DK158384B - Fremgangsmaade til ekstraktion af lactoferrin og immunoglobulin fra en vaeske hidroerende fra maelk - Google Patents
Fremgangsmaade til ekstraktion af lactoferrin og immunoglobulin fra en vaeske hidroerende fra maelk Download PDFInfo
- Publication number
- DK158384B DK158384B DK216782A DK216782A DK158384B DK 158384 B DK158384 B DK 158384B DK 216782 A DK216782 A DK 216782A DK 216782 A DK216782 A DK 216782A DK 158384 B DK158384 B DK 158384B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- lactoferrin
- proteins
- process according
- milk
- silicon
- Prior art date
Links
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 title claims description 18
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 title claims description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 12
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 title claims description 12
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 title claims description 12
- 239000008267 milk Substances 0.000 title claims description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 37
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 claims description 33
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 33
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 33
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 claims description 31
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 claims description 31
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 claims description 31
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 claims description 31
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 14
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims description 13
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 9
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 7
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 6
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 4
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical compound [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 7
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 6
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 6
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 5
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 4
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 4
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 4
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 4
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 4
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 4
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 3
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 102100033468 Lysozyme C Human genes 0.000 description 2
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 2
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 2
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- AWFYPPSBLUWMFQ-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-1-(1,4,6,7-tetrahydropyrazolo[4,3-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NN=C(O1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=C2 AWFYPPSBLUWMFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108010075016 Ceruloplasmin Proteins 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 1
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 108010023244 Lactoperoxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000045576 Lactoperoxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002506 iron compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940057428 lactoperoxidase Drugs 0.000 description 1
- 150000002597 lactoses Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 150000003376 silicon Chemical class 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021241 α-lactalbumin Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/20—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey
- A23J1/205—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey from whey, e.g. lactalbumine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/832—Milk; colostrum
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Dairy Products (AREA)
Description
DK 158384 B
i
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til ekstraktion af lactoferrin og immunoglobulin fra en væske hidrørende fra mælk, hvilken væske i alt væsentligt er udtømtefor casein, ved hvilken fremgangsmåde proteinerne adsorberes på et fast bærermateriale, hvorefter de adsorberede 5 proteiner elueres med en sur opløsning.
De forskellige proteiner, der foruden casein findes i pattedyrs mælk, har tiltrukket talrige industriers og forskeres opmærksomhed. Ligeledes har det arbejde, som man har foretaget med henblik på 10 separation af de forskellige proteiner, navnlig de proteiner, som befinder sig i vallen, dvs. i lactoserum, efter separation af casein, tiltrukket sig opmærksomhed. Blandt meget interessante stoffer, der tilhører denne kategori, er a-lactalbumin, transferrin, lactoferrin, lysozym, serumalbumin, immunoglobuliner osv. Lactofer-15 rinet har farmakologisk interesse: man ved, at dette protein, som fixerer jern, udgør en vigtig beskyttelse mod forskellige bakterieinfektioner. Denne betydning forklares netop ved dette proteins chelaterende virkning overfor jern, hvorved dette element fjernes fra miljøet, hvilket således forhindrer udviklingen af bakterier, 20 for hvilke dette element er absolut nødvendigt. Denne bakteriostatiske egenskab udgør klart en vigtig fordel. Hvad angår immunoglo-bulinerne IgA, IgM og IgG stiger deres betydning hver dag med den fantastiske udvikling af immunologien. Man kender andetsteds fra nytten og anvendelsen af 1 acta!bumi ner, serumalbumin, lysozym og 25 visse andre proteiner og ligeledes proteiner, der fikserer vitaminet Bj2 eller ceruloplasmin, som har den egenskab at kombinere med kobber. Man forstår, at der har været udført arbejder med henblik på separationen af forskellige proteiner hidrørende fra mælkeprodukter og navnlig fra valle, som indeholder proteinerne i opløst tilstand 30 og som almindeligvis udgør et restprodukt i mælkeindustrien. Den største del af de anvendte fremgangsmåder er baseret på anvendelsen af ionbyttere eller på kromatografi på Sephadex ved pH-værdi er, som ikke overstiger 7, og som oftest er under 6,3. En sådan fremgangsmåde omtales f.eks. i beskrivelserne til US patenterne nr. 3.234.199 35 og nr. 3.969.337. Man har ligeledes anvendt elektroforese eller præcipitation via salte og centrifugering, denne sidste metode er blevet beskrevet af Montreuil og Mullet C.R. 250, 1736-7 (1960). Senere er arbejdet til separation af proteiner fra mælk blevet omtalt i beskrivelsen til FR patenter nr. 2.390.906 og nr.
2
DK 158384B
2.399.214, hvor alle andre proteiner end casein først ekstraheres med en harpiksanionbytter og dernæst med silicium, eller omvendt; ekstraktionen finder sted ved en pH-førdi mellem 4 og 7,5.
5 Selv om de forskellige kendte fremgangsmåder egner sig godt til separationen af proteiner, såsom lactalbuminer eller serumalbumin, gør ingen af disse metoder det muligt på effektiv og praktisk måde at opnå proteiner, som fikserer jern, dvs. transferri ner og lacto-ferriner. Skønt lactoserum er et lidet dyrt materiale, indeholder 10 det kun ca. 6,5 g proteiner pr. liter, hvoraf en lille del er lactoferriner: man skal derfor behandle meget store volumener af dette udgangsmateriale for at ekstrahere en lille vægtdel af interessante proteiner. Det er derfor vigtigt at have en fremgangsmåde, der gør det muligt at gennemføre denne ekstraktion med et så godt 15 udbytte som muligt. Det er dette formål, der opnås med den forelig gende opfindelse. Den nye fremgangsmåde ifølge opfindelsen angår navnlig udvindingen af ferrochelaterende proteiner, navnlig lacto-ferrin og transferrin, og desuden immunoglobulinerne fra mælkeserum, der bliver tilbage efter separation af casein.
20 I den efterfølgende del af beskrivelsen omtales af forenklingshensyn kun lactoferrin, men det skal forstås, at dette udtryk også omfatter transferrin og eventuelt andre ferrochelaterende proteiner af samme type, som kan forekomme i mælk fra forskellige pattedyr.
25
Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse er et resultat af påvisningen af, at i modsætning til den kendte teknik foregår separationen ved adsorption af de ovenfor anførte proteiner bedst i et svagt basisk miljø.
30
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen med de indledningsvis angivne karakteristika er således ejendommelig ved, at adsorptionen finder sted i et svagt basisk miljø ved en pH-værdi over 7,5, og at elue-ringen efterfølges af en behandling med en basisk opløsning, og at 35 de herved frigjorte immunoglobuliner og lactoferrin indvindes. Miljøets pH-værdi ligger fortrinsvis mellem 7,7 og 8,8 og mere fortrinsvis mellem 7,9 og 8,5.
Det miljø, der skal behandles ifølge den foreliggende opfindelse,
DK 158384B
3 kan bestå af en vandig væske omfattende de forskellige mælkeproteiner, befriet for i det mindste hovedparten af casein; den mest praktiske kilde er valle, evt. koncentreret eller allerede behandlet til ekstraktion af andre proteiner end lactoferrin.
5
Efter adsorptionen i svagt basisk miljø og eliminering af væsken, der flyder ovenpå, elueres de proteiner, der er bundet til adsor-benset, ved at sænke pH-værdi en til under 7 og fortrinsvis til omkring 4; en foretrukket udførelsesform omfatter udnyttelse af et 10 surt elueringsmiddel, hvis ionstyrke er blevet forøget ved tilsætning af et opløseligt salt.
Som adsorbens kan man med fordel anvende kisel med et gramoverflade- 2 areal på fra 5 til 150 m /g, repræsenterende en porediameter på fra 15 25 til 250 nm (250 til 2500 A). Kiselen kan anvendes i pulverform med tilstrækkelig stor kornstørrelse, f.eks. mellem 5 /zm og 5 mm.
Til anvendelse i en søjle foretrækkes det at anvende sfæriske kugler med en diameter af en størrelsesorden på fra 10 til 500 μχα.
20 Skønt kisel udgør et udmærket bærermateriale til præferentiel binding af lactoferrin kan andre bærermaterialer anvendes, navnlig forskellige naturlige eller syntetiske silicater, såsom bentonit såvel som aktiveret aluminiumoxid.
25 Bindingen i et svagt basisk miljø giver den fordel, at der er en stor selektivitet overfor lactoferrin, som kun ledsages af en del af immunoglobulinerne. De andre proteiner, navnlig lactalbuminer, lactoglobuliner, serumalbumin og resten af immunoglobulinerne bliver tilbage i opløsning i den væske, der flyder ovenpå.
30
Efter udvindingen af lactoferrin'et og immunoglobulinerne bringes bærermaterialet, navnlig kiselen, i kontakt med en svagt basisk opløsning med f.eks. en pH-værdi på fra 8 til 9, hvilket gør den egnet til at blive anvendt til en ny ekstraktion fra et mælke-35 produkt. Det fremgår, at fremgangsmåden ifølge opfindelsen er meget mere simpel end de kendte fremgangsmåder; i forhold til de ovenfor omtalte FR patentskrifter er det således tilstrækkeligt med ét mineralsk bærermateriale i stedet for 2 bærermaterialer, hvoraf det ene er en ionbytter. Desuden finder bindingen sted i et basisk miljø 4
DK 158384B
i stedet for at blive udført ved pH-værdier under 7,5 og navnlig under 7, som det er tilfældet med alle de tidligere metoder.
Efter eluering af bærermaterialet med en sur opløsning vaskes dette 5 bærermateriale i en variation af fremgangsmåden ifølge opfindelsen med en basisk opløsning, hvilket tillader ekstraktion af immu-noglobul i nfraktionen, som ikke er blevet elueret i surt miljø; i dette tilfælde kan den basiske opløsning også gøre det muligt at udvinde en rest af lactoferrin. Vasken i denne udførelsesform kan 10 udføres ved f.eks. en pH-værdi mellem 8 og 10. Et kisel bærermateriales kapacitet overfor lactoferrin påvirkes imidlertid ikke af en sådan vask; vasken kan derfor udelades, når man kun forsøger at ekstrahere lactoferrin.
15 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan anvendes på lactoserum, lige meget hvilken elimineringsmåde af casein, som har ført til denne lactoserum: med andre ord ligegyldigt om caseinet er blevet præcipi-teret ved forsyrning af den oprindelige mælk eller ved indvirkning af et enzym. Fremgangsmåden kan anvendes på valle som sådan, såvel 20 som på væsker, der er opnået ved at opløse faste stoffer fra lactoserum, opnået på kendt måde, f.eks. ved ultrafiltrering eller tørring.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan anvendes til ekstraktion af 25 lactoferriner fra forskellige mælkekilder, navnlig mælk fra får eller køer såvel som human mælk. Da de førstnævnte indeholder meget mindre lactoferrin end den anden, er behandlingen af dem mindre effektiv med de kendte metoder, og det er her, at anvendelsen af fremgangsmåden ifølge opfindelsen gør sig specielt bemærket.
30
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan udføres under de betingelser, der er beskrevet af Gordon, Ziegler & Basch, Biochem. Biophys. Acta 60, 410-411 (1962): i denne variation udføres bindingen til et adsorberende materiale i svagt basisk miljø med en væske omfattende 35 lactoferinet, til hvilket man i forvejen har tilsat en jernforbindelse på en sådan måde, at det tilstedeværende lactoferrin mættes.
Ekstraktionsprocenten af lactoferrin er forøget ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse. Hvad angår sammensætningen af de
c DK 158384B
proteiner, der opnås ved denne fremgangsmåde, efter elueringen fra det adsorberende materiale ved hjælp af en sur opløsning, omfatter den mere end 50% lactoferrin, idet resten hovedsagelig udgøres af immunoglobuliner. Renheden af lactoferrinet, der hovedsageligt 5 anvendes som bakterostatisk middel, er helt tilfredsstillende, og det er ikke nødvendigt at adskille det fra immunoglobulinerne; det har faktisk in vitro vist sig, at lactoferrins evne til at inhibere væksten af patogene bakterier forøges med tilstedeværelsen af immunoglobuliner.
10 I de industrielt vigtige tilfælde, hvor bærermaterialet består af kisel, finder man en kapacitet overfor lactoferrin på mere end 20 mg pr. g kisel, hvilket fuldstændigt berettiger den industrielle anvendelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
15
Ved de betingelser, der hersker under fremgangsmåden ifølge opfindelsen, undergår de immunoglobuliner, som ledsager lactoferrinet, ingen denaturering, og kan derfor anvendes i den farmaceutiske industri og den veterinære industri, eftersom de bibeholder alle 20 deres egenskaber.
De forskellige proteiner, som kan separeres med fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan identificeres med kendte metoder, og navnlig de metoder, der er blevet beskrevet af J. Garnier i Ann. Biol. anim.
25 Bioch. Biophys. 1964, 4 (2) 163-187. De efterfølgende eksempler illustrerer den foreliggende opfindelse.
EKSEMPEL 1 30 I en søjle med en indre diameter på 1 cm anbragtes 5 g kisel korn med en kornstørrelse på fra 100 til 200 /zm; denne kisel havde et gram-overfladeareal på 20 m /g og en porediameter på 80 nm. Kiselen vaskedes med en 0,005M dinatriumphosphatopløsning ^ΗΡΟ^. I en liter af denne phosphatopløsning opløstes 10 g af et pulver opnået 35 ved tørring af det opsamlede faste materiale (resten) ved ultracen-trifugeringen af en lactoserum; dette pulver indeholdt 6,5 g proteiner. pH-Værdien af den opnåede opløsning indstilledes til 8,2. Opløsningen førtes derefter gennem kisel materi al et i den ovenfor anførte søjle med en hastighed på 60 ml/time; søjlen vaskedes
DK 158384B
6 derefter med en 0,005 M dinatriumphosphatopløsning med en pH-værdi på 8,2 for at fjerne alle de proteiner, der ikke er bundet til kiselen. Den bundne lactoferrin elueres derefter med en 0,1 N eddikesyreopløsning tilsat NaCl til en koncentration på 0,5 M. Der 5 opnåedes således en fraktion på 25 ml af en rosafarvet væske indeholdende 40 mg proteiner omfattende 66% lactoferrin, idet resten er immunoglobuliner. Efter en vask af kiselmateri ale ved en passage af en opløsning af 0,005 M dinatriumphosphatopløsning er søjlen parat til en ny adsorptionscyklus.
10 EKSEMPEL 2 På lignende måde som i eksempel 1 vaskedes søjlens materiale med en stødpufferopløsning af tris-HCl, pH-9, tilsat 0,5 M NaCl efter 15 eluering med eddikesyre og udvinding af lactoferrinfraktionen. Dette gav en ny 20 ml fraktion indeholdende 30 mg proteiner, som hovedsageligt bestod af immunoglobuliner, lactoperoxidase og en meget lille mængde lactoferrin. Efter vask af kiselmateri al et i søjlen med en 0,005 M dinatriumphosphatopløsning var søjlen påny parat til 20 brug.
EKSEMPEL 3
Den i eksempel 1 anvendte fremgangsmåde gentoges, men lactoferrin-25 kilden var 1 liter valle, der direkte er opnået ved fremstilling af ost, denne væske tilsattes uden koncentrering 0,005 M dinatriumphosphatopløsning pr. liter. Der opnåedes samme resultater som i eksempel 1.
30 EKSEMPEL 4
Den alkaliske vask i eksempel 2 anvendtes ved en fremgangsmåde, hvor der anvendtes valle ifølge eksempel 3. Dette førte til lignende resultater som i eksempel 2.
35 EKSEMPEL 5
Den i eksempel 1 anvendte fremgangsmåde blev gentaget under anvendelse af 6,5 g bentonit, der forudgående var blevet behandlet med
DK 158384B
7 en vandig N HC1-opløsning, derpå vasket med destilleret vand og tørret. Denne bentonit, som erstatter de 5 g kisel i eksempel 1, har en kornstørrelse på fra 85 til 220 øm. Phosphatopløsningen, som omfatter 10 g faststof af 1actoserumekstrakt per liter, blev jus -5 teret til pH 8,4 før den førtes gennem bentonitten med henblik på adsorption. Eluering med syre gav en proteinfraktion omfattende 53% lactoferrin.
EKSEMPEL 6 10
Fremgangsmåden ifølge eksempel 1 blev gentaget, idet kiselen blev erstattet med 5 g aktiveret aluminiumoxid med en kornstørrelse på fra 105 til 250 øm. Opløsningen, der underkastedes adsorption, havde et pH på 8,06. Efter adsorption til aluminiumet gav syreeluering en 15 proteinfraktion omfattende 57% lactoferrin.
20 25 30 35
Claims (6)
1. Fremgangsmåde til ekstraktion af lactoferrin og immunoglobulin fra en væske hidrørende fra mælk, hvilken væske i alt væsentligt er 5 udtømt for casein, ved hvilken fremgangsmåde proteinerne adsorberes på et fast bærermateriale, hvorefter de adsorberede proteiner elueres med en sur opløsning, kendetegnet ved, at adsorptionen finder sted i et svagt basisk miljø ved en pH-værdi over 7,5, og at elueringen efterfølges af en behandling med en basisk opløs-10 ning, og at de herved frigjorte immunoglobuliner og lactoferrin indvindes.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at pH-værdien i det miljø, der udsættes for adsorptionen, ligger mellem 15 7,7 og 8,8, og fortrinsvis mellem 7,9 og 8,5.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at elueringen finder sted ved en pH-værdi, der ligger under ca. 4. og at elueringsmidlet fortrinsvis indeholder et opløseligt salt, 20 der forøger ionstyrken.
4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, kendetegnet ved, at adsorptionsmidlet er kisel med et p gramoverfladeareal mellem 5 og 150 m /g og en porediameter mellem 25 25 og 250 nm.
5. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-4, kendetegnet ved, at kiselen foreligger i pulverform med en kornstørrelse på fra 5 /zm til 5 mm og fortrinsvis fra 10 til 500 30 /jm.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at adsorptionsmidlet er et naturligt eller syntetisk silicat og/eller et aktiveret aluminiumoxid. 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8109740 | 1981-05-15 | ||
| FR8109740A FR2505615A1 (fr) | 1981-05-15 | 1981-05-15 | Procede d'extraction de lactoferrine et d'immunoglobulines du lait |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK216782A DK216782A (da) | 1982-11-16 |
| DK158384B true DK158384B (da) | 1990-05-14 |
| DK158384C DK158384C (da) | 1990-10-08 |
Family
ID=9258517
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK216782A DK158384C (da) | 1981-05-15 | 1982-05-13 | Fremgangsmaade til ekstraktion af lactoferrin og immunoglobulin fra en vaeske hidroerende fra maelk |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4436658A (da) |
| JP (1) | JPS5828233A (da) |
| AR (1) | AR228653A1 (da) |
| AU (1) | AU557353B2 (da) |
| BE (1) | BE893156A (da) |
| CA (1) | CA1171723A (da) |
| CH (1) | CH650905A5 (da) |
| DE (1) | DE3218348C2 (da) |
| DK (1) | DK158384C (da) |
| FR (1) | FR2505615A1 (da) |
| GB (1) | GB2098998B (da) |
| IE (1) | IE52858B1 (da) |
| IT (1) | IT1151758B (da) |
| NL (1) | NL8201947A (da) |
| SE (1) | SE460669B (da) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0059598B1 (en) * | 1981-02-26 | 1985-07-17 | Unilever Plc | A process and apparatus for the recovery of immunoglobulines |
| DE3432718C1 (de) * | 1984-09-06 | 1986-05-22 | Biotest Pharma GmbH, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung einer Loesung von Milch- und/oder Kolostralimmunglobulinen |
| JPS61145200A (ja) * | 1984-12-19 | 1986-07-02 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ウシラクトフェリンの分離精製法 |
| BE901672A (fr) * | 1985-02-07 | 1985-08-07 | Oleofina Sa | Procede de purification de proteines du lait et de ses derives. |
| US4834974A (en) * | 1986-01-13 | 1989-05-30 | Protein Technologies, Inc. | Immunologically active whey fraction and recovery process |
| US4816252A (en) * | 1985-04-15 | 1989-03-28 | Protein Technology, Inc. | Product and process for transferring passive immunity to newborn domestic animals using ultrafiltered whey containing immunoglobulins |
| US5017372A (en) * | 1986-04-14 | 1991-05-21 | Medicis Corporation | Method of producing antibody-fortified dry whey |
| IE61701B1 (en) * | 1986-07-17 | 1994-11-30 | Morinaga Milk Industry Co Ltd | Process for producing bovine lactoferrin in high purity |
| DE3638767A1 (de) * | 1986-11-13 | 1988-05-26 | Behringwerke Ag | Laktoferrin enthaltendes inkubationsmedium fuer festphasenimmunometrisches verfahren und seine verwendung |
| FR2613368B1 (fr) * | 1987-03-10 | 1989-06-23 | Entremont Sa | Procede pour extraire des proteines du lactoserum, par adsorption et elution |
| IT1206059B (it) * | 1987-03-27 | 1989-04-14 | Consiglio Nazionale Ricerche | Metodo per la deproteinizzazione selettiva del siero di latte |
| JPH0725800B2 (ja) * | 1987-04-10 | 1995-03-22 | 雪印乳業株式会社 | 硫酸エステル化物を用いて乳からラクトフエリンを分離、精製する方法 |
| FR2616628B1 (fr) * | 1987-06-19 | 1989-09-29 | Entremont Sa | Procede pour extraire des proteines du lactoserum par adsorption et elution |
| JPS6483366A (en) * | 1987-09-25 | 1989-03-29 | Mazda Motor | Cast-in method for ceramic member |
| SE458818B (sv) * | 1987-11-27 | 1989-05-16 | Svenska Mejeriernas Riksforeni | Foerfarande foer utvinning av rena fraktioner av laktoperoxidas och laktoferrin ur mjoelkserum |
| GB8729031D0 (en) * | 1987-12-11 | 1988-01-27 | Express Foods Group Ltd | Isolation of immunoglobulin rich fraction from whey |
| FR2626472B1 (fr) * | 1988-02-02 | 1991-06-14 | Roussel Uclaf | Utilisation des proteines du lait pour la fabrication d'un medicament antiviral |
| DE4002204A1 (de) * | 1990-01-26 | 1991-08-01 | Westfalen Milchwerke | Diaetetisches nahrungsmittel fuer patienten mit niereninsuffizienz |
| AU7453391A (en) * | 1990-03-08 | 1991-10-10 | Ferrodynamics, Inc. | Genetically engineered human lactoferrin |
| US6066469A (en) * | 1990-03-08 | 2000-05-23 | Ferro Dynamics, Inc. | Cloning, expression, and uses of human lactoferrin |
| JP2974434B2 (ja) * | 1990-03-15 | 1999-11-10 | 雪印乳業株式会社 | 分泌性コンポネント含有組成物 |
| DE69133442T2 (de) * | 1990-07-13 | 2006-01-12 | Gropep Ltd., Thebarton | Wachstumsfördernder wirkstoff |
| US6319522B1 (en) | 1990-07-13 | 2001-11-20 | Gropep Limited | Growth-promoting agent |
| US7033610B2 (en) | 1990-07-13 | 2006-04-25 | Gropep Pty, Ltd. | Growth-promoting agent |
| JP3035833B2 (ja) * | 1991-01-21 | 2000-04-24 | 雪印乳業株式会社 | シアル酸類含有組成物の製造方法 |
| JP3110078B2 (ja) * | 1991-06-21 | 2000-11-20 | 森永乳業株式会社 | 高純度抗菌性ペプチドの大量製造法 |
| ATE129125T1 (de) * | 1992-01-15 | 1995-11-15 | Campina Melkunie Bv | Verfahren zur isolierung von lactoferrin und lactoperoxidase aus milch und milchprodukten. |
| DE4216769A1 (de) * | 1992-05-21 | 1993-11-25 | Reissbrodt Rolf Dr Rer Nat Hab | Verfahren zur Anwendung von Eisenchelatoren als selektiv Wachstumssupplemente für Mikroorganismen |
| US5861491A (en) * | 1994-02-16 | 1999-01-19 | Pharming B.V. | Isolation of lactoferrin from milk |
| US5869604A (en) * | 1995-11-09 | 1999-02-09 | Georgia Institute Of Technology | Crystallization and purification of polypeptides |
| US20040259770A1 (en) * | 2003-06-19 | 2004-12-23 | Rush University Medical Center | Method for determining leukocyte activation |
| US7125963B2 (en) * | 2004-03-03 | 2006-10-24 | En N Tech Inc | Treatments for contaminant reduction in lactoferrin preparations and lactoferrin containing compositions |
| NZ547859A (en) | 2006-06-09 | 2009-05-31 | Dec Int Nz Ltd | Treatment method and composition for mastitis |
| EP2650302B1 (en) | 2007-07-10 | 2014-10-08 | Glanbia Nutritionals (Ireland) Limited | Method for removing endotoxin from proteins |
| EP3202416A1 (en) * | 2010-04-23 | 2017-08-09 | Probiotec Limited | Composition comprising lactoferrin and immunoglobulin |
| US20130039903A1 (en) * | 2010-04-23 | 2013-02-14 | Probiotec Limited | Eczema treatment |
| US9458225B2 (en) * | 2013-06-26 | 2016-10-04 | United Arab Emirates University | Method for purifying lactoferrin |
| CZ305371B6 (cs) | 2013-11-15 | 2015-08-19 | Univerzita PalackĂ©ho | Způsob separace syrovátkových proteinů z mléčného média a zařízení k provádění tohoto způsobu |
| CN106841017B (zh) * | 2017-01-22 | 2019-05-07 | 耐斯检测技术服务有限公司 | 一种评价辐照或热处理对钴胺素-蛋白结合体影响的方法 |
| US10993459B2 (en) * | 2019-09-23 | 2021-05-04 | Ralph Yoder | Method for unlocking bioactive proteins |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2390906A1 (fr) * | 1977-05-18 | 1978-12-15 | Rhone Poulenc Ind | Procede d'extraction des proteines du lait |
-
1981
- 1981-05-15 FR FR8109740A patent/FR2505615A1/fr active Granted
-
1982
- 1982-05-06 CH CH2796/82A patent/CH650905A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1982-05-12 BE BE0/208068A patent/BE893156A/fr not_active IP Right Cessation
- 1982-05-12 US US06/377,316 patent/US4436658A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-05-12 IE IE1140/82A patent/IE52858B1/en not_active IP Right Cessation
- 1982-05-12 IT IT21210/82A patent/IT1151758B/it active
- 1982-05-12 NL NL8201947A patent/NL8201947A/nl not_active Application Discontinuation
- 1982-05-12 GB GB8213817A patent/GB2098998B/en not_active Expired
- 1982-05-13 AR AR289385A patent/AR228653A1/es active
- 1982-05-13 DK DK216782A patent/DK158384C/da active
- 1982-05-14 CA CA000402997A patent/CA1171723A/fr not_active Expired
- 1982-05-14 DE DE3218348A patent/DE3218348C2/de not_active Expired - Fee Related
- 1982-05-14 SE SE8203056A patent/SE460669B/sv not_active IP Right Cessation
- 1982-05-14 JP JP57080325A patent/JPS5828233A/ja active Granted
- 1982-05-14 AU AU83720/82A patent/AU557353B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU557353B2 (en) | 1986-12-18 |
| CA1171723A (fr) | 1984-07-31 |
| IE52858B1 (en) | 1988-03-30 |
| DE3218348C2 (de) | 1993-12-16 |
| SE460669B (sv) | 1989-11-06 |
| US4436658A (en) | 1984-03-13 |
| IE821140L (en) | 1982-11-15 |
| BE893156A (fr) | 1982-11-12 |
| JPH0354118B2 (da) | 1991-08-19 |
| DE3218348A1 (de) | 1982-12-02 |
| FR2505615B1 (da) | 1984-12-28 |
| IT8221210A0 (it) | 1982-05-12 |
| DK158384C (da) | 1990-10-08 |
| JPS5828233A (ja) | 1983-02-19 |
| GB2098998B (en) | 1984-08-01 |
| IT1151758B (it) | 1986-12-24 |
| FR2505615A1 (fr) | 1982-11-19 |
| AU8372082A (en) | 1982-11-18 |
| AR228653A1 (es) | 1983-03-30 |
| SE8203056L (sv) | 1982-11-16 |
| NL8201947A (nl) | 1982-12-01 |
| GB2098998A (en) | 1982-12-01 |
| CH650905A5 (fr) | 1985-08-30 |
| DK216782A (da) | 1982-11-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK158384B (da) | Fremgangsmaade til ekstraktion af lactoferrin og immunoglobulin fra en vaeske hidroerende fra maelk | |
| DK173642B1 (da) | Fremgangsmåde til ekstrahering af rene fraktioner af lactoperoxidase og lactoferrin af mælkeserum | |
| SU688124A3 (ru) | Способ отделени протеинов | |
| JP5704918B2 (ja) | 第ｖｉｉｉ因子およびフォンビルブラント因子の精製方法 | |
| Al-Mashikhi et al. | Separation of immunoglobulins and lactoferrin from cheese whey by chelating chromatography | |
| NZ224615A (en) | Process for the production of whey protein fractions | |
| JP2652260B2 (ja) | ホエー蛋白質を含む出発原料からのラクトグロブリン除去法 | |
| NZ249235A (en) | Isolating lactoperoxidase or lactoferrin from milk and/or milk derivatives | |
| US8168585B2 (en) | Purification of peptides from colostrum | |
| US5986063A (en) | Isolating β-lactoglobulin and α-lactalbumin by eluting from a cation exchanger without sodium chloride | |
| JP2974434B2 (ja) | 分泌性コンポネント含有組成物 | |
| JP2578384B2 (ja) | 天然産キモシンの回収工程 | |
| EP0758380A1 (en) | A process for separating milk clotting enzymes, and stable rennet compositions | |
| EP3179862A1 (en) | Method for separating alpha-lactalbumin and beta-lactoglobulin | |
| US20170295821A1 (en) | Isolation of soluble proteins from aggregated casein-containing mixtures | |
| DK3097788T3 (da) | Fremgangsmåde til at udvinde lactoferrin fra mælk | |
| NZ243727A (en) | Isolation of charged particles from fluids by ion exchange where the ion exchange medium is disposed on a porous membrane | |
| WO1995004077A1 (fr) | Procede de purification du plasminogene | |
| JP2963081B2 (ja) | 乳およびその副生物からラクトフェリンを分離、 精製する方法 | |
| JP2003212898A (ja) | 卵黄抗体の製造方法 | |
| JPH1129600A (ja) | 乳からラクトフェリンを分離、精製する方法 | |
| JPH02104533A (ja) | 高純度牛免疫グロブリンの製造法 |