CN1188118C - 一种预防或治疗癌症的药物及其用途 - Google Patents

Abstract

提供一种药用有效成分酒花新查尔酮(humulupol)用于预防和治疗癌症。具体地，利用植物啤酒花(Humulus lupulus)为原料，通过粉碎，酒精提取，溶剂处理，硅胶柱层析以氯仿/丙酮混合溶剂洗脱，结晶得到酒花新查尔酮(humulupol)纯品。经过现代波谱技术确定了其化学结构，为一新的天然产物，命名为酒花新查尔酮(humulupol)。实验证明该化合物具有显著的体外抗肿瘤活性，可用于制备治疗癌症的药物。

Description

一种预防或治疗癌症的药物及其用途

技术领域：本发明属于药物技术领域，具体地说，涉及一种治疗癌症的药物及其在制备预防或治疗癌症药物中的应用。

技术背景：根据卫生部一项统计数据显示，中国每年新增160万肿瘤病患者，每年有130万肿瘤病患者死亡。在不到20年的时间里，中国癌症发病率上升了69％，死亡率增长了29％。癌症的高死亡率使得多数人都把癌症看作“死缓”。全世界的情况也是如此。目前临床上使用的化疗药物虽然有一定疗效，但由于其毒性大而给病人带来巨大的肉体痛苦和精神压力，临床上急需毒副作用相对较小而疗效确切的抗肿瘤新药。式I化合物酒花新查尔酮(humulupol)在文献“Phytochemistry 53(2000)759-775”中“Prenylflavonoid variation in Humuluslupulus：distribution and taxonomic signifivance of xanthogalenol and4’-0-methylxanthohumol”一文中有报道，但现有技术中没有含有式I化合物酒花新查尔酮(humulupol)作为有效成分在治疗癌症方面的报道，也没有该化合物具有抗癌活性的报道。

发明内容：本发明的目的在于提供一种含有预防或治疗癌症有效量的式I化合物酒花新查尔酮及可药用载体和/或赋形剂。为了实现上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

一种预防或治疗癌症的药物，其中含有预防或治疗癌症有效量的式I化合物酒花新查尔酮及可药用载体和/或赋形剂。

本发明化合物用作药物上时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0.1～99％，优选为0.5～90％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将所述的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经口服和注射(静注、肌注)两种形式给药。

口服可用其固体或液体制剂，如粉剂、片剂、糖衣剂、胶囊、溶液、糖浆、滴丸剂等。

注射可用其固体或液体制剂，如粉针剂、溶液形注射剂等。

为了更好地理解本发明的实质，下面将用本发明的式I化合物酒花新查尔酮(humulupol)及其与药物载体或赋形剂组成的药物的生物活性结果来说明它在医药领域中的应用。

一、材料与方法

1.样品及制备

样品呈黄色粉末状，二甲基亚砜(DMSO)溶解配制为10mg/ml浓度的贮存液避光保存备用。

2.细胞株

           K562：人白血病细胞株；     CA：人肝癌细胞株

           Bel-7402：人肝癌细胞株；   BGC-823：人胃癌细胞株

           BIU-87：人膀胱癌细胞株；   T-24：人膀胱癌细胞株

3.测定方法

将对数生长期细胞调整为适当浓度后加入96孔培养板，90μl/孔。贴壁生长细胞待培养24小时贴壁后加药；悬浮生长细胞接种后即加药。样品受试浓度为0.01，0.1，1，10，100μg/ml。每孔分别加入10μl不同浓度的受试药，每个浓度设3个平行孔，每个浓度均设相应的无细胞空白对照以排除样品本身的颜色干扰。阴性对照为等体积的培养液，阳性对照为抗癌药顺铂。加药后细胞置37℃，5％CO₂培养箱中分别孵育48h(悬浮细胞)和72h(贴壁细胞)后，加入MTT(5mg/ml，Sigma)，20μl/孔，继续培养4h后，加入三联液[10％SDS-5％异丁醇-0.012mol/L HCL(w/v/v)]，100μl/孔，放置过夜后，用酶标仪(Bioteck EL-340，美国)在570nm波长下测定各孔的OD值。

4.结果处理：用下列公式计算细胞的生长抑制率

     生长抑制率(％)＝OD_阴性对照-OD_加药孔/OD_阴性对照×100％LOGIT法计算受试药对细胞生长的半数抑制浓度IC₅₀。

二、结果

         表1.酒花新查尔酮(humulupol)

对人肿瘤细胞株生长的半数抑制浓度(IC50，μg/ml)

三、结论

在本实验条件下，化合物酒花新查尔酮(humulupol)对以上包括人白血病细胞株(K562)，人肝癌细胞株(CA)，人肝癌细胞株(Bel-7402)，人胃癌细胞株(BGC-823)，人膀胱癌细胞株(BIU-87)，人膀胱癌细胞株(T-24)生长的半数抑制浓度(IC50)在0.031-7.12μg/ml之间，依据中国医药工业杂志1993，24：455-457，周建军等提出的评价抗癌物质活性的改良MTT法得出结论：上述数据显示了明显的抑制癌症的作用。

四、酒花新查尔酮(humulupol)小鼠腹腔给药急性毒性试验

一.材料

1.样品：酒花新查尔酮(humulupol)呈黄色粉末状。二甲基亚砜(DMSO)加少量PEG-400和吐温-80溶解后加生理盐水配制为所需浓度备用；

2.动物：健康ICR小鼠，II级清洁级，18-22g，雌雄各半，由昆明医学院省天然药物药理重点实验室动物室提供。合格证号：滇实动证第9806号。

二.方法

健康ICR小鼠16只，分为1000mg/kg和1500mg/kg两个剂量组，8只/组，雌雄各半，按0.1ml/10g的给药体积腹腔注射相应剂量的酒花新查尔酮(humulupol)，给药后观察动物的反应和死亡情况，观察时间为12天。

三.结果

1.1500mg/kg剂量组动物在给药4h后开始死亡，48h死亡达高峰，72h受试动物全部死亡。死亡前动物出现呼吸急促、抽搐；

2.1000mg/kg剂量组动物在给药后未观察到明显的毒性反应，至给药后的第12天亦未出现动物死亡。

四.结论

从本试验结果可以推测化合物H4在小鼠经腹腔给药的半数致死剂量(LD50)在1000mg/kg和1500mg/kg之间。

具体实施方式：

下面结合实施例进一步对本发明的实质内容进行说明，但本发明的内容并不局限于此。

实施例1：

10kg植物啤酒花(Humulus lupulus)(粒状)室温下用70％乙醇浸泡五次，溶剂回收至小体积，分别用石油醚和乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分回收溶剂后，称重得539.6g。乙酸乙酯部分用适量硅胶拌样后，进行硅胶柱层析(200-300目)，用CHCl₃-MeOH梯度洗脱，得含h17段。该馏段进一步进行硅胶柱层析，CHCl₃-Acetone梯度洗脱，得酒花新查尔酮(humulupol)0.18g。

该方法分离出的化合物酒花新查尔酮(humulupol)其化学名称为2’，4’，4-三羟基-6’-甲氧基-3’-(3”-羟基-异戊烯-1”)-查尔酮，化学结构式为：

分子量为370，分子式为C₂₁H₂₂O₆。无旋光吸收。橙黄色结晶，熔点：296-299℃(石油醚/丙酮)。易溶于甲醇、丙酮，微溶于水。

酒花新查尔酮(humulupol)的结构是基于它的质谱和核磁共振数据特别是二维核磁共振谱而确定。

紫外光谱数据：UVλ(max)(MeOH)(logε)：204(4.23)，366(4.40).

红外光谱数据：IRν_max ^KBr：3540-3200(br)，1623，1601，1436，1229，977，835.

质谱数据：EI-MS m/z：352[M⁺-H₂O](3)，318(60)，300(70)，282(45)，271(100)，254(40)，244(85)，226(60)，149(73)，105(50)，91(75).负离子FAB-MS m/z：369[M-1]。

有关核磁共振数据见表2，3。

从核磁共振数据和质谱等数据推测该化合物属于查耳酮类，并与化合物酒花查尔酮(xanthahumol)很类似(Sun，S.-S.et al.，Phytochemistry 1989，28，1776；Tabata，N.et al.，Phytochemistry 1997，46，683)，只在异戊烯基侧链上发生了变化。在¹H-¹H-COSY谱中，可以明显观察到H-α和H-β，H-3，5和H-2，6，H-1”和H-5”，H-3”和H-4”之间的相关峰。在HMBC谱中，出现羰基碳和H-α，H-β；C-1和H-3，H-5；C-4和H-2，H-6；C-1’和H-5’；C-2’和H-4”；C-3’和H-5’，H-4”；C-4’和H-4”，H-5’；C-6’和H-5’，6’-OCH₃；C-1”和H-3”，H-5”；C-2”和H-4”；C-3”和H-1”，H-4”，H-5”；C-4”和H-3”；C-5”和H-1”，H-3”相关峰。这些数据有力地证实了化学结构为I式所示。

实施例2：

按实施例1制得化合物酒花新查尔酮(humulupol)，按化合物晶体与赋形剂重量比1∶1的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例3：

按实施例1制得化合物酒花新查尔酮(humulupol)，按常规胶囊制剂方法制成胶囊。

实施例4：

按实施例1制得化合物酒花新查尔酮(humulupol)，按化合物晶体与赋形剂重量比1∶2的比例加入赋形剂，制粒压片。

表2.¹H NMR and ¹³C NMR Data for humulupol(in DMSO)

Atom No.	1H(in ppm，Jin Hz)	13C(in ppm，Jin Hz)
			αβ12，63，544-OH1’2’2’-OH3’4’5’6’6’-OCH31”2”3”4”C＝O5”	8.01(d，15.4)7.92(d，15.4)7.83(d，8.6)7.10(d，8.6)10.32(s)14.93(s)6.31(s)4.12(s)4.90，4.864.47(m)2.95(m)1.98(s)	124.2142.8126.4130.8116.3160.3104.9165.5105.6163.791.5161.056.1110.1148.474.129.2192.017.7

表3.¹H-¹H-COSY.HMQC and HMBC Data for humulupol

αβ12，63，544-OH1’2’2’-OH3’4’5’6’6’-OCH31”2”3”4”C＝O5”

H-βH-αH-3，5H-2，6H-5”H-4”H-3”H-1”

H-αH-βH-2，6H-3，5H-5’H-6’-OCH3H-1”H-3”H-4”H-5”

H-βH-α，2，6H-β，3，5H-β，3，5H-4-OHH-2，6H-5’H-4”H-5’，4”H-5’，4”H-5’，6’-OCH3H-3”，5”H-4”H-1”，4”，5”H-3”H-α，βH-1”，3″

实施例5：

按实施例1制得化合物酒花新查尔酮(humulupol)，按化合物晶体与赋形剂重量比1∶3的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例6：

片剂：酒花新查尔酮(humulupol)           100mg

      淀粉                              100mg

      玉米浆17％                        适量

      硬脂酸镁                          适量

实施例7：

胶囊剂：酒花新查尔酮(humulupol)         100mg

        淀粉                            100mg

        硬脂酸镁                        适量

制备方法：将酒花新查尔酮(humulupol)与助剂混合，过筛，在合适的容器中均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊。

实施例8：

安瓿剂：酒花新查尔酮(humulupol)         50mg

制备方法：将酒花新查尔酮(humulupol)溶解于2毫升丙二醇中，过滤所得溶液在无菌条件下装入安瓿瓶中。

Claims (2)

1、一种预防或治疗癌症的药物组合物，其中含有预防或治疗癌症有效量的式I化合物酒花新查尔酮及可药用载体和/或赋形剂。

2、权利要求1所述式I化合物在制备预防或治疗癌症的药物中的应用。