EA014111B1 - Бензимидазолтиофеновые соединения в качестве ингибиторов polo-подобных киназ (plk) - Google Patents

Abstract

В изобретении предложены бензимидазолтиофеновые соединения, фармацевтические композиции, содержащие их, способы их получения и их применение в качестве фармацевтических агентов (формулы А-Н).

Description

Настоящее изобретение относится к новым бензимидазолтиофеновым соединениям, к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, и к применению этих соединений в терапии.

Ро1о-подобные киназы (РЬК) представляют собой сохранившиеся за время эволюции сериновые/треониновые киназы, которые играют важную роль в регуляции процессов в клеточном цикле. РЬК играют роль во вступлении в митоз и в выходе из митоза в разных организмах от дрожжей до клеток млекопитающих. РЬК включают РЬК1, РЬК2, РЬК3 и РЬК4.

Сверхэкспрессия РЬК1, по-видимому, в большой степени связана с неопластическими клетками (включая рак). Опубликованное исследование показало высокие уровни экспрессии РНК РЬК1 в более чем 80% опухолей легкого и молочной железы при слабой экспрессии или ее отсутствии в соседней нормальной ткани. Несколько исследований показали взаимосвязь между экспрессией РЬК, гистологической стадией и прогнозом при некоторых типах рака. Обнаружены существенные корреляции между процентным содержанием РЬК-позитивных клеток и гистологической стадией рака яичников и эндометрия (Р<0,001). В этих исследованиях отмечено, что РЬК сильно экспрессируется в инвазивных клетках карциномы эндометрия, и что это могло бы отражать уровень злокачественности и пролиферации при карциноме эндометрия. Используя анализ ЯТ-РСЯ (полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой), сверхэкспрессию РЬК обнаруживали в 97% карцином пищевода и 73% карцином желудка по сравнению с соответствующими нормальными тканями. Кроме того, пациенты с высокими уровнями сверхэкспрессии РЬК при карциноме пищевода являлись группой со значительно худшим прогнозом, чем пациенты с низкими уровнями сверхэкспрессии РЬК. При раковых заболеваниях головы и шеи повышенная экспрессия мРНК РЬК1 наблюдалась в большинстве опухолей; анализ Каплана-Мейера показал, что пациенты с умеренными уровнями экспрессии РЬК1 жили дольше, чем пациенты с высокими уровнями экспрессии РЬК1. Анализ пациентов с немелкоклеточной карциномой легкого показал аналогичные результаты в отношении экспрессии РЬК1.

В публикации РСТ \УО 2004/014899, 8тйРК1ше ВеесРат, раскрыты новые бензимидазолтиофеновые соединения формулы I

где Я¹ выбран из группы, состоящей из Н, алкила, алкенила, алкинила, -С(О)Я⁷, -СО₂Я⁷, -С(О)ИК⁷Я⁸, -С(О)\(Я )ОЯ⁸. -С(О)\(Я )-Я²-ОЯ⁸. -С(ОЛ'(Я )-РР, -С(ОЛ'(Я )-Я²-РР, -С(О)Ы(К⁷)С(О)Я⁸, -С(О)Н(Я⁷)СО2Я⁸, -С(О)\(Я )С(О)\Я Я⁸. -С(О)\(Я )8(О);Я⁸. -Я²-ОЯ . -Я²-О-С(О)Я , -С(8)Я⁷,

-С(8)\Я Я⁸. -С(8Л'(Я )-РР, -С(8Л'(Я )-Я²-РР, -Я²-8Я , -С( \Я )\Я Я⁸, -С( ΝΡ )Ν(Η⁸)-ΗΡ,

-С(=НК⁷)Н(Я⁸)-Я²-Рй, -Я'АЯ Я⁸, -СИ, -ОЯ , -8(О)ГЯ⁷, -8(О)Л'Я Я⁸, -8(О)2Ы(Я⁷)-РР, -8(О)Л'(Я)-Я²-РР, -ΝΟ⁸, И(Я )-РР, -И(Я )-Я²-РР, -И(Я )-8О;Я⁸ и Не!;

РР представляет собой фенил, возможно замещенный 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогено, алкила, групп -ОН, -Я²-ОН, -О-алкил, -Я²-О-алкил, -ΝΗ₂, -И(Н)алкил, -И(алкил)₂, -СИ и -Ν₃;

Не! представляет собой 5-7-членный гетероцикл, имеющий 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранных из Ν, О и 8, или 5-6-членный гетероарил, имеющий 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранных из Ν, О и 8, причем каждый из них, возможно, замещен 1-2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогено, алкила, оксо, групп -ОН, -Я²-ОН, -О-алкил, -Я²-О-алкил, -ΝΗ₂, -И(Н)алкил, -И(алкил)₂, -СИ и -Ν₃;

О¹ представляет собой группу формулы -(Я²)а-(¥¹)ь-(Я²)_с-Я³;

а, Ь и с являются одинаковыми или разными, и каждый из них независимо равен 0 или 1, и по меньшей мере один из а или Ь равен 1;

η равен 0, 1, 2, 3 или 4;

О представляет собой группу формулы -(Я )_аа-(У )_ЬЬ-(Я )_сс-Я или две соседние группы О² выбраны из группы, состоящей из алкила, алкенила, -ОЯ⁷, -8(О)(Я⁷ и -ИЯ⁷Я⁸, и вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, они образуют С_5-6циклоалкил, С_5-6 циклоалкенил, фенил, 5-7-членный гетероцикл, имеющий от 1 до 2 гетероатомов, выбранных из Ν, О и 8, или 5-6-членный гетероарил, имеющий от 1 до 2 гетероатомов, выбранных из Ν, О и 8;

аа, ЬЬ и сс являются одинаковыми или разными, и каждый из них независимо равен 0 или 1;

каждый из Υ¹ и Υ² является одинаковым или разным и независимо выбран из группы, состоящей из -О-, -8(О)Г, -^Я⁷)-, -С(О)-, -ОС(О)-, -СО2-, -ССО^Щ⁷)-, -С(ОМЯ⁷)8(О)₂-, -ОС(О)МЯ )-, -О8(О)₂-, ^(О^^Я⁷)-, ^(О^^Я^^О)-, -^Я^СО)'-, -^Я^ССО)-, -^Я^СОг- и -^Я^ССО^^⁷)-;

каждый из Я² является одинаковым или разным и независимо выбран из группы, состоящей из алкилена, алкенилена и алкинилена;

каждый из Я³ и Я⁴ является одинаковым или разным, и каждый независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогено, алкила, алкенила, алкинила, -С(О)Я⁷, -С(О)НЯ⁷Я⁸, -СО₂Я⁷, -С(8)Я⁷, -С(8)НЯ⁷Я⁸,

- 1 014111

где кольцо А выбрано из группы, состоящей из С5_юциклоалкила, С5.юциклоалкенила, арила, 5-10членного гетероцикла, имеющего 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из Ν, О и 8, и 5-10-членного гетероарила, имеющего 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из Ν, О и 8 каждый ά равен 0 или 1; е равен 0, 1, 2, 3 или 4;

каждый К⁶ является одинаковым или разным и независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогено, алкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, циклоалкенила, РН. Не!, -СН(ОН)-К²-ОН, -С(О)К⁷,

-СО2К⁷, -СО2-К²-РН, -СО2-К²-Не!, -С(О)МК⁷К⁸, -С(ОМК⁷)С(О)К⁷, -С(ОА(К )СО;К , -С(ОМК⁷)С(О) ΝΚ⁷Κ⁸, -С(О^(К.⁷)8(О)2К.⁷, -С(8)К⁷, -С(8)НК⁷К⁸, -С(=:МК⁷)К⁸, -С(=МК⁷)МК⁷К⁸, -СК^-ОК⁸, =О, -ОК⁷, -ОС(О)К⁷, -ОС(О)РН, -ОС(О)Не!, -ОС(О)МК⁷К⁸, -О-К²-8(О)2К⁷, -8(О)ГК⁷, -8(О)2МК⁷К⁸, -8(О)2РЬ, -8(О)2Не!, -ΝΚ⁷Κ⁸, -^К⁷)С(О)К⁸, -^К⁷)СО2К⁸, -^К⁷)-К²-СО2К⁸, А'(К )С(ОАК К⁸, ^(К⁷)-К²-С(О)МК⁷К⁸, ^(К^С^РН, -Ы(К⁷)С(О)Не1, -Ν(Κ⁷)ΡΗ, -Ы(К⁷)Не1, А'(К )С(ОАК -К'АК К⁸, -\(К )С(О)\(К (РН, -^К⁷)С(О)^К⁷)Не1, -Ы(К⁷)С(О)^К⁷)-К²-Не1, -Ы(К⁷)8(О)2К⁸, -Ы(К⁷)-К²-8(О)2К⁸, -ЫО₂, -ΌΝ и -Ν₃;

где в определении р¹, когда Ь равен 1, и с равен 0, тогда К³ не является галогено, -С(О)К⁷,

-С(О)ИК⁷К⁸, -СО2К⁷, -С(8)К⁷, -С(8)\К К⁸, -С(=ЯК⁷)К⁸, -С( ΝΚ )\К К⁸, -СК Ν-ОК, -ОК⁷, -8(О)ГК⁷, -8(О)2ИК⁷К⁸, -ЫК⁷К⁸, -Ы(К⁷)С(О)К⁸, -Ы(К⁷)8(О)2К⁸, ^О₂, -ΌΝ или -Ν₃;

где в определении р², когда ЬЬ равен 1 и сс равен 0, тогда К⁴ не является галогено, -С(О)К⁷,

-С(ОАК К⁸, -СО2К⁷, -С(8)К⁷, -С(8)НК⁷К⁸, -С(=:МК⁷)К⁸, -С( Ν'Ι! АК К⁸, -СК \-ОК, -ОК⁷, -8(О)ГК⁷, -8(О)2НК⁷К⁸, -ЫК⁷К⁸, -Ы(К⁷)С(О)К⁸, -Ы(К⁷)8(О)2К⁸, ^О₂, -ΌΝ или -Ν₃;

К⁵ выбран из группы, состоящей из Н, галогено, алкила, циклоалкила, ОК⁷, -8(О)(К⁷, -НК⁷К⁸,

-ННС(О)К⁷, АНС(ОАК К⁸ и НН8(О)₂К⁷, ί равен 0, 1 или 2; и каждый К⁷ и каждый К⁸ являются одинаковыми или разными и каждый независимо выбран из группы, состоящей из Н, алкила, алкенила, алкинила, циклоалкила и циклоалкенила;

где, когда К¹ представляет собой -СО₂СН₃ и η равен 0, тогда р¹ не является -ОН;

или их фармацевтически приемлемая соль, сольват или физиологически функциональное производное.

Также раскрыты фармацевтические композиции, содержащие эти соединения, способы их получения и способы лечения состояний, опосредованных РЬК, с применением этих соединений

Краткое изложение сущности изобретения

Согласно первому аспекту изобретения предложено соединение, выбранное из:

ΗΝ.

- 2 014111 где * указывает хиральный атом углерода; и его фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

В другом аспекте предложено энантиомерно обогащенное соединение, выбранное из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н, где стереохимия хирального атома углерода представляет собой В.

В третьем аспекте изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение, выбранное из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов. В одном воплощении фармацевтическая композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.

В четвертом аспекте изобретения предложен способ лечения состояния, опосредованного РЬК, у млекопитающего, нуждающегося в этом. Данный способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов.

В пятом аспекте изобретения предложен способ лечения поддающегося лечению новообразования у млекопитающего, нуждающегося в этом. Данный способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов. Поддающееся лечению новообразование может быть выбрано из группы, состоящей из рака молочной железы, рака толстой кишки, рака легкого, включая мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточный рак легкого, рака простаты, рака эндометрия, рака желудка, меланомы, рака яичника, рака поджелудочной железы, плоскоклеточной карциномы, карциномы головы и шеи, карциномы пищевода, гепатоцеллюлярного рака и гематологических злокачественных заболеваний, таких как острые лейкозы и агрессивные лимфомы.

В шестом аспекте данного изобретения предложен способ лечения рака молочной железы у млекопитающего, нуждающегося в этом. Данный способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов.

В седьмом аспекте данного изобретения предложен способ лечения рака яичника у млекопитающего, нуждающегося в этом. Данный способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов.

В восьмом аспекте данного изобретения предложен способ лечения немелкоклеточного рака легкого у млекопитающего, нуждающегося в этом.

Данный способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов.

В девятом аспекте данного изобретения предложен способ лечения рака простаты у млекопитающего, нуждающегося в этом. Данный способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н, и его фармацевтически приемлемых солей или сольватов.

В десятом аспекте данного изобретения предложен способ лечения гематологического злокачественного заболевания у млекопитающего, нуждающегося в этом. Данный способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов.

В другом аспекте данного изобретения предложен способ лечения состояния, характеризующегося неадекватной пролиферацией клеток. Данный способ включает приведение клетки в контакт с терапевтически эффективным количеством соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов.

В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ ингибирования пролиферации клетки. Данный способ включает приведение клетки в контакт с некоторым количеством соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов.

В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ ингибирования митоза в клетке. Данный способ включает введение в клетку некоторого количества соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов.

В другом аспекте настоящего изобретения предложено соединение, выбранное из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для применения в терапии.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено соединение, выбранное из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для применения в лечении состояния, опосредованного РЬК, у млекопитающего, нуждающегося в этом.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено соединение, выбранное из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для применения в лечении поддающегося лечению новообразования у млекопитающего.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено соединение, выбранное из А, В, С, Ό, Е, Р, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для применения в лечении рака молочной железы, рака яичника, немелкоклеточного рака легкого, рака простаты или гематологического злокачественного заболевания у млекопитающего.

- 3 014111

В другом аспекте настоящего изобретения предложено соединение, выбранное из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для применения в лечении состояния, характеризующегося неадекватной пролиферацией клеток.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено соединение, выбранное из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для применения в ингибировании пролиферации клетки.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено соединение, выбранное из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для применения в ингибировании митоза в клетке.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для изготовления лекарственного средства для лечения состояния, опосредованного РЬК, у млекопитающего.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для изготовления лекарственного средства для лечения новообразования, поддающегося лечению, у млекопитающего.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для изготовления лекарственного средства для лечения рака молочной железы, рака яичника, немелкоклеточного рака легкого, рака простаты или гематологического злокачественного заболевания у млекопитающего.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для изготовления лекарственного средства для лечения состояния, характеризующегося неадекватной пролиферацией клеток у млекопитающего.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для изготовления лекарственного средства для ингибирования пролиферации клетки.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения, выбранного из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов, для изготовления лекарственного средства для ингибирования митоза в клетке.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение, выбранное из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н и их фармацевтически приемлемых солей или сольватов для применения в лечении новообразования, поддающегося лечению, такого как рак молочной железы, рак яичника, немелкоклеточный рак легкого, рак простаты или гематологические злокачественные заболевания у млекопитающего.

Подробное описание изобретения

При использовании в данном описании изобретения соединение(я) по изобретению или соединение(я), выбранное(ые) из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н означает соединение(я), выбранное(ые) из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н, или энантиомерно обогащенное(ые) соединение(я), выбранное(ые) из А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н, или его(их) фармацевтически приемлемую соль или сольват.

При использовании в данном описании изобретения соединение(я), выбранное(ые) из А-1, В-1, С1, Ό-1, Е-1, Е-1, С-1 и Н-1 означает соединение(я), выбранное(ые) из А-1, В-1, С-1, Ό-1, Е-1, Е-1, С-1 и Н-1, или его(их) фармацевтически приемлемую соль или сольват.

При использовании в данном описании изобретения термин возможно означает, что событие(я), описанное далее, может происходить или может не происходить, и включает как событие(я), которое(ые) происходит(ят), так и событие(я), которое(ые) не происходит(ят).

Соединения по данному изобретению существуют в стереоизомерных формах (например, они содержат один или более чем один хиральный или асимметрический атом углерода). Термин хиральный относится к молекуле, которая не может быть наложена на свое зеркальное отображение. Термин ахиральный относится к молекуле, которая может быть наложена на свое зеркальное отображение.

Термин стереоизомеры относится к соединениям, которые имеют одинаковый химический состав, но отличаются по расположению атомов или групп в пространстве. Стереоизомеры могут быть оптическими изомерами или геометрическими изомерами. Оптические изомеры включают как энантиомеры, так и диастереомеры. Энантиомер представляет собой один из пары оптических изомеров, содержащих хиральный атом углерода, молекулярная конфигурация которого имеет лево- и правосторонние (хиральные) формы. То есть энантиомер относится к каждому из пары оптических изомеров соединения, которые являются неналагающимися зеркальными отображениями друг друга. Диастереомер является одним из пары оптических изомеров соединения с двумя или более центрами асимметрии, молекулы которых не являются зеркальными отображениями друг друга. Номенклатура хирального центра определяется (К)-(8)-системой. Обозначено ли конкретное соединение согласно данной системе как К- или 8- энантиомер, зависит от природы атомов или групп, которые связаны с хиральным углеродом.

Энантиомеры отличаются по их поведению в отношении плоскополяризованного света, то есть по их оптической активности. Говорят, что энантиомер, который вращает плоскополяризованный свет по

- 4 014111 направлению часовой стрелки, является правовращающим, и его обозначают символом б или (+) для положительного вращения. Говорят, что энантиомер, который вращает плоскость поляризованного света в направлении против часовой стрелки, является левовращающим, и его обозначают символом I или для отрицательного вращения. Не существует корреляции между конфигурацией энантиомеров и направлением, в котором они вращают плоскость поляризованного света. Также не существует необходимой корреляции между обозначением (К) и (8) и направлением вращения плоскости поляризованного света. Оптическую активность, или направление вращения плоскополяризованного света, энантиомера соединения по изобретению можно определить, используя стандартные методики.

Термины рацемат и рацемическая смесь при использовании в данном описании изобретения относятся к смеси (К)- и (8)-оптических изомеров (например энантиомеров) соединения в равном, т.е. 50:50, соотношении.

Термин энантиомерно обогащенный при использовании в данном описании изобретения относится к препаратам, содержащим смесь оптических изомеров, в которой количество одного энантиомера больше, чем количество другого. Таким образом, термин энантиомерно обогащенный относится к смесям оптических изомеров, где соотношение энантиомеров составляет более чем 50:50. Энантиомерно обогащенное соединение содержит более 50 мас.% одного энантиомера по отношению к другому. Например, энантиомерно обогащенный 5-{6-[(метилсульфонил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксамид относится к композиции, содержащей более 50 мас.% (К)-энантиомера данного соединения по отношению к (8)-энантиомеру. В одном воплощении энантиомерно обогащенное соединение содержит по меньшей мере 75 мас.% одного энантиомера по отношению к другому. В другом воплощении энантиомерно обогащенное соединение содержит по меньшей мере 80 мас.% одного энантиомера по отношению к другому. В одном конкретном воплощении энантиомерно обогащенное соединение содержит по меньшей мере 85 мас.% одного энантиомера по отношению к другому.

Термин энантиомерно чистое при использовании в данном описании изобретения относится к энантиомерно обогащенным соединениям, содержащим по меньшей мере 90 мас.% одного энантиомера по отношению к другому. В одном воплощении энантиомерно чистое соединение содержит по меньшей мере 95 мас.% одного энантиомера по отношению к другому. В одном конкретном воплощении энантиомерно чистое соединение содержит по меньшей мере 99 мас.% одного энантиомера по отношению к другому.

Согласно настоящему изобретению предложены соединения, выбранные из

где * указывает хиральный атом углерода; и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов. В одном конкретном воплощении соединения А, В, С, Ό, Е, Г, О и Н являются энантиомерно обо- 5 014111 гащенными, причем стереохимия хирального атома углерода представляет собой К. В другом воплощении соединения А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н являются энантиомерно чистыми, причем стереохимия хирального атома углерода представляет собой К. Таким образом, в одном предпочтительном воплощении настоящего изобретения предложены энантиомерно обогащенные и энантиомерно чистые соединения, выбранные из

5-{6-[(метилсульфонил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил} окси)-2-тиофенкарбоксамида;

3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-{6-[(метилсульфонил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-2тиофенкарбоксамида;

5-{6-[(4-метилпиперазин-1-ил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-{(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил] этокси}тиофен-2-карбоксамида;

3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-{6-[(4-метилпиперазин-1-ил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил} тиофен-2-карбоксамида;

5-[6-(4-пиперидинилокси)-1Н-бензимидазол-1 -ил] -3 -({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)2-тиофенкарбоксамида;

3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-[6-(4-пиперидинилокси)-1Н-бензимидазол-1-ил]-2-тиофенкарбоксамида;

5-{6-[(1-метил-4-пиперидинил)окси]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил] этил}окси)-2-тиофенкарбоксамида и

- 6 014111

3-{[(1В)-1-(2-Хлорфенил)этил]окси}-5-{6-[(1-метил-4-пиперидинил)окси]-1Н-бензимидазол-1-ил}2-тиофенкарбоксамида;

и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов.

Специалистам в данной области очевидно, что соединения по настоящему изобретению можно использовать в форме их фармацевтически приемлемых солей или сольватов. Фармацевтически приемлемые соли соединений по настоящему изобретению (или их энантиомерно обогащенные или энантиомерно чистые формы) включают обычные соли, образованные из фармацевтически приемлемых неорганических или органических кислот или оснований, а также четвертичные аммониевые соли. Более конкретные примеры подходящих солей кислот включают соли соляной, бромисто-водородной, серной, фосфорной, азотной, перхлорной, фумаровой, уксусной, пропионовой, янтарной, гликолевой, муравьиной, молочной, малеиновой, винной, лимонной, пальмовой, малоновой, гидроксималеиновой, фенилуксусной, глутаминовой, бензойной, салициловой, фумаровой, толуолсульфоновой, метансульфоновой (мезилат), нафталин-2-сульфоновой, бензолсульфоновой, гидроксинафтойной, иодисто-водородной, яблочной, стериновой, дубильной кислот и подобные им. Другие кислоты, такие как щавелевая, хотя сами и не являются фармацевтически приемлемыми, могут быть полезны в получении солей, пригодных в качестве промежуточных соединений в получении соединений по изобретению и их фармацевтически приемлемых солей. Конкретные примеры подходящих основных солей включают натриевые, литиевые, калиевые, магниевые, алюминиевые, кальциевые, цинковые, Ν',Ν-дибензилэтилендиаминовые, хлорпрокаиновые, холиновые, диэтаноламиновые, этилендиаминовые, Ν-метилглюкаминовые и прокаиновые соли.

Термин сольват при использовании в данном описании изобретения относится к комплексу переменной стехиометрии, образованному растворенным веществом (соединением по изобретению или его энантиомерно обогащенной или энантиомерно чистой формой) и растворителем. Растворители, в качестве примера, включают воду, метанол, этанол или уксусную кислоту.

Способы получения фармацевтически приемлемых солей и сольватов соединений по изобретению являются традиционными в данной области техники. Смотрите, например, Вигдег'к Меб1ста1 Сйетщбу Аиб Эгид ЭБсоуегу 5^4Ь Ε6ίΐίοη, Уо1. 1: Рг1пс1р1ек Аиб Ргасбсе.

Как будет очевидно специалистам в данной области в способах получения соединений по изобретению, описанных ниже, некоторые промежуточные соединения альтернативно могут находиться в форме фармацевтически приемлемых солей или сольватов соединения. Эти термины в том виде, как они применяются к любому промежуточному соединению, используемому в способе получения соединений по изобретению, имеют те же самые значения, что и указаны выше в отношении соединений по изобретению. Способы получения фармацевтически приемлемых солей и сольватов таких промежуточных соединений известны в данной области и аналогичны способу получения фармацевтически приемлемых солей и сольватов соединений по изобретению.

Соединения по настоящему изобретению типично представляют собой ингибиторы РБК. Под ингибитором РБК подразумевается соединение, которое демонстрирует р1С₅₀ более 6 в анализе ингибирования РБК, описанном ниже в примерах, или 1С₅₀ менее 10 мкМ в анализе с метиленовым синим или в анализе ингибирования роста Се11-ТИге С1о, описанных ниже в примерах; более конкретно, ингибитор РБК представляет собой соединение, которое демонстрирует р1С₅₀ более 7 или 1С₅₀ менее 1 мкМ, с использованием способов, описанных в примерах, приведенных ниже.

Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены соединения по изобретению для применения в лечении животного, например млекопитающего, такого как человек. В частности, в настоящем изобретении предложены соединения для применения в лечении состояния, опосредованного РБК. В настоящем изобретении также предложены соединения для применения в лечении новообразования, поддающегося лечению. Термин новообразование, поддающееся лечению определен ниже. В частности, в настоящем изобретении предложены соединения для применения в лечении ряда солидных опухолей, включая, но не без ограничения ими, рак молочной железы, рак яичника, немелкоклеточный рак легкого, рак простаты и гематологические злокачественные заболевания, включая, без ограничения ими, острые (миелоидные и лимфоидные) лейкозы и агрессивные лимфомы.

Согласно настоящему изобретению предложены соединения для применения в лечении состояния, характеризующегося неадекватной пролиферацией клеток. Согласно настоящему изобретению также предложены соединения для применения в ингибировании пролиферации клетки. Согласно настоящему изобретению также предложены соединения для применения в ингибировании митоза в клетке.

Согласно настоящему изобретению предложены способы лечения некоторых состояний или заболеваний, все из которых включают стадию введения терапевтически эффективного количества соединения по изобретению. Термин лечение при использовании в данном описании изобретения относится к

- 7 014111 облегчению определенного состояния, к устранению или ослаблению симптомов этого состояния, к замедлению или устранению развития состояния и к предупреждению или к задерживанию повторного возникновения данного состояния у субъекта, страдавшего от него ранее.

Термин терапевтически эффективное количество при использовании в данном описании изобретения означает количество соединения по изобретению, которое является достаточным у субъекта, которому его вводят, чтобы вызвать тот биологический или медицинский ответ клеточной культуры, ткани, системы, животного (включая человека), которого добиваются, например, исследователь или практикующий врач. Например, терапевтически эффективное количество соединения по изобретению для лечения состояния, опосредованного РЬК, представляет собой количество, достаточное для лечения состояния, опосредованного РЬК, у субъекта. Аналогично, терапевтически эффективное количество соединения по изобретению для лечения новообразования, поддающегося лечению, представляет собой количество, достаточное для лечения новообразования, поддающегося лечению, у субъекта. В одном воплощении настоящего изобретения терапевтически эффективное количество соединения по изобретению представляет собой количество, достаточное для ингибирования митоза клетки. В одном воплощении настоящего изобретения терапевтически эффективное количество соединения по изобретению представляет собой количество, достаточное для регуляции, модуляции, связывания или ингибирования РЬК.

Точное терапевтически эффективное количество соединения по изобретению будет зависеть от ряда факторов, включая, без ограничения ими, возраст и массу субъекта, которого лечат, конкретное расстройство, требующее лечения, и его тяжесть, природу препарата и путь введения, и, в конечном счете, будет определять по усмотрению лечащего врача или ветеринара. Обычно соединение по изобретению будут давать для лечения в интервале от 0,1 до 200 мг/кг массы тела реципиента (животного) в сутки или на дозу или на цикл лечения и более типично в интервале от 1 до 100 мг/кг массы тела в сутки или на дозу или на цикл лечения. Приемлемые дозировки могут составлять от примерно 0,1 до примерно 2000 мг в сутки, на дозу или цикл лечения и предпочтительно от примерно 0,1 до примерно 500 мг в сутки, на дозу или цикл лечения.

В качестве одного аспекта настоящего изобретения предложены способы регуляции, модуляции, связывания или ингибирования РЬК для лечения состояний, опосредованных РЬК, в частности РЬК1. Регуляция, модуляция, связывание или ингибирование РЬК относится к регуляции, модуляции, связыванию или ингибированию активности РЬК, в частности РЬК1, а также к регуляции, модуляции, связыванию или ингибированию сверхэкспрессии РЬК, в частности РЬК1. Такие состояния включают некоторые новообразования (включая раковые заболевания и опухоли), которые ассоциированы с РЬК, в частности с РЬК1, и состояния, характеризующиеся неадекватной пролиферацией клеток.

В настоящем изобретении предложен способ лечения состояния, опосредованного РЬК, в частности РЬК1, который включает введение животному терапевтически эффективного количества соединения по изобретению. Этот способ и другие способы по настоящему изобретению являются полезными для лечения животного, такого как млекопитающее, и, в частности, людей. Состояния, опосредованные РЬК, известны в данной области и включают, без ограничения ими, новообразования и состояния, характеризующиеся неадекватной пролиферацией клеток.

В настоящем изобретении также предложен способ лечения новообразования, поддающегося лечению (рака или опухоли), у животного, такого как млекопитающее (например, человек), нуждающегося в этом, причем данный способ включает введение данному животному терапевтически эффективного количества соединения по изобретению. Новообразование, поддающееся лечению при использовании в данном описании изобретения относится к новообразованиям, которые поддаются лечению ингибитором РЬК.

Новообразования, ассоциированные с РЬК и, следовательно, поддающиеся лечению ингибитором РЬК, известны в данной области и включают как первичные, так и метастатические опухоли и раковые заболевания. Например, поддающиеся лечению новообразования, входящие в объем настоящего изобретения, включают, без ограничения ими, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак легкого (включая мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточный рак легкого), рак простаты, рак эндометрия, рак желудка, меланому, рак яичника, рак поджелудочной железы, плоскоклеточную карциному, карциному головы и шеи, карциному пищевода, гепатоцеллюлярную карциному и гематологические злокачественные заболевания, включая, без ограничения ими, острые лейкозы и агрессивные лимфомы. В одном конкретном воплощении настоящего изобретения предложен способ лечения рака молочной железы у животного, такого как млекопитающее (например, человек), нуждающегося в этом, путем введения терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению В другом конкретном воплощении настоящего изобретения предложен способ лечения рака яичника у животного, такого как млекопитающее (например, человек), нуждающегося в этом, путем введения терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению. В другом конкретном воплощении согласно настоящему изобретению предложен способ лечения немелкоклеточного рака легкого у животного, такого как млекопитающее (например, человек), нуждающегося в этом, путем введения терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению. В другом конкретном воплощении согласно настоящему изобретению предложен способ лечения рака простаты у животного, такого как мле

- 8 014111 копитающее (например, человек), нуждающегося в этом, путем введения терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению. В другом конкретном воплощении согласно настоящему изобретению предложен способ лечения острого лейкоза, включая острый миелоидный лейкоз и острый лимфоидный лейкоз, у животного, такого как млекопитающее (например человек), нуждающегося в этом, путем введения терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению. В другом конкретном воплощении согласно настоящему изобретению предложен способ лечения агрессивной лимфомы у животного, такого как млекопитающее (например человек), нуждающегося в этом, путем введения терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению.

При лечении таких поддающихся лечению новообразований соединения по данному изобретению можно использовать по одному или с получением аддитивных или синергических эффектов с одним или более другими соединениями по изобретению, или в комбинации с некоторыми существующими химиотерапиями и/или с другими терапиями против новообразований. Кроме того, соединения по данному изобретению можно использовать для восстановления эффективности одного или более других соединений по данному изобретению, некоторых существующих химиотерапий и/или других терапий против новообразований. Термин терапии против новообразований при использовании в данном описании изобретения включает, без ограничения ими, цитотоксическую химиотерапию, гормональную терапию, целевые киназные ингибиторы, терапевтические моноклональные антитела, хирургию и лучевую терапию.

Согласно настоящему изобретению также предложен способ лечения состояния, характеризующегося неадекватной пролиферацией клеток, у животного, такого как млекопитающее (например, человек), нуждающегося в этом. Данный способ включает введение терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению. Под неадекватной пролиферацией клеток подразумевается пролиферация клеток в результате неадекватного роста клеток, пролиферация клеток в результате избыточного деления клеток, пролиферация клеток в результате деления клеток с повышенной скоростью, пролиферация клеток в результате неадекватного выживания клеток и/или клеточная пролиферация в нормальной клетке, происходящая с нормальной скоростью, которая, тем не менее, является нежелательной. Состояния, характеризующиеся неадекватной пролиферацией клеток, включают, без ограничения ими, новообразования, пролиферативные расстройства кровеносных сосудов, фиброзные расстройства, мезангиально-клеточные пролиферативные расстройства и воспалительные/иммунноопосредованные заболевания. Пролиферативные расстройства кровеносных сосудов включают артрит и рестеноз. Фиброзные расстройства включают цирроз печени и атеросклероз. Мезангиально-клеточные пролиферативные расстройства включают гломерулонефрит, злокачественный нефросклероз и гломерулопатии.

Воспалительные/иммуноопосредованные расстройства включают псориаз, заживление застарелых ран, отторжение органотрансплантата, синдромы тромбозной микроангиопатии и нейродегенеративные заболевания. Остеоартрит и другие заболевания, зависимые от пролиферации остеокластов, связанные с избыточной резорбцией кости, являются примерами состояний, характеризующихся неадекватной пролиферацией клеток, при которых пролиферация клеток происходит в нормальных клетках с нормальной скоростью, но, тем не менее, является нежелательной.

Согласно настоящему изобретению также предложен способ ингибирования пролиферации клетки, причем данный способ включает приведение данной клетки в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для ингибирования пролиферации клетки. В одном конкретном воплощении данная клетка представляет собой неопластическую клетку. В одном конкретном воплощении данная клетка представляет собой неадекватно пролиферирующую клетку. Термин неадекватно пролиферирующая клетка при использовании в данном описании изобретения относится к клеткам, которые растут неадекватно (ненормально), к клеткам, которые делятся избыточно или с повышенной скоростью, к клеткам, которые неадекватно (ненормально) выживают, и/или к нормальным клеткам, которые пролиферируют с нормальной скоростью, но для которых пролиферация является нежелательной. Неопластические клетки (включая раковые клетки) являются примером неадекватно пролиферирующих клеток, но они не являются единственными неадекватно пролиферирующими клетками.

РЬК является необходимой для митоза клетки и, соответственно, считается, что соединения по изобретению являются эффективными для ингибирования митоза. Ингибирование митоза относится к ингибированию входа в фазу М клеточного цикла, к ингибированию нормального хода фазы М клеточного цикла, как только клетка вошла в фазу М, и к ингибированию нормального выхода из фазы М клеточного цикла. Таким образом, соединения по настоящему изобретению могут ингибировать митоз путем ингибирования вхождения клетки в митоз, путем ингибирования прохождения клетки через митоз или путем ингибирования выхода клетки из митоза. В одном аспекте настоящего изобретения предложен способ ингибирования митоза в клетке, включающий введение в клетку количества соединения по изобретению, достаточного для ингибирования митоза. В одном конкретном воплощении данная клетка представляет собой неопластическую клетку. В одном конкретном воплощении данная клетка представляет собой неадекватно пролиферирующую клетку.

Согласно настоящему изобретению также предложено применение соединения по изобретению для

- 9 014111 изготовления лекарственного средства для лечения состояния, опосредованного РЬК, у животного, такого как млекопитающее (например, человек). Согласно настоящему изобретению дополнительно предложено применение соединения для изготовления лекарственного средства для лечения поддающегося лечению новообразования у животного. В частности, согласно настоящему изобретению предложено применение соединения для изготовления лекарственного средства для лечения рака молочной железы у животного. Согласно настоящему изобретению также предложено применение соединения для изготовления лекарственного средства для лечения рака яичника у животного. Согласно настоящему изобретению предложено применение соединения для изготовления лекарственного средства для лечения немелкоклеточного рака легкого у животного. Согласно настоящему изобретению также предложено применение соединения для изготовления лекарственного средства для лечения рака простаты у животного. Согласно настоящему изобретению предложено применение соединения для изготовления лекарственного средства для лечения острого лейкоза (включая острый миелоидный и острый лимфоидный лейкоз) у животного. Согласно настоящему изобретению предложено применение соединения для изготовления лекарственного средства для лечения агрессивной лимфомы у животного. Согласно настоящему изобретению дополнительно предложено применение соединения для изготовления лекарственного средства для лечения состояния, характеризующегося неадекватной пролиферацией клеток. Согласно настоящему изобретению дополнительно предложено применение соединения для изготовления лекарственного средства для ингибирования пролиферации клетки. Согласно настоящему изобретению дополнительно предложено применение соединения для изготовления лекарственного средства для ингибирования митоза в клетке.

Хотя для применения в терапии терапевтически эффективное количество соединения по изобретению, возможно, может быть введено в виде необработанного химического соединения, обычно оно представлено в виде активного ингредиента фармацевтической композиции или препарата. Соответственно, согласно данному изобретению дополнительно предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение по изобретению. Данная фармацевтическая композиция может дополнительно содержать один или более чем один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель и/или эксципиент. Данные носитель(и), разбавитель(и) и/или эксципиент(ы) должны быть приемлемыми в смысле совместимости с другими ингредиентами данного препарата и не вредными для их реципиента. Согласно другому аспекту данного изобретения также предложен способ получения фармацевтического препарата, включающий смешивание соединения по изобретению с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем и/или эксципиентом.

Фармацевтические препараты могут быть представлены в стандартной лекарственной форме, содержащей заданное количество активного ингредиента на стандартную дозу. Такая единица может содержать терапевтически эффективную дозу соединения по изобретению или часть терапевтически эффективной дозы, так что многократные стандартные лекарственные формы можно вводить в заданное время для достижения желательной терапевтически эффективной дозы. Предпочтительными композициями со стандартными дозами являются препараты, содержащие суточную дозу или субдозу активного ингредиента, как здесь изложено выше, или ее подходящую долю. Кроме того, такие фармацевтические препараты можно получить любым способом, хорошо известным в фармацевтической области.

Фармацевтические препараты могут быть адаптированы для введения любым подходящим путем, например пероральным (включая буккальный или сублингвальный), ректальным, назальным, местным (включая буккальный, сублингвальный или трансдермальный), вагинальным или парентеральным (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный или внутрикожный) путем. Такие препараты могут быть получены любым способом, известным в области фармации, например путем сочетания активного ингредиента с носителем(ями) или с эксципиентом(ами).

Фармацевтические препараты, адаптированные для перорального введения, могут быть представлены в виде дискретных единиц, таких как капсулы или таблетки; порошков или гранул; растворов или суспензий в водных или неводных жидкостях, пищевых пен или кремов; жидких эмульсий масло-вводе или жидких эмульсий вода-в-масле. Например, для перорального введения в форме таблетки или капсулы активный лекарственный компонент можно объединять с пероральным, нетоксичным, фармацевтически приемлемым инертным носителем, таким как этанол, глицерин, вода и тому подобное. Порошки получают путем измельчения данного соединения до подходящего мелкого размера и смешивания с аналогично измельченным фармацевтическим носителем, таким как пищевой углеводород, такой как, например, крахмал или манит. Также могут присутствовать корригент, консервант, диспергирующий агент и краситель

Капсулы изготавливают путем получения порошковой смеси, как описано выше, и заполнения ей формованных желатиновых оболочек. Перед операцией заполнения в порошковую смесь можно добавить скользящие смазывающие вещества, такие как коллоидный диоксид кремния, тальк, стеарат магния, стеарат кальция и твердый полиэтиленгликоль. Также можно добавить разрыхлитель или солюбилизирующий агент, такой как агар-агар, карбонат кальция или карбонат натрия, для улучшения доступности лекарственного средства при проглатывании данной капсулы.

Кроме того, когда это желательно или необходимо, в данную смесь также можно включать подхо

- 10 014111 дящие связующие вещества, смазки, разрыхлители и красители. Подходящие связующие вещества включают крахмал, желатин, природные сахара, такие как глюкоза или бета-лактоза, кукурузные подсластители, природные и синтетические камеди, такие как аравийская камедь, трагакантовая камедь или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлозу, полиэтиленгликоль, воска и тому подобное. Смазки, используемые в этих лекарственных формах, включают натрия олеат, натрия стеарат, магния стеарат, натрия бензоат, натрия ацетат, натрия хлорид и тому подобное. Разрыхлители включают, без ограничения ими, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и тому подобное. Таблетки готовят в виде препарата, например, путем получения порошковой смеси, гранулирования или комкования, добавления смазки и разрыхлителя и прессования в таблетки. Порошковую смесь получают путем смешивания подходящим образом измельченного соединения с разбавителем или с основой, как описано выше, и, возможно, со связующим веществом, таким как карбоксиметилцеллюлоза, альгинат, желатин или поливинилпирролидон, с замедлителем растворения, таким как парафин, с ускорителем всасывания, таким как четвертичная соль, и/или с абсорбционным агентом, таким как бентонит, каолин или дикальция фосфат. Порошковую смесь можно гранулировать путем увлажнения со связующим веществом, таким как сироп, крахмальная паста, акациевая камедь или растворы целлюлозных или полимерных веществ, и продавливания через сетку. В качестве альтернативы гранулированию, порошковую смесь можно прогнать через таблетировочную машину, в результате чего получают не полностью сформированные куски, разламывающиеся на гранулы. Гранулы можно смазать для предотвращения прилипания к формующим таблетки пуансонам путем добавления стеариновой кислоты, стеаратной соли, талька или минерального масла. Смазанную смесь затем прессуют в таблетки. Соединения по настоящему изобретению также можно объединять с легкосыпучим инертным носителем и непосредственно прессовать в таблетки без прохождения через стадии гранулирования или комкования. Можно обеспечить прозрачное или непрозрачное защитное покрытие, состоящее из изолирующего покрытия из шеллака, покрытия из сахара или полимерного вещества и глянцевого покрытия из воска. В эти покрытия можно добавлять красители для различения разных стандартных дозировок.

Пероральные жидкости, такие как растворы, сиропы и эликсиры, можно получать в стандартных лекарственных формах так, что данное количество содержит заданное количество активного ингредиента. Сиропы можно получать путем растворения соединения в подходящим образом ароматизированном водном растворе, тогда как эликсиры получают путем применения нетоксичного спиртового наполнителя. Суспензии можно приготовить в виде препарата путем диспергирования соединения в нетоксичном наполнителе. Также можно добавлять солюбилизаторы и эмульгаторы, такие как этоксилированные изостеариловые спирты и полиоксиэтиленсорбитоловые эфиры, консерванты, корригирующие добавки, такие как масло перечной мяты или природные подсластители, или сахарин, или другие искусственные подсластители и тому подобное.

Когда это уместно, препараты в виде стандартной лекарственной формы для перорального введения можно микроинкапсулировать. Препарат также может быть приготовлен для продления или замедления высвобождения, например, путем нанесения покрытия или заделывания частиц вещества в полимеры, воск или тому подобное.

Соединения по данному изобретению также можно вводить в виде липосомных систем доставки, таких как маленькие однослойные везикулы, большие однослойные везикулы и многослойные везикулы. Липосомы можно сформировать из различных фосфолипидов, таких как холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.

Соединения по данному изобретению также можно доставлять, используя моноклональные антитела в качестве индивидуальных носителей, с которыми связаны молекулы соединения. Соединения также можно связать с растворимыми полимерами в качестве нацеливаемых носителей лекарственного средства. Такие полимеры могут включать пептиды, поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламидфенол, полигидроксиэтиласпартамидфенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенный остатками пальмитоила. Кроме того, соединения можно связать с классом биоразлагаемых полимеров, полезных для достижения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например с полимолочной кислотой, полиэпсилон-капролактоном, полигидроксимасляной кислотой, полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидропиранами, полицианоакрилатами и со сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей.

Фармацевтические препараты, адаптированные для трансдермального введения, могут быть представлены в виде отдельных пластырей, предназначенных для того, чтобы оставаться в тесном контакте с эпидермисом реципиента в течение длительного периода времени. Например, активный ингредиент может быть доставлен из пластыря ионтофорезом, как в общем виде описано в РНагтассн11са1 Рс5саге11. 3(6):318 (1986).

Фармацевтические препараты, адаптированные для местного введения, могут быть приготовлены в виде мазей, кремов, суспензий, лосьонов, порошков, растворов, паст, гелей, спреев, аэрозолей или масел.

Для лечения глаз или других наружных тканей, например рта и кожи, препараты предпочтительно наносят в виде мази или крема для местного применения. При приготовлении в виде препарата мази, активный ингредиент можно использовать либо с парафиновой, либо со смешивающейся с водой основой

- 11 014111 мази. Альтернативно, активный ингредиент можно приготовить в виде крема с кремовой основой маслов-воде или вода-в-масле.

Фармацевтические препараты, адаптированные для местных введений в глаз, включают глазные капли, где активный ингредиент растворен или суспендирован в подходящем носителе, особенно в водном растворителе.

Фармацевтические препараты, адаптированные для местного введения в рот, включают лепешки, пастилки и полоскания для полости рта.

Фармацевтические препараты, адаптированные для ректального введения, могут быть представлены в виде суппозиториев или клизм.

Фармацевтические препараты, адаптированные для назального введения, где носитель представляет собой твердое вещество, включают грубый порошок, имеющий размер частиц, например, в интервале от 20 до 500 мкм, который вводят способом, при котором производится втягивание воздуха через нос, т.е. посредством быстрой ингаляции через носовой ход из контейнера с порошком, удерживаемого вплотную к носу. Подходящие препараты, данный носитель является жидкостью, для введения в виде назального спрея или в виде назальных капель включают водные или масляные растворы активного ингредиента.

Фармацевтические препараты, адаптированные для введения путем ингаляции, включают присыпки или аэрозоли, которые могут быть образованы посредством различных типов дозирующих аэрозольных баллончиков, небулайзеров или инсуффляторов.

Фармацевтические препараты, адаптированные для вагинального введения, могут быть представлены в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или спреевых препаратов.

Фармацевтические препараты, адаптированные для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные инъецируемые растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические средства и растворенные вещества, которые делают данный препарат изотоничным крови предполагаемого реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загустители. Препараты могут быть представлены в однодозовых или многодозовых контейнерах, например в запаянных ампулах и сосудах, и могут храниться в сублимированном (лиофилизированном) состоянии, которое требует только добавления стерильного жидкого носителя, например воды для инъекций, непосредственно перед применением. Инъекционные растворы и суспензии, приготовленные для немедленного приема, могут быть получены из стерильных порошков, гранул и таблеток.

Следует понимать, что в дополнение к ингредиентам, конкретно упомянутым выше, препараты могут включать другие агенты, традиционные в данной области, имеющие отношение к типу рассматриваемого препарата, например агенты, подходящие для перорального введения, могут включать корригенты.

В вышеописанных способах лечения и применениях соединение по изобретению можно использовать само по себе, в комбинации с одним или более чем одним другим соединением по изобретению, или в комбинации с другими терапевтическими агентами и/или в комбинации с другими антинеопластическими терапиями. В частности, в способах лечения состояний, опосредованных РЬК, и в способах лечения новообразований, поддающихся лечению, предусматривается комбинация с другими химиотерапевтическими агентами, а также комбинация с хирургической терапией и с лучевой терапией. Термин химиотерапевтический при использовании в данном описании изобретения относится к любому химическому агенту, оказывающему терапевтический эффект на субъекта, которому его вводят. Химиотерапевтические агенты включают, без ограничения ими, антинеопластические агенты, анальгетики и противорвотные средства. Термин антинеопластические агенты при использовании в данном описании изобретения включает как цитостатические, так и цитотоксические агенты, такие как, но без ограничения ими, агенты для цитотоксической химиотерапии, гормональной терапии, нацеленные ингибиторы киназы и терапевтические моноклональные антитела. Комбинированные терапии согласно настоящему изобретению, таким образом, включают введение по меньшей мере одного соединения по изобретению и применение по меньшей мере одного другого способа лечения рака. В одном воплощении комбинированные терапии согласно настоящему изобретению включают введение по меньшей мере одного соединения по изобретению и по меньшей мере одного другого химиотерапевтического агента. В одном конкретном воплощении настоящее изобретение включает введение по меньшей мере одного соединения по изобретению и по меньшей мере одного антинеопластического агента. В качестве дополнительного аспекта, согласно настоящему изобретению предложены способы лечения и применения, как описано выше, которые включают введение соединения по изобретению вместе с по меньшей мере одним химиотерапевтическим агентом. В одном конкретном воплощении данный химиотерапевтический агент представляет собой антинеопластический агент. В другом воплощении настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, как описано выше, дополнительно содержащая по меньшей мере один другой химиотерапевтический агент, более конкретно данный химиотерапевтический агент представляет собой антинеопластический агент.

Обычно любой химиотерапевтический агент, который обладает активностью против поддающегося лечению новообразования, которое лечат, можно использовать в комбинации с соединениями по изобре

- 12 014111 тению, при условии, что этот конкретный агент клинически совместим с терапией, использующей соединение по данному изобретению. Типичные антинеопластические агенты, полезные в настоящем изобретении, включают, но без ограничения ими, агенты против микротрубочек, такие как дитерпеноиды и алкалоиды барвинка; координационные комплексы платины; алкилирующие агенты, такие как азотистые иприты, оксазафосфорины, алкилсульфонаты, нитрозомочевины и триазены; антибиотики, такие как антрациклины, актиномицины и блеомицины; ингибиторы топоизомеразы II, такие как эпиподофиллотоксины; антиметаболиты, такие как аналоги пурина и пиримидина, и антифолатные соединения; ингибиторы топоизомеразы I, такие как камптотецины; гормоны и аналоги гормонов; ингибиторы путей трансдукции сигналов; ингибиторы ангиогенеза на основе нерецепторной тирозинкиназы; иммунотерапевтические агенты; проапоптозные агенты и ингибиторы передачи сигнала в клеточном цикле.

Агенты против микротрубочек или антимитотические агенты представляют собой фазоспецифичные агенты, активные против микротрубочек опухолевых клеток на протяжении фазы М или фазы митоза клеточного цикла. Примеры агентов против микротрубочек включают, без ограничения ими, дитерпеноиды и алкалоиды барвинка. Примеры дитерпеноидов включают, без ограничения ими, паклитаксел и его аналог доцетаксел. Примеры алкалоидов барвинка включают, без ограничения ими, винбластин, винкристин и винорелбин. Координационные комплексы платины представляют собой нефазоспецифичные антинеопластические агенты, которые взаимодействуют с ДНК. Комплексы платины поступают в опухолевые клетки, подвергаются гидратации и образуют внутри межнитевые поперечные связи с ДНК, что приводит к неблагоприятным биологическим эффектам на опухоль. Примеры координационных комплексов платины включают, без ограничения ими, оксалиплатин, цисплатин и карбоплатин.

Алкилирующие агенты представляют собой нефазоспецифичные антинеопластические агенты и сильные электрофилы. Обычно алкилирующие агенты образуют, посредством алкилирования ковалентные связи с ДНК через нуклеофильные группировки молекулы ДНК, такие как фосфатные, амино и гидроксильные группы. Такое алкилирование нарушает функцию нуклеиновой кислоты, что приводит к гибели клетки. Примеры алкилирующих агентов включают, без ограничения ими, азотистые иприты, такие как циклофосфамид, мелфалан и хлорамбуцил; алкилсульфонаты, такие как бусульфан; нитрозомочевины, такие как кармустин; и триазены, такие как дакарбазин.

Антибиотические химиотерапевтические агенты представляют собой нефазоспецифичные агенты, которые связываются или встраиваются в ДНК. Обычно такое действие приводит к стабильным комплексам ДНК или к разрыву нити, что нарушает обычную функцию нуклеиновых кислот, приводя к гибели клетки. Примеры антибиотических антинеопластических агентов включают, без ограничения ими, актиномицины, такие как дактиномицин, антрациклины, такие как даунорубицин и доксорубицин; и блеомицины.

Ингибиторы топоизомеразы II включают, без ограничения ими, эпиподофиллотоксины.

Эпиподофиллотоксины представляют собой фазоспецифические антинеопластические агенты, происходящие из растения мандрагора. Эпиподофиллотоксины обычно воздействуют на клетки в фазах 8 и С₂ клеточного цикла путем образования трехкомпонентного комплекса с топоизомеразой II и ДНК, что вызывает разрывы нити ДНК. Разрывы нити накапливаются, и следует гибель клетки. Примеры эпиподофиллотоксинов включают, без ограничения ими, этопозид и тенипозид.

Антиметаболические неопластические агенты представляют собой фазоспецифичные антинеопластические агенты, которые действуют на 8-фазе (синтез ДНК) клеточного цикла, ингибируя синтез ДНК или ингибируя синтез пуриновых или пиримидиновых оснований и, таким образом, ограничивая синтез ДНК. Соответственно, 8-фаза не протекает, и следует гибель клетки. Примеры антиметаболических антинеопластических агентов включают, без ограничения ими, фторурацил, метотрексат, цитарабин, меркаптопурин и тиогуанин.

Камптотецины, включающие камптотецин и производные камптотецина, имеются в наличии или находятся в разработке в качестве ингибиторов топоизомеразы I. Считается, что цитотоксическая активность камптотецинов имеет отношение к их ингибиторной активности в отношении топоизомеразы I. Примеры камптотецинов включают, без ограничения ими, иринотекан, топотекан и различные оптические формы 7-(4-метилпиперазинометилен)-10,11-этилендиокси-20-камптотецина. Гормоны и гормональные аналоги являются полезными соединениями для лечения раковых заболеваний, при которых существует связь между гормоном(ами) и ростом и/или отсутствием роста раковой опухоли. Примеры гормонов и гормональных аналогов, считающихся полезными в лечении новообразований, включают, без ограничения ими, адренокортикостероиды, такие как преднизон и преднизолон, которые полезны в лечении злокачественной лимфомы и острого лейкоза у детей; аминоглютетимид и другие ингибиторы ароматазы, такие как анастрозол, летразол, воразол и экземестан, полезные в лечении адренокортикальной карциномы и гормонозависимой карциномы молочной железы, содержащей рецепторы эстрогена; прогестрины, такие как мегестрола ацетат, полезные в лечении гормонозависимого рака молочной железы и карциномы эндометрия; эстрогены, андрогены и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, ципротерона ацетат, и 5а-редуктазы, такие как финастерид и дутастерид, полезные в лечении карциномы простаты и доброкачественной гипертрофии простаты; антиэстрогены, такие как тамоксифен, торемифен, ралоксифен, дролоксифен и йодоксифен, полезные в лечении гормонозависимой кар

- 13 014111 циномы молочной железы; и гонадотропин-высвобождающий гормон (СпКН) и его аналоги, такие как гозерелина ацетат и леупролид, которые стимулируют высвобождение лютинизирующего гормона (ЬН) и/или фолликулстимулирующего гормона (Е8Н) при кратковременном или периодическом применении, но приводят к подавлению ЬН и Е8Н при долговременном применении, показанном для лечения карциномы простаты и гормонозависимой карциномы молочной железы.

Ингибиторы пути трансдукции сигнала представляют собой те ингибиторы, которые блокируют или ингибируют химический процесс, который вызывает внутриклеточное изменение. При использовании здесь такое изменение представляет собой пролиферацию клетки, выживание, ангиогенез или дифференциацию. Ингибиторы трансдукции сигнала, полезные в настоящем изобретении, включают ингибиторы рецепторных тирозинкиназ, нерецепторных тирозинкиназ, блокаторы 8Н2/8Н3 доменов, ингибиторы сериновых/треониновых киназ, фосфатидил-инозитол-3 киназ, мио-инозитольной передачи сигнализов и онкогенов Как.

Некоторые протеин-тирозинкиназы катализируют фосфорилирование специфических тирозильных остатков в различных белках, вовлеченных в регуляцию клеточного роста. Такие протеин-тирозинкиназы можно грубо классифицировать как рецепторные или нерецепторные киназы.

Рецепторные тирозинкиназы представляют собой трансмембранные белки, имеющие внеклеточный лигандсвязывающий домен, трансмембранный домен и тирозинкиназный домен. Рецепторные тирозинкиназы вовлечены в регуляцию роста клетки и иногда называются рецепторами факторов роста. Было показано, что неадекватная или неконтролируемая активация многих из этих киназ, т.е. аберрантная киназная активность рецептора фактора роста, например за счет сверхэкспрессии или мутации, приводит к неконтролируемому клеточному росту. Соответственно, аберрантная активность таких киназ связана со злокачественным ростом ткани. Следовательно, ингибиторы таких киназ могли бы обеспечить способы лечения рака. Рецепторы факторов роста включают, например, рецептор эпидермального фактора роста (ЕСЕК, ЕгЬВ2 и ЕгЬВ4), рецептор тромбоцитарного фактора роста (ΡΌ6ΕΚ), рецептор фактора роста эндотелия сосудов (УЕСЕК), тирозинкиназы с иммуноглобулиноподобными и с гомологичными эпидермальным фактором роста доменами (Т1Е-2), рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (1СЕ-1), рецепторы макрофагального колониестимулирующего фактора (сГтк). ВТК, скИ, стек рецепторы фактора роста фибробластов (ЕСЕ), рецепторы Тгк (ТгкА, ТгкВ и ТгкС), рецепторы эфрина (ЕрЬ) и рецептор протоонкогена КЕТ. Некоторые ингибиторы рецепторов факторов роста находятся в разработке и включают антагонисты лигандов, антитела, ингибиторы тирозинкиназы, антисмысловые олигонуклеотиды и аптамеры. Рецепторы факторов роста и агенты, ингибирующие функцию рецептора фактора роста, описаны, например, в КаШ, ίοΐιπ С, Ехр. Θρίη. ТЬег. Ра1еп1к (2000) 10(6):803-818; 811а\\уег е! а1. ОПТ. Уо1. 2, Νο. 2. ЕеЬгиагу 1997 и Ьойк, Еб. е! а1. Сго\\111 ЕасЮг КесерЮгк ак Тагде!к, Νονν Мо1еси1аг Тагде!к Гог Сапсег СЬетоШегару, Еб. Аогктап, Раи1 апб Кегг, Оау1б, СКС Ргекк 1994, Ьопбоп.

Тирозинкиназы, которые не являются рецепторными киназами факторов роста, называются нерецепторными тирозинкиназами. Нерецепторные тирозинкиназы, полезные в настоящем изобретении, которые представляют собой мишени или потенциальные мишени антинеопластических лекарственных средств, включают с8сг, Ьск, Еуп, Уек, 1ак, сАЬ1, ЕАК (киназа фокальной адгезии), тирозинкиназу Брутонса и Всг-АЬ1. Такие нерецепторные киназы и агенты, которые ингибируют функцию нерецепторной тирозинкиназы, описаны в 81пЬ, 8. апб Согеу, 8.1, (1999) 1оигпа1 оГ НетаЮ(Негару апб 8(ет Се11 КекеагсЬ 8 (5): 465-80; и Во1еп, ЬВ., Вгидде, 18., (1997) Аппиа1 Кеу1е\у оГ 1ттипо1оду, 15: 371-404.

Блокаторы доменов 8Н2/8Н3 представляют собой агенты, которые нарушают связывание домена 8Н2 или 8Н3 у ряда ферментов или адапторных белков, включая субъединицу р85 Р13-К, киназы 8гссемейства, адапторные молекулы (8Ье, Сгк, №к, СгЬ2) и Как-САР. Домены 8Н2/8Н3 в качестве мишеней для противораковых лекарственных средств обсуждаются в 8тДЬда11, Т.Е. (1995), 1оита1 оГ РЬагтасо1одюа1 апб Тохюо1одюа1 МеШобк, 34(3) 125-32.

Ингибиторы сериновых/треониновых киназ, включая блокаторы МАР-киназного каскада, которые включают блокаторы КаГ-киназ (КаГк), митоген- или внеклеточно регулируемой киназы (МЕК) и экстраклеточные регулируемых киназ (ЕКК); и блокаторы членов семейства протеинкиназы С (РКС), включая блокаторы подтипов РКС (альфа, бета, гамма, эпсилон, мю, лямбда, йота, зета), семейства киназ 1кВ (1ККа, 1ККЬ), семейства киназ РКВ, членов семейства киназ Ак! и рецепторных киназ ТСЕ-бета. Такие сериновые/треониновые киназы и их ингибиторы описаны в Уатато1о, Т., Тауа, 8., Ка1ЬисЫ, К., (1999), 1оита1 оГ ВюсЬетМгу. 126 (5) 799-803; Вгоб!, Р, 8аташ, А., апб №уаЬ, К. (2000), Вюсйетюа1 РЬагтасо1оду, 60. 1101-1107; Маккадие, 1., Ае1к-Сагс1а, Е. (1996) Сапсег 8игуеук. 27:41-64; РЫЕр, Р.А., апб Натк, А.Ь. (1995), Сапсег Тгеа1теп1 апб КекеагсЬ. 78: 3-27, Ьаскеу, К. е( а1. Вюогдатс апб Мебюта1 СЬет1к!гу ЬеЬегк, (10), 2000, 223-226; и МагЦпех-Ьасаск Ь., е! а1., Ιπί. 1. Сапсег (2000), 88(1), 44-52.

Ингибиторы членов семейства фосфатидилинозитол-3-киназы, включающие блокаторы Р13-киназы, АТМ, ^NА-ΡК и Ки, также могут быть полезными в комбинации с настоящим изобретением. Такие киназы обсуждаются в АЬгаЬат, К.Т. (1996), Сштеп! Ор1шоп ш 1ттипо1оду. 8 (3) 412-8; Саптап, С.Е., Ыт, Ό.8. (1998), Опсодепе 17 (25) 3301-3308; 1асккоп, 8.Р. (1997), 1п1етабопа1 1оита1 оГ ВюсЬетИйу апб Се11 Вю1оду. 29 (7):935-8; и 2Ьопд, Н. е! а1., Сапсег Кек, (2000) 60(6), 1541-1545.

Также полезными в комбинации с настоящим изобретением являются ингибиторы мио

- 14 014111 инозитольной передачи сигналов, такие как блокаторы фосфолипазы С и аналоги миоинозитола. Такие ингибиторы передачи сигналов описаны в Роток, 6., апк Кохлкохткк1 А., (1994) №\ν Мо1еси1аг ТатдеБ Гог Сапсег СйетоШетару ек., Раи1 ХУогктап апк Эау|к Кегг, СЯС Ргекк 1994, Ьопкоп.

Другой группой ингибиторов пути трансдукции сигналов, полезных в комбинации с настоящим изобретением, являются ингибиторы онкогена Яак. Такие ингибиторы включают ингибиторы фарнезилтрансферазы, геранил-геранилтрансферазы и СААХ-протеиназ, а также антисмысловые олигонуклеотиды, рибозимы и иммунотерапию. Было показано, что такие ингибиторы блокируют активацию Яак в клетках, содержащих мутант Яак дикого типа, действуя, таким образом, как антипролиферативные агенты. Ингибирование онкогена Яак обсуждается в 8сйатоукку, О.6., Яохакок, У.Я., Оетуакош, 8.Ι., Ма1ат, Р. (2000), 1оитпа1 о! Бютек1са1 8с1епсе. 7(4) 292-8; АкЫЬу, Μ.Ν. (1998), Ситтеп! Ортюп ίη Ыр1ко1оду. 9(2)99102; и ВюСЫт. Вюрйук. Ас!а, (1989) 1423(3):19-30.

Как упомянуто выше, антитела, связывающиеся с лигандом рецепторной киназы, также могут служить в качестве ингибиторов трансдукции сигнала. Эта группа ингибиторов пути трансдукции сигнала включает применение гуманизированных антител к внеклеточному лигандсвязывающему домену рецепторных тирозинкиназ. Например, ЕОРЯ-специфичное антитело 1тс1опе С225 (смотрите Огееп, М.С. е! а1., Мопос1опа1 АпЦЬоку ТЫегару Гог 8ойк Титогк, Сапсег Тгеа!. Яеу., (2000), 26(4), 269-286); ЕгЬВ2-антитело Нетсеркп® (смотрите Тутокте Кшаке 81дпа1шд ш Вгеак! Сапсег: ЕгЬВ Ратку Яесер!ог Тугокше Кшакек, Вгеак! Сапсег Яек., 2000, 2(3), 176-183); и УЕ6РЯ2-специфичное антитело 2СВ (смотрите Вгеккеп, Я.А. е! а1., 8е1ес1|уе 1п1иЬйюп оГ УЕ6РЯ2 Ас(1У11у Ьу а Мопос1опа1 АпЦ-УЕ6Е АпЦЬоку В1оскк Титог 6го\\111 ш Мсе, Сапсег Яек. (2000) 60, 5117-5124).

Ингибиторы рецепторных киназ, вовлеченных в ангиогенез, также могут найти применение в настоящем изобретении. Ингибиторы ангиогенеза, связанного с УЕ6РЯ и Т1Е2, обсуждаются выше в связи с ингибиторами трансдукции сигнала (оба рецептора представляют собой рецепторные тирозинкиназы). В комбинации с соединениями по настоящему изобретению можно использовать другие ингибиторы. Например, анти-УЕОР антитела, которые не распознают УЕ6РЯ (рецепторная тирозинкиназа), но связываются с лигандом; низкомолекулярные ингибиторы интегрина (альфа_убета₃), которые будут ингибировать ангиогенез; эндостатин и ангиостатин (не-ЯТК) также могут быть полезными в комбинации с ингибиторами РЬК.

В комбинации с соединениями по данному изобретению также могут быть полезны агенты, используемые в иммунотерапевтических схемах. В комбинации по настоящему изобретению также можно использовать агенты, используемые в проапоптозных схемах (например Ьс1-2-антисмысловые олигонуклеотиды). Члены семейства белков Вс1-2 блокируют апоптоз. Повышающая регуляция Ьс1-2, следовательно, связана с хеморезистентностью. Исследования показали, что эпидермальный фактор роста (Е6Р) стимулирует антиапоптозные члены Ьс1-2-семейства (например тс1-1). Соответственно, стратегии, разработанные для понижающей регуляции экспрессии Ьс1-2 в опухолях продемонстрировали клиническую пользу и в настоящее время находятся на фазах ΙΙ/ΙΙ клинических исследований, а именно Ьс1-2антисмысловой олигонуклеотид 63139 от 6еШа. Такие проапоптозные стратегии с использованием стратегии антисмысловых олигонуклеотидов в отношении Ьс1-2 обсуждаются в \Уа1ег 1.8. е! а1., 1. С1ш. Опсо1. 18:1812-1823 (2000); и Кйака 8. е! а1., АпИкепке Яек. Иеу. 4:71-79 (1994).

Ингибиторы сигнализации в клеточном цикле ингибируют молекулы, вовлеченные в контроль клеточного цикла. Циклинзависимые киназы (СИК) и взаимодействующие с ними циклины контролируют продвижение по клеточному циклу у эукариот. Скоординированная активация и инактивация разных комплексов циклин/СИК необходима для нормального продвижения по клеточному циклу. Несколько ингибиторов сигнализации в клеточном цикле находятся в разработке. Например, примеры циклинзависимых киназ, включая СИК2, СИК4 и СИК6, и их ингибиторы описаны, например, в Яокаша, е! а1., Ехр. Орш. ТЫеп РаГеШк, 10(2):215-230 (2000).

В одном воплощении способы по настоящему изобретению включают введение животному соединения по изобретению в комбинации с ингибитором пути трансдукции сигнала, в частности с гефитинибом ДЯЕ88А®).

Способы и применения с использованием этих комбинаций могут включать введение соединения по изобретению и другого химиотерапевтического/антинеопластического агента либо последовательно в любом порядке, либо одновременно в отдельных или в комбинированных фармацевтических композициях. При комбинировании в том же самом препарате очевидно, что два данных соединения должны быть стабильными и совместимыми друг с другом и с другими компонентами данного препарата и могут быть приготовлены в виде препарата для введения. При приготовлении в виде отдельного препарата их можно представить в любом удобном препарате способом, известным для таких соединений в данной области техники.

Когда соединение по изобретению используют в комбинации с химиотерапевтическим агентом, доза каждого соединения может отличаться от дозы при использовании данного соединения самого по себе. Подходящие дозы легко оценят специалисты в данной области. Подходящая доза соединения(ий) по изобретению и другого(их) терапевтически активного(ых) агента(ов) и относительное время введения

- 15 014111 будут выбраны так, чтобы добиться желательного комбинированного терапевтического эффекта, и они находятся в пределах компетенции и свободного выбора лечащего врача.

Соединения по данному изобретению можно удобно получить способами, описанными в примерах, следующих ниже.

В настоящем изобретении также предложены меченные радиоактивным изотопом соединения по изобретению и биотинилированные соединения по изобретению и их варианты, присоединенные к твердой подложке. Меченные радиоактивным изотопом соединения по изобретению и биотинилированные соединения по изобретению можно получить с использованием традиционных методик. Например, меченные радиоактивным изотопом соединения по изобретению можно получить путем взаимодействия соединения по изобретению с газом тритием в присутствии подходящего катализатора с получением меченных радиоактивным изотопом соединений по изобретению. В одном воплощении данные соединения являются тритированными.

Меченные радиоактивным изотопом соединения по изобретению и биотинилированные соединения по изобретению являются полезными в анализах для идентификации соединений, которые ингибируют РЬК, для идентификации соединений для лечения состояния, опосредованного РЬК, для лечения новообразований, поддающихся лечению, для лечения состояний, характеризующихся неадекватной пролиферацией, для ингибирования пролиферации клетки и для ингибирования митоза в клетке. Соответственно, согласно настоящему изобретению предложен способ анализа для идентификации таких соединений, включающий стадию специфического связывания меченного радиоактивным изотопом соединения по изобретению или биотинилированного соединения по изобретению с белком-мишенью или с клеточными гомогенатами. Более конкретно, подходящие способы анализа будут включать анализы конкурентного связывания. Меченные радиоактивным изотопом соединения по изобретению и биотинилированные соединения по изобретению и их варианты, присоединенные к твердой подложке, можно использовать в анализах в соответствии со способами, традиционными в данной области.

Следующие примеры предназначены только для иллюстрации и не предназначены для ограничения объема данного изобретения каким-либо способом, данное изобретение определяется следующей ниже формулой изобретения.

Следующие сокращения, используемые в примерах, имеют значения, приведенные ниже:

г - грамм(ы);

мг - миллиграмм(ы);

моль - моль(и);

ммоль - миллимоль(и);

н. - нормальный;

л - литр(ы);

мл - миллилитр(ы);

мкл - микролитр(ы);

ч - час(ы);

мин - минута(ы);

°С - градусы Цельсия

НС1 - соляная кислота;

ЬСМ - дихлорметан;

МеОН - метанол;

ЕЮЛс - этилацетат;

Мд80₄ - сульфат магния;

ЫаНС0₃ - бикарбонат натрия;

К₂С0₃ - карбонат калия;

Ыа₂80₄ - сульфат натрия;

Ν₂ - азот;

Н2 - водород.

ХЛ№ГРН08 (4,5-бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантен) представляет собой имеющийся в продаже катализатор от ЛИпсН.

Реактивы имеются в продаже или получены согласно методикам, описанным в литературе. В следующих структурах Ме относится к группе -СН₃.

Промежуточный пример 1. Метил-5-амино-3-({(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2тиофенкарбоксилат

Стадия А. Метил-5-нитро-3-({(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат

- 16 014111

Суспензию трифенилфосфина на полимерной подложке (62,36 г, 2,21 ммоль/г, 137,8 ммоль) в ЭСМ (1,0 л) перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Смесь охлаждали до 0°С. Добавляли метил-3-гидрокси-5-нитро-2-тиофенкарбоксилат (20,00 г, 98,44 ммоль), который может быть получен способом, аналогичным описанному в литературе (Вагкег, ЕМ.; Нийй1е8Фп, Р.К.; \Уоой, М.Ь.; Вигк1й, 8.Л. 1оигпа1 оГ Сйеш1са1 Ке8еагсй (Μίηίρήηΐ) 2001, 1001-1022), затем добавляли (18)-1-[2-(трифторметил) фенил]этанол (26,20 г, 137,8 ммоль) и ди-трет-бутилазодикарбоксилат (31,73 г, 137,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 21,25 ч, затем фильтровали через фриттованную воронку и концентрировали. Остаток обрабатывали 4н. НС1 в 1,4-диоксане (300 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь затем гасили добавлением 3н. гидроксида натрия (300 мл) и насыщенного водного №НС’О₃ (200 мл). Смесь экстрагировали Όί’Μ (3x250 мл). Объединенные органические фракции сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали на силикагеле. Очистка колоночной хроматографией (от 0 до 25% ЕЮАс:гексаны) давала 36,08 г (98%) соединения, указанного в заголовке, в виде желтого масла. ¹Н ЯМР (300 МГц, ί.Όί.Ί₃): δ 7.82 (й, 1Н, 1=7,8 Гц), 7.68 (й, 1Н, 1=7,8 Гц), 7.59 (ΐ, 1Н, 1=7,4 Гц), 7,46 (8, 1Н), 7.42 (ΐ, 1Н, 1= 7,6 Гц), 5.77 (ф 1Н, 1=6,1 Гц), 3.94 (8, 3Н), 1.74 (й,3НД=6,1 Гц).

Стадия Б. Метил-5-амино-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат

В колбу, оснащенную температурным датчиком, верхней механической мешалкой, обратным холодильником и воронкой для добавления, добавляли порошок железа (26,84 г, 480,6 ммоль) и уксусную кислоту (130 мл). Суспензию железа/уксусной кислоты механически перемешивали и нагревали до внутренней температуры 50°С. В воронку для добавления добавляли раствор метил-5-нитро-3-({(1К)-1-[2(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилата (36,08 г, 96,13 ммоль) в уксусной кислоте (160 мл). Затем раствор в воронке для добавления добавляли по каплям к суспензии железа/уксусной кислоты с такой скоростью, чтобы внутренняя температура поддерживалась на уровне ниже 60°С (общее время добавления - 2,5 ч). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли Όί'Μ (500 мл) и затем гасили добавлением 6н. гидроксида натрия (750 мл) и насыщенного водного ЫаНСОз (200 мл). Затем всю смесь фильтровали через слой целита для удаления нерастворимого вещества, промывая целит дополнительным количеством Όί'Μ (250 мл). Разделяли водную и органическую фракции. Водную фракцию экстрагировали ЕЮАс (2x400 мл). Органические фракции объединяли, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали с получением 30,66 г (92%) соединения, указанного в заголовке, в виде оранжевого твердого вещества. ¹Н ЯМР (300 МГц, СОС1₃): δ 7.89 (й, 1Н, 1=7,7 Гц), 7.62 (й, 1Н, 1=7,7 Гц), 7.56 (ΐ, 1Н, 1=7,7 Гц), 7.36 (ΐ, 1Н, 1=7,7 Гц), 5.72 (8, 1Н), 5.65 (φ 1Н, 1=6,3 Гц), 4.26 (Ьг 8, 2Н), 3.80 (8, 3Н), 1.66 (й, 3Н, 1=6,3 Гц), М8 (АРС1) (масс-спектрометрия с химической ионизацией при атмосферном давлении): 368,00 [М+Ыа]⁺.

Промежуточный пример 2. Метил-5-амино-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-2-тиофенкарбоксилат

Стадия А. Метил-3-{ [(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-нитро-2-тиофенкарбоксилат

Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-нитро-2-тиофенкарбоксилат получали из метил-3гидрокси-5-нитро-2-тиофенкарбоксилата и (18)-1-(2-хлорфенил)этанола в соответствии с методикой, аналогичной методике в промежуточном примере 1, стадия А. 'Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆): δ 7.96 (8,

- 17 014111

1Н), 7.65 (бб, 1Н, 1=1,7, 7,8 Гц), 7.47 (бб, 1Н, 1=1,5, 7,7 Гц), 7.40 (б!, 1Н, 1=1,3, 7,5 Гц), 7.34 (б!, 1Н, 1=1,9, 7,5 Гц), 5.98 (ц, 1Н, .1 6.0 Гц), 3.85 (8, 3Н), 1.59 (б, 3Н, .16.2 Гц).

Стадия Б. Метил-5-амино-3-{ [(К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-2-тиофенкарбоксилат.

Метил-5-амино-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-2-тиофенкарбоксилат получали из метил-3{[(1Я)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-нитро-2-тиофенкарбоксилата в соответствии с методикой, аналогичной методике в промежуточном примере 1, стадия Б. 'Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο-6₆): δ 7.54 (бб, 1Н, 1=1,8, 7,9 Гц), 7.45 (бб, 1Н, 1=1,4, 7,7 Гц), 7.37 (б!, 1Н, 1=1,4, 7,7 Гц), 7.31 (б!, 1Н, 1=1,8, 7,6 Гц), 6.76 (Ьг 8, 2Н), 5.57 (ц, 1Н, .1 6.2 Гц), 5.49 (8, 1Н), 3.63 (8, 3Н), 1.51 (б, 3Н, .16.4 Гц); Μ8 (Е81) (масс-спектрометрия с электрораспылительной ионизацией): 334,03 |Μ+Να|'.

Пример 1. 5-{6-[(Метилсульфонил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К-1-[2-(трифторметил)фе-

Способ 1. Стадия А. 5-(Гидроксиметил)-2-нитрофенол

К смеси 3-гидрокси-4-нитробензойной кислоты (5,0 г, 27,3 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (100 мл) добавляли триметилборат (4,9 мл, 43,7 ммоль), затем добавляли диэтилэтерат трифторида бора (5,5 мл, 43,7 ммоль). Затем медленно по каплям добавляли боран-пиридиновый комплекс (4,1 мл, 41,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре, затем охлаждали до 0°С и гасили МеОН (10 мл). Смесь концентрировали под вакуумом и остаток переносили в толуол (200 мл), затем экстрагировали 1н. водным гидроксидом натрия (3x100 мл). Объединенные водные слои доводили до рН 1,0 путем добавления 12н. НС1, затем экстрагировали Е!ОН (3x250 мл). Объединенные органические слои промывали водой, рассолом, сушили над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом с получением 4,55 г (98%) соединения, указанного в заголовке, в виде светло-желтого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο-6₆): δ 10.87 (8, 1Н), 7.85 (б, 1Н, Б=8,6 Гц), 7.08 (8, 1Н), 6.88 (бб, 1Н, 1=1,19, 8,51 Гц), 5.43 (8, 1Н), 3.33 (8, 2Н).

Стадия Б. 3-Гидрокси-4-нитробензилпивалат

Смесь 5-(гидроксиметил)-2-нитрофенола (11,35 г, 67,15 ммоль) и 3-(2,2-диметилпропаноил)-1,3тиазолидин-2-тиона (15,0 г, 73,89 ммоль), которую можно получить способом, аналогичным методике, описанной в литературе (Уатаба, 8. Те!гаЬебгои Ье!!ег8, 1992, 33, 2171-2174), перемешивали в толуоле (670 мл) при 100°С в течение 40 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом до объема приблизительно 200 мл и образующуюся взвесь фильтровали через фильтровальную бумагу, промывая твердое вещество холодным толуолом. Затем фильтрат концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 0 до 20% Е!ОАс/гексаны с получением 11,09 г (65%) соединения, указанного в заголовке, в виде прозрачного желтого масла. Ή ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Θ-6₆): δ 11.05 (8, 1Н), 7.87 (б, 1Н, Б=8,42 Гц), 7.06 (8, 1Н), 6.90 (бб, 1Н, 1=1,46, 8,42 Гц), 5.09 (8, 2Н), 1.18 (8, 9Н).

Стадия В. 4-Нитро-3-{[(трифторметил)сульфонил]окси}бензил пивалат

- 18 014111

К перемешиваемому охлажденному (0°С) раствору 3-гидрокси-4-нитробензилпивалата (11,11 г, 43,9 ммоль) и Ν-фенилтрифторметансульфонимида (16,51 г, 46,2 ммоль) в ЭСМ (220 мл) медленно добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин (15,5 мл, 88,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 45 мин при 0°С, затем в течение 45 мин при комнатной температуре. Затем концентрировали реакционную смесь в вакууме и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 5 до 20% Е1ОАс/гексаны с получением 16,87 г (99%) соединения, указанного в заголовке, в виде не совсем белого твердого вещества. Ή ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-ά₆): δ 8.36 (ά, 1Н, 1=8,42 Гц), 7.75-7.69 (т, 2Н), 5.27 (δ, 2Н), 1.19 (δ, 9Н).

Стадия Г. Метил 5-[(5-{[(2,2-диметилпропаноил)окси]метил}-2-нитрофенил)амино]-3-({(1К)-1-[2(трифторметил)фенил]этил}окси)тиофен-2-карбоксилат

Смесь 4-нитро-3-{[(трифторметил)сульфонил]окси}бензилпивалата (1,0 г, 2,60 ммоль), метил-5амино-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}-окси)тиофен-2-карбоксилата (1,34 г, 3,88 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (150 мг, 0,13 ммоль), трифенилфосфина (68 мг, 0,26 ммоль) и К₂СО₃ (900 мг, 6,5 ммоль) перемешивали в толуоле (5,2 мл) при 100°С в течение 2 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через целит, промывая ЕЮАс и ЭСМ. Фильтрат концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 5 до 25% ЕЮАс/гексан с получением 1,26 г (84%) соединения, указанного в заголовке, в виде красного масла. ¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-ά₆): δ 9.75 (δ, 1Н), 8.09 (ά, 1Н, 1=8,6 Гц), 7.89 (ά, 1Н, 1=7.87 Гц), 7.69-7.78 (т, 2Н), 7.52 (ΐ, 1Н, 1= 7.59 Гц), 7.34 (δ, 1Н), 7.01 (άά, 1Н, 1=1,46, 8.60 Гц), 6.62 (δ, 1Н), 5.70-5.75 (т, 1Н), 5.07 (δ, 2Н), 3.74 (δ, 3Н), 1.58 (ά, 3Н, 1=6,22 Гц), 1.13 (δ, 9Н).

Стадия Д. Метил-5-[(2-амино-5-{[(2,2-диметилпропаноил)окси]метил}фенил)амино]-3-({(1К)-1-[2(трифторметил) фенил] этил } окси)тиофен-2 -карбоксилат

Смесь метил-5-[(5-{[(2,2-диметилпропаноил)окси]метил}-2-нитрофенил)амино]-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)тиофен-2-карбоксилата (2,42 г, 4,17 ммоль) и платины (сульфидированная, 5 мас.%, на углероде) (811 мг, 0,21 ммоль) в Е1ОАс (30 мл) добавляли в реакционный сосуд высокого давления. Реакционную смесь вакуумировали и продували газообразным Ν2, затем подавали газообразный Н₂ под давлением 50 фунт/кв.дюйм 344,738 кПа в течение 1 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, промывая Е1ОАс. Фильтрат концентрировали под вакуумом с получением 2,27 г (99%) соединения, указанного в заголовке, в виде желтовато-коричневого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-ά₆): δ 8.62 (δ, 1Н), 7.84 (ά, 1Н, 1=7,87 Гц), 7.72 (άά, 2Н, 1=7,60, 13,09 Гц), 7.50 (ΐ, 1Н, 1=7.60 Гц), 7.01 (ά, 1Н, 1=1,46 Гц), 6.88 (άά, 1Н, 1=1,74, 8,15 Гц), 6.68 (ά, 1Н, 1=8,24 Гц), 5.83 (δ, 1Н), 5.59-5.65 (т, 1Н), 4.97 (δ, 2Н), 4.85 (δ, 2Н), 3.64 (δ, 3Н), 1.55 (ά, 3Н, 1 =6,23 Гц), 1.11 (δ, 9Н); Μδ (ΕδΙ): 551 [М+Н]⁺.

Стадия Е. Метил-5-(6-{[(2,2-диметилпропаноил)окси]метил}-1Н-бензимидазол-1-ил)-3-({(1К)-1-[2(трифторметил)фенил]этил}окси)тиофен-2-карбоксилат

- 19 014111

К смеси метил-5-[(2-амино-5-{[(2,2-диметилпропаноил)окси]метил}фенил)амино]-3-({(1К)-1-[2(трифторметил)фенил]этил}окси)тиофен-2-карбоксилата (2,27 г, 4,13 ммоль) в триэтилортоформиате (10 мл, 60,2 ммоль) и ЭСМ (3 мл) добавляли пиридиния паратолуолсульфонат (100 мг, 0,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 1 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Всю реакционную смесь загружали на силикагель и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 0 до 50% Е1ОАс/гексаны с получением 2,0 г (86%) соединения, указанного в заголовке, в виде светлого желтовато-коричневого твердого вещества. 'Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆): δ 8.65 (5, 1Н), 7.99 (б, 1Н, 1=7,87 Гц), 7.75-7.80 (т, 2Н), 7.72 (б, 1Н, 1 =7,87 Гц), 7.63 (5, 1Н), 7.53 (1, 1Н, 1=7,60 Гц), 7.40 (5, 1Н), 7.35 (б, 1Н, 1=8,42 Гц), 5.96 (д, 1Н, 1=6,10 Гц), 5.21 (5, 2Н), 3.83 (5, 3Н), 1.65 (б, 3Н, 1=6,23 Гц), 1.16 (5, 9Н); М8 (Е81): 561 [М+Н]⁺.

Стадия Ж. Метил-5-[6-(гидроксиметил)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил] этил } окси)тиофен-2 -карбоксилат

К перемешиваемому раствору метил-5-(6-{[(2,2-диметилпропаноил)окси]метил}-1Н-бензимидазол1-ил)-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)тиофен-2-карбоксилата (5,21 г, получен из другой партии с использованием методики, аналогичной примеру 1, способ 1, стадия Е, 9,30 ммоль) в МеОН (24 мл) добавляли 0,5 М гидроксид натрия в МеОН (24,0 мл, 12 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч, затем гасили уксусной кислотой (2 мл). Реакционную смесь разбавляли ЭСМ (350 мл) и наполовину насыщенным водным раствором рассола (150 мл). Водный слой экстрагировали ЭСМ (250 мл). Объединенные органические слои сушили над Мд§О₄ и концентрировали под вакуумом с получением 4,40 г (99%) соединения, указанного в заголовке, в виде светло-желтого твердого вещества. Ή ЯМР (400 МГц, ПМ8О-б₆): δ 8.58 (5, 1Н), 7.99 (б, 1Н, 1=7,87 Гц), 7.69-7.81 (т, 3Н), 7.51-7.58 (т, 2Н), 7.38 (5, 1Н), 7.30 (б, 1Н, 1= 8,42 Гц), 5.96 (д, 1Н, 1=6,10 Гц), 5.30 (1, 1Н, 1=5,77 Гц), 4.62 (б, 2Н, 1=5,86 Гц), 3.83 (5, 3Н), 1.65 (б, 3Н, 1=6,23 Гц); М8 (Е81): 477 [М+Н]⁺.

Стадия З. Метил-5-[6-(хлорметил)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-({(1К-1-[2-(трифторметил)фенил]этил} окси)тиофен-2 -карбоксилат

К перемешиваемому раствору метил-5-[6-(гидроксиметил)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-({(1К)-1-[2(трифторметил)фенил]этил}окси)тиофен-2-карбоксилата (1,47 г, 3,08 ммоль) и трифенилфосфина (1,05 г, 4,01 ммоль) в ЭСМ (30 мл) добавляли Ν-хлорсукцинимид (0,53 г, 4,01 ммоль). Реакционную смесь затем нагревали до температуры дефлегмации и перемешивали в течение 20 мин, затем охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляли ЭСМ (400 мл) и наполовину насыщенным водным раствором рассола (150 мл). Водный слой затем экстрагировали ЭСМ. Объединенные органические слои сушили над №₂8О₄, концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 10 до 60% Е1ОАс/гексаны с получением 1,4 г (92%) соединения, указанного в заголовке, в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О-б₆): δ 8.65 (5, 1Н), 7.99 (б, 1Н, 1=7,87 Гц), 7.727.81 (т, 3Н), 7.69 (5, 1Н), 7.54 (1, 1Н, 1=7,69 Гц), 7.43 (б, 1Н, 1= 8,42 Гц), 7.38 (5, 1Н), 5.97 (д, 1Н, 1=6,10 Гц), 4.91 (5, 2Н), 3.84 (5, 3Н), 1.66 (б, 3Н, 1=6,23 Гц); М8 (Е81): 495 [М+Н]⁺.

Стадия И. Метил-5-{6-[(метилтио)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил] этил } окси)тиофен-2 -карбоксилат

- 20 014111

К перемешиваемой смеси метил-5-[6-(хлорметил)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)тиофен-2-карбоксилата (200 мг, 0,40 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (2,5 мл) добавляли тиометилат натрия (37 мг, 0,52 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, затем разбавляли ЕЮЛс, промывали водой (5х), рассолом, сушили над Ν;·ι₂8ϋ₄. концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 0 до 60% ЕЮЛс/гексаны с получением 147 мг (72%) соединения, указанного в заголовке, в виде белого твердого вещества. М8 (Е81): 507 [М+Н]⁺.

Стадия К. 5-{6-[(Метилтио)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил] этил}окси)тиофен-2-карбоксамид

Смесь метил-5-{6-[(метилтио)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил] этил}окси)тиофен-2-карбоксилата (144,0 мг, 0,28 ммоль) и 7н. аммиака в МеОН (18 мл, 126,0 ммоль) добавляли в стеклянную реакционную колбу высокого давления. Колбу герметично закрывали, затем нагревали до 80°С в течение приблизительно 16 ч. Колбу охлаждали до комнатной температуры, открывали и реакционную смесь концентрировали под вакуумом, затем очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 0 до 3% МеОН/ОСМ с 1% гидроксидом аммония с получением 130 мг (93%) соединения, указанного в заголовке, в виде бело-золотистого твердого вещества. 'Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-ά₆): δ 8.49 (δ, 1Н), 7.93 (б, 1Н, 1= 7,68 Гц), 7.85 (Ьг 8, 1Н), 7.80-7.75 (т, 2Н), 7.69 (б, 1Н, 1=8,23 Гц), 7.56 (ΐ, 1Н, 1=7,68 Гц), 7.39 (8, 1Н), 7.29 (б, 1Н, 1=8,42 Гц), 7.15 (Ьг 8, 1Н), 7.08 (8, 1Н), 5.94 (т, 1Н), 3.79 (8, 2Н), 1.93 (8, 3Н), 1.75 (б, 3Н, 1=6,22 Гц); М8 (Е81): 492 [М+Н]⁺.

Стадия Л. 5-{6-[(Метилсульфонил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил) фенил]этил}окси)тиофен-2-карбоксамид

К перемешиваемому охлажденному (-10°С) раствору 5-{6-[(метилтио)метил]-1Н-бензимидазол-1ил}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)тиофен-2-карбоксамида (76 мг, 0,15 ммоль) в ЭСМ (3,0 мл) добавляли мета-хлорпероксибензойную кислоту (70 мг, 0,31 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 мин, затем концентрировали под вакуумом. Остаток разбавляли хлороформом и промывали водным насыщенным ШНСОз, водой, сушили над Νη₂8Ο₄, концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 0 до 5% МеОН/ОСМ с 1%-ным гидроксидом аммония, с получением 78 мг (96%) соединения, указанного в заголовке, в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О-б₆): δ 8.57 (8, 1Н), 7.95 (б, 1Н, 1=7,87 Гц), 7.85 (Ьг 8, 1Н), 7.80-7.73 (т, 3Н), 7.69 (8, 1Н), 7.55 (ΐ, 1Н, 1=7,69 Гц), 7.38 (б, 1Н, 1=8,42 Гц), 7.19 (8, 1Н), 7.12 (Ьг 8, 1Н), 5.95-5.89 (т, 1Н), 4.61-4.58 (т, 2Н), 2.89 (8, 3Н), 1.75 (б, 3Н, I =6,04 Гц); М8 (Е81): 524 [М+Н]⁺.

Способ 2. Стадия А. Метил-5-{6-[(метилсульфонил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат

- 21 014111

Смесь метил-5-[6-(хлорметил)-1Н-бензимидазол-1 -ил]-3 -({(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил} окси)тиофен-2-карбоксилата (4,53 г, полученного из другой партии с использованием методики, аналогичной методике, описанной в примере 1, способ 1, стадия 3, 9,17 ммоль), натриевой соли метансульфиновой кислоты (2,81 г, 27,5 ммоль) и этанола (40,0 мл) добавляли в стеклянную реакционную колбу высокого давления. Колбу герметично закрывали, затем нагревали до 85°С в течение приблизительно 16 ч. Колбу охлаждали до комнатной температуры, открывали и реакционную смесь концентрировали под вакуумом, затем очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 5 до 35% ЕЮАе/гексана с получением 4,54 г (92%) соединения, указанного в заголовке, в виде светло-желтого твердого вещества. '11 ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆): δ 8.67 (δ, 1Н), 8.01 (Б, 1Н, 1=7,87 Гц), 7.82-7.70 (т, 4Н), 7.53 (ί, 1Н, 1=7,69 Гц), 7.45 (8, 1Н), 7.40 (Б, 1Н, 1=8,42 Гц), 5.95 (т, 1Н), 4.63 (т, 2Н), 3.83 (δ, 3Н), 2.90 (δ, 3Н), 1.65 (Б, 3Н, 1=6,204 Гц); Μ8 (Е81): 539 [М+Н]⁺.

Стадия Б. 5-{6-[(Метилсульфонил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1В)-1-[2-(трифторметил) фенил]этил}окси)-тиофен-2-карбоксамид

Смесь метил-5-{6-[(метилсульфонил)метил]-1Н-бензимидазол-1 -ил }-3-({(1В)-1-[2-(трифторметил) фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилата (4,53 г, 8,42 ммоль) и 7н. аммиака в МеОН (250,0 мл, 1,75 моль) добавляли в стеклянную реакционную колбу высокого давления. Колбу герметично закрывали, затем нагревали до 85°С в течение приблизительно 36 ч. Колбу охлаждали до комнатной температуры, открывали и реакционную смесь объединяли со второй партией метил-5-{6-[(метилсульфонил)метил]-1Нбензимидазол-1-ил}-3-({(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилата (4,11 г, 7,63 ммоль), которую также обрабатывали 7н. аммиаком в МеОН (200,0 мл, 1,40 моль) в стеклянной реакционной колбе высокого давления при 85°С в течение приблизительно 36 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и открывали колбу. Объединенные реакционные смеси концентрировали под вакуумом, затем очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 0 до 5% МеОН/ОСМ с 1%-ным гидроксидом аммония с получением 7,47 г (89%) соединения, указанного в заголовке, в виде не совсем белого твердого вещества. М8 (Е81): 524 [М+Н]⁺.

Пример 2. 3-{ [(1В)-1-(2-Хлорфенил)этил]окси}-5-(6-[(метилсульфонил)-метил]-1Н-бензимидазол-1ил)-2-тиофенкарбоксамид

Стадия А. Метил-3-{[(1В)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-{6-[(метилтио)метил]-1Н-бензимидазол-1ил}тиофен-2-карбоксилат

Соединение, указанное в заголовке, получали из метил-5-[6-(хлорметил)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3{[(1В)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}тиофен-2-карбоксилата согласно методике, аналогичной примеру 1, способ 1, стадия I. М8 (Е8Г): 473 [М+Н]⁺.

Стадия Б. 3-{[(1В)-1-(2-Хлорфенил)этил]окси}-5-{6-[(метилтио)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил} тиофен-2-карбоксамид

- 22 014111

Соединение, указанное в заголовке, получали из метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-{6[(метилтио)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}тиофен-2-карбоксилата согласно методике, аналогичной примеру 1, способ 1, стадия К.

Ή ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆): δ 8.53 (8, 1Н), 7.83 (δ, 1Н), 7.71-7.66 (т, 2Н), 7.49 (ά, 1Н, 1= 7,87 Гц), 7.45-7.35 (т, 3Н), 7.29 (ά, 1Н, 1=8,42 Гц), 7.16-7.11 (т, 2Н), 6.01-5.95 (т, 1Н), 3.82 (8, 2Н), 1.94 (8, 3Н), 1.73 (ά, 3Н, 1=6,41 Гц); Μ8 (ЕМ): 458 [М+Н]⁺.

Стадия В. 3-{ [(1К)-1-(2-Хлорфенил)этил]окси}-5-{6-[(метилсульфонил)метил]-1Н-бензимидазол-1ил}-2-тиофенкарбоксамид

Соединение, указанное в заголовке, получали из 3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-{6[(метилтио)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}тиофен-2-карбоксамида согласно методике, аналогичной примеру 1, способ 1, стадия Л. '11 ЯМР (400 МГц, ΌΜ80-ά₆): δ 8.61 (8, 1Н), 7.84 (8, 1Н), 7.79 (ά, 1Н, 1= 8,24 Гц), 7.73 (8, 1Н), 7.70-7.67 (т, 1Н), 7.49-7.47 (т, 1Н), 7.44-7.33 (т, 3Н), 7.26 (8, 1Н), 7.12 (8, 1Н), 5.97-5.93 (т, 1Н), 4.64-4.60 (т, 2Н), 2.90 (8, 3Н), 1.73 (ά, 3Н, 1=6,41 Гц); Μ8 (ЕМ): 490 [М+Н]⁺.

Промежуточный пример 3. Метил-5-(6-бром-1Н-бензимидазол-1-ил)-3-гидрокси-2-тиофенкарбоксилат

Стадия А. Метил-5-(6-бром-1Н-бензимидазол-1-ил)-3-{[(1,1 -диметилэтил)(диметил)силил]окси}-2тиофенкарбоксилат

К смеси 5-бром-1Н-бензимидазола (43,78 г, 222,0 ммоль) в хлороформе (800 мл) добавляли Νметилимидазол (44,5 мл, 560,0 ммоль), затем добавляли метил-2-хлор-3-оксо-2,3-дигидро-2-тиофенкарбоксилат (44,8 г, 233,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 20 ч при комнатной температуре, затем добавляли Ν-метилимидазол (18,0 мл, 226,0 ммоль), затем трет-бутилдиметилсилилхлорид (36,8 г, 245,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч, затем гасили МеОН и вливали в Ό0Μ и воду. Водный слой экстрагировали Ό0Μ (3х). Объединенные органические слои затем сушили над №₂8О₄, концентрировали и разделяли хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 50 до 75% 25%-ного ЕЮАс в гексане/гексане с получением 25,18 г (24%) соединения, указанного в заголовке. Μ8 (ЕМ): 467 [М+Н]⁺.

Стадия Б. Метил-5-(6-бром-1Н-бензимидазол-1 -ил)-3-гидрокси-2-тиофенкарбоксилат

К перемешиваемому раствору метил-5-(6-бром-1Н-бензимидазол-1-ил)-3-{[(1,1-диметилэтил)(диметил)силил]окси}-2-тиофенкарбоксилата (25,18 г, 53,9 ммоль) в ТНГ (540,0 мл) добавляли 1,0 М тетрабутиламмония фторид в ТНГ (60,0 мл, 60,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1,5 ч, затем добавляли насыщенный водный ΝΉ₄Ο1 (200 мл). Образующуюся взвесь перемешивали в течение 15 мин, затем разбавляли водой (750 мл) и ЕЮАс (1,0 л). Водный слой отделяли, и его рН доводили до 3,0 добавлением 1 М водной НС1. Затем экстрагировали водный слой ЕЮАс (3х). Объединенные органические слои промывали водной 0,1М НС1, рассолом, сушили над Μ§§0₄ и концентрировали под вакуумом с

- 23 014111 получением 19,4 г (100%) соединения, указанного в заголовке, в виде бледно-желтого твердого вещества. М8 (Ε8Ι): 353 [М+Н]⁺.

Пример 3. 5-(6-{ (4-Метилпиперазин-1 -ил)метил]-1Н-бензимидазол-1 -ил}-3-{(1К)-1-[2-(трифторметил) фенил] этокси }тиофен-2 -карбоксамид

Способ 1.

Стадия А. 3 -Метил-5-(6-бром-1Н-бензимидазол-1 -ил)-3-{( 1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этокси} тиофен-2-карбоксилат

Суспензию трифенилфосфина на полимерной подложке (53,0 г, 2,04 ммоль/г, 108 ммоль), (18)-1-[2(трифторметил)фенил]этанола (15,4 г, 81,0 ммоль) и метил-5-(6-бром-1Н-бензимидазол-1-ил)-3гидрокситиофен-2-карбоксилата (промежуточный пример 3) (19,0 г, 53,9 ммоль) в ЭСМ (750 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Взвесь затем обрабатывали ди-третбутилазодикарбоксилатом (24,8 г, 108 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч, затем пропускали через фильтровальную бумагу, промывая твердые вещества смолы ЭСМ и МеОН. Фильтрат концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 5 до 50% ЕЮАс/гексана с получением 23,8 г (84%) соединения, указанного в заголовке, в виде бледножелтого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О-й₆): δ 8.63 (8, 1Н), 7.97 (й, 1Н, 1=7,87 Гц), 7.80-7.71 (т, 3Н), 7.65 (й, 1Н, 1=1,65 Гц), 7.57-7.48 (т, 2Н), 7.35 (8, 1Н), 5.99 (ф 1Н, 1=5,98 Гц), 3.83 (8, 3Н), 1.65 (й, 3Н, 1=6,04 Гц); М8 (Ε8Ι): 525 [М+Н]⁺.

Стадия Б. Метил-3-{(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этокси}-5-(6-винил-1Н-бензимидазол-1-ил) тиофен-2-карбоксилат

К смеси 3-метил-5-(6-бром-1Н-бензимидазол-1-ил)-3-{(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этокси} тиофен-2-карбоксилата (23,8 г, 45,4 ммоль), калия винилтрифторбората (7,25 г, 54,5 ммоль) и триэтиламина (6,3 мл, 45,4 ммоль), перемешиваемой при комнатной температуре в н-пропаноле (230 мл) добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(11) дихлорметана (750 мг, 0,91 ммоль). Смесь затем нагревали до температуры дефлегмации и перемешивали в течение 3 ч, затем охлаждали до комнатной температуры, вливали в воду и экстрагировали ЕЮАс (3х). Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Мд§0₄, концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 10 до 40% ЕЮАс/гексана с получением 17,06 г (80%) соединения, указанного в заголовке, в виде желтой твердой пены. ¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ80-ά₆): δ 8.59 (8, 1Н), 7.98 (й, 1Н, 1= 7,87 Гц), 7.80-7.71 (т, 3Н), 7.59 (δ, 1Н), 7.56-7.52 (т, 2Н), 7.39 (δ, 1Н), 6.85 (йй, 1Н, 1=10,98 и 17,75 Гц), 6.00 (ф 1Н, 1=6,10 Гц), 5.86 (й, 1Н, 1=17,56 Гц), 5.31 (й, 1Н, 1=10,98 Гц), 3.83 (8, 3Н), 1.65 (й, 3Н, 1=6,04 Гц); М8 (Ε8Ι): 473 [М+Н]⁺.

Стадия В. Метил-5-[6-(1,2-дигидроэтил)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-{(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этокси}тиофен-2-карбоксилат

- 24 014111

К перемешиваемому раствору метил-3-{(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этокси}-5-(6-винил-1Нбензимидазол-1-ил)тиофен-2-карбоксилата (17,06 г, 36,1 ммоль) в 360 мл смеси ацетон/вода (3:1) добавляли 4-метилморфолина Ν-оксид (5,1 г, 43,4 ммоль), затем 2,5 мас.% раствор тетроксида осмия в 2метил-2-пропаноле (10,0 мл, 0,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч, затем гасили водным (насыщенным) сульфитом натрия. Смесь экстрагировали ЕЮАс (3х). Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Мд§О₄, концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 1 до 8% МеОН/ЭС'М с 1%ным гидроксидом аммония с получением 16,72 г (92%) соединения, указанного в заголовке, в виде бледно-желтой твердой пены. ^!Н ЯМР (400 МГц, ^М§О-б₆): δ 8.59 (б, 1Н, 1=1,46 Гц), 7.98 (б, 1Н, 1=7,87 Гц), 7.80-7.68 (т, 3Н), 7.59-7.52 (т, 2Н), 7.36-7.31 (т, 2Н), 5.95 (д, 1Н, 1=6,10 Гц), 5.37 (1, 1Н, 1=3,66 Гц), 4.764.64 (т, 2Н), 3.83 (8, 3Н), 3.46-3.42 (т, 2Н), 1.65 (б, 3Н, 1=6,04 Гц); М8 (Ε8Ι): 507 [М+Н]⁺.

Стадия Г. Метил-5-(6-формил-1Н-6ензимидазол-1 -ил)-3-{(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этокси} тиофен-2-карбоксилат

К раствору метил-5-[6-(1,2-дигидроэтил)-1Н-бензимидазол-1 -ил]-3-{(1В)- 1-[2-(трифторметил)фенил]этокси}тиофен-2-карбоксилата (16,72 г, 33,0 ммоль) в смеси 1:1:1 ЭСМ/вода/МеОН (220 мл) добавляли перйодат натрия (10,58 г, 49,5 ммоль). Образующуюся суспензию перемешивали в течение 1 ч, затем разбавляли водой и ЕЮАс. Водный слой экстрагировали ЕЮАс (3х). Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Мд§О₄ и концентрировали под вакуумом с получением 14,76 г (94%) соединения, указанного в заголовке, в виде бледно-желтой твердой пены. ¹Н ЯМР (400 МГц, 1)\18О-с1₆): δ 10.09 (8, 1Н), 8.87 (8, 1Н), 8.19 (8, 1Н), 8.02-7.89 (т, 3Н), 7.81-7.72 (т, 2Н), 7.57-7.51 (т, 2Н), 5.98 (д, 1Н, 1=6,10 Гц), 3.84 (8, 3Н), 1.66 (б, 3Н, 1=6,22 Гц); М8 (Ε8Ι): 475 [М+Н]⁺.

Стадия Д. Метил-5-{6-[(4-метилпиперазин-1-ил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-{(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этокси}тиофен-2-карбоксилат

К перемешиваемому раствору метил-5-(6-формил-1Н-бензимидазол-1-ил)-3-{(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этокси}тиофен-2-карбоксилата (14,76 г, 31,1 ммоль), н-метилпиперазина (5,72 мл, 62,3 ммоль) и уксусной кислоты (2,1 мл, 37,4 ммоль) в дихлорэтане (150 мл) добавляли натрия триацетоксиборгидрид (9,9 г, 46,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1,5 ч, затем добавляли 5%-ный водный К₂СО₃, пока рН не достигал приблизительно 8. Смесь затем разбавляли ЕЮАс и водой. Водный слой экстрагировали ЕЮАс (3х). Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над №ь8О₄. концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 1 до 8% МеОН/ЭС’М с 1%-ным гидроксидом аммония с получением 15,82 г (91%) соединения, указанного в заголовке, в виде бледно-желтой твердой пены. 'Н ЯМР (400 МГц, ЭМ8О-б₆): δ 8.57 (8, 1Н), 7.98 (б, 1Н, 1= 7,87 Гц), 7.80-7.68 (т, 3Н), 7.54 (1, 1Н, 1=7,59 Гц), 7.46 (8, 1Н), 7.33-7.28 (т, 2Н), 5.97 (д, 1Н, 1=6,16 Гц), 3.83 (8, 3Н), 3.55 (8, 2Н), 2.45-2.20 (т, 8Н), 2.13 (8, 3Н), 1.66 (б, 3Н, 1= 6,04 Гц); М8 (Е81): 559 [М+Н]⁺.

Стадия Е. 5-{6-[(4-Метилпиперазин-1-ил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-{(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этокси}тиофен-2-карбоксамид

Смесь метил-5-{6-[(4-метилпиперазин-1-ил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-{(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этокси}тиофен-2-карбоксилата (15,82 г, 28,35 ммоль) и 7н. аммиака в МеОН (250 мл, 1,75 моль) добавляли в стеклянную реакционную колбу высокого давления. Колбу герметично закрывали,

- 25 014111 затем нагревали до 80°С в течение приблизительно 40 ч. Колбу охлаждали до комнатной температуры, открывали и реакционную смесь концентрировали под вакуумом, затем очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 2 до 8% МеОН/БСМ с 1%-ным гидроксидом аммония с получением 14,11 г (92%) соединения, указанного в заголовке, в виде белой твердой пены. 'Н ЯМР (400 МГц, БМ8Ой₆): δ 8.49 (8, 1Н), 7.93 (й, 1Н, 1=7,87 Гц), 7.86 (Ьг 8, 1Н), 7.80-7.75 (т, 2Н), 7.68 (й, 1Н, 1=8,23 Гц), 7.56 (ΐ, 1Н, 1=7,68 Гц), 7.33 (8, 1Н), 7.28(й, 1Н, 1=8,42 Гц), 7.15 (Ьг 8, 1Н),7.06(8, 1Н), 5.94 (ц, 1Н, 1=6,10 Гц), 3.52 (8, 2Н), 2.45-2.20 (т, 8Н), 2.13 (8, 3Н), 1.74 (й, 3Н, 1=6,22 Гц); М8 (ЕЗЦ: 544 [М+Н]⁺.

Способ 2. Стадия А. 2-Бром-4-{[(метокси)метил]окси}-1-нитробензол

Вг

Раствор 3-бром-4-нитрофенола (20,0 г, 91,7 ммоль) в БСМ (475 мл) перемешивали при 0°С. Добавляли диизопропилэтиламин (19,2 мл, 110,0 ммоль), затем добавляли по каплям раствор хлорметилметилового эфира (7,7 мл, 100,9 ммоль) в БСМ (25 мл). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, затем нагревали до комнатной температуры и гасили водой (150 мл). Смесь вливали в рассол (150 мл) и водный слой экстрагировали ЕЮЛс (3х). Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Мд8О₄, концентрировали под вакуумом и разделяли хроматографией на силикагеле (330 г), элюируя градиентом от 0 до 25% ЕЮЛс/гексан с получением 20,0 г (83%) соединения, указанного в заголовке, в виде прозрачного оранжевого масла. ¹Н ЯМР (400 МГц, БМ8О-й₆): δ 8.07 (й, 1Н, 1=8.97 Гц), 7.50 (й, 1Н, 1=2,20 Гц), 7.21 (йй, 1Н, 1=8,97 и 2,38 Гц), 5.34 (8, 2Н), 3.39 (8, 3Н).

Стадия Б. Метил-5-[(5-{[(метилокси)метил]окси}-2-нитрофенил)амино]-3-({(1К.)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат

К перемешиваемому раствору метил-5-амино-3-({(1К.)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2тиофенкарбоксилата (1,32 г, 3,82 ммоль) и 2-бром-4-{[(метилокси)метил]окси}-2-нитробензола (1,0 г, 3,82 ммоль) в диоксане (20 мл) добавляли трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (70,0 мг, 0,076 ммоль) и ХЛЫТРНО8 (97,0 мг, 0,17 ммоль), затем карбонат цезия (6,2 г, 19,0 ммоль). Смесь нагревали до 60°С и перемешивали в течение 12 ч, затем охлаждали до комнатной температуры, разбавляли ЕЮЛс и фильтровали через целит, промывая твердые вещества ЕЮЛс и БСМ. Фильтрат концентрировали под вакуумом и разделяли хроматографией на силикагеле (120 г), элюируя градиентом от 5 до 35% ЕЮЛс/гексана с получением 1,64 г (82%) соединения, указанного в заголовке, в виде красного масла. ¹Н ЯМР (400 МГц, БМ8О-й₆): δ 9.85 (8, 1Н), 8.12 (й, 1Н, 1=9,33 Гц), 7.90 (й, 1Н, 1=7,87 Гц), 7.74 (т, 2Н), 7.53 (ΐ, 1Н, 1=7,68 Гц), 6.84 (й, 1Н, 1=2,56 Гц), 6.73-6.68 (т, 2Н), 5.77-5.72 (т, 1Н), 5.23 (8, 2Н), 3.75 (8, 3Н), 3.37 (8, 3Н), 1.58 (й, 3Н, 1=6,22 Гц); М8 (Е8Т): 527 [М+Н]⁺.

Стадия В. Метил-5-(6-{ [(метилокси)метил]окси}-1Н-бензимидазол-1-ил)-3-({(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат

В реакционную колбу высокого давления для гидрирования добавляли метил-5-[(5-{[(метилокси) метил]окси}-2-нитрофенил)амино]-3-({(1К.)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат (2,0 г, 3,8 ммоль), пиридиния пара-толуолсульфонат (95,0 мг, 0,38 ммоль), 5 мас.% платину на углероде (сульфидированную) (740 мг, 0,19 ммоль) и триметилортоформиат (40 мл). Колбу продували Ν₂ (газ),

разный Н₂ под давлением 50 фунтов/кв.дюйм (344,738 кПа) в течение 3 ч. Реакционную смесь затем фильтровали через целит, промывая твердые вещества ЕЮЛс и БСМ. Затем фильтрат концентрировали под вакуумом с получением 1,92 г (100%) соединения, указанного в заголовке, в виде светло-желтой твердой пены. Ή ЯМР (400 МГц, БМ8О-й₆): δ 8.49 (8, 1Н), 7.98 (й, 1Н, 1=8,05 Гц), 7.79-7.66 (т, 3Н), 7,53

- 26 014111 (ί, 1Н, 1=7,59 Гц), 7.35 (8, 1Н), 7.22 (ά, 1Н, 1=2,20 Гц), 7.06 (άά, 1Н, 1=8,78 и 2,20 Гц), 5,97 (ф 1Н, 6,04 Гц), 5.23 (8, 2Н), 3.83 (8, 3Н), 3.39 (8, 2Н), 1.65 (ά, 3Н, 1=6,22 Гц); М8 (Е81): 507 [М+Н]⁺.

Стадия Г. Метил-5-(6-гидрокси-1Н-бензимидазол-1 -ил)-3 -({(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил} окси)-2-тиофенкарбоксилат

К перемешиваемому раствору метил-5-(6-{[(метилокси)метил]окси}-1Н-бензимидазол-1-ил)-3({(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилата (8,18 г, другая партия, полученная согласно методике, аналогичной примеру 3, способ 2, стадия В, 16,16 ммоль) в смеси 1:1 ТНР/Ме0Н (130 мл) добавляли 1н. НС1 в воде (65 мл, 65,0 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 35°С и перемешивали в течение 72 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь вливали в ЭСМ (500 мл) и добавляли воду (100 мл). Смесь нейтрализовали до рН 7 добавлением водного (насыщенного) №1НС0₃. Водный слой затем экстрагировали ЭСМ (1х) и ЕЮЛс (1х). Объединенные органические слои сушили над Мд§0₄, концентрировали под вакуумом и разделяли хроматографией на силикагеле (120 г), элюируя градиентом от 10 до 60% Е10Лс/гексана с получением 6,9 г (92%) соединения, указанного в заголовке, в виде пенистого твердого вещества светло-лососевого цвета. 'Н ЯМР (400 МГц, ЭМ80-0₆): δ 9.62 (8, 1Н), 8.41 (8, 1Н), 8.00 (ά, 1Н, 1=7,87 Гц), 7.80-7.71 (т, 2Н), 7.56-7.51 (т, 2Н), 7.38 (8, 1Н), 7.05 (ά, 1Н, 1=2,01 Гц), 6.81 (άά, 1Н, 1=8,70 и 2,11 Гц), 5,95 (т, 1Н), 3.83 (8, 3Н), 1.64 (ά, 3Н, 1= 6,23 Гц); М8 (Е81): 463 [М+Н]⁺.

Стадия Д. Метил-3-({(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-5-(6-{[(трифторметил)сульфонил] окси}-1Н-бензимидазол-1 -ил)-2-тиофенкарбоксилат

К перемешиваемому охлажденному (0°С) раствору метил-5-(6-гидрокси-1Н-бензимидазол-1-ил)-3({(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилата (2,49 г, 5,38 ммоль) и Ν-фенилтрифторметана сульфонамида (2,06 г, 5,76 ммоль) в ЭСМ (30 мл) добавляли диизопропилэтиламин (2,0 мл, 11,5 ммоль). Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 ч. Затем концентрировали реакционную смесь под вакуумом и хроматографировали на силикагеле (120 г), элюируя градиентом от 5 до 40% Е10Лс/гексана с получением 3,12 г (98%) соединения, указанного в заголовке, в виде светло-желтого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, ПМ80Д₆): δ 8.76 (8, 1Н), 8.01-7.94 (т, 2Н), 7.80-7.70 (т, 3Н), 7.56-7.43 (т, 3Н), 5.98 (ф 1Н, 1=6,10 Гц), 3.84 (8, 3Н), 1.65 (ά, 3Н, 1=6,22 Гц); М8 (Е81): 595 [М+Н]⁺.

Стадия Е. 3 -{(1В)-1 -[2-(Трифторметил)фенил]этокси}-5-(6-винил-1Н-бензимидазол-1 -ил)тиофен-2карбоксилат

К смеси метил-3-({(1В)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-5-(6-{[(трифторметил)сульфонил] окси}-1Н-бензимидазол-1-ил)-2-тиофенкарбоксилата (20,69 г, получен из другой партии с использованием методики, аналогичной примеру 3, способ 2, стадия Е, 34,83 ммоль), калия винилтрифторбората (5,6 г, 42,10 ммоль) и триэтиламина (4,85 мл, 34,86 ммоль), перемешиваемой при комнатной температуре в нпропаноле (175 мл), добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(11) дихлорметана (570 мг, 0,70 ммоль). Затем нагревали смесь до температуры дефлегмации и перемешивали в течение 3 ч, затем охлаждали до комнатной температуры, вливали в воду и экстрагировали ЕЮЛс (3х). Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Мд§0₄, концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 10 до 50% Е10Лс/гексана с получением 12,98 г (79%) соединения, указанного в заголовке, в виде светло-желтой твердой пены. М8

- 27 014111 (Е81): 473 [М+Н]⁺.

Стадия Ж. Метил-5-[6-(1,2-дихлорэтил)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-{(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил] этокси}тиофен-2-карбоксилат

Соединение, указанное в заголовке, можно получить в соответствии с методикой, аналогичной примеру 3, способ 1, стадия В.

Стадия 3. Метил-5-(6-формил-1Н-бензимидазол-1 -ил)-3-{(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этокси} тиофен-2-карбоксилат

Соединение, указанное в заголовке, можно получить в соответствии с методикой, аналогичной примеру 3, способ 1, стадия Ό.

Стадия И. Метил-5-{6-[(4-метилпиперазин-1-ил)метил]-1Н-бензимидазол-1 -ил}-3-{(1К)-1-[2-(трифторметил) фенил] этокси }тиофен-2 -карбоксилат

Соединение, указанное в заголовке, можно получить в соответствии с методикой, аналогичной методике из примера 3, способ 1, стадия Е.

Стадия К. 5-{6-[(4-Метилпиперазин-1-ил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-{(1К)-1-[2-(трифторметил) фенил] этокси }тиофен-2-карбоксамид

Соединение, указанное в заголовке, можно получить в соответствии с методикой, аналогичной примеру 3, способ 1, стадия Е.

Способ 3.

Стадия А. Метил-5-{6-[(4-метилпиперазин-1-ил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2(трифторметил) фенил] этил } окси)тиофен-2 -карбоксилат

К перемешиваемому раствору метил-5-[6-(хлорметил)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-({(1К)-1-[2(трифторметил)фенил]этил}окси)тиофен-2-карбоксилата (150 мг, 0,30 ммоль) в диоксане (1,0 мл) добавляли Ν-метилпиперазин (50 мкл, 0,45 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 60°С в течение 18 ч, охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в Е!ОАс и воде. Водный слой экстрагировали Е!ОАс. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над сульфатом натрия, концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 0 до 10% ΜеОН/^СΜ с 1%-ным гидроксидом аммония с получением 134 мг (79%) соединения, указанного в заголовке, в виде белого твердого вещества. Μ8 (Е81): 559 [М+Н]⁺.

Стадия Б. 5-{6-[(4-Метилпиперазин-1-ил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-{(1К)-1-[2-(трифторме

- 28 014111 тил) фенил] этокси }тиофен-2 -карбоксамид

Соединение, указанное в заголовке, можно получить в соответствии с методикой, аналогичной примеру 3, способ 1, стадия Е.

Способ 4. Стадия А-4-[бис(метилокси)метил]-2-бром-1-нитробензол

СН, СН,

Раствор 3-бром-4-нитробензальдегида (7,97 г, 34,6 ммоль), который получали способом, аналогичным методике, описанной в литературе (Ка1п1хку. А.К.; Х1е, Ь. Тс1га11<Мгоп Ье11ега, 1996, 37, 347-350), триметилортоформиата (11,4 мл, 104 ммоль) и гидрата паратолуолсульфоновой кислоты (329 мг, 1,73 ммоль) в МеОН (69 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционную смесь затем гасили добавлением насыщенного водного гидроксида аммония (1 мл) и концентрировали на силикагеле. Очистка колоночной хроматографией (градиент от 10 до 25% Е1ОАс тексаны) давала 8,76 г (92%) соединения, указанного в заголовке, в виде оранжевого масла. 'Н ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 7.89 (т, 2Н), 7.59 (т, 1Н), 5.47 (δ, 1Н), 3.38 (δ, 6Н).

Стадия Б. Метил-5-({5-[бис(метилокси)метил]-2-нитрофенил}амино)-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)

Раствор трис(дибензилиденацетон)дипалладия(0) (117 мг, 0,127 ммоль), 9,9-диметил-4,5-бис (дифенилфосфино)ксантена (162 мг, 0,280 ммоль), метил-5-амино-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил} окси)-2-тиофенкарбоксилата (2,31 г, 6,69 ммоль), 4-[бис(метилокси)метил]-2-бром-1-нитробензола (1,76 г, 6,37 ммоль) и карбоната цезия (10,39 г, 31,89 ммоль) в 1,4-диоксане (25 мл) получали в круглодонной колбе в атмосфере Ν2. Колбу освобождали от содержимого, заполняли три раза Ν2 и затем перемешивали при 60°С в течение 16 ч. Реакционную смесь затем разбавляли тетрагидрофураном (100 мл) и концентрировали на силикагеле. Очистка колоночной хроматографией (градиент от 5 до 75% ЕЮАс/гексан) давала 2,79 г (81%) соединения, указанного в заголовке, в виде красной пены. ¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 9.63 (Ьг δ, 1Н), 8.21 (т, 1Н), 7.94 (т, 1Н), 7.62 (т, 2Н), 7.48 (δ, 1Н), 7.40 (т, 1Н), 7.02 (т, 1Н), 6.47 (δ, 1Н), 5.73 (ф 1Н, 1=6,2 Гц), 3.88 (δ, 3Н), 3.34 (δ, 1Н), 3.31 (δ, 3Н), 3.28 (δ, 3Н), 1.72 (ά, 3Н, 1=6,2 Гц); Μδ (ΕδΙ): 541 [М+Н]⁺.

Стадия В. Метил-5-{6-[бис(метилокси)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1В)-1-[2-(трифторметил)

К раствору метил-5-({5-[бис(метилокси)метил]-2-нитрофенил}амино)-3-({(1В)-1-[2-(трифторметил) фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилата (2,71 г, 5,01 ммоль) в триметилортоформиате (50 мл) в колбе Фишера-Портера (^11ег-Рог1ег) добавляли пиридиния пара-толуолсульфонат (126 мг, 0,501 ммоль) и сульфидированную платину на углероде (5 мас.% Ρΐ, 977 мг, 0,250 ммоль Ρΐ). Смесь гидрировали на гидрогенизационной установке Фишера-Портера при давлении водорода 50 фунтов/кв. дюйм (344,738 кПа), пока не прекращалось поглощение водорода (17 ч). Реакционную смесь фильтровали через фильтр из

- 29 014111 пористого стекла для удаления катализатора, промывая ЭСМ (75 мл). Элюат концентрировали с получением 2,61 г (100%) неочищенного соединения, указанного в заголовке, в виде оранжевого масла, которое переносили на следующую стадию без очистки. М8 (Е81): 521 [М+Н]⁺.

Стадия Г. Метил-5-(6-формил-1Н-бензимидазол-1 -ил)-3 -({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил} окси)-2-тиофенкарбоксилат

К раствору неочищенного метил-5-{6-[бис(метилокси)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилата (2,61 г, 5,01 ммоль) (со стадии В выше) в ацетоне (20 мл) и воде (5 мл) добавляли пиридиния пара-толуолсульфонат (126 мг, 0,501 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре и затем вливали в воду (30 мл) и насыщенный водный NаНСОз (30 мл). Смесь экстрагировали ЭСМ (2x30 мл). Объединенные органические фракции сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали на силикагеле. Очистка колоночной хроматографией (градиент от 30 до 100% Е1ОАс:гексаны) давала 1,37 г (58%, 2 стадии) соединения, указанного в заголовке, в виде светло-желтого твердого вещества. ¹Н ЯМР (300 МГц, СЭСЕ): δ 10.06 (5, 1Н), 8.13 (5, 1Н), 7.96-7.88 (т, 4Н), 7.72-7.61 (т, 2Н), 7.44 (т, 1Н), 6.82 (5, 1Н), 5.84 (д, 1Н, 1=6,3 Гц), 3.95 (5, 3Н), 1.79 (б, 3Н, 1=6,3 Гц); М8 (Е81): 475 [М+Н]⁺.

Стадия Д. Метил-5-{6-[(4-метил-1-пиперазинил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат

Соединение, указанное в заголовке, можно получить в соответствии с методикой, аналогичной примеру 3, способ 1, стадия Д.

Стадия Е. 5-{6-[(4-Метилпиперазин-1-ил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-{(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этокси}тиофен-2-карбоксамид

Соединение, указанное в заголовке, можно получить в соответствии с методикой, аналогичной методике из примера 3, способ 1, стадия Е.

Пример 4. 3-([(1К)-1-(2-Хлорфенил)этил]окси)-5-{6-[(4-метилпиперазин-1-ил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}тиофен-2-карбоксамид

Стадия А. Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-[(5-{[(2,2-диметилпропаноил)окси]метил}2-нитрофенил)амино]-2-тиофенкарбоксилат

К смеси (4-нитро-3-{[(трифторметил)сульфонил]окси}фенил)метил-2,2-диметилпропаноата (1,0 г,

- 30 014111

2,59 ммоль), метил-5-амино-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-2-тиофенкарбоксилата (промежуточный пример 2) (860 мг, 2,75 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладия(0) (70,0 мг, 0,076 ммоль) и ΧΑΝΤРНО8 (90,0 мг, 0,16 ммоль) добавляли толуол (7,0 мл). Начинали перемешивание, затем добавляли карбонат цезия (2,95 г, 9,1 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 60°С и перемешивали в течение 30 мин, затем охлаждали до комнатной температуры, разбавляли ЕЮАс и фильтровали через целит, промывая твердые вещества ЕЮАс и ЭСМ. Фильтрат концентрировали под вакуумом и хроматографировали на силикагеле (40 г), элюируя градиентом от 5 до 15% ацетон/гексан с получением 920 мг (65%) соединения, указанного в заголовке, в виде красного твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, ЭМ8О-б₆): δ 9.77 (8, 1Н), 8.09 (б, 1Н, 1=8,61 Гц), 7.63 (бб, 1Н, 1=7,69 и 1,65 Гц), 7.46-7.30 (т, 4Н), 7.01 (бб, 1Н, 1=8,79 и 1,47 Гц), 6.67 (8, 1Н), 5.76-5.70 (т, 1Н), 5.09 (8, 2Н), 3.73 (8, 3Н), 1.56 (б, 3Н, 1=6,23 Гц), 1.14 (8, 9Н); М8 (Е81): 547 [М+Н]⁺.

Стадия Б. Метил-5-[(2-амино-5-{[(2,2-диметилпропаноил)окси]метил}фенил)амино]-3-{[(1К)-1-(2хлорфенил)этил]окси}-2-тиофенкарбоксилат

В реакционную колбу высокого давления для гидрирования добавляли метил-3-{[(1К)-1-(2хлорфенил)этил]окси}-5-[(5-{[(2,2-диметилпропаноил)окси]метил}-2-нитрофенил)амино]-2-тиофенкарбоксилат (6,5 г из другой партии, полученный с использованием методики, аналогичной примеру 4, стадия А, 11,9 ммоль), 5 мас.% платины на углероде (сульфидированной) (2,2 г, 0,56 ммоль) и ЕЮАс (95 мл). Колбу продували Ν₂ (газ), вакуумировали (3х), затем Н₂ (газ), вакуумировали (3х). Затем подавали газообразный водород под давлением 344,738 кПа в течение 3 ч. Реакционную смесь затем фильтровали через целит, промывая твердые вещества ЕЮАс и ЭСМ. Затем концентрировали фильтрат под вакуумом с получением 5,46 г (89%) соединения, указанного в заголовке, в виде желтого твердого вещества. М8 (Е81): 517[М+Н]⁺.

Стадия В. Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-(6-{ [(2,2-диметилпропаноил)окси]метил}1Н-бензимидазол-1-ил)-2-тиофенкарбоксилат

Перемешиваемую смесь метил-5-[(2-амино-5-{[(2,2-диметилпропаноил)окси]метил}фенил)амино]3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-2-тиофенкарбоксилата (5,45 г, 10,5 ммоль), пиридиния паратолуолсульфоната (265 мг, 1,0 ммоль) и триэтилортоформиата (15 мл) нагревали до 40°С в течение 1 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Всю смесь выливали на силикагелевый картридж (25 г) и очищали хроматографией на силикагеле (120 г), элюируя 100%-ными гексанами в течение 10 мин, затем градиентом от 0 до 10% ЕЮАс/гексан с получением 4,71 г (85%) соединения, указанного в заголовке, в виде желтого твердого вещества. М8 (Е81): 527 [М+Н]⁺.

Стадия Г. Метил-3-{ [(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-[6-(гидроксиметил)-1Н-бензимидазол-1ил]-2-тиофенкарбоксилат

Соединение, указанное в заголовке, получали из метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-(6{[(2,2-диметилпропаноил)окси]метил}-1Н-бензимидазол-1-ил)-2-тиофенкарбоксилата в соответствии с методикой, аналогичной методике из примера 1, способ 1, стадия Ж. М8 (Е81): 443 [М+Н]⁺.

Стадия Д. Метил-5-[6-(хлорметил)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-2тиофенкарбоксилат

- 31 014111

Соединение, указанное в заголовке, получали из метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-[6(гидроксиметил)-1Н-бензимидазол-1-ил]-2-тиофенкарбоксилата в соответствии с методикой, аналогичной методике из примера 1, способ 1, стадия 3. М8 (Е81): 461 [М+Н]⁺.

Стадия Е. Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-{6-[(4-метилпиперазин-1-ил)метил]-1Нбензимидазол-1-ил}тиофен-2-карбоксилат

К перемешиваемой смеси метил-5-[6-(хлорметил)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил) этил]окси}-2-тиофенкарбоксилата (150 мг, 0,32 ммоль) в диоксане (1,5 мл) добавляли н-метилпиперазин (55 мкл, 0,49 ммоль) и триэтиламин (136 мкл, 0,97 ммоль). Реакционную смесь затем нагревали при 45°С в течение 18 ч, охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в ЕЮАс (125 мл) и воде (50 мл). Затем экстрагировали водный слой ЕЮАс. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Мд§0₄, концентрировали под вакуумом и хроматографировали на силикагеле (4 г), элюируя градиентом от 0 до 10% МсОН/ЭСМ с 1%-ным гидроксидом аммония с получением 123 мг (72%) соединения, указанного в заголовке, в виде светло-желтого твердого вещества. М8 (Е81): 525 [М+Н]⁺.

Стадия Ж. 3-{ [(1К)-1-(2-Хлорфенил)этил]окси}-5-{6-[(4-метилпиперазин-1-ил)метил]-1Н-бензимидазол-1 -ил}тиофен-2-карбоксамид

Соединение, указанное в заголовке, получали из метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-{6[(4-метилпиперазин-1 -ил)метил]-1Н-бензимидазол-1-ил}тиофен-2-карбоксилата в соответствии с методикой, аналогичной примеру 3, способ 1, стадия Е. 'Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О-й₆): δ 8.52 (8, 1Н), 7.83 (8, 1Н), 7.69 (й, 2Н, 1= 8,24 Гц), 7.51-7.34 (т, 4Н), 7.28 (й, 1Н, 1= 8,24 Гц), 7.16-7.11 (т, 2Н), 5.98 (ф 1Н, 1=6,35 Гц), 3.55 (8, 2Н), 2.42-2.22 (т, 8Н), 2.13 (8, 3Н), 1.72 (й, 3Н, 1=6,23 Гц); М8 (Е81): 510 [М+Н]⁺.

Промежуточный пример 4. Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-(6-гидрокси-1Нбензимидазол-1 -ил)-2-тиофенкарбоксилат

Стадия А. 2-Бром-4-({[4-(метилокси)фенил]метил}окси)-1-нитробензол.

2-Бром-4-фтор-1-нитробензол (20,0 г, 90,9 ммоль) и 4-метоксибензиловый спирт (22,7 мл, 182 ммоль) растворяли в ЭСМ (400 мл) при перемешивании. Добавляли 1н. раствор гидроксида натрия (400 мл), затем тетрабутиламмония гидросульфат (3,09 г, 9,10 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 8 ч и вливали в делительную воронку. Слои разделяли и водный слой экстрагировали один раз ЭСМ и один раз диэтиловым эфиром. Объединенные органические слои сушили над Мд§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка флэш-хроматографией давала 28,01 г (91%) соединения, указанного в заголовке. Ή ЯМР (400 МГц, СПС1₃): δ 8.03 (й, 1Н, 1=9,2 Гц), 7.50 (й, 1Н, 1=2,6 Гц), 7.39-7.34

- 32 014111 (т, 2Н), 7.17 (йй, 1Н, 1=2,7, 9,0 Гц), 6.95-6.91 (т, 2Н), 5.14 (8, 2Н), 3.73 (8, 3Н).

Стадия Б. Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-{[5-({[4-(метилокси)фенил]метил}окси)-2нитрофенил]амино}-2-тиофенкарбоксилат

2-Бром-4-({[4-(метилокси)фенил]метил}окси)-1-нитробензол (20,19 г, 59,7 ммоль) и метил-5-амино3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-2-тиофенкарбоксилат (18,60 г, 59,7 ммоль) растворяли в 1,4диоксане (500 мл) при перемешивании в колбе, оснащенной механической мешалкой, обратным холодильником и термометром. Раствор дегазировали в течение 75 мин путем барботирования азота через перемешиваемый раствор. Добавляли 9,9-диметил-4,5-бис(дифенилфосфино)ксантен (1,52 г, 2,63 ммоль), карбонат цезия (97,26 г, 299 ммоль) и трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (1,09 г, 1,19 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 60°С и перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через целит. Твердое вещество промывали 20%-ным МеОН в ЭСМ. Фильтрат концентрировали на приблизительно 200 г силикагеля. Твердое вещество помещали во фриттованную воронку и промывали 10%-ным ЕЮАс в ЭСМ. Фильтрат концентрировали в вакууме. Очистка флэш-хроматографией давала 27,18 г (80%) соединения, указанного в заголовке. ¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃): δ 9.87 (8, 1Н), 8.10 (й, 1Н, 1=9,5 Гц), 7.63 (т, 1Н), 7.39-7.29 (т, 4Н), 7.23 (т, 1Н), 6.96-6.90 (т, 2Н), 6.80 (й, 1Н, 1=2,6 Гц), 6.75 (8, 1Н), 6.69 (йй, 1Н, 1=2,6, 9,3 Гц), 5.75 (ф 1Н, 1= 6,3 Гц), 5.03 (АВ, 2Н, 1_ав=13,2 Гц, 1_АВ=11,3 Гц), 3,74 (8, 3Н), 3,74 (8, 3Н), 1.55 (й, 3Н, 1=6,4 Гц).

Стадия В. Метил-5-{ [2-амино-5-({[4-(метилокси)фенил]метил}окси)фенил]амино}-3-{[(1К)-1-(2хлорфенил)этил]окси}-2-тиофенкарбоксилат

н,о-о

Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-{[5-({[4-(метилокси)фенил]метил}окси)-2-нитрофенил]амино}-2-тиофенкарбоксилат (27,18 г, 47,8 ммоль) растворяли в ЕЮАс (400 мл) при перемешивании. Добавляли сульфидированную платину (5 мас.% на углероде, 2,80 г) и реакционную смесь помещали под давление 1 атм Н₂, используя баллонную установку. Через 36 ч добавляли дополнительное количество катализатора (2,80 г) и продолжали перемешивание под давлением 1 атм водорода. Еще через 16 ч реакционную смесь фильтровали через слой целита, промывая ЕЮАс. Фильтрат концентрировали с получением соединения, указанного в заголовке, которое немедленно переносили на следующую стадию. ^!Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃): δ 8.66 (Ьг 8, 1Н), 7.56 (йй, 1Н, 1=1,7, 7,8 Гц), 7.41-7.09 (т, 5Н), 6.93-6.88 (т, 2Н), 6.71 (й, 1Н, 1=2,8 Гц), 6.65 (й, 1Н, 1=8,6 Гц), 6.57 (йй, 1Н, 1=2,7, 8,6 Гц), 5.87 (8, 1Н), 5.62 (ф 1Н, 1=6,4 Гц), 4.82 (8, 2Н), 4.46 (Ьг 8, 2Н), 3,73 (8, 3Н), 3.64 (8, 3Н), 1.52 (й, 3Н, 1=6,2 Гц).

Стадия Г. Метил-3-{ [(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-[6-({ [4-(метилокси)фенил]метил}окси)-1Нбензимидазол-1 -ил]-2-тиофенкарбоксилат

Метил-5-{[2-амино-5-({[4-(метилокси)фенил]метил}окси)фенил]амино}-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил) этил]окси}-2-тиофенкарбоксилат растворяли в триметилортоформиате (100 мл) и диэтиловом эфире (100 мл) при перемешивании. Добавляли одной порцией пиридиния паратолуолсульфонат (0,601 г, 2,39 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 ч и гасили добавлением триэтиламина (приблизительно 3 мл). Смесь концентрировали и очищали флэш-хроматографией с получением 25,45 г (97% за 2 стадии) соединения, указанного в заголовке. ¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃): δ 8.47 (8, 1Н), 7.71 (йй, 1Н, 1=1,6, 8,2 Гц), 7.63 (й, 1Н, 1=9,0 Гц), 7.43-7.08 (т, 7Н), 7.00 (йй, 1Н, 1=2,4, 8,8 Гц), 6.96-6.90 (т, 2Н), 5.97 (д, 1Н, 1=6,4 Гц), 5.03 (АВ, 2Н, 1_АВ=17,1 Гц, 1_АВ=11,3 Гц), 3.80 (8, 3Н), 3.73 (8, 3Н), 1.60 (й, 3Н, 1=6,4 Гц).

- 33 014111

Стадия Д. Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-(6-гидрокси-1Н-бензимидазол-1-ил)-2тиофенкарбоксилат

Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-[6-({[4-(метилокси)фенил]метил}окси)-1Н-бензимидазол-1-ил]-2-тиофенкарбоксилат (25,45 г, 46,4 ммоль) растворяли в ЭСМ (120 мл) и охлаждали до 0°С при перемешивании. Добавляли по каплям трифторуксусную кислоту (40,0 мл, 519 ммоль) через воронку для добавления. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч и добавляли по каплям через воронку для добавления гидроксид натрия (20,0 г, 500 ммоль) в воде (120 мл). Затем рН данной смеси доводили до нейтрального значения насыщенным раствором NаНСОз. Реакционную смесь вливали в делительную воронку и слои разделяли. Водный слой промывали ЕЮАс. Объединенные органические слои сушили над Μ§§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка флэш-хроматографией давала 14,86 г (75%) соединения, указанного в заголовке. 'Н ЯМР (400 МГц, СБС1₃): δ 9.62 (8, 1Н), 8.45 (8, 1Н), 7.74 (άά, 1Н, 1=1,7, 7,7 Гц), 7.53 (ά, 1Н, 1=8,8 Гц), 7.46-7.38 (т, 3Н), 7.32 (т, 1Н), 7.08 (ά, 1Н, 1=2,2 Гц), 6.79 (άά, 1Н, 1=2,2, 8,6 Гц), 5.94 (ф 1Н, 1=6,2 Гц), 3.79 (8, 3Н), 1.60 (ά, 3Н, 1=6,2 Гц).

Промежуточный пример 5. Метил-5-(6-гидрокси-1Н-бензимидазол-1-ил)-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил) фенил] этил } окси)-2-тиофенкарбоксилат

Стадия А. Метил-5-{[5-({[4-(метилокси)фенил]метил}окси)-2-нитрофенил]амино}-3-({(1К)-1-[2(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат

Соединение, указанное в заголовке, получали из метил-5-амино-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилата и 2-бром-4-({ [4-(метилокси)фенил]метил}окси)-1-нитробензола в соответствии с методикой, аналогичной промежуточному примеру 4, стадия Б. МС (ЕМ): 603 [М+Н]⁺.

Стадия Б. Метил-5-{ [2-амино-5-({[4-(метилокси)фенил]метил}окси)фенил]амино}-3-({(1К)-1-[2(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат

Соединение, указанное в заголовке, получали из метил-5-{[5-({[4-(метилокси)фенил]метил}окси)-2нитрофенил]амино}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилата в соответствии с методикой, аналогичной методике из промежуточного примера 4, стадия В. МС (ЕМ): 573 [М+Н]⁺.

Стадия В. Метил-5-(6-гидрокси-1Н-бензимидазол-1-ил)-3 -({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил} окси)-2-тиофенкарбоксилат

- 34 014111

Метил-5-{[2-амино-5-({[4-(метилокси)фенил]метил}окси)фенил]амино}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат (11 г, 19,19 ммоль) растворяли в 100 мл триметилортоформиата при перемешивании. Добавляли одной порцией пиридиния паратолуолсульфонат (0,502 г, 1,91 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 ч. Смесь концентрировали и неочищенный метил-5-[6-({[4-(метилокси)фенил]метил}окси)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат растворяли в хлороформе (75 мл) и охлаждали до 0°С при перемешивании. Добавляли трифторуксусную кислоту (50,0 мл, 649 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч и оставляли нагреваться до комнатной температуры. Смесь концентрировали при охлаждении для удаления большей части трифторуксусной кислоты. Смесь растворяли в хлороформе (200 мл). Реакционную смесь вливали в делительную воронку и слои разделяли. Затем доводили рН данной смеси до нейтрального значения насыщенным раствором NаНСОз. Водный слой промывали хлороформом. Объединенные органические слои сушили над Μ§80₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка флэш-хроматографией давала 8,16 г (92% за 2 стадии) соединения, указанного в заголовке. ¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃): δ 7.88 (б, 1Н, Б=7,87 Гц), 7.83 (8, 1Н), 7.66-7.55 (т, 3Н), 7.40 (!, 1Н, Б=7,7 Гц), 6.92 (б, 1Н, .12.2 Гц), 6.85 (бб, 1Н, 1=2,3, 8,7 Гц), 5.78 (ц, 1Н, Б=6,23 Гц), 5.47 (8, 1Н), 3.91 (8, 3Н), 1.75 (б, 3Н, .16.2.3 Гц); Μ8 (Е81): 463 [М+Н]⁺.

Пример 5. 5-[6-(4-Пиперидинилокси)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил] этил}окси)-2-тиофенкарбоксамид

Стадия А. 1,1-Диметилэтил-4-({1-[5-[(метилокси)карбонил]-4-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил] этил}окси)-2-тиенил]-1Н-бензимидазол-6-ил}окси)-1-пиперидинкарбоксилат

Метил-5-(6-гидрокси-1Н-бензимидазол-1 -ил)-3 -({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2тиофенкарбоксилат (0,478 г, 1,03 ммоль), карбонат цезия (0,470 г, 1,44 ммоль) и трет-бутиловый эфир 4(толуол-4-сульфонилокси)пиперидин-1-карбоновой кислоты (0,439 г, 1,24 ммоль) объединяли в 10 мл Ν,Ν-диметилформамида и нагревали до 60°С при перемешивании. Реакционную смесь нагревали в течение 36 ч и охлаждали до комнатной температуры. Смесь вливали в Е!ОАс и воду и слои разделяли. Органический слой промывали рассолом и объединенные водные слои экстрагировали Е!ОАс. Объединенные органические слои сушили над Μ§80₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка флэшхроматографией давала 0,482 г (72%) соединения, указанного в заголовке. ¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο-6₆): δ 8.43 (8, 1Н), 7.95 (бб, Б=7,7 Гц, 1Н), 7.78-7.66 (т, 2Н), 7.63 (б, Б=8,8 Гц, 1Н), 7.50 (т, 1Н), 7.29 (8, 1Н), 7.09 (б, .12.2 Гц, 1Н), 7.01 (бб, Б=8,8, 2,2 Гц, 1Н,), 5.97 (ц, .1 6.2 Гц, 1Н), 4.59 (т, 1Н), 3.81 (8, 3Н), 3.653.56 (т, 2Н), 3.25-3.15 (т, 2Н), 1.91-1.82 (т, 2Н), 1.63 (б, .16.2 Гц, 3Н), 1.59-1.49 (т, 2Н), 1.38 (8, 9Н). Μ8 т/ζ 646 (М+1).

Стадия Б. Метил-5-[6-(4-пиперидинилокси)-1Н-бензимидазол-1 -ил]-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил) фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат

- 35 014111

1,1-Диметилэтил-4-({1-[5-[(метилокси)карбонил] -4-({(1Я)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2тиенил]-1Н-бензимидазол-6-ил}окси)-1-пиперидинкарбоксилат (1,84 г, получен из другой партии с использованием методики, аналогичной методике из примера 5, стадия А, 2,85 ммоль) растворяли в 30 мл ИСМ при перемешивании и охлаждали до 0°С. Добавляли по каплям трифторуксусную кислоту (10,0 мл, 130 ммоль) через воронку для добавления. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч и добавляли по каплям 2н. раствор гидроксида натрия (60 мл) через воронку для добавления. Для доведения рН до щелочного значения использовали насыщенный водный раствор NаΗСОз. Смесь вливали в делительную воронку, и слои разделяли. Водный слой промывали один раз ИСМ и один раз диэтиловым эфиром. Объединенные органические слои сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка флэш-хроматографией давала 1,37 г (88%) соединения, указанного в заголовке. 'Н ЯМР (400 МГц, ИМ8О-к₆): δ 8.42 (к, 1Н), 7.95 (к, 1= 7,9 Гц, 1Н), 7.78-7.67 (т, 2Н), 7.61 (к, 1= 8,6 Гц, 1Н), 7.61 (т, 1Н), 7.30 (к, 1Н), 7.05 (к, 1=2,2 Гц, 1Н), 6.97 (кк, 1=8,8, 2,2 Гц, 1Н,), 5.96 (ф 1=6,1 Гц, 1Н), 4.41 (т, 1Н), 3.80 (к, 3Н), 2.97-2.88 (т, 2Н), 2.59-2.49 (т, 2Н), 1.92-1.83 (т, 2Н), 1.63 (к, 1=6,1 Гц, 3Н), 1.51-1.38 (т, 2Н). М8 т/ζ 546 (М+1).

Стадия В. 5-[6-(4-Пиперидинилокси)-1Н-бензимидазол-1 -ил]-3 -({(1Я)-1-[2-(трифторметил)фенил] этил } окси)-2 -тиофенкарбоксамид

Метил-5-[6-(4-пиперидинилокси)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-({(1Я)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил} окси)-2-тиофенкарбоксилат (0,154 г, 0,282 ммоль) растворяли в 7н. аммиаке в МеОН (12,0 мл, 84,0 ммоль) в герметично закрытой пробирке и нагревали до 80°С в течение 2 суток. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Очистка флэш-хроматографией давала 0,129 г (86%) соединения, указанного в заголовке. ¹Н ЯМР (400 МГц, ИМ8О-к₆): δ 8.34 (к, 1Н), 7.91 (к, 1=8,0 Гц, 1Н), 7.81 (Ьг к, 1Н), 7.78-7.70 (т, 2Н), 7.61 (к, 1=8,4 Гц, 1Н), 7.53 (т, 1Н), 7.12 (Ьг к, 1Н), 7.03 (к, 1Н), 7.00-6.93 (т, 2Н,), 5.94 (ф 1=6,2 Гц, 1Н), 4.44 (т, 1Н), 3.03-2.94 (т, 2Н), 2.70-2.61 (т, 2Н), 1.96-1.86 (т, 2Н), 1.72 (к, 1=6,2 Гц, 3Н), 1.59-1.46 (т, 2Н). М8 т/ζ 531 (М+1).

Пример 6. 3-{[(1Я)-1-(2-Хлорфенил)этил]окси}-5-[6-(4-пиперидинилокси)-1Н-бензимидазол-1-ил]2-тиофенкарбоксамид

Стадия А. 1,1-Диметилэтил-4-[(1-{4-{[(1Я)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-[(метилокси)карбонил]-2тиенил}-1Н-бензимидазол-6-ил)окси]-1 -пиперидинкарбоксилат

Метил-3-{[(1Я)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-(6-гидрокси-1Н-бензимидазол-1-ил)-2-тиофенкарбоксилат (2,00 г, 4,66 ммоль), трифенилфосфин (4,89 г, 18,6 ммоль) и трет-бутил-4-гидрокси-1пиперидинкарбоксилат (1,88 г, 9,34 ммоль) растворяли в ИСМ (50 мл) при перемешивании и охлаждали до 10°С. Добавляли по каплям через шприц диизопропилазодикарбоксилат (1,84 мл, 9,35 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин и оставляли нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч и адсорбировали на силикагеле. Очистка флэшхроматографией давала соединение, указанное в заголовке, наряду с небольшими количествами примеси.

- 36 014111 ¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О-й₆): δ 8.47 (8, 1Н), 7.70 (άά, 1Н, 1=1,6, 7,7 Гц), 7.64 (ά, 1Н, 1=8,8 Гц), 7.44-7.37 (т, 2Н), 7.34 (8, 1Н), 7.31 (т, 1Н,), 7.15 (ά, 1Н, 1=2,4 Гц), 7.01 (άά, 1Н, 1=2,2, 8,8 Гц), 5.97 (ф 1Н, 1=6,2 Гц), 4.59 (т, 1Н), 3.80 (8, 3Н), 3.65-3.56 (т, 2Н), 3.27-3.14 (т, 2Н), 1.92-1.81 (т, 2Н), 1.60 (ά, 3Н, 1=6,2 Гц), 1.60-1.47 (т, 2Н), 1.38 (8, 9Н); М8 (Ε8Ι): 612 [М+Н]⁺.

Стадия Б. Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-[6-(4-пиперидинилокси)-1Н-бензимидазол1-ил]-2-тиофенкарбоксилат

1,1-Диметилэтил-4-[(1-{4-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-[(метилокси)карбонил]-2-тиенил}1Н-бензимидазол-6-ил)окси]-1-пиперидинкарбоксилат растворяли в ЭСМ (60 мл) и охлаждали до 0°С. Добавляли по каплям трифторуксусную кислоту (15,0 мл, 195 ммоль) через воронку для добавления. Реакционную смесь перемешивали в течение 1,5 ч и добавляли по каплям 2н. раствор гидроксида натрия (88 мл) через воронку для добавления. Для доведения рН до ~8 использовали насыщенный водный раствор NаНСОз. Смесь вливали в делительную воронку и слои разделяли. Водный слой промывали ОСМ (3х) и ЕЮАс (1х). Объединенные органические слои сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка флэш-хроматографией давала 1,95 г (82% за 2 стадии) соединения, указанного в заголовке. Ή ЯМР (400 МГц, ПМ8О^₆): δ 8.46 (8, 1Н), 7.71 (άά, 1Н, 1= 1,7, 7,7 Гц), 7.62 (ά, 1Н, 1=8,8 Гц), 7.46-7.38 (т, 2Н), 7.35 (8, 1Н), 7.32 (т, 1Н,), 7.09 (ά, 1Н, 1=2,2 Гц), 6.97 (άά, 1Н, 1=2,2, 8,8 Гц), 5.97 (ф 1Н, 1=6,2 Гц), 4.42 (т, 1Н), 3.80 (8, 3Н), 2.96-2.88 (т, 2Н), 2.58-2.49 (т, 2Н), 1.93-1.84 (т, 2Н), 1.60 (ά, 3Н, 1=6,2 Гц), 1.51-1.39 (т, 2Н); М8 (Ε8Ι): 512 [М+1]⁺.

Стадия В. 3-{[(1К)-1-(2-Хлорфенил)этил]окси}-5-[6-(4-пиперидинилокси)-1Н-бензимидазол-1-ил]2-тиофенкарбоксамид

Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-[6-(4-пиперидинилокси)-1Н-бензимидазол-1-ил]-2тиофенкарбоксилат (0,150 г, 0,293 ммоль) растворяли в 7 н. аммиаке в МеОН (12,0 мл, 84,0 ммоль) в герметично закрытой пробирке и нагревали до 80°С в течение 48 ч. Раствор концентрировали и повторно загружали в него свежий 7н. аммиак в МеОН (12,0 мл, 84,0 ммоль) и нагревали до 110°С в течение 72 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Очистка флэшхроматографией давала 0,126 г (87%) соединения, указанного в заголовке. ¹Н ЯМР (400 МГц, ЭМ8ОМ₆): δ 8.38 (8, 1Н), 7.79 (Ьг 8, 1Н), 7.66 (άά, 1Н, 1=1,6, 7,7 Гц, 1Н), 7.61 (ά, 1Н, 1=8,8 Гц), 7.45 (άά, 1Н, 1=1,3, 7,8 Гц), 7.40 (т, 1Н), 7.84 (т, 1Н), 7.11 (8, 1Н), 7.11 (Ьг 8, 1Н,), 7.01 (ά, 1Н, 1=2,2 Гц), 6.96 (άά, 1Н, 1=2,3, 8,7 Гц), 5.98 (ф 1Н, 1=6,2 Гц), 4.41 (т, 1Н), 2.98-2.89 (т, 2Н), 2.62-2.53 (т, 2Н), 1.94-1.84 (т, 2Н), 1.70 (ά, 3Н, 1=6,2 Гц), 1.54-1.40 (т, 2Н); М8 (Ε8Ι): 497 [М+Н]⁺.

Пример 7. 5-{6-[(1-Метил-4-пиперидинил)окси]1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксамид

Стадия А. Метил-5-{6-[(1-метил-4-пиперидинил)окси]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат

Метил-5-[6-(4-пиперидинилокси)-1Н-бензимидазол-1-ил]-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил)фенил]

- 37 014111 этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат (0,200 г, 0,367 ммоль) растворяли в БСМ (4 мл) и МеОН (2 мл). Добавляли через шприц уксусную кислоту (0,025 мл, 0,44 ммоль) и формальдегид (0,055 мл, 37% в воде, 0,74 ммоль). Добавляли одной порцией натрия триацетоксиборгидрид (0,117 г, 0,552 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч и гасили насыщенным раствором NаНСОз. Смесь вливали в БСМ и наполовину насыщенный водный NаНСОз. Слои разделяли, и водный слой промывали БСМ (3х) и ЕЮЛс (1х). Объединенные органические слои сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка флэш-хроматографией давала 0,150 г (73%) соединения, указанного в заголовке. ¹Н ЯМР (400 МГц, БМ8О-й₆): δ 8.43 (8, 1Н), 7.96 (й, 1=7,7 Гц, 1Н), 7.78-7.68 (т, 2Н), 7.62 (й, 1=9,0 Гц, 1Н), 7.51 (т, 1Н), 7.32 (8, 1Н), 7.06 (Ьг 8, 1Н), 6.98 (т, 1Н,), 5.97 (ц, 1=6,0 Гц, 1Н), 4.41 (т, 1Н), 3.80 (8, 3Н), 3.26 (8, 3Н), 2.52-2.43 (т, 2Н), 2.27-2.11 (т, 2Н), 1.98-1.85 (т, 2Н), 1.73-1.60 (т, 2Н), 1.62 (й, 1=6,0 Гц, 3Н). М8 (Е8Т): 560 [М+Н]⁺.

Стадия Б. 5-{6-[(1-Метил-4-пиперидинил)окси]-1Н-бензимидазол-1-ил}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил) фенил] этил } окси)-2-тиофенкарбоксамид

Метил-5-{6-[( 1 -метил-4-пиперидинил)окси]-1Н-бензимидазол-1 -ил}-3-({(1К)-1-[2-(трифторметил) фенил]этил}окси)-2-тиофенкарбоксилат (0,148 г, 0,264 ммоль) растворяли в 7 н. аммиаке в МеОН (12,0 мл, 84,0 ммоль) в герметично закрытой пробирке и нагревали до 80°С в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Очистка флэш-хроматографией давала 0,138 г (96%) соединения, указанного в заголовке. ¹Н ЯМР (400 МГц, БМ8О-й₆): δ 8.35 (8, 1Н), 7.92 (й, 1=7,7 Гц, 1Н), 7.82 (Ьг 8, 1Н), 7.80-7.71 (т, 2Н), 7.64-7.51 (т, 2Н), 7.12 (Ьг 8, 1Н), 7.06 (8, 1Н), 6.996.94 (т, 2Н,), 5.95 (ц, 1=6,2 Гц, 1Н), 4.36 (т, 1Н), 2.64-2.53 (т, 2Н), 2.23-2.11 (т, 2Н), 2.17 (8, 3Н), 1.941.84 (т, 2Н), 1.73 (й, 1=6,2 Гц, 3Н), 1.71-1.57 (т, 2Н). М8 (Е8Т): 545 [М+Н]⁺.

Пример 8. 3-{[(1К)-1-(2-Хлорфенил)этил]окси}-5-(6-[(1-метил-4-пиперидинил)окси]-1Н-бензимидазол-1-ил}-2-тиофенкарбоксамид

Стадия А. Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-{6-[(1-метил-4-пиперидинил)окси]-1Нбензимидазол-1 -ил}-2-тиофенкарбоксилат

Метил-3-{[(1К)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-[6-(4-пиперидинилокси)-1Н-бензимидазол-1-ил]-2тиофенкарбоксилат (0,260 г, 0,508 ммоль) растворяли в БСМ (4 мл) и МеОН (2 мл). Добавляли через шприц уксусную кислоту (0,035 мл, 0,61 ммоль) и формальдегид (0,076 мл, 37% в воде, 1,0 ммоль). Добавляли одной порцией натрия триацетоксиборгидрид (0,161 г, 0,760 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч и вливали в БСМ и наполовину насыщенный водный NаНСОз. Слои разделяли и водный слой промывали БСМ и ЕЮЛс. Объединенные органические слои сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка флэш-хроматографией давала 0,215 г (80%) соединения, указанного в заголовке. ^!Н ЯМР (400 МГц, БМ8О-й₆): δ 8.48 (8, 1Н), 7.73 (йй, 1Н, 1=1,8, 7,7 Гц), 7.63 (й, 1Н, 1=8,8 Гц), 7.47-7.40 (т, 2Н), 7.38 (8, 1Н), 7.34 (т, 1Н,), 7.12 (й, 1Н, 1=2,2 Гц), 6.99 (йй, 1Н, 1=2,2, 8,8 Гц), 5.98 (ц, 1Н, 1=6,2 Гц), 4.41 (т, 1Н), 3.80 (8, 3Н), 2.65-2.54 (т, 2Н), 2.24-2.13 (т, 2Н), 2.17 (8, 3Н), 1.971.87 (т, 2Н), 1.72-1.61 (т, 2Н), 1.62 (й, 3Н, 1=6,2 Гц); М8 (ЕЗЦ: 526 [М+Н]⁺.

Стадия Б. 3-{ [(1К)-1-(2-Хлорфенил)этил]окси}-5-{6-[(1-метил-4-пиперидинил)окси]-1Н-бензимидазол-1-ил}-2-тиофенкарбоксамид

- 38 014111

Метил-3-{[(1Я)-1-(2-хлорфенил)этил]окси}-5-{6-[(1-метил-4-пиперидинил)окси]-1Н-бензимидазол1-ил}-2-тиофенкарбоксилат (0,214 г, 0,407 ммоль) растворяли в 7 н. аммиаке в МеОН (12,0 мл, 84,0 ммоль) в герметично закрытой пробирке и нагревали до 80°С в течение 2,5 суток. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Очистка флэш-хроматографией давала 0,208 г (100%) соединения, указанного в заголовке. 'Н ЯМР (400 МГц, БМ8О-б₆): δ 8.39 (8, 1Н), 7.80 (Ьг 8, 1Н), 7.67 (бб, 1Н, 1=1,5, 7,6 Гц), 7.62 (б, 1Н, 1=8,6 Гц), 7.45 (ш, 1Н), 7.41 (ш, 1Н), 7 34 (ш, 1Н), 7.13 (8, 1Н), 7.11 (Ьг 8, 1Н), 7.02 (б, 1Н, 1=2,0 Гц), 6.97 (бб, 1Н, 1=2,2, 8,8 Гц), 5.99 (ц, 1Н, 1=6,2 Гц), 4.37 (ш, 1Н), 2.63-2.53 (ш, 2Н), 2.22-2.14 (ш, 2Н), 2.17 (8, 3Н), 1.95-1.86 (ш, 2Н), 1.71 (б, 3Н, 1=6,2 Гц), 1.701.59 (ш, 2Н); М8 (Ε8Ι): 511 [М+Н]⁺.

Сравнительные примеры

Сравнительные примеры номер 121, 126, 127, 136 и 143 можно получить, используя способы, известные в данной области, включая способы, описанные в публикации РСТ \УО 2004/014899, 8шйРК1те ВеесРаш Согр.__

Номер	Структура
121	А \5
126
127	Н,С д А. Н,СХ°
136	О—*\. 7° ДЪ
143	V

Биологические примеры

I. Анализ ингибирования РЬК1.

А. Получение домена РЬК киназы с 6х Ν-концевой Н18 меткой.

Домен РЬК киназы с 6х Ν-концевой Н18 меткой (аминокислоты 21-346, затем МККСННННННБ) 8ΕΟ ΙΌ: Νο. 1 получали из клеток Т. ηί, инфицированных бакуловирусом, под контролем промотора полиэдрина. Все процедуры проводили при 4°С. Клетки лизировали в 50 мМ НЕРЕ8, 200 мМ №С1, 50 мМ имидазоле, 5%-ном глицерине; рН 7,5. Гомогенат центрифугировали при 14000 об./мин в роторе 8ЬЛ1500 в течение 1 ч и супернатант фильтровали через фильтр 1,2 мкм. Супернатант загружали в колонку с

- 39 014111 никель-хелатированной сефарозой (Атегайат Рйагтааа) и промывали буфером для лизиса. Белок элюировали, используя стадии с 20%-ным, 30%-ным и 100%-ным буфером Б, где буфер Б представляет собой 50 мМ НЕРЕ8, 200 мМ ЫаС1, 300 мМ имидазол, 5%-ный глицерин; рН 7,5. Фракции, содержащие РЬК, определяли посредством 8Ό 8-РАСЕ (электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия). Фракции, содержащие РЬК, разбавляли в пять раз 50 мМ НЕРЕ8, 1 мМ ΌΤΤ (дитиотреитол), 5% глицерина; рН 7,5, затем загружали на колонку 8Р 8ерйаго8е (Атегайат Рйагтааа). После промывания колонки 50 мМ НЕРЕ8, 1 мМ ΌΤΤ, 5% глицерина; рН 7,5, РЬК ступенчато элюировали 50 мМ НЕРЕ8, 1 мМ ΌΤΤ, 500 мМ ЫаС1, 5%-глицерина; рН 7,5. РЬК концентрировали с использованием мембраны с порогом отсечения молекулярной массы 10 кДа и затем загружали на гель-фильтрационную колонку с 8ирегБех 200 (Атегайат Рйагтааа), уравновешенную в 25 мМ НЕРЕ8, 1 мМ ΌΤΤ, 500 мМ ЫаС1, 5% глицерина; рН 7,5. Фракции, содержащие РЬК, определяли посредством 8Э8-РАСЕ. РЬК объединяли, разделяли на аликвоты и хранили при температуре -80°С. Качество проб контролировали с использованием масс-спектрометрии, Ν-концевого секвенирования и аминокислотного анализа.

Б. Ферментативную активность +/- ингибиторы определяли следующим образом.

Все измерения получали в условиях, когда образование сигнала линейно возрастало в зависимости от времени и фермента. Тестируемые соединения добавляли в белые 384-луночные планшеты для анализа (0,1 мкл для 10 мкл и некоторых 20 мкл анализов, 1 мкл для некоторых 20 мкл анализов) в варьирующих известных концентрациях в 100%-ном ΌΜ8Ο (диметилсульфоксид). ΌΜ8Ο (конечное содержание 1-5%, как это целесообразно) и Е^ΤА (этилендиаминтетрауксусная кислота) (65 мМ в реакционной смеси) использовали в качестве контролей. Реакционную смесь готовили при 22°С следующим образом:

мМ НЕРЕ8, рН 7,2;

мМ Μβί,’Ε;

мкМ АТФ (аденозинтрифосфат);

0,05 мкКи/лунку ³³Р-у АТФ (10 Ки/ммоль);

мкМ субстратного пептида (Έиотин-А11x-8ΕN^Τ^^Ε^) 8Е0 ΙΌ:Νο. 2;

0,15 мг/мл В8А (бычий сывороточный альбумин);

мМ ΌΤΤ (дитиотреитол);

нМ домена киназы РЬК1 (добавлен в последнюю очередь).

Реакционную смесь (10 или 20 мкл) быстро добавляли в каждую лунку немедленно после добавления фермента посредством автоматических жидкостных манипуляторов и инкубировали в течение 1-1,5 ч при 22°С. 20-мкл ферментативные реакции останавливали 50 мкл останавливающей смеси (50 мМ Е^ΤА, 4,0 мг/мл 8РА шариков, покрытых стрептавидином, в стандартном РВ8 (фосфатный буферный солевой раствор) Дульбекко (без Μ§²⁺ и Са²⁺), 50 мкМ АТФ) на лунку. 10 мкл реакции останавливали 10 мкл останавливающей смеси (50 мМ Е^ΤА, 3,0 мг/мл визуализирующих шариков 8РА, связанных со стрептавидином (ЬеаБ8еекег), в стандартном РВ8 Дульбекко (без Μ§²⁺ и Са²⁺), 50 мкМ АТФ) на лунку. Планшеты герметично закрывали прозрачными пластиковыми покрытиями, центрифугировали при 500/д в течение 1 мин или давали им отстояться в течение ночи и проводили счет радиоактивности на РаскагБ Τορί,'οιιηΙ в течение 30 с/лунку (обычный 8РА) или визуализировали с использованием установки для визуализации У1еМих (ЬеаБ8еекег 8РА). Сигнал, превышающий фон (контроли с Е^ΤА), превращали в процент ингибирования по отношению к значениям, полученным в контрольных (только с ΌΜ8Ο) лунках.

В. Результаты.

Данные представлены в табл. 1 ниже. В табл. 1, +=р1С₅₀ <6; ++=р1С₅₀ 6-8; +++=р1С₅₀ >8.

II. Анализ ингибирования роста с метиленовым синим - ингибирование пролиферации клеток ингибиторами РЬК1.

В общем случае линии клеток в экспоненциальной фазе роста, происходящие из разных опухолей, культивируемые в подходящих средах, содержащих 10%-ную телячью плодную сыворотку, при 37°С в инкубаторе с 5% СО2, помещали с низкой плотностью (менее 2000 клеток/лунку) в 96-луночные планшеты. Через двадцать четыре часа после перемещения клетки обрабатывали разными концентрациями тестируемых соединений в диапазоне от 10 мкМ до 0,04 нМ. Несколько лунок оставляли необработанными в качестве контроля. Через семьдесят два часа после обработки определяли число клеток с использованием 100 мкл на лунку метиленового синего (8щта Μ9140) (0,5% в смеси 50:50 этанол:вода). Краситель инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем промывали планшеты и солюбилизировали краситель в 1%-ной натриевой соли Ν-лауроилсаркозина (81дта Ь5125, в РВ8) (дополнительные подробности анализа с метиленовым синим описаны ниже). Планшеты считывали на считывающем устройстве для микропланшетов, измеряя ΟΌ (оптическая плотность) при 620 нм.

Процент ингибирования роста клеток выражали как процент пролиферации по отношению к 100%ной пролиферации (контроль). Концентрацию тестируемого соединения, которая ингибировала рост клеток на 50% (1С₅₀), определяли аппроксимацией данных с 4 параметрами, используя ХЬ1й (значение бесклеточного контроля вычитали из всех проб для учета фона). Данные показаны в табл. 1 ниже и являются компиляцией данных нескольких разных экспериментов, каждый из которых проводили с использовани

- 40 014111 ем общих параметров, описанных выше, хотя в некоторых примерах могли использоваться незначительные вариации.

В одном анализе нормальные человеческие фибробласты крайней плоти (НЕЕ), линии опухолевых клеток толстой кишки (НСТ116, ВКО), легкого (Н460, А549) и молочной железы (МСЕ7) человека культивировали в ЭМЕМ (среда Игла, модифицированная по Дульбекко) с высоким содержанием глюкозы (ЫЕе Тес11по1од1С5). содержащей 10% телячьей плодной сыворотки (ЕВ8), при 37°С во влажном инкубаторе с 5% СО₂, 95% воздуха. Клетки собирали, используя трипсин/ЕОТА, подсчитывали, используя гемоцитометра, и помещали в 100 мкл культуральной среды на лунку со следующими плотностями в 96луночном планшете для культуры ткани (Еа1соп 3075): НЕЕ - 5000 клеток/лунку, НСТ116 - 3000 клеток/лунку, ВКО - 2500 клеток/лунку, Н460 - 2500 клеток/лунку, А549 -5000 клеток/лунку, МСЕ - 4000 клеток/лунку. На следующие сутки соединения разбавляли ЭМЕМ с низким содержанием глюкозы, содержащей 100 мкг/мл гентамицина, из 10 мМ маточных растворов в ЭМ8О до концентрации, в два раза превышающей конечную требующуюся концентрацию. 100 мкл/лунку этих разведений добавляли к 100 мкл сред, уже находящихся в планшетах для анализа. В контрольные лунки добавляли среду, содержащую 0,6% ЭМ8О. Конечная концентрация ЭМ8О во всех лунках составляла 0,3%. Клетки инкубировали при 37°С с 5% СО₂ в течение 72 ч. Среду удаляли отсасыванием. Клеточную биомассу оценивали путем окрашивания клеток 80 мкл на лунку метиленового синего (81дта М9110, 0,5% в смеси 50:50 этанол:вода) и инкубируя при комнатной температуре в течение 30-60 мин. Краситель удаляли отсасыванием и планшеты промывали погружением в воду, затем сушили на воздухе. Для высвобождения красителя из клеток добавляли 100 мкл солюбилизирующего раствора (1%-ный Ν-лауроилсаркозин, натриевая соль, 8щта Ь5125, в РВ8) и аккуратно встряхивали планшеты в течение примерно 30 мин. Оптическую плотность при 620 нм измеряли на считывающем устройстве для микропланшетов. Процент ингибирования клеточного роста рассчитывали относительно контрольных лунок, обработанным носителем. Концентрацию соединения, которая ингибирует рост клеток на 50% (1С₅₀), интерполировали с использованием нелинейной регрессии (Левенберга-Маркара) и уравнения: у=У_тах*(1-(х/(К+х)))+У2, где К был равен 1С₅₀.

Данные представлены в табл. 1, приведенной ниже. В табл. 1+=1С₅₀>1 мкМ; ++=1С₅₀ 0,1-1 мкМ; +++=р1С₅₀<0,1 мкМ.

III. Определение связывания белка с белками плазмы человека с использованием равновесного диализа.

96-Луночный планшет (высокопроизводительный диализ): маточные растворы соединений добавляли в человеческую плазму в целевой концентрации 2000 нг/мл. Смесь аккуратно переворачивали несколько раз для обеспечения гомогенности, и отбирали 50 мкл аликвоты в трех параллелях для проверки исходных концентраций. После сборки диализного планшета (полоски мембраны НТП1а1у515, предел отсечения молекулярной массы 12000-14000 Да) в донорное отделение лунки помещали плазму с добавленным соединением (150 мл) и в приемное отделение помещали фосфатный буферный солевой раствор, рН 7,4 (150 мкл). Готовили восемь лунок на соединение и тип плазмы. Планшет помещали в инкубатор при 37°С на шейкере для планшета. После 6-часового инкубационного периода планшет извлекали. Анализировали одиночные 50 мкл аликвоты из каждого донорного и акцепторного компартмента (на лунку). Анализ проб проводили ЖХ/М8/М8 (результаты представлены как отношения площадь пика лекарственного средства/площадь пика внутреннего стандарта). Анализ связывания белка также может быть проведен с использованием диализных ячеек вместо НТ 96-луночных планшетов для диализа. Данные представлены в табл. 1 ниже. В табл. 1, % связывания белка, +=>98%; ++=95-98%; +++=<95%.

IV. Высокопроизводительный анализ растворимости.

Для каждого соединения готовили две пробы. Одна (стандартная проба) содержит соединение в фиксированной концентрации 20 мкМ в смешанном коктейле водных/органических растворителей. Другая (тестируемая проба) содержит соединение в максимальной концентрации 200 мкМ в 0,05 М фосфатном буфере, рН 7,4; ее встряхивали в течение 24 ч. Тестируемую пробу фильтруют через 0,45 мкм фильтр и затем центрифугируют в течение 10 мин для удаления любого не растворившегося твердого вещества. На этих пробах проводят анализы ВЭЖХ. Для расчета растворимости использовали площади пиков. Данные представлены в табл. 1 ниже. В табл. 1, растворимость, +=<30 мкМ; ++=30-100 мкМ; +++=>100 мкМ.

- 41 014111

Таблица 1

№ примера	ΡίΚΙ рЮя	НСТ116 1Сзд (мкМ)	Н460 1Сво (мкМ)	МСР7 (мкМ)	А549 1СЮ (мкМ)	нко 1Свд (мкМ)	НРР Юно (мкМ)	% связывания белка	Растворимость (мкМ)
1	+++	+++	+++	+++	+++	+++	++	++	++
2	+++	+++	+++	+++	+++	+++	++	++	++
3	+++	+++	+++	+++	+++	+++	+++	>++	+++
4	+++	+++	+++	+++	+++	+++	+++	но	+++
5	+++	+++	+++	+++	+++	+++	++	++	+++
6	+++	+++	+++	но	+++	+++	++	+++	+++
7	+++	+++	+++	+++	+++	++ +	++	+++	+++
8	+++	+++	+++	но	+++	+++	+++	+++	+++
Сравн. прим. 127	+++	++	+++	++	+++	+++	+		+
Сравн. прим. 126		+++	+++	+	+++	+++	++	+	но
Сравн. прим. 121		+		+	+	+	+	++	но
Сравн. прим. 136	++	++	++	++	но	++	+	+++	но
Сравн. прим. 143	++	++	+	++	+	++	+	+++	+

НО: не определено

Табл. 1 показывает, что заявленные соединения обладают лучшими свойствами по сравнению с протестированными сравнительными примерами. Например, соединения из примеров 1-8 имеют лучшую ферментативную и клеточную активность относительно сравнительных примеров 121, 136 и 143 в РЬК1ферментативном анализе и в анализе пролиферации клеток с метиленовым синим во многих исследованных линиях клеток. Соединения из примеров 1-8 имеют лучшую растворимость в 0,05 М фосфатном буфере с рН 7,4 относительно сравнительного примера 127. Соединения из примеров 1-3 и 5-8 имеют лучшее связывание белка в человеческой сыворотке, определенное посредством анализа с использованием равновесного диализа относительно сравнительного примера 126 и 127.

V. Се11ТПег-01о - Ингибирование пролиферации клеток ингибиторами РЬК1.

Линии клеток в экспоненциальной фазе роста, происходящие из разных опухолей, культивированные в подходящих средах, содержащих 10%-ную телячью плодную сыворотку, при 37°С в инкубаторе с 5% СО₂, переносили в 96-луночные планшеты с низкой плотностью (менее 2000 клеток/лунку). Через двадцать четыре часа после перенесения клетки обрабатывали разными концентрациями тестируемых соединений в интервале от 10 мкМ до 0,04 нМ. Несколько лунок оставляли необработанными в качестве контроля. Через семьдесят два часа после обработки определяли число клеток с использованием 50-100 мкл на лунку Се11ТПег-01о (Рготеда #07573). Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин и хемилюминесцентный сигнал считывали на ридере ^с1ог V или Епу18юп 2100.

Процент ингибирования роста клеток выражали как процент пролиферации по отношению к 100%ной пролиферации (контроль). Концентрацию тестируемого соединения, которая ингибировала рост клеток на 50% (1С₅₀), определяли аппроксимацией данных с 4 параметрами, используя ХЬ1й (значение бесклеточного контроля вычитали из всех проб для учета фона). Данные Се11-ТПег 01о показаны в табл. 2, приведенной ниже, и представляют собой компиляцию данных из нескольких разных экспериментов, каждый из которых проводили с использованием основных параметров, описанных выше, хотя в некоторых примерах могли использоваться незначительные вариации. В табл. 2, +=1С₅₀ >1 мкМ; ++=1С₅₀ 0,5-1 мкМ; +++=1С₅₀ <0,5 мкМ.

- 42 014111

Таблица 2

Линия клеток	Пр 1	Пр 2	Пр 3	Пр 4	Пр 5	Пр 6	Пр 7	Пр 8
НСТ116 ю60	НО	но	+++	НО		но	но	но
А5494.1См	НО	но	+++	НО	+++	но	но	но
СОД02051СИ	но	но	+++	но	+++	но	но	но
НТ291СЮ	но	но	+++	но	+++	но	но	но
МХ-1 (Са0	но	но	+++	но	+++	но	но	но
5КОУ-3 (Сю	но	но	+++	но	+++	но	но	но
бЫСаР 1СИ	но	но	+++	но	но	но	но	но
Р388 (См	но	но	+++	но	но	но	но	но
Н12991С60	но	но	+++	ЙО	+++	но	но	но
Нв(а 1С$о	но	но	++*	ЙО	но	но	но	но
НЫ51С»	но	но	+++	но	но	но	Й0	но
МСР7 ГСм	но	но	+Ή»	но	+-Н-	но	но	но
МУ522 (См	но	но		но	+Ή·	но	но	но
ΜϋΑ-ΜΒ-468 1См	но	но	+++	но	+++	но	но	но
РАНС-1 1СИ	но	но	+++	но	но	но	но	но
М1аРаса 1СВ(1	но	но	+++	но	но	но	но	но
АЗРСЗ (См	но	но	+++	но	но	но	но	но
ВХРСЗ 1СЮ	но	но	+++	но	но	но	но	но

Перечень последовательностей <110> Корпорация 5ттСЬК1тпе ВеесЬат <120> БЕНЗИМИДАЗОЛТИОФЕНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ <130> РК61603 <150> 60/714,337 <151> 2005-09-06 <150> 60/786,244 <151> 2006-03-27 <160> 2 <170> ГазБЗЕС для Ишйоиз Версия 4.0 <210> 1 <211> 11 <212> РКТ <213> клетки Τ.ηι, инфицированные бакуловирусом <400 1

Меб Дув Дуз С1у Нтз Нтз Нтз Нтз Нтз Н1з Азр

10 <210> 2 <211> 9 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Оптимизированный РДК пептидный субстрат <400> 2

Зег РЬе Азп Азр ТЬг Деи Азр РЬе Азр

5

Claims (5)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение
2. 2. Фармацевтически приемлемая соль соединения сн₃
3. 3. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.1 или соль по п.2 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.
4. 4. Фармацевтическая композиция по п.3, где указанная композиция энантиомерно обогащена изображенным К-изомером по отношению к соответствующему 8-изомеру.
5. 5. Фармацевтическая композиция по п.3, где указанная композиция содержит по меньшей 90 мас.% изображенного К-изомера по отношению к соответствующему 8-изомеру.

   Евразийская патентная организация, ЕАПВ

   Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2