EA010802B1 - Оксилипины из полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью и способы их получения и применения - Google Patents

Оксилипины из полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью и способы их получения и применения Download PDF

Info

Publication number
EA010802B1
EA010802B1 EA200701100A EA200701100A EA010802B1 EA 010802 B1 EA010802 B1 EA 010802B1 EA 200701100 A EA200701100 A EA 200701100A EA 200701100 A EA200701100 A EA 200701100A EA 010802 B1 EA010802 B1 EA 010802B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
όραη
dihydroxy
oil
hydroxy
docosanoid
Prior art date
Application number
EA200701100A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200701100A1 (ru
Inventor
Линда Мэри Артерберн
Уилльям Барклай
Бинди Данги
Джеймс Флэтт
Джанг Ли
Мэри Ван Элсвик
Original Assignee
Мартек Байосайенсиз Корпорейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Мартек Байосайенсиз Корпорейшн filed Critical Мартек Байосайенсиз Корпорейшн
Publication of EA200701100A1 publication Critical patent/EA200701100A1/ru
Publication of EA010802B1 publication Critical patent/EA010802B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A61K31/202—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids having three or more double bonds, e.g. linolenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/42—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D303/00—Compounds containing three-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D303/02—Compounds containing oxirane rings
    • C07D303/38—Compounds containing oxirane rings with hydrocarbon radicals, substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6434—Docosahexenoic acids [DHA]

Abstract

Описываются новые оксилипины, называемые в описании докозаноидами, которые происходят из С22 полиненасыщенных жирных кислот, и к способам получения и применения таких оксилипинов. Раскрывается также применение докозапентаеновой кислоты (С22:5n-6) (DPAn-6), докозапентаеновой кислоты (С22:5n-3) (DPAn-3) и докозатетраеновой кислоты (DTAn-6: С22:4n-6) в качестве субстратов для производства новых оксилипинов и получаемых с помощью их оксилипинов. Раскрывается также применение DPAn-6, DPAn-3, DTAn-6 и/или оксилипинов, происходящих из них, и/или новых докозаноидов, происходящих из структур С22 жирных кислот, в области терапевтического и питательного или косметического применения, и особенно противовоспалительных или противонейродегенеративных соединений. Изобретение относится также к новым способам получения масел и композиций, богатых полиненасыщенной кислотой с длинной цепью (LCPUFA), которые содержат увеличенные и эффективные количества происходящих из LCPUFA оксилипинов и особенно докозаноидов.

Description

Данное изобретение относится, в общем, к применению докозапентаеновой кислоты (С22:5п-6) (ΌΡΆη-б), докозапентаеновой кислоты (С22:5п-3) (ИРАп-3) и докозатетраеновой кислоты (С22:4п-6) (ИТАп6) в качестве субстратов для производства новых оксилипинов и, собственно, к получаемым оксилипинам. Изобретение относится далее к применению ИРЛп-б, ЭРЛп-З. ИТАп-6 и/или оксилипинов, происходящих из них, в частности, в качестве противовоспалительных соединений. Изобретение относится также к новым способам производства масел, богатых полиненасыщенной кислотой с длинной цепью (длинноцепочечной полиненасыщенной кислотой) (ЬСРИРА), и к композициям, которые содержат повышенные и эффективные количества происходящих из ЬСРИРЛ оксилипинов, и в частности докозаноидов.
Предпосылки изобретения
В 1990 годах исследователи идентифицировали гидроксипроизводные некоторых жирных кислот в макроводорослях (морских водорослях) и описали возможную роль данных соединений в заживлении ран и клеточной сигнализации в организмах (Оегтюк & Вешай 1993; Сепуюк с1 а1. 1993; Сепуюк 1994). Они обнаружили, что данные соединения сходны с соединениями, продуцируемыми в организме человека липоксигеназным способом. Те же самые исследователи попытались разработать культуры клеточной суспензии данных морских водорослей для продуцирования (производства) эйкозаноидов и родственных оксилипинов из С18 жирных кислот (линолевой кислоты и линоленовой кислоты) и арахидоновой кислоты (С20: 4п-6) (АВА) в красных, коричневых и зеленых морских водорослях. Однако производство биомассы морских водорослей в данных системах культур оказалось очень плохим (например, около 0,6-1,0 г/л биомассы морских водорослей за 15 дней (Воггег е1 а1. 1996)), и даже непосредственное добавление к культурам ключевых жирных кислот лишь минимально увеличило продуцирование оксилипинов по сравнению с контрольными опытами (Воггек е1 а1. 1997). Кроме того, в некоторых случаях добавляемые свободные жирные кислоты оказались токсичными для культур (Воггек е1 а1. 1997). Поэтому данные системы сохранили лишь академический интерес для производства окисленных форм данных жирных кислот, и в настоящее время продолжаются исследования в отношении С18 и С20 оксилипинов в данных морских водорослях (например, ВоиатаЬ е1 а1. 2004).
Оксилипины из длинноцепочечной омега-6 (п-6, или ω-6, или N6) жирной кислоты, АВА, хорошо изучены, и обычно считается, что они являются провоспалительными для людей. Однако было найдено, что оксилипины из длинноцепочечной омега-3 (п-3, или ω-3, или N3) обычно являются противовоспалительными. В начале 2000 годов 8егйап и другие исследователи обнаружили, что гидроксилированные формы двух длинноцепочечных омега-3 полиненасыщенных жирных кислот (омега-3 ЬСРИРАк) (т.е. эйкозапентаеновой кислоты (С20:5, п-3) (ЕРА) и докозагексаеновой кислоты С22:6, п-3) (ИНА)) получаются в организме человека (8егйап е1 а1. 2004а, Ь; ВаппепЬетд е1 а1. 2005а, Ь). Они определили маршруты, по которым омега-3 (п-3 или ω-3) ЬСРИРАк, ЕРА и ИНА перерабатываются под действием циклооксигеназ, ацетилированных циклооксигеназного-2 или липоксигеназного ферментов, приводя в результате к получению новых моно-, ди- и тригидроксипроизводных данных жирных кислот. Было установлено, что получающиеся соединения, которые были названы резолвинами (потому что они вовлечены в фазу инактивации острого воспаления) или докозатриенами (потому что они получаются из докозагексаеновой кислоты и содержат сопряженные двойные связи), обладают сильными противовоспалительными (Ап!а е1 а1. 2005а, Ь, с; Р1отег & Реггей 2005; Нопд е1 а1. 2003; МагдекеШ е1 а1. 2003; Апе1 е1 а1. 2005), антипролиферативными и нейрозащитными (Вахап 2005а, Ь; Ва/ап е1 а1. 2005; Ве1ауеу е1 а1. 2005; ВШог1с11 е1 а1. 2005; Скеп & Вахап 2005; ЬП<1\у е1 а1. 2005; Миккедее е1 а1. 2004) свойствами. Было замечено также, что данные соединения имеют более длительные периоды полураспада в организме человека по сравнению с другими типами эйкозаноидов.
В последние несколько лет в различных патентах и публикациях патентных заявок описаны аналоги гидроксипроизводных АВА, ИНА и ЕРА, маршруты, по которым они образуются, способы их синтеза в лабораторных условиях с помощью органических синтетических средств или биогенеза с использованием циклооксигеназного или липокигеназного ферментов и применение данных гидроксипроизводных в качестве фармацевтических соединений для лечения воспалительных заболеваний. Данные патенты и публикации суммированы кратко ниже.
Патент США № 4560514 описывает получение как провоспалительного (ЬХ-А), так и противовоспалительного тригидроксилипоксинов (ЬХ-В), происходящих из арахидоновой кислоты (АВА). Описывается также использование данных соединений как в изучении, так и предотвращении воспаления (в качестве фармацевтических соединений).
В публикации патентной заявки США № 2003/0166716 описывается использование липоксинов (происходящих из АВА) и аспирин-запускаемых липоксинов в лечении астмы и воспалительных заболеваний дыхательных путей. Изучены также химические структуры различных противовоспалительных аналогов липоксина.
В публикации патентной заявки США № 2003/0236423 раскрываются методы синтеза, основанные на органической химии получения тригидрокси полиненасыщенных эйкозаноидов и их структурных
- 1 010802 аналогов, включая способы получения производных данных соединений. Обсуждается также применение данных соединений и их производных в лечении воспалительных состояний или нежелательной клеточной пролиферации.
Публикация РСТ № \¥О 2004/078143 направлена на способы идентификации рецепторов, которые взаимодействуют с ди- и тригидрокси ЕРА расщепляющими аналогами.
В публикации патентной заявки США № 2004/0116408А1 раскрывается, что взаимодействие ЕРА или ΌΗΑ в организме человека с циклооксигеназой-ΙΙ (СОХ2) и анальгетиком, таким как аспирин, ведет к образованию ди- и тригидрокси ЕРА или ΌΗΑ соединений с благоприятными эффектами в отношении воспаления. В ней также описываются способы применения и способы получения данных соединений.
В публикации патентной заявки США № 2005/007 53 98А1 раскрывается, что докозатриен 10,178докозатриен (нейропротектин Ό1), по-видимому, оказывает нейрозащитные действия в организме человека.
В публикации РСТ № \¥О 2005/089744Α2 описывается, что ди- и тригидроксирезолвиновые производные ЕРА и ΌΗΑ и их стабильные аналоги являются благоприятными в лечении заболеваний дыхательных путей и астмы.
Хотя приведенные выше ссылки описывают липоксины, происходящие из ΑΚΑ и докозатриенов, и резолвины, происходящие из ΌΗΑ и ЕРА, так же, как и различные применения таких соединений, в технике остается все еще потребность в альтернативных способах обеспечения потребителей противовоспалительными выгодами и другими выгодами от данных ЬСРиРЛ оксилипинов (и, в частности, докозаноидов), иных, чем обеспечение потребителей сочетаниями ΓΕΡΕίΑ масла и аспирина или химическое синтезирование желаемых производных или их аналогов.
Кроме того, ни в одной из приведенных выше ссылок не описываются ни способы получения данных специальных соединений в микробных культурах или растениях, ни способы увеличения содержания данных желаемых гидроксипроизводных жирных кислот в съедобных маслах. В дополнение к сказанному, ни одна из данных ссылок не описывает какие-либо гидроксипроизводные из других ΕΕΡϋΕΑ и ни одна из данных ссылок не предполагает, что гидроксипроизводные каких-либо ΕΕΡϋΕΑ, иных, чем ΑΒΑ, ΌΗΑ и ЕРА, могли бы играть благоприятную роль.
Краткое содержание изобретения
Одно воплощение настоящего изобретения относится, в общем, к изолированному докозаноиду докозапентаеновой кислоты (ΌΡΑη-6).
Такой докозаноид может включать в себя, но не ограничивается указанными, Β- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из моногидроксипроизводных ΌΡΑη-6, дигидроксипроизводных ΌΡΑη-6 и тригидроксипроизводных ΌΡΑη-6. Такой докозаноид может, более конкретно, включать, но не ограничивается указанными, Β- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из 7-гидрокси ΌΡΑη-6; 8-гидрокси ΌΡΑη-6; 10-гидрокси; 11-гидрокси ΌΡΑη-6; 13-гидрокси ΌΡΑη-6; 14-гидрокси ΌΡΑη-6; 17-гидрокси ΌΡΑη-6; 7,17дигидрокси ΌΡΑη-6; 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-6; 13,17-дигидрокси ΌΡΑη-6; 7,14-дигидрокси ΌΡΑη-6; 8,14дигидрокси ΌΡΑη-6; 16,17-дигидрокси ΌΡΑη-6; 4,5-дигидрокси ΌΡΑη-6; 7,16,17-тригидрокси ΌΡΑη-6 и
4.5.17- тригидрокси ΌΡΑη-6; или его аналог, производное или соль.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к изолированному докозаноиду докозапентаеновой кислоты (ΌΡΑη-3). Такой докозаноид может включать в себя, но не ограничивается указанными, Β- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из моногидроксипроизводных ΌΡΑη-3, дигидроксипроизводных ΌΡΑη-3 и тригидроксипроизводных ΌΡΑη-3. Такой докозаноид может более конкретно включать, но не ограничивается указанными, Β- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из 7-гидрокси ΌΡΑη-3; 10-гидрокси ΌΡΑη-3; 11-гидрокси ΌΡΑη-3; 13-гидрокси ΌΡΑη-3; 14-гидрокси ΌΡΑη-3; 16-гидрокси ΌΡΑη-3; 17-гидрокси ΌΡΑη-3; 7,17-дигидрокси ΌΡΑη-3; 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-3; 8,14-дигидрокси ΌΡΑη-3; 16,17-дигидрокси ΌΡΑη-3; 13,20-дигидрокси ΌΡΑη-3; 10,20-дигидрокси ΌΡΑη-3; 13,20-дигидрокси ΌΡΑη-3 и 7,16,17-тригидрокси ΌΡΑη-3; или его аналог, производное или соль.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к изолированному докозаноиду докозатетраеновой кислоты (ΌΤΑη-6). Такой докозаноид может включать в себя, но не ограничивается указанными, Β- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из моногидроксипроизводных ΌΤΑη-6, дигидроксипроизводных ΌΤΑη-6 и тригидроксипроизводных ΌΤΑη-6. Такой докозаноид может более конкретно включать, но не ограничивается указанными, Β- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из 7-гидрокси ΌΤΑη-6; 10-гидрокси ΌΤΑη-6; 13-гидрокси ΌΤΑη-6; 17-гидрокси ΌΤΑη-6; 7,17-дигидрокси ΌΤΑη-6;
10.17- дигидрокси ΌΤΑη-6; 16,17-дигидрокси ΌΤΑη-6 и 7,16,17-тригидрокси ΌΤΑη-6; или его аналог, производное или соль.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к изолированному докозаноиду С22 полиненасыщенной жирной кислоты, где докозаноидом является Β- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из 4,5-эпокси-17-гидрокси ΌΡΑ; 7,8-эпокси ΌΗΑ; 10,11-эпокси ΌΗΑ; 13,14-эпокси ΌΗΑ; 19,20-эпокси ΌΗΑ; 13,14-дигидрокси ΌΗΑ; 16,17-дигидрокси ΌΤΑη-6; 7,16,17-тригидрокси ΌΤΑη-6; 4,5,17-тригидрокси ΌΤΑη-6; 7,16,17-тригидрокси ΌΤΑη-3; 16,17-дигидрокси ΌΤΑη-3; 16,17-дигидрокси ΌΤΚ.Αη-6;
7.16.17- тригидрокси ΌΤΚ.Αη-6; 4,5-дигидрокси ΌΤΑη-6 и 10,16,17-тригидрокси ΌΤΚΑη-6; или его аналог, производное или соль.
Еще одно воплощение изобретения относится к композиции, включающей по крайней мере один из
- 2 010802 любых описанных выше докозаноидов. Композиция включает, но не ограничивается ими, терапевтическую композицию, питательную или пищевую композицию или косметическую композицию. Согласно одному из аспектов композиция дополнительно включает аспирин. Согласно еще одному аспекту композиция дополнительно включает соединение, выбранное из ΌΡΑη-б, ΌΡΑη-3, ΌΤΑη-б, ΌΗΑ, ЕРА, оксилипинового производного ΌΗΑ и оксилипинового производного ЕРА. Согласно еще одному аспекту композиция дополнительно включает по крайней мере один агент, выбранный из статина, нестероидного противовоспалительного агента, антиоксиданта и нейрозащитного агента. Согласно еще одному аспекту композиция дополнительно включает фармацевтически приемлемый носитель. Согласно еще одному аспекту композиция включает масло, выбранное из микробного масла, масла семян растений и масла водных животных.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к маслу, включающему по крайней мере около 10 мкг докозаноида на грамм масла. Другие воплощения охватывают масло, включающее по крайней мере около 20 мкг докозаноида на грамм масла, по крайней мере около 50 мкг докозаноида на грамм масла или по крайней мере около 100 мкг докозаноида на грамм масла. Согласно одному аспекту докозаноидом в определенном выше масле является полиненасыщенная жирная кислота, выбранная из докозатетраеновой кислоты (ΌΤΑη-б), докозапентаеновой кислоты (ΌΡΑη-б), докозапентаеновой кислоты (ΌΡΑη-3), докозагексаеновой кислоты (ΌΗΑ) и эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА). Согласно еще одному аспекту докозаноид выбран из полиненасыщенной жирной кислоты, выбранной из докозатетраеновой кислоты (ΌΤΑη-б), докозапентаеновой кислоты (ΌΡΑη-б) и докозапентаеновой кислоты (ΌΡΑη-3). Согласно еще одному аспекту докозаноидом является любой из определенных выше докозаноидов. Масло может включать, но не ограничивается ими, микробное масло, масло семян растений и масло водных животных.
Еще одно воплощение изобретения включает композицию, включающую любое из определенных выше масел, которые могут включать, но не ограничиваются ими, терапевтическую композицию, пищевую композицию или косметическую композицию.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к композиции, включающей полиненасыщенную жирную кислоту с длинной цепью, выбранную из ΌΡΑη-б, ΌΡΑη-3 и ΌΤΑη-б, и фармацевтически или питательно приемлемый носитель. Согласно одному аспекту композиция дополнительно включает аспирин. Согласно еще одному аспекту композиция дополнительно включает фермент, который катализирует производство деказоноидов из ΌΡΑη-б, ΌΤΑη-б или ΌΡΑη-3.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к способу предотвращения или снижения по крайней мере одного симптома воспаления или нейродегенерации у индивидуума. Способ включает в себя стадию введения лицу, которое подвержено риску, или которому поставлен диагноз, или которое подозревается в наличии у него воспаления или нейродегенерации или состояния или заболевания, связанных с ними, агента, выбранного из группы, состоящей из ΌΡΑη-б, ΌΡΑη-3, оксилипинового производного ΌΡΑη-б и оксилипинового производного ΌΡΑη-3, для снижения по крайней мере одного симптома воспаления или нейродегенерации у индивидуума. Согласно одному аспекту агент является эффективным для снижения продуцирования фактора некроза опухоли-α (ΤΝΡ-α) Т-лимфоцитами. Согласно еще одному аспекту агент является эффективным для снижения миграции нейтрофилов и макрофагов в участок воспаления. Согласно еще одному аспекту агент является эффективным для снижения продуцирования у индивидуума интерлейкина-ΐβ (ΙΌ-β). Согласно еще одному аспекту агент является эффективным для снижения у индивидуума макрофагового хемотактическогог протеина-1 (МСР-1). Производное оксилипина, используемое в настоящем способе, может включать любой из докозаноидов настоящего изобретения, описанных выше. В одном из предпочтительных воплощений агент выбран из 17-гидрокси ΌΡΑη-б и 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-б, или его производного, или аналога, или соли. Еще в одном воплощении агент выбран из ΌΡΑη-б и ΌΡΑη-3.
Согласно одному аспекту способ дополнительно включает введение индивидууму по крайней мере одной омега-3 жирной кислоты с длинной цепью и/или ее оксилипинового производного. Такая омега-3 жирная кислота может включать, не ограничивается ими, ΌΗΑ и/или ЕРА.
В одном из аспектов ΌΡΑη-б или ΌΡΑη-3 предоставляется в одной из следующих форм: в виде триглицерида, содержащего ΌΡΑη-б или ΌΡΑη-3, в виде фосфолипида, содержащего ΌΡΑη-б или ΌΡΑη3, в виде свободной жирной кислоты, в виде этилового или метилового эфира ΌΡΑη-б или ΌΡΑη-3.
Согласно еще одному аспекту ΌΡΑη-б, или ΌΡΑη-3, или ее оксилипиновое производное предоставляется в форме микробного масла, животного масла или растительного масла, которое происходит из масла семян растений, которые были подвержены генетической модификации с получением полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью. В одном аспекте оксилипиновое производное получают с помощью ферментативного превращения ΌΡΑη-б или ΌΡΑη-3 в ее оксилипиновое производное. Еще в одном аспекте оксилипиновое производное синтезируют химическим путем бе ηονο.
Согласно любому из приведенных выше аспектов данного способа изобретения способ может дополнительно включать введение индивидууму аспирина. Согласно одному из аспектов способ дополнительно включает введение по крайней мере одного агента, выбранного из: статина, нестероидного проти
- 3 010802 вовоспалительного агента, антиоксиданта и нейрозащитного агента.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к способу получения докозаноида, включающему химический синтез любого из описанных выше докозаноидов настоящего изобретения.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к способу получения докозаноидов, включающему каталитическое получение докозаноидов путем контактирования ΌΡΑη-б субстрата, ΌΤΑη-б субстрата или ΌΡΑη-3 субстрата с ферментом, который катализирует получение докозаноидов из указанного ΌΡΆη-б субстрата, указанного ΌΤΆη-б субстрата или указанного ΌΡΆη-3 субстрата.
Еще одного воплощение настоящего изобретения относится к способу получения докозаноидов, включающему культивирование микроорганизмов, продуцирующих полиненасыщенную жирную кислоту с длинной цепью (ΌΟΡυΡΑ), или выращивание ^СΡυΕΑ-продуцирующих растений, которые генетически модифицированы для сверхэкспрессии фермента, который катализирует получение докозаноидов из 1 .(ΤΡΤΑ с 22 углеродами, с получением указанных докозаноидов.
Еще один способ настоящего изобретения относится к способу получения докозаноидов, включающему контактирование полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью (ΌΟΡυΡΑ), продуцируемых ^СΡυΕΑ-продуцирующими микроорганизмами, ^СΡυΕΑ-продуцирующими растениями или ^СΡυΕΑ-продуцирующими животными, с ферментом, который катализирует превращение указанных ΌΟΡυΡΑ в докозаноиды.
В одном аспекте описанных выше способов получения докозаноидов фермент выбирают из группы, состоящей из липоксигеназы, циклооксигеназы и цитохром Р450 фермента. Например, такие ферменты включают, но не ограничиваются ими, 12-липоксигеназу, 5-липоксигеназу, 15-липоксигеназу, циклооксигеназу-2, гемоглобин альфа 1, гемоглобин бета, гемоглобин гамма Α, ΟΥΡ4Α11, СУР4В1, ΟΥΡ4Ε11, ΟΥΡ4Ε12, ΟΥΡ4Ε2, ΟΥΡ4Ε3, ΟΥΡ4Ε8, (ΎΡ4Υ2. ΟΥΡ4Χ1, ΟΥΡ41, ΟΥΡ212, ΟΥΡ2Ο8, тромбоксан Асинтазу 1, простагландин 12-синтазу и простациклин-синтазу. Согласно одному аспекту ΌΟΡυΕΑ выбирается из ΌΡΑη-б, ΌΤΑη-б и ΌΡΑη-3.
Согласно одному из аспектов описанных выше способов ^СΡυΕΑ-продуцирующие микроорганизмы или ^СΡυΕΑ-продуцирующие растения генетически модифицированы для получения ΌΟΡυΕΑ. Согласно еще одному аспекту ^СΡυΕΑ-продуцирующие микроорганизмы эндогенно продуцируют ΌΟΡυΡΑ (например, Тйгаи81осйу1пбб).
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к способу обогащения масла по крайней мере одним оксилипином, происходящим из ΌΟΡυΡΑ, или стабилизации указанного оксилипина в масле. Способ включает культивирование ^СΡυΕΑ-продуцирующего микроорганизма с соединением, которое усиливает ферментативную активность фермента, который катализирует превращение ΌΟΡυΕΑ в оксилипины. В одном аспекте соединение стимулирует экспрессию фермента. Еще в одном аспекте соединение усиливает или инициирует автоокисление ΌΟΡυΕΑ. В одном из предпочтительных аспектов соединением является ацетилсалициловая кислота.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к способу обогащения масла по крайней мере одним оксилипином, происходящим из ΌΟΡυΡΑ, или стабилизации указанного оксилипина в масле. Способ включает разрушение микробов или семян масличных растений в присутствии фермента, который катализирует превращение ΌΟΡυΕΑ в оксолипины, согласно которому микробы и семена масличных растений продуцируют по крайней мере одну ΌΟΡυΕΑ.
Согласно одному из аспектов описанных выше способов фермент выбирается из группы, состоящей из липоксигеназы, циклооксигеназы и цитохром Р450 фермента. Согласно еше одному аспекту способ дополнительно включает выделение и очистку оксилипинов. Согласно данному аспекту оксилипины могут также дополнительно перерабатываться и выделяться в виде производных оксилипинов или их солей.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к способу переработки масла, содержащего оксилипиновые производные ΌΟΡυΡΑ, включающему стадии: (а) выделения или регенерации масла, содержащего оксилипиновые производные ΌΟΡυΡΑ, производимые с помощью микробного, растительного или животного источника; и (Ь) переработки или рафинирования масла с использованием процесса, который сводит до минимума удаление свободных жирных кислот из масла, давая масло, которое сохраняет оксилипиновые производные ΌΟΡυΕΑ. Согласно одному из аспектов животным является водное животное, включающее, но не ограниченное ими, рыб. Согласно одному из аспектов растением являются семена масличных растений. Согласно одному из аспектов микробным источником является Тйгаи81осйу1г1б.
В описанном выше способе в одном из аспектов стадия переработки включает экстракцию масла спиртом, смесью спирт:вода или органическим растворителем. Еще в одном аспекте стадия переработки включает экстракцию масла неполярным органическим растворителем. Еще в одном аспекте стадия переработки включает экстракцию масла спиртом или смесью спирт: вода.
В описанном выше способе стадия переработки может дополнительно включать фильтрование с охлаждением, отбеливание, дополнительное фильтрование с охлаждением и дезодорирование масла. В одном аспекте стадия переработки дополнительно включает отбеливание и дезодорирование масла в отсутствие стадий фильтрования при охлаждении. Согласно еще одному аспекту стадия переработки дополнительно включает дезодорирование масла в отсутствие стадий фильтрования при охлаждении или
- 4 010802 отбеливания.
Описанный выше способ может дополнительно включать стадию добавления к маслу антиоксиданта.
В описанном выше способе стадия переработки может включать приготовление масла в виде эмульсии.
Согласно одному из аспектов описанного выше способа масло дополнительно обрабатывается с помощью контактирования с ферментом, который катализирует превращение ЬСРИРА в оксилипины. Такой фермент может включать, но не ограничивается ими, липоксигеназу, циклооксигеназу и цитохром Р450 фермент. В одном аспекте фермент иммобилизован на субстрате.
Описанный выше способ может дополнительно включать стадию отделения оксилипиновых производных ЬСРИРА от ЬСРИРА в масле с помощью технологического приема, включающего, но не ограниченного хроматографией. Данная стадия отделения может дополнительно включать добавление указанных отделенных ЬСРИРЛ оксилипинов к маслу или к композиции.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к способу переработки масла, содержащего оксилипиновые производные ЬСРИРЛ, включающему стадии: (а) регенерации масла, содержащего оксилипиновые производные ЬСРИРЛ, продуцируемые с помощью микробного, растительного или животного источника; (Ь) переработки масла и (с) отделения ЬСРИРЛ оксилипинов от ЬСРИРЛ в масле. Согласно одному аспекту способ дополнительно включает перед стадией (с) стадию превращения ЬСРИРЛ в масле в ЬСРИРЛ оксилипины с помощью химического или биологического процесса. В одном аспекте способ дополнительно включает добавление к продукту отделенных ЬСРИРЛ оксилипинов.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к способу предотвращения или снижения по крайней мере одного симптома воспаления или нейроденерации у индивидуума, включающему введение пациенту, который подвержен риску, или которому поставлен диагноз, или который подозревается в наличии у него воспаления или нейродегенерации или состояния или заболевания, связанных с ними, агента, выбранного из ΌΤΆη-б и оксилипинового производного ΌΤΆη-б, для снижения по крайней мере одного симптома воспаления или нейродегенерации у индивидуума. В одном аспекте агентом является В- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из моногидроксипроизводных ΌΤΆη-б, дигидроксипроизводных ΌΤΆη-б и тригидроксипроизводных ΌΤΆη-б. В одном аспекте агентом является В- или 8-эпимер любого из описанных выше докозаноидов из ΌΤΆη-б или его аналога, производного или соли.
Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к организму, включающему РИРЛ РК8 путь, в котором организм был генетически трансформирован для экспрессии фермента, который превращает ЬСРИРЛ в оксилипин. Согласно одному аспекту организм выбирается из группы, состоящей из растений и микроорганизмов. Согласно еще одному аспекту организмом являются семена масличных растений, которые были генетически модифицированы для экспрессии РИРЛ РК8 траектории для продуцирования полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью. Согласно еще одному аспекту организмом является микроорганизм, включающий, но не ограниченный им, микроорганизм, включающий эндогенную РИРЛ РК8 траекторию. Согласно одному аспекту фермент выбирается из группы, состоящей из липоксигеназы, циклооксигеназы и цитохром Р450 фермента.
Краткое описание фигур изобретения
Фиг. 1 представляет график, показывающий кинетику реакций 15-липоксигеназы с ΌΗΆ, ОРЛп-6 и ОРЛп-3.
Фиг. 2 А показывает структуру 15-липоксигеназных продуктов ΌΗΛ.
Фиг. 2В представляет масс-спектральный анализ 17-гидрокси ΌΗΛ.
Фиг. 2С представляет масс-спектральный анализ 10,17-дигидрокси ΌΗΛ.
Фиг. 2Ό представляет масс-спектральный анализ 7,17-дигидрокси ΌΗΛ.
Фиг. ЗА показывает структуру 15-липоксигеназных продуктов ОРЛп-б.
Фиг. ЗВ представляет масс-спектральный анализ 17-гидрокси ИРАп-6.
Фиг. ЗС представляет масс-спектральный анализ 10,17-дигидрокси ИРАп-6.
Фиг. 3Ό представляет масс-спектральный анализ 7,17-дигидрокси ИРАп-6.
Фиг. 4 А показывает структуру 15-липоксигеназных продуктов ИРАп-3.
Фиг. 4В представляет масс-спектральный анализ 17-гидрокси ИРАп-3.
Фиг. 4С представляет масс-спектральный анализ 10,17-дигидрокси ИРАп-З.
Фиг. 4Ό представляет масс-спектральный анализ 7,17-дигидрокси ИРАп-3.
Фиг. 5А показывает структуру 15-липоксигеназных продуктов ^ΤАη-б.
Фиг. 5В представляет масс-спектральный анализ 17-гидрокси ^ΤАη-б.
Фиг. 5С представляет масс-спектральный анализ 7,17-дигидрокси ^ΤАη-б.
Фиг. б показывает основные оксилипиновые продукты ИРАп-6 после последовательной обработки 15-липоксигеназой с последующим гемоглобином.
Фиг. 7 показывает основные 5-липоксигеназные продукты ИИА.
Фиг. 8 показывает основные 5-липоксигеназные продукты ОРАи-б.
Фиг. 9 показывает основные 15-липоксигеназные продукты ИРАп-3.
Фиг. 10 показывает основные 15-липоксигеназные продукты ИИА.
- 5 010802
Фиг. 11 показывает основные 15-липоксигеназные продукты ΌΡΑη-б.
Фиг. 12 показывает основные 15-липоксигеназные продукты ΌΡΑη-3.
Фиг. 13 показывает структуры происходящих из ЕРА оксилипинов.
Фиг. 14А и 14В показывает структуры происходящих из ΌΗΑ оксилипинов.
Фиг. 15 показывает структуры происходящих из ΌΡΑη-б оксилипинов.
Фиг. 1б показывает структуры происходящих из ΌΡΑη-3 оксилипинов.
Фиг. 17 показывает структуры происходящих из ΌΤΑη-б оксилипинов.
Фиг. 18А представляет масс-спектральную общую ионную хроматографию моно- и дигидроксипроизводных ΌΗΑ и ΌΡΑη-б в ΌΗΑ+ΌΡΑη-б масле водорослей.
Фиг. 18В показывает М8/М8 спектры моногидрокси ΌΡΑη-б производных в ΌΗΑ+ΌΡΑη-б масле водорослей.
Фиг. 18С показывает М8/М8 спектры дигидрокси ΌΡΑη-б производных в ΌΗΑ+ΌΡΑη-б масле водорослей.
Фиг. 19 представляет график, показывающий действие кормления ΌΟΡυΕΑ маслами на отек или эдему лапы на крысах.
Фиг. 20А представляет график, показывающий общую миграцию клеток в экссудаты воздушного дивертикула после введения докозаноидов, происходящих из ΌΗΑ и ΌΡΑη-б, на модели воспаления дорзального воздушного дивертикула мышей.
Фиг. 20В представляет график, показывающий концентрации 1Ь-1б в экссудатах воздушного дивертикула после введения происходящих из ΌΗΑ и ΌΡΑη-б докозаноидов на модели воспаления дорзального воздушного дивертикула мышей.
Фиг. 20С представляет график, показывающий концентрации макрофагового хемотактического белка (протеина) 1 (МСР-1) после введения происходящих из ΌΗΑ и ΌΡΑη-б докозаноидов на модели воспаления дорзального воздушного дивертикула мышей.
Фиг. 21 представляет график, показывающий действие докозаноидов на ΤΝΕα-индуцируемое продуцирование 1Ь-1б в глиальных клетках человека.
Фиг. 22 представляет график, показывающий действие докозаноидов на секрецию ΤΝΕα Τ-лимфоцитами человека.
Фиг. 23 показывает структуры дополнительных новых происходящих из ί'22-ΡυΕΑ оксилипинов.
Подробное описание изобретения
Учитывая потребность в технике в новых противовоспалительных соединениях и альтернативных способах обеспечения известными противовоспалительными соединениями, такими как липоксины, резолвины и докозатриены, описанные выше, авторы настоящего изобретения сделали несколько взаимосвязанных открытий, которые привели в результате к предоставлению новых противовоспалительных реагентов и улучшенных композиций для использования при противовоспалительных применениях.
Во-первых, настоящее изобретение относится к обнаружению его авторами того, что омега-б жирные кислоты с длинной цепью, докозапентаеновая кислота (ΌΡΑη-б; С22:5п-6) и докозатетраеновая кислота (ΌΤΑη-б; С22:4п-6) (называемая также адреновой кислотой), так же, как и омега-3 взаимозаменяемая часть ΌΡΑη-б, докозапентаеновая кислота (ΌΡΑη-3; С22:5п-3), являются субстратами для производства новых соединений, называемых здесь обычно как Εί'ΡυΕΑ оксилипины, и более конкретно называемых докозаноидами (включая моно-, ди-, три-, тетра- и пентагидроксипроизводные таких докозаноидов). Термины оксилипин и докозаноид, используемые здесь, определены и описаны подробно ниже. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что ΌΡΑη-б, ΌΡΑη-3, ΌΤΑη-б и их оксилипиновые производные могут служить подобно омега-3 жирным кислотам с длинной цепью ΌΗΑ и ЕРА и их оксилипиновым производным в качестве сильных противовоспалительных агентов. Следовательно, согласно одному воплощению настоящее изобретение предоставляет новые оксилипины, происходящие из омега-б жирных кислот ΌΡΑη-б и ΌΤΑη-б и/или из омега-3 жирных кислот ΌΡΑη-3 и их производных и аналогов, а также способы получения и использования таких оксилипинов в качестве противовоспалительных соединений и пищевых или питательных/сохраняющих здоровье добавок. Настоящее изобретение предоставляет также применение данных Εί,’ΡυΕΑ (ΌΡΑη-б, ΌΤΑη-б и ΌΡΑη-3) самих по себе в качестве новых противовоспалительных соединений (например, в качестве предшественников для оксилипинов или в качестве агентов со свойственной им противовоспалительной активностью).
Первоначально авторы настоящего изобретения установили, что присутствие ΌΡΑη-б в ΌΗΑ масле существенно усиливает уменьшение воспаления у пациентов (например, усиливает уменьшение индикаторов или медиаторов воспаления, такое как продуцирование провоспалительного цитокина и продуцирование эйкозаноида) по сравнению с ΌΗΑ маслом, которое не содержит каких-либо других жирных кислот. На основании данной находки авторы настоящего изобретения обнаружили, что уникальная структура ΌΡΑη-б, ΌΤΑη-б и ΌΡΑη-3 дает возможность данным ΌίΡυΕΑ служить в качестве субстрата в ферментативной реакции, сходной с реакцией, в которой происходит превращение ΌΗΑ в докозатриены или резолвины, приводя в результате к удивительной находке, что ΌΡΑη-б, ΌΤΑη-б и ΌΡΑη-3 и их оксилипиновые производные являются новыми, сильными противовоспалительными агентами.
До настоящего изобретения не было известно, что омега-6 жирная кислота с длинной цепью, ΌΡΑη-6, может служить как субстрат для производства новых оксилипинов с противовоспалительными свойствами, аналогичными или превышающими свойства ранее описанных докозатриенов и резолвинов, происходящих из ЕРА и ΌΗΑ. На основании доказательств, имеющихся до данного изобретения, считалось, что присутствие ΌΡΑη-6 в масле приведет к продуцированию провоспалительных соединений и, следовательно, снизит общий противовоспалительный эффект ΌΗΑ-содержащего масла. Например, ΌΡΑη-6 может свободно ретропревращаться в арахидоновую кислоту (ΑΚΑ), в отношении которой обычно считают, что она является провоспалительной, поскольку она является предшественником для разнообразного множества высокосильных провоспалительных эйкозаноидов, включая лейкотриен В4 и простагландин Е2. Действительно, большинство эйкозаноидов, происходящих из омега-6 жирной кислоты ΑΚΑ, являются провоспалительными (Сйтоу с1 а1. 2004; Меубаш с1 а1. 1990; §1шорои1о5 2002), и потребление ЛИЛ полностью изменяет противовоспалительные действия ΌΗΑ (см. пример 14 ниже). Поэтому до настоящего изобретения обычно считалось, что ΌΡΑη-6 будет провоспалительным, поскольку он попадает в ΑΚΑ метаболический путь. Более того, до настоящего изобретения не было известно, что докозапентаеновая кислота (ΌΡΑη-6; С22:5п-6) вследствие ее уникальной структуры является важным субстратом для производства новых оксилипинов или что новые оксилипины могут также производиться из докозапентаеноваой кислоты (ΌΡΑη-3; С22:5п-3) и докозатетраеновой кислоты (ΌΤΑη-6; С22:4п-6). Действительно, авторы настоящего изобретения установили, что ΌΡΑη-6 и ΌΡΑη-3 являются более превосходящими субстратами в оксилипин-генерирующих реакциях по сравнению с ΌΗΑ, и установили, что ΌΤΑη-6 также является субстратом в оксилипин-генерирующих реакциях. Это демонстрируется в отношении превращения каждого из ΌΗΑ, ΌΡΑη-6 и ΌΡΑη-3 15-липоксигеназой в примере 1 ниже. Следовательно, производство докозаноидов из ΌΡΑη-6 и ΌΡΑη-3 является более эффективным и будет приводить в результате к более высоким уровням оксилипинового продукта, чем производство докозаноидов из ΌΗΑ.
В дополнение к сказанному, не признавалось, что оксилипины, синтезируемые из ΌΡΑη-6 и ΌΡΑη-3, обладают уникальными свойствами, особенно в отношении воспаления. В частности, не связываясь с теорией, авторы настоящего изобретения считают, что ΌΡΑη-6 и ΌΡΑη-3 и их оксилипиновые производные, и особенно ΌΡΑη-6 и ее оксилипиновые производные, являются равными по силе или даже более сильными противовоспалительными соединениями, чем ΌΗΑ, ЕРА или оксилипиновые производные указанных Εί-ΤυΡΑ. Не связываясь с теорией, авторы настоящего изобретения также полагают, что ΌΤΑη-6 и ее оксилипиновые производные обладают противовоспалительными свойствами. Действительно, сочетания ΌΡΑη-6 и ΌΡΑη-3 и/или их оксилипиновых производных, и в частности ΌΡΑη-6 и/или ее оксилипиновых производных, с ΌΗΑ или ЕРА и/или их оксилипиновыми производными (и особенно с ΌΗΑ и/или ее оксилипиновыми производными) обеспечивают преимущество в пищевых применениях (например, в любых применениях изобретения, направленного на предоставление питательных веществ и пищевых агентов для поддержания, стабилизации, увеличения, усиления или улучшения здоровья индивидуума или органического процесса, с помощью которого организм ассимилирует и использует пищу и жидкости для функционирования, роста и поддержания и которое включает нутрацевтические применения), терапевтических применениях (например, в любых применениях изобретения, направленного на предотвращение или профилактику, лечение, управление, заживление, облегчение и/или вылечивание от заболевания или состояния, которое является отклонением от здоровья индивидуума) и других применениях (например, в косметике) по сравнению с одной ΌΗΑ, ЕРА и/или их оксилипиновыми производными.
Более конкретно, авторы настоящего изобретения обнаружили, что потребление масла, содержащего ΌΡΑη-6 в дополнение к омега-3 жирной кислоте, ΌΗΑ, вызывает до >90% снижение продуцирования воспалительного цитокина, в то время как потребленное одной ΌΗΑ в масле облегчает снижение продуцирования воспалительного цитокина только примерно на 13-29%, даже когда доза ΌΗΑ приблизительно в 3 раза выше, чем в ΌΗΑ+ΌΡΑη-6 масле. Секреция воспалительного эйкозаноида также значительно снижается под действием ΌΡΑη-6 по сравнению с одной ΌΗΑ. Следовательно, авторы настоящего изобретения обнаружили, что масло, содержащее ΌΡΑη-6 и ее оксилипиновые производные, обладает значительными противовоспалительными свойствами. Кроме того, авторы настоящего изобретения утверждают, что присутствие ΌΡΑη-6 и омега-3 жирной кислоты с длинной цепью (например, ΌΗΑ) или ее оксилипиновых производных, известных также как докозаноиды, в сочетании приводит в результате к производству докозаноидов (определенных ниже), которые имеют дополнительные противовоспалительные активности. Следовательно, рецептуры композиций (рецептуры), содержащие как омега-3 жирную кислоту с длинной цепью, такую как ΌΗΑ, так и ΌΡΑη-6 или их оксилипины, являются значительно более сильными противовоспалительными рецептурами, чем рецептуры, содержащие одни омега-3 жирные кислоты. Более того, ΌΡΑη-6 и ее оксилипиновые производные представляют новые противовоспалительные агенты для использования их одних или в сочетании с множеством других агентов. ΌΡΑη-3 и ее оксилипиновые производные и/или ΌΤΑη-6 и ее оксилипиновые производные могут также предоставлять преимущества над использованием одной ΌΗΑ.
Авторы настоящего изобретения впервые обнаружили, что ΌΡΑη-6 обладает противовоспалительными свойствами и будет усиливать противовоспалительный эффект омега-3 жирных кислот с длинной цепью, таких как ΌΗΑ. Более конкретно, авторы настоящего изобретения установили, что наиболее от
- 7 010802 даленная п-3 связь между атомами углерода 19 и 20 в ΌΗΑ не вовлечена в образование биологически важных докозатриенов или 178-резолвинов и, следовательно, отсутствие данной двойной связи в ΌΡΑη-6 не препятствует метаболическому превращению данной жирной кислоты в аналогичные оксилипины под действием биологических ферментов, таких как липоксигеназы. Авторы настоящего изобретения дополнительно установили, что двойные связи, вовлекаемые во множество ферментативных превращений ΌΗΑ в оксилипины, особенно соединения, известные как резолвины (т.е. двойные связи между углеродами 7 и 8, углеродами 10 и 11, углеродами 13 и 14 и углеродами 16 и 17 в ΌΗΑ), также присутствуют в ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 и ΌΡΑη-3, облегчая их использование в качестве субстрата для производства оксилипинов. Не связываясь с теорией, считается, что это объясняется различиями в данных, которые наблюдали авторы настоящего изобретения в исследованиях с использованием масел, содержащих ΌΗΑ и ΌΡΑη-6, по сравнению с одной ΌΗΑ. Авторы настоящего изобретения в настоящее время продемонстрировали, что те же самые ферменты, которые превращают ΌΗΑ в докозаноиды или 178-резолвины, распознают любую (η-3) или (η-6) С-22 ΡΌΓΑ. Следовательно, как и ΌΗΑ, ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 и ΌΡΑη-3 являются субстратами для новых оксилипинов, которые могут служить как сильные противовоспалительные молекулы. В дополнение, данные наблюдения также говорят о том, что ΌίΡυΕΑ с 24 или более атомами углерода, и которые имеют двойные связи, расположенные между углеродами 7 и 8, углеродами 10 и 11, углеродами 13 и 14 и углеродами 16 и 17, также служат в качестве субстратов для производства новых оксилипинов и могут продуцироваться или усиливаться в различных маслах и композициях с использованием способов, описанных в настоящей заявке.
Авторы настоящего изобретения, следовательно, впервые установили, что ферменты, образующие оксилипины, такие как описанные ранее докозатриены и резолвины, происходящие из ΌΗΑ, не различаются между (η-6) и (η-3) 22-углерод жирными кислотами в качестве субстратов вследствие присутствия определенных двойных связей в том же самом положении в данных молекулах. Фактически, авторы настоящего изобретения впервые обнаружили, что С22п-6 жирные кислоты являются предпочтительными для данных ферментов. Авторы настоящего изобретения также впервые установили, что оксилипины из ΌΡΑη-6 обладают сильной противовоспалительной активностью и что сочетание оксилипинов как из ΌΗΑ, так и из ΌΡΑη-6 является более полезным в отношении противовоспалительной активности, чем оксилипины из одной ΌΗΑ.
Согласно еще одному воплощению изобретения авторы настоящего изобретения обнаружили новые пути производства обогащенных ΌίΡυΕΑ масел, которые также содержат увеличенные и эффективные количества ΌίΡυΕΑ оксилипинов (в частности, докозаноидов), включая новые оксилипины настоящего изобретения, так же, как и оксилипины, которые были описаны ранее. Данные богатые ΌίΡυΕΑ масла могут использоваться в питательных или пищевых (включая нутрацевтические), косметических и/или фармацевтических (включая терапевтические) применениях, обеспечивая немедленное противовоспалительное/нейрозащитное действие гидрокси-^СΡυΕΑ производных наряду с присущими им долгосрочными эффектами самих Εί’ΡυΡΑ.
Авторы настоящего изобретения также обнаружили, что общепринятые источники ΌίΡυΕΑ, такие как масла из водорослей и масла из рыб, имеют только крайне малые количества гидроксилпроизводных ΌίΡυΡΑ, и, следовательно, ΌίΡυΕΑ оксилипинов, особенно докозаноидов (например, примерно от 1 нг/г до примерно 10 мкг/г масла). Это является частично следствием генетических факторов и факторов окружающей среды, связанных с продуцированием организмов (например, водорослей, рыбы), а также следствием способов, используемых для переработки Εί'ΡυΡΛ масел из данных организмов. Принимая во внимание, что обеспечение маслами, обогащенными ΌίΡυΕΑ оксилипинами, продуктов питания могло бы принести огромную пользу человеку и его здоровью и дало бы альтернативу химическим синтезированным оксилипиновым аналогам или маслам, содержащим неадекватные количества ΌίΡυΕΑ оксилипинов, авторы настоящего изобретения обнаружили альтернативные пути производства данных ΌίΡυΕΑ масел так, чтобы они были обогащены ΌίΡυΕΑ оксилипинами (и, в частности, докозаноидами), так же, как и альтернативные пути переработки ΌίΡυΕΑ масел, чтобы дополнительно обогатить их и увеличить содержание в маслах Εί-ΤυΡΑ оксилипина (и, в частности, докозаноида), тем самым, значительно увеличивая уровни их ΌίΡυΕΑ оксилипина (и, в частности, докозаноида) по сравнению с уровнями, обнаруживаемыми в обычно производимых/перерабатываемых ΌίΡυΕΑ маслах.
Кроме того, авторы настоящего изобретения открыли оксилипины, которые производятся из ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 и ΌΡΑη-3, и данные оксилипины могут теперь производиться химическим или биогенетическим образом и использоваться в качестве неочищенных, получистых или чистых соединений во множестве композиций и их готовых форм или даже добавляться к маслам, таким как ΌίΡυΕΑ- или ΌίΡυΕΑоксилипинсодержащие масла для увеличения или дополнения природных оксилипинов в таких маслах. Такие соединения могут также служить в качестве ведущих соединений для производства дополнительных активных аналогов данных оксилипинов в проектировании и производстве питательных агентов и терапевтических лекарств.
Общие определения
Для целей данной заявки полиненасыщенные жирные кислоты с длинной цепью (ΌίΡυΕΑ) определяются как жирные кислоты с длиной цепи из 18 или более атомов углерода, и предпочтительными явля
- 8 010802 ются жирные кислоты с длиной цепи из 20 или более атомов углерода, содержащие 3 или более двойных связей. ЬСРИРА омега-6 ряда включают дигомогаммалинолевую кислоту (С20:3п-6), арахидоновую кислоту (С20:4п-6), докозатетраеновую кислоту или адреновую кислоту (С22:4п-6) и докозапентаеновую кислоту (С22:5п-6). ЬСРИРА омега-3 ряда включают эйкозатриеновую кислоту (С20:3п-3), эйкозатетраеновую кислоту (С20:4п-3), эйкозапентаеновую кислоту (С20:5п-3), докозапентаеновую кислоту (С22:5п-3) и докозагексаеновую кислоту (С22:6п-3). ЬСРИРЛ включают также жирные кислоты с более чем 22 атомами углерода и 4 или более двойными связями, включающие, но не ограниченные ими, (С24:6п-3) и (С28:8п-3).
Термины полиненасыщенная жирная кислота и РИРЛ включают не только форму свободной жирной кислоты, но также и другие формы, такие как форма триацилглицерин (ТАС). фосфолипидную (РЬ) форму и другие этерифицированные формы.
Используемый здесь термин липид включает фосфолипиды; свободные жирные кислоты; эфиры жирных кислот; триацилглицериды; диацилглицериды; моноацилглицериды; лизофосфолипиды; мыла; фосфатиды; стерины и сложные эфиры стерина; каротеноиды; ксантофилы (например, оксикаротеноиды); углеводороды и другие липиды, известные специалистам в данной области.
Для целей данной заявки оксилипины определяются как биологически активные, окисленные производные полиненасыщенных жирных кислот, образованных с помощью окислительного метаболизма полиненасыщенных жирных кислот. Оксилипины, которые получаются липоксигеназным способом, называются липоксинами. Оксилипины, которые получаются циклооксигеназным способом, называются простаноидами. Оксилипины, образованные из жирных кислот с 20 углеродами (арахидоновой кислоты и эйкозапентаеновой кислоты), называются эйкозаноидами.
Эйкозаноиды включают в себя простагландины, лейкотриены и тромбоксаны. Они получаются или липоксигеназным способом (лейтриены), или циклооксигеназным способом (простагландины, простациклин, тромбоксаны). Оксилипины, образованные из жирных кислот с 22 углеродами (докозапентаеновая кислота п-6 или п-3, докозагексаеновая кислота и докозатетраеновая кислота), называются докозаноидами. Конкретные примеры данных соединений описаны ниже. Имеется в виду, что общая ссылка на оксилипин, описываемый здесь, охватывает производные и аналоги конкретных оксилипиновых соединений.
Используемый здесь термин аналог относится к химическому соединению, которое в структурном отношении сходно с другим соединением, но слегка отличается по составу (как в случае замещения 1 атома атомом, отличным от первого элемента, или в случае присутствия определенной функциональной группы, или замены одной функциональной группы другой функциональной группой) (см. подробное обсуждение аналогов настоящего изобретения ниже).
Используемый здесь термин производное, когда он используется для описания соединения настоящего изобретения, означает, что по крайней мере один водород, связанный с ненасыщенным соединением, заменен отличным от него атомом или химическим фрагментом (см. подробное обсуждение производных настоящего изобретения ниже).
Обычно термин биологически активное указывает, что соединение обладает по крайней мере одной заметной активностью, которая оказывает действие на метаболический или иные процессы клетки или организма, измеряемое или наблюдаемое ш νίνο (т.е. в условиях естественной физиологической окружающей среды) или ш νίίτο (т.е. в лабораторных условиях).
Окисленные производные полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью (ЬСРИРА) включают моно-, ди-, три-, тетра- и пентагидроксипроизводные ЬСРИРА, а также включают свободные, этерифицированные, перокси- и эпокси-формы данных производных. Данные моно-, ди-, три-, тетра- и пентагидроксипроизводные ЬСРИРА являются производными, которые содержат 3, 4 или более двойных связей, обычно по крайней мере 2 из которых являются сопряженными, и 1 или более некарбоксигидроксильных групп. Предпочтительно данные производные содержат 4-6 двойных связей и по крайней мере 1-3 некарбоксигидроксильных групп, и более предпочтительно 2 или более некарбоксигидроксильных групп.
Окисленные производные омега-3 жирных кислот ЕРА и ИНА, катализируемые липоксигеназным или циклооксигеназным ферментами, включая ацетилированные формы циклооксигеназы 2 (СОХ2), которые способны снижать или устранять воспалительные процессы, обычно называют резолвинами, что является созданным новым термином (неологизмом), который является функциональным по природе. Докозатриены представляют подкласс оксилипинов, происходящих из ИНА, и содержат три сопряженные двойные связи. Протектин является еще одним впервые созданным функциональным термином для гидроксипроизводных омега-3 жирной кислоты ИНА, которые оказывают нейрозащитное действие.
Согласно настоящему изобретению термин докозаноид относится, в частности, к любым окисленным производным (оксилипинам) любой 22-углеродной ЬСРИРА (например, ИНА, ИРАп-6, ЬРАп-3 или ЬТАп-6). Структуры таких производных описаны подробно ниже. Отмечается, что, хотя авторы настоящего изобретения признают, что новые оксилипиновые производные (докозаноиды) настоящего изобретения, которые происходят из ИРАп-6, ИРАп-3, или ИТАп-6, также можно было бы считать резолвинами или протектинами на основе сходных функциональных характерных признаков таких оксилипинов, для целей настоящего изобретения предпочтительно, чтобы новые оксилипины настоящего
- 9 010802 изобретения назывались обычно с использованием термина докозаноид, что дает ясное структурное определение таких соединений. Докозаноиды из БРАи-б, БРАи-3 и БТАи-б, насколько известно авторам настоящего изобретения, никогда не были описаны ранее.
Оксилипины, раскрытые в настоящем изобретении
Одно воплощение настоящего изобретения относится к новым оксилипинам, происходящим из БРАи-б, БРАи-3 или БТАи-б, и любым аналогам или производным таких оксилипинов, включая любые композиции, или рецептуры, или продукты, содержащие такие оксилипины или их аналоги, а также масла или другие композиции, или рецептуры, или продукты, которые обогащены любым способом любым ЬСРИРА оксилипином или его аналогами или производными, и особенно любым оксилипином, происходящим из БНА, ЕРА, БРАи-б, БРАи-3 или БТАи-б, и более конкретно любым докозаноидом, и еще более конкретно любым оксилипином, происходящим из БРАи-б, БРАи-3 или БТАи-б. Настоящее изобретение относится также к любым маслам, или композициям, или рецептурам, или продуктам, в которых такие оксилипины (любой оксилипин, происходящий из БНА, ЕРА, БРАи-б, БРАи-3 или БТАи-б, и более конкретно любой докозаноид) стабилизируются или сохраняются в маслах и композициях, улучшая количество, качество или стабильность оксилипина в масле или композиции и/или улучшая абсорбцию, биодоступность и/или эффективность оксилипинов, содержащихся в маслах или композициях.
Как описывалось выше, известно множество происходящих из БНА и ЕРА оксилипинов, обладающих противовоспалительной активностью, антипролиферативной активностью, противооксидантной активностью, нейрозащитной или вазорегуляторной активностью (Уе е( а1. 2002), которые, как правило, называют резолвинами или протектинами. Такие оксилипины считаются охватываемыми настоящим изобретением, особенно в воплощениях, в которых такие оксилипины обогащены в маслах и композициях, предпочтительно с использованием способов и стадий переработки по настоящему изобретению. В дополнение к сказанному, настоящее изобретение предоставляет новые оксилипины, происходящие из БРАи-б, БРАи-3 или БТАи-б, включая их аналоги или производные, которые также обогащены в различных маслах и композициях, предпочтительно с использованием способов и процессов изобретения, или которые могут получаться и, при желании, отделяться или очищаться множеством биологических или химических методов, включая бе иоуо производство, для использования в любом терапевтическом, пищевом (включая нутрацевтическое), косметическом или другом применении, описанном здесь. Следовательно настоящее изобретение охватывает отделенные, полуочищенные и очищенные оксилипины, описанные здесь, а также источники оксилипинов, включая синтезированные и природные источники (например, масла или растения и их части), и включает любой источник, который обогащен присутствием оксилипина, раскрытого в настоящем изобретении генетическим, биологическим или химическим методом, или с помощью стадий переработки, описанных здесь.
Обычно оксилипины могут иметь или провоспалительные, или противовоспалительные свойства. Согласно настоящему изобретению провоспалительные свойства представляют свойства (характерные признаки, активности, функции), которые усиливают воспаление в клетках, тканях или в организме, а противовосапалительные свойства представляют свойства, которые ингибируют такое воспаление. Воспаление в клетках, тканях и/или организмах может определяться по множеству характерных признаков, включающих, но не ограниченных ими, продуцирование провоспалительных цитокинов (например, интерлейкина-ία (1Ь-1а), ΙΕ-1β, фактора некроза опухоли-α (ΙΝΡα), 1Ь-б, 1Ь-8, 1Ь-12, макрофагового воспалительного протеина-ία (М1Р-1а), макрофагового хемотактического протеина-1 (МСР-1, известного также как макрофаг/моноцит хемотактический и активирующий фактор или моноцит хемоаттрактантный протеин-1) и интерферона-γ (ΙΡΝ-γ)), продуцирование эйкозаноида, продуцирование гистамина, продуцирование брадикинина, продуцирование простагландина, продуцирование лейкотриена, лихорадку, отек или другую припухлость и аккумулирование или накопление клеточных медиаторов (например, нейтрофилов, макрофагов, лимфоцитов и др.) в участке воспаления.
Согласно одному воплощению оксилипины, раскрытые в настоящем изобретении, представляют оксилипины, обладающие противовоспалительными свойствами, такие как оксилипины, происходящие из БНА, ЕРА, БРАи-б, БРАи-3 и БТАи-б (подробно описанных ниже). Другие важные биоактивные свойства оксилипинов включают, но не ограничиваются ими, антипролиферативную активность, антиоксидантную активность, нейрозащитную и/или вазорегуляторную активность. Данные свойства также являются предпочтительными свойствами оксилипинов, раскрытых в настоящем изобретении, и предпочтительно являются характерными для оксилипинов, происходящих из БНА, ЕРА, БРАи-б, БТАи-б и БРАи-3. Согласно еще одному воплощению оксилипины настоящего изобретения включают любые оксилипины, происходящие из БРАи-б, или БРАи-3, или БТАи-б, независимо от конкретных функциональных свойств оксилипина. Предпочтительные оксилипины, происходящие из БРАи-б, или БРАи-3, или БТАи-б, включают оксилипины, которые дают питательную и/или терапевтическую пользу, и более предпочтительно имеют противовоспалительную активность, противопролиферативную активность, антиоксидантную активность и/или нейрозащитную активность.
Оксилипины, происходящие из ЕРА
Оксилипины, происходящие из ЕРА, раскрытые в настоящем изобретении, включают, но не огра
- 10 010802 ничиваются ими, 15-эпилипоксин А4 (58,6К,15К-тригидроксиэйкозатетраеновая кислота) и его промежуточная 15К-гидроксиэйкозапентаеновая кислота (15К-НЕРЕ); резолвин Е1 (5,12,18-тригидрокси ЕРА) и его промежуточные соединения 5,6-эпокси,18К-гидрокси-ЕРЕ, и 58-гидро(перокси),18К-гидрокси-ЕРЕ, и 18К-гидрокси-ЕРЕ (18К-НЕРЕ); и резолвин Е2 (58,18К-дигидрокси-ЕРЕ или 58,18К-диНЕРЕ) и его промежуточные соединения. См. фиг. 13 ниже в отношении структур данных ЕРА производных. Происходящие из ЕРА оксилипины описываются подробно в работе 8егйаи (2005), которая целиком включена в данное описание в качестве ссылки.
Происходящие из ΌΗΑ оксилипины
Оксилипины, происходящие из ΌΗΑ, которые раскрыты в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими, резолвин Ό1 (7,8,17К-тригидрокси ΌΗΑ) и резолвин Ό2 (7,16,17К-тригидрокси ΌΗΑ) наряду с их 8-эпимерами и их промежуточными соединениями, включающими 178/К-гидроксиперокси ΌΗΑ, и 78-гидроперокси,178/К.-ΟΗ-^ΗΑ, и 7(8)-эпокси-178/Κ.-ОН-^ΗΑ; резолвин Ό4 (4,5,17Ктригидрокси ΌΗΑ) и резолвин Ό3 (4,11,17К-тригидрокси ΌΗΑ) наряду с их 8-эпимерами и их промежуточными соединениями, включающими 178/К-гидроперокси ΌΗΑ, и 48-гидроперокси,178/К.-ΟΗ ΌΗΑ, и 4(5)-эпокси-178/К.-ΟΗ ΌΗΑ; и нейропротектин Ό1 (10,178-докозатриен, протектин Ό1) наряду с его Кэпимером и их промежуточными соединениями, включающими дигидроксипродукт 16,17-эпоксидокозатриен (16,17-эпокси ΌΤ) и гидропероксипродукт 178-гидроперокси ΌΗΑ; резолвин Ό5 (78,178-дигидрокси ΌΗΑ) и резолвин Ό6 и их гидроксилсодержащие промежуточные соединения; и эпоксипроизводные 7,8-эпокси ΌΡΑ, 10,11-эпокси ΌΡΑ, 13,14-эпокси ΌΡΑ и 19,20-эпокси ΌΡΑ и дигидроксипроизводное 13,14-дигидроксидокозапентаеновую кислоту; другие моногидрокси ΌΗΑ производные, включая Ки 8-эпимеры 7-гидрокси ΌΗΑ, 10-гидрокси ΌΗΑ, 11-гидрокси ΌΗΑ, 13-гидрокси ΌΗΑ, 14-гидрокси ΌΗΑ, 16-гидрокси ΌΗΑ и 17-гидрокси ΌΗΑ; и другие дигидрокси ΌΗΑ производные, включая К- и 8эпимеры 10,20-дигидрокси ΌΗΑ, 7,14-дигидрокси ΌΗΑ и 8,14-дигидрокси ΌΗΑ. См. примеры 2, 7 и 10 и фиг. 2Λ-2Ό, 7, 10 и 14А и В ниже, что касается описаний и структур данных ΌΗΑ производных. Происходящие из ΌΗΑ оксилипины описаны подробно в работах 8етйаи (2005) и Уе е! а1. (2002), которые целиком включены в данное описание в качестве ссылки.
Происходящие из ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 или ΡΡΑη-3 оксилипины и другие новые докозаноиды из С22 жирных кислот
Одно из воплощений настоящего изобретения относится к новым оксилипинам, которые происходят из ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 или ΌΡΑη-3. Еще одно воплощение изобретения относится к новым докозаноидам, которые могут производиться из С22 ΡΌΕΑ. В частности, авторы настоящего изобретения описывают здесь новые докозаноиды, структуры которых конструируются бе ηονο из структур С22 жирной кислоты. Оксилипины, охватываемые настоящим изобретением, включают любые оксилипины, происходящие из ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 или ΌΡΑη-3 или обычно из С22 жирных кислот, и более конкретно описываются здесь как докозаноиды. Новые докозаноиды включают любые окисленные производные ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6, ΌΡΑη-3 или любые другие новые окисленные производные С22 жирных кислот (например, см. фиг. 23), включая любые их производные или аналоги. В частности, докозаноиды настоящего изобретения включают, но не ограничиваются ими, любой К- или 8-эпимер любого моногидрокси-, дигидроксиили тригидроксипроизводного любой из ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 или ΌΡΑη-3 или С22 жирных кислот и могут включать производные по любому углероду, который образует углерод-углеродную двойную связь в ΌΟΡυΕΑ. Докозаноиды настоящего изобретения включают также любой продукт ферментативной реакции, которая использует ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 или ΌΡΑη-3 в качестве субстрата и которая катализируется оксилипин-генерирующим ферментом, включающим, но не ограниченным ими, липоксигеназы, циклооксигеназы, цитохром Р450 ферменты и другие гемсодержащие ферменты, такие как ферменты, описанные в табл. 1 (см. ниже). Табл. 1 дает достаточную информацию для идентификации перечисленных известных ферментов, включая официальные наименования, официальные символические обозначения, вымышленные наименования, организмы и/или номера последовательности для ферментов, присвоенные в базе данных.
Таблица 1. Липоксигеназа (ЪОХ), циклооксигеназа (СОХ), цитохром Р450 (ΟΎΡ) ферменты и другие гемсодержащие ферменты, которые могут использоваться для переработки ΌΟΡυΕΑ масел и жирных кислот с получением их гидроксил-жирно-кислотных производных с помощью описанных здесь способов.
Α) Ферменты типа липоксигеназы.
ΑΌΟΧ12.
Официальный символ: ΑΕΟΧ12; и наименование: арахидонат 12-липоксигеназа [Ηοηο 5ар1ео5|. Другие вымышленные наименования: ΗΟΝΟ:429, ЬОО12.
Другие обозначения: 12(8)-липоксигеназа; 12-липоксигеназа/арахидонат 12-липоксигеназа тромбоцитного типа.
Хромосома: 17; положение: 17р13.1Оепе1О: 239.
Α1οχ5.
Официальный символ: Α1οχ5; и наименование: арахидонат 5-липоксигеназа [Кайи8 гюгсещеиД. Другие вымышленные наименования: ΚΟΌ:2096, ΌΟΧ5Α.
Другие обозначения: 5-Липоксигеназа; 5-липоксигеназа.
- 11 010802
Хромосома: 4; положение: 4ц42Сепе1Ь: 25290.
АЬОХЕ3.
Официальный символ: ЛЬОХЕЗ; и наименование: арахидонат липоксигеназа 3 [Ното кар1епк].
Другие вымышленные наименования: НСЫС:13743.
Другие обозначения: эпидермальная липоксигеназа; липоксигеназа-3.
Хромосома: 17; положение: 17р13.6епеГО: 59344.
ЬОС425997.
Аналогичный арахидонат липоксигеназе 3; эпидермальной липоксигеназе; липоксигеназе-3 [Са11ик да11ик].
Хромосома: ИпбепеГО: 425997.
ЬОС489486.
Аналогичный арахидонат 12-липоксигеназе, 12К тип (липоксигеназа 12 типа эпидермиса) (12К-липоксигеназа) (12К-ЬОХ) [Сашк ГатШапк].
Хромосома: 56епеГО: 489486.
ЬОС584973.
Аналогичный арахидонат 12-липоксигеназе, 12К тип (липоксигеназа 12 типа эпидермиса) (12К-липоксигеназа) (12К-ЬОХ) [81гоп§у1осеп1го1ик ригригаШк].
Хромосома: 56епеГО: 584973.
ЬОС583202.
Аналогичный арахидонат 12-липоксигеназе, 12К тип (липоксигеназа 12 типа эпидермиса) (12К-липоксигеназа) (12К-ЬОХ) |81гопду1осеп1го1и8 ригригаШк].
Хромосома: ИпбепеГО: 583202.
ЬОС579368.
Аналогичный арахидонат 12-липоксигеназе, 12К тип (липоксигеназа 12 типа эпидермиса) (12К-липоксигеназа) (12К-ЬОХ) [81гоп§у1осеп1го1ик ригригаШк].
Хромосома: ИпбепеГО: 579368.
ЬОС504803.
Аналогичный арахидонат 12-липоксигеназе, 12К тип (липоксигеназа 12 типа эпидермиса) (12К-липоксигеназа) (12К-ЬОХ) [Вок 1аигик].
Хромосома: ИпбепеГО: 504803.
ЛЬОХ5.
Официальный символ: ЛЬОХ5; и наименование: арахидонат 5-липоксигеназа [Ното кар1епк].
Другие вымышленные наименования: НСЫС:435, 5-ЬО, 5ЬРС, ЬОС5.
Другие обозначения: арахидоновая кислота 5-липоксигеназа; лейкотриен А4 синтаза.
Хромосома: 10; положение: 10д11.26епеГО:240.
О81ЫВа00576О7.
Липоксигеназа Ь-2; липоксигеназа [Огу/а кайуа (]арошса сиШуаг-дгоир)].
СепеГО: 3044798.
Л1ох15Ь.
Официальный символ: А1ох 15Ь; и наименование: арахидонат 15-липоксигеназа, второй тип [Мик тикси1ик].
Другие вымышленные наименования: МС1:1098228, 8-ЬОХ, 88-ЬОХ, А1ох8.
Другие обозначения: 88-липоксигеназа.
Хромосома: 11; положение: 11 В46епеГО: 11688.
АЬОХ5АР.
Официальный символ: АЬОХ5АР; и наименование: арахидонат 5-липоксигеназа-активирующий белок [Ното кар1епк].
Другие вымышленные наименования: НСЫС:436, РЬАР.
Другие обозначения: МК-886-связывающий белок; пять-липоксигеназа-активирующий белок.
Хромосома: 13; положение: 13д126епеГО: 241.
ЬОС489485.
Аналогичный арахидонат 15-липоксигеназе, тип II (15-ЬОХ-2) (88-липоксигеназа) (88-ЬОХ) [Сашк ГатШапк].
Хромосома: 56епеГО: 489485.
БОС557523.
Аналогичный арахидонат 5-липоксигеназе (5-липоксигеназа) (5Ь0) [Оашо гепо|.
Хромосома: 156епеГО: 557523.
А1ох5ар.
Официальный символ: А1ох5ар; и наименование: арахидонат 5-липоксигеназа-активирующий белок [Мик тикси1ик].
Другие вымышленные наименования: МС1:107505, Р1ар.
Другие обозначения: арахидонат 5-липоксигеназа-активирующий белок.
- 12 010802
Хромосома: 5СеηеI^: 11б90.
ЬОС562561.
Аналогичный арахидонат 5-липоксигеназе (5-липоксигеназа) (5ЬО) |Ό;·ιηίο гегю].
Хромосома: инСенеЮ: 5б25б1.
БОС423769.
Аналогичный арахидонат 5-липоксигеназе (5-липоксигеназа) (5ЬО) [Са11и8 да11и§].
Хромосома: бСеиеЮ: 4237б9.
БОС573013.
Аналогичный арахидонат 5-липоксигеназе (5-липоксигеназа) (5ЬО) [Όαηίο гепо|.
Хромосома: ШЛевеЮ: 573013.
БОС584481.
Аналогичный арахидонат 5-липоксигеназе (5-липоксигеназа) (5ЬО) [8ΐ^οηду1οсеηί^οΐиδ ригригаФк].
Хромосома: ^СеиеЮ: 584481.
5ЬОХ-картофеля.
ΑΑΌ04258. Сообщения 5-липоксигеназа 8... [§ί: 2789б52].
15-ЬОХ-соевых бобов.
Р08170. Сообщения липоксигеназа семян... [§ί: 12б398].
12-ЬОХ-свиньи.
Ό10621. Сообщения 8ιΐδ ксгоГа ген £... [§ί: б0391233].
B) Циклооксигеназные ферменты.
СОХ2-человека.
ΑΑΝ87129. Сообщения простагландин §γη... [§ί:27151898].
C) Гемоглобинсодержащие ферменты НВА1.
Официальный символ: НВА1; и наименование: гемоглобин, альфа 1 [Ηοтο кар1ещ].
Другие вымышленные наименования: ΗСNС:4823, СЭ31.
Другие обозначения: альфа 1 глобин; альфа один глобин; альфа-1 глобин; альфа-1-глобин; альфа-2 глобин; альфа-2-глобин; гемоглобин альфа 1 цепь; гемоглобин альфа 2; гемоглобин альфа-1 цепь; гемоглобин альфа-2.
Хромосома: 1б; положение 1бр13.3СеηеI^: 3039.
ΗΒΒ.
Официальный символ: НВВ; и наименование: гемоглобин, бета [Ηοтο кар1ещ].
Другие вымышленные наименования: ΗСNС:4827, СЭ1131-С. ΗΒΌ, гемоглобин.
Другие обозначения: бетаглобин; бетаглобин цепь; гемоглобин А бета цепь; гемоглобин бета цепь; гемоглобин дельта ЕФ11а вариант.
Хромосома: 11; положение: 11р15.5Сепе1О: 3043.
№С1.
Официальный символ: ИВС1; и наименование: гемоглобин, гамма Α [Ηοηο кар1ещ].
Другие вымышленные наименования: ΗСNС:4831, ΗΒСΑ, ИВСК ЖССЫ, ΡЯО2979.
Другие обозначения: А-гамма глобин; гамма А гемоглобин; гамма глобин; гемоглобин гамма-α цепь; гемоглобин, гамма, регулятор.
Хромосома: 11; положение Ор^^Се^ГО: 3047.
Ό) Ферменты цитохром Р450 типа (Ген, Организм, Ген База данных: 8\νίδδΡΐΌΡ Ген база данных: ЕМВЬ/Генбанк/ΌΌΒΙ).
ίΑΡ4Α11, Ηοтο кар1е1К СР4АВ ЧЕЛОВЕКА, Б04751 Ό26481 8б7580 8б7581 ΑΕ525488 ΑΥ369778 Х71480
СΥΡ4Α4, ОгусФ1адик сишси1ш, СΡ4Α4 ΚΑΒΙΤ, Б04758 102818
СΥΡ4Α5, ОгусФ1адик сишси1ш, СΡ4Α5 ΚΑΒΙΤ, М28б55 Х57209
СΥΡ4Αб, ОгусФ1адик сишси1ш, СΡ4Αб ΚΑΒΙΤ, М28б5б М29531
СΥΡ4Α7, ОгусФ1адик сишси1ш, СΡ4Α7 ΚΑΒΙΤ, М28б57 М29530
ΟΥΡ4Β1, Ηοтο кар1ещ, СΡ4Β1 Η^ΑΝ, 102871 Х1бб99 ΑΕ491285 ΑΥ064485 ΑΥ064486
ΟΥΡ4Β1, ОгусФ1адик сишси1ш5, СΡ4Β1 ΚΑΒΙΤ, М29852 ΑΕ176914 ΑΕ332576
СΥΡ4С1, Β1α^ιυδ άίδ^ίάαίίδ, СΡ4С1 ΒΕΑΌΙ, М63798
СΥΡ4С21, Β^^Ή дегташса, СΡ4Сυ ΒΡΑΟΡ, ΑΕ275641
СΥΡ4Е4, Ι)ΐΌδορΙιι1α те1апο^аδΐе^, С4ΑЕ1 ОКОМЕ, ΑΕ003423 ΑΕ009194 ΑΥ058450 И34331
ΟΥΡ4Ε11, Ηοтο δαρ^ιΐδ, СΡ4ΕΒ Η^ΑΝ, ΑΕ236085 Β^16853 Α^05336
СΥΡ4Ε12, Ηοтο кар1ещ, СΡ4ΕС Η^ΑΝ, ΑΥ008841 ΑΒ035130 ΑΒ035131 ΑΥ358977
СΥΡ4Ε2, Ηοтο кар1ещ, СΡ4Ε2 Η^ΑΝ, Ό26480 И02388 ΑΒ015306 ΑΕ467894 Α^05336 Β^67437 Βί.Ό67439 Βί.Ό67440 ΑΕ221943
СΥΡ4Ε3, Ηοтο кар1ещ, СΡ4Ε3 Η^ΑΝ, Ό12620 Ό12621 ΑΒ002454 ΑΒ002461 ΑΕ054821 ΑΥ792513
СΥΡ4Ε8, Ηοтο карлик, СΡ4Ε8 Η^ΑΝ, ΑΕ133298
СΥΡ4V2, Ηοтο кар1ещ, СΡ4V2 Η^ΑΝ, ΑΥ422002 ΑΚ122600 ΑΚ126473 Β^60857
СΥΡ4V2, Ροιιμο рудтаеик, СΡ4V2 ΡΟΝΙΆ, СК858234
С’^ХЦ Ηοтο кар1ещ, СΡ4X1 Η^ΑΝ, ΑΥ358537 ΑΚ098065 Β^28102
- 13 010802
ΟΥΡ4Ζ1. Ното кар1епк. СР4/1 НИМАЫ. ΑΥ262056 ΑΥ3 58631
Сур4а1. Кайик погуедкик. СР4А1 КАТ. М14972 Х07259 М57718
Сур4а2, Кайик погуедкик. СР4А2 КАТ. М57719 ВС078684
Сур4а3, Кайик погуедкик. СР4А3 КАТ. М33936
Сур4а8. Кайик погуедкик. СР4А8 КАТ. М37828
Сур4аа1. ЭгокорНПа те1аподак1ет. С4АА1 ЭКОМЕ АЕ003808
Сур4ас1. ЭгокорНИа те1аподак1ег. С4АС1 ЭКОМЕ АЕ003609 ΑΥ0516^2
Сур4ас2. ЭгокорНИа те1аподак1ег. С4АС2 ЭКОМЕ. АЕ003609
Сур4ас3. ЭгокорНПа те1аподак1ег. С4АС3 ЭКОМЕ. АЕ003609 ΑΥ061002
Сур4ай1. ЭгокорНПа те1аподак1ег. С4АЭ1 ЭКОМЕ. АЕ003837 ΑΥ061058
Сур4Ы. Мик тикси1ик. СР4В1 МОИ8Е. Ό50834 ВС008996
Сур4Ы. Кайик погуедкик. СР4В1 КАТ. М29853 ВС074012
Сур4с3. 1)гокор1и1а те1аподак!ег. СР4С3 1)РО\1Е. АЕ003775 ВТ010108 И34323
Сур4й1. 1)гокор1ик те1аподаккг. СР4121 1ЖОМ1Е. Х67645 АЕ016992 АЕ016993 АЕ016994 АЕ016995 АЕ016996 АЕ016997 АЕ016998 АЕ016999 АЕ017000 АЕ017001 АЕ017002 АЕ017003 АЕ017004 АЕ003423 АЕ003423 Ζ98269
Сур4й1. ЭгокорНПа к1ти1апк. СР4Э1 РКО81. АЕ017005
Сур4й10. ЭгокорНйа тей1еп. С4Э10 РКОМТ. И91634
Сур4й14. ЭгокорНйа те1аподак!ег. С4Э14 ЭКОМЕ. АЕ003423 АЬ009194
Сур4й2. 1)гокор1ик те1аподак1ег. СР4122 1ЖОМ1Е. Х75955 Ζ23005 АЕ003423 АЬ009194 ΑΥ118763 АЕ017006 АЕ017007АЕ017008 АЕ017009 АЕ017010 АЕ017011 АЕ017012 АЕ017013 АЕ017014 АЕ017015 АЕ017016 АЕ017017 АЕ017018
Сур4й20. ЭгокорНйа те1аподак!ег. С4Э20 ЭКОМЕ. АЕ003475
Сур4й21. ЭгокорНйа те1аподак!ег. С4Э21 ЭКОМЕ. АЕ003618
Сур4й8. ЭгокорНПа те1аподаккг. СР4Э8 ЭКОМЕ. АЕ003558 ΑΥ058442 И34329
Сур4е1. ЭгокорНйа те1аподак!ег. СР4Е1 ЭКОМЕ. АЕ003837 ΑΥ118793
Сур4е2. ЭгокорНйа те1аподак!ег. СР4Е2 ЭКОМЕ. И56957 АЕ003837 ΑΥ058518 Х86076 И34332
Сур4е3. ЭгокорНйа те1аподак!ег. СР4Е3 ЭКОМЕ. АЕ003626 И34330
Сур4е5. ЭгокорНйа тей1еп. СР4Е5 РКОМТ. И78486
Сур4Е1. Кайик погуедкик. СР4Е1 КАТ. М94548 АЕ200361
Сур4Е14. Мик тикси1ик. СР4ЕЕ МОИ8Е. АВ037541 АВ037540 АЕ233644 АК005007 АК018676 ВС011228
Сур4Е4. Кайик погуедкик. СР4Е4 КАТ. И39206
Сур4Е5. Кайик погуедкик. СР4Е5 КАТ. И39207
Сур4Е6. Кайик погуедкик. СР4Е6 КАТ. И39208
Сур4д1. ЭгокорНПа те1апос.|ак1ег. СР461 ЭКОМЕ. АЕ003417 АЬ009188 И34328
Сур4д15. ЭгокорНйа те1аподак!ег. С4615 ЭКОМЕ. АЕ159624 АЕ003486 ΑΥ060719
Сур4р1. ЭгокорНПа те1аподаккг. СР4Р1 ЭКОМЕ. АЕ003834 ΑΥ071584 И34327
Сур4р2. ЭгокорНПа те1апос.|ак1ег. СР4Р2 ЭКОМЕ. АЕ003834 ΑΥ051564
Сур4р3. ЭгокорНПа те1апос.|ак1ег. СР4Р3 ЭКОМЕ. АЕ003834 ΑΥ075201
Сур4к3. ЭгокорНйа те1аподак!ег. СР483 ЭКОМЕ АЕ003498
Сур4у3. Мик тикси1ик. СР4У3 МОИ8Е. АВ056457 АК004724
Сур4х1. Кайик погуедкик. СР4Х1 КАТ. АЕ439343
СХР2 семейство ферментов цитохром Р450 (последовательности из Генбанка)
С'^Р212 последовательности из ГенБанка.
ЫМ_000775.
Ното каркпк цитохром Р450. семейство 2. подсемейство 1. полипептид 2 (СХР212) д1| 184 9100 71 ге£| ΝΜ_000775.2| [184 91007]
ЫМ_000770.
Ното каркпк цитохром Р450. семейство 2. подсемейство С. полипептид 8 (СΥР2С8). вариант копии Нр1-1. мРНК дт| 137871881 ге£|ым_000770.2Ϊ [13787188]
ЫМ_030878.
Ното каркпк цитохром Р450. семейство 2. подсемейство С. полипептид 8 (СΥР2С8). вариант копии Нр1-2. мРНК д1| 1378718б| ге£| ΝΜ_030878.11 [13787186]
ЫМ_023025.
Ка1ик погуедкик цитохром Р450. семейство 2. подсемейство 1. полипептид 4 (Сур2_)4). мРНК дд.1 6188 9 0871 ге£|йМ_023025.2| [61889087]
ΌΝ992115.
- 14 010802
ТС 119679 целый мозг взрослого человека, крупная вставка, рСМУ библиотека экспрессии Ното кар<епк кДНК клон ТС119679 5', аналогичный Ното кар1еик цитохрому Р450, семейство 2, подсемейство 1, полипептид 2 (СУР212), мРНК последовательность д±| 6625194б| дЬ| ϋΝ992115.111 [66251946]
Ζ84061.
88Ζ84061 токий свиной кишечник, кДНК библиотека 8ик ксгоГа кДНК клон С13609 5', аналогичный цитохром Р450 монооксигеназе СУР212, мРНК последовательность дх| 18О639о| етпЬ| Ζ84061.1Ι [1806390]
ВС091149.
Яа!ик погуедкик цитохром Р450, семейство 2, подсемейство 1, полипептид 4, мРНК (кДНК клон МСС:108684 1МЛСЕ:7323516), полный сбк дд! 6068816б| дЪ! ВС091149.11 [60688166]
380169.
Вок Таигик хромосома Ип геномно непрерывная, механически фрагментированная последователь ность целого генома д11 616303021 ге£| ΝΝ_380169.11 Βϋϋη_Κ<3Α215 002_1 [6163030211
ВС032594.
Ното кар1епк цитохром Р450, семейство 2, подсемейство 1, полипептид 2, мРНК (кДНК клон МСС:44831 1МЛСЕ: 5527808) полный сбк <311 2159566б| дь| ВС032594.11 [21595666]
ΝΤ_086582.
Ното кар1епк хромосома 1 геномно непрерывная, чередующаяся сборка д1| 514603681 ге£| ΝΤ_086582.1| Нз1_86277 [51460368]
ΝΤ_032977.
Ното кар1епк хромосома 1 геномно непрерывная д1| 514586741 ге£| ΝΤ_032977.7| Нз1_33153 [514586 74]
С0581852.
1РЕиМ1СЕ^МС’О_4 6633 Ка1хе_ММН Масаса ти1айа кДНК клон 1В1и\У: 17960 5', аналогичный основаниям 384-953, очень сходный с СУР212 человека (Нк.152096), мРНК последовательность д1| 504133821 дЬ| СО581852.11 [50413382]
ΑΥ410198.
Мик тикси1ик СУР212 ген, У1ЯТиАЬ ΤΡΑΝ8ί.ΈΙΡΤ. частичная последовательность, геномная над зорная последовательность д1| 397бб1бб1 дЬ| ΑΥ410198.1| [39766166]
ΑΥ410197.
Рап 1год1оНу(ек СУР212 ген, У1ЯТиАЬ ΤΡΑΝδΕΈΙΡΤ, частичная последовательность, геномная надзорная последовательность д±| 3 97661651 дЬ| ΑΥ410197.1| [39766165]
ΑΥ410196.
Ното кар1епк СУР212 ген, νίΚΤυΑΕ ΤΚΑΝδΕΚΙΡΤ, частичная последовательность, геномная надзорная последовательность д±| 397661641 дЬ| ΑΥ410196.11 [39766164]
ΑΥ426985.
Ното кар1епк цитохром Р450, семейство 2, подсемейство Е полипептид 2 (СУР212) ген, полный сбк д1| 375745031 дЬ| ΑΥ426985.11 [37574503]!
АВ080265.
Ното кар1епк СУР212 мРНК для цитохрома Р450 212, полный сбк д1| 1887407б| аЬ]| АВ080265.11 [18874076]
ΑΕ272142.
Ното кар1епк цитохром Р450 (СУР212) ген, полный сбк дЯ 212621851 дЬ| АР272142.1| [21262185]!
υ37143.
Ното кар1епк цитохром Р450 монооксигеназа СУР212 мРНК, полный сбк дд| 182545121 дк| и37143.21 Н5Ц37143 [18254512]
ΑΕ039089.
Ното каргепк цитохром Р450 (СУР212) ген, частичный сбк
- 15 010802 дд.| 144865671 дЬ| АВ039089.11 АР039089 [14486567]
СУР5 семейство цитохром Р450 ферментов (последовательности из Генбанка)
ΝΜ_011539.
Μυκ ти8си1и8 тромбоксан А синтаза 1, тромбоцит (1Ъха8 1), мРНК д1| 319814651 ге£|ыМ_01153 9.2| [31981465]
ΝΜ_030984.
Ηοιηο καρίοηκ тромбоксан А синтаза 1 (тромбоцит, цитохром Р450, семейство 5, подсемейство А) (ΤВXА81), вариант копии ΤΧ8-ΙΙ, мРНК дб| 136998391 ге£|кМ_030984.1| [13699839]
ΝΜ_001061.
Ηοιηο καρίοηκ тромбоксан А синтаза 1 (тромбоцит, цитохром Р450, семейство 5, подсемейство А) (ΤВXА81), вариант копии ΤΧ8-Ι, мРНК дх1136998381 Γβί,ΝΜ_001061.2] [13699838]
ВС041157.
Ηοηο καρίοηκ тромбоксан А синтаза 1 (тромбоцит, цитохром Р450, семейство 5, подсемейство А), вариант копии ΤΧ8-Ι, мРНК (кДНК клон М6С:4872б 1МА6Е:5755195), полный сбк д11 273712251 дЬ| ВС041157.1| [27371225]
СУР8 семейство цитохром Р450 ферментов (последовательности из Генбанка)
ΝΜ_000961.
Ηοηο καρίοηκ простагландин 12 (простациклин) синтаза (ΓΤ6Ι8), мРНК д1| 61676177! ге£, ΝΜ_000961. з| [61676177]
ΝΜ_008968.
Μυκ ιηιικαιΐιικ простагландин 12 (простациклин) синтаза (Γΐ§ίκ), мРНК дх| 319820831 ге£! ΝΜ_008968.2| [31982083]
И8З402.
Ηοηο καρίοηκ ΓΤ6Ι8 (СУР8) ген для простациклинсинсазы, полный с^ д±| 60683846! Ώ83402.2| [60683846]
ВС062151.
Μυκ ιηιικαιΐιικ простагландин 12 (простациклин) синтаза, мРНК (кДНК клон ΜΟί.’:70035 IΜА6Е:б5121б4), полный с^ да.! 38328177, дЬ| ВС062151.11 [38328177]!
a) Происходящие из ИРАи-б оксилипины.
Происходящие из ИРАи-б оксилипины (называемые также оксилипинами или, более конкретно, докозаноидами, из ИРАи-б) включают, но не ограничиваются ими, любой В- или 8-эпимер любого моногидрокси-, дигидрокси-, тригидрокси- или полигидроксипроизводного ИРАи-б и могут включать гидроксипроизводные по любому углероду, который образует углерод-углеродную двойную связь в ЭРА η-б. Некоторые примеры новых происходящих из ИРАи-б оксилипинов настоящего изобретения включают, но не ограничиваются ими, В- и 8-эпимеры моногидроксипродуктов ИРАи-б, включая 7-гидрокси ЬРАиб, 8-гидрокси ИРАи-б, 10-гидрокси ИРАи-б, 11-гидрокси ИРАи-б, 1З-гидрокси ИРАи-б и 17-гидрокси ИРАи-б (предпочтительно 17-гидрокси ИРАи-б); В- и 8-эпимеры дигидроксипроизводных ИРАи-б, включая 7,17-дигидрокси ИРАи-б, 10,17-дигидрокси ИРАи-б, 13,17-дигидрокси ИРАи-б, 7,14-дигидрокси ИРАи-б, 8,14-дигидрокси ИРАи-б, 1б,17-дигидрокси ЬРАи-б и 4,5-дигидрокси ЬРАи-б (предпочтительно 10,17-дигидрокси ИРАи-б,); и тригидроксипроизводные ИРАи-б, включая В- и 8-эпимеры 7,1б,17-тригидрокси ЬРАи-б и 4,5,17-тригидрокси ЬРАи-б. Структуры ЬРАи-б оксилипинов описаны и/или показаны в примерах З, б, 8 и 11 и на фиг. З А-ЗИ, б, 8, 11 и 15.
Структуры различных докозаноидных продуктов ферментативного (15-липоксигеназа, 5-липоксигеназа, 12-липоксигеназа и гемоглобин) превращения ЬРАи-б показаны в примерах З, б, 8 и 11. Данные ИРАи-б производные в структурном отношении аналогичны производным, получаемым из ЭИА (примеры 2, 7 и 10) и ИРАи-З (примеры 4, 9 и 12), когда используются те же ферменты.
Примеры З-12 демонстрируют производство докозаноидных продуктов из ИРАи-б, так же, как и ОИА. ЬРАп-З, ^ΤЛи-б, и пример 1З описывает оксилипиновые (докозаноидные) продукты, найденные в 1)1^/1)1^11-6 ЬСРИРА масле.
b) Происходящие из ИРАи-З оксилипины.
Происходящие из ИРАи-З оксилипины (называемые также оксилипинами или, более конкретно, докозаноидами, из ИРАи-З) включают, но не ограничиваются ими, любой В- или 8-эпимер любого моногидрокси-, дигидрокси-, тригидрокси- или полигидроксипроизводного ИРАи-З и могут включать гидроксипроизводные по любому углероду, который образует углерод-углеродную двойную связь в ИРАи-З. Некоторые примеры новых происходящих из ИРАи-З оксилипинов настоящего изобретения включают,
- 1б 010802 но не ограничиваются ими, Β- и 8-эпимеры моногидроксипродуктов ΌΡΑη-3, включая 7-гидрокси ΌΡΑη-
3, 10-гидрокси ΌΡΑη-3, 11-гидрокси ΌΡΑη-3, 13-гидрокси ΌΡΑη-3, 14-гидрокси ΌΡΑη-3, 16-гидрокси ΌΡΑη-3 и 17-гидрокси ΌΡΑη-3; Β- и 8-эпимеры дигидроксипроизводных ΌΡΑη-3, включая 7,17-дигидрокси ΌΡΑη-3, 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-3, 8,14-дигидрокси ΌΡΑη-3, 16,17-дигидрокси ΌΡΑη-3, 13,20-дигидрокси ΌΡΑη-3 и 10,20-дигидрокси ΌΡΑη-3; и тригидроксипроизводные ΌΡΑη-3, включая Β- и 8-эпимеры 7,16,17-тригидрокси ΌΡΑη-3. Структуры ΌΡΑη-3 оксилипинов описаны и/или показаны в примерах
4, 9 и 12 и на фиг. 4Α-4Ό, 9, 12 и 16.
с) Происходящие из ΌΡΑη-6 оксилипины.
Происходящие из ΌΤΑη-6 оксилипины (называемые также оксилипинами или, более конкретно, докозаноидами, из ΌΤΑη-6) включают, но не ограничиваются ими, любой Β- или 8-эпимер любого моногидрокси-, дигидрокси-, тригидрокси- или полигидроксипроизводного ΌΤΑη-6 и могут включать гидроксипроизводные по любому углероду, который образует углерод-углеродную двойную связь в ΌΤΑη-6. Некоторые примеры новых происходящих из ΌΤΑη-6 оксилипинов настоящего изобретения включают, но не ограничиваются ими, Β- и 8-эпимеры моногидроксипродуктов ΌΤΑη-6, включая 7-гидрокси ΌΤΑη6, 10-гидрокси ΌΤΑη-6, 13-гидрокси ΌΤΑη-6 и 17-гидрокси ΌΤΑη-3; Β- и 8-эпимеры дигидроксипроизводных ΌΤΑη-6, включая 7,17-дигидрокси ΌΤΑη-6, 10,17-дигидрокси ΌΤΑη-6 и 16,17-дигидрокси ΌΤΑη6; и тригидроксипроизводные ΌΤΑη-6, включая Β- и 8-эпимеры 7,16,17-тригидрокси ΌΤΑη-6. Структуры ΌΤΑη-6 оксилипинов описаны и/или показаны в примере 5 и на фиг. 5А-5С и 17.
б) Новые происходящие из Ε22-ΡυΡΑ оксилипины.
Другие новые происходящие из Ε22-ΡϋΡΑ оксилипины (называемые также оксилипинами или, более конкретно, докозаноидами, из Ε22-ΡϋΡΑ) включают, но не ограничиваются ими, любой Β- или 8эпимер любого моногидрокси-, дигидрокси-, тригидрокси- или полигидроксипроизводного Ε22-ΡϋΡΑ8 и могут включать гидрокси производные по любому углероду, который образует углерод-углеродную двойную связь в Ε22-ΡϋΡΑ. Некоторые примеры новых докозаноидов, которые охватываются настоящим изобретением, включают, но не ограничиваются ими, 4,5-эпокси-17-гидрокси ΌΡΑ, 7,8-эпокси ΌΗΑ, 10,11-эпокси ΌΗΑ, 13,14-эпокси ΌΗΑ, 19,20-эпокси ΌΗΑ, 13,14-дигидрокси ΌΗΑ, 16,17-дигидрокси ΌΤΑη-6, 7,16,17-тригидрокси ΌΤΑη-6, 4,5,17-тригидрокси ΌΤΑη-6, 7,16,17-тригидрокси ΌΤΑη-3, 16,17-дигидрокси ΌΤΑη-3, 16,17-дигидрокси ΌΤΒΑη-6,7, 16,17-тригидрокси ΌΤΚ.Αη-6, 4,5-дигидрокси ΌΤΑη-6 и 10,16,17-тригидрокси ΌΤΚΑη-6. Структуры данных происходящих из Ε22-ΡυΡΑ докозаноидов показаны на фиг. 23.
Происходящие из ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 и ΌΡΑη-3 оксилипины или другие происходящие из Ε22-ΡΌΡΑ оксилипины настоящего изобретения, так же, как и аналоги или производные любых таких оксилипинов настоящего изобретения, могут быть получены с помощью химического синтеза или биологического синтеза, включая бе ηονο синтез или ферментативное превращение субстрата. Альтернативно, такие оксилипины могут быть получены путем отделения, обогащения и/или превращения субстратов из природных источников (описанных ниже). Согласно настоящему изобретению ссылка на оксилипин, происходящий из конкретной ΌΕΡυΡΑ, такой как происходящий из ΌΡΑη-6 оксилипин, или ΌΡΑη-6 оксилипиновое производное, или ΌΡΑη-6 оксилипиновый аналог, например, относится к оксилипину, который был получен любым способом, с использованием знания структуры оксилипина, который может быть получен с использованием ΌΡΑη-6 в качестве субстрата. Такой оксилипин необязательно получается с помощью ферментативной реакции или биологической системы, а, как упоминалось выше, может альтернативно синтезироваться химическим путем бе ηονο. В дополнение к сказанному, аналоги или производные встречающихся в природе ΌΡΑη-6 оксилипинов могут конструироваться на основе структуры встречающихся в природе ΌΡΑη-6 оксилипинов, которые отличаются от природного ΌΡΑη-6 оксилипина по крайней мере одной модификацией. Такие аналоги могут также синтезироваться бе ηονο с использованием методов химического синтеза или с использованием видоизменений методов биологического производства (например, ферментативных реакций). Способы получения оксилипинов согласно настоящему изобретению, включая способы обогащения природных источников таких оксилипинов, и с помощью ферментативного превращения субстратов, раскрыты в данном описании. Способы химического синтеза соединений, таких как оксилипины, также известны в данной области техники и могут свободно применяться к новым оксилипиновым соединениям настоящего изобретения. Такие способы также описаны здесь.
Согласно настоящему изобретению имеется в виду, что термин подобные докозаноиду соединения, или аналоги докозаноида, или производные докозаноида или докозаноидные производные включают аналоги любых докозаноидов, описанных здесь, включая любой из новых докозаноидов настоящего изобретения, которые включают С22 жирную кислоту, имеющую по крайней мере три олефиновые группы (углерод-углеродные двойные связи). Аналогичный термин также может использоваться для более общего описания аналогов и производных любых описанных здесь оксилипинов (например, подобных оксилипину соединений, аналогов оксилипина, производных оксилипина).
Используемый здесь термин аналог относится к химическому соединению, которое структурно сходно с другим соединением и отличается слегка по составу (как в случае замены 1 атома атомом иного элемента или в случае присутствия конкретной функциональной группы или замены одной функцио
- 17 010802 нальной группы какой-либо еще функциональной группой). Таким образом, аналогом является соединение, которое сходно или сравнимо по функции и виду, но не по структуре или происхождению ссылочного соединения. Например, соединением, на которое ссылаются, может быть ссылочный докозаноид, такой как любой докозаиоид, происходящий из ΌΗΑ, ΌΡΑη-б, ΌΡΑη-3 или ΌΤΑη-б, а аналогом является вещество, обладающее химической структурой или химическими свойствами, сходными со структурой или свойствами ссылочного докозаноида.
Термины замещенный, замещенное производное и производное, когда они используются для описания соединения настоящего изобретения, означают, что по крайней мере один водород, присоединенный к незамещенному соединению, заменен отличным от него атомом или химическим фрагментом. Примеры заместителей включают, но не ограничиваются ими, гидрокси, алкил, галоген, нитро, циано, гетероцикл, арил, гетероарил, амино, амид, сложный эфир, простой эфир, карбоновую кислоту, тиол, сложный тиоэфир, простой тиоэфир, сульфоксид, сульфон, карабамат, пептидил, ΡΟ3Η2 и их смеси.
Хотя производное имеет физическую структуру, аналогичную структуре исходного соединения, производное может иметь отличные химические и/или биологические свойства от свойств исходного соединения. Такие свойства могут включать, но не ограничиваются ими, повышенную или пониженную активность исходного соединения, новую активность по сравнению с исходным соединением, увеличенную или уменьшенную биодоступность, повышенную или пониженную эффективность, повышенную или пониженную стабильность ίη νίίτο и/или ίη νίνο и/или повышенные или пониженные свойства абсорбции.
Специалистами в данной области техники должно быть оценено, что соединения изобретения, имеющие хиральный центр, могут существовать и быть изолированы в оптически активной и рацемической формах. Некоторые соединения могут проявлять полиморфизм. Должно быть понятно, что настоящее изобретение охватывает любые рацемические, оптически-активные, полиморфные или стереоизомерные формы или их смеси соединения изобретения, которое обладает полезными свойствами, описанными здесь, в данной области техники должно быть хорошо известно, как приготавливать оптическиактивные формы (например, с помощью разложения рацемической формы перекристаллизацией, с помощью синтеза из оптически-активных исходных материалов, с помощью хирального синтеза или с помощью хроматографического разделения с использованием хиральной стационарной фазы) и как определять противовоспалительную активность, например, с использованием стандартных испытаний, описанных здесь, или с использованием других аналогичных тестов, которые хорошо известны в данной области.
Пролекарства любых из оксилипинов, описанных здесь, и предпочтительно любых из докозаноидов, описанных здесь, и даже более предпочтительно любых определенных докозаноидов, показанных, например, на любой из фиг. 2А-2Б, 3Α-3Ό, 4Α-4Ό, 5А-5С, б-17, 18А-18С и 23, могут быть идентифицированы с использованием обычных технологий, известных в данной области. В данной области техники известны различные формы пролекарств. Что касается примеров таких пролекарственных производных, см., например: а) Όβδί^η ο£ Ρίοάπίβδ. под редакцией Η. Випбдаагб (ЕЕсуюг. 1985) и Ме11юб8 ίη Εηζνιηοίοβν. νοί. 42, р. 309-39б, под редакцией ^1ббег, е1 а1. (Лсабетс ΡΐΌ88, 1985); Ь) ΤβχώοοΕ ο£ Όπ.ι§ Όβδί^η амб Όονοίοριηοηΐ под редакцией ΚΓο§8§ααΓά-Εαι^η и Η. Ви^^ааМ, СНар1ег 5 Ое^м амб Αρρίκαίίοη ο£ Ггобгидз, автора Η. ВцЫ^аагб ρ. 113-191 (1991); с) Η. ВцЫ^аагб, Αбνапсеб Όπ.ι§ Оебуегу К^ете, 8, 1-38 (1992); б) Η. ВцЫ^аагб, е1 а1., ίουΓηπΙ ο£ ^атасеиШ^ Боенсе^ 77: 285 (1988); и е) Ν. Какеуа, е1 а1., СНет. Ρΐιηπη. Ви11., 32: б92 (1984), каждая из котроых включена сюда в качестве ссылки.
Дополнительно, изобретение также включает сольваты, метаболиты и соли (предпочтительно фармацевтически приемлемые соли) соединений любых из описанных здесь оксилипинов, и в особенности любых из докозаноидов, описанных здесь, и более особенно любых конкретных докозаноидов, показанных, например, на любой из фиг. 2А-2Б, 3Α-3Ό, 4Α-4Ό, 5А-5С, б-17, 18А-18С и 23.
Термин сольват относится к совокупности молекулы с 1 или более молекулами растворителя. Метаболит представляет фармакологически активный продукт, производимый посредством ίη νίνο метаболизма в теле или организме, определенного соединения или его соли. Такие продукты могут быть результатом, например, реакции окисления, восстановления, гидролиза, амидирования, деамидирования, сложной этерификации, деэтерификации, ферментативного расщепления и т. п. вводимого или получаемого соединения. Соответственно, изобретение включает метаболиты соединений любых оксилипинов, описанных здесь, и в частности любых докозаноидов, описанных здесь, и еще более особенно любых конкретных докозаноидов, показанных, например, на любой из фиг. 2Α-2Ό, 3Α-3Ό, 4Α-4Ό, 5А-5С, б-17, 18А-18С и 23, включая соединения, полученные способом, включающим контактирование соединения данного изобретения с организмом в течение периода времени, достаточного для получения его метаболического продукта.
Используемая здесь фармацевтически приемлемая соль или соль включает соли, которые сохраняют биологическую эффективность свободных кислот и оснований определенного соединения и которые не являются биологически или иным образом нежелательными. Соединение изобретения может обладать достаточно кислотной, достаточно щелочной или обоими функциональными группами и соответственно реагировать с любым из неорганических или органических оснований и неорганических или
- 18 010802 органических кислот для образования фармацевтически приемлемой соли. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают соли, получаемые взаимодействием соединений настоящего изобретения с минеральной или органической кислотами или неорганическим основанием, такие соли включают сульфаты, пиросульфаты, бисульфаты, сульфиты, бисульфиты, фосфаты, вторичные кислые фосфаты, первичные кислые фосфаты, метафосфаты, пирофосфаты, хлориды, бромиды, йодиды, ацетаты, пропионаты, деканоаты, каприлаты, акрилаты, форматы, изобутираты, капроаты, гептаноаты, пропиолаты, оксалаты, малонаты, сукцинаты, субераты, себакаты, фумараты, малеаты, бутин-1,4-диоаты, гексин-1,6-диоаты, бензоаты, хлорбензоаты, метилбензоаты, динитробензоаты, гидроксибензоаты, метоксибензоаты, фталаты, сульфонаты, ксилолсульфонаты, фенилацетаты, фенилпропионаты, фенилбутираты, цитраты, лактаты, гамма-гидроксибутираты, гликоляты, тартраты, метансульфонаты, пропансульфонаты, нафталин-1сульфонаты, нафталин-2-сульфонаты и манделаты. Так как одно соединение настоящего изобретения может включать более чем один кислотный или щелочной фрагмент, соединения настоящего изобретения могут включать моно-, ди- или трисоли в одном соединении.
Если соединение изобретения представляет основание, желаемая фармацевтически приемлемая соль может быть получена любым подходящим методом, доступным в данной области техники, например с помощью обработки свободного основания кислотным соединением, в частности такой неорганической кислотой, как соляная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и аналогичные, или с такой органической кислотой, как уксусная кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, миндальная кислота, фумаровая кислота, малоновая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, гликолевая кислота, салициловая кислота, пиранозидиловая кислота, такая как глюкуроновая кислота или галактуроновая кислота, альфагидроксикислота, такая как лимонная кислота или тартаровая кислота, аминокислота, такая как аспарагиновая кислота или глутаминовая кислота, ароматическая кислота, такая как бензойная кислота или коричная кислота, сульфоновая кислота, такая как п-толуолсульфоновая кислота или этансульфоновая кислота, или аналогичными.
Если соединение изобретения представляет кислоту, желаемая фармацевтически приемлемая соль может быть получена любым подходящим методом, например обработкой свободной кислоты неорганическим или органическим основанием. Предпочтительными неорганическими солями являются соли, образуемые щелочными или щелочно-земельными металлами, такими как литий, натрий, калий, барий и кальций. Предпочтительные соли органических оснований включают, например, аммониевую соль, дибензиламмониевую, бензиламмониевую, 2-гидроксиэтиламмониевую, бис(2-гидроксиэтил)аммониевую соль, фенилэтилбензиламин, дибензилэтилендиамин и аналогичные соли. Другие соли кислотных фрагментов могут включать, например, соли, образуемые с прокаином, хинином и Ν-метилглюкозамином плюс соли, образуемые с основными аминокислотами, такими как глицин, орнитин, гистидин, фенилглицин, лизин и аргинин.
Масла, композиции, рецептуры или продукты, содержащие ΌΡΑη-6, ΌΡΑη-3, ΌΤΑη-6, другие ί22-ΤίΡυΤΑ, другие ΌίΡυΕΑ и/или оксилипины, производные от них
Настоящее изобретение включает масла, композиции, рецептуры или продукты, включающие ΕίΡΕΡΑ и/или ΌίΡυΕΑ оксилипины, описанные здесь. Согласно настоящему изобретению термин продукт может использоваться для общего или родового описания любого масла, композиции, рецептуры настоящего изобретения, хотя один термин мог бы быть предпочтительнее другого в зависимости от контекста использования продукта. В одном воплощении изобретения масла, композиции и рецептуры включают, по крайней мере, ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6, или ΌΡΑη-3, или оксилипины, происходящие из них, или любые их сочетания, и могут дополнительно включать любые другие ΌίΡυΤΑ и/или любые оксилипины, производные от них. Такие оксилипины могут быть получены любым химическим или биологическим (биогенным) методом, включающим бе поуо синтез, ферментативное превращение из любого источника (например, с помощью ферментов, включающих липоксигеназы, циклооксигеназы, цитохром Р450 ферменты и другие гемсодержащие ферменты) с помощью очистки из любого источника и производства из любого биологического источника (например, микробных, растительных, животных источников).
В одном из воплощений изобретения масла обогащаются для наличия любого ^СΡυΕΑ-производного оксилипина (также известного как ΌίΡυΤΑ оксилипин), включая любой оксилипин, производный от ΌΗΑ, ΕΡΑ, ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 и/или ΌΡΑη-3, с предпочтением ^СΡυΕΑ-производного докозаноидов и более предпочтительно оксилипинов, производных от ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 или ΌΡΑη-3. В другом воплощении масла, композиции или рецептуры, содержащие любой ^СΡυΕΑ-производный оксилипин, производятся, перерабатываются или обрабатываются для сохранения и/или улучшения стабильности, абсорбции, биоактивности, биодоступности или эффективности ΌίΡυΕΑ оксилипинов в маслах, композициях или готовых рецептурах. Ниже описаны различные способы получения, переработки и добавления масел, композиций или рецептур.
Источники ΌίΡυΕΑ и ^СΡυΕΑ-производных оксилипинов для использования в настоящем изобретении
Любой источник ΌίΡυΕΑ может использоваться для получения ΌίΡυΕΑ, оксилипинов, масел, композиций, готовых форм (рецептур) настоящего изобретения, включая, например, животные (беспозвоночные и позвоночные), растительные и микробные источники.
- 19 010802
Примеры животных источников включают водных животных (например, рыб, морских млекопитающих и ракообразных, таких как криль и другие эуфазиды) и липиды, экстрагируемые из животных тканей (например, мозга, печени, глаза и т.д.).
Более предпочтительные источники включают микроорганизмы и растения. Предпочтительные микробные источники ЬСРИРА включают водоросли, грибки (включая дрожжи и нитевидные грибки (гифомицеты) рода МогПегеПа), протисты и бактерии.
Использование в качестве источника микроорганизмов, таких как водоросли, может обеспечить органолептические преимущества, т.е. жирные кислоты из такого источника, как микроорганизмы, могут не иметь рыбного вкуса и запаха, который могут иметь жирные кислоты рыбного происхождения. Однако рыбные масла также включены в настоящее изобретение. Поскольку рыбные масла могут естественным образом подвергаться окислительным процессам, которые дают альдегиды и кетоны, что придает неприятный запах и вкус таким рыбным маслам, настоящее изобретение обладает преимуществом предписанного или целенаправленного окисления специфических соединений для получения докозаноидов или смесей докозаноидов, что обеспечивает благоприятное качество масел, содержащих такие докозаноиды, включая рыбные масла. В предпочтительном воплощении в настоящем изобретении используются рыбные масла, содержащие ΩΝΛ и/или ЕРА и ИРАп-6, ИТАп-6 и/или ИРАп-3.
Примеры бактериальных источников включают морские бактериальные источники, такие как представители рода 8йетапе11а и У1Ыго.
Более предпочтительно источник ЬСРИРА включает водоросли или протисты. Предпочтительные водоросли и род протистов являются членами царства 8!гатепорйа и более предпочтительно являются членами следующих групп водорослей: динофлагелляты, диатомовые водоросли, хризофиты или траустохитриды.
Предпочтительно динофлагелляты являются представителями рода Сгурйесобшшт и еще более предпочтительно представителями вида СгурЙесобтшт сойпй.
Разработки привели к частому пересмотру таксономии Тйгаик!осйу!пбк (траустохитриды). Теоретики, таксономии помещают Т11гаик1ос11у1пбк с морскими водорослями или подобными водорослям протистами. Однако, ввиду неопределенности таксономии, для целей настоящего изобретения должно быть лучше рассматривать штаммы, описанные в настоящем изобретении как Тйтаийосйуйтбк, для включения следующих организмов: отряд: Т11гаик1ос11у1па1ек; семейство: Тйгаик!осйу!пасеае (род: Тйгаик!осйу!пит (который для данного примерения включает И1кеша, хотя некоторые рассматривают ее как отдельный род), 8сЫхосйу!пит, 1аропосйу!пит, Ар1апосйу!пит или Е1та) или ЬаЬугт!ки1асеае (род: ЬаЬупп!йи1а, ЬаЬуппЙшЫбек или ЬаЬуппЙютуха). Также следующие рода иногда включены или в семейство Тйгаик!осйу!пасеае, или в ЬаЬугт!Ьи1асеае: АНйогша, Сога11осйуПшт, И1р1орйугук и Руггйокогик), а для целей данного изобретения охватываются ссылкой на Тйгаийосйуйтб или представителя отряда Тйгаик!осйу!па1ек. Признано, что во время данного изобретения пересмотр таксономии Тйгаик!осйу!г1бк поместил род ЬаЬуппЙшЫбек в семейство ЬаЬупп11ш1асеае и подтверждает помещение двух семейств Тйгаик!осйу!пасеае и ЬаЬугт!Ьи1асеае в линию 81гатепорПе. Отмечается, что ЬаЬупп!йи1асеае иногда обычно называются лабиринтулидами или лабиринтулами или лабиринтулоиды и ТЬгаик!осЬу!пасеае обычно называются траустохитридами, хотя, как обсуждалось выше, для целей ясности данного изобретения ссылка на Т11гаик1ос11у1пбк охватывает любой представитель отряда Т11гаикЮс11у1па1ек и/или включает представителей как Тйгаик!осйу!пасеае, так и ЬаЬупп11ш1асеае. Информация в отношении таких водорослей может быть найдена, например, в патентах США №№ 5407957, 5130242 и 5340594, которые включены сюда в качестве ссылки.
Особенно предпочтительные источники ЬСРИРА и оксилипинов для использования в настоящем изобретении включают микроорганизмы из рода, включающего, но не ограниченного ими, Тйгаик!осЬу1лит, .ГаропосйуПшт, Ар1апосйу!пит, Е1та и 8с1ихос11у1пит в пределах Тйгаик!осйу!пасеае и ЬаЬуйп!йи1а, ЬаЬугт!йи1о1бек или ЬаЬуппЙютуха в пределах ЬаЬугт!йи1асеае. Предпочтительные виды этих родов включают, но не огрничиваются ими, любые виды в пределах ЬаЬупп!йи1а, включая ЬаЬупп11ш1а кр., ЬаЬугт!йи1а а1депепык, ЬаЬугт!йи1а сюпкоткки, ЬаЬуйп!йи1а сйайопй, ЬаЬуйп!йи1а соепосукйк, ЬаЬугт!йи1а тасгосукйк, ЬаЬугт!йи1а тасгосукйк айапйса, ЬаЬугт!йи1а тасгосукйк тасгосукйк, ЬаЬугт!йи1а тадшйса, ЬаЬугт!йи1а тти!а, ЬаЬугт!йи1а гоксоГГепык, ЬаЬуйп!йи1а уа1копоуи, ЬаЬугт!йи1а УЙеШпа, ЬаЬуйп!йи1а уйеШпа расШса, ЬаЬуйп!йи1а УЙеШпа УЙеШпа, ЬаЬуйп!йи1а хорГи; любые виды ЬаЬупп!йи1о1бек, включая ЬаЬупп!йи1о1бек кр., ЬаЬупп!йи1о1бек тти!а, ЬаЬупп!йи1о1бек ксЫхосйуйорк; любые виды ЬаЬупп!йотуха, включая ЬаЬуйййотуха кр., ЬаЬуппбютуха роййа, ЬаЬуйййотуха каиуадеаш, любые виды Ар1апосйуйшт, включая Ар1апосйу!пит кр. и Ар1апосйу!пит кегдие1епк1к; любые виды Е1та, включая Е1та кр., Ейпа тапка1Ьа, Е1та ктопйса; любые виды .1аропосЬу!пит, включая 1аропос11у1пит кр., Иропоскуйшт таппит; любые виды 8сЫхосЬуйшт, включая 8с1пхос11у1гшт кр., 8с1пхос11у1гшт аддгедайт, 8с1ихос11у1гшт йтастит, 8с1пхос11у1гшт ттийт, 8с1пхос11у1гшт ос!окрогит; и любые виды ТйгаийосЬуйшт, включая Тйгаик!осЬу!йит кр., Тйгаик!осйу!пит аддгедайт, Тйгаик!осЬу!пит агиб1теп!а1е, Тйгаик!осйу!пит аигеит, Тйгаик!осЬу!йит Ьеп!Ысо1а, Тйгаик!осЬу!пит д1оЬокит, Тйгаик!осЬу!йит ктпек Тйгаик!осйу!пит тойуит, Тйгаик!осйу!пит расйубегтит, Тйгаик!осйу!пит ргоНГегит, Тйгаик!осйу!пит гокеит, ТйгаийосйуПшт кйтайт, И1кеша кр., И1кеша тти!а, И1кеша ргоГипба, И1кеша габ1а!е, И1кеша кагкайапа и И1кеша У1кшдепык. Особенно предпоч
- 20 010802 тительные виды в пределах этих родов включают, но не ограничиваются ими, любые виды §сЬ170сЬу1г1ит, включая 8с1ихос11у1пит аддгеда!ит, 8с1ихос11у1пит йтастит, 8с1ихос11у1пит тбшШт; или любые виды Тйгаи81осйу1гшт (включая вышеупомянутые виды Шкета, такие как υ. хлкигдепкШ, υ. атоеЬоИа, υ. кагкапапа, υ. ргоГипба, υ. габ1а!а, υ. тти!а и υ.κρ. ΒΡ-5601), и включающие Тбгаийосйубшт кбга!ит, Т11гаик1ос11у1пит аигеит, Тбгаийосйубшт гокеит и любые виды ^аρопосЬу!^^ит. Особенно предпочтительные представители ТбгаикНсйубгакк включают, но не ограничиваются ими, 8с1ихос11у1пит кр. (831) (АТСС 20888); ЗсЬпосЬупит кр. (88) (АТСС 20889); ЗсЬйосЬуиит кр. (ЬС-ВМ) (ЛТСС 18915); 8с1ихос11у1пит кр. (8В21); 8с1ихос11у1пит аддгеда!ит (Оо1бк!еш е! Ве1кку) АТСС 28209); 8с1ихос11у1пит бтасшит (Нопба е! УокосЫ) (ΙΡΟ 32б93); Т11гаикЮс11у1пит кр. (23В) (ΑΠΌ 20892); Т11гаикЮс11у1пит кбга!ит (8сбле1бег) АТСС 24473); Т11гаик1ос11у1пит аигеит (Оо1бк!еш) АТСС 34304); Т1шшк1ос11у1пит гокеит (Оо1бк!ет) АТСС 28210); Е1ропос11у1пит кр. (Ь1) АТСС 28207); Т11гаик1ос11у1пит кр. 12В АТСС 20890); Т11гаик1ос11у1пит кр. υ42-2 АТСС 20891); и ЕаЬупп11ш1а (лабиринтулиды) штамм Ь59 (Китон) (ΙΡΟΌ Α^ Ыо. РЕВМ Ρ-19897).
В одном аспекте организмы-источники масел разрабатываются генетическим путем для увеличения продуцирования ΕΟΡυΡΑ и/или ΕΟΡυΡΑ оксилипинов. Более предпочтительными источниками являются микроорганизмы (которые могут выращиваться в ферментерах) или семена масличных культур. Например, микроорганизмы и растения могут генетически проектироваться для экспрессии генов, которые продуцируют ЕСТЕТА. Такие гены могут включать гены, кодирующие белки, вовлеченные в классические пути синтазы жирной кислоты, или гены, кодирующие белки, вовлеченные в путь ΡυΡΑ поликетид синтазы (ΡΚ8). Гены и белки, вовлеченные в классические пути синтазы жирной кислоты, и генетически модифицированные организмы, такие как растения, трансформируемые такими генами, описаны, например, в Ыар1ег и 8ауапоνа, Ρ^осееб^пдк оГ Не Ыибгбоп 8ос1е1у (2005), б4: 387-393; ВоЬеб е! а1., Ρиηсбоηа1 Ρ1ηη( Вю1оду (2005) 32: 473-479; или публикации патентной заявки США 2004/0172б82. ΡυΡΑ ΡΚ8 путь, гены и белки, включенные в данный путь, и генетически модифицируемые микроорганизмы и растения, трансформируемые такими генами для экспрессии и продуцирования ΡυΡΑ, в деталях описаны в патенте США № б5бб583; публикации патентной заявки США № 20020194б41, публикации патентной заявки США № 20040235127А1 и публикации патентной заявки США № 20050100995А1, каждая из которых включена сюда целиком в качестве ссылки.
Предпочтительные масличные культуры включают сою, кукурузу, сафлор, подсолнечник, канолу, лен, или рапс, лен и табак, которые генетически модифицированы для выработки ΕϋΡυΡΑ, как описано выше. Более предпочтительно семена масличных культур также обладают или могут модифицироваться для обладания (например, с помощью генетической разработки) ферментными системами для преобразования ЕСТЕТА в ее гидроксипроизводные формы (т.е. оксилипин). Такие ферменты хорошо известны в данной области техники и описаны, например, в табл. 1.
Приемы генетического преобразования (трансформации) микроорганизмов и растений хорошо известны в данной области техники. Воплощением настоящего изобретения является то, что молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие любой один или более ферментов для превращения ΕϋΡυΡΑ в его гидроксипроизводную форму (и, если требуется, его кофактор), могут использоваться для преобразования растений или микроорганизмов для инициации, улучшения и/или изменения (модифицирования) способности к продуцированию оксилипинов таких растений или микроорганизмов. Технологии преобразования для микроорганизмов хорошо известны в данной области техники и описаны, например, в 8атЬгоок е! а1., 1989, Мо1еси1аг С1ошпд: Α ЬаЬога!огу Мапиа1, Со1б 8рппд НагЬог ЬаЬк бгекк. Общие технологии преобразования динофлагеллятов, которые могут быть приспособлены для применения с Сгурбюсоббиит сокт/ в деталях описаны в ЬоНшк апб М111ег, Т1е ΡΕιηί 1оита1 (1998) 13 (3): 427-435. Общая технология генетического преобразования ТбгаикЮсйубгбк подробно описана в публикации патентной заявки США № 200301бб207 опубликованной 4 сентября 2003г.
Способы генетической разработки растений также хорошо известны в данной области. Например, были разработаны многочисленные способы преобразования растений, включая биологические и физические протоколы преобразования. См., например, М1к1 е! а1., бгосебпгек Гог 1п!гобисшд Рогещп ΌΝΑ 1п1о Ρ18π!8 в Ме!1обк ίη ΡΕιηί Мо1еси1аг Вю1оду апб В^о!есЬпо1оду, Обск, В.В. апб Т1отркоп, ЕЕ. Ебк. (СВС Ργο88, 1ис., Воса Ва1оп, 1993), стр. б7-б8. В дополнение, доступными являются векторы и методы культивирования ίη νίίΐΌ клеток растений или преобразования и регенерации тканей растений. См., например, ОгиЬег е! а1., Уес1огк Гог ΡΕ-ιηΙ ТгапкГогтабоп в публикации Ме!1обк ίη ΡΕιηί Мо1еси1аг Вю1оду апб Вю1есбио1оду, Сбск, В.В. апб Тботркоп, ЕЕ. Ебк. (СВС Ργο88, 1пс., Воса Ва!оп, 1993), рр. 89-119. См. также Ногксй е! а1., 8с1епсе 227: 1229 (1985); Кабо, С.1., Сгб. Веν. Ρ1ηηΙ. 8сЕ 10: 1 (1991); Мо1опеу е! а1., ΡΕιηί Се11 Веробк 8: 238 (1989); патент США № 4940838; патент США № 54б47б3; 8апГогб е! а1., Ρаб. 8сЕ Тес1по1. 5: 27 (1987); 8апГогб, ЕС., Тгепбк ВЫесЬ. б: 299 (1988); 8апГогб, ЕС., Ρ^^Ε Ρ^! 79: 20б (1990); К1еш е! а1., Вю!ес1по1оду 10: 2б8 (1992); Ζ1ιηη§ е! а1., Вю/Тес1по1оду 9: 99б (1991); РекЕауек е! а1., ЕМВО I., 4: 2731 (1985); СЫкНи е! а1., Ρι-ос Ыа!1. Αсаб. 8с1. υ8Α 84: 39б2 (1987); Наш е! а1., Мо1. Сен. Сене!. 199: 1б1 (1985); Ргарег е! а1., ΡΕιηί Се11 Ρ^^Ε 23: 451 (1982); Вопп е! а1., в публикации ΑЬк!^ас!к оГ νΐΐ!1 1п!етабопа1 Сопдгекк оп ΡΕιηί Се11 апб Т1ккие Си1!иге IЛΡΤС, Α2-38, р. 53 (1990); Р'НаПшп е! а1., ΡΕιηί Се11 4: 1495-1505 (1992) апб 8репсег е! а1., Ρ^! Мо1. Вю1. 24: 51-б1 (1994).
- 21 010802
Предпочтительно микроорганизмами или масличными культурами растений, используемыми в качестве источника ЬСРИРА и оксилипинов, происходящих из них, являются микроорганизмы и растения, которые продуцируют РИРА (или естественным путем, или с помощью генной инженерии), имеющие С20, или высшие полиненасыщенные жирные кислоты.
Предпочтительно ЬСРИРА, продуцируемые микроорганизмами или растениями, имеют 3, 4 или более двойных связей. Еще более предпочтительно микроорганизмы или растения продуцируют С20 или высшие ЬСРИРА с 5 или более двойными связями. Еще более предпочтительно микроорганизмы или растения продуцируют С20 или высшие ЬСРИРА, включающие, но не ограниченные ими, ЕРА (20:5и-3), ΩΝΛ (С22:би-3), БРАи-3 (22:5и-3), БРАи-б (22:5и-б), БТАи-б (22:4и-б) или сочетания этих ЬСРИРА.
В другом воплощении предпочтительно, чтобы микроорганизмы или растительные источники ЬСРИРА естественным образом экспрессировали ферменты, такие как циклооксигеназы, липоксигеназы, цитохром Р450 ферменты (включая гидроксилазы, пероксидазы и оксигеназы) и/или другие гемсодержащие ферменты, для биохимического превращения ЬСРИРА в оксилипины (например, в гидрокси, пероксидные или эпоксидные производные ЬСРИРА). Изобретение также включает организмы (например, растения или микроорганизмы), которые выбраны в природе или генетически разработаны для экспрессии данных ферментов и/или для обладания усиленной активностью этих ферментов в организмах. Организмы могут быть генетически разработаны для экспрессии или нацеливания любого фермента, который катализирует биохимическое превращение ЬСРИРА в оксилипины, такие как циклооксигеназы, липоксигеназы, цитохром Р450 ферменты (включая гидроксилазы, пероксидазы, и оксигеназы) и/или другие гемсодержащие ферменты, для биохимического превращения ЬСРИРА в оксилипины.
Многочисленные примеры таких ферментов известны в данной области техники и перечислены в табл. 1, хотя изобретение не ограничивается данными конкретными ферментами. Ферменты в табл. 1 описываются по их названиям, официальным символам, вымышленным наименованиям, организмам и/или ссылкой на входящий номер базы данных в Национальном Центре информационной биотехнологии, который содержит информацию последовательности для ферментов и генов, кодирующую такие ферменты. Вся информация, включенная во входящие номера базы данных, включена сюда в качестве ссылки. Эти ферменты и гены, кодирующие такие ферменты, или их гомологи (включая натуральные (естественные) варианты), могут использоваться для того, чтобы генетически спроектировать организм, который вырабатывает ЬСРИРА для экспрессии фермента, или чтобы иметь целью эндогенную форму фермента для инициирования, прироста или увеличения активности этих ферментов в организме. Необязательно, данные ферменты могут быть предназначены в особый отдел (например, пластиды в растениях), который отделен от отделов, содержащих ЬСРИРА, регулирующих потенциал для образования и разложения оксилипинов, продуцируемых ш νίνο. Ферменты (эндогенные или рекомбинантные) могут помещаться под контролем индуцируемого промотора, так чтобы продуцирование оксилипинов из ЬСРИРАк могло контролироваться в организме. Например, в растениях оксилипины могут образовываться во время обработки после сбора урожая, при которой масличное семя размалывается для обеспечения возможности контакта ЬСРИРА и ферментов оксигеназы.
Источники микробных или растительных клеток ЬСРИРА, используемые в настоящем изобретении, предпочтительно включают те клетки микроорганизмов или растений, которые могут выращиваться в ферментере или фотобиореакторе. Более предпочтительно источники микробных или растительных клеток ЬСРИРА, используемые в настоящем изобретении, предпочтительно включают те клетки микроорганизмов или растений, которые могут выращиваться в ферментерах гетеротрофно.
Уникальные характеристики масел, производимых по настоящему изобретению
Масла, содержащие оксилипины ЬСРИРА, раскрытые в данном описании, обладают уникальными характеристиками по сравнению с оксилипинами, которые синтезируются химическим путем пли получаются с помощью ферменативного превращения ш νίίτο, как описано до настоящего изобретения. ЬСРИРА оксилипины, и в частности докозаноиды, присутствуют в маслах в своих свободных и/или сложноэтерифицированных формах. В сложноэтерифицированной форме ЬСРИРА оксилипины, и в частности докозаноиды, могут присутствовать в триглицериде, диглицериде, моноглицериде, фосфолипиде, сложном эфире стерина и/или сложноэфирных формах воска. Поскольку оксилипины ранее были описаны только в форме свободной жирной кислоты, (сложно)этерифицированные формы представляют новые формы оксилипинов, присутствие которых может усиливаться, стабилизироваться или сохраняться в маслах или композициях настоящего изобретения. Вне связи с какой-либо теорией авторы настоящего изобретения считают, что, коль скоро ЬСРИРА оксилипины, и в частности докозаноиды, образуются в форме свободной жирной кислоты, они могут переэтерифицироваться в одну из этерифицированных форм. Альтернативно, молекулы жирной кислоты могут превращаться в оксилипины, хотя они находятся все еще в этерифицированной форме.
ЬСРИРА масла, обрабатываемые по способам, описанным согласно настоящему изобретению (см. ниже), будут иметь общие концентрации ЬСРИРА оксилипина, и в частности общие концентрации докозаноидов, которые составляют по крайней мере 2Х, по крайней мере 3Х, по крайней мере 4Х, по крайней мере 5Х, по крайней мере 10Х, по крайней мере 20Х, по крайней мере 50Х, по крайней мере 100Х, по крайней мере 200Х, по крайней мере 400Х, по крайней мере 1000Х или по крайней мере 5000Х и выше
- 22 010802 (включая наращивание IX, например, 20Х, 21Х, 22Х и т.д.), чем концентрации в виде следов, обычно обнаруживаемые в ЬСРИРА маслах, которые были получены с помощью стандартного процесса рафинирования, отбеливания и дезодорирования, обычно используемого для съедобных масел. ЬСРИРА масла, производимые с помощью процессов, описанных в соответствии с настоящим изобретением, предпочтительно содержат по крайней мере 1 мкг, по крайней мере 5 мкг, по крайней мере 10 мкг, по крайней мере 15 мкг, по крайней мере 20 мкг, по крайней мере 30 мкг, по крайней мере 50 мкг, по крайней мере 100 мкг, по крайней мере 200 мкг, по крайней мере 500 мкг, по крайней мере 1000 мкг, по крайней мере 2000 мкг, по крайней мере 5000 мкг, по крайней мере 10000 мкг или по крайней мере 50000 мкг по крайней мере одного или более ЬСРИРА оксилипинов, и в частности докозаноидов, на грамм масла (включая любое другое наращивание по 0,1 мкг приростам). Отмечается, что с помощью обработки и очистки масел или композиций концентрации ЬСРИРА оксилипина могли бы фактически быть гораздо выше (например, приблизительно 100%) во время фазы производства, хотя масла и композиции обычно разбавляются или титруются до количеств, описанных выше, перед тем, как они используются в пищевом, терапевтическом или другом процессе.
Масла, производимые согласно настоящему изобретению, обогащаются предпочтительно гидроксильными формами ИНА, и/или ЕРА, и/или ИРАп-3, и/или ИРАп-6, и/или ИТАп-6. Богатые ЬСРИРА гидроксипроизводными масла данного изобретения могут обогащаться гидроксиформами ЬСРИРА, включая производные только одной ЬСРИРА (например, ИНА, или ЕРА, или ИРАп-6, или ИРАп-3, или ИТАп-6) или сочетания ЬСРИРАк (например, ИНА плюс ИРА (п-6 и/или п-3), ЬТАп-6 или ЕРА).
ИРАп-6, или ИРАп-3, или ЬТАп-6 масла, композиции и рецептуры
Одно воплощение настоящего изобретения включает применение самих ЬСРИРА, и особенно ИРАп-6 и/или ИРАп-3 в качестве противовоспалительных или нейрозащитных агентов (т.е. предоставляются ЬСРИРА одни или в сочетании с их метаболитами оксилипина). ИРАп-6 и/или ИРАп-3 могут предоставляться по одной или в сочетании с другими ЬСРИРА, и предпочтительно ИНА и/или ЕРА. ИТАп-6, обладающая противовоспалительными или нейрозащитными свойствами, также охватывается настоящим изобретением. Предпочтительно ИРАп-6, ИРАп-3 или ИТАп-6, используемые в настоящем изобретении, предоставляются в одной из следующих форм: в виде триглицерида, содержащего ИРАп-6, ИТАп-6 и/или ИРАп-3, в виде фосфолипида, содержащего ИРАп-6, ЬТАп-6 и/или ИРАп-3, в виде свободной жирной кислоты, в виде этилового или метилового эфира ИРАп-6, ЬТАп-6 и/или ИРАп-3.
В предпочтительном воплощении ПРАи-6, ЬТАп-6 и/или ИРАп-3 представляется в форме масла, и предпочтительно микробного масла (дикого типа или генетически модифицированного) или растительного масла из семян масличной культуры, которая была модифицирована генами, которые катализируют производство ЬСРИРА. Предпочтительные микробные источники и источники из культур масличных семян описаны подробно выше. Предпочтительно ИРАп-6, ИТАп-6 или ИРАп-3, используемая в настоящем изобретении, включая масла и композиции, содержащие такие ЬСРИРА и/или их оксилипиновые производные, содержит одну или более из следующих дополнительных ЬСРИРА или их оксилипиновых производных: ИНА или ЕРА. Наиболее предпочтительно дополнительной ЬСРИРА является ИНА.
ИРАп-6 представляет жирную кислоту омега-6 ряда с наиболее длинной цепью. Докозапентаеновая кислота (п-6) находится в многочисленных видах пищи человека и в грудном молоке человека при уровнях от 0,0 до 2,4% (ТаЬег с1 а1. 1998) и составляет приблизительно 0,1% всех жирных кислот (ΚοΙοΙζΚο с1 а1. 1992), соответственно. Главными источниками ИРАп-6 в пище взрослых и детей являются домашняя птица (мясо и яйца) и морепродукты (ТаЬег е1 а1. 1998, ΝίοΙιοΓ е1 а1. 1998). ИРАп-6 является типично компонентом тканей тела человека, включая сердце (^00^1^ е1 а1. 1989), головной мозг (Б^еηие^йο1т е! а1. 1978, О'Впеп е! а1. 1965), печень (8а1ет 1989), красные кровяные клетки (Бапйега е! а1. 1978, Запйеге е1 а1. 1979) и адипозную ткань (С1апййип е! а1. 1981).
Масла, композиции или рецептуры композиций (или любые продукты), раскрытые в настоящем изобретении, предпочтительно включают ^РАи-6, ОРАп-3 и/или ИТАп-6 в количестве, которое составляет по крайней мере около 2 вес.%, или по крайней мере около 5 вес.%, или по крайней мере около 10 вес.%, или по крайней мере около 15 вес.%, или по крайней мере около 20 вес.%, или по крайней мере около 25 вес.%, или по крайней мере около 30 вес.%, или по крайней мере около 35 вес.%, или по крайней мере около 40 вес.%, или по крайней мере около 45 вес.%, или по крайней мере около 50 вес.% и т.д., с наращиванием по 1 вес.% (т.е. 2, 3, 4, 5,..) и вплоть до или по крайней мере около 95 вес.% или выше всех липидов в масле, композиции рецептуры. ИНА и/или ЕРА также может быть включена в количестве, которое составляет по крайней мере около 2 вес.%, или по крайней мере около 5 вес.%, или по крайней мере около 10 вес.%, или по крайней мере около 15 вес.%, или по крайней мере около 20 вес.%, или по крайней мере около 25 вес.%, или по крайней мере около 30 вес.%, или по крайней мере около 35 вес.%, или по крайней мере около 40 вес.%, или по крайней мере около 45 вес.%, или по крайней мере около 50 вес.% и т.д., с наращиванием по 1 вес.% (т.е. 2, 3, 4, 5,..) и вплоть до или по крайней мере около 95 вес.% или выше всех липидов в масле, композиции, готовой форме или другом продукте.
Согласно еще одному воплощению масло, композиция, готовая форма или другой продукт включает около 30 вес.% или более, около 35 вес.% или более, около 40 вес.% или более, около 45 вес.% или более, около 50 вес.% или более, около 55 вес.% или более, около 60 вес.% или более, около 65 вес.% или
- 23 010802 более, около 70 вес.% или более, около 75 вес.% или более, около 80 вес.% или более, около 85 вес.% или более, около 90 вес.% или более или около 95 вес.% или более сочетания ΌΡΑη-6 и ΌΗΑ. Предпочтительно соотношение ΌΗΑ и ΌΡΑ (η-6) в масле, композиции, готовой форме или другом продукте составляет между примерно 1:10 до около 10:1 или любое соотношение между 1:10 и 10:1.
Формы предоставления ΌίΡυΓΑ и оксилипинов
В соответствии с настоящим изобретением ΌίΡυΓΑ и/или их оксилипиновые производные, которые используются в маслах, добавках, косметических средствах, терапевтических композициях и других готовых формах или продуктах, описанные здесь, предоставляются во множестве форм. Например, такие формы включают, но не ограничиваются ими, масло водорослей, включающее ΌίΡυΓΑ и/или их оксилипиновые производные, предпочтительно получаемые, как описано здесь; растительное масло, включающее ΡυΡΑ и/или ее оксилипиновые производные, предпочтительно получаемые, как описано здесь; триглицеридное масло, включающее ΡυΓΑ; фосфолипиды, включающие ΡυΓΑ; сочетание белка, триглицерида и/или фосфолипида, включающих ΡυΓΑ; высушенные морские микроводоросли, включающие ΡυΓΑ; сфинголипиды, включающие ΡυΓΑ; сложные эфиры ΡυΓΑ; свободную жирную кислоту; коньюгат ΡυΓΑ еще с одной биоактивной молекулой; и их сочетания. Жирные кислоты с длинной цепью могут предоставляться в количествах и/или соотношениях, которые отличаются от количеств или соотношений, которые находятся в случае природных средств получения жирных кислот, таких как смешение, очистка, обогащение (например, с помощью приемов культивирования и/или переработки) и методы генной инженерии источника. Биоактивные молекулы могут включать любые подходящие молекулы, включая, но не ограничиваясь ими, белок, аминокислоту (например, встречающиеся в природе аминокислоты, такие как ΌΗΑ-глицин, ΌΗΑ-лизин, или аналоги аминокислот), лекарства и карбогидраты. Формы, описанные здесь, позволяют обеспечить гибкость при формировании пищевых продуктов высокого сенсорного качества, диетические или питательные добавки и фармацевтические агенты.
Согласно одному воплощению изобретения источник желаемых фосфолипидов включает очищенные фосфолипиды из яиц, растительных масел и животных органов, получаемые процессом экстрации полярными растворителями (включающими спирт или ацетон), таким как процесс Бгю1ех, и процесс экстракции фосфолипидов (ΡΕΡ) (или родственных процессов) для получения масел или композиций (питательные добавки, косметические средства, терапевтические рецептуры композиций), богатых ΌΡΑη-6, и/или ΌΡΑη-6, или происходящими из них докозаноидами, одними или в сочетании с ΌΗΑ, и/или ЕРА, и/или происходящими из них оксилипинами. Процесс Бгю1ех и родственные процессы описаны более подробно в патенте ΡίΤ/ΙΒ01/00841, озаглавленном Ме11юб Гог 1йе Бгасбопабоп оГ 011 апб Бо1аг Ыр1бСоЩабипд Ыабуе Вате Ма1епак (Способ фракционирования масла и содержащих полярный липид нативных сырьевых материалов), заявленном 12 апреля 2001г., опубликованном как XVО 01.76715 18 октября 2001г.; ΡίΤ/ΙΒ/00963, озаглавленном Ме11юб Гог 1йе Бгасбопабоп оГ Об апб Ρο1;π Ыр|б-Соп1абппд Ыабуе Вате Ма1епа18 ибпд Αίοοίιοί апб СепбгГидабоп (Способ фракционирования масла и содержащих полярный липид нативных сырьевых материалов с использованием спирта и центрифугирования), заявленном 12 апреля 2001г., опубликованном как ν0 01/76385 18 октября 2001г.; и ΡίΤ/ΌΕ95/01065, озаглавленном, 'Егосе^ Гог Ехбтасбпд Ыабуе Ριό6ιιο18 Χνΐιίοΐι аге ηοΐ Χνη^Γ-81ιΛΠ Бгот Ыабуе 8иЬ81апсе М1х1иге8 Ьу СепбгГида1 Богсе (Способ экстрагирования нативных продуктов, которые не являются водорастворимыми из смесей нативных веществ с помощью центробежной силы), заявленном 12 августа 1995г., опубликованном как ν0 96/05278 22 февраля 1996г.; каждых из которых включен в данное описание в качестве ссылки.
Любые биологически приемлемые дозированные формы и их сочетания охватываются существом изобретения. Примеры таких дозированных форм включают без ограничения жевательные таблетки, быстрорастворяющиеся таблетки, шипучие таблетки, реконституируемые или воссоздаваемые порошки, эликсиры, жидкости, растворы, суспензии, эмульсии, таблетки, многослойные таблетки, двуслойные таблетки, капсулы, мягкие желатиновые капсулы, твердые желатиновые капсулы, каплеты, ромбовидные таблетки (подушечки), жевательные подушечки, шарики, порошки, гранулы, частицы, микрочастицы, диспергируемые гранулы, каше, душе, суппозитории, кремы, местные средства, ингалянты, аэрозольные ингалянты, пластыри, ингалянты в виде частиц, имплантаты, хранилище имплантатов, перевариваемые средства, инъецируемые препараты, инфузии, средства зрдавохранения, сладости, крупы, злаковые покрытия, пищевые продукты, питательные пищевые продукты, функциональные пищевые продукты и их сочетания. Препараты упомянутых выше дозированных форм хорошо известны специалистам в данной области. Предпочтительно пища (пищевой продукт), которая обогащена желаемыми ΌίΡυΓΑ и/или их оксилипиновыми производными, выбирается из группы, включающей, но не ограниченной ими, подвергнутые термической обработке продукты и смеси; жевательную резинку; злаки на завтрак; сырные продукты; орехи и продукты на основе орехов; желатины, пудинг и наполнители; мороженые продукты молочного производства; аналоги молочных продуктов; твердые и мягкие леденцы; мыла и смеси мыл; закуски; переработанный фруктовый сок; переработанный овощной сок; жиры и масла; рыбные продукты; растительно-белковые продукты; продукты из домашней птицы и мясные продукты.
Более конкретно, масла, содержащие ΌίΡυΓΑ и их оксилипиновые производные, и особенно с повышенными уровнями ΌίΡυΓΑ оксилипинов (и особенно докозаноидов), полезны в качестве диетиче
- 24 010802 ских или пищевых добавок в форме заполненных маслом капсул или обогащенных пищевых продуктов, напитков или детского питания (молочных смесей для младенцев) для усиления противовоспалительных свойств данных продуктов и/или для того, чтобы способствовать более сбалансированной иммунной функции по сравнению с достигаемой с помощью ΌίΡυΕΑ масла с низким содержанием или без ΌίΡυΕΑ оксилипина (и особенно докозаноида). Например, капсулы с ΌίΡυΕΑ маслами, обогащенными ΌίΡυΕΑ оксилипином (и, в частности, докозаноидом), и предпочтительно желатиновые капсулы для защиты от окисления, предоставляются для доставки как ΌίΡυΕΑ, так и содержимого, обогащенного ΌίΡυΕΑ оксилипином (и, в частности, докозаноидом), в пищевой добавке. При других применениях пищевые продукты и напитки, включающие, но не ограниченные ими, продукты молочного производства и молочные аналоги, подвергнутые термической обработке продукты и кондитерские изделия, переработанные мясные изделия и аналоги мяса, зерновые продукты и крупы или злаковые продукты, жидкие и энергетические напитки, включающие соки и напитки на основе сока, продукты на основе газированных или переработанных напитков или молочные смеси для младенцев, обогощаются ΌίΡυΕΑ маслами с повышенными уровнями ΌίΡυΕΑ оксилипинов (и, в частности, докозаноидов), увеличивая, тем самым, всасывание ΌίΡυΕΑ оксилипина (и, в частности, докозаноида) по сравнению с одними ΌίΡυΕΑ маслами, не обогащенными ΌίΡυΕΑ оксилипином (и, в частности, докозаноидом). Еще в одном примере ΌίΡυΕΑ масла, обогащенные ΌίΡυΕΑ оксилипином (и, в частности, докозаноидом), могли микроинкапсулироваться перед обогощением пищевых продуктов, напитков или молочных смесей, снижая окисление/разложение ΌίΡυΕΑ оксилипинов (и, в частности, докозаноидов) и/или ΌίΡυΕΑ и улучшая органолептические свойства и срок службы обогащенного пищевого продукта/напитка или детской молочной смеси. Еще в одном примере масла, обогащенные ΌίΡυΕΑ оксилипином (и, в частности, докозаноидом), могли формулироваться в крем или эмульсию для топических применений для снижения воспаления или ΌίΡυΕΑ масла, обогащенные ΌίΡυΕΑ оксилипином (и, в частности, докозаноидом), могли формулироваться в фотозащитные или косметические средства, такие как кремы для лица или рук, увлажнители, основы, глазные гели или кремы для бритья, снижая раздражение кожи или покраснение, аллергические реакции или отечность/эдему. Еще в одном примере более высокообогащенные или очищенные формы ΌίΡυΕΑ оксилипинов (и, в частности, докозаноида) или масла, богатые ΌίΡυΕΑ оксилипином (и, в частности, докозаноидом), могли использоваться в фармацевтических рецептурах для предотвращения или снижения симптомов состояний или заболеваний, ассоциированных с местными, системными, хроническими или острыми воспалительными реакциями или процессами.
Дополнительные компоненты
Согласно одному воплощению настоящего изобретения любые из источников ΌίΡυΕΑ и/или их оксилипиновых производных, включая любые масла или композиции, или рецептуры, содержащие такие ΌίΡυΕΑ или их оксилипиновые производные, могут предоставляться с одним или более дополнительными компонентами, которые могут быть применены в способе изобретения. Такие дополнительные компоненты включают, но не ограничиваются ими, любой дополнительный противовоспалительный агент, питательную добавку (например, витамины, минералы и другие питательные агенты, включающие нутрацевтические агенты), терапевтический агент или фармацевтический или питательный носитель (например, любой эксципиент, разбавитель, средство доставки или соединения носителя и рецептуры, которые могут использоваться в соединении с фармацевтическими (включая терапевтические) композициями или питательными композициями).
Согласно одному предпочтительному воплощению ΌίΡυΕΑ и/или их оксилипиновые производные предоставляются наряду, с ацетилсалициловой кислотой (Α8Α), или аспирином, или любым другим противовоспалительным агентом.
Способы получения и оптимизации производства ΌίΡυΕΑ и происходящих из ΌίΡυΕΑ оксилипинов
Способы получения масел, содержащих ΌίΡυΕΑ (включая ΌΗΑ и ΌΡΑη-6) с использованием микробной технологии описаны в технике. Патент США № 5130242 и патент США № 5340594 описывают способы получения богатых ΌΗΑ и ΌΡΑ липидов с помощью ферментации с использованием 8с1и/ос11у1пшп крр. или ΤЬ^аи8ΐосЬуΐπит §рр. Публикация патентной заявки США № 2003/0161866 раскрывает процесс получения масел, содержащих ΌΗΑ и ΌΡΑη-6, с помощью культивирования микроорганизма, принадлежащего к предположительному роду и1кеша.
Способы получения содержащих ΌίΡυΕΑ масел растений и семян растений описываются, например, в патенте США № 6566583; публикации патентной заявки США № 2002/0194641, публикации патентной заявки США № 20040235127А1 и публикации патентной заявки США № 20050100995А1, так же, как и публикации №1р1ег и 8ауаиоуа Ггосеебшдк оГ Ле Миббои 8оае1у (2005), 64: 387-393; КоЬей е1 а1., РивсРона! Ρ1αηΙ Вю1оду (2005) 32: 473-479; или публикации патентной заявки США 2004/0172682.
Как обсуждалось выше, оксилипины, раскрытые в настоящем изобретении, могут быть получены с помощью химического синтеза с использованием ΌίΡυΕΑ предшественников или могут синтезироваться полностью бе поуо. Способы химического синтеза оксилипиновых соединений известны в технике (например, см. Робгщиех аиб 8риг (2004); Иобгщиех апб 8риг, 2005; СибГогб е1 а1. (2004)). Кроме того, общие химические способы синтеза также известны в технике. Например, соединения настоящего изо
- 25 010802 бретения могут получаться с помощью как общепринятых приемов, так и приемов твердофазного синтеза, известных специалистам в данной области техники. Общепринятые приемы включают те, что описаны в патентах США №№ 5569769 и 5242940 и РСТ публикации № УО 96/37476, причем все указанные источники целиком включены в данное описание в качестве ссылки. Комбинаторные приемы синтеза могут, однако, быть особенно приемлемы для синтеза соединений настоящего изобретения. См., например, Вго\\'п. СоШетрогагу Огдашс 8уи!Ье818, 1997, 216; Ее1бег аиб Ρορρίη^Γ, Α6ν. Эгид Кез., 1997, 30, 111; Ва1кеийоЫ е! а1., Αηде^. СЬет. Ιη!. Еб. Еид1., 1996, 35, 2288; Великеих е! а1., Τеί^аЬеб^οи, 1996, 52, 4527; Великеих е! а1., Τе!^аЬеб^οη, 1997, 53, 5643; ΤЬοтρ8οη е! а1., СЬет. Кет., 1996, 96, 555; и №Τζί е! а1., СЬет. Кет., 1997, 2, 449-472.
Соединения настоящего изобретения могут синтезироваться из легкодоступных исходных материалов. Различные заместители, имеющиеся в соединениях настоящего изобретения, могут присутствовать в исходных соединениях, заместители могут добавляться к любому из промежуточных соединений или добавляться после образования конечных продуктов с помощью известных методов по реакциям замещения или превращения. Если заместители сами по себе являются реакционноспособными, тогда сами заместители могут быть защищены согласно известным в технике приемам. В технике известно и применяется широкое разнообразие защитных групп. Примеры многих возможных групп можно найти в Ργο!ес!ке Сгоирз ίη Огдашс 8уи1йе818 Ьу ТУ. Сгееи, ίοΐιη УПеу аиб 8οηβ, 1981, содержание которой целиком включено в описание. Например, нитрогруппы могут вводиться нитрованием и нитрогруппа может превращаться в другие группы, такие как амино, восстановлением, и галоген, диазотированием аминогруппы и ее заменой галогеном. Ацильные группы могут вводиться ацилированием по ФриделюКрафтсу. Ацильные группы могут затем трансформироваться в соответствующие алкильные группы различными методами, включающими восстановление по νοΤΤ-ΚίδΚ^Γ и восстановление по Клеменсону. Аминогруппы могут алкилироваться, образуя моно- и диалкиламиногруппы; а меркапто- и гидроксигруппы могут алкилироваться с образованием соответствующих простых эфиров. Первичные спирты могут окисляться окислителями, известными в технике, с образованием карбоновых кислот или альдегидов, а вторичные спирты могут окисляться с образованием кетонов. Таким образом, для предоставления широкого разнообразия заместителей по всей молекуле исходного материала, промежуточных соединений или конечного продукта, включая отделенные продукты, могут применяться реакции замещения или замены.
Поскольку соединения настоящего изобретения могут иметь некоторые заместители, которым необходимо присутствовать, производится введение каждого заместителя, конечно, в зависимости от конкретных заместителей и химических условий, необходимых для их образования. Таким образом, рассмотрение того, как один заместитель мог бы оказать воздействие при химической реакции, когда образуется еще один заместитель, повлечет за собой соответствующие приемы, известные специалистам в данной области. Это будет дополнительно зависеть от вовлеченного в процесс кольца.
Альтернативно, оксилипины получаются каталитическим путем с помощью основанных на ферментах приемов с использованием ^СΡυΕΑ в качестве субстрата. Согласно одному воплощению ферменты, такие как липоксигеназа, циклооксигеназы, цитохром Р450 ферменты и другие гемсодержащие ферменты, такие как описаны в табл. 1 (например, предоставляемые в виде рекомбинантных или изолированных/иммобилизованных ферментных препаратов), контактируются ίη νί!Γο с ^СΡυΕΑ, продуцируемыми организмом, во время экстракции или обработки после сбора биомассы микроорганизма, или растения, или масла семян, посредством чего ^СΡυΕΑ, продуцируемые организмом, превращаются в оксилипины. Оксилипиновые производные Εί-ΤυΡΑ могут также продуцироваться микроорганизмами в ферментере и выделяться и очищаться для использования. Предпочтительные методы производства и выделения оксилипинов, которые, как считают, увеличивают количество, качество и стабильность соединений, описаны ниже. Оксилипины, производимые с помощью любого из приведенных выше приемов производства, могут дополнительно перерабатываться и выделяться в виде производных оксилипинов или их солей для того, чтобы усиливать склонность к выделению, стабильности, абсорбции, биодоступности и/или эффективности, при желании. В дополнение к сказанному, оксилипины, производимые любым из описанных здесь приемов, могут использоваться для добавления других источников оксилипинов (например, очищенного ΕΡΈυίΑ масла) или предоставляться в виде любой композиции или рецептуры для использования в любых применениях, описанных здесь.
Способы оптимизации производства концентраций ΕΡΈυίΑ оксилипина, продуцируемого организмами, в маслах
Условия производства или ферментации могут оптимизироваться для увеличения производства Εί-ΡΕΤΑ оксилипинов (и, в частности, докозаноидов) и/или для стабилизации после того, как они были получены. Эти методы включают выбор условий для культуры, которые увеличивают активность и/или экспрессию ферментов, продуцирующих данные соединения. Например, клеточный состав потенциально может изменять любое условие культивирования, которое изменяет концентрацию клеток и/или удельную скорость роста культуры. Условия культивирования, о которых известно, что они модифицируют продуцирование метаболитов или вторичных метаболитов в микроорганизмах, включают, но не ограничиваются ими, следующие: стресс от гипоосмотической или гиперосмотической солености, стресс от
- 26 010802 ограничения питания (такого, как азот, фосфор, углерод и/или следы металлов), температурный стресс (более высокая или более низкая температура, чем обычно), повышенный или пониженный уровни кислорода и/или диоксида углерода и физические стрессы, такие как сдвиг. Кроме того, уровень метаболитов или вторичных метаболитов в клетках может меняться с фазой роста (по экспоненте против стационарной) и обеспечением различных предшествующих молекул для биопревращения микроорганизмом.
Данные методы включают также использование добавок, как органических, так и неорганических, которые увеличивают данную ферментативную активность или альтернативно непосредственно усиливают аутоокисление ЬСРИРА в данные соединения и/или стабилизируют ЬСРИРА оксилипины (и, в частности, докозаноиды), когда они получены. Например, к среде для культивирования могут добавляться соединения, которые модифицируют или ацетилируют СОХ2 (такие, как одна из многих форм ацетилсалициловой кислоты), или соединения, которые стимулируют экспрессию или активность СОХ2, липоксигеназы, цитохром Р450 ферментов (включая гидроксилазы, пероксидазы и оксигеназы) и/или других гемсодержащих ферментов. Примеры соединений, которые могут увеличивать экспрессию или активность липоксигеназ, циклооксигеназ, цитохрома Р450 и других гемсодержащих ферментов в культуре, включают, но не ограничиваются ими, АТР, цитокины (например, интерлейкин-4, интерлейкин-13 или фактор, стимулирующий гранулоцитмакрофаг колонию), гормоны (например, брадикинин или 1,25-дигидроксивитамин Ό3), катионные металлы (например, Са2+), фосфолипиды (например, фосфатидилсерин), жирные кислоты (например, ИНА), предварительно образованные гидропероксиды, глюкокортикоиды (например, дексаметазон), нестероидные и противовоспалительные соединения (например, ацетилсалициловую кислоту или аспирин) и другие индукторы активностей цитохрома Р450 (например, этанол, фибраты и другие пролифераторы пероксима, феобарбитал, стероиды и рифампицин). Кроме того, предпочитаются также соединения или условия, которые ведут к аутоокислению ЬСРИРА в микроорганизме, приводя в результате к образованию от моно- до пентагидроксипроизводных данных ЬСРИРА. Например, такие соединения или условия, которые могут промотировать аутоокисление ЬСРИРА, включают, но не ограничиваются ими, металлы (включая переходные металлы, такие как железо, медь или цинк, и щелочно-земельные металлы, такие как магний), перекиси, липидные радикалы и высококислородные условия.
Усовершенствованные процессы экстракции масла, которые увеличивают содержание или сохранение ЬСРИРА оксилипина
Ферменты играют важную роль в образовании гидроксипроизводных ЬСРИРА, имеются предпочтительные способы усиления контакта между данными ферментами и ЬСРИРА для увеличения образования гидроксипроизводных. В одном предпочтительном процессе микробные клетки или семена масличной культуры разрушаются (например, с помощью гомогенизации для микробных клеток или с помощью дробления для семян масличных культур) и получающееся масло и смесь биомассы оставляются инкубироваться в течение какого-то периода времени в оптимальных условиях (например, температуры, рН, остаточной активности воды, концентрации ионов и присутствия любых необходимых совместных факторов), чтобы позволить ферментам высвободиться в биомассе для реакции непосредственно с ЬСРИРА. Аналогично, данным образом могут облегчаться процессы аутоокисления.
Модификация условий обработки масла
Предпочтительные способы обработки или переработки масла включают способы, которые сконцентрированы на минимальной обработке масла. С помощью процессов, используемых в общепринятой переработке семян масличных культур, стремятся удалить свободные жирные кислоты или соединения, подобные свободной жирной кислоте, и, тем самым, удалить подобные жирной кислоте гидроксипроизводные ЬСРИРА. В частности, следует избегать обработки масел каустической содой, сконцентрированной на удалении свободных жирных кислот (обычно называемой очисткой или рафинированием масла). Предпочтительно масло экстрагируется спиртом (например, изопропиловым спиртом), или другим органическим растворителем (например, гексаном), или их смесью, или сверхкритическими жидкостями (например, двуокисью углерода), и получающееся в результате масло фильтруется при охлаждении, отбеливается или осветляется, снова фильтруется при охлаждении, а затем дезодорируется. В более предпочтительном способе стадии фильтрования при охлаждении устраняются и масло просто отбеливается и дезодорируется после экстракции. И в еще более предпочтительном способе после экстракции масла ограничиваются единственной стадией обработки, а именно дезодорированием масла. В указанных выше способах экстракции для использования при экстрагировании масел предпочтительны спирты или спиртоводные смеси, а не использование таких органических растворителей, как гексан. В качестве альтернативы химической экстракции масло может отделяться от биомассы винтовым прессом или разрушением с последующим центрифугированием с использованием разделяющих вспомогательных средств переработки, таких как первичный спирт или носитель масла. Данные грубые масла могут очищаться и стабилизироваться с помощью одного или более методов, описанных выше.
Способы дополнительной обработки ЬСРИРА масла (микробного, растительного, рыбного) для увеличения и/или стабилизации содержания ЬСРИРА оксилипина
Согласно одному предпочтительному способу после того, как масло экстрагировано и обработано по способу, описанному выше, или по любому подходящему способу, к маслу для того, чтобы способст
- 27 010802 вовать стабилизации ΕΟ'ΡυΕΑ оксилипинов (и, в частности, докозаноидов) в масле, могут добавляться антиоксиданты. Согласно еще одному предпочтительному способу антиоксиданты могут добавляться в один или более моментов в процессе экстракции и очистки, чтобы снизить до предела потенциальное окислительное разложение оксилипинов и/или ίΕΡυΡΑ. В дополнение к этому, оксилипины становятся более полярными молекулами, так как в них включается больше гидроксильных групп, масло может получаться в виде эмульсии для увеличения содержания/растворимости/стабильности как полярных, так и менее полярных форм ΕΟ'ΡυΡΑ оксилипинов (и, в частности, докозаноидов) и для облегчения их использования, например, в широком многообразии пищевых и фармацевтических применений по сравнению с формами, доступными для использования с одной формой ингредиента масла.
В предпочтительном поточном процессе богатое Ρί,'ΡΙΡΑ масло (на основе микробного, растительного или животного (включая рыбное)) или гидролизованная или омыленная форма масла может обрабатываться в реакционной системе на основе ферментов (например, на колонке или в реакторе с мешалкой) для облегчения ферментативного производства ίΕΡυΡΑ оксилипинов (и, в частности, докозаноидов) в масле. Ферменты могут присутствовать или в свободной, или иммобилизованной форме в данных системах. Примеры ферментов (включая липоксигеназы, циклооксигеназы, цитохром Р450 ферменты и другие гемсодержащие ферменты), которые могут использоваться в данных системах, перечислены в табл. 1. Реакционные условия, такие как температура, рН, активность остаточной воды, концентрация ионов и присутствие кофакторов, могут выбираться для максимизации скорости и степени превращения ΡυΡΑ в липоксины. Масло может обрабатываться с помощью колонки/реактора или в масляной форме, или в виде гидролизованных свободных жирных кислот, которые получаются с помощью гидролиза ΡυΡΑ-содержащих триглицеридов в масле с превращением ΡυΡΑ из сложноэтерицированной формы в форму свободной кислоты.
В одном воплощении изобретения любое из масел, производимых с помощью любого из описанных здесь способов, может далее обрабатываться для отделения или очистки ίΕΡυΡΑ оксилипинов от ίΕΡυΡΑ в масле. Данный процесс может проводиться на маслах, которые были уже обработаны с помощью любого процесса рафинирования, включая масла или их продукты, которые были обработаны для превращения ίΕΡυΡΑ в масле в оксилипиновые производные. Например, Ρί,'ΡυΡΑ оксилипины могут отделяться от Ρί,'ΡυΡΑ с помощью любого подходящего приема, такого как прием любой хроматографии, включая, но не ограничиваясь ею, жидкостную хроматографию на силикагеле. В одном воплощении производимые Ρί,'ΡυΡΑ оксилипины, обогащенные или очищенные с помощью процессов настоящего изобретения (включая любой из способов производства/обработки, описанных здесь, и/или синтез бе ηονο), могут снова добавляться к (титрованному) еще одному маслу, такому как Ρί,'ΡυΡΑ масло, производимое любым методом, и/или могут добавляться к любой композиции, или рецептуре, или другому продукту.
После того, как масла/жирные кислоты обработаны данным образом, масло/жирные кислоты могут использоваться непосредственно в областях пищевого, фармацевтического или косметического применения или могут использоваться для добавления (смешением) к Ρί,'ΡυΡΑ- или не-^СΡϋΕΑ-содержащим маслам для увеличения содержания в них Ρί,'ΡυΡΑ оксилипинов (и, в частности, докозаноидов). Данным способом можно достичь стойкого содержания Ρί,'ΡυΡΑ оксилипина (и, в частности, докозаноида) в конечном масляном продукте.
При использовании липоксигеназных ферментов в данных типах систем вплоть до 100% целевых Ρί,'ΡυΡΑ может трансформироваться в их гидроксипроизводные. Примером такой системы является колонка с иммобилизованным ферментом, содержащая иммобилизованную 15-липоксигеназу. Когда ΌΡΑη-6 обрабатывается в данной системе, ΌΡΑη-6 трансформируется в гидропероксиды 17-гидроперокси ΌΡΑη-6 и 10,17-дигидроперокси ΌΡΑη-6, которые могут затем трансформироваться в гидроксипроизводные 17-гидрокси ΌΡΑη-6 и 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-6, после восстановления таким агентом, как NаΒΗ4. Данная концентрированная форма Ρί,'ΡυΡΑ оксилипинов (и, в частности, докозаноидов) может затем титроваться в соответствующее съедобное масло с достижением желаемого содержания Ρί,'ΡυΡΑ оксилипина (и, в частности, докозаноида) в конечном масле.
Применение ΌΡΑη-6, ΌΡΑη-3 и/или ΌΤΑη-6 Ρί,'ΡυΡΑ оксилипинов и масел или композиций, включающих ΌΡΑη-6, ΌΡΑη-3 и/или ΌΤΑη-6 и/или любых других Ρί,'ΡυΡΑ оксилипинов
Настоящее изобретение основывается на применении ΌΟΡυΡΑ, включающих ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 и/или ΌΡΑη-3 и/или их оксилипиновых производных и/или различных масел, которые обогащены оксилипиновыми производными С20 и более высших ΡϋΡΑ, и особенно докозаноидами, для обеспечения противовоспалительного, антипролиферативного, нейрозащитного и/или вазорегуляторного эффектов у людей и других животных. Такие эффекты улучшают общее состояние здоровья индивидуума, так же, как и состояние при лечении или профилактике множества заболеваний и состояний индивидуума. Например, изобретение включает способы лечения метаболического дисбаланса и болезненных состояний, которые могли бы способствовать модуляции воспаления, обеспечиваемой композициями и маслами, содержащими ίΕΡυΡΑ и оксилипин, и особенно докозаноид, описанными здесь.
Дополнительные виды применения, охватываемые настоящим изобретением для применения любых ίΕΡυΡΑ и/или оксилипинсодержащих масел, композиций или рецептур, описанных в данном опи- 28 010802 сании (предпочтительно включая ΌΡΑη-б, ΌΡΑη-3 или их оксилипиновые производные и применимую ΌΤΑη-б или ее оксилипиновые производные, так же, как и масла и продукты, производимые с такими маслами, которые обогащены производными оксилипина), включают, но не ограничиваются следующими: (1) РН' несовместимость во время беременности; (2) воспалительные заболевания кишечника и желудочно-кишечного тракта (например, болезнь Крона, воспалительное заболевание пищеварительного тракта, колит и некротизирующий энтероколит у младенцев); (3) аутоиммунные заболевания (например, инсулинзависимый сахарный диабет (диабет типа I), рассеянный склероз, ревматоидный артрит, системную красную волчанку, хроническую прогрессирующую миастению, болезнь, обусловленную чувствительностью к недостаточности глютена, аутоиммунный тироидит, болезнь Адинсона, болезнь Трейва и ревматический кардит); (4) хронические болезни связанные с возрастом, которые вовлекают воспаление (например, сердечно-сосудистую болезнь, диабет типа II, связанную с возрастом макулярную дегенерацию, атопические заболевания, метаболический синдром, болезнь Альцгеймера, цистический фиброз, рак ободочной кишки и др.); (5) воспалительные заболевания кожи (например, дерматит (любую форму), экзему, псориаз, розовые угри, акне, гангренозную пиодермию, крапивницу и др.); (б) воспалительные заболевания глаз и (7) воспаление вследствие инфекционных болезней (бактериальных, грибковых, вирусных, паразитических и др.). Многие из них являются болезнями, при которых пациенты не хотят быть на стероидах или неспецифических противовоспалительных лекарствах вследствие негативных побочных эффектов.
Соответственно, одно воплощение настоящего изобретения относится к применению: (1) ΌΡΑη-б, ΌΡΑη-3 и/или их оксилипинового производного (докозаноида) и, в некоторых воплощениях, ΌΤΑη-б и/или ее оксилипинового производного, по одному или в сочетании друг с другом и/или с другими ΌίΡυΕΑ и/или их оксилипиновыми производными (предпочтительно ΌΗΑ или ЕРА и наиболее предпочтительно ΌΗΑ); и/или (2) масла или продукта, производимого с использованием такого масла, в котором масло обогащено по количеству, качеству и/или стабильности содержащихся в нем ΌίΡυΕΑ оксилипина и предпочтительно докозаноидов. Применение данных композиций обычно обеспечивается маслом или продуктом с использованием такого масла, питательной добавки, косметической рецептуры или фармацевтической композиции (медикамента или лекарства). Такие масла, добавки, композиции и рецептуры могут применяться для уменьшения воспаления у пациента, у которого есть воспаление или который рискует развитием у него воспаления, или болезни, или состояния, связанного с воспалением. Такие масла, добавки, композиции и рецептуры могут также использоваться для снижения любых симптомов, относящихся к нейродегенерации, или болезни, связанной с нейродегенерацией у пациента, который имеет или рискует развитием у него нейродегенеративного состояния или болезни. В частности, пациент, подвергаемый лечению с использованием композиции изобретения, имеет воспаление, связанное с продуцированием эйкозаноидов и/или того, что обычно называют в технике провоспалительными цитокинами. Такие цитокины включают, но не ограничиваются ими, интерлейкин-1а (ΙΌ-1α), ΙΌ-1 β, фактор некроза опухоли-α (ΤΝΕα), Ш-б, ΙΌ-8, ΙΌ-12, макрофаг воспалительный протеин-1а (ΜΙΡ-1α), макрофаг хемотактический протеин-1 (МСР-1) и интерферон-γ (ΙΕΝ-γ). Пациенту вводят композицию, включающую какое-то количество таких ΌίΡυΕΑ и/или их оксилипиновых производных в количестве, эффективном для уменьшения по крайней мере одного симптома воспаления или нейродегенерации у пациента.
Симптомы воспаления включают как физиологические, так и биологические симптомы, включая, но не ограничиваясь ими, продуцирование цитокинов, продуцирование эйкозаноидов, продуцирование гистамина, брадикинина, простагландина, лейкотриена, лихорадку, отек или эдему или другие припухлости, боль (например, головные боли, мышечные боли, крампи (болезненные спазмы), боли суставов), озноб, усталость/утрату энергии, потерю аппетита, скованность мышц или суставов, красноту тканей, удержание жидкости и накопление клеточных медиаторов (например, нейтрофилов, макрофагов, лимфоцитов и др.) в участке воспаления. Заболевания, связанные с воспалением, включают, но не ограничиваются ими, состояния, связанные с заражением инфицирующими агентами (например, бактериями, вирусами), шок, ишемию, сердечно-легочные заболевания, аутоиммунные заболевания, нейродегенеративные состояния, и аллергические воспалительные состояния, и различные другие заболевания, подробно описанные здесь. Примеры описывают применение докозаноидов настоящего изобретения для снижения воспаления ίη νίνο и ίη νίΐτο, измеряемого по многим параметрам воспалительной ответной реакции.
Симптомы, связанные с нейродегенерацией, включают как физиологические, так и биологические симптомы, включая, но не ограничиваясь ими, нейродегенерацию, интеллектуальные отклонения, расстройства поведения, нарушения сна, общие медицинские осложнения, деменцию, психоз, беспокойство, депрессию, воспаление, боль и дисфагию (расстройство глотания). Нейродегенеративные болезни, которые можно лечить с использованием оксилипиновых производных и композиций изобретения, включают, но не ограничиваются ими, шизофрению, биполярное расстройство, дислексию (способность к чтению заметно ниже ожидаемой), диспраксию (повреждение или патологическое функционирование какого-либо органа), расстройство гиперактивности в связи с дефицитом внимания (ΑΌΗΌ), эпилепсию, аутизм, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, старческое слабоумие, расстройство активации пероксисомно
- 29 010802 го пролифератора (РКАК), рассеянный склероз, нейропатию, вызываемую диабетом, нейропатию, макулярную дегенерацию, ретинопатию предсозревания, болезнь Хантингтона, боковой амиотрофический склероз (АЬЗ), пигментный ретинит, церебральный паралич, мышечную дистрофию, рак, цистический фиброз, пороки неврального канала, депрессию, синдром 2е11теедег, ШкеисераЫу, синдром Дауна, заболеваний мышц-глаз-головного мозга, синдром ^а1кег-^агЬигд, болезнь С11агос1-Мапе-Тоо111. миозит цитоплазматических телец (ΙΒΜ) и аниридию.
В одном воплощении настоящего изобретения новые докозаноиды изобретения, и/или масла, или композиции, содержащие такие докозаноиды, используются для селективного нацеливания на особые провоспалительные цитокины и состояния или болезни, связанные с продуцированием данных цитокинов. На основе наблюдений авторов настоящего изобретения того, что конкретные докозаноиды изобретения могут селективно ингибировать некоторые цитокины, авторы настоящего изобретения предполагают, что такие докозаноиды могут использоваться при особых состояниях или заболеваниях для обеспечения более селективного лечения индивидуума и во избежание побочных эффектов, которые могут быть связаны с более глобальным ингибированием воспалительных процессов. Например, авторы настоящего изобретения показали, что БРАи-б докозаноиды, 17-гидрокси БРАи-б и 10,17-дигидрокси БРАи-б, значительно снижают секрецию сильного провоспалительного цитокина 1Ь-1 β, причем снижение, даваемой соединением 10,17-дигидрокси БРАи-б, является значительно большим, чем снижение, обеспечиваемой или БНА оксилипиновым производным, или обычным противовоспалительным агентом, индометацином. Еще более поразительными оказались наблюдаемые различия между активностями двух различных оксилипиновых производных БРАи-б. Как показано в примерах 20 и 21, хотя продемонстрировано, что и 17-НБРАи-б, и 10,17-дигидрокси БРАи-б являются сильными противовоспалительными агентами, имеются различия между активностью данных двух БРАи-б оксилипинов в их действии на продуцирование цитокина (например, ГС-1 β), указывая на то, что одно соединение может быть более подходящим, чем другое, для конкретных применений (например, сепсис в сравнении с набуханием). В частности, 17-НБРАи-б оказалась более сильной, чем происходящий из БНА оксилипин для ингибирования миграции клеток, а 10,17-дигидрокси БРАи-б была более сильной, чем БНА оксилипин, для снижения секреции ΙΕ-1β. Следовательно, специалисты в данной области могут выбирать докозаноиды настоящего изобретения для конкретных использований и снижать возможные побочные эффекты от лечения по сравнению с использованием более пан-специфических или общих противовоспалительных агентов.
Композиции и способ настоящего изобретения предпочтительно защищают пациентов от воспаления, или от состояния, или заболевания, связанного с воспалением. Используемое здесь выражение защищать от заболевания (или симптома, или состояния) относится к уменьшению симптомов заболевания; снижению числа случаев заболевания и/или снижению тяжести заболевания. Защита пациента может относиться к способности питательной или терапевтической композиции настоящего изобретения при введении пациенту предотвращать воспаление, и/или излечивать, или снимать воспаление и/или симптомы, признаки или причины болезни/состояния. Как таковая, защита пациента от болезни или состояния включает как предотвращение случаев заболевания или состояния (профилактическое лечение), так и лечение пациента, у которого уже есть заболевание или состояние или который испытывает первоначальные симптомы болезни или состояния (терапевтическое лечение). Термин заболевание или болезнь или состояние относится к любому отклонению от нормального здоровья животного и включает состояние, когда присутствуют симптомы болезни, так же, как и состояния, при которых произошло отклонение (например, заражение, генная мутация, генетический порок, и др.), но симптомы еще не проявляются.
Согласно настоящему изобретению оксилипины (или их аналоги или производные), композиции, включающие такие оксилипины, и способы изобретения являются подходящими для использования на любом индивидууме (субъекте), который является представителем класса позвоночных, млекопитающих, включая, без ограничения, приматов, домашний скот и домашних любимых животных (например, животное компаньон). Наиболее типично индивидуумом является человек. Согласно настоящему изобретению термины пациент, индивидуум и субъект могут использоваться взаимозаменяемо и необязательно относятся к животному или лицу, которое является больным (т.е. термины могут означать здорового индивидуума или индивидуума, который не испытывает каких-либо симптомов болезни или состояния). В одном воплощении индивидуум, которому могут вводить или назначать оксилипин(ы), или композицию, или рецептуру, или масло настоящего изобретения, включает индивидуума, который рискует, у которого диагностировано или подозревается наличие воспаления или нейродегенерации или состояния или заболевания, относящихся к ним. Индивидуумами могут быть также здоровые особи, для которых оксилипины или композиции изобретения используются для усиления, поддержания или стабилизации здоровья индивидуума.
Количество ЬСРИРА или ее оксилипинового производного, вводимое индивидууму, может быть любым количеством, подходящим для предоставления желаемого результата снижения по крайней мере одного симптома воспаления или нейродегенерации или защиты индивидуума от состояния или заболевания, связанного с таким воспалением или нейродегенарцией. В одном воплощении ЬСРИРА, такая как
- 30 010802
ИРАи-б, вводится в дозе от примерно 0,5 до примерно 200 мг РИРА на кг веса тела индивидуума, хотя дозы не ограничиваются данными количествами. ЬСРИРА оксилипиновое производное или смесь оксилипиновых производных вводится в дозе от примерно 0,2 мкг до примерно 50 мг оксилипина на кг веса тела индивидуума, хотя дозы не ограничиваются данными количествами.
Хотя композиции и рецептуры изобретения могут вводиться топически или в виде инъецируемого препарата, наиболее предпочтительным способом введения является оральное введение. Предпочтительно используемые здесь композиции и рецептуры вводятся субъектам в виде питательных добавок, и/или продуктов (включая пищевые продукты), и/или фармацевтических рецептур, и/или напитков, более предпочтительно пищевых продуктов, напитков и/или питательных добавок, более предпочтительно пищевых продуктов и напитков, более предпочтительно пищевых продуктов.
Как обсуждалось выше, в композиции, когда они вводятся или предназначаются субъекту, могут включаться дополнительные агенты, такие как противовоспалительные агенты, витамины, минералы, носители, эксципиенты и другие терапевтические агенты. Предпочтительным дополнительным агентом является аспирин или какой-либо другой подходящий противовоспалительный агент.
Оксилипины (или их аналоги, или производные, или соли), композиции, включающие такие оксилипины, и способы изобретения являются также подходящими для использования в качестве пищевых ингредиентов, питательных добавок или терапевтических агентов при применении аквакультуры на любом индивидууме (субъекте), который является представителем класса позвоночных, таких как рыба, или беспозвоночных, таких как креветки.
Следующие результаты экспериментов предоставляются с целью иллюстрации и не предназначены для ограничения объема притязаний изобретения.
Примеры
Пример 1.
Следующий пример демонстрирует, что ИРАи-б может полностью превращаться в моногидроксидиеновое производное с помощью 15-липоксигеназы и превращается более эффективно, чем или ИРАиЗ, или ЬКА.
15-Липоксигеназа соевых бобов (8^дта-А1άπсй, 81. Ρουίκ, МО) при конечной концентрации 4 мкг/мл примешивалась к 100 мкл растворам ОИА, ИРАи-б или ИРАи-З (ШСИек Ргеб, Εΐίκιαη, ΜΝ) в 0,05Μ натрийборатном буфере, рН 9,0, и реакционные смеси инкубировались при 0°С. Появление моногидроксисопряженных диеновых производных жирной кислоты контролировалось с помощью абсорбции при 2З8 нм. Сопряженные диеновые продукты определялись количественно с использованием коэффициента экстинкции 28000 М-1см-1 (8Ыт1/и е1 αΐ.; Μеΐйοάκ ίη Εηζγηο1ο§γ, 1990, νοί. 187, 29б-З0б). Как показано в примере 1, в данных условиях 100% ИРАи-б эффективно превращалось в ее сопряженное диеновое производное, тогда как около 85% ИРАи-З и 50% ЬЧА превращались в их соответствующие сопряженные диеновые (моногидрокси) производные с помощью 15-липоксигеназы. В данных условиях реакции не происходило никакого заметного накопления дигидроксипроизводных.
Пример 2.
Следующий пример описывает основные 15-липоксигеназные продукты ОИА.
ОИА (100 мкМ, ИиСйек Ргеб, Εΐίκίαη, ΜΝ) инкубировалась с 15-ЬОХ (4 мкг/мл) в 005М натрийборатном буфере, рН 9,0, при 4°С при энергичном перемешивании в течение З0 мин. Реакционные продукты восстанавливались ΝαΒΗ4 (0,45 мг/мл), а затем экстрагировались на твердофазном С-18 картридже ^ибе^ Όί^ονΌΓν И8С-19) с использованием для элюирования безводного этанола. Реакционные продукты анализировались с помощью Γ·ί'.7Μ8/Μ8 с использованием инструмента высокоэффективной (или высокой разрешающей способности) жидкостной хроматографии (ИРЬС) Адбеи! 1100 серии (8αη Раυ1ο, СА США), соединенного с масс-спектрометром с ионной ловушкой Е^ште З000, снабженным источником электрораспылительной ионизации (Вгикег Όαΐΐοηκκ, ВШенс;·! ΜА США). ИРЬС осуществлялась на ПХА С18(2) колонке (250x4,6 мм, 5 мкм, РИе^те^х, ^пиисе СА, США) с использованием подвижной фазы, состоящей из 100 мМ ацетата аммония в З0% метаноле в воде с градиентом ацетонитрила, повышающимся с 48 до 90% на протяжении 50 мин (скорость потока 0,4 мл/мин). Масс-спектрометр эксплуатировался отрицательным ионодетекционным образом. В качестве распыляющего и осушающего газа использовался азот с давлением распылителя 20 фунт/кв.дюйм (1,40б кг/кв.см) и скоростью потока осушающего газа 7 л/мин. Температура поверхности раздела поддерживалась при ЗЗ0°С.
На фиг. 2А изображены структуры моно- и дигидроксипродуктов данной реакции ОЧА. На фиг. 2В изображен Μ8/Μ8 спектр моногидроксипродукта, показывающий молекулярный ион (т/ζ З4З) и характерные фрагменты 17-гидрокси ОМА. Вставка показывает УФ спектр данного соединения с ожидаемым пиком при 2З7 нм, характеристика сопряженного диена. На фиг. 2С и 2Ό изображены Μ8/Μ8 спектры двух дигидроксипродуктов с показанными молекулярными ионами (т/ζ З59) и характерными фрагментами 10,17-гидрокси ЬКА (2С) и 7,17-дигидрокси ЬКА (2Ό). Вставки УФ спектра показывают ожидаемые триплетные пики при 270 нм, характеристика сопряженного триена для 10,17-дигидрокси ^ΗΛ, и один пик при 242, характеристика двух пар сопряженных диенов, разделенных метиленовой группой, для 7,17-дигидрокси ЬКА.
Пример З.
- З1 010802
Следующий пример показывает основные 15-липоксигеназные продукты ΌΡΑη-б и демонстрирует получение моно- и дигидроксипроизводных аналогично продуктам, получаемым из ΌΗΑ (см. пример 2).
ΌΡΑη-б обрабатывался 15-липоксигеназой и анализировался с помощью ЬС/М8/М8 в условиях, описанных в примере 2. На фиг. 3Α изображены структуры моно- и дигидроксиреакционных продуктов данной реакции ΌΡΑη-6/15-ЬОХ. На фиг. 3Β изображен М8/М8 спектр моногидроксипродукта, показывающий молекулярный ион (т/ζ 345) и фрагменты, характерные для 17-гидрокси ΌΡΑη-б. Вставка показывает УФ спектр данного соединения с ожидаемым пиком при 237 нм, характерным для сопряженного диена. На фиг. 3С и 3Ό изображены М8/М8 спектры двух дигидроксипродуктов с молекулярными ионами (т/ζ 361) и указаны фрагменты, характерные для 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-б (3С) и 7,17-дигидрокси ΌΡΑη-б (3Ό). Вставки УФ спектра показывают ожидаемые триплетные пики при 270 нм, характеристика сопряженного триена для 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-б, и один пик при 242, характеристика двух пар сопряженных диенов, разделенных метиленовой группой для 7,17-дигидрокси ΌΡΑη-б.
Пример 4.
Следующий пример показывает основные 15-липоксигеназные продукты ΌΡΑη-3 и демонстрирует получение моно- и дигидроксипроизводных аналогично продуктам, получаемым из ΌΗΑ (см. пример 2) и ΌΡΑη-б (пример 3).
ΌΡΑη-3 обрабатывался 15-липоксигеназой и анализировался с помощью ЬС/М8/М8 в условиях, описанных в примере 2. На фиг. 4А изображены структуры моно- и дигидроксиреакционных продуктов данной реакции ΌΡΑη-3/15-ЬОХ. На фиг. 4В изображен ЬС/М8 спектр моногидроксипродукта, показывающий молекулярный ион (т/ζ 345) и фрагменты, характерные для 17-гидрокси ΌΡΑη-3. Вставка показывает УФ спектр данного соединения с ожидаемым пиком при 237 нм, характерным для сопряженного диена. На фиг. 4С и 4Ό изображены М8/М8 спектры двух дигидроксипродуктов с молекулярными ионами (т/ζ 361) и указаны фрагменты, характерные для 10,17-гидрокси ΌΡΑη-3 (4С) и 7,17-дигидрокси ΌΡΑη-3 (4Ό).
Вставки УФ спектра показывают ожидаемые триплетные пики при 270 нм, характеристика сопряженного триена для 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-3, и один пик при 242, характеристика двух пар сопряженных диенов, разделенных метиленовой группой, для 7,17-дигидрокси ΌΡΑη-3.
Пример 5.
Следующий пример показывает основные 15-липоксигеназные продукты ΌΤΑη-б и демонстрирует получение моногидрокси и дигидроксипроизводных аналогично продуктам, получаемым из ΌΗΑ (пример 2), ΌΡΑη-б (пример 3) и ΌΡΑη-3 (пример 4).
ΌΤΑη-б смешивался с 15-липоксигеназой и анализировался с помощью ЬС/М8/М8 в условиях, описанных в примере 2. На фиг. 5А изображена структура моногидроксиреакционного продукта. На фиг. 5В изображен М8/М8 спектр моногидроксипродукта, показывающий молекулярный ион (т/ζ 347) и фрагменты, характерные для 17-гидрокси ΌΤΑη-б. Вставка показывает УФ спектр, указывающий ожидаемый пик при 237 нм, характерный для сопряженного диена. На фиг. 5С изображены ЬС/М8 спектры дигидроксипродукта с молекулярным ионом (т/ζ 361) и указаны фрагменты, характерные для 7,17-дигидрокси ΌΤΑη-б. Вставка УФ спектра показывает ожидаемый пик при 242 нм, характеристика двух пар сопряженных диенов, разделенных метиленовой группой.
Пример б.
Следующий пример показывает структуру ферментативных продуктов, получаемых из ΌΡΑη-б после последовательной обработки 15-липоксигеназой с последующей обработкой гемоглобином.
ΌΡΑη-б (в концентрации 100 мкМ) смешивалась с 15-липоксигеназой соевых бобов (20 мкг/мл, конечная концентрация) с энергичным перемешиванием при 4°С. Продукты сразу же экстрагировались на 8ире1сο ^^δсονе^у Ό8Ο-19 картриджах с использованием для конечного элюирования безводного этанола. Полученные таким образом гидропероксипроизводные концентрировались до 1,5 мМ и использовались для последующих катализируемых гемоглобином реакций. Гидропероксипроизводные (конечная реакционная концентрация, 30 мкг/мл) смешивались с гемоглобином человека (300 мкг/мл, 8щтаΑ16γΚ1ι) в солевом растворе, буферируемом фосфатом Дульбекко при 37°С в течение 15 мин. Реакционная смесь подкислялась до рН 3 ледяной уксусной кислотой, и продукты очищались твердофазной экстракцией. Реакционные продукты анализировались с помощью ЬС-М8/М8. Фиг. 6 иллюстрирует докозаноидные продукты ферментативной реакции, о чем судят по масс-спектрам (не показаны).
Пример 7.
Следующий пример показывает основные 5-липоксигеназные продукты ΌΗΑ.
К 10 мл реакционной смеси, содержащей 100 мкМ ΌΗΑ (ШСйек Ριόγ, Е^кхащ МИ) в 0,05М NаМЕ8 буфере, рН 6,3, 100 мкМ 8Ό8 и 0,02% С12Е10, добавлялось 200 мкл 10 ед./мкл картофельной 5-липоксигеназы (Сау^аеη СйептосаК М^ппеарο1^δ, МЛ). Реакция протекала в течение 30 мин при 4°С, и реакционные продукты восстанавливались добавлением 1 мл 0,5 мг/мл NаΒΗ4. Реакционные продукты экстрагировались с использованием С-18 картриджей и анализировались с помощью ЬС/М8/М8, как описано в примере 2. Показаны основные продукты реакции, определенные по тандемной масс-спеткроскопии наряду с диагностическим молекулярным ионом и фрагменты (фиг. 7).
Пример 8.
- 32 010802
Следующий пример показывает основной 5-липоксигеназный продукт ΩΡΑπ-6 и показывает получение моногидроксипроизводного аналогично 5-ЬОХ продуктам ΩΜΑ (пример 7).
□ΡΑ11-6 (100 мкМ) обрабатывалась 55-липоксигеназой, как описано в примере 7. Реакционные продукты анализировались с помощью БС/М8/М8, как в примере 2. Показаны основные продукты реакции, определенные по тандемной масс-спеткроскопии наряду с диагностическим молекулярным ионом и фрагменты (фиг. 8).
Пример 9.
Следующий пример показывает основные 5-липоксигеназные продукты ΩΡΑιι-! и показывает получение моно- и дигидроксипроизводных аналогично 5-ЬОХ продуктам ΩΜΑ (пример 7).
ΩΡΑιι-! (100 мкМ) обрабатывалась 5-липоксигеназой, как описано в примере 7. Реакционные продукты анализировались с помощью БС/М8/М8, как в примере 2. Показаны основные продукты реакции, определенные по тандемной масс-спеткроскопии наряду с диагностическим молекулярным ионом и фрагменты (фиг. 9).
Пример 10.
Следующий пример показывает основные 12-липоксигеназные продукты ΩΜΑ.
Для ферментной реакции 100 мкл 0,75 ед./мкл 12-липоксигеназы, происходящей из лейкоцитов свиньи (Саутеп Сйетоса1к, М1ппеаройк, М№), добавлялось к 10 мл раствора, содержащим 100 мкМ ΩΜΑ (М.1С11ек Ргер, Е1ук1ап, М№) в 0,1М Трис-НС1, рН 7,5, 5 мМ ΕΌΤΑ и 0,03% Твин-20. Реакция продолжалась на протяжении 30 мин при 4° С, и реакционные продукты восстанавливались добавлением 1 мл 0,5 мг/мл №1ВН.-|. Реакционные продукты экстрагировались с использованием С-18 картриджей в твердой фазе и анализировались с помощью БС/М8/М8, как описано в примере 2. Показаны основные продукты реакции, определяемые по тандемной масс-спектроскопии наряду с диагностическим молекулярным ионом и фрагменты (фиг. 10).
Пример 11.
Следующий пример показывает основные 12-липоксигеназные продукты ΩΡΑιι-Γ) и показывает получение моно- и дигидроксипроизводных аналогично производным, получаемым по реакции ΟΜΑ/12ЬОХ (пример 10).
ΟΡΑΐ'ΐ-6 (100 мкМ) обрабатывалась 12-липоксигеназой, как описано в примере 10. Реакционные продукты анализировались с помощью БС/М8/М8, как в примере 2. Показаны основные продукты реакции, определенные по тандемной масс-спектроскопии наряду с диагностическим молекулярным ионом и фрагменты (фиг. 11).
Пример 12.
Следующий пример показывает основные 12-липоксигеназные продукты ΩΡΑιι-! и показывает получение моно- и дигидроксипроизводных аналогично производным, получаемым по реакции ΟΜΑ/12ЬОХ (пример 10) и по реакции □ ΡΑΐ'ΐ-6/12-ЬОХ (пример 11).
□ΡΑΐ'ΐ-3 (100 мкМ) обрабатывалась 12-липоксигеназой, как описано в примере 10. Реакционные продукты анализировались с помощью БС/М8/М8, как в примере 2. Показаны основные продукты реакции, определяемые по тандемной масс-спектроскопии наряду с диагностическим молекулярным ионом и фрагменты (фиг. 12).
Пример 13.
Следующий пример описывает масс-спектральный анализ оксилипинов в □ΜΑ/ΩΡΑι·!-!) Ρί'ΡυΕΑ масле водорослей.
Получаемое из водорослей ^НΑ+^ΡΑη-6 масло (0,5 г), разбавленное 1,5 мл гексана, пропускалось через 15 ммх200 мм силикагельную колонку с использованием увеличивающихся концентраций этилацетата в гексане для элюирования различных классов липидов. Фракции, содержащие липиды, идентифицировались с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) с использованием смеси петролейный эфир:этиловый эфир:уксусная кислота (80:20:1) в качестве подвижной фазы, а затем дополнительно сортировались на моно- и дигидроксидокозаноиды (т/ζ 343, 345, 359 или 361) с использованием ЬС/М8 на жидкостном хроматографе модели 1100 Не\\'1е11 Раскагб, оборудованном ионизацией с электрораспылением (Ε8Ι) и масс-селективным детектором модели 1100 Не\\'1е11 Раскагб (М8Э). Фракции, содержащие гидроксилдокозаноидные продукты, сливались, концентрировались и далее анализировались с помощью тандемной масс-спектроскопии (М8/М8) на приборе ΑΡΙ Ο8ΤΑΡ* Ри1каг ί НуЬпй (с тройным квадрупольным временем гибридизации в потоке) БС/М8/М8 (устройство для масс-спектроскопии Со1огабо ишуегкйу). Образец вводился с использованием непосредственного вливания в источник Ε8Ι (ионизация с электрораспылением), использующий отрицательную ионизацию.
На фиг. 18А изображена М8 общая ионная хроматограмма (ΤΙΟ) докозаноидной фракции, показывающая присутствие моногидрокси ΌΡΑ (ΠΌΡΑ), и дигидрокси ΌΡΑ (ди-ΠΌΡΑ) ([М-Н] 345 и 361 т/ζ, соответственно), и моногидрокси ΩΚΑ (Н^НΑ, [М-Н] 343 т/ζ) наряду с фрагментами, соответствующими [М-Н]-Н2О, [М-Н]-СО2 и [М-Н]-Н2О/СО2, которые являются характерными фрагментами данных соединений.
На фиг. 18В изображены М8/М8 спектры моногидрокси 0ΡΑι·ι-6 ([М-Н] 345 т/ζ), показывающие
- 33 010802 характерные [М-Н]-Н2О, [М-Н]-СО2 и [М-Н]-Н2О/СО2 фрагменты наряду с т/ζ 245 и 201 фрагментами, указывающими на присутствие 17-НЭРАп-6 в масле.
На фиг. 18С изображен М8/М8 дигидрокси ЭРАп-6 с характерными фрагментами, соответствующими [М-Н]-Н2О (т/ζ 343), [М-Н]-СО2 (т/ζ 317) и [М-Н]-Н2О/СО2 (т/ζ 299), [М-Н]-2 Н2О/СО2 (т/ζ 281), и фрагментами, указывающими на присутствие 10,17-дигидрокси ЭРАп-6 (т/ζ 261-Н2О/СО2; 153).
Пример 14.
Следующий пример показывает результаты исследования отека на лапе крысы, при котором животным давали при кормлении различные сочетания ЬСРИРА.
Взрослым самцам крыс 8ргадие Эа\\'1еу (п=10/группа обработки или лечения) скармливали модифицированные А1И-76 корма, составленные так, что они включали 1,2% ИНА, 1,2% ИНА+0/44% ЬРАп-6 или 1,2% ИНА+0,46% арахидоновой кислоты (АКА), в течение 4 недель. Чтобы вызвать отек задних лап, использовался каррагенан (1%) на 14 день кормления (левая лапа) и на 28 день (правая лапа). Отек измерялся плетизмографически с использованием замены водой через 3 ч после инъекции. Значения 28 дня (±ст.откл.) показаны на фиг. 19. Аналогичные результаты получены на 14 день. *р<0,05.
Фиг. 19 показывает, что масло, содержащее сочетание ИНА и ЬРАп-6. давало статистически значительно лучшее уменьшение объема отека, чем одна ИНА или ИНА и АКА. На данной модели омега-6 жирная кислота АКА полностью изменяла противовоспалительную активность ИНА.
Пример 15.
Следующий пример демонстрирует сильное противовоспалительное действие ИРАп-6-производных оксилипинов 17-гидрокси ЬРАп-6 и 10,17-дигидрокси ЬРАп-6 на модели мышей с дорзальным воздушным дивертикулом. Чистый 17К-гидрокси ИНА (17К-НИНА) закупали у фирмы Саутеп Сйет1са1к (Апп АгЬог, М1). Докозаноиды 17-гидрокси ЬРАп-6 (17-НИРАп-6) и 10,17-дигидрокси ЬРАп-6 (10,17-НИРАп6) синтезировали биогенно из ЬРАп-6 (ИиСйек Ргер, Е1ук1ап, МИ) с использованием соевой липоксигеназы (8|дта-А1йпс11) и очищали с помощью НРЬС, как описано в примере 2. Органические растворители выпаривались, и соединения повторно растворялись в забуференном фосфатом солевом растворе (РВ8), стерилизовались на фильтре, и концентрации доводились до 1000 нг/мл с использованием коэффициентов молярной зкстинкции 28000 и 40000 М-1см-1, соответственноб для моно- и дигидроксидокозаноидов. Самкам мышей С57/В16 (п=10 мышей на группу) инъецировали подкожно стерильный воздух в области спины для инициирования дорзальных воздушных дивертикулов. Спустя 6 дней с помощью инъекции внутрь дивертикула вводили 0,9 мл стерильного РВ8 с последующим введением 100 нг докозаноида в 0,1 мл РВ8 или одного РВ8. Данная инъекция сопровождалась в пределах 5 мин инъекцией внутрь дивертикула 100 нг мышиного рекомбинантного ТИРа (Рерго!есй, 1пс, ΝΓ США) в 0,1 мл РВ8. Контрольные животные не получали никакого ТИРа. В качестве положительного контроля за 30 мин до введения ТИРа интрапертонеально вводили 2 мг/кг индометацина (Са1Ьюсйет, 8ап П1едо, СА). Спустя 4 ч после введения ТИРа экссудаты воздушного дивертикула удалялись и клетки окрашивались раствором Тигк'а и подсчитывались. Экссудаты замораживались для более поздних анализов цитокина с использованием промышленных наборов или комплектов ЕЫ8А. Коридор ошибок представляет значения (±ст.откл.) группы (п=10). Группы сравнивали с использованием теста Стьюдента, р величины указаны.
Фиг. 20 А показывает общую миграцию клеток в экссудаты воздушного дивертикула. 17-Гидрокси ЭРАп-6 и 10,17-дигидрокси ЭРАп-6 приводили в результате к значительным снижениям общего числа клеток в дивертикуле вследствие уменьшения как числа нейтрофилов, так и макрофагов (не показано). 17-гидрокси ЭРАп-6 была более сильной, чем как 17К-гидрокси ИНА, так и индометацин, по снижению клеточной инфильтрации.
Фиг. 20В показывает концентрации 1Ь-1в в экссудатах воздушного дивертикула. Как 17-гидрокси ПРАп-6, так и 10,17-дигидрокси ЭРАп-6 приводили в результате к значительным снижениям секреции сильного провоспалительного цитокина ГЬ-1 β, при этом снижение, даваемое 10,17-гидрокси ПРАи-6, было значительно больше, чем снижение, даваемое или оксилипиновым производным ИНА, или индометацином.
Фиг. 20С показывает концентрации макрофагового хемотактического протеина-1 (МСР-1) в экссудатах воздушного дивертикула. Как 17-гидрокси ^РАи-6, так и 10,17-дигидрокси ЭРАп-6 приводили в результате к значительным снижениям секреции данного хемоаттрактантного цитокина, и оба соединения приводили в результате к большему ингибированию МСР-1, чем индометацин.
Фиг. 20А-С показывают, что два оксилипиновых производных ЭРА п-6 17-гидрокси ЭРАп-6 и
10,17-дигидрокси ЭРАп-6 являются сильными противовоспалительными агентами, приводящими к пониженной иммунной клеточной миграции на данной модели воспаления. Снижение ключевых провоспалительных цитокинов может способствовать данной противовоспалительной активности.
Примечательно, существуют различия между активностью данных двух ЭРАп-6 оксилипинов в отношении их действия на продуцирование цитокина (например, 1Ь-1в), что говорит о том, что одно соединение может быть более подходящим, чем другое, для конкретных применений (например, сепсис в сравнении с отечностью). 17-Гидрокси ЭРАп-6 является более сильной, чем ИНА-производный оксилипин в отношении ингибирования клеточной миграции, а 10,17-дигидрокси ЭРАп-6 является более силь
- 34 010802 ной, чем ΌΗΑ оксилипин, в отношении снижения секреции Ι6-1β.
Пример 16.
Следующий пример показывает противовоспалительное действие ΌΗΑ- и ΌΡΑη-6-производных докозаноидов на культуре клеток.
Действие докозаноидов на продуцирование ΤΝΡα-индуцируемого ЕС-1 β глиальными клетками: глиальные клетки человека (ΌΒΟΤΒΟ-05ΜΟ, АТСС, Мапаззаз, УА) культивировались в течение 24 ч в 96луночных чашках для культуры (105 клеток на лунку) в 0,2 мл ΚΡΜΙ-среды, содержащей добавки и сыворотку (как, описывается АТСС), после чего среда заменялась свежей средой, содержащей докозаноиды или носитель (ΡΒ8), с последующим в пределах 5 мин добавлением человеческого рекомбинантного ΤΝΡα (81дша-А1бг1сй, 81. Ьошз, МО) в конечной концентрации 100 нг/мл. Клетки инкубировались в течение 17 ч перед тем, как супернатанты удалялись, и клетки лизировались 0,2% Тритоном-Х100 в ΡΒ8. Клеточные лизаты анализировались на 1Ь-1 β с использованием промышленного комплекта ЕЫ8А (Β&Ό 8уз1етз, М1ппеаройз, ΜΝ) (фиг. 21). Коридор ошибок представляет значения (п=3) ±ст.откл. *р=0,06 в сравнении с контролем с использованием 1-теста Стьюдента. 17-ΗΌΗΑ: 17В-гидрокси ΌΗΑ; 17ΗΌΡΑη-6: 17-гидрокси ΌΡΑη-6; 10, 17-диΗ^ΡΑη-6: 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-6.
Пример 17.
Следующий пример дополнительно иллюстрирует противовоспалительное действие 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-6 на лимфоциты человека в культуре и демонстрирует, что дигидрокси ΌΡΑη-6 соединение является более сильным, чем ΌΗΑ аналог (10,17-дигидрокси ΌΗΑ) по снижению секреции ΤΝΡα Τ лимфоцитами, стимулируемыми анти-СО3/анти-СО28 антителами.
Фиг. 22А: действие докозаноидов на секрецию ΤΝΡα Τ лимфоцитами человека. Анализ проводился, по существу, как описано в публикации Лпе1 е1 а1., 2005. Вкратце, моноядерные клетки периферической крови человека отделялись от венозной крови с использованием градиента Ε^со11-Ρа^ие™ Плюс (Αше^зйаш Ьюзаепсез). Т лимфоциты отделялись с использованием колонки для обогащения Т клетками человека (Β&Ό 8уз1етз) согласно инструкциям производителя. Очищенные Т клетки обрабатывались 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-6, или 10,17-дигидрокси ΌΗΑ, или носителем (0,05% этанол) в ΡΡΜΙ-1640 средах, содержащих 10% инактивируемую теплом плодную бычью сыворотку, в течение 6 ч при 37°С. Лимфоциты (200000 клеток в 200 мкл средах на лунку) затем переносились на 96-луночные планшеты, покрытые как анти-СО3 антителами, так и анти-СО28 антителами (100 мкл 2 мкг/мл каждого из антител на протяжении ночи для покрытия лунок), и инкубировались в течение 41 ч. Концентрации ΤΝΡα определялись в клеточных супернатантах с помощью ΕΌΙ8Α (Β&Ό 8уз1етз). Значения группы ±ст.откл. (η=4) сравнивались с помощью т-теста Стюдента. *р<0,05 и **р<0,01 в сравнении с контролем; # указывает на статистическое различие (р=0,037) между группами, обрабатываемыми 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-6 и 10,17-дигидрокси ΌΗΑ при 10 нМ концентрациях.
Фиг. 22В показывает концентрации ΤΝΡα в супернатантах от лимфоцитов, не обрабатываемых докозаноидами, которые культивировались в непокрытых лунках или в лунках, покрытых только анти-СО3 антителами, только анти-СО28 антителами или сочетанием двух видов антител.
Ссылки
ΑΛ1 е1 а1. (2005). Τίκ босозоа1пепе рго1о1ес1ш Ό1 1з ргобисеб Ьу Τй2-зке^^ηд апб ргото1ез Питан Τ се11 арор1оз1з У1а Ιίρίά-гай с1из1еппд. ЕВС Еарегз ίη Егезз. Мапизспр1 М509796200.
ΑπΙη е1 а1. (2005а). Τίκ соп1пЬибопз оГ пзр1Г1п апб т1сгоЫа1 охудепазе 1о 1йе Ьюзуп1йез1з оГ апбшПаттаЮгу гезоМпз: №хе1 охудепазе ргобис1з Ггот отеда-3 ро1уипзаШга1еб Га11у аабз. ВюсПет. Вюрйуз. Вез. Соттип. 2005 (ίη ргезз).
ΑπΙη е1 а1. (2005Ь). Везо1уш Е1, аη епбодепоиз Ир1б теб1а1ог бепуеб Ггот отеда-3 е1созареп1аепо1с ас1б, рго1ес1з адатз1 2,4,6-1^^η^1^оЬеηζеηе зибошс ааб-шбисеб сойбз. Ριγκ. №11. Αсаб. 8сЕ υ8Α, 102 (21): 7671-6.
ΑπΙη е1 а1. (2005с). 81егеосйетка1 азз1дпшеп1, ап1йиГ1атша1огу ргорегйез, апб гесер1ог Гог 1Пе отеда-3 11р1б теб1а1ог гезоМп Е1. 1. Ехр. Меб. 201 (5): 713-22.
Βαη^η^ι^ е1 а1. (2005а). Мо1еси1аг сисийз оГ ге8о1ибоп: Гогтабоп апб асбопз оГ гезоМпз апб ргоЮсбпз.
1. Iттиηо1. 174 (7): 4345-55. ЕггаШт ίη: 1. 1шшипо1. 2005 Мау 1; 174 (9): 5884.
Βαηικι^Γβ е1 а1. (2005Ь). Мо1еси1аг сисийз оГ гезойШоп: Гогшн6оп апб асбопз оГ гезоМпз апб рго1есбпз. 1. 1тшипо1. 174 (7): 4345-55.
Βηζηπ (2005а). Ь1р1б з1дпа11пд ίη пеига1 р1азбсйу, Ьгаш гераи, апб пеигорго1ес11оп. Мо1. №игоЬю1. 32 (1): 89-103.
Βηζηπ (2005Ь). Nеи^оρ^о1ес1^η Ό1 (ΝΡΌ1): а ΌΗΑ-бепуеб шеб1а1ог 1йа1 рго1ес1з Ьгаш апб гебпа адатз1 се11 шщгу-шбисеб ох1бабуе зГгезз. Βηίη ΡαΙ^Ε (2): 159-66.
Βηζηπ е1 а1. (2005). Βίαιη гезропзе 1о бдшу апб пеигобедепегабоп: епбодепоиз пеигорго1есбуе з1дпайпд. Αηη. ΝΥ Αсаб. 8сЕ 1053: 137-47.
Βе1ауеν е1 а1. (2005). Оосозайехаепою ас1б сошр1ехеб 1о а1Ьитт ейсйз йдй-дгабе 1зсйешк пеигорго1есбоп. 81гоке. 36 (1): 118-23.
Βоиа^аЬ е1 а1. (2004). Τίκ 1ппа1е 1тшиш1у оГ а шаппе геб а1да туокез охуйртз Ггош Ьо1П 1йе еюозапо1б
- 35 010802 апб ос1абесапо1б ра!Нтеаук. Иап!. ?Нукю1. 135: 1838-1848.
Ви!оукН е! а1. 2005. Οη Ле к!гис!иге, купЛек1к апб тесНашкт оГ Гогтайоп оГ пеигорго!ес11п Ό1-η ηоνе1 ап!йайатта!огу сотроипб оГ босокаНехаепок ас1б ГатПу. 1 Ыр1б Иек. 2005 (ίη ргекк).
СНеа & Вахап (2005). Ыр1б κίμηη1ίημ: к1еер, купарйс р 1 ак!1с11у, ааб пеигорго!есйоп. ?гок!ад1апб1пк ОЛег Ыр1б Меб1а!. 77 (1-4): 65-76.
Р1о\\'ег ааб БетеЛ (2005). СоШгоИтд 1аГ1атта!1оп: а Га! сНапсе? I. Ехр. Меб. 201 (5): 671-4.
Сег\\Чск (1994). 81гис1иге ааб ЬюкупЛекк оГ таппе а1да1 охуйртк. ВюсЫтка е! ВюрНукка Αска 1221: 243-255.
Сег\\Чск & Ветай (1993). Екокапо1бк ааб ге1а!еб сотроиабк Ггот тагте а1дае. ₽адек 101-150 ίη 2аЬогкк1 ааб Лиа\νау (ебк) Магте Вю!есНпо1оду Уо1. 1: ΡНа^шасеиίка1 ааб Ьюасйуе ргобасВ. Лепит ₽гекк, ΝΥ.
Сег\\Чск ек а1. 1993. Вю1одка11у асЛ'е охуйршк Ггот кеа\хеебк. ЫубгоЬю1од1а 260/261: 653-665. СЛоу е! а1. (2004). 1а£1атта!огу геко1икоп: аете оррогЛшйек Гог бгид бйсохегу. №11аге Кеуктек 3: 401-416.
Сш1£огб е! а1. (2004). №хе1 3-оха Нрохш Α4 апа1одиек \νίΛ еаНаасеб сНетка1 ааб текаЬоНс к1аЬ1Шу Науе ап!нак1атта!огу асЛЯу ίη у1уо. ί. Меб. СНет. 2004 Αр^. 8;47 (8): 2157-65.
Чоад е! а1. (2003). №хе1 босокаЛепек ааб 17§-геко1у1ак депега!еб Ггот босокаНехаеаок ааб ίη тигте кат, Нитаа Ь1ооб, ааб дНа1 се11к. Αи!асо^бк ίη ап!1-1п£1атта!1оп. ί. Вю1. СНет., 278 (17): 14677-87.
ЬикЛ е! а1. (2005). Α го1е Гог босокаНехеаок ааб-бепуеб аеагорго1ес11п Ό1 ίη аеига1 се11 кигу1уа1 ааб Α1ζНе^те^ Лкеаке. ί. ί'Ίίη. Луек!. 2005 (ίη ргекк).
МагдекеШ е! а1. (2003). №хе1 босокапо1бк 1пН1Ь1! Ьгат 1ксНет1а-герегкик1оп-теб1а!еб 1еикосу!е 1аГ111га11оа ааб рго1а£1атта!огу депе ехргеккюп. 1. Вю1. СНет. 278 (44): 43807-17.
Меубаш (1990). Ок!агу тоби1а!1оп оГ су!октек ааб Ью1одка1 Гапсбопк. №11ббоп Кеуктек 48: 361-367.
МикНедее е! а1. (2004). №игорго!есбп Ό1: а босокаНехаеао1с ааб-бепуеб босокаЛепе рго!ес!к Нитаа гебпа1 р1дтеп! ер1ЛеНа1 се11к Ггот ох1бабуе к!гекк. ₽гос. №111. Αсаб. 8α. υδΑ. 101 (22): 8491-6.
Коббдаех ааб 8риг (2004). Р1гк! 1о(а1 купЛеык оГ 7(8),16(К),17(8)-Кеко1ут Ό2, а ро!еа! ап11-1айатта!огу 11р1б теб1а!ог. Τе!^аЬеб^оη Ье!!егк 45: 8717-8720.
Коббдаех ааб 8риг (2005). Р1гк! !о!а1 купЛеык оГ 7(к),17(8)-КекоМп Ό5, а ро!еа! ап!1-1а£1атта!огу босокапо1б. Τеί^аНеб^оη Ье!!егк 46 (21): 3623-7.
Коггег е! а1. (1996). Веуе1ортеп! ааб Ьюгеас!ог саШхабоп оГ а аоуе1 кет1б1Негеп!1а!еб бккие какреак1оа бепуеб Ггот !Не тагте р1аа! Лс^ок^рНоа^а соаЛа. Вю!есНпо1оду ааб В1оеад1аеег1пд 49: 559-567.
Коггег е! а1. (1997). Тюби^ои оГ Нубгоху1 ГаНу аабк Ьу се11 какреак1оа си1!игек оГ !Не тагте Ьго\\'п а1да Ьаттапа кассНаппа. ?Ну!осНет1к1гу 46 (5): 871-877.
8егНап е! а1. (2004а). КекоМпк, босокаЛепек, апб пеигорго!ес!тк, шоуе1 отеда-3-бепуеб теб1а!огк, апб Лен епбодепоик акршп-!пддегеб ертегк. Ыр1бк. 39 (11): 1125-32.
8егНап е! а1. (2004Ь). КекоМпк, босока!пепек, апб пеигорго!ес!тк, поуе1 отеда-3-бепуеб теб1а!огк, апб Леи акршп-!пддегеб епбодепоик ерМегк: ап охеМе\\· оГ Леи рго!есбуе го1ек ίη са!аЬак1к. ?гок!ад1апбтк ОЛег Ыр1б Меб1а!. 73 (3-4): 155-72.
81торои1ок (2002). Отеда-3 Гайу аабк ίη 1а£1аттайоп апб аи!о1ттипе б1кеакек. ί. Αт. Со11. №.11г. 21 (6): 495-505.
Υе е! а1. (2002). Су!осНготе Ρ-450 ерохудепаке те1аЬо1йек оГ босокаНехаепоа!е ро!еп11у бйа!е согоаагу абебо1ек Ьу асйуайпд 1агде-сопбис!апсе са1сшт-асйуа!еб ро!аккшт сНаппе1к. ί. ?Нагтасо1. ΤНе^ареи!. 303 (2): 768-76.
Каждый из литературных источников, описанных или цитированных здесь, включен целиком в описание в качестве ссылки.
Хотя подробно описаны различные воплощения настоящего изобретения, специалистам в данной области очевидно, что могут иметь место модификации и адаптации данных воплощений. Следует четко понимать, однако, что такие модификации и адаптации охватываются рамками объема настоящего изобретения, представленного в следующих пунктах формулы изобретения.

Claims (112)

1. Изолированный докозаноид докозапентаеновой кислоты (ΌΡΑη-6).
2. Изолированный докозаноид по п.1, в котором докозаноидом является К- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из моногидроксипроизводных ΌΡΑη-6, дигидроксипроизводных ΌΡΑη-6 и тригидроксипроизводных ΌΡΑη-6.
3. Изолированный докозаноид по п.1, в котором докозаноидом является К- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из 7-гидрокси ΌΡΑη-6; 8-гидрокси ΌΡΑη-6; 10-гидрокси ΌΡΑη6; 11-гидрокси ΌΡΑη-6; 13-гидрокси ΌΡΑη-6; 14-гидрокси ΌΡΑη-6; 17-гидрокси ΌΡΑη-6; 7,17дигидрокси ΌΡΑη-6; 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-6; 13,17-дигидрокси ΌΡΑη-6; 7,14-дигидрокси ΌΡΑη-6; 8,14-дигидрокси ΌΡΑη-6; 16,17-дигидрокси ΌΡΑη-6; 4,5-дигидрокси ΌΡΑη-6; 7,16,17-тригидрокси ΌΡΑη6 и 4,5,17-тригидрокси ΌΡΑη-6 или ее аналога, производного или соли.
4. Изолированный докозаноид докозапентаеновой кислоты (ΌΡΑη-3).
5. Изолированный докозаноид по п.4, в котором докозаноидом является К- или 8-эпимер докоза
- 36 010802 ноида, выбранного из группы, состоящей из моногидроксипроизводных ОРАп-3, дигидроксипроизводных ЭРАп-3 и тригидроксипроизводных ОРАп-3.
6. Изолированный докозаноид по п.5, в котором докозаноидом является К- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из 7-гидрокси ОРАп-3; 10-гидрокси ОРАп-3; 11-гидрокси ЭРАп-3; 13-гидрокси ОРАп-3; 14-гидрокси ОРАп-3; 16-гидрокси ОРАп-3; 17-гидрокси ОРАп-3; 7,17дигидрокси ОРАп-3; 10,17-дигидрокси ОРАп-3; 8,14-дигидрокси ОРАп-3; 16,17-дигидрокси ОРАп-3; 13,20-дигидрокси ОРАп-3; 10,20-дигидрокси ОРАп-3 и 7,16,17-тригидрокси ОРАп-3 или ее аналога, производного или соли.
7. Изолированный докозаноид докозатетраеновой кислоты (ОТАп-6).
8. Изолированный докозаноид по п.7, в котором докозаноидом является К- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из моногидроксипроизводных ОТАп-6, дигидроксипроизводных ЭТАп-6 и тригидроксипроизводных ОТАп-6.
9. Изолированный докозаноид по п.8, в котором докозаноидом является К- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из 7-гидрокси ЭТА п-6; 10-гидрокси ЭТА п-6; 13-гидрокси ЭТАп-6; 17-гидрокси ЭТАп-6; 7,17-дигидрокси ЭТАп-6; 10,17-дигидрокси ЭТАп-6; 16,17-дигидрокси ЭТАп-6 и 7,16,17-тригидрокси ЭТАп-6 или ее аналога, производного или соли.
10. Изолированный докозаноид С22 полиненасыщенной жирной кислоты, в котором докозаноидом является К- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из 4,5-эпокси-17-гидрокси ЭРА; 7,8-эпокси ОНА; 10,11-эпокси ОНА; 13,14-эпокси ОНА; 19,20-эпокси ОНА; 13,14-дигидрокси ОНА; 16,17-дигидрокси ЭТАп-6; 7,16,17-тригидрокси ЭТАп-6; 4,5,17-тригидрокси ЭТАп-6; 7,16,17тригидрокси ЭТАп-3; 16,17-дигидрокси ЭТАп-3; 16,17-дигидрокси ОТКАп-6; 7,16,17-тригидрокси ОТКАп-6; 4,5-дигидрокси ЭТАп-6 и 10,16,17-тригидрокси ОТКАп-6 или ее аналога, производного или соли.
11. Композиция, включающая по крайней мере один докозаноид, заявленный в любом одном из пп.1-10.
12. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что композиция является терапевтической композицией.
13. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что композиция является питательной композицией.
14. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что композиция является косметической композицией.
15. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что она дополнительно включает аспирин.
16. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что она дополнительно включает соединение, выбранное из группы, состоящей из ОРАп-6, ОРАп-3, ОТАп-6, ОНА, ЕРА, оксилипинового производного ОНА и оксилипинового производного ЕРА.
17. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что она дополнительно включает по крайней мере один агент, выбранный из группы, состоящей из статина, нестероидного противовоспалительного агента, антиоксиданта и нейрозащитного агента.
18. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что она дополнительно включает фармацевтически приемлемый носитель.
19. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что она включает масло, выбранное из группы, состоящей из микробного масла, масла семян растений и масла водных животных.
20. Масло, включающее по крайней мере около 10 мкг докозаноида на грамм масла.
21. Масло по п.20, отличающееся тем, что оно включает по крайней мере около 20 мкг докозаноида на грамм масла.
22. Масло по п.20, отличающееся тем, что оно включает по крайней мере около 50 мкг докозаноида на грамм масла.
23. Масло по п.20, отличающееся тем, что оно включает по крайней мере около 100 мкг докозаноида на грамм масла.
24. Масло по любому из пп.20-23, отличающееся тем, что докозаноид выбран из полиненасыщенной жирной кислоты, выбранной из группы, состоящей из докозатетраеновой кислоты (ОТАп-6), докозапентаеновой кислоты (ОРАп-6), докозапентаеновой кислоты (ЭРАп-3), докозагексаеновой кислоты (ОНА) и эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА).
25. Масло по любому из пп.20-23, отличающееся тем, что докозаноид выбран из полиненасыщенной жирной кислоты, выбранной из группы, состоящей из докозатетраеновой кислоты (ОТАп-6), докозапентаеновой кислоты ЩРАп-6) и докозапентаеновой кислоты (ОРАп-3).
26. Масло по любому из пп.20-23, отличающееся тем, что докозаноид выбран из докозапентаеновой кислоты (ОРАп-6).
27. Масло по п.26, отличающееся тем, что докозаноидом является К- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из моногидроксипроизводных ОРАп-6, дигидроксипроизводных ЭРАп-6 и тригидроксипроизводных ЭРАп-6.
28. Масло по п.26, отличающееся тем, что докозаноидом является К- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из 7-гидрокси ЭРАп-6; 8-гидрокси ЭРАп-6; 10-гидрокси ЭРАп-6; 11гидрокси ЭРАп-6; 13-гидрокси ЭРАп-6; 14-гидрокси ЭРАп-6; 17-гидрокси ЭРАп-6; 7,17-дигидрокси
- 37 010802
ΌΡΑη-6; 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-6; 13,17-дигидрокси ΌΡΑη-6; 7,14-дигидрокси ΌΡΑη-6; 8,14дигидрокси ΌΡΑη-6; 16,17-дигидрокси ΌΡΑη-6; 4,5-дигидрокси ΌΡΑη-6; 7,16,17-тригидрокси ΌΡΑη-6 и
4.5.17- тригидрокси ΌΡΑη-6 или ее аналога, производного или соли.
29. Масло по любому из пп.20-23, отличающееся тем, что докозаноид выбран из докозапентаеновой кислоты (ΌΡΑη-3).
30. Масло по п.29, отличающееся тем, что докозаноидом является В- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из моногидроксипроизводных ΌΡΑη-3, дигидроксипроизводных ΌΡΑη-3 и тригидроксипроизводных ΌΡΑη-3.
31. Масло по п.29, отличающееся тем, что докозаноидом является В- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из 7-гидрокси ΌΡΑη-3; 10-гидрокси ΌΡΑη-3; 11-гидрокси ΌΡΑη-3; 13гидрокси ΌΡΑη-3; 14-гидрокси ΌΡΑη-3; 16-гидрокси ΌΡΑη-3; 17-гидрокси ΌΡΑη-3; 7,17-дигидрокси ΌΡΑη-3; 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-3; 8,14-дигидрокси ΌΡΑη-3; 16,17-дигидрокси ΌΡΑη-3; 13,20дигидрокси ΌΡΑη-3; 10,20-дигидрокси ΌΡΑη-3 и 7,16,17-тригидрокси ΌΡΑη-3 или ее аналога, производного или соли.
32. Масло по любому из пп.20-23, отличающееся тем, что докозаноид выбран из докозатетраеновой кислоты (ΌΤΑη-6).
33. Масло по п.32, отличающееся тем, что докозаноидом является В- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из моногидроксипроизводных ΌΤΑη-6, дигидроксипроизводных ΌΤΑη-6 и тригидроксипроизводных ΌΤΑη-6.
34. Масло по п.32, отличающееся тем, что докозаноидом является В- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из 7-гидрокси ΌΤΑη-6; 10-гидрокси ΌΤΑη-6; 13-гидрокси ΌΤΑη-6; 17гидрокси ΌΤΑη-6; 7,17-дигидрокси ΌΤΑη-6; 10,17-дигидрокси ΌΤΑη-6; 16,17-дигидрокси ΌΤΑη-6 и
7.16.17- тригидрокси ΌΤΑη-6 или ее аналога, производного или соли.
35. Масло по любому из пп.20-34, отличающееся тем, что масло выбрано из группы, состоящей из микробного масла, масла семян растений и масла водных животных.
36. Композиция, включающая масло, заявленное в любом из пп.20-35.
37. Композиция по п.36, отличающаяся тем, что она является терапевтической композицией.
38. Композиция по п.36, отличающаяся тем, что она является питательной композицией.
39. Композиция по п.36, отличающаяся тем, что она является косметической композицией.
40. Композиция, включающая полиненасыщенную жирную кислоту с длинной цепью, выбранную из группы, состоящей из ΌΡΑη-6, ΌΡΑη-3, и ΌΤΑη-6, и фармацевтически или питательно приемлемого носителя.
41. Композиция по п.40, отличающаяся тем, что она дополнительно включает аспирин.
42. Композиция по п.40, отличающаяся тем, что она дополнительно включает фермент, который катализирует получение докозаноидов из указанной ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 или ΌΡΑη-3.
43. Способ предотвращения или снижения по крайней мере одного симптома воспаления или нейродегенерации у индивидуума, включающий введение индивидууму, который подвержен риску, или которому поставлен диагноз, или который подозревается в наличии у него воспаления или нейродегенерации или состояния или заболевания, связанных с ними, агента, выбранного из группы, состоящей из ΌΡΑη-6, ΌΡΑη-3, оксилипинового производного ΌΡΑη-6 и оксилипинового производного ΌΡΑη-3, для снижения по крайней мере одного симптома воспаления или нейродегенерации у индивидуума.
44. Способ по п.43, отличающийся тем, что агент является эффективным для снижения продуцирования фактора некроза опухоли-α (ΤΝΓ-α) Т лимфоцитами.
45. Способ по п.43, отличающийся тем, что агент является эффективным для снижения миграции нейтрофилов и макрофагов в участок воспаления.
46. Способ по п.43, отличающийся тем, что агент является эффективным для снижения продуцирования у индивидуума интерлейкина-1 β (ΙΌ-β).
47. Способ по п.43, отличающийся тем, что агент является эффективным для снижения у индивидуума макрофагового хемотактического протеина-1 (МСР-1).
48. Способ по п.43, отличающийся тем, что он включает дополнительно введение индивидууму по крайней мере одной омега-3 жирной кислоты с длинной цепью и/или ее оксилипинового производного.
49. Способ по п.48, отличающийся тем, что омега-3 жирная кислота выбрана из группы, состоящей из ΌΗΑ и ЕРА.
50. Способ по п.43, отличающийся тем, что ΌΡΑη-6 или ΌΡΑη-3 предоставляется в одной из следующих форм: в виде триглицерида, содержащего ΌΡΑη-6 или ΌΡΑη-3, в виде фосфолипида, содержащего ΌΡΑη-6 или ΌΡΑη-3, в виде свободной жирной кислоты, в виде этилового или метилового эфира ΌΡΑη-6 или ΌΡΑη-3.
51. Способ по п.43, отличающийся тем, что ΌΡΑη-6, или ΌΡΑη-3, или ее оксилипиновое производное предоставляется в форме микробного масла, животного масла или растительного масла, которое происходит из масла семян растений, которое было подвержено генетической модификации с получением полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью.
- 38 010802
52. Способ по п.43, отличающийся тем, что оксилипиновое производное получают с помощью ферментативного превращения ΌΡΑη-6 или ΌΡΑη-3 в ее оксилипиновое производное.
53. Способ по п.43, отличающийся тем, что оксилипиновое производное синтезируют химическим путем бе ηονο.
54. Способ по п.43, отличающийся тем, что оксилипиновое производное выбирают из группы, состоящей из К-эпимеров моногидроксипродуктов ΌΡΑη-6, 8-эпимеров моногидроксипродуктов ΌΡΑη-6, К-эпимеров моногидроксипродуктов ΌΡΑη-3, 8-эпимеров моногидроксипродуктов ΌΡΑη-3, К-эпимеров дигидроксипродуктов ΌΡΑη-6, 8-эпимеров дигидроксипродуктов ΌΡΑη-6, К-эпимеров дигидроксипродуктов ΌΡΑη-3, 8-эпимеров дигидроксипродуктов ΌΡΑη-3, К-эпимеров тригидроксипродуктов ΌΡΑη-6, 8-эпимеров тригидроксипродуктов ΌΡΑη-6, К-эпимеров тригидроксипродуктов ΌΡΑη-3 и 8-эпимеров тригидроксипродуктов ΌΡΑη-3.
55. Способ по п.43, отличающийся тем, что оксилипиновым производным является К- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из 7-гидрокси ΌΡΑη-6; 8-гидрокси ΌΡΑη-6; 10-гидрокси ΌΡΑη-6; 11-гидрокси ΌΡΑη-6; 13-гидрокси ΌΡΑη-6; 14-гидрокси ΌΡΑη-6; 17-гидрокси ΌΡΑη-6; 7,17дигидрокси ΌΡΑη-6; 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-6; 13,17-дигидрокси ΌΡΑη-6; 7,14-дигидрокси ΌΡΑη-6; 8,14-дигидрокси ΌΡΑη-6; 16,17-дигидрокси ΌΡΑη-6; 4,5-дигидрокси ΌΡΑη-6; 7,16,17-тригидрокси ΌΡΑη6 и 4,5,17-тригидрокси ΌΡΑη-6, или ее аналога, производного или соли.
56. Способ по п.43, отличающийся тем, что оксилипиновым производным является К- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из 7-гидрокси ΌΡΑη-3; 10-гидрокси ΌΡΑη-3; 11гидрокси ΌΡΑη-3; 13-гидрокси ΌΡΑη-3; 14-гидрокси ΌΡΑη-3; 16-гидрокси ΌΡΑη-3; 17-гидрокси ΌΡΑη-3;
7,17-дигидрокси ΌΡΑη-3; 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-3; 8,14-дигидрокси ΌΡΑη-3; 16,17-дигидрокси ΌΡΑη3; 13,20-дигидрокси ΌΡΑη-3; 10,20-дигидрокси ΌΡΑη-3 и 7,16,17-тригидрокси ΌΡΑη-3 или ее аналога, производного или соли.
57. Способ по п.43, отличающийся тем, что агент выбран из группы, состоящей из 17-гидрокси ΌΡΑη-6 и 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-6, или ее производного или аналога.
58. Способ по п.43, отличающийся тем, что агентом является 17-гидрокси ΌΡΑη-6 или ее производное или аналог.
59. Способ по п.43, отличающийся тем, что агентом является 10,17-дигидрокси ΌΡΑη-6 или ее производное или аналог.
60. Способ по п.43, отличающийся тем, что агентом является ΌΡΑη-6.
61. Способ по п.43, отличающийся тем, что агентом является ΌΡΑη-3.
62. Способ по любому из пп.43-61, отличающийся тем, что он включает дополнительно введение индивидууму аспирина.
63. Способ по любому из пп.43-61, отличающийся тем, что он включает дополнительно введение по крайней мере одного агента, выбранного из группы, состоящей из статина, нестероидного противовоспалительного агента, антиоксиданта и нейрозащитного агента.
64. Способ получения докозаноидов, отличающийся тем, что он включает химический синтез докозаноида, заявленного в любом из пп.1-10.
65. Способ получения докозаноидов, отличающийся тем, что он включает каталитическое получение докозаноидов путем контактирования ΌΡΑη-6 субстрата, ΌΤΑη-6 субстрата или ΌΡΑη-3 субстрата с ферментом, который катализирует получение докозаноидов из указанного ΌΡΑη-6 субстрата, указанного ΌΤΑη-6 субстрата или указанного ΌΡΑη-3 субстрата.
66. Способ получения докозаноидов, отличающийся тем, что он включает культивирование микроорганизмов, продуцирующих полиненасыщенную жирную кислоту с длинной цепью (ΌΟΡυΡΑ), или выращивание ^СΡϋΡΑ-продуцирующих растений, которые генетически модифицированы для сверхэкспрессии фермента, который катализирует получение докозаноидов из ΌΟΡυΡΑ с 22 углеродами, с получением указанных докозаноидов.
67. Способ получения докозаноидов, отличающийся тем, что он включает контактирование полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью (ΌΟΡυΡΑ), продуцируемых ^СΡϋΡΑ-продуцирующими микроорганизмами, ^СΡϋΡΑ-продуцирующими растениями или ^СΡϋΡΑ-продуцирующими животными, с ферментом, который катализирует превращение указанных ΌΟΡυΡΑ в докозаноиды.
68. Способ по любому из пп.65-67, отличающийся тем, что фермент выбирают из группы, состоящей из липоксигеназы, циклооксигеназы и цитохром Р450 фермента.
69. Способ по любому из пп.65-67, отличающийся тем, что фермент выбирают из группы, состоящей из 12-липоксигеназы, 5-липоксигеназы, 15-липоксигеназы, циклооксигеназы-2, гемоглобина альфа 1, гемоглобина бета, гемоглобина гамма А, ΟΥΡ4Α11, ΟΥΡ4Β1, ΟΥΡ4Ρ11, ΟΥΡ4Ρ12, ΟΥΡ4Ρ2, ΟΥΡ4Ρ3, ΟΥΡ4Ρ8, ΟΥΡ4ν2, ΟΥΡ4Χ1, ΟΥΡ41, ΕΥΡ2Ι2, ΟΥΡ2Ο8, тромбоксан А синтазы 1, простагландин 12 синтазы и простациклин синтазы.
70. Способ по п.66 или 67, отличающийся тем, что ΌΟΡυΡΑ выбирают из группы, состоящей из ΌΡΑη-6, ΌΤΑη-6 и ΌΡΑη-3.
71. Способ по п.66 или 67, отличающийся тем, что ^СΡϋΡΑ-продуцирующие микроорганизмы или ^СΡϋΡΑ-продуцирующие растения генетически модифицированы для получения ΌΟΡυΡΑ.
- 39 010802
72. Способ по п.бб или б7, отличающийся тем, что ΕίΡυΕΑ-продуцирующие микроорганизмы эндогенно продуцируют ΕίΡυΕΑδ.
73. Способ по п.72, отличающийся тем, что ΕίΡυΕΑ-продуцирующими микроорганизмами являются Τ1ιπιι.151οΗΜπ65.
74. Способ обогащения масла по крайней мере одним оксилипином, происходящим из ΕίΡυΕΑ, или стабилизации указанного оксилипина в масле, отличающийся тем, что включает культивирование ΕίΡυΕΑ-продуцирующего микроорганизма с соединением, которое усиливает ферментативную активность фермента, который катализирует превращение ΕίΡυΕΑ в оксилипины.
75. Способ по п.74, отличающийся тем, что соединение стимулирует экспрессию фермента.
76. Способ по п.74, отличающийся тем, что соединение усиливает или инициирует автоокисление ΕίΡυΕΑ.
77. Способ по п.74, отличающийся тем, что соединением является ацетилсалициловая кислота.
78. Способ обогащения масла в отношении присутствия по крайней мере одного оксилипина, происходящего из ΕίΡυΕΑ, или стабилизации указанного оксилипина в масле, отличающийся тем, что включает разрушение микробов или семян масличных растений в присутствии фермента, который катализирует превращение ΕίΡυΕΑ в оксилипины, согласно которому микробы и семена масличных растений продуцируют по крайней мере одну ΕίΡυΕΑ.
79. Способ по п.78, отличающийся тем, что фермент выбирают из группы, состоящей из липоксигеназы, циклооксигеназы и цитохром Р450 фермента.
80. Способ по любому из пп.74-79, отличающийся тем, что дополнительно включает выделение и очистку оксилипинов.
81. Способ по п.80, отличающийся тем, что оксилипины также дополнительно перерабатывают и выделяют в виде производных оксилипинов или их солей.
82. Способ переработки масла, содержащего оксилипиновые производные ΕίΡυΕΑ, отличающийся тем, что он включает:
a) выделение или регенерацию масла, содержащего оксилипиновые производные ΕίΡυΕΑ, продуцируемые микробным, растительным или животным источником; и
b) рафинирование масла с использованием процесса, который сводит до минимума удаление свободных жирных кислот из масла, давая масло, которое сохраняет оксилипиновые производные ΕίΡυΕΑδ.
83. Способ по п.82, отличающийся тем, что животным является водное животное.
84. Способ по п.82, отличающийся тем, что животным является рыба.
85. Способ по п.82, отличающийся тем, что растением является растение с масличными семенами (масличные культуры растений).
86. Способ по п.82, отличающийся тем, что микробным источником является Τ1ιπιιι51οΗι\·Ιπ6.
87. Способ по любому из пп.82-8б, отличающийся тем, что стадия рафинирования включает экстракцию масла спиртом, смесью спирт:вода или органическим растворителем.
88. Способ по любому из пп.82-8б, отличающийся тем, что стадия рафинирования включает экстракцию масла неполярным органическим растворителем.
89. Способ по любому из пп.82-8б, отличающийся тем, что стадия рафинирования включает экстракцию масла спиртом или смесью спирт:вода.
90. Способ по любому из пп.82-89, отличающийся тем, что стадия рафинирования дополнительно включает фильтрование с охлаждением, отбеливание, дополнительное фильтрование с охлаждением и дезодорирование масла.
91. Способ по любому из пп.82-89, отличающийся тем, что стадия рафинирования дополнительно включает отбеливание и дезодорирование масла в отсутствие стадий фильтрования при охлаждении.
92. Способ по любому из пп.82-89, отличающийся тем, что стадия рафинирования дополнительно включает дезодорирование масла в отсутствие стадий фильтрования при охлаждении или отбеливании.
93. Способ по любому из пп.82-8б, отличающийся тем, что дополнительно включает добавление к маслу антиоксиданта.
94. Способ по любому из пп.82-8б, отличающийся тем, что стадия рафинирования может включать приготовление масла в виде эмульсии.
95. Способ по любому из пп.82-89, отличающийся тем, что масло дополнительно обрабатывают с помощью контактирования с ферментом, который катализирует превращение ΕίΡυΕΑ в оксилипины.
96. Способ по п.95, отличающийся тем, что фермент выбран из группы, состоящей из липоксигеназы, циклооксигеназы и цитохром Р450 фермента.
97. Способ по п.95, отличающийся тем, что фермент иммобилизован на субстрате.
98. Способ по любому из пп.82-97, отличающийся тем, что дополнительно включает стадию отделения оксилипиновых производных ΕίΡυΕΑ в масле от ΕίΡυΕΑ.
99. Способ по п.98, отличающийся тем, что стадию отделения осуществляют с помощью хроматографии.
100. Способ по п.98, отличающийся тем, что он дополнительно включает добавление указанных от
- 40 010802 деленных ЬСРИРА оксилипинов к маслу или к композиции.
101. Способ переработки масла, содержащего оксилипиновые производные ЬСРИРА, отличающийся тем, что он включает:
a) регенерацию масла, содержащего оксилипиновые производные ЬСРИРА, продуцируемые с помощью микробного, растительного или животного источника;
b) рафинирование масла и
c) отделение ЬСРИРА оксилипинов от ЬСРИРА в масле.
102. Способ по п.101, отличающийся тем, что дополнительно включает, перед стадией (с), стадию превращения ЬСРИРАк в масле в ЬСРИРА оксилипины с помощью химического или биологического процесса.
103. Способ по п.101 или 102, отличающийся тем, что способ дополнительно включает добавление к продукту указанных отделенных ЬСРИРА оксилипинов.
104. Способ предотвращения или снижения по крайней мере одного симптома воспаления или нейродегенерации у индивидуума, отличающийся тем, что он включает введение пациенту, который подвержен риску, или которому поставлен диагноз, или который подозревается в наличии у него воспаления или нейродегенерации или состояния или заболевания, связанных с ними, агента, выбранного из группы, состоящей из БТАи-б и оксилипинового производного БТАи-б, для снижения по крайней мере одного симптома воспаления или нейродегенерации у индивидуума.
105. Способ по п.104, отличающийся тем, что агентом является К- или 8-эпимер докозаноида, выбранного из группы, состоящей из моногидроксипроизводных БТАи-б, дигидроксипроизводных БТАи-б и тригидроксипроизводных БТАи-б.
106. Способ по п.104, отличающийся тем, что агентом является К- или 8-эпимер докозаноида, выбранный из группы, состоящей из 7-гидрокси БТАи-б; 10-гидрокси БТАи-б; 13-гидрокси БТАи-б; 17гидрокси БТАи-б; 7,17-дигидрокси БТАи-б; 10,17-дигидрокси БТАи-б; 1б,17-дигидрокси БТАи-б и
7,1б,17-тригидрокси БТАи-б или ее аналога, производного или соли.
107. Организм, включающий РИРА РК8 путь или траекторию, в котором(ой) организм генетически трансформирован для экспрессии фермента, который превращает ЬСРИРА в оксилипин.
108. Организм по п.107, отличающийся тем, что организм выбран из группы, состоящей из растений и микроорганизмов.
109. Организм по п.107, отличающийся тем, что организмом являются семена масличных растений, которые генетически модифицированы для экспрессии РИРА РК8 траектории для производства полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью.
110. Организм по п.107, отличающийся тем, что организмом является микроорганизм.
111. Организм по п.110, отличающийся тем, что микроорганизм включает эндогенную РИРА РК8 траекторию.
112. Организм по п.107, отличающийся тем, что фермент выбран из группы, состоящей из липоксигеназы, циклооксигеназы и цитохром Р450 фермента.
EA200701100A 2004-11-19 2005-11-21 Оксилипины из полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью и способы их получения и применения EA010802B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US62984204P 2004-11-19 2004-11-19
US72903805P 2005-10-21 2005-10-21
PCT/US2005/042462 WO2006055965A2 (en) 2004-11-19 2005-11-21 Oxylipins from long chain polyunsaturated fatty acids and methods of making and using the same

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200701100A1 EA200701100A1 (ru) 2007-10-26
EA010802B1 true EA010802B1 (ru) 2008-12-30

Family

ID=36407879

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200701100A EA010802B1 (ru) 2004-11-19 2005-11-21 Оксилипины из полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью и способы их получения и применения

Country Status (13)

Country Link
US (2) US7884131B2 (ru)
EP (1) EP1824809A4 (ru)
JP (1) JP2008520739A (ru)
KR (1) KR20070090928A (ru)
CN (1) CN101102988B (ru)
AU (1) AU2005306320B2 (ru)
BR (1) BRPI0516803A (ru)
CA (1) CA2588166A1 (ru)
EA (1) EA010802B1 (ru)
IL (1) IL183246A0 (ru)
MX (1) MX2007006049A (ru)
NZ (1) NZ555394A (ru)
WO (1) WO2006055965A2 (ru)

Families Citing this family (61)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090318394A1 (en) * 2004-11-19 2009-12-24 Julie Nauroth Long Chain Polyunsaturated Fatty Acids and Methods of Making and Using the Same
US7893106B2 (en) * 2004-11-19 2011-02-22 Martek Biosciences, Corporation Oxylipins from stearidonic acid and γ-linolenic acid and methods of making and using the same
KR101870626B1 (ko) * 2005-07-08 2018-06-26 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 치매 및 치매-전단계와 관련된 용태의 치료를 위한 다중불포화 지방산
US8273792B2 (en) * 2005-10-03 2012-09-25 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Anti-inflammatory actions of neuroprotectin D1/protectin D1 and it's natural stereoisomers
US20090320148A1 (en) * 2006-01-31 2009-12-24 Martek Biosciences Corporation Oxylipins from stearidonic acid and gamma-linolenic acid and methods of making and using the same
GB0604647D0 (en) * 2006-03-08 2006-04-19 Shchepinov Mikhail Stabilized food supplements and their derivatives
AU2007243282A1 (en) * 2006-04-28 2007-11-08 Resolvyx Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of cardiovascular disease
CN101528218A (zh) * 2006-07-19 2009-09-09 雷索维克斯药品公司 治疗粘膜炎的组合物和方法
WO2008057283A2 (en) * 2006-10-26 2008-05-15 Resolvyx Pharmaceuticals, Inc. Use of resolvins for inhibition of bone loss
WO2008070129A2 (en) * 2006-12-05 2008-06-12 Resolvyx Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of inflammatory disease
US20110190389A1 (en) * 2007-02-20 2011-08-04 Linda Arterburn Oxylipins from long chain polyunsaturated fatty acids and methods of making and using the same
NZ579852A (en) * 2007-03-23 2012-03-30 Novartis Ag Use of a masked or coated copper salt for the treatment of macular degeneration
US20100159540A1 (en) * 2007-03-26 2010-06-24 Ana Rodriguez Synthesis of resolvins and intermediates, compounds prepared thereby, and uses thereof
US8324277B2 (en) 2007-08-01 2012-12-04 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Nitrated-fatty acids modulation of type II diabetes
WO2009038671A2 (en) * 2007-09-14 2009-03-26 Resolvyx Pharmaceuticals, Inc. Oxylipin compounds for treating autoimmune diseases
AU2008312006B2 (en) * 2007-10-12 2013-12-12 Resolvyx Pharmaceuticals, Inc. Omega-3 fatty acids, hydroxy polyunsaturated fatty acids, lipoxin compounds, or oxyliptin compounds for the treatment of ophthalmic conditions
US20110027841A1 (en) * 2007-12-21 2011-02-03 Martek Biosciences Corporation Method for preparation of oxylipins
EP2280928B1 (en) 2008-05-01 2018-07-25 Complexa Inc. Vinyl substituted fatty acids
US8686038B2 (en) 2008-06-19 2014-04-01 The Univsersity of Utah Research Foundation Use of nitrated lipids for treatment of side effects of toxic medical therapies
US20140024713A1 (en) 2008-06-19 2014-01-23 University Of Utah Research Foundation Use of nitrated lipids for treatment of side effects of toxic medical therapies
EP2344441B1 (en) * 2008-09-16 2016-02-17 The Brigham And Women's Hospital Inc. 7,14-dihydroxy-docosahexaenoic acid compounds
CN102245176B (zh) * 2008-10-31 2015-05-27 脂质医药有限公司 用作药物的脂肪酸
WO2010095706A1 (ja) * 2009-02-20 2010-08-26 国立大学法人東京大学 新規抗炎症性化合物
ES2345241B1 (es) * 2009-03-16 2011-09-08 Lipopharma Therapeutics Uso de 2-hidroxiderivados de acidos grasos poliinsaturados como medicamentos.
PT2429317T (pt) * 2009-04-17 2016-07-22 Natac Pharma S L Composições ricas em ácidos gordos ómega-3 com um teor baixo de ácido fitânico
WO2011014261A1 (en) * 2009-07-31 2011-02-03 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Fatty acids as anti-inflammatory agents
SG178948A1 (en) 2009-09-01 2012-04-27 Catabasis Pharmaceuticals Inc Fatty acid niacin conjugates and their uses
USRE46608E1 (en) 2009-09-01 2017-11-14 Catabasis Pharmaceuticals, Inc. Fatty acid niacin conjugates and their uses
WO2011041639A2 (en) 2009-10-02 2011-04-07 Miller Raymond A Heteroatom containing substituted fatty acids
AU2010313249B2 (en) 2009-10-30 2016-05-19 Biojiva Llc Alleviating oxidative stress disorders with PUFA derivatives
WO2012023254A1 (ja) * 2010-08-19 2012-02-23 国立大学法人 東京大学 オメガ３系脂肪酸由来の新規抗炎症性代謝物
WO2012026106A1 (ja) * 2010-08-25 2012-03-01 国立大学法人 東京大学 光学活性な新規抗炎症性化合物及びその製造方法
NZ744990A (en) 2010-11-29 2019-10-25 Amarin Pharmaceuticals Ie Ltd Low eructation composition and methods for treating and/or preventing cardiovascular disease in a subject with fish allergy/hypersensitivity
US11712429B2 (en) 2010-11-29 2023-08-01 Amarin Pharmaceuticals Ireland Limited Low eructation composition and methods for treating and/or preventing cardiovascular disease in a subject with fish allergy/hypersensitivity
AU2012249921B2 (en) 2011-04-26 2017-06-08 Biojiva Llc Oxidative retinal diseases
CA2834343C (en) 2011-04-26 2021-10-12 Retrotope, Inc. Disorders implicating pufa oxidation
KR102020579B1 (ko) 2011-04-26 2019-09-10 레트로토프 인코포레이티드 에너지 프로세싱 손상 장애 및 미토콘드리아 결함
AU2012249917B2 (en) 2011-04-26 2017-06-15 Biojiva Llc Neurodegenerative disorders and muscle diseases implicating PUFAs
US9416118B2 (en) * 2011-06-10 2016-08-16 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Docosahexaenoyl ethanolamides
EP2744491B1 (en) 2011-08-19 2020-07-29 The University of Utah Research Foundation Combination therapy with nitrated lipids and inhibitors of the renin-angiotensin-aldosterone system
US10322118B2 (en) * 2012-04-10 2019-06-18 Trustees Of Dartmouth College Compounds and methods for inhibiting Cif virulence factor
ES2946109T3 (es) 2012-05-10 2023-07-12 Solutex Na Llc Aceites con actividad antiinflamatoria que contienen mediadores pro-resolutivos especializados naturales y sus precursores
EP2861227A4 (en) 2012-06-17 2016-01-27 Matinas Biopharma Inc OMEGA-3 PENTAIC ACID COMPOSITIONS AND METHODS OF USE
CA3050298A1 (en) 2012-08-24 2014-02-27 Sun Pharma Global Fze Ophthalmic formulation of polyoxyl lipid or polyoxyl fatty acid and polyalkoxylated alcohol for use in the treatment of ocular conditions
CA2930987A1 (en) 2013-01-11 2014-07-17 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Cyp450 lipid metabolites reduce inflammation and angiogenesis
WO2014130894A1 (en) * 2013-02-21 2014-08-28 University Of Southern California Compositions for the treatment of inflammatory diseases
WO2014143272A1 (en) * 2013-03-13 2014-09-18 Matinas Biopharma Inc. Omega-3 pentaenoic acid compositions and methods of use
JP6692745B2 (ja) * 2013-05-30 2020-05-13 ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッドＴｈｅ Ｂｒｉｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｏｍｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｉｎｃ． 新規ｎ−３イムノリソルベント：構造及び作用
JP7025212B2 (ja) * 2015-02-09 2022-02-24 ボード オブ スーパーバイザーズ オブ ルイジアナ ステート ユニバーシティ アンド アグリカルチュアル アンド メカニカル カレッジ 炎症性、変性及び神経変性疾患の治療のための化合物、組成物及び方法
EP3865484B1 (en) 2015-07-07 2023-11-08 H. Lundbeck A/S Pde9 inhibitor with imidazo pyrazinone backbone for treatment of peripheral diseases
EP3325438A4 (en) * 2015-07-20 2019-04-03 The Brigham and Women's Hospital, Inc. CLARIFICATION OF NEW RESOLVINS 13 SERIES INCREASING WITH ATORVASTATIN AND ELIMINATING INFECTIONS
WO2017041094A1 (en) 2015-09-03 2017-03-09 Solutex Na Llc Compositions comprising omega-3 fatty acids, 17-hdha and 18- hepe and methods of using same
BR112018006687A2 (pt) 2015-10-02 2018-10-09 Complexa Inc prevenção, tratamento e reversão de doenças utilizando montantes terapeuticamente eficazes de ácidos graxos ativos
FI3373976T3 (fi) 2015-11-10 2024-03-25 Sun Pharmaceutical Ind Ltd Topikaalisia formulaatioita ja niiden käyttöjä
US10730821B2 (en) 2015-11-23 2020-08-04 Retrotope, Inc. Site-specific isotopic labeling of 1,4-diene systems
WO2019104311A1 (en) * 2017-11-27 2019-05-31 Brown University Compositions and methods for suppressing neurological disease
WO2019104315A1 (en) * 2017-11-27 2019-05-31 Brown University Compositions and methods using lipids for treating neurological disease
WO2019203540A2 (ko) * 2018-04-16 2019-10-24 한국생명공학연구원 다중불포화지방산의 멀티-하이드록시 유도체 생산 방법
SG11202102872QA (en) 2018-09-24 2021-04-29 Amarin Pharmaceuticals Ie Ltd Methods of reducing the risk of cardiovascular events in a subject
KR20200042285A (ko) * 2018-10-15 2020-04-23 (주)아모레퍼시픽 피부장벽 강화용 조성물
WO2021168311A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Retrotope, Inc. Processes for isotopic modification of polyunsaturated fatty acids and derivatives thereof

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6174695B1 (en) * 1997-08-12 2001-01-16 The Regents Of The University Of California Epoxide hydrolase inhibitor methods

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS63238075A (ja) * 1987-03-24 1988-10-04 Mitsumaru Kagaku Kk 高度不飽和脂肪酸からのラクトン類の製造法
US4866046A (en) * 1988-05-31 1989-09-12 Top Laboratories, Inc. Low-dosage sublingual aspirin
US5102670A (en) * 1990-09-14 1992-04-07 Abraham Nader G Method for treating eye disorders by reducing 12(r)-hydroxyeicosatetraenoic acid and 12(r)-dihydroxyeicosatrienoic acid levels
JPH05286956A (ja) * 1992-04-06 1993-11-02 Nippon Suisan Kaisha Ltd ドコサペンタエン酸モノエポキシ体、及びその製造法
US6887901B1 (en) * 1993-06-15 2005-05-03 Brigham & Women's Hospital, Inc. Lipoxin compounds and their use in treating cell proliferative disorders
GB9403857D0 (en) * 1994-03-01 1994-04-20 Scotia Holdings Plc Fatty acid derivatives
CZ281096B6 (cs) * 1994-06-30 1996-06-12 Jindřich Mudr. Drsc. Mourek Tuková složka mléčné výživy a dětská výživa
US5955496A (en) * 1996-08-13 1999-09-21 The Regents Of The University Of California Dihydroxy-oxy-eicosadienoates
PL190181B1 (pl) * 1996-10-11 2005-11-30 Scarista Ltd Zastosowanie oleju zawierającego kwas eikozapentaenowy (KEP) i/lub kwas stearydonowy (KS) oraz preparat farmaceutyczny zawierający olej
DE19757414A1 (de) * 1997-12-23 1999-07-01 Nutricia Nv Fettmischung
JPH11209259A (ja) * 1998-01-20 1999-08-03 Noevir Co Ltd 皮膚化粧料
WO2000051444A1 (fr) * 1999-03-04 2000-09-08 Suntory Limited Utilisation d'une matiere contenant de l'acide docosapentaenoique
JP4474082B2 (ja) * 1999-07-07 2010-06-02 キリン協和フーズ株式会社 水酸化脂肪酸およびδ−ラクトン類の製造方法
DK1228026T3 (da) 1999-11-09 2004-04-05 Alcon Inc 15-Hydroxyicosatetraensyrerelaterede forbindelser og fremgangsmåde til anvendelse
EP1296923B3 (en) * 2000-02-16 2012-04-11 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Aspirin-triggered lipid mediators
DE10046541A1 (de) * 2000-09-19 2002-03-28 Knoll Ag Mechanisch stabile darreichungsformen, enthaltend Ubichinone
US7154022B2 (en) * 2000-10-06 2006-12-26 Board Of Trustees Operating Michigan State University Divinyl ether synthase gene, and protein and uses thereof
US20050129739A1 (en) * 2001-05-14 2005-06-16 Gerhard Kohn Production and use of a polar lipid-rich fraction containing omega-3 and/or omega-6 highly unsaturated fatty acids from microbes, genetically modified plant seeds and marine organisms
US7030159B2 (en) * 2001-12-18 2006-04-18 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Approach to anti-microbial host defense with molecular shields with EPA and DHA analogs
US7527935B2 (en) * 2002-03-19 2009-05-05 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation G-protein coupled receptor having eicosanoid as ligand and gene thereof
EP2022775B1 (en) * 2002-04-01 2014-10-15 University of Southern California Trihydroxy polyunsaturated eicosanoids
US7582785B2 (en) * 2002-04-01 2009-09-01 University Of Southern California Trihydroxy polyunsaturated eicosanoid derivatives
FR2843124B1 (fr) * 2002-08-02 2004-10-15 Goemar Lab Sa Procede de preparation d'acides gras polyinsatures libres et de leurs metabolites d'oxydation
EP2216318B1 (en) * 2002-08-12 2018-10-10 Brigham And Women's Hospital Resolvins: Biotemplates for therapeutic interventions
US20040166130A1 (en) * 2002-12-23 2004-08-26 L'oreal Lanolin-free cosmetic composition comprising a hydroxylated fatty acid aromatic ester
US7893106B2 (en) * 2004-11-19 2011-02-22 Martek Biosciences, Corporation Oxylipins from stearidonic acid and γ-linolenic acid and methods of making and using the same

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6174695B1 (en) * 1997-08-12 2001-01-16 The Regents Of The University Of California Epoxide hydrolase inhibitor methods

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0516803A (pt) 2008-09-23
KR20070090928A (ko) 2007-09-06
EP1824809A4 (en) 2010-03-03
WO2006055965A3 (en) 2006-11-30
US20110178047A1 (en) 2011-07-21
CN101102988B (zh) 2011-12-14
NZ555394A (en) 2010-07-30
MX2007006049A (es) 2007-07-24
CN101102988A (zh) 2008-01-09
AU2005306320B2 (en) 2011-09-08
US7884131B2 (en) 2011-02-08
US20060241088A1 (en) 2006-10-26
EP1824809A2 (en) 2007-08-29
IL183246A0 (en) 2007-08-19
WO2006055965A2 (en) 2006-05-26
CA2588166A1 (en) 2006-05-26
EA200701100A1 (ru) 2007-10-26
AU2005306320A1 (en) 2006-05-26
JP2008520739A (ja) 2008-06-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA010802B1 (ru) Оксилипины из полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью и способы их получения и применения
US20110190389A1 (en) Oxylipins from long chain polyunsaturated fatty acids and methods of making and using the same
US7893106B2 (en) Oxylipins from stearidonic acid and γ-linolenic acid and methods of making and using the same
Ward et al. Omega-3/6 fatty acids: alternative sources of production
Qi et al. Identification of a cDNA encoding a novel C18-Δ9 polyunsaturated fatty acid-specific elongating activity from the docosahexaenoic acid (DHA)-producing microalga, Isochrysis galbana
US20090318394A1 (en) Long Chain Polyunsaturated Fatty Acids and Methods of Making and Using the Same
CN102010324A (zh) 阿司匹林触发的脂质介体
AU2020270489A1 (en) Dihomo-gamma-linolenic acid-containing microbial oil and dihomo-gamma-linolenic acid-containing microbial biomass
JP7259034B2 (ja) 超長鎖脂肪酸組成物
Kannan et al. Microbial production of omega‐3 fatty acids: an overview
US20090320148A1 (en) Oxylipins from stearidonic acid and gamma-linolenic acid and methods of making and using the same
AU2011253846A1 (en) Oxylipins from long chain polyunsaturated fatty acids and methods of making and using the same
JP7250267B2 (ja) 脂質および脂肪酸組成物の製造方法、ならびに脂肪酸組成物
WO2024043787A1 (en) Cetoleic acid composition
de Figueiredo Rodrigues Industrial Production of Omega-3 Polyunsaturated Fatty Acids from Fish Oil and Microalgae
Rodrigues Industrial production of omega-3 polyunsaturated fatty acids from fish oil and microalgae

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AZ BY KZ KG MD TJ TM RU

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM