CN101683346B

CN101683346B - 一种替拉扎明非肠道含水制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN101683346B
Application number: CN200810161583.0A
Authority: CN
Inventors: 孟昭珂; 郭殿武; 杜九龄
Original assignee: Hangzhou Minsheng Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Hangzhou Minsheng Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2008-09-24
Filing date: 2008-09-24
Publication date: 2015-04-01
Anticipated expiration: 2028-09-24
Also published as: CN101683346A

Abstract

本发明提供了一种替拉扎明非肠道含水制剂及其制备方法，其中所述制剂包括：浓度为1—500mmol/l的药学制剂中可接受的除柠檬酸、乳酸外的有机酸盐缓冲液或无机酸盐缓冲液或者由无机酸盐和有机酸组成的缓冲液和浓度为0.01—4mmol/l的替拉扎明或其可用的盐。其中所述制剂的pH值为2.0～7.0。解决了现有技术中替拉扎明溶液放置容易析出的问题，增强该制剂的稳定性和安全性，满足临床和广大患者对该药的需求。

Description

一种替拉扎明非肠道含水制剂及其制备方法

技术领域

本发明属药物制剂技术领域，具体涉及一种替拉扎明非肠道含水制剂及其制备方法。

背景技术

替拉扎明，英文名称tirapazamine或TPZ，化学名称：3-氨基-1，2，4苯并三嗪-1，4-二氧化物(3-Amino-1，2，4-benzotuiazine-1，4-dioxide)，又名Win59075或SR4233，其化学结构式如下：

(替拉扎明的化学结构式)

分子式：C₇H₆N₄O₂

分子量：178

替拉扎明是一种新型的生物还原活性物。它在肿瘤组织乏氧细胞内能够被还原生成一种具有细胞毒性作用的代谢产物。这种代谢产物对乏氧细胞的杀伤作用显著超过它的母体化合物，使肿瘤组织内乏氧细胞死亡，可以同时显著增加肿瘤放射治疗及肿瘤一系列化学治疗药物的抗肿瘤作用，因而作为一种新颖的乏氧细胞增敏剂被引入基础及临床实验。

替拉扎明的作用机制：替拉扎明对乏氧细胞具有特异的细胞毒性。在乏氧细胞存在的情况下，替拉扎明在细胞内代谢产生自由基，自由基与DNA大分子结合，导致DNA损害和细胞死亡。Katherineb等认为替拉扎明在细胞核内代谢是替拉扎明引起DNA破坏及产生细胞毒性的主要原因。他们还通过大量的试验证实替拉扎明在乏氧细胞内抑制DNA复制的作用显著高于电离辐射。同时，delahoussayeym等对替拉扎明的代谢机制进行深入的研究：替拉扎明经乏氧细胞核内某些还原酶作用后的代谢产物均可DNA单链断裂。而另一方面DNA的双链断裂是由于替拉扎明被细胞核内一未知的依赖NADPH活性的还原酶还原产生的化合物所致。

替拉扎明作为放疗增敏剂：与放射线联合治疗恶性实体肿瘤的作用机制经过长期的研究证实，几乎所有的人类恶性实体肿瘤中无论肿瘤的大小均存在乏氧细胞，一般约占肿瘤细胞的10％～20％左右，也有高达50％或者少至1％，还有一些细胞介于乏氧状态与有氧状态之间。恶性实体肿瘤内的乏氧细胞当氧张力低于0.5mmHg时就会产生对放射治疗的抵抗性，其氧增强比(Oxygenationenhancementrate OER)为25～30，即杀灭乏氧细胞所需剂量是杀灭有氧细胞所需剂量的三倍。在有氧状态下，由于分子氧的存在而把应在照射中能得到修复的损伤固定下来，不再产生修复。因此，肿瘤乏氧细胞经照射后产生的损伤中，由于乏氧，可以使它们得到修复，也就增加了对放射线的抵抗性。替拉扎明能选择性的杀伤乏氧细胞，低LET射线则主要杀伤非乏氧细胞，两者联合应用，将使放射治疗的效果大大增强。Brown等报道了对荷SCCV I I、RIF、EMT6、KHT/R瘤的C₃H/Km小鼠和BALB/c小鼠实验的结果：在分次照射前给予008mmol/Kg的替拉扎明，采用体内实验/离体存活分析方法进行评价，证明替拉扎明可以显著增加辐射所引起的肿瘤细胞死亡，并且替拉扎明剂量修饰因子(DMF)值显著大于传统放射增敏剂SR2508。

替拉扎明作为化疗增敏剂与顺铂联合应用治疗恶性肿瘤的分子机制的研究进展。以往研究表明，肿瘤细胞对顺铂的敏感性取决于两种DNA交联修复蛋白Ercc1和XRA的表达，且顺铂能上调ERCC1的表达。Goldbergz等应用替拉扎明和顺铂对两种不同的细胞株分别进行处理，两种细胞株一种对顺铂高度敏感一种对顺铂不敏感，处理方法分为同时用药和先后用药两种，结果发现两种处理方法对顺铂敏感组ERCC1mRNA和蛋白表达均没有显著改变。在顺铂不敏感组，替拉扎明可以上调ERCC1的表达，而顺铂对ERCC1的表达没有影响。XRA的表达在各组均未见改变。据此，Goldbergz等认为替拉扎明与顺铂的协同作用，并非由于替拉扎明抑制ERCC1和XRA的表达所致，替拉扎明的乏氧细胞毒性也许起到了更为重要的作用。

目前国外针对替拉扎明与放射治疗和化学药物联合应用治疗恶性实体肿瘤的临床试验已经大规模的展开。替拉扎明作为一种放射治疗、化学治疗的增敏药物，与放射治疗与化学治疗联合应用时具有协同的抗肿瘤活性，增加了放射治疗、化学治疗对肿瘤的杀伤效应，毒副反应可以耐受，没有出现危及生命的或不可恢复的毒副作用，为抗肿瘤治疗开辟了新的领域。因此，在肿瘤的治疗中，预期有很好的应用前景。

1992年12月29日出版的US5175827公开了1，2，4-苯并三嗪氧化物与放射治疗结合用于治疗肿瘤的应用。1，2，4-苯并三嗪氧化物使肿瘤细胞对放射治疗敏感，并且使患者更顺应治疗的用药程式。

Holden等(1992)在“用SR-4233加强烷基化试剂在FSaIIC鼠纤维肉瘤中的活性”(JNCI84：187-193)公开了SR-4233(即3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氧化物，该化合物是已知的，并且在下文中被称作替拉扎明)与抗肿瘤烷基化试剂结合的应用。

国际申请PC/US1989/01037公开了用作放射增敏剂和选择性细胞毒剂的1，2，4-苯并三嗪氧化物。其他有关的专利包括：US3868372和US4001410，公开了1，2，4-苯并三嗪氧化物的衍生物。

国际申请PCT/US1996/13550公开了1，2，4-苯并三嗪氧化物的制剂。它是一种非肠道的含水制剂，其主要特征为含有柠檬酸盐缓冲液，并且限定了柠檬酸盐的浓度为0.001M—0.1M，最优选的处方中加入的柠檬酸为0.9605克，加水稀释至1000ml。同时规定了主药替拉扎明的优选剂量范围为0.5—0.810克，最优选的处方中加入替拉扎明0.7克，加水稀释至1000ml。经过换算，该专利中提到的替拉扎明的浓度范围为0.0028M—0.0046M。

但是，替拉扎明的缺点是在非肠道给药的药物载体中的溶解度不够，并且在这些载体中不稳定。原有同类制剂在低温存放过程中存在不稳定、贮藏期较短、易受温度影响而析出等缺陷。

在对替拉扎明的水性制剂研究中，我们发现替拉扎明在水中的溶解性非常差，按照现有技术(包括国际申请PCT/US1996/13550中公开的技术方案)配制的注射液非常的不稳定，在常温(20℃)条件下放置一段时间，就会析出少量结晶，后证明结晶为替拉扎明。而在低温(4℃)放置24小时后，也会有替拉扎明结晶析出。由于替拉扎明水性制剂是作为注射液使用，主药替拉扎明的析出会严重影响患者使用的安全性和有效性，增大药物使用的风险。因此，研制出一种更为安全、稳定、有效、且符合人体注射要求的替拉扎明水性制剂，成为了药物制剂研究工作者的当务之急。

发明内容

本发明的目的，在于找到一种更稳定的替拉扎明非肠道含水制剂，以解决现有技术方案中替拉扎明放置容易析出的问题，增强该制剂的稳定性和安全性，满足临床和广大患者对该药的需求。

为提高替拉扎明制剂的稳定性和延长贮藏期，我们对新型替拉扎明的非肠道含水制剂进行了全面地研究。

替拉扎明的生化性质表明该分子既不是高极性的，也不是高亲脂性的，其结晶结构是通过分子间力牢固键合的，因此替拉扎明可以是水合形式。且高温高压应激反应结果表明，替拉扎明生理盐水制剂pH值明显变化，表明该制剂需要一定程度的缓冲。

已知控制适当的pH对于保持替拉扎明制剂的稳定性很重要。允许施用适当的药用可接受的酸性化合物或缓冲体系。优选的酸性化合物包括药用可接受的pKa在2~4.5之间的有机酸，这些酸包括2-羟基烷醇酸，如枸橼酸、乳酸、酒石酸或苹果酸。如使用药用可接受的缓冲体系，从缓冲体系类别中选择可有效地维持pH在5以下，优选在2~4.5范围间，缓冲剂的配制是使用广为所知的方法。

新处方通过调整替拉扎明的非肠道含水制剂的缓冲剂，选取醋酸盐缓冲液和磷酸盐缓冲液作为溶剂环境来提高替拉扎明制剂的稳定性和贮藏时间。

磷酸盐缓冲液(pH2)甲液：取磷酸16.6毫升，加水至1000毫升摇匀；乙液：取磷酸二氢钠71.63克，加水使溶解成1000毫升。取上述甲液72.5毫升与乙液27.5毫升混合。

醋酸铵缓冲液(pH3.5)取醋酸铵25克，加水25毫升溶解后，加7mol/L盐酸溶液38毫升，用2mol/L盐酸溶液准确调节ph至3.5，用水稀释至100毫升。

醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.6)取醋酸钠5.1克，加冰醋酸20毫升，再加水稀释至250毫升。

枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)甲液：取枸橼酸21克或无水枸橼酸19.2克，加水使溶解成1000毫升。乙液：取磷酸氢二钠71.63克，加水使溶解成1000毫升，取上述甲液61.45毫升与乙液38.55毫升混合，摇匀，既得。

醋酸-醋酸钾缓冲液(pH4.3)取醋酸钾14克，加冰醋酸20.5毫升，再加水稀释至1000毫。

醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)取醋酸钠18克，加冰醋酸9.8毫升，再加水稀释至1000毫升。

醋酸-醋酸铵缓冲液(pH4.5)取醋酸铵7.7克，加水50毫升溶解后，加冰醋酸6毫升，稀释至100毫升。

最优是醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.6)。

本发明提供了一种替拉扎明非肠道含水制剂，其中包括：浓度为1—500mmol/l的药学制剂中可接受的除柠檬酸、乳酸外的有机酸盐缓冲液或无机酸盐缓冲液或者由无机酸盐和有机酸组成的缓冲液和浓度为0.01—4mmol/l的替拉扎明或其可用的盐。其中所述制剂的pH值为2.0～7.0。

进一步的，其中所述的有机酸盐缓冲液为醋酸盐缓冲液；所述无机酸盐缓冲液为磷酸盐缓冲液；所述由无机酸盐和有机酸组成的缓冲液为枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液；所述制剂的pH值为2.0～7.0。

所述非肠道含水制剂优选处方1000ml水溶液基本组成为：

0.00178克—0.712克替拉扎明或其可药用盐；

0.0819克—41克醋酸钠；

0.321ml—160ml冰醋酸；

pH值为2.5～6.5。

更优选处方中醋酸-醋酸钠缓冲液浓度为5—10mmol/l，替拉扎明或其可药用盐浓度为0.05—3.3mmol/l的，其1000ml水溶液基本组成为：

0.0089克—0.59克替拉扎明或其可药用盐；

0.4095克—27.3克醋酸钠；

1.605ml—107ml冰醋酸；

pH值为3.0～6.0。

最优选处方1000ml水溶液基本组成为：

0.5克替拉扎明或其可药用盐；

20.4克醋酸钠；80ml冰醋酸；

pH值为3.6。

或者最优选处方1000ml水溶液基本组成为：

0.015克替拉扎明或其可药用盐；

0.612克醋酸钠；

2.4ml冰醋酸；

pH值为6.0。

本发明还提供了一种制备替拉扎明非肠道含水制剂的方法，其特征在于：用水配制所述的缓冲液，升高温度，并使缓冲液温度保持50-60℃，缓慢加入替拉扎明或其可药用盐搅拌使完全溶解，冷却至常温后，添加或不添加注射用制剂所用的附加剂，加适量水至1000毫升，调PH，即得。

根据所需用途，制成大输液添加注射用制剂所用的附加剂；制成小针可添加也可不添加注射用制剂所用的附加剂。其中所述附加剂可以为输液制剂常用的等渗调节剂(如氯化钠、葡萄糖等)，稳定剂和抗氧化剂等。

本发明还提供了一种包含有化合物替拉扎明的非肠道含水制剂在制备治疗癌瘤的药物中的用途，其中所述制剂处方包括：浓度为1—500mmol/l的药学制剂中可接受的除柠檬酸、乳酸外的有机酸盐缓冲液或无机酸盐缓冲液或者由无机酸盐和有机酸组成的缓冲液和浓度为0.01—4mmol/l的替拉扎明或其可用的盐；pH值为2.0～7.0。

具体实施方式

下面结合以下实例对本发明做进一步描述，但本发明并不仅仅限于此。

制剂制备实施例一：

A：替拉扎明 0.712克

B：醋酸钠 41克

C：冰醋酸 160毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为2.5。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例二：

A：替拉扎明 0.0089克

B：醋酸钠 0.4095克

C：冰醋酸 1.605毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约50℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后，添加氯化钠等渗透压调节剂，加适量水至1000毫升，pH约为6.0。

制剂用途：静脉滴注。

制剂制备实施例三：

A：替拉扎明 0.59克

B：醋酸钠 27.3克

C：冰醋酸 107毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约55℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为6.0。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射

制剂制备实施例四：

A：替拉扎明 0.00178克

B：醋酸钠 0.0819克

C：冰醋酸 0.321毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后，添加葡萄糖等渗透压调节剂，加适量水至1000毫升，pH约为6.5。

制剂用途：静脉滴注。

制剂制备实施例五：

A：替拉扎明 0.5克

B：醋酸钠 20.4克

C：冰醋酸 80毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为3.6。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例六：

A：替拉扎明 0.015克

B：醋酸钠 0.612克

C：冰醋酸 2.4毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约50℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后，添加氯化钠、葡萄糖等渗透压调节剂，加适量水至1000毫升，pH约为6.0。

制剂用途：静脉滴注。

制剂制备实施例七：

A：替拉扎明 0.00178克

B：醋酸钾 0.098克

C：冰醋酸 0.144毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后，添加氯化钠等渗透压调节剂，加适量水至1000毫升，pH约为6.8。

制剂用途：静脉滴注。

制剂制备实施例八：

A：替拉扎明 0.713克

B：醋酸钾 49.07克

C：冰醋酸 71.8毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约55℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为2.3。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例九：

A：替拉扎明 0.0089克

B：醋酸钾 0.4908克

C：冰醋酸 0.72毫升

制剂用途：静脉滴注。

制剂制备实施例十：

A：替拉扎明 0.594克

B：醋酸钾 32.71克

C：冰醋酸 48毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约50℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为3.5。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例十一：

A：替拉扎明 0.5克

B：醋酸钾 7.7克

C：冰醋酸 6毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为4.3。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例十二：

A：替拉扎明 0.015克

B：醋酸钾 0.231克

C：冰醋酸 0.18毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后，添加氯化钠、葡萄糖等渗透压调节剂，加适量水至1000毫升，pH约为6.5。

制剂用途：静脉滴注。

制剂制备实施例十三：

a)替拉扎明 0.00178克

b)醋酸铵 0.0771克

c)冰醋酸 0.06毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后，添加氯化钠等渗透压调节剂，加适量水至1000毫升，pH约为6.4。

制剂用途：静脉滴注。

制剂制备实施例十四：

A：替拉扎明 0.713克

B：醋酸铵 38.54克

C：冰醋酸 30毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为3.1。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例十五：

A：替拉扎明 0.297克

B：醋酸铵 12.85克

C：冰醋酸 10毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为3.8。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例十六：

A：替拉扎明 0.594克

B：醋酸铵 25.69克

C：冰醋酸 20毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为3.5。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例十七：

A：替拉扎明 0.5克

B：醋酸铵 7.7克

C：冰醋酸 6毫升

制剂用途：静脉注射

制剂制备实施例十八：

A：替拉扎明 0.015克

B：醋酸铵 0.231克

C：冰醋酸 0.18毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后，添加葡萄糖等渗透压调节剂，加适量水至1000毫升，pH约为6.8。

制剂用途：静脉滴注。

制剂制备实施例十九：

a)替拉扎明 0.594克

b)磷酸二氢钠 68.9克

c)磷酸 6毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为4.1。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例二十：

a)替拉扎明 0.713克

b)磷酸二氢钠 205.6克

c)磷酸 18毫升

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为2.0。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例二十一：

a)替拉扎明 0.00178克

b)磷酸二氢钠 0.411克

c)磷酸 0.036毫升

制剂用途：静脉滴注。

制剂制备实施例二十二：

A：替拉扎明 0.015克

B：磷酸二氢钠 1.557克

C：磷酸 0.138毫升

制剂用途：静脉滴注。

制剂制备实施例二十三：

A：替拉扎明 0.5克

B：磷酸二氢钠 51.9克

C：磷酸 4.6毫升

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例二十四：

a)替拉扎明 0.594克

b)枸橼酸 35克

c)磷酸二氢钠 26克

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为5.2。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例二十五：

A：替拉扎明 0.713克

B：枸橼酸 105.1克

C：磷酸二氢钠 78克

制剂用途：静脉注射。

制剂制备实施例二十六：

a)替拉扎明 0.00891克

b)枸橼酸 0.21克

c)磷酸二氢钠 0.156克

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后，添加葡萄糖等渗透压调节剂，加适量水至1000毫升，pH约为6.6。

制剂用途：静脉滴注。

制剂制备实施例二十七：

A：替拉扎明 0.015克

B：枸橼酸 0.39克

C：磷酸二氢钠 0.828克

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后，添加氯化钠、葡萄糖等渗透压调节剂，加适量水至1000毫升，pH约为6.7。

制剂用途：静脉滴注。

制剂制备实施例二十八：

A：替拉扎明 0.5克

B：枸橼酸 13克

C：磷酸二氢钠 27.6克

取约500毫升水溶解B和C，适量升温，使溶液温度保持约60℃，缓慢加入A搅拌使完全溶解，冷却至常温后加适量水至1000毫升，pH约为4.0。灌封至20ml的安瓿中，封口，包装即得。

制剂用途：静脉注射。

稳定性对比研究：

根据以上发明的技术方案，我们选取了醋酸-醋酸钠缓冲液(实施例四)、醋酸-醋酸钾缓冲液(实施例十)、醋酸-醋酸铵缓冲液(实施例十五)、磷酸盐缓冲液(实施例十七)、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(实施例二十五)以及国际申请PCT/US1996/13550说明书实施例柠檬酸缓冲液作为主要的稳定体系，配制出澄明的替拉扎明溶液，并在20℃恒温条件和4℃恒温条件储存，观察其外观及析出情况。具体如下：

20℃恒温条件，观察浓度为0.5g/l不同配方的替拉扎明含水制剂的稳定性，结果见表一：

表一、不同配方的替拉扎明溶液在20℃恒温条件下的稳定性

4℃恒温条件，观察浓度为0.5g/l不同配方的替拉扎明含水制剂的稳定性，结果见表二：

表二、不同配方的替拉扎明溶液在4℃恒温条件下的稳定性

动物药理试验对比研究：

为了观察本发明的技术方案中的配方在使用过程中动物的反应和耐受性，我们进行了家兔血管刺激试验和肌肉刺激试验，并与国际申请PCT/US1996/13550中的采用柠檬酸缓冲液的注射液进行对比研究。

一、替拉扎明注射液血管刺激试验：

试验目的：观察静脉注射新配方的替拉扎明注射液与替拉扎明柠檬酸盐注射液的血管刺激反应比较。

试验材料：

1、受试药物：替拉扎明醋酸钠注射液(实施例五)、替拉扎明醋酸钾注射液(实施例十一)、替拉扎明醋酸铵注射液(实施例十七)、替拉扎明磷酸盐注射液(实施例二十三)、替拉扎明枸橼酸-磷酸氢二钠注射液(实施例二十八)、替拉扎明柠檬酸钠注射液(国际申请PCT/US1996/13550说明书中实施例)。

2、0.9％氯化钠注射液。

3、动物：家兔，新西兰种普通级，雌雄各半，体重1.8-2.4kg。

试验方法：

家兔12只，固定于兔箱内，其中6只分别于一侧耳缘静脉无菌操作缓慢注射0.7mg/ml替拉扎明注射液生理盐水溶液1.0ml，在另一侧注射同体积的生理盐水。另6只分别于一侧耳缘静脉无菌操作缓慢注射每天注射1次，注射药物分别为0.7mg/ml的替拉扎明醋酸钠注射液、替拉扎明醋酸钾注射液、替拉扎明醋酸铵注射液、替拉扎明磷酸盐注射液、替拉扎明枸橼酸-磷酸氢二钠注射液、替拉扎明柠檬酸钠注射液1.0ml，在另一侧注射同体积的生理盐水。在同一部位连续3次，于最后一次给药后约24小时观察注射部位血管及周围组织的反应，并以颈动脉放血方式处死家兔，取注射部位及其前方3cm血管及周围组织，作常规病理组织学观察。

试验结果：

家兔缓慢静脉注射替拉扎明醋酸钠注射液，在其前方静脉和周围组织肉眼未见明显的红、肿或坏死等异常现象。组织学切片检查发现，与静脉注射生理盐水相比，静脉注射替拉扎明醋酸钠注射液的家兔耳缘静脉血管结构正常，无出血、炎症、组织变性和坏死等反应。

家兔缓慢静脉注射替拉扎明醋酸钾注射液，在其前方静脉和周围组织肉眼未见明显的红、肿或坏死等异常现象。组织学切片检查发现，与静脉注射生理盐水相比，静脉注射替拉扎明醋酸钾注射液的家兔耳缘静脉血管结构正常，无出血、炎症、组织变性和坏死等反应。

家兔缓慢静脉注射替拉扎明醋酸铵注射液，在其前方静脉和周围组织肉眼未见明显的红、肿或坏死等异常现象。组织学切片检查发现，与静脉注射生理盐水相比，静脉注射替拉扎明醋酸铵注射液的家兔耳缘静脉血管结构正常，无出血、炎症、组织变性和坏死等反应。

家兔缓慢注射替拉扎明磷酸盐注射液，在其前方静脉和周围组织出现细微肉眼可见的红、肿现象。组织学切片检查发现，与静脉注射生理盐水相比，静脉注射替拉扎明磷酸盐注射液的家兔耳缘静脉血管有少量的出血、炎症反应。

家兔缓慢注射替拉扎明枸橼酸-磷酸氢二钠注射液，在其前方静脉和周围组织出现细微肉眼可见的红、肿现象。组织学切片检查发现，与静脉注射生理盐水相比，静脉注射替拉扎明枸橼酸-磷酸氢二钠注射液的家兔耳缘静脉血管有少量的出血、炎症反应。

家兔缓慢注射替拉扎明柠檬酸盐注射液，在其前方静脉和周围组织出现细微肉眼可见的红、肿现象。组织学切片检查发现，与静脉注射生理盐水相比，静脉注射替拉扎明柠檬酸盐注射液的家兔耳缘静脉血管有少量的出血、炎症反应。

试验结论：

结果表明，缓慢静脉注射替拉扎明醋酸钠注射液、替拉扎明醋酸钾注射液、替拉扎明醋酸铵注射液无血管刺激反应。较替拉扎明磷酸盐注射液、替拉扎明枸橼酸-磷酸氢二钠注射液和已有的替拉扎明柠檬酸盐注射液血管刺激小。

二、替拉扎明葡萄糖注射液肌肉注射刺激试验：

试验目的：观察肌肉注射不同配方的替拉扎明注射液对肌肉的刺激反应。

试验材料：

2、0.9％氯化钠注射液。

3、动物：家兔，新西兰种普通级，雌雄兼用。

试验方法：

家兔七只，分别在其左右两股四头肌内上下交叉注射替拉扎明醋酸钠注射液、替拉扎明醋酸钾注射液、替拉扎明醋酸铵注射液、替拉扎明磷酸盐注射液、替拉扎明枸橼酸-磷酸氢二钠注射液、替拉扎明柠檬酸钠注射液2.0ml/只或生理盐水2.0ml/只，注射后48小时击头致昏，纵向切开股四头肌，观察注射局部形态、色泽等，并按表三换算成反应等级。

表三.刺激反应级数

反应级	刺激反应
		0	无明显变化
1	轻度充血，其范围在0.5×1.0厘米以下
		2	中度充血，其范围在0.5×1.0厘米以上
3	重度充血，伴有肌肉变性
		4	出现坏死，有褐色变性
5	出现广泛性坏死

试验结果：

家兔股四头肌分别注射上述配方的替拉扎明注射液的部位均与生理盐水一样，反应级数为0级，无明显变化。

试验结论：

替拉扎明醋酸钠注射液、替拉扎明醋酸钾注射液、替拉扎明醋酸铵注射液、替拉扎明磷酸盐注射液、替拉扎明枸橼酸-磷酸氢二钠注射液、替拉扎明柠檬酸钠注射液(国际申请PCT/US1996/13550)均无明显的刺激反应。

Claims

1.一种替拉扎明非肠道含水制剂，其特征在于：1000ml水溶液基本组成为：

0.5克替拉扎明或其可药用盐；

20.4克醋酸钠；

80ml冰醋酸；

pH值为3.6。