DK170100B1

DK170100B1 - 2'-Substituerede 4-deoxytiazolo(5,4-c)rifamycin SV-derivater, fremgangsmåde til fremstilling heraf, en sådan forbindelse til anvendelse som lægemiddel, anvendelse af forbindelsen til fremstilling af et antibakterielt medikament samt farmaceutisk præparat indeholdende forbindelsen

Info

Publication number: DK170100B1
Application number: DK630686A
Authority: DK
Inventors: Bruno Cavalleri; Marco Turconi; Giovanni Tamborini
Original assignee: Lepetit Spa
Priority date: 1985-12-30
Filing date: 1986-12-29
Publication date: 1995-05-22
Also published as: US4880789A; EP0228606A3; CA1271472A; EP0228606B1; DK630686A; ES2031815T3; DK630686D0; IE863277L; IL80447A; HK97391A; JPS62158292A; ATE60772T1; HU196812B; JPH07108909B2; HUT45072A; IE59505B1; EP0228606A2; GB8531887D0; IL80447A0; SG67091G

Description

i DK 170100 Bl

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte 2’-substituerede 4-deoxytiazolo[5,4-cJrifamycin SV-deriva-terr disses fremstilling og anvendelse samt farmaceutisk præparat af disse.

C

4-Deoxytiazolo[5,4-c]rifamycin SV (der også kaldes rifamycin P) er fremstillet både ved gæring af stammer af Nocardia og kemiske processer. Gæringsprocessen er angivet i britisk patentskrift nr. 1.470.426,mens kemiske processer er beskrevet i USA patentskrifterne nr. 4.144.234 10 og 4.129.562.

2'-Alkyl-4-deoxytiazolo[5,4-c ]rifamycin SV-deriva-ter er beskrevet i US patentskrift nr. 4.169.834; 2'-hy-drazonometyl-4-deoxytiazolo[5,4-c]rifamycin SV er beskrevet i EP offentliggørelsesskrift nr. 5.140, mens 4-deoxytiazolo[5,4-c]-15 rifamycin SV med en monoaminosubstituent eller en hydrazinsubstituent i stilling 2' er angivet i DE offentliggørelsesskrift nr. 2.741.066 og fremstilles ved omsætning af 3-bromrifamycin S med vedkommende tiourinstof derivat.

20

Endelig beskriver USA patentskrift nr. 4.116.957 mo-nosuostituerede 4'-aminothiazolorifamycinderivater som angives at besidde høj antibakteriel aktivitet.

Det har nu overraskende vist sig, at tilsvarende disubstituerede derivater har en endnu større in vivo an-Zo tibakteriel aktivitet.

I overensstemmelse hermed er forbindelserne ifølge opfindelsen ejendommelige ved at de har den almene formel CH- C£L CH- 30 «'Λτι* Y OH OH U 18 VCH S I?

/ °N 16 I

CH-.0—^27 QH OHNJX^CH

\ CH3 §k ik Jk 35 // \ X 3 oAAAs

\ «1 v=*L

^ ^0 N^'HR2r3 CHj .2 i DK 170100 B1 hvor R betegner hydrogen eller acetyl, og 9 o R og R uafhængigt af hinanden hver betegner C.j_4 alkyl * eller sammen med det hosstillede nitrogenatom betegner en 4-7-leddet mættet heterocyklisk ring udvalgt 5 blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazi- * nyl, oxazolidinyl, pyrazolidinyl, tiazolidinyl, morfo-lidinyl og imidazolidinyl, hvori et ringnitrogenatom 4 eventuelt er substitueret med en substituent R udvalgt blandt C.j_4 alkyl; hydroxy-C.j_4 alkyl; C2_4 alkanoyl; C^_4 alkoxykarbonyl; fenyl som eventuelt er substitueret med 1-3 substituenter udvalgt blandt halogen, hydroxy, C.j_4 alkyl og C-|_4 alkoxy; fenyl-C^_4 alkyl hvor fenyl-ringen eventuelt er substitueret med 1-3 substituenter udvalgt blandt halogen, hydroxy, C^_4 alkyl og C-|_4 alkoxyogfeny1-C^_4 alkoxykarbonyl hvor fenylringen eventuelt er substitueret med 1-3 substituenter udvalgt blandt halogen, hydroxy, C-j_4 alkyl og C,j_4 alkoxy, og farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf.

I nærværende beskrivelse med tilhørende krav menes 20 der med betegnelsen C^_4 alkyl alkylgrupper med 1-4 kulstofatomer såsom metyl, ætyl, propyl, 1-metylætyl, 2-metyl-1-propyl, 2-metyl-2-propyl og butyl. C.j_4 alkoxy betegner alkoxy- grupper med 1-4 kulstof atomer såsom metoxy, aetoxy, propoxy, 1—metylæto- 25 xy, 2-metylpropoxy, 2-metyl-2-propoxy og butoxy. Med halogen menes en af de fire halogener klor, brom, jod og fluor.

En foretrukken gruppe forbindelser ifølge opfin- delsen er sådanne forbindelser med formel I hvor R er en 30 acetylgruppe.

En yderligere foretrukken klasse forbindelser ifølge opfindelsen er sådanne forbindelser med formel I, hvor 1 2 3 R er acetyl og R og R enten hver for sig betegner metyl * 1 2 3 3 2 eller ætyl,eller R og R sammen med det hos-35 liggende nitrogenatom er en pyrrolidinyl-, morfolinyl-, piperidinyl- eller piperazinylgruppe som eventuelt er sub- 3 stitueret som defineret ovenfor med en gruppe R . Særlig 3 DK 170100 B1 foretrukne udførelsesformer for forbindelserne ifølge opfindelsen er følgende forbindelser med formel I: 2'-(4"-morfolinyl)-rifamycin P, 2 * — (1 "-piperidinyD-rifamycin P, 5 2'-(4"-metyl-1 "-piperazinyD-rifamycin P og 2'-(N,N-diætylamino)-rifamycin P.

Opfindelsen angår endvidere en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne med den almene formel I, hvilken 10 fremgangsmåde, er ejendommelig ved, at man omsætter en forbindelse med den almene formel if3 ?H3 )H OH il 18 >,17

0^ il 16 II

M 0H"C>-CH3 1 J3

20 . \p 11^ M

1 ^0 CH3 hvor R1 betegner hydrogen eller acetyl, 25 a) med en amin med den almene formel HNR1R2, hvor R1 og R har de i krav 1 angivne betydninger, dog ikke usub-stitueret piperazin, i nærværelse af et inert organisk opløsningsmiddel til dannelse af en forbindelse med formel Σ hvor gruppen 2 3 NR R er som defineret i krav 1. undtagen en foroindelse hvor 3 4 5 2 3 3 3Q NR R er en usubstitueret piperazingruppe og .om ønsket 4 b) til dannelse af en forbindelse med formel I, hvor 2 3 . - gruDpen NR R er en usubstitueret piperazingruppe, unaer- 5 kaster den tilsvarende forbindelse med formel I, hvor R er en fenyl-C.j_4-alkoxykarbonylgruppe, kontrolleret hydro-genolyse, fortrinsvis i et polært organisk opløsningsmid-

O O

del i nærværelse af en hydrogeneringskatalysator.

4 DK 170100 B1

Beaktionstemperaturen i trin a) er i almindelighed mellem 5 C og 40 C

og fortrinsvis mellem 15 og 30°C idet den foretrukne reaktionstemperatur er stuetemperatur. Det inerte organiske opløsningsmiddel kan være et af de organiske opløsningsmid-^ ler,som ikke i ugunstig retning griber ind i reaktionens forløb og som er i stand til i det mindste delvis at oplø- 2 3 se udgangsmaterialet med formel II og aminen IkiR R , mens det ikke er nødvendigt at enten udgangsmaterialerne eller slutprodukterne er fuldstændigt opløst i reaktionsblandin-10 gen til dannelse af en homogen fase. Repræsentative eksempler på inerte organiske opløsningsmidler er mættede cykliske ætere såsom tetrahydrofuran og dioxan, glykolætere såsom di-metoxyætanol og C^_^-alkylalkanoater såsom ætylacetat, pro-pylacetat og ætylpropionat samt blandinger deraf.

Det hydrogenolytiske trin der behøves for at vinde 4 det piperazinderivat,hvor R er hydrogen, ud fra den til- 4 svarende forbindelse,hvor R er som defineret ovenfor men forskellig fra hydrogen, må udføres under betingelser som ikke fører til væsentlig hydrogenering af ansa-dobbelt- 20 bindingerne. Denne hydrogenolyse udføres fortrinsvis i et polært organisk opløsningsmiddel såsom en lavtkogende al- kanol i nærværelse af en hydrogeneringskatalysator som fx palladium på kul. De mest foretrukne betingelser består i tilstedeværelse af absolut ætanol som opløsningsmiddel 25 og 10%s palladium på kul som katalysator. Reaktionsforløbet overvåges på kendt måde ved HPLC eller TLC-teknikker således, at en sagkyndig vil være i stand til at regulere de særlige reaktionsbetingelser og fastslå hvornår reaktionen kan anses for udført.

30 Sædvanlige rensningsprocesser såsom ekstraktion med opløsningsmidler, udfældning ved tilsætning af ikke-opløs-ningsmidler eller ved ændring af mediets pH-værdi samt kromatografiske processer egner sig til rensning af forbin- ' delserne ifølge opfindelsen.

35 DK 170100 Bl 5

Egnede kromatografiske processer indbefatter præparativ TLC, søjlekromatografering og HPLC.

De fysisk-kemiske data og rensningsmetoder for nogle repræsentative forbindelser ifølge opfindelsen fremgår af nedenstående tabel I og II. Nærmere betegnet er de heri anførte forbindelser forbindelser med formel I hvor er acetyl, dog med undtagelse af forbindelsen 3b hvor i R er hydrogen.

DK 170100 Bl 6 HH·*] »_1 w 1_1 Λ'ΗΐΟ

i-* r·* r·* r— tn R H

•ro o. o tr ro . p g.

iQ · ro *

I I il I

0 o o o o to z z z z a t to ro to to to to to to to ·(*

O—a O—Z O—Z o I

O —> Z σ — — o o to o æ o o o z o z cn z z z to to σι to to to ω Z *_· ^ ·*—* — en ro cn to to to 1 i li 3 7: η· Ό

Qj *- Z

O H* M Q,—- H· > ^ V N \ (D O Η» σ< in cn t-* t—* i—i *o ro •v. o o o cn > H 3 <*» O O S *< M m OHM g ro o £ £ t+ et »3 4 h O -H· 2 » M O OZ Z H· 3 g, p <+ > > M H 3-2. m

O Ω O vQ Z £ M

> » o H

O I g ro t-h o ^ z tt 3 Z σ in enen m t—1 W it"

+ o*- to S

01 r* ro ' ro ro r+ *3 μ m - to en cn w h· in cn m Qj oo

Z

ro s ro ro ro ro ro tn o o sr o o p.

»· ^ ^ ^ N J3 t-h Hi iQ (6 l-h tfl to

CO to U) to H* S

^ O o o oo r? g: en o en vj co Tf rt ro 7 DK 170100 B1 u> CO CO to M (TjH· hrj c σ p> hi ?vhio w

03 § H O

• Η σ h ‘S * n- 03 0) I 1 ' ' JL &

0 cn o O O Ω tO

a i as a a a μ ίο Οι to JO to to —* to in to to cn to n— z o o—25 n~z i o—a

a— o a — a ~ Q

too (D Co O CO o OO

— a (+ a a o a

to to JO to a JO

O w H "" '-'to'-' to a to to to I to co

1 t I O I

σι a cn Η- «S*

Oj w t-j O to Η* Η* 'v > \ N ' (D 0 H· cn oo co I cn Ι_ι Ό t-h o O , H ¢)

Μ Ο H* Q 3 HH

M o o g 03 c< a rt- ο Μ o h 3 Ω S ^ O «+ H* »* se oj

> a o a g » £ E

O ft > ft <Q M £ φ O 0 P M a η η > > i 2 ^ ° 0 n „ σ

CD

rt cn *> OHto 3 Z ,¾ + + + w i-1 a *9 *> »-· ^ to 2, °

CD

H

M . t-* - ^ ' 'CO t—* ft H· cn cn o oo "" Qj *« **· - '« I—*

to CO CO

Tv ' ' cn cn a

CD

£3 tr tr tr p ο» § a a ο ο ο π " ** - ' ifl

Hi CD Hi Hi to

t-* CO

*J to c=! ' - in M M a M 00 Ό CO ~J σ

Λ Λ Λ £ 'S

ft

CD

« DK 170100 Bl 8 Η Η· hr) hr)

, , , Ml O O

uiit» ω co cn s H κ Φ pi .(-.ø· ø.

iQ · tn ro fu rt

III

o o o o to cc 2 ta 33 to to to 50 to , to to to 33—2 0—2 0—2 —- & σ» —.

O S3 O 2 0 2 »-2 ** 2 to O to O to O — O'" H — 2 to to 2 to to Co

2 I ω I I

cn »0 • g. s o to M 0,-2 ' "v ^ O ^ H- cn it* to ro 0 H)

*-«. o o o, trj P

to o o ,(--3¾ M w s ^ ro W M g CO O ju M r+ rt p b H- C.

η- o o M η· s 5.

o > > a CT.

> O O iQ 2 O

O cn § £ 1 cn tr σ ro ro i— rt

- a g’ H

cn I to H 2

^ I_I

m w wro t-j

μ m t-* rt S

to i to to — £ 2 ro a

σ π* S

' ' H- t ao. » I ^ ^ **“*

t-h H, M

* *-* lo g cn *j vo o pi * - ' ' Λ i? O VO <Λ to dp ^ w rt ro t 9 DK 170100 B1

Noter: 1) Når der i tabellen er angivet to mængder blev reagenset tilsat i to portioner på de angivne tidspunk- 5 ter.

2) a) Syrebehandling som beskrevet for forbindelse 1a; b) syre/base-behandling som beskrevet for forbindelse 3a; c) Prepræparativ TLC, eluentblanding Ci^C^iMeOH 95:5, 10 forbindelsen opsamles, opløses i en blanding af ætyl acetat og surt vand, det organiske lag fraskilles og koncentreres til et lille rumfang; produktet udfældes med petroleumsæter; d) Prepræparativ TLC, eluentblanding CK^C^sMeOH 95:5, 15 derefter oparbejdet som beskrevet for forbindelse 4; e) Krystalliseret fra ætylacetat; f) Udfældet fra ætylacetat med petroleumsæter; g) Udfældet fra CH2C12 med petroleumsæter; h) Søjlekromatografering på silikagel 60 (0,06-0,2 mm;

20 Merck Co.), elueringsmiddelblanding CH2C12:MeOH

95:5.

25 30 35 10 DK 170100 B1 α> η- »ri ?r ru o cn s h «-» t—* h* t—1 μ rr o< o σ ro tQ · ro m o o π o hrj

tf* tf* Q

vo oo to to H

33 TO Z Z g

o\ cn cn cn S

o oo to to L.

z z z z tf* tf* U> CO _» O O o o

I-1 t—1 Μ M

(-* i-1 ro (->

TO TO TO TO

i-3

O

O 0-0 o - - X « tf* CO tf* CO Ϊ0 σ» oo κ» cn Hi to 1-3 ro σ ro

M

— TO

UJ l_l L_1 D/WS H

^ 1 £ £ ros*d h Ό Ό VD 00 UK , V f ® <? H-D. - i i t 3 ro

*-· ·“ to ^ Id H O

*o oo o oo ti I ri

tf* O O tf* CO

9 TOi 3

=· rr O

vo oo oo +00 O tr

(-* VD fO O \ S

U> VD to g Ό 3; .S

' ' " "χ - TO 7t M t-* VD N 00 w “ 00 o 00 >· tf* CO tO tO tf* 00 tO tf* CO tO g co o tf* co co o to to o to ro ; O CO to o to 00 CO to 00 00 x ^

H· 'S

• —roe σ 3 o < • tf*tf*tf*totf*ib.tf* tf* tf* tf* 3 ju X X X 3* X X X Ί ^ ^ t o en σι o tf* σι h tf* σ\ —-

00 H 00 00 Ό tO Η Λ to M

o

VQ

(0 DK 170100 B1 1 1 CD H- bj brj ^ hi o o u> to to t-j D* 0) Hi (D •HD' r+ iq · cn

(D P

ft O O O o o

tfik tn tU

M W W o tn hri EC 03 S3 S tt 0 tn in tn σι tn n

Ja. cn tn o os a a 2 a a z φ .fc. Ja to J* J» |_1 o o o o o f-i I-* _» o t—1 t-> (-* U) w W 05 05 05 05 ►3

o o o o o O

M ^ ' cn cn U> i-» >j o in oo id

Hi to 1-3

PJ

tr

CD

M

— ζβ , Pj cn ,3 h

Μ M t-* •-‘Møø^l H

CD 00 *O C\ C\ μ-jM* 0 to to to in η·Οι"

1 I I · I D (D

Μ Μ Μ *-» f-> η O

id oo ~J σι σι w i Ο to in in σ *J to J, ί ΐ- 2 s

i -3 ' Ja ?E

+ 3 Π << •O 3 00 -v.00 10+00 3 ID oo 3 N to to ID S.n «» N Ό ^ M in 3 tn 05 ti * * N 00 - ' \ ' ·— 1

ID COO to ID Η* N O

to 00 M

»J to w 00

X" tO ID

>u

V

3 ^UlO^UMilaUM^UtO 0> loototoototoototoMto X ^

tOOOOOOOOxJOOOOOtOOlD , X K

rr —* CD G

• S S"

Mcna\o*Nø\to<n*-Jvo»ChCn η» Ν)Ο>6χ00ΌΝ5ΐη»-*σΐ10Λ.10 0

G

P) 12 DK 170100 B1 trj

O

U) OJ OJ H

(0 O- O φ H- »tJ rt in o ω CO Θ li p H C rt IQ .

CD ff

O O O

tt* it* itb VD CO «t« .

tu æ BS bi σ\ cn tji o

o co H

Z O 2 g ** Η*». φ O Z O h

M rfk M

to O to _» cn h cn ^ h w

F

o o o O

-¾ ^ ^ £» U) U1 η vo ω 5d

Hl to w <-3 fil σ Θ h

H

—« Ui H

M *“* DiCn 3 ^ SS ® s *6 pj to ω HD· tj' * I p. Qi ·* * S m 3 rø o

t-* CO CO (O h( O

Ό OJ Ol Zl | (JJ

VD *w P s n 0 η h VD CO g ffi vd ω σι ω ,ο to OJ —1 *— (-+ VD "« » ' tn o

H

>· 3 »UtOtOitkUlOtOtkUlO 0) u)OÆk(jJU)Ouitou>oto χ —. ; tOVOtOvJH«JtOOOOOO«*J ·» g

—«(OG

I § < Λ. Ji. Jb- tn itb ib. i{^ itb itb ytb ·—’ '— £» o in h in σν o .e* σν h

COHVO H iti to «Ο Ό σν H O

VQ

n 13 DK 170100 B1

O

1-i cn rf* r+

(D H* hj CO

tn o ?u tn S M r+ • η σ IQ .

CD

o o ±1» tb» tO tO ^ æ ac o

U1 U1 H

σι *· 3 z z cd

U) •ti H

o o i—· i—* —» Μ M w to w

o o O

LO U> co o Jd

Hl to h3

fD

σ

CD

— to H

K, Oj CD 3

M to CD s rø H

CD O M3« H

O O H· Qj ^ • I 3 CD ®

M tO iO hj O

00 O |U> l*> M —'

p S

£ 0 O m g g

00 oo to <£J

o to -(+

VD tO

% ^ V0 CØ 3 it> u to w to tu to O to UHU X -—· V0 -J OO 0\ tO O -g

— CD C

3 O < 3 33

lt^ (t« W l&k — W

^ ^ ^ ^ ^

m *. cn vø #> σι M

to σ» m ~j m ui O

iQ

« . il ' llif illlliltlltnltyiliiliiili 14 DK 170100 B1

Noter til Tabel II: På silikagel 60 F254-plader (Merck Co) opløsningsmiddelløb 10,0 cm: 5 1) Analyseresultaterne for C, Η, N, S (og Cl) lå inden for +0,4% af de teoretiske værdier.

2) Elueringsmiddelblanding CHCl^:MeOH 9:1. Under disse betingelser er for rifamycin P 0,42.

10 3) Bestemt i kapillærrør af glas.

4) Rifamycin P udviser følgende værdier for Xmax i metanol: 225, 260, 305, 352, 412 nm.

i.b. = Ikke bestemt.

15 20 25 30 35 15 DK 170100 B1

Forbindelserne ifølge opfindelsen har antimikro-biel virkning mod granpositive og nogle gramnegative bakterier og er tillige virksomme mod stammer af mycobakterier, navnlig mod Mycobacterium tuberculosis.

5 I overensstemmelse hermed angår opfindelsen endelig forbin delserne ifølge opfindelsen til anvendelse som angivet i krav 7, anvendelse af disse forbindelser som angivet i krav 8 og et farmaceutisk præparat der er ejendommeligt ved det i krav 9's kendetegnende del angivne.

10 Den mindste inhiberende koncentration (MIC) for re præsentative forbindelser ifølge opfindelsen bestemtes under anvendelse af den dobbelte fortyndingsmetode i et mi-krotitersystem. De anvendte medier var: Todd-Hewitt-suppe (Difco) for streptocokker; "Iso" -Sensitest suppe (Oxoid) 15 for stafylokokker og gramnegative bakterier. Det sluttelige 4 inokulum var ca. 10 cfp/ml. MIC blev aflæst som den laveste koncentration der ikke udviste nogen synlig vækst efter 18-24 timers inkubering ved 37°C. For Mycobakterium tuberculosis bestod inokulet af 0,5-1% af en 7-9 da- 20 ges kultur i Dubos-medium. Forsøgene udførtes i Kirschner-medium suppleret med 10% hesteserum. Iagttagelse blev foretaget efter 7 dages inkubering ved 37°C.

De opnåede resultater fremgår af nedenstående tabel III.

DK 170100 Bl 16 S'tiWH'iJtotnmcocntnmcn h-o •<tnt-,w^<+f+rtctr+rtrtr+ mi m ωφφωομμμμφφφφ s ifl O C O" B* (+ · · · (D · · · Ό H Pi σ Dl ra (D (D T3 IQ B i ΦΟΗ-ΜΒ'ΒΗιΗιγ+ΦΦΦ'^ φ H- OBCDH-toDiUSMOCCCI-· 01 r+ot-'O φφφομ^μο φ 3 ΦΒΗΒ^ΕΪΟΩΟΦΦΦΩ *T Φ ΜΦΦΗ·α3ΦΦΩ£Ε£0 01 \ H-cn φμΟμηωοιοιοιω·1*) « p *0 Φ 3 Η· H· C o o gDJEJODiH-cntntntBiBtBC m φ φ o μ φ o o o οι σ Γ+'-ίΒΗΗ·Φ>ί>ίσασσ · > d d 3 η· cn ^ ·< JO a il !» 3 σιοο c o o o σ φ c <+ φ H- 3 CD X O O Ω tQ H· M 3 Η· X Η φ Φ tr Ω O D) a « -i < 3 f1 tr1 —4 C D) d οι φ ni —» o o φ σι ω Λ* > Μ φ -λ σι oo m -» -* t n rt (-30 H tO > .P* O tow > φ n to > to -> h3 -* O oo tn 1-3 Μ Ω Η· h3 2 ιΡ» O toto Ο Η· οι η ο η ο η φ ιό (1 U) Μ ω CE οο σι W CO —» 00 U1 Φ Ο -J Ο -* OJ fr1 50 — 00 rt < .Ρ* Η· <J1 < CO —1 —1 η* ι-3 to COfOWWOH-tOOVOOO -* |+ a > · ^ ^ ^ > φ φ B“ o pi otoooo r+Φ

lO · O 00 -* O —* H

to oo cn ·ρ* σι η-

3 H

H

< H

to -» to H· O WUltOWOH--*OVOOO ft ^ ^ ^ ^ mmJl *+·»**

o to cntoocu wootooo O

to U1 W Cn · UlO OO *

W CO

2

H

-» to -» σ —> o to cn to <n æ ο Η· -* Ο ιΡ» Ο Ο Ο σ % I ^ ^ ** ^ ο φ ο ο ο o 3 —1 * to ο ο o id σ> to oo to -* \ 3

H

—λ -* OOVtP*WOH--*OVOOO o ^ — -1 to o p otoooo oo o · to 00 —» o o ip* to CT\ 00 iP* —» cn to to —» Ο W^tOtOOH·—‘OVOOO Oj ^ > » ·» -1 ^ % —1 Ο φ otoooo to w · σ> oo —» ο o U1 iP* iP* W OO iP*

to to —1 —* —1 —1 T

to totowwo Η- .P* O tO Ο Ο Ο Φ * · ^ 00 ^ ^ ^ Ο φ ο O o o σι · σ» w w co it* iP* ifc* to to w -» O to V V ιΡ* O H-tOOVOOO l-ti ·< «I —I * I * .1 * * * cn to to O φ —* to O o o oooo cn · to oo cn cn cn

Ip* CD ιΡ* tp* tP* DK 170100 ΒΊ 17 Φ SujiH'iDjmwmwmtntD η· o ^ kjcnHtnnrtr+r+r+r+r+rtrt Hin ΩΦΦΩΟΗΠΗΗΡΦΦΡ 8 « cn 030'3'(+···Φ···,ϋΗΦ c σ ϋ cn φ φ Ό trj POH-HdOHiHic+PPP^C Φ H· Ό ω3Φη·μ3ΦΦ033ΡΗ tn h r+OHO (Diuroonnno Φ 3 φ Φ3Η3“<ΡΩΩ0ΦΦΦΩ ί* Φ

n nppHdSPPOCCCO

Φ h-w pjHOHHommcno · ^

ft d TD VQ 3 H· h· d Ω OD

3ddOdH-cncncni-3i-3i3d n r+ 3 φ Φ O n Ρ O O O ω σπ· φ r+ H d Η Η· φ > > Ό C C, C · σ

cl d d 3 h tn 13 i-3 ?d 50 Sd Ρ P

σναο αηοοσρ d oo (DH-dcnXOOOvQ ^wtHH r+ o HdH-XH Φ Φ Φ dP OOPtT]'^l*ti-l'JPlr1tr,“‘d n £ tø φ ffi -» O O Φ 01 (Π Η· 0 HP -1 on oo tn -» -» οι Φ ^ Ο η Μ 5> π ο to σι ί> Η tn tn > cn -» η3 -* Ο οο on ι-3 φ 3* Η· t-3 S ·&· Q to to Ο Ρ ω t3 cn Ο ο Ο ο Ο ^ φ Q Ο w γ+ η ω m οο ** C οο -» οο on < Η VO Ό Ο —* 00 Η· 00 S3 -» οο Γ+ 3 σι < Η φ φ rr ο on ft D* Φ _» οο -» οο οο Η· Η %) —· øitoøioooHtootoooo Φ 3 ^ ^ ^ > Μ fh ΟφΟΟΟΟ < Η Ρ) 00 · 00 Ο Ο Ο Η·Η g to to tt* >fc» —‘ (+ •σ 5 · ρ. Ο Ηι Ο —» 00 ' 0 ρ. —* 000100C0OH-—‘OVOOO θ' Η 3 « · ί —» » ^ ^ S <+ 1 ο Φ ο to ο ο ο η ιη 3 σι · οι οο —* ο ο ΟΦ Φ 00 00010000 "Γ+ « a w ρ. 3

01 —1 00 —1 01 ΟΟ IQ

(+ tfc* ØltOOOØlOH-^OHOOO Ω \ Φ - * - ' ' ' 3 3 ΟΦ^ΟΟΟΟ Η rt ο * —> οο -* ο CD 01 to 01 00 ω Γ+ ^ Φ _ι v-^voe-toovooo cl S <« « > —j ^ g to to to -> ¢- ο to to ο ο Φ οοοο οο to · øiooonøiøi >. on ιΡ* »ρ* *ρ* H· • φ σι oo . o VOOtt*OHiC»OVOOO Φ ,· *. _»_» ' · ^ to to to op- —» to on o o p. on οοοο σι· toco σι οι ^ on tfc> tC* * Φ ^ t tt—*

51) η OOØlOOCOOH-tOOVOOO

Hi · " · 1H Φ Οφ —* tO —* —* —1 |-{ . 01 · to 00 to to to Q t> on on on on < (0 ct —» σι oo oo on

O ØlJ^tOtOOH·—»OVOOO

> ^ ^ —i > ^ " on oo p o to on σ o to · σι οο 01 oo

tC* tP* tO

18 DK 170100 B1

Den antimikrobielle aktivitet af forbindelserne ifølge opfindelsen er også bekræftet ved forsøg in vivo. Resultaterne ved behandling af eksperimentelt fremkaldt T

septicemi hos mus fremgår af nedenstående tabel IV.

® Dyrene (grupper på fem mus) blev inficeret ved in- traperitoneal injektion af en 16-timers suppekultur af Staphylococcus aureus TOUR L 165. Podningerne blev reguleret på en sådan måde at ubehandlede dyr døde af septicemi inden for 48 timer. Dyrene behandledes en gang om dagen ^ i 3 dage begyndende umiddelbart efter infektionen. På den 10. dag beregnedes værdien for ED^ i mg/kg/dag ved den af Spearman-Karber angivne metode (D.J. Finney, Statistical method in biological assay, side 524. C. Griffin Ltd.,

London, 1952) på basis af %-andelen af overlevende dyr ef-15 ter hver dosis.

Tabel IV

Forbindelse ED5q mg/kg/dag 20 ifBlge eksempel oral indgift subkutan indgift 1b 0,21 0,21 1c 2,5 0,63 2 - 0,63 0,16 25 3a 0,36 0,16 3b 13 10 3c >20 3,3 3d 3,3 3,3 3e 1,9 0,63 30 5 0,82 0,21 y

De følgende eksempler tjener til nærmere belysning af opfindelsen. » 35 DK 170100 81 19

Eksempel 1

a) 2 * -(1"-Pyrrolidinyl)-rifamycin P

10 ml pyrrolidin sættes til en opløsning af 1,0 g 2 (1,35 mmol) rifamycin P i 150 ml THF (tetrahydrofuran) ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen omrøres i 5 timer hvorefter den udhældes i isvand, syrnes med fortyndet saltsyre og ekstraheres med 2 x 100 ml eetylacetat (EtOAc). De forenede ekstrakter vaskes med vand til neutralitet, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til et ringe rumfang ved 45°C under vakuum. Tilsætning af petroleumsæter fører til dannelse af et bundfald som opsamles og renses ved præparativ TLC (tyndlagskromatografering) på følgende måde: Det faste stof opløses i nogle få ml metanol og opløsningen overføres på silikagelplader 60 PF254 (Mer°k)' som fremkaldes med en blanding af CI^Cl^

MeOH 95:5. Den zone som svarer til det i overskriften angivne produkt skrabes af og elueres med MeOH (metanol). Ekstrakten inddampes til tørhed og remanensen opløses i 2Q ætylacetat og vaskes med fortyndet saltsyre, tørres over natriumsulfat og koncentreres til et lille rumfang. Ved tilsætning af petroleumsæter danner der sig et bundfald som frafiltreres og tørres under vakuum.

Udbyttet og de fysisk-kemiske data er angivet i ta-2^ bellerne I og II.

Ved at gå frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1a, men under anvendelse af vedkommende amin-reaktant, vindes følgende forbindelser, for hvilke reaktionsbetingelser, rensningsdetaljer, udbytter og fysisk-kemiske data 2q er angivet i tabellerne I og II: b) 2*-(4"-Morfolinyl)-rifamycin P, HNR2R^ = morfolin.

c) 2'-(4"-Fenyl-1"-piperazinyl)-rifamycin P, HNR2R3 = 22 1-fenylpiperazin.

20 DK 170100 B1 d) 21-(4"-Fenylmetyl-1"-piperazinyl)-rifamycin P, 2 3 .

HSIR R = 1-benzylpiperazm.

V

e) 21-(4"-ætoxykarbonyl-1"-piperazinyl)-rifamycin P, 2 3 5 HNR R = 1-ætoxykarbonylpiperazin. * f) 2,-(4"-Fenylmetoxykarbonyl-1"-piperazinyl)-rifamy- 2 3 cin P, HNR R = 1-fenylmetoxykarbonylpiperazin.

10 Eksempel 2

2'-(1 "-Piperidinyl)-rifamycin P

1,0 g (1,35 mmol) rifamycin P opløses i 15 ml pipe-ridin og den resulternede opløsning omrøres i 30 timer ved ^ stuetemperatur. Reaktionsblandingen udhældes i isvand og oparbejdes som beskrevet i eksempel 1a. Rensningsdetaljer, udbytte og fysisk-kemiske data fremgår af tabellerne I og II.

2Q Eksempel 3

a) 2,-(4"-Metyl-1"-piperazinyl)-rifamycin P

10 ml 1-metylpiperazin sættes til en opløsning af 2,0 g (2,7 mmol) rifamycin P i 300 ml EtOAc og reaktionsblandingen omrøres i 90 minutter ved stuetemperatur hvorpå 25 der tilsættes yderligere 10 ml 1-metylpiperazm. Omrøringen fortsættes i 3,5 timer hvorpå reaktionsblandingen udhældes i isvand og syrnes med fortyndet saltsyre idet pH holdes mellem 4 og 5.

Det organiske lag kasseres og den vandige fase brin-30 ges til pH ca. 7 med NaHCO^ og ekstraheres med EtOAc. Det organiske ekstrakt tørres over natriumsulfat og koncentreres til et ringe rumfang. Ved afkøling vindes den i over-skriften angivne forbindelse som et krystallinsk pulver der udfælder sig. Rensningsdetaljer, udbytte og fysisk-35 kemiske data fremgår af tabellerne I og II.

21 DK 170100 B1

Ved at gå frem som beskrevet i eksempel 3a, men under anvendelse af vedkommende amin-reaktant, vindes nedenstående forbindelser, for hvilke rensningsdetaljer, udbytte og fysisk-kemiske data er oplyst i tabellerne 5 I og II.

b) 25-Desacetyl-2'-(4"-metyl-1"-piperazinyl)-rifamycin 2 3 P (ud fra 25-desacetyl-rifamycin P), HNR R = 1-metylpipera-zin.

10 c) 2'-[4"-(2'"-Hydroxyætyl)-1"-piperazinyl]-rifamycin P, HNR2R3 = 1-(2-hydroxyætyl)-piperazin.

d) 2,-[4"-(4'"-Klorfenyl)-1"-piperazinyl]-rifamycin P, 15 HNR2R3 = 1-(4-klorfenyl)-piperazin.

e) 2'-[4"-(4'"-Metoxyfenyl)-1"-piperazinyl]-rifamycin 2 3 P, HNR R = 1-(4-metoxyfenyl)-piperazin.

20 Eksempel 4

21-(1"-Piperazinyl)-rifamycin P

En opløsning af 0,22 g (0,23 mol) 2,-[4"-fenylmeto-xykarbonyl-1"-piperazinyl]-rifamycin P i 30 ml absolut æta-25 nol henstår under en hydrogenstrøm og med omrøring ved stuetemperatur og atmosfæretryk i nærværelse af 50 mg 10%s palladium på kul i 1 time. Reaktionen overvåges ved TLC (Rf 0,4 i forhold til udgangsforbindelsen). Når reaktionen er fuldført filtreres reaktionsblandingen og opløs-2q ningsmidlet afdampes. Remanensen opløses i MeOH og renses ved præparat TLC på silikagel 60 PF2^4~plader (elu-eringsmiddelblanding CHCl^iMeOH 9:1). De zoner som indeholder det i overskriften angivne produkt elueres med MeOH.

De metanoliske ekstrakter inddampes til tørhed, remanen-35 sen opløses i ætylacetat og opløsningen vaskes med en vandig NaHCO^-opløsning ved pH 8,5, tørres over natriumsulfat og koncentreres til et lille rumfang. Ved tilsætning 22 DK 170100 B1 af petroleumsæter udfælder den i overskriften angivne forbindelse og den frafiltreres og tørres under vakuum.

Eksempel 5 5 *

2l-(N,N~Diætylamino)-rifamycin P

5 ml Ν,Ν-diætylamin sættes til en opløsning af 0,5 g (0,67 mmol) rifamycin P i 25 ml EtOAc og reaktionsblandingen henstår ved stuetemperatur i 5 dage. Derefter ud-.jq hældes den i isvand og syrnes med fortyndet saltsyre. Det organiske lag fraskilles, vaskes med vand til neutralitet, tørres over natriumsulfat og inddampes til tørhed. Remanensen opløses i 2 ml CH2C12 og underkastes flash-kroma-tografering ved at blive overført til en kolonne af 35 g 15 silikagel 60 (0,04-0,06 mm) fra Merck, hvorpå der fremkaldes med: a) CH2C12 (250 ml), b) CH2C12 indeholdende 0,5 rumfangs% metanol (500 ml), 2Q c) CH2C12 indeholdende 1 rumfangs% metanol (500 ml) og d) CH2C12 indeholdende 1,8 rumfangs% metanol (1 liter).

Denne sidstnævnte blanding eluerer det i overskriften angivne produkt og der opsamles fraktioner på hver 100 ml 25 (12 fraktioner). De fraktioner som indeholder det i over skriften angivne produkt forenes og inddampes til tørhed, hvorved der vindes 33 mg ren forbindelse.

Fremstilling af udgangsmaterialer ^ Rifamycin P (4-deoxytiazolo[5,4-c]rifamycin SV)

Rifamycin P fremstilles som beskrevet i GB patentskrift nr. 1470426, US patentskrift nr. 4144234 og US patentskrift nr. 4129562.

2 *-Metoxykarbonyl-rifamycxn P

2'-Metoxykarbonyl-rifamycin P fremstilles som be- 35 23 DK 170100 B1 skrevet af Cricchio et al i Tetrahedron 1415-1421 (1981) og US patentskrift nr. 4129562.

25-Desacetylrifamycin P

5 En opløsning af 4,5 g (5,5 mmol) 2'-metoxykarbonyl- rifamycin P i 200 ml acetone og 100 ml 50%s vandigt NaOH henstår ved stuetemperatur under omrøring. Reaktionen overvåges ved TLC (CHCl3:MeOH 95:5) indtil udgangsforbindelsen forsvinder (ca. 30 minutter). Reaktionsblandingen udhæl-10 des i isvand og ekstraheres med EtOAc. Ekstrakten tørres over natriumsulfat og inddampes derefter til tørhed under vakuum i løbet af 30 minutter. Remanensen opløses i 300 ml af samme blanding af acetone og vandigt NaOH hvorpå opløsningen inddampes på ny. Remanensen opløses i CHC13 og 15 renses ved søjlekromatografering på 220 g silikagel under eluering med CHC13 indeholdende stigende mængder MeOH (fra 1,5 til 2 rumfangs%). Fraktioner som indeholder det ønskede produkt forenes og opløsningsmidlerne afdampes til tørhed. Ved krystallisering fra EtOAc vindes der 3,5 g 20 (90%) af den ønskede forbindelse med smp. 172-174°C.

UV (MeOH), nm (log ε): 224 (4,26), 260 (4,21), 298 ΙΠαΧ (4,17), 405 (4,14).

Beregnet for C3gH44N2°10S: C H 6,36 N 4,02 S 4,60

Fundet: C 61,76 H 6,30 N 3,95 S 4,47%.

25 30 35

Claims

24 DK 170100 B1 1. 2'-Substituerede 4-deoxytiazolo[5,4-c]rifamycin SV- derivater, kendetegnet ved at de har den almene _ formel 5 * 9H3 9H3 9=3 R '0-<2 I T tf Y OH OH i I 18 >-CH, ^,17 1° / J O. I116 I ^Λ27 CH tf if “3 æ) c,kJ\Vh / I G »C o'VY'-s 11 15 °--N 9 3

1. NR R ch3 hvor R1 betegner hydrogen eller acetyl og 2 3 R og R uafhængigt af hinanden hver betegner C.j_4 alkyl 20 eller sammen med det hosstillede nitrogenatom betegner en 4-7-leddet mættet heterocyklisk ring udvalgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazi-nyl, oxazolidinyl, pyrazolidinyl, tiazolidinyl,.morfo-lidinyl og imidazolidinyl, hvori et ringnitrogenatom 4 25 eventuelt er substitueret med en substituent R udvalgt blandt C.j_4 alkyl? hydroxy-C^_4 alkyl? al^anoyl/ C^_4 alkoxykarbonyl? fenyl som eventuelt er substitueret med 1-3 substituenter udvalgt blandt halogen, hydroxy, C1-4 alkyl og C^_4 alkoxy? fenyl-C1_4 alkyl hvor fenyl-30 ringen eventuelt er substitueret med 1-3 substituenter * udvalgt blandt halogen, hydroxy, C.j_4 alkyl og C.j_4 alkoxyogfenyl-C^_4 alkoxykarbonyl hvor fenylringen even- i tuelt er substitueret med 1-3 substituenter udvalgt blandt halogen, hydroxy, C.j_4 alkyl og C^_4 alkoxy, og farmaceu-35 tisk acceptable syreadditionssalte deraf. 25 DK 170100 B1

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved at er en acetylgruppe.

3. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved at R er en acetylgruppe og R1 2 og R3 4 uafhængigt af hin-5 anden hver er en metyl- eller ætylgruppe eller sammen med det hosstillede nitrogenatom er en pyrrolidinyl-, morfoli-nyl-, piperidinyl- eller piperazinylgruppe som eventuelt er substitueret med en substituent R som defineret i krav 1.

4. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved at den er 2'-(4"tmorfolinyl)-rifamycin p, 2 * — (1"-piperidinyl)-rifamycin P, 2,-(4,,-metyl-1 "-piperazinyD-rifamycin P eller 15 2'-(Ν,Ν-diætylamino)-rifamycin P.

5. Fremgangsmåde til fremstilling af forbindelser med den almene formel I som defineret i krav 1, kendetegnet ved at man omsætter en forbindelse med den almene formel 9H3 fH3 9H3 R °~Y5 OH OH il 18 )-CH, V.17 / 3 0^ U16 11

25 CH30^27 f pHNf^CHj ft i T **! oV/'S \ I 11 ' 31_2'| °-W\> N—1

30 CH3 hvor R betegner hydrogen eller acetyl, 2 3 2 a) med en amin med den almene formel HNR R , hvor R 3 4 og R har de i krav 1 angivne betydninger, dog ikke usub- 26 DK 170100 B1 5 stitueret piperazin, i nærværelse af et inert organisk opløsningsmiddel til dannelse af en forbindelse tiled formel I hvor gruppen 2 3 NR R er son defineret i krav 1 undtagen en forbindelse hvor r 2 3 NR R .er en usubstitueret piperazmgruppe og an ønsket b) til dannelse af en forbindelse med formel I, hvor 2. f 10 gruppen NR R er en usubstitueret piperazingruppe, under- . 4 kaster den tilsvarende forbindelse med formel I, hvor R er en fenyl-C^^-alkoxykarbonylgruppe kontrolleret hydro-genolyse, fortrinsvis i et polært organisk opløsningsmiddel i nærværelse af en hydrogeneringskatalysator.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 5fkendetegnet ved at reaktionstemperaturen i trin a) er mellem 5 og 40°C, fortrinsvis stuetemperatur.

7. Forbindelse ifølge krav 1 til anvendelse som lægemiddel .

8. Anvendelse af en forbindelse som angivet i krav 1 til fremstilling af et medikament til antibakteriel brug.

9. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved at det indeholder en forbindelse med formel I som angivet i krav 1 eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditions-25 salt deraf i blanding med et eller flere farmaceutisk acceptable bærestoffer. ?