DK169666B1

DK169666B1 - Farmaceutisk aktive derivater af D,L-glutamin- og D,L-asparaginsyre, fremgangsmåde til deres fremstilling samt farmaceutisk sammensætning og sammensætning til anvendelse ved husdyrbrug indeholdende sådanne derivater

Info

Publication number: DK169666B1
Application number: DK425487A
Authority: DK
Inventors: Francesco Makovec; Rolando Chiste; Claudio Lucio Rovati; Angelo Luigi Rovati
Original assignee: Rotta Research Lab
Priority date: 1985-12-17
Filing date: 1987-08-14
Publication date: 1995-01-09
Also published as: IT1215169B; JPS62181246A; EP0286643B1; IT8568062A0; PT83952A; JPH0543698B2; ES2081777A6; GR862921B; ZA869460B; AU595858B2; WO1987003869A3; PT83952B; US4769389A; WO1987003869A2; CA1269110A; IE59534B1; IE863233L; DK425487D0; DK425487A; EP0286643A1

Description

DK 169666 B1 I

i

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte, farmaceutisk aktive derivater af D,L-glutaminsyre og D,L-asparaginsyre med formlen 5

COOH

i ‘“2»n

CH—NH-CO-R^ X

10

CO-N

\ R3 15 hvori n er 1 eller 2, er en mono- eller disubstitueret phenylgruppe substitueret med halogener, fortrinsvis chlor og fluor, eller med en methylgruppe i 3- og 4-20 -stillingerne, r er en lineær eller forgrenet alkylgruppe med 4-7 carbonatomer, fortrinsvis en pentyIgruppe, og r3 er en alkoxyalkylgruppe eller en hydroxyalkyl-gruppe med ialt 3-6 carbonatomer, fortrinsvis 25 2-ethoxyethyl, 3-methoxypropyl, 3-ethoxypropyl eller 3-hydroxypropyl,.

samt disse forbindelsers farmaceutisk acceptable salte.

Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne I samt en farmaceutisk sammensætning 30 og en sammensætning til anvendelse ved husdyrbrug indeholdende mindst én af de her omhandlede forbindelser.

Forbindelserne ifølge opfindelsen har vist sig at besidde interessante farmakologiske egenskaber med hensyn til levende organismer, hvilke egenskaber kan til-35 lægges en kraftig antagonistisk aktivitet over for chole-cystokinin (CCK) og andre bioregulerende peptider, som

O

2 DK 169666 B1 forbindelserne ifølge opfindelsen udviser.

De pågældende forbindelser kan således anvendes med fordel til behandling af forskellige sygdomme hos mennesker, såsom lidelser i fordøjelsessystemet, og 5 kan således f.eks. anvendes til behandling af colitis, galdestensdiskinesia og til pancreatitis.

I betragtning af deres farmakologiske karakteristika kan man også forudse, at de vil kunne anvendes til behandling af mentale forstyrrelser, der skyldes mang-10 ler i CCK's eller andre bioaktive polypeptiders 'fysiologiske neuronniveauer, og ligeledes til behandling af a-norexia eller til fremme af vægtforøgelse hos husdyr eller til behandling af sygdomme, hvor en patologisk cellevækst skyldes bioaktive peptider (formodentlig såsom 15 forskellige tumorer).

Som allerede nævnt har forbindelserne ifølge opfindelsen en kraftig anti-CCK-aktivitet ved forskellige forsøgsmodeller både in vivo og in vitro. De reducerer således kontraktioner fremkaldt af CCK i galdeblæren 20 hos marsvin både in vitro og in vivo og inhiberer kontraktioner fremkaldt i colon hos kaniner.

Særlig kraftig er også deres beskyttende virkning over for pancreatitis fremkaldt eksperimentelt ved hjælp af curulein og med natriumtaurocholat.

25 Farmaceutiske former af forbindelserne ifølge opfindelsen kan fremstilles ved hjælp af gængse metoder i form af f.eks. tabletter, kapsler, suspensioner, opløs·? ninger og suppositorier og kan indgives oralt, parente-ralt eller i rectum.

30 Det aktive stof indgives til patienten i reg len i et forhold på fra 0,1 til 10 mg/kg legemsvægt pr. dosis. Til parenteral indgift foretrækkes det at anvende et vandopløseligt salt af de pågældende forbindelser, såsom natriumsaltet eller et andet salt, der er ik-35 ke-toksisk og pharmaceutisk acceptabelt. Stoffer, der almindeligvis anvendes inden for den farmaceutiske in-

O

3 DK 169666 B1 dustri, såsom ekscipienser, bindemidler, smagsstoffer, dispergeringsmidler, farvestoffer5fugtemidler etc.^kan anvendes som inaktive bestanddele.

Fremgangsmåden til fremstilling af derivater-5 ne af glutaminsyre og asparaginsyre ifølge opfindelsen omfatter følgende trin: (a) omsætning af et indre anhydrid med formlen CO-

J

10 (OH,) ' ~ II

- ~ 2 n CH-NH—CO-R.

co-r-J.

15 hvor n og R-^ har de ovenfor anførte betydninger, ^r2 med en amin med formlen H-N , hvor R, og R, har de ovenfor R3 anførte betydninger, i et molforhold på 1-5 20 ved en temperatur fra -10°C til +10°C, hvorefter forbindelserne med formlen I udvindes fra reaktionsblandingen.

De indre anhydrider med formlen II er forbindelser, der er kendt (jfr. italiensk patentansøgning . 67644-A/84 og 68070-A/84), medens de fleste af aminerne 25 u med formlen Η-Νχ er nye forbindelser, der ikke tidli-E3 gere har været syntetiseret.

Den række trin, der omfatter fremgangsmåden ifølge 30 ge opfindelsen, er vist i sin helhed i nedenstående reaktionsskema .

35

O

4 DK 169666 B1

COOH COOH

REAKTIONS- | | SKEMA (CH2)n . (CH2) n O (ttt) - j 2 n acylerxng j 2 n j 1,1 CH—NH2 -- CH—NH—C—Rj I R.—CO—Cl j

COOH 1 , COOH

5 (trin b)

COOH

O CH O

dehydratisering /^(ch ) amidering | 2 " jf 10 (“in0> «<* QX^ (II) R3 (trin a) (I)

Acyleringstrinnet b udføres ved en temperatur 15 på ca. 5°C i et tidsrum fra 1 til 24 timer, fortrinsvis 12 timer.

I trin c er reaktionstiden i reglen fra ca.

30 minutter til 12 timer, fortrinsvis ca. 3 timer, og mængden af eddikesyreanhydrid er fortrinsvis 3 mol pr.

20 mol forbindelse med formlen III.

I amideringstrinnet indføres aminen med formlen H-N fortrinsvis i et molforhold på 2,5 til 1 i forhold r3 26 til det indre anhydrid med formlen II, og reaktionen forløber i et tidsrum fra ca. 30 minutter til 12 timer, fortrinsvis 3 timer.

^2

Aminerne med formlen H-N , hvor R- er en li-30 R3 neær eller forgrenet alkylkæde med 5-7 carbonatomer, og R3 er en alkoxyalkylgruppe, er hidtil ukendte.

Den almindelige fremgangsmåde til fremstilling 35 /Ro af aminerne med formlen H-N^ udføres ved at omsætte R3

O

5 DK 169666 B1 et overskud (fortrinsvis 2-3 gange i mol) af en primær hydroxyalkylamin eller en alkoxyalkylamin med forftilen Η-Νχ , såsom f.eks. methoxypropylamin, med 1 mol af R- 5 3 det tilsvarende alkylhalogenid, såsom f.eks. n-pentylbro-mid, i et polært eller ikke-polært opløsningsmiddel, fortrinsvis en alkohol, såsom isopropylalkohol, i et tidsrum på mellem 1 og 24 timer, fortrinsvis 8 timer, ved tilba-10 gesvalingstemperaturen for det anvendte opløsningsmiddel.

Derpå isoleres aminen i ren form fra reaktionsblandingen ved fraktioneret destillation under vakuum.

Opfindelsen vil i det følgende blive belyst ved hjælp af eksempler.

15

Eksempel 1

Fremstilling af D,L-4-(3,4-dichlorbenzoylamino)-5-[N-3--methoxypropyl)-pentylamino]-5-oxo-pentansyre (forbindelse 1 i tabel I) 20 3 0,2 g (0,1 mol) 3,4-dichlor-benzoyl-glutamin- syreanhydrid fyldes i en reaktor og suspenderes i 100 ml vand. Suspensionen afkøles til ca. 5°C, og der tildryp-pes 32,2 g (0,25 mol) N-pentyl-N-(3-methoxypropyl)-arnin i løbet af et tidsrum på ca. 15 minutter.

25 Reaktionen får lov at forløbe i tre timer ved denne temperatur og syrnes derpå med iseddike. Der filtreres, vaskes med vand indtil neutralitet og tørres.

Herved fås 23,5 g, et udbytte på 50,9%.

Smp. 113-115°C (krystalliserer fra acetone).

30 TLC. R^: 0,83 (isoamyl/acetone/vand = 5:2:2).

Alle forbindelserne med formlen I syntetiseres ved hjælp af samme metode (se reaktions skemaet ovenfor) .

Som eksempler på disse forbindelser med flere 35 karakteristika, der identificerer dem, samt de opnåede udbytter er anført de i nedenstående Tabel I nævnte.

DK 169666 B1 6 o O O O O O in in

CM C-ι CM CM CM CM O O

2 2 Z Z 22 in in in in CM CM

H CM CM CM CM CMCM000022 d) i—I 1—4 i—l r—i rH r*H CN 04 04 04 cH r—1 e u uoo’ouzzzzuu ti o o cm rr a>aJvDvD^^r<-ir-i £ ro ro ro ro CMCMcorororororo r° as S S I Æsasszzzz w rH «—i cm ro o O co ro CM cm ,—I r—i

CM CM CM CM CMCMCMCMCMCMCMCM

<u O OOO UUO O O U Ό V

-P

+> σι h in. ^ ocooovDCMincrioo ___. ^ r~ r' o f' i' *« ·—

J2 <*> O —i tn CT\ tOCMcOCMC'ir-4r''CM

iQ^tn -o' cm r-ι cM.HCMro->a,vøcoco 3 ro in r- co cMrrcDai-o'fHr^co -te CO CO CO 00 νΟ^Ι^Γ'-Γ^Ι'-Γ'-Γ' IH v- — y — —

Pi, o ooo oooooooo i r4 rH r—4 r—l r4 »—4 ^ .......... ·· ··

Q> CM CM Γ0 CO i—I J4 54 CM CM

Ό Q) Q) Ό ' Ό -¾ U d'd.e.q- iq «o

•HQ) ββ β β ί I ?, ϋ t! S C

hS. o >>> ««<ua,j3j3|§

'J ’ 4-1 κ·ί>ί> k* «—I ,—I QJ

"I β (D \ \ \ SM\>1>,UU\\ P tQ U r4 t—H c—4 t—4 «Η Q | Q i (0 (Q r4 r4 m < ooo oooo oo >iH g c g Gcuu^f-iC -g

Lj <Sj <ϋίΟ<υ UJloftw>i>i(oio

5 5 S

fSHH ΗΗμμΜΗΗΗ

rH

C, CZ U <H O

0) 1 o CM rH tOin-TTCOCOCOCriCM

r-ι O '—in ro to σ i i i t i -i i i p r j CMOO '1 111 '3'CMCMmiOOOCOr'·

.g 7 n, r' * CO in-'TCOCMtOCTtOCOr'Or-C

£ _ -L ^ , & .-4 CM CTl CO r4 r-l *H r—I

O c — X yC £ i—I .H

ΜΊ S — Z Z m

O CM 1 I

'Ό O ΠΤ DC O i—I .—1 <—· «—i *—· ·—· 0) r l r)_ π . r\ rH 1 i—I >4 >1 >1 >4 5~l s v—u u — u g ,_y>i?o>.aarHaaa-i « - ~ cr'iaxjsoosoooo:* , 5-1 O O 4J5454.C5454.54 jr 54 a S54H (DQ,CliUG<aDi+l <D I CD Di >i 111(1)1110) -tj !? δχχΗοοοχοοοκ > ir o o a—i £ d jr o jr jt jr o •h 3

54 Q24J4JiQQi<U>i(!j4JG2mM4J

(1) £<D<D-HO£j=£a)£££a)

q I I i I 54 I i I I I I I I

1-1 rocMrocoDiCMcorocMcocorocM

··

H r*4 *—I rH rH rH i—H rH rH rH rH t—H rH

CM >"1 rO rO rO

r-l Bi 4-1 4J4J4J JJJJJJJJ-JJJJJJJJ

fl] CCCCddCCCCd. d I i, SU ΠΠΠΠ <g ^ H 1-1 7* 1-1 £1 >1 >1 >1 >1 Τ' 71 -r1 <-< d d fi d £< >1 >i >i

dl Q)Q)m S d C C o h r) H

ϋ I Λ. .g JO^®*^**

a 9* 9* £* α -S α Dl § 0 S S

rH I ll| Γ W i I r r ® 0

Bi 54 54 5-1 54 1 I rH rH O, Dl Λ Λ o ooo 54 54>i>ii i a a

rH 1—I rH rH 0 0 JT jC «Η r—i 1 I

s jr jr jr ,η,η43Ζ!>,>,54 54 0 ooo jrjroøjrjroo

*H *r4 -*4 -r4 O O £ £ 44 -Di—I »H

Ό Ό Ό Ό -W -H -P -H n) m jr JT

1 iii Ό'θ,σ,ο££ϋϋ -ςτ MT T tT 11(11111 ΜΓ^Γ^Γ^·*3*ΓΟ^*ΜΓ γο co coco -----ro co co ro

C CM CM CM CM

. CMCMCMCMCMCMCMCM

Si 54 0 IV, rH CM co -Ο· ΐηνθΓ~£θσθ<Η<Μ

H rH rH

7 DK 169666 B1 j 5 m lo in in lo lo

in in O O O O O O

, O O CM (N M (N CM CM

η CM o) Z Z Z Z 2 , z ^

Φ Z Z CM CM CM CM CM CMO

Sr-CCM<—c 1—» ·—c —c <“I <-' CM

u U fe. U CJ O U u U Z

n>HOCM co. ·«· ld o co or l r m ro ro cm ro ro ro cm m x s x x z z se z ss ω r-i »—i CM OCMCO r—l OCM w

CM CM CM CM CM CM CM CM CN S

CDOUU CJUU o o o o -P +*

Tj o

f (M CD U1 CD O m O COi—I U

-- -- ·- r— (Ti Λ "3· Γ- <—i CM LD CO CM OCM “ 73^-10 CM CM LOCOr-l CO ΓΟΌ* >·

D H

O

lO LO CM O CO LD I" CO· ri * F-ioco C^ocn CO LD in n

1 ' «Ί «-\ ·— *» ·— *- O" O

fHOOO OOO o O O f] * *

r-| ,-i r-T >-< <-* * H

S ' P ~ ~ i -¾¾ Ό •o'S-y'S o I ti fj Cj £j C (tf C 01 Λ · g g’ 5 Φ ^ Ρβ> 4> < o < ““^Tr-icD cucdoj <d <α χ ;;

^«o OCCCCC O 4J

Μ (-1 C C O O O -o o »H C 0) WOurocti-P x> x> -p -P >i «2 h n x: x; o φ o) o) cd sxi «rj

0 5 +3 O O O o u X JJ -H

a a < cc < < «c a a g * O r-f ® tø o O O _ O’

+1 —r-C I—t OL r^LO'T Γ~- CM O CJ

U .Ilt 1 1 1 ' Λ ri. -H

n co cd r- m" ro ι-h ^ o r; C) iS &oi ό o cMcnr- o t-ico .

^ g Γ-4 rX H rX ^

~ CO P

H 5~i 0 i—i r-t <—< c* ^ i i >i >i >( δτ1 δ? P ^ ^ η1 Ό m OuDiCbOiOiP) DiDjQi ϊί S OOO OOO, O 00 g .Λ MPPPPI p p & s «j ααααα>ιαο,α B til i i x i i i -p «Τ’ &1 S1 jb1 $? £ <u * o o o δ o £ 8 oo -g 555 5 5 p +3 5xJ o.

fff P T f Pi ro cn ro co o »x^ co ro co qj 5 Λ χ £ >< >, XD -P iX rX φ >1 >i>1 Φ cf· -s £ I S rr S’ JSSr. ϊ -¾ ^ s,a,fi5£7ciis,& a · -, Ί8.Α5 > ^ rS o' Φ •Η (Η ι-l Η ίΡΗ?1 5 ^ § § g i ^ ι gi s η ^ U ί i f u ΐ p « KIOOOOPOOÆ d S S« ΦΗ °cw5oox: υ og ^ ” 5 S "5 S '5 -π ‘5 S S ω ·· iii i i T3 i \ \ & m ro ^ ^ ^ir I ^

coco CO co CO coco XII

co •Η Ό rH β P CM CM CM CM CM CM CM *—<»—< ΦΠ3 Q >

rQ

Lj nro-'Tin lo Γ-- co cti o«—ι λ f—( i—l »—1 I—l 1—ι r—ι 1—I CM CM *

O

8 DK 169666 B1

Eksempel 2

Fremstilling af N-(3-methoxypropyl)-pentylamin (forbindelse 1 i tabel II) 891 g (10 mol) 3-methoxypropylamin blandes med 5 1 liter isopropanol ved omgivelsernes temperatur i en re aktionsbeholder. 755 g (5 mol) n-pen ty lbromid sættes til opløsningen, hvorefter den opvarmes under tilbagesvaling (ca. 90°C) i 12 timer. Opløsningsmidlet afdampes ved formindsket tryk, remanensen fortyndes med 2 liter 2N 10 natriumcarbonat, overfaseolien fraskilles og destilleres ved formindsket tryk, idet fraktionen ved 104-108°C/ 20 mm Hg opsamles. Derved fås 390 g produkt, udbytte 73%.

Flere eksempler på N-(alkoxyalkyl)-alkylamin-15 forbindelser, der anvendes til at syntetisere forbindelserne, med formlen I ifølge opfindelsen, er anført i tabel II nedenfor tillige med flere karakteristika, der identificerer dem, og de opnåede udbytter.

N-(3-Hydroxypropyl)-pentylamin fremstilles 20 som beskrevet i litteraturen [J.A.C.S. 59, 2280 (1937)].

25 30 35 9 DK 169666 B1

CD

•P

+» >1 nft· nomouoooot^co t^c^tvocotomr^t^r'

D W

ϋ? +> 1 Λί ε oocjon-cvirt'T-c § I I I I 1 7 11 I 1 β 24 c\i ocnrj^c^cxjr^nvo (D CJrHt-IW'f-C'-lT-t—c H g1 Cl c O u: g W v

O

Ή >1 -

Oj c—^ fH ·"“* i—< 'g * >, ,-H O. >, >. >1 >1 >< >, 5 i fx jj^xi’a.-p-p-p-1-1'^·!-’

1= aj4->-POCD!D5)C)2(D

6 ~ „ E<D<DmeE6E&£ • β ~ = ='

•H = U

jji ' ^ C cncMconcMcnncnnn h I t, > H fr ^ - h c a ί m (D « Π3 cd >,>,>.>< >i i ^ >> >^ Λ

P_J <M .AJ ϋ JJ -O JJ .—t >1 Λ .C

=; ccccc>itf(D-u? .O CJ o o α r- jf .c o a.G.c.c.c.^3'3 et, 0 -H c E Ό = 1 i Å c -c rj

'C

2 ^run^rinot^ooo 5 0 10 DK 169666 B1

Den kraftige anti-cholecystokinin-(anti-CCK)--aktivitet, der udvises af mange af forbindelserne i-følge opfindelsen, vil nu blive påvist ved hjælp af en række farmakologiske forsøg udført både in vitro og 5 in vivo.

Anti-CCK-aktivitet på marsvinegaldeblærer in vitro

En længdestrimmel af marsvinegaldeblære anbringes i et bad til isolerede organer i Krebs ved en tempe-10 ratur på 32°C og oxygeneres kontinuerligt med en oxygen/-C02-blanding = 95/5 vo/vo.

De isometriske kontraktioner påvises ved hjælp af en krafttransduktor og noteres.

Galdeblæren kontraheres ved hjælp af en 10 ng/ml 15 koncentration af CCK-8; den antagonistiske aktivitet hos forbindelserne ifølge opfindelsen med hensyn til CCK's kontraherende virkning bestemmes ved hjælp af forskellige koncentrationer, for at bestemme værdien af IC50, dvs. den koncentration i mikrogram/ml af forbindelsen, der har en an-20 tagoniserende virkning på 50% på CCK's kontraherende virkning.

De opnåede resultater ses i tabel III, hvori er anført de afprøvede forbindelser og de fundne IC50-vær-dier, som beregnes ved hjælp af regressionsmetoden ved en 25 prøve bestående af mindst tre forsøg for hver undersøgt forbindelse.

30 35 DK 169666 B1 11 o

Tabel III

Anti-CCK-8-aktivitet (anvendt koncentration: 10 ng/ml) hos forbindelserne ifølge opfindelsen på marsvinegalde-blærer in vitro udtrykt som IC50 i mikrogram/ml 5

Forb. Aktivitet _ IC50 (mcg/ml) 1 0,1 2 0,1 10 3 °76 4 3.0 5 0,8 6 0.3 7 0.9 e 15 9 4’° 10 4.1 11 2’e 12 2,9 13 8,9 14 0,8 15 0,7 20 , T_ 16 1 j5 17 1,6 18 4,8 19 0,6 20 0r9 21 4,7 ^ Progluraid'. 340,0 30 Af de i tabellen anførte data fremgår det, at forbindelserne ifølge opfindelsen har en 50%’s anta-goniserende virkning på CCK-8's aktivitet ved en koncentration, som for de fleste aktive forbindelsers vedkommende (f.eks. forbindelserne 1 og 2) kun er ca. 10 gan-35 ge større end den specifikke agonists, hvilket viser en meget høj virkningsspecificitet. Desuden har den valg-

O

12 DK 169666 B1 te sammenligningsforbindeIse, "Proglumid", der er den mest kendte af de kendte medikamenter med anti-CCK-ak-tivitet, en aktivitet · ca. 3000 gange mindre ved denne prøve end den mest aktive forbindelse ifølge opfin-5 delsen.

For at bekræfte resultatet af undersøgelserne in vitro, afprøves flere af de mere interessante forbindelser in vivo ved hjælp af marsvinegaldeblærer in situ.

Den anvendte fremgangsmåde er beskrevet af 10 Ljungberg [Svensk Farm. Tidsskr. Jj>9, 351-354 (1964)].

Marsvin med en vægt på ca. 400 g anæstetise-res med urethan; de stoffer, der afprøves, indgives intravenøst (i.v.) i halsvenen.

Galdeblærens respons på de stoffer, der afprø-15 ves, påvises ved hjælp af en krafttransduktor og noteres ved hjælp af et mikrodynamometer. 10 ng/kg CCK-8 vælges som den optimale kontraherende dosis. De antagonistiske forbindelser, der afprøves, indgives i stigende doser for at tillade en beregning af en ID50-værdi, dvs.

20 den dosis (i mg/kg i.v.) med en 50%'s inhiberende virkning mod kontraktioner fremkaldt af 10 ng/kg i.v. CCK-8.

De opnåede resultater er vist i tabel IV nedenfor, som anfører den opnåede virkning udtrykt som ID50.

25 30 35

O

13 DK 169666 B1

Tabel IV

Anti-CCK-8-aktivitet (anvendt koncentration: 10 ng/kg) hos flere forbindelser ifølge opfindelsen på marsvine-galdeblærer in situ, udtrykt som ID50 i mg/kg i.v. sam-5 menlignet med "Proglumid".

Forb. ID50 (mg/kg i.v.) 1 Or11 2 · 0.10 3 ' 0,75 10 7 4 5,08 5 0.,68 6 8,40 7 0,65 8 2.02 g 3,85 15 10 3,66 11 ’ 2,25 • 12 4 744 13 6j70 14 i-,10 15 O784 20 16 2J08 17 3,25 18 6.79 19 0η74 20 0754 21 3,69 25 Proglumid- 70,5

De opnåede resultater bekræfter hovedsagelig det, der allerede er fremgået af forsøg in vitro, nemlig, at flere af forbindelserne ifølge opfindelsen er yderst- 30 kraftige CCK-antagonister, der kan blokere kontraktioner af galdeblæren fremkaldt af CCK-8 indgivet i koncentrationer, der ligger betydelig over defy der fremkalder patologiske syndromer,ved doser på ca. 0,1 mg/kg (for forbindelserne 1 og 2). De afprøvede forbindelser er ligeledes be- 35 tydelig mere aktive en kontrolmedikamentet "Proglumid" in vivo.

O

14 DK 169666 B1

Den antispastiske aktivitet, som de her omhandlede forbindelser udøver på hele fordøjelseskanalen, er også betragtelig. Målt på mus v.ed den vegetabilske car-bonprøve (gennemgangshastigheden gennem maven og tarme-5 ne) belyses denne aktivitet i nedenstående tabel.

Tabel V

Eksempler på antispastiske aktiviteter hos forbindelserne ifølge opfindelsen indgivet intraperitonealt til mus. Vær-10 dierne er anført som ED50 i mg/kg, dvs. den dosis, som reducerer carbons intestinale gennemgangstid med 50%.

Antispastiske aktiviteter

Forb.__ED50 mg/kg (i.p.)_ 15 1 12.8 2 14;0 - 3 25;0 5 2078 7 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1179 20 · 15 4472 19 18/5 20 27;9

En langt mere specifik anti-spastisk aktivitet, 2 som ligger nærmere ved en fysiologisk situation, er vist 3 ved hjælp af følgende forsøg.

4

En anæstetiseret kanins abdomen opskæres, så 5 at colon transversum blotlægges. En lille ballon fuld ' 6 af vand indsættes på et bestemt punkt og forbindes med en 7 tryktransduktor ved hjælp af en polyethylenkanyle fyldt 8 med vand.

9 Når den optimale sensitivitet er fastsat i for 10 hold til fysiologiske kontraktioner, indgives produkterne 11 gennem lårvenen. Kontraktioner fremkaldes ved indgift af 100 ng/kg CCK.

O

15 DK 169666 B1

Aktiviteterne hos forbindelserne? ifølge opfindelsen er vist i nedenstående tabel.

Tabel VI

5 Antispastisk aktivitet i kaniners colon stimuleret med CCK-8

Forb. Doser Forsøg Forsøg ED5Q (mgAg i.v.) (irg/kg i.v.) 1 2 r= (korrelat.

koefficient 10 °73 ~ 1?2 3 " 34,1 ED50 = 1,24 1 1 -'4 5/6 -S5’7 r.0.96 3 —1007.0 -87.,8 ' °:3 " 9Γ8 “ 8 9 10Γ2 EDSO = 1.47 2 1 -45;1 “ 39/8 r = 0-98

15 3 8870 - B2j4 T

25 ~ 3377 ° EDSO = 92?6

Proglumid. 50 - 38^1 - 16rl r = 0 83 100 - 64^4 - 43^1 7 35 ' 2

De anførte data viser, at flere af de afprøvede forbindelser ifølge opfindelsen, som allerede vist for galdeblærens vedkommende, også modvirker kontraktioner fremkaldt i tarmkanalen ved hjælp af CCK indgivet i høje doser (100 ng/kg).

3 pc 4

Den antispastiske aktivitet ses ved doser på ca. 1 mg/kg for den bedste af de anvendte forbindelser, som er næsten 100 gange mere aktive end "Proglumid", selv ved denne prøve.

5

En anden særlig interessant farmakologisk e- 6 30 · 7 jendommelighed ved de omhandlede forbindelser, som vil kunne resultere i en betydelig terapeutisk fornyelse, er deres aktivitet på forskellige former for leverbetæn 8 delse fremkaldt eksperimentelt hos dyr ved hjælp af ce- 9 rulein og natriumtaurocolat.

10

Forsøgene udføres på følgende måde.

O

16 DK 169666 B1

Leverbetændelse (pancreatitis) fremkaldt med cerulein I det væsentlige følges Niedereau m.fl.'s metode [Gastroenterology 88, 1192-1204 (1985)].

Voksne hanmus får hver time en cerulein-injek-5 tion (Takus) (50 mqgram/kg) i alt seks gange.

Forbindelsen indgives 30 minutter før hvér ce>-rulein-indgift. 9 timer efter behandlingens påbegyndelse tages der blod fra "rectro-orbitory" plexus efter anæstesi med ether, dyrene aflives, og pancreas fjernes og 10 vejes. Aktiviteten af serumamylase bestemmes ved hjælp af Ceska-metoden [Clin. Chim. Acta 26, 437-444 (1969)].

De opnåede resultater for flere af forbindelserne ifølge opfindelsen er anført i tabel VII nedenfor sammenlignet med resultaterne for "Proglumid" og er ud-15 trykt som ED50, dvs. den mængde stof i mg/kg i.v., der har 50% inhiberende virkning på pancreas' vægtforøgelse og koncentrationen af serumamylase.

Af de anførte data fremgår det, at forbindelserne ifølge opfindelsen udviser beskyttende aktivitet på 20 pancreas ved meget lave doser:, de beregnede ED50-vær- dier er af størrelsesordenen 4-5 mg/kg både for inhibering af stigningen i serumamylase og vægtforøgelse af pancreas. Kontrolmedikamentet "Proglumid" er ligeledes aktivt, men ved betydelig højere doser. Forholdet i aktivitet 25 mellem den mest aktive forbindelse ifølge opfindelsen og "Proglumid" ved denne prøve er faktisk ca. 50. 1 35 DK 169666 B1 17

Tabel VII

Eksempler på den beskyttende aktivitet af' forbindelserne ifølge opfindelsen på pancreatitis hos mus fremkaldt eksperimentelt med cerulein fri c ft ^ — -r·

HH o O

g 2 o, > " c °- ' Sn? 8. ? , , Sjn? g! t , , 3 H ‘ ' S ·Γ i ’ 1 S f3 —

E fn O

g g g o co h ® £3 H ,r~ t m~ cn co cn o * £ £ £ - £ § o * o fri H O O * © CSC ^ ^ S. °l °i °1 ål * i g" sf 8 i 2 § s 3 3 2 § § s jh ce æ ^

2 fri S

Pi CO CD

««3 § « S, »02 « s ur i s «r i. s si m g s n o _ ffi fø o o v in tn oj cd *-< ^

H: C3 Q cvi -1 O · V H O SS

ea S £ S cm co o n o <#> >

N

4J

Oi

fB

5 > £ r ·« in o co η o V c« α -<rin f" £* 3 S g1 n S ® § « n ^ * S- ^ ul_ Ί ” ,SS>o'o o cT o' o o o o o o o o o

0 O CQ

Ή fl H

1 co N

<#> ft 13 - ((__ !- d d •Η ^ ^

C *71 ^ M <—V ^ O CO

Ή rH ν’ ca Ή v ^ (!) ^ .* ^ 3 Μ V y 2 c* <; s^'cb^, n Ja S\£d) φ \ e cj <uee φ e °S,ne °oo ϋ£ιη.ο , ε ^ o .88 + C-TO.S + o r- h + ™ 3

Mn"" ~ ~ Ud'" W M , , „

CDOhCHCHC OOCMCCMCCMC ® ^ T5 -5 O H

H-.H · H · i-c «--I HH · —I *7i Η Η . 0 ^ β η ηγ^οι^οι^« HH 'd.S'dijO^ HH g ,_} e ,-< g:gd^ d-t d*t op d 3 S : «3 o o Ep 3 p jj jj ·Η P ·γ4 / fH $-lV-l Ή l· ^ I* βΓ“1 t* 5-{ $-4 <-< C *-< u -P4J +> *P cao ω o q q no do do d d d o fi o do d d p u 00 ««o o o 000^0.0, ° o £ + £ + ft+fn^rm4· « « 5*; J*. o. + c. + -. - _ ____LI- ---------- -— n - - - i -——

O

18 DK 169666 B1

Pancreatitis fremkaldt med natriumtaurocolat

Der anvendes den af Aho m.fl. beskrevne fremgangsmåde i Scandinavian J. Gastroenterology 15, 411-416 (1980).

5 Hanrotter med en vægt på ca. 250 g underka stes laparatomi, og pancreas blotlægges. Der injiceres 0,3 ml af en 6% opløsning af natriumtaurocolat direkte i pancreasvævet.

De produkter, der undersøges, indgives intra-10 peritonealt (i.p.) 30 minutter før operationen og 3 ti mer efter operationen. Seks timer efter laparatomien . fjernes blod fra "retro-orbitory" plexus efter anæstesi med ether, dyrene aflives, og pancreas fjernes og vejes. Serumamylaseaktiviteten bestemmes ved den ovenfor be-15 skrevne metode.

De opnåede resultater med forbindelserne 1 og 2 er anført i tabel VIII sammenlignet med resultaterne for "Proglumid".

20 25 30 35 DK 169666 B1 19 &. ^ C O, „ W Ή ΙΟ in

Orø n ·% —> —

ZhltJ' ^ COCO CM -— ., Η Η Λ r-σ» cn cn cn -P ci tø ^ il cn || — <n o

S § e s ? 8 C, S ? I lus S * * ~ gi -p o· Hg§ ^ ^ “I °A °L Ί ^ ^ © Μ' λ> > r^'C'ro co r-i cn in cn -P 3 rrvøfM cn i O 'a-co •H © <—i <-* > 4->

H

-P Ό

Λ! © H

Cd £ rj i S g is o rr co coco (-'j vo cr^ r- ooj-t tn^ «-^

<§ h - ^ S ^ αΓοΓ o~ oT ri rirj o' cT ri io* ^ oT

rt fl) >j « X! <-t r-l «—< ·—' CNr-C

S 8 2 W C

Φ -C-1 2 m JJ

•P £3 Λ -P Φ---i----- '>i g "i------

X -H

MM (x, S S, «.i » g S β. Λ Η Μ λ; HU X m _ O — ΓΗ Μ © Køs ,, °Αιη II So II vocr H © IB S g 11 iocTi II CO σ

> ro 4J mg E tf 1 - A

Η φ h S^° in II ^ jl nil © Ό id M O Q Q Jj. gi gi <#> > 5 (—i cd r- ^ o ΓΗ -r co

B ,£} © ίο <ςρ f' -=Γ n ^ n CN

^ -q< 00 O «3· ΙΟ Γ" CN "C

om <-· m

M

Q) ή * »O

Ό +> H --------------------------- -- - -

·© -P

o, ©

MM © © (C

Sd g < g g· glH'i' H * * M o © A c c ©gc & © o o ia g +5 g o o ' ; o *' o Bo· o .

w c , tn jj cn 4-> , muwjj cn -u cn m m + ^n3 «_© ro + — ©'—co«—© + ~-© —' © MM ^ ^ ^ o ^ M cmocnONO MM -.0 . "o © © r· r r φφ s: æ x: © © Ό Ό jc li 11 li li 11 iiagiSifl li li _llJjijijil iiifi ftfill il ggl o 20 DK 169666 B1

De følgende tabeller angiver gennemsnitsværdierne for foderindtagelse og den gennemsnitlige vægt af liver gruppe dyr beregnet ugentlig samt Student t-værdien beregnet mellem de forskellige behandlede grupper og 5 gruppen af kontroldyr. Af de i tabellerne IX og X anførte data fremgår det, at daglige doser på 0,625 mg/kg forbindelse nr. 1 giver en forøgelse på ca. 20% i foderindtagelsen sammenlignet med kontroldyrene; denne forøgelse er ca. 30% for de andre afprøvede doser og er til en-10 hver tid yderst signifikant.

Vægtforøgelse hos de behandlede dyr sammenlignet med vægtforøgelse hos kontroldyrene udviser lignende resultater; alle grupper, der er behandlet med forbindelse 1, giver en signifikant større vægtforøgelse end kontrol-15 dyrene begyndende fra behandlingens første uge.

Af dataene i tabel VIII fremgår det, at tauro-colat fremkalder forstørrelse af pancreas svarende til den, der bevirkes af CCK-8. Virkningen af stigningen i amylase er imidlertid langt mindre udtalt; det er såle-20 des klart, at taurocalåts virkningsmekanisme er mindre specifik. Men selv i dette forsøg inhiberer forbindelserne ifølge opfindelsen begge virkninger, som visser tilstedeværelsen af en inflammationsproces i pancreas, ved doser mellem 5 og 10 mg/kg vægt.

25 "Proglumid" er kun aktiv i koncentrationer, der er 30-60 gange højere.

For at bekræfte den hypotese, at anti-CCK-ak-tiviteten, der udvises af de fleste af de pågældende forbindelser, med fordel kan anvendes ved behandlingen af 30 anorexia hos mennesker eller som et appetit-stimulerende middel til husdyr, udføres følgende forsøg:

Der benyttes hanrotter med en begyndelsesvægt på ca. 160 g, og de inddeles i grupper på 10 dyr. Hver gruppe får medikamentet (forbindelse 1) i de anførte 35 doser dagligt i tre uger peroralt.

O

21 DK 169666 B1

Medikamentet i form af natriumsaltet opløses i vand og indgives i et volumen på 10 ml E^O/ka, medens kontrolgruppen får et lige så stort volumen opløsningsmiddel alene.

5 10 15 20 25 30 35 DK 169666 Bl 22

·-( CO V UO

*— »v.

gj r* n « cm v« S1 +1 +( - +1 * + 1 «

, 3 to ' CM

I v lo in n — Ό · ^ — * *-0 C co o cm o co05 o *-< (Π O- tn t^·

gi CM CM CM CM

(U

A

<D

CM O (O

•h M q) ct r~ „r~ η © I v 05 : w* mi 3 -H · +1 * +! “ <D -¾ +IO rr * ,¾^ · o o lo r» cm π tn 3 cm o— i-.- ~~ 5.(¾ o cm « t-- v cm ®

π tn CO CM -I CM

lg -ΰ W W CM

Ή (1)-1-1

V

H LO -t ·- O CM

E-> \ ® —cm in —--i σ> « o o cn .-i O to CO CM o

τ( Ή r-t ' t—( CM

•(C

M © ^ O O O

fe r-t · r-1 · H · O O O

tn tn in (D> Q)> <D > ...

tn tn tn * * *

H+J i—! 4-J >-) +1 Z

s CD CD CD

b? O 30 3 0 0 0

g* Μ Ή (D -M (D Ή <D

P -o O 'O AV AV S

.¾ 3 M3 M3 M3 CD

° ..o -o+J .. o +> .. o +> m <i< a(xtCQ u fe cn q fet oi DK 169666 B1 23 m to to >- «__ v * · in · O co co « t n · * tn - - +l · ø +i +i tn +i to „ ^ C3 —s C5 . r- v — ro o *^tn

„ o w o ro tr-H

^ OJ CO O £* ro

r-< 05 .'C »O

4-) <V »s is *s ro co ro * 's ; w * «ri * £ ω +i +1’ +ιό +,n S' C5 λ ? ro ° cj -s ø ø -s j- *s ro Φ o ~ o ^ m ro Q. · v to “ ro ^ ro p. co co co ro ro 0 0 t7 (D in ro o C' 5 Φ ro ro ^-.ro* S u S' +! +1 ^ +1 v +1 « rH M rJ fs. m Ο <D Q) in ro c- o ο ro 444J . — ro *- *- ·- *-

0344 H v to ro to ro Q

ti cl O ro "C1 v q g ro ro ro ro HO Do

CO

a) 'd o X 'd -H _ jj oj o ro ro ro ,rO n M S' S S' S' 0 0 0 0 roro ro ro.

Λ ‘w 0 +1 +| ro -HO +1¾ (tf *H DO — *-s ;! μ tfi H >cn v n ro no O 0 ro' ¢1 ro o" cn~ a H $ £ to Ο Ο to OO W B ro ro t7> >0 ?y o > no

CD *T

£ *S o 0) Qj CD . o tr> Ή co co in <D cd o£ co ro in H g ^ 0- -r « UO J= ctf ^ Φ in ro o « < < < 0_ S- ø ro . . . ο ο o

£ CD CD CD V V V

£ 0 > 0 > 0 > £.&*&«- (D CD CD CD w w w P , ro oj ro ο-) ro o-i . . .

ω 0 <u CD CD Z Z

0) Φ ro Ttfo-i'øo-i'ø-t-1 M o øø øø øø 0* 54 ro co ro oj ro <y 2 4-1 Λ'ΰ Λ fl Λ ί ,¾ 0 ø 0· 0 0 Øø ” ϋ .. Ο .. Ο -Ρ .. Ο -Ρ .. Ο -Ρ Ε < X nløcn οΙ0ω qEhW 0

O

24 DK 169666 B1

Inhiberende virkning på et af CCK-8 fremkaldt pancreas-adenocarcinoms vækstrate

Man ønsker at undersøge virkningen af en af de mere aktive forbindelser ifølge opfindelsen, såsom an-5 ticholecystokinin, dvs. forbindelse 1, på CCK's tro-phiske aktivitet på normale pancreasceller og på et pancreas-adenocarcinoms celler.

Hanhamstere inokuleres i kæbeposen med en sus- 5 pension af 1 x 10 tumorceller fra et pancreas-adenocar-10 cinom. Fem dage efter inokuleringen opdeles dyrene ti]fældigt i fire grupper på hver 10 dyr, dvs. en kontrolgruppe, en gruppe dyr, der behandles med 8 mQg/kg CCK-8 tre gange daglig,· en gruppe dyr, der behandles med 4 mg/kg i.p. doser forbindelse 1 tre gange daglig, og en 15 fjerde gruppe, der samtidig behandles med forbindelse 1 og CCK-8 på den ovenfor anførte måde.

15 dage efter denne behandling aflives dyrene, og den normale pancreas og de pancreas-tumorer, der blev startet i kæbeposen, fjernes og vejes.

20 DNA ekstraheres og måles ved gængse metoder.

De opnåede resultater er anført i Tabel XI, hvor de er udtrykt som gennemsnitsværdier + S.E.

25 30 35 DK 169666 B1 25 --;- +: + jj + * c m ro ·· r~· ** m imjj σ\ m < cn CQ in · .« - - co *^cn *- 3 in o > o > m +j cn mm mm o o

.--- O O »v »N

rji ·-. ·» O o é- ° +i +i y-<c m -¾1 s 2 ^ η- 'τ "3* co eh Q cP o'_cT_cP _ S< JJ ” O C * j.

r> <1> * * w 03 -P + * 3 .m cr> ·* r·· ·* + +1 , jj ‘σ\ m <£ -3- CQ m tflCL'cn — —x m m ft - Γ- m > O > - +) CD ^ Ό +> ej

H g « , R

cdgS.gmr' m o* y cd π !> ^ *->* g Λ i in s jo g-g?+l +l +1 +l

+C 2 (£ f! S m m O CO

+i U Q ' r-. *—- c s 53' cm m in co Q) ft ri! H r-rt V£> o o 4j 0 ft m —i r—i_«—i {0 £ ft ^ + + +J CD jj + + CO u c * ·* k* ft <u tn ·· m *· m 03 n 03 in cm < CQ σι IPj- 3 rv IQ ΙΠ *·· >5 JJ 00 O > O > Γ-

^5 W

•rtJ -P

H Qj I tn vd m ud x 03 i O O o o H G <D gjm ° ° ° ° CD -H u S g +1+1 +1 +1 Λ C O U _ „ irt ij g g cn co m

IH ft § gj.g ^ 'X °L

H & q o <—i o o tyi--' — CD 0 * ' 03 4J „ £ G U G i + 0) CD <D 4j + n- ft <H o3 cn tn ·· m *· co

CD m p cm o < m CD

nnijj in nu) o 3 O 00 O' ^ > O > m Æ ra C di m cd cn r~~ •HQ)- - *- ·-. ·— ft 03 co o r- cn M O ¢9 CM -I m H « ft 3 +1+1 +1 +1

Ό Oj U , in co <M CM

CD G ti *-· WCDcC^r-^ r+ o _i j o, ? p~ m in m

Cl) <0______ H O

03 g —---- : ^ o o

G ft σ> · · cr> JTJT

g «3 S' ^ < S1 ° °

8 « « S $ VV

00 m ^ hi æ u T

___-ϋ·----—s--—- +

H CO · · H

1 1 00 A

CD -H < co: QJ &4 Q +

CQ H

O

26 DK 169666 B1

De i tabellen anførte data viser, hvorledes hormonet cholecystokinin (hvoraf CCK-8 er den biologisk aktive komponent) , som har en trophisk virkning på normale pancreasceller, også stimulerer væksten af et pan-5 crease-adenocarcinom. Forbindelsen 1 modvirker begge disse CCK-81s virkninger i et yderst signifikant omfang.

De ovenfor anførte forsøgsdata synes at vise, at anvendelse af forbindelse 1 eller andre anti-cholecy-stokinin-forbindelser ifølge opfindelsen kan have en sær-10 lig gunstig virkning ved behandlingen af tumorer, der opretholdes af endogene bioaktive polypeptider (især CCK), såsom pancreastumorer og gastro-intestinale tumorer.

Toksicitet og tolerance hos dyr 15 Stofferne ifølge den foreliggende opfindelse har vist sig at have forholdsvis lav toksicitet og at kunne tolereres godt, hvis deres aktivitet og deres sandsynlige dosisniveauer hos mennesker tages i betragtning.

Tabel XII viser LD50-værdierne hos mus for in-20 travenøs injektion (i.v.), dvs. den dosis af medikamentet, der fremkalder døden hos 50% af de behandlede dyr, for flere af de mere interessante forbindelser, og et terapeutisk indeks, som tager hensyn til både anti-CCK--aktiviteten in vivo og forbindelsernes toksicitet, dvs.

25 forholdet mellem produkternes LD50 værdier og de tilsvarende ED50-værdier fra tabel IV.

30 35

O

27 DK 169666 B1

Tabel XII

Toksicitet, anti-CCK-aktivitet in vivo og relative terapeutiske indices

Forb. LD50 i ANTI-CCK-aktivitefc*) TERAPEUTISK

5 (mg.kg i.v. ) Πί VIVO INDEX

HOS MARSVIN DL50/ED 50 ED50 mg/kg i.v.

1 39-6 0.11 3600 2 338 0.10 3380 / 10 3 298 0j 75 397 5 485 0,68 713 7 440 0.65 677 14 425 li 10 386 t 15 288 0,84 343 15 19 297 0.74 401 20 ' 362 0,84 431

Proglumid 2400 70.5 34

2^ (* ) Værdier fra tabel IV

Af de i tabel XII anførte resultater fremgår det, at de mere aktive omhandlede forbindelser har en forholdsvis stor sikkerhedsmargin, der ses af forskel-25 len mellem de akute toksicitetsværdier og den meget høje farmakologiske aktivitet. Disse sikkerhedsmarginer er blevet vurderet som et terapeutisk index, der er meget højt for de mere aktive forbindelser (over 3000).

Af de anførte data fremgår det ligeledes, at 30 de her omhandlede forbindelsers terapeutiske indeks er fra 10 til 100 gange større end "Proglumid"s.

Forbindelserne ifølge opfindelsen tåles også udmærket ved parenteral indgift. Således kan forbindelse 1, som har det højeste terapeutiske indeks, injiceres in-

OC

travenøst i vandig opløsning i form af natriumsaltet i forsøgsdyrene i koncentrationer op til 1,5% (injiceret

O

28 DK 169666 B1 volumen: 10 ml/kg svarende til 150 mg/kg) uden at forårsage hæmolyse eller variationer i hæmatokritten.

Desuden giver forbindelserne ikke anledning til vævsbeskadigelse i denne koncentration, når de in-5 jiceres subcutant.

De ovenfor anførte forsøgsdata har således vist den mulige anvendelse af disse forbindelser ved behandlingen af forskellige patologiske tilstande, der angår mave-tarmkanalen, f.eks. ved spastiske syndromer 10 og smerter i almindelighed, såsom galdeblære-diskinesia og irritabel colon.

Anvendelsen af disse produkter til behandling af leverbetændelse kan være særlig fordelagtig, eftersom der ikke findes pålidelige aktive medikamenter, hvis ef-15 fektivitet er blevet påvist ved hjælp af passende farmakologiske prøver, til denne patologiske tilstand.

Ligeledes kan en behandling af tumorer, der opretholdes- af endogene bio-aktive polypeptider, såsom f.eks. CCK, med held foregå ved hjælp af disse forbin-20 delser.

Endvidere er det muligt at forudse en gunstig terapeutisk anvendelse-af mange af de her omhandlede forbindelser til behandling af forskellige former for anorexia og ligeledes til behandling af flere pato-25 logiske tilstande i centralnervesystemet betinget af mangel på CCK eller andre bio-aktive peptider i de fysiologiske neuronniveauer, både til ikke-alvorlige tilstande (hvortil der indiceres såkaldte beroligende midler) og til alvorlige former, såsom skizofreni, eller 30 til andre, der foruden nervesystemet omfatter det muskulære system, såsom parkinsonisme.

35

Claims

1. Farmaceutisk aktive derivater af D,L-glu-tamin- og D,L-asparaginsyre, kendetegnet ved, 5 at de har formlen COOH (CEL·) I 2 n CH-NH-CO-R^ I

10 CO-N^2 'R3 hvori n er 1 eller 2, er en mono- eller disubstitueret phenylgruppe substitueret med halogener, fortrinsvis chlor og fluor, eller med en methylgruppe i 3- og 4--stillingerne, R2 er en lineær eller forgrenet alkylgrup- pe med 4-7 carbonatomer, fortrinsvis en pen- 20 tylgruppe, og R^ er en alkoxyalkylgruppe eller en hydroxyal- kylgruppe med 3-6 carbonatomer ialt, eller er farmaceutisk acceptable salte deraf.

2. Derivat af D,L-glutamin- og D,L-asparagin-syre ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R0 er en pentylgruppe, og R^ er valgt blandt 2-ethoxyethyl, 3-methoxypropyl, 3-ethoxypropyl og 3-hydroxypropyl.

3. Derivat af glutaminsyre ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R1 er 3,4-dichlorphenyl, R~ er en pentylgruppe, og R- er en 3-methoxypropylgruppe. 30. j

4. Farmaceutisk sammensætning, kendetegnet ved, at den omfatter mindst én af forbindelserne ifølge krav 1 eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf som aktiv bestanddel. 0_ 5. Sammensætning til anvendelse ved husdyrbrug som appetitstimulerende middel til husdyr for at forøge O 30 DK 169666 B1 vægtstigningsraten, kendetegnet ved, at den indeholder mindst én forbindelse ifølge krav 1 som aktiv bestanddel.

6. Fremgangsmåde til fremstilling af et derivat 5 af D,L-glutaminsyre og D,L-asparaginsyre ifølge krav 1, kendetegnet ved, at et indre anhydrid med formlen CO- 10 (CH,) 2 n CH-NH-CO-E^ XX co- 15 hvori n og R^ har de i krav 1 anførte betydninger, omsættes med en sekundær amin med formlen

20 H-N^2 XII ' '*3 hvori R2 og R^ har de i krav 1 anførte betydninger, i et molforhold fra 1 til 5 ved en temperatur fra -10 til 10cC, 25 og at forbindelserne med formlen I udvindes fra reaktionsblandingen. 30 35