DK2267007T3 - Nye genprodukter, der danner eller nedbryder polyaminosyrer, af Bacillus licheniformis og herpå byggende forbedrede bioteknologiske produktionsfremgangsmåder - Google Patents

Claims (18)

1. Fremgangsmåde til reduktion af slim, som skyldes poly-gamma-glutamat, kendetegnet ved undertrykkelse af funktionen i det af genet ywtA kodede protein YwtA (CapC, PgsC) med en aminosyresekvens, som er i det mindste 94% identisk med den i SEQ ID NO. 6 anførte aminosyresekvens, som et i dannelsen af polyaminosyrer impliceret enzym eller som underenhed af et sådant enzym.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at funktionen af proteinet YwtA er undertrykt under fermenteringen af mikroorganismen.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved en reduktion af det slim, som skyldes polyaminosyrer, til 50%.

4. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 1, 2 eller 3, kendetegnet ved, at mikroorganismen a) er en bakterie og/eller b) er en gram-negativ bakterie eller c) er en gram-positiv bakterie.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at mikroorganismen er udvalgt blandt en af slægterne Escherichia, Klebsiella, Pseudomonas, Xanthomonas, Bacillus, Staphylococcus eller Corynebacterium.

6. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, kendetegnet ved følgende trin til undertrykkelse af funktionen af det af genet ywtA kodede protein YwtA: a) udvælgelse af to områder på sekvensen SEQ ID NO. 5, b) kloning af områderne i en vektor, således af de flankerer en del, som koder for et ikkeaktivt protein, eller således at de følger direkte efter hinanden, idet det derimellem liggende område udelades, c) deletering af genet ywtA med den i trin b) fremstillede vektor og d) påvisning af gen-deletionen.

7. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, kendetegnet ved, at funktionen af det af genet ywtA kodede protein YwtA (CapC, PsgC) er undertrykt ved hjælp af anvendelse af en nukleinsyre med en deletions- eller insertionsmutation, fortrinsvis omfattende de randsekvenser, som omfatter hver især i det mindste 70 til 150 nukleinsyrepositioner, af det for proteinet kodende område.

8. Fremgangsmåde til fremstilling af et genanvendeligt stof ved hjælp af fermentering af en mikroorganisme, kendetegnet ved, at dannelsen af poly-gamma-glutamat under fermenteringen er reduceret af mikroorganismen ved hjælp af undertrykkelse af funktionen af det af genet ywtA kodede protein YwtA (CapC, PgsC) med en aminosyresekvens, som er i det mindste 94% identisk med den i SEQ ID NO. 6 anførte aminosyresekvens, som et i dannelsen af polyaminosyrer impliceret enzym eller som underenhed af et sådant enzym.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 8, kendetegnet ved, at funktionen af det af genet ywtA kodede protein YwtA (CapC, PgsC) er undertrykt ved hjælp af en fremgangsmåde med følgende trin: a) udvælgelse af to områder på sekvensen SEQ ID NO. 5, b) kloning af områderne i en vektor, således at de flankerer en del, som koder for et ikkeaktivt protein, eller således at de følger direkte efter hinanden, idet det derimellem liggende område udelades, c) deletering af genet ywtA med den i trin b) fremstillede vektor og d) påvisning af gen-deletionen.

10. Fremgangsmåde ifølge krav 8 eller 9, kendetegnet ved, at funktionen af det af genet ywtA kodede protein YwtA (CapC, PsgC) er undertrykt ved hjælp af anvendelse af en nukleinsyre med en deletions- eller insertionsmutation, fortrinsvis omfattende de randsekvenser, som omfatter hver især i det mindste 70 til 150 nukleinsyrepositioner, af det for proteinet kodende område.

11. Fremgangsmåde ifølge krav 8, 9 eller 10, kendetegnet ved, at det genanvendelige stof er et naturligt stof, et kosttilskudsmiddel eller en farmaceutisk relevant forbindelse eller et enzym.

12. Fremgangsmåde ifølge krav 11, kendetegnet ved, at enzymet er udvalgt af gruppen af a-amylaser, proteaser, cellulaser, lipaser, oxidoreduktaser, peroxidaser, laccaser, oxidaser og hemicellulaser.

13. Anvendelse af en nukleinsyre kodende for et i dannelsen af poly-gamma-glutamat impliceret protein YwtA (CapC, PgsC) med en aminosyresekvens, som er i det mindste 94% identisk med den i SEQ ID NO. 6 anførte aminosyresekvens, eller hver især dele heraf til undertrykkelse af funktionen af proteinet YwtA (CapC, PgsC) som et i dannelsen af polyaminosyrer impliceret enzym eller som underenhed af et sådant enzym.

14. Anvendelse af en nukleinsyre kodende for et i dannelsen af poly-gamma-glutamat impliceret protein YwtA (CapC, PgsC) med en aminosyresekvens, som er i det mindste 94% identisk med den i SEQ ID NO. 6 anførte aminosyresekvens, eller hver især dele heraf til reduktion af det slim, som skyldes poly-gamma-glutamat, til 50% under fermenteringen af en mikroorganisme.

15. Anvendelse ifølge krav 13 eller 14, kendetegnet ved, at nukleinsyren har sekvensen SEQ ID NO. 5.

16. Anvendelse af en nukleinsyre med en deletions- eller insertionsmutation omfattende de randsekvenser, som hver især omfatter i det mindste 70 til 150 nukleinsyrepositioner, af det for et protein YwtA (CapC, PsgC) med aminosyresekvensen, som er i det mindste 94% identisk med den i SEQ ID NO. 6 anførte aminosyresekvens, kodende område til reduktion af det slim, som skyldes poly-gamma-glutamat under fermenteringen af en mikroorganisme.

17. Mikroorganisme, hvor det for et i dannelsen af poly-gamma-glutamat impliceret genprodukt kodende gen ywtA funktionelt er inaktiveret, idet den kodende nukleotidsekvens ywtA har en nukleotidsekvens, som er i det mindste 94% identisk med den i SEQ ID NO. 5 anførte nukleotidsekvens.

18. Mikroorganisme ifølge krav 17, idet det drejer sig om Bacillus licheniformis.