CN115611720B - 新型ent-strobane烷型二萜类化合物及其制备方法、药物组合物和应用 - Google Patents

新型ent-strobane烷型二萜类化合物及其制备方法、药物组合物和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种新型ent‑strobane烷型二萜类化合物、其制备方法、药物组合物和应用，本发明研究了其在制备抗肿瘤药物中的应用，结果表明，所提供的Fisheristrobane B对肝癌细胞BEL‑7402、乳腺癌细胞MDA‑MB‑231和白血病细胞U937作用24h之后均具有显著杀伤作用，且其活性显著优于阳性药顺铂，可用于开发相关的抗肿瘤类药物。

Description

新型ent-strobane烷型二萜类化合物及其制备方法、药物组 合物和应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，更具体地，涉及一种新型ent-strobane烷型二萜类化合物及其制备方法、药物组合物和在抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
狼毒大戟（Euphorbia fischeriana Steud.）为大戟科（Euphorbiaceae）大戟属多年生草本植物，为中药狼毒的来源之一，始载于《神农本草经》，以根入药，其味苦、辛，性平，入肺经，具有逐水祛痰，破积杀虫的功效，主治痰食虫积，慢性气管炎，咳嗽气喘，结核，疥癣等疾病，临床上用于治疗肿瘤、结核病以及皮肤病等。狼毒大戟中的二萜类成分主要包括松香烷、阿替生烷、贝壳杉烷、巴豆烷、海松烷等多种类型。现代药理研究表明狼毒大戟中的二萜类成分具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗病毒等药理活性。基于狼毒大戟的传统功效和药理活性研究，发明人从狼毒大戟的根部分离得到新型ent-strobane烷型二萜类化合物，并发现其可以抑制多种肿瘤细胞的生长。
发明内容
针对现有技术所存在的不足，本发明提供了一种新型ent-strobane烷型二萜类化合物及其制备方法、药物组合物和应用。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种新型ent-strobane烷型二萜类化合物，其是具有如下式所示的结构：
Figure 425045DEST_PATH_IMAGE001
。
本发明另一方面还提供了上述ent-strobane烷型二萜类化合物的制备方法，所述ent-strobane烷型二萜类化合物是从狼毒大戟中提取分离获得。
在上述技术方案中，所述ent-strobane烷型二萜类化合物的制备方法，包括以下步骤：
S1、取干燥的狼毒大戟根部，加入溶剂回流提取，合并提取液后浓缩，得浸膏；
S2、将浸膏加入到8-15倍质量的水中混悬后，用石油醚萃取，将石油醚萃取物经硅胶柱色谱，使用石油醚-乙酸乙酯洗脱，收集馏分后利用硅胶薄层层析检识，根据254 nm和365 nm下观察Rf值分别为0.83-0.85、0.77-0.81、0.73-0.76、0.69-0.71、0.65-0.67、0.62-0.64、0.58-0.61、0.55-0.57、0.52-0.54、0.48-0.51、0.44-0.47、0.36-0.39、0.30-0.33的荧光斑点和10%硫酸香草醛显色为灰紫色的斑点结果合并相似馏分依次得到13个馏分，分别命名为A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L和M；
S3、利用HPLC-UV追踪目标化合物紫外吸收选择馏分F经硅胶柱色谱，使用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集到70-80个馏分后，利用硅胶薄层层析检识，合并为13个馏分F1~F13；利用HPLC-UV追踪目标化合物紫外吸收选择馏分F5经硅胶柱色谱，使用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集到50-60个馏分后，利用硅胶薄层层析检识，合并为14个馏分N1~N14；利用HPLC-UV追踪目标化合物紫外吸收选择馏分N4经ODS柱色谱，使用甲醇-水梯度洗脱收集到40-50个馏分后，利用薄层色谱检识合并为12个馏分O1~O12；
S4、以甲醇-水为流动相，采用HPLC法，利用C18色谱柱在馏分O8中制备得到ent-strobane烷型二萜类化合物。
在本发明的具体实施方式中，步骤S4中，在HPLC法分离馏分O8时所用的流动相中，甲醇和水的体积比为（81：19）-（85：15），该ent-strobane烷型二萜类化合物的保留时间为42-45 min。
在本发明的具体实施方式中，步骤S3中，将馏分F经硅胶柱色谱，使用体积比为（100：0）-（0：100）的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集到70-80个馏分后，利用硅胶薄层层析检识，合并为13个馏分F1~F13；
和/或，将馏分O5经硅胶柱色谱，使用体积比为（100：0）-（0：100）的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集到50-60个馏分后，利用硅胶薄层层析检识，合并为14个馏分N1~N14；
和/或，将馏分N4经ODS柱色谱，使用体积比为（60：40）-（100：0）的甲醇-水梯度洗脱收集到40-50个馏分后，利用薄层色谱检识合并为12个馏分O1~O12。
在本发明的具体实施方式中，步骤S2中，将石油醚萃取物经硅胶柱色谱，使用体积比为（100：0）-（0：100）的石油醚-乙酸乙酯洗脱，并收集60-70个馏分后利用硅胶薄层层析检识，合并依次得到馏分A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L和M；
在本发明的具体实施方式中，步骤S1中，所述溶剂为88-98 V%的乙醇水溶液，且其加入质量为狼毒大戟的8-10倍，回流提取的次数为2-4次，每次提取1-3h。
本发明又一方面还提供了上述ent-strobane烷型二萜类化合物的药物组合物。
具体地，在上述技术方案中，所述药物组合物包括增效剂和药效学上可接受的载体或赋形剂。也就是说，含有作为活性成份的本发明的ent-strobane烷型二萜类化合物和常规药物赋形剂或辅剂或载体的药物组合物亦包含在本发明内。
具体地，在上述技术方案中，所述增效剂为以下物质的任一种：
羟基喜树碱、紫杉醇、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、米托蒽醌、氮芥、环磷酰胺、顺铂(DDP)、卡铂、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、卡培他滨、雷替曲塞、阿糖胞苷、吉西他滨、甲氨蝶呤、培美曲塞、羟基脲、6-巯嘌呤、阿霉素、吉西他滨、C1-C20酰胺基吉西他滨、氟铁龙、克拉屈滨、氟尿嘧啶、替加氟、卡莫氟、双呋氟尿嘧啶、去氧氟尿苷、艾西拉滨、卡培他滨、5'-脱氧-5-氟胞苷、5'-脱氧-5-氟尿苷、2'-脱氧-5-氟尿苷、阿糖胞苷、环胞苷、曲沙他滨、沙帕他滨、地西他滨、伯舒替尼、他菲替尼、依罗替尼、达克替尼、来那替尼、多韦替尼、帕纳替尼、巴非替尼、司美替尼、卡扎替尼、鲁索替尼、卢佐替尼、艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、色瑞替尼、阿法替尼、舒尼替尼、拉帕替尼、克唑替尼、阿帕替尼、埃罗替尼、卡奈替尼、阿西替尼、博舒替尼、尼洛替尼、吉非替尼、达沙替尼、西他列汀、伊马替尼、6-巯嘌呤、甲氨蝶呤、氨蝶呤、羟基脲、肌苷二醛、腺苷二醛、依鲁替尼、曲美替尼、鲁索利替尼、阿扎胞苷、氯法拉滨、来那度胺等。
具体地，在上述技术方案中，所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、冲剂、滴丸或微丸。
本发明再一方面还提供了上述二萜类化合物在制备预防或治疗恶性肿瘤的药物中的应用。
本发明与现有技术相比，具有以下优点：
（1）本发明提供了一种目前尚未见报道的ent-strobane烷型二萜类化合物，并进一步提供了一种操作简单、重现性好、提取纯度高的从狼毒大戟中提取获得该ent-strobane烷型二萜类化合物的方法；
（2）试验结果表明，本发明所提供的ent-strobane烷型二萜类化合物对肝癌细胞BEL-7402、乳腺癌细胞MDA-MB-231和白血病细胞U937均具有显著的细胞毒作用，可用于开发抗肿瘤、抗癌类药物，尤其针对临床化疗阶段药物。
附图说明
图1为本发明实施例1所制得的化合物的HR-ESI-MS谱；
图2为本发明实施例1所制得的化合物的1H NMR谱（500 MHz，CDCl3）；
图3为本发明实施例1所制得的化合物的13C NMR谱（125 MHz，CDCl3）。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。
应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例中，如无特别说明，所用手段均为本领域常规的手段。
本文中所用的术语“包含”、“包括”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1
一种ent-strobane烷型二萜类化合物的制备方法，包括如下步骤：
S1、称取狼毒大戟干燥根46 kg，加入质量为狼毒大戟10倍量的95 V%的乙醇水溶液作为溶剂回流提取三次，每次提取2 h，合并提取液后浓缩，得到2.0 kg浸膏；
S2、将浸膏（2.0 kg）加入到其10倍质量的水（20 L）中混悬后，用混悬液1.5倍量体积的石油醚萃取3次，得到1000 g石油醚萃取物，将石油醚萃取物经硅胶柱色谱，使用体积比为100︰0、90︰10、80︰20、70︰30、60︰40、50︰50、40︰60、30︰70、20︰80、10︰90和0︰100的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，每500 mL体积为1个馏分，共收集到65个馏分，利用硅胶薄层层析检识，根据254 nm和365 nm下观察Rf值分别为0.83-0.85、0.77-0.81、0.73-0.76、0.69-0.71、0.65-0.67、0.62-0.64、0.58-0.61、0.55-0.57、0.52-0.54、0.48-0.51、0.44-0.47、0.36-0.39、0.30-0.33的荧光斑点和10%硫酸香草醛显色为灰紫色的斑点结果合并相似馏分依次得到13个馏分，分别命名为A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L和M；
S3、利用HPLC-UV追踪目标化合物紫外吸收选择馏分F经硅胶柱色谱，使用体积比为100︰0、90︰10、80︰20、70︰30、60︰40、50︰50、40︰60、30︰70、20︰80、10︰90和0︰100的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，每1000 mL体积为1个馏分，收集到75个馏分后，利用硅胶薄层层析检识，合并为13个馏分F1~F13，利用HPLC-UV追踪目标化合物紫外吸收选择馏分F5经硅胶柱色谱，使用体积比为100︰0、90︰10、80︰20、70︰30、60︰40、50︰50、40︰60、30︰70、20︰80、10︰90和0︰100的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集到58个馏分后，利用硅胶薄层层析检识，合并为14个馏分N1~N14，利用HPLC-UV追踪目标化合物紫外吸收选择馏分N4经ODS柱色谱，使用体积比为60︰40、70︰30、80︰20、90︰10、100︰0的甲醇-水梯度洗脱，每500 mL体积为1个馏分，收集到50个馏分后，利用薄层色谱检识合并为12个馏分O1~O12；
S4、利用HPLC法，以体积比为83:17的甲醇-水为流动相在馏分O8中制备得到化合物（tR = 42-45 min）。
本发明实施例提供了实施例1所制得的化合物的物理性质和检测数据，具体如下：
白色油状物；根据高分辨质谱（HR-ESI-MS，图1）m/z 285.2212 [M – H2O + H]+（计算值285.2213），推测其分子量为302，结合1H NMR（图2）、13C NMR谱（图3），确定其分子式为C20H30O2，计算其不饱和度为6。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) 谱（图2）显示，在低场区含有1个醛氢信号[δ H 9.34(s)]；2 个烯氢信号[δ H 6.78 (1H, d, J = 7.3 Hz), 5.56 (1H, d, J = 6.1 Hz)]；高场区存在4 个甲基信号[δ H 1.21(3H, d, J = 7.3 Hz), 0.86, 0.80, 0.74 (each 3H,s)]。
13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) 谱图（图3）显示共有20个碳信号，其中有4个甲基碳信号（δ C 33.8, 21.6, 20.3, 17.6），5个亚甲基碳信号（δ C 41.9, 41.4, 39.4, 25.0,19.1），6个次甲基碳信号（包括2个烯氢碳信号，δ C 152.3, 124.5, 65.4, 61.5, 56.4,31.6），5个季碳信号（包括1个羰基、2个烯氢碳信号，δ C 194.1, 149.6, 134.7, 39.7,33.4）。结合1H NMR谱图，推测其可能为二萜类化合物，结构中可能含有1个醛基、2对双键、1个羟基和4个甲基。
根据与已知化合物数据比对及C-3和C-11位的化学位移变化，推断羟基取代位置发生了变化。在HMBC谱中，H-3 (δ H 1.42)和C-19 (δ C 21.6)、C-1 (δ C 39.4)，H-11 (δ H4.58)和C-8 (δ C 134.7)、C-13 (δ C 149.6)的远程相关，证明了羟基取代在C-11位。
在NOESY谱图中，可观察到H3-20和H3-19，H-5和H-9、H-11、H3-16、H3-18具有NOE相关，由此可以确定5位、9位、11位、18位甲基、16位甲基为α位取代，11位羟基、19位甲基、20位甲基为β取代。
综上所述，确定了新化合物（Fisheristrobane B）的结构如下：
Figure 645942DEST_PATH_IMAGE001
。
为了更好地理解本发明的实质，下面结合药理试验及结果来说明上述二萜类化合物在制药领域中的新应用。
试验例
本试验例公开了上述化合物Fisheristrobane B的肿瘤细胞活性抑制实验。
（1）实验材料和仪器
BEL-7402、MDA-MB-231及U937细胞株购自中国科学院细胞典藏库（上海）；
DMEM培养基、RPMI 1640培养基、PBS 缓冲液、胎牛血清（FBS）和胰蛋白酶均购自美国Gibco公司；
CCK8细胞活性检测试剂盒（美国MCE公司）；
DMSO（美国Sigma公司）；
96孔板（美国corning公司）；
二氧化碳细胞培养箱（美国 Thermo Fisher Scientific公司）；
全波长酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific公司）；
BIOFUGE STRATOS离心机（美国 Thermo Fisher Scientific公司）；
IX73倒置电子显微镜（日本Olympus公司）；
移液器（德国Eppendorf公司）；
超净工作台、离心管、吸管等相关耗材。
（2）细胞复苏及培养
取出液氮中标记好的BEL-7402、MDA-MB-231及U937细胞冻存管，立即投入37℃水浴锅中，尽量于1 min 内完成快速解冻融化；对冻存管进行酒精消毒后，将管中冻存液转入15 mL无菌离心管，并加入相应的培养基，使之混匀，再离心去除上清液；重复上述步骤一次进行洗涤，随后加10 mL培养液混匀重悬细胞，再将其转移至10 mL培养皿内，并放于 37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
当细胞密度达到70%-80%时，将其传代；先吸去旧的培养基，加入PBS 洗涤2次，在培养皿中加入含EDTA的胰蛋白酶并放置37 ℃培养箱3min，随后加入培养基终止消化，1000rpm离心5min，吸去消化液后，重新加入含血清的培养基并反复吹打细胞，形成细胞悬液，最后根据细胞数量，将其转移到新的培养皿中，完成细胞传代。
（3）CCK-8法评价细胞活性
将BEL-7402、MDA-MB-231及U937细胞分别以1×104细胞/孔铺板于96孔板，每组6个复孔，铺板后培养24小时，将化合物Fisheristrobane B溶解后分别稀释至100、50、25、12.5、6.25、3.125 μM处理细胞后再37 ℃下处理48 h，再加入CCK-8试剂盒10 μL, 2 h后利用酶标仪检测450 nm处吸光度值，并计算细胞增殖抑制率。
细胞增殖抑制率（%）=[(A对照-A样品)/ (A对照-A空白)]×100%；
结果如表所示
表1. 二萜类化合物抑制肿瘤细胞筛选试验结果
Figure 999563DEST_PATH_IMAGE002
Fisheristrobane B的肿瘤细胞活性抑制试验结果表明，化合物FisheristrobaneB对人肝癌细胞BEL-7402、人肺癌细胞MDA-MB-231和人白血病细胞U937具有显著的抑制作用，且其活性显著优于阳性药顺铂（Cisplatin）。表明本发明所述的二萜类化合物是天然产物中具有开发前景的抗肿瘤候选前体药物。
综上，本发明所述的ent-strobane烷型二萜类化合物可以作为治疗恶性肿瘤的药物前体应用。
对比例1
本发明对比例1提供了一种ent-strobane烷型二萜类化合物的制备方法，其步骤与实施例1类似，区别仅在于，步骤S3中，将馏分N4经ODS柱色谱时，使用体积比为40：60的甲醇-水进行洗脱。
结果显示，无法制备得到该化合物。
对比例2
本发明对比例2提供了一种ent-strobane烷型二萜类化合物的制备方法，其步骤与实施例1类似，区别仅在于，步骤S4中，在HPLC法分离馏分O8时所用的流动相中，甲醇和水的体积比为70：30。
结果显示，无法制备得到该化合物。
应用例1
本发明应用例公开了一种以Fisheristrobane B为原料药的胶囊剂，其组份如下：
Fisheristrobane B 18.0 mg
淀粉6.0 g
焦亚硫酸氢钠0.2 g
硬脂酸镁0.2 g
无水乙醇适量
制成100粒。
具体制备过程如下：
取Fisheristrobane B和淀粉、焦亚硫酸氢钠混合均匀，加无水乙醇制成软材，过24目筛，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，混匀，装入胶囊。
应用例2
本发明应用例公开了一种以化合物Fisheristrobane B为原料药的颗粒剂，其组份如下：
Fisheristrobane B15.0 mg
淀粉 6.0 g
亚硫酸氢钠0.2 g
硬脂酸镁0.2 g
无水乙醇0.1 mL；
制成100袋。
具体制备过程如下：
取Fisheristrobane B与淀粉、亚硫酸氢钠混匀后，加入无水乙醇制成软材，过24目筛，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，混匀，装袋。
应用例3
本发明应用例公开了一种以化合物Fisheristrobane B为原料药的口服液，其组份如下：
Fisheristrobane B 20.0 mg
蔗糖3.0 g
亚硫酸氢钠0.2 g
对羟基苯甲酸甲酯0.2 g
碳酸氢钠0.1 mL
注射用水1000 mL；
制成100支。
具体制备过程如下：
上述组分混匀后，采用口服液常规制备方法，分装即可。
应用例4
本发明应用例公开了一种以化合物Fisheristrobane B分别为原料药的注射剂，其组份如下：
Fisheristrobane B16.0 mg
维生素C 0.2 g
氯化钠 6.0 g
碳酸氢钠0.1 mL
注射用水 1000mL；
制成100支。
具体制备过程如下：
上述组分混匀后，采用注射剂常规制备方法，即可得100支。
应用例5
本发明应用例公开了一种以化合物Fisheristrobane B和环磷酰胺为原料药的片剂，其组份如下：
Fisheristrobane B20.0 mg
环磷酰胺 5 g
羟丙基甲基纤维素 18 g
滑石粉 0.4 g
乳糖 0.2 g
硬脂酸镁 0.2 g
无水乙醇0.1 mL；
制成100片。
具体制备过程如下：
取Fisheristrobane B、环磷酰胺和羟丙基甲基纤维素、滑石粉、乳糖、硬脂酸镁混合均匀，加无水乙醇制成软材，过24目筛，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，混匀，压片。
应用例6
本发明应用例公开了一种以化合物Fisheristrobane B和来那度胺为原料药的胶囊剂，其组份如下：
Fisheristrobane B 16.0 mg
来那度胺2.0 g
淀粉 6.0 g
焦亚硫酸氢钠 0.2 g
硬脂酸镁 0.2 g
无水乙醇0.1 mL；
制成100粒。
具体制备过程如下：
取Fisheristrobane B、来那度胺和淀粉、焦亚硫酸氢钠混匀后，加入无水乙醇制成软材，过24目筛，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，混匀，装入胶囊。
应用例7
本发明应用例公开了一种以化合物Fisheristrobane B和长春瑞滨为原料药的注射剂，其组份如下：
Fisheristrobane B20.0 mg
长春瑞滨 2.0 g
维生素C 0.2 g
氯化钠 6.0 g
碳酸氢钠0.1 mL
注射用水 1000mL；
制成100支。
具体制备过程如下：
上述组分混匀后，采用注射剂常规制备方法，即可得100支。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。
应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (9)

1.一种新型的ent-strobane烷型二萜类化合物，其特征在于，
具有如下式所示的结构：
Figure QLYQS_1
。
2.权利要求1所述的ent-strobane烷型二萜类化合物的制备方法，其特征在于，所述ent-strobane烷型二萜类化合物是从狼毒大戟中提取分离而获得；
包括以下步骤：
S1、取干燥的狼毒大戟根部，加入溶剂回流提取，合并提取液后浓缩，得浸膏；
S2、将浸膏加入到8-15倍质量的水中混悬后，用石油醚萃取，将石油醚萃取物经硅胶柱色谱，使用石油醚-乙酸乙酯洗脱，收集馏分后利用硅胶薄层层析检识，根据254 nm和365nm下观察Rf值相同的荧光斑点和10%硫酸香草醛显色为灰紫色的斑点结果合并相似馏分依次得到13个馏分，分别命名为A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L和M；
S3、利用HPLC-UV追踪目标化合物紫外吸收选择馏分F经硅胶柱色谱，使用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集到70-80个馏分后，利用硅胶薄层层析检识，合并为13个馏分F1~F13；利用HPLC-UV追踪目标化合物紫外吸收选择馏分F5经硅胶柱色谱，使用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集到50-60个馏分后，利用硅胶薄层层析检识，合并为14个馏分N1~N14；利用HPLC-UV追踪目标化合物紫外吸收选择馏分N4经ODS柱色谱，使用甲醇-水梯度洗脱收集到40-50个馏分后，利用薄层色谱检识合并为12个馏分O1~O12；
S4、以甲醇-水为流动相，采用HPLC法，利用C18色谱柱在馏分O8中制备得到ent-strobane烷型二萜类化合物；
其中，步骤S4中，在HPLC法分离馏分O8时所用的流动相中，甲醇和水的体积比为（81：19）-（85：15），且结构如上式所示的ent-strobane烷型二萜类化合物的保留时间为42-45min；
步骤S3中，将馏分F经硅胶柱色谱，使用体积比为（100：0）-（0：100）的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集到70-80个馏分后，利用硅胶薄层层析检识，合并为13个馏分F1~F13；
和/或，将馏分F5经硅胶柱色谱，使用体积比为（100：0）-（0：100）的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集到50-60个馏分后，利用硅胶薄层层析检识，合并为14个馏分N1~N14；
和/或，将馏分N4经ODS柱色谱，使用体积比为（60：40）-（100：0）的甲醇-水梯度洗脱收集到40-50个馏分后，利用薄层色谱检识合并为12个馏分O1~O12。
3.根据权利要求2所述的ent-strobane烷型二萜类化合物的制备方法，其特征在于，
步骤S2中，将石油醚萃取物经硅胶柱色谱，使用体积比为（100：0）-（0：100）的石油醚-乙酸乙酯洗脱，并收集60-70个馏分后利用硅胶薄层层析检识，合并依次得到馏分A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L和M；
和/或，步骤S1中，所述溶剂为88-98 V%的乙醇水溶液，且其加入质量为狼毒大戟的8-10倍，回流提取的次数为2-4次，每次提取1-3h。
4.一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1所述的新型ent-strobane烷型二萜类化合物。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，还包含药学上可接受的载体或赋形剂。
6.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括增效剂；
所述增效剂为以下物质的一种或若干种：羟基喜树碱、紫杉醇、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、米托蒽醌、氮芥、环磷酰胺、顺铂、卡铂、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、雷替曲塞、培美曲塞、阿霉素、吉西他滨、C1-C20酰胺基吉西他滨、氟铁龙、克拉屈滨、氟尿嘧啶、替加氟、卡莫氟、双呋氟尿嘧啶、去氧氟尿苷、艾西拉滨、卡培他滨、5'-脱氧-5-氟胞苷、5'-脱氧-5-氟尿苷、2'-脱氧-5-氟尿苷、阿糖胞苷、环胞苷、曲沙他滨、沙帕他滨、地西他滨、伯舒替尼、他菲替尼、依罗替尼、达克替尼、来那替尼、多韦替尼、帕纳替尼、巴非替尼、司美替尼、卡扎替尼、鲁索替尼、卢佐替尼、艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、色瑞替尼、阿法替尼、舒尼替尼、拉帕替尼、克唑替尼、阿帕替尼、埃罗替尼、卡奈替尼、阿西替尼、博舒替尼、尼洛替尼、吉非替尼、达沙替尼、西他列汀、伊马替尼、6-巯嘌呤、甲氨蝶呤、氨蝶呤、羟基脲、肌苷二醛、腺苷二醛、依鲁替尼、曲美替尼、鲁索利替尼、阿扎胞苷、氯法拉滨、来那度胺。
7.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、冲剂、滴丸或微丸。
8.权利要求1所述的ent-strobane烷型二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.权利要求4-7任一项所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
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