из наиболее эффективных основаны на водном растворе мономерного комплекса цисплатина. В качестве активного агента в этих средствах выступает ион платины, координированный такими лигандами-носителями, которые поглощаются опухолевыми клетками практически также интенсивно, как и нормальными, и потому средства, содержащие цисплатин, характеризуются не только высокой противоопухолевой активностью, но и высокой токсичностью.
Не менее активные, но значительно менее токсичные противоопухолевые средства основаны на водном растворе полимерного комплекса платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой (Ρΐ-ДПК), представляющего собой продукт реакции цисплатина и ДНК, в котором один из лигандов-носителей иона платины является нуклеотидом, встроенным в структуру двунитчатых спиралей макромолекул ДНК, интенсивно поглощаемых только быстро размножающимися опухолевыми клетками, и поэтому противоопухолевые средства, содержащие соединение Ρΐ-ДНК, с высокой степенью избирательности поражают опухолевые ткани при несущественном повреждении нормальных [Лечение неоперабельных опухолей органов брюшной полости. С. А. Шалимов и др. 1998, с. 103].
Мономерный комплекс цисплатин и полимерный комплекс Ρΐ-ДНК, которые являются основными веществами в средствах, недостаточно растворимы и химически нестабильны в воде, поэтому в средства, основанные на их водных растворах, вводят фармацевтические добавки. В качестве добавок используют фармакологически приемлемые соли, регуляторы рН и другие стабилизирующие агенты, предпочтительно такие, которые за счет собственной биологической активности, проявляемой одновременно со способностью повышать растворимость и химическую устойчивость основного вещества, позволяют обеспечить эффективность лечения при лучшей переносимости.
Известное противоопухолевое средство на основе водного раствора соединения платины с полианионом дезоксирибонуклеиновой кислоты (Ρΐ-ДНК) (активное вещество) включает неассоциированные макромолекулы Ρΐ-ДНК размером 0,05-0,15 мкм в наибольшем измерении, натрий хлористый, натрий лимонно-кислый, аммоний хлористый и фторурацил в виде натриевой соли (вспомогательное вещество) при соотношении компонентов в водном растворе, мас.%:
Ρΐ -ДНК 0,130-0,153 натрий хлористый натрий лимонно-кислый
0,080-0,090
0,040 -0,053 аммоний хлористый 0,015-0,018 натриевая соль фторурацила 0,025 - 0,370 [см. декларационный патентный Украины № 70456, публ. 15.10.2004, заявители Шалимов С.А., Волченскова И.И., Майданевич Н.Н.].
Как показали исследования, водный раствор известного средства имеет рН 6,5-7,5 и плотность 1,0012-1,0016 г/см3, при которых неассоциированные молекулы соединения Ρΐ-ДНК имеют наиболее высокую противоопухолевую активность, а фторурацил имеет способность усиливать эту активность и уменьшать токсичность соединения платины при выдерживании полученного средства в интервале температур выше 35°С. Снижение температуры способствует основаниям молекул Ρΐ-ДНК вступать во внутримолекулярные взаимодействия кооперативного характера интенсивнее, чем в межмолекулярные взаимодействия с родственными анионами натриевой соли фторурацила, и поэтому пространственные структуры молекул Ρΐ-ДНК необратимо конденсируются
Внутримолекулярная конденсация структур, которые содержат очень маленькие атомы платины с плотностью 21,45 г/см3, приводит к уменьшению пространственных структур молекул Ρΐ-ДНК до таких размеров, что их плавучая плотность превышает плотность раствора, и они под действием силы тяжести оседают в виде рыхлого осадка. При этом анионы фторурацила склоны взаимодействовать в большей мере с протонами раствора, чем с основаниями Ρΐ-ДНК, и поэтому переходят в состояние нейтральных молекул собственного основания, растворимость которого ограничена в воде и которое оседает в виде кристаллов, растворимых при повышении температуры. Осаждение активного и вспомогательного ве ществ вызывает уменьшение их концентрации в растворе средства и, тем самым, снижает его противоопухолевую активность и терапевтическую эффективность, ограничивает его применение только местными аппликациями и внутрибрюшными инфузиями, исключая внутривенные, внутриартериальные инфузии и интерстициальный путь введения.
Известно использование основания фторурацила как структурного фрагмента тегафура - предшественника фторурацила в организме - для приготовления противоопухолевой композиции, содержащей тегафур и урацил в мольном соотношении 1:4 [патент США 5534513, МПК 7 А61К 31/505, заявитель ТА1НО ΡΗΑ ВМАСЕ иТ1САЬ СО ЕГО. (1Ρ), публ. 09.07.1996].
- 1 015680
Известно применение мочевины как диуретика, кератолитика, средства, снижающего внутричерепное и внутриглазное давление [М.М. Туркевич. Фармацевтическая химия, 1973, с. 45], а также в качестве эксципиента, добавляемого в твердые дозированные лекарственные формы для перорального введения.
Известно применение высоких концентраций мочевины и повышения рН более чем до 11 для раскручивания спирализованных нитей природной двухцепочечной ДНК [А. Ленинджер. Биохимия, 1976, с. 737].
Известно применение натрия гидроксида в фармации для регулирования рН растворов лечебных средств. Кроме того, известно, что под действием высоких концентраций мочевины и при рН>11,0 спирализованые двойные нити нативной ДНК расплетаются [А. Ленинджер. Биохимия, 1976, с. 737].
Однако в известных источниках нет сведений о применении урацила, мочевины и натрия гидроксида как средств, предотвращающих внутримолекулярную конденсацию спирализованых нитей соединений металлов с ДНК. Не известно также о применении мочевины в дозированных формах лечебных препаратов для парентерального введения. Эффективные интервалы концентраций и соотношение активной субстанции, фторурацила и солей в водном растворе средства, которое заявляется, соответствуют соотношениям, установленным при разработке известного средства для внутрибрюшных, внутривенных и внутриартериальных инфузий, которые выдерживаются при температуре 35-40°С. Интервалы концентраций урацила и мочевины детерминированы мольным соотношением фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1. Интервалы концентраций натрия гидроксида ограничены снизу значением рН, что исключает возможность протонирования фторурацила, а сверху фармацевтическими требованиями.
Известен способ получения противоопухолевого средства путем выдерживания в течение 16-26 ч волокон ДНК в цитратно-солевом растворе, который содержит натрий хлористый и натрий лимоннокислый, путем растворения волокон при механическом перемешивании и нагревании раствора ДНК до 70-90°С, постепенного введения в нагретый раствор ДНК нагретого до такой же температуры цитратносолевого раствора цис-дихлородиаминплатины (ДДП), добавления к смеси водного раствора натриевой соли фторурацила и термостатирования смеси растворов ДНК и ДДП при 70-90°С в течение 15-20 мин [см. декларационный патент Украины № 70456, публ. 15.10.2004, заявители Шалимов С. А., Волченскова И.И., Майданевич Н.Н.].
Добавление водного раствора натриевой соли фторурацила к смеси растворов ДНК и ДДП перед термостатированием не способствует усилению межмолекулярных взаимодействий молекул Ρΐ-ДНК с родственными молекулами раствора и ослаблению внутримолекулярных взаимодействий кооперативного характера в них и не исключает возможности взаимодействия анионов фторурацила с протонами раствора при температурах ниже 35°С. Именно поэтому известный способ уже при комнатной температуре не предотвращает необратимую внутримолекулярную конденсацию пространственных структур Ρΐ-ДНК и не препятствует протонированию анионов фторурацила в растворе средства. Во избежание этих явлений необходимо перед термостатированием проводить дополнительные технологические операции введения в раствор средства компонентов, которые бы повышали его рН, а также плотность. Кроме того, противоопухолевое средство, полученное известным способом, возможно использовать лишь при температуре 35-37°С, так как при снижении температуры активность средства уменьшается. К тому же высокая температура средства усложняет его хранение, транспортировку и использование.
Известен способ стабилизации противоопухолевого средства на основе водного раствора цисплатина с концентрацией 0,1-1,0 мг/мл, в котором используют натрий хлористый в количестве 1-20 мг/мл, соляную кислоту до рН 2,0-3,0 и маннит (диуретик) в количестве 2-150 мг/мл [патент СССР 1192596 А, публ. 15.11.1985].
Известны водные растворы соединения Ρΐ-ДНК, стабилизированные натрием хлористым и натрием лимонно-кислым (средством против свертывания крови) в количествах, соответствующих мольному соотношению платины, фосфора ДНК, натрия хлористого и натрия лимонно-кислого 4:6:30:3 [патент Украины № 60597, публ. 15.07.2005; 61543, публ. 15.08.2005; 66476 А, публ. 17.05.2004].
Однако наиболее эффективным и наименее токсичным противоопухолевым средством на основе водного раствора соединения Ρΐ-ДНК является средство, описанное выше в патенте Украины № 70456, которое стабилизируют натрием хлористым, натрием лимонно-кислым, аммонием хлористым (средством, вызывающим отхаркивающее действие и усиливающим действие диуретинов) и дополнительно стабилизирующим агентом - натриевой солью фторурацила при соотношении компонентов в растворе, указанном выше.
Натриевая соль фторурацила усиливает противоопухолевый и ослабляет токсический эффекты основного вещества, так как она способна выступать как в качестве модулятора фармакологического действия макромолекул Ρΐ-ДНК в организме, так и в качестве стабилизатора концентрации макромолекул Ρΐ-ДНК в водном растворе средства.
- 2 015680
Однако водный раствор соединения Ρΐ-ДНК в известном средстве имеет рН 6,5-7,5, при котором использование натриевой соли фторурацила позволяет стабилизировать концентрацию Ρΐ-ДНК в растворе при температуре выше 35°С. Понижение температуры способствует выделению из раствора макромолекул соединения Ρΐ-ДНК в виде рыхлого осадка и натриевой соли фторурацила в виде кристаллов основания фторурацила, что вызывает уменьшение концентрации основного вещества и стабилизирующего агента в растворе дозированной лекарственной формы средства и отрицательно влияет на его противоопухолевую активность и терапевтическую эффективность и, кроме того, ограничивает условия его хранения и возможности применения местными аппликациями и внутрибрюшинными инфузиями, исключая внутривенные и внутриартериальные инфузии, эндолимфатические инъекции и интерстициальный путь введения.
Исходя из вышеизложенного, перед данным изобретением поставлен ряд задач, которые необходимо решить.
Одна из задач, которая стоит перед настоящим изобретением, заключается в создании противоопухолевого средства, в котором путем добавления к известному средству урацила, мочевины и натрия гидроксида обеспечивают возможность предотвращения внутримолекулярной конденсации основного вещества и протонирования вспомогательного вещества и, тем самым, избежать их осаждения и уменьшения их концентрации в растворе в интервале температур 25-15°С, чем достигают повышение противоопухолевой активности и терапевтической эффективности средства и расширение его применения.
Вторая задача, стоящая перед изобретением, заключается в разработке способа получения противоопухолевого средства, в котором путем использования водных растворов урацила, мочевины и натрия гидроксида при соответствующих технологических условиях достигают, с одной стороны, ослабления интенсивности внутримолекулярных взаимодействий кооперативного характера в молекулах Ρΐ-ДНК и, с другой стороны, усиления интенсивности взаимодействия их оснований с родственными молекулами раствора, а именно с фторурацилом, урацилом и мочевиной, которые обеспечивают возможность создания средства, которое содержит активное вещество Ρΐ-ДНК, молекулы которого не конденсируются при температуре выдерживания готового средства в интервале 25-15°С, что, в свою очередь, предупреждает и предотвращает осаждение макромолекул из раствора.
Третья задача, стоящая перед изобретением, заключается в создании способа стабилизации противоопухолевых средств на основе водного раствора соединения платины с повышенной избирательностью специфического действия и повышенной терапевтической эффективностью.
Поставленные задачи решаются предложенным изобретением.
Первая задача решается за счет того, что противоопухолевое средство на основе водного раствора соединения платины с полианионом дезоксирибонуклеиновой кислоты (Ρΐ-ДНК), которое включает неассоциированные макромолекулы Ρΐ-ДНК размером 0,05-0,15 мкм в наибольшем измерении, натрий хлористый, натрий лимонно-кислый, аммоний хлористый и фторурацил в виде натриевой соли, согласно изобретению дополнительно содержит урацил и мочевину в мольном соотношении фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1, при соотношении компонентов в водном растворе, мас.%:
Р1 -ДНК 0,130-0,153
натрий хлористый 0,080-0,090
натрий лимонно-кислый 0,040 - 0,053
аммоний хлористый 0,015-0,018
натриевая соль фторурацила 0,025 - 0,370
урацил 0,018-0,270
мочевина 0, 010-0,144,
а также натрия гидроксида до получения рН 8,4-9,9.
При этом плотность раствора составляет 1,0054-1,0058 г/см3.
Поставленная вторая задача решается за счет того, что предложен способ получения противоопухолевого средства путем выдерживания в течение 16-26 ч волокон ДНК в цитратно-солевом растворе, содержащем натрий хлористый и натрий лимонно-кислый, растворения волокон при механическом перемешивании и нагревания раствора ДНК до 70-90°С, постепенного введения в нагретый раствор ДНК нагретого до той же температуры цитратно-солевого раствора цис-дихлородиаминплатины (ДДП), термостатирования смеси растворов ДНК и ДДП при 70-90°С в течение 15-20 мин и добавления к смеси перед термостатированием водного раствора натриевой соли фторурацила, в котором согласно изобретению перед термостатированием одновременно вместе с водным раствором натриевой соли фторурацила дополнительно вводят водный раствор урацила и водный раствор мочевины с концентрациями, которые соответствуют мольному соотношению фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1, и водный раствор натрия гидроксида с рН 11,0-12,0, а потом раствор средства доводят до рН 8,4-9,9 и до плотности 1,0054-1,0058 г/см3.
- 3 015680
Предложенный способ получения противоопухолевого средства разрешает достичь повышенных значений рН и плотности раствора, что исключает возможность взаимодействия фторурацила с протонами раствора, а это, в свою очередь, обеспечивает получение средства с макромолекулами Ρΐ-ДНК, которые не конденсируются, размером 0,05-0,15 мкм в наибольшем измерении при температуре выдерживания готового средства в интервале 25-15°С. При этом повышение плотности раствора предупреждает осаждение макромолекул из раствора средства.
Об использовании основания фторурацила, урацила и мочевины в самостоятельном виде или в смеси друг с другом, так же как и об использовании регуляторов рН в качестве средств, которые препятствуют выделению из растворов макромолекулярных соединений металлов с ДНК не известно. Не известно также об использовании мочевины в дозированных лекарственных формах препаратов для парентерального введения.
Эффективные интервалы концентраций и соотношения основного вещества и солей в водном растворе, стабилизированном по способу, который заявляется, отвечают концентрациям и соотношениям, установленным при разработке известного способа получения соединения Ρΐ-ДНК в водном растворе для внутрибрюшинных, внутривенных и внутриартериальных инфузий, которые имеют рН 6,5-7,5 и выдерживаются при температуре 35-40°С. Интервалы концентраций основания фторурацила, урацила и мочевины детерминированы мольным соотношением нуклеотида Ρΐ-ДНК, основания фторурацила, урацила и мочевины, которое составляет 1:(6-12):(0,6-1,2):(0,6-1,2). Интервалы концентрации регулятора рН ограничены снизу значениями, которые исключают возможность кристаллизации основания фторурацила, а сверху - фармацевтическими требованиями.
Предложенный способ стабилизации не позволяет выделяться из раствора макромолекулам Ρΐ-ДНК и молекулам основания фторурацила, что, в свою очередь, обеспечивает получение противоопухолевых средств с такими концентрациями компонентов, которые не изменяются в их дозированных лекарственных формах при температуре выдерживания готового продукта в интервале 25-5 °С при длительном хранении.
На практике противоопухолевое средство получали следующим образом.
Волокна ДНК выдерживали в течение 16-26 ч в цитратно-солевом растворе, который содержал натрий хлористый и натрий лимонно-кислый. Растворяли их при механическом перемешивании и нагревании раствора ДНК до 70-90°С. В нагретый раствор ДНК постепенно вводили нагретый до той же температуры цитратно-солевой раствор цис-дихлородиаминплатины (ДДП). Потом добавляли к смеси водный раствор натриевой соли фторурацила. Одновременно вместе с водным раствором натриевой соли фторурацила дополнительно вводили водный раствор урацила и водный раствор мочевины с концентрациями, которые отвечали мольному соотношению фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1, и водный раствор натрия гидроксида с рН 11,0-12,0, чем раствор средства доводили до рН 8,4-9,9 и плотности 1,00541,0058 г/см3. После этого смеси растворов ДНК и ДДП в течение 15-20 мин выдерживали при температуре 70-90°С.
Примеры получения противоопухолевого средства приведены в табл. 1, где примеры 1-3 касаются средства, которое заявляется, а пример 4 - известного средства.
Таблица 1
№ примера Условия получения средства Время выдерживания ДНК, час Температура нагревай термостатирования,
Количество начальных компонентов, г/л
ДНК ДДП №С1 Να,ΠγΙ ΝϋΡιι 1!га игеа ΝαΟΗ
1 0,67 0,87 0,80 0,40 3,70 2,70 1,44 0,80 20 90
2 0,68 0,92 0,86 0,48 2,50 1,84 0,99 0,72 26 70
3 0,74 0,96 0,90 0,53 0,25 0,18 0,10 0,60 16 85
4 0,72 0,96 0,90 0,50 2,50 26 85
Обозначения в таблице: ЫаС1 - хлористый натрий, Ш3С\1 - натрий лимоннокислый, ШГ'и - натриевая соль фторурацила, Ига - урацил, Игеа - мочевина.
При молекулярных массах урацила 112 г-моль, фторурацила 153 г-моль, мочевины 60 г-моль:
для первого примера число молей урацила равняется 2,70/112=0,024; фторурацила - 3,70/153=0,024; мочевины - 1,44/60=0,024;
для второго примера число молей для указанных веществ равняется 0,016 и для третьего примера число молей для указанных веществ равняется 0,0016.
Таким образом, водный раствор урацила и водный раствор мочевины вводили с концентрациями, которые соответствовали мольному соотношению фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1.
- 4 015680
Характеристики средства, которое заявляется, в зависимости от условий получения сравнивали с характеристиками известного средства. Результаты приведены в табл. 2, где примеры 1-3 относятся к заявляемому средству, а пример 4 - к известному средству.
Таблица 2
№ примера Характеристика полученного средства
Темпера тура выдержи* ваиия, °С Состав средства, масс % Размер молекул РС-ДНК мкм Плотность раствора, г/см*
Р(-ДНК ШС1 Νβ,Ογΐ ЫЩС! ЫаРц ига игеа ЫаОН до достижения рН раствора
1 15 0,130 0,082 0,053 0,015 0,370 0,272 0,142 9,9 0,05-0,15 1,0056
2 15 0,142 0,080 0,048 0.016 0,250 0,182 0,098 8,4 0,05-0,14 1,0058
20 0,142 0,080 0,048 0,016 0.250- 0,182 0,098 8,8 0,05-0,15 1,0054
25 0,142 0,080 0,048 0,016 0250 0,182 0,098 9,2 0,05-0,15 1,0054
3 20 0,153 0,090 0,040 0,018 0,025 0,016 0,010 8,8 0,05-0,15 1,0056
4 25 0,152 0,085 0,046 0,015 0,250 6,9 0,03-0,07 1,0012
15 0.152 0,085 0,046 0.015 0,250 6,6 0,02-0,05 1,0016
Различия в водных растворах заявляемого средства и известного подтверждаются разными значениями рН, которые определены потенциометрически, и разными величинами плотности, найденными пикнометрически. Различия в пространственных структурах молекул Ρΐ-ДНК, которые образовываются при температуре ниже 35 °С в известном средстве и в заявляемом средстве подтверждаются в примерах таблицы их разными размерами в молекулярных структурах, которые по данным электронной микроскопии отличаются один от другого в 2-3 раза. Размер молекулярных структур в примерах заявляемого средства соответствует размеру неассоциированных индивидуальных макромолекул вещества, которое подтверждает отсутствие внутримолекулярной конденсации молекул Ρΐ-ДНК в средстве, выдержанном при температуре 25-15°С.
Противоопухолевую активность известного средства и заявляемого средства исследовали в тесте цитотоксичности на модели культивированных клеток, полученных из операционного материала больного злокачественной олигодендроастроцитомой головного мозга. Клетки культивировали в питательной смеси стандартного состава: среда Игла (40%), эмбриональная телячья сыворотка (30-40%), глюкоза (800 мг %), инсулин (0,2 ед/мл) при постоянном режиме газового состава и температуре 36,5°С в инкубаторе. Через 4 суток после посева в период интенсивного роста клетки контрольной культуры обрабатывали физиологическим раствором, а клетки экспериментальных культур обрабатывали растворами заявляемого средства и раствором известного средства, выдержанных при температурах 25-15°С. Время инкубации после обработки культур составило 24 ч. Противоопухолевую активность оценивали по цитотоксичности, которую характеризовали по относительному в сравнении с контролем количеству погибших клеток. Результаты подсчета относительного количества погибших клеток, выраженные в процентах, отображены в табл. 3, в которой приведены под № 1 показатели контрольной культуры клеток, обработанной физиологическим раствором, под № 2-4 - показатели экспериментальных культур клеток, обработанных растворами заявляемого средства, под № 5 - показатели экспериментальных культур клеток, обработанных раствором известного средства. Данные табл. 3 приведены без сведений о концентрации солей натрия хлористого, натрия лимонно-кислого и аммония хлористого.
- 5 015680
Таблица 3
Куль тура клеток №п/п Препарат Температура Выдерживания, °С Концент рация, мкг/мл Процент погибших клеток
Р1-ДНК ЫаЕи ига игеа
1 Физиологиче ский раствор 0,7
2 Средство по примеру №1 15 30,0 74,0 54,0 28,0 96,0
3 Средство по примеру №2 15 30,0 50,0 36,0 20,0 86,8
20 30,0 50,0 36,0 20,0 84,3
25 30,0 50,0 36,0 20,0 86,2
4 Средство по примеру №3 20 30,0 5,0 3,6 2,0 64,7
5 Средство по примеру №4 25 30,0 50,0 52,1
15 30,0 50,0 24,2
Данные табл. 3 свидетельствуют о том, что при сравнении количественной оценки противоопухолевой активности в тесте цитотоксичности заявляемое средство существенно превосходит известное. Выдержанное при одинаковой температуре 15°С и введенное в культуру при одинаковых концентрациях соединения Р1-ДНК 30 мкг/мл и натриевой соли фторурацила 50 мкг/мл известное средство вызывает гибель только 24,2% клеток, тогда как заявляемое - 86,8%.
Таким образом, предложенное средство сохраняет свою высокую противоопухолевую активность и терапевтическую эффективность даже при температурах 25-15°С, что значительно упрощает его хранение, транспортировку и использование.
Предложенное средство может быть использовано в разных дозированных формах.
Противоопухолевое заявляемое средство было применено в клинической терапии первичных и метастатических опухолей легких, почек, брюшины и плевры, органов пищеварения и опорно двигательного аппарата в дозированных формах для внутривенного, внутриартериального и внутрибрюшного введения; в терапии опухолевых поражений головы, шеи и кожи - в дозированных формах для местного применения в виде аппликаций; при опухолях головного мозга - интерстициально с внутриоперационной имплантацией резервуара Оммуа в ложе хирургически удаленной опухоли. Опыт клинического применения заявляемого средства показал, что использование его дозированных форм как для внутрибрюшного и местного применения, так и для внутривенного, внутриартериального и интерстициального введения повышает эффективность химиотерапии, которая выражается в увеличении продолжительности жизни больных и повышении качества жизни во время проведения курса лечения и в отдаленный период времени. При этом каких-нибудь важных клинических или лабораторных проявлений побочных эффектов у больных не было выявлено.
Следующая (третья) задача решается данным изобретением за счет того, что предложен способ стабилизации противоопухолевых средств на основе водного раствора соединения платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой (Р1-ДНК), в соответствии с которым в качестве дополнительного стабилизирующего агента используют смесь основания фторурацила с урацилом и мочевиной в мольном соотношении нуклеотида Р1-ДНК, основания фторурацила, урацила и мочевины 1:(6-12):(0,6-1,2):(0,6-1,2) при понижении концентрации протонов в растворе до 8,4-9,9. Кроме того, используют соединения платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой (Р1-ДНК) в концентрации 1,30-1,53 мг/мл, натрий хлористый в количестве 0,80-0,90 мг/мл, натрий лимонно-кислый в количестве 0,40-0,53 мг/мл, аммоний хлористый в количестве 0,15-0,18 мг/мл и дополнительный стабилизирующий агент, согласно изобретению используют комплекс Р1-ДНК, молекулы которого ниже 35°С не выделяются из раствора.
В составе средства макромолекулы Р1-ДНК могут содержать одну из ДНК, выделенную из природных источников или синтезированную методами генной инженерии с молекулярной массой, не ограничиваясь этим, 0,3-20 млн Да.
Для доведения рН раствора в средствах до 8,4-9,9 используют либо гидроксид натрия, либо гидроксид калия, либо гидроксид аммония, либо какой-нибудь другой фармакологически приемлемый регулятор рН.
Заявляемый способ стабилизации был применен в технологии получения противоопухолевых средств, перечисленных в табл. 4, которые отличались друг от друга природой ДНК, предшествующей соединению Р1-ДНК.
- 6 015680
Таблица 4
№ противоопухолевого средства Характеристика ДНК-предшественницы соединения РсДНК
Происхождение Соотношении А + Т г+ц Молекулярная масса, млн дальтон
1 Генно-инженерная ДНК филадельфийской хромосомы 1,38 0,3 -0,5
2 Молоки лососевых и осетровых рыб 1,43 0,3-0,5
3 Селезенка крысы 1,43 3-4
4 Селезенка крупного рогатого скота, марки Б 1,36 4-7
5 Селезенка поросенка, марки Б 1,43 5-6
6 Опухоль печени человека 1,54 18-20
7 Лейкозная опухоль Швеца крысы 1,04 17-18
8 Селезенка крупного рогатого скота, марки А 1,36 7-14
9 Селезенка поросенка, марки А 1,43 12-16
Обозначения в таблице: А - аденин, Т - тимин, Г - гуанин, Ц - цитозин.
На практике способ стабилизации противоопухолевых средств осуществляли следующим образом. В водный раствор, содержащий соединение Ρΐ-ДНК, макромолекулы которого ниже 35 °С не выделяются из раствора, натрий хлористый, натрий лимонно-кислый и аммоний хлористый, вводили водный раствор дополнительного стабилизирующего агента, содержащий, смесь основания фторурацила, урацила и мочевины. Одновременно вместе с водным раствором стабилизирующего агента дополнительно вводили водный раствор регулятора рН, содержащий натрия гидроксид до рН 11,0-12,0, которым раствор целевого средства доводили до рН 8,4-9,9.
Конкретные условия способа стабилизации противоопухолевых средств, представленных в табл. 4, с указанием количеств исходных компонентов в растворе основного вещества, в растворе дополнительного стабилизирующего агента и в растворе регулятора рН приведены в табл. 5, где примеры 1-9 касаются способа, который заявляется, а примеры 10 и 11 - известного способа.
- 7 015680
Таблица 5
№ № Условия осуществления способа
Количество исходных компонентов, г/л
в растворе основного вещества в растворе стабилизирующего агента В раствоворе регулятора рН
Р1-ДНК ИаС1 Ча3Су1 ЧНдС! ЧаЬ'и Ри ига Бгеа ЧаОН
1 1 1,30 0,83 0,53 0,17 2,75 0,236 0,127 0,75
2 2 133 0,87 ОДО 0,15 3,23 0,255 0,149 0,73
3 3 1,48 0,80 0,46 0,18 3,12 0,224 0,132 0,80
4 4 130 0,90 0,48 0,15 2.38 0,205 0,122 0,63
5 5 1,30 0,85 0,45 0,16 2,06 0,158 0,106 0,68
6 6 1,30 0,80 0,40 0,15 1Д7 0,118 0,063 0,60
7 7 1,40 0,85 0,46 0,16 1,47 0,147 0,080 0,70
8 8 1ДЗ 0,90 033 0,18 1 1.62 0,139 0,099 0,80
9 9 1,48 0,88 0,42 0,17 2,34 0,157 0,108 0,75
10 8 130 0,90 030 0,18 1,89
11 9 1,48 0,80 озз 0,15 1,82
Обозначения в таблице: ЫаС1 - натрий хлористый; Ыа3Су! - натрий лимоннокислый; ΝΗ4Ο1 - аммоний хлористый; ЫаЕи - натриевая соль фторурацила; Ги - основание фторурацила; Ига - урацил; Цгеа - мочевина; ΝαΟΗ - натрия гидроксид.
Характеристики способа, который заявляется, в зависимости от условий осуществления и температуры выдерживания средства сравнивали с характеристиками известного способа по данным, приведенным в табл. 6, где примеры 1-9 касаются способа, который заявляется, а примеры 10 и 11 - известного способа.
- 8 015680
Таблица 6
№ примера № противоопухолевого средства Характеристика способа
температура выдерживания средства, °С концентрация ком растворе средства понентов в мг/мл Мольное соотношение нуклеотида Ρΐ- ДНК, Ей, В Та и Цгеа
Ρΐ- ДНК №С1 Ка,Су( \Щ1 Ν«Ριι Ей ИаОН ДО дост ижения
1 1 25 130 0,87 033 0,17 2,75 93 1:12:1,2:1,2
2 2 20 1,53 0,83 0,50 0,15 3,22 9,4 1:12:1,1:1,2.
3 3 20 1,48 0,80 0,46 0,18 3,12 9,8 1:12:1-.1,1
4 4 15 1,50 0,90 0,48 0,15 2,37 8,7 1:9:0,9:1,0
<5 5 10 130 0,85 0,45 0,16 2,65 8,8 1:9:0,8:1,0
6 6 5 1,30 0,80 0,40 0,15 137 »3 1:6:0,6:0,6
7 7 5 1,40 0,84 0,45 0,17 1,47 8,9 1:6:0,7:0,7
8 8 20 133 0,90 0,53 0,18 1,62 9,9 1:6:0,6:0,8
8 15 133 0,87 0,51 0,16 1,62 9,9 1:6:0,6:0,8
8 10 133 0,90 0,52 0,17 1,62 9,8 1:6:0,6:0,8
9 9 15 1,48 0,88 0,42 0,16 2,32 9,2 1:9:0,7:0,9
9 10 1,48 0,87 0,40 0,15 2,32 93 1:9:0,7:0,9
9 5 1,48 0,88 0,41 0,16 232 9,1 1:9:0,7:0,9
10 8 38 130 0,90 0,50 0,18 1,89 7,0
8 15 1,04 0,90 0,50 0,18 1,47 6,8
И 9 38 1,48 0,85 0,53 0,15 1,82 8,0
9 10 0,63 0,85 озз 0,15 1,19 7,6
Различия в характеристиках заявляемого и известного способов подтверждаются разными интервалами значений рН, измеренными потенциометрически, и отсутствием температурной зависимости концентраций основного вещества и дополнительного стабилизирующего агента, контролируемых методами количественного анализа. Различия в концентрациях, которые возникают при температуре ниже 35°С в известном способе, подтверждаются в примерах таблицы уменьшением концентрации соединения Ρΐ-ДНК от 1,50 до 1,04 мг/мл, т.е. на 30,7%, а №1Ри от 1,89 до 1,47 мг/мл, т.е. на 22% в водном растворе средства, выдержанном при 15°С. При выдерживании средства около 10°С концентрация уменьшается для Ρΐ-ДНК от 1,48 до 0,63 мг/мл, т.е. уже на 57,4%, а для №1Ри от 1,82 до 1,19 мг/мл, т.е. на 34,4%. Концентрации основного вещества и дополнительного стабилизирующего агента в примерах способа, который заявляется, соответствуют концентрациям в растворах, выдерживаемых при температурах выше 35°С, что подтверждает возможность способа обеспечить условия, при которых макромолекулы Ρΐ-ДНК и молекулы основания фторурацила не выделяются из раствора при выдерживании целевого продукта в интервале температур 25-5°С.
Противоопухолевую активность, которую способны обеспечить заявляемый и известный способы стабилизации средствам, исследовали в тесте цитотоксичности на модели адаптированных для культивирования клеток злокачественной астроцитомы головного мозга человека. Клетки поддерживали в питательной среде Игла с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки, глюкозы и инсулина при постоянном режиме газового состава и температуре 36,5°С в инкубаторе. В период интенсивного роста клетки контрольной культуры обрабатывали физиологическим раствором, а клетки экспериментальных культур - растворами средств, стабилизированных по заявляемому и известному способам, которые предварительно выдерживали при температуре 10°С. Противоопухолевую активность оценивали по цитотоксичности, характеризуемой относительным по отношению к контролю количеством клеток, погибших через 24 ч после обработки средствами. Результаты подсчета относительного количества погибших клеток, выраженного в процентах, даны в табл. 7, где под № 1 приведены показатели контрольной культуры клеток, обработанных физиологическим раствором, под № 2-5 - показатели экспериментальных культур, обработанных растворами средств, стабилизированных по заявляемому способу, под № 6 - показатели
- 9 015680 экспериментальной культуры, обработанной раствором средства, стабилизированного по известному способу.
Таблица 7
Культура клеток №№ п/и Температура выдерживания Средство Количество мл средства на 1 л среды культивиро- Концентрация РС-ДНКв среде Процент погибших клеток
1 10 Физиологический раствор 0,02 1Д
2 10 Средство № 8, стабилизированное по способу в примере 8 0,02 30,6 86,4
3 10 Средство № 9, стабилизированное по способу в примере 9 0,02 29,6 80,4
4 10 Средство № 5, стабилизированное по способу в примере 5 0,02 26,0 78,8
5 10 Средство № 3, стабилизированное по способу в примере 3 0,02 29,6 82,1
6 10 Средство № 9, стабилизированное по способу в примере 9 0,02 12,6 32,2
Данные табл. 7 свидетельствуют о том, что при сравнении количественной оценки противоопухолевой активности в тесте цитотоксичности заявляемый способ стабилизации существенно превосходит известный. Выдержанные при одинаковой температуре 10°С и примененные в одинаковых объемах 0,02 мл с одинаковыми количествами 1,48 мг/мл Ρΐ-ДНК при температуре выше 35°С водные растворы средства, стабилизированного по известному способу, после введения в среду культивирования объемом 1 л создают в ней концентрацию основного вещества всего 12,6 мг/л, которая вызывает гибель только 32,2% клеток, тогда как водные растворы средства, стабилизированного по заявляемому способу, после введения в среду культивирования создают в ней концентрацию Ρΐ-ДНК 29,6 мг/л, которая вызывает гибель 80,4-82,1 % клеток.
Таким образом, предложенный способ стабилизации обеспечивает повышенное избирательное специфическое действие комплекса Ρΐ-ДНК и его повышенную терапевтическую эффективность даже при температурах 25-5°С, а также обеспечивает расширенные условия хранения средств и расширенный диапазон их применения за счет использования комплекса платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой (Ρΐ-ДНК), макромолекулы которого ниже 35°С не выделяются из раствора, за счет использования смеси основания фторурацила с урацилом и мочевиной, а также за счет использования раствора с пониженной концентрацией протонов.
Противоопухолевые средства, стабилизированные по заявляемому способу, могут быть использованы в разных дозированных формах.
Опыт клинического применения противоопухолевых средств, стабилизированных по заявляемому способу, показал, что их использование в дозированных формах как для внутрибрюшинного и местного путей введения, так и для внутривенного, внутриартериального, эндолимфатического и интерстициального повышает эффективность терапии первичных и метастатических опухолей, локализованных в области головы, шеи, легких, почек, органов пищеварения и опорно-двигательного аппарата. Повышение эффективности выражается в увеличении продолжительности жизни больных и улучшении качества их жизни как во время проведения курсов лечения, так и в отдаленный после лечения период времени. При этом каких -либо серьезных клинических или лабораторных проявлений побочных эффектов у больных не было выявлено.

Claims (11)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Противоопухолевое средство на основе водного раствора соединения платины с полианионом дезоксирибонуклеиновой кислоты, содержащее неассоциированные макромолекулы Ρΐ-ДНК размером 0,05-0,15 мкм в наибольшем измерении, натрий хлористый, натрий лимонно-кислый, аммоний хлористый и фторурацил в виде натриевой соли, которое отличается тем, что оно дополнительно содержит урацил и мочевину в мольном соотношении фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1 при соотношении компонентов в водном растворе, мас.%:
    Ρί-ДНК 0,130-0,153 натрий хлористый 0,080-0,090 натрий лимонно-кислый 0,040- 0,053 аммоний хлористый 0,015-0,018 натриевая соль фторурацила 0,025 - 0,370 урацил 0,018-0,270 мочевина 0, 010-0,144,
    а также натрия гидроксид для достижения рН 8,4-9,9.
  2. 2. Противоопухолевое средство по п.1, которое отличается тем, что плотность раствора равняется 1,0054-1,0058 г/см3.
  3. 3. Способ получения противоопухолевого средства путем выдерживания в течение 16-26 ч волокон ДНК в цитратно-солевом растворе, который содержит натрий хлористый и натрий лимонно-кислый, растворения волокон при механическом перемешивании и нагревании раствора ДНК до 70-90°С, постепенного введения в нагретый раствор ДНК нагретого до той же температуры цитратно-солевого раствора цис-дихлородиаминплатины (ДДП), термостатирования смеси растворов ДНК и ДДП при 70-90°С в течение 15-20 мин и добавления к смеси перед термостатированием водного раствора натриевой соли фторурацила, который отличается тем, что перед термостатированием одновременно вместе с водным раствором натриевой соли фторурацила дополнительно вводят водный раствор урацила и водный раствор мочевины с концентрациями, которые соответствуют мольному соотношению фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1, и водный раствор натрия гидроксида с рН 11,0-12,0, а потом раствор средства доводят до рН 8,4-9,9 и до плотности 1,0054-1,0058 г/см3.
  4. 4. Способ стабилизации противоопухолевых средств на основе водного раствора соединения платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой (Ρΐ-ДНК), который отличается тем, что в качестве дополнительного стабилизирующего агента используют смесь основания фторурацила с урацилом и мочевиной в мольном соотношении нуклеотида Ρΐ-ДНК, основания фторурацила, урацила и мочевины 1:(6-12):(0,61,2):(0,6-1,2) при понижении концентрации протонов в растворе до 8,4-9,9.
  5. 5. Способ по п.4, который отличается тем, что концентрация комплекса Ρΐ-ДНК составляет 1,30-1,53 мг/мл.
  6. 6. Способ по п.4, который отличается тем, что средство дополнительно содержит натрий хлористый в количестве 0,80-0,90 мг/мл.
  7. 7. Способ по п.4, который отличается тем, что средство дополнительно содержит натрий лимоннокислый в количестве 0,40-0,53 мг/мл.
  8. 8. Способ по п.4, который отличается тем, что средство дополнительно содержит аммоний хлористый в количестве 0,15-0,18 мг/мл.
  9. 9. Способ по п.4, который отличается тем, что используют терапевтически приемлемую ДНК, выделенную из природных источников или синтезированную методами генной инженерии, с молекулярной массой 0,3-20 млн Да.
  10. 10. Способ по п.4, который отличается тем, что для доведения рН раствора в средствах до 8,4-9,9 используют или гидроксид натрия, или гидроксид калия, или гидроксид аммония, или какой-нибудь другой фармакологически пригодный регулятор рН.
  11. 11. Противоопухолевое средство на основе водного раствора соединения платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой, которое стабилизировано в соответствии со способом по п.4.
    4^8) Евразийская патентная организация, ЕАПВ
    Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
EA201100618A 2008-12-22 2009-11-23 Противоопухолевое средство, способ его получения и способ его стабилизации EA201100618A1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UA200814666 2008-12-22
UAA200906849A UA90233C2 (ru) 2009-06-30 2009-06-30 Способ стабилизации противоопухолевых средств на основе водного раствора соединения платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой
PCT/UA2009/000058 WO2010074662A1 (ru) 2008-12-22 2009-11-23 Противоопухолевое средство, способ его получения и способ его стабилизации

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA015680B1 true EA015680B1 (ru) 2011-10-31
EA201100618A1 EA201100618A1 (ru) 2011-10-31

Family

ID=42288021

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201100618A EA201100618A1 (ru) 2008-12-22 2009-11-23 Противоопухолевое средство, способ его получения и способ его стабилизации

Country Status (8)

Country Link
CN (1) CN102227222B (ru)
BG (1) BG66625B1 (ru)
BR (1) BRPI0923273A2 (ru)
EA (1) EA201100618A1 (ru)
IL (1) IL213446A (ru)
PL (1) PL219734B1 (ru)
TR (1) TR201104008T1 (ru)
WO (1) WO2010074662A1 (ru)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102784098A (zh) * 2011-05-20 2012-11-21 湖南省湘中制药有限公司 丙戊酸镁注射液及其制备工艺
JP6286447B2 (ja) * 2013-01-04 2018-02-28 ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム シトラートを含む組成物およびその適用
CN104027301B (zh) * 2013-03-05 2017-05-10 肖云彩 一种奥拉西坦组合物注射液
RU2667128C2 (ru) 2016-12-29 2018-09-14 Герман Петрович Беккер Композиция для приготовления противоопухолевого средства и способ приготовления противоопухолевого средства на ее основе

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5534513A (en) * 1991-09-05 1996-07-09 Taiho Pharmaceutical Company, Ltd. Antitumor potentiator and antitumor composition
UA70456A (en) * 2003-09-23 2004-10-15 Serhii Oleksandrovych Shalimov Dosage form of infusional antineoplastic drug and dosage form of infusional antineoplastic drug and method for its production method for its production
UA70455A (en) * 2003-09-23 2004-10-15 Serhii Oleksandrovych Shalimov Antineoplastic platinum drug for topical treatmentantineoplastic platinum drug for topical treatment of oropharyngeal cancer and method for its usage of oropharyngeal cancer and method for its usage

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5534513A (en) * 1991-09-05 1996-07-09 Taiho Pharmaceutical Company, Ltd. Antitumor potentiator and antitumor composition
UA70456A (en) * 2003-09-23 2004-10-15 Serhii Oleksandrovych Shalimov Dosage form of infusional antineoplastic drug and dosage form of infusional antineoplastic drug and method for its production method for its production
UA70455A (en) * 2003-09-23 2004-10-15 Serhii Oleksandrovych Shalimov Antineoplastic platinum drug for topical treatmentantineoplastic platinum drug for topical treatment of oropharyngeal cancer and method for its usage of oropharyngeal cancer and method for its usage

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
USSERY D.W., DNA Denaturation, Academic Press, 2001, [on-layn]. Naydeno iz Internet: <URL:http://www.cbs.dtu.dk/stafβ'dave/genomics_course/2001_DNAdenature.pd?ú>, str. 2, kol. 1, stroki 3-6 *

Also Published As

Publication number Publication date
IL213446A0 (en) 2011-07-31
CN102227222B (zh) 2012-11-21
PL219734B1 (pl) 2015-07-31
BG66625B1 (bg) 2017-12-15
WO2010074662A1 (ru) 2010-07-01
BRPI0923273A2 (pt) 2014-01-28
TR201104008T1 (tr) 2011-10-21
IL213446A (en) 2013-11-28
BG110926A (bg) 2011-10-31
CN102227222A (zh) 2011-10-26
EA201100618A1 (ru) 2011-10-31
PL394863A1 (pl) 2011-09-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2063881B1 (en) A composition and method for the efficacious and safe administration of halopyruvate for the treatment of cancer
JP2005515202A (ja) プラチナ誘導体の薬学的調合物
JP2020530467A (ja) 癌転移を処置するためにキナーゼを標的とする方法
EA015680B1 (ru) Противоопухолевое средство, способ его получения и способ его стабилизации
BG106589A (bg) Фармацевтични разтвори от левосимендан
CN107362370B (zh) 一种基于金纳米簇联合NGF siRNA治疗胰腺癌的方法
KR100644172B1 (ko) 핵산 함유 복합체 제제의 제조 방법
US20120302503A1 (en) PEPTIDES FOR PREVENTING OR TREATING A DISEASE OR DISORDER ASSOCIATED WITH CBP OR p300 MISREGULATION, AND METHODS FOR USE AND IDENTIFICATION THEREOF
CN101732345A (zh) 顺铂脊柱肿瘤缓释植入剂及其制备方法
RU2461375C1 (ru) Способ комбинированного лечения больных местно-распространенным раком желудка
CN107698639A (zh) 一类吉西他滨磷酸酯的n‑甲酸酯乏氧活化前药及其应用
US11674141B2 (en) Ischemic-lesion-site-specific gene therapy
WO2009096245A9 (ja) 医薬組成物又は組合せ剤
CN114569545B (zh) 一种稳定的米托蒽醌制剂
UA90233C2 (ru) Способ стабилизации противоопухолевых средств на основе водного раствора соединения платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой
CN113144213B (zh) 一种多级pH响应基因-药物共递送的纳米药物、制备方法及其应用
CN113150067B (zh) Gsdme抑制剂及其在肿瘤化疗诱导的消化道损伤防治中的用途
WO2022143766A1 (zh) 苯酞化合物于脑膜瘤治疗的应用
EP3384900B1 (en) Stable dosage form of etidronate-cytarabine conjugate
CN112574071A (zh) 一种双胍基连接脂肪碳链的两亲性二甲双胍衍生物及其制药用途
CN107837237B (zh) 一种培美曲塞二钠药物组合物及其制备方法
BRPI0923273B1 (pt) Anitumor agent and methods for production and stabilization
CN101683346B (zh) 一种替拉扎明非肠道含水制剂及其制备方法
UA86338C2 (ru) Противоопухолевое средство на основе водного раствора комплекса платины с днк и способ его получения
CN104619324A (zh) 治疗肿瘤的组合药物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU

NF4A Restoration of lapsed right to a eurasian patent

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU

PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU