CN1202827A - 1,2,4－苯并三嗪氧化物制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了用于治疗癌瘤的非肠道含水制剂,该制剂含有在柠檬酸盐缓冲液中的1,2,4－苯并三嗪－3－胺－1,4－二氧化物,本发明还公开了癌瘤的治疗方法。

Description

1，2，4-苯并三嗪氧化物制剂
                 发明背景
发明领域
本发明涉及癌瘤(cancer tumor)的治疗。具体说，本发明涉及用含有1，2，4-苯并三嗪氧化物的缓冲水载体治疗癌瘤。
已报道的研究进展
1，2，4-苯并三嗪氧化物是已知化合物。US3980779公开了用于促进家畜生长的含有下式3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氧化物的抗菌组合物
Figure A9619849600071
其中
R和R1之一是氢、卤素、低级烷基、卤代(低级烷基)、低级烷氧基、氨基甲酰基、磺酰氨基、羧基或低级烷氧基羰基，R和R1中的另一个是卤素、低级烷基、卤代(低级烷基)、低级烷氧基、氨基甲酰基、磺酰氨基、羧基或低级烷氧基羰基。
1992年12月29日出版的US5175827公开了1，2，4-苯并三嗪氧化物与放射治疗结合用于治疗肿瘤的应用。1，2，4-苯并三嗪氧化物使肿瘤细胞对放射治疗敏感，并且使患者更顺应该治疗的用药程式。
Holden等(1992)在“用SR-4233加强烷基化试剂在FSaIIC鼠纤维肉瘤中的活性”(JNCI84：187-193)公开了SR-4233(即3-氨基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氧化物，该化合物是已知的，并且在下文中有时被称作tirapazamine)与抗肿瘤烷基化试剂结合的应用。其中分别对四种抗肿瘤烷基化试剂，即顺氨氯铂、环磷酰胺、卡氮芥和苯丙氨酸氮芥进行了实验，以测定tirapazamine克服缺氧肿瘤细胞对抗肿瘤烷基化试剂耐药性的能力。对tirapazamine本身及其与不同量的每种抗肿瘤烷基化试剂的结合进行实验。当SR-4233恰好在用环磷酰胺、卡氮芥和苯丙氨酸氮芥单次剂量治疗之前给药时，发现所述的剂量增加导致对肿瘤细胞产生协同细胞毒性作用。
国际申请PCT/US89/01037公开了用作放射增敏剂和选择性细胞毒剂的1，2，4-苯并三嗪氧化物。其他有关的专利包括：US3868372和4001410，其中公开了1，2，4-苯并三嗪氧化物的制备；以及US3991189和3957799，其中公开了1，2，4-苯并三嗪氧化物的衍生物。
已经发现，当与放疗和化疗结合时，1，2，4-苯并三嗪氧化物可以有效地治疗癌瘤。
放疗、化疗和外科手术是治疗癌症的三种主要方法。作为外科手术的替代疗法，放疗和化疗的作用主要是控制肿瘤的变化，而外科手术仅限于解剖方面。已有知识表明如果提高放疗和化疗的作用，则可以使癌症患者的治愈率更高并且生活质量更好。
提高放疗或化疗效果的一种途径是利用肿瘤中含氧量低的优点-正常组织与肿瘤组织之间几种可利用的差别之一。血管异常生长的特征是大量实体瘤。异常毛细系统通常会造成暂时或永久缺氧区。一般来说，缺氧增加了正常细胞或癌细胞对治疗的耐受性。加强对缺氧肿瘤细胞杀灭(或者限制放射对正常组织损伤)的方法将提高放疗或化疗的治疗指数。
已经开发出的苯并三嗪化合物利用了肿瘤细胞中相对缺氧的的优点。迄今最有希望的苯并三嗪系列中的tirapazamine在缺氧条件下被生物还原成活性中间体。该活性中间体可以造成DNA损伤，从而加强了放疗或化疗的作用，并且有其自身特有的细胞毒性。由于邻近的正常组织不是缺氧的，因此所述生物还原作用对缺氧肿瘤细胞具有选择性细胞毒作用。
体外研究表明，苯并三嗪类化合物实际上优于硝基咪唑放射增敏剂和其他生物还原剂，如表I所示。
                    表I
    对各种生物还原剂的体外缺氧细胞毒性比
生物还原剂(和类型)      缺氧细胞毒性比a
啮齿动物   人
Tirapazamine(苯并三嗪二N-氧化物)RSU-1069(硝基咪唑/氮丙啶)醚醇硝唑(硝基咪唑)紫菜霉素(醌)二胺硝吖啶(硝基氮丙啶)丝裂霉素C(醌)  75-200               15-10075-100               10-2010-15                155-10                 ～107                    --1-5                  1-2
a缺氧细胞毒性比＝对于杀灭相同量的细胞来说，在有氧条件与缺氧条件下相比所需的药物浓度比。
但是，tirapazamine的缺点是在非肠道给药用的药物载体中溶解度不够，并且在这些载体中不稳定。已发现，tirapazamine在水中的溶解度约为0.81毫克/毫升，这就需要给患者施用大体积的约1升溶液，以提供适当的剂量。曾试图用表面活性剂例如吐温80和聚合物如Pluronic F68、吡咯烷酮和白蛋白增加其溶解度，但是未取得成功，仅仅最小限度地增加溶解度。用共溶剂增加溶解度更为成功，但是，使预期最小耐受剂量tirapazamine溶解所必需的共溶剂的比例将意味着需要输注大量的共溶剂，例如最高达120毫升的丙二醇，以50％v/v丙二醇/水溶液的形式。如此大体积的共溶剂是注射制剂所不希望的，并且对患者造成不希望的临床危险。
Tirapazamine还缺乏架藏稳定性：在0.1N氢氧化钠中回流不到4小时即完全降解。
本发明的主要目的是提供可输注/可注射的含水制剂，该制剂含有足量的抗癌剂，并且是架藏稳定的。在对tirapazamine进行的广泛临床研究表明，不具有足够溶解度和稳定性的这种非常有希望的药物对于患有癌瘤的无数患者没有帮助。
                 发明概述
本发明提供了用于治疗癌症的非肠道含水制剂，其中包括：
治疗癌瘤有效量的式(I)化合物或在非肠道可接受的缓冲液中浓度约为0.001M至约0.1M的所述化合物的可药用盐
Figure A9619849600101
其中X是H；1-4个碳原子的烃基；被OH、NH2、NHR或NRR取代的1-4个碳原子的烃基；卤素；OH；1-4个碳原子的烷氧基；NH2；NHR或NRR；其中每个R独立地选自1-4个碳原子的低级烷基和1-4个碳原子的低级酰基，以及被OH、NH2、1-4个碳原子的烷基仲氨基和1-4个碳原子的二烷基叔氨基、1-4个碳原子的烷氧基或卤素取代的1-4个碳原子的低级烷基和1-4个碳原子的低级酰基；并且当X是NRR时，两个R直接连结或者通过桥氧连结形成吗啉代环、吡咯烷子基环或哌啶子基环；
n是0或1；并且
Y1和Y2彼此独立为H；硝基；卤素；1-14个碳原子的烃基，包括环和不饱和烃基，它们任意地被1或2个取代基取代，所述取代基选自卤素、羟基、环氧基、1-4个碳原子的烷氧基、1-4个碳原子的烷硫基、伯氨基(NH2)、1-4个碳原子的烷基仲氨基、1-4个碳原子的二烷基叔氨基(在1-4个碳原子的二烷基叔氨基中，两个烷基连结在一起形成吗啉代、吡咯烷子基或哌啶子基)、1-4个碳原子的的酰氧基、1-4个碳原子的酰氨基及其硫代类似物、乙酰氨基1-4个碳原子的烷基、羧基、1-4个碳原子的烷氧羰基、氨基甲酰基、1-4个碳原子的烷基氨基甲酰基、1-4个碳原子的烷基磺酰基或1-4个碳原子的烷基磷酰基，其中烃基可以任意地被单醚(-O-)键间隔；或者其中Y1和Y2彼此独立为吗啉代、吡咯烷子基、哌啶子基、NH2、NHR’、NR’R’O(CO)R’、NH(CO)R’、O(SO)R’或O(POR’)R’，其中R’是1-4个碳原子的烃基，该烃基可以被OH、NH2、1-4个碳原子的烷基仲氨基、1-4个碳原子的二烷基叔氨基、吗啉代、吡咯烷子基、哌啶子基、1-4个碳原子的烷氧基或卤素取代基取代。
尤其是，本发明用于治疗癌瘤的非肠道制剂含有：
约0.500至约0.810克式(I)化合物；
约0.100至约9.000克氯化钠；
约0.1至约10.00克柠檬酸；
约0.02至约3.00克氢氧化钠；和
在水中调节至pH 3.0-5.0，加适量水至1000毫升。
优选的本发明抗癌瘤化合物是tirapazamine，1，2，4-苯并三嗪-3-胺1，4-二氧化物，结构式如下
Figure A9619849600111
其分子量为178.16，熔点为在220℃分解。
最优选的静脉制剂为，每毫升溶液含有在pH为约3.7至约4.3的等渗柠檬酸盐缓冲液中的约0.7至约0.81毫克/毫升tirapazamine。
本发明还涉及癌瘤患者的癌瘤治疗方法，该方法包括给所述患者施用治疗癌瘤有效量的制剂。
                 发明详述
抗肿瘤药
本发明提供了治疗哺乳动物癌瘤包括人体癌瘤、特别是实体瘤的组合物和方法。对于本发明的这一方面，给患有癌瘤并需要治疗的哺乳动物施用包含在柠檬酸盐缓冲液中的有效量的式I化合物，约1.5至约24小时后，给所述哺乳动物施用肿瘤敏感的有效量的化疗药。在1993年9月22日提交的美国专利申请125609中描述了式I化合物和实验化合物，该专利申请公开的内容全部引入本文作为参考。
在本发明制剂的制备中，对于癌症化合物的足够溶解度和所述制剂的架藏稳定性曾进行了深入的研究，结果如下所述。
下面将具体参照tirapazamine制剂描述本发明，但是应该理解，式(I)所包括的其他化合物也包括在本发明的权利要求范围内。
Tirapazamine的溶解度
Tirapazamine在水和各种载体中的溶解度示于表II中。
                            表II
        Tirapazamine在含水介质中的溶解度
        溶剂                 温度℃                毫克/毫升注射用水                          20                    1.43注射用水                          15                    0.85生理盐水                          15                    0.85柠檬酸盐缓冲液0.05M pH 4(等渗)    15                    0.81乳酸盐缓冲液0.1M pH 4(等渗)       15                    0.90吐温80 0.2％w/v                   15                    0.9吐温80 20％w/v                    15                    1.02Pluronic F68 20％w/v              15                    1.08吡咯烷酮(Kollidon 12PF)10％w/v    15                    0.95白蛋白4.5％w/v                    20                    1.33白蛋白20％w/v                     20                    1.71甘油50％v/v水溶液                 15                    2.93甘油                              15                    4.59丙二醇50％v/v水溶液               15                    2.58丙二醇                            15                    3.27PEG400 50％v/v水溶液              15                    1.60PEG400                            15                    5.12二甲基甲酰胺25％v/v水溶液         15                    1.831％苄醇：10％乙醇：89％水v/v      15                    1.23乙醇10％v/v水溶液                 15                    0.93乙醇50％v/v水溶液                 15                    2.32乙醇65％v/v水溶液                 15                    2.84乙醇85％v/v水溶液                 15                    1.71乙醇                              15                    0.47
有限的溶解度0.81mg/ml使得需要输注1升的液体，因此，为了将液体体积减至最小，需要增加溶解度。曾试图通过使用表面活性剂(吐温80)和聚合物(Pluronic F68，吡咯烷酮，白蛋白)增加溶解度，但是未取得成功，溶解度仅有最小量的增加。
用共溶剂增加溶解度获得了成功，但是，使预期最大耐受剂量tirapazamine(～700毫克)溶解所必需的共溶剂的比例将意味着需要输注大量的共溶剂(例如最高达120毫升的丙二醇，以50％v/v丙二醇/水溶液的形式输注)。
Tirapazamine的生化性质表明该分子既不是高极性的，也不是高亲脂性的。由(i)分配系数(辛醇/水)0.15(logP-0.82)和(ii)在200℃熔融分解(这表明tirapazamine的结晶结构是通过分子间力牢固键合的)说明了这种性质。该分子的平面(planar)性质使得由于每一平面间借助N-氧化物的氮和氧的分子间吸引(电荷相互转移)而有序堆积结晶。如果水分子与含氧部分是通过氢键合的，则tirapazamine可以是水合形式。
为了预言化合物在水-溶剂混合物中的溶解度，人们曾试图用各种参数如介电常数、溶解性参数、表面张力、界面张力、氢键给体和受体密度以及辛醇-水分配系数将有机溶剂分类。在tirapazamine溶解度研究中选用的各种溶剂如表III所示。通过用由实验数据绘制的溶解度图的斜率校正这些参数，这些参数已经准确地用于预言非极性溶质的溶解度。那些能反映溶剂内聚性的参数，例如溶解度参数和界面张力与斜率最相关，因此，纯共溶剂的氢键合能力以提供质子基团或接受质子基团的密度表示。
                   表III
                溶剂的极性指数
(Rubino，J.T.和Yalkowsky，S.H.，共溶性与共溶剂极性，药学
研究(Pharmaceutical Research)，4(1987)220-230)
                  水      DMSO      DMF      DMA      GLYC      PG      PEG400介电常数             78.5     46.7      36.7     37.8     42.5      32.0    13.6溶解度参数           23.4     12.0      12.1     10.8     17.7      12.6    11.3界面张力(达因/厘米)  45.6     0.9       6.9      4.6      32.7      12.4    11.7表面张力(达因/厘米)  72.7     44.0      36.8     35.7     60.6      37.1    46.0logP                 -4.0     -1.4      -0.85    -0.66    -2.0      -1.0    ---氢键给体密度         111.0    0.0       0.0      0.0      41.1      27.4    5.6氢键受体密度         11.0     28.2      38.7     32.3     82.2      54.4    50.8
其中：
DMSO＝二甲基亚砜
DMF＝二甲基甲酰胺
DMA＝二甲基乙酰胺
GLCY＝甘油
PG＝丙二醇
PEG400＝聚乙二醇400
大体积分数(fractions)的非质子传递溶剂例如二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基乙酰胺(DMA)由于偶极作用和疏水作用，破坏水的结构。两性溶剂例如甘油、PEG400和丙二醇(PG)可以自身缔合并与水通过氢键合，因此，该溶剂实际上不适用于不参与氢键合的溶质。溶质的分配系数是预言共溶剂是否有效的指标。用下列方程可成功地预言在各种溶剂系统中的溶解度：
    logCs＝logCo＝f(logR+0.89logP+0.03)
其中Cs和Co是分别在溶剂混合物和水中的溶解度，f是共溶剂系数，R是有关的溶解能力(通常的值为：DMF＝4，甘油＝0.5)，P是分配系数。当P趋于1(logP0)时，溶解度不可能增加，因为
               logCs＝logCo
由于tirapazamine的logP值为-0.8，该方程说明，共溶剂不象想象的那样对水溶性具有显著影响。由这些共溶剂进行的实验结果表明，这些共溶剂没有显著增加tirapazamine的溶解度。
稳定性
在121℃，采用多次21分钟高压釜循环进行应激反应实验。这些研究表明，tirapazamine在生理盐水的酸性溶液中或者在用0.05M柠檬酸盐或0.1M乳酸盐缓冲液缓冲的溶液中更稳定。在pH5.9的磷酸盐缓冲液存在下以及在pH 6的柠檬酸盐缓冲液中，tirapazamine不稳定。经8个高压釜循环后，生理盐水制剂的pH由4.5变为4.9，因此该制剂需要一定程度的缓冲。
在121℃、经单次21分钟高压釜循环之后，在升高的温度50℃和70℃下贮存也使制剂产生应激反应。已发现，在乳酸盐缓冲液存在下，经70℃贮存后，tirapazamine是不稳定的。经多次高压釜施压没有出现这种不稳定性。已发现，对于pH4的0.05M柠檬酸盐来说，制剂最稳定。
因此，使用柠檬酸盐缓冲液制备tirapazamine制剂。在15℃tirapazamine的溶解度需要将浓度由1毫克/毫升降低至0.5毫克/毫升。对在pH3.5、4.0和4.5的柠檬酸盐缓冲液中的应激反应也进行同样对pH限度的测定。以此研究的数据为基础，pH应限制在4.0±0.3。
根据所得的稳定性数据，最稳定的tirapazamine制剂是在pH4的柠檬酸盐缓冲液中。tirapazamine在柠檬酸盐缓冲液中的溶解度在15℃时为0.81毫克/毫升。因此，为了限制输注液的体积，进一步研究所用的最大浓度为0.7毫克/毫升。
通过对在pH 4.0的柠檬酸盐缓冲液中的2×10升稳定的tirapazamine批料施压，评价缓冲液浓度(0.05或0.005M)对稳定性的影响。
在0.005M和0.05M柠檬酸盐缓冲液中的tirapazamine在50℃放置2个月后均是稳定的。在70℃，0.05M柠檬酸盐制剂是不稳定的，因此，选择较低的柠檬酸盐浓度(0.005M)来开发临床制剂。下面将讨论用于化学研究的临床制剂：
tirapazamine          0.700克
氯化钠                8.700克
柠檬酸                0.9605克
氢氧化钠              0.2500克
加适量水至1000毫升，调至pH4.0。
将tirapazamine贮存在20毫升透明玻璃安瓿中，其中含有在等渗柠檬酸盐缓冲液中的0.7毫克/毫升(14毫克)tirapazamine。在15℃和30℃，将安瓿贮存在不透光的包装中。
给药
用本发明的制剂在大鼠和狗中进行急性耐受研究、单次或多次剂量研究以及体外脊髓抑制研究。
在小鼠的急性耐受研究中，tirapazamine的LD10和LD50值分别为98和101毫克/公斤。
在大鼠和狗中进行单次、2周和2月多次剂量研究。在两种动物中以及每种方案中观察到的临床迹象和症状包括流涎、血白细胞(在狗中包括淋巴细胞数)量下降，以及血红细胞量下降。
药理学
在培养物中研究tirapazamine对各种需氧和缺氧细胞的作用，以测定tirapazamine细胞毒性的选择性。Tirapazamine(20μM)是有效的和选择性缺氧细胞体外杀灭剂，对苍鼠、小鼠和人细胞系的缺氧细胞毒性比分别为150、119和52(比放射致敏物质例如硝基咪唑类化合物、丝裂霉素C和甲基丝裂霉素大1-2个数量级)。在氧压(1％-20％O2；主要在1％-4％O2)范围内也观察到该细胞毒性。
在小鼠肿瘤模型体内，当tirapazamine以0.30毫摩尔/公斤(160mg/m2)的单次剂量或0.08毫摩尔/公斤(43mg/m2)的多次剂量与分级放射(2.5Gy×8)一同使用时也同样有效。当与单次大剂量(20Gy)放射同时使用时，0.30毫摩尔/公斤(160mg/m2)单次剂量的tirapazamine也是有效的。在每次放射治疗(2.5Gy×8)之前，以0.08毫摩尔/公斤(43mg/m2)的多次剂量施用tirapazamine是最有效的，治愈了几只小鼠的SCCVII肿瘤；如果不进行放射治疗，则tirapazamine的作用最差，通常细胞杀灭的log值小于1。当与分级放射治疗一同使用时，与放射治疗作用于需氧细胞相比，如果tirapazamine作用与单一的细胞群体(缺氧细胞)，则tirapazamine所产生的作用与预言的效果相同。
已经对tirapazamine的作用机理进行了详细的研究，该机理与药物代谢紧密相关。下面描述了在一-N-氧化物的还原过程中tirapazamine产生游离基的可能作用机理，这使得DNA的单链或双链断裂。在缺氧条件下，tirapazamine代谢成2-电子还原产物WIN64102(一-N-氧化物；SR4317)，然后代谢成4-电子还原产物WIN60109(O-N-氧化物；SR4330)。检查用tirapazamine治疗后DNA损伤修复的几项研究表明DNA修复抑制是剂量相关的，并且与X射线产生的效果相似。
Figure A9619849600171
对苯并三嗪二-N-氧化物tirapazamine进行了深入的体外和体内研究，以测定和定量其功效并阐明其作用机理。
体外
在培养物中研究tirapazamine对各种需氧和缺氧细胞的作用，以测定tirapazamine细胞毒性的选择性。研究使用中国苍鼠卵巢细胞(CHO-HA-1)、小鼠细胞(C3H 10T1/2，RIF-1，和SCCVII)和人细胞系(HCT-8，AG1522，A549和HT1080)。如表4所示，tirapazamine(20μM)是有效的和选择性缺氧细胞体外杀灭剂。
                      表4
      Tirapazamine对在需氧或缺氧条件下培养的
            8种细胞系的体外细胞毒性
        细胞系   敏感   IC50 c指数b  (μM)     缺氧细胞毒性比a
 物种     名称 细胞系    该物种的平均数
苍鼠    CHO-HA-1(正常d)     48    5 100-200      150
小鼠    RIF-1(肿瘤)SCCVII(肿瘤)C3H 10T1/2(正常)     30    339    4118   12 80-100160-200      11975-100
人      HCT-8(肿瘤)A549(肿瘤)AG1522(正常)HT1080(肿瘤)     94    10280   15190   1322 15-4025-5050           52100
a缺氧细胞毒性比＝得到大约相同存活率的tirapazamine在空气中的浓度/tirapazamine在氮气中的浓度。
b敏感指数＝在缺氧条件下和20μM浓度下达到10-2(1％)存活率所需的时间(分钟)。
cIC50＝在缺氧条件下培养1小时抑制50％细胞生长所需的浓度。
d正常＝无肿瘤发生。
体内
只用tirapazamine治疗
当仅用单次剂量tirapazamine对小鼠进行体内研究时，可以预期，与缺氧肿瘤细胞百分数相应，仅杀灭较少量的细胞。实验数据表明，在这种情况下，通常杀灭细胞的log值低于1(存活分数≥1·10-1)。例如，单次剂量治疗所观察到的最大细胞杀灭量是在SCCVII肿瘤中(存活分数＝5·10-1)，并且在FSaIIC纤维肉瘤中仅有一个小的肿瘤生长延迟3天。
在不进行放射治疗的条件下，用tirapazamine多次剂量治疗可以预期会比单次剂量治疗产生稍大的细胞杀灭作用，甚至当tirapazamine剂量较低时也如此。但是，在四种不同的小鼠肿瘤中，最低存活分数是5·10-1，而在第5种小鼠肿瘤(RIF-1肿瘤)中该值降至5·10-2。
Tirapazamine与放射治疗结合
在下述各种模型中，估计是由于杀死细胞或延迟肿瘤生长，tirapazamine加强了放射治疗的抗肿瘤作用。实验用肿瘤包括FSaIIC、SCCVII、RIF-1、EMT6和KHT。当tirapazamine以单次剂量或多次剂量方案进行治疗、或者当该药物与单次剂量放射治疗或分级放射治疗结合时，tirapazamine加强细胞杀灭作用。
在一项研究中，tirapazamine与放射治疗相加的抗肿瘤作用超过了这两种治疗的加合作用。当施用tirapazamine 2.5-0.5小时后进行放射治疗或者最多达6小时后，tirapazamine的活性被加强。除了对缺氧细胞的作用之外，如果在放射治疗之前或之后使需氧细胞在缺氧条件下与tirapazamine接触，那么tirapazamine可以使需氧细胞体外放射敏感。
在一项研究中，与缺氧细胞致敏物质etanidazole相比，用tirapazamine进行的治疗将放射治疗的抗肿瘤活性加强到更高的程度。
tirapazamine的氧浓度/细胞毒性曲线表明该药物特别适于与放射疗法结合。低于约30torr(mmHg)的细胞对放射的损伤作用抗性增加。但是，硝基芳族和醌类抗菌素放射敏感物质仅仅在非常低的氧含量下最有效。因此，它们对于肿瘤中存在的中等缺氧放射抗性细胞没有毒性。相反，在放射耐受所具有的整个氧浓度范围内，tirapazamine的细胞毒性保持相对恒定。
与迄今所研究的其他放射敏感物质不同，在高氧浓度下(即在正常组织中所观察到的)，tirapazamine毒性降低。在体外系统中，在缺氧条件下tirapazamine的毒性比在100％氧蒸汽条件下tirapazamine的毒性高至少50至＞2000倍。由于该药物对多种多样放射耐受的肿瘤细胞具有活性，而对具有高氧含量的正常细胞无毒，tirapazamine对缺氧肿瘤细胞的毒性具有选择性。
Tirapazamine与化疗结合
当给患有FSaIIC纤维肉瘤的小鼠施用tirapazamine(25-75毫克/公斤，IP＝83.3-250mg/m2)时，观察到一些肿瘤细胞直接被杀灭。将tirapazamine(50毫克/公斤，IP＝167mg/m2)与环磷酰胺(150毫克/公斤，IP＝500mg/m2)、苯丙氨酸氮芥(10毫克/公斤，IP＝33mg/m2)或顺铂(10毫克/公斤，IP＝33mg/m2)结合时，在该模型中，肿瘤生长的延迟增加了1.6-5.3倍。
对正常组织的影响
在以下两项实验中使用雌性C3H/Km小鼠，以测定tirapazamine对那些对离子化放射敏感的正常组织可能存在的影响。采用分级放射法进行正常皮肤反应实验和腿(大腿)痉挛实验。在这两项实验中，tirapazamine均未对组织产生影响。
为了测定tirapazamine是否可能影响正常组织，对雌性C3H/Km小鼠的右后肢进行为期4天的8级(3、4、5或6 Gy)照射，每隔12小时换一级照射。在每级照射之前30分钟或照射之后立即给小鼠注射盐水或tirapazamine(0.08毫摩尔/公斤＝43mg/m2)。从首次照射后的第10天至第32天，每周三次对接受照射大腿的皮肤反应划分等级。按照与先前研究过的小鼠相似的等级规格将小鼠确定为“盲目的”-不了解其治疗的组[Brown JM，Goffinet DR，Cleaver JE，Kallman RF，“相对于正常小鼠皮肤而言，卤代嘧啶类似物慢性动脉内灌注优先使小鼠肉瘤放射敏感”，JNCI(1971)47，77-89]。皮肤反应测定表明，tirapazamine与放射治疗结合没有产生放射敏感作用或附加的毒性。
前面已经参照具体实例描述了本发明，应该理解，在本发明范围内的任何修改对于本领域专业人类来说是显而易见的。

Claims (11)

1.用于治疗癌瘤的非肠道含水制剂，其中包括：
治疗癌瘤有效量的式(I)化合物或在非肠道可接受的缓冲液中浓度约为0.001M至约0.1M的所述化合物的可药用盐
Figure A9619849600021
其中X是H；1-4个碳原子的烃基；被OH、NH2、NHR或NRR取代的1-4个碳原子的烃基；卤素；OH；1-4个碳原子的烷氧基；NH2；NHR或NRR；其中每个R独立地选自1-4个碳原子的低级烷基和1-4个碳原子的低级酰基，以及被OH、NH2、1-4个碳原子的烷基仲氨基和1-4个碳原子的二烷基叔氨基、1-4个碳原子的烷氧基或卤素取代的1-4个碳原子的低级烷基和1-4个碳原子的低级酰基；并且当X是NRR时，两个R直接连结或者通过桥氧连结形成吗啉代环、吡咯烷子基环或哌啶子基环；
n是0或1；并且
Y1和Y2彼此独立为H；硝基；卤素；1-14个碳原子的烃基，包括环状和不饱和烃基，它们任意地被1或2个取代基取代，所述取代基选自卤素、羟基、环氧基、1-4个碳原子的烷氧基、1-4个碳原子的烷硫基、伯氨基(NH2)、1-4个碳原子的烷基仲氨基、1-4个碳原子的二烷基叔氨基(在1-4个碳原子的二烷基叔氨基中，两个烷基连结在一起形成吗啉代、吡咯烷子基或哌啶子基)、1-4个碳原子的的酰氧基、1-4个碳原子的酰氨基及其硫代类似物、乙酰氨基1-4个碳原子的烷基、羧基、1-4个碳原子的烷氧羰基、氨基甲酰基、1-4个碳原子的烷基氨基甲酰基、1-4个碳原子的烷基磺酰基或1-4个碳原子的烷基磷酰基，其中烃基可以任意地被单醚(-O-)键间隔；或者其中Y1和Y2彼此独立为吗啉代、吡咯烷子基、哌啶子基、NH2、NHR’、NR’R’O(CO)R’、NH(CO)R’、O(SO)R’或O(POR’)R’，其中R’是1-4个碳原子的烃基，该烃基可以被OH、NH2、1-4个碳原子的烷基仲氨基、1-4个碳原子的二烷基叔氨基、吗啉代、吡咯烷子基、哌啶子基、1-4个碳原子的烷氧基或卤素取代基取代。
2.癌瘤患者的癌瘤治疗方法，该方法包括给所述患者施用治疗癌瘤有效量的制剂，所述制剂包括：
治疗癌瘤有效量的式(I)化合物或在柠檬酸盐缓冲液中浓度约为0.005M至约0.05M的所述化合物的可药用盐
其中X是H；1-4个碳原子的烃基；被OH、NH2、NHR或NRR取代的1-4个碳原子的烃基；卤素；OH；1-4个碳原子的烷氧基；NH2；NHR或NRR；其中每个R独立地选自1-4个碳原子的低级烷基和1-4个碳原子的低级酰基，以及被OH、NH2、1-4个碳原子的烷基仲氨基和1-4个碳原子的二烷基叔氨基、1-4个碳原子的烷氧基或卤素取代的1-4个碳原子的低级烷基和1-4个碳原子的低级酰基；并且当X是NRR时，两个R直接连结或者通过桥氧连结形成吗啉代环、吡咯烷子基环或哌啶子基环；
n是0或1；并且
Y1和Y2彼此独立为H；硝基；卤素；1-14个碳原子的烃基，包括环状和不饱和烃基，它们任意地被1或2个取代基取代，所述取代基选自卤素、羟基、环氧基、1-4个碳原子的烷氧基、1-4个碳原子的烷硫基、伯氨基(NH2)、1-4个碳原子的烷基仲氨基、1-4个碳原子的二烷基叔氨基，在1-4个碳原子的二烷基叔氨基中，两个烷基连结在一起形成吗啉代、吡咯烷子基或哌啶子基、1-4个碳原子的的酰氧基、1-4个碳原子的酰氨基及其硫代类似物、乙酰氨基1-4个碳原子的烷基、羧基、1-4个碳原子的烷氧羰基、氨基甲酰基、1-4个碳原子的烷基氨基甲酰基、1-4个碳原子的烷基磺酰基或1-4个碳原子的烷基磷酰基，其中烃基可以任意地被单醚(-O-)键间隔；或者其中Y1和Y2彼此独立为吗啉代、吡咯烷子基、哌啶子基、NH2、NHR’、NR’R’O(CO)R’、NH(CO)R’、O(SO)R’或O(POR’)R’，其中R’是1-4个碳原子的烃基，该烃基可以被OH、NH2、1-4个碳原子的烷基仲氨基、1-4个碳原子的二烷基叔氨基、吗啉代、吡咯烷子基、哌啶子基、1-4个碳原子的烷氧基或卤素取代基取代。
3.用于治疗癌瘤的非肠道含水制剂，其中包括：
约0.500至约0.810克式(I)化合物或在柠檬酸盐缓冲液中浓度约为0.005M至约0.05M的所述化合物的可药用盐
其中X是H；1-4个碳原子的烃基；被OH、NH2、NHR或NRR取代的1-4个碳原子的烃基；卤素；OH；1-4个碳原子的烷氧基；NH2；NHR或NRR；其中每个R独立地选自1-4个碳原子的低级烷基和1-4个碳原子的低级酰基，以及被OH、NH2、1-4个碳原子的烷基仲氨基和1-4个碳原子的二烷基叔氨基、1-4个碳原子的烷氧基或卤素取代的1-4个碳原子的低级烷基和1-4个碳原子的低级酰基；并且当X是NRR时，两个R直接连结或者通过桥氧连结形成吗啉代环、吡咯烷子基环或哌啶子基环；
n是0或1；并且
Y1和Y2彼此独立为H；硝基；卤素；1-14个碳原子的烃基，包括环状和不饱和烃基，它们任意地被1或2个取代基取代，所述取代基选自卤素、羟基、环氧基、1-4个碳原子的烷氧基、1-4个碳原子的烷硫基、伯氨基(NH2)、1-4个碳原子的烷基仲氨基、1-4个碳原子的二烷基叔氨基，在1-4个碳原子的二烷基叔氨基中，两个烷基连结在一起形成吗啉代、吡咯烷子基或哌啶子基、1-4个碳原子的的酰氧基、1-4个碳原子的酰氨基及其硫代类似物、乙酰氨基1-4个碳原子的烷基、羧基、1-4个碳原子的烷氧羰基、氨基甲酰基、1-4个碳原子的烷基氨基甲酰基、1-4个碳原子的烷基磺酰基或1-4个碳原子的烷基磷酰基，其中烃基可以任意地被单醚(-O-)键间隔；或者其中Y1和Y2彼此独立为吗啉代、吡咯烷子基、哌啶子基、NH2、NHR’、NR’R’O(CO)R’、NH(CO)R’、O(SO)R’或O(POR’)R’，其中R’是1-4个碳原子的烃基，该烃基可以被OH、NH2、1-4个碳原子的烷基仲氨基、1-4个碳原子的二烷基叔氨基、吗啉代、吡咯烷子基、哌啶子基、1-4个碳原子的烷氧基或卤素取代基取代；
约0.100至约9.000克氯化钠；
约0.9000至约10.00克柠檬酸；
约0.200至约3.000克氢氧化钠；和
在水中调节至pH3.0-5.0，加适量水至1000毫升。
4.癌瘤患者的癌瘤治疗方法，该方法包括给所述患者施用治疗癌瘤有效量的权利要求3的制剂。
5.用于治疗癌瘤的非肠道含水制剂，其中包括：
治疗癌瘤有效量的、在柠檬酸盐缓冲液中浓度约为0.005M至约0.05M的1，2，4-苯并三嗪-3-胺1，4-二氧化物。
6.权利要求5的非肠道含水制剂，其中所述柠檬酸盐缓冲液的pH值为约3.7-4.3。
7.癌瘤患者的癌瘤治疗方法，该方法包括给所述患者施用治疗癌瘤有效量的权利要求5的制剂。
8.用于治疗癌瘤的非肠道含水制剂，其中包括：
约0.500至约0.810克1，2，4-苯并三嗪-3-胺1，4-二氧化物；
约5.000至约9.000克氯化钠；
约0.9000至约10.00克柠檬酸；
约0.200至约3.000克氢氧化钠；和
在水中调节至pH 3.7-4.3，加适量水至1000毫升。
9.癌瘤患者的癌瘤治疗方法，该方法包括给所述患者施用治疗癌瘤有效量的权利要求8的制剂。
10.用于治疗癌瘤的非肠道含水制剂，其中包括：
0.700克1，2，4-苯并三嗪-3-胺1，4-二氧化物；
8.700克氯化钠；
0.9605克柠檬酸；
0.2500克氢氧化钠；和
在水中调节至pH4，加适量水至1000毫升。
11.癌瘤患者的癌瘤治疗方法，该方法包括给所述患者施用治疗癌瘤有效量的权利要求10的制剂。
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