JP2000166560A - 新規挿入配列 - Google Patents

新規挿入配列

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JP2000166560A
JP2000166560A JP10348374A JP34837498A JP2000166560A JP 2000166560 A JP2000166560 A JP 2000166560A JP 10348374 A JP10348374 A JP 10348374A JP 34837498 A JP34837498 A JP 34837498A JP 2000166560 A JP2000166560 A JP 2000166560A
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arg
leu
ser
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Yoshiya Gunji
義哉 郡司
Hisashi Yasueda
寿 安枝
Yoshio Kawahara
義雄 河原
Shinichi Sugimoto
愼一 杉本
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Ajinomoto Co Inc
Original Assignee
Ajinomoto Co Inc
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Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 メタン資化性細菌であるメチロコッカス
・カプスラタスNCIMB11132株のメタンモノオキシゲナー
ゼをコードするsMMO遺伝子中に見い出された、配列表配
列番号１の塩基番号５〜１９からなる塩基配列を有する
インバーテッドリピートを両端に有する新規な挿入配
列。 【発明の効果】 本発明の挿入因子は、挿入変異株の作
成、遺伝子マッピング、プロモーター検索、染色体ＤＮ
Ａへの遺伝情報の挿入、特定遺伝子の破壊等、遺伝解析
の有効な手段、あるいはメタン資化性菌の染色体遺伝子
工学による改良に利用することができる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、メタン資化性細菌
由来の新規な挿入配列に関する。挿入配列は、染色体上
のいろいろな部位に転位・挿入され得るので、遺伝解析
の有効な手段として、又は、細菌の染色体上に所望の遺
伝子を組み込む手段として、利用することができる。
【０００２】
【従来の技術】原核生物および真核生物のいずれにも、
ゲノム内部あるいはゲノム相互間のある部位から他の部
位に移動するDNA配列が知られており、一般的に転位因
子と呼ばれている。このような転位因子の大部分のもの
は、ある部位から他の部位へ移動するのに必要な部位特
異的組換え酵素（トランスポゼース）を、自身の配列上
にコードしている。このような転位因子の中では最も小
さく簡単な構造を有する因子は、挿入配列(IS：insersi
on sequence)と呼ばれている。
【０００３】微生物における転位配列の一つである挿入
配列には、いくつかの特徴がある。それらは、およそ１
〜２kbの大きさを有しており、その両端には８〜20bp程
度のインバーテッドリピート（逆方向反復配列）が存在
している。また、挿入配列が微生物染色体に挿入される
ときには、挿入配列の外側にターゲットとなる配列の重
複が生じる（Mobile Genetic Elements. Academic Pres
s, New York, p.159-221(1983)）。微生物の挿入配列
は、大腸菌由来のもの[Mol. Gen. Genet. Vol. 122, 26
7-277 (1973)]、赤痢菌由来のもの[J. Bacteriol. Vol1
72, 4090-4099 (1993)]、酢酸菌由来のもの[Mol. Micro
biol. Vol. 9, 211-218 (1993)]、マイコプラズマ由来
のもの[Mol. Microbiol. Vol. 7, 577-584 (1993)]等に
おいてよく研究されている。
【０００４】一方、メタン資化性菌については、その菌
体を利用した酸化生成物の連続的製造法（特開平５−３
２７９号、特開昭５４−１４３５８３号）、メタン資化
性菌を利用した環境汚染物質の分解のよる環境浄化（特
開平６−２４５７６１号、特開平８−２４９０５号）、
及びメタンを蛋白質資材量に変換する発酵法（特開昭５
０−４０７８８号）などの発明が知られており、産業上
重要な微生物である。しかしながら、メタン資化性細菌
由来の挿入配列についての、従来の報告例はない。
【０００５】
【発明の概要】本発明者らは、メタン資化性菌であるメ
チロコッカス・カプスラタス（Methylococcus capsulat
us）由来の酵素、メタンモノオキシゲナーゼ(以下、「s
MMO」と略すことがある) の機能を解析するために、sMM
Oタンパク質をコードする遺伝子（以下、「sMMO遺伝
子」と略すことがある）をクローニングする過程で、同
遺伝子中に挿入配列が存在することを見い出した。本発
明は、この知見に基づいてなされたものである。
【０００６】すなわち本発明は、メチロコッカス属細菌
の染色体ＤＮＡ由来である配列表配列番号１に示す塩基
配列を有する挿入配列である。本発明はまた、両端にイ
ンバーテッドリピートを有する挿入配列であって、該イ
ンバーテッドリピートが配列表配列番号１の塩基番号５
〜１９からなる塩基配列を有する挿入配列を提供する。
【０００７】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の挿入配列は、メタン資化性菌であるメチロコッ
カス・カプスラタスNCIMB11132株のsMMO遺伝子中に発見
されたものであり、同株の染色体ＤＮＡから分離・取得
することができる。以下に、この挿入配列を取得する方
法の一例を示す。
【０００８】メチロコッカス・カプスラタスNCIMB11132
株は、NCIMB（National Collectionof Industrial and
Marine Bacteria Ltd., 23 St.Machar Drive, Aberdeen
AB2 1RY, Scotland, UK）から何人も入手することがで
きる。NCIMB11132株を培養するために用いる培地として
は、該細菌が十分に増殖し得るものであればよいが、好
適な培地としてホイッテンベリー等の培地（J. Gen. Mi
crobiol., ６１, ２０５ー２０８頁、１９７０年）があ
る。培地を入れた培養容器の空間をメタンと酸素含有ガ
ス（空気など）との混合ガスにて置換し、該ガスと接触
している培地にNCIMB11132株を接種する。本発明に用い
るメチロコッカス・カプスラタスは好気性細菌であり、
その培養は20〜50℃にて好気的条件で、回分培養もしく
は連続培養を行えばよい。
【０００９】sMMO遺伝子を含むＤＮＡ断片は、同遺伝子
の公知の塩基配列に基づいて作成したオリゴヌクレオチ
ドをプライマーに用いたPCR法（ポリメラーゼチェイン
リアクション）により、sMMO遺伝子の一部を含むＤＮＡ
断片を取得し、同ＤＮＡ断片をプローブとして、以下に
述べる方法でメチロコッカス・カプスラタス株染色体由
来のDNAライブラリーからハイブリダイゼーション法に
より、分離取得することができる。
【００１０】メチロコッカス・カプスラタスNCIMB11132
株の培養液から染色体DNAは、それ自体既知の通常用い
られる方法（例えば、[Biochem. Biophys. Acta.,72, 6
19(1963)]）等で抽出することができる。
【００１１】DNAライブラリーは、染色体ＤＮＡを適当
な制限酵素、例えばBamHIを用いて分解し、得られる様
々な大きさのDNA断片をプラスミドベクター、例えばpUC
18（宝酒造製）に連結し、連結反応液を用いて適当な宿
主、例えばエシェリヒア・コリJM109を形質転換するこ
とにより、調製することができる。
【００１２】ハイブリダイゼーションによりsMMO遺伝子
を含むＤＮＡ断片を持つクローンを選択するためのプロ
ーブは、sMMO遺伝子の公知の塩基配列から適宜設定した
塩基配列、例えば配列表配列番号３及び４に示す塩基配
列を有するオリゴヌクレオチドをプライマーとし、メチ
ロコッカス・カプスラタスの染色体ＤＮＡを鋳型とする
PCRによって、得ることができる。
【００１３】上記のようにして得られるプローブを用い
て、メチロコッカス・カプスラタスNCIMB11132株の染色
体ＤＮＡライブラリーについて、コロニーハイブリダイ
ゼーションを行う。ハイブリダイゼーションによりプロ
ーブであるsMMO遺伝子部分DNA断片とハイブリダイズす
るクローンからプラスミドDNAを抽出し、該プラスミド
を制限酵素BamHIにより切断し、挿入断片を得ることに
より、本発明の挿入配列を含むＤＮＡ断片を取得するこ
とができる。
【００１４】上記のようにして、後記実施例で得られた
7.5kbpのBamHI断片の制限酵素地図を、図１に示す。こ
の7.5kbpの断片中から、さらにSmaIで切り出された約5.
0kbpの断片（以下、「SmaI断片」ともいう）を含むプラ
スミドベクターpHSG398（宝酒造(株)製）は、pHSMO50と
命名され、このプラスミドpHSMO50を保持するE. coli J
M109株（AJ13497）は、1998年10月16日に通商産業省工
業技術院生命工学工業技術研究所（郵便番号305-8566
茨城県つくば市東一丁目１番3号）に受託番号FERM P-17
024として寄託されている。この寄託菌株からプラスミ
ドを調製し、同プラスミドからSmaI断片を切り出せば、
本発明の挿入配列を含むＤＮＡ断片を得ることができ
る。
【００１５】上記のようにして得られた本発明の挿入配
列の塩基配列を、配列表配列番号１に示す。この塩基配
列において、塩基番号１〜４、及び塩基番号1340〜1343
のAATTはターゲット配列であると考えられる。また、こ
のターゲット配列の内側に隣接している塩基番号５〜1
9、及び塩基番号1325〜1339位の配列はインバーテッド
リピートである。
【００１６】本発明の挿入配列は、上記の方法の他、配
列番号１に示す塩基配列に基づいて合成したオリゴヌク
レオチドをプライマーに用いることにより、メチロコッ
カス・カプスラタスNCIMB11132株の染色体ＤＮＡからPC
R法によって直接増幅することもできる。
【００１７】本発明の挿入配列は、公知の挿入配列と同
様の利用に供することができる。例えば、メタン資化性
細菌における遺伝子の破壊、遺伝子の増幅あるいは遺伝
子発現の機構の解明に利用することができる。
【００１８】また、本発明の挿入配列又は同挿入配列に
含まれているインバーテッドリピートは、人工トランス
ポゾンの構築に利用することができる。トランスポゾン
は、２つの挿入配列の間に薬剤耐性遺伝子等の遺伝子が
挟まれた形のものと、挿入配列内に薬剤耐性遺伝子等の
遺伝子が挿入された形のものとがある。したがって、本
発明の挿入配列で所望の遺伝子を挟むことにより、トラ
ンスポゾンを構築することができる。また、所望の遺伝
子を上記インバーテッドリピートで挟むことによって
も、挿入配列又はトランスポゾンを構築することができ
る。
【００１９】挿入配列又はトランスポゾンの転移にはト
ランスポゼースが必要であり、通常、挿入配列は内部に
トランスポゼース遺伝子を含む。本発明の挿入配列に
も、342アミノ酸からなるポリペプチドをコードし得る1
026bpのオープンリーディングフレーム（配列番号１に
おいて塩基番号90〜1115）が見い出されている。このポ
リペプチドのアミノ酸配列は、公知のトランスポゼース
との相同性は見い出されていないが、これがトランスポ
ゼースをコードしていることが推定できる。このトラン
スポゼースを用いれば人工トランスポゾンを作成するこ
とができる。
【００２０】トランスポゼース遺伝子は人工トランスポ
ゾン内部にあってもよいし、これらの外部にあってもよ
い。例えば、人工トランスポゾンが搭載されるベクター
に、トランスポゼース遺伝子を同時に搭載してもよい
し、該ベクターとは別のもうひとつのベクターにトラン
スポゼース遺伝子を搭載してもよい。また、トランスポ
ゼース遺伝子はメタン資化性細菌の染色体上に存在して
いても良い。
【００２１】構築された人工トランスポゾンは、適当な
ベクターに搭載して宿主であるメタン資化性細菌に導入
される。メタン資化性細菌としては、例えばメチロコッ
カス属細菌、具体的にはメチロコッカス・カプスラタ
ス、メチロモナス・アルバス、メチロシナス・トリコス
ポリウム等が挙げられる。
【００２２】人工トランスポゾンを搭載するプラスミド
としては、特に制限はないが、メタン資化性細菌で機能
するプラスミドを用いればよい。具体的には、R68.45、
RP4、pVK100、及びこれらを改良した薬剤耐性遺伝子を
有するプラスミド等である。プラスミドをメタン資化生
細菌に導入する方法としては、Warner等の方法（FEMSMi
crobiol. Lett., 7, 181-185 (1980)）を用いればよ
い。
【００２３】人工トランスポゾンに適当な薬剤耐性遺伝
子を搭載させ、同トランスポゾンを保持する宿主を選択
する薬剤濃度を適宜設定することにより、多コピーの人
工トランスポゾンが染色体に転移した遺伝子増幅体を効
率よく取得することができる（特開平９−７０２９１号
参照）。
【００２４】
【実施例】本発明を、以下の実施例によりさらに具体的
に説明する。
【００２５】＜１＞メタン資化性細菌メチロコッカス・
カプスラタスの染色体ＤＮＡライブラリーの作製 ホイッテンベリー等の培地［J. Gen. Microbiol., 61,
205-208, 1970］を入れた培養容器の空間を、メタンと
空気との混合ガスにて置換した。該ガスと接触している
培地にメタン資化性細菌メチロコッカス・カプスラタス
NCIMB11132株を接種し、ガス置換を行いながら好気的
条件で回分培養した。
【００２６】上記のようにして培養したメチロコッカス
・カプスラタス NCIMB11132の菌体から、Biochem. Biop
hys. Acta., 72, 619 (1963)に記載の方法で、染色体DN
Aを抽出した。この染色体DNAを制限酵素BamHIを用いて
完全分解した。得られた様々な大きさのDNA断片を、プ
ラスミドベクターpUC18（宝酒造(株)製）のBamHI部位に
挿入した。得られた組換えプラスミドでエシェリヒア・
コリJM109を形質転換し、染色体ＤＮＡライブラリーを
作製した。
【００２７】＜２＞コロニーハイブリダイゼーションに
よるsMMO遺伝子のクローニング 上記染色体ＤＮＡライブラリーからsMMO遺伝子断片を含
むクローンを、コロニーハイブリゼーションにより選択
した。ハイブリダイゼーション用のプローブは、PCR法
によりsMMO遺伝子断片を増幅することによって調製し
た。メチロコッカス・カプスラタスのsMMO遺伝子は、そ
の塩基配列が既に報告されており［Gene,91, 27-34 (19
90)］、その配列に基づいて配列番号３及び配列番号４
に示すオリゴヌクレオチドを合成した。
【００２８】前記と同様にして調製したメチロコッカス
・カプスラタスの染色体ＤＮＡを鋳型とし、上記オリゴ
ヌクレオチドをプライマーとしてPCR反応を行った。PCR
反応は、デナチュレーション工程（９４℃、１０秒）、
アニーリング工程（５５℃、３０秒）、及びエクステン
ション工程（７２℃、１分３０秒）からなるサイクルを
３０サイクル行った。
【００２９】上記のようにして増幅されたsMMO遺伝子の
部分断片をプローブとして、前記染色体ＤＮＡライブラ
リーについてコロニーハイブリダイゼーションを行っ
た。プローブの標識及びハイブリダイゼーション反応
は、DIG-ハイプライム DNAラベリング＆デテクションス
ターターキットＩ（ベーリンガー・マンハイム社より購
入）を用い、添付のプロトコールに従って行った。
【００３０】ハイブリダイゼーションの陽性クローンか
ら組換えプラスミドＤＮＡを抽出し、該プラスミドＤＮ
Ａを制限酵素BamHIにより切断し、挿入断片を確認し
た。その結果、プラスミドpUC18の長さ約2.3kbのDNA断
片に加え、大きさが約7.5kbの挿入DNA断片が認められ
た。この組み換えプラスミドをpSMO75と命名した。この
挿入断片の制限酵素地図を図１に示す。また、BamHIで
切り出されるこの7.5kbpの断片中から、さらにSmaIで切
り出された約5.0kbpの断片（以下、「SmaI断片」ともい
う）を、プラスミドベクターpHSG398（宝酒造(株)製）
にサブクローニングした。このプラスミドをpHSMO50と
命名した。このプラスミドpHSMO50を保持するE. coli J
M109株は、AJ13497と命名され、1998年10月16日に通商
産業省工業技術院生命工学工業技術研究所（郵便番号30
5-8566 茨城県つくば市東一丁目１番3号）に受託番号F
ERM P-17024として寄託されている。
【００３１】上記SmaI断片の塩基配列を、ジデオキシヌ
クレオチド酵素法（dideoxychain termination法）[Pro
c. Natl. Acad. Sci., USA, 74. 5463 (1997)］を用い
て決定した。
【００３２】上記のようにして、メチロコッカス・カプ
スラタス NCIMB11132株のsMMO遺伝子をクローニング
し、塩基配列を決定したところ、sMMO遺伝子中に挿入配
列が存在することが確認された。この挿入配列の塩基配
列を配列番号１に示す。
【００３３】上記塩基配列の検討を行ったところ、１位
から４位までのTTAAの配列が、1340位から1343位までの
配列にも認められ、これがターゲット配列であり、か
つ、その内側に隣接している５位のCから19位のAに至る
配列と、1325位のTから1339位のGに至る配列の相補鎖は
同じ配列であり、これがインバーテッドリピートである
ことが明らかになった。これらのことより、この部分が
挿入配列であることがわかった。
【００３４】上記のように決定した挿入配列を更に詳細
に検討したところ、90位のAから1115位のAまでの1026bp
のオープンリーディングフレームが見い出された。翻訳
可能な342アミノ酸配列（ATGでコードされるMetから始
まる配列）を、配列番号１及び配列番号２に示す。この
アミノ酸配列から予想される蛋白質の分子量は約38,000
であった。このアミノ酸配列を、コンピューターによる
データベースとのアミノ酸配列相同性検索に供したが、
高い相同性を示す既知のアミノ酸配列は見い出されなか
った。
【００３５】
【発明の効果】本発明の挿入配列は、染色体上のいろい
ろな部位に転位・挿入することが可能であり、この能力
によって、本発明の挿入因子を遺伝解析の有効な手段と
して用いることができる。利用の例としては、挿入変異
株の作成、遺伝子マッピング、プロモーター検索、遺伝
情報の挿入、特定遺伝子の破壊等が挙げられる。また、
同挿入配列を用いて、メタン資化性菌を染色体遺伝子工
学を用いて改良することができる。
【００３６】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> 味の素株式会社（Ajinomoto Co., Inc.） <120> 新規挿入配列（Novel insertion sequence） <130> P-6080 <141> 1998-12-08 <160> 4 <170> PatentIn Ver. 2.0
【００３７】 <210> 1 <211> 1343 <212> DNA <213> Methylococcus capsulatus <220> <221> CDS <222> (90)..(1115) <400> 1 ttaacaggcc gttgaaaaac tcccccgcag ccgcccgtgc tgccggtacc atgtgagcgg 60 cggcgacgac gagacagcag acaccgaag atg aga ggc aca cag aac ttc caa 113 Met Arg Gly Thr Gln Asn Phe Gln 1 5 ggg gcg atg ttc agc tac atc agc ctt gaa gag cgg gta ccg gcc aga 161 Gly Ala Met Phe Ser Tyr Ile Ser Leu Glu Glu Arg Val Pro Ala Arg 10 15 20 cac ccg ctg cgc aag ctg cgc gcg ctg gtc gat gcc ttg ctg gcc agc 209 His Pro Leu Arg Lys Leu Arg Ala Leu Val Asp Ala Leu Leu Ala Ser 25 30 35 40 atg agc gcg gaa ttc gag gcg gtc tat gcc cgc cgt ggc cgc cct tcg 257 Met Ser Ala Glu Phe Glu Ala Val Tyr Ala Arg Arg Gly Arg Pro Ser 45 50 55 gtg ccg ccc gaa atg ctg ctc aag gcg ttg ctg ctg caa atc ctg ttt 305 Val Pro Pro Glu Met Leu Leu Lys Ala Leu Leu Leu Gln Ile Leu Phe 60 65 70 tcc atc cgc agc gag cgg ctg ctg gtg gag gcc atc gac tac aac ctg 353 Ser Ile Arg Ser Glu Arg Leu Leu Val Glu Ala Ile Asp Tyr Asn Leu 75 80 85 ctg tac cgc tgg ttc gtg ggc ctg aac tgg aag aca agg tgt ggg acc 401 Leu Tyr Arg Trp Phe Val Gly Leu Asn Trp Lys Thr Arg Cys Gly Thr 90 95 100 act cca cct tca gcg cca acc gcc agc ggc tgt tca acg aaa gac ctc 449 Thr Pro Pro Ser Ala Pro Thr Ala Ser Gly Cys Ser Thr Lys Asp Leu 105 110 115 120 gcc cgc gtg ttc ttt gag cgg gtc aaa tac acc gcg gac tgg gcg aag 497 Ala Arg Val Phe Phe Glu Arg Val Lys Tyr Thr Ala Asp Trp Ala Lys 125 130 135 ttg atc ggt gac gag cac ttc agc gtc gac ggc aca ctc atc gag gcc 545 Leu Ile Gly Asp Glu His Phe Ser Val Asp Gly Thr Leu Ile Glu Ala 140 145 150 tgg gcc tcg caa aag agc ttc aag cgc aag gac gca agc ggc agt gac 593 Trp Ala Ser Gln Lys Ser Phe Lys Arg Lys Asp Ala Ser Gly Ser Asp 155 160 165 gac ggc gca ccg ccc cag ggt cgc aac ccc gag gtg gat ttc aag ggc 641 Asp Gly Ala Pro Pro Gln Gly Arg Asn Pro Glu Val Asp Phe Lys Gly 170 175 180 gag acc cgt cgc aac gac acc cac gcc agc acg aca gat gcc gat gcg 689 Glu Thr Arg Arg Asn Asp Thr His Ala Ser Thr Thr Asp Ala Asp Ala 185 190 195 200 cgg ctg ttc aag aaa gct gca ggc gac aag tcc cgc ctg tgc cac atg 737 Arg Leu Phe Lys Lys Ala Ala Gly Asp Lys Ser Arg Leu Cys His Met 205 210 215 ggt cac atc ctc atg gac aac cga cac ggg ctg gtg gtg gac gtc gaa 785 Gly His Ile Leu Met Asp Asn Arg His Gly Leu Val Val Asp Val Glu 220 225 230 atc acc cat gcc agc ggc acg gcc gag cgg cag gcc gca ctc aag atg 833 Ile Thr His Ala Ser Gly Thr Ala Glu Arg Gln Ala Ala Leu Lys Met 235 240 245 ctc cag cgc caa aag cgc aaa gcc ggc cga ctc acc gtg ggg gcg gac 881 Leu Gln Arg Gln Lys Arg Lys Ala Gly Arg Leu Thr Val Gly Ala Asp 250 255 260 aag ggc tat gac tgc cgt gcc ttc gtg cag ggc tgc cgc aag ctg ggg 929 Lys Gly Tyr Asp Cys Arg Ala Phe Val Gln Gly Cys Arg Lys Leu Gly 265 270 275 280 atc acc ccg cac gtg gcg gcc aaa gcc aag cac tcg gcc att gac gga 977 Ile Thr Pro His Val Ala Ala Lys Ala Lys His Ser Ala Ile Asp Gly 285 290 295 cgc acc cag cgg cac gaa ggc tac aag gtg agc ctg agg tgc gca aac 1025 Arg Thr Gln Arg His Glu Gly Tyr Lys Val Ser Leu Arg Cys Ala Asn 300 305 310 gca tcg agg agc att tcg gct gga tca aga ccg tgg gcg gtc tgg cca 1073 Ala Ser Arg Ser Ile Ser Ala Gly Ser Arg Pro Trp Ala Val Trp Pro 315 320 325 aga cca agc tca tcg ggc atg cca agc tgg cgg ggc agg cgc 1115 Arg Pro Ser Ser Ser Gly Met Pro Ser Trp Arg Gly Arg Arg 330 335 340 tgatgtgctt tgccgcgtac aacctcgtgc gcatgggctc cctcggtggc tggtgggatg 1175 cgcatcatgc gtgattgcgg gggtcagtgc gcccaaaatg ggcgagcagc tcccaatggg 1235 ggagcccaag ccgctgccgg agccgagaaa aacggcttgc gccggcctcg gacccacgca 1295 aacgggtaca tggccgcttc gatggacact ttttcaacgg cctgttaa 1343
【００３８】 <210> 2 <211> 342 <212> PRT <213> Methylococcus capsulatus <400> 2 Met Arg Gly Thr Gln Asn Phe Gln Gly Ala Met Phe Ser Tyr Ile Ser 1 5 10 15 Leu Glu Glu Arg Val Pro Ala Arg His Pro Leu Arg Lys Leu Arg Ala 20 25 30 Leu Val Asp Ala Leu Leu Ala Ser Met Ser Ala Glu Phe Glu Ala Val 35 40 45 Tyr Ala Arg Arg Gly Arg Pro Ser Val Pro Pro Glu Met Leu Leu Lys 50 55 60 Ala Leu Leu Leu Gln Ile Leu Phe Ser Ile Arg Ser Glu Arg Leu Leu 65 70 75 80 Val Glu Ala Ile Asp Tyr Asn Leu Leu Tyr Arg Trp Phe Val Gly Leu 85 90 95 Asn Trp Lys Thr Arg Cys Gly Thr Thr Pro Pro Ser Ala Pro Thr Ala 100 105 110 Ser Gly Cys Ser Thr Lys Asp Leu Ala Arg Val Phe Phe Glu Arg Val 115 120 125 Lys Tyr Thr Ala Asp Trp Ala Lys Leu Ile Gly Asp Glu His Phe Ser 130 135 140 Val Asp Gly Thr Leu Ile Glu Ala Trp Ala Ser Gln Lys Ser Phe Lys 145 150 155 160 Arg Lys Asp Ala Ser Gly Ser Asp Asp Gly Ala Pro Pro Gln Gly Arg 165 170 175 Asn Pro Glu Val Asp Phe Lys Gly Glu Thr Arg Arg Asn Asp Thr His 180 185 190 Ala Ser Thr Thr Asp Ala Asp Ala Arg Leu Phe Lys Lys Ala Ala Gly 195 200 205 Asp Lys Ser Arg Leu Cys His Met Gly His Ile Leu Met Asp Asn Arg 210 215 220 His Gly Leu Val Val Asp Val Glu Ile Thr His Ala Ser Gly Thr Ala 225 230 235 240 Glu Arg Gln Ala Ala Leu Lys Met Leu Gln Arg Gln Lys Arg Lys Ala 245 250 255 Gly Arg Leu Thr Val Gly Ala Asp Lys Gly Tyr Asp Cys Arg Ala Phe 260 265 270 Val Gln Gly Cys Arg Lys Leu Gly Ile Thr Pro His Val Ala Ala Lys 275 280 285 Ala Lys His Ser Ala Ile Asp Gly Arg Thr Gln Arg His Glu Gly Tyr 290 295 300 Lys Val Ser Leu Arg Cys Ala Asn Ala Ser Arg Ser Ile Ser Ala Gly 305 310 315 320 Ser Arg Pro Trp Ala Val Trp Pro Arg Pro Ser Ser Ser Gly Met Pro 325 330 335 Ser Trp Arg Gly Arg Arg 340
【００３９】 <210> 3 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:PCR primer <400> 3 ggtaagttta tgcagcgagt tcacactatc acggcggt 38
【００４０】 <210> 4 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:PCR primer <400> 4 tcgcatgaag gggccaagtc cggcggggcc 30
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の挿入配列を含むsMMO遺伝子の一部を含
むＤＮＡ断片の制限酵素地図。長方形は、挿入配列中の
オープンリーディングフレームを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 河原 義雄 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１味の素 株式会社発酵技術研究所内 (72)発明者 杉本 愼一 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１味の素 株式会社発酵技術研究所内 Ｆターム(参考） 4B024 AA20 BA80 CA03 EA04

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 メチロコッカス属細菌の染色体ＤＮＡ由
    来である配列表配列番号１に示す塩基配列を有する挿入
    配列。
  2. 【請求項２】 両端にインバーテッドリピートを有する
    挿入配列であって、該インバーテッドリピートが配列表
    配列番号１の塩基番号５〜１９からなる塩基配列を有す
    る挿入配列。
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