EA003927B1

EA003927B1 - Антагонисты фактора опухолевого некроза и их применение при эндометриозе

Info

Publication number: EA003927B1
Application number: EA200100799A
Authority: EA
Inventors: Франческо Боррелли; Мауро Д'Антонио; Фабрицио Мартелли
Original assignee: Апплайд Резеч Системз Арс Холдинг Н.В.
Priority date: 1999-01-22
Filing date: 2000-01-19
Publication date: 2003-10-30
Also published as: BR0008182A; SK287313B6; EP1143997B1; US20040057954A1; KR20060128056A; NO20013577D0; CA2356737A1; WO2000043031A1; PL204713B1; JP2002535284A; JP4601176B2; CN1698894A; CN1212152C; HK1082690A1; HK1043059A1; CZ302866B6; PL350002A1; EP1022027A1; IL144413A0; CA2356737C

Abstract

Раскрыто применение антагониста фактора опухолевого некроза (TNF), представляющего собой секвестрирующий антагонист или антагонист сигнализации в качестве активного вещества фармацевтической композиции для лечения и/или профилактики эндометриоза, для повышения частоты имплантации и фертильности. Антагонисты TNF, которые могут применяться в способе настоящего изобретения, включают растворимые молекулы рецептора TNF, антитела и соединения против TNF, которые предотвращают и/или ингибируют сигнализацию рецепторов TNF. Изобретение обеспечивает облегчение состояний пациенток, страдающих бесплодием, связанным с эндометриозом.

Description

Настоящее изобретение будет теперь проиллюстрировано примером, который ни в коей мере не предназначен для его ограничения и ссылается на следующие чертежи.

Описание фигур

На фиг. 1 показаны воздействия антида (2 мг/кг, вводимого подкожно 1 раз в 3 дня), рекомбинантного растворимого ΤΝΕ-ΒΙ (10 мг/кг, вводимого подкожно 2 раза/день в течение периода 1 нед.), на размер имплантатов у крыс с экспериментальным эндометриозом через 2 и 9 дней после последнего лечения. Эти данные, которые были получены с использованием 6 животных на группу для первого значения времени, и 5 животных на группу для второго значения времени, представляют среднее процентное значение ингибирования ± стандартная ошибка средней.

На фиг. 2 показаны воздействия рекомбинантного растворимого ΤΝΕ-ΒΙ (10 мг/кг, вводимого 2 раза/д в течение периода 1 нед) и антида (2 мг/кг, вводимого 1 раз в 3 дня) на активность естественных киллеров селезенки крыс против клеток УАС (высвобождение ⁵¹ Сг) через 2 дня (панель А) и 9 дней (панель В) после последнего лечения. Данные представляют среднее процентное значение лизиса ± стандартная ошибка средней.

На фиг. 3 показаны воздействия рекомбинантного растворимого ΤΝΒ-Κ1 (10 мг/кг, вводимого 2 раза/д в течение периода 1 нед) в сравнении с контролем и антидом (2 мг/кг, вводимого 1 раз в 3 дня) на уровень эстрадиола-17в в сыворотке при экспериментальном эндометриозе у крыс. Данные представляют среднюю концентрацию эстрадиола-17в ± стандартная ошибка средней.

Пример

Материалы и методы

Животные. Самки крыс линии 8ргадиеЭа\\'1су (250-275 г) были закуплены у Сйаг1е8 Ктуег Пайа (Са1со, Ьессо Иа1у). Животных содержали в следующих условиях окружающей среды: температура 22 ± 2°С, относительная влажность 55 ± 10%, вентиляция 15 ± 3 объемов воздуха за 1 ч, фильтруемого через фильтры НЕРА 99,97% и искусственное освещение с циркадным циклом 12 часового освещения (с 7:00 до 19:00). Перед экспериментами животным давали возможность акклиматизироваться к этим условиям в течение периода, по меньшей мере, 1 недели. Животные без ограничений получали стандартный гранулированный корм.

Исследуемые препараты. Антид был произведен и представлен фирмой Васйет (СаИГогша, И8А). Используемая в примере молекула человеческого рекомбинантного растворимого ΤΝΕ-Κ1 имеет последовательность, соответствующую сегменту 20-180 человеческого ΤΝΕ-Κ1 (Νορίκπ е1 а1., 1990) и была получена в клетках СНО и предоставлена 1и1егрйагт ЬаЬога1ог1е5 Ий. (1§гае1) под названием г-КГВР-1.

Материал. Общий материал клеточной культуры был закуплен в С1Ьсо ВВЬ, ЫГе Τесйпо1ощек (Ра151еу, ИК). Набор ΡΙΛ 17β эстрадиола был закуплен в фирме ОРС (Ьок Апде1е5, СА, И8А). Инокетам был закуплен в фирме У1гЬас (Саггок, ЕВ). [⁵¹Сг]-натрий хромат был закуплен у ΝΕΝ ЭироШ (Войоп, МА, И8А). Ромпун был закуплен в фирме Вауег АС (Ъеуегкикеп, ΌΕ). Шелковая нить была закуплена у компании ЕЙисоп (Роте/1а. ΙΤ).

Экспериментальная модель эндометриоза у крыс.

Для исследования воздействий рекомбинантного растворимого ΤΝΕ-ΒΙ при эндометриозе использовали ранее описанную экспериментальную модель (1опек, 1987) с небольшими модификациями. В условиях анестезии инокетамом/ромпуном аутологичный фрагмент ткани эндометрия (длиной 1 см) резецируют из правого рога матки и помещают в раствор с фосфатным буфером при 37°С. Сегмент матки вскрывают продольным разрезом, и отрезок размером 5х5 см без удаления миометрия трансплантируют на внутреннюю поверхность брюшной стенки с использованием прошивания в четырех углах нерассасываемой шелковой нитью.

Исследование воздействий изучаемых препаратов при экспериментальной модели эндометриоза.

Экспериментальный эндометриоз вызывают хирургическим путем у наркотизированных крыс, как указано выше. Кроме того, аналогичным образом удаляют один рог матки у другой группы, но трансплантируют квадрат размером 5х5 мм жировой ткани, окружающей матку (группа ложнооперированных животных). Еще одну группу крыс, не подвергавшихся никакому хирургическому вмешательству, держат в качестве здоровой контрольной группы. Через 3 недели после индукции эндометриоза животных подвергают второй лапоротомии (лапоротомия перед лечением) для оценки размера и жизнеспособности эктопической ткани эндометрия. Используя измеритель, регистрируют площадь поверхности (длина х ширину). Как показано в табл. 1, животных с признаками жизнеспособных имплантатов включают в группы, предназначенные для лечения, так что в конце эксперимента получают 6 животных на группу для точки времени первого забоя и 5 животных на группу для точки времени второго забоя. Различные виды лечения начинают после периода восстановления длительностью 1 нед. Контрольная группа получает только солевой раствор, другая группа получает 3 подкожных инъекции антида 2 мг/кг 1 раз в 3 дня по схеме, которая, как было показано ранее, подавляет активность яичников и гипоталамуса (8йагре е1 а1., 1990). Другая группа в течение периода 1 нед. получает 10 мг/кг рекомбинантного растворимого ΤΝΕ-ΒΙ, разделенные на 2 суточные дозы.

Таблица 1

Трансплантация эндометрия	Лечение	Дни лечения⁽¹⁾	Дни забоя⁽¹⁾
Нет	Солевой раствор	28-34	36, 43
Ложно оперированные	Солевой раствор	28-34	36, 43
Да	Солевой раствор	28-34	36, 43
Да	Антид (2 мг/кг)	28, 31, 34	36, 43
Да	Рекомбинантный растворимый ΤΝΤ-Κ.Ι (10 мг/кг) в двух суточных дозах	28-34	36, 43

(1) Со дня хирургической имплантации (1-ый день).

В предназначенные точки времени забоя (2 и 9 дни после последнего лечения, т.е. на 36 и 43 день после хирургической имплантации) животных наркотизируют; из брюшной аорты берут образцы крови, отделяют сыворотку и хранят при -20°С до тех пор, пока не проводят анализ на содержание 17в-эстрадиола. Иссекают селезенки для измерения активности естественных киллеров (ΝΚ) . В каждую точку времени забоя измеряют площадь поверхности очагов, подобных эндометриозу, для нормализации данных рассчитывают процент вариации в сравнении с величиной при лапоротомии перед лечением по формуле (X - Хо) ------- х 100

Хо, где Х₀ - размер во время лапоротомии перед лечением, а Х - размер во время забоя. Затем рассчитывают среднюю величину вариации в процентах в каждой группе.

Определение активности ΝΚ.

Степень активности ΝΚ определяют с использованием анализа высвобождения ⁵¹ Сг. Клетки мышиной лимфомы УАС-1 собирают во время фазы экспоненциального роста и однократно промывают средой (ΚΡΜΙ 1640, содержащей пенициллин/стрептомицин, Ь-глутамат и 10% инактивированной нагреванием сыворотки овцы). Клеточный осадок инкубируют со 100 мккюри [⁵¹Сг] -натрия хромата при 37°С, 5% СО2 в течение 2 ч. Затем клетки промывают 3 раза 10 мл аналитической среды, ресуспендируют в желаемой концентрации и добавляют в аналитическую планшету в присутствии крысиных спленоцитов. Их ресуспендируют в аналитической среде в желаемой концентрации (2 х 10⁶/мл) и проводят серийные разведения в аналитической среде в тройных И-образных лунках 96-луночной планшеты перед добавлением меченых ⁵¹ Сг клеток-мишеней. Меченые ⁵¹ Сг клетки-мишени (5 х 10³) добавляют в каждую лунку аналитической планшеты и для каждого образца анализируют три отношения эффекторов к мишеням (200:1, 100:1 и 50:1). Планшету, содержащую клеточную смесь эффекторов и мишеней центрифугируют при 200хд в течение 4 мин, а затем инкубируют при 37°С, в 5% СО₂ в течение 4 ч. После дополнительного центрифугирования планшеты при 200хд в течение 4 мин, 20 мкл надосадочной жидкости из каждой лунки переносят на стекловолоконный фильтр и βсчетчиком оценивают ассоциированную радиоактивность.

Процентную долю лизиса рассчитывают следующим образом:

СрШзатр^е — Ср1и₅р_ОП^. -------------- х юо Ср1П1о£а1 - Ср1Л₃р_Оп1:.л где срт_8атр1е = среднее высвобождение ⁵¹ Сг в присутствии эффекторных клеток;

срт_8роп!. = среднее высвобождение ⁵¹Сг из клеток-мишеней в присутствии культуральной среды;

срт_!о!а1 = среднее высвобождение ⁵¹ Сг из клеток-мишеней в присутствии 1% Тп1оп-Х100.

Определение содержания 17в-эстрадиола. Концентрацию 17в-эстрадиола в сыворотке определяют с использованием имеющегося в продаже набора для количественного определения эстрадиола в сыворотке без этапа экстракции (ИРС, Ьо8 Апде1е§, СА, И8А). Вкратце, меченый ¹²⁵Ι эстрадиол конкурирует с эстрадиолом в образце сыворотки за участки антител. После инкубации отделение связанного эстрадиола от свободного достигают декантированием. Затем пробирку для подсчета помещают в гамма счетчик (ЬКВ-РЬаттааа \Уа11ак), причем результаты подсчета обратно пропорционально связаны с количеством эстрадиола, присутствующего в образце сыворотки. Количество эстрадиола в образцах определяют сравнением данных подсчета с калибровочной кривой. Антисыворотка высоко специфична для эстрадиола с относительно низкой перекрестной реактивностью по отношению к другим естественно встречающимся стероидам. Образцы из одного экспериментального цикла анализируют в одной иммунной пробе.

Статистический анализ. Статистическая значимость различий, наблюдающихся среди групп лечения, оценивают с использованием программы ΑΝΟνΑ, имеющейся в программном обеспечении 81а1дгар1ис5 Р1и§® (версия 1.4). Применяют мультипараметрический критерий Тикеу (Р<0.05).

Результаты

Исследование воздействий рекомбинантного растворимого ΤΝΓ-ΚΙ при экспериментальном эндометриозе

Успешный рост и развитие имплантированной хирургическим путем ткани эндометрия у крыс предоставили исследовательскую модель, которую использовали для изучения некоторых аспектов эндометриоза, которые невозможно адекватно исследовать у людей (ИиЛеу е! а1., 1992). Предыдущие исследования экспериментального эндометриоза у крыс показывают, что антид соответствующим образом действует в качестве положительного контроля (8Ьатре е! а1., 1990). Как показано в итоговой табл. 2, в настоящем примере эффект антида сравнивался с точки зрения размера имплантата до и после лечения с размерами, полученными с использованием рекомбинантного растворимого ΤΝΡ-ΚΙ.

Таблица 2

Лечение	Доза (мг/кг)	Время наблюдения после последнего лечения (дни)	Средняя± стандартное отклонение средней величины перед лечением (см²)	Средняя± стандартное отклонение средней величины после лечения (см²)
Солевой раствор	-	2	1,45±0,41	1,18±0,15
Растворимый ΤΝΡ-ΚΙ	10	2	1,43±0,38	0,77±0,09
Антид	2	2	1,43±0,34	0,08±0,02
Солевой раствор	-	9	1,28±0,24	0,97±0,11
Растворимый ΤΝΡ-ΚΙ	10	9	1,42±0,38	0,54±0,19
Антид	2	9	1,41±0,32	0,19±0,09

Результаты выражены на фиг. 1 в виде среднего ингибирования в процентах фрагментов имплантированного эндометрия (рассчитанного, как описано выше).

Антид был эффективен в плане уменьшения размера очагов, подобных эндометриозным (фиг. 1), вызывая почти полную (соответственно 94 и 88%, в сравнении с первоначальным размером) ремиссию в обеих точках времени наблюдения после прекращения лечения. Лечение в течение 1 недели человеческим рекомбинантным растворимым ΤΝΡ-ΚΙ (10 мг/кг, в двух ежесуточных дозах) привело к существенному уменьшению размеров (соответственно 33 и 64%, в сравнении с первоначальным размером) очагов, подобных эндометриозным в обеих точках времени наблюдения, но статистически значимому (Р<0.05, ΑΝΟνΑ и тест Тикеу) только на 9 день. В любые точки времени имплантаты не наблюдались у ложно оперированных животных.

Оценка активности клеток ΝΚ

Активность клеток ΝΚ оценивали в тестах ίη νίίτο с использованием клеток селезенки в сравнении с клетками УАС. Никаких различий между группами выявлено не было (фиг. 2), аналогично тому, что наблюдалось у бабуинов, где у животных с эндометриозом и без него не была обнаружена разница цитотоксичности по отношению эндометрия и активности клеток ΝΚ (Э'Ноодке еί а1., 1995). Эти данные противоречат данным, полученным у людей, где сообщалось о подавлении активности клеток ΝΚ у пациенток с эндометриозом при значимой корреляции между сниженной активностью перитонеальных ΝΚ и тяжестью эндометриоза (Оо51ег1упск еί а1., 1992).

Оценка содержания эстрадиола-17в в сыворотке

Концентрацию эстрадиола-17в в сыворотке измеряли радиоиммуноанализом в обеих точках времени наблюдения. Значимое различие наблюдалось в группах леченных антидом, в сравнении с нелеченными контролями во второй точке времени наблюдения. При сравнении с контролями, для рекомбинантного растворимого ΤΝΡ-ΚΙ статистически значимые различия не наблюдались (фиг. 3; (Р<0,05, ΑΝΟνΑ и тест Тикеу).

Выводы

На экспериментальной модели эндометриоза у крыс введение антагониста ΤΝΡ, растворимой формы ΤΝΡ-ΚΙ, дает впервые отчетливые доказательства потенциальной эффективности не связанного с гормонами лечения, основанного на цитокинах, этого патологического состояния. Таким образом, антагонисты ΤΝΡ представляют альтернативу существующим методам медикаментозного лечения с точки зрения снижения частоты побочных эффектов. Эти данные оценивают применение антагонистов ΤΝΡ при лечении бесплодия, связанного с эндометриозом.

Специалистам в данной области будут ясны или они смогут понять, используя не более чем обычные эксперименты, многие эквиваленты конкретных вариантов реализации изобретения, описанных в данной заявке. Предполагается, что эти и все другие эквиваленты будут охвачены следующей формулой изобретения.

Список библиографических источников

Αήοί, Α., Τаζике, 8.Ь, ΑΐΙατ. Е., Кйшап, Н.Ц апб О1Ке, ΌΤ, 1996а, Мо1. Нит. Кергоб. 2, 40-45.

Ατίοί, Α., Ога1, Е., Вики1те7, О., Эи1еЬа, Α., О1Ке, ΌΤ., апб 1опе§, Е.Е., 1996Ь, ЕегШ. 8ίеπ1. 65, 603-607.

Ατίοί, Α., Ога1, Е., ΑΙΙπγ Е., Τаζике, 8.Ι, апб О1Ке, Ό.Ε, 1997, Гегб1. 81еп1. 67, 1065-1072.

ВагЫеп, К.Ь, 1988, Ν. Еп§1. I. Меб. 318, 512-514.

Ва/хопг Ρ. апб Вепбег, В., 1996, Ν. Епд1. Меб. 334, 1717-1725.

Скеипд, Α.Ν., 1996, Сигг. Орт. ОЬк1е1. Супесо1 8,46-51.

ЭНоодке, ΤΜ, 8скеегкпск, ЕР., Кошпскх, Р.К, Н111, ΕΑ., апб ВатЬга, С8., 1995,

Нит.Кергоб. 10, 558-562

Эа^ооб, Μ.Υ., 1993, ΙπΙ. I. ОупаесоЕ ОЬ8ίеί. 40 (8ирр1), 829-42.

Эиб1еу, ΌΙ, Наίа8ака, НЕБ, Вгапск, Ό.^., Наттопб, Е., апб

Мйске11, Μ.Ό, 1992, Αт. I. ОЬйеЕ ОупесоЕ 167, 1774-1780.

Ещегтапп. Е, СаА М.Е, Ршеба, Е, Обет, К.К., апб СоШпя I. Ь., 1988, Еегб1. 81еп1. 50, 573579.

Ещегтапп, Е, КедЫег, К.В., 8йтск1ег, К.С., апб СоШпя I. Ь., 1989, ^.Αηб^ο1. 10, 270-274.

ЕШой. М.Е, Маш1, Κ.Ν., Ее1бтапп, М., Ьопд-Еох, Α., Скаг1е§, Р., Ву1, Н, апб ^ообу, ΕΝ, 1994, Раисе! 344, 1125-1127.

Епде1тапп, Н., ШтЕк, Ό., апб ХУпкаск, Ό., 1990, I. Вю1. Скет. 265,1531-1536.

Иег8, V., 1991, ΕΕΒδ Ьей. 285, 199-212.

Сгау, Р.У, Аддагуа1, Β.Β., Веп!оп, С.У., Вппдтап, Т.8., Непхек У.Е, 1аггей, ЕА., Ьеипд, Б.У., Мойа!, В., Ν§, Ρ., апб

8уебегаку, Ь.Р., 1984, ХаИие 312, 721-724.

Найп, И.У, Саггайег, К.Р., Ео1бе§у, КС, апб МеСшге, ЕЬ., 1986, Ат. 1. ОЬйе!. Супесо1. 155, 1109-1113.

На1те, 1., 1991, Апп. Ν. Υ. Асаб. 8сЕ 622, 266-274.

Нагаба, Т., Υо8й^ока, Н., Υо8й^ба, 8., Нуайе, Т., рпойага, Υ., Ташкауа, М., апб Тегакауа, Ν., 1997, Ат. 1. ОЬйе!. Супесок 176,593-597.

Но, НК, Уи, М/Г., апб Υапд, Υ.8., 1997, Ат.ЕК.ергоб.1ттипо1. 38, 400-412.

Ногпипд, Ό., Куап, ЬР., Сйао, У.А., У1дпе, ЕЬ., 8сйпоск, Ε.Ό., апб Тау1ог, Κ.Ν, 1997, 1. С1т. ЕпбосйпоЕ Ме!аЬ. 82,1621-1628.

Нип!, 1.8., Сйеп, Н.Ь, Ни, ХЬ., апб ТаШЬ/абей, 8., 1992, Вю1. Кергоб. 47,141-147.

1опе§, К.С, 1987, Ас!а Епбосппок (Сорепй.) 114, 379-382.

Кшдй!, И.М., Тппй, Н., Ье, 1., 81еде1, 8., 8йеа1у, Ό., МсИопоидй, М, 8са11оп, В., Мооге, М.А, Убсек, 1., апб Иаббопа, Р., 1993, Мо1. 1ттипо1. 30,1443-1453.

Кошпскх, Р.К., Меи1етап, С., Иетеуеге, 8., ЬекаЙге, Е., апб Согтййе, Е.Е, 1991, Еегбк 8!ей1. 55,759-765.

Кошпскх, Р.К. апб Майш, Ό., 1994, Сигг. Орт. ОЬйе!. Супесо1. 6,231-241.

Мас8уееп, ККМ., 1993, Мшг'к Тех!Ьоок ой ра!йо1оду, 13!й еб. (Уйа1еу К.; Ι8ΒΝ 0-34055145-3), 1024-1025.

Майпак, Ь.К., Βи!!^ат, У.С.Е, Ейак, 8., апб 81тр5оп, ЕЬ., 1980, Ат. 1. ОЬйе!. Супесо1. 137, 332-337.

Ма!аШо!ак18, Ь, №опакг М., 2ойпбак1, А., Наззап, Е., Сеогдоийаз, У., апб Коитап!акк, Е., 1997, 1п!. 1. Еегй1. Уотепз. Меб. 42, 211-214.

Мой, Н., Nакадауа, М., 1!ой, Ν., Уаба, К., апб Татауа, Т., 1990, Ат. 1. Кергоб. 1ттипо1. 24, 45-50.

Шрйаг Υ., Кетрег, О., Β^акеЬи8Сй, С., Епд1етапп, Н., 2уапд, К., Абегка, Ό., Но1!тапп, Н, апб Уа11асй, Ό., 1990, ΕМΒО^. 9.3269-3278.

Ооз!ег1упск, Ό.Ε, Меи1етап, С., Уаег, М., Уапберийе, М., апб Кошпскх, Р.К, 1992, Еег!б. 8!егб. 58, 290-295.

Оуейоп, С., Еегпапбе/-8йау, 8., Нккз, В., Β-γ^^, Ό., апб 8!агкеу, Р., 1996, НитВергоб. 11, 380-386.

Репшса, Ό., №бут, С.Е., Науййск, 1.8., 8ееЬигд, Р.Н., Иегупск, К., Ра11абто, М.А, Койг, У.Е, Аддагуа1, Β.Β., апб Соеббе1, И.У., 1984, №1!иге 312, 724-729.

Капа, Ν., Βγηππ, И.Р., Ноизе, К., СеЬе1, Н., Ко!тап, С., апб Ото\У5кг У.Р., 1996, Еег!б. 8!егб. 65, 925-930.

КеуеШ, А., Мобо!!1, М., Ап5а1бй С., апб МаккоЬпо, М., 1995, ОЬз!е!. Супесок 8игу, 50, 747-754.

КоЬу, К.Е., Ьайат, Ν., апб Нип!, 1.8., 1996, 1. Кергоб. Еегбк 106, 285-290.

8йа1аЬу, М.К., Ьаедге1б, У.У, Аттапп,

А.Е, апб Ыддй!, Н.И., 1989, ЬаЬ. 1пуей. 61, 564570.

8йа1аЬу, М.К, 8ипбап, А., Ьоексйег, Н, Β^оскйаи8, М., Бе^к-шег У., апб Е8реу1к, Т., 1990, ЕЕхр.Меб. 172, 1517-1520.

8йагре, К.Ь., Βе^!е^о. М.С., апб Уегпоп, М.У., 1990, Ргод. Сйп. Βϊθ1. Кез. 323, 449-58.

Тиса, А., 1ате§, Н., СЫсйеройкйе, К., Βоππейоу, ΕΥ., Иауег, ЕМ., апб 2иЬ1ег, К.Н.,

1992, 1. 1ттипо1 148, 2778-2784.

Уа11ег, К.С. апб 8йау, К.У., 1993, Еег!б. 8!еп1. 59, 511-515.

2йапд, К.Е, Убб, К.А., апб Оуадо, ЕМ,

1993, Еегй1. 8!еп1. 59, 1196-1201.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение антагониста ΊΝΕ, представляющего собой секвестрирующий антагонист или антагонист сигнализации, в качестве активного вещества фармацевтической композиции для лечения и/или профилактики эндометриоза.
2. Применение антагониста ΊΝΕ, представляющего собой секвестрирующий антагонист или антагонист сигнализации, в качестве активного вещества фармацевтической композиции для повышения частоты имплантации и фертильности путем уменьшения эндометриозных поражений.
3. Применение по п.1 или 2, где секвестрирующий антагонист представляет его рецепторную молекулу, производное или фрагмент, который связывается с Т№.
4. Применение по п.3, где рецепторная молекула выбрана из группы, состоящей из Т№К1 и Т№-КП.
5. Применение по п.3, где рецепторная молекула представляет внеклеточный домен Т№К1.
6. Применение по п.3, где рецепторная молекула представляет человеческий растворимый рекомбинантный Т№-КЕ
7. Применение по п.3, где рецепторная молекула представляет многомерную молекулу рецептора Т№ или ее функциональную часть.
8. Применение по п.7, где многомерная молекула рецептора Т№ включает весь или функциональную часть двух или более внеклеточных доменов рецепторов ΤNΕ, связанных посредством одного или нескольких полипептидных линкеров.
9. Применение по п.3, где рецепторная молекула представляет слитую молекулу иммунорецептора или ее функциональную часть.
10. Применение по п.9, где слитая молекула иммунорецептора включает весь или функциональную часть рецептора Т№ и цепь иммуноглобулина.

химерного моноклонального антитела, гуманизированного моноклонального антитела или его фрагмента.
11. Применение по п.1 или 2, где секвестрирующий антагонист представляет антитело против ΤΝΕ или его фрагмент.
12. Применение по п.11, где моноклональное антитело выбрано из группы, состоящей из ' ² Д-после последнего лечения а Д· после последнего лечения (*)Р<0,005 в сравнении с контрольной группой