EA015266B1 - Способ получения зрелых дендритных клеток для индуцирования иммунного ответа и применение полученных клеток - Google Patents
Способ получения зрелых дендритных клеток для индуцирования иммунного ответа и применение полученных клеток Download PDFInfo
- Publication number
- EA015266B1 EA015266B1 EA200801385A EA200801385A EA015266B1 EA 015266 B1 EA015266 B1 EA 015266B1 EA 200801385 A EA200801385 A EA 200801385A EA 200801385 A EA200801385 A EA 200801385A EA 015266 B1 EA015266 B1 EA 015266B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- cells
- dendritic cells
- dendritic
- day
- immune response
- Prior art date
Links
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 74
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 55
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims description 80
- 230000028993 immune response Effects 0.000 title claims description 12
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims description 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 24
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims description 20
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 18
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 14
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 9
- 210000003643 myeloid progenitor cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 20
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 20
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 12
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 230000002187 allostimulatory effect Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 102400000887 Cholecystokinin-7 Human genes 0.000 description 5
- 101800001542 Cholecystokinin-7 Proteins 0.000 description 5
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 4
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 4
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 3
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 2
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 2
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 2
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 230000002121 endocytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000037455 tumor specific immune response Effects 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 101100058598 Arabidopsis thaliana BPM1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100028681 C-type lectin domain family 4 member K Human genes 0.000 description 1
- 101710183165 C-type lectin domain family 4 member K Proteins 0.000 description 1
- 101150114515 CTBS gene Proteins 0.000 description 1
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 1
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010031099 Mannose Receptor Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 229940029030 dendritic cell vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000001159 endocytotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000000680 phagosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/22—Colony stimulating factors (G-CSF, GM-CSF)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/25—Tumour necrosing factors [TNF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2523/00—Culture process characterised by temperature
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Virology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Данное изобретение касается в определенных вариантах осуществления способа получения дендритных клеток путем применения температур ниже 37°C во время развития клеток-предшественников и незрелых дендритных клеток. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение касается популяций дендритных клеток и их применения.
Description
Данное изобретение касается способов и средств, применяемых для индуцирования иммунных ответов против злокачественных образований и инфекционных болезней. Более конкретно, данное изобретение относится к улучшенным способам образования представляющих антиген клеток.
Предпосылки изобретения
Иммунная терапия на основе дендритных клеток, при которой используют природные механизмы представления антигена, представляет собой наиболее многообещающий нетоксический способ лечения рака. Его можно использовать как самостоятельное лечение или как вспомогательное для других типов терапии, таких как, например, хирургическое вмешательство, облучение и химиотерапия. Стратегия основана на ех νίνο манипуляции и реинтродукции клеточных продуктов для обхода иммунных компетентностей с целью индуцирования специфичных к опухоли иммунных ответов. Таким образом, основной целью такой иммунной терапии на основе дендритных клеток является индукция специфичных к опухоли эффекторных клеток ίη νίνο, и последние успехи сфокусированы на СЭ8+ цитотоксических Т-лимфоцитах (СТЬ), способных распознавать и убивать опухолевые клетки. Кроме того, для лечения инфекционных болезней, таких как, например, ВИЧ (вирус иммунодефицита человека), могут быть полезны стратегии вакцинации на основе дендритных клеток.
Представление антигена
Индукция специфичных к опухоли иммунных ответов требует включения специальных представляющих антиген клеток (АРС), экспрессирующих молекулы главного комплекса гистосовместимости (МНС), а также связанных мембран и выделяемых костимуляторных молекул. К тому же, такие АРС должны быть способны поглощать, процессировать и представлять антигены в ассоциации с молекулами МНС.
Дендритные клетки (ИС) представляют собой специальные АРС иммунной системы со способностью активировать и наивные, и Т-клетки памяти. Стадии, ведущие к созреванию ОС, ассоциированы с определенными свойствами клеток. Незрелые ОС особенно полезны при поглощении внеклеточных антигенов путем фагоцитоза или пиноцитоза и процессировании антигенов к пептидам в эндоцитотическом компартменте, таком как эндосомы и фагосомы. Здесь пептиды связаны с молекулами МНС класса II. Незрелые ОС также обладают уникальной способностью вводить пептиды из экзогенных протеинов путь МНС класса I презентации, процесс, названный кросс-презентация.
Способность эффективно стимулировать иммунный ответ активацией СЭ4+ типа 1 хелперных Т-клеток (ТЫ клеток) и СЭ8+ цитотоксических Т-клеток (СТЬ) критически зависит от зрелых ОС. Только полностью созревшие ОС, обеспеченные панелью связанных с мембранами костимуляторных и вспомогательных молекул, таких как, например, ί.Ό40. СЭ80, СЭ83. СЭ86 и МНС класса II, могут эффективно индуцировать пролиферацию и дифференциацию антигенспецифичных Т-лимфоцитов1.
Фундаментальная роль костимуляторной активности ОС заключается в обеспечении выделяемыми цитокинами, в частности 4Е-12р70. Его роль в активации Т-клеток и их поляризации для ТЫ типа ответа была четко показана НеиПег е( а1. (1996)1. К тому же достаточная корреляция между присутствием (Ы-12экспрессирующих зрелых ОС в опухоли и выживанием пациента была представлена Июне е( а1. (2005). Зрелые ОС для цели вакцинации должны продуцировать ограниченные количества ингибирующего ТЫ клетки цитокина Ш-И).
ССК.7 является рецептором для хемокинов ССЬ19 и ССЬ21, которые продуцируются клетками стромы в лимфатических узлах. ОС, экспрессирующие достаточные уровни активированных ССК.7, мигрируют в лимфатический узел в ответ на ССЬ19 или ССЬ212. Здесь они встречают Т-лимфоциты и могут инициировать иммунный ответ.
Протоколы образования зрелых БС
Описано множество протоколов образования зрелых ОС. В настоящее время в наиболее часто применяемом стандартном протоколе для индукции ОС используют смесь созревания, включающую ЫЧбета, (Ы-6, ТИР-альфа и простагландин Е2. Несмотря на миграционную активность из-за ССК.7 и иммуностимуляторную активность ίη νίνο, ОС, созревший с помощью этой смеси, образует ОС с пониженной способностью продуцировать [Б12р703.
Вторая группа протоколов созревания ОС включает полиинозиновую :полицитидиловую кислоту, поли-(ЕС). Ее обычно применяют в комбинации с цитокинами, такими как ТИР альфа, Ш-Щета, ШИ-гамма и ШИ-альфа. ОС, образованная этим способом, продуцирует Ш-121370, но они обычно экспрессируют низкие уровни ССК.7. Низкие уровни экспрессии ССК.7, характеризующиеся получением ОС в присутствии поли-(ЕС), ограничивают их ίη νίνο миграцию в лимфатические узлы.
Недавно опубликованная заявка на патент США И8 2005/0003533 А1 раскрыла способ созревания дендритных клеток, экспрессирующих ССК.7, который впоследствии при стимуляции СЭ40Б мог бы индуцировать продуцирование Ш-12р70.
Все еще существует необходимость развития стандартизированных способов для образования зрелых дендритных клеток, экспрессирующих высокие уровни активированных ССК.7, и которые также продуцируют достаточное количество Ш-12Р70.
К тому же, несмотря на попытки множества исследователей, вакцина на основе дендритных клеток
- 1 015266 для применения в терапии рака вообще обеспечила слабую клиническую эффективность иммунных ответов. Эти вакцины, главным образом, были получены ех νίνο манипуляцией и введением антигена аутологических БС. Повышенные требования по отношению к безопасности пациента нуждаются в высоком уровне воспроизводимости и соответствия с нормативными требованиями. Таким образом, существует строгая необходимость в способах, которые получают должным образом обеспеченные БС, эффективно индуцирующие иммунные ответы и, в частности, обеспечивающие улучшенные клинические ответы.
Кроме того, ех νίνο образованные БС можно было бы также реализовать как терапевтическую вакцину в лечение некоторых хронических инфекционных болезней, таких как ВИЧ и гепатит В и С, где традиционный подход с вакциной не является эффективным. Результаты предклинических и первых клинических4-5 исследований показали, что основанная на БС иммунотерапия могла бы быть перспективной стратегией для лечения пациентов с хроническими инфекциями ВИЧ-1 и гепатита В и С. Поскольку при раковой иммунотерапии эффективный клинический ответ против этих межклеточных инфекционных агентов связан с индукцией ТЫ хелперного ответа, необходимого для развития СБ8+ эффекторных клеток5. Поэтому можно предположить, что ех νίνο образованные дендритные клетки будут обладать одинаковыми характеристиками для лечения и рака, и хронических инфекционных болезней.
Раскрытие данного изобретения
В первом аспекте данное изобретение касается способа образования дендритных клеток путем применения температур ниже 37°С во время развития клеток-предшественников в незрелые дендритные клетки.
Во втором аспекте данное изобретение касается популяции дендритных клеток, где указанные клетки получили способом образования дендритных клеток путем применения температур ниже 37°С во время развития клеток-предшественников в незрелые дендритные клетки.
В третьем аспекте данное изобретение касается фармацевтической композиции, включающей популяцию дендритных клеток, где указанные клетки получили способом образования дендритных клеток путем применения температур ниже 37°С во время развития клеток-предшественников в незрелые дендритные клетки.
В четвертом аспекте данное изобретение касается применения популяции клеток, где указанные клетки получили способом образования дендритных клеток путем применения температур ниже 37°С во время развития клеток-предшественников в незрелые дендритные клетки для стимуляции и/или экспансии Т-клеток.
В пятом аспекте данное изобретение касается применения популяции клеток, где указанные клетки получают способом образования дендритных клеток путем применения температур ниже 37°С во время развития клеток-предшественников в незрелые дендритные клетки для индуцирования иммунного ответа у субъекта.
В шестом аспекте данное изобретение касается применения популяции клеток, где указанные клетки получают способом образования дендритных клеток путем применения температур ниже 37°С во время развития клеток-предшественников в незрелые дендритные клетки, для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения рака или инфекционных болезней.
Краткое описание графических материалов
Данное изобретение представлено детально ниже со ссылкой на графические материалы, в которых фиг. 1 иллюстрирует эффект температуры на важные костимуляторные и вспомогательные поверхностные молекулы БС;
фиг. 2 - эффект температуры на количество 16-10. продуцируемое БС в течение начальных дней культуры (А) и продуцируемое незрелыми БС (В) и зрелыми БС (С);
фиг. 3 - эффект температур 31, 34 и 37°С на продукцию 1Ь-12р70 незрелыми (А) и зрелыми (В, С) дендритными клетками, образованными новым способом и стандартным способом;
фиг. 4 - эффект низкой температуры на экспрессию ССК.7;
фиг. 5 - фенотип незрелых и зрелых БС, образованных способом по данному изобретению (А) и по сравнению со стандартным способом (В);
фиг. 6 - фенотипическую стабильность зрелых БС со временем;
фиг. 7 - фенотип и аллостимуляторную (МЬК) активность БС на день 7 и день 10;
фиг. 8 - аллостимуляторную активность БС, образованных способом по данному изобретению и стандартному способу;
фиг. 9 - функциональную презентацию СМУ-антигена, измеренную индукцией ΙΡΝ-γ (ЕЬИЗРОТ (ферментативный иммуносорбентный анализ с применением электрофореза) анализ).
Детальное описание данного изобретения
Данное изобретение описано в деталях ниже. С целью объяснения необходимо применять следующие определения, и всякий раз, когда следует, выражения, применяемые в единственном числе, также следует использовать во множественном числе и наоборот.
- 2 015266
Определения
Этап дифференциации, как применяется здесь, означает этап, где клеткам предоставляется возможность дифференцироваться в ответ на определенные факторы дифференциации.
Этап созревания, как применяется здесь, означает этап, где клеткам предоставляется возможность созревать в ответ на присутствие факторов созревания.
Пониженная температура' или сниженная температура, как применяется здесь, означает, что температура ниже 37°С.
Способ образования дендритных клеток является хорошо известным способом 1.Н. Рс1сг5. который первым описал способность моноцитов трансформироваться в подобные ЭС клетки ίη νίίτο, сначала спонтанно, а позже в присутствие СМ-С8Р и 1Ь-46. После публикаций Коташ с1 а1. (1994)7 и 8а11и51о & Ρ;·ιηζ;·ι\Όθθ1ιί;·ι (1994)8 моноциты, культивируемые в присутствие этих двух цитокинов, стали широко применять для получения ЭС. Методика начинается с выделения моноцитов из периферической крови и их культуры в присутствие СМ-С8Р и 1Ь-4 в течение 5-7 дней. Полученные клетки обладают свойствами незрелых ИС, характеризующихся низкими уровнями костимуляторных молекул и высокой эндоцитарной активностью. Во время созревания, индуцированого ЬР8, ΤΝΡ-альфа или другими агентами созревания, клетки существенно активируют костимуляторные и вспомогательные молекулы, такие как, например, СИ40, СИ80, СЭ83 и СИ86, и подавляют эндоцитарную активность.
Ιη νίίτο культуру тканей обычно держат при 37°С. Известно, что клетки Лангерганса функционально активны при окружающей температуре кожи 29-31°С, и немногочисленные исследования подтверждают биологический эффект ίη νίίτο пониженных температур культуры в клеточных системах, таких как, например, клетки яичника китайского хомячка (СНО) и альвеолярных макрофагов свиньи.
В отличие от работы Ваки с1 а1. (2003) Ιηί. 1ттипа1., 15(9): 1053-61, исследующих эффект температур, подобных температурам при лихорадке, на ИС активацию и созревание, пониженные температуры проанализированы только в немногих случаях по их эффекту на рост клеток млекопитающих. Иех1ег с1 а1. (1977) предложили применение 33°С для культивирования гематопоэтических стволовых клеток9. А^атазав-РЫ^аз е1 а1. (1995) обнаружили, что экспрессия маркеров клеток Лангерганса СЭ1а на моноцитах активировали во время 24-часового культивирования при 34°С по сравнению с 37°С10.
Никто не раскрыл, как получить незрелые или зрелые дендритные клетки применением пониженных температур.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается способа образования дендритных клеток применением температур ниже 37°С во время развития клеток-предшественников в незрелые дендритные клетки.
ΙΠ-10 является негативным регулятором ИС развития и продуцируется во время активации линии моноцитных клеток в присутствие СМ-С8Р11. К1гк1еу е1 а1. (2003) сообщили, что ΙΠ-10 продуцирование линией макрофаговых клеток, стимулированное ЬР8, было существенно снижено в ответ на уменьшение температуры инкубации от 37 до 31°С12. Сниженная температура, включенная в способ данного изобретения, может, таким образом, обеспечить улучшенные условия для образования ИС путем, например, низкой концентрации 1Ь-10.
Проанализировали эффект культивируемых моноцитов в присутствии СМ-С8Р и 1Ь-4 при различных температурах (31, 34 и 37°С) на уровень экспрессии СИ1а незрелых ИС, молекулы, чрезвычайно чувствительной к ингибиторному эффекту 1Ь-10. Заявители обнаружили, что ИС, образованная при более низких температурах, имела более высокие уровни своей экспрессии. Все дальнейшие эксперименты выполняли при 34°С. Следующее принципиальное наблюдение заключалось в том, что ΙΠ-10 уровни, определяемые в супернатантах культур, были действительно существенно ниже, чем в культуре при более низкой температуре.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается способа, где образованные дендритные клетки являются зрелыми дендритными клетками.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается способа, где развитие клетокпредшественников и незрелых дендритных клеток включает дифференциацию указанных клеток.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается способа, где температура во время дифференциации ниже 37°С.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается способа, где температура составляет от 31 до 37°С. Температура может быть любой из температур 31, 32, 33, 34, 35 или 36°С.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается способа, где температура составляет 34°С.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается способа, где клетки-предшественники являются аутологическими клетками-предшественниками.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается способа, где клетки-предшественники выбирают из миелоидных клеток-предшественников или стволовых клеток.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается способа, где миелоидные клеткипредшественники являются моноцитами.
- 3 015266
В другом варианте осуществления данное изобретение касается популяции дендритных клеток, образованных способом по данному изобретению.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается популяция дендритных клеток, где указанные клетки экспрессируют ССК.7 и/или 1Ь-12р70.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается популяции дендритных клеток, где указанные клетки экспрессируют ί.Ό1;·ι. СО14’к. СЭ83, СЭ86 и 1к-10’к.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается популяции дендритных клеток, дополнительно включающей по меньшей мере один антиген, представленный в ассоциации с МНС молекулой на поверхности клетки.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается популяции дендритных клеток. где указанный по меньшей мере один антиген является опухолевым антигеном.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается популяции дендритных клеток. где указанный опухолевый антиген выбран из группы. включающей антиген рака яичка. антиген линиеспецифической дифференциации, опухолевый надэкспрессированный антиген, мутированный или аберрантно экспрессированный антиген и вирусный антиген.
В дополнительном варианте осуществления данное изобретение касается применения популяции дендритных клеток, как определено выше, для стимуляции и/или экспансии Т-клеток.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается применения популяции дендритных клеток для стимуляции или экспансии Т-клеток, где указанные Т-клетки являются аутологическими Т-клетками.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается применения популяции дендритных клеток для стимуляции или экспансии Т-клеток, где указанное применение является ίη νίίτο применением.
В еще одном варианте осуществления данное изобретение касается применения популяции дендритных клеток для индуцирования иммунного ответа у субъекта.
В другом варианте осуществления данное изобретение касается фармацевтической композиции, включающей популяцию дендритных клеток, где указанная популяция определена выше.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается применения фармацевтической композиции как лекарственного средства.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается фармацевтической композиции, включающей популяцию дендритных клеток и дополнительно включающей традиционные вспомогательные агенты и наполнители.
В альтернативном варианте осуществления данное изобретение касается применения дендритных клеток для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения рака или инфекционных болезней.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается применения популяции дендритных клеток для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения рака или инфекционных болезней, где указанный рак выбран из группы, включающей меланому, рак груди, рак толстой кишки и рак легкого, или может быть каким-либо видом рака.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается применения популяции дендритных клеток для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения рака или инфекционных болезней, где инфекционные болезни выбраны из группы, включающей ВИЧ и гепатит или другие хронические инфекционные болезни.
Примеры
Данное изобретение теперь проиллюстрировано следующими примерами, которые не предназначены для ограничения каким-либо путем.
Пример 1. Образование дендритных клеток при пониженной температуре.
Дендритные клетки типично образуются из лейкоцитарной пленки, полученной из банка крови. 60 мл лейкоцитарной пленки разбавляют 60 мл фосфатным буфферезированным солевым раствором Дюльбекко без Са и без Мд (ΌΡΒ8, продукт Νο. ВЕ17-512Е, СатЬгех, Ве1дшт) и применяют для четырех 50-мл пробирок, каждая из которых содержит 15 мл Ьутрйоргер (продукт Νο. 1053980, ΑΧΙ8-8ΗΙΕΕΌ РоС Α8, Νοπνην). После центрифугирования (460 г, 30 мин, 20°С) 10-20 мл верхнего слоя плазмы переносят в отдельные пробирки. Рассчитали, что это составляет приблизительно 40% плазмы (разбавленной плазмы). Окончательное приготовление плазмы включает добавление гепарина (25 международных единиц/мл) и центрифугирование (1500 г, 15 мин, 4°С). Одноядерные клетки собрали с раздела двух сред, дважды разбавили содержащим ΕΌΤΑ (этилендиаминтетрауксусная кислота) ΌΡΒ8 и промыли 4-5 центрифугированиями, сначала при 250 г, второй раз при 200 г, а затем при 150 г, все центрифугирование осуществляли при 4°С 12 мин. Перед последним центрифугированием клетки подсчитали с помощью счетчика ^иИет (Весктап Οοι,ιΙ^Γ, модель Ζ2), а количество моноцитов оценили как число клеток со средним размером около 9 мкм. Клетки можно хранить при -80°С (в разбавленной плазме с 10% ΌΜ8Θ, 107 моноцитов на сосуд) или использовать непосредственно в экспериментах.
- 4 015266
Клетки пересуспендировали в адсорбционной среде (ΚΡΜΙ 1640 (СатЬтех) дополненная 2 мМ Ь-глутамина и 2% плазмы) при концентрации 2х106 моноцитов/мл 5 мл клеточной суспензии поместили в Т25 не-ТС-обработанные колбы Еа1сои. Через 1 ч адсорбции при 37°С неадгерентные клетки удалили, адгерентные клетки дважды промыли теплым ΒΡΜΙ 1640 и в каждую колбу добавили 7 мл культуральной среды (ΒΡΜΙ 1640 дополненная 2 мМ Ь-глутамина и 1% плазмы).
Колбы поместили в различные температуры: 31, 34 и 37°С, в отдельные СО2-инкубаторы. Добавили факторы дифференциации ΟΜ-СЗЕ и 1Ь-4 при окончательных концентрациях 100 и 50 нг/мл соответственно в день 1, 3 и 5.
Добавили ΤΝΡ-альфа при окончательной концентрации 10 нг/мл в день 6 для индуцирования созревания и подняли температуру до 37°С в течение последних 24 ч инкубации.
В день 7 клетки собрали и определили их фенотип анализом ЕАС8 (рассеивание возбужденной флуоресценции сортированных клеток). Клетки окрасили с помощью прямых конъюгированных антител СИ1а-фикоэритрина (РЕ), СИ14-флуоресцина изотиоцианата (Е1ТС), СИ83-РЕ, СИ86-РЕ, НЬА-ΩΒ-Ρ.-ΟЕ1ТС (все от Рйаттшдеи, ВескГои ΩίοΚιηδοη. ВтоибЬу, Иеитатк) и ССК7-Е1ТС (К&И ЗуДетз Еигоре, АЬшдГои, иК). Применяли контроли приемлемых изотипов. Образцы анализировали с помощью проточного питометра ЕАС8 СайЬиг (ВескГои Июкшкои) и программного обеспечения СТЬЬОнеД (ВескГои Июктзои).
Результат соответствующих экспериментов показан на фиг. 1. Меньше клеток, культивируемых при сниженных температурах, экспрессировали СИ1а, по сравнению с клетками, культивируемыми при 37°С, тогда как меньше СИ83 и СИ86 положительных клеток наблюдали для клеточных популяций, культивируемых при низких температурах. Средний индекс флуоресценции (ΜΕΙ) для СИ1а был в два раза выше в культуре при 31 и 34°С по сравнению с 37°С. Оцененная в процентах степень созревания ИС, экспрессирующих СИ83 и СИ86, была ниже при 31-34°С. Это отражает или более низкую чувствительность к факторам созревания клеток, культивируемых при сниженной температуре, или то, что для процесса их созревания необходима температура 37°С.
Пример 2. Эффект пониженной температуры на продуцирование 1Ь-10.
Продуцирование ΙΠ-10, который является отрицательным регулятором ИС, изучали во время дифференциации моноцитов в дендритные клетки. Измеряли его концентрацию в культуральном супернатанте, взятом в дни 1, 3 и 5. Продуцирование ГЬ-10 измеряли сэндвич-ЕЫ8А (твердофазный иммуноферментный анализ), что включает иммобилизованное антитело (АЬ), стандарт или образец, биотинилированное определение АЬ и НКР (пероксидаза хрена)-стрептавидин, с помощью набора КеаОу-ЗеЬСо от еВю8С1еиее, главным образом, по рекомендациям изготовителя с некоторыми модификациями. После продолжавшегося в течение ночи связывания иммобилизованного АЬ в 96-луночных планшетах №тс тахйотр и промывания этап блокирования продлили по меньшей мере на 3 ч при комнатной температуре. Стандартный график получили по семи серийным разведениям стандарта, начиная с 200 пг/мл ГЬ-10. Стандарты и образцы инкубировали при комнатной температуре на протяжении 2 ч с последующей инкубацией при 4°С на протяжении ночи. Следующие этапы выполняли по протоколу производителя. Раствор тетраметилбензидинового субстрата из того же набора использовали в ферментной реакции НКР, а после завершения реакции измеряли оптическую плотность с поправкой на длину волны как разницу между считываниями при 490 и 620 нм. Результаты одного из таких экспериментов представлены на фиг. 2А. Спонтанное продуцирование ЬИ-10 моноцитами было низким в течение первого дня и существенно активировалось после добавления ΟΜ-СЗЕ и [И-4 в день 1. Клетки, культивируемые при 34°С до дня 5, продуцировали, в общем, существенно более низкие количества ΙΠ-10 по сравнению с клетками, культивируемыми при 37°С. Анализ нескольких культур ИС в день 5 показал похожий график (фиг. 2В). Сниженное продуцирование ΙΠ-10 при 34°С по сравнению с 37°С продолжалось даже после промывания клеток в день 5, при помещении их при 37°С, добавлении агента созревания в день 6 и сбора супернатантов в день 8 (фиг. 2С). Эти результаты показывают, что клетки, культивируемые при температурах ниже 37°С, приобретают стабильный фенотип низкого продуцирования ΙΠ-10.
Пример 3. Эффект пониженной температуры на продуцирование ^-^/70.
Заявитель также исследовал эффект температуры на продуцирование Ш-12р70. Продуцирование ΙΗ-12ρ70 измерили с помощью сэндвич-ЕЫЗА, что включает иммобилизованное АЬ, стандарт или образец, биотинилированное определение АЬ и НКР-стрептавидин. Набор ИиоЗеГ ЕЫ8А 0еуе1ортеи1 ЗуДет для ΙΕ-12ρ70 (К&И ЗуДетз) использовали главным образом по рекомендациям изготовителя с некоторыми модификациями. После продолжавшегося в течение ночи связывания иммобилизованного АЬ в 96-луночных планшетах №тс тахйотр и промывания этап блокирования продлили по меньшей мере на 3 ч при комнатной температуре. Стандартный график получили по семи серийным разведениям стандарта, начиная с 500 пг/мл Ι^12ρ70. Стандарты и образцы инкубировали при комнатной температуре на протяжении 2 ч с последующей инкубацией при 4°С на протяжении ночи. Следующие этапы выполняли по протоколу производителя. Смесь перекиси водорода с тетраметилбензидином использовали как раствор субстрата для НКР, а после окончания ферментной реакции измеряли оптическую плотность с поправкой на длину волны как разницу между считываниями при 490 и 620 нм.
- 5 015266
Таблица 1
Эффект температуры в течение первых 5 дней культуры на продуцирование 1Ь-12р70 во время созревания, индуцированного имитацией МСМ
| Культура ОС | Температура инкубации до дня 5 | Продуцирование 1Ь-12р70 во время созревания, пг/мл |
| 36/04-3-3 | 34°С | 35,1 |
| 36/04-3-4 | 37°С | 14,1 |
| 17/05-2-1 | 34°С | 55,2 |
| 17/05-2-3 | 37°С | 35,7 |
| 18/05-2-1 | 34°С | 19,0 |
| 18/05-2-3 | 37°С | 3,7 |
Как можно видеть (табл. 1), клетки, полученные при 34°С, продуцируют существенно более высокие уровни 1Ь-12р70.
Пример 4. Выбор пластиковой емкости культуры тканей.
Сравнили два типа пластиковых емкостей культуры тканей: полистирол нетканевой культуры (Р8) (продукт Νο. 353813, Т25 ВЭ-Вюкс1Спсе. И8А) и пластиковую емкость Рптапа™ (продукт Νο. 353813, Т25 ВЭ-Вюкаепсе, И8Л). Эксперимент установил подобие в методике, описанной в примере 1, использующей пластиковые поверхности, предварительно обработанные за 15-45 мин 2% аутологической плазмой в качестве источника компонентов, таких как, например, межклеточные компоненты, подобные фибриногену и фибронектину, в безсывороточной среде ΑΙΜ-ν при 34°С до дня 5, после чего культуры выдерживали при 37°С. Агенты созревания: ΤΝΡ альфа, 1Ь-1 бета, 1Ь-б и простагландин Е2, добавили в день б, а культуры собрали в день 8.
Клетки-предшественники имеют в зависимости от условия выращивания возможность развиваться в макрофаги или ЭС. Через несколько дней в культивируемых клетках, предназначенных для развития в макрофаги, будут формироваться культуры адгерентных клеток, тогда как клетки, предназначенные для развития в ЭС, будут формировать культуры более свободно прикрепленных клеток. Сначала равное число клеток было высеяно и прикреплено к различным пластиковым емкостям культур ткани. Проверка культур ЭС со дня б световой микроскопией показала существенно меньшее число адгерентных клеток в пластиковой емкости Рптапа™ по сравнению с клетками, растущими на другом типе пластика. В общем, культуры, растущие в пластиковой емкости Рптапа™, также оказались более чистыми, т.е. имели меньше продуктов разрушения, отражая меньшую степень смерти клеток во время созревания.
Проанализировали применение различной концентрации плазмы для предварительной обработки пластиковой емкости. Незначительные отличия в свойствах ЭС наблюдали при обработке пластиковой емкости Рптапа™ 2, 10, 20 или 40% плазмой (данные не показаны). Однако отметили, что количество загрязняющих лимфоцитов снижалось с повышением концентрации плазмы до 10%. Поэтому включили этап обработки пластиковой емкости Рптапа™ 10% плазмой в способе, описанном в эксперименте 1, в следующие эксперименты.
В следующих экспериментах сравнили способ данного изобретения со стандартным способом, который выполняли, как описано ниже, если не определено иное.
Дендритные клетки типично образовывались из лейкоцитарной пленки, полученной из банка крови. б0 мл лейкоцитарной пленки растворили б0-мл безкальциевом и безмагниевом фосфатном буфферезированном солевом растворе Дюльбекко (ЭРВ8, продукт Νο. ВЕ17-512Р, СатЬгех, Ве1дшт) и поместили в четыре 50-мл пробирки, каждая из которых содержала 15 мл Ьутрйоргер (продукт Νο. 1053980, ΑΧΙ88Н1ЕЬЭ РοС Α8, Νοπνίκ). После центрифугирования (4б0 г, 30 мин, 20°С) 10-20 мл верхнего слоя плазмы перенесли в отдельные пробирки. Одноядерные клетки собрали с границы разделения, разбавили в два раза РВ8 ΕΌΤΑ без кальция и магния и промыли с помощью трех центрифугирований, первое при 250 г, второе при 175 г, а последнее при 110 г, все центрифугирование выполняли при 4°С 12 мин. Перед последним центрифугированием клетки подсчитали с помощью счетчика ^ϋΙίΟΓ (Весктап ί.'οιι1^Γ модель Ζ2), а количество моноцитов определили как число клеток со средним размером около 9 мкм.
Клетки ресуспендировали в адсорбционной среде (ВРМ1 1640 (СатЬгех), дополненной 2 мМ Ь-глутамина и 1% инактивированной нагреванием аутологической плазмы) при концентрации 2х10б моноцитов/мл. 5 мл клеточной суспензии поместили в Τ25 необработанные колбы Рптапа™. Через 1 ч адсорбции при 37°С неадгерентные клетки удалили, а в каждую колбу добавили 5 мл среды культивирования (КРМ1 1б40, дополненной 2 мМ Ь-глутамина и 1% плазмы).
В день 1 среду заменили свежей средой. В день 3 добавили 2 мл среды. В день 5 все неадгерентные клетки собрали и поместили в Τ25 колбах Рптапа™ со свежей средой.
Колбы поместили при 37°С в СО2-инкубатор. Факторы дифференциации ОМ-С8Е и 1Ь-4 при окончательных концентрациях 100 и 50 нг/мл соответственно добавили в день 1, 3 и 5.
ΤΝΕ-α или смесь цитокина (1Ь-1, 1Ь-6, ΤΝΕ-α и РСЕ-2) добавили в день 6 для индуцирования созревания.
В день 7 клетки собрали, а их фенотип определили анализом ЕЛС8.
Пример 5. Продуцирование 1Ь-12р70 фиг. 3 иллюстрирует измерение продуцирования 1Ь-12р70 за два дня (день 7 и 8). Показали, что дендритные клетки, образованные новым способом, продуцируют существенно более высокие количества ГЕ-12р70, чем дендритные клетки, образованные стандартным способом.
Пример 6. Экспрессия ССК7.
Для изучения эффекта низкой температуры на экспрессию ССК.7 применили смесь созревания, включающую 1Ь-1бета, 1Ь-6, ΤΝΕ-альфа и простагландин Е2, вместо использования только ΤΝΕ-альфа. Результат экспериментов, представленный на фиг. 1В, является сравнением трех различных температур с новым способом и стандартным способом. Можно увидеть, что экспрессия ССК.7 более высокая при новом способе по сравнению со стандартным способом.
Также проанализировали функциональную экспрессию ССК7 рецептора дендритной клеткой, образованной новым способом в стандартном анализе миграции (С11ето1х П18ро8аЫе СйетоШхю 8уз1ет (Модель 116-5) от №иго РгоЬе, ОаййегвЬигд, ΜΌ, И8Л). Наблюдали миграцию дендритных клеток по направлению к хемокинам ССЬ19 с ОС, образованными новым способом (данные не показаны), подтверждая экспрессию функционального ССК7 рецептора.
Пример 7. Выход клеток.
Описанный здесь новый способ также показал повышение выхода клеток по сравнению со стандартным способом. В трех различных повторностях выявили более высокий выход клеток при всех анализированных температурах (31, 34 и 37°С) по новому способу в сравнении со стандартным способом. См. табл. 2.
Таблица 2
| Температура/Способ | 31°С | 34°С | 37°С |
| Новый способ 1) 2) 3) | 2,2 х 106 2.6 х 10б 1.7 х 106 | 2,0 х 106 1,8 х 106 2,0 х 106 | 2.6 х 106 1,3 х Ю6 1.6 х 106 |
| Стандартный способ 1) 2) 3) | 1,7 х 106 1,3 хЮ6 0,8 х 10б | 1,1 х 106 1,6 х 106 1,0 х 106 | 0,9 х 106 0,6 х 106 0,6 х 106 |
Пример 8. Вариации маркеров от пробы к пробе ОС, образованных способом по данному изобретению.
В соответствии с требованиями ОМР для продуцирования дендритных клеток в медицинских целях должны наблюдаться низкие вариации от пробы к пробе в свойствах дендритных клеток. С этой целью выполняли получение дендритных клеток из крови 8 различных доноров в течение трехнедельного периода, используя те же серии всех используемых реагентов и 0,5% аутологической плазмы в качестве дополнения к среде Л1М-У. Для сравнения выполняли продуцирование ОС с помощью стандартного способа (37°С). Эксперименты выполняли на размороженных РВМС (мононуклеары периферической крови). В табл. 3 приведены свойства ОС, образованных в этих экспериментах. В отличие от высокой вариабельности в свойствах ОС, образованных стандартным способом, наблюдается очень низкая степень вариабельности в свойствах ОС, полученных новым способом.
- 7 015266
Таблица 3
Различные маркеры, экспрессированные в процентной доле дендритных клеток, образованных или стандартным способом, или новым способом
| С1)1а | СО14 | СО86ВЬ1С0КНй | НЬА1> | СВ83 | ССК7 | |||||||
| Донор | 8 | N | 8 | N | 8 | N | 8 | N | 8 | N | 8 | N |
| 23/05 | 56 | 44 | 73 | 18 | 28 | 70 | 98 | 100 | 28 | 70 | Νϋ | Νϋ |
| 24/05 | 41 | 85 | 2 | 1 | 49 | 99 | 99 | 100 | 75 | 99 | Νϋ | Νϋ |
| 25/05 | 0 | 10 | 17 | 1 | 80 | 99 | 99 | 100 | 83 | 99 | 63 | 98 |
| 26/05 | 50 | 69 | 9 | 1 | 90 | 99 | 100 | 100 | 91 | 99 | 85 | 98 |
| 27/05 | 53 | 86 | 9 | 1 | 93 | 100 | 100 | 100 | 93 | 100 | 90 | 99 |
| 28/05 | 69 | 73 | 37 | 12 | 25 | 86 | 97 | 100 | 41 | 86 | 18 | 81 |
| 29/05 | 66 | 84 | 60 | 2 | 43 | 96 | 98 | 100 | 43 | 99 | 17 | 95 |
| 30/05 | 86 | 89 | 25 | 1 | 63 | 99 | 100 | 100 | 63 | 99 | 56 | 98 |
| X: | 53 | 68 | 29 | 5 | 59 | 94 | 99 | 100 | 65 | 94 | 55 | 95 |
8: стандартный способ, Ν: способ по данному изобретению, ΝΏ: не определяли, X: среднее значение.
В заключение, фиг. 4А представляет фенотипы незрелых (день 5) и зрелых (день 8) дендритных клеток, образованных новым способом. Также измеряли экспрессию ί.Ό80. маннозного рецептора (МК) и двух маркеров клеток Лангерганса - ί.Ό207 (лангерин) и Е-кадгерина. Как видно, клетки, образованные способом по данному изобретению, не являются клетками Лангерганса.
Фиг. 4В представляет фенотип незрелых (день 5) и зрелых (день 8) дендритных клеток, образованных новым способом и стандартным способом. Окрасили клетки для экспрессии стандартных ΌΟ маркеров. Незрелые клетки (день 5) показывают более чистую СЭ1а популяцию. Зрелая популяция (день 8) показывает высокую и однородную НЬА Ό, СЭ83 и СЭ86 экспрессию в клетках, образованных новым способом, по сравнению со стандартным способом. Также экспрессия ССК7 однородная при новом способе.
Пример 9. Стабильность дендритных клеток, образованных новым способом.
После инфекции в организме дендритные клетки должны мигрировать и достигать лимфатического узла для того, чтобы стимулировать Т-клетки. Поэтому очень важно, что ОС поддерживают свой фенотип несколько дней. Общий путь выполнение анализа стабильности заключается в сборе клеток в день 8, промывании цитокинов и продолжительном культивировании клеток в отсутствии стимуляторных цитокинов. Выполняли этот вид экспериментов путем культивирования клеток без цитокинов в течение двух дней. Фиг. 5 представляет результаты ТАС8 анализа ОС, собранных в день 8 и после дополнительных двух дней культуры. Ясно, что экспрессия измеренных параметров: СЭ1а, 0014, СЭ83, НЬА-Ό и ССК7, остается в большей степени неизменной, и, таким образом, фенотип остается стабильным.
В подобном эксперименте без промывания цитокинов в день 8 проанализировали и фенотип, и аллостимуляторную активность дендритных клеток в день 7 или день 10. Фиг. 6А и 6В показывают фенотип и аллостимуляторную активность соответственно. Результаты показывают, что аллостимуляторный эффект остается все еще высоким после 10 дней культуры и фенотипический профиль в день 10 напоминает профиль, измеренный в день 7, подтверждая высокую стабильность образованных дендритных клеток.
Пример 10. Аллостимуляция дендритными клетками, образованными новым способом.
Сравнили аллостимуляторные способности ОС, полученных стандартным способом и способом по данному изобретению. Клетки культивировали в среде КРМ1 1640 с 5% АВ человеческой сыворотки. Клеткиреспондеры являлись одноядерными клетками, полученными от здоровых доноров разделением по градиенту плотности лейкоцитарной пленки периферической крови. Клетки-стимуляторы представляли собой облученные зрелые дендритные клетки, полученные после 2-дневного воздействия смесью цитокинов для созревания, как описано в примере 4. Клетки-стимуляторы, 0,1х106 клеток в 100 мкл, смешали с титрованными количествами клеток-стимуляторов (в 100 мкл), как показано на фиг. 7, и культивировали 5 дней в и-донных 96-луночных микротитровальных планшетах. В течение последних 18 ч добавили 3Н-тимидин (0,1 мкКюри/мл). Впоследствии, клетки собрали для подсчета сцинтилляции. Данные выразили как средние значения числа импульсов в минуту четырех реплицированных культур. Критерий Уилкоксона применили для оценивания различий между двумя способами, применяемыми для образования ОС. Как видно, дендритные клетки, полученные способом по данному изобретению, имеют аллостимуляторную активность в 3-10 раз выше.
Пример 11. Представление антигена дендритными клетками, полученными новым способом.
Для объяснения потенциала ОС по представлению антигена Т-клеткам, проводили ΙΝΕγ ЕЫ8РОТ анализ с Т-клетками, стимулированными ОС, оголенными или сенсибилизированными СМУ (цитомега
- 8 015266 ловирус) пептидом. Анализ ΙΝΕγ ЕЫ8РОТ выбрали, поскольку он обеспечивает четкий результат на отдельном клеточном уровне и поскольку Т-клетки после столкновения с антигеном, представленным АРС, высвобождают ΙΝΕγ. Данную вирусную модель выбрали, поскольку используемый СМУ пептид рестриктирован по НЬА-А2, а донорный материал, как известно, был ΗΕΆ-Α2 положительным, и 80% популяции обладало ответом СМУ. Фиг. 8 представляет результаты анализа ЕБ18РОТ, показывающие, что существует сильный ответ от Т-клеток, стимулированных ОС, введенными с СМУ пептидом, показывая, что эти ОС способны представлять антиген Т-клеткам.
Claims (12)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Способ получения зрелых дендритных клеток для индуцирования иммунного ответа, экспрессирующих на своей поверхности СИ1а, СИ14низкий, СИ83, СИ86, 1й-10низкий, ССП7 и 1Ь-12р70 и имеющих стабильный фенотип низкого продуцирования 16-10, при котором клетки-предшественники и незрелые дендритные клетки культивируют в присутствии факторов созревания и дифференцировки, таких как СМ-С8Р, 1Ь-4 и ΕΝΕ-ο., при температуре от 31 до 37°С.
- 2. Способ по п.1, где температура составляет 34°С.
- 3. Способ по любому из пп.1, 2, где клетки-предшественники являются аутологическими клеткамипредшественниками.
- 4. Способ по любому из пп.1-3, где клетки-предшественники выбирают из миелоидных клетокпредшественников или стволовых клеток.
- 5. Способ по п.4, где миелоидные клетки-предшественники являются моноцитами.
- 6. Популяция дендритных клеток, получаемых способом по любому из пп.1-5, где указанные клетки экспрессируют СИ1а, СИ14низкий, СИ83, СИ86, 1й-10низкий, ССП7 и 1Ь-12р70 и где указанные клетки имеют стабильный фенотип низкого продуцирования 1Ь-10.
- 7. Применение популяции клеток по п.6 для стимуляции и/или экспансии Т-клеток.
- 8. Применение по п.7, где указанные Т-клетки являются аутологическими Т-клетками.
- 9. Применение по пп.7, 8, которое осуществляют ш уйго.
- 10. Применение популяции клеток по п.6 для индуцирования иммунного ответа у субъекта.
- 11. Фармацевтическая композиция для индуцирования иммунного ответа, включающая популяцию дендритных клеток по п.6.
- 12. Фармацевтическая композиция по п.11 для индуцирования иммунного ответа против злокачественных образований и инфекционных болезней.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DKPA200501742 | 2005-12-08 | ||
| PCT/DK2006/000694 WO2007065439A1 (en) | 2005-12-08 | 2006-12-07 | Method for generating dendritic cells employing decreased temperature |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200801385A1 EA200801385A1 (ru) | 2008-10-30 |
| EA015266B1 true EA015266B1 (ru) | 2011-06-30 |
Family
ID=37745820
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200801385A EA015266B1 (ru) | 2005-12-08 | 2006-12-07 | Способ получения зрелых дендритных клеток для индуцирования иммунного ответа и применение полученных клеток |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9771558B2 (ru) |
| EP (1) | EP1971680B1 (ru) |
| JP (1) | JP2009518017A (ru) |
| CN (1) | CN101321861B (ru) |
| AT (1) | ATE545698T1 (ru) |
| AU (1) | AU2006322451A1 (ru) |
| BR (1) | BRPI0619520A2 (ru) |
| CA (1) | CA2640836C (ru) |
| CY (1) | CY1113016T1 (ru) |
| DK (1) | DK1971680T3 (ru) |
| EA (1) | EA015266B1 (ru) |
| ES (1) | ES2382565T3 (ru) |
| IL (1) | IL191782A (ru) |
| MY (1) | MY145814A (ru) |
| NO (1) | NO20083023L (ru) |
| NZ (1) | NZ569343A (ru) |
| PT (1) | PT1971680E (ru) |
| WO (1) | WO2007065439A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2663468C1 (ru) * | 2017-09-25 | 2018-08-06 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ лечения местно-распространенного нерезектабельного рака поджелудочной железы |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009062502A1 (en) * | 2007-11-13 | 2009-05-22 | Dandrit Biotech A/S | Method for generating tolerogenic dendritic cells employing decreased temperature |
| RU2486238C1 (ru) * | 2011-12-29 | 2013-06-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития России) | СПОСОБ НАГРУЗКИ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК АНТИГЕНОМ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ Opisthorchis felineus |
| TW202138005A (zh) * | 2019-12-27 | 2021-10-16 | 特定非營利活動法人北東日本研究機構 | 癌症治療方法及醫藥 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020182194A1 (en) * | 2001-04-04 | 2002-12-05 | Shanghai Brilliance Biotech Institute | Cytokine gene modified antigen-presenting cell/tumor cell conjugate, its preparation and use |
| US20040009596A1 (en) * | 2002-03-28 | 2004-01-15 | Rao Kanury V. S. | Extract from an Indian green mussel (perna viridis) for differentiation and maturation of dendric cells |
| US20050003533A1 (en) * | 2003-05-08 | 2005-01-06 | Pawel Kalinski | Mature type-1 polarized dendritic cells with enhanced IL-12 production and methods of serum-free production and use |
| WO2006127150A2 (en) * | 2005-04-08 | 2006-11-30 | Argos Therapeutics, Inc. | Dendritic cell compositions and methods |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4306813B2 (ja) * | 1995-09-19 | 2009-08-05 | アスビオファーマ株式会社 | 動物細胞の新規培養方法 |
| US5849589A (en) * | 1996-03-11 | 1998-12-15 | Duke University | Culturing monocytes with IL-4, TNF-α and GM-CSF TO induce differentiation to dendric cells |
| US20050084966A1 (en) * | 1999-04-20 | 2005-04-21 | Edelson Richard L. | Methods for inducing the differentiation of blood monocytes into functional dendritic cells |
| US20010026937A1 (en) * | 2000-01-11 | 2001-10-04 | Juha Punnonen | Monocyte-derived dendritic cell subsets |
| JP4219789B2 (ja) * | 2002-10-30 | 2009-02-04 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 骨髄由来の不死化樹状細胞株 |
| CA2522207A1 (en) * | 2003-04-14 | 2004-10-28 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for ex vivo hybridoma-free production of polyclonal and monoclonal antibodies and generation of immortalized cell populations |
-
2006
- 2006-12-07 EP EP06818153A patent/EP1971680B1/en active Active
- 2006-12-07 WO PCT/DK2006/000694 patent/WO2007065439A1/en active Application Filing
- 2006-12-07 PT PT06818153T patent/PT1971680E/pt unknown
- 2006-12-07 BR BRPI0619520-2A patent/BRPI0619520A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-12-07 JP JP2008543659A patent/JP2009518017A/ja active Pending
- 2006-12-07 CA CA2640836A patent/CA2640836C/en active Active
- 2006-12-07 AU AU2006322451A patent/AU2006322451A1/en not_active Abandoned
- 2006-12-07 EA EA200801385A patent/EA015266B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2006-12-07 MY MYPI20081987A patent/MY145814A/en unknown
- 2006-12-07 CN CN2006800456978A patent/CN101321861B/zh active Active
- 2006-12-07 DK DK06818153.6T patent/DK1971680T3/da active
- 2006-12-07 ES ES06818153T patent/ES2382565T3/es active Active
- 2006-12-07 NZ NZ569343A patent/NZ569343A/en active IP Right Revival
- 2006-12-07 AT AT06818153T patent/ATE545698T1/de active
- 2006-12-07 US US12/086,050 patent/US9771558B2/en active Active
-
2008
- 2008-05-27 IL IL191782A patent/IL191782A/en active IP Right Grant
- 2008-07-08 NO NO20083023A patent/NO20083023L/no not_active Application Discontinuation
-
2012
- 2012-05-15 CY CY20121100452T patent/CY1113016T1/el unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020182194A1 (en) * | 2001-04-04 | 2002-12-05 | Shanghai Brilliance Biotech Institute | Cytokine gene modified antigen-presenting cell/tumor cell conjugate, its preparation and use |
| US20040009596A1 (en) * | 2002-03-28 | 2004-01-15 | Rao Kanury V. S. | Extract from an Indian green mussel (perna viridis) for differentiation and maturation of dendric cells |
| US20050003533A1 (en) * | 2003-05-08 | 2005-01-06 | Pawel Kalinski | Mature type-1 polarized dendritic cells with enhanced IL-12 production and methods of serum-free production and use |
| WO2006127150A2 (en) * | 2005-04-08 | 2006-11-30 | Argos Therapeutics, Inc. | Dendritic cell compositions and methods |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| ATHANASAS-PLATSIS S. ET AL.: "Induction of the CD1a Langerhans cell marker on human monocytes", ARCHIVES OF ORAL BIOLOGY, vol. 40, no. 2, February 1995 (1995-02), pages 157-160, XP002421679, ISSN: 0003-9969, cited in the application * |
| BASU S. ET AL.: "Fever-like temperature induces maturation of dendritic cells through induction of hsp90", INTERNATIONAL IMMUNOLOGY, vol. 15, no. 9, September 2003 (2003-09), pages 1053-1061, XP002979688, ISSN: 0953-8178 cited in the application the whole document * |
| JONULEIT H. ET AL.: "Pro-inflammatory cytokines and prostaglandins induce maturation of potent immunostimulatory dendritic cells under fetal calf serum-free conditions". EUROPEAN JOURNAL OF IMMUNOLOGY, vol. 27, no. 12, December 1997 (1997-12), pages 3135-3142, XP000906835, ISSN: 0014-2980, cited in the application the whole document * |
| KIRKLEY J.E. ET AL.: "Temperature alters lipopolysaccharide-induced cytokine secretion by RAW 264.7 cells", SCANDINAVIAN JOURNAL OF IMMUNOLOGY, vol. 58, no. 1, July 2003 (2003-07), pages 51-58, XP002421680, ISSN: 0300-9475, cited in the application * |
| SCANDELLA E. ET AL.: "Prostaglandin E2 is a key factor for CCR7 surface expression and migration of monocyte-derived dendritic cells", BLOOD, vol. 100, no. 4, 15 August 2002 (2002-08-15), pages 1354-1361, XP002383699, ISSN: 0006-4971, cited in the application the whole document * |
| VOLKMANN A. ET AL.: "A conditionally immortalized dendritic cell line which differentiates in contact with T cells or T cell-derived cytokines", EUROPEAN JOURNAL OF IMMUNOLOGY, vol. 26, no. 11, November 1996 (1996-11), pages 2565-2572, XP008022329, ISSN: 0014-2980 the whole document * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2663468C1 (ru) * | 2017-09-25 | 2018-08-06 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ лечения местно-распространенного нерезектабельного рака поджелудочной железы |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1971680A1 (en) | 2008-09-24 |
| EA200801385A1 (ru) | 2008-10-30 |
| CA2640836C (en) | 2018-05-15 |
| US20090196856A1 (en) | 2009-08-06 |
| IL191782A0 (en) | 2008-12-29 |
| WO2007065439A1 (en) | 2007-06-14 |
| ATE545698T1 (de) | 2012-03-15 |
| US9771558B2 (en) | 2017-09-26 |
| BRPI0619520A2 (pt) | 2011-10-04 |
| DK1971680T3 (da) | 2012-06-11 |
| CN101321861B (zh) | 2012-10-24 |
| CA2640836A1 (en) | 2007-06-14 |
| JP2009518017A (ja) | 2009-05-07 |
| EP1971680B1 (en) | 2012-02-15 |
| CN101321861A (zh) | 2008-12-10 |
| MY145814A (en) | 2012-04-30 |
| ES2382565T3 (es) | 2012-06-11 |
| PT1971680E (pt) | 2012-05-23 |
| CY1113016T1 (el) | 2016-04-13 |
| NZ569343A (en) | 2011-11-25 |
| NO20083023L (no) | 2008-08-28 |
| IL191782A (en) | 2012-05-31 |
| AU2006322451A1 (en) | 2007-06-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100223395B1 (ko) | 사람수지상세포의시험관내생성방법및이의용도 | |
| US6004807A (en) | In vitro generation of human dendritic cells | |
| JP2002529073A (ja) | 三次元装置における造血前駆細胞からのリンパ様組織特異的細胞の生成 | |
| Chiang et al. | Optimizing parameters for clinical-scale production of high IL-12 secreting dendritic cells pulsed with oxidized whole tumor cell lysate | |
| BRPI0619499A2 (pt) | composições e métodos para indução da ativação de células dendrìticas monocìticas imaturas | |
| US20240189353A1 (en) | Modulated immunodominance therapy | |
| Luger et al. | Toll-like receptor 4 engagement drives differentiation of human and murine dendritic cells from a pro-into an anti-inflammatory mode | |
| Romain et al. | CD 34‐derived dendritic cells transfected ex vivo with HIV‐G ag m RNA induce polyfunctional T‐cell responses in nonhuman primates | |
| STOROZYNSKY et al. | Interleukin‐3 and granulocyte–macrophage colony‐stimulating factor enhance the generation and function of dendritic cells | |
| US20210147803A1 (en) | Method for producing natural killer cells | |
| EA015266B1 (ru) | Способ получения зрелых дендритных клеток для индуцирования иммунного ответа и применение полученных клеток | |
| JP2015509382A (ja) | 組織構築体およびその使用 | |
| Matoba et al. | T cell subsets in the immune rejection of murine heterotopic corneal allografts. | |
| AU2013203315B2 (en) | Method for generating dendritic cells employing decreased temperature | |
| Viet et al. | Human umbilical cord blood derived serum and platelet-rich plasma can replace fetal bovine serum to induce human monocytes into dendritic cells | |
| Burgoyne | Improved dendritic cell therapy for cancer by enhancing in vivo lymph node migration using a novel chemokine-based sorting method | |
| MX2008007152A (en) | Method for generating dendritic cells employing decreased temperature |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RH4A | Grant of a duplicate of a eurasian patent | ||
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |