EA012754B1 - Усовершенствованный тестостероновый гель и способ его применения - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение касается усовершенствованной композиции чрескожного водно-спиртового тестостеронового геля, обеспечивающего, среди прочего, желаемый фармакокинетический гормональный профиль, и способов его использования.

Description

Данная заявка притязает на приоритет предварительной заявки на патент США № 60/725276, поданной 12 октября 2005 г., полное содержание которой включается в настоящее изобретение путем отсылки.

Уровень техники

Тестостерон, являющийся основным циркулирующим в кровяном русле мужским половым гормоном у мужчин, синтезируется из холестерола. Из 6-7 мг тестостерона, образующихся в организме за сутки, более 95% секретируют приблизительно 500 млн клеток Лейдига яичек. Для развития и поддержания функции яичек необходимы два гормона гипофиза - лютеинизирующий гормон (ЬН) и фолликулостимулирующий гормон (Е8Н). Находящийся в кровотоке тестостерон в ходе метаболизма превращается в 17-кетостероиды двумя различными путями. Тестостерон может превращаться в дигидротестостерон (ΌΗΤ) при участии фермента 5-альфа-редуктазы либо в эстрадиол (Е₂) при участии ферментного комплекса ароматазы.

В кровотоке тестостерон на 98% связан с белками. У мужчин приблизительно 40% связанного с белками тестостерона находится в комплексе с белком 8НВС (глобулин, связывающий половые гормоны с высоким сродством). Остальные 60% связанного тестостерона образуют непрочный комплекс с альбумином. В связи с этим в клинических лабораториях имеется ряд методов определения тестостерона. Термин «свободный тестостерон», как он здесь используется, относится к той части содержащегося в кровотоке тестостерона, которая не связана с белками. Термин «общий тестостерон» или просто «тестостерон» здесь означает суммарное содержание тестостерона: свободный плюс связанный с белками. Термин «биодоступный тестостерон» здесь относится к тестостерону, не связанному с 8НВО, и включает тестостерон, слабо связанный с альбумином.

В следующей табл. 1 от Медицинского центра Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе Харбор суммированы данные о нормальных концентрациях гормонов у взрослых мужчин.

Таблица 1

Нормальные уровни гормонов у мужчин

Гормон	Нормальный диапазон
Тестостерон (Т)	298-1043 нг/дл
Свободный тестостерон	3,5-17,9 нг/дл
Дигидротестостерон (ОН Г)	31-193 нг/дл
Отношение ОНТ/Т	0,052-0,33
ΏΗΤ+Τ	372-1349 нг/дл
8НВО	10,8-46,6 нмоль/л
Фолликулостимулирующий гормон (Р8Н)	1,0-6,9 млЕ/мл
Лютеинизирующий гормон (ЬН)	1,0-8,1 млЕ/мл
Эстрадиол (Е2)	17,1-46,1 пг/мл

По литературным данным период полужизни тестостерона значительно варьирует: от 10 до 100 мин. Однако исследователи согласны в том, что у здоровых молодых мужчин содержание тестостерона в кровотоке подвержено суточным изменениям. Максимальный уровень отмечается приблизительно между 6 и 8 ч утра, затем на протяжении дня концентрация гормона снижается. В типичном гормональном профиле максимальный уровень 720 нг/дл, минимальный - 430 нг/дл. Физиологическое значение этих суточных изменений неясно.

Мужской гипогонадизм бывает в результате различных патофизиологических состояний, при которых концентрация тестостерона понижена за пределы нормального диапазона. Иногда пониженная активность половых желез связана с рядом физиологических изменений: ослабленное либидо, импотенция, недостаточная тощая масса тела, пониженная плотность костной ткани, депрессивные состояния, пониженная общая активность.

Обычно, классифицируя гипогонадизм, выделяют три типа. Первичный гипогонадизм включает недостаточность функции яичек из-за их врожденного или приобретенного отсутствия (анорхия); синдромы, связанные с наличием лишней Х- либо Υ-хромосомы (ΧΥΧ, 46ХХ); синдром Нунана; дисгенезия половых желез; опухоли, происходящие из клеток Лейдига; неопущение или недостаточное опущение яичек; синдром Дель-Кастельо (наличие только клеток Сертоли); крипторхизм; двусторонний перекрут; мигрирующее яичко; орхиэктомия; синдром Клайнфельтера; химиотерапия; токсическое поражение (алкоголизм или тяжелые металлы); системное заболевание (почечная недостаточность, цирроз печени, диабет, дистрофическая миотония). У больных с первичным гипогонадизмом не нарушен механизм обратной связи в том смысле, что низкие концентрации тестостерона в сыворотке крови ассоциированы с высокими концентрациями Е8Н и ЬН. Однако при недостаточности яичек или иных органов высокие концентрации ЬН неэффективны для стимуляции перегрузки тестостероном.

При вторичном гипогонадизме имеет место идиопатический дефицит гонадотропина или люлиберина (ЬН-рилизинг-гормона). Этот тип гипогонадизма включает синдром Каллмана, синдром ПрадераЛабхарта-Вилли, синдром Лоренса-Муна-Барде-Бидля, недостаточность и/или аденому гипофиза, син

- 1 012754 дром Паскуалине, гемохроматоз, гиперлактинемию, повреждение гипофиза-гипоталамуса в связи с опухолью, травмой, лучевым поражением или ожирением. Поскольку у больных с вторичным гипогонадизмом не наблюдается нормальной обратной связи, пониженные концентрации тестостерона не ассоциированы с повышенным уровнем ЬН или Р8Н. Таким образом, в этих случаях у мужчин низкие уровни тестостерона в сыворотке крови, а уровни гонадотропных гормонов нормальные либо низкие.

Гипогонадизм может быть связан с возрастом. У мужчин после 20-30 лет происходит медленное, но неуклонное снижение среднего уровня тестостерона в сыворотке крови. По оценкам исследователей, это снижение составляет около 1-2% в год. Одномоментные поперечные углубленные исследования показали, что у 50-летних мужчин средний уровень тестостерона составляет 75% от такового в 30 лет. Поскольку концентрация 8НВС в сыворотке крови у мужчин с возрастом увеличивается, уровни биодоступного и свободного тестостерона падают даже значительнее, чем общего тестостерона. По оценкам исследователей, примерно у 50% здоровых мужчин в возрасте 50-70 лет уровень биодоступного тестостерона ниже пределов нормального диапазона. Более того, по мере старения суточный ритм колебаний уровня тестостерона часто нивелируется или полностью исчезает. Основная связанная со старением проблема заключена, по-видимому, в системе гипофиз-гипоталамус. Например, обнаружено, что с возрастом уровни ЬН не увеличиваются, несмотря на низкие уровни тестостерона. Нелеченая недостаточность тестостерона у пожилых мужчин независимо от своей причины может приводить к разнообразным физиологическим изменениям, включая половую дисфункцию, понижение либидо, сокращение мышечной массы, понижение плотности костной ткани, плохое настроение, ослабление умственной деятельности. В результате развивается старческий гипогонадизм, обычно называемый мужским климаксом. На сегодняшний день гипогонадизм является самым распространенным среди мужчин гормональным дефицитом: он отмечается у 0,5% представителей мужского пола. В настоящее время, по оценкам, лишь 5% из 4-5 млн американцев всех возрастных групп с гипогонадизмом получают гормонозаместительную терапию, направленную на восстановление уровня тестостерона.

Раскрытие изобретения

Настоящее изобретение касается усовершенствованного состава чрескожного водно-спиртового геля с тестостероном, обеспечивающего, среди прочего, желательный фармакокинетический гормональный профиль, и способов его применения.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 - стандартизованная диаграмма Парето, демонстрирующая влияние изучаемых факторов (тестостерон, изопропилмиристат, этиловый спирт) на ответ переменная-вязкость.

Фиг. 2 - стандартизованная диаграмма Парето, демонстрирующая влияние изучаемых факторов (тестостерон, изопропилмиристат, этиловый спирт) на процент проникновения метки.

Фиг. 3 - стандартизованная диаграмма Парето, демонстрирующая влияние изучаемых факторов (тестостерон, изопропилмиристат, этиловый спирт) на отношении САК.

Фиг. 4 - рассчитанная поверхность отклика, иллюстрирующая ответ (отношение САК) для данной комбинации тестостерона и изопропилмиристата при содержании этилового спирта (95%-ного об./об.) 74,3% (мас./мас.).

Фиг. 5 - профили рассчитанной поверхности отклика, представленной на фиг. 4.

Фиг. 6 - график, показывающий суммарное количество высвободившегося тестостерона (САК) как функцию времени для различных композиций с тестостероном (Р57, Р58 и Р59) в сравнении с контрольной (Р56).

Фиг. 7 - график, показывающий суммарное количество проникающего тестостерона как функцию времени для композиции Р57.

Фиг. 8 - график, показывающий суммарное количество проникающего тестостерона как функцию времени для композиции Р58.

Фиг. 9 - график, показывающий суммарное количество проникающего тестостерона как функцию времени для композиции Р59.

Фиг. 10 - график, показывающий среднюю наблюдаемую концентрацию тестостерона в сыворотке крови в зависимости от времени в день 1.

Фиг. 11 - график, показывающий среднюю наблюдаемую концентрацию тестостерона в сыворотке крови в зависимости от времени в день 14.

Раскрытие изобретения

Хотя настоящее изобретение может быть воплощено во многих различных формах, здесь обсуждается лишь несколько специфических воплощений; однако, настоящее раскрытие следует рассматривать только как иллюстрацию примерами принципов настоящего изобретения, не ограничивающую данное изобретение описанными воплощениями.

Данное изобретение касается усовершенствованной композиции тестостеронового геля и способов его использования.

В одном своем воплощении данное изобретение обращено к способу чрескожного введения тестостерона в составе водно-спиртового геля. Этот гель содержит тестостерон (или производное тестостерона); один или более низших спиртов (этанол или изопропанол); агент, способствующий впитыванию

- 2 012754 препарата (изопропилмиристат); загуститель; воду. Кроме того, по настоящему изобретению он может (необязательно) включать соли, мягчители, стабилизаторы, антисептики, отдушки и пропелленты.

Настоящее изобретение также включает наборы, способы, составы и фармацевтические композиции для лечения, профилактики, обращения, остановки или замедления прогрессирования гипогонадизма или иных расстройств, связанных с низким уровнем тестостерона, в клинически явных случаях либо для лечения симптомов, ассоциированных с гипогонадизмом или расстройствами, связанными с низким уровнем тестостерона, или относящихся к ним. Пациенту на момент введения препарата уже может быть поставлен диагноз «гипогонадизм» и/или «низкий уровень тестостерона» либо для него есть риск их развития. Данное изобретение предназначено предпочтительно для взрослых людей старше 18 лет, более предпочтительно - старше 21 года.

Термином «производное» называют соединение, полученное из другого соединения сходной структуры путем замены или замещения одного атома (группы атомов, части молекулы) на другой (другую). Например, производное данного соединения может быть получено в результате замены атома водорода на алкил-, ацил-, амино- или иную группу.

Термин «низший спирт» (сам по себе или в сочетаниях) здесь означает молекулу или часть молекулы спирта, содержащую 1-6 атомов углерода, образующих линейную или же разветвленную цепь. В одном воплощении данного изобретения низший спирт содержит 1-4 атомов углерода, а в другом 2-3; примерами таких спиртовых молекул (частей молекулы) являются метанол, этанол, этанол И8Р (согласно Фармокопее США) (т.е. 95%-ный об./об.), н-пропанол, изопропанол, н-бутанол, изобутанол, втор- и третбутанол.

Термин «этанол» здесь относится к соединению с формулой С₂Н₅ОН. Это вещество может использоваться в виде спирта И8Р, обезвоженного спирта И8Р либо в любой из обычных форм, включая сочетания с различными количествами воды.

Композиции используются в «фармакологически эффективных количествах». Это означает, что концентрация лекарственного вещества, вводимого в составе композиции, обеспечивает терапевтический уровень данного вещества, поступившего в организм к концу курса лечения. Поступление лекарственного вещества в организм получающего лечение человека зависит от ряда переменных, включая продолжительность приема препарата, индивидуальную дозировку, скорость высвобождения лекарственного вещества из композиции (например, тестостерона из содержащего его геля), площадь обрабатываемой поверхности тела и др. Так, в случае тестостерона необходимое его количество можно определить экспериментально по скорости выхода гормона из геля (скорости движения в геле) и через кожу в присутствии и в отсутствие агентов, способствующих чрескожному проникновению.

В одном своем воплощении данное изобретение обращено к способу чрескожного введения тестостерона в составе водно-спиртового геля. Гель содержит один или более низших спиртов (этанол, изопропанол); агент, способствующий проникновению через кожу; загуститель; воду. В одном воплощении гель содержит несущий отрицательный заряд предшественник полимерного загущающего агента, нейтрализуемый компонентом, дающим гидроокись, например гидроокись натрия. Кроме того, по данному изобретению композиция может включать (необязательно) соли, мягчители, стабилизирующие агенты, антисептики, отдушки, пропелленты.

В способы и композиции по данному изобретению включены изомерные формы и таутомеры описанных соединений и их фармацевтически приемлемые соли. Примерами таких солей являются соли муравьиной, уксусной, пропионовой, янтарной, гликолевой, глюконовой, молочной, яблочной, винной, лимонной, аскорбиновой, глюкуроновой, малеиновой, фумаровой, пировиноградной, аспарагиновой, глутаминовой, бензойной, антраниловой, стеариновой, салициловой, η-гидроксибензойной, фенилуксусной, миндальной, метиленгидроксинафтойной, метансульфоновой, этансульфоновой, бензолсульфоновой, пантотеновой, толуолсульфоновой, 2-гидроксиэтансульфоновой, сульфаниловой, циклогексиламиносульфоновой, альгиновой, β-гидроксимасляной, галактаровой и галактуроновой кислот.

Загустители (гелеобразующие агенты), пригодные для использования по данному изобретению, включают нейтрализованные анионные полимеры, например полиакриловую кислоту. Предпочтительны карбомеры (сополимеры полиакриловой кислоты), особенно производимые и продаваемые компанией Νονβοη 1пс. (С1стс1апй. ОЫо) под торговым знаком СатЬороГ (см. Интернет-сайт 1Шр//\\л\л\'.по\'еоп.сот; включено сюда путем отсылки). Особенно предпочтительны СатЬоро1§^к υΐΐτβζ 10, 940, 941, 954, 980, 981, ΕΤΌ 2001, ΕΖ-2, ΕΖ-3). Наиболее предпочтительны СатЬоро1^к 940 и СатЬоро1^к 980. Наиболее предпочтительные анионоактивные полимеры включают карбоксиполиметилен и карбоксиметилцеллюлозу. Подходят также другие известные полимерные загущающие агенты, например полимерные эмульгаторы Ретн1еп^к и поликарбофилы №\'еоп^к. Дополнительные загустители, усилители и адъюванты обычно можно найти в ВетшдФп'к Тйе 8с1епсе апй Ртасйсе о! Рйаттасу, Меайе РиЫщЫпд Со.,и8 Рйаттасоре1а/№1юпа1 Еотти1ату, что включено в настоящее изобретение путем отсылки.

В одном воплощении данного изобретения композиция представляет собой гель, мазь, крем или пластырь и содержит тестостерон; агент, способствующий проникновению лекарственного вещества в кожу (например, изопропилмиристат); загуститель (например, нейтрализованный карбомер); низший спирт (этанол или изопропанол); воду.

- 3 012754

В другом воплощении данного изобретения композиция содержит предшественник анионного полимерного загустителя (например, карбомер), соединенный с нейтрализующим веществом в количестве, достаточном для формирования геля в ходе создания композиции.

В другом воплощении данного изобретения композиция содержит предшественник анионного полимерного загустителя (например, карбомер) вместе с нейтрализующим веществом в количестве, достаточном для формирования геля с вязкостью более 9000 сП (измеряли с помощью вискозиметра ВгоокПе1б ВУ ΌνΐΙ+ со шпинделем ВУ6 при скорости вращения, эквивалентной 10 об./мин и при температуре 20°С).

В следующем воплощении данного изобретения композиция содержит предшественник анионного полимерного загустителя (например, карбомер) вместе с нейтрализующим агентом, который выбирают из группы, состоящей из гидроокиси натрия, гидроокиси аммония, гидроокиси калия, аргинина, аминометилпропанола, тетрагидроксипропилэтилендиамина, триэтаноламина («ТЕА»), трометамина, кокамина РЕС-15. диизопропаноламина и триизопропаноламина или их комбинаций в количествах, достаточных для формирования геля в ходе создания композиции. Подходящие нейтрализующие агенты и их использование с выбранными предшественниками анионного полимерного загустителя описаны в «№ιΠπι1ί5ίη§ СагЬороЕ апб Ретц1еп^к Ро1утега ίη Ациеоих апб Нубгоа1сойойс 8у51ет5». Соттегс1а1 Вгосйиге ΤΌ8-237 (Ос1оЬег 1998) Ьу №сеоп 1пс. о! С1еуе1апб, ОЫо, что включено в данное изобретение путем отсылки.

В ином воплощении данного изобретения композиция содержит предшественник анионного полимерного загустителя (например, карбомер) вместе с нейтрализующим агентом, в качестве которого использовали гидроокись натрия в концентрации 0,1, или 1,5, или 2н. или же какой-либо иной водный раствор подходящей крепости в количестве, достаточном для формирования геля. В одном воплощении композицию получали, используя 0,1н. гидроокись натрия в концентрациях от около 1 до около 10,0%. Соответственно, в воплощениях можно использовать любое содержание 0,1н. №1ОН от около 1,0 до около 10,0%, например 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0 или 10,0%.

В одном воплощении данного изобретения композиция является гелем, полученным в результате объединения следующих веществ в приблизительном процентном соотношении.

Таблица 2

Ингредиенты, объединенные в тестостероновые композиции (% мас./мас.)

т (Тестостерон)	Спирт (95%-ный объем/объем)	Изопропилмиристат	Карбопол- 980	ΝαΟΗ (0,1 н)	Вода (очищенная)
1,20	73,5	1,00	1,0	7,00	16,3
1,40	73,5	1,00	1,0	7,0	16,1
1,60	73,5	1,00	1,0	7,0	15,9

В одном воплощении данного изобретения композиция содержит от около 1,22 до около 1,62% тестостерона, например 1,22, 1,42 или 1,62% тестостерона.

В другом воплощении данного изобретения композиция содержит от около 1,15 до около 1,22% (мас./мас.) тестостерона.

В другом воплощении данного изобретения композиция содержит от около 1,30% до около 1,45% (мас./мас.) тестостерона.

В другом воплощении данного изобретения композиция содержит от около 1,50 до около 1,70% (мас./мас.) тестостерона.

В одном воплощении данного изобретения композиция содержит от около 1,15 до около 1,8% (мас./мас.) тестостерона; от около 0,6 до около 1,2% (мас./мас.) изопропилмиристата; от около 60 до около 80% (мас./мас.) спирта, выбираемого из группы, состоящей из этанола и изопропанола; загуститель в количестве, достаточном для придания композиции вязкости более 9000 сП; воду.

В одном воплощении данного изобретения композиция содержит от около 1,15 до около 1,8% (мас./мас.) тестостерона; от около 0,6 до около 1,2% (мас./мас.) изопропилмиристата; от около 67 до около 74% (мас./мас.) спирта, выбираемого из группы, состоящей из этанола и изопропанола; загуститель в количестве, достаточном для придания композиции вязкости более 9000 сП; воду.

Композиция по данному изобретению может содержать от около 1,15 до около 1,25% (мас./мас.) тестостерона, от около 1,30 до около 1,45% (мас./мас.) тестостерона, от около 1,50 до около 1,70% (мас./мас.) тестостерона.

В одном из воплощений данного изобретения вязкость композиции составляет от около 13000 до около 33000 сП. Соответственно, вязкость композиции по данному изобретению может быть любой в диапазоне от около 13000 до около 33000 сП, например 14000, 15000, 16000, 17000, 18000, 19000, 20000, 21000,22000,23000,24000, 25000,26000,27000,28000, 29000,30000,31000, 32000 или 33000 сП.

В одном воплощении данного изобретения композицию получают, соединяя от около 1,30 до около 1,45% (мас./мас.) тестостерона; от около 0,6 до около 1,4% (мас./мас.) изопропилмиристата; от около 67 до около 74% (мас./мас.) этанола; от около 0,6 до около 1,4% (мас./мас.) карбомера; от около 6,5 до около

- 4 012754

7,5% (мас./мас.) 0,1н. ΝαΟΗ и дополнительную воду.

В другом воплощении данного изобретения композицию получают, соединяя от около 1,50 до около 1,70% (мас./мас.) тестостерона; от около 0,6 до около 1,4% (мас./мас.) изопропилмиристата; от около 67 до около 74% (мас./мас.) этанола; от около 0,6 до около 1,4% (мас./мас.) карбомера; от около 6,5 до около 7,5% (мас./мас.) 0,1н. ΝαΟΗ; и дополнительную воду.

В еще одном воплощении данного изобретения композицию получают, соединяя от около 1,15 до около 1,25% (мас./мас.) тестостерона; от около 0,6 до около 1,4% (мас./мас.) изопропилмиристата; от около 67 до около 74% (мас./мас.) этанола; от около 0,6 до около 1,4% (мас./мас.) карбомера; от около 6,5 до около 7,5% (мас./мас.) 0,1н. ΝαΟΗ; и дополнительную воду.

Гель втирают или размазывают по участку кожи испытуемого и дают ему высохнуть. Гель сохнет быстро: за время от около 30 с до около 3 мин после нанесения. Например, гель втирают в участок кожи наружной стороны верхней части бедра один раз в день. После нанесения испытуемый моет руки. В результате нанесения геля на кожу возрастает уровень тестостерона с желаемым фармакокинетическим профилем, что эффективно лечит или предотвращает гипогонадизм и/или связанные с ним симптомы. Таким образом композиция по данному изобретению полезна для лечения ряда состояний и заболеваний.

В одном воплощении данного изобретения используется пакет с полиэтиленовой подкладкой, совместимой с компонентами тестостеронового геля, как описано ниже. Такой пакет может содержать единичную дозу либо несколько доз.

В другом воплощении данного изобретения для композиции используется вмещающий несколько доз жесткий контейнер (например, с ручной помпой-дозатором), у которого внутри помещается больший по размерам станиолевый пакет с композицией. Эти внутренние пакеты могут также иметь полиэтиленовую подкладку. В одном воплощении данного изобретения такой многодозовый контейнер содержит безвоздушную помпу, содержащую выстланный полиэтиленом станиолевый мешок, в горлышке которого имеется ручная помпа. В одном воплощении данного изобретения помпа обеспечивает выделение в сумме около 75 г геля. В одном воплощении данного изобретения помпу перед использованием надо залить, нажав до конца 3 раза и выбросив выделившийся гель. В одном воплощении данного изобретения помпа содержит достаточно продукта, чтобы обеспечить заливку и выделение определенного числа точных доз. В одном воплощении данного изобретения при каждом нажатии помпы до конца выделяется 1,25 г тестостеронового геля; в этом воплощении для получения дозы 3,75 г геля нужно нажать помпу до конца 3 раза; для дозы 5 г - 4 раза, 7,5 г - 6 раз, 10 г - 8 раз и т.д. Конечно, при каждом нажатии можно извлечь любое количество геля для желаемой дозы. Размеры мешка, помещающееся в нем количество геля и объем выделения за одно нажатие помпы не ограничены этими воплощениями и их можно изменять и подбирать в зависимости от потребностей пациентов.

Эти способы и композиции по настоящему изобретению обеспечивают более широкие по сравнению с имеющимися в настоящее время возможности для лечения, профилактики, обращения, прекращения или замедления прогрессирования гипогонадизма или других расстройств, связанных с низким уровнем тестостерона в организме, например, мужчины.

В одном воплощении данного изобретения фармацевтическую композицию вводят 1, 2 или 3 раза в сутки либо так часто, как того требуется для достижения желаемого терапевтического эффекта. В другом воплощении данного изобретения композицию вводят 1, 2 или 3 раза в сутки через день. В другом воплощении данного изобретения композицию вводят 1, 2 или 3 раза в сутки раз в неделю, или раз в две недели, или раз в месяц.

В одном воплощении данного изобретения терапевтически эффективная доза составляет от около 1,0 до около 10,0 г, предпочтительно от около 1,25 до около 6,25 г.

Помимо использования в медицине настоящее изобретение также ценно для ветеринарии, включая млекопитающих, пресмыкающихся и птиц, в том числе грызунов, сельскохозяйственных и экзотических животных. В одном воплощении данного изобретения млекопитающие включают примата (например, человек, обезьяна или лемур), лошадь, собаку, свинью и кошку. В другом воплощении данного изобретения грызуны включают крысу, мышь, белку или морскую свинку.

После нанесения композиции на кожу происходит высвобождение из нее стероидного гормона со скоростью и продолжительностью, обеспечивающими в одном воплощении данного изобретения поступление в кровоток пациента по меньшей мере 10 мкг/сут. гормона.

В другом воплощении данного изобретения после нанесения композиции на кожу происходит высвобождение из нее стероидного гормона со скоростью и продолжительностью, обеспечивающими достижение концентрации тестостерона в кровотоке более чем около 300 нг/дл сыворотки.

В другом воплощении данного изобретения после нанесения композиции на кожу происходит высвобождение из нее стероидного гормона со скоростью и продолжительностью, обеспечивающими достижение концентрации тестостерона в кровотоке более чем около 300 нг/дл сыворотки в течение периода времени, начиная через около 0,5 ч после введения и кончая около 24 ч после введения.

В другом воплощении данного изобретения после нанесения композиции на кожу происходит высвобождение из нее стероидного гормона со скоростью и продолжительностью, обеспечивающими достижение концентрации тестостерона в кровотоке от около 298 до около 1043 нг/дл сыворотки.

- 5 012754

В другом воплощении данного изобретения после введения композиции концентрация тестостерона в сыворотке крови поддерживалась между около 400 и 1050 нг/дл.

В еще одном воплощении данного изобретения после введения композиции концентрация тестостерона в сыворотке крови поддерживалась между около 200 и 1800 нг/дл.

В другом воплощении данного изобретения после введения композиции полученная С_тах составляла от около 300 до около 5000 нг/дл.

В другом воплощении данного изобретения композицию вводили испытуемым ежедневно в дозе от около 1,25 до около 3,75 г (например, около 1,25 г, или около 2,50 г, или около 3,75 г). Возможна также любая другая подходящая доза.

В еще одном воплощении данного изобретения у нуждающегося в лечении пациента уровень тестостерона в сыворотке крови перед первым применением (предварительная обработка) композиции по данному изобретению был ниже, чем около 300 нг/дл.

В другом воплощении данного изобретения через по меньшей мере 30 суток ежедневного введения композиции концентрация тестостерона в сыворотке крови пациента составляет по меньшей мере от около 300 до около 1050 нг/дл, например около 300-400 нг/дл, около 300-500 нг/дл, около 500-700 нг/дл, около 700-900 нг/дл, около 400-500 нг/дл, около 500-600 нг/дл, около 600-700 нг/дл, около 700-800 нг/дл, около 800-900 нг/дл, около 900-1000 нг/дл, около 1000-1100 нг/дл, около 400-1050 нг/дл, около 500-1050 нг/дл, около 600-1050 нг/дл, около 700-1050 нг/дл.

В еще одном воплощении данного изобретения после ежедневного введения композиции общая концентрация тестостерона у испытуемого выше около 300 нг/дл. В одном воплощении данного изобретения общая концентрация тестостерона в сыворотке крови испытуемого превышает около 400, около 500, около 600 или около 700 нг/дл. В одном воплощении данного изобретения общая концентрация тестостерона измеряется через 24 ч после введения. В одном воплощении данного изобретения общая концентрация тестостерона измеряется спустя более 2 сут. после ежедневного введения (например, через 10, 14, 20 или 30 сут.).

В другом воплощении способов, наборов, комбинаций и композиций по данному изобретению композицию вводят испытуемому 1, 2 или 3 раза в сутки ежедневно на протяжении по меньшей мере 7 суток. В одном воплощении композицию вводят 1 раз в день.

Пример 1. Разработка усовершенствованного тестостеронового геля (гелей).

Введение.

Для того чтобы разработать новую композицию тестостеронового геля, был проведен ряд исследований с целью получить и испытать гелевые композиции, содержащие различные количества тестостерона, изопропилмиристата и этилового спирта. Предварительные исследования показали, что вязкость геля можно повысить, несколько увеличивая концентрации гелеобразующих и нейтрализующих агентов. Для создания расчета в исследовании влияния трех ингредиентов (тестостерона, изопропилмиристата, этилового спирта) на вязкость водно-спиртового геля и на проникновение из него тестостерона ίη νίίτο была использована статистическая программа. Исследования ίη νίίτο, в которых изучалось проникновение тестостерона в кожу, осуществляли в диффузионной камере Франца. Концентрацию тестостерона в «рецепторных» образцах определяли методом ВЭЖХ или при помощи бета-сцинтилляционного счетчика (для радиоактивного мечения). На основании результатов этих исследований были получены три оптимизированных композиции и их испытали на предмет проникновения в кожу, которое определяли при помощи метода ВЭЖХ. У всех трех оптимизированных композиций вязкость и проникновение ίη νίίτο были значительно лучше, чем у имеющейся в продаже композиции (1%-ный тестостероновый гель).

Цели.

В настоящем раскрытии суммированы исследования, проведенные с целью разработки композиции (композиций) тестостеронового геля с улучшенной вязкостью, уменьшенным наносимым объемом и улучшенным проникновением в кожу ίη νίίτο сравнительно с имеющейся в продаже композицией (1%ный тестостероновый гель).

Способ.

а. Статистический расчет.

Был создан статистический расчет (81а1Сгар1ис5 Р1и§ 5.1) для изучения влияния трех ингредиентов (тестостерона, этилового спирта и изопропилмиристата) на вязкость и проникновение тестостерона в кожу ίη νίίτο из водно-спиртового геля. Концентрации двух остальных ингредиентов (карбопола 980 и 0,1 н гидроокиси натрия) были постоянными. Ниже приводится краткое изложение расчетов.

Вид расчета: поверхность отклика;

Название расчета: план Βοχ-Βο1ιη1<οη;

Число экспериментальных факторов: 3 (все непрерывные);

Число блоков данных: 1;

Число прогонов: 15 (по случайной выборке);

Число степеней свободы ошибки: 5.

- 6 012754

Факторы	Низкая концентрация, %	Высокая концентрация, %
Тестостерон	1,33	2,0
Изопропилмиристат	0,5	1,0
Спирт (95% об/об)	72,5	76,1

В следующей табл. 3 суммированы ингредиенты испытываемых композиций в соответствии со статистическим расчетом. Эти композиции были получены в количествах по 1 кг и хранились в стеклянных банках для использования в аналитических и других (проникновение в кожу) исследованиях.

Таблица 3

Ингредиенты, объединенные в испытываемые и контрольную композиции (% мас./мас.)

Р# (Композиция)	Т (Тестостерон)	Спирт (95% об/об)	Изопропил миристат	Карбопол 980	ШОП 0,1 н	Очищенная вода
41 .	1,665	74,3	0,75	1,0	7,00	15,3
42	1,665	72,5	0,50	1,0	7,00	17,3
43	1,665	76,1	0,50	1,0	7,00	. 13,7
44	2,000	74,3	0,50	1,0	7,00	15,2
45	1,330	74,3	0,50	1,0	7,00	15,9
46	1,330	76,1	0,75	1,0	7,00	13,8
47	2,000	74,3	1,00	1,0	7,00	14,7
48	1,665	74,3	0,75	1,0	7,00	15,3
Р# (Композиция)	Т (Тестостерон)	Спирт (95% об/об)	Изопропил миристат	Карбопол 980	МаОН 0,1 и	Очищенная вода
49	1,330	74,3	1,00	1,0	7,00	15,4
50	2,000	72,5	0,75	1,0	7,00	16,8
51	1,665	76,1	1,00	1,0	7,00	13,2
52	2,000	76,1	0,75	1,0	7,00	13,2
53	1,665	72,5	1,00	1,0	7,00	16,8
54	1,330	72,5	0,75	1,0	7,00	17,4
55	1,665	74,3	0,75	1,0	7,00	15,3
56 (контроль)	1,000	72,5	0,50	0,9	4,75	20,4

b. Аналитические испытания.

Во всех испытываемых композициях и контрольных образцах определяли физические (внешний вид, рН, вязкость) и химические (определение тестостерона, изопропилмиристата и спирта) свойства.

c. Исследования проникновения в кожу ίη νίίτο.

Проникновение тестостерона изучали количественно, помещая фрагменты человеческой кожи в диффузионную камеру Франца. Кожу располагали горизонтально между донорным и рецепторным отделениями камеры. Поверхность кожи, экспонированная к испытываемой композиции в верхнем отделении, составляла 0,64 см², объем рецепторного отделения был 5,0 мл. Температуру поддерживали 37°С при помощи двойной водяной проточной рубашки вокруг нижнего отделения камеры. Донорное отделение было открыто сверху.

Радиоактивное мечение.

Испытываемые композиции содержали ¹⁴С-меченый тестостерон. Радиоактивно меченную композицию (5-15 мг геля, содержащего 0,125-0,250 мкКи) помещали на поверхность эпидермиса за счет силы тяжести. Из нижнего отделения периодически (0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 и 24 ч) отбирали пробы и измеряли радиоактивность/количество лекарственного вещества, проникшего через кожу. Также определяли количество радиоактивной метки/лекарственного вещества, остающееся на коже. Дальнейшие подробности этих экспериментов и результаты представлены в примере 2.

Исследование методом ВЭЖХ.

Испытываемую композицию (300 мг ± 5%, содержащие 3000 мкг лекарственного вещества - 1%ный гель) помещали на поверхность эпидермиса за счет силы тяжести. Периодически (0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 и 24 ч) брали аликвоты, замещая их свежим буферным раствором, и определяли в них содержание тестостерона. Дальнейшие подробности этих экспериментов и результаты представлены в примере 3.

б. Анализ данных.

Помимо данных, приведенных в соответствующих примерах, данные, полученные путем радиоактивного мечения и применения ВЭЖХ, обрабатывали при помощи статистической программы (81а1СтарЫск Р1и8 5.1). Эта программа использовалась также для определения оптимальных уровней различных факторов, которые могли бы обеспечить максимальный отклик.

Результаты и обсуждение.

Аналитические данные.

Все испытываемые композиции были прозрачными и имели рН 5,68-5,82. Содержание тестостеро

- 7 012754 на, изопропилмиристата и спирта было близко к желаемому. В следующей таблице суммированы результаты аналитических определений через 1 месяц хранения при 40°С/75% относительной влажности.

Таблица 4

Результаты аналитических исследований для испытываемых и контрольной композиций*

Е# (Композиция)	Внешний вид	рН	Вязкость (сП)	Содержание тестостерона (%)	Содержание спирта(%) (95% об/об)	Содержание изопропилмиристата (%)
41	прозрачный гель	5,79	23567	1,69	73,8	0,67
42	прозрачный гель	5,76	26900	1,66	71,8	0,45
43	прозрачный гель	5,82	23000	1,69	75,5	0,44
44	прозрачный гель	5,75	26700	2,00	74,1	0,44
45	прозрачный гель	5,76	25467	1,32	73,7	0,44
46	прозрачный гель	5,69	30233	1,40	74,5	0,74
47	прозрачный гель	5,78	24733	2,02	73,3	0,92
48	прозрачный гель	5,79	24767	1,66	74,3	0,68
49	прозрачный гель	5,76	24300	1,33	73,8	0,93
50	прозрачный гель	5,72	26133	2,02	71,7	0,68
51	прозрачный гель	5,82	20700	1,75	75,4	0,93
52	прозрачный гель	5,83	19733	2,00	75,5	0,68
53	прозрачный гель	5,72	26033	1,68	71,7	0,95
54	прозрачный гель	5,69	28267	1,34	71,9	0,69
55	прозрачный гель	5,77	23233	1,67	74,0	0,68
56 (контроль)	прозрачный гель	5,59	22033	1,01	72,4	0,44

* Результаты испытаний через 1 месяц хранения при 40°С/75% отн. влажн.

Поскольку одной из задач этого исследования было увеличение вязкости геля, был проведен статистический анализ для оценки влияния тест-факторов (тестостерон, изопропилмиристат, этиловый спирт) на отклик переменная-вязкость. Ниже приведены суммированные результаты этого анализа.

Таблица 5

Вариационный анализ для вязкости

Источник	Сумма квадратов	Число степеней свободы ϋί	Среднее квадратическое значение	Отношение Р	Значение Р
А:Т	9.41613Е6	1	9,41613Е6	1,58	0,2488
В:1РМ	3.16945Е6	1	3.16945Е6	0,53	0,4892
С:ЕЮН	1,94337Е7	1	1,94337Е7	3,27	0,1137
АА	1,43962Е6	1	1,43962Е6	0,24	0,6379
АВ	3,37413Е6	1	3,37413Еб	0,57	0,4760
АС	3,50601Е7	1	3,50601Е7	5,89	0,0456
вв	1,00605Е6	1	1.00605Е6	0,17	0,6933
ВС	1,95303Е6	1	1,95303Е6	0,33	0,5847
сс	286812,0	1	286812,0	0,05	0,8325
Суммарная погрешность	4,16608Е7	7	5,95155Е6
Суммарно (с поправкой)	1.17733Е8	16

Т - тестостерон, ΙΡΜ - изопропилмиристат, Ε1ΘΗ - этиловый спирт.

На фиг. 1, где столбик А представляет тестостерон, В - изопропилмиристат, С - этиловый спирт, двумя буквами обозначены сочетания этих факторов. Видно, что сочетание спирта и тестостерона (АС) имеет значительный негативный эффект в отношении вязкости. Это наблюдение согласуется с более

- 8 012754 ранними исследованиями эффекта спирта; чтобы добиться максимальной вязкости, содержание спирта должно быть минимально возможным.

Данные о проникновении: метод радиоактивного мечения.

В этом исследовании использовались образцы кожи от двух доноров. Для сведения к минимуму эффекта различий между образцами кожи, данные о проникновении (доля проникшей метки - %ЬР) для испытываемых композиций были нормализованы, чтобы учитывалось сочетание испытываемой композиции и соответствующей донорной кожи. Дополнительно проводили статистический анализ данных по отношению %ЬР (опыт/контроль, отношение %ЬР), чтобы выявить тенденции и оптимальные концентрации тестостерона, изопропилмиристата и этилового спирта. Ниже приведены суммированные данные такого рода.

Таблица 6 Данные по радиоактивному мечению, использованные для статистического анализа*

Р# (Композиция)	Донор	Т	ΙΡΜ	Спирт(%) (95% об/об)	%ТР	Отношение %1.Р
41	8127	. 1,665	0,75	74,3	4,86	0,83
42	8127	1,665	0,50	72,5	3,45	0,59
43	8127	1,665	0,50	76,1	2,7	0,46
44	8127	2,000	0,50	74,3	3,8	0,65
45	8300	1,330	0,50	74,3	3,51	0,46
46	8300	1,330	0,75	76,1	6,37	0,84
47	8300	2,000	1,00	74,3	3,57	0,47
48	8300	1,665	0,75	74,3	5,38	0,71
49	8300	1,330	1,00	74,3	9,47	1,25
50	8300	2,000	0,75	72,5	5,69	0,75
51	8300	1,665	1,00	76,1	6,73	0,89
52	8300	2,000	0,75	76,1	2,22	0,29
53	8300	1,665	1,00	72,5	4,61	0,61
54	8300	1,330	0,75	72,5	4,33	0,57
55	8300	1,665	0,75	74,3	4,33	0,57
56 (контроль)	8127	1,000	0,50	72,5	5,87	1,00
56 (контроль)	8300	1,000	0,50	72,5	7,56	1,00

* Данные о %ЬР из примера 2. Отношение %5 ЬР рассчитано из значении %ЬР. Т - тестостерон, 1РМ - изопропилмиристат, ЬР - проникшая метка.

Таблица 7

Вариационный анализ для отношения доли проникшей метки (отношение %ЬР)

Источник	Сумма квадратов	Число степеней свободы Όί	Среднее квадратическое значение	Отношение Р	Значение Р
А:Т	0,213314	1	0,213314	7,19	0,0315
В:1РМ	0,107294	1	0,107294	3,62	0,0990
С:ЕЮН	0,00430679	1	0,00430679	0,15	0,7145
АА	0,119589	1	0,119589	4,03	0,0847
АВ	0,131132	1	0,131132	4,42	0,0736
АС	0,0554353	1	0,0554353	1,87 .	0,2140
ВВ	0,00724917	1	0,00724917	0,24	0,6363
ВС	0,0800686	1	0,0800686	2,70	0,1445
сс	0,00941549	1	0,00941549	0,32	0,5908
Суммарная погрешность	0,207716	7	0,0296737
Суммарно (с поправкой)	0,947084	16

Диаграмма Парето на фиг. 2 показывает, что содержание тестостерона имеет значительный негативный эффект, а содержание изопропилмиристата - позитивный (не являющийся статистически значимым) в отношении доли (%) проникшей метки. Вышеприведенный анализ свидетельствует, что максимальное содержание тестостерона в гелевой композиции должно быть меньше наивысшего изученного значения, а содержание изопропилмиристата должно быть близко к наивысшему изученному значению.

Данные о проникновении: метод ВЭЖХ.

В этом исследовании использовались те же образцы кожи (от двух доноров), что и для радиоактивного мечения. Для сведения к минимуму эффекта различий между образцами кожи, данные о проникновении (поток или суммарное высвободившееся количество - САК) для испытываемых композиций были нормализованы, чтобы учитывалось сочетание испытываемой композиции и соответствующей донор

- 9 012754 ской кожи. Дополнительно проводили статистический анализ данных по отношению САК (опыт/контроль), чтобы выявить тенденции и оптимальные концентрации тестостерона, изопропилмиристата и этилового спирта. Ниже приведены суммированные данные такого рода.

Таблица 8

Данные ВЭЖХ, использованные для статистического анализа*

Г# (Композиция)	Донор	Т	ΙΡΜ	Спирт(%) (95% об/об)	САК	Отношение САК
41	8127	1,665	0,75	74,3	189,81	1,02
42	8127	1,665	0,50	72,5	188,21	1,01
43	8127	1,665	0,50	76,1	50,11	0,27
44	8127	2,000	0,50	74,3	151,95	0,82
45	8300	1,330	0,50	74,3	74,13	0,69
46	8300	1,330	0,75	76,1	117,87	1,09
47	8300	2,000	1,00	74,3	114,61	1,06
48	8300	1,665	0,75	74,3	208,82	1,94
49	8127	1,330	1,00	74,3	298,76	1,61
50	8127	2,000	0,75	72,5	94,71	0,51
51	8127	1,665	1,00	76,1	254,57	1,37
52	8127	2,000	0,75	76,1	113,93	0,61
53	8127	1,665	1,00	72,5	326,46	1,76
54	8127	1,330	0,75	72,5	200,45	1,08
55	8127	1,665	0,75	74,3	240,61	1,30
56 (контроль)	8127	1,000	0,50	72,5	185,71	1,00
56 (контроль)	8300	1,000	0,50	72,5	107,79	1,00

Т - тестостерон, ΙΡΜ - изопропилмиристат, САК - суммарное высвобожденное количество

Таблица 9 ΑΝΟνΑ для отношения суммарного высвобожденного количества (отношение САК) Вариационный анализ для вязкости

А:Т	0,452519 | 1	0,452519	3,27	0,1135
В:1РМ	1,01713 | 1	1,01713	7,35	0,0302
С:ЕЮН	0,18431	1	0,18431	1,33	0,2864
АА	0,164241	1	0,164241	1,19	0,3120
АВ	0,0291287	1	0,0291287	0,21	0,6603
АС	0,0600202	1	0,0600202 1 0,43	0,5312
ВВ	0,000234383	1	0,000234383 0,00	0,9683
ВС	0,0737582	1	0,0737582 0,53	0,4891
СС	0,200542	1	0,200542 1,45	0,2678
Суммарная погрешность	0,968701	7	0,138386
Суммарно (с поправкой)	3,03859	16

Результаты, приведенные в табл. 8, были подвергнуты регрессионному анализу и дали следующий алгоритм:

Отношение САК = 5,1239 - 0,4403*Т + 1,5781*ΙΡΜ - 0,0607*ЕЮН, где Т - содержание тестостерона (% мас./мас.), ГОМ - содержание изопропилмиристата (% мас./мас.), ЕЮН - содержание 95%-ного спирта (% об./об.).

В одном воплощении данного изобретения значения Ν, ΙΡΜ и ЕЮН выбираются в пределах приведенных ниже диапазонов, так что вышеуказанный алгоритм дает величину отношения САК больше 1, предпочтительно больше 1,1 или наиболее предпочтительно больше 2. Диапазоны: тестостерон 0,1-2,0% (мас./мас.), предпочтительно 1,15-1,8% (мас./мас.); изопропилмиристат 0,2-2,0% (мас./мас.), предпочтительно 0,6-1,2% (мас./мас.); спирт (95%-ный об./об.) 60,0-80,0% (мас./мас.), предпочтительно 72,5-76,1% (мас./мас.).

Относительно диаграммы Парето на фиг. 3 статистический анализ ясно показывает, что содержание изопропилмиристата имеет значительный положительный эффект на отношение САК, а содержание тестостерона - отрицательный (статистически незначимый). Из фиг. 3 следует, что максимальное содержание тестостерона в гелевой композиции должно быть меньше наивысшего изученного значения, а содержание изопропилмиристата должно быть близко к наивысшему изученному значению. Результаты, полученные методом ВЭЖХ, количественно согласуются с полученными методом радиоактивного мечения.

Оптимизация отклика.

Данные о проникновении, полученные методами ВЭЖХ и радиоактивного мечения, количественно близки. Для удобства данные, полученные методом ВЭЖХ, были использованы для предсказания (статистическая оптимизация) оптимального содержания тестостерона, изопропилмиристата и спирта для данной ответной реакции. Статистическая программа дала следующие сочетания величин содержания этих

- 10 012754 факторов, максимизирующие отношение суммарного высвобожденного количества (отношение САК). Таблица 10 Оптимизированные значения факторов для суммарного высвобожденного количества (отношение САК) Цель: максимизировать отношение САК

Оптимальное значение=1,81748

Фактор	Низкое значение	Высокое значение	Оптимальное значение
Тестостерон	1,0	2,0	1,28995
Изопропилмиристат	0,5	1,0	1,0
Этиловый спирт	72,5	76,1	73,7366

Фиг. 4 и 5 иллюстрируют рассчитанный отклик (отношение САК) для данного сочетания тестостерона и изопропилмиристата при содержании 95%-ного (об./об.) спирта 74,3% (мас./мас.).

а. Выбор композиции.

На основании графического изображения поверхности отклика и предсказанных оптимальных значений факторов для дальнейшего исследования проникновения лекарственного вещества в кожу были выбраны следующие три композиции. Для удобства эти три композиции тестировали только методом ВЭЖХ.

Таблица 11 Ингредиенты, объединенные с получением избранных испытываемых и контрольной композиций (% мас./мас.)

Г# (Композиция)	Т (Тестостерон)	Спирт (95% об/об)	Изопропил миристат	Карбопол 980	ЦаОН 0,1 н	Очищенная ' вода
57	1,20	73,5	1,00	1,0	7,00	16,3
58	1,40	73,5	1,00	1,0	7,00	16,1
59	1,60	73,5	1,00	1,0	7,00	15,9
56 (контроль)	1,00	72,5	0,50	0,9	4,75	20,4

В следующей таблице суммированы результаты начальных (после получения) аналитических исследований избранных композиций.

Таблица 12

Результаты аналитических исследований избранных испытываемых и контрольной композиций

Р# (Композиция)	Внешний вид	рН	Вязкость (сП)	Содеряоание тестостерона (%)	Содержание спирта (95% об/об)	Содержание изопропилмиристата (%)
57	прозрачный гель	5,66	24500	1,21	73,1	0,94
58	прозрачный гель	5,71	25533	1,42	72,7	0,94
59	прозрачный гель	5,68	24800	1,61	73,3	0,94
56(контроль)	прозрачный гель	5,57	20267	1,02	71,8	0,43

В следующей таблице и на фиг. 6 суммированы данные о проникновении лекарственного вещества из трех избранных композиций (точки для фиг. 6 и таблицы получены из примера 4, табл. 17-20).

Таблица 13

Данные анализа методом ВЭЖХ, использованные для статистического анализа*

Время (ί)	Р56 (1% гель)	Р57(1,2% гель)	Р58 (1,4% гель)	Г59 (1,6% гель)
САК	8В	САК	8ϋ	САК	8ϋ	САК	80
0	0	0	0,0	0	0,0	0,00	0,0	0
1	0	0	0,5	0,7	0,0	0,00	0,0	0
2	0	0	1,3	0,5	1,3	1,2	0,5	0,3
4	0,40	0,1	4,3	1,3	4,0	1,0	2,9	1,3
6	1,52	0,3	14,2	4,5	11,0	2,7	13,8	4,6
8	6,96	1,5	38,0	11,5	35,9	11,0	43,5	10,8
10	18,35	3,4	57,0	17,9	65,4	14,3	64,5	10,4
22	48,20	12,5	119,2	51,0	129,1	11,8	137,5	30,6
24	50,76	12,3	129,7	50,4	137,0	13,9	156,3 .	36,4

* Точки получены из примера 4, табл. 17-20.

- 11 012754

Для всех трех выбранных композиций было отмечено значительно лучшее проникновение, чем в контроле (2-3-кратное САК). Эти результаты также подтверждают наблюдения, сделанные при начальной проверке композиций, и они послужили основанием для окончательного выбора композиций.

Выводы.

Для планирования экспериментов, основанных на трех ключевых факторах (тестостерон, изопропилмиристат, этиловый спирт), была использована статистическая программа. Эту программу также использовали для анализа данных аналитических исследований и исследований проникновения в кожу ί^η νίΐτο, а также выявления тенденций и оптимальных значений каждого из этих факторов для достижения максимального отклика (проникновения).

Три избранных композиции тестостеронового геля имели более высокую вязкость (примерно 4000 сП), чем контрольная композиция.

Для трех избранных композиций наблюдалось значительно лучшее проникновение тестостерона ίη νίΐΓΟ (в 2-3 раза по сравнению с контролем) во фрагменты человеческой кожи.

Пример 2. Чрескожное поглощение экспериментальных композиций тестостеронового геля через человеческую кожу с использованием метода радиоактивного мечения.

Материалы.

Композиции изготавливали и получали от 8о1уау РЬагтасеийсак. Тестостерон (¹⁴С) был предоставлен Атепсап Ка4ю1аЬе1е4 СЬеткак 1пс. (8ΐ Ьоик, МО). Все прочие химические вещества и реагенты приобретались у апробированных поставщиков и были наивысших возможных качества и чистоты.

Методы.

Описание устройства для трансдермальной диффузии.

В исследованиях использовалось устройство для трансдермальной диффузии РегтеСеаг, Ве1111е11ет. РА), имеющее 9 диффузионных камер в ряд и снабженное магнитной мешалкой для перемешивания жидкости в рецепторном отделении (600 об./мин). Чрескожное поглощение ίη νίΐτο изучали, помещая образцы человеческой кожи в диффузионные камеры Франца. Фрагмент кожи располагали горизонтально между донорным и рецепторным отделениями камеры. Площадь поверхности кожи, экспонированная в донорном отделении, была 0,64 см²; объем рецепторного отделения 5,0 мл.

Рецепторное отделение заполняли забуференным фосфатом физиологическим раствором (РВ8) рН 7,4, пропиленгликолем (1:1) и гентамицина сульфатом (50 мкг/мл). Вокруг рецепторного отделения имелась двойная проточная водяная рубашка (37°С), чтобы поддерживать температуру кожи на физиологическом уровне. Донорное отделение было открыто в окружающую среду, так что поверхность кожи контактировала с окружающим воздухом лаборатории. В каждом опыте отслеживалась относительная влажность (КН) в экспериментальном пространстве (вокруг диффузионной камеры), которая, по измерениям, составляла 35-45% во всех экспериментах.

Исследование проникновения в кожу.

В качестве образцов кожи использовали полученные при помощи дерматома срезы человеческой кожи, взятой с трупов в области бедра (предоставлены банком тканей И8 Т|55не апй Се11, 8а11 Ьаке СНу, υΐαΐι). Образцы брали не позже, чем через 8 ч после смерти донора, замораживали в физиологическом растворе с глицеролом (10% глицерола мас./об.) и хранили при -80°С вплоть до использования. В экспериментах использовался материал от двух разных доноров. Каждый эксперимент осуществляли по меньшей мере по 6 раз для каждой композиции с кожей от одного донора. Данные о проникновении в кожу для испытываемых композиций сравнивали с таковыми для имеющегося в продаже 1%-ного тестостеронового геля (в 6 повторах), полученными с кожей от того же донора; все данные были нормализованы относительно контрольной (имеющейся в продаже) композиции.

В этих экспериментах использовали радиоактивно меченный тестостерон (¹⁴С, удельная радиоактивность 50-60 мКи/ммоль), предоставленный Атепсап Ка4ю1аЬе1е4 СЬетюак; чистота препарата 99,5% (по данным ВЭЖХ).

Радиоактивный гель готовили с таким расчетом, чтобы на область диффузии площадью 0,64 см² в камере Франца наносилось 0,125-0,250 мкКи в минимальном количестве геля. Это минимальное количество геля составляло по меньшей мере 5,0-15,0 мг. Соответствующее количество радиоактивного тестостерона (12,5 мкКи/125 мкл этанола) выпаривали в колбе с круглым дном досуха. В эту колбу помещали 500 мг холодной гелевой композиции, взбалтывали в течение 5 мин и оставляли на ночь (12-16 ч) для уравновешивания. Затем этот гель взбалтывали 30 мин, чтобы обеспечить гомогенность. Гомогенность распределения радиоактивности в композиции определяли, снимая показания счетчика радиоактивности с 9 точно взвешенных (около 5 мг) образцов (стандарты).

Замороженную кожу оттаивали при комнатной температуре в течение 30-45 мин. Затем ее промывали водой, чтобы удалить глицерол, помещали в РВ8 рН 7,4 и осторожно встряхивали во встряхивателе (100 об./мин) в течение 20 мин для удаления следов глицерола. Промытую кожу устанавливали в диффузионную камеру приблизительно за 30 мин до нанесения композиции. Композицию в количестве 5-15 мг наносили на поверхность эпидермиса с помощью шприца за счет силы тяжести (в каждом опыте количество геля было достаточно для покрытия испытываемой поверхности и определяли массу распределенного по ней геля). Периодически (через 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 и 24 ч) отбирали образцы рецепторного отде

- 12 012754 ления камеры, чтобы измерить количество лекарственного вещества, проникшего через кожу.

Процедура промывки.

В конце опыта (24 ч) оставшийся на поверхности кожи препарат удаляли, промывая поверхность 200 мкл различных растворителей по следующей схеме:

1- е промывание: Се1ау1оп™ спиртовой (10/90 об./об.);

2- е промывание: вода;

3- е промывание: Се1ау1оп™ спиртовой (10/90 об./об.);

4- е промывание: вода;

5- е промывание: вода.

Затем поверхность, на которую была нанесена композиция, промокали палочкой с ватным кончиком (Ο-Ιίρ). Промывные растворы, палочку с ваткой и донорное отделение диффузионной камеры помещали в этиловый спирт (20 мл) и давали всей радиоактивности выйти в спирт. Экспонированную область кожи собирали дерматомом. Для подсчета латеральной диффузии собирали боковые участки кожи и измеряли в них радиоактивность, чтобы определить баланс массы в этих опытах.

Кожу из области активной диффузии, а также боковые участки кожи измельчали при помощи остроконечных диссекционных ножниц (81дта) и для экстракции радиоактивности оставляли на ночь для переваривания в 3 мл раствора 8о1иепе 350™ (РАСКАКЭ).

Радиоактивность образцов, полученных, как описано выше, измеряли (суммарную и во взвешенных аликвотах) с помощью сцинтилляционного счетчика для жидких образцов, снабженного специальным программным обеспечением.

Оценку делали для стандартов (0,5 мл/5 мл Р1соДиог 40™), для жидкости из рецепторного отделения (1,0 мл/10 мл Р1соДиог 40™) и для точно взвешенных аликвот спиртового раствора, содержащего промывные растворы (0,5 мл/5 мл РкоДиог 40™).

Для эпидермиса и дермы после переваривания добавляли 15 мл Нюшс Р1иог 30™ (РАСКАКЭ). Фоновый счет автоматически вычитался из величины счета каждого образца в импульсах за минуту (число распадов в минуту).

Анализ данных.

Результаты выражали как количество или долю (%) нанесенного тестостерона, обнаруженного в разных отделениях. Нанесенные количества тестостерона определяли по показаниям счетчика для разведенных стандартов. Каждый результат представляет среднее значение шести экспериментальных определений и ассоциирован с их стандартной ошибкой среднего.

1. Количество тестостерона и долю (%) поглощенной дозы в жидкости в рецепторном отделении каждый раз рассчитывали следующим образом:

% = (ф/01)х100, где 01 - количество, поглощенное на момент времени ΐ,

Οί - нанесенное количество в момент времени 0.

2. Общее количество и соответствующая доля (%) поглощенной дозы как функция времени (суммарные значения).

3. Средний поток проникшего тестостерона рассчитывали по наклону линейного участка графика зависимости О от времени и выражали в мкКи/см²/ч.

4. Количество и доля (%) введенной дозы, обнаруженные в коже и в промывных растворах.

Достоверность определения проверяли по согласованию данных по радиоактивности различных образцов (такая сводка должна быть включена между 90 и 110% наносимой дозы для каждого опыта).

Результаты и выводы.

Из табл. 14 видно, что в случаях композиций Р45, Р47, Р52, Р53, Р54 и Р55 проникает гораздо меньше тестостерона, чем в случае Р56 (Р<0,001). Для композиций Р41, Р42, Р43, Р44, Р46, Р48, Р50, Р51 количество проникшего тестостерона, по-видимому, меньше, чем для Р56. Однако разница между этими композициями и Р56 не была статистически значимой (Р>0,05). Для Р49 проникновение выше, чем для Р56, но разница между этими двумя композициями не была статистически значимой (Р>0,05). Данные по балансу массы показывают, что удержание тестостерона в коже варьирует. Эти данные также демонстрируют, что баланс массы составляет 90-110% начального количества нанесенного С-тестостерона (табл. 14).

В случае композиций Р41, Р42, Р46, Р49, Р50 поток, хотя, по-видимому, и выше, чем в случае Р56, различия не были статистически значимыми (Р>0,05). Для всех других композиций поток, хотя, повидимому, и ниже, чем в контроле, разница по сравнению с Р56 не была статистически значимой (Р>0,05) за исключением случая Р45.

По результатам этого исследования ясно, что скорость и степень проникновения тестостерона через человеческую кожу для всех испытанных композиций были ниже, чем для контрольной композиции (или в некоторых случаях сходные), и ни для одной из испытанных композиций не наблюдалось существенно более высокого проникновения по сравнению с контролем (Р56).

- 13 012754

Ограничения исследований потока.

Проведенные в данной работе исследования основывались на кинетике конечных доз, где стадией, лимитирующей скорость, является взятое количество геля. Вследствие использования конечных доз для большинства композиций был получен нелинейный профиль проникновения, что затрудняло расчет стационарного потока. Тем не менее по точкам, соответствующим моментам времени 2-10 ч, были рассчитаны значения потока, что является допущением линейной прогрессии потока, но в действительности стационарное состояние в этих экспериментах не достигалось. Следовательно, значения ЛИС (площадь под кривой) дают для сравнения композиций лучшее представление, чем значения потока.

Таблица 14 Исследования баланса массы

Донор 8127

	Р41	Р42	Р43	Р44	Р56
Среднее	3ϋ	Среднее	3ϋ	Среднее	8Ώ	Среднее	80	Среднее	8ϋ
В промывных растворах, %	72,84	19,88	82,63	12,27	95,46	8,71	92,22	3,68	92,01	13,45
Боковая кожа, %	1,15	2,14	0,27	0,18	0,31	0,41	0,36	0,29	0,59	0,40
Контрольная кожа,%	10,57	4,50	6,38	5,27	4,18	1,14	5,80	2,28	3,52	2,39
Проникновение, %	4,86	1,53	3,45	0,43	2,70	0,70	3,80	2,05	5,87	5,05
Суммарно, %	89,42		92,73		102,65		102,18		101,99

Донор 8300

	Р45	Р46	Р47	Р48	Р56
Среднее	8ϋ	Среднее	8ϋ	Среднее	8ϋ	Среднее	3ϋ	Среднее	8ϋ
В промывных растворах, %	95,41	5,29	86,91	3,16	87,98	13,59	79,68	7,41	86,08	3,67
Боковая кожа, %	0,24	0,14	0,42	0,17	0,14	0,08	0,25	0,10	0,21	0,09
Контрольная кожа, %	4,09	2,05	4,67	1,84	2,29	0,84	4,88	2,76	4,07	1,59
Проникновение, %	3,51	1,65	6,37	3,98	3,57	1,25	5,38	3,81	7,56	1,78
Суммарно, %	103,25		98,37		93,98		90,19		97,92

Донор 8300

	Р49	Р50	Г51	Р52	Р56
Среднее	8ϋ	Среднее	8ϋ	Среднее	8ϋ	Среднее	30	Среднее	5ϋ
В промывных растворах, %	79,64	5,61	88,34	2,30	91,04	8,28	95,51	4,07	86,08	3,67
Боковая кожа, %	0,41	0,24	0,29	0,25	0,54	0,59	0,23	0,21	0,21	0,09
Контрольная кожа, %	8,29	2,69	5,70	2,12	6,58	1,92	2,67	0,84	4,07	1,59
Проникновение, %	9,47	2,14	5,69	1,72	6,73	2,28	2,22	0,40	7,56	1,78
Суммарно, %	97,82		100,01		104,89		100,64		97,92

Донор 8300

	Р53	Р54	Е55	Р56
Среднее		Среднее		Среднее		Среднее	8П
В промывных растворах, %	85,33	4,58	87,39	4,37	90,02	2,64	86,08	3,67
Боковая кожа, %	0,20	0,08	0,35	0,33	0,09	0,05	0,21	0,09
Контрольная кожа, %	9,14	2,93	5,88	3,69	4,37	3,29	4,07	1,59
Проникновение, %	4,61	0,62	4,33	0,68	4,33	0,68	7,56	1,78
Суммарно, %	99,28		97,95		98,81		97,92

Пример 3. Исследование поглощения экспериментальных композиций тестостеронового геля через человеческую кожу ίη νίΐΓΟ методом ВЭЖХ.

Методы.

Человеческая кожа. Замороженная человеческая кожа была предоставлена И.8. Т188ие апб Се11 (Сшаппаб, ОН). Материал транспортировали в сухом льду и по получении хранили при -80°С вплоть до использования. Средняя толщина срезов (изготовляли с помощью дерматома) составляла 540 мкм. Каждый эксперимент проводили в шести повторах (п=6), используя материал от одного и того же донора для каждой композиции. Также материал от каждого донора исследовали на проникновение 1%-ного имеющегося в продаже геля (Е56) в трех повторах и все данные нормализовали по отношению к этим измерениям.

Композиции. Композиции готовили и получали от δοϊνην Рйагтасеибсак. Их использовали «вслепую» за исключением контрольной (имеющегося в продаже 1%-ного тестостеронового геля, Р56).

Исследования переноса. Чрескожное поглощение ίη νίΐτο исследовали количественно, помещая человеческую кожу в диффузионную камеру Франца. Образец кожи располагали горизонтально между донорным и рецепторным отделениями камеры. Площадь поверхности кожи, экспонированная испытываемой композиции, составляла 0,64 см², объем рецепторного отделения 5 мл. Температуру поддержива- 14 012754 ли 37°С с помощью двойной проточной водяной рубашки вокруг нижнего отделения камеры; это обеспечивало поддержание температуры кожи на физиологическом уровне. Верхнее отделение камеры было открыто сверху.

Рецепторное отделение камеры заполняли жидкостью рецепторного отделения, состоявшей из забуференного фосфатом физиологического раствора (РВ8) рН 7,4 и пропиленгликоля (1:1). Кожу помещали в камеру приблизительно за 30 мин до нанесения испытываемой композиции. Композицию (300 мг ± 5%, что содержало 3000 мкг активного вещества 1%-ного геля) наносили на поверхность эпидермиса за счет силы тяжести. Периодически (0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 и 24 ч) отбирали образцы, заменяя взятый объем свежим буферным раствором.

Анализ. В образцах определяли содержание тестостерона методом ВЭЖХ при следующих условиях:

: Ацетонитрил : Вода (50:50) : С18, 3 мкм, 150 мм РЬепотепех (Νιιοίοοϊίΐ) : 30 мкл

Подвижная фаза

Колонка

Вносимый объем

Скорость потока : I мл/мин

Длина волны : 239 нм

Результаты.

Представленные в табл. 15 результаты выражены как суммарное количество проникшего тестостерона в зависимости от времени для различных композиций. Таблица показывает суммарное количество проникшего тестостерона относительно контрольного/имеющегося в продаже продукта для материала (человеческая кожа) от одного и того же донора. Средний поток проникшего тестостерона рассчитывали по наклону линейного участка графика зависимости САК (суммарное высвобожденное количество) от времени и выражали в мкг/см²/ч. Результаты выражены как отношение потока для испытываемых и контрольной композиций (опыт/контроль). Также сравнивали суммарное количество тестостерона, проникшее через 1 см² кожи, с таковым для контрольной композиции и выражали в виде отношения (опыт/контроль). Таким образом, каждую испытываемую композицию сравнивали с контрольной (имеющимся в продаже гелем) по суммарному проникновению и величине потока; результаты собраны в табл. 15. Для каждой композиции оценивали статистическую значимость сравнения с контрольным продуктом, используя вариационный анализ. Средняя разница с Р<0,05 считалась статистически значимой. Данные для каждой композиции относительно контрольного продукта показывают отношение потоков и отношение суммарных высвобожденных количеств, а также статистические выводы.

Выводы.

Проникновение тестостерона через срезы человеческой кожи наблюдали для всех композиций, которые различались по степени проникновения, варьировавшей от 1 до 7%.

Как показывает табл. 15, композиции Е48, Е49 и Е53 характеризовались лучшим по сравнению с имеющимся в продаже продуктом проникновением, как было определено путем сравнения суммарного количества тестостерона, проникшего через кожу за 24 ч, и/или потока при статистически значимых ве личинах.

Таблица 15

Данные, полученные методом ВЭЖХ и использованные для статистического анализа

Композиция	Донор	Поток, мкг/см2/ ч	Суммарное высвобожденное количество (САК) мкг	Относительное стандартное отклонение ((ЗЭ/среднее) 100)	Отношение потока	Отношение САК	Статистически лучше, чем имеющийся в продаже состав?
Отношение потока	Отношение САК
Г 41 (п=4)	8127	13,03	189,81	11,87	0,65	1,02	Нет	Нет
Р 42 (п=5)	8127	10,944	188,21	55,52	0,54	1,01	Нет	Нет
Р 43 (п=6)	8127	3,44	50,11	23,91	0,17	0,27	Нет	Нет
Р 44 (п=6)	8127	10,57	151,95	22,05	0,53	0,82	Нет	Нет
Г 45 (11=6)	8300	5,95	74,13	29,00	0,47	0,69	Нет	Нет
Р 46 (п=6)	8300	11,16	117,87	22,60	0,88	1,09	Нет	Нет
Г 47 (п=6)	8300	10,85	114,61	22,57	0,86	1,06	Нет	Нет
Р 48 (11=6)	8300	20,53	208,82	39,5	1,62	1,94	Да	Да
Р 49 (п=6)	8127	20,34	298,76	18,70	1,01	1,61	Нет	Да
Р 50 (11=6)	8127	6,78	94,71	28,76	0,34	0,51	Нет	Нет
Р51 (п=6)	8127	21,37	254,57	29,68	1,06	1,37	Нет	Нет
Р 52 (п=4)	8127	8,18	113,93	40,08	0,41	0,61	Нет	Нет
р 53 (п=б)	8127	24,04	326,46	28,49	1,19	1,76	Нет	Да
Р 54 (п=6)	8127	14,75	200,45	37,80	0,73	1,08	Нет	Нет
Р 55 (п=4)	8127	16,67	240,61	27,58	0,83	1,30	Нет	Нет
Р 56 (п=3)	8127	20,13	185,71	23,15	Нет данных	Нет данных	Нет данных	Нет данных
Г 56 (п=3)	8300	12,69	107,79	7,00	Нет данных	Нет данных	Нет данных	Нет данных

- 15 012754

Пример 4. Исследование поглощения для трех композиций тестостеронового геля через человеческую кожу 1п νΐΐΐΌ методом ВЭЖХ.

Методы.

Человеческая кожа. Замороженная человеческая кожа была предоставлена υ.δ. Т188ие апй Се11 (Сшаппай, ОН). Материал транспортировали в сухом льду и по получении хранили при -80°С вплоть до использования. Средняя толщина срезов (изготовляли с помощью дерматома) составляла 700 мкм. Каждый эксперимент проводили в шести повторах (п=6), используя материал от одного и того же донора для каждой композиции. Проникновение для контрольной композиции Р56 (имеющегося в продаже 1%-ного тестостеронового геля) исследовали также в шести повторах (п=6) и все данные нормализовали относительно этих измерений.

Композиции. Композиции готовили и получали от 8о1\^гау Рйагтасеийсак. Их использовали «вслепую» за исключением контрольной (имеющегося в продаже 1%-ного тестостеронового геля, Р56).

Исследования переноса. Чрескожное поглощение ш νίϋΌ исследовали количественно, помещая человеческую кожу в диффузионную камеру Франца. Образец кожи располагали горизонтально между донорным и рецепторным отделениями камеры. Площадь поверхности кожи, экспонированная испытываемой композиции, составляла 0,64 см², объем рецепторного отделения 5 мл. Температуру поддерживали 37°С с помощью двойной проточной водяной рубашки вокруг рецепторного отделения камеры; это обеспечивало поддержание температуры кожи на физиологическом уровне. Донорное отделение камеры было открыто сверху.

Рецепторное отделение камеры заполняли жидкостью для рецепторного отделения, состоявшей из забуференного фосфатом физиологического раствора (РВ8) рН 7,4 и пропиленгликоля (1:1). Кожу помещали в камеру приблизительно за 30 мин до нанесения испытываемой композиции. Композицию (300 мг ± 5%, что содержало 3000 мкг активного вещества 1%-ного геля) наносили на поверхность эпидермиса за счет силы тяжести. Периодически (0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 и 24 ч) отбирали образцы, заменяя взятый объем свежим буферным раствором.

Анализ. В образцах определяли содержание тестостерона методом ВЭЖХ при следующих условиях:

: Ацетонитрил : Вода (50:50) : С18, 3 мкм, 150 мм Рйепошепех (Ыис1еоы1) : 30 мкл

Подвижная фаза

Колонка

Вносимый объем

Скорость потока

Длина волны : 1мл/мин

239 нм

Результаты.

Представленные в табл. 17-20 и на фиг. 7-9 результаты выражены как суммарное количество проникшего тестостерона в зависимости от времени для различных композиций. Каждая таблица показывает суммарное количество проникшего тестостерона относительно контрольного/имеющегося в продаже продукта для материала (человеческая кожа) от одного и того же донора. Средний поток проникшего тестостерона рассчитывали по наклону линейного участка графика зависимости САК (суммарное высвобожденное количество) от времени и выражали в мкг/см²/ч. Результаты выражены как отношение потока для испытываемых и контрольной композиций (опыт/контроль). Также сравнивали суммарное количество тестостерона, проникшее через 1 см² кожи, с таковым для контрольной композиции и выражали в виде отношения (опыт/контроль). Таким образом, каждую испытываемую композицию сравнивали с контрольной (имеющимся в продаже гелем) по суммарному проникновению и величине потока; результаты собраны в табл. 16. Для каждой композиции оценивали статистическую значимость сравнения с контрольным продуктом, используя вариационный анализ. Средняя разница с Р<0,05 считалась статистически значимой.

Выводы.

Проникновение тестостерона через срезы человеческой кожи наблюдали для трех композиций; оно составило около 3% (САК).

Все три испытанные композиции Р57, Р58 и Р59 характеризовались лучшим проникновением по сравнению с имеющимся в продаже продуктом, как следовало из сравнения суммарного количества тестостерона, проникшего за 24 ч и/или потока при статистически значимых величинах.

Соответственно, используя опыт настоящего раскрытия, можно приготовить водно-спиртовой гель, содержащий тестостерон, изопропилмиристат, этанол, воду и загущающий агент в количестве, достаточном для придания гелю вязкости выше примерно 9000 сП, и этим гелем, нанесенным на помещенную в диффузионную камеру Франца человеческую кожу в количестве около 300 мг, через 24 ч будет обеспечено отношение потока тестостерона выше 1 или предпочтительно выше 1,5, где отношение потоков это отношение потока тестостерона, выраженное в количестве на единицу площади в единицу времени, которое проникает через кожу в названных условиях, к потоку тестостерона, которое проникает через кожу в случае геля сходной вязкости, содержащего 1% (мас./мас.) тестостерона, 0,5% (мас./мас.) изопропилмиристата и 72,5% (мас./мас.) 95%-ного (об./об.) спирта в таких же условиях. Водно-спиртовой гель

- 16 012754 содержит 1,15-1,8% (мас./мас.) тестостерона, 0,6-1,2% (мас./мас.) изопропилмиристата и 72,0-78,0% (мас./мас.) 95%-ного (об./об.) спирта.

Таблица 16

Сводка данных по чрескожному проникновению тестостерона через 24 ч после нанесения испытываемых (Е57, Е58 и Е59) и контрольной (Е56) композиций

Композиция	Донор	Поток, мкг/см^ч	Суммарное высвобожденное количество (САК), мкг	Относительное стандартное отклонение ((80/среднее) 100)	Отношение потока	Отношение САК	Статистически лучше, чем имеющийся в продаже состав?
Отношение потока	Отношение САК
Контроль Р56 (п=6)	8126	4,20	50,76	26,08	-	-	-	-
Р57 (п=6)	8126	10,69	129,66	41,77	2,55	2,55	Да	Да
Р58 (п=6)	8126	8,70	136,98	10,88	2,07	2,70	Да	Да
Р59 (п=6)	8126	12,67	156,32	15,25	3,02	3,08	Да	Да

Таблица 17

Данные по чрескожному проникновению тестостерона для контрольной композиции (Е56)

Время, ч	Контроль (импульсы с площади)	Концентрация, (мкг/мл)	Концентрация Χϋίΐ	Концентрация* 0,3	Всего (5 мл)	Суммарно (мкг)	Суммарно (см2)		Поток (мкг/см2/ч)
0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
1,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
2,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
4,00	4137,83	0,05	0,05	0,02	0,25	0,25	0,40	0,10	0,20
6,00	15522,67	0,19	0,19	0,06	0,96	0,97	1,52	0,30	0,56
8,00	71183,00	0,88	0,88	0,26	4,38	4,46	6,96	1,49	2,72
10,00	185241,67	2,28	2,28	0,68	11,41	11,74	18,35	3,37	5,69
22,00	484302,17	5,97	5,97	1,79	29,83	30,85	48,20	12,49	2,49
24,00	481870,50	5,94	5,94	1,78	29,68	32,49	50,76	12,29	1,28

Таблица 18

Данные по чрескожному проникновению тестостерона для экспериментальной композиции Е57

Время, ч	Р57 (импульсы с площади)	Концентрация, (мкг/мл)	Концентрация Χϋίΐ	Концентрация* 0,3	Всего (5 мл)	Суммарно (мкг)	Суммарно (см2)	8Э	Поток (мкг/см2/ч)
0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
1,00	5171,20	0,06	0,06	0,02	0,31	0,31	0,48	0,73	0,48
2,00	13574,00	0,16	0,16	0,05	0,81	0,83	1,30	0,53	0,82
4,00	45117,33	0,54	0,54	0,16	2,71	2,77	4,33	1,29	1,52
6,00	147837,67	1,77	1,77	0,53	8,87	9,10	14,21	4,45	4,94
8,00	393201,67	4,72	4,72	1,42	23,58	24,35	38,04	11,49	11,91
10,00	571442,33	6,86	6,86	2,06	34,28	36,45	56,96	17,86	9,46
22,00	1201173,50	14,41	14,41	4,32	72,05	76,28	.119,19	50,99	5,19
24,00	1240824,00	14,89	14,89	4,47	74,43	82,98	129,66	50,45	5,24

Таблица 19

Данные по чрескожному проникновению тестостерона для экспериментальной композиции Е58

Время, ч	Р58 (импульсы с площади)	Концентрация, (мкг/мл)	Концентрация ХЫ1	Концентрация* 0,3	Всего (5 мл)	Суммарно (мкг)	Суммарно (см2)		Поток (мкг/см2/ч)
0,00	0,00	0,00	0,00	0.00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
1,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
2,00	13377,80	0,16	0,16	0,05	0,80	0,80	1,25	1,23	1,25
4,00	41996,33	0,50	0,50	0,15	2,52	2,57	4,01	1,03	1,38
6,00	114316,00	1,37	1,37	0,41	6,86	7,06	11,03	2,71	3,51
8,00	372728,67	4,47	4,47	1,34	22,36	22,97	35,89	10,99	12,43
10,00	665420,00	7,98	7,98	2,39	39,91	41,86	65,41	14,32	14,76
22,00	1304913,50	15,65	15,65	4,70	78,27	82,62	129,09	11,80	5,31
24,00	1123168,83	15,72	15,72	4,72	78,62	87,67	136,98	13,89	3,95

- 17 012754

Таблица 20

Данные по чрескожному проникновению тестостерона для экспериментальной композиции Е59

Время, ч	Е 59 (импульсы с площади)	Концентрация, (мкг/мл)	Концентрация Χϋϋ	Концентрация* 0,3	Всего (5 мл)	Суммарно (мкг)	Суммарно (см2)	δϋ	Поток (мкг/см2/ч)
0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
1,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
2,00	5610,17	0,07	0,07	0,02	0,35	0,35	0,54	0,25	0,54
4,00	30049,67	0,37	0,37	0,11	1,86	1,88	2,94	1,34	1,20
6,00	140427,33	1,74	1,74	0,52	8,69	8,82	13,79	4,64	5,42
8,00	439193,83	5,44	5,44	1,63	27,18	27,83	43,49	10,80	14,85
10,00	629849,83	7,80	7,80	2,34	38,98	41,26	64,47	10,42	10,49
22,00	1346943,00	16,67	16,67	5,00	83,36	87,98	137,47	30,64	6,08
24,00	1461065,83	18,08	18,08	5,43	90,42	100,05	156,32	36,38	9,43

Пример 5. Фармакокинетика однократной и многократных доз тестостерона после введения 1,62%ного водно-спиртового геля в дозах 1,25; 2,50; 3,75; 5,00 и 6,25 г у мужчин с гипогонадизмом.

Задачи.

Определить фармакокинетику однократной и многократных доз тестостерона после введения 1,62%-ного водно-спиртового геля в дозах 1,25 г (20,3 мг); 2,50 г (40,5 мг); 3,75 г (60,8 мг); 5,00 г (81,0 мг) и 6,25 г (101,3 мг) у мужчин с гипогонадизмом.

Оценить пропорциональность доз и накопление тестостерона в диапазоне доз 1,25 г (20,3 мг) - 6,25 г (101,3 мг).

Методы.

Композиции. Композиции готовили и получали от Зо1уау Рйагтасеийсак. Их использовали «вслепую», за исключением контрольной (имеющегося в продаже 1%-ного тестостеронового геля, Е56).

План исследования. Одноцентровое открытое рандомизированное исследование воздействия однократной и многократных доз с параллельными группами пациентов - лиц мужского пола с гипогонадизмом. Пациентов распределили случайным образом на 5 групп, в каждой из которых должно было быть 12 человек (всего 60 человек).

Пациенты, давшие согласие на участие в этом исследовании и удовлетворявшие критериям отбора, были случайным образом распределены на следующие группы.

Таблица 21

Группы пациентов

Группа	Доза геля, г	Доза тестостерона,
А	1,25	20,3
В	2,50	40,5
С	3,75	60,8
ϋ	5,00	81,0
Е	6,25	101,3

Каждый пациент получал однократную (день 1) и многократные (дни 2-14) дозы 1,62%-ного тестостеронового геля на протяжении 14-дневного периода лечения. Испытываемый лекарственный препарат применяли местно один раз в сутки по утрам. Общая продолжительность исследования составляла 17 дней, не включая период скрининга. Все эти 17 дней пациенты не покидали клиники. В следующей таблице перечислены ингредиенты использованной в этом исследовании композиции.

Таблица 22

Ингредиенты, объединенные для получения исследуемой композиции

Компонент	Функция	% (масса/масса)
Тестостерон	Активное начало	1,62
Этиловый спирт 95%-ныЙ (объем/объем)*	Усилитель абсорбции	73,5
Изопропилмиристат	Усилитель, абсорбции	1,0
Карбопол 980	Загуститель	1,0
Натрия гидроокись 0,1 и	Нейтрализующий агент	7,0
Вода очищенная	Растворитель	15,9

* Эквивалентно около 68,1% абсолютного спирта в композиции.

Пациенты: 56 мужчин с гипогонадизмом.

Основные критерии отбора: лица мужского пола в возрасте 18-75 лет включительно; уровень тестостерона в сыворотке крови <300 нг/дл по данным местной клинической лаборатории; индекс массы тела (ΒΜΙ) 20-35 кг/м² включительно.

Способы и оценка данных.

Введение дозы: 1,62%-ный гель применяли местно один раз в сутки по утрам с 11-го по 14-й день.

- 18 012754

Место нанесения геля было в области от плеча до локтя или на животе. Испытываемый препарат наносили по 1,25 г до тех пор, пока не достигалась желаемая суммарная доза, причем обрабатываемая поверхность была максимально возможной.

За 20 мин до назначенного момента нанесения препарата пациенты принимали душ, промывая место нанесения водой с мылом. Пациентам не разрешалось находиться в душе долее 10 мин. Предназначенный для нанесения геля участок поверхности тела тщательно вытирали досуха.

Медицинский персонал, участвовавший в процедуре, перед тем, как манипулировать с испытываемым препаратом, надевал резиновые перчатки - новую пару для каждого пациента. Каждую разовую дозу геля 1,25±0,02 г отвешивали на листке бумаги для взвешивания на весах. Сразу после взвешивания гель с бумаги наносили непосредственно на предназначенное для того место на теле пациента, что делали сотрудники, занятые в исследовании. Затем сам пациент рукой втирал препарат в кожу этого места. Процедуру повторяли до тех пор, пока не достигалась желаемая суммарная доза (1,25-6,25 г).

Отбор образцов для получения фармакокинетических данных. У каждого пациента брали образцы цельной крови (по 10 мл) для определения общего тестостерона, дигидротестостерона и эстрадиола по следующей временной схеме:

день накануне 1-го: перед получением дозы, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 16 ч относительно запланированного момента нанесения геля в последующие дни;

день 1: перед получением дозы, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 16 ч после получения дозы;

дни 2-13 перед получением дозы;

день 14: перед получением дозы, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16 и 24 ч после получения дозы.

Биологический анализ. Определяли общий тестостерон, дигидротестостерон и эстрадиол в сыворотке крови с помощью апробированного метода БС-М8/М8 (жидкостная хроматография/массспектрометрия).

Критерии оценки.

Безопасность: показатели жизненно важных функций, электрокардиография, физикальное обследование, клинические лабораторные анализы (включая определение простата-специфичного антигена Р8Л), пальцевое ректальное исследование, суммарная оценка симптомов при заболеваниях предстательной железы (1Р88), гематокрит, определение тестостерона.

Фармакокинетика: для этого предварительного отчета фармакокинетические параметры (ЛИС 0-24, С_тах, С_средн, С_тт, изменение от пиковой концентрации до минимальной, Т_тш и Т_тах) выводили как по наблюдаемой концентрации тестостерона в сыворотке крови, так и по приведенной к базовому уровню (исходной).

Статистические методы: описательная статистика (η, среднее, 8Ό, СУ, средняя линия, среднее геометрическое, минимум, максимум) и графическое представление.

Таблица 23

Демографическая характеристика пациентов (среднее (диапазон))

Группа обработки	N	Возраст (лет)	Индекс массы тела (кг/м2)
А (1,25 г)	И	50 (27-69)	30.4 (25.6-33.6)
В (2,50 г)	И	50(31-66)	31.0 (25.9-36.1)
С (3,75 г)	11	52 (38-65)	29.3 (21.8-35.3)
ϋ (5,00 г)	12	55 (37-68)	29.6 (22.6-34.0)
Е (6,25 г)	11	48 (27-68)	30.2 (27.3-32.7)
Все группы	56	51 (27-69)	30.1 (21.8-36.1)

Таблица 24

Этническая характеристика пациентов (Ν (%))

Группа обработки	N	Белые (не испанского или латиноамериканского происхождения	Белые (испанского или латиноамер ик анского происхождения	Чернокожие	Азиаты
А	11	5	5	0	1
В	11	5	6	0	0
С	11	5	5.	1	0
ϋ	12	5	7	0	0
Е	11	2	9	0	0
Все группы	56	22 (39,3%)	32(57,1%)	1 (1,8%)	1 (1,8%)

Определение базового уровня тестостерона.

Все пациенты на момент определения исходного уровня тестостерона до начала применения лекарственного препарата имели концентрацию тестостерона в сыворотке крови <300 нг/дл, что соответство

- 19 012754 вало диагнозу гипогонадизма. Уровень тестостерона определяли в местной клинической лаборатории методом хемилюминесценции. Средний исходный уровень общего тестостерона в сыворотке крови варьировал от 215 до 232 нг/дл в пяти группах, различавшихся по принимаемой дозе тестостеронового геля. Эти данные представлены в табл. 25.

Таблица 25

Средние значения базового уровня тестостерона при скрининге

Группа обработки	N	Средняя базовая концентрация тестостерона (нг/дл) .	Диапазон
А	11	215	73-286
В	11	. 231	132-293
С	11	230	93-295
ϋ	12	232	132-293
Е	11	225	158-282
Все группы	56	227	23-295

Данные о концентрации тестостерона в зависимости от времени.

Графики средней наблюдаемой концентрации тестостерона как функции времени в день 1 и день 14 представлены на фиг. 10 и 11 соответственно.

Как видно на фиг. 10, в день 1 имело место непрерывное увеличение наблюдаемой концентрации тестостерона в сыворотке крови во всех группах пациентов в течение приблизительно 8 ч после нанесения геля. Затем концентрация тестостерона не изменялась вплоть до конца 24-часового интервала между моментами введения препарата. Судя по этим графикам, во всех группах пациенты получали достаточно тестостерона, чтобы его уровень в крови повысился сверх нижнего предела нормального диапазона (>300 нг/дл) после введения единичной дозы в день 1. Согласующиеся уровни тестостерона наблюдались на большинстве графиков концентрации тестостерона в зависимости от времени, охватывающих 24 ч после получения многократных доз 1,62%-ного тестостеронового геля. Исключение составляет группа Ό (доза 5,00 г): в этом случае через 6 ч после введения препарата отмечался значительный всплеск концентрации тестостерона в сыворотке крови. Это возрастание средних значений получалось из-за данных от одного из пациентов, у которого концентрация тестостерона через 6 ч после нанесения геля составляла 4980 нг/дл.

Как видно на фиг. 11, на 14-й день средние концентрации тестостерона оставались выше нижнего предела нормального диапазона (>300 нг/дл) через 24 ч после введения препарата во всех пяти группах, различающихся по вводимой дозе. Увеличение экспозиции тестостерона наблюдалось при увеличении дозы сверх диапазона 1,25-6,25 г, за исключением второго пика на графике для группы Ό (5 г).

Результаты по фармакокинетике тестостерона.

Фармакокинетические результаты для наблюдаемых и приведенных к базовому уровню концентраций тестостерона после введения пациентам однократной дозы 1,62%-ного тестостеронового геля в день 1 представлены ниже в табл. 26.

Таблица 26 Фармакокинетические параметры для однократной дозы 1,62%-ного тестостеронового геля в день 1

Параметр	Группа обработки	Доза геля, г	Доза тестостерона, г	Среднее арифметическое (8ϋ)
N	Наблюдаемое	N	с поправкой на базовое значение
АиС(0-24)	А	1,25	20,3	11	7376 (1465)	11	1934 (1005)
(нг-ч/дл)	В	2,50	40,5	11	9112(3354)	9	3168-(1845)
	С	3,75	60,8	11	8719(2831)	10	3330 (1875)
	ϋ	5,00	81	12	11933 (3188)	12	5329(3296)
	Е	6,25	101,3	11	11137(3024)	11	5573 (2602)
Середа	А	1,25	20,3	11	307(61)	11	81 (42)
(нг/дл)	В	2,50	40,5	И	380 (140)	9	132(77)
	С	3,75	60,8	11	363 (118)	10	139 (78)
	ϋ	5,00	81	12	497(133)	12	222(137)
	Е	6,25	101,3	11	464 (265)	11	232 (108)
Стах	А	1,25	20,3	11	387 (80)	11	159 (57)
(нг/дл)	В	2,50	40,5	11	479(161)	9	234(102)
	С	3,75	60,8	11	533 (211)	10	305 (178)
	ϋ	5,00	81	12	698(231)	12	424 (200)
	Е	6,25	101,3	11	657(215)	И	424(210)
Ттох[а]	А	1,25	20,3	11	12(4-24)	И	12 (4-24)
(ч)	В	2,50	40,5	11 '	12(4-24) .	9	16 (8-24)
	С	3,75	60,8	11	16 (8 - 24)	10	16 (8-24)
	О	5,00	81	12	12 (2-24)	12	12 (6-24)
	Е	6,25	101,3	11	12(8-24)	11	12(8-24)

а] медиана (диапазон)

- 20 012754

Наблюдаемая средняя концентрация тестостерона в сыворотке крови С_средн в день 1 была в пределах нормального диапазона 300-1000 нг/дл при всех дозах. Средние АИС и С_средн в целом увеличивались в диапазоне доз 1,25-6,25 г, причем значения были сходны для групп В и С, Ό и Е соответственно. Средняя С_тах увеличивалась с увеличением дозы от 1,25 до 5,00 г, затем не изменялась. Среднее Т_тах для всех групп кроме 5,00 г было 12 ч, варьируя от 2 до 24 ч.

Наблюдаемые значения С_тах в день 1 для доз геля 1,25 г; 2,50 г и 3,75 г оставались ниже верхнего предела нормального диапазона (<1000 нг/дл). В группе Ό (5 г) у одного пациента была отмечена С_тах=1070 нг/дл. В группе Е у одного пациента была отмечена С_тах=1020 нг/дл. Все прочие значения С_тах в день 1 были <1000 нг/дл в группах Ό и Е.

Значения параметров АИС и С_средн с поправкой на базовый уровень увеличивались с увеличением дозы во всех пяти группах. Исправленные с учетом базового уровня средние значения Ссредн показывают, что эндогенная концентрация тестостерона возрастала с 81 до 232 нг/дл вместе с увеличением однократной дозы 1,62%-ного тестостеронового геля от 1,25 до 6,25 г.

Фармакокинетические результаты введения многократных доз 1,62%-ного тестостеронового геля для наблюдаемого в день 14 уровня тестостерона в сыворотке крови и уровня с поправкой на базовый уровень представлены ниже в табл. 27.

Таблица 27 Фармакокинетические параметры для многократных доз 1,62%-ного тестостеронового геля в день 14

Параметр	Группа обработки	Доза геля, г	Доза тестостерона, г	Среднее арифметическое (8ϋ)
N	Наблюдаемое	N	с поправкой на базовое значение
АЕ!С(0-24)	А	1,25	20,3	И	7731 (2914)	9	3149 (2909)
(нг-ч/дл)	В	2,50	40,5	11	9232 (4146)	11	3174-(2628)
	С	3,75	60,8	11	11132(2950)	11	5346 (3834)
	ϋ	5,00	81	8	16115 (11345)	8	9646(12002)
	Е	6,25	101,3	10	15250(4123)	10	10005 (4474)
Ссредн	А	1,25	20,3	11	322 (121)	9	131 (121)
(нг/дл)	В	2,50	40,5	11	385 (173)	11	132 (110)
	С	3,75	60,8	11	464 (123)	И	223 (160)
	β	5,00	81	8	671 (473)	8	402 (500)
	Е	6,25	101,3	9	634 (182)	9	413 (197)
Стах	А	1,25	20,3	И	464(158)	9	293 (170)
(нг/дл)	В	2,50	40,5	11	506 (195)	11	266 (119)
	С	3,75	60,8	11	750(221)	11	523 (241)
	ϋ	5,00	81	8	1422(1450)	8	1145 (1466)
	Е	6,25	101,3	10	1179 (520)	10	965 (527)
Ттах[й]	А	1,25	20,3	И	8(0-16)	9	4(0,5-16)
(ч)	В	2,50	40,5	11	4(0-16)	11	8, (0,5 - 24)
	С	3,75	60,8	11	8(1-12)	И	1 (1 -12)
	ϋ	5,00	81	8	1,5(0,5-24)	8	1,5 (0,5-24)
	Е	6,25	101,3	10	6 (0,5 - 24)	10	6 (0,5 - 24)
СпЯп	А	1,25	20,3	11	209 (91)	9	46 (77)
(нг/дл)	В	2,50	40,5	11	263 (138)	11	29 (70)
	С	3,75	60,8	11	310(106)	11	89 (152)
	ϋ	5,00	81	8	414(184)	8	154 (203)
	Е	6,25	101,3	10	351 (43)	10	102 (74)
Отклонение	А	1,25	20,3	11	81 (20)	9	271 (166)
	В	2,50	40,5	11	66(18)	И	262(188)
	С	3,75	60,8	11	97 (43)	11	' 252(149)
	ϋ	5,00	81	8	129 (66)	8	355 (306)
	Е	6,25	101,3	9	117 (52)	9	201 (69)

а] медиана (диапазон)

Наблюдаемые значения параметров АИС, С_средн и С_тах в день 14 увеличивались с увеличением дозы от 1,25 до 5,00 г, достигая, по-видимому, постоянного уровня при дозе 6,25 г. В группе, получавшей дозу 5,00 г, у одного пациента (#25791) в день 14 были отмечены С_тах=4980 нг/дл и С_средн=1801 нг/дл. Эти значения были приблизительно в 4 раза выше, чем у других пациентов в той же группе. Причина столь высоких величин у этого пациента неизвестна. Когда его данные были исключены из расчета, среднего для группы в приведенной выше таблице, фармакокинетические параметры для группы, получавшей дозу 5,00 г, уменьшились: С_тах с 1422 до 914 нг/дл, С_средн с 671 до 510 нг/дл. С такими средними значения

- 21 012754 ми получалась тенденция увеличения С_средн и Стах с увеличением дозы в диапазоне 1,25-6,25 г.

Наблюдаемые средние значения С_тт оставались выше нижнего предела нормального диапазона концентраций тестостерона в сыворотке крови (>300 нг/дл) при введении многократной дозы на уровнях 3,75 г; 5,00 г и 6,25 г. Наблюдаемые значения средней С_средн для всех доз варьировали от 322 до 671 нг/дл и были в пределах нормального диапазона концентраций тестостерона в сыворотке крови - от 300 до 1000 нг/дл.

При дозе геля 1,25 г наблюдаемые значения С_тах в день 14 оставались ниже верхнего предела нормального диапазона (<1000 нг/дл). В других группах у в совокупности 12 пациентов наблюдались С_тах выше 1000 нг/дл. При дозе 2,50 г у одного из пациентов была С_тах=1010 нг/дл. При дозе 3,75 г у одного пациента была С_тах=1070 нг/дл. При дозе 5,00 г у четырех пациентов были С_тах >1000 нг/дл (от 1050 до 4980 нг/дл). При дозе 6,25 г у шести пациентов были С_тах >1000 нг/дл в пределах 1110-2080 нг/дл. Эти наблюдения базируются на результатах анализа методом ЬС-М8/М8. Таких значений не отмечалось в ходе проведенного в клинических условиях исследования на безопасность, предшествовавшего применению тестостеронового геля.

Средние значения Ссредн. С учетом исходного уровня возрастали на протяжении всего диапазона доз. Эта величина показывает, что концентрации эндогенного тестостерона увеличивались со 131 до 413 нг/дл на протяжении диапазона доз 1,25-6,25 г через 14 суток многократного введения 1,62%-ного тестостеронового геля.

Выводы.

На основании предварительных сведений о негативных явлениях, связанных с приемом тестостеронового геля; лабораторных измерений гематокрита и безопасности тестостерона; оценки состояния места нанесения можно утверждать, что 1,62%-ный тестостероновый гель был безопасен и хорошо переносим в диапазоне доз 1,25-6,25 г геля (20,3-101,1 мг тестостерона). После однократного и многократного введения 1,62%-ного тестостеронового геля в диапазоне доз 1,25-6,25 г геля (20,3-101,1 мг тестостерона) достигались средние значения С_средн в нормальном диапазоне 300-1000 нг/дл.

При наивысших примененных дозах 5,00 и 6,25 г геля (81,0 и 101,3 мг тестостерона соответственно) наблюдалась более высокая частота превышения значениями С_тах верхнего предела нормального диапазона у мужчин. Показан соответствующий мониторинг в III фазе клинических испытаний.

Все приводимые здесь ссылки, включая публикации, патентные заявки и патенты, включаются в настоящее изобретение путем отсылки в такой же степени, как если бы каждая ссылка в отдельности была указана как включаемая путем отсылки и полностью здесь излагалась.

При использовании отдельных численных значений они представляются как приблизительные, как если бы эти значения предварялись словами «около» или «приблизительно». Также численные значения различных диапазонов, приводимые в данной заявке, представляются, если не указано иного, как если бы минимальное и максимальное значения в этих диапазонах предварялись словами «около» или «приблизительно». Таким образом, варианты значений выше и ниже границ представленных диапазонов могут быть использованы для достижения по существу таких же результатов, какие получаются при использовании значений в пределах указанных диапазонов. Здесь слова «около» и «приблизительно», относящиеся к численным значениям, будут иметь свое обычное значение для рядового специалиста в области техники, к которой наиболее близка специфика конкретного объекта изобретения, или в области, имеющей отношение к элементу или диапазону. Степень расширения четких численных границ зависит от многих факторов. Например, некоторые достойные рассмотрения факторы включают элемент и/или эффект данной степени отклонения, влияющие на осуществление заявленного объекта изобретения, равно как и другие соображения, известные специалистам в данной области техники. В данном документе использование различающихся количеств значащих цифр для различных численных значений не означает ограничения того, что использование слов «около» или «приблизительно» должно служить для расширения того или иного численного значения.

Таким образом, в общем случае эти слова расширяют численное значение. Также раскрытие диапазонов имеется в виду как непрерывный ряд, включающий каждое значение между минимальным и максимальным плюс расширение диапазона, создаваемое употреблением слов «около» и «приблизительно». Таким образом, приведение диапазонов значений здесь служит кратким способом охватить каждое отдельное значение в пределах диапазона (если не указано иного) и каждое отдельное значение включено в описание, как если бы оно приводилось здесь в отдельности.

Использование выражений «это/данное/настоящее изобретение» не означает какого-либо ограничения формулы изобретения и не следует делать вывод, что любое описание или рассуждение, в котором фигурируют эти выражения, применяется к каждому пункту формулы изобретения. Названные выражения использованы здесь по лексическим или грамматическим соображениям и никак не ограничивают ни один пункт формулы изобретения.

Здесь описаны альтернативные воплощения заявленного изобретения, включая наилучший известный изобретателям способ осуществления заявленного изобретения. Варианты раскрытых воплощений будут очевидны для рядового специалиста в данной области техники по прочтении этих раскрытий. Изобретатели ожидают, что опытные специалисты при необходимости сумеют осуществить такие варианты;

- 22 012754 что заявленное изобретение будет использоваться не только в точности так, как здесь описано. Соответственно, заявленное изобретение включает все модификации и эквиваленты объекта изобретения, изложенного в прилагаемой к данной заявке формуле изобретения, насколько позволяет соответствующий закон. Более того, любая комбинация вышеописанных элементов во всех ее возможных вариантах охватывается заявленным изобретением, если здесь не указано иного или если это не противоречит явно содержанию.

Следует отдавать себе отчет в том, что любые диапазоны, отношения и диапазоны отношений, которые могут быть составлены или выведены из любых приведенных здесь данных, представляют собой дальнейшие воплощения данного раскрытия и включаются в настоящее изобретение как часть раскрытия - как если бы они были подробно изложены. Это относится к диапазонам, которые включают или не включают конечные верхнее и/или нижнее граничные значения. Соответственно, рядовой специалист в области техники, наиболее близко касающейся конкретного диапазона, отношения или диапазона отношений, оценит тот факт, что такие значения однозначно выводятся из представленных здесь данных.

Использование сходных определителей в контексте данного раскрытия (особенно в контексте нижеследующих пунктов формулы изобретения) должны быть истолкованы так, чтобы охватывать как единственное, так и множественное число, если здесь не указано иного или если нет явного противоречия с контекстом. Все описанные здесь способы могут быть применены в любом нужном порядке, если здесь не указано иного или если нет явного противоречия с контекстом. Представленное здесь использование любого и всех примеров или характерных для них выражений (такие как, например, «предпочтительный», «предпочтительно») имеет целью лишь дальнейшую иллюстрацию содержания раскрытия и не накладывает ограничения на пределы пунктов формулы изобретения. Никакие лексические особенности описания не следует истолковывать как указывающие на какой-либо незаявленный элемент как существенный для практического осуществления заявленного изобретения.

Claims (20)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Водно-спиртовая гелевая фармацевтическая композиция, содержащая:

   ί. от 1,15 до 1,8% (мас./мас.) тестостерона;

   ίί. от 0,6 до 1,2% (мас./мас.) изопропилмиристата;

   ίίί. от 60 до 80% (мас./мас.) спирта, выбираемого из группы, состоящей из этанола и изопропанола; ίν. загуститель в количестве, достаточном для придания композиции вязкости свыше 9000 сП; и ν. воду.
2. 2. Композиция по п.1, где композиция содержит от 67,0 до около 74,0% (мас./мас.) спирта, выбранного из группы, состоящей из этанола и изопропанола.
3. 3. Композиция по п.1 или 2, где композиция содержит от 1,50 до 1,70% (мас./мас.) тестостерона.
4. 4. Композиция по п.3, где композиция содержит около 1,62% (мас./мас.) тестостерона.
5. 5. Композиция по п.1 или 2, где композиция содержит от 1,15 до 1,25% (мас./мас.) тестостерона.
6. 6. Композиция по п.5, где композиция содержит около 1,22% (мас./мас.) тестостерона.
7. 7. Композиция по п.1 или 2, где композиция содержит от 1,30 до 1,45% (мас./мас.) тестостерона.
8. 8. Композиция по п.7, где композиция содержит около 1,42% (мас./мас.) тестостерона.
9. 9. Композиция по любому из пп.1-8, где композиция содержит от 0,6 до 1,4% (мас./мас.) загустителя.
10. 10. Композиция по любому из пп.1-9, где загуститель получают путем объединения полиакриловой кислоты - предшественника с нейтрализующим агентом в ходе получения композиции.
11. 11. Композиция по п.10, где загуститель является нейтрализованным карбомером.
12. 12. Композиция по п.10 или 11, где нейтрализующий агент выбирают из группы, состоящей из гидроокиси натрия, гидроокиси аммония, гидроокиси калия, аргинина, аминометилпропанола, тетрагидроксипропилэтилендиамина, триэтаноламина, трометамина, РЕС-15 кокамина, диизопропаноламина, триизопропаноламина и их сочетаний.
13. 13. Композиция по п.10, где нейтрализующим агентом служит 0,1н. ЫаОН в количестве от 6,5 до 7,5% (мас./мас.).
14. 14. Композиция по любому из пп.1-13, где композиция имеет вязкость от 13000 до 33000 сП.
15. 15. Композиция по любому из пп.1-14, где композиция предназначена для лечения гипогонадизма у пациента-мужчины.
16. 16. Композиция по п.15, где пациент имеет перед началом лечения концентрацию тестостерона в сыворотке крови менее 300 нг/дл.
17. 17. Способ лечения гипогонадизма у пациента-мужчины, включающий стадии:

    a. предоставления водно-спиртовой гелевой фармацевтической композиции по любому из пп.1-14,

    b. введения терапевтически эффективной дозы композиции в участок кожи пациента; где после нанесения композиции на кожу пациента композиция обеспечивает достаточно тестостерона для того, чтобы его концентрация в сыворотке крови пациента была от 298 до 1043 нг/дл сыворотки.
18. 18. Способ по п.17, где пациент имеет перед началом лечения концентрацию тестостерона в сыворотке крови менее 300 нг/дл.

    - 23 012754
19. 19. Способ по п.17 или 18, где терапевтически эффективную дозу композиции вводят пациенту ежедневно.
20. 20. Способ по п.19, где терапевтически эффективную дозу вводят один раз, два раза или три раза ежедневно в течение по меньшей мере около 7 дней.