DK171330B1

DK171330B1 - Pyridoncarboxylsyre-derivater, fremgangsmåde til fremstilling deraf samt antibakterielt farmaceutisk præparat

Info

Publication number: DK171330B1
Application number: DK306586A
Authority: DK
Inventors: Kuniyoshi Masuzawa; Seigo Suzue; Keiji Hirai; Takayoshi Ishizaki
Original assignee: Kyorin Seiyaku Kk
Priority date: 1985-06-28
Filing date: 1986-06-27
Publication date: 1996-09-09
Also published as: FI85697B; CN1010312B; NO862621D0; AU5919086A; ATE57699T1; CN86104479A; EP0208210B1; EP0208210A1; DK306586D0; MX162950B; FI862757A0; DE3675087D1; JPH0635457B2; JPS624284A; ES2000185A6; KR870000322A; US4753953A; NO166126C; CA1262349A; HUT43051A

Description

i DK 171330 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte pyridon-carboxylsyre-derivater ifølge krav 1 og en fremgangsmåde til fremstilling deraf. Disse derivater finder anvendelse i antibakterielle farmaceutiske præparater.

5

Antibakterielle midler er alledere beskrevet i EP A 106 489. Forbindelserne, som er beskrevet deri, er naphthy-rin-, quinolin- og benzoxacincarboxylsyrer.

10 Efter at man i 1963 indførte nalidixinsyre, som er blevet anvendt til behandling af urinvejsinfektioner med gramnegative bakterier, har man gennemført et meget intensivt forskningsarbejde med hensyn til yderligere udvikling af pyridoncarboxy1syre analoge.

15

For visse forbindelser (f.eks. norfloxacin) har man for nylig konstateret, at der foreligger en bemærkelsesværdig antibakteriel aktivitet over for ikke alene gram-negative bakterier men ligeledes gram-positive bakterier. Denne 20 aktivitet over for gram-positive bakterier er imidlertid noget mindre end den over for gram-negative bakterier.

Man har i det nyeste tid udviklet lægemidler, som havde en relativ stærk aktivitet over for gram-positiv bakteri-25 er (f.eks. Cl-934 en forbindelse af den ovenfor nævnte EP-A 106 489); men som viste sig at være i besiddelse af en svagere aktivitet over for gram-negative bakterier, end det var tilfældet ved de hidtil kente forbindelser (f.eks. norfloxacin og ciprofloxacin).

30

Man har nu som et resultat af undersøgelserne overraskende fundet, at hidtil ukendte derivater af pyridoncarb-oxylsyre med den anførte formel (I) udviser særdeles interessant potentiel aktivitet over for gram-positiv 35 bakterier uden en svækkelse af aktiviteten over for gramnegative bakterier i sammenligning med aktiviteten for hidtil kendte analoge forbindelser, og at de derfor synes i

R

2 DK 171330 B1 at være bedre egnede til kommercielle præparater og til forsknings-lægemidler med hensyn til in vivo og in vitro antibakteriel aktivitet over for såvel gram-negative som gram-positive bakterier.

5

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse besidder yderligere fremragende antibakteriel aktivitet ikke alene over for aerobe bakterier, men ligeledes over for anaerobe bakterier.

10

Forbindelserne ifølge opfindelsen absorberes godt og distribueres godt i vævet, når de indgives peroralt til dyr.

15 De foreliggende forbindelser er derfor aktive i lave doseringer over for såvel gram-positive som gram-negative bakterier, og de udgør således værdifulde midler til behandlingen af humane, animalske og planteinfektionssyg-donune.

20

Den foreliggende opfindelse angår en forbindelse med den almene formel (1)

O

F _ JL COOR

25 ΥΎι (I>

Rl -NH(CH2)n— y γ Å ch3 30 hvori R er hydrogen eller C^-Cg alkyl, Y er flour, chlor eller brom, R1 er hydrogen, C^-Cg alkyl, Cg-Cg alkoxycar-bonyl, benzyloxycarbonyl, C^-Cg alkylcarbonyl, arylcarbo-35 nyl eller arYlaUcYlcar‘bonyl og n er 0 eller 1, og hydrater og farmaceutisk acceptable syreadditionssalte og basesalte deraf.

3 DK 171330 Bl

Opfindelsen angår endvidere en fremgangsmåde til frem· stilling af en forbindelse med formlen (I), somomfatter, at man kondenserer en forbindelse med formlen (II) 5 F i COOR (II) 10 ' k hvori X er et halogenatom, og hvori R og Y har de i krav 1 angivne betydninger, med et pyrrolidin-derivat med 15 formlen (III) R1 -rø(CH2)n—(III) 20 CH3 hvori og n har de i krav 1 angivne betydeninger.

25 Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse med formlen (I), hvori R er et hydrogenatom, som omfatter, at man hydrolyserer en forbindelse med formlen (IV)

30 F JL yCOOA

rry

AM/yA'N

R^NHlCHaJn—^j I, ^ 35 CH3 DK 171330 Bl 4 hvori A er C^-Cg alkyl, og hvori Y, R1 og n har de i krav 1 angivne betydninger.

Opfindelsen angår endvidere en fremgangsmåde til frem-5 stilling af en forbindelse med formlen (I), hvori R1 er et hydrogenatom, som omfatter, at man deacylerer en forbindelse med formlen (V)

O

F I COOR

i° ι"ΤΐΓ (v) tf-WMCHjl,,—(j I Ϊ CH3 15 2 hvori R er C2~Cg alkoxycarbonyl, arylalkoxycarbonyl, C^-Cg alkylcarbonyl, arylcarbonyl eller arylalkylcar- bonyl og hvori R, Y og n har de i krav 1 angivne betyd-20 ninger.

Opfindelsen angår i det mindste et antibakterielt farmaceutisk præparat, som omfatter en forbindelse ifølge formel (I).

25

Forbindelserne med formlen (1) indeholder geometriske isomere (cis og trans isomere) og deres optiske isomere på grund af orientering af begge substituenteme i 3- og 4-stillingerne på pyrrolidinringen samt 7-substituenten.

30 Samtlige disse isomere og blandinger deraf er af bekvemmelighedsgrunde gengivet ved enhedsformlen. Den foreliggende opfindelse er således ikke begrænset til én af disse isomere eller til blandinger deraf.

35 I det følgende beskrives fremgangsmåden til fremstilling af forbindelsen ifølge opfindelsen i DK 171330 B1 5

TryWCaX + **™*r-£T om **1 “ ,. Γ 5 O'*°

YrV" FnVC0QR

^.nWch^^n"yS M —> R‘-NHlCHJ„^N>Y^ m 10 * 1 2 hvori R, R , R og Y har de ovenfor nævnte betydninger.

Man lader således forbindelser med formlen (II) reagere 15 med aminer med formlen (III), hvorved man syntetiserer forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse med formlen (I). I det tilfælde, hvor det drejer sig om for- 1 2 bindeiser, i hvilket R er en beskyttelsesgruppe R for 1 en aminogruppe i formlen (III), f.eks. idet R er en 20 alkoxycarbonylgruppe, f.eks. methoxy-, ethoxy-, t-butoxy-eller benzyloxycarbonylgruppe eller en acylgruppe, f.eks. formyl, acetyl, propionyl eller benzoylgruppe, fjernes fra de således opnåede forbindelser med formlen (V) beskyttelsesgruppen i overensstemmelse med sædvanlig 25 fremgangsmåde til dannelse af forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse, i hvilken R1 er et hydrogenatom.

Når det drejer sig om forbindelser, i hvilke R(=A) i formlen (II) er en lavere alkylgruppe, hydrolyserer man de ved omsætningen opnåede forbindelser med formlen (III) 30 i overensstemmelse med sædvanlig fremgangsmåde, og esteren IV omdannes til carboxylsyre til dannelse af forbindelsen ifølge den foreliggende opfindelse, i hvilken R er et hydrogenatom. Reaktionen af forbindelserne med formlen (III) gennemføres fortrinsvis ved opvarmning af blandin-35 gen 1 et opløsningsmiddel, såsom vand, alkoholer, aceto-nltril, dimethylformamid (DMF), dimethylsulfoxid (DMSO), hexamethylphosphortriamid, pyridin eller picolin, eller 6 DK 171330 B1 uden tilstedeværelsen af opløsningsmiddel. Reaktionstemperaturen vælges passende i området mellem stuetemperatur og 200 °C, fortrinsvis stuetemperatur-160 °C. Mere detaljeret foretrækker man at lade forbindelserne med formlen 5 (II) reagere med 1-5 gange antal mol af forbindelser med formlen (III) i fra 1 til adskillige timer ved fra stuetemperatur til 160 °C i fra 2 til 10 gange rumfanget a£ de ovenfor nævnte opløsningsmidler. På dette tidspunkt er det ligeledes ønskværdigt at anvende et syrefjernende 10 middel, såsom triethylamin, diazabicyclo-baser eller ka-liumcarbonat. Man kan yderligere hydrolysere forbindelserne IV, i hvilket R(=A) i formlen (I) er en lavere al-kylgruppe, i overensstemmelse med sædvanlig fremgangsmåde. Sådan hydrolyse lader sig let gennemføre med alkalis-15 ke midler, såsom kaliumhydroxid eller med syre såsom svovlsyre ved stuetemperatur op til kogepunktet af opløsningsmidlerne i vand, i en blandingsvæske af vand og alkoholer, i en blandingsvæske af vand og eddikesyre osv. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

Forbindelserne med formlen (I) kan yderligere omdannes, 2 dersom dette ønskes, til de farmaceutiske acceptable 3 ammoniumsalte eller carboxylsyremetalsalte ved behandling 4 med syre eller med alkalisk middel. Syren kan være en 5 organisk eller en uorganisk syre, såsom f.eks. saltsyre, 6 svovlsyre, phosphorsyre, eddikesyre, methansulfonsyre, 7 oxalsyre og mælkesyre. Carboxylsyremetalsaltene kan 8 f.eks. være natrium-, kalium-, magnesium-, calcium-, alu 9 minium-, cerium-, chrom-, cobolt-, kobber-, jern-, zink-, 10 platin- og sølvsalte.

11 12

Forbindelserne med formlen (I), hydrater og salte deraf, 13 kan anvendes som lægemidler i konventionelle former for 14 farmaceutiske formuleringer, som f.eks. kan være tablet 15 ter, kapsler, pulvere, salver, suppositorier, injektions- 16 væsker eller øjendråber, og som er egnede til peroralt, parenteral, enteral eller lokal indgift.

7 DK 171330 Bl

De efterfølgende eksempler belyser opfindelsen nærmere.

Referenceeksempel 1 5 3-aminomethyl-4-methylpyrrolidin.

Man lod henstå ved stuetemperatur 1 4 age en opløsning af 5 g ethyl-3-methyl-2-oxo-4-pyrrolidincarboxylat [Chem. Pharm. Bull., 24, 1362 (1967)] i 100 ml methanol, der var 10 vættet med gasformlg ammoniak. Reaktionsblandingen blev opkoncentreret, og inddampningsresten blev omkrystalliseret med ethanol til dannelse af 3-methyl-2-oxo-4-pyrroli-dincarboxamid (3,4 g ), smp. 169-171 °C.

15 Elementæranalyse (%) for C6HioN2°2'

Beregnet (Fundet): C: 50,70 (50,83); H: 7,09 (7,23); N: 19,70 (19,53).

Man satte gradvis under omrøring til en suspension af 2,5 20 9 lithiumaluminiumhydrid i 50 ml tetrahydrofuran 3,23 g 3-methyl-2-oxo-4-pyrrolidincarboxamid. Efter omrøring i 2 timer blev suspensionen afkølet i et bad af is og vand, og man tilsatte 3,6 ml vand. Det derved opnåede bundfald blev frafiltreret, og man ekstraherede det uopløselige 25 materiale med 90 ml varm ethanol. Filtratet og opløsningen af ekstraktet blev forenet og opkoncentreret. Inddampningsresten blev destilleret under reduceret tryk til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (1,75 g), kogepunkt 71-86 °C/3866 N/m2.

30

Referenceeksempel 2 1-benzyl-cls-3-t-butoxycarbonylamino-4-methylpyrrolidin.

35 Man satte dråbe for dråbe under omrøring ved stuetempera tur 13,68 g ethyl-3-methyl-2-oxo-4-pyrrolidincarboxylat til en suspension af 2,30 g natriumhydrid i 100 ml abso- 8 DK 171330 B1 lut dioxan. Efter omrøring i 30 minutter satte man i løbet af 20 minutter 16,42 g benzylbromid til reaktionsblandingen, hvorpå man omrørte i 2 timer og lod henstå natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen blev 5 hældt ud i 100 ml isvand og ekstraheret med chloroform, vasket med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat og opkoncentreret. Inddampningsresten blev renset ved vakuum destillation til dannelse af ethyl-l-benzyl-3-methyl-2-oxo-4-pyrrolidincarboxylat (16,86 g), kogepunkt 155-185 10 °C/266,6 N/m2.

Man opvarmede under omrøring og under tilbagesvaling i 5 timer en blanding af 16,0 g ethyl-l-benzyl-3-methyl-2-oxo-4-pyrrolidincarboxylat, 16 ml 80% hydrazinhydrat og 15 16 ml ethanol, hvorpå man opkoncentrerede. Fjernelse af overskydende hydrazin fra inddampningsresten ved azeotro-pisk destillation med ethanol og benzen førte til 1-ben-zy1-3-methyl-2-oxo-4-pyrrolidincarboxylsyre, hydrazid (16,38 g) i form af en farveløs viskøs olie.

20

Til en blanding af denne olie i 100 ml isvand indeholdende 6,5 ml koncentreret saltsyre og 100 ml ether satte man dråbe for dråbe under omrøring i løbet af 5 minutter ved 0-3 °C en opsløsning af 4,92 g natriumnitrit i 10 ml 25 vand. Efter omrøring i 20 minutter blev det organiske lag frasepareret, vasket med Isvand og derpå med afkølet mættet vandig natriumhydrogencarbonat-opløsning, tørret over vandfrit natriumsulfat og opkoncentreret ved en temperatur lavere end stuetemperatur. Til den således opnåede 30 inddampningsrest satte man 100 ml t-butanol og opvarmede under tilbagesvaling i 6 timer. Reaktionsblandingen blev opkoncentreret til dannelse af l-benzyl-4-t-butoxycarbo-nylamino-3-methyl-2-oxopyrrolidin (14,96 g).

35 Man satte dråbe for dråbe til en suspension af 3,61 g li-thiumaluminiumhydrid i 150 ml absolut ether en opløsning af 14,46 g l-benzyl-4-t-butoxycarbonylamino-3-methyl-2- 9 DK 171330 B1 oxopyrrolidin 1 100 ml absolut ether, Idet man omrørte 1 1 time ved -5 °C - +3 °C. Efter omrøring i 1 time ved 0 °C blev reaktionsblandingen hældt ud i isvand, og man tilsatte 50% vandig natriumhydroxid-opløsning, det orga-5 niske lag blev frasepareret, vasket med vand og derpå med mættet vandig natriumchlorid-opløsning, tørret over vandfrit natriumsulfat og opkoncentreret. Inddampningsresten blev omkrystalliseret i azetonitril til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (4,87 g) i form af farve-10 løse prismer, smp. 134-140 °C.

Elementæranalyse (%) for ci7H26N2®2'

Beregnet (Fundet): C: 70,31 (70,61); H: 9,03 (9,08); N: 9,64 (9,89).

15 NMR (6 i CDClg): 1,08 (3H, d, J = 6 HZ, -CHg), 1,43 (9H, s, -C(CH3)3), 1,87 (IH, m,Hy_pCK), 2,00 (IH, m, /-¾5 m, 20 2.61 (2H, d. J-5.5 Hz. /—f** ). 2.96 (IH. m.

λΤ »· 3.55 (2H, s. -CH2*£^ ). 3.70 (IH. m. )·

25 H H

4.89 (IH. br. d. -NH-C0D-). 7.28 (5H. m. )·

Referenceeksempel 3 30 cis-3-t-butoxycarbonylamino-4-methylpyrrolidin

Man rystede med hydrogen, som blev absorberet, under for- , 2 højet tryk (100 kg/cm ) og ved stuetemperatur i 22 timer en suspension af 5,37 g l-benzyl-cis-3-t-butoxycarbonyl-35 amino-4-methylpyrrolidin og 2,70 g 10% palladium-på-træ kul i 50 ml ethanol. Katalysatoren blev fjernet ved filtrering, og filtratet blev inddampet til dannelse af ej * m DK 171330 Bl 10 den 1 overskriften nævnte forbindelse (3,25 g). Forbindelsen overgik gradvis til fast form ved stuetemperatur.

NMR ( 6 i CDC13): 1,07 (3H, d, J=7,0 Hz, -CH3), 1,45 (9H, s, -C(CH )3), 1,68-2,15 (IH, m, -n"Tm ). 2,30 (IH, s. HH~i }.

2,50 (IH, dd, J=10,8, 7,5 Hz, -M ), 2,71 (IH, dd, J=ll,2, 5,8 H>—**cs /—f**'

Hz, -N ), 3,18 (IH, dd, J=10,4, 7,0 Hz, -N >. 3,22 (IH.

\—Les —mU' μ>—l»ci .jjc 10 dd, J=ll,4, 6,6 Hz, -n ). 3,42-3,78 (IH, m, -n| ). 4,60- y—r-K/H- N—“C~ '—Uc£ 4,92 (IH, br, -n I ).

Referenceeksempel 4 15 1-benzyl-trans-3-t-butoxycarbony1amino-4-methylpyrrolidIn

Man satte 240 g ethyl-methaerylat til en opløsning af 75 g benzylamin i 150 ml ethanol, hvorpå man opvarmede under 20 tilbagesvaling i 23 timer. Reaktionsblandingen blev inddampet, og den således opnåede inddampningsrest blev destilleret under reduceret tryk til dannelse af N-(2- ethoxycarbonylpropyl)-benzylamin (93,3 g) i form af en 2 farveløs væske, kogepunkt 122 °C/533 N/m .

25

Til en opløsning af denne væske i 140 ml ethanol satte man 96,5 g ethyl-bromacetat, hvorpå man opvarmede under tilbagesvaling i 2 timer. Efter afkøling blev reaktionsblandingen hældt ud i 500 ml isvand og gjort alkalisk med 30 40% vandig natriumhydroxid-opløsning, hvorpå man ekstra herede med benzen. Det organiske lag blev vasket med fortyndet vandigt natriumhydroxid-opløsning og derpå med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat og opkoncentre-ret. Inddampningsresten blev destilleret under reduceret 35 tryk til dannelse af N-ethoxycarbonylmethyl-N-(2-ethoxy- carbonylpropyl)-benzylamin (114,4 g) i form af en gul 2 væske, kogepunkt 147 °C/400 N/m .

11 DK 171330 B1

Man satte dråbe for dråbe en opløsning af 11,2 g af denne olie 1 100 ml absolut benzen til en suspension af 27,5 g natriumethoxid 1 150 ml benzen igennem 30 minutter ved 10 °C. Efter omrøring 1 1,5 timer ved denne temperatur blev 5 reaktionsblandingen ektraheret med 100 ml koncentreeret saltsyre. Saltsyrelaget blev opvarmet under tilbagesvaling i 28 timer, hvorpå uopløseligt materiale blev fjernet ved filtrering, og filtratet blev opkoncentreret. Til den således opnåede inddampningsrest satte man 300 ml 10 vand og gjorde alkalisk med 40% vandig natriumhydroxid-opløsning (pH 10), hvorpå man ekstraherede med ether. Det organiske lag blev vasket med mættet vandig natrium-chlorid-opløsning, tørret over vandfrit natriumsulfat og opkoncentreret. Inddampningsresten blev destilleret under 15 reduceret tryk til dannelse af l-benzyl-4-methyl-3-pyrro-lidon (41,8 g) i form af en gul væske, kogepunkt 104-107 °C.

Man satte dråbe for dråbe ved 20-25 °C igennem 30 minut-20 ter til en opløsning af 78,3 g hydroxylaminhydrochlorid i 300 ml vand en opløsning af ovenstående væske (41,8 g) i 300 ml ethanol. Derpå satte man 63,2 g natriumhydrogen-carbonat til blandingen, og blandingen blev omrørt i 30 minutter ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen fik lov 25 at henstå natten over ved 5 °C, hvorpå man til blandingen satte 150 ml vand og ekstraherede med dichlormethan. Det organiske lag blev vasket med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat og opkoncentreret til dannelse af 1-benzyl- 3-hydroxyimino-4-methylpyrrolidin (45,7 g) som et farve-30 løst fast stof, smp. 85-94 °C.

En suspension af 40 g af dette faste stof og 12,5 g Raney nikke (W7) i methanol indeholdende ammoniak blev rystet med hydrogen, som blev absorberet under forhøjet tryk (80 2 35 kg/cm ) ved stuetemperatur i løbet af 12 timer. Katalysatoren blev fjernet ved filtrering, og filtratet blev inddampet. Den derved opnåede inddampningsrest blev destil DK 171330 Bl 12 leret under reduceret tryk til dannelse af 3-amino-l-benzyl-4-methylpyrrolidin (31,0 g) i form af en farveløs væske, kogepunkt 100-104 °C/266,6 N/m^.

5 10 g af denne væske blev anbragt i en beholder med stor åbning og omrørt med luft ved stuetemperatur. Til det derved opnåede bundfald satte man 50 ml ether og opsamlet ved filtrering til dannelse af 4,1 g trans-3-amino-1-ben-zyl-4-methylpyrrolidin, hydrocarbonat, smp. 74-80 °C.

10

Man satte under omrøring ved stuetemperatur til en opløsning af 4,0 g trans-3-amino-l-benzyl-4-methylpyrrolidin, hydrocarbonat og 3,2 g triethylamin i 50 ml 50% vandig dioxan 5,8 g t-butoxycarbonyloxyimino-2-phenyl-acetoni-15 tril (Boc-ON). Efter omrøring i 3 timer blev reaktionsblandingen hældt ud i isvand og ekstraheret med ether.

Det organiske lag blev vasket med IN vandig natriumhydroxid-opløsning og derpå med mættet vandig natrium-chlorid-opløsning, tørret over vandfrit natriumsulfat og 20 opkoncentreret. Inddampningsresten blev renset ved sili-cagel søjlechromatografi, idet man eluerede med benzen til chloroform:methanol:koncentreret vandig ammoniak-opløsning (10:10:1) til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (5,24 g). Omkrystallisation i hexan 25 førte til farveløse nåle (5,04 g), smp. 79-80 °C.

Elementæranalyse (%) for ci7H26N2°2'

Beregnet (Fundet): C: 70,31 (70,26); H: 9,02 (8,90); N: 0,65 (9,69).

30 NMR (6 i CDC1-): 0,93 (3H, d, J=6,6 Hz, -CH,) , 1.44 (9H,. s, v-f"- ‘n -C(CH3)3)# 2,06-2 .,49 (3H, m. -n^ M ) , 2,57-2,92 (2H, m, ).

3,57 (2H, s, -6Η-/Π) ), 4.13 (IH, m,' -N| **"), 4,75 (IH, br, -NH- '— H_ H '- C00-), 7,27 (5H, s, ).

Η5 'H

13 DK 171330 B1

Referenceeksempel 5 trans-3-t-butoxycarbonylamino-4-methylpyrrolidin.

5 En suspension af 4,8 g l-benzyl-trans-3-t-butoxycarbonyl-amino-4-methylpyrrolidin og 1,8 g 10% palladium-på-trækul i 40 ml ethanol blev rystet med hydrogen, som blev absor- Λ beret under forhøjet tryk (100 kg/cnr) ved 50-70 °C Igennem 6,5 timer. Katalysatoren blev fjernet ved filtre-10 ring, og filtratet blev inddampet til dannelse af den 1 overskriften nævnte forbindelse (3,09 g) i form af en brun olie. Denne olie og det gradvis til fast form ved stuetemperatur.

15 NMR (0 i CDC13): 0,97 (3 H, d, J=6,6 Hz, -CiLj), 1,45 (9H, s.

-C( ch3 )3), 2,16 (IH, br. s, H->Q ), 2.,22^ (IH, m. -ifT^ ), 2^39-2^79 (2H, m, - N~~T ), 3,06-3y34 (2H, m, Γ* ), 4 10 (1Ή,

a'ttc h^-cs H

), 4,67 (IH, br, -NH-COO-). H

20

Eksempel 1 7- (3-aminomethyl-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-8-chlor-l-cyc-25 lopropyl-6-f luor-1,4-dlhydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre

Man opvarmede under tilbagesvaling i 1 time en blanding af 0,6 g 8-chlor-l-cyclopropyl-6,7-difluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre, 5 ml vandfrit acetonitril, 30 0,27 g 3-aminomethyl-4-methylpyrrolidin og 0,3 g 1,8-di- azabicyclo[5,4,0]-7-undecen (DBU), hvorpå man omrørte ved stuetemperatur i 7 timer. Det derved opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering og omkrystalliseret i chloroform-methanol-koncentreret ammoniakvand (10:10:1) 35 til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (0,26 g) i form af farveløse prismer, smp. 235-238 °C.

DK 171330 Bl 14

Elementæranalyse (%) for cigH2iclFN3' I^O,

Beregnet (Fundet): C: 55,41 (55,46); H: 5,63 (5,73); N: 10,20 (10,19).

5 Eksempel 2 7-(3-aminomethyl-4-methyl-l-pyrrolidinyi)-l-cyclopropyl- 6,8-dlfluor-1,4-dlhydro-4-oxo-3-qulnollncarboxylsyre.

10 Man opvarmede under tilbagesvaling 1 1 time en blanding af 0,6 g l-cyclopropyl-6,7,8-trifluor-l,4-dihydro-4-oxo- 3-quinolincarboxylsyre, 5 ml vandfrit acetonitril, 0,29 g 3-aminomethyl-4-methylpyrrolidin og 0,33 g DBU, hvorpå man omrørte ved stuetemperatur i 2 timer og lod henstå 15 natten over. Det derved opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering og omkrystalliseret i chloroform-methanol- koncentreret ammoniakvand (10:10:1) til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (0,45 g) i form af farveløse prismer, smp. 249-252,5 °C.

20

Elementæranalyse (%) for cigH2iF2N3°3' H2°'

Beregnet (Fundet): C: 57,72 (57,41); H: 5,86 (5,70); N: 10,63 (10,57).

25 Eksempel 3 7-(3-t-butoxycarbonylamino-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-8-chlor-l-cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolin-carboxy1syre.

30

Man opvarmede under tilbagesvaling i 1 time en blanding af 0,5 g 8-chlor-l-cyclopropyl-6,7-difluor-l,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre, 5 ml vandfrit acetonitril, 0,5 g 3-t-butoxycarbonylamino-4-methylpyrrolidin og 0,25 35 g DBU. Reaktionsblandingen blev opkoncentreret under reduceret tryk, til den således opnåede inddampningsrest satte man acetonitril-ether (1:1) til udkrystallisering, 15 DK 171330 B1 og bundfaldet blev opsamlet ved filtrering. Dette bundfald blev omkrystalliseret 1 dichlormethan-methanol til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (0,4 g) som et lysegult pulver, snip. 213-215 °C.

5

Elementæranalyse (%) for ^23H27C1FN3°5'

Beregnet (Fundet): C: 57,56 (57,66); H: 5,67 (5,70); N: 8,76 (8,81).

10 Eksempel 4 7-(3-amino-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-8-chlor-l-cyclopro-pyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinollncarboxylsyre.

15 Man opløste 0,35 g 7-(3-t-butoxycarbonylamino-4-methyl-l- pyrrolidinyl)-8-chlor-l-cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro- 4-oxo-3-quinolincarboxylsyre i en blanding af 5 ml methanol og 5 ml koncentreret saltsyre, hvorpå man omrørte ved stuetemperatur i 30 minutter. Efter at reaktionsblandin-20 gen var blevet opkoncentreret under reduceret tryk, blev den derved opnåede inddampningsrest opløst 1 10 ml ethanol og neutraliseret med koncentreret vandig ammoniakopløsning. Det derved opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering, vasket med vand og omkrystalliseret i chloro-25 form-methanol-koncentreret ammoniakvand til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (0,07 g) som et lysegult pulver, smp. 231-234 °C.

Elementæranalyse (%) for ci8Hi9C1FN3°3' 30 Beregnet (Fundet): C: 56,92 (56,87); H: 5,04 (5,17); N: 11,06 (11,03).

Eksempel 5 35 7-[3-(N-acetyl-N-methylamino)-4-methyl-l-pyrrolidinyl]-1- cyclopropyl-6,8-difluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolin-carboxy1syre 16 DK 171330 B1

Man opvarmede under tilbagesvaling 1 1 time en blanding af 0,5 g l-cyclopropyl-6,7,8-trifluor-l,4-dihydro-4-oxo- 3-quinolincarboxylsyre, 5 ml vandfrit acetonltrll, 0,42 g 3-(N-acetyl-N-methylamino)-4-methylpyrrolidin og 0,27 g 5 DBU, hvorpå man lod henstå natten over. Det derved opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering og vasket med acetonitril-ether til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (0,56 g) som et lysegult pulver.

10 OH OH

KBr / / IRv cm : 1730 (C=0), 1660 (C=0), 1630 (C=0).

MAX

Eksempel 6 ^ l-cyclopropyl-6,8-dlfluor-1,4-dihydro-7-(3-methylamino-4- methyl-l-pyrrolidinyl)-4-oxo-3-quinolinearboxy1syrehydro-chlorid.

Man opløste i 5 ml 20% vandig saltsyreopløsning 0,56 g 7-[3-(N-acetyl-N-methylamino)-4-methyl-l-pyrrolidinyl]-l-cyclopropyl-6,8-difluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincar-boxylsyre og opvarmede under tilbagesvaling i 2 timer. Derpå blev reaktionsblandingen opkoncentreret under reduceret tryk, man satte til den således opnåede inddamp-^ ningsrest 10 ml ethanol og lod udkrystallisere ved afkøling. Det derved opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering og omkrystalliseret i methanol til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse som et lysegult pulver, smp. 242-246 °C.

30

Elementæranalyse (%) for ci9H2iF2N3°3' HC1, 2 ^0:

Beregnet (Fundet): C: 50,73 (50,57); H: 5,83 (5,73); N: 9,34 (9,40).

35 DK 171330 Bl 17

Eksempel 7 7-(3-t-butoxycarbonylamino-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-1-cyclopropyl-6,8-difluor-1,4-dlhydro-4-oxo-3-qulnollncar-5 boxy1syre.

Man opvarmede under tilbagesvaling 1 1 time en blanding af 0,5 g l-cyclopropyl-6,7,8-trifluor-1,4-dihydro-4-oxo- 3-quinolincarboxylsyre, 5 ml vandfrit acetonitril, 0,53 g 10 3-t-butoxycarbonylamino-4-methylpyrrolidin og 0,27 g DBU.

Efter afkøling 1 et køleskab blev det derved opnåede bundfald opsamlet ved filtrering og vasket med acetonitril og derpå med ether til dannelse af den 1 overskriften nævnte forbindelse (0,32 g) som et lysegult pulver, 15 smp. 230-231 °C.

OC(CH^)« KBr / IRv cm"·: 3350 (NH), 1700 (-00), 1630 (OO).

MAX

20 Eksempel 8 7-(3-amino-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-l-cyclopropyl-6,8- difluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyrehydro- chlorld 25

Man opløste i en blanding af 5 ml methanol og 5 ml koncentreret saltsyre 0,27 g 7-(3-t-butoxycarbonylamino-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-l-cyclopropyl-6,8-difluor-1,4-di-hydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre og omrørte ved stue-30 temperatur i 30 minutter. Efter at reaktionsblandingen var blevet opkoncentreret under reduceret tryk, blev den derved opnåede inddampningsrest opløst i 10 ml ethanol og udkrystalliseret ved afkøling. Det derved opnåede bundfald blev omkrystalliseret i ethanol til dannelse af den 35 i overskriften nævnte forbindelse (0,14 g) i form af et 18 DK 171330 B1 lysegult pulver, smp. 272-274 °C.

Elementæranalyse (%) for C18H19F2N3°3- HC1' 1/2 K20:

Beregnet (Fundet): C: 52,88 (52,66); H: 5,18 (5,16); 5 N: 10,28 (10,20).

Eksempel 9 8-chlor-1-cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-7-(3-methyl-10 aminomethyl-4-methyl-l-pyrrolidinyl) -4-oxo-3-quinolin- carboxylsyre.

Man opvarmede under tilbagesvaling 1 1 time en blanding af 0,5 g 8-chlor-l-cycloporpyl-6,7-difluor-1,4-dihydro-4-15 oxo-3-quinolincarboxylsyre, 5 ml vandfrit acetonitril, 0,32 g 3-methylaminomethyl-4-methylpyrrolidin og 0,25 g DBU, hvorpå man lod henstå natten over ved stuetemperatur. Det derved opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering, vasket med acetonitril og derpå med ether og om-20 krystalliseret i chloroform-methanol-koncentreret vandig ammoniak-opløsning til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (0,31 g) som et lysegult pulver, smp. 253-255 °C.

25 Elementæranalyse (%) for C2oH23C1FN3°3' 1/4 H20, Beregnet (Fundet): C: 58,25 (58,36); H: 5,74 (5,96); N: 10,19 (10,10).

Eksempel 10 30 l-cyclopropyl-6,8-difluor-1,4-dihydro-7-(3-methylaminome-thyl-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-4-oxo-3-quinolincarboxylsy-re.

35 Man opvarmede i 1 time en blanding af 0,5 g 1-cyclopro- pyl-6,7,8-trifluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxyl- syre, 5 ml vandfrit acetonitril, 0,34 g 3-methylaminome- 19 DK 171330 B1 thyl-4-methylpyrrolidin og 0,27 g DBU, hvorpå man lod henstå natten over ved stuetemperatur* Det derved opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering, vasket med aceto-nitril og derpå med ether og omkrystalliseret 1 chloro-5 form-methanol-koncentreret vandig ammoniak-opløsning til dannelse af den 1 overskriften nævnte forbindelse (0,41 g) 1 form at et hvidt pulver, smp. 252-254 °C.

Elementæranalyse (%) for C20H23F2N3°3' H2°' 10 Beregnet (Fundet): C: 59,38 (59,14); H: 6,10 (6,09); N: 10,39 (10,34).

Eksempel 11 15 8-chlor-l-cyclopropy1-7-(3-ethylaminomethy1-4-methyl-1 - pyrrolidinyl)-6-fluor-l,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincar- boxylsyre

Man opvarmede under tilbagesvaling i 2 timer en blanding 20 af 0,5 g 8-chlor-l-cyclopropyl-6,7-difluor-l,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre, 5 ml vandfrit acetonitril, 0,36 g 3-ethylaminomethyl-4-methylpyrrolidin og 0,25 g DBU, hvorpå man lod henstå natten over ved stutemperatur.

Det derved opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering, 25 vasket med acetonitril og derpå med ether og omkrystalliseret i chloroform-methanol-koncentreret vandig ammoniakopløsning til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (0,56 g) i form af et lysegult pulver, smp. 254-257 °C.

30

Elementæranalyse (%) for 02^2^^3^3, 3/4 I^O,

Beregnet (Fundet): C: 57,92 (57,75); H: 6,13 (6,03); N: 9,65 (9,66).

35 20 DK 171330 B1

Eksempel 12 l-cyclopropyl-7- (3-ethylaminomethyl-4-methyl-l-pyrrolidi-nyl)-6,8-difluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre 5

Man opvarmede under tilbagesvaling 1 1 time en blanding af 0,5 g l-cyclopropyl-6,7,8-trifluor-1,4-dihydro-4-oxo- 3-quinolincarboxylsyre, 5 ml vandfrit acetonitril, 0,38 g 3-ethylaminomethyl-4-methylpyrrolidin og 0,27 g DBU, 10 hvorpå man lod henstå natten over ved stutemperatur. Det derved opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering, vasket med acetonitril og derpå med ether og omkrystalliseret i chloroform-methanol-koncentreret vandig ammoniakopløsning til dannelse af den i overskriften nævnte for-15 bindelse (0,47 g) i form af et lysegult pulver, smp. 224-226 °C.

Elementæranalyse (%) for C2iH25F2N3°3' ^4 H20'

Beregnet (Fundet): C: 61,53 (61,81); H: 6,27 (6,31); 20 N: 10,25 (10,31).

Eksempel 13 7-(cis-3-amino-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-8-chlor-l-cyclo-25 propyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre

Man opvarmede i 1 time en blanding af 1,8 g 8-chlor-l-cyclopropyl-6,7-difluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincar-boxylsyre, 18 ml vandfrit acetonitril, 1,81 g cis-3-t-30 butoxycarbonylamino-4-methylpyrrolidin (referenceeksempel 3) og 0,90 g DBU. Den derved fremkomne blanding blev op-koncentreret under reduceret tryk, og den således opnåede inddampningsrest blev opløst i chloroform og vasket med 10% vandig citronsyreopløsning. Chloroformlaget blev 35 yderligere vasket med mættet vandig natriumchloridopløs- ning, tørret over vandfrit natriumsulfat og opkoncentre-ret under reduceret tryk. Den således opnåede inddamp- 21 DK 171330 B1 nlngsrest blev opløst 1 25 ml varm methanol, og efter afkøling blev det derved opnåede bundfald opsamlet ved filtrering. Derpå blev dette bundfald bragt i suspension i 18 ml methanol, til hvilken opløsning man satte dråbe for 5 dråbe 18 ml koncentreret saltsyre og omrørte ved stuetemperatur i 15 minutter. Reaktionsblandingen blev neutraliseret med koncentreret vandigt ammoniakopløsning, og efter afkøling blev det derved opnået bundfald opsamlet ved filtrering og vasket med vand, dermed med methanol og 10 derpå med ether til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (1,67 g) i form af et hvidt pulver, smp. 240-243 °C (dekomponering).

Elementæranalyse (%) for C18H19C1FN3°3' 15 Beregnet (Fundet): C: 56,92 (57,13); H: 5,04 (5,06); N: 11,06 (10,73).

Eksempel 14 20 7-(trans-3-amino-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-8-chlor-l-cyc- lopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsy-re.

Man opvarmede under tilbagesvaling i 5 timer en blanding 25 af 2,2 g 8-chlor-l-cyclopropyl-6,7-difluor-l,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre, 22 ml vandfrit acetonitril, 2,4 g trans-3-t-butoxycarbonylamino-4-methylpyrrolidin (referenceeksempel 5) og 1,22 g DBU. Reaktionsblandingen blev opkoncentreret under reduceret tryk, og den derved 30 opnåede inddampningsrest blev opløst i chloroform og vas ket med 10% vandig citronsyreopløsning. Chloroformlaget blev yderligere vasket med mættet vandig natriumchlorid-opløsning, tørret over vandfrit natriumsulfat og opkoncentreret under reduceret tryk. Den derved opnåede ind-35 dampningsrest blev opløst i 20 ml varm methanol, og efter køling opsamlede man det således opnåede bundfald ved filtrering til dannelse af 7-(trans-3-t-butoxycarbonyl- 22 DK 171330 B1 amino-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-8-chlor-l-cyclopropyl-6-fluor-l,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre (3,62 g) i form af gule nåle, smp. 210-213 °C (dekomponering).

5 Elementæranalyse (%) for ^s^ClFNgOg,

Beregnet (Fundet): C: 57,56 (57,33); H: 5,67 (5,61); N: 8,76 (8,76).

3,55 g af dette bundfald blev derpå bragt 1 suspension 1 10 25 ml methanol, og man satte til denne opløsning dråbe for dråbe 25 ml koncentreret saltsyre og omrørte ved stuetemperatur i 1 time. Reaktionsblandingen blev neutraliseret med koncentreret vandig ammoniakopløsning, og det derved fremkomne bundfald blev efter afkøling opsamlet 15 ved filtrering og vasket med vand, med methanol og derpå med ether til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (2,19 g) som et gullighvidt pulver, smp. 183-187 °C.

20 Elementæranalyse (%) for C^gH^ClFN^Og, 1/4 H20,

Beregnet (Fundet): C: 56,25 (56,47); H: 5,11 (4,95); N: 10,93 (10,97).

Eksempel 15 25 7-(trans-3-amino-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-l-cyclopropyl- 6,8-dlfluor-l,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre.

Man opvarmede under tilbagesvaling i 1 time en blanding 30 af 0,4 g l-cyclopropyl-6,7,8-trifluor-l,4-dihydro-4-oxo- 3-quinolincarboxylsyre, 4 ml vandfrit acetonitril, 0,43 g trans-3-t-butoxycarbonylamino-4-methylpyrrolidin og 0,22 g DBU. Efter afkøling blev det derved opnåede bundfald opsamlet ved filtrering og vasket med acetonitril og der-35 på med ethanol til dannelse af 7-(trans-3-t-butoxycarbo-nylamino-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-l-cyclopropyl-6,8-di-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre (0,34 g) i 23 DK 171330 B1 form af et gulllghvidt pulver, smp. 237-240 °C (dekompo-nering).

Elementæranalyse (%) for C23H27F2N3°5' 5 Beregnet (Fundet); C; 59,60 (59,31); H; 5,87 (5,81); N; 9,07 (9,01).

0,41 g af dette bundfald blev derpå bragt 1 suspension 1 5 ml trifluoreddikesyre og omrørt ved stutemperatur 1 2 10 timer. Reaktionsblandingen blev opkoncentreret under reduceret tryk, til den således opnåede inddampningsrest satte man 10 ml isvand og opløste i IN vandig natriumhydroxid-opløsning. Efter frafiltrering af uopløseligt materiale blev den derved opnåede opløsning neutraliseret 15 med eddikesyre. Det derved opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering og omkrystalliseret i methanol-chloroform til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (0,15 g) i form af et gullighvidt pulver, smp. 257-260 °C.

20

Elementæranalyse (%) for cieH19F2N303' 3/4 H20,

Beregnet (Fundet); C; 57,37 (57,36); H; 5,48 (5,47); N: 11,15 (11,06).

25 Eksempel 16 7-(cis-3-t-butoxycarbonylamino-4-methyl-l-pyrrolidinyl)- l-cyclopropyl-6,8-difluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolin-carboxylsyre.

30

Man opvarmede under tilbagesvaling i 1 time en blanding af 0,5 g l-cyclopropyl-6,7,8-trifluor-1,4-dihydro-4-oxo- 3-quinolincarboxylsyre, 6 ml vandfrit acetonitril, 0,53 g cis-3-t-butoxycarbonylamino-4-methylpyrrolidin og 0,27 35 DBU, hvorpå man opsamlede det dannede bundfald ved fil trering til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (0,72 g) som et lysegult pulver, smp. 229-230 °C.

! i

F

Elementær-analyse (%) for C2H27F2N3°5'

Beregnet (Fundet): C: 59,60 (59,47); H: 5,87 (5,85); N: 9,07 (9,01).

24 DK 171330 Bl 5 Eksempel 17 7-(cis-3-amino-4-methyl-1-pyrrolidlny1)-1-cyclopropy1- 6,8-dlfluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-qulnolincarboxylsyre.

10 Man omrørte i 2 timer ved stuetemperatur en blanding af 0,3 g 7-(cis-3-t-butoxycarbonylamino-4-methyl-l-pyrroli-dinyl)-l-cyclopropyl-6,8-difluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-qui-nolincarboxylsyre i 5 ml ethanol og 6 ml ethanolisk hydrogenchlorid, hvorpå man opkoncentrerede. Til inddamp-15 ningsresten blev sat ethanol, og det derved opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering og vasket med ethanol til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (0,21 g) i form af et lysegult pulver, smp. 274-275 °C (dekomponering).

20

Elementæranalyse (%) for for ci8Hi9F2N3°3' 2/3 H2°'

Beregnet (Fundet): C: 52,49 (52,54); H: 5,22 (5,13); N: 10,20 (10,09).

25 Eksempel 18 7-(cis-3-amino-4-methyl-l-pyrrolldinyl)-8-brom-l-cyclo-propyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre. 1 2 3 4 5 6

Man opvarmede under tilbagesvaling i 2 timer en blanding 2 af 0,19 g 8-brom-l-cyclopropyl-6,7-difluor-l,4-dihydro-4- 3 oxo-3-quinolincarboxylsyre, 0,14 g cis-3-t-butoxycarbo- 4 nylamino-4-methylpyrrolidin, 0,095 g DBU og 5 ml vandfrit 5 acetonitril, hvorpå man opkoncentrerede. Den derved op- 6 nåede inddampningsrest blev opløst i 70 ml chloroform, vasket med 10% vandig citronsyreopløsning og derpå med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat, hvorpå den op- 25 DK 171330 B1 koncentreret. Til den således opnåede olieagtige inddamp-ningsrest satte man varmt methanol til udkrystallisering, hvorpå man afkølede. Det således opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering, sat til 3 ml af en blanding af 5 koncentreret saltsyre og methanol (1:1) og omrørt i 2,5 timer ved forhøjet temperatur. Reaktionsblandingen blev neutraliseret med koncentreret vandig ammoniakopløsning, det således opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering, vasket med isvand og omkrystalliseret i dichlorme-10 than-methanol-koncentreret vandig ammoniakopløsning (10:10:1) til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (0,06 g) i form af gule prismer, smp. 225-226,5 °C (dekomponering).

15 Elementæranalyse (%) for Cl8H19BrFN3°3'

Beregnet (Fundet): C: 50,96 (51,05); H: 4,51 (4,71); N: 9,90 (9,98).

Eksempel 19 20 7-( trans-3-Amino-4-methyl-l-pyrrolidinyl )-8-brom-l-cyclo-propyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsyre

Man opvarmede under tilbagesvaling 1,5 timer en blanding 25 af 0,11 g 8-brom-l-cyclopropyl-6,7-difluor-l,4-dihydro-4- oxo-3-quinolincarboxylsyre, 0,082 g trans-3-t-butoxycar-bonylamino-4-methylpyrrolidin, 0,054 g DBU og 5 ml vandfrit acetonitril, hvorpå man opkoncentrerede. Den derved opnåede inddampningsrest blev opløst i 50 ml chloroform 30 og vasket med 10% vandig citronsyreopløsning og derpå med vand. Det organiske lag blev opkoncentreret under reduceret tryk, og til den således opnåede olieagtige inddampningsrest satte man methanol til en krystallisation. Det derved opnåede bundfald blev opsamlet ved filtrering, 35 vasket med afkølet methanol, og dette blev sat til 2 ml koncentreret saltsyre-methanol (1:1) og omrørt i 1 time ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen blev neutralise- 26 DK 171330 B1 ret med koncentreret vandig ammoniakopløsning, den blev opkoncentreret under reduceret tryk, og den således opnåede inddampningsrest blev renset ved silicagel søjle-chromatografi (chloroform:methanol:koncentreret vandig 5 ammoniakopløsning - 20:6:1) og derpå omkrystalliseret i dichlormethan-methanol (1:1) til dannelse af den i overskriften nævnte forbindelse (0,04 g) som et lysegult pulver, smp. 186-190 oC (dekomp.).

10 Elementæranalyse (%) for ci8H19BrFN3°3' beregnet (fundet): C 50,96 (50,91); H 4,51 (4,60); N 9,90 (9,72).

Eksperiment 1. Antibakterielt spektrum 15

Man bestemte de minimale inhibitionskoncentrationer (MIC) i overensstemmelse med den metode, som er anbefalet af Japan Society of Chemotherapy. De derved opnåede resultater er vist i efterfølgende tabel 1.

20 25 30 35 l ( i t DK 171330 B1 27

Tabel 1-1 In vitro antibakteriel aktivitet (standard stammer) MIC Ug/ml)

Organisme (10® celler/ml) Gram Eks. 1 Eks. 2 Eks. 4 Eks. 8 Eks. 9

Bacillus sub tills PCT 219 ·*·_0,0125 0,0125 0,0125 0,025 0,0125

Staphylococcus aureus 209 P + 0,0125 0,025 0,025 0,05 0,05 S. aureus Smith + 0,0125 0,025 0,05 0,05 0,05 S. aureus IID 670 (Terajima) + 0,025 0,025 0,05 0,10 0,0125 S. epidermldis IID 866 + 0,0125 0,025 0,05 0,10 0,05

Streptococcus pyogenes (S-8) + 0,0125 0,05 0,10 - 0,05 S. pyogenes IDD 692__+ 0,025 0,05 0,10 - 0,05 S. pneumoniae IDD 552 + 0,0125 0,05 0,10 - 0,05 E. faecalls IDD 682__+ 0,05 0,10 0,10 - 0,05

Escherichia coll NIHJ JC-2 - 0,025 0,025 0,0063 0,0125 0,05 E. coll ATCC 10536 - 0,025 0,025 0,0125 0,025 0,05 E. coll ML 4707 - 0,025 θΤθ25~ 0,0125 0,0125 0,025~

Proteus vulgaris IF0 3167 - 0,05 0,05 0,0125 0,025 0,05 P. mirabilis IID 994 - 0,05 0,05 0,025 0,05 0720

Morganella morganii IID 602 - 0,10 0,10 0,05 0,05 0,20

Klebsiella pneumoniae KY(GN)6445 - 0,05 0,05 0,0125 0,25 0,05 K. pneumoniae I-220S - 0,05 0,05 0,05 0,05 0,10

Enterobacter cloacae IID 977 - 0,05 0,05 0,05 0,05 0,20

Citrobacter freundii IID 976 - 0,05 0,05 0,025 0,05 0,05

Serratia marcescens IID 618 - 0,10 0,10 0,05 0,05 0,20

Shigella sonnei IID 969_ - 0,025 0,025 0,0063 0,025 0,025

Salmonella enter!tidis IID 604 - 0,05 0,05 0,025 0,05 0,10

Pseudomonas aeruginosa V-l - 0,10 0,10 0,20 0,39 0,39 P. aeruginosa IFO 12689_~ 0,78 0,78 0,39 0,39 1,56 P. aeruginosa IID 1210_ - 0,78 0,78 0,39 0,39 1,56 P. cepacia GIFU 518__- 0,39 0,39 0,20 0,39 0,78 P. maltophilia GIFU 2491_ - 0,10 0,20 0,05 0,10 0,20 DK 171330 Bl 28

Tabel 1-2 In vitro antibakteriel aktivitet (standard stammer) MIC (ug/ml)

Organisme (10** celler/ml) Gram Eks. 1 Eks. 2 Eks. 4 Eks. 8 Eks. 9 Yersinia enterocolitica IID 981 - 0,05 0,05 0,025 0,05 0,10

Acinetobacter anitratus IID 876 - 0,05 0,05 0,025 0,05 0,20

Alcaligenes faecalis 0114002 - 0,20 0,20 0,10 0,20 0,39

Bacteroides fragilis GM 7000 - 30,10 0,78 0,10 0,78 0,20 B. fragi lis 0558__- 30,05 0,39 0,05 0,39 0,10 B. fragilis 25285_~ 30,05 0,39 0,05 0,30 0,10 B. distasonis 8503 - 0,39 3,13 0,39 0,78 0,39 B. thetaiotaomicron (0661)__- 0,10 0,78 0,10 0,39 0,20 B. vulgatus KYA 29327_ - 0,10 0,78 0,10 0,39 0,20

Fusobacterium mortiferum 4249 - 30,05 0,39 0,20 0,39 0,20 F. necrophorum S-45 - 0,10 0,39 0,20 0,39 0,20 F. varium KYA 8501 - 0,39 0,78 0,78 1,56 0,78

Eubacterium lentum GAI 5242 + 0,20 0,78 0,10 0,39 0,20 E. llmosum KYA 8486_ + 0,39 1,56 0,20 0,78 0,39

Propionibacterium acens 11828 + 0,20 0,39 0,78 3,13 0,78

Peptococcus magnus KY 017 + 30,05 0,20 0,05 0,20 0,15

Glostridium difficile I-E + - - 0,20 C. perfringens KYA 13123 + £0,05 0,20 0,10 0,39 0,10 C. ramosum + 0,20 0,78 0,78 1,56 0,39

Peptostreptococcus anaerobius + 30,05 0,10 0,20 0,39 0,05 KYA 27337

Pst, micros UPI 5464-1__+ 0,39 0,39 0,10 0,39 0,39

Veillonella parvula KYA 10790 - 0,10 0,39 0,10 0,39 0,39 DK 171330 Bl 29

Tabel 1-3 In vitro antibakteriel aktivitet (standard stammer) _MIC (ug/ml)_

Organisme (10® celler/ml) Gram Eks.10 Eks.ll Eks.12 Eks.13 Eks.14

Bacillus subtilis PCT 219 "+ 0,025 O*, 0125 0,025 0,0125 0,0125

Staphylococcus aureus 209 P +0,05 0,0125 0,05 0,05 0,025 S. aureus Smith + 0,05 0,0125 0,05 0,025 0,025 S. aureus IID 670 (Terajima) + 0,05 0,0125 0,05 0,05 0,05 S. epidermidis IID 866 + 0,05 0,0125 0,05 0,05 0,05

Streptococcus pyogenes (S-8) + 0,10 0,05 0,10 0,10 S. pyogenes IDD 692 + 0,20 0,05 0,10 0,10__~ S. pneumoniae IDD 552 + 0,10 0,05 0,10 0,10__~ E. faecalis IDD 682 + 0,20 0,05 0,10 0,10

Escherichia coll NIHJ JC-2__-_0,05 0,025 0,05 0,0063 0,0063 E. coli ATCC 10536 - 0,05 0,025 0,05 0,0125 0,0063 E. coli ML 4707 - 0,05 0,05 0,05 0,0063 0,0063

Proteus vulgaris IF0 3167 - 0,05 0,05 0,10 0,0125 0,0125 P. mirabilis IID 994 - 0,20 0,10 0,10 0,025 0,025

Morganella morganii IID 602 - 0,20 0,20 0,20 0,05 0,05

Klebsiella pneumoniae KY(GN)6445 - 0,05 0,05 0,05 0,25 0,0125 K. pneumoniae I-220S - 0,20 0,20 0,20 0,05 0,0125

Enterobacter cloacae IID 977 - 0,20 0,20 0,20 0,05 0,05

Citrobacter freundii IID 976 - 0,05 0,10 0,10 0,025 0,0125

Serratia marcescens IID 618 - 0,20 0,20 0,20 0,05 0,05

Shigella sonnei IID 969 - 0,05 0,025 0,05 0,0063 0,0063

Salmonella enteritidis IID 604~ - 0,10 0,20 0,20 0,025 0,025

Pseudomonas aeruginosa V-l - 0,39 0,78 0,78 0,10 0,10 P. aeruginosa IFO 12689 - 3,13 3,13 3,13 0,39 0,39 P. aeruginosa IID 1210 - 1,56 3,13 3,13 0,39 0,39 P. cepacia GIFU 518 - 0,78 0,78 0,78 0,39 0,20 P. maltophilia GIFU 2491__-_0,39 0,39 0,39 0,05 0,05

Tabel 1-4 In vitro antibakteriel aktivitet (standard stammer) DK 171330 B1 30 MIC (ug/ml)

Organisme (10^ celler/ml) Gram Eks.10 E3cs.ll Eks.12 Eks.13 Eks.14 Yersinia enterocolltlca IIP 981 - 0,10 0,20 0,20 0,05 0,025

Acinetobacter anitratus IID 876 - 0,10 0,10 0,10 0,025 0,025

Alcaligenes faecalis 0114002 - 0,78 0,78 0,78 0,10 0,05

Bacteroides fragilis GM 7000 - 0,78 0,10 0,78 0,05 0,05 B. fragilis 0558__- 0,78 ^05~ 0,39 0,05 0,05 B. fragilis 25285_ - 0,78 0,05 0,39 0,05 0,05 B. distasonis 8503_ - 3,13 0,39 3,13 0,20 0,10 B. thetaiotaomicron (0661) - 3,13 0,20 1,56 0,10 0,10 B. vulgatus KYA 29327__- 1,56 0,05 0,78 0,05 0,05

Fusobacterinm mortiferum 4249 - 0,39 0,20 0,39 0,10 0,10 F. necrophorum S-45 - 0,39 0,10 0,39 0,05 0,05 F. varium KYA 8501__- 1,56 1,56 1,56 0,78 0,78

Eubacterium lentum GAI 5242 + 0,78 0,20 0,39 0,05 0,05 E. limosum KYA 8486 + 1,56 0,78 1,56 - -

Propionibacterium acens 11828 + 1,56 1,56 3,13 0,78 0,78

Peptococcus magnus KY 017 + 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05

Glostridium difficile I-E_ + 0,78 0,10 0,78 0,39 0,39 C. perf ringens KYA 13123_ + 0,20 <>,05 0,10 0,05 0,05 C. ramosum _ + 0,78 0,20 0,78 0,39 0,39

Peptostreptococcus anaerobius + 0,20 0,05 0,20 0,10 0,10 KYA 27337 -

Pst, micros UPI 5464-1__+ 0,78 0,39 0,78 0,10 0,05

Veillonella parvula KYA 10790 - 0,78 0,39 0,78 0,10 0,05 DK 171330 Bl 31

Tabel 1-5 In vitro antibakteriel aktivitet (standard stammer) _MIC Ug/ml)_

Organisme (10^ celler/ml) Gram Eks.15 Eks.17 Eks.18 Eks.19 Bacillus subtilis PCT 219 ~ +0,025 0,025 0,0125 0,0125

Staphylococcus aureus 209 P +0,05 0,05 0,025 0,025 S. aureus Smith + 0,05 0,05 0,025 0,025 S. aureus IID 670 (Terajima) + 0,20 0,05 0,05 0,05 S. epidermidis IID 866 + 0,05 0,05 0,05 0,05

Streptococcus pyogenes (S-8) + 0,05 0,20 0,10 0,10 S. pyogenes IDD 692 + 0,10 0,39 0,20 0,20 S. pneumoniae IDD 552 + 0,05 0,20 0,20 0,10 E. faecalis IDD 682_ + 0,10 0,20 0,20 0,20

Escherichia coli NIHJ JC-2 - 0,0063 0,0125 0,0063 0,0063 E. COli ATCC 10536 ~ ~ 0,05 0^025~ 0,0125 0,0125 E. coli ML 4707 ~ ~ 0,0063 0,025 0,0125 0,0125

Proteus vulgaris IF0 3167 - 0,0125 0,025 0,0125 0,0125 P. mirabilis IID 994 ~ ~ 0,025 0,05 0,025 0,05

Morganella morganii IID 602 - 0,05 0,05 0,05 0,05

Klebsiella pneumoniae KY(GN)6445 - 0,0125 0,025 0,0125 0,025 K. pneumoniae I-220S - 0,035 0,05 0,05 0,05

Enterobacter cloacae IID 977 - 0,05 0,05 0,025 0,05

Citrobacter freundii IID 976 - 0,0125 0,025 0,025 0,025

Serratia marcescens IID 618 - 0,05 0,205 0,025 0,05

Shigella sonnei IID 969 - 0,0125 0,0125 0,0063 0,0063

Salmonella enter!tidis IID 604 - 0,025 0,05 0,025 0,05

Pseudomonas aeruginosa V-l - 0,10 0,20 0,39 0,20 P. aeruginosa IFO 12689 - 0,39 0,39 0,78 0,39 P. aeruginosa IID 1210 - 0,78 0,78 1,56 0,78 P. cepacia GIFU 518 - 0,10 0,39 0,39 P. maltophilia GIFU 2491_ - 0,05 0,39 0,05 0,05 DK 171330 Bl 32

Tabel 1-6 In vitro antibakteriel aktivitet (standard stammer) _MIC (gg/ml)_

Organisme (ΙΟ** celler/ml) Gram Eks.15 Eks.17 Eks.18 Eks.19 Yersinia enterocolitica IID 981 - 0,05 0,05 0,025 0,025

Acinetobacter anitratus IID 876 - 0,025 0,05 0,025 0,025

Alcaligenes faecalis 0114002 - 0,10 0,39 0,20 0,10

Bacteroides fragilis GM 7000 - 0,20 0,39 0,10 0,10 B. fragilis 0558 - 0,20 0,39 0,05 0,05 B. fragilis 25285 - 0,20 0,39 ~ 0,05 0JO~“ B. distasonls 8503_ - 0,39 0,78 0,39 0,20 B. thetaiotaomicron (0661) - 0,39 0,78 0,20 0,20 B. vulgatus KYA 29327_ - 0,39 0,39 0,10 0,10

Fusobacterium mortiferum 4249 - 0,20 0,39 0,20 0,20 F. necrophorum S-45 - 0,20 0,39 0,10 0,10 F. varlum KYA 8501_~ 1,56 1,56 0,78 0,78

Eubacterium lentum GAI 5242 + 0,10 0,20 0,05 0,10 E. limosum KYA 8486 + - - 0,10

Propionibacterium acens 11828 + 1,56 3,13 1,56 1,56

Peptococcus magnus KY 017 + 0,05 0,20 0,05 0,05

Glostrldlum difficile I-E_~ 1,56 1,56 0,39 0,78 C. perfringens KYA 13123_ + 0,10 0,20 0,10 0,20 C. ramosum + 0,78 1,56 0,78 0,78

Peptostreptococcus anaerobius + 0,20 0,39 0,20 0,20 KYA 27337__'__'_

Pst, micros UPI 5464-1_ + 0,10 0,20 0,10 0,10

Veillonella parvula KYA 10790 - 0,10 0,20 0,10 0,10 33 DK 171330 B1

Tabel 1-7 og 1-8 viser sammenligninger imellem på den ene side eksemplerne 15 og 12 ifølge opfindelsen og på den anden side eksemplerne 15 og 11 1 EP-A 106 489, som forekommer at være de strukturelt set nærmest beslægtede 5 kendte forbindelser.

Forbindelserne Ref. 1 og Ref. 2 i tabellerne repræsenterer henholdsvis eksemplerne 15 og 11 i EP-A 106 489.

10 Som det fremgår af angivne sammenlignende data, har forbindelserne ifølge opfindelsen en uventet nyttig virkning med hensyn til antibakteriel aktivitet over for anaerobe bakterier.

15 20 25 1 35

Tabel 1-7 In vitro antibakterie1 aktivitet (anaerobe bakterier) DK 171330 B1 34 MIC (ag/ml)

Organisme (10** celler/ml) Gram Eks. 15 Ref. 1 Eks. 12 Ref. 2

Bacillus subtilis PCI 219 + 0,025 0,10 0,025 0,05

Staphylococcus aureus 209 P + 0,05 0,10 0,05 0,10 S. aureus Smith + 0,05 0,20 0,05 0,10 S. aureus IID 670 (Terajima) + 0,20 0,20 0,05 0,10 S. epidermidis IID 866 + 0,05 0,20 0,05 0,10

Streptococcus pyogenes (S-8) + 0,05 0,39 0,10 0,20 S. pyogenes IID 692 + 0,10 0,39 0,10 0,20 S. pneumoniae IID 552 + 0,05 0,39 0,10 0,20 E. faecalis IID 682__+ 0,10 0,39 0,10 0,20

Escherichia ooli NIHJ JC-2 - 0,0063 0,025 0,05 0,10 E. coli ATCC 10536 - 0,05 0,025 0,05 0,10 E. coli ML 4707 - 0,0063 0,025 0,05 0,10

Proteus vulgaris IFO 3167 - 0,0125 0,05 0,10 0,05 P. mirabilis IID 994 - 0,025 0,10 0,10 0,20

Morganella morganii IID 602 - 0,05 0,10 0,20 0,39

Klebsiella pneumoniae KY(GN)6445 - 0,0125 0,05 0,05 0,20 K. pneumoniae 1-220S - 0,025 0,10 0,20 0,39

Enterobacter cloacae IID 977 - 0,05 0,10 0,20 0,78

Citrobacter freundii IID 976 - 0,0125 0,05 0,10 0,20

Serratia marcescens iid 618 - 0,05 0,05 0,20 0,39

Shigella sonnei IID 969 - 0,0125 0,025 0,05 0,10

Salmonella enter!tidis IID 604 - 0,025 0,05 0,20 0,39

Pseudomonas aeruginosa V-l - 0,10 0,20 0,78 3,13 P. aeruginosa IFO 12689 - 0,39 0,39 3,13 6,25 P. aeruginosa IID 1210 - 0,78 0,39 3,13 6,25 P. cepacia GIFU 518_ - 0,10 0,78 0,78 P. maltophilia GIFU 2491__ 0,05 0,39 0,39

Yersinia enterocolitica IID 981 - 0,05 0,05 0,20 0,39

Acinetobacter anitratur IID 876 - 0,025 0,39 0,10 0,39

Alcaligenes faecalis 0114002 - 0,10 0,39 0,78 6,25 35

Tabel 1-8 In vitro antibakteriel aktivitet (anaerobe bakterier) DK 171330 Bl MIC (ug/ml)

Organisme (10^ celler/ml) Gram Eks. 15 Ref. 1 Eks. 12 Ref. 2 Bacteroides fragilis GM 7000 - 0,20 3,13 0,78 6,25 B. fragilis 0558 - 0,20 3,13 0,39 3,13 B. fragilis 25285_ 0,20 3,13 0,39 3,13 B. distasonis 8503 - 0,39 6,25 3,13 6,25 B. thetaiotaomicron (0661) - 0,39 6,25 1,56 25 B. vulgatus KYA (ATCC) 29327 - 0,39 6,25 0,78 6,25

Fusobacterium mortlferum 4249 - 0,20 1,56 0,39 F. necrophorum S-45 - 0,20 1,56 0,39 1,56 F. varium KYA 8501 - 1,56 3,13 1,56 6,25

Eubacterium lentum GA1 5242 + 0,10 1,56 0,39 3,13

Propionibacterium acens 11828 + 1,56 6,25 3,13

Peptococcus magnus KY 017 + 0,05 0,78 0,05

Clostridium difficile I-E + 1,56 6,25 0,78 C. perf ringens KYA 13123 + 0,10 0,39 0,10 0,39 C. ramosum + 0,78 6,25 0,78 3,13

Peptostreptococcus anaerobius KYA 27337 __+ 0,20 0,78 0,20 0,78

Pst. micros UPI 5464-1 + 0,10 0,39 0,78 3,13

Veillonella parvula KYA 10790 - 0,10 0,39 0,78 3,13 36 DK 171330 B1

Eksperiment 2 Terapeutisk effektivitet over for systemiske infektioner hos mus I hvert af eksperimenterne anvendte man i hver.gruppe 5 5 ICR-mus. Musene blev inokuleret intraperitonealt med bakterie-suspensioner, og forbindelserne blev indgivet peroralt med fem doseringer en time efter infektionen. Antallet af overlevende forsøgsdyr blev bestemt dagligt i 3 - 7 dage. Den effektive dosis i 50% af tilfældene (ED^q), 10 som beskytter 50% af forsøgsdyrene fra død forårsaget af infektionen, blev bestemt ud fra forholdet mellem dosering og overlevelsesantal.

De opnåede resultater er vist i de efterfølgende tabeller 15 2 til 4.

Den beskyttende effektivitet af forbindseiserne ifølge opfindelsen var meget større end effektiviteten for referenceforbindelserne .

20

Tabel 2 E. coli ML 4707 25 MIC (ng/ml) ED50 (mg/kg)

Eksempel 8 0,025 1,0

Eksempel 13 0,0125 1,0 30 CPFX 0,0125 1,4

Udfordringsdosis: 8,5 x 10^ cfu/mus.

35 37 DK 171330 B1

Tabel 3 MR S. aureus KYB 623 5 MIC (ug/ml) ED5Q (mg/kg)

Eksempel 13 0,025 3,7

Eksempel 14 0,0125 2,1 10 CPFX 0,39 37 (+ Musin)

O

Udfordringsdosis: 3,1 x 10 cfu/mus.

15 Tabel 4 S. pneumoniae S-4288 20 MIC (ug/ml) EDg0 (mg/kg)

Eksempel 8 0,20 20,7

Eksempel 13 0,10 12,1 CPFX 1,58 >100 25 -

Q

Udfordringsdosis: 4,8 x 10 cfu/mus. 1 35

Claims

1. Derivater af 7-(3-amino-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-l-cy-clopropyl-6-fluor-l,4-dihydro-4-oxo-3-quinolincarboxylsy- 5 re, kendetegnet ved, at de har den almene formel: O F II COOR io xxj ch3 15 hvori R er hydrogen eller C.-C, alkyl, Y er fluor, chlor 1 lo eller brom, R er hydrogen, C^-C^ alkyl, C2~Cg alkoxycar-bonyl, benzyloxycarbonyl, C^-Cg alkylcarbonyl, arylcarbo-nyl eller arylalkylcarbonyl, og n er 0 eller 1, og 20 hydrater og farmaceutisk acceptable syreadditionssalte og basesalte deraf.

2. Fremgangsmåde til fremstilling af et quinolincarboxyl-syre-derivat med formlen (I) ifølge krav 1, kende- 25 tegnet ved, at man kondenserer en forbindelse med formlen: O F

30. X J x'ΤΪ (II) Y Å 35 hvori X er et halogenatom, og hvori R og Y har de i krav 1 angivne betydninger, med et pyrrolidin-derivat med formlen DK 171330 B1 39 R1 -NH(CH2)n—( 111) CH3 5 hvori R1 og n har de i krav 1 angivne betydninger.

3. Fremgangsmåde til fremstilling af et quinolincarboxyl-syre-derivat med formlen (I) ifølge krav 1, hvori R er 10 hydrogen, kendetegnet ved, at man hydrolyserer en forbindelse med formlen: O F 11 COOA

15. X J (IV) R‘-NH(CH2)n—< \ ^ I CH3 20 hvori A er C^-Cg alkyl, og hvori Y, R* og n har de i krav 1 angivne betydninger.

4. Fremgangsmåde til fremstilling af et quinolincarboxyl-25 syre-derivat med formlen (I) ifølge krav 1, hvori R*- er hydrogen, kendetegnet ved, at man deacylerer en forbindelse med formlen: O ,n f II coor IT T <v> P? -NH(CH2)n—<PjN 0¾ 35 2 hvori R er Cg-C^ alkoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl. 40 DK 171330 B1 Ci“Cg alkylcarbonyl, arylcarbonyl eller arylalkyl- carbonyl, og hvori R, Y og n har de i krav 1 angivne betydninger .

5. Antibakterielt farmaceutisk præparat, kende tegnet ved, at det omfatter mindst én forbindelse ifølge krav 1 sammen med et inert, farmaceutisk acceptabelt bærestof. 10 15 20 25 30 35