DK162895B

DK162895B - Fremgangsmaade til fremstilling af desoxyribonucleosidphosphonater

Info

Publication number: DK162895B
Application number: DK424784A
Authority: DK
Inventors: Joachim Engels; Alfred Jaeger
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1983-09-06
Filing date: 1984-09-05
Publication date: 1991-12-23
Also published as: DK424784D0; JPH0662662B2; AU3275684A; ES8505384A1; GR80287B; DK166585C; EP0136543A2; DK131591A; DK424784A; PT79172A; DE3475307D1; ES535627A0; DK162895C; DK167359B1; AU570266B2; JPH05262787A; ATE38839T1; CA1235079A; AU1138488A; DK131691D0

Description

DK 162895 B

Ikke-ioniske analoge af desoxyribonucleinsyrer (DNA) har betydning til undersøgelse af DNA-DNA- og DNA-protein-vekselvirkninger. Især har phosphonsyrees-tere af desoxyribonucleosider interesse som følge af 5 deres kemiske stabilitet, på grund af deres celletilgængelighed samt deres forøgede resistens mod nucleaser.

Hidtil har der været beskrevet fire forskellige synteseveje til fremstilling af nucleotidernes methylphosphonat-analoge: 10 1. Ogilvie m.fl. (M.J. Nemer og K.K. Ogilvie, Tetra hedron Lett. 21, side 4149 (1980)), fremstillede et fuldstændigt beskyttet uridyl-3',5'-uridin-methylphospho-nat ved Michaelis-Arbuzovsche omlejring af det tilsvarende phosphitmellemtrin. Denne reaktion (behandling med me-15 thyliodid i 20 timer ved 50°C) turde som følge af de her herskende drastiske betingelser ikke være alment anvendelig, da man f.eks. kan forvente en methylering af purin-baserne.

2. Ts'o m.fl. (P.S. Miller, J. Yano, E. Yano, C. Caroll, 20 K. Jayaraman og P.O.P Ts'o, Biochemistry 18, 5134 (1979),

Proc.. Natl. Acad. Sci., USA 78, 1537 (1981), P.S. Miller, N. Drean, S.M. Pulford, K.B. McParland, J. Biol.Chem.

225. 9659 (1980) udviklede en syntesevej, som er analog med phosphotriestermetoden ved oligonukleotidsyntesen. Hertil 25 anvendes som vigtigste mellemtrin en beskyttet nucleotid-3 ' -O-methylphosphonsyre-jS-cyanoethylester. Denne metode har phosphotriestermetodens kendte fordele og ulemper, idet man specielt som ulempe kan nævne phosphor (V)-forbindelsens ringe reaktivitet.

30 3. Agarwal m.fl. (jvf. K.L. Agarwal og F.Riftina, Nucl.

Acid Res. j>, 3009 (1979)) anvendte methylphosphonsyre-dichlorid som bifunktionelt phosphonyleringsmiddel.

Ved det andet trin behøver man her en aktivering af chlo-ridet med tetrazol. Det opnåede råprodukt kan kun ren-35 ses via effektiv chromatografi.

DK 162895 B

2 4. J. Engels og A. Jager går ifølge Angew. Chem. Suppl.

1982, 2010, ud fra methyldichlorphosphan. Dette fører dog til dannelse af 8% symmetrisk 3^31-forbindelse som biprodukt. Det er endvidere angivet, at phosphorsyr1ingesterfor-5 bindeisen reagerer glat med S eller Se, hvorved der åbnes mulighed for fremstilling af de S- eller Se-analoge forbindelser. N.D. Sinha, V. Grossbruchhaus og H. Koster i Tetrahedron Lett. 24, 887 (1983), går også ud fra methyldichlorphosphan og syntetiserer nucleotidmethylphosphonaterne på 10 polymer bærer. En karakterisering af de opnåede produkter mangler endnu.

Medens man på den ene side hos methylphosphonsyredi-chloridet er udsat for, at det andet halogens reaktivitet for det meste er for ringe og derfor nødvendiggør en yder-15 ligere aktivering, er tilfældet hos phosphinsyredichloriderne tværtimod, at aktiviteten er for høj. Således forekommer der vanskeligheder ved håndteringen (ekstremt vandfrit medium) , og oven i købet dannes der uundgåeligt symmetrisk phosphorsyr1ingester.

20 Den foreliggende opfindelse angår en særlig frem gangsmåde til fremstilling af desoxyribonucleosidphosphonater med den almene formel

B

25 T"°K^ 0 (I)

Z = P - R

'xj G-0 hvori T betegner en beskyttelsesgruppe for en primær hydroxygruppe, 35 fortrinsvis triphenylmethyl (= Tr), p-anisoyldiphenylmethyl eller di-(p-anisoyl)-phenylmethyl,

DK 162895 B

3 B betegner en nucleosidbaserest, i hvilken en tilstedeværende exo-aminofunktion er beskyttet, fortrinsvis 1-thyminyl, l-(N-4-benzoylcytosinyl), 9-(N-6-benzoyladeninyl) eller 9-(N-2-isobutyroylguaninyl), 5 G betegner en beskyttelsesgruppe for en sekundær hydroxy-gruppe, Z betegner oxygen, svovl eller selen, og R er alkyl med indtil 8 carbonatomer, cyclohexyl, benzyl eller eventuelt med fluor, chlor, brom, lavere alkyl, 10 lavere alkoxy eller trifluormethyl substitueret phenyl, men fortrinsvis methyl, ethyl, phenyl eller benzyl, navnlig methyl, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at et bifunktionelt phosphonyleringsreagens med den almene formel 15 R - P. (II) hvori R har den ovenfor anførte betydning, X er chlor eller 20 Y, og Y er en gruppe med delstrukturen ^r1

-N

X 2 R

1 2 25 hvor R og R er ens eller forskellige alkyl- eller cyclo- alkyIrester med indtil 8 carbonatomer eller phenylgrupper, 1 2 eller R og R danner sammen med nitrogenet en mættet eller umættet heterocyclisk ring, der kan indeholde yderligere heteroatomer, omsættes med et nucleosid med den almene for-30 mel τ-°Ί^Β »id H-0 35 hvori T og B har den ovenfor anførte betydning, fortrinsvis ved en temperatur fra -80 til +100°C, især ved -20

DK 162895 B

4 til 0°C, og den herved opnåede forbindelse med den almene formel <iv> 0

R - P

10 hvori substituenterne T, B, R, G og Y har den ovenfor anførte betydning, omsættes med en forbindelse med den almene formel G-0 hvori B og G har den ovenfor anførte betydning, fortrinsvis ved en temperatur fra -20 til +100°C, især ved stue-temperatur, og den opnåede forbindelse med den almene formel

’XJ

? (VI)

25 * - l B

ho

G- O

30 hvori T, R, B og G har den ovenfor anførte betydning, oxida-tivt eller ved behandling med svovl eller selen overføres i en forbindelse med den almene formel (I), fortrinsvis ved en temperatur fra -80 til +100'C, især ved en temperatur fra -20°C til stuetemperatur.

35 Sammenlignet med den ovenfor omtalte, kendte teknik opnås der ved den her omhandlede fremgangsmåde følgende

DK 162895 B

5 fordele: I forhold til Ogilvie m.fl. opnås kortere reaktionstider og mildere reaktionsbetingelser uden anvendelse af methyliodid, som fører til sidereaktioner på heterocycliske 5 baser.

I forhold til de af Ts'o m.fl. anvendte phosphor(V)derivater er de ifølge opfindelsen anvendte phosphor(III)derivater mere reaktive.

I forhold til Agerwal m.fl. og Engels m.fl. undgås 10 dannelsen af 3', 3' -dinucleosidmethylphosphonater som biprodukter, ligesom der heller ikke er risiko for en delvis fraspaltning af den syrelabile 5'-hydroxybeskyttelsesgruppe, som følge af at der i et efterfølgende trin frigives HC1, som skal opfanges af en base.

15 Forbindelserne med den almene formel (I), hvori Z

betyder svovl eller selen, samt mellemprodukterne med den almene formel (IV) er hidtil ukendte forbindelser.

Som grupper med den almene formel -NR^R2 kommer f.eks. følgende på tale: 20 dimethylamino, diethylamino, diisopropylamino, methyl-ethylamino, methylpropylamino, methylhexylamino, me-thylcyclohexylamino, morpholino, pyrrolidino, piperi-dino, methylanilino, diphenylamino, imidazolo, triazolo, benzotriazolo og tetrazolo.

25 Udgangsmaterialerne med den almene formel (II), hvori X betyder chlor, kan fås ved omsætning af den tilsvarende dichlorphosphan, fortrinsvis methyldichlorphos-phan, med en sekundær amin med den almene formel 30 H - NR3*2 (VII) 1 2 hvori R og R har den ovenfor anførte betydning.

Forbindelser med den almene formel (II)y hvori X betyder en gruppe med strukturen Y, kan tilsvarende fås 35 ved yderligere omsætning med samme eller en anden sekundær amin med den almene formel (VII). Forbindelserne

O

6

DK 162895 B

med formel (II) kan renses ved vakuumdestillation.

Omsætningen af phosphonyleringsreagenset med den almene formel (II) med et egnet beskyttet nucleosid med den almene formel (III) sker i et moderat polært opløsningsmiddel, fortrinsvis chloroform, under udelukkel-5 se af fugtighed. Som hjælpebase for denne reaktion kan anvendes tertiære aminer, fortrinsvis ethyldiisopro-pylamin (Hiinig-base) . Oparbejdningen sker ved vandig ekstraktion og fældning af produkterne med den almene formel (IV) ved hjælp af et upolært opløsningsmiddel såsom petroleumsether eller pentan. De således udvundne phosphorsyrlingesteramider med den almene formel (IV) fremkommer som farveløse pulvere og kan karakteriseres ved spektroskopiske data såsom H-NMR, P-NMR eller UV- eller elementæranalyse. Yderligere kan de også ved direkte oxidation overføres til phosphonsyreesterami-derne med den almene formel

T-°y°N

20 ? (VIII)

Σ =p-R I

. Y

25 hvori T, B, Z, R og Y har den ovenfor anførte betydning, som derpå kan isoleres og karakteriseres.

Det bør fremhæves, at der ikke dannes påviselige mængder symmetrisk 31,31-dinucleosidphosphonit.

Forbindelserne med den almene formel (IV) er i tør 30 tilstand og opbevaret ved mindst -20°C stabile i mindst 1 måned, således som påvist ved P-NMR. Denne store bestandighed hos phosphorsyrlingesteramiderne er forbløffende og understreger denne metodes værdi. Deres universelle anvendelighed ved opbygningen af nucleosidernes phosphon-35 syrediestere viser sig ved omsætningen med egnede 3'-beskyttede nucleosider:

DK 162895 B

7

Herved opløses de 5'-beskyttede nucleosidphospho-nitter med den almene formel (IV) i et moderat polært opløsningsmiddel, fortrinsvis acetonitril, chloroform eller tetrahydrofuran, og blandes med nucleosidet med den 5 almene formel (V) (beskyttet i 3'-stillingen). Egnede beskyttelsesgrupper G på forbindelserne med den almene formel (V) er acylgrupper såsom benzoyl, acetyl, pivaloyl eller laevulonyl eller silylgrupper såsom tert.butyldimeth-ylsilyl. Reaktionen katalyseres med en syre, fortrinsvis 10 en azol eller et aminhydrochlorid. Særlig egnet er benzo-triazol. Det er bemærkelsesværdigt, at HPLC-analyse af det dannede produkt ikke viser tilstedeværelse af de symmetriske 5',5'-isomere og kun spor af de 3',3'-isomere phos-phonater.

15 Det labile mellemprodukt, phosphorsyrlingtriesteren med den almene formel (VI) oxideres direkte til phosphonat med den almene formel (I), hvor Z betyder oxygen. Ud over de hertil gængse oxidationsmidler, såsom dinitrogentetroxid eller iod, har peroxider, især vandfrit tert.butylhydroper-20 oxid, vist sig velegnede hertil. Reaktionen gennemføres fortrinsvis i et moderat polært opløsningsmiddel som fortrinsvis acetonitril eller chloroform. Især må man tage hensyn til den kendte (jvf. F.W. Hoffmann, R.G. Roth, T.C. Simmons, i J.

Amer. Chem. Soc. 80, 5937-40 (1958)) syrekatalyserede om-25 estering af diacylalkylphosphonitterne.

Karakteriseringen af forbindelserne (som til 31 dels allerede er kendte) sker ved hjælp af P-NMR og ^H-NMR samt ved chromatografiske sammenligninger med autentiske materialer.

30 Fremstillingen af forbindelserne med den almene formel (I), hvori Z betyder svovl eller selen, sker ved direkte omsætning af forbindelserne med den almene formel (VI) med elementært svovl eller selen. Indrøring i et polært opløsningsmiddel såsom tetrahydrofuran sammen 35 med den støkiometriske mængde svovl eller selen fører i gode udbytter til de tilsvarende thio- eller selenphos-

O

8

DK 162895 B

phonater med den almene formel (I). Karakteriseringen 31 sker foruden ved elementæranalyse også via P-NMR og 1H-NMR.

På grund af tilstedeværelsen af et asymmetri-5 centrum på nucleosiddelen og tilvejebringelsen af et nyt ved phosphoratomet foreligger phosphonaterne med den almene formel (I) som diastereomere blandinger (se tabel 6, isomerene 1 og 2). En variation af parametrene såsom opløsningsmiddel, temperatur og rækkefølgen for tilsæt-10 ningen indvirker kun i meget ringe omfang på isomerfor- holdet, som ligger i nærheden af det statistiske lsl-for-hold.

I øvrigt tjener de følgende eksempler til at belyse opfindelsen nærmere» 15

Fremstilling af udgangsmateriale.

h3c-p[n(ch3)2]2 I en trehalset 1000 ml kolbe med dråbetragt og mekanisk omrører anbringes 125 ml (1,9 mol) dimethylamin 20 i 400 ml vandfri diethylether, og under isafkøling tilsættes i løbet af 60 minutter 60 ml (0,40 mol) methyldi-chlorphosphan opløst i 200 ml vandfri ether. Efter omrøring i 2 timer ved stuetemperatur og i 1 time ved 50°C filtreres bundfaldet fra under beskyttende gas, eftervaskes 2 25 gange med 100 ml ether, og filtratet inddampes ved ca.

0,1 bar. Den tilbageblivende remanens destilleres hurtigt over ved 0,5 bar/124°C. En findestillation med en Vigreux-kolonne på 50 cm giver ved 64-65°C/65 mbar et udbytte på 36,6 g (66% af det teoretiske) af en farveløs 30 væske.

Analyse: Cl - <0,2% 31P-NMR (THF) i = 87 ppm 1H-NMR (CDC1J S = 1,23 ppm (d, 7Hz, P-CHJ S = 2,66 ppm (d, 7Hz, N(CH3)2 35 9

DK 162895 B

o

Eksempel a) 51-Tritylnucleosidet med formlen (III) (1 mmol) opløses i 6 ml vandfri chloroform under indifferent ni-trogenatmosfære, og hertil sættes 2 mmol H^CP[N(-CH3)2J2· Reaktionen er tilendebragt efter 12 timer ved stuetemperatur (omrøring) eller allerede efter 2 timer ved tilsætning af katalytiske mængder (på 0,1 mmol) collidinhydrochlorid. Derefter overføres opløsningen sammen med 100 ml methy-lenchlorid til en 250 ml skilletragt og rystes to gange med 50 ml mættet kogsaltopløsning (indeholdende 0,1 ml triethylamin). Den organiske fase tørres over vandfrit natriumsulfat og inddampes til et skum. Dette omrøres i 2 timer med 50 ml pentan. Resten suges fra, opløses i 2 ml diethylether og tildryppes langsomt til 50 ml godt 1 o omrørt pentan. Det fine bundfald filtreres og tørres, hvilket giver et udbytte på 85 til 95% af forbindelsen med den almene formel (IV) (se tabel 2 og 3).

31

Forbindelserne kan påvises direkte ved P-kernere- 20 sonansspektroskop! eller kan påvises efter oxidation med tert.butylhydroperoxid som phosphonsyreesteramider med den almene formel (VIII) (se tabellerne 4 og 5).

31

Indenfor P-NMR-spektret viser disse stoffer indtil 3% hydrolyseret produkt (nucleosidmethylphosphinat), 25 men ingen påviselig mængde af symmetrisk 3',3'-dinu- cleosidphosphonit. Herved vises overlegenheden i forhold til de hidtil kendte metoder, der konsekvent har leveret fra ca. 5 til ca. 10% af disse produkter. Som tørrede pulvere opbevares det dannede produkt ved -20°C, og der kan 30 ingen sønderdeling iagttages indenfor 1 måned.

Analogt anvendtes følgende reagenser: 35 10

DK 162895 B

o H c ^2H5>2 b c . p„N ZCH(CH3)2_72 ,3 ^C1 3 XC1

CcH, / 6 5 ✓ Vh N(CfiH ), H,C - CH3 H,C - 652 J Cl J NC1 b) 5'-Tritylnucleosid med formlen (III) (1/00 mmol) og 1/71 ml (10 mmol) Ν,Ν/Ν-ethyldiisopropylamin kommes i 6 ml THF, og der tildryppes langsomt 2/00 mmol phosphonyle-ringsmiddel med formlen (II). Efter omrøring ved stuetemperatur natten over tildryppes reaktionsopløsningen i 50 ml med NaCl mættet iskoldt vand. Efter ekstraktion to gan- 15 ge med hver 20 ml methylenchlorid tørres den organiske fase med natriumsulfat, og opløsningsmidlet fjernes i vakuum.

Den yderligere rensning sker ved fældning således som ovenfor (se tabellerne 2 og 3).

Den under a) eller b) fremstillede forbindelse med 20 formlen IV tørres sammen med 0,20 mmol 3 *-O-benzoylthymidin og 0,80 mmol 1-H-benzotriazol i en rundbundet kolbe og opløses derpå i 1,0 ml tørt acetonitril. Indenfor et minut er reaktionen afsluttet, hvorved der opstår et meget luft- og syrelabilt phosphonit med formlen (VI), som, opløst i ace- 25

tonitnl eller tetrahydrofuran,direkte ved oxidation med 0,25 mmol vandfrit tert.butylhydroperoxid (ifølge H. Langhals, E. Fritz og J. Mergelsberg, Chem. Ber. 113. 3366 (1980)) overføres i phosphonatet med formlen (I), hvor Z

betyder oxygen, i et udbytte på 80 til 90%. (jvf. tabel 6).

30

Alternativt tilsættes 30 mg (0,95 mmol) svovl til 0,7 mmol af forbindelsen med formlen (VI) ved -20°C, idet der omrøres natten over ved stuetemperatur. For det meste er reaktionen allerede afsluttet efter nogle få timerDerefter tilsættes 20 ml chloroform, og den orga-35 niske fase rystes tre gange med vand. Efter tørring over

O

11

DK 162895 B

natriumsulfat og fjernelse af opløsningsmidlet fås et råprodukt, som renses ved chromatografi på kiselgel, og som giver et udbytte på 80 til 90% af forbindelsen med formlen (I) (jvf. tabel 6) .

Alternativt sættes 118 mg (1,5 mmol) sort selen 5 til 0,7 mmol af forbindelsen med formlen (VI), og der omrøres natten over. Efter oparbejdningen (gennemføres således som ovenfor anført) fås forbindelsen med formlen (I) i et udbytte på 60% (jvf. tabel 6) .

HPLC-analyse af reaktionsmroduktet (i tilfældet 10 Z = 0 ved sammenligning med autentisk reference ifølge P.O.P. T'so m.fl. Biochemistry 18, 5134 (1979)) viser et indhold på ca. 1% af 3' ,3'-phosphonaterne, men intet 5',5'-isomer.

15 20 25 30 35 12

DK 162895B

"n a

o fO

<M r· cr ^ CO a "å i ,0 «j

B rO

0) ^ O

^ Cn £ H __ __ Λ _ 9 f co s < aa aaa a

_ 5 CM 's? CM CM CM CM

r1 > O ^ i CM ·« *-5-1 B ·- *· »·*·*· v tn i'-' r~ < c\ tn tn tn tn tn tn ζ! V i ·- -o ww ww -— v— n rs v- a VO *- 3~ lo i min T- r~ cn co i m - 's* σι m o co oo U * * g * £ » *> *.·.·. ».

ro ^ r-— r*w r~ m coco co co B co r-t — u

H O H U

W « g rH £ . £ _ _ Λ

22 - N N N

S i co ro a a NN a i-ι te μ *— ° a a σι 0 τ- η ιι -ο* t- σι σι ILJ I Ιο Μ Γ- ο ιι cm ιι σι ιι ο ιι ** · vc> |Jli CM Ha CO ι~3 -μ* 1-3 id ίο CM kO “'ro - — v —- —· >. — Ό V- CM rd CM »C CM Ό CM 13 <D r- ’Tj

S

^ CO CO

ω i 1 _

,2 O 0 Μ P

•h x- m U o Ά U \ ^ · -b ° y, tf r- ^ og £ .Li pijQ *3· Ml1 t- n « I * ^

£ -v. cm cm I

0 O "3* ^ .. «I

fc 0 & s< s s m ui '*—* *>*** ··

' r-H

’oad'U Λ ϋ 0 o ro

Λ S — CM CM

tf 2 Η - '

&* . I CM <“ CM

^ 2 CM £ r: ^ 0 * m co

CO

I > I >11 M’ o

CM

CM CO

CM ο . a m ·—- . 52-kk rno * »" "» Xm t\ I\ ΪΛ i\ £ „

h. y 0“ U -w ®v/. τ η I

• 1 f * g

2 H

cm 0 "6

Q rC *H G

. fi-i Q fu v t—i H 2—i /—2 X“"S 2"“\\ 0 1,¾ U u /,^ P5 \\ i I / 2 « ",|3 . , · cy V V V ., -E=o . * I *· l _______ tf Xi 0 rc 13

DK 162895B

'"cm Τη a CM X — u o cm ^ rH Γ-, * ί —. o n CM N X CO a — a σ\ Ό n O - cm *- ^ —» a * · *— o a co . u r- r-t m s,u a ^ ii ω a vr kj □ i 52 3 “uw £ ^ s bs I— N _ O'. T Γ" N VO -k

CM xtf a Si o ^ oa CON

a -οί * - a «τ- - a x- CM·» on I x~ » CM O’

Pi ^ CO I M3 ''k. - z vo ii »nt vo n ii cm n

t— Ο pk x— a OH

• k. —. v ·. *. *—· ' ·» lo CM Τ3 i— CM r- Ό Π '-f *0

*N N

a a ο σι

ητ» cd n nr·»«— NON

x— x t— a x~ \ n a X- a n ·» n ·» vo »-in ·* co »co . CM - a x— «. t— *. x— * x— ». χ— ».

S1 a Λ U Nr~ \Γ' '-».co I co \σ» x~ T vo ii co ii co ii nil nil ^7V a ea »-a x- a χ- a n a χ-a ο I i ft x- ό x- a x-a x-a x-a

\z" ° ΐ *N *N N

a a a 1 n - ο σι cn Λ o a — - -· —' ·» *-

> u η η N Or- V0NCOOVOO

Η H rH -XT a 'C' \ n a η'-», n »— n v cm ·. cm »· σ> -k n ».cm fS X- k x- k X- k. X- »k X- k ο n V. x— \ X— 'v. O Mr \ X—

·— a x^ II x- II I— 11 O II O II

μ o »a* a ^ a n a ^ a ^ a O _i c£ k.—- k '—' k k —* k'—' ω φ g x- ό x-a x-a x— a x-a 1-1 s z

<o g T

aM a Λ ^ Λ

Cm X— r- Γ" N Ci N ON r- N

in in a m a m a ^ a Λ k- v CM k· cm »-cm »-cm , £j ^ *-» r- * a » i^k » Γ' » ' .° ! vo \ in \ x- \ x- \ x- \ x—

« E I · O —' σι II χ- II r- II σι II

a vo in a vo a m a n a a r^a r^ar^ar^a r—ϊ λ ^ C> *3 c i ci

Ioj n> cm

All ». · ·» VO

V— Ο o vo » ? 5 8 £X Λ J. ^ g g Q vo n xa* a co - z I . k. · »· * « I cm σι r* 0x3*0 *

Cm v η n cm η η ^ ω

X— x— X— x— «— * X in S

n — i I i I l S fr*

CM

' m — -i a cm n a η -η τΐ ., a a cm a mm +jj->

u υ g -vo Evo VV

0. ° ° o 0 CM ΐ g Λ o ° n *w ^ *T* m u m -π ^ x- . n a a: n a a a η a a vo «ο U (J U U O iti Λ 14

DK 162895 B

σ> £3 t— a •ro ro r* · • K *^r- Π o ii

T CM l-D

a *-^r *- 73 - \

' O] N

— in K

ro CM co £d - *

U CM CO

— \ II

z »-D

I MD ^

Pi ·· CM 73 tn r- ro ro a B {5 3 CM 73 ro CQ-7S. U Bi ίπ Z\ * £ "

Oli Ss · cm - >,tp

>7"°·^ ώ . 5J

l aP 4° S, g 8 ' S Έ a -ai

C· ^ CM -HH

£5 _ ^ ^ >i

H S CO *· i—I O

w 2 i co -—- >, tn i a \ w o -η Ό a ro —- tn c •ο <- r- -h to • “ “ f i <u H Qi 1 0) — _

m .E O S Q

^ ,0 . g Jq >1 r-i

5 Q-i 4^ co *cj r_I

o £·Ρ -* —T *=; •H ^ tn o) ^q ^ i—i ·η o 4 £ 1¾ -i & s ^ ^ !d \ >ij- c -S s a ϋ ro CM ra c Λ -a tn & ro s *h ·* ·* ^ 3 t>i c o ή §Qin VD -« 4 c S 1) \ _

rH I I rj< «C 2 Uo >1 O

« ft« v V ? V-g ra o u g jq »--i i i (0 -CO«~ +* "ri ih ·£5 «

Eh 1 5-j O O d 33

>i+J N N Λ λ CO

H S S 8 gg S & ? *? V “h —- 5) q >n n j μ

Λ N 3 E +J I I I V JJ

_ CQ N δ QO 2 Z 2 _.

ra 73 o -η jj g www B u < υ o o -H i i i 3 qj SQ-C\ r- c\ 0 0

II II II II II -S S

5-1 M N d o P.

u „ u sa%s .¾ *“

'to £| h £j S Q < O O ·* H

E-t % Q Q ”t0 · Λ “oT?

DK 162895 B

CM CM

15 ”~Ln m • »-pi »->·*

.. ' CM CM

^ u (J

cm lo 2 —· 2 K

— K 'DJ Γ- οο .— cm — n? ·> * ir! NCJ Nr- N *c vø U K - K 0 κ o \ — ^ r- 2 O O -f-f'-, 2 N -CM *- T— O i~ - 1 HJ p- r- il >. \o N —· ch ii ro E n 73 r- p- x* —>· ^ cm sr tn to K co - ιι i— o ro · pj »O'- -C1 n -K g i- NP Jj W S +ΙΌ K i- *=r U '5 g\ li ^ r ri o li — " m 7> -o' U l p in n d ιϊ S , vø - c\ —'co o o 2 «- _-iU p -¾ -2 - - - JJ -¾ 2 CM "—' O I CM r- CO P) i- —' 2 X! «"1 0 CO K "ø η σι ,β - ' jj CO 1— O ø td χ^ ii o U i- *3< pj vø T- co MT g m* roi co co cm in ro . øj . v -.*-vS - ^ *·' — CO ^ V— t— Ότ— r~ T— x— ^ jz.

+J

ω J. is c, c, ^ s •3 gS S N N ΐ· ·* S o cm ίη m K ffiffi-u

Dj CO M1 - - - CM 00 P- 0) O, K “-ID UD U3 - - - +>

C. Π i- i- T- r- VØ VØ Γ— -H

V X II II II i— i~ 77 ^ od h m 6 co pd vø ii oo 11 σι II ·η . „ c Ox IX Ox 05 “C3 “1Q %

fel oi V T- >σ 1- Ό 1-¾ 1-¾ 1-¾ 1-¾ B

^7\ ^ 'To -H

° lo-A-S u · _ * VA8«>S!_SR 3 2

O ϋ ». N CM *- ίΰ H

Y i r- id - i γμ J-( . \ CM i— X» **_ 0 fx fd 2 o ¾ cm - σ. η co i-ι— co 2 iø — lo i- in 6 uv m η 0 >-r V. V. >. '-- ». - Γ0 V 0] g _ 7* p· p> T3 r* Ό r- o H 1 S “ H K ^ -i H i- .—. —. .— .— -— > ^ p. co ρ- σι co η <d

X £} Ol O CJl OlOO cMH -U

«.O * * - w 33 Μ H

* __- bi ro co co ^j<o* iw-x

KO—' vr —' —' - —' CM Ό DC

o «Η — -x C JS

. co—' esc c c: ciri'-icO'O

Sh k κ H i i ^ B e >< 15 2 ϋ H CO "Cø M* 'M* O 0^---

7P p vø iø vø vø VØ vø ϋ Ό O

^5 > CMCM CM CM CM CM

fi ‘h —’ -vr

·* O

Λ Ό (V

MØ . co 06 a fc.

# w " 'P in s

^ S CO EH

d kj n-ι

0) -a-P *H *H

XI g O ø 4J

<o Ch u dl 0 13¾ ---r-l r-l 0 1*6 O Ό O'ød'øøø Κ.-1 m in in Mr μ m

Sq o *- * *- c - r 00 2lo· σι σ co co ® o 5 0 w I CM CO CO CO CO > rp η-j

ØJ ·« I I 1 I I O I 0 -Μ -M

1—1- . y C

- " w CM «2 & *2 Λ **-* ro cm in JP S .vi0 m f S **cm - ^vø a • r-“ 5 u u D υ J> . £< 16

DK 162895B

O *N

w æ

'V

ro v ir; π ii Y n*2.

di *— ό μ "Fo 'Ί1 ro ΰ m S3 cvT * 1

U \ CO

VD 11 2 vob . I « ·—- ft <M Ό ^ m - t? fn O U <o _ g \ in ft ‘ I id w vS1 O ^ \> S T”

Ir N 5 V -__ U I r- to Q KH ^ (j w *· C- co g co

S VD

Μ · 2 CO *·

-- i CO

co 4< i \ .

S3 -* ro «*«.

rQ-T^ U *- 2 r— w olJKn

£~ ° § rnFT

J co co in E-i 2 » ^ υ -y * Η · ^ ω o ri r- co H CM (V! 1 “?s

<DH

W 0) y rr, -Ί S Ό O ™ <u m bi _i Ό 0 -> Æ T- ^ C Ή g U *- n •H g "H t~ r- r- ·£ i f ? 7 7 7 s 0 ft ΓΜ ..

t, τ- * H - .

CO r- p « i

H

5 « £ ~ N fl * Λ co n tq *.

m 'ΰ ο -Ά .

< o o o *» ,H >« n Λ "φ jp« i? "" % έ g a i?

DK 162895B

17

NN

* S & X “ s eS CO eS ID - v ·. «. — Γ— γ- γο in in rr 'tf m m

S3 »— t— t— τ— _i il r-v II

η i— lf O II «tf. li O 11 In A in A .

T cob too oboib v- t— Ό CS Ό t— rc3 Ή Ό η Ό Λ — ^'n ^ E-l

g g g£ g £ B

en 1- es ·—· ^ 7ΪΓ te m KD 1— N II ve— "tf TJ "tf xli rj w s1 w «β· t-3 'tf en _._· _ O T ---- - “ -w _1 ,Η r- r· t- Ό r- H n B „ „ & ^ Øi Di

x1 S1 & &R & S S

V, en — — — - —' -1 S5 r- σ\ oo

. Π ΟΊ —. CTi O II 00 Λ CO C CO

* Y co to ω ω σο ι-ό en t n „tj _ en m - xx — ·-—· . ·—· , — M T- T- r-'dr-'"1’-1 u

Q

^ c

>1 ρΛω eSeSS’O

>, β7\ ? S -g S o g o £

E „o T i ocooOO

' j y s: _ _ s· V y-o-P-O Ι-x m o \/ II X _ — — es es o fX rn tr> m id .. 1 m B O es es sp -» t-4 - w w- h u V_1 ^ o S3 _ _ S B § S·» i I c 1 • 5 § s s s s = > es es M es +j ro <0

^ 4J

<U

n -· S

<u o) 12

ω S

mm . ? οι o N — s S «w S ^ h c Om χϋ •Η Ό · . ID r ) e •ss 1 g ΐ„ ° I s £ gÆ η» - Λ

Di G) Il ·· .-- Din ^ Di ro cn> 4J w ^ N>0- "> m m o s _, μ r- mm . æ u μ

m. - Æ cr> --' M

S gU'-- i-» in Γί MMM

•9 s -H co o o [s M M M

S g Q oo <- v- en +JÆ-P

^ III II I _ O

Pi CS Ό S "Ό ^— v i—I Ή en r- 2 5 2 Λ •H Æ H -P >-l O (0 o H-l m m 0)

M D M

0) --- w W o id Λ u

Claims

1. Fremgangsmåde til fremstilling af desoxyribo-nucleosidphosphonater med den almene formel

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der anvendes forbindelser med formlerne (II)- (IV), hvori T betyder triphenylmethyl, p-anisoyldiphenylmethyl eller 5 di-(p-anisoyl)-phenylmethyl, B betyder 1-thyminyl, 1-(N-4-benzoylcytosinyl), 9-(N--6-benzoyladeninyl) eller 9-(N-2-isobutyroylguaninyl), og R betyder methyl, ethyl, phenyl eller benzyl.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, ken detegnet ved, at forbindelserne med formlen (II) og (III) omsættes ved en temperatur fra -80 til +100°C.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 3, kendetegnet ved, at omsætningen finder sted ved -20°C til 0°C.

5. Fremgangsmåde ifølge et eller flere af de foregående krav, kendetegnet ved, at forbindelserne med formlerne (IV) og (V) omsættes ved en temperatur fra -20°C til +100°C.

5 H-0 \ hvori T og B har den ovenfor anførte betydning, og den opnåede forbindelse med den almene formel

0 IIVI i R - P v y hvori substituenterne T, B, R, G og Y har den ovenfor anførte betydning, omsættes med en forbindelse med den almene formel . B H-O-^OO (V)

20 G-0 hvori B og G har den ovenfor anførte betydning, og den opnåede forbindelse med den almene formel B

25 T~°"]</ N) 0 (VI) R - P B 1 / °vl 30 „ ^ G—0 hvori T, R, B og G har den ovenfor anførte betydning, oxida-tivt eller ved behandling med svovl eller selen overføres i en forbindelse med den almene formel (I). DK 162895 B

5 T-°iQ o (I) Z = P - R t> · G-0 hvori T betegner en beskyttelsesgruppe for en primær hydroxy-gruppe, 15. betyder en nucleosidbaserest, i hvilken en tilstedeværende exo-aminofunktion er beskyttet, G, betyder en beskyttelsesgruppe for en sekundær hydroxy-gruppe, Z betyder oxygen, svovl eller selen, og 20 R er alkyl med indtil 8 carbonatomer, cyclohexyl, benzyl eller eventuelt med fluor, chlor, brom, lavere alkyl, lavere alkoxy eller trifluormethyl substitueret phenyl, kendetegnet ved, at et bifunktionelt phosphony-leringsreagens med den almene formel

25 X / R - P (II) ^Y hvori R har den ovenfor anførte betydning, X er chlor eller 30 Y, og Y er en gruppe med strukturen X*1 - N \ 2 ΈΓ 1 2 hvor R og R er ens eller forskellige alkyl- eller cyclo- 35 alkylgrupper med indtil 8 carbonatomer eller phenylgrupper, ] 2 eller R og R danner sammen med nitrogenet en mættet eller umættet heterocyclisk ring, der kan indeholde yderligere he- teroatomer, omsættes med et nucleosid med den almene formel DK 162895 B \

6. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendeteg-20 net ved, at omsætningen finder sted ved stuetemperatur.

7. Fremgangsmåde ifølge et eller flere af de foregående krav, kendetegnet ved, at forbindelsen med formlen (VI) overføres oxidativt eller ved behandling med svovl eller selen i en forbindelse med formlen 25 (I) ved -80 til +100eC.

8. Fremgangsmåde ifølge krav 7, kendetegnet ved, at omsætningen finder sted ved en temperatur fra -20°C til stuetemperatur.