DK174268B1

DK174268B1 - 17-spiro-steroider, deres fremstilling samt lægemidler med indhold deraf

Info

Publication number: DK174268B1
Application number: DK198805090A
Authority: DK
Inventors: Lucien Nedelec; Daniel Philibert; Andre Claussner; Martine Moguilewsky
Original assignee: Aventis Pharma Sa
Priority date: 1987-09-18
Filing date: 1988-09-13
Publication date: 2002-10-28
Also published as: KR960013446B1; US4921846A; EP0308345A1; FR2620707B1; KR890005143A; HUT48275A; ZA886820B; IE882813L; ES2054844T3; SU1665877A3; CN1031942C; EP0308345B1; HU199505B; JPH01106899A; DK509088A; ATE88716T1; IE61751B1; DE3880601T2; PT88536A; JP2794297B2

Description

- i - * DK 174268 B1

Opfindelsen angår hidtil ukendte 17-spiro-steroider med formlen X som angivet i krav 1.

Fordelagtige forbindelser er angivet i krav 2-6.

Gruppen 1*2 betegner fortrinsvis en ligekædet eller forgrenet mættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, f.eks. methyl, ethyl, propyl eller butyl.

R2 betegner fortrinsvis methyl eller ethyl.

Især betegner R2 methyl.

Gruppen R2 kan være i alpha- eller beta-stilling. Man foretrækker de forbindelser, hvor R2 befinder sig i beta-stilling. I dette sidste tilfælde er oxygenatomet i spiroether-gruppen i 17beta-stilling.

Når R^ omfatter en carboxygruppe, kan denne være omdannet til farmaceutisk acceptabelt salt. Blandt disse mulige salte kan f.eks. nævnes natrium-, kalium-, lithium-, calcium-, magnesium- og ammoniumsaltene. Blandt organiske baser kan nævnes methylamin, propylamin, trimethylamin, diethylamin, triethylamin, Ν,Ν-dimethylethanolamin, tris-(hydroxymethyl)-aminomethan, ethanolamin, pyridin, pico-lin, dicyclohexylamin, morpholin, benzylamin, procain, lysin, arginin, histidin og N-methylglucamin .

Når omfatter en gruppe, som kan omdannes til salt med en syre, og især en aminogruppe, får man additionssaltene med syrerne.

Opfindelsen omfatter farmaceutisk acceptable syreadditionssalte af de til salte omdannelige forbindelser med formlen (I) 'som f.eks. de salte, der dannes med'sål tsyre, hydrogenbromidsyre, /" ‘ ---- .

S _ ... ^ - 2 - DK 174268 B1 salpetersyre, svovlsyre, phosphorsyre, eddikesyre, myresyre, propionsyre, benzoesyre, maleinsyre, fumarsyre, ravsyre, vinsyre, citronsyre, oxalsyre, glyoxylsyre, aspara-ginsyre, alcansulfonsyrer såsom methan- eller ethansulfon-syre, arylsulfonsyrer såsom benzen- eller p-toluensulfon-syre og arylcarboxylsyrer.

De foretrukne forbindelser med formlen (I) er især de forbindelser, som er beskrevet i eksemplerne. Blandt disse beskrevne forbindelser foretrækkes: - (17R)-1lbeta-(4-(dimethylamino)-phenyl)-spiro-(estra-4,9-dien-17,2'-oxetan)-3-on, - (17R}-llbeta-(4-(methylthio)-phenyl)-spiro-(estra-4,9-di-en-17,2'-oxetan)-3-on.

Opfindelsen angår ligeledes en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne med formlen (I) defineret som ovenfor eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf med syrer eller baser, og denne fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav 7's kendetegnende del anførte.

I en foretrukken udførelsesform for den omhandlede fremgangsmåde udføres omdannelsen af forbindelserne med formlen (II) ved hjælp af et dehydratiseringsmiddel, som ligeledes er i stand til at frigøre ketongruppen, fortrinsvis ved hjælp af en sulfonester (sur form), f.eks. en i handelen gående sul fonharpiks på en bærer af polystyren eller på en bærer af styren/divinyl/benzen-polymer. Man kan imidlertid benytte en mineralsyre såsom saltsyre eller svovlsyre i en lavmolekylær alkanol eller perchlorsyre i eddikesyre eller en sulfonsyre såsom p-toluensulfonsyre eller surt kaliumsulfat i en blanding af vand og methylenchlorid.

I formlen (II) kan K betegne en ketalgruppe såsom dimethyl-ketal, ethylen-dioxy, 2,2-dimethylpropan-l,3-dioxy, en tilsvarende thioketal, en oxim eller en methyloxim. Det oxidationsmiddel, som man lader indvirke på forbindel- s . . -_ DK 174268 B1 - 3 - serne med formlen d^) , eller det epoxideringsmiddel, som man lader indvirke til opnåelse af forbindelserne med formlen dg), er fortrinsvis en persyre såsom m-chlor-perbenzoesyre, pereddikesyre eller perphthalsyre. Man kan ligeledes benytte hydrogenperoxid alene eller i nærværelse af hexachlor- eller hexafluoracetone.

Det vil forstås, at man alt efter antallet af grupper, som kan gøres til genstand for oxidation, kan benytte et eller flere ækvivalenter oxidationsmiddel.

Hvis man således f.eks. vil oxidere svovlatomet i R^ til sulfon, bør man naturligvis benytte mindst 2 ækvivalenter oxidationsmiddel.

- Den stærke base, som man benytter på forbindelserne med formlen dft), kan være et alkalimetalamid såsom natriumamid eller lithiumamid, eventuelt fremstillet in situ.

Det alkylhalogenid, som man benytter, er fortrinsvis et iodid såsom methyliodid.

Det aromatiseringsmiddel, som man benytter til fremstilling af forbindelserne med formlen dg), er fortrinsvis et acylhalogenid såsom acetylbromid eller et syrean'nydrid såsom eddikesyreanhydrid eller en blanding af begge.

Den eventuelle acylering af forbindelserne med formlen {Ιβ) og den acylering, som fører til forbindelserne med formlen d^), udføres på gængs måde. Man benytter fortrinsvis et acylhalogenid.

Den eventuelle alkylering af forbindelserne med formlen (Ig) udføres efter gængse metoder. Man benytter f.eks. et alkylhalogenid.

Det hydrolysemiddel, som man benytter til opnåelse af - 4 - DK 174268 B1 forbindelserne med formlen (Ιβ) eller (Ic), er fortrinsvis en alkalimetalbase såsom natrium- eller kaliumhydroxid, og reaktionen udføres i en lavmolekylær alkohol såsom methanol eller ethanol.

Oximeringen af forbindelserne med formlen (l'A) udføres under anvendelse af hydroxylamin i form af salt, fortrinsvis chlorhydratet, i en alkohol ved tilbagesvalingstemperatur.

Omdannelsen af forbindelserne med formel (I) til et farmaceutisk acceptabelt salt udføres under gængse betingelser.

Man kan f.eks. arbejde i nærværelse af ethanolisk natriumhydroxid. Man kan ligeledes benytte et natriumsalt såsom carbonatet eller også surt natrium- eller kaliumcarbonat.

På samme måde udføres omdannelsen af forbindelserne med formel (I) til et farmaceutisk acceptabelt salt ved'hjælp af en syre under gængse betingelser. Man arbejder fortrinsvis med saltsyre, f.eks. i etheropløsning.

I en foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er det cykliseringsmiddel, som man fortrinsvis lader indvirke på forbindelserne med formlen (III), tosyl-chlorid i nærværelse af pyridin. Man kan ligeledes benytte methylsulfonylchlorid.

Forbindelserne med formlen (I) samt deres farmaceutisk acceptable salte er yderst interessante produkter fra et farmakologisk synspunkt. Umiddelbart før kravene er anført et sammenligningsforsøg vedrørende den nærmeste kendte teknik ifølge EP 116 974.

Undersøgelse af forbindelserne på hormonreceptorerne har vist progestomimetisk eller antiprogestomimetisk, androgen eller antiandrogen virkning.

Forbindelserne med formlen (I) har især en bemærkelses- - 5 - DK 174268 B1 værdig antiprogestomimetisk virkning.

Forbindelserne med formlen (I) har ligeledes en antigluco-corticoid virkning, således som det fremgår af forsøgsresultaterne nedenfor.

Visse forbindelser har imidlertid en antiprogestomimetisk virkning, som er større end deres antiglucocorticoide virkning.

Forbindelserne med formlen (I) og deres farmaceutisk acceptable salte, som har antiprogestomimetisk virkning, kan benyttes som svangerskabsforebyggende midler. De kan benyttes mod hormonale forstyrrelser.

Visse forbindelser med formlen (I) samt deres farmaceutisk acceptable salte kan ligeledes frembyde progestomimetiske egenskaber og kan således benyttes til behandling af amenorrhe, dysmenorrhe og lutealinsufficiens.

Forbindelserne med formlen (I) og deres farmaceutisk acceptable salte kan således benyttes som lægemidler til navnlig behandling af sekundære virkninger af glucocorticoider, og de gør det muligt at behandle forstyrrelser som skyldes en hypersecretion af glucocorticoider, og navnlig at behandle aldersfænomener generelt, især hypertension, athero-sclerose, osteoporose, diabetes, fedme og immunodepression og søvnløshed.

Forbindelserne med formlen (I) samt deres farmaceutisk acceptable salte, som har antiandrogenvirkning, kan ligeledes benyttes til behandling af prostatahypertrofi og -cancer, hyperandrogeni, anemi, hirsutisme og acne.

Forbindelserne med formlen (I) og deres farmaceutisk acceptable salte virker ligeledes hæmmende på celledannelse, hvilket gør dem egnede til behandling af hormonafhængig - 6 - DK 174268 B1 cancer, især mammære carcinomer og deres metastaser. Disse egenskaber gør dem ligeledes egnede til behandling af godartede tumorer.

Visse af forbindelserne med formlen (I) og deres farmaceutisk acceptable salte har estrogene og/eller antiestrogene egenskaber. De antiestrogene egenskaber gør dem egnede til behandling af estrogenafhængig cancer.

De estrogene egenskaber, som forbindelserne med formlen (I) og deres farmaceutisk acceptable salte ligeledes kan have, gør dem ligeledes egnede til behandling af forstyrrelser i forbindelse med hypofolliculini, f.eks. af amenorrhé, dys-menorrhé, gentagen abort, premenstruelle forstyrrelser samt til behandling af menopause.

Opfindelsen angår således som lægemidler de farmaceutisk acceptable eller ikke-toxiske forbindelser med formlen (I) i de benyttede doser samt deres farmaceutisk acceptable salte.

Opfindelsen angår navnlig som lægemidler de ovenfor nævnte foretrukne forbindelser med formlen (I) og navnlig følgende: - (17R)-11beta-(4-(dimethylamino)-phenyl)-spiro-(estra-4,9-dien-17,2'-oxetan)-3-on, - (17R)-libeta-{4-(methylthio)-phenyl)-spiro-(estra-4,9-di-en-17,2'-oxetan)-3-on.

Den nyttige dosis varierer i afhængighed af den lidelse, som skal behandles, og indgiftsmåden. Den kan f.eks. variere mellem 10 mg og 1 g om dagen hos voksne ad oral vej.

De hidtil ukendte forbindelser med formlen (I) og deres salte defineret som ovenfor kan benyttes til fremstilling af farmaceutiske præparater, der som aktiv bestanddel inde- - 7 - DK 174268 B1 holder i det mindste en af disse forbindelser.

Forbindelserne med formlen (I) og deres farmaceutisk acceptable salte benyttes ad fordøjelsesvejenieller parente-ralt eller lokalt. De kan foreskrives i form af uoversuk-rede eller oversukrede tabletter, gelatinekapsler, granulat, stikpiller og injektionspræparater, pomade, creme, gele, og disse former fremstilles efter gængse metoder.

Den eller de aktive bestanddele kan inkorporeres deri sammen med i disse farmaceutiske præparater normalt benyttede tilsætningsstoffer såsom talkum, gummi arabicum, laktose, stivelse, magnesiumstearat, cacaosmør, vandige eller ikke-vandige bærestoffer, fedtstoffer af animalsk eller vegetabilsk oprindelse, paraffinderivater, glykoler og diverse fugte-, dispergerings- eller emulgeringsmidler og konserveringsmidler.

Opfindelsen angår således farmaceutiske præparater, der som aktiv bestanddel indeholder i det mindste en forbindelse med formlen (I) eller i det mindste et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

Ved fremstilling af forbindelserne med formlen (I) passeres forbindelserne med formlen (II'):

/'Q

<ιή

OH

hvor R^, og K har samme betydning som ovenfor, og X' betegner ~^CH2^nl_/ ^νΟΓ ηχ = 2 eller 4 eller X' betegner -ch=ch-ch2-ch2-.

Forbindelserne med formlen (II') kan fremstilles ved cykli- sering af de tilsvarende forbindelser med formlen (IV): - 8 - DK 174268 B1 R.y^·/2

OH

hvor K, R1, r2 og X har samme betydning som ovenfor, og X' betegner ~^Η2^η1~' ^vor n^ = 2 eller 4, eller X’ betegner -CH=CH-CH2-CH2.

Forbindelserne med formlen (IV) kan selv fremstilles ud fra forbindelserne med formlen (V): R P? j&r ·· 6h hvor X, R^ og R2 har samme betydning fom ovenfor, ved indvirkning på disse forbindelser af derivater med formlen: H-C=C-(CH2)20H eller CH3C02Alk i nærværelse af en stærk base (Alk = alkyl eventuelt efterfulgt af en sepa ration af de opnåede isomere blandinger ved gængse metoder såsom chromatografi.

De opnåede forbindelser, hvor D-ringen har følgende struktur: ^L^OH vfa*" ^1^J^C5C-(CH2)20H ieller (1) (2) - 9 - DK 174268 B1 hvor R2 og Alk har samme betydning ' som ovenfor, underkastes derpå en delvis eller total hydrogenering, for de første forbindelsers (1) vedkommende til opnåelse af forbindelserne med formlen (IV), hvor X' betegner henholdsvis en gruppe -CH=CH-CH2-CH2- eller “^CH2^ni' hvor betegner tallet 4.

Forbindelserne med formlen (2) underkastes et reduktionsmiddel til opnåelse af forbindelserne med formlen (IV), hvor X’ betegner -(CH2)2~.

Forbindelserne med formlen (II), hvor X betegner - (CH2)-, kan fremstilles ved indvirkning på forbindelserne med formlen (V) af et trimethylsulfoniumhalogenid i nærværelse af en stærk base.

Man finder fremgangsmåder til fremstilling af forbindelser' af denne type i europæisk patentskrift nr.

EP 0.192.598.

Forbindelserne med formlen (II') kan ligeledes fremstilles på følgende måde:

Man omsætter en forbindelse med formlen (VI): R2

CcS^ (VI) hvor K og R2 har samme betydning som ovenfor, enten med en forbindelse med formlen H-C=C-(CH2)20H til opnåelse af en forbindelse med samme D-ring som forbindelsen (1) ovenfor, og derefter underkaster man forbindelsen en delvis eller fuldstændig hydrogeneringsreaktion, eller med en forbindelse med formlen CH3C02Alk til opnåelse -10- DK 174268 B1 af en forbindelse med samme D-ring som forbindelsen (2) ovenfor, og derefter underkaster man denne forbindelse en reduktionsreaktion til opnåelse af en forbindelse med formlen (VII):

_fOH

......

hvor KV X' og R2 har samme betydning som ovenfor, og man underkaster forbindelserne med formlen (VII) indvirkning af et cykliseringsmiddel til opnåelse af en forbindelse med formlen (VIII): hvor K, r"2 og X' har samme betydning som ovenfor, hvilken forbindelse man underkaster indvirkning af et epoxiderings-middel til opnåelse af en forbindelse med formlen (IX):

R

-^v· 2 γ_γΤΓ> II ΐΓν·' II \ J χ · <ix) hvor K, R2 og X’ har samme betydning som ovenfor, på hvilken forbindelse man lader indvirke en af følgende forbindelser: (Rj^CuLi, R^MgHal i nærværelse af cupro- - 11 - DK 174268 B1 eller cuprisalte eller (R^^CuCNld^ til opnåelse af de forventede forbindelser med formlen (II').

I en foretrukken udførelsesform for ovennævnte fremgangsmåde er midlet til cyklisering af forbindelserne med formlen (IV) til forbindelser med formlen (II1) toluensulfonyl-chlorid eller methansulfonylchlorid i pyridin.

Indvirkningen af forbindelsen med formlen på forbindelsen med formlen (V) udføres fortrinsvis i nærværelse af kalium-tert.-butylat eller butyl- eller methyl-lithium i et opløsningsmiddel såsom tetrahydrofuran.

Indvirkningen af forbindelsen med formlen CH^CC^Alk, hvor Alk fortrinsvis betegner tert.-butyl, udføres fortrinsvis i nærværelse af lithiumdiisopropylamid i et opløsningsmiddel såsom tetrahydrofuran.

Den fuldstændige hydrogenering af forbindelsen (1) udføres f.eks. ved hjælp af en blanding af methanol og palladium på kul eller ved hjælp af chlortristriphenylphosphinorhodium i benzen eller en blanding af benzen og ethanol og passage af hydrogen. Delvis hydrogenering kan foretages ved hjælp af hydrogen i nærværelse af palladium på bariumsulfat, som er forgiftet med en amin såsom quinolin eller triethylamin, i et opløsningsmiddel såsom ethylacetat.

Reduktionen af forbindelsen- . (2) kan fortrinsvis udføres ved hjælp af lithiumaluminiumhydrid, f.eks. i tetrahydro-furan.

Dannelsen af epoxidet i 17,20-stillingen udføres fortrinsvis ved indvirkning af trimethylsulfoniumiodid i nærværelse af kalium-tert.-butylat i et opløsningsmiddel eller en blanding af opløsningsmidler såsom tetrahydrofuran og dimethylsulfoxid.

- 1 2 - DK 174268 B1

Forbindelserne med formlen (III) kan fremstilles ved indvirkning på de nævnte forbindelser med formlen (IV) af et dehydratiseringsmiddel/ som ligeledes er i stand til at frigøre ketongruppen, og som vælges blandt de ovennævnte reagenser, især fortyndet eddikesyre eller saltsyre i methanol.

Denne reaktion kan desuden udføres ud fra forbindelserne med formlen (I) ovenfor uden isolering af forbindelsen (IV), idet reaktionen til delvis eller fuldstændig hydrogenering af forbindelserne med formlen (I) efterfølges af en reaktion til ophævelse af beskyttelsen af ketongruppen.

Det epoxideringsmiddel, som benyttes til omdannelse af forbindelserne med formlen (VIII) til forbindelser med formlen (IX), er hydrogenperoxid i hexafluoracetone. Man fraskiller den ikke ønskede beta-isomer ved chromatografi.

Det reagens, som man fortrinsvis lader indvirke på forbindelsen med formlen (IX), er forbindelsen R^MgBr i nærværelse af cuprochlorid.

I udførelseseksemplerne nedenfor findes der eksempler på udførelsen af sådanne præparationer.

Foruden forbindelserne ifølge eksemplerne nedenfor kan følgende forbindelser fremstilles inden for opfindelsens rammer:

Forbindelserne med formlen (11A): hvor , R2 og X har følgende værdier, og hvor oxygenatomet i spiroetheren er i 17beta-stilling.

- 13 - DK 174268 B1

I R1 I R2 I x I

f___________________L—________________I______________-—I

1 ^ 1 p ch3 I -ch2 I

I Y I Μ I <ch2>2 i I I ·· I <ch2)4 i I .1 . ___________I ch=ch-ch2~ch2 i

I hc'^' I " I “c^2 I

I Hj Ί I '< I c ch2> 2 i I I I <ch2)4 i I__1_t>_I ch=ch-ch2-ch2 1

I jéX.c«3 i ^ Ί ^ I

I J Η I fCH2)2 i

l " I · I (ch2)4 I

1---"_1_!1_|_ CH--CH-CH?-CH?_I

I y^«3 I - I -ch2 I

I <1 I li I <CH2>2 i

I " I ·· I <ch2)4 I

I " I II t ch = ch-ch2-ch2 J

i I , I -ch2 i i „ i „ i !

I „I „I “"ZH I

I_" . . J_._I cH=CH-m^=ata I

i @r 1 i „ i -«2 i

I ''I „ I tc«2>2 I

I ” · I I (ch2>4 I

I " I "l ch=ch-ch2-ch2 1 - 14 - DK 174268 B1

I Ri I R2 I x I

l___________________I___________________!...................I

I ''Η"'' I β c2H5 i “CH2 i

I . Å I "I C C H 2 > 2 I

I J I "I CCH2>4 I

I I 11 I ch=ch-ch2-ch2 I

I V, ! o< CH3 I -CH2 i

I ·» I Ί I CCH2) 2 I

I Ί I "I (CH2)4 i

I_.. 1_Ί_I CH = CH-CH2-CH2 I

I i I A ch3 I -ch2 I

i @rH~ i 11 i <ch2)2 i

i I ” I (ch2}4 I

I_»_______J__"_I CH = CH-CH?-CH? 1 i f”3 i · i -ch2 i I jS) I 11 I <ch2)2 i I ίί I " I CCH2)4 i

1_»_1__I ch-ch-ch2-ch2 I

I I " f -ch2 I

i jgr Nt,ii i ii i tcH2>2 i I j I " i (CH2)4 i

I_“__I_n [ ch=ch-ch2-ch2 I

i ^OCH3 i 11 · ~ch2 i

I Ψ I ‘1 I · <CH2>2 I

I ί i "I cch2>4 i I_”___J_^_1 ch=ch-ch2-ch2 1

I «r-'V 1 " i "ch2 I

[X I -I I cch2)2 i Ιγ I “I cch2)4 1

I M » I "I ch=ch-ch2-ch2 I

I u I : “Ί ...........I

- 15 - DK 174268 B1

I R1 I *2 I X I

I I .-l·!* I I

I I ' I I

ί~ °^f i ; i ^2 I ® I I cch2)2 [ I .V I !_(CH2)4 i

! LnJ I " I -CH2 I

I (é) I I ich2>2 I

i T I I cch2)4 i i ________I_______,±__I ch=ch-ch2-ch 2.___|

I I " I -ch2 I

lp) I I cch2)2 I

I T I I cch2)4 I

|____I_"_I ch=ch-ch2-ch2 I

I (6/SEt 1 ' 1 "CHz 1

I Y I I <ch2)2 I

I ; I I (ch2)4 i

I Λ__I_ />__I CH = CH-CH?-CH? I

I l " I -ch2 i I p) I I cch2)2 l I » ' _ I !_(_ch7)a i

I I "CH2 I

I Ψ "I (CH2)2 i i : , i (ch2)4 i

I "_I_«_I ch=ch~*ch2~ch2 I

- 16 - DK 174268 B1 I Ri I R2 i x f

I___________________I___________________L-________________I

I Q I I -ch2 I

li I "I (ch2)2 I

I Y, I “ I tCH2)4 I

f__ ;____I_^_I CH=CH-CH?-CH? I

ill "I -ch2 I

i G i " ! cch2>2 i I gj I “I <ch2>4 i

i V I "I CH=CH-CH2”ch2 I

Γ ' I il I -CH2"'.....i

I @ I I <ch2)2 I

I y I 11 I cch2)4 [ I _J n I ch = ch-ch2-ch2 |

i I " I -ch2 I

I 3 I 11 1 cch2}2 i i Y I " I <ch2)4 i I_;· _L_"___I____CH=CH-CH?-CH?_____j i 1 :l 1 -ch2 i 1 © I ·» I (CH2)2 i

1 I 11 I <ch2)4 I

I I "I ch=ch-ch2-ch2 I

i (Sj i "i -ch2 i I T i "I <ch2)2 i I I '* I (CH2)4 i I ·" I “ I ch=ch-ch2-ch2 [ I (¾ 1 “ " I -ch2 i i Y i ”1 (CH2)2 i I I 11 I cch2)4 i

I I ·» I ch=ch-ch2-ch2 I

r 1 1 ^

I T I " I tCH2)2 I

I I u I <ch2)4 1 I_______1_"_I CH = CH-CH2-CH2 1 1

i I I

- 17 - DK 174268 B1

l Ri I R2 I x I

I t I I

ι T~3 i : i :chz i

I . Y I " I (CH2)2 I

I I ' 1 cch2)4 i

1_ _1_ __ _ I CH = CH-CH?-CH? I

I ' I ^ I " i I I I (CH2)2 i i r\ 1 " 1 <CH2>4 1 I KJ I I ch=ch-ch2-ch2 1 i ~ ~ i 7r Γ” -ch2...........i t yy i i <ch2>2 i I 0 I I <ch2)4 i

j_ I " I ch=ch-ch2-ch2 I

I '^<:ΗΚ,^ ...... i I -ch2 i I X I ! <ch2)2 i \ kJ \ I (ch2>4 i

I I I I ch=ch-ch2-ch2 I

- 18 - DK 174268 B1

Eksempel 1: (17R)-llbeta-(4-(dimethvlamino)-phenyl)-spiro-(estra-4,9-dien-17,2'-oxetan)-3-one.

Trin A: 3,3-((1,2-ethandiy1)-bis-oxy)-17beta-hydroxy-19-nor -17alpha-pregna-5 (10), 9(11)-dien-21'-syre-(1,1-dimethylethyl )-ester.

Man afkøler til -73°C en opløsning af 568 ml lithiumdiiso-propylamid med en koncentration på 0,51M i 1,4 liter tetra-hydrofuran og tilsætter i løbet af 20 min. ved en temperatur mellem -73 og -72°C 37,3 ml tert.-butylacetat, og man omrører 1 time ved -73°C. Man lader temperaturen stige til -60°C, indfører i løbet af 30 min. 17,38 g cyklisk 3,3-(1,2 -ethandiyl)-acetal af estra-5(10),9(11)-dien-3,17-dion i 260 ml tetrahydrofuran og omrører derpå 1 time 20 min. ved -60°C.

Man lader temperaturen stige til 0°C og tilsætter i løbet af 15 min. 520 ml ammoniumchlorid i mættet vandig opløsning, omrører 1 time ved stuetemperatur, dekanterer og extraherer den vandige fase med methylenchlorid. Man vasker de organiske faser med mættet vandig natriumchloridopløs-ning, tørrer og inddamper til tørhed. Man chromatograferer resten på silicagel, eluerer med en blanding af cyclohexan, ethylacetat og triethylamin (95:5, l°/oo. Man isolerer 20,3 g af den forventede forbindelse.

NMR spektrum (CDCl^ + 1 dråbe C^D^-N): 3,97 ppm: H ethylendioxy i 3-stillingen 5,6 ppm: 0,9 ppm: H18

4,55 ppm: OH

I, 47 ppm: H i tert.-Bu

Præparation af lithiumdiisopropylamid efter House et coll., J. Org. Chem. 43, 704 (1978).

- 19 - DK 174268 B1

Ud fra 68 ml diisopropylamin får man den forventede forbindelse i opløsning: Koncentration 0,51M.

Trin B: Cyklisk (1,2-ethandiyl)acetal af 17,21-dihydroxy-19 -nor-17alpha-pregna-5(10),9(11)-dien-3-one.

Man opløser under indifferent atmosfære 20,3 g af den ovenfor fremstillede forbindelse i 400 ml tetrahydrofuran og tilsætter i løbet af 5 min. ved 18-22eC 14,38 g lithium- aluminiumhydrid. Man opvarmer til 40°C i en time. Efter afkøling til 15-20oC tilsætter man 600 ml methylenchlorid, afkøler til 0-5°C og tilsætter langsomt 130 ml mættet vandig natriumbicarbonatopløsning. Man frafiltrerer den opnåede udfældning, vasker den ved udrivning med methylenchlorid, dekanterer filtratet og ekstraherer den vandige fase med methylenchlorid. Man vasker de organiske faser med mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og inddamper til tørhed. Man udriver resten med ether, suger fra, tørrer under formindsket tryk og får 12,47 g af den forventede forbindelse.

NMR spektrum (CDC1-, + 1 dråbe C^Dr-N):

-- i 3D

3.96 ppm: H i ethylendioxy 5,59 ppm: 0,88 ppm: Hlg 3.97 ppm:

3,33 ppm: H i OH

Trin C: Cyklisk (17R)-(1,2-ethandiyl)-acetal af spiro-(es-tra-5(10),9(11)-dien-17,2'-oxetan)-3-one.

Man opløser 12,47 g af den ovenfor fremstillede forbindelse i 250 ml pyridin. Man tilsætter gradvis 24,94 g tosyl-chlorid og omrører 2 timer ved stuetemperatur. Man tilsætter is og vand og ekstraherer med ethylacetat, vasker de organiske faser med mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og inddamper til tørhed ved medbringning med toluen.

- 20 - DK 174268 B1

Man suspenderer de opnåede 19,80 g tosylat i 890 ml 5%'s ethanolisk kaliumhydroxidopløsning og omrører under tilbagesvaling i 40 min. Man afdestillerer ethanolet under formindsket tryk, tilsætter vand og is, omrører 10 min., tørrer udfældningen, vasker den med vand indtil neutralitet, opløser den i methylenchlorid, fradekanterer vandet, tørrer og inddamper til tørhed. Man chromatograferer resten på silicagel (elueringsmiddel cyclohexan og ethylacetat (90:10) tilsat l°/oo triethylamin) og isolerer 8,97 g af den forventede forbindelse. Smp = 136°C.

NMR spektrum (CDCl^) ppm: 3,99 : Hi ethylendioxy 5,64 : Hu 0,76 : H18 4,30 til 4,50 : H21

Trin D: Cyklisk (17R)-(1,2-ethandiyl)-acetal af 5alpha,10 alpha-epoxy-spiro-(estra-5(10),9(11)-dien-17,2'-oxetan)-3-one og den tilsvarende 5beta,lObeta-epoxy-isomer.

Man opløser de ovenfor opnåede 8,97 g forbindelse i 180 ml methylenchlorid, tilsætter 9 ml hexachloracetone, afkøler til -30°C og tilsætter i løbet af 15 min. ved en temperatur mellem -33 og -31°C 27 ml 50%'s hydrogenperoxid og omrører derefter 3 timer ved 0-2°C. Man hælder reaktionsblandingen i 300 ml mættet natriumbicarbonatopløsning, tilsætter ved 15-20°C natriumthiosulfat indtil fravær af peroxid og dekanterer. Man extraherer den vandige fase med methylenchlorid, vasker de organiske faser med vand og med en mættet natriumchloridopløsning, tørrer og inddamper til tørhed. Man chromatograferer resten på silicagel (elueringsmiddel: Cyclohexan og ethylacetat (80:20) tilsæt l°/oo triethylamin) og isolerer 1,82 g af 5beta,10beta-epo-xy-forbindelsen og 5,36 g af Salpha,10alpha-epoxy-for-bindelsen.

- 2 1 - DK 174268 B1 IR spektrum (CHCl..): J -i alpha-epoxy : 973 cm : 823 cm'1 beta-epoxy : 981 cm ^ : 830 cm 1 NMR spektrum (CDCl^): alpha-epoxy : 0,76 H^g • : 3,92 ppm ketal : 6,09 ppm ^ : 4,30 til 4,46 ppm beta-epoxy : 0,75 ppm H^g : 3,91 ppm ketal : 5,92 ppm ^ : 4,30 til 4,46 ppm F^^

Trin E; Cyklisk (17R)-(1,2-ethandiyl)-acetal af 5alpha-hy-droxy-1lbeta-(4-(dimethylamino)-phenyl)-spiro-(estr-9-en-17, 2'-oxetan)-3-one.

Man opløser under indifferent atmosfære 0,861 g 5alpha, lOalpha-epoxid fremstillet ovenfor i 18 ml tetrahydrofuran, tilsætter 24 mg cuprochlorid, afkøler til 0-5°C, indfører i løbet af 30 min. 8,3 ml 4-dimethylaminophenylmagnesium-bromid i opløsning (0,87M) i tetrahydrofuran og omrører 1 time ved denne temperatur. Man hælder ved 15-20°C reaktionsblandingen i 40 ml mættet vandig ammoniumchloridopløs-ning, omrører 10 min., dekanterer og extraherer den vandige fase med ethylacetat. Man vasker de organiske faser med en mættet natriumchloridopløsning, tørrer og inddamper til tørhed. Man chromatograferer resten på silicagel (elu-eringsmiddel: Cyclohexan og ethylacetat (70:30) tilsat l°/oo triethylamin). Man isolerer 1 g af den forventede forbindelse. Smp = 178°C.

- 22 ' DK 174268 B1 NMR spektrum (CDCl^): 4,00 ppm : H ethylendioxy 2,91 ppm : H dimethylamino 4,28 til 4,45 ppm : H.^ og H21 0,40 ppm : H18

4,31 ppm : OH

Trin F: (17R)-llbeta-(4-(dimethylamino)-phenyl)-spiro-(es-tra-4,9-dien-17,2'-oxetan)-3-one.

Man opløser 0,944 g af den ovenfor fremstillede forbindelse 1 6,6 ml 70%'s eddikesyre, opvarmer til 41-43°C og omrører 2 timer 15 min. Man afkøler til 0-5°C, tilsætter ammoniak indtil en pH-værdi over 8, extraherer med methylenchlorid, vasker med en mættet natriumchloridopløsning og inddamper til tørhed. Man chromatograferer resten på silicagel (elu-eringsmiddel: Cyclohexan og ethylacetat (80:20)) og isolerer 0,468 g af den forventede forbindelse.

Efter omkrystallisation af isopropanol smelter forbindelsen ved 108°C.

IR spektrum (CHC1-J: 5 -1 konjugeret keton : 1654 cm C=C : 1612 cm-1 aromatisk gruppe : 1561 cm 1 U.V. spektrum (EtOH): max. 260 nm £=17.400 max. 302 nm £=20.500

EtOH HC1 0,IN: max. 300 nm £ = 18.900 vendepunkt 218-240 nm - 23 - DK 174268 B1 NMR spektrum (CDCl-j) ppm: 2,92 : H dimethylamino 5,76 : H4 0,48 : H18 4,40 : H11 og H21 6,67 1 til ca. 7 07 J aromatiske grupper

Eksempel 2: (17R)-llbeta-(4-(methylthio)-phenyl)-spiro-(es-tra-4,9-dien-17,2'-oxetan)-3-one.

Trin A: Cyklisk (17R)-(l,2-ethandiyl)-acetal af 5alpha-hy-droxy-llbeta-(4-(methylthio)-phenyl)-spiro-(estr-9-en-17,2' -oxetan)-3-one.

Man afkøler til 0-5eC i 15 min. under indifferent atmosfære 55,3 ml 4-(methylthio)-phenylmagnesium i tetrahydrofuran (koncentration 0,81M) og 148 g cuprochlorid. Man indfører i løbet af 25 min. ved 3,5-5°C 5,36 g cyklisk (17R)-(l,2-et-handiyl)-acetal af 5alpha,10alpha-epoxy-spiro-(estra-5(10), 9,(ll)-dien-17,2'-oxetan)-3-one i 53 ml tetrahydrofuran og omrører ved 0-5°C i 1 time 30 min. og derefter arbejder man som i trin E i eksempel 1 til opnåelse af 0,24 g af den forventede forbindelse.

NMR spektrum (CDCl^):

2,46 ppm : H3C-S

3,9 til 4,1 ppm : H ethylendioxy 0,38 ppm : H^g

4,30 til 4,45 ppm : Hu, og OH

7,16 ppm : aromatiske grupper

Trin B: (17R)-1lbeta-(4-(methylthio)-phenyl)-spiro-(estra- 4,9-dien-17,2'-oxetan)-3-one.

Man opløser 2 g af den ovenfor fremstillede forbindelse i 40 ml ethanol, tilsætter 2 g harpiks med det indregistrerede varemærke Amberlite IRC 84 (Rohm Haas) og opvarmer til - 24 - DK 174268 B1 tilbagesvaling 7 timer under indifferent atmosfære. Ved stuetemperatur frasuger man harpiksblandingen og produkter, skyller med ethanol og med methylenchlorid og inddamper filtratet til tørhed til opnåelse af 1,194 g af den forventede forbindelse. Smp.= 154°C.

Efter to omkrystallisationer af 99,8% ethanol får man en forbindelse med Smp. 160°C.

IR spektrum (CHClj); C=0 : 1653 cm-1 C=C : 1603 cm"1 .. . fl556 cm-1

aromatiske grupper J

(_1493 cm U.V. spektrum (EtOH):

Max. 260 nm, £. = 16.500

Max. 300 nm, £ = 20.100 NMR spektrum (CDCl^): 5,77 ppm : H4 2,46 ppm : S-CH^

0,44 ppm : H1Q

4,3 til 4,5 ppm: 7,12 ppm 1 7,18 ppmj aromatiske grupper

Eksempel 3: (17S)-1lbeta-(4-(dimethylamino)-phenyl)-3 *,41, 51,6'-tetrahydro-spiro-(estra-4,9-dien-17,2'-(2H)-pyran)-3-one.

Trin Ά: Cyklisk (1,2-ethandiyl)-acetal af 5alpha,17beta-di-hydroxy-libeta-(4-(dimethylamino)-phenyl)-17alpha-(4-hydro-xy-l-butynyl)-estr-9-én-3-one.

Man opløser 5 g kalium-tert.-butylat i 20 ml vandfrit te-trahydrofuran, afkøler til -5°C og indfører i løbet af 5 min.1,9 g cyklisk (1,2-ethandiyl)-acetal af 5alpha-hydro- -25- DK 174268 B1 xy-llbeta-(4-(dimethylamino)-phenyl)-estr-9-én-3-one. Man omrører 10 min. og indfører derpå i løbet af 15 min. en opløsning af 2/4 ml 3-butynol i 20 ml tetrahydrofuran, omrører 1 time og hælder i 200 ml mættet mononatriumfosfat-opløsning og extraherer den vandige fase med methylen-chlorid/ tørrer og inddamper til tørhed. Man renser resten på silicagel under eluering med en blanding af cyclohexan og ethylacetat (1:1) og derefter med ethylacetat tilsat 1% ammoniak. Der fås 1,775 g af den forventede forbindelse.

NMR spektrum (CDCl^ + 1 dråbe C,.D,.N): 2,90 ppm : H i demethylamino 3,97 ppm : H ethylendioxy 0,5 ppm : H18

3,73 ppm : CHj-OH

6,62 og 7,04 ppm : aromatiske grupper

Trin Bi libeta-(4-(dimethylamino)-phenyl)-17beta-hydroxy-17 alpha-(4-hydroxybutyl)-estra-4,9-dien-3-one.

Man hydrogenerer 871 mg af den ovenfor fremstillede forbindelse i 40 ml methanol i nærværelse af 0,4 g palladium på kul. Efter filtrering og eliminering af opløsningsmidlerne optager man resten i 10 ml 10%’s eddikesyre og omrører 1 time ved 45°C. Man neutraliserer med en mættet vandig natriumbicarbonatopløsning og extraherer derefter med methylenchlorid. Man tørrer den organiske fase og inddamper til tørhed under formindsket tryk. Man chromato-graferer resten på silicagel, eluerer med ethylacetat og får 640 ml af den forventede forbindelse.

IR spektrum (CHCl^): C=0 . 1654 cm"1 f 1612 cm-1 i 1561 cm“1 ^1518 cm'1 OH : 3615 cm"1 - 26 - DK 174268 B1 NMR spektrum (CDC1-J: 2,9 ppm : ^ \__/ 4.33 ppm 0,57 ppm H18 5.73 H4

3,67 CH2OH

6,65 og 7,02 ppm aromatiske grupper

Trin C: (17S)-libeta-(4-(dimethylamino)-phenyl}-3’,4',5',6' -tetrahydro-spiro-(estra-4,9-dien-17,2 * — (2H)-pyran)-3-one.

Man afkøler til 0°C en opløsning indeholdende 788 mg af den i forrige trin fremstillede forbindelse og 15 ml vandfrit pyridin, tilsætter 1,5 g tosylchlorid og omrører 1 time ved stuetemperatur. Man tilsætter 30 ml is og neutraliserer med 14,5 ml koncentreret saltsyre. Man extraherer den vandige fase med methylenchlorid, tørrer og inddamper til tørhed.

Man renser resten ved passage over silicagel, idet man elu-erer med methylenchlorid og acetone (95:5), og man får 0,2 g af den forventede forbindelse.

NMR spektrum (CDCl^): 2,90 ppm : H i demethylamino 4.33 ppm : 0,53 ppm : Hlg

3,46 og 3,74 ppm : -CH^O

5.74 ppm : H4 7,02 og 6,64 ppm : aromatiske grupper

Eksempel 4: (17S)-libeta-(4-(dimethylamino)-phenyl)-spiro-(estra-4,9-dien-17,21-oxiran)-3-one.

Man arbejder som i trin B i eksempel 2 ud fra 2,42 g cyklisk (1,2-ethandiyl)-acetal af llbeta-(4-(dimethylamino) -phenyl)-5alpha-hydroxy-spiro-(estr-9-en-17,2'-oxiran)-3-one ved harpiks med det indregistrerede varemærke Amberlite -27- DK 174268 B1 IRC 84.

Efter afkøling frafiltrerer man harpiksen og skyller den med 60 ml ethanol, og man inddamper til tørhed. Man udriver resten med 30 ml isopropylether under omrøring ved 40°C.

Man isafkøler, suger fra, skyller med isopropylether, tørrer under formindsket tryk og får 0,844 g af den forventede forbindelse. Af moderludene får man yderligere 0,273 g forbindelse. Smp. = 228°C.

Efter rensning ved chromatografi på silicagel under elu-ering med cyclohexan og ethylacetat (70:30) isolerer man 0,750 g forbindelse af 1. udbytte. Smp. = 234°C.

AlphaD = +270° + 3,5° (c = 0,5% CHC13>.

NMR spektrum (CDCl^): 2,92 ppm : H i dimethylamino 5,8 ppm : 4,33 ppm : 0,6 ppm : Hjg 2,63 og 2,98 ppm : H i oxiran 6,67 og 7,01 ppm : aromatiske grupper

Eksempel 5: (17S)-libeta-(4-(methylthio)-phenyl)-spiro-(es-tra-4,9-dien-17,2'-oxiran)-3-one.

Trin A: Cyklisk 3,3-(1,2-ethandiyl)-acetal af 5alpha-hydro-xy-llbeta-(4-(methylthio)-phenyl)-estr-9-en-3,17-dien.

Man afkøler til -6°C 0,672 g cuprichlorid, 0,212 g lithium-chlorid, 165 ml vandfrit tetrahydrofuran og 16,5 g cyklisk 3,3-(1,2-ethandiyl)-acetal af 5alpha,10alpha-epoxy-estr-9(11) -en-3,17-dion og indfører dråbevis i løbet af 1 time 15 min. 100 ml af en 0,75M opløsning af 4-(methyl-thio)-phenylmagnesiumbromid. Man omrører under indifferent atmosfære ved -10°C i 1 time, tilsætter 100 ml mættet ammo-niumchloridopløsning og omrører 10 min.

- 28 - DK 174268 B1

Man extraherer med ethylacetat, vasker med vand, tørrer og inddamper til tørhed under formindsket tryk. Man optager resten i lidt hexan, suger fra, vasker hexanet og får efter tørring under formindsket tryk ved 60°C i 1 time 22,2 g råprodukt. Smp. = 202 °C.

Efter chromatografi på silicagel af dette under eluering med en blanding af cyclohexan og ethylacetat (1:1) tilsat l°/oo triethylamin og omkrystallisation af ethylacetat får man forbindelsen med smeltepunkt 209°C.

Trin B: Cyklisk (17S)—(1,2-ethandiyl)-acetal af llbeta-(4-(raethylthio)-phenyl-(spiro-(estr-9-en-17,2'-oxiran)-3-one.

Man afkøler til 5°C 12,7 ml af en opløsning (0,9M) af kalium-tert.-butylat, 22 ml tetrahydrofuran og 27 ml vandfrit dimethylsulfoxid, tilsætter i løbet af nogle minutter 2,20 g trimethylsulfoniumiodid og omrører 30 min. ved 5°C.

Man hælder derpå ved 5°C + 1°C i løbet af 7 min. 2,45 g af den ovenfor fremstillede forbindelse i 30 ml vandfrit te-trahydrofuran og omrører 1 time ved 0-5°C. Man hælder reaktionsblandingen i 300 ml vand, extraherer med ethylacetat, vasker med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og inddamper til tørhed. Man optager resten i 15 ml ethyl-ether, isafkøler, suger fra, udriver med et minimum af kold ethylether, tørrer under formindsket tryk og får 2,1 g af den forventede forbindelse. Smp. = 130°C (inst.).

IR spektrum (CHCl^): OH : 3508 cm 1 aromatiske grupper: 1592 cm * 1555 cm * 1493 cm"1 j DK 174268 B1 -29-

Trin C: (17S)-libeta-(4-(methylthio)-phenyl)-spiro-{estra- 4,9-dien-17,21-oxiran)-3-one.

Man opløser under indifferent atmosfære 2,1 g af den ovenfor fremstillede forbindelse i 100 ml ethanol. Man tilsætter 4,2 g harpiks af varemærket Amber-lite IRC 84 (RHOM-HAAS) og opvarmer til tilbagesvaling i 15 timer 30 min. Efter afkøling filtrerer man, vasker med ethanol, inddamper filtratet, holder i kold tilstand 1 time, suger fra og udriver produktet med et minimum af koldt ethanol, tørrer under formindsket tryk og isolerer 0,49 g af den forventede forbindelse. Smp. = 121-122°C.

Efter omkrystallisation af en blanding af ethanol og methy-lenchlorid (4:5) får man en forbindelse med smeltepunkt 122°C og dernæst 167°C.

U.V. spektrum (EtOH) molekylvagt 406,6 Max. 259 nm e £ = 15.700 Max. 300 nm £ = 18.700 NMR spektrum (CDCl^); 2,43 ppm: CH^S 5,76 ppm: 4,32 ppm: H·^ 0,55 ppm: 2,61 og 2,94 ppm: H i oxiran 7,02 og 7,13 ppm: aromatiske grupper

Farmakologisk undersøgelse.

Undersøgelse af virkningen af de omhandlede forbindelser på de hormonale receptorer:

Progestogen receptor i uterus hos kanin.

Umodne kaniner på ca. 1 kg. modtager subcutant 25 g estradiol. 5 dage efter denne behandling aflives dyrene, og - 3.0 - DK 174268 B1 uterus udtages, vejes og hormogeniseres ved 0°C ved hjælp af et Potter's PTFE-glas i en TS-stødpudeholdig opløsning (Tris 10 mM, saccharose 0,25M, HCl pH 7,4) (1 g væv pr.

50 ml TS). Hormogenatet ultracentrifugeres derpå (105.000 g x 90 min.) ved 0°C. Portioner af den således opnåede overliggende væske inkuberes ved 0°C i et tidsrum t med en konstant koncentration (T) af den tritium behandlede forbindelse R (17,21-dimethyl-19-nor-4,9-pregnadien-3,20-dion) -9 i nærværelse af voksende koncentrationer (0 - 2500 x 10 M) af enten koldt R eller koldt progesteron eller kold forbindelse, som skal undersøges. Koncentrationen af bundet tritiumbehandlet R (B) måles derpå i hvert inkubat ved teknikken med adsorption på kul-dextran.

Glucocorticoidreceptor i thymus hos rotter.

Hanrotter af stammen Sprague-Dawley EOPS med en vægt på 160-200 g underkastes adrenalektomi. 4-8 dage efter denne fjernelse aflives dyrene, og thymus fjernes og hormoge-· niseres ved 0°C i en stødpude af Tris lOmM saccharose 0,25M, dithiothreitol 2mM, HCl pH 7,4 ved hjælp af et Potter’s PTFE-glas (1 g væv pr. 10 ml TS). Hormogenatet ul-tracentrifugeres derpå (105.000 g x 90 min.) ved 0°C. Portioner af den således opnåede overliggende væske inkuberes ved 0°C i et tidsrum (t) med en konstant koncentration (T) af tritiumholdig dexamethason i nærværelse af voksende kon- -9 centrationer (0 - 2500 x 10 M) af enten koldt dexamethason eller den kolde forbindelse, som skal undersøges. Koncentrationen af bundet tritiumholdig dexamethason (B) måles derpå i hvert inkubat ved teknikken med adsorption på kul-dextran.

Beregning af den relative bindinqsaffinitet (ARL):

Beregningen af den relative bindingsaffinitet (ARL) er identisk for alle receptorer. Man tegner følgende 2 kurver: Procentsatsen for bundet tritiumholdigt hormon B/T i - 31 - DK 174268 B1 afhængighed af logarithmen til koncentrationen af koldt referencehormon og B/T i afhængighed af logarithmen til koncentrationen af den undersøgte kolde forbindelse. Man bestemmer den rette linie for ligningen I™ = (B max + B min)/2 50 - t- B max/T = procentsats af bundet tritiumholdigt hormon for en inkubation af dette tritiumholdige hormon i koncentrationen (T).

B min/T = procentsatsen af bundet tritiumholdigt hormon for en inkubation af dette tritiumholdige hormon i koncentrationen (T) i afhængighed af et stort overskud af koldt hormon (2500 x 10-^M).

Skæringspunkterne mellem den rette linie og kurvene gør det muligt at bestemme de koncentrationer af koldt referencehormon (CH) og af undersøgt kold forbindelse (CX), som med 50% inhiberer bindingen af det tritiumholdige hormon til receptoren. Den relative bindingsaffinitet (ARL) af den undersøgte forbindelse bestemmes ved ligningen: *”· =100 Hr

De opnåede resultater er som følger:

Inkubationstid ved 0°C

Forbindelser iflg.

eksempel Progestogen Glucocorticoid 1 93 4Ϊ5~~ ΐ 2 6 43 • 2 23 67 56 22 3 24 157 23 24 -32- DK 174268 B1

Konklusion:

De undersøgte forbindelser, navnlig forbindelsen ifølge eksempel 1, frembyder en udtalt affinitet for de glucocor-ticoide og progestogene receptorer.

Af de opnåede resultater kan man slutte, at forbindelserne kan have agonist- eller antagonistvirkning over for gluco-corticoider og progestogener.

II Antiqlucocorticoidvirkninq:

Den benyttede teknik er afledt af den metode, som er beskrevet af Dausse et Coll. i Molecular Pharmacology 13, 948-955 (1977) ("The relationship beetween glucocorticoid structure and effects upon Thymocytes"), for thymo-cyter hos mus.

Thymocyter fra adrenalektomiserede rotter inkuberes ved ""8 37°C i 3 timer i et næringsmiljø indeholdende 5x10 M de-xamethason i nærværelse eller i fravær af en forbindelse, som skal undersøges, i forskellige koncentrationer. Man tilsætter tritiumholdigt uridin og fortsætter inkubationen i 1 time. Man afkøler inkubaterne, behandler dem med en 5%’s opløsning af trichloreddikesyre, filtrerer dem på Whatman-papir GF/A og vasker dem 3 gange med en 5%'s opløsning af trichloreddikesyre. Man bestemmer den af filteret tilbageholdte radioaktivitet.

Glucocorticoiderne og navnlig dexamethason fremkalder en formindskelse af inkorporeringen af tritiumholdigt uridin. Forbindelserne ifølge eksempel 1-3 modsætter sig denne virkning.

- 3.3 - DK 174268 B1

Forbindelse 5x10 °M dexamethason + % inhibering af iflg. den undersøgte forbin- virkningen af eksempel delse i en koncentration dexamethason På

_ ---------------------- -------------------I

1 10'8M 16 10_7M 55 10~6M 122 2 10"8M 10 10_7M 27 10-6M 76 3 10_8M 7 10"7M 22 10_6M 93

Man har desuden konstateret, at de undersøgte forbindelser benyttet alene ikke fremkalder nogen virkning af glucocor-ticoidtype.

Konklusion:

De undersøgte forbindelser har en meget udtalt antigluco-corticoidvirkning, medens de er helt uden glucocorticoid-virkning.

III Abortvirkning hos rotter.

Man bestemmer dagen for svangerskab ved tilstedeværelsen af spermatozoider i vaginal afskrab. På svangerskabets dag Jg indgiver man den pågældende forbindelse i suspension i carboxymethylcellulose indeholdende 0,5% Tween (indregistreret varemærke).

Dyrene aflives 72 timer efter behandlingen, og uterus undersøges til bestemmelse af svangerskabets tilstand.

Man konstaterer en fuldstændig abort hos alle dyr i gruppen med forbindelsen ifølge eksempel 1 indgivet i en dosis på 3 mg/kg.

- 34 - DK 174268 B1

Sammenligningsforsøg

Idet man går frem som angivet ovenfor, bestemmer man den relative bindingsaffinitet (ARL) på de progestogene og glucocorticoide receptorer for følgende forbindelser: - Forbindelse ifølge eksempel 1 (Forbindelse A); - Lacton af 3-(ll-beta-(4-dimethylaininophenyl)-17-beta--hydroxy-3-oxo-4,9-(10)-estradien-17-alpha-y1)-propi-onsyre (eksempel 1 i europæisk patentskrift nr. EP 116.974, forbindelsen X).

Der fås følgende resultater: I---------------------,----------------------, j Progestogenreceptor |Glucocorticoidreceptorj I---------i-----------i-----------1----------i

I 2 t I 24 t I 4 t I 24 t I

I-------------j---------I-----------,-----------,----------, I Forb. A I 93 I 415 | 126 | 43 |

I-------------1---------1-----------I-----------,----------I

I Forb. X I 85 I 277 | 61 | 22 | I-------------I---------I-----------j-----------1----------,

Forbindelsen ifølge opfindelsen har altså en større affinitet til de progestogene og glucocorticoide receptorer end forbindelsen ifølge den kendte teknik.

- 35 - DK 174268 B1

Yderligere sammenligningsforsøg

Nedenstående test in vivo (jvfr. III, s. 33) viser, at forbindelserne ifølge opfindelsen (DPA) er bedre end dem ifølge EP 116974 (Schering), med andre ord: overgangen fra lacton til spiroether giver en lige så god eller bedre abortvirkning in vivo.

Abortaktivitet, %

Patent__Eks. p-Ph__Οιη lrog/kg 3mg/kg lOing/kg

Schering l(Pdt X) NMe2__A__0__25___85_ DPA__1__NMe?__B__30__100___ DPA__3__NMe?__C__0__50__ DPA 4 NMe2___D__0_ 25____ A: -O-C(O)-(CH2) 2” » B: “O" (CHj) 2“ C:-0-(cH2)4- ; D:-0-CH2-

Claims

2. Forbindelser ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de har formlen (I1): r2 ri ^ f A u,> hvor R^ har samme betydning som i krav 1, i beta-stilling betegner en carbonhydridgruppe med 1-18 carbonatomer, idet oxygenatomet i spiro-etheren er i 17beta-stilling, X" betegner en gruppe -(CH2)n'S hvor n" betegner 2 eller 4, eller X" betegner en gruppe -CH=CH-CH2-CH2-, samt farmaceutisk acceptable additionssalte deraf med syrer eller baser. - 38 - DK 174268 B1
3. Forbindelser ifølge krav 1-2, kendetegnet ved, at betegner en phenylgruppe, der er substitueret i p-stil1 ingen, eller farmaceutisk acceptable additionssalte deraf med syrer eller baser.
4. Forbindelser ifølge krav 1-3, kendetegnet ved, at betegner en af følgende grupper: -O-C OG -0-0 _ 3 ' -0-0“ O'sch3 ~0~s^ -Q-<° -O~ch0 CH3 . .. eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf.
5. Forbindelser med formlen (I) ifølge krav 4, kendetegnet ved, at R^ betegner en gruppe: /CH3 -O* <„, eller en gruppe: SCH3 eller farmaceutisk acceptable \—-I syreadditionssalte deraf. - 39 - DK 174268 B1
6. Forbindelser ifølge krav 1-5, kendetegnet ved, at det er følgende forbindelser: - (17R)-llbeta-(4-(dimethylamino)-phenyl)-spiro-(estra-4,9-dien-17,2'-oxetan)-3-on, - (17R)-libeta-(4-(methylthio)-phenyl)-spiro-(estra-4,9-di-en-17,2'-oxetan)-3-on.
7. Fremgangsmåde til fremstilling af forbindelser med den almene formel (I) ifølge krav 1 eller farmaceutisk acceptable additionssalte deraf med syreri eile^ baser.-', kendetegnet ved, at man a) til fremstilling af forbindelserne med formlen (XA>: n,v''T I I hvor X, R^, R2, R* og R" har samme betydning som i krav 1, underkaster en forbindelse med formlen (II): RZ (I1) OH hvor , R2 og X har samme betydning som ovenfor, og K betegner en blokeret ketongruppe, indvirkning af et dehydratiseringsmiddel, som ligeledes er i stand til at frigøre ketongruppen, til opnåelse af forbindelserne med - 40 - DK 174268 B1 formlen (IA), hvor R* og R" betegner et hydrogenatom, og at man om ønsket oxiderer de fremstillede forbindelser med formlen (IA), hvor R^ indeholder et svovl- eller nitrogenatom, til opnåelse af tilsvarende forbindelser, hvor R^ indeholder et svovlatom oxideret til sulfoxid eller til sulfon eller et nitrogenatom oxideret til N-oxid, og at man om ønsket underkaster forbindelserne med formlen (1^), ... hvor R' og/eller R'' betegner hydrogen, indvirkning af en stærk base og derefter et C^-C^-alkylhalogenid til opnåelse af en forbindelse med formlen (I ), hvor R' og/eller R'' betegner en alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, eller at man b) til fremstilling af forbindelserne med formlen (Ιβ): ^ (IB} ReO— hvor X, og R^ har samme betydning som i krav 1, og Re' har samme betydning som Re, defineret i krav, undtagen acyl med 1-12 carbonatomer, underkaster en forbindelse med formlen <I'A): c ko R Λ . /N. ζ. 2 ^ 1 "v hvor X, R^ og R2 har samme betydning som ovenfor, og som opnås som beskrevet ovenfor, indvirkning af et aromatise-ringsmiddel og derefter eventuelt indvirkning af et hydro-lysemiddel, hvorpå man endelig om ønsket underkaster forbindelsen med formlen (1^) hvor Re"betegner et hydrogenatom indvirkning af et alkyleringsmiddel med 1-6 carbonatomer, eller at man: c) til fremstilling af forbindelserne med formlen (Ic): <v DK 174268 B1 - 41 - K2 .0 hvor X, R^ og R2 har samme betydning som i krav 1/ underkaster en forbindelse med formlen <11A) indvirkning af et middel til acylering og derefter hydrolyse, eller at man: d) til fremstilling af forbindelserne med formlen (lp) R^ _^2 0 «V hvor X, R^ og R2 har samme betydning som i .krav 1, underkaster en forbindelse med formlen (I’A) indvirkning af et epoxideringsmiddel, eller at man: e) til fremstilling af forbindelserne med formlen dE): R *2 0 · hvor X, og R2 har samme betydning som i krav 1, lader hydroxylamin indvirke på en forbindelse med formlen (I* ), og at man: f) om ønsket omdanner de opnåede forbindelser med formlen dft), dg)/ dc)/ dD) og (iE) til farmaceutisk acceptable additionssalte med syrer éflér baser, eller at man: - 42 - DK 174268 B1 g) til fremstilling af forbindelsen med formlen (I) hvor X betegner en gruppe -(CH2)4~ eller -CH=CH-CH2-CH2- behandler en forbindelse med formlen (III): cun hvor og R2 har samme betydning som i krav 1, og den punkterede linie angiver den eventuelle tilstedeværelse af en dobbeltbinding mellem de carbonatomer, som bærer den, med et cykliseringsmiddel til opnåelse af en forbindelse med formlen (I"A): R2 "" (Ι"λ) hvor R^, R2 og den punkterede linie har samme betydning som ovenfor, hvilke forbindelser med formlen (I"A) man om ønsket omdanner til tilsvarende forbindelser med formlen (IA), hvor en af grupperne R' og R" eller begge grupper R' og R" betegner en alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, og til tilsvarende forbindelser med formlen (Ιβ), dc), °9 (Ig) efter en af de fremgangsmåder, som er beskrevet ovenfor under punkterne b)-e).
8. Lægemidler, kendetegnet ved, at det er forbindelser med den almene formel (I) ifølge krav 1 samt farmaceutisk acceptable additionssalte deraf med syre'r^eller baser... - 43 - DK 174268 B1
9. Lægemidler, kendetegnet ved, at det er forbindelsen med den almene formel (I) ifølge krav 2-5 eller farmaceutisk acceptable .additionssalte deraf med syrer eller baser.
10. Lægemidler, kendetegnet ved, at det er forbindelsen med den almene formel (I) ifølge krav 5 eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf-
11. Farmaceutiske præparater, kendetegnet ved, at de som aktiv bestanddel indeholder i det mindste et af lægemidlerne ifølge krav 8-10.