EA005598B1 - Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы - Google Patents

Abstract

В изобретении описаны соединения общей формулы Iгде Rвыбирают из группы, включающей H, F, Cl, C-C-алкил, C-C-циклоалкил и CF; Rобозначает H или Me; Rобозначает H, Me или Et, при условии, что Rи Rоба не обозначают Me, и если Rобозначает Me, то Rне обозначает Et; Rобозначает Et, циклопропил, пропил, изопропил или циклобутил; и Q выбирают из группы, включающейи их фармацевтически приемлемые соли, являющиеся ингибиторами обратной транскриптазы ВИЧ дикого типа и некоторых мутантных штаммов.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к новым соединениям и их фармацевтически приемлемым солям, их применению либо индивидуально, либо в сочетании с другими терапевтическими агентами для лечения или профилактики ВИЧ-инфекции и к содержащим эти соединения фармацевтическим композициям.

Предпосылки создания изобретения

Болезнь, известная как синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), вызывается вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), прежде всего штаммом, известным как ВИЧ-1. Для репликации ВИЧ в клетке-хозяине, информация о вирусном геноме должна быть интегрирована в ДНК клетки-хозяина. Однако ВИЧ представляет собой ретровирус, т.е. вирус, у которого генетическая информация считывается с РНК. Вследствие этого в цикле репликации ВИЧ должна присутствовать стадия транскрипции вирусного генома (РНК) с образованием ДНК, что является обратным по отношению к обычному процессу. Транскрипция вирусной РНК с образованием ДНК происходит с помощью фермента, называемого поэтому обратной транскриптазой (ОТ). Вирион ВИЧ наряду с вирусной РНК включает копию ОТ.

Для обратной транскриптазы характерны три известные ферментативные функции; она действует как РНК-зависимая ДНК-полимераза, как рибонуклеаза и как ДНК-зависимая ДНК-полимераза. Действуя как РНК-зависимая ДНК-полимераза, ОТ транскрибирует синтез копии одноцепочечной ДНК вирусной РНК. Действуя как рибонуклеаза, ОТ расщепляет исходную вирусную РНК и высвобождает ДНК, непосредственно полученную на матрице исходной РНК. И наконец, действуя как ДНК-зависимая ДНКполимераза, ОТ обеспечивает получение второй комплементарной цепи ДНК, используя первую цепь ДНК в качестве матрицы. Две цепи образуют двухцепочечную ДНК, которая интегрируется в геном клетки-хозяина с помощью другого фермента, называемого интегразой.

Соединения, которые ингибируют ферментативные активности обратной транскриптазы ВИЧ-1, могут ингибировать репликацию ВИЧ-1 в зараженных клетках. Такие соединения можно применять для предупреждения или лечения вызываемой ВИЧ-1 инфекции у людей, что продемонстрировано при использовании известных ингибиторов ОТ, таких как 3'-азидо-3'-дезокситимидин (ΑΖΤ), 2',3'дидезоксиинозин (66Ι), 2',3'-дидезоксицитидин (66С), 64Τ. 3ТС, невирапин, делавирдин, эфавиренз и абакавир, основных лекарственных средств, которые в настоящее время разрешены для применения при лечении СПИДа.

Как и в случае любой антивирусной терапии, применение ингибиторов ОТ для лечения СПИДа в конце концов приводит к снижению чувствительности вируса к данному лекарственному средству. Устойчивость (пониженная чувствительность) к указанным лекарственным средствам является результатом мутаций, затрагивающих сегмент обратной транскриптазы гена ро1. К настоящему времени охарактеризовано несколько мутантных штаммов ВИЧ, для которых установлено, что устойчивость к известным терапевтическим агентам является результатом мутаций в гене ОТ. Примерами некоторых из наиболее распространенных выявленных, связанных с лечением мутаций являются мутация У181С, включающая замену тирозина (Υ) в ко доне 181 на остаток цистеина (С), и Κ103Ν, включающая замену лизина (К) в положении 103 на аспарагин (Ν). Другие мутанты, частота которых возрастает в процессе лечения с использованием известных антивирусных средств, представляют собой мутанты с одной мутацией У106А, О190А, Υ188С и Р236Б; и мутанты с двумя мутациями К103МГ181С, Κ103Ν/Ρ225Η, Κ103Ν/ν108Ι и Κ103Ν/Ε100Ι.

Поскольку лечение и предупреждение ВИЧ-инфекции с использованием антивирусных средств продолжается, следует ожидать увеличения числа новых устойчивых штаммов. Отсюда ясно, что существует потребность в разработке новых ингибиторов ОТ, отличающихся различным механизмом действия в отношении разных мутантов.

Имеющие трициклические структуры соединения, которые являются ингибиторами ВИЧ-1, описаны в патенте И8 Νο. 5366972. Другие ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ-1 описаны у Нагдгауе и др., 1. Ме6 Сйеш., 34, 2231 (1991).

В патенте И8 Νο. 5705499 в качестве ингибиторов ОТ предложены 8-арилалкил- и 8-арилгетероалкил-5,11-дигидро-6Н-дипиридо[3,2-В:2',3'-Е][1,4]диазепины. Установлено, что приведенные в качестве примера соединения обладают определенной активностью в отношении ОТ ВИЧ-1 дикого типа и мутантной ОТ, прежде всего Υ181Ο но при этом они менее эффективны в отношении других несущих одну мутацию мутантов, таких как Κ103Ν.

Установлено, что соединения по настоящему изобретению являются эффективными ингибиторами мутаций Υ181ί.' и Κ103Ν, а также широкого спектра других мутантов с одной мутацией и некоторых известных мутантов с двойной мутацией, таких как Κ103Ν/Υ181ί.' и Κ103Ν/Ρ225Η.

Краткое изложение сущности изобретения

Настоящее изобретение позволяет преодолеть сложности и недостатки прототипов с помощью новых соединений, которые являются эффективными ингибиторами штаммов ВИЧ-1, несущих одну и две мутации ОТ.

Первым объектом изобретения является соединение общей формулы I

-1005598

где К² выбирают из группы, включающей Η, Е, С1, С1-С₄алкил, С₃-С₄циклоалкил и СЕ₃;

К⁴ обозначает Н или Ме;

К⁵ обозначает Н, Ме или Εΐ при условии, что К⁴ и К⁵ оба не обозначают Ме, и если К⁴ обозначает Ме, то К⁵ не обозначает Εΐ;

К¹¹ обозначает Ме, Εΐ, циклопропил, пропил, изопропил или циклобутил; и С) выбирают из группы, включающей

или его фармацевтически приемлемая соль.

Вторым объектом изобретения является ингибитор репликации ВИЧ общей формулы I или его фармацевтически приемлемая соль.

Третьим объектом изобретения является ингибитор обратной транскриптазы ВИЧ общей формулы I или его фармацевтически приемлемая соль.

Четвертым объектом изобретения является способ лечения или предупреждения ВИЧ-инфекции, заключающийся в том, что пациенту вводят ингибирующее ВИЧ количество соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Пятым объектом изобретения является фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения или предупреждения ВИЧ-инфекции, которая содержит соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.

Шестым объектом изобретения является способ получения соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Подробное описание изобретения

Определения

В контексте настоящего описания понятие «С₁-С₄алкил» обозначает алкильные радикалы с прямой или разветвленной цепью, содержащие от 1 до 4 атомов углерода, и они представляют собой метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил и трет-бутил.

В контексте настоящего описания понятие «С₃-С₄циклоалкил» обозначает насыщенные циклические углеводородные радикалы, содержащие 3-4 атома углерода, и они представляют собой циклопропил и циклобутил.

Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления

Предпочтительным вариантом осуществления изобретения являются соединения формулы I, в которых К² предпочтительно обозначает С1, Е или Н.

Более предпочтительно К² обозначает С1 или Н. Наиболее предпочтительно К² обозначает Н.

Предпочтительным вариантом осуществления изобретения являются соединения формулы I, в которых К⁴ предпочтительно обозначает Н.

Другим вариантом осуществления изобретения являются соединения формулы I, в которых предпочтительно К⁵ обозначает Ме.

Предпочтительными соединениями по изобретению являются соединения формулы I, в которых К¹¹ обозначает Εΐ или циклопропил. Более предпочтительно К¹¹ обозначает Εΐ.

Предпочтительным вариантом осуществления изобретения являются соединения формулы I, в которых С) предпочтительно выбирают из группы, включающей

-2005598

Более предпочтительно О обозначает

Другими предпочтительными вариантами осуществления изобретения являются соединения, выбранные из группы, включающей

Соединения по изобретению являются эффективными ингибиторами обратной транскриптазы дикого типа, они также обладают способностью ингибировать ферменты, например, несущие одну мутацию, такие как У181С, Κ103Ν, У106Л, Θ190Ά, У188С и Р236Б. Соединения ингибируют также ферменты, несущие две мутации, такие как К103М¥181С, Κ103Ν/Ρ225Η, Κ103Ν/ν108Ι и Κ103Ν/Ε100Ι.

Соединения формулы I обладают ингибирующей активностью в отношении обратной транскриптазы ВИЧ-1. При введении в виде приемлемых дозируемых форм их можно применять для лечения СПИДа, СПИД-ассоциированного комплекса (АРС) и аналогичных, связанных с заражением ВИЧ-1 заболеваний. Таким образом, еще одним объектом изобретения является способ лечения вызываемой ВИЧ-1 инфекции, заключающийся во введении инфицированному ВИЧ-1 человеку терапевтически эффективного количества описанного выше нового соединения формулы I. Независимо от того, рекомендованы они для лечения или профилактики, соединения можно применять также для предупреждения перинатальной передачи ВИЧ-1 от матери к ребенку, путем их введения матери до рождения ребенка.

Соединения формулы I можно вводить в виде однократной или разделенных доз пероральным или парентеральным путем. Приемлемая пероральная доза соединения формулы I составляет примерно от 0,5 мг до 1 г в день. Предпочтительная пероральная доза соединения формулы I составляет примерно 100800 мг в день для пациента весом 70 кг. В композициях для парентерального введения приемлемая стандартная доза может содержать от 0,1 до 250 мг указанных соединений, предпочтительно от 1 до 200 мг. Однако должно быть очевидно, что вводимая доза должна варьироваться от пациента к пациенту и доза, предназначенная для введения любому конкретному пациенту, должна зависеть от рекомендаций лечащего врача, который в качестве критериев для назначения конкретной соответствующей дозы должен использовать габариты и состояние пациента, а также реакцию пациента на лекарственное средство.

Когда соединения по настоящему изобретению подлежат введению пероральным путем, их можно вводить в качестве лекарственных средств в форме фармацевтических препаратов, которые содержат их в сочетании с совместимым фармацевтическим носителем. Такой носитель может представлять собой инертный органический или неорганический носитель, пригодный для перорального введения. Примерами таких носителей являются вода, желатин, тальк, крахмал, стеарат магния, гуммиарабик, раститель ные масла, полиалкиленгликоли, вазелин и т.п.

Фармацевтические композиции можно приготавливать общепринятым методом и полученные в результате дозируемые формы могут представлять собой твердые дозируемые формы, например, таблетки, драже, капсулы и т.п., или жидкие дозируемые формы, например растворы, суспензии, эмульсии и т.п. Фармацевтические препараты можно подвергать общепринятым фармацевтическим обработкам, таким как стерилизация. Кроме того, фармацевтические препараты могут содержать обычные адъюванты, такие как консерванты, стабилизаторы, эмульгаторы, корригенты, смачивающие агенты, буферы, соли для изменения осмотического давления и т.п. Твердые носители, которые можно использовать, представляют собой, например, крахмал, лактозу, маннит, метилцелюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, тальк, диоксид кремния, вторичный кислый фосфат кальция и высокомолекулярные полимеры (такие, как полиэтиленгликоль).

При парентеральном применении соединение формулы I можно вводить в водном или неводном растворе, суспензии или эмульсии в фармацевтически приемлемом масле или смеси жидкостей, которые могут содержать бактериостатические агенты, антиоксиданты, консерванты, буферы или другие ингре диенты, придающие раствору изотоничность с кровью, загустители, суспендирующие агенты или другие фармацевтически приемлемые добавки. Добавки указанного типа включают, например, тартратный, цит

-3005598 ратный и ацетатный буферы, этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, комплексообразователи (такие как ЭДТА), антиоксиданты (такие как бисульфит натрия, метабисульфит натрия и аскорбиновая кислота), высокомолекулярные полимеры (такие как жидкие полиэтиленоксиды) для регуляции вязкости и полиэтиленовые производные ангидридов сорбита. При необходимости можно также добавлять консерванты, такие как бензойная кислота, метил- или пропил парабен, бензалконийхлорид и другие четвертичные аммонийные производные.

Соединения по изобретению можно также вводить в виде назальных растворов, и они могут содержать в водном носителе помимо соединений по изобретению приемлемые буферы, регуляторы тоничности, консерванты, препятствующие микробному заражению, антиоксиданты и агенты, повышающие вязкость. Примерами агентов, применяемых для повышения вязкости, являются поливиниловый спирт, производные целлюлозы, поливинилпирролидон, полисорбаты или глицерин. Применяемые консерванты, препятствующие микробному заражению, могут представлять собой бензалконийхлорид, тимеросал, хлорбутанол или фенилэтиловый спирт.

Соединения по изобретению можно вводить также с помощью суппозитория.

Соединения по изобретению можно получать с помощью известных методов органического синтеза. Примеры реакционных схем приведены на схемах 1-6.

Схема 1. Получение промежуточных продуктов, в которых К⁴ обозначает Ме.

Схема 2. Получение промежуточных продуктов, в которых К⁵ обозначает Ме.

Последовательность осуществления реакций, представленных на схеме 2, аналогична последовательности, описанной у ТМ. К1ипдег и др.; I. Мед. Сйет., 41, 2960-71, 1998, и у С.П СуМп и др.; ά. Мед. Сйет., 41, 2972-84, 1998.

-4005598

Схема 3. Получение промежуточных продуктов, в которых К² обозначает С1-С₃алкил.

Схема 4. Получение промежуточных продуктов, в которых К² обозначает СР₃.

Схема 5. Введение хинолинового ядра.

\ . о

-5005598

Схема 6. Альтернативный путь получения соединений, в которых К⁴ обозначает Ме.

κ-νη₂ ксилолы, Δ

Как указано выше, соединения по изобретению ингибируют ферментативную активность ОТ ВИЧ-

1. Основываясь на описанной ниже оценке биологической активности, установлено, что указанные соединения ингибируют такой вид активности ОТ ВИЧ-1, как активность РНК-зависимой ДНКполимеразы ВИЧ-1. Установлено (данные не представлены), что они ингибируют также такой вид активности ОТ ВИЧ-1, как активность ДНК-зависимой ДНК-полимеразы. Установлено, что с помощью описанного ниже анализа обратной транскриптазы (ОТ), можно тестировать способность соединений ингибировать активность ОТ ВИЧ-1 как РНК-зависимой ДНК-полимеразы. С помощью этого была изучена активность некоторых конкретных соединений, приведенных ниже в примерах. Результаты исследования представлены в табл. 2 в виде значений 1С₅₀ (нМ) и в табл. 3 в виде значений ЕС₅₀ (нМ).

Примеры

Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано с помощью примеров, которые не ограничивает его объем. Все реакции осуществляли в атмосфере азота или аргона. Температура дана в градусах Цельсия. Если не указано иное, то процентное содержание или соотношение компонентов в растворе выражено в об.%. Ниже приведены сокращения или символы, применяемые в настоящем описании:

ДЭАД: диэтилазодикарбоксилат;

ДИАД: диизопропилазодикарбоксилат;

ДИЭА: диизопропилэтиламин;

ДМАП: 4-(диметиламино)пиридин;

ДМСО: диметилсульфоксид;

ДМФ: диметилформамид;

МС Е8: масс-спектрометрия с использованием электронного пучка;

Εΐ: этил;

ЕЮАс: этилацетат;

Εΐ₂Ο: простой диэтиловый эфир;

ЖХВР: высокоэффективная жидкостная хроматография;

1Рг: изопропил;

Ме: метил;

МеОН: метанол;

МеСК ацетонитрил;

КБС: Ν-бромсукцинимид;

Рй: фенил;

ТБЭ: трис-борат-ЭДТА;

ТБТУ: тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-К,К,К'К'-тетраметилурония;

ТФК: трифторуксусная кислота;

ТГФ: тетрагидрофуран;

МС (Е8): масс-спектрометрия с использованием электронного пучка;

МС (ЕАВ) или ЕАВ/МС: масс-спектрометрия с использованием бомбардировки быстрыми атомами; ВРМС: масс-спектрометрия высокого разрешения;

БОЕ: бляшкообразующие единицы;

ДЭПК: диэтилпирокарбонат;

ДМСО: диметилсульфоксид;

ДТТ: дитиотреитол;

ЭДТА: этилендиаминтетраацетат;

УМФ: уридин-5'-монофосфат;

УТФ: уридин-5'-трифосфат.

-6005598

Синтез

В приведенных ниже примерах проиллюстрированы методы получения соединений по изобретению.

Пример 1 (номер 24, табл. 1). 5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Ндипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он.

а) 2-(Этиламино)-3-нитропиридин.

К раствору 2-хлор-3-нитропиридина (51 г, 325 ммолей) в ТГФ (650 мл) добавляли 2М раствор этиламина ТГФ (365 мл, 731 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь сливали на воду (~1,5 л) и образовавшийся твердый продукт фильтровали и сушили при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (52 г).

б) Амино-2-(этиламино)пиридин.

Раствор 2-(этиламино)-3-нитропиридина (52 г) в МеОН (600 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) в присутствии 20% Рб(ОН)₂/С (10,4 г). Катализатор удаляли фильтрацией через диатомовую землю. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества черного цвета (39 г, общий выход после стадий а) и б): 88%).

в) 2-Хлор-Ы-{2-(этиламино)-3-пиридинил}-5-бром-3-пиридинкарбоксамид.

К охлажденному раствору 3-амино-2-(этиламино)пиридина (30,6 г, 223 ммоля) в МеСЫ (740 мл) добавляли твердый ЫаНСОз (56,3 г, 669 ммолей). Через 5 мин добавляли неочищенный 5-бром-2-хлор-3пиридинкарбонилхлорид (1 экв 223 ммоля), полученный из 5-бром-2-гидрокси-3-пиридинкарбоновой кислоты и §ОС1₂ [согласно методу, описанному у Т.^. Сего и др. в: 8уп!й. Соттип., 19, 553-559, 1989 (публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки), но за исключением того, что не проводили обработку водой]. Через 2 ч реакционную смесь сливали на смесь лед/Н₂О (1,5 л) и образовавшееся твердое вещество фильтровали, промывали Н₂О, а затем гексаном. После сушки в течение ночи при пониженном давлении получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества черного цвета указанное в заголовке соединение (54,9 г, выход 69%).

г) 8-Бром-5,11 -дигидро-11-этил-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4] диазепин-6-он.

К раствору 2-хлор-Ы-{2-(этиламино)-3-пиридинил}-5-бром-3-пиридинкарбоксамида (54,9 г, 154,4 ммоля) в пиридине (308 мл) при 50°С добавляли по каплям 1М раствор ЫаГМДС (гексаметилдисилазид натрия) в ТГФ (355 мл, 355 ммолей). Через 10 мин реакционной смеси давали охладиться до комнатной температуры, а затем сливали на ледяную воду (2 л). Образовавшийся твердый продукт фильтровали, промывали водой, а затем гексаном. Твердый продукт сушили при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (36 г, выход 75%) в виде твердого вещества темно-зеленого цвета.

д) 8-Бром-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

К раствору 8-бром-5,11-дигидро-11-этил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (36,7 г, 115 ммолей) в ДМФ (380 мл) добавляли ЫаН (3,5 г, 138 ммолей) и смесь нагревали до 50°С в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и обрабатывали Ме1 (14,3 мл, 230 ммолей). Через 1,5 ч реакционную смесь сливали на ледяную воду. Твердый продукт фильтровали, промывали водой, а затем гексаном, получая после сушки указанное в заголовке соединение (37,9 г, выход 99%) в виде твердого вещества темно-зеленого цвета.

е) 5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Аллилтрибутилолово (30,7 мл, 99,0 ммолей) и Рб(Рй₃Р)₄ (5,20 г, 4,50 ммоля) добавляли к дегазированному (полученному путем пропускания через раствор Ν₂ в течение 30 мин) раствору 8-бром-5,11дигидро-11-этил-5-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (30,0 г, 90,0 ммолей) в ДМФ (450 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 90°С в течение 1,5 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспрессхроматографией (гексан: ЕЮАс. от 8:2 до 7:3), получая указанное в заголовке соединение (22,19 г, выход 84%).

ж) 5,11-Дигидро-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-5-метил-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2'.3'-е] [ 1,4] диазепин-6-он.

Струей озонированного кислорода в течение 2,5 ч барботировали холодный (-78°С) раствор 5,11дигидро-11-этил-5-метил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (22,19 г, 75,4 ммоля) в СН₂С1₂ (150 мл) и МеОН (150 мл). Затем раствор в течение 15 мин барботировали Ν₂, после этого к раствору добавляли твердый ЫаВН₄ (4,99 г, 132 ммоля). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры. Через 1 ч добавляли водный насыщенный раствор ЫН₄С1 (200 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Органические растворители удаляли при пониженном давлении. К остатку добавляли воду (300 мл) и СНС1₃ (300 мл). Фазы разделяли и водный слой экстрагировали СНС1₃ (3х300 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (Е!ОАс:СНС1₃, 4:1), получая указанное в заголовке соединение (16,1 г, выход 72%) в виде твердого вещества белого цвета.

з) 5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

-7005598

Диэтилазодикарбоксилат (ДЭАД) (12,8 мл, 81,0 ммоль) добавляли при комнатной температуре по каплям к раствору, содержащему 5,11-дигидро-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-5-метил-6Н-дипиридо[3,2Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (16,1 г, 54,0 ммоля), 4-гидроксихинолин (11,6 г, 81,0 ммоль) и РБ₃Р (213 г, 81,0 ммоль) в ТГФ (270 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (ЕЮ Ас: МеОН; 95:5), получая указанное в заголовке соединение (17,7 г, выход 77% ) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 426 (МН)⁺.

Пример 2 (номер 2, табл. 1). 2-Хлор-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он.

а) 6-Хлор-2-(этиламино)-3 -нитропиридин.

Охлажденный на льду раствор ΕίΝΗ₂ (49,8 г, 1,10 моля) в толуоле (200 мл) добавляли в течение 15 мин к охлажденному на льду раствору 2,6-дихлор-3-нитропиридина (100,0 г, 0,52 моля) в толуоле (225 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 45 мин. Добавляли воду (500 мл) и ЕЮАс (500 мл) и разделяли фазы. Органический слой последовательно промывали водой (200 мл) и соляным раствором (200 мл), сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Оставшийся твердый продукт перекристаллизовывали из МеОН, получая указанное в заголовке соединение (83,7 г, выход 80%) в виде игольчатых кристаллов желтого цвета.

б) 3-Амино-6-хлор-2-(этиламино)пиридин.

Раствор, содержащий 8иС1₂-Н₂О (616,3 г, 2,73 моля) в водном 12н. растворе НС1 (500 мл), быстро добавляли при комнатной температуре к раствору 6-хлор-2-(этиламино)-3-нитропиридина (169,5 г, 0,84 моля) в АсОН (1,7 л). Через 20 мин смесь охлаждали до 0°С и добавляли воду (250 мл). Затем небольшими порциями добавляли ΝαΟΗ (240 г). Образовавшуюся суспензию фильтровали, удаляя соли олова. Фильтрат разбавляли водой (3,5 л), раствор подщелачивали, добавляя водный 10н. ΝαΟΗ, а затем экстрагировали ЕЮАс (3х1,7 л).Объединенные органические слои промывали соляным раствором (1 л), сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспрессхроматографией (гексан:ЕЮАс, 3:2), получая указанное в заголовке соединение (89,9 г, выход 62%) в виде твердого коричневого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 172/174 (МН)⁺.

в) 5-Бром-2-хлор-№{2-(этиламино)-6-хлор-3-пиридинил}-3 пиридинкарбоксамид.

Раствор 5-бром-2-хлор-3-пиридинкарбонилхлорида (30,0 г, 97,0 ммоля) в МеСN (100 мл) добавляли при комнатной температуре через канюлю к раствору 3-амино-6-хлор-2-(этиламино)пиридина (16,6 г, 97,0 ммоля) в МеСN (180 мл), содержащему твердый №1НСО₃, (14,2 г, 169 ммоля). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли воду (200 мл) и смесь перемешивали в течение 10 мин. Образовавшуюся суспензию фильтровали. Твердый продукт промывали ЕьО (50 мл) и концентрировали из раствора пиридина (3х50 мл), получая указанное в заголовке соединение (28,4 г, выход 75%).

г) 8-Бром-2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

1М раствор NаГМДС в ТГФ (167,5 мл, 167,5 моля) медленно добавляли к раствору 5-бром-2-хлор№{2-(этиламино)-6-хлор-3-пиридинил}-3-пиридинкарбоксамида (28,4 г, 72,8 ммоля) в пиридине (146 мл), нагретому до 50°С. Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 1,5 ч. Затем смесь сливали на смесь вода/лед (1л) и через 1 ч образовавшуюся суспензию фильтровали. Твердый продукт промывали водой и сушили при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (23,4 г, выход 91%).

д) 8-Бром-2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е] [1,4]диазепин-6-он.

Твердый NаΗ (60%-ная масляная дисперсия, 3,46 г, 86,1 ммоля) добавляли в течение 30 мин к раствору 8-бром-2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (23,4 г, 66,3 ммоля) в ДМФ (220 мл) при 50°С. Смесь перемешивали при 50°С в течение 1 ч, затем давали охладиться до комнатной температуры. Смесь сливали на воду (1 л) и образовавшуюся суспензию фильтровали. Твердый продукт последовательно промывали водой и гексаном, затем сушили при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (23,0 г, выход 94%).

е) 2-Хлор-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6он.

Аллилтрибутилолово (21,3 мл, 68,7 ммоля) и Рб(Рй₃Р)₄ (3,61 г, 3,12 ммоля) добавляли к дегазированному (пропускание Ν₂ через раствор в течение 30 мин) раствору 8-бром-2-хлор-5,11-дигидро-11-этил5-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (23,0 г, 62,5 ммоля) в ДМФ (312 мл). Смесь нагревали до 90°С в течение 2 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (гексан:ЕЮАс, 7:3), получая указанное в заголовке соединение (13,4 г, выход 65%).

ж) 2-Хлор-5,11-дигидро-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-5-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Озонированный кислород вносили в холодный (-78°С) раствор 2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-5метил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (13,4 г, 40,7 ммоля) в МеОН (102 мл) и СН₂С1₂ (102 мл) до полного исчезновения алкена. Раствор барботировали азотом, удаляя избыток О₃. Затем небольшими порциями добавляли твердый №1ВН₄ (2,69 г, 71,1 ммоля) и смеси давали нагреться до

-8005598 комнатной температуры. Через 1 ч добавляли водный насыщенный раствор ΝΗ₄Ο (150 мл) и смесь перемешивали в течение 20 мин. Органические растворители удаляли при пониженном давлении. К водному раствору добавляли воду (100 мл). Раствор экстрагировали СНС1₃ (3х200 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (Е1ОАс:СНС1₃, 4:1), получая указанное в заголовке соединение (10,4 г, выход 77%).

з) 2-Хлор-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е] [1,4] диазепин-6-он.

Диэтилазодикарбоксилат (ДЭАД) (4,26 мл, 27,0 ммолей) добавляли при комнатной температуре по каплям к раствору, содержащему 2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-5-метил-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (6,00 г, 18,0 ммоля), 4-гидроксихинолин (3,92 г, 27,0 ммолей) и Рй₃Р (7,09 г, 27,0 ммолей) в ТГФ (90 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (Е1ОАс:МеОН, 95:5), получая указанное в заголовке соединение (6,22 г, выход 75%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 460/462.

Пример 3 (номер 6, табл. 1). 2-Хлор-11-циклопропил-5,11-дигидро-5-метил-8-{2-(4-хинолинилокси) этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

а) 6-Хлор-2-(циклопропиламино)-3 -нитропиридин.

Раствор циклопропиламина (1,25 г, 22,0 ммоля) в толуоле (11 мл) добавляли в течение 10 мин к охлажденному на льду раствору 2,6-дихлор-3-нитропиридина (2,00 г, 10,4 ммоля) в толуоле (10 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч при комнатной температуре в течение 2 ч. К смеси добавляли воду (50 мл) и разделяли фазы. Органический слой промывали соляным раствором (25 мл), сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (гексан:Е1ОАс, 3:2), получая указанное в заголовке соединение (1,97 г, выход 89%) в виде твердого вещества желтого цвета.

б) 2-Хлор-11-циклопропил-5,11-дигидро-8-(2-гидроксиэтил)-5-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4] диазепин-6-он.

Указанное в заголовке соединение получали из 6-хлор-2-(циклопропиламино)-3-нитропиридина согласно методу, аналогичному описанному в примере 2 для получения 11-этильного аналога.

в) 2-Хлор-11-циклопропил-5,11-дигидро-5-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2Ь:2',3'-е][ 1,4] диазепин-6-он.

Диэтилазодикарбоксилат (ДЭАД) (85,6 мкл, 0,54 ммоля) добавляли при комнатной температуре по каплям к раствору, содержащему 2-хлор-11-циклопропил-5,11-дигидро-8-(2-гидроксиэтил)-5-метил-6Ндипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (125 мг, 0,36 ммоля), 4-гидроксихинолин (78,9 мг, 0,54 ммоля) и Рй₃Р (143 мг, 0,54 ммоля) в ТГФ (1, 8 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток частично очищали экспрессхроматографией (Е1ОАс:МеОН; 95:5). Твердый продукт дополнительно очищали с помощью ЖХВР с обращенной фазой (колонка СотЫРгер АЭ8-АО 50х20 мм, 5 мкм, 120 А, 5-100% МеСЖ0.10%, ТФК/вода+0,10% ТФК в течение 25 мин), получая указанное в заголовке соединение в виде трифторацетата (17,7 г, выход 77% ) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 472/474 (МН)⁺.

Пример 4 (номер 4, табл. 1). 5,11-Дигидро-11-этил-2-фтор-5-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он.

а) 2,6-Дифтор-3-нитропиридин.

К смеси концентрированной серной кислоты (600 мл) и дымящей азотной кислоты (90%, 400 мл) в ледяной бане (внутренняя температура поддерживалась на уровне 5-10°С) добавляли по каплям 2,6дифторпиридин (200 г, 1,74 моля). Образовавшуюся смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь медленно сливали на 3 кг льда и экстрагировали Е1₂О (2х2 л). Объединенные органические слои промывали водным 1,5н. раствором №ЮН (2х1 л), затем водным насыщенным раствором NаНСО₃ (400 мл) до тех пор пока значение рН не достигало примерно 8-9. Органические слои сушили над Мд§О₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении до постоянной массы (до удаления не прореагировавшего 2,6-дифторпиридина: 10-12%). В результате получили указанное в заголовке соединение в виде жидкости желтого цвета (207,3 г, выход 74% ).

б) 2-(Этиламино)-6-фтор-3 -нитропиридин.

К раствору 2,6-дифтор-3-нитропиридина (45,7 г, 285 ммолей) в ТГФ (500 мл) при -40°С добавляли по каплям раствор этиламина (25,7 г, 570 ммолей) в ТГФ (250 мл). Через 30 мин реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток растворяли в ЕЮАс. Органическую фазу промывали соляным раствором, сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали. Образовавшийся продукт желтого цвета очищали экспресс-хроматографией (15% ЕЮАс в гексане), получая указанное в заголовке соединение (43,2 г, выход 82%) в виде твердого вещества желтого цвета.

в) 3-Амино-2-(этиламино)-6-фторпиридин.

Раствор 2-(этиламино)-6-фтор-3-нитропиридина (43,2 г, 230 ммолей) в ТГФ (1 л) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм) в присутствии 20% Рд(ОН)₂/С

-9005598 (4,35 г). Катализатор удаляли фильтрацией через диатомовую землю. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (36,3 г, выход 95%) в виде твердого вещества черного цвета.

г) 2-Хлор-Ы-{2-(этиламино)-6-фтор-3-пиридинил}-5-бром-3-пиридинкарбоксамид.

К охлажденному раствору (4°С) 3-амино-2-(этиламино)-6-фторпиридина (31,0 г, 200 ммолей) в МеСЫ (160 мл) добавляли твердый ЫаНСО₃ (50,4 г, 600 ммолей). Через 15 мин добавляли раствор 5бром-2-хлор-3-пиридинкарбонилхлорида (1 экв, 200 ммолей) в МеСЫ (155 мл). После выдерживания в течение 60 мин при комнатной температуре реакционную смесь сливали на воду (1,2 л) и перемешивали в течение 30 мин. Образовавшееся твердое вещество фильтровали, сушили в течение ночи при пониженном давлении при 50°С. В результате получили указанное в заголовке соединение (73,7 г, выход 99%) в виде твердого вещества черного цвета.

д) 8-Бром-5,11-дигидро-11-этил-2-фтор-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

К раствору 2-хлор-Ы-{2-(этиламино)-6-фтор-3-пиридинил}-5-бром-3-пиридинкарбоксамида (73,5 г, 216 молей) в пиридине (435 мл) при 50°С добавляли по каплям 1М раствор ЫаГМДС в ТГФ (520 мл, 520 ммолей). Через 10 мин реакционной смеси давали охладиться до комнатной температуры, затем сливали на ледяную воду (2 л). Образовавшийся твердый продукт фильтровали, промывали водой и затем гексаном. Твердый продукт сушили при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (50,6 г, выход 69%) в виде твердого вещества темно-зеленого цвета.

е) 8-Бром-5,11-дигидро-11-этил-2-фтор-5-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

К раствору 8-бром-5,11-дигидро-11-этил-2-фтор-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (44 г, 130,5 ммоля) в ДМФ (520 мл) добавляли ЫаН (4,28 г, 178 ммолей) и смесь нагревали до 50°С в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и обрабатывали МеI (24,4 мл, 522 ммоля). Через 1,5 ч реакционную смесь сливали на ледяную воду. Твердый продукт фильтровали, промывали водой и затем гексаном, сушили при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (43,2 г, выход 94%) в виде твердого вещества темно-серого цвета.

ж) 5,11 -Дигидро-11-этил-2-фтор-5-метил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4] диазепин-6он.

Аллилтрибутилолово (32,0 мл, 103,4 ммоля) и Рб(Рй₃Р)₄ (5,43 г, 4,70 ммоля) добавляли к дегазированному (через раствор в течение 45 мин пропускали Ν₂) раствору 8-бром-5,11-дигидро-11-этил-2-фтор5-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (33,0 г, 94,0 ммоля) в ДМФ (470 мл). Для завершения реакции вводили дополнительное количество Рб(Рй₃)₄ (1,09 г, 0,94 ммоля вносили в реакционную смесь через 1, 2, 3, 4, 5 ч ). Смесь нагревали до 90°С в течение 6 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (гексан:Е1ОАс, от 8:2 до 7:3), получая указанное в заголовке соединение (22,4 г, выход 76%).

з) 5,11-Дигидро-11-этил-2-фтор-8-(2-гидроксиэтил)-5-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Струей озонированного кислорода в течение 3 ч барботировали холодный (-78°С) раствор 5,11дигидро-11-этил-2-фтор-5-метил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (22,38 г, 71,6 ммоля) в СН₂С1₂ (100 мл) и МеОН (100 мл). Затем раствор барботировали струей Ν₂ в течение 15 мин и затем к раствору добавляли твердый ЫаВН₄ (5,05 г, 133 ммоля). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры. Через 1 ч в реакционную смесь вносили дополнительную порцию ЫаВН₄ (1,62 г, 43,0 моля). После выдерживания в течение еще 1 ч добавляли насыщенный раствор ЫН₄С1 (150 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Органические растворители удаляли при пониженном давлении. Добавляли воду (200 мл) и смесь экстрагировали СНС1₃ (3х300 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (Е1ОАс:СНС1₃, 4:1), получая указанное в заголовке соединение (19,7 г, выход 72%) в виде твердого вещества белого цвета.

и) 5,11-Дигидро-11-этил-2-фтор-5-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е] [1,4]диазепин-6-он.

Диэтилазодикарбоксилат (ДЭАД) (14,3 мл, 91,0 ммоль) добавляли при комнатной температуре по каплям к раствору, содержащему 5,11-дигидро-11-этил-2-фтор-8-(2-гидроксиэтил)-5-метил-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [1,4]диазепин-6-он (19,2 г, 60,7 ммоля), 4-гидроксихинолин (13,2 г, 91,0 ммоль) и РЬ₃Р (23,9 г, 91,0 ммоль) в ТГФ (300 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (Е1ОАс:МеОН; 95:5), получая указанное в заголовке соединение (17,9 г, выход 67%) в виде твердого продукта белого цвета: МС (Ε8Σ) т/ζ 444 (МН)⁺.

Пример 5 (номер 1, табл. 1). 2-Хлор-5,11-дигидро-11-этил-4-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он.

а) 2-Хлор-Ы-(2,6-дихлор-4-метил-3-пиридинил)-3-пиридинкарбоксамид.

ЫаНСО₃ (21,72 г, 258,6 ммоля) добавляли к раствору 3-амино-2,6-дихлор-4-метилпиридина (41,61 г, 235,1 ммоля; полученному согласно методу, описанному у К.С. Сгсашдег и др. 1. НеЮгосусПс СЬет. 32, 259-263, 1995) в МеСЫ (350 мл) и образовавшуюся суспензию перемешивали в течение 15 мин. Затем в

-10005598 течение 30 мин вводили раствор 2-хлорникотинилхлорида (43,44 г, 246,8 ммоля) в МеСЫ (500 мл). Образовавшуюся суспензию перемешивали при комнатной температуре. Через 24 ч было установлено, что раствор являлся кислым и поэтому в него вводили дополнительное количество ЫаНСО₃ (3,00 г, 35,7 ммоля). Затем суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение еще 2 дней. Затем смесь сливали на смесь воды (2 л) и льда (200 г) и перемешивали в течение 20 мин. Твердый продукт фильтровали и промывали водой (500 мл) и затем образовавшийся твердый продукт сушили над Р₂О₅ при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (62,55 г, выход 84%) в виде порошка белого цвета.

б) Ы-(2,6-Дихлор-4-метил-3-пиридинил)-2-(этиламино)-3-пиридинкарбоксамид.

Раствор 2-хлор-Ы-(2,6-дихлор-4-метил-3-пиридинил)-3-пиридинкарбоксамида (63,17 г, 194,0 ммоля) и этиламина (28,0 г, 583 ммоля) в ксилоле (250 мл) перемешивали при температуре 120-125°С в стальном автоклаве в течение 7 ч. Образовавшуюся суспензию сливали на воду (1 л), перемешивали в течение 15 мин и фильтровали. Остаток растворяли в ЕЮАс и промывали водой (трижды), соляным раствором и сушили над Мд§О₄. Фильтрат экстрагировали ЕЮАс и объединенные органические экстракты промывали водой и соляным раствором и сушили над Мд§О₄. Затем две фракции объединяли и избыток ксилола удаляли совместной перегонкой с бензолом, получая указанное в заголовке соединение (61,98 г, твердое вещество розового цвета) в виде основного компонента смеси соединений. Неочищенный продукт использовали непосредственно в следующей реакции.

в) 5-Бром-Ы-(2,6-дихлор-4-метил-3-пиридинил)-2-(этиламино)-3-пиридинкарбоксамид.

Твердый КОАс (22,2 г, 229 ммолей) добавляли к неочищенному раствору Ы-(2,6-дихлор-4-метил-3пиридинил)-2-(этиламино)-3-пиридинкарбоксамида (61,98 г, <190 ммолй) в АсОН (600 мл). Затем в течение 30 мин добавляли раствор Вг₂ (9,7 мл, 191 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин вводили дополнительные количества КОАс и Вг₂ до тех пор пока по данным ТСХ не оставалось исходного продукта (всего 11,2 г КОАс и 5,91 мл Вг₂). Затем раствор сливали на воду (2 л) и перемешивали в течение 20 мин. Твердый продукт удаляли фильтрацией и затем растворяли в ЕГО (1 л). Эфирный раствор промывали водой (трижды), водным насыщенным раствором №1НСО₃. соляным раствором, затем сушили (Мд§О₄), получая смесь, содержащую в качестве основного компонента указанное в заголовке соединение (77,7 г, пена желтого цвета). Продукт непосредственно использовали в следующей реакции.

г) 8-Бром-2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Раствор неочищенного 5-бром-Х-(2,6-дихлор-4-метил-3-пиридинил)-2-(этиламино)-3-пиридинкарбоксамида (77,7 г, ммолей) в безводном пиридине (1,0 л) нагревали до 50°С. Затем по каплям добавляли 1М раствор ЫаГМДС в ТГФ (418 мл, 418 ммолей) и перемешивание продолжали в течение еще 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры добавляли воду (50 мл) и смесь концентрировали до 2/3 объема с помощью роторного испарителя. Затем остаток сливали на воду (3 л). После фильтрации получили указанное в заголовке соединение (23,44 г) в виде твердого вещества рыжевато-коричневого цвета. Фильтрат экстрагировали ЕЮАс (трижды) и объединенные экстракты промывали водой и соляным раствором, затем сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (гексан: ЕЮ Ас, 9:1 или СНС1₃), получая дополнительное количество указанного в заголовке соединения (14,06 г, всего 37,50 г, выход после трех стадий 50%).

д) 2-Хлор-5,11 -дигидро- 11-этил-4-метил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][ 1,4]диазепин-6он.

Раствор 8-бром-2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-4-метил-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-она (12,6 г, 34,3 ммоля) в ДМФ (25,0 мл) дегазировали при пониженном давлении в течение 20 мин. Добавляли Рб(РРй₃)₄ (775 мг, 0,7 ммоля), а затем аллилтрибутилолово (12,5 мл, 41,1 ммоля). После дегазации при пониженном давлении в течение 10 мин смесь нагревали до 100°С в течение 7 ч. Затем смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (гексан:ЕЮАс, 19:1), получая указанное в заголовке соединение (8,04 г, выход 71% ) в виде твердого вещества желтого цвета.

е) 2-Хлор-5,11-дигидро-11 -этил-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][ 1,4] диазепин-6-он.

Струю О₃ пропускали через холодный (-78°С) раствор 2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-4-метил-8-(2пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (8,04 г, 24,4 ммоля) и Судана III в СН₂С1₂ (120 мл) и МеОН (120 мл). После превращения раствора розового цвета в коричневый, раствор барботировали О₂ в течение 10 мин. Затем добавляли ЫаВН₄ (1,12 г, 29,4 ммоля) и раствору давали нагреться до комнатной температуры. Через 30 мин вносили дополнительное количество ЫаВН₄ (500 мг). Через 1 ч добавляли водный насыщенный раствор ЫН₄С1 и смесь перемешивали в течение 20 мин. Раствор концентрировали при пониженном давлении и экстрагировали СН₂С1₂ (трижды). Объединенные органические экстракты промывали соляным раствором, сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (СНС1₃:ЕЮН, 97:3), получая указанное в заголовке соединение (6,01 г, выход 74%) в виде твердого вещества белого цвета.

ж) 2-Хлор-5,11-дигидро-11-этил-4-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е] [1,4]диазепин-6-он.

-11005598

Диэтилазодикарбоксилат (ДЭАД) (83 мкл, 0,53 моля) добавляли при комнатной температуре по каплям к раствору, содержащему 2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (125 мг, 0,38 ммоля), 4-гидроксихинолин (76,3 мг, 0,53 ммоля) и Р11₃Р (138 мг, 0,53 ммоля) в ТГФ (2,5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ЕЮАс (60 мл) и раствор последовательно промывали 1н. водным раствором ΝαΟΗ (3х10 мл) и соляным раствором (15 мл), затем сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспрессхроматографией (Е1ОАс:МеОН, 9:1), получая указанное в заголовке соединение (52 мг, выход 30%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (ЕМ) т/ζ 460/462 (МН)⁺.

Пример 6 (номер 7, табл. 1). 5,11-Дигидро-11-этил-2-фтор-4-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он.

а) 8-Бром-5,11-дигидро-11-этил-2-{{(4-метоксифенил)метил}амино }-4-метил-6Н-дипиридо [3,2Ь:2',3'-е][ 1,4] диазепин-6-он.

8-Бром-2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (2,50 г, 6,80 ммоля) растворяли в диоксане (10 мл) в стеклянном толстостенном сосуде и к раствору добавляли 4метоксибензиламин (4,0 мл, 30,6 моля). Смесь нагревали до 170°С в течение 5 дней. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ЕЮАс и промывали 10%-ным водным раствором ΝΗ₄Ο1. сушили над Мд§О₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая масло коричневого цвета, которое хроматографировали на силикагеле (гексан:Е1ОАС, 4:1). В результате получили указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества желтого цвета (1,35 г, выход 42%).

б) 2-Амино-8-бром-5,11-дигидро-11-этил-4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

8-Бром-5,11-дигидро-11-этил-2-{{(4-метоксифенил)метил}амино }-4-метил-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'е][1,4]диазепин-6-он (6,52 г, 18,7 ммоля) растворяли в трифторуксусной кислоте (100 мл) и раствор перемешивали с помощью магнитной мешалки при комнатной температуре в течение 18 ч. Трифторуксусную кислоту выпаривали при пониженном давлении и остаток сливали на смесь, содержащую воду (450 мл), концентрированный №Н₄ОН (50 мл) и ЕЮАс (400 мл). Смесь перемешивали с помощью магнитной мешалки в течение 2 ч при комнатной температуре. Органическую фазу концентрировали при пониженном давлении. Осадок желтого цвета отфильтровывали и промывали водой, сушили при пониженном давлении, получая 7,51 г твердого вещества желтого цвета, которое растирали в Е1₂О, получая указанное в заголовке соединение (5,12 г, выход 105%) в виде твердого вещества желтого цвета.

в) 8-Бром-5,11-дигидро-11-этил-2-фтор-4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е] [1,4]диазепин-6-он.

В пластмассовый сосуд вносили 2-амино-8-бром-5,11-дигидро-11-этил-4-метил-6Н-дипиридо[3,2Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (5,10 г, 14,6 ммоля). Добавляли НЕ-пиридин (100 г) и образовавшуюся суспензию охлаждали до 0°С. В течение 30 мин добавляли в виде нескольких порций нитрит натрия (1,12 г,

16,1 ммоля), получая раствор фиолетового цвета. Затем смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь сливали на смесь льда и 6н. №ЮН. Суспензию бежевого цвета экстрагировали ЕЮАс. Органические экстракты объединяли, сушили над Мд§О₄, фильтровали и концентрировали. Остаток растирали с Е1₂О/гексаном, получая указанное в заголовке соединение (4,30 г, выход 84%).

г) 5,11-Дигидро-11-этил-2-фтор-4-метил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6он.

Аллилтрибутилолово (7,77 мл, 25,1 ммоля) и Рб(Рй₃Р)₄ (1,32 г, 1,14 ммоля) добавляли к дегазированному раствору (через раствор в течение 30 мин пропускали Ν₂) 8-бром-5,11-дигидро-11-этил-2-фтор4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (8,0 г, 22,8 ммоля) в ДМФ (114 мл). Смесь нагревали до 90°С в течение 3 ч. Смесь сливали на воду (250 мл) и экстрагировали ЕЮАс (4х250 мл). Объединенные органические слои промывали 20%-ным водным раствором №Н₄ОН (250 мл) и соляным раствором (250 мл), сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (гексан:ЕЮАс, от 4:1 до 1:1), получая указанное в заголовке соединение (3,16 г, выход 51%).

д) 5,11-Дигидро-11-этил-2-фтор-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Струей озонированного кислорода в течение 45 мин барботировали охлажденный (-78°С) раствор 5,11-дигидро-11-этил-2-фтор-4-метил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (3,16 г, 10,1 ммоля) в СН₂С1₂ (25 мл) и МеОН (25 мл). После этого раствор барботировали струей Ν₂ в течение 15 мин и затем к раствору добавляли твердый №1ВН₄ (669 мг, 17,1 ммоля). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры. Через 2 ч добавляли водный насыщенный раствор №Н₄С1 (50 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Органические растворители удаляли при пониженном давлении. Оставшийся водный раствор экстрагировали СНС1₃ (3х100 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (ЕЮАс:СНС1₃, 1:1), получая указанное в заголовке соединение (2,40 г, выход 75%) в виде твердого вещества белого цвета.

-12005598

е) 5,11-Дигидро-11-этил-2-фтор-4-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е] [1,4]диазепин-6-он.

Диизопропилазодикарбоксилат (ДИАД) (117 мкл, 0,59 ммоля) добавляли по каплям к раствору, содержащему 5,11 -дигидро-11-этил-2-фтор-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он (125 мг, 0,40 ммоля), 4-гидроксихинолин (86,0 мг, 0,59 ммоля) и Рй₃Р (156 мг, 0,59 ммоля) в ТГФ (1,9 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ЕЮАс (40 мл) и раствор последовательно промывали 3н. водным раствором ΝαΟΗ (3х20 мл), водным насыщенным раствором ΝΗ.·|ί.Ί (15 мл), соляным раствором (15 мл), затем сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток частично очищали экспресс-хроматографией (ЕЮАс:МеОН; 95:5). Твердый продукт дополнительно очищали с помощью ЖХВР с обращенной фазой (колонка СотЫРгер ΑΌ8АО 50х20 мм, 5 мкм, 120 А, 5-100% МеСК+0,10% ТФК/вода+0,10% ТФК в течение 25 мин), получая трифторацетат указанного в заголовке соединения (106 мг, выход 48%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Е81) т/ζ 444 (МН)⁺.

Пример 7 (номер 5, табл. 1). 11-(Циклопропил)-5,11-дигидро-2-фтор-4-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4] диазепин-6-он.

а) 11 -Циклопропил-5,11-дигидро-2-фтор-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4] диазепин-6-он.

Указанное в заголовке соединение получали из 8-бром-2-хлор-11-циклопропил-5,11-дигидро-4метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она с помощью метода, аналогичного методу получения соответствующего 11-этильного аналога, который описан в примере 6.

б) 11-Циклопропил-5,11-дигидро-2-фтор-4-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2Ь:2',3'-е][ 1,4] диазепин-6-он.

Диизопропилазодикарбоксилат (ДИАД) (131 мкл, 0,66 ммоля) добавляли при комнатной температуре по каплям к раствору, содержащему 11-(циклопропил)-5,11-дигидро-2-фтор-8-(2-гидроксиэтил)-4метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (140 мг, 0,44 ммоля), 4-гидроксихинолин (96,4 мг, 0,66 ммоля) и Рй₃Р (124 мг, 0,66 ммоля) в ТГФ (2,2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ЕЮАс (60 мл) и раствор последовательно промывали 3н. водным раствором №ЮН (3х20 мл), водным насыщенным раствором КН₄С1 (20 мл) и соляным раствором (20 мл), затем сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток частично очищали экспресс-хроматографией (ЕЮАс:МеОН; 95:5). Твердый продукт дополнительно очищали с помощью ЖХВР с обращенной фазой (колонка СотЫРгер АОЗ-Аф 50х20 мм, 5 мкм, 120 А, 5-100% МеСК+0,10% ТФК/вода+0,10% ТФК в течение 25 мин), получая трифторацетат указанного в заголовке соединения (104 мг, выход 43%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Е81) т/ζ 456 (МН)⁺.

Пример 8 (номер 8, табл. 1). 5,11-Дигидро-11-этил-4-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Ндипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он.

а) 5,11 - Дигидро-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4] диазепин-6-он.

Смесь, содержащую 2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо[3,2Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (168 мг, 0,51 ммоля), формиат аммония (318 мг, 5,1 ммоля) и 10% Рб/С (50 мг) в ЕЮН (6 мл), перемешивали при комнатной температуре. Через 2 ч вносили дополнительные количества формиата аммония (200 мг, ммоль) и 10% Рб/С (50 мг). После перемешивания в течение еще 24 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в СНС1₃ и смесь промывали водным насыщенным раствором №1НСО₃. сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (122 мг, выход 81%) в виде масла желтого цвета.

б) 5,11-Дигидро-11-этил-4-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Диизопропилазодикарбоксилат (ДИАД) (42 мкл, 0,21 ммоля) добавляли при комнатной температуре по каплям к раствору, содержащему 5,11-дигидро-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо[3,2Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он. (42,0 мг, 0,14 ммоля), 4-гидроксихинолин (31 мг, 0,21 ммоля) и Рй₃Р (55,4 мг, 0,21 ммоля) в ТГФ (0,7 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ЕЮАс (60 мл) и раствор последовательно промывали 3н. водным раствором №ЮН (3х20 мл), водным насыщенным раствором ИН₄С1 (20 мл) и соляным раствором (20 мл), затем сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток частично очищали экспресс-хроматографией (ЕЮАс:МеОН; 95:5). Твердый продукт дополнительно очищали с помощью ЖХВР с обращенной фазой (колонка СотЫРгер ЛЭЗ-АО 50х20 мм, 5 мкм, 120 А, 5-100% МеСК+0,10% ТФК/вода+0,10% ТФК в течение 25 мин), получая трифторацет указанного в заголовке соединения (14,2 мг, выход 19%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Е81) т/ζ 426 (МН)⁺.

Пример 9 (номер 3, табл. 1). 11-(Циклопропил)-5,11-дигидро-4-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он.

-13005598

а) 5-Бром-2-хлор-И-(2,6-дихлор-4-метил-3-пиридинил)-3-пиридинкарбоксамид.

3-Амино-2,6-дихлор-4-метилпиридин (0,51 г, 2,85 ммоля) растворяли в толуоле (35 мл) и добавляли пиридин (0,27 мл, 3,28 ммоля). Затем по каплям в течение 30 мин добавляли 5-бром-2-хлор-3пиридинкарбонилхлорид (0,80 г, 3,14 ммоля). Образовавшуюся смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, разбавляли водой и экстрагировали толуолом (дважды). Объединенные органические экстракты сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Образовавшееся вязкое масло растирали с СН₂С1₂, и с помощью вакуумной фильтрации собирали твердое вещество белого цвета, получая указанное в заголовке соединение (0,41 г, выход 36%).

б) 5-Бром-2-(циклопропиламино)-И-(2,6-дихлор-4-метил-3-пиридинил)-3-пиридинкарбоксамид.

Раствор 5-бром-2-хлор-И-(2,6-дихлор-4-метил-3-пиридинил)-3-пиридинкарбоксамида (3,00 г, 7,61 ммоля) и циклопропиламина (2,11 мл, 30,5 ммоля) в ксилоле выдерживали в запечатанной пробирке при 120°С в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, разбавляли водой и экстрагировали ЕЮАс (дважды). Объединенные органические экстракты сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Образовавшийся остаток очищали растиранием (Е1₂О:гексан, 3:1), получая указанное в заголовке соединение (2,35 г, выход 75%) в виде твердого вещества светло-желтого цвета.

в) 8-Бром-2-хлор-11-циклопропил-5,11-дигидро-4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6он.

Раствор 5-бром-2-(циклопропиламино)-И-(2,6-дихлор-4-метил-3-пиридинил)-3-пиридинкарбоксамида (105 мг, 0,254 ммоля) в пиридине (3,0 мл) нагревали до 50°С и добавляли 1М раствор NаГМДС в ТГФ (0,53 мл, 0,53 ммоля). Образовавшийся раствор перемешивали при 50°С в течение 3 ч. Реакцию прекращали, добавляя водный насыщенный раствор ΝΗ₄Ο, разбавляли водой и экстрагировали ЕЮАс (трижды). Объединенные органические экстракты промывали соляным раствором, сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Образовавшийся остаток очищали экспрессхроматографией (гексан: ЕЮАс, 7:3), получая указанное в заголовке соединение (32 мг, выход 33%).

г) 2-Хлор-11-циклопропил-5,11-дигидро-4-метил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4] диазепин-6-он.

Раствор 8-бром-2-хлор-11-циклопропил-5,11-дигидро-4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (0,046 г, 0,122 ммоля) в ДМФ (2,0 мл) дегазировали, барботируя Ν₂ в течение 10 мин. Добавляли Рб(РРй₃)₄ (2,8 мг, 0,003 ммоля) и аллилтрибутилолово (0,45 мл, 0,146 ммоля) и образовавшийся раствор нагревали до 90°С в течение 2,5 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали СН2С12 (трижды) и ЕЮАс (дважды). Объединенные органические экстракты сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Образовавшийся остаток очищали экспресс-хроматографией (от гексана до смеси гексан:ЕЮАс, 7:3), получая указанное в заголовке соединение (0,033 г, выход 80%).

д) 2-Хлор-11-циклопропил-5,11-дигидро-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е][1,4] диазепин-6-он.

Холодный (-78°С) раствор 2-хлор-11-циклопропил-5,11-дигидро-4-метил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (0,82 г, 2,43 ммоля) в СН₂С1₂ (7,5 мл) и МеОН (7,5 мл) насыщали О₃ до приобретения раствором светло-голубой окраски. Реакционную смесь выдерживали при -78°С в течение 10 мин, затем добавляли №1ВН₄ (0,23 г, 9,71 ммоля) и смеси давали медленно нагреться до комнатной температуры в течение 2 ч. Реакцию прекращали, добавляя водный 10%-ный раствор лимонной кислоты и экстрагировали ЕЮАс (трижды). Органические экстракты объединяли, промывали соляным раствором, сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Образовавшийся остаток очищали экспресс-хроматографией (МеОН:СН2С12, от 2 до 10%), получая указанное в заголовке соединение (0,41 г, выход 60%) в виде твердого вещества белого цвета.

е) 11-Циклопропил-5,11-дигидро-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Указанное в заголовке соединение получали с помощью метода, аналогичного методу, описанному в примере 8а для получения 11-этильного аналога.

ж) 11-Циклопропил-5,11-дигидро-4-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е] [1,4]диазепин-6-он.

Диизопропилазодикарбоксилат (ДИАД) (167 мкл, 0,85 ммоля) добавляли при комнатной температуре по каплям к раствору, содержащему 11-(циклопропил)-5,11-дигидро-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (175 мг, 0,57 ммоля), 4-гидроксихинолин (123 мг, 0,85 ммоля) и Р11₃Р (223 мг, 0,85 ммоля) в ТГФ (2,8 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ЕЮАс (60 мл) и раствор последовательно промывали 3н. водным раствором №ОН (3x20 мл), водным насыщенным раствором ХН₄С1 (20 мл) и соляным раствором (20 мл), затем сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (ЕЮАс:МеОН; 95:5), получая указанное в заголовке соединение (74 мг, выход 30%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Е81) т/ζ 438 (МН)⁺.

-14005598

Пример 10 (номер 21, табл. 1). 5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-8-{2-{(1-оксидо-4-хинолинил)окси} этил}-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е][ 1,4] диазепин-6-он.

Твердую мХПБК (80-85%, метахлорпербензойная кислота) (2,21 г, 10,2 ммоля) добавляли при комнатной температуре к раствору 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Ндипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (2,56 г, 6,02 ммоля) в СН₂С1₂ (30 мл) и ТГФ (30 мл) (следует отметить, что реакцию можно осуществлять только в СН₂С1₂). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в СНС1₃ (400 мл), раствор последовательно промывали водным 10%-ным раствором Ыа₂8₂О₃ (3х75 мл), водным насыщенным раствором ЫаНСО₃ (3х75 мл) и соляным раствором (75 мл), сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (СНС1₃:МеОН, 9:1), получая указанное в заголовке соединение (2,01 г, выход 76%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 442 (МН)⁺.

Пример 11 (номер 17, табл. 1). 2-Хлор-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-8-{2-{(1-оксидо-4-хинолинил) окси}-этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

С помощью процесса, идентичного описанному в примере 10, из 2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-5метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (2,70 г, 5,87 ммоля) получали указанное в заголовке соединение (2,05 г, выход 73%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 476/478 (МН)⁺.

Пример 12 (номер 11, табл. 1). 5,11-Дигидро-11-этил-2-фтор-5-метил-8-{2-{(1-оксидо-4-хинолинил) окси}этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Твердую мХПБК (457 мг, 2,12 ммоля) добавляли к раствору 5,11-дигидро-2-фтор-11-этил-5-метил8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (470 мг, 1,06 ммоля) в СН2С12 (10 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 13 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в СНС1₃ (75 мл), раствор последовательно промывали водным 10%-ным раствором Ыа₂8₂О₃ (3x25 мл), водным насыщенным раствором ЫаНСО₃ (3х25 мл) и соляным раствором (25 мл), сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (СНС1₃:МеОН, от 19:1 до 9:1), получая указанное в заголовке соединение (250 мг, выход 51%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 460 (МН)⁺.

Пример 13 (номер 10, табл. 1). 2-Хлор-11-циклопропил-5,11-дигидро-5-метил-8-{2-{(1-оксидо-4хинолинил)окси}этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Твердую мХПБК (177 мг, 0,82 ммоля) добавляли к раствору 2-хлор-11-циклопропил-5,11-дигидро5-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (143 мг, 0,30 ммоля) в СН2С12 (3 мл) и ТГФ (3 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 14 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ЕЮАс (50 мл), раствор последовательно промывали водным раствором 10% Ыа₂8₂О₃ (3х10 мл), водным насыщенным раствором ЫаНСО₃ (3х10 мл) и соляным раствором (10 мл), сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток частично очищали экспресс-хроматографией (от Е1ОАс:МеОН, 95:5 до СН₂С1₂:МеОН, 9:1). Неочищенный продукт дополнительно очищали с помощью ЖХВР с обращенной фазой (колонка СотЫРгер АО8-АЦ 50х20 мм, 5 мкм, 120 А, 5-100% МеСЫ+0,10% ТФК/вода+0,10% ТФК в течение 25 мин). Очищенные фракции обрабатывали водным насыщенным раствором ЫаНСО₃, экстрагировали ЕЮАс и раствор сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (28,3 мг, выход 19%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 488/490 (МН)⁺.

Пример 14 (номер 14, табл. 1). 2-Хлор-5,11-дигидро-11-этил-4-метил-8-{2-{(1-оксидо-4-хинолинил) окси}этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Твердую мХПБК (46,9 мг, 0,22 ммоля) добавляли к раствору 2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-5-метил8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (50,0 мг, 0,11 ммоля) в СН₂С1₂ (2,2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ΕΐОАс (50 мл), раствор последовательно промывали 10%-ным водным раствором Ыа₂8₂О₃ (3х10 мл), водным насыщенным раствором ПаНСО₃ (3х10 мл) и соляным раствором (10 мл), сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью ЖХВР с обращенной фазой (колонка СотЫРгер АО8-АЦ 50х20 мм, 5 мкм, 120 А, 5-100% МеСЫ+0,10% ТФК/вода+0,10% ТФК в течение 25 мин). Очищенные фракции обрабатывали водным насыщенным раствором №НСО₃. экстрагировали ΕΐОАс и раствор сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (32,5 мг, выход 63%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 488/490 (МН)⁺.

Пример 15 (номер 9, табл. 1). 5,11-Дигидро-11-этил-2-фтор-4-метил-8-{2-{(1-оксидо-4-хинолинил) окси}этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

С помощью процесса, идентичного описанному в примере 14, из 5,11-дигидро-11-этил-2-фтор-4метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (125 мг, 0,28 ммоля)

-15005598 получали указанное в заголовке соединение (40 мг, выход 31%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 460 (МН)⁺.

Пример 16 (номер 12, табл. 1). 5,11-Дигидро-11-этил-4-метил-8-{2-{(1-оксидо-4-хинолинил)окси} этил}6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он.

Твердую мХПБК (163 мг, 0,75 ммоля) добавляли к раствору 5,11-дигидро-11-этил-4-метил-8-{2-(4хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (144 мг, 0,34 ммоля) в СН₂С1₂ (7,5 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь разбавляли СН₂С1₂ (125 мл), промывали последовательно водным 10%-ным раствором Ыа₂8₂О₃ (2x25 мл), водным насыщенным раствором ЫаНСОз (2х25 мл) и соляным раствором (25 мл), затем сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (СН₂С1₂:МеОН, 10:1), получая указанное в заголовке соединение (102 мг, выход 68%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 442 (МН).

Пример 17 (номер 15, табл. 1). 11-Циклопропил-5,11-дигидро-4-метил-8-{2-{(1-оксидо-4-хинолинил)окси}этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

С помощью процесса, идентичного описанному в примере 14, из 11-циклопропил-5,11-дигидро-4метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (37,1 мг, 0,085 ммоля) получали указанное в заголовке соединение (35 мг, выход 91%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 454 (МН)⁺.

Пример 18 (номер 25, табл. 1). 2-Хлор-5,11-дигидро-11-этил-4-метил-8-{2-(5-хинолинилокси)этил}6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он.

Диэтилазодикарбоксилат (ДЭАД) (77 мкл, 0,49 ммоля) добавляли при комнатной температуре по каплям к раствору, содержащему 2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (125 мг, 0,38 ммоля), 5-гидроксихинолин (70,9 мг, 0,49 ммоля) и РП₃Р (128 мг, 0,49 ммоля) в ТГФ (2,5 мл). Через 1,5 ч в смесь вносили дополнительные количества ДЭАД (35 мкл, 0,22 ммоля) и РР11₃ (59 мг, 0,22 ммоля). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем разбавляли ЕЮАс (50 мл) и раствор последовательно промывали водным 1н. раствором ЫаОН (4х10 мл) и соляным раствором (15 мл), затем сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (СН₂С1₂:ацетон, 85:15). Образовавшийся твердый продукт растирали с Е1₂О, получая указанное в заголовке соединение (38 мг, выход 22%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 460/462 (МН)⁺.

Пример 19 (номер 20, табл. 1). 2-Хлор-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-8-{2-{(1-оксидо-5-хинолинил) окси}этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Диэтилазодикарбоксилат (ДЭАД) (160 мкл, 1,01 ммоля) добавляли при комнатной температуре по каплям к раствору, содержащему 2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-5-метил-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (225 мг, 0,68 ммоля), 5-гидроксихинолин (147 мг, 1,01 ммоля) и РП₃Р (266 мг, 1,01 ммоля) в ТГФ (3,4 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток частично очищали экспресс-хроматографией (Е1ОАс:МеОН; 95:5). Фракции, содержащие 5-хинолинилоксипроизводное, концентрировали, растворяли в СН₂С1₂ (2 мл) и ТГФ (5 мл) и обрабатывали мХПБК (80%, 248 мг, 1,15 ммоля) при комнатной температуре. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ЕЮАс (50 мл), промывали последовательно 10%-ным водным раствором №ь8₂О₃ (3х10 мл), водным насыщенным раствором ЫаНСО₃ (3х10 мл) и соляным раствором (10 мл), затем сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (от ЕЮАс:МеОН, 95:5 до СН₂С1₂:МеОН, 9:1), получая указанное в заголовке соединение (113 мг, выход после 2 стадий 35% ) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 476/478 (МН)⁺.

Пример 20 (номер 18, табл. 1). 5,11-Дигидро-11-этил-2-фтор-5-метил-8-{2-{(1-оксидо-5-хинолинил) окси}этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

С помощью процесса, идентичного процессу, описанному в примере 19, из 5,11-дигидро-11-этил-2фтор-8-(2-гидроксиэтил)-5-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (267 мг, 0,84 ммоля) получали указанное в заголовке соединение (204 мг, выход после 2 стадий 52%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 460 (МН)⁺.

Пример 21 (номер 19, табл. 1). 2-Хлор-5,11-дигидро-11-этил-4-метил-8-{2-{(1-оксидо-5-хинолинил) окси}этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

С помощью процесса, идентичного процессу, описанному в примере 19, но используя диизопропилазодикарбоксилат (ДИАД) вместо диэтилазодикарбоксилата, из 2-хлор-5,11-дигидро-11-этил-8-(2гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (223 мг, 0,67 ммоля) получали указанное в заголовке соединение (43,4 мг, выход 2 стадий 14%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 476/478 (МН)⁺.

Пример 22 (номер 23, табл. 1). 5,11-Дигидро-11-этил-2-фтор-4-метил-8-{2-{(1-оксидо-5-хинолинил) окси}этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

-16005598

С помощью процесса, идентичного процессу, описанному в примере 21, из 5,11-дигидро-11-этил-2фтор-8-(2-гидроксиэтил)-4-метил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (250 мг, 0,79 ммоля) получали указанное в заголовке соединение (64,7 мг, выход после 2 стадий 8%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (ЕБ1) т/ζ 460 (МН)⁺.

Пример 23 (номер 22, табл. 1). 2-Хлор-5,11-дигидро-11-этил-8-{2-{(1-оксидо-4-хинолинил)окси} этил}-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е][ 1,4] диазепин-6-он.

МС (ЕБ1) т/ζ 462/464 (МН)⁺.

Пример 24 (номер 26, табл. 1). 5,11-Дигидро-5,11-диэтил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Ндипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он.

МС (ЕБ1) т/ζ 440 (МН)⁺.

Пример 25 (номер 27, табл. 1). 5,11-Дигидро-5,11 -диэтил-8-{2-{(1-оксидо-4-хинолинил)окси}этил}6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он.

МС (ЕБ1) т/ζ 456 (МН)⁺.

Пример 26 (номер 28, табл. 1). 2,5-Диметил-5,11-дигидро-11-этил-8-{2-(1-оксидо-4-хинолинилокси) этил}-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е][ 1,4] диазепин-6-он.

а) 5-Бром-2-хлор-Ы-(6-хлор-2-метил-3-пиридинил)-3-пиридинкарбоксамид.

№1НСО₃ (3,9 г, 46,4 ммоля) добавляли к раствору 3-амино-2-хлор-6-метилпиридина (2,2 г, 15,4 ммоля), полученному согласно методу, описанному у К.С. θΓοζίη§0Γ и др. 1. Не!егосусйс СНет.. 32, 259263, 1995, в МеСЫ (50 мл). Образовавшуюся суспензию перемешивали в течение 15 мин и в течение 30 мин вводили раствор неочищенного 5-бром-2-хлор-3-пиридинкарбонилхлорида (4 г), полученного из 5бром-2-гидрокси-3-пиридинкарбоновой кислоты и §ОС1₂ [согласно методу, описанному у Т.^. Сего и др. в: Буп111. Соттип., 19, 553-559, 1989 (публикация включена в качестве ссылки), но за исключением обработки водой] в МеСЫ (10 мл). Образовавшуюся суспензию перемешивали при комнатной температуре. Через 24 ч смесь сливали на смесь воды (100 мл) и льда (10 г) и перемешивали в течение 20 мин. Суспензию фильтровали и образовавшийся твердый продукт промывали водой (50 мл) и гексаном (25 мл), затем сушили над Р₂О₅ при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (1,8 г, выход 31% ) в виде порошка белого цвета.

б) 5-Бром-Ы-(2-хлор-6-метил-3-пиридинил)-2-(этиламино)-3-пиридинкарбоксамид.

Раствор 5-бром-2-хлор-Ы-(2-хлор-6-метил-3-пиридинил)-3-пиридинкарбоксамида (1,7 г, 4,8 ммоля) и этиламина (2М в ТГФ, 10,5 ммоля, 5,2 мл) в ТГФ (5 мл) перемешивали при температуре от 90 до 95°С в закрытом автоклаве в течение 16 ч. Образовавшуюся смесь сливали на воду (100 мл), перемешивали в течение 15 мин и фильтровали. Твердый продукт промывали водой, а затем гексаном, получая указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества желтого цвета (1,58 г, выход 89%).

в) 8-Бром-5,11-дигидро-2-5-диметил-11-этил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Раствор неочищенного 5-бром-Ы-(2-дихлор-6-метил-3-пиридинил)-2-(этиламино)-3-пиридинкарбоксамида (0,7 г, 1,8 ммоля) в безводном пиридине (18 мл) нагревали до 50°С. Затем по каплям добавляли 1М раствор ЫаГМДС в ТГФ (7,2 мл, 7,2 ммоля) и перемешивание продолжали в течение еще 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли метилйодид (0,6 мл, 9 ммолей) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли воду (25 мл) и смесь экстрагировали ЕЮАс (трижды) и объединенные экстракты промывали водой и соляным раствором, затем сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (гексан: ЕЮ Ас, 8:2), получая указанное в заголовке соединение (259 мг, выход 41%).

г) 5,11-Дигидро-2,5-диметил-11-этил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

Раствор 8-бром-5,11-дигидро-2,5-диметил-11-этил-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (258 мг, 0,7 ммоля) в ДМФ (7,4 мл) дегазировали при пониженном давлении в течение 20 мин. Добавляли Рб(РРН₃)₄ (43 мг, 0,04 ммоля), а затем аллилтрибутилолово (0,3 мл, 0,85 ммоля). После дегазации при пониженном давлении в течение 10 мин смесь нагревали до 100°С в течение 1,5 ч. Затем смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (гексан:ЕЮАс, 8:2), получая указанное в заголовке соединение (184 мг, выход 98% ) в виде твердого вещества желтого цвета.

д) 5,11-Дигидро-2,5-диметил-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6он.

Струю О₃ пропускали через холодный (-78°С) раствор, содержащий 5,11-дигидро-2,5-диметил-11этил-8-(2-пропенил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (187 мг, 0,6 ммоля) и Судан III в СН2С12 (3 мл) и МеОН (3 мл). После превращения розового раствора в коричневый, раствор барботировали в течение 10 мин О₂. Затем добавляли ЫаВН₄ (57 мг, 1,52 ммоля) и раствору давали нагреться до комнатной температуры. Через 30 мин вводили дополнительное количество ЫаВН₄ (20 мг). Через 2 ч добавляли водный насыщенный раствор ЫН₄С1 и смесь перемешивали в течение 20 мин. Раствор концентрировали при пониженном давлении и экстрагировали СН₂С1₂ (трижды). Объединенные органические экстракты промывали соляным раствором, сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (ЕЮАс:гексан 6:4), получая указанное в заголовке соединение (111 мг, выход 58%) в виде твердого вещества белого цвета.

-17005598

е) 2,5-Диметил-5,11-дигидро-11-этил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4] диазепин-6-он.

Диэтилазодикарбоксилат (ДЭАД) (139 мкл, 0,88 ммоля) добавляли по каплям при комнатной температуре к раствору, содержащему 5,11-дигидро-2,5-диметил-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (110 мг, 0,35 ммоля), 4-гидроксихинолин (128 мг, 0,88 ммоля) и Рй₃Р (231 мг, 0,88 ммоля) в ТГФ (3,5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс (60 мл) и раствор последовательно промывали 1н. водным раствором ΝαΟΗ (3x10 мл) и соляным раствором (15 мл), затем сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (ЕЮАс, затем ЕЮАс:МеОН, 9,5:0,5), получая указанное в заголовке соединение (57 мг, выход 37%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 440 (МН)⁺.

ж) 5,11-Дигидро-2,5-диметил-11-этил-8-{2-{(1-оксидо-4-хинолинил)окси}этил}-6Н-дипиридо[3,2Ь:2',3'-е][ 1,4] диазепин-6-он.

Твердую мХПБК (80-85%, мета-хлорпербензойная кислота) (60 мг, 0,28 ммоля) добавляли к раствору 5,11-дигидро-2,5-диметил-11-этил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е] [1,4]диазепин-6-она (55 мг, 0,13 ммоля) в СН₂С1₂ (1,3 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 ч, затем разбавляли СН₂С1₂. Образовавшийся раствор последовательно промывали 10%-ным водным раствором №₂8₂О₃, водным насыщенным раствором NаНСО₃ и соляным раствором, сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (МеОН/ЕЮАс, от 2% до 5%), получая указанное в заголовке соединение (59 мг, выход 99%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Ε8Ι) т/ζ 456 (МН)⁺.

Пример 27 (номер 29, табл. 1). 5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-8-{2-(1-оксо-4-хинолинилокси)этил}2-(трифторметил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

а) 2-(Этиламино)-3 -нитро-6-(трифторметил)пиридин.

К раствору аммонийной соли 2-нитроацетамида (4 г, 33 ммоля) в воде (165 мл) добавляли ацетат пиперидиния (33 ммоля) в воде, а затем медленно добавляли 4-этокси-1,1,1-трифтор-3-бутен-2-он (6,1 мл, 43 ммоля) в МеОН (11 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре и кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционной смеси давали охладиться 45°С и добавляли водный раствор НС1 (1н.) до доведения значения рН до кислого. После выдерживания в течение 1 ч при комнатной температуре реакционную смесь экстрагировали СН₂С1₂ (трижды). Объединенный органический слой последовательно промывали водой и соляным раствором, сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (ЕЮАс, затем ЕЮАС:МеОН, 9:1), получая 3-нитро-6-(трифторметил)-2(1Н)-пиридинон (2,7 г, выход 40%) в виде твердого вещества желтого цвета.

К раствору 3-нитро-6-(трифторметил)-2(1Н)-пиридинона (2,4 г, 11,5 ммоля) в ДМФ (69 мл) добавляли гидрид натрия (350 мг, 13,8 ммоля). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при 45°С, охлаждали до комнатной температуры и добавляли Ν-фенилтрифторметансульфонимид (4,9 г, 13,8 ммоля). Через 1 ч добавляли 2М раствор этиламина в ТГФ (13 мл, 25 ммолей). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь сливали на воду (100 мл) и экстрагировали ЕЮАс (трижды). Объединенный органический слой последовательно промывали водой и соляным раствором, сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (гексан: ЕЮАс, 9:1), получая требуемое соединение (1,1 г, выход 41%) в виде масла желтого цвета.

б) 3-Амино-2-(этиламино)-6-(трифторметил)пиридин.

Раствор 2-(этиламино)-3-нитро-6-(трифторметил)пиридина (1,1 г, 4,9 ммоля) в МеОН (40 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере водород (1 атм) в присутствии 20% Рб(ОН)₂/С (100 мг). Катализатор удаляли фильтрацией через диатомовую землю. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение в виде масла оранжевого цвета (1 г).

в) 2-Хлор-№{2-(этиламино)-6-(трифторметил)-3-пиридинил}-5-бром-3-пиридинкарбоксамид.

К охлажденному раствору 3-амино-2-(этиламино)-6-трифторметилпиридина (1 г, 4,9 ммоля) в МеСN (24 мл) добавляли твердый NаНСО₃ (906 мг, 11 ммолей). Через 5 мин добавляли неочищенный 5бром-2-хлор-3-пиридинкарбонил хлорид, полученный из 5-бром-2-гидрокси-3-пиридинкарбоновой кислоты и 8ОС1₂ [согласно методу, описанному у Т.^. Сего и др. в: 8уп111. Соттип., 19, 553-559, 1989 (публикация включена в качестве ссылки), но за исключением обработки водой] (1 экв., 4,9 ммоля). Через 2 ч реакционную смесь сливали на смесь лед/Н2О (1,5 л) и образовавшийся твердый продукт фильтровали, промывали Н2О и затем гексаном. После сушки при пониженном давлении в течение ночи получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества светло-желтого цвета (1,6 г, выход 77%).

г) 8-Бром-5,11-дигидро-11-этил-2-(трифторметил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он.

К раствору 2-хлор-№{2-(этиламино)-6-(трифторметил)-3-пиридинил}-5-бром-3-пиридинкарбоксамида (766 мг, 1,8 ммоля) в ДМФ (18 мл) добавляли №Н (137 мг, 5,4 ммоля). Реакционную смесь пере

-18005598 мешивали при 80°С. Через 1 ч реакционной смеси давали охладиться до комнатной температуры и затем сливали на воду (20 мл). Образовавшуюся смесь экстрагировали ЕЮАс (трижды). Объединенный органический слой последовательно промывали водой и соляным раствором, сушили (МдЗО₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (гексан:ЕЮАс, 7:3), получая требуемое соединение (200 мг, выход 28%) в виде твердого вещества желтого цвета.

д) 8-Бром-5,11-дигидро-11-этил-5-метил-2-(трифторметил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин6-он.

К раствору 8-бром-5,11-дигидро-11-этил-2-(трифторметил)-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е][ 1,4]диазепин6-она (200 мг, 0,52 ммоля) в ДМФ (2,6 мл) добавляли ΝαΗ (20 мг, 0,78 ммоля) и смесь нагревали до 50°С в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и обрабатывали Ме1 (97 мкл, 1,56 ммоля). Через 16 ч реакционную смесь разбавляли водой. Образовавшуюся смесь экстрагировали ЕЮАс (трижды). Объединенный органический слой последовательно промывали водой и соляным раствором, сушили (МдЗО₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (гексан:ЕЮАс, 8,5:1,5), получая указанное в заголовке соединение (110 мг, выход 53%) в виде пены белого цвета.

е) 5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-8-(2-пропенил)-2-(трифторметил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4] диазепин-6-он.

Аллилтрибутилолово (98 мкл, 0,32 ммоля) и Рб(Рй₃Р)₄ (16 мг, 0,02 ммоля) добавляли при комнатной температуре к дегазированному (пропускали через раствор Ν₂ в течение 30 мин) раствору 8-бром-5,11дигидро-11-этил-5-метил-2-(трифторметил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (11 мг, 0,27 ммоля) в ДМФ (1,4 мл). Смесь перемешивали при 90°С в течение 1,5 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (гексан:ЕЮАс, от 8:2 до 7:3), получая указанное в заголовке соединение (101 мг, выход 99%).

ж) 5,11 - Дигидро-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-5-метил-2-(трифторметил)-6Н-дипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [1,4]диазепин-6-он.

Струей озонированного кислорода барботировали холодный (-78°С) раствор 5,11-дигидро-11-этил5-метил-8-(2-пропенил)-2-(трифторметил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (100 мг, 0,27 ммоля) в СН₂С1₂ (2,7 мл) и МеОН (2,7 мл) в течение 2,5 ч. Затем раствор барботировали струей Ν₂ в течение 15 мин и затем к раствору добавляли твердый №1ВН₄ (52 мг, 1,4 ммоля). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры. Через 1 ч добавляли водный насыщенный раствор ΝΉ₄Ο (5 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли СН2С12 и водный слой повторно экстрагировали СН2С12. Объединенный органический слой последовательно промывали водой и соляным раствором, сушили (МдЗО₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (ЕЮАс: гексан: от 75:25 до ЕЮАс 100%), получая указанное в заголовке соединение (60 мг, выход 59% ) в виде твердого вещества белого цвета.

з) 5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-2-(трифторметил)-6Н-дипиридо [3,2Ь:2',3'-е] [ 1,4] диазепин-6-он.

Диэтилазодикарбоксилат (ДЭАД) (38 мкл, 0,24 ммоля) при комнатной температуре добавляли по каплям к раствору, содержащему 5,11-дигидро-11-этил-8-(2-гидроксиэтил)-5-метил-2-(трифторметил)6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-он (58 мг, 0,16 ммоля), 4-гидроксихинолин (35 мг, 0,24 ммоля) и Р11₃Р (62 г, 0,24 ммоля) в ТГФ (1,6 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (ЕЮАс:МеОН; 95:5), получая указанное в заголовке соединение (24 мг, выход 31%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Е31) т/ζ 494, 495 (МН)⁺.

и) 5,11-Дигидро-11-этил-5-метил-8-{2-{(1-оксидо-4-хинолинил)окси}этил}-2-(трифторметил)-6Ндипиридо [3,2-Ь:2',3'-е] [ 1,4]диазепин-6-он.

Твердую мХПБК (80-85%, мета-хлорпербензойная кислота) (16 мг, выход 0,08 ммоля) добавляли при комнатной температуре к раствору 5,11-дигидро-11-этил-5-метил-8-{2-(4-хинолинилокси)этил}-2(трифторметил)-6Н-дипиридо[3,2-Ь:2',3'-е][1,4]диазепин-6-она (22 мг, 0,04 ммоля) в СН₂С1₂ (0,5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 ч, затем разбавляли СН₂С1₂. Образовавшийся раствор последовательно промывали 10%-ным водным раствором №ь3₂О₃. водным насыщенным раствором NаНСО₃ и соляным раствором, сушили (МдЗО₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали экспресс-хроматографией (МеОН:СНС13, от 5 до 10%), получая указанное в заголовке соединение (11 мг, выход 52%) в виде твердого вещества белого цвета: МС (Е31) т/ζ 511 (МН)⁺.

-19005598

Таблица 1

Соединения формулы I

Таблица 1 номер	К2	к4	К5	к	0
	С1	Ме	н	Εί	/V
2	С1	Н	Ме	Εί	/V
3	н	Ме	Н	цикРг
4	Р	Н	Ме	Εί	РР
5	Р	Ме	Н	цикРг	V?
6	С1	Н	Ме	цикРг
7	Р	Ме	Н	Εί	РР

Таблица 1 номер	к2	к4	К5	к11	0
8	н	Ме	Н	Εί	/Р
9	Р	Ме	Н	Εί	хо
10	С1	Н	Ме	цикРг	чо
11	Р	н	Ме	Εί	чо
12	н	Ме	Н	Εί	хо_
14	С1	Ме	Н	Εί	О
15	н	Ме	Н	цикРг	V

-20005598

Таблица 1 номер	к2	к4	К5	к”	Ω
17	С1	н	Ме	Εΐ	χο
18	г	н	Ме	Εΐ	0”
19	С1	Ме	Н	Εΐ	0”
20	С1	Н	Ме	Εΐ	0“
21	н	Н	Ме	Εΐ	0
22	С1	Н	Н	Εΐ	V

Таблица 1 номер	К2	к4	к5	к11	Ω
23	Г	Ме	н	Εΐ	ΡΡ 0“
24	н	Н	Ме	Εΐ
25	С1	Ме	Н	Εΐ	ΡΡ
26	н	Н	Е1	Εΐ	ΡΡ
27	н	Н	Е1	Εΐ
28	СНз	н	СНз	Εΐ	ррр
29	СЕз	н	СНз	Εΐ	χό“

-21005598

Анализ обратной транскриптазы (ОТ)

Теоретическая основа анализа

Одним из ферментов, которые кодирует вирус иммунодефицита человека (ВИЧ-1), является обратная транскриптаза (1), названная так, потому что она транскрибирует копию ДНК на матрице РНК. Эту активность можно оценить количественно с помощью бесклеточного ферментного анализа и на основе того факта, что обратная транскриптаза обладает способностью использовать для транскрипции радиоактивномеченной цепи ДНК синтетическую матрицу поли-г(С), примированную биотинилированным олиго д(Г), и ³Н-дГТФ в качестве субстрата. Описанный ниже анализ основан на применении фермента дикого типа (который представляет собой доминирующую форму фермента у пациентов, зараженных ВИЧ1), однако, в аналогичных условиях анализа можно применять и мутантные ОТ (например, мутант У181С, полученный сайтнаправленным мутагенезом, в котором остаток тирозина в кодоне заменен остатком цистеина). Этот анализ позволяет оценить эффективность соединений в отношении ингибирования мутантных ферментов.

Материалы:

а) Получение фермента

Несколько мутантов клона ОТ ВИЧ-1 ΙΙΙΒ ВН10 получали от Др. С.-К. 31ιί1ι (фирма Воейппдег 1пде1йе1т Рйагтасеийсак 1пс., И3) в векторе рКК233-2 (фирма Рйагташа). Клон ОТ ВИЧ рКЯТ2, содержащий только ОТ гена р66, регулируемого опероном 1ас/промотором 1гс получали от Др. Зиттегк (Йельский университет) (2). В ген ОТ дикого типа интродуцировали определенные аминокислотные замены с помощью сайтнаправленного мутагенеза. Клоны ОТ субклонировали в бактериальном экспрессионном векторе рКК233-2. Полученные клоны включали клон дикого типа, Уа1106А1а, Туг181Сук, Туг188Сук, Туг188Ьеи, С1у190А1а и Рго236Ьеи. Другие клоны были получены заявителями с помощью сайтнаправленного мутагенеза клонов ОТ рКК233-2, и они включали Ьук103Акп, Ьук103Акп/Туг181Сук, Ьук103Акп/Ьеи10011е, Ьук103Акп/Рго225Н1к и Ьук103Акп/Уа110811е.

Очистка фермента

Очистку рекомбинантной обратной транскриптазы осуществляли с использованием комбинации описанных ранее методов (3). Одну колонию из полученных на свежем планшете трансформированных клеток линии ДМ109 использовали для инициации роста предварительной культуры, выращенной в течение ночи при 37°С. Этой предварительной культурой инокулировали два литра среды для роста. При значении ОП₆₀₀ ~1,5 (5-6 ч при 37°С) индуцировали экспрессию гена ОТ изопропилтиогалактозидом (ИПТГ) (конечная концентрация 1 мМ) и продолжали ферментацию в течение еще нескольких часов при 37°С. После центрифугирования супернатанты отбрасывали, а клеточный дебрис объединяли и хранили при -80°С до очистки. Клеткам давали оттаять при 4°С в течение ночи и их суспендировали в буфере для лизиса (МЕЗ 50 мМ, рН 6, ЭДТА 1 мМ, 10 об.% глицерина, 0,02% (мас./об.) н-октил-З-И-глюкозида, 0,02% (мас./об.) азида натрия). Добавляли лизоцим и смесь инкубировали на льду в течение 40 мин. После гомогенизации с помощью Иоипсе в присутствии лизоцима и обработки ультразвуком клетки центрифугировали в течение 30 мин. Супернатант (31) собирали и хранили при 4°С. Полученный с помощью центрифугирования дебрис ресуспендировали в буфере для экстракции (МЕЗ 50мМ, рН 6, КРО₄ 50 мМ, рН 6, КС1 100 мМ, 10 об.% глицерина, 0,02% (мас./об.) н-октил-З-И-глюкозида, 0,02% (мас./об.) азида натрия) и перемешивали в течение 30 мин при 4°С. Эту вторую смесь вновь центрифугировали и собирали супернатант (З2). Вышеописанный процесс повторяли еще дважды, собирая супернатанты 33 и 34, и затем в течение ночи осуществляли одну последнюю экстракцию (35). Полимин Р (конечная концентрация 0,005%) добавляли к объединенным супернатантам для удаления нуклеиновых кислот. Этот раствор перемешивали в течение 75 мин при 4°С и центрифугировали в течение 1 ч. Супернатант (ЗЗ1) осаждали на льду с помощью 20%-ного (мас./об.) сульфата аммония и перемешивали в течение 1 ч при 4°С. Затем смесь центрифугировали и образовавшийся супернатант (332) осаждали, добавляя 40%-ный (мас./об.) сульфат аммония (всего 60%), перемешивали в течение 1 ч и вновь центрифугировали. Конечный дебрис (Р1) хранили в течение ночи при 4°С до его очистки на следующий день. Если не указано иное, все стадии очистки осуществляли при 4°С.

Дебрис (Р1) ресуспендировали в МЕ3 50 мМ, рН 6, КРО₄ 10 мМ, рН 6, КС1 100 мМ, 10 об.% глицерина, 0,02% (мас./об.) н-октил-З-И-глюкозида, 0,02% (мас./об.) азида натрия. Суспензию подвергали диализу в противотоке этого же буфера в течение ночи, используя диализную трубку типа 12-14 кДа МХУС'О. Диализат центрифугировали и супернатант фильтровали через фильтры типа МШех-РР, 0,8 мкм. Профильтрованный образец вносили в заполненную гидроксиапатитом колонку (объем слоя 30 мл) и промывали этим же буфером. Связанный фермент элюировали ~220 мл линейного градиента от 10 до 300 мМ КРО₄ в вышеописанном буфере. Фракции, содержащие гетеродимер р66/р51 (что определяли с помощью ДСН-ПААГ, 8% и Вестерн-блоттинга), объединяли для внесения в следующую колонку. Содержащие ОТ фракции разбавляли в 2 раза с помощью смеси, содержащей бис-Трис-пропан 50 мМ, рН 7,0, (ЫН₄)₂3О₄ 1М, 0,02% (мас./об.) ОВС, 10 об.% глицерина, 0,02% (мас./об.) ΝαΝ₃, и вносили в гепаринсефарозную колонку Н1-Тгар (объем слоя 5 мл) и промывали этим же буфером. Связанную ОТ затем элюировали с помощью 75 мл линейного градиента от 0 до 1М сульфата аммония в этом же буфере. Со-22005598 держащие ОТ фракции объединяли на основе данных, полученных с помощью ДСН-ПААГ и Вестернблоттинга. Концентрацию протеина в этом пуле определяли методом Брадфорда (ВгадГогд), используя БСА в качестве стандарта. Конечный препарат фермента подвергали диализу в противотоке смеси, содержащей МЕ8 50 мМ, рН 6, КРО₄ 300 мМ, рН 6, КС1 175 мМ, 10 об.% глицерина, 0,02% (мас./об.) азида натрия, и разделяли на аликвоты и хранили при -80°С.

Процедура анализа:

Радиометрический ферментный анализ был адаптирован к формату 96-луночного титрационного микропланшета и основан на применении сцинтилляционных гранул с нанесенным стрептавидином. Анализ в целом описан ниже. Ферменту ОТ ВИЧ-1 давали оттаять и его соответствующим образом разбавляли в Трис/НС1 50 мМ, рН 7,8 содержащем №С1 60 мМ, гексагидрат МдС1₂ 2мМ, ДТТ 6 мМ, восстановленный глутатион 2 мМ и 0,02% (мас./об.) Сйарз, до получения «3 нМ фермента. К 30 мкл этого раствора фермента добавляли 10 мкл раствора ингибитора (от 50 мкМ до 2,5нМ ингибитора в указанном выше буфере, содержащем 5 об.% ДМСО). Планшет предварительно инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре до обработки на следующей стадии. На этой стадии предварительной инкубации наиболее высокая и наиболее низкая концентрации ингибитора составляли 12,5 мкМ и 0,62 нМ соответственно и концентрация ДМСО составляла 3,75 об.%. Затем ферментативную реакцию инициировали, добавляя 10 мкл растворов субстратов. Конечная реакционная смесь содержала Трис/НСд 50 мМ, рН 7,8, №С1 60 мМ, МдС1₂«6Н₂О 2 мМ, ДТТ 6 мМ, Ο8Η 2 мМ, Сйарз 0,02% (мас./об.), ДМСО 3 об.% , Поли-гС 179 нМ, биотин дГ₁₅ 18 нМ, дГТФ 288 нМ и ³Н-дГТФ 71 нМ.

На этой стадии инкубации наиболее высокая и наиболее низкая концентрации ингибитора составляли 10 мкМ и 0,5 нМ соответственно. После добавления субстратов планшет заклеивали пластиковым покрытием и инкубировали в течение 1 ч при 37°С в безводном термостате. Затем реакцию прекращали, добавляя 75 мкл 0,5М раствора ЭДТА, содержащего 5 мг/мл сцинтилляционных гранул с нанесенным стрептавидином.

Планшет встряхивали в течение 2 мин при средней скорости и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем добавляли 75 мкл 7М раствора хлорида цезия, планшет встряхивали в течение 2 мин при средней скорости и вновь инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем планшет заклеивали пластиковым покрытием и подсчитывали радиоактивность с помощью сцинтилляционного и люминсцентного счетчика для микропланшетов типа ТорСоипй^ХТ™ фирмы Раскагд. Радиоактивность в каждой лунке подсчитывали в течение 60 с. В каждый анализируемый ряд входили чистая и контрольная лунки.

Для расчета процента ингибирования использовали следующее уравнение:

Имп./мин. в лунке - имп./мин. в чист.лунке % ингибирования = (1-[.....................................-.........])х100 имп./ми. в контр.лунке- имп./мин. в чист.лунке

С помощью указанного выше анализа оценивали способность соединений по изобретению ингибировать ОТ дикого типа (^Т) и мутантные ферменты. Результаты приведены в табл. 2 и представлены в виде 1С₅₀ (нМ).

Для подтверждения способности указанных соединений ингибировать репликацию ВИЧ их тестировали также с помощью человеческой Т-клеточной культуры (фирма 8упсуБа) с использованием описанного ниже анализа.

Твердофазный иммуноферментый анализ (ЕБ18А) для оценки активности в клеточной культуре

Способность соединений по изобретению ингибировать репликацию ВИЧ в клеточной культуре оценивали в 96-луночном планшете. Полную среду КРМ1 1640, содержащую КРМ1 1640+10% фетальной бычьей сыворотки, 10 мкг/мл гентамицина и 10 мкМ β-меркаптоэтанол, использовали для разбавления соединения, а также питательной среды для клеток. Клеточную линию Т-лимфоцитов С8166 заражали с множественностью заражения 0,001 вирусами, кодирующими обратную траскриптазу дикого типа и мутантную. Затем клетки инкубировали в течение 3 дней в присутствии серийных разведений соединений по изобретению. Объединяли супернатанты 8 клеток-копий и определяли концентрацию внеклеточного р24 с помощью имеющегося в продаже набора для анализа антигена ВИЧ-1 р24 (Весктап-СоиЙет®). Уровень ингибирования (% ингибирования) рассчитывали из следующего уравнения:

р24 пг/мл ингибитора % ингибирования = (1-[..............................])х100 р24 пг/мл контроля

Результаты представлены в табл. 3 и выражены в виде ЕС₅₀ (нМ).

Анализ специфичности

Для оценки специфичности ингибирующей активности соединений по изобретению в отношении различных ферментов для нескольких соединений с помощью известных методов анализа оценивали ингибирующую способность в отношении других вирусных полимераз (таких как РНК-зависимые РНКполимеразы вируса гепатита и респираторно-синцитиального вируса), а также полимераз млекопитающих (таких как РНК-зависимая ДНК-полимераза гипофиза теленка и человеческая теломераза). Ни для одного из изученных таким образом соединений не была обнаружена какая-либо заметная ингибирую

-23005598 щая активность в отношении этих ферментов. Эти результаты свидетельствуют о том, что способность соединений по изобретению ингибировать активность ферментов является прежде всего специфичной по отношению к ОТ ВИЧ-1.

Литературные источники (включенные в настоящее описание в качестве ссылок):

1. Вепп 8., и др., 8с1епсе 230:949, 1985.

2. ί)Ά(μιιΊ;ι К.Т. и 8ишшег§ ^.С., I. Лсц. 1тт. Эе1'. 8уп. 2:579, 1989.

3. а) ГОптеп Т.С. и др., Рго1ет Бхргезыоп & Рипйсайоп 3:479, 1992; 4. Ь) КоЫ^аеФ Б.Л., 8с1епсе 256(5065): 1783, 1992.

Таблица 2

Ингибирование соединениями формулы I ОТ дикого типа и мутантных штаммов ОТ

1С₅₀

1С₅0

1С50

1^50

Κ103Ν/

Κ103Ν

Κ103Ν

Κ103Ν

У181С /Р225Н /У1081 /Ы001

4318

199

190

7511

301

135

3395

175

9,5

206

1372

336

1422

661

710

6,6

255

229

102 >10000

212

124

121

2298

-24005598

ЕС50

ЕС₅о ес₅₀

Κ103Ν/

Κ103Ν/

Κ103Ν/

У181С

Р225Н

Таблица 3

Ингибирование соединениями формулы I штаммов дикого типа и мутантных штаммов ВИЧ в клеточных культурах

1,1

0,93

0,92

118

7,6

7,5

2,0

3,2

0,34

4,1

3,9

0,26

2,7

12,4

1,5

5,0

2,9

2,8

Claims (12)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение общей формулы I где К² выбирают из группы, включающей Н, Т, С1, С1-С₄алкил, С₃-С₄циклоалкил и СТ₃;

   К⁴ обозначает Н или Ме;

   К⁵ обозначает Н, Ме или Εΐ при условии, что К⁴ и К⁵ оба не обозначают Ме, и если К⁴ обозначает Ме, то К⁵ не обозначает Εΐ;

   К¹¹ обозначает Ме, Εΐ, циклопропил, пропил, изопропил или циклобутил и

   С) выбирают из группы, включающей

   -25005598 или его фармацевтически приемлемая соль.
2. 2. Соединение по п.1, где К¹¹ обозначает Εΐ или циклопропил, или его фармацевтически приемлемая соль.
3. 3. Соединение по п.1, где О выбирают из группы, включающей или его фармацевтически приемлемая соль.
4. 4. Соединение по п.1, где О обозначает или его фармацевтически приемлемая соль.
5. 5. Соединение по п.1, где К⁵ обозначает Ме, или его фармацевтически приемлемая соль.
6. 6. Соединение по п.1, где К¹¹ обозначает Εΐ, или его фармацевтически приемлемая соль.
7. 7. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль.
8. 8. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль.
9. 9. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль.
10. 10. Применение соединения формулы I по любому из пп.1-9 или его фармацевтически приемлемой соли в качестве ингибитора репликации ВИЧ.
11. 11. Способ лечения или предупреждения ВИЧ-инфекции, заключающийся в том, что пациенту вводят ингибирующее ВИЧ количество соединения формулы I по любому из пп.1-9 или его фармацевтически приемлемой соли.
12. 12. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения или предупреждения ВИЧинфекции, содержащая соединение формулы I по любому из пп.1-9 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.