CN114409670A - 具有抗肿瘤活性苦木素类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
具有抗肿瘤活性苦木素类化合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种从鸦胆子中分离得到的具有抗肿瘤活性苦木素类化合物及其制备方法。本发明将鸦胆子干燥成熟果实的80％乙醇提取物经大孔树脂脱色素，再由正向硅胶柱、MCI柱、聚酰胺柱划段，最后经过凝胶和高效液相HPLC分离纯化得到二个新的化合物，并采用MTT法测试新化合物对Mia PaCa‑2胰腺癌细胞的IC50(半数抑制浓度)，表明化合物具有良好的抗胰腺癌作用，可作为抗胰腺癌药物开发的先导化合物。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域；具体涉及一种从鸦胆子中分离的2种具有抗肿瘤活性苦木素类化合物的制备方法和在抗胰腺癌方面的用途。
背景技术
胰腺癌是一组主要起源于胰腺导管上皮及腺泡细胞的消化道恶性肿瘤，恶性程度极高，诊断和治疗都很困难，而且进展十分迅速，是预后最差的恶性肿瘤之一。胰腺癌发病率和死亡率近年来明显上升，手术切除率不足20％、放化疗疗效有限且会引起一系列毒副作用，至今5年生存率仍保持在8％左右。尽管手术仍然是治疗胰腺癌的首要方法，但由于胰腺癌常常发现较晚，而丧失根治的机会。因此，探寻低毒高效的新型抗癌药物一直是医药研究的重点方向。
天然产物一直是寻找治疗抗癌药物的重要来源，如传统的紫杉醇、喜树碱等对肿瘤的治疗作用具有重要的临床意义。早期研究发现，鸦胆子苦木素类成分体内外抗胰腺癌作用确切，有效剂量下安全，可能是有价值的先导物。鸦胆子来源于苦木科鸦胆子属植物鸦胆子Brucea javanica(L.)Merr.的干燥成熟果实。主要分布在亚洲、印尼、澳洲的热带和亚热带，在中国主要分布在广东和广西。其清热、燥湿、杀虫、解毒等功效广泛用于治疗痢疾、久泻、疟疾、痔疮、疔毒和赘疣等常见疾病。我国早年就开始研究鸦胆子抗癌作用，目前生产的鸦胆子油乳剂在临床上被广泛应用于肺癌、前列腺癌和胃肠癌的治疗。
鸦胆子中主要含苦木素类、生物碱类、黄酮类、苯丙素类、蒽醌类、脂肪酸类等化合物，其中苦木素类是其主要生物活性成分。本发明首次从鸦胆子中分离得到两种苦木素类化合物具有一定的抗胰腺癌作用，可能成为抗胰腺癌药物开发的先导化合物。
发明内容
本发明的目的是对鸦胆子活性成分进行深入研究，从植物鸦胆子的干燥成熟果实中首次分离得到了两个苦木素类化合物，另外本发明筛选出了这两个苦木素类化合物的制备方法。并且本发明通过实验发现，该苦木素类化合物具有一定的抑制胰腺癌细胞增殖活性，该化合物可用于制备抗胰腺癌药物或作为抗胰腺癌药物开发的先导化合物。
本发明提供的苦木素类化合物结构式为：
具有抗肿瘤活性的苦木素类化合物的制备方法，其包括以下步骤：
步骤1：将干燥鸦胆子果实粉碎，加入8～16倍量体积乙醇溶液，搅匀，反复回流提取，过滤，合并滤液，减压回收乙醇并挥至无醇味得浸膏；
步骤2：将浸膏用适量的蒸馏水混旋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位；
步骤3：取步骤2的乙酸乙酯部位进行预处理过的大孔树脂吸附，并用30～80％乙醇洗脱，收集合并洗脱液，减压回收乙醇，备用；
步骤4：取步骤3洗脱液，经正相硅胶柱色谱分离，依次用石油醚-乙酸乙酯，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，通过薄层色谱检测，合并相似成分进行，得到6个组分Fr.1～Fr.6；
步骤5：取步骤4的Fr.6组分经聚酰胺柱色谱，甲醇-水等度洗脱，组分记为Fr.6-1；
步骤6：取步骤4的组分Fr.6-1经MCI中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱，薄层色谱检测合并相同流分，得到4个组分Fr.6-1-1～Fr.6-1-4；将组分Fr.6-1-1经C18中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，薄层色谱检测合并相同流分，得到5个组分Fr.6-1-1-1～Fr.6-1-1-5；最后将组分Fr.6-1-1-4通过C18高压制备色谱反复洗脱得化合物1；
步骤7：取步骤2的正丁醇部位进行预处理过的大孔树脂吸附，并用乙醇-水梯度洗脱，薄层色谱检测合并相同流分，得到3个组分Fr.ZDC-1～Fr.ZDC-3；
步骤8：取步骤7的组分Fr.ZDC-2，经正相硅胶柱色谱分离，依次用石油醚-乙酸乙酯，甲醇梯度洗脱，通过薄层色谱检测，合并相似成分进行，得到3个组分Fr.ZDC-2-1～Fr.ZDC-2-3；
步骤9：取步骤8的组分Fr.ZDC-2-3经聚酰胺柱色谱，甲醇-水等度洗脱，组分记为Fr.ZDC-2-3-1；
步骤10：取步骤9的组分Fr.ZDC-2-3-1经MCI中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，薄层色谱检测合并相同流分，得到3个组分Fr.ZDC-2-3-1-1～Fr.ZDC-2-3-1-3；将组分Fr.ZDC-2-3-1-1经C18中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，薄层色谱检测合并相同流分，得到4个组分Fr.ZDC-2-3-1-1-1～Fr.ZDC-2-3-1-1-4；最后将组分Fr.ZDC-2-3-1-1-2通过C18高压制备色谱反复洗脱得化合物2。
作为优选方案，本发明中两个苦木素类新化合物的制备方法是按下述步骤进行的：
步骤1：将干燥鸦胆子果实粉碎，加入8倍量体积80％乙醇，搅匀，反复回流提取3次，每次3h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇并挥至无醇味得浸膏。
步骤2：将浸膏用适量的蒸馏水混旋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位。
步骤3：取步骤2的乙酸乙酯部位进行预处理过的大孔树脂吸附，并用80％乙醇洗脱，收集合并洗脱液，减压回收乙醇，备用。
步骤4：取步骤3洗脱液，经正相硅胶柱色谱分离，依次用石油醚-乙酸乙酯(85:15，75:25，55:45，35:65)，二氯甲烷-甲醇(95:5，0:100)梯度洗脱，通过薄层色谱检测，10％硫酸-乙醇显色观察成分相似情况，相似成分进行合并，得到6个组分Fr.1～Fr.6。
步骤5：取步骤4的Fr.6(二氯甲烷-甲醇0:100洗脱组分)经聚酰胺柱色谱，30％甲醇-水等度洗脱，组分记为Fr.6-1。
步骤6：取步骤4的组分Fr.6-1经MCI中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到4个组分Fr.6-1-1～Fr.6-1-4；将组分Fr.6-1-1经C18中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到5个组分Fr.6-1-1-1～Fr.6-1-1-5。最后将组分Fr.6-1-1-4通过C18高压制备色谱反复洗脱得化合物1。
步骤7：取步骤2的正丁醇部位进行预处理过的大孔树脂吸附，并用乙醇-水梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到3个组分Fr.ZDC-1～Fr.ZDC-3。
步骤8：取步骤7的组分Fr.ZDC-2，经正相硅胶柱色谱分离，依次用石油醚-乙酸乙酯(70:30，50:50)，甲醇梯度洗脱，通过薄层色谱检测，10％硫酸-乙醇显色观察成分相似情况，相似成分进行合并，得到3个组分Fr.ZDC-2-1～Fr.ZDC-2-3。
步骤9：取步骤8的组分Fr.ZDC-2-3(甲醇洗脱组分)经聚酰胺柱色谱，30％甲醇-水等度洗脱，组分记为Fr.ZDC-2-3-1。
步骤10：取步骤9的组分Fr.ZDC-2-3-1经MCI中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到3个组分Fr.ZDC-2-3-1-1～Fr.ZDC-2-3-1-3；将组分Fr.ZDC-2-3-1-1经C18中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到4个组分Fr.ZDC-2-3-1-1-1～Fr.ZDC-2-3-1-1-4。最后将组分Fr.ZDC-2-3-1-1-2通过C18高压制备色谱反复洗脱得化合物2。
作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的苦木素类化合物的制备方法，
步骤6和步骤10所述的C18高压制备色谱的具体条件为：步骤6和步骤10所述的C18高压制备色谱的具体条件为：日本岛津LC-20AR，SPD-20A紫外可见光检测器，检测波长254nm，XBridge BEH C18OBDTM Prep Column,
3.5μm,10mm×250mm,1/pkg，洗脱剂为40％甲醇-水。
本发明的活性实验采用对MiaPaCa-2胰腺癌细胞进行增殖抑制实验，选择临床用药吉西他滨作为阳性对照药物，MTT法测试了新化合物对MiaPaCa-2胰腺癌细胞的IC50(半数抑制浓度)最终证明上述化合物具有良好的抗胰腺癌作用。
有益效果：
本发明通过大量实验筛选提取分离技术，首次从中药鸦胆子Bruceajavanica(L.)Merr.中分离得到具有抗胰腺癌活性的二个新化合物。本发明提供的整个制备工艺合理，可操作性强。
附图说明
图1化合物1的HR-ESI-MS图；
图2化合物1的1HNMR图(CD3OD-d4)；
图3化合物1的13C NMR图(CD3OD-d4)；
图4化合物2的HR-ESI-MS图；
图5化合物2的1HNMR图(CD3OD-d4)；
图6化合物2的13C NMR图(CD3OD-d4)。
具体实施方式
实施例1
本发明中两个苦木素类化合物制备方法是按照下述步骤进行的：
步骤1：将20kg干燥鸦胆子果实粉碎，加入80％乙醇160L，搅匀，105℃反复回流提取3次，每次3h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇并挥至无醇味得浸膏3.1kg。
步骤2：将浸膏用10L蒸馏水溶解分散，然后依次用200mL石油醚(6次)、乙酸乙酯(4次)、正丁醇(3次)进行萃取，分别得到石油醚部位525g、乙酸乙酯部位221g、正丁醇部位730g和水部位1200g。
步骤3：取乙酸乙酯部位进行预处理过的AB-8大孔树脂吸附(0.3-1.2mm，北京索莱宝科技有限公司)。将乙酸乙酯部位浸膏用400mL甲醇溶解，采用湿法上样，大孔树脂柱体积约为3L，全部上样后使其吸附12h，最后用80％乙醇洗脱4-5个柱体积，收集合并洗脱液，减压回收乙醇，备用。
步骤4：取步骤3洗脱液，经正相硅胶(200-300目，青岛海洋化工厂)柱色谱分离，依次用石油醚-乙酸乙酯(体积比85:15，75:25，55:45，35:65)，二氯甲烷-甲醇(体积比95:5，0:100)梯度洗脱，通过薄层色谱检测，10％硫酸-乙醇显色观察成分相似情况，相似成分进行合并，得到6个组分Fr.1～Fr.6。
步骤5：取步骤4的Fr.6(二氯甲烷-甲醇0:100洗脱组分)经聚酰胺柱色谱，30％甲醇-水等度洗脱4-5个柱体积，收集合并洗脱液，减压回收甲醇，备用，组分记为Fr.6-1。
步骤6：取步骤4的组分Fr.6-1(44g)经MCI(75-150μm，日本三菱化学)中压制备色谱，甲醇-水(甲醇体积依次为20％，40％，60％，80％，100％)体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到4个组分Fr.6-1-1～Fr.6-1-4。将组分Fr.6-1-1经C18(100μm，青岛邦凯高新技术材料有限公司)中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水(甲醇体积依次为10％，20％，30％，40％，50％，60％，100％)体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到5个组分Fr.6-1-1-1～Fr.6-1-1-5。最后将组分Fr.6-1-1-4通过C18高压制备色谱(日本岛津LC-20AR，SPD-20A紫外可见光检测器，检测波长254nm，XBridge BEH C18OBDTM Prep Column,
3.5μm,10mm×250mm,1/pkg)，40％甲醇-水反复洗脱得化合物1。
步骤7：取步骤2的正丁醇部位进行预处理过的大孔树脂吸附，并用乙醇-水(甲醇体积依次为20％，50％，80％)梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到3个组分Fr.ZDC-1～Fr.ZDC-3。
步骤8：取步骤7的组分Fr.ZDC-2，经正相硅胶柱色谱分离，依次用石油醚-乙酸乙酯(体积比70:30，50:50)和甲醇梯度洗脱，通过薄层色谱检测，10％硫酸-乙醇显色观察成分相似情况，相似成分进行合并，得到3个组分Fr.ZDC-2-1～Fr.ZDC-2-3。
步骤9：取步骤8的组分Fr.ZDC-2-3(甲醇洗脱组分)经聚酰胺柱色谱，30％甲醇-水等度洗脱4-5个柱体积，收集合并洗脱液，减压回收甲醇，备用，组分记为Fr.ZDC-2-3-1。
步骤10：取步骤9的组分Fr.ZDC-2-3-1经MCI中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水(甲醇体积依次为0％，20％，40％，60％，100％)体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到3个组分Fr.ZDC-2-3-1-1～Fr.ZDC-2-3-1-3；将组分Fr.ZDC-2-3-1-1经C18中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水(甲醇体积依次为10％，30％，50％，70％，100％)体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到4个组分Fr.ZDC-2-3-1-1-1～Fr.ZDC-2-3-1-1-4。最后将组分Fr.ZDC-2-3-1-1-2通过C18高压制备色谱(日本岛津LC-20AR，SPD-20A紫外可见光检测器，检测波长254nm，XBridge BEH C18OBDTM Prep Column,
3.5μm,10mm×250mm,1/pkg)，40％甲醇-水反复洗脱得化合物2。
本发明进行的TLC检识的条件：
条件1：紫外灯(254nm)荧光；
条件2：紫外灯(365nm)荧光；
条件3：10％硫酸乙醇，烤板机105℃，2min加热显色。
本发明进行的结构鉴定的技术：高分辨质谱(Waters Synapt G2-Si QTOF)、1HNMR、13C NMR和二维核磁谱(Bruker 500MHz)等。
化合物1为白色粉末，[α]20D 10(c 0.1，MeOH)，能溶于甲醇、乙醇、乙腈等，不溶于水。UV最大吸收λmax278nm。如图1，HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 467.1552[M+H+]，推测分子式为C22H26O11。
如图2和3，1H-NMR(500MHz，CD3OD-d4)谱显示有3个甲基质子信号：δppm 1.83(3H，s，H-18)，1.36(3H，s，H-19)，2.05(3H，s，H-2’)。
13C-NMR(125MHz，CD3OD-d4)谱及DEPT谱显示有22个碳信号，其中包括3个甲基碳信号：δppm 13.4(C-18)，15.7(C-19)，20.5(C-2’)；3个sp3杂化亚甲基碳信号(包括1个与氧相连的亚甲基碳)：δppm50.1(C-1)，30.1(C-6)，74.4(C-20)；7个sp3杂化次甲基碳信号(包括4个与氧相连的次甲基碳)：δppm43.2(C-5)，85.1(C-7)，42.6(C-9)，72.4(C-11)，77.2(C-12)，a(C-14)，68.8(C-15)；3个sp3杂化季碳信号(包括1个与氧相连的季碳)：δppm46.6(C-8)，42.2(C-10)，82.7(C-13)；2个sp2杂化季碳信号(包括1个与氧相连的季碳)：δppm145.8(C-3)，130.5(C-4)；4个羰基碳信号：δppm194.6(C-2)，169.7(C-16)，174.4(C-21)，171.5(C-1’)。
1H-1H COSY谱显示H-5/H-6α，H-9/H-11之间存在相关。HMBC谱显示H-1α和C-2，C-3，C-5，C-19相关，H-1β和C-2，C-10，C-19相关，表明了A环的结构；H-5和C-4，C-6相关，H-6α和C-7，C-8，C-10相关，表明了B环的结构；H-11和C-8，C-12，C-13相关，表明了C环的结构以及C-11，C-12上存在的两个羟基结构；H-18和C-3，C-4，C-5相关，H-19和C-1，C-5，C-9，C-10相关，表明了C-18，C-19两个甲基的连接位置；H-2’和C-1’相关，表明了侧链的连接方式。
化合物的空间构型由NOESY谱确定，NOESY谱显示H-1α/H-5/H-6α，H-9/H-11之间存在相关，表明H-5，H-9，H-11为α构型；还显示H-7/H-12/H-14/H-19之间存在相关，表明H-7，H-12，H-14，C-19甲基为β构型。
结合上述信息，确定化合物结构为：
表1化合物1的核磁数据：
1H(500MHz)and 13C(125MHz)in CD3OD-d4
a:not detectable
化合物2为白色粉末，[α]20D 12(c 0.1，MeOH)，能溶于甲醇、乙醇、乙腈等，不溶于水。UV最大吸收λmax223，278nm。如图4，HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z551.2154[M+H+]，推测分子式为C27H34O12。
如图4和5，1H-NMR(500MHz，CD3OD-d4)谱显示有5个甲基质子信号：δppm 1.85(3H，s，H-18)，1.37(3H，s，H-19)，1.34(3H，s，H-5’)，1.34(3H，s，H-6’)，2.15(3H，d，J＝1.3Hz，H-7’)；1个烯质子信号：δppm6.07(1H，d，J＝1.3Hz，H-1)。
13C-NMR(125MHz，CD3OD-d4)谱及DEPT谱显示有27个碳信号，其中包括5个甲基碳信号：δppm 13.4(C-18)，15.6(C-19)，28.5(C-5’)，28.5(C-6’)，15.7(C-7’)；3个sp3杂化亚甲基碳信号(包括1个与氧相连的亚甲基碳)：δppm50.2(C-1)，30.1(C-6)，74.5(C-20)；7个sp3杂化次甲基碳信号(包括4个与氧相连的次甲基碳)：δppm43.3(C-5)，84.9(C-7)，42.6(C-9)，72.4(C-11)，77.1(C-12)，51.1(C-14)，68.0(C-15)；1个sp2杂化次甲基碳信号：δppm 113.2(C-2’)；4个sp3杂化季碳信号(包括2个与氧相连的季碳)：δppm46.6(C-8)，42.2(C-10)，82.7(C-13)，74.6(C-4’)；3个sp2杂化季碳信号(包括1个与氧相连的季碳)：δppm145.8(C-3)，130.5(C-4)，167.9(C-3’)；4个羰基碳信号：δppm194.6(C-2)，170.0(C-16)，174.5(C-21)，167.3(C-1’)。
1H-1H COSY谱显示H-5/H-6α，H-9/H-11之间存在相关。HMBC谱显示H-1α和C-2，C-3，C-10，C-19相关，H-1β和C-2，C-10，C-19相关，表明了A环的结构；H-5和C-4相关，H-6α和C-8，C-10相关，H-7和C-5相关，表明了B环的结构；H-11和C-8，C-12，C-13相关，表明了C环的结构以及C-11，C-12上存在的两个羟基结构；H-18和C-3，C-4，C-5相关，H-19和C-1，C-10相关，表明了C-18，C-19两个甲基的连接位置；H-2’和C-3’，C-4’，C-7’相关，H-5’，H-6’同时和C-3’，C-4’相关，H-7’和C-2’，C-3’，C-4’相关，表明了侧链的连接方式。
化合物的空间构型由NOESY谱确定，NOESY谱显示H-1α/H-5/H-6α，H-9/H-11之间存在相关，表明H-5，H-9，H-11为α构型；还显示H-6β/H-7/H-12/H-14/H-19之间存在相关，表明H-7，H-12，H-14，C-19甲基为β构型。
结合上述信息，确定化合物结构为：
表2化合物2的核磁数据：
1H(500MHz)and 13C(125MHz)in CD3OD-d4
实施例2：
本发明化合物的抗胰腺癌活性研究是按照下述步骤进行的：
1.肿瘤细胞培养
将Mia PaCa-2胰腺癌细胞株(中国科学院细胞库)，以含10％胎牛血清的DMEM培养液(美国Gibco公司)，在37℃，5％CO2条件下培养。进行传代培养时，先取出一盘Mia PaCa-2胰腺癌细胞，去培养液，加入3mLPBS，清洗两遍。加入1mL胰酶消化，2min后加入1mL培养液终止消化，常温离心，5min，1000r/min。去上清，加1mL含10％胎牛血清的DMEM培养液，重悬得细胞悬液。
2.实验药物的配制
称取适量上述实施例1制备得到的化合物1和2溶解于DMSO中，使母液终浓度为50mM，4℃冰箱储存。
实验之前，将母液用DMEM培养基稀释，使药物浓度为50μM，并且保证DMSO的最终浓度低于0.1％。
加入不同体积的DMEM培养基将化合物1和2稀释成不同浓度。同时用含有0.1％DMSO的DMEM培养基作为阴性对照。
3.药物对肿瘤细胞株的毒性
将肿瘤细胞用培养基悬浮，以6×103的细胞密度接种96孔板(100μL/孔)，37℃，5％CO2条件下培养24h。在肿瘤细胞株的对数生长期，加入不同浓度的化合物1和2，37℃，5％CO2条件下培养24h。
4.MTT法检测细胞活力
待化合物1和2与肿瘤细胞作用24h后，每孔加入20μL MTT溶液(5mg/mL)无菌培养箱中孵育3h。完全吸弃上清液，每孔加入150μL的DMSO，在摇床上反应30min，使蓝紫色的甲瓒结晶溶解。使用酶标仪在570nm波长下测定OD值。利用GraphPad Prism 8软件计算化合物的IC50(半数抑制浓度)。
表2化合物对MiaPaCa-2胰腺癌细胞的抑制作用(IC50值)
| 名称 | IC<sub>50</sub>(μM) |
| 化合物1 | 247.40 |
| 化合物2 | 38.46 |
实验结论：本发明中的两个化合物对于Mia PaCa-2胰腺癌细胞具有抑制作用，其中化合物2的活性更强，具有开发成抗胰腺癌新药的潜力。
Claims (8)
1.一种具有抗肿瘤活性的苦木素类化合物，其特征在于，结构式如下：
2.权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的苦木素类化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤1：将干燥鸦胆子果实粉碎，加入8～16倍量体积乙醇溶液，搅匀，反复回流提取，过滤，合并滤液，减压回收乙醇并挥至无醇味得浸膏；
步骤2：将浸膏用适量的蒸馏水混旋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位；
步骤3：取步骤2的乙酸乙酯部位进行预处理过的大孔树脂吸附，并用30～80％乙醇洗脱，收集合并洗脱液，减压回收乙醇，备用；
步骤4：取步骤3洗脱液，经正相硅胶柱色谱分离，依次用石油醚-乙酸乙酯，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，通过薄层色谱检测，合并相似成分进行，得到6个组分Fr.1～Fr.6；
步骤5：取步骤4的Fr.6组分经聚酰胺柱色谱，甲醇-水等度洗脱，组分记为Fr.6-1；
步骤6：取步骤4的组分Fr.6-1经MCI中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱，薄层色谱检测合并相同流分，得到4个组分Fr.6-1-1～Fr.6-1-4；将组分Fr.6-1-1经C18中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，薄层色谱检测合并相同流分，得到5个组分Fr.6-1-1-1～Fr.6-1-1-5；最后将组分Fr.6-1-1-4通过C18高压制备色谱反复洗脱得化合物1；
步骤7：取步骤2的正丁醇部位进行预处理过的大孔树脂吸附，并用乙醇-水梯度洗脱，薄层色谱检测合并相同流分，得到3个组分Fr.ZDC-1～Fr.ZDC-3；
步骤8：取步骤7的组分Fr.ZDC-2，经正相硅胶柱色谱分离，依次用石油醚-乙酸乙酯，甲醇梯度洗脱，通过薄层色谱检测，合并相似成分进行，得到3个组分Fr.ZDC-2-1～Fr.ZDC-2-3；
步骤9：取步骤8的组分Fr.ZDC-2-3经聚酰胺柱色谱，甲醇-水等度洗脱，组分记为Fr.ZDC-2-3-1；
步骤10：取步骤9的组分Fr.ZDC-2-3-1经MCI中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，薄层色谱检测合并相同流分，得到3个组分Fr.ZDC-2-3-1-1～Fr.ZDC-2-3-1-3；将组分Fr.ZDC-2-3-1-1经C18中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，薄层色谱检测合并相同流分，得到4个组分Fr.ZDC-2-3-1-1-1～Fr.ZDC-2-3-1-1-4；最后将组分Fr.ZDC-2-3-1-1-2通过C18高压制备色谱反复洗脱得化合物2。
3.根据权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的苦木素类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将干燥鸦胆子果实粉碎，加入8～10倍量体积60～80％乙醇，搅匀，反复回流提取1～3次，每次1～3h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇并挥至无醇味得浸膏；
步骤2：将浸膏用适量的蒸馏水混旋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位；
步骤3：取步骤2的乙酸乙酯部位进行预处理过的大孔树脂吸附，并用80％乙醇洗脱，收集合并洗脱液，减压回收乙醇，备用；
步骤4：取步骤3洗脱液，经正相硅胶柱色谱分离，依次用体积比为85:15，75:25，55:45，35:65的石油醚-乙酸乙酯依次洗脱，然后再用体积比95:5和0:100的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，通过薄层色谱检测，10％硫酸-乙醇显色观察成分相似情况，相似成分进行合并，得到6个组分Fr.1～Fr.6；
步骤5：取步骤4的Fr.6，即二氯甲烷-甲醇0:100洗脱组分，经聚酰胺柱色谱，30％甲醇-水等度洗脱，组分记为Fr.6-1；
步骤6：取步骤4的组分Fr.6-1经MCI中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到4个组分Fr.6-1-1～Fr.6-1-4；将组分Fr.6-1-1经C18中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到5个组分Fr.6-1-1-1～Fr.6-1-1-5，最后将组分Fr.6-1-1-4通过C18高压制备色谱反复洗脱得化合物1；
步骤7：取步骤2的正丁醇部位进行预处理过的大孔树脂吸附，并用乙醇-水梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到3个组分Fr.ZDC-1～Fr.ZDC-3；
步骤8：取步骤7的组分Fr.ZDC-2，经正相硅胶柱色谱分离，依次用体积比为70:30和50:50的石油醚-乙酸乙酯，甲醇梯度洗脱，通过薄层色谱检测，10％硫酸-乙醇显色观察成分相似情况，相似成分进行合并，得到3个组分Fr.ZDC-2-1～Fr.ZDC-2-3；
步骤9：取步骤8的甲醇洗脱组分Fr.ZDC-2-3，经聚酰胺柱色谱，30％甲醇-水等度洗脱，组分记为Fr.ZDC-2-3-1；
步骤10：取步骤9的组分Fr.ZDC-2-3-1经MCI中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到3个组分Fr.ZDC-2-3-1-1～Fr.ZDC-2-3-1-3；将组分Fr.ZDC-2-3-1-1经C18中压制备色谱分离纯化，采用甲醇-水体系梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积，薄层色谱检测合并相同流分，得到4个组分Fr.ZDC-2-3-1-1-1～Fr.ZDC-2-3-1-1-4；最后将组分Fr.ZDC-2-3-1-1-2通过C18高压制备色谱反复洗脱得化合物2。
4.根据权利要求2或3所述的具有抗肿瘤活性的苦木素类化合物的制备方法，其特征在于，
步骤6和步骤10所述的C18高压制备色谱的具体条件为：日本岛津LC-20AR，SPD-20A紫外可见光检测器，检测波长254nm，XBridge BEH C18 OBDTM Prep Column,
3.5μm,10mm×250mm,1/pkg，洗脱剂为40％甲醇-水。
5.权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的苦木素类化合物在制备抗癌症的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的癌症包括胰腺癌。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，将苦木素类化合物与药学上可接受的载体制备成口服制剂或外用制剂。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的口服制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂、注射剂或颗粒剂。
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