EA009712B1 - Способ получения радиосенсибилизирующего средства - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к лекарственным препаратам растительного происхождения, в частности к способу получения радиосенсибилизирующего средства из Artemisia glabella Kar. etKir. (полыни гладкой) и может быть использовано в медицине. Цель достигается тем, что в качестве радиосенсибилизирующего средства используется производное сесквитерпенового лактона - гидрохлорид 1(10)β-эпокси-13-диметиламино-5,7α,6,11β(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олид (1), синтезированный из 1 (10) β-эпокси-5,7α,6β(Н)-гвай-3(4), 11(13)-диен-6,12-олида (2), выделенного из полыни гладкой Artemisia glabella Kar. et Kir. с формулойЗаявляемый препарат не имеет побочных эффектов, хорошо переносится больными, не усиливает повреждающее действие лучевой терапии на нормальные ткани, обладает селективно радиосенсибилизирующим действием на опухоль. Данный препарат рекомендуется использовать при лучевой и химиолучевой терапии злокачественных опухолей.

Description

Изобретение относится к лекарственным препаратам растительного происхождения, в частности, к способу получения препарата из Аг!еш181а §1аЬе11а Каг. е! Κϊγ (полыни гладкой), обладающего радиосенсибилизирующим действием, и может быть использовано в медицине.

Цель достигается тем, что в качестве радиосенсибилизирующего средства исдользуется производное сесквитерпенового лактона - гидрохлорид 1(10) в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)ен-6,12-олид (1), синтезированный из 1(10) в-эпокси-5,7а,6в(Н)-гвай-3(4),11(13)-диен-6,12-олида (2), выделенного из полыни гладкой Аг!еш181а §1аЬе11а Каг. е! Κϊγ. с формулой

В литературе описаны методы хлороформной, спиртовой, водной экстракции растительного сырья полыни гладкой (Кагарлицкий А.Д., Адекенов С.М., Куприянов А.Н. Сесквитерпеновые лактоны растений Центрального Казахстана. - Алматы: Наука, 1987, 240 с). Количественный выход сескви-терпеновых лактонов из полыни гладкой при извлечении органическими растворителями обеспечивает экстракция хлороформом (0,34% в расчете на сухое сырье). Но способ хлороформной экстракции имеет существенные недостатки, так как хлороформ является дорогостоящим растворителем и обладает токсическим действием.

Технический результат заявляемого способа заключается в предварительном извлечении эфирного масла из Аг1еш181а §1аЬе11а Каг. е! Κϊγ. (полыни гладкой) при температуре 75°С, давлении - 0,6 кгс/см², времени перегонки с водяным паром - 3 ч, с последующей экстракцией растительного сырья жидким диоксидом углерода (СО₂) при давлении 150 ± 2 бар, температуре 60°С ± 0,5, времени экстракции - 3 ч, извлечением целевого вещества методом колоночной хроматографии при элюировании толуолом, с дальнейшей перекристаллизацией, аминированием и гидрохлорированием, с получением диметиламинопроизводного и с последующей перекристаллизацией из смеси спирт: этилацетат = 1:3 и лиофильной сушкой конечного продукта (субстанция) при температуре +65°С, продолжительности сушки 24 ч, конечной температурой субстанции +60°С.

Предлагаемый способ является экологически чистым, так как используется нетоксичный экстрагент жидкий диоксид и хроматографическое разделении очищенного СО₂-экстракта проводится толуолом. При СО2-экстракции выход целевого вещества в 2 раза выше, чем при экстракции хлороформом (табл. 1).

- 1 009712

Таблица 1. Количественный выход 1(10) в-эпокси-5,7а,6в(Н)-гвай-3(4), 11(13)-диен-6,12-олида при экстракции сырья различными экстрагентами

№	Вид экстракции	Выход суммы веществ в % на сухое сырье	Выход 1 (10) β-эпокси5.7а,бР(Н)-гвай -3(4). 11(13)- диен-6,12-олида в % на сухое сырье
1	Вода (температура 85-90°С; время 1 час)	1.5	0.002
2	Петролейный эфир : диэтиловый эфир (2:1) ( при комнатной температуре; время 24 часа)	3.2	0.002
3	Бензол (температура 50-55°С; время 2 часа)	3.4	Следовые количества
4	Эфир (при комнатной температуре; время 1 час)	4.8	0.11
5	Хлороформ (температура 50-55°С; время 2 часа)	6.7	0.34
6	Спирт (температура 50-55°С; время 1 час)	5.1	0.18
7	СО2 (давление - 150±2 бар, температура 60°С±0,5; время 3 часа)	11.5	0,7

Для обеспечения количественного выхода из сырья целевого вещества 1(10)в-эпокси-5,7а,6в(Н)гвай-3(4), 11(13)-диен-6,12-олида, с одной стороны, и организации безотходного производства обрабатываемого растительного сырья, с другой стороны, предварительно извлекают эфирное масло на установке УЭМ-Э. Эфирное масло полыни гладкой обладает противовоспалительным действием и антибактериальной активностью. Измельченную надземную часть (бутоны, цветочные корзинки, листья) полыни гладкой (до 10 кг) загружают в кассету, где оно при помощи вращающегося устройства распределяется по всему сечению кассеты. Перегонку с водяным паром проводят при температуре 75°С, давлении - 0,6 кгс/см². Время перегонки 3 ч. Выход эфирного масла 0,65%.

После предварительной отгонки эфирного масла за счет подачи пара при пониженной температуре под вакуумом удаляются компоненты летучей фракции, освобождается доступ растворителя к местам локализации сесквитерпенового лактона в сырье, вследствие чего увеличивается выход и чистота целевого вещества.

Предварительное удаление эфирных масел из полыни гладкой влияет на эффективность последующей СО₂-экстракции.

В шроте после СО₂-экстракции остаточное содержание 1(10)в-эпокси-5,7а,6в(Н)-гвай-3(4), 11(13)диен-6,12-олида (рис. 1) без удаления эфирных масел сравнительно выше причем, оно больше (0,8-1,5% от исходного количества вещества в сырье), чем в шроте с предварительным удалением эфирного масла (0,2-0,4% от исходного количества вещества в сырье).

- 2 009712

100Л2 120/55 130/55 140/55 160/55 180/55 давление бар/температура о С

Рис. 1. Остаточное количество 1(10) 3-эпокси-5,7а,63(Н)-гвай-3(4), 11(13)-диен-6,12-олида (в % от исходного количества вещества в сырье) в шроте после СО₂-экстракции (сырье без предварительного удаления эфирного масла)

Рис. 2. Остаточное количество 1(10) 3-эпокси-5,7а,63(Н)-гвай-3(4), 11(13)-диен-6,12-олида в шроте после СО2-экстракции (в % от исходного количества в сырье) (сырье после удаления эфирного масла)

Пример. Экстракцию растительного сырья осуществляют методом СО₂-экстракции. 9,8 кг сырья полыни гладкой после удаления эфирных масел загружают через люк экстрактора, после герметизации люка в экстрактор подается жидкий СО₂ при регулируемом давлении 150 ± 2 бар и температуре 60°С ± 0,5. Время экстракции 3 ч. Выход густого экстракта 340 г.

Густой экстракт накапливают до 1 кг.

Полученную сумму экстрактивных веществ очищают от балластных веществ. Для этого густой экстракт вносят в аппарат, снабженной рубашкой для обогрева, мешалкой, обратным холодильником, люком для разгрузки смолки и мытья аппарата, гильзой для термометра, двумя верхними и одним нижним штуцерами. В аппарат помещают 1000 г густого экстракта, вливают из мерника 2 л этилового спирта, подогретого до 60°С, в котором растворяют смолку при перемешивании. Для поддержания заданной температуры (60°С) в рубашку аппарата подается 1 л горячей воды. Затем из мерника в аппарат заливается подогретая до 70°С дистиллированная вода в объемном соотношении спирт-вода = 2:1. Смесь тщательно перемешивается в течение 30 мин и выдерживается при комнатной температуре без перемешивания в течение суток. На дно аппарата выпадают в осадок балластные вещества. Спустя сутки осадок взбалтывают мешалкой, и водно-спиртовый раствор отфильтровывается через керамический фильтр, встроенный в штуцер нижнего спуска. Процесс фильтрации осуществляется при помощи вакуума, создаваемого в сборнике, в котором собирается фильтрат. После окончания фильтрации вентиль нижнего спуска аппарата закрывают, в аппарат подают подогретый до 60°С спирт из мерника, в котором растворяют при перемешивании оставшийся после фильтрации балласт, добавляют горячую дистиллированную воду (70°С) при соотношении спирт:вода = 2:1. Весь вышеописанный процесс повторяется трижды. Полученный фильтрат упаривают на ротационном испарителе до 1/5 исходного объема. К оставшейся смеси добавляют этилацетат в соотношении 1:1. Смесь помещают в делительную воронку, нижний слой сливают, верхний спиртово-этилацетатный слой собирают отдельно. Экстракцию повторяют три раза. Объединенные спиртово-этилацетатные извлечения упаривают на роторном испарителе. Выход суммы экстрактивных веществ (смолка) 600 г.

Полученную смолку очищают методом хроматографии на индивидуальные компоненты на колонке с силикагелем марки КСК (размер частиц от 0,3 до 1 мм) при соотношении сумма-носитель = 1:20. Первую фракцию 10 мл не содержащую целевое вещество, получаемую при элюировании толуолом (воск, остаточное количество эфирных масел), собирают и используют для получения фракций эфирного масла

- 3 009712 полыни гладкой после СО₂- экстракции. При элюировании колонки толуолом выделяют кристаллизующуюся фракцию, которую переносят в термоустойчивую круглодонную колбу емкостью 10,0 л, элюент отгоняют, содержимое колбы растворяют в гексане при нагревании на водяной бане при соотношении вещество - растворитель = 1:10 и фильтруют под вакуумом. При охлаждении до комнатной температуры из фильтрата выделяют бесцветное кристаллическое вещество состава С1₅Н₁₈О₃, т.пл.100-102°С, /о/²⁰ _в+ 45° (с 0,3; хлороформ). Выход целевого вещества после полного удаления гексана составляет 210 г.

В ИК-спектре отмечены полосы поглощения при 1760 (карбонил γ-лактона), 1660 см^-1 (С=С). В УФспектре имеется максимум поглощения при 204 нм, (ε 19800), характеризующий экзоциклический метилен в сопряжении с карбонилом γ-лактонного цикла.

В масс-спектре присутствует пик молекулярного иона с небольшой интенсивностью т/ζ 246, что соответствует молекулярному весу. Наличие фрагмента с т/ζ 231 обусловлено потерей молекулярным ионом метильной группы при эпоксиде, как наименее прочно связанной с соседним атомом углерода по сравнению с метилом при двойной связи. Фрагменты с т/ζ 213 (М-СН₃-Н₂О)⁺, 203 (М-СН₃-СО)⁺, 185 (МСН3-Н2О-СО)⁺ подтверждают наличие лактонного карбонила и эпоксидной группы.

В спектре ПМР наблюдаются сигналы протонов метила при эпоксидной группе - синглет при 1,34 м.д., протонов метила при двойной связи - синглет при 1,94 м.д., протона Н-5 - дублет при 2,95 м.д. с КССВ 10 Гц, протонов экзометилена, сопряженного с карбонилом γ-лактона, - дублеты при 5,42 и 6,10 м.д. с КССВ 3 Гц каждый, винильного протона при 5,56 м.д. Характер расщепления сигнала лактонного протона (однопротонный триплет с центром при 3,97 м.д.) указывает на то, что у этого соединения лактонное кольцо расположено при С6-С7 основного скелета, а константа спин-спинового взаимодействия (КССВ 10 Гц) - на его транс-сочленение, расположение сигнала лактонного протона в слабом поле указывает на цис-соотношение между С₁₍₁₀₎- эпоксидным кольцом и Н-6.

На основании спектральных данных установлено (ИК-, ПМР-, С¹³ -ЯМР-, масс-), что выделенный сесквитерпеновый лактон имеет строение 1(10) в-эпокси-5,7а,6в(Н)-гвай-3(4), 11(13)-диен-6,12-олид.

Для получения водорастворимой формы данного лактона синтезируют гидрохлорид его диметиламинопроизводного - гидрохлорид 1(10) в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олид.

Для получения аминопроизводного данного соединения исходное вещество-1(10)в-эпокси5,7а,6в(Н)-гвай-3(4), 11(13)-диен-6,12-олид растворяют в спирте при соотношении 1:10. Затем в спиртовый раствор по каплям при перемешивании в течение 10 мин добавляют диметилкарбамид в мольном соотношении = целевое вещество: диметилкарбамид = 1: 1,62. После полной конверсии исходного вещества (в течение 25 мин) упаривают спирт на роторном испарителе. После кристаллизации остатка из смеси спирт: этилацетат = 1:3 получен 1(10) в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12олид с т. пл. 94,5-95,5°С; К._£ 0,25 (эфир).

Затем 1(10) в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олид растворяют в спирте и барботируют хлористым водородом до рН 5,35+0,05 (контроль по рН-метру). После окончания реакции спирт упаривают под вакуумом и добавляют этилацетат при соотношении 1:2. При этом выпадают кристаллы гидрохлорида 1(10) в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида. Раствор выпаривают под вакуумом до получения сухой кристаллической массы. Полученные кристаллы отфильтровывают на фильтре Шотта № 4. Кристаллы промывают этилацетатом до обесцвечивания маточного раствора. Конечное вещество сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре 60°С и давлении 5 мм рт.ст. до потери массы при высушивании не выше 0,5%. Высушенный конечный продукт (субстанция) используют для получения лиофилизированного препарата.

Получение гидрохлорида 1(10) в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида приведено на схеме (см. ниже).

Конечный продукт (субстанция) растворяют водой для инъекций из расчета: 2г сухого вещества 100 мл воды. Полученный 2%-ный раствор лиофилизируют следующим способом: фильтруют раствор через стерильный фильтр Миллипор, заправленный мембранными фильтрами 0,45 мкм; 0,2 мкм соответственно в стерильную стеклянную емкость. Раствор с помощью автомата «Роза -2» разливают в ампулы по 2 мл и сушат в лиофилизаторе ΕΖ-45. Для этого ампулы помещают в кассеты. Кассеты заворачивают в стерильную простыню и помещают в морозильный прилавок для закаливания при -40°С, не менее чем на 12 ч. Кассеты поступают на сушку. Через 2 ч после начала сушки включают подогрев полок. Полки нагревают постепенно до +60 (+5°С). Переход продукта с минусовой температуры на плюсовую происходит на 12-13-ом ч сушки. Конечная температура продукта не должна превышать +60°С. Продолжительность сушки 24 ч.

- 4 009712

Схема получения гидрохлорида 1(10) в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида

После лиофильной сушки ампулы запаивают на аппарате групповой запайки ампул «Роза-2». Ампулы герметизируют в атмосфере стерильного кислорода.

Радиосенсибилизирующую активность гидрохлорида 1(10) в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в(Н)гвай-3(4)-ен-6,12-олида определяют на трех видах опухолей - солидной карциноме Эрлиха линии ΕΕΌ, на меланоме В-16, карциноме легких Льюиса, привитых мышам с массой 20-24 г в мышцу голени, с использованием внутрибрюшинного введения. Арглабин вводят мышам по 5, 10, 15, 20 мг/кг в объеме 0,2 мл за 20-30 мин до начала облучения. Контрольную группу составляют животные, не получавшие гидрохлорид 1(10) βэпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11 в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида.

Облучение опухолей в дозах 20 и 25 г проведено на 9-й день после перевивки, когда диаметр голени составлял 8-11 мм. Измерения опухолей проводили трижды в неделю в двух взаимно перпендикулярных направлениях по максимальному диаметру голени, а также измеряли длину растущей опухоли. Результаты экспериментов представлены в виде отношения средних объемов новообразований в данной группе животных на день измерения к среднему объему на день облучения, который принят равным 1.

На рис. 3.1.1а показана динамика роста контрольных, необлученных новообразований, и облученных опухолей. На рис. 3.1.1б показана динамика изменения объема только у облученных новообразований, что позволяет лучше проводить сравнение объемом у опухолей. На рис. 3.1.2 представлена динамика гибели животных. Именно сопоставление данных на рис. 3.1.1а; 3.1.1б с рис. 3.1.2 позволяет составить полное представление о динамике роста опухолей, ибо гибель животного с наиболее крупным новообразованием приводит к тому, что у оставшихся животных снижается «средний» диаметр опухоли. Средний объем опухолей у контрольных животных вдруг снижается в конце срока наблюдения.

- 5 009712 νΐ/Уо

40,0 η	Δ
35,0	О
30,0	о
25,0	ч
20,0
15,0
10,0
5,0 -
0,01

о

Рис.3.1.1а. Динамика роста карциномы легкого Льюис мышей после локального гамма-облучения опухолей в дозе 20 Гр в комбинации с Арглабином, введенным внутрибрюшинно за полчаса до облучения.

Гр

10 15

Дни после облучения

Арглабин (5 мг/кг)+20 АрглабинЦО мг/кг )+2 .Цблучение 25 Гр

По результатам испытаний видно, что введение арглабина сенсибилизирует опухоли к облучению, причем эффект снижения скорости роста опухолей усиливается с увеличением количества введенного препарата. Такой же эффект в целом наблюдается и по увеличению продолжительности жизни животных.

νΐ/νο

Рис.3.1.16. Динамика роста карциномы легкого Льюис мышей после локального гамма-облучения опухолей в дозе 20 Гр в комбинации с Арглабином, введенным внутрибрюшинно за полчаса до облучения.

12

Δ Арглабин (5 мг/кг)+20 ф Арглабин (10 мг/кг)+20 Гр

О Арглабин (15 мг/кг)+20 Гр Ж Арглабин (20 мг/кг)+20 Гр

Облучение 25

Ιη

10 15

Дни после облучения

Рис. 3.1.2. Динамика гибели мышей с карциномой легкого Льюис после локального облучения на фоне внутрибрюшинного введения арглабина за полчаса до облучения

ЖАргл 5 мг/кг+Обл 20 Гр

Δ Аогл 10 мг/кг+Обл 20

Алгл 15 мг/кг+Обл 20

Алгл 20 мг/кг+Обл 20

Дни после облучения при доклинических испытаниях выявлено, что гидрохлорид 1(10)в-эпокси-13диметиламино-5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида при внутрибрюшинном введении в переносимых дозах усиливает лучевое поражение опухолей, проявляющееся в торможении роста опухолей и увеличеТаким образом,

- 6 009712 нии продолжительности жизни животных по сравнению с животными, не получавшими препарат. Эффект исследуемого препарата возрастает с повышением его концентрации.

Введение животным препарата не повышает тяжесть лучевых реакций нормальных тканей.

На основании вышеприведенных результатов экспериментальных доклинических исследований гидрохлорид 1(10) в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в,(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида обладает радиосенсибилизирующим действием и рекомендован для проведения клинических испытаний при лучевой терапии злокачественных опухолей.

Клинические испытания радиосенсибилизирующего действия 1(10) в-эпокси-13-диметиламино5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида проводились на 20 больных в возрасте от 33 до 66 лет с впервые установленным диагнозом - местнораспространенный рак молочной железы, получающих предоперационное химиолучевое лечение. Больные были разделены на 2 группы:

группа - исследуемая (лечение гидрохлоридом 1(10) в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в(Н)гвай-3(4)-ен-6,12-олидом);

группа- контрольная (без применения гидрохлорида 1(10) в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в (Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида)

Препарат вводится в виде 2% раствора (2 мл физраствора на 1 флакон препарата - 40 мг) за 15 мин до сеанса лучевой терапии через день в дозе 5 мг/кг веса внутривенно струйно, всего 15 введений.

Эффективность оценена у всех 20 больных, включенных в исследование. В табл. 2 представлены результаты предоперационного химиолучевого лечения в исследуемой и контрольной группах с использованием клинического и рентгенологического методов, которые сравнивались с исходными данными перед началом лечения. Клиническая оценка проводилась по динамике размеров опухоли в молочной железе и лимфоузлах. При мамографии оценивались размеры опухолевых узлов, степень инфильтрации молочной железы и отечность кожи.

Из табл. 2 видно, что полная и частичная регрессия опухоли достигнута у 19 из 20 (95,0%) больных, получавших лучевое лечение, проведенное на фоне гидрохлорида 1(10) в-эпокси-13-диметиламино- 5,7α, 6,11 β (Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида. Причем у 4 (20,0%) отмечена полная резорбция опухоли. В контрольной группе больных, получавших лучевое лечение без гидрохлорида 1(10) в-эпокси-13-диметиламино5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида. В контрольной группе полный и частичный эффект отмечен у 14 из 20 (70,0%) пациенток, из которых только в одном случае (5,0%) зарегистрирован полный эффект. Следует отметить тенденцию к увеличению вероятности полной регрессии опухоли у больных после лучевого лечения с 1(10) в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олидом.

Таблица 2. Степень регрессии опухоли после предоперационной химиолучевой терапии у больных раком молочной железы III стадии

Группы.	К-во больных	Эффект
Стабилизация	Частичный эффект	Полный эффект
Л Аг*	%		%	у^Ап	%
Исследуемая группа (с заявляемым препаратом)	20	1	5,0	15	75,0	4	20,0
Контрольная группа	20	6	30,0	13	65,0	1	5,0

После проведенного лечения всем пациенткам было произведено оперативное вмешательство - выполнена радикальная мастэктомия с сохранением грудных мышц.

Для более объективной оценки эффективности химиолучевого лечения при гистологическом исследовании операционного материала определялась степень лечебного патоморфоза в опухоли и в метастатически измененных лимфоузлах. Результаты гистологического исследования первичной опухоли представлены в табл. 3.

Как видно из табл. 3, при гистологическом исследовании полная морфологически подтвержденная регрессия первичной опухоли (лечебный патоморфоз IV степени - опухолевые клетки не обнаруживаются) достигнута у 2 пациенток исследуемой группы (10%). В контрольной группе IV степень патоморфоза не наблюдалась. III степень лечебного патоморфоза (некроз, фиброз, единичные дегенеративно измененные клетки рака) зафиксирована у 10 больных исследуемой группы (50%) и у 4 пациенток из группы контроля (20%). Таким образом, полный и выраженный противоопухолевый эффект по морфологическому критерию отмечен у 12 больных (60%), лечившихся с гидрохлоридом 1(10)в-эпокси-13диметиламино- 5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида, и у 20% в группе контроля, разница статистически достоверна (р<0,01).

- 7 009712

Таблица 3. Степень лечебного патоморфоза в первичной опухоли в больных раком молочной железы в 2-х группах

Группы	К-во больных	Степень патоморфоза
0	I	II	III	IV
Абе.	%	Абс.	%	Абс.	%	Абс.	%	Абс.	%
Исследуемая группа (арглабин)	20			1	5,0	7	35,0	10	50,0	2	10,0
Контрольная группа	20	2	10,0	6	30,0	8	40,0	4	20,0

Результаты гистологического исследования регионарных лимфоузлов представлены в табл. 4. Таблица 4. Степень лечебного патоморфоза в метастатически измененных регионарных лимфоузлах

Г руппы	К-во больных	Степень патоморфоза
0	I	II	III	IV
Абс.	%	Абс.	%	Абс.	%	Абс.	%	Абс.	%
Исследуемая группа (арглабин)	20	1	5,0	1	5,0	6	30,0	4	20,0	8	40,0
Контрольная группа	20	5	25,0	5	25,0	6	30,0	4	20,0

Как видно из табл. 4, частота полного лечебного патоморфоза (IV степени) была значительно выше в группе с исследуемым препаратом (44,4%) по сравнению с контрольной (5,6%). Частота выраженного патоморфоза (III степени) также была выше при использовании с заявляемым препаратом (22,2%), чем без него (5,6%). И наоборот, случаи с отсутствием (0 степень) или слабым (I степень) патоморфозом преобладали в контрольной группе (22,2% и 38,9% соответственно) по сравнению с основной (5,6% и 0% соответственно).

Таким образом, при метастастазах рака молочной железы в регионарные лимфоузлы проведение лучевой терапии на фоне введений заявляемого препарата достоверно улучшило непосредственные результаты лечения: частота лечебного патоморфоза Μ^ν степени в метастатически измененных лимфоузлах составила 66,6% и была достоверно выше, чем в контрольной группе (11,2%; р<0,005).

Гематологическая токсичность химиолучевого лечения была также умеренной, однако более выраженной у больных, лечившихся с включением гидрохлорида 1(10) 3-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,113(Н)-гвай-3(4)ен-6,12-олида по сравнению с контрольной группой, результаты представлены в табл. 5.

Таблица 5. Изменение показателей крови у больных РМЖ в основной и контрольной группах (критерии ВОЗ)

Изменения показателей крови	Группы
Лучевая терапия на фоне арглабина	Лучевая терапия
Абс.	%	Абс.	%
Лейкопения I степени II степени	7 О	35,0 1 С А ι	4 э υ	20,0 1 с с
Тромбоцитопения I степени	1	5,0
Анемия I степени II степени	3 1	15,0 5,0	2	10,0
К-во больных	20	20

Результаты клинических испытаний показали, что гидрохлорид 1(10) в-эпокси-13-диметиламино5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида не имеет побочных эффектов и хорошо переносится больными, не усиливает повреждающее действие лучевой терапии на нормальные ткани, обладает радиосенсибилизирующим действием, достоверно увеличивая частоту объективных регрессий опухоли и

- 8 009712 частоту выраженного лечебного патоморфоза (ΙΙΙ-ΐν степени) как в первичной опухоли, так и в метастатически измененных лимфоузлах по сравнению с контрольной группой.

Таким образом, заявляемый препарат рекомендуется использовать в качестве сенсибилизирующего средства при лучевой и химиолучевой терапии злокачественных опухолей.

Преимущества способа получения нового радиосенсибилизирующего средства

1. Наличие промышленной сырьевой базы - полынь гладкая (Лйешша §1аЬе11а Каг. с1 Κίτ) возделывается в опытном хозяйстве Института фитохимии на площади 5,6 га с ежегодным производством 6,0 т сухой массы для последующей переработки.

2. Доступность и простота способа выделения суммы экстрактивных веществ из сырья полыни гладкой, заключающегося в предварительном извлечении эфирного масла из растительного сырья при температуре 48°С, давлении - 0,6 кгс/см², времени перегонки с водяным паром 3 ч, с последующей экстракцией растительного сырья жидким диоксидом углерода (СО₂) при давлении 150±2 бар, температуре 60°С ± 0,5, времени экстракции 3 ч, очисткой целевого вещества 1(10) в-эпокси-5,7а,6в(Н)-гвай-3(4), 11(13)-диен-6,12-олида из экстракта методом колоночной хроматографии толуолом, дальнейшей его перекристаллизацией, аминированием и гидрохлорированием, с получением гидрохлорида 1(10) β-эпокси13-диметиламино-5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида и с последующей его перекристаллизацией и лиофильной сушкой конечного продукта (субстанции) при температуре +65°С, продолжительности сушки 24 ч, конечной температурой субстанции +60°С.

3. Способ является экологически чистым, так как используется нетоксичный экстрагент - жидкий диоксид и хроматографическое разделение очищенного СО₂-экстракта проводится толуолом.

4. При СО₂-экстракции сырья выход сесквитерпенового лактона-1(10) в-эпокси-5,7а,6в(Н)-гвай3(4), 11(13)-диен-6,12-олида в 2 раза выше, чем при экстракции хлороформом.

5. Заявляемый препарат не имеет побочных эффектов и хорошо переносится больными, не усиливает повреждающее действие лучевой терапии на нормальные ткани, обладает селективно радиосенсибилизирующим действием на опухоль.

Claims (1)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   Способ получения радиосенсибилизирующего средства из растительного сырья, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют надземную часть полыни гладкой (ЛПетыа §1аЬе11а Каг. е1 Κίτ.), из которой извлекают эфирное масло при температуре 75°С, давлении 0,6 кгс/см², времени перегонки с водяным паром 3 ч, с последующей экстракцией растительного сырья жидким диоксидом углерода (СО₂) при давлении 150±2 бар, температуре 60±0,5°С, времени экстракции 3 ч, очисткой 1(10)βэпокси-5,7а,6в(Н)-гвай-3(4),11(13)-диен-6,12-олида из экстракта методом колоночной хроматографии с использованием толуола, дальнейшей его перекристаллизацией, аминированием и гидрохлорированием, полученный гидрохлорид 1(10)в-эпокси-13-диметиламино-5,7а,6,11в(Н)-гвай-3(4)-ен-6,12-олида подвергают перекристаллизации и лиофильной сушке при температуре +65°С в течение 24 ч до конечной температуры +60°С.