FI85697C - Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt aktiva 7-(1-pyrrolidinyl)-1-cyklopropyl-6-fluor-1,4 -dihydro-4-oxo-3-kinolin-karboxylsyraderivat. - Google Patents

Description

1 85697

Menetelmä farmakologisesti aktiivisten 7-(1-pyrrolidinyyli)-l-syklopropyyli-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliini-kar-boksyylihappojohdannaisten valmistamiseksi

Tämä keksintö kohdistuu menetelmään määrättyjen uusien farmakologisesti aktiivisten 7-(1-pyrrolidinyyli)-1-syklo-propyyli-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliini-karboksyy-lihappojohdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava I

0

9 F\ J

R2-N(CH2)n_ ^y^j^Y-COOR ^

H3C Y A

jossa R on vetyatomi tai alempi alkyyliryhmä, Y on vetyatomi tai halogeeniatomi, R2 on vetyatomi, alempi alkyyliryhmä, alkoksikarbonyyliryhmä tai asyyliryhmä ja n on 0 tai 1, tai niiden hydraattien tai farmaseuttisesti hyväksyttävien happo-additio- tai alkalisuolojen valmistamiseksi.

Sanonnalla "alempi alkyyliryhmä" tarkoitetaan tässä yhteydessä alkyyliradikaaleja, joissa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyliä, etyyliä ja isopropyyliä.

Sanonnalla "halogeeniatomi" tarkoitetaan tässä yhteydessä fluoria, klooria, bromia ja jodia, erityisesti fluoria, klooria ja bromia.

Sanonnalla "alkoksikarbonyyliryhmä" tarkoitetaan tässä yhteydessä alempia alkoksikarbonyyliradikaaleja, joissa on 2-6 hiiliatomia, kuten metoksi-, etoksi-, t-butoksikarbonyyliä ja sen tapaisia, tai aryylialkoksikarbonyyliradikaaleja, kuten bentsyylioksikarbonyyliä.

Sanonnalla "asyyliryhmä" tarkoitetaan tässä yhteydessä alempi alkyylikarbonyyliradikaaleja, joissa on 1-5 hiiliatomia tai aryylikarbonyyliradikaaleja tai aryylialkyylikarbonyyliradi-**' kaaleja, joissa on 7-12 hiiliatomia, kuten esim. formyyliä, asetyyliä, propionyyliä, bentsoyyliä ja sen tapaisia.

Kaavan (I) mukainen yhdiste sisältää geometrisiä isomeerejä (cis- ja transisomeerejä) ja niiden optisia isomeerejä, johtuen molempien substituenttien suuntautumisesta asemassa 3 ja 4 pyrrolidiinirenkaassa (7-substituentti). Kaikki isomeerit ja niiden seokset on kuitenkin yksinkertaisuuden vuoksi esitetty yhdellä ainoalla kaavalla. Näin ollen esillä oleva keksintö ei ole rajoitettu yhteen isomeeriin tai niiden seokseen.

Siitä lähtien, kun nalidiksiinihappo, jota on käytetty gram-negatiivisten bakteerien aiheuttamien virtsatietulehdusten hoitoon, esiteltiin 1963, on pyridonikarboksyylihappoanalogin jatkokehittelyn eteen tehty intensiivistä työtä.

Siten on viime aikoina todettu, että määrätyillä yhdisteillä (esim. norfloksasiinilla eli l-etyyli-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-7-(1-piperatsinyyli)-3-kinoliinikarboksyylihapolla) on huomattava bakteerinvastainen vaikutus ei ainoastaan gram-nega-tiivisia bakteereja vaan myös gram-positiivisiä bakteereja vastaan. Niiden vaikutus gram-positiivisia bakteereja vastaan on kuitenkin hieman pienempi kuin gram-negatiivisia bakteereja vastaan.

Aivan viime aikoina on kehitetty lääkkeitä, joilla on suhteellisen voimakas aktiviteetti gram-positiivisia bakteereja vastaan (esim. CI — 934 ), mutta on osoittautunut, että niillä on heikompi aktiivisuus gram-negatiivisia bakteereja vastaan kuin ennestään tunnetuilla yhdisteillä (esim. norfloksasiinilla tai siprofloksasiinilla eli l-syklopropyyli-6-fluori-1,4-dihy-dro-4-okso-7-(piperatsinyyli)-3-kinoliinikarboksyylihapolla).

Julkaisuista US-4 571 369, US-4 604 401, US-4 620 007 ja US-4 655 079 ja EP-A-0 106 489, EP-A-0 126 355 ja EP-A-0 167 763 sekä FI-C-77855 tunnetaan tiettyjä kinoliinikarboksyylihappo-johdannaisia. Näissä julkaisuissa ei kuitenkaan ole esitetty yhtään esimerkkiä yhdisteistä, joissa kinoliinirengas olisi 7-asemastaan substituoitu disubstituoidulla pyrrolidiinilla, kuten keksinnön mukaiset yhdisteet. Lisäksi keksinnön mukaisten yhdisteiden bakteerinvastainen aktiivisuus on huomattavasti parempi kuin näistä julkaisuista tunnettujen yhdisteiden, 3 85697 erityisesti gram-negatiivisia bakteereja ja anaerobisia bakteereja vastaan.

Julkaisusta EP-A-0 235 762 tunnetaan yhdisteitä, jotka sisältävät erilaisen substituentin 1-asemassa kuin keksinnön raukaiset yhdisteet. Lisäksi tästä julkaisusta tunnettujen yhdisteiden ja keksinnön raukaisten yhdisteiden välillä on huomattava ero bakteerinvastaisen aktiivisuuden suhteen.

Tutkimusten tuloksena on nyt yllättäen havaittu, että kaavan (I) mukaisilla kinolinonikarboksyylihapon uusilla johdannaisilla on merkittävän voimakas aktiivisuus gram-positiivisia bakteereja vastaan ilman että aktiivisuus gram-negatiivisia bakteereja vastaan alenisi verrattuna mihin tahansa ennestään tunnettuun analogiin ja ovat näin ollen käyttökelpoisia kaupallisiin valmisteisiin ja tutkimuslääkkeissä in vitro ja in vivo bakteerinvastäisessä vaikutuksessa sekä gram-negatiivisia että gram-posisiLiivisiä bakteereja vastaan.

Keksinnön mukaisilla yhdisteillä on lisäksi erinomainen bakteerin vastainen vaikutus ei ainoastaan aerobisia bakteereja vastaan vaan myös anaerobisia bakteereja vastaan.

Keksinnön mukaiset yhdisteet absorboituvat ja jakaantuvat hyvin kudokseen, kun niitä annetaan suun kautta eläimille.

Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat sen vuoksi aktiivisia alhaisissa annoksissa sekä gram-positiivisia että gram-negatiivisia bakteereja vastaan ja ovat näin ollen arvokkaita aineita hoidettaessa tulehduksia ihmisissä, eläimissä ja kasveissa.

Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan keksinnön mukaisesti valmistaa siten, että kondensoidaan yhdiste, jolla on kaava (II) 4 85697

O

F II

>i-COOR

Jiv *L jJ ' (II)

X N

' A

jossa R on vetyatomi tai alempi alkyyliryhmä, X on halogee-niatomi ja Y on vetyatomi tai halogeeniatomi, pyrrolidiini-johdannaisen kanssa, jolla on kaava (III) R2-N(CH2)n H ^^ NH (III) h3c^ ^ jossa R2 on vetyatomi tai alempi alkyyliryhmä, alkoksikarbo-nyyliryhmä tai asyyliryhmä, minkä jälkeen haluttaessa, kun saadussa tuotteessa R2 on alkoksikarbonyyliryhmä tai asyyliryhmä, tämä suojaryhmä poistetaan ja kun R on alempi alkyyliryhmä saatu tuote hydrolysoidaan kaavan I mukaiseksi karbok-syylihapoksi.

Seuraava kaavio kuvaa tätä valmistusta.

R2-N(CH2)n 0 H \ n

.f COOR NH

xl y + x—f (m) N (II) CH3 1 >1 Y R1 0 0 F | F |

R2-N(CH2 )n \x.\ A ^COOR R2-N(CH2)n \ ACOOR

N J N (I') N 1 N

'A ^ ' A ·> 5 85697

Kaavan (I) mukaista yhdistettä syntetisoidaan antamalla kaavan (II) mukaisten yhdisteiden reagoida kaavan (III) mukaisten amiinien kanssa. Kuitenkin, siinä tapauksessa, että on suojaryhmä aminoryhmälle kaavassa (III), esim. on alkoksikarbonyyliryhmä, esim. metoksi-, etoksi-, t-butoksi-, bentsyylioksikarbonyyliryhmä ja asyyliryhmä, esim. formyyli, asetyyli, propionyyli, bentsoyyli ja sen tapainen, poistetaan suojaryhmä kaavan (I') yhdisteistä tavanomaisin menetelmin keksinnön mukaisen yhdisteen, jossa R^ on vetyatomi, aikaansaamiseksi. Siinä tapauksessa, että on alempi alkyyliryhmä kaavan (II) yhdisteessä hydrolysoidaan tuloksena saatu kaavan (I') yhdiste tavanomaisin menetelmin esterin muuttamiseksi karboksyylihapoksi, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on vetyatomi. Kaavan (III) mukaisten yhdisteiden reaktio suoritetaan edullisesti kuumentamalla seosta liuottimessa, kuten vedessä, alkoholeissa, asetonitriilissä, trimetyylifor-mamidissa (DMF), dimetyylisulfoksidissa (DMSO), heksametyyli-fosforitriamidissa, pyridiinissä, pikoliinissä ja sen tapaisissa tai ilman liuotinta. Reaktiolämpötila valitaan sopivasti huoneen lämpötilan ja 270°C:n väliltä, edullisesti huoneen lämpötilan ja l60°C:n väliltä. Tarkemmin sanottuna on edullista antaa kaavan (II) yhdisteiden reagoida 1-5 kertaa suuremman moolimäärän kanssa kaavan (III) yhdisteitä yhdestä useaan tuntiin huonelämpötilan ja 160°C:n välillä : edellä mainittujen liuottimien 2-10-kertaisessa tilavuudessa.

Tällöin on edullista käyttää happoa poistavia aineita, kuten trietyyliamiinia, di-atsabisykloemäksiä ja kaliumkarbonaattia. Yhdisteitä (I'), joissa R on alempi alkyyliryhmä, voidaan lisäksi hydrolysoida tavanomaisella menetelmällä. Tällainen hydrolysointi voidaan suorittaa 6 85£97 helposti alkaleilla kuten kaliumhydroksideilla tai hapoilla kuten rikkihapolla lämpötilassa, joka on huoneenlämpötilan ja liuottimien ja veden, veden ja alkoholien seoksen, veden ja etikkahapon seoksen jne kiehumispisteen välillä.

Haluttaessa voidaan kaavan (I) yhdisteet lisäksi muuntaa farmaseuttisesti hyväksyttäviksi ammoniumsuoloiksi tai karbok-syylihappometallisuoloiksi käsittelemällä hapolla tai alkalilla. Happo voi olla orgaaninen tai epäorgaaninen happo kuten esim. kloorivetyhappo, rikkihappo, fosforihappo, etikkahappo, metaa-nisulfonihappo, oksaalihappo ja maitohappo. Karboksyylihappo-metallisuolat voivat olla esim. natrium-, kalium-, magnesium-, kalsium-, aluminium-, seerium-, kromi-, koboltti-, kupari-, rauta-, sinkki-, platina- ja hopeasuoloja.

Kaavan (I) yhdistettä, sen hydraatteja ja suoloja voidaan käyttää lääkkeinä tavanomaisten farmaseuttisten valmisteiden muodossa, jotka voivat olla esim. tabletteja, kapseleja, jauheita, voiteita, peräpuikkoja, ruiskeita tai silmätippoja, jotka soveltuvat annettaviksi suun kautta, ruuansulatuskanavan ulkopuolisesta, ruuansulatuskanavan sisäpuolisesta tai paikallisesti.

Keksintöä selostetaan alla lähemmin esimerkkien avulla. Vertailuesimerkki I

3-aminometyyli-4-metyylipyrrolidini

Liuosta jossa oli 3-metyyli-2-okso-4-pyrrolidiinikarboksy-laattia /Chem. Pharm. Bull., 2_4, 1362 ( 1976]_/ (5 g) metano-lissa (100 ml) kyllästettynä ammoniakkikaasulla, jätettiin huoneen lämpötilaan neljäksi päiväksi. Jälkeenpäin reaktioseos väkevöitiin ja jäännös uudelleenkiteytettiin etanolista, jolloin saatiin 3-metvyli-2-okso-4-pyrrolidiinikarboksamidia (3,4 g), sp 169-171°C.

Analyysi (%) yhdisteelle CgH^g^C^, laskettu (Saatu): C, 50,70 (50,83), H, 7,09 (7,23); N, 19,70 (19,53).

7 85697

Suspensioon jossa oli litiumaluminiumhydridiä (2,5 g) tet-rahydrofuraanissa (3,23 g) lisättiin asteittain 3-metyyli-2-' okso-4-pyrrolidiinikarboksamidia (3,23 g) sekoittaen. Kahden tunnin sekoituksen jälkeen suspensio jäähdytettiin jää-vesihauteessa ja tähän lisättiin vettä (3,6 ml). Saatu sakka poistettiin suodattamalla ja liukenematon aines uutettiin kuumalla etanolilla (90 ml). Suodate ja uuttoliuos yhdistettiin ja väkevöitiin. Jäännös tislattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (1,75 g, kp 71-86 °C/29 mmHg.

Vertailuesimerkki 2 1 -bentsyyli-cis-3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyylipyrrolidiini

Suspensioon jossa oli natriumhycroksidia (2,30 g) absoluuttisessa dioksaanissa (100 ml) lisättiin tipoittain etyyli 3-me-tyvli-2-ckso-4-pyrrolidiinikarboksylaattia (13,63 g) sekoittaen huoneen lämpötilassa. 30 min. sekoituksen jälkeen lisättiin reaktioseokseen bentsyylibromidia (16,42 g) 20 min. aikana, sekoitettiin sitten kaksi tuntia ja annettiin seista yön yli huoneen lämpötilassa. Reaktioseos kaadettiin jää-ve-teen (100 ml) ja uutettiin kloroformilla, pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin. Jäännös puhdistettiin tyhjötislaamalla, jolloin saatiin etyyli 1 -bentsyyli-3-metyyli-2-okso-4-pyrrolidiinikarboksvlaattaa (16,86 c), kp 155-l85°C/2 mmKg.

Seosta jossa oli etyyli 1-bentsyyli-3-metyyli-2-okso-4-pyrrolidiinikarboksvlaattia (16,0 c) , 80 %:sta hydratsiini-hydraattia (16 ml) ja etanolia (16 ml) refluksoitiin 5 tuntia sekoittaen ja väkevöitiin sitten. Poistamalla hydrat-siini ylimäärä jäännöksestä etanolin ja bentsesnin atsio-tropilla, saatiin 1-bentsyyli-3-metyyli-2-okso-4-pvrroli-diinikarboksyylihapcohvdratsidiä (16,3S g) värittömänä vis-koottisena öljynä.

Tämän öljyn ja jääveden (100 ml) seokseen, jossa oli väkevää kloorivetvhappoa (6,5 ml) ja eetteriä (100 ml), lisättiin tipoittain liuosta, jossa oli natr iumni.tr i ittiä 14.92 g 8 85697 vedessä (10 ml) sekoittaen 5 min. 0-3°C:ssa. 20 min. sekoituksen jälkeen erotettiin orgaaninen kerros, pestiin jää-vedellä ja sen jälkeen jäähdytetyllä kylläisellä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä nat-riumsulfaatilla ja väkevöitiin lämpötilassa, joka oli huoneen lämpötilan alapuolella. Saatuun jäännökseen lisättiin t-butanolia (100 ml) ja refluksoitiin 6 tuntia. Reaktioseos väkevöitiin, jolloin saatiin 1-bentsyyli-4-t-butoksikarbo-nyyliamino-3-metvyli-2-oksopyrrolidiniä (14,96 g).

Suspensioon jossa oli litiumaluminiumhydridiä (3,61 g) absoluuttisessa eetterissä (150 ml) lisättiin tipoittain liuosta, jossa oli 1-bentsyyli-4-butoksikarbonyyliamino-3-metyyli-2-oksopyrrolidiniä (14,46 g) absoluuttisessa eetterissä (100 ml) sekoittaen tunnin lämpötilassa, joka oli välillä -5 ^ 3°C. Tunnin sekoituksen jälkeen 0°C:ssa reaktioseos kaadettiin jää-veteen ja lisättiin natriumhydroksi-din 50 °6:sta vesiliuosta, orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä ja sen jälkeen kylläisellä natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin. Jäännös uudelleenkiteytettiin asetonitrii-listä, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (4,87 g) värittöminä prismoina, sp 134-140°C.

Analyysi (%) yhdisteelle C-|7H26N2°2' laskettu (Saatu): C, 70,31 (.70,61); H, 9,03 (9,08); N, 9,64 (9,89).

NMR (6 CDC13:ssa): 1,08 (3H, c, J=6 HZ, -CH3), 1,43 (9H, s, H>—-c >C:- -C(CHJ ,), 1,87 (1H, m, -N I ), 2,0 (1H, Hm, -/Π'η ), 2,61 3 3 7—fCz' 1 (2H, d, J=5,5 Hz, -N ), 2,96 (1H, m, -N ), 3,55 (2H, s, -· >/ 3,70 (1H' m' -N L· )' 4,89 (1H, br, d, -NH-COO-) , 7,2c N >N; (5H, m, -yK H ) - h' h 9 85697

Vertailuesimerkki 3 cis-3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyylipyrrolidini

Suspensiota jossa oli 1-bentsyyli-cis-3-t-butoksikarbonyy- liamino-4-metyylipyrrolidiniä (5,37 g) ja 10 %:sta palladium- hiilellä (2,70 g) etanolissa (50 ml) ravistettiin vedyn 2 absorboimiseksi korotetussa paineessa (100 kg/crrt ) huoneen lämpötilassa 22 tuntia. Kalyvtti poistettiin suodattamalla ja suodate haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (3,25 g). Yhdiste tuli vähitellen kiinteäksi huoneen lämpötilassa.

NMR (6 CDC13:ssa): 1,07 (3H, d, J=7,0 Hz, -CH3), 1,45 (9H, s. -C(CH3)3). 1.68-2.15 (1H. m, /H ). 2.30 UH. s, ΗκΓ^ ), 2.50 (1H, dd, J=10.8, 7.5 Hz. ). 2.71 (1H. dd, J = 11.2, 5.8 —r*g: —·<'· j—->wc

Hz, -n ), 3.18 (1H, dd, J=10.4, 7.0 Hz, -n I ), 3.22 {1H, V-*C- -r-U: HJ-'-Ci_ dd, J=ll.4, 6.6 Hz, -n | ), 3.42-3.78 (1H, m, P ), 4.60- j-«MH- N-‘C'~ ^-Le l 4.92 (1H, br. -m | ).

Vertailuesimerkki 4 1-bentsyyli-trans-3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyylipvrro-lidini

Liuokseen jossa oli bentsyyliaminia (75 g) etanolissa (150 ml) lisättiin etyylimetakrylaattia (240 g) ja refluksoitiin 23 tuntia. Reaktioseos haihdutettiin ja saatu jäännös tislattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin N-(2-etoksi-karbonyylipropyyli)bentsyyliaminia (93,3 g) värittömänä nesteenä, kp 122°C/4 mmHg.

Tämän nesteen liuokseen etanolissa (140 ml) lisättiin etyyli-btomiasetaattia (96,5 g) ja refluksoitiin 2 tuntia. Jäähdytyksen jälkeen kaadettiin reaktioseos jää-veteen (500 ml) ja tehtiin emäksiseksi natriumhydroksidin 40 %:sella vesi-liuoksella ja uutettiin bentseenillä. Orgaaninen kerros pestiin q t; < 9 7 10 b^;/ natriumhydroksidin laimealla vesiliuoksella ja sitten vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin.

Jäännös tislattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin N-etoksikarbonyylimetyyli-N-(2-etoksikarbonyylipropyyli)-bentsyyliamiinia (114,4 g) keltaisen nesteen muodossa, kp 147°C/3 mmHg.

Tämän öljyn (111,2 g) liuosta absoluuttisessa bentseenissä (100 ml) lisättiin tipoittain suspensioon, jossa oli natrium-etoksidia (27,5 g) absoluuttisessa bentseenissä (150 ml) 30 minuuttia 10°C:ssa. 1,5 tunnin sekoituksen jälkeen samassa lämpötilassa uutettiin reaktioseos väkevällä kloorivetyhapolla (100 ml). Kloorivetyhappokerros refluksoitiin 28 tuntia ja liukenematon aines poistettiin suodattamalla ja suodatin väkevöitiin. Saatuun jäännökseen lisättiin vettä (300 ml) ja tehtiin emäksiseksi natriumhydroksidin 40 %:sella vesiliuoksella (pH 10), ja uutettiin vedellä. Orgaaninen kerros pestiin nat-riumkloridi.n kylläisellä vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin. Jäännös tislattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1-bentsyyli-4-metyyli- 3-pyrrolidonia (41,8 g) keltaisena nesteenä, kp 104-107°C.

Liuokseen jossa oli hydroksyyliamiinihycrokloridia (73,3 g) vedessä (300 ml) lisättiin tipoittain tämän nesteen (41,8 g) liuosta etanolissa (300 ml) 20-25°C:ssa 30 minuuttia. Natriumbikarbonaattia (63,2 c) lisättiin tähän seokseen ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa. Reaktioseoksen annettiin seistä yön yli 5°C:ssa, sen jälkeen lisättiin 150 ml vettä seokseen ja uutettiin dikloorimetaanilla. Orgaaninen kerros pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin, jolloin saatiin 1-bentsyyli-3-hydroksi-imino-4~metyylipyrro-lidiniä (45,7 g) värittömänä kiintoaineena, sp 85-94°C.

Tämän kiintoaineen (40 g) ja Raney-nikkelin (W7, -12,5 g) suspensiota metanolissa sisältäen ammoniakkia ravistettiin

O

vedyn kanssa korotetussa paineessa (80 kg/cm ) huoneen lämpötilassa 12 tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodate haihdutettiin. Saatu jäännös tislattiin alennetussa 1 1 85 697 paineessa, jolloin saatiin 3-amino-1-bentsvyli-4-netvyli-pyrrolidiniä (31,0 g) värittömänä nesteenä, kp 100-104°C/2 mmHg.

Tätä nestettä (10 g) kaadettiin avosuiseen astiaan ja sekoitettiin ilman kanssa huoneen lämpötilassa. Saatuun sakkaan lisättiin eetteriä (50 ml) ja otettiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin trans-3-amino-1-bentsyyli-4-metyylipyrroli-dinihydrokarbonaattia (4,1 g), sp 74-80°C.

Liuokseen jossa oli trans-3-amino-1-bentsvyli-4-metyylipvrro-lidinihvdrokarbonaattia (4,0 g) ja trietvyliaminia (3,2 g) dioksaanin 50 %:ssa vesiliuoksessa (50 ml) lisättiin t-butck-sikarbonyylioksi-imino-2-fenyyliasetonitriiliä (Boc-ON, 5,8 g) sekoittaen huoneen lämpötilassa. 3 tunnin sekoituksen jälkeen kaadettiin reaktioseos jää-veteen ja uutettiin eetterillä. Orgaaninen kerros pestiin natriunhydroksidin 1M vesi-liuoksella ja sen jälkeen natriumkloridin kylläisellä vesi-liuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin. Jäännös puhdistettiin piigeelikolonnikromatogra-fialla eluoiden bentseenillä ja kloroformi:metanoli:ammoniakin väkevällä vesiliuoksella (10:10:1), jolloin saatiin otsikon yhdistettä (5,24 g). Uudelleenkiteyttämällä heksaanista saatiin värittömiä neuloja (5,04 g), sp 79-30°C.

Analyysi (%) yhdisteelle laskettu (Saatu): ' 6' C, 70,31 (70,26); K, 9,02 (8,90); N, 9,65 (9,69).

NMR (<5 CDC13: ssa) : 0,9 3 (3 H, d, J = 6,6 Hz, -CH3) , 1,4 4 (9 H, s, ' ' -C(CH,),), 2.06-2 . 4 9 (3H, m, -n I ), 2.57-2.92 ( 2H, m, -M )- .··*. 4 4 \ L* V— 3.57 ( 2 H, s, -Ch^5> ). 4·13 (1H- '>' 4·75 (1H' br' _NK' COO-), 7.27 ( 5H, s, Ό"*

H* M

1 2 85697

Vertalluesimerkki 5 trans-3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyylipyrrolidini

Suspensioon jossa oli 1-bentsyyli-trans-3-t-butoksikarbo-nyyliamino-4-metyylipyrrolidiniä (4,8 g) ja 10 %:sta palladium-hiilellä (1,8 g) etanolissa (40 ml) ravistettiin vedyllä korotetussa paineessa (100 kg/cm^) 50-70°C:ssa 6,5 tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodate haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (3,09 g) ruskeana öljynä.

Tämä öljy tuli vähitellen kiinteäksi huoneen lämpötilassa.

NMR (5 CDCl3:ssa): 0,97 (3H, d, J=6,6 Kz, -CH3), 1,45 (9H, s, -C( CH3 )3), 2.16 ( 1H, hr, s, _I ), 2.22^ (1H, m, .>4 |* ), 2.3 9-2.79 (2H, m, -M j ), 3.06-3.34 (2H, m, .yf j" ), 4.10 (1R, m» -N ["*'), 4*67 ( 1H., br, -NH-COO-). H< '

Esimerkki 1 7-(3-aminometyyli-4-metyyli-1-pyrrolidinvyli)-8-kloori-1-syklopropyyli-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarbok-syylihappo

Seosta jossa oli 8-kloori-1-syklopropyyli-6,7-difluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyvlihappoa (0,6 g), vedetöntä asetonitriiliä (5 ml), 3-aminometyyli-4-metyylipvrro-lidiniä (0,27 g) ja 1,8-diatsabisyklo/S", 4 ,£7“7-undekeeniä (DBU; 0,3 g) refluksoitiin tunnin ajan ja sekoitettiin sen jälkeen huoneen lämpötilassa 7 tuntia. Saatu sakka otettiin talteen suodattamalla ja uudelleenkiteytettiin kloroformi-• : metanoli-väkevöidystä ammoniakin vesiliuoksesta (10:10:1), ----- jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,26 g) värittöminä . prismoina, sp 235-238°C.

Analyysi (¾) yhdisteelle C19H21C1FN303iH20, laskettu (Saatu): C, 55,41 (55,46); H, 5,63 (5,73); N, 10,20 (10,19).

13 85697

Esimerkki 2 7-(3-aminometyyli-4-metyyli-l-pyrrolidinyyli)-1-syklopropyy-li-6,8-difluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyyli-happo

Seosta, jossa oli l-syklopropyyli-6,7,8-trifluori-1,4-di-hydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappo (0,6 g), vedetöntä asetonitriiliä (5 ml), 3-aminometyyli-4-metyylipyrrolidii-niä (0,29 g) ja DBU:ta (0,33 g) refluksoitiin tunnin ajan ja sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 2 tuntia ja annettiin seistä yön yli. Saatu sakka otettiin talteen suodattamalla ja uudelleen kiteytettiin kloroformi-metano-li-väkevöidystä ammoniakkivesiliuoksesta (10:10:1), jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,45 g) värittöminä prismoina, sp. 249-252,5°C.

Analyysi (%) yhdisteelle C19H21F2H3O3.H2O, laskettu (Saatu): C, 57,72 (57,41); H, 5,86 (5,70); 10,63 (10,57).

Esimerkki 3 7- (3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyyli-l-pyrrolidinyyli)- 8- kloori-l-syklopropyyli-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappo

Seosta, jossa oli 8-kloori-l-syklopropyyli-6,7-difluori-1,4- 85697 14 dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappoa (0,5 g), vedetöntä asetonitriiliä (5 ml), 3-t-butoksikarbonyyliami.no- 4-metyylipyrrolidin (0,5 g) ja DBU:ta (0,25 g) refluksoi-tiin tunnin. Reaktioseos väkevöitiin alennetussa paineessa, saatuun jäännökseen lisättiin asetonitriili-eetteriä (1:1) sen kiteyttämiseksi ja sakka otettiin talteen suodattamalla. Tämä sakka uudelleenkiteytettiin dikloorimetaani-metanolista, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,4 g) vaalean keltaisena jauheena, sp 213-215°C.

Analyysi (%) yhdisteelle C22H27C^^3°5' las'<ettu (Saatu): C, 57,56 (57,66); H, 5,67 (5,70); N, 8,76 (8,81).

Esimerkki 4 7-(3-amino-4-metyyli-1-pvrrolidinyyli)-8-kloori-1-syklopro-pyyli-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksvylihappc 7-(3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metvyli-1-pyrrolidinyyli)-S -kloori-1-svklopropyyli-6-fluori-1,4-dihvdro-4-ckso-3-kino-liinikarboksiilihappo (0,35 g) liuotettiin metanoliin (5 ml) ja väkevän kloorivetyhapon (5 ml) seokseen ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Sen jälkeen reaktioseos väkevöitiin alennetussa paineessa, saatu .jäännös liuotettiin etanoliin (10 ml) ja neutraloitiin ammoniakin väkevällä vesi-. .. liuoksella. Saatu sakka otettiin talteen suodattamalla, pes tiin vedellä ja uudelleenkiteytettiin kloroformi-metane1 i -ammoniakin väkevästä vesiliuoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,07 g) vaalean keltaisena jauheena, sp 231-234'WC.

Analvysi (¾) yhdisteelle C.aH.nClFb\0^, laskettu (Saatu): 1819 j 3 C, 56,92 (56,87); H, 5,04 (5,17); N, 11,06 (11,03).

Esimerkki 5 7-/3-(N-asetyvli-N-metyyliamino)-4-metyvli-1-pyrrolidinyvliT- 1-syklopropvyli-6,8-difluori-1,4-cihydro-4-okso-3-kinoliini---- karboksyvlihappo

Seosta jossa oli 1-svklopropyyli-6,7,8-trifluori-1,4-dihvdro- 4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappoa (0,5 g), vedetöntä aseto- 15 85597 nitriiliä (5 ml), 3-(N-asetyyli-N-metyyliamino)-4-metyyli-pyrrolidiniä (0,42 g) ja DBU:ta (0,27 g) refluksoitiin tunnin ajan ja annettiin seistä yön yli. Saatu sakka otettiin talteen suodattamalla ja pestiin asetonitriili-eetterillä, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,56 g) vaalean keltaisena jauheena.

OH

IRv^?5 cm"1: 1730 (C=0), 1660 (C=0 ), 1630 (C=0).

MAX

Esimerkki 6 1-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-dihydro-7-(3-metyyliamino- 4-metyyli-1-pyrrolidinyyli)-4-okso-3-kinoliinikarboksyyli-happohydrokloridi 7-/3-(N-asetyyli-N-metyyliamino)-4-metvyli-1-pyrrolidinyyli7~ syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-dihvdro-4-okso-3-kinoliini-karboksyylihappoa (0,56 g) liuotettiin kloorivetyhapon 20 %:seen vesiliuokseen (5 ml) ja refluksoitiin 2 tuntia.

Sen jälkeen reaktioseos väkevöitiin alennetussa paineessa, saatuun jäännökseen lisättiin etanolia (10 ml) ja kiteytettiin jäähdyttäen. Saatu sakka otettiin talteen suodattamalla ja . uudelleenkiteytettiin metanolista, jolloin saatiin otsikon yhdistettä vaalean keltaisena jauheena, sp 242-246°C.

Analyysi (%) yhdisteelle iF2N3°3 ‘ HC1 · 2 ^0: laskettu (Saatu): C, 50,73 (50,57); H, 5,83 (5,73); N, 9,34 (9,40).

Esimerkki 7 7-(3-t-butoksikarbonvyliamino-4-metyyli-1-pyrrolidinyyli)- 1-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-dihvdro-4-okso-3-kinoliini-·"* karboksyylihappo

Seosta jossa oli 1-syklopropyyli-6,7,8-trifluori-1,4-dihydro- 4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappoa (0,5 g), vedetöntä ase-tonitriiliä (5 ml), 3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyylipyrro-lidiniä (0,53 g) ja DBU:ta (0,27 g) refluksoitiin tunnin ajan.

ie 85697

Pakastimessa suoritetun jäähdytyksen jälkeen otettiin sakka talteen suodattamalla ja pestiin asetonitriilillä ja eetterillä peräkkäin, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,32 g) vaalean keltaisena jauheena, sp 230-231°C.

oc(ch3)3 KRf — 1 IRVMAX Cm '* 3350 (NH) ' 1700 (-c=0 )' 1630 (C=0)

Esimerkki 8 7-(3-amino-4-metvyli-1-pyrrolidinyyli)-1-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyvlihappo-hydrokloridi 7-(3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyyli-1-pyrrolidinyyli)- 1-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliini-karboksyylihappoa (0,27 g) liuotettiin metanoliin (5 ml) ja väkevöidyn kloorivetyhapon (5 ml) seokseen ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Sen jälkeen reaktioseos väkevöitiin alennetussa paineessa, saatu jäännös liuotettiin etanoliin (10 ml) ja kiteytettiin jäähdyttäen. Saatu sakka uudelleenkiteytettiin metanolista, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,14 g) vaalean keltaisena jauheena, sp 272-274°C.

·' Analyysi (%) yhdisteelle C1 gH1 9F2N303 . HC1.1 /2 H20: laskettu (Saatu): C, 52,88 (52,66); H, 5,18 (5,16); N, 10,28 (10,20).

Esimerkki 9 '' ' 8-kloori-1-syklopropyyli-6-fluori-1,4-dihydro-7-(3-metvyli- aminometyyli-4-metyyli-1-pyrrolidinyyli)-4-okso-3-kinoliini-' karboksyylihappo

Seosta jossa oli 8-kloori-1-syklopropyyli-6,7-difluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksvylihappoa (0,5 g), vedetöntä asetonitriiliä (5 ml), 3-metvyliaminometyyli-4-metyyli-pyrrolidiniä (0,32 g) ja DBU:ta (0,25 g) refluksoitiin tunnin **·: ja annettiin seistä yön yli huoneen lämpötilassa. Saatu sakka otettiin talteen suodattamalla, pestiin asetonitriilillä ja eetterillä peräkkäin ja uudelleenkiteytettiin kloroformi- 17 85 £97 metanoli-ammoniakkiväkevästä vesiliuoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,31 g) vaalean keltaisena jauheena, sp 253-255°C.

Analyysi (%) yhdisteelle C2oH23ClFN3°3* 1HjO, laskettu (Saatu): C, 58,25 (58,36); H, 5,74 (5,96); N, 10,19 (10,10).

Esimerkki 10 1-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-dihydro-7-(3-metyvliamino-metyyli-4-metyyli-1-pyrrolidinyyli)-4-okso-3-kinoliinikar-boksyylihappo

Seosta jossa oli 1-syklopropyyli-6,7,8-trifluori-1,4-dihydro- 4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappoa (0,5 g), vedetöntä ase-tonitriiliä (5 ml), 3-metyyliaminometyyli-4-metyylipyrrolidii-niä (0,34 g) ja DBU:ta (0,27 g) refluksoitiin tunnin ja annettiin seistä yön yli huoneen lämpötilassa. Saatu sakka otettiin talteen suodattamalla, pestiin asetonitriilillä ja sen jälkeen eetterillä ja uudelleenkiteytettiin kloroformi-metanoli-ammo-niakin väkevöidystä vesiliuoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,41 g) valkoisena jauheena, sp 252-254°C.

Analyysi (%) yhdisteelle C20H23F2N3°3*3/4 H20/ Las^ettu .;· (Saanto): C, 59,38 (59,14); H, 6,10 (6,09); N, 10,39 ( 10,34).

Esimerkki 1 1 8-kloori-1-syklopropyvli-7-(3-etyyliaminometyyli-4-metvyli- 1-pyrrolidinyyli)-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikar-boksyylihappo ‘ ' Seosta jossa oli 8-kloori-1-syklopropyyli-6,7-difluori-1,4- dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksvylihappoa (0,5 g), vedetöntä asetonitriiliä (5 ml), 3-etyyliaminometyvli-4-metyyli-pyrrolidiniä (0,36 g) ja DBU:ta (0,25 g) refluksoitiin 2 tuntia ja annettiin seistä yön yli huoneen lämpötilassa.

Saatu sakka otettiin talteen suodattamalla, pestiin asetonitriilillä ja sen jälkeen eetterillä ja uudelleenkiteytettiin ie 85697 kloroformi-metanoli-ammoniakin väkevöidystä vesiliuoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,56 g) vaalean keltaisena jauheena, sp 254-257°C.

Analyysi (%) yhdisteelle C2-j H25C^FN3°3 ·3/4 H20, Laskettu (Saanto): C, 57,92 (57,75); H, 6,13 (6,03); N, 9,65 (9,66).

Esimerkki 1 2 1-syklopropyyli-7-(3-etyyliaminometyyli-4-metyyli-1-pyrro-lidinvyli)-6,8-difluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikar-boksyylihappo

Seosta jossa oli 1-syklopropyyli-6,7,8-trifluori-1,4-dihydro- 4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappo (0,5 g), vedetöntä aseto-nitriiliä (5 ml), 3-etyyliaminometyyli-4-metvylipyrrolidiniä (0,38 g) ja DBU:ta (0,27 g) refluksoitiin tunnin ja annettiin seistä yön yli huoneen lämpötilassa. Saatu sakka otettiin talteen suodattamalla, pestiin asetonitriilillä ja sen jälkeen eetterillä ja uudelleenkiteytettiin kloroformi-metanoli-ammo-niakin väkevästä vesiliuoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,47 g).vaalean keltaisena jauheena, sp 224-226°C.

• Analyysi (%) yhdisteelle C2iH25F2N3°3‘1H20, Laskettu (Saanto): C, 61,53 (61,81); H, 6,27 (6,31); N, 10,25 (10,31).

Esimerkki 13 . . 7-(cis-3-amino-4-metyvli-1-pyrrolicinyyli)-8-kloori-1-syklo- propyyli-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyy-lihappo

Seosta jossa oli 8-kloori-1-syklopropyyli-6,7-difluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyvlihappoa (1,8 g), vede-: töntä asetonitriiliä (IS ml), cis-3-t-butoksikarbonyyliamino- 4-metyylipvrrolidiniä (vertailuesimerkki 3; 1,81 g) ja DBU:ta (0,90 g) refluksoitiin tunnin. Saatu seos väkevöitiin alennetussa paineessa, saatu jäännös liuotettiin kloroformiin ja pestiin sitruunahapon 10 %:sella vesiliuoksella. Kloroformiker-ros pestiin edelleen natriumkloridin kylläisellä vesiliuoksella, 19 05697 kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alennetussa paineessa. Saatu jäännös liuotettiin kuumaan metanoliin (25 ml) ja, jäähdytyksen jälkeen, saatu sakka otettiin talteen suodattamallaJ Sitten tämä sakka suspen-doitiin metanoliin (18 ml), tähän liuokseen lisättiin väkevää kloorivetyhappoa (18 ml) tipoittain ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa 15 minuuttia. Reaktioseos neutraloitiin ammoniakin väkevällä vesiliuoksella, jäähdytyksen jälkeen saatu sakka otettiin talteen suodattamalla ja pestiin vedellä, metanolilla ja sitten eetterillä otsikon yhditeeksi (1,67 g) joka saatiin valkoisena jauheena, sp 240-243°C (hajoaa).

Analyysi {%) yhdisteelle gH^^ClFN^O^, Laskettu (Saanto): C, 56,92 (57,13); H, 5,04 (5,06); N, 11,06 (10,73).

Esimerkki 14 7-(trans-3-amino-4-metyyli-1-pyrrolidinyyli)-8-kloori-1- syklopropyyli-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarbok-syylihappo

Seosta jossa oli 8-kloori-1-syklopropyyli-6,7-difluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappoa (2,2 g), vedetöntä asetonitriiliä (22 ml), trans-3-t-butoksikarbonyyli-amino-4-metyylipyrroliöiniä (vertailuesimerkki 5; 2,4 g) ja DBUrta (1,22 g) refluksoitiin 5 tuntia. Reaktioseos väkevöi-tiin alennetussa paineessa, saatu jäännös liuotettiin kloro-' formiin ja pestiin sitruunahapon 10 %:sella vesiliuoksella.

. Kloroformikerros pestiin edelleen natriumkloridin kylläisellä vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alennetussa paineessa. Saatu jäännös liuotet-_ - tiin kuumaan metanoliin (20 ml) ja, jäähdytyksen jälkeen, saatu sakka otettiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 7-(trans-3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyyli-1-pyrrolidi-nyyli)-8-kloori-1-syklopropyyli-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso- 3-kinoliinikarboksyvlihappoa (3,62 g) keltaisina neuloina, : sp 210-213°C (hajoaa).

20 8 5 597

Analyysi (%) yhdisteelle 0^3^2 7^^3^5, Laskettu (Saanto): C, 57,56 (57,33); H, 5,67 (5,61); N, 8,76 (8,76).

Sen jälkeen tämä sakka (3,55 g) suspendoitiin metanoliin (25 ml), tähän liuokseen lisättiin väkevää kloorivetyhappoa (25 ml) tipoittain ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa tunti. Reaktioseos neutraloitiin ammoniakin väkevällä vesi-liuoksella jäähdytyksen jälkeen, saatu sakka otettiin talteen suodattamalla ja pestiin vedellä, metanolilla ja sitten eetterillä, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (2,19 g) valkoisen keltaisena jauheena, sp 183-187°C.

Analyysi (%) yhdisteelle gH^gClFM303.1/4 H20, Laskettu (Saatu): C, 56,25 (56,47); H, 5,11 (4,95); N, 10,93 (10,97).

Esimerkki 15 7-(trans-3-amino-4-metyyli-1-pyrrolidinvyli)-1-syklopropyyli- 6,8-difluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappo

Seosta jossa oli 1-syklopropyyli-6,7,8-trifluori-1,4-dihyd-ro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappoa (0,4 g), vedetöntä asetonitriiliä (4 ml), trans-3-t-butoksikarbonvyliamino-3-metyylipyrrolidiniä (0,43 g) ja DBU:ta (0,22 g) refluksoitiin - ' tunnin. Jäähdytyksen jälkeen saatu sakka otettiin talteen suodattamalla ja pestiin asetonitriilillä ja sitten etanolilla, ; "·- jolloin saatiin 7-(trans-3-t-butoksikarbonvyliamino-4-metyy- V-' li-1-pyrrolidinyyli)-1-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-dihydro- 4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappoa (=,34 g) valkoisen kel-•V- täisenä jauheena, sp 237-240°C (hajoaa).

Analyysi (%) yhdisteelle C23H27F2N3°5' Laskettu (Saatu): C, 59,60 (59,31 ); H, 5,87 (5,81); N, 9,07 (9,01).

Sitten tämä sakka (0,4 1 g) suspendoitiin tr ifluorietikka-happoon (5 ml) ja sekoitettiin huoneen· lämpötilassa 2 tuntia, r Reaktioseos väkevöitiin alennetussa paineessa, tähän jäännök- ....: seen lisättiin jää-vettä (10 ml) ja liuotettiin natriumhydrok- sidin 1N vesiliuokseen. Liukenemattomien aineiden poistamisen 21 6 £ £ 9 7 jälkeen suodattamalla, saatu liuos neutraloitiin etikkaha-.polla. Saatu sakka otettiin talteen suodattamalla ja uudel-leenkiteytettiin metanoli-kloroformista, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,15 g) valkoisen keltaisena jauheena, sp 257-260°C.

Analyysi (%) yhdisteelle 8^19^2^^* 3/4 ^0, Laskettu (Saanto): C, 57,37 (57,26); H, 5,48 (5,47); N, 11,14 (11,06).

Esimerkki 16 7-(cis-3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyyli-1-pyrrolidinyy-li)-1-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-dihvdro-4-okso-3-kino-liinikarboksyylihappo

Seosta jossa oli 1-syklopropyyli-6,7,8-trifluori-1,4-dihyd-ro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappoa (0,5 g), vedetöntä asetonitriiliä (6 ml), cis-3-t-butoksikarbonvyliamino-4-me-tyylipyrrolidiniä (0,53 g) ja DBU:ta (0,27 g) refluksoitiin tunnin ja saatu sakka otettiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,72 g) vaalean kellertävänä jauheena, sp 229-230°C.

Analyysi (%) yhdisteelle C23H27F2N3°5' Laskettu (Saatu): ;’·· c, 59,60 (59,47); N, 5,87 (5,85); N, 9,07 (9,01).

: ·.. Esimerkki 1 7 ·.! 7- (cis-3-amino-4-metyyli-1-pyrrolidinvyli) -1-syklopropyyli- • 6,8-difluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliini-karboksyyli- happohvdrokloridi ____: Seosta jossa oli 7-(cis-3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyy- -· li-1-pyrrolidinyyli)-1-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-di- hydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappoa (0,3 g) etanolissa (5 ml) ja etanolipitoista kloorivetyä (6 ml) sekoitettiin 2 tuntia huoneen lämpötilassa ja väkevöitiin sitten.

;Jäännökseen lisättiin etanolia ja saatu sakka otettiin tal- teen suodattamalla ja pestiin etanolilla, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,21 g) vaalean kellertävänä jauheena, P e. * 9 7 22 ' - v ' f sp 274-275°C (hajoaa).

Analyysi (%) yhdisteelle gH1gF2N303.HC1.2/3 H20, Laskettu (Saatu): C 52,49 (52,54); H, 5,22 (5,13; N, 10,20 (10,09).

Esimerkki 18 7-(cis-3-amino-4-metyyli-1-pyrrolidinyyli)-8-bromi-1-syklopropyyli-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarbok-syylihappo

Seosta jossa oli 8-bromi-1-syklopropyyli-6,7-difluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappoa (0,19 g), cis- 3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyylipyrrolidiniä (0,14 g), DBUita (0,095 g) ja vedetöntä asetonitriiliä (5 ml) refluk-soitiin 2 tuntia ja väkevöitiin sitten. Saatu jäännös liuotettiin kloroformiin (70 ml), pestiin sitruunahapon 10 %:sella vesiliuoksella ja sitten vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin sitten. Saatuun öljymäiseen jäännökseen lisättiin kuumaa metanolia sen kiteyttämiseksi ja jäähdytettiin. Saatu sakka otettiin talteen suodattamalla, lisättiin väkevän kloorivetyhapon-metanolin (1:1, 3 ml) seokseen ja sekoitettiin 2,5 tuntia korotetussa lämpötilassa. Reaktioseos neutraloitiin ammoniakin väkevällä vesiliuoksella, saatu sakka otettiin talteen suodattamalla, pestiin jää-ve-dellä ja uudelleenkitevtettiin dikloorimetaani-metanoli-ammoniakin väkevästä vesiliuoksesta (10:10:1), jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,06 g) keltaisina prismoina, sp 225-226,5°C (hajoaa).

Analyysi (%) yhdisteelle C^gH^gBrFN^O^, Laskettu (Saanto): C, 50,96 (51,05); H, 4,51 (4,71); N, 9,90 (9,98).

23 8 5 697

Esimerkki 19 7-(trans-3-amino-4-metyyli-l-pyrrolidinyyli)-8-bromi-l-syklopropyyli-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikar-boksyylihappo

Seosta, jossa oli 8-bromi-l-syklopropyyli-6,7-difluori- 1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappoa (0,11 g), trans-3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyylipyrrolidiiniä (0,082 g), DBUrta (0,054 g) ja vedetöntä asetonitriiliä (5 ml) refluksoitiin 1,5 tuntia ja väkevöitiin sitten.

Saatu sakka liuotettiin kloroformiin (50 ml) ja pestiin sitruunahapon 10-%:isella vesiliuoksella ja sen jälkeen vedellä. Orgaaninen kerros väkevöitiin alennetussa paineessa ja öljyiseen jäännökseen lisättiin metanolia sen kiteyt-tämiseksi. Saatu sakka otettiin talteen suodattamalla, pestiin jäähdytetyllä metanolilla ja tämä lisättiin väkevään kloorivetyhappo-metanoliin (1:1, 2 ml) ja sekoitettiin lunnin huonoon lämpötilassa. Reaktioseos neutraloitiin sitten väkevällä ammoniakin vesiliuoksella, väkevöitiin alennetussa paineessa ja saatu sakka puhdistettiin piigeeli-kolonnikromatografiällä (kloroformismetanoli:ammoniakin väkevä vesiliuos = 20:6:1) ja uudelleenkiteytettiin sitten dikloorimetaaniin-metanolista (1:1), jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,04 g) vaalean keltaisena jauheena, sp. 186-190°C (hajoaa).

Analyysi (%) yhdisteelle CigHigBrF^Oj, laskettu (Saatu): C, 50,96 (50,91); H, 4,51 (4,60); N, 9,90 (9,72).

Esimerkki 20 7-(cis-3-amino-4-metyyli-l-pyrrolidinyyli)-1-syklopropyy-li-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappo 24 8 5 597

Seosta, jossa oli 7-kloori-l-syklopropyyli-6-fluori- 1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihappoa (0,7 g), cis-3-t-butoksikarbonyyliamino-4-metyylipyrrolidiiniä (0,62 g), DBU:ta (0,43 g) ja vedetöntä asetonitriiliä (30 ml) refluksoitiin 52 tuntia. Jäähdytyksen jälkeen saatu sakka otettiin talteen suodattamalla, pestiin jäähdytetyllä asetonitriilillä ja tämä lisättiin väkevän kloorivetyhapon ja metanolin seokseen (1:1, 5 ml) ja sekoitettiin 40 minuuttia korotetussa lämpötilassa. Reak-tioseos otettiin talteen suodattamalla, pestiin jäähdytetyllä vedellä riittävästi ja uudelleenkiteytettiin kloroformi -metanoli-ammoniakin väkevästä vesiliuoksesta (10:10:3), jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,076 g) vaalean keltaisina prismoina, sp. 268-270°C (hajoaa).

Analyysi (%) yhdisteelle CigH20FN3O3.2/3 H2O, laskettu (Saatu): C, 60,59 (60,50); H, 6,02 (6,05); N, 11,76 (11,61).

Seuraavaksi arvioitiin esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden bakteerien vastaista vaikutusta siprofloksat-siinin (CPFX) vastaavaan vaikutukseen, jota pidetään kaikkein parhaimpana yhdisteenä alan kirjallisuudessa.

.' Esimerkki 1 Bakteerien vastainen kirjo

Pienimmät inhiboivat väkevyydet (MIC) määritettiin ·.: Japan Society of Chemotherapyn suosittelemalla menetel- - ·*· mällä. Tulokset on esitetty taulukossa 1.

25 85 697

Taulukko' 1-1_ Bakteerinvastainen .vaikutus- in vitro (stardardlkantoja)_ MIC (yg/ml)

Organismi (106 solua/ml) Gram-—...........

_Isim. 1 Isiin. 2 Esim. 4 Esim. 8 Esim. 9

Bacillus subcilis PCI 219__+ 0.0125 O.OI25 O.OL25 0.025 0.0125

Staphylococcus aureus 209 P__+__0.0125 0.025 0.025 0.05__0.05 S. aureus Smith _.__+__0.0125 0.025 0.05 0.05__0.05 | S. aureus IIP 670 (Teraiima)__+ 0.0251 0.025 0.05 O.IC 0.0125 ! S. GPidermidis IIP 866__f 0.0125 0.025 0.05 0.10 0.05

Streptococcus pyogenes (S-8)__+__0,0125 0.05__0.10__I__0-05 S. pyogenes IIP 692_.__+__0.025 0.05__0.10__~__0·05 S. pneumoniae IIP 552__+__0.0125 0.05__0.10__0-05 E. faecalis ΓΤΡ 682__+ 1 0.05- 0.10 0.10 - 0.05

Escherichia coli NInJ JC-2__-__O.Q25 0.025 0.0063 0.0125 0.05 i E. coli ATCC 10536_ - 1 0,025 0.025 0.0125 0.025 0.05 E. coli ML 9707__-__0.025¾ 0.025 0.0125¾ 0.0125 0.025

Proteus vulgaris IFO 3167__-__0.05__0,05 0.0125 0.02$! 0.05 P. mirabilis IIP 994__ 0.05 0.05 0.025 0.05 ! 0.20 !

Morganella morzsr.ii 112 602_ 0.10 0.10 0.05 0.05 ! 0.20 j

Klebsiella oneur.oni.ac KY(C1,')6445 - 0.05 0.05 0.0125 0.025 0.05 I -------- - I- K. pneumoniae 1-220S__-_0.05 0.05 0.05 0.05 0.10

Enterobacter cloacae TIP 977__=__0.05 i 0.05 0.05 0.05 0.20 - Citrobacter freundii IIP 976__ 0,05 0.05 0.025 0.05 0.05 1 Serratia maxc&scens IIP 618__-_0.10 0.10 0.05 0.05 0.20 - Shigella sonnei IIP 969 -__0.025 0.025 0.0053 0.025 0.025

• Salsoneila enteritidis IIP 60&__-__0.05 0.05 0.025 0.05 Q. 1Q

; Pseudomonas aerucir.psa V-l__Q.loi 0.10 0.20 0.39 0.39 P. aeruginosa IFO 12689__ 0.73 0.78 0.39 0.39 1.56 P. aeruginosa IIP 1210__0.7S 0.78 0.39 0.39 1.56 .....: P- ceoacia GIPU 513_ 0.39 0,39 0.20 0.39 0.78 P. maltoohilia GIFU 2A91_ - 0.10 0.20 0.05 Q.1Q o.20 85697 26

Taulukko 1-2 Bakteerinvastainen vaikutus in vitro (standardikantoja) MIC QJg/ml)

Organismi (106 solua/ml) Gram-<----——--;-

Esim. 1 Esim. 2 Esim. 4 Esim. 8 Esim. 9

Yersinia enterocolitica IIP 981__-__0.05 0.05 0.025 0.05 0.10

Acinetobacter amitratus IIP 876__-__0.05 0.05 0.025 0.05 0.20

Alcaliaenes faecalls 01UQQ2__ 0.20 0.20 0.10 0.20 0.39

Bacteroides frajU-LLs OM 7000__£0.10 0.78 0.10 0.78 0.20 B. fragilis 0558__to.05 0.39 0.05 0.39 0.10 B. fraeilis 25255__t 0.05 0.39 0.05 0.39 0.10 B. discasonis 8503__0.39 I 3.13 0.39 0.78 0.39 B. thecaiotaomicron (0661)__-__0.10__0.78 0.20__0.78 0.39 B. vulgatus KYA 29327__0.10 ! 0.78 0.10 0.39 0.20

Fusobacterium rr.orci f erum 6249__^0.05__0.39__0.20__0.39__0.20 F. necraohorun S-65__-__0.10__0.39__0.20__0.39__0,20 F. varium KYA 8501_ 0.39 0.78 0.73 1.56 0.78

Emhaccsrium lencun GAI 52^2_ f 0.20 1 0.73 0.10 0.39 1 0.20 E. li mersu m KYA 8A86_ + 0,39 t 1.56 0,20 | 0.78 0.39

Promionibaccerium acens 1 1828_f 0.20 0.39 0.78 3.13 0.78

PepfDcoccus nacnus KY .017__+ 5 0.05 0.20 0.05 0.20 0,05

Clos-crldium difficile I-E__+__-__-__-__-__Q. 20 C. per£rinzens KYA 13123__+ ύ 0.05 j 0.20 0,10 0.39 j 0.10 C. ramosum__+__0.20 ! 0.78 0.78 1.56 Q . 39 ; Peptoscreptococcus a„aarohiuS t i0.05 0.10 0.20 0.3, ..„„3 _KYA, 27227_____

Pst. micros UPI 5&64-1__+__0.39 0.39 0.10 0.39 0.39

Veillonella parvula KYA 10790__-__0.10__0.39__0.10__Q . 39 0.39

Taulukko 1-3 Bakteerinvastainen vaikutus in vitro (standardikantoja) 27 85697 g -.MIC (ug/nil)

Organismi (10° solua/ml) Gram_ ___r-~———· _____ Esim.10 Esim.11 Esim. 12 Esim. 13 {Esim. 14

Bacillus sutrrilis PCI 219__+ 0.025 0.0125 0.025 0.01251 0.0125

Staphylococcus aureus 209 P__+__0.05 O.OI25 0.05__0.05__0.025 S. aureus Smith__+ 0.05 0.0125 0.05 0.0251 O.C25 S. aureus IIP 670 (Terajima)__+ 0.05 0.0125 0.05 0.05 1 0.05 S. eoiderrridis IID 866 0.05 0.0125 0.05 0.05 0.05 ------

Streptococcus ovogenes (S-8)__+__0.10 0.05 0.10 0.10 S. pyogenes IIP 692__+__0,20__0.05__0,10__0.10__- S. pneumoniae IID 552__+__0.10 0.05 0.10 0.10__-_ E. iaecalis IID 632__♦ 0.20 0.05 0.10 0.10

Escherichia coli NIHJ JC-2__ 0.05 0.025 0.05 0.00631 0.0063

E. coli ATCC 10536__ 0.05 1 0.0251 0.05 0.0125! 0.0063 I

E. coli ML £707__ 0.05 0.05 0.05 | 0.0063 0.0063

Proteus vulgaris IF0 3167__ 0.05 0.05 0.10 0.0125 0.0125 P. nlrabilis IID 994 - 0.20 I 0.1C ! 0.L0 I 0.0251 0.025 - ' — I . -- — « I n—·' »i n—..π— ) korranella corzanii IID 602__ 0.20 0.20 0.20 0.05 I 0.C5

Klebsiella oneur.onia'e .KY(C2,')6445 - 0.05 0.05 I 0.05 0.02 5! 0.0125 — - --1 K. maunoniae 1-220S_ 0.20 0.20 0.20 0.05 0.0125

Enterobacter cloacae IIP 977__-__0.20 0.20 0.20 0.05 0.05 · Cltrobacter freunriii IID 976_ -__0.05__0.10__0.10__Q .025 0.0125 ; Serratia marcescens IID 618__-__0.20 0.20 0.20 0.05 0.05

Shigella sormei IID 969__-__0.05 1 0.025 0,05 Ο.ΟΟ63! 0.0063 ·.: Salmonella enceritidis ΙΓΡ 604__-__0.10__0.20 0.20 0.025 0.025 - Pseudomonas aeruginosa V-l__2__0.39 0.73 0.7S 0.10 0.10 • P. aeruginosa I?0 12689__-__3.13__3.13__3.13__0.39 0.39 P. aeruginosa IIP 1210_ I__1--6__3.13__3.13 0.39 0.39 P. cepacia GIFU 518__1__0· 0.73__0,73 0.39 0.20 P. maltophilia GIFU 2491__I__^1·__0-39__0.39__Q . 05 0.05 .Taulukko 1-3 Bakteerinvastäinen vaikutus in vitro (standardikantoja) 28 85 697 MIC (yg/rol)

Organismi (106 solua/ml) Gram----- _ Is im. 10 Isiin.11 Isim.12 Esim. 13 . Isim. 14

Yersinia encerocolitica IIP 98L__ 0.10 0.20 0.20 0.05 0.025

Acinetobacter anitratus IIP 876__n... 0.10, 0.10__0.10__0,025 0.025

Alcaligenes faecalis 01U0Q2 . - 0.78 0.78 0.78 0.10 .0.05

Bacceroides fragilis GM 7000_. - 0.78 0.10 0.73 0.05 , 0.05 B., fragills 0558___ 0.73 -50.05 0.39 0.05 0.05 B. fragilLs. 25285 _. - 0.73 0.05 0.39 0.05 , 0.05 B. distasonis 8503_._ 3.13 0.39 3.13 0.20 0.10 B. thetaiotaorcicron (0661)__-__3.13__0.20__1.56__0.10__0.10 B. vulgatus KYA 2932.7,_._ 1.56 £0.05 0.73 | 0.05 0.05

Fusobacteriun mortiferun 4249 ...__-__0.39 0.20 0.39 0.10 0.10 F. necrophorun S-45__-__0.39__0.10 0.39__0.05__0.05 F. varjoa KYA 8501_. . ._ 1.56 1.56 1.56 | 0.78 0.78

Eubacterium lencum GAI 5242__+__0.73 0.20 0.39 0.05 0.05 E. limosua KYA 5636_._+_1.56 0.78 1.56__-__-

Propjonibacteriun acer.s 11828__+__1.56__1.56 i 3.13 I 0.78__0.78

Peptococcus magnus KY 017_ + t0.05 50.05 10.05 0.05 0,05

Closcridiun difficile I-E__·» | 0.78__0.10 0.73__Q. 39 0.39 C. perfrtrrgens KYA 13123__+__0.20 5 0.05 1 0.10 0.05 ! 0.05 C. ranosura_[__+__0.73 0.20 0,78 0.39 0.39

Pepcostreptococcus anaerobius _ , Λ „ , „ + 0.20 ^ 0.05 0.20 0.10 0.10 KYA 27337 ' ' ......— — - ..... —— » .. » — I —

Pst. micros UPI 5&6A-1__+__0.7S 0.39 0.78 0.10 .0.05

Veillonella parvula KYA 10790__-__0.78__0.39__0.73 0.10 0,05

Taulukko 1-5 Bakteerin vastainen vaikutus in vitro (standardikantoja) 29 8 5 597 MIC (μg/ml)

Organismi (10^ solua/ml) Gram “n : T

__Esim.15 Esim.17 Esim.18 Esim.19

Bacillus subtilis PCI 219 + 0.025 0.025 0.0125 0,0125

Staphylococcus aureus 209 P__+__0.05 0.05 0.025 0,025 $. aureus Smith__+__0.05 0.05 0.025 0,025 S. aureus IIP 670 (Terajima)__+__0.20__0.05__0.05 0.05 S. epidermidis IIP 866_ + j 0.05 I 0.05 0.05 Q.Q5

Streptococcus pyogenes (S-8)_j_+__0.05 0.20 0.10 0,10 S. pyogenes IIP 692__+ 0.10 0.39 0.20 Q,2Q_ S. pneumoniae IIP 552__+__0.05__0.20 0.20 0.10- E. faecalis IIP 682_·* 0.10 0.20 0.20 Q .20

Escherichia coli NIHJ JC-2_ 0.C0S3 0.0125 0.0063 0,.0063 E, coli ATCC 10536__0.05 1 0.025¾ 0.0125 Q.Q125 E. coli ML 4707__ 0,0063 0.025 0,0125 0,0125

Proteus vulgaris IFO 3167__- | 0.01251 0.025 0.0125 0,0125 P. mirahilis IIP 904_| - | 0.02 = 1 0.05 0.015! Q,Q5

Morganella morganii IIP 602__-__0.05 1 0.05 0.05 j 0,05

Klebsiella pneumoniae KY(GN)64&5 - 0.0125) 0.0251 0.0125 0,025 K. pneumoniae 1-220S__-__0.025¾ 0.05 0.05 0,05

Enterobacter cloacae IIP 977__-__0.05 0.05 0.025 0,05

Citrobacter freundii IIP 976__ 0.0125 0.025 0.025 Q.Q25

Serratia marcescens IIP 618__-__0.05__0.05 Q.025 0.05-

Shigella sonnei IIP 969_;__ 0.0125 0.0L2-5 0.0053 ! Q ,QQ63 ; Salmonella enteritidls IIP 60A__I 0.025 0.05 0.025 0 ,05

Pseudomonas aeruginosa V-1__-_0.10 0.20 0.39 0.20 P. aeruginosa IFO 12689__-__0.39 0.39 i 0.78 Q 39 P. aeruginosa IIP 1210__-__0.73 0.73 1.56 0 78 P. cepacia GIFU 513__-__0.10 0.39 0.39 P. maItophilia GIFU 2491__-__0.05 0.39 0.05 0,05

Taulukko 1-6 _ Bakteerinvastainen vaikutus in vitro, (standardikantoja) 30 85697 MIC (yg/ral)

Organismi (10 solua/ml) Gram--___ __, _ Esim.15 Esim.17 Esim.18 Esim.19

Yersinia e-ntexocolltica IIP 931__-__0.05 0.05 0.025 0,025

Acinetobacter anitratus IIP 676__-__0.025 0,05 0.025 0,025

Alcallzenes faecalis 0114002 , - 0, 10 0.39 0.20 0,10

Bacteroides frazllls GM 7000 0.20 0.39 0.10 0J0 B. fragi Us 0553 ·__- 0.20 0.39 0.05 Q >05 B. frazilis 252 S5_' ...........- ... 0.20 0.39 0.05 0,10 B. discacoris £503_ 0.39 | 0.78 0.39 I Q ,20_ B. theraJLntaocicron (0661)__ 0.39 0.78 0.20 0.20_ B. vulgatus KZA 29327__ 0.39 0.39 0.10 0,10_

Fusohacteriur. cortiferun 4249__-__0.20__0.39 0.20 0,20 F. necrophoruc S-45__-__0.20__0.39 0.10 0,10 F. vartun «3A S501 , ,__ 1.56 1 . 56 0.78 0 ,78

Eubacterium lentue CAJ 5242_ + 0.10 0.20 0.05 Q.1Q_ E. lir.osue KYA £436__+__-__-__-__0,10

Proaionibacr°-J::- azars 1182S__+__1.56__3.13__1.56 ! 1,56_

Pepcococcus maznus KY 017__+ 1 0.05__0.20__0.05 0 ,05__

Clostridium dirficile I-E__+__1.56__1.56__0.39 0,78_ C. parf-rinze-ns KYA 13123__♦ 1 0.10 0.20 0.10 0,20 C, ranosum_ +__0.78__1.56__0.78 0,78

Pejpto streptococci! s anaerohius . + 0.2Q 0>39 0-2Q 0j20 _ KYA 27337_;__;__

Pst. mic-ros U?I 5464-1__+ 0.10 0.20 Q.1Q 0,10

Veillonella parvula KYA 10790_ - 0.10 0.20 0.10 |qjq

Taulukko 1-7 Bakteerinvastairien vaikutus in vitro (standardikantoja) 85697 31 HIC ftig/ml)

Organismi (106 solua/ml) Gram Esim.20jcpra NFLX

Bacillus subtilis PCI 219__+ 0.05 0.05 0.10

Staphylococcus aureus '209 P__+__0.05 0.39 0.78 S. aureus Smith___+__0.10 0.39 0.78 • S. aureus IIP 670 (Terajima)__+ 0.10 0.39 1.56 S. epidennidis IIP 866 __+__0.10 0.39 0.78

Streptococcus pyogenes (S-8)__+__0.78__0.39__1.56 S. pyogenes IIP 692__+__0.39 0.78 3.13 S. pneumoniae IID 552 + 0.39 1.56 3.13 ------ E. faecalis IID 682_ + 0.39 0.78 1 1.56

Escherichia coli NIKJ JC-2 - 0.05 $0.0063 0.05 E. coli ATCC 10536__ 0.05 0.0L25I 0.05 E. coli ML &707__0,05 -£0.00631 0.05

Proteus vulgaris IFQ 3167__-__0.C5 £0.0063 0.CL5 P. mlrabilis IID 994__ 0.05 0.0125 0.05

Horganella morgan-ίι IIP 602_·__—__0.05__0.05__0.05

Klebsiella oneumoniae KY(Gh’)6445 - 0.05 0.0125 0.05 '--1 i K. pneumoniae 1-220S_ - 1 0.05 0.05 j 0.10

Enterobacter cloacae IID 977__—__0.05__0.05__0.10

Citrobacter freundii IID 976__-__0.05 =0.0063 0.05

Serratia marcescens IID 618__-__0.05__0.39__0.05

Shigella sonnei IIP 969__0.05 ($0.00631 0.05

Salmonella enteritidis IID 604 0.05 0.025 0.05

Pseudomonas aeruginosa V-l__-__0·20__0.20 0.39 P. aeruginosa 1F0 12689__0-39__0.39__0.78 P. aeruginosa IID 1210__-__1 .56 0.78 3.13 P. cepacia GIFU 518__-__“__-__-_ P. maltophilia GIFU 2491__-__0 - 39 0.39 6.25

Taulukko 1-8 Bakteerinvastainen vaikutus in vitro (standardikantoja) 32 85697 MIC (pg/ml)

Organismi (106 solua/ml) Gram---

Isim.20 CPFX NFLX

Yersinia errcerocoLitica IIP 981__-__0.05 0.025 0.10

Acinetohactex anltra~tus ΓΤΡ 876__-__0.10 0.025 1.56

Alcaligenes faecalis 0114002__-__0.20__0.39__1,56

Bacteroides Fxagilis GM 7000__ 1.56 3.13 25 ' B. fragilis 0558 _ . - 1.56 1 3.13 25 B. fra gills 252Z5 . ''__ 1.56 6.25 25 B, disxajsonis 8503__- 6.25 6.25 B. thetaiotaondcron (0661)__-__6.25 25__-_ B. vulgabus KY A 29327__6.25 i _-

Fusobasr erinä norci fVrrni 4249__—__1.56__- 1 _

F. necrj^hona S—-5__-__1.56 1 1 . 56 I

F. vtrriinr. ΚΎΑ 8501_ 12.5 I 12.5 1 100

Eubacteriun le" f-n CAI 52-2__+__0.78__0.7fl__-_ E. Ilmo sun KTA 8186__+__0.20__-__-_j

Propionibactsriur: acens 11525__+ 12.5__12.5 !

Pepcococcus cajums KY 017__+__0.39__0.39__-_

Clostridiun difficile I-E__+__6.25__-__50_ C. perfringens ΚΣΑ L3177__+__0.78__0.39__-_ C. raeosua__+__6.25__6.25 50_

Peptostreptococcus anaerosius , ,, . c, + 1.56 1.56 KY A 27337_;____

Pst. micros UPI 5464-1___0.39__0.20__-_

Veillonella parvula KY A 10790__-__0.39__0.20__-_J

CPFX : siprofloksasiini, vrt. selitys s. 2 NFLX : norfloksasiini, vrt. selitys s. 2 33 «5697

Koe 2 Terapeuttinen teho systeemisiä infektioita vastaan hiirissä

Kussakin kokeessa käytettiin 5 ICR-hiirtä kussakin ryhmässä. Hiiriin ruiskutettiin vatsaontelon sisäisesti bakteerisus-pensiota ja yhdisteet annettiin suun kautta viitenä annoksena tunti infektioin jälkeen.

Eloonjääneiden lukumäärä määritettiin päivittäin 3-7 päivän ajan. 50-prosenttisesti tehokas annos (ED^q), joka suojaa 50 % eläimistä infektion aiheuttamalta kuolemalta määritettiin annosmäärän ja eloonjäämislukumäärän välisestä suhteesta.

Tulokset on esitetty taulukossa 2-4.

Esillä olevan yhdisteen suojavaikutus oli paljon suurempi kuin verokkiyhdisteillä.

Taulukko 2 E.coli ML 4707 MIC (ug/ml) ED5q (mg/kg

Esimerkki 8 0,025 1,0

Esimerkki 13 0,0125 1,0 CPFX 0,0125 1,4 Käyttöannos: 8,5 x 10^ cfu/hiiri

Taulukko 3 MR S. aureus KYB 623 MIC (ug/ml) ED50 (mg(kg

Esimerkki 13 0,025 3,7

Esimerkki H 0,0125 2,1 CPFX 0,39 37 (+Musiini) 8 . . 9 Kävttöannos: 3,1 x 10 cfu/hiiri 34 85 5 97

Taulukko 4 S. pneumoniae S-4288 MIC (ug/ml) ED5Q (mg/kg)

Esimerkki 8 0,20 20,7

Esimerkki 13 0,10 12,1 CPFX 1,56 >100 Käyttöannos: 4,8 x 10^ cfu/hiiri m * » 0 • • · m

Claims (1)

1. 35 85697 Patenttivaatimus Menetelmä farmakologisesti aktiivisen 7-(1-pyrrolidinyyli)-l-syklopropyyli-6-fluori-1,4-dihydro-4-okso-3-kinoliini-kar-boksyylihappojohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava (I) O R2-N(CH2)n VV||- COOR H Ί \ JL iL Jl (i) J-V Y | H3C Δ jossa R on vetyatomi tai alempi alkyyliryhmä, Y on vetyatomi tai halogeeniatomi, R2 on vetyatomi, alempi alkyyliryhmä, alkoksikarbonyyliryhmä tai asyyliryhmä ja n on 0 tai 1, tai sen hydraattien tai farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditio- tai alkalisuolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että kondensoidaan yhdiste, jolla on kaava (II) 0 NYi|f|)-COOR JL Jk β UD X ^ y N ' A jossa R on vetyatomi tai alempi alkyyliryhmä, X on halogeeniatomi ja Y on vetyatomi tai halogeeniatomi, pyrrolidiini-johdannaisen kanssa, jolla on kaava (III) R2-N(CH2)n \ (III) H3C-^ jossa R2 on vetyatomi tai alempi alkyyliryhmä, alkoksikarbonyyliryhmä tai asyyliryhmä, minkä jälkeen haluttaessa, kun saadussa tuotteessa R2 on alkoksikarbonyyliryhmä tai asyyliryhmä, tämä suojaryhmä poistetaan ja kun R on alempi alkyyliryhmä saatu tuote hydrolysoidaan kaavan I mukaiseksi karboksyylihapoksi. f ς '', 7 36 ' - ' ' Förfarande för framställning av ett farmakologiskt aktivt 7-(1-pyrrolidinyl)-l-cyklopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo- 3-kinolin-karboxylsyraderivat med formeln (I) 0 R2-N(CH2)n H ‘'T“\ I II Ij (I) N--- H3C A väri R är en väteatom eller lägre alkylgrupp, Y är en väte-atom eller halogenatom, R2 är en väteatom, lägre alkylgrupp, alkoxikarbonylgrupp eller acylgrupp och n är 0 eller 1, eller hydrater eller farmaceutiskt acceptabla syraadditions-eller alkalisalter därav, kännetecknat av att man konden-serar en förening med formeln (II) 0 —COOR jL 1 Ij (II) X ^ tK ’ A väri R är en väteatom eller lägre alkylgrupp, X är en halogenatom och Y är en väteatom eller halogenatom, med ett pyrrolidinderivat med formeln (III) R2-N(CH2)n V\ NH (III) : «3c väri R2 är en väteatom eller lägre alkylgrupp, alkoxikar-·’ bonylgrupp eller acylgrupp, varefter, om sä önskas, dä R2 i den erhällna produkten är en alkoxikarbonylgrupp eller V acylgrupp, avlägsnas denna skyddsgrupp, och dä R är en lägre alkylgrupp, hydrolyseras den erh&llna produkten tili en karboxylsyra med formeln I.