DK168666B1 - 5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidinderivater, fremgangsmåde til deres fremstilling samt farmaceutiske præparater indeholdende disse - Google Patents

Description

DK 168666 B1

Teknisk område 5 Opfindelsen angår hidtil ukendte derivater af N-(4-[2-(5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]-pyrimidin-6-yl)ethyl]ben-zoyl)-L-glutaminsyre, hvilke derivater er antineoplastiske stoffer, en fremgangsmåde til deres fremstilling samt farmaceutiske præparater indeholdende forbindelserne.

10

Teknikkens stade

Folsyreantimetabolitterne aminopterin og amethopterin (også kendt som 10-methyl aminopterin eller methotrexat) er 15 antineoplastiske stoffer. Disse stoffer inhiberer enzymatiske omsætninger, der involverer metaboliske derivater af folsyre. F.eks. inhiberer amethopterin dihydrofolatreductase, et enzym, der er nødvendigt for regeneringen af tetrahydrofolat fra dihydrofolat, som 20 opstår ved omsætningen af 2-deoxyuridylat til thymidylat ved hjælp af enzymet thymidylatsyntetase.

Andre derivater af folsyre og aminopterin er blevet syntetiseret og testet som antimetabolitter. Blandt disse 25 er forskellige "deaza"forbindelser, i hvilke en methylen eller methylidengruppe optager en plads i molekylet, der normalt er besat med en imino eller nitrilogruppe henholdsvis. Disse derivater har en varierende grad af antimetabolisk aktivitet. 10-deazaaminopterin er stærkt 30 aktiv (Sirotak et al., Cancer Treat. Rep., 1978, 62, 1047), hvorimod 10-deazafolsyre ikke viser nogen nævneværdig virkning (Struck et al., J. Med. Chem., 1971, 14, 693). 5-deazafolsyre er kun svagt cytotoxisk, hvorimod 5-deazaaminopterin har en aktivitet svarende til 35 amethopterins (Taylor et al., J. Org. Chem., 1983, 48, 4852). 8,10-Dideazafolsyre er kun ganske lidt virksomt som DK 168666 B1 2 dihydrofolatreductaseinhibitor (De Graw et al-, "Chemistry and Biology of Pteridines" Elsevier, 1979, 229), medens 5,8,10-trideazafolsyre også kun viser svag aktivitet mod muse L1210 leukæmi (Oatis et al., J. Med.c Chem., 1977, 20, 5 1393). 8,10-Dideazaaminopterin rapporteres at være aktiv (U.S. patent nr. 4,460,591) og 5,8,10-trideazaaminopterin udviser aktivitet mod muse L1210 leukæmi (Yan et al., J. Heterocycl. Chem., 1979, 16, 541).

10 Redegørelse for opfindelsen

Forbindelserne ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at de er valgt blandt 15 (i) forbindelserne med den almene formel

0H /-V

^\v^S.CH2"CH2\ y-CONH-CH-CH2CH2COOH

” 1X J w “

H

25 hvori konfigurationen omkring det med * mærkede carbonatom er L, (ii) de tautomere former deraf; og 30 (iii) de farmaceutisk acceptable alkalimetal-, jordal- kalimetal-, ikke-giftige metal-, ammonium- og substituerede ammoniumsalte deraf.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at 35 et glutaminsyrederivat med formlen: DK 168666 Bl R4-CH2CHj^ y-CONH-^HCH2CH2COOR6 COOR5 5

II

i hvilken konfigurationen omkring carbonatomet mærket med * er L; og 10 R4 er

OH

i

Li j 15 7 s

R HN ^ N

H

R5 og R6 er ens eller forskellige carboxylsyre-beskyttelsesgrupper; og 20 R7 er hydrogen eller en araino-beskyttelsesgruppe, underkastes hydrolyse eller hydrogenolyse.

Det farmaceutiske præparat ifølge opfindelsen er 25 ejendommeligt ved, at det omfatter en mængde af forbindelsen ifølge opfindelsen, som ved dosering til pattedyret i en enkelt- eller multidosiskur er virksomt til at bekæmpe neoplastisk vækst, i forbindelse med et farmaceutisk acceptabelt bærestof.

30

Fremgangsmåder til udøvelse af opfindelsen

Forbindelser ifølge opfindelsen er derivater af den heterocycliske ring pyrido[2,3-d]pyrimidin, der nummereres 35 således: DK 168666 B1 4 4 5 2 7 5 1.8

Forbindelserne med formlen I eksisterer i tautomer ligevægt med de tilsvarende 3,4-dihydro-4-oxoforbindelser.

10 OH 0 N iT^i ' li j

15 N Η2Ν^ννΝ N

For nemheds skyld afbildes 4-hydroxyformen, og den tilsvarende nomenklatur benyttes overalt i denne be- 20 skrivelse, idet det underforstås, at den tautomere 3,4- dihydro-4-ketoform er indbefattet i hvert eneste tilfælde.

Den absolutte konfiguration omkring det carbonatom, der er mærket med en * i glutaminsyrekæden, er L, som er den samme 25 absolutte konfiguration omkring det tilsvarende a- carbonatom i alanin.

Alle de ovennævnte former, der kan adskilles som beskrevet ovenfor, er inden for opfindelsens område. Opfindelsen 30 omfatter de farmaceutisk acceptable alkalimetal-, jordalkalimetal-, ikke-giftige metal-, ammonium- og substituerede ammoniumsalte, såsom f.eks. natrium, kalium, lithium, calcium, magnesium, aluminium, zink, ammonium, trimethylammonium, triethylammonium, triethanolammonium, 35 pyridinium, substitueret pyridinium o. lign.

5 DK 168666 B1

Forbindelserne ifølge denne opfindelse har en virkning på et eller flere enzymer, der benytter folsyre og navnlig metaboliske derivater af folsyre som substrat. Følgende forbindelse er repræsentativ: 5

Forbindelse nr. 4.

N-(4-[2-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7, 8-tetrahydropyrido[2,3-d] pyrimidin-6-yl)-ethyl]benzoyl)-L-glutaminsyre.

10

Tabel 1 15

Inhibering af dihydrofolatreductase (DHFR) (Kaufman et al., "Methods in Enzymology", Jacobs og Wilcheck, Eds., Academic Press: New York, 1974,pp 272-281).

20

Forbindelse ICKnM

4 5,6xl0-4 25

Tabel 2

Inhibering af thymidylatsyntetase 30 (Wahba et al., J. Biol. Chem., 1961, 236, 611)

Forbindelse IC^M

4 >lxl0"3 35

Tabel 3 DK 168666 B1 6 5 Substrat for folat polyglutamatsyntetase

Inkubering med delvis oprenset muselever FPGS (specifik aktivitet = 1,2 nmol h-1 (mg protein)) i 1 time ved 37°C; kurver over fuld mætning målt for prøver in duplo ved 6 10 koncentrationer - se Moran et al., Anal. Biochem., 1984, 146, 326.

Forbindelse Rel* K Rel* V „ tå max 15 4 0,05 + 0,02 1,24 + 0,10 FH4 0,05 + 0,01+ 1,31 + 0,07+ * I forhold til folsyre.

+ Publicerede data, se Moran et al., Biochemistry, 20 1984, 23, 4580.

Tabel 4 25

Inhibering af L121Q museleukæmiceller i vævskultur - se Foley et al., Biochem. Pharmacol., 1967, 16, 658.

Forbindelse ICgnM

30 4 5,9xl0'8 35

Tabel 5 7 DK 168666 B1 5 Forøgelse 1 livslængde (ILS) hos mus (BDF.,) efter peritoneal injektion af 105 L1210 leukæmiceller.

Forbindelserne blev givet intraperitonealt i 9 dage i den anførte dosis.

10

Forbindelse Dosis (mg/kg) %ILS

4 2 27 4 35 15 8 59 12 63

Navnlig N-(4- [2-( 2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahydropyri-do [ 2,3-d] pyrimidin-6-yl) - ethyl ] benzoyl) -L-glutaminsyre er 20 en enestående antimetabolit. Medens den har god aktivitet, sammenlignelig med methotrexat, mod L1210 leukæmi, er forbindelsen en svag hæmmer af dihydrofolatreductase, hvilket tyder på aktivitet overfor andre af de enzymer, der har med folat at gøre end DHFR. Denne konklusion understøttes af 25 dets aktivitet mod methotrexatresistente celler.

30 35

Tabel 6 DK 168666 B1 8

Indvirkning på methotrexatresistente L-1210 leukæmi 5

Gennemsnitlig forøget

Forbindelse Dosis (mg/kg) livslængde i dage 10 Kontrol - 0

Methotrexat 2 0 4 2 +8 4 4 +11 4 8 +17 15 4 12 +25

Forbindelserne kan fremstilles ved hydrolyse eller hydrogenolyse af et glutaminsyrederivat med formlen: 20 /-\ R4-CH2CH^ y-CONH-CHCH2CH2COOR6 COOR5

II

25 i hvilken R4 er

OH

, I

7 / r hn n

H

R5 og R6 er ens eller forskellige carboxylsyrebeskyttel- 35 DK 168666 B1 9 sesgrupper; og R7 er hydrogen eller en aminosyrebeskyttelsesgruppe.

C

5 Hydrolysen udføres ved normal temperatur, idet der benyttes vandig syre eller base, såsom f.eks. vandig alkalimetal-hydroxid, evt. i nærværelse af et vandblandbart, organisk opløsningsmiddel, såsom methanol, ethanol, tetrahydrofuran, dimethylformamid og lignende, eller en syre som f.eks. 10 trifluoreddikesyre. Når der benyttes base, dannes produktet primært i form af det dikatjoniske glutamatsalt, og kan let fældes ved justering af pH, blandt andet ved udsyring med f.eks. eddikesyre. De resulterende produkter er almindeligvis højtsmeltende, krystallinske eller mikrokrystallinske, 15 faste stoffer.

GIutaminsyremellemprodukterne med formlen II kan fås ved at hydrogenere en pyrido[2,3-d]pyrimidinforbindelse med formlen; 20 °H ' j-- ^Ο3=0Η ~χ 'Y-CONH-éH-CH-CH-COOR6 \—/ I 52 2 n n ti n n 111 30 hvori R5, R6 og R7 er som tidligere defineret. Hydrogeneringen kan udføres ved fra 50-100 psi i et inert opløsningsmiddel og i nærværelse af en egnet katalysator, 35 såsom de ædle metaller eller metaloxider, såsom palladium eller platinoxid, evt. på en bærer, såsom carbon eller '4 DK 168666 B1 10 calciumcarbonat, f.eks. Pd/C, Pd/CaC03, Pt02.

5,6,7,8-Tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidinylmellemproduktet med formlen II kan desuden fremstiles ved uafhængig 5 hydrogenering af det tilsvarende mellemprodukt med formlen II, hvori R4 er

OH

r7hn'^v^n'^vn 15 Alternativt kan et 5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]py-rimidinyl-mellemprodukt med formlen II fremstilles direkte ved hydrogenering af pyrido[2,3-d]pyrimidinen med formlen III under anvendelse af mere skrappe betingelser, såsom forlængelse af hydrogeneringstiden, forøgelse af trykket 20 og/eller forhøjelse af temperaturen.

Mellemproduktet med formlen III kan fremstilles på adskillige måder. I en udførelses form kobles et ben-zoesyrederivat med formlen 25 OH ' y-v

Jv. λ CH=CH "V '\-C0NH

7 ^ Λ V

30 r'hN N N ^

IV

med et beskyttet glutaminsyrederivat med formlen 35 11 DK 168666 B1 R5OCOCHCH-CH-COOR6 I 2 2 nh2

5 V

idet der benyttes almindelig teknik til dannelse af peptidbindinger, såsom aktivering af carboxylsyren ved 10 dannelse af det blandede anhydrid, behandling med DCC, eller brug af diphenylchlorphosphonat.

Alternativt kan et aldehyd med formlen 15

OH

CHO

ΐίι

VI

25 (se Taylor et al., J. Org. Chem., 1983, 48, 4852) kobles med et Wittigreagens med formlen (CgHs) 3P+ —y-CONHCHCH2CH2COOR6 \ — / c oo ir

VII

35 12 DK 168666 B1 (Se Yan, J. Het. Chem. , 1979, 16, 541) i nærværelse af natriumhydrid eller en anden stærk, ikke-nucleophil base i et opløsningsmiddel såsom N-methylpyrrolidon eller dimethylformamid. Den omvendte reaktion kan også anvendes, (( 5 nemlig reaktionen af et Wittigreagens med formlen

OH

X. CH«P(C,H.).

s |Τί" 10 Lu 7 ^ S'

R HN N N

VIII

15 med et N-(4-formyl- eller 4-alkanoylbenzoyl)-L-gluta-minsyre, i hvilken carboxyl syregrupperne er beskyttede.

Benzoesyrederivatet med formlen IV kan fremstilles ved cyclisering af et 4-[l-(2-substitueret 3-cyanopyridin-5-20 yl)alk-l-en-2-yl[benzoat med formlen 25 N*C /«v CH=CH^ r8

30 . K

g i hvilken R er amino eller 4-nitrophenylthio, med guanidin 35 i t-butanol og en ækvimolær mængde af et alkalimetal -t-butoxid, såsom natrium- eller kalium-t-butoxid.

13 DK 168666 B1

Almindeligvis er benzoatesteren en t-butylester. Andre alkoxid-alkoholkombinationer kan også benyttes til guanidincycliseringsreaktionen, men man må være omhyggelig med at begrænse transestrificeringen til det mindst mulige.

5 Produktet fra denne cyclisering f'er et 4-[1-(2,4-diaminopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl )alk-en-2-yl]benzoat med formlen

10 n«2 /-V

CH=CH"\ N>-C00-alkyl N \=/

t kJ

H2N ^ n ^ w 15

X

20 Benzoatet med formlen X kan hydrolyseres med syre, såsom vandig myresyre, og giver det tilsvarende benzoesyrederivat med formlen IV, i hvilken R1 er amino og R7 er hydrogen.

2,4-Diaminoforbindelserne med formlen IV omdannes til de tilsvarende 2-amino-4-hydroxyforbindelser ved behandling 25 med base. Det er ønskeligt først at beskytte 2-aminogruppen ved omdannelse til en acetamidogruppe. Således resulterer behandling med eddikesyreanhydrid i nærværelse af en hydro-genacceptor som f.eks. 4-dimethylaminopyridin i acylering af 2-aminogruppen og dannelsen af et blandet anhydrid med 30 benzoesyre, hvilket sidste hydrolyseres med base for at gendanne det frie benzoesyrederivat med formlen IV. Behandling med base, såsom 1 N natriumhydroxid giver så den tilsvarende 4-hydroxyforbindelse.

35 Mellemproduktet IX kan også fremstilles ved brug af et Wittigreagens. Således kan [2-{4-nitrophenylthio)-3-cyano- DK 168666 Bl 14 pyridin-5-ylmethyl] triphenylmethylphosphoniumbromid fremstilles ifølge Taylor et al-, J. Org. Chem-, 1983, 48, 4852 ved kondensation af 2-methyl-3-ethoxyacrolein og a-cyano- thioacetamid, hvorved fås 3-cyano-5-methyl-2(lH)pyridin- <1 5 thion, behandling af produktet med 4-nitrofluorbenzen, hvorved fås 2-( 4-nitrophenylthio)-3-cyano-5-methylpyridin, bromering med N-bromsuccinimid, hvorved fås 2-(4-nitrophe-nylthio) -3-cyano-5-brommethylpyridin og tilsætning af triphenylphosphin. Denne forbindelse kobles så med en for-10 bindelse med formlen 0=CH'-A 'VcOO-alkyl

15 \=J

XI

Amino- og carboxylsyre-beskyttelsesgrupper er beskrevet f.eks. af Greene i "Protective Groups in Organic 20 Synthesis", John Wiley & Sons, Inc., 1981, og McOmie i "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, 1983.

Forbindelserne med formlen I kan bruges alene eller i kom-25 bination til at behandle neoplasmer, der tidligere har været behandlet med methotrexat, inklusive choriocarcinomer, leukæmi, adenocarcinoma mammae, hudcancer (eng.: epidermid cancers) på hoved og hals, cancer i lungernes pladeepitel eller "Small-cell" lungecancer og forskellige lymphosarco-30 mer. Forbindelserne kan også bruges til at behandle mycosis fungoides og psoriasis, som er påvirkelige af methotrexat.

Forbindelserne kan indgives enten oralt eller bedre paren-teralt, alene eller i kombination med andre antineoplasti-35 ske stoffer, steroider etc. til et pattedyr, der lider af neoplasmer og behøver behandling. Parenterale indgiftsveje 15 DK 168666 B1 omfatter intramuskulær, intrathekal, intravenøs eller intraarteriel indgift. I almindelighed indgives lægemidlet stort set på samme måde som methotrexat, men på grund af dets afvigende virkningsmekanisme kan N-(4-[2-(2-amino-4-5 hydroxy-5,6,7,8-tetrahydropyrido-[2,3-d]pyrimidin-6-yl)- ethyl]-benzoyl)-L-glutaminsyre indgives i højere doser, end der normalt anvendes af methotrexat. Leucovorin som antidot er ikke nødvendigt. Dosisniveauet må tilpasses til den enkelte neoplasme, til patientens tilstand og til responset, 10 men i almindelighed vil doser på fra omkring 10 til omkring 100 mg/dag i 5-10 dage, eller en enkelt daglig indgift af 250-500 mg gentaget periodisk, f.eks. hver 14. dag. Orale doseringsenheder omfatter tabletter og kapsler indeholdende fra 1-10 mg lægemiddel per dosisenhed. Opløsninger i isoto-15 nisk saltvand indeholdende 20-100 mg/ml kan bruges til parenteral indgift.

De følgende eksempler tjener til yderligere at illustrere opfindelsen- I de anførte NMR-data betyder "s" en singlet, 20 Hd" en dublet, "t” en triplet, "g" en kvartet, "m" en multiplet og "br" betyder en bred top.

5 16 DK 168666 B1

Eksempel 1 [3-Cyano-2-(4-nitrophenylthio)-5-pyridinylmethyl]triphenyl-phosphoniumbromid: A. En blanding af 60,00 g (0,221 mol) 3-cyano-2-(4-nitrophenylthio) -5-methylpyridin, 39,37 g (0,221 mol) N-bromsuccinimid, 3,0 g benzoylperoxid og 60 ml benzen blev refluxet i 16 timer under bestråling med en 275 W UV-pære.

10 Opløsningsmidlet blev fjernet under reduceret tryk og remanensen blev rystet med en blanding af 1 1 vand og 1 1 methylenchlorid. Det organiske lag blev skilt fra, vasket med 1 1 vand, tørret over vandfrit magnesiumsulfat og filtreret. Fjernelse af opløsningsmidlet ved inddampning 15 under reduceret tryk gav 3-cyano-2-(4-nitrophenylthio)-5- brommethylpyridin, som kan benyttes i det følgende trin uden yderligere oprensning.

B. Det faste stof fra afsnit A blev omrørt ved stue- 20 temperatur med en opløsning af 58,01 g (0,221 mol) triphenylphosphin i 500 ml benzen. Filtrering af reaktionsblandingen gav 77,63 g [3-cyano-2-(4-nitro-phenylthio)-5-pyridinylmethyl]-triphenylphosphoniumbromid.

25 Omrøring af moderluden ved stuetemperatur i 6 timer gav

yderligere 5,67 g, (totaludbytte 83,30 g, 62%). Omkrystallisation af acetonitril gav [3-cyano-2-(4-nitrophenylthio)-5-pyridinylmethyl]triphenylphos-phoniumbromid som lysegule krystaller smp. < 200°C

30 størkner, og smelter atter ved 253-256°C (dec).

C. Alternativt lader man 3-cyano-2-(4-nitrophenylthio)-5-brommethylpyridin reagere i tetrahydrofuran med tri-(n-bu-tyl)phosphin i 10 timer. Efter tilsætning af ether filtre- 35 res det faste stof, der dannes, fra og vaskes med 1:1 tetrahydrofuran:ether, hvilket giver [3-cyano-2-(4-nitro- DK 168666 Bl 17 phenylthio )pyridin-5-ylmethyl ] -tri- (n-butyl )phosphoniumbro-mid som et fast, hvidt stof; smp. 175-176°C; NMR (CDCl3, 80 MHz) δ 0.85-2.63(m,27H), 4.76(d, 2H, J=15.4 Hz), 7.74(d, 2H, J=9.0 Hz), 8.26(d, 2H, J=9.0 Hz), 8.55(brs, IH), 8.79 5 (brs, IH); IR (KBr) 2950, 2860, 2220, 1595, 1575, 1515, 1390, 1340, 1075 og 845 cm'1; HRMS 471.2116 (M*-HBr). Beregnet for C25H34N302 PS471.2109.

Eksempel 2 10 3- Cyano-2-(4-nitrophenylthio)-5-(2-(4-ethoxycarbonylphe-nyl)ethenyl]pyridin.

A. En blanding af 4,544 g (7,42 mmol) [3-cyano-2-(4-nitro-15 phenyl thio)-5-pyridinylmethyl ] triphenylphosphoniumbromxd, 0,751 g (7,42 mmol) triethylamin og 50 ml chloroform blev omrørt ved stuetemperatur i 15 min. og 1,322 g (7,42 mmol) 4- ethoxycarbonylbenzaldehyd blev derefter tilsat. Efter omrøring ved stuetemperatur i 96 timer blev der tilsat 100 ml 20 vand. Blandingen blev filtreret, og det organiske lag blev skilt fra og vasket med 2 x 100 ml vand, tørret og filtre ret. Inddampning af filtratet under reduceret tryk gav en remanens, der blev chromatograferet på kiselgel. Ureageret aldehyd blev elueret med 2:1 petrolether:benzen, medens 25 titelproduktet, der alternativt kan navngives som 2-(4-nitrophenylthio)-3-cyano-5-( 4-ethoxycarbonylstyryl) pyridin blev elueret med benzen. Inddampningen af benzeneluatet gav 2,82 g (88%) 3-cyano-2-(4-nitrophenylthio)-5-[2-(4-ethoxy-carbonylphenyl)ethenyl] pyridin som et lysegult, fast stof. 30 Produktet ændrer sig fra et fast stof til et gummiagtigt stof under 100°C og derefter til en klar væske mellem 180 og 220°C; NMR (Me2S0-d6) 6 1.34 (t, 3H, J=6,3 Hz), 4.32 (q, 2H, J=6.3 Hz), 6.73 (d, IH, J=13 Hz), 6.99 (d, IH, J=13 Hz), 7.27 (d, 2H, J=9Hz), 7.74, 7.85, 7.94 (dd, 2H, 2H), 35 8.26, 8.31 (dd, 2H, IH), 8.38 (d, IH, J=1.8 Hz); IR (KBr) 2220, 1707, 1605, 1597, 1575, 1512, 1344, 1295-1277, 1174 DK 168666 Bl 18 cm”1.

Anal.: Beregnet for C23H17N304S: C, 64.08; H, 3.97; N, 9.74; S, 7.43. Fundet: C, 63.82; H, 4.01; N, 9.51; S, 7.38.

5 B. 3-cyano-2- (4-nitrophenyl thio) -5- [ 2- (4-tert-butoxy- carbonylphenyl )ethenyl] pyri din blev fremstillet i 81% udbytte ved den ovenfor angivne methode, idet der imidlertid blev benyttet 4-(tert-butoxycarbonyl )benzaldehyd 10 i stedet for 4-ethoxycarbonylbenzaldehyd; smp. ubestemt (cis-trans blanding); NMR (CDC13) δ 1.62 (s, 9H), 6.43 (d, IH, J=13 Hz), 6.90 (d, IH, J=13Hz), 7.24 (d, 2H, J=9 Hz), 7.69 (d, 2H, J=8.1 Hz), 7.76 (d, IH, J=2.7 Hz), 7.92 (d, 2H, J=8.1 Hz), 8.22 (d, 2H, J=9 Hz), 8.34 (d, IH, J=2.7 15 Hz); IR (KBr) 2220, 1707, 1600, 1577, 1518, 1341, 1290, 1163 cm"1.

Anal.: Beregnet for C2SH21N304S: C, 65.35; H, 4.61; N, 9.14; S, 6.98. Fundet: C, 65.28; H, 4.68; N, 9.20; S, 6,93.

20 På tilsvarende måde fås ved at erstatte 4-ethoxycarbonylbenzaldehyd med en 4-alkoxycarbonylacetophenon eller en 4-alkoxycarbonylpropiophenon, de tilsvarende 3-cyano-2-(4-nitrophenylthio) -5- [2-(4-alkoxycarbonylphenyl )prop-l-25 enyljpyridin og 3-cyano-2-(4-nitrophenylthio)-5-[2-(4-alkoxycarbonylphenyl)but-l-enyl]pyridin forbindelser. Dette kan eksemplificeres som følger:

Til en opløsning af 18,89 g [3-cyano-2-(4-nitrophenylthio)-30 5-pyridinylmethyl]-tri-(n-butyl )phosphoniumbromid i 150 ml tør methylenchlorid blev der i adskillige småportioner tilsat 5,36 ml 1,5-diazabicylo[5.4.0]undec-5-en. Under omrøring af reaktionsblandingen i nitrogenatmosfære i 15 min. blev der tilsat 7,53 g 4-(t-butoxycarbonyl)acetophenon (al-35 ternativt navngivet som tert-butyl-4-acetylbenzoat). Blandingen blev opvarmet til reflux i 72 timer, afkølet til 19 DK 168666 B1 stuetemperatur og ekstraheret med mættet natriumchlorid-opløsning. Ekstrakterne blev tørret over vandfrit natriumsulfat og derpå chromatograferet på flash kiselgel med methylenchlorid som eluent. Eluatet blev koncentreret under 5 reduceret tryk og remanensen blev tritureret med ether. Det resulterende faste stof blev isoleret ved filtrering og gav

5,64 g (35%) trans-3-cyano-2-[(4-nitrophenylthio)3-5-[2-(4-tert-butoxycarbonylphenyl)prop-l-enyl]pyridin som et bleggulligt fast stof: smp 180-181°C (benzen-ether); NMR

10 (CDC13, 250 MHz) δ 1.61 (s, 9H), 2.29 (d, 3H, J=1.23 Hz), 6.70 (brs, IH), 7.52 (d, IH, J=8.62 Hz), 7.74 (d, IH, J=8.84 Hz), 7.92 (d, IH, J=2.09 Hz) 8.00 <d, IH, J=8.62 Hz), 8.27 (d, IH, J=8.84 Hz), 8.53 (d, IH, J=2.09 Hz); IR (KBr) 3060, 2970, 2220, 1695, 1595, 1515, 1425, 1380, 1365, 15 1340, 1290, 1160, 1110, 1010 og 840 cm-1.

Anal. Beregnet for C26H23N304S: C, 65.94; H, 4.90; N, 8.87; S, 6.77. Fundet: C, 66.88; H, 4.64; N, 8.51; S, 6.77.

20 Koncentrering af filtratet under reduceret tryk og triturering af remanensen, fulgt af filtrering og vask med ether gav 2,08 g (13%) cis-3-cyano-2-(4-nitrophenylthio)-5-[2-(4-tert-butoxycarbonylphenyl)prop-l-enyl]pyridin som et bleggulligt fast stof, smp. 126-127°C (ethylacetat-hexan), 25 NMR (CDCI3, 250 MHz) δ 1.60 (s, 9H), 2.25 (d, 3H, J=1.41 Hz), 6.39 (brs), 7.18 (d, IH, J=8.28 Hz), 7.41 (d, IH, J=2.22 Hz), 7.63 (d, IH, J=8.91 Hz), 7.95 (d, IH, J=8.28 Hz), 8.09 (d, IH, J=2.22 Hz), 8.23 (d, IH, J=8.91 Hz); IR (KBr) 3110, 2970, 2225, 1720, 1520, 1345, 1165, 1105, 920 30 og 840 cm”1.

Anal. beregnet for C26H23N304S: C, 65.94; H, 4.90; N, 8.87; S, 6.77. Fundet: C, 65.92; H, 4.81; N, 8.62; S, 656.

35 Det 4-( t-butoxycarbonyl )acetophenon, der blev brugt i den foregående procedure, kan fremstilles som følger: 20 DK 168666 B1

Til en suspension af 1,64 g 4-acetylbenzoesyre i 30 ml tør benzen blev tilsat 3.0 ml friskdestilleret thionylchlorid. Blandingen blev opvarmet under reflux i 5 timer.

5 Reaktionsblandingen blev afkølet til stuetemperatur og opløsningsmidlet blev fjernet under reduceret tryk.

Den resulterende remanens blev opløst i 5 ml tør me-thylenchlorid, og opløsningen blev sat til en blanding af 10 1,11 g tør tert-butanol og 1,42 g tør pyridin. Efter omrøring af reaktionsblandingen i en nitrogenatmosfære i 15 timer, blev blandingen fortyndet med methylenchlorid og ekstraheret med vand. Den organiske opløsning blev tørret over vandfrit natriumsulfat, og opløsningsmidlet blev 15 fjernet under reduceret tryk. Remanensen blev chromatograferet på en kiselgelsøjle, idet der blev benyttet en 20% ethylacetat-hexanblanding som eluent. Hovedfraktionen, der blev isoleret fra søjlen, indeholdt 2,01 g (91%), 4-(t-butoxycarbonyl)acetophenon som et hvidt 20 fast stof: smp. 56.5-57,5°C; NMR (CDC13 80 MHz) d 1.61 (s, 9H), 2.63 (s, 3H, 7.95 (d, 2H, J=9.0 Hz), 8.09 (d, 2H, J=9.0 Hz); IR (KBr) 2980, 2930, 1720, 1680, 1400, 1365, 1295, 1250, 1165, 1100, 845, 760 og 690 cm'1.

25 Alternativt kan 4-(t-butoxycarbonyl)acetophenon isoleres ved destillation under reduceret tryk, kp 90-100°C/0,l mm. Analogt fremstilles 4-(t-butoxycarbonyl)propiophenon og omdannes til 3-cyano-2-(4-nitrophenylthio)-5-[2-(4-tert-butoxycarbonylphenyl)but-1-enyl]pyridin.

30

Eksempel 3 2-Amino-3-cyano-5-[(2-(4-ethoxycarbonylphenyl)ethenyl]pyri-midin.

En suspension af 2,00 g (4,64 mmol) 3-cyano-2-(4-nitrophe- 35 21 DK 168666 B1 nylthio) - 5- [ 2- (4-ethoxycarbonylphenyl )ethenyl] pyridin, 1,553 g (6.95 mmol) cupribromid og 50 ml flydende ammoniak blev omrørt i et trykrør ved stuetemperatur i 13 dage. Afdampning af ammoniakken gav en mørk remanens, der blev 5 chromatograferet på magnesiumsilikat, idet der blev benyttet methylenchlorid som eluent. Eluatet blev fjernet ved inddampning under reduceret tryk, og remanensen chromatograferet på kiselgel. Ureageret udgangsmateriale blev elue-ret med benzen, medens 0,87 g (64%) af produktet, der også 10 kan kaldes 2-amino-3-cyano-5-(4-ethoxycarbonylstyryl)pyri-din blev elueret med ethylacetat og isoleret ved inddampning af ethylacetaten som et lysegult fast stof, smp. 135-141,5°C; NMR (Me2S0-d6) δ 1.39 (t, 3H, J-6.3Hz), 4.38 (q, 2H, J=6.3 Hz), 6.67 (m, 2H), 7.10 (br, 2H), 7.45 (d, 2H, 15 J=9 Hz) 7.71 (d, IH, J=3.6 Hz), 7.97 (d, 2H, J=9 Hz), 8.11 (d, IH, J=3.6 Hz); IR (KBr) 3155, 2218, 1715, 1650-1645, 1593, 1491, 1277, 100 cm'1.

Anal. Beregnet for C17H15H302: C, 69.61; H, 5.16; N, 14.33.

20 Fundet; C, 69.37; H, 5.25; N, 14.22.

Ved at erstatte en ækvivalent mængde af 3-cyano-2-(4-nitro-phenylthio)-5-[2- (4-tert-butoxycarbonylphenyl)ethenyl]pyridin i den foregående procedure fås 2-amino-3-cyano-5-[2-25 (4-tert-butoxycarbonylphenyl )ethenyl]pyridin, der også kan navngives som 2-amino-3-cyano-5-(4-t-butoxycarbonylsty-ryl)pyridin; udbytte 1,4 g (84%) lysegule krystaller, smp. 190-195°C; NMR (Me2SO-d6) 6 1.57 (s, 9H), 6.57-6.60 (m, 2H), 7.00 (br, 2H), 7.35 (d, 2H, J=8.1 Hz), 7.65, (d, IH, 30 3=2,7 Hz), 7.84 (d, 2H, J=8.1 Hz), 8.00 (d, IH, J=2.7 Hz); IR (KBr) 3460, 3360, 2215, 1707, 1623, 1480, 1300, 1287, 1158 cm'1.

Anal. Beregnet for C19H19N302: C, 71.00; H, 5.96; N, 13.07.

35 Fundet; C, 70.83; H, 6.03; N, 12.83.

22 DK 168666 B1

Eksempel 4 2.4- Diamino-6- [ 2- (4-tert-butoxycarbonyl -phenyl) ethenyl ] py-rido[2,3-d]pyrimidin.

(( 5

Til en opløsning af 4.54 mmol guanidin i form af den frie base (fremstillet af 0,433 g (4,54 mmol) guanidin hydrochlorid og 0,114 g natrium i 25 ml tør tert-butanol) blev tilsat 1,325 g (4,12 mmol) 2-amino-3-cyano-5-[2-(4-10 tert-butoxyphenyl)ethenyl]pyridin. Den dybrøde suspension blev opvarmet til reflux under tør nitrogen i 8 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet til stuetemperatur og filtreret- Bundfaldet blev vasket successivt med vand, acetone og ether og derefter tørret under reduceret tryk, 15 hvilket gav 0,911 g (61%) af titelforbindelsen, der alternativt kan navngives som 2,4-diamino-6-(4-tert-butoxycarbonylstyryl)-5-deazapteridin som et lysegult, fast stof, smp. > 350°C ; NMR (Me2S0-d6) 6 1.55 (s, 9H), 6.42 (br, 2H), 6.73 (m, 2H), 7.30-8.00 (br, 2H), 7.35 (d, 2H, 20 J=9Hz), 7.81 (d, 2H, J=9Hz), 8.34 (m, 2H); IR (KBr) 3320- 3300, 3200-3140, 2970, 1718, 1626, 1610-1600, 1550, 1450- 1445, 1288, 1167, 812 cm'1.

Anal.: Beregnet for C20H21N5O2: C, 66.10; H, 5.82; N, 25 19.27. Fundet C, 65.88; H, 5.86; N, 18.98.

Eksempel 5 2.4- Diamino-6-[2-(4-carboxyphenyl)ethenyl]pyrido[2,3-d]py-30 rimidin.

A. En opløsning af 1,27 g 2,4-diamino-6-[2-(4-tert-butoxycarbonylphenyl)ethenyl]pyrido[2,3-d]pyrimidin og 10 ml 88% myresyre blev omrørt ved stuetemperatur. Et gult 35 fast stof begyndte at dannes efter omkring 12 timer, og efter 4 dages omrøring blev reaktionsblandingen filtreret- 23 DK 168666 B1

Det: isolerede faste stof blev vasket godt, successivt med vand, methanol og acetone, og blev derefter tørret under reduceret tryk, hvilket gav 0,85 g (79%) af titelforbindelsen, som alternativt kan navngives som 2,4-5 diamino-6-(4-carboxystyryl)-5-deazapteridin, smp. > 300°C.

B. Alternativt blev 0,48 g 2,4-diamino-6-[2-(4-tert-butoxycarbonylphenyl)ethenyl]pyrido[2,3-d] pyrimidin sat til en mættet opløsning af hydrogenchlorid i 20 ml nitromethan 10 ved 0°. Reaktionsblandingen blev hurtigt viscøs og antog en dybgul farve, og efter nogle få minutters omrøring dannedes et grynet, fast stof. Efter en times omrøring blev 50 ml ether tilsat og bundfaldet filtreret fra. Det isolerede faste stof blev opløst i 50 ml 10% vandig natriumcarbonat. 15 Tilsætning af eddikesyre til sur reaktion resulterede i udskillelse af et fast, gult stof, der blev isoleret ved filtrering og tørret under reduceret tryk; udbytte 0,31 g (92%) 2,4-diamino-6-[2—(4-carboxyphenyl)ethenyl]pyrido[2,3- d]pyrimidin; NMR (Me2S0-d6) 6 6.75 (s, 2H), 7,35, 7,85 (AB 20 q, 4H, J=9 Hz), 8.38 (s, 2H); IR (Nujol) 3400-2300, 3380, 3150, 1700, 1650, 1630, 1590 cm'1.

Eksempel 6 25 2-Amino-4-hydroxy-6-[2-(4-carboxyphenyl)-ethenyl]pyri- do[2,3-d]pyrimidin.

A. En suspension af 1,0 g 2,4-diamino-6-[2-(4-carboxyphenyl ) ethenyl ] py ri do [ 2,3 - d ] py rimi din i 30 ml 1 N 30 vandig natriumhydroxid blev opvarmet under reflux under nitrogen i 3 timer. Den resulterende homogene, orange opløsning blev afkølet til stuetemperatur, gjort sur med 6 ml iseddikesyre, og det resulterende gule bundfald isoleret ved filtrering. Filterkagen blev vasket succesivt med vand, 35 methanol, acetone og ether, og blev derefter tørret under reduceret tryk, hvilket gav 0,88 g (88%) af DK 168666 Bl 24 titelforbindelsen, der også kan navngives enten som 6-[2-(4-carboxyphenyl)ethenyl]-5-deazapterin eller 6-(4- carboxystyryl)-5-deazapterin, som et mikrokrystallinsk, gult pulver, smp. > 250°C; NMR (TFA-dx) δ{6.8, 7.25 (AB q, 5 2H, J=12 Hz), 7.45, 8.2 (AB q, 4H, J=9 Hz), 8.55 (s, IH), 8.85 (s, IH); IR (Nujol) 3500-2500 (br), 1670, 1625, 1600 cm-1.

B. På lignende måde omdannes 2,4-diamino-6-[2-(4-carboxy-10 phenyl )prop-l-enyl)pyrido[2,3-d]pyrimidin til 2-amino-4- hydroxy-6- [2-( 4-carboxyphenyl )prop-l-enyl] pyrido [2,3-d] py-rimidin, smp. > 250°C; NMR (DMS0-d6, 80 MHz) δ 2.28 og 2.30 (brs, 3H), 6.77 og 7.06 (brs, IH), 7,72 (d, 2H, J=8.5Hz), 7.97 (d, 2H, J=8.5 Hz), 8.27 (d, IH, J=2.0 Hz), 8.72 (d, 15 IH, J=2.0 Hz).

Eksempel 7 2-Acetamido-4-hydroxy-6- [2-(4-acetoxycarbonylphenyl )ethe-20 nyl]pyrido-[2,3-d]pyrimidin.

En suspension af 0,88 g 2-amino-4-hydroxy-6-[2-(4-carboxyphenyl)ethenyl]pyrido[2,3-d]pyrimidin i 20 ml eddikesyreanhydrid indeholdende 0,05 g 4-dimethyl-25 aminopyridin blev opvarmet under nitrogen til 120°C i 3 timer. Reaktionsblandingen blev kølet til stuetemperatur. 50 ml ether blev tilsat, og det resulterende gule, faste stof blev Isoleret ved filtrering, hvilket gav 0,95 g (84%) af titelforbindelsen; smp. > 300°C; IR (Nujol) 3350, 3150, 30 1800, 1670, 1600 cm-1.

Eksempel 8 2-Acetamido-4-hydroxy-6-[2-( 4-carboxyphenyl )-ethenyl]pyri-35 do[2,3-d]pyrimidin.

25 DK 168666 B1

Til en suspension af 0,95 g 2-acetamido-4-hydroxy-6-[2—(4-acetoxycarbonylphenyl) ethenyl ] pyrido [2,3-d] pyrimidin i 50 ml vand blev tilsat 1 N vandig natriumhydroxid, indtil opløsningen var homogen. Tilsætning af eddikesyre til sur 5 reaktion medførte dannelsen af et gult bundfald, der blev isoleret ved filtrering. Filterkagen blev vasket successivt med vand, methanol, acetone og ether. Det tilbageværende, faste stof blev omkrystalliseret af DMF, hvilket gav 0,65 g (77%) af titelproduktet, der også kan navngives som 2-10 acetamido-6-(4-carboxystyryl)-5-deaza-4(3H)-pteridinon som et mikrokrystallinsk, gult stof, smp. > 300°C; NMR (TFA-d1) 6 2.5 (s, 3H), 6.85, 7.32 (AB q, 2H, J=12 Hz), 7.45, 8.18, (AB q, 4H, J=9Hz), 8.65 (s, IH), 9-02 (s, IH); IR (Nujol) 3300-2200 (br), 1685, 1655, 1630, 1600, 1565 cm'1. MS: 15 Beregnet for C18H14N404: 350. Fundet: m/e 350 (base), 308.

Eksempel 9

Diethyl-N- (4- [ 2- (2-acetamido-4-hydroxypyrido [ 2,3-d] pyrimi-20 din-6-yl) ethenyl] benzoyl-L-glutamat.

Til en iskold opløsning af 1,5 g (0,0043 mol) 2-acetamido- 4-hydroxy-6- [ 2- (4-carboxyphenyl) ethenyl] pyrido [ 2,3-d] pyrimidin i 40 ml N-methylpyrrolidon indeholdende 1,4 ml N-25 methylmorpholin blev sat 1,72 g (0,0064 mol) phenyl N-phenylphosphoramidochloridat i én portion. Den resulterende blanding blev omrørt ved 0°C i 30 minutter. Diethyl-L-glu-tamat-hydrochlorid (1,53 g, 0,0064 mol) blev så tilsat, og reaktionsblandingen blev omrørt ved stuetemperatur natten 30 over. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk og det tilbageblivende faste stof tritureret med 50 ml 1 N vandig natriumcarbonat. Blandingen blev filtreret, og det isolerede, faste stof opløst i 20 ml chloroform. Chloro-formopløsningen blev tørret over vandfri magnesiumsulfat og 35 filtreret. Filtratet blev inddampet til tørhed og chroma-tograferet på kiselgel. Eluering med chloroform:methanol 26 DK 168666 B1 (95:5) gav 1,52 gram (66%) af titelforbindelsen, der også kan navngives som diethyl 2-acetyl-5,10-dideaza-9,10-dide-hydrofolat, smp. > 250°C; NMR (CDCl3Me2SO-d6) δ 1.15-1.45 (2t, 6H, J=6 Hz), 2.0-2.65 (m,4H), 2.3 (s,3H), 4.0-4.35 5 (2q, 4H, J=Hz), 4.5-4.75 (m, IH), 6.7, 6.9 (AB q, 2H, J=15

Hz), 7.33, 7.84 (AB q, 4H, J=9 Hz), 8.25-8.38 (m, 2H), 8.62 (d, IH, J=2Hz), 11.5-12.5 (br, 2H); IR (Nujol) 3320, 3150, 1730, 1680, 1630, 1600 cm'1.

10 Anal.: Beregnet for C27H29N507: C, 60.56; H, 5.42; N, 13.08. Fundet: C, 60.26; H, 5-45; N, 12.84.

Eksempel 10 15 Diethyl-N- ( 4- [2- ( 2-acetamido-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahydro-pyrido [ 2,3 -d] pyrimidin- 6 -yl) ethyl ] benzoyl) -L-glutamat.

En opløsning af diethyl N- ( 4- [ 2- (2-acetamido-4-hydroxypyri-do[2,3-d]pyrimidin-6-yl)ethenyl]benzoyl)-L-glutamat i 30 ml 20 trifluoreddikesyre blev hydrogeneret ved et hydrogentryk på 55 psi i nærværelse af 1,0 g 5% Pd/C ved stuetemperatur i 14 timer. Katalysatoren blev fjernet ved filtrering, filtratet inddampet under reduceret tryk, og det tilbageblevne faste stof fordelt mellem 100 ml chloroform og 50 ml 25 2 N vandig natriumcarbonat. Den organiske fase blev skilt fra, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdampet, hvilket gav en gummiagtig masse, der blev chromatograferet på kiselgel. Eluering med chloro-formimethanol (97:3) gav 0,25 g (56%) diethyl N-(4-[2-(2-30 acetamido-4-hydroxypyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)ethyl]ben- zoyl)-L-glutamat; smp. 215-217°C; NMR (CDC13) δ 1.25, 1.35 (2t, 6H, J=6 Hz), 2.1-2.5 (m, 4H), 2.55 (s, 3H), 3.1 (s, 4H), 4.15, 4.25 (2q, 4H, J=6 Hz), 4.6-4.96 (m, IH), 7.05 (s, IH), 7.25, 7.75 (AB q, 4H, J=9 Hz), 8.35 (d, IH, J=3 35 Hz), 8.77 (d, IH, J=3 Hz); IR (Nujol) 3200, 3150, 1725, 1675, 1630, 1605 cm"1. Anal.: Beregnet for C27H31N507: C, 27 DK 168666 B1 60.32; H, 5.81; N, 13.03. Fundet C, 59.98; H, 6.03; N 12.92).

Yderligere eluering med 95:5 chloroform:methanol gav 0,08 g 5 (18%) af titelforbindelsen, der også kan navngives som diethyl 2-acetyl-5,10-dideaza-5,6,7, 8-tetrahydrofolat; smp.

> 200°C; NMR (CDCl3/Me2SO-d6) δ 1.24, 1.28 (2t, 6H, J=6

Hz), 1.5-3.3 (m, 13H), 2.18 (s, 3H), 4.1, 4.18 (2a, 4H, J=6 Hz), 4.4-4.7 (m, IH), 6.2 (s, 3H), 4.1, 4.18 (2a, 4H, J=6 10 Hz), 4.4-4.7 (m, IH), 6.2 (s, IH), 7.28, 7.85 (AB q, 4H, J=9 Hz), 8.4 (d, IH, J=8 Hz); IR (Nujol) 3320, 3250, 1730, 1630, 1575 cm-1. Anal.: Beregnet for C27H35N507: C, 59.87; H, 6.51; N, 12.93. Fundet C, 59.66; H, 6.71; N, 12.77.

15 Eksempel 11 N-(4-[2-(2-Amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3- d]pyrimidin-6-yl)ethyl]benzoyl)-L-glutaminsyre.

20 En homogen opløsning af diethyl-N-(4-[2-(2-acetamido-4-hy-droxy-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)ethyl]-benzoyl)-L-glutamat i methanol blev hydrolyseret med natriumhydroxyd efterfulgt af tilsætning af eddikesyre og centrifugering, hvilket gav titelforbindelsen, der også kan 25 navngives som 5,10-dideaza-5,6,7,8-tetrahydrofolsyre, i 87% udbytte; smp. > 250°C, NMR (TFA) 6 1.7-3.9 (m, 13H), 5.0- 5.25 (m, IH), 7.45, 7.85 (AB q, 4H, J=9 Hz).

Ud fra diethyl-N-(4-[2-(2-acetamido-4-hydroxypyrido[2,3-30 d]pyrimidin-6-yl)-ethenyl]benzoyl)-L-glutamat fik man på samme måde N-(4-[2-(2-amino-4-hydroxypyrido[2,3-d]pyrimi-din-6-yl)ethenyl]benzoyl)-L-glutaminsyre, smp. > 200*0.

Eksempel 12 35 I typiske modeller blev de anførte tumorceller implanteret r DK 168666 B1 28 subkutant i axillærregionen på mus. Efter intraperitoneal indgift af det første stof fra eksempel 11 blev længden og bredden af kontroltumoren (der kun fik saltvand) målt på det angivne tidspunkt og sammenlignet me^ de dyr, der fik 5 testforbindelsen for at den procentvise hæmning kunne udregnes.

29 DK 168666 B1

% HÆMNING

dosis mg/kg „ 5

Antal dages

Tumorsystem 25 * 50 100 200 behandling

6C3HED

10 Lymfosarcom 91 100 100 100 8 B-16 98 99 100 100 5 C3H adenocarci- 15 noma mammae 86 100 100 200 10

Lewis lungecar- cinom 58 77 94 100 10 20 M-5 Ovarie carci- nom 12 31 54 80 10*

Madison lunge 54 72 87 90 10 25 X5563 Plasmacelle myelom 100 100 100 100+ 10 30 * 5 dages forsinkelse + Toxisk

Claims (4)

1. 2. Forbindelse ifølge krav 1 som er N-(4-[2-(2-amino-4- hydroxy-5,6,7, 8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)-ethyl]benzoyl)-L-glutaminsyre.
2. 3. Farmaceutisk formulering til bekæmpelse af neoplastisk 30 vækst i et pattedyr, kendetegnet ved, at det omfatter en mængde af en forbindelse ifølge krav 1, som ved dosering til pattedyret i en enkelt- eller multidosiskur er virksomt til at bekæmpe nævnte vækst, i forbindelse med et farmaceutisk acceptabelt bærestof. 35
3. 4. Farmaceutisk formulering til bekæmpelse af neoplastisk DK 168666 B1 vækst i et pattedyr, kendetegnet ved, at det omfatter en mængde af en forbindelse ifølge krav 2, som ved dosering til pattedyret i en enkelt- eller multidosiskur er virksomt til at bekæmpe nævnte vækst, i forbindelse med et i 5 farmaceutisk acceptabelt bærestof.
4. 5. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at et glutamin- syrederivat med formlen: 10 R4-CH2CH^ y-CONH-^HCH2CH2COORé ' COOR5 15 II i hvilken konfigurationen omkring carbonatomet mærket med * er L; og 20 R4 er OH “ , λΧΤ R HN ^ ti * H R5 og R6 er ens eller forskellige carboxylsyre-30 beskyttelsesgrupper; og R7 er hydrogen eller en amino-beskyttelsesgruppe, underkastes hydrolyse eller hydrogenolyse. 35