DK162894B

DK162894B - Phosphonyl-hydroxyacyl-(l)-prolin-derivat eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf

Info

Publication number: DK162894B
Application number: DK002887A
Authority: DK
Inventors: Donald Steven Karanewsky; Jr Edward William Petrillo
Original assignee: Squibb & Sons Inc
Priority date: 1986-01-06
Filing date: 1987-01-05
Publication date: 1991-12-23
Also published as: PH24150A; CS266599B2; PL263552A1; ES2015267B3; IE59688B1; EP0229520B1; CA1279651C; KR870007188A; JPH0357115B2; IL81154A0; CN87100055A; NZ218475A; NO171504B; EP0229520A1; PT84062A; JPS62164691A; FI870029L; CS9687A2; DE3671631D1; US4745196A

Description

i

DK 162894 B

I US-patentskrift nr. 4.452.790 er beskrevet antihy-pertensive phosphonyl-hydroxyacyl-aminosyrederivater med formlen

0 R2 O

5 II I II

R -P-O-CH-C-X

OR3 hvori X omfatter L-prolin. I eksempel 1 i patentskriftet 10 beskrives forbindelsen o CH3 o /\

ii i ii . I

( O )“ (CH2) 4 -P-O-CH-C- N--COOH

15 VI/ I (L)

OH H

Den foreliggende opfindelse angår et phosphonyl-hy-droxyacyl-L-prolin-derivat med formlen I

20 nh2 O (CH2)4 O /\ (I) /—\ II I II 1

(0/~(CH2)4 - p - o - CH - C - N--COOH

25 Vi/ I (S) (L)

OH

eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

Denne forbindelse med formlen I er særlig anvendelig som antihypertensivt middel på grund af sin enestående orale 30 aktivitet, der er betydelig højere end aktiviteten af forbindelsen fremstillet ifølge eksempel 1 i US patentskrift nr. 4.452.790.

Forbindelsen med formlen I kan fremstilles ved at koble en phosphonsyre med formlen 35

O

(CH2)4 - P - OH (II)

40 H

til hydroxy-acylprolinesteren med formlen

DK 162894B

2

Prot

NH

5 (CH2)4 0 /\ i II i HO - CH - C - N--COOR4 (III) (L)

H

10 hvori "Prot" er en beskyttelsesgruppe, såsom

O

^0^-CH2-Q-C-t og R4 er en esterbeskyttelsesgruppe, der 15 let kan fjernes, såsom benzyl eller methyl, i nærværelse af dicyclohexylcarbodiimid og Ν,Ν-dimethylaminopyrimidin. Denne omsætning udføres i et opløsningsmiddel, såsom tetrahydrofu-ran, og man får mellemproduktet med formlen (IV), hvor "prot" og R4 har de ovenfor nævnte betydninger 20

Prot

NH

25 9 (9H2) 4 O /\ /^λ II I II i ^0^-(CH2)4 - P - O - CH - C - N-- COOR4 (IV)

H

30 Dette mellemprodukt med formlen IV oxideres med et oxideringsmiddel, såsom natriumperiodat, hvorved man får esterproduktet med formlen (V), hvor "prot" og R4 har de ovenfor nævnte betydninger

Prot

35 I

NH

1 Λ O (0*2)4 O y\ Λ=χ 1 I Bl- 40 <( ))-(0¾) 4 - P - O - CH - C - B--COOR. (V) V=7 I (L)

OH H

Ved fjernelse af aminobeskyttelsesgruppen og R4-ester-gruppen, eksempelvis ved hydrogenering, når R4 er benzyl, 45 fås phosphonyl-hydroxyacyl-prolin-slutproduktet med formlen I.

Forbindelsen med formlen I kan også fremstilles ved behandling af en phosphonsyrediester med formlen VI

O

3

DK 162894 B

5 4 - P - ORg (VI) 0R5 hvori R5 er en estergruppe, der let kan fjernes, såsom benzyl eller methyl, med phosphorpentachlorid, hvorved man får phosphonochloridatet med formlen VII, hvor R5 har den ovenfor 10 nævnte betydning 0 <0)-(ch2)4 - P - Cl (VII) 15 0R5

Phosphonochloridatet med formlen VII behandles med hydroxyacyl-prolinesteren med formlen III i nærværelse af Ν,Ν-dimethylaminopyridin og triethylamin, hvorved man får diesteren med formlen VIII, hvor "prot", R4 og R5 har de 20 ovenfor nævnte betydninger

Prot

NH

1 /V

25 0 (CH2) 4 0

/~r\ II I II I

(OV(ch2)4 - P - 0 - CH - C - N--COOR4 (VIII) \__/ I (L)

0R5 H

30 Ved fjernelse af aminobeskyttelsesgruppen og R4- og R5-esterbeskyttelsesgrupperne, såsom ved hydrogenering, når R4 °g R5 begge er benzyl, fås slutproduktet med formlen I.

Slutproduktet med formlen I kan omdannes til den tilsvarende disalt-forbindelse ved behandling af disyren 35 med et egnet saltdannende reagens. Egnede disalt-forbindelser omfatter de farmaceutisk acceptable salte, såsom natrium, kalium, lithium og calcium. Således kan man behandle disyre-produktet med lithiumhydroxid, natriumhydroxid, kaliumhydroxid eller calciumhydroxid, hvorved man får det ønskede 4 0 disalt-produkt.

Slutproduktet med formlen I, herunder farmaceutisk acceptable salte deraf, er anvendelige som antihypertensive midler. Med virkningen af enzym-renin på angiotensinogen, 4

DK 162894 B

et pseudoglobulin i blodplasma, fremstilles angiotensin I.

Ved hjælp af angiotensin-omdannende-enzym (ACE) omdannes angiotensin I til angiotensin II. Det sidstnævnte er et aktivt pressor-stof, som er blevet inddraget som det til 5 grund liggende middel ved adskillige former for hypertension hos forskellige pattedyrarter, eksempelvis mennesker. Slutproduktet med formlen I går ind i angiotensionogen -» (renin) -* angiotensin I -» angiotensin II sekvensen ved at inhibere angiotensin-omdannende-enzym og derved mindske eller under-10 trykke dannelsen af pressor-stoffet angiotensin II. Således 1indres angiotensin-afhængig hypertension hos en pattedyrart (eksempelvis mennesker) der lider deraf, ved indgift af et præparat, der indeholder slutproduktet med formlen I.

Især har det vist sig, at forbindelsen med formlen I 15 er særlig anvendelig som oralt antihypertensivt middel.

Forbindelsen med formlen I har vist et højt biotilgængelighedsniveau efter oral indgift til et forsøgsdyr.

Følgelig er en enkelt dosis eller 2-4 afdelte daglige orale doser, forudsat, at det er på basis af 20 fra ca. 0,5 til ca. 10 mg/kg legemsvægt pr. dag, af forbindelsen med formlen I, hensigtsmæssig til nedsæt-ning af blodtryk.

Forbindelsen med formlen I kan også formuleres med et diuretikum til behandling af hypertension.

25 Kombinationsprodukter, der indeholder forbindelsen med formlen I og et diuretikum, kan indgives i en virkningsfuld mængde, som omfatter en samlet daglig dosis fra ca. 30 til ca. 600 mg, fortrinsvis fra ca.

30 til ca. 330 mg af forbindelsen med formlen I, 3° og ca. 15 til ca. 300 mg, fortrinsvis fra ca. 15 til ca. 200 mg af diuretikum til en pattedyrart, der har behov derfor. Diuretika, der kommer i betragtning til anvendelse i kombination med forbindelsen ifølge den foreliggende opfindelse, og som skal 35 tjene som eksempler, er thiazid-diuretika, eksempelvis chlorthiazid, hydrochlorthiazid, flumethiazid, 5

DK 162894 B

hydroflumethiazid, bendroflumethiazid, methylclothiazid, trichlormethiazid, polythiazid eller benzthiazid samt ethacrynsyre, ticrynafen, chlorthalidon, furosemid, musolimin, bumetanid, triamteren, amilorid og spironolac-5 ton og salte af sådanne forbindelser.

Forbindelsen med formlen I kan formuleres til anvendelse til nedsættelsen af blodtryk i præparater såsom tabletter, kapsler eller eliksirer til oral indgift, eller i sterile opløsninger eller suspensioner 10 til parenteral indgift. Fra ca. 10 til ca. 500 mg af forbindelsen med formlen I blandes med eksempelvis fysiologisk acceptabelt bæremedium, bærer, strækkemiddel, bindemiddel, konserveringsmidler, stabiliseringsmiddel og smags- og aromastof, i en enhedsdoseringsform som 15 krævet ved accepteret farmaceutisk praksis. Mængden af aktivt stof i disse blandinger eller præparater er sådan, at man opnår en passende dosering indenfor det angivne område.

Naturligvis kan man også fremstille forbindelsen 20 med formlen I ifølge fremgangsmåden i US-patentskrift nr. 4.452.790.

Af de følgende eksempler belyser eksemplerne 2 og 3 opfindelsen. Temperaturer er angivet i °C.

25 Eksempel 1 a) -6-amino-2-hvdroxvhexansvre

En vandig opløsning af 18,3 g (0,1 mol) L-lysin, monohydrochlorid ledes gennem en "AG 3-X4A" (100-200 mesh) ionbyttersøjle (OH-form, lag-volumen:500 ml), idet man 30 eluerer med vand. De ninhydrin-positive fraktioner forenes, gøres sure med 100 ml (0,2 mol) 2 molær (4N) svovlsyre og inddampes til tørhed.,

Det rå L-lysin, disvovlsyresalt tages op i 250 ml 10%'s svovlsyre og behandles dråbevis med en 35 opløsning af 25,9 g (0,36 mol) natriumnitrit i 100 ml vand ved en badtemperatur fra 45 til 50°C over et

DK 162894 B

O

6 tidsrum af 2 timer. Når tilsætningen er tilendebragt, omrøres blandingen ved 45-50°C i yderligere 4,5 timer, den overskydende salpetersyre nedbrydes med urinstof, og blandingen hældes på en "AG-50-X8" ionbyttersøjle 5 (H+-form, 200 ml lag-volumen). Søjlen elueres med vand og derpå med vandig ammoniak (koncentreret ammoniak/vand, 1:3) for at eluere produktet. De ninhydrin-positive fraktioner forenes og inddampes, hvorved man får et lyserødt halvfast stof, som omkrystalliseres fra en 10 blanding af vand og ethanol, hvorved man får 8,20 g (S)-6-amino-2-hydroxyhexansyre som hvide krystaller:

Smp. 197-199°, [a]jp = -12,2° (c = 1,2, vand).

TLC (silicagel; isopropanol/koncentreret ammoniak/-vand: 7:2:1) = 0,16 (indeholder spor af lysin, 15 Rf = 0,22) .

b) (S)-6-[[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]-2-hydroxy- hexansyre

En blanding af 7,5 g (51,0 mmol) (S)-6-amino-20 -2-hydroxyhexansyre i 50 ml IN natriumhydroxid-opløsning ved en isbads temper atur på 0°C indstilles til en pH-værdi på 10,0 med koncentreret saltsyre og behandles med 8,4 ml (95%, 55,9 mmol) benzylchlorformiat i ca. 1 ml--portioner med 15 minutters mellemrum. Gennem reak-25 tionsforløbet holdes pH-værdien på en værdi på 9,8-10,2 ved tilsætning af IN natriumhydroxidopløsning. Når tilsætningen er tilendebragt og pH-værdien stabiliseret, omrøres blandingen ved en pH-værdi på 10 og en temperatur på 0°C i yderligere 45 minutter 30 og vaskes derpå med en portion ethyletherl Den vandige opløsning gøres sur med koncentreret saltsyre til en pH-værdi på 1 og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetat-ekstraktet vaskes med mættet natrium- chlorid-opløsning, tørres over natriumsulfat og ind-35 dampes. Remanensen krystalliseres fra isopropylether, hvorved man får 13,5 g rå produkt som et hvidt fast

O

7

DK 162894 B

stof. Ved omkrystallisering af det rå produkt fra en blanding af ethylacetat og hexan fås 11,48 g (S)-6-[[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]-2-hydroxyhexansyre som et hvidt krystallinsk fast stof, smp. 79- 81°, 5 [a]!?2 = +4,5°, [a],-. = +26,8° (c = 1,1, chloroform).

u obo TLC (silicagel; eddikesyre/methanol/methylenchlorid: 1:1:20) Rf = 0,19.

c) 1-[(S)-6-[[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]-2-hydroxy- 10 -1-oxohexyl]-L-prolin, phenylmethyl-ester

En blanding af 1,4 g (5,0 mol) (S)-6~[[(phenylmethoxy)-carbonyl]amino]-2-hydroxyhexansyre, 1,33 g (5,5 mmol) L-prolin, phenylmethylecter, monohydrochlorid, og 0,76.ml (5,5 mmol) triethylamin i 15 ml tør tetrahydrofuran 15 ved 0°C (isbad) behandles med 0,71 g (5,26 mmol) 1- -hydroxybenzotriazolhydrat og 1,08 g (5,23 mmol) dicyclo-hexylcarbodiimid. Opløsningen omrøres ved 0°C i 3 timer, tillades derpå at varme op til stuetemperatur og omrøres i yderligere 1 time. Blandingen filtreres, fortyndes 20 med ethylacetat og vaskes på hinanden følgende med 5% kaliumbisulfat, mættet natriumbicarbonat og mættet natriumchlorid, tørres over natriumsulfat og inddampes. Remanensen tages op i carbontetrachlorid, filtreres for at fjerne de sidste spor af dicyclohexylurinstof og 25 inddampes. Det rå produkt renses ved flashchromatografi på silicagel (35 g, "Whatman LPS-1") , idet man eluerer med ethylacetat/hexan (2:1) til dannelse af 2,24 g 1-I(S)-6-[[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]-2-hydroxy--1-oxohexyl]-L-prolin, phenylmethyl-ester som en farveløs, 30 særdeles viskos olie. TLC (silicagel; methanol/methylen-chlorid, 5:95) = 0,36.

35

DK 162894 B

O

8

Eksempel 2 (S)-1-[6-amino-2-[[hydroxy(4-phenylbutyl)phosphinyl]-oxy] -1-oxohexyl]-L-prolin, dilithiumsalt a) (4-phenylbuty1)phosphonsyre, dibenzylester 5 50% 1,01 g (20,8 mmol) natriumhydrid-olie- dispersion sættes til en opløsning af 5,25 g (20,0 mmol) dibenzylphosphit i 30 ml tørt dimethyl-, formamid under argon. Den fremkomne blanding omrøres ved stuetemperatur i 1 time og ved 40°C (badtemperatur) 10 i 30 minutter. Den fremkomne, klare, gule opløsning tillades at afkøle til stuetemperatur og behandles med en opløsning af 4,0 g (23,7 mmol) 4-phenylbutylchlorid i 3 ml dimethylformamid. Den fremkomne blanding omrøres ved stuetemperatur i 18 timer og ved 40°C i 2 timer.

15 Blandingen fordeles mellem ethylacetat og 1% kalium-bisulfat. Den organiske fase vaskes på hinanden følgende med vand (to gange), mættet natriumbicarbonat (to gange) og mættet natriumchlorid (to gange), tørres over natriumsulfat og inddampes. Remanensen renses 20 ved flashchromatografi (silicagel, 100 g "LPS-l") idet man eluerer med ethylacetat/hexan (3:7) til dannelse af (4-phenylbutyl)phosphonsyre, dibenzyl-ester som en farveløs, noget viskos olie.

25 b) 1- [ (S)-2-[[(4-phenylbutyl) (phenylmethoxy)- phosphinyl] oxy] -6- [ [ (phenylmethoxy) carbonyl] amino] --1-oxohexyl]-L-prolin, phenylmethylester 320 mg (1,54 mmol) phosphorpentachlorid sættes til en opløsning af 595 mg (1,51 mmol) (4-phenylbutyl)-30 -phosphonsyre, dibenzylester i 3,0 ml tør'benzen.

Den fremkomne blanding omrøres ved stuetemperatur under argon i 30 minutter og ved 60°C (badtemperatur) i 45 minutter. Opløsningen inddampes ved 60°C og et tryk på 67 Pa, tages op i benzen og inddampes igen.

35 Denne fremgangsmåde gentages to gange. Det rå phosphon- chloridat tages op i 5,0 ml tørt methylenchlorid, behand-

O

9

DK 162894 B

les med en opløsning af 0,72 g (1,54 mmol) 1— [ (S) — -6-[[(phenylmethoxy)carbonyl] amino]-2-hydroxy-1-oxohexyl]--L-prolin, phenylmethylester i 50 ml tørt methylenchlorid, 0,35 ml (2,53 mmol) triethylamin og 40 mg dimethylamino-5 pyridin, og omrøres ved stuetemperatur under argon.

Efter 4 timers forløb fordeles blandingen mellem ethyl-acetat og 5% kaliumbisulfat-opløsning. Den organiske fase vaskes på hinanden følgende med 5% kaliumbisulfat--opløsning, mættet natriumbicarbonat-opløsning og 10 mættet natriumchlorid-opløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og inddampes. Dette rå produkt behandles igen med en anden portion phosphonchloridat under de samme betingelser som ovenfor beskrevet. Ved oparbejdelse som nævnt ovenfor og rensning ved flashchromatografi 15 (silicagel, 100 g "LPS-1"), idet man eluerer med en blanding af acetone og hexan i forholdet 3:7, fås 428 mg 1-[ (S)—2— [ [ (4-phenylbutyl) (phenylmethoxy)phosphinyl3-oxy]-6- [ [ (phenylmethoxy)carbonyl]amino3-1-oxohexyl]-L--prolin, phenylmethylester som en viskos olie. TLC 20 (silicagel; methanol/methylenchlorid: 5:95) R^ = 0,45.

TLC (silicagel; acetone/methylenchlorid: 2:8) viser to pletter (isomere ved phosphor, ca. 1:1) = 0,54 og 0,49.

c) (S) -1- [6-amino-2- [ [hydroxy (4-phenylbutyl) - 25 phosphinyl]oxy]-l-oxohexy3]-L-prolin, dilithiumsalt

En opløsning af phenylmethylesterproduktet fra del (b) (428 mg, 0,57 ramol) i en blanding af 15 ml methanol, 3 ml vand og 0,27 ml triethylamin behandles med 10 g 10%'s palladium på carbonkatalysator og omrøres 30 under en atmosfære af hydrogen (ballon) i'3 timer. Blandingen filtreres gennem "Celite", og katalysatoren vaskes grundigt med methanol. De forenede filtrater behandles med 0,85 ml (1,7 mmol) 2N lithiumhydroxid-opløsning og indampes til tørhed. Remanensen tages op i vand, filtreres 35 (Millipore) og lyophiliseres. Det rå produkt renses på en HP-20 søjle (rumfang: 250 ml, søjlediameter; 2,54 cm), 10

DK 162894 B

o idet man eluerer med en gradient af vand-}acetone (90%) ved en strømningshastighed på 5 ml/minut og idet man opsamler fraktioner på 5 ml. De fraktioner, der indeholder produkt, forenes og inddampes til tørhed. Remanensen 5 tages op i vand, filtreres (Millipore) og lyophiliseres, hvorved man får 215 mg (S)-1-[6-amino-2-[[hydroxy(4--phenylbutyl)phosphinyl]oxy]-1-oxo-hexyl]-L-prolin, dilithiumsalt som et hvidt fast stof; [a]^ = -41,4° (c = 1,15, methanol). TLC (silicagel; isopropanol/-10 koncentreret ammoniak/vand: 7:2:1) = 0,33.

Analyse for 2Li. 1? 3 ^0:

Beregnet: C 53,01 H 7,12 N 5,89 P 6,51

Fundet: C 52,97 H 7,35 N 5,74 P 6,2 15

Eksempel 3 (S)-1-[6-amino-2-[[hydroxy(4-phenylbutyl)phosphinyl]oxy]- -1-oxohexyl]-L-prolin a) (4-Phenylbutyl)phosphinsyre 20 Til en suspension af 60 g (0,566 mmol) natrium- hypophosphithydrat i 600 ml absolut ethanol sættes der 15 ml koncentreret svovlsyre, 25,0 g (0,189 mmol) 4-phenyl-l-buten og 3,0 g 2,2'-azobisisobutyronitril.

Den fremkomne blanding tilbagesvales i 6 timer, 25 behandles med en anden portion på 2,0 g 2,2'-azo- bisisobutyronitril og tilbagesvales i yderligere 16 timer.

Den afkølede blanding filtreres og inddampes in vacuo.

Remanensen suspenderes i 200 ml vand, gøres basisk med 50% natriumhydroxid-opløsning og vaskes med to portioner 30 ethylether på hver 200 ml. Den vandige fase gøres sur med koncentreret svovlsyre og ekstraheres med ethylacetat.

Ethylacetatekstraktet vaskes med mættet natriumchlorid- opløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og inddampes, hvorved man får 34,5 g rå (4-phenylbutyl)-phosphinsyre.

Denne rå syre (34,5 g) tages op i 200 ml ethylether og behandles med en opløsning af 26,3 g (0,174 mmol) 35 11

DK 162894 B

o 1-adamantanamin i 200 ml ethylether. Det hvide bundfald samles op, vaskes med ethylether og tørres i vakuum, hvorved man får 54,2 g (4-phenylbutyl)-phosphinsyre, 1-adamantanaminsalt som et hvidt fast stof; smp.

5 192-200°C.

Dette 1-adamantanaminsalt (10,5 g) fordeles mellem ethylacetat og IN saltsyre (hver for sig 150 ml) . Ethylacetatfasen vaskes med IN saltsyre og mættet natriumchlorid-opløsning, tørres over vandfrit 10 natriumsulfat og inddampes, hvorved man får 5,75 g ren (4-phenylbutyl)-phosphinsyre som en farveløs viskos olie. TLC (silicagel; isopropanol/koncentreret ammoniak/vand: 7:2:1) R^ = 0,67.

15 b) 1-[(S)-6-[[(phenylmethoxy)carbonyl]amino] - -2-[[hydroxy(4-phenylbutyl)phosphinyl]oxy]-1-oxo-hexyl]-L-prolin, phenylmethylester, 1-adamantanaminsalt 0,67 g (3,38 mmol) (4-phenylbutyl)phosphinsyre og 1,0 g (2,14 mmol) 1-[ (S)-6-[[(phenylmethoxy)carbonyl]-20 amino]-2-hydroxy-l-oxohexyl]-L-prolin, phenylmethylester (1,0 g, 2,14 mmol) i 8,0 ml tør tetrahydrofuran behandles med 0,67 g (3,25 mmol) dicyclohexylcarbodiimid og 0,1 g dimethylaminopyridin og omrøres ved stuetemperatur under argon. Efter 2 timers forløb filtreres blandingen, 25 fortyndes med ethylacetat og vaskes på hinanden følgende med 5% kaliumbisulfat-opløsning, mættet natriumbicarbonat--opløsning og mættet natriumchlorid-opløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og inddampes. Remanensen filtreres gennem en pude af silicagel ("SiliCAR CC7", 30 10 g) , idet man eluerer med en blanding af acetone og hexan i forholdet 1:1. Fraktionerne, der indeholder produkt, forenes og inddampes, hvorved man får 1,42 g 1-[ (S)-6-[[(phenylmethoxy)carbonyl] amino]-2- [ C (4— -phenylbutyl) phosphinyl ] oxy] -1-oxohexy 1 ] -L-prolin, 35 phenylmethylester som en farveløs olie. TLC (silicagel; acetone/hexan: 1:1) Rf = 0,18.

O

12

DK 162894 B

Den ovennævnte phenylmethylester (1,42 g) tages op i 10 ml dioxan, behandles med en opløsning af 0,5 g (2,34 mmol) natriumperiodat i 6 ml vand og omrøres ved stuetemperatur i 16 timer. Den orange blanding 5 fordeles derpå mellem ethylacetat og 1% kaliumbisulfat- -opløsning. Den organiske fase vaskes med vand, fortyndet natriumbisulfatopløsning og mættet natriumchlorid-op-løsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og inddampes.

Det rå produkt tages op i en lille mængde ethylacetat 10 (ca. 5 ml), fortyndes med ca. 20 ml ethylether og behandles med en opløsning af 0,34 g (0,25 mmol) 1-adamantanamin i 4 ml ethylether. Den hvide udfældning opsamles, vaskes med ethylether og tørres i vakuum, hvorpå man får 1,5 g 1-[(S)-6-[[(phenylmethoxy)carbonyl]-15 amino]-2-[[hydroxy(4-phenylbutyl)phosphinyl]oxy]-1- -oxohexyl]-L-prolin, phenylmethylester, 1-adamantanamin-salt som et hvidt fast stof, smp.: 129-140°. TLC (silicagel, eddikesyre/methanol/methylenchlorid: 1:1:20) = 0,24 (fri syre).

20 c) (S)-1-[6-amino-2-[[hydroxy(4-phenylbutyl)- phosphinyl]oxy]-1-oxohexyl]-L-prolin 1-Adamantanaminsaltproduktet fra del (b) (0,8 g, 0,98 mmol) fordeles mellem 20 ml ethylacetat og 20 ml 25 saltsyre. Ethylacetatlaget vaskes med IN saltsyre og mættet natriumchlorid-opløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og inddampes, Remanensen tages op i 8,0 ml ethanol, behandles med 0,1 g 10% palladium på carbonkatalysator og omrøres under 30 en atmosfære af hydrogen (ballon) i 1,5 timer.

Blandingen filtreres gennem "Celite" og inddampes til tørhed. Remanensen tages op i vand og filtreres gennem et polycarbonatfilter for at fjerne spor af bicyclohexylurinstof. Ved bortdampning af elueringsmidlet 35 fås 0,41 g (S)-l-[6-amino-2-[[hydroxy(4-phenylbutyl)-phosphinyl]oxy]-1-oxohexyl]-L-prolin som et hvidt fast

O

13

DK 162894 B

stof; smp.: 160-175°C efter triturering fra acetonitril. Materiale, krystalliseret fra en blanding af vand og acetonitril: smp.: 187-192°C (dekomp.); [a]^ = -46,7° (c = 5,05, methanol). TLC (silicagel; isopropanol/-5 ammoniak/vand: 7:2:1) Rf = 0,24.

Analyse for C21H33N2°6P*0;7H20:

Beregnet: C 55,67 H 7,65 N 6,18 P 6,84

Fundet: C 55,67 H 7,76 N 6,28 P 6,55 10

Eksempel 4

Man fremstiller 1000 tabletter, der hver indeholder de følgende bestanddele (S)-1-[6-Amino-2-[[hydroxy(4-15 -phenylbutyl)phosphinyl]oxy ]-l- -oxohexyl]-L-prolin 100 mg

Majsstivelse 50 mg

Gelatine 7,5 mg "Avicel" (mikrokrystallinsk 20 cellulose) 25 mg

Magnesiumstearat 2,5 mg 185 mg ud fra tilstrækkelige samlede mængder ved at blande (S)-1-[6-amino-2-[[hydroxy(4-phenylbutyl)phosphinyl]-25 oxy]-1-oxohexyl]-L-prolinet og majsstivelse med en vandig opløsning af gelatinen. Blandingen tørres og formales til et fint pulver. Avicel og derpå magnesiumstearat iblandes under granulering. Blandingen komprimeres i en tabletmaskine til dannelse af 1000 tabletter, som 30 hver indeholder 100 mg aktiv bestanddel.

På lignende måde kan man fremstille tabletter, der indeholder 100 mg af produktet fremstillet ifølge eksempel 2 .

35 14

DK 162894 B

Eksempel 5 1000 tabletter, der hver indeholder de følgende bestanddele (S)-1-[β-Amino-2-[[hydroxy(4-5 -phenylbutyl)phosphinyl]oxy]-1- -oxohexyl]-L-prolin 100 mg "Avicel" 100 mg

Hydrochlorthiazid 12,5 mg

Lactose 113 mg 10 Majsstivelse 17,5 mg

Stearinsyre 7 mg 350 mg fremstilles ud fra tilstrækkelige samlede mængder ved at blande (S)-1-[6-amino-2-[[hydroxy(4-phenylbutyl)-15 phosphinyl]oxy]-1-oxohexylJ-L-prolin, "Avicel” og en portion af stearinsyren sammen til dannelse af kugler. Kuglerne formales og passeres gennem en nr. 2 sigte og blandes derpå med hydrochlorthiazidet, lactose, majsstivelse og resten af stearinsyren. Blandingen komprimeres til 20 350 mg kapselformede tabletter i en tabletmaskine. Ta bletterne ridses til deling i halve tabletter.

På lignende måde kan man fremstille tabletter, der indeholder 100 mg af produktet fremstillet ifølge eksempel 2.

25

Biologiske data

Forbindelserne med formlen I afprøves in vivo på normotensive rotter ved bevidsthed. Angiotensin I indgivet intravenøst, hæver blodtrykket på grund af om-30 dannelse til angiotensin II via angiotensin-omdannende enzym (ACE) . ACE-inhibering afspejles ved svækkelsen af en an-giotensin-I pressorrespons (dvs. dannelse af angiotensin II) efter indgift af forbindelsen. In vivo test-fremgangsmåden er beskrevet i flere enkeltheder af Rubin et al., 35 "SQ14,225 (D-3-Mercapto-2-Methylpropanoyl-L-Prolin), A Novel

Orally Active Inhibitor Of Angiotensin I Converting Enzyme", 15

DK 162894 B

J. Pharm. Exp. Therap., Bd. 204, s. 271-280 (1978).

I tabellen vises de resultater, der fås efter indgift af orale doser (Mg/kg legemsvægt) af forbindelserne med formlen I. Doserne er valgt således, at de giver ækvimolære 5 mængder af forsøgsforbindelserne for at fjerne forskelle på grund af forskelle i molekylvægt. Inhiberingen af angiotensin I pressorresponsen udtrykkes som procent af responsen over for angiotensin I, opnået før indgift af forsøgsforbindelsen, og måles med regelmæssige intervaller under en 10 3-timers periode efter indgiften af forsøgsforbindelsen.

Den maksimale procentuelle inhibering, der iagttages under dette tidsrum, er angivet i tabellen som et tal fra 0 til 100%. Alle resultater er gennemsnitsværdier, der fås ved afprøvning af hver forbindelse på mindst 4 rotter.

15 Det observeres, at øgede mængder af indgiven forbindelse fører til forøgede inhiberingsniveauer.

Maximum % inhibering 20

Prøvefor bindelse (Mg/kg) 0,5 1,5 5 15 25 Eksempel 2 20,90 74,00 91,00 97,10

Eksempel 3 46,60 69,00 89,90

Claims

16 DK 162894 B Patentkrav.

1. Phosphonyl-hydroxyacyl-(L)-prolin-derivat, kendetegnet ved, at det har formlen I NH2

5 I ^ 0 (CH2)4 O . (I) (OV(CH2)4 - P - O - CH - C - N--COOH W I (S) (L)

10 OH H eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

2. Derivat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det er (S)-l-[6-amino-2-[ [hydroxy-(4-phenylbutyl) -phosphinyl ] -oxy ] -1-oxohexyl ] -L-prolin.

3. Derivat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det er (S) -1-[6-amino-2-[ [hydroxy- (4-phenylbutyl) -phosphinyl ] -oxy] -1-oxohexyl ] -L-prolin-dilithiumsalt.